ES2904575T3 - Derivados de indol como inhibidores de la replicación del virus del dengue - Google Patents

Abstract

Un compuesto de fórmula (I) **(Ver fórmula)** una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de estos; dicho compuesto se selecciona de un grupo donde R1 es F, R2 es F, CH3 u OCH3 y R3 es H, R1 es H, R2 es Cl o F y R3 es CH3, R1 es CH3, R2 es OCH3, F o H y R3 =H, R1 es H, R2 es Cl o F y R3 es H, R1 es CH3, R2 es H y R3 es F, R1 es F, R2 es H y R3 es CH3, R1 es H, R2 es OCH3 y R3 es H o Cl, R1 es H, R2 es F y R3 es F, R1 es CF3 u OCF3, R2 es H y R3 es H, R1 es Cl, R2 es OCH3 y R3 es H

Description

D ESC R IPCIÓN

Derivados de indol como inhibidores de la replicación del virus del dengue

La presente invención se refiere a compuestos de indol mono o disustituidos, métodos para prevenir o tratar infecciones por el virus del dengue mediante el uso de dichos compuestos y al uso de dichos compuestos como medicamento, más preferiblemente a su uso como un medicamento para tratar o prevenir infecciones por el virus del dengue. La presente invención se refiere además a composiciones farmacéuticas o preparaciones de combinación de compuestos y a composiciones o preparados para uso como medicamento, más preferiblemente para la prevención o tratamiento de infecciones por el virus del dengue. La invención también se refiere a los procesos de preparación de los compuestos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

Los flavivirus, que son transmitidos por los mosquitos o las garrapatas, causan infecciones que ponen en riesgo la vida de los seres humanos, como la encefalitis y la fiebre hemorrágica. Se conocen cuatro serotipos distintos, aunque estrechamente vinculados, del dengue flavivirus, denominados DENV-1, -2, -3 y -4. El dengue es endémico en la mayoría de las regiones tropicales y subtropicales de todo el mundo, principalmente en zonas urbanas y semiurbanas. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), 2.500 millones de personas, de las cuales mil millones son niños, presentan riesgo de infección por DENV (OMS, 2002). Se estima que cada año, se producen en el mundo entre 50 y 100 millones de casos de fiebre del dengue [FD], medio millón de casos de enfermedad del dengue grave (es decir, fiebre hemorrágica por dengue [DHF] y síndrome de shock por dengue [DSS]), y más de 20.000 muertes. La DHF se ha convertido en la principal causa de hospitalización y muerte entre los niños en regiones endémicas. En conjunto el dengue representa la causa más común de enfermedad por arbovirus. Debido a los grandes brotes, que han tenido lugar recientemente en países situados en Latinoamérica, el Sudeste Asiático y el Pacífico Occidental (incluso Brasil, Puerto Rico, Venezuela, Camboya, Indonesia, Vietnam, Tailandia), la cantidad de casos de dengue ha aumentado drásticamente en los últimos años. No solo la cantidad de casos de dengue está en aumento, a medida que la enfermedad se propaga a nuevas áreas, sino que además, los brotes tienden a ser más graves.

Para prevenir y/o controlar la enfermedad asociada con la infección del virus del dengue, los únicos métodos disponibles en la actualidad son las estrategias de erradicación de mosquitos para controlar el vector. Aunque se está avanzando en el desarrollo de vacunas contra el dengue, han surgido muchas dificultades. Estas dificultades incluyen la existencia de un fenómeno, que se conoce como mejora dependiente de anticuerpos (ADE). La recuperación de una infección causada por un serotipo proporciona inmunidad de por vida contra ese serotipo, pero solo confiere una protección parcial y transitoria contra una infección subsiguiente provocada por uno de los otros tres serotipos. Después de la infección con otro serotipo, los anticuerpos heterólogos preexistentes forman complejos con el serotipo del virus del dengue de la nueva infección, pero no neutralizan el patógeno. Por el contrario, se cree que se facilita el ingreso del virus a las células, lo que resulta en la replicación no controlada del virus y títulos virales con picos mayores. Tanto en las infecciones primarias como en las secundarias, los títulos virales más altos se asocian con la enfermedad del dengue más grave. Dado que los anticuerpos maternos pueden pasar fácilmente a los niños mediante la lactancia, esta podría ser una de las razones por la que los niños se ven más afectados por la enfermedad del dengue grave que los adultos.

En sitios donde dos o más serotipos que circulan simultáneamente, también conocidos como regiones hiperendémicas, el riesgo de la enfermedad del dengue grave es significativamente mayor debido a un mayor riesgo de sufrir una infección secundaria, más grave. Por otra parte, en una situación de hiperendemicidad, la probabilidad de aparición de cepas más virulentas se incrementa, lo que a su vez aumenta la probabilidad de fiebre hemorrágica por dengue (DHF) o síndrome de shock por dengue.

Los mosquitos que transmiten el dengue, incluso los mosquitos de los géneros Aedes aegypti y Aedes albopictus (mosquito tigre) se están dirigiendo hacia el Norte. Según los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades (CDC) de los Estados Unidos, actualmente, ambos géneros de mosquitos se encuentran omnipresentes en el sur de Texas. La propagación de mosquitos portadores del dengue hacia el Norte no se limita a los Estados Unidos, si no que se ha observado también en Europa.

A pesar de los grandes esfuerzos de las últimas tres décadas, actualmente, no existe una vacuna disponible para proteger a los seres humanos contra la enfermedad del virus del dengue. El problema principal radica en desarrollar una vacuna, que ofrezca protección contra los cuatro serotipos en la misma medida (una vacuna tetravalente). Además, hoy en día, no existen fármacos antivirales específicos para el tratamiento o la prevención de la infección por el virus de la fiebre del dengue. Claramente, aún existe una gran necesidad médica no satisfecha de contar con agentes terapéuticos para la prevención o el tratamiento de infecciones virales en animales, más específicamente, en seres humanos y, particularmente, para las infecciones virales causadas por Flavivirus, más específicamente, el virus del dengue. Los compuestos con buena potencia antiviral, niveles reducidos de efectos secundarios, de existir, un amplio espectro de actividad contra múltiples serotipos del virus del dengue, una toxicidad baja y/o buenas propiedades farmacocinéticas o dinámicas resultan muy necesarios.

La presente invención proporciona compuestos, derivados de indol mono o disustituido, que muestran una actividad potente y elevada contra los cuatro (4) serotipos del virus del dengue. Por otra parte, los compuestos de conformidad con la invención poseen un buen perfil farmacocinético y, sorprendentemente, estos compuestos específicos muestran una mejor estabilidad quiral.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se basa en el hallazgo inesperado, que indica que al menos uno de los problemas mencionados anteriormente se puede resolver mediante los compuestos actuales de la invención.

La presente invención proporciona compuestos, que han probado poseer una actividad antiviral potente contra los cuatro (4) serotipos conocidos actualmente. La presente invención demuestra, además, que estos compuestos inhiben de manera eficiente la proliferación de virus del dengue (DENV). Por lo tanto, estos compuestos constituyen una clase útil de compuestos potentes, que se puede utilizar en el tratamiento y/o la prevención de infecciones virales en animales, mamíferos y seres humanos, más específicamente para el tratamiento y/o la prevención de infecciones por el virus del dengue.

La presente invención se refiere además al uso de dichos compuestos como medicamentos y a su uso para la fabricación de medicamentos para el tratamiento y/o la prevención de las infecciones virales, en particular, las infecciones causadas por los virus pertenecientes a la familia de los virus del dengue en animales o mamíferos, más específicamente, en seres humanos. La invención también se refiere a métodos para la preparación de todos estos compuestos y a composiciones farmacéuticas que los comprenden en una cantidad efectiva.

La presente invención también se refiere a un método de tratamiento o prevención de infecciones causadas por el virus del dengue en seres humanos, mediante la administración de una cantidad efectiva de uno o más de dichos compuestos, o una sal farmacéuticamente aceptable de estos, opcionalmente en combinación con uno o más medicamentos, como otro agente antiviral o vacuna de dengue o ambos, a un paciente en necesidad de tratamiento.

Un aspecto de la invención consiste en proporcionar compuestos de fórmula (I)

una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de estos; dicho compuesto se selecciona de un grupo donde

R¹ es F, R² es F, CH³ u OCH³ y R³ es H,

R¹ es H, R² es Cl o F y R³ es CH³ ,

R¹ es CH³ , R² es OCH³ , F o H y R³ =H,

R¹ es H, R² es Cl o F y R³ es H,

R¹ es CH³ , R² es H y R³ es F,

R¹ es F, R² es H y R³ es CH³ ,

R¹ es H, R² es OCH³ y R³ es H o Cl,

R¹ es H, R² es F y R³ es F,

R¹ es CF³ u OCF³ , R² es H y R³ es H,

R¹ es Cl, R² es OCH³ y R³ es H.

En particular, los compuestos de la invención o su forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de estos, se seleccionan del grupo:

una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de estos; dicho compuesto se selecciona de un grupo donde:

R¹ es F, R² es F, CH³ o OCH³ y R³ es H,

R¹ es H, R² es Cl o F y R³ es CH³ ,

R¹ es CH³ , R² es OCH³ , F o H y R³ =H,

R¹ es H, R² es Cl o F y R³ es H,

R¹ es CH³ , R² es H y R³ es F,

R¹ es F, R² es H y R³ es CH³ ,

R¹ es H, R² es OCH³ y R³ es H o Cl,

R¹ es H, R² es F y R³ es F,

R¹ es CF³ u OCF³ , R² es H y R³ es H,

R¹ es Cl, R² es OCH³ y R³ es H

para inhibir la replicación del virus del dengue en una muestra biológica o un paciente.

Parte de la presente invención es también una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de fórmula (I) o una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de este, junto con uno o más excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) incluyen las sales de adición de ácido y las sales básicas de dichos compuestos. Las sales de adición de ácido adecuadas se forman a partir de ácidos, que forman sales no tóxicas. Las sales básicas adecuadas se forman a partir de bases, que forman sales no tóxicas.

Lo compuestos de la invención también pueden existir en formas no solvatadas y solvatadas. El término "solvato" se usa en la presente para describir un complejo molecular, que comprende el compuesto de la invención y una o más moléculas de disolvente farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, etanol.

El término "polimorfo" se refiere a la capacidad del compuesto de la invención de existir en más de una forma o estructura cristalina.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse como productos cristalinos o amorfos. Pueden obtenerse, por ejemplo, como tapones, polvos o películas sólidas por métodos como precipitación, cristalización, secado por congelación, secado por pulverización o secado por evaporación. Se pueden administrar solos o en combinación con uno o más otros compuestos adicionales de la invención o en combinación con uno o más fármacos adicionales. Generalmente, se administrarán como una formulación en asociación con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. El término "excipiente" se usa en la presente para describir cualquier ingrediente distinto del o los compuestos de la invención. La elección del excipiente depende en gran medida de factores como el modo particular de administración, el efecto del excipiente sobre la solubilidad y estabilidad y la naturaleza de la forma de dosificación.

Los compuestos de la presente invención o cualquier subgrupo de estos pueden formularse en diversas formas farmacéuticas para propósitos de administración. Como composiciones apropiadas se pueden citar todas las composiciones empleadas usualmente para administrar fármacos sistémicamente. Para preparar las composiciones farmacéuticas de la presente invención, se combina una cantidad efectiva del compuesto particular, opcionalmente en forma de sal de adición, como el ingrediente activo en mezcla con un vehículo farmacéuticamente aceptable; el vehículo puede tomar una amplia variedad de formas en función de la forma de preparación deseada para la administración. Estas composiciones farmacéuticas se encuentran deseablemente en forma de dosificación unitaria adecuada, por ejemplo, para administración oral o rectal. Por ejemplo, para preparar las composiciones en forma de dosificación oral, se puede emplear cualquiera de los medios farmacéuticos habituales, como agua, glicoles, aceites, alcoholes y similares en el caso de preparaciones líquidas orales, como suspensiones, jarabes, elixires, emulsiones y soluciones o vehículos sólidos, como almidones, azúcares, caolín, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes disgregantes y similares en el caso de polvos, píldoras, cápsulas y tabletas. Debido a su facilidad de administración, las tabletas y cápsulas representan las formas unitarias de dosificación oral más ventajosa, en cuyo caso se emplean obviamente vehículos farmacéuticos sólidos. También se incluyen preparaciones en forma sólida, que se pueden convertir, poco antes de su uso, en formas líquidas.

Resulta especialmente ventajoso formular las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente en forma de dosificación unitaria para facilitar la administración y uniformidad de la dosis. Forma de dosificación unitaria, como se utiliza en la presente, se refiere a unidades físicamente diferenciadas, adecuadas como dosificaciones unitarias. Cada unidad contiene una cantidad predeterminada de ingrediente activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el vehículo farmacéutico requerido. Los ejemplos de dichas formas de dosificación unitaria incluyen tabletas (incluso tabletas ranuradas o recubiertas), cápsulas, píldoras, paquetes de polvos, obleas, supositorios, soluciones o suspensiones inyectables y similares así como múltiplos segregados de estas.

Los entendidos en el tratamiento de enfermedades infecciosas podrán determinar la cantidad efectiva a partir de los resultados de las pruebas, que se presentan a continuación. En general, se considera que una cantidad diaria efectiva oscilaría entre 0.01 mg/kg a 50 mg/kg de peso corporal, más preferiblemente entre 0.1 mg/kg y 10 mg/kg de peso corporal. Puede ser apropiado administrar la dosis requerida como dos, tres, cuatro o más subdosis a intervalos apropiados a lo largo del día. Dichas subdosis se pueden formular como formas de dosificación unitarias, por ejemplo, pueden incluir una cantidad de ingrediente activo por forma de dosificación unitaria de 1 a 1000 mg y, en particular, de 5 a 200 mg.

La dosificación y frecuencia de administración exactas dependen del compuesto particular de fórmula (I) utilizado, la afección particular que se está tratando, la gravedad de la afección que se está tratando, la edad, el peso y la condición física general del paciente particular así como de otra medicación que el sujeto pueda estar tomando, como es bien sabido por los entendidos en la técnica. Además, es evidente que la cantidad efectiva puede reducirse o aumentarse en función de la respuesta del sujeto tratado y/o de la evaluación del médico, que prescribe los compuestos de la presente invención. Por lo tanto, las escalas de cantidad efectiva mencionadas anteriormente son meramente orientativas y no están destinadas a limitar el alcance o uso de la invención en ninguna medida.

La presente divulgación también pretende incluir todos los isótopos de átomos, que se encuentran en los compuestos de la invención. Por ejemplo, los isótopos de hidrógeno incluyen tritio y deuterio y los isótopos de carbono incluyen C-13 y C-14.

Los presentes compuestos utilizados en la presente invención también pueden existir en su forma estereoquímicamente isómera, donde se definen todos los compuestos posibles constituidos por los mismos átomos unidos por la misma secuencia de enlaces, pero con diferentes estructuras tridimensionales, que no son intercambiables. Salvo que se mencione o indique lo contrario, la designación química de los compuestos abarca la mezcla de todas las formas estereoquímicamente isómeras posibles, que pueden poseer dichos compuesto.

Dicha mezcla puede contener todos los diastereómeros y/o enantiómeros de la estructura molecular básica de dicho compuesto. Todas las formas estereoquímicamente isómeras de los compuestos utilizados la presente invención, tanto en forma pura o mezcladas unas con otras, están incluidas dentro del alcance de la presente invención, incluso cualquier mezcla racémica o racemato.

Las formas estereoisómeras puras de los compuestos e intermedios como se menciona en la presente se definen como isómeros sustancialmente libres de otras formas enantioméricas o diastereoméricas de la misma estructura molecular básica de dichos compuestos o intermedios. En particular, el término 'estereoisoméricamente puros' se refiere a compuestos o intermedios, que tienen un exceso estereoisomérico de al menos el 80% (es decir, mínimo el 90% de un isómero y máximo el 10% de los otros isómeros posibles) hasta un exceso estereoisomérico del 100% (es decir, el 100% de un isómero y nada del otro), más específicamente, compuestos o intermedios, que tienen un exceso estereoisomérico del 90% hasta el 100%, incluso más específicamente, que tienen un exceso estereoisomérico del 94% hasta el 100% y, más en particular, que tienen un exceso estereoisomérico del 97% hasta el 100%. Los términos "enantioméricamente puro" y "diastereoméricamente puro" deben entenderse de una manera similar, pero teniendo en cuenta el exceso enantiomérico, respectivamente el exceso diastereomérico de la mezcla en cuestión.

Las formas estereoisómeras puras de los compuestos e intermedios utilizados en esta invención se pueden obtener mediante la aplicación de procedimientos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los enantiómeros pueden separarse entre sí por medio de la cristalización selectiva de sus sales diastereoméricas con ácidos o bases ópticamente activas. Los ejemplos incluyen ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido ditoluoiltartárico y ácido canfosulfónico. Alternativamente, los enantiómeros pueden separarse por técnicas cromatográficas, mediante el uso de fases estacionarias quirales. Dichas formas estereoquímicamente isoméricas puras también se pueden derivar de las correspondientes formas estereoquímicamente isoméricas puras de los materiales de partida apropiados, siempre que la reacción ocurra estereoespecíficamente. Preferiblemente, si se desea un estereoisómero específico, dicho compuesto se sintetizará por métodos de preparación estereoespecíficos. Estos métodos emplearán ventajosamente materiales de partida enantioméricamente puros.

Enfoques sintéticos generales

La síntesis de compuestos de fórmula general I puede llevarse a cabo como se describe en el Esquema 1. Se puede convertir ácido 2-(4-fluoro-2-metoxifenil) acético (II) en el correspondiente cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil) acetilo (III) con un reactivo de cloración, como cloruro de tionilo. La reacción de Friedel-Crafts del cloruro de ácido IlI con un indol sustituido de fórmula general IV se puede realizar mediante un reactivo ácido de Lewis, como Et²AlCl o TiCl4 en un disolvente adecuado, como CH²Cl² o 1,2-dicloroetano, y en condiciones de reacción adecuadas, que implican típicamente (pero no exclusivamente) refrigeración, para proporcionar el indol 3-acilado de fórmula general V. La introducción de una porción anilina en la posición alfa con respecto a la porción carbonilo de los compuestos de fórmula general V se puede lograr mediante una secuencia de reacción, que implica, por ejemplo, bromación de V con un reactivo, como tribromuro de feniltrimetilamonio, en un disolvente adecuado, como THF, para proporcionar los compuestos de fórmula general VI y la posterior reacción de los compuestos de fórmula general VI 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina (VII) en un disolvente adecuado, como CH³CN, y típicamente mediante una base, como TEA o DIPEA, para proporcionar los compuestos de fórmula general I como mezclas racémicas. La separación quiral de los compuestos de fórmula general I se puede realizar, por ejemplo, mediante cromatografía quiral para proporcionar los enantiómeros A y B de la fórmula general I.

Esquema 1

En algunos casos, la síntesis del intermedio de fórmula general V mediante el enfoque de síntesis de Friedel-Crafts, se beneficia de la presencia de un grupo protector (PG) en el indol-N durante la etapa de reacción de Friedel-Crafts, tal como se indica en el Esquema 2. Para este fin, el indol sustituido de fórmula general IV se puede convertir primero a un Intermediario N-protegido de fórmula general VIII, tal como por ejemplo un intermediario N-tosilato de fórmula general VIII (PG = Ts), usando un reactivo tal como, por ejemplo, cloruro de tosilo, en presencia de una base como, por ejemplo, hidruro de sodio. La reacción de Friedel-Crafts del indol sustituido de fórmula general IV con cloruro de ácido III puede realizarse usando un reactivo ácido de Lewis como por ejemplo Et²AlCl o TiCl4 en un disolvente adecuado como por ejemplo CH²Cl² o 1,2-dicloroetano, y bajo las condiciones adecuadas de reacción que por lo general (pero no exclusivamente) implican refrigeración, para proporcionar el indol N-protegido 3-acilado de fórmula general IX. La eliminación del grupo protector de indol-N PG del intermediario de fórmula general IX se puede realizar con un reactivo como, por ejemplo, LiOH (para PG = Ts) en una mezcla disolvente como, por ejemplo, THF/agua a una temperatura de reacción adecuada, para proporcionar el indol 3-acilado de fórmula general V .

Ejemplos

Métodos LC/MS

La medición por Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) se realizó mediante el uso de una bomba LC, una red de diodos (DAD) o un detector de rayos UV y una columna, como se especifica en los métodos correspondientes. De ser necesario, se incluyen detectores adicionales (véase la tabla de métodos, que se incluye a continuación). El flujo de la columna se lleva al espectrómetro de masas (MS), que se configura con una fuente de iones de presión atmosférica. Está dentro del conocimiento del entendido establecer los parámetros de ajuste (por ejemplo, rango de barrido, tiempo de permanencia...) con el fin de obtener los iones, que permiten la identificación del peso molecular (MW) monoisotópico nominal del compuesto. La adquisición de datos se realizó con el software adecuado.

Los compuestos se describen por sus tiempos de retención experimentales (Rt) y iones. Si no se especifica de forma diferente en la tabla de datos, el ion molecular reportado corresponde a [M+H]+ (molécula protonada) y/o [M-H]-(molécula desprotonada). En caso de que el compuesto no fuera directamente ionizable, se especifica el tipo de aducto (es decir, [M+NH4]+, [M+HCOO]-, etc...). Para moléculas con múltiples patrones isotópicos (Br, Cl), el valor reportado es el obtenido para la masa de isótopos más baja. Todos los resultados se obtuvieron con incertidumbres experimentales, que se asocian comúnmente con el método utilizado.

En adelante, "SQD" significa Detector Cuádruplo Simple; "MSD", Detector Selectivo de Masas; "RT", temperatura ambiente; "BEH", híbrido enlazado de etilsiloxano/sílice; "DAD", Detector de Rayos de Diodo; "HSS", Sílice de Alta Resistencia.

Códigos del método LC/MS (flujo expresado en mL/min., temperatura en columna (T) en °C, tiempo de ejecución en minutos).

Métodos SFC-MS

La medición SFC se realizó por medio de un sistema de cromatografía de fluidos supercríticos (SFC), compuesto por una bomba binaria para la liberación de dióxido de carbono (CO²) y un modificador, un muestreador automático, un horno de columna, un detector de red de diodos equipado con una celda de flujo de alta presión de hasta 400 bares. Si se configura con un Espectrómetro de Masas (MS), el flujo de la columna se lleva al (MS). Está dentro del conocimiento del entendido establecer los parámetros de ajuste (por ejemplo, rango de barrido, tiempo de permanencia...) con el fin de obtener los iones, que permiten la identificación del peso molecular (MW) monoisotópico nominal del compuesto. La adquisición de datos se realizó con el software adecuado.

Métodos analíticos SFC-MS (flujo expresado en mL/min., temperatura de columna (T) en °C, tiempo de ejecución en minutos, contrapresión (BPR) en bares).

Puntos de fusión

Los valores son o bien los valores máximos o los rangos de fusión y se obtienen con las incertidumbres experimentales, que se asocian comúnmente con este método analítico.

DSC823e (indicado como DSC)

Para una serie de compuestos, los puntos de fusión se determinaron con un DSC823e (Mettler-Toledo). Los puntos de fusión se midieron con un gradiente de temperatura de 10°C/minuto. La temperatura máxima fue de 300°C.

Rotaciones ópticas:

Las rotaciones ópticas se midieron en un polarímetro Perkin-Elmer 341 con una lámpara de sodio y se reportaron como se indica a continuación: [a]° (A, c g/100ml, disolvente, T°C).

[a]iT = (100a) / (l x c) : donde l es la longitud de ruta en dm y c es la concentración en g/100 ml para una muestra a una temperatura T (°C) y una longitud de onda A (en nm). Si la longitud de onda de la luz usada es 589 nm (línea D de sodio), entonces el símbolo D podría utilizarse en su lugar. Siempre se debe dar el signo de la rotación (+ o -). Cuando se utiliza esta ecuación, la concentración y el disolvente siempre se proporcionan entre paréntesis después de la rotación. La rotación se representa mediante el uso de grados y no se proporcionan unidades de concentración (se supone que es g/100 ml).

Ejemplo 1: Síntesis de 1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 1) y separación quiral en Enantiómeros 1A y 1B.

Síntesis del Síntesis del Intermediario 1a:

Se agregó ácido 2-(4-fluoro-2-metoxifenil) acético [CAS 886498-61-9] (28.9 g, 157 mmol) en porciones pequeñas a cloruro de tionilo (150 mL) y la solución resultante se agitó durante la noche a temperatura ambiente. El solvente se concentró bajo presión reducida y se co-evaporó con tolueno para proporcionar cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (31.8 g) como un residuo aceitoso que se usó sin purificación adicional en la siguiente etapa.

Síntesis del Intermediario 1b:

Una solución de 6-fluoro-1 H-indol [CAS 399-51-9] (14.2 g, 105 mmol) en CH²Cl² (400 mL) se enfrió a 0°C bajo atmósfera-N². Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (160 mL, 160 mmol) se agregó durante un periodo de 10 min a la solución agitada y la mezcla resultante se mantuvo a 0°C durante 40 min. Posteriormente, una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (31.8 g, 157 mmol) en CH²Cl² (300 mL) se agregó por goteo durante un periodo de 2.5 h mientras que la temperatura interna de la mezcla de reacción se mantenía debajo de 5°C. La temperatura de la mezcla de reacción agitada se mantuvo a 0°C durante 3.5 h. El baño de hielo se eliminó y después de agitarse a temperatura ambiente durante 2.5 h, la mezcla de reacción se enfrió nuevamente a 0°C y la reacción se inactivó mediante la adición lenta de una solución de tetrahidrato de tartrato de potasio sodio [CAS 6100­ 16-9] (59.6 g, 210 mmol) en agua (70 mL) mientras se mantenía la temperatura interna de la mezcla por debajo de 10°C. Después de agitarse durante 30 min adicionales a 0°C, el baño de hielo se eliminó y la mezcla resultante se diluyó con THF (1 L). Se agregó Na2SO4 (150 g) y después de agitación durante la noche, la mezcla se filtró sobre dicalite®. La torta de filtrado se lavó dos veces con THF (2x 1 L). Los filtrados combinados se evaporaron bajo presión reducida a un volumen residual de aproximadamente 50 mL. Un precipitado blanco se filtró y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 1b (22.3 g) como un polvo blanco.

Síntesis de Compuesto 1 y separación quiral de Enantiómeros 1A y 1B:

Una solución agitada de 1-(6-fluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 1b (11.0 g, 36.3 mmol) en THF (300 mL) se enfrió a 0°C bajo atmósfera-N². Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (14.3 g, 38.2 mmol) en THF (100 mL) se agregó por goteo durante un periodo de 45 min. La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se evaporó bajo presión reducida a un residuo blanco. Este residuo, que contenía la 2-bromo-1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 1c en bruto, se disolvió en acetonitrilo (300 mL). Después de la adición de 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (14.8 g, 73 mmol) y diisopropiletilamina (13 mL, 75 mmol), la mezcla se agitó a 50°C durante dos días - hasta la completa conversión al Compuesto 1. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida, el residuo se mezcló con agua (500 mL) y el producto se extrajo con 2-metil-THF (2x 500 mL). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con HCl 0.5N (800 mL), una solución saturada acuosa de NaHCO3 (200 mL) y salmuera (200 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se cristalizó a partir de EtOAc (50 mL). Los sólidos se filtraron y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 1-(6-fluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 1,9.9 g) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 1 (9.67 g) se realizó mediante cromatografía quiral de fase normal (Fase estacionaria: AS 20 pm (1 kg), Fase móvil: 100% MeOH). Las fracciones del producto que contenían el primer enatiómero eluído se combinaron y se evaporaron bajo presión reducida (baño de agua 38°C) a un volumen residual de 30 mL. La suspensión resultante se filtró y los sólidos se lavaron con fracciones pequeñas de MeOH y se secaron al vacío a 40°C para proporcionar Enantiómero 1A (2.9 g) como un sólido blanco. Las fracciones combinadas de producto del segundo producto eluído se evaporaron bajo presión reducida (baño de agua 37°C) hasta un volumen residual de 90 mL. Los sólidos se filtraron, se lavaron con fracciones pequeñas de MeOH y se secaron al vacío a 40°C para proporcionar Enantiómero 1B (3.15 g).

Compuesto 1:

1H RMN (360 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.73 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.23 (d, J=7.75 Hz, 1 H) 6.56 - 6.62 (m, 2 H) 6.74 (td, J=8.48, 2.48 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.46 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.35, 2.50 Hz, 1 H) 7.02 - 7.11 (m, 2 H) 7.28 (dd, J=9.62, 2.38 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.61, 6.83 Hz, 1 H) 8.15 (dd, J=8.76, 5.59 Hz, 1 H) 8.44 (s, 1 H) 12.09 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-A): Rt 1.08 min, MH+ 501

Enantiómero 1A:

1H RMN (600 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.23 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 6.58 - 6.59 (m, 1 H) 6.59 - 6.60 (m, 1 H) 6.73 (td, J=8.44, 2.49 Hz, 1 H) 6.92 (t, J=1.61 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.30, 2.49 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.80 Hz, 1 H) 7.06 (ddd, J=9.68, 8.80, 2.35 Hz, 1 H) 7.27 (dd, J=9.61,2.27 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.66, 6.90 Hz, 1 H) 8.15 (dd, J=8.80, 5.58 Hz, 1 H) 8.43 (s, 1 H) 12.09 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-A): Rt 1.08 min, MH+ 501

[a]D20: 131.7° (c 0.48, DMF)

s Fc quiral (Método s Fc -K): Rt 2.22 min, MH+ 501, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 241 °C

Enantiómero 1B:

1H RMN (360 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.23 (d, J=7.77 Hz, 1 H) 6.56 - 6.61 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.48, 2.46 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.83 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.36, 2.49 Hz, 1 H) 7.01 - 7.12 (m, 2 H) 7.27 (dd, J=9.62, 2.38 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.62, 6.85 Hz, 1 H) 8.15 (dd, J=8.77, 5.59 Hz, 1 H) 8.44 (s, 1 H) 12.07 (s a, 1 H) LC/MS (Método LC-A): Rt 1.07 min, MH+ 501

[a]D20: -127.7° (c 0.535, DMF)

SFC quiral (Método SFC-K): Rt 3.68 min, MH+ 501, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 249°C

Ejemplo 2: Síntesis 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(6-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 2) y separación quiral en Enantiómeros 2A y 2B .

Síntesis del Intermediario 2a:

Una solución agitada de 6-fluoro-7-metil-1 H-indol [CAS 57817-10-4] (5.41 g, 36.2 mmol) en CH²CL (100 mL) se enfrió sobre hielo bajo atmósfera-N². Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (54.4 mL, 54.4 mmol) se agregó por goteo. Después de 15 min a 0°C, una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (11.0 g, 54.4 mmol, para síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (30 mL) se agregó por goteo mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de 5°C. El baño de hielo se eliminó y la suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La mezcla de reacción se vertió lentamente en una solución saturada acuosa fría (0°C) de NaHCO3. La mezcla se filtró sobre dicalite® y la torta de filtrado se lavó con THF. Los filtrados combinados se extrajeron con EtOAc, se secaron sobre MgSO4 y se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se trituró con CH²CL y los sólidos se filtraron para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(6-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 2a (7.47 g) como un polvo blanco.

Síntesis del Intermediario 2b:

Una solución agitada de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(6-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 2a (7.43 g, 23.56 mmol) en

THF (100 mL) enfriado a 0°C bajo atmósfera-N². Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1]

(8.96 g, 23.8 mmol) en THF (100 mL) se agregó por goteo. Después de la adición, la mezcla de reacción se agitó durante 2 h a temperatura ambiente. La suspensión se filtró para eliminar Los sólidos y el filtrado se evaporó bajo presión reducida. El residuo se trituró con CH²Cl² , los sólidos se filtraron y se secaron al vacío para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)etanona 2b (8.95 g).

Síntesis de Compuesto 2 y separación quiral de Enantiómeros 2A y 2B:

2-Bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)etanona 2b (3.07 g, 7.8 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (1.63 g, 8.11 mmol), y diisopropiletilamina (1.35 mL, 7.83 mmol) se mezclaron en CH³CN (100 mL) y la mezcla se calentó bajo reflujo durante 3 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, el solvente se evaporó bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre sílice

(Fase estacionaria: HP-Spher 25 pM (340 g), Fase móvil: heptano/EtOAc gradiente 100/0 a 0/100). Las fracciones del producto se evaporaron bajo presión reducida. Una pequeña cantidad del residuo aceitoso se solidificó mediante trituración con CH²CL. Los sólidos se aislaron mediante filtración, se lavaron con CH²CL y secaron al vacío para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(6-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 2, 250 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 2 (787 mg) se realizó mediante SFC preparativa (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel OJ 30 x 250 mm, Fase móvil: CO² , MeOH con /'PrNH²0.2%) y las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron bajo presión reducida. El primer enatiómero eluído se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna (Fase estacionaria: HP-Spher 25 pM (10 g), Fase móvil: heptano/EtOAc gradiente

100/0 a 0/100). La evaporación de las fracciones del producto y liofilización del residuo aceitoso a partir de una mezcla de CH³CN y agua proporcionó Enantiómero 2A (91 mg) como un polvo amorfo. El segundo enantiómero eluído se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna (Fase estacionaria: HP-Spher 25 pM (10 g), Fase móvil: heptano/EtOAc gradiente 100/0 a 0/100). La evaporación de las fracciones del producto y liofilización del residuo aceitoso a partir de una mezcla de CH³CN y agua proporcionó enantiómero 2B (141 mg) como un polvo amorfo.

Compuesto 2:

1H RMN (360 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 2.38 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.25 (d, J=7.69 Hz, 1 H)

6.59 (d, J=10.28 Hz, 2 H) 6.73 (t, J=8.32 Hz, 1 H) 6.88 - 7.10 (m, 4 H) 7.36 (t, J=7.68 Hz, 1 H) 7.97 (dd, J=8.00, 6.07

Hz, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 12.23 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-A): Rt 1.11 min, MH+ 515

Enantiómero 2A:

1H RMN (360 MHz, DMSO-da) 5 ppm 2.38 (d,

J=1.57 Hz,

3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.25 (d, J Hz, 1 H) 6.56 - 6.62 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.49, 2.49 Hz, 1 H) 6.90 - 7.07 (m, 4 H) 7.36 (dd, J=8.62, 6.83 Hz, 1 H) 7.97 (dd, J=8.71,5.21 Hz, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 12.22 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.06 min, MH+ 515

[a]D20: 110.6° (c 0.5, DMF)

SFC quiral (Método SfC-L): Rt 2.86 min, MH+ 515, pureza quiral 100%.

Enantiómero 2B:

1H RMN (360 MHz, DMSO-da) 5 ppm 2.38 (d, J=1.59 Hz, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.25 (d, J Hz, 1 H) 6.56 - 6.59 (m, 1 H) 6.59 - 6.62 (m, 1 H) 6.73 (td, J=8.47, 2.46 Hz, 1 H) 6.87 - 7.10 (m, 4 H) 7.36 (dd, J=8.60,

6.83 Hz, 1 H) 7.97 (dd, J=8.68, 5.23 Hz, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 12.22 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.07 min, MH+ 515

[a]D20: -104.1° (c 0.538, DMF)

SFC quiral (Método SFC-L): Rt 3.38 min, MH+ 515, pureza quiral 100%.

Ejemplo 3: Síntesis de 1-(6-cloro-7-metiMH-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 3) y separación quiral en Enantiómeros 3A y 3B.

Síntesis del Intermediario 3a:

Una solución agitada de 6-cloro-7-metil-1 H-indol [CAS 57817-09-1] (3.2 g, 19.3 mmol) en CH²CI² (150 mL) bajo corriente de N² , se enfrió sobre un baño de enfriamiento de hielo-NaCl. Se agregó cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (29 mL, 29 mmol) durante un periodo de 2 min y la solución fría se agitó a -10°C durante 30 min. Una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (5.48 g, 27.1 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (30 mL) se agregó por goteo durante 30 min mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de -10°C y la mezcla resultante se agitó durante 2 h adicionales a -10°C. La reacción se inactivó mediante la adición lenta de una solución de tetrahidrato de tartrato de potasio sodio [CAS 6100-16-9] (10.9 g, 38.6 mmol) en agua (10 mL) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 15 min. Un precipitado blanco se presentó en la mezcla de reacción. El precipitado se aisló por filtración, se lavó con agua y se secó al vacío para proporcionar 1 -(6-cloro-7-metil-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 3a (4200 mg) como un sólido blancuzco.

Síntesis del Intermediario 3b:

Una solución de 1-(6-cloro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 3a (2000 mg, 6.03 mmol) en THF (120 mL) se agitó a temperatura ambiente bajo atmósfera-N². Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.38 g, 6.33 mmol) en THF (35 mL) se agregó por goteo y la mezcla se agitó durante 90 min adicionales a temperatura ambiente. El precipitado se filtró y el filtrado se concentró al vacío para proporcionar 2-bromo-1 -(6-cloro-7-metil-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 3b (2200 mg) como un polvo blancuzco.

Síntesis de Compuesto 3 y separación quiral de Enantiómeros 3A y 3B:

Se suspendió 2-bromo-1-(6-cloro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 3b (1.29 g, 3.15 mmol) en CH³CN (60 mL). Se agregaron 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (0.7 g, 3.46 mmol), y diisopropiletilamina (1.2 mL, 6.9 mmol) y la mezcla agitada se calentó a 65°C durante 4 h. La mezcla se concentró al vacío y el residuo se repartió entre EtOAc y agua. La capa orgánica se separó, se secó sobre Na²SO⁴ , se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (Fase estacionaria: Grace Reveleris® sílice (330 g), Fase móvil: EtOAc/heptano gradiente 50/50 a 100/0) y posteriormente mediante HPLC preparativa (Fase estacionaria: Uptisphere C18 ODB - 10 gm, 200 g, 5 cm, Fase móvil: solución 0.25% NH⁴HCO³ en agua, CH³CN) para proporcionar 1-(6-cloro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 3 , 725 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 3 (635 mg) se realizó utilizando separación quiral de fase normal (Fase estacionaria: AS 5 gm, Fase móvil: 100% MeOH, elución isocrática. Detección de longitud de onda 308 nm, flujo 1mL/min). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron para proporcionar Enantiómero 3A (223 mg) como el primer producto eluído y Enantiómero 3B (247 mg) como el segundo producto eluído. Ambos enantiómeros 3A y 3B ocurrieron como polvos amorfos.

Compuesto 3:

1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d) 5 ppm 2.49 (s, 3 H) 2.94 (s, 3 H) 3.77 (s, 3 H) 4.12 (s, 3 H) 6.03 (d, J=6.31 Hz, 1 H) 6.18 (d, J=6.27 Hz, 1 H) 6.42 (t, J=2.20 Hz, 1 H) 6.57 (td, J=8.36, 2.42 Hz, 1 H) 6.64 (dd, J=10.56, 2.42 Hz, 1 H) 6.70 (dd, J=2.21, 1.51 Hz, 1 H) 6.84 (t, J=1.76 Hz, 1 H) 7.24 - 7.30 (m, 1 H) 7.28 (d, J=8.58 Hz, 1 H) 8.15 (d, J=8.61 Hz, 1 H) 8.17 (d, J=3.07 Hz, 1 H) 8.70 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.16 min, MH+ 531

Enantiómero 3A:

1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm 2.50 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.26 (d, J=7.68 Hz, 1 H) 6.57 - 6.59 (m, 1 H) 6.60 - 6.63 (m, 1 H) 6.73 (td, J=8.48, 2.50 Hz, 1 H) 6.90 - 6.93 (m, 1 H) 6.96 (dd, J=11.37, 2.55 Hz, 1 H) 7.02 (d, J=7.71 Hz, 1 H) 7.22 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.62, 6.82 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=8.50 Hz, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 12.25 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-A): Rt 1.18 min, MH+ 531

[a]D20: 111.1° (c 0.515, DMF)

SFC quiral (Método SfC-M): Rt 2.07 min, MH+ 531, pureza quiral 100%.

Enantiómero 3B:

1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 2.50 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.26 (d, J=7.70 Hz, 1 H) 6.56 - 6.59 (m, 1 H) 6.60 - 6.62 (m, 1 H) 6.73 (td, J=8.48, 2.51 Hz, 1 H) 6.91 - 6.93 (m, 1 H) 6.96 (dd, J=11.33, 2.53 Hz, 1 H) 7.02 (d, J=7.72 Hz, 1 H) 7.22 (d, J=8.54 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.62, 6.82 Hz, 1 H) 7.99 (d, J=8.50 Hz, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 12.25 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-A): Rt 1.18 min, MH+ 531

[a]D20: -100.7° (c 0.55, DMF)

SFC quiral (Método SFC-M): Rt 2.45 min, MH+ 531, pureza quiral 100%.

Ejemplo 4: Síntesis 1-(6-cloro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 4) y separación quiral en Enantiómeros 4A y 4B.

Síntesis del Intermediario 4a:

Una solución agitada de 6-cloro-1 H-indol [CAS 17422-33-2] (2.23 g, 14.7 mmol) en CH²Cl² (125 mL) bajo corriente de N² , se enfrió a 0°C utilizando un baño de hielo. Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (22.1 mL, 22.1 mmol) se agregó por goteo y la mezcla se agitó durante 10 min a 0°C. Posteriormente, una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (4.47 g, 22.1 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (30 mL) se agregó por goteo durante un periodo de 50 min y la mezcla resultante se mantuvo a 0°C durante 1 h y posteriormente se agitó a 10°C durante 1 h. Después de enfriar a 0°C nuevamente, la reacción se inactivó mediante la adición lenta de una solución de tetrahidrato de tartrato de potasio sodio [CAS 6100-16-9] (8.31 g, 29.4 mmol) en agua (9 mL) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó mediante la adición de 2-metil-THF (150 mL) y se agitó durante 30 min a temperatura ambiente. Na2SO4 (30 g) se agregó y después de agitarse durante 30 min, la mezcla se filtró sobre dicalite®. La torta de filtrado se lavó varias veces con 2-metil-THF y los filtrados combinados se concentraron al vacío a un volumen residual de 25 mL. Después de reposar durante 2 h, un precipitado se formó y el precipitado se filtró y se secó al vacío para proporcionar 1-(6-cloro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 4a (2.85 g).

Síntesis de Compuesto 4 y separación quiral de Enantiómeros 4A y 4B:

Una solución de 1-(6-cloro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 4a (0.8 g, 2.52 mmol) en THF (40 mL) se agitó bajo corriente de N² y se enfrió en un baño de hielo. Se agregó tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56­ 1] (0.99 g, 2.64 mmol) en porciones y la mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y posteriormente a temperatura ambiente durante 1 h. Los sólidos se eliminaron de la mezcla de reacción por filtración. El filtrado, que contenía 2-bromo-1-(6-cloro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 4b en bruto, se mezcló con 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (0.56 g, 2.77 mmol) y diisopropiletilamina (1.3 mL, 7.55 mmol) y los solventes se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se recogió con CH³CN (50 mL) y calentó bajo reflujo durante 18 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua (250 mL). Los productos se extrajeron con 2-metil-THF (2x) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se agitó en EtOAc (7.5 mL) y los sólidos se filtraron. El filtrado se evaporó bajo presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre sílice (Fase estacionaria: Grace Reveleris® sílice 40 g, Fase móvil: heptano/EtOAc gradiente 100/0 a 0/100). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se evaporaron, y el residuo se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa (Fase estacionaria: Uptisphere C18 ODB - 10 gm, 200 g, 5 cm, Fase móvil: solución 0.25% NH⁴HCO³ en agua, CH³CN). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron bajo presión reducida, y el residuo se coevaporó con MeOH. El residuo sólido se agitó en Et²O (7.5 mL), se filtró y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 1-(6-cloro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona racémica (Compuesto 4, 352 mg).

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 4 (352 mg) se realizó mediante separación quiral de fase normal (Fase estacionaria: AS 500 g 20 gm, Fase móvil: 100% MeOH). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron bajo presión reducida. El primer producto eluído se agitó en CH²Cl² (5 mL), se filtró y se secó al vacío a 40°C para proporcionar Enantiómero 4A (56 mg). El segundo producto eluído se agitó en CH²Cl² (3.5 mL), se filtró y se secó al vacío a 40°C para proporcionar Enantiómero 4B (68 mg).

Compuesto 4:

1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.73 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.24 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.59 (s, 2 H) 6.74 (td, J=8.4, 2.2 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.97 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.06 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.23 (dd, J=8.5, 1.6 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.4, 7.1 Hz, 1 H) 7.54 (d, J=1.6 Hz, 1 H) 8.15 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.47 (s, 1 H) 11.82 - 12.42 (s a, 1 H) LC/MS (Método LC-A): Rt 1.12 min, MH+ 517

Enantiómero 4A:

1H RMN (360 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.22 (d, J=7.75 Hz, 1 H) 6.56 - 6.60 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.45, 2.51 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.83 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.38, 2.51 Hz, 1 H) 7.06 (d, J=7.73 Hz, 1 H) 7.20 (dd, J=8.49, 1.96 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.66, 6.83 Hz, 1 H) 7.52 (d, J=1.94 Hz, 1 H) 8.13 (d, J=8.49 Hz, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 12.24 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-A): Rt 1.15 min, MH+ 517

[a]D20: 129.9° (c 0.525, DMF)

s Fc quiral (Método SfC-N): Rt 2.77 min, MH+ 517, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 245°C

Enantiómero 4B:

1H RMN (360 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.71 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.22 (d, J=7.75 Hz, 1 H) 6.56 - 6.60 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.49, 2.47 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.65 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.35, 2.48 Hz, 1 H) 7.06 (d, J=7.79 Hz, 1 H) 7.20 (dd, J=8.51, 1.93 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.63, 6.84 Hz, 1 H) 7.52 (d, J=1.92 Hz, 1 H) 8.13 (d, J=8.51 Hz, 1 H) 8.45 (s, 1 H) 12.10 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-A): Rt 1.15 min, MH+ 517

a]D20: -123.3° (c 0.544, DMF)

SFC quiral (Método s Fc -N): Rt 3.52 min, MH+ 517, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 247°C

Ejemplo________5 Síntesis 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 5) y separación quiral en Enantiómeros 5A y 5B.

Síntesis del Intermediario 5a:

Una solución agitada de 6-metoxi-1 H-indol [CAS 3189-13-7] (2.54 g, 17.3 mmol) en CH²CI² (100 mL) bajo corriente de N² , se enfrió a -22°C utilizando un baño de enfriamiento de acetona criostat-controlado. Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (25.9 mL, 25.9 mmol) se agregó por goteo y la mezcla se agitó a -22°C durante 20 min. Posteriormente, una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (5.24 g, 25.9 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (60 mL) se agregó por goteo durante un periodo de 90 min mientras se mantenía la temperatura interna por debajo de -20°C y la mezcla resultante se mantuvo a -20°C durante 2.5 h. La reacción se inactivó mediante la adición lenta de una solución de tetrahidrato de tartrato de potasio sodio [CAS 6100-16-9] (9.74 g, 34.5 mmol) en agua (10 mL) y la mezcla se agitó a -20°C durante 30 min y posteriormente a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se diluyó mediante la adición de THF (300 mL) y se agitó durante 1 h a temperatura ambiente. Na2SO4 (32 g) se agregó y después de agitarse durante 18 h, la mezcla se filtró sobre dicalite®. La torta de filtrado se lavó varias veces con THF y los filtrados combinados se concentraron al vacío a un volumen residual de 7.5 mL. Después de reposar durante 4 h, un precipitado se formó y el precipitado se filtró y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(6-metoxi-1 H-indol-3-il)etanona 5a (2.21 g).

Síntesis de Compuesto 5 y separación quiral de Enantiómeros 5A y 5B:

Una solución de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-1H-indol-3-il)etanona 5a (2.2 g, 7.02 mmol) en THF (150 mL) se agitó bajo corriente de N² y se enfrió en un baño de hielo. Se agregó tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207­ 56-1] (2.77 g, 7.37 mmol) en porciones y la mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y posteriormente a temperatura ambiente durante 2 h. Se agregó 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (4.24 g, 21.1 mmol) y se evaporó aproximadamente 125 mL de solvente bajo presión reducida. Se agregó CH³CN (50 mL) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 días y posteriormente at 50°C durante 2 días. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se vertió en agua (200 mL). Los productos se extrajeron con 2-metil-THF (2x) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre sílice (Fase estacionaria: Grace Reveleris® sílice 120 g, Fase móvil: heptano/EtOAc gradiente 100/0 a 0/100). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se lavaron con HCl 1N (100 mL), una solución acuosa saturada de NaHCO3, se secaron con MgSO4, se filtraron y se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se cristalizó a partir de una mezcla de CH²Cl² (10 mL) y diisopropiléter (15 mL), se filtró y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona racémica (Compuesto 5 , 2.25 g). Una pequeña cantidad de Compuesto 5 (150 mg) se purificó adicionalmente mediante suspensión en MeOH (4 mL) durante 2 h. Los sólidos se filtraron y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-1H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona racémica (Compuesto 5 , 112 mg).

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 5 (2.1 g) se realizó mediante separación quiral de fase normal (Fase estacionaria: (S,S)-Whelk-O 1, Fase móvil: 100% EtOH). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron. El primer producto eluído se agitó en MeOH (6 mL), se filtró y se secó al vacío a 40°C para proporcionar Enantiómero 5A (825 mg). El segundo producto eluído se agitó en MeOH (5 mL), se filtró y se secó al vacío a 40°C para proporcionar Enantiómero 5B (784 mg).

Compuesto 5:

1H RMN (400 MHz, DMSO-dfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.76 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.19 (d, J=7.66 Hz, 1 H) 6.55 - 6.61 (m, 2 H) 6.72 (td, J=8.47, 2.49 Hz, 1 H) 6.83 (dd, J=8.71,2.30 Hz, 1 H) 6.90 (t, J=1.65 Hz, 1 H) 6.92 - 6.98 (m, 2 H) 7.00 (d, J=7.69 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.60, 6.85 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=8.71 Hz, 1 H) 8.29 (s, 1 H) 11.85 (s a, 1 H) LC/MS (Método LC-A): Rt 1.01 min, MH+ 513

Enantiómero 5A:

1H RMN (400 MHz, DMSO-dfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.77 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.68 Hz, 1 H) 6.56 - 6.61 (m, 2 H) 6.72 (td, J=8.48, 2.48 Hz, 1 H) 6.83 (dd, J=8.72, 2.30 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.65 Hz, 1 H) 6.92 - 6.98 (m, 2 H) 7.01 (d, J=7.70 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.61,6.85 Hz, 1 H) 8.02 (d, J=8.71 Hz, 1 H) 8.30 (s, 1 H) 11.76 (s a, 1 H) LC/MS (Método LC-A): Rt 1.04 min, m H+ 513

[a]D20: -127.5° (c 0.6, DMF)

s Fc quiral (Método SFC-I): Rt 3.01 min, MH+ 513, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 190°C

Enantiómero 5B:

1H RMN (400 MHz, DMSO-dfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.77 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.67 Hz, 1 H) 6.55 - 6.62 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.48, 2.49 Hz, 1 H) 6.83 (dd, J=8.72, 2.30 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.65 Hz, 1 H) 6.93 - 6.98 (m, 2 H) 7.01 (d, J=7.68 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.61,6.84 Hz, 1 H) 8.03 (d, J=8.71 Hz, 1 H) 8.30 (s, 1 H) 11.82 (s a, 1 H) LC/MS (Método LC-A): Rt 1.04 min, m H+ 513

[a]D20: 125.3° (c 0.455, DMF)

SFc quiral (Método SFC-I): Rt 2.51 min, MH+ 513, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 204°C

Ejemplo____________ 6 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 6) y separación quiral en Enantiómeros 6A y 6B.

Síntesis del Intermediario 6a:

Una solución agitada de 7-fluoro-5-metil-1 H-indol [CAS 442910-91-0] (2.54 g, 17.0 mmol) en CH²Cl² (150 mL) bajo corriente de N² , se enfrió a 0°C utilizando un baño de hielo. Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (25.6 mL, 25.6 mmol) se agregó por goteo y la mezcla se agitó a 0°C durante 30 min. Posteriormente, una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (5.18 g, 25.6 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (150 mL) se agregó por goteo y la mezcla resultante se agitó a 0°C durante 1 h y posteriormente a temperatura ambiente durante 3 h. La reacción se vertió en hielo-agua que contenía tetrahidrato de tartrato de potasio sodio sobrante [CAS 6100-16­ 9]. La mezcla se filtró sobre dicalite® y la torta de filtrado se lavó varias veces con THF. La capa orgánica se separó, se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se suspendió en CH²Cl² (20 mL). Los sólidos se filtraron, se lavaron con una pequeña cantidad de una mezcla de CH²Cl² / heptano (1/1) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 6a (4.13 g).

Síntesis del Intermediario 6b:

Una solución de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 6a (4.11 g, 13.0 mmol) en THF (100 mL) se agitó bajo corriente de N² y se enfrió en un baño de hielo. Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (5.39 g, 14.3 mmol) en THF (150 mL) se agregó por goteo y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. Los sólidos se eliminaron por filtración, se lavó con THF y los filtrados combinados se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se trituró con una pequeña cantidad de CH²Cl² , Los sólidos se aislaron mediante filtración y se secaron al vacío para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(7-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)etanona 6b (4.81 g) como un polvo blanco.

Síntesis de Compuesto 6 y separación quiral de Enantiómeros 6A y 6B:

Una solución de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 6b (1.02 g, 2.59 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (782 mg, 3.89 mmol) y diisopropiletilamina (670 pL, 3.89 mmol) en CH³CN (25 mL) se agitó a temperatura ambiente durante 4 días y la mezcla se calentó posteriormente a 70°C durante 10 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, Los solventes se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se recogió con CH²Cl² , se lavó con HCl 0.5N y agua, se secó sobre MgSÜ4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre sílice (Fase estacionaria: Biotage® SNAP Ultra 100 g, Fase móvil: EtOAc:EtOH (3:1)/heptano gradiente 0/100 a 50/50). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se evaporaron bajo presión reducida para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(7-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona racémica (Compuesto 6, 747 mg) como un sólido blanco.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 6 (747 mg) se realizó mediante SFC preparativa (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, Fase móvil: CO² , EtOH con /'PrNH²0.2%). Las fracciones del producto se combinaron, se evaporaron bajo presión reducida y se secaron al vacío a 50°C. El primer producto eluído proporcionó Enantiómero 6A (275 mg) como un sólido amorfo blanco. El segundo producto eluído proporcionó Enantiómero 6B (259 mg) como un polvo amorfo blanco.

Compuesto 6:

LC/MS (Método LC-A): Rt 1.13 min, MH+ 515

Enantiómero 6A:

1H RMN (360 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 2.39 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.24 (d, J=7.78 Hz, 1 H) 6.55 - 6.62 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.48, 2.49 Hz, 1 H) 6.88 - 6.99 (m, 3 H) 7.01 (d, J=7.80 Hz, 1 H) 7.35 (dd, J=8.61,6.83 Hz, 1 H) 7.79 (s, 1 H) 8.40 (s, 1 H) 12.49 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.04 min, MH+ 515

[a]D20: 134.0° (c 0.332, DMF)

SFC quiral (Método SfC-O): Rt 2.24 min, MH+ 515, pureza quiral 100%.

Enantiómero 6B:

1H RMN (360 MHz, DMSO-db) 5 ppm 2.39 (s, 3 H) 3.10 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.25 (d, J=7.79 Hz, 1 H) 6.57 - 6.61 (m, 2 H) 6.74 (td, J=8.48, 2.48 Hz, 1 H) 6.89 - 6.99 (m, 3 H) 7.02 (d, J=7.80 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.62, 6.83 Hz, 1 H) 7.79 (s, 1 H) 8.41 (s, 1 H) 12.47 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.04 min, MH+ 515

[a]D20: -129.2° (c 0.288, DMF)

SFC quiral (Método SFC-O): Rt 3.40 min, MH+ 515, pureza quiral 100%.

Ejemplo 7: Síntesis de 1-(5,6-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 7) y separación quiral en Enantiómeros 7A y 7B.

Síntesis del Intermediario 7a:

Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (19.9 mL, 19.9 mmol) se agregó por goteo a 0°C a una solución de 5,6-difluoro-1 H-indol [CAS 169674-01-5] (2.0 g, 13.1 mmol) en CH²Cl² (24 mL). Después de 30 min a 0°C, una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (4.0 g, 19.6 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (24 mL) se agregó lentamente. La reacción se agitó a 0°C durante 3 h. Solución 1N de sal de Rochelle (50 mL) se agregó y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 1 h. El precipitado se filtró y se repartió entre en EtOAc y HCl 1N. La fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO4, se filtraron y concentraron bajo presión reducida para proporcionar 1 -(5,6-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 7a (4.0 g).

Síntesis del Intermediario 7b:

Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (1.9 g, 2.37 mmol) en THF (30 mL) se agregó por goteo a 0°C a una solución de 1 -(5,6-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 7a (1.5 g, 4.70 mmol) en THF (50 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 15 min y a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se recogió con un mínimo de acetonitrilo. El precipitado se filtró para proporcionar 2-bromo-1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 7b (1.9 g).

Síntesis de Compuesto 7 y separación quiral de Enantiómeros 7A y 7B:

Una mezcla de 2-bromo-1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 7b (0.800 g, 2.01 mmol) y 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (1.2 g, 6.03 mmol) en acetonitrilo (8 mL) se irradió en un horno de microondas a 100°C durante 10 min. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl 1N. La fase orgánica se lavó con una solución saturada acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El residuo se cristalizó a partir de acetonitrilo para proporcionar 1-(5,6-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 7 , 640 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 7 (596 mg) se realizó mediante SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® IA 5 gm 250 x 20mm, Fase móvil: 70% CO², 30% MeOH) para producir 250 mg del primer enatiómero eluído y 250 mg del segundo enantiómero eluído. El primer enatiómero eluído se solidificó mediante trituración con Et²O para proporcionar Enantiómero 7A (194 mg) como un polvo amorfo. El segundo enantiómero eluído se solidificó mediante trituración con Et²O para proporcionar Enantiómero 7B (212 mg) como un polvo amorfo.

Compuesto 7:

1H RMN (300 MHz, DMSO-dfe) □ ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.23 (d, J=7.8 Hz, 1 H) 6.57 - 6.61 (m, 2 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.91 (s, 1 H) 6.96 (dd, J=11.4, 2.5 Hz, 1 H) 7.06 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.6, 6.9 Hz, 1 H) 7.54 (dd, J=10.8, 7.0 Hz, 1 H) 8.01 (dd, J=11.2, 8.1 Hz, 1 H) 8.48 (s, 1 H) 12.19 (s a., 1 H)

LC-MS (Método LC-D) Rt 3.3 min, MH+ 519

Enantiómero 7A:

1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.22 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.55 - 6.60 (m, 2 H) 6.74 (td, J=8.4, 2.4 Hz, 1 H) 6.88 - 6.92 (m, 1 H) 6.95 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.4, 6.9 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=10.7, 6.9 Hz, 1 H) 8.00 (dd, J=11.2, 8.0 Hz, 1 H) 8.47 (s, 1 H) 12.18 (s a., 1 H) LC/MS (Método LC-C): Rt 3.00 min, MH+ 519

[a]D20: 103.9° (c 0.282, DMF)

SFC quiral (Método SFC-G): Rt 3.16 min, MH+ 519, pureza quiral 100%.

Enantiómero 7B:

1H RMN (500 MHz, DMSO-dfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.22 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.55 - 6.61 (m, 2 H) 6.74 (td, J=8.4, 2.4 Hz, 1 H) 6.91 (s, 1 H) 6.96 (dd, J=11.3, 2.4 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=10.7, 6.9 Hz, 1 H) 8.00 (dd, J=11.0, 8.2 Hz, 1 H) 8.47 (s, 1 H) 12.18 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.00 min, MH+ 519

[a]D20: -109.2° (c 0.285, DMF)

SFC quiral (Método SFC-G): Rt 3.92 min, MH+ 519, pureza quiral 99.17%.

Ejemplo 8: Síntesis de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 8) y separación quiral en Enantiómeros 8A y 8B.

Síntesis del Intermediario 8a:

Se agregó Cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (22 mL, 22 mmol) por goteo a 0°C a una solución de 5-fluoro-7-metil-1 H-indol [CAS 1082041-52-8] (1.62 g, 10.9 mmol) en CH²Cl² (45 mL). Después de 30 min a 0°C, se agregó lentamente una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.3 g, 16.3 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (30 mL) a 0°C. La reacción se agitó a 0°C durante 3 h. Se agregó solución de sal de Rochelle (1N, 75 mL) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado se filtró y se repartió entre en EtOAc y HCl 1N. La fase orgánica se lavó con HCl 1N y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El residuo se recogió con una cantidad mínima de EtOAc. El precipitado se filtró para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 8a (2.4 g).

Síntesis del Intermediario 8b:

Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.2 g, 5.85 mmol) en THF (60 mL) se agregó por goteo a 0°C a una solución de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 8a (1.66 g, 5.26 mmol) en THF (45 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró bajo presión reducida para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 8b (1.9 g).

Síntesis de Compuesto 8 y separación quiral de Enantiómeros 8A y 8B:

Una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1 H-indol-3-il)etanona 8b (0.100 g, 0.254 mmol) y 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (0.155 g, 0.770 mmol) en acetonitrilo (1 mL) se irradió en un horno de microondas a 100°C durante 10 min. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl 1N. La fase orgánica se lavó con una solución saturada acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El residuo se cristalizó a partir de EtOAc y heptano para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-7-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil) fenil)amino)etanona (Compuesto 8 , 95 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 8 (491 mg) se realizó mediante SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak IC 5 gm 250 x 30 mm, Fase móvil: 60% CO² , 40% /PrOH) para producir 224 mg del primer enatiómero eluído y 212 mg del segundo enantiómero eluído. El primer enatiómero eluído se cristalizó a partir de Et²O y algunas gotas de CH³CN para proporcionar Enantiómero 8A (174 mg) como un polvo blanco. El segundo enantiómero eluído se cristalizó a partir de Et²O y algunas gotas de CH³CN para proporcionar Enantiómero 8B (164 mg) como un polvo blanco.

Compuesto 8:

1H RMN (300 MHz, DMSO-ds) □ ppm 2.47 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.24 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.55 - 6.64 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.4, 2.4 Hz, 1 H) 6.87 - 6.98 (m, 3 H) 7.04 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 7.66 (dd, J=9.7, 2.5 Hz, 1 H) 8.46 (s, 1 H) 12.23 (s a., 1 H)

LC-MS (Método LC-E): Rt 8.5 min, MH+ 515

Enantiómero 8A:

1H RMN (500 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2.47 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.24 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.53 - 6.65 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.8, 2.4 Hz, 1 H) 6.88 - 6.99 (m, 3 H) 7.05 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.8, 6.9 Hz, 1 H) 7.66 (dd, J=9.6, 2.4 Hz, 1 H) 8.46 (s, 1 H) 12.24 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.07 min, MH+ 515

[a]D20: 101.1° (c 0.282, DMF)

SFC quiral (Método SfC-B): Rt 3.31 min, MH+ 515, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 208°C

Enantiómero 8B:

1H RMN (500 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2.47 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.24 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.54 - 6.63 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.87 - 6.98 (m, 3 H) 7.04 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.35 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 7.66 (dd, J=9.6, 2.4 Hz, 1 H) 8.46 (s, 1 H) 12.24 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.07 min, MH+ 515

[a]D20: -105.3° (c 0.264, DMF)

SFC quiral (Método SFC-B): Rt 4.39 min, MH+ 515, pureza quiral 99.67%.

Punto de fusión: 208°C

Ejemplo 9: Síntesis de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 9) y separación quiral en Enantiómeros 9A y 9B.

Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (13.5 mL, 13.5 mmol) se agregó por goteo a -15°C a una solución de 5-fluoro-6-metil-1 H-indol [CAS 1000343-16-7] (1.0 g, 6.97 mmol) en CH²Cl² (30 mL). Después de 30 min a -15°C, una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo (2.0 g, 10.0 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (20 mL) se agregó lentamente. La reacción se agitó a -15°C durante 3 h. solución 1N de sal de Rochelle (50 mL) se agregó y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 1.5 h. El precipitado se filtró y se repartió entre en EtOAc y HCl 1N. La fase orgánica se lavó con HCl 1N y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y concentró bajo presión reducida para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metil-1H-indol-3-il)etanona 9a (1.2 g).

Síntesis del Intermediario 9b:

Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (1.8 g, 4.81 mmol) en THF (50 mL) se agregó por goteo a 0°C a una solución 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(5-fluoro-6-metil-1 H-indol-3-il)etanona 9a (1.2 g, 3.78 mmol) en THF (40 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 15 min y a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se recogió con un mínimo de EtOAc. El precipitado se filtró para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metil-1H-indol-3-il)etanona 9b (1.2 g).

Síntesis de Compuesto 9 y separación quiral de Enantiómeros 9A y 9B:

Una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(5-fluoro-6-metil-1 H-indol-3-il)etanona 9b (0.204 g, 0.517 mmol) y 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (0.309 g, 1.54 mmol) en acetonitrilo (1 mL) y THF (1 mL) se irradió en un horno de microondas a 100°C durante 10 min. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con HCl 1N. La fase orgánica se lavó con una solución saturada acuosa de NaHCO3 y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El residuo se cristalizó a partir de EtOAc para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metil-1H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil) fenil)amino)etanona (Compuesto 9, 162 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 9 (462 mg) se realizó mediante SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak AD-H 5 gm 250 x 30 mm, Fase móvil: 60% CO² , 40% MeOH) para producir 160 mg del primer enatiómero eluído y 170 mg del segundo enantiómero eluído. El primer enatiómero eluído se purificó nuevamente mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 4 g, CH²Cl²/MeOH 99/1). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron a sequedad. El residuo (120 mg) se solidificó a partir de Et²O y algunas gotas de CH³CN para proporcionar Enantiómero 9A (83 mg) como un polvo blanco. El segundo enantiómero eluído se purificó nuevamente mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 4 g, CH²Cl²/EtOAc 98/2). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron a sequedad. El residuo (110 mg) se solidificó a partir de Et²O y algunas gotas de CH³CN para proporcionar Enantiómero 9B (68 mg) como un polvo blanco.

Compuesto 9:

1H RMN (300 MHz, DMSO-ds) □ ppm 2.31 (d, J=1.4 Hz, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.56 - 6.61 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.90 (m, 1 H) 6.95 (dd, J=11.6, 2.4 Hz, 1 H) 7.03 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 7.28 - 7.42 (m, 2 H) 7.77 (d, J=10.6 Hz, 1 H) 8.39 (s, 1 H) 12.02 (s, 1 H)

LC-MS (Método LC-E): Rt 8.6 min, MH+ 515

Enantiómero 9A:

1H RMN (500 MHz, DMSO-dfe) 5 ppm 2.29 - 2.32 (m, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 3.71 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.53 - 6.61 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.4, 2.5 Hz, 1 H) 6.90 (s, 1 H) 6.95 (dd, J=11.4, 2.5 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.28 - 7.42 (m, 2 H) 7.77 (d, J=10.4 Hz, 1 H) 8.40 (s, 1 H) 12.05 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.05 min, MH+ 515

[a]D20: 125.5° (c 0.3945, DMF)

SFC quiral (Método SFC-D): Rt 2.54 min, MH+ 515, pureza quiral 99.05%.

Punto de fusión: 206°C

Enantiómero 9B:

1H RMN (500 MHz, DMSO-db) 5 ppm 2.26 - 2.33 (m, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 3.71 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.53 - 6.60 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.90 (s, 1 H) 6.95 (dd, J=11.4, 2.5 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.27 - 7.41 (m, 2 H) 7.77 (d, J=10.7 Hz, 1 H) 8.40 (s, 1 H) 12.05 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.05 min, MH+ 515

[a]D20: -129.5° (c 0.3955, DMF)

SFC quiral (Método SFC-D): Rt 2.98 min, MH+ 515, pureza quiral 99.18%.

Punto de fusión: 206°C

Ejemplo 10: 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(6-metoxi-5-metil-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 10) y separación quiral en Enantiómeros 10A y 10B.

Síntesis del Intermediario 10a:

Se agregó cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (18.6 mL, 18.6 mmol) por goteo a 0°C a una solución de 6-metoxi-5-metil-1 H-indol [CAS 1071973-95-9] (2 g, 12.4 mmol) en CH²Cl² (60 mL). Después de 30 min a 0°C, se agregó lentamente cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.3 g, 16.3 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (60 mL) a 0°C. La reacción se agitó a 0°C durante 3 h. Hielo-agua se agregó y el precipitado se filtró, se lavó con agua, y se secó al vacío para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-metil-1H-indol-3-il)etanona 10a (3.15 g).

Síntesis del Intermediario 10b:

A 0°C, se agregó por goteo una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (3.8 g, 10.1 mmol) en THF (90 mL) a una mezcla de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-metil-1H-indol-3-il)etanona 10a (3.15 g, 9.6 mmol) en THF (90 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2.5 h. El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se recogió con una cantidad mínima de CH³CN y diisopropiléter. El precipitado se filtró y se secó al vacío para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 10b (2.8 g).

Síntesis de Compuesto 10 y separación quiral de Enantiómeros 10A y 10B:

Una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-metoxi-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 10b (1.0 g, 2.46 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (743 mg, 3.69 mmol) y diisopropiletilamina (0.64 mL, 3.69 mmol) en CH³CN (15 mL) y THF (15 mL) se calentó a 70°C durante 12 h. Los solventes se eliminaron bajo presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se lavó dos veces con HCl 1N, se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el solvente se concentró bajo presión reducida. La purificación se realizó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 pm, 40 g, CH2Cl2/CH3OH 99.8/0.2). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron a sequedad para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1 -(6-metoxi-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 10, 638 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 10 se realizó mediante SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® AD-H 5 pm 250 x 30 mm, Fase móvil: 70% CO² , 30% /PrOH) para producir 244 mg del primer enatiómero eluído y 163 mg del segundo enantiómero eluído. El primer enatiómero eluído se purificó nuevamente mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 pm, 40 g, CH²Cl²/EtOAc 98/2). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron a sequedad. El residuo (161 mg) se solidificó a partir de Et²O y algunas gotas de CH³CN para proporcionar Enantiómero 10A (136 mg). El segundo enantiómero eluído se purificó nuevamente mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 pm, 40 g, CH²Cl²/EtOAc 98/2). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron a sequedad. El residuo (158 mg) se solidificó a partir de Et²O y algunas gotas de CH³CN para proporcionar Enantiómero 10B (135 mg).

Compuesto 10:

1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 2.21 (s, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.79 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.18 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.55 - 6.60 (m, 2 H) 6.72 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.89 - 7.00 (m, 4 H) 7.35 (dd, J=8.5, 7.1 Hz, 1 H) 7.90 (s, 1 H) 8.23 (s, 1 H) 11.75 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.04 min, MH+ 527

Punto de fusión: 224°C

Enantiómero 10A:

1H RMN (500 MHz, DMSO-db) 5 ppm 2.21 (s, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 3.71 (s, 3 H) 3.79 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.18 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.53 - 6.60 (m, 2 H) 6.72 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.87 - 7.02 (m, 4 H) 7.35 (dd, J=8.5, 7.1 Hz, 1 H) 7.90 (s, 1 H) 8.24 (d, J=2.8 Hz, 1 H) 11.76 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.03 min, MH+ 527

[a]D20: -121.5° (c 0.284, DMF)

SFC quiral (Método SFC-F): Rt 2.35 min, MH+ 527, pureza quiral 100%

Punto de fusión: 242°C

Enantiómero 10B:

1H RMN (500 MHz, DMSO-ab) 5 ppm 2.21 (s, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 3.71 (s, 3 H) 3.79 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.18 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.54 - 6.60 (m, 2 H) 6.72 (td, J=8.5, 2.2 Hz, 1 H) 6.87 - 7.02 (m, 4 H) 7.35 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 7.90 (s, 1 H) 8.24 (s, 1 H) 11.76 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.03 min, MH+ 527

[a]D20: 122.9° (c 0.284, DMF)

SFC quiral (Método SFC-F): Rt 3.33 min, MH+ 527, pureza quiral 99.1%.

Punto de fusión: 242°C

Ejemplo 10.1: estabilidad quiral del Enantiómero 10B a un pH 7.4

La estabilidad quiral del Enantiómero 10B (R = OMe) se evaluó mediante la determinación del exceso enantiomérico (ee%) luego de la incubación durante 24 h y 48 h en una solución tamponada a un pH 7.4 a 40°C y 60°C. Para evaluar la influencia del sustituyente-metoxi del Enantiómero 10B (R = OMe) en la estabilidad de la racemización más reciente, se examinó la estabilidad quiral del Enantiómero 10’B (R = H) bajo las siguientes condiciones. Para lograr esto, se prepararon soluciones tamponadas 5 pM (pH = 7.4) de 10B y 10’B mediante la mezcla de 25 pL de una solución 100 pM de 10B y 10’B en DMSO con tampón 475 pL acuoso a un pH 7.4. Las muestras se tomaron 24 h y 48 h después de la incubación a 40°C y 60°C. Las muestras analíticas se analizaron mediante SFC quiral (detección MS) y la pureza quiral se expresó como el exceso enantiomérico (ee% = %enantiómero B - %enantiómero A). Ambos Enantiómeros 10B y 10’B tuvieron una pureza quiral de 100% antes de su incubación.

ee%

Compuesto Temperatura Tiempos de muestreos

(h)

24 48

40°C 100 100

10B

60°C 97 97

40°C 96 73

10’B

60°C 22 9

Ejemplo 11: 2-(4-fluoro-2-metoxifen¡l)-1-(5-fluoro-6-metox¡-1 H-indol-3-¡l)-2-((3-metox¡-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 11) y separación quiral en Enantiómeros 11A y 11B.

Síntesis del Intermediario 11a:

Se agregó por goteo cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (20 mL, 20 mmol) a 0°C a una solución de 5-fluoro-6-metoxi-1 H-indol [CAS 1211595-72-0] (2.2 g, 13.3 mmol) en CH²Cl² (60 mL). Después de 30 min a 0°C, se agregó lentamente cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.85 g, 19 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (60 mL) a 0°C. La reacción se agitó a 0°C durante 3 h. hielo-agua y se agregó una solución acuosa de NaHCO3. La mezcla de reacción se extrajo con CH²Cl²/MeOH. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró, y el solvente se concentró bajo presión reducida. El residuo se recogió con un mínimo de CH²Cl². El precipitado se filtró y se secó para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)etanona 11a (3.2 g).

Síntesis del Intermediario 11b:

A 0°C, se agregó por goteo una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (3.22 g, 8.56 mmol) en THF (80 mL) a una mezcla de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metoxi-1H-indol-3-il)etanona 11a (2.7 g, 8.15 mmol) en THF (80 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2.5 h. El precipitado se filtró, se lavó con EtOAc y agua y se secó para proporcionar una primera partida de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metoxi-1H-indol-3-il)etanona 11b (1.5 g). La capa orgánica del filtrado se separó, se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se recogió con una cantidad mínima de CH³CN y diisopropiléter. El precipitado se filtró y se secó al vacío para proporcionar una segunda partida de 11b (1.7 g).

Síntesis de Compuesto 11 y separación quiral de Enantiómeros 11A y 11B:

Una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-fluoro-6-metoxi-1H-indol-3-il)etanona 11b (0.8 g, 1.95 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (589 mg, 2.93 mmol) y diisopropiletilamina (0.51 mL, 2.93 mmol) en CH³CN (15 mL) y THF (15 mL) se calentó a 70°C durante 72 h. Los solventes se eliminaron bajo presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se lavó dos veces con HCl 1N, se lavó con agua, se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y el solvente se concentró bajo presión reducida. La purificación se realizó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 40 g, CH2Cl2/CH3OH 99.5/0.5). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron a sequedad para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(5-fluoro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 11,450 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 11 (380 mg) se realizó mediante SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® IC 5 gm 250 x 20 mm, Fase móvil: 70% CO² , 30% MeOH) para producir después de la cristalización a partir de CH3CN/diisopropiléter, 174 mg del primer enatiómero eluído (Enantiómero 11 A ) y 165 mg del segundo enantiómero eluído (Enantiómero 11B).

Compuesto 11:

1H RMN (500 MHz, DMSO-dfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.85 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.58 (s, 2 H) 6.73 (td, J=8.4, 2.5 Hz, 1 H) 6.87 - 6.92 (m, 1 H) 6.96 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.03 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=7.3 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.4, 6.9 Hz, 1 H) 7.83 (d, J=12.0 Hz, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 11.95 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 2.89 min, MH+ 531

Punto de fusión: 172°C

Enantiómero 11A:

1H RMN (500 MHz, DMSO-dfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.71 (s, 3 H) 3.85 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.19 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.53 - 6.61 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.4, 2.5 Hz, 1 H) 6.90 (s, 1 H) 6.96 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=7.3 Hz, 1 H) 7.35 (dd, J=8.4, 6.8 Hz, 1 H) 7.82 (d, J=12.0 Hz, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 11.96 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 2.89 min, MH+ 531

[a]D20: 104.9° (c 0.264, DMF)

SFC quiral (Método SfC-E): Rt 2.92 min, MH+ 531, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 247°C

Enantiómero 11B:

1H RMN (500 MHz, DMSO-dfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.71 (s, 3 H) 3.85 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.53 - 6.61 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.4, 2.5 Hz, 1 H) 6.90 (s, 1 H) 6.96 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=7.3 Hz, 1 H) 7.35 (dd, J=8.4, 6.9 Hz, 1 H) 7.82 (d, J=11.7 Hz, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 11.95 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 2.89 min, MH+ 531

[a]D20: -105.7° (c 0.279, DMF)

SFC quiral (Método SFC-E): Rt 3.92 min, MH+ 531, pureza quiral 99.37%.

Punto de fusión: 245°C

Ejemplo______________12: 1 -(7-cloro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 12) y separación quiral en Enantiómeros 12A y 12B.

Síntesis del Intermediario 12a:

Se agregó por goteo Cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (16.5 mL, 16.5 mmol) a 0°C a una solución de 7-cloro-6-metoxi-1 H-indol [CAS 1227604-21-8] (2 g, 11 mmol) en CH²Cl² (60 mL). Después de 30 min a 0°C, se agregó lentamente cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.3 g, 16.3 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (60 mL) a 0°C. La reacción se agitó a 0°C durante 3 h. Se agregó hielo-agua y el precipitado se filtró, se lavó con agua, y se secó al vacío para proporcionar 1-(7-cloro-6-metoxi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 12a (2.7 g).

Síntesis del Intermediario 12b:

A 0°C, se agregó por goteo una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (3.06 g, 8.15 mmol) en THF (80 mL) a una mezcla de 1-(7-cloro-6-metoxi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 12a (2.7 g, 7.76 mmol) en THF (80 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 2.5 h. El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró bajo presión reducida, se solubilizó en EtOAc y se lavó con agua. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se recogió con una cantidad mínima de CH³CN y diisopropiléter. El precipitado se filtró y se secó al vacío para proporcionar 2-bromo-1-(7-cloro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 12b (3.2 g).

Síntesis de Compuesto 12 y separación quiral de Enantiómeros 12A y 12B:

Una mezcla de 2-bromo-1-(7-cloro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 12b (0.9 g, 2.11 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (637 mg, 3.16 mmol) y diisopropiletilamina (0.55 mL, 3.16 mmol) en CH³CN (20 mL) y THF (20 mL) se calentó a 45°C durante 72 h. Los solventes se eliminaron bajo presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se lavó dos veces con HCl 1N, se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y el solvente se concentró bajo presión reducida. La purificación se realizó mediante cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (15-40 gm, 80 g, CH2Cl2/CH3OH 99.5/0.5). Las fracciones puras se recogieron y se evaporaron a sequedad para proporcionar 1-(7-cloro-6-metoxi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 12, 820 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 12 (750 mg) se realizó mediante SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralcel® OD-H 5 gm 250 x 30 mm, Fase móvil: 60% CO² , 40% MeOH) para producir, después de solidificar en diisopropiléter, 285 mg del primer enatiómero eluído (Enantiómero 12A) y 260 mg del segundo enantiómero eluído (Enantiómero 12B) como polvos amorfos.

Compuesto 12:

1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.87 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.24 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.51 - 6.64 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.4, 2.2 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.96 (dd, J=11.4, 2.2 Hz, 1 H) 7.03 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.11 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.32 - 7.41 (m, 1 H) 8.05 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.36 (s, 1 H) 12.20 (s, 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.02 min, MH+ 547

Enantiómero 12A:

1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.87 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.24 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.53 - 6.64 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.4, 2.2 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.96 (dd, J=11.4, 2.2 Hz, 1 H) 7.03 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.11 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.4, 7.6 Hz, 1 H) 8.05 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.36 (s, 1 H) 12.20 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.01 min, MH+ 547

[a]D20: 89.7° (c 0.262, DMF)

s Fc quiral (Método s Fc -C): Rt 2.79 min, MH+ 547, pureza quiral 98.98%.

Enantiómero 12B:

1H RMN (500 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.87 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.24 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.54 - 6.62 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.2 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.96 (dd, J=11.2, 2.2 Hz, 1 H) 7.03 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.11 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.5, 7.6 Hz, 1 H) 8.05 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.36 (s, 1 H) 12.20 (s a., 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.01 min, MH+ 547

[a]D20: -93.2° (c 0.236, DMF)

SFc quiral (Método SFC-C): Rt 3.76 min, MH+ 547, pureza quiral 99.66%.

Ejemplo 13: Síntesis de 1-(6,7-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 13) y

separación quiral en Enantiómeros 13A y 13B.

Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (20 mL, 20 mmol) se agregó por goteo a 0°C a una solución de 6,7-difluoro-1 H-indol [CAS 271780-84-8] (1.5 g, 10.1 mmol) en CH²Cl² (45 mL). Después de 30 min a 0°C, se agregó lentamente una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.1 g, 15.04 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en CH²Cl² (30 mL). La reacción se agitó a 0°C durante 3 h. Se agregó solución 1N de sal de Rochelle (50 mL) y la mezcla de reacción se agitó vigorosamente a temperatura ambiente durante 1 h. El precipitado se filtró y se repartió entre en EtOAc y HCl 1N. La fase acuosa se extrajo con EtOAc. Las fases orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO⁴ , se filtraron y concentraron bajo presión reducida para proporcionar 1-(6,7-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 13a (1.6 g).

Síntesis del Intermediario 13b:

Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (2.3 g, 6.06 mmol) en THF (45 mL) se agregó por goteo a 0°C a una solución de 1-(6,7-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 13a (1.8 g, 5.57 mmol) en THF (55 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 15 min y a temperatura ambiente durante la noche. El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc. El filtrado se concentró bajo presión reducida. El residuo se recogió con un mínimo de acetonitrilo. El precipitado se filtró para proporcionar 2-bromo-1-(6,7-difluoro-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 13b (2.0 g).

Síntesis de Compuesto 13 y separación quiral de Enantiómeros 13A y 13B:

Una mezcla de 2-bromo-1-(6,7-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 13b (1.3 g, 3.29 mmol) y 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (2.0 g, 9.91 mmol) en acetonitrilo (13 mL) se irradió en un horno de microondas a 100°C durante 10 min. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc, se lavó con HCl 1N y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y concentró bajo presión reducida. El residuo se trituró con acetonitrilo, acetato de etilo y éter dietílico para proporcionar 1-(6,7-difluoro-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 13, 750 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 13 (1.27 g) se realizó mediante SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® IC 5 gm 250 x 30 mm, Fase móvil: 70% CO² , 30% MeOH) para producir después de la cristalización a partir de CH²Cl²/diisopropiléter, 409 mg del primer enatiómero eluído (Enantiómero 13A) y 385 mg del segundo enantiómero eluído (Enantiómero 13B).

Compuesto 13:

1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) □ ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.27 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.56 - 6.63 (m, 2 H) 6.74 (td, J=8.4, 2.4 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.96 (dd, J=11.3, 2.4 Hz, 1 H) 7.06 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.25 (m, 1 H) 7.36 (dd, J=8.6, 6.9 Hz, 1 H) 7.93 (dd, J=8.8, 4.4 Hz, 1 H) 8.51 (d, J= 2.8 Hz, 1 H) 12.8 (s a., 1 H)

Lc -MS (Método LC-F) Rt 1.41 min, MH+ 519

Enantiómero 13A:

1H RMN (500 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 12.80 (s a, 1 H) 8.50 (s., 1 H) 7.93 (m, 1 H) 7.37 (t, J=7.3 Hz, 1 H) 7.16 - 7.29 (m, 1 H) 7.06 (d, J=7.3 Hz, 1 H) 6.86 - 6.99 (m, 2 H) 6.74 (t, J=7.3 Hz, 1 H) 6.60 (m, 2 H) 6.26 (d, J=7.3 Hz, 1 H) 3.98 (s., 3 H) 3.73 (s., 3 H) 3.10 (s., 3 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.05 min, MH+ 519

[a]D20: -47.8° (c 0.2827, DMF)

SFC quiral (Método SFC-A): Rt 2.52 min, MH+ 519, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 226°C

Enantiómero 13B:

1H RMN (500 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 12.78 (s a, 1 H) 8.49 (s, 1 H) 7.92 (dd, J=8.7, 4.3 Hz, 1 H) 7.36 (t, J=7.7 Hz, 1 H) 7.16 - 7.28 (m, 1 H) 7.04 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.86 - 6.99 (m, 2 H) 6.74 (td, J=8.5, 1.9 Hz, 1 H) 6.54 - 6.65 (m, 2 H) 6.26 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 3.98 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.05 min, MH+ 519

[a]D20: 48.2° (c 0.3009, DMF)

SFC quiral (Método SfC-A): Rt 3.04 min, MH+ 519, pureza quiral 99.57%.

Punto de fusión: 222°C

Ejemplo 14: Síntesis 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 14) y separación quiral en Enantiómeros 14A y 14B.

Síntesis del Intermediario 14a:

Una solución de 6-fluoro-5-metil-1 H-indol [CAS 162100-95-0] (880 mg, 5.9 mmol) en CH²CI² (50 mL) se enfrió a 0°C bajo atmósfera-N². Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (8.85 mL, 8.85 mmol) se agregó por goteo y la mezcla resultante se mantuvo a 0°C durante 15 min. Una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (1.67 g, 8.26 mmol) en CH²Cl² (25 mL) se agregó por goteo. Se continuó agitando a 0°C durante 1 h y la mezcla de reacción posteriormente se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se vertió en una solución agitada en hielo de sal de Rochelle. La mezcla se filtró sobre dicalite® y la torta de filtrado se lavó varias veces con THF. Los filtrados se combinaron. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera y agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo sólido se suspendió en CH²Cl² (30 mL). El precipitado se filtró, se lavó con una pequeña cantidad de CH²Cl² y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 14a (1.22 g).

Síntesis del Intermediario 14b:

Una solución agitada de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(6-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 14a (1.22 g, 3.87 mmol) en THF (125 mL) se enfrió a 0°C. Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (1.6 g, 4.26 mmol) en THF (25 mL) se agregó por goteo. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 2 h y a temperatura ambiente durante 2 h. Los sólidos se eliminaron por filtración y se lavaron con THF. Los filtrados combinados se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se mezcló con EtOAc (50 mL). Los sólidos se aislaron mediante filtración, se lavaron con una pequeña cantidad de EtOAc y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)etanona 14b (1.48 g), que se utilizó sin purificación adicional en la siguiente etapa.

Síntesis de Compuesto 14 y separación quiral de Enantiómeros 14A y 14B:

Una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-metil-1H-indol-3-il)etanona 14b (1.5 g, 3.65 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (1.10 g, 5.48 mmol) y diisopropiletilamina (629 pL, 3.65 mmol) en CH³CN (100 mL) se agitó a 85°C durante la noche. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en CH²Cl² (100 mL), se lavó con HCl 1N (100 mL) y agua (100 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre sílice (Fase estacionaria: Grace Reveleris® sílice 120 g, Fase móvil: EtOAc:EtOH(3:1)/heptano gradiente 0/100 a 50/50). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron bajo presión reducida. El sólido residual se agitó en CH²Cl² (20 mL). El precipitado se filtró y se lavó con CH²Cl². El sólido se agitó en MeOH (20 mL). El precipitado se filtró y se lavó con MeOH. El sólido (630 mg) se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa (Fase estacionaria: Uptisphere® C18 ODB - 10 pm, 200 g, 5 cm, Fase móvil: solución 0.25% NH⁴HCO³ en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron bajo presión reducida, y se co-evaporaron con EtOAc (20 mL) para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(6-fluoro-5-metil-1 H-indol-3-il)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 14, 426 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 14 (426 mg) se realizó mediante SFC preparativa (Fase estacionaria: Chiralpak® Diacel AD 20 x 250 mm, Fase móvil: CO² , EtOH 0.4% /PrNH²). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron para proporcionar Enantiómero 14A como el primer producto eluído y Enantiómero 14B como el segundo producto eluído. Ambos enantiómeros 14A y 14B se solidificaron como se indica a continuación: los residuos de evaporación se agitaron en H²O/MeOH 1/1 (5 mL) durante 1 h, el precipitado se aisló por filtración, se lavó con H²O/MeOH 1/1 y se secó al vacío a 50°C para proporcionar Enantiómero 14A (113 mg) y Enantiómero 14B (97 mg) como un polvo blancos.

Compuesto 14:

1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 ppm 2.30 (d, J=1.3 Hz, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.21 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.58 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 6.95 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 6.99 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 7.22 (d, J=10.3 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 8.03 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 11.95 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.07 min, MH+ 515

Enantiómero 14A:

1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 5 ppm 2.30 (d, J=1.5 Hz, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.21 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.58 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.6 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.7 Hz, 1 H) 6.95 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 6.98 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 7.22 (d, J=10.3 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 8.03 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 11.95 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.06 min, MH+ 515

[a]D20: 150.0° (c 0.51, DMF)

SFC quiral (Método s Fc -J): Rt 3.49 min, MH+ 515, pureza quiral 100%.

Enantiómero 14B:

1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 2.31 (d, J=1.3 Hz, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.21 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.59 (d, J=1.8 Hz, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.92 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 6.95 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 6.99 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 7.22 (d, J=10.3 Hz, 1 H) 7.36 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 8.03 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 11.95 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.06 min, MH+ 515

[a]D20: -137.3° (c 0.52, DMF)

s Fc quiral (Método SFC-J): Rt 3.85 min, MH+ 515, pureza quiral 100%.

Ejemplo 15: Síntesis 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(5-metil-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 15) y separación quiral en Enantiómeros 15A y 15B.

Síntesis del Intermediario 15a:

Una solución de 5-metil-1 H-indol [CAS 614-96-0] (5 g, 38.1 mmol) en CH²Cl² (100 mL) se enfrió a -10°C bajo atmósfera-N². Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (57.2 mL, 57.2 mmol) se agregó por goteo y la mezcla resultante se mantuvo a -10°C durante 10 min. Una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (11.6 g, 57.2 mmol) en CH²Cl² (100 mL) se agregó por goteo. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3.5 h. La mezcla de reacción se vertió en una solución agitada en hielo de sal de Rochelle. La mezcla se filtró sobre dicalite® y la torta de filtrado se lavó varias veces con THF. Los filtrados se combinaron. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo sólido se suspendió en CH²Cl² (30 mL). El precipitado se filtró, se lavó (2x) con una pequeña cantidad de CH²Cl² y se secó al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 15a (7.19 g).

Síntesis del Intermediario 15b:

Una solución agitada de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-metil-1H-indol-3-il)etanona 15a (7.19 g, 24.2 mmol) en THF (500 mL) se enfrió a 0°C. Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (10 g, 26.6 mmol) en THF (150 mL) se agregó por goteo. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. Los sólidos se eliminaron por filtración y se lavaron con THF. Los filtrados combinados se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se mezcló con EtOAc (50 mL). Los sólidos se aislaron mediante filtración, se lavaron con una pequeña cantidad de EtOAc y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-metil-1H-indol-3-il)etanona 15b (8.02 g).

Síntesis de Compuesto 15 y separación quiral de Enantiómeros 15A y 15B:

Una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-metil-1 H-indol-3-il)etanona 15b (3.5 g, 9.3 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (2.81 g, 14 mmol) y diisopropiletilamina (1.60 mL, 9.3 mmol) en CH³CN se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La temperatura de la reacción se aumentó a 80°C durante 1 h y la mezcla posteriormente se agitó nuevamente a temperatura ambiente durante 2 días. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en CH²Cl² (100 mL), se lavó con HCl 1N (100 mL) y salmuera (100 mL), se secó sobre MgSO⁴ , se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (Fase estacionaria: Grace Reveleris® sílice 120 g, Fase móvil: EtOAc/heptano gradiente 35/65 a 45/55). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron bajo presión reducida. El residuo (3.96 g) se purificó adicionalmente mediante HPLC preparativa (Fase estacionaria: Uptisphere® C18 ODB - 10 gm, 200 g, 5 cm, Fase móvil: solución 0.25% NH⁴HCO³ en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron, se evaporaron bajo presión reducida, y se co-evaporaron con EtOAc (20 mL). El sólido residual se agitó en una mezcla de MeOH (5 mL) y agua (5 mL) durante 1 h. El precipitado se filtró y se secó al vacío para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(5-metil-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 15, 1.92 g) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 15 (1.50 g) se realizó mediante separación quiral de fase normal (Fase estacionaria: AS 20 gm, Fase móvil: 100% metanol). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron para proporcionar Enantiómero 15A (742 mg) como el primer producto eluído y Enantiómero 15B (745 mg) como el segundo producto eluído. Enantiómero 15A se purificó adicionalmente mediante cromatografía en columna sobre sílice (Fase estacionaria: Grace Reveleris® sílice 40 g, Fase móvil: CH²CL/MeOH gradiente 100/0 a 90/10). Las fracciones que contenían producto se combinaron y se evaporaron. El residuo sólido se agitó en MeOH/agua (1/1) (14 mL) durante 2 h. El precipitado se filtró y se secó al vacío a 50°C para proporcionar Enantiómero 15A (361 mg) como un polvo blanco. Enantiómero 15B se agitó en MeOH/agua (1/1) (14 mL) durante 5 h. El precipitado se filtró y se secó al vacío a 50°C para proporcionar Enantiómero 15B (445 mg) como un polvo blanco.

Compuesto 15:

1H RMN (360 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 2.39 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.22 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.55 - 6.62 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.92 (s a, 1 H) 6.96 (dd, J=11.3, 2.6 Hz, 1 H) 6.99 - 7.06 (m, 2 H) 7.31 -7.39 (m, 2 H) 7.98 (s, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 11.94 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-A): Rt 1.09 min, m H+ 497

Enantiómero 15A:

1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 2.39 (s, 3 H) 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.21 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.56 - 6.61 (m, 2 H) 6.72 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.92 (t, J=1.7 Hz, 1 H) 6.95 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 6.99 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 7.04 (dd, J=8.4, 1.3 Hz, 1 H) 7.32 - 7.39 (m, 2 H) 7.98 (s, 1 H) 8.36 (s, 1 H) 11.92 (s a, 1 H)

l C/MS (Método l C-B): Rt 2.03 min, MH+ 497

[a]D20: 149.8° (c 0.49, DMF)

s Fc quiral (Método s Fc -J): Rt 3.67 min, MH+ 497, pureza quiral 100%.

Enantiómero 15B:

1H RMN (360 MHz, DMSO-db) 5 ppm 2.39 (s, 3 H) 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.00 (s, 3 H) 6.21 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.55 - 6.61 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.92 (t, J=1.6 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.3, 2.2 Hz, 1 H) 7.00 - 7.06 (m, 2 H) 7.31 - 7.39 (m, 2 H) 7.98 (s, 1 H) 8.37 (s, 1 H) 11.95 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.03 min, m H+ 497

a]D20: -149.3° (c 0.515, DMF)

SFC quiral (Método s Fc -J): Rt 4.06 min, MH+ 497, pureza quiral 99.6%.

Ejemplo 16: Síntesis 1-(5-cloro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 16) y separación quiral en Enantiómeros 16A y 16B.

Síntesis del Intermediario 16a:

A solución 5-cloro-6-metoxi-1 H-indol [CAS 90721-60-1] (4 g, 22 mmol) en CH²CI² (150 mL) se enfrió a 0°C bajo atmósfera-N². Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (33 mL, 33 mmol) se agregó por goteo y la mezcla resultante se mantuvo a 0°C durante 15 min. Una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (6.25 g, 30.8 mmol) en CH²Cl² (50 mL) se agregó por goteo. La mezcla de reacción se agitó a 0°C durante 1 h y posteriormente a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se vertió en una solución agitada en hielo de sal de Rochelle. La mezcla se filtró sobre dicalite® y la torta de filtrado se lavó varias veces con THF. Los filtrados se combinaron. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se mezcló con CH²Cl² (50 mL). Los sólidos se filtraron y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 1-(5-cloro-6-metoxi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 16a (4.01 g) como un polvo. El filtrado se evaporó bajo presión reducida. El residuo se recogió con CH²Cl² (10 mL). Los sólidos se filtraron y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar una segunda partida de 16a (369 mg).

Síntesis del Intermediario 16b:

Una solución agitada de 1-(5-cloro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 16a (3.5 g, 8.96 mmol) en THF (500 mL) se enfrió a 0°C. Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (3.7 g, 9.85 mmol) en THF (100 mL) se agregó por goteo. La mezcla de reacción se agitó bajo enfriamiento (0°C) durante 5 h y posteriormente a temperatura ambiente durante 2 h. Los sólidos se eliminaron por filtración y se lavaron con THF. Los filtrados combinados se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se mezcló con EtOAc (50 mL). Los sólidos se aislaron mediante filtración, se lavaron con una pequeña cantidad de EtOAc y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-bromo-1 -(5-cloro-6-metoxi-1 H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 16b (3.02 g).

Síntesis de Compuesto 16 y separación quiral de Enantiómeros 16A y 16B:

Una mezcla de 2-bromo-1-(5-cloro-6-metoxi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)etanona 16b (3.02 g, 6.58 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (1.81 g, 8.99 mmol) y diisopropiletilamina (1.13 mL, 6.58 mmol) en CH³CN (120 mL) se agitó durante la noche a 60°C. La temperatura de la reacción se aumentó a 80°C durante 8 h y finalmente a 90°C con agitación durante la noche . La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en CH²Cl² (100 mL), se lavó con HCl 1N (100 mL) y agua (100 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante HPLC preparativa (Fase estacionaria: RP XBridge® Prep C18 OBD - 10 gm, 50 x 150 mm, Fase móvil: solución 0.25% NH⁴HCO³ en agua, CH³CN). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se agitó en EtOAc (20 mL). Los sólidos se aislaron mediante filtración para proporcionar una primera partida de 1-(5-cloro-6-metoxi-1H-indol-3-il)-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)etanona (Compuesto 16, 309 mg) como una mezcla racémica. El filtrado se evaporó bajo presión reducida. Se agregó MeOH y la suspensión resultante se agitó durante 30 min. Los sólidos se filtraron para proporcionar una segunda partida de racémico Compuesto 16 (423 mg).

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 16 (493 mg) se realizó mediante separación quiral de fase normal (Fase estacionaria: AS 20 gm, Fase móvil: 100% metanol). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron para proporcionar Enantiómero 16A como el primer producto eluído y Enantiómero 16B como el segundo producto eluído. Enantiómero 16A se agitó en MeOH (5 mL) durante 30 min. El precipitado se filtró, se lavó con MeOH (2x 2 mL) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar Enantiómero 16A (156 mg) como un polvo blanco. Enantiómero 16B se agitó en MeOH (5 mL) durante 30 min. El precipitado se filtró, se lavó con MeOH (2x 2 mL) y se secó al vacío a 50°C para proporcionar Enantiómero 16B (146 mg) como un polvo blanco.

Compuesto 16:

1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.87 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.59 (d, J=1.3 Hz, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.8 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.01 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.14 (s, 1 H) 7.36 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 8.12 (s, 1 H) 8.35 (s, 1 H) 11.98 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.02 min, MH+ 547

Enantiómero 16A:

1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.86 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.55 - 6.62 (m, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.90 (t, J=1.2 Hz, 1 H) 6.95 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.00 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.14 (s, 1 H) 7.36 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 8.11 (s, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 11.97 (s a, 1 H)

l C/MS (Método LC-A): Rt 1.10 min, MH+ 547

[a]D20: 138.1° (c 0.565, DMF)

s Fc quiral (Método SfC-J): Rt 4.17 min, MH+ 547, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 252°C

Enantiómero 16B:

1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 3.08 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.86 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.20 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.58 (d, J=1.3 Hz, 2 H) 6.73 (td, J=8.5, 2.4 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.5 Hz, 1 H) 6.95 (dd, J=11.4, 2.4 Hz, 1 H) 7.00 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 7.14 (s, 1 H) 7.36 (dd, J=8.6, 7.0 Hz, 1 H) 8.11 (s, 1 H) 8.34 (s, 1 H) 11.98 (s a, 1 H)

LC/MS (Método Lc -A): Rt 1.11 min, MH+ 547

[a]D20: -121.7° (c 0.545, DMF)

s Fc quiral (Método SFC-J): Rt 4.57 min, MH+ 547, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 253°C

Ejemplo 17: Síntesis de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 17) y separación quiral en Enantiómeros 17A y 17B.

Síntesis del Intermediario 17a:

A 0°C, bajo una corriente de N² , se agregó hidruro de sodio (2.48 g, 64.81 mmol) en porciones a una mezcla de 5-(trifluorometil)-1 H-indol [CAS 100846-24-0] (10 g, 54.01 mmol) en DMF (150 mL) y la mezcla se agitó a 0°C durante 30 min. Una solución de cloruro de tosilo (11.3 g, 59.4 mmol) en DMF (50 mL) se agregó por goteo y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Después de enfriar a 0°C, la reacción se inactivó mediante la adición de agua. El precipitado resultante se filtró y se secó al vacío a 70°C durante la noche para proporcionar 1 -tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 17a (18.4 g).

Síntesis del Intermediario 17b:

Se agregó por goteo cloruro de titanio(IV) (2.32 mL, 21.2 mmol) a temperatura ambiente a una solución agitada de 1 -tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol 17a (3.6 g, 10.6 mmol) y cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (3.85 g, 19 mmol, síntesis: véase Ejemplo 1) en 1,2-dicloroetano (70 mL). La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Se agregó hielo-agua. La mezcla de reacción se extrajo con EtOAc. La capa orgánica se secó sobre MgSO⁴ , se filtró, y el solvente se concentró bajo presión reducida. El compuesto bruto se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (15-40 pm, 80 g, CH²Cl²/MeOH 99.5/0.5). Las fracciones que contenían Compuesto 17b se combinaron y el solvente se evaporó bajo presión reducida. El compuesto se agitó en CH³CN/diisopropiléter. El precipitado se filtró y se secó para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(1-tosil-5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona 17b (3 g).

Síntesis del Intermediario 17c:

Se agregó hidróxido de litio (0.66 g, 15.8 mmol) a una solución de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1 -(1 -tosil-5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 17b (3.2 g, 6.33 mmol) en THF (18 mL) y agua (6 mL). La mezcla se agitó a 30°C durante 1 h.

Se agregaron agua y EtOAc. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSÜ4, se filtró y el solvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo sólido se agitó en diisopropiléter. El precipitado se filtró y se secó para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometil)-1H-indol-3-il)etanona 17c (2.1 g).

Síntesis del Intermediario 17d:

A 0°C, se agregó por goteo una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1 ] (1.6 g, 4.27 mmol) en THF (50 mL) a una mezcla de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 17c (1.5 g, 4.27 mmol) en THF (50 mL). La mezcla se agitó a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 4 h. El precipitado se filtró y se lavó con EtOAc. Los filtrados combinados se concentraron bajo presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc. La capa orgánica se lavó con agua, se secó sobre MgSO4, se filtró, y el solvente se evaporó bajo presión reducida. El residuo se agitó en diisopropiléter. El precipitado se filtró y se secó para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 17d (1.8 g).

Síntesis de Compuesto 17 y separación quiral de Enantiómeros 17A y 17B:

Una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona 17d (1.2 g, 2.79 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (617 mg, 3.07 mmol) y diisopropiletilamina (0.48 mL, 2.79 mmol) en CH³CN (60 mL) y THF (30 mL) se agitó a 70°C durante 24 h. La solución se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en EtOAc y la solución se lavó con HCl 1N. La capa orgánica se separó, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre gel de sílice (15­ 40 pm, 80 g, CH²Cl²/MeOH 99.5/0.5). Las fracciones que contenían Compuesto 17 se combinaron y el solvente se evaporó bajo presión reducida. El compuesto se cristalizó a partir de diisopropiléter/CHaCN para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(5-(trifluorometil)-1 H-indol-3-il)etanona (Compuesto 17, 410 mg) como una mezcla racémica.

Los Enantiómeros de Compuesto 17 se separaron mediante SFC preparativa quiral (Fase estacionaria: Chiralpak® AD-H 5 pm 250 x 20 mm, Fase móvil: 75% CO² , 25% /PrOH) para proporcionar, después de la cristalización a partir de éter de petróleo/diisopropiléter, 147 mg del primer enatiómero eluído 17A y 150 mg del segundo enantiómero eluído 17B.

Compuesto 17:

1H RMN (500 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.27 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 6.59 (d, J=1.3 Hz, 2 H) 6.74 (td, J=8.4, 2.4 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.97 (dd, J=11.3, 2.5 Hz, 1 H) 7.06 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.5, 6.9 Hz, 1 H) 7.54 (dd, J=8.5, 1.6 Hz, 1 H) 7.69 (d, J=8.5 Hz, 1 H) 8.49 (s, 1 H) 8.60 (s, 1 H) 12.43 (s a, 1 H) LC/MS (Método LC-C): Rt 3.09 min, MH+ 551

Punto de fusión: 160°C

Enantiómero 17A:

1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.27 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 6.59 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.3 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.96 (dd, J=11.4, 2.3 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.6 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 7.1 Hz, 1 H) 7.53 (dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1 H) 7.69 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 8.49 (s, 1 H) 8.59 (s, 1 H) 12.39 (s a, 1 H) LC/MS (Método LC-C): Rt 3.13 min, MH+ 551

[a]D20: -119.3° (c 0.2364, DMF)

SFC quiral (Método SFC-H): Rt 3.40 min, MH+ 551, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 231 °C

Enantiómero 17B:

1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.73 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.27 (d a, J=8.1 Hz, 1 H) 6.59 (s, 2 H) 6.74 (td, J=8.2, 2.3 Hz, 1 H) 6.92 (s, 1 H) 6.96 (d a, J=11.6 Hz, 1 H) 7.05 (d a, J=8.1 Hz, 1 H) 7.33 - 7.41 (m, 1 H) 7.54 (d a, J=8.6 Hz, 1 H) 7.69 (d a, J=8.6 Hz, 1 H) 8.49 (s, 1 H) 8.60 (s, 1 H) 12.37 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-C): Rt 3.13 min, MH+ 551

[a]D20: 112.8° (c 0.2545, DMF)

SFC quiral (Método SFC-H): Rt 4.45 min, MH+ 551, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 230°C

Ejemplo 18: Síntesis 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 18) y separac¡ón qu¡ral en Enant¡ómeros 18A y 18B.

Síntes¡s del Intermediario 18a:

Una solución de 5-(trifluorometoxi)-1 H-indol [CAS 262593-63-5] (5 g, 24.9 mmol) en CH²CI² (150 mL) se enfrió a 0°C bajo atmósfera-N². Una solución de cloruro de dietilaluminio 1M en hexano (37.3 mL, 37.3 mmol) se agregó por goteo y la mezcla resultante se mantuvo a 0°C durante 15 min. Una solución de cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo 1a (7.05 g, 34.8 mmol) en CH²Cl² (50 mL) se agregó por goteo. Se continuó agitando a 0°C durante 1 h y a temperatura ambiente durante 1.5 h. La mezcla de reacción se vertió en una solución agitada en hielo de sal de Rochelle. Después de que el hielo se había derretido, la mezcla se filtró sobre dicalite® y la torta de filtrado se lavó varias veces con THF. Los filtrados se combinaron. Las capas se separaron y la capa orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se trituró con CH²Cl² (50 mL) y el precipitado se filtró para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 18a (7.36 g). El filtrado se concentró al vacío y el residuo sólido se agitó en CH²Cl² (10 mL). El filtrado de los sólidos proporcionó una segunda partida de 18a (431 mg).

Síntesis del Intermediario 18b:

Una solución agitada de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 18a (7.35 g, 20.0 mmol) en THF (200 mL) se enfrió a 0°C. Una solución de tribromuro de feniltrimetilamonio [CAS 4207-56-1] (8.28 g, 22.0 mmol) en THF (100 mL) se agregó por goteo. La suspensión resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Los sólidos se eliminaron por filtración y se lavaron con THF. Los filtrados combinados se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se mezcló con EtOAc (30 mL). Los sólidos se aislaron mediante filtración, se lavaron con una pequeña cantidad de EtOAc y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 18b (7.8 g).

Síntesis de Compuesto 18 y separación quiral de Enantiómeros 18A y 18B:

Una mezcla de 2-bromo-2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-1-(5-(trifluorometoxi)-1 H-indol-3-il)etanona 18b (3 g, 6.72 mmol), 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina [CAS 62606-02-4] (1.85 g, 9.18 mmol) y diisopropiletilamina (1.16 mL, 6.72 mmol) en CH³CN (120 mL) se agitó a 90°C durante 24 h. La mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El residuo se disolvió en CH²Cl² (100 mL), se lavó con HCl 1N (100 mL) y agua (100 mL), se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna sobre sílice (Fase estacionaria: Grace Reveleris® sílice 120 g, Fase móvil: EtOAc:EtOH (3:1)/heptano gradiente 0/100 a 50/50). Las fracciones deseadas se combinaron y se evaporaron bajo presión reducida. El residuo se agitó en EtOAc (20 mL). Los sólidos se aislaron mediante filtración y se secaron al vacío a 50°C para proporcionar 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)-2-((3-metoxi-5-(metilsulfonil)fenil)amino)-1-(5-(trifluorometoxi)-1H-indol-3-il)etanona (Compuesto 18, 608 mg) como una mezcla racémica.

La separación quiral de los enantiómeros de Compuesto 18 (578 mg) se realizó mediante separación quiral de fase normal (Fase estacionaria: AS 20 gm, Fase móvil: 100% metanol). Las fracciones del producto se combinaron y se evaporaron para proporcionar Enantiómero 18A como el primer producto eluído y Enantiómero 18B como el segundo producto eluído. Se precipitó Enantiómero 18A mediante agitación durante la noche desde MeOH/agua. El precipitado se filtró y se secó al vacío a 50°C para proporcionar Enantiómero 18A (123 mg) como un polvo blanco. Se precipitó Enantiómero 18B mediante agitación durante la noche desde MeOH/agua. El precipitado se filtró y se secó al vacío a 50°C para proporcionar Enantiómero 18B (91 mg) como un polvo blanco.

Compuesto 18:

1H RMN (400 MHz, DMSO-afe) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.73 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.25 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.59 (d, J=1.3 Hz, 2 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.92 (t, J=1.3 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.05 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.7, 1.9 Hz, 1 H) 7.38 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 7.59 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.07 (s a, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.28 (s a, 1 H) LC/MS (Método LC-B): Rt 2.13 min, MH+ 567

Enantiómero 18A:

1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.25 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.59 (d, J=1.5 Hz, 2 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.7 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.8, 2.0 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.7, 6.9 Hz, 1 H) 7.59 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.07 (d, J=1.1 Hz, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.29 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.12 min, MH+ 567

[a]D20: 112.0° (c 0.465, DMF)

s Fc quiral (Método SfC-J): Rt 2.85 min, MH+ 547, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 215°C

Enantiómero 18B:

1H RMN (400 MHz, DMSO-ds) 5 ppm 3.09 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 6.25 (d, J=7.7 Hz, 1 H) 6.59 (d, J=1.3 Hz, 2 H) 6.74 (td, J=8.5, 2.5 Hz, 1 H) 6.91 (t, J=1.7 Hz, 1 H) 6.96 (dd, J=11.2, 2.4 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=7.9 Hz, 1 H) 7.21 (dd, J=8.7, 1.9 Hz, 1 H) 7.37 (dd, J=8.6, 6.8 Hz, 1 H) 7.59 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 8.07 (d, J=0.9 Hz, 1 H) 8.54 (s, 1 H) 12.28 (s a, 1 H)

LC/MS (Método LC-B): Rt 2.12 min, MH+ 567

[a]D20: -116.7° (c 0.425, DMF)

SFC quiral (Método SFC-J): Rt 3.17 min, MH+ 547, pureza quiral 100%.

Punto de fusión: 214°C

ACTIVIDAD ANTIVIRAL DE LOS COMPUESTOS DE LA INVENCIÓN

Ensayo antiviral de DENV-2

La actividad antiviral de todos los compuestos de la invención se ensayó contra la cepa 16681 de DENV-2 que se marcó con la proteína verde fluorescente mejorada (eGPF: Tabla 1). El medio de cultivo consiste en un medio esencial mínimo suplementado con 2% de suero de ternera fetal inactivado por calor, 0.04% de gentamicina (50 mg/ml) y 2 mM de L-glutamina. Las células Vero, obtenidas de ECACC, se suspendieron en un medio de cultivo y se añadieron 25pL a placas de 384 pocillos (2.500 células/pocillo), que ya contienen los compuestos antivirales. Típicamente, estas placas contienen una dilución cuádruple en serie de 9 etapas de dilución del compuesto del ensayo a 200 veces la concentración final en DMSO al 100% (200nL). Además, la concentración de cada compuesto se prueba por cuadruplicado (rango de concentración final: 25pM - 0.00038pM). Por último, cada placa contiene pocillos que están asignados como controles de virus (que contienen las células y los virus en ausencia del compuesto), controles de células (que contienen las células en ausencia del virus y el compuesto) y controles de medios (que contienen medios en ausencia de células, virus y compuestos). A los pocillos asignados como controles de medios se añadieron 25pL del medio de cultivo en lugar de células Vero. Una vez que se añadieron las células a las placas, las placas se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente para permitir que las células se distribuyan uniformemente dentro de los pocillos. Luego, las placas se incubaron en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO²) hasta el día siguiente. Posteriormente, la cepa 16681 de DENV-2, marcada con eGFP, se añadió a una multiplicidad de infección (MOI) de 0.5. Por lo tanto, se añadieron 15pL de suspensión de virus a todos los pocillos que contienen el compuesto de prueba y a los pocillos asignados como control de virus. Paralelamente, se añadieron 15pL de medio de cultivo a los controles de medios y células. Seguidamente, las placas se incubaron durante 3 días en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO²). El día de la lectura, la fluorescencia eGFP se midió con un microscopio de fluorescencia automatizado a 488 nm (láser azul). Con el uso de un sistema LIMS interno se calcularon las curvas de respuesta a la dosis de inhibición para cada compuesto y se determinó la concentración efectiva máxima media (EC⁵⁰). Por lo tanto, el porcentaje de inhibición (I) para cada concentración de ensayo se calcula mediante la siguiente fórmula: I = 100*(St-Scc)/(Svc-Scc); St, Scc y Svc son la cantidad de señal eGFP en los pocillos del compuesto de prueba, control de células y control de virus, respectivamente. La EC⁵⁰ representa la concentración de un compuesto en la que la replicación del virus se inhibe al 50%, que se mide por una reducción del 50% de la intensidad fluorescente eGFP comparada con el control de virus. La EC⁵⁰ se calcula con la interpolación lineal.

Paralelamente se evaluó la toxicidad de los compuestos en las mismas placas. Una vez realizada la lectura de la señal eGFP se agregaron 10pL de resazurina, una tintura de viabilidad celular, a todos los pocillos de las placas de 384 pocillos. El ensayo de resazurina se basa en la reducción de la resazurina azul por NADH, producida por las células, en el producto altamente fluorescente, resorufina. La formación de resorufina fluorescente de color rosa está directamente relacionada con la cantidad de células viables en el pocillo. Las placas se incubaron durante 5 horas adicionales en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO²). Luego se midieron las placas en un lector de Infinito (Tecan) mediante el uso de una longitud de onda de excitación de 530 nm. También se determinó la concentración citotóxica máxima media (CC⁵⁰), definida como la concentración requerida para reducir la conversión de resazurina al 50%, en comparación con la de los pocillos de control de células. Por último, se determinó el índice de selectividad (SI) para los compuestos, que se calculó de la siguiente manera: SI = CC⁵⁰/EC⁵⁰.

Tabla 1: EC⁵⁰. CC⁵⁰. y SI para los compuestos de la invención en el ensayo antiviral de DENV-2

Ensayo de tetravalente con transcriptasa inversa cuantitativa-PCR (RT-qPCR): Protocolo A.

La actividad antiviral de los compuestos de la invención se ensayó contra la cepa TC974#666 (NCPV; Tabla 6) de DENV-1, la cepa 16681 de DENV-2 (Tabla 7), la cepa H87 (NCPV; Tabla 8) de DENV-3 y las cepas H241 (NCPV, Tabla 9) y de DENV-4 en un ensayo de RT-qPCR. Por lo tanto, se infectaron células Vero, ya sea con DENV-1, -2, -3 o -4 en presencia o ausencia de compuestos de ensayo. Al día 3 de infectadas, las células se lisaron y los lisados celulares se utilizaron para preparar ADNc de objetivo viral (3'UTR de DENV; tabla 2) y un gen de referencia celular (P-actina, tabla 2). Posteriormente, se realizó un PCR en tiempo real dúplex en un instrumento Lightcycler480. El valor Cp generado es inversamente proporcional a la cantidad de expresión de ARN de estos objetivos. La inhibición de la replicación de DENV produce un cambio de Cp en el compuesto de ensayo para el gen 3'UTR. Por otro lado, si un compuesto de ensayo es tóxico para las células se observará un efecto similar sobre la expresión de p-actina. El método comparativo AACp se utiliza para calcular EC⁵⁰, que se basa en la expresión génica relativa del gen objetivo (3'UTR) normalizado con el gen de limpieza celular (p-actina).

Tabla 2 : Cebadores y sondas utilizados para RT-PCR cuantitativa, en tiempo real

El medio de cultivo consiste en un medio esencial mínimo suplementado con 2% de suero de ternera fetal inactivado por calor, 0.04% de gentamicina (50 mg/ml) y 2 mM de L-glutamina. Las células Vero, obtenidas de ECACC, se suspendieron en un medio de cultivo y se añadieron 75pL/pocillo a placas de 96 pocillos (10.000 células/pocillo), que ya contienen los compuestos antivirales. Típicamente, estas placas contienen una dilución cuádruple en serie de 9 etapas de dilución del compuesto del ensayo a 200 veces la concentración final en DMSO al 100% (500nL; rango de concentración final: 25pM - 0.00038pM). Asimismo, cada placa contiene pocillos que están asignados como controles de virus (que contienen las células y los virus en ausencia del compuesto) y controles de células (que contienen las células en ausencia del virus y el compuesto). Una vez que las células se agregaron a las placas, las placas se incubaron en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO²) hasta el día siguiente. Luego se agregaron la cepa TC974 # 666 de DENV-1, a un MOI de 0.6, cepa 16681 de DENV-2 a un MOI de 0.01, cepa H87 de DENV-3 a un MOI de 1.0 y las cepas H241 de DENV-4 a un MOI de 0.2 y SG/06K2270DK1/2005 a un MOI de 0.16. Por lo tanto, se añadieron 25pL de suspensión de virus, y se agregó a todos los pocillos que contienen el compuesto de prueba y a los pocillos asignados como control de virus. Paralelamente, se añadieron 25pL de medio de cultivo a los controles de células. Seguidamente, las placas se incubaron durante 3 días en un incubador completamente humidificado (37°C, 5% CO²). Después de 3 días, se eliminó el sobrenadante de los pocilios y las células se lavaron dos veces con PBS enfriado con hielo (~ 100 pl). El granulado celular dentro de las placas de 96 pocillos se almacenó a -80°C durante al menos 1 día. A continuación, se extrajo el ARN con el kit para lisis Cells-to-CTTM, de conformidad con las instrucciones del fabricante (Applied Biosystems). Los lisados de células se pueden almacenar a -80°C o utilizarse inmediatamente en la etapa de transcripción inversa.

Como preparación para la etapa de transcripción inversa se preparó la mezcla A (tabla 3A) y se distribuyeron 7.57pL/pocillo en una placa de 96 pocillos. Después de la adición de 5pL del lisado celular, se siguió con una etapa de desnaturalización durante 5 minutos a 75°C (tabla 3B). Posteriormente, se añadieron 7.43pL de la mezcla B (tabla 3C) y se inició el paso de transcripción reversa (tabla 3D) para generar ADNc.

Por último, se preparó una mezcla de RT-qPCR, la mezcla C (tabla 4A), que se distribuyó en placas de 96 pocillos LightCycler qPCR a los que se agregaron 3pL de ADNc y la qPCR se realizó de conformidad con las condiciones de la tabla 4B en un LightCycler 480.

Mediante el uso del software LightCycler y un sistema LIMS interno, se calcularon las curvas dosis-respuesta para cada compuesto y se determinaron la concentración media máxima eficaz (EC⁵⁰) y la concentración citotóxica media máxima (CC⁵⁰).

Tabla 3: Síntesis de ADNc mediante el uso de la Mezcla A, desnaturalización, Mezcla B y transcripción inversa.

Mezcla A

A

Volumen mezcla/

ocillo l ^7.57

Etapa de

B desnaturalización:

C Mezcla B

D Protocolo de síntesis de ADNc

Tabla 4: Protocolo y mezcla para qPCR

A Mezcla C

Volumen

mezcla/conducto Ul ^22.02

B Protocolo PCR3

Tabla 6: Ensayos sobre ECso. CCso. y SI para los compuestos contra el serotipo 1 en RT-qPCR

Tabla 7: Ensayos sobre ECso. CCso. y SI para los compuestos contra el serotipo 2 en RT-qPCR

Tabla 8: Ensayos sobre ECso. CCso. y SI para los compuestos contra el serotipo 3 en RT-qPCR

Tabla 9: Ensayos sobre ECso. CCso. y SI para los compuestos contra cadenas serotipo 4 en RT-qPCR

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de fórmula (I)

una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de estos; dicho compuesto se selecciona de un grupo donde

R¹ es F, R² es F, CH³ u OCH³ y R³ es H,

R¹ es H, R² es Cl o F y R3 es CH3,

R¹ es CH3, R² es OCH3, F o H y R3 =H,

R¹ es H, R² es Cl o F y R3 es H,

R¹ es CH3, R² es H y R3 es F,

R¹ es F, R² es H y R³ es CH³ ,

R¹ es H, R² es OCH3 y R3 es H o Cl,

R¹ es H, R² es F y R3 es F,

R¹ es CF³ u OCF³ , R² es H y R³ es H,

R¹ es Cl, R² es OCH³ y R³ es H

2. Un compuesto o su forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de este de conformidad con la reivindicación 1, donde el compuesto se selecciona entre el grupo:

3. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de fórmula (I) o una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de este de conformidad con la reivindicación 1 o 2, junto con uno o más excipientes, diluyentes o vehículos farmacéuticamente aceptables.

4. Un compuesto de fórmula (I) o una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de este de conformidad con la reivindicación 1 o una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3 para su uso como medicamento.

5. Un compuesto de fórmula (I) o una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de este de conformidad con la reivindicación 1 o una composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3 para su uso en el tratamiento del dengue.

6. Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural (I)

una forma estereoisomérica, una sal, un solvato o un polimorfo farmacéuticamente aceptables de este; dicho compuesto se selecciona de un grupo donde

R¹ es F, R² es F, CH³ u OCH³ y R³ es H,

R¹ es H, R² es Cl o F y R³ es CH³ ,

R¹ es CH³ , R² es OCH³ , F o H y R³ =H,

R¹ es H, R² es Cl o F y R3 es H,

R¹ es CH3, R² es H y R3 es F,

R¹ es F, R² es H y R3 es CH3,

R¹ es H, R² es OCH3 y R3 es H o Cl,

R¹ es H, R² es F y R3 es F,

R¹ es CF³ u OCF³ , R² es H y R³ es H,

R¹ es Cl, R² es OCH³ y R³ es H

para su uso en la inhibición de la replicación del virus del dengue en una muestra biológica o un paciente.

7. El compuesto para su uso de conformidad con la reivindicación 6 que comprende además la coadministración de un agente terapéutico adicional.

8. El compuesto para su uso de la reivindicación 7 donde dicho agente terapéutico adicional es seleccionado de un agente antiviral o vacuna contra el dengue, o ambos.

9. Un método para la síntesis de los compuestos de fórmula (I) según se reivindican en la reivindicación 1 o 2 que comprende las etapas de:

a) convertir ácido 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acético (II) en el correspondiente cloruro de 2-(4-fluoro-2-metoxifenil)acetilo (III) con un reactivo de cloración;

b) reacción de Friedel-Crafts del cloruro de ácido (III) con un indol sustituido de fórmula general (IV) realizada usando un reactivo ácido de Lewis en un disolvente adecuado y en condiciones de reacción adecuadas, para proporcionar el indol 3-acilado de fórmula general (V), donde R1, R2 y R3 tienen el mismo significado que en la reivindicación 1;

c) bromación de (V) con un reactivo en un disolvente adecuado para proporcionar los compuestos de fórmula general (VI);

d) reacción de los compuestos de fórmula general (VI) con 3-metoxi-5-(metilsulfonil)anilina (VII) en un disolvente adecuado y típicamente usando una base para proporcionar los compuestos de fórmula general I como mezclas racémicas;

e) separación quiral de los compuestos de fórmula general I para proporcionar los enantiómeros A y B de fórmula general I.

10. Un método de conformidad con la reivindicación 9, donde el intermedio de fórmula general (V) se prepara siguiendo las etapas de:

i) convertir el indol sustituido de fórmula general (IV) en un intermedio N-protegido de fórmula general (VIII) usando un reactivo en presencia de una base, donde PG es un grupo protector, y R1, R2 y R3 tienen el mismo significado que en la reivindicación 1;

ii) reacción de Friedel-Crafts del indol sustituido de fórmula general (VIII) con el cloruro de ácido (III) realizada usando un reactivo ácido de Lewis en un disolvente adecuado y en condiciones de reacción adecuadas, para proporcionar el indol 3-acilado de fórmula general (IX);

iii) eliminación del grupo protector de N del indol del intermedio de fórmula general (IX) con un reactivo en una mezcla de disolventes y a una temperatura de reacción adecuada para proporcionar el indol 3-acilado de fórmula general (V)