FI84272B - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara 4-aminoandrostenderivat. - Google Patents

Description

1 84272

Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten 4-amino-androsteenijohdannaisten valmistamiseksi

Keksintö koskee uusien kaavan I mukaisten 4-amino-5 androsteenidionijohdannaisten ja niiden isomeerien ja farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistusta,

rrS

!0 _' (I) nh2 15 jossa kaavassa symboli --- merkitsee, että (x) ja (y) toisistaan riippumatta ovat joko yksinkertainen sidos tai kaksoissidos. Näillä yhdisteillä on aromitaasia inhiboiva vaikutus.

Jäljempänä esitetyissä kaavoissa katkoviiva (''''') 20 merkitsee sitä, että substituentti on a-konfiguraatiossa, eli renkaan tason alapuolella; kiilamainen viiva («·) merkitsee, että substituentti on β-konfiguraatiossa, eli renkaan tason yläpuolella; ja aaltoviiva (αλ/l0) merkitsee, että substituentti voi olla α-konfiguraatiossa tai β-kon-25 figuraatiossa tai molemmissa. Niinpä kun kaavassa on substituentti aaltoviivan kanssa, kaava voi esittää yhdistettä, jossa substituentti on ainoastaan a-konfiguraatiossa tai ainoastaan β-konfiguraatiossa, tai kaava voi esittää seosta, jossa on sekä yhdisteitä, joissa substituentti on 30 α-konfiguraatiossa, että yhdisteitä, joissa substituentti on β-konfiguraatiossa.

Edullisia kaavan (I) mukaisten yhdisteiden suoloja ovat suolat farmaseuttisesti hyväksyttävien happojen kanssa, sekä epäorgaanisten happojen, kuten esim. kloorive-35 ty-, rikki- tai fosforihapon, että orgaanisten happojen, 2 84272 kuten esim. sitruuna-, fumaari-, maleiini-, maali-, askor-biini-, viini-, bentsoe-, etikka-, fenyylietikka-, syk-loheksyylietikka-, 3-sykloheksyylipropioni-, metaanisulfo-ni-, etaanisulfoni-, bentseenisulfoni, p-tolueenisulfoni-5 tai p-nitrobentseenisulfonihapon, kanssa.

Yhdisteryhmä käsittää myös kvaternääriset ammonium-suolat ja hydroksidit, kuten kvaternääriset alkyyli-, esim. metyyli-, etyyli- tai setyyliammoniumsuolat, jodi-dit, bromidit, kloridit ja hydroksidit.

10 Esimerkkejä erityisen edullisista kaavan I mukai sista yhdisteistä ovat: 4-aminoandrost-4-eeni-3,17-dioni; 4-aminoandrosta-4,6-dieeni-3,17-dioni; 4-aminoandrosta-l,4,6-trieeni-3,17-dioni; 15 ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat.

Kaavan I mukaisia yhdisteitä ja niiden isomeerejä ja farmaseuttisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan valmistaa siten, että A) yhdiste, jonka kaava on 20 0 ? 25 0===^^

L

(II) (Ha) joissa L on poistuva ryhmä, joka on korvattavissa nukleo-30 tiilisellä substituutiolla, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on M - N3 (III) jossa M on alkalimetalli- tai ammoniumkationi tai tri-35 Ci-C6-alkyylisilyyliryhmä, jolloin saadaan kaavan (I) mu- 3 84272 kainen yhdiste, jossa (x) on yksinkertainen sidos ja (y) on kaksoissidos, tai B) yhdiste, jonka kaava on 5 0 (IV) io ^ t

L

jossa L tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) on yksinker-15 täinen sidos ja (y) on kaksoissidos, tai C) yhdiste, jonka kaava on 0 20 \ <Ia) N3 pyrolysoidaan, jolloin saadaan kaavion (I) mukainen yh-25 diste, jossa (x) on yksinkertainen sidos ja (y) on kaksoissidos; tai D) yhdiste, jonka kaava on 0 30 (ib) N3 35 4 84272 pelkistetään; ja haluttaessa kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) on yksinkertainen sidos ja (y) on kaksoissidos, pelkistetään jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) ja 5 (y) ovat molemmat yksinkertaisia sidoksia, ja/tai halut taessa kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) on yksinkertainen sidos, hapetetaan, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) on kaksoissidos, ja/tai haluttaessa kaavan (I) mukainen yhdiste muutetaan toiseksi 10 kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi ja/tai haluttaessa kaa van (I) mukainen yhdiste muutetaan suolaksi tai kaavan I mukaisen yhdisteen suola muutetaan vapaaksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi ja/tai haluttaessa kaavan (I) mukaisten isomeerien seos jaetaan yksittäisiksi isomeereik-15 seen.

Poistuva ryhmä L voi olla halogeeniatomi tai alko holin reaktiivisen esterin jäännös, joko sulfonihappoesterin tai karboksyylihappoesterin.

Kun L on halogeeni, se on edullisesti jodi, bromi 20 tai kloori.

Kun L on yllä määritelty esteri jäännös, se on edullisesti ryhmä R7S02-0-, jossa R7 on metyyli, trifluorimetyy-li, p-tolyyli tai p-nitrofenyyli, tai ryhmä R8-C00-, jossa Ra on metyyli, trifluorimetyyli tai p-nitrofenyyli.

25 Kun M kaavan (III) mukaisessa yhdisteessä on alka- limetallikationi, se on edullisesti natrium- tai litium-kationi .

Kun M on tri-C^-Cg-alkyylisilyyliryhmä, se on edullisesti trimetyylisilyyli tai dimetyyli-tert-butyylisilyy-30 li.

Niinpä edullisia kaavan (III) mukaisia yhdisteitä ovat natriumatsidi, litiumatsidi, ammoniumatsidi, trime-tyylisilyyliatsidi ja dimetyyli-tert-butyylisilyyliatsidi.

Reaktio kaavan (II) tai (Ha) mukaisen yhdisteen ja 35 kaavan (III) mukaisen yhdisteen välillä suoritetaan edul- 5 84272 lisesti orgaanisessa liuottimessa, kuten esimerkiksi N,N-dimetyyliformamidissa. N,N-dimetyyliasetamidissa tai dime-tyylisulfoksidissa; jonkin verran vettä tai vesipitoista alkoholiliuosta, esim. metanoli- tai etanoliliuosta, voi-5 daan lisätä haluttaessa lisäämään kaavan (III) mukaisen atsidin liukoisuutta.

Kun reaktio suoritetaan voimakkaammin vaikuttavissa olosuhteissa, esimerkiksi korkeammassa lämpötilassa, esim. välillä noin 60-150°C, ja käyttäen pitempiä reaktioaikoja, 10 esim. 30 minuutista useisiin tunteihin, saadaan kaavion (I) mukaista yhdistettä, jossa (x) on yksinkertainen sidos ja (y) on kaksoissidos.

Reaktio kaavion (IV) mukaisen yhdisteen ja kaavion (III) mukaisen yhdisteen välillä suoritetaan analogisesti 15 yllä kuvatun kaavion (II), (Ha) ja (III) mukaisten yhdisteiden välisen reaktion kanssa.

Menetelmänvaihtoehdon C) mukainen pyrolyysi voidaan suorittaa kuumentamalla lämpötilassa välillä 100-150°C muutamasta minuutista useisiin tunteihin sopivassa väliai-20 neessa kuten esimerkiksi N,N-dimetyyliformamidissa, N,N-dimetyyliasetamidissa tai dimetyylisulfoksidissa, tai niiden vesipitoisissa seoksissa, heikon emäksen kuten esim. NaN3:n, LiN3:n, trietyyliamiinin, kollidiinin tai vastaavan läsnäollessa.

25 Menetelmävaihtoehdossa D) käytettäviä sopivia pel- kistimiä ovat esim. propaani-1,3-ditioli trietyyliamiinis-sa [Tetr. Lett. 39, 3633 (1978)], ditiolitreitoli vesipitoisissa liuoksissa, merkaptoetikkahappo ja trietyyliamii-ni. Pelkistys voidan myös suorittaa katalyyttisesti, esim. 30 palladiumkatalyyteillä.

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa (x) on yksinkertainen sidos ja (y) on kaksoissidos, pelkistys vastaavaksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi, jossa (x) ja (y) molemmat ovat yksinkertaisia sidoksia, voidaan suorittaa 35 tunnettujen menetelmien mukaisesti, esimerkiksi litiumilla 6 84272 ja ammoniakilla vedettömässä liuottimessa kuten esim. di-etyylieetterissä, dioksaanissa tai tetrahydrofuraanissa, lämpötilassa välillä noin -70...-40°C menetelmällä, jonka ovat kuvanneet J.A. Campbell ja J.C. Babcock, J. Am. Chem.

5 Soc. 81, 4069 (1959).

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen, jossa (x) on yksinkertainen sidos, hapetus vastaavaksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi, jossa (x) on kaksoissidos, voidaan suorittaa millä tahansa sopivalla hapetusaineella; esimerkiksi 2,3-10 dikloori-5,6-disyanobentsokinonia (DDQ) voidaan käyttää vedettömässä inertissä liuottimessa kuten esim. bentsee-nissä, palautusjäähdytyslämpötilassa, tai vaihtoehtoisesti voidaan myös käyttää seleenidioksidia tavanomaisten menetelmien mukaisesti.

15 Tavanomaisia menetelmiä voidaan käyttää valmistet taessa kaavan (I) mukaisesta yhdisteestä suola ja valmistettaessa vapaa kaavan (I) mukainen yhdiste suolasta, ja tavanomaisia menetelmiä, kuten esim. frakiokiteytetystä ja kromatografiaa voidaan käyttää erotettaessa kaavan (I) mu-20 kaisten isomeerien seos yksittäisiksi isomeereiksi.

Kaavan (II) mukaista yhdistettä, jossa poistuva ryhmä L on halogeeniatomi, voidaan valmistaa halogenoimal-la kaavan (VII) mukainen yhdiste ' ,οό* ~ 30

Halogenointi voidaan suorittaa tunnetulla tavalla, esimerkiksi käyttäen tionyyli- tai sulfonyylikloridia ha-logenoivana aineena ja toimien esim. pyridiinissä lämpötilassa välillä noin 0-50°C, seuraten menetelmää, jonka ovat 35 kuvanneet N. Sugimoto et ai., Chem. Pharm. Bull. (Tokio) 7 84272 10, 427 (1962).

Kaavan (II) mukaista yhdistettä, jossa poistuva ryhmä L on alkoholin reaktiivisen esterin tähde, voidaan valmistaa esteröimällä yhdiste, jonka kaava on 5 o f(Vili! 10 !i halutulla sulfoni tai karboksyylihapolla, esim. kaavan R7S03H mukaisella sulfonihapolla tai kaavan R8C00H mukaisella karboksyylihapolla, joissa R7 ja R8 ovat yllä määriteltyjä tai edullisesti kyseisten happojen reaktiivisella 15 johdannaisella, erityisesti esim. vastaavalla halogenidil- la, edullisesti kloridilla, tai anhydridillä.

Esteröintireaktio voidaan suorittaa käyttäen tavallisia menetelmiä, joita on kuvattu orgaanisessa kemiassa tämän tyyppiselle reaktiolle seuraten tavanomaisia raene-20 telmiä.

Kaavan (Ha) mukaista yhdistettä voidaan valmistaa epoksoimalla vastaavan kaavan (VII) mukainen yhdiste.

Epoksointi voidaan suorittaa käsittelemällä sopivalla hapettavalla aineella, edullisesti väkevällä esim. 25 36 % H202:lla, alkoholisessa, esim. metanolisessa tai eta- nolisessa, alkalimetalli-, esim. natrium- tai kalium-hydr-oksidiliuoksessa. Reaktio-olosuhteita, jotka ovat alan ammattimiehelle tuttuja ja joita on paljon kuvattu orgaanisessa kemiassa, voidaan seurata.

30 Vaihtoehtoinen tapa valmistaa kaavan (I) mukaista yhdistettä, jossa L on halogeeni, on käsitellä kaavan (Ha) mukaista yhdistettä halogeenivetyllä, esim. HClrlla tai HBr:lla. Reaktio voidaan suorittaa tunnettujen menetelmien mukaisesti, esimerkiksi liuottimessa, joka voi 35 olla kloroformi, dikloorimetaani, tetrakloorimetaani, di- 8 84272 kloorietaani tai jääetikkahappo, huoneen lämpötilassa, seuraten menetelmää, jonka ovat kuvanneet B. Camerini et ai., Il Farmaco ed. Sei. 11, 586 (1956).

Kaavan (IV) mukaista yhdistettä, jossa L on halo-5 geeni, voidaan valmistaa halogenoimalla kaavan (IX) mukaista yhdistettä tunnettujen menetelmien mukaisesti, esimerkiksi käsittele-15 mällä N-halosukkinimidillä tai asetamidilla, esim. N-bro-misukkinimidillä tai N-bromiasetamidilla, halogenoidussa orgaanisessa liuottimessa kuten esim. hiilitetrakloridis-sa, seuraten menetelmää, jonka ovat kuvanneet Djerassi et ai. J. Am. Chem. Soc. 72, 4534 (1950).

20 Kaavan (IV) mukaiset yhdisteet, joissa L on alkoho lin reaktiivisen esterin jäännös, joka on yllä määritelty, ovat tunnettuja yhdisteitä, tai niitä voidaan valmistaa tunnetuilla menetelmillä tunnetuista yhdisteistä.

Kaavojen (III), (VII), (VIII) ja (IX) mukaiset yh-25 disteet ovat tunnettuja yhdisteitä tai niitä voidaan valmistaa tunnetuilla menetelmillä tunnetuista yhdisteistä.

Erityisesti esimerkiksi kaavan (VIII) mukaista yhdistettä voidaan valmistaa seuraamalla menetelmää, jonka ovat kuvanneet B. Camerino et ai.. Il Farmaco 7, 19 30 (1956).

Kaavan I mukaiset yhdisteet ovat endogeenisten and-rogeenien biotransformaation inhibiittoreita, eli ne ovat steroidisen aromataasin inhibiittoreita.

Aromataasi (estrogeenin syntetaasi) on entsyymi, 35 joka vastaa viimeisestä vaiheesta estrogeenien biosyntee- 9 84272 sissä: androgeenien konversiosta estrogeeneiksi, esim.

androsteenidionista ja testosteronista vastaavasti estro-niksi ja estradioliksi.

Aromataasi on mikrosomaalinen P450-entsyymikomp-5 leksi, joka toimii androgeenisella substraatilla.

Koska aromataasin vaikutuksesta syntyneet tuotteet, eli estrogeenit, ovat vastuussa hormoneista riippuvien kasvainten kasvusta, kaavan I mukaisilla aromataasia inhiboivilla yhdisteillä voi olla käyttöä hoidettaessa kysei-10 siä kasvaimia.

Yllä esitetyn perusteella kaavan mukaiset yhdis teet voivat olla käyttökelpoisia vaihtoehtona umpieritys-rauhasen poistolle, esim. munasarjojen, aivolisäkkeen tai lisäkilpisrauhasten poistolle, hoidettaessa pitkälle 15 edenneitä hormoneista riippuvia kasvaimia, erityisesti rinta-, haima-, kohtu- ja munasarjasyöpiä, erityisesti rintasyöpää.

Kaavan (I) mukaisille aromataasin inhibiittoreille voi löytyä käyttöä myös syntyvyyden säännöstelyssä: estro-20 geenipitoisuuksien väheneminen in vivo johtaa sukurauha- sia inhiboivaan vaikutukseen ja riittämättömään kohdun kehittymiseen; aromataasin inhibiittorit voivat samalla olla kiinnittymisen estäjiä. Eräs kaavan I mukaisten yhdisteiden käyttö on hoidettaessa eturauhasen hypertrofiaa tai 25 hyperplasiaa, jotka johtuvat liiallisesta estrogeenin tuotannosta muuttaen estrogeeni/antrogeeni-suhdetta suuremmaksi .

Edelleen kaavan I mukaisia yhdisteitä, jotka vähentävät estradiolin tuotantoa, voidaan käyttää hoidettaessa 30 miesten hedelmällisyyshäiriöitä (Drugs 28:263, 1984). On nimittäin tunnettua, että estradiolilla on osuutensa siittiöiden muodostumisen säätelyssä, ja se voi epäsuorasti ehkäistä siittiöiden muodostumista ehkäisemällä Leidigin soluja tuottamasta maksimimäärää testosteronia vastavaiku-35 tuksena LH:lie. Niinpä alentunut estradiolin tuotanto, 10 84272 joka voidaan saada aikaan antamalla kaavan I mukaisia yhdisteitä, johtaa sekä siittiöiden määrän että hedelmällisyyden paranemiseen potilailla, joiden hedelmättömyys johtuu siittiöiden vähäisyydestä.

5 Kaavan I mukaisten yhdisteiden aromataasin inhibi- tio määritettiin esim. sekä in vitro (ihmisen istukan aro-mataasi) että in vivo (munasarjojen aromataasin aktiivisuus) rotissa.

Esimerkiksi 4-aminoandrosta-4,6-dieeni-3,17-dionin 10 (sisäinen koodi FCE 24210) aktiivisuutta verrattiin tunnettujen aromataasin inhibiittoreiden 4-hydroksiandrost- 4-eeni-3,17-dionin (40H-A). A1-testololaktonin ja andros— ta-1,4-dieeni-3,17-dionin aktiivisuuteen [A.M.H. Brodie, Cancer Research (Suppl.) 42, 3312 s, (1982; D.F. Covey ja 15 W.F. Hood, Cancer Research (Suppl.) 42, 3327 s, (1982)].

Seuraavia testimenetelmiä käytettiin, a) Aromataasin inhibitio in vitro

Entsyymisysteemi eristettiin ihmisen istukkakudoksen mikrosomifraktiosta tavanomaisella menetelmällä. Käy-20 tettiin Thompsonin ja Siiterin koetta [E.A. Thompson ja P.K. Siiteri, J. Biol Chem. 249, 5364, (1974)], jossa määritetään aromatisoinnin nopeus mitattuna 4-[16,26,3H]-and-rosteeni-3,17-dionista vapautunut 3H20. Kaikki viljelyt suoritettiin täristävässä vesihauteessa 37°C:ssa ilmassa 25 10 mM kaliumfosfaattipuskurissa, pH 7,5, joka sisälsi 100 mM KCl:a, 1 mM EDA:a ja 1 mM ditiotreitolia.

Kokeet suoritettiin 1 ml: n viljelytilavuudessa, joka sisälsi 50 nM 4-[3M] androsteenidionia, inhibiit-toreita eri konsentraatioina, 100 μΜ NADPH:a, ja 0,05 mg 30 mikrosomaalista propteiinia. 15 minuutin viljelyn jälkeen reaktio keskeytettiin lisäämällä kloroformia (5 ml). Tätä sentrifugoitiin 1500 x g:ssä 5 minuuttia, pohjalle jääneet ainekset (0,5 ml) poistettiin vesikerroksesta muodostuneen 3h20 :n määrittämiseksi.

35 Kullekin yhdisteelle määritettiin pitoisuus, joka 11 84272 tarvitaan vähentämään aromataasin vaikutusta 50 % (IC50), piirtämällä käyrä inhibitio-% inhibiittorin konsentraation logaritmin funktiona.

Kunkin yhdisteen suhteellinen teho verrattuna yh-5 disteeseen 4 OH-A laskettiin seuraavasta suhteesta: 4 OH-A:n IC50

Suhteellinen teho = ——- testattavan yhdisteen IC50 10 b) Aromataasin inhibitio in vivo rotilla

Aikuisia naaraspuolisia rottia käsiteltiin kahdesti ihonalaisesti 100 I.U:lla kantavan tamman seerumin gonado-tropiinia (PMSG) 4 päivän välein, tavoitteena lisätä muna-15 sarjojen aromataasin aktiivisuutta, seuraten Brodien mene-telmää [A.M.H. Brodie et ai., Steroids 38, 693, (1981)].

Kolme päivää toisen PMSG-käsittelyn jälkeen 6 eläimen ryhmälle annettiin kullekin suun kautta väliainetta (0,5 % metoceliä) tai inhibiittoria 30 mg/kg. Eläi-20 met tapettiin 24 tuntia myöhemmin, mikrosomit eristettiin munasarjoista ja niiden aromataasin aktiivisuus määritettiin menetelmällä, joka on sama kuin kohdassa a) kuvattu.

Viljelyt suoritettiin 30 minuutissa 1 ml:n vilje-lytilavuudella, joka sisälsi 0,1 mg mikrosomaalista pro-25 teiinia, 100 nM 4-[3H] androsteenidionia ja 100 μΜ NADPH:a. Aromataasin aktiivisuuden inhibitio-% laskettiin.

Saadut tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.

12 84272

Taulukko

Yhdiste In vitro In vivo

IC^r, Suhteellinen Aromataasin in-oU

5 nM teho hibitio-% annok sella 30 mg/kg p.o.

4-hydroksiandrost- 10 4-eeni-3,17-dioni 44 (1.00) tehoton (4-OH-A) määrittely -testololaktoni (testolaktoni) 8240 (0.005) tehoton androsta-1,4-dieeni- 15 3,17-dioni 112 (0.39) 37 4-aminoandrosta- 4,6-dieeni-3,17- dioni (FCE 24210) 148 (0.30) 70 4-aminoandrosta-20 1,4,6-trieeni- 3.17- dioni (FCE 24928) 160 (0.27) 78

Taulukoidut tiedot osoittavat, että kaavan I mu-25 kaiset yhdisteet, esim. 4-aminoandrosta-4,6-dieeni-3,17- dioni (FCE 24210) ja 4-aminoandrosta-l,4,6-trieeni-3,17- dioni (FCE 24928), ovat erittäin tehokkaita aromataasin inhibiittoreita sekä in vitro että in vivo.

In vitro uuden yhdisteen FCE 24210 todettiin ole-30 van suunnilleen yhtä tehokkaan kuin androsta-1,4-dieeni- 3.17- dioni ja 55 kertaa tehokkaamman kuin A1-testololak-toni.

Vaikkakin uuden yhdisteen teho in vitro on noin kolme kertaa alhaisempi kuin yhdisteen 4-OH-A teho, se on 35 kuitenkin erittäin tehokas annettuna in vivo suun kautta, joka johtuu sen epätavallisesta vastustuskyvystä hepa- i3 84272 tiittista metabolisaatiota vastaan, kun taas 4-OH-A on tehoton samalla annoksella (30 mg/kg).

Tosiasiassa pääasiallinen haitta terapeuttisessa käytössä kasvainten vastaisena aineena naisilla on se, 5 että 4-OH-A vaatii parenteraalista annostelua, koska yhdiste konjugoituu laajasti oraalisen annostelun jälkeen [R.C. Coombes et ai., Lancet II, 1237, (1984)].

Yhdisteellä FCE 24928 saadaan lähes samat tulokset.

10 Toisaalta yhdisteiden FCE 24210 ja FCE 24928 ak tiivisuus in vivo on myös huomattavasti parempi kuin and-rosta-1,4-dieeni-3,17-dionin.

Korkean terapeuttisen indeksinsä takia kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan turvallisesti käyttää lääke-15 tieteessä. Esimerkiksi kaavan I mukaisten yhdisteiden akuutti toksisuus (LD50) hiirillä, joka määritettiin antamalla kasvavia annoksia ja mittaamalla seitsemäntenä päivänä oraalisesta käsittelystä, todettiin merkitykset-tömästi.

20 Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan antaa erilai sina annosmuotoina, esim. suun kautta tabletteina, kapseleina, sokerilla tai kalvolla päällystettyinä tabletteina, nestemäisinä liuoksina tai suspensioina; rektaalises-ti peräpuikkoina; parenteraalisesti, esim. lihaksensisäi-25 sesti, tai suonensisäisesti injektiolla tai infuusiolla. Annos riippuu potilaan iästä, painosta ja kunnosta, ja annostelutavasta; esimerkiksi annos, joka sopii annettavaksi suun kautta aikuisille ihmisille, esim. keksintöä edustavalle yhdisteelle FCE 24210, voi vaihdella välillä 30 noin 10...150-200 mg annosta kohti, 1-5 kertaa päivässä.

Farmaseuttiset valmisteet, jotka sisältävät kaavan I mukaisia yhdisteitä, valmistetaan tavallisesti tavanomaisten menetelmien mukaisesti ja annetaan farmaseuttisesti sopivassa muodossa.

35 Esimerkiksi kiinteät suun kautta annettavat val mistemuodot voivat sisältää yhdessä aktiivisen aineen i4 84272 kanssa laimentimia, esim. laktoosia, dekstroosia, sakkaroosia, selluloosaa, maissitärkkelystä tai perunatärkkelystä; voiteluaineita, esim. silikaa, talkkia, steariini-happoa, magnesium- tai kalsiumstearaattia ja/tai polyety-5 leeniglykoleja; sidonta-aineita, esim. tärkkelyksiä, ara-bikumeja, gelatiinia, metyyliselluloosaa, karboksimetyy-liselluloosaa tai polyvinyylipyrrolidonia; kasautumista ehkäiseviä aineita, esim. tärkkelystä, algiinihappoa, al-ginaatteja tai natriumtärkkelysglykolaattia; poreiluseok-10 siä; väriaineita; makeutusaineita; kostutusaineita, kuten lesitiiniä, polysorbaatteja, lauryylisulfaatteja; ja yleensä myrkyttömiä ja farmaseuttisesti inaktiivisia aineita, joita käytetään farmaseuttisissa valmisteissa. Näitä farmaseuttisia valmisteita voidaan valmistaa tavan-15 omaisella tavalla, esimerkiksi sekoittamalla, granuloimalla, tabletoimalla, päällystämällä sokerilla, tai kal-vopäällystysprosesseilla.

Suun kautta annettavaksi tarkoitetut nestemäiset dispersiot voivat olla esim. siirappeja, emulsioita ja 20 suspensioita.

Siirapit voivat sisältää kantajana esim. sakkaroosia tai sakkaroosia yhdessä glyseriinin ja/tai mannitolin ja/tai sorbitolin kanssa.

Suspensiot ja emulsiot voivat sisältää kantajana 25 esimerkiksi luonnon kumia, agaria, natriumalginaattia, pektiiniä, metyyliselluloosaa, karboksimetyyliselluloosaa tai polyvinyylialkoholia.

Suspensiot ja liuokset, jotka on tarkoitettu lihasten sisäisiin injektioihin, voivat sisältää yhdessä ak-30 tiivisen yhdisteen kanssa farmaseuttisesti hyväksyttävää kantajaa, esim. steriiliä vettä, oliiviöljyä, etyyli-oleaattia, glykoleja, esim. propyleeniglykolia, ja haluttaessa sopivan määrän lidokaiinihydrokloridia.

Suonensisäisiin injektioihin tai infuusioihin tar-35 koitetut liuokset voivat sisältää esimerkiksi steriiliä vettä tai edullisesti ne voivat olla steriilien, vesipi- 15 84272 toisten isotonisten suolaliuosten muodossa.

Peräpuikot voivat sisältää yhdessä aktiivisen aineen kanssa farmaseuttisesti hyväksyttävää kantajaa, esim. kaakaovoita, polyetyleeniglykolia, polyetyleenisor-5 bitaanin rasvahappoesteriä pinta-aktiivisena aineena tai lesitiiniä.

Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.

Esimerkki 1 4-aminoandrosta-4,6-dieeni-3,17-dioni [I, R = NH7, 10 (x) = yksinkertainen sidos, (y) = kaksoissidos]

Sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi 4,98 g 4-me-taanisulfonyylioksiandrost-4-eeni-3,17-dionia 250 ml:ssa dimetyyliformamidia, lisättiin 1,1 g jauheista natrium-atisidia, joka oli sekoitettu 14 ml:aan vettä. Saatua 15 seosta sekoitettiin 100°C:ssa 90 minuuttia.

Sitten jäähdytetty seos kaadettiin 1 litraan vettä samalla jäähdyttäen ulkopuolisesta, ja saatua seosta uutettiin etyyliasetaalilla (4x250 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin perusteellisesti kyllästetyllä natriumklori-20 din vesiliuoksella, kuivattiin ja haihdutettiin vakuumis-sa, jolloin saatiin epäpuhdasta tuotetta, joka puhdistettiin kromatografiapylväässä neutraalilla Al203:lla.

Eluoimalla gradientilla n-heksaani:etyyliasetaat-tista (1:1) etyyliasetaattiin saatiin otsikkoyhdistettä 25 keltaisena kiinteänä aineena, sul.piste 148-150°C (hajosi ): [a]D = + 199,1° (C = 1, CHC13); UV (95 % EtOH): mex = 347 nm, = 12,95; NMR (CDCI3) 6: 0,87 (3H, s); 1,00 (3H, s); 4,45 (2H, bs); 30 6,01 (1H, dd); 6,40 (1H, dd).

Esimerkki 2 4-aminoandrosta-4,6-dieeni-3,17-dioni [I, R = NH,, (x) = yksinkertainen sidos,_(y) = kaksoissidos]

Sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi 6,04 g 4,5-35 epoksiandrosta-3,17-dionia 100 ml:ssa dimetyylisulfoksi- 16 84272 dia ja 1,5 ml väkevää H2S04:a, lisättiin 20,8 g jauheista natriumatsidia. Saatua seosta sekoitettiin 100°C:ssa 1 tunnin ajan, jäähdytettiin ja kaadettiin 1000 ml:aan jäistä 3 % HCl:n vesiliuosta. Seosta sekoitettiin 15 mi-5 nuuttia, jonka jälkeen se suodatettiin, pestiin dietyyli-eetterillä ja pH nostettiin 9:ään lisäämällä 2 N NaOH:n vesiliuosta. Saatu saostuma suodatettiin, pestiin vedellä ja kuivattiin vakuumissa 50°C:ssa. Näin saatiin 4,5 g ot-sikkoyhdistettä, sul.piste 148-150°C (hajosi).

10 Esimerkki 3 4-atsidoandrost-4-eeni-3,17-dioni [I, R = N,, (x) = (y) = yksinkertainen sidos]

Sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi 1,0 g 4-me-taanisulfonyylioksiandrost-4-eeni-3,17-dionia 5 mlrssa 15 dimetyyliformamidia, lisättiin 229 mg jauheista natriumatsidia, joka oli liuotettu 3 ml:aan vettä. Saatua seosta sekoitettiin 60°C:ssa 1 tunti, jäähdytettiin, kaadettiin 250 ml:aan kylmää vettä ja uutettiin etyyliasetaatilla (4x50 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin kyllästetyllä 20 NaCl:n vesiliuoksella, kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin jäännös, joka puhdistettiin pylväässä flash-kromatografiällä neutraalilla Al203:lla. Eluoimalla n-heksaani:dietyylieetterillä (1:1) saatiin 0,52 g otsikkoyhdistettä, sul.piste 142-143°C.

25 UV (95 % EtOH): raax * 284 nm, = 9,855; IR (nujoli): „„ = 2100, 1730, 1670, 1590 cm*1; NMR (CDC13 + DMS0, 6): 0,91 (3H, s); 1,21 (3H, s); 3,10 (1H, s).

Esimerkki 4 30 4-atsidoandrost-4-eeni-3,17-dioni [I, R = N-, (x) - (y) = yksinkertainen sidos]

Sekoitetaan liuokseen, joka sisälsi 1,5 g 4,5-epoksiandrosta-3,17-dionia 26 ml:ssa dimetyylisulfoksidia ja 0,35 ml väkevää rikkihappoa, lisättiin 5,2 g jauheista 35 natriumatsidia. Saatua seosta lämmitettiin 40°C:ssa 40 17 84272 minuuttia, jäähdytettiin, kaadettiin 250 ml:aan jäävettä ja uutettiin etyyliasetaatilla (4x100 ml). Yhdistettyjä orgaanisia uutteita käsiteltiin samoin kuin esimerkissä 3. Näin saatiin 1,15 g otsikkoyhdistettä, sul.piste 142-143°C.

5 Esimerkki 5 4-aminoandrosta-4,6-eeni-3,17-dioni [I, R = NH,, (x) = yksinkertainen sidos, (y) = kaksoissidos]

Sekoitetaan liuokseen, joka sisälsi 1,1 g 6-bromi-androst-4-eeni-3,17-dionia 57,4 mltssa dimetyyliformami-10 dia, lisättiin 0,250 g natriumatsidia, joka oli liuotettu 2 ml:aan vettä. Saatua seosta kuumennettiin 100°C:ssa 90 minuuttia, jäähdytettiin ja käsiteltiin samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 1. Näin saatiin 0,325 g otsikkoyhdistettä, sul.piste 148-150°C (hajosi).

15 Esimerkki 6 4-atsidoandrost-4-eeni-3,17-dioni [I, R = N,, (x) = (y) = yksinkertainen sidos]

Sekoitettiin liuokseen, joka sisälsi 1,1 g 6-bro-miandrost-4-eeni-3,17-dionia 57,4 ml:ssa dimetyyliform-20 amidia, lisättiin 0,250 g natriumatsidia. Saatua seosta kuumennettiin 30-35°C:ssa 72 tuntia, jäähdytettiin ja käsiteltiin samalla tavalla kuin on kuvattu esimerkissä 3. Näin saatiin 0,476 g otsikkoyhdistettä, sul.piste (MeOH) 143-144°C (hajosi); 25 [a]D = + 237° (c - 1, CHC13); UV (95 % EtOH): max = 284 nm, = 10,495.

Esimerkki 7 4-atsidoandrosta-l,4,6-trieeni-3,17-dioni [I, R = N^, (x) = (y) = kaksoissidos] 30 Sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi 0,5 g 66-bro- mi-7a-asetoksiandrosta-l,4-dieeni-3,17-dionia 30 ml:ssa dimetyyliformamidia ja 1,2 ml vettä, lisättiin 0,11 g natriumatsidia. Reaktioseosta kuumennettiin 100°C:ssa 45 minuuttia, jäähdytettiin, kaadettiin 500 ml:aan jäävettä 35 ja uutettiin etyyliasetaatilla. Yhdistetyt uutteet pestiin vedellä, kuivattiin natriumsulfaatilla, suodatettiin ie 84272 ja haihdutettiin vakuumissa, jolloin saatiin jäännös, joka puhdistettiin kromatografioimalla pylväässä silikagee-lillä. Eluoimalla n-heksaani:etyyliasetaatilla (70:30) saatiin 0,28 g otsikkoyhdistettä, sul.piste 123-125°C (ha-5 josi); [a]D = + 155° (c = 0,5, CHC13);

IR (nujoli) : max = 2120, 1740, 1650, 1630, 1605, 1575 cnT

i.

/ NMR (CDC13, 6): 0,92 (3H, s); 1,18 (3H, s); 6,22 (1H, 10 dd); 6,26 (1H, d); 6,66 (1H, dd); 7,29 (1H, d).

Esimerkki 8 4-atsidoandrost-l,4-dieeni-3,17-dioni [I, R = N,, (x) = kaksoissidos, (y) = yksinkertainen sidos]

Otsikkoyhdistettä saatiin 4-metaanisulfonyylioksi-15 androsta-1,4-dieeni-3,17-dionista ja natriumatsidista käyttäen samaa menetelmää kuin on kuvattu esimerkissä 3.

Vaihtoehtoisesti otsikkoyhdistettä saatiin 4,5-epoksiandros-l-eeni-3,17-dionista ja natriumatsidista käyttäen samaa menetelmää kuin on kuvattu esimerkissä 4, 20 sul.piste 144-146°C (hajosi); UV (95 % EtOH): max = 239 nm, = 15,945

Bax « 303 nm, = 4,490; IR (nujoli): nax = 2110, 1730, 1650, 1630, 1595 cm1; NMR (CDCI3, 6): 0,93 (3H, s); 1,25 (3H, s); 3,15 (1H, m); 25 6,27 (1H, d); 7,08 (1H, d).

Esimerkki 9 4-amlnoandrosta-4,6-dieeni-3,17-dioni [I, R = NH7, (x) = yksinkertainen sidos, (y) = kaksoissidos]

Seosta, joka sisälsi 0,125 g 4-atsidoandrost-4-30 eeni-3,17-dionia 10 ml:ssa dimetyyliformamidia ja 0,4 ml IN natriumatsidia vesipitoisessa liuoksessa, sekoitettiin ja kuumennettiin 90-100°C:ssa 30 minuuttia, jona aikana havaittiin typen kehittymistä. Jäähdytyksen jälkeen reak-tioseosta käsiteltiin kuten on kuvattu esimerkissä 1.

35 Näin saatiin 0,085 g otsikkoyhdistettä, sul.piste 147-143 °C (hajosi).

19 84272

Esimerkki 10 4-aminoandrost-4-eeni-3,17-dioni [I, R = NH7, (x) = (y) = yksinkertainen sidos]

Suspensioon, joka sisälsi 3,83 g 4-atsidoandrost4-5 eeni-3,17-dionia 600 ml:ssa juuri tislattua kuivaa meta-nolia, lisättiin propaani-1,3-ditiolia ja 12 ml tri-etyyliamiinia. Saatua keltaista seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa typpi-ilmakehässä 7 tuntia, kaadettiin veteen, pH säädettiin 2:een IN HCl:n vesiliuoksella, ja 10 seos pestiin dietyylieetterillä. Vesipitoinen kerros tehtiin neutraaliksi 2N NaOH:n vesiliuoksella, ja saatu saostuma suodatettiin pois, kuivattiin ja kiteytettiin etyyliasetaatista.

Näin saatiin 2,60 g otsikkoyhdistettä, sul.piste 15 186-188°C; [a]D = + 167° (C = 1, CHClj); UV (95 % EtOH): max 294 nm, = 7,354; NMR (CDC13, 6): 0,93 (3H, s); 1,20 (3H, s); 2,90 (2H, m);

Analogisella tavalla valmistettiin seuraavia yh-20 disteitä: 4-aminoandrost-l,4-dieeni-3,17-dioni, sul.piste 162-9°C; I.R. (KBr) max = 3460, 3370, 1735, 1665, 1620, 1580 cm-1; U.V. (95 % EtOH); max = 226, = 15509; 322, = 3293; 25 N.M.R. (CDCI3, 6): 0,94 (3H, s) 1,23 (3H, s); 3,65 (2H, s); 6,32 (1H, d); 7,10 (1H, d); 4-aminoandrost-l,4,6-trieeni-3,17-dioni, sul.piste 206-8°C; I.R. (KBr) „„ = 3460, 3380, 1730, 1645, 1620, 1560 30 cm-1; N.M.R. (CDCI3, 6): 1,00 (3H, s); 1,19 (3H, s); 4,00 (3H, s); 5,93 (1H, dd); 6,33 (1H, d), 6,52 (1H, dd); 7,10 (1H, d); 4-aminoandrosta-4,6-dieeni-3,17-dioni, sul.piste 148-35 150°C (haj. ); [a]D = + 199,1° (c = 1, CHCI3); 20 84272 U.V. (95 % EtOH); max = 347 nm, = 12,395; N.M.R. (CDC13) δ; 0,87 (3H, s); 1,00 (3H, s); 4,45 (2H, bs); 6,01 (1H, dd); 6,40 (1H, dd).

Esimerkki 11 5 4-amlnoandrost-4-eeni-3,17-dioni [I, R = NH7, (x) = (y) = yksinkertainen sidos]

Sekoitettuun liuokseen, joka sisälsi 0,45 g 4-ami-noandrosta-4,6-dieeni-3,17-dionia 20 ml:ssa dietyylieette-riä ja 40 ml nestemäistä ammoniakkia, lisättiin 0,28 g 10 metallista litiumia pienissä erissä. Saatua sinistä reak-tioseosta sekoitettiin vielä 30 minuuttia, laimennettiin absoluuttisella etanolilla kunnes sininen väri häipyi, ja seoksen annettiin palautua huoneen lämpötilaan. Saatu jäännös sekoitettiin veteen, uutettiin dietyylieetterillä 15 ja puhdistettiin kuten on kuvattu esimerkissä 10. Näin saatiin 0,280 g otsikkoyhdistettä, sul.piste 185-187°C.

Esimerkki 12 4-aminoandrosta-4,6-dieeni-3,17-dionin hydroklori-di [I, R = NH7, (x) = (y) = yksinkertainen sidos, hydro-20 kloridina]

Liuosta, joka sisälsi 0,5 g 4-aminoandrosta-4,6-dieeni-3,17-dionia 20 mlrssa etanolia, käsiteltiin 16,7 ml:11a 0, IN HCl:n vesiliuosta. Sitten keltaista liuosta käsiteltiin 0,02 g:11a hiiltä, suodatettiin ja alkoholi 25 tislattiin alennetussa paineessa. Saatu vesipitoinen liuos lyofilisoitiin, jolloin saatiin 0,54 g kuivaa otsikkoyhdistettä vaaleankeltaisena jauheena.

Analogisella menetelmällä lähtien esimerkeissä 1 ja 11 mainituista 4-aminoyhdisteistä valmistettiin vastaavat 30 hydrokloridit, ja samalla tavalla valmistettiin esimer keissä 1 ja 11 mainituista 4-aminoyhdisteistä suolat rikki-, fosfori-, sitruuna-, fumaari-, askorbiini-, maali-, viini-, bentsoe-, fenyylietikka-, sykloheksyyli-etikka-, 3-sykloheksyylipropaani-, metaanisulfoni-, bentseenisulfo-35 ni-p-tolueenisulfoni- ja p-nitrobentseenisulfonihapon kanssa.

Claims (5)

1. 21 84272 Patenttivaatimus Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten 4-aminoandrosteenidionijohdannaisten 5 ja niiden isomeerien ja farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, O 10
2. 15 NH2 jossa kaavassa symboli --- merkitsee, että (x) ja (y) toisistaan riippumatta ovat joko yksinkertainen sidos tai kaksoissidos, tunnettu siitä, että 20 A) yhdiste, jonka kaava on iVA~ rr0 L (II) (Ha) 30 joissa L on poistuva ryhmä, joka on korvattavissa nukleo-fiilisella substituutiolla, saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on
3. 35 M - N3 (III) 84272 jossa M on alkalimetalli- tai ammoniumkationi tai tri-Cj-C6-alkyylisilyyliryhmä, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) on yksinkertainen sidos ja (y) on kaksoissidos, tai
4. 5 B) yhdiste, jonka kaava on O 10 (IV) L 15 jossa L tarkoittaa samaa kuin edellä, saatetaan reagoimaan kaavan (III) mukaisen yhdisteen kanssa, jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) on yksinkertainen sidos ja (y) on kaksoissidos, tai C) yhdiste, jonka kaava on 20 0 ί^ΤΎ 25 N3 pyrolysoidaan, jolloin saadaan kaavion (I) mukainen yh-30 diste, jossa (x) on yksinkertainen sidos ja (y) on kaksoissidos; tai D) yhdiste, jonka kaava on 35 23 84272 o db)
5. 5 J N 3 pelkistetään; ja haluttaessa kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) on 10 yksinkertainen sidos ja (y) on kaksoissidos, pelkistetään jolloin saadaan kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) ja (y) ovat molemmat yksinkertaisia sidoksia, ja/tai haluttaessa kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa (x) on yksinkertainen sidos, hapetetaan, jolloin saadaan kaavan (I) 15 mukainen yhdiste, jossa (x) on kaksoissidos, ja/tai haluttaessa kaavan (I) mukainen yhdiste muutetaan toiseksi kaavan (I) mukaiseksi yhdisteeksi ja/tai haluttaessa kaavan (I) mukainen yhdiste muutetaan suolaksi tai kaavan I mukaisen yhdisteen suola muutetaan vapaaksi kaavan (I) 20 mukaiseksi yhdisteeksi ja/tai haluttaessa kaavan (I) mukaisten isomeerien seos jaetaan yksittäisiksi isomeereik-seen. 24 84272