ES2932354T3

ES2932354T3 - Dinucleótidos cíclicos como agentes anticáncer

Info

Publication number: ES2932354T3
Application number: ES18752985T
Authority: ES
Inventors: Brian E Fink; Dharmpal S Dodd; Lan-Ying Qin; Zheming Ruan; Yufen Zhao; Lalgudi S Harikrishnan; Muthoni G Kamau; Steven J Walker
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2017-07-28
Filing date: 2018-07-26
Publication date: 2023-01-18
Anticipated expiration: 2038-07-26
Also published as: WO2019023459A1; EP3658565B1; US20190030057A1; AR112290A1; KR102709265B1; EP3658565A1; JP2020529400A; TW201909903A; CN110997691A; US10744150B2; CN110997691B; KR20200032180A; JP7186764B2

Abstract

La presente invención está dirigida a compuestos de las fórmulas I, II y III como se muestra a continuación (I) (II) (III) donde todos los sustituyentes se definen aquí, así como composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden compuestos de la invención y dichas composiciones para uso en el tratamiento de diversos trastornos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Dinucleótidos cíclicos como agentes anticáncer

Campo de la invención

La invención proporciona nuevos compuestos, composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos y sus usos, por ejemplo, para el tratamiento o la prevención de ciertos cánceres y a su uso en terapia.

Antecedentes de la invención

La inmunoterapia es un área de rápida expansión de tratamiento médico en la que el sistema inmune del paciente deliberadamente se activa, se suprime o de otro modo se modula para un efecto terapéutico positivo. Los agentes inmunoterapéuticos incluyen aquellas cosas tales como células, antígenos, anticuerpos, ácidos nucleicos, proteínas, péptidos, ligandos naturales y moléculas preparadas sintéticamente. Las citoquinas son pequeñas moléculas de glicoproteína conocidas por su papel en la producción de respuesta inmune por medio de redes de señalización complejas. Las citoquinas se han explorado como agentes inmunoterapéuticos, pero su administración directa está obstaculizada por varios factores que incluyen su vida media corta en la sangre que solamente se puede compensar con dosis frecuentes y a menudo altas. Un enfoque muy promisorio es la inducción de citoquinas en la que el paciente se trata con un agente inmunomodulador que acciona la producción de una o más citoquinas terapéuticamente beneficiosas en su cuerpo.

Un agente en la producción de citoquinas es la proteína adaptadora STING (Estimulador de genes de interferón, STimulator of /Merferon Genes; también conocida como MPYS, TMEM173, MITA y ERIS). STING es un receptor intracelular situado en el retículo endoplasmático. La unión con STING por un agonista activa una vía de señalización que culmina en la inducción de IFN de tipo I, que se segregan y protegen las células secretoras y cercanas. STING puede ser activada por dos vías diferentes, donde cada una implica un tipo diferente de agonista de dinucleótido simple (“CDN”). En la primera vía, el agonista es un CDN exógeno usado por patógenos bacterianos como segundo mensajero (Burdette et al. 2013). En la segunda vía, la sintasa GMP-AMP cíclica enzimática (cGAS) detecta el ADN citosólico y, en respuesta, sintetiza un CDN que funciona como agonista de STING endógeno (Ablasser et al. 2013; Gao et al. 2013; Sun et al. 2013).

La activación de STING da como resultado la regulación hacia arriba de las vías de IRF3 y NF-^kB que llevan a la inducción de Interferón-p y otras citoquinas. STING es crucial para las respuestas al ADN citosólico de origen patógeno o de huésped.

Dos CDN de agonistas de STING bacterianos exógenos son 3'3'-cGAMP y c-GMP. El CDN agonista de STING endógeno realizado por cGAS es 2'3'-cGAMP. Los CDN bacterianos se caracterizan por dos puentes de 3'5' fosfodiéster, mientras que el CDN producid por cGAS se caracteriza por un puente 2'5' y un puente 3'5' fosfodiéster. Como abreviatura, los primeros CDN se mencionan como 3'3' CDN y los últimos como 2'3' CDN. Por razones históricas, los 3'3' CDN también se mencionan como la forma “canónica” y los 2'3' CDN se mencionan como la forma “no canónica”.

Además de proteger un organismo contra una infección patógena, también se informó que la activación de STING es beneficiosa en el tratamiento de enfermedades inflamatorias y, en un área de particular interés actual, cáncer. La administración de un CDN sintético en combinación con la vacuna de cáncer STINGVAX demostró una mayor eficacia antitumoral en múltiples modelos terapéuticos (Fu et al. 2015). Se informó que la administración de agonistas de STING sola muestra una potente eficacia antitumoral inmune en un modelo murino (Corrales et al. 2015a). Para reseñas en el papel de STING en infección, inflamación y/o cáncer, véase Ahn et al. 2015; Corrales et al. 2015b y 2016; y Barber 2015.

Los documentos W O 2016/096174 A1, W O 2014/189805 A1, W O 2015/185565 A1 desvelan dinucleótidos cíclicos como activadores de STING para su uso en el tratamiento del cáncer.

La presente invención, por lo tanto, proporciona nuevos dinucleótidos cíclicos que pueden ser de utilidad para el tratamiento de cáncer.

Síntesis de la invención

Se proporcionan compuestos de las fórmulas (I) y (II)

en donde todos los sustituyentes se definen en la presente.

En otro aspecto, se proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

En otro aspecto, se proporciona un activador de STING (de la fórmula I), para su uso en el tratamiento del cáncer.

Descripción detallada de la invención

Los siguientes son aspectos y formas de realización de la presente invención, así como aspectos adicionales y formas de realización que pueden estar dentro del alcance de aquellas mostradas. Los aspectos de la invención no se limitan a los descritos más abajo.

Un compuesto de la fórmula I

en donde

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra es H, halógeno, alquilo C^1-6sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C^3-6sustituido con 0-6 R5, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)²Ra1, -NRa1S(O)²NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1; Rb es H, alquilo C^1-6sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C^3-6sustituido con 0-6 R5, -C(O)Ra1, -C(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5 es H, halógeno, alquilo C ^1-3, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R5a es H o alquilo C1-3;

R6 es H, halógeno, alquilo C ^1-3, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R8 es H, halógeno, alquilo C ^1-3, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

o una de sus sales, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables.

El compuesto de acuerdo con la fórmula I, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula I, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula I, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula I, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula I, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula I, en donde

R1 es

y

R2 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula I, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula I, en donde

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula I, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R3 es H, CH3, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5 es H, halógeno, alquilo C^1-3, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R5a es H o alquilo C^1-3;

R6 es H, halógeno, alquilo C^1-3, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R8 es H, halógeno, alquilo C^1-3, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra es H, halógeno, alquilo C^1-6sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C3-6 sustituido con 0-6 R5, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)²Ra1, -NRa1S(O)²NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1; Rb es H, alquilo C^1-6sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C^3-6sustituido con 0-6 R5, -C(O)Ra1, -C(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R3 es H, CH3, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

R6 es H, halógeno, alquilo C ^1-3, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)2Ra1, -NRa1S(O)2NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

Y es CH o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R3 es F;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R3 es H, CH3, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra es H, halógeno, alquilo C^1-6sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C^3-6sustituido con 0-6 R5, CN, NO², OH, ORa1, SRa1, -C(O)NRa1Ra1, -COORa1, -OC(O)Ra1, -OC(O)NRa1Ra1, -NRa1Ra1, -NRa1 C(O)Ra1, -NRa1COORa1, -NRa1C(O)NRa1Ra1, -NRa1S(O)²Ra1, -NRa1S(O)²NRa1Ra1, -S(O)Ra1, -S(O)NRa1Ra1, -S(O)²Ra1 o S(O)²NRa1Ra1; Rb es H, sustituido con 0-6 R5, cicloalquilo C^3-6sustituido con 0-6 R5, -C(O)Ra1, -C(O)NRa1Ra1, -, -S(O)²Ra1 o S(O)2NRa1Ra1;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R3 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R3a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R3 y R3a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

Un compuesto de la fórmula

Un compuesto de la fórmula

Un compuesto de la fórmula

Un compuesto de la fórmula II

en donde

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula II, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C^1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es F;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH3, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R4 es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R4a es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R4 y R4a se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

o una de sus sales, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables. El compuesto de la fórmula

o una de sus sales, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables. Se desvela en la misma un compuesto de la fórmula III

en donde

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

El compuesto de acuerdo con la fórmula III, en donde

R1 es

y

R2 es

Se devela en la misma, el compuesto de acuerdo con la fórmula III

en donde

X es S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

Se desvela en la misma el compuesto de acuerdo con la fórmula III

en donde

X es O;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R5a es H o alquilo C^1-3;

R9 es H, halógeno o metilo;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1; cuando n = 0, el anillo es un anillo de ciclopropilo de 3 miembros;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

El compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C1-3;

R5a es H o alquilo C1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X es O o S;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X es S;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

X es O;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

Se desvela en la misma el compuesto de la fórmula

en donde

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z1 es N o CRa;

Z2 es NRb;

Ra1 es H o alquilo C^1-3;

R5a es H o alquilo C^1-3;

Y es CR5 o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

En otro aspecto, se proporciona un compuesto seleccionado de ejemplos ilustrados o sus sales, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables.

En otro aspecto, se proporciona un compuesto seleccionado de

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3^á5,12A5-difosfatnciclo[13.3.0.069]octadecano-3,12-diona;

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-8-14-hidroxi-1H-imidazo[2,1-b]purin-1-il}-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecano-3,12-ditiona;

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.069]octadecano-3,12-ditiona;

9-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-8-il]-6,9-dihidro-1H-purin-6-ona;

(1S,6S,8R,9R,15R,17R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-17-{4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-3-hidroxi-12-sulfanil-3-sulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-12-ona;

(1 R,6S,8R,9R,15R,17R, 18S)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-17-{4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-18-fluoro3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecano-3,12-ditiona;

[(1R,6S,8R,9R, 15R,17R,18S)-17-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecano-3,12-ditiona;

1-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-17-il]-1H,4H,5H-imidazo[2,1-b]purin-4-ona; (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecano-3,12-diona;

1-[(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.06’9]octadecan-17-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida; 1-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-17-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida; 1-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-8-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida; (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-18-hidroxi-8-(6-hidroxi-9H-purin-9-il)-17-{4-oxo-1H,4H,5H-imidazo[2,1-b]purin-1-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.069]octadecano-3,12-diona;

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-17-{4-hidroxi-1H-imidazo[2,1-b]purin1-il}-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.2.1.069]octadecano-3,12-ditiona;

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-17-(6-hidroxi-9H-purin-9-il)-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]-octadecano-3,12-ditiona;

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18S)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.06,9]octadecano-3,12-ditiona; y

2-amino-9-[(1 R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13.3.0.069]octadecan-8-il]--6,9-dihidro-1H-purin-6-ona o una de sus sales, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables.

En otro aspecto, se proporciona un compuesto seleccionado de

En otro aspecto, se proporciona un compuesto seleccionado de cualquier lista de subgrupos de compuestos dentro del alcance de cualquiera de los aspectos anteriores.

OTRAS FORMAS DE REALIZACIÓN DE LA INVENCIÓN

En otra forma de realización, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos uno de los compuestos de la invención o uno de sus estereoisómeros, tautómeros o sales farmacéuticamente aceptables, o solvatos.

En otra forma de realización, la invención proporciona un proceso para preparar un compuesto de la invención o uno de sus estereoisómeros, tautómeros, sales farmacéuticamente aceptables o solvatos.

En otra forma de realización, la invención proporciona uno o más compuestos de la invención, solo, u, opcionalmente, en combinación con otro compuesto de la invención y/o al menos otro tipo de agente terapéutico para uso en el tratamiento y/o profilaxis de diversos tipos de cáncer.

En otra forma de realización, la invención se refiere al tratamiento y/o prevención de varios tipos de cáncer, que incluyen cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer colorrectal, melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de Hodgkin, cáncer de vejiga, carcinoma esofágico, carcinoma gástrico, carcinoma ovárico, carcinoma cervical, carcinoma pancreático, carcinoma de próstata, cáncer de mama, carcinoma urinario, tumores cerebrales tales como glioblastoma, linfoma no Hodgkin, leucemia linfática aguda (LLA), leucemia linfática crónica (LLC), leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia mieloide crónica (LMC), carcinoma hepatocelular, mieloma múltiple, tumores del estroma gastrointestinal, mesotelioma y otros tumores sólidos u otros cánceres hematológicos.

En otra forma de realización, la invención se refiere al tratamiento y/o prevención de varios tipos de cáncer, que incluyen, pero no se limitan a, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de Hodgkin o cáncer de vejiga.

En otra forma de realización, la invención proporciona un compuesto de la presente invención para su uso terapéutico. En otra forma de realización, la invención proporciona una preparación combinada de un compuesto de la presente invención y uno o más agentes terapéuticos adicionales, para su uso simultáneo, separado o consecutivo en la terapia. APLICACIONES TERAPÉUTICAS

Los dinucleótidos cíclicos de la invención inducen interferones de tipo I y/o citoquinas proinflamatorias in vitro en células humanas, células animales y sangre humana. La actividad inductora de citoquinas de estos CDN requiere la presencia de STING, de acuerdo con lo confirmado mediante experimentos in vitro en células humanas o animales. Los CDN de la invención son agonistas del STING receptor.

El término “agonista” se refiere a cualquier sustancia que active un receptor biológico in vitro o in vivo para provocar una respuesta fisiológica.

"STING" es una abreviatura de "estimulador de genes de interferón", también conocido como "estimulador del interferón de retículo endoplásmico (ERIS)", " mediador de la activación de IRF3 "MITA)", "MYPS" o "proteína de transmembrana 173 (TM173)". STING es una proteína receptora de transmembrana que en los humanos está codificada por el gen TMEM173. La activación de STING mediante dinucleótidos cíclicos (c Dn ) conduce a la activación de las vías de IRF3 y de NF-kB y por lo tanto a la inducción de los interferones de tipo I y de las citoquinas proinflamatorias, respectivamente.

Un objeto de la presente invención son los dinucleótidos cíclicos de la Fórmula (I) para su uso en un tratamiento terapéutico en humanos o animales. En particular, los compuestos de la presente invención pueden utilizarse para aplicaciones terapéuticas o de diagnóstico en la salud humana o animal.

La expresión “agente terapéutico” se refiere a una o más sustancias que se administran a un ser humano o a un animal con el objetivo de lograr algún tipo de efecto terapéutico en dicho ser humano o animal, que incluye prevenir, curar o mitigar los efectos de una infección o enfermedad, y/o para de otro modo mejorar la salud de dicho ser humano o animal.

El término “monoterapia” se refiere al uso de una sustancia y/o estrategia, individuales, para tratar un ser humano o un animal en cualquier contexto clínico o médico, a diferencia del uso de múltiples sustancias y/o múltiples estrategias para tratar un ser humano o un animal en el mismo contexto clínico o médico, independientemente de si las múltiples sustancias y/o múltiples estrategias se utilizan consecutivamente en cualquier orden o simultáneamente.

En la presente, la expresión “agente terapéutico” se refiere a una o más sustancias químicas que se administran a un ser humano o a un animal a efectos de matar tumores, o para ralentizar o detener el desarrollo de tumores, y/o para ralentizar o detener la división de células cancerosas y/o para prevenir o ralentizar las metástasis. Los agentes quimioterapéuticos se administran frecuentemente para tratar un cáncer, pero también están indicados para otras enfermedades.

El término “quimioterapia” se refiere al tratamiento médico de un ser humano o de un animal con uno o más agentes quimioterapéuticos (véase la definición anterior).

El término “quimioinmunoterapia” se refiere al uso combinado, o bien consecutivamente en cualquier orden o simultáneamente, de sustancias quimioterapéuticas y/o de estrategias, y a sustancias inmunoterapéuticas y/o estrategias. La quimioinmunoterapia se utiliza frecuentemente para tratar un cáncer, pero también puede utilizarse para tratar otras enfermedades.

La expresión “sistema inmunológico” se refiere al conjunto, o a uno o más cualesquiera componentes, de las moléculas, sustancias (por ejemplo, los fluidos corporales), estructuras anatómicas (por ejemplo, células, tejidos y órganos) y a procesos fisiológicos que intervienen en la prevención de la infección en el cuerpo, en la protección del cuerpo durante la infección o durante la enfermedad, y/o en dar ayuda al cuerpo para recuperarse después de una infección o enfermedad. Una definición completa de “sistema inmunológico” se halla fuera del alcance de esta patente; sin embargo, esta expresión debería ser entendida por cualquier profesional que tenga experiencia ordinaria en el campo.

La expresión “agente inmunológico” se refiere a cualquier sustancia endógena o exógena que pueda interactuar con uno o más componentes cualesquiera del sistema inmunológico. La expresión “agente inmunológico” incluye anticuerpos, antígenos, vacunas y sus componentes constituyentes, ácidos nucleicos, fármacos naturales o sintéticos, compuestos orgánicos naturales o sintéticos, citoquinas, células naturales o modificadas, sus análogos sintéticos, y/o sus fragmentos.

El término “antagonista” se refiere a cualquier sustancia que inhiba, contrarreste, regule descendentemente, y/o desensibilice un receptor biológico in vitro o in vivo para provocar una respuesta fisiológica.

El término “inmunoterapia” se refiere a cualquier tratamiento médico en el que uno o más componentes del sistema inmunológico de un ser humano o de un animal son modulados deliberadamente a efectos de lograr directa o indirectamente algún beneficio terapéutico, lo que incluye efectos sistémicos y/o locales, y efectos preventivos y/o curativos. La inmunoterapia puede implicar la administración de uno o más agentes inmunológicos (véase la definición anterior), sea solos o en cualquier combinación, a un ser humano o a un animal administrado por cualquier vía (por ejemplo, oralmente, por vía intravenosa, térmica, mediante inyecciones, inhalación, etc.), tanto si esto se efectúa de manera sistémica, local o ambos.

La “ inmunoterapia” puede implicar provocar, incrementar, disminuir, detener, prevenir, bloquear o de otro modo modular la producción de citoquinas, y/o activar o desactivar citoquinas o células inmunológicas, y/o modular los niveles de las células inmunológicas, y/o entregar una o más sustancias terapéuticas o de diagnóstico a una ubicación particular en el cuerpo o a un tipo particular de célula o tejido, y/o destruir un tipo particular de células o tejidos. La inmunoterapia puede utilizarse para lograr efectos locales, efectos sistémicos o una combinación de ambos efectos. El término “ inmunosuprimido” describe el estado de cualquier sujeto humano o animal cuyo sistema inmunológico está funcionalmente disminuido, desactivado o de otro modo comprometido, o en el que uno o más componentes inmunológicos están funcionalmente disminuidos, desactivados o de otro modo comprometidos.

La “ irnriunosupresión” puede ser la causa, consecuencia o producto secundario de una enfermedad, infección, agotamiento, nutrición deficiente, tratamiento médico o de algún otro estado fisiológico o clínico.

Las expresiones “sustancia inmunomoduladora”, “sustancia inmunomodulante”, “agente inmunomodulador” e “ inmunomodulador”, utilizadas en la presente como sinónimos, se refieren a cualquier sustancia que, al administrarse un ser humano o a un animal, influyen de manera directa en el funcionamiento del sistema inmunológico de dicho ser humano o animal. Los ejemplos de inmunomoduladores comunes incluyen, pero no se limitan a: antígenos, anticuerpos y fármacos de molécula pequeña.

El término “vacuna” se refiere a una preparación biológica administrada a un ser humano o a un animal a efectos de suscitar o reforzar una respuesta específica del sistema inmunológico y/o una protección contra uno o más antígenos en dicho ser humano o animal.

El término “vacunación” se refiere al tratamiento de un ser humano o de un animal con una vacuna o al acto de administrar una vacuna a un ser humano o a un animal.

El término “adyuvante” se refiere a una sustancia terapéutica secundaria que se administra (sea secuencialmente en cualquier orden, o simultáneamente) junto con una sustancia terapéutica primaria para lograr algún tipo de efecto complementario, sinérgico o de otro modo beneficioso que no podría lograrse mediante el uso de la sustancia terapéutica primaria sola. Es posible utilizar un adyuvante junto con una vacuna, quimioterapia, o alguna otra sustancia terapéutica. Los adyuvantes pueden reforzar la eficacia de la sustancia terapéutica primaria, reducir la toxicidad o efectos secundarios de la sustancia terapéutica primaria, o proporcionar algún tipo de protección al sujeto que recibe la sustancia terapéutica primario, tal como sin limitación, un funcionamiento mejorado del sistema inmunológico. En una forma de realización, el dinucleótido cíclico de la fórmula (I) puede administrarse como inmunoterapia a un ser humano o a un animal para inducir una producción in vivo de una o más citoquinas que son terapéuticamente beneficiosas para dicho ser humano o animal. Este tipo de inmunoterapia podría utilizarse solo o en combinación con otras estrategias de tratamiento, tanto secuencialmente en cualquier orden, o simultáneamente. Podría utilizarse para prevenir, curar y/o mitigar los efectos de una infección o enfermedad en dicho ser humano o animal, y/o para modular el sistema inmunológico de dicho ser humano o animal para lograr algún otro beneficio terapéutico.

En una forma de realización particular, los dinucleótidos cíclicos de la presente invención pueden utilizarse para la inmunoterapia de inducción de citoquinas en individuos inmunosuprimidos.

En este ejemplo, podría administrarse un dinucleótido cíclico de la fórmula (I) a un sujeto humano o animal inmunosuprimido para inducir una producción in vivo de una o más citoquinas que de manera directa o indirecta refuerzan el sistema inmunológico de dicho ser humano o animal. Los sujetos que podrían beneficiarse de dicho tratamiento incluyen aquellos que sufren de trastornos autoinmunológicos, deficiencias o defectos del sistema inmunológico, infecciones microbianas o virales, enfermedades infecciosas, o cáncer.

Por lo tanto, la presente invención revela un dinucleótido cíclico de la fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para uso en la inducción de citoquinas en individuos inmunosuprimidos.

En otra forma de realización, los dinucleótidos cíclicos de la presente invención pueden utilizarse para la inmunoterapia de inducción de citoquinas en combinación con la quimioterapia. En este ejemplo, un dinucleótido cíclico de la fórmula (I) se administraría conjuntamente con uno o más agentes quimioterapéuticos, consecutivamente en cualquier orden o simultáneamente, a un paciente de cáncer, para detener el crecimiento de, contraer y/o destruir tumores en dicho paciente. La quimioinmunoterapia resultante de la combinación de la inducción de citoquinas, proporcionada por el o los compuestos de la presente invención, y la citotoxicidad, proporcionada por el o los agentes quimioterapéuticos, podría ser menos tóxica para el paciente, causar menos efectos secundarios en el paciente y/o presentar una mayor eficacia antitumoral de la que proveerían el o los agentes quimioterapéuticos utilizados en monoterapia.

Por lo tanto, la presente invención revela un método para tratar un cáncer, en donde dicho método comprende administrar a un paciente con lo necesite: un agente quimioterapéutico; y un dinucleótido cíclico de la fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para uso en el tratamiento del cáncer.

Otro objetivo de la presente invención son los dinucleótidos cíclicos de la fórmula (I) destinados a utilizarse en el tratamiento de una infección bacteriana, de una infección viral o un cáncer.

Como se utiliza la presente, el término “cáncer” se refiere a la condición fisiológica en sujetos que se caracteriza por un crecimiento o muerte celular no regulados o desregulados. El término “cáncer” incluye los tumores sólidos y los tumores de origen sanguíneo, ya sea malignos o benignos.

En una forma de realización preferida, el cáncer es del siguiente grupo: cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer colorrectal, melanoma, carcinomas de células renales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de Hodgkin o cáncer de vejiga.

Por lo tanto, la presente invención revela un dinucleótido cíclico de la fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para uso en el tratamiento de una infección bacteriana, una infección vírica o un cáncer..

Otro objetivo de la presente invención son los dinucleótidos cíclicos de la fórmula (I) para utilizarse en el tratamiento de una patología que puede ser aliviada por la inducción de una inmunorrespuesta por medio de la trayectoria de STING.

Si bien en la terapia es posible utilizar un compuesto de la fórmula (I) al igual que sus sales farmacéuticamente aceptables como el compuesto en sí, suele presentárselo comúnmente como una composición farmacéutica.

Las composiciones farmacéuticas pueden presentarse en forma de dosis unitarias que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por dosis unitaria. Las composiciones de dosificación unitaria preferidas son aquellas que contienen una dosis o subdosis diaria, o una de sus fracciones adecuadas, de un ingrediente activo. Tales dosis unitarias pueden por lo tanto administrarse más de una vez por día. Las composiciones de dosificación unitaria preferidas son aquellas que contienen una dosis o subdosis diaria (para administrarse más de una vez por día), de acuerdo con lo mencionado anteriormente en la presente, o una de sus fracciones adecuadas, de un ingrediente activo.

Los tipos de cánceres que puede tratarse con los compuestos de la invención incluyen, pero no se limitan a cánceres cerebrales, cánceres de piel, cánceres de vejiga, cánceres orgánicos, cánceres de mama, cánceres gástricos, cánceres pancreáticos, cánceres de próstata, cánceres colorrectales, cánceres de sangre, cánceres de pulmón y cánceres de hueso. Los ejemplos de tales tipos de cáncer incluyen neuroblastoma, carcinoma intestinal tal como carcinoma rectal, carcinoma de colon, carcinoma de poliposis adematoso familiar y cáncer colorrectal no poliposis hereditario, carcinoma de esófago, carcinoma labial, carcinoma de laringe, cánceres nasofaríngeos, cánceres de la cavidad oral, cánceres de glándulas salivales, cánceres de peritoneo, sarcoma de tejidos blandos, cánceres uroteliales, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma gástrico, adenocarcinoma, carcinoma tiroidea medular, carcinoma tiroidea papilar, carcinoma renal, carcinoma parénquimal de riñones, carcinoma de ovario, carcinoma de cerviz, carcinoma de cuerpo uterino, carcinoma de endometrio, carcinoma pancreático, carcinoma de próstata, carcinoma de testículos, carcinomas de mama que incluyen HER2 Negativo, carcinoma urinario, melanoma, tumores de cerebro tales como glioblastoma, astrocitoma, meningioma, meduloblastoma y tumores neuroectodérmicos periféricos, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, linfoma de Burkitt, leucemia linfática aguda (ALL), leucemia linfática crónica (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), linfoma de leucemia de células T de adulto (CML), linfoma de células B grandes difusas, leucemia de células T del adulto (DLBCL), carcinoma hepatocelular, mieloma múltiple, seminoma, osteosarcoma, condrosarcoma, cánceres de canales anales, cordoma, cáncer de tubo de Falopio, enfermedades mieoproliferativas, mesotelioma, cánceres del tracto biliar, y algunos otros tipos raros.

Los compuestos de la invención son útiles para el tratamiento de determinados tipos de cáncer por sí mismos o en combinación o administración conjunta con otros agentes terapéuticos o terapia de radiación. Por lo tanto, en una forma de realización los compuestos de la invención se administran juntamente con terapia de radiación o con un segundo agente terapéutico con una actividad citostática o antinoplásica. Los compuestos de quimioterapia citostática adecuados incluyen, pero no se limitan a: (i) antimetabolitos; (ii) agentes de fragmentación de ADN, (iii) agentes de reticulación de ADN, (iv) agentes de intercalación;(v) inhibidores de la síntesis de las proteínas; (vi) venenos de topoisomerasa I, tales como camptotecina o topotecán; (vii) venenos de topoisomerasa II, (viii) agentes dirigidos a los microtúbulos, (ix) inhibidores de quinasas;(x) agentes de investigación misceláneos (xi) hormonas; e (xii) antagonistas de hormonas. Se contempla que los compuestos de la invención pueden ser útiles en combinación con cualquier agente conocido que entre en las 12 clases anteriores, así como cualquier agente futuro que se encuentre actualmente en desarrollo. En particular, se contempla que los compuestos de la invención pueden ser útiles en combinación con los estándares de cuidado actuales, así como también con los que evolucionen en el futuro previsible. Las dosis específicas y los regímenes de dosificación se basarían en el conocimiento en evolución de los médicos y de la experiencia general en la técnica.

También se proporcionan en la presente memoria formas de realización en las que los compuestos de la invención se administran con uno o más agentes de inmunooncología. Los agentes inmunooncológicos usados en la presente, también conocidos como inmunoterapias contra el cáncer, son eficaces para potenciar, estimular y/o regular ascendentemente las respuestas inmunológicas en un sujeto. En un aspecto, la administración de un compuesto de la invención con un agente inmunooncológico tiene un efecto sinérgico en la inhibición del crecimiento tumoral. En un aspecto, los compuestos de la invención se administran secuencialmente antes de la administración del agente inmunooncológico. En otro aspecto, los compuestos de la invención se administran simultáneamente con el agente de inmunología-oncología. Y en otro aspecto más, los compuestos de la invención se administran secuencialmente después de la administración del agente inmunooncológico.

En otro aspecto, los compuestos de la invención pueden formularse conjuntamente con un agente inmunooncológico. Los agentes inmunooncológicos incluyen, por ejemplo, un fármaco de molécula pequeña, u otra molécula biológica. Los ejemplos de agentes inmunooncológicos biológicos incluyen, pero no se limitan a, vacunas contra el cáncer, anticuerpos y citoquinas. En un aspecto, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal. En otro aspecto, el anticuerpo monoclonal es humanizado o humano.

En un aspecto, el agente inmunooncológico es: (i) un agonista de un receptor estimulante (que incluye un coestimulador) o: (ii) un antagonista de una señal inhibidora (que incluye una coinhibición) en las células T, las cuales dan lugar a la amplificación de respuestas de células T específicas de antígeno (a menudo denominadas reguladores de punto de control inmunitario.

Determinadas moléculas estimulantes e inhibidoras son miembros de la superfamilia de las inmunoglobulinas (IgSF). Una familia importante de ligandos unidos a membrana que se unen a receptores coestimuladores o coinhibidores es la familia B7, que incluye B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA) y B7-H6. Otra familia de ligandos unidos a membrana que se unen a receptores coestimuladores o coinhibidores es la familia de moléculas de TNF que se unen a miembros de la familia de receptores de TNF cognato, que incluye CD40 y CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, ABRIL, BCMA, LTpR, LUZ, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, linfotoxina a/TNFp, TNFR2, TNFa, LTpR, linfotoxina a ip2 , FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR.

En un aspecto, las respuestas de células T pueden estimularse mediante una combinación de un compuesto de la invención y uno o más de: (i) un antagonista de una proteína que inhibe la activación de células T (por ejemplo, inhibidores del punto de control inmunitario) tales como CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, Galectina 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galectina-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1 y TIM-4, y (ii) un agonista de una proteína que estimula la activación de las células T como B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 y CD28H.

Otros agentes que pueden combinarse con compuestos de la invención para el tratamiento de cáncer incluyen antagonistas de receptores inhibidores en células NK o agonistas de receptores activadores en células NK. Por ejemplo, los compuestos de la invención se pueden combinar con antagonistas de KIR, tales como lirilumab.

Otros agentes más para terapias de combinación incluyen agentes que inhiben o agotan macrófagos o monocitos, que incluyen, pero no se limitan a, antagonistas de CSF-1R tales como anticuerpos antagonistas de CSF-1R que incluyen RG7155 (WO11/70024, WO11/107553, WO11/131407, WO13/87699, WO13/119716, WO13/132044) o FPA-008 (WO11/140249; WO13169264; WO14 /036357).

En otro aspecto, los compuestos de la invención se pueden usar con uno o más agentes agonísticos que ligan receptores coestimuladores positivos, agentes de bloqueo que atenúan la señalización a través de receptores inhibidores, antagonistas y uno o más agentes que aumentan sistémicamente la frecuencia de T antitumoral, células, agentes que superan distintas vías inmunosupresoras dentro del microambiente tumoral (p. ej., compromiso del receptor inhibidor de bloque (p. ej., interacciones PD-L1/PD-1), agotan o inhiben a Tregs (por ejemplo, mediante el uso de un anticuerpo monoclonal anti-CD25 daclizumab) o por depleción ex vivo de perlas anti-CD25), inhiben las enzimas metabólicas tales como IDO, o inhiben/previenen la anergia o el agotamiento de las células T) y de los agentes que activan la activación inmune innata y/o la inflamación en los sitios tumorales.

En un aspecto, el agente de inmunooncología es un antagonista de CTLA-4, tal como un anticuerpo antagonista de CTLA-4. Los anticuerpos de CTLA-4 adecuados incluyen, por ejemplo, YERVOY (ipilimumab) o tremelimumab. En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de PD-1, tal como un anticuerpo antagonista de PD-1. El anticuerpo de PD-1 puede seleccionarse de Opdivo (nivolumab), Keytruda (pembrolizumab), PDR001 (Novartis, véase WO2015/112900), MEDI-0680 (AMP-514) (AstraZeneca, véase WO2012/145493), REGN-2810 (Sanofi/Regeneron, véase WO2015/112800), JS001 (Taizhou Junshi), BGB-A317 (Beigene, véase WO2015/35606), INCSHR1210 (SHR-1210) (Incyte/Jiangsu Hengrui Medicine, véase WO2015/085847), TSR-042 (ANB001) (Tesara/AnaptysBio, véase WO2014/179664), GLS-010 (Wuxi/Harbin Gloria Pharmaceuticals), AM-0001 (Armo/Ligand), o STI-1110 (Sorrento, véase WO2014/194302). El agente inmunooncológico también puede incluir pidilizumab (CT-011), aunque su especificidad por la unión a PD-1 ha sido cuestionada. Otro enfoque para apuntar al receptor PD-1 es la proteína recombinante compuesta del dominio extracelular de PD-L2 (B7-DC) fusionado a la porción Fc de IgG1, llamada AMP-224.

En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un antagonista de PD-L1, tal como un anticuerpo antagonista de PD-L1. El anticuerpo de PD-L1 se puede seleccionar entre Tecentriq (atezolizumab), durvalumab, avelumab, STI-1014 (Sorrento, véase WO2013/181634) o CX-072 (CytomX; véase WO2016/149201).

En otro aspecto, el agente de inmunooncología es un antagonista de LAG-3, tal como un anticuerpo antagonista de LAG-3. Los anticuerpos de LAG3 adecuados incluyen, por ejemplo, BMS-986016 (WO10/(19570, W O14/ 08218), o IMP-731 o IMP-321 (WO08/132601, WO09/44273).

En otro aspecto, el agente de inmunooncología es un agonista de CD137 (41BB), tal como un anticuerpo de agonista de CD137. Los anticuerpos de CD137 adecuados incluyen, por ejemplo, urelumab y PF-05082566 (WO12/32433). En otro aspecto, el agente de inmunooncología es un agonista de GITR, tal como un anticuerpo agonista de GITR. Los anticuerpos de GITR adecuados incluyen, por ejemplo, BMS-986153, BMS-986156, Tr X-518 (documento WO06/105021, WO09/009116) y MK-4166 (WO11/028683).

En otro aspecto, el agente de inmunooncología es un antagonista de IDO. Los antagonistas de IDO adecuados incluyen, por ejemplo, la JIFE-024360 (WO2006/122150, WO07/75598, WO08/36653, WO08/36642), indoximod, o NLG-919 (WO09/73620, WO09/1156652, WO11/56652, WO12/142237).

En otro aspecto, el agente de inmunooncología es un agonista de OX40, tal como un anticuerpo agonista de OX40. Los anticuerpos de OX40 adecuados incluyen, por ejemplo, MEDI-6383 o MEDI-6469.

En otro aspecto, el agente de inmunooncología es un antagonista de OX40L, tal como un antagonista de anticuerpo de OX40. Los antagonistas de OX40L adecuados incluyen, por ejemplo, RG-7888 (WO06/029879).

En otro aspecto, el agente de inmunooncología es un agonista de CD40, tal como un anticuerpo de CD40 agonístico. En otra forma de realización más, el agente de inmunooncología es un antagonista de CD40, tal como un anticuerpo de CD40 antagonista. Los anticuerpos de CD40 adecuados incluyen, por ejemplo, lucatumumab o dacetuzumab. En otro aspecto, el agente inmunooncológico es un agonista de CD27, tal como un anticuerpo agonístico de CD27. Los anticuerpos de CD27 adecuados incluyen, por ejemplo, varlilumab.

En otro aspecto, el agente de inmunooncología es MGA271 (un B7H3) (WO11/109400).

La terapia de combinación tiene por objetivo abarcar la administración de estos agentes terapéuticos de una manera secuencial, es decir, en la que cada agente terapéutico se administra en un tiempo diferente, así como la administración de estos agentes terapéuticos, o al menos dos de los agentes terapéuticos, en una manera sustancialmente simultánea. Se puede lograr una administración sustancialmente simultánea, por ejemplo, mediante la administración al sujeto de una única forma de dosificación que tenga una relación fija de cada agente terapéutico o en múltiples formas de dosificación únicas para cada uno de los agentes terapéuticos. La administración secuencial o sustancialmente simultánea de cada agente terapéutico puede efectuarse mediante cualquier ruta apropiada que incluye, pero que no se limita a, rutas orales, rutas intravenosas, rutas intratumorales, rutas intramusculares y absorción directa a través de tejidos de la membrana mucosa. Los agentes terapéuticos pueden administrarse por la misma ruta o por diferentes rutas. Por ejemplo, un primer agente terapéutico de la combinación seleccionada puede administrarse por inyección intravenosa mientras que los otros agentes terapéuticos de la combinación pueden administrarse por vía oral. Como alternativa, por ejemplo, todos los agentes terapéuticos pueden administrarse por vía oral o todos los agentes terapéuticos pueden administrarse por inyección intravenosa. La terapia de combinación también puede abarcar la administración de los agentes terapéuticos como se describió anteriormente en combinación adicional con otros ingredientes biológicamente activos y terapias no farmacológicas (por ejemplo, cirugía o tratamiento por radiación). Cuando la terapia de combinación comprende además un tratamiento sin fármaco, el tratamiento sin fármaco puede realizarse en cualquier momento adecuado siempre que se consiga un efecto beneficioso de la acción conjunta de la combinación de los agentes terapéuticos y el tratamiento sin fármaco. Por ejemplo, en casos apropiados, el efecto beneficioso se logra incluso cuando el tratamiento no farmacológico se elimina temporalmente de la administración de los agentes terapéuticos, tal vez por días o incluso semanas.

La presente invención puede incorporarse en otras formas específicas. Esta invención abarca todas las combinaciones de aspectos preferidos de la invención indicadas en la presente. Se entiende que cualquiera y todas las formas de realización de la presente invención pueden tomarse junto con cualquier una o más formas de realización adicionales. También se entiende que cada elemento individual de las formas de realización es su propia forma de realización independiente. Además, cualquier elemento de una forma de realización está destinado a combinarse con cualquiera y todos los demás elementos de cualquier forma de realización para describir una forma de realización adicional. COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS Y DOSIFICACIÓN

La invención también proporciona composiciones farmacéuticamente aceptables que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más de los compuestos de la fórmula I, formulados junto con uno o más vehículos (aditivos) y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables, y opcionalmente, uno o más agentes terapéuticos adicionales descritos arriba. Como se describe en detalle a continuación, las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden formularse especialmente para la administración en forma sólida o líquida, incluidas las adaptadas para lo siguiente: (1) administración oral, por ejemplo, soluciones o suspensiones acuosas o no acuosas), comprimidos, por ejemplo, aquellas dirigidas a la absorción bucal, sublingual y sistémica, bolos, polvos, gránulos, pastas para aplicación a la lengua; (2) administración parenteral, por ejemplo, mediante inyección subcutánea, intramuscular, intratumoral, intravenosa o epidural como, por ejemplo, una solución o suspensión estéril, o formulación de liberación sostenida; (3) aplicación tópica, por ejemplo, como crema, pomada, o un parche o aerosol de liberación controlada aplicado a la piel; o intratumoralmente.

La expresión "farmacéuticamente aceptable" se emplea en la presente para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance de un juicio médico sólido, son adecuados para el uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acorde con una relación beneficio/riesgo razonable.

La expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" como se usa en la presente significa un material, composición o vehículo farmacéuticamente aceptable, tal como un relleno líquido o sólido, diluyente, excipiente, adyuvante de fabricación (por ejemplo, lubricante, magnesio de talco, estearato de calcio o zinc, o ácido estérico), o material encapsulante de un solvente, que interviene en el transporte o acarreo del compuesto objetivo desde un órgano, o parte del cuerpo, a otro órgano, o parte del cuerpo. Cada portador debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes de la formulación y de no ser perjudicial para el paciente.

Las formulaciones de la presente invención incluyen aquellas adecuadas para administración oral, intratumoral, nasal, tópica (que incluyen bucal y sublingual), rectal, vaginal y/o parenteral. Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en forma de dosificación unitaria y se pueden preparar mediante cualquier método bien conocido en la técnica de la farmacia. La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con un material vehículo para producir una única forma de dosificación variará en función del paciente que se está tratando y del modo particular de administración. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con un material vehículo para producir una única forma de dosificación será por lo general la cantidad del compuesto que produce un efecto terapéutico. En términos generales, de un cien por ciento, esta cantidad variará de aproximadamente el 0,1 por ciento a aproximadamente el noventa y nueve por ciento de ingrediente activo, con preferencia de aproximadamente el 5 por ciento a aproximadamente el 70 por ciento, lo con mayor preferencia de aproximadamente el 10 por ciento a aproximadamente el 30 por ciento.

En determinadas formas de realización, una formulación de la presente invención comprende un excipiente seleccionado del grupo que consiste en ciclodextrinas, celulosas, liposomas, agentes formadores de micelas, por ejemplo, ácidos biliares y vehículos poliméricos, por ejemplo, poliésteres y polianhídridos; y un compuesto de la presente invención. En determinadas formas de realización, una formulación mencionada anteriormente hace que un compuesto de la presente invención sea biodisponible por vía oral.

Los métodos para preparar estas formulaciones o composiciones incluyen la etapa de poner en asociación un compuesto de la presente invención con el vehículo y, opcionalmente, uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan asociando uniforme e íntimamente un compuesto de la presente invención con vehículos líquidos, o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y luego, si es necesario, lo que dan forma al producto.

Las formulaciones de la invención adecuadas para administración oral pueden estar en forma de cápsulas, sellos, píldoras, comprimidos, pastillas (que usan una base aromatizada, generalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto), polvos, gránulos, o como una solución o una suspensión en una líquido acuoso o no acuoso, o como una emulsión líquida de aceite en agua o agua en aceite, o como elixir o jarabe, o como pastillas (mediante el uso de una base inerte, como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia) y/o como enjuagues bucales y similares, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada de un compuesto de la presente invención como ingrediente activo. Un compuesto de la presente invención también se puede administrar como un bolo, electuario o pasta.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención adecuadas para administración parenteral comprenden uno o más compuestos de la invención en combinación con una o más soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones acuosas o no acuosas isotónicas estériles farmacéuticamente aceptables, o polvos estériles que pueden reconstituirse en inyectables estériles, disoluciones o dispersiones justo antes de su uso, que pueden contener azúcares, alcoholes, antioxidantes, tampones, bacteriostáticos, solutos que hacen que la formulación sea isotónica con la sangre del receptor deseado o agentes de suspensión o espesantes.

En algunos casos, para prolongar el efecto de un fármaco, es deseable disminuir la absorción del fármaco por inyección subcutánea, intratumoral o intramuscular. Esto se puede lograr mediante el uso de una suspensión líquida de material cristalino o amorfo que tiene una escasa solubilidad en agua. La velocidad de absorción del fármaco depende entonces de su velocidad de disolución que, a su vez, puede depender del tamaño del cristal y la forma cristalina. Como alternativa, la absorción retardada de una forma de fármaco administrada por vía parenteral se logra mediante la disolución o suspensión del fármaco en un aceite vehículo .

Las formas de depósito inyectables se preparan mediante la formación de matrices microencapsuladas de los compuestos sujeto en polímeros biodegradables tales como poliláctido-poliglicólido. En función de la relación entre fármaco y polímero, y la naturaleza del polímero particular empleado, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen poli(ortoésteres) y poli(anhfdridos). Las formulaciones inyectables de depósito también se preparan mediante el atrapamiento de fármaco en liposomas o microemulsiones que son compatibles con el tejido del cuerpo.

Cuando los compuestos de la presente invención se administran como productos farmacéuticos, a humanos y animales, se les puede dar per se o como una composición farmacéutica que contiene, por ejemplo, del 0,1 al 99 % (más con preferencia, del 10 al 30 %) de ingrediente activo en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.

Independientemente de la vía de administración seleccionada, los compuestos de la presente invención, que se pueden usar en una forma hidratada adecuada y/o las composiciones farmacéuticas de la presente invención, se formulan en formas de dosificación farmacéuticamente aceptables por métodos convencionales conocidos por aquellos con experiencia en la técnica.

Los niveles de dosificación reales de los ingredientes activos en las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden variarse para obtener una cantidad del ingrediente activo que sea eficaz para lograr la respuesta terapéutica deseada para un paciente particular, composición y modo de administración, sin ser tóxicos para el paciente.

El nivel de dosificación seleccionado dependerá de varios factores que incluyen la actividad del compuesto particular de la presente invención empleada, o el éster, sal o amida del mismo, la vía de administración, el tiempo de administración, la velocidad de excreción o el metabolismo de la presente invención, el compuesto particular que se emplea, la velocidad y el grado de absorción, la duración del tratamiento, otros fármacos, compuestos y/o materiales utilizados en combinación con el compuesto particular empleado, la edad, el sexo, el peso, la condición, la salud general y los antecedentes médicos la historia del paciente que se está tratando, y factores similares bien conocidos en las artes médicas.

Un médico o veterinario que tenga experiencia ordinaria en la técnica puede determinar y prescribir fácilmente la cantidad eficaz de la composición farmacéutica requerida. Por ejemplo, el médico o veterinario podría iniciar dosis de los compuestos de la invención empleados en la composición farmacéutica a niveles inferiores a los requeridos para lograr el efecto terapéutico deseado y aumentar gradualmente la dosificación hasta que se logre el efecto deseado. Por lo general, una dosis diaria adecuada de un compuesto de la invención será la cantidad del compuesto que sea la dosis más baja efectiva para producir un efecto terapéutico. Dicha dosis efectiva generalmente dependerá de los factores descritos anteriormente. En términos generales, las dosis orales, intravenosas, intracerebroventriculares y subcutáneas de los compuestos de esta invención para un paciente variarán de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg por kilogramo de peso corporal por día.

Si bien es posible administrar un compuesto de la presente invención solo, es preferible administrar el compuesto como una formulación (composición) farmacéutica.

Definiciones

A menos que en la presente se indique específicamente lo contrario, las referencias hechas en singular también pueden incluir el plural. Por ejemplo, "un" y "una" pueden referirse a uno, o uno o más.

A menos que se indique lo contrario, se supone que cualquier heteroátomo con valencias insatisfechas tiene átomos de hidrógeno suficientes para satisfacer las valencias.

A lo largo de la memoria descriptiva y las reivindicaciones anexas, una fórmula química o nombre químico dado puede comprender todos los estereoisómeros y los isómeros ópticos y sus racematos en que existen estos isómeros. A menos que se indique otra cosa, todas las formas quirales (enantioméricas y diastereoméricas) y racémicas están dentro del alcance de la invención. Muchos isómeros geométricos de enlaces dobles C=C, enlaces dobles C=N, sistemas de anillos y similares también pueden estar presentes en los compuestos y todos estos isómeros estables están contemplados en la presente invención. Los isómeros geométricos cis y trans (o E y Z) de los compuestos de la presente invención se describen y se pueden aislar como una mezcla de isómeros o como formas isoméricas separadas. Los presentes compuestos se pueden aislar en formas ópticamente activas o racémicas. Las formas ópticamente activas se pueden preparar por resolución de formas racémicas o por síntesis a partir de materiales de partida ópticamente activos. Todos los procesos usados para preparar compuestos de la presente invención y los productos intermedios preparados en la presente se consideran parte de la presente invención. Cuando se preparan los productos enantioméricos o diastereoméricos, estos se pueden separar por medio de métodos convencionales, por ejemplo, por cromatografía o cristalización de fraccionamiento. En función de las condiciones de proceso, los productos finales de la presente invención se obtienen en forma libre (neutra) o salina. Tanto la forma libre como las sales de estos productos finales están dentro del alcance de la invención. Si se desea esto, se puede convertir una forma de un compuesto en otra forma. Una base libre o ácido libre se pueden convertir en una sal; una sal se puede convertir en el compuesto libre u otra sal; se puede separar una mezcla de compuestos isoméricos de la presente invención en los isómeros individuales. Los compuestos de la presente invención, su forma libre y sus sales pueden existir en formas tautoméricas múltiples, en donde los átomos de hidrógeno se transponen en otras partes de las moléculas y los enlaces químicos entre los átomos de las moléculas se reordenan consecuentemente. Se ha de entender que todas las formas tautoméricas, siempre que puedan existir, se incluyen dentro de la invención.

Con fines de claridad y de acuerdo con la convención estándar en la técnica, se utiliza el símbolo

en las fórmulas y tablas para mostrar la unión que es el punto de fijación de la parte o sustituyente en el núcleo de la estructura.

Adicionalmente, para fines de claridad, cuando un sustituyente tenga un guion (-) que no se encuentra entre dos letras o símbolos, este se utiliza para indicar un punto de fijación para un sustituyente. Por ejemplo, -CONH²está fijado por intermedio del átomo de carbono.

Además, por razones de claridad, cuando no se muestra un sustituyente en el extremo de una línea llena, esto indica que hay un grupo metilo (CH³) conectado a la unión.

Adicionalmente, el grupo fosforotioatol se puede dibujar como

El término “contraión” se usa para representar una especie con carga negativa tales como cloruro, bromuro, hidróxido, acetato y sulfato o una especie con carga positiva como sodio (Na+), potasio (K+), amonio (RnNHm+ donde n = 0-4 y m = 0-4), y similares.

La expresión “grupo de extracción de electrones” (EWG) se refiere a un sustituyente que polariza un enlace, extrayendo la densidad de electrones hacia sí misma y lejos de otros átomos unidos. Los ejemplos de EWG incluyen, pero sin limitación, CF³, CF²CF³, CN, halógeno, haloalquilo, NO², sulfona, sulfóxido, éster, sulfonamida, carboxamida, alcoxi, alcoxiéter, alquenilo, alquinilo, OH, C(O)alquilo, CO²H, fenilo, heteroarilo, -O-fenilo y -O-heteroarilo. Los ejemplos preferidos de EWG incluyen, pero sin limitación, CF³, CF²CF³, CN, halógeno, SO²(alquilo C^1-4), CONH(alquilo C^1-4), CON(alquilo C1-4)2 y heteroarilo. Los ejemplos de mayor preferencia de EWG incluyen, pero no se limitan a, CF³y CN.

Como se usa en la presente, la expresión "grupo protector de amina" significa cualquier grupo conocido en la técnica de la síntesis orgánica para la protección de grupos amina que son estables a un agente de reducción de éster, una hidrazina disustituida, R4-M y R7-M, un nucleófilo, un agente reductor de hidrazina, un activador, una base fuerte, una base aminada impedida y un agente de ciclación. Estos grupos protectores de amina que se ajustan a estos criterios incluyen aquellos enumerados en Wuts, P. G. M. y Greene, T.W. Protecting Groups in Organic Synthesis, 4.a Edición, Wiley (2007) y The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 3, Academic Press, New York (1981). Los ejemplos de grupos protectores de amina incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: (1) tipos de acilo como formilo, trifluoroacetilo, ftalilo y p-toluensulfonilo; (2) tipos de carbamato aromáticos tales como benciloxicarbonilo (Cbz) y benciloxicarbonilos sustituidos, 1-(p-bifenil)-1-metiletoxicarbonilo y 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (Fmoc); (3) tipos de carbamato alifáticos tales como terc-butiloxicarbonilo (Boc), etoxicarbonilo, diisopropilmetoxicarbonilo y aliloxicarbonilo; (4) tipos de carbamato de alquilo cíclicos tales como ciclopentiloxicarbonilo y adamantiloxicarbonilo; (5) tipos de alquilo tales como trifenilmetilo y bencilo; (6) trialquilsilano como trimetilsilano; (7) tipos que contienen tiol tales como feniltiocarbonilo y ditiasuccinoílo; y (8) tipos de alquilo tales como trifenilmetilo, metilo y bencilo; y tipos de alquilo sustituidos tales como 2,2,2-tricloroetilo, 2-feniletilo y t-butilo; y tipos de trialquilsilano como trimetilsilano. De acuerdo con lo mencionado en la presente, el término “sustituido” implica que al menos un átomo de hidrógeno está reemplazado con un grupo no hidrógeno, siempre que se mantengan las valencias normales y que la sustitución dé como resultado un compuesto estable. Los enlaces dobles del anillo, de acuerdo con lo utilizado en la presente, son enlaces dobles que se forman entre dos átomos de anillo adyacentes (por ejemplo, C=C, C=N o N=N).

En los casos en los que haya átomos de nitrógeno (por ejemplo, aminas) en los compuestos de la presente invención, se pueden convertir en N-óxidos por tratamiento con un agente oxidante (por ejemplo, mCPBA y/o peróxidos de hidrógeno) para obtener otros compuestos de esta invención. Así, se considera que los átomos de nitrógeno mostrados y reivindicados cubren tanto el nitrógeno mostrado como su derivado de N-óxido (N ^O ).

Cuando cualquier variable se produce más de una vez en cualquier constituyente o fórmula para un compuesto, su definición en cada aparición es independiente de su definición de cualquier otra aparición. Así, por ejemplo, si se muestra un grupo sustituido con 0-3 R, entonces dicho grupo puede estar opcionalmente sustituido con hasta tres grupos R y en cada aparición R está seleccionado, de modo independiente, de la definición de R. Además, las combinaciones de sustituyentes y/o variables son permisibles solamente si tales combinaciones dan como resultado, compuestos estables.

Cuando se muestra que un enlace para un sustituyente cruza un enlace que conecta dos átomos en un anillo, entonces tal sustituyente se puede unir con cualquier átomo en el anillo. Cuando un sustituyente se enumera sin indicar el átomo en el que tal sustituyente está unido con el resto del compuesto de una fórmula dada, entonces dicho sustituyente se puede unir por medio de cualquier átomo en tal sustituyente. Las combinaciones de sustituyentes y/o variables son permisibles solamente si tales combinaciones dan como resultado compuestos estables.

La presente invención pretende incluir todos los isótopos de átomos que se producen en los presentes compuestos. Los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico pero diferentes números másicos. A modo de ejemplo general y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen deuterio y tritio. Los isótopos de hidrógeno se pueden denotar como 1H (hidrógeno), 2H (deuterio) y 3H (tritio). Comúnmente se denotan como D para deuterio y T para tritio. En la aplicación, CD³denota un grupo metilo, en donde todos los átomos de hidrógeno son deuterio. Los isótopos de carbono incluyen 13C y 14C. Los compuestos rotulados isotópicamente de la invención pueden ser preparados en general por medio de técnicas convencionales conocidas por aquellos con experiencia en la técnica o por medio de procesos análogos a los descritos en la presente, mediante el uso de un reactivo rotulado isotópicamente apropiado en vez del reactivo no rotulado empleado de otro modo.

De acuerdo con lo utilizado en la presente, “sales farmacéuticamente aceptables” se refieren a derivados de los compuestos descritos en donde el compuesto principal se modifica preparando su ácido o base. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales minerales o de ácidos orgánicos de sales de grupos básicos tales como aminas; y sales alcalinas u orgánicas de grupos ácidos tales como ácidos carboxílicos. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario del compuesto principal formado, por ejemplo, a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Por ejemplo, tales sales no tóxicas convencionales incluyen aquellas derivadas de ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, sulfámico, fosfórico y nítrico; y las sales preparadas de ácidos orgánicos tales como ácido acético, propiónico, succínico, glicólico, esteárico, láctico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacético, glutámico, benzoico, salicílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzoico, fumárico, toluensulfónico, metansulfónico, etandisulfónico, oxálico e isetiónico, y similares.

Las sales farmacéuticamente aceptables de la presente invención se pueden sintetizar a partir del compuesto principal que contiene un resto básico o ácido por medio de métodos químicos convencionales. En general, tales sales se pueden preparar mediante la reacción de las formas de ácido o base libres de estos compuestos con una cantidad estequiométrica de la base o ácido apropiado en agua o en un solvente orgánico o en una mezcla de los dos; en general, se prefieren los medios no acuosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol o acetonitrilo. Las listas de sales apropiadas se hallan en Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22.a Edición, Allen, L. V. Jr., Ed.; Pharmaceutical Press, Londres, Reino Unido (2012).

Además, los compuestos de la fórmula I pueden tener formas profarmacológicas. Cualquier compuesto que se convertirá in vivo para proporcionar el agente bioactivo (es decir, un compuesto de la fórmula I) es un profármaco. Se conocen bien diversas formas de profármacos en la técnica. Para ejemplos de estos derivados profarmacológicos, véase:

a) Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985) y Widder, K. et al., eds., Methods in Enzymology, 112:309-396, Academic Press (1985);

b) Bundgaard, H., Chapter 5, “Design and Application of Prodrugs”, A Textbook of Drug Design and Development, pp. 113-191, Krosgaard-Larsen, P. et al., eds., Harwood Academic Publishers (1991);

c) Bundgaard, H., Adv. Drug Deliv. Rev., 8:1-38 (1992);

d) Bundgaard, H. et al., J. Pharm. Sci., 77:285 (1988);

e) Kakeya, N. et al., Chem. Pharm. Bull., 32:692 (1984); y

f) Rautio, J (Editor). Prodrugs and Targeted Delivery (Methods and Principles in Medicinal Chemistry), Vol. 47, Wiley-VCH, 2011.

Los compuestos que contienen un grupo carboxi pueden formar ésteres fisiológicamente hidrolizables que sirven como profármacos al ser hidrolizados en el cuerpo para obtener compuestos de la fórmula I per se. Estos profármacos se administran con preferencia por vía oral cuando la hidrólisis en muchas ocasiones se produce principalmente bajo la influencia de las enzimas digestivas. La administración parenteral se puede usar cuando el éster per se es activo o en aquellas ocasiones en las que la hidrólisis se produce en la sangre. Los ejemplos de ésteres fisiológicamente hidrolizables de compuestos de la fórmula I incluyen alquilo C ¹-⁶, alquil-bencilo C¹-⁶, 4-metoxibencilo, indanilo, ftalilo, metoximetilo, alcanoil-oxi C^1-6- alquilo C ^1-6(por ejemplo, acetoximetilo, pivaloiloximetilo o propioniloximetilo), alcoxicarboniloxi C^1-6- alquilo C ^1-6(por ejemplo, metoxicarbonil-oximetilo o etoxicarboniloximetilo, gliciloximetilo, fenilgliciloximetilo, (5-metil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)-metilo) y otros ésteres fisiológicamente hidrolizables bien conocidos usados, por ejemplo, en las técnicas de penicilina y cefalosporina. Estos ésteres pueden ser preparados por técnicas convencionales conocidas en la técnica.

La preparación de los profármacos es bien conocida en la técnica y se describe, por ejemplo, King, F. D., ed., en Medicinal Chemistry: Principies and Practice, The Royal Society of Chemistry, Cambridge, Reino Unido (2.a edición, reproducido, 2006); Testa, B. et al., Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism. Chemistry, Biochemistry and Enzymology, VC^hA y Wiley-VCH, Zurich, Suiza (2003); Wermuth, C. G., ed., The Practice of Medicinal Chemistry, 3.a edición, Academic Press, San Diego, CA (2008).

El término “solvato” implica una asociación física de un compuesto de esta invención con una o varias moléculas de solvente, ya sean orgánicas o inorgánicas. Esta asociación física incluye ligación de hidrógeno. En ciertas ocasiones, el solvato será capaz de aislamiento, por ejemplo, cuando una o varias moléculas de solvente se incorporan en la red cristalina del sólido cristalino. Las moléculas de solvente en el solvato pueden estar presentes en una disposición regular y/o una disposición sin orden. El solvato puede comprender ya sea una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de las moléculas de solvente. “Solvato” comprende solvatos en fase de solución y aislab les. Los solvatos de ejemplo incluyen, pero no se limitan a, hidratos, etanolatos, metanolatos e isopropanolatos. Los métodos de solvatación se conocen en general en la técnica.

Como se usa en la presente, el término "paciente" se refiere a organismos a tratar mediante los métodos de la presente invención. Tales organismos incluyen con preferencia, pero no se limitan a, mamíferos (por ejemplo, murinos, simios, equinos, bovinos, porcinos, caninos, felinos, y similares), y con mayor preferencia se refiere a seres humanos. Como se usa en la presente, la expresión "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad de un fármaco o agente farmacéutico, es decir, un compuesto de la invención, que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que se busca, por ejemplo, por un investigador o un clínico. Además, la expresión “cantidad terapéuticamente efectiva" significa cualquier cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no ha recibido tal cantidad, da como resultado un tratamiento, curación, prevención o mejora de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o una disminución en la tasa de avance de una enfermedad o trastorno. Se puede administrar una cantidad eficaz en una o más administraciones, aplicaciones o dosificaciones y no se pretende que esté limitada a una formulación o vía de administración particular. El término también incluye dentro de su alcance cantidades efectivas para reforzar una función fisiológica normal.

Como se usa en la presente, el término "tratar" incluye cualquier efecto, por ejemplo, disminución, reducción, modulación, mejora o eliminación, que da como resultado la mejora de la afección, enfermedad, trastorno y similares, o mejora de un síntoma de la misma.

Como se usa en la presente, la expresión "composición farmacéutica" se refiere a la combinación de un principio activo con un vehículo, inerte o activo, haciendo que la composición sea especialmente adecuada para uso terapéutico o de diagnóstico in vivo o ex vivo.

Los ejemplos de bases incluyen, pero no se limitan a, hidróxidos de metales alcalinos (por ejemplo, sodio), metales alcalinotérreos (por ejemplo, magnesio), hidróxidos, amoníaco y compuestos de fórmula NW ⁴+, en la que W es alquilo C^1-4y similares.

Para su uso terapéutico, las sales de los compuestos de la presente invención se consideran como farmacéuticamente aceptables. Sin embargo, las sales de ácidos y de bases que no son farmacéuticamente aceptables pueden encontrar un uso, por ejemplo, en la preparación o purificación de un compuesto farmacéuticamente aceptable.

MÉTODOS DE PREPARACIÓN

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse de varias maneras bien conocidas por aquellos con experiencia en la técnica de la síntesis orgánica. Los compuestos de la presente invención pueden sintetizarse mediante el uso de los métodos descritos a continuación, junto con métodos de síntesis conocidos en la técnica de la química orgánica sintética, o variaciones de los mismos como apreciarán aquellos con experiencia en la técnica. Los métodos preferidos incluyen, pero no se limitan a, los que se describen a continuación. Todas las referencias citadas en este documento se incorporan en la presente por referencia en su totalidad.

Los compuestos de esta invención se pueden preparar mediante el uso de las reacciones y técnicas descritas en esta sección. Las reacciones se realizan en solventes apropiados para los reactivos y materiales empleados y son adecuados para las transformaciones que se efectúan. Además, en la descripción de los métodos de síntesis descritos a continuación, debe entenderse que todas las condiciones de reacción propuestas, incluida la elección del solvente, la atmósfera de reacción, la temperatura de reacción, la duración del experimento y los procedimientos de tratamiento, se eligen según las condiciones estándar para esa reacción, que deberían ser reconocidas con facilidad por aquellos con experiencia en la técnica. Aquellos con experiencia en la técnica de la síntesis orgánica entienden que la funcionalidad presente en diversas partes de la molécula debe ser compatible con los reactivos y las reacciones propuestas. Dichas restricciones a los sustituyentes que son compatibles con las condiciones de reacción serán fácilmente evidentes para aquellos con experiencia en la técnica y en tal caso deben utilizarse métodos alternativos.

Esto a veces requerirá una evaluación para modificar el orden de los pasos de síntesis o para seleccionar un esquema de proceso particular con preferencia a otro para obtener un compuesto deseado de la invención. También se reconocerá que otra consideración importante en la planificación de cualquier ruta de síntesis en este campo es la elección juiciosa del grupo protector utilizado para la protección de los grupos funcionales reactivos presentes en los compuestos descritos en esta invención. Un informe autorizado en cuanto a las muchas alternativas para el profesional capacitado ha sido elaborado por: Greene and Wuts (Protective Groups In Organic Synthesis, cuarta edición, Wiley and Sons, 2007).

Los compuestos de la fórmula (I) pueden prepararse por referencia a los métodos ilustrados en los siguientes Esquemas. Como se muestra en la presente, el producto final es un compuesto que tiene la misma fórmula estructural que la Fórmula (I)-(III). Se entenderá que cualquier compuesto de la fórmula (I)-(III) puede producirse mediante los esquemas y mediante la selección adecuada de reactivos con la sustitución apropiada. Los solventes, las temperaturas, las presiones y otras condiciones de reacción pueden ser seleccionados con facilidad por aquellos con experiencia ordinaria. Los materiales de partida están disponibles comercialmente o pueden ser preparadas con facilidad por aquellos con experiencia ordinaria en la técnica. Los constituyentes de los compuestos son como se definen aquí o en cualquier parte en la memoria descriptiva.

Esquema 1

v

Un método de preparación de ejemplos de la presente revelación se describe en el Esquema 1. El método comienza a partir de un 2'-F ribo-nucleósido (i), en donde la nucleobase (R1 o R2) se protege apropiadamente (PG²o PG³), como con un grupo benzoílo y el grupo 5'-hidroxi se protege apropiadamente (PG¹), como con un DMTr éter y la posición 3' es una funcionalidad fosforamidita. En la etapa 1, el tratamiento con reactivos apropiados, como trifluoroacetato de piridina seguido por butilamina, da el H-fosfonato (ii). La ulterior remoción del grupo protector 5'-OH en la etapa 2, en condiciones ácidas (PG¹= DMTr) da compuestos de la fórmula iii. El compuesto resultante de la fórmula iii se puede hacer reaccionar con una fosforamidita ( iv) totalmente protegida en la etapa 3 y luego inmediatamente tiolada, por ejemplo con DDTT, para proporcionar compuestos de la fórmula v. La remoción del grupo protector del segundo ribonucleósido en la etapa 4, en condiciones apropiadas (por ejemplo, trihidrofluoruro de trimetilamina cuando PG⁴= TBDPS) proporciona compuestos de la fórmula vi. El tratamiento de compuestos vi con un reactivo de ciclación apropiado en la etapa 5, como DMOCP seguido inmediatamente con un reactivo de tiolación, como 3H-1,2-benzoditiol-3-ona en la etapa 6 da compuestos de la fórmula vii. Los compuestos de la fórmula vii se pueden tratar con un reactivo apropiado, por ejemplo NH4OH/MeOH, para remover el cianoetil y los grupos protectores de la nucleobase (PG²y PG³= benzoílo) para obtener compuestos de la fórmula ( I).

Los Ejemplos adicionales de la presente invención se pueden preparar de acuerdo con el Esquema 2.

Esquema 2

El método comienza a partir de un cicloalquilo apropiadamente sustituido o ribo-nucleósido (viii), en donde la nucleobase (R1 o R2) se protege de modo apropiado (PG²o PG³), como con un grupo benzoílo y el grupo 5'-hidroxi se protege de modo apropiado (PG¹), como con un DMTr éter y la posición 3' es una funcionalidad fosforamidita. En la etapa 1, el tratamiento con los reactivos apropiados, como trifluoroacetato de piridina seguido por butilamina, da como resultado el H-fosfonato (ix). La posterior eliminación del grupo protector de 5'-OH en la etapa 2, en condiciones ácidas (PG¹= DMTr) da como resultado los compuestos de la fórmula x . El compuesto de la fórmula x resultante se puede hacer reaccionar con una fosforamidita totalmente protegida (xi) en la etapa 3 seguido por oxidación, por ejemplo, con t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfurización, por ejemplo, con DDTT (X = S), para proporcionar los compuestos de la fórmula xii. La eliminación del grupo protector de xii en la etapa 4, en condiciones apropiadas (por ejemplo, trihidrofluoruro de trietilamina cuando PG⁴= TBDPS) proporciona compuestos de la fórmula xiii. El tratamiento de los compuestos xiii con un reactivo de ciclación apropiado en la etapa 5, como DMOCP seguido por oxidación, por ejemplo, con t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfurización, por ejemplo, con DDTT (X = S) en la etapa 6 da como resultado los compuestos de la fórmula xiv. Los compuestos de la fórmula xiv se pueden tratar con un reactivo apropiado para eliminar los grupos protectores restantes de la nucleobase, por ejemplo, NH4OH/MeOH (PG²y PG³= benzoílo) para obtener los compuestos de la fórmula ( I).

Un método adicional para la preparación de los ejemplos de la presente revelación se describe en el Esquema 3.

Esquema 3

Los compuestos de la fórmula xvi se pueden preparar a partir de un compuesto apropiadamente protegido de la fórmula xv por medio de una cantidad de vías conocidas por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el tratamiento de xv (donde PG⁵= Tritilo y PG⁴= Ac) con un compuesto heterocíclico apropiado en condiciones de Mitsunobu proporciona compuestos de la fórmula xvi. La eliminación selectiva de un grupo protector, por ejemplo, donde PG⁴= Ac, se puede llevar a cabo en una cantidad de condiciones, por ejemplo, por tratamiento con amoníaco o MeMgCl, para obtener los compuestos de la fórmula xvii. El acoplamiento de los compuestos de la fórmula xvii con una fosforamidita apropiadamente protegida (viii) seguido por oxidación, por ejemplo, con t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfurización, por ejemplo, con DDTT (X = S) proporciona los compuestos de la fórmula xviii. La posterior eliminación de grupos protectores (por ejemplo, PG⁵= Tritilo o TBDPS, PG¹= DMTr) en varias condiciones conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo, con TFA) proporciona compuestos de la fórmula xix. La macrociclación de compuestos de la fórmula xix se puede llevar a cabo en una cantidad de modos conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el tratamiento con difenilfosfito, seguido por oxidación, por ejemplo, con t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfurización, por ejemplo, con DDTT (X = S) proporciona compuestos de la fórmula xx. La eliminación de todos los grupos protectores restantes proporciona compuestos de la fórmula general (I).

Un método adicional para la preparación de ejemplos de la presente revelación se describe en el Esquema 4.

Esquema 4

Etapa 4

La reacción de compuestos de la fórmula xvii también se puede llevar a cabo con fosforamiditas de la fórmula xxi, seguido por oxidación, por ejemplo, con t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfurización, por ejemplo, con DDTT (X = S) para obtener compuestos de la fórmula general xxii. La posterior eliminación de grupos protectores (por ejemplo, PG⁵= Tritilo o TBS, PG¹= DMTr) en varias condiciones conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo, con TFA) proporciona compuestos de la fórmula xxiii. La macrociclación de compuestos de la fórmula xxiii se puede llevar a cabo en una cantidad de modos conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el tratamiento con difenilfosfito, seguido por oxidación, por ejemplo, con t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfurización, por ejemplo, con DDTT (X = S) proporciona compuestos de la fórmula xxiv. La eliminación de todos los grupos protectores restantes proporciona compuestos de la fórmula general (II).

De modo alternativo, un método adicional para la preparación de los ejemplos de la presente revelación se describe en el Esquema 5.

Esquema 5

El método comienza a partir de un nucleósido natural o modificado apropiadamente sustituido (xxv), en donde la nucleobase (R2) está apropiadamente protegida (PG = grupo protector), como con un grupo benzoílo. En la etapa 1, el tratamiento de xxv con un reactivo de organofósforo apropiado (V), por ejemplo, uno de los enumerados en la tabla 1, en un solvente apropiado (tales como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base apropiada (por ejemplo, DBU) da como resultado los compuestos de la fórmula xxvi. El tratamiento con un alcohol apropiadamente protegido (por ejemplo, xxvii) en la etapa 2, en un solvente apropiado (por ejemplo, acetonitrilo o dimetilformamida) en presencia de una base (por ejemplo, DBU) da como resultado los compuestos de la fórmula xxviii. En la etapa 3, uno o los dos grupos protectores (PG¹y PG⁵) se pueden eliminar en condiciones conocidas por los expertos en la técnica para obtener alcohol (xxix) o un diol (xxx). Los compuestos de la fórmula xxx se pueden tratar con un reactivo de organofósforo apropiado (V), por ejemplo, uno de los enumerados en la tabla 1, en un solvente apropiado (tales como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base apropiada (por ejemplo, DBU) para obtener los compuestos de la fórmula xxxiii. De modo alternativo, se pueden tratar los compuestos de la fórmula xxix con un reactivo de organofósforo apropiado (V), por ejemplo, uno de los enumerados en la tabla 1, en un solvente apropiado (tales como acetonitrilo de dimetilformamida), con una base apropiada (por ejemplo, DBU) para obtener los compuestos de la fórmula xxxi. En la etapa 6, el grupo protector (R = PG⁵) se puede eliminar para obtener el alcohol xxxii. El tratamiento de xxxii, en la etapa 7, con una base apropiada (por ejemplo, DBU) da como resultado los compuestos de la fórmula xxxiii. La eliminación de los grupos protectores restantes, de ser necesario, da como resultado los compuestos de la fórmula ( I).

Un método adicional para la preparación de ejemplos de la presente revelación se describe en el Esquema 6.

Esquema 6

El método comienza a partir de un nucleósido natural o modificado apropiadamente sustituido (xxxiv), en donde la nucleobase (R2) está apropiadamente protegida (PG = grupo protector), tales como con un grupo benzoílo. En la etapa 1, el tratamiento de xxxiv con un reactivo de organofósforo apropiado (V), por ejemplo, uno de los enumerados en la tabla 1, en un solvente apropiado (tales como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base apropiada (por ejemplo, DBU) da como resultado los compuestos de la fórmula xxxv. El tratamiento con un alcohol apropiadamente protegido (por ejemplo, xlii) en la etapa 2, en un solvente apropiado (por ejemplo, acetonitrilo o dimetilformamida) en presencia de una base (por ejemplo, DBU) da como resultado los compuestos de la fórmula xxxvi. En la etapa 3, uno o los dos grupos protectores (PG¹y PG⁵) se pueden eliminar en condiciones conocidas por los expertos en la técnica para obtener alcohol (xxxvii) o un diol (xxxviii). Los compuestos de la fórmula xxxviii se pueden tratar con un reactivo de organofósforo apropiado (V), por ejemplo, uno de los enumerados en la tabla 1, en un solvente apropiado (tales como acetonitrilo o dimetilformamida), con una base apropiada (por ejemplo, DBU) para obtener los compuestos de la fórmula xli. De modo alternativo, se pueden tratar los compuestos de la fórmula xxxvii con un reactivo de organofósforo apropiado (V), por ejemplo, uno de los enumerados en la tabla 1, en un solvente apropiado (tales como acetonitrilo de dimetilformamida), con una base apropiada (por ejemplo, DBU) para obtener compuestos de la fórmula xxxix. En la etapa 6, el grupo protector (R = PG⁵) se puede eliminar para obtener el alcohol xl. El tratamiento de xl, en la etapa 7, con una base apropiada (por ejemplo, DBU) da como resultado los compuestos de la fórmula xli. La eliminación de los grupos protectores restantes, de ser necesario, da como resultado los compuestos de la fórmula (I).

Un método adicional para la preparación de ejemplos de la presente revelación se describe en el Esquema 7.

Esquema 7

El método comienza a partir de una fosforamidita apropiadamente protegida (xliii) preparada por medio de métodos conocidos por los expertos en la técnica. El acoplamiento de los compuestos de la fórmula xliii con un alcohol apropiadamente protegido (xliv) seguido por oxidación, por ejemplo, con t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfurización, por ejemplo, con DDTT (X = S) proporciona compuestos de la fórmula xvl. La posterior eliminación de grupos protectores (por ejemplo, PG⁴= T ritilo o TBDPS, PG²= DMTr) en varias condiciones conocidas por los expertos en la técnica (por ejemplo, con TFA) proporciona compuestos de la fórmula xlvi. La macrociclación de compuestos de la fórmula xlvi se puede llevar a cabo en una cantidad de modos conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el tratamiento con difenilfosfito, seguido por oxidación, por ejemplo, con t-butilhidroperóxido (X = O) o sulfurización, por ejemplo, con DDTT (X = S) proporciona compuestos de la fórmula xvlii. La eliminación de todos los grupos protectores restantes proporciona compuestos de la fórmula general (III).

La invención se define adicionalmente en los siguientes ejemplos. Debe entenderse que los ejemplos se dan a modo de ilustración solamente. A partir de la exposición precedente y de los Ejemplos, aquellos con experiencia en la técnica pueden determinar las características esenciales de la invención. Como resultado, la invención no está limitada por los ejemplos ilustrativos expuestos a continuación, sino que se define por las reivindicaciones adjuntas a la misma.

Abreviaturas

Pueden utilizarse las siguientes abreviaturas en la siguiente sección de Ejemplos y en otras partes en la presente:

Ejemplos 1-1 y 1-2

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-12-hidroxi-3-sulfanil-12-sulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,06,9]octadecan-3-ona

Preparación del producto intermedio 1A:

1A

A una solución a -78 °C de bis((1R,2S,5R)-2-isopropil-5-metilciclohexil)fumarato (5 g, 12,7 mmol) en tolueno (64 ml) se añadió cloruro de dietilaluminio (25 ml, 25 mmoL) gota a gota, bajo nitrógeno. La reacción se agitó a -78 °C durante 10 min, luego se añadió 1,1-dimetoxieteno (1,3 ml, 14 mmol) y la reacción se agitó durante 10 min más. La reacción se inactivó con adición gota a gota de 1 ml de metanol y 1 ml de hidróxido de sodio acuoso al 15 %. Metanol (2,5 ml) se añadió y la mezcla se agitó durante 10 min. A la mezcla se añadió 1 g de sulfato de magnesio y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. La suspensión se filtró a través de un taco de Celite y el filtrado se concentró al vacío para dar el producto crudo. El material crudo se purificó por cromatografía flash sobre 120 g de gel de sílice (gradiente de 20 min, con 0-10 % de acetato de etilo en hexanos) y luego se recristalizó en 95:5 metanol:agua para dar el Producto intermedio 1A (5,6 g, 91 %) en forma de un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 4,85 - 4,66 (m, 2H), 3,56 - 3,49 (m, 1H), 3,36 - 3,28 (m, 3H), 3,16 (s, 3H), 2,61 (dd, J=11,9, 10,7 Hz, 1H), 2,22 - 2,15 (m, 1H), 2,11 - 1,96 (m, 2H), 1,93 - 1,80 (m, 1H), 1,75 - 1,65 (m, 3H), 1,62 - 1,34 (m, 8H), 1,12 - 0,84 (m, 18H), 0,80 -0,75 (m, 6H).

Preparación del producto intermedio 1B:

1B

A una solución a 0 °C del Producto intermedio 1A (17 g, 35,4 mmol) en THF (88 ml) se añadió LAH (2,013 g, 53,0 mmol). La reacción se calentó lentamente hasta temperatura ambiente, luego se calentó a 55 °C durante 5 h, seguido por agitación a temperatura ambiente durante 16 h. La solución se enfrió hasta 0 °C, se inactivó con 5 ml de agua, 5 ml de 15 % de NaOH ac., lentamente se calentó hasta TA y se agitó durante 10 min. Se añadió agua (20 ml) y la mezcla se agitó a TA durante 10 min. A esta mezcla se añadieron 10 g de MgSO4 y la agitación se continuó durante 10 min. Luego se filtró a través de un taco de Celite y el filtrado se concentró al vacío. El material resultante se disolvió en 200 ml de hexanos y se extrajo con agua (3x150 ml). Los extractos acuosos combinados se saturaron con sulfato de amonio. La fase acuosa se extrajo (3x125 ml) con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio), se filtraron y se concentraron al vacío para dar el Producto intermedio 1B (3,74 g, 60 %) en forma de un aceite incoloro transparente. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 53,84 - 3,71 (m, 3H), 3,56 (dd, J = 10,4, 8,3 Hz, 1H), 3,21 (d, J = 2,2 Hz, 6H), 2,49 - 2,24 (m, 2H), 2,23 - 1,95 (m, 2H), 1,72 (ddd, J = 12,4, 7,6, 1,0 Hz, 2H).

Preparación del producto intermedio 1C:

1C

A una solución de Producto intermedio 1B (1 g, 5,7 mmol) e imidazol (0,97 g, 14 mmol) en DCM (28 ml) se añadió terc-butilclorodifenilsilano (3 ml, 11,6 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla resultante se lavó con agua y bicarbonato de sodio acuoso al 50 %, luego se secó (sulfato de sodio) y se concentró al vacío. El material crudo se purificó por cromatografía flash sobre 80 g de gel de sílice (gradiente de 20 min, con 0-10 % de acetato de etilo en hexanos) para obtener el Producto intermedio 1C. (3,7 g, 100 %) en forma de un aceite incoloro transparente. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ó 7,74 - 7,62 (m, 8h ), 7,45 - 7,32 (m, 12H), 3,88 (dd, J = 10,3, 8,4 Hz, 1H), 3,72 - 3,58 (m, 3H), 3,20 (d, J = 8,8 Hz, 6H), 2,51 - 2,45 (m, 1H), 2,25 (dd, J = 11,7, 8,8 Hz, 1H), 1,90 - 1,74 (m, 2H), 1,03 (d, J = 4,2 Hz, 18H).

Preparación del producto intermedio 1D:

1D

Una mezcla del producto intermedio 1C (3,6 g, 5,5 mmol) y ácido tósico (0,10 g, 0,55 mmol) en 28 ml de acetona se agitó a temperatura ambiente durante 3 días. El solvente se removió al vacío. La mezcla se dividió en EtOAc y agua, la capa orgánica se separó y la fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se concentraron al vacío. El material crudo se purificó por cromatografía flash sobre 80 g de gel de sílice (gradiente de 20 min, con 0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para obtener el Producto intermedio 1D (3,3 g, 97 %) en forma de un aceite incoloro transparente. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ó 7,69 - 7,63 (m, 8H), 7,47 - 7,35 (m, 12H), 3,99 (dd, J = 10,6, 4,0 Hz, 1H), 3,92 - 3,82 (m, 2H), 3,71 (dd, J = 10,6, 3,8 Hz, 1H), 3,34 -3,28 (m, 1H), 3,04 - 2,80 (m, 2H), 1,33 - 1,27 (m, 1H), 1,10 - 0,98 (m, 18H).

Preparación del producto intermedio 1E:

1E

A una solución a -78 °C del producto intermedio 1D (3,3 g, 5,4 mmol) en 27 ml de THF se añadió L-Selectride (5,9 ml, 5,9 mmol) gota a gota, bajo nitrógeno. La reacción se agitó a -78 °C durante 20 min y luego se inactivó lentamente con agua. Se añadió peróxido de hidrógeno (0,55 ml, 5,4 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. A esta mezcla se añadió bicarbonato de sodio acuoso al 50 % y se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. La mezcla se extrajo con EtOAc y las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se concentraron al vacío. El material crudo se purificó por cromatografía flash sobre 80 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-30 % de acetato de etilo en hexanos) para obtener el Producto intermedio 1E (2,38 g, 73 %) en forma de un aceite incoloro transparente. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ⁶7,79 - 7,54 (m, ⁸H), 7,48 - 7,28 (m, 12H), ^{4 , 5 4}- ^{4 , 4 6}(m, 1H), 4,03 - 3,90 (m, 1H), 3,68 - 3,55 (m, 2H), 3,19 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 2,53 (br s, 1H), 2,38 (dquin, J = 10,4, 5,3 Hz, 1H), 2,28 - 2,19 (m, 1H), 2,16 - 2,12 (m, 1H), 1,11 - 1,08 (m, 9H), 1,05 - 1,04 (s, 9H).

Preparación del producto intermedio 1F:

1F

A una solución a 0 °C del producto intermedio 1E (0,38 g, 0,62 mmol) y piridina (0,08 ml, 0,94 mmol) en 2 ml de diclorometano se añadió una solución de anhídrido tríflico (0,13 ml, 0,75 mmol) en 1 ml de diclorometano. La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 10 min y luego se inactivó con agua helada y se diluyó con 10 ml de diclorometano. La solución se lavó con 5 ml de bisulfato de sodio acuoso al 5 %. La capa orgánica se separó, se secó (sulfato de sodio) y se concentró in vacuo. El producto intermedio 1F crudo se usó en la siguiente etapa sin ulterior purificación.

Preparación del producto intermedio 1G:

1G

A una suspensión de N-(9H-purin-6-il)benzamida (2 g, 8,36 mmol) en DCM (41,8 ml) se añadió hidróxido de tetrabutilamonio (40 % ac.) (5,45 ml, 8,36 mmol) a TA. Después de 5 minutos, la reacción se volvió una solución turbia. El solvente se removió in vacuo y el material resultante se azeotropó 2 x 30 ml con tolueno y 30 ml de EtOAc para dar un sólido blanquecino. El sólido se trituró con Et²O y luego se recolectó por filtración al vacío para dar el Producto intermedio 1G (4 g, ⁸mmol, 100 % de rendimiento) en forma de un sólido blanquecino. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d⁶) ⁶8,30 (s, 1H), 8,10 (br d, J = 7,2 Hz, 2H), 7,90 (s, 1H), 7,56 - 7,42 (m, 3H), 3,21 - 3,11 (m, ⁸H), 1,57 (quin, J = 7,9 Hz, ⁸H), 1,31 (sxt, J = 7,3 Hz, ⁸H), 0,94 (t, J = 7,3 Hz, 12H).

Preparación del producto intermedio 1H:

1H

A una suspensión a 0 °C del Producto intermedio 1G (1,56 g, 3,24 mmol) en THF (32 ml) se añadió una solución del producto intermedio 1F (2,4 g, 3,2 mmol) en 2 ml de diclorometano durante 5 min. La reacción se calentó hasta TA y se agitó durante 16 h. La mezcla se dividió en acetato de etilo y agua y la capa orgánica se lavó con agua y salmuera y luego se secó (sulfato de sodio) y se concentró al vacío. El material crudo se purificó por cromatografía flash sobre 40 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-100 % de acetato de etilo en hexanos) para obtener el Producto intermedio 1H (0,49 g, 18 %) en forma de un aceite. LCMS, [M+H]+ = 830

Preparación del producto intermedio 1I:

1I

Una mezcla del producto intermedio 1H (0,44 g, 0,53 mmol) y trihidrofluoruro de trietilamina (0,34 ml, 2,1 mmol) en acetonitrilo (2,6 ml) se agitó en un matraz de teflón a TA durante 16 h. El solvente se removió luego al vacío. El material crudo se purificó por cromatografía flash sobre 12 g de gel de sílice (gradiente de 10 min, con 0-20 % de metanol en diclorometano) para obtener el Producto intermedio 1I (0,126 g, 67 %) en forma de una espuma blanca. LCMS, [M+H]+= 354

Preparación del producto intermedio 1J:

1J

A una mezcla bifásica del producto intermedio 1I (0,64 g, 1,8 mmol) en DMF (5,7 ml)/DIPEA (3,2 ml, 18 mmol) se añadió TBDPS-Cl (0,93 ml, 3,6 mmol) a temperatura ambiente y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se dividió en acetato de etilo y agua, y la capa orgánica se lavó con HCl 1 N seguido por bicarbonato de sodio saturado y luego se secó (sulfato de sodio) y se concentró al vacío. El material crudo se purificó por cromatografía flash sobre 40 g de gel de sílice (gradiente de 20 min, con 0-20 % de metanol en diclorometano) para obtener una mezcla de productos. La mezcla luego se purificó por ISCO en fase inversa sobre 150 g de Gold C18 con 25-100 % de solvente A:(95 % de agua con 0,05% de T ^fA: 5 % de ACN), solvente B (95 % de ACN: 5 % de agua con 0,05 % de TFA) para obtener el Producto intermedio 1J (0,22 g, 20 % de rendimiento) en forma de una espuma blanca. LCMS, [M+H]+ = 592

Preparación del producto intermedio 1K:

1K

A una solución del producto intermedio 1J (0,061 g, 0,10 mmol) en DCM (0,51 ml) se añadió una solución de 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (8,5 mg, 0,072 mmol) en 0,2 ml de ACN. A la reacción se añadió 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi)propanonitrilo (0,049 ml, 0,155 mmol) gota a gota y la reacción se agitó a TA durante 16 h. La mezcla se diluyó con diclorometano, se lavó con bicarbonato de sodio acuoso al 50 %, se secó (sulfato de sodio) y se concentró al vacío. El material crudo se purificó por cromatografía flash sobre 4 g de gel de sílice (gradiente de 10 min, con 0-100 % de acetato de etilo en hexanos) para obtener el Producto intermedio 1K (0,072 g, 88 % de rendimiento) en forma de un sólido.

Preparación del producto intermedio 1L:

1L

Una solución de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il 2-cianoetil diisopropilfosforamidita (Sigma-Aldrich, 2 g, 2,3 mmol) en ACN (5 ml) se trató con agua (0,05 ml, 2,7 mmol), seguido por trifluoroacetato de piridina (0,53 g, 2,7 mmol) La solución incolora se agitó durante 10 min y luego se concentró al vacío para obtener una espuma rosada clara. El sólido resultante se disolvió en MeCN (5 ml) y se concentró hasta sequedad. El material resultante nuevamente se disolvió en MeCN (5 ml). Una solución de DBU (2,75 ml, 18,3 mmol) en ACN (6 ml) y nitrometano (1 ml, 18,3 mmol.) se preparó. A esta solución de DBU se añadió la solución de ACN anterior en una porción y la mezcla se agitó durante 20 min. La reacción luego se vertió en una solución acuosa al 15 % en peso de KH²PO⁴(25 ml) y 2-MeTHF (20 ml) y se agitó. La capa acuosa se extrajo con 2-MeTHF (20 ml) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa al 15 % en peso de KH²PO⁴(2 x 20 ml), luego una solución de salmuera (20 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró al vacío. El gel resultante se secó por destilación azeotrópica con 2-MeTHF (30-40 ml/g totales, cargado en 8-10 ml). El material crudo luego se disolvió en DCM (20 ml). Metanol (1 ml.) se añadió, seguido por ácido dicloroacético (0,8 ml, 10,8 mmol). La reacción se agitó durante 3 h. A esta mezcla se añadió piridina (2 ml, 27 mmol.) y luego la mezcla se concentró al vacío en un residuo de tipo gel. Se añadió dimetoxietano (10 ml) y se precipitó un sólido blanco. Los sólidos se recolectaron por filtración y se resuspendieron en DME (2,5 ml/g) y se agitaron cuidadosamente con una espátula en el filtro. Los sólidos se filtraron otra vez y el proceso se repitió dos veces más para obtener el Producto intermedio 1L en forma de un polvo blanco (1 g, 72 %).

Preparación del producto intermedio 1M:

1M

El Producto intermedio 1K (0,119 g, 0,150 mmol) se azeotropó con ACN (3x1 ml) y luego se disolvió en 0,5 ml de ACN. El Producto intermedio 1L (0,076 g, 0,173 mmol) y trifluoroacetato de piridina (0,044 g, 0,225 mmol) se combinaron y se azeotroparon con piridina (2 x 0,5 ml) y 1 ml de ACN y luego se disolvió en 0,5 ml de ACN. A esta solución, bajo nitrógeno se añadió la solución del producto intermedio 1K anterior. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A la reacción se añadió (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formidamida (0,032 g, 0,158 mmol) y la solución amarilla brillante resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. La mezcla se dividió en EtOAc y bicarbonato de sodio acuoso al 10 %. Las capas se separaron y la capa acuosa se extrajo 2x5 ml con EtOAc. Las capas orgánicas combinadas se secaron (sulfato de sodio) y se concentraron al vacío. El material se purificó por ISCO en fase inversa sobre columna C18 de 150 g con 25-100 % de solvente A:(agua:ACN:acetato de amonio 95/5/0,01 M) solvente B:(ACN:agua:acetato de amonio 95/5/0,01 M) para obtener el Producto intermedio 1M (0,054 g, 31 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco después de liofilización. LCMS, [M+H]+= 1161,5.

Preparación del producto intermedio 1N:

1N

A una solución del producto intermedio 1M (0,061 g, 0,053 mmol) en ACN (2 ml) se añadió trihidrofluoruro de trietilamina (0,086 ml, 0,526 mmol) a TA. La reacción se agitó a TA durante 6 h y luego se calentó a 50 °C durante 5 h. La reacción se inactivó con carbonato de calcio (0,158 g, 1,577 mmol) y luego se agitó a TA durante 10 min. Los sólidos resultantes se filtraron, y el filtrado se concentró al vacío. El material crudo se purificó por ISCO en fase inversa sobre una columna C18 de 50 g con 0-100 % de agua:ACN:acetato de amonio 95/5/0,01 M a ACN:agua:acetato de amonio 95/5/0,01 M) para dar el Producto intermedio 1N (20 mg, 41 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco después de la liofilización. LCMS, [M+H]+= 922,2

Preparación del producto intermedio 1O:

1O

Se azeotropó el Producto intermedio 1N (0,02 g, 0,022 mmol) con piridina (5 x 1 ml) y luego se disolvió en piridina (2 ml). 2-óxido de 2-cloro-5,5-dimetil-1,3,2-dioxafosfinano (0,012 g, 0,065 mmol) se azeotropó con piridina (5x1 ml) y luego se disolvió en piridina (2 ml) y se enfrió hasta 0 °C. La solución del producto intermedio 1N anterior luego se añadió gota a gota durante un período de 20 min. La reacción se calentó lentamente hasta temperatura ambiente y luego se agitó durante 30 min. A la reacción se añadió (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formidamida (5,8 mg, 0,03 mmol) y agua (8 pl, 0,4 mmol) y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. El solvente se removió al vacío. La mezcla cruda se purificó por ISCO en fase inversa sobre 50 g de C18 con 0-100 % de agua:ACN:acetato de amonio 95/5/0,01 M a ACN:agua:acetato de amonio 95/5/0,01 M) para dar el Producto intermedio 1O (0,0196 g, 97 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco después de la liofilización. LCMS, [M+H]+= 936,2.

Ejemplos 1-1 y 1-2

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-12-hidroxi-3-sulfanil-12-sulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatricido[13,3,0,06,9]octadecan-3-ona

Diastereómero 1 (1 -1) Diastereómero 2 (1 -2)

Una mezcla del producto intermedio 1O (0,0196 g, 0,021 mmol) y amoníaco (7 M en MeOH) (0,5 ml, 3,50 mmol) en acetonitrilo (0,5 ml)/MeOH (0,500 ml) se agitó a 40 °C durante 16 h. El material crudo se purificó por LC/MS preparativa con las siguientes condiciones para obtener dos diastereómeros: Columna: Agilent Bonus RP 21,2 x 100 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo; gradiente: 0 % de B se mantiene a 0-6 minutos. 0 %-40 % de B durante 20 minutos, luego se mantiene durante 4 minutos al 100 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinaron y se secaron por evaporación centrífuga.

Ejemplo 1-1: 1,9 mg. Tiempo de retención: 2,14 min. (Columna: Agilent Bonus RP, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,8 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo. Temperatura: 50 °C; gradiente: 0 % de B se mantiene a durante 1 min, luego 0 % de B a 100 % de B durante 4 min, luego se mantiene a 0,75 min al 100 % de B; flujo: 1 ml/min; detección: MS y UV (220 nm)). Masa observada: 675,01.

Ejemplo 1-2: 2,5 mg, Tiempo de retención: 2,28 min (Columna: C18 Waters XBridge, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,7 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; temperatura: 50 °C; gradiente: 0 % de B a 100 % de B durante 3 min, luego se mantiene a 0,75 min al 100 % de B; flujo: 1 ml/min; detección: MS y UV (220 nm). Masa observada: 675,16.

De modo alternativo, los Ejemplos 1-1 y 1-2 se pueden preparar junto con los Ejemplos 2-1 y 2-2 como se describe más abajo.

Ejemplos 2-1, 1-1,2-2 y 1-2

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-diona

Diastereómero 2 (2-2)

Diastereómero 4 (1-2)

Preparación del producto intermedio 2A:

A una solución de 1B (24 g, 136 mmol) en tolueno (1362 ml) a temperatura ambiente se añadió acetato de vinilo (129 g, 1498 mmol). A continuación, se añadió lipasa de páncreas porcino (Sigma, 36 g, 136 mmol) en una porción y se agitó la suspensión clara resultante a temperatura ambiente durante 21,6 h. Luego se filtró la mezcla a través de Celite y se enjuagó la torta filtrante con EtOAc. Luego se evaporaron los filtrados combinados in vacuo y se purificó el residuo por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 330 g ISCO que eluye con 0-100 % de acetato de etilo en hexano para obtener 2A (30 g, 137 mmol, 101 % de rendimiento) en forma de un aceite que se usó como tal en la siguiente reacción. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ó 4,27 - 3,99 (m, 2H), 3,88 - 3,61 (m, 2H), 3,33 - 3,05 (m, 6H), 2,46 - 2,32 (m, 2H), 2,32 - 2,17 (m, 1H), 2,12 - 2,00 (m, 3H), 1,88 - 1,73 (m, 1H).

Preparación del producto intermedio 2B:

2B

Se añadió ácido tósico (1,307 g, 6,87 mmol) en una porción a una solución de 2A (30 g, 137 mmol) en acetona (500 ml) a temperatura ambiente. Se dejó agitar la reacción a temperatura ambiente durante 3 h en cuyo punto la reacción estaba completa. Se añadió Et3N (1,916 ml, 13,75 mmol) y se evaporó la mezcla in vacuo. Luego se purificó el residuo por ISCO mediante el uso de un gradiente de hexano/acetato de etilo - producto eluido con acetato de etilo puro. Luego se combinaron y evaporaron las fracciones que contenían producto. Durante la evaporación, no se aplicó calor y 2B (22 g, 93 %) se obtuvo en forma de un aceite. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ó 4,44 - 4,22 (m, 2H), 4,02 - 3,88 (m, 1H), 3,85 - 3,69 (m, 1H), 3,41 - 3,25 (m, 1H), 3,17 - 3,02 (m, 1H), 2,97 - 2,85 (m, 1H), 2,85 - 2,66 (m, 1H), 2,20 -2,09 (m, 3H), 1,86 - 1,72 (m, 1H).

Preparación del producto intermedio 2C:

2C

Se trató una solución 2B (23,67 g, 137 mmol) en DCM anhidra (916 ml) a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno con Et3N (30,7 ml, 220 mmol) seguido por DMAP (1,680 g, 13,75 mmol). Luego se añadió (Clorometantriil)tribenceno (49,8 g, 179 mmol) en una porción y se dejó agitar la mezcla resultante a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno durante la noche. Se inactivó la reacción por la adición de solución saturada de bicarbonato de sodio (200 ml). Luego se extrajo la capa acuosa con una porción adicional de DCM (100 ml) y las capas orgánicas combinadas luego se secaron (MgSO⁴) y se evaporaron in vacuo. Luego se purificó el aceite resultante en una columna de 330 g ISCO que eluye con 0-40 % de acetato de etilo en hexano para obtener 2C (31,83 g, 55,9 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ó 7,57 - 7,39 (m, 6H), 7,39 - 7,18 (m, 9H), 4,41 - 4,21 (m, 2H), 3,57 - 3,42 (m, 1H), 3,34 - 3,24 (m, 1H), 3,24 - 3,11 (m, 2H), 2,95 - 2,78 (m, 2H), 2,07 - 1,93 (m, 3H).

Preparación del producto intermedio 2D:

2D

Se añadió LS-Selectride (36,2 ml, 36,2 mmol) gota a gota por medio de un embudo de ecualización de presión a una solución agitada de 2C (12 g, 29,0 mmol) a -78 °C bajo una atmósfera de nitrógeno. La adición tomó un total de 30 min para completarse. Luego se dejó la reacción bajo agitación a -78 °C durante 40 min. Se inactivó la reacción por la adición lenta de solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio (85 ml) y luego se eliminó y se reemplazó el baño frío con un baño de agua helada. Cuando la temperatura interna alcanzó 0 °C, se añadió peróxido de hidrógeno (59,1 ml, 579 mmol) gota a gota por medio de una pipeta de vidrio. Se dejó agitar la mezcla resultante a temperatura ambiente durante ~4 h antes de diluir con agua y extraer con acetato de etilo (3x). Luego se lavaron las capas orgánicas combinadas con solución saturada de bicarbonato de sodio, se secaron (MgSO4) y se evaporaron in vacuo. Se purificó este material crudo por cromatografía en columna en un sistema ISCO que eluye con un gradiente del 0-40 % de acetato de etilo/hexano. Se recolectaron y se evaporaron las fracciones para proporcionar 2D (7,75 g, 18,61 mmol, 64,3 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) ó 7,60 - 7,42 (m, 6H), 7,42 - 7,18 (m, 10H), 4,61 - 4,40 (m, 1H), 4,13 - 4,02 (m, 2H), 3,47 - 3,27 (m, 2H), 2,71 - 2,65 (m, 1H), 2,65 - 2,44 (m, 2H), 2,20 - 2,11 (m, 2H), 2,11 -2,02 (m, 3H).

Preparación del producto intermedio 2E:

Se añadió a una solución a 0 °C de Ph3P (1,071 g, 4,08 mmol) en THF (20 ml)/tolueno (4 ml) DIAD (0,700 ml, 3,60 mmol). Se agitó la reacción a 0 °C durante 30 min. Se añadió a la reacción 6-cloro-9H-purina (0,557 g, 3,60 mmol) y 2D (1,0 g, 2,4 mmol). Se agitó la reacción a 50 °C durante 16 h y luego se concentró in vacuo. Se purificó el material crudo por cromatografía flash sobre 40 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-100 % de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar 2E (1,0 g, 1,8 mmol, 75 % de rendimiento) en forma de una espuma blanca. [M+H]+ = 553,2.

Preparación del producto intermedio 2F:

2F

Se añadió a una solución a 0 °C de 2E (1,74 g, 3,15 mmol) en THF (16 ml) cloruro de metilmagnesio (3 M en THF) (2,1 ml, 6,3 mmol). Se calentó la mezcla hasta temperatura ambiente y se agitó la reacción durante 2 h. Luego se inactivó la reacción con cloruro de amonio acuoso saturado y se agitó a temperatura ambiente durante 10 min. Luego se dividió la mezcla en EtOAc y agua, se separó la capa orgánica y se extrajo la fase acuosa con EtOAc. Se secaron las capas orgánicas combinadas (sulfato de sodio) y se concentraron in vacuo. Se purificó el material crudo por cromatografía flash sobre 80 g de gel de sílice (gradiente de 15 minutos, con 0-100 % de EtOAc/DCM) para obtener 2F (1,16 g, 2,27 mmol, 72 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 511,3.

De modo alternativo, se puede preparar 2F a partir de 1B como se describe más abajo:

Preparación del producto intermedio 2G:

2G

Se añadió a una solución del producto intermedio 1B (4,0 g, 22,70 mmol) en piridina (60 ml) a 0 °C cloruro de benzoílo (6,59 ml, 56,7 mmol). Se dejó calentar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se inactivó la reacción con agua y luego se diluyó con acetato de etilo, se transfirió a un embudo de separación, se lavó con HCl 1M (3x), salmuera (2x), bicarbonato de sodio saturado (3x), salmuera (3x) y luego se secó (sulfato de sodio). Se filtró la mezcla y se concentró el filtrado para proporcionar el producto crudo. Se disolvió el material crudo en un mínimo de hexano y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 220 g, que eluye con 0-25 % de acetato de etilo/hexanos, luego 25-100 % de acetato de etilo/hexanos, 150 ml/min) para proporcionar el producto intermedio 2G (8,06 g, 20,97 mmol, 92 % de rendimiento). 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 8,21 - 7,91 (m, 4H), 7,64 - 7,51 (m, 2H), 7,42 (q, J = 7,4 Hz, 4H), 4,74 - 4,53 (m, 1H), 4,49 - 4,32 (m, 3H), 3,25 (d, J = 15,5 Hz, 6H), 2,93 - 2,66 (m, 1H), 2,58 - 2,44 (m, 1H), 2,42 - 2,28 (m, 1H), 2,04 - 1,82 (m, 1H).

Preparación del producto intermedio 2H:

2H

Se añadió a una solución del producto intermedio 2G (6,2 g, 16,13 mmol) en acetonitrilo (100 ml) a 0 °C ácido sulfúrico concentrado (1,631 ml, 29,0 mmol). Se dejó calentar la mezcla resultante hasta temperatura ambiente y agitar durante la noche. Luego se diluyó la mezcla de reacción con acetato de etilo, se lavó con agua, bicarbonato de sodio saturado (3x) y salmuera (3x). Se secó la capa orgánica (sulfato de sodio), se filtró y se concentró para proporcionar el sólido blanco crudo. Se disolvió el sólido en una cantidad mínima de diclorometano y se purificó por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 220 g ISCO (2 min mantenido al 0 % de gradiente, luego gradiente de 19 min, que eluye con 0-75 % de acetato de etilo en hexanos) para proporcionar el producto intermedio 2H (4,44 g, 13,12 mmol, 81 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. 1H RMN (499 m Hz , CLOROFORMO-d) ó 8,19 -7,89 (m, 4H), 7,67 - 7,53 (m, 2H), 7,45 (dd, J = 8,1, 3,1 Hz, 4H), 4,60 (d, J = 6,4 Hz, 4H), 3,80 - 3,59 (m, 1H), 3,31 -3,21 (m, 1H), 3,15 - 3,05 (m, 1H), 3,03 - 2,92 (m, 1H).

Preparación del producto intermedio 2I:

2I

Se añadió LS-Selectride (1 M THF) (21,03 ml, 21,03 mmol) gota a gota durante 15 min a una solución a -78 °C del producto intermedio 2H (5,93 g, 17,53 mmol) en THF (85 ml). Se agitó la mezcla resultante a -78 °C durante 45 min. Se inactivó la reacción con agua (6 ml) seguido por la adición de peróxido de hidrógeno (30 %) (2,148 ml, 21,03 mmol). Se eliminó el baño de enfriamiento y la mezcla se calentó hasta temperatura ambiente. Se diluyó la reacción con acetato de etilo, se transfirió a un embudo de separación y se dividió con bicarbonato de sodio saturado. Se extrajo la mezcla con acetato de etilo. Se lavó la capa orgánica con salmuera (3x), se secó (sulfato de sodio), se filtró y se concentró para proporcionar un aceite transparente. Se disolvió el aceite en una cantidad mínima de diclorometano y se purificó por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 330 g ISCO (gradiente de 28 min, que eluye con 0-60 % de acetato de etilo/hexanos, 200 ml/min) para proporcionar el producto intermedio 2I (3,66 g, 10,75 mmol, 61,4 % de rendimiento) en forma de un aceite transparente. LCMS, [M+H]+ = 341.

Preparación del producto intermedio 2J:

2J

Se añadió a una solución de producto intermedio 2I, (2,49 g, 7,32 mmol) en THF (35 ml) a 0 °C borhidruro de litio (2 M en THF, 4,02 ml, 8,05 mmol). Después de 25 min, se eliminó el baño de enfriamiento y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 4 h. Se enfrió la mezcla de reacción hasta 0 °C y se añadió lentamente ácido acético (0,440 ml, 7,68 mmol), seguido por agua (30 ml). Se diluyó la reacción con acetato de etilo, se transfirió a un embudo de separación, se lavó con agua y salmuera. Se secó la capa orgánica con sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró en un aceite. Se disolvió el aceite en una cantidad mínima de diclorometano y se purificó por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 120 g ISCO (gradiente de 19 min, eluido con 0-8 % de metanol/diclorometano, 80 ml/min) para proporcionar el producto intermedio 2J (1,09 g, 4,61 mmol, 63,1 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 237. 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 8,06 (dd, J = 8,3, 1,3 Hz, 2H), 7,59 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,51 - 7,41 (m, 2H), 4,91 - 4,57 (m, 1H), 4,37 (dd, J = 9,5, 6,4 Hz, 2H), 3,96 (br s, 2H), 2,54 (br d, J = 5,4 Hz, 3H), 2,39 - 2,07 (m, 3H).

Preparación del producto intermedio 2K:

Se añadió a una solución a 0 °C de producto intermedio 2J (1,05 g, 4,44 mmol) en piridina (25 ml) cloruro de tritilo (1,858 g, 6,67 mmol). Se dejó calentar la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se inactivó la reacción con metanol (10 ml), se agitó durante 10 minutos y luego se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo resultante en diclorometano, se transfirió a un embudo de separación, se lavó con agua y salmuera. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar un aceite transparente. Se disolvió el aceite en una cantidad mínima de diclorometano y metanol y se purificó por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 80 g ISCO (gradiente de 26 min, eluido con 0-50 % de acetato de etilo/hexano, 60 ml/min) para obtener producto intermedio 2K (1,78 g, 3,72 mmol, 84 % de rendimiento) en forma de un aceite transparente espeso. 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 8,16 - 7,98 (m, 2H), 7,68 - 7,54 (m, 1H), 7,48 (dd, J = 8,5, 1,3 Hz, 8H), 7,38 - 7,30 (m, 6H), 7,28 (s, 4H), 4,65 - 4,46 (m, 1H), 4,44 - 4,24 (m, 2H), 3,59 - 3,28 (m, 2H), 2,68 (d, J = 6,3 Hz, 2H), 2,39 - 2,15 (m, 2H).

Preparación del producto intermedio 2L:

2L

Se añadió diisopropil (E)-diacen-1,2-dicarboxilato (123 mg, 0,606 mmol) gota a gota a una solución a 0 °C del producto intermedio 2K (145 mg, 0,303 mmol), 6-cloro-9H-purina (94 mg, 0,606 mmol) y trifenilfosfina (159 mg, 0,606 mmol) en THF (2 ml). Se agitó la mezcla resultante a 50 °C durante 1 h, se enfrió hasta TA, luego se inactivó con MeOH (0,2 ml), diclorometano (2,5 ml) y trietilamina (0,1 ml). Se agitó la mezcla durante 10 min y se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en una cantidad mínima de diclorometano y se purificó por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 24 g ISCO (eluido con 0-50 % de acetato de etilo/hexano, luego se lavó con 50-100 % de acetato de etilo/hexanos), 35 ml/min) para proporcionar el producto intermedio 2L (169 mg, 0,275 mmol, 91 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 615.

Preparación del producto intermedio 2F:

2F

Se añadió cloruro de metilmagnesio (1,008 ml, 3,02 mmol) una solución a 0 °C de producto intermedio 2L (186 mg, 0,302 mmol) en THF (2 ml). Se agitó la mezcla a 0 °C durante 30 min, luego a TA durante 1 h. Se inactivó la reacción con metanol, se diluyó con solución saturada de cloruro de amonio y acetato de etilo y se agitó para obtener capas transparentes. Se transfirió la mezcla a un embudo de separación, se diluyó con acetato de etilo, se lavó con solución saturada de cloruro de amonio y luego salmuera. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró in vacuo para proporcionar un aceite amarillo. Se disolvió el aceite en una cantidad mínima de diclorometano y se purificó por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 24 g ISCO (eluido con 0-100 % de acetato de etilo/hexanos, 35 ml/min) para obtener 2F (60 mg, 0,117 mmol, 38,8 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 511. 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 9,07 - 8,57 (m, 1H), 8,29 - 7,89 (m, 1H), 7,42 - 7,34 (m, 6H), 7,28 (s, 9H), 4,86 - 4,61 (m, 1H), 3,88 - 3,65 (m, 2H), 3,51 - 3,28 (m, 2H), 3,04 - 2,84 (m, 1H), 2,72 - 2,60 (m, 1H), 2,54 - 2,42 (m, 1H), 2,40 - 2,26 (m, 2H).

Preparación del producto intermedio 2M:

2M

Se azeotropó una mezcla de IH-tetrazol (32,9 mg, 0,470 mmol) y el producto intermedio 2F (200 mg, 0,391 mmol) con acetonitrilo (3 x 5 ml) y luego se resuspendió en acetonitrilo (2,5 ml) y se dejó bajo una atmósfera de nitrógeno. Por separado, se azeotropó (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il (2-cianoetil) diisopropilfosforamidita (Sigma-Aldrich, 377 mg, 0,431 mmol) con acetonitrilo (3x5 ml) y se volvió a disolver en acetonitrilo (2,5 ml). Se añadió esta solución, bajo nitrógeno, a la solución de producto intermedio 2F y 1H-tetrazol preparada con anterioridad. Se dejó agitar la reacción durante 1h y luego se añadió (E)-W,W-dimetil-W-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (96 mg, 0,470 mmol) y se agitó durante 30 min. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo, se disolvió en MeOH y se purificó en columna C18 ISCO Gold 150 g en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de acetato de amonio; gradiente: 0-100 % de B en 15 volúmenes de columna para proporcionar el producto intermedio 2M (450 mg, 0,341 mmol, 87 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco después de liofilización. LCMS, [M+H]+ = 1317/1318.

Preparación del producto intermedio 2N:

2N

Se añadió a una solución de producto intermedio 2M en DCM (8 ml) trietilsilano (1 ml, 6,26 mmol) seguido por la adición de TFA (0,146 ml, 1,897 mmol). Se agitó la reacción durante 1 h y luego se trató con piridina (0,307 ml, 3,79 mmol) y se concentró a un aceite. Se disolvió el residuo en MeOH y se purificó en columna C18 ISCO Gold 50 g en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo: agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: mantenido al 0 % de B para 2 volúmenes de columna, 0-100 % de B para 20 volúmenes de columna para proporcionar el producto intermedio 2N (225 mg, 0,291 mmol, 77 % de rendimiento) en forma de un sólido después de liofilización. LCMS, [M+H]+ = 773.

Preparación del producto intermedio 2O:

Se añadió a una solución del producto intermedio 2N (0,250 g, 0,323 mmol) en piridina (16,17 ml) fosfonato de difenilo (0,088 ml, 0,453 mmol) gota a gota durante un período de 20 minutos a TA. Luego se añadió a la mezcla de reacción (£)-W,W-dimetil-W-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,106 g, 0,517 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se añadió otra porción de (£)-W,W-dimetil-W-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,106 g, 0,517 mmol) y se agitó la reacción a TA durante 5 h. Se concentró la reacción in vacuo, se disolvió en metanol, se filtró y se concentró el filtrado in vacuo para proporcionar el producto crudo. Se purificó el material en columna C18 ISCO Gold 50 g en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo: agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: 5-100 %, gradiente de 15 min para proporcionar el producto intermedio 2O (230 mg, 0,270 mmol, 84 % de rendimiento) en forma de mezcla de diastereómeros después de liofilización. LCMS, [M+H]+ = 851.

Ejemplos 2-1, 1-1,2-2 y 1-2:

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-diona

Diastereómero 2 (2-2)

Diastereómero 4 (1-2

A la mezcla diastereomérica, al producto intermedio 2O (0,23 g, 0,270 mmol) se añadió hidróxido de amonio (5,26 ml, 135 mmol) y se agitó la mezcla a 40 °C durante 16 h. Se eliminó el solvente in vacuo y se separaron los diastereómeros en un W ater Autopure con una columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x l50 mm con agua/acetonitrilo (0,1 % de ácido fórmico) como eluyente para proporcionar los Ejemplos 2-1, 1-1, 2-2 y 1-2.

Ejemplo 2-1: 7,5 mg. Método analítico de LCMS A ; tR: 0,38 min; masa observada: 675,1;

^{Ejemplo 1-1:} ^{6 mg. Método analítico de LCMS A} ; ^{tR: 0,40 min; masa observada: 675,0;}

^{Ejemplo 2-2:} ^{11 mg. Método analítico de LCMS A} ; ^{tR: 0,42 min; masa observada: 675,1;}

^{Ejemplo 1-2:} ^{15,8 mg. Método analítico de LCMS A} ; ^{tR: 0,46 min; masa observada: 675,1;}

Ejemplos 3

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-8-{4-hidroxi-1H-imidazo[2,1-b]purin-1-il}-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-ditiona

Diastereómeros 1 (3-1)

Diastereómeros 2 (3-2)

Diastereómeros 3 (3-3)

Diastereómeros 3 (3-4)

Preparación del producto intermedio 3A

Se enfrió una solución con contenido de trifenilfosfina (732 mg, 2,79 mmol) en una mezcla de THF (12 ml)/tolueno (6 ml) en un baño de hielo y se trató gota a gota con DIAD (0,525 ml, 2,70 mmol). Se añadió a la suspensión resultante una solución con contenido de producto intermedio 2D (750 mg, 1,801 mmol) y acetato de ((1S,2R,3R)-3-(2-(bis(fercbutoxicarbonil)amino)-6-cloro-9H-purin-9-il)-2-(tritiloximetil)ciclobutil)metilo (Preparado como en el Journal of Organic Chemistry (2000), 65(22), 7697-7699 ; 999 mg, 2,70 mmol) en THF (5 ml). Se eliminó el baño de hielo y se agitó la reacción a 35 °C durante 20 h. Se enfrió la mezcla de reacción hasta TA y se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice de 80 g ISCO y se purificó mediante el uso del sistema Teledyne ISCO, que eluye en un gradiente de 20 min con 0-100 % de DCM/EtOAc para proporcionar el producto intermedio 3A (900 mg, 1,171 mmol, 65,1 % de rendimiento) LCMS, [M+H]+ = 768

Preparación del producto intermedio 3B:

3B

Se añadió a una solución de producto intermedio 3A (1,9 g, 2,473 mmol) en dioxano (3 ml) ácido fórmico (6 ml, 156 mmol) y H2O (1 ml, 55,5 mmol)). Se agitó la mezcla a 75 °C durante 3,5 h, luego a 50 °C durante la noche. Luego se concentró la mezcla de reacción y se coevaporó el residuo con tolueno dos veces y luego con MeOH. Se disolvió el residuo en MeOH (70 ml), se enfrió hasta 0 °C y se trató con amoníaco en EtOH (2 M, 2,473 ml, 4,95 mmol), la mezcla se agitó durante 1 h y luego se añadió otra porción de amoníaco en EtOH (2 M, 1,0 ml) y se agitó la mezcla durante 1 h. Luego se concentró la mezcla de reacción hasta sequedad y se disolvió el residuo en DMF (8 ml). Se añadieron imidazol (0,505 g, 7,42 mmol) y TBS-Cl (0,745 g, 4,95 mmol) y se agitó la mezcla a TA durante 1 h. Se añadió agua y se extrajo la mezcla con EtOAc dos veces. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con 10 % de LiCl, salmuera, se secaron sobre MgSO4 y se concentraron. Se purificó el residuo por columna de sílice de 40 g, 0-10 % de gradiente de MeOH/DCM para proporcionar el producto intermedio 3B (0,57 g, 1,352 mmol, 54,7 % de rendimiento).

Preparación del producto intermedio 3C:

A una solución de producto intermedio 3B (0,57 g, 1,352 mmol), 2-(4-nitrofenil)etan-1-ol (0,339 g, 2,028 mmol) y Ph3P (0,532 g, 2,028 mmol) en 1,4-dioxano (10 ml) se añadieron DiAD (0,394 ml, 2,028 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante la noche y luego se concentró. Se purificó el residuo por cromatografía en columna de gel de sílice (24 g, 0-100 % de EtOAc/DCM), luego se purificó el producto obtenido por cromatografía en columna C18 ISCO en fase inversa (50 g Gold, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: 5-100 % de B). Se disolvió el producto resultante en MeOH (5 ml), se añadió NH ³ (7 N en MeOH, 1 ml) y se agitó la mezcla a TA durante la noche. Se añadió otra porción de NH ³ (7 N en MeOH, 9 ml) y se agitó la reacción a TA durante la noche. Luego se concentró la mezcla de reacción para proporcionar el producto intermedio 3C (415 mg, 0,785 mmol, 58,1 % de rendimiento). 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,23 - 8,14 (m, 2H), 8,04 - 8,00 (m, 1H), 7,66 - 7,58 (m, 2H), 4,84 - 4,72 (m, 2H), 4,63 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 3,90 - 3,77 (m, 1H), 3,76 - 3,69 (m, 3H), 3,30 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,06 - 2,90 (m, 1H), 2,63 - 2,47 (m, 1H), 2,35 - 2,12 (m, 2H), 0,79 (s, 9H), 0,02 (d, J = 3,0 Hz, 6H). LCMS, [M+H]+ = 529.

Preparación del producto intermedio 3D:

Se añadió a una solución de producto intermedio 3C (415 mg, 0,785 mmol) en EtOH/pH = 4,5 tampón de acetato de amonio (12 ml/12 ml) 2-bromoacetaldehído (1,3 M en etanol/1 M HCl, 3,0 ml, 3,90 mmol). Se agitó la mezcla a TA durante la noche. Luego se añadió otra porción de 2-bromoacetaldehído (1,3 M en Etanol/1 M HCl, 3,0 ml, 3,90 mmol) y se agitó la reacción a TA durante la noche. Luego se concentró la mezcla de reacción para eliminar la mayor parte del EtOH y se extrajo la capa acuosa con DCM dos veces. Se lavaron los extractos combinados con NaHCO3 saturado ac., salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron in vacuo. Se purificó el residuo por cromatografía flash en columna de gel de sílice (12 g, 0-10 % de gradiente de MeOH/DCM para proporcionar el producto intermedio 3D (154 mg, 0,279 mmol, 35,5 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 553.

Preparación del producto intermedio 3E:

Se concentró una solución del producto intermedio 3D (100 mg, 0,181 mmol) y 1H-tetrazol (63,4 mg, 0,905 mmol) en MeCN (6 ml) hasta sequedad en el evaporador rotativo. Este proceso se repitió dos veces, donde la última vez se concentra a ~3 ml de CH³CN residual. Se añadió MS 4Á activado (8 piezas) y se agitó la mezcla bajo una atmósfera de N²(g). Por separado, se azeotropó (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il (2-cianoetil) diisopropilfosforamidita (Sigma-Aldrich, 238 mg, 0,271 mmol) con MeCN dos veces, donde el último azeotropado se deja ~ 3 ml de CH³CN residual. Se añadió MS 4Á activado (8 piezas). Se transfirió esta solución a la solución anterior por cánula, se enjuagó con MeCN seco (2 x 2 ml) para una transferencia completa. Se agitó la reacción a TA durante 1 h, y luego se añadió (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (74,3 mg, 0,362 mmol) y se agitó la reacción a TA durante la noche. Se filtró y se concentró la mezcla de reacción in vacuo. Se disolvió el residuo en DCM y se lavó con NaHCO3 ac. Se concentró la capa orgánica para obtener el producto intermedio 3E (246 mg) que se usó como tal en la siguiente etapa.

Preparación del producto intermedio 3F:

3F

A una solución del producto intermedio crudo 3E (246 mg, 0,181 mmol) en DCM (4 ml) se añadió MeOH (0,073 ml, 1,809 mmol) y ácido dicloroacético (0,060 ml, 0,724 mmol). Se agitó la reacción durante 20 min y se añadió más ácido dicloroacético (0,060 ml, 0,724 mmol) y se agitó la mezcla durante 1 h. A la mezcla de reacción se añadió piridina (0,5 ml) y luego se concentró la mezcla y se coevaporó el residuo con tolueno. Se cargó el residuo resultante en celite y se purificó en una columna C18 en fase inversa (50 g GOLD, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con acetato de amonio; gradiente: 0-100 % de B) para proporcionar O-((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il) O-(((1S,2R,3R)-2-(((tercbutildimetilsilil)oxi)metil)-3-(4-(4-nitrofenetoxi)-1H-imidazo[2,1-b]purin-1-il)ciclobutil)metil) O-(2-cianoetil) fosforotioato (100 mg) y el producto intermedio 3F. El O-((2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-il) O-(((1S,2R,3R)-2-(((terc-butildimetilsilil)oxi)metil)-3-(4-(4-nitrofenetoxi)-1H-imidazo[2,1-b]purin-1-il)ciclobutil)metil) O-(2-cianoetil) fosforotioato (100 mg) aislado anterior se trató con TFA/DCM (1,5 ml/1,5 ml) y se agitó a TA durante 3 h. Luego se diluyó la mezcla de reacción con tolueno y se concentró. Se disolvió el residuo en DCM y se lavó con NaHCO³saturado ac. Se combinó la capa orgánica con el producto intermedio 3F de antes, se concentró y se cargó en celite y se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice (columna de 12 g, 0-10 % de gradiente de MeOH/DCM) para obtener el producto intermedio 3F (119 mg, 0,126 mmol, 69,7 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 943.

Preparación del producto intermedio 3G:

Se azeotropó el producto intermedio 3F (119 mg, 0,126 mmol) con piridina (6 ml), se disolvió en piridina (25 ml) y luego se concentró en aproximadamente ~15 ml. A TA, se añadió una solución de fosfonato de difenilo (59,1 mg, 0,252 mmol) en piridina (1,5 ml) durante 4 h. Luego se añadió (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (78 mg, 0,379 mmol) en una porción y se agitó la mezcla a TA durante la noche. Se inactivó la reacción con agua (0,1 ml) y se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en DCM/MeOH, se cargó en celite y se purificó en columna C18 ISCO Gold 50 g en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: 0-100 % de B durante 25 min. Las fracciones que contenían el producto deseado se concentraron para obtener el producto intermedio 3G (113 mg, 88 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 1021.

Preparación del producto intermedio 3H:

Se añadió a una solución del producto intermedio 3G (110 mg, 0,108 mmol) en MeOH (4 ml) se añadió NH⁴OH (27 % ac., 7 ml). Se sonicó la mezcla y luego se agitó a TA durante 3,5 h. Luego se almacenó la mezcla en el refrigerador durante tres días y luego se calentó hasta TA y se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en una pequeña cantidad de MeOH y agua, se cargó en un cartucho de carga sólido y se purificó por columna C18 ISCO Gold 50 g ac. en fase inversa para compuestos polares; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: 0-70 % de B. Las fracciones que contienen el producto deseado se concentraron para proporcionar el producto intermedio 3H (120 mg, 0,139 mmol, 129 % de rendimiento).

Ejemplos 3

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-8-{4-hidroxi-1H-imidazo[2,1-b]purin-1-il}-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,06'9]octadecano-3,12-ditiona

Diastereómeros 1 (3-1)

Diastereómeros 2 (3-2)

Diastereómeros 3 (3-3)

Diastereómeros 4 (3-4)

Se disolvió el producto intermedio 3H (110 mg, 0,127 mmol) en piridina (2 ml) y se añadió DBU (0,288 ml, 1,910 mmol) y se agitó la mezcla a 30 °C durante dos días. Luego se diluyó la mezcla de reacción con acetonitrilo y se añadió AcOH se añadió (0,109 ml, 1,910 mmol). Se concentró la mezcla y se azeotropó el residuo con ACN dos veces más. Se disolvió el residuo resultante en H²O/acetonitrilo y se purificó por columna C18 ISCO Gold 50 g en fase inversa; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: 0-30 % de B. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron, se concentraron y se liofilizaron para proporcionar una mezcla de diastereómeros (87 mg) que se separaron por condiciones cromatográficas de HPLC preparativa: Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc(pH 6,5); B: MeOH (% de A=100- % de B); gradiente: 5 % de B mantenido durante 2 min, 5-26 % de B durante 24,5 min, 29-95 % de B durante 0,5 min, 95-5 % de B durante 1 min. Detección: 260 nm. Se concentraron las fracciones que contenían los productos deseados para obtener los Ejemplos 3-1, 3-2, 3-3 y 3-4.

Ejemplo 3-1: 6,4 mg; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 7; masa observada: 715,2; tR: 9,14 min. 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 9,02 - 8,97 (m, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,00 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,41 (d, J = 15,4 Hz, 1H), 5,52 - 5,36 (m, 1H), 5,35 - 5,20 (m, 1H), 5,07 - 4,97 (m, 1H), 4,54 (dt, J = 11,4, 2,8 Hz, 1H), 4,48 - 4,37 (m, 2H), 4,31 (dd, J = 11,4, 2,1 Hz, 1H), 4,22 - 4,14 (m, 1H), 4,12 - 3,98 (m, 2H), 3,13 - 3,01 (m, 1H), 2,75 - 2,59 (m, 2H), 2,32 (q, J = 10,0 Hz, 1H).

Ejemplo 3-2: 12,1 mg; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 7; masa observada: 715,2; tR: 10,05 min. 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 9,05 - 8,90 (m, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,97 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,28 (br d, J = 1,2 Hz, 1H), 6,41 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 5,53 - 5,30 (m, 1H), 5,24 - 5,07 (m, 1H), 5,05 - 4,96 (m, 1H), 4,61 - 4,52 (m, 1H), 4,50 - 4,41 (m, 2H), 4,24 (br d, J = 9,4 Hz, 2H), 4,13 - 3,98 (m, 2H), 3,25 - 3,14 (m, 1H), 2,65 (br t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,40 - 2,27 (m, 1H).

Ejemplo 3-3: 9,6 mg; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 7; 715,2; tR: 13,36 min. 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,72 - 8,61 (m, 1H), 8,29 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,09 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,39 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 5,66 - 5,45 (m, 1H), 5,39 - 5,23 (m, 1H), 5,15 - 5,02 (m, 1H), 4,60 (dt, J = 11,7, 3,1 Hz, 1H), 4,50 - 4,37 (m, 2H), 4,28 (br dd, J = 11,7, 3,0 Hz, 1H), 4,21 - 4,07 (m, 2H), 4,06 - 3,95 (m, 1H), 3,11 - 2,99 (m, 1H), 2,73 -2,59 (m, 2H), 2,35 - 2,19 (m, 1H).

Ejemplo 3-4: 9,5 mg; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 7; 715,2; tR: 14,78 min. 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,72 - 8,59 (m, 1H), 8,30 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,07 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,40 (dd, J = 15,1, 1,1 Hz, 1H), 5,61 - 5,41 (m, 1H), 5,10 - 5,04 (m, 2H), 4,56 (dt, J = 11,8, 3,6 Hz, 1H), 4,49 (br d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,36 - 4,21 (m, 3H), 4,17 - 4,06 (m, 1H), 3,99 (dt, J = 10,5, 7,0 Hz, 1H), 3,17 - 3,09 (m, 1H), 3,08 - 3,01 (m, 1H), 2,67 - 2,58 (m, 2H).

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 7

Instrumento: Agilent 1290; columna: columna C18 Xselect CSH, 3,5 pm, 2,0 X150 mm; tasa de flujo: 0,3 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de NH⁴OAC (pH 6,5); B: MeOH (% de A=100- % de B); gradiente: 0-50 % de B durante 15 min, 50-95 % de B durante 2 min.

Ejemplos 4-1 y 4-2:

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,06'9]octadecano-3,12-ditiona

Diastereómero 1 (4-1)

Diastereómero 2 (4-2)

Preparación del intermediario 4A:

4A

A una solución de N-(9-((2R,3R,4S,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-((ferc-butildimetilsilil)oxi)-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-il)benzamida (ArkPharm Inc, 10,3 g, 13,07 mmol) en DCM anhidra (50 ml) se añadió 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (1,0 M en acetonitrilo, 9,15 ml, 9,15 mmol), seguido por la adición gota a gota de 3-((bis(diisopropilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo (4,73 g, 15,69 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 4 h y luego se añadió 3-((bis(diisopropilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo adicional (3 g, 9,89 mmol) y se agitó la reacción a TA durante la noche. Se inactivó la reacción con MeOH anhidro (1,2 ml) y se agitó durante 10 min, luego se diluyó con DCM, se lavó con NaHCO³saturado y se secó sobre MgSO⁴. TEA (1 ml) se añadió, la mezcla se filtró y se concentró el filtrado in vacuo. Se purificó el residuo por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 120 g ISCO (la columna se pretrató con 1 % de TEA/hexano, luego se ejecutó con EtOAc/hexano = 0-100 %) para proporcionar producto intermedio 4A (12,8 g, 12,95 mmol, 99 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 905.

Preparación del producto intermedio 4B:

4B

Se concentraron una mezcla de producto intermedio 2F (0,322 g, 0,630 mmol) y IH-tetrazol (0,053 g, 0,756 mmol) en acetonitrilo anhidro (5 ml) hasta sequedad en el evaporador rotativo (2 x 5 ml) y luego se resuspendieron en acetonitrilo (2,5 ml) y se dejaron bajo una atmósfera de nitrógeno. Por separado, se concentró el producto intermedio 4A (0,685 g, 0,693 mmol) en ACN anhidro (2,5 m) hasta sequedad in vacuo. Se disolvió el residuo en ACN (1 ml) y se añadió gota a gota a la mezcla agitada de antes a TA. Se agitó la mezcla de reacción bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 16 h. Luego se añadió (E)-W,W-dimetil-W-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,155 g, 0,756 mmol) y se agitó la mezcla a TA durante 2 h. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo y se purificó el material crudo por cromatografía flash sobre 24 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-20 % de MeOH en DCM) para obtener el producto intermedio 4B (0,97 g, 0,678 mmol, 108 % de rendimiento) en forma de una espuma. LCMS, [M+H]+ = 1429,9

Preparación del producto intermedio 4C:

4C

A una solución de producto intermedio 4B (0,97 g, 0,678 mmol) y trietilsilano (1,083 ml, 6,78 mmol) en diclorometano (13,57 ml) se añadieron TFA (0,157 ml, 2,035 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 1 h y luego se añadió agua (5 ml). Se inactivó la reacción con bicarbonato de sodio acuoso saturado hasta que cesó la producción de gas. La capa orgánica se separó y se extrajo la capa acuosa con DCM (2 x 10 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron (sulfato de magnesio), se filtraron y se concentró el filtrado in vacuo. Se suspendió el material crudo en éter dietílico, se agitó a temperatura ambiente durante 1 h para formar un polvo fino que luego se recolectó por filtración in vacuo, mediante el lavado con hexanos y éter dietílico. Se dividió el material en hexanos y metanol. Se separó la capa de metanol y se lavó con hexanos (2 x 10 ml). Luego se concentró la capa de metanol in vacuo para proporcionar el producto intermedio 4C (0,4845 g, 81 % de rendimiento) en forma de un sólido amarillo pálido. LCMS, [M+H]+ = 885.

Preparación del producto intermedio 4D:

4D

Se preparó el producto intermedio 4D a partir del producto intermedio 4C de acuerdo con el procedimiento descrito para el producto intermedio 2O. Se purificó el material crudo en una columna C18 ISCO Gold 50 g en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: 0-100 % durante 15 min para proporcionar el producto intermedio 4D (0,2 g, 0,208 mmol, 98 % de rendimiento) en forma de un sólido. LCMS, [M+H]+ = 963.

Preparación del producto intermedio 4E:

Se agitó una mezcla del producto intermedio 4D (0,165 g, 0,171 mmol) y trihidrofluoruro de trietilamina (0,139 ml, 0,856 mmol) en piridina (1,7 ml) a TA durante 16 h. Se inactivó la reacción con carbonato de calcio (0,86 g, 8,56 mmol), se diluyó con MeOH y se filtró. Se concentró el filtrado in vacuo para proporcionar una mezcla de dos diastereómeros del producto intermedio 4E (0,145 g, 0,171 mmol, 100 % de rendimiento) en forma de un aceite. LCMS, [M+H]+ = 849.

Ejemplos 4-1 y 4-2:

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,069]octadecano-3,12-ditiona

Diastereómero 1 (4-1)

Diastereómero 2 (4-2)

Se agitó la mezcla diastereomérica del producto intermedio 4E (0,045 g, 0,053 mmol) e hidróxido de amonio saturado (2 ml, 51,4 mmol) a TA durante 1 h y luego se calentó hasta 50 °C durante 16 h. Se concentró la mezcla de reacción in vacuo y luego se liofilizó en un producto crudo sólido. Se purificó el material crudo por LC preparativa con las siguientes condiciones: Columna: Agilent Bonus RP, 200 mm x 19 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo: agua con 20 mM de acetato de amonio; gradiente: mantenimiento de 6 minutos al 0 % de B, 0-25 % de B durante 20 minutos, luego un mantenimiento de 4 minutos al 100 % de B; tasa de flujo: 20 ml/min; temperatura de columna: 25 C. La recolección de fracciones se disparó por señales de MS. Las fracciones con contenido del producto deseado se combinaron y se secaron por evaporación centrífuga. Se aislaron dos diastereómeros.

Ejemplo 4-1: 1,4 mg; Método analítico de LCMS B; tR: 2,19 min; masa observada: 672,82.

Ejemplo 4-2: 3,2 mg: Método analítico de LCMS B; tR: 2,28 min; masa observada: 672,95.

Ejemplos 5-1,5-2, 5-3 y 5-4:

9-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-8-il]-6,9-dihidro-1H-purin-6-ona

Preparación del producto intermedio 5A:

5A

A una solución de producto intermedio 2E (0,6 g, 1,085 mmol) en dioxano (9,04 ml) se añadió hidróxido de sodio (0,121 g, 3,04 mmol). Se agitó la reacción durante 16 h, luego a 60 °C durante 3 días. A continuación, LiOH (1,0 M ac., 3,25 ml, 3,25 mmol) se añadió y se agitó la reacción a 60 °C durante 16 h. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo para eliminar solventes orgánicos. Se extrajo la fase acuosa restante con EtOAc y la capa orgánica combinada se secó (MgSO4) y se concentró in vacuo. Se purificó el material crudo por cromatografía flash sobre 40 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-10 % de MeOH en DCM) para obtener producto intermedio 5A en forma de un sólido. LCMS, [M+H]+ = 493,4

Preparación del producto intermedio 5B:

Se preparó el producto intermedio 5B de acuerdo con el mismo procedimiento que el descrito para el producto intermedio 4B. Se purificó el material crudo por cromatografía flash sobre 40 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-20 % de MeOH en DCM) para obtener una mezcla de producto intermedio 5B y producto intermedio 5C (1,0 g) en forma de un aceite.

Preparación del producto intermedio 5C:

A la mezcla de producto intermedio 5B y producto intermedio 5C (1,0 g, 0,770 mmol) de antes y trietilsilano (0,615 ml, 3,85 mmol) en diclorometano (15,39 ml) se añadió TFA (0,178 ml, 2,309 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 1 h. Se añadió agua (5 ml) y la mezcla de reacción se inactivó con bicarbonato de sodio acuoso saturado hasta que cesó la producción de gas. Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con DCM (2x10 ml) y con 2-Me-THF (2x10 ml). Las capas orgánicas se combinaron y se secaron (sulfato de magnesio) y se concentraron in vacuo. Se suspendió el residuo en éter dietílico y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Se formó un polvo fino y se recolectó por filtración in vacuo, mediante el lavado con hexanos y éter dietílico. Se dividió el material en hexanos y metanol. Se separó la capa de metanol y se lavó con hexanos (2x10 ml). La capa de metanol se concentró in vacuo para proporcionar el producto intermedio 5C (0,49 g, 0,649 mmol, 84 % de rendimiento) en forma de un sólido amarillo pálido. LCMS, [M+H]+ = 755

Preparación del producto intermedio 5D:

A una solución a 0 °C de producto intermedio 5C (0,44 g, 0,583 mmol) en piridina (21,20 ml) se añadió una solución de fosfonato de difenilo (0,135 ml, 0,700 mmol) en piridina (2,10 ml) gota a gota durante un período de 1 h. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 16 h. Luego se trató la mezcla con (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,180 g, 0,875 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 3 h. Se concentró la mezcla de reacción in vacuo. Se purificó el residuo en columna C18 ISCO Gold 50 g en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: 0-100 % de B durante 15 min para proporcionar el producto intermedio 5D (0,081 g, 16,68 % de rendimiento) en forma de una mezcla sólida de diastereómeros después de liofilización. LCMS, [M+H]+ = 833.

Ejemplos 5-1,5-2, 5-3 y 5-4:

Diastereómeros 4 (5-4)

A la mezcla diastereomérica de producto intermedio 5D (0,081 g, 0,097 mmol) se añadió amoníaco (7 N en MeOH, 6,95 ml, 48,6 mmol) y se agitó la mezcla a TA durante 1 h. Luego se calentó la reacción hasta 50 °C durante 3 h. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo y se purificó el residuo en una columna C18 ISCO Gold 50 g en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: 0-100 % de B durante 15 min para proporcionar una mezcla de diastereómeros que se separaron por LC/MS preparativa con las siguientes condiciones: Columna: Agilent Bonus RP 21,2 x 100 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo; gradiente: 0 % de B mantenido durante 0-6 minutos. 0 %-25 % de B durante 16 minutos, luego un mantenimiento de 4 minutos al 100 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones con contenido del producto deseado se combinaron y se secaron por evaporación centrífuga.

Ejemplo 5-1: 3,5 mg; Método analítico de LCMS B; masa observada: 676,0; tiempo de retención: 2 min.

Ejemplo 5-2: 3 mg; Método analítico de LCMS B; masa observada: 676,0; tiempo de retención: 2,05 min.

Ejemplo 5-3: 3,5 mg; Método analítico de LCMS B; masa observada: 676,0; tiempo de retención: 2,14 min. Ejemplo 5-4: 3,1 mg; Método analítico de LCMS B; masa observada: 676,0; tiempo de retención: 2,29 min.

Ejemplos 6-1,6-2, 6-3 y 6-4:

(1S,6S,8R,9R,15R,17R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-17-{4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-3-hidroxi-12-sulfanil-3-sulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-12-ona

Diastereómeros 4 (6-4)

Preparación del producto intermedio 6A:

A un recipiente de base redonda se añadió KOH en polvo (1,279 g, 22,79 mmol), acetonitrilo anhidro (50 ml), tris(2-(2-metoxietoxi)etil)amina (0,292 ml, 0,912 mmol) y se agitó la mezcla a TA durante 5 min. Se añadió a la suspensión resultante 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1 g, 6,51 mmol) y se continuó agitando a temperatura ambiente durante 5 minutos más. Se añadió a la suspensión resultante (2R,3S,5R)-5-cloro-2-(((4-metilbenzoil)oxi)metil)tetrahidrofuran-3-il 4-metilbenzoato (Carbosynt, 2,53 g, 6,51 mmol) en porciones durante un período de 5 minutos y se continuó agitando a TA durante 30 minutos. Luego se filtró la mezcla de reacción y se lavó el residuo con MeCN. Se concentró el filtrado y se purificó por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de una columna de 120 g ISCO (gradiente de 27 min, con 0-50 % de acetato de etilo en hexanos). Las fracciones con contenido de producto se combinaron y se concentraron in vacuo para obtener el producto intermedio 6A (1,95 g, 3,85 mmol, 59,2 % de rendimiento) en forma de un sólido incoloro. 1H RMN (499 MHz, DMSO-d6) ó 8,65 (s, 1H), 7,99 - 7,94 (m, 3H), 7,85 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,38 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,80 - 6,74 (m, 2H), 5,76 (dt, J = 6,3, 2,4 Hz, 1H), 4,66 - 4,50 (m, 3H), 3,21 - 3,13 (m, 1H), 2,77 (ddd, J = 14,3, 6,1, 2,5 Hz, 1H), 2,41 (s, 3H), 2,38 (s, 3H). LCMS, [M+H]+ = 506,2, tR 1,17 min, Método analítico de LCMS A.

Preparación del producto intermedio 6B:

6B

Se calentó una suspensión de producto intermedio 6A (1,90 g, 3,76 mmol) en amoníaco frío (7 N en metanol, 0,54 ml, 3,76 mmol) hasta TA y se agitó bajo una atmósfera de nitrógeno durante 24 h. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo. Se purificó el residuo blanco resultante por cromatografía flash sobre 80 g de gel de sílice (gradiente de 26 min, eluido con 0-20 % de MeOH en DCM) para obtener el producto intermedio 6B (0,83 g, 3,08 mmol, 82 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 270

Preparación del producto intermedio 6C:

6C

Se concentró una solución de producto intermedio 6B (0,83 g, 3,08 mmol) en piridina (3 ml) hasta sequedad en un evaporador rotativo. Al residuo se añadió piridina (20 ml), DMTr-Cl (1,095 g, 3,23 mmol), DM^aP (0,019 g, 0,154 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 14 h. Luego se inactivó la mezcla de reacción con metanol y se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en DCM y se lavó con solución saturada de NaHCO3. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de una columna de 80 g ISCO (gradiente de 40 min, eluido con 0-100 % de EtOAc en hexanos con 0,5 % de TEA. Las fracciones con contenido de producto se combinaron y se concentraron in vacuo para obtener el producto intermedio 6C (1,66 g, 2,90 mmol, 94 % de rendimiento). 1H RMN (499 MHz, DMSO-d6) ó 8,63 (s, 1H), 7,80 (d, J = 3,8 Hz, 1H), 7,40 - 7,29 (m, 2H), 7,27 - 7,16 (m, 7H), 6,90 - 6,76 (m, 4H), 6,69 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 6,63 (t, J = 6,6 Hz, 1H), 5,40 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,49 - 4,39 (m, 1H), 3,98 (q, J = 4,7 Hz, 1H), 3,75 - 3,69 (m, 6H), 3,17 (d, J = 4,9 Hz, 2H), 2,68 (dt, J = 13,3, 6,5 Hz, 1H), 2,35 (ddd, J = 13,4, 6,6, 4,5 Hz, 1H). LCMS, [M+H]+ = 571/572.

Preparación del producto intermedio 6D:

A una solución del producto intermedio 6C (0,8 g, 1,40 mmol) en DCM anhidra (15 ml) se añadió una solución de 4,5-dicianoimidazol (0,165 g, 1,40 mmol) en acetonitrilo (5,0 ml). Se añadió 2-cianoetil N,N,N',N'-tetraisopropilfosforodiamidita (0,71 ml, 2,24 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante 3 h. Luego se diluyó la mezcla de reacción con DCM y se inactivó con NaHCO3 saturado. La capa orgánica se separó y se secó sobre sulfato de sodio. El filtrado luego se concentró in vacuo y el residuo crudo se purificó por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 40 g ISCO (gradiente de 13 min, eluido con 0-50 % de gradiente de DCM-EtOAc). Las fracciones con contenido de producto se concentraron para obtener el producto intermedio 6D (0,8 g, 74,1 % de rendimiento) en forma de espuma blanca. LCMS, [M+H]+ = 689,3.

Preparación del producto intermedio 6E:

6E

Se concentró una solución de 1H-tetrazol (123 mg, 1,761 mmol) y el producto intermedio 2F (180 mg, 0,352 mmol) en MeCN (3 ml) en un evaporador rotativo y se repitió el azeótropo (2x3 ml). Se disolvió el residuo resultante en MeCN (3 ml) y se añadieron m S 4Á activados (150 mg) y la mezcla se mantuvo bajo una atmósfera de nitrógeno. Por separado, se concentró el producto intermedio 6D (354 mg, 0,458 mmol) en MeCN (3 ml) en un evaporador rotativo y se repitió el proceso (3 x 1 ml). Se disolvió el residuo resultante en MeCN (3 ml) y se añadió a la solución agitada anterior por medio de jeringa. Se agitó la mezcla de reacción a TA durante la noche. Luego se trató la mezcla de reacción con DDTT (145 mg, 0,704 mmol) y se agitó durante 30 minutos, luego se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en EtOAc, se lavó con NaHCO3 saturado ac., luego con salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo. Se suspendió el residuo crudo en DCM (6 ml) y se añadieron ácido 2,2-dicloroacético (2,027 ml, 3,52 mmol) y trietilsilano (0,563 ml, 3,52 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a TA durante 0,5 h. Luego se inactivó la reacción con piridina (0,5 ml, 6,18 mmol) y se concentró en un evaporador rotativo. Se purificó el residuo por cromatografía en columna mediante el uso de una columna de 12 g ISCO (Solvente A: DCM, Solvente B: 20 % de DCM-MeOH). Se concentraron las fracciones con contenido de producto para obtener el producto intermedio 6E (115 mg, 0,172 mmol, 48,8 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 669/671. Una fracción impura (80 mg) se recuperó y se purificó en una columna ISCO Gold 15 g C18 en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; gradiente: 0 100 % de B durante 20 min. Se liofilizaron las fracciones con contenido de producto para proporcionar un producto intermedio 6E adicional (20 mg, 0,030 mmol, 8,48 % de rendimiento). LC^mS, [M+H]+ = 669/671.

Preparación del producto intermedio 6F:

Se concentró una solución de producto intermedio 6E (0,02 g, 0,030 mmol) en piridina seca (6 ml) en un evaporador rotativo y se repitió el azeótropo (2 x 3 ml). Se volvió a disolver el residuo en piridina seca (6 ml) bajo una atmósfera de nitrógeno y se añadió una solución de difenilfosfito (0,012 ml, 0,060 mmol) en piridina (1 ml) gota a gota durante 30 min. Luego se añadió DDTT (0,025 g, 0,119 mmol) y se agitó la reacción a t A durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción in vacuo y se suspendió el residuo en EtOAc y se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado. Se lavó la capa orgánica con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo crudo en MeCN y se concentró en evaporador rotativo y se repitió el azeótropo pocas veces. Se formó un precipitado en MeCN y se filtró. Se concentró el filtrado in vacuo para proporcionar el producto intermedio 6F que se usó en la siguiente etapa sin ulterior purificación. LCMS, [M+H]+ = 747.

Ejemplos 6-1,6-2, 6-3 y 6-4:

Diastereómeros 1 (6-1)

Diastereómeros 2 (6-2)

Diastereómeros 3 (6-3)

Diastereómeros 4 (6-4)

A una solución de producto intermedio 6F en MeCN (0,6 ml) se añadió hidróxido de amonio al 27 % (3 ml, 77 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a 45 °C durante 2 h. La mezcla de reacción luego se secó bajo una corriente moderada de nitrógeno. Se purificó el producto crudo en condiciones cromatográficas de HPLC preparativa; Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de TEAA (pH 6,5); B: 80:20 ACN:20 mM de TEAA (pH 6,5); gradiente: 5-35 % de B durante 50 min, 35-95 % de B durante 2 min, 95-5 % de B durante 1 minuto para obtener los Ejemplos 6-1, 6-2, 6-3 y 6-4 después de liofilización.

Ejemplo 6-1: 0,80 mg masa observada: 676,0; ^{í r}: 15,56 min. condiciones cromatográficas de HPLC analítica 1 Ejemplo 6-2: 0,92 mg masa observada: 676,0; í ^r: 16,15 min. condiciones cromatográficas de HPLC analítica 1 Ejemplo 6-3: 0,52 mg masa observada: 676,0; í ^r: 17,91 min. condiciones cromatográficas de HPLC analítica 1 Ejemplo 6-4: 1,14 mg masa observada: 676,0; ^{í r}: 18,64 min. condiciones cromatográficas de HPLC analítica 1

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 1:

Instrumento: Agilent 1290 HPLC/MS; columna: columna C18 Xselect CSH, 3,5 pm, 3,0 X150 mm; tasa de flujo: 0,5 ml/min; fase móvil: A: 10 mM de TEAA (pH 6,5); B: 80:20 ACN:10 mM de T^eA^a(pH 6,5); gradiente: 5-35 % de B durante 30 min, 35-95 % de B durante 2 min, 95-5 % durante 1 minuto.

Ejemplos 7-1,7-2, 7-3 y 7-4:

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18S)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-17-{4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-ditiona

Diastereómeros 3 (7-3)

Diastereómeros 4 (7-4)

Preparación del producto intermedio 7A:

A una solución de (2R,3S,4R,5R)-5-((benzoiloxi)metil)-3-fluorotetrahidrofuran-2,4-diil dibenzoato (Arkpharm Inc., 5 g, 10,77 mmol) en DCM anhidra (20 ml) se añadió HBr (solución al 33 % en ácido acético, 5,31 ml, 32,3 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 3 horas, luego se vertió en porciones en una solución acuosa helada de NaHCÜ3 mientras se agitaba. Se añadió DCM adicional y se continuó la agitación hasta que la capa acuosa tuviera un pH de ~7-8. Se separó la capa orgánica fría y se lavó con NaHCÜ3 saturado ac., se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo para obtener el producto intermedio 7A (~5 g) en forma de un gel incoloro que se usó de inmediato en la siguiente etapa. 1H RMN (499 MHz, Cloroformo-D) ó 8,15 - 8,10 (m, 2H), 8,10 - 8,05 (m, 2H), 7,64 (tí, J = 7,5, 1,3 Hz, 1H), 7,58 (tt, J = 7,5, 1,3 Hz, 1H), 7,53 - 7,48 (m, 2H), 7,47 - 7,41 (m, 2H), 6,65 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 5,70 - 5,51 (m, 2H), 4,88 - 4,78 (m, 2H), 4,76 - 4,68 (m, 1H).

Preparación del producto intermedio 7B:

Se concentró una suspensión de 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (1,536 g, 10,00 mmol) y acetonitrilo anhidro (20 ml) en un evaporador rotativo y al residuo se añadió acetonitrilo (20 ml) y luego se concentró la mezcla otra vez. Luego se suspendió el residuo en acetonitrilo anhidro (100 ml) y se añadió hidruro de sodio (60 % de dispersión en aceite mineral, 0,400 g, 10,00 mmol). Se agitó la suspensión resultante a TA durante 15 minutos para formar una mezcla turbia a la que se añadió una solución recién preparada de producto intermedio 7A crudo (4,23 g, 10 mmol) en acetonitrilo anhidro (25 ml). Se agitó la mezcla de reacción a T^adurante 16 horas y luego se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en DCM (400 ml) y se lavó con agua (2 x 100 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se cromatografió el residuo en gel de sílice mediante el uso de 0-50 % de EtOAc en hexanos para proporcionar el producto intermedio 7B (2,65 g, 5,34 mmol, 53,4 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 496.

Preparación del producto intermedio 7C:

A una solución agitada de producto intermedio 7B (2,63 g, 5,30 mmol) en metanol (10 ml) se añadió metóxido de sodio (0,5 M en metanol, 10,61 ml, 5,30 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 30 minutos y luego se añadió HCl acuoso (1 N, 5,30 ml, 5,30 mmol) y se concentró la mezcla in vacuo. Se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de una columna de 40 g ISCO; gradiente 0-30 % de MeOH en DCM. Las fracciones con contenido del producto deseado se combinaron y se concentraron para obtener el producto intermedio 7C (1,39 g, 4,83 mmol, 91 % de rendimiento). 1H RMN (499 MHz, Cloroformo-D) ó 8,65 (s, 1H), 7,49 (dd, J = 3,8, 2,3 Hz, 1H), 6,74 - 6,65 (m, 2H), 5,26 - 5,09 (m, 1H), 4,78 (ddd, J = 19,0, 5,0, 3,0 Hz, 1H), 4,09 (q, J = 4,2 Hz, 1H), 4,01 (ddd, J = 12,0, 3,7, 1,2 Hz, 1H), 3,98 - 3,89 (m, 1H), 2,81 (br s, 2H). LCMS: m/z 288,1 (M+H), tR 0,71 min, Método analítico de LCMS A.

Preparación del producto intermedio 7D

Se concentró una solución de producto intermedio 7C (1,39 g, 4,83 mmol) en piridina (3 ml) en un evaporador rotativo y al residuo se añadió piridina (20 ml), DMTr-Cl (1,719 g, 5,07 mmol) y D^mA ^p(0,030 g, 0,242 mmol) y se agitó la mezcla a TA durante 14 h. Luego se inactivó la mezcla de reacción con metanol y se concentró. Se disolvió el residuo en DCM y se lavó con solución saturada de NaHCO3. Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se concentró y se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de una columna de 80g ISCO; gradiente: 0 100 % de EtOAc en hexanos con 0,5 % de TEA. Las fracciones con contenido del producto deseado se combinaron y se concentraron para obtener el producto intermedio 7D (2,39 g, 4,05 mmol, 84 % de rendimiento). 1H RMN (499 MHz, DMSO-d6) ó 8,70 (s, 1H), 7,68 (dd, J = 3,7, 2,3 Hz, 1H), 7,41 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,32 - 7,21 (m, 7H), 6,90 - 6,85 (m, 4H), 6,76 - 6,71 (m, 2H), 6,03 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 5,31 - 5,15 (m, 1H), 4,43 (dq, J = 19,3, 4,6 Hz, 1H), 4,10 - 4,04 (m, 1H), 3,74 (s, 6H), 3,37 - 3,32 (m, 1H), 3,30 - 3,24 (m, 1H). LCMS: m/z 590,2 (M+H), tR 1,11 min, Método analítico de LCMS A

Preparación del producto intermedio 7E

7E

A una solución de producto intermedio 7D (2,38 g, 4,03 mmol) en DCM anhidra (24 ml) se añadió una solución de 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (0,476 g, 4,03 mmol) en acetonitrilo anhidro (8 ml), seguido por 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi)propanonitrilo puro (2,050 ml, 6,45 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 16 h. Luego se inactivó la reacción con algunas gotas de metanol, se diluyó con DCM y se lavó con solución saturada ac. de NaHCO³. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró en un aceite transparente. Se disolvió el aceite en una cantidad mínima de DCM y se cromatografió sobre gel de sílice mediante el uso de 0-50 % de EtOAc en Hexanos. Las fracciones con contenido del producto deseado se combinaron y se concentraron, luego se reconcentraron dos veces en evaporador rotativo en acetonitrilo (2 x 5 ml) para obtener el producto intermedio 7D (2,68 g, 84 %) en forma de una espuma. 1H RMN (499 MHz, DMSO-d6) 58,68 (d, J = 5,0 Hz, 1H), 7,76 (ddd, J = 5,5, 3,6, 2,2 Hz, 1H), 7,45 - 7,38 (m, 2H), 7,33 - 7,20 (m, 7H), 6,90 - 6,82 (m, 4H), 6,81 - 6,73 (m, 2H), 5,57 - 5,37 (m, 1H), 4,86 - 4,68 (m, 1H), 4,22 - 4,13 (m, 1H), 3,73 (d, J = 3,0 Hz, 7H), 3,63 - 3,47 (m, 3H), 3,43 - 3,33 (m, 2H), 2,77 - 2,61 (m, 2H), 1,15 - 0,95 (m, 12H). LCMS: m/z 303,1 (DMTr+), 707,2, 709,2 (producto hidrolizado durante el análisis), tR: 1,09 min, Método analítico de LCMS A.

Preparación del producto intermedio 7F:

Se concentró una solución de 1H-tetrazol (68,5 mg, 0,978 mmol) y el producto intermedio 2F (100 mg, 0,196 mmol) en MeCN (3 ml) en un evaporador rotativo y se repitió el azeótropo (2 x 3 ml). Se disolvió el residuo resultante en MeCN (3 ml), se añadieron MS 4Á activados (150 mg) y la mezcla se dejó bajo una atmósfera de nitrógeno. Por separado, el producto intermedio 7E (186 mg, 235 mmol) en MeCN (3,00 ml) se concentró en un evaporador rotativo y se repitió el proceso (3 x 1 ml). Se disolvió el residuo resultante en MeCN (3,0 ml) y se añadió a la mezcla agitada anterior por medio de jeringa. Se agitó la mezcla de reacción a TA durante la noche, luego se trató con DDTT (48,3 mg, 0,235 mmol), se agitó durante 30 min y se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en EtOAc, se lavó con NaHCO3 saturado ac., luego con salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo. El producto crudo, producto intermedio 7F, se usó como tal en la siguiente etapa. LCMS: m/z 1178,2 (M-H), tR: 1,44 min, Método analítico de LCMS C.

Preparación del producto intermedio 7G:

7G

A una solución de producto intermedio 7F crudo (172 mg, 0,140 mmol) en DCM (7 ml) se añadió agua (1 gota), trietilsilano (0,223 ml, 1,396 mmol) y se agitó la mezcla. Se añadió una solución de ácido dicloroacético (0,092 ml, 1,117 mmol) en DCM (2 ml) durante un período de 2 minutos. Luego se diluyó la mezcla de reacción con DCM y se extrajo con NaHCO3 saturado ac. La capa orgánica combinada se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró y luego se purificó por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de 0-20 % de metanol en DCM. Las fracciones con contenido de producto se combinaron y se concentraron para obtener el producto intermedio 7G (64 mg, 0,093 mmol, 66,7 % de rendimiento) en forma de una goma incolora. LCMS: m/z 686,8 (M+H), tR 0,80 min, Método analítico de LCMS D.

Preparación del producto intermedio 7H:

7H

Se coevaporó el producto intermedio 7G (64 mg, 0,093 mmol) con piridina anhidra tres veces y luego se disolvió el residuo en piridina anhidra (25 ml). Se añadió una solución de difenilfosfito (43,6 mg, 0,186 mmol) en piridina (1 ml) gota a gota y se agitó la mezcla de reacción a TA durante 1 h. Mientras se controlaba la reacción con LCMS, la mezcla de reacción se tituló con difenilfosfito en piridina hasta la desaparición completa de diol de partida por LC (total, se necesitaron ~2,5 equivalentes de difenilfosfito para que la reacción se completara). A la mezcla de reacción se añadió DDTT (115 mg, 0,558 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. Luego se concentró la mezcla de reacción para eliminar la mayor parte de la piridina. Se lavó el sólido amarillo resultante con metanol (3 x 5 ml), se agitó y se decantó por medio de un tubo Bohdan fritado. Se añadió Celite al filtrado y la suspensión se concentró en un evaporador rotativo y se mantuvo bajo Hvac a TA durante 1 h. El polvo resultante se cargó en un cartucho de carga sólida y se purificó por ISCO en fase inversa mediante el uso de una columna Redisep 50 g C-18, que eluye con 5-95 % de MeCN en agua con contenido de NH4OAc 0,01 M, con un mantenimiento a ~50 %. Las fracciones que contenían el producto deseado se combinaron y se concentraron bajo una corriente moderada de nitrógeno y se dejaron bajo Hvac para obtener una mezcla diastereomérica del producto intermedio 7H (46 mg, 0,060 mmol, 64,6 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS: m/z 765 (M+H), tR 0,82 min, Método analítico de LCMS D.

Ejemplos 7-1,7-2, 7-3 y 7-4:

Diastereómeros 1 (7-1)

Diastereómeros 2 (7-2)

Diastereómeros 3 (7-3)

Diastereómeros 4 (7-4)

A un recipiente de base redonda de 250 ml con contenido de la mezcla diastereomérica producto intermedio 7H (46 mg, 0,060 mmol) se añadió NH⁴OH acuoso al 30 % (10 ml). Se tapó el recipiente con un septo, se ventiló con una aguja de calibre fino y se calentó a 40 °C durante 2 h. Luego se enfrió la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se concentró bajo una corriente de nitrógeno. Se disolvió el residuo en agua (~5 ml) y se purificó por condiciones cromatográficas de HPLC preparativa; Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH⁴OAc (pH 6,5); B: Acetonitrilo (% de A = 100- % de B); 10-21 % de B durante 10 min; 21-95 % de B durante 1 min; se mantuvo al 95 % de B durante 1 min; detección: 260 nm para obtener los Ejemplos 7-1, 7-2, 7-3 y 7-4 en forma de sólidos blancos.

Ejemplo 7-1: 2,2 mg Método analítico de LCMS D ; masa observada: 693; tR: 0,44 min.

Ejemplo 2-2: 4,3 mg Método analítico de LCMS D ; masa observada: 693; tR: 0,48 min.

Ejemplo 7-3: 3,2 mg Método analítico de LCMS D ; masa observada: 693; tR: 0,53 min.

Ejemplo 7-4: 6,7 mg Método analítico de LCMS D ; masa observada: 693,0; tR: 0,58 min.

Ejemplos 8-1,8-2, 8-3 y 8-4:

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18S)-17-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,06,9]octadecano-3,l2-ditiona

Diastereómeros 1 (8-1)

Diastereómeros 2 (8-2)

Diastereómeros 3 (8-3)

Diastereómeros 4 (8-4)

En un vial a presión de 2 dracmas separado con contenido de cada diastereómero de los Ejemplos 7-1,7-2, 7-3 y 7 4 se añadió hidróxido de amonio acuoso al 28 % (500 uL). Se taparon los viales con una tapa de septo a prueba de presión y se calentaron a 50 °C durante 16 h y luego se enfriaron. Se purificaron los productos hechos del diastereómero Ejemplos 7-1, 7-2 y 7-3 por condiciones cromatográficas de HPLC preparativa; Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH⁴OAc(pH 6,5); B: Acetonitrilo (% de A=100- % de B); 10-13,3 % de B durante ⁶min; 13,3-95 % de B durante 0,5 min; se mantuvo al 95 % de B durante 1,5 min; detección: 260 nm, para obtener los Ejemplos 8-1, 8-2 y 8-3, respectivamente.

Se purificó el producto hecho a partir del diastereómero Ejemplos 7-4 por condiciones cromatográficas de HPLC preparativa; Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc (pH 6,5); B: Acetonitrilo (% de A = 100- % de B); 10-15,5 % de B durante 10 min; 15,5-95 % de B durante 0,5 min; se mantuvo al 95 % de B durante 1,5 min; detección: 260 nm, para obtener Ejemplos 8-4.

Ejemplo 8-1: 2,2 mg; tR: 6,33 min; M+1 obs = 674,2 condiciones cromatográficas de HPLC analítica 2 Ejemplo 8-2: 4,3 mg; tR: 6,58 min; M+1 obs = 674,2 condiciones cromatográficas de HPLC analítica 2 Ejemplo 8-3: 3,2 mg; tR: 6,65 min; M+1 obs = 674,2 condiciones cromatográficas de HPLC analítica 2 Ejemplo 8-4: 6,7 mg; tR: 8,67 min; M+1 obs = 674,2 condiciones cromatográficas de HPLC analítica 2

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 2:

Instrumento: Agilent 1290 (LVL-L4021 Lab); columna: columna C18 Xselect CSH, 3,5 pm, 3,0X150 mm; tasa de flujo: 0,5 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de NH⁴OA (pH 6,5); B: ACN (% de A=100- % de B); gradiente: 5-30 % de B durante 20 min; 95 % de B durante 1 min. Detección: 260 nm.

Ejemplos 9-1,9-2, 9-3 y 9-4:

1-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-17-il]- 1H,4H,5H-imidazo[2,1-b]purin-4-ona

Diastereómeros 1 (9-1)

Diastereómeros 2 (9-2)

Diastereómeros 3 (9-3)

Diastereómeros 4 (9-4)

Preparación del producto intermedio 9A:

9A

Se disolvió 2-Amino-9-((2R,3R,4R,5R)-3-fluoro-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-1,9-dihidro-6H-purin-6-ona (Astatech, 5 g, 17,53 mmol) en piridina (100 ml) y se concentró en un evaporador rotativo. Se repitió este procedimiento y se volvió a disolver el residuo en piridina (125 ml) y luego se trató gota a gota con anhidro acético (4,96 ml, 52,6 mmol) y se agitó a TA durante la noche. Luego se trató la mezcla de reacción con MeOH (20 ml), se agitó durante 5 min y luego se concentró hasta sequedad. Se suspendió el residuo resultante en agua (100 ml), se sonicó y se agitó hasta formarse una precipitación fina. Los sólidos se filtraron, se enjuagaron con agua y éter dietílico y se secaron para proporcionar el producto intermedio 9A (5 g, 13,54 mmol, 77 % de rendimiento). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 10,75 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 6,57 - 6,50 (bm, 2H), 6,16 - 6,07 (m, 1H), 5,83 - 5,64 (m, 1H), 5,59 - 5,49 (m, 1H), 4,41 - 4,32 (m, 2H), 4,27 - 4,17 (m, 1H), 2,18 - 2,12 (m, 3H), 2,09 - 2,01 (m, 3H); LCMS, [M+H]+ = 370.

Preparación del producto intermedio 9B:

9B

A una solución de producto intermedio 9A (5 g, 13,54 mmol), 2-(4-nitrofenil)etan-1-ol (3,39 g, 20,31 mmol) y trifenilfosfina (5,33 g, 20,31 mmol) en 1,4-dioxano (100 ml) se añadió gota a gota DIAD (3,95 ml, 20,31 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante la noche y luego se concentró. Se disolvió el residuo en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de 120 g ISCO de gel de sílice y se purificó mediante el uso del sistema Teledyne ISCO, que eluye en un gradiente de 20 min con 5-100 % de DCM/EtOAc para proporcionar producto con óxido de trifenilfosfina residual. Se disolvió el material en MeOH (10 ml) y se trató con amoníaco (7 N en MeOH, 0,293 ml, 13,54 mmol), se agitó durante 8 h y luego se concentró en ~1/2 volumen. Luego se trató la mezcla con éter dietílico y se dejó agitar durante 5 h. Se filtró el producto precipitado y se lavó con éter dietílico para proporcionar el producto intermedio 9B (4 g, 9,21 mmol, 68,0 % de rendimiento), LCMS, [M+H]+ = 435. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 8,22 - 8,17 (m, 2H), 8,12 - 8,09 (m, 1H), 7,67 - 7,61 (m, 2H), 6,60 - 6,52 (m, 2H), 6,14 - 6,05 (m, 1H), 5,69 - 5,64 (m, 1H), 5,40 - 5,21 (m, 1H), 5,17 - 5,11 (m, 1H), 4,71 - 4,64 (m, 2H), 4,46 - 4,34 (m, 1H), 3,98 - 3,91 (m, 1H), 3,78 - 3,70 (m, 1H), 3,64 -3,54 (m, 1H), 3,29 - 3,22 (m, 2H).

Preparación del producto intermedio 9C:

9C

Se trataron una solución de producto intermedio 9B (4 g, 9,21 mmol) en EtOH (50 ml) y tampón de acetato de amonio (pH 4,5, 50 ml, 9,21 mmol) con 2-bromoacetaldehído (~1,3 M, en EtOH /1 N HCl 1:1, 29,5 ml, 36,8 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a 35 °C durante 48 h. Se enfrió la reacción hasta TA y luego se concentró en ~1/2 volumen y se llevó a un pH ~8 con bicarbonato de amonio sólido. Se filtró el producto precipitado, se lavó con agua helada y éter dietílico para obtener el producto intermedio 9C (2 g, 4,36 mmol, 47,4 % de rendimiento), m/z (459, M+H). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) ó 8,39 (s, 1H), 8,22 - 8,17 (m, 2H), 7,87 - 7,84 (m, 1H), 7,67 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,52 - 7,49 (m, 1H), 6,71 (d, J = 14,2 Hz, 1H), 5,78 (d, J = 6,7 Hz, 1H), 5,64 - 5,47 (m, 1H), 5,13 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 4,79 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 4,46 - 4,33 (m, 1H), 4,08 (br d, J = 7,6 Hz, 1H), 3,80 - 3,67 (m, 1H), 3,58 (ddd, J = 12,5, 5,1, 2,8 Hz, 1H), 3,34 (br m, 2H).

Preparación del producto intermedio 9D:

9D

Se disolvió el producto intermedio 9C (2 g, 4,36 mmol) en piridina anhidra (25 ml) y se concentró en un evaporador rotativo. Se repitió el procedimiento y el residuo luego se volvió a disolver en piridina (25 ml) bajo nitrógeno y se añadió DMTr-Cl (1,478 g, 4,36 mmol) en una porción. Se agitó la mezcla de reacción durante 22 horas y luego se trató con metanol (~2 ml) y se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en DCM (200 ml), se lavó con agua, bicarbonato de sodio saturado ac., se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se disolvió el producto crudo en una pequeña cantidad de DCM y se cargó en una columna de gel de sílice de 80 g ISCO y se purificó mediante el uso del sistema Teledyne ISCO, que eluye durante 20 minutos, gradiente del 0-50 %; solvente A: DCM con 0,25 % de TEA; Solvente B: EtOAc. Las fracciones con contenido del producto deseado se combinaron y se concentraron para proporcionar el producto intermedio 9D (2,2 g, 2,89 mmol, 66,3 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 761.

Preparación del producto intermedio 9E:

A una solución del producto intermedio 9D (0,5 g, 0,657 mmol) y 1 H-im¡dazol-4,5-d¡carbon¡tr¡lo (0,085 g, 0,723 mmol) en DCM (5 ml) se añadió 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi) propanonitrilo (0,433 ml, 1,314 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante la noche, luego se inactivó con bicarbonato de sodio saturado ac. (10 ml) y se diluyó con DCM (50 ml). La capa orgánica se secó (Na2SÜ4), se filtró y se concentró. Se disolvió el producto crudo en una pequeña cantidad de DCM, se cargó en una columna de 24 g ISCO de gel de sílice y se purificó mediante el uso del sistema Teledyne ISCO, que eluye durante 10 minutos, gradiente del 0-50 %; solvente A: DCM con 0,25 % de TEA; solvente B: EtOAc para proporcionar el producto intermedio 9D (625 mg, 0,650 mmol, 99 % de rendimiento) en forma de una mezcla de diastereómeros.

Preparación del producto intermedio 9F:

Se concentró una solución del producto intermedio 2F (0,26 g, 0,509 mmol) y 1H-tetrazol (0,043 g, 0,611 mmol) en acetonitrilo anhidro (5 ml) en un evaporador rotativo y se disolvió el residuo en acetonitrilo anhidro (2,5 ml). Se azeotropó el producto intermedio 9E (0,538 g, 0,560 mmol) en acetonitrilo anhidro (2,5 ml) y luego se disolvió en acetonitrilo (1 ml) y se añadió gota a gota a la mezcla agitada anterior. Se agitó la mezcla de reacción bajo nitrógeno a temperatura ambiente durante 16 h. Luego se añadió (£)-W,W-dimetil-W-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,125 g, 0,611 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 2 h. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo y se purificó el residuo por cromatografía flash sobre 12 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-100 % de DCM/EtoAc) para obtener el producto intermedio 9F (0,3 g, 0,273 mmol, 53,6 % de rendimiento) en forma de un aceite. LCMS, [M+H]+ = 1402/1403.

Preparación del producto intermedio 9G:

A una solución del producto intermedio 9F (0,28 g, 0,199 mmol) en DCM (1,989 ml) se añadió trietilsilano (0,318 ml, 1,989 mmol) y TFA (0,046 ml, 0,597 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción durante 2 h. y luego se inactivó con bicarbonato de sodio acuoso al 50 %. Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con THF (2 x 5 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo. Se trituró el material crudo con éter dietílico (3x10 ml) para formar un precipitado que se filtró y se secó para obtener el producto intermedio 9G (0,250 g, 0,291 mmol, 146 % de rendimiento) en forma de un sólido blanquecino. LCMS, [M+H]+ = 858.

Preparación del producto intermedio 9H:

9H

A una solución del producto intermedio 9G (0,250 g, 0,291 mmol) en piridina seca (47,7 ml) se añadió gota a gota una solución de difenilfosfito (0,090 ml, 0,466 mmol) en piridina (5,30 ml) durante un período de 4 horas. Se agitó la reacción bajo nitrógeno durante 16 h y luego se añadió ^dD^tT (0,120 g, 0,583 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo y se purificó el material crudo por ISCO en fase inversa sobre 50 g de C18 con 0-100 %, durante 15 min de gradiente, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio, para proporcionar una mezcla de diastereómeros del producto intermedio 9H (0,168 g, 0,179 mmol, 61,6 % de rendimiento) en forma de un sólido después de liofilización. LCMS, [M+H]+ = 936.

Preparación del producto intermedio 9I:

9I

Se agitaron una mezcla de producto intermedio 9H (0,168 g, 0,179 mmol) y amoníaco (2 M en alcohol isopropílico, 5 ml, 10,00 mmol) a 50 °C durante 8 h. Luego se redujo el solvente bajo una corriente moderada de nitrógeno y se disolvió el residuo en hidróxido de amonio (2 ml, 51,4 mmol) y se calentó a 50 °C durante 3 h. Se redujo la mezcla de reacción con una corriente moderada de nitrógeno y se liofilizó durante la noche para obtener mezclas diastereoméricas del producto intermedio 9I (0,155 g, 0,179 mmol, 100 % de rendimiento) en forma de un sólido.

Ejemplos 9-1,9-2, 9-3 y 9-4:

Diastereómeros 1 (9-1)

Diastereómeros 2 (9-2)

Diastereómeros 3 (9-3)

Diastereómeros 4 (9-4)

Se agitaron una mezcla del producto intermedio 9I (0,155 g, 0,179 mmol) y DBU (0,27 ml, 1,795 mmol) en piridina (1,8 ml) a TA durante 1 h. Se añadió tampón de acetato de amonio/AcOH (pH 4,5, 2 ml) y se concentró la mezcla de reacción in vacuo. Se purificó el residuo por ISCO en fase inversa sobre 50 g de C18 con 0-100 %, durante 15 min de gradiente, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 0,01 M de acetato de amonio para proporcionar una mezcla de diastereómeros (0,08 g, 0,112 mmol, 62,4 % de rendimiento) después de liofilización. Se separaron los diastereómeros en condiciones cromatográficas de HPLC preparativa: Instrumento: Waters Autopure Columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de TEAA (pH 6,5); B: 80:20 ACN:20 mM de TEAA (pH 6,5); gradiente; 7 14 % de B durante 14 min, 14-95 % de B durante 0,5 min, 95 % de B mantenido durante 0,5 min y 95-5 % de B durante 0,5 min para obtener los Ejemplos 9-1, 9-2, 9-3 y 9-4 en forma de sólidos blancos después de liofilización.

Ejemplo 9-1: 5,0 mg; tR: 0,36 min; M+1 obs = 714,9 Método analítico de LCMS A

Ejemplo 9-2: 3,1 mg; tR: 0,39 min; M+1 obs = 715,0 Método analítico de LCMS A

Ejemplo 9-3: 6,3 mg; tR: 0,41 min; M+1 obs = 715,4 Método analítico de LCMS A

Ejemplo 9-4: 1,8 mg; tR: 0,46 min; M+1 obs = 715,1 Método analítico de LCMS A

Ejemplos 10

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-diona

Preparación del producto intermedio 10A:

Se concentró una solución de producto intermedio 2F (0,100 g, 0,196 mmol) y IH-tetrazol (0,016 g, 0,235 mmol) en MeCN anhidro (1 ml) en un evaporador rotativo y se disolvió el residuo resultante en MeCN anhidro (1 ml). Se concentró una solución de (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il (2-cianoetil) diisopropilfosforamidita (Sigma-Aldrich, 0,189 g, 0,215 mmol) en MeCN anhidro (2,5 ml) en un evaporador rotativo, se volvió a disolver en MeCN (1 ml) y se añadió gota a gota a la mezcla agitada de antes a TA. Se agitó la mezcla de reacción bajo nitrógeno a TA durante 16 h. Se añadió ferc-Butil hidroperóxido (0,089 ml, 0,489 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 h. Luego se inactivó la reacción con tiosulfato de potasio acuoso saturado y se agitó durante 20 min. Se extrajo la mezcla con EtOAc, se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo. Se purificó el material crudo por cromatografía flash sobre 12 g de gel de sílice (gradiente de 15 min, con 0-100 % de DCM/EtOAc) para obtener el producto intermedio 10A (0,22 g, 0,169 mmol, 86 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. L^cMS, [M+H]+ = 1301.

Preparación del producto intermedio 10B:

10B

A una solución del producto intermedio 10A (0,22 g, 0,169 mmol) y trietilsilano (0,270 ml, 1,690 mmol) en DCM (1,69 ml) se añadió TFA (0,04 ml, 0,51 mmol) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción a TA durante 2 h, se diluyó con DCM (5 ml), agua (5 ml) y se trató con bicarbonato de sodio saturado hasta que cesó la producción de gas. Se agitó la mezcla durante 30 minutos y se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con DCM (2 x 5 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo. Se trituró el residuo con éter dietílico (3 x 10 ml), luego con hexanos (2 x 10 ml) para obtener el producto intermedio 10B (0,089 g, 0,118 mmol, 69,6 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 757,4

Preparación del producto intermedio 10C:

A una solución del producto intermedio 10B (0,085 g, 0,112 mmol) en piridina seca (20 ml) se añadió gota a gota una solución de difenilfosfito (0,035 ml, 0,180 mmol) en piridina (2,2 ml) durante 4 horas. Se agitó la mezcla de reacción bajo nitrógeno durante 16 h y luego se añadió agua (0,04 ml, 2,245 mmol), seguido por yodo (0,043 g, 0,168 mmol) y se agitó la mezcla a TA durante 15 min. Se inactivó la reacción con tiosulfato de sodio saturado hasta que desapareció el color y luego se concentró la mezcla in vacuo. Se trituró el residuo tres veces con 10:1 éter dietílico:acetonitrilo para proporcionar el producto intermedio 10C (0,05 g, 0,061 mmol, 54,4 % de rendimiento) en forma de un sólido amarillo. LCMS, [M+H]+ = 819

Ejemplos 10

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,06'9]octadecano-3,12-diona

Se agitaron una mezcla del producto intermedio 10C (0,05 g, 0,061 mmol) y amoníaco (2 M en isopropanol, 6,10 ml, 12,21 mmol) a 50 °C durante 8 h. Se aisló el producto por LC/MS preparativa con las siguientes condiciones: Columna: Agilent Bonus RP 21,2 x 100 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo; gradiente: 0 % de B mantenido durante 0-6 minutos. 0 %-25 % de B durante 16 minutos, luego un mantenimiento de 4 minutos al 100 % de B; flujo: 20 ml/min. Las fracciones con contenido del producto deseado se combinaron y se secaron por evaporación centrífuga para obtener el Ejemplo 10 (9,2 mg); masa observada: 643,1; tiempo de retención: 2,14 min. Método analítico de LCMS B.

Ejemplos 11

1-[(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,069]octadecan-17-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida

Diastereómeros 1 (11-1)

Diastereómeros 2 (11 -2)

Diastereómeros 3 (11 -3)

Diastereómeros 4 (11 -4)

Preparación del producto intermedio 11A:

A una solución marrón oscura de yodo (1,691 g, 6,66 mmol) en acetona (250 ml) se añadió D-(+)-xilosa (10,0 g, 66,6 mmol) en forma de un sólido. Se agitó la mezcla heterogénea resultante a temperatura ambiente. Después de 2,5 horas, se añadió una segunda porción de yodo (1,302 g, 5,13 mmol) en acetona (150 ml) a la mezcla de reacción. Después de 4,5 horas, todo el sólido se había disuelto y se inactivó la reacción con tiosulfato de sodio acuoso al 10 % (200 ml), lo que da como resultado una mezcla incolora, que se concentró in vacuo. Luego se extrajo la fase acuosa con DCM (4 x 100 ml) y se secaron las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo para obtener el producto intermedio 11A (13,03 g, 56,6 mmol, 85 % de rendimiento) en forma de un aceite transparente, incoloro. 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) ó 6,01 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 4,52 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 4,29 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 4,14 - 4,04 (m, 2H), 4,04 - 4,01 (m, 1H), 1,49 (s, 3H), 1,44 (s, 3H), 1,39 (s, 3H), 1,33 (s, 3H).

Preparación del producto intermedio 11B:

A una solución agitada de producto intermedio 11A (4,61 g, 20,0 mmol) en acetonitrilo (17,43 ml) y agua (18,48 ml) se añadió ACN (0,329 g, 0,600 mmol) en forma de un sólido. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente. Después de 6 horas, se inactivó la reacción con hidróxido de amonio (1,4 ml, 10,00 mmol) y se filtró la suspensión resultante sobre un taco de Celigel (9:1 w/w Celite/gel de sílice), enjuagando con MeOH (3 x 10 ml). Se concentró el filtrado in vacuo y se coevaporó el residuo con MeOH varias veces, luego se secó durante la noche a alto vacío para obtener el producto intermedio 11B (3,83 g, 20,14 mmol, 101 % de rendimiento) en forma de un aceite amarillo transparente. 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 5,99 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 4,53 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 2,7 Hz, 1H), 4,20 - 4,11 (m, 2H), 4,08 - 4,03 (m, 1H), 3,86 (br s, 1H), 2,51 (br s, 1H), 1,49 (s, 3H), 1,33 (s, 3H).

Preparación del producto intermedio 11C:

A una suspensión enfriada (0 °C) del producto intermedio 11B (3,80 g, 20,0 mmol) en CH²Cl²(32,0 ml) y piridina (8,0 ml) bajo atmósfera de nitrógeno se añadió una solución de cloruro de benzoílo (2,321 ml, 20,00 mmol) en CH²Cl²(3,00 ml) por un embudo de adición durante 2 horas. Se dejó agitar la reacción durante la noche a temperatura ambiente. Se enfrió la reacción otra vez hasta 0 °C y se añadió otra porción de cloruro de benzoílo (0,464 ml, 4,00 mmol) en CH²Cl²(0,60 ml) por un embudo de adición durante 40 min. Se agitó la mezcla a 0 °C durante otra hora, luego se inactivó la reacción con H²O (10 ml) y se concentró in vacuo. Se dividió el residuo en CH²Cl²(100 ml) y agua (50 ml). Se lavó la fase orgánica con bicarbonato de sodio saturado ac. (50 ml) y agua (3 x 50 ml), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo. Se eliminó piridina residual mediante la coevaporación algunas veces con tolueno para obtener el producto intermedio 11C (5,46 g, 18,55 mmol, 93 % de rendimiento) en forma de un aceite amarillo transparente.

LCMS, [M+H]+ = 295.

Preparación del producto intermedio 11D:

A una solución del producto intermedio 11C (10,55 g, 35,8 mmol) en MeOH (90 ml) se añadió yodo (0,90 g, 3,55 mmol) en forma de un sólido. Se agitó la mezcla resultante a reflujo durante 2 h, luego se dejó agitar a temperatura ambiente durante el fin de semana. Se inactivó la reacción con tiosulfato de sodio acuoso al 10 % (100 ml), que resulta en una mezcla incolora, que se concentró in vacuo para eliminar metanol y luego se extrajo con CH²Cl²(3 x 100 ml).

Se lavaron las capas orgánicas combinadas con salmuera (200 ml), se secaron (Na2SÜ4), se filtraron y se concentraron in vacuo. Se disolvió el producto crudo en una pequeña cantidad de CH²Cl², se adsorbieron en un tapón de SiÜ ²y se purificó por cromatografía flash (SiO2, 0-10 % de MeOH en CH²Cl², columna de 120 g, 27,1 min de gradiente) para obtener el producto intermedio 11D (7,64 g, 28,5 mmol, 79 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro transparente.

Preparación del producto intermedio 11E:

Se trató una solución del producto intermedio 11D (7,64 g, 28,5 mmol) en CH²Cl²(142 ml) con DAST (18,81 ml, 142 mmol) por medio de jeringa. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 8 horas, se enfrió la reacción hasta 0 °C y cuidadosamente se vertió en un matraz con pico grande con contenido de una mezcla 2:1 de NaHCO3 acuoso saturado y hielo (600 ml). Se añadió NaHCO3 sólido a la mezcla en pequeñas cantidades hasta que el pH fuera de ~8-9. Luego se separaron las capas y se extrajo la fase acuosa con CH²Cl²(3 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron in vacuo. Se disolvió el producto crudo en una pequeña cantidad de CH²Cl², se adsorbió en un tapón de SiO²y se purificó por cromatografía flash (SiO², 0-75 % de EtOAc en hexanos, columna de 220 g, 26,7 min de gradiente) para obtener el producto intermedio 11E (4,14 g, 15,32 mmol, 53,8 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro transparente.

Preparación del producto intermedio 11F:

A una solución de producto intermedio 11E (4,14 g, 15,32 mmol) en piridina (30,6 ml) se añadió cloruro de benzoílo (2,67 ml, 22,98 mmol) gota a gota por medio de jeringa. Se agitó la reacción a temperatura ambiente bajo una atmósfera de nitrógeno. Después de 16 horas, se vertió la reacción en bicarbonato de sodio acuoso saturado (150 ml) a 0 °C y se extrajo con Et²O (3 x 150 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con HCl acuoso 1 M (2 x 100 ml), agua (100 ml), salmuera (100 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron in vacuo. Se coevaporó el residuo dos veces con tolueno y se secó a alto vacío. Se disolvió el producto crudo en una pequeña cantidad de CH²Cl², se adsorbió en un tapón de SiO²y se purificó por cromatografía flash (SiO², 0-50 % de EtOAc en hexanos, columna de 120 g, 27,1 min de gradiente) para obtener el p-anómero: (3,34 g, 8,92 mmol, 58,2 % de rendimiento) 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 68,12 - 8,07 (m, 4H), 7,63 - 7,56 (m, 2H), 7,50 - 7,44 (m, 4H), 5,45 (td, J = 4,9, 1,7 Hz, 1H), 5,44 (dt, J = 53,1, 4,9 Hz, 1H), 5,14 (t, J = 1,6 Hz, 1H), 4,71 - 4,64 (m, 1H), 4,63 - 4,58 (m, 1H), 4,49 (dd, J = 11,7, 4,7 Hz, 1H), 3,40 (s, 3H) como un aceite incoloro transparente y el a-anómero: (1,66 g, 4,43 mmol, 28,9 % de rendimiento). 1H RMN (500 MHz, CLOROFORMO-d) 68,15 - 8,11 (m, 2H), 8,08 - 8,03 (m, 2H), 7,63 - 7,57 (m, 2H), 7,51 - 7,44 (m, 4H), 5,32 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 5,27 (ddd, J = 55,8, 5,8, 1,8 Hz, 1H), 5,12 (ddd, J = 22,6, 5,8, 4,6 Hz, 1H), 4,70 (dtd, J = 25,8, 3,7, 1,8 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 11,9, 4,0 Hz, 1H), 4,53 (dd, J = 12,1, 3,7 Hz, 1H), 3,51 (s, 3H) como un aceite incoloro transparente (mezclas anoméricas combinadas, producto intermedio 11F, 87 % de rendimiento)

Preparación del producto intermedio 11G:

A una solución de mezclas anoméricas del producto intermedio 11F (5,00 g, 13,36 mmol) en ácido acético (40,0 ml) se añadió anhidro acético (4,79 ml, 50,8 mmol) seguido por ácido sulfúrico (2,78 ml, 52,1 mmol). Se agitó la solución amarilla transparente resultante a temperatura ambiente. Después de 4,5 horas, se vertió la reacción cuidadosamente en un matraz con pico grande con contenido de una mezcla agitada 2:1 (v/v) de NaHCO3 acuoso saturado y hielo (600 ml). Se añadió NaHCO3 sólido hasta que el pH fuera de ~7-8 y se extrajo la mezcla resultante con CH²CI²(4 x 200 ml), se lavó con agua (300 ml), salmuera (300 ml), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo. Se disolvió el producto crudo en una pequeña cantidad de CH²Cl², se adsorbió en un tapón de SiO²y se purificó por cromatografía flash (SiO², 0-50 % de EtOAc en hexanos, columna de 120 g, 27,1 min de gradiente) para obtener el producto intermedio 11G (4,43 g, 11,01 mmol, 82 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro transparente.

Preparación del producto intermedio 11H:

11H

A una solución de 2,3-diaminobenzoato de metilo (Combi-block, 10 g, 60,2 mmol) en AcOH (250 ml) se añadió nitrito de sodio (4,15 g, 60,2 mmol) en pequeñas porciones durante 40 minutos y se agitó la reacción durante la noche a TA. A la mezcla de reacción se añadió agua (200 ml) y se precipitó el producto en forma de un sólido. El sólido se filtró, se lavó con agua (3 x 20 ml) y se secó in vacuo para obtener el producto intermedio 11H (8,0 g). Se concentró el filtrado con sílice (10 g) y luego se purificó en una columna de gel de sílice (0-10 % de MeOH en DCM, columna de 24 g, 18 min de gradiente, para proporcionar producto adicional (1,96 g); recuperación total del producto intermedio 11H (9,96 g, 56,2 mmol, 93 % de rendimiento). 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 8,38 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,21 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,51 (t, J = 7,9 Hz, 1H), 4,11 (s, 3H).

Preparación del producto intermedio 11I:

A una suspensión de producto intermedio 11H (2 g, 11,29 mmol) y el producto intermedio 11G (4,54 g, 11,29 mmol) en CH³CN anhidro (30 ml) a TA se añadió gota a gota cloruro de estaño (IV) (1,33 ml, 11,29 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante 5 h a TA, luego se alcalinizó con bicarbonato de sodio acuoso saturado y se extrajo con EtOAc (3 x 50 ml). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron in vacuo. Se purificó el residuo en una columna ISCO (80 g, 0-60 % de EtOAc en Hexano) para proporcionar el producto intermedio 11I (5,5 g, 9,53 mmol, 84 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 520. 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 8,12 (dd, J = 7,4, 0,8 Hz, 1H), 8,10 - 8,05 (m, 2H), 8,02 - 7,96 (m, 2H), 7,91 (dd, J = 8,3, 1,0 Hz, 1H), 7,63 - 7,60 (m, 1H), 7,55 - 7,43 (m, 6H), 6,75 (dd, J = 4,9, 1,1 Hz, 1H), 6,54 - 6,38 (m, 1H), 6,01 - 5,76 (m, 1H), 5,06 - 4,86 (m, 1H), 4,73 (dd, J = 12,4, 3,8 Hz, 1H), 4,58 (dd, J = 12,4, 3,9 Hz, 1H), 4,11 (s, 3H).

Preparación del producto intermedio 11J:

A una solución del producto intermedio 111 (5,5 g, 10,59 mmol) en MeOH anhidro (30 ml) se añadió metanolato de sodio (4,23 ml, 2,117 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a TA durante 2 h. A la reacción se añadió resina DOEW 200 H+ (2 g). Se agitó la mezcla durante 20 minutos, se filtró y luego se concentró el filtrado hasta sequedad. Se coevaporó el residuo en un evaporador rotativo con piridina (5 ml). Se disolvió el residuo en piridina (20 ml) y se añadió DMTr-Cl (3,95 g, 11,65 mmol). Después de agitar la mezcla de reacción a TA durante 5 horas, se añadió MeOH (5 ml) y se agitó la mezcla a TA durante 10 min. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo y se purificó el residuo en una columna de gel de sílice (80 g), 33 min de gradiente 0-60 % de EtOAc en Hex para proporcionar el producto intermedio 11J (4,7 g, 7,66 mmol, 72,3 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 614. 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 8,12 (dd, J = 7,3, 0,9 Hz, 1H), 8,00 (dd, J = 8,3, 0,8 Hz, 1H), 7,75 - 7,67 (m, 1H), 77,37 - 7,30 (m, 4H), 7,25 - 7,19 (m, 5H), 6,76 (d, J = 8,8 Hz, 4H), 6,38 (dd, J = 6,0, 0,8 Hz, 1H), 5,57 - 5,44 (m, 1H), 5,43 - 5,27 (m, 1H), 4,69 - 4,51 (m, 1H), 4,13 (s, 3H), 3,79 (d, J = 1,1 Hz, 6H), 3,45 (dd, J = 10,7, 3,9 Hz, 1H), 3,31 (dd, J = 10,7, 4,1 Hz, 1H), 2,96 (br d, J = 3,9 Hz, 1H))

Preparación del producto intermedio 11H:

11K

Se añadió 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (1,0 M en acetonitrilo, 3,65 ml, 3,65 mmol) A una solución del Producto intermedio 11J (3,2 g, 5,21 mmol) en DCM anhidra (50 ml), seguido por la adición gota a gota de 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi)propanonitrilo (1,886 g, 6,26 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 16 h. Luego se diluyó la mezcla de reacción con DCM, se lavó con NaHCO³saturado ac. y se secó sobre MgSO⁴y se añadió TEA (1 ml). Se filtró la mezcla y se concentró el filtrado in vacuo. Se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice (columna de 40 g, 0-60 % de gradiente eluido con EtOAc en hexano con 0,5 % v/v de trietilamina, durante 21 minutos) para obtener el Producto intermedio 11K (3,98 g, 4,89 mmol, 94 % de rendimiento).

Preparación del Producto intermedio 11L:

Se preparó el Producto intermedio 11L a partir de IH-tetrazol (54,8 mg, 0,783 mmol), el Producto intermedio 2F (200 mg, 0,391 mmol), el Producto intermedio 11K (350 mg, 0,431 mmol) y DDTT (88 mg, 0,431 mmol) de acuerdo con el procedimiento descrito para el Producto intermedio 7F . Se purificó el producto crudo en gel de sílice (columna de 4 g, eluido con 0-50 % de gradiente de EtOAc en Hexanos durante 15 minutos) para proporcionar el Producto intermedio 11L (350 mg, 0,279 mmol, 71,2 % de rendimiento).

Preparación del Producto intermedio 11M:

Se disolvió el Producto intermedio 11L (350 mg, 0,279 mmol) en diclorometano (10 ml) y se añadieron trietilsilano (445 pl, 2,79 mmol) y ácido 2,2-dicloroacético (230 pl, 2,79 mmol). Se agitó la reacción durante tres horas a temperatura ambiente. Luego se diluyó la mezcla de reacción con DCM (30 ml), se lavó con NaHCO3 saturado ac., se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró in vacuo. Se purificó el residuo en una columna de gel de sílice (12 g, eluido con 0-20 % de MeOH en DCM) para proporcionar el Producto intermedio 11M (153 mg, 0,215 mmol, 77 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 711.

Preparación del Producto intermedio 11N:

Se azeotropó el Producto intermedio 11M (153 mg, 0,215 mmol) con piridina (2 ml) y el residuo se volvió a disolver en piridina (10 ml) y se añadió a la solución fosfonato de difenilo (83 pl, 0,43 mmol) gota a gota durante 20 minutos. Luego se añadió (É)-W,W-dimetil-W-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (133 mg, 0,646 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 horas y luego se concentró in vacuo. Se suspendió el residuo en metanol para formar un precipitado amarillo que se filtró y se concentró el filtrado in vacuo. Se extrajo el residuo resultante en DCM y se coevaporó con celite (5 g), se cargó en una columna y se purificó en una columna ISCO Gold 50 g C18 en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente: 0-50 % de B durante 14, se mantuvo al 50 % de gradiente durante 5 min. para proporcionar una mezcla de cuatro diastereómeros del Producto intermedio 11N (80 mg, 0,101 mmol, 47,1 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 789.

Ejemplo 11

1-[(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,06'9]octadecan-17-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida

Diastereómeros 1 (11-1)

Diastereómeros 2 (11 -2)

Diastereómeros 3 (11 -3)

Diastereómeros 4 (11 -4)

Se calentó el Producto intermedio 11N (80 mg, 0,101 mmol) en hidróxido de amonio al 27 % (3 ml) a 50 °C durante 3 horas y luego se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en agua (2 ml), se filtró y se purificó por condiciones cromatográficas de HPLC preparativa; Instrumento: Agilent 1260 Bionert Quat LC/FLD; columna: Luna Phenyl-Hex 5 um 4,6 x 250; tasa de flujo: 1 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc (pH 6,5); B: Metanol (% de A=100-% de B); gradiente: 20 % mantenido durante 10 min, 20-95 % durante 1 min, 95-20 % durante 2 min y 20s mantenido durante 3 min. Detección a 260 nm para obtener los Ejemplos 11-1, 11-2, 11-3 y 11-4.

Ejemplo 11-1: 4,7 mg; tR: 8,73 min; M+1 obs = 701,9; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 3: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,60 (s, 1H), 8,34 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,21 (s, 1H), 8,12 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 7,64 (dd, J = 8,2, 7.4 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 5,99 - 5,67 (m, 2H), 4,82 - 4,62 (m, 2H), 4,59 - 4,45 (m, 2H), 4,21 - 4,10 (m, 2H), 4.04 (br d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,83 - 3,73 (m, 1H), 3,72 - 3,63 (m, 1H), 2,73 - 2,61 (m, 1H), 2,55 - 2,44 (m, 1H), 2,38 -2,24 (m, 1H).

Ejemplo 11-2: 3,2 mg; tR: 10,13 min; M+1 obs = 702,0; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 3; 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,43 (s, 2H), 8,21 (s, 1H), 8,07 (dd, J = 7,3, 0,7 Hz, 1H), 7,66 (dd, J = 8,3, 7,3 Hz, 1H), 6.68 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,96 - 5,71 (m, 2H), 4,85 - 4,66 (m, 3H), 4,44 - 4,32 (m, 1H), 4,27 - 4,21 (m, 3H), 4,20 - 4,13 (m, 1H), 3,93 - 3,82 (m, 1H), 3,44 - 3,36 (m, 1H), 2,69 - 2,47 (m, 2H), 2,30 (d, J = 9,5 Hz, 1H).

Ejemplo 11-3: 3,7 mg; tR: 11,10 min; M+1 obs = 702,0; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 3; 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,55 (s, 1H), 8,42 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,15 - 8,05 (m, 1H), 7,71 - 7,64 (m, 1H), 6.68 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,91 - 5,70 (m, 1H), 5,65 - 5,43 (m, 1H), 4,87 - 4,80 (m, 1H), 4,77 - 4,67 (m, 1H), 4,66 - 4,57 (m, 1H), 4,43 - 4,31 (m, 1H), 4,21 - 4,11 (m, 1H), 4,10 - 4,04 (m, 1H), 4,03 - 3,90 (m, 2H), 3,71 - 3,57 (m, 1H), 2,80 -2,65 (m, 1H), 2,48 - 2,33 (m, 1H), 2,23 - 2,11 (m, 1H).

Ejemplo 11-4: 4,2 mg; tR: 11,72 min; M+1 obs = 701,9; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 3; 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,58 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,09 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,72 (dd, J = 8,3, 7,4 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,74 - 5,39 (m, 2H), 4,85 - 4,81 (m, 1H), 4,80 - 4,63 (m, 1H), 4,41 - 4,34 (m, 1H), 4,32 - 4,22 (m, 2H), 4,21 - 4,05 (m, 2H), 4,01 - 3,89 (m, 1H), 3,45 - 3,37 (m, 1H), 2,64 - 2,48 (m, 2H), 2,26 - 2,12 (m, 1H).

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 3:

Instrumento: Agilent 1200 HPLC/MS; columna: Luna Phenyl-Hex 3um 3 x150; tasa de flujo: 0,5 ml/m in; fase móvil: A: 20 mM de NH4OAc (pH 6,5); B: Metanol (% de A=100-% de B); gradiente: 0-15 % durante 20 min, 15-95 % durante 1 min. Detección a 260 nm.

Ejemplos 12

1-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,06'9]octadecan-17-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida

Diastereómeros 3 (12-3)

Diastereómeros 4 (12-4)

Preparación del Producto intermedio 12A

Se calentó una suspensión de D-(-)Arabinosa (10 g, ^{6 6 , 6}mmol) en DMF (150 ml) hasta 95 °C bajo una atmósfera de nitrógeno hasta que fue homogénea y luego se enfrió hasta 55 °C. Se añadió 4H-imidazol (9,07 g, 133 mmol) seguido por la adición gota a gota de terc-butilclorodifenilsilano (17,11 ml, ^{6 6 , 6}mmol) durante 10 min. Luego se agitó la mezcla de reacción a 55 °C durante 3 h y luego se enfrió hasta temperatura ambiente. Luego se diluyó la mezcla con CH²Cl²(300 ml) y se lavó con HCl acuoso (0,2 M, 100 ml), seguido por NaHCO3 (150 ml). Se secó la capa orgánica sobre MgSO4, se filtró y se concentró el filtrado in vacuo. Se coevaporó el residuo en un evaporador rotativo con tolueno (3 x 100 ml) y se secó el aceite amarillo resultante a alto vacío durante 15 min. Se purificó el material crudo por cromatografía flash sobre 750 g de gel de sílice (eluido con 0-15 % de gradiente durante 13 min., 10 % de B mantenido durante 5 min; Solvente A: DCM, solvente B: 20 % de MeOH en DCM) para obtener el Producto intermedio 12A (14,8 g, 57,2 %). LCMS, [M+H]+ = 389.

Preparación del Producto intermedio 12B:

Se añadió ácido sulfúrico concentrado (0,77 ml, 13,71 mmol) y sulfato de cobre (II) anhidro²(14,6 g, 91 mmol) a una solución del Producto intermedio 12A (14,8 g, 38,1 mmol) en acetona¹²seca (190 ml) a temperatura ambiente. Se agitó la suspensión resultante a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argón durante ⁸h. Se filtró la mezcla de reacción a través de un embudo fritado con medio y los sólidos en el embudo se enjuagaron con acetona. NH⁴OH (27 %, 3,0 ml) se añadió al filtrado y el (sulfato de amonio) precipitado eliminó por filtración a través de un embudo fritado con medio. Se concentró el filtrado in vacuo y se secó el residuo al vacío para proporcionar el producto crudo que se purificó por cromatografía flash sobre 220 g de gel de sílice (35-65 % de EtOAc/Hexanos) para obtener el Producto intermedio 12B (13,8 g, 32,2 mmol, 85 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro.

¹Se secó acetona mediante agitación con MgSO⁴durante 15,5 h y luego filtración a través de un embudo sinterizado con medio.

²Luego se secó CuSO⁴anhidro mediante calentamiento a 120 °C en un horno de vacío durante 14,0 h.

Preparación del Producto intermedio 12C

12C

Se añadió cloruro de bencilo (20,0 ml, 170 mmol) e hidróxido de potasio en polvo (18,0 g, 273 mmol, recién molido con un mortero) a una solución del Producto intermedio 12B (13,2 g, 30,8 mmol) en THF (130 ml) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla a 62 °C durante 19 h, luego se enfrió hasta temperatura ambiente y se filtró a través de celite. Se enjuagó la torta filtrante con THF y se concentró el filtrado in vacuo. Se secó el residuo al vacío durante la noche y se purificó por cromatografía flash (ISCO 330 g SiO², eluido con 0-10 % de EtOAc/CH²Cl²) para obtener el Producto intermedio 12C (5,44 g, 14,69 mmol, 47,7 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro. Luego se purificó una fracción impura adicional por cromatografía (ISCO 120 g SiO², 0-30 % de EtOAc/Hexanos) para obtener el Producto intermedio 12C adicional (4,41 g, 11,90 mmol, 38,7 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro. Rendimiento total 86,4 %. 1H RMN (500 MHz, Cloroformo-d) ó 7,34 (m, 10H), 5,92 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 4,60 (m, 4H), 4,29 (m, 1H), 4,06 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 3,67 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 1,47 (s, 3H), 1,35 (s, 3H). LCMS, [M+H]+ = 393.

Preparación del Producto intermedio 12D:

Se añadió cloruro de acetilo (34 ml) a MeOH (131 ml) a 0 °C y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Luego se añadió el Producto intermedio 12C (9,85 g, 26,6 mmol). Se agitó la solución resultante a temperatura ambiente durante 3,1 horas, se enfrió hasta 0 °C y se inactivó con NaHCO3 (16,7 g), añadido en porciones. Se filtró la suspensión resultante a través de un embudo fritado con medio y los sólidos se enjuagaron con MeCN. Se concentró el filtrado casi hasta sequedad, se disolvió en EtOAc (170 ml), se lavó con NaHCO3 saturado dos veces (1 x 150 ml y 1 x 75 ml), luego se lavó con NaCl saturado (100 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo para proporcionar el producto crudo, que se cromatografió (ISCO 120 g, SiO², columna flash, 0-40 % de EtOAc/Hexanos) para obtener el Producto intermedio 12D (8,93 g, 25,7 mmol, 97 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro. LCMS, [M+H]+ = 367.

Preparación del Producto intermedio 12E

A una solución agitada del Producto intermedio 12D (8,26 g, 23,74 mmol), se añadió piridina (15,5 ml, 191 mmol) en diclorometano (250 ml) a 0 °C bajo una atmósfera de argón. Luego se añadió gota a gota anhídrido trifluorometansulfónico (4,9 ml, 28,8 mmol). Después de agitar a 0 °C durante 30 min, se diluyó la mezcla de reacción con EtOAc (300 ml), se lavó con HCl 1 M acuoso (3 x 200 ml) y NaHCO3 saturado (200 ml). Se secó la capa orgánica (Na2SO4), se filtró y se concentró in vacuo. Se secó el residuo al vacío durante 1 h para proporcionar el Producto intermedio 12E crudo (11,15 g, 23,40 mmol, 99 % de rendimiento) en forma de un aceite amarillo pálido que se usó de inmediato como tal en la siguiente etapa. LCMS, [M+Na]+ = 499.

Preparación del Producto intermedio 12F:

12F

Se añadió fluoruro de tetrabutilamonio (1 M en THF, 117 ml, 117 mmol) a una solución del Producto intermedio 12E recién preparada (11,15 g, 23,40 mmol) en THF (150 ml) a 0 °C bajo una atmósfera de argón. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 66 h y luego se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en éter dietílico/diclorometano (6:1, 50 ml), se lavó con NH4Cl saturado (3 x 200 ml), NaHCO3 al 5 % ac. (200 ml) y agua/NaCl saturado ac. (1:1, 150 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio y se concentró y se purificó el residuo por cromatografía flash sobre 120 g de gel de sílice eluido con 0-50 % de acetato de etilo/Hexano para proporcionar el Producto intermedio 12F (2,1 g, 6,06 mmol, 25,9 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro. Lc Ms , [M+Na]+ = 369.

Preparación del Producto intermedio 12G:

Bncf F

12G

Se añadió HCl acuoso (1 M, 12,5 ml, 12,50 mmol) a temperatura ambiente a una solución agitada del Producto intermedio 12F (2,1 g, 6,06 mmol) en AcOH (61,0 ml). Se agitó la mezcla de reacción a 65 °C durante 3 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y luego se evaporó a presión reducida para remover la mayor parte del AcOH. Se enfrió la mezcla acuosa restante hasta 0 °C y se alcalinizó por adición lenta de NaHCO3 saturado (40 ml). Se dividió la mezcla en EtOAc (100 ml) y agua (25 ml) y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (2 x 40 ml). Se combinaron las capas orgánicas, se lavaron con agua (40 ml) y NaCl saturado (40 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo. Se secó el residuo al vacío para proporcionar el Producto intermedio 12G (2,0 g, 6,02 mmol, 99 % de rendimiento) en forma de un aceite amarillento. LCMS, [M+Na]+ = 355.

Preparación del Producto intermedio 12H:

12H

Se añadió trietilamina (2,6 ml, 18,56 mmol)una solución agitada del Producto intermedio 12G (2,0 g, 6,02 mmol) en diclorometano (16,0 ml) a 0 °C bajo una atmósfera de argón. Después de agitar durante 5 min a 0 °C, se añadió anhídrido acético (0,70 ml, 7,26 mmol) seguido por 4-dimetilaminopiridina (0,074 g, 0,602 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 15 minutos, se enfrió hasta 0 °C y se inactivó por adición lenta de NH4Cl saturado ac. (4,0 ml). Se dividió la mezcla en agua (20 ml) y EtOAc (100 ml) y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (2 x 30 ml). Se combinaron las capas orgánicas, se lavaron con agua (40 ml) y NaCl saturado (40 ml), se secaron (Na2SO4), se filtraron y se concentraron in vacuo. Se purificó el residuo por cromatografía flash sobre 80 g de gel de sílice eluido con 0-30 % de acetato de etilo/Hexanos para obtener el Producto intermedio 12H (1,9 g, 5,07 mmol, 84 % de rendimiento) en forma de un aceite incoloro. LCMS, [M+Na]+ = 397 en forma de una mezcla anomérica.

Preparación del Producto intermedio 12I:

12I

Se añadió perclorostannano (0,625 ml, 5,34 mmol), gota a gota, una suspensión del Producto intermedio 12H (2 g, 5,34 mmol) y el Producto intermedio 11H (0,946 g, 5,34 mmol) en acetonitrilo (30 ml) bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla de reacción durante 5 h y luego se inactivó con NaHCO3 saturado ac. y se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml). Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo. Se purificó el residuo en una columna ISCO (40 g, 0-60 % de EtOAc/hexanos) para proporcionar el Producto intermedio 12I (1,6 g, 3,26 mmol, 60,9 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 492.

Preparación del Producto intermedio 12J:

12J

Se enfrió el Producto intermedio 12I (1,2 g, 2,441 mmol) en DCM (100 ml) hasta -78 °C. Se añadió gota a gota tricloroborano (19,53 ml, 19,53 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a -78 °C durante 4 h. Se inactivó cuidadosamente la reacción con NaHCO3 saturado ac. para formar un precipitado que se recolectó y se lavó con DCM (5 x 1 ml) y se secó para obtener el Producto intermedio 12J (522 mg, 68,7 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 312.

Preparación del Producto intermedio 12K:

12K

Al Producto intermedio 12J (522 mg, 1,677 mmol) en 5 ml de piridina se añadió DMTr-Cl (682 mg, 2,012 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche y luego se inactivó con MeOH (1 ml), se agitó durante 10 min. y se concentró en un evaporador rotativo. Se purificó el residuo en una columna ISCO (40 g, 0-60 % de EtOAc/hexanos durante 27 min.) para proporcionar el Producto intermedio 12K (500 mg, 0,815 mmol, 48,6 % de rendimiento). LCMS, [M+Na]+ = 636.

Preparación del Producto intermedio 12L:

Se añadió 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (0,815 ml, 0,815 mmol) a una solución del Producto intermedio 12K (500 mg, 0,815 mmol) en DCM anhidra (10 ml) a 0 °C seguido por 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi)propanonitrilo (295 mg, 0,978 mmol). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 4 h y luego se diluyó con d Cm (20 ml), se lavó con NaHCO3 saturado ac., se secó sobre sulfato de sodio y se concentró in vacuo. Se purificó el residuo en una columna ISCO (24 g, 24 min de gradiente: 0-100 % de EtOAc/Hex con 0,5 % de NEt3) para proporcionar el Producto intermedio 12L (570 mg, 0,700 mmol, 86 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 814.

Preparación del Producto intermedio 12M:

Se preparó el Producto intermedio 12M a partir de 1H-tetrazol (68,5 mg, 0,978 mmol), el Producto intermedio 2F (250 mg, 0,489 mmol), el Producto intermedio 12L (397 mg, 0,489 mmol) y DDTT (110 mg, 0,538 mmol) de acuerdo con el procedimiento descrito para el Producto intermedio 7F . Se purificó el producto crudo en una columna ISCO (24 g, eluido con 0-100 % de EtOAc/Hexanos durante 18 min.) para proporcionar Producto intermedio 12M (617 mg, 0,491 mmol, 100 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 1255.

Preparación del Producto intermedio 12N:

12N

Se preparó el Producto intermedio 12N a partir del Producto intermedio 12M (617 mg, 0,491 mmol), trietilsilano (785 pl, 4,91 mmol) y ácido 2,2-dicloroacético (405 pl, 4,91 mmol) de acuerdo con el procedimiento descrito para el Producto intermedio 11N. Se purificó el material crudo en una columna ISCO (24 g, 0-10 % de MeOH/DCM durante 18 minutos) para proporcionar el Producto intermedio 12N (211 mg, 0,297 mmol, 60,4 % de rendimiento).

Preparación del Producto intermedio 12O:

Se añadió una solución de fosfonato de difenilo (0,115 ml, 0,593 mmol) en piridina (5 ml) gota a gota a una solución de Producto intermedio 12N (211 mg, 0,297 mmol) en piridina (15 ml)) durante un período de 40 minutos. Se añadió (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (183 mg, 0,890 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 16 h y luego se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en metanol, se filtró y se concentró el filtrado en un residuo que se purificó en una columna ISCO Gold 50 g C18 en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente: 0-50 % de B durante 13 min; 50 % mantenido durante 3 min para obtener el Producto intermedio 12O (74 mg, 0,094 mmol, 31,6 % de rendimiento) en forma de una mezcla de diastereómeros.

Ejemplo 12

1-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-17-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida

Diastereómeros 1 (12-1)

Diastereómeros 2 (12-2)

Diastereómeros 3 (12-3)

Diastereómeros 4 (12-4)

Se calentó el Producto intermedio 12O (74 mg, 0,094 mmol) en hidróxido de amonio al 27 % (2 ml) a 50 °C durante 3 horas y luego se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en agua (2 ml), se filtró y se purificó por condiciones cromatográficas de HPLC preparativa: Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 Prep, 5 pm, 21,2 X250 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc (pH 4,7); B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente; 5-21 % de B durante 20 min; 21-95 % de B durante 1 min; 95-5 % de B durante 1 min; detección a 260 nm para obtener Ejemplos 12-1, 12-2, 12-3 y 12-4

Ejemplo 12-1: 4,2 mg; tR: 11,95 min; M+1 obs = 702,3; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 4: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,57 (s, 1H), 8,31 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,12 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,77 - 7,64 (m, 1H), 6,90 - 6,79 (m, 1H), 6,15 - 5,82 (m, 1H), 5,54 - 5,36 (m, 1H), 4,87 - 4,81 (m, 1H), 4,73 (br d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,63 - 4,54 (m, 1H), 4,51 - 4,38 (m, 1H), 4,23 - 4,10 (m, 3H), 4,09 - 4,03 (m, 1H), 4,02 - 3,91 (m, 1H), 2,65 - 2,54 (m, 2H), 2,53 - 2,45 (m, 1H).

Ejemplo 12-2: 2,6 mg; tR: 13,62 min; M+1 obs = 702,2; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 4: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,51 (s, 1H), 8,27 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,12 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,73 (dd, J = 8,3, 7,4 Hz, 1H), 6,82 (dd, J = 16,1, 1,7 Hz, 1H), 6,15 - 5,91 (m, 1H), 5,70 - 5,55 (m, 1H), 4,85 - 4,70 (m, 1H), 4,59 -4,49 (m, 1H), 4,44 - 4,33 (m, 1H), 4,32 - 4,16 (m, 2H), 4,13 - 4,02 (m, 2H), 4,00 - 3,89 (m, 1H), 3,28 - 3,14 (m, 1H), 2,64 - 2,51 (m, 2H), 2,47 - 2,34 (m, 1H).

Ejemplo 12-3: 5,3 mg; ^{í r}: 14,58 min; M+1 obs = 702,1; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 4: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) 68,47 (s, 1H), 8,27 - 8,18 (m, 2H), 8,11 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,80 - 7,54 (m, 1H), 6,81 (br d, J = 16,5 Hz, 1H), 6,20 - 5,95 (m, 1H), 5,71 - 5,52 (m, 1H), 4,86 - 4,74 (m, 2H), 4,53 (br d, J = 6,7 Hz, 1H), 4,33 - 4,22 (m, 3H), 4,14 (br d, J = 4,2 Hz, 3H), 2,63 - 2,51 (m, 2H), 2,46 - 2,35 (m, 1H)

Ejemplo 12-4: 5,7 mg; ^{í r}: 17,49 min; M+1 obs = 702,1; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 4: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) 68,52 (s, 1H), 8,32 - 8,17 (m, 2H), 8,11 (d, J = 6,9 Hz, 1H), 7,74 - 7,62 (m, 1H), 6,82 (dd, J = 16,3, 1,9 Hz, 1H), 6,10 - 5,86 (m, 1H), 5,64 - 5,40 (m, 1H), 4,85 - 4,70 (m, 1H), 4,58 (br d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,34 - 4,01 (m, 7H), 2,64 - 2,45 (m, 3H).

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 4:

Instrumento: Agilent 1200 HPLC/MS; columna: columna Agilent Eclipse Plus C183,5 pm, 4,6 X 100 mm; tasa de flujo: 1 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc (pH 4,7); B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente; 10-50 % de B durante 15 min; 50-95 % de B durante 1 min.

Ejemplos 13

1-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,06'9]octadecan-8-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida

Diastereómeros 1 (13-1)

Diastereómeros 2 (13-2)

Diastereómeros 3 (13-3)

Diastereómeros 4 (13-4)

Preparación del Producto intermedio 13A:

13A

Se enfrió una solución del Producto intermedio 2D (500 mg, 1,200 mmol) y trietilamina (491 pl, 3,60 mmol) en DCM (20 ml) hasta 0 °C y se añadió cloruro de metansulfonilo (189 pl, 2,401 mmol) gota a gota. Se calentó lentamente la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente, se agitó durante 1 hora, se lavó con NaHCO3 saturado ac., salmuera, se secó sobre Na2SO4 se filtró y se concentró in vacuo para obtener el Producto intermedio 13A crudo. 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) 67,54 -7,29 (m, 9H), 7,28 - 7,16 (m, 6H), 5,25 - 5,17 (m, 1H), 3,50 - 3,36 (m, 2H), 3,31 (dd, J = 9,7, 6,8 Hz, 1H), 2,85 (s, 3H), 2,80 - 2,72 (m, 1H), 2,66 - 2,55 (m, 2H), 2,50 - 2,39 (m,1H), 2,33 - 2,23 (m, 1H), 2,07 (s, 3H).

Preparación del Producto intermedio 13B:

13B

Se disolvió el Producto intermedio 13A crudo en DMF (5 ml), se añadió azida sódica (234 mg, 3,60 mmol) y se agitó la reacción a 60 °C durante dos días. Se diluyó la mezcla de reacción con agua (10 ml) y se extrajo con EtOAc (3x15 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con salmuera, se secaron sobre Na²SO⁴, se filtraron y se concentraron in vacuo para obtener Producto intermedio 13B. 1H R^mN (499 MHz, CLOROFORMO-d) 57,50 - 7,39 (m, 9H), 7,38 - 7,31 (m, 6H), 4,07 (d, J = 5,7 Hz, 2H), 3,69 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,22 - 3,08 (m, 2H), 2,65 - 2,52 (m, 1H), 2,42 - 2,31 (m, 2H), 2,29 - 2,20 (m, 1H), 1,99 (s, 3H).

Preparación del Producto intermedio 13C:

13C

Se disolvió el Producto intermedio 13B en MeOH (30 ml) y se añadió 10 % de Pd sobre carbón (0,4 eq) bajo 25 psi H²(g). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 3 horas, luego se filtró a través de celite y se lavó la torta filtrante con MeOH (3 x 5 ml). Se concentró el filtrado in vacuo para obtener el Producto intermedio 13C.

Preparación del Producto intermedio 13D:

Se añadió 3-fluoro-2-nitrobenzoato de metilo (239 mg, 1,200 mmol) y W-etil-W-isopropilpropan-2-amina (418 pl, 2,401 mmol) a una solución del Producto intermedio 13C en DMF (5 ml). Se agitó la reacción a 50 °C durante 16 horas, se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con EtOAc (2 x 15 ml). Se lavó la capa orgánica con salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. Se disolvió el material crudo en MeOH (30 ml, 0,4 eq.) y se agitó bajo 25 psi H²(g) durante 4 h. Se filtró la mezcla de reacción a través de celite y se lavó la torta filtrante con MeOH (3x5 ml). Se concentraron los filtrados combinados para proporcionar el Producto intermedio 13D.

Preparación del Producto intermedio 13G:

13G

Se disolvió el Producto intermedio 13D crudo en AcOH (10 ml), se añadió nitrito de sodio (83 mg, 1,200 mmol) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 16 h. Se concentró la mezcla de reacción y se disolvió el residuo en EtOAc (20 ml), se lavó con NaHCO3 saturado ac., salmuera, se secó sobre Na2SÜ4 y se concentró hasta sequedad. Se azeotropó esta mezcla con piridina (2 ml), luego se disolvió en piridina (5 ml) y se añadió cloruro de tritilo (502 mg, 1,801 mmol). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió MeOH (1 ml) y se agitó la mezcla durante 10 min y se concentró la mezcla de reacción in vacuo. Se purificó el residuo resultante en sílice 0-100 % de EtOAc/hex para proporcionar el Producto intermedio 13G (230 mg, 33,3 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 576.

Preparación del Producto intermedio 13H:

13H

Se añadió metanolato de sodio (160 pl, 0,080 mmol) a una solución del Producto intermedio 13G (230 mg, 0,400 mmol) en MeOH seco (5 ml). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 4 h, se inactivó con AcOH (0,1 ml) y luego se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo resultante en EtOAc (20 ml), se lavó con NaHCO3 saturado ac., salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. Se purificó el material crudo en sílice (ISCO 12 g, 0-100 % de EtOAc/hexanos durante 18 min) para obtener el Producto intermedio 13H.1H RMN (499 ^mH^z, CLOROFORMO-d) ó 8,10 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,46 (br d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,37 (br d, J = 8,0 Hz, 6H), 7,28 (s, 9H), 5,06 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 4,20 - 4,09 (s, 3H), 3,88 - 3,76 (m, 2H), 3,48 - 3,35 (m, 1H), 3,29 - 3,21 (m, 1H), 3,20 -3,10 (m, 1H), 2,80 - 2,65 (m, 2H), 2,48 (br d, J = 4,4 Hz, 1H). LCMS, [M+H]+ = 534.

Preparación del Producto intermedio 13I:

Se preparó el Producto intermedio 13I a partir de 1H-tetrazol (55,9 mg, 0,798 mmol), el Producto intermedio 13H (213 mg, 0,399 mmol), (2R,3R,4R,5R)-5-(6-benzamido-9H-purin-9-il)-2-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-4-fluorotetrahidrofuran-3-il (2-cianoetil) diisopropilfosforamidita (Sigma-Aldrich, 524 mg, 0,599 mmol) y DDTT (90 mg, 0,439 mmol) de acuerdo con el procedimiento descrito para el Producto intermedio 7F . Se purificó el producto crudo en sílice (ISCO 24 g; gradiente: 0-100 % de EtOAc/hexanos durante 27 min) para proporcionar el Producto intermedio 13I (490 mg, 0,366 mmol, 92 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 1340

Preparación del Producto intermedio 13J:

13J

Se añadió trietilsilano (584 pl, 3,66 mmol) y ácido 2,2-dicloroacético (302 pl, 3,66 mmol) a una solución del Producto intermedio 13I (490 mg, 0,366 mmol) en DCM (10 ml). Después de 2 h, se diluyó la mezcla de reacción con DCM (20 ml), se lavó con NaHCÜ3 saturado ac., se secó sobre Na2SÜ4 y se concentró. Se purificó el residuo en sílice (12 g; 0 10 % de MeOH/DCM) para proporcionar el Producto intermedio 13J (290 mg, 0,364 mmol, 100 % de rendimiento) en forma de un par de diastereómeros. LCMS, [M+H]+ = 796.

Preparación del Producto intermedio 13K:

13K

Se añadió gota a gota el Producto intermedio 13J (290 mg, 0,364 mmol) en piridina (15 ml) a temperatura ambiente bajo atmósfera de nitrógeno a una solución de fosfonato de difenilo (141 pl, 0,729 mmol) en piridina (4 ml) durante 2 h. Luego se añadió (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (224 mg, 1,093 mmol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche. Se concentró la mezcla de reacción en un evaporador rotativo. Se agitó el residuo en MeOH (10 ml) durante 10 min y se filtró el precipitado amarillo resultante. Se añadió celite (3 g) al filtrado y se concentró la mezcla in vacuo, se cargó en una columna y se purificó en una columna ISCO Gold 150 g C18 en fase inversa, fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente: 0- 60 % de B durante 20 min; 60 % de B mantenido durante 5 min para obtener una mezcla de dos diastereómeros de elución rápida del Producto intermedio 13K (80 mg, 25,1 %) y otra mezcla de dos diastereómeros de elución lenta del Producto intermedio 13K (87 mg, 27,3 %). LCMS, [M+H]+ = 874.

Ejemplos 13

Diastereómeros 1 (13-1)

Diastereómeros 2 (13-2)

Diastereómeros 3 (13-3)

Diastereómeros 4 (13-4)

Se calentó la mezcla de dos diastereómeros de elución rápida del Producto intermedio 13K (80 mg, 0,092 mmol) en NH³(7 N en MeOH, 5 ml) a 50 °C durante 3 h. Se concentró la reacción, se disolvió en agua (2 ml), se filtró y se purificó por condiciones cromatográficas de HPLC preparativa: Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 Prep, 5 pm, 21,2 X250 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 0,1 % de TFA en H2O; B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente; 5-20 % de B durante 15 min, 20-95 % de B durante 1 min, 95-5 % de B durante 1 min; detección: 260 nm para obtener los Ejemplos 13-1 y 13-2

Ejemplo 13-1: 1,2 mg; tR: 10,00 min; M+1 obs = 702,3; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 5: 1H RMN (499 MHz, ÓXIDO DE DEUTERIO) ó 8,43 (s, 1H), 8,31 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,46 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,25 - 7,11 (m, 1H), 6,27 (d, J = 14,2 Hz, 1H), 6,06 - 5,84 (m, 1H), 5,30 (br d, J = 8,3 Hz, 2H), 5,01 - 4,85 (m, 5H), 4,63 -4,53 (m, 2H), 4,52 - 4,45 (m, 2H), 4,19 - 4,12 (m, 2H), 4,07 (s, 3H), 3,25 (s, 1H), 3,11 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 2,97 - 2,86 (m, 1H), 2,65 - 2,49 (m, 2H).

Ejemplo 13-2: 2,3 mg; tR: 11,58 min; M+1 obs = 702,3; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 5: 1H RMN (499 MHz, ÓXIDO DE DEUTERIO) ó 8,41 (s, 1H), 8,27 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,44 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 7,13 - 7,00 (m, 1H), 6,26 (d, J = 13,9 Hz, 1H), 5,57 - 5,38 (m, 1H), 5,30 (br d, J = 8,8 Hz, 1H), 5,06 - 4,92 (m, 1H), 4,54 -4,42 (m, 2H), 4,20 - 4,09 (m, 2H), 4,09 - 4,03 (m, 1H), 4,02 - 3,93 (m, 1H), 3,38 - 3,28 (m, 1H), 3,11 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 2,97 - 2,86 (m, 1H), 2,66 - 2,49 (m, 2H)

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 5:

Instrumento: Agilent 1200 HPLC/MS; columna: columna Agilent Eclipse Plus C183,5 pm, 3,0 X 100 mm; tasa de flujo: 0,5 ml/min; fase móvil: A: 0,05 % de TFA en H²O; B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente; 10-41 % de B durante 20 min, 41-95 % de B durante 1 min, 95-10 % de B durante 1 min.

Se calentó la mezcla de dos diastereómeros de elución lenta del Producto intermedio 13K (87 mg, 0,092 mmol) en NH³(7 N en MeOH, 5 ml) a 50 °C durante 3 h. Se concentró la reacción, se disolvió en agua (2 ml), se filtró y se purificó por condiciones cromatográficas de HPLC preparativa: Instrumento: Waters Autopure Columna: columna Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 Prep, 5 pm, 21,2 X250 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc (pH 4,7); B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente 10-25 % de B durante 20 min, 25-95 % de B durante 1 min, 95-10 % de B durante 1 min.; detección: 260 nm para obtener los Ejemplos 13-3 y 13-4.

Ejemplo 13-3: 1,0 mg; tR: 8,60 min; M+1 obs = 702,0; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 6: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,70 - 8,51 (m, 1H), 8,39 - 8,27 (m, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,11 - 8,02 (m, 1H), 7,67 - 7,51 (m, 1H), 6,46 - 6,25 (m, 1H), 5,77 - 5,58 (m, 1H), 5,43 - 5,33 (m, 1H), 5,30 - 5,18 (m, 1H), 4,65 - 4,52 (m, 1H), 4,46 (br d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,42 - 4,33 (m, 1H), 4,27 (br d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,23 - 4,12 (m, 2H), 4,11 - 3,99 (m, 1H), 3,74 - 3,61 (m, 1H), 2,81 - 2,52 (m, 3H).

Ejemplo 13-4: 2,2 mg; tR: 12,98 min; M+1 obs = 702,0; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 6: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,70 - 8,47 (m, 1H), 8,34 - 8,12 (m, 2H), 8,07 - 7,97 (m, 2H), 7,55 (t, J = 7,7 Hz, 1H), 6,38 (br d, J = 15,0 Hz, 1H), 5,65 - 5,43 (m, 1H), 5,37 (br d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,20 - 5,04 (m, 1H), 4,61 - 4,45 (m, 2H), 4,40 -4,22 (m, 3H), 4,18 (br s, 1H), 4,09 - 4,00 (m, 1H), 3,80 - 3,65 (m, 1H), 3,23 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 2,80 - 2,55 (m, 3H).

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 6:

Instrumento: Agilent 1200 HPLC/MS; columna: columna Agilent Eclipse Plus C183,5 pm, 4,6 X 100 mm; tasa de flujo: 1 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc (pH 4,7); B: ACN (% de A=100 % de B); gradiente; 5 % de B mantenido durante 2 min; 5-25 % de B durante 15 min; 25-95 % de B durante 1 min.

Ejemplos 14

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-18-hidroxi-8-(6-hidroxi-9H-purin-9-il)-17-{4-oxo-1H,4H,5H-imidazo[2,1-b]purin-1 -il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,06'9]octadecano-3,12-diona

Preparación del Producto intermedio 14A

Se concentró una solución del Producto intermedio 2F (250 mg, 0,489 mmol) y 1H-tetrazol (171 mg, 2,446 mmol) en MeCN (10 ml) en un evaporador rotativo y se repitió dos veces el producto azeotropado. Se añadió CH3CN (6 ml) y MS 4Á activado (180 mg) al residuo y se dejó la mezcla bajo agitación bajo una atmósfera de nitrógeno. Por separado, se azeotropó el Producto intermedio 15G (735 mg, 0,685 mmol) con MeCN tres veces, se disolvió el residuo en CH³CN (6 ml) y se añadió MS 4Á activado (180 mg). Se transfirió esta mezcla a la solución anterior por medio de una cánula y se enjuagó con MeCN seco (2x2 ml) para una transferencia completa. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 4 h y luego se añadió DDTT (201 mg, 0,978 mmol) y se agitó la mezcla durante 30 min. Luego se filtró la mezcla de reacción, se concentró y se disolvió el residuo en EtOAc y se lavó con NaHCÜ3 saturado ac. Se concentró la capa orgánica hasta sequedad y se disolvió el residuo en DCM (8 ml). Se añadieron Trietilsilano (0,391 ml, 2,446 mmol) y ácido dicloroacético (0,404 ml, 4,89 mmol) y un par de gotas de agua y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1,5 h. Se añadió TFA (0,113 ml, 3 eq., 1,468 mmol) y se agitó la mezcla durante 4 h. Se añadió piridina (4 ml) y se concentró la mezcla. Se añadió NaHCO3 saturado ac. al residuo y se extrajo la capa acuosa con DCM 3 times. Se secaron las capas orgánicas combinadas (sulfato de sodio), se filtró y se concentró. Se purificó el residuo en una columna de sílice (12 g, eluido con 0-100 % de gradiente de EtOAc/hexano). Una segunda purificación por cromatografía flash en sílice (12 g, 0-20 % de gradiente de MeOH/DCM) dio como resultado el Producto intermedio 14A (250 mg). LCMS, [M+H]+ = 970

Preparación del Producto intermedio 14B:

Se azeotropó el Producto intermedio 14A (250 mg, 0,258 mmol) con piridina 3 veces y se extrajo el residuo en piridina (30 ml). Se añadió una solución de fosfonato de difenilo (0,099 ml, 0,515 mmol) en piridina (1,5 ml) durante 30 minutos y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (212 mg, 1,030 mmol) y se agitó la mezcla durante dos días. Luego se concentró la mezcla de reacción y se azeotropó el residuo con ACN (2x5 ml). Se suspendió el residuo luego en ACN, se filtró el sólido y se concentró el filtrado. Se disolvió el residuo en DCM, se cargó en celite y se purificó en una columna ISCO Gold 50 g C18 en fase inversa (fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente: 5-70 % de B, se eluyó el producto deseado a aproximadamente el 40-50 % de B). Se combinaron las fracciones que contenían producto deseado y se concentraron para remover la mayor parte del acetonitrilo. Se extrajo la solución acuosa restante con DCM y se concentró para proporcionar el Producto intermedio 14B (110 mg, 0,105 mmol, 40,7 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 1048.

Preparación del Producto intermedio 14C

14C

Se agitó una solución de DBU (0,237 ml, 1,574 mmol) y nitrometano (0,085 ml, 1,574 mmol) en piridina (1,0 ml) durante ^{2 0}min. Se añadió esta solución a una solución del Producto intermedio 14B ^{( 1 1 0}mg, 0,105 mmol) en piridina (0,5 ml) durante 10 min. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante la noche, se concentró y se azeotropó con ACN tres veces. Se disolvió el residuo en NH⁴OH conc. (27 % aq.) y se calentó en un recipiente a presión sellado a 50 °C durante la noche. Luego se concentró la mezcla de reacción, se cargó en celite y se purificó en una columna ISCO Gold 15,5 g C18 en fase inversa (fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente:0-50 % de B). Las fracciones con contenido de producto deseado se combinaron y se concentraron para proporcionar el Producto intermedio 14C (100 mg, 0,121 mmol, 115 % de rendimiento).

Ejemplo 14

Se trató el Producto intermedio 14C (100 mg, 0,121 mmol) con piridina (0,2 ml) y TEA.3HF (0,8 ml), se sonicó en una solución homogénea y se calentó a 50 °C durante 5 h. Se añadió acetato de trietilamonio (1 M, 2 ml), se concentró la mezcla y se disolvió el residuo en agua. Se purificaron los productos crudos por LC/MS preparativa con las siguientes condiciones: Columna: Agilent Bonus RP, 200 mm x 21,2 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo: agua con 20 mM de acetato de amonio; gradiente: mantenimiento de 6 minutos al 0 % de B, 0-100 % de B durante 20 minutos, luego un mantenimiento de 4 minutos al 100 % de B; tasa de flujo: 20 ml/min; temperatura de columna: 25 C. Se disparó la recolección de fracciones por señales de MS. Se combinaron las fracciones con contenido del producto deseado y se secaron por evaporación centrífuga para obtener Ejemplos 14-1, 14-2, 14-3 y 14-4.

Ejemplo 14-1: 2,0 mg; Método analítico de LCMS E; masa observada: 714,0; tR: 0,22 min.

Ejemplo 14-2: 2,6 mg; Método analítico de LCMS E; masa observada: 714,2; tR: 0,25 min.

Ejemplo 14-3: 3,7 mg; Método analítico de LCMS E; masa observada: 714,2; tR: 0,27 min.

Ejemplo 14-4: 2,2 mg; Método analítico de LCMS E; masa observada: 714,2; tR: 0,44 min.

Método analítico de LCMS E:

Condiciones de inyección 1: Columna: Waters XBridge BEH C18 XP (50x2,1 mm) 2,5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de NH4OAc; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de NH4OAc; temperatura: 50 °C; gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos; flujo: 1,1 ml/min.

Ejemplos 15

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-17-{4-hidroxi-1H-imidazo[2,1-b]purin-1-il}-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,069]octadecano-3,12-ditiona

Diastereómeros 3 (15-3)

Diastereómeros 4 (15-4)

Preparación del Producto intermedio 15A:

Se añadió DIAD (14,25 ml, 73,3 mmol) gota a gota una suspensión de (2R,3R,4R,5R)-2-(acetoximetil)-5-(2-amino-6-oxo-1,6-dihidro-9H-purin-9-il)tetrahidrofuran-3,4-diil diacetato (20 g, 48,9 mmol), 2-(4-nitrofenil)etan-1-ol (12,25 g, 73,3 mmol) y trifenilfosfina (19,22 g, 73,3 mmol) en THF (100 ml) bajo nitrógeno. La mezcla de reacción lentamente se volvió una solución amarilla transparente después de 2 h. Se concentró la mezcla de reacción y se disolvió el residuo en EtOAc (500 ml). Se lavó la solución resultante con NaHCO3 sat. ac., salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y luego se concentró para proporcionar el Producto intermedio 15A crudo en forma de un aceite marrón espeso. LCMS, [M+H]+ = 559.

Preparación del Producto intermedio 15B:

15B

Se añadió NH³(7 N en MeOH, 50 ml) al Producto intermedio 15A crudo en MeOH (50 ml). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 8 h y luego se concentró. Se lavó el residuo con agua (20 ml x 3), que se decantó cada vez. Se lavó el residuo viscoso resultante con Et²O (20 ml x 3), luego se trató con 50 ml de EtOAc y se dejó agitar durante 5 h. El producto se cristalizó en forma de un sólido. Se recolectó el sólido y se lavó con éter dietílico para proporcionar el Producto intermedio 15B (17,5 g, 40,5 mmol, 83 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 432. 1H RMN (499 MHz, DMSO-d6) ó 8,19 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 8,10 (s, 1H), 7,65 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,46 (s, 2H), 5,78 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 5,39 (br d, J = 6,1 Hz, 1H), 5,13 (d, J = 4,6 Hz, 1H), 5,09 (s, 1H), 4,68 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 4,46 (br d, J = 5,4 Hz, 1H), 4,15 - 4,08 (m, 1H), 3,89 (br d, J = 3,7 Hz, 1H), 3,69 - 3,59 (m, 1H), 3,57 - 3,47 (m, 1H), 3,26 (t, J = 6,9 Hz, 2H).

Preparación del Producto intermedio 15C:

A una solución del Producto intermedio 15B (17,5 g, 40,5 mmol) en 50 ml de EtOH se añadió 150 ml de tampón de NhUOAc/AcOH (pH 4,5) y 2-bromoacetaldehído (~1,3 M en etanol/1 M HCl, 93 ml, 121 mmol). Se agitó la mezcla durante 24 h a 35 °C, luego se redujo el volumen in vacuo a aproximadamente 50 ml. Se neutralizó la mezcla restante con bicarbonato de amonio sólido a pH 7 y se trató con acetonitrilo (~200 ml). Se precipitó Producto intermedio 15C como un sólido blanco. Se filtró el sólido y se enjuagó con acetonitrilo y se secó para proporcionar ~6 g de producto. Se concentró el filtrado para proporcionar una suspensión. Se diluyó la suspensión con acetonitrilo (100 ml) y MeOH (10 ml) y se filtró el sólido y se enjuagó con acetonitrilo. Los sólidos se combinaron para proporcionar el Producto intermedio 15C (9,5 g, 51,4 % de rendimiento), LCMS, [M+H]+ = 457.

Preparación del Producto intermedio 15D:

Se coevaporó el Producto intermedio 15C (3,75 g, 8,22 mmol) en un evaporador rotativo con piridina (10 ml x 2). Luego se disolvió en piridina (60 ml) y se añadió cloruro de 4,4'-dimetoxitritilo (2,92 g, 8,63 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 horas, se inactivó la mezcla de reacción con MeOH (3 ml) y se agitó durante 10 min. Luego se concentró in vacuo y se extrajo el residuo en DCM (100 ml), se lavó con 1,5 M KHPO⁴y luego se concentró. Se purificó el material crudo en columna de 220 g de sílice que se trató con DCM (con 0,25 % de TEA) y eluido con 0 % al 10 % de MeOH/ DCM( con 0,25 % de TEA) para proporcionar el Producto intermedio 15D (4 g, 5,27 mmol, 64,2 %). LCMS, [M+H]+ = 759. 1H RMN (499 MHz, DMSO-d6) ó 8,32 (s, 1H), 8,14 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,05 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,53 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,17 - 7,05 (m, 5H), 7,03 - 6,92 (m, 4H), 6,69 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 6,68 - 6,57 (m, 2H), 6,29 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 5,96 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,83 (td, J = 4,8, 2,2 Hz, 1H), 4,78 - 4,66 (m, 2H), 4,38 (td, J = 7,1, 4,8 Hz, 1H), 4,20 (dd, J = 6,8, 3,5 Hz, 1H), 3,69 (d, J = 4,9 Hz, 6H), 3,34-3,30 (m, 2H), 3,24 (dd, J = 10,8, 2,3 Hz, 1H), 2,96 (dd, J = 10,9, 3,9 Hz, 1H).

Preparación del Producto intermedio 15E:

15E

El Producto intermedio 15D (3,4 g, 4,48 mmol) en 5 ml de DMF y 5 ml de DCM se trató con IH-im idazol (1,220 g, 17,92 mmol), seguido por adición de terc-butilclorodimetilsilano (0,743 g, 4,93 mmol). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 16 h y 1 eq. adicional de terc-butilclorodimetilsilano se añadió y se agitó la reacción durante 16 h. Luego se inactivó la reacción con 2 ml de MeOH y se agitó durante 10 min. Luego se diluyó con 200 ml de EtOAc, se lavó con NaHCO3 sat. ac., salmuera, se secó sobre Na2SO4, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo en una columna ISCO 330 g Gold con 0-30 % de EtOAc/DCM durante 60 min para proporcionar Producto intermedio 15E (1,9 g, 2,176 mmol, 48,6 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 873. 1H RMN (499 MHz, DMSO-d6) ó 8,41 - 8,28 (m, 1H), 8,14 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 8,04 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 7,62 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,16 - 7,03 (m, 5H), 7,00 - 6,93 (m, 4H), 6,77 - 6,60 (m, 4H), 6,32 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 5,81 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 4,89 - 4,80 (m, 1H), 4,78 - 4,67 (m, 2H), 4,51 (dd, J = 7,3, 4,6 Hz, 1H), 4,27 - 4,17 (m, 1H), 3,74 - 3,60 (m, 6H), 3,42 - 3,22 (m, 3H), 2,89 (dd, J = 11,0, 3,1 Hz, 1H), 0,75 (s, 9H), 0,14 - -0,21 (m, 6H).

Preparación del Producto intermedio 15G:

Se añadió 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (0,596 ml, 0,596 mmol) (1 M en ACN) a una solución del Producto intermedio 15E (0,52 g, 0,596 mmol) en DCM (10 ml) a temperatura ambiente bajo N², seguido por la adición gota a gota de 3-((bis(diisopropilamino)fosfanil)oxi)propanonitrilo (0,359 g, 1,191 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante la noche y luego se diluyó con DCM (60 ml) y se lavó con 10 % de NaHCO³ac. Se extrajo la capa acuosa con DCM adicional (30 ml). Se secaron las capas de DCM combinadas sobre Na2SO4, se filtraron y se concentraron. Se purificó el residuo en un sistema ISCO (columna de 12 g, 0-100 % de EtOAc/DCM con 0,25 % de TEA eluido durante 18 min) para proporcionar un par de diastereómeros del Producto intermedio 15G (0,52 g, 0,484 mmol, 81 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 1073.

Preparación del Producto intermedio 15I:

Se preparó el Producto intermedio 15I a partir de IH-tetrazol (53,5 mg, 0,764 mmol), el Producto intermedio 2F (195 mg, 0,382 mmol), el Producto intermedio 15G (410 mg, 0,382 mmol) y DDTT (86 mg, 0,420 mmol) de acuerdo con el procedimiento descrito para el Producto intermedio 7F . Se purificó el producto crudo en sílice (columna de 4 g, eluido con 0-10 % de MeOH/DCM con 0,25 % de TEA durante 15 min) para proporcionar el Producto intermedio 15I (500 mg, 0,274 mmol, 71,6 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 1463.

Preparación del Producto intermedio 15J:

El Producto intermedio 15I (0,5 g, 0,342 mmol) en 20 ml de DCM se trató con trietilsilano (0,546 ml, 3,42 mmol) y ácido 2,2-dicloroacético (0,282 ml, 3,42 mmol). La solución se volvió de rosa fuerte a transparente durante ~3 horas lo que indica la terminación de la reacción. Se diluyó la mezcla de reacción con DCM (30 ml), se lavó con NaHCO3 ac. saturado, se secó sobre Na2SO4, se filtró y luego se concentró in vacuo. Se purificó el residuo en sílice (columna de 12 g, eluido con 0-20 % de MeOH/DCM durante 18 min) para proporcionar el Producto intermedio 15J (233 mg, 0,254 mmol, 74,3 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 917.

Preparación del Producto intermedio 15K

15K

Se coevaporó el Producto intermedio 15J (233 mg, 0,254 mmol) con piridina (2 ml), luego se disolvió en piridina (10 ml). Se añadió fosfonato de difenilo (0,098 ml, 0,508 mmol) gota a gota a esta solución de piridina durante 20 minutos. Luego se añadió (E)-W,W-dimetil-W-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (156 mg, 0,762 mmol) y se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 16 horas. Luego se concentró la mezcla in vacuo y se suspendió el residuo en metanol para formar un precipitado amarillo que se eliminó por filtración. Se concentró el filtrado in vacuo y se coevaporó el residuo resultante, en MeOH (10 ml) con celite (5 g), se cargó en una columna y se purificó en una columna ISCO Gold 50 g C18 en fase inversa (fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente: 0- 50 % de B durante 14 min, se mantuvo al 50 % de gradiente durante 5 min.) para proporcionar una mezcla de cuatro diastereómeros de Producto intermedio 15K (110 mg, 0,111 mmol, 43,5 % de rendimiento)LCMS, [M+H]+ = 995.

Preparación del Producto intermedio 15L:

Se calentó el Producto intermedio 15K (110 mg, 0,111 mmol) en 4 ml de hidróxido de amonio al 27 % a 50 °C durante 3 horas, luego se concentró in vacuo. Se disolvió el residuo en 5 ml de piridina y DBU (218 pl, 0,884 mmol) se añadió. Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante la noche durante 18 h. Se añadió 3 g de celite a la mezcla de reacción y luego se concentró la mezcla in vacuo. Se cargó el sólido resultante en una columna y se purificó en una columna ISCO Gold 50 g C18 en fase inversa (fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo :agua con acetato de amonio 0,01 M; gradiente: 0- 40 % de B durante 20 min, se mantuvo al 40 % de gradiente durante 10 min.) para proporcionar 4 aislados con contenido de diastereómeros de Producto intermedio 15L (aislado 1: 17 mg, 0,021 mmol, 18,61 % de rendimiento); (aislado 2: 20 mg, 0,024 mmol, 21,89 % de rendimiento); (aislado 3 : 15 mg, 0,018 mmol, 16,42 % de rendimiento), (aislado 4 : 20 mg, 0,024 mmol, 21,89 % de rendimiento, LCMS, [M+H]+ = 827.

Ejemplo 15

Diastereómeros 1 (15-1)

Diastereómeros 2 (15-2)

Diastereómeros 3 (15-3)

Diastereómeros 4 (15-4)

Se disolvieron por separado los aislados 1-4 del Producto intermedio 15L en 0,4 ml de complejo de trihidrofluoruro de trietilamina y se agitó a 37 °C durante 2 h. A cada mezcla de reacción, se añadió NH4OAc ac. 2 M (2 ml) y se agitó durante 10 min. Luego, se filtró cada reacción y se purificó por HPLC preparativa.

Aislado 1: Condiciones cromatográficas: Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NHUOAc en H2O (PH 6,5); B: MeOH (% de A=100-% de B); gradiente; 5-26 % de B durante 26,5 min, 26-95 % de B durante 0,5 min, 95-5 % de B durante 1 min; detección: 260 nm; para obtener Ejemplo 15-1

Ejemplo 15-1: 1,2 mg; tR: 8,42 min; M+1 obs = 713,2; condiciones cromatográficas de HPLC analítica A: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,72 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,88 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,38 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,12 (br d, J = 4,1 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 4,47 (br d, J = 2,3 Hz, 1H), 4,28 (br dd, J = 5,6, 1,9 Hz, 1H), 4,26 - 4,13 (m, 4H), 4,08 (dt, J = 11,1, 3,5 Hz, 1H), 4,03 - 3,93 (m, 1H), 2,64 - 2,50 (m, 2H), 2,21 (br d, J = 9,3 Hz, 2H).

Aislado 2: Condiciones cromatográficas: Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc en H2O (PH 6,5); B: MeOH (% de A=100-% de B); gradiente; 5-16,8 % de B durante 17 min, 16,8-95 % de B durante 0,5 min, 95-5 % de B durante 1 min; detección: 260 nm; para obtener Ejemplo 15-2.

Ejemplo 15-2: 2,6 mg; tR: 9,57 min, M+1 obs = 712,3; condiciones cromatográficas de HPLC analítica A: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,44 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,96 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 5,20 - 5,08 (m, 1H), 4,83 - 4,73 (m, 1H), 4,67 - 4,54 (m, 2H), 4,46 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 4,24 - 4,12 (m, 2H), 4,11 - 3,95 (m, 3H), 3,27 - 3,17 (m, 1H), 2,65 (dt, J = 10,7, 8,0 Hz, 1H), 2,40 (td, J = 8,7, 4,2 Hz, 1H), 2,22 -2,13 (m, 1H).

Aislado 3: Condiciones cromatográficas: Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc en H2O (PH 6,5); B: MeOH (% de A=100-% de B); gradiente; 5-16,8 % de B durante 17 min, 16,8-95 % de B durante 0,5 min, 95-5 % de B durante 1 min; detección: 260 nm; para obtener Ejemplo 15-3.

Ejemplo 15-3: 2,6 mg; tR: 9,22 min, M+1 obs = 712,3; condiciones cromatográficas de HPLC analítica A: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,67 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,87 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,35 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 5,15 (td, J = 8,0, 4,2 Hz, 1H), 4,97 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 4,90 - 4,87 (m, 1H), 4,51 (d, J = 2,6 Hz, 1H), 4,39 - 4,22 (m, 2H), 4,20 - 4,00 (m, 3H), 3,94 (dt, J = 10,1, 8,2 Hz, 1H), 3,27 - 3,16 (m, 1H), 2,70 (td, J = 9,2, 2,7 Hz, 1H), 2,55 (dt, J = 10,6, 8,2 Hz, 1H), 2,36 - 2,20 (m, 1H).

Aislado 4: Condiciones cromatográficas: Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 X150 mm; tasa de flujo: 20,0 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc en H2O (PH 6,5); B: MeOH (% de A=100-% de B); gradiente; 5-26 % de B durante 26,5 min, 26-95 % de B durante 0,5 min, 95-5 % de B durante 1 min; detección: 260 nm; para obtener Ejemplo 15-4

Ejemplo 15-4: 1,0 mg; tR: 11,64 min, M+1 obs = 712,3; condiciones cromatográficas de HPLC analítica A: 1H RMN (499 MHz, METANOL-d4) ó 8,43 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,89 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 7,21 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 6,33 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,24 - 5,15 (m, 1H), 4,78 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,50 (br d, J = 2,1 Hz, 2H), 4,42 - 4,27 (m, 2H), 4,23 (ddd, J = 10,3, 5,8, 3,9 Hz, 1H), 4,15 - 4,08 (m, 1H), 4,07 - 4,03 (m, 1H), 3,96 - 3,86 (m, 1H), 3,24 - 3,14 (m, 1H), 2,63 (dt, J = 10,4, 8,1 Hz, 1H), 2,59 - 2,48 (m, 1H), 2,30 - 2,19 (m, 1H).

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica A:

Instrumento: Agilent 1290 HPLC/MS; columna: columna Xselect CSH C18 3,5 pm, 3,0 X 150 mm; tasa de flujo: 0,5 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de NH4OAc (pH 6,5); B: MeOH (% de A=100-% de B); gradiente: 0-40 % de B en 23 min, 40 % de B-95 % de B en 1 min.

Ejemplo 16

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-17-(6-hidroxi-9H-purin-9-il)-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,06'9]octadecano-3,12-ditiona

Preparación del Producto intermedio 16A:

16A

Se añadió DMTr-Cl (60,6 g, 179 mmol) en una porción a una suspensión de 9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-dihidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)-1H-purin-6(9H)-ona (Sigma, 40 g, 149 mmol) en piridina anhidra (1,5 L). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante el fin de semana. Luego se inactivó la reacción por la adición de metanol y la mezcla se evaporó in vacuo. Se extrajo el residuo en DCM y se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Se secó la capa orgánica (Na2SO4), se filtró y se evaporó in vacuo para proporcionar producto crudo que se purificó por cromatografía flash sobre 1,5 kg de gel de sílice: fase móvil A; DCM, fase móvil B: 20 % de MeOH en D^cM; gradiente 0-25 % de B durante 10,5 min, 25-75 % de B durante 2,5 min, 75 % de B mantenido durante 2 min para obtener el Producto intermedio 16A (25,3 g, 29,7 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 571.

Preparación del Producto intermedio 16B:

16B

Se añadió TBDMS-Cl (10,02 g, 66,5 mmol) en una porción a una solución del Producto intermedio 16A (25,3 g, 44,3 mmol) e imidazol (9,06 g, 133 mmol) en piridina anhidra (296 ml). Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se añadieron imidazol adicional (4,53 g, 66,5 mmol) y TBDMS-Cl (5,01 g, 33,3 mmol) y se agitó la reacción durante la noche. Luego se concentró la mezcla de reacción hasta sequedad y se purificó el material crudo por cromatografía flash sobre 1,5 kg de gel de sílice: fase móvil A; DCM; fase móvil B; EtOAc: Gradiente: 0-50 % de B durante 8 min, 50 % de B mantenido durante 2 min para obtener Producto intermedio 16B (25,3 g, 29,7 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 685.

Preparación del Producto intermedio 16C

Se añadió 1H-imidazol-4,5-dicarbonitrilo (1 M en MeCN, 10,22 ml, 10,22 mmol) a una solución de Producto intermedio 16B (10g, 14,60 mmol) en DCM anhidra (60 ml) seguido por adición gota a gota de 3-((bis(diisopropilamino)fosfino)oxi)propanonitrilo (5,72 g, 18,98 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. Luego se inactivó la reacción con MeOH anhidro (2 ml) y se agitó durante 10 min. La mezcla se diluyó con DCM, se lavó con NaHCO3 saturado ac., se secó sobre MgSO4, se añadió TEA (1 ml), se filtró y se concentró el filtrado. Se purificó el residuo por cromatografía en gel de sílice (40 g columna se equilibró con 0,5 % de TEA/DCM, eluido con gradiente 0-50 % de EtOAc/DCM) para obtener el Producto intermedio 16C (8 g, 9,04 mmol, 61,9 % de rendimiento).

Preparación del Producto intermedio 16D:

16D

Una solución del Producto intermedio 2F (0,150g, 0,294 mmol) y 1H-tetrazol (0,062 g, 0,881 mmol) en acetonitrilo anhidro (5 ml) se concentró en evaporador rotativo y se disolvió el residuo acetonitrilo anhidro (5 ml). Por separado, el Producto intermedio 16C (0,403 g, 0,455 mmol) en acetonitrilo anhidro (5 ml) se concentró en un evaporador rotativo, luego se disolvió en acetonitrilo anhidro (2,5 ml) y se añadió gota a gota a la mezcla agitada anterior a temperatura ambiente. Después de 3,5 h, se añadió (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,090 g, 0,440 mmol) y se agitó la mezcla durante 30 min. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo y se purificó el residuo por cromatografía flash sobre gel de sílice (columna de 12 g, se eluyó 0-100 % de gradiente de EtOAc/Hexano durante 25 min) para proporcionar una espuma blanca después de concentrar in vacuo. Se disolvió el material resultante en DCM (5 ml) y se añadieron trietilsilano (0,469 ml, 2,94 mmol) y ácido dicloroacético (0,114 g, 0,881 mmol). Se agitó la mezcla durante 3 h. Se añadió el ácido dicloroacético adicional y se agitó la mezcla durante otras 3 horas. TFA (300 uL) luego se añadió y se agitó la mezcla de reacción durante la noche. La mezcla de reacción luego se inactivó con MeOH y se concentró. Se disolvió el residuo en MeOH, se neutralizó con piridina y se concentró. Se purificó el residuo por cromatografía flash sobre gel de sílice (0-50 % de MeOH/ DCM, columna de 12 g, 25 min de gradiente) para obtener el Producto intermedio 16D (230 mg, 0,294 mmol, 100 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 782.

Preparación del Producto intermedio 16E:

A la solución del Producto intermedio 16D (0,176 g, 0,228 mmol) en piridina (11,38 ml) a temperatura ambiente se añadió fosfonato de difenilo (0,062 ml, 0,319 mmol) gota a gota durante 20 min. Se inactivó la reacción con (E)-N,N-dimetil-N'-(3-tioxo-3H-1,2,4-ditiazol-5-il)formimidamida (0,093 g, 0,455 mmol), se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas y se concentró in vacuo. Se suspendió el residuo en metanol, se filtró y se concentró el filtrado in vacuo. Se purificó el residuo resultante por ISCO en fase inversa (50 g de C18 con 0-100 % de gradiente de durante 15 minutos; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con acetato de amonio 0,01 M) para proporcionar el Producto intermedio 16E (50 mg, 0,058 mmol, 19,77 % de rendimiento) en forma de una mezcla de diastereómeros. LCMS, [M+H]+ = 860.

Ejemplo 16

Se añadió hidróxido de amonio (2 ml, 51,4 mmol) al Producto intermedio 16E (50 mg, 0,058 mmol) y se agitó la reacción a 50 °C durante 10 h. Se concentró la mezcla de reacción, se azeotropó en piridina y se añadió trihidrofluoruro de trietilamina (0,8 ml, 4,91 mmol). Se agitó la mezcla a 37 °C durante 2 h y luego se inactivó con NH4Ac (1 M, 2 ml) y se purificó por LC/MS preparativa con las siguientes condiciones: Columna: Agilent Bonus RP 21,2 x 100 mm, partículas de 5 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo; gradiente: 0 % de B mantenido durante 0-6 minuto. 0 %-100 % de B durante 20 minutos, luego un mantenimiento de 4 minutos al 100 % de B; flujo: 20 ml/min. Se combinaron las fracciones con contenido del producto deseado y se secaron por evaporación centrífuga. El producto se presentó como una mezcla de todos los diastereómeros. Masa observada: 674; tiempo de retención: 2,11 min. Método analítico de LC/MS: Columna: Agilent Poroshell 120 Bonus-RP, 2,1 mm x 100 mm, partículas de 2,7 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo; gradiente: 0 % de B mantenido durante 0-1 minutos. 0 %-100 % de B durante 4 minutos, luego a 0,5 minutos se mantuvo al 100 % de B; flujo: 1 ml/min; detección: MS y UV (220 nm).

Preparación de reactivos de fósforo (V)

Reactivo 1

Reactivo 4

Los reactivos de fósforo (V) (Reactivos 1-4) usados en la preparación de los Ejemplos 17 y 18 se prepararon de acuerdo con los procedimientos proporcionados en el documento USSN 62/657551 presentado el 13 de abril de 2018.

Ejemplos 17-1 y 17-2:

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18S)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,06'9]octadecano-3,12-ditiona

Diastereómero 1 (17-1)

Diastereómero 2 (17-2)

Preparación del Producto intermedio 17A:

Se añadió N-(9-((2R,3S,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-fluoro-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-il)benzamida (documento WO2004097049, 1 g, 1,480 mmol), imidazol (0,302 g, 4,44 mmol) y DMF anhidra (3 ml) a un recipiente de 50 ml. Se añadió gota a gota TBDPS-Cl (0,570 ml, 2,22 mmol) a la solución marrón pálida resultante durante un período de 5 minutos. Se agitó la mezcla de reacción resultante bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 40 h. Se inactivó la mezcla de reacción con metanol, se agitó durante 10 minutos, se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (2 x 100 ml) seguido por salmuera (1 x 100 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se disolvió la goma amarilla pálida resultante en DCM mínima (con 0,5 % de TEA) y se purificó por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de 0-100 % de EtOAc en hexanos (con 0,5 % de trietilamina). Se combinaron las fracciones con contenido de producto y se concentraron para obtener el Producto intermedio 17A (1,13 g, 1,236 mmol, 84 % de rendimiento). LCMS: m/z 914,0 (M+H), t^R: 1,44 min, Método analítico de LCMS A. ¹H RMN (499 MHz, DMSO-d⁶) ó 11,21 (br s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,29 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 7,3 Hz, 2H), 7,69 - 7,58 (m, 1H), 7,58 - 7,46 (m, 8H), 7,37 (td, J = 7,5, 4,4 Hz, 4H), 7,25 - 7,14 (m, 5H), 7,12 - 7,04 (m, 4H), 6,78 - 6,72 (m, 4H), 6,66 (dd, J = 12,0, 5,2 Hz, 1H), 5,69 - 5,45 (m, 1H), 4,86 - 4,69 (m, 1H), 4,37 - 4,22 (m, 1H), 3,70 (d, J = 3,6 Hz, 6H), 3,23 - 3,03 (m, 2H), 0,97 (s, 9H).

Preparación del Producto intermedio 17B:

Se añadió DCM de grado reactivo (20 ml), trietilsilano (1,566 ml, 9,80 mmol) y agua (2 gotas) a un recipiente que contenía el Producto intermedio 17A (1,12 g, 1,225 mmol). Se añadió gota a gota una solución de ácido dicloroacético (0,203 ml, 2,450 mmol) en DCM (1 ml) a la solución resultante. Se agitó la solución de color marrón resultante a temperatura ambiente durante 5 h. Se añadió una solución acuosa saturada de NaHCO³a la mezcla de reacción. Se extrajo la mezcla resultante con DCM (3 x 25 ml). Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. Se disolvió el residuo gomoso en DCM mínima y se purificó por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de a 80 g gel de sílice columna y 0-10 % de MeOH en DCM durante 25 min. Se combinaron las fracciones con contenido de producto y se concentraron para obtener el Producto intermedio 17B (711 mg, 1,162 mmol, 95 % de rendimiento). ^lC^mS: m/z 612,5 (M+H), t ^R: 1,04 min Método analítico de LCMS A.

¹H RMN (499 MHz, DMSO-d⁶) sin desacoplamiento de F: ó 11,21 (br s, 1H), 8,72 (s, 1H), 8,45 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 8,11 - 7,99 (m, 2H), 7,71 - 7,61 (m, 5H), 7,59 - 7,42 (m, 8H), 6,63 (dd, J = 14,7, 4,4 Hz, 1H), 5,53 - 5,34 (m, 1H), 5,00 (t, J = 5,7 Hz, 1H), 4,71 (dt, J = 17,8, 4,2 Hz, 1H), 4,09 (q, J = 4,6 Hz, 1H), 3,54 - 3,36 (m, 2H), 1,08 (s, 9H).

Preparación del Producto intermedio 17C:

17C

Se cargó un recipiente de 50 ml con el Producto intermedio 17B (100 mg, 0,163 mmol), Reactivo 1 (146 mg, 0,327 mmol) y acetonitrilo anhidro (1,6 ml). Se añadió gota a gota DBU (0,074 ml, 0,490 mmol) a la solución transparente incolora resultante. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 15 min. Luego se diluyó la mezcla de reacción con éter (20 ml) y se lavó con NaHCO³acuoso (1 g de NaHCO ³en 20 ml agua). Se separó la capa orgánica amarilla pálida. Se extrajo la capa acuosa con éter (1 x 10 ml). Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron. Se disolvió el residuo en DCM mínima y se purificó por cromatografía en gel de sílice (columna de 24 g de sílice) mediante el uso de hexanos durante 2 min, 0-60 % de EtOAc en hexanos durante 7 min, se mantuvo al 60 % de EtOAc durante 2 min, 60-100 % de EtOAc durante 6 minutos. Se combinaron las fracciones con contenido de producto y se concentraron para obtener el Producto intermedio 17C (132 mg, 0,154 mmol, 94 % de rendimiento) en forma de una goma incolora que se coevaporó con MeCN (3x) para obtener un sólido blanco. Este polvo blanco se usó en la siguiente etapa. LCMS: m/z 858,6 (M+H), t^R: 1,25 min, Método analítico de LCMS A.

Preparación del Producto intermedio 17G:

17G

Se añadió el Producto intermedio 2E (1,94 g, 3,51 mmol) y dioxano (10 ml) a una bomba de acero. Se añadió hidróxido de amonio acuoso al 30 % (20 ml, 154 mmol) a la solución incolora resultante. Se calentó la mezcla de reacción turbia resultante a 70 °C durante 2 d. Luego se concentró la mezcla de reacción hasta sequedad. Se adsorbió el producto crudo en Celite y se purificó por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de una columna de 80 g y se eluyó con 0-20 % de MeOH en D^cM para obtener el Producto intermedio 17G (1,59 g, 3,23 mmol, 92 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS: m/z 492,5 (M+H), tR: 0,82 min Método analítico de LCMS A. 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 8,32 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,42 - 7,33 (m, 6H), 7,31 - 7,18 (m, 9H), 5,61 (br s, 2H), 4,61 (q, J = 8,6 Hz, 1H), 3,81 - 3,66 (m, 2H), 3,39 (dd, J = 9,9, 5,5 Hz, 1H), 3,30 (dd, J = 10,0, 6,5 Hz, 1H), 3,23 (br s, 1H), 3,08 - 2,98 (m, 1H), 2,63 - 2,48 (m, 2H), 2,36 - 2,25 (m, 1H).

Preparación del Producto intermedio 17H:

Se añadió imidazol (1,058 g, 15,54 mmol) y DMF anhidra (6 ml) a un recipiente que contenía el Producto intermedio 17G (1,91 g, 3,89 mmol). Se añadió gota a gota TBDPSCl (1,497 ml, 5,83 mmol) a la solución resultante. Se agitó la mezcla de reacción resultante bajo una atmósfera de nitrógeno durante 40 h. Se añadió imidazol adicional (350 mg) y TBDPSCl (0,5 ml) a la mezcla de reacción y se agitó a temperatura ambiente durante 1 h adicional. Luego se inactivó la reacción con metanol y se agitó durante 10 min. Se diluyó la mezcla resultante con EtOAc y se lavó con agua (2 x 100 ml) y salmuera (1 x 100 ml). Se secó la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se purificó la goma resultante por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de 0-20 % de MeOH en DCM. Se combinaron las fracciones con contenido de producto y se concentraron para obtener el Producto intermedio 17H (2,51 g, 3,44 mmol, 88 % de rendimiento). LCMS: m/z 730,6 (M+H), tR: 1,20 min, Método analítico de LCMS A.

Preparación del Producto intermedio 17I:

17I

Se enfrió una solución del Producto intermedio 17H (2,50 g, 3,42 mmol) en piridina anhidra (5 ml) en un baño de agua helada y luego se añadió gota a gota cloruro de benzoílo (0,48 ml, 4,11 mmol). Después de 10 minutos a 0 °C, se retiró el baño de agua helada y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió agua (~20 ml) y el producto formó una goma sólida. Se decantó el agua y se disolvió la goma en THF (~10 ml), se añadió NH⁴OH acuoso al 28-30 % (~6 ml) y se agitó la mezcla vigorosamente a temperatura ambiente durante 2 h. Luego se concentró la mezcla de reacción in vacuo y se diluyó el residuo con EtOAc y se lavó con agua (1x) y salmuera (1x). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró. Se disolvió el residuo en d Cm mínima y se purificó por gel de sílice cromatografía flash en una columna de 220 g, mediante el uso de 0-100 % de EtOAc en hexanos. Se combinaron las fracciones con contenido de producto y se concentraron para obtener el Producto intermedio 17I (2,56 g, 3,07 mmol, 90 % de rendimiento) en forma de una espuma blanca. ¹H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) 6 8,94 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,07 - 8,00 (m, 2H), 7,70 - 7,60 (m, 5H), 7,58 - 7,51 (m, 2H), 7,47 - 7,30 (m, 12H), 7,25 - 7,17 (m, 9H), 4,86 (q, J = 8,8 Hz, 1H), 3,75 (d, J = 4,5 Hz, 2H), 3,34 (dd, J = 9,8, 4,7 Hz, 1H), 3,27 - 3,18 (m, 1H), 3,17 - 3,06 (m, 1H), 2,64 - 2,54 (m, 1H), 2,53 - 2,41 (m, 1H), 2,39 - 2,25 (m, 1H), 1,06 (s, 9H).

Preparación del Producto intermedio 17J:

17J

Se añadió una solución de ácido dicloroacético (0,208 ml, 2,52 mmol) en DCM (1 ml) a una solución del Producto intermedio 17I (300 mg, 0,360 mmol) en DCM (5 ml), trietilsilano (0,574 ml, 3,60 mmol) y agua (2 gotas) y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 5 h. Se añadió NaHCO³acuoso saturado a la mezcla de reacción y se extrajo la capa acuosa con DCM (3x 15 ml). Se secaron las capas orgánicas combinadas sobre sulfato de sodio y se concentraron in vacuo. Se disolvió el residuo en DCM mínima y se purificó por cromatografía flash mediante el uso de una columna de 40 g de gel de sílice eluido con 0-10 % de MeOH/ DCM durante 10 min. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se concentraron para obtener el Producto intermedio 17J (188 mg, 0,318 mmol, 88 % de rendimiento) en forma de una espuma blanca. ¹H RMN (499 MHz, DMSO-d⁶) 611,12 (br s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 8,10 - 8,00 (m, 2H), 7,70 - 7,61 (m, 5H), 7,59 - 7,52 (m, 2H), 7,51 - 7,41 (m, 6H), 4,82 (q, J = 8,7 Hz, 1H), 4,70 (t, J = 5,1 Hz, 1H), 3,88 - 3,75 (m, 2H), 3,65 - 3,48 (m, 2H), 3,08 - 2,98 (m, 1H), 2,52 - 2,24 (m, 3H, superpuesto con pico de DMSO), 1,02 (s, 9H). ^lC^mS: m/z 592,5 (M+H), t ^R: 1,04 min, Método analítico de Lc Ms A.

Preparación del Producto intermedio 17D:

17D

Se añadió el Producto intermedio 17J (45,5 mg, 0,077 mmol) y acetonitrilo anhidro (1 ml) a un recipiente de 50 ml. Se coevaporó la suspensión resultante con MeCN (3 x 1 ml). Se añadió acetonitrilo anhidro (1 ml) al polvo blanco resultante. Se añadió DBU (0,023 ml, 0,154 mmol) a la suspensión blanca resultante para obtener una solución transparente. Se añadió a esta solución una suspensión fina sonicada del Producto intermedio 17C (132 mg, 0,154 mmol, coevaporado con MeCN tres veces) en acetonitrilo anhidro (3 ml) gota a gota durante 5 minutos. Se agitó la mezcla de reacción turbia resultante a temperatura ambiente durante 1 h. Luego se concentró la mezcla de reacción. Al residuo se añadió MeCN (1 ml). Se agitó la solución resultante a temperatura ambiente durante 2 h. Se concentró la mezcla de reacción en <100 uL, se acidificó con ácido acético (0,026 ml, 0,461 mmol) y se purificó por cromatografía en gel de sílice mediante el uso de 0-30 % de MeOH n DCM para obtener el Producto intermedio 17D (68 mg, 0,042 mmol, 55,2 % de rendimiento)

Preparación del Producto intermedio 17E:

17E

Se añadió trihidrofluoruro de trietilamina (1 g, 6,20 mmol) a un recipiente que contenía el Producto intermedio 17D (68 mg, 0,042 mmol). Se agitó la suspensión resultante bajo atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente durante 5 h. Luego se diluyó la mezcla de reacción con MeCN (~3 ml) y se inactivó el exceso de Hf con trietilamina (1,8 ml, 12,73 mmol). Luego se inactivó el exceso de fluoruro con isopropoxitrimetilsilano (2,8 ml, 21,22 mmol). Se agitó la mezcla de reacción resultante durante 10 min a temperatura ambiente y luego se concentró hasta sequedad. Se disolvió el residuo en MeCN, se adsorbió en Celite y se purificó por cromatografía en gel de sílice en fase inversa. Condiciones: Columna: 15,5 g HP C18; C18 RediSep High Performance GOLD; CV 13,5 ml, tasa de flujo recomendada 30 ml/min. Teledyne ISCO cat # 69-2203-334; Lot#281127806W; Solvente A: 95 % de agua, 5 % de MeCN, NH⁴Oac; Solvente B: 5 % de agua, 95 % de MeCN, NH⁴Oac; Gradiente (en A): 0 % de B durante 5 min, 0-50 % de B durante 20 min. Se eluyó el producto deseado al ~20 % de B. Se combinaron las fracciones con contenido de producto y se concentraron en el Producto intermedio 17E obtenido (22 mg, 0,027 mmol, 64,4 % de rendimiento). LCMS: m/z 805,5 (M+H), t ^R: 0,63 min, Método analítico de LCMS A.

Preparación del Producto intermedio 17F:

17F

Se añadió DMF anhidra (3 ml) y DBU (0,062 ml, 0,410 mmol) a un recipiente que contenía el Producto intermedio 17E (22 mg, 0,027 mmol). Se añadió en porciones el Reactivo 4 (16,99 mg, 0,041 mmol) a la solución resultante durante un período de 10 minutos mientras se agitaba vigorosamente. Después de 20 min a temperatura ambiente, se añadió el Reactivo 4 adicional (16,99 mg, 0,041 mmol) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 30 min más. Se inactivó la mezcla de reacción con metanol y se concentró. El aceite resultante con el Producto intermedio 17F se usó como tal en la siguiente etapa. LCMS: m/z 883,0 (M-H), tR: 0,46 min, Método analítico de LCMS A.

Ejemplos 17-1 y 17-2:

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18S)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-ditiona

Diastereómero 1 (17-1)

Diastereómero 2 (17-2)

Se añadió una solución metanólica de amoníaco 7,0 N (4 ml, 28,0 mmol) al Producto intermedio 17F crudo. Se transfirió la solución resultante a un vial a presión de 40 ml y se calentó a 50 °C durante 2 h. Se enfrió la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente y se concentró. Se añadió agua al residuo seguido por ácido acético hasta lograr un pH <5. Luego se diluyó la muestra a ~2 ml y se filtró a través de un filtro de jeringa. Se purificó el filtrado por cromatografía preparativa de HPLC. Condiciones; Instrumento: Waters Autopure; columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5 pm, 19 x 150 mm; tasa de flujo: 20 ml/min; fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc (pH 6,5); B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente: 5 % de B durante 8 min; 5-26,5 % de B durante 14 min, 26,5-95 % de B durante 0,5 min, 95-5 % de B durante 1,5 min para obtener los Ejemplos 17-1 y 17-2 después de liofilización.

Ejemplo 17-1: 1,5 mg; masa observada: 675,2; tR: 14,32 min.; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 8 Ejemplo 17-2: 4,5 mg; masa observada: 675,2; tR: 14,62 min.; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 8

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 8:

Instrumento: Agilent 1290 HPLC/MS; columna: columna Xselect CSH C18, 3,5 pm, 3,0 X150 mm; tasa de flujo: 0,5 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de NH4OAc (pH 6,5); B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente: 5 % de B durante 10 min; 5-50 % de B durante 15 min, 50-95 % de B durante 1 min.

Ejemplos 18-1, 18-2:

2-amino-9-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-8-il]- 6,9-dihidro-1H-purin-6-ona

Diastereómero 1 (18-1)

Diastereómero 2 (18-2)

Preparación del Producto intermedio 18A:

Se secó azeotrópicamente una mezcla de N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-fluoro-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-il)benzamida (AstraTech, 503 mg, 0,744 mmol) y Reactivo 4 (499 mg, 1,117 mmol) con ACN (3 x 3 ml) con sonicación entre cada azeótropo en sólidos libres de las paredes del recipiente. Se suspendió el sólido blanco resultante en acetonitrilo (5 ml). Se añadió gota a gota DBU (0,223 ml, 1,489 mmol). Después de 20 minutos se inactivó la reacción con ácido acético (0,224 ml, 3,72 mmol), se agitó durante algunos minutos, se diluyó con acetato de etilo, se transfirió a un embudo de separación, se lavó con NaHCO³sat., se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. Se disolvió el residuo en un mínimo de diclorometano y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 40 g, eluido con 0-100 % de acetato de etilo/hexanos, 40 ml/min). Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se concentraron para proporcionar el Producto intermedio 18A (654 mg, 0,709 mmol, 95 % de rendimiento) en forma de una espuma blanca. LCMS, [M+H]⁺= 922. 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) d 9,13 - 8,95 (m, 1H), 8,77 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 8,12 - 7,97 (m, 2H), 7,69 - 7,61 (m, 1H), 7,59 - 7,53 (m, 2H), 7,46 - 7,39 (m, 2H), 7,36 - 7,19 (m, 7H), 6,82 (d, J = 8,9 Hz, 4H), 6,44 - 6,32 (m, 1H), 6,02 5,84 (m, 1H), 5,83 - 5,74 (m, 1H), 5,09 - 4,97 (m, 1H), 4,92 - 4,82 (m, 1H), 4,60 -4,42 (m, 2H), 3,80 (s, 6H), 3,67 - 3,55 (m, 1H), 3,52 - 3,38 (m, 1H), 2,65 - 2,53 (m, 1H), 2,29 - 2,21 (m, 1H), 2,21 -2,10 (m, 1H), 2,03 - 1,84 (m, 3H), 1,81 - 1,77 (m, 4H), 1,76 - 1,73 (m, 3H).

Preparación del Producto intermedio 18B:

Se añadió di-ferc-butil dicarbonato (9,77 g, 44,8 mmol) a una suspensión de 6-(benciloxi)-9H-purin-2-amina (Accela, 3 g, 12,44 mmol) y N,N-dimetilpiridin-4-amina (0,152 g, 1,244 mmol) en THF (100 ml). Se agitó la solución verde claro transparente resultante durante la noche a temperatura ambiente. Luego se eliminó el THF in vacuo. Se disolvió el residuo resultante en diclorometano, se lavó con HCl 1 M y salmuera, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró. Se disolvió el residuo resultante en un mínimo de diclorometano y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 220 g, eluido con 0-100 % de acetato de etilo/hexanos, 150 ml/min). Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se concentraron para proporcionar el Producto intermedio 18B (5,3 g, 9,79 mmol, 79 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS, [M+H]⁺= 542. ¹H RMN (499 MHz, DMSO-d⁶) ó 8,74 (s, 1H), 7,59 - 7,48 (m, 2H), 7,46 - 7,33 (m, 3H), 5,70 - 5,52 (m, 2H), 1,62 (s, 9H), 1,42 (s, 18H)

Preparación del Producto intermedio 18C.

Se añadió bicarbonato de sodio saturado (50 ml, 9,73 mmol) a una solución de Producto intermedio 18B (5,27 g, 9,73 mmol) en MeOH (100 ml). Se calentó la mezcla de reacción hasta 50 °C durante 2 horas, luego se enfrió hasta temperatura ambiente y luego se eliminó la mayor parte del metanol en un rotavapor. Se añadió agua (50 ml) y se extrajo la mezcla resultante con diclorometano (3 x 50 ml). Se secaron los extractos combinados de diclorometano sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró para proporcionar una espuma blanca. Se disolvió la espuma en un mínimo de diclorometano y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 220 g, eluido con 0-5 % de metanol/diclorometano, 150 ml/min). Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se concentraron para obtener el Producto intermedio 18C (3,74 g, 8,47 mmol, 87 % de rendimiento). LCMS, [M+H]⁺= 442. ¹H RMN (499 MHz, DMSO-d⁶) ó 13,73 - 13,49 (m, 1H), 8,64 - 8,27 (m, 1H), 7,57 -7,48 (m, 2H), 7,45 - 7,27 (m, 3H), 5,70 - 5,53 (m, 2H), 1,39 (s, 18H)

Preparación del Producto intermedio 18D.

Se añadió gota a gota diisopropil (E)-diacen-1,2-dicarboxilato (1,242 ml, 5,99 mmol) a una solución a 0 °C de trifenilfosfina (1,572 g, 5,99 mmol) en THF (20 ml) y tolueno (10 ml). Después de 20 min a 0 °C, se añadió una solución de Producto intermedio 2D (1,248 g, 3,00 mmol), Producto intermedio 18C (1,984 g, 4,49 mmol) en THF (20 ml) y tolueno (10 ml) a la mezcla de DEAD/Ph3P por medio de una cánula. Se enjuagó el recipiente con THF (10 ml) y tolueno (5 ml) y se transfirió por medio de una cánula a la mezcla de reacción. Después de 1 h se retiró el baño de enfriamiento y se agitó la reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la reacción luego en un rotavapor. Se disolvió el residuo en un mínimo de diclorometano y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 220 g, y se eluyó con 0-25 % de acetato de etilo/diclorometano, seguido por 25-100 % de acetato de etilo/diclorometano 150 ml/min). Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se concentraron para proporcionar el Producto intermedio 18D (2,32 g, 2,76 mmol, 92 % de rendimiento) en forma de una espuma blanca. LCMS, [M+H]+ = 840; 1H RMN (499 MHz, CLOROFORMO-d) ó 7,99 - 7,79 (m, 1H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 7,28 (s, 18H), 5,75 - 5,50 (m, 2H), 5,15 - 4,95 (m, 1H), 4,26 - 4,16 (m, 2H), 3,36 - 3,20 (m, 2H), 3,13 - 2,97 (m, 1H), 2,72 - 2,59 (m, 1H), 2,54 - 2,35 (m, 2H), 2,05 - 2,00 (m, 3H), 1,45 - 1,38 (m, 18H).

Preparación del Producto intermedio 18E.

18E

Se añadió hidróxido de potasio (1,46 g, 26,0 mmol) a una solución a temperatura ambiente del Producto intermedio 18D (2,18 g, 2,60 mmol) en MeOH (50 ml) y agua (20 ml). La solución resultante se calentó a reflujo (80 °C) durante 10 días. En el día 1 después de 5 h, se añadió agua (10 ml). Se añadió KOH adicional (0,8 g) disuelto en agua (6 ml) en ambos días 2 y 3. En el día 10, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. Se eliminó la mayor parte del metanol en un rotavapor. Se diluyó el residuo con agua y se ajustó a pH 4 con HCl 1 M. El precipitado blanco resultante se recolectó por filtración al vacío y se lavó con agua para proporcionar un sólido blanco que se secó a alto vacío durante la noche a 50 °C. Luego se secó el sólido en un liofilizador durante 2 días para proporcionar el Producto intermedio 18E (1,84 g, 3,62 mmol, 140 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. El Producto intermedio 18E se usó sin posterior purificación. LCMS, [M+H]+ = 508.

Preparación del Producto intermedio 18F:

18F

Se añadió gota a gota clorotrimetilsilano (1,570 ml, 12,37 mmol) a una solución a 0 °C de Producto intermedio 18E en una mezcla de diclorometano (8 ml) y piridina (2 ml). Después de 5 min., se retiró el baño de enfriamiento y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 min. La mezcla se enfrió hasta 0 °C y cloruro de benzoílo (0,197 ml, 1,701 mmol) se añadió. Después de 1,5 h, se concentró la mezcla de reacción hasta sequedad y se disolvió el residuo en THF (10 ml), luego se trató con LiOH 1 M (2,1 ml). La mezcla de reacción se colocó en un refrigerador durante dos días. LiOH adicional (1 M) y THF se añadieron hasta que la reacción estuviera completa. Se inactivó la reacción con HOAc y luego se concentró en un rotavapor para remover la mayor parte del THF. Se diluyó con agua el residuo resultante y se extrajo con diclorometano. Se combinaron los extractos, se lavaron con salmuera, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron para proporcionar un aceite. Se disolvió el aceite en un mínimo de diclorometano y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 80 g, eluido con 0-15 % de metanol/diclorometano, 60 ml/min). Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado para proporcionar el Producto intermedio 18F (355 mg, 0,580 mmol, 37,5 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS, [M+H]⁺= 612. ¹H RMN (499 MHz, DMSO-d⁶) ó 12,57 - 12,12 (m, 1H), 11,86 (s, 1H), 8,41 -8,27 (m, 1H), 8,06 - 7,95 (m, 2H), 7,75 - 7,64 (m, 1H), 7,62 - 7,50 (m, 2H), 7,31 - 7,23 (m, 6H), 7,21 (s, 9H), 4,73 - 4,63 (m, 1H), 4,62 - 4,55 (m, 1H), 3,57 - 3,45 (m, 2H), 3,19 - 3,15 (m, 1H), 3,11 - 3,04 (m, 1H), 3,02 - 2,93 (m, 1H), 2,49 -2,42 (m, 1H), 2,23 - 2,11 (m, 1H), 2,08 - 1,97 (m, 1H).

Preparación del Producto intermedio 18G:

18G

Se azeotropó una mezcla de Producto intermedio 18F (100 mg, 0,164 mmol) y el Producto intermedio 18A (126 mg, 0,137 mmol) con acetonitrilo (3 x 3 ml), luego se secó a alto vacío durante 20 min. Se colocó el residuo bajo una atmósfera de nitrógeno y se disolvió en DMF (2 ml). Se añadió gota a gota DBU (0,061 ml, 0,410 mmol) y se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 1 h. Se inactivó la reacción por la adición de MeOH seguido por HOAc. Se concentró la mezcla resultante hasta sequedad. Se disolvió el residuo en un mínimo de diclorometano y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 24 g, eluido con 0-15 % de metanol/diclorometano, seguido por 15-100 % de metanol/diclorometano, 35 ml/min). Se combinaron las fracciones con contenido de material deseado y se concentraron para proporcionar el Producto intermedio 18G (64 mg, 0,047 mmol, 34 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 1365.

Preparación del Producto intermedio 18H:

18H

Se añadió ácido 2,2-dicloroacético (0,015 ml, 0,187 mmol) a una solución a temperatura ambiente de metanol (0,019 ml, 0,469 mmol) y el Producto intermedio 18G (64 mg, 0,047 mmol) en diclorometano (1,0 ml). Se inactivó la reacción con trietilamina (0,026 ml, 0,187 mmol) y luego se concentró hasta sequedad. Se disolvió el aceite transparente resultante en un mínimo de diclorometano y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 24 g, eluido con 0-100 % de metanol/diclorometano, 35 ml/min). Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se concentraron para proporcionar el Producto intermedio 18H (50 mg, 0,047 mmol, 100 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 1063

Preparación del Producto intermedio 18I:

18I

Se azeotropó una mezcla del Producto intermedio 18H (10,2 mg, 9,59 pmol) y el Reactivo 3 (12,85 mg, 0,029 mmol) con acetonitrilo (3 x 3 ml), mediante sonicación después de cada adición de acetonitrilo. Se colocó el residuo resultante bajo una atmósfera de nitrógeno y se suspendió en DCM (1 ml), se sonicó y se enfrió hasta 0 °C para proporcionar una suspensión turbia. Después de 5 min a 0 °C, se añadió DBU (8,61 pl, 0,058 mmol). La reacción se volvió transparente. Después de 20 minutos, se inactivó la reacción con isopropoxitrimetilsilano (8,52 pl, 0,048 mmol) seguido por ácido acético (5,49 pl, 0,096 mmol). Se purificó la mezcla de reacción directamente en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 12 g, eluido con 0-100 % de metanol/diclorometano, 35 ml/min). Las fracciones que contenían los productos deseados se combinaron para proporcionar el Producto intermedio 18I (10,7 mg, 8,17 pmol, 85 % de rendimiento). LCMS, [M+H]+ = 1309.

Preparación del Producto intermedio 18J:

Se añadió ácido 2,2-Dicloroacético (6,05 pl, 0,073 mmol) a una solución a temperatura ambiente de triisopropilsilano (0,018 ml, 0,088 mmol) y el Producto intermedio 18I (9,60 mg, 7,33 pmol) en diclorometano (2,0 ml). Después de 35 min, se añadió la mezcla de reacción a una solución a temperatura ambiente de DBU (0,033 ml, 0,220 mmol) en diclorometano (2 ml). Después de 15 min, se concentró la reacción hasta sequedad. Se lavó el residuo con éter (3 x 3 ml) y se decantaron cuidadosamente los lavados de éter y se descartaron. Se disolvió el residuo resultante en una mezcla de MeOH/DCM y se concentró en suficiente celite para proporcionar un polvo de flujo libre. Se cargó el polvo en un cartucho de carga sólida ISCO y se purificó en un sistema de cromatografía ISCO companion (columna de 15,5 g ISCO GOLD C-18 que se había equilibrado con fase móvil A: 5:95 acetonitrilo/agua con acetato de amonio 0,01 M. fase móvil B: 95:5 acetonitrilo/agua con acetato de amonio 0,01 M. Se eluyó con 0-100 % de B, 30 ml/min). Se liofilizaron las fracciones que contenían el material deseado para proporcionar el Producto intermedio 18J (7,7 mg, 8,57 pmol, 117 % de rendimiento), que se usó sin posterior purificación. LCMS, [M+H]+ = 899 (m+1).

Ejemplo 18-1

Se agitó una solución de Producto intermedio 18J (6,6 mg, 7,34 pmol) y amoníaco (7N en MeOH, 2 ml, 14,69 mmol) a 40 °C durante 4,5 h, luego se enfrió hasta temperatura ambiente. Se concentró la reacción hasta sequedad bajo una corriente de nitrógeno para proporcionar 10 mg de un aceite transparente. Se purificó el aceite por HPLC preparativa en fase inversa. Instrumento: Agilent Bionert 1260, Columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5pm, 10 X 250 mm. Tasa de flujo: 5,0 ml/min. Fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc (pH 6,5); B: ACN (% de A=100-% de B). 0-20 % de B de 0-10 min. 20-100 % de B 10-111 min. Detección: 260 nm. Volumen de inyección: 500 pL. Tiempo de retención de 5,713 min diana. Preparación de la muestra: 10 mg de la muestra se disolvieron en ~2,5 ml de MeOH/DMSO/DMF. Se reunieron las fracciones con contenido de producto y se liofilizaron para proporcionar el Ejemplo 18-1 (1,3 mg, 1,610 pmol, 21,93 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. Masa observada: 691,1; tR: 3,65 min.; Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 9

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 9:

Instrumento: Agilent 1290 HPLC/MS; columna: columna Xselect CSH C18, 3,5 pm, 2,1 X 150 mm; tasa de flujo: 0,35 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de NH4OAc (pH 6,5); B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente: 5-95 % de B durante 15 min.

Preparación del Producto intermedio 18K:

18K

Se azeotropó una mezcla del Producto intermedio 18H (15,2 mg, 0,014 mmol) y el Reactivo 4 (19,15 mg, 0,043 mmol) con acetonitrilo (3x3 ml), mediante sonicación después de cada adición de acetonitrilo. Se purgó el residuo resultante con nitrógeno, se suspendió en DCM (1 ml), se sonicó y se enfrió hasta 0 °C para proporcionar una suspensión turbia. Después de 10 min, se añadió DBU (0,013 ml, 0,086 mmol). La reacción se volvió transparente. Después de 20 min., se inactivó la reacción con isopropoxitrimetilsilano (0,013 ml, 0,071 mmol), seguido por ácido acético (8,19 pl, 0,143 mmol). Se purificó la mezcla de reacción directamente en un sistema de cromatografía ISCO companion (cartucho de sílice de 12 g, eluido con 0-100 % de metanol/diclorometano, 35 ml/min). Se combinaron las fracciones que contenían el material deseado para proporcionar el Producto intermedio 18K (25 mg, 0,019 mmol, 134 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco que se usó sin posterior purificación. LCMS, [M+H]+ = 1309 (m+1).

Preparación del Producto intermedio 18L:

Se añadió ácido 2,2-Dicloroacético (0,012 ml, 0,143 mmol) a una solución a temperatura ambiente de triisopropilsilano (0,035 ml, 0,172 mmol) y el Producto intermedio 18K (18,72 mg, 0,014 mmol) en diclorometano (2,0 ml). Después de 25 min, se añadió más ácido 2,2-dicloroacético (0,012 ml, 0,143 mmol). Después de 10 min adicionales, se añadió la mezcla de reacción a una solución a temperatura ambiente de DBU (0,064 ml, 0,429 mmol) en diclorometano (2 ml). Después de 15 min, se concentró la reacción hasta sequedad. Se trató el residuo con éter (3 x 3 ml), se decantaron cuidadosamente los lavados de éter y se descartaron. Se disolvió el residuo resultante MeOH/DCM y se concentró en suficiente celite para proporcionar un polvo de flujo libre. Se cargó el polvo en un cartucho de carga sólido ISCO y se purificó en un sistema de cromatografía de fase inversa ISCO companion (columna de 15,5 g ISCO GOLD C-18 que se había equilibrado con la fase móvil A: 5:95 acetonitrilo/agua con acetato de amonio 0,01 M. Fase móvil B: 95:5 acetonitrilo/agua con acetato de amonio 0,01 M. Se eluyó con 0-100 % de B, 30 ml/min). Se liofilizó la fracción que contenía el producto deseado para proporcionar el Producto intermedio 18L (7 mg, 7,79 pmol, 54,5 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. LCMS, [M+H]+ = 899.

Ejemplo 18-2

2-amino-9-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,06'9]octadecan-8-il]- 6,9-dihidro-1H-purin-6-ona

Se calentó una solución de Producto intermedio 18L (7 mg, 7,79 pmol) y amoníaco (7 N en MeOH 2 ml, 15,58 mmol) hasta 40 °C. Después de 3 h, la reacción se enfrió hasta temperatura ambiente. Se concentró la reacción hasta sequedad bajo una corriente de nitrógeno, luego se secó al vacío para proporcionar 8,7 mg de un residuo. Se purificó el residuo por fase inversa HPLC: Instrumento: Waters Autopure, Columna: Columna Luna Omega Polar C18 5pm, 21,2 X 250 mm. Tasa de flujo: 20,0 ml/min fase móvil: A: 100 mM de NH4OAc (pH 4,7); B: ACN (% de A=100-% de B). Gradiente 0-18 % de B durante 13 min, 18-95 % de B de 13 -13,5 min. Tiempo de retención del compuesto deseado 11,56 min. Detección: 260 nm, volumen de inyección: 100 pL. Preparación de la muestra: 8,7 mg de la muestra disueltos en ~1,5 ml de DMSO/DMF/MeOH. Se liofilizaron las fracciones que contenían producto para proporcionar el Ejemplo 18-2 (2,5 mg, 3,44 pmol, 44 % de rendimiento) en forma de un sólido blanco. Masa observada: 691,1; tR: 3,08 min.; condiciones cromatográficas de HPLC analítica 10

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 10:

Instrumento: Agilent 1290 HPLC/MS; columna: Columna Luna Omega Polar C18, 3 pm, 2,1 X 150 mm; tasa de flujo: 0,35 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de NH4OAc (pH 4,7); B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente: 5-100 % de B durante 15 min.

Ejemplos 18-3, 18-4

Preparación del Producto intermedio 18M:

18M

Se preparó el Producto intermedio 18M mediante un método similar a 18A a partir de N-(9-((2R,3R,4R,5R)-5-((bis(4-metoxifenil)(fenil)metoxi)metil)-3-fluoro-4-hidroxitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-6-il)benzamida (AstraTech) y Reactivo 3 LCMS, [M+H]+ = 922. ^{í r}: 1,29 min. ^{M étod o a n a lít ico C.}

Preparación del Producto intermedio 18N

Se purgó al vacío una suspensión de 18D (75 mg, 0,089 mmol) y 10 % Pd/C (12 mg, 0,089 mmol) en MeOH (2 ml) con hidrógeno y luego se agitó bajo un balón de hidrógeno durante la noche. Se purgó la reacción con nitrógeno y luego se diluyó con DCM (2 ml), se filtró a través de una frita de 0,35 pm y se concentró in vacuo para proporcionar 18N (67 mg, 100 %). LCMS: [M+H]+ = 750, ^{í r}: 1,15 min. Método analítico A.

Preparación del P roducto in te rm ed io 18O y 18P.

Se trató el P roducto in term edio 18N (67 mg, 0,089 mmol) con amoníaco (7 M en MeOH) (2,7 ml, 18,76 mmol). Se agitó la solución transparente resultante a temperatura ambiente durante dos días. Se concentró la mezcla resultante y se purificó por cromatografía en gel de sílice (columna de 4 g, MeOH/DCM=0-10 %) para proporcionar una mezcla de los productos intermedios 18N y 18O (49 mg). 18O: LCMS: [M+H]+ = 708, í ^r: 1,08 min; 18P: LCMS: [M+H]+ = 608, ^{í r}: 1,00 min. Método analítico A

Preparación de los Productos intermedios 18Q y 18R:

18R

Se azetropó una mezcla de 18O y 18P (49 mg) y 18M (128 mg, 0,138 mmol) con ACN (2 x 5 ml). Se disolvió el residuo en DCM (3 ml) y la solución transparente se enfrió hasta 0 °C. Se añadió DBU (0,063 ml, 0,415 mmol) en una porción. Después de 30 min, se añadió 18M adicional (55 mg) y la agitación se continuó durante 30 min. Se inactivó la reacción con MeOH (0,5 ml) y luego se concentró. Se disolvió el residuo en una pequeña cantidad de MeOH y se purificó por cromatografía en columna de fase inversa C18 (50 g GOLD, ACN/H ²O = 5-90 % con 10 mM de NH⁴OAc) para proporcionar una mezcla de 18Q y 18R (120 mg). 18Q: LCMS: [M+H]⁺= 1462, t ^R: 1,14 min; 18R: LCMS: [M+H]⁺= 1362, t ^R: 1,09 min. Método analítico C.

Preparación de Productos intermedios 18S:

18S

Se disolvió una mezcla de 18Q y 18S (115 mg) en DCM (1,5 ml) y se añadieron trietilsilano (0,101 ml, 0,629 mmol) y TFA (1,5 ml). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 h y luego se diluyó con MeOH y se concentró. Se disolvió el residuo en 7 N NH³/MeOH y luego se concentró. El residuo se cargó en celite y se purificó en una columna C18 en fase inversa ISCO (15,5 g, ^gO^lD, ACN/H ²O=5-40 % con 10 mM de NH⁴OAc) para proporcionar 18S (38 mg). LCMS: [M+H]⁺= 717, t ^R: 0,43 min. Método analítico C.

Preparación de los Productos intermedios 18T:

18T

Se agitó una solución de 18S (36 mg, 0,050 mmol) en 7N Nhb/MeOH (6 ml) a temperatura ambiente durante 4,5 h y luego se concentró para proporcionar el Producto intermedio 18T crudo (36 mg). LCMS: [M+H]+ = 613, tR: 0,28 min. Método analítico C.

Ejemplos 18-3 y 18-4

Diastereómero 3 (18-3)

Diastereómero 4 (18-4)

Se azetropó el Producto intermedio 18T (31 mg, 0,051 mmol) con piridina (5 ml) dos veces, luego se disolvió en piridina (8 ml) y se añadió DBU (114 pl, 0,759 mmol). La mezcla se azeotropó otra vez para remover aproximadamente 3 ml de piridina y se agitó la solución resultante durante 10 min. Se añadió muy lentamente una solución del Reactivo 4 (56,5 mg, 0,127 mmol) en ACN (1 ml) durante 30 min. Se concentró la reacción luego y se azeotropó con tolueno dos veces. El residuo luego se trató con éter, se sonicó y la solución de éter transparente se decantó (x3). Luego se disolvió el residuo sólido restante en MeOH/H²O (3 ml) y se purificó por HPLC en fase inversa (Instrumento: Waters Autopure, Columna: columna Xselect RP Prep C18 OBD, 5pm, 19 X150 mm, tasa de flujo: 20,0 ml/min fase móvil: A: 100 mM de NH⁴OAc (pH 6,5); B: ACN (% de A=100-% de B). Gradiente 0-16 % de B durante 16 min, 16-95 % de B a partir de 16 -16,5 min.) para obtener los compuestos deseados:

Ejemplo 18-3, (2,8 mg). LCMS: [M+H]⁺= 691. t^R: 5,48 min, Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 11.

Ejemplo 18-4 (4,6 mg, %), LC^mS: [M+H]⁺= 691, t^R: 6,80 min, Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 11.

Condiciones cromatográficas de HPLC analítica 11: Instrumento: Agilent 1290 HPLC/MS; columna: columna Xselect CSH C18, 3,5pm, 2,1 X150 mm; tasa de flujo: 0,35 ml/min; fase móvil: A: 20 mM de NH⁴OAc (pH 6,5); B: ACN (% de A=100-% de B); gradiente: 5-100 % de B durante 15 min.).

Método analítico de LCMS A:

Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrones; Solvente A = 100 % agua con 0,05 % TFA; Solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % TFA; Gradiente = 2-98 % de B durante 1 minuto, luego a 0,5 minutos se mantuvo al 98 % de B; tasa de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Método analítico de LCMS B :

Condiciones de inyección 1: Columna: Agilent Bonus RP, 2,1 mm x 50 mm, partículas de 1,8 pm; fase móvil A: agua con 20 mM de acetato de amonio; fase móvil B: acetonitrilo.

Temperatura: 50 °C; gradiente: 0 % de B mantenido durante 1 min, luego 0 % de B al 100 % de B durante 4 min, luego a 0,75 min se mantuvo al 100 % de B; flujo: 1 ml/min; detección: MS y UV (220 nm). Resultados de inyección 1. Método analítico de LCMS C:

Waters Acquity UPLC BEH C18 (2,1 x 50 mm), 1,7 micrones; Solvente A = 95 % agua / 5 % de acetonitrilo con acetato de amonio; Solvente B = 95 % de acetonitrilo / 5 % agua con acetato de amonio; Gradiente = 5-95 % de B durante 1 minuto, luego a 0,5-minute se mantuvo al 100 % de B; tasa de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm); (NH4OAc modo /-).

Método analítico de LCMS D:

Waters Acquity UPLC BEH C18 BEH C18 (2,1x50 mm), 1,7 micrones; Solvente A = 100 % agua con 0,05 % de TFA; Solvente B = 100 % de acetonitrilo con 0,05 % de t Fa ; Gradiente = 15-98 % de B durante 5 minuto, luego a 0,5 minutos se mantuvo al 98 % de B; tasa de flujo: 0,8 ml/min; detección: UV a 220 nm).

Método analítico de LCMS E:

Condiciones de inyección 1: Columna: Waters XBridge BEH C18 XP (50x 2,1 mm) 2,5 pm; fase móvil A: 5:95 acetonitrilo:agua con 10 mM de NH4OAc; fase móvil B: 95:5 acetonitrilo:agua con 10 mM de NH4OAc; Temperatura: 50 °C; gradiente: 0-100 % de B durante 3 minutos; flujo: 1,1 ml/min.

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BIOLÓGICA

Protocolo de ensayo de reportero STING THP1

Se derivaron células THP1-Dual™ de la línea celular monocítica humana THP-1 por integración estable de dos constructos reporteros inducibles. Para este fin, las células THP1-Dual™ permiten el estudio simultáneo de la vía de NF-^kB, mediante el control de la actividad de SEAP y la vía de IRF mediante la evaluación de la actividad de una luciferasa segregada (Lucia). Ambas proteínas reporteras se podían medir con facilidad en el sobrenadante de cultivo celular cuando se usa QUANTI-Blue™, un reactivo de detección SEAP y QUANTI-Luc™, un reactivo de detección de luciferasa.

Las células THP1-Dual™ inducen la activación de NF-kB en respuesta a los agonistas de STING. También disparan la vía de IRF después de la estimulación con agonistas de STIN^g, como cGAMP. Aquí, las células THP-1-Dual se usaron para evaluar aglutinantes específicos de STING para función en el nivel celular.

Se añadieron diluciones seriales de compuestos en DMSO a un bajo volumen de placas de 384 cavidades a 100 nl/cavidad mediante el uso de un dispensador acústico ECHO (Labcyte, modelo 550) para lograr una concentración de partida final de 100 pM en suspensión celular. Se añadieron células reporteras de STING THP-1 Dual™ (Invivogen, Dual cells cat #THPD-nfis) a las placas con compuestos a 15.000 células en 10 pl por cavidad en medio RPMI (Gibco, cat #11875) con 10 % de plasma humano en un volumen bajo de placa de cultivo tisular de fondo transparente de paredes negras de 384 cavidades (Corning, cat #3542) para ensayo de SEAP y placa blanca sólida de bajo volumen (Corning, cat # 3826) para ensayo de luciferasa. Una columna de la placa se reservó para tratamiento con cGAMP a 100 pM para el cálculo de activación al 100 % y una columna para ningún tratamiento (solo DMSO) para activación de línea de base. Las placas se incubaron luego en incubadora a 37 °C a 5 % de CO²durante 20 horas.

En el ensayo de SEAP, se añaden 5 pl de 2x QuantiBlue (Invivogen, cat # Rep-qb2) a las placas negras de 384 cavidades sembradas con células THP1 y se incuban a 37 °C durante 2 horas. Las placas se leyeron en un Envision (Perkin Elmer) a 620 nm de longitud de onda (OD620). En el ensayo de luciferasa, se añaden 5 pl de Quantiluc (Invivogen, Rep-qlc2) a placas blancas de 384 cavidades sembradas con células THP1 y se leen a 5 minutos en el Envision (Perkin Elmer) mediante el uso de un protocolo de luminescencia (RLU). Para ambas líneas celulares, se determinó el 100 % de activación por el valor (RLU) de células THP-1 Dual STING estimuladas con 100 pM de cGAMP (Invivogen, cat # TLRL-NACGA23-5).

ENSAYOS DE ENLACE DE STING HTRF

Se utilizó un ensayo de competición basado en FRET para evaluar la unión del artículo de prueba a STING de TS y STING AQ. El dominio ctoplásmico de STING etiquetado con His (TS o AQ) a una concentración de 20 nM se incubó con un anticuerpo anti-His marcado con Tb 2,5 nM, el compuesto de prueba y una sonda análoga de cGAMP marcado con fluoresceína (BioLog n.° de cat. C195) a una concentración de 200 nM (STING de TS) o 40 nM (STING AQ) en PBS con Tween-20 al 0,005 % y BSA al 0,1 % durante una hora. Se midió la fluorescencia a 495 nm y 520 nm utilizando un lector de microplacas EnVision para cuantificar la FRET entre el anticuerpo anti-His marcado con Tb y la sonda marcada con fluoresceína. El fondo se definió como la señal obtenida en ausencia de la proteína STING, y las relaciones de la FRET sustraídas del fondo se normalizaron con respecto a la señal máxima obtenida en ausencia del compuesto de prueba. Estos valores se convirtieron a un porcentaje de inhibición. El porcentaje de inhibición se determinó para los compuestos de prueba a 11 concentraciones. La IC⁵⁰, definida como la concentración del compuesto del ensayo de competición necesaria para reducir la unión específica de la sonda en un 50 %, se calculó mediante el uso de la ecuación logística de 4 parámetros para ajustar los datos.

STING WT: His-TVMV-S-hSTING(155-341)-H232R MGSSHHHHHHSSGETVRFQGHMSVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVSQRL YILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTGDRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVLEYATPLQTL

FAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCRTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDS

SFSLSQEVLRHLRQEEKEEV (SEQ ID NO: 1)

STING AQ: His-TVMV-S-hSTING(155-341)-G230A-R293Q MGSSHHHHHHSSGETVRFQGHMSVAHGLAWSYYIGYLRLILPELQARIRTYNQHYNNLLRGAVSQRL YILLPLDCGVPDNLSMADPNIRFLDKLPQQTADRAGIKDRVYSNSIYELLENGQRAGTCVLEYATPLQTL FAMSQYSQAGFSREDRLEQAKLFCQTLEDILADAPESQNNCRLIAYQEPADDSSFSLSQEVLRHLRQE EKEEV (SEQ ID NO: 2)

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de la fórmula I

en la que

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^aes H, halógeno, alquilo C ^{1 -6}sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C^{3 -6}sustituido con 0-6 R⁵, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR ^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R ^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^a1C(O)R^{a 1}, -NR ^{a 1}COOR^{a 1}, -NR^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR ^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}; R^bes H, alquilo C ^{1 -6}sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C^{3 -6}sustituido con 0-6 R⁵, -C(O)R ^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R³es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{3 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R⁵es H, halógeno, alquilo C ^{1 -3}, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR ^a1C(O)R^{a 1}, -NR ^{a 1}COOR^{a 1}, -NR ^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

R⁶es H, halógeno, alquilo C ^{1 -3}, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR ^a1C(O)R^{a 1}, -NR ^{a 1}COOR^{a 1}, -NR ^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R⁸es H, halógeno, alquilo C ^{1 -3}, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR ^a1C(O)R^{a 1}, -NR ^{a 1}COOR^{a 1}, -NR ^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R⁹es H, halógeno o metilo;

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1;

2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula I

en la que

X es S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^aes H, halógeno, alquilo C ^{1 -6}sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C^{3 -6}sustituido con 0-6 R⁵, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR ^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R ^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^a1C(O)R^{a 1}, - NR^{a 1}COOR^{a 1}, -NR^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR ^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R^{a 1}, - S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}; R^bes H, alquilo C ^{1 -6}sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C^{3 -6}sustituido con 0-6 R⁵, -C(O)R ^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R³es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{3 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R⁵es H, halógeno, alquilo C ^{1 -3}, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^a1C(O)R^{a 1}, - NR^{a 1}COOR^{a 1}, -NR ^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR ^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R ^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

R⁶es H, halógeno, alquilo C ^{1 -3}, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^a1C(O)R^{a 1}, - NR^{a 1}COOR^{a 1}, -NR ^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR ^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R ^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R⁸es H, halógeno, alquilo C ^{1 -3}, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^a1C(O)R^{a 1}, - NR^{a 1}COOR^{a 1}, -NR ^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR ^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R ^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R⁹es H, halógeno o metilo;

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1;

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula I

en la que

X es O;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R³es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{3 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

R⁹es H, halógeno o metilo;

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1;

4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

en la que

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R³es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{3 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R⁵es H, halógeno, alquilo C^{1 -3}, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^a1C(O)R^{a 1}, - NR^{a 1}COOR^{a 1}, -NR ^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR ^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R ^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

R⁹es H, halógeno o metilo;

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1;

5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

en la que

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R³es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{3 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

R⁹es H, halógeno o metilo;

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1;

6. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

en la que

X es O o S;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R³es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{3 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

R⁹es H, halógeno o metilo;

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1;

7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

en la que

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R³es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{3 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

R⁸es H, halógeno, alquilo C^{1 -3}, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^a1C(O)R^{a 1}, - NR^{a 1}COOR^{a 1}, -NR ^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR ^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R ^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

en la que

X es O o S;

R1 y R2 son, cada uno de modo independiente

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R³es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{3 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R³y R^{3 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

9. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 de la fórmula

10. Un compuesto de fórmula II

en la que

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^aes H, halógeno, alquilo C^{1 -6}sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C^{3 -6}sustituido con 0-6 R⁵, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR ^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R ^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^a1C(O)R^{a 1}, - NR^{a 1}COOR^{a 1}, -NR^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR ^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R^{a 1}, - S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}; R^bes H, alquilo C ^{1 -6}sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C^{3 -6}sustituido con 0-6 R⁵, -C(O)R ^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R⁴es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{4 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R⁴y R^{4 a}se pueden tomar juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R⁴y R^{4 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

R⁹es H, halógeno o metilo;

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1;

11. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 de la fórmula

en la que

X es O o S;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^aes H, halógeno, alquilo C^{1 -6}sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C^{3 -6}sustituido con 0-6 R⁵, CN, NO², OH, OR^{a 1}, SR^{a 1}, -C(O)NR ^{a 1}R^{a 1}, -COOR^{a 1}, -OC(O)R ^{a 1}, -OC(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^a1C(O)R^{a 1}, -NR ^{a 1}COOR^{a 1}, -NR^{a 1}C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -NR^{a 1}S(O)²R^{a 1}, -NR ^{a 1}S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)R^{a 1}, -S(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1}; R^bes H, alquilo C ^{1 -6}sustituido con 0-6 R⁵, cicloalquilo C^{3 -6}sustituido con 0-6 R⁵, -C(O)R ^{a 1}, -C(O)NR^{a 1}R^{a 1}, -S(O)²R^a1o S(O)²NR^{a 1}R^{a 1};

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R⁴es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{4 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R⁴y R^{4 a}pueden tomarse juntos para formar un carbociclo de 3-4 miembros; o

R⁴y R^{4 a}pueden tomarse juntos para formar un sustituyente de C=CH ²;

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

R⁹es H, halógeno o metilo;

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

n es 0 o 1;

12. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 de la fórmula

en la que

X es O o S;

X1, X2, X3 y X4 son cada uno, de modo independiente, O o NH;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R⁴es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{4 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R^{4 a}es H, CH³, halógeno u OH;o

R⁴y R^{4 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

13. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 de la fórmula

en la que

X es O o S;

R1 y R2 son cada uno, de modo independiente,

Z ¹es N o CR^a;

Z²es NR^b;

R^a1es H o alquilo C^{1 -3};

R⁴es H, CH³, halógeno, NH²u OH;

R^{4 a}es H, CH³, halógeno, NH²u OH; o

R⁴y R^{4 a}se pueden tomar juntos para formar un sustituyente de C=CH²;

R^{5 a}es H o alquilo C^{1 -3};

Y es CR⁵o N;

m es 0, 1, 2 o 3;

14. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 10 de la fórmula

15. Un compuesto de acuerdo con las reivindicaciones 1 o 10 que se selecciona entre:

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3^á5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-diona;

(1 R,6S,8R,9R,15R,17R, 18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-8-{4-hidroxi-1H-imidazo[2,1 -b]purin-1-il}-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-ditiona;

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,069]octadecano-3,12-ditiona;

9-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-8-il]-6,9-dihidro-1H-purin-6-ona;

(1S,6S,8R,9R,15R,17R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-17-{4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-3-hidroxi-12-sulfanil-3-sulfaniliden-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-12-ona;

(1R,6S,8R,9R, 15R,17R,18S)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-17-{4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-ditiona;

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18S)-17-{4-amino-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-7-il}-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-ditiona

1-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-17-il]- 1H,4H,5H-imidazo[2,1-b]purin-4-ona; (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3^a5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-diona;

1-[(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,069]octadecan-17-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida; 1-[(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-17-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida; 1- [(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-8-il]-1H-1,2,3-benzotriazol-4-carboxamida; (1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-18-hidroxi-8-(6-hidroxi-9H-purin-9-il)-17-{4-oxo-1H,4H,5H-imidazo[2,1-b]purin-1-il}-3,12-disulfanil-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,069]octadecano-3,12-diona;

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-17-{4-hidroxi-1H-imidazo[2,1-b]purin-1-il}-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,2,1,069]octadecano-3,12-ditiona;

(1S,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-8-(6-amino-9H-purin-9-il)-3,12,18-trihidroxi-17-(6-hidroxi-9H-purin-9-il)-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-ditiona;

(1R,6S,8R,9R,15R,17R,18S)-8,17-bis(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-2,4,11,13,16-pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecano-3,12-ditiona; y

2- amino-9-[(1 R,6S,8R,9R,15R,17R,18R)-17-(6-amino-9H-purin-9-il)-18-fluoro-3,12-dihidroxi-3,12-disulfaniliden-2.4.11.13.16- pentaoxa-3A5,12A5-difosfatriciclo[13,3,0,069]octadecan-8-il]- 6,9-dihidro-1H-purin-6-ona o una de sus sales, tautómeros o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables.

16. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 10 o una de sus sales farmacéuticamente aceptables y uno o más portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.

17. Un compuesto o compuestos según las reivindicaciones 1 o 10 o una de sus sales farmacéuticamente aceptables para usar en el tratamiento del cáncer.

18. El compuesto o compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para uso de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el cáncer es cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer colorrectal, melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de Hodgkin, cáncer de vejiga, carcinoma esofágico, carcinoma gástrico, carcinoma de ovario, carcinoma cervical, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, cánceres de mama, carcinoma urinario, tumores cerebrales tales como glioblastoma, linfoma no Hodgkin, leucemia linfática aguda (ALL), leucemia linfática crónica (CLL), leucemia mieloide aguda (AML), leucemia mieloide crónica (CML), carcinoma hepatocelular, mieloma múltiple, tumores estromales gastrointestinales, mesotelioma y otros tumores sólidos u otros cánceres hematológicos.

19. El compuesto o compuestos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos para uso de acuerdo con la reivindicación 18, en donde el cáncer es cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, cáncer colorrectal, melanoma, carcinoma de células renales, cáncer de cabeza y cuello, linfoma de Hodgkin o cáncer de vejiga.

20. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para usar en el tratamiento del cáncer en un sujeto que lo necesite, en combinación con uno o más agentes inmunooncológicos.

21. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 10, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un agente anticancerígeno que es un anticuerpo o una porción del mismo que se une a un antígeno que se une específicamente a un receptor de Muerte Programada-1 (PD-1) e inhibe la actividad de PD-1 para su uso en el tratamiento de un sujeto aquejado de cáncer.

22. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo y el agente anticancerígeno o una porción de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a un receptor de Muerte Programada-1 (PD-1) e inhibe la actividad de PD-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 21, en donde el anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab o pembrolizumab.

23. El compuesto o sales farmacéuticamente aceptables del mismo y el agente anticancerígeno o una porción del mismo que se une al antígeno que se une específicamente a un receptor de Muerte Programada-1 (PD-1) e inhibe la actividad de PD-1 para su uso de acuerdo con la reivindicación 21, en donde el anticuerpo anti-PD-1 es nivolumab.