ES2902369T3 - Anticuerpos anti-LAG-3 para tratar neoplasias malignas hemáticas - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo anti-LAG-3 para su uso en un método de tratamiento de una neoplasia maligna hemática en un paciente humano, en donde el anticuerpo anti-LAG-3 comprende (a) una CDR1 de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 7; (b) una CDR2 de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 8; (c) una CDR3 de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 9; (d) una CDR1 de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 10; (e) una CDR2 de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 11; y (f) una CDR3 de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 12, y en donde el método comprende al menos un ciclo de administración del anticuerpo anti-LAG-3, en donde el ciclo es un período de ocho semanas, en donde para cada uno de al menos un ciclo, el anticuerpo anti LAG-3 se administra de la siguiente manera: (a) cuatro dosis de 20 mg del anticuerpo anti-LAG-3; (b) cuatro dosis de 80 mg del anticuerpo anti-LAG-3; (c) cuatro dosis de 240 mg del anticuerpo anti-LAG-3; o (d) cuatro dosis de 800 mg del anticuerpo anti-LAG-3.

Description

DESCRIPCIÓN

Anticuerpos anti-LAG-3 para tratar neoplasias malignas hemáticas

Antecedentes de la Invención

El gen 3 de activación de linfocitos (LAG-3; CD223) es una proteína transmembrana de tipo I que se expresa en la superficie celular de las células T CD4+ y CD8+ activadas y en los subconjuntos de células NK y dendríticas (Triebel F, et al, J. Exp. Med. 1990; 171:1393- 1405; Workman CJ, et al, J. Immunol 2009; 182(4):1885-91). LAG-3 está estrechamente relacionado con CD4, que es un co-receptor de la activación de células T auxiliares. Ambas moléculas tienen cuatro dominios similares a Ig extracelulares y requieren la unión a su ligando, el complejo de histocompatibilidad principal (MHC) de clase II, para su actividad funcional. A diferencia de CD4, LAG-3 solo se expresa en la superficie celular de células T activadas y su escisión de la superficie celular pone fin a la señalización de LAG-3. LAG-3 también puede encontrar como una proteína soluble, pero no se une al MHC de clase II y su función se desconoce.

Se ha informado que LAG-3 juega un papel importante en la promoción de la actividad de las células T reguladoras (Treg) y en la activación y proliferación de las células T de regulación negativa (Workman CJ, et al, J. Immunol 2005; 174:688-695). Las Treg tanto naturales como inducidas expresan LAG-3 aumentada, lo que se requiere para su función supresora máxima (Camisaschi C, et al, J. Immunol 2010; 184:6545-6551 y Huang CT, et al, Immunity. 2004; 21:503-513). Por otra parte, la expresión ectópica de LAG-3 en células T efectoras CD4+ redujo su capacidad proliferativa y las confirió un potencial regulador contra células T de terceros (Huang CT, et al., Immunity. 2004; 21:503-513). Estudios recientes también han demostrado que la expresión elevada de LAG-3 en células T CD8+ agotadas específicas del virus de la coriomeningitis linfocítica (LCMV) contribuye a su estado insensible y limita las respuestas antitumorales de las células T CD8+ (Blackburn SD, et al, Nat Immunol 2009; 10:29-37 y Grosso JF, et al, J. Clin. Invest. 2007; 117:3383-3392). De hecho, LAG-3 mantiene la tolerancia a los antígenos propios ytumorales a través de efectos directos sobre las células T CD8+ en 2 modelos de murinos (Grosso JF, et al, J. Clin. Invest. 2007; 117:3383-3392).

La infección provocada por el virus de Epstein-Barr es otro factor más a tener en cuenta en la posible inducción del agotamiento de las células T en las neoplasias malignas hemáticas. Se sabe que los casos de CLL, de síndrome de Richtery de linfoma asociados al EBV, son generalmente más agresivos que los de su EBV(-) homólogo (Tsimberidou AM, et al, Leuk Lymphoma 2006;47:827; Ansell SM, et al, Am J Hematol 1999;60:99; Dolcetti R, et al, Infectious Agents and Cancer2010;5:22; Kanakry JA, et al, Blood 2013;121:3547). Curiosamente, la expresión de inhibidores de puntos de control similares a PD-L1 y LAG-3, también se ha documentado en tumores malignos asociados al EBV (Green MR, et al, Clin Cancer Res 2012;18:1611; Monti S, et al, Blood 2005;105:1851). De hecho, se ha documentado una alta expresión de LAG-3 en infecciones víricas crónicas, y su bloqueo con anticuerpos anti-LAG-3, ha sido capaz de reducir los títulos víricos y la expresión de inhibidores de puntos de control en modelos murinos (Blackburn SD, et al., Nat. Immunol. 2009;10 29-37). Además, la expresión de LAG-3, solo o en combinación con otros marcadores, se ha evaluado como un marcador de pronóstico o predictivo en la CLL y en el linfoma de Hodgkin (Zhang J, et al, BMC Bioinformatics 2010;11(Supl. 9):S5; Kotaskova J, et al, J Mol Diagn 2010;12(3):328-334). Nuevos datos indican que la expresión de LAG-3 en linfocitos infiltrantes tumorales (TIL) y en sangre periférica, actúa como mediadora en el agotamiento de las células T en neoplasias malignas hemáticas (Dickinson j D, et al, Leuk Lymphoma 2006;47(2):231-44). Por otra parte, el bloqueo de LAG-3 con anticuerpos específicos ha demostrado actividad antitumoral en modelos de leucemia (Berrien-Elliott, M, et al, Cancer Research 2013;73(2):605-616) y de tumores sólidos (Woo, S-R, et al., Cancer Research 2011; 72(4):917-927; Goding, S. R., etal, Journal of Immunology, Baltimore, Md 1950; 190(9):4899-909). Por lo tanto, LAG-3 es una diana terapéutica en las neoplasias malignas hemáticas. Su bloqueo con el anticuerpo anti-LAG-3, solo y en combinación con el tratamiento habitual (por ejemplo, ibrutinib, lenalidomida) o con otros inhibidores de puntos de control (por ejemplo, nivolumab), merece una exploración adicional en estudios clínicos.

En el documento WO 2014/008218 se describen anticuerpos monoclonales aislados que se unen específicamente a LAG-3, y su uso en el tratamiento del del cáncer.

En el documento WO 2010/019570 también se describen anticuerpos monoclonales aislados que se unen específicamente a LAG-3, y su uso en el tratamiento del cáncer.

"Un estudio en fase 1, con aumento progresivo de la dosis y ampliación de cohortes sobre la seguridad, tolerabilidad y eficacia del anticuerpo LAG-3 (BMS-98601) en leucemia linfocítica crónica, linfomas y mieloma múltiple recidivantes o refractarios" (anónimo; XP055195481; publicado el 20-11-2014) es un estudio clínico sobre la seguridad, la tolerabilidad, las toxicidades limitantes de la dosis y la dosis máxima tolerada de BMS-986016 administrado a sujetos con leucemia linfocítica crónica, linfomas y mieloma múltiple recidivantes o refractarios.

En el documento WO 2015/042246 se describen métodos para el tratamiento clínico de tumores (por ejemplo, tumores sólidos avanzados) utilizando un anticuerpo anti-LAG-3 en combinación con un anticuerpo anti-PD-1.

Por consiguiente, es un objetivo de la presente invención proporcionar métodos mejorados para el tratamiento de pacientes con neoplasias malignas hemáticas utilizando inmunoterapia con anti-LAG-3.

Sumario

En un aspecto, como se define en las reivindicaciones, la invención proporciona un anticuerpo anti-LAG-3 para su uso en un método de tratamiento de una neoplasia maligna hemática en un paciente humano.

Los anticuerpos anti-LAG-3 son para su uso en métodos para el tratamiento de neoplasias malignas hemáticas, (por ejemplo, neoplasias malignas derivadas de líneas celulares mieloides o linfoides, tales como leucemias, linfomas y mielomas) en un paciente humano, que comprende administrar al paciente el anticuerpo de anti-LAG-3, en donde el anticuerpo se administra (o es para su administración) de acuerdo con un régimen de dosificación clínica particular (es decir, a una cantidad de dosis particular y de acuerdo con un programa de dosificación específico). En una realización, el paciente humano padece un linfoma o una leucemia linfocítica crónica, recidivante o refractaria, tal como leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma de Hodgkin (HL) o linfoma no de Hodgkin (NHL).

Un anticuerpo anti-LAG-3 ilustrativo es BMS-986016, que comprende las cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias expuestas en los SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente, o fragmentos de unión a antígeno y variantes de los mismos (véase, por ejemplo, el documento WO 2014/008218). El anticuerpo comprende las regiones determinantes de la complementariedad (CDR) o las regiones variables (VR) de cadena pesada y ligera de BMS-986016. El anticuerpo comprende los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena pesada (VH) de BMS-986016 que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO:3, y los dominios CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena ligera (VL) de BMS-986016 que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 5. El anticuerpo comprende las secuencias de cadena pesada de CDR1, CDR2 y CDR3 expuestas en los SEQ ID NO: 7, 8 y 9, respectivamente, y las secuencias de cadena ligera de CDR1, CDR2 y CDR3 expuestas en los SEQ ID NO: 10, 11 y 12, respectivamente. En otra realización, el anticuerpo tiene regiones VH y/o VL que comprenden las secuencias de aminoácidos expuestas en el SEQ ID NO: 3 y/o en el SEQ ID NO: 5, respectivamente. En otra realización, el anticuerpo comprende las regiones VH y/o VL codificadas por las secuencias de ácidos nucleicos expuestas en el SEQ ID NO: 4 y/o SEQ ID NO: 6, respectivamente. En otra realización, el anticuerpo compite por la unión con LAG-3 y/o se une al mismo epítopo en LAG-3, como ocurre con los anticuerpos mencionados anteriormente. En otra realización, el anticuerpo tiene una identidad de secuencia de aminoácidos de la región variable de al menos aproximadamente 90 % con los anticuerpos mencionados anteriormente (por ejemplo, una identidad de la región variable de al menos aproximadamente 90 %, 95 % o 99 % con el SEQ ID NO: 3 o SEQ ID NO: 5).

Por consiguiente, en una realización, se proporcionan anticuerpos para su uso en métodos para el tratamiento de una leucemia linfocítica crónica y linfomas (por ejemplo, CLL, HL, o NHL) recidivantes o refractarios en un paciente humano, comprendiendo los métodos administrar al paciente una cantidad eficaz de:

un anticuerpo anti-LAG-3 que comprende los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena pesada que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 3, y los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena ligera que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 5,

en donde el método comprende al menos un ciclo de administración, en donde el ciclo es un período de ocho semanas, en donde para cada uno de al menos un ciclo, se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-LAG-3 a una dosis de 20, 80, 240 u 800 mg.

El anticuerpo anti-LAG-3 se administra a las siguientes dosis:

(a) 20 mg de anticuerpo anti-LAG-3;

(b) 80 mg de anticuerpo anti-LAG-3;

(c) 240 mg de anticuerpo anti-LAG-3; o

(d) 800 mg de anticuerpo anti-LAG-3.

La dosis del anticuerpo anti-LAG-3 es una dosis fija constante.

En otra realización, el anticuerpo anti-LAG-3 se administra los días 1, 15, 29 y 43 de cada ciclo. En otra realización, el tratamiento consiste en hasta 12 ciclos.

En una realización, el anticuerpo anti-LAG-3 se administra como una primera línea ("frontal") de tratamiento (por ejemplo, el tratamiento inicial o primer tratamiento). En otra realización, el anticuerpo anti-LAG-3 se administra como una segunda línea de tratamiento (por ejemplo, después del tratamiento inicial con el mismo agente terapéutico o uno diferente, incluyendo después de la recidiva y/o cuando el primer tratamiento ha fracasado). Los anticuerpos anti-LAG-3 pueden administrarse a un sujeto a través de cualquier medio adecuado. En una realización, el anticuerpo se formula para administración intravenosa.

La eficacia de los métodos de tratamiento proporcionados en el presente documento puede evaluarse utilizando cualquier medio adecuado. El tratamiento produce al menos un efecto terapéutico, por ejemplo, una reducción del número de células malignas a lo largo del tiempo, una respuesta completa, una respuesta parcial y que la enfermedad sea estable.

También se desvelan kits que incluyen una composición farmacéutica que contiene un anticuerpo anti-LAG-3, tal como BMS-986016, y un transportador farmacéuticamente aceptable, en una cantidad terapéuticamente eficaz adaptada para su uso en los métodos descritos en el presente documento. En una realización, el kit comprende:

(a) una dosis de un anticuerpo anti-LAG-3 que comprende los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena pesada que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 3, y los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena ligera que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 5; y

(b) instrucciones para usar el anticuerpo anti-LAG-3 en un método de la invención.

En otro aspecto, se proporciona un anticuerpo anti-LAG-3, comprendiendo dicho anticuerpo los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena pesada que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 3, y los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena ligera que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 5, para la administración en al menos un ciclo, en donde para cada ciclo, se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-LAG-3 a una dosis de 20, 80, 240 u 800 mg.

Breve Descripción de las Figuras

La figura 1 es un esquema que ilustra las partes de un ensayo clínico de la fase I.

La figura 2 es un diagrama esquemático que ilustra las fases de cribado, tratamiento, seguimiento clínico y seguimiento durante la supervivencia del ensayo clínico.

La figura 3 es una tabla que ilustra el programa de muestreo de los biomarcadores.

La figura 4 muestra los resultados del análisis de IHC (inmunohistoquímica) de LAG-3 en células de NSCLC. La figura 5 muestra los resultados del análisis de IHC de LAG-3 en células del carcinoma gástrico.

La figura 6 es un gráfico que compara el porcentaje de células positivas a LAG-3, en relación con todos los otros tipos de células en la sección del tumor, en células del melanoma.

La figura 7 es un gráfico que compara el porcentaje de células positivas a LAG-3, en relación con todos los otros tipos de células en la sección del tumor, en células de NSCLC.

La figura 8 es un gráfico que compara el porcentaje de células positivas a LAG-3, en relación con todos los otros tipos de células en la sección del tumor, en células de carcinoma de células renales (RCC).

La figura 9 es un gráfico que compara el porcentaje de células positivas a LAG-3, en relación con todos los otros tipos de células en la sección del tumor, en células del carcinoma gástrico.

La figura 10 es un gráfico que compara el porcentaje de células positivas a LAG-3, en relación con todos los otros tipos de células en la sección del tumor, en células epidermoides de carcinoma de cabeza y cuello.

La figura 11 es una tabla que resume el porcentaje de células positivas a LAG-3 en células linfoides (células tumorales y TILS), en relación con todos los otros tipos de células en la sección del tumor, basándose en el análisis al microscópico óptico de LAG-3 de células del linfoma no de Hodgkin.

La figura 12 muestra los resultados del análisis de IHC de LAG-3 en células de NHL y DBLCL; figura 12A, vista a baja resolución y figura 12B, vista a alta resolución.

La figura 13 muestra los resultados del análisis de IHC de LAG-3 en células de NHL y FL; figura 13A, vista a baja resolución y figura 13B, vista a alta resolución.

La figura 14 muestra los resultados del análisis de IHC de LAG-3 en células de NHL, TMAy CLL; figura 14A, vista a baja resolución y figura 14B, vista a alta resolución.

Descripción Detallada

I. Definiciones

Como se usa el presente documento, el término "paciente" o "sujeto" es un paciente humano con cáncer (por ejemplo, un paciente que tiene un tumor sólido avanzado, tal como un tumor sólido refractario avanzado).

Como se usa el presente documento ,"neoplasia maligna hemática" se refiere a un tipo de cáncer que afecta a la sangre, a la médula ósea y/o a los ganglios linfáticos. Dichas neoplasias malignas se caracterizan por células malignas o cancerosas y proceden de cualquiera de los dos linajes de células sanguíneas principales, es decir, la línea celular mieloide (que produce los granulocitos, eritrocitos, trombocitos, macrófagos y mastocitos) o la línea de células linfoides (que produce las células B, T, NK y plasmáticas). Estos cánceres incluyen todos los tipos de leucemias, linfomas y mielomas, por ejemplo, leucemias linfocíticas y/o mielógenas aguda, crónica, linfocítica y/o mielógena, tales como leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia mielógena aguda (AML), leucemia linfocítica crónica (CLL) y leucemia mielógena crónica (CML), AML no diferenciada (M0), leucemia mieloblástica (MI), leucemia mieloblástica (M2; con maduración de células), leucemia promielocítica (M3 o una variante de M3 [M3V]), leucemia mielomonocítica (M4 o variante de M4 con eosinofilia [M4E]), leucemia monocítica (M5), eritroleucemia (M6), leucemia megacarioblástica (M7), sarcoma granulocítico aislado, y cloroma; linfomas, tales como linfoma de Hodgkin (HL), linfoma no de Hodgkin (NHL), linfomas de células B, linfomas de células T, linfoma linfoplasmacitoide, linfoma de células B monocitoides, linfoma de tejido linfoide asociado a la mucosa (MALT), linfoma anaplásico de células grandes, linfoma/leucemia de células T adultas, linfoma de células del manto, linfoma de células T angioinmunoblásticas, linfoma angiocéntrico, linfoma intestinal de células T, linfoma mediastínico primario de células B, linterna periférico de células T, linterna linfoblástico, trastorno linfoproliferativo postrasplante, linfoma histiocítico verdadero, linfoma del sistema nervioso central primario, linfoma pleural primario, linfoma linfoblástico (LBL), linfoma de Burkitt, linfoma histiocítico difuso (DHL), linfoma cutáneo de células T (CTLC), (también denominado micosis fungoide o síndrome de Sezary), y linfoma linfoplasmacitoide (LPL) con macroglobulinemia de Waldenstrom; mielomas, tales como mieloma de IgG, mieloma de la cadena ligera, mieloma no secretor, mieloma asintomático (también denominado mieloma indolente), plasmocitoma solitario, y mielomas múltiples. Los cánceres particulares que se pueden tratar utilizando los anticuerpos para su uso en los métodos de la invención incluyen, por ejemplo, leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma de Hodgkin (HL) o linfoma no de Hodgkin (NHL).

Como se usa en el presente documento, "tratamiento eficaz" se refiere a un tratamiento que produce un efecto beneficioso, por ejemplo, la mejora de al menos un síntoma de una enfermedad o un trastorno. Un efecto beneficioso puede ser una mejora sobre el inicio, es decir, una mejora sobre una medición u observación realizada antes de iniciar la terapia de acuerdo con el método. Un efecto beneficioso también puede ser detener, ralentizar, retardar o estabilizar una progresión perjudicial de un marcador de una neoplasia maligna hemática. Un tratamiento eficaz puede referirse al alivio de al menos un síntoma de una neoplasia maligna hemática. Dicho tratamiento eficaz puede reducir, por ejemplo, el dolor del paciente, reducir el tamaño y/o el número de células malignas, puede reducir o prevenir la metástasis de una célula maligna, y/o puede retrasar el crecimiento de células malignas.

La expresión "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad de un agente que proporciona el resultado biológico, terapéutico y/o profiláctico deseado. Este resultado puede ser la reducción, mejora, paliación, reducción, retraso y/o alivio de uno o más de los signos, síntomas, o causas de una enfermedad, o cualquier otra alteración deseada de un sistema biológico. Con referencia a la neoplasia maligna hemática, una cantidad eficaz comprende una cantidad suficiente para disminuir la tasa de crecimiento de las células malignas (por ejemplo, para suprimir el progreso de la neoplasia maligna) o para prevenir o retrasar otra proliferación de células malignas no deseadas. En algunas realizaciones, una cantidad eficaz es una cantidad suficiente para retrasar el desarrollo de células malignas. En algunas realizaciones, una cantidad eficaz es una cantidad suficiente para prevenir o retrasar la recidiva de células malignas. Una cantidad eficaz puede administrarse en una o más administraciones. La cantidad eficaz del fármaco o la composición puede: (i) reducir el número de células malignas; (ii) inhibir, retardar, ralentizar hasta cierto punto, y puede detener la infiltración de las células malignas; (iii) inhibir (es decir, ralentizar en cierta medida y puede detener la metástasis de células malignas; (iv) prevenir o retrasar la aparición y/o recidiva de células malignas, y/o (vii) aliviar en cierta medida uno o más de los síntomas asociados a la malignidad. En un ejemplo, una "cantidad eficaz" es la cantidad de anticuerpo anti-LAG-3 que clínicamente ha demostrado que incide sobre una disminución significativa de la neoplasia maligna o ralentizando la progresión de la neoplasia maligna, tal como un aumento en el número de células malignas. Tal como se usa en el presente documento, las expresiones "dosis fija", "dosis constante" y "dosis fija constante" se usan indistintamente y se refieren a una dosis que se administra a un paciente sin tener en cuenta el peso o la superficie corporal (SC) del paciente. Por lo tanto, la dosis fija o constante no se proporciona como una dosis en mg/kg, sino más bien como una cantidad absoluta del agente (por ejemplo, el anticuerpo anti-LAG-3).

Como se usa en el presente documento, una "dosis basada en la superficie corporal (SC)" se referirá a una dosis (por ejemplo, del anticuerpo anti-LAG-3) que se ajusta a la superficie corporal (SC) del paciente individual. Una dosis basada en la SC puede proporcionarse como mg/kg de peso corporal. Se han publicado varios cálculos para llegar a la SC sin tener que realizar ninguna medición directa, siendo el cálculo más ampliamente utilizado el de la fórmula de Du Bois (Du Bois, EF, Arch. Intern. Medicine 1916; 17:863-871; y Verbraecken J, et al., Metabolism Clinical and Experimental 2006; 55(4):515-24). Otras fórmulas ilustrativas para calcular la SC incluyen la fórmula de Mosteller (Mosteller, et al, N. Engl J. Med 1987; 317:1098), la fórmula de Haycock (Haycock, et al, J. Pediatr. 1978; 93:62-66), la fórmula de Gehan y George (Gehan, et al, Cancer Chemother Rep 1970, 54:225-235), la fórmula de Boyd (Current JD, The Internet Journal of Anesthesiology 1998, 2(2); y Boyd, Edith (1935), University de Minnesota The Institute of Child Welfare, Serie de Monografías, No. x. London: Oxford University Press), la fórmula de Fujimoto (Fujimoto S, et al, Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50), la fórmula de Takahira (Fujimoto S, et al, Nippon Eiseigaku Zasshi 1968; 5:443-50) y la fórmula de Schlich (Schlich E, et al, Ernahrungs Umschau 2010;57:178-183).

El término "anticuerpo" describe polipéptidos que comprenden al menos un sitio de unión a antígeno derivado del anticuerpo (por ejemplo, la región Vh/VL o Fv, o c Dr ). Los anticuerpos incluyen las formas conocidas de los anticuerpos. Por ejemplo, el anticuerpo puede ser un anticuerpo humano, un anticuerpo humanizado, un anticuerpo biespecífico o un anticuerpo quimérico. El anticuerpo también puede ser un Fab, Fab'2, ScFv, SMIP, Affibody®, nanocuerpo o un anticuerpo de dominio. El anticuerpo también puede ser de cualquiera de los siguientes isotipos: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgAsec, IgD e IgE. El anticuerpo puede ser un anticuerpo de origen natural o puede ser un anticuerpo que se ha alterado (por ejemplo, por mutación, deleción, sustitución, conjugación con una porción diferente del anticuerpo). Por ejemplo, un anticuerpo puede incluir uno o más aminoácidos variantes (en comparación con un anticuerpo de origen natural) que cambia una propiedad (por ejemplo, una propiedad funcional) del anticuerpo. Por ejemplo, en la técnica se conocen muchas de estas alteraciones, que influyen, por ejemplo, en la semivida, en la función efectora y/o en las respuestas inmunitarias con respecto al anticuerpo en un paciente. El término anticuerpo también incluye construcciones polipeptídicas artificiales que comprenden al menos un sitio de unión a antígeno derivado del anticuerpo.

El término "LAG-3" (siglas del inglés, Lymphocyte Activation Gene-3) se refiere al gen 3 de activación de linfocitos. El término "LAG-3" incluye variantes, isotermas, homólogos, ortólogos y parálogos. Por ejemplo, los anticuerpos específicos para una proteína LAG-3 humana pueden, en ciertos casos, reaccionar de forma cruzada con una proteína LAG-3 de una especie distinta a la humana. En otras realizaciones, los anticuerpos específicos para una proteína LAG-3 humana pueden ser completamente específicos para la proteína LAG-3 humana y no mostrar otros tipos de reactividad de forma cruzada con otras especies o pueden reaccionar de forma cruzada con LAG-3 de otras especies determinadas, pero no con todas las demás especies (por ejemplo, reaccionar de forma cruzada con LAG-3 de mono, pero no con LAG-3 de ratón). La expresión "LAG-3 humana" se refiere a la secuencia humana de LAG-3, tal como la secuencia de aminoácidos completa de LAG-3 humana que tiene el n.° de registro del Genbank NP_002277 (SEQ ID NO: 13). La expresión "LAG-3 de ratón" se refiere a la secuencia de LAG-3 de ratón, tal como la secuencia de aminoácidos completa de LAG-3 de ratón que tiene el n.° de registro del Genbank NP_032505. LAG-3 también se conoce en la técnica como, por ejemplo, CD223. La secuencia de LAG-3 humana puede diferir de la LAG-3 humana con el n.° de registro del Genbank Np_002277 por tener, por ejemplo, mutaciones conservadas o mutaciones en regiones no conservadas y LAG-3 tiene sustancialmente la misma función biológica que LAG-3 humana con el n.° de registro del Genbank NP_002277. Por ejemplo, una función biológica de LAG-3 humana es que tiene un epítopo en el dominio extracelular de LAG-3 que se une específicamente por un anticuerpo de la presente descripción o una función biológica de LAG-3 humana es la unión a moléculas de MHC de la clase II.

La expresión "LAG-3 de mono" pretende abarcar proteínas de LAG-3 expresadas por monos del Viejo Mundo y del Nuevo Mundo, incluyendo pero sin limitación, LAG-3 de mono cynomolgus (Macaca fascicularis o macaco de Java) y LAG-3 de mono rhesus (Macaca mulata, o macaco de la India). Una secuencia de aminoácidos representativa de LAG-3 de mono es la secuencia de aminoácidos de LAG-3 de mono rhesus que también se deposita en el GenBank con el n.° de registro XM_001108923. Otra secuencia de aminoácidos representativa de lAG-3 de mono es la secuencia de mono rhesus alternativa del clon pa23-5 como se describe en el documento US 2011/0150892 Al. Esta secuencia de rhesus alternativa muestra una sola diferencia de aminoácido, en la posición 419, en comparación con la secuencia depositada en el GenBank.

Una secuencia de LAG-3 humana particular será generalmente al menos 90 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de LAG-3 humana con el n.° de registro del Genbank. NP_002277 y contiene restos de aminoácidos que identifican la secuencia de aminoácidos como de ser humano en comparación con las secuencias de aminoácidos de LAG-3 de otras especies (por ejemplo, murinas). En ciertos casos, una LAG-3 humana puede ser al menos 95 %, o incluso al menos 96 %, 97 %, 98 % o 99 % idéntica a la secuencia de aminoácidos de LAG-3 con el n.° de registro del Genbank. NP_002277. En ciertas realizaciones, una secuencia de LAG-3 humana mostrará no más de 10 diferencias de aminoácidos con respecto a la secuencia de LAG-3 con el n°. de registro del GenBank NP_002277. En ciertas realizaciones, la LAG-3 humana puede mostrar no más de 5, o incluso no más de 4, 3, 2 o 1 aminoácido de diferencia con respecto a la secuencia de LAG-3 con el n.° de registro del GenBank NP_002277. El porcentaje de identidad puede determinarse como se describe en el presente documento.

II. Anticuerpos anti-LAG-3

Los anticuerpos anti-LAG-3-humanos (o los dominios de VH/VL derivados de los mismos) adecuados para su uso en la invención, pueden generarse utilizando métodos bien conocidos en la materia. Alternativamente, se pueden utilizar los anticuerpos anti-LAG-3 reconocidos en la materia. Por ejemplo, puede utilizarse el anticuerpo anti-LAG-3 humano descrito en el documento US2011/0150892 Al, y al que se hace referencia como anticuerpo monoclonal 25F7 (también conocido como "25F7" y "LAG3.1). Otros anticuerpos de anti-LAG-3 reconocidos en la materia que pueden utilizarse incluyen IMP731 descrito en el documento US 2011/007023.

También pueden utilizarse anticuerpos que compiten con cualquiera de los anticuerpos reconocidos en la materia, mencionados anteriormente, por la unión con LAG-3.

Un anticuerpo anti-LAG-3 ilustrativo es BMS-986016 que comprende las cadenas pesada y ligera que comprenden las secuencias mostradas en los SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente, o fragmentos de unión a antígeno y variantes de los mismos, como se describe en el documento WO 2014/008218.

El anticuerpo tiene las CDR de cadena pesada y ligera o las regiones variables de BMS-986016. El anticuerpo comprende los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región VH de BMS-986016 que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 3, y los dominios de Cd R1, CDR2 y CDR3 de la región VL de BMS-986016 que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 5. El anticuerpo comprende los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 que comprenden las secuencias expuestas en los SEQ ID NO: 7, 8 y 9, respectivamente, y los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 que comprenden las secuencias expuestas en los SEQ ID NO: 10, 11 y 12, respectivamente. En otra realización, el anticuerpo comprende las regiones VH y/o VL que comprenden las secuencias de aminoácidos expuestas en el SEQ ID NO: 3 y/o SEQ ID NO: 5, respectivamente. En otra realización, el anticuerpo comprende regiones variable de cadena pesada (VH) y/o variable de cadena ligera (VL) codificadas por las secuencias de ácidos nucleicos expuestas en el SEQ ID NO: 4 y/o SEQ ID NO: 6, respectivamente. En otra realización, el anticuerpo compite por la unión con y/o se une al mismo epítopo sobre LAG-3 como los anticuerpos mencionados anteriormente. En otra realización, el anticuerpo se une a un epítopo de LAG-3 humana que comprende la secuencia de aminoácidos PGHPLAPG (SEQ ID NO: 14). En otra realización, el anticuerpo se une a un epítopo de LAG-3 humana que comprende la secuencia de aminoácidos HPAAPSSW (SEQ ID NO: 15) o PAAPSSWG (SEQ ID NO: 16).

En otra realización, el anticuerpo tiene al menos aproximadamente un 90 % de identidad de secuencia de aminoácidos de la región variable con los anticuerpos mencionados anteriormente (por ejemplo, al menos aproximadamente un 90 %, 95 % o 99 % de identidad de la región variable con el SEQ ID NO: 3 o Se Q ID NO: 5).

III. Composiciones Farmacéuticas

Las composiciones farmacéuticas adecuadas para la administración a pacientes humanos se formulan normalmente para la administración parenteral, por ejemplo, en un transportador líquido, o son adecuadas para su reconstitución en una solución o suspensión líquida para la administración intravenosa.

En general, dichas composiciones comprenden normalmente un transportador farmacéuticamente aceptable. Como se usa en el presente documento, la expresión "farmacéuticamente aceptable", significa aprobado por una agencia reguladora del gobierno o indicado en la Farmacopea de los Estados Unidos de América u otra farmacopea generalmente reconocida para su uso en animales, particularmente en seres humanos. El término "transportador" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el cual se administra el compuesto. Dichos transportadores farmacéuticos pueden ser líquidos estériles, tales como agua y aceites, incluyendo los derivados del petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo, ricinoleato de glicerol polietilenglicol, y similares. Como transportadores puede emplearse agua o solución salina acuosa y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol, particularmente para soluciones inyectables (por ejemplo, que comprenden un anticuerpo anti-LAG-3). Las composiciones líquidas para administración parenteral pueden formularse para administración por inyección o infusión continua. Las vías de administración por inyección o infusión incluyen intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intratecal y subcutánea. En una realización, el anticuerpo anti-LAG-3 se administra por vía intravenosa.

IV. Poblaciones de pacientes

En el presente documento se proporcionan anticuerpos anti-LAG-3 para su uso en métodos clínicos para el tratamiento de una neoplasia maligna hemática (por ejemplo, una leucemia linfocítica crónica o un linfoma recidivante o refractario) en pacientes humanos.

Los ejemplos de cánceres que pueden tratarse usando los anticuerpos anti-LAG-3 para su uso en los métodos de la invención, incluyen todas las neoplasias malignas hemáticas procedentes de cualquiera de los dos linajes de células sanguíneas principales, es decir, la línea celular mieloide (que produce granulocitos, eritrocitos, trombocitos, macrófagos y mastocitos) o la línea celular linfoide (que produce células B, T, NK y plasmáticas). Estos cánceres incluyen todos los tipos de leucemias, linfomas y mielomas, por ejemplo, leucemia aguda, crónica, linfocítica y/o mielógena, tal como leucemia linfocítica aguda (ALL), leucemia mielógena aguda (AML), leucemia linfocítica crónica (CLL) y leucemia mielógena crónica (CML), AML no diferenciada (M0), leucemia mieloblástica (M1), leucemia mieloblástica (M2; con maduración celular), leucemia promielocítica (M3 o variante M3 [M3V]), leucemia mielomonocítica (M4 o variante M4 con eosinofilia [M4E]), leucemia monocítica (M5), eritroleucemia (M6), leucemia megacarioblástica (M7), sarcoma granulocítico aislado y cloroma; linfomas, tales como linfoma de Hodgkin (HL), linfoma no de Hodgkin (NHL), linfomas de células B, linfomas de células T, linfoma linfoplasmacitoide, linfoma de células B monocitoides, linfoma de tejido linfoide asociado a la mucosa (MALT), linfoma anaplásico de células grandes, linfoma/leucemia de células T adultas, linfoma de células del manto, linfoma de células T angioinmunoblásticas, linfoma angiocéntrico, linfoma intestinal de células T, linfoma mediastínico primario de células B, linfoma periférico de células T, linfoma linfoblástico, trastorno linfoproliferativo postrasplante, linfoma histiocítico verdadero, linfoma del sistema nervioso central primario, linfoma pleural primario, linfoma linfoblástico (LBL), linfoma de Burkitt, linfoma histiocítico difuso (DHL), linfoma cutáneo de células T (CTLC) (también denominado micosis fungoide o síndrome de Sezary) y linfoma linfoplasmacitoide (LPL) con macroglobulinemia de Waldenstrom; mielomas, tales como mieloma de IgG, mieloma de cadena ligera, mieloma no secretor, mieloma asintomático (también denominado mieloma indolente), plasmocitoma solitario, y mielomas múltiples. Los cánceres particulares que pueden tratarse utilizando los métodos de la invención incluyen, por ejemplo, leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma de Hodgkin (HL) o linfoma no de Hodgkin (NHL).

En una realización, el paciente humano padece leucemia linfocítica crónica o linfoma recidivante o refractario. En una realización particular, el paciente humano padece leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma de Hodgkin (HL) o linfoma no de Hodgkin (NHL).

Los pacientes pueden someterse a ensayo o seleccionarse con respecto a uno o más de los atributos clínicos descritos anteriormente antes, durante o después del tratamiento.

V. Protocolos de Tratamiento

Los protocolos de tratamiento adecuados para el tratamiento de una neoplasia maligna hemática en un paciente humano incluyen, por ejemplo, administrar al paciente una cantidad eficaz de:

un anticuerpo anti-LAG-3 que comprende los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena pesada que tienen la secuencia descrita en el SEQ ID NO: 3 y los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena ligera que tienen la secuencia descrita en el SEQ ID NO: 5,

en donde el método comprende al menos un ciclo de administración, en donde el ciclo es un período de ocho semanas, en donde para cada uno de al menos un ciclo, se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-LAG-3 a una dosis de aproximadamente 1, 3, 10, 20, 50, 80, 100, 130, 150, 180, 200, 240, 280, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750 u 800 mg. En otro aspecto, se administran cuatro dosis del anticuerpo anti-LAG-3 a una dosis de 0,01, 0,03, 0,25, 0,1, 0,3, 1, o 3, 5, 8 o 10 mg/kg de peso corporal.

El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso en los métodos de la invención se administra a las siguientes dosis:

(a) 20 mg de anticuerpo anti-LAG-3;

(b) 80 mg de anticuerpo anti-LAG-3;

(c) 240 mg de anticuerpo anti-LAG-3; o

(d) 800 mg de anticuerpo anti-LAG-3;.

La dosis del anticuerpo anti-LAG-3 es una dosis fija constante. En una realización, la dosis del anticuerpo anti-LAG-3 varía a lo largo del tiempo. Por ejemplo, el anticuerpo anti-LAG-3 puede administrarse inicialmente a una dosis alta y puede reducirse a lo largo del tiempo. En otra realización, el anticuerpo anti-LAG-3 se administra inicialmente a una dosis baja y se aumenta a lo largo del tiempo.

En otra realización, la cantidad de anticuerpo anti-LAG-3 administrada es constante en cada dosis. En otra realización, la cantidad de anticuerpo administrada varía con cada dosis. Por ejemplo, la dosis de mantenimiento (o de seguimiento) del anticuerpo puede ser superior o igual a la dosis de carga que se administra primero. En otra realización, la dosis de mantenimiento del anticuerpo puede ser inferior o igual a la dosis de carga.

En otra realización, el anticuerpo anti-LAG-3 se formula para administración intravenosa. En una realización, el anticuerpo anti-LAG-3 se administra los días 1, 15, 29 y 43 de cada ciclo.

En otras realizaciones, el anticuerpo anti-LAG-3 se administra una vez por semana, una vez cada dos o tres semanas, una vez al mes o siempre que se observe un beneficio clínico o hasta que haya una respuesta completa, una enfermedad progresiva confirmada o una toxicidad inmanejable.

Según sea necesario, puede repetirse un ciclo de administración que sea de ocho semanas. En otra realización, el tratamiento consiste en hasta 12 ciclos.

Se administran 4 dosis del anticuerpo anti-LAG-3 por ciclo de ocho semanas.

En otra realización, el anticuerpo anti-LAG-3 se administra como una primera línea de tratamiento (por ejemplo, el tratamiento inicial o primer tratamiento). En otra realización, el anticuerpo anti-LAG-3 se administra como una segunda línea de tratamiento (por ejemplo, después del tratamiento inicial o primer tratamiento, incluyendo después de la recidiva y/o cuando el primer tratamiento ha fracasado).

VI. Resultados

Las respuestas a la terapia pueden incluir los siguientes criterios:

CRITERIOS DE RESPUESTA DE LINFOMA MALIGNO DEL GRUPO DE TRABAJO INTERNACIONAL (GTI) DL 2007 (Cheson, BD, et al J Clin Oncol. 2007; 25:579)

____________ _________________________ (continuación) _________________________________ Respuesta | Definición | Masas ganglionares | Bazo, Hígado, | Médula Ósea Palabras clave: CR = remisión completa, CT = tomografía computarizada; FDG = [18F] fluorodesoxiglucosa; GTI = Grupo de Trabajo Internacional; NA = no aplicable; PD = enfermedad progresiva; PET = tomografía por emisión de positrones; PR = remisión parcial; SD = enfermedad estable; SPD = suma del producto de los diámetros.___________________________________________________

CRITERIOS DE RESPUESTA DE CLL CON MODIFICACIONES DEL GRUPO DE TRABAJO INTERNACIONAL

_____________________(GTI) DEL 2008 (Hallek M, et al, Blood 2008; 111(12):5446 - 5456)____________________ REMISION COMPLETA (CR)

• Ausencia de linfadenopatía en la exploración física y técnicas radiográficas apropiadas. Los ganglios linfáticos no deben superar un diámetro de 1,5 cm.

• Ninguna hepatomegalia o esplenomegalia en la exploración física o técnicas radiográficas apropiadas si está en un ensayo clínico.

• Ausencia de síntomas inespecíficos.

• CBC (complete blood count, hemograma completo) normal, como se muestra mediante:

- Leucocitos polimorfonucleares > 1.500/|il

- Linfocitos en sangre < 4.000/ul _________________________________________________- Plaquetas > 100.000/|il____________________________

- Hemoglobina > 11,0 g/dl (sin transfusión o eritropenia exógena.

• La aspiración y la biopsia de médula deben efectuarse después de que los resultados clínicos y de laboratorio demuestren que se han cumplido todos los requisitos indicados anteriormente, para demostrar que se ha alcanzado una CR. La médula ósea debe analizarse mediante citometría de flujo y/o inmunohistoquímica (IHC) para demostrar que carece de células B clonales de CLL. La muestra de médula debe ser al menos normocelular para la edad, siendo linfocitos < 30 % de las células nucleadas. Los ganglios linfoides deben evaluarse mediante IHC para definir si están compuestos principalmente por células T o linfocitos que no sean células de CLL o células de CLL. Los casos con células residuales de CLL por citometría de flujo o IHC convencional se definen como remisión parcial (PR). Si la médula ósea es hipocelular, debe hacerse otra determinación a las 4-6 semanas. Las muestras deben revisarse nuevamente junto con la patología anterior.

Enfermedad residual mínima (MRD); realizada mediante flujo de 4 colores de MRD, PCR de oligonucleótidos específicos de alelo con sensibilidad a 1 célula de CLL por 10.000 leucocitos.________________________________ REMISION COMPLETA con recuperación incompleta de la médula ósea (CRi) Por lo demás CR, pero que tienen anemia, trombocitopenia o neutropia persistente que parecen estar relacionadas con la toxicidad por fármacos persistente y no con la actividad de la enfermedad. El resultado a largo plazo de estos pacientes puede ser diferente al de la CR no citopénica.____________________________________________________________________________ REMISION PARCIAL (PR)

Al menos 2 de los siguientes:

• disminución > 50 % en el recuento de linfocitos de sangre periférica desde el inicio del tratamiento anterior. • reducción > 50 % en el agrandamiento del tratamiento anterior observado del bazo o del hígado.

• reducción del 50 % en el infiltrado de la médula, o de los ganglios linfoides B

• reducción > 50 % en la linfadenopatía (preferentemente por CT) como se define por lo siguiente.

REMISION COMPLETA con recuperación incompleta de la médula ósea (CRi) Por lo demás CR, pero que tienen anemia, trombocitopenia o neutropia persistente que parecen estar relacionadas con la toxicidad por fármacos persistente y no con la actividad de la enfermedad. El resultado a largo plazo de estos pacientes puede ser diferente al de la CR no citopénica.

REMISION PARCIAL (PR)

- Una disminución del tamaño del ganglio linfático del 50 % o mayor ya sea en los productos de la suma de hasta 6 ganglios linfáticos, o en el diámetro más grande del(de los) ganglio(s) linfático(s) agrandado(s) detectado(s) antes de la terapia.

- Sin aumento en ninguno de los ganglios linfáticos, y sin nuevo ganglio linfático agrandado. En los ganglios linfáticos pequeños (< 2 cm), un aumento inferior al 25 % no se considera que sea significativo.

- Una reducción en el agrandamiento del tratamiento anterior observado del bazo o del hígado del 50 % o mayor, detectado (preferentemente) mediante tomografía computarizada (CT).

Al menos uno de los siguientes:

• Leucocitos polimorfonucleares > 1.500/|il o mejora del 50% sobre el valor inicial sin necesidad de factores de crecimiento exógenos.

• Plaquetas > 100.000/|il o mejora del 50 % sobre el valor inicial.

• Hemoglobina >11,0 g/dl o mejora del 50 % sobre el valor inicial sin transfusiones___________________________ ___________________________________________ (continuación)___________________________________________ ENFERMEDAD PROGRESIVA (PD)

Al menos uno de los siguientes:____________________________________________________________________ • Aparición de cualquier nueva lesión, tal como ganglios linfáticos agrandados (> 1,5 cm), esplenomegalia de nueva aparición, hepatomegalia de nueva aparición u otros infiltrados de los órganos.

• Un aumento > 50 % en el diámetro determinado más grande de cualquier sitio previo. Un ganglio linfático de 1 a 1,5 cm debe aumentarse en el 50 % o más hasta un tamaño más grande que 1,5 cm en el eje más largo. Un ganglio linfático de más de 1,5 cm debe aumentarse hasta más de 2,0 cm en el eje más largo.

• Un aumento del 50 % o mayor en la suma del producto de los diámetros de los ganglios múltiples.

• aumento > 50 % en el tamaño del hígado o el bazo.

• aumento > 50 % en el número absoluto de linfocitos circulantes con > 5.000 linfocitos B por microlitro.

• Transformación a una histología más agresiva (por ejemplo, síndrome de Richter). Siempre que sea posible, este diagnóstico debe establecerse mediante biopsia del ganglio linfático.

• Durante la terapia, las citopenias no pueden utilizarse para definir el progreso de la enfermedad. Después del tratamiento, el progreso de cualquier citopenia (citopenia no relacionada hasta autoinmunitaria) se documenta mediante:

a. una disminución de los niveles de Hb en > 20 g/l (2 g/dl) o hasta < 100 g/l (10 g/dl), o

b. una disminución de los recuentos de plaquetas en más del 50 % o menor que 100 x 109/l (100.000/|il), lo cual ocurre al menos 3 meses después del tratamiento, que define el progreso de la enfermedad, si la biopsia de la médula demuestra un infiltrado de __________________________________________ células clonales de CLL.___________________________________ ENFERMEDAD ESTABLE (SD)

Sujetos que no han alcanzado una CR o una PR o que no han mostrado PD.________________________________ RECIDIVA: se define como un paciente que ha alcanzado previamente los criterios anteriores (“Remisión completa”, “Remisión parcial”) de una CR o PR, pero que después de un período de 6 o más meses, demuestra indicios de progresión de la enfermedad (véase la descripción anterior de enfermedad progresiva)________________________

Los pacientes tratados de acuerdo con los métodos descritos en el presente documento experimentan, preferentemente, una mejora en al menos una señal de la malignidad. En una realización, la mejora se mide por una reducción en el número de células malignas. En otra realización, puede utilizarse un hemograma completo y/o frotis de sangre para evaluar la capacidad de respuesta a una terapia. En otra realización, puede utilizarse una biopsia de un ganglio linfático y/o una biopsia de médula ósea para evaluar la capacidad de respuesta a una terapia.

En una realización, el paciente tratado muestra una respuesta completa (CR), una respuesta parcial (PR), una enfermedad estable (SD), una enfermedad completa relacionada con el sistema inmunitario (irCR), una respuesta parcial relacionada con el sistema inmunitario (irPR), o una enfermedad estable relacionada con el sistema inmunitario (irSD). En otra realización, el paciente tratado experimenta una disminución en la tasa de crecimiento de las células malignas, es decir, una supresión del crecimiento de las células malignas. En otra realización, la recidiva de las células malignas puede prevenirse o retrasarse y en cierta medida, uno o más de los síntomas asociados al cáncer, pueden aliviarse.

En otras realizaciones, la administración de cantidades eficaces de los anticuerpos anti-LAG-3 para su uso en los métodos de la invención produce al menos un efecto terapéutico seleccionado del grupo que consiste en una reducción del número de células malignas que aparecen con el tiempo, la remisión completa, la remisión parcial o que la enfermedad sea estable. En otras realizaciones adicionales, los anticuerpos anti-LAG-3 para su uso en los métodos de la invención producen una tasa de beneficio clínico comparable (CBR = CR PR SD > 6 meses) mejor que la conseguida con un anticuerpo anti-LAG-3 en comparación con otro régimen terapéutico. En otras realizaciones, la mejora de la tasa de beneficio clínico es de aproximadamente 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o mayor, en comparación con otro régimen terapéutico.

VII. Kits y Formas Farmacéuticas Unitarias

En el presente documento también se desvelan kits que incluyen una composición farmacéutica que contiene un anticuerpo anti-LAG-3, tal como BMS-986016, y un transportador farmacéuticamente aceptable, en una cantidad terapéuticamente eficaz, adaptados para su uso en los métodos anteriores. Opcionalmente, los kits también pueden incluir instrucciones, por ejemplo, que comprenden programas de administración, para permitir que un facultativo (por ejemplo, un médico, personal de enfermería o un paciente) administre la composición contenida en el mismo para administrar la composición a un paciente que tiene cáncer (por ejemplo, un tumor sólido). El kit también puede incluir una jeringa.

Opcionalmente, los kits incluyen envases múltiples monodosis de las composiciones farmacéuticas que contienen, cada uno de ellos, una cantidad eficaz del anticuerpo anti-LAG-3 para una sola administración de acuerdo con los métodos proporcionados anteriormente. En los kits también pueden incluirse instrumentos o dispositivos necesarios para la administración de la(s) composición(es) farmacéutica(s). Por ejemplo, un kit puede proporcionar una o más jeringas precargadas que contengan una cantidad del anticuerpo anti-LAG-3.

En una realización, la presente divulgación proporciona un kit para el tratamiento de una neoplasia maligna hemática en un paciente humano, comprendiendo el kit:

(a) una dosis de un anticuerpo anti-LAG-3 que comprende los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena pesada que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 3, y los dominios de CDR1, CDR2 y CDR3 de la región variable de cadena ligera que tienen la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 5; y

(b) instrucciones para usar el anticuerpo anti-LAG-3 en cualquiera de los métodos y los regímenes de dosificación clínica descritos en el presente documento.

Los siguientes ejemplos son meramente ilustrativos y no deben interpretarse como limitantes del alcance de esta divulgación en modo alguno ya que muchas variaciones y equivalentes serán evidentes para los expertos en la materia al leer la presente divulgación.

EJEMPLOS

Ejemplo 1: Farmacología preclínica del anticuerpo anti-LAG-3 (BMS-986016)

Anticuerpo Anti-LAG-3. BMS-986016

BMS-986016 es un anticuerpo completamente humano específico de LAG-3 humano que se aisló de ratones transgénicos inmunizados que expresaban genes de inmunoglobulina humana. Dicho anticuerpo se expresa como un anticuerpo de isotipo IgG4 que incluye una mutación estabilizadora (S228P) en la región bisagra para la unión atenuada con el receptor de Fc para reducir o eliminar la posibilidad de destruir células diana mediada por anticuerpos o por el complemento. Las secuencias de aminoácidos de cadena pesada y ligera de BMS-986016 se proporcionan en los SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente.

La capacidad de BMS-986016 para unirse al antígeno LAG-3 humano recombinante se determinó usando Biacore y ensayo inmunoenzimático ligado a enzimas (ELISA). La unión a transfectantes de LAG-3+ de ser humano y de primate y a células T de ser humano o de primate activadas, se midió usando citometría de flujo y análisis de Scatchard. BMS-986016 se une a LAG-3 de ser humano con alta afinidad (Kd = 0,12-0,5 nM), e inhibe la unión de LAG-3 a células que expresan su ligando, el MHC de clase II (CI50, 0,67 nM). BMS-986016 se une a LAG-3 de cynomolgus en células de c Ho transfectadas y en células T de cynomolgus activadas con una afinidad más baja (CE50, 21,5-34,3 nM) que a células T humanas activadas. Una alta concentración de BMS-986016, en ausencia de coestimulación secundaria, no suscita una respuesta medible de citocinas de células de sangre periférica humana cultivadas ni el fármaco actúa como mediador en la destrucción medible de las células diana dependiente de anticuerpos o del complemento. BMS-986016 promueve la activación de un hibridoma de células T de ratón específico de antígeno que expresan LAG-3 humano en cocultivo con una célula presentadora de antígeno positiva al MHC de clase II. Además, BMS-986016 potencia la activación de células T humanas en ensayos de estimulación con superantígenos cuando se añade solo o en combinación con nivolumab (anticuerpo anti-PD-1).

Ejemplo 2: Toxicidad del anticuerpo anti-LAG-3 (BMS-986016)

Se realizaron los siguientes estudios toxicológicos preclínicos:

A. Estudio de toxicidad combinada intravenosa de cuatro semanas conforme a GLP (Good Laboratory Practice, prácticas correctas de laboratorio) en monos Cynomolgus con una recuperación de 6 semanas con BMS-986016 y nivolumab

Los resultados relativos al tratamiento con BMS-986016 como un agente único fueron los siguientes:

1. El agente único BMS-986016 administrado hasta 100 mg/kg/semana no dio lugar a cambios adversos.

2. Se consideró que la NOAEL (non-observed adverse effect level, dosis máxima sin efecto adverso observado) del agente único BMS-986016, era de 100 mg/kg/semana (ABC[0-168h] promedio = 474,000 |igh/ml). Las dosis administradas (100 mg/kg de BMS-986016) son > 10 veces más altas que las dosis máximas propuestas para el estudio actual.

B. Estudio de reactividad cruzada tisular con BMS-986016 conforme a GLP en tejidos seleccionados de ser humano y de mono Cynomolgus.

Los resultados relativos a la reactividad cruzada fueron los siguientes:

1. Se observó una tinción positiva con BMS-986016-FITC en la membrana plasmática o en los gránulos de la membrana plasmática de los siguientes tejidos humanos: leucocitos mononucleares de la vejiga urinaria, glóbulos rojos, colon-intestino grueso, ojo, esófago, intestino delgado, estómago, riñón, pulmón, ganglio linfático, placenta, glándula salival, piel, bazo, timo, amígdalas, útero-cuello uterino y el útero-endometrio; y células hematopoyéticas de la médula ósea. Además, la tinción con BMS-986016-FITC se observó en el citoplasma del epitelio de las células endocrinas de la hipófisis humana. Dentro del panel limitado de tejidos evaluados del mono cynomolgus, se observó tinción con BMS-986016-FITC en la membrana plasmática o en los gránulos de la membrana plasmática de los leucocitos mononucleares del bazo.

2. Con los informes científicos de células que expresan LAG-3 en los centros germinales y las zonas de células T interfoliculares de los tejidos linfoides normales humanos (ganglios linfáticos, amígdalas, bazo, timo, médula ósea y tejido linfoide asociado a la mucosa) y que tienen la morfología y distribución de los linfocitos (Huard, et al, Inmunogenetics 1994; 39(3):213-217), se pronosticó la tinción de leucocitos mononucleares y de células hematopoyéticas con BMS-986016-FITC en este estudio (en los tejidos de ser humano y de mono cynomolgus).

3. Dado que en un estudio piloto de reactividad cruzada en tejido el ARNm de LAG-3 se expresó en la hipófisis humana y que se observó tinción de LAG3.1-G4P-FITC en la adenohipófisis de la hipófisis humana, también se pronosticó tinción de BMS-986016-FITC del citoplasma del epitelio de las células endocrinas de la hipófisis humana y de los gránulos citoplasmáticos. Aunque no se esperaba que BMS-986016 tuviese acceso al compartimiento citoplasmático in vivo y los estudios de toxicología de dosis repetidas en monos no mostraron efectos en la glándula hipofisaria, estos hallazgos pueden ser de importancia clínica y se verificarán.

C. Liberación de atocinas in vitro y evaluación de la activación de linfocitos con BMS-986016 usando células mononucleares de sangre periférica humana

Los resultados relativos a la liberación de citocinas in vitro y la evaluación de la activación de los linfocitos fueron los siguientes:

1. BMS-986016 no indujo la liberación de citocinas cuando se presentaba a células mononucleares de sangre periférica (PBMC) humana, independientemente de la concentración, el donante o el tiempo de incubación. Los niveles de citocinas observados estuvieron ya sea en o cerca de los límites inferiores de cuantificación del ensayo sin indicios de dependencia de la dosis o del patrón a través de los donantes (IL-1 p, IL-2, IL-5, IL-10, IL-12p70, y IFN-y) o en general se superponen con los niveles de citocinas de las PBMC incubadas con controles negativos (IL-6, IL-8, TNF-a).

2. En consonancia con la ausencia de liberación de citocinas, no hubo indicios de que BMS-986016 indujese la activación de las células T o NK, mediada por la expresión en la superficie de c D25 y CD69. Los niveles de expresión de estos marcadores en las células T y NK después de la estimulación con BMS-986016 fueron similares a los observados tras la estimulación con controles negativos.

En general, estos datos indican que BMS-986016 no posee un potencial agonista para inducir la activación de células T ni NK o la liberación de citocinas.

Ejemplo 3: Metabolismo preclínico y características farmacocinéticas del anticuerpo anti-LAG-3 (BMS-986016)

De acuerdo con la normativa reguladora de los productos farmacéuticos derivados de la biotecnología (Normativa Tripartita Armonizada del ICH (International Council for Harmonisation, Consejo Internacional de Armonización, Evaluación de la Seguridad preclínica S6(R1) de los Productos Farmacéuticos derivados de la biotecnología. International Conference on Harmonisation (Conferencia Internacional de Armonización, 2011)), no se han realizado estudios de metabolismo con BMS-986016 en animales. La degradación in vivo esperada de los anticuerpos monoclonales (mAbs, monoclonal antibodies) es para péptidos y aminoácidos pequeños a través de las rutas bioquímicas que son independientes de las enzimas del citocromo P450.

BMS-986016 demostró propiedades farmacocinéticas (PK) favorables en monos cynomolgus. Tanto de los estudios de PK IV de una sola dosis y de dosis repetidas, BMS-986016 se descompone biexponencialmente y la exposición fue aproximadamente proporcional a la dosis. La depuración sistémica (CLTp) varía de 0,12 a 0,22 ml/h/kg y su semivida terminal (SEMIVIDA-T) de 133 a 414 horas. El volumen de distribución en equilibrio (Vss, steady state volume of distribution) fue de 62 a 72 ml/kg, lo que sugiere una distribución limitada fuera del plasma. Se detectaron anticuerpos anti-BMS-986016 en algunos monos, pero la presencia de anticuerpos anti-BMS-986016 pareció no tener ningún impacto sobre la exposición a BMS-986016.

Ejemplo 4: Ensayo de fase 1 en pacientes que tienen CLL y linfomas recidivantes o refractarios

Para demostrar la eficacia de la administración de BMS-986016 como tratamiento, se realizó un ensayo de fase 1 del anticuerpo anti-LAG-3 (BMS-986016) en pacientes con CLL y linfomas recidivantes o refractarios.

Se trata de un estudio abierto de fase 1 de BMS-986016 administrado como agente único a sujetos con CLL y linfomas recidivantes o refractarios. El estudio se llevará a cabo en 2 partes. La parte A consiste de un diseño de aumento progresivo de la dosis de 3 3 3 en sujetos con CLL, HL y NHL recidivantes o refractarios. La parte B consiste en una ampliación de cohorte en 4 poblaciones restringidas por la enfermedad de aproximadamente 12 sujetos cada una (Figura 1). El tratamiento en la parte B comenzará cuando en la parte A se haya determinado la MTD (dosis máxima tolerada) (o la MAD (dosis máxima administrada) si no se estableció la MTD).

Los sujetos completarán hasta 3 períodos de estudio: Cribado (hasta 28 días), tratamiento (hasta un máximo de doce ciclos de 8 semanas de terapia de estudio), y Seguimiento clínico (135 días después de la última dosis del fármaco de estudio; en casos específicos, podrá considerarse un período de seguimiento más prolongado si aparece una señal de eficacia). Las WOCBP (women of childbearing potential, mujeres con posibilidad de quedar embarazadas), tendrán evaluaciones de seguimiento adicionales hasta el día 165 con respecto a pruebas de embarazo domiciliarias.

El período de tratamiento consiste en hasta doce ciclos de tratamiento de 8 semanas. Cada ciclo de tratamiento comprende 4 dosis de BMS-986016 administrada los días 1, 15, 29, y 43. A los sujetos se les permitirá continuar con el tratamiento del estudio hasta la primera aparición de cualquiera de: (1 ) cumplimiento de los criterios de interrupción, (2) finalización del número máximo de doce ciclos de 8 semanas, (3) enfermedad progresiva (PD) confirmada o (4) deterioro clínico. Los sujetos que interrumpan el tratamiento entrarán en un periodo de seguimiento clínico de 135 días (Figura 2).

Los exámenes físicos, las mediciones de las constantes vitales, los electrocardiogramas (ECG) de 12 derivaciones, la pulsioximetría y las evaluaciones clínicas de laboratorio, se llevarán a cabo en momentos seleccionados a lo largo del intervalo de dosificación. A lo largo del estudio los AA (acontecimientos adversos) se verificarán estrechamente. Para el análisis farmacocinético (PK), la sangre se extraerá después de iniciar la administración del fármaco de estudio.

A los sujetos se les permitirá continuar la terapia durante un máximo de hasta doce ciclos de 8 semanas, hasta que se confirme la PD o hasta el cumplimiento de los criterios de interrupción como se describe en el presente documento. Los sujetos pueden permanecer en el estudio durante un total de hasta aproximadamente 2,3 años, incluyendo un periodo de exploración de 28 días, hasta doce ciclos de 8 semanas de tratamiento y un periodo de seguimiento clínico de 135 días. Se espera que la duración total del estudio sea de aproximadamente 4,3 años desde el momento de la primera visita del primer sujeto hasta el seguimiento necesario del último sujeto inscrito.

Parte A: Aumento progresivo de la dosis

En la parte A, se utilizará un diseño de 3 3 3 para evaluar la seguridad de BMS-986016. Los niveles de dosis evaluados durante el aumento progresivo de la dosis se proporcionan en la Figura 1 y en Tabla 1 (expuestas más adelante). En cada cohorte de la dosis, se tratará inicialmente a tres sujetos; en la cohorte 1 de la dosis, los 3 primeros sujetos se denominarán sujetos centinela y comenzarán el tratamiento con al menos 5 días de diferencia. Los sujetos de las cohortes posteriores no tendrán que respetar el intervalo de 5 días entre las fechas de inicio del tratamiento.

El aumento progresivo de la dosis dependerá del número de DLT (toxicidades limitantes de la dosis) sufridas durante el intervalo de evaluación de DLT según lo determinado por el monitor médico e investigadores. El intervalo de evaluación de DLT comienza el primer día de tratamiento y continúa durante 8 semanas, es decir, hasta el día 56 del primer ciclo.

Para el aumento progresivo de la dosis en la parte A se procederá de la siguiente manera:

- Si ninguno de los 3 primeros pacientes evaluables en una cohorte de la dosis sufre una DLT dentro del intervalo de evaluación de DLT, entonces los 3 siguientes sujetos serán tratados en la siguiente cohorte de dosis más alta. - Si 1 de los 3 primeros sujetos evaluables en una cohorte sufre una DLT dentro del intervalo de evaluación de DLT, entonces 3 sujetos adicionales serán tratados en esa cohorte de dosis.

- Si hay más de 1 de los 6 primeros sujetos evaluables que sufren una DLT durante el intervalo de evaluación de DLT, entonces los 3 siguientes sujetos serán inscritos en la siguiente cohorte de dosis más alta.

- Si 2 de los 6 primeros sujetos evaluables en una cohorte sufren una DLT, esta cohorte se ampliará a 9 sujetos evaluables.

- Si > 2 de los 3 primeros pacientes evaluables, > 3 de los 6 primeros sujetos evaluables o > 3 de los 9 primeros sujetos evaluables en una cohorte sufren una DLT dentro del intervalo de evaluación de DLT, este nivel de dosis habrá superado la MTD y se dará por terminado el aumento progresivo de la dosis.

continuación

Parte B: Aumento progresivo de la Cohorte

El propósito de ampliar la cohorte es reunir información adicional de seguridad, tolerabilidad, eficacia preliminar, PK, y características farmacodinámicas con relación a BMS-986016. La dosis seleccionada para la Parte B no superará la MTD (o la MAD si la MTD no se ha determinado) en la parte A, puede ser una dosis intermedia a las dosis evaluadas en la parte A, y puede incorporar la evaluación de otros datos, incluidos los efectos tóxicos retardados y PK y los datos farmacodinámicos de la Parte A. El modelado también puede usarse para ayudaren cuanto a informar sobre selección de la dosis evaluada en la Parte B.

Cuatro cohortes de ampliación estarán restringidas a los tipos de tumores enumerados en la Figura 1 y en la Tabla 2 (expuestas más adelante). La evaluación continua de los acontecimientos de toxicidad se evaluará a lo largo de la inscripción en las cohortes de ampliación. Si en cualquier momento, la tasa agregada de las toxicidades relacionadas con el tratamiento que cumplan los criterios de DLT supera el 33% en todos los sujetos tratados en las ampliaciones de cohorte de la Parte B, los descubrimientos se comentarán con el monitor médico y con los investigadores; la inscripción adicional puede interrumpirse. Dependiendo de la naturaleza y del grado de la toxicidad y después de evaluar la proporción de riesgo:beneficio, la dosis de todas las cohortes o de las cohortes seleccionadas puede reducirse.

________Tabla 2: Tipos de Tumores admisibles en la Parte B - Expansión de la Cohorte________ Tipo de Tumor3______________________________ Total de Sujetos___________________________ Leucemia Linfocítica Crónica (CLL)_______________ aproximadamente 12_______________________ Linfoma Difuso de Células B Grandes (DLBCL)_____ aproximadamente 12_______________________ Linfoma de Células del Manto (MCL)______________ aproximadamente 12_______________________ Linfoma de Hodgkin (HL)________________________ aproximadamente 12_______________________ Total_________________________________________ aproximadamente 48_______________________ a Ningún sujeto de la Parte B recibirá tratamiento con los regímenes de anticuerpos moduladores de células inmunitarias (ICMAR), tal como, pero sin limitación, anticuerpos anti- CTLA-4, anti-PD-1, anti-PD-L1, anti-PD-L2, anti-KIR, anti-CD137 y/o anti-OX40, excepto para la terapia con anticuerpos anti-CD20, alemtuzumab o brentuximab.________________________________________________________

Toxicidades limitantes de la dosis

Con el fin de orientar las decisiones relativas al aumento progresivo de la dosis en la parte A, la toxicidad limitante de la dosis (DLT) se determinará según la incidencia, intensidad y duración de los acontecimientos adversos (AA) que se consideren relacionados con el tratamiento del estudio. El intervalo de evaluación de DLT comienza el primer día de tratamiento y continúa hasta el día 56 del primer ciclo (es decir, 8 semanas). Los acontecimientos adversos se clasifican de acuerdo con los criterios comunes de terminología de acontecimientos adversos (CTCAE) v4.0 del Instituto Nacional del Cáncer (NCI). A efectos de la gestión del sujeto, cualquier AA que cumpla los criterios del DLT independientemente del ciclo en el que se produzca, dará lugar a la interrupción del tratamiento.

El aumento progresivo de la dosis depende del número de DLT sufridas durante el intervalo de evaluación de la DLT, determinado por monitor médico y los investigadores. No se permite el aumento progresivo de la dosis intrasujetos. Los sujetos que reciben al menos 1 dosis del fármaco de estudio durante el intervalo de evaluación de 8 semanas serán considerados evaluables para la determinación de la DLT. Los sujetos que abandonen el estudio durante el intervalo de evaluación de la DLT por razones distintas de una DLT y/o para quienes los datos de seguridad no están disponibles durante todo el intervalo de evaluación de DLT pueden reemplazarse con el mismo nivel de la dosis. En el caso de que no pueda administrarse una perfusión en una visita programada durante el intervalo de evaluación de la DLT, ésta debe administrarse tan pronto como sea posible. Si el retraso es de entre 1 y 7 días, deben realizarse los procedimientos de la visita originalmente programada y los sujetos se considerarán evaluables para la determinación de la DLT. Si el retraso es superior a 7 días, se considerará que la dosis se omite y no se sustituirá. Los sujetos con un retraso de más de 7 días no se considerarán evaluables para la determinación de la DLT. Los sujetos no evaluables podrán ser sustituirse al mismo nivel de dosis.

Duración del Estudio

Se permitirá que los sujetos continúen con la terapia hasta doce ciclos de 8 semanas, si se confirma la PD, o hasta que cumplan los criterios de interrupción. Los sujetos pueden permanecer en el estudio durante un total de hasta aproximadamente 2,3 años, incluido un periodo de selección de 28 días, hasta doce ciclos de 8 semanas de tratamiento, un periodo de seguimiento clínico de 135 días, y para las WOCBP, pruebas de embarazo domiciliarias adicionales hasta el día 165. Se espera que la duración total del estudio sea de aproximadamente 4,3 años desde el momento de la primera visita del primer sujeto hasta el seguimiento necesario del último sujeto inscrito.

Número de sujetos

Aproximadamente 84 sujetos pueden recibir la dosificación (aproximadamente 36 sujetos durante el aumento progresivo de la dosis y hasta 48 sujetos en la ampliación de la cohorte).

Población de estudio

Hombres y mujeres con confirmación histológica o citológica de CLL, linfoma de Hodgkin o linfoma no de Hodgkin (incluyendo linfomas de células T y B) con recidiva después de un tratamiento previo o que no han respondido al tratamiento previo y que cumplan con todos los criterios de inscripción, serán admisibles para participar en el estudio. Aumento progresivo de la dosis (Parte A)

Se admitirán sujetos adultos con linfoma no de Hodgkin (NHL), linfoma de Hodgkin (HL) o leucemia linfocítica crónica (CLL) recidivantes o refractarios.

Ampliación de la cohorte (Parte B)

Durante la ampliación de la cohorte se permitirán cuatro grupos restringidos por enfermedad según la Tabla 2 (anterior).

Partes A y B

El recuento de neutrófilos debe ser > 750/|il y el recuento de plaquetas > 50.000/ml. Están excluidos los sujetos con linfoma primario cutáneo, enfermedades linfoproliferativas asociadas a deficiencias inmunitarias primarias y linfomas asociados a infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH). También se excluyeron los sujetos con trastornos autoinmunitarios.

Las mujeres no deben estar en periodo de gestación o lactancia. Las WOCBP deben tener una prueba de embarazo con resultado negativo 24 horas antes de recibir su primera dosis de medicamento del estudio. Las WOCBP deben aceptar seguir las instrucciones del método o de los métodos anticonceptivos durante un total de 24 semanas después de su última dosis del fármaco en investigación (un período de 30 días más el tiempo necesario para que el fármaco en investigación se someta a 5 semividas (es decir, un total de 165 días o 24 semanas).

Los hombres que son sexualmente activos con WOCBP deben aceptar seguir las instrucciones del método o de los métodos anticonceptivos basándose en la información del Apéndice 3 durante un total de 33 semanas después de su última dosis del fármaco en investigación (un período de 90 días más el tiempo necesario para que el fármaco en investigación se someta a 5 semividas (es decir, un total de 225 días o 33 semanas).

Las DLT hepática, no hemática y hemática se definen individualmente como se indica a continuación.

1. DLT hepática

Cualquiera de los siguientes acontecimientos relacionados con el fármaco se considerarán como una DLT hepática:

• Alanina aminotransferasa (ALT) o aspartato aminotransferasa (AST) > 8 x ULN, independientemente de la duración • ALT o AST > 5 X y < 8 X ULN, que no regresa a < Grado 1 a las 2 semanas a pesar de la intervención médica • Bilirrubina total > 5 X ULN

• ALT o AST > 3 X ULN y bilirrubina total simultánea > 2 X ULN

2. DLT No Hemática

Cualquiera de los siguientes acontecimientos relacionados con el fármaco se considerarán como una DLT no hemática:

• Dolor ocular de grado 2 o reducción de la agudeza visual que requiera tratamiento sistémico

• Dolor ocular de grado 2 o reducción de la agudeza visual que no responda a la terapia tópica y que no mejore al grado 1, en el transcurso de 2 semanas desde el inicio de la terapia tópica

• Toxicidad no hepática o no hemática > grado 3 con las excepciones indicadas a continuación. Los siguientes acontecimientos no hemáticos de grado 3 no serán considerados como DLT:

• Anomalía electrolítica de grado 3 que dura < 72 horas, no es clínicamente complicada, y se resuelve espontáneamente o responde a la intervención con medicamentos convencionales

• Aumento de la amilasa o lipasa de grado 3 que no está asociado a síntomas, manifestaciones clínicas o pruebas radiográficas de pancreatitis

• Náuseas o vómitos de grado 3 que duran < 48 horas y se resuelve a < grado 1 ya sea espontáneamente o con la intervención de medicamentos convencionales

• Fiebre de grado 3 que se resuelve a las 72 horas y que no está asociada a compromiso hemodinámico (incluyendo hipotensión, o pruebas clínicas o de laboratorio de deterioro por perfusión específico de órganos)

• Reagudización tumoral de grado 3 (que se define como dolor, irritación o sarpullido que se localiza en lugares donde se sabe o se sospecha que hay un tumor)

• Cansancio de grado 3 durante menos de 7 días

3. Definición de DLT Hemática

Cualquiera de los siguientes acontecimientos relacionados con el fármaco se considerarán como una DLT hemática:

• Anemia de grado 4

• Neutropenia febril de grado 4 de cualquier duración

• Neutropenia de grado 4 que no se resuelve a grado 3 o menor en los 5 días siguientes al inicio del factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF)

• Transfusión de plaquetas o recuento de plaquetas < 10.000/|il

• Trombocitopenia de grado 3 asociada a hemorragia clínicamente significativa

• Hemólisis de grado 3

• Anemia de grado 3 en sujetos con anemia de grado < 1 al inicio del tratamiento

Los pacientes que reciben al menos 1 dosis del fármaco de estudio durante el intervalo de evaluación de 8 semanas serán considerados evaluables para la determinación de la DLT. En el caso de que el fármaco de estudio no se pueda administrar en una visita programada durante el intervalo de evaluación de la d Lt , éste debe administrarse tan pronto como sea posible. Si el retraso es de entre 1 y 7 días, los procedimientos en la visita programada originalmente se deben realizar y los pacientes se considerarán evaluables para la determinación de la DLT. Si el retraso supera los 7 días, se considerará que la dosis se omite y no será reemplazada. Los sujetos con un retraso superior a 7 días no se considerarán evaluables para la determinación de la DLT. Los sujetos no evaluables podrán sustituirse en el mismo nivel de la dosis. Los pacientes que omitieron una dosis durante el periodo de evaluación de la DLT pueden continuar con el tratamiento si el sujeto no tiene otra manera de cumplir con los criterios de interrupción permanente.

Criterios de inclusión

1. Consentimiento informado por escrito firmado

Antes de realizar cualquiera de los procedimientos relacionados con el estudio, que no se considere que formen parte del tratamiento habitual (o de referencia), el sujeto debe firmar y fechar el formulario de consentimiento informado por escrito aprobado por el IRB/IEC (Institutional Review Board/Institutional Ethics Committee, Comité institucional de Revisión/Comité de ética de la investigación).

Consentimiento para la toma de muestras de biopsia:

(i) Antes del tratamiento, los sujetos deben dar su consentimiento para que se realice (en todos los sujetos) una biopsia tumoral (por ejemplo, de ganglios linfáticos). Si clínicamente no es factible realizar una biopsia tumoral antes del tratamiento, el sujeto debe dar su consentimiento para permitir la adquisición de una muestra tumoral (por ejemplo, de tumor primario, de ganglio linfático, etc.) de archivo. No se admiten pacientes que antes del tratamiento no puedan proporcionar una biopsia tumoral reciente o una muestra tumoral de archivo. No se admiten pacientes cuya biopsia antes del tratamiento produzca una cantidad o calidad inadecuada de tejido, solo por ese motivo.

(ii) Antes del tratamiento, los sujetos deben dar su consentimiento para que se realice (en todos los sujetos) una biopsia y/o un aspirado unilateral de médula ósea y durante el tratamiento en respuesta completa (CR), respuesta parcial (PR) o enfermedad progresiva (PD), según se indique clínicamente. Los sujetos que se hayan sometido a una biopsia y/o aspirado de médula ósea una vez finalizada su última terapia no pueden utilizar estos resultados en lugar de la biopsia de la médula ósea de referencia requerida.

2. Población de referencia

(a) Los sujetos deben tener confirmación histológica o citológica de leucemia linfocítica crónica, linfoma de Hodgkin o linfoma no de Hodgkin y tener recidiva después de un tratamiento previo o no haber respondido al tratamiento previo.

(b) Aumento progresivo de la dosis, Parte A:

(i) Linfoma linfocítico crónico

(ii) Linfoma de Hodgkin

(iii) Linfoma no de Hodgkin

(c) Ampliación de la cohorte, Parte B

(i) Linfoma linfocítico crónico

(ii) Linfoma difuso de células B grandes

(iii) Linfoma de las células del manto

(iv) Linfoma de Hodgkin

(v) Mieloma múltiple

(d) Los sujetos deben tener al menos una lesión medible > 1,5 cm como se define en los criterios de respuesta al Linfoma (Cheson et al, J. Clin Oncol 2007;25(5):579-586) y CLL (Hallek et al, Blood 2008;111(12)5446-5456). Los lugares donde se localizan los tumores que se consideran medibles no deben haber recibido radioterapia previa. (e) Solo se permiten sujetos sin exposición previa a regímenes de anticuerpos moduladores de células inmunitarias (iCmAR), tales como los anticuerpos anti-CTLA-4, anti-PD-1, anti-PD-Ll, anti-PD-L2, anti-KIR, anti-CD137 o anti-OX40. Se permite terapia previa con anticuerpos anti-CD20, alemtuzumab, o brentuximab.

(f) Los sujetos deben haber progresado o ser resistentes a, al menos, una terapia estándar anterior, incluyendo radiación, inmunoterapia, quimioterapia citotóxica y terapia con anticuerpos seleccionados (anti-CD20, alemtuzumab, o brentuximab). No se consideran líneas de tratamiento distintas las siguientes: la adición de un compuesto a un régimen en curso, el reinicio del mismo régimen después de un descanso farmacológico o el cambio de terapia IV a oral.

(g) Los sujetos no son admisibles para un trasplante o cualquier terapia estándar que se sabe que prolonga o salva la vida. (Los sujetos que son admisibles para un trasplante o cualquier terapia estándar que se sabe que prolonga o salva la vida y que hayan rechazado un trasplante o cualquier terapia estándar que se sabe que prolonga o salva la vida son admisibles para el estudio.

(h) Los sujetos deben estar más de 100 días después del trasplante autólogo

(i) Estado del Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG, Grupo Oncológico Cooperativo de la Costa Este) de o a 1

(j) Esperanza de vida > 10 semanas en el momento del consentimiento informado por evaluación del investigador (k) Función orgánica adecuada tal como se define a continuación:

(i) Neutrófilos > 500/|il (estable fuera de cualquier factor de crecimiento en el plazo de 1 semana de la primera administración del fármaco de estudio)

(ii) Plaquetas > 50 X 103/|il (la transfusión para alcanzar este nivel no está permitida en el plazo de 2 semanas de la primera administración del fármaco de estudio)

(iii) Hemoglobina > 8,5 g/dl (la transfusión para lograr este nivel no está permitida en el plazo de 2 semanas de la primera administración del fármaco de estudio)

(iv) Creatinina < 1,5 X ULN o depuración de la creatinina > 40 ml/min (fórmula de Cockcroft-Gault)

(v) ALT y AST < 3 X ULN

(vi) Bilirrubina total < 1,5 X ULN (excepto sujetos con síndrome de Gilbert que deben tener la bilirrubina directa normal)

(vii) Función tiroidea normal, o estable con suplementos hormonales según la evaluación del investigador

(l) Capacidad para cumplir con el tratamiento, la PK, y la recogida de muestras farmacodinámicas y el seguimiento requerido del estudio.

(m) Reinscripción del sujeto: Este estudio permite la reinscripción de un sujeto que ha interrumpido el estudio como un fracaso previo al tratamiento (es decir, el sujeto no se ha distribuido aleatoriamente ni tratado). Si se vuelve a inscribir, el sujeto debe volver a dar su consentimiento.

Edad y estado reproductivo

(a) La edad de los hombres y las mujeres es >18 años en el momento del consentimiento informado

(b) Las mujeres con posibilidad de quedar embarazadas (WOCBP, women of childbearing potential) deben haber dado un resultado negativo en una prueba de embarazo en orina o en suero negativa (prueba de embarazo en orina: sensibilidad mínima de 25 UI/l o unidades equivalentes de gonadotropina coriónica humana [hCG]) en un plazo de 24 horas antes del inicio del fármaco de estudio.

(c) Las mujeres no debe estar proporcionando lactancia.

(d) Las WOCBP deben aceptar seguir las instrucciones del método o métodos anticonceptivos mientras durante el tratamiento con BMS-986016 más 5 semividas de BMS-986016 (135 días), más 30 días (duración del ciclo ovulatorio) durante un total de 165 días (24 semanas) después de finalizar el tratamiento.

(e) Los hombres sexualmente activos con WOCBP deben aceptar seguir las instrucciones del método o métodos anticonceptivos mientras dure el tratamiento con BMS-986016 más 5 semividas de BMS-986016 (135 días) más 90 días (duración de la renovación de los espermatozoides) durante un total de 225 días (33 semanas) después de finalizar el tratamiento.

Los investigadores deberán aconsejar a las WOCBP y a hombres que sean sexualmente activos con WOCBP sobre la importancia de la prevención del embarazo y las implicaciones de un embarazo inesperado. Los investigadores deberán informar a las WOCBP y a los hombres que sean sexualmente activos con WOCBP sobre el uso de métodos anticonceptivos sumamente eficaces. Dichos métodos tienen una tasa de ineficacia de < 1 % por año cuando se usan sistemática y correctamente.

Como mínimo, los sujetos deben aceptar el uso de 2 métodos anticonceptivos, siendo uno de ellos sumamente eficaz y el otro muy eficaz o menos eficaz.

(f) Los hombres azoospérmicos y las WOCBP sin actividad heterosexual continuada, están exentos de los requisitos anticonceptivos. Sin embargo, las WOCBP que se abstengan de actividad heterosexual continuada deberán someterse a pruebas de embarazo como se describe en este protocolo.

Criterios de Exclusión

1. Excepciones de la enfermedad de referencia

(a) Se excluyen los sujetos con linfoma primario cutáneo, con enfermedades linfoproliferativas asociadas a inmunodeficiencias primarias y con linfomas asociados a infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).

(b) Se excluyen los sujetos que se sabe o se sospecha que tienen metástasis en el sistema nervioso central (SNC) o con el SNC como el único sitio de la enfermedad activa:

(i) Los sujetos con metástasis cerebral controlada podrán inscribirse. Las metástasis cerebrales controladas se definen como aquellas que no tienen progresión radiográfica durante al menos 4 semanas después de la radiación o el tratamiento quirúrgico en el momento del consentimiento. Los sujetos deben haber dejado los esteroides durante al menos 2 semanas antes del consentimiento informado y no tener signos y síntomas neurológicos nuevos o progresivos.

(ii) Los sujetos con signos o síntomas de metástasis cerebral no son admisibles a menos que ésta se descarte mediante tomografía computarizada (TC) o resonancia magnética (RM).

2. Antecedentes médicos y enfermedades simultáneas

(a) Se excluyen los sujetos con una neoplasia maligna previa, excepto con cáncer de piel de células basales o de células escamosas tratado adecuadamente, carcinoma in situ de cuello uterino o de la vejiga, o carcinoma lobular o ductal in situ de mama. Los sujetos con otras neoplasias malignas anteriores diagnosticadas hace más de 2 años (en el momento del consentimiento informado) que hayan recibido tratamiento con intención curativa, sin indicios de enfermedad durante el intervalo y que según el investigador presenten un bajo riesgo de recidiva, serán admisibles.

(b) Los sujetos con cualquier enfermedad autoinmunitaria activa o con antecedentes o sospecha de enfermedad autoinmunitaria conocida, con la excepción de sujetos con vitíligo aislado, asma/atopia infantil resuelta, hipoadrenalismo o hipopituitarismo controlado, y pacientes eutiroideos con antecedentes de enfermedad de Grave (los sujetos con hipertiroidismo controlado deben ser negativos a los anticuerpos contra la tiroglobulina y la peroxidasa tiroidea y a la inmunoglobulina estimulante del tiroides antes de la administración del fármaco de estudio).

(c) El sujeto padece anemia hemolítica autoinmunitaria (AIHA) o trombocitopenia autoinmunitaria (ITP) que requieran dosis terapéuticas de esteroides sistémicos

(d) El sujeto se ha sometido a cualquier trasplante alogénico

(e) Una afección médica conocida o subyacente que, según el investigador o el patrocinador, podría hacer que la administración del fármaco de estudio sea peligrosa para el sujeto o pueda afectar negativamente a la capacidad del sujeto para cumplir o tolerar los procedimientos del estudio y/o la terapia del estudio, o confundir la capacidad de interpretar la tolerabilidad de BMS-986016 en los sujetos tratados

(f) Requerimiento de oxígeno suplementario a diario

(g) Enfermedad cardiovascular significativa o no controlada, incluyendo, pero sin limitación, cualquiera de lo siguiente:

(i) Infarto de miocardio o ictus/accidente isquémico transitorio (TIA) en los 6 meses previos a su consentimiento

(ii) Angina de pecho no controlada en los 3 meses previos a su consentimiento

(iii) Cualquier antecedente de arritmias clínicamente significativas (tales como taquicardia ventricular, fibrilación ventricular o taquicardia ventricular en entorchado)

(iv) Prolongación del intervalo QTc > 480 mseg

(v) Antecedentes de otras cardiopatías clínicamente significativas (es decir, miocardiopatía, insuficiencia cardíaca congestiva con clasificación funcional III-IV de la New York Heart Association (NYHA), pericarditis, derrame pericárdico significativo)

(h) Análisis de sangre positivo al VIH o síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) conocido

(i) Antecedentes de cualquier hepatitis crónica demostrada mediante:

(i) Una prueba positiva para el anticuerpo de la hepatitis A (HepA IgM). Observación: los antecedentes de infección por virus de la hepatitis A resuelta no son un criterio de exclusión.

(ii) Una prueba positiva para el antígeno superficial de la hepatitis B (HBsAg) y/o el antígeno del núcleo de la hepatitis B

(iii) Una prueba positiva para la carga vírica de la hepatitis C cualitativa (por PCR)

(j) Indicios de infección activa que requiere terapia antibacteriana, antivírica o antifúngica, sistémica < 7 días antes de iniciar la terapia con el fármaco de estudio

(k) Cualquier otra enfermedad médica aguda o crónica significativa

(l) Sujetos que no pueden someterse a una venopunción y/o tolerar un acceso venoso

(m) Cualquier otra razón médica, psiquiátrica y/o social de peso que determine el investigador.

(n) Cualquiera de los siguientes procedimientos o medicaciones:

(i) En las 2 semanas anteriores al momento del consentimiento informado:

(1) Corticosteroides sistémicos o tópicos a dosis inmunosupresoras (> 7,5 mg/día de prednisona o equivalente)

(2) Preparaciones a base de plantas medicinales

(ii) En las 4 semanas anteriores a la administración del fármaco de estudio:

(1) Cualquier fármaco en investigación o placebo

(2) Cualquier terapia contra el cáncer (quimioterapia, anticuerpo monoclonal con intención antineoplásico [por ejemplo, terapia con anticuerpos anti-CD20, anti-CD30, o con alemtuzumab], vacunas terapéuticas, radioterapia o tratamiento hormonal)

(3) Vacunas no oncológicas que contienen virus vivos

(4) Terapia de hiposensibilización alergénica

(5) Cirugía mayor

(iii) En las 6 semanas anteriores a administrar el fármaco de estudio:

(1) Nitrosureas, fludarabina

(iv) En las 10 semanas anteriores a administrar el fármaco de estudio:

(1 ) inmunoconjugados con radio o toxinas (por ejemplo, brentuximab)

Alergias y Reacciones Adversas al fármaco

(a) Antecedentes de alergia a los componentes de BMS-986016 (por ejemplo, antecedentes de reacciones graves de hipersensibilidad a los fármacos formulados con polisorbato 80)

4. Otros criterios de exclusión

(a) Presos o pacientes que están encarcelados involuntariamente

(b) Sujetos detenidos obligatoriamente para el tratamiento de una enfermedad psiquiátrica o física (por ejemplo, una enfermedad infecciosa)

(c) Incapacidad de cumplir con las restricciones y actividades/tratamientos prohibidos

Evaluaciones de seguridad

Los acontecimientos adversos se evalúan continuamente durante el estudio y durante 135 días después del último tratamiento. Los acontecimientos adversos evalúan de acuerdo con la versión 4.0 del NCI CTCAE. Los acontecimientos adversos se codifican utilizando la versión más actualizada del Medical Dictionary for Regulatory Activities (MedDRA) y se revisan para determinar su posible importancia y significado.

Evaluaciones de eficacia

Las evaluaciones de eficacia se llevarán a cabo y se notificarán en el CRD (cuaderno de recogida de datos) utilizando la evaluación de eficacia adecuada en función del tipo de tumor. Los sujetos con NHL o HL se evaluarán utilizando los criterios de respuesta revisados para el linfoma maligno (Revised Response Criteriafor Malignant Lynphoma)(Cheson et al, J. Clin. Oncol. 2007;25(5):579-586). Los sujetos con CLL se evaluarán utilizando las directrices para el diagnóstico y tratamiento de la leucemia linfocítica crónica (Guidelines for the Diagnosis and Treatment of Chronic Lymphocytic Leukemia) (Hallek et al., Blood 2008;111(12):5446-56).

Evaluaciones de eficacia secundarias

Las evaluaciones de la enfermedad se realizarán entre los días 50 y 56 de cada ciclo de tratamiento (hasta doce ciclos de tratamiento de 8 semanas) y en la visita de seguimiento de 30 días. Las respuestas tumorales serán evaluadas por el investigador para los sujetos con datos adecuados según la definición de los siguientes criterios de eficacia: • Pacientes con NHL y HL: Criterios de respuesta revisada para el linfoma maligno

• Pacientes con CLL: Guías para el Diagnóstico y Tratamiento de la leucemia linfocítica crónica

Análisis de muestras farmacocinéticas

A través de un inmunoensayo validado, el anticuerpo BMS-986016 se analizará en muestras de suero. Además, las muestras de suero seleccionadas pueden analizarse mediante un método analítico explorador que mide BMS-986016 con fines de exploración de tecnología; no se informará sobre los datos exploradores.

Evaluaciones de biomarcadores exploradores

El tejido tumoral, la médula ósea y/o el material aspirado se recogerán antes de la terapia y en puntos temporales seleccionados durante el tratamiento en todos los sujetos en las Partes A y B. La sangre periférica se recogerá antes de la terapia y en puntos temporales seleccionados durante el tratamiento de los 3 primeros sujetos inscritos en cada nivel de dosis en la Parte A y en todos los sujetos de la parte B. Si se extraen muestras de biomarcadores pero no se administra el fármaco de estudio, se conservarán las muestras. En la figura 3 se proporciona un calendario de evaluaciones farmacodinámicas.

Biomarcadores solubles

Los factores solubles, tales como citocinas, quimiocinas, receptores solubles y anticuerpos contra antígenos tumorales, se caracterizarán y cuantificarán mediante inmunoensayos en suero. Los análisis pueden incluir, pero no necesariamente se limitan a, CD25 soluble, PD-1 soluble, LAG-3 soluble y CXCL-9. Las muestras de suero recogidas también se utilizarán para la evaluación de las respuestas específicas contra el antígeno tumoral suscitadas tras el tratamiento con monoterapia para explorar cuales son los anticuerpos antitumorales que están más asociados a la respuesta clínica. Los niveles de anticuerpos contra antígenos de prueba para el cáncer se evaluaran mediante ensayos múltiples y ELISA.

Inmunofenotipificación de los materiales aspirados de PBMC y de médula ósea

La proporción de los subgrupos de linfocitos específicos y los niveles de expresión de los marcadores coestimuladores de las células T en las preparaciones de PBMc , se cuantificará mediante citometría de flujo. Los análisis pueden incluir, pero no necesariamente se limitan a, la proporción de células T, B, y NK, la proporción de subconjuntos de células T efectoras y de memoria, y los niveles de expresión de LAG-3, PD-1, PD-L1, PD-L2, ICOS, y Ki67.

Ensayos Funcionales Ex Vivo

Para explorar si nivolumab restablece la activación y función de las células T, las PBMC se aislarán y se crioconservarán. Se realizarán ensayos sobre el estado funcional de las células T efectoras, incluyendo pero sin limitación, ensayos con interferón gamma (IFN-y) y CD107.

Expresión génica de sangre periférica

El nivel de expresión de genes relacionados con la respuesta a BMS-986016 se cuantificará utilizando métodos moleculares tales como micromatrices de Affymetrix y/o análisis cuantitativo de RT-PCR en muestras de sangre entera. El análisis puede incluir, pero no necesariamente se limita a, genes asociados a rutas relacionadas inmunológicamente, tales como la activación de células T y el procesamiento y la presentación de antígenos.

Ocupación del Receptor de BMS-986016

El porcentaje de BMS-986016 unido a células inmunitarias, así como la intensidad de fluorescencia media (MFI) del fármaco unido, se cuantificarán mediante un ensayo de ocupación del receptor basado en citometría de flujo. Este ensayo se llevará a cabo en sangre periférica y, si procede, en los materiales aspirados de la médula ósea. El ensayo de ocupación del receptor proporcionará datos para determinar la cantidad y el tipo de células T con las cuales el fármaco está interactuando en diferentes compartimentos biológicos. Las muestras se tomarán antes del tratamiento para definir una referencia y en el momento de recoger el material aspirado de la médula ósea. El análisis de sangre periférica y de material aspirado de médula ósea se realizará en muestras recientes; por lo tanto, es fundamental que las muestras se envíen rápidamente después de recogerlas.

Análisis del repertorio de células T

Se ha demostrado que la baja diversidad del compartimiento de las células T periféricas se correlaciona con una pobre supervivencia global en el cáncer de mama metastásico (Manuel et al, Oncoimmunology 2012;1(4):432-440). Una teoría antigua en la inmunooncología sugiere que un entorno inmunológico diverso y activado está mejor adaptado para la erradicación del tumor en comparación con un repertorio sesgado de células T intactas y con tolerancia inducida. Para explorar si un repertorio diverso de células T es predictivo de una respuesta a la terapia, la secuenciación de ADN a alto rendimiento, de la siguiente generación, se llevará a cabo sobre ADN aislado de sangre periférica y de tejido tumoral para cuantificar la composición del repertorio de células T antes de la monoterapia y durante la misma.

Análisis de SNP

Para identificar posibles polimorfismos asociados a la seguridad y eficacia de BMS-986016, se evaluarán genes seleccionados para determinar polimorfismos mononucleotídicos (SNP, single-mononucleotide polymorphism). El análisis se limitará a los polimorfismos de la secuencia ligados a los genes y a las rutas asociadas a PD-1/PD-L1, LAG-3, y al fenotipo de células T activadas, incluyendo PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, MHC II y CTLA-4.

Medidas de biomarcadores basados en tumor

Los especímenes de biopsia tumoral (por ejemplo, de tumor primario, ganglios linfáticos) se obtendrán antes y después del tratamiento con b MS-986016 para caracterizar las poblaciones de células inmunitarias y la expresión de marcadores tumorales seleccionados.

Antes del tratamiento se tomará una biopsia tumoral (por ejemplo, de tumor primario, ganglios linfáticos) de todos los adultos que hayan dado su consentimiento. Si una biopsia tumoral previa al tratamiento no es clínicamente factible, se debe proporcionar una muestra de tejido tumoral de archivo (conservada previamente) (por ejemplo, de tumor primario, ganglios linfáticos, etc.), ya sea en un bloque fijado en formol e incluido en parafina (FFPE, formalin-fixed, paraffin-embedded) o en portaobjetos sin teñir, para realizar estudios correlativos. El informe patológico debe presentarse con la muestra de la biopsia reciente o de archivo. Si se dispone de una biopsia tanto reciente como de archivo, ambas muestras deben enviarse.

Las biopsias tumorales durante el tratamiento son opcionales y se recogerán en los sujetos que a los que se les realizó una biopsia al inicio del estudio. La biopsia puede obtenerse durante el ciclo 1, los días 50 a 56 (o antes, si se está clínicamente indicado) y de nuevo en la PD. La biopsia puede coordinarse con la obtención de imágenes de diagnóstico especificado en el protocolo.

Se realizará una biopsia y/o un aspirado de médula ósea unilateral al inicio del estudio o hasta 28 días antes de la primera dosis del fármaco de estudio en todos los sujetos. Los sujetos que hayan tenido un resultado de aspirado y de biopsia de médula ósea desde la finalización de su última terapia no podrán utilizar estos resultados de médula ósea en lugar de médula ósea de referencia requerida para este estudio. Durante el tratamiento se obtendrán muestras de biopsia y/o aspirado de médula ósea en la Cr , PR o PD, según se indique clínicamente, y pueden coordinarse con la obtención de imágenes de diagnóstico especificado en el protocolo.

Las muestras de biopsia y de médula ósea pueden usarse para las siguientes evaluaciones:

Caracterización de linfocitos infiltrantes de tumor (TIL), antígenos tumorales y positividad vírica

Para evaluar el número y la composición de los infiltrados inmunitarios, para definir los subconjuntos de células inmunitarias presentes en tejido tumoral FEPP antes y después de la exposición a la terapia, se utilizará inmunohistoquímica (IHC). Estos análisis de IHC incluirán, pero no estarán necesariamente limitados a, los siguientes marcadores: CD4, ^c D8, FOXp3, PD-1, LAG-3, y MHC II. El estado del virus de Epstein-Barr (EBV) del tumor también puede determinarse mediante ensayos que evalúan el ARN que codifica el EBV, la expresión de LMP-1 o ensayos similares. Por ejemplo, se realizó un análisis de IHC con LAG-3 humano en células humanas de amígdalas y con NHL según el siguiente protocolo, y estos resultados se muestran en las figuras 4-14B:

Equipo y Materiales

Sistema de tinción automática Leica

Sistema de tinción automática BioGenex i6000

BioCare Medical Decloaking Chamber™ Plus

Reactivos:

Xylene® (EM Science, Cat n.° UN1307)

Etanol (AAPER alcohol y Chemical Co)

AR10 (BioGenex®, Cat n.° HK057-5K)

Tampón de lavado (DAKO®, Cat n.° S3006)

Bloque de peroxidasa (Leica® Cat n.° RE71O1-CE)

Bloque de Proteína (Leica® Cat n.° RE7I02-CE)

Diluyente de anticuerpos Comment (BioGenex®, Cat n.° HK156-5K)

DAB (Leica® Cat n.° RE7190-CE)

Hematoxilina (Dako®, Cat n.° S3309)

Anticuer os:

Procedimiento:

1. El desparafinado y la rehidratación se llevaron a cabo en un sistema de tinción automática Leica utilizando xileno (2 veces, durante 5 minutos cada uno), etanol al 100 % (2 veces, durante 2 minutos cada uno), etanol al 95 % (2 veces, durante 2 minutos cada uno), etanol al 70 % (2 veces, durante 2 minutos cada uno), H2O destilada (dH2O) (durante 2 minutos);

2. La recuperación del antígeno se realizó utilizando Biocare Medical Decloaking Chamber Plus®. La solución AR10 se calentó a 105 °C (P1) durante 20 minutos, a continuación, se lleva a la siguiente etapa (P2 ventilador encendido a 95 °C; ventilador apagado a 90 °C);

3. El portaobjetos se enfrió a temperatura ambiente durante 15 minutos, se aclaró con agua (durante aproximadamente 1 minuto);

4. Los reactivos de IHC se colocaron en un sistema de tinción automática i6000;

5. Los portaobjetos se colocaron en un sistema de tinción automática i6000, que usa la pluma para prueba PAP para definir la zona tisular; y

6. La IHC se realizó con el sistema de tinción automática BioGenex i6000 utilizando el modo de investigación de la siguiente manera.

Etapas de IHC en i6000 (Kit NovoLink):

1. El "bloque de peroxidasa" se aplicó (Kit NovoLink) durante 10 minutos, seguido de aclarado con tampón de lavado de IHC (3 veces);

2. El Bloque de Proteína (Kit NovoLink) se aplicó a los portaobjetos, y se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente, después se lavó con tampón (3 veces);

3. Los anticuerpos se aplicaron a los portaobjetos y se incubaron durante 1 hora a temperatura ambiente y se lavaron con tampón (3 veces);

4. El "Bloque Post-primario" (Kit Novolink) se añadió a los portaobjetos y se incubó durante 30 minutos y se lavó con tampón (3 veces);

5. El "Polímero de NovoLink" (Kit Novolink) se añadió a los portaobjetos y se incubó durante 45 minutos;

6. Los portaobjetos se aclararon con tampón de lavado de IHC (3 veces);

7. Los sustratos cromogénicos de DAB (Kit NovoLink) se añadieron y se revelaron durante 5 minutos;

8. Los portaobjetos se lavaron aclarando con dH2O durante 5 veces a temperatura ambiente;

9. Los portaobjetos tiñeron con tinción de contraste de hematoxilina (Dako) 1:1, durante 1 minuto a temperatura ambiente;

10. Después, los portaobjetos se lavaron aclarando con dH2O (5 veces a temperatura ambiente).

Deshidratación y recubrimiento del portaobjetos:

1. Los portaobjetos se retiraron del sistema de tinción automática i6000 y se colocaron en el sistema de tinción automática Leica;

2. Los portaobjetos se deshidrataron con etanol al 70 %, etanol al 95 %, 2X etanol al 100 % (2 minutos cada uno); 3. Los portaobjetos se lavaron con xileno (2 veces en 2 minutos cada uno); y

4. Los portaobjetos se recubrieron con medio de montaje Cytoseal en el aparato de recubrimiento de portaobjetos Leica CM5030.

Carga vírica en suero

El estado de la carga vírica del virus de Epstein-Barr (EBV) y del citomegalovirus (CMV) se evaluará en suero mediante (PCR) a diferentes puntos temporales. Después, la carga vírica se correlacionará con los resultados clínicos y la expresión de los marcadores tales como CD4, CDS, FoxP3, PD-1, LAG-3 y MHC II en el tejido tumoral.

Caracterización del repertorio de células T

Como se ha descrito anteriormente, para evaluar la composición del repertorio de células T, la secuenciación del ADN se realizó en tejido tumoral antes y después del tratamiento. El ADN se aisló del bloque tumoral FFPE o de solución RNAlater o de preparaciones equivalentes.

Análisis de la expresión génica

Las biopsias tumorales y las muestras de médula ósea que se recogen en la solución RNAlater o en un fijador equivalente, se examinarán para determinar la expresión génica del ARNm mediante tecnología de micromatriz de genes Affymetrix y/o RT-PCR para detectar la expresión de los genes relacionados inmunológicamente seleccionados.

Características citogenéticas, mutaciones y marcadores tumorales

Es necesario realizar los siguientes análisis iniciales si no se han realizado previamente:

Sujetos con linfoma de Hodgkin: amplificación 9p24.1, CD30

Sujetos con CLL: del 11q, del 13q, del l7p, estado de las IGHV (cadenas pesadas de las inmunoglobulinas), CD38 y microglobulina p2

Sujetos con DLBCL: Fenotipo ABC, GCB, o inclasificable y microglobulina p2.

Los resultados de estos marcadores clínicos se correlacionarán tanto con los resultados clínicos como con el fenotipo agotado en las células T.

Recogida de muestras tumorales

1. Biopsia (tumor primario y/o ganglio linfático)

Se requiere un mínimo de 1 bloque de tejido tumoral FFPE (preferido) o un mínimo de 10 secciones no teñidas de FFPE para evaluar el estado de LAG-3, e Be R-ISH y otras evaluaciones del biomarcador. También podrían aceptarse biopsias tumorales en formalina si no se dispone de FFPE.

Las muestras de biopsia deberían obtenerse mediante escisión, incisión o con aguja gruesa. Los materiales aspirados con aguja fina u otras muestras de citología solo se permiten después comentarlo con el Supervisor Médico del laboratorio promotor.

Se recomienda fijar las muestras en formol tamponado neutro al 10 % durante 24 a 48 horas.

Si se presentan en portaobjetos, el grosor recomendado de la sección tisular es de 4 micrómetros y los portaobjetos deben cargase positivamente. Los portaobjetos deben enviarse refrigerados a 2-8 °C.

Si se toma una biopsia reciente, se recomienda un máximo de 4 biopsias con aguja gruesa. En el momento del procedimiento, se recomienda encarecidamente que un patólogo evalúe la calidad de la biopsia. El tejido tumoral obtenido de estas biopsias se dividirá por igual en muestras de FFPE y RNAlater.

El investigador, consultando con el personal de radiología, debe determinar el grado de riesgo asociado al procedimiento y considerarlo aceptable. Las biopsias pueden realizarse con anestesia local o sedación consciente. Deben seguirse las directrices institucionales para realizar con seguridad las biopsias. Se pueden realizar biopsias mediante escisión para obtener muestras de biopsia del tumor. Para obtener una muestra de biopsia, no deben realizarse procedimientos invasivos que requieran anestesia general. Sin embargo, si se realiza un procedimiento quirúrgico por una indicación clínica, el tejido tumoral sobrante puede utilizarse con fines de investigación con el consentimiento del sujeto.

2. Biopsia y/o material aspirado de médula ósea

La biopsia y/o el material aspirado de médula ósea tomados al inicio del estudio, en la CR o PR, y en la progresión, se utilizarán para evaluar el estado fenotípico y funcional de las células inmunitarias y tumorales.

La biopsia y/o el material aspirado de médula ósea se obtendrán siguiendo las normas institucionales para estos procedimientos. Las instrucciones detalladas para recoger biopsias y/o material aspirado de médula ósea se proporcionan en el Manual de Procedimientos de Laboratorio. En resumen, se requiere un mínimo de 1 bloque de tejido tumoral FFPE (preferido) o un mínimo de 10 secciones de médula ósea FFPE sin teñir y se recogerán aproximadamente 10 ml de material aspirado en un tubo con heparina sódica y se enviarán con exposición al medio ambiente. El informe de patología debe enviarse con la muestra de biopsia.

Acontecimientos adversos

Un acontecimiento adverso (AA) se define como cualquier nueva aparición o empeoramiento médico desfavorable de una afección médica preexistente en un sujeto en investigación clínica al que se le administra un producto en investigación (medicinal) y que no necesariamente tiene una relación causal con este tratamiento. Por tanto, un AA es cualquier signo desfavorable y no deseado (tal como un hallazgo anómalo de laboratorio), síntoma o enfermedad asociado temporalmente al uso del producto en investigación, ya sea si considera o no relacionado con el producto en investigación.

La relación causal con el fármaco de estudio la determina un médico y se utiliza para evaluartodos los acontecimientos adversos (AA). La relación casual puede ser una de las siguientes:

Relacionada: Existe una relación causal razonable entre la administración del fármaco de estudio y el AA.

No Relacionada: No existe ninguna relación causal razonable entre la administración del fármaco de estudio y el AA.

1. Acontecimientos adversos graves

Un acontecimiento adverso grave (AAG) es cualquier aparición médica desfavorable que en cualquier dosis:

• conduzca a la muerte

• sea potencialmente mortal (que se define como un acontecimiento en el que el paciente estuvo en riesgo de morir en el momento del acontecimiento; no se refiere a un acontecimiento que hipotéticamente podría haber causado la muerte si fuera más grave)

• requiera la hospitalización del paciente o prolongue su hospitalización existente

• ocasione una discapacidad/incapacidad persistente o significativa

• sea una anomalía congénita/defecto de nacimiento

• sea una acontecimiento médico importante (definido como uno o más acontecimientos médicos que puedan suponer una amenaza inmediata para la vida o causar la muerte o la hospitalización, pero que, según el criterio médico y científico adecuado, puede poner en peligro al sujeto o requerir una intervención (por ejemplo, médica, quirúrgica) para evitar uno de los otros resultados graves mencionados en la definición anterior). Como ejemplos de acontecimientos de este tipo se incluyen, pero sin limitación, el tratamiento intensivo en una sala de urgencias o a domicilio para el broncoespasmo alérgico; discrasias sanguíneas o convulsiones que no conducen a hospitalización. Una posible lesión hepática inducida por fármacos (DILI, drug induced liver injury) también se considera que es un acontecimiento médico importante.

La sospecha de transmisión de un agente infeccioso (por ejemplo, patógeno o no patógeno) a través del fármaco de estudio es un AAG. Aunque el embarazo, la sobredosis, el cáncer y la posible lesión hepática inducida por fármacos (DILI) no siempre son graves, según la definición reglamentaria, estos acontecimientos deben ser tratarse como AAG. Cualquier componente de un criterio de valoración del estudio que se considere que está relacionado con la terapia del estudio (por ejemplo, la muerte es un criterio de valoración, si la muerte se produjo debido a anafilaxia, esta debe notificarse) se comunicará como AAG.

Las siguientes hospitalizaciones no se consideran AAG:

- una visita a la sala de urgencias u otro departamento del hospital < 24 horas, que no dé lugar a un ingreso (a menos que se considere como un acontecimiento médico importante o potencialmente mortal) - intervención quirúrgica programada con anterioridad a la firma del consentimiento

- ingreso según el protocolo para un procedimiento médico/quirúrgico programado

- evaluación habitual de la salud que requiera ingreso durante el inicio del procedimiento/para verificar la tendencia del estado de salud (por ejemplo, una colonoscopia habitual)

- ingreso médico/quirúrgico que no sea para poner remedio a la mala salud y que esté programado antes de incorporarse al estudio. En estos casos se requiere documentación apropiada

- ingreso por otra circunstancia vital que no tenga relación con el estado de salud y que no requiera una intervención médica/quirúrgica (por ejemplo, la falta de vivienda, insuficiencia económica, descanso por prescripción médica, circunstancias familiares, razones administrativas).

Después de que el sujeto haya dado su consentimiento por escrito para participar en el estudio, se recogen todos los AAG, estén o no relacionados con el fármaco de estudio, son recolectados, incluyendo los que se cree que están asociados a los procedimientos especificados en el protocolo. Se recogen todos los AAG que se producen durante el período de cribado y en los 135 días de suspensión de la dosificación. Si procede, se recogen los AAG que se relacionen con cualquier procedimiento especificado en el protocolo posterior (por ejemplo, una biopsia de piel para seguimiento). Se hace un seguimiento de todos los AAG hasta su resolución o estabilización.

2. Acontecimientos adversos no graves

Un acontecimiento adverso no grave es un AA no clasificado como grave. La recogida de información de un AA no grave comienza al inicio del estudio del fármaco y se prolonga durante 135 días después de la interrupción de la dosificación. Se hace un seguimiento de los AA no graves hasta su resolución o estabilización, o se notifican como AAG en caso de que se agraven. El seguimiento también es necesario para los AA no graves que causan la interrupción o suspensión del fármaco de estudio y de los presentes al final del tratamiento de estudio, según sea apropiado. Todos los AA no graves identificados se registran y se describen en la página de AA no graves del CRF (cuaderno de recogida de datos) (en soporte electrónico o en papel).

Se solicita la cumplimentación de los CRF complementarios para los AA y/o anomalías de laboratorio que se notifican/identifican durante el estudio.

Determinación del tamaño de la muestra

1. Parte A: Aumento progresivo de la dosis

El tamaño de la muestra en cada dosis depende de la toxicidad observada y no se puede determinar con precisión. La parte A tendrá de 3 a 9 pacientes en cada cohorte.

2. Parte B: Ampliación de la cohorte

Un tamaño de la muestra de aproximadamente 12 pacientes por cohorte permitirá una mejor estimación de la tasa de toxicidad y proporcionará una mayor precisión en torno a las estimaciones de la eficacia preliminar. Si 3 de 12 sujetos en una cohorte (es decir, < 30 %) padecen una toxicidad, existe al menos un 90 % de confianza de que la verdadera tasa de toxicidad no sea mayor que 48 % (basándose en el intervalo de confianza del 90 % unilateral binomial exacto de Clopper-Pearson). Además, para una señal de seguridad explorada en todas las cohortes, si 14 de 48 sujetos (es decir, < 30 %) en la parte de ampliación del estudio padecen una toxicidad, existe al menos un 90 % de confianza de que la tasa real de toxicidad no supere el 40 %.

Un tamaño de muestra de aproximadamente 12 sujetos por cohorte también permite estimar la proporción de sujetos con respuesta objetiva (es decir, respuesta completa [CR] respuesta parcial [PR]) dentro de una cohorte de tal manera que el intervalo de confianza del 90 % bilateral para una tasa de respuesta objetiva podría ser del 7 % al 53 % en el caso de que 3 sujetos (25 %) tuvieran una respuesta, y del 12 % al 61 % en el caso de que 4 sujetos (33 %) tuvieran una respuesta. Además, dada una tasa de respuesta verdadera del 15% o superior, existe más de una posibilidad del 86 % de observar al menos una respuesta en una cohorte de 12 sujetos.

Poblaciones para el análisis

• Todos los sujetos inscritos: Todos los sujetos (incluyendo los descartados en el proceso de selección) que firmaron un consentimiento informado para el estudio.

• Todos los sujetos tratados: Todos los pacientes que reciban al menos una dosis completa o parcial de BMS-986016.

• Sujetos evaluables por la respuesta: Todos los sujetos tratados que tienen una evaluación de referencia evaluable de la enfermedad, y uno de los siguientes: (1 ) al menos una evaluación de la enfermedad sobre el tratamiento evaluable, (2) progresión clínica, o (3) muerte antes de la primera evaluación de la enfermedad durante el tratamiento.

• Conjunto de análisis farmacocinético: Todos los sujetos tratados y que tengan datos de PK adecuados para definir al menos un parámetro de PK válido serán incluidos en las tablas de resumen. Se mostrarán todos los datos de concentración en suero disponibles de los sujetos tratados.

• Conjunto de análisis de inmunogenicidad: Todos los sujetos que reciban una dosis completa o parcial de BMS-986016, que tengan disponible una muestra de referencia y al menos una muestra de inmunogenicidad después de iniciar el tratamiento, se incluirán en las tablas de resumen. Se mostrarán todos los datos disponibles de los sujetos tratados.

• Conjunto de análisis farmacodinámico: Todos los sujetos tratados que tengan al menos una medición válida para un determinado biomarcador, se incluirán en los resúmenes y listados de ese biomarcador.

Criterios de valoración

1. Criterios de valoración primarios

El criterio de valoración primario de este estudio de fase 1 es la seguridad, medida a nivel de estudio por la tasa de AA, AAG, muertes y anomalías de laboratorio, evaluada durante el tratamiento y durante hasta 135 días después del último tratamiento. Todos los sujetos que reciben al menos una dosis de BMS-986016 o de nivolumab serán analizados con respecto a la seguridad.

2. Criterios de valoración secundarios

a. Farmacocinética

La PK de BMS-986016 se evaluará como un objetivo secundario utilizando los siguientes criterios de valoración derivados de la concentración en suero frente a los datos de tiempo en varios puntos temporales.

Los parámetros PK que se van a evaluar incluyen:

Cmáx Concentración máxima observada en suero

Tmáx Tiempo de concentración máxima observada en suero

Cmín Concentración mínima observada en suero

Ceoinf Concentración observada al final de la perfusión

Ctau Concentración al final de un intervalo de dosificación (por ejemplo, concentración a las 336 horas)

Css,prom Concentración promedio sobre un intervalo de dosificación ([ABC(TAU)/tau] AUC(TAU) Área bajo la curva de concentración-tiempo en un intervalo de dosificación CLT Aclaramiento corporal total

Vss Volumen de distribución en equilibrio

T-HALFef AUC Semivida de eliminación eficaz que explica el grado de acumulación de ABC observado

T-HALFef Cmáx Semivida de eliminación eficaz que explica el grado de acumulación Cmáx observado

AI_AUC Índice de acumulación; relación de AUC(TAU) en equilibrio con respecto a ABC(TAU) después de la primera dosis

AI_Cmáx Índice de acumulación de Cmáx; relación de Cmáx en equilibrio hasta Cmáx después de la primera dosis

AI_Ctau Índice de acumulación de Ctau; relación de Ctau en equilibrio con respecto a Ctau después de la primera dosis

AI_Ceoinf Índice de acumulación de Ceoinf; relación de Ceoinf en equilibrio hasta Ceoinf después de la primera dosis

DF Grado de fluctuación o índice de fluctuación ([Cmáx - Ctau]/Css, prom)

Los valores de los parámetros de PK del sujeto individual se obtienen mediante métodos no compartimentales con un programa de análisis de PK validado. En los análisis se utilizan tiempos reales.

b. Eficacia

Para investigar la actividad antitumoral preliminar de BMS-986016, se evaluarán los siguientes criterios de valoración secundarios:

• Tasa de respuesta objetiva (ORR), es decir, la proporción de sujetos con una mejor respuesta global de CR o PR • Duración de la respuesta (DOR), según criterios actuales relevantes para cada tipo de enfermedad

• La tasa de supervivencia sin de progresión con punto temporal de referencia (PFSR) a los 4, 6, 8 y 10 meses de tratamiento y 30 días después de la última dosis, se evaluará como un parámetro explorador.

3. Criterios de valoración exploradores/Biomarcadores

Los criterios de valoración de los biomarcadores de sangre periférica pueden incluir mediciones tales como niveles de factores solubles, así como subconjuntos de células T caracterizados por inmunofenotipificación, en cada punto temporal programado. Los criterios de valoración de los biomarcadores de las biopsias tumorales pueden incluir, pero sin limitación, medidas tales como el estado funcional y la disposición de los linfocitos y la expresión del gen 3 de activación de linfocitos (LAG-3), el complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase II, muerte celular programada 1 (PD-1), y ligando de muerte celular programada 1 (PD-L1). También pueden proporcionarse mediciones de ocupación del receptor tal como se caracteriza en la sangre periférica, médula ósea y ganglios linfáticos (si están disponibles).

Análisis

A menos que se especifique de otra manera, los datos de seguridad de las Partes A y B se resumirán tanto: 1) en general por el nivel de la dosis y en todos los niveles de dosis y también, 2 ) por nivel de la dosis y en todos los niveles de la dosis dentro de cada tipo del tumor. Los datos de eficacia se resumirán por el nivel de la dosis dentro de cada tipo de tumor.

1. Datos demográficos y características de referencia

Se tabularán las distribuciones de las frecuencias de género y etnia. Se tabularán los datos estadísticos del resumen de la edad, peso corporal, altura e índice de masa corporal (BMI).

2. Análisis de eficacia

En sujetos con HL y NHL, los Criterios de Respuesta Revisados para Linfoma Maligno (Apéndice 1) se utilizarán para evaluar la eficacia. Para los sujetos con CLL, se utilizarán las Directrices para el diagnóstico y tratamiento de la Leucemia Linfocítica Crónica.

Se determinaran las BOR, ORR, DOR, y PFSR individuales en los puntos temporales seleccionados. Los resultados de BOR se resumirán utilizando las tablas de frecuencia. La ORR, la PFSR del punto de referencia (a los 4, 6, 8 y 10 meses de tratamiento y 30 días después de la última dosis) y los intervalos de confianza correspondientes, se calcularán para la Parte B y según los datos, podrán calcularse para la Parte A. La DOR y PFSR serán estimadas por el tipo de tumor utilizando la metodología de Kaplan-Meier. Las presentaciones exploras adicionales de eficacia pueden incluir sujetos con un aumento progresivo de la dosis como con ampliación de cohortes agrupados por el tipo de tumor, el tratamiento, la exposición previa a la inmunoterapia, o marcadores tumorales de referencia. También se generarán gráficos de cambio individual en la carga de la enfermedad a lo largo del tiempo. Los cambios individuales en los marcadores tumorales a lo largo del tiempo se pueden presentar gráficamente por el nivel de la dosis dentro de los tipos de enfermedades seleccionadas. Dependiendo de la finalidad del análisis, la eficacia se puede informar, ya sea para todos los pacientes tratados o los pacientes evaluables por la respuesta.

3. Análisis de Seguridad

Todos los sujetos que reciben terapia del fármaco de estudio se incluirán en el análisis de criterios de valoración de seguridad. Todos los AA registrados se enumerarán y se tabularán por categoría de órgano, aparato o sistemas, el término preferido, la relación con el fármaco del estudio, y el tratamiento. La codificación se realizará de acuerdo con la versión más actual de MedDRA. Las constantes vitales y los resultados de las pruebas de laboratorio clínicas seleccionadas se enumerarán y se resumirán por tratamiento. Se enumerará cualquier hallazgo significativo de la exploración física así como los resultados de las pruebas de laboratorio clínico. Se enumerarán todas las anomalías de ECG identificadas por el investigador.

4. Análisis farmacocinéticos

Los parámetros PK de BMS-986016 se calcularán utilizando análisis no compartimentales. Los datos estadísticos resumidos se tabularán con respecto a los parámetros PK de BMS-986016 por tratamiento y día/semana de estudio. Para describir la dependencia de la dosis de BMS-986016, pueden proporcionarse gráficos de dispersión de Cmáx y ABC (TAU) frente a la dosis por cada día medido. La proporcionalidad de la dosis de BMS-986016 también se puede evaluar basándose en modelo energético.

5. Análisis de biomarcadores exploradores

El efecto farmacodinámico sobre los TIL, los MIL, y otros marcadores tumorales clave en los sujetos sometidos a biopsia, se resumirá utilizando estadígrafos descriptivos y representaciones gráficas. Además, la correlación de los cambios en los TIL o MIL y la expresión de los marcadores tumorales con las medidas de los marcadores de la sangre periférica puede explorarse gráficamente, y utilizar estrategias de modelado adecuadas basadas en la disponibilidad de los datos. Las asociaciones de las mediciones de los biomarcadores de la sangre periférica o de la biopsia del tumor con resultados clínicos también pueden explorarse gráficamente y evaluarse adicionalmente según sea necesario mediante métodos tales como, pero sin limitación, regresión logística y caracterizarse con datos estadísticos apropiados.

6. Análisis de inmunogenicidad

Se proporcionará una lista de todos los datos de inmunogenicidad disponibles. Se resumirán el número y porcentaje de sujetos que cumplen las definiciones de los criterios de valoración especificados. Para examinar la posible relación entre la inmunogenicidad y la seguridad, puede explorarse una tabla que resuma la frecuencia y el tipo de los AA de especial interés a través del estado de inmunogenicidad. Además, también pueden explorarse las posibles relaciones entre la inmunogenicidad y la eficacia, los marcadores farmacodinámicos y/o la farmacocinética (PK).

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo anti-LAG-3 para su uso en un método de tratamiento de una neoplasia maligna hemática en un paciente humano, en donde el anticuerpo anti-LAG-3 comprende

(a) una CDR1 de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 7;

(b) una CDR2 de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 8;

(c) una CDR3 de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 9;

(d) una CDR1 de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 10;

(e) una CDR2 de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 11; y (f) una CDR3 de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia expuesta en el SEQ ID NO: 12, y en donde el método comprende al menos un ciclo de administración del anticuerpo anti-LAG-3, en donde el ciclo es un período de ocho semanas, en donde para cada uno de al menos un ciclo, el anticuerpo anti LAG-3 se administra de la siguiente manera:

(a) cuatro dosis de 20 mg del anticuerpo anti-LAG-3;

(b) cuatro dosis de 80 mg del anticuerpo anti-LAG-3;

(c) cuatro dosis de 240 mg del anticuerpo anti-LAG-3; o

(d) cuatro dosis de 800 mg del anticuerpo anti-LAG-3.

2. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-LAG-3 está formulado para administración intravenosa.

3. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según las reivindicaciones 1 o 2, en donde el tratamiento consiste en hasta 12 ciclos.

4. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el método comprende la administración del anticuerpo anti-LAG-3 los días 1, 15, 29 y 43 de cada ciclo.

5. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el tratamiento produce al menos un efecto terapéutico seleccionado de una reducción del número de células malignas, una inhibición de la infiltración de células malignas, una inhibición de la metástasis de células malignas, una prevención de la aparición de células malignas y una reducción de uno o más de los síntomas asociados a la neoplasia maligna.

6. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde la neoplasia maligna se selecciona de leucemia, linfoma y mieloma.

7. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la neoplasia maligna se selecciona de leucemia linfocítica crónica recidivante o refractaria y linfoma.

8. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según la reivindicación 7, en donde la neoplasia maligna se selecciona de leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma de Hodgkin (HL) y linfoma no de Hodgkin (NHL).

9. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el anticuerpo anti-LAG-3 comprende regiones variables de cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias expuestas en los SEQ ID NO: 3 y 5, respectivamente.

10. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde el anticuerpo anti-LAG-3 comprende cadenas pesada y ligera que tienen las secuencias expuestas en los SEQ ID NO: 1 y 2, respectivamente.

11. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, en donde el anticuerpo anti-LAG-3 tiene un isotipo IgG4 que incluye una mutación S228P.

12. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde el método comprende adicionalmente usar inmunohistoquímica para evaluar el número y la composición de filtrados inmunitarios para definir los subconjuntos de células inmunitarias presentes en muestras de tejido tumoral fijadas en formol e incluidas en parafina, recogidas del paciente humano antes y después de una exposición al anticuerpo anti-LAG-3.

13. El anticuerpo anti-LAG-3 para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde el método comprende adicionalmente analizar los niveles de expresión de LAG-3, PD-1, PD-L1, PD-L2, ICOS y Ki67 en una muestra de células mononucleares de sangre periférica o de material aspirado de médula ósea del paciente humano recogidos antes de una terapia con el anticuerpo anti-LAG-3.