FI89984B - Enstegsimmuntest foer bestaemning av antigenspecifika antikroppar hoerande till immunoglobulingruppen a, m, d eller e och medel daerfoer - Google Patents
Enstegsimmuntest foer bestaemning av antigenspecifika antikroppar hoerande till immunoglobulingruppen a, m, d eller e och medel daerfoer Download PDFInfo
- Publication number
- FI89984B FI89984B FI882356A FI882356A FI89984B FI 89984 B FI89984 B FI 89984B FI 882356 A FI882356 A FI 882356A FI 882356 A FI882356 A FI 882356A FI 89984 B FI89984 B FI 89984B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- antigen
- immunoglobulin
- antibodies
- solid phase
- labeled
- Prior art date
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 80
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 78
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 78
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 title 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 39
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 39
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 29
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 53
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 12
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 5
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims description 4
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims description 4
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 claims description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims description 2
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 claims description 2
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 claims description 2
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 claims description 2
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 claims description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 claims description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 2
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 claims description 2
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 10
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 229940043517 specific immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 229940098197 human immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 2
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M sodium periodate Chemical compound [Na+].[O-]I(=O)(=O)=O JQWHASGSAFIOCM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013026 undiluted sample Substances 0.000 description 2
- XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 6-chloro-2-n,2-n-diethylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound CCN(CC)C1=NC(N)=CC(Cl)=N1 XZIIFPSPUDAGJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 1
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 238000005497 microtitration Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000010915 one-step procedure Methods 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000012207 quantitative assay Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940035044 sorbitan monolaurate Drugs 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/962—Prevention or removal of interfering materials or reactants or other treatment to enhance results, e.g. determining or preventing nonspecific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/82—Hepatitis associated antigens and antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
89 984
Yksivaiheinen immuunitesti immunoglobuliiniryhmään A, M, D tai E kuuluvien antigeenispesifisten vasta-aineiden määrittämiseksi ja siihen soveltuva väline 5 Tämä keksintö koskee immuunikemiallista menetelmää vasta-aineiden osoittamiseksi ja määrittämiseksi, jotka vasta-aineet ovat spesifisiä määrätylle antigeenille ja kuuluvat johonkin immunoglobuliiniryhmään. Tämä menetelmä soveltuu immunoglobuliiniryhmään A, M, D tai E kuuluvien 10 vasta-aineiden hyvin herkkään ja spesifiseen osoittamiseen ja määrittämiseen.
Immunoglobuliinit ovat vasta-aineita, joita eliön immuunijärjestelmä muodostaa vierasaineita (antigeenejä) vastaan (esimerkiksi taudinaiheuttajien proteiinit, bak-15 teerien polysakkaridit, seerumiproteiinit, kudosproteiinit ja muut immunoglobuliinit). Immunoglobuliinimolekyyli koostuu yhdestä tai useammasta neljän polypeptidiketjun yhdistelmästä, joka koostuu kahdesta raskaasta ketjusta, joiden molekyylimassa on noin 53 000 daltonia ja kahdesta 20 kevyestä noin 22 000 daltonin ketjusta, jotka ketjut ovat disulfidisiltojen yhteensitomia.
Immunoglobuliinit jaetaan yleensä ryhmiin G, A, M, D ja E ja niistä käytetään vastaavasti merkintöjä IgG, IgA, IgM, IgD ja IgE. Nämä viisi immunoglobuliiniryhmää 25 eroavat toisistaan raskaiden ketjujen, joita kutsutaan gamma-, alfa-, myy-, delta- ja epsilonketjuiksi, antigee-nideterminantin suhteen; lisäksi IgG-, IgA- ja IgM-ryhmät jakautuvat immunoglobuliinialaryhmiin.
Immunoglobuliinit voidaan pilkkoa fragmenteiksi, 30 joissa antigeeniä sitova ominaisuus on tallella ja antigeenejä sitomattomiksi fragmenteiksi. Antigeeniä sitovia fragmentteja ovat esimerkiksi Fab-, Fab'- ja F(ab' ^-fragmentit. Fragmentteja, joilla ei ole antigeeniä sitovaa vaikutusta, ovat esimerkiksi Fc- ja Fc'-fragmentit.
35 Immunoglobuliinien pitoisuudet normaalista ihmis- ·; Q 9 ς 4
2 ' ' ° H
seerumissa ovat seuraavat (mg/ml): IgG 8 - 16, IgA 1,4 -4, IgM 0,5 - 2, IgD 0,0 - 0,4 ja IgE 0,000017 - 0,00045.
Ihmisseerumissa esiintyy määrällisesti eniten IgG-ryhmän immunoglobuliineja. IgM-ryhmän immunoglobuliineja 5 esiintyy sangen pian infektion jälkeen, mistä syystä niiden määrittäminen on merkityksellistä infektiosairauden varhaisen tunnistuksen tai akuutin infektion diagnosoinnin kannalta.
IgA-ryhmän immunoglobuliinit ovat toiseksi runsaim-10 min esiintyviä immunoglobuliineja ja tärkeimpiä erityksel-lisiä vasta-aineita.
Ryhmien IgD ja IgE immunoglobuliineja voidaan havaita kasvaneina pitoisuuksina tiettyjen patologisten prosessien yhteydessä; esimerkiksi IgE:llä on syöttösoluja 15 herkistäviä ominaisuuksia ja patologisesti merkityksellinen rooli monien allergisten reaktioiden yhteydessä. IgD-vasta-aineita esiintyy autoimmuunisairauksien yhteydessä. Antigeenispesifisten immunoglobuliinien, erityisesti tietyn ryhmän, määrittäminen on erityisen tärkeää tiettyjen 20 lois-, bakteeri- ja virussairauksien toteamiseksi, jolloin akuutit infektiot ovat erotettavissa parantuneista ja voidaan mahdollisesti tehdä prognooseja.
Immunoglobuliinien määrittämiseksi tunnetaan lukuisia immunologisia menetelmiä. Menetelmät immunoglobulii-25 nien jakamiseksi ryhmiin fysikaalisesti, esimerkiksi im-muunidiffuusio, immuunielektroforeesi ja tiheysgradient-tisentrifugointi, ovat työläitä, epätarkkoja ja häiriöalttiita.
Antigeenispesif isiä immunoglobuliine ja voidaan mää-30 rittää nk. suorilla immuunimääritysmenetelmillä. Niissä immobilisoidaan kiinteälle kantajalle immuunikomponenttia, jolla on sitoutumisaffiniteetti määritettävän vasta-aineryhmän suhteen, esimerkiksi ihmisen IgM:n μ-ketjun vastaisia vasta-aineita ja detektoidaan antigeenispesifinen im-35 munoglobuliinin osa joko leimatun antigeenin avulla tai 3 • '>984 leimaamattoman antigeenin ja antigeenispesifisen leimatun vasta-aineen yhdistelmänä. Kvantitatiivisen määrityksen kohteena on kiinteään faasiin sitoutunut leimatun immuuni-komponentin osa, joka on suoraan verrannollinen osoitetta-5 van vasta-aineen pitoisuuteen.
Leimaamiseen käytetään esimerkiksi fluoresoivia ja kromoforisia aineita tai radioisotooppeja, entsyymejä tai immuunikomponenteilla kuormitettuja hiukkasia, kuten erytrosyyttejä tai lateksihiukkasia; tapahtuneen reaktion half) väittäväksi tekemiseen voidaan käyttää myös käytetyn antigeenin biologista toimintaa, esimerkiksi hemolyysiä.
Tunnetun menetelmän eräänä haittapuolena on se, että tutkittavan immuuniglobuliiniryhmän ei-antigeenispe-sifinen immunoglobuliiniosa kilpailee antigeenispesifisen 15 osan kanssa kyseisistä kiinteällä faasilla olevista vasta-aineista (kompetitio). Siten voidaan saada näiden osien määräsuhteista riippuvalla tavalla erilaisia tuloksia, vaikka antigeenispesifisen vasta-aineosan määrä pysyisi muuttumattomana (ei-antigeenispesifisen immunoglobuliini-20 osan määrä voi vaihdella kertoimella 5 tai enemmän).
Kaikissa tähän mennessä kuvatuissa ja lainatuissa nk. suorissa ja epäsuorissa menetelmissä on oleellista, että kun näyte on saatettu reagoimaan (inkuboitu) kiinteällä kantajalla olevan immuunikomponentin kanssa ja en-25 nen reaktiota osoitusimmuunikomponentin kanssa, sitoutumaton materiaali poistetaan pesemällä. Tästä menetelmästä käytetään siksi nimitystä "kaksivaihemenetelmä".
Testi, jossa käytetään valmista kantajalle sidottua komponenttia, vaatii siten vähintään kolme reaktiovaihetta 30 (näyte, toinen immuunikomponentti, osoitusreaktio), joiden välissä on vähintään kaksi pesuvaihetta, jolloin kukin reaktiovaihe vaatii tietyn reaktioajan, niin että koko-naistestausaika on näiden aikojen summa.
Tehtävänä oli lyhentää ja yksinkertaistaa suoraa 35 testiä ja sulkea pois ei-antigeenispesifisten immunoglo- ^984 4 buliinien kilpailu antigeenispesifisten kanssa antigeeni-spesifisen vasta-aineosan luotettavan kvantitatiivisen määrittämisen mahdollistamiseksi.
Nyt on yllättävästi havaittu, että tämä on mahdol-5 lista saattamalla kantajalle sidottu immuunikomponentti, analysoitavaa ainetta sisältävä näyte ja leimattu osoitus-immuunikomponentti yhteen tekemättä pesua näytteen lisäyksen ja leimatun osoitusimmuunikomponentin lisäämisen välissä.
10 Tämä "yksivaihemenetelmä" tuli mahdolliseksi, kun onnistuttiin välttämään kaksi häiriömahdollisuutta:
Ensinnäkin täytyy välttää antigeenispesifisten IgG-vasta-aineiden vaikutus, niin etteivät ne enää reagoi tai reagoivat vain epäoleellisessa määrin antigeenien kanssa, 15 mikä ilmiö häiritsisi varsinaista osoitusmenettelyä. Tämä häiriö esitetään tärkeimpänä siksi, että määritettäessä immunoglobuliiniryhmiin IgA, IgM, IgE tai IgD kuuluvia antigeenispesifisiä vasta-aineita potilasnäytteistä on yleensä samanaikaisesti ja suurehkoina pitoisuuksina läsnä 20 antigeenispesifisiä igG-vasta-aineita.
Toiseksi täytyy estää reumatekijoiden (RF), ts. anti-IgG-vasta-aineiden, joita liittyy erilaisiin immunoglobuliiniryhmiin, aktiivisuus, sillä nämä voivat johtaa tuloksen vääristymiseen. Tämä vääristyminen on mahdollis-25 ta, koska RF:t sitoutuvat kiinteällä faasilla oleviin vasta-aineisiin ja RF:ien puolestaan sitoma antigeenispesifi-nen IgG sitoo antigeenejä, jolloin saadaan väärä positiivinen osoitusreaktio.
Nämä kaksi häiriömahdollisuutta voitiin sulkea pois 30 esimerkiksi lisäämällä näytteeseen (esimerkiksi seerumiin) anti(ihmis-IgG:n gammaketju) ("RF-Absorbens, Behringwerke AG) .
Keksintö koskee immuunikemiallista menetelmää nesteessä olevien immunoglobuliiniryhmään A, M, D tai E kuu-35 luvien antigeenispesifisten vasta-aineiden määrittämisek- 5 ' ' - · si, jossa menetelmässä kiinteä faasi, jolle on immobili-soitu tämän immunoglobuliiniryhmän vastaisia vasta-aineita tai tällaisen vasta-aineen fragmenttia, saatetaan kosketukseen tämän nesteen kanssa, jolloin tämä immunoglobu-5 liiniryhmä sitoutuu kiinteään faasiin ja saatetaan tämä kiinteä faasi kosketukseen merkkiainetta mahdollisesti sisältävän antigeenin ja, ellei antigeeni ole leimattu, leimatun vasta-aineen tai antigeenin vastaisen vasta-aineen leimatun fragmentin kanssa ja määritetään kiinteään 10 faasiin sitoutuneen merkkiaineen määrästä tämän johonkin mainituista immunoglobuliiniryhmistä kuuluvan, antigeenis-pesifisen vasta-aineen määrä. Menetelmälle on tunnusomaista, että kiinteä faasi on kosketuksessa samanaikaisesti määritettäviä vasta-aineita sisältävän nesteen kanssa ja 15 joko leimatun tai leimaamattoman antigeenin kanssa, jolloin aineena, joka estää immunoglobuliini G:n sitoutumisen kiinteään faasiin ja antigeenin mahdollisen sitoutumisen immunoglobuliini G:hen lisätään anti-ihmis-IgG:tä, aggre-goitua ihmis- tai eläin-IgGstä tai gamma-Fc-fragmenttia. 20 Ihmisen immunoglobuliini G:n gammaketjun vastaista vasta-ainetta [anti(ihmis-IgG:n gammaketju)], aggregoitua, ihmisen tai eläimen IgGstä tai gamma-Fc-fragmenttia, edullisesti anti(ihmis-IgG:n gammaketju) voidaan vaikutuksen voimistamiseksi käyttää myös yhdessä.
25 Tällainen aine, edullisesti anti(ihmis-IgG:n gam maket ju) (RF-Absorbens, Behringwerke AG) voidaan lisätä esimerkiksi näytteen laimentamiseen käytettävään puskuriin, edullisesti määrä, joka kompleksoi keskimäärin 15 mg/ml seerumissa olevaa IgGstä (laskettuna laimentamatto-30 masta näytteestä).
Tämä toimenpide mahdollistaa yksivaihemenetelmän, jolla näyte voidaan testata laimennusasteen ollessa 3-8-kertainen (esimerkiksi 1:700) verrattuna tunnettuun kak-sivaihemenetelmään (laimennusaste testissä 1:100 - 1:200). 35 Samanaikaisesti mainittu kilpailu suljetaan käytän- 6 9 9 9 S 4 nöllisesti katsoen kokonaan pois, mikä mahdollistaa oikean ja toistettavissa olevan kvantitatiivisen määrittämisen ja suuremman toteamisherkkyyden saavuttamisen (ks. taulukko 2).
5 Keksinnön mukaisen menetelmän suoritusmuoto, jossa käytetään leimattua antigeeniä, on edullinen.
Voidaan kuitenkin käyttää myös leimaamatonta antigeeniä ja tämän antigeenin vastaista leimattua vasta-ainetta tai tällaisen vasta-aineen leimattua fragmenttia.
10 Leimaamiseen käytetään esimerkiksi fluoresoivia ja kromoforisia aineita tai radioisotooppeja, entsyymejä tai immuunikomponenteilla kuormitettuja hiukkasia, kuten erytrosyyttejä tai lateksihiukkasia; tapahtuneen reaktion havaittavaksi tekemiseen voidaan käyttää myös käytetyn anti-15 geenin biologista toimintaa, esimerkiksi hemolyysiä.
Edullisesti käytetään entsyymiä.
Kiinteälle faasille immobilisoidaan edullisesti im-munoglobuliiniryhmän M vastaisia vasta-aineita tai tällaisten vasta-aineiden fragmentteja, joissa on säilynyt 20 reaktiivisuus näiden immunoglobuliinien kanssa.
Keksinnön mukaista menetelmää käytetään edullisesti vasta-aineiden määrittämiseen, jotka ovat hepatiitti B -ydinproteiinin, hepatiitti A -antigeenien, ihmisen immuu-nivajaus (HIV) -antigeenien, vihurirokko- tai sytomegalo-25 virusantigeenien tai Treponema pallidum tai Toxoplasma gondii -antigeenien vastaisia.
Keksintö koskee myös välinettä keksinnön mukaisen menetelmän toteuttamiseksi, joka koostuu vähintään kantajasta, jolle ihmisen jonkin immunoglobuliiniryhmän vastai-30 set spesifiset vasta-aineet sidotaan, leimatusta antigeenistä, joka on spesifinen tälle immunoglobuliinille ja reagenssit merkkiaineen osoittamiseksi tai määrittämiseksi. Keksinnön mukaisille välineille on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksissa esitetään.
35 Tällainen väline koostuu edullisesti vähintään kan- G G G Γ 4 η s s ^ tajasta, jolle ihmisen IgM:n suhteen spesifiset vasta-aineet sidotaan, antigeenistä, leimatuista antigeenispesi-fisistä vasta-aineista ja reagensseista merkkiaineen osoittamiseksi.
5 Edullinen on myös sellainen väline, joka koostuu yhdestä rakenneosasta, joka sisältää kaikki menetelmässä tarvittavat reagenssit kuivassa muodossa.
Kiinteäfaasikantajamateriaaliksi soveltuvat muovit, kuten polystyreeni, polyvinyylikloridi, polyamidi tai muut 10 synteettiset polymeerit, luonnon polymeerit, kuten selluloosa, samoin kuin luonnon polymeerien johdannaiset, kuten selluloosa-asetaatti tai nitroselluloosa sekä myös lasi, erityisesti lasikuidut.
Kantajat voivat olla helmien, sauvojen, putkien ja 15 mikromaljojen muodossa. Tasomaiset rakenteet, kuten paperiliuskat, levyt ja kalvot ovat samoin soveltuvia. Kantajan pinta voi olla vesiliuoksia läpäisevä tai läpäisemätön.
Edullisia kantajia ovat mikromaljät.
20 Keksinnön mukaiseen menetelmään soveltuva kiinteä faasi valmistetaan sitomalla vasta-ainevalmiste irrever-siibelisti kantajalle. Ilmausta "kiinteä faasi" käytetään tässä yhteydessä sekä itse kantajasta että kantajasta sille sidottuine immuunikemiallisine reagensseineen.
25 Tämän keksinnön hengen mukainen irreversiibeli si dos on esimerkiksi 1) adsorptioon perustuva sidos, joka ei katkea menetelmässä käytettävien aineiden, kuten leimattujen im-muunireagenssien, laimennus- tai puskuriliuosten vaikutuk- 30 sesta, 2) immuunikemiallisesti (affiniteetiltaan voimakkaat vasta-aineet) tai ei-immuunikemiallisesti sitoutuvien väliryhmien kautta muodostuva bioaffiniteettisidos, jolloin väliryhmä voi koostua biotiinista ja avidiinista tai 35 myös muista reseptori-ligandipareista, v! C C 4 8 ' - + 3) kovalenttinen suora sidos tai 4) kovalenttinen, kemiallisesti bifunktionaalisen väliryhmän kautta muodostuva sidos.
Kovalenttinen sidos on edullinen, kun käytetään 5 vettä läpäiseviä kantajia; adsorptiosidos on edullinen käytettäessä sekä vettä läpäiseviä että vettä läpäisemättömiä kantajia.
Erityisen edullinen on vasta-ainevalmisteiden suora adsorptiivinen sitominen gammasäteilyllä käsitellylle po-10 lystyreenikantajalle.
Vasta-aineiden leimaamiseen voidaan käyttää mono-klonaalisia tai polyklonaalisia vasta-aineita samoin kuin niiden antigeenejä sitovia fragmentteja, joita valmistetaan alan kirjallisuudessa kuvatuin menetelmin.
15 Leimattujen antigeenien valmistuksessa käytettävinä antigeeneinä tulevat kyseeseen perinteiset puhdistetut proteiinit, synteettiset peptidit tai geeniteknisesti valmistetut proteiinit, joiden valmistusta kuvataan alan kirjallisuudessa.
20 Leimaaminen tehdään menetelmillä, jotka ovat mai nittujen merkkiaineiden yhteydessä alan kirjallisuudessa kuvattuja menetelmiä.
Leimattaessa vasta-aineita peroksidaasientsyymillä voidaan käyttää perjodaattimenetelmää [J. Histochem. Cy-25 tochem. 22 (1974) 1084 - 1090] tai julkaisun J. Immunoas say 4 (1983) 209 - 327 mukaisella menetelmällä, jossa si-toutumiskumppani kytketään heterobifunktionaalisen rea-genssin avulla.
Kuvatun yksivaiheimmuunitestiä koskevan keksinnön 30 käyttömahdollisuudet ovat periaatteessa samat kuin edellä kuvattujen suorien ja epäsuorien monivaihetestien käyttötarkoitukset. Tämä uusi menetelmä eroaa edukseen niistä kolmessa suhteessa:
Analysoitavaa ainetta sisältävän näytteen ja lei-35 mattujen immuunireagenssien samanaikaisen inkuboinnin an- siosta jää pois yksi inkubointivaihe ja yksi pesutapahtu- ma, mikä yksinkertaistaa huomattavasti testin toteuttamis ta.
9 !3 9 9 8 4
Kuten jäljempänä olevista esimerkeistä on havaitta-5 vissa, saa yksivaihemenetelmä aikaan kokeen kokonaiskeston huomattavan lyhenemisen, millä on edellä mainitun edun, menetelmän helpon toteutettavuuden myös klinikkaolosuh-teissa, lisäksi suuri merkitys akuuttien infektioiden nopealle osoittamiselle.
10 Kolmanneksi tämän yksivaihemenetelmän avulla on mahdollista tutkia näytteitä voimakkaasti laimennettuina, mikä johtaa mahdollisen kilpailun eliminoitumiseen ja mahdollistaa siten luotettavan, toistettavissa olevan määrityksen antigeenispesifisten immunoglobuliinien toteamis-15 herkkyyden ollessa samalla parempi.
Seuraavassa esimerkissä esitetään keksinnön eräs suoritusmuoto, joka ei kuitenkaan rajoita keksintöä. Esimerkki
Toksoplasmaspesifisen immunoglobuliini M:n määrittäminen 20 ihmisseerumista A. Polyklonaalisen anti(ihmis-IgM):n valmistus
Vuohen anti(ihmis-IgM) valmistettiin teoksessa
Method of Enzymatic Analysis, Antigens and Antibodies, 3. p., voi. X, päätoimittaja Hans Ulrich Bergmeyer, 1986, s. 25 292 - 308 kuvatulla tavalla.
B. Toksoplasma-antigeenin valmistus
Toxoplasma grandii -loisia lisättiin hiirten vatsaontelossa kolmen vuorokauden ajan. Kun hiiret oli teurastettu, otettiin loiset talteen huuhtomalla vatsaontelot 30 fosfaattipuskuroidulla keittosuolaliuoksella, pH 7,2, pestiin tekemällä useita sedimentointeja sentrifugoimalla ja suspendoitiin uudelleen. Siten saatu suspensio ultraääni-käsiteltiin jäähdyttäen samalla, sentrifugoitiin ja käytettiin supernatanttia antigeeninä entsyymileimauksessa.
8 9 9 8 4 ίο C. Antigeenin entsyymileimaus
a) 20 mg peroksidaasia (POD) sekoitettiin 0,5 ml:aan fosfaattipuskuroitua keittosuolaliuosta (PBS), pH
7,0 ja tehtiin aktivointi lisäämällä 0,6 ml natriumperjo- 5 daattia. Kun seosta oli pidetty noin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa, poistettiin perjodaattiylimäärä kromatogra-fisesti (G25 Sephadex) ja otettiin talteen ruskeanvihreä eluaatti (aktivoitu POD).
b) Peroksidaasin kytkeminen antigeeniin 10 Kahteen massaosaan aktivoitua peroksidaasia lisät tiin 1 massaosa toksoplasma-antigeeniä keittosuola-karbo-naattipuskurissa, pH 9,5. Kun oli inkuboitu kaksi tuntia huoneen lämpötilassa, pelkistettiin muodostuneet Schiff-emäkset lisäämällä natriumboorihydridiä (1 mg/1 mg POD:-15 tä). Värillinen konjugaatti stabiloitiin lisäämällä 1 mg/ml fenolia ja 2 % naudan seerumialbumiinia. Testissä optimaalinen käyttölaimennus määritettiin shakkilautatit-rauksella, jossa mitattiin toksoplasma-IgM-positiivisia ja -negatiivisia seerumeja kohdassa E kuvatulla tavalla yksi-20 vaihetestissä käyttämällä erilaisia antigeeni-peroksidaa- sikonjugaattipitoisuuksia. Optimaaliseksi pitoisuudeksi valittiin pitoisuus, jolla positiivisten ja negatiivisten näytteiden antamien signaalien erotus oli suurimmillaan.
D. Polystyreenimikrotitrausmaljojen päällystys . 25 anti(ihmis-IgM):llä Säteilytetty jä polystyreenimikrotitrausmal jo ja (EP-julkaisu 0 061 167), joissa oli syvennystä kohden 100 μΐ anti(ihmis-IgM)-liuosta fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, pH 7,5, inkuboitiin useita tunteja huoneen lämpöti-30 lassa. Vasta-aineliuoksen optimaalinen pitoisuus määritet tiin ennalta tekemällä laimennussarja ja testaamalla nämä koepäällystykset. Sitten maljat imettiin tyhjiksi, pestiin fosfaattipuskuroidulla keittosuolaliuoksella, kuivattiin silikageelin avulla ja pakattiin vesi- ja ilmatiiviisti.
: ·· ' n c 4 11 E. Toksoplasma-IgM-vasta-aineiden määritys keksinnön mukaisella yksivaihemenetelmällä a) Seeruminäyte ja toksoplasma-IgM-positiivinen ja toksoplasma-IgM-negatiivinen vertailunäyte laimennet-5 tiin kukin suhteessa 1:350 0,3 M Tris-puskuriliuoksella (pH 7,5), joka sisälsi 5 ml/100 ml toksoplasmavasta-ainei-ta sisältämätöntä naudan seerumia, 0,1 ml/100 ml RTween 20 (polyetyleenisorbitaanimonolauraattia) ja ihmisen IgG:n (gammaketjun) vastaista vasta-ainetta pitoisuutena, joka 10 sitoisi 15 mg/ml IgGrtä laimentamattomasta näytteestä laskettuna; b) tätä liuosta laitettiin 50 μΐ kuhunkin päällystettyjen mikrotitrausmaljojen syvennykseen, johon oli ennalta laitettu 50 μΐ peroksidaasilla leimattua toksoplas- 15 ma-antigeeniä shakkilautatitrauksella ennalta määrättynä optimaalisena pitoisuutena samassa puskurissa; c) malja peitettiin ja inkuboitiin kaksi tuntia lämpötilassa 37 °C; d) poistettiin sitten sisältö imemällä ja maljat 20 pestiin kolmesti PBS:llä, joka sisälsi 0,1 ml/100 ml RTween 20; e) sitten lisättiin syvennystä kohden 100 μΐ kromo-geeniliuosta (o-fenyleenidiamiini-HCl) sitraatti-fosfaat-tipuskurissa (pH 5,5) ja inkuboitiin 30 minuuttia huoneen 25 lämpötilassa; f) sen jälkeen lisättiin syvennystä kohden 100 μΐ 1 N rikkihappoa entsymaatisen substraattireaktion pysäyttämiseksi ja tehtiin liuoksille fotometrinen määritys aallonpituudella 492 nm.
* ,:0984 12 g) Esimerkkejä saaduista tuloksista:
Taulukko 1
Milliekstinktio (mE 492 nm) 5 Voimakkaasti positiivinen kontrolli 1 080
Heikosti positiivinen kontrolli 314
Negatiivinen kontrolli 58
Positiivinen näyte 1 302
Negatiivinen näyte 104 10 Näytettä on pidettävä positiivisena, jos sen antama arvo on suurempi kuin negatiivisen vertailunäytteen eks-tinktio + 100 mE (esimerkissä 158 mE).
F. IgM-vasta-aineiden määritys tunnetulla kaksi- 15 vaihemenetelmällä Käytettiin samanlaista peroksidaasileimattua tokso-plasma-antigeeniä, jonka valmistusta kuvataan esimerkin kohdassa Cb ja samanlaisia mikromaljoja, joiden valmistusta kuvataan esimerkin kohdassa D.
20 a) Taulukossa 2 esitetyt seeruminäytteet laimennet tiin kukin suhteessa 1:200 0,3 M Tris-puskuriliuoksella (pH 7,5), joka sisälsi 5 ml/100 ml toksoplasmavastaaineis-ta vapaata naudan seerumia ja 0,1 ml/100 ml RTween 20 (po-lyoksietyleenisorbitaanimonolauraattia); - 25 b) tätä liuosta laitettiin 50 μΐ päällystetyn mik- romaljan kuhunkin syvennykseen; c) maljat peitettiin ja inkuboitiin yksi tunti lämpötilassa 37 °C; d) sisältö imettiin pois ja maljat pestiin kolmesti 30 PBS:llä, joka sisälsi 0,1 ml/100 ml RTween 20; e) sen jälkeen lisättiin 50 μΐ/syvennys peroksidaa-sileimattua toksoplasma-antigeeniä; f) peitettiin maljat uudestaan ja inkuboitiin kaksi tuntia lämpötilassa 37 °C; 35 g) imettiin sitten sisältö pois ja pestiin maljat 13 : ν' 9 c. 4 kolmesti PBSzllä, joka sisälsi 0,1 ml/100 ml RTween 20; h) lisättiin 100 μΐ/syvennys kromogeeniä (o-feny-leenidiamiini-HCl) sitraatti-fosfaattipuskurissa, pH 5,5 ja inkuboitiin 30 minuuttia huoneen lämpötilassa; 5 i) lisättiin sitten 100 μΐ/syvennys 1 N rikkihappoa entsymaattisen substraattireaktion pysäyttämiseksi ja tehtiin liuoksille fotometrinen mittaus aallonpituudella 492 nm.
Taulukossa 2 esitetyt seeruminäytteet käsiteltiin 10 myös kohdissa Ea - Ee kuvatun yksivaihemenetelmän mukaisesti.
Näiden kahden menetelmän tulokset esitetään taulukossa 2.
Taulukko 2 15
Milliekstinktio (mE nm)
Yksivaihemenetelmä Kaksivaihemenetelmä Testin kesto 2,0 h 3,5 h
Posit, vert.näyte 1 400 (1 600) 2 300 20 Neq. vert.näyte_88 ( 141)_136_
Potilasseerumit 1 204 (145) 155 2 498 (127) 133 3 495 (102) 159 4 499 (110) 123 25 5 466 (113) 118 6 466 (158) 202 7* 1 480 (428) 621
Mitatuista ekstinktioarvoista, jotka kuvaavat tok-30 soplasma-IgM-vasta-aineiden pitoisuutta seerumissa, on havaittavissa, että yksivaihemenetelmä antoi positiivisia tuloksia potilasseerumeista 1-6 (mE492 nm suurempi kuin 88 + 100), joista saatiin kaksivaihemenetelmällä negatiiviset tulokset (mE492 nin pienempi kuin 136 + 100).
35 RF-absorbenssin jättäminen pois yksivaiherneneteI - : : ' - P 4 14 mässä aiheuttaa useiden seerumien kohdalla vääriä negatiivisia arvoja, esimerkiksi seerumien 1-6 tapauksessa tai alentuneita arvoja, esimerkiksi seerumin 7 kohdalla, kuten suluissa olevista arvoista on nähtävissä.
5 Toksoplasma-IgM-vasta-aineiden osoittaminen yksi- vaihemenetelmällä on siten herkempi ja mainittujen ja muiden vasta-aineiden osoittaminen on toteutettavissa nopeammin ja yksinkertaisemmin, kuten näiden kahden menetelmän vaatiman työn, joka on nähtävissä kohdista E ja F, vertaa-10 minen osoittaa.
Claims (10)
1. Immunokemiallinen menetelmä nesteessä olevien immunoglobuliiniryhmään A, M, D tai E kuuluvien antigee- 5 nispesifisten vasta-aineiden määrittämiseksi, jossa menetelmässä kiinteä faasi, jolle on sidottu immunoglobulii-niryhmän vastaisia vasta-aineita tai tällaisen vastaaineen fragmenttia, saatetaan kosketukseen nesteen kanssa, jolloin immunoglobuliiniryhmä sitoutuu kiinteään faasiin ja 10 kiinteä faasi saatetaan kosketukseen joko merkkiaineella leimatun antigeenin kanssa tai leimaamattoman antigeenin ja antigeenin vastaisen leimatun vasta-aineen tai leimatun vasta-ainefragmentin kanssa, ja määritetään kiinteään faasiin sitoutuneen merkkiaineen määrästä johonkin mainituis-15 ta immunoglobuliiniryhmistä kuuluvan, antigeenispesifisen vasta-aineen määrä, tunnettu siitä, että kiinteä faasi on kosketuksessa samanaikaisesti määritettäviä vasta-aineita sisältävän nesteen kanssa ja joko leimatun tai leimaamattoman antigeenin kanssa, jolloin aineena, joka 20 estää immunoglobuliini G:n sitoutumisen kiinteään faasiin ja antigeenin mahdollisen sitoutumisen immunoglobuliini G:hen lisätään anti-ihmis-IgG:tä, aggregoitua ihmis- tai eläin-IgG:tä tai gamma-Fcfragmenttia.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n-25 n e t t u siitä, että käytetään leimattua antigeeniä.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään leimaamatonta antigeeniä ja tämän antigeenin vastaista leimattua vastaainetta tai tällaisen vasta-aineen leimattua fragmenttia. • 30
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että toinen vasta-aine tai molemmat vasta-aineet ovat monoklonaalisia vasta-aineita tai monoklo-naalisten vasta-aineiden fragmentteja.
5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, t u n-35 n e t t u siitä, että määritettävät vasta-aineet ovat ' A 16 sellaisia immunoglobuliiniryhmän M vasta-aineita, jotka ovat hepatiitti B-ydinproteiinin, hepatiitti A-antigee-nien, ihmisen immuunivajaus(HIV)antigeenien, vihurirokko-tai sytomegalovirusantigeenien tai Treponema pallidum tai 5 Toxoplasma gondii -proteiinien vastaisia.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että merkkiaine on entsyymi.
7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että merkkiaineena ovat erytrosyytit. 10
8. Väline patenttivaatimuksen 1 mukaisen menetelmän toteuttamiseksi, tunnettu siitä, että se koostuu vähintään kantajasta, jolle ihmis-IgM:n suhteen spesifiset vasta-aineet on sidottu, sekä leimatusta antigeenistä, jolle tämä IgM on spesifinen, reagensseista merkkiaineen 15 osoittamiseksi tai määrittämiseksi ja aineesta, joka estää immunoglobuliini G:n sitoutumisen kiinteään faasiin ja antigeenin mahdollisen sitoutumisen immunoglobuliini G:hen, ja joka aine on anti-ihmis-IgG:tä, aggregoitua ihmis- tai eläin-IgG:tä tai gamma-Fc-fragmenttia. 20
9. Väline patenttivaatimuksen 1 mukaisen menetelmän toteuttamiseksi, tunnettu siitä, että se koostuu vähintään kantajasta, jolle ihmis-IgM:n suhteen spesifiset vasta-aineet on sidottu, sekä antigeenistä, leimatusta antigeenispesifisestä vasta-aineesta, reagensseista merk-25 kiaineen osoittamiseksi ja aineesta, joka estää immunoglobuliini G:n sitoutumisen kiinteään faasiin ja antigeenin mahdollisen sitoutumisen immunoglobuliini G:hen, ja joka aine on anti-ihmis-IgG:tä, aggregoitua ihmis- tai eläin-IgG:tä tai gamma-Fc-fragmenttia. 30
10. Väline patenttivaatimuksen 1 mukaisen menetel män toteuttamiseksi, tunnettu siitä, että se koostuu yhdestä ainoasta rakenneosasta, joka sisältää kaikki menetelmässä tarvittavat reagenssit kuivassa muodossa. 17
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19873717401 DE3717401A1 (de) | 1987-05-23 | 1987-05-23 | Einschritt-immuntest zur bestimmung von antigen-spezifischen antikoerpern aus einer der immunglobulin-klassen a, m, d oder e und dazu geeignetes mittel |
| DE3717401 | 1987-05-23 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI882356A0 FI882356A0 (fi) | 1988-05-19 |
| FI882356A FI882356A (fi) | 1988-11-24 |
| FI89984B true FI89984B (fi) | 1993-08-31 |
| FI89984C FI89984C (fi) | 1993-12-10 |
Family
ID=6328247
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI882356A FI89984C (fi) | 1987-05-23 | 1988-05-19 | Enstegsimmuntest foer bestaemning av antigenspecifika antikroppar hoerande till immunoglobulingruppen a, m, d eller e och medel daerfoer |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6632682B1 (fi) |
| EP (1) | EP0292810B1 (fi) |
| JP (1) | JP2636331B2 (fi) |
| AT (1) | ATE93060T1 (fi) |
| AU (1) | AU619183B2 (fi) |
| CA (1) | CA1336063C (fi) |
| DE (2) | DE3717401A1 (fi) |
| DK (1) | DK173687B1 (fi) |
| ES (1) | ES2059434T3 (fi) |
| FI (1) | FI89984C (fi) |
| NO (1) | NO172264C (fi) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3837616A1 (de) * | 1988-11-05 | 1990-05-10 | Behringwerke Ag | Einschritt-immuntest zur bestimmung von antigen-spezifischen antikoerpern aller immunglobulin-klassen und dazu geeignetes mittel |
| FR2640143B1 (fr) * | 1988-12-13 | 1991-03-15 | Maes Ludo | Anticorps polymerises, diriges contre des immunoglobulines - leur utilisation dans des tests de diagnostic |
| JPH0325366A (ja) * | 1989-06-22 | 1991-02-04 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 特異抗体の測定法 |
| EP0456794A1 (en) * | 1989-12-01 | 1991-11-21 | PB Diagnostic Systems, Inc. | Immunoassay for antibodies to infectious disease agents |
| DE4040306A1 (de) * | 1990-12-17 | 1992-06-25 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung von antikoerpern gegen lipocortine |
| WO1992018865A1 (en) * | 1991-04-11 | 1992-10-29 | Cedars-Sinai Medical Center | Immunoassay for the detection of hiv specific igm |
| DE4439452A1 (de) * | 1994-11-04 | 1996-05-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Antikörperklassenspezifisches Entstörungsreagenz |
| DE19649389A1 (de) * | 1996-11-29 | 1998-06-04 | Boehringer Mannheim Gmbh | Antigenspezifischer IgM-Nachweis |
| US6303081B1 (en) * | 1998-03-30 | 2001-10-16 | Orasure Technologies, Inc. | Device for collection and assay of oral fluids |
| US8062908B2 (en) * | 1999-03-29 | 2011-11-22 | Orasure Technologies, Inc. | Device for collection and assay of oral fluids |
| WO1999050656A1 (en) * | 1998-03-30 | 1999-10-07 | Epitope, Inc. | Collection device for single step assay of oral fluids |
| JP4523156B2 (ja) * | 1998-06-24 | 2010-08-11 | アルク−アベル・アー／エス | 液体試料中における抗体の検出方法 |
| US20050069962A1 (en) | 2001-10-12 | 2005-03-31 | Archer Robert M | Antibody complexes and methods for immunolabeling |
| US8323903B2 (en) | 2001-10-12 | 2012-12-04 | Life Technologies Corporation | Antibody complexes and methods for immunolabeling |
| KR101491700B1 (ko) | 2007-08-23 | 2015-02-11 | 가부시키가이샤 엘에스아이 메디엔스 | 비특이반응 억제제 |
| KR101343035B1 (ko) * | 2008-12-22 | 2013-12-18 | 삼성전자 주식회사 | 제1수용체, 차단물질 및 제2수용체가 고정화된 고체 기판을포함하는 표적물질을 분석하기 위한 물품 및 그 용도 |
| WO2011074965A1 (en) * | 2009-12-17 | 2011-06-23 | Stichting Sanquin Bloedvoorziening | Methods and means for counteracting an activity of an fc domain |
| US10260111B1 (en) | 2014-01-20 | 2019-04-16 | Brett Eric Etchebarne | Method of detecting sepsis-related microorganisms and detecting antibiotic-resistant sepsis-related microorganisms in a fluid sample |
| EP3853612A4 (en) | 2018-09-18 | 2021-10-27 | Siemens Healthcare Diagnostics, Inc. | ZIKA VIRUS IMMUNOLOGICAL ASSAY METHODS AND REAGENTS |
| FR3110245A1 (fr) * | 2019-05-16 | 2021-11-19 | Universite Jean Monnet Saint Etienne | Procede de detection de pneumocoques |
| CN111077323A (zh) * | 2020-01-12 | 2020-04-28 | 天津市宝坻区人民医院 | 消除胰岛素自身抗体干扰的胰岛素测定试剂盒 |
Family Cites Families (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4130634A (en) * | 1974-03-15 | 1978-12-19 | University Of Illinois Foundation | Method for detecting and quantifying antigens |
| DE2643208C2 (de) * | 1976-09-25 | 1985-09-05 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Immunologisches Bestimmungsverfahren |
| US4273756A (en) * | 1978-07-28 | 1981-06-16 | Abbott Laboratories | Immunoassay for class specific antibodies |
| EP0008473B1 (en) * | 1978-08-24 | 1983-06-01 | Akzo N.V. | Method for the detection and/or determination of an antigen specific immunoglobulin, immuno-reagents to be used in said method and test kit for said determination |
| US4292403A (en) * | 1978-08-24 | 1981-09-29 | Akzona Incorporated | Detection and/or determination of IgM, IgA, IgD and IgE immunoglobulins |
| DE2930706A1 (de) * | 1979-07-28 | 1981-02-05 | Medac Klinische Spezialpraep | Verfahren zum nachweis von erregerspezifischen antikoerpern |
| US4486530A (en) * | 1980-08-04 | 1984-12-04 | Hybritech Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| DE3111474A1 (de) | 1981-03-24 | 1982-10-07 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | "mittel zur immunologischen diagnose sowie verfahren zu seiner herstellung" |
| DE3266967D1 (en) * | 1982-01-05 | 1985-11-21 | Int Inst Cellular Molecul Path | Method of immunoassay |
| US4434227A (en) * | 1982-02-08 | 1984-02-28 | Abbott Laboratories | Immunoassay for class specific immunoglobulin antibodies |
| DE3206729A1 (de) * | 1982-02-25 | 1983-09-01 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Immunologisches agglutinationsverfahren |
| US4477576A (en) * | 1982-07-26 | 1984-10-16 | Mex Research Associates | Antigen assay method and kit |
| FR2534030A1 (fr) * | 1982-10-01 | 1984-04-06 | Pasteur Institut | Procede de detection et de dosage d'une substance biologique par erythroadsorption |
| US4663277A (en) * | 1983-05-20 | 1987-05-05 | Profile Diagnostic Sciences Inc. | Virus detection method and materials |
| JPS60256057A (ja) * | 1984-06-01 | 1985-12-17 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | 免疫学的測定法 |
| JPS61942A (ja) * | 1984-06-14 | 1986-01-06 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 光情報記録媒体 |
| BE901567A (fr) * | 1985-01-24 | 1985-05-17 | Inst Internat De Pathologie Ce | Procede de dosage immunologique d'anticorps de diverses classes dans un echantillon liquide. |
| EP0189389B1 (fr) * | 1985-01-24 | 1989-04-05 | Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire | Procédé de dosage immunologique d'anticorps de diverses classes dans un échantillon liquide |
| IL80129A0 (en) * | 1986-09-23 | 1986-12-31 | Savyon Diagnostics Ltd | Method for the determination of igm and iga immunoglobulins and reagents therefor |
| US4962023A (en) * | 1987-06-22 | 1990-10-09 | Louisiana State University, Agricultural And Mechanical College | Single incubation immuno sorbent assay method using particle labels to detect test antigen specific antibodies in presence of other antibodies |
-
1987
- 1987-05-23 DE DE19873717401 patent/DE3717401A1/de not_active Withdrawn
-
1988
- 1988-05-13 AT AT88107704T patent/ATE93060T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-05-13 ES ES88107704T patent/ES2059434T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-13 DE DE8888107704T patent/DE3883073D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-13 EP EP88107704A patent/EP0292810B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-05-19 FI FI882356A patent/FI89984C/fi not_active IP Right Cessation
- 1988-05-20 NO NO882204A patent/NO172264C/no unknown
- 1988-05-20 JP JP63122214A patent/JP2636331B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-20 DK DK198802775A patent/DK173687B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-05-20 CA CA000567380A patent/CA1336063C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-05-20 AU AU16485/88A patent/AU619183B2/en not_active Ceased
-
1995
- 1995-05-22 US US08/445,584 patent/US6632682B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE93060T1 (de) | 1993-08-15 |
| DK277588A (da) | 1988-11-24 |
| JP2636331B2 (ja) | 1997-07-30 |
| DK173687B1 (da) | 2001-06-25 |
| JPH01118769A (ja) | 1989-05-11 |
| NO172264B (no) | 1993-03-15 |
| FI89984C (fi) | 1993-12-10 |
| ES2059434T3 (es) | 1994-11-16 |
| DE3717401A1 (de) | 1988-12-08 |
| DK277588D0 (da) | 1988-05-20 |
| US6632682B1 (en) | 2003-10-14 |
| DE3883073D1 (de) | 1993-09-16 |
| NO882204D0 (no) | 1988-05-20 |
| NO172264C (no) | 1993-06-23 |
| AU619183B2 (en) | 1992-01-23 |
| FI882356A (fi) | 1988-11-24 |
| EP0292810A3 (en) | 1989-10-11 |
| EP0292810A2 (de) | 1988-11-30 |
| AU1648588A (en) | 1989-11-23 |
| EP0292810B1 (de) | 1993-08-11 |
| FI882356A0 (fi) | 1988-05-19 |
| NO882204L (no) | 1988-11-24 |
| CA1336063C (en) | 1995-06-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI89984B (fi) | Enstegsimmuntest foer bestaemning av antigenspecifika antikroppar hoerande till immunoglobulingruppen a, m, d eller e och medel daerfoer | |
| CA1111346A (en) | Assay of antibodies of double surface reagent in presence of interfering materials | |
| Yolken | Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA): a practical tool for rapid diagnosis of viruses and other infectious agents. | |
| US4292403A (en) | Detection and/or determination of IgM, IgA, IgD and IgE immunoglobulins | |
| US6489129B1 (en) | Antigen-specific IgM detection | |
| JP3330604B2 (ja) | 固相免疫学的検定法 | |
| JP2599058B2 (ja) | クラス特異的な免疫グロブリン抗体の免疫分析法 | |
| JPS6367661B2 (fi) | ||
| GB2026691A (en) | Determination of class-specific antibody | |
| KR20000057316A (ko) | 항원-특이적 면역글로불린 지 검출방법 | |
| EP0722087B1 (en) | Measurement system using whole blood | |
| JPH0346561A (ja) | 分析物検出のための方法、試薬及び試験ストリップ | |
| AU619019B2 (en) | An article for performing immunological assays utilizing organic dyes and methods for producing and utilizing same | |
| CA2008100A1 (en) | Method for the determination of immunologically detectable substance | |
| KR920005964B1 (ko) | 항원에 대해 특이적인 종류의 항체 측정 방법 및 이 방법을 실행하기 위한 시약 | |
| CA1334825C (en) | Solid phase indicator red blood cells and method | |
| JPH01209370A (ja) | 免疫活性物質の測定法及び測定試薬 | |
| JPH0421819B2 (fi) | ||
| EP0304238A2 (en) | Method for detecting and confirming the presence of antibodies | |
| EP0762123A1 (en) | Immunoassay device and immunoassay method using the same | |
| JP2972241B2 (ja) | 全イムノグロブリンクラスの抗原特異的抗体を測定するための１段階イムノアツセイ | |
| JPH10319017A (ja) | 蛍光エネルギー転移を利用した物質の測定方法およびそのための試薬 | |
| AU645970B2 (en) | A method for the determination of antibodies against organisms causing infectious diseases in body fluids, agents for this purpose and the use thereof in this method | |
| CA2167931A1 (en) | Hydrazine derivatized cells | |
| CA2172840C (en) | Measuring method using whole blood sample |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| PC | Transfer of assignment of patent |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH |
|
| FG | Patent granted |
Owner name: DADE BEHRING MARBURG GMBH |
|
| MA | Patent expired |