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ES2934432T3 - Compuestos de imidazopirazina, métodos de preparación y usos de los mismos - Google Patents

Compuestos de imidazopirazina, métodos de preparación y usos de los mismos Download PDF

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ES2934432T3
ES2934432T3 ES18738713T ES18738713T ES2934432T3 ES 2934432 T3 ES2934432 T3 ES 2934432T3 ES 18738713 T ES18738713 T ES 18738713T ES 18738713 T ES18738713 T ES 18738713T ES 2934432 T3 ES2934432 T3 ES 2934432T3
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ES
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alkyl
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cell
group
stereoisomer
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ES18738713T
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Xiong Cai
Xianbin Zhong
Chunqiang Ye
Qijie He
Shifeng Qin
Changgeng Qian
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Dongguan Zhengxing Beite Medicine Tech Co Ltd
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Dongguan Zhengxing Beite Medicine Tech Co Ltd
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems

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  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Se describen un compuesto de imidazopirazina, un método de preparación del mismo y su uso. Específicamente, se describen un compuesto que tiene una estructura como la representada por la fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero o un profármaco del mismo, y el uso del compuesto, la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el profármaco del mismo en la preparación de un medicamento El medicamento se usa para prevenir y/o tratar enfermedades y/o síntomas relacionados con la hiperactividad de la tirosina quinasa de Bruton en un sujeto. Se describe además el uso del compuesto, la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el profármaco del mismo en la preparación de una formulación. La formulación se usa para reducir o inhibir la actividad de la tirosina quinasa de Bruton en las células. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos de imidazopirazina, métodos de preparación y usos de los mismos
Campo técnico
La presente divulgación pertenece al campo técnico de los medicamentos y se refiere a un compuesto de imidazopirazina, a un método para preparar el compuesto y a un uso del compuesto en la preparación de un fármaco. El fármaco se usa para prevenir y/o tratar una enfermedad y/o una afección de un sujeto asociado con hiperactividad de la tirosina quinasa de Bruton.
Antecedentes
La tirosina quinasa de Bruton (BTK) es una molécula de señalización clave en un complejo de señalización del receptor de linfocitos B y es una proteína quinasa clave para la supervivencia y proliferación de un linfocito. BTK desempeña un papel importante en la supervivencia y propagación de un linfocito B maligno.
Un inhibidor de BTK tiene un efecto anticanceroso al inhibir la BTK de una célula tumoral. El primer inhibidor de BTK, Ibrutinib, es un compuesto de 4'-aminopirazolo[3,4-d]pirimidina (Honigberg LA, et al. Proc Natl Acad Sci USA, 107: 13075, 2010), que inhibe la BTK de forma irreversible mediante la unión selectiva y covalente con un resto cisteína del sitio activo (Cys-481) de una proteína diana BTK para prevenir eficazmente la migración de un tumor desde un linfocito B a un tejido linfoide que se adapta a un entorno de crecimiento tumoral. Desde el año 2013, Ibrutinib está aprobado por la FDA estadounidense para el tratamiento del linfoma de células del manto resistente (LCM), la leucemia linfocítica crónica resistente (LLC), LLC mutante con deleción 17p (del 17p) y macroglobulinemia primaria.
A excepción de Ibrutinib, los inhibidores de BTK AVL-292 (CC292), ONO-4059, BGB-3111 y acalabrutinib (ACP-196) también se encuentran en la etapa de desarrollo clínico para tratamientos de linfoma no Hodgkin de linfocitos B, leucemia linfocítica crónica, mieloma múltiple, tricoleucemia, leucemia linfoblástica aguda del adulto y similares. Una terapia combinada de ibrutinib con un fármaco quimioterapéutico u otro fármaco contra el cáncer dirigido puede mejorar el efecto curativo del tumor. En la prueba clínica, un fármaco que se puede usar en combinación con el inhibidor de BTK incluye rituximab, lenalidomida, fludarabina, ciclofosfamida, adriamicina, vincristina y prednisona.
La actividad de BTK en las células primitivas de aproximadamente el 80 % de los pacientes con leucemia mielógena aguda (LMA) aumenta en comparación con la de las células hematopoyéticas normales, lo que hace que las células sean sensibles al inhibidor oral de BTK ibrutinib in vitro (Marcel Spaargaren M. Lancet Heamat. 2: e180, 2015). Una investigación clínica del tratamiento de la leucemia mielógena aguda mediante la administración de ibrutinib solo o en combinación con arabinósido de citosina ha entrado en el estadio clínico de fase II.
En los últimos años, se ha descubierto que la BTK se expresa en una célula y un tejido de un tumor sólido, tal como cáncer de próstata, y el nivel de expresión está relacionado con la clasificación del cáncer (Guo W. et al. Cell Death Dis. 5: e1409, 2014). La BTK inhibe la BTK de linfocitos B y macrófagos y recupera la respuesta inmunitaria antitumoral dependiente de linfocitos T (Gunderson A.J. et al. Cancer Discov. 6: 270, 2016). Un ensayo clínico de fase II del uso de ibrutinib y acalabrutinib para tratar varios tumores sólidos, tal como CPNMC, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de colon y similares, está en desarrollo (Clinical Trials. gov).
El efecto de BTK en un sistema de mensajero del receptor de linfocitos B (BCR) es muy importante en el proceso de desarrollo y activación de un linfocito B normal. La anomalía de la señal BCR está asociada con una enfermedad autoinmunitaria, tal como la artritis reumatoide (AR). Además, la BTK también se expresa en una célula mieloide, que incluye un monocito, un macrófago, un neutrófilo y un mastocito. Estas células se infiltran en la cavidad de la membrana sinovial y generan citocinas inflamatorias, lo que agrava la afección de artritis. El inhibidor de BTK puede bloquear la proliferación de células dependientes de un receptor de linfocitos B y reducir la generación de citocinas inflamatorias (Whang J. A., Chang B.Y Drug Discov Today. 19: 1200, 2014). Los estudios preclínicos muestran que el inhibidor de BTK también es efectivo para diversas inflamaciones y enfermedades autoinmunitarias, tal un modelo animal de artritis reumatoide. A excepción de la artritis reumatoide y el lupus eritematoso, este tipo de fármaco tiene la posibilidad de ser utilizado para nefritis lúpica, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren, asma por enfermedad subyacente y así sucesivamente. Un uso del inhibidor de BTK, tales como el c C-292 y el HM71224, para el tratamiento de enfermedades autoinmunitarias, tal como artritis reumatoide, ha entrado en la etapa de ensayo clínico (Clinical Trials. gov ID: NCT01975610, NCT01765478).
Acalabrutinib (ACP-196) es un inhibidor de BTK de segunda generación y tiene una mayor selectividad por BTK que por otras quinasas. Acalabrutinib no inhibe EGFR, ITK y TEC y no tiene influencia en la fosforilación de EGFR en el locus Y1068 y el locus Y1173. Acalabrutinib tiene un valor de CI50 más tarde que el inhibidor de BTK de primera generación ibrutinib. A diferencia del inhibidor de BTK de primera generación, los datos experimentales clínicos y preclínicos muestran que acalabrutinib puede bloquear la vía de BTK de forma selectiva sin influir sobre el EGFR normal y no destruirá la vía de la molécula clave que mantiene las plaquetas sanguíneas y la función inmunológica, evitando o reduciendo así algunos efectos adversos asociados con el tratamiento del cáncer (Byrd JC et al. N Engl J Med 374: 323, 2016).
Todos los estudios anteriores muestran que el inhibidor de BTK, especialmente el inhibidor selectivo de BTK, tal como un fármaco para la prevención y el tratamiento de tumores, diversas inflamaciones y enfermedades autoinmunitarias, tiene un gran valor potencial.
El documento WO2016/106623 desvela compuestos inhibidores de BTK, sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, composiciones farmacéuticas de los mismos o su uso en terapia.
El documento WO2016/106624 desvela compuestos inhibidores de BTK, sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, composiciones farmacéuticas de los mismos o su uso en terapia.
El documento WO2016/192074 desvela compuestos inhibidores de BTK o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos o composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos y su uso en terapia.
El documento CN101674834 desvela compuestos inhibidores de cinasa irreversibles, métodos para sintetizar tales inhibidores irreversibles y métodos para usar tales inhibidores irreversibles en el tratamiento de enfermedades. El documento CN103917545 desvela compuestos de anillos de piridina fusionados de 6-5 miembros o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos y su uso en terapia.
El documento CN103889987 se refiere a compuestos de anillo de piridina fusionados de 6-5 miembros o composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos y su uso en terapia.
El documento WO 2015/057992 desvela métodos para mejorar la hematopoyesis y aumentar los recuentos de glóbulos blancos en sujetos y pacientes que utilizan inhibidores basados en el sistema de anillo de heteroarilo fusionado en 6,5 de la tirosina quinasa de Bruton (Btk).
El documento WO 2016/087994 desvela métodos terapéuticos para usar un inhibidor de BTK para tratar cánceres de tumores sólidos mediante la modulación del microambiente tumoral, incluyendo macrófagos, monocitos, mastocitos, linfocitos T colaboradores, linfocitos T citotóxicos, linfocitos T reguladores, linfocitos citolíticos naturales, células supresoras de origen mieloide, linfocitos B reguladores, neutrófilos, células dendríticas y fibroblastos.
El documento WO2016/128912 desvela composiciones terapéuticas y métodos de uso de las composiciones, incluyendo combinaciones de un inhibidor de BTK, un inhibidor de la fosfoinosítido 3-quinasa (PI3K), incluyendo inhibidores de PI3K selectivos para las isoformas y y 6 y selectivos para las isoformas y y 6 (PI3K-Y, 8, PI3K-Y y PI3K-8, un inhibidor de muerte programada 1 (PD-1) o ligando de muerte programada 1 (PD-L1) y/o un inhibidor de Janus quinasa-2 (JAK-2).
El documento WO2016/105582 desvela nuevas formulaciones que liberan inhibidores de quinasa covalentes reversibles e irreversibles, en particular, inhibidores de BTK, en el intestino delgado y específicamente en el íleon y el yeyuno del intestino delgado.
Sumario
Basándose en una extensa investigación, los inventores han descubierto que un compuesto representado por la fórmula (I) tiene una actividad inhibidora de BTK y, por lo tanto, puede funcionar como un inhibidor de BTK, por ejemplo, el compuesto puede usarse para prevenir y/o tratar una enfermedad asociada con la BTK, tal como un tumor, inflamación y enfermedad autoinmunitaria.
Por lo tanto, un aspecto de la presente divulgación se refiere a un compuesto que tiene una estructura representada por la fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un estereoisómero del mismo o un profármaco del mismo:
Figure imgf000004_0001
en donde,
A se selecciona entre CH o N;
n es 0, 1,2 o 3;
R1 se selecciona entre siguientes grupos:
Figure imgf000004_0002
en donde cada uno de R3 y R4 se selecciona independientemente entre H y alquilo C1-C6 ;
R5 se selecciona entre H, alquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C6 , alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con amino, alquilo C1-C4 sustituido con alquilamino C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con di(alquil C1-C3)amino y alquilo C1-C4 sustituido con un grupo heterocíclico;
cada uno de X1, X2 , X3 y X4 se selecciona independientemente entre C(R2) y N;
R2 se selecciona entre H, átomo de halógeno, alquilo C1-C6 , alcoxi C1-C6 y alquilo C1-C6 halogenado;
W e Y cada uno de se selecciona independientemente entre O, N(R6), S y alquileno C1-C6 , y al menos uno de W e Y se selecciona entre alquileno C1-C6 ;
R6 se selecciona entre H o alquilo C1-C6 ;
Ar se selecciona entre fenilo o un heteroarilo de 5 a 6 miembros heteroarilo (tal como heteroarilo que contiene nitrógeno de 5 a 6 miembros), opcionalmente, el fenilo o el heteroarilo de 5 a 6 miembros está sustituido con un grupo seleccionado entre un átomo de halógeno, alquilo C1-C6 , alcoxi C1-C6 y alquilo C1-C6 halogenado.
En algunas realizaciones, A es CH.
En algunas realizaciones,
Figure imgf000004_0003
se seleccionan cada uno entre C(R2); o uno de X1, X2 , X3 restantes se seleccionan entre C(R2).
En algunas realizaciones, X1, X2 , X3 y X4 son cada uno CH.
En algunas realizaciones, X1 es N y X2 , X3 y X4 se seleccionan cada uno entre C(R2), más preferentemente, X2 , X3 y
X4 son cada uno CH.
En algunas realizaciones, X2 es N y X1, X3 y X4 se seleccionan cada uno entre C(R2), más preferentemente, X1, X3 y
X4 son cada uno CH.
En algunas realizaciones, X3 es N y X1, X2 y X4 se seleccionan cada uno entre C(R2), más preferentemente, X1, X2 y
X4 son cada uno CH.
En algunas realizaciones, X4 es N y X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno entre C(R2), más preferentemente, X1, X2 y
X3 son cada uno CH.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene una estructura representada por la fórmula (II):
Figure imgf000005_0001
en donde X5 , cada uno de X6, X7 , X8 y X9 se selecciona independientemente entre C(R7) o N;
R7 se selecciona entre H, átomo de halógeno, alquilo C1-C6 , alcoxi C1-C6 y alquilo C1-C6 halogenado.
En algunas realizaciones, cada uno de X5 , X6, X7 , X8 y X9 se selecciona entre C(R7); o uno de X5 , X6, X7 , X8 y X9 es N y los restantes se seleccionan entre C(R7).
En algunas realizaciones, X5 es N y cada uno de X6, X7 , X8 y X9 se selecciona entre C(R7).
En algunas realizaciones, X6 es N y cada uno de X5 , X7 , X8 y X9 se seleccionan entre C(R7).
En algunas realizaciones, X7 es N y cada uno de X5 , Xe, X8 y X9 se selecciona entre C(R7).
En algunas realizaciones, X8 es N y cada uno de X5 , Xe, X7 y X9 se selecciona entre C(R7).
En algunas realizaciones, X9 es N y cada uno de X5 , Xe, X7 y Xa se selecciona entre C(R7).
En algunas realizaciones, X5 , Xe, X7 , X8 y X9 son cada uno CH.
En algunas realizaciones, Xe, X7 , Xa y X9 son cada uno CH, X5 es C(R7), y R7 se selecciona entre un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado.
En algunas realizaciones, X5 , X7 , Xa y X9 son cada uno CH, Xe es C(R7), y R7 se selecciona entre un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado.
En algunas realizaciones, X5 , Xe, Xa y X9 son cada uno CH, X7 es C(R7), y R7 se selecciona entre un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado.
En algunas realizaciones, X5 , Xe, X7 y X9 son cada uno CH, Xa es C(R7), y R7 se selecciona entre un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado.
En algunas realizaciones, X5 , Xe, X7 y Xa son cada uno CH, X9 es C(R7), y R7 se selecciona entre un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado.
En algunas realizaciones, W se selecciona entre O, N(Re) o S, Re se selecciona entre H o alquilo Ci-Ce; Y se selecciona entre alquileno Ci-Ce.
En algunas realizaciones, Y se selecciona entre alquileno Ci-C3, tales como metileno, i,i-etilideno y i,2-etilideno. En algunas realizaciones, n es i o 2.
En algunas realizaciones, n es i.
En algunas realizaciones, un átomo de carbono quiral en
Figure imgf000006_0001
es de una configuración sinistral.
En algunas realizaciones, R1 se selecciona entre siguientes grupos:
Figure imgf000006_0002
En algunas realizaciones, R1 se selecciona entre
Figure imgf000006_0003
En algunas realizaciones, R5 se selecciona entre H, alquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C6 , alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con alquilamino C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con di(alquil C1-C3)amino y alquilo C1-C4 sustituido con un grupo heterocíclico que contiene nitrógeno, saturado de 5 a 6 miembros.
En algunas realizaciones, R1 es
Figure imgf000006_0004
En algunas realizaciones, R3 es H.
En algunas realizaciones, R4 es H.
En algunas realizaciones, R5 se selecciona entre H, alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con alquilamino C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con di(alquil C1-C3)amino y alquilo C1-C4 sustituido con un grupo heterocíclico que contiene nitrógeno, saturado de 5 a 6 miembros.
En algunas realizaciones, R1 es
Figure imgf000006_0005
En algunas realizaciones, R5 se selecciona entre H, alquilo C1-C4 y cicloalquilo C3-C6.
En algunas realizaciones, A es CH;
X1, X2, X3 y X4 son cada uno CH; o
X1 es N, X2 , X3 y X4 son cada uno CH; o
X2 es N, X1, X3 y X4 son cada uno CH; o
X3 es N, Xi, X2 y X4 son cada uno CH; o
X4 es N, X1, X2 y X3 son cada uno CH;
W es O, N(Ra) o S, R6 se selecciona entre H o alquilo C1-C3 ;
Y se selecciona entre alquileno C1-C3 ;
n es 1;
R1 se selecciona entre
Figure imgf000007_0001
en donde R3 es H;
R4 es H;
R5 se selecciona entre H, alquilo C1-Ca, cicloalquilo C3-Ca, alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con alquilamino C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con di(alquil C1-C3)amino y alquilo C1-C4 sustituido con un grupo heterocíclico que contiene nitrógeno, saturado de 5 a 6 miembros;
Ar se selecciona entre fenilo o heteroarilo que contiene nitrógeno de 6 miembros, opcionalmente, el fenilo o el heteroarilo que contienen nitrógeno de 6 miembros está sustituido con un grupo seleccionado entre un átomo de halógeno, alquilo C1-Ca, alcoxi C1-Ca y alquilo C1-Ca halogenado.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene una estructura representada por la fórmula (III):
Figure imgf000007_0002
en donde X1 es CH o N;
W se selecciona entre O, S y N(Ra), Ra se selecciona entre H o metilo;
Y se selecciona entre metileno, 1,1-etilideno y 1,2-etilideno;
cada uno de Xa y X7 se selecciona independientemente entre C(R7), R7 se selecciona entre H, F, trifluorometilo y metoxilo.
X9 se selecciona entre CH o N;
R1 es
Figure imgf000007_0003
en donde R3 es H, R4 es H y R5 se selecciona entre H, metilo sustituido con metoxilo, metilo sustituido con dimetil amino y metilo sustituido con piperidilo; o
R1 es
Figure imgf000008_0001
en donde R5 se selecciona entre H, metilo, etilo, isopropilo y ciclopropilo; o Ri es
O O R4
h ! s t ¿ K
v T R 5
R3
, en donde R3 , R4 y R5 son cada uno H.
En algunas realizaciones, el compuesto de la presente divulgación se selecciona entre:
Figure imgf000008_0002
Figure imgf000009_0001
Figure imgf000010_0001
Un aspecto de la presente divulgación se refiere a una composición farmacéutica que incluye el compuesto de la presente divulgación, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el estereoisómero del mismo o el profármaco del mismo.
Opcionalmente, la composición farmacéutica de la presente divulgación incluye además uno o más excipientes farmacéuticos.
En la presente divulgación, el excipiente farmacéutico es un vehículo o un aditivo utilizado en la producción farmacéutica y dispensación de recetas y se refiere a un material, a excepción de un componente activo, que se ha evaluado racionalmente respecto a la seguridad, el contenido en una preparación farmacéutica. Además de la formabilidad, sirviendo como vehículo y mejorando la estabilidad, el excipiente farmacéutico tiene además funciones importantes, tales como solubilización, hidrotropía y liberación controlada y es un componente importante que puede afectar a la calidad, la seguridad y la eficacia de un fármaco. Según su fuente, el excipiente farmacéutico se puede clasificar en un material natural, un material semisintético y un material sintético. Según su efecto y uso, el excipiente farmacéutico se puede clasificar en un disolvente, un propulsor, un solubilizante, un agente de hidrotropía, un agente emulsionante, un colorante, un aglutinante, un disgregante, una carga, un lubricante, un agente humectante, un regulador de la presión osmótica, un estabilizante, un deslizante, un agente saborizante, un conservante, un agente de suspensión, un material de recubrimiento, uno aromático, un agente anti-adhesivo, un antioxidante, un agente quelante, un potenciador de la penetración, un ajustador del pH, un tampón, un plastificante, un tensioactivo, un agente espumante, un antiespumante, un espesante, un agente de inclusión, un hidratante, un absorbente,, un diluyente, un floculante y defloculante, una ayuda de filtro, un retardante de liberación y así sucesivamente. De acuerdo a su forma de administración, el excipiente farmacéutico se puede clasificar en administración oral, administración por inyección, administración en la mucosas, administración percutánea o tópica, administración por inhalación a través de la cavidad nasal o la cavidad oral, administración oftálmica, etc. El mismo excipiente farmacéutico se puede utilizar para preparaciones farmacéuticas que tienen diferentes formas de administración y pueden tener diferentes efectos y usos.
La composición farmacéutica de la presente divulgación se puede preparar en varias formas de dosificación adecuadas según su forma de administración.
En la administración oral, la composición farmacéutica se puede convertir en cualquier forma de preparación aceptable para administración oral, incluyendo, aunque sin limitación, comprimidos, cápsula, gránulo, pastilla, jarabe, solución oral, suspensión bucal, emulsión oral, y así sucesivamente. En donde, un vehículo utilizado por el comprimido generalmente se compone de lactosa y almidón de maíz y se puede añadir además con un lubricante tal como estearato de magnesio. Un diluyente usado por la cápsula generalmente se compone de lactosa y almidón de maíz seco. Un componente activo generalmente se mezcla con un agente emulsionante adecuado y un agente de suspensión adecuado en la suspensión oral. Opcionalmente, se puede añadir además un agente edulcorante, un agente aromático y un colorante a las formas de preparación oral anteriores.
En administración percutánea o tópica, la composición farmacéutica se puede convertir en forma de una pomada adecuada, forma de loción y forma de linimento, en donde un componente activo puede suspenderse o disolverse en uno o más vehículos. Un vehículo utilizable en la preparación de la pomada incluye, aunque sin limitación, aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, propilenglicol, óxido de polietileno, óxido de polipropileno, cera emulsionada y agua. Un vehículo utilizable en la preparación de loción o linimento incluye, entre otros, aceite mineral, monoestearato de sorbitán deshidratado, Tween 60, cera de éster de hexadecilo, alcohol aromático de hexadeceno, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua.
La composición farmacéutica también se puede administrar en forma de inyección, incluyendo solución de inyección, polvo estéril para inyección y solución concentrada para inyección. En donde, un vehículo utilizable y un disolvente utilizable incluyen agua, solución de Ringer y solución de cloruro de sodio isotónica. Además, un aceite estéril no volátil, tal como monoglicéridos y diglicéridos, también se puede utilizar como disolvente o medio de suspensión.
Opcionalmente, el compuesto de la presente divulgación, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el estereoisómero del mismo o el profármaco del mismo puede administrarse en combinación con un segundo agente terapéutico. Por consiguiente, la composición farmacéutica de la presente divulgación puede incluir opcionalmente uno o más segundos agentes terapéuticos. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un fármaco quimioterapéutico, un fármaco dirigido contra el cáncer o un fármaco inmunoterapéutico. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico se selecciona entre rituximab, lenalidomida, fludarabina, ciclofosfamida, adriamicina, vincristina y prednisona.
Un aspecto de la presente divulgación se refiere al uso del compuesto, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el estereoisómero del mismo o el profármaco del mismo para preparar un fármaco. El fármaco se usa para prevenir y/o tratar una enfermedad y/o una afección de un sujeto asociado con hiperactividad de la tirosina quinasa de Bruton. Por tanto, la presente invención proporciona un compuesto como se describe en el presente documento, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo para su uso como fármaco para prevenir y/o tratar una enfermedad y/o una afección seleccionada entre el grupo que consiste en tumor, inflamación y enfermedad autoinmunitaria;
preferentemente, el tumor es un tumor hematológico seleccionado entre el grupo que consiste en linfoma, mieloma, leucemia linfocítica y leucemia mieloide aguda;
preferentemente, el tumor es un tumor sólido seleccionado entre el grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de ovarios y cáncer de colon;
preferentemente, la inflamación o la enfermedad autoinmunitaria se selecciona entre el grupo que consiste en artritis reumatoide, lupus eritematoso, nefritis lúpica, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren y asma por enfermedad subyacente;
preferentemente, el fármaco es para prevenir y/o tratar a un mamífero, más preferentemente, un bovino, un equino, un ovino, un porcino, un canino, un felino, un roedor y un primate, más preferentemente, un ser humano; preferentemente, el fármaco incluye además uno o más segundos gentes terapéuticos;
preferentemente, el segundo agente terapéutico es un fármaco quimioterapéutico, un fármaco dirigido contra el cáncer o un fármaco inmunoterapéutico;
preferentemente, el segundo agente terapéutico se selecciona entre el grupo que consiste en rituximab, lenalidomida, fludarabina, ciclofosfamida, adriamicina, vincristina y prednisona.
En algunas realizaciones, la enfermedad y/o la afección asociada con la hiperactividad de la tirosina quinasa de Bruton se selecciona entre tumor (tal como un tumor hematológico o un tumor sólido), inflamación o enfermedad autoinmunitaria.
En algunas realizaciones, el tumor hematológico se selecciona entre linfoma, mieloma, leucemia linfocítica y leucemia mieloide aguda.
En algunas realizaciones, el tumor sólido se selecciona entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de ovarios y cáncer de colon.
En algunas realizaciones, la inflamación o enfermedad autoinmunitaria se selecciona entre artritis reumatoide, lupus eritematoso, nefritis lúpica, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren y asma por enfermedad subyacente.
En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero; tal como un bóvido, un equino, un ovino, un porcino, un canino, un felino, un roedor y un primate; tal como un ser humano.
En algunas realizaciones, la composición farmacéutica incluye además uno o más segundos gentes terapéuticos. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un fármaco quimioterapéutico, un fármaco dirigido contra el cáncer o un fármaco inmunoterapéutico. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico se selecciona entre rituximab, lenalidomida, fludarabina, ciclofosfamida, adriamicina, vincristina y prednisona.
Un aspecto de la presente divulgación se refiere a un método para prevenir y/o tratar una enfermedad y/o una afección de un sujeto asociada con hiperactividad de la tirosina quinasa de Bruton. El método incluye administrar al sujeto una cantidad preventiva y/o terapéuticamente efectiva del compuesto de la presente divulgación, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el estereoisómero del mismo o el profármaco del mismo, o la composición farmacéutica de la presente divulgación.
En algunas realizaciones, la enfermedad y/o la afección asociada con la hiperactividad de la tirosina quinasa de Bruton se selecciona entre tumor (tal como un tumor hematológico o un tumor sólido), inflamación o enfermedad autoinmunitaria.
En algunas realizaciones, el tumor hematológico se selecciona entre linfoma, mieloma, leucemia linfocítica y leucemia mieloide aguda.
En algunas realizaciones, el tumor sólido se selecciona entre cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de ovarios y cáncer de colon.
En algunas realizaciones, la inflamación o enfermedad autoinmunitaria se selecciona entre artritis reumatoide, lupus eritematoso, nefritis lúpica, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren y asma por enfermedad subyacente.
En algunas realizaciones, el sujeto es un mamífero; tal como un bóvido, un equino, un ovino, un porcino, un canino, un felino, un roedor y un primate; tal como un ser humano.
En algunas realizaciones, el método incluye además administrar al sujeto uno o más segundos agentes terapéuticos. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico es un fármaco quimioterapéutico, un fármaco dirigido contra el cáncer o un fármaco inmunoterapéutico. En algunas realizaciones, el segundo agente terapéutico se selecciona entre rituximab, lenalidomida, fludarabina, ciclofosfamida, adriamicina, vincristina y prednisona.
Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un uso del compuesto de la presente divulgación, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el estereoisómero del mismo o el profármaco del mismo para preparar una preparación, y la preparación se usa para disminuir o inhibir la actividad de la tirosina quinasa de Bruton en una célula. Por tanto, la presente invención proporciona el uso de un compuesto como se describe en el presente documento, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, para disminuir o inhibir una actividad de la tirosina quinasa de Bruton en una célula, in vitro;
preferentemente, la célula se selecciona entre una célula tumoral, preferentemente, una célula tumoral sólida, más preferentemente, una célula de cáncer de pulmón, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de estómago, una célula de cáncer de hígado, una célula de cáncer de páncreas, una célula de cáncer de ovarios y una célula de cáncer de colon;
preferentemente, la célula se selecciona entre una célula mieloide o un linfocito;
preferentemente, la célula es una célula primaria obtenida del sujeto, un cultivo de la célula primaria o una línea celular establecida.
En algunas realizaciones, la preparación se administra en el cuerpo de un sujeto (tal como un mamífero; tal como un bóvido, un equino, un ovino, un porcino, un canino, un felino, un roedor y un primate; tal como un ser humano) para disminuir o inhibir la actividad de la tirosina quinasa de Bruton en una célula in vivo; o la preparación se administra a una célula in vitro (tal como una línea celular o una célula del sujeto) para disminuir o inhibir la actividad de la tirosina quinasa de Bruton en la célula in vitro.
En algunas realizaciones, la célula se selecciona entre una célula tumoral, tal como una célula tumoral sólida, tal como una célula de cáncer de pulmón, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de estómago, una célula de cáncer de hígado, una célula de cáncer de páncreas, una célula de cáncer de ovarios y una célula de cáncer de colon.
En algunas realizaciones, la célula se selecciona entre una célula mieloide o un linfocito.
En algunas realizaciones, la célula es una célula primaria del sujeto, un cultivo de la célula primaria o una línea celular establecida.
Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un método para disminuir o inhibir una actividad de la tirosina quinasa de Bruton en una célula, incluyendo la administración a la célula de una cantidad efectiva del compuesto de la presente divulgación, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el estereoisómero del mismo o el profármaco del mismo. Por tanto, la presente invención proporciona un kit, que comprende un compuesto como se describe en el presente documento, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo y que opcionalmente comprende además una instrucción de uso;
en donde,
preferentemente, el kit se utiliza para disminuir o inhibir una actividad de la tirosina quinasa de Bruton en una célula in vitro;
preferentemente, la célula se selecciona entre una célula tumoral, más preferentemente, una célula tumoral sólida, más preferentemente, una célula de cáncer de pulmón, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de estómago, una célula de cáncer de hígado, una célula de cáncer de páncreas, una célula de cáncer de ovarios y una célula de cáncer de colon;
preferentemente, la célula se selecciona entre una célula mieloide o un linfocito;
preferentemente, la célula es una célula primaria obtenida de un sujeto, un cultivo de la célula primaria o una línea celular establecida.
En algunas realizaciones, el método se realiza in vivo o in vitro. Preferentemente, el método se realiza in vivo, por ejemplo, el método se aplica en el cuerpo de un sujeto (tal como un mamífero; tal como un bóvido, un equino, un ovino, un porcino, un canino, un felino, un roedor y un primate; tal como un ser humano) para disminuir o inhibir la actividad de la tirosina quinasa de Bruton en una célula in vivo; o método se realiza in vitro, por ejemplo, el método se aplica en una celda in vitro (tal como una línea celular o una célula del sujeto) para disminuir o inhibir la actividad de la tirosina quinasa de Bruton en la célula in vitro.
En algunas realizaciones, la célula se selecciona entre una célula tumoral, por ejemplo, una célula tumoral sólida, tal como una célula de cáncer de pulmón, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de estómago, una célula de cáncer de hígado, una célula de cáncer de páncreas, una célula de cáncer de ovarios y una célula de cáncer de colon.
En algunas realizaciones, la célula se selecciona entre una célula mieloide o un linfocito.
En algunas realizaciones, la célula es una célula primaria del sujeto, un cultivo de la célula primaria o una línea celular establecida. Otro aspecto de la presente divulgación se refiere a un kit que incluye el compuesto de la presente divulgación, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el estereoisómero del mismo o el profármaco del mismo y, opcionalmente, incluye además una instrucción de uso.
En algunas realizaciones, el kit se usa para disminuir o inhibir una actividad de la tirosina quinasa de Bruton en una célula.
En algunas realizaciones, la célula se selecciona entre una célula tumoral, por ejemplo, una célula tumoral sólida, tal como una célula de cáncer de pulmón, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de estómago, una célula de cáncer de hígado, una célula de cáncer de páncreas, una célula de cáncer de ovarios y una célula de cáncer de colon.
En algunas realizaciones, la célula se selecciona entre una célula mieloide o un linfocito.
En algunas realizaciones, la célula es una célula primaria de un sujeto, un cultivo de la célula primaria o una línea celular establecida.
En la presente divulgación, los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que el comúnmente entendido por aquellos expertos en la materia, a menos que se indique de otro modo. Por otra parte, los procedimientos de cultivo celular y de laboratorio de inmunología usados en el presente documento son todos procedimientos convencionales ampliamente usados en el campo relacionado. Al mismo tiempo, para comprender mejor la presente divulgación, a continuación se proporcionan definiciones y explicaciones de los términos relevantes.
Como se usa en el presente documento, el término "estereoisómero" incluye isómero conformacional e isómero configuracional, en donde el isómero configuracional incluye principalmente el isómero cis-trans y el isómero óptico. El compuesto de la presente divulgación puede estar presente en forma de estereoisómero y, por lo tanto, cubre todas las posibles formas de estereoisómero y cualquier combinación o mezcla de las mismas, por ejemplo, enantiómeros individuales, diastereoisómeros individuales o mezcla de los anteriores. Cuando el compuesto de la presente divulgación contiene un doble enlace olefínico, a menos que se indique específicamente, el compuesto incluye isómero cis, isómero trans y cualquier combinación de los mismos.
Como se usa en el presente documento, la expresión "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a: (1) una sal formada por un grupo funcional ácido (tal como -COOH, -OH, -SO3H y similares) existentes en el compuesto de la presente divulgación y un ion positivo inorgánico u orgánico adecuado (base), por ejemplo, una sal formada por el compuesto de la presente divulgación y un metal alcalino o alcalinotérreo, una sal de amonio del compuesto de la presente divulgación y una sal formada por el compuesto de la presente divulgación y una base orgánica que contiene nitrógeno; y (2) una sal formada por un grupo funcional alcalino (tal como -NH2 y similares) existente en el compuesto de la presente divulgación y un ion negativo inorgánico u orgánico adecuado (ácido), por ejemplo, una sal formada por el compuesto de la presente descripción y un ácido inorgánico o ácido carboxílico orgánico.
Por lo tanto, la "sal farmacéuticamente aceptable" del compuesto de la presente divulgación incluye, pero no se limita a, sal de metal alcalino, tales como sal de sodio, sal de potasio, sal de litio, etc.; sal de metal alcalinotérreo, tal como sal de calcio, sal de magnesio, etc.; otra sal metálica, tal como sal de aluminio, una sal de hierro, sal de cinc, sal de cobre, sal de níquel, sal de cobalto, etc.; sal alcalina inorgánica, tal como sal de amonio; sal alcalina orgánica, tal como sal de tere-octilamina, sal de dibencilamina, sal de morfolina, sal de glucosamina, sal de éster alquílico de fenilglicina, sal de etanodiamina, sal de N-metilglucosamina, sal de guanidina, sal de dietilamina, sal de trietilamina, sal de diciclohexilamina, sal de N,N'-dibenciletanodiamina, sal de cloroprocaína, sal de procaína, sal de dietanol amina, sal de N-bencil-feniletilamina, sal de piperazina, sal de tetrametilamonio, sal de tri(hidroximetil)metilamonio; sal de ácido haloide, tales como fluorohidrato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, etc.; sal de ácido inorgánico, tales como nitrato, perclorato, sulfato, fosfato, etc.; sulfonato de alquilo inferior, tales como, metil sulfonato, trifluorometil sulfonato, etil sulfonato, etc.; aril sulfonato, tales como sulfonato de benceno, sulfonato de p-benceno, etc.; sal de ácido orgánico, tales como acetato, malato, fumarato, succinato, citrato, tartrato, oxalato, maleato, etc.; sal de aminoácido, tales como sal de glicina, sal de trimetil glicina, sal de arginina, sal de ornitina, sal de glutamina, aspartatos, etc.
Como se usa en el presente documento, el término "profármaco", también conocido como fármaco precursor, precursor de fármaco, profármaco, se refiere a un compuesto, obtenido mediante la modificación del compuesto de la presente divulgación, que no tiene o tiene menos actividad in vitro y libera un fármaco activo in vivo mediante conversión enzimática o no enzimática para ejercer un efecto terapéutico. El principio de diseño y el método de preparación del profármaco son conocidos por los expertos en la materia.
Como se usa en el presente documento, la expresión "alquilo C1-C6" se refiere a alquilo lineal o ramificado que contiene de 1 a 6 átomos de carbono, tales como alquilo C1-C3 , alquilo C1-C4 , alquilo C1-C3 , alquilo C1-C2 , alquilo C1, alquilo C2 , alquilo C3 , alquilo C4 , alquilo C5 o alquilo C6. El ejemplo específico incluye, pero no se limita a, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, tere-butilo, n-pentilo, isopentilo, 2-metilbutilo, neo-pentilo, 1 -etilpropilo, nhexilo, iso-hexilo, 3-metilpentilo, 2-metilpentilo, 1-metilpentilo, 3,3-dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 1,1-dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 2,3-dimetilbutilo, 2-etilbutilo, 1,2-dimetilpropilo. La expresión "alquilo C1-C4" se refiere a ejemplos específicos que contienen de 1 a 4 átomos de carbono en alquilo C1-C6. La expresión "alquilo C1-C3" se refiere a un ejemplo específico que contiene de 1 a 3 átomos de carbono en alquilo C1-C6.
Como se usa en el presente documento, la expresión "alcoxi C1-C6" se refiere a un grupo formado a modo de "alquil C1-C6-O-", en donde el "alquilo C1-C6" es como se ha definido anteriormente. El ejemplo específico incluye, pero no se limita a, metoxi, etoxi, n-propoxi, iso-propoxi, n-butoxi, 2-butoxi, iso-butoxi, tere-butoxi, sec-butoxi, pentiloxi, hexoxi y así sucesivamente. La expresión "alcoxi C1-C3" se refiere a un ejemplo específico que contiene de 1 a 3 átomos de carbono en alcoxi C1-C6.
Como se usa en el presente documento, la expresión "átomo de halógeno" se refiere un átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo y átomo de yodo.
Como se usa en el presente documento, la expresión "alquilo C1-C6 halogenado" se refiere a un grupo obtenido a partir de "alquilo C1-C6" en el cual uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos por uno o más átomos de halógeno y las expresiones "átomo de halógeno" y "alquilo C1-C6" son como se han definido anteriormente. La expresión "alquilo C1-C4 halogenado" de la presente divulgación se refiere a un ejemplo específico que contiene de 1 a 4 átomos de carbono en alquilo C1-C6 halogenado.
Como se usa en el presente documento, la expresión "alquilamino C1-C3" se refiere a un grupo formado a modo de "alquil C1-C3-NH-", en donde "alquilo C1-C3" es como se ha definido anteriormente. El ejemplo específico incluye, pero no se limita a, metilamino, etilamino, propilamino e isopropilamino.
Como se usa en el presente documento, la expresión "di(alquil C1-C3)amino" se refiere a un grupo formado a modo de "di(alquil C1-C3)-N-", en donde "alquilo C1-C3" es como se ha definido anteriormente. El ejemplo específico incluye, pero no se limita a, dimetilamino, dietilamino, dipropilamino, metiletilamino y así sucesivamente.
Como se usa en el presente documento, la expresión "alquileno C1-C6" se refiere a un grupo obtenido a partir de alquilo C1-C6 mediante la retirada de un átomo de hidrógeno, tales como alquileno C1-C3 , alquileno C1-C4 , alquileno C2-C4 , en donde el "alquilo C1-C6" es como se ha definido anteriormente. El ejemplo específico incluye, pero no se limita a, metileno (-CH2-), 1,2-etilideno (-CH2CH2-), 1,1-etilideno (-CH(CH3)-), trimetileno (-CH2CH2CH2-) y así sucesivamente. El "alquileno C1-C3" se refiere al ejemplo específico que contiene de 1 a 3 átomos de carbono en los ejemplos anteriores.
Como se usa en el presente documento, la expresión "grupo heterocíclico" se refiere a un grupo cíclico en el cual al menos uno de los átomos del anillo es un heteroátomo (como un átomo de oxígeno, átomo de azufre, átomo de nitrógeno), tal como un grupo heterocíclico de 3 a 8 miembros, grupo heterocíclico de 5 a 6 miembros, grupo heterocíclico que contiene nitrógeno, grupo heterocíclico que contiene oxígeno, grupo heterocíclico que contiene azufre, grupo heterocíclico saturado, grupo heterocíclico insaturado, grupo heterocíclico saturado de 3 a 8 miembros, grupo heterocíclico saturado de 5 a 6 miembros, grupo heterocíclico que contiene nitrógeno de 3 a 8 miembros, grupo heterocíclico que contiene oxígeno de 3 a 8 miembros, grupo heterocíclico que contiene azufre de 3 a 8 miembros, grupo heterocíclico que contiene nitrógeno de 5 a 6 miembros, grupo heterocíclico que contiene nitrógeno saturado de 3 a 8 miembros, grupo heterocíclico que contiene nitrógeno saturado de 5 a 6 miembros. El ejemplo específico incluye, pero no se limita a, aziridinilo, 2H-aziridinilo, diazaciclopropilo, 3H-diazaciclopropenilo, azetidinilo, 1,4-dioxanilo, 1,3-dioxanilo, 1,3-dioxaciclopentilo, 1,4-dioxaciclohexadienilo, tetrahidrofuranilo, dihidropirrolilo, pirrolidinililo, imidazolidinilo, 4,5-dihidroimidazolilo, pirazolidinilo, 4,5-dihidropirazolilo, 2,5-dihidrotienilo, tetrahidrotienilo, 4,5-dihidrotiazolilo, piperidilo, piperazinilo, morfolinilo, hexahidropirimidilo, hexahidropiridazinilo, 4,5-dihidrooxazolilo, 4,5-dihidroisoxazolilo, 2,3-dihidroisoxazolilo, 2H-1,2-oxazinilo, 4H-1,2-oxazinilo, 6H-1,2-oxazinilo, 4H-1,3-oxazinilo, 6H-1,3-oxazinilo, 4H-1,4-oxazinilo, 4H-1,3-tiazinilo, 6H-1,3-tiazinilo, 2H-piranilo, 2H-piran-2-ona, 3,4-dihidro-2H-piranilo y así sucesivamente.
Como se usa en el presente documento, el término "arilo" se refiere a hidrocarbilo aromático monocíclico o policíclico, tal como arilo de 6 a 10 miembros. El ejemplo específico incluye, pero no se limita a, fenilo, naftilo, antracenilo, fenantrilo y así sucesivamente.
Como se usa en el presente documento, el término "heteroarilo" se refiere a arilo que contiene al menos un heteroátomo seleccionado entre nitrógeno, oxígeno y azufre, tales como heteroarilo de 6 a 10 miembros, heteroarilo de 5 a 6 miembros, heteroarilo que contienen nitrógeno, heteroarilo que contine oxígeno, heteroarilo que contine azufre, heteroarilo que contiene oxígeno de 5 a 6 miembros y heteroarilo que contiene oxígeno de 6 a 10 miembros. El ejemplo específico incluye, pero no se limita a, furanilo, tienilo, pirrolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, imidazolilo, pirazolilo, 1,2,3-triazolilo, 1,2,4-triazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, piridilo, 2-piridinona, 4-piridinona, pirimidinilo, 2H-1,2-oxazinilo, 4H-1,2-oxazinilo, 6H-1,2-oxazinilo, 4H-1,3-oxazinilo, 6H-1,3-oxazinilo, 4H-1,4-oxazinilo, piridazinilo, pirazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,3,5-triazinilo, 1,2,4,5-tetraazinilo, azacicloheptatrieno, 1,3-diazepina, benzofuranilo, benzoisofuranilo, benzotienilo, indolilo, isoindolilo, benzoxazolilo, benzoimidazolilo, indazolilo, benzotriazolilo, quinolilo, 2-quinolinona, 4-quinolinona, 1-isoquinolinona, isoquinolilo, acridinilo, fenantridinilo, benzopiridazinilo, piridazinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, fenazinilo, pteridinilo, purinilo, naftiridinilo, fenazina, fenotiazina, etc.
Como se usa en el presente documento, el término "cicloalquilo C3-C6" se refiere a alquilo saturado monocíclico que contiene de 3 a 6 átomos en el anillo, tales como cicloalquilo de 3 a 4 miembros, cicloalquilo de 3 a 5 miembros, cicloalquilo de 4 a 6 miembros, cicloalquilo de 5 a 6 miembros y cicloalquilo de 3, 4, 5, 6 miembros. El ejemplo específico incluye, pero no se limita a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, etc.
Efectos beneficiosos de la presente invención:
El compuesto de la presente divulgación tiene un efecto inhibidor significativo sobre la BTK pero ningún efecto inhibidor significativo sobre EGFR, Tec, Txk e ITK. El compuesto de la presente divulgación puede inhibir el crecimiento tumoral de manera dependiente de la dosis. El compuesto de la presente divulgación tiene buena selectividad en comparación con el inhibidor de BTK de primera generación y tiene una propiedad farmacocinética excelente en comparación con el inhibidor de BTK de segunda generación y es más seguro y eficaz.
El compuesto de la presente divulgación se puede usar para tratar varias enfermedades relacionadas con la BTK y tiene un gran valor de aplicación, en particular para el tratamiento de tumores hematológicos, tumor sólido, inflamación y enfermedad autoinmunitaria.
Breve descripción de los dibujos
La Figura 1 muestra las curvas de concentración en plasma-tiempo de ratas a las que se les administró por vía oral respectivamente el compuesto 1 y ACP-196 (20 mg/kg). Como se muestra en la figura, el compuesto 1 tiene una semivida más corta y una mayor cantidad de exposición en plasma.
La figura 2 muestra la relación dosis-efecto de la inhibición del compuesto 1 con el crecimiento del tumor trasplantado con la cepa de células de linfoma TMD-8, en donde la figura 2A muestra un cambio del volumen tumoral de cada grupo de ratones y la figura 2B muestra un cambio de peso de cada grupo de ratones. El resultado muestra que el compuesto 1 puede inhibir el crecimiento del tumor trasplantado con TMD-8 de forma dependiente de la dosis a través de administración oral.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS REALIZACIONES
Las realizaciones de la presente invención se describirán en detalle a continuación a modo de ejemplo, sin embargo, los expertos en la técnica deben entender que los siguientes ejemplos pretenden ilustrar la invención, pero no limitar el alcance de la invención. Cuando las condiciones específicas no se indiquen en los ejemplos, se llevarán a cabo de acuerdo con las condiciones convencionales o las condiciones recomendadas por el fabricante. Los reactivos o aparatos, cuyos fabricantes no se indican, son productos convencionales que están disponibles comercialmente. El compuesto de la presente divulgación se puede preparar mediante los siguientes esquemas sintéticos.
Esquema 1:
Figure imgf000016_0001
-------------------------------- W n -N
^~ ~ N B o c
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Esquema 2:
Figure imgf000017_0001
Esquema 3:
Figure imgf000018_0001
Ejemplo 1: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 1)
Etapa 1a, preparación de clorhidrato de (3-cloropirazin-2-il)metanamina (compuesto 102): Se añadió níquel Raney (4,00 g) en una solución de 3-cloropirazin-2-nitrilo (compuesto 101) (6,00 g, 43,0 mmol, 1,0 equivalente) en ácido acético (50 ml) para reaccionar en atmósfera de hidrógeno a temperatura ambiente durante 1,5 días. La solución de reacción se filtró, el filtrado se centrifugó, el restante se centrifugó con tolueno (40 ml), HCl 1 N (15 ml) y tolueno (40 ml) sucesivamente, el restante se disolvió ultrasónicamente en tetrahidrofurano (30 ml) y se filtró, la torta del filtro se centrifugó para obtener clorhidrato de (3-cloropirazin-2-il)metanamina (8,75 g, rendimiento: 100 %). Sólido de color negro; CLEM (IEN):m/z 144 [M+1]+.
Etapa 1b, preparación de (S)-2-(((3-cloropirazin-2-il)metil)carbamoil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (compuesto 104): Se añadieron trietilamina (5,58 g, 55,2 mmol, 4,0 equivalentes) y ((benciloxi)carbonil)-L-prolina (compuesto 103) (3,43 g, 13,8 mmol, 1,0 equivalente) en una solución de clorhidrato de (3-cloropirazin-2-il)metanamina (compuesto 102) (2,48 g, 13,8 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (80 ml) a 0 °C, se agitaron durante 15 minutos a 0 °C y después se añadió hexafluorofosofato de 2-(7-azobenzotriazolil)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU, 5,50 g, 14,5 mmol, 1.05 equivalentes) y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 5 minutos a una temperatura de 0 °C a temperatura ambiente. La solución de reacción se diluyó con diclorometano (200 ml) y después se lavó con una solución de cloruro de amonio (200 mlx1), una solución saturada de bicarbonato sódico (200 mlx1) y una solución acuosa saturada de sal de mesa (200 mlx1) sucesivamente, la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró, el filtrado se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol=80:1) y se obtuvo (S)-2-(((3-cloropirazin-2-il)metil)carbamoil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (2,85 g, rendimiento: 55,1%). Sustancia oleosa de color pardo claro; CLEM (IEN):m/z 375 [M+1]+.
Etapa 1c, preparación de (S)-2-(8-cloroimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (compuesto 106): A 0 °C, se añadió 1,3-dimetilimidazolidinona (compuesto 105) (2,60 g, 22,8 mmol, 3,0 equivalentes) en una solución de (S)-2-(((3-cloropirazin-2-il)metil)carbamoil)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (compuesto 104) (2,85 g, 7,6 mmol, 1,0 equivalente) en acetonitrilo (60 ml) y después se añadió lentamente gota a gota oxicloruro de fósforo (4,66 g, 30,4 mmol, 4,0 equivalentes), la solución de reacción se hizo reaccionar durante 5 minutos a 0 °C, se recuperó a temperatura ambiente y después, en una atmósfera protectora de nitrógeno, se calentó a 65 °C y se calentó a reflujo durante 2 días. La solución de reacción se vertió lentamente en agua amoniacal - agua enfriada con hielo (150 ml-300 ml), se agitó durante 15 minutos y se extrajo con acetato de etilo (300 mlx2), las fases orgánicas se combinaron y se centrifugaron, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano: metanol=500:6) y se obtuvo el (S)-2-(8-cloroimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (2,06 g, rendimiento: 76,3%). Sustancia oleosa de color pardo claro; CLEM (IEN):m/z 357 [M+1]+.
Etapa 1d, preparación de (S)-2-(1-bromo-8-cloroimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (compuesto 107): Se añadió N-bromosuccinimida (1,03 g, 5,8 mmol, 1,0 equivalente) en una solución de (S)-2-(8-cloroimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (compuesto 106) (2,06 g, 5,8 mmol, 1,0 equivalente) en N,N-dimetilformamida (24 ml) y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 3 horas a temperatura ambiente. La solución de reacción se diluyó con acetato de etilo (300 ml) y se lavó con solución acuosa de sal de mesa semisaturada (300 mlx3), la fase orgánica se mezcló con gel de sílice y se centrifugó, se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano: metanol=100:1) para obtener (S)-2-(1-bromo-8-cloroimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1 -carboxilato de bencilo (1,76 g, rendimiento: 69,6 %). Sólido de color rosa; CLEM (IEN):m/z 435 [M+1]+.
Etapa 1e, preparación de (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (compuesto 108): Se añadieron (S)-2-(1-bromo-8-cloroimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (compuesto 107) (1,76 g, 4,0 mmol, 1,0 equivalente), isopropanol (30 ml) y amoniaco (10 ml) en un tubo cerrado herméticamente, se calentaron a 110 °C y se hicieron reaccionar durante una noche en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se secó por centrifugación, el resto se disolvió en metanol y después se centrifugó, se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano: metanol=100:1) para obtener (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (1,32 g, rendimiento: 79,5 %). Sustancia espumosa de color blanco; CLEM (IEN); m/z 416 [M+1]+.
Etapa If, preparación de bromhidrato de (S)-1-bromo-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 109): Se añadieron (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de bencilo (compuesto 108) (1,32 g, 3,2 mmol, 1,0 equivalente) y una solución al 33% de ácido bromhídrico en ácido acético (12 ml) en un recipiente de reacción, se disolvió ultrasónicamente y se hizo reaccionar durante 20 minutos a temperatura ambiente. La solución de reacción se vertió en una solución de diclorometano (100 ml), en donde se precipitó un sólido, se filtró, la torta de filtración se centrifugó con metanol tres veces, después del centrifugado, se obtuvo bromhidrato de (S)-1-bromo-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (1,16 g, rendimiento: ~100%). Sólido de color pardo claro; CLEM (IEN):m/z 282 [M+1]+.
Etapa 1g, preparación de (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 110): A 0 °C, se añadió trietilamina (0,81 g, 8,0 mmol, 2,5 equivalentes) en una solución de bromhidrato de (S)-1-bromo-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 109) (1,16 g, 3,2 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (30 ml), después se añadió lentamente, gota a gota una solución de BOC anhídrido (0,72 g, 3,3 mmol, 1.05 equivalentes) en diclorometano (5 ml) y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 25 minutos a 0 °C. La solución de reacción se diluyó con diclorometano (150 ml) y se lavó con agua salada (100 mlx2), la fase orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, el filtrado se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano: metanol=80:1) para obtener (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (1,08 g, rendimiento: 88,5 %). Sustancia espumosa de color blanco; CLEM (IEN):m/z 382 [M+1]+.
Etapa 1h, preparación de (S)-2-(8-amino-1-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de fercbutilo (compuesto 301-1): Se añadieron ácido 4-benciloxibencenoborónico (0,77 g, 3,4 mmol, 1,5 equivalentes), una solución de carbonato potásico (0,95 g, 6,9 mmol, 3,0 equivalentes) en agua (12 ml) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (0,17 g, 0,23 mmol, 0,1 equivalente) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 110) (0,86 g, 2,3 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (36 ml). En una atmósfera protectora de nitrógeno, la solución de reacción se calentó a 100 °C y se sometió a reflujo durante una noche. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 60:1) para obtener (S)-2-(8-amino-1-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,95 g, rendimiento: 85,0%). Sustancia espumosa de color pardo claro; CLEM (IEN):m/z 486 [M+1]+.
Etapa 1i, preparación de (S)-1-(4-(benciloxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-1): Se añadió ácido trifluoroacético (4,0 ml) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 301-1) (0,95 g, 1,96 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (20 ml) y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La solución de reacción se vertió en una solución saturada de carbonato sódico (100 ml) y se extrajo con diclorometano (100 mlx4), la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró, el filtrado se centrifugó y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano: metanol:trietilamina = 15:1:0,05) para obtener (S)-1-(4-(benciloxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a] pirazin-8-amina (0,57 g, rendimiento: 75,4%). Sólido de color amarillo pálido; CLEM (EN);m/z 386 [M+1]+.
Etapa 1j, preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 1): A 0 °C, se añadieron trietilamina (0,22 g, 2,22 mmol, 1,5 equivalentes) y hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0,62 g, 1,63 mmol, 1,1 equivalentes) en una solución de ácido 2-butinoico (0,14 g, 1,63 mmol, 1,1 equivalentes) en diclorometano (17 ml), después se añadió una solución de (S)-1-(4-(benciloxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-1) (0,57 g, 1,48 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (20 ml) gota a gota y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 25 minutos a 0 °C. La solución de reacción se diluyó con diclorometano y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol=60:1) para obtener (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (545 mg, rendimiento: 81,3%). Sólido de color amarillo claro; c Le M (IEN):m/z 452 [M+1]+, RMN 1H (CDCla, 500 MHz): 87,75 - 7,76 (m, 1H), 7,53 - 7,57 (m, 2H), 7,28 - 7,46 (m, 5H), 7,05 - 7,10 (m, 3H), 5,42 - 5,45 (m, 1H), 5,12 (s, 2H), 5,09-5,25 (m, 2H), 3,82 - 3,91 (m, 2H), 2,30 - 2,55 (m, 3H), 2,01 - 2,04 (m, 1H), 1,97 (s, 3H).
Ejemplo 2: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 2)
Etapa 2a, preparación de 1-bromo-4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)benceno (compuesto 204-2): Se añadieron bromuro de p-(trifluorometil)bencilo (compuesto 201-2) (1,20 g, 5 mmol, 1,0 equivalente), p-bromofenol (compuesto 203-2) (0,95 g, 5,5 mmol, 1,1 equivalentes), carbonato potásico (1,38 g, 10 mmol, 2,0 equivalentes) y acetonitrilo (50 ml) en un matraz con forma de berenjena, se calentaron y se sometieron a reflujo durante 3 horas. La solución de reacción se concentró, el residuo se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo = 20:1) para obtener 1-bromo-4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)benceno (1,60 g, rendimiento: 97,0%). Sólido incoloro.
Etapa 2b, preparación de 4,4,5,5-tetrametil-2-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)-1,3,2-dioxaborolano (compuesto 206-2): Se añadieron bis(pinacolato)diboro (compuesto 205) (1,35 g, 5,30 mmol, 1,1 equivalente), acetato potásico (0,98 g, 9,60 mmol, 2,0 equivalentes) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (0,37 g, 0,50 mmol, 0,1 equivalente) en una solución de 1-bromo-4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)benceno (compuesto 204-2) (1,60 g, 4,80 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (500 ml), la solución de reacción se calentó a 100 °C y se sometió a reflujo durante una noche en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo = 20:1) para obtener 4,4,5,5-tetrametil-2-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)-1,3,2-dioxaborolano (1,32 g, rendimiento: 73%). Sólido incoloro.
Etapa 2c, preparación de (S)-2-(8-amino-1-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a] pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 301-2): Se añadieron 4,4,5,5-tetrametil-2-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)-1,3,2-dioxaborolano (compuesto 206-2) (0,119 g, 0,31 mmol, 1,5 equivalentes), una solución de carbonato potásico (0,087 g, 0,63 mmol, 3,0 equivalentes) en agua (3 ml) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (0,015 g, 0,02 mmol, 0,1 equivalente) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a] pirazin-3-il)-pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 110) (0,08 g, 0,21 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (12 ml). La solución de reacción se calentó a 100 °C y se sometió a reflujo durante una noche en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 40:1) para obtener (S)-2-(8-amino-1-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,100 g, rendimiento: 86,0 %). Sustancia espumosa de color pardo claro; CLEM (IEN):m/z 554 [M+1]+.
Etapa 2d, preparación de (S)-3-(pirrolidin-2-il)-1-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a] pirazin-8-amina) (compuesto 302-2): Se añadió ácido trifluoroacético (2,0 ml) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 301-2) (0,10 g, 0,18 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (10 ml) y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La solución de reacción se vertió en una solución saturada de carbonato sódico (100 ml) y se extrajo con diclorometano (100 mlx4), la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró, el filtrado se centrifugó y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol:trietilamina = 15:1:0,05) para obtener (S)-3-(pirrolidin-2-il)-1-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (0,065 g, rendimiento:80,0%). Sólido de color amarillo claro; CL-EM (IEN): m/z 454 [M+1]+.
Etapa 2e, preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1- il)but-2-in-1-ona (compuesto 2): A 0 °C, se añadieron trietilamina (0,021 g, 0,21 mmol, 1,5 equivalentes) y hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazolil)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0,059 g, 0,154 mmol, 1,1 equivalentes) en una solución de ácido 2-butinoico (0,013 g, 0,154 mmol, 1,1 equivalentes) en diclorometano (10 ml), y después se añadió lentamente gota a gota una solución de (S)-3-(pirrolidin-2-il)-1-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina) (compuesto 302-2) (0,065 g, 0,14 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (5 ml) y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 25 minutos a 0 °C. La solución de reacción se diluyó con diclorometano y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 20:1) para obtener (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-((4-(trifluorometil)bencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (50 mg, rendimiento: 69,0%). Sólido incoloro; CLEM (IEN): m/z 520 [M+1]+, RMN 1H (CDCla, 500 MHz): 87,78-7,77 (d, 1H), 7,67-7,65 (d, 2H), 7,58­ 7,54 (t, 4H), 7,09-7,00 (m, 3H), 5,42-5,39 (m, 1H), 5,19 (s, 2H), 5,09-5,25 (m, 2H), 3,91-3,82 (m, 2H), 2,55-2,31 (m, 3H), 2,07-2,01 (m, 1H), 2,00 (s, 3H).
Ejemplo 3: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2- in-1-ona) (compuesto 3)
Etapa 3a, preparación de 1-bromo-4-((4-fluorobencil)oxi)benceno (compuesto 204-3): Una solución de 4-bromofenol (compuesto 203-2) (0,60 g, 3,47 mmol, 1,3 equivalentes) en acetonitrilo (12 ml) se añadió en un recipiente de reacción, después se añadieron carbonato potásico (0,74 g, 5,34 mmol, 2,0 equivalentes) y bromuro 4-fluorobencilo (compuesto 201-3) (0,50 g, 2,67 mmol, 1,0 equivalente) y la solución de reacción se calentó a 80 °C y se sometió a reflujo durante 3,5 horas en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se centrifugó, el restante se disolvió en acetato de etilo (100 ml) y se lavó con agua (100 ml), la fase orgánica se mezcló con gel de sílice y se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo) para obtener 1-bromo-4-((4-fluorobencil)oxi)benceno (0,92 g, rendimiento: ~100%). Sólido de color blanco.
Etapa 3b, preparación de 2-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (compuesto 206-3): Se añadieron bis(pinacolato)diboro (205) (1,00 g, 3,93 mmol, 1,2 equivalentes), acetato potásico (0,80 g, 8,18 mmol, 2,5 equivalentes) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (0,24 g, 0,33 mmol, 0,1 equivalente) en una solución de 1-bromo-4-((4-fluorobencil)oxi)benceno (compuesto 204-3) (0,92 g, 3,27 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (30 ml). La solución de reacción se calentó a 100 °C y se sometió a reflujo durante una noche en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo = 50:1) para obtener 2-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (0,95 g, rendimiento: 88,8%). Sustancia oleosa de color amarillo pálido.
Etapa 3c: preparación de (S)-2-(8-amino-1-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 301-3):
Se añadieron 2-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)-4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolano (compuesto 206-3) (0,18 g, 0,55 mmol, 1,4 equivalentes), una solución de carbonato potásico (0,16 g, 1,17 mmol, 3,0 equivalentes) en agua (3 ml) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (0,03 g, 0,04 mmol, 0,1 equivalente) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 110) (0,15 g, 0,39 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (9 ml). La solución de reacción se calentó a 100 °C y se sometió a reflujo durante 5 horas en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 80:1) para obtener (S)-2-(8-amino-1-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato (0,21 g, rendimiento: ~100%). Sólido de color pardo claro; CLEM (IEN):m/z 504 [M+1]+.
Etapa 3d, preparación de (S)-1-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-3): Se añadió ácido trifluoroacético (2,0 ml) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 301-3) (0,21 g, 0,42 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (10 ml) y se agitó durante 50 minutos a temperatura ambiente. La solución de reacción se vertió en una solución saturada de carbonato sódico (100 ml) y se extrajo con diclorometano (100 mlx3), la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró, el filtrado se centrifugó y se purificó por cromatografía de capa fina (eluyente: diclorometano:metanol = 5:1) para obtener (S)-1-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (0,12 g, rendimiento: 70,6%). Sólido de color pardo claro; CLEM (IEN):m/z 404 [M+1]+.
Etapa 3e, preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto3): A 0 °C, se añadieron N,N-diisopropiletilamina (0,06 g, 0,45 mmol, 1,5 equivalentes) y hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazolil)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0,13 g, 0,33 mmol, 1,1 equivalentes) en una solución de ácido 2-butinoico (0,03 g, 0,33 mmol, 1,1 equivalentes) en diclorometano (5 ml), después se añadió lentamente gota a gota una solución de (S)-1-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-3) (0,12 g, 0,30 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (10 ml) y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 15 minutos a 0 °C. La solución de reacción se diluyó con diclorometano y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 30:1) para obtener un producto en bruto (95 mg), después una purificación adicional mediante cromatografía de capa fina (eluyente: diclorometano:metanol = 10:1), se obtuvo (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-((4-fluorobencil)oxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (75 mg, rendimiento: 53,6%). Sólido de color amarillo pálido; CLEM (IEN): m/z 470 [M+1]+, RMN 1H (CDCla, 500 MHz); 87,75­ 7,77 (m, 1H), 7,54-7,58 (m, 2H), 7,41-7,44 (m, 2H), 7,03-7,11 (m, 5H), 5,41-5,44 (m, 1H), 5,08 (s, 2H), 3,78-3,94 (m, 2H), 2,50-2,55 (m, 1H), 2,29-2,35 (m, 1H), 1,98-2,07 (m, 2H), 1,93 (s, 3H).
Ejemplo 4: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 5)
Etapa 4a, preparación de 2-((4-bromofenoxi)metil)piridina (compuesto 204-5): A 0 °C, a una solución de 4-bromofenol (compuesto 203-2) (1,00 g, 5,78 mmol, 1,0 equivalente) en tetrahidrofurano (30 ml), se le añadieron 2-piridinametanol (compuesto 202-5) (0,63 g, 5,78 mmol, 1,0 equivalente) y trifenilfosfina (1,67 g, 6,36 mmol, 1,1 equivalentes) en una atmósfera de nitrógeno, además se añadió azodiformiato de diisopropilo (AIAD, 1,29 g, 6,36 mmol, 1,1 equivalentes) gota a gota y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 2 horas a temperatura ambiente. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1) para obtener 2-((4-bromofenoxi)metil)piridina (compuesto 204-5) (1,87 g, 7,08 mmol, 1,0 equivalente). Sólido incoloro; CL-EM (IEN): m/z 264 [M+1]+.
Etapa 4b, preparación de 2-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina (compuesto 206-5): Se añadieron bis(pinacolato)diboro (compuesto 205) (2,16 g, 8,50 mmol, 1,2 equivalentes), acetato potásico (1,74 g, 17,70 mmol, 2,5 equivalentes) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (0,52 g, 0,71 mmol, 0,1 equivalente) en una solución de 2-((4-bromofenoxi)metil)piridina (compuesto 204-5) (1,87 g, 7,08 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (60 ml), la solución de reacción se calentó a 100 °C y se sometió a reflujo durante una noche en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo = 10:1) para obtener 2-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina (1,88 g, rendimiento: 85,5%). Sustancia oleosa de color amarillo pálido.
Etapa 4c, preparación de (S)-2-(8-amino-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato) de ferc-butilo (compuesto301-5): Se añadieron 2-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina (compuesto 206-5) (0,28 g, 0,92 mmol, 1,4 equivalentes), una solución de carbonato potásico (0,27 g, 1,95 mmol, 3,0 equivalentes) en agua (3 ml) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (0,05 g, 0,07 mmol, 0,1 equivalente) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 110) (0,25 g, 0,65 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (9 ml) y la solución de reacción se calentó a 100 °C y se sometió a reflujo durante una noche en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 30:1) para obtener (S)-2-(8-amino-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato) de ferc-butilo (0,28 g, rendimiento: 87,5 %). Sustancia espumosa de color pardo claro; CLEM (IEN): m/z 487 [M+1]+.
Etapa 4d, preparación de (S)-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-5): Se añadió ácido trifluoroacético (3,0 ml) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato) de ferc-butilo (compuesto301-5) (0,28 g, 0,58 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (10 ml) y se agitó durante 1 hora a temperatura ambiente. La solución de reacción se vertió en una solución saturada de carbonato sódico (100 ml) y se extrajo con diclorometano (100 mlx3), la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro, se filtró, el filtrado se centrifugó y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol:trietilamina = 15:1:0,1) para obtener (S)-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (0,21 g, rendimiento: 95,1%). Sustancia espumosa de color pardo claro; CLEM (IEN): m/z 387 [M+1]+.
Etapa 4e, preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 5): A 0 °C, a una solución de ácido 2-butinoico (0,05 g, 0,60 mmol, 1,1 equivalentes) en diclorometano (6 ml), se le añadieron N,N-diisopropiletilamina (0,10 g, 0,81 mmol, 1,5 equivalentes) y hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazolil)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0,23 g, 0,60 mmol, 1,1 equivalentes), después se añadió lentamente una solución de (S)-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-5) (0,21 g, 0,54 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (10 ml) gota a gota y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 15 minutos a 0 °C. La solución de reacción se diluyó con diclorometano y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 30:1) para obtener (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (223 mg, rendimiento: 92,6%). Sustancia espumosa de color pardo claro; CLEM (IEN): m/z 453 [M+1]+, RMN 1H (CDCla, 500 MHz): 88,61-8,62 (m, 1H), 7,71­ 7,75 (m, 2H), 7,52-7,57 (m, 3H), 7,23-7,30 (m, 1H), 7,04-7,12 (m, 3H), 5,42-5,45 (m, 1H), 5,27 (s, 2H), 3,68-3,89 (m, 2H), 2,51-2,54 (m, 2H), 2,31-2,32 (m, 1H), 2,03-2,05 (m, 1H), 1,97 (s, 3H).
Ejemplo 5: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-((4-fluoropiridin-2-il)metoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 6)
Etapa 5a, preparación de 2-(bromometil)-4-fluoropiridina (compuesto 201-6): Se añadieron 2-metil-4-fluoropiridina (0,4 g, 3,60 mmol, 1,0 equivalente), NBS (0,64 g, 3,60 mmol, 1,0 equivalente), AIBN (59 mg, 0,36 mmol, 0,1 equivalente) y tetraclorometano (8 ml) en un recipiente de reacción, se calentaron a 80 °C y se hicieron reaccionar durante una noche. La solución de reacción se centrifugó y después se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo = 20:1) para obtener 2-(bromometil)-4-fluoropiridina (0,152 g, rendimiento: 22%). Líquido oleoso de color amarillo pálido; CLEM (IEN): m/z 190 [M+1]+.
Etapa 5b, preparación de 2-((4-bromofenoxi)metil)-4-fluoropiridina (compuesto 204-6): Se añadieron p-bromofenol (compuesto 203-2) (0,138 g, 0,8 mmol, 1,0 equivalente), 2-(bromometil)-4-fluoropiridina (compuesto 201-6) (0,152 g, 0,8 mmol, 1,0 equivalente), carbonato potásico (0,166 g, 1,2 mmol, 1,2 equivalentes) y acetonitrilo (8 ml) en un recipiente de reacción, se calentaron a 80 °C y se hicieron reaccionar durante 1,5 horas. La solución de reacción se centrifugó y después se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo: acetato de etilo = 10:1) para obtener 2-((4-bromofenoxi)metil)-4-fluoropiridina (0,224 g, rendimiento: 99%). Sólido de color amarillo pálido; CLEM (IEN): m/z 282[M+1]+.
Etapa 5c, preparación de 4-fluoro-2-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina (compuesto 206-6): Se disolvieron 2-(4-bromofenoximetil)-4-fluoropiridina (compuesto 204-6) (0,224 g, 0,794 mmol, 1,0 equivalente) y bis(pinacolato)diboro (compuesto 205) (0,222 g, 0,874 mmol, 1,1 equivalente) en dioxano (6 ml) y después se añadieron acetato potásico (0,234 g, 2,38 mmol, 3,0 equivalentes) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (0,058 g, 0,079 mmol, 0,1 equivalente), se reemplazaron con nitrógeno tres veces y después se llevó a cabo la reacción durante una noche a 100 °C. Después de la reacción, se obtuvo un producto en bruto por concentración y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo = 10:1) para obtener 4-fluoro-2-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina (0,20 g, rendimiento: 77%). Sólido de color amarillo pálido; CLEM (IEN): m/z 330 [M+1]+.
Etapa 5d, preparación de (S)-2-(8-amino-1-(4-((4-fluoropiridin-2-il)metoxi)fenil)imidazo[1,5-a] pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 301-6): Se disolvieron (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1 -carboxilato de ferc-butilo (compuesto 110) (0,095 g, 0,248 mmol, 1,0 equivalente) y 4-fluoro-2-((4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenoxi)metil)piridina (compuesto 206-6) (0,098 g, 0,298 mmol, 1,2 equivalentes) en dioxano (6 ml) y agua (2 ml) y después, se añadieron carbonato potásico (0,103 g, 0,744 mmol, 3,0 equivalentes) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (18 mg, 0,025 mmol, 0,1 equivalente). Se reemplazó con nitrógeno tres veces y luego se llevó a cabo la reacción durante 10 horas a 100 °C. Después de la reacción, se obtuvo un producto en bruto por concentración y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo=30:1) para obtener (S)-2-(8-amino-1-(4-((4-fluoropiridin-2-il)metoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,12 g, rendimiento: 96%). Sólido de color amarillo pálido; CLEM (Ie N): m/z 505[M+1]+.
Etapa 5e, preparación de (S)-1-(4-((4-fluoropiridin-2-il)metoxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a] pirazin-8-amina (compuesto 302-6): Se disolvió (S)-2-(8-amino-1-(4-((4-fluoropiridin-2-il)metoxi)fenil)imidazo[1,5-a] pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 301-6) (0,12 g, 0,238 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (5 ml), además se añadió al mismo, ácido trifluoroacético (1 ml) y después, la reacción se llevó a cabo durante 0,5 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (50 ml) y se lavó con una solución saturada de carbonato sódico (30 mlx2) y agua saturada con sal de mesa (20 ml) sucesivamente, después la capa orgánica se mezcló con gel de sílice, se centrifugó y después se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol:trietilamina = 100:10:1) para obtener (S)-1-(4-((4-fluoropiridin-2-il)metoxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (95 mg, rendimiento: 99 %). Sólido de color amarillo pálido; CLEM (IEN): m/z 405[M+1]+.
Etapa 5f, preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-((4-fluoropiridin-2-il)metoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 6):
Se añadieron (S)-1-(4-((4-fluoropiridin-2-il)metoxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-6) (95 mg, 0,235 mmol, 1,0 equivalente), ácido 2-butinoico (22 mg, 0,258 mmol, 1,1 equivalentes), HATU (98 mg, 0,258 mmol, 1,1 equivalentes) y carbonato potásico (49 mg, 0,353 mmol, 1,5 equivalentes) en N,N-dimetilformamida (3 ml) y se hizo reaccionar durante 0,5 horas a 0 °C. La solución de reacción se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con diclorometano (30 mlx3), el extracto se secó sobre sulfato sódico anhidro, se concentró y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 20:1) para obtener (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-((4-fluoropiridin-2-il)metoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (18 mg, rendimiento: 16%). Sólido de color gris, punto de fusión: 162,3-165,1 °C. CLEM (IEN): m/z 471[M+1]+, RMN 1H (DMSO-d6, 500 MHz): 88,66-8,62 (m, 1H), 7,79-7,72 (m, 1H), 7,54-7,44 (m, 3H), 7,34-7,30 (m, 1H), 7,18 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,08­ 7,03 (m, 1H), 6,03-5,97 (m, 2H), 5,69-5,43 (m, 1H), 5,27 (s, 2H), 3,82-3,79 (m, 1H), 3,58-3,55 (m, 1H), 2,40-2,08 (m, 3H), 2,03-1,94 (m, 4H).
Ejemplo 6: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(6-(benciloxi)piridin-3-il)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 9)
Etapa 6a, preparación de 2-(benciloxi)-5-bromopiridina (compuesto204-9): Se añadió alcohol bencílico (2,59 g, 24,0 mmol, 1,2 equivalentes) en N,N-dimetilformamida (30 ml), solución de hidruro sódico (1,04 g, 26,0 mmol, 1,3 equivalentes) a 0 °C, la mezcla se agitó durante 1 hora a 0 °C, además se añadió 2,5-dibromopiridina (4,74 g, 20 mmol, 1,0 equivalente), y la solución de reacción se hizo reaccionar durante una noche a temperatura ambiente. La solución de reacción se diluyó con acetato de etilo (300 ml) y se lavó con una solución semisaturada de sal de mesa (300 mlx4), la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró. El filtrado se centrifugó tres veces con éter de petróleo, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo:acetato de etilo = 200:1) para obtener 2-(benciloxi)-5-bromopiridina (3,76 g, rendimiento: 71,2%). Sustancia oleosa incolora; CLEM (IEN): m/z 264 [M+1]+.
Etapa 6b, preparación de 2-(benciloxi)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridina (compuesto 206-9): Se añadieron bis(pinacolato)diboro (compuesto 205) (4,34 g, 17,1 mmol, 1,2 equivalentes), acetato potásico (3,48 g, 35,5 mmol, 2,5 equivalentes) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (1,16 g, 1,4 mmol, 0,1 equivalente) en una solución de 1,4-dioxano (50 ml) de 2-(benciloxi)-5-bromopiridina (compuesto 204-9) (3,67 g, 14,2 mmol, 1,0 equivalente) y la solución de reacción se calentó a 100 °C y se sometió a reflujo durante una noche en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: éter de petróleo:diclorometano = 2:1) para obtener 2-(benciloxi)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridina (2,63 g, rendimiento: 59,5%). Sólido de color blanco; CLEM (IEN): m/z 312 [M+1]+.
Etapa 6c, preparación de (S)-2-(8-amino-1-(6-(benciloxi)piridin-3-ilimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 301-9): Se añadieron 2-(benciloxi)-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)piridina (compuesto 206-9) (0,41 g, 1,31 mmol, 2,0 equivalentes), una solución de carbonato potásico (0,27 g, 1,95 mmol, 3,0 equivalentes) en agua (3 ml) y [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II) (0,05 g, 0,07 mmol, 0,1 equivalente) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 110) (0,25 g, 0,65 mmol, 1,0 equivalente) en 1,4-dioxano (9 ml), la solución de reacción se calentó a 100 °C y se sometió a reflujo durante 4 horas en una atmósfera protectora de nitrógeno. La solución de reacción se centrifugó, el restante se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 50:1) para obtener (S)-2-(8-amino-1-(6-(benciloxi)piridin-3-il)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (0,25 g, rendimiento: 79,1%). Sustancia espumosa de color pardo claro; CLEM (IEN): m/z 487 [M+1]+.
Etapa 6d, preparación de (S)-1-(6-(benciloxi)piridin-3-il)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-9): Se añadió ácido trifluoroacético (3,0 ml) en una solución de (S)-2-(8-amino-1-(6-(benciloxi)piridin-3-il)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de ferc-butilo (compuesto 301-9) (0,25 g, 0,51 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (10 ml) y se agitó durante 50 minutos a temperatura ambiente. La solución de reacción se vertió en una solución saturada de carbonato sódico (100 ml) y se extrajo con diclorometano (100 mlx3), la fase orgánica se secó sobre sulfato sódico anhidro y se filtró, el filtrado se centrifugó y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol:trietilamina = 15:1:0,05) para obtener un producto en bruto (0,15 g), el producto en bruto se purificó por cromatografía (eluyente: diclorometano:metanol = 5:1) para obtener (S)-1-(6-(benciloxi)piridin-3-il)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (0,14 g, rendimiento: 71,1%). Sólido de color blanco; CLEM (IEN): m/z 387 [M+1]+.
Etapa 6e, preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(6-(benciloxi)piridin-3 -il)imidazo [1,5 -a] pirazin-3 -il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 9): A 0 °C, a una solución de ácido 2-butinoico (0,034 g, 0,40 mmol, 1,1 equivalentes) en diclorometano (4 ml), se le añadieron N,N-diisopropiletilamina (0,07 g, 0,54 mmol, 1,5 equivalentes) y hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazolil)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0,15 g, 0,40 mmol, 1,1 equivalentes), y después, se añadió lentamente una solución de (S)-1-(6-(benciloxi)piridin-3-il)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-9) (0,14 g, 0,36 mmol, 1,0 equivalente) en diclorometano (11 ml) gota a gota, y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 15 minutos a 0 °C. La solución de reacción se diluyó con diclorometano y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 30:1) para obtener (S)-1-(2-(8-amino-1-(6-(benciloxi)piridin-3 -il)imidazo [1,5-a]pirazin-3 -il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (140 mg, rendimiento: 85,9%). Sólido de color blanco; CLEM (IEN): m/z 453 [M+1]+; RMN 1H (CDCla, 500 MHz): 88,42-8,43 (m, 1H), 7,77-7,89 (m, 2H), 7,33­ 7,49 (m, 5H), 6,91-7,13 (m, 2H), 5,42-5,46 (m, 3H), 3,68-3,90 (m, 2H), 2,01-2,53 (m, 4H), 1,97(s, 3H)+
Ejemplo 7: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-fenetoxifenil)imidazo [1,5 -a]pirazin-3 -il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 17)
Etapa 7a, preparación de 4,4,5,5-tetrametil-2-(4-fenetoxifenil)-1,3,2-dioxaborolano (compuesto 206-17): Se añadieron 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-il)fenol (1,1 g, 5,0 mmol, 1,0 equivalente), feniletanol (compuesto 202-17) (0,6 g, 5,0 mmol, 1,0 equivalente), trifenilfosfina (3,93 g, 15,0 mmol, 3,0 equivalentes) y diisopropil azodicarboxilato (2,87 g, 16,5mol, 3,5 equivalentes) en un recipiente de reacción y se hizo reaccionar durante 4 horas a temperatura ambiente. La solución de reacción se diluyó con diclorometano (50 ml) y se lavó con solución acuosa semisaturada de sal de mesa (50mlx3), la fase orgánica se mezcló con gel de sílice, se centrifugó y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:n-hexano = 1:2) para obtener 4,4,5,5-tetrametil-2-(4-fenetoxifenil)-1,3,2-dioxaborolano (0,9 g, rendimiento: 56,2%). Sólido de color rosa; CLEM (IEN): m/z 326[M+1]+.
Etapa 7b, preparación de 2-(8-amino-1-(4-fenetoxifenil)imidazo [1,5 -a]pirazin-3 -il)pirrolidin-1-carboxilato de (S)-fercbutilo (compuesto 301-17): Se añadieron (S)-ferc-butil-2-(8-amino-1-bromoimidazo[1,5 -a]pirazin-3 -il)pirrolidin-1-carboxilato (compuesto 110) (0,58 g, 1,5 mmol, 1,0 equivalente), 4,4,5,5-tetrametil-2-(4-fenetoxifenil)-1,3,2-dioxaborolano (compuesto 206-17) (0,58 g, 1,8 mmol, 1,2 equivalentes), tetraquis(trifenilfosfina)paladio (0,17 g, 0,15 mmol, 0,1 equivalente), carbonato sódico (0,32 g, 3 mol, 2,0 equivalentes), 1,4-dioxano (10 ml) y agua (3 ml) en un recipiente de reacción y se hizo reaccionar durante una noche en un baño de aceite a 80 °C. La solución de reacción se diluyó con diclorometano (100 ml) y se lavó con una solución acuosa saturada de sal de mesa (50 mlx3), la fase orgánica se centrifugó y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: acetato de etilo:ciclohexano = 2:1) para obtener 2-(8-amino-1-(4-fenetoxifenil)imidazo [1,5 -a]pirazin-3 -il)pirrolidin-1-carboxilato de (S)-ferc-butilo (0,6 g, rendimiento: 80,0%). Sólido de color amarillo pálido; CLEM (IEN): m/z 500[M+1]+.
Etapa 7c, preparación de (S)-1-(4-fenetoxifenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-17): Se añadieron 2-(8-amino-1-(4-fenetoxifenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-carboxilato de (S)-ferc-butilo (compuesto 301-17) (0,6 g, 1,2 mmol, 1,0 equivalente), ácido trifluoroacético (15 ml) y diclorometano (20 ml) en un recipiente de reacción y se hizo reaccionar durante 1 hora a temperatura ambiente. La solución de reacción se diluyó con diclorometano (100 ml), el valor de pH se reguló para que fuera ligeramente alcalino con bicarbonato sódico saturado, la fase orgánica se centrifugó, después de la purificación por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 10:1), se obtuvo (S)-1-(4-fenetoxifenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (0,4 g, rendimiento: 83,3%). Sólido de color amarillo; CL-EM (IEN): m/z 500[M+1]+.
Etapa 7d, preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-fenetoxifenil)imidazo[1, 5-a]pirazin-3 -il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (compuesto 17): Se añadieron (S)-1-(4-fenetoxifenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302­ 17) (0,40 g, 1,0 mmol, 1,0 equivalente), ácido propiólico (0,084 g, 1,0 mmol, 1,0 equivalente), HATU (0,46 g, 1,2mol, 1,2 equivalentes), DIEA(0,26 g, 2,0 mmol, 2,0 equivalentes) y diclorometano(10 ml) en un recipiente de reacción y se hizo reaccionar durante 15 minutos en un baño de agua enfriada con hielo. La solución de reacción se procesó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 20: 1) para obtener (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-fenetoxifenil)imidazo [1,5-a]pirazin-3 -il)pirrolidin-1-il)but-2-in-1-ona (200 mg, rendimiento: 43%). Sólido de color casi blanco, punto de fusión: 91-93 °C. CLEM (IEN): m/z 466 [M+1]+, RMN 1H (DMSO-d6, 600 MHz): 87,76 (d, J = 5 Hz, 1H), 87,71 (d, J = 5 Hz, 1H), 87,46 (m, 5H), 7,33 (m,10H), 7,22 (t, J = 7 Hz, 2H), 7,05 (m, 6H), 7,02 (d, J = 5 Hz,1H), 5,90 (m, 5H), 5,65 (s, 1H), 5,42 (s, 1H), 4,25 (m, 5H), 3,77 (m, 3H), 3,06 (m, 5H), 2,00 (s, 5H), 1,62 (s, 3H).
Ejemplo 8: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (compuesto 21)
Se disolvió (S)-1-(4-(benciloxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-1) (161 mg, 0,418 mmol, 1,0 equivalente) en tetrahidrofurano (10 ml) y se enfrió a 0 °C mediante un baño de agua enfriada con hielo. Se añadió gota a gota cloruro de acriloílo (35 mg, 0,418 mmol, 1,0 equivalente) disuelto en tetrahidrofurano (5 ml), después la reacción se realizó durante 10 minutos a 0 °C. Después de que la reacción se completase, la mezcla de reacción se concentró para dar un producto en bruto, el cual se procesó mediante cromatografía de capa fina (diclorometano:metanol = 30:1) para obtener (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(benciloxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1- il)prop-2-en-1-ona (35 mg, rendimiento: 19%). Sólido de color blanco, punto de fusión: 100,2-103,1 °C. ClEm (IEN): m/z 440[M+1]+, RMN 1H (CDCla, 500 MHz): 07,79 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,55-7,52 (m, 2H), 7,46-7,26 (m, 5H), 7,08-7,06 (m, 3H), 6,49-6,43 (m, 1H), 6,35-6,31 (m, 1H), 5,69-5,66 (m, 1H), 5,49-5,33 (m, 2H), 5,12 (s, 2H), 3,92-3,87 (m, 1H), 3,76-3,70 (m, 1H), 2,69-2,61 (m, 1H), 2,50-2,43 (m, 1H), 2,35-1,98 (m, 3H).
Ejemplo 9: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(6-(benciloxi)piridin-3-il)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (compuesto 25)
A 0 °C, a una solución de ácido crílico (0,04 g, 0,59 mmol, 1,1 equivalentes) en N,N-dimetilformamida (5 ml), se le añadieron 4-dimetilaminopiridina (0,18 g, 1,47 mmol, 3,0 equivalentes) y clorhidrato de 1-etil-(3-dimetillaminopropil)carbodina (0,14 g, 0,74 mmol, 1,5 equivalentes), después, además se añadió lentamente una solución de (S)-1-(6-(benciloxi)piridin-3-il)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-9) (0,19 g, 0,49 mmol, 1,0 equivalente) en N,N-dimetilformamida (7 ml) gota a gota, la solución de reacción se hizo reaccionar durante 15 minutos a 0 °C, se añadió además la solución de N,N-dimetilformamida (8 ml), y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 7 horas a temperatura ambiente. La solución de reacción se diluyó con acetato de etilo (200 ml) y se lavó con solución acuosa de sal de mesa semisaturada (200 mlx3), la fase orgánica se lavó con una solución al 2% de ácido acético (100 mlx1), una solución saturada de bicarbonato sódico (100 mlx1) y una solución acuosa saturada de sal de mesan (100 mlx1) sucesivamente, la fase acuosa se reguló a pH“ 7 y se extrajo con acetato de etilo (100 mlx1), la fase orgánica resultante se lavó con una solución saturada de bicarbonato sódico (100 mlx1), las fases orgánicas se combinaron, se centrifugaron, se recristalizaron con metanol y se purificó además por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 20:1) para obtener un producto en bruto (30 g), el cual se purificó más por cromatografía en capa fina (diclorometano:metanol = 10:1) para obtener (S)-1-(2-(8-amino-1-(6-(benciloxi)piridin-3-il)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (23 mg, rendimiento: 10,7 %). Sólido de color blanco; CLEM (IEN): m/z 441 [M+1]+, RMN 1H (CDCla, 500 MHz): 88,42-8,43 (m, 1H), 7,81-7,88 (m, 2H), 7,33-7,49 (m, 5H), 7,11-7,12 (m, 1H), 6,91-6,93 (m, 1H), 6,31-6,50 (m, 2H), 5,67-5,70 (dd, 1H), 5,47-5,50 (m, 1H), 5,10-5,43 (m, 4H), 3,88-3,92 (m, 1H), 3,73-3,75 (m, 1H), 2,42-2,45 (m, 1H), 2,29-2,34 (m, 1H), 1,99-2,14 (m, 2H).
Ejemplo 10: Preparación de (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)prop-2- en-1-ona (compuesto 29)
A 0 °C, a una solución de ácido crílico (0,03 g, 0,48 mmol, 1,1 equivalentes) en diclorometano (10 ml), se le añadieron N,N-diisopropiletilamina (0,11 g, 0,66 mmol, 1,5 equivalentes) y hexafluorofosfato de 2-(7-azobenzotriazolil)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (0,18 g, 0,48 mmol, 1,1 equivalentes), además se añadió lentamente gota a gota una solución de (S)-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)-3-(pirrolidin-2-il)imidazo[1,5-a]pirazin-8-amina (compuesto 302-5) (0,17 g, 0,44 mmol, 1,0 equivalente) en mezcla de diclorometano (20 ml) y tetrahidrofurano (10 ml) y la solución de reacción se hizo reaccionar durante 15 minutos a 0 °C. La solución de reacción se diluyó con diclorometano y se purificó por cromatografía en columna (eluyente: diclorometano:metanol = 20:1) para conseguir un producto en bruto (90 mg), el cual se purificó adicionalmente por cromatografía de capa fina (diclorometano:metanol = 8:1) para obtener (S)-1-(2-(8-amino-1-(4-(piridin-2-ilmetoxi)fenil)imidazo[1,5-a]pirazin-3-il)pirrolidin-1-il)prop-2-en-1-ona (60 mg, rendimiento: 30,9%). Sólido de color amarillo claro; CLEM (IEN): m/z 441 [M+1] , RMN 1H (CDCla, 500 MHz): 88,61-8,62 (m, 1H), 7,71-7,79 (m, 2H), 7,47-7,55 (m, 3H), 7,23-7,25 (m, 1H), 7,05-7,11 (m, 3H), 6,31-6,50 (m, 2H), 5,66-5,69 (dd, 1H), 5,46-5,49 (m, 1H), 5,30 (s, 4H), 3,88-3,91 (m, 1H), 3,70-3,76 (m, 1H), 2,61-2,66 (m, 1H), 2,44-2,48 (m,1H), 2,05-2,14 (m, 2H).
De acuerdo con los métodos de preparación de los Ejemplos 1-10, se sintetizaron adicionalmente los siguientes compuestos:
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Ejemplo 11: Prueba de bioactividad
I. Ensayo de inhibición de la actividad de la quinasa BTK
1. Método de ensayo
La actividad de la proteína quinasa BTK se analizó mediante el ensayo de cambio de movilidad Caliper (en referencia a J Biomol Screen 14:31, 2009). El compuesto de la presente divulgación se disolvió en DMSO y luego se diluyó 10 veces con solución tampón de quinasa (HEPES 50 mM, pH 7,5, Brij-35 al 0,0015 %, MgCb 10 mM, DTT 2 mM). Se añadieron 5 pl de DMSO al 10 % con una concentración de reacción final 5 veces mayor del compuesto disuelto en una placa de 384 pocillos y a un pocillo de control sin el compuesto y a un pocillo de control sin actividad quinasa se añadieron respectivamente 5 pl de DMSO al 10 %. Se añadieron 10 pl de solución de quinasa BTK (BTK, n.° cat. 08­ 080, Carna) con una concentración de reacción final de 2,5 veces y se mezcló con el compuesto y luego se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente, en donde al pocillo de control sin actividad quinasa se le añadieron 10 pl de solución tampón de quinasa. Se añadieron además 10 pl de una solución de sustrato de un péptido SRCtide sustrato marcado con FAM (Biochem, n.° de catálogo 112394) y ATP (90 pM) con una concentración de reacción final de 2,5 veces para iniciar la reacción. Luego se realizó la incubación durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de una incubación de 1 hora a 28 °C, se añadieron 25 pl de solución de parada (HEPES 100 mM, pH 7,5, Brij-35 al 0,015 %, reactivo de recubrimiento n.° 3 al 0,2 %, EDTA 50 mM) para terminar la reacción. Los datos de la relación de conversión se leyeron en Caliper EZ Reader II (Caliper Life Sciences). Se calculó el índice de inhibición y la fórmula de cálculo es: inhibición
proporción %=(máx-conversión)/(máx-mín.)x100 %
2. Resultados del ensayo
El compuesto de la presente divulgación puede inhibir fuertemente la actividad de BTK. Las actividades de los compuestos representativos de la presente divulgación presentados en las pruebas de BTK se enumeran en la Tabla 1. En estas pruebas, se utilizan los siguientes niveles: con respecto a la CI50, I > 750 nM, 750 nM > II > 300 nM, 300 nM > III > 100 nM, IV < 100 nM
Tabla 1 Resultados de la inhibición de la actividad de la cinasa
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II. Ensayo de inhibición de EGFR no específico de quinasa, Tec, Txk y ITK
1. Método de ensayo
(1) Ensayo de inhibición de la actividad de EGFR
En el caso de Km ATP, la actividad de la proteína quinasa EGFR T790M/L858R se analizó mediante el ensayo de cambio de movilidad Caliper (en referencia a J Biomol Screen 14:31, 2009).
Método de ensayo: el compuesto a analizar se disolvió en DMSO y luego se diluyó con una solución tampón de quinasa (HEPES 50 mM-pH7.5, Brij-35 al 0,0015 %, MgCb 10 mM, DTT 2 mM). Se añadieron 5 pl de DMSO al 10 % con una concentración de reacción final de 5 veces del compuesto disuelto en una placa de 384 pocillos, a un pocillo de control sin el compuesto se le añadieron 5 pl de DMSO al 10 % y a un pocillo de control sin actividad quinasa se le añadieron 5 pl de la solución tampón de quinasa. Después de añadir 10 pl de EGFR diluido 2,5 veces (Cama, n.° cat. 08-115, Lote 13-CBS-0005M) solución de cinasa, la incubación se realizó durante 10 minutos a temperatura ambiente y 10 pl de solución de sustrato diluida 2,5 veces Peptide FAM-P22 (GL Biochem, N.° de Cat. 112393, Lote n.° P130408-ZB112393) también se añadió. Después de incubar durante 60 minutos a 28 °C, se añadieron 25 pl de solución de parada (HEPES 100 mM, pH 7,5, Brij-35 al 0,015 %, reactivo de recubrimiento n.° 3 al 0,2 %, Ed TA 50 m) para terminar la reacción. Los datos de la relación de conversión se leyeron en Caliper EZ Reader II (Caliper Life Sciences). La relación de conversión se convirtió en los datos de la relación de inhibición.
Se trazó una curva con la concentración del compuesto y la relación de inhibición como los valores de abscisas y ordenadas. Se utilizó el software XLFit excel add-in versión 4.3.1 para ajustar la curva y calcular la CI50. Relación de inhibición %=(relación máx-conversión)/(máx-mín)x100, en donde máx se refiere a la relación de conversión del pocillo de control en el que el compuesto está ausente en DMSO y mín se refiere a la relación de conversión del pocillo de control sin actividad quinasa.
(2) Ensayo de inhibición de actividades Tec, Txk e ITK
Las actividades inhibitorias del compuesto a Tec, Txk e ITK de ser humano fueron realizadas por Eurofins Pharma Discovery Services UK Limited (UK) del Reino Unido. En el caso de Km ATP, la prueba adoptó el método de la proteína quinasa radiactiva. La quinasa se diluyó con solución tampón (MOPS 20 mM, EDTA 1 mM, Brij-35 al 0,01 %, glicerol al 5 %, 6-mercaptoetanol al 0,1 %, 1 mg/ml de BSA) antes de la reacción. El compuesto se disolvió en DMSO al 100 % y tenía una concentración de reacción final de 50 veces.
La solución de reacción ITK incluía MOPS 8 mM pH 7,0, EDTA 0,2 mM, 0,33 mg/ml de proteína básica de mielina, acetato de magnesio 10 mM y se añadió [y-33P]-ATP (aproximadamente 500 cpm/pmol), ATP-Mg 200 pM, después de mezclar, se inició la reacción, la incubación se realizó durante 40 minutos a temperatura ambiente y se añadió solución de ácido fosfórico al 3 % para terminar la reacción. Se colocaron 10 pl (solución de reacción) en una membrana de filtración P30, se lavaron con ácido fosfórico 75 mM durante 5 minutos, se secaron con metanol una vez y luego se realizó el recuento por centelleo.
La solución de reacción Tex de tipo activo contenía MOPS 8 mM pH 7,0, EDTA 0,2 mM, Na3VO4 1 mM, Na-6.fosfoglicerol 5 mM, EFPIYDFLPAKKK 400 pM, acetato de magnesio 10 mM y [y-33P]-ATP (aproximadamente 500 cpm/pmol), se añadió ATP-Mg 120 pM, después de mezclar, se inició la reacción, la incubación se realizó durante 40 minutos a temperatura ambiente y se añadió solución de ácido fosfórico al 3 % para terminar la reacción. Se colocaron 10 pl (solución de reacción) en una membrana de filtración P30, se lavaron con ácido fosfórico 75 mM durante 5 minutos, se secaron con metanol una vez y luego se realizó el recuento por centelleo.
La solución de reacción TxK incluía MOPS 8 mM pH 7,0, EDTA 0,2 mM, GEEPLYWSFPAKKK 250 j M, acetato de magnesio 10 mM y [y-33P]-ATP (aproximadamente 500 cpm/pmol), se añadió ATP-Mg 200 j M, después de mezclar, se inició la reacción, la incubación se realizó durante 40 minutos a temperatura ambiente y se añadió solución de ácido fosfórico al 3 % para terminar la reacción. Se colocaron 10 j l (solución de reacción) en una membrana de filtración P30, se lavaron con ácido fosfórico 75 mM durante 5 minutos, se secaron con metanol una vez y luego se realizó el recuento por centelleo.
2. Resultados del ensayo
Las actividades inhibitorias de los compuestos para EGFR se muestran en la Tabla 2. El inhibidor de BTK de primera generación Ibrutinib es un inhibidor de EGFR con una actividad muy alta, ibrutinib inhibe el EGFR de tipo salvaje de forma no selectiva, en relación con que este medicamento causa efectos secundarios en el canal alimentario del cuerpo humano, pápula de la piel y similares. El inhibidor de EGFR de segunda generación ACP-196 no tiene efecto en la fosforilación de EGFR en el locus Y1068 y el locus Y1173, por lo tanto, no hay un efecto inhibitorio significativo para EGFR cuando está en alta concentración. Al igual que ACP-196, el compuesto 1 no inhibe el EGFR y la posibilidad de causar efectos tóxicos y secundarios relacionados con la inhibición del EGFR es muy baja.
Tabla 2 Actividades inhibidoras de los^ com uestos para EGFR
Figure imgf000030_0002
Las actividades inhibitorias del compuesto 1 y ACP-196 a Itk, Tec y Txk se muestran en la Tabla 3. El inhibidor de BTK de primera generación ibrutinib no es específico para la inhibición de BTK, excepto porque tiene un efecto inhibidor de EGFR, el inhibidor de BTK de primera generación puede inhibir aún más las actividades de quinasas como ITK, Tec y Txk (Byrd JC et al. N Engl J Med 374: 323, 2016). El inhibidor de BTK de segunda generación ACP-196 no tiene un efecto inhibidor significativo para ITK, Tec y Txk, puede bloquear la vía BTK de forma no selectiva, pero no puede destruir la vía de la molécula clave que mantiene las plaquetas sanguíneas y la función inmunológica, evitando o reduciendo así algunos efectos adversos relacionados con el tratamiento del cáncer. De manera similar a ACP-196, las actividades inhibidoras del compuesto 1 a ITK, Tec y Txk son muy bajas.
Tabla 3 Actividades inhibitorias del com uesto 1 ACP-196 a^ ITK, Tec y Txk
Figure imgf000030_0001
III. Ensayo de inhibición de la proliferación de células tumorales
1. Método de ensayo
La viabilidad celular se evaluó midiendo el contenido de trifosadenina (ATP) utilizando el método del kit de ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo (Promega, #G7572, Madison, WI). La cepa de células de linfoma de linfocitos B grandes difusos TMD-8 y las cepas de células de CPNM HCC827 se adquieren en Shanghai Fudan IBS Cell Center y la Colección Americana de Cultivos Tipo (ATCC). Después de que las células fueran digeridas de una placa de cultivo celular con pancreatina y resuspendidas con medio de cultivo DPBS, se usó un contador celular automático Sceptre (Millipore, #PHCC00000) para contar y medir la densidad celular. Las células se diluyeron para formar una solución que contenía 44.000 células por mililitro. La solución de células con la densidad ajustada se añadió a una placa de ensayo de células con 90 j l por pocillo. La placa de pocillos se colocó en una incubadora con 5 % de CO2 a 37 °C para ser incubado durante 24 horas y luego se añadió el compuesto a ensayar con diferentes concentraciones. Las células y el compuesto se incubaron juntos durante 72 horas en presencia de suero de ternera fetal al 10 %. El contenido de ATP se midió utilizando el kit de ensayo de viabilidad celular luminiscente Cel lTiter-Gl o® (refiriéndose a las instrucciones del fabricante) para evaluar la inhibición del crecimiento celular. En términos breves, a cada pocillo se le añadieron 30 j l de reactivo CellTiter-Glo®, la placa se agitó durante 10 minutos para inducir la lisis de las células y la señal de fluorescencia se detectó y registró mediante un analizador de fluorescencia/quimioluminiscencia Fluoroskan Ascent FL (Thermo Scientific Fluoroskan Ascent FL). El valor máximo de la señal se obtuvo a partir de células procesadas con dimetilsulfóxido (DMSO) durante 72 o 120 horas. El valor de señal mínimo obtenido del medio de cultivo separado (en el que el número de células era cero) se definió como 0. Relación de inhibición %=(valor de señal máximo-valor de señal del compuesto)/(valor de señal máximo-valor de señal mínimo)x 100 %. Los datos se procesaron utilizando el software GraphPad Prism V5.0 (GraphPad Software, San Diego, CA). El valor de la CI50 se ajustó y calculó a través de una curva dosis-respuesta en forma de S.
2. Resultados del ensayo
Las actividades antiproliferativas de los compuestos de la presente divulgación en la prueba basada en células se enumeran en la Tabla 4. En estas pruebas, se utilizan los siguientes niveles: con respecto a la CI50, I > 10 j M, 10 j M > II > 1 j M, 1 j M > III > 0,5 j M, 0,5 j M > IV > 0,1 j M y V < 0,1 j M. Los compuestos de la presente divulgación tienen actividades antiproliferativas muy fuertes para células tumorales tales como TMD-8 mientras que tienen actividades más débiles o ninguna actividad para células de CPNMC HCC827. La cepa celular HCC827 lleva el exón 19 del EGFR y es sensible al inhibidor de EGFR. Los resultados del ensayo muestran que los compuestos de la presente divulgación tienen buena selectividad.
Figure imgf000031_0002
IV. Ensayo de farmacocinética (PK)
1. Método de ensayo
Una rata SD macho con 250-300 g de peso se dejó en ayunas durante la noche antes del ensayo. El compuesto a ensayar se disolvió en éter de sulfobutilo-p-ciclodextrina al 30 % (SBE-p-CD) y se administró por vía intragástrica a la rata en dosis de 20 mg/kg. Tomar sangre a los 15 minutos, 30 minutos y 1, 2, 3, 4, 6, 8 y 24 horas después de la administración, y se extrajeron aproximadamente 0,3 ml de sangre en cada punto de tiempo. Las muestras de sangre se colocaron en tubos de centrífuga que contenían K2-EDTA (etilendiaminotetraacetato dipotásico) y el plasma se tomó mediante tratamiento centrífugo (2000 g, 10 minutos, 4 °C) y se almacenó en un refrigerador a temperatura ultrabaja de -80 °C. Se mezclaron 50 j l de muestra de plasma con 50 j l de patrón interno (IS) y se extrajo con acetato de etilo. Después de secado al vacío, el residuo se disolvió de nuevo en acetonitrilo. La muestra se filtró y se inyectó en LC-MS/MS para ser analizada.
2. Resultados del ensayo
La Figura 1 muestra las curvas de concentración en plasma-tiempo de ratas a las que se les administró respectivamente por vía oral el compuesto 1 y ACP-196 (20 mg/kg). La Tabla 5 muestra los parámetros farmacocinéticos del compuesto 1 y ACP-196 en los cuerpos de las ratas.
Como se muestra en la figura 1 y en la Tabla 5, la semivida del compuesto 1 en el cuerpo de la rata es de 4,2 horas, la semivida del ACP-196 es de 7,9 horas, mientras la Cmáx y el AUC del compuesto 1 es más del doble que el de ACP-196. El compuesto 1 ha sido bien adsorbido en el cuerpo de la rata y tiene una alta cantidad de exposición en plasma. ACP-196, como un inhibidor irreversible de BTK, es más seguro y eficaz que el inhibidor de BTK de primera generación Ibrutinib, que se cree que está relacionado con la corta semivida y la alta cantidad de exposición plasmática de ACP-196, excepto por la alta selectividad de ACP-196 a BTK (Byrd JC et al. N Engl J Med 374: 323, 2016). El compuesto 1 tiene una semivida más corta y una mayor cantidad de exposición en plasma en comparación con ACP-196 y, por lo tanto, es posiblemente más seguro y eficaz.
Tabla 5 Parámetros farmacocinéticos del compuesto 1 y ACP-196 en el cuerpo de las ratas (20 mg/kg de administración oral
Figure imgf000031_0001
V. Ensayo farmacodinámico del modelo tumoral
1. Método de ensayo
En el presente ensayo se estudió la relación dosis-efecto de la inhibición del compuesto con el crecimiento tumoral en un modelo de tumor trasplantado TMD-8 de la cepa de células de linterna de linfocitos B grandes difusos. Cuando el volumen del tumor TMD-8 alcanzó alrededor de los 200 mm3, los animales se dividieron en cuatro grupos de administración oral, es decir, grupo de control de vehículo y grupos de administración oral de 50 mg/kg, 100 mg/kg y 200 mg/kg del compuesto 1 (n=8/grupo). El compuesto 1 se disolvió en éter de sulfobutilo-p-ciclodextrina al 30 % (SBE-p-CD) y 1,0 mol equivalente de ácido clorhídrico (pH 3-4) y se administró por vía intragástrica a razón de 10 ml/kg una vez al día continuamente durante 21 días.
Se midió el volumen del tumor y se calcularon el volumen tumoral relativo (VTR) y la proporción aumentada del volumen tumoral relativo. VTR = Vt/V0 , en donde Vt es el valor promedio del volumen del tumor el t° día siguiente al de la agrupación y administración, y V0 es el valor promedio del volumen del tumor el día de la agrupación. T/C=grupo de tratamiento VTR/grupo control VTRx100 %.
2. Resultados del ensayo
Después de administrar al grupo vehículo durante 18 días, el ensayo se detuvo porque el volumen del tumor excedía los 3000 mm3. La figura 2 muestra la relación dosis-respuesta de la inhibición del compuesto 1 con el crecimiento del tumor trasplantado con la cepa de células de linfoma TMD-8, en donde la figura 2A muestra el cambio del volumen tumoral de cada grupo de ratones y la figura 2B muestra el cambio de peso de cada grupo de ratones. Como se muestra en las figuras, después de administrar el compuesto 1 durante 18 días, la administración de una dosis de 50 mg/kg puede inhibir levemente el crecimiento del tumor (T/C es 71 %, p<0,05); la administración de dosis de 100 mg/kg puede detener el crecimiento del tumor (T/Cis 7 %, p<0,001) y la administración de dosis de 200 mg/kg puede hacer que el tumor desaparezca sustancialmente (T/Cis -91 %, P<0,001). El peso del animal de cada grupo de administración aumentó en comparación con el de antes de la administración. Los pesos aumentaron de forma más evidente en el grupo de vehículo y en el grupo de dosis baja, lo que puede ser relevante para el rápido crecimiento del tumor. El resultado muestra que el compuesto 1 puede inhibir el crecimiento del tumor trasplantado con TMD-8 de forma dependiente de la dosis a través de administración oral.

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto que tiene una estructura como la representada por la fórmula (I), una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o un estereoisómero del mismo:
    Figure imgf000033_0001
    en donde,
    A se selecciona entre CH o N; preferentemente, A es CH;
    n es 0, 1,2 o 3;
    R1 se selecciona entre siguientes grupos:
    Figure imgf000033_0002
    en donde cada uno de R3 y R4 se selecciona independientemente entre H y alquilo C1-C6 ;
    R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C6 , alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con amino, alquilo C1-C4 sustituido con alquilamino C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con di(alquil C1-C3)amino y alquilo C1-C4 sustituido con un grupo heterocíclico;
    cada uno de X1, X2 , X3 y X4 se selecciona independientemente entre C(R2) y N;
    R2 se selecciona entre el grupo que consiste en H, átomo de halógeno, alquilo C1-C6 , alcoxi C1-C6 y alquilo C1-C6 halogenado;
    cada uno de W e Y se selecciona independientemente entre el grupo que consiste en O, N(R6), S y alquileno C1-C6 al menos uno de W e Y se selecciona entre alquileno C1-C6 ;
    R6 se selecciona entre H o alquilo C1-C6 ; y
    Ar se selecciona entre fenilo o heteroarilo de 5-6 miembros, preferentemente, heteroarilo que contiene nitrógeno de 5 a 6 miembros, opcionalmente, el fenilo o el heteroarilo de 5 a 6 miembros está sustituido con un grupo seleccionado entre un átomo de halógeno, alquilo C1-C6 , alcoxi C1-C6 y alquilo C1-C6 halogenado.
    2. El compuesto de la reivindicación 1, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde X1, X2 , X3 y X4 se seleccionan cada uno entre C(R2); o, uno de X1, X2 , X3 seleccionan cada uno entre C(R2);
    preferentemente, X1, X2 , X3 y X4 son cada uno CH;
    preferentemente, X1 es N, y X2 , X3 y X4 se seleccionan cada uno entre C(R2), más preferentemente, X2 , X3 y X4 son cada uno CH;
    preferentemente, X2 es N, y X1, X3 y X4 se seleccionan cada uno entre C(R2), más preferentemente, X1, X3 y X4 son cada uno CH;
    preferentemente, X3 es N, y X1, X2 y X4 se seleccionan cada uno entre C(R2), más preferentemente, X1, X2 y X4 son cada uno CH;
    preferentemente, X4 es N, y X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno entre C(R2), más preferentemente, X1, X2 y X3 son cada uno CH.3
    3. El compuesto de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde el compuesto tiene una estructura como la representada por la fórmula (II):
    Figure imgf000034_0001
    en donde cada uno de X5 , X6, X7 , X8 y X9 se selecciona independientemente entre C(R7) o N;
    R7 se selecciona entre el grupo que consiste en H, átomo de halógeno, alquilo C1-C6 , alcoxi C1-C6 y alquilo C1-C6 halogenado;
    preferentemente, cada uno de X5 , X6, X7 , X8 y X9 se selecciona entre C(R7); o, uno de X5 , X6, X7 , X8 y X9 es N y los restantes se seleccionan cada uno entre C(R7);
    preferentemente, X5 es N y cada uno de X6, X7 , X8 y X9 se selecciona entre C(R7);
    preferentemente, X6 es N y cada uno de X5 , X7 , X8 y X9 se selecciona entre C(R7);
    preferentemente, X7 es N y cada uno de X5 , Xe, X8 y X9 se selecciona entre C(R7);
    preferentemente, X8 es N y cada uno de X5 , Xe, X7 y X9 se selecciona entre C(R7);
    preferentemente, X9 es N y cada uno de X5 , Xe, X7 y X8 se selecciona entre C(R7);
    preferentemente, X5 , Xe, X7 , X8 y X9 son cada uno CH;
    preferentemente, Xe, X7 , X8 y X9 son cada uno CH, X5 es C(R7, y R7 se selecciona entre el grupo que consiste en un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado;
    preferentemente, X5 , X7 , X8 y X9 son cada uno CH, Xe es C(R7, y R7 se selecciona entre el grupo que consiste en un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado;
    preferentemente, X5 , Xe, X8 y X9 son cada uno CH, X7 es C(R7, y R7 se selecciona entre el grupo que consiste en un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado;
    preferentemente, X5 , Xe, X7 y X9 son cada uno CH, X8 es C(R7, y R7 se selecciona entre el grupo que consiste en un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado;
    preferentemente, X5 , Xe, X7 y Xa son cada uno CH, X9 es C(R7, y R7 se selecciona entre el grupo que consiste en un átomo de halógeno, alquilo Ci-Ce, alcoxi Ci-Ce y alquilo Ci-Ce halogenado.
    4. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones i a 3, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde W se selecciona entre O, N(Re) o S, Re se selecciona entre H o alquilo Ci-Ce; Y se selecciona entre alquileno Ci-Ce; preferentemente, Y se selecciona entre alquileno Ci-C3, más preferentemente, metileno, i,i-etilideno y i,2-etilideno.
    5. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones i a 4, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde n es i o 2;
    preferentemente, n es i;
    preferentemente, un átomo de carbono quiral en
    Figure imgf000034_0002
    es de una configuración sinistral.
    e. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones i a 5, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde Ri se selecciona entre los siguientes grupos:
    Figure imgf000035_0001
    preferentemente, Ri se selecciona entre
    Figure imgf000035_0002
    preferentemente, R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C6 , alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con alquilamino C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con di(alquil C1-C3)amino y alquilo C1-C4 sustituido con un grupo heterocíclico que contiene nitrógeno, saturado de 5 a 6 miembros.
    7. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde R1 es
    Figure imgf000035_0003
    preferentemente, R3 es H;
    preferentemente, R4 es H;
    preferentemente, R5 se selecciona entre H, alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con alquilamino C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con di(alquil C1-C3)amino y alquilo C1-C4 sustituido con un grupo heterocíclico que contiene nitrógeno, saturado de 5 a 6 miembros.
    8. El compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde R1 es
    Figure imgf000035_0004
    preferentemente, R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-C4 y cicloalquilo C3-C6.
    9. El compuesto de la reivindicación 1, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde,
    A es CH;
    X1, X2, X3 y X4 son cada uno CH; o
    mientras que X2 , X3 y X4 son cada uno CH; o
    mientras que X1, X3 y X4 son cada uno CH; o
    mientras que X1, X2 y X4 son cada uno CH; o
    mientras que X1, X2 y X3 son cada uno CH;
    Figure imgf000035_0005
    , en donde R6 se selecciona entre H o alquilo C1-C3 ; Y se selecciona entre alquileno C1-C3 ;
    R1 se selecciona entre
    Figure imgf000036_0001
    en donde R3 es H;
    R4 es H;
    R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, alquilo C1-C6 , cicloalquilo C3-C6 , alquilo C1-C4 sustituido con alcoxi C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con alquilamino C1-C3 , alquilo C1-C4 sustituido con di(alquil Ci-C3)amino y alquilo C1-C4 sustituido con un grupo heterocíclico que contiene nitrógeno, saturado de 5 a 6 miembros;
    Ar se selecciona entre fenilo o heteroarilo que contiene nitrógeno de 6 miembros, opcionalmente, el fenilo o el heteroarilo que contienen nitrógeno de 6 miembros está sustituido con un grupo seleccionado entre un átomo de halógeno, alquilo C1-C6 , alcoxi C1-C6 y alquilo C1-C6 halogenado.
    10. El compuesto de la reivindicación 1, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde el compuesto tiene una estructura como la representada por la fórmula (III):
    Figure imgf000036_0002
    en donde X1 es CH o N;
    W se selecciona entre O, S y N(R6), R6 se selecciona entre H o metilo;
    Y se selecciona entre el grupo que consiste en metileno, 1,1-etilideno y 1,2-etilideno;
    X6 y X7 cada uno de se selecciona independientemente entre C(R7), en donde R7 se selecciona entre el grupo que consiste en H, F, trifluorometilo y metoxilo;
    X9 se selecciona entre CH o N;
    R1 es
    Figure imgf000036_0003
    en donde R3 es H, R4 es H y R5 se selecciona entre el grupo que consiste en H, metilo sustituido con metoxilo, metilo sustituido con dimetil amino y metilo sustituido con piperidilo; o
    R1 es
    Figure imgf000036_0004
    en donde R5 se selecciona de entre el grupo que consiste en H, metilo, etilo, isopropilo y ciclopropilo; o
    R1 es
    Figure imgf000037_0001
    en donde R3 , R4 y R5 son cada uno H.
    11. El compuesto de la reivindicación 1, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, en donde el compuesto se selecciona entre:
    Figure imgf000037_0002
    Figure imgf000038_0001
    Figure imgf000039_0001
    12. Una composición farmacéutica, que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo,
    opcionalmente, comprendiendo además la composición farmacéutica uno o más excipientes farmacéuticos; opcionalmente, comprendiendo además la composición farmacéutica uno o más segundos agentes terapéuticos; preferentemente, siendo el segundo agente terapéutico un fármaco quimioterapéutico, un fármaco dirigido contra el cáncer o un fármaco inmunoterapéutico;
    preferentemente, seleccionándose el segundo agente terapéutico entre el grupo que consiste en rituximab, lenalidomida, fludarabina, ciclofosfamida, adriamicina, vincristina y prednisona.
    13. Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo para su uso como fármaco para prevenir y/o tratar una enfermedad y/o una afección seleccionada entre el grupo que consiste en tumor, inflamación y enfermedad autoinmunitaria;
    preferentemente, el tumor es un tumor hematológico seleccionado entre el grupo que consiste en linfoma, mieloma, leucemia linfocítica y leucemia mieloide aguda;
    preferentemente, el tumor es un tumor sólido seleccionado entre el grupo que consiste en cáncer de pulmón, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de páncreas, cáncer de ovarios y cáncer de colon;
    preferentemente, la inflamación o la enfermedad autoinmunitaria se selecciona entre el grupo que consiste en artritis reumatoide, lupus eritematoso, nefritis lúpica, esclerosis múltiple, síndrome de Sjogren y asma por enfermedad subyacente;
    preferentemente, el fármaco es para prevenir y/o tratar a un mamífero, más preferentemente, un bovino, un equino, un ovino, un porcino, un canino, un felino, un roedor y un primate, más preferentemente, un ser humano; preferentemente, el fármaco incluye además uno o más segundos gentes terapéuticos;
    preferentemente, el segundo agente terapéutico es un fármaco quimioterapéutico, un fármaco dirigido contra el cáncer o un fármaco inmunoterapéutico;
    preferentemente, el segundo agente terapéutico se selecciona entre el grupo que consiste en rituximab, lenalidomida, fludarabina, ciclofosfamida, adriamicina, vincristina y prednisona.
    14. Uso del compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo, para disminuir o inhibir una actividad de la tirosina quinasa de Bruton en una célula, in vitro;
    preferentemente, la célula se selecciona entre una célula tumoral, preferentemente, una célula tumoral sólida, más preferentemente, una célula de cáncer de pulmón, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de estómago, una célula de cáncer de hígado, una célula de cáncer de páncreas, una célula de cáncer de ovarios y una célula de cáncer de colon;
    preferentemente, la célula se selecciona entre una célula mieloide o un linfocito;
    preferentemente, la célula es una célula primaria obtenida del sujeto, un cultivo de la célula primaria o una línea celular establecida.
    15. Un kit, que comprende el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, la sal farmacéuticamente aceptable del mismo o el estereoisómero del mismo y que opcionalmente comprende además una instrucción de uso; en donde,
    preferentemente, el kit se utiliza para disminuir o inhibir una actividad de la tirosina quinasa de Bruton en una célula in vitro;
    preferentemente, la célula se selecciona entre una célula tumoral, más preferentemente, una célula tumoral sólida, más preferentemente, una célula de cáncer de pulmón, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de estómago, una célula de cáncer de hígado, una célula de cáncer de páncreas, una célula de cáncer de ovarios y una célula de cáncer de colon;
    preferentemente, la célula se selecciona entre una célula mieloide o un linfocito;
    preferentemente, la célula es una célula primaria obtenida de un sujeto, un cultivo de la célula primaria o una línea celular establecida.
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