FI73217B - Foerfarande foer framstaellning av en ny terapeutiskt aktiv 5-(2-klorbensyl)-3-hydroxi-5,6,7,7a-tetrahydro- 4h-tieno/3,2-c/pyridin-2-on samt dess additionssalter. - Google Patents

Description

1 73217

Menetelmä uuden terapeuttisesti aktiivisen 5-(2-klooribent-syyli)-3-hydroksi-5,6,7,7a-tetrahydro-4H-tieno/3,2-c/pyridin-2-onin ja sen additiosuolojen valmistamiseksi.

Förfarande för framställning av en ny terapeutiskt aktiv 5—(2— klorbensyl)-3-hydroxi-5,6,7,7a-tetrahydro-4H-tieno/3,2-cJ-pyridin-2-on samt dess additionssalter.

Keksinnön kohteena on menetelmä uuden 5,6,7,7a-tetrahydro-4H-tieno/3,2-c/pyridin-2-onijohdannaisen valmistamiseksi, jolla johdannaisella on käyttöä ihmisten ja eläinten lääkkeenä. Keksinnön mukaan valmistetaan seuraavan kaavan (I) “JnCr-O » mukainen uusi 5,6,7,7a-tetrahydro-4H-tieno/3,2-c7pyridin-2-onijohdannainen ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät additio-suolat epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa.

: Epäsymmetrisen hiiliatomin läsnäolon takia tämä yhdiste voi esiintyä kahtena enantiomeerimuotona.

Keksinnön mukaan kaavan (I) mukainen yhdiste valmistetaan siten, että: a) nitrosoidaan kaavan (II) mukainen yhdiste 0 ^ S Cl b) hydrataan muodostunut kaavan (III) mukainen keto-oksiimi H0N^ (III) ·. JXr$> 2 73217 c) käsitellään saatu kaavan (IV) - mukainen hydrattu yhdiste hapon avulla kaavan (I) mukaisen halutun johdannaisen saamiseksi.

Kaavan (II) mukainen yhdiste, joka on tämän keksinnön mukaisen menetelmän avulla valmistetun yhdisteen valmistuksen lähtömateriaali, selitetään yhdessä sen valmistusmenetelmän kanssa hakijan jättämässä FR-patenttihakemusjulkaisussa 80 25 274.

Nitrosointivaihe, jonka avulla saadaan kaavan (III) mukainen yhdiste, toisin sanoen 5-(2-kloori-bentsyyli)-3-(hydroksi-imi-no)-4,5,6,7-tetrahydro-3H-tieno/3,2-c/pyr idin-2-oni, suoritetaan jääetikkahappoväliaineessa inertissä kaasussa saattamalla kaavan (II) mukainen yhdiste reagoimaan natriumnitriitin kanssa.

Hydrausvaihe suoritetaan perkloorihapon ja katalysaattorin ollessa läsnä edullisesti palladium-hiiltä käyttäen, liuotettuna alkoholiin kuten metanoliin, etanoliin, isopropanoliin tai alkoholin vesiliuokseen 10...50 °C:ssa.

Happokäsittely suoritetaan kaavan (IV) mukaisella yhdisteellä, joka on liuotettu seokseen, jossa on alkoholia, kuten metano-lia, etanolia, tai isopropanolia, ja happoa, kuten kloorivety-happoa tai bromivetyhappoa, jonka konsentraatio on 1 N...3 N. Tämä vaihe suoritetaan palautustislausolosuhteissa inertissä kaasussa 3...6 tuntia.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä: . a) 5- (2-kloori-bentsyyli)-3- (hydroksi-imino)-4,5,6,7-tetr a-hydro-SH-tieno/^, 2-c/pyr idin-2-oni 3 73217

Suspendoidaan 25 g (0,0068 moolia) 5-(2-kloori-bentsyyli)-5,6,7,7a-tetrahydro-4H-1 ieno/*3,2-c/pyr id in-2-oni ok salaatti a 125 ml:aan jääetikkahappoa inertissä kaasutilassa, minkä jälkeen reaktioväliaine jäähdytetään 0...-5 °C:een ja lisätään siihen tiputtaen liuos, jossa on 5 g (0,072 moolia) natrium-nitriittiä 30 mltssa vettä. Muodostuneen materiaalin annetaan olla huoneenlämmössä 7 tuntia. Kiteet'poistetaan suodattamalla, pestään eetterillä ja kuivataan. Tuote kiteytetään uudelleen vedestä, jolloin saadaan keltaisia kiteitä, joiden sulamispiste on 222 °C. Saanto 70 %.

b) 5- (2-kloor i-bentsvyli) -3- (hydroksi-imino) -3a,4,5,6,7,7a- heksahydro-3H-tieno/3,2-c/pyrid in-2-oni

Liuotetaan 15 g (0,0376 moolia) edellä saatua kaavan (III) mukaista yhdistettä seokseen, jossa on 900 ml metanolia ja 8 ml 70-prosenttista perkloorihappoa. Reaktioväliaineeseen lisätään 4 g 10-prosenttista palladiumhiiltä suspendoituna 100 ml:aan etanolia. Reaktioväliaine hydrataan reaktorissa ilmanpaineessa (1 atm) ja sen annetaan sitten olla huoneenlämmössä 6 tuntia. Katalysaattori poistetaan suodattamalla, minkä jälkeen reaktioväliaine haihdutetaan kuiviin.

Saatu jäännös liuotetaan veteen ja neutraloidaan sitten natriumbikarbonaatin kyllästyneellä vesiliuoksella. Vesifaasi uutetaan dikloorimetaanilla, orgaaninen faasi kuivataan vedettömän natriumsulfaatin avulla ja haihdutetaan sitten kuiviin. Öljymäinen jäännös puhdistetaan kromatografoimalla piihappo-geeliä sisältävässä pylväässä, käyttämällä eluenttina toluee-nin ja etyyliasetaatin 1:1 seosta.

Lopullinen puhdistus tehdään oksalaatin kautta. Beigenvärisiä kiteitä, sp. 200 °C, saanto 65 %.

c) 5-(2-kloori-bentsyyli)-3-hydroksi-5,6,7,7a-tetrahydro-4H-tieno/3,2-c/pyr id in-2-oni 4 73217

Liuotetaan 10,4 g (0,0334 moolia) edellisessä vaiheessa saatua kaavan (IV) mukaista yhdistettä seokseen, jossa on 250 ml iso-propyylialkoholia ja 45 ml 2 N kloorivetyhappoa. Saatua liuosta keitetään palautustislausta soveltaen 4 tuntia inertissä kaasutilassa. Tämän jälkeen liuos haihdutetaan kuiviin ja jäännös otetaan natriumbikarbonaatin kyllästyneeseen vesi-liuokseen. Vesifaasi uutetaan dikloorimetaani1la. Orgaaninen faasi kuivataan vedettömän natriumsulfaatin avulla ja haihdutetaan kuiviin. Saatu öljymäinen jäännös puhdistetaan suodattamalla piihappogeeliä sisältävän kerroksen läpi käyttämällä eluenttina tolueenin ja etyyliasetaatin 1:1 seosta. Emäs saadaan 81 % saantona beigenvärisinä kiteinä, sp. 121 °c.

Valmistettiin tavanomaisin menetelmin eri suoloja: hemioksalaatti: kermanvärisiä kiteitä, sp. 170 °c (uudel-leenkiteytettynä isopropyylialkoholin ja asetonitriilin seoksesta ) nitraatti: vaaleanpunaisia kiteitä, sp. 181 °c (uudelleen-kiteytettyinä isopropanolin ja metanolin seoksesta) - hydrokloridi: beigenvärisiä kiteitä, sp. 139 °C (uudelleen-kiteytettyinä isopropanolista).

Keksinnön mukaan valmistettua yhdistettä voidaan käyttää terapeuttisessa seoksessa, jolla erikoisesti on verihiutaleiden kasautumista ja veritukoksen syntymistä vastustava aktiviteetti, ja joka tehollisena komponenttina sisältää kaavan (I) mukaista johdannaista tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävää additiosuolaa epäorgaanisen tai orgaanisen hapon kanssa.

Toksikologinen tutkimus koski akuuttista, kroonista, alikroo-nista ja hidastettua myrkyllisyyttä ja todisti keksinnön mukaisen johdannaisen hyvän toleranssin ja pienen myrkyllisyyden.

Hiirillä, rotilla ja kaniineilla suoritetut kokeet näyttivät, että keksinnön mukainen johdannainen suun kautta tai vatsaon- 5 73217 telon sisäisesti annettuna ei koskaan antanut mitään paikallista tai systeemistä reaktiota, mitään säännöllisesti suoritettujen biologisten kontrollien häiriöitä eikä mitään makroskooppista tai mikroskooppista vahinkoa suoritetuissa eri kokeissa .

Farmakologinen tutkimus osoitti keksinnön mukaisen yhdisteen verihiutaleiden kasautumista ja veritukosten muodostumista vastustavaa vaikutusta.

1- Verihiutaleiden kasautumista vastustava vaikutus Tämä koe suoritettiin rotilla, joille suun kautta annettiin 100 mg keksinnön mukaista yhdistettä kolme päivää ajankohtina -48 h, -24 h ja -2 h. Ajankohtana 0 otettiin 4 ml suuruinen verinäyte puudutetun eläimen kaulalaskimosta soveltamalla Renaud in tekniikkaa. Tätä sitraatilla käsiteltyä verta käytettiin kasautumisen määrityksessä.

a) Adenosiini-difosfaatilla (A.D.P.) aiheutetun verihiutaleiden kasautumisen määritys

Kaadettiin nopeasti 2 ml sitraatilla käsiteltyä verta pieneen pikariin, joka oli sijoitettu magneettitangolla varustettuun magneettiseen sekoittimeen. Muutaman sekunnin sekoittamisen jälkeen lisättiin pikariin 0,4 ml liuosta, jossa oli 0,66 adenosiini-difosfaattia/ml. Sekoitettiin 5 sekuntia, minkä jälkeen otettiin kaksi 0,5 ml verinäytettä: ensimmäiseen näytteeseen sekoitettiin 0,5 ml EDTA-formalde-hydiliuosta (EDTA = etyleenidiamiinitetraetikkahappo) toiseen näytteeseen sekoitettiin ainoastaan 0,5 ml EDTA-liuosta.

EDTA-formaldehydilisäyksen tarkoituksena on stabiloida veri ja täten kiinnittää kasautuminen, kun taas päinvastoin EDTA saat taa kaikki verihiutaleiden kasautumiset hajoamaan.

6 73217

Molempien seosten annettiin olla levossa 10 minuuttia, minkä jälkeen ne sentrifugoitiin hitaasti 5 minuuttia punaisten verisolujen erottamiseksi, minkä jälkeen pinnalle nouseva runsaasti hiutaleita sisältävä plasma (PRP) poistettiin, laimennettiin ja laskettiin hiutaleet.

Kasautumisen taso määritettiin seuraavan suhteen mukaan hiutaleiden lukumäärä EDTA- formaldehydissä_ x 3.OO = prosenttimäärä kasautu- hiutaleiden lukumäärä EDTA:ssa mattomia hiutaleita

Mitä lähempänä tämä suhde on arvoa 100, sitä suurempi on kokeiltavan materiaalin estävä vaikutus verihiutaleiden kasautumiseen.

Täten määritettiin, että 5 rotan ryhmässä, jotka oli käsitelty keksinnön mukaisella yhdisteellä, oli saavutettu prosenttiluku 44 + 13, kun taas 5 rotan kontrolliryhmässä prosenttiluku oli 6 + 2.

b) Kollageenilla aiheutetun verihiutaleiden kasautumisen määritys

Lisättiin 0,5 mitään sitraatilla käsiteltyä verta 0,10 ml liuosta, jossa oli 10 yg kollageenia/ml. Verihiutaleiden laskenta suoritettiin keskeytyksettä, jolloin väliainetta jatkuvasti sekoitettiin.

Vapaiden verihiutaleiden lukumäärän pienenemistä ajan funktiona seurattiin jatkuvasti ja täten voitiin piirtää käyrä, jonka kaltevuus antoi alkuperäisen kasautumisnopeuden.

Viiden rotan ryhmällä, jotka oli käsitelty keksinnön mukaisella yhdisteellä, oli alkuperäinen kasautumisnopeus 2,33 + 1,18, kun taas 5 rotan käsittelemättömällä ryhmällä tämä nopeus oli 12,44 + 2,65.

7 73217

Tutkimukseen, joka kohdistettiin verihiutaleiden kasautumien estävään vaikutukseen, liittyi myös keksinnön mukaisen yhdisteen vaikutus verenvuotoaikaan.

Käytetty menetelmä oli sovellutus tekniikasta, jonka ovat esittäneet L. Stella, M.B. Donati & G. de Gaetano, Thromb. Res., 1975, 7, 709-716.

Koe suoritettiin rotilla, joita oli suun kautta käsitelty 65 h, 41 h ja 17 h aikaisemmin 200 mg:lla keksinnön mukaista yhdistettä suspendoituna 10 ml:aan/kg arabikumin 5-prosenttis-ta vesiliuosta. Pentobarbitaalilla suoritetun puudutuksen jälkeen häntä leikattiin 5 mm sen päästä. Veri imettiin huolellisesti pois 15 sekunnin välein, jolloin pidettiin huoli siitä, että ei kosketettu haavaa.

Verenvuodon tyrehtyminen oli saavutettu, kun verenvuoto päättyi minuutiksi.

Verenvuotoajat lausuttiin sekunteina, eikä enää laskettu aikoja, jotka olivat pitempiä kuin 1200 sekuntia (20 minuuttia).

Täten määritettiin, että vertailueläimissä, joille annettiin ainoastaan arabikumia, oli keskimääräinen verenvuotoaika 390 sekuntia, kun tämä aika käsiteltyjen eläinten tapauksessa oli yli 1200 sekuntia.

2- Antitromboottinen vaikutus Tämä vaikutus tutkittiin kahden menetelmän mukaan.

a) Kokeellinen tromboosimenetelmä silkkilankaa käyttäen.

Tämän tutkimuksen periaate on sovellutus ruumiin ulkopuolella tapahtuvaan kiertoon perustuvasta kokeellisesta tromboosimene-telmästä, jonka ovat selittäneet Teruhiko Umetsu & Kazuko Sanai (Thromb. Haemost., 3j*/ 1, 1978).

8 73217

Paljastettiin vatsaontelonsisäisellä pentobarbitaaliruiskeella puudutetun rotan vasemmanpuoleinen kaulalaskimo ja oikeanpuoleinen ulkopuolinen päänvaltimo.

Valtimon ja laskimon välinen ohikytkentä koostui keskeisestä katetrista ja kahdesta sivukatetrista. Valkoinen luonnonsilk-kilanka sovitetiin keskeiseen osaan ja verenvirtaus aikaansaatiin uudelleen 20 minuutin ajaksi. Veren virtauksen tultua keskeytetyksi puristamalla lanka poistettiin varovasti ja punnittiin välittömästi. Kostean silkkilangan keskipaino oli määritetty aikaisemmin.

Käsittely suoritettiin 48 h, 24 h ja 2 h ennen kuin verenvirtaus ohikytkennän läpi aloitettiin, antamalla suun kautta 200 mg/kg keksinnön mukaista yhdistettä suspendoituna 10 ml:aan/kg arabikumin 5-prosenttista liuosta, jolloin kontrollille annettiin ainoastaan arabikumin 5-prosenttista liuosta.

Täten määritettiin, että keskimääräisen veritukoksen paino molemmissa 10 rotan ryhmissä oli 38,62 + 1,18 mg kontrolli-eläimillä ja 25,0 + 6,42 mg käsitellyillä eläimillä ( -35 %).

b) Laskimotromboosimenetelmä metallikierukkaa käyttäen Tämä menetelmä oli sovellutus menetelmästä, jonka ovat esittäneet Friedman & co-workers Am. J. Physiol., 1960, 199, 770-774. Metallikierukka (hammaslääkäreiden käyttämä tahnantäyttö-laite) leikattiin sopivaan kokoon ja työnnettiin rottien alempaan ontelolaskimoon, kun rotille oli 48 h, 24 h ja 2 h aikaisemmin suun kautta annettu 200 mg/kg kokeiltavaa yhdistettä suspendoituna 10 ml:aan/kg arabikumin 5-prosenttista vesiliuosta.

Viisi tuntia myöhemmin tämä metallikierukka poistettiin yhdessä sen pidättämän veritukoksen kanssa, kuivattiin varovasti peräkkäin useaan kertaan imemällä suodatinpaperilla, ja punnittiin. Tämän jälkeen veritukos poistettiin metallikierukas-ta, joka jälleen kuivattiin ja punnittiin. Erotuksesta saatiin 9 73217 täten veritukoksen keskipaino: se oli 3,4 + 0,4 mg kontrolli-rotille (10 rottaa), joille annettiin ainoastaan arabikumia, ja 2,1 + 0,3 mg rotille (10 eläintä), joita käsiteltiin keksinnön mukaisella aktiivisella komponentilla ( - 36 %).

Edellä selitetyt toksikologiset ja farmakologiset tutkimukset todistavat keksinnön mukaisen yhdisteen pienen myrkyllisyyden ja sen erinomaisen toleranssin yhdessä sen mielenkiintoisten verihiutaleiden kasautumista ja veritukoksia estävien ominaisuuksien kanssa, minkä seurauksena tämä yhdiste on erittäin arvokas lääkintätarkoituksiin ihmis- ja eläinlääkinnässä.

Tämän keksinnön mukainen lääkeseos voidaan muotoilla suun kautta annettaviksi tableteiksi, pinnoitetuiksi tableteiksi, kapseleiksi, tipoiksi, rakeiksi tai siirapiksi. Siitä voidaan myös muodostaa peräpuikkoja peräaukon kautta annettaviksi ja parenteraalista antamista varten ruiskutettavia liuoksia.

Jokainen yksikköannos sisältää edullisesti 0,010 g...0,500 g keksinnön mukaista yhdistettä, jolloin päivittäinen annos vaihtelee rajoissa 0,025...1,50 g aktiivista komponenttia, riippuen potilaan iästä ja käsitellyn tilanteen vakavuudesta.

: Keksinnön mukaisen yhdisteen verihiutaleiden kasautumista estävien antitromboottisten ominaisuuksien ansiosta voidaan tätä yhdistettä käyttää sellaisten sairauksien estämiseen ja käsittelyyn, jotka aiheuttavat verihiutaleiden kasautumisen patologista modifikaatiota, kuten veritukos-veritulppa-sairau-det.

Claims (6)

10 7321 7

1. Menetelmä terapeuttisesti aktiivisen 5,6,7,7a-tetrahydro-4H-tieno/3,2-c/pyridin-2-onijohdannaisen, jonka rakennekaava (I) on no r^\ ΓχΤΟ o ^ ^ Cl ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien additiosuolojen valmistamiseksi epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa, tunnettu siitä, että a) nitrosoidaan kaavan (II) mukainen yhdiste .*Xr£> b) hydrataan muodostuva, seuraavan kaavan (III) mukainen keto-oksiimi c) käsitellään saatu seuraavan kaavan (IV) mukainen hydrattu johdannainen hapolla kaavan (I) mukaisen halutun johdannaisen saamiseksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että nitrosointi suoritetaan natriumnitriitillä jää-etikkahappoväliaineessa ja inertissä kaasussa.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu 11 7321 7 siitä, että hydraus suoritetaan katalysaattorin ja perkloori-hapon ollessa läsnä.

4. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että happokäsittely suoritetaan edullisesti kloorivety-hapolla, jonka konsentraatio on 2 N, palautustislausta soveltaen ja inertissä kaasussa.

1. Förfarande för framställning av ett terapeutiskt aktivt 5,6,7,7a-tetrahydro-4H-tieno/3,2-c/pyridin-2-onderivat med följande strukturformel (I) :zcrp » och dess additionssalter med farmaceutiskt acceptabla oorga-niska eller organiska syror, kännetecknat därav, att man a) nitroserar en förening med formeln (II) b) hydrogenerar den resulterande ketooximen med följande formel (III) ^ /==\ (III) . sXrP c) behandlar det resulterande hydrogenerade derivatet enligt följande formel (IV) HCN /=\ .ΧΧΓ'Ρ