[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

FI58332C - FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ESTRAR AV KLAVULANSYRA - Google Patents

FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ESTRAR AV KLAVULANSYRA Download PDF

Info

Publication number
FI58332C
FI58332C FI780201A FI780201A FI58332C FI 58332 C FI58332 C FI 58332C FI 780201 A FI780201 A FI 780201A FI 780201 A FI780201 A FI 780201A FI 58332 C FI58332 C FI 58332C
Authority
FI
Finland
Prior art keywords
clavulanic acid
ethyl acetate
ester
clavulanate
group
Prior art date
Application number
FI780201A
Other languages
Finnish (fi)
Other versions
FI58332B (en
FI780201A (en
Inventor
Martin Cole
Thomas Trevor Howarth
Christopher Reading
Original Assignee
Beecham Group Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB17410/74A external-priority patent/GB1508977A/en
Priority claimed from FI751133A external-priority patent/FI54144C/en
Application filed by Beecham Group Ltd filed Critical Beecham Group Ltd
Publication of FI780201A publication Critical patent/FI780201A/en
Publication of FI58332B publication Critical patent/FI58332B/en
Application granted granted Critical
Publication of FI58332C publication Critical patent/FI58332C/en

Links

Landscapes

  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Description

raSFH [B] (11)KUULUTUSjULKAlSU C g 7 7 OraSFH [B] (11) NOTICE C g 7 7 O

flgjTffi L J ' } UTLÄGGN INGSSKRIFT 0 ° ° ^ ^ jg^fe c (4S) Patentti «y-vnnctty 12 01 1231 ^ T ^ (51) Kv.ik.3/int.ci.3 C 07 D 498/04 SUOMI —FINLAND (21) P«*nttlh»lMnHM — P»t*nttn*öknln| 780201 (22) H*k*ml*ptlvl — Arottkntnpdtf 23.01.78 ^ ^ (23) Alku pilvi — Clltl|h«ttdtg 16.04.75 (41) Tullut luikituksi — Bllvlt offuntllf 23.01.78flgjTffi LJ '} UTLÄGGN INGSSKRIFT 0 ° ° ^ ^ jg ^ fe c (4S) Patent «y-vnnctty 12 01 1231 ^ T ^ (51) Kv.ik.3 / int.ci.3 C 07 D 498/04 ENGLISH —FINLAND (21) P «* nttlh» lMnHM - P »t * nttn * öknln | 780201 (22) H * k * ml * ptlvl - Arottkntnpdtf 23.01.78 ^ ^ (23) The beginning of the cloud - Clltl | h «ttdtg 16.04.75 (41) Gotten stuck - Bllvlt offuntllf 23.01.78

Patentti· ]a rekisterihallitut (44) Nihtmicp™* μ kUul.|ulk.iWn pvm.-Patents ·] a registered (44) Nihtmicp ™ * μ kUul. | Ulk.iWn pvm.-

Patent· och registerstyrelsen Amttktn utltfd och uti.skrifttn public·™* 30.09.80 (32)(33)(31) ^yydutty utuolkuut—Bu|lrd prlorltut 20.0l+. 7l+ 09.10.7^, 21.06.71*, 11.12.7!+ Iso-Britannia-Storbritannien(GB) 17^+10/7^, 43651/74, 27715/7^, 53525/7!+ (71) Beecham Group Limited, Beecham House, Great West Road, Brentford,Patents and registries Amttktn utltfd och uti.skrifttn public · ™ * 30.09.80 (32) (33) (31) ^ yydutty utuolkuut — Bu | lrd prlorltut 20.0l +. 7l + 09.10.7 ^, 21.06.71 *, 11.12.7! + United Kingdom-Storbritannien (GB) 17 ^ + 10/7 ^, 43651/74, 27715/7 ^, 53525/7! + (71) Beecham Group Limited, Beecham House, Great West Road, Brentford,

Middlesex, Englanti~England(GB) (72) Martin Cple, Dorking, Surrey, Thomas Trevor Howarth, Rudwick, Sussex, Christopher Reading, Southwater, Sussex, Englanti-England(GB) (7!+) Berggren Oy Ah (5!+) Menetelmä klavulaanihapon estereiden valmistamiseksi - Förfarande för framställning av estrar av klavulansyraMiddlesex, England ~ England (GB) (72) Martin Cple, Dorking, Surrey, Thomas Trevor Howarth, Rudwick, Sussex, Christopher Reading, Southwater, Sussex, England-England (GB) (7! +) Berggren Oy Ah (5! +) Method for the preparation of esters of clavulanic acid - Förfarande för framställning av estrar av klavulansyra

(62) Jakamalla erotettu hakemuksesta 751133 (patentti 54l44) - Avdelad frän ansökan 751133 (patent 5^1 !+M(62) Divided by division 751133 (patent 54144) - Avdelad frän trap 751133 (patent 5 ^ 1! + M

Tämä keksintö kohdistuu menetelmään klavulaanihapon estereiden valmistamiseksi klavulaanihaposta tai sen suolasta. Klavulaanihappoa voidaan valmistaa viljelemällä aerobisesti Streptomyces clavulige-rusta.This invention relates to a process for the preparation of esters of clavulanic acid from clavulanic acid or a salt thereof. Clavulanic acid can be prepared by aerobically culturing Streptomyces clavulige.

a. Streptomyces clavuligerusta on selostettu yksityiskohtaisesti Higgens'in ym. julkaisussa Int. J. Systematic Bacteriology, 2_1, 326 (1971). Tällä streptomyseetilla on mielenkiintoa, koska se tuotti määrättyjä β-laktaamiantibiootteja, kuten penisilliiniä N, 7-(5-amino-5-karboksivaleramido)-3-karbamoyylioksimetyyli-3-kefem-4-karboksyylihappoa ja 7-(5-amino-5-karboksivaleramido)-3-karbamoyyli-oksimetyyli-7-metoksi-3-kefem-4-karboksyylihappoa. Streptomyseetti on deponoitu Agricultural Research Service Collection'iin nimikkeellä NRRL 3585 ja American Type Culture Collections'iin nimikkellä ATCC 27064. Streptomyces clavuligerukseen on myös viitattu US-patentissa n:o 3 770 590 sekä myös Nagarajan'in ym. artikkelissa julkaisussa J. Amer. Chem. Soc., 9_3, 2308 (1971), Brannaon' in ym. artikkelissa julkaisussa Antimicrob. Agents Chemother., 1, 237 (1972) ja julkaisussa Antimicrob. Agents Chemother., 3^, 247 (1972) sekä Higgens'in ym. artikkelissa julkaisussa J. Antibiotics, 2T_, 298 (1974).a. Streptomyces clavuligerus is described in detail in Higgens et al., Int. J. Systematic Bacteriology, 21, 326 (1971). This streptomycet is of interest because it produced certain β-lactam antibiotics such as penicillin N, 7- (5-amino-5-carboxivaleramido) -3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carboxylic acid and 7- (5-amino-5- karboksivaleramido) -3-carbamoyl-oxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid. Streptomycetes is deposited in the Agricultural Research Service Collection under the designation NRRL 3585 and in the American Type Culture Collections under the designation ATCC 27064. Streptomyces clavuligerus is also referred to in U.S. Patent No. 3,770,590 as well as in Nagarajan et al., J. Amer. Chem. Soc., 9_3, 2308 (1971), in Brannaon et al., Antimicrob. Agents Chemother., 1, 237 (1972) and Antimicrob. Agents Chemother., 3, 247 (1972) and Higgens et al., J. Antibiotics, 2, 298 (1974).

2 58332 b. B-laktamaasit ovat entsyymejä, jotka avaavat penisilliinien ja kefalosporiinien β-laktaamirenkaan antaen tuotteita, joilta puuttuu bakteerienvastäinen vaikutus. Näitä entsyymejä tuottavat useat bakteerit, erityisesti Escherichian, Klebsiellan, Proteuksen, Pseudo-monaksen, Enterobachterin ja Staphylococcuksen lajit tai kannat ja ne ovat useissa tapauksisa selityksenä tällaisten organismien määrättyjen kantojen vastustuskyvylle muutamiin penisilliineihin ja ke-falosporiineihin nähden, β-laktamaasituotannon tärkeys ymmärretään, kun oivalletaan että suuri osa kliinisesti eristetyistä organismeista tuottavat 'B-laktamaasia /katso esim. M. Wilson ja I.A. Freeman, Bacteriological Proceedings, 80 (1969) , jossa he artikkelissa "Penicillin Inactivation by Gram-negative Bacilli" osoittavat että 84 % amerikkalaisessa sairaalassa eristeytistä gram-negatiivisista organismeista tuottavat B-laktamaasia7· Monissa tapauksissa jotkut penisilliinit tai kefalosporiinit ovat tehottomia hoidettaessa β-lakta-maasia tuottavien organismien aiheuttamia sairauksia johtuen β-lakta-maasia tuottavan aineen yhteisinfektion tavallisesta esiintymisestä /katso esim. R. May ym? Brit. J. Dis. Chest., 66, 185 (1972/7· B-lakta-maasia inhiboivan aineen yhdistäminen penisilliinin tai kefalosporii-nin kanssa luulisi suojaavan jälkimmäistä bakteerien β-laktamaasi-hajotukselta ja siten parantavan niiden bakteerienvastaista vaikutusta monia infektioita aiheuttavia organismeja vastaan. Tätä bakteerien-vastaisen vaikutuksen tehostumisprosessia kutsutaan synergismiksi, kun yhdistelämän bakteerienvastainen vaikutus on paljon suurempi kuin molempien erillisten aineiden aktiviteettien yksinkertainen summa. Seoksen B-laktamaasia inhiboivaa ainesosaa kutsutaan synergistiksi ja tällaiset aineet ovat arvokkaita penisilliinien ja kefalosporiinien bakteerienvastaista vaikutusta lisääviä aineita vastustuskykyisiä organismeja vastaan. Tämän keksinnön tarkoituksena on aikaansaada tällaisia synergistejä.2,58332 b. Β-lactamases are enzymes that open the β-lactam ring of penicillins and cephalosporins to give products that lack antibacterial activity. These enzymes are produced by several bacteria, in particular species or strains of Escherichia, Klebsiella, Proteus, Pseudo-monas, Enterobachter and Staphylococcus, and in many cases explain the resistance of certain strains of such organisms to a few penicillins, that a large proportion of clinically isolated organisms produce β-lactamase / see eg M. Wilson and IA Freeman, Bacteriological Proceedings, 80 (1969), in which they show in an article "Penicillin Inactivation by Gram-negative Bacilli" that 84% of gram-negative organisms isolated in an American hospital produce β-lactamase7 · In many cases, some penicillins or cephalosporins are ineffective in diseases caused by β-lactamase-producing organisms due to the common occurrence of co-infection with a β-lactase-producing substance / see e.g. R. May et al. Brit. J. Dis. Chest., 66, 185 (1972/7 · The combination of a β-lactamase inhibitor with penicillin or cephalosporin would appear to protect the latter from β-lactamase degradation by bacteria and thus enhance their antibacterial activity against many infectious organisms. the process of enhancing the effect is called synergism when the antibacterial effect of the combination is much greater than the simple sum of the activities of the two separate substances. synergists.

c. Esimerkkejä määrättyjen 3-laktamaasiin nähden vastustuskykyisten puolisynteettisten penisilliinien ja kefalospotiinien, kuten B-laktamaasi-inhibiittoreiden ja penisilliinien sekä kefalosporiinien synergistien käyttöä on jo selostettu kirjallisuudessa, katso esim. Sutherland ym., Nature, 201, 868 (1964)? Sabath ym., Nature 204, 1066 (1964)? O'Callaghan ym., Antimicrob. Agents and Chemothera-py, 1968, 67 (1969). Millään näistä tunnetuista aineista ei kuitenkaan ole mitään dramaattista vaikutusta seoksessa läsnä olevan toisen antibioottisen aineen vaikutusalueeseen.c. Examples of the use of certain 3-lactamase-resistant semisynthetic penicillins and cephalospotins, such as β-lactamase inhibitors and synergists of penicillins and cephalosporins, have already been described in the literature, see e.g. Sutherland et al., Nature, 201, 868 (1964). Sabath et al., Nature 204, 1066 (1964)? O'Callaghan et al., Antimicrob. Agents and Chemotherapy, 1968, 67 (1969). However, none of these known substances have any dramatic effect on the range of action of the second antibiotic present in the mixture.

3 58332 d. On selostettu että määrätyt aktinomyseetti-viljelmät tuottavat 3-laktamaasia inhiboivia aineita, jotka toimivat synergistisesti penisilliinien tai kefalosporiinien kanssa, kuten esim. brittiläisessä patentissa n:o 1 363 075 jaHata'n ym. J. Antibiotics, 25, 473 (1972) ja Umezawa'n ym., J. Antibiotics, ,26, 51 (1973) selostamat viljelmät. Millään näistä aktinomysetaali-alkuperää olevista 3-laktamaasi-inhi-biittoreista ei kuitenkaan ole havaittu olevan kliinistä käyttöä. Erityisen huomattavia piirteitä, jotka erottavat klavulaanihapon muista aktinomysetaali-alkuperää olevista B-laktamaasi-inhibiitto-reista ovat sen uutettavuus orgaanisiin liuottimiin suodosviljelmis-tä pH-arvossa 2, sen stabiliteetti ihmisveressä ja sen laaja baktee-rienvastaisen ja 8-laktamaasia inhiboivan aktiviteetin spektri, sen alhainen molekyylipaino ja korkeat R^-arvot paperikromatografiässä, jossa on käytetty lukuisia liuotinjärjestelmiä.3,58332 d. Certain actinomycete cultures have been reported to produce β-lactamase inhibitors that act synergistically with penicillins or cephalosporins, as described, e.g., in British Patent No. 1,363,075 and Hata et al., J. Antibiotics, 25, 473 (1972) and Umezawa. 'n et al., J. Antibiotics,, 26, 51 (1973). However, none of these 3-lactamase inhibitors of actinomycetal origin have been found to have clinical use. Particularly noteworthy features that distinguish clavulanic acid from other β-lactamase inhibitors of actinomycetal origin are its extractability into organic solvents from filtrate cultures at pH 2, its stability in human blood and its extensive antibacterial and β-lactamase inhibitory activity. low molecular weight and high R 1 values in paper chromatography using numerous solvent systems.

On havaittu, että Streptomyces clavuligeruksen aerobinen viljelmä tavanomaisissa ravintOväliaineissa noin 25-30°C:ssa karkeasti ottaen neutraaleissa olosuhteissa tuottaa 8-laktamaasia inhiboivan aineen, jolla myös on bakteerienvastainen vaikutus. Tälle uudelle aineelle on annettu nimitys "klavulaanihappo".It has been found that aerobic culture of Streptomyces clavuligerus in conventional nutrient media at about 25-30 ° C under roughly neutral conditions produces an 8-lactamase inhibitor which also has antibacterial activity. This new substance has been termed "clavulanic acid".

Klavulaanihapolla on seuraavat ominaisuudet: (a) Se on karboksyylihappo.Clavulanic acid has the following properties: (a) It is a carboxylic acid.

(b) Se muodostaa natriumsuolan.(b) It forms a sodium salt.

(c) Se kykenee inhiboimaan Staphylococcus aureuksen kantojen kasvun.(c) It is capable of inhibiting the growth of Staphylococcus aureus strains.

(d) Se kykenee synergoimaan ampisilliinin bakteerienvastaisen vaikutuksen Escherichia colin, Klebsiella aerogenesin ja Staphylococcus aureuksen 3-laktamaasia tuottavia kantoja vastaan.(d) It is able to synergize the antibacterial effect of ampicillin against β-lactamase-producing strains of Escherichia coli, Klebsiella aerogenes and Staphylococcus aureus.

(e) Se kykenee synergoimaan kefaloridiinin bakteerienvastaisen vaikutuksen Proteus mirabiliksen ja Staphylococcus aureuksen 3-laktamaasia tuottavia kantoja vastaan.(e) It is able to synergize the antibacterial effect of cephaloridine against 3-lactamase-producing strains of Proteus mirabilis and Staphylococcus aureus.

(f) Se muodostaa metyyliesterin, jolla on molekyylipaino (massa-spektroskopian mukaan) 213, 0635, joka vastaa kaavaa CgH^NOs.(f) It forms a methyl ester having a molecular weight (by mass spectroscopy) of 213, 0635 corresponding to the formula C 9 H 2 NO 3.

Klavulaanihapon voidaan siten katsoa oleva kaavan CgHgNO^ mukainen yksiemäksinen karboksyylihappo.Clavulanic acid can thus be considered to be a monobasic carboxylic acid of the formula CgHgNO2.

4 583324,58332

Streptomyces clavuligeruksen tuottamalla yhdisteellä, jolla on yllä olevat ominaisuudet, on kaava (II): _S°\ /cn20a * / ^ (II) nco2hA compound produced by Streptomyces clavuligerus having the above properties has the formula (II): _S ° \ / cn20a * / ^ (II) nco2h

Siten klavulaanihappoa voidaan nimittää 3-(3-hydroksietylideeni)-7-okso-4-oksa-l-atsabisyklo/3,2,07heptaani-2-karboksyylihapoksi.Thus, clavulanic acid can be called 3- (3-hydroxyethylidene) -7-oxo-4-oxa-1-azabicyclo / 3.2.07 heptane-2-carboxylic acid.

Klavulaanihapon stereokemia kohdassa C5 ja C2 on sama kuin luonnossa esiintyvissä penisilliineissä ja kefalosporiineissa, joten klavulaanihappoa voidaan kuvata rakennekaavalla (I): ^<\ ch2oh Γ f* <I> co2hThe stereochemistry of clavulanic acid at C5 and C2 is the same as in naturally occurring penicillins and cephalosporins, so clavulanic acid can be represented by structural formula (I): ^ <\ ch2oh Γ f * <I> co2h

Siten täydellisempi kemiallinen nimitys klavulaanihapolle on Z-(2R, 5R)-3-(3-hydroksietylideeni)-7-okso-4-oksa-l-atsabisyklo/3,2, 0/hep-taan i-2-karboksyy1ihappo.Thus, the more complete chemical designation for clavulanic acid is Z- (2R, 5R) -3- (3-hydroxyethylidene) -7-oxo-4-oxa-1-azabicyclo [3.2.0] heptane-2-carboxylic acid.

Klavulaanihapon suuri käyttökelpoisuus on ilmeinen oivallettaessa, että Kelbsiella aerogenesin A määrätyt kannat, joiden kasvua ei inhiboi ampisilliinin, amoksisilliinin, karbenisilliinin tai bentsyyii-penisilliinin läsnäolo määrässä 125^ug/ml tai klavulaanihapon läsnäolo määrässä 10yug/ml, inhiboituvat kun läsnä on alle 12,5^ug/ml edellä mainittuja penisilliinejä, jos läsnä on myös 5^ug/ml klavulaanihappoa. Samanlaisia tuloksia on myös havaittu erilaisia klavu-laanihappoestereitä sisältävissä yhdistelmissä. Esimerkiksi Klebsiella aerogenesin A kannat, joiden kasvua ei 125^,ug/ml ampisillii-nia tai 10^ug/ml klavulaanihappometyyliesteriä inhiboi, inhiboituvat vähemmästä kuin 12,5^,ug/ί sta/ml ampisilliinia klavulaanihappome-tyyliesterin läsnäollessa määrässä 5^ug/ml.The high utility of clavulanic acid is evident in the realization that certain strains of Kelbsiella aerogenesin A whose growth is not inhibited by the presence of ampicillin, amoxicillin, carbenicillin or benzylpenicillin at 125 ug / ml or the presence of clavulanic acid at less than 10 ug / ml are inhibited. μg / ml of the above-mentioned penicillins, if 5 μg / ml of clavulanic acid is also present. Similar results have also been observed in combinations containing different clavannic acid esters. For example, strains of Klebsiella aerogenes A that do not inhibit growth by 125 ug / ml ampicillin or 10 ug / ml clavulanic acid methyl ester are inhibited by less than 12.5 ug / ml ampicillin in the presence of clavulanic acid methyl ester in an amount of 5 ug. / ml.

Tämän keksinnön tarkoituksena on näin ollen valmistaa klavulaanihapon estereitä.It is therefore an object of the present invention to prepare clavulanic acid esters.

5 583325,58332

Klavulaanihapon sopivia estereitä ovat sellaiset, jotka ovat peräisin alkoholeista kuten metanolista, etanolista, propanolista, buta-nolista, 2,2,2-trikloorietanolista, 2,2,2-trifluorietanolista, bent-syylialkoholista, p-nitrobentsyylialkoholista, fenolista, asetoksi-metanolista, pivaloyylioksimetanolista, 2-dimetyyliaminoetanolista ja muista tavanomaisista alkoholeista. Lukuisat klavulaanihapon esterit ovat käyttökelpoisia välituotteita määrätyissä klavulaanihapon puhdistusprosessissa. Monet klavulaanihappoesterit ovat käyttökelpoisia synergistisiä yhdisteitä. Tällaisten esterien aktiviteetti voi johtua esterin hydrolyysistä kantahapoksi.Suitable esters of clavulanic acid are those derived from alcohols such as methanol, ethanol, propanol, butanol, 2,2,2-trichloroethanol, 2,2,2-trifluoroethanol, benzyl alcohol, p-nitrobenzyl alcohol, phenol, acetoxymethanol. , pivaloyloxymethanol, 2-dimethylaminoethanol and other conventional alcohols. Numerous clavulanic acid esters are useful intermediates in certain clavulanic acid purification processes. Many clavulanic acid esters are useful synergistic compounds. The activity of such esters may be due to the hydrolysis of the ester to the parent acid.

Tässä yhteydessä sanonta esteri käsittää esterit, jotka ovat peräisin alkoholista tai tiolista, jolla on kaava RÖH tai RSH, jossa R on orgaaninen tähde. Sopivia ryhmiä R ovat alkyyli, alkenyyli, alky-nyyli, aryyli, aryylialkyyli tai muut samantapaiset ryhmät, joista mikä tahansa voi olla haluttaessa substituoitu. Jottei molekyyli-paino kohoaisi suhteettomassa määrin ryhmät R eivät tavallisesti sisällä enemmän kuin 16 hiiliatomia, edullisesti korkeintaan 12 hiili-atomia ja kaikkein sopivimmin korkeintaan 8 hiiliatomia.In this context, the phrase ester comprises esters derived from an alcohol or thiol of the formula RÖH or RSH, where R is an organic residue. Suitable groups R include alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl, arylalkyl, or the like, any of which may be optionally substituted. In order not to increase the molecular weight disproportionately, the groups R usually do not contain more than 16 carbon atoms, preferably at most 12 carbon atoms and most preferably at most 8 carbon atoms.

Ryhmä R on edullisesti peräisin alkoholista RÖH tai (vähemmän edullisesti) tiolista RSH, joka on farmaseuttisesti hyväksyttävä.The group R is preferably derived from the alcohol ROH or (less preferably) the thiol RSH, which is pharmaceutically acceptable.

Sopivia substituentteja, joita voidaan sisällyttää ryhmään R ovat halogeeniatomi ja alhaiset alkoksyyli-, hydroksyyli-, alhaiset asyy-lioksyyli-, alhaiset alkyyliamino-, alhaiset dialkyyliamino-, ja sentapaiset ryhmät. Sanonta "alhainen" tarkoittaa että ryhmä sisältää korkeintaan 6 hiiliatomia ja edullisesti korkeintaan 4 hiiliatomia. Siten R voi esim. olla metyyli, etyyli, n-propyyli, isopropyyli, suora tai haarautunut butyyli, pentyyli, heptyyli, oktyyli, nonyyli, dekyyli, undekyyli, dodekyyli, vinyyli, allyyli, butenyyli, syklo-propyyli, syklobutyyli, syklopentyyli, sykloheksyyli, sykloheptyyli, sykloheksenyyli, sykloheksadienyyli, metyylisyklopentyyli, metyyli-sykloheksyyli, bentsyyli, bentshydryyli, fenyylietyyli, naftyyli-metyyli, fenyyli, naftyyli, propynyyli, tolyyli, 2-kloorietyyli, 2,2,2-trikloorietyyli, 2,2,2-trifluorietyyli, asetyylimetyyli, bentsoyylimetyyli, 2-metoksietyyli, 2-dimetyyliaminoetyyli, 2-dietyy-liaminoetyyli, 2-piperidinoetyyli, 2-morfolinoetyyli, 3-dimetyyli-aminopropyyli, p-klooribentsyyli, p-metoksibentsyyli, p-nitrobent-syyli, p-bromibentsyyli, m-klooribentsyyli, 6-metoksinaftyyli-2- 6 58332 metyyli-p-kloorifenyyli, p-metoksifenyyli tai mikä tahansa sellainen ryhmä kuten myös sellaiset ryhmät, joiden penisilliini- tai ke-falosporiinitekniikasta tiedetään tuottavan sellaisia estereitä, jotka helposti hydrolysoituvat elävässä elimistössä kanta-antibiootiksi.Suitable substituents which may be included in the group R include a halogen atom and low alkoxyl, hydroxyl, low acyloxy, low alkylamino, low dialkylamino, and the like groups. The phrase "low" means that the group contains up to 6 carbon atoms and preferably up to 4 carbon atoms. Thus, for example, R may be methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, straight or branched butyl, pentyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, vinyl, allyl, butenyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl , cycloheptyl, cyclohexenyl, cyclohexadienyl, methylcyclopentyl, methylcyclohexyl, benzyl, benzhydryl, phenylethyl, naphthylmethyl, phenyl, naphthyl, propynyl, tolyl, 2-chloroethyl, 2,2,2-trichloroethyl, 2,2,2-trichloroethyl, 2,2,2-trichloroethyl, , acetylmethyl, benzoylmethyl, 2-methoxyethyl, 2-dimethylaminoethyl, 2-diethylaminoethyl, 2-piperidinoethyl, 2-morpholinoethyl, 3-dimethylaminopropyl, p-chlorobenzyl, p-methoxybenzyl, p-nitrobenzyl, p-bromobenzyl, p-bromobenzyl , m-chlorobenzyl, 6-methoxynaphthyl-2-6,58332 methyl-p-chlorophenyl, p-methoxyphenyl or any such group as well as groups known to produce such esters by the penicillin or cephalosporin technique, which are easily hydrolysed in the living body to the parent antibiotic.

Helposti hydrolysoitavia estereitä ovat esim. ne, joilla on kaavat (V) ja (VI) : __/ , ch2oh I / ^ (v) J— ° \ co ; N0- C — x — CO — A-, i 3 Ä2Easily hydrolyzable esters are, for example, those of formulas (V) and (VI): __ /, ch2oh I / ^ (v) J— ° \ co; N0- C - x - CO - A-, i 3 Ä2

_/CH20H_ / CH20H

J—(vi) o 'J— (vi) o '

^CO^ CO

^-0— CH-Z^ -0— CH-Z

I II I

X_ C = YX_ C = Y

joissa A^ on vetyatomi, alkyyli-, aryyli- tai aralkyyliryhmä, A2 on vetyatomi tai metyyliryhmä, A3 on alkyyli-, aryyli- tai aralkyyliryhmä, X on happi tai rikki, Y on happi tai rikki ja Z on kaksiarvoinen orgaaninen ryhmä. Kaavojen (V) ja (VI) mukaisia estereitä, jotka verraten helposti vapauttavat klavulaanihappoa verivirtaan antamisen jälkeen, ovat sellaisia, joissa A^ on vetyatomi, A2 on vety-atomi tai metyyliryhmä ja A3 on metyyli-, etyyli-, propyyli-, bu-tyyli-, bentsyyli- tai fenyyliryhmä ja ne joissa X on happi, Y on happi ja Z on -CH2CH2-, -CH:CH-, . ^ OCH, X) “ -wherein A 1 is a hydrogen atom, an alkyl, aryl or aralkyl group, A 2 is a hydrogen atom or a methyl group, A 3 is an alkyl, aryl or aralkyl group, X is oxygen or sulfur, Y is oxygen or sulfur and Z is a divalent organic group. Esters of formulas (V) and (VI) which relatively easily release clavulanic acid after administration to the bloodstream are those in which A 1 is a hydrogen atom, A 2 is a hydrogen atom or a methyl group and A 3 is a methyl, ethyl, propyl, a style, benzyl or phenyl group and those in which X is oxygen, Y is oxygen and Z is -CH 2 CH 2 -, -CH: CH-,. ^ OCH, X) "-

Edellisen kaavan yhteydessä käytettynä sanonta "alkyyli" tarkoittaa 7 58332 korkeintaan 6 hiiliatomia sisältävää alkyyliä, sanonta "aryyli" tarkoittaa fenyyliä, naftyyliä tai fenyyliä, joka on substituoitu iner-tillä substituentilla, kuten fluori- tai klooriatomilla tai metyyli-tairaetoksyyliryhmällä tai sen tapaisella, tässä yhteydessä käytettynä sanonta "aralkyyli" tarkoittaa aryyliryhmällä substituoitua alkyyli-ryhmää.As used in the preceding formula, the term "alkyl" means 7,55332 alkyl having up to 6 carbon atoms, the term "aryl" means phenyl, naphthyl or phenyl substituted with an inert substituent such as a fluorine or chlorine atom or a methyl or ethoxyl group or the like, herein as used herein, the term "aralkyl" means an alkyl group substituted with an aryl group.

Kaavojen (V) ja (VI) mukaisia erityisen sopivia estereitä ovat ne, joilla on kaavat (VII) ja (VIII): . 0Particularly suitable esters of formulas (V) and (VI) are those of formulas (VII) and (VIII):. 0

-s' v . CH~OH-s' v. CH ~ OH

/=^ a4 (VII) }—»-—c t o XC0 - O - CH - 0 - CO - A5/ = ^ a4 (VII)} - »-— c t o XCO - O - CH - O - CO - A5

, CH*>OH, CH *> OH

HB

J- N -—/ & NC0 - 0 - /A6 o I iT (Vili) o 6 joissa A4 on vetyatomi tai metyyliryhmä, Ag on metyyli, t-butyyli tai fenyyliryhmä ja Αβ on vetyatomi tai metoksiryhmä.J- N -— / & NC0 - 0 - / A6 o I iT (Vili) o 6 wherein A4 is a hydrogen atom or a methyl group, Ag is a methyl, t-butyl or phenyl group and Αβ is a hydrogen atom or a methoxy group.

Monet klavulaanihapon esterit eroavat penisilliinien tai kefalospo-riinien analogisista estereistä siinä, että niillä on suurempi pyrkimys hydrolysoitua k1avuläänihapoksi lievissä olosuhteissa. Siten esim. yksinkertaiset alkyyliesterit, kuten metyyliesteri, hitaasti hydrolysoituvat klavulaanihapoksi vedessä, joka on puskuroitu pH-arvoon 7. Esterit, jotka läpikäyvät jonkin verran hydrolyysia lievissä olosuhteissa ovat kaavan (IX) mukaisia:Many esters of clavulanic acid differ from analogous esters of penicillins or cephalosporins in that they have a greater tendency to hydrolyze to cavulanic acid under mild conditions. Thus, for example, simple alkyl esters, such as methyl ester, are slowly hydrolyzed to clavulanic acid in water buffered to pH 7. Esters which undergo some hydrolysis under mild conditions are of formula (IX):

I-f°\-/ CH2°H1 DEG C.- / CH2 DEG C.

J—»-( (IX) 0 \J - »- ((IX) 0 \

C02RC02R

jossa R on 1-9 hiiliatomia sisältävä hiilivetyryhmä, joka mahdollisesti on substituoitu halogeenilla, alhaisella alkoksilla, hydrok-s-yIillä tai mahdollisesti suolan muodossa olevilla emäksisisillä 8 58332 ryhmillä, joilla on kaava NR R , jossa R on vetyatomi tai alhainen 3 alkyyliryhmä, R on vetyatomi tai alhainen alkyyliryhmä tai sitou- 2 3 tunut ryhmään r2, niin että NR RJ on 5- tai 6-jäseninen rengas.wherein R is a hydrocarbon group having 1 to 9 carbon atoms optionally substituted by halogen, lower alkoxy, hydroxy-s or optionally basic 8,83332 groups in the form of a salt of formula NR R wherein R is a hydrogen atom or a lower alkyl group, R is a hydrogen atom or a lower alkyl group or is attached to the group r2 so that NR RJ is a 5- or 6-membered ring.

Kaavan (I) yhteydessä käytettynä sanonta "alhainen" tarkoittaa että ryhmä sisältää 1-4 hiiliatomia.As used in connection with formula (I), the phrase "low" means that the group contains 1 to 4 carbon atoms.

Sopivia Rl-ryhmiä ovat alkyyli- ja aralkyyliryhmät, jotka mahdollisesti on substituoitu halogeenilla, metoksyylillä, hydroksyyIillä tai suolatuilla NR2R3-ryhmillä, joissa r2 on metyyli- tai etyyli- ryhmä ja R3 on metyyli- tai etyyliryhmä tai sitoutunut ryhmään R^, 2 3 niin että NR R on pyrrolidiini-, piperidiini- tai morfoliiniryhmä.Suitable R 1 groups include alkyl and aralkyl groups optionally substituted with halogen, methoxyl, hydroxyl or salted NR 2 R 3 groups, wherein r 2 is a methyl or ethyl group and R 3 is a methyl or ethyl group or is attached to the group R 1, that NR R is a pyrrolidine, piperidine or morpholine group.

Alkyyliryhmät Rl ovat kaikkein edullisimmin suoraketjuisia korkeintaan 6 hiiliatomia sisältäviä ryhmiä, jotka mahdollisesti on substi- 2 3 tuoitu yhdellä nietoksilla, hydroksyylillä, NR R -suola- ryhmällä tai yhdellä kloori-, bromi- tai jodiatomilla tai CCI3- tai CF3-ryhmällä.The alkyl groups R1 are most preferably straight-chain groups having up to 6 carbon atoms, optionally substituted by one nitro, hydroxyl, NR R salt group or one chlorine, bromine or iodine atom or a CCl3 or CF3 group.

Klavulaanihapon synergisteinä erityisen käyttökelpoisia estereitä ovat ne, jotka hydrolysoituvat nisäkkäiden kudoksissa, erityisesti ihmisveressä, klavulaanihapon tai sen suolan muodostamiseksi, koska uskotaan, että k.lavulaanihappo ja sen suolat pyrkivät olemaan hieman käyttökelpoisempia synergistisiä aineita kuin itse esterit. Monet kaavojen (V)-(IX) mukaiset esterit ovat käyttökelpoisia tähän tarkoitukseen.Particularly useful esters of clavulanic acid are those that hydrolyze in mammalian tissues, especially human blood, to form clavulanic acid or a salt thereof, as it is believed that k.lavulanic acid and its salts tend to be slightly more useful synergists than the esters themselves. Many esters of formulas (V) to (IX) are useful for this purpose.

Tämän keksinnön erityisen sopivien estereiden lisäryhmä ovat ne käyttökelpoiset välituotteet, jotka ovat helposti muunnettavissa klavulaanihapoksi tai sen suolaksi sellaisilla kemiallisilla tai biokemiallisilla menetelmillä, joita tunnetaan penisilliini- tai ke-falosporiinitekniikasta riittävän lieviksi hajottamatta reaktiivisia happolabiileja β-laktaamirenkaita.A further group of particularly suitable esters of this invention are those useful intermediates which are readily converted to clavulanic acid or its salt by chemical or biochemical methods known in the penicillin or cephalosporin technique to be sufficiently mild without degrading reactive acid labile β-lactam.

Esteri on kaikkein edullisimmin sellainen, joka on poistettavissa hydraamalla. Tällaiseen prosessiin sopivia tavanomaisia este reitä ovat bentsyyli, substituoitu bentsyyli, bentshydryyli, substituoitu bentshydryy1i, trityyli ja sentapaiset. Bentsyyliesteri on osoittautunut erityisiin käyttökelpoiseksi tähän tarkoitukseen.Most preferably, the ester is one that can be removed by hydrogenation. Conventional barriers suitable for such a process include benzyl, substituted benzyl, benzhydryl, substituted benzhydryl, trityl and the like. The benzyl ester has proven to be particularly useful for this purpose.

Minkä tahansa substituentin luonne esteriryhmässä on epäolennainen niin kauan kun se ei häiritse hydraasireaktiota.The nature of any substituent on the ester group is irrelevant as long as it does not interfere with the hydrazo reaction.

9 58332 Tämän keksinnön tarkoituksena on aikaansaada menetelmä klavulaani-hapon esterien valmistamiseksi klavulaanihaposta tai sen suolasta muodostamalla esteri sinänsä tunnetuilla menetelmillä.It is an object of the present invention to provide a process for the preparation of clavulanic acid esters from clavulanic acid or a salt thereof by esterification by methods known per se.

Klavulaanihappo tai sen suola voidaan muuttaa esteriksi alla selostetuilla esteröintireaktioilla. Suosittu menetelmä klavulaanihapon halutun esterin muodostamiseksi on saattaa klavulaanihapon suola reagoimaan esteröintiaineen kuten reaktiivisen halogenidin, sulfonaat-tiesterin tai sentapaisen kanssa, kuten alla on selostettu. Tällaiset reaktiot suoritetaan usein orgaanisessa liuottimessa, jolla on korkea dielektrisyyskerroin kuten dimetyyliformamidissa, dimetyyli-formamidi/asetonissa, dimetyylisulfoksidissa, N-metyyliasetamidissa, heksametyylifosforämidiäsa ja sentapaisessa.Clavulanic acid or a salt thereof can be converted to an ester by the esterification reactions described below. A preferred method of forming the desired ester of clavulanic acid is to react the salt of clavulanic acid with an esterifying agent such as a reactive halide, sulfonate thiester, or the like, as described below. Such reactions are often performed in an organic solvent having a high dielectric constant such as dimethylformamide, dimethylformamide / acetone, dimethylsulfoxide, N-methylacetamide, hexamethylphosphoramidite and the like.

Haluttaessa voidaan klavulaanihapon suola liuottaa liuottimeen tavanomaiseen tapaan tai se voidaan sitoa polymeeriseen kantajaan. Sopivia tässä menetelmässä käytettäviä kantajia ovat voimakkaasti emäksiset anioninvaihtohartsit, erityisesti ne joilla on makroverkkoi-nen luonne, joka sallii vedettömien liuotinjärjestelmien käytön. Amerblyst A26 on havaittu sopivaksi tähän tarkoitukseen. Klavulaani-happosuola voidaan adsorboida hartsille viljelmäsuodoksesta ja hartsi sen jälkeen suspendoida dimetyyliformamidiin, joka sisältää natrium-jodidia tai vaihtoehtoisesti eluoida kolonnikohtaisesti natriumjo-didin dimetyyliformamidiliuoksella tai dimetyyliformamidin ja asetonin seoksessa.If desired, the salt of clavulanic acid may be dissolved in a solvent in a conventional manner or may be bound to a polymeric carrier. Suitable carriers for use in this process are strongly basic anion exchange resins, especially those having a macrogrid nature that allows the use of anhydrous solvent systems. Amerblyst A26 has been found to be suitable for this purpose. The clavulanic acid salt can be adsorbed on the resin from the culture filtrate and the resin then suspended in dimethylformamide containing sodium iodide or alternatively eluted per column with sodium iodide in dimethylformamide solution or in a mixture of dimethylformamide and acetone.

Muodostuttuaan puhdistetaan klavulaanihapon epäpuhdas esteri tavallisesti kromatograafisesti. Tällaisissa menetelmissä liuotetaan esteri tavallisesti orgaaniseen liuottimeen kuten etyyliasetaattiin, metyleenikloridiin, kloroformiin, sykloheksaaniin tai samantapaisiin liuottimiin. Kromatograafisessa prosessissa käytetty kiinteä faasi on tavallisesti inertinen aine kuten piigeeli tai kromatograa-fisesti samantapainen aine.Once formed, the crude ester of clavulanic acid is usually purified by chromatography. In such processes, the ester is usually dissolved in an organic solvent such as ethyl acetate, methylene chloride, chloroform, cyclohexane or the like. The solid phase used in the chromatographic process is usually an inert substance such as silica gel or a chromatographically similar substance.

Jakeet, jotka tulevat kolonnista, voidaan testata klavulaanihapon läsnäolon suhteen käyttämällä hyväksi tämän synergistisiä ominaisuuksia. Aktiiviset jakeet yhdistetään tavallisesti ja orgaaninen liuotin poistetaan haihduttamalla alennetussa paineessa.Fractions coming from the column can be tested for the presence of clavulanic acid by taking advantage of its synergistic properties. The active fractions are usually combined and the organic solvent is removed by evaporation under reduced pressure.

10 5 8332 Tällä menetelmällä saatu esteri on tavallisesti riittävän puhdas, mutta yhdiste voidaan kromatografoida uudestaan haluttaessa.The ester obtained by this method is usually sufficiently pure, but the compound can be rechromatographed if desired.

Keksinnön mukainen menetelmä klavulaanihapon estereiden valmistamiseksi on tunnettu siitä, että klavulaanihappo tai sen suola saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava Q - R, jossa Q on helposti korvattava ryhmä ja R on 1-9 hiiliatomia sisältävä hii-livetyryhmä, joka mahdollisesti on substituoitu halogeenilla,alemmalla alkoksiryhmällä, hydroksyyliryhmällä tai mahdollisesti suolan 2 3 2 muodossa olevalla emäksisellä ryhmällä NR R , jossa R on vetyatomi 3 tai alempi alkyyliryhmä ja R on vetyatomi tai alempi alkyyliryhmä 2 2 3 tai on liittynyt ryhmään R niin, että NR R on 5- tai 6-jäseninen rengas.The process for preparing clavulanic acid esters according to the invention is characterized in that clavulanic acid or a salt thereof is reacted with a compound of formula Q to R, wherein Q is an easily displaceable group and R is a hydrocarbon group having 1 to 9 carbon atoms, optionally substituted by halogen. , a lower alkoxy group, a hydroxyl group or optionally a basic group NR R in the form of a salt 2 3 2, wherein R is a hydrogen atom 3 or a lower alkyl group and R is a hydrogen atom or a lower alkyl group 2 2 3 or is attached to the group R so that NR R is 5- or 6-member ring.

Sopivia klavulaanihapon suoloja, joita voidaan saattaa reagoimaan yhdisteiden R - Q kanssa, ovat alkalimetallisuolat kuten natrium-tai kaliumsuolat tai muut tavanomaiset suolat kuten hopeasuola.Suitable salts of clavulanic acid which can be reacted with the compounds R to Q include alkali metal salts such as sodium or potassium salts or other conventional salts such as the silver salt.

Sopivia Q-ryhmiä ovat ne atomit tai ryhmät, joiden tiedetään olevan korvattavissa karboksylaattianioneilla ja ovat kloori-, bromi- ja jodiatomi, sulfonihappoesterit kuten O-SC^CH^ tai O'SC^CgH^CH^, aktiiviset esteriryhmät kuten OCO-H tai O-CO-CF^ ja muut tavanomaiset nukleofiileilla korvattavat ryhmät.Suitable Q groups are those atoms or groups which are known to be displaceable by carboxylate anions and which are chlorine, bromine and iodine atoms, sulphonic acid esters such as O-SC 2 CH 2 or O'SC 2 C 6 H 2 CH 2, active ester groups such as OCO-H or O-CO-CF 2 and other conventional nucleophilic displaceable groups.

Edellinen reaktio suoritetaan tavallisesti orgaanisessa liuottimessa, jolla on suhteellisen korkea dielektrisyyskerroin, kuten dimetyyli-formamidissa, asetonissa, dioksaanissa, tetrahydrofuraanissa tai sentapaisessa ja kohtuullisessa lämpötilassa kuten lämpötiloissa, joka on välillä -5 ja 100°C, tavallisesti 5 - 30°C:ssa, esim. ympäristön lämpötilassa.The above reaction is usually carried out in an organic solvent having a relatively high dielectric constant such as dimethylformamide, acetone, dioxane, tetrahydrofuran or the like and at a reasonable temperature such as -5 to 100 ° C, usually 5 to 30 ° C, e.g., at ambient temperature.

Klavulaanihapon saattaminen reagoimaan diatsoyhdisteen kanssa on hellävarainen menetelmä alkyyli-, aralkyyli- tai sentapaisten esterien valmistamiseksi. Diatsotointireaktio voidaan suorittaa tavanomaisissa reaktio-olosuhteissa, esim. kohtuullisessa lämpötilassa ja tavanomaisessa liuottimessa. Tällaiset reaktiot suoritetaan tavallisesti lämpötilassa välillä noin -5 ja 100°C, tavallisesti 5 - 30°C:ssa, esim. ympäristön lämpötilassa. Sopivia liuottimia tätä reaktiota varten ovat alhaiset alkanolit kuten metanoli ja etanoli ja liuottimet kuten 11 58332 tetrahydrofuraani, dioksaani ja sentapaiset. Etanoli on osoittautunut erityisen käyttökelpoiseksi liuottimeksi tässä reaktiossa.Reacting clavulanic acid with a diazo compound is a gentle method for preparing alkyl, aralkyl or similar esters. The diazotization reaction can be carried out under conventional reaction conditions, e.g., at a reasonable temperature and in a conventional solvent. Such reactions are usually carried out at a temperature between about -5 and 100 ° C, usually at 5 to 30 ° C, e.g. at ambient temperature. Suitable solvents for this reaction include low alkanols such as methanol and ethanol and solvents such as 11,58332 tetrahydrofuran, dioxane and the like. Ethanol has proven to be a particularly useful solvent in this reaction.

Klavulaanihapon reaktio alkoholin tai tiolin kanssa kondensaatiota edistävän aineen läsnäollessa tapahtuu tavallisesti inertissä orgaanisessa liuottimessa, jolla on suhteellisen korkea dielektrisyys-kerroin, kuten asetonitriilissä. Tämä reaktio suoritetaan tavallisesti ympäristön lämpötilassa tai alennetussa lämpötilassa, esim. lämpötilassa välillä -10 ja 22°C, tavallisesti lämpötilassa välillä -5 ja 18°C, esim. alunperin 0°C:ssa ja sen jälkeen asteittain lämmittäen noin 150C:een. Käytetty kondensaatiota edistävä aine on tavallisesti sellainen, joka poistaa vettä reaktioseoksesta. Sopivia aineita ovat karbodi-imidit, karbodi-imidatsolit tai sentapaiset reagenssit. Disykloheksyylikarbodi-imidi on osoittautunut erityisen sopivaksi kondensaatiota edistäväksi aineeksi tässä prosessissa käytettäväksi. Klavulaanihapon itsekondensoitumisen vähentämiseksi mahdollisimman pieneksi, suoritetaan tämä reaktio tavallisesti alkoholin tai tiolin huomattavan ylimäärän läsnäollessa.The reaction of clavulanic acid with an alcohol or thiol in the presence of a condensation agent usually takes place in an inert organic solvent having a relatively high coefficient of dielectrics, such as acetonitrile. This reaction is usually carried out at ambient temperature or at a reduced temperature, e.g. at a temperature between -10 and 22 ° C, usually at a temperature between -5 and 18 ° C, e.g. initially at 0 ° C and then gradually warmed to about 150 ° C. The condensation agent used is usually one that removes water from the reaction mixture. Suitable substances are carbodiimides, carbodiimidazoles or the like. Dicyclohexylcarbodiimide has proven to be a particularly suitable condensation promoter for use in this process. To minimize the self-condensation of clavulanic acid, this reaction is usually performed in the presence of a substantial excess of alcohol or thiol.

Muita sopivia esterinmuodostusmenetelmiä ovat (d) hiilidioksidin poistaminen yhdisteestä, jolla on kaava (XI):Other suitable ester formation methods include (d) removing carbon dioxide from a compound of formula (XI):

_1^°\ CH«OH_1 ^ ° \ CH «OH

\ V\ V

/—Ν~-( \:0-0 -CO-O-R4 jossa r4 on inertinen orgaaninen ryhmä, ja (e) kaavan (XI) mukaisen yhdisteen saattaminen reagoimaan alkoholin RÖH kanssa (tai vähemmän edullisesti tiolin RSH kanssa).And - (-: O-O-CO-O-R 4 wherein r 4 is an inert organic group, and (e) reacting a compound of formula (XI) with an alcohol RHH (or less preferably with the RSH of a thiol).

Hiilidioksidi voidaan poistaa kaavan (XI) mukaisesta yhdisteestä spontaanisesti sen valmistuksen aikana tai vaihtoehtoisesti kuumentamalla kaavan (XI) mukaista yhdistettä inertissä liuottimessa. Sopivia intertisiä liuottimia ovat eetteriliuottimet kuten dietyyli-eetteri, tetrahydrofuraani, dioksaani ja sentapaiset. Monissa tapauksissa kaavan (XI) mukainen yhdiste hajoaa spontaanisesti jo alennetussa lämpötilassa, esim. -5°C:ssa, jolloin saadaan esteri, jolla on kaava: ” 58332 -fy/*·Carbon dioxide can be removed from the compound of formula (XI) spontaneously during its preparation or, alternatively, by heating the compound of formula (XI) in an inert solvent. Suitable inert solvents include ether solvents such as diethyl ether, tetrahydrofuran, dioxane and the like. In many cases, the compound of formula (XI) decomposes spontaneously already at reduced temperature, e.g. -5 ° C, to give an ester of formula: “58332 -fy / * ·

J-NJ-N

0 nco2r4 jossa R4 on määrityksen R piiriin kuuluva inertti ryhmä.0 nco2r4 wherein R4 is an inert group included in the definition of R.

Kun kaavan (XT) mukainen yhdiste on saatettava reagoimaan alkoholin (tai vähemmän edullisesti tiolin) kanssa suoritetaan tämä reaktio tavallisesti inertissä liuottimessa kuten eetteriliuottimessa alkoholiyli-määrän (tai tioliylimäärän) läsnäollessa klavulaanihappojohdannaisen itse-kondensoitumisen ehkäisemiseksi.When a compound of formula (XT) is to be reacted with an alcohol (or less preferably a thiol), this reaction is usually carried out in an inert solvent such as an ether solvent in the presence of an excess of alcohol (or an excess of thiol) to prevent self-condensation of the clavulanic acid derivative.

Tällaiset esteröintimenetelmät eivät yleensä ole yhtä käyttökelpoisia kuin ne, joissa klavulaanihapon suola saatetaan reagoimaan edellä selostetun R - Q:n kanssa.Such esterification methods are generally not as useful as those in which the salt of clavulanic acid is reacted with R-Q described above.

Kaavan (XI) mukainen yhdiste voidaan valmistaa saattamalla klavulaanihapon suola reagoimaan yhdisteen C1*C0*0*R4 kanssa tai sen kemiallisen ekvivalentin kanssa. Tavallisesti tämä reaktio suoritetaan alhaisessa lämpötilassa, esim. korkeintaan 5°C:ssa ja inertissä liuottimessa, esim. dietyylieetterissä, tetrahydrofuraanissa, dioksaanissa ja sentapaisessa. Tässä reaktiossa käytetty klavulaanihapon suola on edullisesti lipofiilinen suola, niin että se liukenee liuottimeen, joskin vähemmän edullista natriumsuolaa voidaan käyttää suspendoi-malla se reaktioväliaineeseen.A compound of formula (XI) may be prepared by reacting a salt of clavulanic acid with C1 * C0 * 0 * R4 or a chemical equivalent thereof. Usually, this reaction is carried out at a low temperature, e.g. up to 5 ° C, and in an inert solvent, e.g. diethyl ether, tetrahydrofuran, dioxane and the like. The salt of clavulanic acid used in this reaction is preferably a lipophilic salt so that it is soluble in a solvent, although a less preferred sodium salt can be used by suspending it in the reaction medium.

13 5833213 58332

Esimerkki 1Example 1

Klavulaanihapon esterin (metyyliesteri) valmistus ,_/η20Η _2£- pA/V· 0 '' “2Na 0)— -/ 'co2ch3 19,8 mg klavulaanihapon natriumsuolaa liuotettiin 0,5 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia ja käsiteltiin 0,25 ml:11a metyylijodidia. Seistyään huoneen lämpötilassa 1 1/2 tuntia vedettömissä olosuhteissa poistettiin liuottimet tyhjössä. Jäännös puhdistettiin P.L.C.: llä piigeelillä (piigeeli 60F254, E. Merck, Darmstadt, Saksan Liittotasavalta) eluoimalla etyyliasetaatilla, jolloin saatiin klavulaanihapon metyyliesteri värittömänä öljynä (R^ 0,38, punainen väri trifenyylitetratsoliumkloridisuihkeella), jolla oli seuraavat ominaisuudet:Preparation of clavulanic acid ester (methyl ester), _ / η20Η _2 £ - pA / V · 0 '' “2Na 0) - - / 'co2ch3 19.8 mg of clavulanic acid sodium salt was dissolved in 0.5 ml of dry dimethylformamide and treated with 0.25 ml : 11a methyl iodide. After standing at room temperature for 1 1/2 hours under anhydrous conditions, the solvents were removed in vacuo. The residue was purified on P.L.C. silica gel (silica gel 60F254, E. Merck, Darmstadt, Germany) eluting with ethyl acetate to give clavulanic acid methyl ester as a colorless oil (Rf 0.38, red color with triphenyltetrazolium chloride spray) having the following characteristics:

Analyysi: havaittu C 50,49; H 5,43; N 6,29 C9Hi:lN05 edellyttää C 50,70; H 5,20; N 6,57Analysis: Found C 50.49; H 5.43; N 6.29 C 9 H 1: NO 5 requires C 50.70; H 5.20; N 6.57

Amaks (metanoli): ei absorptiota yli 215 nm vmaks (filmi): 3300-3600 (leveä), 1800, 1750, 1695 cm-^Amax (methanol): no absorption above 215 nm vmax (film): 3300-3600 (broad), 1800, 1750, 1695 cm-1

Likimääräinen ensimmäisen suuruusluokan N.M.R. (CDCl^): 2,49 (leveä S, 1, korvattu D20:lla), 3,05 (d, 1, J =17,5 Hz), 3,54 (dd, 1, J = 17,5 Hz, J2 = 2,5 Hz), 3,84 (S, 3) 4,24 (d, 2, J = 7 Hz), 4,93 (dt, 1, J = 7 Hz, J2 = 1,5 Hz), 5,07 (d, 1, J = 1,5 Hz), 5,72 (d, 1, J = 2,5 Hz)Approximate first-order N.M.R. (CDCl 3): 2.49 (broad S, 1, replaced by D 2 O), 3.05 (d, 1, J = 17.5 Hz), 3.54 (dd, 1, J = 17.5 Hz) , J2 = 2.5 Hz), 3.84 (S, 3) 4.24 (d, 2, J = 7 Hz), 4.93 (dt, 1, J = 7 Hz, J2 = 1.5 Hz ), 5.07 (d, 1, J = 1.5 Hz), 5.72 (d, 1, J = 2.5 Hz)

Molekyylipaino (massakirjo): 213,0635.Molecular weight (mass spectrum): 213.0635.

Laskettu yhdisteelle C^H^NO^: 213,0637.Calculated for C 18 H 18 NO 3: 213.0637.

Metyyliesterin ohutkerroskromatografia osoitti yhden vyöhykkeen kussakin seuraavista liuotinjärjestelmistä: butanoli/etanoli/vesi 4:1:5 t/t ylin faasi R^ 0,75, isopropanoli/vesi, 7:3 t/t Rf 0,95, etyyliasetaatti/etyylialkoholi 8:2 t/t R^ 0,87. Vyöhykkeet todettiin bioautografiällä käyttäen Klebsiella aerogenesia bentsyyli-penisilliinilisäyksellä (synergismijärjestelmä).Thin layer chromatography of the methyl ester showed one zone in each of the following solvent systems: butanol / ethanol / water 4: 1: 5 v / v top phase Rf 0.75, isopropanol / water, 7: 3 v / v Rf 0.95, ethyl acetate / ethyl alcohol 8: 2 t / t Rf 0.87. Zones were identified by bioautography using Klebsiella aerogenesis with benzyl-penicillin addition (synergism system).

Esimerkki 2Example 2

Klavulaanihapon esterin (p-nitrobentsyyliesteri) valmistus 14 583 32 CH-OH _ jYV —> j-fW1*·Preparation of clavulanic acid ester (p-nitrobenzyl ester) 14,583 32 CH-OH _ jYV -> j-fW1 * ·

^ \ 0 / . I^ \ 0 /. I

C02Na \ -jT\_ C02CH2 \ V-NO 2CO 2 Na \ -jT \ _ CO 2 CH 2 \ V-NO 2

Klavulaanihapon natriumsuolan käsittely p-nitrobentsyylibromidilla kuivassa DMF:ssä antoi P.L.C.:n jälkeen värittömän öljyn, joka kiteytyi kloroformi-eetteristä, jolloin saatiin klavulaanihapon p-nitrobentsyyliesteri valkoisina sulkamaisina neuloina, sp. 111-112° C, uudelleenkiteytyksen jälkeen sp. oli 117,5-118°C.Treatment of the sodium salt of clavulanic acid with p-nitrobenzyl bromide in dry DMF gave, after P.L.C., a colorless oil which crystallized from chloroform ether to give p-nitrobenzyl ester of clavulanic acid as white capped needles, m.p. 111-112 ° C, after recrystallization m.p. was 117.5-118 ° C.

Esimerkki 3Example 3

Klavulaanihapon esterin (bentsyyliesteri) valmistus CH2OH ch2ohPreparation of clavulanic acid ester (benzyl ester) CH2OH ch2oh

—> f H-> f H

A--N-L IA - N-L I

o NCO»a J-N-k, 0 CO,CH2Pho NCO »a J-N-k, 0 CO, CH2Ph

Epäpuhdasta 3-(β-hydroksietylideeni)-7-okso-4-oksa-l-atsabisyklo-/3,2,07heptaani-2-karbonihapon natriumsuolaa (oletettavasti suurin piirtein 55 mg puhdasta ainetta) kuivassa dimetyyliformamidissa (0,64 ml) käsiteltiin bentsyylibromidilla (0,18 ml). Liuosta pidettiin huoneen lämpötilassa (noin 17-18°C) 3 tuntia vedettömissä olosuhteissa. Reaktioseos fraktionoitiin piigeelillä, eluoitiin etyyliasetaatilla, jolloin saatiin 3-(β-hydroksietylideeni)-7-okso- 4-oksa-l-atsabisyklo-/3,2,07heptaani-2-karbonihapon bentsyyliesterin olennaisesti puhdas muoto (63 mg) värittömänä öljynä. Infranpuna (filmi) 1800, 1745, 1695 cm-1; n.m.r. (CDCl3), 2,25 (s, 1, korvattavissa D20:lla), 3,05 (d, 1, J = 17 Hz), 3,51 (dd, 1, J = 17 Hz, J2 = 2,5 Hz), 4,24 (d, 2, J = 7,5 Hz), 4,92 (dt, 1, J = 7,5 Hz, J2 = 1,5 Hz), 5,15 (d, 1, J = 1,5 Hz), 5,24 (s, 2), 5,71 (d, 1, J = 2,5 Hz), 7,456 (s, 5).The crude sodium salt of 3- (β-hydroxyethylidene) -7-oxo-4-oxa-1-azabicyclo [3.2.07] heptane-2-carboxylic acid (presumably approximately 55 mg of pure substance) in dry dimethylformamide (0.64 ml) was treated with benzyl bromide (0.18 ml). The solution was kept at room temperature (about 17-18 ° C) for 3 hours under anhydrous conditions. The reaction mixture was fractionated on silica gel, eluting with ethyl acetate to give essentially pure form (63 mg) of 3- (β-hydroxyethylidene) -7-oxo-4-oxa-1-azabicyclo [3.2.07] heptane-2-carboxylic acid benzyl ester as a colorless oil. Infrared (film) 1800, 1745, 1695 cm-1; n.m.r. (CDCl 3), 2.25 (s, 1, substitutable with D 2 O), 3.05 (d, 1, J = 17 Hz), 3.51 (dd, 1, J = 17 Hz, J 2 = 2.5 Hz), 4.24 (d, 2, J = 7.5 Hz), 4.92 (dt, 1, J = 7.5 Hz, J2 = 1.5 Hz), 5.15 (d, 1, J = 1.5 Hz), 5.24 (s, 2), 5.71 (d, 1, J = 2.5 Hz), 7.456 (s, 5).

15 5833215 58332

Esimerkki 4Example 4

Klavulaanihapon bentsyyliesterin valmistaminen S. clavuligeruksen viljelysuodoksien raakauutteistaPreparation of benzyl ester of clavulanic acid from crude extracts of culture filtrates of S. clavuligerus

Patentin 54 144 esimerkissä 10 selostetulla tavalla saatua viljelysuodosta (20 1) tyhjöhaihdutettiin käyttäen liuoksen kalvon nousuun perustuvaa haihdutinta 5 litraksi. Väkevöite pakastekuivattiin sen jälkeen käyttäen Edwards E.F.6-hyllypakastekuivainta, jota valmistaa Edwards High Vacuum Ltd. 300 g siten saatua kiintoainetta sisälsi 3 g natriumklavulaanihappoa entsyymin inhibiitioanalyysin mukaan. Kiintoaine suspendoitiin 900 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia ja 150 ml bentsyylibromidia lisättiin. Seosta sekoitettiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa ja laimennettiin sen jälkeen 1 litralla etyyliasetaattia. Reaktioseos suodatettiin ja suodate väkevöitiin mahdollisimman pieneen tilavuuteen. öljymäinen jäännös uutettiin vielä 1 litralla etyyliasetaattia ja uute suodatettiin. Suodate väkevöitiin jälleen ja saatu öljymäinen jäännös panostettiin 6,72 cm x 35,56 cm:n piigeelipilarille (Biogel Biosil A 100 meshiä) syklohek-saanissa. Kolonni eluoitiin sykloheksaanilla bentsyylibromidin poistamiseksi ja liuotin vaihdettiin sen jälkeen etyyliasetaattiin ja 20 ml:n jakeita otettiin talteen. Jakeet testattiin klavulaanihapon bentsyyliesterin läsnäolon suhteen täplittämällä lasipohjaisille piigeeli-ohutkerroskromatografialevyille (Merck-esipäällystetty pii-geeli 60 F 254) ja ruiskuttamalla 2,3,5-trifenyylitetratsoliumklo-ridi (TTC)-suihkereagenssilla. Intensiivisen punaisia täpliä tämän reagenssin kanssa antavat jakeet tutkittiin edelleen ohutkerros-kromatografiällä piigeelilevyillä käyttäen liuottimena kloroformi-etyyliasetaattia 8:2 ja suihkuttamalla kehitetyt levyt TTC-suihkeel-la. Klavulaanihapon bentsyyliesteri juoksee R^-arvossa 0,31 lämpötilassa 22°C. Tätä esteriä sisältävät jakeet yhdistettiin ja väkevöitiin 15 ml:aan ja tämä liuos kromatografoitiin edelleen 3,81 cm x 40,64 cm:n piigeelikolonnissa (Merck piigeeli H, tyyppi 60) kloro-formi/etyyliasetaatti 8:2 liuottimena. 15 ml:n jakeita otettiin talteen ja testattiin bentsyyliesterin suhteen kuten yllä on selostettu. Esteriä sisältävät jakeet väkevöitiin 8 ml:aan ja puhdistettiin lopuksi kolonnikromatografoimalla 2,54 cm x 40,64 cm:n piigeelikolonnissa (Merck piigeeli H, tyyppi 60) etyyliasetaatti/ sykloheksaanilla 8:2 liuottimena. Valitut jakeet yhdistettiin ja tyhjöhaihdutettiin, jolloin saatiin puhdas bentsyyliesteri öljynä, 160 mg.The culture filtrate (20 L) obtained as described in Example 10 of U.S. Patent 54,144 was vacuum evaporated using an evaporator based on the rise of the solution film to 5 liters. The concentrate was then lyophilized using an Edwards E.F.6 shelf lyophilizer manufactured by Edwards High Vacuum Ltd. 300 g of the solid thus obtained contained 3 g of clavulanic acid sodium according to an enzyme inhibition assay. The solid was suspended in 900 ml of dry dimethylformamide and 150 ml of benzyl bromide were added. The mixture was stirred for 2 hours at room temperature and then diluted with 1 liter of ethyl acetate. The reaction mixture was filtered and the filtrate was concentrated to a minimum volume. the oily residue was extracted with a further 1 liter of ethyl acetate and the extract was filtered. The filtrate was concentrated again and the resulting oily residue was loaded onto a 6.72 cm x 35.56 cm silica gel column (Biogel Biosil A 100 mesh) in cyclohexane. The column was eluted with cyclohexane to remove benzyl bromide and the solvent was then changed to ethyl acetate and 20 ml fractions were collected. Fractions were tested for the presence of clavulanic acid benzyl ester by spotting on glass-based silica gel thin layer chromatography plates (Merck precoated silica gel 60 F 254) and spraying with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) spray reagent. The fractions giving intense red spots with this reagent were further examined by thin layer chromatography on silica gel plates using chloroform-ethyl acetate 8: 2 as solvent and spraying the developed plates with TTC spray. The benzyl ester of clavulanic acid runs at an Rf value of 0.31 at 22 ° C. The fractions containing this ester were combined and concentrated to 15 ml, and this solution was further chromatographed on a 3.81 cm x 40.64 cm silica gel column (Merck silica gel, type 60) as chloroform / ethyl acetate 8: 2 solvent. 15 ml fractions were collected and tested for benzyl ester as described above. The ester-containing fractions were concentrated to 8 ml and finally purified by column chromatography on a 2.54 cm x 40.64 cm silica gel column (Merck silica gel, type 60) with ethyl acetate / cyclohexane as 8: 2 solvent. The selected fractions were combined and vacuum evaporated to give pure benzyl ester as an oil, 160 mg.

16 5833216 58332

Esimerkki 5Example 5

Klavulaanihappobentsyyliesterin valmistusPreparation of clavulanic acid benzyl ester

Suihkukuivattua kiintoainetta (3,3 kg), joka sisälsi 69,4 g klavulaa-nihappoa entsyymi-inhibiitioanalyysillä määritettynä,saatiin patentin 54 144 esimerkissä 16 selostetuilla tavalla. Kiintoaine lietettiin 5,5 litraan dimetyyliformamidia ja 500 ml bentsyylibromidia lisättiin. Huoneen lämpötilassa 2 tuntia suoritetun sekoituksen jälkeen lisättiin 12 1 etyyliasetaattia ja kiintoaineet poistettiin suodattamalla. Suodate tyhjöhaihdutettiin öljymäiseksi jäännökseksi (212 g). Jäännös panostettiin kolonnille, jossa oli 10,16 cm x 33,02 cm:n piigeelipatja (Hopkins & Williams MFC) sykloheksaanissa. Ko-lonni eluoitiin 12 litralla sykloheksaania bentsyylibromidiylimää-rän poistamiseksi. Eluentti vaihdettiin sen jälkeen etyyliasetaatiksi ja 500 ml:n jakeita otettiin talteen. Nämä testattiin bentsyy-liklavulanaattipitoisuuden suhteen täplittämällä piigeeli-ohut-kerroskromatografialevyillä (Merck esipäällystetty piigeeli 60 F 254) ja suihkutettiin 2,3,5-trifenyylitetratsoliumkloridilla (TTC) suihkereagenssina. Intensiivisen punaisia täpliä antavat jakeet tutkittiin edelleen ohutkerroskromatografiällä piigeelillä käyttäen liuottimena kloroformi/etyyliasetaattia 8:2 ja suihkuttamalla kehitetyt levyt TTC-suihkeella. Jakeet 5-13 sisälsivät esterin pääosan ja nämä yhdistettiin sekä tyhjöväkevöitiin öljyksi (79,3 g). Tämä valmiste kromatografoitiin sen jälkeen 10,16 cm x 45,72 cm:n piigeelikolonnilla (Merck piigeeli H tyyppi 60) kloroformi/ etyyliasetaatilla 8:2 liuottimena. Jakeet valittiin kuten yllä on selostettu ja antoivat väkevöitettäessä 45,9 g öljyä, jonka puhtaus-aste oli 62 % NMR-spektroskopialla määritettynä.A spray-dried solid (3.3 kg) containing 69.4 g of clavulanic acid as determined by enzyme inhibition analysis was obtained as described in Example 16 of Patent 54,144. The solid was slurried in 5.5 liters of dimethylformamide and 500 ml of benzyl bromide was added. After stirring at room temperature for 2 hours, 12 L of ethyl acetate was added and the solids were removed by filtration. The filtrate was vacuum evaporated to an oily residue (212 g). The residue was loaded onto a column with a 10.16 cm x 33.02 cm silica gel mattress (Hopkins & Williams MFC) in cyclohexane. The column was eluted with 12 liters of cyclohexane to remove excess benzyl bromide. The eluent was then changed to ethyl acetate and 500 ml fractions were collected. These were tested for benzyl cyclavulanate content by spotting on silica gel thin layer chromatography plates (Merck precoated silica gel 60 F 254) and sprayed with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) as a spray reagent. The fractions giving intense red spots were further examined by thin layer chromatography on silica gel using chloroform / ethyl acetate 8: 2 as solvent and spraying the developed plates with TTC spray. Fractions 5-13 contained most of the ester and were combined and vacuum concentrated to an oil (79.3 g). This preparation was then chromatographed on a 10.16 cm x 45.72 cm silica gel column (Merck silica gel type 60) with chloroform / ethyl acetate as 8: 2 solvent. The fractions were selected as described above and concentrated to give 45.9 g of an oil with a purity of 62% as determined by NMR spectroscopy.

Tämä tuote kromatografoitiin lopuksi 6,97 cm x 45,72 cm:n Sepbadex LH 20 kolonnilla sykloheksaani/kloroformissa 1:1. Jakeiden valinnan ja väkevöittämisen jälkeen saatiin väritön öljy (27,6 g), joka osoittautui 95 %:sesti puhtaaksi klavulaanihapon bentsyyliesterik-si NMR-spektroskooppisen tarkastelun perusteella. (Sephadex LH 20 on Sephadex'in Q25 hydroksipropyylijohdannainen, jota valmistaa Pharmacia, Iso Britannia, 75 Uxbridge Road, Lontoo W5, Englanti).This product was finally chromatographed on a 6.97 cm x 45.72 cm Sepbadex LH 20 column in cyclohexane / chloroform 1: 1. After selection and concentration of the fractions, a colorless oil (27.6 g) was obtained which was found to be 95% pure to the benzyl ester of clavulanic acid by NMR spectroscopic examination. (Sephadex LH 20 is a hydroxypropyl derivative of Sephadex Q25 manufactured by Pharmacia, UK, 75 Uxbridge Road, London W5, England).

Esimerkki 6Example 6

Klavulaanihappobentsyyllesterin valmistusPreparation of clavulanic acid benzyl ester

Viljelysuodos (150 1), pH 7,0 sisälsi 16,2 g klavulaanihappoa (nat-riumsuola) entsyymin inhibiitioanalyysillä määritettynä. Tätä suo- 17 58332 datetta sekoitettiin 5 kg:n kanssa Amberlyst A. 26-anioninvaihtohart-sia kloridimuodossa (Rohm & Haas Company, Philadelphia, USA) 1 tunnin ajan huoneen lämpötilassa. Hartsi suodatettiin sen jälkeen ja suodate analysoitiin uudestaan,jolloin osoittautui, että 6,4 g kla-vulaanihappoa oli poistunut. Hartsi pestiin 20 litralla deionoitua vettä, sitten 20 litralla asetonia ja 10 litralla dimetyyliformami-dia (DMF). Uudelleensuodatuksen jälkeen suspendoitiin hartsi 2,3 litraan DMF/0,2-m NaJ. Tähän lisättiin 200 ml bentsyylibromidia ja suspensiota sekoitettiin perinpohjaisesti. Seistyään huoneen lämpötilassa 16 tuntia lisättiin etyyliasetaattia (21) ja hartsi suodatettiin sitten, jolloin hartsin lisäpesunesteet (etyyliasetaatti) yhdistettiin suodoksen kanssa. Uute väkevöitiin sen jälkeen pieneen tilavuuteen ja kromatografoltiin 6,72 cm x 45,72 cm:n piigee-likolonnilla (Merck piigeeli H tyyppi 60) etyyliasetaatti/syklo-heksaanilla 8:2 liuottimena. Bentsyyliklavulanaattia sisältävät jakeet valittiin täplittämällä piigeeli-ohutkerroskromatografiale-vyillä ja suihkuttamalla TTC-reagenssilla, kuten edellä on selostettu (esimerkki 24). Valitut jakeet väkevöitiin 20 ml:aan ja kromatografoitiin sen jälkeen 3,81 cm x 45,72 cm:n piigeelikolon-nilla (Merck piigeeli H tyyppi 60) kloroformi/etyyliasetaatilla 8:2 liuottimena. Valitut jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin värittömäksi öljyksi (440 mg), josta 90 % oli bentsyyliklavulanaattia NMR-spektroskopialla määritettynä.The culture filtrate (150 L), pH 7.0, contained 16.2 g of clavulanic acid (sodium salt) as determined by enzyme inhibition analysis. This filtrate was mixed with 5 kg of Amberlyst A. 26 anion exchange resin in chloride form (Rohm & Haas Company, Philadelphia, USA) for 1 hour at room temperature. The resin was then filtered and the filtrate was re-analyzed to show that 6.4 g of clavulanic acid had been removed. The resin was washed with 20 liters of deionized water, then with 20 liters of acetone and 10 liters of dimethylformamide (DMF). After refiltration, the resin was suspended in 2.3 liters of DMF / 0.2 M NaJ. To this was added 200 ml of benzyl bromide and the suspension was stirred thoroughly. After standing at room temperature for 16 hours, ethyl acetate (21) was added and the resin was then filtered, whereby additional resin washings (ethyl acetate) were combined with the filtrate. The extract was then concentrated to a small volume and chromatographed on a 6.72 cm x 45.72 cm silica gel column (Merck silica gel type 60) with ethyl acetate / cyclohexane as 8: 2 solvent. Fractions containing benzyl clavulanate were selected by spotting on silica gel thin layer chromatography plates and spraying with TTC reagent as described above (Example 24). Selected fractions were concentrated to 20 mL and then chromatographed on a 3.81 cm x 45.72 cm silica gel column (Merck silica gel type 60) with chloroform / ethyl acetate 8: 2 as solvent. The selected fractions were combined and evaporated to a colorless oil (440 mg), 90% of which was benzyl clavulanate as determined by NMR spectroscopy.

Esimerkki 7Example 7

Klavulaanihapon bentsyyliesterin valmistus S. clavuligeruksen vil-jelysuodoksen raakauutteistaPreparation of benzyl ester of clavulanic acid from crude extracts of S. clavuligerus culture filtrate

Patentin 54 144 esimerkissä 14 selostetulla tavalla saadun viljelysuodoksen buta-noliuutteen vesipitoisen takaisinuutteen alikvootti pakastekuivat-tiin käyttäen Edwards'in kammiokuivaintä. 24 g:n annos saatua kiin toainetta sisälsi 0,96 g natriumklavulaanihappoa entsyymi-inhibii-tioanalyysillä määritettynä. Tämä kiintoaine suspendoitiin 75 ml: aan kuivaa dimetyyliformamidia ja 75 ml bentsyylibromidia lisättiin. Seosta sekoitettiin 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Suspensio laimennettiin sen jälkeen 500 ml:11a etyyliasetaattia ja seos suodatettiin. Suodate väkevöitiin öljymäiseksi jäännökseksi pyörivässä tyhjöhaihduttimessa. Tämä jäännös panostettiin 5,08 cm x 35,56 cm:n piigeelikolonnille (Biogel Biocel A.100 mesh) syklohek-saanissa. Bentsyylibromidia eluoitiin kolonnista ja liuotin vaihdettiin sen jälkeen etyyliasetaattiin ja 10 ml:n jakeita otettiin tai- 18 58332 teen. Klavulaanihapon bentsyyliesteriä sisältävät jakeet valittiin kuten esimerkissä 24. Lisäpuhdistus aikaansaatiin myös kuten esimerkissä 4 on selostettu kolonnikromatografiällä. Tämä menetelmä antoi 220 mg puhdasta bentsyyliesteriä.An aliquot of the aqueous back extract of the Buta-nol extract of the culture filtrate obtained as described in Example 14 of U.S. 54,144 was lyophilized using an Edwards chamber dryer. A 24 g portion of the resulting solid contained 0.96 g of sodium clavulanic acid as determined by enzyme inhibition analysis. This solid was suspended in 75 ml of dry dimethylformamide and 75 ml of benzyl bromide was added. The mixture was stirred for 2 hours at room temperature. The suspension was then diluted with 500 ml of ethyl acetate and the mixture was filtered. The filtrate was concentrated to an oily residue on a rotary evaporator. This residue was loaded onto a 5.08 cm x 35.56 cm silica gel column (Biogel Biocel A.100 mesh) in cyclohexane. Benzyl bromide was eluted from the column and the solvent was then changed to ethyl acetate and 10 ml fractions were taken up in tea. Fractions containing clavulanic acid benzyl ester were selected as in Example 24. Further purification was also accomplished as described in Example 4 by column chromatography. This method gave 220 mg of pure benzyl ester.

Esimerkki 8Example 8

Klavulaanihappometyyliesterin hydrolyysi klavulaanihapoksi 2,17 mg klavulaanihappoesteriä liuotettiin 0,1 ml:aan metanolia ja käsiteltiin 0,208 ml:lla natriumhydroksidiliuosta (0,0482-n).Hydrolysis of Clavulanic Acid Methyl Ester to Clavulanic Acid 2.17 mg of clavulanic acid ester was dissolved in 0.1 ml of methanol and treated with 0.208 ml of sodium hydroxide solution (0.0482-n).

1 tunnin jälkeen huoneen lämpötilassa sisälsi reaktioseos useita tuotteita. Ohutkerroskromatografia-analyysi osoitti, että eräällä pääkomponenteista oli R^-arvo, joka oli identtinen klavulaanihapon natriumsuolan kanssa, värireaktiot ja biologinen analyysi oli yhtäpitävä tämän klavulaanihapon natriumsuolan kanssa.After 1 hour at room temperature, the reaction mixture contained several products. Thin layer chromatographic analysis showed that one of the major components had an R 1 value identical to the sodium salt of clavulanic acid, color reactions, and the biological analysis was consistent with the sodium salt of this clavulanic acid.

Esterin hidasta muuttumista klavulaanihapoksi havaittiin, kun 1 mg/ml yhdistettä haudutettiin 37°C:ssa 0,05-m fosfaattipuskurissa pH-arvossa 7. Reaktiota seurattiin paperikromatografiällä (bio-autografinen järjestelmä). Käytettäessä butanoli/etanoli/vesi-järjestelmää reaktion seuraamiseen 2 tunnin ajanjakson aikana havaittiin, että metyyliesterin vyöhyke Rf-arvossa 0,79 pieneni kooltaan, kun taas klavulaanihapon vyöhyke R^-arvossa 0,12 suureni.Slow conversion of the ester to clavulanic acid was observed when 1 mg / ml of the compound was incubated at 37 ° C in 0.05 M phosphate buffer at pH 7. The reaction was monitored by paper chromatography (bio-autograph system). When using a butanol / ethanol / water system to monitor the reaction over a 2 hour period, it was found that the band of the methyl ester at Rf decreased by 0.79, while the band of clavulanic acid at Rf increased by 0.12.

Esimerkki 9Example 9

Esimerkkejä klavulaanihapon metyyliesterin aktiviteetista Testit bakteerienvastaisen vaikutuksen suhteen liemessä osoittivat, että klavulaanihapon metyyliesterillä on laaja aktiviteettispektri vaikka suuruusluokaltaan alhaisempi kuin klavulaanihapolla. Ei ollut selvää johtuiko tämä aktiviteetti itse yhdisteen aktiviteetistä tai esterin hitaan vesipitoisen hydrolyysin vapauttamasta klavulaanihaposta. Klavulaanihapon metyyliesteri osoitti merkittävää bakteerienvastaista synergismiä yhdessä ampisilliinin tai kefa-loridiinin kanssa näihin antibiootteihin vastustuskykyisiä bakteereja vastaan. Siten ampisilliinin pienin inhiboiva väkevyys (M.I.C.) Staphylococcus aureusta (Russell) vastaan aleni 500 ^ug:sta/ml alle 0,4 1,0 ^ug/ml:n klavulaanihapon metyyliesteriä läsnäollessa.Examples of Clavulanic Acid Methyl Ester Activity Tests for antibacterial activity in the broth showed that clavulanic acid methyl ester has a broad spectrum of activity, albeit in a lower order of magnitude than clavulanic acid. It was not clear whether this activity was due to the activity of the compound itself or to the clavulanic acid released by the slow aqueous hydrolysis of the ester. Clavulanic acid methyl ester showed significant antibacterial synergism in combination with ampicillin or cephaloridinine against bacteria resistant to these antibiotics. Thus, the minimum inhibitory concentration (M.I.C.) of ampicillin against Staphylococcus aureus (Russell) decreased from 500 μg / ml to less than 0.4 in the presence of 1.0 μg / ml clavulanic acid methyl ester.

Kefaloriidinin M.I.C. aleni 1,5 ^,ug:sta/ml alle 0,03 ^,ug/ml klavulaanihapon metyyliesterin läsnäollessa 1 ^ug/ml. Ampisilliinin M.I.C. Proteus mirabilista C889 vastaan aleni 500 yUg:sta/ml 31 ^,ug:aan/ml klavulaanihapon metyyliesterin läsnäollessa 5 ^,ug/ml.Cephaloridin M.I.C. decreased from 1.5 μg / ml to less than 0.03 μg / ml in the presence of clavulanic acid methyl ester 1 μg / ml. Ampicillin M.I.C. Proteus against mirabil C889 decreased from 500 μg / ml to 31 μg / ml in the presence of clavulanic acid methyl ester at 5 μg / ml.

19 5833219 58332

Esimerkki 10Example 10

Pivaloyylioksimetyyliklavulanaatin valmistusPreparation of pivaloyloxymethyl clavulanate

Bromimetyylipivalaatin (0,37 g) sekoitettuun liuokseen kuivassa dimetyyliformamidissa (5 ml) lisättiin natriumklavulanaattia (0,49 g). 2 tunnin jälkeen huoneen lämpötilassa käsiteltiin reak- tioseosta etyyliasetaatilla (20 ml), sykloheksaanilla (10 ml) ja vedellä (20 ml). Seos erottui kahdeksi kerrokseksi ja vedetön kerros erotettiin, pestiin vedellä (20 ml) ja kuivattiin natrium-sulfaatilla. Kuivattu liuos haihdutettiin jättäen jäljelle halutun tuotteen vaaleankeltaisena öljynä (500 mg). N.m.r. (CDCl-j) , 1,26 (s, 9), 3,13 (d, 1, J = 17 Hz), 3,62 (dd, 1, J = 17 Hz, J = 2,5 Hz, 4,3 (d, 2, J = 7,5 Hz), 5,0 (dt, 1, J = 7,5 Hz, J2 = 1,5 Hz), 5,16 (d, 1, J = 1,5 Hz), 5,79 (d, 1, J = 2,5 Hz), 5,92 δ (s, 2); i.r. (nestefilmi), v β-laktaami C.O. 1800 cm-1, esteri C=0 1760 cm 1.To a stirred solution of bromomethyl pivalate (0.37 g) in dry dimethylformamide (5 ml) was added sodium clavulanate (0.49 g). After 2 hours at room temperature, the reaction mixture was treated with ethyl acetate (20 mL), cyclohexane (10 mL) and water (20 mL). The mixture was separated into two layers, and the anhydrous layer was separated, washed with water (20 ml) and dried over sodium sulfate. The dried solution was evaporated to leave the desired product as a pale yellow oil (500 mg). N.m.r. (CDCl 3), 1.26 (s, 9), 3.13 (d, 1, J = 17 Hz), 3.62 (dd, 1, J = 17 Hz, J = 2.5 Hz, 4 , 3 (d, 2, J = 7.5 Hz), 5.0 (dt, 1, J = 7.5 Hz, J2 = 1.5 Hz), 5.16 (d, 1, J = 1, 5 Hz), 5.79 (d, 1, J = 2.5 Hz), 5.92 δ (s, 2), ir (liquid film), β-lactam CO 1800 cm-1, esters C = 0 1760 cm 1.

Esimerkki 11Example 11

Klavulaanihapon ftalidiesterlen valmistus 3-bromiftaiidin (0,43 g) sekoitettuun liuokseen kuivassa dimetyyliformamidissa (5 ml) lisättiin natriumklavulanaattia (0,5 g) ja liuos jätettiin huoneen lämpötilaan 2 tunniksi. Liuos käsiteltiin etyyliasetaatilla (20 ml), sykloheksaanilla (10 ml) ja vedellä (30 ml) ja ravistettiin perinpohjaisesti. Vedetön kerros pestiin vedellä (20 ml), kuivattiin (Na^O^) ja haudutettiin, jolloin saatiin vaaleankeltainen kumi. Molemmat diastereoisomeeriset esterit erotettiin käyttäen korkeapainenestekromatografiaa 40 cm x 10 mm:n piigeelikolonnilla (Mercosorb SI 60, 5^u) eluoiden etyyliasetaatilla virtausnopeudella 3 ml/min.Preparation of phthalide ester of clavulanic acid To a stirred solution of 3-bromophthalide (0.43 g) in dry dimethylformamide (5 ml) was added sodium clavulanate (0.5 g) and the solution was left at room temperature for 2 hours. The solution was treated with ethyl acetate (20 mL), cyclohexane (10 mL) and water (30 mL) and shaken thoroughly. The anhydrous layer was washed with water (20 mL), dried (Na 2 O 4) and incubated to give a pale yellow gum. Both diastereoisomeric esters were separated using high pressure liquid chromatography on a 40 cm x 10 mm silica gel column (Mercosorb SI 60, 5 μl) eluting with ethyl acetate at a flow rate of 3 ml / min.

Ensimmäinen ftalidiesteri (viiveaika 7,15 min) kiteytyi etyyliasetaatista neuloina, sp. 102°C ja sillä oli seuraava i.r. (nujol mull) v 3-laktaami C=0 1790 cm”1, esteri C=0 1755 cm 1, n.m.r. (CD^COCD^): 3,14 (d, 1, J = 17,5 Hz), 3,76 (dd, 1, J = 17,5 Hz, J2 = 2,5 Hz), 4,25 (d, 2, J - 7,5 Hz), 5,0 (dt, 1, J1 = 7,5 Hz, J2 = 1,5 Hz), 5,4 (s, 1, J = 1,5 Hz), 5,82 (d, 1, J = 2,5 Hz), 7,7 (s, 1), 8,06 δ (m, 4); molekyylipaino (massaspektrometria: 331,0696 vastaa kaavaa C16H13N07 (las^ettu 331,0692). Toisella diastereoisomeerilla (viiveaika 8,85 min) oli seuraava i.r. (CH2Cl2-liuos) v 8-laktaami C=0 1800 cm 1, esteri C=0 1780 cm 1; nmr (CDCl^) 2,42 (leveä S, 1, korvattavissa D20:lla), 3/12 (d# i; j = i8 Hz), 3,60 (dd, 1, 20 58332 J1 = 18 Hz, J2 = 2,5 Hz), 4,30 (d, 2, J = 7,5 Hz), 5,0 (dt, 1, J]_ = 7,5 Hz, J2 = 1,5 Hz), 5,12 (d, 1, J = 1,5 Hz), 5,76 (d, 1, J = 2,5 Hz), 7,52 (s, 1), 7,85 δ (m, 4).The first phthalide ester (delay time 7.15 min) crystallized from ethyl acetate as needles, m.p. 102 ° C and had the following i.r. (nujol Mull) v 3-lactam C = 0 1790 cm-1, ester C = 0 1755 cm-1, n.m.r. (CD2 COCD4): 3.14 (d, 1, J = 17.5 Hz), 3.76 (dd, 1, J = 17.5 Hz, J2 = 2.5 Hz), 4.25 ( d, 2, J = 7.5 Hz), 5.0 (dt, 1, J1 = 7.5 Hz, J2 = 1.5 Hz), 5.4 (s, 1, J = 1.5 Hz) , 5.82 (d, 1, J = 2.5 Hz), 7.7 (s, 1), 8.06 δ (m, 4); molecular weight (mass spectrometry: 331.0696 corresponds to the formula C16H13NO7 (calculated 331.0692). The second diastereoisomer (lag time 8.85 min) had the following ir (CH2Cl2 solution) v 8-lactam C = 0 1800 cm 1, ester C = 0 1780 cm -1; nmr (CDCl 3) 2.42 (broad S, 1, substitutable with D 2 O), 3/12 (d # i; j = i8 Hz), 3.60 (dd, 1, 20 58332 J1 = 18 Hz, J2 = 2.5 Hz), 4.30 (d, 2, J = 7.5 Hz), 5.0 (dt, 1, J] _ = 7.5 Hz, J2 = 1.5 Hz ), 5.12 (d, 1, J = 1.5 Hz), 5.76 (d, 1, J = 2.5 Hz), 7.52 (s, 1), 7.85 δ (m, 4).

—ro\_/H2°H oJ_ »7 • y0 \ 0 = CO. .S >=0—Ro \ _ / H2 ° H oJ_ »7 • y0 \ 0 = CO. .S> = 0

HMHM

^0 CH-OH // \ yy — · °^ 0 CH-OH // \ yy - · °

' „ ^0, CH-OHCH 2 OH

--S \ / 2 J-N—/ o = do--S \ / 2 J-N— / o = do

Esimerkki 12Example 12

Nonyyliklavulanaatin valmistusPreparation of nonyl clavulanate

Natriumklavulanaattia (44 mg) kuivassa dimetyyliformamidissa (2 ml) käsiteltiin nonyylijodidilla (76 mg) ja jätettiin huoneen lämpötilaan 2 tunniksi. Liuotin haihdutettiin ja jäännös fraktionoitiin piigeelille, eluoitiin etyyliasetaatti-heksaanilla (2:1), jolloin saatiin tuote öljynä, i.r. (filmi) 1800, 1745, 1690 cm Molekyy-lipaino (massaspektrometria) = 325,1890 mikä vastaa kaavaa C17H27N05 <laskettu 325,1889).Sodium clavulanate (44 mg) in dry dimethylformamide (2 ml) was treated with nonyl iodide (76 mg) and left at room temperature for 2 hours. The solvent was evaporated and the residue was fractionated on silica gel, eluting with ethyl acetate-hexane (2: 1) to give the product as an oil, i.r. (film) 1800, 1745, 1690 cm Molecular weight (mass spectrometry) = 325.1890 corresponding to the formula C17H27NO5 <calculated 325.1889).

Esimerkki 13Example 13

Metyyliklavulanaatin valmistusPreparation of methyl clavulanate

Klavulaanihappoa (130 mg) etanolissa (10 ml) käsiteltiin diatso-metaanin ylimäärällä eetterissä. 2 minuutin jälkeen huoneen lämpötilassa reaktio vaikutti (ohutkerroskromatografia) loppuunvledyltä.Clavulanic acid (130 mg) in ethanol (10 ml) was treated with excess diazomethane in ether. After 2 minutes at room temperature, the reaction appeared to be complete (thin layer chromatography).

21 5833221 58332

Liuos haihdutettiin tyhjössä ja jäännös puhdistettiin kromatogra-foimalla piigeelillä, eluoiden etyyliasetaatilla. Metyyliklavu-lanaattia sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin kirkas öljy (104 mg).The solution was evaporated in vacuo and the residue was purified by chromatography on silica gel, eluting with ethyl acetate. The methyl clavulanate fractions were combined and evaporated to give a clear oil (104 mg).

Esimerkki 14Example 14

Metyyliklavulanaatin valmistusPreparation of methyl clavulanate

Klavulaanihappoa (200 mg) asetonitriilissä (5 ml) jäähdytettiin ja sekoitettiin 0°C:ssa. Metanolia (0,5 ml) ja disykloheksyylidikarbo-di-imidiä (206 mg) lisättiin ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Suspensio suodatettiin ja suodate haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin raakaa metyyliklavulanaattia. Raa-katuote puhdistettiin kromatografoimalla piigeelillä, eluoiden etyyliasetaatilla, jolloin saatiin kirkas öljy (140 mg).Clavulanic acid (200 mg) in acetonitrile (5 ml) was cooled and stirred at 0 ° C. Methanol (0.5 ml) and dicyclohexyldicarbodiimide (206 mg) were added and the reaction mixture was stirred at room temperature overnight. The suspension was filtered and the filtrate evaporated in vacuo to give crude methyl clavulanate. The crude product was purified by chromatography on silica gel, eluting with ethyl acetate to give a clear oil (140 mg).

Esimerkki 15Example 15

Fenyyliklavulanaatin valmistusPreparation of phenyl clavulanate

Klavulaanihappoa (100 mg) asetonitriilissä (5 ml) jäähdytettiin ja sekoitettiin 0°C:ssa. Liuokseen lisättiin fenolia (0,94 g) ja disykloheksyylidikarbodi-imidiä (100 mg) ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yön yli. Suspensio suodatettiin ja suodate haihdutettiin. Jäännös fraktionoitiin piigeelillä, eluoitiin etyyliasetaatti-heksaanilla (1:1), jolloin saatiin fenyy-liklavulanaattia (70 mg). I.r. (filmi) 1800, 1770, 1690 cm N.m.r. (CDCl-j) 2,18 (leveä s, 1) , 3,06 (dd, 1, J = 17 Hz, J2 = 0,9 Hz), 3,54 (dd, 1, Jx = 17 Hz, J2 = 2,6 Hz), 4,29 (d, 2, J = 7,5 Hz), 5,1 (dt, 1, = 7,5 Hz, J2 = 1,5 Hz) 5,29 (d, 1, J = 1,5 Hz), 5,76 (dd, 1, = 2,6 Hz, J2 = 0,9 Hz), 7,35 δ (m, 5). Molekyyli- paino, (massaspektrometria) = 275,0777 mikä vastaa kaavaa ci4Hi3N05 (laskettu 275,0794).Clavulanic acid (100 mg) in acetonitrile (5 ml) was cooled and stirred at 0 ° C. To the solution were added phenol (0.94 g) and dicyclohexyldicarbodiimide (100 mg), and the reaction mixture was stirred at room temperature overnight. The suspension was filtered and the filtrate was evaporated. The residue was fractionated on silica gel, eluting with ethyl acetate-hexane (1: 1) to give phenyl lyclavulanate (70 mg). I.r. (film) 1800, 1770, 1690 cm N.m.r. (CDCl 3) 2.18 (broad s, 1), 3.06 (dd, 1, J = 17 Hz, J 2 = 0.9 Hz), 3.54 (dd, 1, Jx = 17 Hz, J 2) = 2.6 Hz), 4.29 (d, 2, J = 7.5 Hz), 5.1 (dt, 1, = 7.5 Hz, J2 = 1.5 Hz), 5.29 (d, 1, J = 1.5 Hz), 5.76 (dd, 1, = 2.6 Hz, J 2 = 0.9 Hz), 7.35 δ (m, 5). Molecular weight, (mass spectrometry) = 275.0777 corresponding to the formula ci4Hi3NO5 (calculated 275.0794).

Esimerkki 16 2,2,2-trikloorietyyliklavulanaatin valmistusExample 16 Preparation of 2,2,2-trichloroethyl clavulanate

Natriumklavulanaattia (221 mg) suspendoitiin kuivaan tetrahydro-furaaniin (5 ml) ja sekoitettiin 0°C:ssa. Trikloorietyylikloori-formiaattia (211 mg) kuivassa tetrahydrofuraanissa (1 ml) lisättiin yllä olevaan suspensioon 20 minuutin aikana. Seoksen annettiin saavuttaa huoneen lämpötila ja sekoitettiin yön yli. Suspensio suodatettiin ja suodate haihdutettiin tyhjössä. Jäännös kro-matografoitiin piigeelillä eluoiden etyyliasetaatti-heksaanilla 22 58332 (2:1), jolloin saatiin haluttu tuote öljynä. I.r. (filmi) 1800, 1760, 1690 cm-1. N.m.r. (CDC13) 1,56 (leveä S, 1), 3,07 (dd, 1, J1 = 17,5 Hz, J2 = 0,7 Hz), 3,56 (dd, 1, = 17,5 Hz, J2 = 2,5Sodium clavulanate (221 mg) was suspended in dry tetrahydrofuran (5 ml) and stirred at 0 ° C. Trichloroethyl chloroformate (211 mg) in dry tetrahydrofuran (1 ml) was added to the above suspension over 20 minutes. The mixture was allowed to reach room temperature and stirred overnight. The suspension was filtered and the filtrate was evaporated in vacuo. The residue was chromatographed on silica gel eluting with ethyl acetate-hexane 22,58332 (2: 1) to give the desired product as an oil. I.r. (film) 1800, 1760, 1690 cm-1. N.m.r. (CDCl 3) 1.56 (broad S, 1), 3.07 (dd, 1, J1 = 17.5 Hz, J2 = 0.7 Hz), 3.56 (dd, 1, = 17.5 Hz, J2 = 2.5

Hz), 4,24 (d, 2, J = 7,5 Hz), 4,69 (d, 1, J = 12 Hz), 4,92 (d, 1, J = 12 Hz), 5,02 (dt, 1, J1 = 7,5 Hz, J2 = 1,3 Hz), 5,19 (d, 1, J = 1,3 Hz), 5,73 δ (dd, 1, = 2,5 Hz, J2 = 0,7 Hz). Molekyylipaino (massaspektrometria) = 328,9621 mikä vastaa kaavaa H-^NO^Cl^ (laskettu 328,9625).Hz), 4.24 (d, 2, J = 7.5 Hz), 4.69 (d, 1, J = 12 Hz), 4.92 (d, 1, J = 12 Hz), 5.02 (dt, 1, J1 = 7.5 Hz, J2 = 1.3 Hz), 5.19 (d, 1, J = 1.3 Hz), 5.73 δ (dd, 1, = 2.5 Hz , J2 = 0.7 Hz). Molecular weight (mass spectrometry) = 328.9621 corresponding to the formula H- ^ NO ^ Cl ^ (calculated 328.9625).

,_/CH20H ,-y°\ /H20H, / / CH 2 OH, -y ° \ / H 2 OH

\J C1C0-0R-> \_J\ J C1C0-0R-> \ _J

y-"Cy "C.

;;

CO Na S' C0-0-C0-0-RCO Na S 'C0-0-C0-0-R

XX

I-f^°\/CH20HI-f ^ ° \ / CH20H

co2rCO 2 R

Esimerkki 17Example 17

Natriumklavulanaatin valmistusPreparation of sodium clavulanate

Bentsyyliklavulanaattia (840 mg) etanolissa (30 ml) ja vedessä (5 ml) hydrattiin 10 %:sella Pd/c:llä (267 mg) ja natriumbikarbonaattina (244 mg) 25 min huoneen lämpötilassa ja ilmakehän paineessa. Katalysaattori suodatettiin, pestiin vedellä ja etanolilla ja yhdistetyt suodatteet haihdutettiin tyhjössä. Tuote kiteytyi vesi-asetoniseoksesta mikroneuloina (565 mg). Uudelleenkiteytys vesi-asetonista antoi neuloja jotka P20^:llä tyhjössä kuivattuina 24 tuntia antoivat seuraavan analyysin: C 41,01, 40,86; H 3,77, 3,64; N 5,68, 5,51; i.r. (KBr-levy) 1785, 1700, 1620 cm-1; Nmr (D20) 3,06 (d, 1, J = 18,5 Hz), 3,57 (dd, 1, J1 = 18,5 Hz, J2 = 2,5 Hz), 4,15 (d, 2, J = 8 Hz), 5,3 (HOD), 4,9 (m), 5,71 (d, 1, J = 2,5 Hz).Benzyl clavulanate (840 mg) in ethanol (30 mL) and water (5 mL) was hydrogenated with 10% Pd / c (267 mg) and sodium bicarbonate (244 mg) for 25 min at room temperature and atmospheric pressure. The catalyst was filtered off, washed with water and ethanol and the combined filtrates were evaporated in vacuo. The product crystallized from water-acetone as microneedles (565 mg). Recrystallization from water-acetone gave needles which, dried under P 2 O 3 in vacuo for 24 hours, gave the following analysis: C 41.01, 40.86; H 3.77, 3.64; N 5.68, 5.51; I.R. (KBr plate) 1785, 1700, 1620 cm-1; Nmr (D 2 O) 3.06 (d, 1, J = 18.5 Hz), 3.57 (dd, 1, J1 = 18.5 Hz, J 2 = 2.5 Hz), 4.15 (d, 2 , J = 8 Hz), 5.3 (HOD), 4.9 (m), 5.71 (d, 1, J = 2.5 Hz).

Esimerkki 18Example 18

Ampisilliinin ja klavulaanlhapon esterien välinen bakteerienvastai-nen synergismiAntibacterial synergism between ampicillin and clavulanic acid esters

Ampisilliinin, klavulaanihapon, natriumsuolan ja ampisilliinin 23 5 8 3 3 2 pienin inhiboiva väkevyys (M.I.C.-arvot) 1 ^,ug/ml:n klavulaaniha-pon natriumsuolan läsnäollessa määritettiin useille $-laktamaasia tuottaville bakteereille. Organismit ympättiin Oxoid-herkkyystes-tiliemeen, jota oli pienissä syvennyksissä muovikaukalossa ja joka sisälsi ampisilliinin, klavulaanihapon natriumsuolan tai ampisillii-nin plus 1 ^ug/ml:n klavulaanihapon natriumsuolan erillisiä väkevyys-gradientteja (mikrotiitterimenetelmä). Yön yli seisseen liemiympin lopullinen laimennus oli 0,5 x 10 Kaukaloa haudutettiin 37° C:ssa yön yli ja bakteerien kasvun päätepisteet merkittiin muistiin seuraavana aamuna. M.I.C.-arvot yug:ssa/ml on esitetty taulukossa 1, mikä paljastaa, että synergisti 1 yug/ml:n alhaisessa väkevyydessä merkittävästi lisää ampisilliinin bakteerienvastaista vaikutusta tiettyjä gram-positiivisia ja gram-negatiivisia bakteereja vastaan. Synergismimekanismi todennäköisesti käsittää ampisillii-niä tuhoavien β-laktamaasientsyymien inhibiition, joskaan muiden mekanismien esiintymistä ei voida sulkea pois.The minimum inhibitory concentration (M.I.C. values) of ampicillin, clavulanic acid, sodium salt and ampicillin 23 5 8 3 3 2 in the presence of 1 μg / ml of sodium salt of clavulanic acid was determined for several β-lactamase-producing bacteria. The organisms were inoculated into Oxoid susceptibility broth in small wells in a plastic tray containing separate concentration gradients (microtiter) of ampicillin, clavulanic acid sodium salt or ampicillin plus 1 ug / ml clavulanic acid sodium salt. The final dilution of the overnight broth inoculum was 0.5 x 10. The trough was incubated at 37 ° C overnight and the endpoints of bacterial growth were recorded the next morning. The M.I.C. values in yug / ml are shown in Table 1, revealing that the synergist at a low concentration of 1 yug / ml significantly increases the antibacterial effect of ampicillin against certain gram-positive and gram-negative bacteria. The mechanism of synergism is likely to involve inhibition of ampicillin-destroying β-lactamase enzymes, although the presence of other mechanisms cannot be ruled out.

Samanlaisia tuloksia kuin taulukossa 1 saatiin, kun ampisilliini korvattiin amoksisilliinillä tai ampisilliinin ftalidyyliesterillä.Similar results to those obtained in Table 1 were obtained when ampicillin was replaced with amoxicillin or ampicillin phthalidyl ester.

Taulukko 1table 1

Ampisilliinin ja klavulaanihapon estereiden välinen bakteerien- vastainen synergismi Klebsiella aerogenesin rotuja vastaanAntibacterial synergism between ampicillin and clavulanic acid esters against Klebsiella aerogenes breeds

Rotu Ampisilliini Ampisilliini + Ampisilliini + yksinään 5 ,ug/ml klavulaa- 5 ,ug/ml klavulaa- ninapon metyyli- ninapon bentsyyli- esteriä esteriä A 500 1,9 1,9 E 70 500 3,9 3,9 62 500 3,9 3,9Breed Ampicillin Ampicillin + Ampicillin + alone 5, ug / ml clavulan 5, ug / ml clavulanic acid methylnin acid benzyl ester ester A 500 1.9 1.9 E 70 500 3.9 3.9 62 500 3, 9 3.9

Ei klavulaanihapon metyyliesteri eikä klavulaanihapon bentsyyli-esteri inhiboinut testiorganismien kasvua väkevyydessä 100 ^ug/ml.Neither clavulanic acid methyl ester nor clavulanic acid benzyl ester inhibited the growth of test organisms at a concentration of 100 μg / ml.

Esimerkki 19Example 19

Klavulaanihappoesterln bakteerienvastainen vaikutus Klavulaanihapon natriumsuolan bakteerienvastainen vaikutus erilaisia bakteereja vastaan määritettiin käyttäen mikromäärämenetelmää. Klavulaanihapon natriumsuolan sarjalaimennuksia Oxoid-herkkyystesti-liemessä, joka oli mikromäärä muovikaukalossa, ympättiin kunkin organismin yön yli seisseellä liemiviljelmällä, niin että ympin lop- -4 24 58332 pulaimennus oli 0,5 x 10 . Viljelmiä haudutettiin yön yli ja bakteerien kasvukohdat mitattiin seuraavana aamuna havainnoimalla viljelmän sameutta. Tulokset ilmaistuna likimääräisinä MIC-arvoina (minimi-inhibiitioväkevyys ^ug/ml) onesistetty taulukossa 2, joka osoittaa, että yhdisteellä on laaja bakteerienvastaisen vaikutuksen alue.Antibacterial activity of clavulanic acid ester The antibacterial activity of the sodium salt of clavulanic acid against various bacteria was determined using the microassay method. Serial dilutions of the sodium salt of clavulanic acid in Oxoid susceptibility test broth, which was a micron amount in a plastic tray, were inoculated with an overnight culture of each organism so that the final dilution of the inoculum was 0.5 x 10. Cultures were incubated overnight and bacterial growth sites were measured the next morning by observing the turbidity of the culture. The results expressed as approximate MIC values (minimum inhibitory concentration μg / ml) are shown in Table 2, which shows that the compound has a wide range of antibacterial activity.

Taulukko 2Table 2

Klavulaanihappoesterien bakteerienvastainen vaikutusAntibacterial effect of clavulanic acid esters

Organismi Klavulaanihapon esterin MIC_ Klavulaa-The organism MIC_ Clavulanic acid ester

Bentsyyli- Nonyyli- Pivaloyyli- Ftalidyyli- nihapon esteri esteri oksimetyy- esteri natrium- liesteri suolan MIC*Benzyl-Nonyl-Pivaloyl-Phthalidylic acid ester ester oxymethyl ester sodium ester salt MIC *

Bacillus subtilis A 250 31 62 125 62Bacillus subtilis A 250 31 62 125 62

Staph.aureusStaph.aureus

Oxford 62 31 31 31 15Oxford 62 31 31 31 15

Staph.aureusStaph.aureus

Russell 125 31 62 15 15Russell 125 31 62 15 15

Escherichia coli 10418 125 >500 125 125 125 xKlavulaanihapon natriumsuolan MIC on lisätty vertailun vuoksi, korkeat MIC-arvot johtuvat käytetystä raskaasta ympistä.The MIC of the sodium salt of Escherichia coli 10418 125> 500 125 125 125 xClavulanic acid has been increased for comparison, the high MIC values are due to the heavy inoculum used.

Esimerkki 20Example 20

Bentsyylioksikarbonyylimetyyliklavulanaatti ^ -CI?20H ch oh rrv _, n-V’ J \ CO Na u ^ 2 CO^CH-CO-CH-C^Hc 2 2 2 2 6 5Benzyloxycarbonylmethyl clavulanate ^ -Cl 2 H 2 O, n-V 'J \ CO Na u ^ 2 CO 2 CH-CO-CH-C 2 Hc 2 2 2 2 6 5

Natriumklavulanaattia (0,6 g) ja bentsyylibromiasetaattia (0,46 ml) liuotettiin N,N-dimetyyliformamidiin (7 ml). Kun liuos oli seissyt 2 tuntia huoneenlämpötilassa, liuotin haihdutettiin tyhjössä. Di-etyylieetteriä (50 ml) etyyliasetaattia (25 ml) ja jäävettä (50 ml) lisättiin, ravisteltiin ja erotettiin. Vesikerros pestiin vielä 25 58332 50 ml:lla liuotinseosta. Yhdistetyt liuotinkerrokset pestiin 10 ml:lla jäävettä, kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin öljyksi, joka kromatografoitiin piihappogeelillä käyttäen sykloheksaania ja etyyliasetaattia eluentteina. Jakeet jotka sisälsivät bentsyylioksi-karbonyylimetyyliklavulanaattia, kerättiin talteen ja haihdutettiin värittömäksi öljyksi.Sodium clavulanate (0.6 g) and benzyl bromoacetate (0.46 ml) were dissolved in N, N-dimethylformamide (7 ml). After standing for 2 hours at room temperature, the solvent was evaporated in vacuo. Diethyl ether (50 ml), ethyl acetate (25 ml) and ice water (50 ml) were added, shaken and separated. The aqueous layer was washed with an additional 25,58332 50 mL of solvent mixture. The combined solvent layers were washed with 10 ml of ice water, dried over sodium sulfate and evaporated to an oil which was chromatographed on silica gel using cyclohexane and ethyl acetate as eluents. Fractions containing benzyloxycarbonylmethyl clavulanate were collected and evaporated to a colorless oil.

I.r. (kalvo): 3510 (b, OH), 1805 (3“laktaami C=0), 1760 (br, esteri C=0's), 1700 cm-1 (C=C).I.r. (film): 3510 (b, OH), 1805 (3 'lactam C = O), 1760 (br, ester C = O's), 1700 cm-1 (C = C).

N.m.r. (CDC13): 1,86 (1H, bs, häviää deuteroinnissa, CH2OH), 3,04 (1H, d, J 18Hz, 60-H), 3,46 (1H, dd, J 18Hz, J 2,5Hz, 6a-H), 4,19 (2H, d, J 8HZ, CH2OH), 4,71 (2H, s, OCH2CO), 4,97 (1H, t, J 8Hz, =CHCH2OH), 5,14 (1H, s, 3-CH), 5,19 (2H, s, PhCH2), 5,66 (1H, d, J 2,5Hz, 5-CH) , 7,34 (5H, S, PliCH2) .N.m.r. (CDCl 3): 1.86 (1H, bs, disappears in deuteration, CH 2 OH), 3.04 (1H, d, J 18Hz, 60-H), 3.46 (1H, dd, J 18Hz, J 2.5Hz, 6a-H), 4.19 (2H, d, J 8 Hz, CH 2 OH), 4.71 (2H, s, OCH 2 CO), 4.97 (1H, t, J 8 Hz, = CHCH 2 OH), 5.14 (1H , s, 3-CH), 5.19 (2H, s, PhCH 2), 5.66 (1H, d, J 2.5 Hz, 5-CH), 7.34 (5H, S, PliCH 2).

Esimerkki 21Example 21

NatriumkarboksimetyyliklavulanaattiNatriumkarboksimetyyliklavulanaatti

CHo0H CH-OHCH 0 OH CH-OH

ny rr-y C02CH2C02CH2C6H5 0 io2CH2C02Nany rr-y CO 2 CH 2 CO 2 CH 2 C 6 H 5 O 10 CH 2 CO 2 Na

Bentsyylioksikarbonyylimetyyliklavulanaattia (0,2 g) uudelleentisla-tussa tetrahydrofuraanissa (5 ml) hydrattiin 22°C:ssa 5 %:lla palladiumia käsitellyllä bariumsulfaatilla (0,2 g) 30 minuutin ajan. Katalyytti poistettiin suodattamalla. Suodokseen lisättiin sitten vettä (1,0 ml) ja kiinteää natriumvetykarbonaattia (0,11 g). Seos jäähdytettiin 10°C:en ja sekoitettiin 5 minuuttia. Ylimääräinen NaHC03 suodatettiin pois ja suodos haihdutettiin tyhjössä hauraaksi vaahdoksi.Benzyloxycarbonylmethyl clavulanate (0.2 g) in redistilled tetrahydrofuran (5 ml) was hydrogenated at 22 ° C with 5% palladium-treated barium sulfate (0.2 g) for 30 minutes. The catalyst was removed by filtration. Water (1.0 ml) and solid sodium hydrogen carbonate (0.11 g) were then added to the filtrate. The mixture was cooled to 10 ° C and stirred for 5 minutes. Excess NaHCO 3 was filtered off and the filtrate was evaporated in vacuo to a brittle foam.

I.r. (väkevä DMSO-liuos): 1801 (β-laktaami C = 0), 1753 (esteri C=0), 1700 (C=C), 1630 cm"1 (C02~).I.r. (concentrated DMSO solution): 1801 (β-lactam C = 0), 1753 (ester C = 0), 1700 (C = C), 1630 cm -1 (CO 2 -).

26 5833226 58332

Esimerkki 22Example 22

BentshydryyliklavulanaattiBentshydryyliklavulanaatti

CH0OH CH-OHCH0OH CH-OH

rry _ O \ υ \ C02H C02CH(C6H5)2rry _ O \ υ \ CO2H CO2CH (C6H5) 2

Difenyylidiatsometaania (112 mg) petrolieetterissä (40-60°C) lisättiin liuokseen, jossa oli klavulaanihappoa (38 mg) tetrahydrofuraa-nissa (4 ml). Saatua liuosta sekoitettiin yli yön huoneenlämpötilassa ja liuotin poistettiin sitten alipaineessa, jolloin saatiin öljymäinen jäännös, joka kromatografoitiin piihappogeelillä, eluoiden etyyliasetaatti-heksaani-seoksella, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (135 mg).Diphenyldiazomethane (112 mg) in petroleum ether (40-60 ° C) was added to a solution of clavulanic acid (38 mg) in tetrahydrofuran (4 ml). The resulting solution was stirred overnight at room temperature and then the solvent was removed under reduced pressure to give an oily residue which was chromatographed on silica gel eluting with ethyl acetate-hexane to give the title compound (135 mg).

I.r. (CHC13): 3400 (OH), 1805 (3-laktaami C=0), 1755 cm"1 (esteri C=0), 1700 (C=C).I.r. (CHCl 3): 3400 (OH), 1805 (3-lactam C = O), 1755 cm -1 (ester C = O), 1700 (C = C).

N.m.r. (CDC13): 2,05 (1H, s, OH), 3,03 (1H, d, J 17Hz, 6B-CH), 3,53 (1H, dd, J 17Hz, J' 2,5Hz, 6a-CH), 4,22 (2H, d, J 7Hz, =CHCH2), 4,94 (1H, t, J 7Hz, =CHCH2), 5,27 (1H, s, 3-CH), 5,76 (1H, d, J 2,5Hz, 5-CH), 7,03 (1H, s, CHPh2), 7,46 δ (10H, s, aromaattiset protonit).N.m.r. (CDCl 3): 2.05 (1H, s, OH), 3.03 (1H, d, J 17 Hz, 6B-CH), 3.53 (1H, dd, J 17 Hz, J '2.5 Hz, 6a- CH), 4.22 (2H, d, J 7 Hz, = CHCH 2), 4.94 (1H, t, J 7 Hz, = CHCH 2), 5.27 (1H, s, 3-CH), 5.76 ( 1H, d, J 2.5 Hz, 5-CH), 7.03 (1H, s, CHPh2), 7.46 δ (10H, s, aromatic protons).

Esimerkki 23 2-bentsyylioksikarbonyyliamino-2-metoksikarbonyylietyyliklavulanaattiExample 23 2-Benzyloxycarbonylamino-2-methoxycarbonylethyl clavulanate

C/H20H CH OHC / H 2 OH CH OH

_f* / 5'H2OH_f * / 5'H2OH

yy — rcy C02H 0 CO-CH-CHCO_CH^ 2 2 j 2 3 NHCO-CH 0CcHc 2 2 6 5yy - rcy CO 2 H 0 CO-CH-CHCO_CH ^ 2 2 j 2 3 NHCO-CH 0CcHc 2 2 6 5

Bentsyylioksikarbonyyli-L-seriinimetyyliesteriä (500 mg) ja disyklo-heksyylikarbodi-imidiä (143 mg) lisättiin jäähdytettyyn (0°C) ja sekoitettuun liuokseen, jossa oli klavulaanihappoa (138 mg) tetrahydro-furaanissa (4 ml). Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneenlämpötilaan ja sekoitettiin yli yön. Reaktioseos suodatettiin, pestiin, 27 58332 kuivattiin ja liuotin poistettiin alipaineessa,jolloin saatiin jäännös, joka kromatografoitiin piihappogeelillä eluoiden etyyli-asetaatti-heksaanilla, jolloin saatiin otsikon yhdistettä kumina (103 mg).Benzyloxycarbonyl-L-serine methyl ester (500 mg) and dicyclohexylcarbodiimide (143 mg) were added to a cooled (0 ° C) and stirred solution of clavulanic acid (138 mg) in tetrahydrofuran (4 ml). The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and stirred overnight. The reaction mixture was filtered, washed, dried and the solvent removed under reduced pressure to give a residue which was chromatographed on silica gel eluting with ethyl acetate-hexane to give the title compound as a gum (103 mg).

I.r. (CHC13): 3400, (br, OH ja NH), 1805 (β-laktaami C=0), 1760 ja 1725 (C=0 x 3), 1700 cm"1 (C=C) .I.r. (CHCl 3): 3400, (br, OH and NH), 1805 (β-lactam C = O), 1760 and 1725 (C = O x 3), 1700 cm -1 (C = C).

N.m.r. (CDC13): 2,42 (1H, s, OH), 3,08 (1H, d, J 17Hz, 68-CH), 3,58 (1H, d, J 17Hz, J' 2,5Hz, 6a-CH), 3,88 (3H, s, C02CH3), 3,98 - 5,15 (6H, m, =CHCH2 ja C02CH2CH), 5,2 (1H, m, 3-CH), 5,25 (2H, s, CH2Ph), 5,73 (1H, d, J 2,5Hz), 6,01 (1H, m, NH), 7,53 δ (5H, s, aromaattiset protonit).N.m.r. (CDCl 3): 2.42 (1H, s, OH), 3.08 (1H, d, J 17 Hz, 68-CH), 3.58 (1H, d, J 17 Hz, J '2.5 Hz, 6a- CH), 3.88 (3H, s, CO 2 CH 3), 3.98 - 5.15 (6H, m, = CHCH 2 and CO 2 CH 2 CH), 5.2 (1H, m, 3-CH), 5.25 (2H , s, CH 2 Ph), 5.73 (1H, d, J 2.5 Hz), 6.01 (1H, m, NH), 7.53 δ (5H, s, aromatic protons).

Esimerkki 24 2-Amino-2-metoksikarbonyylietyyliklavulanaatin hydrokloridiExample 24 2-Amino-2-methoxycarbonylethyl clavulanate hydrochloride

CH-OH CHo0HCH-OH CHoOH

rr%J _> rrw C02CH2CH-C02CH3 co2ch2chco2ch3 l MU Uf’ 1 NH.C0-CHoCÄHc 2 2 2 6 5 2-bentsyylioksikarbonyyliamino-2-metoksikarbonyylietyyliklavulanaattia (85 mg) tislatussa tetrahydrofuraanissa (2 ml), joka sisälsi etikka-happoa (10 mg) hydrattiin 10 %:sella Pd/C-katalyytillä (40 mg). 60 minuutin kuluttua ohutlevykromatografia (liuotin etyyliasetaatti) osoitti yhden tuotteen muodostumista ja jonkin verran reagoimatonta lähtöainetta. Katalyytti suodatettiin pois ja suodos väkevöitiin, jolloin saatiin öljy, joka kromatografoitiin ioninvaihtokolonnilla ("Amberlite" IRA 401 Cl -muodossa) (eluoiden etyyliasetaatti-heksaa-nilla). Saadun liuoksen haihdutus antoi haluttua materiaalia viskoosina kumina.rr% J _> rrw CO2CH2CH-CO2CH3 co2ch2chco2ch3 l MU Uf '1 NH.CO-CHoCÄHc 2 2 2 6 5 2-Benzyloxycarbonylamino-2-methoxycarbonylethyl clavulanate (85 mg) in distilled tetrahydrofuran (10 ml), each containing (2 ml) mg) was hydrogenated with 10% Pd / C catalyst (40 mg). After 60 minutes, thin layer chromatography (solvent ethyl acetate) showed the formation of one product and some unreacted starting material. The catalyst was filtered off and the filtrate was concentrated to give an oil which was chromatographed on an ion exchange column ("Amberlite" in IRA 401 Cl form) (eluting with ethyl acetate-hexane). Evaporation of the resulting solution gave the desired material as a viscous gum.

I.r. (nestekalvo): 1805 (β-laktaami), 1760 (esteri CO), 1695 cm 1 (C=C). N.M.r. (D20): 3,13 (1H, d, J 17 Hz, 63-CH), 3,57 (1H, dd, J 17Hz, J 3Hz, 6a-CH), 3,8 (3H, s, OCH3), 4,14 (2H, d, J 7Hz, =CHCH2), 5,70 δ (1H, d, J 3Hz, 5-CH), muut piikit HOD:n pimentämiä.I.r. (liquid film): 1805 (β-lactam), 1760 (ester CO), 1695 cm -1 (C = C). N.m.r. (D 2 O): 3.13 (1H, d, J 17 Hz, 63-CH), 3.57 (1H, dd, J 17 Hz, J 3 Hz, 6a-CH), 3.8 (3H, s, OCH 3) , 4.14 (2H, d, J 7 Hz, = CHCH 2), 5.70 δ (1H, d, J 3 Hz, 5-CH), other peaks obscured by HOD.

58332 2858332 28

Esimerkki 25 2-(2-Fenyylisulfonyyli)etyyliklavulanaatti ° \ \ C00CH„CHoS0oCcHc co2h 2 2 2 265Example 25 2- (2-Phenylsulfonyl) ethyl clavulanate ° C \ CH2SO2CcHcc2h2

Liuos, jossa oli klavulaanihappoa (199 mg) tetrahydrofuraanissa (8ml), jäähdytettiin 0°C:en ja sitä käsiteltiin disykloheksyyli-karbodi-imidillä (206 mg), pyridiinillä (79 mg) ja β-(fenyylisulfo-nyyli)etanolilla (1,0 g). Sekoitetun liuoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötila ja sitä sekoitettiin huoneenlämpötilassa yli yön. Suspensio suodatettiin ja suodos väkevöitiin alipaineessa. Saatu jäännös kromatografoitiin piihappogeelillä eluoiden etyyliasetaatti-heksaaniseoksilla, jolloin saatiin otsikon yhdistettä öljynä (155 mg). I.r. (CHC13): 3400 (br, OH), 1800 (β-laktaami C=0) , 1750 (esteri C=0), 1695 (C=C), 1310 ja 1150 cm-1 (S02)j N.m.r. (CDC13): 2,18 (1H, s, OH), 3,08 (1H, d, J 17Hz, 63-CH), 3,52 (1H, dd, J 17Hz, J' 2,5Hz, 6a-CH), 3,59 (2H, t, J 6Hz, CH2S02), 4,25 (2H, d, J 7,5Hz, =CHCH2), 4,57 (2H, t, J 6Hz, CH2CH2S02); 4,7 - 5,01 (2H, m, =CHCH2 ja 3-CH), 5,7 (1H, d, J 2,5Hz, 5-CH), 7,5 - 8,2 δ (5H, m, Ph).A solution of clavulanic acid (199 mg) in tetrahydrofuran (8 ml) was cooled to 0 ° C and treated with dicyclohexylcarbodiimide (206 mg), pyridine (79 mg) and β- (phenylsulfonyl) ethanol (1, 0 g). The stirred solution was allowed to reach room temperature and stirred at room temperature overnight. The suspension was filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was chromatographed on silica gel eluting with ethyl acetate-hexane to give the title compound as an oil (155 mg). I.r. (CHCl 3): 3400 (br, OH), 1800 (β-lactam C = 0), 1750 (ester C = O), 1695 (C = C), 1310 and 1150 cm -1 (SO 2) and N.m.r. (CDCl 3): 2.18 (1H, s, OH), 3.08 (1H, d, J 17 Hz, 63-CH), 3.52 (1H, dd, J 17 Hz, J '2.5 Hz, 6a- CH), 3.59 (2H, t, J 6 Hz, CH 2 SO 2), 4.25 (2H, d, J 7.5 Hz, = CHCH 2), 4.57 (2H, t, J 6 Hz, CH 2 CH 2 SO 2); 4.7 - 5.01 (2H, m, = CHCH 2 and 3-CH), 5.7 (1H, d, J 2.5 Hz, 5-CH), 7.5 - 8.2 δ (5H, m , Ph).

Esimerkki 26 2-MetyylitioetyyliklavulanaattiExample 26 2-Methylthioethyl clavulanate

CH,OH ,CH20HCH, OH, CH 2 OH

0/ \ \ C02H C02CH2CH2SCH30 / CO 2 H CO 2 CH 2 CH 2 SCH 3

Liuos, jossa oli klavulaanihappoa (199 mg) tetrahydrofuraanissa (8 ml), jäähdytettiin 0°C:en ja sitä käsiteltiin disykloheksyyli-karboli-imidillä (200 mg) ja β-(metyylitio)etanolilla (960 mg). Sekoitetun liuoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötila ja sitä sekoitettiin huoneenlämpötilassa yli yön. Susoensio suodatettiin ja 29 58332 suodos väkevöitiin alipaineessa. Saatu jäännös kromatografoitiin piihappogeelillä eluoiden etyyliasetaatti-heksaaniseoksilla, jolloin saatiin otsikon yhdistettä öljynä (145 mg).A solution of clavulanic acid (199 mg) in tetrahydrofuran (8 ml) was cooled to 0 ° C and treated with dicyclohexylcarbolimide (200 mg) and β- (methylthio) ethanol (960 mg). The stirred solution was allowed to reach room temperature and stirred at room temperature overnight. The susceptibility was filtered and 29,58332 filtrate was concentrated in vacuo. The resulting residue was chromatographed on silica gel eluting with ethyl acetate-hexane to give the title compound as an oil (145 mg).

I.r. (CHC13): 3400 (OH), 1805 (β-laktaami C=0), 1750 (esteri C=0), 1695 cm"1 (C=C).I.r. (CHCl 3): 3400 (OH), 1805 (β-lactam C = 0), 1750 (ester C = 0), 1695 cm -1 (C = C).

N.m.r. (CDC13): 1,72 (1H, s, OH), 2,15 (3H, s, SCH^ , 2,85 (2H, t, J 7Hz, CH2SCH3), 3,05 (1H, dd, J 17Hz, J' 1Hz, 68-CH), 3,55 (1H, dd, J 17Hz, J' 2,5Hz, 6ot-CH), 4,32 (2H, t, J 7Hz, CH2CH2SCH3), 4,30 (2H, d, J 7,5Hz, =CHCH2), 4,97 (1H, dt, J 7,5Hz, J' 1,5Hz, =CHCH2), 5,09 (1H, m, 3-CH), 5,73 δ (1H, dd, J 2,5Hz, J' 1Hz, 5-CH).N.m.r. (CDCl 3): 1.72 (1H, s, OH), 2.15 (3H, s, SCH 2, 2.85 (2H, t, J 7 Hz, CH 2 SCH 3), 3.05 (1H, dd, J 17 Hz) , J '1Hz, 68-CH), 3.55 (1H, dd, J 17Hz, J' 2.5Hz, 6ot-CH), 4.32 (2H, t, J 7Hz, CH2CH2SCH3), 4.30 ( 2H, d, J 7.5Hz, = CHCH 2), 4.97 (1H, dt, J 7.5Hz, J '1.5Hz, = CHCH 2), 5.09 (1H, m, 3-CH), δ .73 δ (1H, dd, J 2.5 Hz, J '1 Hz, 5-CH).

Esimerkki 27 2-PyridyylietyyliklavulanaattiExample 27 2-Pyridylethyl clavulanate

_ ^H20H CH-OHH 2 OH CH-OH

r-ry rCVr-ry rCV

N-·/ >-NV »= ° \ ^ \ ^ co2h co2ch2ch2—nN- · /> -NV »= ° \ ^ \ ^ co2h co2ch2ch2 — n

Liuos, jossa oli klavulaanihappoa (135 mg) tetrahydrofuraanissa (5 ml), jäähdytettiin 0°C:en ja sitä käsiteltiin 2-(2-hydroksietyyli)-pyridiinillä (200 mg) (2,5 ekvivalenttia) ja disyklokarbodi-imidillä (143 mg) (1-ekvivalentti). Sekoitetun liuoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötila ja sitä sekoitettiin huoneenlämpötilassa yli yön. Suspensio suodatettiin ja suodos väkevöitiin alipaineessa. Saatu jäännös kromatografoitiin piihappogeelillä eluoiden etyyliasetaatilla, joka sisälsi 5 % metanolia, jolloin saatiin otsikon yhdistettä öljynä (100 mg).A solution of clavulanic acid (135 mg) in tetrahydrofuran (5 ml) was cooled to 0 ° C and treated with 2- (2-hydroxyethyl) pyridine (200 mg) (2.5 equivalents) and dicyclocarbodiimide (143 mg). ) (1 equivalent). The stirred solution was allowed to reach room temperature and stirred at room temperature overnight. The suspension was filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The resulting residue was chromatographed on silica gel eluting with 5% methanol in methanol to give the title compound as an oil (100 mg).

I.r. (CHC13): 3400 (OH), 1805 (0-laktaami C=0), 1750 (esteri C=0) , 1695 cm-1 (C=C); N.m.r. (CDC13): 2,20 (1H, s, OH), 2,97 (1H, d, J 17Hz, 60-CH), 3,11 (2H, t, J 7Hz, CH2CH2Py) , 3,42 (1H, dd, J 17Hz, J' 2,5 Hz, 6ct-CH) , 4,15 (2H, d, J 7Hz, =CHCH2), 4,45 - 4,9 (3H, m, CH2CH2Py ja =CHCH2), 4,97 (1H, m, 3-CH), 5,51 (1H, d, J 2,5Hz, 5-CH), 7,0 - 7,4 (2H, m, pyridyyli-3-CH ja 5-CH), 7,45 - 7,85 (1H, m, pyridyyli-4-CH), 8,35 -8,70 δ (1H, m, pyridyyli-6-CH).I.r. (CHCl 3): 3400 (OH), 1805 (O-lactam C = O), 1750 (ester C = O), 1695 cm -1 (C = C); N.m.r. (CDCl 3): 2.20 (1H, s, OH), 2.97 (1H, d, J 17 Hz, 60-CH), 3.11 (2H, t, J 7 Hz, CH 2 CH 2 Py), 3.42 (1H , dd, J 17 Hz, J '2.5 Hz, 6ct-CH), 4.15 (2H, d, J 7Hz, = CHCH 2), 4.45 - 4.9 (3H, m, CH 2 CH 2 Py and = CHCH 2) , 4.97 (1H, m, 3-CH), 5.51 (1H, d, J 2.5 Hz, 5-CH), 7.0-7.4 (2H, m, pyridyl-3-CH) and 5-CH), 7.45-7.85 (1H, m, pyridyl-4-CH), 8.35-8.70 δ (1H, m, pyridyl-6-CH).

30 5833230 58332

Esimerkki 28Example 28

Ftaali-imidometyyliklavulanaattiPhthalimide imidometyyliklavulanaatti

CHo0H CH-OHCH 0 OH CH-OH

r^W rTW.r ^ W rTW.

« \ » ''"“Λο C02Na«\» '' "“ Λο C02Na

OO

Ftaali-imidometyylikloridia (1,95 g) lisättiin sekoitettuun liuokseen, jossa oli natriumklavulanaattia (221 mg) kuivassa dimetyyli-formamidissa (2 ml) ja liuos jätettiin huoneenlämpötilaan neljäksi tunniksi. Liuosta käsiteltiin etyyliasetaatilla ja vedellä ja ravisteltiin perusteellisesti. Vedetön kerros erotettiin, kuivattiin ja väkevöitiin alipaineessa, jolloin saatiin jäännös, joka kiteytyi etyyliasetaatin ja kevyen maaöljyjakeen (40-60°C) seoksesta, jolloin saatiin otsikon yhdistettä (130 mg); sp. 163°C.Phthalimidomethyl chloride (1.95 g) was added to a stirred solution of sodium clavulanate (221 mg) in dry dimethylformamide (2 ml) and the solution was left at room temperature for four hours. The solution was treated with ethyl acetate and water and shaken well. The anhydrous layer was separated, dried and concentrated under reduced pressure to give a residue which crystallized from a mixture of ethyl acetate and a light petroleum fraction (40-60 ° C) to give the title compound (130 mg); mp. 163 ° C.

I.r. (CHC1,): 3400 (br, OH), 1805 (β-laktaami C=0), 1785, 1760 ja -1 JI.r. (CHCl 3): 3400 (br, OH), 1805 (β-lactam C = 0), 1785, 1760 and -1 J

1735 cm (ftaali-imidyyli C=0, esteri C=0).1735 cm (phthalimidyl C = 0, ester C = 0).

N.m.r. 1,7 (1H, s, OH), 3,08 (1H, d, J 17Hz, 60-CH), 3,56 (1H, dd, J 17Hz, J’ 2,5Hz, 6a-CH), 4,25 (2H, d, J 7,0Hz, =CHCH2), 4,95 (1H, dt, J 7,5Hz, J· 1Hz, =CHCH2), 5,11 (1H, d, J 1Hz, 3-CH), 5,75 (1H, d, J 2,5Hz, 5-CH), 5,87 (2H, d, CH2Phth), 7,75 - 8,2 δ (4H, m, Phth).N.m.r. 1.7 (1H, s, OH), 3.08 (1H, d, J 17 Hz, 60-CH), 3.56 (1H, dd, J 17 Hz, J '2.5 Hz, 6a-CH), 4 .25 (2H, d, J 7.0Hz, = CHCH 2), 4.95 (1H, dt, J 7.5Hz, J · 1Hz, = CHCH 2), 5.11 (1H, d, J 1Hz, 3- CH), 5.75 (1H, d, J 2.5 Hz, 5-CH), 5.87 (2H, d, CH 2 Phhth), 7.75-8.2 δ (4H, m, Phth).

Esimerkki 29 p-Bronri-dbentsyyliklavulanaattiExample 29 p-Bronri-benzyl clavulanate

|— OH| - OH

__/Q\ J__ / Q \ J

vXXVxx

O "'C02CH2^ BrO "'CO2CH2 ^ Br

Natriumklavulanaattia (70 mg) kuivassa dimetyyliformamidissa (1,0 ml) käsiteltiin p-bromibentsyylibromidilla (245 mg) ja seos jätettiin huoneenlämpötilaan 2 tunniksi. Liuotin haihdutettiin tyhjössä ja jäännös fraktioitiin piihappogeelillä eluoiden etyyliasetaatti-heksaanilla (3:1), jolloin saatiin tuote neulasina, sp. 101-2°C; 31 58332 ir(CHCl3), 1805, 1750 ja 1695 cm-1; nmr (CDCl-j) δ 1,94 (1H, S, OH), 3,12 (1H, dd, J 17,5 ja 0,8 Hz, 6&-CH), 3,62 (H, dd, J 17,5 ja 2,5 Hz, 6a-CH), 4,32 (2H, d, J 7,0 Hz, 9-CH2), 4,99 (1H, dt, J 7,0 ja 1,5 Hz, =CHCH2OH), 5,20 (1H, S, 3-CH), 5,28 (2H, S, C02CH2), 5,81 (1H, dd, J 2,5 ja 0,8 Hz, 5-CH), 7,45 (2H, d, J 8,5Hz, aromaattiset protonit) ja 7,68 (2H, d, J 8,5 Hz, aromaattiset protonit).Sodium clavulanate (70 mg) in dry dimethylformamide (1.0 ml) was treated with p-bromobenzyl bromide (245 mg) and the mixture was left at room temperature for 2 hours. The solvent was evaporated in vacuo and the residue partitioned on silica gel eluting with ethyl acetate-hexane (3: 1) to give the product as needles, m.p. 101-2 ° C; 31,58332 and (CHCl 3), 1805, 1750 and 1695 cm -1; nmr (CDCl 3) δ 1.94 (1H, S, OH), 3.12 (1H, dd, J 17.5 and 0.8 Hz, 6 & -CH), 3.62 (H, dd, J 17.5 and 2.5 Hz, 6a-CH), 4.32 (2H, d, J 7.0 Hz, 9-CH 2), 4.99 (1H, dt, J 7.0 and 1.5 Hz) , = CHCH 2 OH), 5.20 (1H, S, 3-CH), 5.28 (2H, S, CO 2 CH 2), 5.81 (1H, dd, J 2.5 and 0.8 Hz, 5-CH ), 7.45 (2H, d, J 8.5 Hz, aromatic protons) and 7.68 (2H, d, J 8.5 Hz, aromatic protons).

Esimerkki 30 β-(Ν,Ν-dietyyli)aminoetyyliklavulanaatti ι-r'V0"Example 30 β- (Ν, Ν-diethyl) aminoethyl clavulanate ι-r'V0 "

N VeAg9 C1C—C-H2N--^} 2Jt— NN VeAg9 C1C — C-H2N - ^} 2Jt— N

υ C02 υ C02CH2CH2N(Et)2 a) Hopeaklavulanaattiυ CO 2 υ CO 2 CH 2 CH 2 N (Et) 2 (a) Silver clavulanate

Kaikki seuraavat toimenpiteet suoritettiin lähes täydellisessä pimeydessä .All subsequent procedures were performed in near complete darkness.

Natriumklavulanaatin tetrahydraattia (2,93 g) ionivaihdetussa vedessä (6 ml) lisättiin hopeanitraattiin (1,69 g) ionivaihdetussa vedessä (2 ml). Viiden minuutin kuluttua ruskehtavan keltainen sakka suodatettiin, pestiin ionivaihdetulla vedellä (2 ml) ja sitten asetonilla (10 ml) ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin hopeaklavulanaattia (620 mg) ruskehtavan keltaisena kiinteänä aineena; v (nujoli)Sodium clavulanate tetrahydrate (2.93 g) in deionized water (6 ml) was added to silver nitrate (1.69 g) in deionized water (2 ml). After 5 minutes, the tan precipitate was filtered, washed with deionized water (2 mL) and then acetone (10 mL) and dried in vacuo to give silver clavulanate (620 mg) as a tan solid; v (nujoli)

m m 3.Xm m 3.X

1785, 1695 (olkapää) ja 1580 (leveä) cm b) Esterin muodostus1785, 1695 (shoulder) and 1580 (wide) cm b) Ester formation

Hopeaklavulanaattia (500 mg) lisättiin β-(Ν,Ν-dietyyli)aminoetyyli-kloridiin (135 mg; 0,6 ekvivalenttia) dimetyyliformamidissa (3 ml) ja seosta sekoitettiin magneettisesti pimeässä 1 tunnin ajan ympäristön lämpötilassa. Suspensio laimennettiin etyyliasetaatilla (10 ml) ja suodatettiin. Suodos haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin vaaleankeltainen öljy, joka vähitellen tummeni seistessään; υ ^ (kalvo) 1800, 1750 ja 1695 cm'1; n.m.r. (CDClj) 6 1,04 (t., J 7,5Hz, N(CH2CH3)2), 2,43 - 3,0 (M, -CH2CH2N(CH2CH3)2), 3,07 (d, J 17Hz, 63-CH), 3,53 (dd, J 17 ja 2,5Hz, 6a-CH), 3,62 (leveä s., OH), 4,32 58332 32 (m, 9-CH2 ja -CC>2CH2CH2N) , 4,98 (br.t., J 7HZ, 8-CH), 5,12 (br,s., 3-CH), 5,76 (d, J 2,5Hz, 5-CH).Silver clavulanate (500 mg) was added to β- (Ν, Ν-diethyl) aminoethyl chloride (135 mg; 0.6 equivalents) in dimethylformamide (3 ml) and the mixture was stirred magnetically in the dark for 1 hour at ambient temperature. The suspension was diluted with ethyl acetate (10 mL) and filtered. The filtrate was evaporated in vacuo to give a pale yellow oil which gradually darkened on standing; υ ^ (film) 1800, 1750 and 1695 cm-1; n.m.r. (CDCl 3) δ 1.04 (t, J 7.5 Hz, N (CH 2 CH 3) 2), 2.43 - 3.0 (M, -CH 2 CH 2 N (CH 2 CH 3) 2), 3.07 (d, J 17 Hz, 63-CH), 3.53 (dd, J 17 and 2.5 Hz, 6a-CH), 3.62 (broad s, OH), 4.32 58332 32 (m, 9-CH 2 and -CO 2 CH 2 CH 2 N) ), 4.98 (br.t., J 7 Hz, 8-CH), 5.12 (br, s., 3-CH), 5.76 (d, J 2.5 Hz, 5-CH).

Esimerkki 31 (Antrasen-2-yyli)metyyliklavulanaattiExample 31 (Anthracen-2-yl) methyl clavulanate

— OH- OH

r-f"0 Ir-f "0 I

°^N οδο° ^ N οδο

Natriumklavulanaattia (0,5 g) ja 9-kloorimetyyliantraseenia (1,0 g) sekoitettiin dimetyyliformamidissa huoneenlämpötilassa yli yön. Re-aktioseos jaettiin etyyliasetaatin ja veden kesken ja etyyliasetaatti-kerros väkevoitiin alipaineessa. Fraktiointi piihappogeelillä eluoiden etyyliasetaatti-heksaanilla (1:1) antoi keltaisen, kiteisen tuotteen (0,5 g; 57 %), sp. 120°C; ir (CHCl-j) 1805, 1745 ja 1695cm"1; n.m.r. (CDCl-j) δ 1,35 (1H, br., OH), 2,90 (1H, d, J 17Hz, 6&-CH), 3,33 (1H, dd, J 17 ja 2,5 Hz, 6a-CH), 3,96 (2H, d, J 7Hz, 9-CH2>, 4,61 (1H, br.t., J 7 Hz = CH CH2OH), 4,98 (1H, S, 3-CH), 5,52 (1H, d, J 2,5Hz, 5-CH), 6,13 (2H, S, C02CH2), 7,2 - 8,5 (9H, m, aromaattiset protonit).Sodium clavulanate (0.5 g) and 9-chloromethylanthracene (1.0 g) were stirred in dimethylformamide at room temperature overnight. The reaction mixture was partitioned between ethyl acetate and water, and the ethyl acetate layer was concentrated under reduced pressure. Fractionation on silica gel eluting with ethyl acetate-hexane (1: 1) gave a yellow crystalline product (0.5 g; 57%), m.p. 120 ° C; ir (CHCl-j) 1805, 1745 and 1695 cm -1; nmr (CDCl-j) δ 1.35 (1H, br., OH), 2.90 (1H, d, J 17 Hz, δ & -CH), 3 , 33 (1H, dd, J 17 and 2.5 Hz, 6a-CH), 3.96 (2H, d, J 7 Hz, 9-CH 2>, 4.61 (1H, br.t., J 7 Hz) = CH CH 2 OH), 4.98 (1H, S, 3-CH), 5.52 (1H, d, J 2.5 Hz, 5-CH), 6.13 (2H, S, CO 2 CH 2), 7.2 - 8.5 (9H, m, aromatic protons).

Esimerkki 32 N-bentsoksatsolonyylimetyyliklavulanaattiExample 32 N-Benzoxazolonylmethyl clavulanate

_^0 CH-OH_ ^ 0 CH-OH

0/ XCO-0-CH„0 / XCO-0-CH „

Natriumklavulanaatin tetrahydraattia (0,6 g) liuotettuna N,N-dimetyyliformamidiin (6 ml) käsiteltiin N-kloorimetyylibentsoksätso-lonilla (0,4 g) huoneenlämpötilassa sekoittaen. Neljän tunnin kuluttua Liuotin haihdutettiin tyhjössä ja jäännös jaettiin etyyliasetaatin (25 ml) ja veden (25 ml) kesken. Etyyliasetaattikerros 58332 kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin öljyksi, joka puhdistettiin pylväskromatografisesti piihappogeelillä käyttäen syklo-heksaania ja etyyliasetaattia eluentteina; saanto 0,5 g haurasta vaahtoa liuottimien poiston jälkeen.Sodium clavulanate tetrahydrate (0.6 g) dissolved in N, N-dimethylformamide (6 ml) was treated with N-chloromethylbenzoxazolone (0.4 g) with stirring at room temperature. After 4 hours, the solvent was evaporated in vacuo and the residue partitioned between ethyl acetate (25ml) and water (25ml). The ethyl acetate layer 58332 was dried over sodium sulfate and evaporated to an oil which was purified by column chromatography on silica gel using cyclohexane and ethyl acetate as eluents; yield 0.5 g of brittle foam after removal of solvents.

Ir. (kalvo) 3400 (br, OH) 1790 (br, β-laktaami, molemmat esteri C=0) 1695cm 1 (C=C). N.m.r. 1,6 (1H, bs, vaihdot D20:n kanssa, CH2OH), 3,0 (1H, d, J 17Hz, 6-&-CH), 3,44 (1H, dd, J 17Hz, J 3Hz, 6-cx-CH) , 4,08 (2H, d, J 7Hz, CH2OH) , 4,79 (1H, t, J 7Hz, CH=) , 5,02 (1H, S, 3-CH), 5,60 (1H, d, J 3Hz, 5-CH), 5,86 (2H, S, CH2~N), 7,12 (4H, bs, C6H4).Ir. (film) 3400 (br, OH) 1790 (br, β-lactam, both ester C = O) 1695 cm -1 (C = C). N.m.r. 1.6 (1H, bs, exchanges with D 2 O, CH 2 OH), 3.0 (1H, d, J 17 Hz, 6 - & - CH), 3.44 (1H, dd, J 17 Hz, J 3 Hz, 6 -cx-CH), 4.08 (2H, d, J 7 Hz, CH 2 OH), 4.79 (1H, t, J 7 Hz, CH =), 5.02 (1H, S, 3-CH), 5, 60 (1H, d, J 3 Hz, 5-CH), 5.86 (2H, S, CH 2 -N), 7.12 (4H, bs, C 6 H 4).

Toinen näyte, joka valmistettiin analogisesti, jähmettyi seistessään ja sen sp. oli tällöin 95°C.The second sample, prepared analogously, solidified on standing and its m.p. was then 95 ° C.

Sillä oli IR-spektri (nujoliliete) 3560, 3490, 1795 ja 1690 cm \ Esimerkki 33 2- (Bentsyylioksikarbonyyli)-2-(bensyylioksikarbonyyli-amino)etyyll-klavulanaattiIt had an IR spectrum (nujol slurry) of 3560, 3490, 1795 and 1690 cm -1 Example 33 2- (Benzyloxycarbonyl) -2- (benzyloxycarbonylamino) ethyl clavulanate

|— OH| - OH

p"T^ 1— N-k ^NHC02CH2C6H5 O CO-CH^CH ~ co2ch2c6h5p "T ^ 1— N-k ^ NHCO2CH2C6H5 O CO-CH ^ CH ~ co2ch2c6h5

Klavulaanihappo (199 mg) kuivassa tetrahydrofuraanissa jäähdytettiin 0°C:en ja sitä käsiteltiin N-bent^ylioksikarbonyyli-L-seriinin ben-syyliesterillä (660 mg) ja disykloheksyylikarbodi-imidillä. Seoksen annettiin saavuttaa huoneenlämpötila ja se jätettiin siihen yli yön (magneettisekoitus). Liuottimen haihdutus alipaineessa ja jäännöksen fraktiointi piihappogeelillä eluoiden etyyliasetaatti-heksaaniseok-silla, antoi tuotteen (108 mg) öljynä, infrapunaspektri (CHCl^) 1805, 1760, 1725cm"1; n.m.r. (CDCl-j) δ 2,2 (1H, br. , OH), 2,94 (1H, d, J 17Hz, 63-CH), 3,33 (1H, dd, J 17 ja 2,5Hz, 6a-CH), 4,99 (1H, S, 3- CH), 5,10 (2H, S, C02CH2CgH5) , 5,18 (2H, S, , 5,45 (1H, d, J 2,5Hz, 5-CH), 5,81 (1H, br.d, J 8Hz, NH), 3,35 (10H, S, 2 x CgH5).Clavulanic acid (199 mg) in dry tetrahydrofuran was cooled to 0 ° C and treated with benzyl ester of N-Benzyloxycarbonyl-L-serine (660 mg) and dicyclohexylcarbodiimide. The mixture was allowed to reach room temperature and left overnight (magnetic stirring). Evaporation of the solvent under reduced pressure and fractionation of the residue on silica gel eluting with ethyl acetate-hexane gave the product (108 mg) as an oil, infrared spectrum (CHCl 3) 1805, 1760, 1725 cm -1; nmr (CDCl 3) δ 2.2 (1H, br. , OH), 2.94 (1H, d, J 17 Hz, 63-CH), 3.33 (1H, dd, J 17 and 2.5 Hz, 6a-CH), 4.99 (1H, S, 3- CH), 5.10 (2H, S, CO 2 CH 2 C 8 H 5), 5.18 (2H, S,, 5.45 (1H, d, J 2.5 Hz, 5-CH), 5.81 (1H, br.d. , J 8Hz, NH), 3.35 (10H, S, 2 x C 9 H 5).

Muut protonit esiintyivät alueella 4,1-4,9 δ monimutkaisena rakenteena .The other protons ranged from 4.1 to 4.9 δ as a complex structure.

34 5833234 58332

Esimerkki 34Example 34

Klavulaanihapon 3-syanopropyyliesteri _s ch.ch2oh + N-k O ' C02NaClavulanic acid 3-cyanopropyl ester _s ch.ch2oh + N-k O 'CO2Na

-CH. CH9OHCH. CH9OH

-* cA“N--k- * cA “N - k

u C02CH2CH2CH2CNand CO 2 CH 2 CH 2 CH 2 CN

Spektritiedot esimerkille 34 N.m.r. (CDC13): 2,03 (2H, m, CH^CN) , 2,50 (2H, t, J 6Hz, CH2CN), 2,68 (1H, br., OH), 3,05 (1H, d, J 17,5 Hz, 68-CH), 3,55 (1H, dd, J 17,5 ja 2,5 Hz, 601-CH) , 4,1-4,5 (4H, m, C02CH2 ja CH2OH) , 4,93 (1H, t, J 7,5 Hz, 8-CH) , 5,13 (1H, S, 3-CH) , 5,72 (lii, d, J, 2,5Hz, 5-CH).Spectral data for Example 34 N.m.r. (CDCl 3): 2.03 (2H, m, CH 2 CN), 2.50 (2H, t, J 6 Hz, CH 2 CN), 2.68 (1H, br., OH), 3.05 (1H, d , J 17.5 Hz, 68-CH), 3.55 (1H, dd, J 17.5 and 2.5 Hz, 601-CH), 4.1-4.5 (4H, m, CO 2 CH 2 and CH 2 OH ), 4.93 (1H, t, J 7.5 Hz, 8-CH), 5.13 (1H, S, 3-CH), 5.72 (li, d, J, 2.5Hz, 5- CH).

Natriumklavulanaatin tetrahydraattia (2, 9 g) liuotettiin dimetyyli-formamidiin (50 ml) huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen lisättiin 4-bromibutyronitriiliä (2,2 g). Reaktiota sekoitettiin 3 tuntia huoneenlämpötilassa, jolloin näyte tutkittuna ohutlevykromatogra-fisesti (piihappolevyt kehitettynä etyyliasetaatissa) osoitti huomattavaa esterimuodostusta, 0,6. Reaktiota puhdistettiin tavalliseen tapaan, so, uuttamalla etyyliasetaattiin, pesemällä sen jälkeen useita kertoja vedellä, kuivaamalla MgS04:lla, mikä johti liuottimen haihdutuksen jälkeen keltaiseen öljyyn. NMR-tutkimus osoitti ylimäärin reagoimatonta nitriiliä. öljy liuotettiin kloroformiin ja kaadettiin G60-piihappokolonniin (20 g) ja eluoitiin kloroformilla. Tuotetta sisältävät jakeet (tie) kerättiin talteen ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin haluttua tuotetta vaaleankeltaisena öljynä.Sodium clavulanate tetrahydrate (2.9 g) was dissolved in dimethylformamide (50 ml) at room temperature, followed by the addition of 4-bromobutyronitrile (2.2 g). The reaction was stirred for 3 hours at room temperature, at which point the sample, examined by thin layer chromatography (silica plates developed in ethyl acetate), showed considerable ester formation, 0.6. The reaction was purified in the usual manner, i.e., by extraction into ethyl acetate, followed by washing several times with water, drying over MgSO 4, which resulted in a yellow oil after evaporation of the solvent. NMR analysis showed an excess of unreacted nitrile. the oil was dissolved in chloroform and poured onto a G60 silica column (20 g) and eluted with chloroform. The product-containing fractions (road) were collected and evaporated in vacuo to give the desired product as a pale yellow oil.

IR ja NMR yhdenmukaisia rakenteen kanssa (sisälsi hivenmääriä liuottimia) .IR and NMR consistent with structure (contained traces of solvents).

35 5833235 58332

Esimerkki 35Example 35

Bentsyyliklavulanaatin p-trityylieetteri «v-cxS * J3CC""·" O x C02NaBenzyl clavulanate p-trityl ether «v-cxS * J3CC" "·" O x CO2Na

-r^0·^ CH.CH-OH-r ^ 0 · ^ CH.CH-OH

-^ I 2 N ^CO„CH? —^3— 0C ~ Ph Z Z ^ Ph- ^ I 2 N ^ CO „CH? - ^ 3— 0C ~ Ph Z Z ^ Ph

Natriumklavulanaatin tetrahydraattia (17,1 g) liuotettiin dimetyyli-formamidiin (500 ml) huoneenlämpötilassa, minkä jälkeen bentsyylibro-midin p-trityylieetteriä (23 g erittäin epäpuhdasta materiaalia) lisättiin. Liuosta sekoitettiin 1 tunti huoneenlämpötilassa ja puhdistettiin sitten tavalliseen tapaan uuttamalla etyyliasetaattiin jne. Tuote eristettiin pylväskromatografisesti G60-piihapolla (400 g) käyttäen kloroformi-n-heksaania suhteessa 1:1. Näin saatu tuote sisälsi yhä jonkin verran UV-herkkiä epäpuhtauksia (ei klavulaaniepäpuhtauksia) ja uusi kromatografinen erotus suoritettiin G60-piihapolla (40 g) käyttäen etyyliasetaatti-n-heksaania suhteessa 1:1 eluanttina. Tämä tuotti tyydyttävän tuloksen.Sodium clavulanate tetrahydrate (17.1 g) was dissolved in dimethylformamide (500 ml) at room temperature, followed by the addition of benzyl bromide p-trityl ether (23 g of highly impure material). The solution was stirred for 1 hour at room temperature and then purified in the usual manner by extraction into ethyl acetate, etc. The product was isolated by column chromatography on G60 silica (400 g) using chloroform-n-hexane in a ratio of 1: 1. The product thus obtained still contained some UV-sensitive impurities (no clavulan impurities) and a new chromatographic separation was performed with G60 silica (40 g) using ethyl acetate-n-hexane in a 1: 1 ratio as eluent. This produced a satisfactory result.

NMR yhdenmukainen rakenteen kanssa.NMR consistent with structure.

Spektritiedot esimerkille 35Spectral data for Example 35

Infrapuna (nujoli) 1805, 1747 ja 1695cm Nmr (CDCl^) 2,94 (1H, d, J, 17 Hz, 6B-CH), 3,40 (1H, dd, J 17 ja 2,5 Hz, 6a-CH), 4,16 (2H, d, J 6,5 Hz, CH2OH), 4,83 (1H, t, J 6,5Hz, 8-CH), 4,99 (3H, br.S, C02CH2 ja 3-CH), 5,61 (1H, d, J 2,5Hz, 5-CH), 6,6-7,7 (m, aromaattiset protonit).Infrared (nujol) 1805, 1747 and 1695cm Nmr (CDCl 3) 2.94 (1H, d, J, 17 Hz, 6B-CH), 3.40 (1H, dd, J 17 and 2.5 Hz, 6a- CH), 4.16 (2H, d, J 6.5 Hz, CH 2 OH), 4.83 (1H, t, J 6.5 Hz, 8-CH), 4.99 (3H, br.S, CO 2 CH 2 and 3-CH), 5.61 (1H, d, J 2.5 Hz, 5-CH), 6.6-7.7 (m, aromatic protons).

Esimerkki 36 2-BromietyyliklavulanaattiExample 36 2-Bromoethyl clavulanate

[—r°v_r0H[-R ° v_r0H

° V--+ z C02CH2CH2Br 36 58332° V - + z CO 2 CH 2 CH 2 Br 36,58332

Liuosta, jossa oli natriumklavulanaatin tetrahydraattia (2,05 g) dimetyyliforraamidissa (5 ml), käsiteltiin 1,2-dibromietaanilla (1 ml). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 7 päivää ja sen jälkeen suurin osa liuottimesta poistettiin tyhjössä 30°C:ssa. Vettä lisättiin jäännökseen ja seos uutettiin etyyliasetaatilla. Etyyli-asetaattiliuos pestiin vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin. Tuote eristettiin pylväskromatografisesti (piigeeli, etyyliasetaatti eluenttina). Saalis 168 mg.A solution of sodium clavulanate tetrahydrate (2.05 g) in dimethylformamide (5 ml) was treated with 1,2-dibromoethane (1 ml). The mixture was stirred at room temperature for 7 days and then most of the solvent was removed in vacuo at 30 ° C. Water was added to the residue, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The ethyl acetate solution was washed with water, dried over magnesium sulfate and evaporated. The product was isolated by column chromatography (silica gel, ethyl acetate as eluent). Yield 168 mg.

N.m.r. (CDC13) 2,0 (1H, leveä s, vaihtokelpoiset), 3,04 (1H, d, J 17Hz), 3,49 (2H, t, J 7Hz), 3,48 (1H, dd, J 3 ja 17Hz), 4,18 (2H, d, J 7Hz), 4,43 (2H, t, J 7Hz), 4,93 (1H, t, J 7Hz), 5,05 (1H, s jossa hienoa kytkeytymistä), 5,67 (1H, d, J 3Hz).N.m.r. (CDCl 3) 2.0 (1H, broad s, interchangeable), 3.04 (1H, d, J 17 Hz), 3.49 (2H, t, J 7 Hz), 3.48 (1H, dd, J 3 and 17Hz), 4.18 (2H, d, J 7Hz), 4.43 (2H, t, J 7Hz), 4.93 (1H, t, J 7Hz), 5.05 (1H, s with fine coupling) , 5.67 (1H, d, J 3 Hz).

Esimerkki 37 FenasyyllklavulanaattiExample 37 Phenacyl clavulanate

I— OHI— OH

rTf o λ in S CO-CH-C C£Hc O 2 2 6 5rTf o λ in S CO-CH-C C £ Hc O 2 2 6 5

Natriumklavulanaatin tetrahydraattia (0,5 g) minimimäärässä dime-tyyliformamidia, käsiteltiin fenasyylibromidilla (0,34 g) ja seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 3 tuntia. Liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin etyyliasetaattiin. Etyyliasetaattiliuos pestiin vedellä, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin, jolloin saatiin fenasyyliesteriä (400 mg) kiinteänä aineena; sp. 89-90°C, infra-punaspektri (kalvo) 3450, 1800, 1760 ja 1700cm 1; n.m.r. (CDCl^) δ 3,02 (1H, dd, J 17 Hz ja 1Hz, 68-CH), 3,65 (1H, dd, J 17 ja 3Hz, 6a-CH) , 4,20 (2H, d, J 8Hz, 9-¾) , 5,00 (1H, dt, J 8Hz, =CH CH2OH) , 5,23 (1H, br. s., 3-CH), 5,58 (2H, S, CHjCOCgHg), 5,74 (1H, dd, J 17 ja 1Hz, 5-CH), 7,7 (5H, m, COCgHg); molekyylipaino (massaspektroskopia) 317,0894 (todettu), 317,0899 (laskettu).Sodium clavulanate tetrahydrate (0.5 g) in a minimum amount of dimethylformamide was treated with phenacyl bromide (0.34 g) and the mixture was stirred at room temperature for 3 hours. The solvent was removed in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate. The ethyl acetate solution was washed with water, dried (MgSO 4) and evaporated to give the phenylacyl ester (400 mg) as a solid; mp. 89-90 ° C, infrared spectrum (film) 3450, 1800, 1760 and 1700 cm -1; n.m.r. (CDCl 3) δ 3.02 (1H, dd, J 17 Hz and 1 Hz, 68-CH), 3.65 (1H, dd, J 17 and 3 Hz, 6a-CH), 4.20 (2H, d, J 8 Hz, 9-¾), 5.00 (1H, dt, J 8 Hz, = CH CH 2 OH), 5.23 (1H, br. S., 3-CH), 5.58 (2H, S, CH 2 CO 2 Hg) , 5.74 (1H, dd, J 17 and 1 Hz, 5-CH), 7.7 (5H, m, COCl 3 H 2); molecular weight (mass spectroscopy) 317.0894 (found), 317.0899 (calculated).

Analyysi kokeellisesti C 60,23; H 5,00; N 4,40 % laskemalla C 60,57; H 4,73; N 4,42 % 37 58332Analysis experimentally C 60.23; H 5.00; N 4.40% calculated for C 60.57; H 4.73; N 4.42% 37,58332

Esimerkki 38 2-PyridyylimetyyliklavulanaattiExample 38 2-Pyridylmethyl clavulanate

rTV"0HRTV "0H

' / N ^ n)'/ N ^ n)

Liuokseen, jossa oli natriumklavulanaatin tetrahydraattia (1,17 g) ja 2 - pyridyylimetyylibromidin hydrobromidia (1,01 g) DMF:ssa (8 ml), lisättiin kaliumkarbonaattia (552 mg). Seosta sekoitettiin yli yön ja laimennettiin sitten yhtä suurella tilavuusmäärällä etyyliasetaattia. Liuos suodatettiin, suodos haihdutettiin ja jäännös uutettiin etyyliasetaatilla. Tämä menettely toistettiin ja tuote puhdistettiin kromatografisesti (piigeeli, etyyliasetaatti). Saalis 335 mg.To a solution of sodium clavulanate tetrahydrate (1.17 g) and 2-pyridylmethyl bromide hydrobromide (1.01 g) in DMF (8 ml) was added potassium carbonate (552 mg). The mixture was stirred overnight and then diluted with an equal volume of ethyl acetate. The solution was filtered, the filtrate was evaporated and the residue was extracted with ethyl acetate. This procedure was repeated and the product was purified by chromatography (silica gel, ethyl acetate). Yield 335 mg.

I.r. (kalvo): 3450, 1805, 1750, 1695cm-1 N.m.r (CDCl^) δ 2,48 (1H, br., vaihtokelpoiset) 3,01 (1H, d, J 17Hz), 3,45 (lH,dd, J 17 ja 3Hz), 4,19 (2H, d, J 7Hz), 4,91 (1H, t jossa hienoa kytkeytymistä, J 7Hz), 5,1 (1H, s jossa hienoa kytkeytymistä) 5,25 (2H, s), 5,66 (1H, d, J 3Hz), 7,1-7,4 (2H, m), 7,67 (1H, dt, J 8 ja 1Hz), 8,52 (1H, d, J 6Hz).I.r. (membrane): 3450, 1805, 1750, 1695 cm -1 Nmr (CDCl 3) δ 2.48 (1H, br., interchangeable) 3.01 (1H, d, J 17 Hz), 3.45 (1H, dd, J 17 and 3Hz), 4.19 (2H, d, J 7Hz), 4.91 (1H, t with fine coupling, J 7Hz), 5.1 (1H, s with fine coupling) 5.25 (2H, s), 5.66 (1H, d, J 3 Hz), 7.1-7.4 (2H, m), 7.67 (1H, dt, J 8 and 1 Hz), 8.52 (1H, d, J 6Hz).

Esimerkki 39 N-bentsyylioksikarbonyyli-N-metyyliaminoetyyllklavulanaatti /- O \ / CH3Example 39 N-Benzyloxycarbonyl-N-methylaminoethyl clavulanate / -O \ / CH3

CO,CH CH NCO, CH CH N

C0-,CHoC,Hc 2 2 6 5C0-, CHoC, Hc 2 2 6 5

Bentsyyliklavulanaattia (1 g) hydrattiin 10 %:sella Pd/C-katalyytiliä (400 mg) THFrssa (30 ml), kunnes mitään esteriä ei ollut jäljellä. Liuos suodatetun ja sitä käytettiin alla kuvatulla tavalla.Benzyl clavulanate (1 g) was hydrogenated with 10% Pd / C catalyst (400 mg) in THF (30 mL) until no ester remained. The solution was filtered and used as described below.

Liuos, jossa oli N-metyyli-N^-nitroso-N^^-dibentsyylioksikarbonyyli- 1,2-diaminoetaania (3,71 g) Cl^C^rssa (10 ml), jäähdytettiin -30°C:en 38 58332 ja sitä käsiteltiin pyrrolidiinilla (0,71 g). Liuosta sekoitettiin -25 --30°:ssa 30 minuuttia ja jäähdytettiin sitten -35°C:en. Yllä kuvatulla tavalla valmistettu klavulaanihappoliuos lisättiin sitten näin valmistetun diatsoyhdisteen sekoitettuun liuokseen sellaisella nopeudella, että lämpötila ei noussut yli -30°C. Vielä 15 minuutin sekoituksen jälkeen lisättiin BF-^-eteraattia (0,5 ml) ja liuosta sekoitettiin 5 minuuttia. Ylimäärin NaHC03~liuosta lisättiin, vesi-kerros erotettiin ja uutettiin metyleenikloridilla. Yhdistetyt me-tyleenikloridiliuokset pestiin vedellä, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin. Jäännöksen toistettu kromatografinen käsittely (piigeeli H, etyyliasetaatti, kloroformi ja eetteri eluentteina) antoi väritöntä kumia (180 mg).A solution of N-methyl-N, N-nitroso-N, N-dibenzyloxycarbonyl-1,2-diaminoethane (3.71 g) in Cl 2 Cl 2 (10 mL) was cooled to -30 ° C at 38,58332 and it was treated with pyrrolidine (0.71 g). The solution was stirred at -25 to 30 ° for 30 minutes and then cooled to -35 ° C. The clavulanic acid solution prepared as described above was then added to the stirred solution of the diazo compound thus prepared at such a rate that the temperature did not rise above -30 ° C. After stirring for an additional 15 minutes, BF -? - etherate (0.5 mL) was added and the solution was stirred for 5 minutes. Excess NaHCO 3 solution was added, the aqueous layer was separated and extracted with methylene chloride. The combined methylene chloride solutions were washed with water, dried (MgSO 4) and evaporated. Repeated chromatography of the residue (silica gel H, ethyl acetate, chloroform and ether as eluents) gave a colorless gum (180 mg).

Ir (kalvo): 3450, 1800, 1745, 1600cm * N.m.r. (CDClj): δ 2,25 (1H, br. s, vaihtokelpoiset) 2,93 (3H, s), 3,00 (1H, d), 3,3-3,6 (5H, m), 4,17 (2H, d, J 7Hz), 3,85 (1H, t, J 7Hz jossa pientä parittumista), 4,98 (1H, s), 5,08 (2H, s), 7,28 (5H, s).Ir (film): 3450, 1800, 1745, 1600cm * N.m.r. (CDCl 3): δ 2.25 (1H, br. S, interchangeable) 2.93 (3H, s), 3.00 (1H, d), 3.3-3.6 (5H, m), 4, 17 (2H, d, J 7Hz), 3.85 (1H, t, J 7Hz with slight pairing), 4.98 (1H, s), 5.08 (2H, s), 7.28 (5H, s ).

Esimerkki 40 1-AsetoksietyyliklavulanaattiExample 40 1-Acetoxyethyl clavulanate

Kuivaan DMF:an (5 ml), jota sekoitettiin 0°C:ssa, lisättiin natrium-klavulanaatin tetrahydraattia (1,025 g) ja sitten 10 minuutin kuluttua 1-bromietyyliasetaattia (1 ml). Seoksen annettiin seistä yli yön jääkaapissa, minkä jälkeen liuotin poistettiin tyhjössä. Vettä lisättiin jäännökseen ja seos uutettiin etyyliasetaatilla. Orgaaninen faasi pestiin vedellä, kuivattiin (MgS04) ja haihdutettiin. Jäännöksen kromatografointi (piigeeli 60, etyyliasetaatti) antoi otsikon yhdistettä (176 mg) (R^ 0,49).To dry DMF (5 mL) stirred at 0 ° C was added sodium clavulanate tetrahydrate (1.025 g) and then after 10 minutes 1-bromoethyl acetate (1 mL). The mixture was allowed to stand overnight in the refrigerator, after which the solvent was removed in vacuo. Water was added to the residue, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The organic phase was washed with water, dried (MgSO 4) and evaporated. Chromatography of the residue (silica gel 60, ethyl acetate) gave the title compound (176 mg) (Rf 0.49).

Ir (CHC13): 3350, 1810, 1770, 1695cm-1 N.m.r. (CDC13): δ 1,47 ja 1,49 (3H, kaksi duplettia, J 5Hz, isomeerien seos etyyli-Cl:ssä), 2,04 (3H, s), 3,01 (1H, d, J 17Hz), 3,45 (1H, dd, J 17 ja 3Hz), 3,15 (1H, br, vaihtokelpoiset), 4,17 (2H, d, J 7Hz), 4,80 (1H, m), 4,98 (1H, s jossa hienoa kytkeytymistä), 5,63 (1H, d, J 3Hz), 6,78 (1H, q, J 5Hz).Ir (CHCl 3): 3350, 1810, 1770, 1695 cm -1 N.m.r. (CDCl 3): δ 1.47 and 1.49 (3H, two doublets, J 5Hz, mixture of isomers in ethyl-Cl), 2.04 (3H, s), 3.01 (1H, d, J 17Hz) , 3.45 (1H, dd, J 17 and 3 Hz), 3.15 (1H, br, interchangeable), 4.17 (2H, d, J 7 Hz), 4.80 (1H, m), 4.98 (1H, s with fine coupling), 5.63 (1H, d, J 3Hz), 6.78 (1H, q, J 5Hz).

39 5833239 58332

Esimerkki 41 1-Etoksikarbonyylioksietyyliklavulanaatti (a) 1-kloorietyyliklooriformaattiExample 41 1-Ethoxycarbonyloxyethyl clavulanate (a) 1-chloroethyl chloroformate

Etyyliklooriformaattia (108,5 g) ja a-atsoisobutyronitriiliä (0,5 g) sekoitettiin ja refluksoitiin. Kuivaa kloorikaasua johdettiin liuoksen läpi, kunnes havaittiin 34,5 g:n painon nousu (vastaten monokloo-rausta). Neste fraktioitiin normaalipaineessa, jolloin saatiin 1-kloorietyyliklooriformaattia (33 g), kp. 117-118°C.Ethyl chloroformate (108.5 g) and α-azoisobutyronitrile (0.5 g) were stirred and refluxed. Dry chlorine gas was passed through the solution until a weight gain of 34.5 g was observed (corresponding to monochlorination). The liquid was partitioned under normal pressure to give 1-chloroethyl chloroformate (33 g), b.p. 117-118 ° C.

(b) Etyyli-l-kloorletyylikarbonaatti(b) Ethyl 1-chloroethyl carbonate

Yllä olevan kohdan (a) tuotetta (14,3 g) lisättiin sekoittaen etanoliin (50 ml) lämpötilan noustessa itsestään 62°C:en. Kun lämpötila oli laskenut 30°C:en, vettä (200 ml) lisättiin. Raskas öljy erottui ja sen kerättiin talteen. Vesifaasi uutettiin dikloorimetaanilla (3 x 50 ml), uutteet yhdistettiin, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin. Saatu öljy tislattiin normaalipaineessa, jolloin saatiin vaadittua yhdistettä (12,1 g), kp. 155-157°C. Rakenne varmistettiin NMR- ja alkuaineanalyysillä (kokeellisesti: C 39,5, H, 6,2, Cl 23,25 %; laskemalla kaavasta C^HgClO^: C 39,4, H, 5,9, Cl 23,2 %.The product of (a) above (14.3 g) was added with stirring to ethanol (50 ml) as the temperature automatically rose to 62 ° C. After the temperature dropped to 30 ° C, water (200 mL) was added. The heavy oil separated and was collected. The aqueous phase was extracted with dichloromethane (3 x 50 ml), the extracts combined, dried (MgSO 4) and evaporated. The resulting oil was distilled under normal pressure to give the required compound (12.1 g), b.p. 155-157 ° C. The structure was confirmed by NMR and elemental analysis (experimental: C 39.5, H, 6.2, Cl 23.25%; calculated from C 11 H 9 ClO 2: C 39.4, H, 5.9, Cl 23.2%.

(c) 1- (Etoksikarbonyylloksi) etyyllklavulanaatti(c) 1- (Ethoxycarbonyloxy) ethyl clavulanate

Kohdasta (b) yllä saatua tuotetta (3,04 g) DMFrssa (5 ml) lisättiin sekoitettuun liuokseen, jossa oli natriumklavulanaattia (5,86 g) ja kaliumjodidia (500 mg) DMFissa (15 ml). 21 tunnin kuluttua seos laimennettiin etyyliasetaatilla (250 ml), pestiin kyllästetyllä NaHCO^-liuoksella, kuivattiin (MgSO^) ja haihdutettiin öljyksi. Tuote puhdistettiin kromatografisesti (Sephadex LH 20, kloroformi/syklohek-saani 1:1), jolloin saatiin vaaleankeltainen öljy (206 mg), joka antoi yhden täplän tlc-analyysissä käyttäen kloroformi/syklohek-saania suhteessa 1:1. Rakenne varmistettiin NMR-spektroskopialla.The product from (b) above (3.04 g) in DMF (5 ml) was added to a stirred solution of sodium clavulanate (5.86 g) and potassium iodide (500 mg) in DMF (15 ml). After 21 h, the mixture was diluted with ethyl acetate (250 mL), washed with saturated NaHCO 3 solution, dried (MgSO 4) and evaporated to an oil. The product was purified by chromatography (Sephadex LH 20, chloroform / cyclohexane 1: 1) to give a pale yellow oil (206 mg) which gave a single spot on tlc analysis using chloroform / cyclohexane 1: 1. The structure was confirmed by NMR spectroscopy.

Täten NMR-spektri, joka vastaa 1-(etoksikarbonyylioksietyyliklavula-naattia, on seuraava: N.m.r. (CDCl^)» 1,33 (3H, t, J 8Hz, OCH2CH3), 1.58 (3H, d, J 5,5Hz, -OCH(CH3)O-), 3,08 (1H, d, J, 17,5Hz, 6&-CH), 3.58 (1H, br.s., OH), 3,57 (1H, dd, J 17,5 ja 3Hz, 6a-CH), 4,23 (2H, d, J 7Hz, 9-CH2) , 4,29 (2H, q, J 8Hz, OCH^H-j) , 4,95 (1H, br.t., J 7Hz, 8-CH), 5,12 (1H, br.s., 3-CH), 5,76 (1H, d, J, 3Hz, 5-CH), 6,83 (1H, q, J, 5,5Hz, -OCH(CH3)O-).Thus, the NMR spectrum corresponding to 1- (ethoxycarbonyloxyethyl clavulanate is as follows: Nmr (CDCl 3) »1.33 (3H, t, J 8Hz, OCH 2 CH 3), 1.58 (3H, d, J 5.5Hz, -OCH (CH3) O-), 3.08 (1H, d, J, 17.5 Hz, 6 & -CH), 3.58 (1H, br.s., OH), 3.57 (1H, dd, J 17.5 and 3Hz, 6a-CH), 4.23 (2H, d, J 7Hz, 9-CH 2), 4.29 (2H, q, J 8Hz, OCH 2 H 2), 4.95 (1H, br.t. , J 7Hz, 8-CH), 5.12 (1H, br.s., 3-CH), 5.76 (1H, d, J, 3Hz, 5-CH), 6.83 (1H, q, J, 5.5Hz, -OCH (CH3) O-).

40 5833240 58332

Esimerkki 42 p-Kloorifenoksimetyyliklavulanaatti Jäähdytettyä (jäävesi), sekoitettua liuosta, jossa oli natriumkla-vulanaatin tetrahydraattia (6 g, 0,02 mol) dimetyyliformamidissa (60 ml), käsiteltiin p-kloorifenoksimetyylikloridilla (3,5 g, 0,02 mol). 2 1/2 tunnin kuluttua <10°C:ssa dimetyyliformamidi haihdutettiin suureksi osaksi tyhjössä huoneenlämpötilassa (20°C). Tähän siirappiin lisättiin etyyliasetaattia (200 ml) ja jääkylmää vettä (20 ml). Etyyliasetaattia kuivattiin natriumsulfaatilla, haihdutettiin siirapiksi ja jäännökselle suoritettiin pylväskromatografinen käsittely piihappogeelillä käyttäen etyyliasetaattia ja sykloheksaa-nia eluentteina (sekoitettuna suhteissa 1:2 - 2:1). Pieni määrä klavulaanihapon dieenin p-kloorifenoksimetyyliesteriä eluoitui ensiksi, mitä seurasi vaadittu puhdas p-kloorifenoksimetyyliklavulanaatti (4,7 g). (Tämä sisälsi hyvin pienen määrän dieeniä, joka oli riittävästi havaittavissa ohutlevykromatografiällä, jotta se voitiin nähdä NMR-spektrissä). Ir: 3400 (br, OH) 1805 (β-laktaami C=0) 1765 (esteri C=0) 1695cm_1 (C=C).Example 42 p-Chlorophenoxymethyl clavulanate A cooled (ice water), stirred solution of sodium clululanate tetrahydrate (6 g, 0.02 mol) in dimethylformamide (60 ml) was treated with p-chlorophenoxymethyl chloride (3.5 g, 0.02 mol). After 2 1/2 hours at <10 ° C, the dimethylformamide was largely evaporated in vacuo at room temperature (20 ° C). To this syrup was added ethyl acetate (200 mL) and ice-cold water (20 mL). The ethyl acetate was dried over sodium sulfate, evaporated to a syrup and the residue was subjected to silica gel column chromatography using ethyl acetate and cyclohexane as eluents (mixed in a ratio of 1: 2 to 2: 1). A small amount of p-chlorophenoxymethyl ester of clavulanic acid diene eluted first, followed by the required pure p-chlorophenoxymethyl clavulanate (4.7 g). (This contained a very small amount of diene that was sufficiently detectable by thin layer chromatography to be seen in the NMR spectrum). Ir: 3400 (br, OH) 1805 (β-lactam C = 0) 1765 (ester C = 0) 1695 cm-1 (C = C).

N.m.r.: (CDC13), 1,5 (OH), 3,00 (1H, d, J 17Hz, 6-p-CH), 3,44 (1H, dd, J 17 ja 3Hz, 6-a-CH), 4,14 (2H, d, J 7Hz, CH2OH), 4,77 (1H, bt, J 7Hz, CH=CH2), 5,02 (1H, bs, 3-CH), 5,60 (1H, d, J 3 Hz, 5-CH), 5,70, 5,77 (2H, ABq, J 7Hz, 0CH20) , 6,89, 7,218 (4H, A^q, J 9Hz, W*Nmr: (CDCl 3), 1.5 (OH), 3.00 (1H, d, J 17 Hz, 6-p-CH), 3.44 (1H, dd, J 17 and 3 Hz, 6-a-CH) , 4.14 (2H, d, J 7 Hz, CH 2 OH), 4.77 (1H, bt, J 7 Hz, CH = CH 2), 5.02 (1H, bs, 3-CH), 5.60 (1H, d, J 3 Hz, 5-CH), 5.70, 5.77 (2H, ABq, J 7 Hz, OCH 2 O), 6.89, 7.218 (4H, A 2 q, J 9 Hz, W *

Esimerkki 43Example 43

BentsyylioksimetyyliklavulanaattiBentsyylioksimetyyliklavulanaatti

Natriumklavulanaatin tetrahydraattia (2,93 g) liuotettiin dimetyyli-formamidiin (20 ml) ja saatu samea liuos suodatettiin. Kirkas keltainen liuos jäähdytettiin jäillä ja sitä sekoitettiin samalla, kun bentsyylikloorimetyylieetteriä (1,57 g, valmistettu menetelmän mukaisesti, jonka ovat esittäneet Graham ja McQuillin J. Chem. Soc.Sodium clavulanate tetrahydrate (2.93 g) was dissolved in dimethylformamide (20 ml) and the resulting cloudy solution was filtered. The clear yellow solution was cooled with ice and stirred while benzyl chloromethyl ether (1.57 g, prepared according to the method of Graham and McQuillin J. Chem. Soc.

1963, 4634) lisättiin tipoittain. Sekoitusta ja jäähdytystä ylläpidettiin 2 1/2 tuntia. Reaktioseos haihdutettiin, jolloin saatiin oranssin värinen öljy, jota uutettiin useita kertoja etyyliasetaatilla. Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet haihdutettiin keltaiseksi öljyksi.1963, 4634) was added dropwise. Stirring and cooling were maintained for 2 1/2 hours. The reaction mixture was evaporated to give an orange oil which was extracted several times with ethyl acetate. The combined ethyl acetate extracts were evaporated to a yellow oil.

öljyn analyysi ohutlevykromatografisesti (piihappogeelilevyillä, eluointi metyyliasetaatti:etyyliasetaatti:metyylisyklopentaanilla suhteessa 1:1:2, näkyväksi teko permanganaattisuihkulla) osoitti 41 58332 kahta vyöhykettä kohdissa 0,21 ja 0,55, joiden voimakkuus oli suunnilleen yhtä suuri, öljy kromatografoitiin kolonnilla, joka oli täytetty piihappogeelillä, ja eluoitiin etyyliasetaatin ja syklo-heksaanin seoksella (1:1). Eluoitujen jakeiden koostumus analysoitiin ohutlevykromatografisesti ja hitaasti etenevä materiaali kerättiin vapaaksi kaikseta havaittavasta epäpuhtaudesta. Haihdutus antoi lähes väritöntä öljyä (0,7 g).Analysis of the oil by thin layer chromatography (silica gel plates, eluting with methyl acetate: ethyl acetate: methylcyclopentane 1: 1: 2, visualization with a permanganate jet) showed 41 58332 two bands at 0.21 and 0.55 with approximately equal chromatographs. filled with silica gel, and eluted with a mixture of ethyl acetate and cyclohexane (1: 1). The composition of the eluted fractions was analyzed by thin layer chromatography and the slow-moving material was collected free of any detectable impurity. Evaporation gave an almost colorless oil (0.7 g).

N.m.r. (CDC13): δ 2,08 (1H, bs), 3,02 (1H, d, J 16Hz), 3,38 (1H, dd, J 16Hz, J' 3Hz), 4,15 (2H, d, J 7Hz), 4,64 (2H, s), 4,87 (1H, bt, J 7Hz), 4,99 (1H, bs), 5,34 (2H, s), 5,58 (1H, d, J 2Hz), 7,25 (5H, bs).N.m.r. (CDCl 3): δ 2.08 (1H, bs), 3.02 (1H, d, J 16 Hz), 3.38 (1H, dd, J 16 Hz, J '3 Hz), 4.15 (2H, d, J 7 Hz), 4.64 (2H, s), 4.87 (1H, bt, J 7 Hz), 4.99 (1H, bs), 5.34 (2H, s), 5.58 (1H, d , J 2Hz), 7.25 (5H, bs).

Esimerkki 44 p-Nitrobentsyylioksimetyyliklavulanaatin valmistusExample 44 Preparation of p-nitrobenzyloxymethyl clavulanate

Natriumklavulanaatin tetrahydraattia (2,93 g) liuotettiin dimetyyli-formamidiin (20 ml) ja saatu samea liuos suodatetiin. Kirkas keltainen liuos jäähdytettiin jäillä ja sekoitettiin samalla kun kloorime-tyyli-p-nitrobentsyylieetteriä (2,02 g) lisättiin tipoittain. (Tämä reagenssi valmistettiin menetelmällä, jota ovat käyttäneet D.N. Kursanov ja P.A. Solodkov, J. Applied Chem. (USSR) (1943) , _16^ sivut 351-5). Reaktioseosta sekoitettiin 2 tuntia ja reaktion edistymistä seurattiin ohutlevykromatografisesti (piihappogeelilevyt, eluointi metyyliasetaatin, etyyliasetaatin ja metyylisyklopentaanin seoksella suhteessa 1:1:2). Tämän ajan kuluttua päätuote oli p-nitro-bentsyylioksimetyyliklavulanaati (Rf 0,18), jossa oli myös pieni määrä eetteriesteriä (kohdassa Rf 0,35). Liuotin poistettiin haihduttamalla ja epäpuhdas reaktiotuote puhdistettiin pylväskormatografiällä piihappogeelillä eluoiden sykloheksaanin ja etyyliasetaatin seoksella suhteessa 5:4. Tuote saatiin haihduttamalla sopivat kromatografia-jakeet ja oli aluksi keltaista öljyä, mutta kiteytyi myöhemmin.Sodium clavulanate tetrahydrate (2.93 g) was dissolved in dimethylformamide (20 ml) and the resulting cloudy solution was filtered. The clear yellow solution was cooled with ice and stirred while chloromethyl p-nitrobenzyl ether (2.02 g) was added dropwise. (This reagent was prepared by the method used by D. N. Kursanov and P. A. Solodkov, J. Applied Chem. (USSR) (1943), pp. 351-5). The reaction mixture was stirred for 2 hours and the progress of the reaction was monitored by thin layer chromatography (silica gel plates, eluting with a 1: 1: 2 mixture of methyl acetate, ethyl acetate and methylcyclopentane). After this time, the main product was p-nitrobenzyloxymethyl clavulanate (Rf 0.18), which also contained a small amount of ether ester (at Rf 0.35). The solvent was removed by evaporation and the crude reaction product was purified by column chromatography on silica gel eluting with a 5: 4 mixture of cyclohexane and ethyl acetate. The product was obtained by evaporation of the appropriate chromatography fractions and was initially a yellow oil but later crystallized.

Infrapunaspektri liitteenä. Röntgensädediffraktogrammi (CuK-säteily), heijastukset kohdalla 2Θ :- 9,7, 11,65, 14,0, 15,6, 16,6, 18,0, 19,55, 20,4, 21,1, 22,8, 23,5, 24,75, 26,3, 28,05, 29,95, N.m.r. (CDC13) δ 1,85 (1H, bs), 3,01 (1H, d, J=16Hz), 3,42 (1H, dd, J=16Hz, 3Hz), 4,14 (2H, d, J=7Hz), 4,73 (2H, s), 4,85 (1H, bt, J=7Hz), 4,97 (1H, s), 5,39 (2H, s), 5,59 (1H, d, J=3Hz), 7,75 (4H, dd, J=62Hz, 8Hz).Infrared spectrum attached. X-ray diffractogram (CuK radiation), reflections at 2Θ: - 9.7, 11.65, 14.0, 15.6, 16.6, 18.0, 19.55, 20.4, 21.1, 22, 8, 23.5, 24.75, 26.3, 28.05, 29.95, Nmr (CDCl 3) δ 1.85 (1H, bs), 3.01 (1H, d, J = 16Hz), 3.42 (1H, dd, J = 16Hz, 3Hz), 4.14 (2H, d, J = 7Hz), 4.73 (2H, s), 4.85 (1H, bt, J = 7Hz), 4.97 (1H, s), 5.39 (2H, s), 5.59 (1H, d, J = 3Hz), 7.75 (4H, dd, J = 62Hz, 8Hz).

42 5 8 3 3 242 5 8 3 3 2

Esimerkki 45 AllyyliklavulanaattiExample 45 Allyl clavulanate

CH-OH CHo0HCH-OH CHoOH

rrW —> rry y~‘-< fn Ma \ 2 co2ch2ch=ch2rrW -> rry y ~ '- <fn Ma \ 2 co2ch2ch = ch2

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli natriumklavulanaatin tetrahydraat-tia (2,05 g) kuivassa dimetyyliformamidissa (9 ml), lisättiin allyy-libromidia (2,44 ml). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 3 tuntia ja liuotin poistettiin sitten tyhjössä alle 30°C:ssa. Jäännös jaettiin veden ja etyyliasetaatin kesken. Etyyliasetaattikerros pestiin vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin. Jäännös puhdistettiin pylväskromatografisesti (piigeeli 60/etyyli-asetaatti, Rf ~ 0,53), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (1,31 g) öljynä.To a stirred solution of sodium clavulanate tetrahydrate (2.05 g) in dry dimethylformamide (9 ml) was added allyl libromide (2.44 ml). The mixture was stirred at room temperature for 3 hours and then the solvent was removed in vacuo below 30 ° C. The residue was partitioned between water and ethyl acetate. The ethyl acetate layer was washed with water, dried over magnesium sulfate and evaporated. The residue was purified by column chromatography (silica gel 60 / ethyl acetate, Rf 0,5 0.53) to give the title compound (1.31 g) as an oil.

I.r. (kalvo): 3400, 1805, 1745, 1695.I.r. (film): 3400, 1805, 1745, 1695.

N.m.r. (CDCl^/ 90ΜΗ^) δ 1,98 (1H, singletti vaihtokelpoinen), 3,02 (1H, dupletti, J 17Hz), 3,46 (1H, kaksoisdupletti, J 17Hz x 3 Hz), 4,19 (2H, dupletti, J 7Hz), 4,61 (2H, dupletti, jossa hienompaa kytkeytymistä J 6Hz), 4,88 (1H, tripletti, jossa hienoa kytkeytymistä, J 7Hz), 5,02 (1H, singletti, jossa hienoa kytkeytymistä), 5,29 (2H, tripletti, jossa hienoa kytkeytymistä, J 8Hz), 5,64 (1H, dupletti, J 3Hz), 5,7-6,1 (1H, multipletti).N.m.r. (CDCl 3 / 90ΜΗ ^) δ 1.98 (1H, singlet interchangeable), 3.02 (1H, doublet, J 17Hz), 3.46 (1H, double doublet, J 17Hz x 3 Hz), 4.19 (2H , doublet, J 7Hz), 4.61 (2H, doublet with finer coupling J 6Hz), 4.88 (1H, triplet with finely coupling, J 7Hz), 5.02 (1H, singlet with fine coupling) , 5.29 (2H, triplet with fine coupling, J 8Hz), 5.64 (1H, doublet, J 3Hz), 5.7-6.1 (1H, multiplet).

Esimerkki 46 AsetonyyliklavulanaattiExample 46 Acetonyl clavulanate

CHo0H CH0OHCHoOH CH0OH

py —* O \ 0 \ C02Na C02CH2C0CH3py - * O \ 0 \ CO2Na CO2CH2CO3CH3

Sekoitettuun liuokseen, jossa oli natriumklavulanaatin tetrahydraat-tia (2,05 g) kuivassa dimetyyliformamidissa (9 ml), lisättiin bromi-asetonia (2,35 ml). Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa yli yön 43 5 8 3 3 2 ja sen jälkeen liuotin poistettiin tyhjössä alle 30°C:ssa. Jäännös jaettiin veden ja etyyliasetaatin kesken. Etyyliasetaattiliuos pestiin vedellä, kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin. Esteri eristettiin pylväskromatografisesti (piigeeli 60/etyyliase-taattieluentti;Rf 0,36), jolloin saatiin otsikon yhdistettä (565 mg).To a stirred solution of sodium clavulanate tetrahydrate (2.05 g) in dry dimethylformamide (9 ml) was added bromoacetone (2.35 ml). The mixture was stirred at room temperature overnight 43 5 8 3 3 2 and then the solvent was removed in vacuo below 30 ° C. The residue was partitioned between water and ethyl acetate. The ethyl acetate solution was washed with water, dried over magnesium sulfate and evaporated. The ester was isolated by column chromatography (silica gel 60 / ethyl acetate eluent; Rf 0.36) to give the title compound (565 mg).

I.r. (kalvo): 3400, 1800, 1755, 1730.I.r. (film): 3400, 1800, 1755, 1730.

N.m.r. (CDCl^ 90ΜΗ^) δ 2,14 (3H, singletti), 2,20 (1H, leveä vaihtokelpoinen), 3,04 (1H, dupletti, 17Hz), 3,46 (1H, kaksoisdupletti, J 17Hz x 3Hz), 4,20 (2H, dupletti, jossa hienoa kytkeytymistä, J 8Hz), 4,7 (2H, singletti), 4,97 (1H, kaksoistripletti, 8Hz,N.m.r. (CDCl 3 90ΜΗ ^) δ 2.14 (3H, singlet), 2.20 (1H, broad interchangeable), 3.04 (1H, doublet, 17Hz), 3.46 (1H, double doublet, J 17Hz x 3Hz) , 4.20 (2H, doublet with fine coupling, J 8Hz), 4.7 (2H, singlet), 4.97 (1H, double triplet, 8Hz,

Jdupl ~ 1,5Hz), 5,12 (1H, hienosti kytkeytynyt singletti), 5,67 (1H, dupletti J 3Hz).Jdupl ~ 1.5Hz), 5.12 (1H, finely coupled singlet), 5.67 (1H, doublet J 3Hz).

Esimerkki 47Example 47

SykloheksyyliklavulanaattiSykloheksyyliklavulanaatti

CH^OHCH ^ OH

n—CH2°Hn -CH 2 ° H

o \ o \ /-v CO H v _/ \ 2 co2—<yo \ o \ / -v CO H v _ / \ 2 co2— <y

Liuosta, jossa oli N-karboetoksi-N-nitrososykloheksyyliamiinia (1,4 g- valmistettu antamalla typpidioksidin reagoida N-karboetok-si-sykloheksyyliamiinin kanssa CCl^rssa vedettömän natriumasetaatin läsnäollessa) dikloorimetaanissa (25 ml) 0°C:ssa, käsiteltiin pyrro-lidiinilla (0,62 ml) ja sekoitettiin 0°C:ssa 30 minuuttia. Tähän liuokseen lisättiin 5 minuutin aikana klavulaanihapon liuosta tetra-hydrofuraanissa (valmistettu hydraamalla bentsyyliklavulanaattia (1 g) tetrahydrofuraanissa (30 ml) 10 %:sella palladium-hiilikata-lyytillä). Saatua liuosta käsiteltiin ylimäärin olevalla natriumbi-karbonaattiliuoksella. Saatu seos uutettiin useilla erillä kloroformia ja kloroformiliuos kuivattiin magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin. Toistettu kromatografinen käsittely (kahdesti etyyliasetaatin ja sykloheksaanin seoksella suhteessa 1:1 ja kerran kloroformilla piigeelillä H) antoi otsikon yhdistettä (46 mg).A solution of N-carboethoxy-N-nitrosocyclohexylamine (1.4 g- prepared by reacting nitrogen dioxide with N-carboethoxy-cyclohexylamine in CCl 4 in the presence of anhydrous sodium acetate) in dichloromethane (25 ml) at 0 ° C was treated with pyro with lidin (0.62 ml) and stirred at 0 ° C for 30 minutes. To this solution was added over 5 minutes a solution of clavulanic acid in tetrahydrofuran (prepared by hydrogenation of benzyl clavulanate (1 g) in tetrahydrofuran (30 ml) with 10% palladium on carbon). The resulting solution was treated with excess sodium bicarbonate solution. The resulting mixture was extracted with several portions of chloroform, and the chloroform solution was dried over magnesium sulfate and evaporated. Repeated chromatography (twice with a 1: 1 mixture of ethyl acetate and cyclohexane and once with chloroform on silica gel H) gave the title compound (46 mg).

I.r. (kalvo): 3400, 1800, 1740, 1695 cm"1.I.r. (film): 3400, 1800, 1740, 1695 cm -1.

N.m.r. (CDC12): δ 1,1 - 2,0 (11H, m 1H vaihtokelpoinen), 3,01 (1H, 44 58332 d, J = 16Hz), 3,45 (1H, dd, J = 16 ja 3Hz), 4,17 (2H, d, J = 7Hz), 4,5 - 5,0 (1H, m), 4,87 (1H, t, J = 7Hz), 4,96 (1H, s), 5,63 (1H, d, J = 3Hz).N.m.r. (CDCl 2): δ 1.1-2.0 (11H, m 1H interchangeable), 3.01 (1H, 44,58332 d, J = 16Hz), 3.45 (1H, dd, J = 16 and 3Hz), 4.17 (2H, d, J = 7Hz), 4.5-5.0 (1H, m), 4.87 (1H, t, J = 7Hz), 4.96 (1H, s), 63 (1H, d, J = 3Hz).

Esimerkki 48 Propargyyliesteri ch2oh I—f-0\/CH20H ΓΙ'* “''T™ J_+ HCSC-CH2Br -> >— N-Example 48 Propargyl ester ch2oh I — f-0 \ / CH2OH ΓΙ '* “' 'T ™ J_ + HCSC-CH2Br ->> - N-

CT \ 0 VxCOOCH_-C=CHCT \ 0 VxCOOCH_-C = CH

C02Na 2CO2Na 2

Natriumklavulanaatin tetrahydraattia (4,4 g, 0,0150 mol) liuotettiin kuivaan DMF:an (25 ml) ja propargyylibromidia (1,6 ml, 2,53 g, 0,0212 mol) lisättiin hitaasti samalla sekoittaen. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 2 tuntia ja se kaadettiin sitten veteen (250 ml) ja tuote uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 100 ml). Yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin vedellä (4 x 100 ml) ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Kirkas, kuiva etyyliasetaattiliuos haihdutettiin kuiviin tyhjössä, jolloin saatiin paksu öljy, jonka osoitettiin ohutlevykromatografisesti (piihappogeelilevyt/etyyli-asetaattikehitysaine) sisältävän kaksi komponenttia.Sodium clavulanate tetrahydrate (4.4 g, 0.0150 mol) was dissolved in dry DMF (25 mL) and propargyl bromide (1.6 mL, 2.53 g, 0.0212 mol) was added slowly with stirring. The mixture was stirred at room temperature for 2 hours and then poured into water (250 ml) and the product extracted into ethyl acetate (3 x 100 ml). The combined ethyl acetate extracts were washed with water (4 x 100 mL) and dried over magnesium sulfate. The clear, dry ethyl acetate solution was evaporated to dryness in vacuo to give a thick oil which was shown by thin layer chromatography (silica gel plates / ethyl acetate developer) to contain the two components.

öljy liuotettiin kloroformiin (2 ml) ja kromatografoitiin Sephadex LH-20-hartsilla käyttäen kloroformin ja sykloheksaanin seosta suhteessa 1:1 eluenttina. Jakeet (25 ml) analysoitiin ohutlevykroma-tografisesti ja ne jakeet, jotka sisälsivät nopeammin liikkuvaa komponenttia huomattavat määrät, kerättiin yhteen ja väkevöitiin tyhjössä, jolloin saatiin paksu öljy (2,2 g). Tämä öljy jähmettyi seistessään yli yön. Ohutlevykromatografinen analyysi osoitti vain yhtä komponenttia. NMR-spektri osoitti kloroformia olevan jonkin verran läsnä.the oil was dissolved in chloroform (2 mL) and chromatographed on Sephadex LH-20 resin using a 1: 1 mixture of chloroform and cyclohexane as eluent. The fractions (25 ml) were analyzed by thin layer chromatography and those fractions containing significant amounts of the faster moving component were pooled and concentrated in vacuo to give a thick oil (2.2 g). This oil solidified on standing overnight. TLC analysis showed only one component. The NMR spectrum showed some chloroform present.

Tuote pestiin eetterillä, jolloin saatiin kiinteää ainetta (700 mg, sp. 65-6°C). Alhainen talteenotto johtui sen huomattavasta liukoisuudesta tähän liuottimeen. Saatiin seuraavat analyysitulokset: 45 58332The product was washed with ether to give a solid (700 mg, mp 65-6 ° C). The low recovery was due to its considerable solubility in this solvent. The following analytical results were obtained: 45 58332

Alkuaineanalyysi, kokeellisesti: C 55,55; H 4,68; N 6,12 %Elemental analysis, experimental: C 55.55; H 4.68; N 6.12%

Laskemalla kaavasta chhiin<^5! C 55,69; H 4,68; N 5,91 % NMR-spektri δ (CDC13); 2,01 (s 1H), 2,6 (t 1H), 2,95 - 3,75 (m 2H), 4,29 (d 2H) , 4,79 - 5,00 (m 3H) , 5,13 (d 1H) , 5,75 (d 1H) .Calculating from the formula to chi <^ 5! C 55.69; H 4.68; N 5.91% NMR spectrum δ (CDCl 3); 2.01 (s 1H), 2.6 (t 1H), 2.95-3.75 (m 2H), 4.29 (d 2H), 4.79-5.00 (m 3H), 5, 13 (d 1H), 5.75 (d 1H).

DMF = dimetyyliformamidi tie = ohutlevykromatografiaDMF = dimethylformamide road = thin layer chromatography

Esimerkki 49 6-Metoksinaft-2-yylimetyyliesteriExample 49 6-Methoxynaphth-2-ylmethyl ester

^CX -r—<\ PH20H^ CX -r - <\ PH20H

<[γ' 0J<[γ '0J

C02Na c°2 -OMeCO 2 Na c ° 2 -OMe

Liuosta, jossa oli vedetöntä natriumklavulanaattia (2,2 g, 10 mmol) ja 6-metoksi-2-bromimetyylinaftaleenia (2,51 g, 10 mmol) kuivassa DMF:ssa (80 ml), sekoitettiin huoneenlämpötilassa. Kolmen tunnin kuluttua reaktioseoksen tutkiminen ohutlevykromatografisesti osoitti, että bromimetyylinaftaleenia ei ollut läsnä. Reaktioliuotin poistettiin tyhjössä 30°C:ssa ja jäännöstä käsiteltiin etyyliasetaatilla (100 ml). Suspensio suodatettiin ja suodos pestiin vedellä (2 x 25 ml), kuivattiin magnesiumsulfaatilla, suodatettiin ja stripattiin, jolloin saatiin oranssi öljy (3,2 g). Tämän tuotteen kromatografointi Sepha-dex LH 20-hartsilla (100 g) (eluentti 50:50 kloroformi:sykloheksaani, keräten 10 ml:n jakeet; jakeet 12-20 sisälsivät vaadittua esteriä määritettynä ohutlevykromatografisesti tehden näkyväksi TTC-suihkul-lax) tuotti kirkaan öljyn, joka jähmettyi seistessään. Tämä materiaali liuotettiin dikloorimetaaniin ja 60-80°C:ssa kiehuvaa bensiiniä lisättiin, kunnes liuos tuli sameaksi. Seoksen seistessä avoimessa keittolasissa muodostui kumi. Yläpuolisen nesteen annettiin haihtua edelleen ja valkoinen kiteinen kiinteä aine muodostui, 2,52 g, 68 %, sp. 89-90°C.A solution of anhydrous sodium clavulanate (2.2 g, 10 mmol) and 6-methoxy-2-bromomethylnaphthalene (2.51 g, 10 mmol) in dry DMF (80 mL) was stirred at room temperature. After 3 hours, examination of the reaction mixture by thin layer chromatography showed that no bromomethylnaphthalene was present. The reaction solvent was removed in vacuo at 30 ° C and the residue was treated with ethyl acetate (100 mL). The suspension was filtered and the filtrate was washed with water (2 x 25 ml), dried over magnesium sulphate, filtered and stripped to give an orange oil (3.2 g). Chromatography of this product on Sepha-dex LH 20 resin (100 g) (eluent 50:50 chloroform: cyclohexane, collecting 10 ml fractions; fractions 12-20 contained the required ester as determined by thin layer chromatography showing TTC spray-lax) afforded a clear oil. , which solidified on standing. This material was dissolved in dichloromethane and gasoline boiling at 60-80 ° C was added until the solution became cloudy. As the mixture stood in an open beaker, a rubber formed. The supernatant was allowed to evaporate further and a white crystalline solid formed, 2.52 g, 68%, m.p. 89-90 ° C.

46 5 8 3 3 246 5 8 3 3 2

Alkuaineanalyysi, kokeellisesti: C 64,91; H 5,00; N 3,77 %Elemental Analysis, Experimental: C, 64.91; H 5.00; N 3.77%

Laskemalla kaavasta ^20H19N^6: ^ 65,04; H 5,15; N 3,79 % nmr (CDC13) 6 1,45 (1H, bs, CH20H), 2,9 (1H, d, 60-H), 3,36 (1H, H dd, 6σ-Η), 3,8 (3H, s, 0CH3), 4,03 (2H, d, CH2OH), 4,7 (1H, t,=^ ), 4,93 (1H, s, CHC02-), 5,27 (2H, s, -CH2OCO), 5,65 (1H, d, 50-H), 7,37 (6H, m, aromaattisia H's).Calculated from the formula ^ 20H19N ^ 6: ^ 65.04; H 5.15; N 3.79% nmr (CDCl 3) δ 1.45 (1H, bs, CH 2 OH), 2.9 (1H, d, 60-H), 3.36 (1H, H dd, 6σ-Η), 3, Δ (3H, s, OCH 3), 4.03 (2H, d, CH 2 OH), 4.7 (1H, t, = ^), 4.93 (1H, s, CHCO 2 -), 5.27 (2H, s, -CH 2 OCO), 5.65 (1H, d, 50-H), 7.37 (6H, m, aromatic H's).

χ 4 % trifenyylitetratsoliumkloridi mc.*tanolissa + yhtä suuri tilavuus-määrä NaOH:n 1-N metanoliliuosta.χ 4% triphenyltetrazolium chloride mc. * in methanol + equal volume of 1-N methanolic NaOH solution.

Esimerkki 50 2-Metoksietyyliesteri ch2ohExample 50 2-Methoxyethyl ester ch2oh

ch3och2ch2ch ch3och2ch2i r~f ΎCHch3och2ch2ch ch3och2ch2i r ~ f ΎCH

2) Nai 4H20 ^-N-2) Na 4H 2 O 2 -N-

C02CH2CH20CHC02CH2CH20CH

2-metoksietyylikloridia (43 g, 0,455 mol) (JACS 1930, 52, 653) lisättiin liuokseen, jossa oli natriumjodidia (75 g, 0,50 mol) asetonissa (500 ml) ja reaktiota refluksoitiin 3-4 tuntia. Suurin osa asetonista tislattiin pois normaalipaineessa, jäännös jäähdytettiin ja laimennettiin eetterillä (200 ml). Eetteriliuos suodatettiin puhtaaksi epäorgaanisista suoloista, pestiin peräkkäin suolaliuoksella (100 ml), 5 %:sella natriumtiosulfaatin vesiliuoksella (100 ml), jälleen suolaliuoksella (100 ml) ja kuivattiin magnesiumsulfaatilla. Suodatuksen jälkeen eetteri poistettiin tislaamalla normaalipaineessa ja tuote eristettiin tislaamalla ottaen talteen jae, joka kiehui 130-140°C:n välillä (normaalipaine). Tuote, raskas vaaleankeltainen neste painoi 20 G (23 % mikäli 100 %:sesti puhdasta).2-Methoxyethyl chloride (43 g, 0.455 mol) (JACS 1930, 52, 653) was added to a solution of sodium iodide (75 g, 0.50 mol) in acetone (500 ml) and the reaction was refluxed for 3-4 hours. Most of the acetone was distilled off under normal pressure, the residue was cooled and diluted with ether (200 ml). The ether solution was filtered free of inorganic salts, washed successively with brine (100 mL), 5% aqueous sodium thiosulfate (100 mL), again with brine (100 mL) and dried over magnesium sulfate. After filtration, the ether was removed by distillation under normal pressure, and the product was isolated by distillation to recover a fraction boiling between 130 and 140 ° C (normal pressure). The product, a heavy pale yellow liquid, weighed 20 G (23% if 100% pure).

Liuokseen, jossa oli natriumklavulanaatin tetrahydraattia (6 g, 0,0205 mol) dimetyyliformamidissa (100 ml), lisättiin 2-metoksi-etyylijodidia (5,6 g, 0,03 mol) huoneenlämpötilassa. Reaktiota sekoitettiin 5 tuntia, minkä ajan kuluttua ohutlevykromatografia (pii-happolevyt kehitettynä etyyliasetaatissa, täplät tehty näkyviksi al-kaalisella TTC-suihkulla, Rf natriumklavulanaatti 0,0, Rf esteri 0,5) osoitti jonkin verran esterin muodostumista. Reaktio laimennettiin 47 58332 etyyliasetaatilla (200 ml) ja vedellä (500 ml), vesiliuos uutettiin uudelleen etyyliasetaatilla (100 ml) ja yhdistetyt orgaaniset uutteet pestiin vedellä (4 x 100 ml). 1-N natriumbikarbonaatilla (100 ml) ja jälleen vedellä (3 x 100 ml) ja kuivattiin sitten magnesiumsulfaatilla. Suodatuksen jälkeen liuotin haihdutettiin tyhjössä ja näin vaaleankeltaisena öljynä saatu esteri kuivattiin lopuksi suurtyhjössä liuottimen ja reagoimattoman jodiyhdisteen viimeisten jälkien poistamiseksi. Saatu tuote oli oleellisesti puhdas pmr-spektrin mukaan.To a solution of sodium clavulanate tetrahydrate (6 g, 0.0205 mol) in dimethylformamide (100 mL) was added 2-methoxyethyl iodide (5.6 g, 0.03 mol) at room temperature. The reaction was stirred for 5 hours, after which time thin layer chromatography (silica plates developed in ethyl acetate, spots visualized by alkaline TTC spray, Rf sodium clavulanate 0.0, Rf ester 0.5) showed some ester formation. The reaction was diluted with 47,58332 ethyl acetate (200 mL) and water (500 mL), the aqueous solution was re-extracted with ethyl acetate (100 mL), and the combined organic extracts were washed with water (4 x 100 mL). 1-N sodium bicarbonate (100 mL) and again with water (3 x 100 mL) and then dried over magnesium sulfate. After filtration, the solvent was evaporated in vacuo and the ester thus obtained as a pale yellow oil was finally dried under high vacuum to remove the last traces of solvent and unreacted iodine compound. The product obtained was substantially pure according to the pmr spectrum.

Saalis: alle 5 %.Yield: less than 5%.

pmr (CDC13): 6 5,65 (1H d): δ 5,05 (1H s) ja 6 4,9 (1H t) peittäen toisiaan: δ 4,2 (4H m): δ 3,6 (2H m): δ 3,35 (3H s) peittäen δ 3,3 (1H m) : δ 2,9 (1H s) .pmr (CDCl 3): δ 5.65 (1H d): δ 5.05 (1H s) and δ 4.9 (1H t) overlapping: δ 4.2 (4H m): δ 3.6 (2H m ): δ 3.35 (3H s) covering δ 3.3 (1H m): δ 2.9 (1H s).

Esimerkki 51 4-Metcksibentsyyliesteri CH-Br CH2°H ^ X _^ .<kx»2oh o^_N 0 "cO^C^OCl^Example 51 4-Methoxybenzyl ester CH-Br CH2 ° H ^ X _ ^. <Kx »2oh o ^ _N O" cO ^ C ^ OCl ^

Natriumklavulanaattia (18,2 g, n. 0,07 mol vedetöntä natriumklavula-naattia, vesipitoisuus 22,8 %) liuotettiin dimetyyliformamidiin (100 ml) ja käsiteltiin liuoksella, jossa oli 4-metoksibentsyyli-bromidia (13,5 g, 0,07 mol) dimetyyliformamidissa (25 ml). Kirkasta liuosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 80 minuuttia ja laimennettiin sitten etyyliasetaatilla (300 ml) ja vedellä (200 ml). Vesiker-ros erotettiin pois ja uutettiin uudelleen etyyliasetaatilla (300 ml). Etyyliasetaattiuutteet yhdistettiin ja pestiin vedellä (200 ml x 6) ja kuivattiin MgS04:lla. Haihdutus tuotti öljyä 19,5 g.Sodium clavulanate (18.2 g, ca. 0.07 mol anhydrous sodium clavulanate, water content 22.8%) was dissolved in dimethylformamide (100 ml) and treated with a solution of 4-methoxybenzyl bromide (13.5 g, 0.07 mol). mol) in dimethylformamide (25 ml). The clear solution was stirred at room temperature for 80 minutes and then diluted with ethyl acetate (300 mL) and water (200 mL). The aqueous layer was separated and re-extracted with ethyl acetate (300 mL). The ethyl acetate extracts were combined and washed with water (200 mL x 6) and dried over MgSO 4. Evaporation gave 19.5 g of oil.

öljy liuotettiin kloroformi/sykloheksaaniin (1:1) ja kromatografoi-tiin 65 x 400 mm:n Sephadex-kolonnissa (500 g, LH 20 täydennetty kloroformi/sykloheksaanin seokseen suhteessa 1:1). Vaadittua esteriä sisältävät jakeet yhdistettiin ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin vaaleankeltainen öljy. Hiertäminen n-heksaanissa antoi kiinteän jauhemaisen tuotteen, joka suodatettiin pois, pestiin suo-datintyynyllä tuoreella n-heksaanilla ja kuivattiin tyhjössä, saalis 12,6 g (57 %), sp. 54,5-55,5°C.the oil was dissolved in chloroform / cyclohexane (1: 1) and chromatographed on a 65 x 400 mm Sephadex column (500 g, LH 20 supplemented with chloroform / cyclohexane 1: 1). The fractions containing the required ester were combined and evaporated in vacuo to give a pale yellow oil. Trituration in n-hexane gave a solid powder which was filtered off, washed on a filter pad with fresh n-hexane and dried in vacuo to give 12.6 g (57%), m.p. 54.5 to 55.5 ° C.

Claims (1)

48 5 8 3 3 2 IR (KBr-kiekko) 3400, 2950, 2840, 1795, 1735, 1690, 1615, 1515, max n 1305, 1250, 1175, 1005, 890, 825 cm . Sama tuote voitiin valmistaa klavulaanihaposta tetrahydrofuraani-liuoksessa ja 4-metoksibentsyylialkoholista ja disykloheksyylikar-bodi-imidistä. Saalis (0,1052 mooliasteikolla) 0,3 g (18 %). Patenttivaatimus Menetelmä bakteereja tappavasti vaikuttavien klavulaanihapon estereiden valmistamiseksi, joilla on kaava ^O. CH-OH ΓΤ >/ s— 0 'co2R jossa R on 1-9 hiiliatomia sisältävä hiilivetyryhmä, joka mahdollisesti on substituoitu halogeenilla, alemmalla alkoksiryhmällä, hydrok- syyliryhmällä tai mahdollisesti suolan muodossa olevalla emäksisellä 2 3 2 3 ryhmällä NR R , jossa R on vetyatomi tai alempi alkyyliryhmä ja R 2 on vetyatomi tai alempi alkyyliryhmä tai on liittynyt ryhmään R 2 3 niin, että NR R on 5- tai 6-jäseninen rengas, tunnettu siitä, että kaavan 0 £o2h mukainen klavulaanihappo tai sen suola saatetaan reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava R-Q, jossa Q on helposti poistuva ryhmä ja R on sama kuin edellä. Förfarande för framställning av antibakteriellt verksamma estrar av klavulansyra, vilka har formeln48 5 8 3 3 2 IR (KBr disc) 3400, 2950, 2840, 1795, 1735, 1690, 1615, 1515, max n 1305, 1250, 1175, 1005, 890, 825 cm-1. The same product could be prepared from clavulanic acid in tetrahydrofuran solution and 4-methoxybenzyl alcohol and dicyclohexylcarbodiimide. Yield (0.1052 on a molar scale) 0.3 g (18%). A process for the preparation of bactericidal esters of clavulanic acid of the formula. CH-OH ΓΤ> / s-0 'co2R wherein R is a hydrocarbon group having 1 to 9 carbon atoms, optionally substituted by halogen, a lower alkoxy group, a hydroxyl group or optionally a basic 2 3 2 3 group in the form of a salt NR R, where R is a hydrogen atom or a lower alkyl group and R 2 is a hydrogen atom or a lower alkyl group or is attached to the group R 2 3 such that NR R is a 5- or 6-membered ring, characterized in that clavulanic acid of the formula 0? o 2h or a salt thereof is reacted with a compound , having the formula RQ, wherein Q is an easily leaving group and R is the same as above. For example, for the production of antibacterial crystals of oestrus,
FI780201A 1974-04-20 1978-01-23 FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ESTRAR AV KLAVULANSYRA FI58332C (en)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB1741074 1974-04-20
GB17410/74A GB1508977A (en) 1974-04-20 1974-04-20 Beta-lactam antibiotic from streptomyces clavuligerus
GB2771574 1974-06-21
GB2771574 1974-06-21
GB4365174 1974-10-09
GB4365174 1974-10-09
GB5352574 1974-12-11
GB5352574 1974-12-11
FI751133 1975-04-16
FI751133A FI54144C (en) 1974-04-20 1975-04-16 FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV KLAVULANSYRA ELLER ETT SALT DAERAV

Publications (3)

Publication Number Publication Date
FI780201A FI780201A (en) 1978-01-23
FI58332B FI58332B (en) 1980-09-30
FI58332C true FI58332C (en) 1981-01-12

Family

ID=27514590

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI780202A FI780202A (en) 1974-04-20 1978-01-23 FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ETT HUVUDSAKLIGEN RENT SALT AV KLAVULANCY
FI780201A FI58332C (en) 1974-04-20 1978-01-23 FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ESTRAR AV KLAVULANSYRA

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
FI780202A FI780202A (en) 1974-04-20 1978-01-23 FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ETT HUVUDSAKLIGEN RENT SALT AV KLAVULANCY

Country Status (1)

Country Link
FI (2) FI780202A (en)

Also Published As

Publication number Publication date
FI58332B (en) 1980-09-30
FI780202A (en) 1978-01-23
FI780201A (en) 1978-01-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0165384B1 (en) Carbapenem derivatives, their preparation and compositions containing them
FI56686C (en) PROCEDURE FOR FRAMSTATION OF AV 7-AMINOCEFALOSPORANSYRADERIVAT MED ANTIBIOTISK VERKAN
SU1407400A3 (en) Method of producing substituted vinylcephalosporins
EP0024832B1 (en) Beta-lactam antibiotics, their preparation, pharmaceutical compositions containing them and their preparation
NO162192B (en) ANALOGY PROCEDURE FOR PREPARING A THERAPEUTIC ACTIVE BETA-LACTAM ANTIBIOTIC.
US4323569A (en) β-Lactam anti-bacterial, compositions containing them and a process for their preparation
US4670431A (en) Beta-lactam antibacterial agents
AU609488B2 (en) (5r, 6s, 1r)-6-(1-hydroxyethyl)-2-(methoxymethyl)penem-3- carboxylic acid derivatives
EP0409164B1 (en) Phenacylpyridiniothiocephalosporins
FI77662B (en) FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV NYA ANTIBAKTERIELLA PENEMDERIVAT.
US4374144A (en) β-Lactam compounds, their preparation and use
FI58332C (en) FOERFARANDE FOER FRAMSTAELLNING AV ESTRAR AV KLAVULANSYRA
EP0131174B1 (en) Substituted phenylglycine derivatives of beta-lactam antibiotics
NO833842L (en) INTERMEDIATE PRODUCTS FOR THE PREPARATION OF CLAVULANIC ACID EATERS
US4387051A (en) β-Lactam antibiotics, their preparation and their use in pharmaceutical compositions
US4048320A (en) Penicillins
EP0003415A2 (en) Beta-Lactam compounds, processes for their preparation,compositions containing them and intermediates of use in their preparation
EP0114750A2 (en) Beta-lactam antibacterial agents
EP0001516A1 (en) Beta-Lactam compounds, processes for their preparation, pharmaceutical compositions containing them and intermediates of use in their preparation
US4416883A (en) Penicillin derivatives
EP0010358A1 (en) Beta-lactam compounds, processes for their preparation, compositions containing them, intermediates of use in their preparation and methods for the production thereof
US3941779A (en) Method for producing 2-(substituted thio)-3-cephem derivatives
GB2105329A (en) Penem-3-carboxylic acid derivatives their preparation and their use as antimicrobial agents
US4349551A (en) Penicillin derivatives and compositions containing them
EP0066373B1 (en) Beta-lactam derivatives, a process for their preparation and compositions containing them

Legal Events

Date Code Title Description
MA Patent expired

Owner name: BEECHAM GROUP LTD