FI89165B - Foerfarande foer framstaellning av fenylkarbamat - Google Patents

Description

1 89165

MENETELMÄ FENYYLIKARBAMAATIN VALMISTAMISEKSI - FÖRFA-RANDE FÖR FRAMSTÄLLNING AV FENYLKARBAMAT

Esillä oleva keksintö liittyy uuteen, tera-5 peuttisesti käyttökelpoiseen fenyylikarbamaattiin, jolla on antikoliiniesteraasiaktiivisuutta.

Erityisesti keksintö liittyy (S)-N-etyyli-3-[(l-dimetyyliamino)etyyli]-N-metyyli-fenyyli-karbamaat-tiin, jolla on kaava I, 10 .CH--CH- 0-C0-N( Λ 3 » U-CH.<CH3 ch3 vapaan emäksen tai happoadditiosuolan muodossa.

20 Kuten tästä kaavasta havaitaan, niin vapaassa emäsmuodossa kaavan I mukaisen yhdisteen kiertosuunnan merkki on (-). Kuitenkin happoadditiosuolan muodossa se voi olla (+) tai (-). Esim. vetytartraatin kiertosuunnan merkki on (+). Esillä oleva keksintö käsittää sekä 25 vapaan emäsmuodon, että happoadditiosuolamuodot, riippumatta niiden kiertosuunnan merkistä.

(t)-N-etyyli-3-[(l-dimetyyliamino)etyyli]-N-metyyli-fenyyli-karbamaatin raseeminen seos sen hydrok-kloridin muodossa tunnetaan eurooppalaisesta patentti-30 hakemuksesta 193,926, missä se on identifioitu RA? HC1:na.

Tämän julkaisun mukaisesti vapaassa emäsmuodossa oleva rasemaatti saadaan a-m-hydroksifenyylietyy-lidimetyyliamiinin amidaatiolla vastaavan karbamoyyli-35 halogenldin kanssa. Saatu yhdiste ja sen farmakologisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat, jotka voidaan valmistaa vapaasta emäsmuodosta tunnetulla tavalla, on 2 89165 esitetty asetyylikoliesteraasi-inhibittoreina keskushermosto järjestelmässä.

Nyt on yllättäen havaittu, että kaavan I mukainen (-)-enantiomeeri ja sen farmakologisesti hyväk-5 syttävät happoadditiosuolat, joista tässä yhteydessä käytetään myöhemmin nimitystä keksinnön mukaiset yhdisteet, omaavat asetyylikoliiniesteraasin erityisen merkittävää ja selektiivistä inhibitiota.

Nämä havainnot ovat odottomattomia, erityises-10 ti, koska ei ole uskottu, että dialkyyliaminoalkyyli sivuketju, joka sisältää optisesti aktiivisen keskuksen, on pääasiassa vastuussa fenyylikarbamaattien ase-tyylikoliiniesteraasia inhiboivasta aktiivisuudesta.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä ei ole koskaan 15 spesifisesti esitetty kirjallisuudessa.

Keksintö tuo esiin menetelmän kaavan I mukaisen yhdisteen valmistamiseksi vapaassa emäsmuodossa tai sen happoadditiosuolamuodossa.

Vapaa emäs voidaan valmistaa rasemaatista 20 enantiomeerien erotuksella tunnettujen menetelmien mukaisesti, esim. käyttäen di-0,0'-p-toluyyli-viinihap-poa. Happoadditiosuolat voidaan valmistaa vapaasta emäksestä tunnetulla tavalla. Näihin kuuluu esim. vety-tartraatti.

25 Keksinnön mukaiset yhdisteet omaavat farmako logista aktiivisuutta, kuten on osoitettu standardi-kokeilla ja ne ovat tämän vuoksi käyttökelpoisia farmaseuttisina aineina. Ne saavuttavat keskushermosto-järjestelmän nopeasti s.c., i.p tai p.o. rotille annon 30 jälkeen. Ne saavat aikaan asetyylikoliiniesteraasiak-tiivisuuden aivoalue-selektiivisen inhibition hippo-kampaali- (aivoturso) ja kortikaali -(kuori) entsyymien ollessa enemmän inhiboituna kuin asetyylikoliinieste-raasi, joka on peräisin striatumista (aivojouvio) ja 35 pons(silta)/medullasta (ydin). Lisäksi niillä on pitkä vaikutuksen kesto.

Seuraavat tulokset, esimerkiksi, kuvaavat li 3 89165 keksinnön mukaisten yhdisteiden farmakologista profiilia verrattuna vastaaviin isomeereihin ja rasemaattei-hin. Yhdiste A on kaavan I mukainen yhdiste sen vety-tartraatin muodossa. Yhdiste B on mainitun suolan opti-5 nen isomeeri. C tarkoittaa kaavan I mukaisen yhdisteen ja sen optisen isomeerin raseemista seosta hydroklori-din muodossa.

In vltro-määrltykset 10 Sähköisesti aikaansaatu 3H-asetyYlikolilnin vapautuminen rotan hippokampaali(aivuturso)leikkeistä Sähköisesti aikaansaatu 3H-asetyylikoliini (3H-15 ACh) vapautuminen rotan hippokampaalileikkeistä on toiminnallinen in vitro-malli tutkittaessa presynapti-sia muskariiniautoreseptoriagonisteja ja -antagonisteja. Tätä mallia voidaan myös käyttää epäsuorana menetelmänä arvioitaessa lääkkeitä, jotka inhiboivat ase-20 tyylikoliiniesteraasia (AChE). AChE aktiivisuuden inhi-bitio johtaa endogeeniseen ACh-akkumulaatioon, joka on siten vuorovaikutuksessa presynaptisten muskariiniauto-reseptoreiden kanssa ja inhiboi 3H-ACh:n lisävapautumis-ta.

25 Rotan hippokampaalileikkeet (Wistar kanta, 180 - 200 g) valmistetaan leikkaamalla poikittaisleikkauk-siksi koko hippokampaalileikkeet 0.3 mm välein Mcll-wain-kudosleikkuri11a. Hippokampaalileikkeitä, jotka on saatu 3 rotasta inkuboidaan 30 min ajan 23 °C 6 ml 30 Krebs-Ringer -liuoksessa, joka sisältää 0.1 uCi 3H-koliinia, ja siirretään superfuusiokammioon ja super-fuusioidaan Kreb'n väliaineella, joka sisältää 10 μΜ hemikolinum-3, nopeudella 1.2 ml/min 30 °C lämpötilassa. Superfusaatin 5 min fraktioiden keräys alkaa 60 min 35 jälkeen. Kaksi aikajaksoa sähköstimulaatioita (2 Hz suorakulmaiset pulssit 2 msec, 10 mA, 2 min) säädetään 70 min jälkeen (S1) ja 125 min jälkeen (S2) superfuu- 4 89165 siosta. Testiaineet lisätään 30 min ennen S2 ja ne ovat superfuusioväliaineissa 145 min asti superfuusiosta. Kokeen lopussa leikkeet liuotetaan väkevään muurahaishappoon ja tritiumpitoisuus määritetään superfusaatista 5 ja liuotetuista leikkeistä. Tritiumvirta ilmaistaan tritiumvirran fraktionaalisena nopeutena per min. Sähköisesti aikaansaatu tritiumvirta lasketaan ekstrapoloidun perustritiumvirran ja kokonaistritiumvirran erotuksena kahden min sähkösitmulaation aikana sekä 10 seuraavan 13 min aikana ja se ilmaistaan prosenttina näytteen keräyksen alussa olevasta tritiummäärästä. Lääkkeen vaikutukset stimulaatiolla aikaansaadulle tri-tiumvirralle ilmaistaan suhteena S2/S1. Kaikista kokeista on tehty toistokokeet käyttäen ohjelmoitavaa 12 15 kanavan superfuusiojärjestelmää. Laskemista varten on käytetty tietokoneohjelmaa.

Tässä kokeessa yhdiste A inhiboi n. 40 % (100 μΜ) sähköisesti aikaansaatua 3H-ACh vapautumista hippo-kampaalileikkeestä, kun rasemaatti C (100 μΜ) inhiboi 20 n. 25 %· Yhdisteen A ja rasemaatin C inhibitoriset vaikutukset voidaan antagonisoida atropiinillä. Nämä tulokset ovat sopusoinnussa AChE-inhiboivan aktiivisuuden kanssa. Yhdiste B on inaktiivinen tässä mallissa.

25 Asetyylikoliiniesteraasi-inhibitio rotan eri aivoalueissa Tässä kokeessa käytetään rotan eri aivoalueiden AChE valmisteita (korteksi (kuori), hippokampus 30 (aivoturso) ja striatum (aivojouvio)) ja IC50 {inhibitoriset pitoisuudet annettuna μΜ) määritetään. Entsyymi-valmisteita esi-inkuboidaan inhibiittorin kanssa 15 min ajan ennen määritystä.

AChE aktiivisuus määritetään Ellmanin jul-35 kaiseman menetelmän mukaisesti (Arch. Biochem. Biophys. 82, 70, 1959). Rotan aivokudos homogenisoidaan kylmässä fosfaattipuskurissa pH 7.3 (0.25 mM), joka sisältää s 89165 0.1 % Triton X-100. Sentrifugoinnin jälkeen kirkkaan supernantin liuosta käytetään entsyymin lähteenä. Entsyymiä esi-inkuboidaan inhibiittorin eri konsentraati-oiden kanssa. Eripituisten ajanjaksojen jälkeen lisä-5 tään substraatti (asetyylitiokoliinijodidi 0.5 mM) ja jäljelle jäävä aktiivisuus määritetään.

Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa 1:

Taulukko 1 10 IC50 Korteksi Hippokampus Striatum

Yhdiste A 2.8 3.7 3.0

Yhdiste B 16.1 14.5 13.8

Rasemaatti C 3.2 3.9 3.2 15

Kuten tästä taulukosta nähdään, AChE inhibitio yhdisteellä A on hieman suurempi kuin yhdisteellä C, kun taas yhdiste B on merkittävästi vähemmän aktiivinen.

20

Asetyylikoliiniesteraasi-inhibitio ex vivo rotan eri . . aivoalueissa 30 min jälkeen yhdisteen A eri annoksien annon 25 mitataan ex vivo AChE aktiivisuus rotan eri aivoalueissa. Menetelmä on esitetty edellä. Havaitut IC5Q-arvot ovat 7 pmol/kg p.o. striatumissa, 4 pmol/kg p.o. hip-pokampuksessa ja 2 pmol/kg p.o. korteksissa. Rasemaatin C annon jälkeen saadut IC5Q-arvot ovat kaikissa tutki-30 tuissa alueissa n. 2 - 3 kertaa korkeampia. Yhdisteen A (10 jumol/kg p.o.) annosta kuuden tunnin kuluttua AChE striatumissa on vielä inhiboitu 16 %:sti, kun taas samaan aikaan aktiivisuudet korteksissa ja hippokampuk-sessa ovat inhiboitu 39 %:sti ja 44 %:sti vastaavasti. 35

In vivo -määritykset 6 89165

Vaikutus dopamiinimetaboliaan

Uros OFA -rottia (150 - 200 g) käytettiin sekä akuutteihin että subkroonisiin kokeisiin. Eläimiä pide-5 tään 12 h ajanjaksoja valoisassa ja pimeässä. Eläimet tapetaan aina välillä 11.00 ja 13.00 h. Aivot leikataan pois välittömästi, leikellään jäässä GLOWINSKI ja IVER-SEN, J Neurochem. 13, 655 (1966), menetelmän mukaisesti, jäädytetään hiilihappojäällä ja kudosnäytteitä 10 säilytetään - 80 °C analyysiin asti.

Dopamiini ja sen metaboliitit DOPAC (3,4-di-hydroksifenyylietikkahappo) ja HVA (homovanilliinihap-po) määritetään aivokudosuutteista, jotka saadaan varastoidun aivokudoksen homogenisaatiolla 0.1 N HC1 -15 liuoksessa, joka sisältää 0.05 mM askorbiinihappoa, sekä tätä seuraavalla sentrifugoinnilla. Käytetään striataali- (aivojuovio) ja kortikaali- (kuori) kudoksia.

Metaboliittien määritys toteutetaan käyttäen 20 joko kaasukromatografia/massa fragmentografia (GCMS) -menetelmää, kuten on kuvattu julkaisussa KAROUM et ai., J. Neurochem. 25, 653 (1975) ja CATABENI et ai., Science 178, 166 (1972), tai fluorometristä menetelmää, kuten on kuvattu julkaisussa WALDMEIER ja MAITRE, Ana-25 lyt. Biochem. 51, 474 (1973). GCMS menetelmää varten kudosuutteet valmistetaan lisäämällä tunnettuja määriä deuteroituja monoamiineja ja niiden vastaavia metabo-liitteja sisäisiksi standardeiksi.

Dopamiinimetabolia striatumissa lisääntyy 30 yhdisteiden A ja B sekä rasemaatin C annon jälkeen (tämä ominaisuus on seurausta asetyylikoliiniakkumulaa-tiosta, jonka aiheuttaa mainitut yhdisteet). Kuitenkin, yhdiste A on aktiivisempi kuin yhdiste B ja rasemaatti C striataalidopamiinimetaboliittikonsentraation kohot-35 tamisessa.

li 7 89165

Muskarilnl- 1a nlkotiinivalkutukset aivojen glukoosin hyväksikäytössä

Muutokset CNS:n funktionaalisessa aktiivisuu-5 dessa ovat yhteydessä muuttuneeseen deoksiglukoosin (DOG) hyväksikäyttöön aivoissa, mikä voidaan osoittaa samanaikaisesti useissa aivoalueissa käyttäen Sokoloff et ai., J. Neurochem. 28, 897 (1977) mukaista autora-diografista menetelmää. Kolinergisten lääkkeiden anto 10 indusoi joko suorasti (muskariini agonistit) tai epäsuorasti (asetyylikoliinin akkumulaatio) tässä mallissa tunnusomaisen "sormenjälki" -mallin modifioimalla alueellista glukoosimetaboliaa.

Käytetään uros Wistar rottia (150 - 200 g). 15 Lääkkeet annetaan eri annoksina ja eri reittejä (i.v., p.o., i.p) eläimille. [14C]-2-deoksiglukoosi (125 injektoidaan 45 min ennen eläinten lopettamista. Aivot leikataan välittömästi pois, jäädytetään - 80 °C lämpötilassa ja tämän jälkeen leikataan leikkeiksi, 20 joiden paksuus on 20 μπι. Radiograafisten kuvien optiset tiheydet mitataan Sokoleff et ai. muunnelman mukaisesti .

Yhdisteiden A ja B (7. 5 μιηοΐ/kg) p.o. annon jälkeen havaitaan merkittäviä muutoksia DOG hyväksi-25 käytössä rotan eri aivoalueissa. Yhdisteen A teho on voimakkaampi kuin yhdisteen B ensimmäisen 30 min aikana. Kaikkein merkittävimmät muutokset havaitaan visuaa-lialueissa ja anteroventraali thalamuksessa sekä myös lateraalissa habenula mukleuksessa.

30

AsetyylikolUnitasot rotan eri aivoalueissa

Yhdisteiden A ja B sekä rasemaatin C vaikutukset AChE inhibiittoreina in vivo määritetään mittaamal-35 la ACh tasot rotan aivojen eri alueissa eri aikoina lääkkeen antamisesta.

Käytetään OFA rottia (200 - 230 g). Eläimet β 39165 tapetaan mikroaaltosäteilytyksellä, joka on kohdistettu päähän (6 kW operointiteho 2450 Mhz säteilytys 1.7 s, Pueschner Mikrowellen-Energietecknik, Bremen). Aivot poistetaan leikellen Glowinski ja Iversen (1966) mukai-5 sesti ja säilytetään - 70 °C lämpötilassa analyysiin asti. Aivo-osat homogenisoidaan 0.1 M perkloorihapossa, joka sisältää ACh-d4 ja Ch(koliini)-d4 sisäiset deute-roidut standardit. Sentrifugoinnin jälkeen endogeeninen ACh ja Ch yhdessä niiden deuteroitujen muunnelmien 10 kanssa uutetaan dipikryyliamiinilla (2,2', 4,4’, 6,6'-heksanitrodifenyyliamiini) dikloorimetaanissa ioni-pareina. Ch-yksiköstä valmistetaan johdannaiset propio-nyylikloridilla ja saatu ACh ja propyylikoliinijohdannaisten seos demetyloidaan natriumbentseenitiolaatilla 15 ja analysoidaan massafragmentografisesti Jenden et ai. Anal. Biochem., 55, 438 - 448, (1973) mukaisesti.

25 μπιοΐ/kg p.o. yksittäinen annos kohottaa ACh konsentraatioita striatumissa, korteksissa ja hippokam-puksessa. Maksimaalinen vaikutus saavutetaan n. 30 min 20 jälkeen oraalisen annon ja vaikutus heikkenee seuraavan 3 - 4 h aikana. Korteksissa ja hippokampuksessa ACh tasot ovat yhä merkittävästi korkeampia 4 h kuluttua verrattuna kontrolleihin. Vaikutukset riippuvat annoksesta. Yhdisteen B vaikutus on merkittävästi heikompi 25 kuin rasemaatin C indusoima vaikutus, ja rasemaatin C vaikutus on merkittävästi heikompi kuin yhdisteen A indusoima vaikutus.

Lisäksi keksinnön mukaiset yhdisteet on havaittu hyvin siedettäviksi ja oraalisesti aktiivisiksi, 30 ja niillä on pitkä vaikutusaika, esim. edellä esitetyissä ja muissa standardikokeissa.

Tämän vuoksi keksinnön mukaiset yhdisteet ovat käyttökelpoisia hoidettaessa vanhuusiän dementiaa, Alzheimerin tautia, Huntingtonin koreaa, tardiivisia (hi-35 das) liikuntahäiriöitä, hyperkinesiaa (liikaliikunta), maniaa, akuutteja sekaannushäiriöitä, Downin syndroomaa ja Friedrichin atasiaa.

Il 9 89165

Indikoitu päiväannos on välillä n. 0.1 - n. 25 mg, esim. n. 0.1 - 5 mg, keksinnön mukaista yhdistettä, yhdessä kiinteän tai nestemäisen kantajan tai laimen-nusaineen kanssa.

5 Edellä olevan mukaisesti esillä oleva keksintö liittyy myös keksinnön mukaisen yhdisteen käyttöön farmaseuttisena aineena, esim. vanhuusiän dementian, Alzheimerin taudin, Huntingtonin korean, tardiivisten liikuntahäiriöiden, hyberkinesian, manian, akuuttien 10 sekaannustilojen, Downin syndrooman ja Friedrichin ataksian hoitoon.

Esillä oleva keksintö liittyy lisäksi farmaseuttiseen ainekokoomukseen, joka sisältää keksinnön mukaista yhdistettä yhdessä ainakin farmaseuttisen 15 kantajan tai laimennusaineen kanssa. Tällaiset aine-kokoomukset voidaan valmistaa konventionaaliseen tapaan .

Seuraavissa esimerkeissä lämpötilat ovat korjaamattomia ja ne ovat °C:na.

20 ESIMERKKI 1: (S)-N-etyyll-3-f(1-dimetyyliamino)etyyli 1-N-metyyli-fenyyli-karbamaatti 130 g (i)-N-etyyli-3-[(1-dimetyyliamino)-25 etyyli]-N-metyyli-fenyyli-karbamaattia ja 210 g (+)- di-0,0 '-p-toluoyyliviinihapon monohydraattia liuotetaan 1.3 1 metanoli/veteen (2 : 1) samalla kuumentaen. Jäähdytyksen jälkeen saostunut suola suodatetaan ja uudel-lenkiteytetään 3 kertaa metanoli/vedestä (2 : 1). (S)-30 enantiomeeri vapautetaan jakoerotuksella 1 N NaOH ja etteeriin. [α]20° = - 32.1 ° (c = 5 etanolissa).

Otsikon mukaisen yhdisteen vetytartraatti (etanolista) sulaa 123 - 125 °. [a]2D° = + 4.7 0 (c = 5 etanolissa).

35 Esillä oleva keksintö liittyy lisäksi kaavan 1' mukaisten fenyylikarbamaattien systeemiseen trans-dermaaliseen annosteluun, 10 8 9 1 65 o H /,

_ o-c-nC

5 I Nr2 4·,, '

C-nC

10 I XRS

ch3 jossa kaavassa 1' R1 on vety, alempi alkyyli, sykloheksyyli, allyyli tai 15 bentsyyli, R2 on vety, metyyli, etyyli tai propyyli, tai

Rx ja R2 muodostavat yhdessä typen kanssa, johon ne ovat liittyneet, morfolino- tai piperidino-radikaalin, R3 on vety tai alempi alkyyli, 20 Rj ja R5 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin tarkoittaa alempaa alkyylia; ja dialkyyliaminoalkyyliryhmä on meta-, orto- tai para-asemassa; vapaan emäksen tai farmaseuttisesti hyväksyttävän hap-poadditiosuolan muodossa.

25 Kaavan 1' mukaiset yhdisteet ja niiden far maseuttisesti hyväksyttävät happoadditiosuolat, kuin myös niiden valmistus ja niiden käyttö asetyylikoliini-esteraasi-inhibiittoreina on tunnettu edellä mainitusta eurooppalaisesta patenttihakemuksesta 193,926.

30 Kaavan 1' mukaisiin yhdisteisiin kuuluu esim.

edellä määritelty yhdiste A ja rasemaatti C.

Nyt on yllättäen havaittu, että kaavan I* mukaiset yhdisteet, vapaan emäksen tai farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditiosuolan muodossa, joista tässä 35 yhteydessä myöhemmin käytetään nimitystä yhdisteet, jotka on tarkoitettu annettavaksi keksinnön mukaisesti, omaavat odottamattoman hyvän ihopenetraation, kun ne li u 39165 annetaan ihon läpi (perkutaanisesti).

Yhdisteiden, jotka on tarkoitettu keksinnön mukaisesti annettavaksi, penetraatio ihon läpi voidaan havaita standardi in vitro- tai in vivo-kokeilla.

5 Eräs in vitro-koe on hyvin tunnettu diffusio- koe, mikä voidaan toteuttaa GB 2098865 A ja T. J. Franz julkaisussa, J. Invest. Dermatol. (1975) 64, 194 - 195, esitettyjen periaatteiden mukaisesti. Liuoksia, jotka sisältävät aktiivista ainetta leimaamattomassa tai 10 radloaktiivisesti leimatussa muodossa saatetaan yhdelle puolelle ehjän ihmisen ihon tai karvattoman rotan ihon eristettyyn osaan 2 cm2 alueelle. Toinen puoli ihoa on yhteydessä fysiologiseen suolaliuokseen. Aktiivisen aineen määrä suolaliuoksessa mitataan konventionaali-15 seen tapaan, esim. HPLC- tai spektrofotometristen menetelmien avulla, tai määrittämällä radioaktiivisuus.

Tässä kokeessa, käytettäessä rotan ihoa, havaittiin esim. seuraavat penetraationopeudet: 20 Edellä määritelty yhdiste A: 23.6 ± 14.9 %

Kaavan I mukainen yhdiste vapaan emäksen muodossa: 28.0 ± 8.2 %

Lisäksi on havaittu, että yhdisteiden, jotka on tarkoi-25 tettu keksinnön mukaisesti annettavaksi, transdermaali-nen antotapa indusoi pitkäaikaisen ja vakion asetyyli-koliiniesteraasiaktiivisuuden inhibition, joka on osoitettu standardikokeilla; matalalla alkuvaikutuksella, mikä on erityisen edullista näiden yhdisteiden siedet-30 tävyyden kannalta.

Esimerkiksi asetyylikoliinesteraasi-inhibitio rotan eri aivoalueissa ex vivo on mitattu yhdisteiden, jotka on tarkoitettu keksinnön mukaisesti annettaviksi, transdermaalisen annon jälkeen ja niitä on verrattu 35 inhibitioon, joka on saatu eri reittien kautta antamisen jälkeen.

Yhdisteet liuotetaan tai laimennetaan n-hep- n 39165 taanilla 1 tai 3 mg/20 μΐ konsentraatioon. Uros rotat (OFA-kanta, n. 250 g) ajellaan niska-alueelta ja liuos saatetaan mikropipetillä ihoon. Antokohta peitetään välittömästi käyttäen ohutta muovikalvoa ja laastaria.

5 Eläimet eivät ylety laastariin. Eri aikoina antamisesta eläimet tapetaan katkaisemalla kaula ja jäljellä oleva AChE aktiivisuus mitataan.

Edellä määritellyn yhdisteen A transdermaali-nen anto, esim., indusoi pitkäkestoisen, annoksesta 10 riippuvan AChE aktiivisuuden inhibition. Vastakkaisesti nopealle alkuvaikutukselle, joka ilmenee joko oraalisessa tai ihonsisäisessä annossa (maks. 15 ja 30 min vastaavasti), AChE inhibitio tapahtuu hitaasti tämän antoreitin jälkeen (maks. > 2 h) ollen vaikuttamatta 15 aivoalueen selektiiviseen AChE inhibitioon.

Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa 2. 24 h jälkeen transdermaalisen annon, AChE aktiivisuus on yhä inhiboitu sentraalisissa ja periferaalisissa alueissa. Vähän ajan kuluttua, oraalisesti annettu 20 yhdiste A ei vaikuta entsyymiin, kun taas s.c. annon jälkeen vain sydämessä oleva entsyymi on merkittävästi inhiboitu.

li 13 39 1 65

PO H CO O r>* CO f“H CM CO

cm m r*>* cnj <r to <r co vo

H »H H H H H

, +1+1+4 +4 +4 +4 +1+1+4 ^ k rtcvH O M N >jinr>

Cfl flj ·*· · t t * · · 2 h ^ o cinn rv cn uo co rt ^ r~· vt r- ro rv cm rt rv o o rvl O -* · : - ————--- co -» m ”4·

JS CO rt UO NON «OOIN

±3 ... ... ... -H -H

C θ' ΓΟ cvl rt fw CN ΙΛΝ rt

"5 rt. rt rt rt CS 00 VJ

S C -H +1 +1 -M -H -H -H +1 +1 CO rt C :S co rt LT O O O' cm ON ro o l~~ ro V ··· ··· ··· Q >1 O' N M rt rt vT ro rt m co CO O uo vo Ν' o O' co uo vo ·· rt rt e +i —~ 5 w \ fO CO en CM O CM CO CT* f-H o rt *! to ^ t—i * · * · · · · · · -ήτ} jj (/),-4 cin*i -<J- σν VO CM vO U J+ • » g 3 ££ ‘J | +4+4+4 4^4444 444444 r+ im >«. (Λ Ό Π VO CO H H Γ'·* n ϋ .□ h nwi vo o o n co J-j r3 CMDCO CM CO O CM CO O* £ W >< ^ o O σν M Ί m N r— co ro cm CD co ro co rt ... ... ... ·.

CN S CO m CO O CO CO NNN O O

(Ö O rt H rt o C " -H ♦» C» rt rt +» -H Ή -H -H +1 -H -H +1

$ *rt NN

* w k r-~ O' o cm/) n esi σ' o vt cm ID ·· t-t ... ... ... ..

►J dP to O' U0 rt N N « CO CM rt vT CN

P CO Ό 00 ro CO O' N a O' < ω_______

H 3 K

3 3 o o co cosrrt ηόο> m p 10 Dj ... ... ... rt Q,

rt g uo uo ao nuo n co i— σ> E

>5 rt rt nj3 H o -h -H -H +1 +1 -H -H -H -H G g^_cj +j CU rv >t non co vt σ> o Qjfp M Dj · · ... ... CO -H >v

rt; rt Ό U0 O CN CM rv CO rt CN ffiCO

lu CO VT 03 rt VO O' rt CO CN -H

W----

- J2 C

n Ό rv IN U0 CO CN O Ό CN rt

• - u ... ... ... B

«« U0 rt U0 CO rt CO CM rt U0 X rt CM X O Ό a) ro co jJ -H-H-H -H -H -H -H+l-H tO··

Z E O O

rt rt T CO O ΓΟ CM CO rt CO > O ... ... ... rt +1 +|

i*3 vo cm ro rt uo cn vo uo ro Q

co vr rv. cm vo ov »-J co cn Eno

----· Dj VO CN

G Ό VO VO VO VO VO VO VO VO jj n N

"a> I : r? ^rt ίί S js m _ to S bo rtc'a «j JS G <c x: x: § ^x: x: x: -5^x:x:x: 3 .. g 3 S >8 *3 5-3 Λ *3 o g|| : ·.: -ro in e e γ-ιε 2e ixjjjc ro Sg3·.1 [g =i uo Β3ιΓί ctJrt-5

.***'. 2 *5 O O VD IJOOVOM· £ COOOM >9*9 m S

,-i |HH ^_CM | O ^_CM M CM X X W PH

14 891 65

Siten uutena sovellutuksena esillä oleva keksintö liittyy farmaseuttisen ainekokoomuksen systeemiseen transdermaaliseen antoon, joka ainekokoomus sisältää kaavan 1' mukaisen yhdisteen vapaan emäksen 5 tai farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditiosuolan muodossa, yhdessä farmaseuttisen kantajan tai laimennus-aineen, joka on sopiva systeemiseen transdermaaliseen antoon, kanssa.

Eräässä lisäsovellutuksessa esillä oleva kek-10 sintö liittyy kaavan 1' mukaisen yhdisteen käyttöön vapaan emäksen tai farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditiosuolan muodossa aktiivisena aineena systeemiseen transdermaaliseen antoon sopivan farmaseuttisen ainekokoomuksen valmistuksessa.

15 Aktiiviset aineet voidaan antaa minä tahansa konventionaalisen nestemäisen tai kiinteän transdermaa-lisen farmaseuttisen ainekokoomuksen muodossa, esim. kuten on kuvattu julkaisuissa, Remington's Pharmaceutical Sciences 16. painos Mack; Sucker, Fuchs ja Spieser, 20 Pharmazeutische Technologie 1. painos, Springer ja GB 2098865 A tai DOS 3212053, joiden sisältö on yhdistetty tähän viitteeksi.

Sopivasti ainekokoomus on viskoosin nesteen, voiteen tai kiinteän säiliön tai matriisin muodossa. 25 Esimerkiksi aktiivinen aine dispergoidaan kauttaaltaan läpikotaisin geelistä tai kiinteästä polymeeristä, esim. eurooppalaisessa patenttihakemuksessa No. 155,229 kuvatusta hydrofiilisestä polymeeristä, valmistettuun kiinteään säiliöön tai matriisiin.

30 Aktiivinen aine voidaan yhdistää laastariin.

Ainekokoomukset transdermaalista antoa varten voivat sisältää n. 1 - n. 20 p-% kaavan 1’ mukaista aktiivista ainetta vapaan emäksen tai farmaseuttisesti hyväksyttävän happoadditiosuolan muodossa.

35 Farmaseuttisia ainekokoomuksia transdermaalis ta antoa varten voidaan käyttää samoihin indikaatioihin kuin oraalisesti tai suonensisäisesti annettavia. An- li is 89165 nettavan farmaseuttisesti aktiivisen aineen määrä riippuu yksilöllisesti farmaseuttisten ainekokoomusten lääkettä vapauttavista ominaisuuksista, lääkkeen penet-raationopeudesta, joka on havaittu in vitro- ja in 5 vivo-kokeilla, aktiivisen aineen tehosta, ihokontak-tialan koosta, kehon osasta, johon yksikkö kiinnitetään, ja vaaditusta vaikutuksen kestosta. Aktiivisen aineen määrä ja farmaseuttisen ainekokoomuksen ala jne. voidaan määrittää rutiinibiosaatavuuskokeilla vertaa-10 maila aktiivisten aineiden veritasoja aktiivista ainetta sisältävän farmaseuttisen ainekokoomuksen ehjään ihoon saattamisen jälkeen, sekä aktiivisen aineen veritasoja, jotka on havaittu farmakologisesti aktiivisen aineen terapeuttisesti tehokkaan annoksen oraalisen tai 15 suonensisäisen annon jälkeen.

Tavallisesti suun kautta annettavan lääkkeen annettuun päiväannokseen nähden sopivan lääkemäärän, joka yhdistetään keksintöön liittyvään transdermaali-seen ainekokoomukseen, valinta riippuu aktiivisen ai-20 neen farmakokineettisistä ominaisuuksista, joihin kuuluu ensimmäinen läpäisyvaikutus (first pass effect); lääkemäärä, joka voi absorboitua ihon läpi kyseessä olevasta matriisista annetulla antoalueella ja annettuna aikana; ja ajanjaksosta, jona ainekokoomus tullaan 25 antamaan. Siten lääkettä, jolla on suuri ensimmäinen läpäisyvaikutus, tarvitaan suhteellisen vähän transder-maalisessa ainekokoomuksessa oraaliseen päiväannokseen verrattuna, koska tällöin vältytään ensimmäiseltä lä-päisyvaikutukselta. Toisaalta tavallisesti matriisista 30 vapautuu ihon läpi maksimissaan vain n. 50 % lääkettä 3 päivän aikana.

Näiden farmaseuttisten ainekokoomusten, esim. lääkesäiliön tehokas kontaktiala iholla on yleisesti luokkaa n. 1-50 cm2, edullisesti 2-20 cm2, ja niitä 35 on tarkoitus käyttää 1-7 päivää, edullisesti 1-3 päivää.

Yhdiste A voidaan esim. antaa annoksina 10 mg 16 891 65 n. 10 cm2 laastarissa, joka kolmas päivä.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat esitettyä ainekokoomusta.

5 ESIMERKKI 2: Transdermaalisen ainekokoomuksen, joka sisältää hydrofiilistä polymeeriä, valmistus

Ainekokoomus 10 Kaavan 1' mukainen yhdiste, esim. yhdiste A 20 %

Hydrofiilinen polymeeri, esim. Eudragit E 100* 30 %

Ei turpoava akrylaattipolymeeri, esim. Durotack 280 - 2416** 44 %

Pehmennin, esim. Brij 97*** 6 % 15 * : Rekisteröity tavaramerkki, saatavissa Röhm'lta,

Darmstadt, Länsi-Saksa ** : Rekisteröity tavaramerkki, saatavissa Delft National Chemie Zutphen'lta, Hollanti 20 ***: Rekisteröity tavaramerkki, saatavissa Atlas

Chemie'lta, Länsi-Saksa

Komponentit lisätään asetoniin tai etanoliin tai muuhun sopivaan haihtuvaan orgaaniseen liuottimeen 25 ja sekoitetaan saaden viskoosia massaa. Massa levitetään aluminoidun polyesterifolion (paksuus 23 mikronia) päälle käyttäen tavanomaisia laitteita, aikaansaamaan märkänä 0.2 mm paksuisen kalvon. Kalvon annetaan kuivua huoneenlämpötilassa 4 - 6 h ajan. Tämän jälkeen alumii-30 nifolio leikataan alaltaan n. 10 cm2 kokoisiksi laastareiksi.

I:

Claims (2)

17 8 9 1 65

1. Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen (S)-N-etyyli-3-[(1-dimetyyliamino)etyyli]-N-metyyli-5 fenyylikarbamaatin valmistamiseksi/ jolla on kaava I, .OL-CH-, O-CO-N' c J · - 6Λ I VCH ch3 15 tai sen happoadditiosuolamuodon valmistamiseksi, tunnettu siitä, että menetelmässä enantiomeerit erotetaan vastaavasta rasemaatista ja saatu kaavan I mukainen yhdiste otetaan talteen vapaan emäksen tai happoadditiosuolan muodossa.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä (S)-N-etyyli-3-[(l-dimetyyliamino)etyyli]-N-metyyli-fenyylikarbamaatin vetytartraatin valmistamiseksi. ie 39165