ES2929276T3

ES2929276T3 - Constructos de anticuerpo para CDH19 y CD3

Info

Publication number: ES2929276T3
Application number: ES19202926T
Authority: ES
Inventors: Shouhua Xiao; Zheng Pan; Dineli Wickramasinghe; M Jeffries; Chadwick Terence King; Brian Mingtung Chan; Peter Kufer; Tobias Raum; Patrick Hoffmann; Doris Rau; Roman Kischel; Bryan Lemon; Holger Wesche; Ralf Lutterbuese
Original assignee: Amgen Research Munich GmbH; Amgen Inc
Current assignee: Amgen Research Munich GmbH; Amgen Inc
Priority date: 2013-01-25
Filing date: 2014-01-27
Publication date: 2022-11-28
Anticipated expiration: 2034-01-27
Also published as: JP6880100B2; AU2014209877A1; EP2948477B1; HUE046412T2; MX369149B; KR102230620B1; JP6522517B2; CN105121468B; NZ709318A; MY175075A; CA2896372A1; BR112015017548B1; KR20150134322A; DK2948477T3; IL240092B; US11498964B2; EP2948477A1; EA201591376A1; BR112015017548A2; IL240092A0

Abstract

La presente invención proporciona una construcción de anticuerpo que comprende un primer dominio de unión humano capaz de unirse a CDH19 humano en la superficie de una célula diana y un segundo dominio capaz de unirse a CD3 humano en la superficie de una célula T. Además, la invención se refiere a una secuencia de ácido nucleico que codifica la construcción del anticuerpo, un vector que comprende dicha secuencia de ácido nucleico y una célula huésped transformada o transfectada con dicho vector. Además, la invención se relaciona con un proceso para la producción de la construcción de anticuerpos de la invención, un uso médico de dicha construcción de anticuerpos y un kit que comprende dicha construcción de anticuerpos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Constructos de anticuerpo para CDH19 y CD3

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un constructo de anticuerpo multiespecífico aislado que comprende un primer dominio de unión humano capaz de unirse a CDH19 humano en la superficie de una célula diana y un segundo dominio capaz de unirse a CD3 humano en la superficie de una célula T como se define en las reivindicaciones. Además, la invención proporciona una secuencia de ácido nucleico que codifica el constructo de anticuerpo, un vector que comprende dicha secuencia de ácido nucleico y una célula huésped transformada o transfectada con dicho vector como se define en las reivindicaciones. Además, la invención proporciona un proceso para la producción del constructo de anticuerpo de la invención, un uso médico de dicho constructo de anticuerpo y un kit que comprende dicho constructo de anticuerpo como se define en las reivindicaciones.

Antecedentes de la invención

El melanoma es un cáncer de piel que está provocado por la transformación oncogénica de los melanocitos, que son células dérmicas productoras de pigmento. En 2009, el melanoma tenía una prevalencia de más de 870.000 casos solo en los EE.UU. (Institutos de salud nacionales de EE.UU.). Cada año, más de 75.000 nuevos casos de melanoma se diagnostican en los EE.UU., y aproximadamente el 25% de los pacientes tienen la enfermedad avanzada en el momento del diagnóstico. A pesar del hecho de que los casos de melanoma primario pueden curarse por cirugía si se detectan lo suficientemente pronto, el melanoma es la causa principal de muerte por enfermedades de la piel en los EE.UU., responsable de aproximadamente 10.000 muertes por año en los EE.UU. Una vez que la enfermedad se ha extendido y se vuelve metastática, el pronóstico es pobre, con una supervivencia relativa a los 5 años del 15%.

Hay cuatro tipos básicos de melanomas. Tres tipos se encuentran en las capas superiores de la piel y el cuarto es invasivo y ha penetrado más profundamente en la piel y puede haberse extendido a otras áreas del cuerpo.

El melanoma de extensión superficial es el tipo más común de melanoma que explica aproximadamente el 70% de todos los casos. Crece a lo largo de la capa superior de la piel durante un tiempo bastante largo antes de penetrar más profundamente. Primero aparece como un parche decolorado plano o ligeramente elevado que tiene límites irregulares y puede ser algo asimétrico en la forma. El color varía, y puede ver áreas de tostado, marrón, rojo, azul o blanco. Este tipo de melanoma puede darse en una verruga anteriormente benigna y se encuentra generalmente en gente joven.

El lentigo maligno es similar al tipo de extensión superficial, ya que también permanece cerca de la superficie de la piel durante bastante rato, y normalmente aparece como una decoloración tostada, marrón o marrón oscura moteada plana o ligeramente elevado. Se encuentra generalmente en los ancianos. Cuando este cáncer se vuelve invasivo, se denomina como melanoma lentigo maligno.

El melanoma lentiginoso acral también se extiende superficialmente antes de penetrar más profundamente. Es bastante diferente de los demás, sin embargo, ya que normalmente aparece como una decoloración negra o marrón bajo las uñas o en las plantas de los pies o palmas de las manos. Este tipo de melanoma se encuentra a veces en gente de piel oscura, y a menudo puede avanzar más rápidamente que el melanoma de extensión superficial y lentigo maligno.

El melanoma nodular es normalmente invasivo en el momento en que se diagnostica por primera vez. La malignidad se reconoce cuando se convierte en un bulto. Es normalmente negro, aunque ocasionalmente es azul, gris, blanco, marrón, tostado, rojo o del tono de la piel. Este es el más agresivo de los melanomas, y se encuentra en el 10 a 15 por ciento de los casos.

Los tratamientos habituales para el melanoma metastático incluyen quimioterapia, terapias dirigidas para pacientes elegibles (p.ej., tratamiento inhibidor de BRAF para pacientes con mutaciones BRAF) e inmunoterapia. El melanoma metastático es un tipo de tumor donde se ha demostrado que la inmunoterapia no solo ralentiza la progresión de la enfermedad, sino que lleva a curas en pacientes en la etapa tardía. La interleuquina-2 se aprobó para el uso de melanoma metastático en 1998, y en 2011 un anticuerpo de direccionamiento a CTLA4, un miembro de una nueva generación de inhibidores de control inmune, consiguió la aprobación por la FDA. Halachmi y Gilchrest Curr Opin Oncol 13:129-136, 2001 proporciona una actualización en los sucesos genéticos en la patogénesis del melanoma, y Torabian y Kashani-Sabet Curr Opin Oncol 17:167-171,2005 describe biomarcadores para el melanoma. Bittner et al. Nature 406:536-540, 2000 expone una clasificación molecular de melanoma maligno cutáneo mediante la caracterización de la expresión génica, y Winnepenninckx et al. J transl Med 4:50, 2006 describe la caracterización de la expresión génica del melanoma cutáneo primario y el resultado clínico.

CDH19 es una proteína transmembrana cadherina tipo II de función desconocida. El gen humano se clonó en 2000 en base a su similitud de secuencia a CDH7 (Kools, P. et al., Genomics. 2000). Las etiquetas de secuencia expresada (ESTs por sus siglas en inglés) para CDH19 se aislaron de las bibliotecas de ADNc de melanocito, indicando que la expresión de CDH19 puede estar limitada a células de origen de la cresta neural (Kools, P. et al. Genomics. 2000).

Como soporte de esta idea, se encontró que la CDH19 de rata se expresa principalmente en los ganglios nerviosos y en las células de Schwann durante el desarrollo embrionario de la rata (Takahashi, M. y Osumi, O. Devl Dynamics.

2005). Bertucci, F. et al. Anticancer Research 27:3441-3450 (2007) describe varios marcadores de pronóstico, p.ej. CDH19, asociados con la progresión metastática en las células de melanoma humano que pueden constituir dianas terapéuticas moleculares en el melanoma metastático.

Los anticuerpos diagnósticos que detectan CDH19 en inmunoelectrotransferencia, inmunohistoquímica o citometría de flujo se conocen en la técnica y están disponibles comercialmente. Esos anticuerpos comprenden anticuerpos poliy monoclonales generados en huéspedes animales.

Compendio de la invención

La presente invención proporciona un constructo de anticuerpo multiespecífico aislado que comprende un primer dominio de unión humano capaz de unirse a CDH19 humano en la superficie de una célula diana y un segundo dominio capaz de unirse a CD3 humano en la superficie de una célula T como se define en las reivindicaciones.

En una realización del constructo de anticuerpo de la invención el primer dominio de unión comprende una región VH que comprende CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 y una región Vl que comprende CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 seleccionados del grupo que consiste en:

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CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1933, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1934, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1935, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1936, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1937 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1938,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1946, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1947, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1948, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1949, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1950 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1951,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1959, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1960, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1961, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1962, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1963 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1964,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1972, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1973, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1974, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1975, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1976 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1977,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1985, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1986, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1987, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1988, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1989 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1990,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1998, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1999, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2000, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 2001, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2002 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2003,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2011, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 2012, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2013, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 2014, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:2015 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2016,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2024, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 2025, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2026, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 2027, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2028 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2029,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2037, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 2038, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2039, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 2040, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2041 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2042, y

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2050, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 2051, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2052, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 2053, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2054 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2055.

En una realización adicional del constructo de anticuerpo de la invención el primer dominio de unión comprende una región VH seleccionada del grupo que consiste en las regiones VH

que se representan en SEQ ID NO: 342, SEQ ID NO: 366, SEQ ID NO: 370, SEQ ID NO: 344 SEQ ID NO 372, SEQ ID NO: 368, SEQ ID NO: 496, SEQ ID NO: 497, SEQ ID NO 498, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 500, SEQ ID NO: 508, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 510, SEQ ID NO 511, SEQ ID NO 512, SEQ ID NO: 519, SEQ ID NO: 520, SEQ ID NO: 521, SEQ ID NO: 522, SEQ ID NO 523, SEQ ID NO: 524, SEQ ID NO: 525, SEQ ID NO: 526, SEQ ID NO: 527, SEQ ID NO: 528, SEQ ID NO 529, SEQ ID NO 530, SEQ ID NO: 531, SEQ ID NO: 532, SEQ ID NO: 533, SEQ ID NO: 534, SEQ ID NO 535, SEQ ID NO 536, SEQ ID NO: 537, SEQ ID NO: 538, SEQ ID NO: 016, SEQ ID NO: 1029, SEQ ID NO: 1042, SEQ ID NO: 1081, SEQ ID NO: 1107, ^{SEQ ID NO:}1120^{, SEQ ID NO: 1250, SEQ ID NO: 1263, SEQ ID NO: 1276, SEQ ID NO: 1289, SEQ ID NO: 1302,}SEQ ID NO: 1654, SEQ ID NO: 1667, SEQ ID NO: 1901, SEQ ID NO: 1914, SEQ ID NO: 1940, SEQ ID NO: 1953, SEQ ID NO: 1966, SEQ ID NO: 1979, SEQ ID NO: 1992, SEQ ID NO: 2005, SEQ ID NO: 2018, SEQ ID NO: 2031, SEQ ID NO: 2044 y SEQ ID NO: 2057.

En otra realización del constructo de anticuerpo de la invención el primer dominio de unión comprende una región VL seleccionada del grupo que consiste en regiones VL

que se representan en SEQ ID NO: 398, SEQ ID NO: 422, SEQ ID NO: 426, SEQ ID NO: 400 SEQ ID NO 428, SEQ ID NO: 424, SEQ ID NO: 591, SEQ ID NO: 592, SEQ ID NO : 593, SEQ ID NO: 594, SEQ ID NO: 595, SEQ ID NO: 603, SEQ ID NO: 604, SEQ ID NO: 605, SEQ ID NO : 606, SEQ ID NO 607, SEQ ID NO: 614, SEQ ID NO: 615, SEQ ID NO: 616, SEQ ID NO: 617, SEQ ID NO 618, SEQ ID NO 619, SEQ ID NO: 620, SEQ ID NO: 621, SEQ ID NO: 622, SEQ ID NO: 623, SEQ ID NO : 624, SEQ ID NO 625, SEQ ID NO: 626, SEQ ID NO: 627, SEQ ID NO: 628, SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO : 630, SEQ ID NO 631, SEQ ID NO: 632, SEQ ID NO: 633, SEQ ID NO: 1018, SEQ ID NO: 1031, SEQ ID NO: 1044, SEQ ID NO: 1083, SEQ ID NO: 1109, ^{SEQ ID NO:}1122^{, SEQ ID NO: 1252, SEQ ID NO: 1265, SEQ ID NO: 1278, SEQ ID NO: 1291, SEQ ID NO: 1304,}SEQ ID NO: 1656, SEQ ID NO: 1669, SEQ ID NO: 1903, SEQ ID NO: 1916, SEQ ID NO: 1942, SEQ ID NO: 1955, ^{SEQ ID NO: 1968, SEQ ID NO: 1981, SEQ ID NO: 1994, SEQ ID NO: 2007, SEQ ID NO:}2020^{, SEQ ID NO: 2033,}SEQ ID NO: 2046 y SEQ ID NO 2059

La invención proporciona además una realización del constructo de anticuerpo de la invención, en el que el primer dominio de unión comprende una región VH y una región VL seleccionadas del grupo que consiste en:

pares de una región VH y una región VL que se representan en SEQ ID NOs: 342+398, SEQ ID NOs: 366+422, SEQ ID NOs 370+426, SEQ ID NOs 344+400, SEQ ID NOs 372+428, SEQ ID NOs: 368+424, SEQ ID NOs 496+591, SEQ ID NOs 497+592, SEQ ID NOs 498+593, SEQ ID NOs: 499+594, SEQ ID NOs 500+595, SEQ ID NOs 508+603, SEQ ID NOs 509+604, SEQ ID NOs: 510+605, SEQ ID NOs 511+606, SEQ ID NOs 512+607, SEQ ID NOs 519+614, SEQ ID NOs: 520+615, SEQ ID NOs 521+616, SEQ ID NOs 522+617, SEQ ID NOs 523+618, SEQ ID NOs: 524+619, SEQ ID NOs 525+620, SEQ ID NOs 526+621, SEQ ID NOs 527+622, SEQ ID NOs: 528+623, SEQ ID NOs 529+624, SEQ ID NOs 530+625, SEQ ID NOs 531+626, SEQ ID NOs: 532+627, SEQ ID NOs 533+628, SEQ ID NOs 534+629, SEQ ID NOs 535+630, SEQ ID NOs: 536+631, SEQ ID NOs 537+632, SEQ ID NOs: 538+633, SEQ ID NOs: 1016+1018, SEQ ID NOs: 1029+1031, SEQ ID NOs 1042+1044, SEQ ID NOs 1081+1083, SEQ ID NOs 1107+1109, SEQ ID NOs: 1120+1122, SEQ ID NOs 1250+1252, SEQ ID NOs 1263+1265, SEQ ID NOs 1276+1278, SEQ ID NOs: 1289+1291, SEQ ID NOs 1302+1304, SEQ ID NOs 1654+1656, SEQ ID NOs 1667+1669, SEQ ID NOs: 1901+1903, SEQ ID NOs 1914+1916, SEQ ID NOs 1940+1942, SEQ ID NOs 1953+1955, SEQ ID NOs: 1966+1968, SEQ ID NOs 1979+1981, SEQ ID NOs 1992+1994, SEQ ID NOs 2005+2007, SEQ ID NOs: 2018+2020, SEQ ID NOs 2031+2033, SEQ ID NOs: 2044+2046 y SEQ ID NOs: 2057+2059.

En una realización adicional de la invención el constructo de anticuerpo está en un formato seleccionado del grupo ^{que consiste en (scFv)}2^{, scFv-mAb de dominio único, diacuerpos y oligómeros de los mismos.}

En una realización preferida, el primer dominio de unión comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

como se representa en SEQ ID NO: 1020, SEQ ID NO: 1033, SEQ ID NO: 1046, SEQ ID NO: 1085, SEQ ID NO: 1111, SEQ ID NO: 1124, SEQ ID NO: 1254, SEQ ID NO: 1267, SEQ ID NO: 1280, SEQ ID NO: 1293, SEQ ID NO: 1306, SEQ ID NO: 1658, SEQ ID NO: 1671, SEQ ID NO: 1905, SEQ ID NO: 1918, SEQ ID NO: 1944, SEQ ID NO: 1957, SEQ ID NO: 1970, SEQ ID NO: 1983, SEQ ID NO: 1996, SEQ ID NO: 2009, SEQ ID NO: 2022, SEQ ID NO: 2035, SEQ ID NO: 2048 y SEQ ID NO: 2061.

En otra realización del constructo de anticuerpo de la invención el segundo dominio de unión es capaz de unirse a CD3 épsilon humano y de Callithrix jacchus, Saguinus Oedipus o Saimiri sciureus.

En una realización preferida el constructo de anticuerpo de la invención tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

como se representa en SEQ ID NO: 1021, SEQ ID NO: 1034, SEQ ID NO: 1047, SEQ ID NO: 1086, SEQ ID NO: 1112, SEQ ID NO: 1125, SEQ ID NO: 1255, SEQ ID NO: 1268, SEQ ID NO: 1281, SEQ ID NO: 1294, SEQ ID NO: 1307, SEQ ID NO: 1659, SEQ ID NO: 1672, SEQ ID NO: 1906, SEQ ID NO: 1919, SEQ ID NO: 1945, SEQ ID NO: 1958, SEQ ID NO: 1971, SEQ ID NO: 1984, SEQ ID NO: 1997, SEQ ID NO: 2010, SEQ ID NO: 2023, SEQ ID NO: 2036, SEQ ID NO: 2049 y SEQ ID NO: 2062.

La invención proporciona además una secuencia de ácido nucleico que codifica un constructo de anticuerpo de la invención.

Además, la invención proporciona un vector que comprende una secuencia de ácido nucleico de la invención. Además, la invención proporciona una célula huésped transformada o transfectada con la secuencia de ácido nucleico de la invención.

En una realización adicional la invención proporciona un proceso para la producción de un constructo de anticuerpo de la invención, comprendiendo dicho proceso cultivar una célula huésped de la invención en condiciones que permitan la expresión del constructo de anticuerpo de la invención y recuperar el constructo de anticuerpo producido del cultivo. Además, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un constructo de anticuerpo de la invención o producido según el proceso de la invención.

En una realización la invención proporciona el constructo de anticuerpo de la invención o producido según el proceso de la invención para usar en la prevención o tratamiento de una enfermedad de melanoma o enfermedad de melanoma metastático.

La enfermedad de melanoma o enfermedad de melanoma metastático puede seleccionarse del grupo que consiste en melanoma de extensión superficial, lentigo maligno, melanoma de lentigo maligno, melanoma lentiginoso acral y melanoma nodular.

En una realización adicional, la invención proporciona un kit que comprende un constructo de anticuerpo de la invención, o producido según el proceso de la invención, un vector de la invención y/o una célula huésped de la invención.

Breve descripción de los dibujos

Figura 1:

La Fig. 1 representa datos de viabilidad celular de células Colo-699 que se han tratado con anticuerpos anti-CDH19 totalmente humanos y una alta concentración de un Fab monovalente Fc anti-humano de cabra conjugado con DM1 (DM1-Fab) en una relación fármaco-anticuerpo (DAR, por sus siglas en inglés) (~1,3). Figura 2:

La Fig. 2 representa los datos de viabilidad celular promedio a partir de un ensayo CHL-1 representado frente a los datos de viabilidad celular promedio del ensayo Colo-699.

Figura 3:

La Fig. 3 muestra la expresión relativa de ARNm de CDH19 en muestras de melanoma metastático y primario.

Figura 4:

La Fig. 4 muestra la expresión de proteína CDH19 en muestras de tumor humano por IHC.

Figura 5:

La Fig. 5 muestra los resultados del análisis de líneas celulares tumorales por citometría de flujo e IHC para identificar los sistemas de modelo con expresión de CDH19 similar a tumores humanos en base al número de receptores de CDH19 presentes en la superficie celular.

Figura 6:

Análisis FACS de anticuerpos biespecíficos CDH19/CD3 en las líneas celulares indicadas:

1) L1.2 no transfectada. 2) células L1.2 transfectadas de forma estable con CDH19 humano, 3) línea celular de melanoma CHL-1,4) línea celular de melanoma A2058, 5) línea de células T humanas positivas a CD3 humano ^HBP-ALL,6^{) línea de células T de macaco 4119 LnPx. Controles negativos [1) a}6^{)]: anticuerpos de detección}sin anticuerpo biespecífico CDH19/CD3 anterior.

Figura 7:

Actividad citotóxica de los anticuerpos biespecíficos CDH19/CD3 como se mide en un ensayo de citotoxicidad basado en FACS de 48 horas. Células efectoras: PBMC humana no estimulada. Células diana: como se indica. Relación de célula efectora a diana (E:T): 10:1.

Figura 8:

Inhibición in vivo del crecimiento tumoral de células Colo699 mediante la administración de CDH19 BiTE 2G6. El constructo de anticuerpo biespecífico inhibe el crecimiento de tumores a dosis de 0,5 mg/kg.

Figura 9:

Inhibición in vivo del crecimiento tumoral de células CHL-1 mediante la administración de CDH19 BiTE 2G6. El constructo de anticuerpo biespecífico inhibe el crecimiento de tumores a dosis de 0,5 mg/kg.

Figura 10:

Actividad citotóxica de anticuerpos biespecíficos CDH19/CD3 como se mide en un ensayo de citotoxicidad basado en formación de imágenes de 48 horas. Células efectoras: células T humanas no estimuladas. Células diana: como se indica. Relación de célula efectora a diana (E:T): 10:1.

Figura 11:

Cromatograma de Captura IMAC y elución CH192G6302 x I2C SA21

El perfil de elución IMAC típico obtenido durante la purificación de un anticuerpo de CDH19 BiTE. La línea roja indica absorción a 254 nm, la línea azul indica absorción a 280 nm. La línea marrón indica conductividad.

1 - Captura. - 2- Pre-elución en imidazol 50 mM. 3. Elución BiTE en imidazol 500 mM.

Figura 12:

Cromatograma de Captura de proteína_A y elución CH192G6302 x F12Q

Perfil de elución de proteína_A típico obtenido durante la purificación de un anticuerpo de CDH19 BiTE. La línea roja indica absorción a 254 nm, la línea azul indica absorción a 280 nm. La línea marrón indica conductividad. La línea verde indica el porcentaje de gradiente aplicado. 1 - Captura. 2 - Elución BiTE. Figura 13:

Perfil de elución SEC de anticuerpo de CDH19 BiTE 2G6302 x I2C SA21

Perfil de elución SEC típico obtenido durante la purificación de un anticuerpo de CDH19 BiTE. Se indican los picos de proteína que corresponden a isoformas de anticuerpo BiTE monomérico y dimérico. BPM = bajo peso molecular. La línea roja indica absorción a 254 nm, la línea azul indica absorción a 280 nm. La línea marrón indica conductividad. 1 - agregados no BiTE en volumen de exclusión SEC. 2. Dímero BiTE. 3. Monómero BiTE. 4. Contaminantes y sales de bajo peso molecular.

Figura 14:

Analíticas SDS PAGE reducidas de Monómero CDH19 BiTE CH19 2G6302 x I2C SA21 (izquierda) y marcador de peso molecular Novex Sharp Protein Standard (Life Technologies).

Figura 15:

Cromatograma HP-SEC que muestra la elución de CDH19 BiTE CH192G6302 x I2C SA21 después de siete días de almacenamiento a 37°C. Línea rosa que indica absorción óptica a 210 nm de longitud de onda. Línea marrón que indica conductividad.

1 Dímero BiTE. 2. Monómero BiTE

Figura 16:

Cromatograma HP-SEC que muestra la elución de CDH19 BiTE CH19 2G6302 x I2C SA21 después de tres ciclos de congelación/descongelación. Línea rosa indica la absorción óptica a 210 nm de longitud de onda. Línea marrón que indica conductividad. 1. Monómero BiTE.

Figura 17:

Cromatograma CatlEX de elución de CDH19 BiTE CH19 2G6 302 x I2C SA21. Línea azul que indica absorción óptica a 280 nm. Línea roja que indica absorción óptica a 254 nm.

Figura 18:

Perfil de elución HIC de CDH19 BiTE CH19 2G6 302 x I2C SA21. Línea azul que indica absorción óptica a 280 nm. Línea roja que indica absorción óptica a 254 nm. Línea marrón que indica conductividad.

Figura 19:

Análisis FACS de anticuerpos biespecíficos CDH19/CD3 en líneas celulares indicadas: 1) células HEK293 transfectadas de forma estable con CDH19 humano, 2) línea de células T humanas positivas a CD3 humano HBP-ALL; controles negativos [1) y 2)]: anticuerpos de detección sin sobrenadante de cultivo celular de anticuerpo biespecífico de CDH19/CD3 anterior.

Figura 20:

La actividad citotóxica de anticuerpos biespecíficos CDH19/CD3 como se mide en un ensayo de citotoxicidad basado en la liberación de cromo de 18 horas. Células efectoras: células T CD8+ humanas estimuladas. Células diana: HEK293 transfectadas con CDH19 humano. Relación de célula efectora a diana (E:T): 10:1.

Descripción detallada de la invención

Definiciones:

Debe notarse que como se usa en la presente memoria, las formas singulares “un”, “una”, y “el/la”, incluyen referencias plurales a menos que el contexto indique claramente otra cosa. Por consiguiente, por ejemplo, la referencia a “un reactivo” incluye uno o más de dichos reactivos diferentes y la referencia a “el método” incluye la referencia a etapas y métodos equivalentes conocidos por los expertos en la técnica que podrían modificarse o sustituirse por los métodos descritos en la presente memoria.

A menos que se indique otra cosa, el término “al menos” que precede a una serie de elementos se va a entender que se refiere a todos los elementos en la serie.

El término “y/o” donde se use en la presente memoria incluye el significado de “y”, “o” y “todas o cualquier otra combinación de los elementos conectados por dicho término”.

El término “alrededor” o “aproximadamente” como se usa en la presente memoria significa en ±20%, preferiblemente en ±15%, más preferiblemente en ±10%, y lo más preferiblemente en ±5% de un valor o intervalo dado.

A lo largo de esta memoria y las reivindicaciones que siguen, a menos que el contexto necesite otra cosa, la palabra “comprenden”, y variaciones tales como “comprende” y “que comprende”, se entenderá que implica la inclusión de un número entero o etapa o grupo de números enteros o etapas expresados aunque no la exclusión de cualquier otro número entero o etapa o grupo de números enteros o etapas distintos. Cuando se usa en la presente memoria el término “que comprende” puede sustituirse con el término “que contiene” o “que incluye” o a veces cuando se usa en la presente memoria con el término “que tiene”.

Cuando se usa en la presente memoria “que consiste en” excluye cualquier elemento, etapa o ingrediente no especificado en el elemento de reivindicación. Cuando se usa en la presente memoria, “que consiste esencialmente en” no excluye materiales o etapas que no afectan materialmente las características básicas y nuevas de la reivindicación.

En cada ejemplo en la presente memoria cualquiera de los términos “que comprende”, “que consiste esencialmente en” y “que consiste en” puede sustituirse con cualquiera de los otros dos términos.

La definición del término “anticuerpo” incluye realizaciones tales como anticuerpos monoclonales, quiméricos, de cadena sencilla, humanizados y humanos, además de fragmentos de anticuerpo, como, entre otros, fragmentos Fab. ^{Los fragmentos de anticuerpo o derivados comprenden además fragmentos F(ab’)}2^{, Fv, scFv o anticuerpos de dominio}único tal como anticuerpos de dominio o nanocuerpos, anticuerpos de dominio variable único o dominio variable único de inmunoglobulina que comprende meramente un dominio variable , que puede ser VHH, VH o VL, que se une específicamente a un antígeno o epítopo independientemente de otras regiones V o dominios; véase, por ejemplo, Harlow y Lane (1988) y (1999), loc. cit.; Kontermann y Dübel, Antibody Engineering, Springer, 2a ed. 2010 y Little, Recombinant Antibodies for Immunotherapy, Cambridge University Press 2009. Dicho dominio variable único de inmunoglobulina incluye no solo un polipéptido de dominio variable único de anticuerpo aislado, sino también polipéptidos más grandes que comprenden uno o más monómeros de una secuencia polipeptídica de dominio variable único de anticuerpo.

En línea con esta definición todas las realizaciones descritas anteriormente del término anticuerpo pueden incluirse bajo el término “constructo de anticuerpo”. Dicho término también incluye diacuerpos o anticuerpos de Redireccionamiento de afinidad dual (DART, por sus siglas en inglés). Además se prevén diacuerpos de cadena única (biespecíficos), diacuerpos en tándem (Tandab), “minicuerpos” ejemplificados por una estructura que es como sigue: (VH-VL-CH3)2, (scFv-CH3)2 o (scFv-CH3-scFv)2, anticuerpos “Fc DART” y anticuerpos “IgG DART”, y multicuerpos tal como triacuerpos. Los dominios variables únicos de inmunoglobulina incluyen no solo un polipéptido de dominio variable único de anticuerpo aislado, sino también polipéptidos más grandes que comprenden uno o más monómeros de una secuencia polipeptídica de dominio variable único de anticuerpo.

Se conocen varios procedimientos en la técnica y pueden usarse para la producción de dichos constructos de anticuerpos (anticuerpos y/o fragmentos). Por consiguiente, los derivados (de anticuerpo) pueden producirse mediante peptidomiméticos. Además, las técnicas descritas para la producción de anticuerpos de cadena sencilla (véase, entre otros, la Patente de EE.UU. 4.946.778, Kotermann y Dübel (2010), loc. cit. y Little (2009), loc. cit.) pueden adaptarse para producir anticuerpos de cadena sencilla específicos para polipéptido(s) elegido(s). Además, los animales transgénicos pueden usarse para expresar anticuerpos humanizados específicos para polipéptidos y proteínas de fusión de esta invención. Para la preparación de anticuerpos monoclonales, puede usarse cualquier técnica que proporcione anticuerpos producidos por cultivos de líneas celulares continuas. Ejemplos para dichas técnicas incluyen la técnica de hibridoma (Kohler y Milstein Nature 256 (1975), 495-497), la técnica de trioma, la técnica de hibridoma de célula B humana (Kozbor, Immunology Today 4 (1983), 72) y la técnica de hibridoma de EBV para producir anticuerpos monoclonales humanos (Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc. (1985), 77-96). La resonancia de plasmón superficial como se emplea en el sistema BIAcore puede usarse para aumentar la eficiencia de anticuerpos fagos que se unen a un epítopo de un polipéptido diana, tal como CD3 épsilon (Schier, Human Antibodies Hybridomas 7 (1996), 97-105; Malmborg, J. Immunol. Methods 183 (1995), 7-13). Se prevé también en el contexto de esta invención que el término “anticuerpo” comprenda constructos de anticuerpo, que pueden expresarse en un huésped como se describe en la presente memoria a continuación, p.ej., constructos de anticuerpo que pueden transfectarse y/o transducirse por medio, entre otros, de virus o vectores de plásmido.

Además, el término “anticuerpo” como se emplea en la invención se refiere también a derivados o variantes de los anticuerpos descritos en la presente memoria que presentan la misma especificidad que los anticuerpos descritos.

Los términos “dominio de unión al antígeno”, “fragmento de unión al antígeno” y “región de unión a anticuerpo” cuando se usan en la presente memoria se refieren a una parte de una molécula de anticuerpo que comprende aminoácidos responsables para la unión específica entre anticuerpo y antígeno. La parte del antígeno que se reconoce específicamente y se une por el anticuerpo se denomina como el “epítopo” como se describe en la presente memoria anteriormente. Como se menciona anteriormente, un dominio de unión al antígeno puede comprender típicamente una región variable de cadena ligera de anticuerpo (VL) y una región variable de cadena pesada de anticuerpo (VH); sin embargo, no tiene que comprender ambas. Los fragmentos Fd, por ejemplo, tienen dos regiones VH y a menudo retienen alguna función de unión al antígeno del dominio de unión al antígeno intacto. Los ejemplos de fragmentos de unión al antígeno de un anticuerpo incluyen (1) un fragmento Fab, un fragmento monovalente que tiene los dominios VL, VH, CL y CH1; (2) un fragmento F(ab’)2, un fragmento bivalente que tiene dos fragmentos Fab unidos por un puente disulfuro en la región bisagra; (3) un fragmento Fd que tiene los dos dominios VH y CH1; (4) un fragmento Fv que tiene los dominios VL y VH de un brazo sencillo de un anticuerpo, (5) un fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature ^{341:544-546), que tiene un dominio VH; (}6^{) una región de determinación de la complementariedad (CDR) aislada, y}(7) un Fv de cadena sencilla (scFv). Aunque los dos dominios del fragmento Fv, VL y VH se codifican por genes separados, pueden unirse, usando métodos recombinantes, por un conector sintético que los permite formarse como una cadena proteína única en que las regiones VL y VH se emparejan para formar moléculas monovalentes (conocidas como Fv de cadena sencilla (scFv); véase p.ej., Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci USA 85:5879-5883). Estos fragmentos de anticuerpo se obtienen usando técnicas convencionales conocidas por los expertos en la técnica, y los fragmentos se evalúan por la función de la misma manera que si fueran anticuerpos intactos.

El término “anticuerpo monoclonal” como se usa en la presente memoria se refiere a un anticuerpo obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos excepto por posibles mutaciones y/o modificaciones post-traducción que se dan de forma natural (p.ej., isomerizaciones, amidaciones) que pueden estar presentes en cantidades menores. Los anticuerpos monoclonales son altamente específicos, dirigiéndose contra un sitio antigénico único. Además, en contraste con preparados de anticuerpo (policlonal) convencionales que incluyen típicamente diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes determinantes (epítopos), cada anticuerpo monoclonal está dirigido contra un único determinante en el antígeno. Además de su especificidad, los anticuerpos monoclonales son ventajosos en que se sintetizan mediante el cultivo de hibridoma, no contaminados por otras inmunoglobulinas. El modificador “monoclonal” indica el carácter de que el anticuerpo se obtiene a partir de una población sustancialmente homogénea de anticuerpos, y no se va a construir como si necesitara la producción del anticuerpo por cualquier método particular. Por ejemplo, los anticuerpos monoclonales a usar de acuerdo con la presente invención pueden fabricarse por el método de hibridoma descrito primero por Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), o puede hacerse por métodos de ADN recombinante (véase, p.ej., Patente de EE.UU. núm. 4.816.567). Los “anticuerpos monoclonales” pueden aislarse también de bibliotecas de anticuerpos fagos usando las técnicas descritas en Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) y Marks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991), por ejemplo.

El término “anticuerpo humano” incluye anticuerpos que tienen regiones variables y constantes que corresponden sustancialmente a secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana conocidas en la técnica, que incluyen, por ejemplo, las descritas por Kabat et al. (Véase Kabat et al. (1991) loc. cit.). Los anticuerpos humanos de la invención pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de línea germinal humana (p.ej., mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o específica del sitio in vitro o por mutación somática in vivo), por ejemplo en las CDRs, y en particular, CDR3. El anticuerpo humano puede tener al menos una, dos, tres, cuatro, cinco o más posiciones sustituidas con un residuo de aminoácido que no se codifica por la secuencia de inmunoglobulina de línea germinal humana. Se enfatiza que la definición de anticuerpos humanos como se usa en la presente memoria también contempla anticuerpos totalmente humanos, que incluyen solo secuencias humanas no artificialmente y/o genéticamente alteradas de anticuerpos como las que se derivan usando tecnologías que usan sistemas tales como el Xenomice.

Ejemplos de “variantes de anticuerpo” incluyen variantes humanizadas de anticuerpos no humanos, anticuerpos “maduros de afinidad” (véase, p.ej., Hawkins et al. J. Mol. Biol. 254, 889-896 (1992) y Lowman et al., Biochemistry 30, 10832-10837 (1991)) y mutantes de anticuerpo con función(ones) efectora(s) alterada(s) (véase, p.ej., Patente de ^{EE.UU. 5.648.260, Kontermann y Dübel (}2010^{), loc. cit. y Little (2009), loc. cit.).}

Como se usa en la presente memoria, “anticuerpo generado in vitro" se refiere a un anticuerpo donde toda o parte de la región variable (p.ej., al menos una CDR) se genera en una selección de células no inmunes (p.ej., una visualización de fagos in vitro, chip de proteína o cualquier otro método en que las secuencias candidatas puedan probarse por su capacidad para unirse a un antígeno). Este término por consiguiente excluye preferiblemente secuencias generadas por redistribución genómica en una célula inmune.

El emparejamiento de un VH y VL forma un único sitio de unión al antígeno. El dominio CH más próximo a VH se designa como CH1. Cada cadena L está unida a una cadena H por un enlace disulfuro covalente, mientras que las dos cadenas H están unidas la una a la otra por uno o más enlaces disulfuro dependiendo en el isotipo de cadena H. Los dominios VH y VL consisten en cuatro regiones de secuencias relativamente conservadas denominadas regiones estructurales (FR1, FR2, FR3 y FR4), que forman un andamio para tres regiones de secuencias hipervariables (regiones determinantes de la complementariedad, CDRs). Las CDRs contienen la mayoría de los residuos responsables de las interacciones específicas del anticuerpo con el antígeno. Las CDRs se denominan como CDR1, CDR2 y CDR3. Por consiguiente, los constituyentes de CDR en la cadena pesada se denominan como H1, H2 y H3, mientras que los constituyentes de CDR en la cadena ligera se denominan como L1, L2 y L3.

El término “variable” se refiere a las partes de los dominios de inmunoglobulina que muestran variabilidad en su secuencia y que están implicados en la determinación de la especificidad y la afinidad de unión de un anticuerpo particular (es decir, el (los) “dominio(s) variable(s)”). La variabilidad no se distribuye uniformemente a lo largo de los dominios variables de los anticuerpos; se concentra en sub-dominios de cada una de las regiones variables de la cadena pesada y ligera. Estos sub-dominios se denominan regiones “hipervariables” o “regiones determinantes de la complementariedad” (CDRs). Las partes más conservadas (es decir, no hipervariable) de los dominios variables se denominan regiones “estructurales” (FRM). Los dominios variables de cadenas pesadas y ligeras que se dan de forma natural comprenden cada una cuatro regiones FRM, adoptando en gran medida una configuración p laminar, conectadas por tres regiones hipervariables, que forman bucles que conectan, y en algunos casos que forman parte de, la estructura p laminar. Las regiones hipervariables en cada cadena se mantienen juntas en estrecha proximidad por las FRM y, con las regiones hipervariables de la otra cadena, contribuyen a la formación del sitio de unión al antígeno (véase Kabat et al., loc. cit.). Los dominios constantes no están implicados directamente en la unión al antígeno, pero muestran varias funciones efectoras, tal como, por ejemplo, citotoxicidad mediada por la célula, dependiente del anticuerpo, y activación complementaria.

Los términos “CDR”, y su plural “CDRs”, se refieren a una región determinante de la complementariedad (CDR) de las que tres constituyen el carácter de unión de una región variable de la cadena ligera (CDRL1, CDRL2 y CDRL3) y tres constituyen el carácter de unión de una región variable de cadena pesada (CDRH1, CDRH2 y CDRH3). Las CDRs contribuyen a la actividad funcional de una molécula de anticuerpo y están separadas por secuencias de aminoácidos que comprenden regiones de andamiaje o estructurales. Los límites y longitudes de CDR respecto a su definición exacta se someten a sistemas de clasificación y numeración diferentes. Las CDRs pueden por lo tanto citarse por las definiciones de Kabat, Chothia, de contacto o cualquier otra definición de límite, incluyendo el sistema de numeración descrito en la presente memoria. A pesar de los diferentes límites, cada uno de estos sistemas tiene algún grado de solapamiento en lo que constituye las denominadas “regiones hipervariables” en las secuencias variables. Las definiciones de CDR según estos sistemas pueden diferir por lo tanto en longitud y áreas limítrofes con respecto a la región estructural adyacente. Véase por ejemplo Kabat, Chothia, y/o MacCallum (Kabat et al., loc. cit.; Chothia et al., J. Mol. Biol, 1987, 196:901; y MacCallum et al., J. Mol. Biol, 1996, 262:732). Sin embargo, se prefiere la numeración de acuerdo con el denominado sistema Kabat. La CDR3 de la cadena ligera y, particularmente, la CDR3 de la cadena pesada pueden constituir los determinantes más importantes en la unión al antígeno en las regiones variables de cadena ligera y pesada. En algunos constructos de anticuerpo, la CDR3 de cadena pesada parece constituir el área principal de contacto entre el antígeno y el anticuerpo. Pueden usarse esquemas de selección in vitro en que se varía la CDR3 sola para variar las propiedades de unión de un anticuerpo o determinar que residuos contribuyen a la unión de un antígeno.

“Que consiste esencialmente en” significa que la secuencia de aminoácidos puede variar en aproximadamente 1, 2, ^{3, 4, 5,}6^{, 7,}8^{, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15% respecto a la secuencia SEQ ID NO: enumerada y que aún retiene actividad}biológica, como se describe en la presente memoria.

En algunas realizaciones, los constructos de anticuerpo de la invención son proteínas aisladas o proteínas esencialmente puras. Una proteína “aislada” no está acompañada por al menos algo del material con el que normalmente está asociada en su estado natural, por ejemplo que constituye al menos aproximadamente 5%, o al menos aproximadamente 50% en peso de la proteína total en una muestra dada. Se entiende que la proteína aislada puede constituir del 5 al 99,9% en peso del contenido de proteína total dependiendo de las circunstancias. Por ejemplo, la proteína puede prepararse a una concentración significativamente mayor mediante el uso de un promotor inducible o promotor de alta expresión, de manera que la proteína se prepara a niveles de concentración aumentados. La definición incluye la producción de una proteína de unión al antígeno en una amplia variedad de organismos y/o células huésped que se conocen en la técnica.

Para secuencias de aminoácidos, la identidad y/o similitud de secuencia se determina usando técnicas estándar conocidas en la técnica, que incluyen, aunque no están limitadas a, el algoritmo de identidad de secuencia local de Smith y Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482, el algoritmo de alineación de identidad de secuencia de Needleman y Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48:443, la búsqueda para el método de similitud de Pearson y Lipman, 1988, Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 85:2444, implementaciones computerizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA, y TFASTA en el Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wis.), el programa de secuencia Best Fit descrito por Devereux et al., 1984, Nucl. Acid Res. 12:387-395, usando preferiblemente las configuraciones por defecto, o por inspección. Preferiblemente, el porcentaje de identidad se calcula por FastDB en base a los siguientes parámetros: penalización por malapareamiento de 1; penalización por hueco de 1; penalización por tamaño de hueco de 0,33; y penalización por unión de 30, “Current Methods in Sequence Comparison and Analysis”, Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, págs. 127 149 (1988), Alan R. Liss, Inc.

Un ejemplo de un algoritmo útil es PILEUP. PILEUP crea un alineamiento de secuencia múltiple a partir de un grupo de secuencias relacionadas usando alineamientos en parejas progresivos. Puede también representar un árbol que muestra las relaciones de agregación usadas para crear el alineamiento. PILEUP usa una simplificación del método de alineamiento progresivo de Feng y Doolittle, 1987, J. Mol. Evol. 35:351-360; el método es similar al descrito por Higgins y Sharp, 1989, CABIOS 5:151-153. Los parámetros PILEUP útiles incluyen un peso del hueco por defecto de 3,00, un peso de longitud de hueco por defecto de 0,10, y huecos finales pesados.

Otro ejemplo de un algoritmo útil es el algoritmo BLAST, descrito en: Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410; Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; y Karin et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:5873-5787. Un programa BLAST particularmente útil es el programa WU-BLAST-2 que se obtuvo de Altschul et al., 1996, Methods in Enzymology 266:460-480. WU-BLAST-2 usa varios parámetros de búsqueda, la mayoría de los cuales se ajustan a los valores por defecto. Los parámetros ajustables se ajustan con los siguientes valores: tramo de solapamiento = 1, fracción de solapamiento = 0,125, umbral de palabra (T) = II. Los parámetros HSP S y HSP S2 son valores dinámicos y se establecen por el propio programa dependiendo de la composición de la secuencia particular y la composición de la base de datos particular frente a la que se está buscando la secuencia de interés; sin embargo, los valores pueden ajustarse para aumentar la sensibilidad.

Un algoritmo útil adicional es gapped BLAST como se presenta por Altschul et al., 1993, Nucl. Acids Res. 25:3389-3402. Gapped BLAST usa las puntuaciones de sustitución BLOSUM-62; el parámetro T umbral se ajusta a 9; el método de doble mutación para desencadenar las extensiones sin huecos, carga las longitudes de hueco de k a un coste de 10+k; Xu se ajusta a 16, y Xg se ajusta a 40 para la etapa de búsqueda en la base de datos y a 67 para la etapa de producción de los algoritmos. Los alineamientos con huecos se desencadenan por una puntuación que corresponde ^{a aproximadamente}22 ^bits.

Generalmente, la homología de aminoácidos, similitud o identidad entre CDRs variantes individuales son al menos 80% con las secuencias representadas en la presente memoria, y más típicamente con homologías o identidades preferiblemente crecientes de al menos 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% y casi 100%. De manera similar, “porcentaje (%) de identidad de secuencia de ácido nucleico” con respecto a la secuencia del ácido nucleico de las proteínas de unión identificadas en la presente memoria se define como el porcentaje de residuos de nucleótido en una secuencia candidata que son idénticos a los residuos de nucleótido en la secuencia de codificación de la proteína de unión al antígeno. Un método específico utiliza el módulo BLASTN de WU-BLAST-2 ajustado a los parámetros por defecto, con tramo de solapamiento y fracción de solapamiento ajustados a 1 y 0,125, respectivamente.

Generalmente, la homología de secuencia de ácido nucleico, similitud o identidad entre las secuencias de nucleótidos que codifican las CDRs variantes individuales y las secuencias de nucleótidos representadas en la presente memoria son al menos 80%, y más típicamente con homologías o identidades preferiblemente crecientes de al menos 80%, ^{81%, 82%, 83%, 84%, 85%,}86^{%, 87%,}88^{%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99%, y casi}100^%.

Por consiguiente, una “CDR variante” es una con la homología, similitud o identidad especificadas para la CDR parental de la invención, y comparte la función biológica, que incluye, aunque no está limitada a, al menos 80%, 81%, 82%, ^{83%, 84%, 85%,}86^{%, 87%,}88^{%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de la especificidad}y/o actividad de la CDR parental.

Mientras que el sitio o región para introducir una variación de secuencia de aminoácidos está predeterminada, la mutación per se necesita no estar predeterminada. Por ejemplo, para optimizar el rendimiento de una mutación en un sitio dado, la mutagénesis aleatoria puede realizarse en el codón o región diana y las variantes de CDR de proteína de unión al antígeno expresadas pueden cribarse para la óptima combinación de la actividad deseada. Las técnicas para hacer mutaciones de sustitución en sitios predeterminados en ADN que tiene una secuencia conocida se conocen bien, por ejemplo, mutagénesis con cebador M13 y mutagénesis por PCR. El cribado de los mutantes se hace usando ensayos de actividades de proteína de unión al antígeno, tal como unión a CDH19.

El término “aminoácido” o “residuo de aminoácido” se refiere típicamente a un aminoácido que tiene su definición reconocida en la técnica tal como aminoácido seleccionado del grupo que consiste en: alanina (Ala o A); arginina (Arg o R); asparagina (Asn o N); ácido aspártico (Asp o D); cisteína (Cys o C); glutamina (Gln o Q); ácido glutámico (Glu o E); glicina (Gly o G); histidina (His o H); isoleucina (He o I); leucina (Leu o L); lisina (Lys o K); metionina (Met o M); fenilalanina (Phe o F); prolina (Pro o P); serina (Ser o S); treonina (Thr o T); triptófano (Trp o W); tirosina (Tyr o Y); y valina (Val o V), aunque pueden usarse aminoácidos modificados, sintéticos o raros como se desee. Generalmente, los aminoácidos pueden agruparse como los que tienen una cadena lateral no polar (p.ej., Ala, Cys, He, Leu, Met, Phe, Pro, Val); una cadena lateral cargada de forma negativa (p.ej., Asp, Glu); una cadena lateral cargada de forma positiva (p.ej., Arg, His, Lys); o una cadena lateral polar no cargada (p.ej., Asn, Cys, Gln, Gly, His, Met, Phe, Ser, Thr, Trp y Tyr).

El término “región hipervariable” (también conocida como “regiones determinantes de la complementariedad” o CDRs) cuando se usa en la presente memoria se refiere a los residuos de aminoácidos de un anticuerpo que están (normalmente tres o cuatro regiones cortas de variabilidad de secuencia extrema) en el dominio de la región V de una inmunoglobulina que forman el sitio de unión al antígeno y son los determinantes principales de la especificidad a antígeno. Hay al menos dos métodos para identificar los residuos de CDR: (1) Un enfoque basado en la variabilidad de secuencia de especies cruzadas (es decir, Kabat et al., loc. cit.); y (2) un enfoque basado en estudios cristalográficos de complejos antígeno-anticuerpo (Chothia, C. et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Sin embargo, en el grado en que dos técnicas de identificación de residuos definen regiones de superposición, pero no regiones idénticas, pueden combinarse para definir una CDR híbrida. Sin embargo, en general, los residuos de CDR se identifican preferiblemente de acuerdo con el denominado sistema Kabat (de numeración).

El término “región estructural” se refiere a las partes reconocidas en la técnica de una región variable de anticuerpo que existen entre las CDRs más divergentes (es decir, hipervariables). Dichas regiones estructurales se denominan típicamente como estructuras 1 a 4 (FR1, FR2, FR3 y FR4) y proporcionan un andamiaje para la presentación de las seis CDRs (tres de la cadena pesada y tres de la cadena ligera) en el espacio tridimensional, para formar una superficie de unión al antígeno.

Típicamente, las CDRs forman una estructura en bucle que puede clasificarse como una estructura canónica. El término “estructura canónica” se refiere a la conformación de cadena principal que se adopta mediante los bucles de unión al antígeno (CDR). A partir de estudios estructurales comparativos, se ha encontrado que cinco de los seis bucles de unión al antígeno tienen solo un repertorio limitado de conformaciones disponibles. Cada estructura canónica puede caracterizarse por los ángulos de torsión del esqueleto polipeptídico. Los bucles correspondientes entre anticuerpos pueden tener, por lo tanto, estructuras tridimensionales muy similares, a pesar de la alta variabilidad de secuencia de aminoácidos en la mayoría de las partes de los bucles (Chothia y Lesk, J. Mol. Biol., 1987, 196:901; Chothia et al., Nature, 1989, 342:877; Martin y Thornton, J. Mol. Biol. 1996, 263:800). Además, hay una relación entre la estructura en bucle adoptada y las secuencias de aminoácidos que la rodean. La conformación de una clase canónica particular se determina por la longitud del bucle y los residuos de aminoácidos que se sitúan en las posiciones clave en el bucle, además de en la estructura conservada (es decir, fuera del bucle). La asignación a una clase canónica particular puede hacerse por lo tanto en base a la presencia de estos residuos de aminoácido claves. El término “estructura canónica” puede también incluir consideraciones como la secuencia lineal del anticuerpo, por ejemplo, como se cataloga por Kabat (Kabat et al., loc. cit.). El esquema (sistema) de numeración Kabat es un patrón ampliamente adoptado para la numeración de los residuos de aminoácidos de un dominio variable de anticuerpo en una forma coherente y es el esquema preferido aplicado en la presente invención como se menciona también en otra parte en la presente memoria. También pueden usarse consideraciones estructurales adicionales para determinar la estructura canónica de un anticuerpo. Por ejemplo, esas diferencias no reflejadas totalmente por la numeración de Kabat pueden describirse mediante el sistema de numeración de Chothia et al. y/o revelarse por otras técnicas, por ejemplo, cristalografía y modelado computacional bi- o tridimensional. Por consiguiente, una secuencia de anticuerpo dada puede situarse en una clase canónica que permita, entre otras cosas, identificar las secuencias del chasis apropiadas (p.ej., en base a un deseo de incluir una variedad de estructuras canónicas en una biblioteca). La numeración de Kabat de las secuencias de aminoácidos de anticuerpo y consideraciones estructurales como se describe por Chothia et al., loc. cit. y sus implicaciones para la construcción de aspectos canónicos de la estructura de anticuerpo, se describen en la bibliografía.

CDR3 es típicamente la mayor fuerza de diversidad molecular en el sitio de unión a anticuerpo. H3, por ejemplo, puede ser tan corto como dos residuos de aminoácido o mayor que 26 aminoácidos. Las estructuras de subunidad y configuraciones tridimensionales de diferentes clases de inmunoglobulinas se conocen bien en la técnica. Para una revisión de la estructura de anticuerpo, véase Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, eds. Harlow et al., 1988. Un experto en la técnica reconocerá que cada estructura de subunidad, p.ej., una estructura CH, VH, CL, VL, CDR, FR, comprende fragmentos activos, p.ej., la parte de la subunidad VH, VL o CDR que se une al antígeno, es decir, el fragmento de unión al antígeno, o, p.ej., la parte de la subunidad CH que se une a y/o activa, p.ej., un receptor Fc y/o complemento. Las CDRs típicamente se refieren a las CDRs de Kabat, como se describe en Sequences of Proteins of immunological Interest, Departamento de salud y servicios sociales de EE.UU. (1991), eds. Kabat et al. Otro patrón para caracterizar el sitio de unión al antígeno se va a referir a los bucles hipervariables como se describe por Chothia. Véase, p.ej., Chothia, et al. (1987; J. Mol. Biol. 227:799-817); y Tomlinson et al., (1995) EMBO J. 14:4628-4638. Aún otro patrón es la definición de AbM usada por el software de modelado de anticuerpos AbM de Oxford Molecular. Véase, generalmente, p.ej., Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. En: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. y Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg). Las realizaciones descritas con respecto a las CDRs de Kabat pueden implementarse de forma alternativa usando relaciones similares descritas con respecto a los bucles hipervariables de Chothia o a los bucles definidos por AbM.

La secuencia de genes del anticuerpo después del montaje y la mutación somática es altamente variada, y estos ^{genes variados se estima que codifican 10}10 ^{moléculas de anticuerpo diferentes (Immunoglobulin Genes, 2a ed., eds.}Jonio et al., Academic Press, San Diego, CA, 1995). Por consiguiente, el sistema inmune proporciona un repertorio de inmunoglobulinas. El término “repertorio” se refiere a al menos una secuencia de nucleótidos derivada completamente o parcialmente de al menos una secuencia que codifica al menos una inmunoglobulina. La(s) secuencia(s) puede(n) generarse por reordenamiento in vivo de los segmentos V, D y J de cadenas pesadas, y los segmentos V y J de cadenas ligeras. De forma alternativa, la(s) secuencia(s) puede(n) generarse a partir de una célula en respuesta a que reordenamiento se da, p.ej., una estimulación in vitro. De forma alternativa, parte o todo de la(s) secuencia(s) puede(n) obtenerse por corte y pegado de ADN, síntesis de nucleótidos, mutagénesis, y otros métodos, véase, p.ej., Patente de EE.UU. 5.565.332. Un repertorio puede incluir solo una secuencia o puede incluir una pluralidad de secuencias, incluyendo unas en una colección genéticamente diversa.

El término “molécula de unión” o “constructo de anticuerpo” en el sentido de la presente descripción indica cualquier molécula capaz de unirse (específicamente) a, interactuar con o reconocer las moléculas diana CDH19 y CD3. Dichas moléculas o constructos pueden incluir partes proteínicas y partes no proteínicas (p.ej., conectores químicos o agentes de reticulado químico tales como glutaraldehído).

En el caso que se use un conector, este conector es preferiblemente de una longitud y secuencia suficiente para asegurar que cada uno de los dominios primero y segundo puede, independientemente el uno del otro, retener sus especificidades de unión diferenciales. Lo más preferiblemente y como se documenta en los ejemplos añadidos, el constructo de anticuerpo de la invención es un “constructo de anticuerpo de cadena sencilla biespecífico”, más preferiblemente un Fv de cadena sencilla biespecífica (scFv). Las moléculas de cadena sencilla biespecífica se conocen en la técnica y se describen en el documento WO 99/54440, Mack, J. Immunol. (1997), 158, 3965-3970, Mack, PNAS, (1995), 92, 7021-7025, Kufer, Cancer Immunol. Immunother., (1997), 45 193-197, Loffler, Blood (2000), ^95,6^{, 2098-2103, Brühl, Immunol., (2001), 166, 2420-2426, Kipriyanov, J. Mol. Biol., (1999), 293, 41-56.}

Los dominios variables dichos comprendidos en los constructos de anticuerpo descritos en la presente memoria pueden conectarse mediante secuencias conectoras adicionales. El término “conector peptídico” define de acuerdo con la presente invención una secuencia de aminoácidos por la que las secuencias de aminoácidos del primer dominio y el segundo dominio del constructo de anticuerpo de la invención se unen las unas con las otras. Una característica técnica esencial de dicho conector peptídico es que dicho conector peptídico no comprende ninguna actividad de polimerización. Entre los conectores peptídicos adecuados están los descritos en las Patentes de EE.UU. núms.

4.751.180 y 4.935.233 o el documento WO 88/09344. Una realización preferida de un conector peptídico se caracteriza ^{por la secuencia de aminoácidos Gly-Gly-Gly-Gly-Ser, es decir Gly}4^{Ser, o polímeros de la misma, es decir (Gly}4^Ser)x,donde x es un número entero 1 o mayor. Las características de dicho conector peptídico, que comprenden la ausencia de la promoción de estructuras secundarias se conocen en la técnica y se describen p.ej. en Dall’Acqua et al. (Biochem. (1998) 37, 9266-9273), Cheadle et al. (Mol Immunol (1992) 29, 21 -30) y Raag y Whitlow (FASEB (1995) 9(1), 73-80). Se prefieren los conectores peptídicos que además no promueven ninguna estructura secundaria. La unión de dichos dominios los unos a los otros puede proporcionarse, p.ej. por ingeniería genética, como se describe en los ejemplos. Los métodos para preparar constructos de cadena sencilla biespecífica condensados y unidos de forma operativa y que los expresan en células de mamífero o bacterias se conocen bien en la técnica (p.ej. documento WO 99/54440 o Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York, 2001).

Para los conectores peptídicos, que conectan los al menos dos dominios de unión en el constructo de anticuerpo de los conectores peptídicos de la invención se prefiere que comprendan solo un pequeño número de residuos de aminoácidos, p.ej. 12 residuos de aminoácidos o menos. Por consiguiente, se prefieren conectores peptídicos de 12, ^{11, 10, 9,}8^{, 7,}6 ^{o 5 residuos de aminoácidos. Un conector peptídico previsto con menos de 5 aminoácidos comprende}4, 3, 2 o un aminoácido(s) en donde se prefieren los conectores ricos de Gly. Un aminoácido “sencillo” particularmente preferido en el contexto de dicho “conector peptídico” es Gly. Por consiguiente, dicho conector peptídico puede consistir en el único aminoácido Gly.

El término “multiespecífico” como se usa en la presente memoria se refiere a una molécula de unión que es un constructo de anticuerpo y comprende al menos un primer y un segundo dominio de unión, en el que el primer dominio de unión es capaz de unirse a un antígeno o diana, y el segundo dominio de unión es capaz de unirse a otro antígeno o diana. Por consiguiente, los constructos de anticuerpo según la invención comprenden al menos especificidades para dos antígenos o dianas diferentes y son al menos biespecíficos. El “constructo de anticuerpo” de la invención también comprende moléculas de unión multiespecíficas tales como p.ej. moléculas de unión triespecífica, las últimas incluyendo tres dominios de unión.

También se prevé que el constructo de anticuerpo de la invención tenga, además de su función para unirse a las moléculas diana CDH19 y CD3, una función adicional. En este formato, el constructo de anticuerpo es un constructo de anticuerpo tri- o multifuncional teniendo como objetivo a células plasmáticas a través de la unión a CDH19, mediando la actividad de la célula T citotóxica a través de la unión a CD3 y proporcionando una función adicional tal como un dominio constante Fc totalmente funcional que media la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo a través del reclutamiento de células efectoras como células NK, una etiqueta (fluorescente, etc.), un agente terapéutico tal como, p.ej., una toxina o radionucleido, y/o medios para mejorar la vida media en suero, etc.

El término “dominio de unión” caracteriza en conexión con la presente invención un dominio que es capaz de unirse a/interactuar específicamente con un epítopo diana dado o un sitio diana dado en las moléculas diana CDH19 y CD3.

Los dominios de unión pueden derivarse de un donante de dominio de unión tal como por ejemplo un anticuerpo. Se prevé que un dominio de unión de la presente invención comprenda al menos dicha parte de cualquiera de los dominios de unión mencionada anteriormente que se necesita para unirse a/interactuar con un epítopo diana dado o un sitio diana dado en las moléculas diana CDH19 y CD3.

Se prevé que el dominio de unión de los donantes de dominio de unión mencionados anteriormente se caracterice por esa parte de estos donantes que es responsable de la unión a la diana respectiva, es decir, cuando esa parte se elimina del donante de dominio de unión, dicho donante pierde su capacidad de unión. “Pierde” significa una reducción de al menos 50% de la capacidad de unión cuando se compara con el donante de unión. Los métodos para mapear estos sitios de unión se conocen bien en la técnica - está por lo tanto en el conocimiento estándar del experto situar/mapear el sitio de unión de un donante de dominio de unión y, así, “derivar” dicho dominio de unión de los respectivos donantes de dominio de unión.

El término “epítopo” se refiere a un sitio en un antígeno al que se une específicamente un dominio de unión, tal como un anticuerpo o inmunoglobulina o derivado o fragmento de un anticuerpo o de una inmunoglobulina. Un “epítopo” es antigénico y por consiguiente el término epítopo se denomina también a veces en la presente memoria como “estructura antigénica” o “determinante antigénico”. Por consiguiente, el dominio de unión es un “sitio de interacción al antígeno”. Dicha unión/interacción se entiende además que define un “reconocimiento específico”. En un ejemplo, dicho dominio de unión que (específicamente) se une a/interactúa con un epítopo diana dado o un sitio diana dado en las moléculas diana CDH19 y CD3 es un anticuerpo o inmunoglobulina, y dicho dominio de unión es una región VH y/o VL de un anticuerpo o de una inmunoglobulina.

Los “epítopos” pueden formarse mediante aminoácidos contiguos o aminoácidos no contiguos yuxtapuestos mediante plegado terciario de una proteína. Un “epítopo lineal” es un epítopo donde una secuencia primaria de aminoácidos comprende el epítopo reconocido. Un epítopo lineal típicamente incluye al menos 3 o al menos 4, y más normalmente, ^{al menos 5 o al menos}6 ^{o al menos 7, por ejemplo, aproximadamente}8 ^{a aproximadamente 10 aminoácidos en una}única secuencia.

Un “epítopo conformacional”, en contraste con un epítopo lineal, es un epítopo en el que la secuencia primaria de los aminoácidos que comprenden el epítopo no es el único componente definitorio del epítopo reconocido (p.ej., un epítopo en el que la secuencia primaria de aminoácidos no se reconoce necesariamente por el dominio de unión). Típicamente un epítopo conformacional comprende un número aumentado de aminoácidos respecto a un epítopo lineal. Con respecto al reconocimiento de epítopos conformacionales, el dominio de unión reconoce una estructura tridimensional del antígeno, preferiblemente un péptido o proteína o fragmento de los mismos (en el contexto de la presente invención, el antígeno para uno de los dominios de unión está comprendido en la proteína CDH19). Por ejemplo, cuando una molécula de proteína se pliega para formar una estructura tridimensional, ciertos aminoácidos y/o el esqueleto polipeptídico que forma el epítopo conformacional se queda yuxtapuesto permitiendo al anticuerpo reconocer al epítopo. Los métodos de determinación de la conformación de epítopos incluyen, aunque no están limitados a, cristalografía de rayos X, espectroscopia de resonancia magnética nuclear bi-dimensional (2D-RMN) y marcado de espín dirigido al sitio y espectroscopia de resonancia paramagnética de electrones (RPE). Además, los ejemplos proporcionados describen un método adicional para caracterizar un dominio de unión dado por medio de agrupación, que incluye una prueba si el dominio de unión dado se une a una o más agrupación(ones) de epítopo(s) de una proteína dada, en particular CDH19.

Como se usa en la presente memoria, el término “agrupación de epítopos” indica la totalidad de epítopos que caen en un tramo contiguo definido de un antígeno. Una agrupación de epítopos puede comprender uno, dos o más epítopos. El concepto de agrupación de epítopos se usa además en la caracterización de las características de los constructos de anticuerpo de la invención.

Los términos “(capaz de) unirse a”, “reconocer específicamente”, “dirigido a” y “que reacciona con” significan de acuerdo con esta invención que un dominio de unión es capaz de interactuar específicamente con uno o más, preferiblemente al menos dos, más preferiblemente al menos tres y lo más preferiblemente al menos cuatro aminoácidos de un epítopo.

Como se usa en la presente memoria, los términos “que interactúa específicamente”, “que se une específicamente” o “se une(n) específicamente” significan que un dominio de unión muestra afinidad apreciable durante una proteína o antígeno particular y, generalmente, no muestra reactividad significativa con proteínas o antígenos distintos de CDH19 ^{o CD3. “Afinidad apreciable” incluye la unión con una afinidad de aproximadamente 10}-6 ^{M (KD) o más fuerte. Preferiblemente, la unión se considera específica cuando la afinidad de unión es aproximadamente 10}-12 ^{a 10}-8 ^{M, 10}12 ^{a 10}-9 ^{M, 10}-12 ^{a 10}-10 ^{M, 10}-11 ^{a 10}-8 ^{M, preferiblemente de aproximadamente 10}-11 ^{a 10}-9 ^{M. Si un dominio de unión}reacciona específicamente con o se une a una diana puede probarse fácilmente, entre otros, comparando la reacción de dicho dominio de unión con una proteína o antígeno diana con la reacción de dicho domino de unión con proteínas o antígenos distintos de CDH19 o CD3. Preferiblemente, un dominio de unión de la invención no se une esencialmente o no es capaz de unirse a proteínas o antígenos distintos de CDH19 o CD3 (es decir, el primer dominio de unión no es capaz de unirse a proteínas distintas de CDH19 y el segundo dominio de unión no es capaz de unirse a proteínas distintas de CD3).

El término “no se une esencialmente”, o “no es capaz de unirse” significa que un dominio de unión de la presente invención no se une a otra proteína o antígeno distinta de CDH19 o CD3, es decir, no muestra reactividad de más de 30%, preferiblemente no más de 20%, más preferiblemente no más de 10%, particularmente preferiblemente no más ^{de 9%,}8^{%, 7%,}6^{% o 5% con proteínas o antígenos distintos de CDH19 o c D3, por lo que la unión a CDH19 o CD3, respectivamente, se ajusta para ser}100^%.

Se cree que la unión específica se efectúa por motivos específicos en la secuencia de aminoácidos del dominio de unión y el antígeno. Por consiguiente, la unión se alcanza como un resultado de su estructura primaria, secundaria y/o terciaria además del resultado de modificaciones secundarias de dichas estructuras. La interacción específica del sitio de interacción con el antígeno con su antígeno específico puede dar por resultado una unión sencilla de dicho sitio al antígeno. Además, la interacción específica del sitio de interacción con el antígeno con su antígeno específico puede alternativamente o adicionalmente dar por resultado en el inicio de una señal, p.ej., debido a la inducción de un cambio de la conformación del antígeno, una oligomerización del antígeno, etc.

Las proteínas (que incluyen fragmentos de las mismas, preferiblemente fragmentos biológicamente activos, y péptidos, normalmente que tienen menos de 30 aminoácidos) comprenden uno o más aminoácidos acoplados los unos a los otros por medio de un enlace peptídico covalente (que da por resultado una cadena de aminoácidos). El término “polipéptido” como se usa en la presente memoria describe un grupo de moléculas, que consisten en más de 30 aminoácidos. Los polipéptidos pueden formar además multímeros tales como dímeros, trímeros y oligómeros superiores, es decir, que consisten en más de una molécula polipeptídica. Las moléculas polipeptídicas que forman dichos dímeros, trímeros, etc. pueden ser idénticos o no idénticos. Las correspondientes estructuras de orden superior de dichos multímeros se denominan, consecuentemente, homo- o heterodímeros, homo- o heterotrímeros, etc. Un ejemplo para un heteromultímero es una molécula de anticuerpo, que, en su forma que se da de forma natural, consiste en dos cadenas polipeptídicas ligeras idénticas y dos cadenas polipeptídicas pesadas idénticas. Los términos “polipéptido” y “proteína” también se refieren a polipéptidos/proteínas modificadas de forma natural en los que la modificación se efectúa p.ej., mediante modificaciones post-traduccionales como glucosilación, acetilación, fosforilación y similares. Un “polipéptido” cuando se hace referencia en la presente memoria puede también estar modificado químicamente tal como pegilado. Dichas modificaciones se conocen bien en la técnica.

“Aislado” cuando se usa para describir el constructo de anticuerpo descrito en la presente memoria, significa un constructo de anticuerpo que se ha identificado, separado y/o recuperado de un componente en su medio de producción. Preferiblemente, el constructo de anticuerpo aislado está libre de asociación con todos los demás componentes de su medio de producción. Los componentes contaminantes de su medio de producción, tal como los resultantes de células transfectadas recombinantes, son materiales que interferirían típicamente con los usos diagnósticos o terapéuticos para el polipéptido, y pueden incluir enzimas, hormonas y otros solutos proteínicos o no proteínicos. En realizaciones preferidas, el constructo de anticuerpo se purificará (1) a un grado suficiente para obtener al menos 15 residuos de la secuencia de aminoácidos N-terminal o interna usando un secuenciador de copa rotatoria, o (2) hasta homogeneidad por SDS-PAGE en condiciones no reductoras o reductoras usando azul Coomassie o, preferiblemente, tinción de plata. Normalmente, sin embargo, un anticuerpo aislado se preparará mediante al menos una etapa de purificación.

Las modificaciones de la secuencia de aminoácidos de los constructos de anticuerpo descritos en la presente memoria se contemplan. Por ejemplo, puede ser deseable mejorar la afinidad de unión y/u otras propiedades biológicas del anticuerpo. Las variantes de secuencia de aminoácidos de los constructos de anticuerpo se preparan introduciendo cambios de nucleótidos apropiados en el ácido nucleico de constructos de anticuerpo, o por síntesis peptídica.

Dichas modificaciones incluyen, por ejemplo, supresiones de, y/o inserciones en, y/o sustituciones de, residuos en las secuencias de aminoácidos de los constructos de anticuerpo. Cualquier combinación de supresión, inserción y sustitución se hace para llegar al constructo final, con tal que el constructo final posea las características deseadas. Los cambios de aminoácidos además pueden alterar los procesos post-traduccionales de los constructos de ^{anticuerpo, tal como cambiar el número o posición de sitios de glucosilación. Preferiblemente, 1, 2, 3, 4, 5,}6^{, 7,}8^{, 9,}10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 25 aminoácidos pueden sustituirse en las regiones estructurales (FRs). Las sustituciones son preferiblemente sustituciones conservativas como se describe en la presente memoria. ^{Adicionalmente o alternativamente, 1,2, 3, 4, 5,}6^{, 7,}8^{, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 25 aminoácidos}pueden insertarse o suprimirse en cada una de las FRs.

Los constructos de anticuerpo multiespecífico de la invención comprenden las secuencias de CDR como se definen en la reivindicación 1. Cualquier constructo de anticuerpo con una modificación de dichas secuencias de CDR no se encuentra dentro de la invención.

Un método útil para la identificación de ciertos residuos o regiones de los constructos de anticuerpo que son posiciones preferidas para la mutagénesis se denomina “mutagénesis de barrido de alanina” como se describe por Cunningham y Wells en Science, 244:1081 -1085 (1989). Aquí, un residuo o grupo de residuos diana en el constructo de anticuerpo se identifica(n) (p.ej. residuos cargados tales como arg, asp, his, lys y glu) y se sustituye(n) mediante un aminoácido cargado neutro o de forma negativa (lo más preferiblemente alanina o polialanina) para afectar la interacción de los aminoácidos con el epítopo.

Esas posiciones de aminoácidos que demuestran sensibilidad funcional a las sustituciones se refinan entonces introduciendo más u otras variantes a, o para, los sitios de sustitución. Por consiguiente, mientras el sitio para introducir una variación de secuencia de aminoácidos se predetermina, la naturaleza de la mutación per se no necesita predeterminarse. Por ejemplo, para analizar el rendimiento de una mutación en un sitio dado, se realiza mutagénesis de barrido de ala o aleatoria en un codón o región diana y las variantes de constructo de anticuerpo expresadas se criban para la actividad deseada.

Preferiblemente, las inserciones de secuencia de aminoácidos incluyen fusiones de amino y/o carboxilo terminales ^{que oscilan en longitud de 1, 2, 3, 4, 5,}6^{, 7,}8^{, 9 o 10 residuos a polipéptidos que contienen un centenar o más}residuos, además de inserciones intrasecuencia de residuos de aminoácidos únicos o múltiples. Una variante de inserción del constructo de anticuerpo incluye la fusión al extremo N o C del anticuerpo a una enzima o una fusión a un polipéptido que aumenta la vida media en suero del anticuerpo.

Otro tipo de variante es una variante de sustitución de aminoácidos. Estas variantes tienen preferiblemente al menos ^{1,2, 3, 4, 5,}6^{, 7,}8^{, 9 o 10 residuos de aminoácidos en el constructo de anticuerpo sustituidos por un residuo diferente.}Se pueden contemplar alteraciones de FR en la cadena pesada y/o ligera.

Las sustituciones preferidas (o reemplazos) son sustituciones conservativas. Sin embargo, se prevé cualquier sustitución (que incluye sustitución no conservativa o uno o más de las “sustituciones ejemplares” enumeradas en la Tabla 1, posterior) siempre y cuando el constructo de anticuerpo retenga su capacidad de unirse a CDH19 por medio del primer dominio de unión y a CD3 épsilon por medio del segundo dominio de unión.

Las sustituciones conservativas se muestran en la Tabla 1 bajo el encabezamiento de “sustituciones preferidas”. Si dichas sustituciones dan por resultado un cambio en la actividad biológica, entonces cambios más sustanciales, denominadas “sustituciones ejemplares” en la Tabla 1, o como se describe adicionalmente a continuación en referencia a clases de aminoácidos, pueden introducirse y los productos cribarse para una característica deseada.

Tabla 1: Sustituciones de aminoácidos

Las modificaciones sustanciales en las propiedades biológicas del constructo de anticuerpo de la presente invención se consiguen seleccionando sustituciones que difieren significativamente en su efecto en el mantenimiento de (a) la estructura del esqueleto polipeptídico en el área de la sustitución, por ejemplo, como una conformación en lámina o helicoidal, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula al sitio diana, o (c) el volumen de la cadena lateral. Los residuos ^{que se dan de forma natural se dividen en grupos basados en las propiedades comunes de la cadena lateral: (}1⁾hidrófobo: norleucina, met, ala, val, leu, ile; (2) hidrófilo neutro: cys, ser, thr; (3) ácido: asp, glu; (4) básico: asn, gin, ^{his, lys, arg; (5) residuos que influyen en la orientación de la cadena: gly, pro; y (}6^{) aromático: trp, tyr, phe.}

Las sustituciones no conservativas implicarán el intercambio de un miembro de una de estas clases por otra clase. Cualquier residuo de cisteína no implicado en el mantenimiento de la conformación apropiada del constructo de anticuerpo puede sustituirse, generalmente con serina, para mejorar la estabilidad oxidativa de la molécula y evitar el reticulado aberrante. De forma inversa, puede(n) añadirse enlace(s) de cisteína al anticuerpo para mejorar su estabilidad (particularmente donde el anticuerpo es un fragmento de anticuerpo tal como un fragmento Fv).

Un tipo particularmente preferido de variante de sustitución implica sustituir uno o más residuos de la región hipervariable de un anticuerpo parental (p.ej., un anticuerpo humanizado o humano). Generalmente, la(s) variante(s) resultante(s) seleccionadas para desarrollo adicional tendrán propiedades biológicas mejoradas respecto al anticuerpo parental a partir del que se generan. Una forma conveniente para generar dichas variantes de sustitución implica la maduración de la afinidad usando la visualización de fagos. Brevemente, varios sitios de la región hipervariable (p.ej., 6-7 sitios) se mutan para generar todas las posibles sustituciones de aminoácido en cada sitio. Las variantes de anticuerpo así generadas se representan en un modo monovalente a partir de partículas de fago filamentoso como fusiones al producto del gen III de M13 empaquetado en cada partícula. Las variantes visualizadas por fagos se criban entonces por su actividad biológica (p.ej., afinidad de unión) como se describe en la presente memoria. Para identificar los sitios de la región hipervariable candidatos para la modificación, puede realizarse la mutagénesis de barrido de alanina para identificar los residuos de la región hipervariable que contribuyen de forma significativa a la unión al antígeno. De forma alternativa, o adicionalmente, puede ser beneficioso analizar una estructura cristalina del complejo antígeno-anticuerpo para identificar los puntos de contacto entre el dominio de unión y, p.ej., CDH19 humano. Dichos residuos de contacto y residuos vecinos son candidatos para la sustitución según las técnicas elaboradas en la presente memoria. Una vez que se generan dichas variantes, el panel de variantes se somete a cribado como se describe en la presente memoria y los anticuerpos con propiedades superiores en uno o más ensayos relevantes pueden seleccionarse para el desarrollo adicional.

Otras modificaciones del constructo de anticuerpo se contemplan en la presente memoria. Por ejemplo, el constructo de anticuerpo puede unirse a uno de una variedad de polímeros no proteínicos, p.ej., polietilenglicol, polipropilenglicol, polioxialquilenos o copolímeros de polietilenglicol y polipropilenglicol. El constructo de anticuerpo puede además estar atrapado en microcápsulas preparadas, por ejemplo, mediante técnicas de coacervación o por polimerización interfacial (por ejemplo, hidroximetilcelulosa o microcápsulas de gelatina y microcápsulas de poli(metilmetacilato), respectivamente), en sistemas de distribución de fármacos coloidales (por ejemplo, liposomas, microesferas de albúmina, microemulsiones, nanopartículas y nanocápsulas), o en macroemulsiones. Dichas técnicas se describen en Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16a Edición, Oslo, A., Ed., (1980).

Los constructos de anticuerpo descritos en la presente memoria pueden formularse también como inmuno-liposomas. Un “liposoma” es una pequeña vesícula compuesta de varios tipos de lípidos, fosfolípidos y/o tensioactivos que es útil para la distribución de un fármaco a un mamífero. Los componentes del liposoma se distribuyen normalmente en una formación bicapa, similar a la disposición lipídica de las membranas biológicas. Los liposomas que contienen el anticuerpo se preparan por métodos conocidos en la técnica, tal como se describe en Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82:3688 (1985); Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 77:4030 (1980); Patentes de EE.UU. núms.

4.485.045 y 4.544.545; y el documento WO 97/38731 publicado el 23 de octubre de 1997. Se describen liposomas con tiempo de circulación mejorado en la Patente de EE.UU. núm. 5.013.556. Los liposomas particularmente útiles pueden generarse por el método de evaporación en fase inversa con una composición lipídica que comprende fosfatidilcolina, colesterol y fosfatidiletanolamina derivada de PEG (PEG-PE). Los liposomas se extruden a través de filtros de tamaño de poro definido para proporcionar liposomas con el diámetro deseado. Los fragmentos Fab’ del anticuerpo de la presente invención pueden conjugarse con los liposomas como se describe en Martin et al. J. Biol. Chem. 257:286-288 (1982) por medio de una reacción de intercambio de disulfuro. Un agente quimioterapéutico está contenido opcionalmente en el liposoma. Véase Gabizon et al. J. National Cancer Inst. 81 (19) 1484 (1989).

Cuando se usan técnicas recombinantes, el constructo de anticuerpo puede producirse intracelularmente, en el espacio periplasmático, o secretarse directamente en el medio. Si el constructo de anticuerpo se produce intracelularmente, como una primera etapa, el residuo particulado, o células huésped o fragmentos lisados, se eliminan, por ejemplo, por centrifugado o ultrafiltración. Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992) describen un procedimiento para aislar anticuerpos que se secretan al espacio periplasmático de E. coli.

La composición de constructo de anticuerpo preparada a partir de las células puede purificarse usando, por ejemplo, cromatografía de hidroxilapatita, electroforesis en gel, diálisis, y cromatografía de afinidad, siendo la cromatografía de afinidad la técnica preferida de purificación.

El término “ácido nucleico” se conoce bien por el experto e incluye ADN (tal como ADNc) y ARN (tal como ARNm). El ácido nucleico puede ser bicatenario y monocatenario, lineal y circular. Dicha molécula de ácido nucleico está comprendida preferiblemente en un vector que está comprendido preferiblemente en una célula huésped. Dicha célula huésped es, p.ej., después de la transformación o transfección con la secuencia de ácido nucleico de la invención, capaz de expresar el constructo del anticuerpo. Para este propósito la molécula de ácido nucleico se une de forma operativa con las secuencias de control.

Un vector es una molécula de ácido nucleico usada como un vehículo para transferir material genético (extraño) a una célula. El término “vector” incluye - aunque no está restringido a - plásmidos, virus, cósmidos y cromosomas artificiales. En general, los vectores diseñados comprenden un origen de replicación, un sitio de multiclonado y un marcador seleccionable. El vector en sí mismo es generalmente una secuencia de nucleótidos, normalmente una secuencia de ADN, que comprende un inserto (transgén) y una secuencia mayor que sirve como el “esqueleto” del vector. Los vectores modernos pueden incluir características adicionales además del inserto de transgén y un esqueleto: promotor, marcador genético, resistencia a antibióticos, gen reportero, secuencia de direccionamiento, etiqueta de purificación de proteína. Los vectores denominados vectores de expresión (constructos de expresión) son específicamente para la expresión del transgén en la célula diana, y tienen generalmente secuencias de control tales como una secuencia promotora que conduce la expresión del transgén. La inserción de un vector en la célula diana se denomina normalmente “transformación” para bacterias, “transfección” para células eucariotas, aunque la inserción de un vector vírico se denomina también “transducción”.

Como se usa en la presente memoria, el término “célula huésped” pretende referirse a una célula en que un ácido nucleico que codifica el constructo de anticuerpo de la invención se introduce por medio de transformación, transfección y similares. Debería entenderse que dichos términos se refieren no solo a la célula sujeto particular sino a la progenie o progenie potencial de dicha célula. Debido a que ciertas modificaciones pueden darse en generaciones sucesivas debido o a mutación o influencias ambientales, dicha progenie puede, de hecho, no ser idéntica a la célula parental, aunque aún se incluyen en el alcance del término como se usa en la presente memoria.

Como se usa en la presente memoria, el término “expresión” incluye cualquier etapa implicada en la producción de un constructo de anticuerpo de la invención que incluye, aunque no está limitado a, transcripción, modificación posttranscripcional, traducción, modificación post-traduccional, y secreción.

El término “secuencias de control” se refiere a secuencias de ADN necesarias para la expresión de una secuencia de codificación unida de forma operable en un organismo huésped particular. Las secuencias de control que son adecuadas para procariotas, por ejemplo, incluyen un promotor, opcionalmente una secuencia operadora, y un sitio de unión al ribosoma. Las células eucariotas se conocen por utilizar promotores, señales de poliadenilación y potenciadores.

Un ácido nucleico está “unido de forma operable” cuando se pone en una relación funcional con otra secuencia de ácido nucleico. Por ejemplo, el ADN para una presecuencia o líder secretor está unido de forma operable al ADN para un polipéptido si se expresa como una preproteína que participa en la secreción del polipéptido; un promotor o potenciador está unido de forma operable a una secuencia de codificación si afecta a la transcripción de la secuencia; o un sitio de unión al ribosoma está unido de forma operable a una secuencia de codificación si se posiciona de manera que facilite la traducción. Generalmente, “unido de forma operable” significa que las secuencias de ADN que están unidas son contiguas, y, en el caso de un líder secretor, contiguas y en fase de lectura. Sin embargo, los potenciadores no tienen que estar contiguos. La unión se consigue por ligado a los sitios de restricción convenientes. Si dichos sitios no existen, los adaptadores de oligonucleótidos sintéticos o conectores se usan de acuerdo con la práctica convencional.

Los términos “célula huésped”, “célula diana” o “célula recipiente” pretenden incluir cualquier célula individual o cultivo celular que pueda ser o ha/han sido recipientes para vectores o la incorporación de moléculas de ácido nucleico exógeno, polinucleótidos y/o proteínas. También se pretende incluir la progenie de una única célula, y la progenie puede no necesariamente ser completamente idéntica (en morfología o en genómica o complemento de ADN total) a la célula parental original debido a mutación natural, accidental o deliberada. Las células pueden ser procariotas o eucariotas, e incluyen aunque no están limitadas a bacterias, células de levadura, células animales y células de mamífero, p.ej., murino, rata, macaco o humano.

Las células huésped adecuadas incluyen células huésped procariotas y eucariotas que incluyen levaduras, hongos, células de insectos y células de mamífero.

El constructo de anticuerpo de la invención puede producirse en bacterias. Después de la expresión, el constructo de anticuerpo de la invención, preferiblemente el constructo de anticuerpo se aísla de la pasta de células E. coli en una fracción soluble y puede purificarse a través de, p.ej., cromatografía de afinidad y/o exclusión por tamaño. La purificación final puede realizarse de forma similar al proceso para purificar el anticuerpo expresado p.ej. en células CHO.

Además de procariotas, los microbios eucarióticos tales como hongos filamentosos o levadura son huéspedes de clonado o expresión adecuados para el constructo de anticuerpo de la invención. Saccharomyces cerevisiae, o levadura de panadero común, es el usado más habitualmente entre los microorganismos huésped eucariotas inferiores. Sin embargo, un número de otros géneros, especies y cepas están habitualmente disponibles y son útiles en la presente memoria, tal como Schizosaccharomycespombe, huéspedes Kluyveromyces tales como, p.ej., K. lactis, K. fragilis (ATCC 12424), K. bulgaricus (ATCC 16045), K. wickeramii (ATCC 24178), K. waltii (At Cc 56500), K. drosophilarum (ATCC 36906), K. thermotolerans y K. marxianus; yarrowia (documento EP 402 226); Pichia pastoris (documento EP 183 070); Candida; Trichoderma reesia (documento EP 244 234); Neurospora crassa; Schwanniomyces tal como Schwanniomyces occidentalis; y hongos filamentosos tales como, p.ej., Neurospora, Penicillium, Tolypocladium y huéspedes Aspergillus tal como A. nidulans y A. niger.

Células huésped adecuadas para la expresión del constructo de anticuerpo glucosilado de la invención, preferiblemente constructos de anticuerpo derivado de anticuerpo se derivan de organismos multicelulares. Ejemplos de células de invertebrados incluyen células vegetales y de insectos. Se han identificado numerosas cepas baculovirales y variantes y células huésped de insectos permisivos correspondientes de huéspedes tales como Spodoptera frugiperda (oruga), Aedes aegypti (mosquito), Aedes albopictus (mosquito), Drosophila melanogaster (mosca de la fruta), y Bombyx mori. Una variedad de cepas víricas para la transfección está públicamente disponible, p.ej., la variante L-1 de Autographa californica NPV y la cepa Bm-5 de Bombyx mori NPV, y dichos virus pueden usarse como el virus en la presente memoria según la presente invención, particularmente por transfección de células de Spodoptera frugiperda.

Los cultivos de células vegetales de algodón, maíz, patata, soja, petunia, tomate, Arabidopsis y tabaco pueden utilizarse también como huéspedes. Los vectores de clonado y expresión útiles en la producción de proteínas en el cultivo de células vegetales se conocen por los expertos en la técnica. Véase p.ej. Hiatt et al., Nature (1989) 342:76-78, Owen et al. (1992) Bio/Technology 10:790-794, Artsaenko et al. (1995) The Plant J 8:745-750, y Fecker et al. (1996) Plant Mol Biol 32:979-986.

Sin embargo, el mayor interés ha sido en células de vertebrados, y la propagación de células de vertebrados en cultivo (cultivo celular) se ha convertido en un procedimiento rutinario. Ejemplos de líneas celulares huésped de mamífero útiles son línea CV1 de riñón de mono transformada por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); línea de riñón embrionario humano (293 o células 293 subclonadas para el crecimiento en cultivo en suspensión, Graham et al., J. Gen. Virol.

36:59 (1977)); células renales de cría de hámster (BHK, ATCC CCL 10); células de ovario de hámster chino/-DHFR (CHO, Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); células sertoli de ratón (TM4, Mather, Biol. Reprod.

23:243-251 (1980)); células renales de mono (CVI ATCC Cc L 70); células renales de mono verde africano (VERO-76, ATCC CRL1587); células de carcinoma de cuello de útero humano (HELA, ATCC CCL 2); células renales caninas (MDCK, ATCC CCL 34), células hepáticas de rata búfalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442); células pulmonares humanas (W138, ATCC CCL 75); células hepáticas humanas (Hep G2, 1413 8065); tumor mamario de ratón (MMT 060562, ATCC CCL5 1); células TRI (Mather et al., Annals N. Y Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); células MRC 5; células FS4; y una línea de hepatoma humano (Hep G2).

Cuando se usan técnicas recombinantes, el constructo de anticuerpo de la invención puede producirse intracelularmente, en el espacio periplasmático o secretarse directamente al medio. Si el constructo de anticuerpo se produce intracelularmente, como una primera etapa, los residuos particulados, o células huésped o fragmentos lisados, se eliminan, por ejemplo, por centrifugado o ultrafiltración. Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992) describen un procedimiento para aislar anticuerpos que se secretan al espacio periplasmático de E. coli. Brevemente, la pasta celular se descongela en presencia de acetato sódico (pH 3,5), EDTA, y fenilmetilsulfonilfluoruro (PMSF) durante aproximadamente 30 min. Los residuos celulares pueden eliminarse por centrifugado. Cuando el anticuerpo se secreta en el medio, los sobrenadantes de dichos sistemas de expresión se concentran generalmente primero usando un filtro de concentración de proteína disponible comercialmente, por ejemplo, una unidad de ultrafiltración Amicon o Milipore Pellicon. Un inhibidor de proteasa tal como PMSF puede incluirse en cualquiera de las etapas anteriores para inhibir la proteólisis y pueden incluirse antibióticos para evitar el crecimiento de contaminantes accidentales.

El constructo de anticuerpo de la invención preparado a partir de células huésped puede purificarse usando, por ejemplo, cromatografía de hidroxilapatita, electroforesis en gel, diálisis y cromatografía de afinidad, siendo la cromatografía de afinidad la técnica preferida de purificación.

La matriz a la que se une el ligando de afinidad es lo más habitualmente agarosa, aunque otras matrices están disponibles. Las matrices mecánicamente estables tales como cristal de poro controlado o poli(estirenodivinil)benceno permiten caudales más rápidos y tiempos de procesado más cortos que los que pueden conseguirse con agarosa. Cuando el constructo de anticuerpo de la invención comprende un domino CH3, el Bakerbond ABXMresin (J.T. Baker, Phillipsburg, NJ) es útil para la purificación. Otras técnicas para la purificación de proteína tal como fraccionamiento en una columna de intercambio iónico, precipitación en etanol, HPLC en fase inversa, cromatografía en sílice, cromatografía en heparina SEPHAROSE™ cromatografía en una resina de intercambio aniónico o catiónico (tal como una columna de ácido poliaspártico), cromato-enfocado, SDS-PAGE y precipitación de sulfato de amonio están también disponibles dependiendo del anticuerpo a recuperar.

El término “cultivo” se refiere al mantenimiento in vitro, diferenciación, crecimiento, proliferación y/o propagación de células en condiciones adecuadas en un medio.

Como se usa en la presente memoria, el término “composición farmacéutica” se refiere a una composición para la administración a un paciente, preferiblemente un paciente humano. La composición farmacéutica preferida particular de esta invención comprende el constructo de anticuerpo de la invención. Preferiblemente, la composición farmacéutica comprende formulaciones adecuadas de vehículos, estabilizantes y/o excipientes. En una realización preferida, la composición farmacéutica comprende una composición para administración parenteral, transdérmica, intraluminal, intraarterial, intratecal y/o intranasal o por inyección directa en el tejido. Se prevé en particular que dicha composición se administre a un paciente por medio de infusión o inyección. La administración de las composiciones adecuadas puede efectuarse por diferentes formas, p.ej., por administración intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular, tópica o intradérmica. En particular, la presente invención proporciona una administración ininterrumpida de la composición adecuada. Como un ejemplo no limitante, la administración ininterrumpida, es decir, continua puede realizarse mediante un pequeño sistema de bombeo llevado por el paciente para medir la entrada de agente terapéutico en el cuerpo del paciente. La composición farmacéutica que comprende el constructo de anticuerpo de la invención puede administrarse usando dichos sistemas de bombeo. Dichos sistemas de bombeo se conocen generalmente en la técnica, y normalmente dependen del cambio periódico de cartuchos que contienen el agente terapéutico a infundir. Cuando se cambia el cartucho en dicho sistema de bombeo, puede ocurrir una interrupción temporal del flujo de otra forma ininterrumpido de agente terapéutico en el cuerpo del paciente. En ese caso, la fase de administración antes de la sustitución del cartucho y la fase de administración posterior a la sustitución del cartucho deberían considerarse aún dentro del significado de los medios y métodos farmacéuticos de la invención que juntos constituyen una “administración ininterrumpida” de dicho agente terapéutico.

La administración continua o ininterrumpida de estos constructos de anticuerpo de la invención puede ser intravenosa o subcutánea por medio de un dispositivo de distribución de fluido o pequeño sistema de bombeo que incluye un mecanismo conductor de fluido para sacar el fluido de un reservorio y un mecanismo de encendido para activar el mecanismo conductor. Los sistemas de bombeo para administración subcutánea pueden incluir una aguja o una cánula para penetrar la piel de un paciente y distribuir la composición adecuada en el cuerpo del paciente. Dichos sistemas de bombeo pueden fijarse o sujetarse directamente a la piel del paciente independientemente de una vena, arteria o vaso sanguíneo, permitiendo así un contacto directo entre el sistema de bombeo y la piel del paciente. El sistema de bombeo puede sujetarse a la piel del paciente durante 24 horas hasta varios días. El sistema de bombeo puede ser de pequeño tamaño con un reservorio para pequeños volúmenes. Como un ejemplo limitante, el volumen del reservorio para la composición farmacéutica adecuada a administrar puede estar entre 0,1 y 50 ml.

La administración continua puede ser transdérmica por medio de un parche puesto en la piel y sustituido en intervalos. Un experto en la técnica está al tanto de sistemas de parche para la distribución de fármacos adecuados para este propósito. Es digno de mención que la administración transdérmica está especialmente dispuesta para la administración ininterrumpida, ya que el intercambio de un primer parche agotado puede conseguirse ventajosamente de forma simultánea con la colocación de un segundo parche nuevo, por ejemplo en la superficie de la piel inmediatamente adyacente al primer parche agotado e inmediatamente antes de la retirada del primer parche agotado. No surgen problemas de interrupción de flujo o fallo de célula de potencia.

Las composiciones inventivas pueden comprender además un vehículo farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de vehículos farmacéuticos adecuados se conocen bien en la técnica e incluyen disoluciones, p.ej. soluciones salinas tamponadas con fosfato, agua, emulsiones, tales como emulsiones aceite/agua, varios tipos de agentes humectantes, disoluciones estériles, liposomas, etc. Las composiciones que comprenden dichos vehículos pueden formularse por métodos convencionales bien conocidos. Las formulaciones pueden comprender carbohidratos, disoluciones tampón, aminoácidos y/o tensioactivos. Los carbohidratos pueden ser azúcares no reductores, preferiblemente trehalosa, sacarosa, octasulfato, sorbitol o xilitol. En general, como se usa en la presente memoria, “vehículo farmacéuticamente aceptable” significa cualquiera y todos los disolventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardantes de la absorción, compatibles con la administración farmacéutica. El uso de dichos medios y agentes para sustancias farmacéuticamente activas se conoce bien en la técnica. Los vehículos, excipientes o estabilizantes aceptables son no tóxicos para los receptores a las dosis y concentraciones empleadas e incluyen: agentes de tamponamiento adicionales; conservantes; co-disolventes; antioxidantes, que incluyen ácido ascórbico y metionina; agentes quelantes tal como EDTA; complejos metálicos (p.ej., complejos de Znproteína); polímeros biodegradables, tales como poliésteres; contraiones formadores de sal, tal como sodio, alcoholes de azúcar polihídricos; aminoácidos, tal como alanina, glicina, asparagina, 2-fenilalanina y treonina; azúcares o alcoholes de azúcar, tal como trehalosa, sacarosa, octasulfato, sorbitol o xilitol estaquiosa, manosa, sorbosa, xilosa, ribosa, mioinisitosa, galactosa, lactitol, ribitol, mioinisitol, galactitol, glicerol, ciclitoles (p.ej., inositol), polietilenglicol; agentes reductores que contienen azufre, tal como glutatión, ácido tióctico, tioglicolato sódico, tioglicerol, [alfa]-monotioglicerol, y tiosulfato sódico; proteínas de bajo peso molecular, tal como albúmina sérica humana, albúmina sérica bovina, gelatina u otras inmunoglobulinas; y polímeros hidrófilos, tal como polivinilpirrolidona. Dichas formulaciones pueden usarse para administraciones continuas que pueden ser intravenosas o subcutáneas con y/o sin sistemas de bombeo. Los aminoácidos pueden ser aminoácidos cargados, preferiblemente lisina, acetato de lisina, arginina, glutamato y/o histidina. Los tensioactivos pueden ser detergentes, preferiblemente con un peso molecular de >1,2 KD y/o un poliéter, preferiblemente con un peso molecular de >3 KD. Ejemplos no limitantes para detergentes preferidos son Tween 20, Tween 40, Tween 60, Tween 80 o Tween 85. Ejemplos no limitantes para poliéteres preferidos son PEG 3000, PEG 3350, PEG 4000 o PEG 5000. Los sistemas tampón usados en la presente invención pueden tener un pH preferido de 5-9 y pueden comprender citrato, succinato, fosfato, histidina y acetato.

Las composiciones de la presente invención pueden administrarse al sujeto a una dosis adecuada que puede determinarse p.ej. por estudios de escalado de dosis mediante administración de dosis crecientes del polipéptido de la invención que muestra especificidad de especies cruzadas descrita en la presente memoria con primates que no son chimpancé, por ejemplo macacos. Como se expresa anteriormente, el constructo de anticuerpo de la invención que muestra especificidad con especies cruzadas descrito en la presente memoria puede usarse ventajosamente en forma idéntica en pruebas preclínicas en primates que no son chimpancé y como fármaco en humanos. Estas composiciones pueden además administrarse en combinación con otros fármacos proteínicos o no proteínicos. Estos fármacos pueden administrarse simultáneamente con la composición que comprende el polipéptido de la invención como se define en la presente memoria o separadamente antes o después de la administración de dicho polipéptido en intervalos y dosis definidos de forma oportuna. El régimen de dosificación se determinará por el médico que atiende y factores clínicos. Como se sabe bien en las técnicas médicas, las dosificaciones para cualquier paciente dependen de muchos factores, incluyendo la talla del paciente, área de superficie corporal, edad, el compuesto particular a administrar, sexo, tiempo y ruta de administración, salud general y otros fármacos que se estén administrando simultáneamente.

Los preparados para la administración parenteral incluyen disoluciones, suspensiones y emulsiones acuosas o no acuosas estériles. Ejemplos de disolventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tal como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Vehículos acuosos incluyen agua, disoluciones, emulsiones o suspensiones alcohólicas/acuosas, que incluyen solución salina y medios tamponados. Los vehículos parenterales incluyen disolución de cloruro sódico, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro sódico, solución de Ringer lactada, o aceites fijos. Los vehículos intravenosos incluyen reponedores de fluidos y nutrientes, reponedores de electrolitos (tal como los basados en la dextrosa de Ringer), y similares. Los conservantes y otros aditivos pueden también estar presentes tal como, por ejemplo, antimicrobianos, anti-oxidantes, agentes quelantes, gases inertes y similares. Además, la composición de la presente invención comprendería vehículos proteínicos, como, p.ej., albúmina de suero o inmunoglobulina, preferiblemente de origen humano. Se prevé que la composición de la invención comprendería, además del polipéptido de la invención definido en la presente memoria, más agentes biológicamente activos, dependiendo del uso previsto de la composición. Dichos agentes podrían ser fármacos que actúan en el sistema gastrointestinal, fármacos que actúan como citostáticos, fármacos que previenen la hiperuricemia, fármacos que inhiben las inmunoreacciones (p.ej. corticosteroides), fármacos que modulan la respuesta inflamatoria, fármacos que actúan en el sistema circulatorio y/o agentes tales como citoquinas conocidas en la técnica. Se prevé también que el constructo de anticuerpo de la presente invención se aplique en una co-terapia, es decir, en combinación con otro medicamento anti-cáncer.

La actividad biológica de la composición farmacéutica definida en la presente memoria puede determinarse por ejemplos por ensayos de citotoxicidad, como se describe en los siguientes ejemplos, en el documento WO 99/54440 o por Schlereth et al. (Cancer Immunol. Immunother. 20 (2005), 1-12). “Eficacia” o “eficacia in vivo" como se usa en la presente memoria se refiere a la respuesta a la terapia por la composición farmacéutica de la invención, usando p.ej. criterios de respuesta NCI estandarizados. El éxito o eficacia in vivo de la terapia que usa una composición farmacéutica de la invención se refiere a la efectividad de la composición para su propósito previsto, es decir, la capacidad de la composición para provocar su efecto deseado, es decir agotamiento de células patológicas, p.ej. células tumorales. La eficacia in vivo puede monitorizarse por métodos estándar establecidos para las entidades de enfermedad respectivas que incluyen, aunque no están limitadas a conteos de glóbulos blancos, diferenciales, clasificación de células activadas por fluorescencia, aspiración de médula ósea. Además, varios parámetros de química clínica específicos de la enfermedad y otros métodos estándar establecidos pueden usarse. Además, la tomografía auxiliada por ordenador, rayos X, tomografía por resonancia magnética nuclear (p.ej., para la evaluación de la respuesta basada en criterios del Instituto Nacional del Cáncer [Cheson BD, Horning SJ, Coiffier B, Shipp MA, Fisher RI, Connors JM, Lister TA, Vose J, Grillo-López A, Hagenbeek A, Cabanillas F, Klippensten D, Hiddemann W, Castellino R, Harris NL, Armitage JO, Carter W, Hoppe R, Canellos GP. Report of an International workshop to standarize response criteria for non-Hodgkin’s lymphomas. Grupo de trabajo internacional patrocinado por NCI. J. Clin Oncol. Abril de 1999; 17(4):1244]), barrido de tomografía de emisión de positrones, conteos de glóbulos blancos, diferenciales, clasificación de células activadas por fluorescencia, aspiración de médula ósea, biopsias/histologías del nódulo linfático, y varios parámetros de química clínica específicos de linfoma (p.ej., lactato deshidrogenasa) y otros métodos estándar establecidos pueden usarse.

Otro desafío principal en el desarrollo de fármacos tales como la composición farmacéutica de la invención es la modulación predecible de propiedades farmacocinéticas. Para este fin, un perfil farmacocinético del candidato a fármaco, es decir, un perfil de los parámetros farmacocinéticos que afectan a la capacidad de un fármaco particular para tratar una condición dada, puede establecerse. Los parámetros farmacocinéticos del fármaco que influyen la capacidad de un fármaco para tratar una cierta entidad de enfermedad incluyen aunque no están limitados a: vida media, volumen de distribución, metabolismo del primer paso hepático y el grado de unión al suero de la sangre. La eficacia de un agente farmacológico dado puede estar influida por cada uno de los parámetros mencionados anteriormente.

“Vida media” significa el tiempo donde el 50% de un fármaco administrado se elimina a través de procesos biológicos, p.ej., metabolismo, excreción, etc.

Por “metabolismo del primer paso hepático” se entiende la propensión de un fármaco a metabolizarse tras el primer contacto con el hígado, es decir, durante su primer paso a través del hígado.

“Volumen de distribución” significa el grado de retención de un fármaco a lo largo de varios compartimientos del cuerpo, como p.ej. espacios intracelulares y extracelulares, tejidos y órganos, etc. y la distribución del fármaco en estos compartimientos.

“Grado de unión al suero sanguíneo” significa la propensión de un fármaco a interactuar con y unirse a las proteínas de suero sanguíneo, tal como albúmina, que lleva a la reducción o pérdida de actividad biológica del fármaco.

Los parámetros farmacocinéticos también incluyen la biodisponibilidad, tiempo de demora (Tlag), Tmax, velocidades de absorción, más inicio y/o Cmax para una cantidad dada de fármaco administrado. “Biodisponibilidad” significa la cantidad de un fármaco en el compartimiento sanguíneo. “Tiempo de demora” significa el retraso de tiempo entre la administración del fármaco y su detección y mensurabilidad en sangre o plasma.

“Tmax” es el tiempo después del cual se alcanza la máxima concentración en sangre del fármaco, y “Cmax” es la concentración en sangre obtenida de forma máxima con un fármaco dado. El tiempo para alcanzar una concentración en sangre o tejido del fármaco que se necesita para su efecto biológico está influido por todos los parámetros. Los parámetros farmacocinéticos de anticuerpos de cadena sencilla biespecíficos que muestran especificidad por especies cruzadas, que pueden determinarse en pruebas animales preclínicas en primates que no son chimpancés como se esboza anteriormente, se describe también p.ej., en la publicación por Schlereth et al. (Cancer Immunol. Immunother.

20 (2005), 1-12).

El término “toxicidad” como se usa en la presente memoria se refiere a los efectos tóxicos de un fármaco manifestados en sucesos adversos o sucesos adversos graves. Estos sucesos secundarios se referirían a una falta de tolerabilidad del fármaco en general y/o una falta de tolerancia local después de la administración. La toxicidad podría también incluir efectos teratogénicos o carcinogénicos provocados por el fármaco.

El término “seguridad”, “seguridad in vivo" o “tolerabilidad” como se usa en la presente memoria define la administración de un fármaco sin inducir sucesos adversos graves directamente después de la administración (tolerancia local) y durante un periodo más largo de aplicación del fármaco. La “seguridad”, “seguridad in vivo” o “tolerabilidad” puede evaluarse p.ej., a intervalos regulares durante el tratamiento y periodo de seguimiento. Las medidas incluyen la evaluación clínica, p.ej., manifestaciones en el órgano, y cribado de anormalidades en laboratorio. La evaluación clínica puede realizarse y las desviaciones a los descubrimientos normales grabarse/codificarse según los estándares NCI-CTC y/o MedDRA. Las manifestaciones en los órganos pueden incluir criterios tales como alergia/inmunología, sangre/médula ósea, arritmia cardiaca, coagulación y similares, como se describe p.ej. en el Common Terminology Criteria for adverse events v3.0 (CTCAE). Los parámetros en laboratorio que pueden probarse incluyen por ejemplo hematología, química clínica, perfil de coagulación y análisis de orina y examen de los demás fluidos corporales tales como suero, plasma, fluido linfático o espinal, licor y similares. La seguridad puede por consiguiente evaluarse p.ej. por examen físico, técnicas de formación de imágenes (es decir, ultrasonidos, rayos X, escáneres CT, formación de imágenes por resonancia magnética (IRM), otras medidas con dispositivos técnicos (es decir, electrocardiogramas), signos vitales, midiendo los parámetros de laboratorio y grabando los sucesos adversos. Por ejemplo, los sucesos adversos en primates que no son chimpancés en los usos y métodos según la invención pueden examinarse mediante métodos histopatológicos y/o histoquímicos.

El término “dosis efectiva” o “dosificación efectiva” se define como una cantidad suficiente para alcanzar o al menos alcanzar parcialmente el efecto deseado. El término “dosis terapéuticamente efectiva” se define como una cantidad suficiente para curar o al menos detener parcialmente la enfermedad y sus complicaciones en un paciente que ya padece la enfermedad. Las cantidades efectivas para este uso dependerán de la gravedad de la infección y el estado general del sistema inmune del propio paciente. El término “paciente” incluye sujetos humanos y otros mamíferos que reciben un tratamiento profiláctico o terapéutico.

El término “dosis efectiva y no tóxica” como se usa en la presente memoria se refiere a una dosis tolerable de un constructo de anticuerpo inventivo que es suficientemente alto para provocar la disminución de células patológicas, eliminación del tumor, encogimiento tumoral o estabilización de la enfermedad sin o esencialmente sin efectos tóxicos principales. Dichas dosis efectivas y no tóxicas pueden determinarse p.ej. por estudios de escalado de dosis descritos en la técnica y deberían estar por debajo de la dosis que induce sucesos secundarios adversos graves (toxicidad limitante de la dosis, TLD).

Los términos anteriores están referidos también p.ej., en la Evaluación de seguridad preclínica de compuestos ^{farmacéuticos derivados de la biotecnología S}6^{; Guía tripartita armonizada ICH; reunión del Comité de dirección de}ICH el 16 de julio de 1997.

La dosis apropiada, o cantidad terapéuticamente efectiva, del constructo de anticuerpo de la invención dependerá de la condición a tratar, la gravedad de la condición, antes de la terapia, y el historial clínico del paciente y respuesta al agente terapéutico. La dosis apropiada puede ajustarse según el juicio del médico que atiende de manera que puede administrarse al paciente una vez o durante una serie de administraciones. La composición farmacéutica puede administrarse como un único agente terapéutico o en combinación con terapias adicionales tal como terapias anti cancerígenas como se necesiten.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención son particularmente útiles para la administración parenteral, es decir, de forma subcutánea, intramuscular, intravenosa, intra-articular y/o intra-sinovial. La administración parenteral puede ser mediante una inyección de bolo o infusión continua.

Si la composición farmacéutica se ha liofilizado, el material liofilizado se reconstituye primero en un líquido apropiado antes de la administración. El material liofilizado puede reconstituirse en, p.ej., agua bacteriostática para la inyección (BWFI), solución salina fisiológica, solución salina tamponada con fosfato (PBS), o la misma formulación en que la proteína ha estado antes de la liofilización.

En un análisis interno de los datos de expresión de ARNm patentado se ha encontrado sorprendentemente que la expresión de CDH19 se eleva tanto en tumores de melanoma primarios como metastáticos en comparación con tejidos normales, no transformados. El análisis interno también confirmó que la expresión de CDH19 en tejidos normales está limitada a fibras nerviosas y ganglios nerviosos periféricos derivados de la cresta neural. La expresión de CDH19 diferencial en tejidos normales y tumorales hace a esta proteína atractiva para los compuestos terapéuticos dirigidos a la superficie celular. Aunque CDH19 se trató previamente como un marcador como parte de largas listas de marcadores asociados con algunos tipos de cáncer (véase p.ej., documento WO2009/055937) o enfermedad de Parkinson (véase p.ej. el documento WO2005/067391), nunca se trató CDH19 como un marcador de pronóstico o una diana de fármaco en conexión con tumores de melanoma.

Como se afirma anteriormente, la presente invención proporciona un constructo anticuerpo multiespecífico aislado que comprende un primer dominio de unión humano capaz de unirse a CDH19 humano en la superficie de una célula diana y un segundo dominio capaz de unión a CD3 humano en la superficie de una célula T como se define en las reivindicaciones.

El “dominio extracelular CDH19” o “ECD de CDH19” se refiere a una forma de CDH19 que está esencialmente libre de dominios transmembrana y citoplasmáticos de CDH19. Se entenderá por el experto que el dominio transmembrana identificado por el polipéptido CDH19 de la presente invención se identifica de acuerdo con los criterios empleados de forma rutinaria en la técnica para identificar ese tipo de dominio hidrofóbico. Los límites exactos de un dominio transmembrana pueden variar pero lo más probablemente por no más de aproximadamente 5 aminoácidos en cualquier extremo del dominio específicamente mencionado en la presente memoria. Un ECD de CDH19 humano preferido se muestra en SEQ ID NO:948. En este contexto se entiende que la ECD de CDH19 representa la parte de CDH19 en la superficie de una célula diana.

El complejo receptor CD3 de célula T es un complejo de proteína y está compuesto por cuatro cadenas distintas. En mamíferos, el complejo contiene una cadena CD3^y, una cadena CD35 y dos cadenas CD3s (épsilon). Estas cadenas se asocian con una molécula conocida como el receptor de célula T (TCR) y la cadena Z para generar una señal de activación en los linfocitos T.

La lisis redirigida de células diana por medio del reclutamiento de células T por un constructo de anticuerpo multiespecífico, al menos biespecífico, implica la formación de sinapsis citolíticas y distribución de perforina y granzimas. Las células T unidas son capaces de lisis de células diana en serie, y no están afectadas por mecanismos de escape inmune que interfieren con el procesado y presentación de antígeno peptídico, o diferenciación de células T clonales; véase, por ejemplo, el documento WO 2007/042261.

La afinidad del primer dominio de unión para CDH19 humano es preferiblemente <15 nM, más preferiblemente <10 nM, incluso más preferiblemente <5 nM, incluso más preferiblemente <1 nM, incluso más preferiblemente <0,5 nM, incluso más preferiblemente <0,1 nM, y lo más preferiblemente <0,05 nM. La afinidad del primer dominio de unión para CDH19 de macaco es preferiblemente <15 nM, más preferiblemente <10 nM, incluso más preferiblemente <5 nM, incluso más preferiblemente <1 nM, incluso más preferiblemente <0,5 nM, incluso más preferiblemente <0,1 nM, y lo más preferiblemente <0,05 nM o incluso <0,01 nM.

La afinidad puede medirse por ejemplo en un ensayo Biacore o en un ensayo Scatchard, p.ej., como se describe en los Ejemplos. El hueco de afinidad para la unión a CDH19 de macaco frente a CDH19 humano es preferiblemente [1:10-1:5] o [5:1-10:1], más preferiblemente [1:5-5:1], y lo más preferiblemente [1:2-3:1 ] o incluso [1:1-3:1]. Otros métodos para determinar la afinidad son bien conocidos por el experto.

Los anticuerpos humanos, respectivamente constructos de anticuerpo humano, evitan algunos de los problemas asociados con anticuerpos/constructos de anticuerpo que poseen regiones variables y/o constantes de murino o rata. La presencia de dichas proteínas derivadas de murino o rata puede llevar al aclaramiento rápido de los anticuerpos/constructos de anticuerpo o puede llevar a la generación de una respuesta inmune frente al anticuerpo/constructo de anticuerpo por un paciente. Para evitar la utilización de anticuerpos/constructos de anticuerpo derivados de murino o rata, pueden generarse anticuerpos humanos o completamente humanos a través de la introducción de la función de anticuerpo humano en un roedor de manera que el roedor produce anticuerpos completamente humanos.

La capacidad para clonar y reconstruir sitios humanos de tamaño de megabases en YACs e introducirlos en las líneas germinales de ratón proporciona un enfoque poderoso para elucidar los componentes funcionales de sitios muy grandes o mapeados toscamente además de generar modelos útiles de enfermedad humana. Además, la utilización de dicha tecnología para la sustitución de sitios de ratón con sus equivalentes humanos podría proporcionar percepciones únicas en la expresión y regulación de productos génicos humanos durante el desarrollo, su comunicación con otros sistemas, y su implicación en la inducción y progresión de la enfermedad.

Una aplicación práctica importante de dicha estrategia es la “humanización” del sistema inmune humoral del ratón. La introducción de sitios de inmunoglobulina (Ig) humana en ratones en que los genes de Ig endógena se han inactivado ofrece la oportunidad para estudiar los mecanismos subyacentes a la expresión programada y montaje de anticuerpos además de su papel en el desarrollo de células B. Además, dicha estrategia podría proporcionar una fuente ideal para la producción de anticuerpos monoclonales totalmente humanos (mAbs) - un peldaño importante hacia el cumplimiento de la promesa de terapia de anticuerpos en la enfermedad humana. Se espera que los anticuerpos/constructos de anticuerpo totalmente humanos minimicen las respuestas inmunogénicas y alérgicas intrínsecas a mAbs de ratón o derivadas de ratón y por consiguiente para aumentar la eficacia y seguridad de los anticuerpos/constructos de anticuerpo administrados. Se puede esperar que el uso de anticuerpos/constructos de anticuerpo totalmente humanos proporcione una ventaja sustancial en el tratamiento de enfermedades humanas crónicas y recurrentes, tales como inflamación, autoinmunidad y cáncer, que necesitan administraciones repetidas de compuesto.

Un enfoque hacia este objetivo era diseñar cepas de ratón deficientes en la producción de anticuerpo de ratón con grandes fragmentos de los sitios de Ig humana en anticipación de que dichos ratones producirían un gran repertorio de anticuerpos humanos en ausencia de anticuerpos de ratón. Los fragmentos de Ig humana grandes conservarían la gran diversidad de genes variables además de la regulación apropiada de producción y expresión de anticuerpos. Explotando la maquinaria de ratón para la diversificación y selección del anticuerpo y la carencia de tolerancia inmunológica a las proteínas humanas, el repertorio de anticuerpos humanos reproducidos en estas cepas de ratón proporcionaría anticuerpos de alta afinidad frente a cualquier antígeno de interés, que incluyen antígenos humanos. Usando la tecnología de hibridoma, podrían fácilmente producirse y seleccionarse mAbs humanos específicos del antígeno con la especificidad deseada. Esta estrategia general se demostró en conexión con nuestra generación de las primeras cepas de ratón XenoMouse, como se publicó en 1994. (Véase Green et al. Nature Genetics 7:13-21 (1994)). Las cepas XenoMouse se diseñaron con cromosomas artificiales de levadura (YACs) que contenían fragmentos de configuración de la línea germinal de tamaño de 245 kb y 190 kb del sitio de cadena pesada humana y sitio de cadena ligera kappa, respectivamente, que contenían secuencias de región variable y constante del núcleo. Id. Se probó que los YACs que contienen Ig humana eran compatibles con el sistema de ratón tanto para el reordenamiento como para la expresión de anticuerpos y eran capaces de sustituir los genes Ig de ratón inactivados. Esto se demostró por su capacidad para inducir el desarrollo de células B, para producir un repertorio humano parecido a un adulto de anticuerpos totalmente humanos, y para generar mAbs humanos específicos de antígeno. Estos resultados también sugirieron que la introducción de porciones más grandes de los sitios de Ig humana que contienen números mayores de genes V, elementos reguladores adicionales, y regiones constantes de Ig humana recapitularían sustancialmente el repertorio completo que es característico de la respuesta humoral humana a la infección e inmunización. El trabajo de Green et al. se extendió recientemente a la introducción de más de aproximadamente 80% del repertorio de anticuerpo humano a través de la introducción de fragmentos YAC de configuración de línea germinal, de tamaño megabase, de los sitios de cadena pesada humana y sitios de cadena ligera kappa, respectivamente. Véase, Méndez et al. Nature Genetics 15:146-156 (1997).

La producción de los ratones XenoMouse se trata adicionalmente y se delinea en la Patente de EE.UU. núm.

6.673.986, las Patentes de EE. UU. núms. 6.162.963, 6.150.584, 6.114.598, 6.075.181 y 5.939.598, así como las solicitudes de patente de EE. UU. subyacentes y las Patentes japonesas núms. 3068 180 B2, 3068506 B2 y 3068 ^{507 B}2^{. Véase también Méndez et al. Nature Genetics 15:146-156 (1997) y Green y Jakobovits J. Exp. Med.}1^88:483-495 (1998). Véase también la Patente europea núm. EP 0463151 B1, otorgamiento publicado el 12 de junio de 1996, Solicitud de patente internacional núm. WO 94/02602, publicado el 3 de febrero de 1994, Solicitud de patente internacional núm. WO 96/34096, publicado el 31 de octubre de 1996, documento WO 98/24893, publicado el 11 junio de 1998, documento WO 00/76310, publicado el 21 de diciembre de 2000, documento WO 03/47336.

En un enfoque alternativo, otros, incluyendo GenPharm International, Inc., han utilizado un enfoque “minisitio”. En el enfoque minisitio, un sitio Ig exógeno se imita a través de la inclusión de trozos (genes individuales) del sitio Ig. Por consiguiente, uno o más genes V.sub.H, uno o más genes D.sub.H, uno o más genes J.sub.H, una región constante mu, y una segunda región constante (preferiblemente una región constante gamma) se forman en un constructo para la inserción en un animal. Este enfoque se describe en la Patente de EE.UU. núm. 5.545.807 a Surani et al. y las Patentes de EE.UU. núms. 5.545.806, 5.625.825, 5.625.126, 5.633.425, 5.661.016, 5.770.429, 5.789.650, 5.814.318, 5.877.397, 5.874.299 y 6.255.458 cada uno de Lonberg y Kay, las Patentes de EE.UU. núms. 5.591.669 y 6.023.010 a Krimpernfort y Berns, Patentes de EE.UU. núms. 5.612.205, 5.721.367 y 5.789.215 a Berns et al., y la Patente de EE.UU. núm. 5.643.763 a Choi y Dunn. Este enfoque se describe adicionalmente en la Patente de EE. UU. de GenPharm International N.° 5.789.650, presentada el 18 de marzo de 1992, la Patente de EE. UU. N.° 5.545.806, presentada el 16 de diciembre de 1992, la Patente de EE. UU. N.° 5.661.016, presentada el 26 de abril de 1993, la Patente de EE. UU. N.° 5.814.318, presentada el 22 de julio de 1993 y la Patente de EE. UU. N.° 5.364.079, presentada el 18 de noviembre de 1993, además de las solicitudes de patente de EE. UU. subyacentes. Véase también la Patente Europea núm. 0 546 073 B1, Solicitudes de patentes internacionales núms. W o 92/03918, WO 92/22645, WO 92/22647, WO 92/22670, WO 93/12227, WO 94/00569, WO 94/25585, WO 96/14436, WO 97/13852 y WO 98/24884 y la Patente de EE.UU. núm. 5.981.175. Véase además Taylor et al., 1992, Chen et al., 1993, Tuaillon et al., 1993, Choi et al., 1993, Lonberg et al., (1994), Taylor et al., (1994), y Tuaillon et al., (1995), Fishwild et al., (1996).

Kirin ha demostrado además la generación de anticuerpos humanos a partir de ratones en que, a través de fusión de microcélula, trozos grandes de cromosomas, o cromosomas enteros, se han introducido. Véase la publicación de solicitud de patente europea núms. 773288 y 843961. Xenerex Biosciences está desarrollando una tecnología para la generación potencial de anticuerpos humanos. En esta tecnología, los ratones SCID se reconstituyen con células linfáticas humanas, p.ej., células B y/o T. Los ratones se inmunizan entonces con un antígeno y pueden generar una respuesta inmune frente al antígeno. Véanse las Patentes de EE.UU. núms. 5.476.996, 5.698.767 y 5.958.765.

Las respuestas del anticuerpo anti-ratón humano (HAMA) han llevado a la industria a preparar anticuerpos quiméricos o humanizados de otra forma. Aunque los anticuerpos quiméricos tienen una región constante humana y región variable murino, se espera que se observarán ciertas respuestas de anticuerpo anti-quimérico humano (HACA), particularmente en utilizaciones crónicas o multi-dosis del anticuerpo. Por consiguiente, sería deseable proporcionar anticuerpos totalmente humanos frente a EGFRvIII para debilitar los problemas y/o efectos de la respuesta HAMA o HACA.

La citotoxicidad mediada por los constructos de anticuerpo biespecífico CDH19/CD3 puede medirse de varias formas. ^{Las células efectoras pueden ser p.ej., células T positivas CD}8 ^{(humanas) enriquecidas estimuladas o células}mononucleares de sangre periférica (humana) no estimulada (PBMC). Si las células diana son de origen de macaco o expresan o están transfectadas con CDH19 de macaco, las células efectoras deberían ser también de origen de macaco de manera que una línea de células T de macaco, p.ej., 4119LnPx. Las células diana expresarían (al menos el dominio extracelular de) CDH19, p.ej., CDH19 humano o de macaco. Las células diana pueden ser una línea celular (tal como CHO) que está transfectada de forma estable o transitoria con CDH19, p.ej., CDH19 humano o de macaco. De forma alternativa, las células diana pueden ser una línea celular expresadora natural positiva de CDH19, tal como la línea celular de mieloma humano CHL-1 o Colo-699. Normalmente se espera que los valores de CE50 sean menores con líneas celulares diana que expresan mayores niveles de CDH19 en la superficie celular. La relación de células efectora a diana (E:T) es normalmente aproximadamente 10:1, pero también puede variar. La actividad citotóxica de constructos de anticuerpo biespecífico CDH19/CD3 puede medirse en un ensayo de liberación de cromo 51 (tiempo de incubación de aproximadamente 18 horas) o en un ensayo de citotoxicidad basado en FACS (tiempo de incubación de aproximadamente 48 horas). Las modificaciones del tiempo de incubación del ensayo (reacción citotóxica) también son posibles. Otros métodos para medir la citotoxicidad se conocen bien por el experto y comprenden ensayos MTT o MTS, ensayos basados en ATP que incluyen ensayos bioluminiscentes, el ensayo de sulforodamina B (SRB), ensayo WST, ensayo clonogénico y la tecnología ECIS.

La actividad citotóxica mediada por los constructos de anticuerpo biespecíficos CDH19/CD3 de la presente invención ^{se mide preferiblemente en un ensayo de citotoxicidad basado en la célula. Se representa por el valor de CE}50^{, que}corresponde a la concentración efectiva máxima media (concentración del constructo de anticuerpo que induce una ^{respuesta citotóxica a medio camino entre la base y el máximo). Preferiblemente, el valor CE}50 ^{de los constructos de}anticuerpo biespecíficos CDH19/CD3 es <20.000 pg/ml, más preferiblemente <5000 pg/ml, incluso más preferiblemente <1000 pg/ml, incluso más preferiblemente <500 pg/ml, incluso más preferiblemente <350 pg/ml, incluso más preferiblemente <320 pg/ml, incluso más preferiblemente <250 pg/ml, incluso más preferiblemente <100 pg/ml, incluso más preferiblemente <50 pg/ml, incluso más preferiblemente <10 pg/ml, y lo más preferiblemente <5 pg/ml.

^{Cualquiera de los valores CE}50 ^{dados anteriormente puede combinarse con cualquiera de los escenarios indicados de un ensayo de citotoxicidad basado en las células. Por ejemplo, cuando se usan las células T positivas CD}8 ^{(humanas) o una línea de células T de macaco como células efectoras, el valor CE}50 ^{del constructo de anticuerpo biespecífico}CDH19/CD3 es preferiblemente <1000 pg/ml, más preferiblemente <500 pg/ml, incluso más preferiblemente <250 pg/ml, incluso más preferiblemente <100 pg/ml, incluso más preferiblemente <50 pg/ml, incluso más preferiblemente <10 pg/ml y lo más preferiblemente <5 pg/ml. Si en este ensayo las células diana son células transfectadas CDH19 ^{(humanas o de macaco) tales como las células CHO, el valor CE}50 ^{del constructo de anticuerpo biespecífico}CDH19/CD3 es preferiblemente <150 pg/ml, más preferiblemente <100 pg/ml, incluso más preferiblemente <50 pg/ml, incluso más preferiblemente <30 pg/ml, incluso más preferiblemente <10 pg/ml y lo más preferiblemente <5 pg/ml.

^{Si las células diana son una línea celular expresadora natural positiva CDH19, entonces el valor CE}50 ^espreferiblemente <350 pg/ml, más preferiblemente <320 pg/ml, incluso más preferiblemente <250 pg/ml, incluso más preferiblemente <200 pg/ml, incluso más preferiblemente <100 pg/ml, incluso más preferiblemente <150 pg/ml, incluso más preferiblemente <100 pg/ml, y lo más preferiblemente <50 pg/ml, o inferior.

^{Cuando se usan PBMCs (humanas) como células efectoras, el valor CE}50 ^{del constructo de anticuerpo biespecífico}CDH19/CD3 es preferiblemente <1000 pg/ml, más preferiblemente <750 pg/ml, más preferiblemente <500 pg/ml, incluso más preferiblemente <350 pg/ml, incluso más preferiblemente <320 pg/ml, incluso más preferiblemente <250 pg/ml, incluso más preferiblemente <100 pg/ml, y lo más preferiblemente <50 pg/ml o menor.

La diferencia en la actividad citotóxica entre la isoforma monomérica y la dimérica de los constructos de anticuerpo biespecífico CDH19/CD3 individuales se refiere como “hueco de potencia”. Este hueco de potencia puede p.ej., ^{calcularse como la relación entre los valores CE}50 ^{de la forma monomérica y dimérica de las moléculas. Los huecos}de potencia de los constructos de anticuerpo biespecíficos CDH19/CD3 de la presente invención son preferiblemente <5, más preferiblemente <4, incluso más preferiblemente <3, incluso más preferiblemente <2 y lo más preferiblemente ^<1^.

El constructo de anticuerpo de la invención es una proteína de fusión que comprende al menos dos dominios de unión, con o sin conectores peptídicos (péptidos espaciadores). Entre los conectores peptídicos adecuados están los descritos en las Patentes de EE.UU. 4.751.180 y 4.935.233 o el documento WO 88/09344.

Otro método para preparar derivados de constructo de anticuerpo oligomérico implica usar una cremallera de leucina. Los dominios de cremallera de leucina son péptidos que promueven la oligomerización de las proteínas en que se encuentran. Las cremalleras de leucina se identificaron originalmente en varias proteínas de unión a ADN (Landschulz et al., 1988, Science 240:1759), y desde entonces se han encontrado en una variedad de diferentes proteínas. Entre las cremalleras de leucina conocidas están los péptidos que se dan de forma natural y derivados de los mismos que dimerizan o trimerizan. Ejemplos de dominios de cremallera de leucina adecuados para producir proteínas oligoméricas solubles se describen en la Solicitud PCT WO 94/10308, y la cremallera de leucina derivada de proteína D tensioactiva (SPD) pulmonar descrita en Hoppe et al., 1994, FEBS Letters 344:191. El uso de una cremallera de leucina modificada que permite la trimerización estable de una proteína heteróloga condensada a ella se describe en Fanslow et al., 1994, Semin. Immunol. 6:267-78. En un enfoque, las proteínas de fusión recombinantes que comprenden un fragmento de anticuerpo de CDH19 o derivado condensado a un péptido cremallera de leucina se expresan en células huésped adecuadas, y los fragmentos de anticuerpo de CDH19 oligoméricos solubles o derivados que forman se recuperan del sobrenadante del cultivo.

Se incluyen en el alcance de esta invención modificaciones covalentes de proteínas de unión al antígeno, y se hacen generalmente, aunque no siempre, post-traduccionalmente. Por ejemplo, varios tipos de modificaciones covalentes de la proteína de unión al antígeno se introducen en la molécula haciendo reaccionar residuos de aminoácido específicos de la proteína de unión al antígeno con un agente derivatizante orgánico que es capaz de reaccionar con cadenas laterales seleccionadas o los residuos N o C terminales.

Los residuos de cisteinilo se hacen reaccionar lo más habitualmente con a-haloacetatos (y aminas correspondientes), tal como ácido cloroacético o cloroacetamida, para dar derivados de carboximetilo o carboxiamidometilo. Los residuos de cisteinilo también se derivatizan por reacción con bromotrifluoroacetona, ácido a-bromo-p-(5-imidozoil)propiónico, fosfato de cloroacetilo, N-alquilmaleimidas, disulfuro de 3-nitro-2-piridilo, disulfuro de metil-2-piridilo, pcloromercuribenzoato, 2-cloromercuri-4-nitrofenol o cloro-7-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol.

Los residuos de histidilo se derivatizan por reacción con dietilpirocarbonato a pH 5,5-7,0 porque este agente es relativamente específico para la cadena lateral de histidilo. El bromuro de para-bromofenacilo también es útil; la reacción se realiza preferiblemente en cacodilato sódico 0,1M a pH 6,0.

Los residuos de lisinilo y amino terminal se hacen reaccionar con anhídridos succínico o de otro ácido carboxílico. La derivatización con estos agentes tiene el efecto de revertir la carga de los residuos de lisinilo. Otros reactivos adecuados para derivatizar residuos que contienen alfa-amino- incluyen imidoésteres tal como picolinimidato de metilo; fosfato de piridoxal; piridoxal; cloroborohidruro; ácido trinitrobencenosulfónico; O-metilisourea; 2,4-pentanodiona; y reacción catalizada por transaminasa con glioxilato.

Los residuos de arginilo se modifican por reacción con uno o varios reactivos convencionales, entre ellos fenilglioxal, 2,3-butanodiona, 1,2-ciclohexanodiona, y ninhidrina. La derivatización de residuos de arginina necesita que la reacción se realice en condiciones alcalinas por el alto pKa del grupo funcional guanidina. Además, estos reactivos pueden reaccionar con los grupos de lisina además del grupo épsilon-amino de arginina.

La modificación específica de residuos de tirosilo puede hacerse, con interés particular en la introducción de marcadores espectrales en residuos de tirosilo por reacción con compuestos de diazonio aromáticos o tetranitrometano. Lo más habitualmente, se usan N-acetilimidazol y tetranitrometano para formar especies O-acetiltirosilo y derivados 3-nitro, respectivamente. Los residuos tirosilo se yodan usando 125I o 131I para preparar proteínas marcadas para usar en radioinmunoensayo, siendo adecuado el método de cloramina T descrito anteriormente.

Los grupos laterales carboxilo (aspartilo o glutamilo) se modifican de forma selectiva por reacción con carbodiimidas (R’-N=C=N— R’), donde R y R’ son grupos alquilo opcionalmente diferentes, tal como 1-ciclohexil-3-(2-morfolinil-4-etil)carbodiimida o 1-etil-3-(4-azonia-4,4-dimetilpentil)carbodiimida. Además, los residuos aspartilo y glutamilo se convierten a residuos asparaginilo y gutaminilo por reacción con iones amonio.

La derivatización con agentes bifuncionales es útil para reticular las proteínas de unión al antígeno a una matriz o superficie de soporte insoluble en agua para usar en una variedad de métodos. Los agentes reticulantes usados normalmente incluyen, p.ej., 1,1-bis(diazoacetil)-2-feniletano, glutaraldehído, ésteres de N-hidroxisuccinimida, por ejemplo, ésteres con ácido 4-azidosalicílico, imidoésteres homobifuncionales, que incluyen ésteres de disuccinimidilo ^{tal como 3,3’-ditiobis(succinimidilpropionato), y maleimidas bifuncionales tales como bis-N-maleimido-1,}8^{-octano. Los}agentes derivatizantes tal como metil-3-[(p-azidofenil)ditio]propioimidato proporcionan intermedios fotoactivables que son capaces de formar retículas en presencia de luz. De forma alternativa, las matrices insolubles en agua reactivas tal como carbohidratos activos por bromuro de cianógeno y los sustratos reactivos descritos en las Patentes de EE.UU. núms. 3.969.287; 3.691.016; 4.195.128; 4.247.642; 4.229.537 y 4.330.440 se emplean para la inmovilización de proteína.

Los residuos de glutaminilo y asparaginilo se desamidan frecuentemente a los residuos glutamilo y aspartilo correspondientes, respectivamente. De forma alternativa, estos residuos se desamidan bajo condiciones suavemente ácidas. Cualquier forma de estos residuos cae dentro del alcance de esta invención.

Otras modificaciones incluyen hidroxilación de prolina y lisina, fosforilación de grupos hidroxilo de residuos serilo o treonilo, metilación de los grupos a-amino de cadenas laterales de lisina, arginina e histidina (T.E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W. H. Freeman & Co., San Francisco, 1983, págs. 79-86), acetilación de la amina N-terminal, y amidación de cualquier grupo carboxilo C-terminal.

Otro tipo de modificación covalente de la proteína de unión al antígeno incluida en el alcance de esta invención comprende alterar el patrón de glucosación de la proteína. Como se sabe en la técnica, los patrones de glucosilación pueden depender tanto de la secuencia de la proteína (p.ej., la presencia o ausencia de residuos de aminoácido de glucosilación particulares, tratada a continuación), o la célula huésped u organismo en que se produce la proteína. Los sistemas de expresión particulares se tratan a continuación.

La glucosilación de polipéptidos está típicamente unida a N o unida a O. Unida a N se refiere a la unión del resto carbohidrato a la cadena lateral de un residuo de asparagina. Las secuencias tri-peptídicas asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina, donde X es cualquier aminoácido excepto prolina, son las secuencias de reconocimiento para la unión enzimática del resto carbohidrato a la cadena lateral de asparagina. Por consiguiente, la presencia de cualquiera de estas secuencias tri-peptídicas en un polipéptido crea un sitio de glucosilación potencial. La glucosilación unida a O se refiere a la unión de uno de los azúcares N-acetilgalactosamina, galactosa o xilosa, a un ácido hidroxiamino, lo más habitualmente serina o treonina, aunque también pueden usarse 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina.

La adición de sitios de glucosilación a la proteína de unión al antígeno se consigue de forma conveniente alterando la secuencia de aminoácidos de manera que contenga una o más de las secuencias tri-peptídicas descritas anteriormente (para sitios de glucosilación unidos a N). La alteración puede hacerse también mediante la adición de, o sustitución por, uno o más residuos de serina o treonina a la secuencia de partida (para sitios de glucosilación unidos a O). Por comodidad, la secuencia de aminoácidos de la proteína de unión al antígeno se altera preferiblemente a través de cambios a nivel de ADN, particularmente mutando el ADN que codifica el polipéptido diana en bases preseleccionadas de manera que se generan codones que se traducirán en los aminoácidos deseados.

Otros medios para aumentar el número de restos carbohidrato en la proteína de unión al antígeno es por acoplamiento químico o enzimático de glucósidos a la proteína. Estos procedimientos son ventajosos en que no necesitan la producción de la proteína en una célula huésped que tiene capacidades de glucosilación para la glucosilación unida a N y O. Dependiendo del modo de acoplamiento usado, el (los) azúcar(es) puede(n) unirse a (a) arginina e histidina, (b) grupos carboxilo libres, (c) grupos sulfhidrilo libres tal como los de cisteína, (d) grupos hidroxilo libres tal como los de serina, treonina o hidroxiprolina, (e) residuos aromáticos tales como los de fenilalanina, tirosina o triptófano, o (f) el grupo amida de glutamina. Estos métodos se describen en el documento WO 87/05330 publicado el 11 de septiembre de 1987, y en Aplin y Wriston, 1981, CRC Crit. Rev. Biochem., págs. 259-306.

La eliminación de restos carbohidrato presentes en la proteína de unión al antígeno de partida puede conseguirse químicamente o enzimáticamente. La desglucosilación química necesita la exposición de la proteína al compuesto ácido trifluorometanosulfónico, o un compuesto equivalente. Este tratamiento da por resultado la escisión de la mayoría o todos los azúcares excepto el azúcar de unión (N-acetilglucosamina o N-acetilgalactosamina), mientras que deja el polipéptido intacto. La desglucosilación química se describe por Hakimuddin et al., 1987, Arch. Biochem. Biophys.

259:52 y por Edge et al., 1981, Anal. Biochem. 118:131. La escisión enzimática de restos carbohidrato en polipéptidos puede conseguirse mediante el uso de una variedad de endo- y exo-glucosidasas como se describe por Thotakura et al., 1987, Meth. Enzymol. 138:350. La glucosilación en sitios de glucosilación potenciales puede evitarse mediante el uso del compuesto tunicamicina como se describe por Duskin et al., 1982, J. Biol. Chem. 257:3105. La tunicamicina bloquea la formación de uniones proteína-N-glucósido.

Otro tipo de modificación covalente de la proteína de unión al antígeno comprende unir la proteína de unión al antígeno a varios polímeros no proteínicos, que incluyen, aunque no están limitados a, varios polioles tal como polietilenglicol, polipropilenglicol o polioxialquilenos, en la manera presentada en las Patentes de EE.UU. núms. 4.640.835; 4.496.689; 4.301.144; 4.670.417; 4.791.192 o 4.179.337. Además, como se sabe en la técnica, las sustituciones de aminoácidos pueden hacerse en varias posiciones en la proteína de unión al antígeno para facilitar la adición de polímeros tal como PEG.

En algunas realizaciones, la modificación covalente de las proteínas de unión al antígeno de la invención comprende la adición de uno o más marcadores.

El término “grupo de marcado” significa cualquier marcador detectable. Ejemplos de grupos de marcado adecuados incluyen, aunque no están limitados a, los siguientes: radioisótopos o radionucleidos (p.ej., 3H, 14C, 15N, 35S, 89Zr, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), grupos fluorescentes (p.ej., FITC, rodamina, lantánido, fósforos), grupos enzimáticos (p.ej., peroxidasa de rábano picante, p-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina), grupos quimioluminiscentes, grupos de biotinilo, o epítopos de polipéptido predeterminados reconocidos por un reportero secundario (p.ej., secuencias de pares de cremallera de leucina, sitios de unión para anticuerpos secundarios, dominios de unión a metal, etiquetas de epítopo). En algunas realizaciones, el grupo marcador se acopla con la proteína de unión al antígeno por medio de brazos espaciadores de varias longitudes para reducir el impedimento estérico potencial. Varios métodos para marcar proteínas se conocen en la técnica y pueden usarse en la realización de la presente invención.

En general, los marcadores caen dentro de una variedad de clases, dependiendo del ensayo en que se van a detectar: a) marcadores isotópicos, que pueden ser isótopos radioactivos o pesados; b) marcadores magnéticos (p.ej., partículas magnéticas); c) restos activos redox; d) tintes ópticos; grupos enzimáticos (p.ej. peroxidasa de rábano picante, p-galactosidasa, luciferasa, fosfatasa alcalina); e) grupos biotinilados; y f) epítopos de polipéptido predeterminado reconocidos por un reportero secundario (p.ej., secuencias de pares de cremallera de leucina, sitios de unión para anticuerpos secundarios, dominios de unión a metal, etiquetas de epítopo, etc.). En algunas realizaciones, el grupo marcador se acopla a la proteína de unión al antígeno por medio de brazos espaciadores de varias longitudes para reducir el impedimento estérico potencial. Varios métodos para marcar las proteínas se conocen en la técnica y pueden usarse en la realización de la presente invención.

Marcadores específicos incluyen tintes ópticos, que incluyen, aunque no están limitados a, cromóforos, fósforos y fluoróforos, siendo los últimos específicos en muchos ejemplos. Los fluoróforos pueden ser o fluoros de “molécula pequeña” o fluoros proteínicos.

Por “marcador fluorescente” se entiende cualquier molécula que puede detectarse por medio de sus propiedades fluorescentes inherentes. Marcadores fluorescentes adecuados incluyen, pero no están limitados a, fluoresceína, rodamina, tetrametilrodamina, eosina, eritrosina, cumarina, metil-cumarinas, pireno, verde malacita, estilbeno, amarillo Lucifer, azul J cascada, rojo Texas, IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC Rojo 640, Cy 5, Cy 5.5, LC rojo 705, verde Oregón, los tintes Alexa-Flúor (Alexa Flúor 350, Alexa Flúor 430, Alexa Flúor 488, Alexa Flúor 546, Alexa Flúor 568, Alexa Flúor 594, Alexa Flúor 633, Alexa Flúor 660, Alexa Flúor 680), Azul cascada, amarillo cascada y R-ficoeritrina (PE) (Molecular Probes, Eugene, OR), FITC, rodamina, y rojo Texas (Pierce, Rockford, IL), Cy5, Cy5.5, Cy7 (Amersham Life Science, Pittsburgh, PA). Tintes ópticos adecuados, que incluyen flouróforos, se describen en Molecular Probes Handbook de Richard P. Haugland.

Los marcadores fluorescentes proteínicos adecuados también incluyen, aunque no están limitados a, proteína fluorescente verde, que incluye una especie Renilla, Ptilosarcus o Aequorea de GFP (Chalfie et al., 1994, Science 263:802-805), EGFP (Clontech Laboratories, Inc., número de acceso Genbank U55762), proteína fluorescente azul (BFP, Quantum Biotechnologies, Inc. 1801 de Maisonneuve Bulevard Oeste, 8a planta, Montreal, Quebec, Canadá H3H 1J9; Stauber, 1998, Biotechniques 24:462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6:178-182), proteína fluorescente amarilla mejorada (EYFP, Clontech Laboratories, Inc.), luciferasa (Ichiki et al., 1993, J. Immunol. 150:5408-5417), p galactosidasa (Nolan et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2603-2607) y Renilla (documentos WO92/15673, WO95/07463, WO98/14605, WO98/26277, WO99/49019, Patentes de EE.UU. núms. 5292658, 5418155, 5683888, 5741668, 5777079, 5804387, 5874304, 5876995, 5925558).

El constructo de anticuerpo de la invención puede además comprender dominios adicionales, que p.ej. son útiles en el aislamiento de la molécula o están relacionados con un perfil farmacocinético adaptado de la molécula.

Los dominios útiles para el aislamiento de un constructo de anticuerpo pueden elegirse de motivos peptídicos o restos introducidos en segundo lugar, que pueden capturarse en un método de aislamiento, p.ej., una columna de aislamiento. Unas realizaciones no limitantes de dichos dominios adicionales comprenden motivos peptídicos conocidos como Myc-etiqueta, HAT-etiqueta, HA-etiqueta, TAP-etiqueta, GST-etiqueta, dominio unido a quitina (CBD-etiqueta), proteína de unión a maltosa (MBP-etiqueta), Flag-etiqueta, Strep-etiqueta y variantes de los mismos (p.ej., StrepII-etiqueta) y His-etiqueta. Todos los constructos de anticuerpo descritos en la presente memoria caracterizados por las CDRs identificadas se prefiere que comprendan un dominio His-etiqueta, que se conoce generalmente como una repetición de residuos His consecutivos en la secuencia de aminoácidos de una molécula, preferiblemente de seis residuos His.

Como se describe en el ejemplo 2 añadido un amplio número de aglutinante específico de CDH19 se ha caracterizado con respecto a características de unión identificadas y esos aglutinantes se agruparon en cinco diferentes contenedores, que se refiere a cinco diferentes subgrupos de dominios de unión específicos a CDH19. Por consiguiente, en una realización del constructo de anticuerpo de la invención el primer dominio de unión comprende una región VH que comprende CDHR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 y una región VL que comprende CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 seleccionados del grupo que consiste en:

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:124, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:125, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:126, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:292, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:293 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:294, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:130, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:131, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:132, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:298, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:299 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:300, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:136, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:137, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:138, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:304, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:305 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:306, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:142, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:143, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:144, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:310, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:311 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:312, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:148, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:149, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:150, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:316, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:317 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:318, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:166, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:167, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:168, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:334, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:335 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:336, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:124, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:125, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:915, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:292, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:293 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:294, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:124, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:125, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:915, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:292, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:293 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:928, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:124, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:125, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:915, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:292, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:293 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:929, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:166, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:167, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:168, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:334, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:335 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:336, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:166, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:167, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:168, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:334, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:335 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:942, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:166, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:167, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:168, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:334, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:335 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:943, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:148, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:149, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:150, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:316, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:317 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:318, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:148, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:149, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:150, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:316, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:317 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:937, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:148, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:149, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:150, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:316, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:317 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:938, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:148, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:149, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:919, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:316, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:317 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:938, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:142, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:143, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:144, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:310, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:311 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:935, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:142, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:143, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:918, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:310, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:311 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:935, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:142, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:143, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:918, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:310, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:311 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:936, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:136, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:137, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:138, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:304, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:305 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:933, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:136, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:137, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:917, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:304, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:305 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:934, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:130, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:131, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:132, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:298, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:299 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:930, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:130, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:131, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:916, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:298, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:299 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:931, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:130, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:131, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:916, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:298, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:299 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:932, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1009, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1010, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1011, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1012, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1013 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1014,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1022, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1023, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1024, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1025, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1026 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1027,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1035, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1036, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1037, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1038, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1039 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1040,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1074, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1075, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1076, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1077, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1078 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1079,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1100, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1101, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1102, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1103, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1104 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1105,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1113, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1114, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1115, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1116, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1117 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1118,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1243, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1244, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1245, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1246, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1247 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1248,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1256, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1257, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1258, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1259, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1260 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1261,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1269, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1270, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1271, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1272, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1273 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1274,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1282, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1283, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1284, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1285, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1286 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1287, y

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1295, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1296, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1297, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1298, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1299 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1300,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1647, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1648, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1649, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1650, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1651 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1652,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1660, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1661, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1662, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1663, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1664 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1665,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1894, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1895, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1896, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1897, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1898 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1899,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1907, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1908, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1909, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1910, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1911 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1912,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1933, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1934, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1935, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1936, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1937 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1938,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1946, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1947, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1948, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1949, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1950 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1951,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1959, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1960, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1961, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1962, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1963 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1964,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1972, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1973, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1974, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1975, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1976 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1977,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1985, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1986, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1987, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1988, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1989 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1990,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1998, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1999, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:2000, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:2001, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:2002 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:2003,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:2011, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:2012, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:2013, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:2014, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:2015 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:2016,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:2024, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:2025, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:2026, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:2027, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:2028 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:2029,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:2037, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:2038, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:2039, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:2040, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:2041 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:2042, y

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:2050, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:2051, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:2052, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:2053, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:2054 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:2055,

que caracterizan todos dominios de unión para CDH19 agrupados en el contenedor 2;

En otras construcciones de anticuerpo desveladas en el presente documento, el primer dominio de unión comprende una región VH que comprende CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 y una región V^lque comprende CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 seleccionadas del grupo que consiste en:

(a) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 52, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 53, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 54, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 220, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 221 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 222, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 82, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 83, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 84, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 250, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 251 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 252, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 82, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 83, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 84, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 250, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 251 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 927, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 82, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 83, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 909, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 250, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 251 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 927, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 52, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 53, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 54, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 220, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 221 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 926,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 52, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 53, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 904, ^cD^r-L1 como se representa en SEQ ID NO: 220, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 221 y c Dr -L3 como se representa en SEQ ID NO: 926,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1126, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1127, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1128, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1129, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1130 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1131,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1165, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1166, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1167, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1168, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1169 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1170,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1334, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1335, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1336, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1337, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1338 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1339,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1347, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1348, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1349, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1350, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1351 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1352, y CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1360 CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1361, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1362, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1363, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1364 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1365,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1425 CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1426, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1427, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1428, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1429 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1430,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1438 CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1439, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1440, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1441, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1442 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1443, y

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2167 CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 2168, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2169, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 2170, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2171 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2172,

que caracterizan todos dominios de unión para CDH19 agrupados en el contenedor 1;

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:94, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:95, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:96, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:262, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:263 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:264, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:100, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:101, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:102, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:268, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:269 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:270, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:118, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:119, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:120, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:286, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:287 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:288, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:154, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:155, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:156, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:322, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:323 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:324, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:100, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:101, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:912, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:268, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:269 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:270, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:100, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:101, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:913, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:268, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:269 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:270, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:94, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:95, <CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:910, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:262, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:263 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:264, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:94, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:95, <CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:911, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:262, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:263 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:264, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:118, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:119, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:120, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:286, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:287 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:288, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:118, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:914, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:120, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:286, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:287 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:288, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:154, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:155, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:920, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:322, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:323 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:324, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:996, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:997, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:998, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:999, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1000 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1001,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1048, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1049, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1050, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1051, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1052 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1053,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1087, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1088, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1089, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1090, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1091 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1092,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1608, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1609, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1610, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1611, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1612 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1613, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1621, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1622, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1623, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1624, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1625 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1626,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1634, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1635, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1636, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1637, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1638 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1639,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1673, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1674, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1675, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1676, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1677 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1678,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1686, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1687, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1688, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1689, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1690 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1691,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1699, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1700, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1701, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1702, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1703 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1704,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1712, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1713, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1714, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1715, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1716 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1717,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1725, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1726, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1727, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1728, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1729 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1730,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1738, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1739, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1740, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1741, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1742 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1743,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1751, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1752, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1753, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1754, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1755 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1756,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1764, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1765, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1766, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1767, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1768 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1769, y

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1920, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1921, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1922, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1923, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1924 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1925,

que caracterizan todos dominios de unión para CDH19 agrupados en el contenedor 3; y

(d) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 4, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 5, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 6, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 172, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 173 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 174, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 10, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 11, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 12, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 178, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 179 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 180, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 28, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 29, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 30, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 196, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 197 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 198, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 34, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 35, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 36, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 202, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 203 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 204, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 46, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 47, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 48, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 214, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 215 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 216, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 58, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 59, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 60, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 226, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 227 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 228, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 64, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 65, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 66, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 232, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 233 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 234, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 70, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 71, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 72, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 238, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 239 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 240, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 160, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 161, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 162, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 328, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 329 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 330, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 46, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 47, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 48, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 924, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 215 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 216, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 46, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 47, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 902, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 924, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 215 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 216, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 46, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 47, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 903, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 924, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 215 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 216, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 46, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 47, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 48, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 925, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 215 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 216, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 70, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 907, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 72, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 238, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 239 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 240, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 70, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 907, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 908, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 238, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 239 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 240, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 28, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 901, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 30, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 922, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 197 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 923, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 58, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 905, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 906, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 226, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 227 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 228, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 58, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 905, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 60, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 226, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 227 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 228, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 160, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 161, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 162, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 939, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 329 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 330, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 160, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 921, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 162, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 939, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 329 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 940, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 160, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 161, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 162, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 941, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 329 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 330, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 28, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 29, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 30, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 196, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 197 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 923, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 28, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 29, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 30, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 922, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 197 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 923, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 28, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 901, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 30, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 922, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 197 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 923, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 28, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 29, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 30, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 939, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 329 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 330,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 970, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 971, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 972, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 973, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 974 y c Dr -L3 como se representa en SEQ ID NO: 975,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1061, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1062, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1063, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1064, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1065 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1066,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1139, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1140, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1141, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1142, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1143 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1144, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1152, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1153, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1154, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1155, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1156 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1157,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1178, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1179, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1180, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1181, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1182 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1183,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1191, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1192, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1193, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1194, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1195 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1196,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1204, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1205, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1206, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1207, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1208 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1209,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1217, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1218, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1219, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1220, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1221 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1222,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1230, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1231, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1232, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1233, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1234 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1235,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1308, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1309, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1310, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1311, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1312 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1313,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1321, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1322, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1323, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1324, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1325 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1326,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1373, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1374, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1375, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1376, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1377 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1378,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1386, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1387, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1388, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1389, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1390 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1391,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1399, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1400, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1401, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1402, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1403 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1404,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1412, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1413, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1414, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1415, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1416 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1417,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1777, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1778, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1779, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1780, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1781 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1782,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1790, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1791, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1792, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1793, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1794 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1795,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1803, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1804, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1805, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1806, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1807 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1808,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1816, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1817, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1818, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1819, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1820 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1821,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1829, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1830, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1831, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1832, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1833 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1834, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1842, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1843, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1844, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1845, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1846 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1847,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1855, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1856, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1857, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1858, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1859 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1860,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1868, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1869, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1870, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1871, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1872 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1873,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1881, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1882, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1883, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1884, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1885 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1886,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2063, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 2064, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2065, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 2066, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2067 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2068,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2076, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 20 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2078, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 20 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2080 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2081,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2089, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 20 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2091, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 20 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2093 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2094,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2102, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2104, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2106 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2107,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2115, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2117, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2119 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2120,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2128, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2130, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2132 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2133,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2141, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2143, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2145 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2146,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2154, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2156, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2158 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2159,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2180, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2182, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2184 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2185,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2193, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2195, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 21 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2197 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2198, y

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2206, CDR-H2

como se representa en SEQ ID NO: 22 CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2208, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 22 CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2210 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2211

que todas caracterizan los dominios de unión para CDH19 agrupados en el contenedor 4; y

(e) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:76, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:77, CDR-^h3 como se representa en SEQ ID NO:78, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:244, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:245 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:246, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:88, ^cD^r-H2 como se representa en SEQ ID NO:89, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:90, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:256, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:257 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:258, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:106, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:107, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:108, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:274, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:275 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:276, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:112, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:113, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:114, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:280, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:281 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:282, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:106, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:107, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:108, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:274, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:275 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:276, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:983, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:984, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:985, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:986, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:987 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:988, CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1582, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1583, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1584, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1585, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1586 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1587, y

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:1595, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:1596,

CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:1597, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:1598, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:1599 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:1600,

que caracterizan todos dominios de unión para CDH19 agrupado en el contenedor 5.

En una realización adicional del constructo de anticuerpo de la invención el primer dominio de unión comprende una región VH seleccionada del grupo que consiste en regiones VH como se representa en SEQ ID NO:342,

SEQ ID NO:366 SEQ ID NO:370 SEQ ID NO:344 SEQ ID NO:372 SEQ ID NO:368 SEQ ID NO:496

0 7

9

agrupados en el contenedor 2.

En los constructos de anticuerpo adicionales desvelados en el presente documento el primer dominio de unión comprende una región VH seleccionada del grupo que consiste en las regiones VH:

(a) como se representa en SEQ ID NO: 362, SEQ ID NO: 364, SEQ ID NO: 485, SEQ ID NO: 486,

SEQ ID NO: 487, SEQ ID NO: 492, SEQ ID NO: 493, SEQ ID NO: 494, SEQ ID NO: 495, SEQ ID NO: 1133,

SEQ ID NO: 1172, SEQ ID NO: 1341, SEQ ID NO: 1354, SEQ ID NO: 1367, SEQ ID NO: 1432,

SEQ ID NO: 1445 y SEQ ID NO: 2174,

agrupados en el contenedor 1;

(c) como se representa en SEQ ID NO:338, SEQ ID NO:354, SEQ ID NO:378, SEQ ID NO:356, SEQ ID NO:476,

SEQ ID NO:477, SEQ ID NO:478, SEQ ID NO:479, SEQ ID NO:480, SEQ ID NO:481, SEQ ID NO:482,

SEQ ID NO:483, SEQ ID NO:484, SEQ ID NO:501, SEQ ID NO:502, SEQ ID NO:503, SEQ ID NO:504,

SEQ ID NO:505, SEQ ID NO:506, SEQ ID NO:517, SEQ ID NO:518, SEQ ID NO:1003, SEQ ID NO:1055,

SEQ ID NO:1094, SEQ ID NO:1615, SEQ ID NO:1628, SEQ ID NO:1641, SEQ ID NO:1680, SEQ ID NO:1693,

SEQ ID NO:1706, SEQ ID NO:1719, SEQ ID NO:1732, SEQ ID NO:1745, SEQ ID NO:1758, SEQ ID NO:1771 y

SEQ ID NO:1927,

agrupados en el contenedor 3;

(d) como se representa en SEQ ID NO: 352, SEQ ID NO: 360, SEQ ID NO: 388, SEQ ID NO: 386,

SEQ ID NO: 340, SEQ ID NO: 346, SEQ ID NO: 374, SEQ ID NO: 348, SEQ ID NO: 390, SEQ ID NO: 463,

SEQ ID NO: 464, SEQ ID NO: 465, SEQ ID NO: 466, SEQ ID NO: 467, SEQ ID NO: 468, SEQ ID NO: 469,

SEQ ID NO: 470, SEQ ID NO: 471, SEQ ID NO: 472, SEQ ID NO: 473, SEQ ID NO: 474, SEQ ID NO: 475,

SEQ ID NO: 488, SEQ ID NO: 489, SEQ ID NO: 490, SEQ ID NO: 491, SEQ ID NO: 513, SEQ ID NO: 514,

SEQ ID NO: 515, SEQ ID NO: 516, SEQ ID NO: 540, SEQ ID NO: 541, SEQ ID NO: 542, SEQ ID NO: 543,

SEQ ID NO 977, SEQ ID NO: 1068, SEQ ID NO: 1146, SEQ ID NO: 1159, SEQ ID NO: 1185,

SEQ ID NO 1198, SEQ ID NO: : 1211, SEQ ID NO: 1224, SEQ ID NO: 1237, SEQ ID NO: 1315,

SEQ ID NO 1328, SEQ ID NO: : 1380, SEQ ID NO: 1393, SEQ ID NO: 1406, SEQ ID NO: 1419,

SEQ ID NO 1469, SEQ ID NO: : 1478, SEQ ID NO: 1485, SEQ ID NO: 1494, SEQ ID NO: 1501,

SEQ ID NO 1508, SEQ ID NO: : 1519, SEQ ID NO: 1526, SEQ ID NO: 1533, SEQ ID NO: 1542,

SEQ ID NO 1549, SEQ ID NO: : 1558, SEQ ID NO: 1565, SEQ ID NO: 1784, SEQ ID NO: 1797,

SEQ ID NO : 1810, SEQ ID NO: 1823, SEQ ID NO: 1836, SEQ ID NO: 1849, SEQ ID NO: 1862, SEQ ID NO : 1875, SEQ ID NO: 1888, SEQ ID NO: 2070, SEQ ID NO: 2083, SEQ ID NO: 2096, SEQ ID NO : 2109, SEQ ID NO: 2122, SEQ ID NO: 2135, SEQ ID NO: 2148, SEQ ID NO: 2161, SEQ ID NO : 2187, SEQ ID NO: 2200 y SEQ ID NO: 2213,

agrupados en el contenedor 4; y

(e) como se representa en SEQ ID NO: 376, SEQ ID NO: 392, SEQ ID NO: 358, SEQ ID NO: 350, SEQ ID NO: 507, SEQ ID NO: 990, SEQ ID NO: 1589 y SEQ ID NO: 1602, agrupados en el contenedor 5.

En otra realización del constructo de anticuerpo de la invención el primer dominio de unión comprende una región VL seleccionada del grupo que consiste en regiones VL como se representa en

SEQ ID NO: 398, SEQ ID NO: 422, SEQ ID NO: 426, SEQ ID NO: 400, SEQ ID NO 428, SEQ ID NO: 424, SEQ ID NO: 591, SEQ ID NO: 592, SEQ ID NO: 593, SEQ ID NO: 594, SEQ ID NO 595, SEQ ID NO: 603, SEQ ID NO: 604, SEQ ID NO: 605, SEQ ID NO: 606, SEQ ID NO: 607, SEQ ID NO 614, SEQ ID NO: 615, SEQ ID NO: 616, SEQ ID NO: 617, SEQ ID NO: 618, SEQ ID NO: 619, SEQ ID NO 620, SEQ ID NO: 621, SEQ ID NO: 622, SEQ ID NO: 623, SEQ ID NO: 624, SEQ ID NO: 625, SEQ ID NO 626, SEQ ID NO: 627, SEQ ID NO: 628, SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 630, SEQ ID NO: 631, SEQ ID NO 632, SEQ ID NO: 633, SEQ ID NO: 1018, SEQ ID NO: 1031, SEQ ID NO: 1044, SEQ ID NO: 1083, SEQ ID NO: 1109, SEQ ID NO: 1122, SEQ ID NO: 1252, SEQ ID NO: 1265, SEQ ID NO: 1278, SEQ ID NO: 1291, SEQ ID NO: 1304, SEQ ID NO: 1656, SEQ ID NO: 1669, SEQ ID NO: 1903, SEQ ID NO: 1916, SEQ ID NO: 1942, SEQ ID NO: 1955, SEQ ID NO: 1968, SEQ ID NO: 1981, SEQ ID NO: 1994, SEQ ID NO: 2007, SEQ ID NO: 2020, SEQ ID NO: 2033, SEQ ID NO: 2046 y SEQ ID NO: 2059, agrupados en el contenedor 2.

En constructos de anticuerpos adicionales desvelados en el presente documento el primer dominio de unión comprende una región VL seleccionada del grupo que consiste en regiones VL:

(a) como se representa en SEQ ID NO: 418, SEQ ID NO: 420, SEQ ID NO: 580, SEQ ID NO: 581, SEQ ID NO: 582, SEQ ID NO: 587, SEQ ID NO: 588, SEQ ID NO: 589, SEQ ID NO: 590, SEQ ID NO: 1135, SEQ ID NO: 1174, SEQ ID NO: 1343, SEQ ID NO: 1356, SEQ ID NO: 1369, SEQ ID NO: 1434, SEQ ID NO: 1447 y SEQ ID NO: 2176,

agrupados en el contenedor 1;

(c) como se representa en SEQ ID NO: 394, SEQ ID NO: 410, SEQ ID NO: 434, SEQ ID NO: 412, SEQ ID NO: 571, SEQ ID NO: 572, SEQ ID NO: 573, SEQ ID NO: 574, SEQ ID NO: 575, SEQ ID NO: 576, SEQ ID NO: 577, SEQ ID NO: 578, SEQ ID NO: 579, SEQ ID NO: 596, SEQ ID NO: 597, SEQ ID NO: 598, SEQ ID NO: 599, SEQ ID NO: 600, SEQ ID NO: 601, SEQ ID NO: 612, SEQ ID NO: 613, SEQ ID NO: 1005, SEQ ID NO: 1057, SEQ ID NO: 1096, SEQ ID NO: 1617, SEQ ID NO: 1630, SEQ ID NO: 1643, SEQ ID NO: 1682, SEQ ID NO: 1695, SEQ ID NO: 1708, SEQ ID NO: 1721, SEQ ID NO: 1734, SEQ ID NO: 1747, SEQ ID NO: 1760, SEQ ID NO: 1773 y SEQ ID NO: 1929,

agrupados en el contenedor 3;

(d) como se representa en SEQ ID SEQ ID NO: 416, SEQ ID NO: 444, SEQ ID NO: 442, SEQ ID NO: 396, SEQ ID NO: 402, SEQ ID NO: 430, SEQ ID NO: 404, SEQ ID NO: 446, SEQ ID NO: 558, SEQ ID NO: 559, SEQ ID NO: 560, SEQ ID NO: 561, SEQ ID NO: 562, SEQ ID NO: 563, SEQ ID NO: 564, SEQ ID NO: 565, SEQ ID NO: 566, SEQ ID NO: 567, SEQ ID NO: 568, SEQ ID NO: 569, SEQ ID NO: 570, SEQ ID NO: 583, SEQ ID NO: 584, SEQ ID NO: 585, SEQ ID NO: 586, SEQ ID NO: 608, SEQ ID NO: 609, SEQ ID NO: 610, SEQ ID NO: 611, SEQ ID NO: 635, SEQ ID NO: 636, SEQ ID NO: 637, SEQ ID NO: 638, SEQ ID NO 979, 1070, SEQ D NO: 1148, SEQ ID NO: 1161, SEQ ID NO: 1187, SEQ ID NO 1200, SEQ ID NO 1213, SEQ ID NO: 1226, SEQ ID NO: 1239, SEQ ID NO: 1317, SEQ ID NO 1330, SEQ ID NO 1382, SEQ ID NO: 1395, SEQ ID NO: 1408, SEQ ID NO: 1421, SEQ ID NO 1471, SEQ ID NO 1480, SEQ ID NO: 1487, SEQ ID NO: 1496, SEQ ID NO: 1503, SEQ ID NO 1510, SEQ ID NO 1521, SEQ ID NO: 1528, SEQ ID NO: 1535, SEQ ID NO: 1544, SEQ ID NO 1551, SEQ ID NO 1560, SEQ ID NO: 1567, SEQ ID NO: 1786, SEQ ID NO: 1799, SEQ ID NO 1812, SEQ ID NO 1825, SEQ ID NO: 1838, SEQ ID NO: 1851, SEQ ID NO: 1864, SEQ ID NO 1877, SEQ ID NO 1890, SEQ ID NO: 2072, SEQ ID NO: 2085, SEQ ID NO: 2098, SEQ ID NO 2111, SEQ ID NO 2124, SEQ ID NO: 2137, SEQ ID NO: 2150, SEQ ID NO: 2163, SEQ ID NO 2189, SEQ ID NO: 2202 y SEQ ID NO: 2215,

agrupados en el contenedor 4; y

(e) como se representa en SEQ ID NO: 432, SEQ ID NO: 448, SEQ ID NO: 414, SEQ ID NO: 406, SEQ ID NO: 602, SEQ ID NO: 992, SEQ ID NO: 1591 y SEQ ID NO: 1604,

agrupados en el contenedor 5.

La invención proporciona además una realización del constructo de anticuerpo de la invención, en el que el primer dominio de unión comprende una región VH y una región VL seleccionada del grupo que consiste en pares de una región VH y una región VL como se representa en

SEQ ID NOs: 342+398, SEQ ID NOs: 366+422, SEQ ID NOs: 370+426, SEQ ID NOs: 344+400, SEQ ID NOs: 372+428, SEQ ID NOs: 368+424, SEQ ID NOs: 496+591, SEQ ID NOs: 497+592, SEQ ID NOs: 498+593, SEQ ID NOs: 499+594, SEQ ID NOs: 500+595, SEQ ID NOs: 508+603, SEQ ID NOs: 509+604, SEQ ID NOs: 510+605, SEQ ID NOs: 511+606, SEQ ID NOs: 512+607, SEQ ID NOs: 519+614, SEQ ID NOs: 520+615, SEQ ID NOs: 521+616, SEQ ID NOs: 522+617, SEQ ID NOs: 523+618, SEQ ID NOs: 524+619, SEQ ID NOs: 525+620, SEQ ID NOs: 526+621, SEQ ID NOs: 527+622, SEQ ID NOs: 528+623, SEQ ID NOs: 529+624, SEQ ID NOs: 530+625, SEQ ID NOs: 531+626, SEQ ID NOs: 532+627, SEQ ID NOs: 533+628, SEQ ID NOs: 534+629, SEQ ID NOs: 535+630, SEQ ID NOs: 536+631, SEQ ID NOs: 537+632, SEQ ID NOs: 538+633, SEQ ID NOs: 1016+1018, SEQ ID NOs: 1029+1031, SEQ ID NOs: 1042+1044, SEQ ID NOs: 1081+1083, SEQ ID NOs: 1107+1109, SEQ ID NOs: 1120+1122, SEQ ID NOs: 1250+1252, SEQ ID NOs: 1263+1265, SEQ ID NOs: 1276+1278, SEQ ID NOs: 1289+1291, SEQ ID NOs: 1302+1304, SEQ ID NOs: 1654+1656, SEQ ID NOs: 1667+1669, SEQ ID NOs: 1901+1903, SEQ ID NOs: 1914+1916, SEQ ID NOs: 1940+1942, SEQ ID NOs: 1953+1955, SEQ ID NOs: 1966+1968, SEQ ID NOs: 1979+1981, SEQ ID NOs: 1992+1994, SEQ ID NOs: 2005+2007, SEQ ID NOs: 2018+2020, SEQ ID NOs: 2031+2033, SEQ ID NOs: 2044+2046 y SEQ ID NOs 2057+2059, todos los pares agrupados en el contenedor 2.

En los constructos de anticuerpo adicionales desvelados en el presente documento el primer dominio de unión comprende una región VH y una región VL seleccionada del grupo que consiste en:

(1) pares de una región VH y una región VL como se representa en SEQ ID NOs: 362+418, SEQ ID NOs: 364+420, SEQ ID NOs: 485+580, SEQ ID NOs: 486+581, SEQ ID NOs: 487+582, SEQ ID NOs: 492+587, SEQ ID NOs: 493+588, SEQ ID NOs: 494+589, SEQ ID NOs: 495+590, SEQ ID NOs: 1133+1135, SEQ ID NOs: 1172+1174, SEQ ID NOs: 1341+1343, SEQ ID NOs: 1354+1356, SEQ ID NOs: 1367+1369, SEQ ID NOs: 1432+1434, SEQ ID NOs: 1445+1447 y SEQ ID NOs: 2174+2176,

todos los pares agrupados en la caja 1;

(3) pares de una región VH y una región VL como se representa en SEQ ID NOs: 338+394, SEQ ID NOs 354+410, SEQ ID NOs 378+434, SEQ ID NOs 356+412, SEQ ID NOs: 476+571, SEQ ID NOs 477+572, SEQ ID NOs 478+573, SEQ ID NOs 479+574, SEQ ID NOs: 480+575, SEQ ID NOs 481+576, SEQ ID NOs 482+577, SEQ ID NOs 483+578, SEQ ID NOs: 484+579, SEQ ID NOs 501+596, SEQ ID NOs 502+597, SEQ ID NOs 503+598, SEQ ID NOs: 504+599, SEQ ID NOs 505+600, SEQ ID NOs 506+601, SEQ ID NOs 517+612, SEQ ID NOs: 518+613, SEQ ID NOs 1003+1005, SEQ ID NOs: 1055+1057, SEQ ID NOs 1094+1096, SEQ ID NOs: 1615+1617, SEQ ID NOs 1628+1630, SEQ ID NOs: 1641+1643 SEQ ID NOs 1680+1682, SEQ ID NOs: 1693+1695, SEQ ID NOs 1706+1708, SEQ ID NOs: 1719+1721 SEQ ID NOs 1732+1734, SEQ ID NOs: 1745+1747, SEQ ID NOs 1758+1760, SEQ ID NOs: 1771+1773 y SEQ ID NOs: 1927+1929

todos los pares agrupados en la caja 3;

(4) pares de una región VH y una región VL como se representa en SEQ ID NOs : 352+408, SEQ ID NOs 360+416, SEQ ID NOs 388+444, SEQ ID NOs 386+442, SEQ ID NOs : 340+396, SEQ ID NOs 346+402, SEQ ID NOs 374+430, SEQ ID NOs 348+404, SEQ ID NOs : 390+446, SEQ ID NOs 463+558, SEQ ID NOs 464+559, SEQ ID NOs 465+560, SEQ ID NOs : 466+561, SEQ ID NOs 467+562, SEQ ID NOs 468+563, SEQ ID NOs 469+564, SEQ ID NOs : 470+565, SEQ ID NOs 471+566, SEQ ID NOs 472+567, SEQ ID NOs 473+568, SEQ ID NOs : 474+569, SEQ ID NOs 475+570, SEQ ID NOs 488+583, SEQ ID NOs 489+584, SEQ ID NOs : 490+585, SEQ ID NOs 491+586, SEQ ID NOs 513+608, SEQ ID NOs 514+609, SEQ ID NOs : 515+610, SEQ ID NOs 516+611, SEQ ID NOs 540+635, SEQ ID NOs 541+636, SEQ ID NOs : 542+637, SEQ ID NOs 543+638, SEQ ID NOs: 977+979, SEQ ID NOs: 1068+1070, SEQ ID NOs 1146+1148, SEQ ID NOs 1159+1161, SEQ ID NOs 1185+1187, SEQ ID NOs 1198+1200, SEQ ID NOs 1211+1213, SEQ ID NOs 1224+1226, SEQ ID NOs 1237+1239, SEQ ID NOs 1315+1317, SEQ ID NOs 1328+1330, SEQ ID NOs 1380,+1382 SEQ ID NOs 1393+1395, SEQ ID NOs 1406+1408, SEQ ID NOs 1419+1421, SEQ ID NOs 1469+1471, SEQ ID NOs 1478+1480, SEQ ID NOs 1485+1487, SEQ ID NOs 1494+1496, SEQ ID NOs 1501+1503, SEQ ID NOs 1508+1510, SEQ ID NOs 1519+1521, SEQ ID NOs 1526+1528, SEQ ID NOs 1533+1535, SEQ ID NOs 1542+1544, SEQ ID NOs 1549+1551, SEQ ID NOs 1558+1560, SEQ ID NOs 1565+1567, SEQ ID NOs 1784+1786, SEQ ID NOs 1797+1799, SEQ ID NOs 1810+1812, SEQ ID NOs 1823+1825, SEQ ID NOs 1836+1838, SEQ ID NOs 1849+1851, SEQ ID NOs 1862+1864, SEQ ID NOs 1875+1877, SEQ ID NOs 1888+1890, SEQ ID NOs 2070+2072, SEQ ID NOs 2083+2085, SEQ ID NOs 2096+2098, SEQ ID NOs 2109+2111, SEQ ID NOs 2122+2124, SEQ ID NOs 2135+2137, SEQ ID NOs 2148+2150, SEQ ID NOs: 2161+2163, SEQ ID NOs: 2187+2189, SEQ ID NOs: 2200+2202 y SEQ ID NOs 2213+2215,

todos los pares agrupados en la caja 4; y

(5) pares de una región VH y una región VL como se representa en SEQ ID NOs: 376+432, SEQ ID NOs: 392+448, SEQ ID NOs: 358+414, SEQ ID NOs: 350+406, SEQ ID NOs: 507+602, SEQ ID NOs: 990+992, SEQ ID NOs: 1589+1591 y SEQ ID NOs: 1602+1604,

todos los pares agrupados en la caja 5.

En una realización preferida el primer dominio de unión comprende un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en como se representa en

SEQ ID NO: 1020, SEQ ID NO: 1033, SEQ ID NO: 1046, SEQ ID NO 1085, SEQ ID NO 1111, SEQ ID NO: 1124, SEQ ID NO: 1254, SEQ ID NO: 1267, SEQ ID NO 1280, SEQ ID NO 1293, SEQ ID NO: 1306, SEQ ID NO: 1658, SEQ ID NO: 1671, SEQ ID NO 1905, SEQ ID NO 1918, SEQ ID NO: 1944, SEQ ID NO: 1957, SEQ ID NO: 1970, SEQ ID NO 1983, SEQ ID NO 1996, SEQ ID NO: 2009, SEQ ID NO : 2022, SEQ ID NO : 2035, SEQ O: 2048 y SEQ ID NO: 2061, todos los ligantes agrupados en la caja 2.

En los constructos de anticuerpo adicionales desvelados en el presente documento el primer dominio de unión comprende un aminoácido seleccionado del grupo que consiste en:

(a) como se representa en SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 1137, SEQ ID NO: 1176, SEQ ID NO: 1345, SEQ ID NO: 1358, SEQ ID NO: 1371, SEQ ID NO: 1436, SEQ ID NO: 1449 y SEQ ID NO: 2178,

todos los ligantes agrupados en la caja 1;

(c) como se representa en SEQ ID NO: 1007, SEQ ID NO: 1059, SEQ ID NO: 1098, SEQ ID NO: 1619, SEQ ID NO: 1632, SEQ ID NO: 1645, SEQ ID NO: 1684, SEQ ID NO: 1697, SEQ ID NO: 1710, SEQ ID NO: 1723, SEQ ID NO: 1736, SEQ ID NO: 1749, SEQ ID NO: 1762, SEQ ID NO: 1775 y SEQ ID NO: 1931,

todos los ligantes agrupados en la caja 3;

(d) como se representa en SEQ ID NO: 981, SEQ ID NO: 1072, SEQ ID NO: 1150, SEQ ID NO: 1163, SEQ ID NO: 1189, SEQ ID NO: 1202, SEQ ID NO: 1215, SEQ ID NO: 1228, SEQ ID NO: 1241, SEQ ID NO: 1319, SEQ ID NO: 1332, SEQ ID NO: 1384, SEQ ID NO: 1397, SEQ ID NO: 1410, SEQ ID NO: 1423, SEQ ID NO: 1473, SEQ ID NO: 1482, SEQ ID NO: 1489, SEQ ID NO: 1498, SEQ ID NO: 1505, SEQ ID NO: 1512, SEQ ID NO: 1523, SEQ ID NO: 1530, SEQ ID NO: 1537, SEQ ID NO: 1546, SEQ ID NO: 1553, SEQ ID NO: 1562, SEQ ID NO: 1569, SEQ ID NO: 1788, SEQ ID NO: 1801, SEQ ID NO: 1814, SEQ ID NO: 1827, SEQ ID NO: 1840, SEQ ID NO: 1853, SEQ ID NO: 1866, SEQ ID NO: 1879, SEQ ID NO: 1892, SEQ ID NO: 2074, SEQ ID NO: 2087, SEQ ID NO: 2100, SEQ ID NO: 2113, SEQ ID NO: 2126, SEQ ID NO: 2139, SEQ ID NO: 2152, SEQ ID NO: 2165, SEQ ID NO 2191, SEQ ID NO: 2204 y SEQ ID NO: 2217,

todos los ligantes agrupados en la caja 4; y

(e) como se representa en SEQ ID NO: 994, SEQ ID NO: 1593 y SEQ ID NO: 1606, agrupados en el contenedor 5.

En un aspecto de la invención, el segundo dominio de unión es capaz de unirse a CD3 humano y a CD3 de macaco, preferiblemente a CD3 épsilon humano y CD3 épsilon de macaco. Adicionalmente o alternativamente, el segundo dominio de unión es capaz de unirse a CD3 épsilon de Callithrixjacchus, Saguinus oedipus y/o Saimirísciureus. Según estas realizaciones, uno o varios dominios de unión del constructo de anticuerpo de la invención son preferiblemente especies cruzadas específicas para miembros del orden mamífero de primates. Los dominios de unión de CD3 específicos de especies cruzadas, por ejemplo, se describen en el documento WO 2008/119567.

Se prefiere particularmente para el constructo de anticuerpo de la presente invención que el segundo dominio de unión capaz de la unión al complejo del receptor de CD3 de células T comprende una región VL que comprende CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 seleccionados de:

(a) CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:27 del documento WO 2008/119567, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO:28 del documento WO 2008/119567 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:29 del documento WO 2008/119567;

(b) CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:117 del documento WO 2008/119567, CDR-L2 como se representa en SEQ ID N^o:118 del documento WO 2008/119567 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:119 del documento WO 2008/119567; y

(c) CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO:153 del documento WO 2008/119567, CDR-L2 como se representa en SEQ ID No :154 del documento WO 2008/119567 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO:155 del documento WO 2008/119567.

En una realización alternativamente preferida del constructo de anticuerpo de la presente invención, el segundo dominio de unión capaz de unirse al complejo receptor CD3 de la célula T comprende una región VH que comprende CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 seleccionado de:

(a) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:12 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:13 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:14 del documento WO 2008/119567;

(b) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:30 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:31 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:32 del documento WO 2008/119567;

(c) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:48 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:49 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:50 del documento WO 2008/119567;

(d) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:66 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:67 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:68 del documento WO 2008/119567;

(e) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:84 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO:85 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:86 del documento WO 2008/119567;

(f) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:102 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID N^o:103 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:104 del documento WO 2008/119567;

(g) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:120 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID N^o:121 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:122 del documento WO 2008/119567;

(h) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:138 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID N^o:139 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:140 del documento WO 2008/119567;

(i) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:156 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID N^o:157 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:158 del documento WO 2008/119567; y

(j) CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO:174 del documento WO 2008/119567, CDR-H2 como se representa en SEQ ID No :175 del documento WO 2008/119567 y CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO:176 del documento WO 2008/119567.

Se prefiere además para el constructo de anticuerpo de la presente invención que el segundo dominio de unión capaz de unirse al complejo receptor CD3 de célula T comprenda una región VL seleccionada del grupo que consiste en una región VL como se representa en SEQ ID NO:35, 39, 125, 129, 161 o 165 del documento WO 2008/119567.

Se prefiere de forma alternativa que el segundo dominio de unión capaz de unirse al complejo receptor CD3 de células T comprenda una región VH seleccionada del grupo que consiste en una región VH como se representa en SEQ ID NO:15, 19, 33, 37, 51, 55, 69, 73, 87, 91, 105, 109, 123, 127, 141, 145, 159, 163, 177 o 181 del documento WO 2008/119567.

Más preferiblemente, el constructo de anticuerpo de la presente invención se caracteriza por el segundo dominio de unión capaz de unirse al complejo receptor CD3 de células T que comprende una región VL y una región VH seleccionadas del grupo que consiste en:

(a) una región VL como se representa en SEQ ID NO:17 o 21 del documento WO 2008/119567 y una región VH como se representa en SEQ ID NO:15 o 19 del documento WO 2008/119567;

(b) una región VL como se representa en SEQ ID NO:35 o 39 del documento WO 2008/119567 y una región VH como se representa en SEQ ID NO:33 o 37 del documento WO 2008/119567;

(c) una región VL como se representa en SEQ ID NO:53 o 57 del documento WO 2008/119567 y una región VH como se representa en SEQ ID NO:51 o 55 del documento WO 2008/119567;

(d) una región VL como se representa en SEQ ID NO:71 o 75 del documento WO 2008/119567 y una región VH como se representa en SEQ ID NO:69 o 73 del documento WO 2008/119567;

(e) una región VL como se representa en SEQ ID NO:89 o 93 del documento WO 2008/119567 y una región VH como se representa en SEQ Id NO:87 o 91 del documento WO 2008/119567;

(f) una región VL como se representa en SEQ ID NO:107 o 111 del documento WO 2008/119567 y una región Vh como se representa en SEQ ID NO:105 o 109 del documento WO 2008/119567;

(g) una región VL como se representa en SEQ ID NO:125 o 129 del documento WO 2008/119567 y una región VH como se representa en s Eq ID NO:123 o 127 del documento WO 2008/119567;

(h) una región VL como se representa en SEQ ID NO:143 o 147 del documento WO 2008/119567 y una región VH como se representa en ^sE^qID NO:141 o 145 del documento WO 2008/119567;

(i) una región VL como se representa en SEQ ID NO:161 o 165 del documento WO 2008/119567 y una región Vh como se representa en SEQ ID NO:159 o 163 del documento WO 2008/119567; y

(j) una región VL como se representa en SEQ ID NO:179 o 183 del documento WO 2008/119567 y una región Vh como se representa en SEQ ID NO:177 o 181 del documento WO 2008/119567.

Según una realización preferida del constructo de anticuerpos de la presente invención, en particular el segundo dominio de unión capaz de unirse al complejo receptor CD3 de células T, los pares de regiones VH y regiones VL están en el formato de un anticuerpo de cadena única (scFv). Las regiones VH y VL se ordenan en el orden VH-VL o VL-VH. Se prefiere que la región VH se sitúe de forma N-terminal a una secuencia conectora. La región VL se sitúa de forma C-terminal a la secuencia conectora.

Una realización preferida del constructo de anticuerpo descrito anteriormente de la presente invención se caracteriza por el segundo dominio de unión capaz de unirse al complejo receptor CD3 de células T que comprende una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NOs:23, 25, 41,43, 59, 61,77, 79, 95, 97, 113, 115, 131, 133, 149, 151, 167, 169, 185 o 187 del documento WO 2008/119567.

En una realización preferida el constructo de anticuerpo de la invención tiene una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en cómo se representa en

SEQ ID NO: 1021, SEQ ID NO: 1034, SEQ ID NO: 1047, SEQ ID NO: 1086, SEQ ID NO: 1112, SEQ ID NO: 1125, SEQ ID NO: 1255, SEQ ID NO: 1268, SEQ ID NO: 1281, SEQ ID NO: 1294, SEQ ID NO: 1307, SEQ ID NO: 1659, SEQ ID NO: 1672, SEQ ID NO: 1906, SEQ ID NO: 1919, SEQ ID NO: 1945, SEQ ID NO: 1958, SEQ ID NO: 1971, SEQ ID NO: 1984, SEQ ID NO: 1997, SEQ ID NO: 2010, SEQ ID NO: 2023, SEQ ID NO: 2036, SEQ ID NO: 2049 y SEQ ID NO: 2062.

Los constructos de anticuerpo adicionales desvelados en el presente documento tienen una secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en

(a) como se represente en SEQ ID NO: 1138, SEQ ID NO: 1177, SEQ ID NO: 1346, SEQ D NO: 1359, SEQ ID NO: 1372, SEQ ID N O :1437 , SEQ ID NO: 145C y SEQ D NO: 2179;

(c) como e represente en SEQ ID NO: 1008, SEQ ID NO: 1060, SEQ ID NO: 1099, SEQ D NO: 1620, SEQ ID NO: 1633, SEQ ID NO: 1646, SEQ ID NO: 1685 , SEQ ID NO: 1698, SEQ D NO: 1711, SEQ ID NO: 1724, SEQ ID NO: 1737, SEQ ID NC : 1750, SEQ ID NO: 763, SEQ ID NO: 1776 y SEQ ID NO: 1932

(d) como se represente en SEQ ID NO:982, SEQ ID NO:1073, SEQ ID NO:1151, SEQ ID NO:1164, SEQ ID NO: 1190, SEQ ID NO:1203, SEQ ID NO:1216, SEQ ID NO:1229, SEQ ID NO:1242, SEQ ID NO:1320, SEQ ID NO: 1333, SEQ ID NO:1385, SEQ ID NO:1398, SEQ ID NO:1411, SEQ ID NO:1424, SEQ ID NO:1474, SEQ ID NO: 1475, SEQ ID NO:1476, SEQ ID NO:1483, SEQ ID NO:1490, SEQ ID NO:1491, SEQ ID NO:1492, SEQ ID NO: 1499, SEQ ID NO:1506, SEQ ID NO:1513, SEQ ID NO:1514, SEQ ID NO:1515, SEQ ID NO:1516, SEQ ID NO: 1517, SEQ ID NO:1524, SEQ ID NO:1531, SEQ ID NO:1538, SEQ ID NO:1539, SEQ ID NO:1540, SEQ ID NO: 1547, SEQ ID NO:1554, SEQ ID NO:1555, SEQ ID NO:1556, SEQ ID NO:1563, SEQ ID NO:1570, SEQ ID NO: 1571, SEQ ID NO:1572, SEQ ID NO:1573, SEQ ID NO:1574, SEQ ID NO:1575, SEQ ID NO:1576, SEQ ID NO: 1577, SEQ ID NO:1578, SEQ ID NO:1579, SEQ ID NO:1580, SEQ ID NO:1581, SEQ ID NO:1789, SEQ ID NO: 1802, SEQ ID NO:1815, SEQ ID NO:1828, SEQ ID NO:1841, SEQ ID NO:1854, SEQ ID NO:1867, SEQ ID NO: 1880, SEQ ID NO:1893, SEQ ID NO:2075, SEQ ID NO:2088, SEQ ID NO:2101, SEQ ID NO:2114, SEQ ID NO:2127, SEQ ID NO:2140, SEQ ID NO:2153, SEQ ID NO:2166, SEQ ID NO:2192, SEQ ID NO:2205 y SEQ ID NO:2218 a 2228; y

(e) como se representa en SEQ ID NO:995, SEQ ID NO:1594 y SEQ ID NO:1607.

En una realización adicional la invención proporciona un proceso para la producción de un constructo de anticuerpo de la invención, comprendiendo dicho proceso cultivar una célula huésped de la invención bajo condiciones que permiten la expresión del constructo de anticuerpo de la invención y recuperar el constructo de anticuerpo producido del cultivo.

Además, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un constructo de anticuerpo de la invención o producido según el proceso de la invención.

Las formulaciones descritas en la presente memoria son útiles como composiciones farmacéuticas en el tratamiento, mejora y/o prevención de la condición médica patológica como se describe en la presente memoria en un paciente que lo necesita. El término “tratamiento” se refiere tanto a tratamiento terapéutico y medidas profilácticas o preventivas. El tratamiento incluye la aplicación o administración de la formulación al cuerpo, un tejido aislado, o célula de un paciente que tiene una enfermedad/trastorno, un síntoma de una enfermedad/trastorno, o una predisposición hacia una enfermedad/trastorno, con el propósito de curar, sanar, aliviar, mitigar, alterar, remediar, mejorar, aumentar o afectar a la enfermedad, al síntoma de la enfermedad, o la predisposición hacia la enfermedad.

Aquellos “que necesitan el tratamiento” incluyen aquellos ya con el trastorno, además de aquellos en que el trastorno se va a evitar. El término “enfermedad” es cualquier condición que se beneficiaría del tratamiento con la formulación de proteína descrita en la presente memoria. Esto incluye trastornos o enfermedades crónicas y agudas que incluyen aquellas condiciones patológicas que predisponen al mamífero a la enfermedad en cuestión. Ejemplos no limitantes de enfermedades/trastornos a tratar en la presente memoria incluyen enfermedad proliferativa, una enfermedad tumoral o un trastorno inmunológico.

En algunas realizaciones, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o una pluralidad del constructo del anticuerpo de la invención junto con unos diluyentes, vehículo, solubilizante, emulgente, conservante y/o adyuvante farmacéuticamente efectivos. Las composiciones farmacéuticas de la invención incluyen, aunque no están limitadas a, composiciones líquidas, congeladas y liofilizadas.

Preferiblemente, los materiales de la formulación son no tóxicos para los receptores a las dosificaciones y concentraciones empleadas. En las realizaciones específicas, las composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un constructo de anticuerpo de la invención.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica puede contener materiales de formulación para modificar, mantener o conservar, por ejemplo, el pH, osmolaridad, viscosidad, claridad, color, isotonicidad, olor, esterilidad, estabilidad, velocidad de disolución o liberación, adsorción o penetración de la composición. En dichas realizaciones, los materiales de formulación adecuados incluyen, aunque no están limitados a, aminoácidos (tales como glicina, glutamina, asparagina, arginina, prolina o lisina); agentes antimicrobianos; antioxidantes (tal como ácido ascórbico, sulfito sódico o sulfito de hidrógeno y sodio); tampones (tal como borato, bicarbonato, Tris-HCl, citratos, fosfatos u otros ácidos orgánicos); agentes de carga (tal como manitol o glicina); agentes quelantes (tal como ácido etilendiaminatetraacético (EDTA)); agentes complejantes (tal como cafeína, polivinilpirrolidona, beta-ciclodextrina o hidroxipropil-beta-ciclodextrina); rellenos; monosacáridos; disacáridos; y otros carbohidratos (tal como glucosa, manosa o dextrinas); proteínas (tal como albúmina sérica, gelatina o inmunoglobulinas); agentes colorantes, saborizantes y diluyentes; agentes emulgentes; polímeros hidrófilos (tal como polivinilpirrolidona); polipéptidos de bajo peso molecular; contraiones formadores de sal (tal como sodio); conservantes (tal como cloruro de benzalconio, ácido benzoico, ácido salicílico, timerosal, alcohol de fenetilo, metilparabeno, propilparabeno, clorhexidina, ácido sórbico o peróxido de hidrógeno); disolventes (tal como glicerina, propilenglicol o polietilenglicol); alcoholes de azúcar (tal como manitol o sorbitol); agentes de suspensión; tensioactivos o agentes humectantes (tal como plurónicos, PEG, ésteres de sorbitán, polisorbatos tal como polisorbato 20, polisorbato, tritón, trometamina, lecitina, colesterol, tiloxapal); agente potenciadores de la estabilidad (tal como sacarosa o sorbitol); agentes potenciadores de la tonicidad (tal como haluros de metal alcalino, preferiblemente cloruro sódico o de potasio, manitol sorbitol); vehículos de distribución; diluyentes; excipientes y/o adyuvantes farmacéuticos. Véase, REMINGTON’S PHARmAc EUTICAL SCIENCES, 18a Edición, (A.R. Gennaro, ed.), 1990, Mack Publishing Company.

En ciertas realizaciones, la composición farmacéutica óptima se determinará por un experto en la técnica dependiendo de, por ejemplo, la ruta prevista de administración, formato de distribución y dosificación deseada. Véase, por ejemplo, REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES, supra. En ciertas realizaciones, dichas composiciones pueden influir en el estado físico, estabilidad, velocidad de liberación in vivo y velocidad de aclaramiento in vivo de las proteínas de unión al antígeno de la invención. En ciertas realizaciones, el vehículo o transporte primario en una composición farmacéutica puede ser o bien acuoso o no acuoso por naturaleza. Por ejemplo, un vehículo o transporte adecuado puede ser agua para inyección, solución salina fisiológica o fluido cerebroespinal artificial, posiblemente suplementado con otros materiales comunes en composiciones para la administración parenteral. La solución salina tamponada neutra o solución salina mezclada con albúmina sérica son vehículos ejemplares adicionales. En realizaciones específicas, las composiciones farmacéuticas comprenden tampón Tris de aproximadamente pH 7,0-8,5, o tampón acetato de aproximadamente pH 4,0-5,5, y pueden además incluir por lo tanto sorbitol o un sustituto adecuado. En ciertas realizaciones de la invención, el anticuerpo humano o fragmento de unión al antígeno del mismo de la invención o el constructo de anticuerpo de las composiciones de la invención puede prepararse para el almacenamiento mezclando la composición seleccionada que tiene el grado deseado de pureza con agentes de formulación opcionales (REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES, supra) en forma de una torta liofilizada o una disolución acuosa. Además, en ciertas realizaciones, el anticuerpo humano o fragmento de unión al antígeno del mismo de la invención o el constructo de anticuerpo de la invención puede formularse como un liofilizado usando excipientes apropiados tales como sacarosa.

Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden seleccionarse para distribución parenteral. De forma alternativa, las composiciones pueden seleccionarse para inhalación o para distribución a través del tracto digestivo, tal como oralmente. La preparación de dichas composiciones farmacéuticamente aceptables está en las capacidades de la técnica. Los componentes de formulación están presentes preferiblemente en concentraciones que son aceptables para el sitio de administración. En ciertas realizaciones, se usan tampones para mantener la composición a pH fisiológico o a un pH ligeramente menor, típicamente en un intervalo de pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 8.

Cuando se contempla la administración parenteral, las composiciones terapéuticas para usar en esta invención pueden proporcionarse en forma de una disolución acuosa parenteralmente aceptable, libre de pirógenos, que comprende el anticuerpo humano deseado o fragmento de unión al antígeno del mismo de la invención o el constructo de anticuerpo de la invención en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Un vehículo particularmente adecuado para la inyección parenteral es agua destilada estéril en que el constructo de anticuerpo de la invención se formula como una disolución isotónica, estéril, conservada apropiadamente. En ciertas realizaciones, la preparación puede implicar la formulación de la molécula deseada con un agente, tal como microesferas inyectables, partículas bio-erosionables, compuestos poliméricos (tal como poli(ácido láctico) o poli(ácido glucólico)), perlas o liposomas, que pueden proporcionar liberación controlada o sostenida del producto que puede distribuirse por medio de inyección de depósito. En ciertas realizaciones, el ácido hialurónico puede usarse también, teniendo el efecto de promover la duración sostenida en la circulación. En ciertas realizaciones, pueden usarse dispositivos de distribución de fármaco implantables para introducir la proteína de unión al antígeno deseada.

Las composiciones farmacéuticas adicionales serán evidentes para los expertos en la técnica, incluyendo formulaciones que implican h el constructo de anticuerpo de la invención en formulaciones de distribución sostenida o controlada. Las técnicas para formular una variedad de otros medios de distribución sostenida o controlada, tal como vehículos liposomas, micropartículas bio-erosionables o perlas porosas e inyecciones de depósito, se conocen también por los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, la Publicación de solicitud de patente internacional núm. WO9315722, que describe la liberación controlada de micropartículas poliméricas porosas para la distribución de composiciones farmacéuticas. Las preparaciones de liberación sostenida pueden incluir matrices poliméricas semipermeables en forma de artículos conformados, p.ej., películas o microcápsulas. Las matrices de liberación sostenida pueden incluir poliésteres, hidrogeles, polilactidas (como se describe en la Patente de EE.UU. núm.

3.773.919 y Publicación de solicitud de patente europea núm. EP 058481), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma-etil-L-glutamato (Sidman et al., 1983, Biopolymers 2:547-556), poli(2-hidroxietil-metacrilato) (Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 y Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105), etilenvinilacetato (Langer et al., 1981, supra) o ácido poli-D(-)-3-hidroxibutírico (Publicación de solicitud de patente europea núm. EP 133.988). Las composiciones de liberación sostenida pueden además incluir liposomas que pueden prepararse por cualquiera de varios métodos conocidos en la técnica. Véase, p.ej., Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82:3688-3692; Publicaciones de solicitudes de patente europea núms. EP 036.676; EP 088.046 y EP 143.949.

Las composiciones farmacéuticas usadas para la administración in vivo se proporcionan típicamente como preparaciones estériles. La esterilización puede conseguirse por filtración a través de membranas de filtración estériles. Cuando la composición se liofiliza, la esterilización usando este método puede realizarse o antes de o después de la liofilización y reconstitución. Las composiciones para administración parenteral pueden almacenarse en forma liofilizada o en una disolución. Las composiciones parenterales generalmente se ponen en un contenedor que tiene un puerto de acceso estéril, por ejemplo, una bolsa o vial de disolución intravenosa que tiene un tapón perforable mediante una aguja de inyección hipodérmica.

Los aspectos de la invención incluyen el constructo de anticuerpo auto-tamponable de las formulaciones de la invención, que pueden usarse como composiciones farmacéuticas, como se describe en la solicitud de patente internacional w O 06138181A2.

Como se trata anteriormente, ciertas realizaciones proporcionan un constructo de anticuerpo de las composiciones de proteína de la invención, particularmente composiciones farmacéuticas de la invención, que comprenden, además del constructo de anticuerpo de la invención, uno o más excipientes tales como los descritos de forma ilustrativa en esta sección y en cualquier otro sitio en la presente memoria. Los excipientes pueden usarse en la invención a este respecto para una amplia variedad de propósitos, tales como ajustar las propiedades físicas, químicas o biológicas de las formulaciones, tal como ajuste de la viscosidad, y o procesos de la invención para mejorar la efectividad y o estabilizar dichas formulaciones y procesos frente a la degradación y el deterioro debido a, por ejemplo, tensiones que se dan durante la fabricación, transporte, almacenaje, preparación pre-uso, administración y después de eso.

Una variedad de exposiciones está disponible en materiales de formulación y estabilización de proteínas y métodos útiles a este respecto, tal como Arakawa et al., “Solvent interactions in pharmaceutical formulations” Pharm Res.

8(3):285-91 (1991); Kendrick et al., “Physical stabilization of proteins in aqueous solution”, en: RATIONAL DESIGN OF STABLE PROTEIN FORMULATIONS: THEORY AND PRACTICE, Carpenter y Manning, eds. Pharmaceutical Biotechnology. 13: 61-84 (2002), y Randolph et al., “Surfactant-protein interactions”, Pharm. Biotechnol. 13:159-75 (2002).

Las sales pueden usarse de acuerdo con ciertas realizaciones de la invención, por ejemplo, para ajustar la fuerza iónica y/o la isotonicidad de una formulación y/o mejorar la solubilidad y/o estabilidad física de una proteína u otro ingrediente de una composición de acuerdo con la invención.

Como se sabe bien, los iones pueden estabilizar el estado nativo de proteínas uniéndose a residuos cargados en la superficie de la proteína y protegiendo los grupos cargados y polares en la proteína y reduciendo la fuerza de sus interacciones electrostáticas, interacciones atractivas y repulsivas. Los iones también pueden estabilizar el estado desnaturalizado de una proteína uniéndose a, en particular, las uniones peptídicas desnaturalizadas (-CONH) de la proteína. Además, la interacción iónica con grupos cargados y polares en una proteína puede también reducir las interacciones electrostáticas intermoleculares y, por consiguiente, evitar o reducir la agregación de proteínas e insolubilidad.

Las especies iónicas difieren significativamente en sus efectos en las proteínas. Se ha desarrollado un número de clasificaciones categóricas de iones y sus efectos en las proteínas que pueden usarse en la formulación de composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención. Un ejemplo es la serie de Hofmeister, que clasifica los solutos iónicos y no iónicos polares por su efecto en la estabilidad conformacional de las proteínas en disolución. Los solutos de estabilización se denominan como “cosmotrópicos”. Los solutos de desestabilización se denominan como “caotrópicos”. Los cosmótropos se usan normalmente a altas concentraciones (p.ej., sulfato de amonio >1 molar) para precipitar proteínas de la disolución (“precipitación salina”). Los caótropos se usan normalmente para dentadura y/o solubilizar proteínas (“solubilidad por salinización”). La efectividad relativa de iones para “solubilizar por salinización” y “precipitar por sales” define su posición en la serie de Hofmeister.

Pueden usarse aminoácidos libres en el constructo de anticuerpo de las formulaciones de la invención de acuerdo con varias realizaciones de la invención como agentes de carga, estabilizantes y antioxidantes, además de otros usos estándar. Puede usarse lisina, prolina, serina y alanina para estabilizar proteínas en una formulación. La glicina es útil en la liofilización para asegurar la correcta estructura de la torta y las propiedades. La arginina puede ser útil para inhibir la agregación de proteínas, en formulaciones tanto líquidas como liofilizadas. La metionina es útil como un antioxidante.

Los polioles incluyen azúcares, p.ej., manitol, sacarosa y sorbitol y alcoholes polihídricos tales como, por ejemplo, glicerol y propilenglicol, y, para propósitos de discusión en la presente memoria, polietilenglicol (PEG) y sustancias relacionadas. Los polioles son cosmotrópicos. Son agentes estabilizantes útiles en formulaciones tanto líquidas como liofilizadas para proteger a las proteínas de los procesos de degradación física y química. Los polioles también son útiles para ajustar la tonicidad de las formulaciones.

Entre los polioles útiles en realizaciones selectas de la invención está el manitol, usado normalmente para asegurar la estabilidad estructural de la torta en formulaciones liofilizadas. Asegura la estabilidad estructural de la torta. Se usa generalmente con un lioprotector, p.ej., sacarosa. El sorbitol y la sacarosa están entre los agentes preferidos para ajustar la tonicidad y como estabilizantes para proteger contra las tensiones de congelación-descongelación durante el transporte o la preparación de cargas durante el proceso de fabricación. Reducir los azúcares (que contienen grupos aldehído o cetona libres), tal como glucosa o lactosa, pueden glucar los residuos de lisina y arginina de la superficie. Por lo tanto, generalmente no están entre los polioles preferidos para usar de acuerdo con la invención. Además, los azúcares que forman dichas especies reactivas, tales como sacarosa, que se hidroliza a fructosa y glucosa bajo condiciones ácidas, y consecuentemente genera glucación, tampoco está entre los polioles preferidos de la invención a este respecto. PEG es útil para estabilizar las proteínas y como un crioprotector y puede usarse en la invención a este respecto.

Las realizaciones del constructo de anticuerpo de las formulaciones de la invención comprenden además tensioactivos. Las moléculas de proteína pueden ser susceptibles de adsorción en las superficies y de desnaturalización y posterior agregación a interfases aire-líquido, sólido-líquido y líquido-líquido. Estos efectos generalmente escalan de forma inversa con la concentración de proteína. Estas interacciones nocivas generalmente escalan de forma inversa con la concentración de proteína y típicamente se exacerban mediante agitación física, tal como la generada durante el transporte y manejo de un producto.

Los tensioactivos se usan de forma rutinaria para evitar, minimizar o reducir la adsorción superficial. Los tensioactivos útiles en la invención a este respecto incluyen polisorbato 20, polisorbato 80, otros ésteres de ácido graso de polietoxilatos de sorbitano, y poloxámero 188.

Los tensioactivos también se usan normalmente para controlar la estabilidad conformacional de la proteína. El uso de tensioactivos a este respecto es específico de la proteína ya que, cualquier tensioactivo dado estabilizará algunas proteínas y desestabilizará otros.

Los polisorbatos son susceptibles de degradación oxidativa y a menudo, cuando se suministran, contienen cantidades suficientes de peróxidos para provocar la oxidación de cadenas laterales de los residuos de proteínas, especialmente metionina. Consecuentemente, los polisorbatos deberían usarse cuidadosamente, y cuando se usen, deberían emplearse a su más baja concentración efectiva. A este respecto, los polisorbatos ejemplifican la regla general de que los excipientes deberían usarse en sus más bajas concentraciones efectivas.

Las realizaciones del constructo de anticuerpo de las formulaciones de la invención comprenden además uno o más antioxidantes. En algún grado la oxidación nociva de proteínas puede evitarse en las formulaciones farmacéuticas manteniendo los niveles apropiados de oxígeno y temperatura ambiental y evitando la exposición a la luz. Los excipientes antioxidantes pueden usarse además para evitar la degradación oxidativa de proteínas. Entre los antioxidantes útiles a este respecto están los agentes reductores, secuestrantes de oxígeno/radicales libres, y agentes quelantes. Los antioxidantes para usar en las formulaciones de proteína terapéuticas de acuerdo con la invención preferiblemente son solubles en agua y mantienen su actividad a lo largo de la vida útil de un producto. EDTA es un antioxidante preferido de acuerdo con la invención a este respecto.

Los antioxidantes pueden dañar las proteínas. Por ejemplo, los agentes reductores, tal como glutatión en particular, pueden alterar las uniones disulfuro intramoleculares. Por consiguiente, los antioxidantes para usar en la invención se seleccionan para, entre otras cosas, eliminar o reducir suficientemente la posibilidad de dañar ellos mismos las proteínas en la formulación.

Las formulaciones de acuerdo con la invención pueden incluir iones metálicos que son co-factores de proteína y que son necesarios para formar complejos de coordinación de proteínas, tal como zinc necesario para formar ciertas suspensiones de insulina. Los iones metálicos también pueden inhibir algunos procesos que degradan proteínas. Sin embargo, los iones metálicos catalizan procesos físicos y químicos que degradan las proteínas.

Los iones de magnesio (10-120 mM) pueden usarse para inhibir la isomerización de ácido aspártico a ácido isoaspártico. Los iones Ca+2 (hasta 100 mM) pueden aumentar la estabilidad de la desoxirribonucleasa humana. Mg+2, Mn+2 y Zn+2, sin embargo, pueden desestabilizar la rhDNasa. De forma similar, Ca+2 y Sr+2 pueden estabilizar el Factor VIII, puede desestabilizarse por Mg+2, Mn+2 y Zn+2, Cu+2 y Fe+2, y su agregación puede aumentarse mediante iones Al+3.

Las realizaciones del constructo de anticuerpo de las formulaciones de la invención comprenden además uno o más conservantes. Los conservantes son necesarios cuando se desarrollan formulaciones parenterales multi-dosis que implican más de una extracción del mismo recipiente. Su función primaria es inhibir el crecimiento microbiano y asegurar la esterilidad del producto a lo largo de la vida útil o término de uso del fármaco. Los conservantes usados normalmente incluyen alcohol de bencilo, fenol y m-cresol. Aunque los conservantes tienen un largo historial de uso con parenterales de moléculas pequeñas, el desarrollo de formulaciones de proteína que incluye conservantes puede cuestionarse. Los conservantes casi siempre tienen un efecto desestabilizante (agregación) en las proteínas, y esto se ha vuelto un factor principal en la limitación de su uso en formulaciones de proteína multi-dosis. Hasta la fecha, la mayoría de fármacos de proteína se han formulado solo para uso único. Sin embargo, cuando las formulaciones multidosis son posibles, tienen la ventaja añadida de permitir la conveniencia del paciente, y comercialización aumentada. Un buen ejemplo es el de la hormona de crecimiento humana (hGH) donde el desarrollo de formulaciones conservadas ha llevado a la comercialización de presentaciones de lápiz de inyección multi-uso más convenientes. Al menos cuatro de dichos dispositivos lápiz que contienen formulaciones conservadas de hGH están actualmente disponibles en el mercado. La norditropina (líquida, Novo Nordisk), Nutropina AQ (líquido, Genentech) y genotropina (cartucho de cámara dual liofilizada, Pharmacia & Upjohn) contienen fenol mientras que Somatrope (Eli Lilly) se formula con mcresol. Se necesita considerar varios aspectos durante la formulación y desarrollo de formas de dosificación conservadas. La concentración de conservante efectivo en el fármaco debe optimizarse. Esto necesita probar un conservante dado en la forma de dosificación con intervalos de concentración que dan efectividad anti-microbiana sin comprometer la estabilidad de la proteína.

Como se esperaría, el desarrollo de formulaciones líquidas que contienen conservantes es más desafiante que las formulaciones liofilizadas. Los productos secos por congelación pueden liofilizarse sin el conservante y reconstituirse con un diluyente que contiene conservante en el momento del uso. Esto acorta el tiempo durante el que un conservante está en contacto con la proteína, minimizando significativamente los riesgos de estabilidad asociados. Con las formulaciones líquidas, la efectividad y estabilidad del conservante debería mantenerse durante la vida útil entera del producto (aproximadamente 18 a 24 meses). Un punto importante a tener en cuenta es que la efectividad del conservante debería demostrarse en la formulación final que contiene el fármaco activo y todos los componentes excipientes.

El constructo de anticuerpo de la invención generalmente se diseñará para rutas y métodos de administración específicas, para dosificaciones de administración y frecuencias de administración específicas, para tratamientos específicos de enfermedades específicas, con intervalos de bio-disponibilidad y persistencia, entre otras cosas. Las formulaciones pueden diseñarse por consiguiente de acuerdo con la invención para la distribución por cualquier ruta adecuada, que incluye aunque no está limitado a oralmente, auralmente, oftálmicamente, rectalmente y vaginalmente y por rutas parenterales, que incluyen inyección intravenosa e intraarterial, inyección intramuscular e inyección subcutánea.

Una vez que se ha formulado la composición farmacéutica, puede almacenarse en viales estériles como una disolución, suspensión, gel, emulsión, sólido, cristal o como un polvo deshidratado o liofilizado. Dichas formulaciones pueden almacenarse o bien en forma lista para usar o en una forma (p.ej., liofilizada) que se reconstituye antes de la administración. La invención también proporciona kits para producir una unidad de administración de dosis única. Los kits de la invención pueden cada uno contener tanto un primer recipiente que tenga una proteína seca como un segundo recipiente que tiene una formulación acuosa. En ciertas realizaciones de esta invención, se proporcionan kits que contienen jeringas pre-llenas de una y múltiples cámaras (p.ej., jeringas líquidas y liojeringas). La cantidad terapéuticamente efectiva de un constructo de anticuerpo de la composición farmacéutica que contiene proteína de la invención a emplear dependerá, por ejemplo, del contexto y objetivos terapéuticos. Un experto en la técnica apreciará que los niveles de dosificación apropiados para el tratamiento variarán dependiendo, en parte, de la molécula distribuida, la indicación para la que el constructo de anticuerpo de la invención se está usando, la ruta de administración, y el tamaño (peso corporal, superficie corporal o tamaño del órgano) y/o condición (la edad y salud general) del paciente. En ciertas realizaciones, el médico puede valorar la dosificación y modificar la ruta de administración para obtener el efecto terapéutico óptimo. Una dosificación típica puede oscilar de aproximadamente 0,1 pg/kg a hasta aproximadamente 30 mg/kg o más, dependiendo de los factores mencionados anteriormente. En realizaciones específicas, la dosificación puede oscilar de 1,0 pg/kg hasta aproximadamente 20 mg/kg, opcionalmente de 10 pg/kg hasta aproximadamente 10 mg/kg o de 100 pg/kg hasta aproximadamente 5 mg/kg.

Una cantidad terapéutica efectiva de un constructo de anticuerpo de la invención da por resultado preferiblemente una disminución en la gravedad de los síntomas de la enfermedad, en un aumento en la frecuencia o duración de periodos libres de síntomas de la enfermedad o una prevención de disfunción o discapacidad debido al padecimiento de la enfermedad. Para tratar tumores que expresan CDH19, una cantidad terapéuticamente efectiva del constructo de anticuerpo de la invención, p.ej., un constructo de anticuerpo anti-CDH19/CD3, preferiblemente inhibe el crecimiento celular o crecimiento tumoral en al menos aproximadamente 20%, al menos aproximadamente 40%, al menos aproximadamente 50%, al menos aproximadamente 60%, al menos aproximadamente 70%, al menos aproximadamente 80%, o al menos aproximadamente 90% respecto a pacientes no tratados. La capacidad de un compuesto para inhibir el crecimiento tumoral puede evaluarse en un modelo animal predictivo de eficacia en tumores humanos.

Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse usando un dispositivo médico. Ejemplos de dispositivos médicos para administrar composiciones farmacéuticas se describen en las Patentes de ^eE.UU. núms. 4.475.196; 4.439.196; 4.447.224; 4.447.233; 4.486.194; 4.487.603; 4.596.556; 4.790.824; 4.941.880; 5.064.413; 5.312.335; 5.312.335; 5.383.851 y 5.399.163.

En una realización preferida, la enfermedad de melanoma o enfermedad de melanoma metastático se selecciona del grupo que consiste en melanoma de extensión superficial, lentigo maligno, melanoma lentigo maligna, melanoma lentiginoso acral y melanoma nodular.

En una realización adicional, la invención proporciona un kit que comprende un constructo de anticuerpo de la invención, o producido según el proceso de la invención, un vector de la invención, y/o una célula huésped de la invención.

Debería entenderse que las invenciones en la presente memoria no están limitadas a una metodología, protocolos o reactivos particulares, como tal pueden variar. La discusión y ejemplos proporcionados en la presente memoria se presentan con el propósito de describir realizaciones particulares solo y no pretenden limitar el alcance de la presente invención, que se define únicamente por las reivindicaciones.

Nada en la presente memoria se va a construir como una admisión de que la invención no tiene derecho a anteceder a la descripción de las publicaciones y patentes citadas a lo largo del texto de esta memoria (incluyendo todas las patentes, solicitudes de patente, publicaciones científicas, especificaciones del fabricante, instrucciones, etc.). En el grado en que el material citado contradiga o sea inconsistente con esta memoria, la memoria sustituirá cualquiera de dicho material.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos se proporcionan con el propósito de ilustrar realizaciones o características específicas de la presente invención. Estos ejemplos no se construirían para limitar el alcance de esta invención. Los ejemplos se incluyen con propósito de ilustración, y la presente invención está limitada solo por las reivindicaciones.

Ejemplo 1 - Anticuerpos monoclonales totalmente humanos frente a CDH19

1.1 Inmunización:

Los anticuerpos totalmente humanos a Cadherina-19 (CDH19) se generaron usando tecnología XENOMOUSE®, ratones transgénicos diseñados para expresar diversos repertorios de anticuerpos IgGK e IgGA totalmente humanos del isotipo correspondiente. (Patentes de Estados Unidos núms. 6.114.598; 6.162.963; 6.833.268; 7.049.426; 7.064.244; Green et al., 1994, Nature Genetics 7:13-21; Méndez et al., 1997, Nature Genetics 15:146-156; Green y Jakobovitis, 1998, J. Ex. Med. 188:483-495; Kellermann y Green, Current Opinion in Biotechnology 13, 593-597, 2002). Los ratones se inmunizaron con múltiples formas de inmunógeno de Cadherina-19, que incluyen: (1) cadherina-19 humana o de mono cinomólogo (“cino”) de longitud completa, (2) ecto-dominio de Cadherina-19 secretado (aminoácidos 1 -596), y (3) una forma unida a la membrana truncada de cadherina-19 humana (aminoácidos 1 -624). Los ratones se inmunizaron durante un periodo de 8 a 10 semanas con un intervalo de 16-18 aumentos.

Los sueros se recogieron a aproximadamente 5 a 9 semanas después de la primera inyección y se determinaron valoraciones específicas por tinción FACs del receptor de Cadherina-19 recombinante expresado de forma temporal en células CHO-S. Un total de 37 animales se identificaron con respuestas inmunes específicas, estos animales se agruparon en 3 grupos y avanzaron a la generación de anticuerpos.

1.2 Preparación de anticuerpos monoclonales

Se identificaron los animales que mostraban valoraciones adecuadas, y se obtuvieron linfocitos de drenar nódulos linfáticos y, si fuera necesario, se acumularon para cada cohorte. Los linfocitos se disociaron del tejido linfoide moliendo en un medio adecuado (por ejemplo, medio de Eagle modificado con Dulbecco (DMEM); obtenible de Invitrogen, Carlsbad, CA) para liberar las células de los tejidos, y se suspendieron en DMEM. Las células B se seleccionaron y/o se expandieron usando métodos estándar, y se condensaron con un compañero de fusión adecuado usando técnicas que se conocían en la técnica.

Después de varios días de cultivo, los sobrenadantes de hibridoma se recogieron y se sometieron a ensayos de cribado como se detalla en los ejemplos posteriores, que incluyen la confirmación de unión a humano y mono cinomólogo además de la capacidad para matar líneas celulares en bioensayos de conjugado anticuerpo secundario-fármaco. Las líneas de hibridoma que se identificaron por tener la unión y propiedades funcionales de interés se seleccionaron después adicionalmente y se sometieron a técnicas de clonado y subclonado estándar. Las líneas clonales se expandieron in vitro, y los anticuerpos humanos secretados se obtuvieron para análisis y se realizó la secuenciación del gen V.

1.3 Selección de anticuerpos de unión específica al receptor de Cadherina-19 por FMAT

Después de 14 días de cultivo, se cribaron los sobrenadantes de hibridoma para anticuerpos monoclonales específicos de CDH19 por Tecnología de Ensayo de Microvolumen Fluorométrica (FMAT) (Applied Biosystems, Foster City, CA). Los sobrenadantes se cribaron frente a células CHO adherentes transfectadas de forma temporal con Cadherina-19 humana y la réplica se cribó frente a células CHO transfectadas de forma temporal con el mismo plásmido de expresión que no contenía el gen de Cadherina-19.

Después de múltiples campañas de cribado, se identificó un panel de 1570 líneas de hibridoma de unión a anti-Cadherina-19 y se avanzó a ensayos de caracterización adicionales.

Ejemplo 2 - Evaluación de anticuerpos monoclonales totalmente humanos frente a CDH19

2.1 Caracterización de unión adicional por Citometría de flujo (FACs)

Los ensayos de unión FACS se realizaron para evaluar la unión de los anticuerpos específicos del receptor de anti-Cadherina-19 al receptor de Cadherina-19 endógeno expresado en las líneas de células tumorales CHL-1. Además, la unión por reacción cruzada a ortólogos de Cadherina-19 de murino y mono cinomólogo se evaluó también mediante FACs usando formas recombinantes de los diversos receptores expresados de forma temporal en las células 293T.

Los ensayos FACs se realizaron incubando sobrenadantes de hibridoma con 10.000 a 25.000 células en PBS/suero bovino fetal al 2%/cloruro de calcio 2 mM a 4°C durante una hora seguido por los lavados con PBS/suero bovino fetal al 2%/cloruro de calcio 2 mM. Las células se trataron entonces con anticuerpos secundarios marcados con flourocromo a 4°C seguido por un lavado. Las células se suspendieron de nuevo en 50 gl de PBS/FBS al 2% y se analizó la unión al anticuerpo usando un instrumento FACSCalibur™.

2.2 Cribado de conjugado anticuerpo fármaco de anticuerpos totalmente humanos derivados de hibridomas XenoMouse®

La muerte celular a través de conjugados anticuerpo fármaco necesita la distribución del conjugado en una célula a través de la internalización y el catabolismo del conjugado de fármaco en una forma que sea tóxica para la célula. Para identificar anticuerpos con estas propiedades, se sembraron líneas de células positivas de CDH19 (Colo-699 o CHL-1) a bajas densidades celulares y se dejaron adherirse toda la noche en una placa de 384 pocillos. Las muestras de hibridoma XENOMOUSE® que contenían anticuerpos anti-CDH19 totalmente humanos se añadieron entonces a estas células en presencia de una alta concentración de un Fab monovalente Fc anti-humano de cabra conjugado con DM1 (DM1-Fab) a una relación de fármaco-anticuerpo relativamente baja (DAR) (~1,3). Las células se incubaron ^{durante 96 horas a 37°C y CO}2 ^{al 5% en presencia de las muestras de anticuerpo y el DM1-Fab. Al final de este tiempo,}la viabilidad celular se evaluó usando el reactivo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo® (Promega) según las recomendaciones del fabricante.

Un ejemplo de los datos de viabilidad celular con las células Colo-699 se muestra en la Figura 1 y la Figura 2. Los anticuerpos capaces de distribuir el DM1 -Fab a las células e inhibir el crecimiento celular se leen con una menor señal luminiscente (RLU). Los anticuerpos principales de interés de este cribado se observan en la esquina izquierda inferior de la Fig. 1 y se indican como círculos abiertos. Estos anticuerpos se llevaron a un ensayo de viabilidad celular en células CHL-1. El dato de viabilidad celular promedio del ensayo CHL-1 se representa frente al dato de viabilidad celular promedio del ensayo Colo-699 (Fig. 2). Los anticuerpos que tenían actividad en células tanto Colo-699 como CHL-1 se indican como círculos abiertos en el lado a mano izquierda de la Figura 2.

Este ensayo se realizó de forma simultánea con el ensayo de unión al anticuerpo FACs anterior (2.2), y los resultados de estos dos estudios se usaron para seleccionar los anticuerpos para la caracterización adicional. En total, 1570 anticuerpos se trataron a través de estos ensayos de viabilidad basados en células y aproximadamente 44 anticuerpos se seleccionaron en las bases de muerte celular in vitro y/o unión de anticuerpo para sub-clonado, secuenciación del gen V y se expresaron en forma recombinante para ensayos de caracterización adicionales como se describe a continuación.

Los 44 anticuerpos se ensayaron de nuevo como en el Ejemplo 2 y se seleccionaron 19 anticuerpos que contenían secuencias únicas. De estos 19 anticuerpos, 18 anticuerpos se analizaron y sus propiedades se caracterizaron en la Tabla 2 posterior. Los datos en esta tabla se generaron usando la unión FACs en CDH-19 humano y cinomólogo recombinante, los datos de unión /- calcio (Ca+2) en transfectantes 293/CDH-19, la unión a CHD-19 endógeno en células tumorales CHL-1 y Colo699 y la competición con el anticuerpo diseñado como 4A9 en la tabla. Estos experimentos proporcionaron las caracterizaciones adicionales para la agrupación de estos anticuerpos en 5 grupos o contenedores.

Tabla 2 - Clasificación del panel principal usando la información de unión al anticuerpo

De estos 18 anticuerpos, 8 anticuerpos se seleccionaron para análisis adicional de su unión de epítopo como se describe a continuación. Al menos un anticuerpo representativo de cada contenedor se seleccionó para análisis adicional.

Ejemplo 3 - Predicción de epítopo

Predicción de epítopo mediante competición con anticuerpo 4A9 y mediante quimeras de Cadherina-19 humanas/de ratón

Se desarrolló un método de competición de unión a 4A9 para identificar los anticuerpos que compiten con la unión a 4A9. En placas con fondo en V y 96 pocillos (Sarstedt núm. 82.1583.001), se incubaron 50.000 células 293T transfectadas de forma temporal con 5 ug/ml de anticuerpos anti-CDH19 purificados durante 1 h a 4°C seguido por un lavado con PBS/FBS al 2%. Se añadieron después 25 pl de 4A9 marcado con Alexa647 5 pg/ml a cada pocillo y las placas se incubaron durante 1 hora a 4°C. Las células se lavaron entonces dos veces y la cantidad de 4A9 marcado con Alexa647 asociado a la célula se cuantificó por citometría de flujo.

Los experimentos incluyeron controles negativos que consistían solo en PBS/FBS al 2%. La señal promedio observada en estos experimentos de control negativos se adoptó como la señal máxima posible para el ensayo. Se compararon los anticuerpos con esta señal máxima y se calculó un porcentaje de inhibición para cada pocillo (% de inhibición = (1 -(Geomedia FL4 con los anticuerpos anti-CDH19/señal Geomedia FL4 máxima)).

La unión al dominio se determinó por citometría de flujo como anteriormente en las células 293T transfectadas de forma temporal con plásmidos que consistían en sustituciones del dominio de repetición de cadherina CDH19 humana sencilla o dual en la estructura de Cadherina19 de ratón clonados en el vector de expresión pTT5 inmediatamente precedido por secuencias principales de CDH19 humano o murino nativo y una etiqueta Flag (SEQ ID NO:968). El experimento incluyó ensayar los anticuerpos anti-CDH19 frente a Cadherina19 de ratón para determinar la idoneidad para la clasificación en estas quimeras humanas/de ratón. Los datos de estos experimentos se presentan en la Tabla posterior titulada como sigue:

Constructos de quimera humana y/o murino

A = huCDH19 (44-772) (véase SEQ ID NO:944)

B = huCDH19 (44-141)::muCDH19 (140-770) (véase SEQ ID NO:952)

C = huCDH19 (44-249)::muCDH19 (248-770) (véase SEQ ID NO:954)

D = muCDH19 (44-139)::huCDH19 (142-249)::muCDH19 (248-770) (véase SEQ ID NO:956)

E = muCDH19 (44-139)::huCDH19 (142-364)::muCDH19 (363-770) (véase SEQ ID NO:958)

F = muCDH19 (44-247)::huCDH19 (250-364)::muCDH19 (363-770) (véase SEQ ID NO:960)

G = muCDH19 (44-362)::huCDH19 (365-772) (véase SEQ ID NO:962)

H = muCDH19 (44-461)::huCDH19 (464-772) (véase SEQ ID NO:964)

I = muCDH19 (44-770) (véase SEQ ID NO:966)

Predicción de epítopo mediante quimeras de Cadherina-19 humana/de pollo

La unión al dominio se determinó por citometría de flujo en células 293T transfectadas de forma temporal con plásmidos que consistían en sustituciones del dominio de repetición de cadherina CDH19 humana sencilla en la estructura de Cadherina19 de pollo clonados en el vector de expresión PTT5 precedido inmediatamente por secuencias principales CDH19 humanas o de pollo nativas y una etiqueta Flag. El experimento incluyó ensayar un subconjunto de anticuerpos anti-CDH19 frente a la Cadherina19 de pollo para determinar la idoneidad para la clasificación en estas quimeras humanas/de pollo.

El siguiente ensayo de unión se completó en presencia de CaCl2 2 mM. En placas con el fondo en V de 96 pocillos (Costar 3897), se incubaron 50.000 células 293T transfectadas de forma temporal con 5 ug/ml de anticuerpos anti-CDH19 purificados durante 1 h a 4°C seguido por dos lavados con PBS/FBS al 2%. Se añadieron entonces 50 |ul de anticuerpo secundario IgG anti-humano marcado con Alexa647 5 qg/ml (Jackson Immuno 109-605-098) y 7AAD 2 ug/ml (Sigma A9400) a cada pocillo y las placas se incubaron durante 15 minutos a 4°C. Las células se lavaron entonces una vez y la cantidad de Ab marcado con Alexa647 asociado a la célula se cuantificó por citometría de flujo. Los experimentos incluyeron controles transfectados sustitutos. Los datos de estos experimentos se presentan en la Tabla posterior, n.d. = no determinado.

Tabla 4 - Resumen de predicción del epítopo del contenedor C de anticuerpos

Leyenda de la Tabla 4

Constructos de quimera humanos y/o de pollo

A = huCDH19 (44-772) (véase SEQ ID NO:944)

J = ckCDH19 (44-776) (véase SEQ ID NO:1451)

K = huCDH19 (44-141)::ckCDH19 (142-776) (véase SEQ ID NO:1452)

L = ckCDH19 (44-141)::huCDH19 (142-249)::ckCDH19 (250-776) (véase SEQ ID NO:1453)

M = ckCDH19 (44-249)::huCDH19 (250-364)::ckCDH19 (365-776) (véase SEQ ID NO:1454)

N = ckCDH19 (44-364)::huCDH19 (365-463)::ckCDH19 (469-776) (véase SEQ ID NO:1455)

O = ckCDH19 (44-468)::huCDH19 (464-772) (véase SEQ ID NO:1456)

Se determinó la unión al dominio por citometría de flujo en células 293T transfectadas de forma temporal con plásmidos que consistían en sustituciones de dominio 1 de repetición de cadherina CDH19 de macaco Rhesus o segmentos del dominio 1 (designados EC1 a, EC1 b, EC1c) en la estructura de Cadherina19 de perro, o sustitución del dominio 2 de repetición de cadherina CDH19 de rata en la estructura de Cadherina19 rhesus clonado en el vector de expresión pTT5 inmediatamente precedido por secuencias principales de CDH19 rhesus o caninas nativas y una etiqueta Flag. El experimento incluyó ensayar un subconjunto de anticuerpos anti-CDH19 frente a Cadherina19 de perro, rata y macaco para determinar la idoneidad para la clasificación en estas quimeras de macaco/perro y rata/rhesus.

El siguiente ensayo de unión se completó en presencia de CaCl22 mM. En placas de fondo en V de 96 pocillos (Costar 3897), se incubaron 50.000 células 293T transfectadas de forma temporal con 5 ug/ml de anticuerpos anti-CDH19 purificados durante 1 h a 4°C seguido por dos lavados con PBS/FBS al 2%. Se añadieron entonces 50 pl de anticuerpo secundario IgG anti-humano marcado con Alexa647 5 pg/ml (Jackson Immuno 109-605-098) y 7AAD 2 ug/ml (Sigma A9400) a cada pocillo y las placas se incubaron durante 15 minutos a 4°C. Las células se lavaron entonces una vez y la cantidad de Ab marcado con Alexa647 asociado a la célula se cuantificó por citometría de flujo. Los experimentos incluyeron controles transfectados sustitutos. Los datos de estos experimentos se presentan en la Tabla posterior, n.d. = no determinado.

Tabla 5 - Resumen de predicción de epítopo del contenedor A de anticuerpo

Leyenda de la Tabla 5

Constructos de quimera de macaco Rhesus, perro y/o rata

P = rhCDH19 (44-772) (véase SEQ ID NO:1457)

Q = caCDH19 (44-770) (véase SEQ ID NO:1458)

R = rhCDH19 (44-141)::caCDH19 (141-770) (véase SEQ ID NO:1459)

S = rhCDH19 (44-65)::caCDH19 (65-770) (véase SEQ ID NO:1460)

T = caCDH19 (44-87)::rhCDH19 (89-114)::caCDH19 (115-770) (véase SEQ ID NO:1461)

U = caCDH19 (44-120)::rhCDH19 (122-137)::caCDH19 (137-770) (véase SEQ ID NO:1462)

V = rhCDH19 (44-141)::raCDH19 (140-247)::rhCDH19 (250-772) (véase SEQ ID NO:1463)

W = raCDH19 (44-770) (véase SEQ ID NO:1464)

Los datos resumidos en la tabla 5 permitieron la segregación del aglutinante del contenedor A 44-141 en los siguientes subgrupos:

Contenedor A.1 44-141

Contenedor A.244-141 (44-114)

Contenedor A.344-141 (44-65)

Predicción del epítopo mediante quimeras de Cadherina-19 de rata/ratón o humano/ratón

que consistían en sustituciones del dominio 3 de repetición de cadherina CDH19 de rata (designado EC3a, EC3b) o sustitución del dominio 3 de repetición de cadherina CDH19 humana (designada EC3c) en la estructura de Cadherina19 de ratón clonados en el vector de expresión pTT5 precedido inmediatamente por la secuencia principal de CDH19 de ratón nativa y una etiqueta Flag. El experimento incluyó ensayar un subconjunto de anticuerpos anti-CDH19 frente a Cadherina19 humana, de rata y de ratón para determinar la idoneidad para la clasificación en estas quimeras de rata/ratón y humanas/de ratón.

El siguiente ensayo de unión se completó en presencia de CaCl22 mM. En placas de fondo en V de 96 pocillos (Costar 3897), se incubaron 50.000 células 293T transfectadas de forma temporal con 5 ug/ml de anticuerpos anti-CDH19 purificados durante 1 h a 4°C seguido por dos lavados con PBS/FBS al 2%. Se añadieron entonces 50 pl de anticuerpo secundario IgG anti-humano marcado con Alexa647 5 pg/ml (Jackson Immuno 109-605-098) y 7AAD 2 ug/ml (Sigma A9400) a cada pocillo y las placas se incubaron durante 15 minutos a 4°C. Las células se lavaron entonces una vez y la cantidad de Ab marcado con Alexa647 asociado a las células se cuantificó por citometría de flujo. Los experimentos incluyeron controles transfectados sustitutos. Los datos de estos experimentos se presentan en la Tabla posterior, n.d. = no determinado.

Tabla 6 - Resumen de la predicción del epítopo del contenedor B de anticuerpos

Leyenda de la Tabla 6

Constructos de quimera de rata/ratón o humano/ratón

A = huCDH19 (44-772) (véase SEQ ID NO:944)

I = muCDH19 (44-770) (véase SEQ ID NO:966)

W = raCDH19 (44-770) (véase SEQ ID NO:1464)

X = muCDH19 (44-323)::raCDH19 (324-327)::muCDH19 (328-770) (véase SEQ ID NO:1465)

Y = muCDH19 (44-770)::raCDH19 (290, 299, 308) (véase SEQ ID NO:1466)

Z = muCDH19 (44-770)::huCDH19 (271) (véase SEQ ID NO:1467)

Los datos resumidos en la tabla 6 permitieron segregar el aglutinante del contenedor B 250-364 en los siguientes subgrupos:

Contenedor B.1 250-364

Contenedor B.2250-364 (324-327) por numeración del roedor como referencia en la tabla 6, que corresponde con los residuos (326-329) en CDH19 humano y de macaco.

Ejemplo 4 - Mutantes del punto crítico/covariante

Un total de 18 anticuerpos se analizaron por potenciales violaciones de puntos críticos y covarianza. Las variantes diseñadas (mostradas a continuación) esbozan sustituciones de aminoácidos capaces de reducir y/o evitar la isomerización, desaminación, oxidación, violaciones de covarianza y similares. Las 80 variantes diseñadas junto con los 15 anticuerpos parentales, que totalizan por consiguiente 95 secuencias, se hicieron avanzar a los procesos de clonado, expresión y purificación. La mutagénesis dirigida al sitio se realizó en las variantes diseñadas en un formato de 96 pocillos. Los anticuerpos parentales y variantes diseñadas se expresaron mediante transfección temporal de para la actividad y características biofísicas. Los 3 anticuerpos parentales que tenían Cys libre (desapareado) o sitio de N-glucosilación no se hicieron avanzar en este proceso. Esos se sustituyeron con la versión diseñada de los anticuerpos parentales. Las variantes diseñadas esbozan sustituciones de aminoácidos capaces de reducir y/o evitar la isomerización, desamidación, oxidación, violaciones de covarianza, inmunogenicidad y similares. Se apreciará que estas secuencias variantes son ejemplos de anticuerpos diseñados dentro del significado de la presente solicitud aunque las mutaciones de punto único y/o puntos múltiples pueden combinarse de cualquier manera combinatoria para llegar a una molécula de unión al antígeno o anticuerpo deseada final.

Ejemplo 5 - Patrón de expresión de ARNm de CDH19

Se extrajo ARN de tejidos de pacientes individuales que representan tumor (>70% de contenido tumoral mediante conteo celular) o normal (0% de contenido tumoral mediante conteo celular). Los tejidos individuales se homogeneizaron usando TissueLyzer (Qiagen, Valencia, CA) y el ARN total se extrajo y purificó mediante el kit de extracción de ARN total m/rVana (Life Technologies, Foster City, CA). La calidad y cantidad del ARN se verificó mediante lecturas del espectrofotómetro NanoDrop (NanoDrop, Wilmington, DE) y perfil de ARN Bioanalyzer (Agilient Technologies, Santa Clara, CA). El ARN era DNAsa tratada con el kit libre de ADN (Life Technologies, Foster City, CA) y transcrito de forma inversa según las especificaciones del fabricante usando hexámeros aleatorios en el kit de transcripción inversa de ADNc de alta capacidad (Life Technologies, Foster City, CA). Se realizó la reacción de cadena polimerasa a tiempo real cuantitativa (qRT-PCR) en ADNc usando cebadores para CDH19, conjunto de sondas Hs00253534_m1, (Life Technologies, Foster City, CA) o gen constitutivo ACTB humano (cebadores CCT GGC ACC CAG CAC AA; GCC GAT CCA CAC GGA GTA CT; sonda ATC AAG ATC ATT GCT CCT CCT GAG CG). 10 pL de componentes de reacción qRT-PCR; 1,0 ng/pL de ADNc, 2xMezcla maestra de PCR universal (Life Technologies, Foster City, CA), ensayo de expresión génica (ACTB; cebadores 75 nM, sonda 150 nM. EPOR; cebadores 300 nM, sonda 250 nM). Siguiendo el programa de amplificación qRT-PCR: (1) activación a 50°C durante 2 min; (2) desnaturalización a 95°C durante 10 min; (3) amplificación de 40 ciclos a 95°C durante 15 s y 60°C durante 1 min con captura de fluorescencia en cada etapa (Sistemas de detección de secuencia ABI PRISM 7900HT, Applied Biosystems). Los valores del ciclo de partida (C^t) se determinaron, usando el software Sequence Detector versión 2.3 (Applied Biosystems) y se transformaron a 2-ñCT para la expresión relativa del tránscrito específico de CDH19 a ACTB. Los resultados se muestran en la Figura 3. De 54 muestras metastáticas y de melanoma primario únicas, puede verse que la mayoría sobreexpresa ARNm de CDH19 respecto a la expresión en muestras de tejido normal.

Ejemplo 6 - Expresión de la proteína CDH19

La expresión de proteína CDH19 se analizó en muestras tumorales humanas por IHC y los resultados se muestran en la Figura 4. Las muestras se fijaron en formalina tamponada neutra al 10% durante 24 horas, se deshidrataron y se incrustaron en parafina. Se cortaron secciones de 4 pm. Las secciones se desparafinaron primero y después se calentaron en disolución DIVA Decloaker (Biocare) durante 40 minutos para la recuperación de antígeno. Las etapas de IHC restantes se realizaron a temperatura ambiente en un equipo de autotinción DAKO. Las secciones se incubaron durante 10 minutos con Peroxidazed 1 (Biocare) para bloquear la peroxidasa endógena, seguido por incubación durante 10 minutos con background sniper (Biocare) para reducir el fondo no específico. Las secciones se incubaron durante 60 minutos con anticuerpo de CDH19 (Novo Biologicals, Catálogo núm. H00028513-B01P) a 5 pg/ml, después se incubaron durante 30 minutos con polímero anti-ratón HPR Envision+ (DAKO), seguido por DAB+ (DAKO) durante 5 minutos. Las secciones se contratiñeron con hematoxilina (DAKO) aproximadamente 1 minuto. La expresión de CDH19 pudo detectarse en el 62% de tumores examinados (intensidad de tinción >1+ en 101 de 162 muestras). El 51% de las muestras tumorales demostraron expresión media a alta (intensidad de tinción de 2+ a 3+ en 83 de 162 muestras). CDH19 mostró una tinción de membrana densa y distinta en muchas muestras, aunque en algunos tumores se notó heterogenicidad.

Ejemplo 7 - Selección de líneas celulares modelos

Las líneas celulares tumorales se analizaron por citometría de flujo e IHC para identificar los sistemas de modelo con expresión de CDH19 similar a los tumores humanos. El anticuerpo IgG4 anti-huCDH19 humano 4A2 se purificó directamente de los medios acondicionados de hibridoma. Por citometría de flujo, 2x105 células se incubaron con 200 nM del anticuerpo de CDH19 4A2 que se conjugó a PE a una relación 1:1. La incubación y las etapas de lavado posteriores se realizaron en presencia de calcio 1,2 mM. Un tubo de perlas liofilizadas QuantiBRITE PE con cuatro niveles de PE (BD, cat. núm. 340495) se preparó de forma simultánea según las instrucciones del fabricante. Las perlas se analizaron por citometría de flujo para generar una curva estándar. Los valores medios de PE obtenidos de las líneas de melanoma después del análisis FACS se calibraron entonces frente a la curva estándar para calcular los anticuerpos unidos por célula (ABC), que proporciona un estimado del número de receptores en cada célula. IHC se realizó como se describe en el Ejemplo 6 y los resultados se proporcionan en la Figura 5. La línea celular de melanoma CHL-1 expresa aproximadamente 10.000 moléculas de CDH19 en la superficie celular, mientras que las células Colo699 expresan aproximadamente 5.000 receptores. Ambas líneas celulares representan tumores con niveles de expresión medios a altos en base a IHC. La expresión en A2058 es muy baja, mientras que las células LOX no expresan ninguna proteína CDH19 detectable.

Ejemplo 8

Para la confirmación de unión a CDH19 humano y a CD3 humano y de macaco, se probaron los anticuerpos biespecíficos por citometría de flujo usando líneas celulares indicadas. L1.2 transfectadas con CDH19 humano, las líneas celulares de melanoma humano CHL-1 y A2058 que expresan CDH19 humano nativo, línea celular de leucemia de células T humanas que expresan CD3 HPB-ALL (DSMZ, Braunschweig, ACC483) y la línea de células T de macaco que expresa CD34119LnPx (Knappe A, et al., Blood, 2000, 95, 3256-3261) se usaron como líneas celulares positivas al antígeno. Además, las células L1.2 no transfectadas se usaron como control negativo.

Para citometría de flujo se incubaron 200.000 células de las respectivas líneas celulares durante 30 min en hielo con 50 pl de anticuerpo biespecífico purificado a una concentración de 5 pg/ml. Las células se lavaron dos veces en PBS/FCS al 2% y la unión de los constructos se detectó con un anticuerpo PentaHis murino (Qiagen; diluido 1:20 en 50 pl de PBS/FCS al 2%). Después del lavado, se detectaron los anticuerpos PentaHis unidos con un anticuerpo específico de Fc gamma (Dianova) conjugado a ficoeritrina, diluido 1:100 en PBS/FCS al 2%. Las muestras se midieron por citometría de flujo en un instrumento FACSCanto II y se analizaron mediante software FACSDiva (ambos de Becton Dickinson).

Los anticuerpos biespecíficos de CDH19/CD3 tiñeron las células L1.2 transfectadas con CDH19 humano, las líneas celulares de melanoma que expresan CDH19 humano CHL-1 y A2058 además de células T humanas y de macaco. Además, no hubo tinción de las células L1.2 no transfectadas (véase la Figura 6).

Ejemplo 9

Actividad citotóxica

Ensayo de citotoxicidad basado en FACS con PBMC humanas no estimuladas

Aislamiento de células efectoras

Las células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) se prepararon por centrifugación de gradiente de densidad de Ficoll a partir de preparados de linfocitos enriquecidos (p.ej. capas leucoplaquetarias), un producto secundario de los bancos de sangre que recogen sangre para las transfusiones. Las capas leucoplaquetarias se suministraron por un banco de sangre local y se prepararon las PBMC en el mismo día de la recogida de sangre. Después de la centrifugación de densidad de Ficoll y lavados extensivos con PBS de Dulbecco (Gibco), los eritrocitos ^{que quedaban se eliminaron de las PBMC por medio de incubación con tampón de lisis de eritrocitos (NH}4^{Cl 155 mM, KHCO}3^{10 mM, EDTA 100 pM). Las plaquetas se eliminaron por medio del sobrenadante tras la centrifugación de}PBMC a 100 x g. Los linfocitos que quedaron principalmente incluyen linfocitos B y T, células NK y monocitos. Las PBMC se mantuvieron en cultivo a 37°C/CO2 al 5% en medio RPMI (Gibco) con Fc S al 10% (Gibco).

Agotamiento de células CD14+ y CD56+

Para el agotamiento de células CD14+, se usaron MicroPerlas de CD14 humanas (Milteny Biotec, MACS, núm. 130 050-201), para el agotamiento de células NK MicroPerlas de CD56 humanas (MACS, núm. 130-050-401). Las PBMC se contaron y se centrifugaron durante 10 min a temperatura ambiente con 300 x g. El sobrenadante se descartó y el gránulo celular se resuspendió en tampón de aislamiento MACS [80 pL/107 células; PBS (Invitrogen, núm. 20012 043), FBS al 0,5% (v/v) (Gibco, núm. 10270-106), EDTA 2 mM (Sigma-Aldrich, núm. E-6511)]. Se añadieron MicroPerlas de CD14 y MicroPerlas de CD56 (20 pL/107 células) y se incubaron durante 15 min a 4-8°C. Las células se lavaron con tampón de aislamiento MACS (1 -2 mL/107 células). Después de la centrifugación (véase anteriormente), el sobrenadante se descartó y las células se resuspendieron en tampón de aislamiento MACS (500 pL/108 células). Las células negativas CD14/CD56 se aislaron entonces usando Columnas LS (Miltenyi Biotec, núm. 130-042-401). Se cultivaron células PBMC sin CD14+/CD56+ en medio completo RPMI, es decir, RPMI1640 (Biochrom AG, núm. FG1215) suplementado con FBS al 10% (Biochrom AG, núm. S0115), 1x aminoácidos no esenciales (Biochrom AG, núm. K0293), tampón Hepes 10 mM (Biochrom AG, núm. L1613), piruvato sódico 1 mM (Biochrom AG, núm. L0473) y penicilina/estreptomicina 100 U/mL (Biochrom AG, núm. A2213) a 37°C en una incubadora hasta que se necesitaron.

Marcaje de la célula diana

^{Para el análisis de la lisis celular en ensayos de citometría de flujo, se usó tinte de membrana fluorescente DiOC}18 (DiO) (Molecular Probes, núm. V22886) para marcar el CDH19 humano - como células diana y distinguiéndolas de las células efectoras. Brevemente, las células se cosecharon, se lavaron una vez con PBS y se ajustaron a 106 células/mL en PBS que contenía FBS al 2% (v/v) y el tinte de membrana DiO (5 pL/106 células). Después de la incubación durante 3 min a 37°C, las células se lavaron dos veces en medio RPMI completo y el número de células se ajustó a 1,25 x 105 células/mL. La vitalidad de las células se determinó usando disolución de Eosina G isotónica al 0,5% (v/v) (Roth, núm. 45380).

Análisis basado en citometría de flujo

diluciones en serie de anticuerpos biespecíficos CDH19.

Se mezclaron volúmenes iguales de células diana marcadas con DiO y células efectoras (es decir, células PBMC sin CD14+), dando por resultado una relación de células E:T de 10:1. Se transfirieron 160 pL de esta suspensión a cada pocillo de una placa de 96 pocillos. Se añadieron 40 pL de diluciones en serie de los anticuerpos biespecíficos de CDH19 y un control negativo biespecífico (un anticuerpo biespecífico basado en CD3 que reconoce un antígeno diana irrelevante) o medio completo RPMI como un control negativo adicional. La reacción citotóxica mediada por el ^{anticuerpo biespecífico se realizó durante 48 horas en una incubadora humidificada con CO}2 ^{al 7%. Después las}células se transfirieron a una nueva placa de 96 pocillos y se monitorizó la pérdida de integridad de la membrana celular diana añadiendo yoduro de propidio (IP) a una concentración final de 1 pg/mL. El IP es un tinte impermeable de membrana que normalmente está excluido de células viables, mientras las células muertas lo absorben y se vuelven identificables por emisión fluorescente.

Las muestras se midieron por citometría de flujo en un instrumento FACSCanto II y se analizaron mediante software FACSDiva (ambas de Becton Dickinson).

Las células diana se identificaron como células positivas en DiO. La células diana negativas con IP se clasificaron como células diana vivas. El porcentaje de citotoxicidad se calculó según la siguiente fórmula:

Citotoxicidad [%] = n^célu

n^{las d}í^an^{a m u e rc a s}x100

^{células d íana}

n = número de sucesos

Usando software GraphPad Prism 5 (Graph Pad Software, San Diego), el porcentaje de citotoxicidad se representó frente a las concentraciones de anticuerpo biespecífico correspondientes. Las curvas de respuesta a la dosis se analizaron con los cuatro modelos de regresión logística paramétrica para la evaluación de curvas de respuesta a la dosis sigmoides con pendiente de colina fija y se calcularon los valores CE50. Los resultados se muestran en la Figura 7.

Ejemplo 10

Experimentos de inhibición del crecimiento tumoral in vivo

Se mezclaron 5 millones de células tumorales Colo699 o CHL-1 con 2,5 millones de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) recién aisladas y se inyectaron subcutáneamente en el flanco izquierdo de ratones desnudos atímicos hembra en el Día 0. El mismo día, los ratones se trataron intraperitonealmente con o CDH19 BiTE 2G6 o BiTE de control no específico (MEC14) a las dosis indicadas. La dosificación continuó diariamente durante los primeros 10 días posteriores a la inoculación del tumor.

Los volúmenes tumorales y pesos corporales se midieron dos veces por semana usando calibradores y una balanza analítica, respectivamente.

Los resultados de los experimentos con células tumorales Colo699 o CHL-1 se muestran en las Figuras 8 y 9.

Ejemplo 11

Actividad citotóxica

Ensayo de citotoxicidad basado en la formación de imágenes con células T humanas no estimuladas.

Células efectoras

Se obtuvieron células T humanas no tratadas anteriormente, purificadas, de AllCells LLC, Alameda, EE.UU.

Análisis basado en imágenes

Este ensayo mide la lisis mediada por células T de células de melanoma. Se combinan 3000 células A2058 (CDH19 positivas) o 2500 células LOX IMVI (CDH19 negativas) con células T humanas no tratadas anteriormente en una relación 1:10 en los pocillos de placas de 384 pocillos. Después de la adición de una dilución en serie de moléculas BiTE con direccionamiento a CDH19 además de un control negativo biespecífico (un anticuerpo biespecífico basado en CD3 que reconoce un antígeno diana irrelevante), las células se incuban durante 48 h a 37°C. Después, las muestras se tratan durante 2 h con Hoechst 33342 30 pM para teñir los núcleos de todas las células y yoduro de propidio 2 pM (IP) para identificar las células muertas.

La adquisición y análisis de imágenes se realizó en un ThermoFisher ArrayScan con un objetivo 10x. Se recogen datos por dos canales, a 386 nm (Hoechst 33342) y a 549 nm (yoduro de propidio).

positivos, IP positivos.

Porcentaje de citotoxicidad se determina como se describe en el ejemplo 7. Los resultados representativos se muestran en la Figura 10.

^Ejemplo12

Determinación de especificidad del dominio y afinidad bioquímica de aglutinantes biespecíficos

Purificación de sub-dominios de CDH19 que carecen de modificaciones post-traduccionales

Un codón de iniciación de metionina seguido por secuencias de nucleótidos que codifica el sub-dominio de CDH19 de ^{la proteína A = huCDH19 (140-367 de SEQ ID NO:944), que precede inmediatamente a un conector G}4^{S y etiqueta}de poli-histidina se clonó en un vector pET adecuado; mientras, las secuencias de nucleótidos que codifican sub dominio de proteínas B = huCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:944) y C = rhCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:1457) se clonaron en el vector pET-SUMO (Life Technologies, Invitrogen) por métodos conocidos en la técnica. Cada uno se expresó en E coli, se aisló de la fracción soluble y se purificó hasta homogeneidad mediante cromatografía de afinidad a quelato metálico, seguido por intercambio de aniones, y cromatografía de exclusión por tamaño en solución salina ^{tamponada con HEPES, CaCl2 3 mM, pH}8^{. El sub-dominio de proteína A retuvo su conector y la etiqueta de}polihistidina terminal C, aunque las etiquetas His-SUMO constitutivas de los extremos N de las proteínas B y C se eliminaron por digestión con proteasa SUMO (Life Technologies, Invitrogen) antes del intercambio aniónico. Se determinó que todas las proteínas tenían su peso molecular esperado mediante ESI LC/MS. Las proteínas usadas en experimentos de unión descritas a continuación se biotinilaron aleatoriamente mediante métodos típicos conocidos en la técnica.

Purificación de sub-dominios de CDH19 con modificaciones post-traduccionales

Se generaron sub-dominios de CDH19 de proteínas D = huCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:944), y E = rhCDH19 (44 367 de SEQ ID NO:1457) clonando secuencias de nucleótido que codifican los respectivos residuos de aminoácidos ^{1-367 en el vector pSURETech235b (Selexis) cada uno inmediatamente precedió un conector G}4^{S y etiqueta de poli-}Histidina se clonaron en el vector pSURETech235b (Selexis), se transfectaron en células CHO-S (Life Technologies, Invitrogen), y se generaron acumulaciones estables después de la selección con higromicina por métodos conocidos en la técnica. Las acumulaciones estables se expandieron y se recogió el medio acondicionado después de 7 días de cultivo en medios libres de suero. CM se intercambió por UF/DF con 5 diavolúmenes de solución salina tamponada ^{con HEPES más CaCl}2 ^{usando una membrana de PES Pellicon 2 10 K de 929,03 cm2 (1 pie cuadrado) y se purificó}hasta homogeneidad como se describe anteriormente. El sub-dominio de CDH19 de las proteínas D y E retuvo el conector constitutivo y las etiquetas de polihistidina C terminal. La secuencia N terminal de cada proteína se determinó que era G44 como se esperaba, mientras que ESI LC/MS de las proteínas purificadas cuando se comparó con las mismas sometidas a digestión de PNGasa F reveló la presencia de glucanos unidos tanto a N como a O. Las proteínas usadas en experimentos de unión descritos a continuación se biotinilaron de forma aleatoria mediante métodos bien conocidos en la técnica.

Métodos para la determinación de la afinidad de unión mediante Octet

El biosensor Octet RED384 se usó para caracterizar las cinéticas y la afinidad de las interacciones proteína-proteína. Las proteínas A-E diana con dominio de CDH19 biotinilado mínimamente se unieron a puntas de estreptavidina en la máquina mientras que se hicieron diluciones en serie de proteínas aglutinantes bi-específicas de analito en placas de 96 pocillos o 384 pocillos. Se encontró a partir del desarrollo del ensayo que las condiciones empíricas de carga de diana eran 10-20 nM de concentración de diana y carga durante 600 segundos para dar una señal 2 nm. Los experimentos de unión se realizaron instalando una placa con diluciones en serie 1:3 de 6 puntos (Tablas 7-9) o 3 puntos (Tabla 10) a partir de concentraciones de partida de 30 nM de cada analito, con dos pocillos de referencia por ^{columna que tenían solo tampón. Tampón Octet: HEPES 10 mM (pH 7,5), NaCl 150 mM, CaCl}2 ^{+/- 1 mM, Tritón X-}100 al 0,13% y BSA 0,10 mg/ml. Los pocillos de referencia y disociación adicionales en la placa también contenían solo tampón. El método de unión fue como sigue: puntas de estreptavidina ForteBio Octet (1) se empaparon en tampón durante 10 minutos; (2) se transfirieron a los pocillos de referencia de la placa y se incubaron durante 5 minutos; (3) se transfirieron a los pocillos de carga de diana y se incubaron durante 10 minutos; (4) se transfirieron a los pocillos de referencia de la placa y se incubaron durante 5 minutos; (5) se transfirieron a los pocillos de muestra y se incubaron durante 5 minutos (Tabla 9) o 20 minutos (Tabla 7, 8, 10); (6) se transfirieron a los pocillos de disociación y se incubaron durante 8,3 minutos (Tabla 9) o 1,5 h (Tablas 7, 8, 10). Los datos en bruto se procesaron de la siguiente manera: (a) las curvas de puntas de referencia se promediaron y se restaron de las curvas de muestra; (b) las curvas de asociación y disociación se aislaron y alinearon al eje Y; (c) la parte entre etapas de asociación y disociación se alineó; (d) el filtro de Savitzky-Golay se implementó para reducir el ruido de la señal y (e) el conjunto resultante de curvas de asociación y disociación para cada interacción muestra-diana se ajustó globalmente con un único modelo de unión 1:1 para determinar los valores medidos de las constantes de velocidad de asociación (Ka) y disociación (Kd) para calcular la constante de disociación de equilibrio, KD.

humana aislada que carecen de modificaciones post-traduccionales

A = h DH1 14 - 7 E li B = h DH1 44- 7 E li

Leyenda de la Tabla 7

Dominios de proteína CDH19 humana que carece de modificaciones post-traduccionales

A = E coli expresó huCDH19 (140-367 de SEQ ID NO:944)

B = E coli expresó huCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:944)

Los datos resumidos en la tabla 7 confirmaron la especificidad de la región de epítopo de CDH19 de aglutinantes biespecíficos y permitieron su clasificación de afinidad relativa.

Tabla 8 - Afinidad bioquímica modulada por calcio de aglutinantes biespecíficos a dominios de proteína CDH19 humana y de macaco aislados que carecen de modificaciones post-traduccionales

Leyenda de la Tabla 8

Dominios de proteína CDH19 que carecen de modificaciones post-traduccionales

B = E coli expresó huCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:944)

C = E coli expresó rhCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:1457)

Los datos resumidos en la tabla 8 permitieron la determinación de la sensibilidad al calcio de aglutinantes biespecíficos y para su clasificación de afinidad relativa. Los datos sugieren además epítopos conformacionales, con el Contenedor B.1 más dependiente de la asociación de CDH19/Ca2+ que el epítopo del Contenedor A.2.

Tabla 9 - Afinidad bioquímica de aglutinantes biespecíficos a dominios de proteína CDH19 humana y de macaco aislados que carecen de modificaciones post-traduccionales.

Leyenda de Tabla 9

Dominios de proteína CDH19 que carecen de modificaciones post-traduccionales

B = E coli expresó huCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:944)

C = E coli expresó rhCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:1457)

Los datos resumidos en la tabla 9 permitieron la clasificación de afinidad relativa de aglutinantes biespecíficos a dominios de CDH19 humanos y de primates no humanos que carecen de glucosilación.

Tabla 10 - Afinidad bioquímica modulada por calcio de aglutinantes biespecíficos a dominios de proteína CDH19 humana y de macaco glucosilados aislados

Leyenda de la Tabla 10

Dominios de proteína CDH19 glucosilada

D = CHO expresó huCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:944)

E = CHO expresó rhCDH19 (44-367 de SEQ ID NO:1457)

Los datos resumidos en la Tabla 10 permitieron la determinación de la sensibilidad al calcio de aglutinantes biespecíficos y la clasificación de afinidad relativa hacia proteínas de dominio de CDH19 humano y de primate no humano glucosiladas. En comparación con los datos en la Tabla 8, las afinidades son similares a aquellas con dominios que carecen de modificaciones post-traduccionales. El dato sugiere además epítopos conformacionales, siendo los Contenedores de epítopo B.1 y B.2 más dependientes de la asociación CDH19/Ca2+ que el Contenedor de epítopo A.2.

Ejemplo 13

Unión biespecífica y reactividad cruzada entre especies:

Para la confirmación de la unión a CDH19 humano y a CD3 humano, los anticuerpos biespecíficos se probaron por citometría de flujo usando las líneas celulares indicadas. Se usaron HEK293 transfectadas con CDH19 humano (véase el ejemplo 14) y la línea celular de leucemia de células T humanas que expresa CD3 HPB-ALL (DSMZ, Braunschweig, ACC483) como líneas celulares positivas al antígeno.

Para la citometría de flujo se incubaron 200.000 células de las respectivas líneas celulares durante 30 min en hielo con 100 |M de sobrenadante de cultivo celular que contenía BiTE. Las células se lavaron dos veces en PBS/FCS al 2% y la unión de los constructos se detectó con un anticuerpo anti-CD3scFv murino (3E5.A5, Amgen; diluido a 2 Mg/ml de PBS/FCS al 2%). Después de lavar, se detectaron anticuerpos anti-CD3scFv unidos con un anticuerpo específico de Fc gamma (Dianova) conjugado a ficoeritrina, diluido 1:100 en PBS/FCS al 2%. Las muestras se midieron por citometría de flujo en un instrumento FACSCanto II y se analizaron mediante software FACSDiva (ambos de Becton Dickinson).

Los anticuerpos biespecíficos CDH19/CD3 tiñeron las células HEK293 transfectadas con CDH19 humano además de las células T humanas y de macaco (véase la Figura 19).

Ejemplo 14

Actividad citotóxica

Aislamiento de células efectoras

Una placa de petri (145 mm de diámetro, Greiner bio-one GmbH, Kremsmünster) se recubrió con un anticuerpo específico anti-CD3 disponible comercialmente (OKT3, Orthoclone) en una concentración final de 1 gg/ml durante 1 hora a 37°C. La proteína no unida se eliminó mediante una etapa de lavado con PBS. Se añadieron 3-5 x 107 PBMC humanas a la placa de petri pre-recubierta en 120 ml de RPMI 1640 con glutamina estabilizada/FCS al 10%/IL-2 20 U/ml (Proleukin®, Chiron) y se estimularon durante 2 días. En el tercer día, las células se recogieron y se lavaron una vez con RPMI 1640. Se añadió IL-2 a una concentración final de 20 U/ml y las células se cultivaron de nuevo durante un día en el mismo medio de cultivo celular que anteriormente.

Agotamiento de células CD4+ y CD56+

Los linfocitos T citotóxicos (CTLs) CD8+ se enriquecieron por agotamiento de células T CD4+ y células NK CD56+ usando Dynal-Beads según el protocolo del fabricante.

Análisis basado en la liberación de 51Cr

Las células diana HEK293 transfectadas con CDH19 humano (producción véase el ejemplo 14) se lavaron dos veces con PBS y se marcaron con 51Cr 11,1 MBq en un volumen final de 50 gl de RPMI suplementado durante 60 minutos a 37°C. Posteriormente, las células diana marcadas se lavaron 3 veces con 5 ml de RPMI y después se usaron en el ensayo de citotoxicidad. El ensayo se realizó en una placa de 96 pocillos en un volumen total de 200 gl de RPMI suplementado con una relación E:T de 10:1. Se usó una concentración de partida de 0,1-1 gg/ml de anticuerpo biespecífico purificado y diluciones triples del mismo. El tiempo de incubación para el ensayo fue 18 horas. La citotoxicidad se determinó como valores relativos de cromo liberado en el sobrenadante respecto a la diferencia de lisis máxima (adición de Tritón-X) y lisis espontánea (sin células efectoras). Todas las medidas se realizaron por cuadruplicado. La medida de actividad de cromo en los sobrenadantes se realizó en un contador gamma Wizard 3’’ (Perkin Elmer Life Sciences GmbH, Koln, Alemania). El análisis de los resultados se realizó con Prism 6 para Windows (versión 6.02, GraphPad Software Inc., San Diego, California, EE.UU.). Los valores CE50 calculados por el programa de análisis a partir de las curvas de respuesta a la dosis sigmoidales se usaron para la comparación de la actividad citotóxica (véase la Figura 20).

Ejemplo 15

Producción y purificación de anticuerpos BiTE

La producción a escala de investigación estandarizada de anticuerpos CDH19 BiTE se realizó en botellas rotatorias. El sobrenadante del cultivo cosechado se sometió después de filtración a purificación de anticuerpo BiTE de dos etapas en base a la captura de cromatografía de afinidad por metales inmovilizados (IMAC) y posterior cromatografía de exclusión por tamaño o captura de Proteína_A y posterior cromatografía de exclusión por tamaño (SEC).

15.1 Etapa de captura IMAC de anticuerpos BiTE

Se usaron los Sistemas de Exploración Ákta® (GE Healthcare) controlados por software Unicorn® para la cromatografía. La cromatografía de afinidad por metales inmovilizados (IMAC) se realizó usando Fractogel EMD chelate® (Merck, Darmstadt) que se cargó con ZnCl2 según el protocolo proporcionado por el fabricante. La columna se equilibró con tampón A (tampón de fosfato sódico 20 mM, NaCl 0,1 M, imidazol 10 mM, pH 7,2) y el sobrenadante del cultivo celular (1000 ml) se aplicó a la columna (10 ml de volumen de empaquetado) a un caudal de 4 ml/min. La columna se lavó con tampón A para eliminar la muestra no unida. La proteína unida se eluyó usando un gradiente de dos etapas de tampón B (tampón de fosfato sódico 20 mM, NaCl 0,1 M, imidazol 0,5 M, pH 7,2) según el siguiente procedimiento:

Etapa 1: tampón B al 10% en 5 volúmenes de columna

Etapa 2: tampón B al 100% en 5 volúmenes de columna

Las fracciones de proteína eluida de la etapa 2 se acumularon para la purificación adicional y se concentraron a 3 ml de volumen final usando unidades de centrifugado Vivaspin (Sartorius-Stedim, Gottingen-Alemania) con membrana PES y un corte de peso molecular de 10 kDa. Todos los compuestos químicos eran de grado de investigación y se compraron de Merck (Darmstadt, Alemania). Figura 11.

15.2 Captura por Proteína_A de anticuerpos BiTE

Se usaron Sistemas de Exploración Ákta® (GE Life Sciences) controlados por software Unicorn® para la cromatografía. Las columnas de afinidad que contienen perlas con Proteína_A unida de forma covalente se usaron para la etapa de captura. La columna se equilibró con tampón de equilibrado a pH 7,4 y se aplicó el sobrenadante del cultivo celular. Después de lavar la columna con tres volúmenes de columna de tampón de equilibrado para lavar la muestra no unida los anticuerpos BiTE unidos se eluyeron mediante la aplicación de una tampón de elución a pH 3,0.

8,0 ya contenida en los tubos de fraccionamiento en el colector de fracción.

Las fracciones de proteína eluida de la etapa 2 se acumularon para purificación adicional y se concentraron a 3 ml de volumen final usando unidades de centrifugación Vivaspin (Sartorius-Stedim, Gottingen-Alemania) con membrana PES y un corte de peso molecular de 10 kDa. Todos los compuestos químicos eran de grado de investigación y se compraron de Merck (Darmstadt, Alemania). Figura 12.

15.3 Cromatografía de exclusión por tamaño

La cromatografía de exclusión por tamaño se realizó en una columna de grado preparativo HiLoad 16/60 Superdex 200 (GE Healthcare) equilibrada con tampón SEC (NaCl 20 mM, NaH2PÜ430 mM, L-arginina 100 mM, pH 7,0) a un caudal de 1 ml/min. Las fracciones de monómero y dímero de anticuerpo BiTE se acumularon y una disolución estándar de trehalosa al 24% se añadió para alcanzar una concentración de trehalosa final del 4%. Las muestras de proteína eluida se sometieron a SDS-PAGE reductor y electroinmunotransferencia de etiqueta Anti-His para el análisis.

Las acumulaciones de proteína se midieron a 280 nm en cubetas de policarbonato con trayectoria de la luz de 1 cm (Eppendorf, Hamburgo-Alemania) y la concentración de proteína se calculó en base al factor calculado por software de análisis de secuencia Vector NTI para cada proteína.

Las acumulaciones de monómero BiTE se ajustaron a 250 pg/ml con tampón de formulación BiTE adicional (NaCl 20 mM, NaH2PÜ430 mM, L-arginina 100 mM, trehalosa al 4%, pH 7,0). Una cantidad de un mínimo de 600 pg para cada BiTE se tomó y se transfirió para las analíticas de proteína inmediatas como se describe en el ejemplo 16.

Las acumulaciones de proteína restantes de monómero de anticuerpo BiTE y dímero de anticuerpo BiTE se hicieron alícuotas en alícuotas de 15 y 50 pg de proteína y se congelaron de golpe en nitrógeno líquido. Se hizo un almacenamiento adicional hasta el uso en un congelador a -80°C hasta el análisis de la actividad biológica y medidas de afinidad. Figura 13.

La pureza del monómero de anticuerpo BiTE aislado se determinó por SDS-PAGE que era >95%. Como se esperaba, el anticuerpo BiTE monomérico purificado apareció como bandas de proteína en el intervalo de peso molecular de 54 56 kDa. Figura 14.

Ejemplo 16

Propiedades de la proteína

La disolución de monómero BiTE recién preparada generada en el ejemplo 15 se aplicó a los siguientes métodos analíticos

• Cromatografía de exclusión por tamaño de alto rendimiento (HP-SEC) de anticuerpos CDH19 BiTE inicialmente monoméricos después de una semana de incubación a 250 pg/ml y 37°C.

• Conversión de monómero BiTE de monómero BiTE a dímero mediante tres ciclos de congelación/descongelación seguido por HP-SEC

• Intercambio catiónico analítico de alta resolución

• Cromatografía de interacción hidrófoba en una matriz de Sepharose Octyl FF.

• Concentración a 2500 pg/ml seguido por almacenamiento toda la noche y medida de turbidez.

• Determinación TA de temperatura de agregación mediante la medida de dispersión de luz dinámica caliente

16.1 Conversión de monómero BiTE a dímero por incubación durante 7 días

15 pg del anticuerpo CDH19 BiTE monomérico a una concentración de 250 pg/ml se incubaron a 37°C durante 7 días.

Una columna SEC de alta resolución TSK Gel G3000 SWXL (Tosoh, Tokio-Japón) se conectó a un purificador Ákta 10 FPLC (GE Lifesciences) equipado con un automuestreador A905. El tampón de equilibrado de columna y de ^{migración consistió en KH}2^PO4^{100 mM - Na2SO4 200 mM ajustado a pH 6,6. Después de 7 días de incubación, la}disolución de anticuerpo BiTE (15 pg de proteína) se aplicó a la columna equilibrada y la elución se realizó a un caudal de 0,75 ml/min a una presión máxima de 7 MPa. La marcha completa se monitorizó a 280, 254 y 210 nm de absorbancia óptica. El análisis se hizo por integración de picos de la señal a 210 nm grabada en la hoja de evaluación de la marcha del software Ákta Unicorn. El contenido en dímero se calculó dividiendo el área del pico dímero por el área total del pico de monómero más dímero. Figura 15

16.2 Conversión de monómero BiTE en dímero mediante tres ciclos de congelación/descongelación

15 pg de anticuerpo BiTE monomérico a 250 pg/ml se congelaron a -80°C durante 30 min seguido por descongelación durante 30 min a temperatura ambiente. Después de tres ciclos de congelación/descongelación el contenido de dímero se determinó por HP-SEC como se describe en el ejemplo 16.1. Figura 16

16.3 Cromatografía de intercambio iónico analítica de alta resolución

Una columna BioPro SP de 1 ml fabricada por YMC (YMC Europe GmbH, Dinslaken-Alemania) con grupos sulfopropilo acoplados a perlas sólidas se conectó a un dispositivo Ákta Micro FPLC (GE Healthcare).

Para el equilibrado de la columna, la dilución de la muestra y el lavado se usó un tampón que consistía en fosfato de dihidrógeno y sodio 20 mM y cloruro sódico 30 mM ajustado con hidróxido sódico a un pH de 5,5.

Para la elución se usó un tampón que consistía en NaH2PÜ420 mM y NaCl 1000 mM ajustado con hidróxido sódico a un pH de 5,5. Se diluyeron 50 qg de monómero de anticuerpo BiTE con tampón de dilución a 50 ml de volumen final. Después del equilibrado de la columna se aplicaron 40 ml de la disolución de proteína diluida a la columna seguido por una etapa de lavado.

La elución se realizó mediante un gradiente constantemente creciente con tampón de elución de cero a 100% sobre un volumen total correspondiente a 200 volúmenes de columna. La marcha completa se monitorizó a absorción óptica de 280 (línea azul) y 254 nm (línea roja).

El porcentaje del pico principal se calculó dividiendo el área del pico del pico principal por la suma del área del pico de todos los picos detectados seguido por la multiplicación con un factor de 100. Figura 17.

CDH19 BiTE CH192G6302 X I2C SA21: 89,3% de porcentaje del pico principal 16.4 Sepharose Octyl FF

Se evaluó la elución de anticuerpos BiTE monoméricos en una cromatografía de interacción hidrófoba en columna C8 de Sepharose Octyl FF (GE Healthcare) con 1 ml de volumen en gel.

50 qg de proteína monomérica de anticuerpo BiTE se llenó con tampón (ácido cítrico 10 mM - lisina 75 mM x HCl -trehalosa al 4% - pH 7,2) a un volumen final de 300 ql. La columna se conectó a un sistema purificador 10 Ákta (GE Healthcare). Un bucle de muestra de 500 ql se conectó al sistema. El sistema y columna se equilibraron con tampón de migración (ácido cítrico 10 mM - lisina 75 mM x HCl - NaCl 200 mM - pH 7,2).

La muestra completa se inyectó en el bucle de muestra y el contenido del bucle de muestra se aplicó a la columna. Después de la inyección de muestra un volumen de 10 ml de tampón de migración se aplicó a la columna a un caudal de 0,2 ml/min mientras se grababa la absorción óptica a 254 y 280 nm junto con la conductividad. Figura 18

CDH19 BiTE CH192G6302 X I2C SA21: elución rápida y completa

16.5 Concentración de monómero BiTE a 2500 qg/ml seguido por almacenamiento toda la noche y medida de turbidez 1000 ql de monómero de CDH19 BiTE se concentraron en dos unidades de centrifugación Vivaspin 500 con membrana PES de 10 kDa (Sartorius-Stedim, Gottingen-Alemania) a un volumen final de 100 ql. Este volumen como se almacenó toda la noche a 5°C en una cabina de enfriamiento. La turbidez se midió tres veces a 340 nm de absorción de longitud de onda óptica. Después el valor medio de los tres valores de medida se calculó.

OD340 Turbidez de CDH19 BiTE CH192G6302 X I2C SA21: 0,034

16.6 Determinación TA de temperatura de agregación por medida de dispersión de luz dinámica caliente

Un volumen de 40 ql de anticuerpo BiTE monomérico a 250 qg/ml se transfirió al núcleo interno de una cubeta de plástico desechable. El núcleo externo situado más profundamente se llenó con tampón de formulación BiTE genérico. La parte superior de la cubeta se selló con un tapón de caucho para evitar la pérdida de líquido por evaporación en el proceso de calentamiento de la muestra.

La cubeta se colocó en un dispositivo de dispersión de luz dinámica Nanostar (Wyatt) y se calentó de 40°C a 70°C a un incremento de calentamiento de 0,5°C/min.

El estado de agregación se monitorizó permanentemente y se grabó en el proceso de calentamiento entero. La evaluación se ejecutó con el paquete de software suministrado por el fabricante del dispositivo.

Temperatura de agregación de CDH19 BiTE CH19 2G6302 X I2C SA21: 52,4°C 16.7 PEGilación de anticuerpos BiTE con bucle de Cys

El anticuerpo BiTE monomérico que contiene un bucle de Cys c-terminal (véase para los detalles metódicos el documento WO 2006/008096) se dializó frente a un tampón Tris/NaCl a pH 7,4 y se redujo mediante la adición del agente de reducción Tris(2-carboxietil)fosfina TCEP (Perbio Pierce) para crear dos cisteínas reducidas del bucle de Cys ahora abierto.

exceso molar y se incubó durante 3 horas a temperatura ambiente.

Una columna de intercambio catiónico de columna de Sepharose SP (GE Healthcare) se conectó a un sistema Ákta FPLC y se equilibró con tampón de unión (tampón fosfato/NaCl de baja molaridad de pH 5,0).

La disolución de proteína se diluyó con tapón de unión ajustado a pH 5,0 para permitir la unión de la proteína BiTE a la columna de intercambio catiónico. El PEG no unido se eliminó en la etapa de lavado con tampón de unión adicional a pH 5,0 sobre 10 volúmenes de columna. La proteína unida se eluyó mediante un porcentaje creciente lineal de tampón de elución de fosfato 20 mM NaCl 1 M.

El anticuerpo BiTE PEGilado eluyó a molaridad más baja del tampón de elución comparado con el anticuerpo BiTE no modificado.

Tabla de secuencias:











Secuencias de aminoácidos y secuencias de polinucleótidos de la región variable anti-CDH19



Tabla IIc: Secuencias de polinucleótido y aminoácidos de la región variable de la cadena pesada 13586 HC [hu anti-<huCDH19> 4F3 VH1 QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQTPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGWYFDLWGRGTLVTVSS SEQ ID NO: 449

13589 HC [hu anti-<huCDH19> 4A9 VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKÜLEWFAYFSYSGSTNYNPSLKSRVTLS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDFWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 45(1

13590 HC [hu anti-<huCDH19> 4B10 VH1 QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGTNEYYADSVKGR FTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDWSFDYWGQGTLVSVSS SEQ ID NO: 451

13874 HC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARDSRYRSGWYDAFDIWGQGTMVTVSS SEQ ID NO: 452

13875 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLTLSSLTAADTAVYFCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 453

13876 HC [hu anti-<huCDH19> 16A4.1 VH1 QVQLQESGPGLAKPSETLSLTCTVSGDSITSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDQRRIAAAGTHFYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 454

13877 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 VH1

e v q l l e s g g g l v q p g g s l r l s c a a s g f t f s s y a m n w v r q a p g k g l e w v s t is g g g a n t y y a d s v k .g r FTTSSDNSKSTLYLQMNSLRAADTAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 455

13878 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 456

13879 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMG1INP1SVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 457

13880 HC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 45 K

13881 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARÜGIQLWLHFDYYVÜQGTLVTVSS SEQ ID NO: 459

13882 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 460

13883 HC [hu anti-<huCDH19> 25G10.1 VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS VDTSKNQFSLK.LSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSS

SEQ ID NO: 461

13885 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYF1HWVRQAPGQGLEWMGI1NPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 462

14022 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 VH1 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRV TISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 463

14024 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-472)(Q17E.H47P) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRVT ISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 464

14025 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 VH1 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQHPGKGLEWTGYIYYTGSAYYNPSLKSRV TISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 465

14026 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-472)(Q17E,H47P) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRVT ISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 466

14027 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1 -472)(Q17E.H47P.D111 E) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGS1SSSGYYWSW1RQPPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRVT ISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSSGWYFQYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 467

14028 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1 -472)(Q17E,H47P,D111 E.W134Y) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYTYYTGSAYYNPSLKSRVT ISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSSGYYFQYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 468

14029 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 VH1 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRV TISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 469

14030 HC [hu anti-<huCDH19> 4F3 (1-471)(R17G) VH1

QVQLVESGGGWQPOGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQTPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGWYFDLWGRGTLVTVSS SEQ ID NO: 470

14031 HC [hu anti-<huCDH19> 4F3 (1-471)(R17G,T47A) VH1

QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGWYFDLWGRüTLVTVSS

SEQ ID NO: 471

14032 HC [hu anti-<huCDH19> 4F3 (1-471)(R17G,T47A,R141Q) VH1

QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGWYFDLWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 472

14033 HC [hu anti-<huCDH19> 4F3 (1-471)(R17G.T47A.D61E.D72E.R141Q) VH1

QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQAPGKGLEYVVAVIWYEGSNKYYAESVRG RFTISRDN SKNTLFLQMNSLRVE DTAV YY CARETGEGWYF DLWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 473

14034 HC [hu anti-<huCDH19> 4F3 (1-471)(R17G,T47A.D61E.D72E,W134Y.R141Q) VH1

QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYAESVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGYYFDLWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 474

14039 HC [hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-477)(R17G.D61E.D72E.K94N) VH1

QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKD RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 475

14040 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 VH1

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLTLSSLTAADTAVYFCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 476

14041 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-469)(T92K) VH1

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLKLSSLTAADTAVYFCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 477

14042 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-469)(T92K.D109E) VH1

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGS1SGYYWSW1RQPPGKGLEWIGY1YY1GSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLKLSSLT AADT AVYFCAREGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 478

14043 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-469)(T92K.W132Y.W135Y) VH1

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWTRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLKLSSLTAADTAVYFCARDGSSGYYRYFDPWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 479

14044 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-469)(T92K) VH1

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLKLSSLTAADTAVYFCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 480

14045 HC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARDSRYRSGWYDAFDIWGQGTMVTVSS SEQ ID NO: 481

14046 HC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-471)(D109E) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARESRYRSGWYDAFDIWGQGTMVTVSS SEQ ID NO: 482

14047 HC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-471)(D109E,W132Y) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARESRYRSGYYDAFDIWGQGTMVTVSS SEQ ID NO: 483

14048 HC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-471)D109E) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARESRYRSGWYDAFDIWGQGTMVTVSS SEQ ID NO: 484

14049 HC [hu anti-<huCDH19> 4F7 VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYSWSW1RQPPGKGLEW1GYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISL DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 485

14050 HC [hu anti-<huCDH19> 4F7 VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTYSGGSISSYSWSWIRQPPGKGLEW1GYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISL DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 486

14051 HC [hu anti-<huCDH19> 4F7 (1-468)(W113Y) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYSWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISL DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNYAFHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 487

14052 HC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-471)(R17G.D61E.D72E.W134Y) VH1 QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVISYEGTNEYYAESVKGR FTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDYSFDYWGQGTLVSVSS SEQ ID NO: 488

14053 HC [hu anti-<huCDH19> 4B10 VH1

q v q l v e s g g g w q p g r s l r l s c a a s g f t f s s y d m h w v r q a p g k g l e w v a v is y d g t n e y y a d s v k .g r FTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDWSFDYWGQGTLVSVSS SEQ ID NO: 489

14054 HC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-471)(R17G) VH1 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGTNEYYADSVKG RFTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDWSFDYWGQGTLVSVSS SEQ ID NO: 490

14055 HC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-471)(R17G,D61 E.D72E) VH1 QVQFVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFFFSSYDMHWVRQAPGKGFEWVAVISYEGFNEYYAESVKGR FTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDWSFDYWGQGTLVSVSS SEQ ID NO: 491

14056 HC [hu anti-<huCDH19> 4A9 VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWFAYFSYSGSTNYNPSLKSRVTLS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDFWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 492

14057 HC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-468)(F55I,A56G) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYFSYSGSTNYNPSLKSRVTLS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDFWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 493

14058 HC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-468)(F55I,A56G) VH1 QVQLQESGPGLVKPSEFLSLFCFVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYFSYSGSFNYNPSLKSRVFLS VDFSKNQFSLKLSSVFAADFAVYYCARNWAFHFDFWGQGFLVFVSS SEQ ID NO: 494

14059 HC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-468)(F55I,A56G,W113Y) VH1 QVQLQESGPGLVKPSEFLSLFCFVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYFSYSGSFNYNPSLKSRVFLS VDFSKNQFSLKLSSVFAADFAVYYCARNYAFHFDFWGQGFLVFVSS SEQ ID NO: 495

14060 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYFFFSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSFSYAQKFQGRV FMFRDFSFSFVFMELSSLRSEDFAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGFLVFVSS SEQ ID NO: 496

14061 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 VH1

QVQL VQSGAE VKKPGASVKV S CKV SG YFFFS YFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPIS V SFS YAQKFQGRV FMFRDFSFSFVFMELSSLRSEDFAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGFLVFVSS SEQ ID NO: 497

14062 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-469)(W133Y) VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYFFFSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSFSYAQKFQGRV FMFRDFSFSFVFMELSSLRSEDFAVYYCARGG1QLYLHFDYWGQGFLVFVSS

SEQ ID NO: 498

14063 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-469)(W133Y) VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYFFFSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSFSYAQKFQGRV FMFRDFSFSFVFMELSSLRSEDFAVYYCARGGIQLYLHFDYWGQGFLVFVSS SEQ ID NO: 499

14064 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-469)(W133Y) VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYFFFSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSFSYAQKFQGRV FMFRDFSFSFVFMELSSLRSEDFAVYYCARGG1QLYLHFDYWGQGFLVFVSS

SEQ ID NO: 500

14065 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470)(S82R,A99E) VH1 CVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFFFSSYAMNYVVRQAPGKGLEWVSFISGGGANFYYADSVKGR FFISRDNSKSFLYLQMNSLRAEDFAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGFFVFVSS SEQ ID NO: 501

14066 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470)(A99E,H105Y) VH1

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVKGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGGMGGYYYCMDVWÜQGTTVTVSS SEQ ID NO: 502

14067 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470)(A99E) VH1

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVKGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 503

14068 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470)(A99E) VH1

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVKGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 504

14069 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470)(D72E,A99E) VH1

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYAESVKGRF TISSDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 505

14070 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470)(H105Y) VH1

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVKGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAADTAVYYCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 506

14071 HC [hu anti-<huCDH19> 16A4.1 (1-474)(T144L) VH1

QVQLQESGPGLAKPSETLSLTCTVSGDSITSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDQRRIAAAGTHFYGMDVWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 507

14072 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGirNPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO; 508

14073 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-469)(W133Y) VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFTHWVRQAPGQGLEWMGIINPTSVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 509

14074 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYGARGG1QLWLHLDYWÜQGTLVTVSS

SEQ ID NO; 510

14075 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMG1INP1SVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 511

14076 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-469)(W133Y) VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 512

14077 HC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-474)(L92Q) VH1 QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVK.g r FT1SRDNSKNTLYLQMN SLRAEDSAVYYCARRAG1PGTTGYYYGMDVWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 513

14078 HC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-474)(R17G.L92Q) VH1 QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYGIHWVRQAPGKGLEWVAVTWYDGSNKYYADSVKG RFT1SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDSAVYYCARRAGIPGTTGYYYGMDVWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 514

14079 HC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-474)(R17G.D61E.D72E.L92Q) VH1 QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFTFSRYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYAESVKGR FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDSAVYYCARRAG1PGTTGYYYGMDVWGQGTTVTVSS

SEQ ID NO: 515

14080 HC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 VH1 QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSRYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGR FTISRDNSKNTLYLLMNSLRAEDSAVYYCARRAGIPGTTGYYYGMDVWGQÜTTVTVSS SEQ ID NO; 516

14081 HC [hu anti-<huCDH19> 25G10.1 VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 517

14082 HC [hu anti-<huCDH19> 25G10.1 (1-469)(D109E,W132Y.W135Y) VH1 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS VDT SKNQFSLKLS S VTAADT A VYYC AREOS SGYYRYFDPWGQGTLVTVS S SEQ ID NO: 51K

14083 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 519

14084 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGI1HPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 520

14085 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 521

14086 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 522

14087 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-469)(W133Y) VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLYLHFDYWGQGTLVTVSS SEQTDNO: 523

14088 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-469)(R27G,G82R) VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEVVMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 524

14089 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGTQLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 525

14090 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGEEWMGTTNPSGGDSTYAQKFQG RLTMT(;DTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR(iGIQLWLHFDYW(¡QGTLVTVSS

SEQ ID NO: 526

14091 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-469)(W133Y) VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 527

14092 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-469)(W133Y) VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO; 52S

14093 HC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO; 529

14094 HC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGTQLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 530

14095 HC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-469)(F90Y) VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 531

14096 HC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-469)(F90Y) VH1 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 532

14097 HC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-469)(F90Y,W133Y) VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVYM ELSS LRSEDTAVYYC A RGGIQLYL H FDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO; 533

14098 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 534

14099 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 535

14100 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-469)(W133Y) VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 536

14101 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-469)(W133Y) VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 537

14102 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-469)(F90Y) VH1

QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYF1HWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 538

13591 HC [hu anti-<huCDH19> 4F7 VH1

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYSWSWIRQPPGKGLEWIGYrYYSGSTNYNPSLKSRVTISL DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDYWGQGTLVTVSS SEQ ID NO: 539

14301 HC [hu anti-<huCDH19> 2G6 VH1

QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKD RFTISRDNSKNTLYLQMKSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 540

14302 HC [hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-477)(R17G,K94N) VH1

QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKD RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 541

14303 HC [hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-477)(D61E.D72E) VH1

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKÜLEWVAFIWYEGSNKYYAESVKD RFTISRDNSKNTLYLQMKSLRAEDTAWYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ TD NO: 542

14304 HC [hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-477)(R17G) VH1

QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKD RFTTSRDNSKNTLYLQMKSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSS SEQ ID NO: 543

Tabla lid: Secuencias de aminoácidos de la región variable de cadena ligera

13586 LC [hu anti-<huCDH19> 4F3 VL1

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO: 544

13589 LC [hu anti-<huCDH19> 4A9 VL1

QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYAVHWYQQFPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSRLSGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 545

13590 LC [hu anti-<huCDH19> 4B10 VL1

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYHQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FALTISSLEPEDFAVYYCQQYSNSWTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO: 546

13874 LC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 VL1

DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVAGSYLAYVYQQKPGQAPRLLISGASSRATGIPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDF AVYY CQQ Y GKSPITF GQGTRLEMKG SEQ ID NO: 547

13875 LC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 VL1

E1VLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISGLEPEDFAVYHCQQYüNSPLTFGGGTKVEIKR

SEQ ID NO: 548

13876 LC [hu anti-<huCDH19> 16A4.1 VL1

ErVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGTPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFA V YYCQQYÍISSPFTK i< ¡C ¡TKVE1KR

SEQ ID NO: 549

13877 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 VL1

EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGrPARVSGSGSGTEF TLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVEIKR SEQ ID NO: 552

13878 LC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDESDYYCATWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 554

13879 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDESDYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 555

13880 LC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDESDYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 556

13881 LC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 VL1

QSVLTQSPSASGTPGQKVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO; 557

13882 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VL1 HSVLTQSPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGCiGTKLTVLG

SEQ ID NO: 555

13883 LC [hu anti-<huCDH19> 25G10.1 VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAWHCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKR SEQ ID NO; 556

13885 LC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 VL1 QSALTQPPSTTGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDESDYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO; 557

14022 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLrYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFTVYYCQQYGSSFTFGPGTKVDIKR SEQ ID NO: 558

14024 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q.T102A.P141Q) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFTFGQGTKVDIKR SEQ ID NO: 559

14025 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q,T102A) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFTFGPGTKVDIKR SEQ ID NO: 560

14026 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q,T102A) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDF A VYY CQQ YGS SFTFGPGTK VDTKR SEQ ID NO: 561

14027 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q,T102A.P141Q) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFTFGQGTKVDIKR SEQ ID NO: 562

14028 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q,T102A.P141Q) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFTFGQGTKVD1KR

SEQ ID NO; 563

14029 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(R29Q,N30S) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFTVYY CQQYGSSFTFGPGTK.VDI KR

SEQ ID NO: 564

14030 LC [hu anti-<huCDH19> 4F3 VL1

C1VLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL1YGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTT SRLEPEDF AVYYCQQYGS S WTFGQGTK VEIKR SEQ ID NO: 565

14031 LC [hu anti-<huCDH19> 4F3 VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO: 566

14032 LC [hu anti-<huCDH19> 4F3 VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO: 567

14033 LC [hu anti-<huCDH19> 4F3 VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIFDRFSGSGSGTD FTLTI SRLEPEDF AVYYCQQYGS SWTFGQGTK VEIKR SEQ ID NO: 568

14034 LC [hu anti-<huCDH19> 4F3 VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO: 569

14039 LC [hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-234)(C42S.D110E) VL1 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTAT LTISGTQA MDEA DYYCQ A WE SSTVVFGGGTK LTVLG SEQ ID NO: 570

14040 LC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235)(H105Y) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISGLEPEDFAV YY CQQYGN SPLTFGGGTKVEIKR SEQ ID NO: 571

14041 LC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235)(H105Y) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISGLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTK VEIKR SEQ ID NO: 572

14042 LC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235)(H105Y) VL1 E1VLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISGLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVETKR SEQ ID NO: 573

14043 LC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235)(H105Y) VL1 E1VLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLL1FGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISGLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKR SEQ ID NO: 574

14044 LC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235KG95R.H105Y.G141Q1 VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKTGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTIS RL EPEDFA VYYCQQYÜNS PLTFGQGTK VEIKR SEQ ID NO: 575

14045 LC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-235)(G149R) VL1 DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVAGSYLAWYQQKPGQAPRLLISGASSRATGIPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGKSPITFGQGTRLEMKR SEQ ID NO: 576

14046 LC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-235)(G149R) VL1 D1VLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVAGSYLAWYQQK.PGQAPRLL1SÜASSRATG1PDRFSÜSGSGT DFTLTTSRLEPEDFAVYYCQQYGKSPITFGQGFRLEMKR SEQ ID NO: 577

14047 LC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-235)(G149R) VL1 DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVAGSYLAWYQQKPGQAPRLLISGASSRATGIPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDFAVYY CQQY GKSPITFGQGTRLEMKR SEQ ID NO: 578

14048 LC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-235)(S57Y,G149R) VL1 DIVLTQSPGTLSLSPGERAFLSCRASQSVAGSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGKSPITFGQGTRLEMKR SEQ ID NO: 579

14049 LC [hu anti-<huCDH19> 4F7 (1-239)(H57Y) VL1 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGWVFGGGTRLTVLG SEQ ID NO: 580

14050 LC [hu anti-<huCDH19> 4F7 (1-239)(H57Y,D110E) VL1 QSVLTQPPSVSGAPGQRVFISCTGSSSNIGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYESSLSGWVFGGGTRLTVLG SEQ ID NO: 581

14051 LC [hu anti-<huCDH19> 4F7 (1-239)(D110E) VL1 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIHGNSNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYESSLSGWVFGGGTRLTVLG SEQ ID NO: 582

14052 LC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-236)(H45Q,A90T) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQYSNSWFFGQGTKVE1KR

SEQ ID NO: 583

14053 LC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-236)(H45Q,A90T) VL1 EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDF AVYY CQQY SNS WTF GQGTKVEIKR SEQ ID NO: 584

14054 LC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-236)(H45Q,A90T) VL1

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYQQRPÜQAPRLL1YÜASSRATGIPDRFSÜSÜSÜTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQYSNSWTFGQÜTKVEIKR SEQ ID NO: 585

14055 LC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-236)(H45Q,A90T) VL1

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQYSNSWTFGQÜTKVEIKR SEQ ID NO: 586

14056 LC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-239)(F47L) VL1

QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYAVHWYQQLPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSRLSGWVFÜÜGTK.LTVLG

SEQ ID NO: 587

14057 LC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-239)(F47L) VL1

QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYAVHWYQQLPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLA1TGLQAEDEADYYCQSYDSRLSGWVFGGGTKLTVLG

SEQ ID NO: 588

14058 LC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-239)(F47L,D110E) VL1

QSVLTQPPSVSÜAPGQRVTISCTÜSSSNIGTGYAVHWYQQLPGTAPKLL1YGNNNRPSÜVPDRFSGSK.SG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYESRLSGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 589

14059 LC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-239)(F47L,D110E) VL1

QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNTGTGYAVHWYQQLPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITÜLQAEDEADYYCQSYESRLSÜWVFÜÜÜTKLTVLÜ SEQ ID NO: 590

14060 LC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-235)(S102A) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 591

14061 LC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-235)(K45Q,S102A) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISÜLQSEDEADYYCATWDDSLNÜWVFÜÜÜTKLTVLÜ SEQ ID NO: 592

14062 LC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-235)(K45Q,S102A) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 593

14063 [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-235)(K45Q,S102A.D111E.N135Q) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDESLQGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 594

14064 LC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-235)(W109Y) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLATSGLQSEDESDYYCATYDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 595

14065 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 VL1

EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARVSGSGSGTEF TLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVEIKR SEQ ID NO: 596

14066 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 VL1

EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARVSGSGSGTEF TLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGÜTKVEIKR SEQ ID NO: 597

14067 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-234)(Q97E.S98P) VL1

EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARVSGSGSGTEF TLTISSLEPEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVEIKR SEQ ID NO: 598

14068 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-234)(V78F.Q97E.S98P) VL1

EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARFSGSGSGTEF TLTISSLEPEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVEIKR SEQ ID NO: 599

14069 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-234)(V78F,97E,S98P) VL1

EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARFSGSGSGTEF TLTISSLEPEDFA VYYCQQ YNYWPLTFGGGTK V El K R

SEQ ID NO: 600

14070 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 VL1

E1VMTQSPVTLSLSLÜERATLSCRASQS1SSNLAWFQQK.PGQAPRLL1YGAFTRATÜ1PARVSGSÜSGTOF TLTTSSLQSEDFA VYYCQQ YNYWPLTFGGGTK VEIKR SEQ ID NO: 601

14071 LC [hu anti-<huCDH19> 16A4.1 (1-235)(G141Q) VL1

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGQGTKVEIKR SEQ ID NO: 602

14072 LC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-235)(K45Q,S102A) VL1

QSALTQPPSTTGTPGQRVTISCSGSRSNIÜSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 603

14073 LC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-235)(K45Q,S102A) VL1

QSALTQPPSTTGTPGQRVT1SCSGSRSN1GSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 604

14074 LC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-235)(T11V,K45Q.S102A) VL1 QSALTQPPSVTGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO; 605

14075 LC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-235)(T11V.K45Q.S102A.D111E.N135Q) VL1 QSALTQPPSVTGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCATWDESMQGWVFüüGTKLTVLG

SEQ ID NO: 606

14076 LC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-235)(T11V.K45Q.S102A.W109Y,D111E.N135Q) VL1 QSALTQPPSVTGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCATYDESMQGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 607

14077 LC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231)(C42S) VL1 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVSWYQQKPGQSPILVIYQDNKWPSGIPERFSGSNSGNTA TLTISGTQAMDEADYY CQAWD S STWFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 608

14078 LC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231)(C42S) VL1 SYELTQPPSVSVSPGQTASrrCSGDRLGEKYVSWYQQKPGQSPILVTYQDNKWPSGTPERFSGSNSGNTA TLTIS( ¡TQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGC ITKLTVLÍ i

SEQ ID NO: 609

14079 LC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231)(C42S.D110E) VL1 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVSWYQQKPGQSP1LVIYQDNKWPSGIPERFSGSNSGNTA TLTISGTQAMDEADYYCQAWESSWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO; 6L0

14080 LC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231)(C42Y) VL1 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVYWYQQKPGQSPILVIYQDNKWPSGIPERFSGSNSGNTA TLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 611

14081 LC [hu anti-<huCDH19> 25G10.1 (1-235)(H105Y) VL1 ErVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTIS RL EPEDFA VYYCQQYGNS PLTFGGGTK VEIKR SEQ ID NO: 612

14082 LC [hu anti-<huCDH19> 25G10.1 (1-235)(H105Y) VL1 E1VLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKR SEQ ID NO: 613

14083 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235)(S7P) VL1 HSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWTQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 614

14084 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235)(H1Q.S7P) VL1 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSÜVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 615

14085 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235)(H1Q.S7P.W109Y) VL1 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVYDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ IDNÜ: 616

14086 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235)(H1Q,S7P.W109Y.D111E.N135Q) VL1 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVYDESLQGWVFGGGTKLTVLG SEQ IDNÜ: 617

14087 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235)(H1Q.S7P.W109Y.D111E.N135Q) VL1 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVYDESLQGWVFGGGTKLTVLG SEQ IDNÜ: 618

14088 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235)(H1Q.S7P) VL1 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLL1YTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 619

14089 LC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-235)(S7P) VL1 QSVLTQPPSASGTPGQKVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 620

14090 LC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-235)(S7P.D111E) VL1 QSVLTQPPSASGTPGQKVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLArSGLQSEDEADYYCAVWDESLNGWVFGGGTKLTVLG

SEQ ID NO: 621

14091 LC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-235)(S7P.D111E) VL1 QSVLTQPPSASGTPGQKVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDESLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 622

14092 LC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-235)(S7P.W109Y.D111E.N135Q) VL1 QSVLTQPPSASGTPGQKVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVYDESLQGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 623

14093 LC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-235)(K45) VL1 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDESDYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 624

14094 LC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-235)(K45Q.S102A) VL1 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYQQLPÜTAPKVL1YTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLA1SGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG

SEQ ID NO: 625

14095 LC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-235)(K45Q.S102A) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 626

14096 LC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-235)(K45Q.S102A.D111E) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSCDEADYYCAAWDESLNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 627

14097 LC[hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-235)(K45Q,S102A.D111E.N135Q) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCAAWDESLQGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 62 X

14098 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-235)(K45Q,S102A) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRESGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 629

14099 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-235)(K45Q,S102A.D111E.N135Q) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDESMQGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 630

14100 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-235)(K45Q.S102A.W109Y.D111E.N135Q) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCATYDESMQGWVFGGGTKLTVLG

SEQ ID NO: 631

14101 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-235)(K45Q.S102A.W109Y) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATYDDSMNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 632

14102 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-235)(K45Q.S102A) VL1

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSN1GSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 633

13591 LC [hu anti-<huCDH19> 4F7 VL1

QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYDVHWYQQLPGTAPKLL1HGNSNRPSGVPDRFSGSK.SG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGWVFGGGTRLTVLG SEQ ID NO: 634

14301 LC [hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-234)(D110E) VL1

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTCWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTAT LTISÜTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 635

14302 LC [hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-234)(C42S.D110E) VL1

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTAT LTISGTQA MDEA DYYCQ A WE SSTVVFGGGTK LTVLG SEQ ID NO: 636

14303 LC [hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-234)(C42S,D110E) VL1

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTAT LTTSGTQAMDEADYYCQAWESSTWFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 637

14304 LC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231)(C42S) VL1

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVSWYQQKPGQSPILVIYQDNKWPSGIPERFSGSNSGNTA TLTISGTQA MDE ADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLG SEQ ID NO: 63X

Secuencias de polinucleótido y aminoácidos de la región variable y constante anti-CDH19

Tabla Illa: Secuencias de polinucleótidos y aminoácidos de la región variable y constante de la cadena pesada

2G6

CAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGT GCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGGCATTTATATüGTATGATüGAAGTAATAAATAGTATGCAGACTCCGTGAAGGAC CGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAAAAGCCTGAGAGCT

GAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAAGGGCCGÜTATAATAGGAACTATAGGCTACTACTAC GGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCG GTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTC AAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCAC ACGTTCCGGGGTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGGAGGGTGGTGACCGTGCCCTCGA GCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGAC AAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTC CTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACC CCTGAGGTGACATGGGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTGAAGTTCAACTGGTAC GTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTAC.AACAGCACGT ACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCACiGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCA AGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCT GACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGC CGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCA AGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAüGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTüATüCATGAG GCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 639

QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKD RFTISRDNSKNTLYLQMKSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK.TTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 640

4A2 CAÜÜTGCAÜCTGCAÜGAGTCGÜGCCCAÜGACTGGTGAAÜCCTrCACAGACCCTGTCCCTCACCTÜC ACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGG AAGGGCCTGGAGTGGATTGGGTACATCTATTACACTGGGAGCGCCTACTACAACCCGTCCCTCAAG AGTCüAüTTACCATATCAGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACT GCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGAAGCAGTGGCTGGTACTTCCAGTATTGG GGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCA CCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCICGGCTGTC CTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACC CAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCC CAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTC AGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGC GTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCG TCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAA GCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGT GTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAA AGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTC'C'GACGGC'TCCTTCTTC'CTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACA AGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACT AC ACGC AGAAG AGCCTCTCCCT GTCTCCGGGT A A ATG A SEQ ID NO: 641

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRV TISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT1SKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK.L TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 642

A9 CAGGTGCAGCTÜCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGC ACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGAAAGGGA CTGGAGTGGTTTGCATATTTCTCTTACAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGA GTCACCTTATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCG GACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGAACTGGGCCTTCCACTTTGACTTCTGGGGC'CAGGGAACC CTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGA GCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGG TGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCÜÜCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAG GACTC'TACTCC'CTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT GCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAC AAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTC CCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGAC GTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCC TGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCC CCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCC CCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAAC'CAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGC'TTCTATCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTC CCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGC AGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGA GCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 643

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWFAYFSYSGSTNYNPSLKSRVTLS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGT AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN TKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNW YVDGVE VFTNAKTKPREEQYNSTYRV V SVLTVLFIQD WLN GKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTYD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 644

4B10 CAÜÜTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAÜÜCGTGGTCCAÜCCTGGGAGGTCCCTGAÜACTCTCCTGT GCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTATGACATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGGCAGTTATATCATATGATGGAACTAATGAATACTATGCAGACTCCGTGAAGGGC

CüATTCACCATCTCCAGAGACACTTCCAAGAACACGCTGTATTTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCT GAGGACACGGCTGTATATTACTGTGCGAGAGAACGATATTTTGACTGGTCTTTTGACTACTGGGGC CAGGGAACCCTGGTCAGCGTCTCTAGTCiCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCC TCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAA CCX K iTGAC'GGTC }TC( ITGGAACTCAG( KX ICCCTGACCAÍ ICCK ÍCGTGCACAC'CTTCCÍX IGCTGTCCTA CAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAG ACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAA ATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGT CTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTG GTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGT GCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCC TCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCC CTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTA CACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAG GCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAG ACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTC'TTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAG AGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTAC ACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 645

QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGTNEYYADSVKGR FTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDWSFDYWGQGTLVSVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDC^jSFFLYSK LTVDKSRVVQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 646

F3 CAGÜTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTÜGTCCAGCCTGGÜAGGTCCCTGAGACTCTCCTGT GCAGCGTCTGGATTCTCCTTCAGTAGCTATGACATGGACTGGGTCCGCCAGACTCCAGGCAAGfiGG CTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAATACTATGCAGACTCCGTGAGGGGC CGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTTTCTGCAAATGAAGAGCCTGAGAGTC GAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGAAACTGGGGAGGGCTGGTACTTCGATCTCTGGGGC CGTGGCACCCTGÜTCACCGTCTCTAÜTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCT

c c t c c a a g a g c a c c t c t g g g g g c a c a g c g g c c c t g g g c t g c c t g g t c a a g g a c t a c t t c c c c ü a a c CfiGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTAC AGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGA

c c t a c a t c t g c a a c g t g a a t c a c a a g c c c a g c a a c a c c a a g g t g g a c a a g a a a g t t g a g c c c a a a TCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTC

t t c c t c t t c c c c c c a a a a c c c a a g g a c a c g c t c a t g a t g t c c c g g a c c c c t g a g g t c a c a t g c g t g g t g g t g g a c g t g a g c c a c g a a g a c c c t g a g g t c a a g t t c a a c t g g t a c g t g g a c g g c g t g g a g g t g c a t a a t g c c a a g a c a a a g c c g c g g g a g g a g c a g t a c a a c a g c a c g t a c c g t g t g g t c a g c g t c c t c a c c g t c c t g c a c c a g g a c t g g c t g a a t g g c a a g g a g t a c a a g t g c a a g g t c t c c a a c a a a g c c c t c c c a g c c c c c a t c g a g a a a a c c a t c t c c a a a g c c a a a g g g c a g c c c c g a g a a c c a c a g g t g t a c a c c c t g c c c c c a t c c c g g g a g g a g a t g a c c a a g a a c c a g g t c a g c c t g a c c t g c c t g g t c a a a g g c t t c t a t c c c a g c g a c a t c g c c g t g g a g t g g g a g a g c a a t g g g c a g c c g g a g a a c a a c t a c a a g a c c a c g c c t c c c g t g c t g g a c t c c g a c g g c t c c t t c t t c c t c t a t a g c a a g c t c a c c g t g g a c a a g a g c a g g t g g c a g c a g g g g a a c g t c t t c t c a t g c t c c g t g a t g c a t g a g g c t c t g c a c a a c c a c t a c a c g c a g a a g a g c c t c t c c c t g t c t c c g g g t a a a t g a

SEQ ID NO: 647

q v q l v e s g g g w q p g r s l r l s c a a s g f s f s s y d m d w v r q t p g k g l e w v a v iw y d g s n k y y a d s v r g r f t is r d n s k n t l f l q m n s l r v e d t a v y y c a r e t g e g w y f d l w g r g t l v t v s s a s t k g p s v f p l a p s s k s t s g g t a a l g c l v k d y f p e p v t v s w n s g a l t s g v h t f p a v l q s s g l y s l s s w t v p s s s l g t q t y ic n v n h k p s n t k v d k k v e p k s c d k t h t c p p c p a p e l l g g p s v f l f p p k p k d t l m is r t p e v t c v v v d v s h e d p e v k f n w y v d g v e v h n a k t k p r e e q y n s t y r v v s v l t v l h q d w l n g k e y k c k v s n k a l p a p ie k t is k a k GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 648

4F7 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGC ACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTAGTTACTCCTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAÜGGA CTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTACAGTGGGAGCACCAACTACAAC'CCCTCCCTCAAGAGTCGA GTCACCATATCATTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCG GACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGGAACTGGGCCTTCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACC CTGGTCACCGTCTCTAGTGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGA GCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGG TGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAG GACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCT GCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAC AAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTC CCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGAC GTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGC CAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCC TGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCC CCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCC CCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCC CAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTC CCGTGCTGGACTCCGACGGCTCC'TTCTTC'CTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGC AGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGA GCCTCTCCCTGTCTCCGGGT AAAT GA SEQ ID NO: 649

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYSWSWIRQPPGKGLEW1GYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISL DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKS RWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 650

16A4 CAGÜTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTÜGCGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGC ACTGTCTCTGGTGACTCCATCACTAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGA CTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTACAGCGGGAGCACCAATTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGA GTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCTGCG GACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATCAAAGGCGGATAGCAGCAGCTGGTACCCACTTCTAC GGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACTGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCC GTCTTCCCCCTGGCGCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTC AAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGGGCCCTGACCAGCCiGCGTGCA CACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCC AGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGA CAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACT CCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGAC CCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTA CGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGT ACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCA AGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCACiCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCT GACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGC CGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCA AGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAG GCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 651

QVQLQESGPGLAKPSETLSLTCTVSGDSITSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDQRRIAAAGTHFYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDP EVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SKLTVDKSRWQQCNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 652

16C1 CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACTTGT ACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGA CTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTACATTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGA GTCACCATGTCAATAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTÜACGCTGAGCTCTTTGACCGCTGCG GACACGGCCGTGTATTTCTGTGCGAGAGATGGGAGCAGTGGCTGÜTACCGGTGGTTCGACCCCTGG GGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAÜGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCG CCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGGGCCCTGACCAÜCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTC CTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAÜCGTGÜTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACC CAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCC CAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTC AGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGC GTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCG TCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAA GCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGT GTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAA AGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACA AGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACT ACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 653

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLTLSSLTAADTAVYFCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP1EKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVCWCSNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 654

17H8 CAÜÜTGCAGCTGCAÜGAGTCGGGCCCAÜGACTÜGTGAAGCCTTCGGAÜACCCTGTCCCTCACGTGC ACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAATAGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGCiGA CTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTACATTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGC ÜTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCTGCG GACACGGCCCTGTATTACTGTGCGAGAGATTCCCGGTATAGAAGTGGCTGGTACGATGCTTTTGAT ATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCC CTGGCGCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAÜCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTAC TTCCCCG AACCGGT GACGGT GTCGTGG AACTCAGGGGCCCT GACC AGCGGCGTGC AC ACCTT CCCG GCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGG GCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTT GAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGA CCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCA CATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGC GTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGT CAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAA CAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATGTGCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAC AGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTG GTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAA CTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTG GACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAA CCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 655

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARDSRYRSGWDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFN W YVDGVEVHNAKTKPREEQ YN STYRV V S VLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAP1EKT1SKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: ⁶⁵⁶

19B5 CAGGTGCAGTTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGC AAGGTTTCTGGATACACCTTCACCAGCTACTTTATTCACTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGACAAGGG CTTGAATGGATGGGAATTATCAACCCTATTAGTGTTAGCACAAGCTACGCACAGAAGTTCCAGGGC AGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTTCATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATC TGAGGACACGGCCGTGT ATTACTGTGCGCGAGGGGGGATACAGCTATGGTTACATTTGGACT ACTO GGGCC'AGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGC GCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGGGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGT CCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCAC CCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGC CCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGT CAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATG CGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGG

AüüTGCATAATGCCAAGACAAAGCCüCGGGAüGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTüTGGTCAGC GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAA AGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGG TGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCA AAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTAC AAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGfiCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGAC AAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCAC TACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 657

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 658

0D3 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGÜCTÜAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGÜTTTCCTGC AAGGTTTCTGGATACACCTTCACCAGCTACTTTATTCACTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGACAAGGG CTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTATTAGTGTTAGCACAAGCTACGCACAGAAGTTCCAGGGC AGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTTCATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATC TGAGGACACGGCCGTGT ATTACTGTGCGCGAGGGGGGATACAGCTATGGTTACATTTTGACTACTG GGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGC

g c c c t c c t c c a a g a g c a c c t c t g g g ü g c a c a g c ü g c c c t g g g c t g c c t ü g t c a a g g a c t a c t t c c c CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGGGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGT

c c t a c a g t c c t c a g g a c t c t a c t c c c t c a g c a g c g t g g t g a c c g t g c c c t c c a g c a g c t t g g g c a c c c a g a c c t a c a t c t g c a a c g t g a a t c a c a a g c c c a g c a a c a c c a a g g t g g a c a a g a a a g t t g a g c c c a a a t c t t g t g a c a a a a c t c a c a c a t g c c c a c c g t g c c c a g c a c c t g a a c t c c t g g g g g g a c c g t c a g t c t t c c t c t t c c c c c c a a a a c c c a a g g a c a c c c t c a t g a t c t c c c g g a c c c c t g a g g t c a c a t g c g t g g t g g t g g a c g t g a g c c a c g a a g a c c c t g a g g t c a a g t t c a a c t g g t a c g t g g a c g g c g t g g a g g t g c a t a a t g c c a a g a c a a a g c c g c g g g a g g a g c a g t a c a a c a g c a c g t a c c g t g t g g t c a g c g t c c t c a c c g t c c t g c a c c a g g a c t g g c t g a a t g g c a a g g a g t a c a a g t g c a a g g t c t c c a a c a a a g c c c t c c c a g c c c c c a t c g a g a a a a c c a t c t c c a a a g c c a a a g g g c a g c c c c g a g a a c c a c a g g t g t a c a c c c t g c c c c c a t c c c g g g a g g a g a t g a c c a a g a a c c a g g t c a g c c t g a c c t g c c t g g t c a a a g g c t t c t a t c c c a g c g a c a t c g c c g t g g a g t g g g a g a g c a a t g g g c a g c c g g a g a a c a a c t a c a a g a c c a c g c c t c c c g t g c t g g a c t c c g a c g g c t c c t t c t t c c t c t a t a g c a a g c t c a c c g t g g a c a a g a g c a g g t g g c a g c a g g g g a a c g t c t t c t c a t g c t c c g t g a t g c a t g a g g c t c t g c a c a a c c a c t a c a c g c a g a a g a g c c t c t c c c t g t c t c c g g g t a a a t g a

SEQ ID NO: 659

q v q l v q s g a e v k k p g a s v k v s c k v s g y t f t s y f ih w v r q a p g q g l e w m g iin p is v s t s y a q k f q g r v t m t r d t s t s t v f m e l s s l r s e d t a v y y c a r g g iq l w l h f d y w g q g t l v t v s s a s t k g p s v f p l a p s s k s t s g g t a a l g c l v k d y f p e p v t v s w n s g a l t s g v h t f p a v l q s s g l y s l s s w t v p s s s l g t q t y ic n v n h k p s n t k v d k k v e p k s c d k t h t c p p c p a p e l l g g p s v f l f p p k p k d t l m is r t p e v t c v w d v s h e d p e v k f n w y v d g v e v h n a k t k p r e e q y n s t y r w s v l t v l h q d w l n g k e y k c k v s n k a l p a p t e k t t s k a k g q p r e p q v y t l p p s r e c m t k n q v s l t c l v k g f y p s d ia v e w e s n g q p e n n y k t t p p v l d s d g s f f l y s k LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 660

22D1 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAGGGTTTCCTGC AAGGTTTCTGGATACACCTTCACCAGCTACTTTATTCACTGGGTACGCCAGGCCCCTGGACAAGGG CTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTATTAGTGTTAGCACAAGCTACGCACAGAAGTTCCAGGGC AGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTTCATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATC TGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGAGGGGGGATACAGCTATGGTTACATTTGGACTACTG GGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGC GCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGÜGGCACAGCÜGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCC CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGGGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGT CCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGGAC CCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGC CCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGT CAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATG CGTGGTGGTGGACGTGAÜCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGG AGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGC GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAA AGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGG TGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCA AAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTAC AAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGAC AAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCAC TACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTC'CGGGTAAATGA

SEQ ID NO: 661

QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFN W YVDGVEVHNAKTKPREEQ YN STYRV V S VLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAP1EKT1SKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 662

2G10 GAGGTGCAACTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTÜGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGT GCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGTTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGG CTGGAGTGGGTCTCAACTATTAGTGGTGGTGGTGCTAACACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGC CGGTTCACCATCTCCAGTGACAATTCCAAGAGCACGCTGTATCTGGAAATGAACAGCCTGAGAGCC GCGGACACGGCCGTATATCACTGTGCGAAAGGGGGAAFGGGGGGATACTACTACGGTATGGACGT CTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCFCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCT GGCGCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTT CCCCGAACCGGTÜACGGTGTCGTÜGAAGTGAGGÜÜGCCTGACCAÜCÜGCGTGGACACCTTCCCGGG TGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGC ACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGA GCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACC GTCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGAGACCCTCATGATCTGCCGGACCCCTGAGGTCACA TGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCC'TGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGT GGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCA GCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACA AAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCGAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCAGAG GTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTC^jC^jTC AAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTA CAAGACCACGCCTCCCGTÜCTGÜACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGAC AAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCAC TACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 663

EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVKGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAADTAVYHCAKGGMGGYYYGMDWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTYLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 664

23A10 CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGT GCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGTCGCTATGGCATACACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGG CTGGAGTGGGTGGCAGTT ATAT GGT ATGATGGAAGT A AT A AATACT ATGCAGACTCCGTüA AüGGC CGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCTAATGAACAGCCTGAGAGCC GAGGACTCGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAAGGGCCGGTATACCTGGAACTACGGGCTACTACTAT GGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCC GTCTTCCCCCTGGCGCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTC AAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGGGCCCTGACCAGCCjCjCGTGCA CACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCC AGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGA CAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACT CCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGAC CCCTGAGGTCACATGCÜTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTA

c g t g g a c g g c :g t g g a g g t g c a t a a t ü € c a a g a c a a a g c c g c g g g a g g a g c a g t a c a a c :a g c a c g t ACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCA AGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATÜACCAAGAACCAGGTCAGCCT GACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGC CGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCA AGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAG GCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 665

QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSRYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGR FTISRDNSKNTLYLLMNSLRAEDSAVYYCARRAG1PGTTGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTV SWN SGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSS W TYPS SSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVS FIEDPEVKFNWYVDGVEVITNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 666

5F8 CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGC AAt ÍGCA I'Cl GGA'l ACACL'n'CACCAGC'i AC1A IA 11C AC TGGG rGCGCCAGGCCCCi'GGACAACKiA CTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCCAGTGGTGGTAGCACAAGGTACGCACAGAAGTTCCAGGG CAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTTCATGGAGCTGAGCAGCCTGAGAT CTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGAGGGGGAATACAGCTATGGTTACATTTTGACTACT GGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCÜTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGG CGCCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCC CCGAACCGGTGACGGTGTCGTGG.AACTCAGGGGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTG TCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCA CCCAGACCTACATCTGCAACÜTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGÜTGGACAAÜAAAÜTTGAÜ CCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCG TCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACAT GCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTG GAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAG CGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAA AGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGG TGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCA AACKtCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTAC AAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGAC

a a g a g c a g g t g g c a g c a g g g g a a c g t c t t c t c a t g c t c c g t g a t g c a t g a g g c t c t g c a c a a c c a c TACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 667

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGrSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 668

25G10 CAÜÜTGCAÜCTGCAÜGAGTCGÜGCCCAÜÜACTGGTGAAÜCCTTCGGAÜACCCTGTCCCTCACCTÜC ACTGTCTCTGGTGGCTCCATCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCCCAGGGAAGGGA CTGGAGTGGATTGGGTATATCTATTACATTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGA GTCACCATGTCAGTAüACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTüTGACCGCTGCG GACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGAGCAGTGGCTGGTACCGGTGGTTCGACCCCTGG GGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGCG CCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCC GAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGGGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTC CTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACC CAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCC CAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTC AGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGC GTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCG TCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAA GCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGT GTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAA AGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACA AGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACA AGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACT AC ACGC AGAAG AGCCTCTCCCT GTCTCCGGGT A A ATG A SEQ ID NO: 669

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG SEQ ID NO: 670

6D1 CAGGTGCAGTTGGTGCAGTCTGGGEjCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGT AAGGCATCTAGATACACCTTCACCAGCTACTATATGTCCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGG CTTGAGTGGATGGGAATAATCCACCCTAGTGGTGGTGACACAACCTACGCACAGAAGTTCCAGGGC AGAGTCACCATGACCGGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATC TGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGGGATAAAACTATGGTTACATTTTGACTATTG GGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGC GCCC'TCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTC'AAGGACTACTTCCC CGAACCGGTÜACGGTGTCGTGGAACTCAGGGGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGT CCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCAC CCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGC CCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGT CAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATG CGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGÍJTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGG AGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGC GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAA AGCCCTCCC'AGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGG TGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCA AAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTAC AAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGAC AAGAGCAGGTGGGAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCAC TACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 671

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGÜIKLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV\rVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 672

26F12 CAGüTGCAGTTGüTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGüGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGC AAGGCATCTAGATACACCTTCACCAACTACTATATGTCCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGG CTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTAGTGGTGGTGACTCAACCTACGCACAGAAGTTCCAGGGC AGACTCACCATGACCGGGGACACGTCCACGAGCAC'AGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATC TGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGGGGGATACAACTATGGTTACATTTTGACTACTG GGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTTCCACCAAGGGCCCATCCGTCTTCCCCCTGGC

g c c c t c c t c c a a g a g c a c c t c t g g g g g c a c a g c g g c c c t g g g c t g c c t g g t c a a g g a c t a c t t c c c CGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGGGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGT CCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCAC CCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGC CCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGT CAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATG CGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGACiCjTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGG AGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGC GTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATÜGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAA AGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGG TGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCA AAGGCTTCTATCCGAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAAGAACTAC AAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGAC AAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCAC TACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA SEQ ID NO: 673

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTWMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLFIQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSL SL SPGK SEQ ID NO: 674

Tabla IlIb: Secuencias de polinucleótidos y aminoácidos de la región variable y constante de la cadena ligera

2G6 TCCTATGAACTGACTCAGCCACCCTCAGTGTGCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGC TCTGGAGATAGGTTGGGGÜAAAAATATACTTGCTÜGTATCAÜCAÜAÜGCCAGGCCAGTCCCCTTTG CTGGTCATCTATCAAGATACCAAGCGÜCCCTCAGGGATCCCTÜAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCT GGTAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGFjCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAG GCGTGGGACAGCAGCACTGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAA GGCCAACCCCACTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTCCAAGCCAACAAGGCCACACT AGTGTGTCTGATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCTGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATGGCAGCCC CGTCAAGGCGGGAGTCjCiAGACCACCAAACCCTCCAAACAGAfiCAACAACAAGTACCiCGGCCAGCA GCTACCTGAGCCTGACGCCCGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAACiCTACAGCTGCCAGGTCACGCAT GAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATGA SEQ ID NO: 675

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTCWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTAT LTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY PGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVA PTECS SEQ ID NO: 676

4A2 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCT GCAGGÜCCAGTCGGAATATTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGÜTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCT CCCAGGCTCCTCATCTATGGTCCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGT GGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTACAGTGTATTAC TGTCAGCAGTATGGTAGCTCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAACGTACGGTG GCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTG,AAATCTGGAACTGCCTCTGTTG TGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCC AATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCA TCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA SEQ ID NO: 677

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRNISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFTVYYCQQYGSSFTFGPGTKVD1KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR

( iEC

SEQ JD NO: 678

A9 CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGACAGAGGGTCACCATCTCCTGC ACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGACAGGTTATGCTGTACACTGGTACCAGCAGTTTCCAGGAACA GCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAACAATCGGCCCTCAGGGGTTCCTGACCGATTCTCTGGCT CCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATT ACT( XXAGTCCTATC ÍACAC iCA( iACT ( tAC ITG( tTT (XX ITGTTC( X iC( X iAC ¡C ^{j C}jACCAAÍ ¡CT( jACCGTCC TAGGTCAGCCCAAGGCCAACCCCACTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTCCAAGCCA ACAAGGCCACACTAGTGTGTCTGATCAGTÜACTTCTACCCGÜGAÜCTGTGACAGTGGCCTÜGAAGG CAGATGGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCAAACCCTCCAAACAGAGCAACAACAAG TACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCTGACGCCCGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTG CCA(j(iTCACGCAT(iAA(KjCjACjCACCXjT(KjACjAA(jACA(jTCXjCCCCTACA(jAAT(;TTCAT(jA SEQ ID NO: 679

QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYAVHWYQQFPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSRLSG\WFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EK.TVAPTECS

SEQ ID NO: 680

B10 GAAATTGTATTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCT GCAGGGCCAGTGAGAGTGTTAGCAACACCTACTTAGCCTGGTACCATCAGAGACGTGGCGAGGCTC CCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGATTCAGTGGCAGTG GGTCTGEiGACAGACTTCGCTCTCACCATCAGCAGTCTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACT GTCAGCAGTACAGTAACTCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGAACTGTG GCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTG TGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCC AATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCA TCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA SEQ ID NO: 681

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYHQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FALTISSLEPEDFAVYYCQQYSNSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 682

F3 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCT GCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCT CCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGT GGGTCTGGÍ iACAC ÍACTTC ACTCTCACCATCAGCA( :ACT( K i AACCT( :A( K iATTTTÍ IC AC iTC ¡TATTAC TGTCAGCAGTATGGTAGCTCGTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGT GGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTT GTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTC CAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAG CAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCC ATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA SEQ ID NO: 683

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 684

4F7 CAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGC ACTGGGAGCAGCTCCAATATCGGGACAGGTTATGATGTACACTGGTATCAGCAGCTTCCAGGAACA GCCCCCAAACTCCTCATCCATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGC TCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAüGCTGAGGATGAGGCTGATTAT TACTGCCAGTCCTATGACAGCAGTCTGAGTGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAGGTTGACCGTC CTAGGTCAGCCCAAGGCCAACCCCACTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTCCAAGCC AACAAGGC'CACACTAGTGTGTCTGATCAGTGACTTCTACCCGGGAGCTGTGACAGTGGCCTGGAAG g c a g a t g g c a g c c c c g t c a a g g c g g g a g t g g a g a c c a c c a a a c c c t c c a a a c a g a g c a a c a a c a a GTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCTGACGCCCGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCT

g c c a g g t c a c g c a t g a a g g g a g c a c c g t g g a g a a g a c a g t g g c c c c t a c a g a a t g t t c a t g a SEQ ID NO: 685

QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIHGNSNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGWVFGGGTRLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 686

16A4 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCT GCAGGGCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGTTATTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTC CCAGGCTGCTCATCTATGGTAGATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGTG GGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTATT GTCAGCAGTACGGTAGCTCACCTTTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACTG TGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGTACCGCCTCTGT TGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCT CCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCA GCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACC CATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA SEQ ID NO: 687

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 688

16C1 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCT GCAGGGCCAGCCAGAGTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCT CCCAGGCTCCTCATCTTTGGTGCATCCAGCAGGGCCACTCiGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGT GGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCGGACTGGAGCCTGAAGATTTTCiCAGTGTATCAC TGTCAGCAGTATGGTAACTCACCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACT GTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGTACCGCCTCTG TTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCC TCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTC AGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCAC CCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA SEQ ID NO: 689

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SGLEPEDFAVYHCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 69Ü

17H8 GACATTGTATTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCT GCAGGGCCAGTC AGAGTGTTGCCGGCAGCT ACCT AGCCTGGT ACCAGC AGAAACCTGGCCAGGCT CCCAGGCTCCTCATCTCTGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGT GGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTAC TGTCAGCAGTATGGTAAATCACCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATGAAAGGAAC TGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGTACCGCCTCT GTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCC CTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCT CAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCA CCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA SEQ ID NO: 691

DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVAGSYLAWYQQKPGQAPRLLISGASSRATGIPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGKSP1TFGQGTRLEMKGTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNATQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC SEQ ID NO: 692

19B5 CAGTCTGCGCTGACTCAGCCACCCTCAACGACTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGT TCTGÜAAGCAGGTCCAACATCÜGAAÜCAATTTTGTAAACTGÜTACAAGCAGCTCCCAGGAACGGC CCCCAAAGTCCTCATCTATACTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCC AAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGTCTGATTATTACT GCGGAACATGGGATGACAGTATGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAACTGACCGTCCTA GGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCACCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAAC AAGGCCACACTGGTÜTGTCTCATAAGTÜACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGÜAAGGCA GATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACGCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTA CGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCC AGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATGA SEQ ID NO: 693

QSALTQPPSTTGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDESDYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 694

0D3 CAGTCTGCGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGACTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGT TCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGCAATTTTGTAAACTGGTACAAGCAGCTCCCAGGAACGGCC CCCAAAGTCCTCATCTATACTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCA AGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGTCTGATTATTACTG TGCAACATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAG GTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCACCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACA AGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAG ATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTAC

g c g g c c a g c a g c t a t c t g a g c c t g a c g c c t g a g c a g t g g a a g t c c c a c :a g a a g c t a c a g c :t g c c a GGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATGA SEQ ID NO: 695

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDESDYYCATWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCL1 SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 696

22D1 CAGTCTGCGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGACTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGT TCTGGAAGCAGCTCCAACATCGüAAGCAATTTTGTAAACTGGTACAAGCAGCTCCCAGGAACGGCC CCCAAAGTCCTCATCTATACTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCA AGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGTCTGATTATTACTG TGCAACATGGGATGACAGTATGAAT(XíTT(KIGTGTTCG(jCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAG GTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCACCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACA AGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTÜACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAG ATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTAC GCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGC'CTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCA GGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATGA SEQ ID NO: 697

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDESDYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 698

2G10 GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGTCACCCTGTCTCTGTCTCTAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCC TGCAGGGCCAGTCAGAGTATTAGCAGCAACTTAGCCTGGTTCCAGCAÜAAACCTGGCCAGGCTCCC AGACTCCTCATCTATGGTGCATTTACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGGTCAGTGGCAGTGGG TCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTC AGCAGTATAATTACTGGCCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAGCGAACTGTG GCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGTACCGCCTCTGTTG TGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCC AATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGC AGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCA TCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA SEQ ID NO: 699

EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARVSGSGSGTEF TLTISSLQSEDFAVYY CQQYN Y WPLTFGÍ i( iTKVElKRTVAAPS VFIFPPSDEQLKSt iTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 700

3A10 TCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACAGCCAGCATCACCTGC TCTGGAGATAGATTGGGüGAGAAATATGTTTGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCCCCTATA CTGGTCATCTATCAAGATAATAAGTGGCCCTCAGGGATCCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTG GGAACACAGCCACTCTGACCATCAGCGGGACCCAGGCTATGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGG CGTGGGACAGCAGCACTGTGGTATTCGGCGGGGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAG GCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCACCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTG GTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCC GTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAG CTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGA AGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATGA SEQ ID NO: 701

SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVCWYQQKPGQSPILVIYQDNKWPSGIPERFSGSNSGNTA TLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLÜQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS SEQ ID NO: 702

25F8 CAGTCTGCGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGACTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGT TCTGGAAGCAÜCTCCAACATCGGAAGGAATTTTGTAAACTGGTATAAGCAGCTCCCAGGAACGGCC CCCAAAGTCCTCATTTATACTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCA AGTCTCiCiCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGTCTGATTATTACTG TGCAGCATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAG GTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCACCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACA AGGCCACACTGGTÜTÜTCTCATAAGTÜACTTCTACCCGGGAÜCCÜTGACAGTGGCCTGGAAÜÜCAG ATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTAC GCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCA GGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATGA SEQ ID NO: 703

QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT ^{SASLAISGLQSEDESDYYCAAWDDSLNG W VF} (.(K ^{¡TKLTVLÍ ¡QPKAAPS VTLFPPSSEELQANKATLVC}LISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EK.TVAPTECS '

SEQ ID NO: 704

5G10 GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGGCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCT GCAGÜGCCAGTCAGAÜTGTTAGCAGCAGCTACTTAGCCTGÜTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCT CCCAGGCTCCTCATCTTTGGTGCATCCAGCAGGGCCACTGGCATCCCAGACAGGTTCAGTGGCAGT GGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGACTGGAGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATCAC TGTCAGCAGTATGGTAACTCACCGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGAACT GTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGTACCGCCTCTG TTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCC TCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTC AGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCAC CCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGA SEQ ID NO: 705

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYHCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 706

6D1 CACTCTGTGCTGACTCAGTCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGACAGAGGGTCACCATCTCTTGTT CTGGAAGCCGCTCCAACATCGGAAGTAATTTTGTAAACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCC CCAAACTCCTCATCTATACTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAA GTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGT GCAGTATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGG TCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCACCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAA GGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGA TAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACG CGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAG GTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATGA SEQ ID NO: 707

HSVLTQSPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKETVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 708

26F12 CAGTCTGTGCTGACTCAGTCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAAGGTCACCATCTCTTGTT CTGGAAGCCÜCTCCAACATCGGAAGTAATTTTÜTAAAGTGGTACCAGGAGCTGCCAGGAACÜGCGC CCAAACTCCTCATCTATACTAATTATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAA GTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGT GCAGTATGGGATGACAGCCTGAATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGG TCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCACCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAA GGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGA TAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACG CGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAüTCCCACAGAAGCTACAüCTGCCAG GTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATGA SEQ ID NO: 709

QSVLTQSPSASGTPGQKVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 710

Tabla IIIc: Secuencias de polinucleótido y aminoácidos de la región variable y constante de la cadena pesada

13586 HC Ihu anti-<huCDH19> 4F3 VH1::hulaG1z QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQTPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGWYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYTCNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDTAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 711

13589 HC Thu anti-<huCDH19> 4A9 VH1::hulG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWFAYFSYSGSTNYNPSLKSRVTLS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGT AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN TKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNW YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPÜK SEQ ID NO: 712

13590 HC fhu anti-<huCDH19> 4B10 VH1::hulqG1z QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGTNEYYADSVKGR FTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDWSFDYWGQGTLVSVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLC TQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVFrNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 713

13874 HC fhu anti-<huCDH19> 17H8.2 VH1::hulqG1z QVQLQESGPÜLVK.PSETLSLTCTVSGGSINSYYWSW1RQPPGKGLEW1GY1YYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARDSRYRSGWYDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLÜTQTY1CNVN HKPSNTKVDKKVEPK.SCDK.THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEV k f n w y v d g v e v h n a k t k p r e e q y n s t y r v v s v l t v l h q d w l n g k e y k c k v s n k a l p a p ie k t is k a k :

GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 714

13875 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 VH1::huIqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTYSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS

1DTSKNQFSLTLSSLTAADTAVYFCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVFTNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 715

13876 HC [hu anti-<huCDH19> 16A4.1 VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLAKPSETLSLTCTVSGDSITSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDQRRIAAAGTHFYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTYSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDP EVKFNW'YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 716

13877 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 VH1::hulqG1z EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVKGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAADTAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVFITFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPC'PAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTYLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSROEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 717

13878 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 VHl::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQÜTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 718

13879 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP1EKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 719

13880 HC fhu anti-<huCDH19> 25F8.1 VH1::hulaG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPRCPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 720

13881 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 VH1::huIaG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 721

13882 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 722

13883 HC [hu anti-<huCDH19> 25G10.1 VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGS1SGYYWSWIRQPPGKÜLEWIGY1YYIGSTNYNPSLKSRVTMS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 723

13885 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 724

14022 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 VHl::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRV TISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 725

14024 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-472KQ17E.H47P) VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRVT ISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGÜPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP1EKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 726

14025 HC [hu anti-<huCDH19> 4A2 VH1::huIqG1z QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRV TISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLlvnSRTPEVTCVWDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL-HNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 727

14026 HC fhu anti-<huCDH19> 4A2 (1-472KQ17E.H47P) VH1::hulaG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSGYYWSYVIRQPPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRVT

1SVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSRSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSniAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 728

14027 HC fhu anti-<huCDH19> 4A2 (1-472KQ17E.H47P.D111 E) VHl::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRVT ISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSSGWYFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GÜTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSÜALTSÜVHTFPAVLQSSÜLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY1CNVNHK. PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 729

14028 HC fhu anti-<huCDH19> 4A2 (1-472KQ17E.H47P.D111 E.W134Y) VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSGYY'WSWIRQPPGKGLEWIGYIYYTGSAYYNPSLKSRVT 1SVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGSSGYYFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKF NWYVDÜVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 730

14029 HC fhu anti-<huCDH19> 4A2 VHl::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSSGYYWSWIRQH PGKGLEW1GYIYYTGSAYYNPSLKSRV TISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYFQYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS\VNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 731

14030 HC fhu anti-<huCDH19> 4F3 (1 -471 )(R17G) VH1::hulqG1z QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWYrRQTPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETÜEGWYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTV'ICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWWDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQÜNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 732

14031 HC [hu anti-<huCDH19> 4F3 (1-471)(R17G,T47A) VH1::huIqG1z QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGWYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVrSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 733

14032 HC fhu anti-<huCDH19> 4F3 (1-471 )(R17G.T47A.R141 Q) VH1::hulaG1z QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRG RFTKRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGWYFDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMTSRTPEVTCWVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVFÍNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 734

14033 HC fhu anti-<huCDH19> 4F3 (1-471 )(R17G.T47A.D61 E.D72E.R141Q) VH1::hulqG1z QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYAESVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGWYFDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSC'DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLIvlISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQWTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 735

14034 HC fhu anti-<huCDH19> 4F3 (1-471 )(R17G.T47A.D61 E.D72E.W134Y.R141Q) VH1::hulaG1z QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFSFSSYDMDWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYAESVRG RFTISRDNSKNTLFLQMNSLRVEDTAVYYCARETGEGYYFDLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVFTNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 736

¹

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_Q ³⁹

_LVE ^H _S ^C

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_V ⁿ

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_G ^(R

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_R ⁶

_Q ¹

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_G ⁷

_K ²

_G ^E

_L ^.

_E ^K

_W ⁹⁴

_V ^N

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_F ^V

₁ ^H m _W ¹ _Y ^::

_E ^h _G ^uI _S ^G

_N ¹ _K ^z _YYAESVKDRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP1E KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKÜFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 737

14040 HC fhu anti-<huCDH19> 16C1.1 VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWRiYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLTLSSLTAADTAVYFCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 738

14041 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-469)(T92K) VH1::huIqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLKLSSLTAADTAVYFCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKMQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 739

14042 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-469HT92K.D109E) VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLK.SRVTMS IDTSKNQFSLKLSSLTAADTAVYFCAREGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 740

14043 HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-469)(T92K.W132Y.W135Y) VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLKLSSLTAADTAVYFCARDGSSGYYRYFDPWÜQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSG GTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKP SNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFN WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKAKGQP REPQVYTLPPSREEMTK.NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTV DKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 741

14044 ^{HC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-469)(T92K) VH1::hulqG1z}QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS IDTSKNQFSLKLSSLTAADTAVYFCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSVINÍSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 742

14045 HC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVK.PSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYY1GSTNYNPSLK.SRVT1SV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARDSRYRSGWYDAFDIWÜQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALÜCLVKDYFPEPVTVSWNSÜALTSÜVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP1EKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 743

14046 HC fhu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-471 )(D109E) VH1::hulaG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARESRYRSGWYDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 744

14047 HC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-471)(D109E,W132Y) VH1::huIqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARESRYRSGYYDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLIvnSRTPEVTCVWDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 745

14048 HC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-471 )(D109E) VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCARESRYRSGWYDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 746

14049 HC [hu anti-<huCDH19> 4F7 VHl::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYSWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISL DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGÜTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVFTNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKS RWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 747

14050 HC [hu anti-<huCDH19> 4F7 VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYSWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISL DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGOL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKS RWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 748

14051 HC [hu anti-<huCDH19> 4F7 (1-468KW113Y) VH1::hulqG1z QVQLQESGPÜLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYSWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISL DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNYAFHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGOL VKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP1EKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKS RVVQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 749

14052 HC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-471 )(R17G.D61 E.D72E.W134Y) VHl::hulqG1z QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVISYEGTNEYY'AESVKGR FTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDYSFDYWGQGTLVSVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSODK.THTCPPCPAPELLÜÜPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVVVDVSHEDPEV RFNWYVDGVEVHNAKTKPROEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT1SKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 750

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14054 HC fhu anti-<huCDH19> 4B10 (1-471KR17G) VH1::hulaG1z QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAV1SYDGTNEYYADSVKG RFTISRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDWSFDYWGQGTLVSVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDTAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 752

14055 HC fhu anti-<huCDH19> 4B10 (1-471 )(R17G.D61 E.D72E) VH1::hulqG1z QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQAPGKGLEWVAVISYEGTNEYYAESVKGR FT1SRDTSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARERYFDWSFDYWGQGTLVSVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVK.DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY1CNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDLAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 753

14056 HC fhu anti-<huCDH19> 4A9 VHl::hulqG1z QVQLQESGPGEVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWFAYFSYSGSTNYNPSLKSRVTLS VDTSKNQFSLK.LSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDFWGQGTLVTVSSASTK.GPSVFPLAPSSKSTSGGT AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN TKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV1CFNW YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 754

14057 HC fhu anti-<huCDH19> 4A9 (1-468)(F55I,A56G) VHl::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYFSYSGSTNYNPSLKSRVTLS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDFWÜQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSÜGT AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN TKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMTSRTPEVTCVWDVSHEDPEVTCFNW YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 755

14058 HC fhu anti-<huCDH19> 4A9 (1-468)(F55I,A56G) VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGS1SGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYFSYSGSTNYNPSLKSRVTLS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGT AALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSN TKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNW YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 756

14059 HC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-468)(F55I,A56G,W113Y) VH1::huIqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYFSYSGSTNYNPSLKSRVTLS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNYAFHFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVF1TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMTSRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKMQVSLTCLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDK.S RWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 757

14060 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEYVMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTK.GPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKAK ÜQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSIC LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 758

14061 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 VHl::hulqG1z QVQLVQSGAEVICKPGASVKVSCK.VSGYTFTSYF1HWVRQAPGQGLEWMGIINP1SVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDLAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 759

14062 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-469KW133Y) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLWLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 760

14063 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-469KW133Y) VHl::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTYFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTC’LVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 761

14064 HC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-469KW133Y) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMG1INPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARÜGIQLYLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALÜCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNÜKEYKCKVSNKALPAPIEKT1SKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNÜQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 762

14065 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470)(S82R,A99E) VH1::huIqG1z EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVKGR FTISRDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCWVDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 763

14066 HC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1 -470KA99E.H105Y) VHl::hulqG1z EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVKGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSEIE DPEVKFNWYVDGVEVEINAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKGKVSNKALPAP1EKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNÜQPENNYK.TTPPVLDSDÜSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALF1NHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 764

14067 HC fhu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470KA99E) VH1::hulaG1z EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVST1SGGGANTYYADSVKGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHE DPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYR W S VLTVL HQDWLNGKEYKCKV SNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 765

14068 HC fhu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470KA99E) VH1::hulqG1z EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSGAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVRGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHE DPE VKFNW Y VDGVEVHNARTKP REEQYNSTYRVVSVLTVLF1QDWLNGKEYKCRV SNKALPAPIEKTI SKAKGQPREPQVYTLPPSRECMTKNQVSLTCLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: ⁷⁶⁶

14069 HC fhu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470)(D72E.A99E) VH1::hulqG1z EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGCANTYYAESVKGRF TISSDNSKSTLYLQMNSLRAEDTAVYHCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALCiCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVFITFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDP EVKFNW'YVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISK AKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 767

14070 HC fhu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-470KH105Y) VHl::hulqG1z EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSTISGGGANTYYADSVKGR FTISSDNSKSTLYLQMNSLRAADTAVYYCAKGGMGGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAP SSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYIC NVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHE DPEVKFNWYVDGVEVFfNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTl SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFF LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 768

14071 HC [hu anti-<huCDH19> 16A4.1 (1-474)(T144L) VH1::huIaG1z QVQLQESGPGLAKPSETLSLTCTVSGDSITSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDQRRIAAAGTHFYGMDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPS SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLÜTQTYICN VNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDP EVKFNWYVDGVEVFINAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLFIQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKT1SK AKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 769

14072 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSFIEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 770

14073 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-469KW133Y) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGG1QLYLFILDYWGQGTLVTVSSASTK.GPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYTCNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSL SLS PGK SEQ ID NO: 771

14074 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKAK GQPREPQVYTLPPSRECMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 772

14075 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGTQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 773 '

14076 HC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-469KW133Y) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEVVMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 774

14077 HC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-474)(L92Q) VH1::huIqG1z QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSRYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGR FT1SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDSAVYYCARRAGIPGTTGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTV SWN SGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSS W TYPS SSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 775

14078 HC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-474KR17G.L92Q) VH1::hulqG1z QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYGIHWVRQAPGRGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVRG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDSAVYYCARRAGIPGTTGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQ TYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDTAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 776

14079 HC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-474KR17G.D61 E.D72E.L92Q) VHl::hulqG1z QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFTFSRYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYEGSNKYYAESVKGR FTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDSAVYYCARRAGIPGTTGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 777

14080 HC [hu anti-<huCDH19> 23A10.3 VH1::hulqG1z QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASÜFTFSRYGIHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDÜSNKYYADSVKGR FT1SRDNSKNTLYLLMNSLRAEDSAVYYCARRAGIPGTTGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 778

14081 HC [hu anti-<huCDH19> 25G10.1 VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDGSSGWYRWFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKST SGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNH KPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVK FNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKAKG QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTGLVKGFYPSD1AVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK.L TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 779

14082 HC Thu anti-<huCDH19> 25G10.1 (1-469KD109E.W132Y.W135Y) VH1::hulaG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISGYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYIGSTNYNPSLKSRVTMS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVT'YCAREGSSGYYRYFDPWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTS GGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHK PSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP1EKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 780

14083 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VH1::huIqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 781

14084 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM1SRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 782

14085 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VHl::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 783

14086 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 VHl::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 784

14087 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-469KW133Y) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLYLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 785

14088 HC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-469)(R27G,G82R) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMSWRQAPGQGLEWMGIIHPSGGDTTYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIKLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKT1SKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 786

14089 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 VH1::huIaG1z QVQLVQSGAEVKK.PGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVA'VDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPS DIAVE WESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 787

14090 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 VH1::huIaG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 788

14091 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-469KW133Y) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFrLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTICVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 789

14092 HC [hu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-469HW133Y) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASRYTFTNYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGDSTYAQKFQG RLTMTGDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSÜALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV\rVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPTEKTTSKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 790

14093 HC fhu anti-<huCDH19> 25F8.1 VH1::hulaG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEVVMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY1CNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGICEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 791

14094 HC fhu anti-<huCDH19> 25F8.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGrSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 792

14095 HC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-469)(F90Y) VH1::huIaG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMTSRTPEVTCVVVDVSHEDPE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 793

14096 HC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-469KF90Y) VH1::hulG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSS KSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNV YHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTC PPCPAPET LGGPSVFI FPPKPKDTI A1TSRTPEVTC\AAT)VSHEJ)PE VKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKA KGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYS KLTVDKSRWQQGNVFSC SVMHEALHNHYTQKSLSL SPGK SEQ ID NO: 794

14097 HC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-469)(F90Y.W133Y) VHl::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYIHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGR VTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSK STSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 795

14098 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 VH1::hulG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWVIGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGÜTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSÜALTSGVHTFPAVLQSSÜLYSLSSVVTVPSSSLGTQTY1CNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 796

14099 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLC.GPSVFLFPPKPKDTLMISRTPnVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGN\TSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

SEQ ID NO: 797

14100 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-469KW133Y) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSY [ITIHWY RQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 798

14101 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-469)(W133Y) VH1::huIaG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSCKVSGYTFTSYFIHWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVFMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLYLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTFITCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 799

14102 HC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-469KF90Y) VH1::hulqG1z QVQLVQSGAEVKKPGASVRVSOCVSGYTFTSYF1HWVRQAPGQGLEWMGIINPISVSTSYAQKFQGRV TMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGGIQLWLHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKS TSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVN HKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEV KFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSK LTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 800

13591 HC [hu anti-<huCDH19> 4F7 VH1::hulqG1z QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYSWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTNYNPSLKSRVTISL DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARNWAFHFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTA ALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWY VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKS RWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 801

14301 HC [hu anti-<huCDH19> 2G6 VH1::hulqG1z QVQLVESGGGWQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKD RFTISRDNSKNTLYLQMKSLRAEDTAVYYCARRAGHGTIGYYYGMDVVVGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQT

Y1CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 802

14302 HC fhu anti-<huCDH19> 2G6 (1-477KR17G.K94N) VHl::hulaG1z QVQLVESGGGWQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKD RFT1SRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARRAG1IGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSNSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDTAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 803

14303 HC íhu anti-<huCDH19> 2G6 (1-477KD61 E.D72E) VHl::hulaG1z QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFTWYEGSNKYYAESVKD RFTISRDNSKNTLYLQMKSLRAEDTAVYYCARRAGIIGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQT

Y1CNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 804

14304_HC[hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-477)(R17G) VH]::huIgG1z QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAFIWYDGSNKYYADSVKD RFTISRDNSKNTLYLQMKSLRAEDTAVYYCARRAGHGTIGYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVS HEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIE KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDG SFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO: 805

Tabla IIId: Secuencias de polinucleótido y aminoácidos de la región variable y constante de la cadena ligera

13586 LC fhu anti-<huCDH19> 4F3 VLl::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSÜSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 806

13589 LC fhu anti-<huCDH19> 4A9 VL1::huLLC-C1 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYAVHWYQQFPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSRLSGWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 807

13590 LC fhu anti-<huCDH19> 4B10 VL1::huKLC ETVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYHQRPGQAPRLLIYGASSRATGTPDRFSGSGSGTD FALTISSLEPEDFAVYYCQQYSNSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLK-SGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 808

13874 LC fhu anti-<huCDH19> 17H8.2 VL1::huKLC DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVAGSYLAWYQQKPGQAPRLLISGASSRATGIPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGK SPITFGQGTRLEMKGTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC SEQ ID NO: 809

13875 LC fhu anti-<huCDH19> 16C1.1 VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SGLEPEDFAVYHCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 810

13876 LC fhu anti-<huCDH19> 16A4.1 VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGGGTK.VE1KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 811

13877 LC fhu anti-<huCDH19> 22G10.1 VL1::huKLC EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARVSGSGSGTEF TLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVE1KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 812

13878 LC fhu anti-<huCDH19> 20D3.1 VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDESDYYCATWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 813

13879 LC fhu anti-<huCDH19> 22D1.1 VLl::hul_LC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDESDYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 814

13880 LC fhu anti-<huCDH19> 25F8.1 VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNTGRNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDESDYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 815

13881 LC fhu anti-<huCDH19> 26F12.1 VL1::huLLC-C2 QSVLTQSPSASGTPGQKVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLT SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 816

13882 LC fhu anti-<huCDH19> 26D1.1 VL1::huLLC-C2 HSVLTQSPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLT SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 817

13883 LC fhu anti-<huCDH19> 25G10.1 VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SRLEPEDFAVYHCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 818

13885 LC fhu anti-<huCDH19> 19B5.1 VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSTTGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDESDYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVnTTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWK.SHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 819

14022 LC fhu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236HN30Q) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQTSSSYLAWYQQKPGQAPRLLTYGPSSRATGTPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFTVYYCQQYGSSFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC SEQ ID NO: 820

14024 LC fhu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q.T102A.P141Q) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFTFGQGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC SEQ TONO: 821

14025 LC fhu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236KN30Q.T102A) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFTFGPGTKVDIK.RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC SEQ ID NO: 822

14026 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q.T102A) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTFJQGLSSPVTKSFNR GEC SEQ JD NO: 823

14027 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q.T102A.P141Q) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFTFGQGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC SEQ ID NO: 824

14028 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236)(N30Q.T102A.P141Q) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASRQISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSFTFGQGTKVD1KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC SEQ JD NO: 825

14029 LC [hu anti-<huCDH19> 4A2 (1-236KR29Q.N30S) VLl::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSISSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGPSSRATGIPDRFSGSGSGTDF TLTISRLEPEDFTVYYCQQYGSSFTFGPGTKVDIICRTVAAPSVFIFPPSDEQLK.SGTASVVCLLNNFYPRE AKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNR GEC SEQ JD NO: 826

14030 LC [hu anti-<huCDH19> 4F3 VI_l::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPC^íQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ JD NO: 827

14031 LC fhu anti-<huCDH19> 4F3 VL1::huKLC

EIVLTQSPGTLSLSPGERATL-SCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ JD NO: 828

14032 LC fhu anti-<huCDH19> 4F3 VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKRGQAPRLL1YGASSRATG1PDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFGQGTKVEJKRTVAAPSVFJFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSÍiNSQESVTEQDSJCDSTYSLSSTLTLSKADYEJCHKVYACEVTJ-lQCiLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 829

14033 LC fhu anti-<huCDH19> 4F3 VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSWTFC^jQC^jTKVEJKRTVAAPSVFJFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ JD NO: 83 Ü

14034 LC fhu anti-<huCDH19> 4F3 VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWTQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTJSRLEPEDFAVYYCQQY(¡SSWTF(JQCiTKVEJKRTVAAPSVFJFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRCJEC SEQ ID NO: 831

14039 LC [hu anti-<huCDH19> 2G6 (1-234)(C42S,D110E) VL1::huLLC-C1 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERf SGSNSGNTAT LTISGTQAMDEADYYCQAWESSTWFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY PGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVA PTECS SEQ ID NO: 832

14040 LC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235)(H105Y) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISGLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQC.LSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 833

14041 LC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235KH105Y) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISGLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 834

14042 LC [hu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235HH105Y) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SGLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 835

14043 LC fhu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235KH105Y) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISGLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 836

14044 LC fhu anti-<huCDH19> 16C1.1 (1-235KG95R.H105Y.G141Q) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFÜASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGQGTKVETKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 837

14045 LC fhu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-235KG149R) VL1::huKLC DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVAGSYLAWYQQKPGQAPRLLISGASSRATGIPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYÜKSP1TFGQGTRLEMKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKFIKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC SEQ ID NO: 838

14046 LC fhu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-235KG149R) VL1::huKLC DIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVAGSYLAWYQQKPGQAPRLLISGASSRATGIPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGKSP1TFGQGTRLEMKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC SEQ JD NO: 839

14047 LC fhu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-235KG149R) VL1::huKLC DIVLTQSPGTLSLSPGER.ATLSCRASQSVAGSYLAWYQQKPGQAPRLLISGASSRATGIPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGKSP1TFGQGTRLEMKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTK SFNRGEC SEQ JD NO: 84Ü

14048 LC [hu anti-<huCDH19> 17H8.2 (1-235)(S57Y,G149R) VL1::huKLC D1VLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVAGSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGTPDRFSGSGSGT DFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGKSPITFGQGTRLEMKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNF YPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTí SFNRGEC SEQ fD NO: 841

14049 LC Thu anti-<huCDH19> 4F7 (1-239KH57Y) VL1::huLLC-C2

QSVLTQPPSVSGAPG jIQRVTISCTGSSSNIGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGWVFGGGTRLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC FTSDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 842

14050 LC [hu anti-<huCDH19> 4F7 (1-239KH57Y.D110E) VL1::huLLC-C2 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYESSLSGWVFGGGTRLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 843

14051 LC [hu anti-<huCDH19> 4F7 (1-239KD110E) VL1::huLLC-C2 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIHGNSNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYESSLSGWVFGGGTRLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 844

14052 LC Thu anti-<huCDH19> 4B10 (1-236KH45Q.A90T) VL1::huKLC

ElVLTQSPGTLS LSPGERATLSCRA SQSVSNTY fILAWY QQRPGQAPRLFIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQYSNSWTFGQGTKVE1KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPR EAKVQWKVDNAFQSGNSQESVTEQDSKDSTYSFSSTFTFSKADYEKHKVYACEVTHQGFSSPVTKSFN RGEC SEQ ID NO: 845

14053 LC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-236)(H45Q,A90T) VL1::huKLC

EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGjIPDRFSGSGSGTD FTLT1SSLEPEDFAVYYCQQYSNSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC SEQ ID NO: 846

14054 LC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1 -236KH45Q.A90T) VL1::huKLC E1VLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATG1PDRFSGSGSGTD FTLTISSLEPEDFAVYYCQQYSNSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC SEQ ID NO: 847

14055 LC [hu anti-<huCDH19> 4B10 (1-236)(H45Q,A90T) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSNTYLAWYQQRPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SSLEPEDFAVYYCQQYSNSWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPR EAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFN RGEC SEQ ID NO: 848

14056 LC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-239KF47L) VL1::huLLC-C1 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYAVHWYQQLPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSRLSG\WFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 849

14057 LC [hu anti-<huCDH19> 4A9 (1-239)(F47L) VL1::huLLC-C1 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYAVHWYQQLPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSRLSGWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKY AAS SYLSLTPEQWKSHRSY SCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 850

14058 LC fhu anti-<huCDH19> 4A9 (1-239KF47L.D110E) VL1::huLLC-C1 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYAVHWYQQLPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYESRLSGWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 851

14059 LC fhu anti-<huCDH19> 4A9 (1-239HF47L.D110E) VL1::huLLC-C1 QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYAVHWYQQLPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYESRLSGWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 852

14060 LC fhu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-235HS102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYKQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 853

14061 LC fhu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1 -235KK45Q.S102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSLNGW\rFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 854

14062 LC fhu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1 -235HK45Q.S102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSLNGWVFGÜGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 855

14063 LC fhu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1 -235KK45Q.S102A.D111 E.N135Q) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCATWDESLQGWVFGGGTKETVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 856

14064 LC [hu anti-<huCDH19> 20D3.1 (1-235)(W109Y) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSCiSSSNIGSNFVNWYKQLPG ¡TAF PKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDESDYYCATYDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 857

14065 LC fhu anti-<huCDH19> 22G10.1 VL1::huKLC EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQS1SSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARVSGSGSGTEF TLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 858

14066 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 VL1::huKLC EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARVSGSGSGTEF TLTISSLQSEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVE1KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO; 859

14067 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-234)(Q97E,S98P) VI_l::huKLC EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARVSGSGSGTEF TLTISSLEPEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFTFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO; 86Ü

14068 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1 -234)(V78F.Q97E.S98P) VL1::huKLC EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQK.PGQAPRLLIYGAFTRATG1PARFSGSGSGTEF TLTISSLEPEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 861

14069 LC [hu anti-<huCDH19> 22G10.1 (1-234)(V78F.Q97E.S98P) VL1::huKLC EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARFSGSGSGTEF TLTISSLEPEDFAVYYCQQYNYWPLTFGGGTKVE1KRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 862

14070 LC fhu anti-<huCDH19> 22G10.1 VL1::huKLC EIVMTQSPVTLSLSLGERATLSCRASQSISSNLAWFQQKPGQAPRLLIYGAFTRATGIPARVSGSGSGTEF TLTISSLQSEDFAVYY CQQYN Y WPLTFÍ i( K iTKVEIKRTVAAPS VFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 863

14071 LC fhu anti-<huCDH19> 16A4.1 (1-235KG141Q) VLl::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGTSSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SRLEPEDFAVYYCQQYGSSPFTFGQGTKVE1KRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKWACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO; 864

14072 LC fhu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1 -235HK45Q.S102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSTTGTPGQRVT1SCSGSRSN1GSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISÜLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGÜTKLTVLÜQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCL ISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVE KTVAPTECS SEQ ID NO: 865

14073 LC fhu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-235HK45Q.S102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSTTGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVL1YTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCL

1SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVE KTVAPTECS SEQ ID NO: 866

14074 LC fhu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-235KT11V.K45Q.S102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSVTGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 867

14075 LC [hu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-235)(T11V.K45Q.S102A.D111E.N135Q) VL1::huLLC-C2 q s a l t q p p s v t g t p g q r v t is c s g s r s n ig s n f v n w y q q l p g t a p k v l iy t n n q r p s g v p d r f s ü s k s g t SASLAISGLQSEDEADYYCATWDESMQGWVFÜÜGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 868

14076 LC fhu anti-<huCDH19> 19B5.1 (1-235KT11V.K45Q.S102A.W109Y.D111 E.N135Q) VLl::huLLC-C2 QSALTQPPSVTGTPGQRVTISCSGSRSN1GSNFVNWYQQLPGTAPKVL1YTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCATYDESMQGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVC

L1SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 869

14077 LC fhu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231HC42S) VL1::huLLC-C2 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVSWYQQKPGQSPILVIYQDNKWPSGIPERFSGSNSGNTA TLT1SGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS ' '

SEQ ID NO: 87Ü

14078 LC fhu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231HC42S) VL1::huLLC-C2 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVSWYQQKPGQSPILVIYQDNKWPSGIPERFSGSNSGNTA TLT1SGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS ' '

SEQ ID NO: 871

14079 LC fhu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231 KC42S.D110E) VL1::huLLC-C2 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVSWYQQKPGQSPILVIYQDNKWPSGIPERFSGSNSGNTA TLTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGGÜTKLTVLÜQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF

YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS SEQ ID NO: 872

14080 LC fhu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231KC42Y) VL1::huLLC-C2 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVYWYQQKPGQSPILVIYQDNKWPSGTPERFSGSNSGNTA TLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTWFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS SEQ ID NO: 873

14081 LC fhu anti-<huCDH19> 25G10.1 (1-235KH105Y) VLl::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSÜSGTD FTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 874

14082 LC fhu anti-<huCDH19> 25G10.1 (1-235KH105Y) VL1::huKLC EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIFGASSRATGIPDRFSGSGSGTD FTLT1SRLEPEDFAVYYCQQYGNSPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVF1FPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYP REAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF NRGEC SEQ ID NO: 875

14083 LC fhu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235)(S7P) VL1::huLLC-C2 HSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 876

14084 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235)(H1Q,S7P) VL]::huLLC-C2 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPK.LLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLATSGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLT SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 877

14085 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235)(H1Q.S7P.W109Y) VL1::huLLC-C2 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCAVYDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCL1 SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ JD NO: 878

14086 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235HH1 Q.S7P.W109Y.D111 E.N135Q) VL1::huLLC-C2 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNTGSNFVNWYQQLPGTAPKLLTYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCAVYDESLQGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 879

14087 LC [hu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235HH1 Q.S7P.W109Y.D111 E.N135Q) VL1::huLLC-C2 QSVLTQPPSASGTPGQRV USCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLrYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVYDESLQGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 880

14088 LC fhu anti-<huCDH19> 26D1.1 (1-235KH1 Q.S7P) VL1::huLLC-C2 QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ JD NO: 881

14089 LC fhu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-235HS7P) VL1::huLLC-C2 QSVLTQPPSASGTPGQKVTISCSGSRSN1GSNFVNWYQQLPGTAPKLL1YTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 882

14090 LC fhu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1 -235HS7P.D111 E) VL1::huLLC-C2 QSVLTQPPSASGTPGQKVTISCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAlSGLQSEDEADYYCAVWDESLNGWVFGGüTKLTVLüQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLL SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAÜVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 883

14091 LC fhu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-235KS7P.D111 E) VL1::huLLC-C2 QSVLTQPPSASGTPGQKVTlSCSGSRSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKLLIYTNYQRPStiVPDRFSGSKSGTS ASLATSGLQSEDEADYYCAVWDESLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLT SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 884

14092 LC íhu anti-<huCDH19> 26F12.1 (1-235)(S7P,W109Y,D111 E.N135Q) VLl::huLLC-C2 QSVLTQPPSASGTPGQKVTISCSGSRSNTGSNFVNWYQQLPGTAPKLLTYTNYQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCAVYDESLQGW'VFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 885

14093 LC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-235)(K45Q) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDESDYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 886

14094 LC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-235)(K45Q.S102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSÜSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 887

14095 LC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1 -235HK45Q.S102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCAAWDDSLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 888

14096 LC [hu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1-235HK45Q.S102A.D111 E) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVT1SCSGSSSNTGRNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCAAWDESLNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV E K T V A P T E Í ’ S

SEQ ID NO: R89

14097 LC íhu anti-<huCDH19> 25F8.1 (1 -235KK45Q.S102A.D111 E.N135Q) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGRNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGT SASLAISGLQSEDEADYYCAAWDESLQGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 890

14098 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-235)(K45Q,S102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLTYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCL ISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVE KTVAPTECS SEQ ID NO: 891

14099 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1 -235HK45Q.S102A.D111 E.N135Q) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCATWDESMQGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCL ISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVE KTVAPTECS SEQ ID NO: 892

14100 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-235)(K45Q.S102A.W109Y.D111 E.N135Q) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLTYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCATYDESMQGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCL1 SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ ID NO: 893

14101 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-235)(K45Q.S102A.W109Y) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSOSSSNIGSNFVNWYQQLPGTAPKVLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLA1SGLQSEDEADYYCATYDDSMNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLI SDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEK TVAPTECS SEQ JD NO: 894

14102 LC [hu anti-<huCDH19> 22D1.1 (1-235)(K45Q,S102A) VL1::huLLC-C2 QSALTQPPSATGTPGQRVTISCSGSSSN1GSNFVNWYQQLPGTAPKVL1YTNNQRPSGVPDRFSGSK.SGTS ASLAISGLQSEDEADYYCATWDDSMNGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCL ISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVE KTVAPTECS SEQ ID NO: 895

13591 LC [hu anti-<huCDH19> 4F7 VL1::huLLC-C1 QSVLTQrPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGTGYDVHWYQQLPGTAPKLLIHGNSNRPSGVPDRFSGSKSG TSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGWVFGGGTRLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVC LISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTV EKTVAPTECS SEQ ID NO: 896

14301 LC íhu anti-<huCDH19> 2G6 (1-234KD11 PEI VL1::huLLC-C1 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTCWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTAT LTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCL1SDFY PGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVA PTECS SEQ ID NO: 897

14302 LC rhu anti-<huCDH19> 2G6 (1-234KC42S.D11 PEI VL1::huLLC-C1 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTAT LTISÜTQAMDEADYYCQAWESSTVVFÜÜGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY PGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVA PTECS SEQ ID NO: 898

14303 LC Thu anti-<huCDH19> 2G6 (1-234KC42S.D11 PEI VL1::huLLC-C1 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYTSWYQQRPGQSPLLVIYQDTKRPSGIPERFSGSNSGNTAT LTISGTQAMDEADYYCQAWESSTVVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFY PGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVA PTECS SEQ JD NO: 899

14304 LC Thu anti-<huCDH19> 23A10.3 (1-231KC42SI VL1::huLLC-C2 SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDRLGEKYVSWYQQKPGQSPILVIYQDNKWPSGIPERFSGSNSGNTA TLT1SGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDF YPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV APTECS SEQ ID NO: 9ÜÜ

Tabla IVa: CDRs de la cadena pesada

Tabla IVb: CDRs de cadena ligera

Secuencias de cadherina humana y de mono cinomolgo





ı62

ı63

ı64

ı65

ı66



 Moléculas de unión biespecífica

TABLA VI

ı72

ı74

ı75

ı76





ı82

ı84

ı86

ı87

ı88



ı92

ı93

ı94

ı96

ı97

ı98

ı99

Ĳ33











Ĳ43

Ĳ44







Ĳ53

Ĳ54

Ĳ55









Ĳ63

Ĳ64

Ĳ65





Ĳ73

Ĳ74

Ĳ77





Ĳ83

Ĳ84

Ĳ85

Ĳ86

Ĳ88



Ĳ93

Ĳ94

Ĳ96

Ĳ98

Ĳ99

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un constructo de anticuerpo multiespecífico aislado que comprende un primer dominio de unión humano capaz de unirse a CDH19 humano en la superficie de una célula diana y un segundo dominio capaz de unirse a CD3 humano en la superficie de una célula T, en el que el primer dominio de unión comprende una región VH que comprende CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 y una región VL que comprende CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 seleccionadas del grupo que consiste en:

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 124, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 125, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 126, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 292, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 293 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 294,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 130, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 131, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 132, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 298, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 299 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 300,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 136, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 137, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 138, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 304, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 305 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 306,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 142, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 143, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 144, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 310, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 311 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 312,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 148, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 149, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 150, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 316, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 317 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 318,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 166, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 167, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 168, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 334, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 335 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 336,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 124, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 125, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 915, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 292, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 293 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 294,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 124, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 125, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 915, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 292, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 293 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 928,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 124, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 125, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 915, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 292, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 293 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 929,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 166, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 167, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 168, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 334, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 335 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 942,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 166, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 167, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 168, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 334, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 335 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 943,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 148, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 149, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 150, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 316, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 317 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 937,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 148, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 149, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 150, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 316, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 317 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 938,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 148, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 149, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 919, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 316, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 317 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 938,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 142, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 143, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 144, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 310, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 311 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 935,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 142, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 143, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 918, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 310, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 311 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 935,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 142, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 143, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 918, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 310, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 311 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 936,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 136, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 137, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 138, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 304, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 305 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 933,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 136, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 137, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 917, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 304, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 305 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 934,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 130, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 131, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 132, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 298, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 299 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 930,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 130, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 131, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 916, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 298, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 299 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 931,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 130, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 131, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 916, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 298, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 299 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 932,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 1009, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 1010, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 1011, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 1012, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 1013 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 1014,

CDR-H1 como se representa en SEQ ID NO: 2011, CDR-H2 como se representa en SEQ ID NO: 2012, CDR-H3 como se representa en SEQ ID NO: 2013, CDR-L1 como se representa en SEQ ID NO: 2014, CDR-L2 como se representa en SEQ ID NO: 2015 y CDR-L3 como se representa en SEQ ID NO: 2016,

2. El constructo de anticuerpo según la reivindicación 1, en el que el primer dominio de unión comprende una región

VH seleccionada del grupo que consiste en las regiones VH como se representa en SEQ ID NO: 342, SEQ ID NO: 366,

SEQ ID NO: 370, SEQ ID NO: 344, SEQ ID NO: 372, SEQ ID NO: 368, SEQ ID NO: 496, SEQ ID NO: 497,

SEQ ID NO: 498, SEQ ID NO: 499, SEQ ID NO: 500, SEQ ID NO: 508, SEQ ID NO: 509, SEQ ID NO: 510,

SEQ ID NO: 511, SEQ ID NO: 512, SEQ ID NO: 519, SEQ ID NO: 520, SEQ ID NO: 521, SEQ ID NO: 522,

SEQ ID NO: 523, SEQ ID NO: 524, SEQ ID NO: 525, SEQ ID NO: 526, SEQ ID NO: 527, SEQ ID NO: 528,

SEQ ID NO: 529, SEQ ID NO: 530, SEQ ID NO: 531, SEQ ID NO: 532, SEQ ID NO: 533, SEQ ID NO: 534,

SEQ ID NO 535, SEQ ID NO: 536, SEQ ID NO: 537, SEQ ID NO: 538, SEQ ID NO: 1016, SEQ ID NO 1029,

SEQ ID NO 1042, SEQ ID NO 1081, SEQ ID NO: 1107, SEQ ID NO: 1120, SEQ ID NO: 1250, SEQ ID NO 1263,

SEQ ID NO 1276, SEQ ID NO 1289, SEQ ID NO: 1302, SEQ ID NO: 1654, SEQ ID NO: 1667, SEQ ID NO 1901,

SEQ ID NO 1914, SEQ ID NO 1940, SEQ ID NO: 1953, SEQ ID NO: 1966, SEQ ID NO: 1979, SEQ ID NO 1992,

SEQ ID NO 2005, SEQ ID NO: 2018, SEQ ID NO: 2031, SEQ ID NO: 2044 y SEQ ID NO: 2057.

3. El constructo de anticuerpo según ^{la reivindicación}1 ^o2^{, en el que el primer dominio de unión comprende una}región VL seleccionada del grupo que consiste en regiones VL como se representa en SEQ ID NO: 398,

SEQ ID NO: 422, SEQ ID NO: 426, SEQ ID NO: 400, SEQ ID NO 428, SEQ ID NO 424, SEQ ID NO : 591,

SEQ ID NO: 592, SEQ ID NO: 593, SEQ ID NO: 594, SEQ ID NO 595, SEQ ID NO 603, SEQ ID NO : 604,

SEQ ID NO: 605, SEQ ID NO: 606, SEQ ID NO: 607, SEQ ID NO 614, SEQ ID NO 615, SEQ ID NO : 616,

SEQ ID NO: 617, SEQ ID NO: 618, SEQ ID NO: 619, SEQ ID NO 620, SEQ ID NO 621, SEQ ID NO : 622,

SEQ ID NO: 623, SEQ ID NO: 624, SEQ ID NO: 625, SEQ ID NO 626, SEQ ID NO 627, SEQ ID NO : 628,

SEQ ID NO: 629, SEQ ID NO: 630, SEQ ID NO: 631, SEQ ID NO: 632, SEQ ID NO: 633, SEQ ID NO: 1018,

^{SEQ ID NO: 1031, SEQ ID NO: 1044, SEQ ID NO: 1083, SEQ ID NO: 1109, SEQ ID NO:}1122^{, SEQ ID NO: 1252,}

SEQ ID NO: 1265, SEQ ID NO: 1278, SEQ ID NO: 1291, SEQ ID NO: 1304, SEQ ID NO: 1656, SEQ ID NO: 1669,

SEQ ID NO: 1903, SEQ ID NO: 1916, SEQ ID NO: 1942, SEQ ID NO: 1955, SEQ ID NO: 1968, SEQ ID NO: 1981,

SEQ ID NO: 1994, SEQ ID NO: 2007, SEQ ID NO: 2020, SEQ ID NO: 2033, SEQ ID NO: 2046 y SEQ ID NO: 2059.

4. El constructo de anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el primer dominio de unión comprende una región VH y una región VL seleccionada del grupo que consiste en:

pares de una región VH como se representa en SEQ ID NOs: 342+398, SEQ ID NOs: 366+422,

SEQ ID NOs: 370+426, SEQ ID NOs : 344+400, SEQ ID NOs: 372+428, SEQ ID NOs 368+424,

SEQ ID NOs: 496+591, SEQ ID NOs : 497+592, SEQ ID NOs: 498+593, SEQ ID NOs 499+594,

SEQ ID NOs: 500+595, SEQ ID NOs : 508+603, SEQ ID NOs: 509+604, SEQ ID NOs 510+605,

SEQ ID NOs: 511+606, SEQ ID NOs 512+607, SEQ ID NOs: 519+614, SEQ ID NOs 520+615,

SEQ ID NOs: 521+616, SEQ ID NOs 522+617, SEQ ID NOs: 523+618, SEQ ID NOs 524+619,

SEQ ID NOs: 525+620, SEQ ID NOs 526+621, SEQ ID NOs: 527+622, SEQ ID NOs 528+623,

SEQ ID NOs: 529+624, SEQ ID NOs : 530+625, SEQ ID NOs: 531+626, SEQ ID NOs 532+627,

SEQ ID NOs: 533+628, SEQ ID NOs : 534+629, SEQ ID NOs: 535+630, SEQ ID NOs 536+631,

SEQ ID NOs: 537+632, SEQ ID NOs: 538+633 SEQ ID NOs: 1016+1018, SEQ ID NOs: 1029+1031,

SEQ ID NOs: 1042+1044, SEQ ID NOs 1081+1083, SEQ ID NOs 1107+1109, SEQ ID NOs: 1120+1122,

SEQ ID NOs: 1250+1252, SEQ ID NOs 1263+1265, SEQ ID NOs 1276+1278, SEQ ID NOs: 1289+1291,

SEQ ID NOs: 1302+1304, SEQ ID NOs 1654+1656, SEQ ID NOs 1667+1669, SEQ ID NOs: 1901+1903,

SEQ ID NOs: 1914+1916, SEQ ID NOs 1940+1942, SEQ ID NOs 1953+1955, SEQ ID NOs: 1966+1968,

SEQ ID NOs: 1979+1981, SEQ ID NOs 1992+1994, SEQ ID NOs 2005+2007, SEQ ID NOs: 2018+2020,

SEQ ID NOs: 2031+2033, SEQ ID NOs: 2044+2046 y SEQ ID NOs: 2057+2059.

5. El constructo de anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el constructo de ^{anticuerpo está en un formato seleccionado del grupo que consiste en (scFv)}2^{, scFv-mAb de dominio único, diacuerpos}y oligómeros de los mismos.

6^{. El constructo de anticuerpo según la reivindicación 5, en el que el primer dominio de unión comprende una secuencia}de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en como se representa en SEQ ID NO: 1020, SEQ ID NO: 1033,

SEQ ID NO: 1046, SEQ ID NO: 1085, SEQ ID NO: 1111, SEQ ID NO: 1124, SEQ ID NO: 1254, SEQ ID SEQ ID NO: 1280, SEQ ID NO: 1293, SE

D NO: 1306, SEQ ID NO: 1658, SEQ ID NO: 1671, SEQ ID SEQ ID NO: 1918, SEQ ID NO: 1944, SEQ ID NO: 1957, SEQ ID NO: 1970, SEQ ID NO: 1983, SEQ ID SEQ ID NO: 2009, SEQ ID NO: 2022, SEQ ID NO: 2035, SEQ ID NO: 2048 y SEQ ID NO: 2061.

7. El constructo de anticuerpo según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en el que el segundo dominio de unión es capaz de unirse a CD3 épsilon humano y de Callithrix jacchus, Saguinus Oedipus o Saimiri sciureus.

8^{. El constructo de anticuerpo según la reivindicación 7, que tiene la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en como se representa en SEQ ID NO: 1021, SEQ ID NO: 1034, SEQ ID NO: 1047, SEQ ID NO:}1086^,

SEQ ID NO: 1112, SEQ ID NO: 1125, SEQ ID NO: 1255, SEQ ID NO: 1268, SEQ ID NO: 1281, SEQ ID NO: 1294,

SEQ ID NO: 1307, SEQ ID NO: 1659, SEQ ID NO: 1672, SEQ ID NO: 1906, SEQ ID NO: 1919, SEQ ID NO: 1945,

SEQ ID NO: 1958, SEQ ID NO: 1971, SEQ ID NO: 1984, SEQ ID NO: 1997, SEQ ID NO: 2010, SEQ ID NO: 2023,

SEQ ID NO: 2036, SEQ ID NO: 2049 y SEQ ID NO: 2062.

9. Una secuencia de ácido nucleico que codifica un constructo de anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8.

10. Un vector que comprende una secuencia de ácido nucleico según la reivindicación 9.

11. Una célula huésped transformada o transfectada con la secuencia de ácido nucleico según la reivindicación 9 o con el vector según la reivindicación 10.

12. Un proceso para la producción de un constructo de anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, comprendiendo dicho proceso cultivar una célula huésped según la reivindicación 11 en condiciones que permiten la expresión del constructo de anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8 y recuperar el constructo de anticuerpo producido del cultivo.

13. Una composición farmacéutica que comprende un constructo de anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o producido según el proceso de la reivindicación 12.

14. El constructo de anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o producido según el proceso de la reivindicación 12 para usar en la prevención o tratamiento de una enfermedad de melanoma o enfermedad de melanoma mestastático.

15. Un kit que comprende un constructo de anticuerpo según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, o producido según el proceso de la reivindicación 12, un vector según la reivindicación 10, y/o una célula huésped según la reivindicación 11.