FI113657B

FI113657B - Menetelmä uusien 11beeta-bentsaldoksiimi-estra-4,9-dieeni-johdannaisten valmistamiseksi käytettäväksi farmaseuttisissa koostumuksissa

Info

Publication number: FI113657B
Application number: FI943687A
Authority: FI
Inventors: Walter Elger; Gerd Schubert; Guenther Kaufmann; Lothar Sobeck; Michael Oettel; Anatoli Kurischko
Original assignee: Schering Ag
Priority date: 1993-09-20
Filing date: 1994-08-09
Publication date: 2004-05-31
Also published as: DE4332283A1; ES2108371T3; JPH07149789A; EP0648778A2; HU9402694D0; NO304989B1; EP0648778A3; PL183181B1; CZ292298B6; NO942953L; FI943687A; CA2130516A1; CA2130516C; NO942953D0; SK95794A3; FI943687A0; NZ264229A; US5693628A; CZ197094A3; HU223339B1

Description

113657

Menetelmä uusien llp-bentsaldoksllml-estra-4f9-dieeni-johdannaisten valmistamiseksi käytettäväksi farmaseuttisissa koostumuksissa 5 Keksintö koskee menetelmää uusien Ιΐβ-bentsaldoksiimi-estra-4,9-dieeni-johdannaisten valmistamiseksi käytettäväksi farmaseuttisissa koostumuksissa.

Ιΐβ-substituoidut fenyyli-estratrieenit ovat jo tunnettuja. 13^-aryyli-17a-propinyyli-estra-4,9-dieenien valmistusta on 10 jo kuvattu esimerkiksi EP-patenttijulkaisussa 057 115, ja 11β- (4-formyylifenyyli)-estra-4,9-dien-3-onien reaktiota -hydroksyyliamiinien kanssa DE-patenttijulkaisussa 3 504 421. Kuvatussa menetelmässä oksimoidaan sekä 11β- formyylifenyyliryhmä että myös 3-ketoryhmä. Tämän lisäksi 15 C-3:ssa muodostuu syn- ja anti-isomeerejä. Kuvattujen yhdisteiden vaikutusta ei vielä tähän mennessä tunneta.

Progesteronia erittyy kuukautiskierron ja raskauden aikana suurissa määrissä munasarjoista ja istukasta. Sen säätelevää merkitystä ei ole oletettavasti kokonaan selvitetty.

20 Varmaa on, että progesteroni vaikuttaa yhdessä estrogeenien kanssa kohdun limakalvon rytmisiin muutoksiin kuukautis- ... kierron ja raskauden aikana. Kohonneen progesteronipitoi- :Y: suuden vaikutuksesta ovulaation jälkeen kohdun limakalvo . muuttuu sellaiseksi, että alkion (blastokystan) kiinnitty- :v. 25 minen kohdun seinämään mahdollistuu. Progesteronista riip- * ” puu samoin myös niiden kudosten säilyminen, joissa kasvava Ύ alkio kehittyy.

I · * ·

Raskauden aikana kohdun lihastoiminnassa tapahtuu dramaat-*; *: tinen muutos. Gravidi kohtulihas reagoi hyvin heikosti tai 30 ei ollenkaan hormonaalisiin ja mekaanisiin ärsykkeisiin, , ·. jotka ilman raskautta aiheuttavat kipuja. Ei ole epäilystä- kään siitä, että progesteroni on tällöin avainasemassa, > * # vaikka raskauden monissa vaiheissa, esimerkiksi välittömästi ennen synnytystä reaktiovalmius on hyvä, veren progesteroni- pitoisuuden ollessa samalla äärimmäisen korkea.

2 113657 5 Edelleen raskaudelle tyypillistä on samoin hyvin korkea pro-gesteronitaso. Rintarauhasten rakenne ja kohdun suun sulkeutuminen synnytysajankohdan lähestymiseen saakka ovat tästä esimerkkejä.

10 Progesteroni osallistuu hienosti ovulaation säätelyyn. Tiedetään, että progesteronilla on suurina annostuksina anti-ovulatorisia ominaisuuksia. Nämä ovat tuloksena aivolisäkkeen gonadotropiinierityksen estosta, joka on edellytyksenä follikkelin kypsymiselle ja ovulaatiolle. Toisaalta on ha-15 väittävissä, että kypsän follikkelin verrattain vähäisellä progesteronin erityksellä on aktiivinen merkitys ovulaation valmistelulle ja aiheuttamiselle. Tällöin on aivolisäkkeen mekanismeilla (ajallisesti rajoitettu progesteronin niin sanottu positiivinen palautevaikutus gonadotropiinierityk-20 seen) havaittavissa suuri merkitys (Loutradie, D.; Human Reproduction 6. 1991, 1238 - 1240).

Vähemmän sen sijaan on analysoitu progesteronin toimintaa ,·. kypsässä follikkelissa ja itse keltarauhasessa, joiden I t * 25 olemassaolosta ei ole epäilystäkään. Lopuksi myös tässä on ' ! tunnustettava endokriiniseen follikkelin ja keltarauhasen • · · *;·; toimintaan kohdistuvat stimuloivat ja estävät vaikutukset.

• *

Progesteronilla ja progesteronireseptoreilla on myös suuri v · 30 merkitys patofysiologisissa prosesseissa. Progesteroniresep torit voidaan osoittaa endometrioosipesäkkeissä, mutta myös :· kohdun, rintarauhasen ja keskushermoston (aivokalvokasvain) kasvaimissa. Näiden reseptorien merkitys viimeksi mainittu-‘ . jen patologisesti relevanttien kudosten kasvuun ei välttä- 35 mättä liity veren progesteronitasoon. On osoitettu, että aineet, jotka on karakterisoitu progesteroniantagonisteiksi, i RU 486 = Mifepriston (EP-0 057 115) ja ZK 98299 = Onapriston ·:··· (julkaisu DE-35 04 421) aikaansaavat näissä kudoksissa sel viä toiminnan muutoksia myös silloin, kun veren progestero- 3 113657 nipitoisuus havaitaan hyvin pieneksi. Näyttää mahdolliselta, että silloin, kun progesteroni ei ole antagonistien vaikutuksesta sitoutunut progesteronireseptoriin, niin progesteronireseptorin transkriptiovaikutusten muutoksilla on suuri 5 merkitys (Chwalisz, K. et. ai., Endocrinology, 129, 317 -322, 1991).

Progesteronin vaikutukset sukupuolielinten ja muiden elinten kudoksissa tapahtuvat vuorovaikutuksessa progesteroniresep-10 torin kanssa. Progesteroni sitoutuu solussa suurella affiniteetilla reseptoriinsa. Tämä aiheuttaa reseptoriproteiinin muutokset: konformaation muutokset, 2 reseptoriyksikön dime-risoituminen kompleksiksi, reseptorin DNA-sitoutumiskohdan paljastuminen proteiinin katketessa (HSP 90), sitoutuminen 15 DNA:n hormoni-vastaaviin (hormoniin reagoiviin) osiin. Lopuksi tiettyjen geenien transkriptio on tarkkaan säädeltyä. (Gronemeyer, H. et ai., J. Steroid. Biochem. Molec. Biol. 41, 3 -8, 1992).

20 Progesteronin tai progesteroniantagonistien vaikutus ei ole riippuvainen ainoastaan niiden konsentraatiosta veressä. Reseptorien konsentraatio solussa on samoin tarkkaan säädeltyä. Estrogeenit stimuloivat progesteronireseptorien syntee-.·. siä useimmissa kudoksissa. Progesteroni estää estrogeenire- 25 septorien synteesiä ja sen oman reseptorin synteesiä. Ole-‘1 tettavasti nämä ja muut estrogeenien ja gestageenien väliset vuorovaikutussuhteet voivat selittää, miksi gestageenit ja * ; antigestageenit voivat vaikuttaa estrogeenista riippuvaisiin ··· tapahtumiin sitoutumatta itse estrogeenireseptoriin. Näillä V ’ 30 suhteilla on luonnollisesti suuri merkitys antigestageenien terapeuttiselle käytölle. Nämä aineet näyttävät soveltuvan vaikuttamaan tarkoituksellisesti naisen lisääntymistapahtu-miin, esim. ovulaation jälkeen estämään hedelmöityneen muna-solun kiinnittymistä kohdun limakalvoon, myöhäisraskaudessa a · . 35 lisäämään kohdun supistumisvalmiutta prostaglandiineja ja ’ oksitosiinia kohtaan tai avaamaan ja pehmittämään ("kypsen- i j : tämään") kohdun kaulaa.

Antigestageenit estävät ovulaation eri kädellislajeilla.

4 113657 Tätä vaikutusmekanismia ei ole selvitetty yksiselitteisesti. Gonadotropiinierityksen eston ohella keskustellaan myös munasarja-mekanismeista, jotka häiritsevät progesteronin para-ja autokriinisiä toimintoja munasarjoissa.

5

Antigestageeneillä on kyky muunnella tai heikentää estrogeenien vaikutuksia, vaikka niillä itsellään ei ole ylipäätänsä minkäänlaista affiniteettia estrogeenireseptoriin sytoplas-matasolla ja vaikka ne voivat saada aikaan estrogeeniresep-10 torikonsentraation kohoamisen. On odotettavissa, että vastaavat ominaisuudet voivat saada aikaan edullisen vaikutuksen endometrioosipesäkkeissä tai kasvainkudoksissa, joissa on estrogeeni- ja progesteronireseptoreita. Erityisiä etuja sairauksiin, kuten endometrioosiin kohdistuvalle edulliselle 15 vaikutukselle voidaan odottaa silloin, kun antigestageenin estovaikutuksiin päästään aikaansaamalla kudoksissa ovulaation estyminen. Ovulaation estymisen ohella jäisi pois myös osa munasarjojen hormonituotannosta ja täten tämän osuuden osaksi tuleva patologisesti muuttuneeseen kudokseen kohdis-20 tuva stimulaatiovaikutus. Vaikean endometrioosin ollessa kyseessä olisi toivottavaa estää ovulaatio ja saattaa muutoin aina ympärillä olevat sukupuolielinten kudokset palautumat-tomasti lepotilaan.

» 1 1 .... 25 Myös ehkäisyä varten keskustellaan menetelmästä, jossa anti- gestageenihoito ehkäisee ovulaation ja tämän jälkeen tapah- I ♦ · tuva gestageenihoito aiheuttaa kohdun limakalvon sekretori- sen transformaation siten, että antigestageeni- ja gestagee-* 1 · ···· nihoitopäivien ja niiden päivien, jolloin mitään hoitoa ei v : 30 tapahdu, tuloksena on 28-päivän pituinen kuukautiskierto, jossa on säännöllinen kuukautisvuoto (Baulieu, E.E., Advan-( ces in Contraception 7, 345 - 1991).

* t · • · · ’ . Antigestageeneillä voi olla erilaisia hormonaalisia ja anti- . 35 hormonaalisia ominaisuuksia. Erityistä terapeuttista merki- ’ tystä on tällöin antiglukokortikoiäisillä ominaisuuksilla.

*11 : Nämä ovat haitallisia terapeuttisessa käytössä, jossa pro- ·;··: gesteronireseptoreiden estyminen on hoidossa tärkeintä, kos ka ne aiheuttavat terapeuttisesti vaadittavina annostuksina 5 113657 ei-toivottuja sivuvaikutuksia, estävät terapeuttisesti merkitsevän annoksen käytön, tai voivat johtaa hoidon keskeytymiseen. Antiglukokortikoidisten ominaisuuksien osittainen tai täydellinen vähentäminen on edellytyksenä antigestagee-5 nihoidolle, erityisesti viikkoja tai kuukausia kestävää hoitoa vaativissa indikaatioissa.

Esillä olevan keksinnön tehtävänä on asettaa käyttöön menetelmä uusien, yleisen kaavan I mukaisten Ιΐβ-bentsaldoksii-mi-estra-4,9-dieeni-johdannaisten valmistamiseksi käytettä-10 väksi farmaseuttisissa koostumuksissa, joilla on antigesta-geeninen vaikutus:

NOZ

r1 or2 (l)

Yleisessä kaavassa I NOZ

\ Γ r1 or2 (n » * l · ,···. 15 R on vetyatomi tai 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryh- < > · * · * · · I · . · · 6 113657 mä, R2 on vetyatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai alkyyli-aryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, asyyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia tai ryhmä -CONHR4 tai -COOR4, jolloin 5 R4 on vetyatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai alkyyliaryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, R3 on vetyatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai alkyyliaryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, 10 ryhmä -(CH2)n-CH2X, jolloin n on 0, 1 tai 2, X on fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomi, syano-, atsido- tai rodanoryhmä, ryhmä ORs tai SRs, jolloin Rs on vetyatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli-15 tai alkyyliaryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, asyyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, ryhmä ORs, jolloin Rs merkitsee samaa kuin edellä, 20 ryhmä -(CH2)0-CH=CH(CH2)p-Re, jolloin o on 0, 1, 2 tai 3 ja p on 0, 1 tai 2 ja Re on vetyatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai alkyyliaryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, hydroksyyliryhmä, alkok->*,w siryhmä tai asyylioksiryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, !*.*. 25 ryhmä -(CH2)qCsCR7, jolloin q on 0, 1 tai 2 ja R7 on vetyatomi, fluori-, kloori-

t · I

; bromi-tai jodiatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai alkyyliaryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia tai asyy-V ‘ 30 liryhmä, jossa on 1 - 10 hii-1latomia, ,,// Z on vetyatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai alkyyli- : i : aryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, asyyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, ryhmä -CONHR4 tai -COOR4, • · . 35 jolloin R4 on vetyatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai .» · * · alkyyliaryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, !.· · tai alkali- tai maa-alkalimetalliatomi.

i*’i Edullisena pidetään yhdisteitä, joissa R1 on metyyli- tai etyyliryhmä, 7 113657 R2 on vetyatomi, 1-10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 1-10 hiiliatomia sisältävä asyyliryhmä tai ryhmä -CONHR4 tai -COOR4, jolloin R4 on vetyatomi, alkyyli- tai aryyliryh-5 mä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, R3 on vetyatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai alkyyli-aryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, 10 R3 on ryhmä -(CH2)n-CH2X, jolloin n on 0, 1 tai 2, X on fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomi, syano-, atsido- tai rodanoryhmä, ryhmä 0RS tai SRs, jolloin Rs on 1 - 6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai 1-6 hiiliatomia sisältävä asyyliryhmä, 15 ryhmä ORs, jolloin Rs on vetyatomi, 1-10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai 1-10 hiiliatomia sisältävä asyyliryhmä, 20 ryhmä -(CH2)0-CH=CH(CH2)p-R6, jolloin o on 0, 1, 2 tai 3 ja p on 0, 1 tai 2 ja R6 on vetyatomi, 1-10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, hyd-roksyyliryhmä, alkoksiryhmä tai asyylioksiryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, » m 25 i I * 1 tai ryhmä - (CH2) qC=CR7, jolloin q on 0, 1 tai 2 ja R on vetyatomi, fluori-, kloori- i « · ; bromi- tai jodiatomi, 1-10 hiiliatomia sisältävä alkyyli- i * · ryhmä tai 1-10 hiiliatomia sisältävä asyyliryhmä, ja Z on ' 30 vetyatomi, 1-10 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 1-10 hiiliatomia sisältävä asyyliryhmä, ryhmä -CONHR4 tai -COOR4, jolloin R4 on vetyatomi tai 1-10 hiiliatomia sisältävä al-; : ; kyyliryhmä, tai alkali- tai maa-alkalimetalliatomi.

I I M

, 35 Erittäin edullisina pidetään yhdisteitä, joissa R2 on 1 - 6 I * * * * * 9 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 1-6 hiiliatomia sisäl-\ tävä asyyliryhmä tai ;·*: ryhmä -CONHR4 tai -COOR4, jolloin R4 on vetyatomi, alkyyli- tai aryyliryhmä, jossa on 1-6 hiiliatomia, R3 on vetyatomi tai 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryh- mä, 8 113657 5 ryhmä -(CH2)n-CH2X, jolloin n on 0, 1 tai 2, X on fluori-, kloori-, bromi- tai jodiatomi, syano-, atsido- tai rodanoryhmä, ryhmä ORs tai SR5, jolloin Rs on 1 - 6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai 1-6 hiiliatomia sisältävä asyyliryhmä, 10 ryhmä ORs, jolloin R5 on 1 - 6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai 1 - 6 hiiliatomia sisältävä asyyliryhmä, 15 ryhmä -(CH2)0-CH=CH(CH2)p-R6, jolloin o on 0, 1, 2 tai 3 ja p on 0, 1 tai 2 ja Rs on alkyyliryhmä, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, alkoksiryhmä tai asyylioksiryhmä, jossa on 1 - 6 hiiliatomia, 20 tai ryhmä -(CH2)q=CR7, jolloin q on 0, 1 tai 2 ja R7 on 1 - 6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai 1-6 hiiliatomia sisältävä asyyliryhmä, ja Z on 1 - 6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, 1-6 hiili-atomia sisältävä asyyliryhmä, ryhmä -CONHR4 tai -COOR4, 25 jolloin R4 on vetyatomi, alkyyli- tai aryyliryhmä, jossa on « 1-6 hiiliatomia.

Edullisimpia ovat: 30 llB-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-hydroksi-17a-*·* ’ metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, ...: HB-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-hydroksi-17a- v : etoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 35 ,,..: HB-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-hydroksi-17a-n- . propoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, I · • * · ‘” *: HB-14-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-hydroksi-17a-i- 9 113657 propoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-176-metoksi-17a metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 5 116-(4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-176-metoksi-17a- etoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-hydroksi-17a-(3-hydroksiprop-l-in-yyli)-estra-4,9-dien-3-oni, 10 116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-metoksi-17a-(3-hydroksiprop-l-in-yyli)-estra-4,9-dien-3-oni, 116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-hydroksi-17a-Z-15 (3-hydroksipropenyyli)-estra-4,9-dien-3-oni, 116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-176-metoksi-17a-Z-(3-hydroksipropenyyli)-estra-4,9-dien-3-oni, 20 17a-kloorimetyyli-116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-176-hydroksi-estra-4,9-dien-3-oni, 17a-kloorimetyyli-116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-176-metoksi-estra-4,9-dien-3-oni, 25 * ; 17a-syanometyyli-116- [ 4- (hydroksi-iminometyyli) fenyyli ] -176- . hydroksi-estra-4,9-dien-3-oni, ! 17a-syanometyyli-116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-176- 30 metoksi-estra-4,9-dien-3-oni, 17a-atsidometyyli-116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-176-metoksi-estra-4,9-dien-3-oni, « · # ....: 35 116-(4-( hydro ks i- iminome tyy 1 i) f enyy 1 i ] -17 6-me toks i- 17a- metyy litiometyyli-estra-4,9-dien-3-oni, • · :.: : 116-[4-(metyylioksi-iminometyyli)fenyyli]-176-metoksi-17a- ':' ‘: metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 113657 10 11β— [4- (asetoksi-iminometyyli) fenyyli] -17fi-metoksi-17cx-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 11β-[4-(metyylioksi-iminometyyli)fenyyli]-17ft-hydroksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 5 11β-{4-[(etoksikarbonyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli}-17B- metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 11β- {4-[(etyyliaminokarbonyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli}-17β-metoksi-17α-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 17β-metoksi-17α-metoksimetyyli-llβ-{4-[(fenyyliaminokarbo-10 nyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli}-estra-4, 9-dien-3-oni ja 11β—[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17β-etoksi-17α-etok-simetyyli-estra-4,9-dien-3-oni.

Keksinnön mukainen menetelmä on tunnettu siitä, että yhdisteen, jolla on yleinen kaava II, o r1 or2 ^_ (II) i * · » jossa R1, R2 ja R3 merkitsevät samaa kuin edellä, annetaan reagoida yhdisteen kanssa, jolla on yleinen kaava

Ha U 113657 5 NH2-0-Y (Ha) jossa Y on vetyatomi, 1-10 hiiliatomia sisältävä alkyyli-ryhmä, 1-10 hiiliatomia sisältävä asyyliryhmä tai ryhmä -CONHR4 tai -COOR4, 10 jolloin R4 on vetyatomi, alkyyli-, aryyli-, aralkyyli- tai alkyyliaryyliryhmä, jossa on 1 - 10 hiiliatomia, ja jolloin yleisen kaavan Ila mukainen yhdiste on mahdollisesti tällaisena yhdisteenä, tai josta yleisen kaavan Ha mukainen yhdiste vapautetaan valituissa reaktio-olosuh-15 teissä, mahdollisesti esiintyvä hydroksyyliamiiniryhmä esteröidään tai eetteröidään ja mahdollisesti saatu yhdiste muutetaan suolaksi.

20 Yleisen kaavan II ja yleisen kaavan Ha mukaisten yhdisteiden välinen reaktio tapahtuu edullisesti siten, että käytetään ekvimolaarisia määriä yhdisteitä.

Yleisen kaavan I mukaisten yhdisteiden, - joissa R2- tai Z-;\4 25 substituentti merkitsevät hydroksyyliryhmää -, esteröinti, eetteröinti tai uretaaninmuodostus voivat haluttaessa tapah-/·, tua seuraavasti: esteröinti voidaan suorittaa sinänsä tunne- tulla tavalla asylointiaineilla, kuten happoanhydrideillä • · • tai happoklorideilla emästen, edullisesti pyridiinin läsnä ·;;; 30 ollessa, eetteröinti metyylijodidilla emästen, edullisesti *·' ‘ kalium-tert.-butanolaatin läsnä ollessa tai uretaaninmuodos tus antamalla reagoida alkyyli- tai aryyli-isosyanaattien kanssa inerteissä liuottimissa, edullisesti tolueenissa tai • » · : antamalla reagoida karbamoyylikloridien kanssa emästen, 35 edullisesti trietyyliamiinin läsnä ollessa.

» ·

Yleisen kaavan II mukaisen lähtöyhdisteen valmistus tapahtuu · 5a,ΙΟα-epoksidistä III

12 1 13657 . o I T_J ( I I I ) h3co ;o h3co>x-/A^^ 10 [vertaa esim. Nedelec Bull. Soc. chim. France (1970), 2548].

Fenyyliryhmän liittäminen llfl-asemaan Ag(io),5a-hydroksi-15 rakenteen IV muodostuessa saavutetaan Cu(I)-suolalla katalysoidulla Grignard-reaktiolla (Tetrahedron Letters 1979, 2051) p-bromibentsaldehydiketaalin, edullisesti p-bromi-bentsaldehydidimetyyliketaalin kanssa 0 eC:n ja 30 °C:n välisessä lämpötilassa.

20 OCH, h3co^ Ϊ: 1 CV)

i v H3co r T

OH

V : Ryhmittymän -(CH2)„CH2X liittäminen tapahtuu sinänsä 35 tunnetun menetelmän mukaisesti spiroepoksidin V kautta ",,i antamalla reagoida trimetyylisulfoniumjodidin ja kalium- . tert.-butanolaatin kanssa dimetyylisulfoksidissa [Hubner et.

: ai.; J. prakt. Chem. 314, 667 (1972); Arzneim. Forsch. 30, » · 13 1 13657 401 (1973] ja och3 h3co^ TT 1 ( V )

H3C°J T

OH

tämän jälkeen avaamalla rengas nukeofiileillä, kuten halo-genideilla ja pseudohalogenideilla, alkoholaateilla ja mer-15 kaptideilla [Ponsold et. ai.; Z. Chem. 11, 106 (1971)].

Tällöin muodostuvat 17a-CH2X-yhdisteet VI

och3 h3co^

Η^ίΓ^Ί , 0H

H2>< I (v 1) h3co^ T H3C0'^v-//N^

· ·· 3 OH

* · I · » » » · I · · 0". voidaan lohkaista joko happamella hydrolyysillä, edullisesti

* ; p-tolueenisulfonihapolla asetonissa (Teutsch et. ai. DE

30 2801416) yleisen kaavan II mukaisiksi aldehydeiksi, joissa v * R2 on vetyatomi, tai sen jälkeen, kun vapaat hydroksyyliryh- mät on eetteröity alkyylihalogenideilla kalium-tert.-butano- laatin läsnä ollessa, ne voidaan muuttaa ensiksi 5a,17B-di- eettereiksi (Kasch et. ai. DD 290 893), jotka sitten voidaan ‘ . 35 muuttaa happamella hydrolyysillä, edullisesti p-tolueenisul- • . fonihapolla asetonissa yleisen kaavan II mukaisiksi aldehy- ’ deiksi, joissa R2 on alkyyliryhmä, edullisesti metyyliryhmä.

i * * ·:*·; Ryhmien - (CH2 )0CH=CH(CH2 )pR6 liittäminen tapahtuu antamalla 14 1 13657

ketonin IV reagoida propin-l-oli-tetrahydro-pyranyylieette-rin ja kalium-tert.-butanolaatin kanssa 17α-(3-hydroksi-l-propionyyli)-17p-hydroksi-yhdisteiksi VII

HaCOs?^3

χ OH

1 ^=cch2oh (VII) h3co.

H3CO^^

OH

5 jotka voidaan hydrolysoida happamella hydrolyysillä edellä ilmoitetuissa olosuhteissa tyyppiä II oleviksi aldehydeik-- 2 si, joissa R on vetyatomi tai ne voidaan hydrolysoida 5a, 17p-dieetterin muodostumisen jälkeen edellä mainittujen menetelmien mukaisesti ja happamen hydrolyysin jälkeen, 2 10 tyyppiä II oleviksi aldehydeiksi, joissa R on alkyyli-ryhmä, tai ne voidaan hydrata sinänsä tunnetulla reaktiolla käyttämällä desaktivoituja katalysaattoreita, kuten 10-pro-senttista palladiumia bariumsulfaatin pinnalla amiinin ·. läsnä ollessa 17a-(3-hydroksipropenyyli)-17p-hydroksi-yh- , 15 disteiksi, jotka muuttuvat happamen hydrolyysin jälkeen ! samoin tyyppiä II oleviksi aldehydeiksi.

• « ' 7 \ ’ Ryhmien -(CH2)qC=CR liittäminen tapahtuu tunnetulla taval- , la antamalla ketonin IV reagoida asetyleenin, propiinin tai : korkeampien homologien kanssa alkalimetallien, kuten litiu- 20 min, natriumin tai kaliumin läsnä ollessa yhdessä alkoholin tai ammoniakin kanssa tai myös butyylilitiumin kanssa eet-·. tereissä, kuten tetrahydrofuraanissa. Näiden yhdisteiden ** hapan hydrolyysi johtaa 17a-C=CR7 substituoituihin, tyyppiä :· II oleviin aldehydeihin.

‘. 25 Saatu yleisen kaavan I mukainen yhdiste muutetaan mahdolli sesti happoadditiosuolaksi, edullisesti fysiologisesti käy- is 1 13657 tettävän hapon suolaksi. Tavanomaisia fysiologisesti käytettäviä epäorgaanisia ja orgaanisia happoja ovat esimerkiksi suolahappo, bromivetyhappo, fosforihappo, rikkihappo, oksaalihappo, maleiinihappo, fumaarihappo, maitohappo, vii-5 nihappo, omenahappo, sitruunahappo, salisyylihappo, adi-piinihappo ja bentsoehappo. Muita käyttökelpoisia happoja on kuvattu esimerkiksi julkaisuissa: Fortschritte der Arz-neimittelforschung, Bd. 10, sivut 224-225, Birkhäuser Ver-lag, Basel und Stuttgart, 1966 ja Journal of Pharmaceutical 10 Sciences, Bd. 66, sivut 1-5 (1977).

Happoadditiosuoloja saadaan yleensä sinänsä tunnetulla tavalla sekoittamalla vapaaseen emäkseen tai sen liuoksiin vastaavaa happoa tai sen liuoksia orgaanisessa liuottimes-sa, esimerkiksi alemmassa alkoholissa, kuten metanolissa, 15 etanolissa, n-propanolissa tai isopropanolissa tai alemmassa ketonissa, kuten asetonissa, metyylietyyliketonis^a tai metyyli-isobutyyliketonissa tai eetterissä, kuten di-etyylieetterissä, tetrahydrofuraanissa tai dioksaanissa. Mainittujen liuottimien seoksia voidaan myös käyttää, jotta 20 kiteet erottuisivat paremmin. Tämän lisäksi voidaan valmistaa kaavan I mukaisen yhdisteen happoadditiosuolojen fysiologisesti käytettäviä, vesipitoisia liuoksia.

Yleisen kaavan I mukaisten yhdisteiden happoadditiosuolat . '·· voidaan muuttaa sinänsä tunnetulla tavalla, esimerkiksi 25 alkaleilla tai ioninvaihtimilla, vapaaksi emäkseksi. Va-: paasta emäksestä voidaan saada muita suoloja antamalla rea- * i c goida epäorgaanisten tai orgaanisten happojen kanssa, eri-tyisesti sellaisten kanssa, jotka soveltuvat terapeuttises-ti käytettävien suolojen muodostukseen. Näitä tai myös mui-30 ta uuden yhdisteen suoloja, kuten esimerkiksi pikraattia, voidaan käyttää myös vapaan emäksen puhdistamiseksi siten, • » · että vapaa emäs muutetaan suolaksi, tämä erotetaan ja suo-,.· lasta vapautetaan jälleen emäs.

» » ;,· Esillä olevan keksinnön mukaisella menetelmällä valmistet- 35 tuja yhdisteitä voidaan käyttää lääkeaineissa, jotka on ;·*: tarkoitettu annettaviksi suun kautta, peräsuolen kautta, t · t t • » • · 113657 16 ruiskeena ihonalaiseen kudokseen, laskimoon tai lihakseen ja jotka sisältävät tavanomaisten kantaja- ja laimennusai-neiden ohella vaikuttavana aineena yleisen kaavan I mukaista yhdistettä tai sen happoadditiosuolaa.

5 Tällaiset lääkeaineet valmistetaan tunnetulla tavalla tavanomaisten, kiinteiden tai nestemäisten kantaja-aineiden tai laimennusaineiden ja tavallisesti käytettyjen, far-maseuttis-teknisten apuaineiden kanssa haluttua antotapaa vastaaviksi annostuksen ollessa sopiva. Edullisena pidetyt 10 valmisteet koostuvat oraaliseen käyttöön soveltuvasta anto-muodosta. Tällaisia antomuotoja ovat esimerkiksi tabletit, kalvotabletit, lääkerakeet, kapselit, pillerit, jauheet, liuokset tai suspensiot tai depot-muodot.

Luonnollisesti kyseeseen tulevat myös parenteraaliset val-15 misteet, kuten injektioliuokset. Edelleen mainittakoon valmisteina esimerkiksi myös peräpuikot.

Vastaavia tabletteja voidaan saada esimerkiksi sekoittamalla vaikuttavaan aineeseen tunnettuja apuaineita, esimerkiksi inerttejä laimennusaineita, kuten dekstroosia, soke-20 ria, sorbitolia, mannitolia, polyvinyylipyrrolidonia, hajo-tusaineita, kuten maissitärkkelystä tai algiinihappoa, sideaineita, kuten tärkkelystä tai gelatiineja, liukuainei-·. ta, kuten magnesiumstearaattia tai talkkia ja/tai depotvai- kutuksen aikaansaamiseksi käytettäviä aineita, kuten kar-* ; 25 boksyylipolymetyleeniä, karboksyylimetyyliselluloosaa, sel- luloosa-asetaattiftalaattia tai polyvinyyliasetaattia. Tab-·’ letit voivat myös koostua useammista kerroksista.

Vastaavasti lääkerakeita voidaan valmistaa päällystämällä tablettien mukaisesti valmistetut ydinosat tavallisesti . 30 lääkerakeiden päällyksissä käytetyillä aineilla, esimer- . kiksi polyvinyylipyrrolidonilla tai shellakalla, arabiku- ;· millä, talkilla, titaanidioksidilla tai sokerilla. Tällöin j · lääkerakeen kuori voi myös koostua useammista kerroksista, jolloin voidaan käyttää edellä tablettien kohdalla mainit-35 tuja apuaineita.

113657 17

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistettua vaikuttavaa ainetta sisältävät liuokset tai suspensiot voivat lisäksi sisältää makua parantavia aineita, kuten sakkariinia, syk-lamaattia tai sokeria sekä esim. aromiaineita, kuten vanil-5 liinia tai appelsiiniuutetta. Ne voivat tämän lisäksi sisältää suspendointiapuaineita, kuten natriumkarboksimetyy-liselluloosaa tai säilöntäaineita, kuten p-hydroksibentso-aatteja. Vaikuttavia aineita sisältäviä kapseleita voidaan valmistaa esimerkiksi siten, että vaikuttavaan aineeseen 10 sekoitetaan inerttiä kantaja-ainetta, kuten maitosokeria tai sorbitolia ja ne suljetaan gelatiinikapseleihin.

Sopivia peräpuikkoja voidaan valmistaa esimerkiksi sekoittamalla vaikuttavaan aineeseen tarkoitukseen soveltuvia kantaja-aineita, kuten neutraalirasvoja tai polyetyleeni-15 glykolia tai niiden johdannaisia.

Keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut Ιΐβ-substitu-oidut bentsaldoksiimi-estra-4,9-dieenit ovat antigestagee-nisesti vaikuttavia aineita, joilla havaitaan aktiviteetin ollessa sama kuin RU 486:11a (Mifepristone) progesteroni-20 reseptorissa (vrt. taulukko 1) tai in vivo vaikutuksen ollessa ylivoimainen (vrt. kuvio 1 ja taulukko 2) RU 486:teen verrattuna selvästi alentunut antiglukokortikoidi-nen aktiviteetti, mikä osoitetaan alentuneella glukokorti- « . koidi-reseptoriin sitoutumisella (vrt. taulukko 1) sekä 25 samoin kymmenpotenssin pienemmällä entsyymi-induktion es- . tymisellä solulinjoissa (vrt. kuviot 2 ja 3) .

* » 1 » 1 • » » • 1

I I

» » ; f 1 »

I I

< > > » 18 113657

Taulukko 1

Valittujen esimerkeissä 1-5 esitettyjen aineiden reseptoriin sitoutuminen

Seuraavan esi- Suhteellinen molaarinen sitoutumisaffini- merkin mukainen teetti (RBA) [%] yhdiste____

Progesteroni- Glukokortikoi- Estrogeeni- reseptori (pro- direseptori reseptori gesteroni = (deksametasoni (estradioli 100 %) = 100 %) = 100 %) 1 (J876)__302_18_< 0,1_ 2 _ 136__82_<0,1_ _3__236__73_< 0,1_ _4__294__66_< 0,1_ _5__90_32_< 0,1_

Vertailu 506 685 RU 486 (Mifepristone)____ ZK 98299 22 39 (Onapristone) ___ 5 Valitut keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut anti-gestageenit (J 867) johtavat marsuilla kierron aikana tämän lisäksi tilastollisesti merkitseviin kohdun painojen alenemisiin annostuksilla, joissa RU 486 kohottaa kohtujen painoja kontrolleihin verrattuna.

10 On odotettavissa, että keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetut antigestageenit aiheuttavat tällä ominaisuuk-: ” sien yhdistelmällä progesteronin ylivoimaisen estymisen, antiglukokortikoidisen aktiviteetin ollessa samanaikaisesti : alentunut. Tämä etu on relevantti erityisesti niissä indi- I'· ; 15 kaatioissa, jotka vaativat hoidon keston vuoksi erityisen - hyvää siedettävyyttä. Kuukautiskierron aikana kiertävät , . estrogeenit vaikuttavat ratkaisevasti kohdun painoon. Koh dun painon aleneminen ilmaisee estrogeenien tämän toiminnan . estymisen. Todettu, RU 486:teen nähden selvästi parempi 20 kohdun painoon kohdistuvan vaikutuksen es- 1 • * 19 113657 tyminen marsulla kierron aikana, viittaa keksinnönmukaisten yhdisteiden (epäsuoriin) antiestrogeenisiin ominaisuuksiin. Vastaavista ominaisuuksista voidaan odottaa erityisen suotuisaa vaikutusta patologisesti muuttuneisiin kudoksiin, 5 joissa estrogeenit välittävät kasvuimpulsseja (endometrioosipesäkkeet, myoomat, rintarauhasen ja sukupuolielinten kar-sinoomat eli syöpäkasvaimet, eturauhasen hyvänlaatuinen hy-pertrofia eli liikakasvu).

10 Taulukko 2 RU 486:n ja J 867:n (esimerkki 1) ennenaikaisen keskenmenon aiheuttava vaikutus rotalla raskauden 5. - 7. päivänä tapahtuneen subkutaanisen annon jälkeen (annostelu 0,2 ml/eläin/-päivä bentsyylibentsoaatti/risiiniöljyssä [1+4 v/v]) 15 _

Ryhmä Annos täydellinen raskauden ED 50 ^

Aine mg/eläin/päivä estyminen ^ mg/eläin/päivä N* /N % 20 Kantaja- aine - 0/13 0 RU 486 3,0 5/5 100 1,0 2/5 40 1,3 0,3 0/5 0 " 25 J 867 3,0 5/5 100 : f 1,0 5/5 100 0,6 :.i.: 0,3 0/5 0 : V 0,1 0/5 0 • * · » ... —I -...1.11 II. ...... I .1- —· : : : 30 + = tyhjä kohtu N = kaikkien naaraiden lukumäärä ··· N*= ei raskaana olevien naaraiden lukumäärä; ++= graafinen määritys ' 35 Kuvio 1 osoittaa marsujen antigestageenihoidon vaikutuksen : ' kohdun kokoon kierron aikana vertaamalla J 867:ää RU 486:n : kanssa.

RU 486:n korkeat annostukset (6 mg/24 tuntia) alentavat 20 113657 hoidettujen eläinten kohtujen painoja. Tämän aineen alhainen annostus johtaa sitä vastoin kohdun painon lievään kohoamiseen. Kaikki J 867:n tutkitut annostukset (1, 3 tai 6 mg/24 tuntia) estivät sitä vastoin kohtujen kasvua tilastollisesti 5 merkitsevästi.

Kuvio 2 esittää J 867:n antiglukokortikoidisen vaikutuksen ihmisen rintasolulinjassa ZR 75/AGP-763 RU 486:teen verrattuna.

10

Deksametasoni indusoi tässä solulinjassa kloramfenikoli-ase-tyylitransferaasi-geeniä (CAT). Tämä induktio estyy antiglu-kokortikoiäisten aineiden vaikutuksesta. J 867 estää yllättäen suurella konsentraatioalueella CAT:ia vähemmän voimak-15 kaasti kuin RU 486 (Mifepristone).

Kuvio 3 osoittaa J 867:n antiglukokortikoidisen vaikutuksen TAT-mallissa rottien hepatoomasoluissa RU 486:teen verrattuna.

20

Deksametasoni stimuloi rotan hepatoomasoluissa tyrosiini-amino-transferaasi-entsyymiä (TAT). Antiglukokortikoiäinen aktiviteetti estää tämän vaikutuksen. J 867:llä on tämän mu-. kaan selvästi heikompi antiglukokortikoiäinen vaikutus kuin ” 25 RU 486:11a.

Seuraavat esimerkit selventävät keksintöä.

,. ·* Esimerkit : 30 Esimerkki 1 434 mg llB-(4-formyylifenyyli)-17B-metoksi-17a-metoksimetyy-·· li-estra-4,9-dien-3-onia liuotetaan huoneenlämpötilassa 8 • I * « ml:aan pyridiiniä ja tähän lisätään 65 mg hydroksyyliamiini- hydrokloridia ja sekoitetaan 25 °C:ssa. Kahden tunnin kulut- 35 tua lisätään edelleen 5 mg hydroksyyliamiinihydrokloridia ja : * 15 minuutin kuluttua liuos laimennetaan vedellä, lisätään 1 : N vesipitoista HCl:ää ja uutetaan kloroformilla, orgaaninen • · · * faasi pestään laimennetulla HCl:llä ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja kaliumkarbonaatilla ja liuotin haihdu- 21 1 13657 tetaan alennetussa paineessa. Saadaan 420 mg raakatuotetta. Sen jälkeen, kun on lisätty asetonia, muodostuvat kiteet, jotka imusuodatetaan ja kiteytetään uudelleen isopropanoli/-CH2C12:sta.

5

Saadaan 305 mg 118-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-178-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia.

Sulamispiste: 118 °C hajoten.

10 aD = + 197° (CHC13) IR-spektri CHCl3:ssa (cm-1): 3575, 3300 (OH); 1705 (N=NOH); 1649 (C=C-C=C-C=0); 1599 (fenyyli) UV-spektri MeOH:ssa λταΛΧ = 264 nm ε = 20 366 = 299 nm ε = 20 288 15 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,533 (s, 1H, H-18); 3,252 (s, 3H, 178-0CH3); 3,393 (s, 3H, 17a-CH20Qj3) ,* 3,441 -3,598 (m, 2H, CH2OR:n ABX-systeemi); 4,381 (d, 1H, J = 6,9 Hz, H-lla); 5,788 (s, 1H, H-4); 7,187 - 7,487 (m, 4H, aromaattiprotönien AA'BB'-systeemi); 8,05 (s, 1H, OH); 8,097 20 (s, 1H, CH=NOH) MS m/e: 449,25509 C2SH3SN04 M"\ Lähtöyhdisteen valmistus:

Valhe A

: " 25 50 g 4-bromibentsaldehydia ja 30 ml o-muurahaishappotrietyy- • · v.; liesteriä sekoitetaan 60 ml:ssa metanolia 0,8 ml:n kanssa tionyylikloridia huoneenlämpötilassa 5 tuntia. Tämän jälkeen I lisätään vielä kerran 0,2 ml tionyylikloridia ja 30 minuutin ·:· kuluttua kaadetaan vesipitoiseen bikarbonaatti-liuokseen ja 30 uutetaan kloroformilla, pestään vesipitoisella bikarbonaat-ti-liuoksella ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa ja saadaan 68 g 4-bromi- » betsaldehydidimetyyliketaalia värittömänä öljynä.

35 2,3 g:aan magnesiumia 20 ml:ssa vedetöntä tetrahydrofuraania lisätään argonatmosfäärissä sen toimiessa suojakaasuna 0,2 : ml dibromimetaania ja reaktion alettua tähän tiputetaan ' * 21,96 g 4-bromibentsaldehydidimetyyliketaalia 70 ml:ssa vedetöntä THF:ää siten, että 40 °C:n lämpötila ei ylity.

22 1 13 6 5 7 Täydellisen lisäyksen jälkeen sekoitetaan edelleen 2 tuntia 30 °C:ssa, tämän jälkeen jäähdytetään -10 °C:seen ja tähän lisätään 511 mg CuCl:ää. Sitten sekoitetaan edelleen 15 minuuttia -30 eC:ssa ja tämän jälkeen tähän tiputetaan 5 liuos, jossa on 6 g 3,3-dimetoksi-5a,10a-epoksi-estr-9(ll)-en-17-onia 30 ml:ssa vedetöntä THFrää. Annetaan lämmetä huoneenlämpötilaan ja Grignard-liuos hajotetaan vesipitoisella ammoniumkloridi-liuoksella. Tuote eristetään uuttamalla etikkaesterillä, orgaaninen faasi pestään neutraaliksi ja 10 kuivataan natriumsulfaatilla. Sen jälkeen, kun liuotin on tislattu alennetussa paineessa, eristetään 19,7 g raakatuo-tetta.

Kromatografioimalla 300 g:11a silikageeliä ja 20 g:11a alu-15 miinioksidia käyttäen tolueeni/etikkaesteri-gradienttia, saadaan 7,38 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyy-li]-5a-hydroksi-estr-9-en-17-onia keltaisena vaahtona.

Vaihe B

20 7,38 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyyli]-5a- hydroksi-estr-9-en-17-onia liuotetaan 85 ml:aan dimetyyli-sulfoksidia ja argonatmosfäärissä sen toimiessa suojakaasu-na lisätään 10,38 g trimetyylisulfoniumjodidia ja annoksittain 7,64 g kalium-tert.-butanolaattia. 1,5 tunnin kuluttua » # : " 25 jäähdytetään 0-5 °C:seen ja tähän lisätään vesipitoista • t · *.V ammoniumkloridi-liuosta. Liimamaisena muodostuva tuote uute- \.V taan CH2Cl2:lla, pestään neutraaliksi, kuivataan natriumsul- f faatilla ja liuottimen haihduttamisen jälkeen eristetään ;!· ruskeana hartsina.

30

Saanto: 8,63 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyy-li]-17B-spiro-l',2'-oksiraani-estr-9-en-5a-olia.

t » * *

Vaihe C

35 8,63 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyyli]-17B- spiro-1' ,2'-oksiraani-estr-9-en-5a-olia liuotetaan 20 ml:aan ;,·. metanolia ja tähän lisätään 20 ml 3N natriummetylaattiliuos- ta ja kuumennetaan 2-3 tuntia paluujäähdyttäen. Liuotin » * haihdutetaan alennetussa paineessa, jäännös liuotetaan 23 113657 CH2C12:teen, pestään neutraaliksi, liuos kuivataan natrium-sulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa.

Saadaan 8,74 g raakatuotetta ruskeana vaahtona. Kromatogra-5 fioimalla 260 g:11a silikageeliä ja 90 g:11a alumiinioksidia käyttäen tolueeni/etikkaesteri-gradienttia, saadaan tulokseksi 1,92 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyy-li]-17a-metoksimetyyli-estr-9-en-5a,17B-diolia.

10 Vaihe D

1,92 g:aan 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyyli]-17a-metoksimetyyli-estr-9-en-5a,17B-diolia 120 mlrssa tolu-eenia lisätään inertissä kaasuatmosfäärissä 8,65 g kalium-tert.-butanolaattia. Suspensiota sekoitetaan 5 minuuttia 15 huoneenlämpötilassa ja tähän tiputetaan 6,35 ml metyylijodi- dia 6 ml:ssa tolueenia siten, että lämpötila ei kohoa yli 40 °C:n. Tunnin kuluttua lisätään 20 ml vettä ja 20 ml etikkaesteriä, faasit erotetaan ja vesipitoinen faasi uutetaan edelleen etikkaesterillä. Orgaaninen faasi pestään 20 neutraaliksi, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa.

Saadaan 1,55 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-(3,3-dimetoksimetyyli)-fenyyli]-17a-metoksimetyyli-estr-9-en-5a,17B-dimetyylieette-25 riä keltaisena vaahtona.

* · t ψ * · • *

' ' Vaihe E

’ ·' 1,55 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-(3,3-dimetoksimetyyli)fenyyli]- , . * * 17a-metoksimetyyli-estr-9-en-5a,17B-dimetyylieetteriä liuo- « t * V · 30 tetaan 12,6 ml:aan asetonia ja tähän lisätään 1,3 ml vettä.

Suojakaasuatmosfäärissä lisätään 158 mg 4-tolueenisulfoni-;· happoa. Sitten sekoitetaan 40 minuuttia huoneenlämpötilassa . : . ja kidepuuro imusuodatetaan, pestään asetonilla ja kiteyte- ’ . tään CH2Cl2/asetonista.

i 35 ' ' Saanto: 0,55 g värittömiä kiteitä.

f » · ' » * ...j Kiteyttämällä uudelleen CH2Cl2/asetonista saadaan tulokseksi 440 mg llB-(4-formyylifenyyli)«17B-metoksi-17a-metoksimetyy- 24 1 13657 li-estra-4,9-dien-3-onia.

Sulamispiste: 233 - 240 °C aD = + 189° (CHC13) 5 IR-spektri CHCl3:ssa (cm-1): 1710 (CHO); 1660 (C=C-C=C=0); 1610 (fenyyli) UV-spektri MeOH:ssa: = 262 nm ε = 10 775

Km = 299 nm ε = 13 999

^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,48 (s, 3H, H-18); 3,25 10 (s, 3H, 17B-0CH3); 3,38 (s, 3H, 17a-CH20CH3 ) ,* 4,40 (d, 1H, J

= 7,2 Hz, H-lla); 5,78 (s, 1H, H-4); 7,28 - 7,93 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-systeemi); 9,95 (s, 1H, CHO) MS m/e: 434,24771 C2eH3404 M"\ 15 Esimerkki 2 217 mg llB-(4-formyylifenyyli)-17B-metoksi-17a-metoksimetyy-li-estra-4,9-dien-3-onia sekoitetaan 4 ml:ssa pyridiiniä 40 mg:n kanssa metoksiamiinihydrokloridia huoneenlämpötilassa. Tunnin kuluttua lisätään vielä 5,2 mg metoksiamiinihydrok-20 loridia. Tähän lisätään kulloinkin 10 ml vettä ja etikkaes-teriä, faasit erotetaan, vesipitoinen faasi uutetaan edelleen, orgaaninen faasi pestään 10 ml:11a laimennettua HCl:ää ja sitten pestään tislatulla vedellä neutraaliksi, kuivataan ja haihdutetaan alennetussa paineessa. Saadaan 241 mg raaka- » · * , 25 tuotetta hartsina. Suorittamalla preparatiivinen kerroskro- *. » ' ; matografia silikageeli 60 PF2S4_3e6:11a käyttäen eluointi- 4 * · '··'·’ aineseoksena tolueeni/asetonia (4 : 1) saadaan tulokseksi »» 1 t * > ·* 188 mg tuotetta vaahtona.

» 1 · 7 : 30 Kiteyttämällä uudelleen asetoni/heksaanista saadaan tulok seksi llB-[4-(metoksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-metoksi-17a-*·· metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia värittöminä levysinä.

t » · · • · · t t *

* , Sulamispiste: 83 - 89 °C

1 I 35 = + 197° (CHC13) ' * IR-spektri CHCl3:ssa [cm-1]: ί 1700 (C=NOCH3), 1649 (C=C-C=C-C=0); 1590 (aromaatti) ·» 1 UV-spektri MeOH:ssa: = 275 nm ε = 23 098 = 300 nm ε = 22 872 25 113 6 5 7 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,529 (s, 3H, H-18); 3,247 (s, 3H, 17B-0CH3); 3,408 (s, 3H, 17a-CH20CH3); 3,39 -3,598 (m, 2H, ABX-systeemi, 17a-CH20-CH3); 4,381 (d, 1H, J = 7,5 Hz, H-lla); 5,773 (s, 1H, H-4); 7,173, 7,201, 7,463, 5 7,491 (m, 4H, aromaattiprotonien AA’BB'-systeemi); 8,023 (s, 1H, CHfenyyli) MS m/e: 463,26950 C29H37N04 vT.

Esimerkki 3 10 180 mg llB-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-metoksi- 17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia asetyloidaan 5 ml:-ssa asetanhydridi/pyridiiniä (1 : 1) 12 tunnin kuluessa. Sen jälkeen, kun on lisätty vettä, uutetaan kolme kertaa etikka-esterillä, orgaaninen faasi pestään laimennetulla HClrllä ja 15 vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa. Saadaan 172 mg raakatuotetta, joka puhdistetaan suorittamalla preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF2S4_1.3ee: 11a käyttäen eluointiaineseoksena tolueeni/asetonia (4 : 1).

20

Saanto: 115 mg 118-[4-(asetyylioksi-iminometyyli)fenyyli]- 17B-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia. Puhdistettu tuote kiteytyy etikkaesteristä.

* < · 25 Sulamispiste: 115 - 120 °C (etikkaesteri) = + 218° (CHC13) UV-spektri MeOH:ssa = 271 nm ε = 28 157 : ’·: = 297 nm ε = 26 369 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,511 (s, 3H, H-18); : 30 2,227 (s, 3H, OCOCU3); 3,247 (s, 3H, 178-0CH3); 3,408 (s, 3H, 17a-CH2OCH3); 3,386, 3,431, 3,544, 3,580 (m, 2H, •i· CH2OCH3); 4,399 (d, 1H, J = 7,2 HZ, H-lla); 5,785 (s, 1H, H-4); 7,242, 7,266, 7,618, 7,647 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-systeemi); 8,315 (s, 1H, CH=NOAc) : ' 35 MS m/e: 491,26971 C30H37N05 M"".

Esimerkki 4 210 mg:aan llB-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-metok-si-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia 5 ml:ssa pyri- 26 1 13657 diiniä tiputetaan vedellä jäähdyttäen 0,3 ml kloorimuura-haishappoetyyliesteriä. Tällöin muodostuu valkoinen sakka. 30 minuutin kuluttua lisätään vettä, jolloin syntyy liuos. Tämän jälkeen muodostuu valkoinen sakka, joka imusuodatetaan 5 ja pestään vedellä. Saanto on kuivauksen jälkeen 133 mg. Vesipitoinen faasi uutetaan kloroformilla, pestään laimennetulla HClrllä ja vedellä, kuivataan ja haihdutetaan alennetussa paineessa. Saanto on 66 mg. Molemmat kiinteät aineet yhdistetään ja suoritetaan preparatiivinen kerroskromatogra-10 fia silikageeli 60 PF2S4+366:11a käyttäen eluointiaineseok-sena tolueeni/asetonia (4 : 1).

Saadaan 150 mg llB-{4-[(etoksikarbonyyli)oksi-iminometyyli]-fenyyli}-178-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-15 onia, joka kiteytetään uudelleen asetoni/heksaanista.

Sulamispiste: 137 - 148 °C (hajoten) οι,-, = + 204° (CHC13) UV-spektri MeOHrssa = 270 nm ε = 27 094 20 = 297 nm ε = 25 604 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,507 (s, 3H, H-18); 1,383 (t, 3H, J = 7,0 Hz, OCH2CH3); 3,246 (s, 3H, 17B-OCH3); 3,410 (s, 3H, 17a-CH2OCH3); 3,39 - 3,56 (m, 2H, CH2OCH3); . 4,35 (d, 1H, J = 7,0 Hz, H-lla); 5,784 (s, 1H, H-4); 7,23, « · • '* 25 7,26, 7,61, 7,64 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-sys- teemi); 8,303 (s, 1H, CH=NR) MS m/e: 431,24701 C2aH33N03 M" - C2HsOCOOH.

♦ · · • · • · " Esimerkki 5 » · « · :Y: 30 244 mg llB-(4-formyylifenyyli)-178-hydroksi-17a-kloorimetyy- li-estra-4,9-dien-3-onia sekoitetaan 4 ml:ssa pyridiiniä 32,2 mg:n kanssa hydroksyyliamiinihydrokloridia huoneenläm-pötilassa. Tunnin kuluttua lisätään vielä 6,9 mg hydroksyyliamiinihydrokloridia. Tämän jälkeen tähän lisätään kulloin- :* · 35 kin 10 ml vettä ja etikkaesteriä, faasit erotetaan, vesipi- » toinen faasi uutetaan edelleen, orgaaninen faasi pestään 10 : .·. ml:11a laimennettua HCl:ää ja sitten pestään tislatulla ve- della neutraaliksi, kuivataan ja haihdutetaan alennetussa paineessa.

27 1 13 6 5 7

Saadaan 183 mg raakatuotetta keltaisena hartsina. Suorittamalla preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PFj54+3gg:11a käyttäen eluointiaineseoksena tolueeni/ase-tonia (4 : 1) saadaan tulokseksi 87,7 mg 17a-kloorimetyyli-5 HB-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-hydroksi-estra- 4,9-dien-3-onia vaahtona.

aD = + 185° (CHC13) UV-spektri MeOHrssa: Xmax = 264 nm ε = 20 797 10 = 299 nm ε = 20 439 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,607 (s, 3H, H-18); 3,628; 3,664, 3,824, 3,861 (m, 2H, ABX-systeemi, 17a-CH2Cl); 4,428 (d, 1H, J = 6,9 Hz, H-lla); 5,807 (s, 1H, H-4); 7,185, 7,212, 7,482, 7,509 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-sys-15 teemi); 8,05 (s, 1H, OH), 8,104 (s, 1H, CHfenyyli) MS m/e: 439,19070 C26H3OClN03 M"\

Lähtöyhdisteen valmistus Vaihe F

20 4,12 g:aan 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyyli]- 17B-spiro-l',2'-oksiraani-estr-9-en-5a-olia (valmistettu esimerkin 1 vaiheen B mukaan) 84 ml:ssa dimetyyliformamidia tiputetaan 0 °C:ssa hitaasti 16,6 ml konsentroitua HCl:ää.

,·, Tunnin kuluttua sekoitetaan 420 ml:aan vettä, jolloin muo- • * · . 25 dostuu hiutaleinen sakka. Sitten pH saatetaan vesipitoisella * t bikarbonaattiliuoksella arvoon 6, sakka imusuodatetaan ja kuivataan.

• ·’ Raakasaanto: 3,38 g okranvärisiä kiteitä, jotka puhdistetaan ♦ pylväskromatografioimalla 90 g: 11a silikageeli 60:tä käyttä- • « · V : 30 en tolueeni/etikkaesteri-gradienttia.

Saanto: 1,16 g 17a-kloorimetyyli-llB-(4-formyylifenyyli)- ··· 17B-hydroksi-estra-4,9-dien-3-onia kiteinä.

‘ . Sulamispiste: 205 - 208 °C (asetoni/heksaani) 35 = +161° (CHC13) IR-spektri CHCl3:ssa [cm-1]: 3600 (OH); 1695 (CHO); 1650 • (C=C-C=C-C=C); 1590 (f enyy li) * » · · ·:··| UV-spektri MeOH:ssa: λιηΛΧ = 262 nm ε = 19 993 = 297 nm ε = 22 775 28 1 13657 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,583 (s, 3H, H-18); 3,30 (s, 1H, OH); 3,63 - 3,85 (m, 2H, CH2Cl:n ABX-systeemi); 4,45 (d, 1H, J = 7,0 Hz, H-lla); 5,809 (s, 1H, H-4); 7,355, 7,382, 7,799, 7,826 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-sys-5 teemi); 9,977 (s, 1H, CHO) MS m/e: 424,18280 C26H29C103 M-.

Esimerkki 6 136 mg llB-(4-formyylifenyyli)-17B-hydroksi-17a-metoksime-10 tyyli-estra-4,9-dien-3-onia liuotetaan huoneenlämpötilassa 2,2 ml:aan pyridiiniä ja tähän lisätään 18 mg hydroksyyli-amiinihydrokloridia ja sekoitetaan 25 eC:ssa. 1,5 tunnin kuluttua lisätään edelleen 4 mg hydroksyyliamiinihydroklori-dia ja 15 minuutin kuluttua liuos laimennetaan vedellä, li-15 sätään 1 N vesipitoista HClrää ja uutetaan kloroformilla, orgaaninen faasi pestään laimennetulla HCl:llä ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja kaliumkarbonaatilla ja liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa.

20 Saadaan 146 mg raakatuotetta, joka puhdistetaan suorittamalla preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF-254+366:11a käyttäen eluointiaineena tolueeni/asetonia (4 : 1).

i 25 Saadaan 110 mg llB-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B- , * « 1 '* > ’ hydroksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia.

: Sulamispiste: 104 °C hajoten (isopropanoli).

aD = + 195° (CHC13) ;‘i : 30 UV-spektri MeOH:ssa: A^a;K. = 263 nm ε = 21 170 = 299 nm ε = 20 188 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,517 (s, 1H, H-18); ,···. 3,418 (s, 3H, 17a-CH2OCH3) ,* 3, 206, 3,237, 3,552, 3,582 (m, 2H, CH2OCH3:n ABX-systeemi); 4,384 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-35 11a); 5,784 (s, 1H, H-4); 7,179, 7,206, 7,456, 7,483 (m, 4H, aromaattiprotonien AA' BB'-systeemi); 7,9 (s, 1H, OH); 8,088 ; /. (s, 1H, CH=NOH) MS m/e: 435,24289 C27H33N04 M·".

29 1 13657

Lähtöyhdisteen valmistus Vaihe G

860 mg 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyyli]-17a-metoksimetyyli-estr-9-en-5a,178-diolia (valmistettu esimer-5 kin 1, vaiheen C mukaan) liuotetaan 80 ml:aan asetonia. Sen jälkeen, kun on lisätty 7,7 ml vettä ja 430 mg 4-tolueeni-sulfonihappoa, kuumennetaan vielä 1,5 tuntia paluujäähdyttä-en, haihdutetaan alennetussa paineessa, jäännös liuotetaan kloroformiin, pH saatetaan 8 ml :11a laimennettua ammoniakkia 10 arvoon 8 ja faasit erotetaan. Orgaaninen faasi pestään neutraaliksi, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa.

Saadaan 590 mg llfl-(4-formyylifenyyli)-17B-hydroksi-17a-15 metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni-l:tä raakatatuotteena, joka kiteytetään uudelleen etikkaesteristä.

Sulamispiste: 195 - 205 eC (etikkaesteri). aD = + 209° (kloroformi) 20 IR-spektri CHCl3:ssa [cm"1]: 3590 (OH); 1710 (CHO); 1660 (0=0-0=0-0=0); 1605 (aromaatti) UV-spektri MeOH:ssa: )^ax = 263 nm ε = 20 683 = 298 nm ε = 20 749 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,509 (s, 3H, H-18); 25 2,666 (s, 1H, OH); 3,196, 3,226, 3,550, 3,580 (m, 2H, CH20CH3 :n ABX-systeemi); 3,417 (s, 3H, OCH3); 4,446 (d, 1H, 'V j = 6,9 Hz, H-lla); 5,797 (s, 1H, H-4); 7,360, 7,386, 7,786, * t * .* 7,813 (m, 4H, aromaattiprotönien AA'BB'-systeemi); 9,970 (s, ..il* 1H, OHO) :T: 30 MS m/e: 420,23300 C27H3204 M*.

·* Esimerkki 7 - t * t , 480 mg 17a-etoksimetyyli-llB-(4-formyylifenyyli)-17B-metok- si-estra-4,9-dien-3-onia liuotetaan huoneenlämpötilassa 6 * ' 35 ml:aan pyridiiniä ja tähän lisätään 74 mg hydroksyyliamiini- : hydrokloridia ja sekoitetaan 25 eC:ssa. 30 minuutin kuluttua * ; lisätään edelleen 8,5 mg hydroksyyliamiinihydrokloridia ja , »· · ,15 minuutin kuluttua liuos laimennetaan vedellä, lisätään 1 9 » N vesipitoista HCl:ää ja uutetaan CH2Cl2:lla, orgaaninen 30 113657 faasi pestään laimennetulla HCl:llä ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja kaliumkarbonaatilla ja liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa.

5 Saadaan 410 mg raakatuotetta, josta saadaan suorittamalla preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF2S4_ _i_366 * 11a 230 mg 17a-etoksimetyyli-118-[4-(hydroksi-imino- metyyli)fenyyli]-17B-metoksi-estra-4,9-dien-3-onia keltaisena vaahtona.

10 aD = +200° (CHC13) UV-spektri MeOHrssa: = 264 nm ε = 20 366

Xmax = 299 nm ε = 20 228 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,533 (s, 1H, H-18); 15 1,267 (t, 3H, J = 6,9 Hz, 17a-CH2OCH2CH3), 3,252 (s, 3H, 17B-0CH3); 3,423 - 3,623 (m, 2H, ABX-systeemi, 17a- CH20CH2CH3); 4,355 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-lla)? 5,783 (s, 1H, H-4); 7,191, 7,219, 7,460, 7,488 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-systeemi); 8,097 (s, 1H, CH=NOH) 20 MS m/e: 463,27069 C2gH37N04 M"\

Lähtövhdisteen valmistus Vaihe H

. 5,33 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyyli]-17B- : ” 25 spiro-1',2'-oksiraani-estr-9-en-5a-olia (valmistettu esimer- kin 1, vaiheen B mukaan) liuotetaan 5 ml:aan etanolia ja tä-V:.: hän lisätään 25 ml 1,5 N natriummetylaatti-liuosta ja kuu- • mennetaan 1 tunti paluu jäähdyttäen. Liuotin haihdutetaan ·;· alennetussa paineessa, jäännös liuotetaan CH2Cl2:teen, pes- 30 tään neutraaliksi, liuos kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa.

Saadaan 5,85 g raakatuotetta ruskeana vaahtona. Kromatogra-fioimalla silikageelillä käyttäen tolueeni/etikkaesteri-35 gradienttia saadaan tulokseksi 1,14 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-':: (dimetoksimetyyli)fenyyli]-17a-etoksimetyyli-estr-9-en-5a,- : 17B-diolia.

• · · • · · · 31 1 13657

Valhe I

1.14 g:aan 3,3-dimetoksi-llB-[4-(dimetoksimetyyli)fenyyli]-17a-etoksimetyyli-estr-9-en-5a,17B-diolia 70 ml:ssa toluee-nia lisätään argonatmosfäärissä sen toimiessa suojakaasuna 5 5,14 g kalium-tert.-butanolaattia. 15 minuutin kuluttua tä hän tiputetaan seos, jossa on 3,8 ml metyylijodidia 4 mlrssa tolueenia. Kahden tunnin kuluttua reaktio keskeytetään lisäämällä 20 ml vettä ja 20 ml etikkaesteriä. Orgaaninen faasi pestään kaksi kertaa vedellä, kuivataan natriumsulfaa-10 tiliä ja haihdutetaan alennetussa paineessa.

Raakasaanto: 1,14 g 3,3-dimetoksi-llB-[4-(3,3-dimetoksime- tyyli)fenyyli]-17a-etoksimetyyli-17B-metoksi-estr-9-en-5a- olia.

15

Vaihe J

1.14 g:aan 3,3-dimetoksi-llB-[4-(3,3-dimetoksimetyyli)fenyy-li]-17a-etoksimetyyli-17B-metoksi-estr-9-en-5a-olia 10 ml-:ssa asetonia lisätään inertissä kaasuatmosfäärissä 1 ml 20 vettä ja 116 mg 4-tolueenisulfonihappoa. 30 minuutin kuluttua laimennetaan vedellä, uutetaan kaksi kertaa etikkaeste-rillä, orgaaninen liuos pestään ja kuivataan natriumsulfaa-tilla. Sen jälkeen, kun liuotin on haihdutettu, jää jäljelle 900 mg 17a-etoksimetyyli-llB-(4-formyylifenyyli)-17B-metok-: ** 25 si-estra-4,9-dien-3-onia keltaisena vaahtona. Kromatografi- v.: oimalla silikageeli 60:llä käyttäen tolueeni/etikkaesteri- : : : gradienttia saadaan tulokseksi 480 mg keltaisia kiteitä.

·· Esimerkki 8 30 244 mg HB-(4-formyylifenyyli)-17B-hydroksi-17a-(3-hydroksi- prop-l-in-yyli)-estra-4,9-dien-3-onia liuotetaan huoneenläm-. Potilassa 4,5 ml:aan pyridiiniä ja tähän lisätään 35,5 mg hydroksyyliamiinihydrokloridia ja sekoitetaan 25 eC:ssa. 30 ** ’ minuutin kuluttua lisätään edelleen 4,8 mg hydroksyyliamii- 35 nihydrokloridia ja 15 minuutin kuluttua liuos laimennetaan ·:··: vedellä, liuotetaan etikkaesteriin, ravistellaan 1 N vesipi- . *. toisen HCl:n kanssa, orgaaninen faasi pestään vedellä, kui- vataan natriumsulfaatilla ja kaliumkarbonaatilla ja liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa.

32 113657

Saadaan 216 mg raakatuotetta, josta saadaan suorittamalla preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF2S4_ ^36e:lla käyttäen eluointiaineseoksena tolueeni/asetonia (4 : 1) 192 mg 116-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-176-hyd-5 roksi-17a-(3-hydroksiprop-l-in-yyli)-estra-4,9-dien-3-onia värittömänä vaahtona.

Sulamispiste 171 - 179 eC (eetteri) aD = +82° (dioksaani) 10 UV-spektri MeOHrssa: = 264 nm ε = 21 495 = 299 nm ε = 20 236 MS m/e: 445,22369 C28H3iN04 M^.

Lähtöyhdisteen valmistus:

15 Vaihe K

3 ml:aan prop-l-in-yyli-3-hydroksitetrahydropyranyylieette-riä 27 ml:ssa vedetöntä THF:ää tiputetaan -5 °C:ssa 12 ml 15 %:ista n-butyylilitiumia heksaanissa. 15 minuutin kuluttua tähän liuokseen tiputetaan 1,2 g 3,3-dimetoksi-116-[4-(dime-20 toksimetyyli)fenyyli]-5a-hydroksi-estr-9-en-17-onia (valmistettu esimerkin 1, vaiheen B mukaan) 16 ml:ssa vedetöntä THF:ää. Sitten sekoitetaan 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, reaktioliuos kaadetaan 150 ml:aan jäävettä ja uutetaan etikkaesterillä. Orgaaninen faasi pestään neutraaliksi, • · ” 25 kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa.

• · · : *: Saadaan 4,23 g ruskeata öljyä, joka puhdistetaan kromatogra- ·· fioimalla silikageeli 60:llä käyttäen tolueeni/etikkaesteri- 30 gradienttia. Saadaan 422 mg 3,3-dimetoksi-116-[4-(dimetoksi-metyyli)fenyyli]-17a-(3-tetrahydropyranyylioksi-prop-l-in-yyli)-estr-9-en-5a,176-diolia vaahtona.

* · * ·

Vaihe L

35 540 mg 3,3-dimetoksi-116-[4-(dimetoksimetyyli)fenyyli]-17a- (3-tetrahydropyranyylioksi-prop-l-in-yyli)-estr-9-en-5a,176-; ’·, diolia sekoitetaan 40 ml:ssa asetonia 100 mg:n kanssa 4 to- lueenisulfonihappoa 2 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Tämän jälkeen haihdutetaan 10 ml:aan, lisätään vesipitoista natri- 33 113657 umbikarbonaattiliuosta ja uutetaan etikkaesterillä. Orgaaninen faasi pestään neutraaliksi, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan alennetussa paineessa.

5 Raakasaanto: 330 mg. Puhdistus suorittamalla preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF2S4H_366:lla antaa tulokseksi 310 mg llB-(4-formyylifenyyli)-17B-hydroksi-17a-(3-hydroksi-prop-l-in-yyli)-estra-4,9-dien-3-onia. Kiteyttämällä uudelleen asetonista saadaan tulokseksi valio koisia kiteitä.

Sulamispiste: 225 - 231 °C. aD = + 59° (kloroformi) UV-spektri MeOH:ssa: λ„ΛΧ = 302 nm ε = 23 608 15 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,496 (s, 3H, H-18); 4,375 (s, 2H, C-CH2OH); 4,497 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-lla); 5,810 (s, 1H, H-4); 7,353, 7,380, 7,797, 7,824 (m, 4H, aromaattiprotonien AA'BB'-systeemi); 9,974 (s, 1H, CHO) MS m/e: 430,21460 C2eH3O04 M"".

20

Esimerkki 9 190 mg llB-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17B-metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-onia suspendoidaan 10 ml:aan tolueenia. Sitten lisätään peräkkäin 0,5 ml fenyyli-: ” 25 isosyanaattia ja 1 ml trietyyliamiinia. Sekoitetaan 3 tuntia huoneenlämpötilassa, tämän jälkeen kuumennetaan 2 tuntia pa-: : : luujäähdyttäen, valkoinen sakka imusuodatetaan ja liuotin : ·]: haihdutetaan alennetussa paineessa. Saadaan 310 mg vaalean- ··· ruskeata kiinteätä ainetta, joka puhdistetaan suorittamalla

• IM

30 preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF254+366:lla käyttäen eluointiaineseoksena tolueeni/aseto-.:. nia (9 : 1)·

Eristetään 65 mg 17B-metoksi-17a-metoksimetyyli-llB-{4-[(fe-': ‘1: 35 nyyliaminokarbonyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli}-estra-4,9- *:··: dien-3-onia.

. ‘.t Sulamispiste: 241 - 246 °C (asetoni) I aD = + 178° (CHC13) UV-spektri MeOH:ssa λιηβχ = 238 nm ε = 29 444 34 113657 λ„ΛΧ = 300 nm ε = 29 649 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,474 (s, 3H, H-18); 3,245 (s, 3H, 17B-0CH3); 3,405 (s, 3H, 17a-CH20CH3); 3,406 -3,545 (m, 2H, ABX-systeemi, 17a-CH2OCH3); 4,413 (d, J = 6,8 5 Hz, 1H, H-lla); 5,797 (s, 1H, H-4); 7,264 (m, 5H, aro- maatti); 7,272, 7,293, 7,548, 7,575 (m, 4H, aromaattipro- tonien AA'BB'-systeemi); 8,0 (s, 1H, CH=N-) MS m/e: 431,24249 C2eH33N03 M" -CeHsCNO +H20.

10 Esimerkki 10 125 mg 17a-etoksimetyyli-llB-(4-formyylifenyyli)-17fi-hydrok-si-estra-4,9-dien-3-onia liuotetaan huoneenlämpötilassa 2 ml:aan pyridiiniä, tähän lisätään 20,2 mg hydroksyyliamiini-hydrokloridia ja sekoitetaan 25 eC:ssa. 50 minuutin kuluttua 15 liuos laimennetaan vedellä, lisätään etikkaesteriä ja faasit erotetaan. Orgaaninen faasi pestään laimennetulla HClrllä ja vedellä, kuivataan natriumsulfaatilla ja liuotin haihdutetaan alennetussa paineessa.

20 Saadaan 127 mg raakatuotetta vaaleankeltaisena vaahtona, josta saadaan sen jälkeen, kun on suoritettu preparatiivinen kerroskromatografia silikageeli 60 PF2S*_^3ee:11a 62 mg 17a-etoksimetyyli-118-[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-178-hydroksi-estra-4,9-dien-3-onia värittömänä vaahtona.

i *·* 25 ;X: aD = + 226° (CHC13) UV-spektri MeOHrssa λ1ηβχ = 265 nm ε = 22 696 Äta.* = 299 nm ε = 21 960 ··· ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [δ, ppm]: 0,520 (s, 1H, H-18); 30 1,249 (t, 3H, J = 7,2 Hz, 17a-CH2OCH2CH3); 3,228 - 3,609 (m, 4H, 2x CH2); 4,381 (d, 1H, J = 7,2 Hz, H-lla); 5,781 (s, . 1H, H-4); 7,181, 7,209, 7,459, 7,486 (m, 4H, aromaattipro- tönien AA'BB'-systeemi); 8,098 (s, 1H, CH=NOH).

» · · *\ ' MS m/e: 449,25540 C2eH35N04 M".

·:··: 35 ·:··: Lähtöyhdisteen valmistus

. *. Vaihe M

• » · ; 340 mg 3,3-dimetoksi-118-[4-(dimetoksimetyyli)fenyyli]-17a- etoksimetyyli-estr-9-en-5a,17B-diolia (valmistettu esimerkin 35 113657 7, vaiheen H mukaan) liuotetaan 2,5 ml:aan asetonia ja tähän lisätään 25 ml vettä ja 35 mg 4-tolueenisulfonihappoa. Tunnin kuluttua laimennetaan 10 ml :11a vettä ja lisätään 10 ml etikkaesteriä. Faasit erotetaan, vesipitoinen faasi uute-5 taan edelleen kaksi kertaa, orgaaninen liuos pestään ja kuivataan natriumsulfaatilla. Sen jälkeen, kun liuotin on haihdutettu jää jäljelle 300 mg kellertäviä kiteitä.

Sen jälkeen, kun on suoritettu preparatiivinen kerroskroma-10 tografia silikageeli 60 PF2B4^36e:11a käyttäen tolueeni/ase-tonia (9 : 1), saadaan tulokseksi 200 mg 17a-etoksimetyyli-11B-(4-formyylifenyyli)-17B-hydroksi-estra-4,9-dien-3-onia kellertävinä kiteinä.

15 Sulamispiste: 144 - 150 eC (asetoni/heksaani) aD = + 171° (CHC13) UV-spektri MeOH:ssa = 263 nm ε = 17 842 = 299 nm ε = 20 083 ^H-NMR-spektri CDCl3:ssa [5, ppm]: 0,512 (s, 1H, H-18); 20 1,249 (t, 3H, IJ = 4,6 Hz, 17a-CH2OCH2CH3); 3,221 - 3,613 (m, 4H, 2 x CH2); 4,447 (d, 1H, J = 6,9 Hz, H-lla); 5,799 (s, 1H, H-4); 7,361, 7,388, 7,788, 7,816 (m, 4H, aromaatti-protonien AA'BB'-systeemi); 9,972 (s, 1H, CH=0).

• *·· 25 Esimerkki 11

Reseptorin sitoutumisaffiniteetin mittaus: ; Reseptorin sitoutumisaffiniteetti määritettiin spesifisesti sitovan 3H-leimatun hormonin (tracer) ja testattavan yhdis-teen kompetitiivisella sitoutumisella eläinten kohde-elimis-30 tä saadun sytosolin reseptoreihin. Tällöin pyrittiin resep- » % * torin saturoimiseen ja reaktiotasapainoon. Valittiin seuraa-. vat inkubointiolosuhteet:

• · I

Progesteronireseptori: sytosoli, joka on valmistettu estra-·:·*! 35 diolia saaneen kaniinin kohdusta, säilytetty -30 °C:ssa TED-

puskurissa (20 mM Tris/HCl:ää, pH 7,4; 1 mM etyleenidiamii-nitetra-asetaattia, 2 mM ditiotreitolia), jossa on 250 mM

1 * * ·· ; sakkaroosia. Tracer: 3H-ORG 2058, 5 nM; Vertailuaine: pro gesteroni.

113657 3 6

Glukokortikoidireseptori: kateenkorva-sytosoli, saatu rotalta, jolta on poistettu lisämunuaiset, kateenkorvia säilytetty -30 eC:ssa; Puskuri: TED. Tracer: 3H-deksametasoni, 20 nM; Vertailuaine: deksametasoni.

5

Estrogeenireseptori: ei-sukukypsän kaniinin kohdusta valmistettu sytosoli, säilytetty -30 °C:ssa TED-puskurissa, jossa on 250 mM sakkaroosia. Tracer: 3H-etinyyliestradioli, 3 nM; Vertailuaine: 17B-estradioli.

10

Sen jälkeen, kun oli inkuboitu 18 tuntia 0-4 eC:ssa, tapahtui sitoutuneen ja vapaan steroidin erottaminen sekoittamalla aktiivihiili/dekstraania (1 %/0,l %), sentrifugoi-malla ja mittaamalla sitoutunut 3H-aktiviteetti päällä ole-15 vasta kerroksesta.

Konsentraatiosarjojen mittaustuloksista määritettiin ICso testattavalle yhdisteelle ja vertailuaineelle ja molempien arvojen osamääränä (x 100 %) suhteellinen molaarinen sitou-20 tumisaffiniteetti.

Esimerkki 12

Rotan varhaisraskauden estäminen:

Naarasrottien annetaan pariutua proestrus-vaiheessa. Osoit-i ’* 25 tamalla siemennesteen esiintyminen vaginan sivelynäytteissä v.: seuraavana päivänä lasketaan tämä päivä raskauden ensimmäi- • ·/ seksi päiväksi (=dl). Käsittely testiaineella tai kantaja- ; ' : aineella tapahtuu 5. - 7. päivänä, ruumiinavaus tapahtuu 9.

·** päivänä. Aineet annetaan 0,2 ml:ssa kantaja-ainetta (bent- 30 syylibentsoaatti/risiiniöljy 1 + 4) ruiskeena ihonalaiseen kudokseen. Eri ryhmien täydellisesti estyneiden raskauksien arvot käyvät ilmi taulukosta 1. Todettiin, että yhdiste J 867 esti hedelmöityneen munasolun kohdun limakalvoon kiin- % * · • t · nittymisen tekijällä 3 paremmin kuin RU 486.

*:·*: 35 :·" Esimerkki 13 . Naarasmarsujen antigestageeni-hoito: • » » ! Aikuisten naarasmarsujen hoito kierron 10. päivästä 18. päi- » c« t · vään (ruumiinavaus). Ilmoitettujen annosten anto ihon alle 37 1 13657 osmoottisten pumppujen avulla (ALZET tyyppi 2 ML1). Kantaja-aine: 2,0 ml propyleeniglykolia/24 tuntia.

Esimerkki 14 5 Yhdisteen J 867 antiglukokortikoidinen vaikutus ihmisen rintasyöpäsolulinjassa ZR75/AGP-763:

Soluviljelykokeet suoritettiin RPMI 1640:ssä, johon oli lisätty 10 % vasikan sikiön seerumia (FKS), 37 °C:ssa lämpö-kaapissa, jossa oli 95 % ilmaa ja 5 % C02:ta. Kokeita varten 10 solut pipetoitiin 60 mm petrimaljoihin. Yhteenvirtaavien solujen kantaja-aine korvattiin kantaja-aineella, joka sisälsi 5 % FKSrää (käsitelty aktiivihiilellä, DCC). CAT-induktiota varten lisättiin deksametasonia konsentraation ollessa 10-7 M etanolissa (0,2 %; v/v). Stimuloitujen solujen talteenotto 15 tapahtui 16 tunnin kuluttua valmistamalla solu-uute solun-liuotuspuskurilla. CAT-määritys suoritettiin firman Boehrin-ger ELISA-testiä käyttäen vastaavasti, kuten on kuvattu muunnettujen solujen kvantitatiivisessa CAT-määrityksessä.

20 Esimerkki 15

Yhdisteen J 867 antiglukokortikoidinen vaikutus rotan hepa-toomasoluissa TAT-koemallia käyttäen:

Soluviljelyt suoritettiin DMEM:ssä muutoin samoissa olosuhteissa kuin esimerkissä 14. Solut asetettiin kokeita varten « :'· 25 24-reikä-levyille. Aineen lisäys virtaaviin hepatoomasolui- » 1 ; hin tapahtui 0,2 %:isessa (v/v) etanolissa 16 tunnin aikana, i ; : Sen jälkeen kun solut oli otettu säästäen talteen solukaapi- me11a ja oli valmistettu solu-uute ultraäänikäsittelyllä, suoritettiin TAT-entsyymimääritys Diamondstonen mukaan.

rl#» 30 ( t | < rt· f * 1 » »

> t f I t I

* t 1 4 • MOI » » t

f I

f * 1 II» f » » I t · 2 2 ritii » »

Claims

33 1 13 6 5 7
1. Menetelmä yleisen kaavan I mukaisten Ιΐβ-bentsaldoksii-mi-estra-4,9-dieeni-johdannaisten valmistamiseksi käytettäväksi farmaseuttisissa koostumuksissa, joilla on antigesta-5 geeninen vaikutus, NOZ Ar ^ or2 -^1^1 (n jossa kaavassa R1 on 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, R2 on vetyatomi tai 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä,
10 R3 on -CHX, ; 2 ' jossa X on halogeeni tai ryhmä OR5, jolloin R5 on 1-6 hii- liatomia sisältävä alkyyliryhmä • t » » » tai ryhmä C=CR7, ‘ jossa R7 on 1-6 hiiliatomia sisältävä hydroksialkyyliryhmä, * , 15 Z on vetyatomi, 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyli- tai asyyliryhmä, ryhmä -CONH-fenyyli tai -COOR4, 2 2 jossa R4 on 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, ! « · tunnettu siitä, että annetaan yleisen kaavan II mukaisen yhdisteen 39 1 13657 o r1 OR2 (ii) jossa R1, R2 ja R3 tarkoittavat samaa kuin edellä; reagoida yleisen kaavan Ha mukaisen yhdisteen kanssa NH -0-Y (Ha) 2 5 jossa Y tarkoittaa samaa kuin Z edellä, ja jolloin yleisen kaavan Ila mukainen yhdiste on mahdollisesti tällaisena yhdisteenä, tai josta yleisen kaavan Ila mukainen yhdiste vapautetaan valituissa reaktio-olosuhteissa, 10 ja jolloin mahdollisesti esiintyvä hydroksyyliamiiniryhmä , esteröidään tai eetteröidään. • : 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan seuraavia yhdisteitä: 11β—[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-hydroksi-17a-me-15 toksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 11β—[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17β-metoksi-17α-me-toksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, | 11β—[4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-17β-hydroksi-17α-(3- | hydroksiprop-l-in-yyli)-estra-4,9-dien-3-oni, ’>· 20 17a-kloorimetyyli-l^- [4-(hydroksi-iminometyyli) fenyyli] - ' ; 17β-hydroksi-estra-4,9-dien-3-oni, 11β-[4-(metyylioksi-iminometyyli)fenyyli]-17β-metoksi-17α-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 113657 11β-[4-(asetoksi-iminometyyli)fenyyli]-17p-metoksi-17a-me-toksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 11β —{4-[(etoksikarbonyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli}—17 β— metoksi-17a-metoksimetyyli-estra-4,9-dien-3-oni, 5 17β-metoksi-17α-InetoksiInetyyli-llβ-{4-[ (fenyyliaminokarbo- nyyli)oksi-iminometyyli]fenyyli}-estra-4,9-dien-3-oni, 17a-etoksimetyyli-l^- [4- (hydroksi-iminometyyli) fenyyli] -17β-metoksi-estra-4,9-dien-3-oni ja 17a-etoksimetyyli -11β- [4-(hydroksi-iminometyyli)fenyyli]-10 17β-]^Μ±ηΛΞί-θ3^3-4,9-dien-3-oni .