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ES2900524T3 - Métodos para el uso de la 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) - Google Patents

Métodos para el uso de la 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) Download PDF

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ES2900524T3
ES2900524T3 ES17708104T ES17708104T ES2900524T3 ES 2900524 T3 ES2900524 T3 ES 2900524T3 ES 17708104 T ES17708104 T ES 17708104T ES 17708104 T ES17708104 T ES 17708104T ES 2900524 T3 ES2900524 T3 ES 2900524T3
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ES
Spain
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adpr
disease
dilithium
cancer
patient
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Active
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ES17708104T
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English (en)
Inventor
Robert Shalwitz
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Original Assignee
Invirsa Inc
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Publication date
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Abstract

La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR), o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma para su uso en un método para tratar, manejar o prevenir una enfermedad o afección adenovírica en un paciente, en donde dicho método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de la 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR), o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; en donde el paciente tiene, o corre el riesgo de desarrollar, la enfermedad o afección adenovírica.

Description

DESCRIPCIÓN
Métodos para el uso de la 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR)
1 Campo de la invención
La presente invención está dirigida en general a métodos para el uso de la 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR), y composiciones de la misma, para tratar, manejar o prevenir enfermedades o afecciones adenovíricas, trastornos oculares, cáncer o enfermedades o afecciones causadas. por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación.
2 Antecedentes de la invención
Se ha aceptado sin reservas que los adenovirus humanos son agentes infecciosos tanto en los individuos inmunocompetentes como en los inmunodeprimidos. Se ha demostrado que las infecciones por adenovirus humanos son la causa de una alta morbilidad y mortalidad en los individuos inmunodeprimidos. A pesar de su naturaleza potencialmente mortal, en la actualidad no existen tratamientos antivíricos autorizados contra las infecciones por adenovirus humanos (véanse Lion, 2014, "Adenovirus Infections in Immunocompetent and Immunocompromised Patients", Clin. Microbio!. Rev, 27 (3): 441-462; Martinez-Aguado et al., 2015 "Antiadenovirus Drug Discovery: Potential Targets and Evaluation Methodologies", Drug Discov. Today, 20 (10): 1235-1242). Los fármacos antivíricos de amplio espectro, tales como el cidofovir, la ribavirina y el ganciclovir, son algunas de las opciones terapéuticas subóptimas para el tratamiento de las infecciones por adenovirus; sin embargo, los resultados han sido variables. Se ha demostrado que el cidofovir exhibe actividad antivírica contra todas las especies de adenovirus humanos; sin embargo, está asociado a poca biodisponibilidad, escasa correlación de los efectos farmacológicos con la dosis prescrita y nefrotoxicidad limitante de la dosis. La ribavirina tiene actividad variable contra diferentes tipos de adenovirus humanos, y muestra la actividad máxima contra el subtipo C; sin embargo, las pruebas de la eficacia terapéutica de la ribavirina in vivo siguen siendo controvertidas a la luz de la baja concentración plasmática que se alcanza con este compuesto. También se sugiere el uso de ganciclovir para tratar las infecciones por adenovirus humanos, pero su actividad contra este virus es relativamente escasa.
La 5' -adenosina difosfato de ribosa (ADPR) es una molécula pequeña de origen natural, que también está disponible en el mercado. Se ha demostrado que la ADPR posee propiedades anticitotóxicas, a través de su identificación como un contribuyente significativo de la actividad anticitotóxica de los extractos de Lactobacillus bulgaricus; in vitro, una concentración de ADPR de tan solo 5 mg/l ofrece una inhibición medible de la citotoxicidad mediada por el factor de necrosis tumoral a (TNF-a) (Véase Johns et al., 2007, "Cytoprotective Agent in Lactobacillus bulgaricus Extracts", Current Microbiology, 54 (2): 131-135). El uso de la ADPR también se ha implicado en la prevención, retraso o tratamiento de los efectos nocivos de la radiación solar en la piel (véase la solicitud de patente internacional WO 2005/123030 A1). También se ha demostrado que la ADPR alivia eficazmente la mucositis en las personas susceptibles, sobre todo cuando se administra antes, durante o después de los tratamientos habitualmente asociados al desarrollo de la mucositis, tales como ciertas quimioterapias, radioterapias o combinaciones de las mismas (véase la solicitud de patente internacional WO 03/099297 A1).
Se ha encontrado que la ADPR y sus composiciones dadas a conocer en la presente memoria se pueden usar de manera eficaz para tratar, manejar o prevenir enfermedades o afecciones adenovíricas, trastornos oculares, cáncer, o enfermedades o afecciones causadas por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación.
3 Compendio de la invención
La presente invención da a conocer la 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR), o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma para su uso en un método para tratar, manejar o prevenir una enfermedad o afección adenovírica en un paciente, en donde dicho método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de la 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR), o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; en donde el paciente tiene, o corre el riesgo de desarrollar, la enfermedad o afección adenovírica.
En una realización, la enfermedad o afección adenovírica es una enfermedad o afección que afecta a cualquier parte del ojo, del oído, de la boca, de las vías respiratorias superiores o de las vías respiratorias inferiores.
En una realización, la enfermedad o afección adenovírica es enfermedad epibulbar, conjuntivitis, queratitis, queratoconjuntivitis, abrasión de la córnea, queratitis infecciosa ulcerosa, queratitis epitelial, queratitis estromal, uveítis, glaucoma agudo, blefaritis, otitis media, otitis externa, gingivitis, mucositis, faringitis, amigdalitis, rinitis, sinusitis, laringitis, laringotraqueítis, traqueítis, bronquitis, bronquiolitis, neumonía bronquiolar, neumonía, exacerbación del asma, exacerbación de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica o exacerbación del enfisema.
En una realización, la administración se realiza por vía de administración tópica, oral, parenteral, mucosa, por inhalación, o infusión intravenosa, intraarterial o intraductal.
En otra realización, la administración se realiza por administración tópica, en donde dicha administración tópica es para:
a. una superficie celular o tisular interna del paciente; o
b. una superficie celular o tisular externa, en donde opcionalmente la superficie celular o tisular externa es la superficie de la piel, ojo, uña, cabello u oreja.
En una realización específica, la administración tópica se realiza mediante:
a. aerosolización, pulverización, administración oral, infusión intratraqueal, intrabronquial o infusión sobre una superficie de las vías respiratorias;
b. administración oral, infusión o enema sobre una superficie del tubo digestivo; o
c. inyección o infusión parenteral en un órgano interno.
En una realización, la ADPR está en forma de una solución, suspensión, emulsión, microemulsión, nanoemulsión, jarabe, elixir, aerosol de polvo seco, aerosol de líquido, comprimido o medio de disolución.
En una realización, el medio de disolución es un comprimido, película o tira de disolución rápida.
En una realización, la ADPR se administra en combinación con otro medicamento.
En una realización, el otro medicamento es un compuesto antivírico, cidofovir, aciclovir, ganciclovir o una sal metálica. En una realización, la sal metálica es una sal de litio, zinc, cobalto o cobre, en la que opcionalmente la sal de litio es el cloruro de litio.
En una realización, la ADPR está en forma de su sal de sodio, sal de litio o sal de dilitio.
La presente invención da a conocer un compuesto que tiene la fórmula:
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o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo del mismo.
La presente invención también da a conocer una composición farmacéutica que comprende (i) ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, y (ii) uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables; en donde la cantidad de ADPR de dilitio en la composición farmacéutica está en el intervalo de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición farmacéutica. Además, la invención da a conocer la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma para su uso en un método para tratar, manejar o prevenir el cáncer en un paciente, en donde dicho método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma; en donde el paciente tiene, o corre el riesgo de desarrollar, cáncer.
En una realización, el cáncer es cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón no microcítico, cáncer de páncreas, adenocarcinoma de páncreas, glioma, glioblastoma multiforme o leucemia mieloide aguda. Además, la invención da a conocer la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma para su uso en un método para tratar, manejar o prevenir un trastorno ocular o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesión física, química, térmica o por radiación en un paciente, en donde dicho método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma; en donde el paciente tiene, o corre el riesgo de desarrollar, el trastorno ocular o la enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesión física, química, térmica o por radiación.
En la presente memoria se describen métodos para tratar, manejar o prevenir enfermedades o afecciones adenovíricas, trastornos oculares, cáncer, o enfermedades o afecciones causadas por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación, como las que se dan a conocer en la presente memoria, que comprenden administrar la 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, o una composición farmacéutica de la misma, a un paciente que tiene, o está en riesgo de desarrollar, una enfermedad o afección adenovírica, un trastorno ocular, cáncer, o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación.
En una realización específica, el compuesto de la ADPR para su uso según la invención está en forma de su sal de sodio. En una realización, el compuesto de la ADPR está en forma de su sal monosódica. En otra realización, el compuesto de la ADPR está en forma de su sal disódica.
En otra realización específica, el compuesto de la ADPR para su uso según la invención está en forma de su sal de litio. En una realización, el compuesto de la ADPR está en forma de su sal de monolitio. En otra realización, el compuesto de la ADPR está en forma de su sal de dilitio.
En determinadas realizaciones, la enfermedad o afección adenovírica es una enfermedad o afección que afecta a cualquier parte del ojo, oído, boca, vías respiratorias superiores o vías respiratorias inferiores. En una realización, la enfermedad o afección adenovírica se selecciona de, pero no se limita a ellas, enfermedad epibulbar, conjuntivitis, queratitis, queratoconjuntivitis, abrasión de la córnea, queratitis infecciosa ulcerosa, queratitis epitelial, queratitis estromal, uveítis, glaucoma agudo, blefaritis, otitis media, otitis externa, gingivitis, mucositis, faringitis, amigdalitis, rinitis, sinusitis, laringitis, laringotraqueítis, traqueítis, bronquitis, bronquiolitis, neumonía bronquiolar, neumonía, exacerbación del asma, exacerbación de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica o exacerbación del enfisema.
En determinadas realizaciones, el cáncer es cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma pulmonar no microcítico, cáncer de páncreas, adenocarcinoma de páncreas, glioma, glioblastoma multiforme o leucemia mieloide aguda.
En determinadas realizaciones, la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable, se administra por vía de administración tópica, oral, parenteral, mucosa o por inhalación. En una realización, la ADPR tal y como se describe en la presente memoria se administra por administración tópica. En una realización, la administración tópica es sobre una superficie celular o tisular interna. En una realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es mediante aerosolización, pulverización, administración oral, infusión o un método similar a cualquier superficie de las vías respiratorias. En otra realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es por administración oral, infusión o enema a cualquier superficie del tubo digestivo (por ejemplo, desde la boca hasta el ano). En otra realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es mediante inyección o infusión parenteral a cualquier órgano interno. En otra realización, la administración tópica es sobre una superficie celular o tisular externa, que incluye, pero no se limita a ellas, la piel, los ojos, las uñas, el cabello o la oreja.
En determinadas realizaciones, la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable, se administra en combinación con otro medicamento. En determinadas formas de realización, el otro medicamento es un compuesto antivírico o una sal metálica. En algunas realizaciones, el otro medicamento es cidofovir, aciclovir o ganciclovir. En una realización específica, el otro medicamento es cidofovir. En determinadas formas de realización, el otro medicamento es una sal de litio, zinc, cobalto o cobre. En ciertas realizaciones, el otro medicamento se selecciona del grupo que consiste en benzoato de litio, bromuro de litio, cloruro de litio, sulfato de litio, tetraborato de litio, acetato de litio, cloruro de zinc, sulfato de zinc, bromuro de zinc, cloruro de cobalto, bromuro de cobalto, bromuro de cobre (CuBr2), cloruro de cobre (CuCb) y sulfato de cobre. En una realización específica, el otro medicamento es cloruro de litio.
En la presente memoria se da a conocer un compuesto que tiene la fórmula:
Figure imgf000005_0001
o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo del mismo.
En un aspecto, se dan a conocer en la presente memoria composiciones farmacéuticas que comprenden (i) ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, y (ii) uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables; en donde la cantidad de ADPR de dilitio en la composición farmacéutica está en el intervalo de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición farmacéutica.
Se da a conocer en la presente memoria la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, para su uso en los métodos para tratar, manejar o prevenir el cáncer en un paciente humano, en donde dicho método comprende administrar a un paciente que tiene o está en riesgo de desarrollar cáncer una cantidad eficaz de la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma. En determinadas realizaciones, el cáncer es cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma pulmonar no microcítico, cáncer de páncreas, adenocarcinoma de páncreas, glioma, glioblastoma multiforme o leucemia mieloide aguda.
4 Breve descripción de las figuras
En la figura 1 se muestra la formación de calvass a partir del adenovirus de serotipo 3 en las células A549 y los efectos de diferentes concentraciones de ADPR (sal monosódica), nicotinamida, cidofovir y combinaciones de los mismos. La figura 2 es un gráfico que representa el efecto de la ADPR (sal monosódica) sobre la formación de calvass en las células A549, con el uso de un ensayo de inhibición de calvass de adenovirus. Específicamente, en la figura 2 se representa la cobertura de las calvass (%) y los efectos de ADPR (sal monosódica), nicotinamida y cidofovir en diversas concentraciones.
En la figura 3 se representa la formación de calvass de adenovirus de serotipo 3 en las células A549 y los efectos de ADPR (sal monosódica), LiCl y combinación de la ADPR (sal monosódica) y el LiCl a concentraciones de 0,4 mM, 1,33 mM y 4 mM.
La figura 4 es un gráfico del porcentaje de la cobertura de las calvass del adenovirus del serotipo 3 en las células A549 y los efectos de ADPR (sal monosódica), LiCl y la combinación de la ADPR (sal monosódica) y el LiCl a la concentración de 4 mM.
En la figura 5 se muestran las imágenes representativas de la conjuntiva y la córnea (lámpara de hendidura) del ojo izquierdo (OS es el ojo izquierdo y OD es el ojo derecho) para el animal P7278 del grupo 1 que no recibió tratamiento. Solo se evalúa el OS, ya que el OD tuvo una respuesta débil al adenovirus. Imagen A: día 1 (OS): Puntuación de la congestión de "2". Imagen B: día 3 (OS): Presencia de herida de la córnea profunda con un aumento de la opacidad de la córnea. Imagen C: día 7 (OS): aumento de la opacidad corneal, que incluye la zona de los rasguños corneales. Imagen D: día 10 (OS): Disminución de la opacidad de los rasguños aunque sigue presente la opacidad generalde la córnea.
En la figura 6 se muestran las imágenes representativas de la conjuntiva y la córnea (lámpara de hendidura) de ambos ojos (OD es el ojo derecho y OS es el ojo izquierdo) para el animal P7279 del grupo 2 que recibió tratamiento con el control de vehículo. Imagen A: día 1 (OD): Presencia de secreción conjuntival. Imagen B: día 1 (OD): Aumento de la opacidad alrededor de los rasguños corneales. Imagen C: día 3 (OD): Aumento de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen D: día 3 (OS): Aumento de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen E: día 7 (OD): Aumento de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen F: día 7 (OS): Aumento ligero de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen G: día 10 (OD): Disminución de la opacidad de los rasguños corneales.
En la figura 7 se muestran las imágenes representativas de la conjuntiva y la córnea (lámpara de hendidura) de ambos ojos (OD es el ojo derecho y OS es el ojo izquierdo) para el animal P7280 del grupo 3 que recibió tratamiento con el artículo de prueba (la ADPR al 2 %, sal monosódica). Imagen A: día 1 (OD): Aumento de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen B: día 1 (OS): Aumento ligero de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen C: día 3 (OD): Disminución de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen D: día 3 (OS): Disminución de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen E: día 7 (OD): Disminuyeron la opacidad de los rasguños corneales y el número de áreas inflamadas. Imagen F: día 7 (OS): Disminución de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen G: día 10 (OD): Disminución de la opacidad de los rasguños corneales. Imagen H: día 10 (OS): tercer núcleo de congestión del párpado de "2". Imagen I: día 10 (OS): Los rasguños parecían curados. Imagen J: día 10 (OS): Disminución de la opacidad de los rasguños corneales.
En la figura 8 se muestra un perfil de HPLC de la ADPR de dilitio sintetizada tal y como se describe en el ejemplo 4.
En la figura 9 se muestra un análisis de espectrometría de masas de la ADPR de dilitio sintetizada tal y como se describe en el ejemplo 4.
En la figura 10 se muestra la puntuación combinada modificada de McDonald-Shadduck (total de todas las subpuntuaciones) en los ojos de conejo al inicio el día 1 (24 horas después de la segunda escarificación corneal e inoculación con adenovirus, y justo antes del inicio del tratamiento) y después del tratamiento el día 2, el día 3 y el día 7. Los tres grupos tratados con la ADPR de dilitio (TID al 0,5 %, 1 % y 2 %) mostraron una mejoría significativa (p < 0,01) el día 3 y el día 7 en comparación con la línea de referencia del día 1. El grupo tratado con el vehículo no mostró ningún cambio significativo.
En la figura 11 se muestran las subpuntuaciones para: congestión conjuntival (imagen A) y el área de la superficie de la afectación de la córnea (imagen B) a partir de la puntuación modificada de McDonald-Shadduck en los ojos de conejo al inicio el día 1 (24 horas después de la segunda escarificación corneal e inoculación con adenovirus, y justo antes del inicio del tratamiento), y después del tratamiento el día 2, el día 3 y el día 7. Para la congestión conjuntival (imagen A), los tres grupos tratados (TID al 0,5 %, 1 % y 2 %) mostraron una mejoría significativa (p < 0,01) el día 3 y el día 7 en comparación con la línea de referencia del día 1. El grupo tratado con el vehículo no mostró ningún cambio significativo. Para la superficie de la afectación de la córnea (imagen B), los tres grupos tratados (TID al 0,5 %, 1 % y 2 %) mostraron una mejoría significativa (p < 0,05) el día 3 y el día 7 en comparación con la línea de referencia del día 1. El grupo tratado con el vehículo no mostró ningún cambio significativo .
En la figura 12 se muestra el porcentaje del crecimiento celular en relación con el control del vehículo para las células ASPC1 después del tratamiento con concentraciones crecientes de: ADPR de dilitio (imagen A), LiCl (imagen B) y SN38 (imagen C).
En la figura 13 se muestra el porcentaje del crecimiento celular en relación con el control del vehículo para las células H1437 después del tratamiento con concentraciones crecientes de: ADPR de dilitio (imagen A), LiCl (imagen B), y SN38 (imagen C).
En la figura 14 se muestra el porcentaje del crecimiento celular en relación con el control del vehículo para las células U87-MG después del tratamiento con concentraciones crecientes de: ADPR de dilitio (imagen A), LiCl (imagen B) y SN38 (imagen C).
En la figura 15 se muestra el porcentaje del crecimiento celular en relación con el control del vehículo para las células MV411 después del tratamiento con concentraciones crecientes de: ADPR de dilitio (imagen A), LiCl (imagen B) y SN38 (imagen C).
5 Descripción detallada
5.1 Definiciones
Tal y como se usa en la presente memoria, se entiende que el término "ADPR" incluye la ADPR así como una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.
Tal y como se usa en la presente memoria, el término "dosis" significa una cantidad de ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable, que se administra en un momento. Una dosis puede comprender una única forma de dosis unitaria o, como alternativa, puede comprender más de una única forma de dosis unitaria (p. ej., una sola dosis puede comprender dos comprimidos), o incluso menos de una única forma de dosis unitaria (p. ej., una sola dosis puede comprender la mitad de un comprimido).
Tal y como se usa en la presente memoria, el término "dosis diaria" significa una cantidad de ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma que se administra en un período de 24 horas. En consecuencia, se puede administrar una dosis diaria de una sola vez (es decir, una vez al día) o, como alternativa, la dosis diaria se puede dividir de modo que la administración de la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, sea dos veces al día, tres veces al día o incluso cuatro veces al día.
Tal y como se usa en la presente memoria, el término "paciente" o "sujeto" incluye animales, tales como los mamíferos, que incluyen, entre otros, primates (por ejemplo, humanos), vacas, ovejas, cabras, caballos, perros, gatos, conejos, ratas, ratones, monos, pollos, pavos, codornices o cobayas y similares. En una realización, tal y como se usa en la presente memoria, el término "paciente" o "sujeto" significa un mamífero. En una realización, tal y como se usa en la presente memoria, el término "paciente" o "sujeto" significa un ser humano.
Tal y como se usa en la presente memoria, una "cantidad eficaz" se refiere a la cantidad de ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo, profármaco o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma que es suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico en el tratamiento de la enfermedad o para retrasar o disminuir al mínimo los síntomas asociados a la enfermedad. En determinadas realizaciones, la enfermedad es una enfermedad o afección adenovírica. En determinadas formas de realización, la enfermedad es cáncer. En determinadas formas de realización, la enfermedad es un trastorno ocular. En determinadas realizaciones, la enfermedad es una enfermedad o afección causada por una infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación.
Tal y como se usa en la presente memoria, los términos "prevenir", "que previene" y "prevención" son como se reconoce en la técnica, y cuando se usan en relación con una afección, tal como una enfermedad o afección adenovírica, un trastorno ocular, cáncer, o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación, o cualquier otra afección médica, tal como las descritas en la presente memoria, se conoce bien en la técnica e incluye la administración de un compuesto que reduce la frecuencia, o retrasa la aparición, de los síntomas de una afección médica en un sujeto en relación con un sujeto que no recibe la composición.
Tal y como se usa en la presente memoria, los términos "tratar", "que trata" y "tratamiento" se refieren a revertir, reducir o detener los síntomas, signos clínicos y la enfermedad subyacente de una afección de manera que se mejore o se estabilice la situación de un sujeto. Los términos "tratar" y "tratamiento" también se refieren a la erradicación o a la mejora de la enfermedad o los síntomas asociados a la enfermedad. En determinadas realizaciones, dichos términos se refieren a disminuir al mínimo la propagación o el empeoramiento de la enfermedad resultante de la administración de un compuesto que se describe en la presente memoria a un paciente con dicha enfermedad. En determinadas realizaciones, la enfermedad es una enfermedad o afección adenovírica. En determinadas formas de realización, la enfermedad es cáncer. En determinadas formas de realización, la enfermedad es un trastorno ocular. En determinadas realizaciones, la enfermedad es una enfermedad o afección causada por una infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación.
Tal y como se usa en la presente memoria, el término "composición farmacéutica" se refiere a las composiciones idóneas para su uso o como tratamiento prescrito para tratar, manejar o prevenir una enfermedad o afección adenovírica, un trastorno ocular, cáncer, o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación.
Tal y como se usa en la presente memoria, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a las sales que, dentro del alcance del juicio médico sólido, son idóneas para su uso en contacto con el tejido humano sin provocar toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares indebidas, y son proporcionales a una relación beneficio/riesgo razonable.
Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se indique otra cosa, el término "aproximadamente" o "unos" significa un error aceptable para un valor en concreto determinado por un experto en la técnica, que depende en parte de cómo se mide o determina el valor. En determinadas realizaciones, el término "unos" o "aproximadamente" significa dentro de 1, 2, 3 o 4 desviaciones estándar. En determinadas realizaciones, el término "unos" o "aproximadamente" significa dentro del 15 %, 10 %, 9 %, 8 %, 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, 0,5 %, o 0,05 % de un valor o margen dado.
Todas las referencias a características o limitaciones en singular de la presente invención incluirán la característica o limitación en plural correspondiente, y viceversa, a menos que se especifique otra cosa o se deduzca claramente lo contrario por el contexto en el que se hace la referencia.
Todas las combinaciones de los métodos o etapas del procedimiento según se usan en la presente memoria se pueden realizar en cualquier orden, a menos que se especifique otra cosa o se deduzca claramente lo contrario por el contexto en el que se realiza la combinación referenciada.
Las composiciones farmacéuticas y los métodos de la presente invención pueden comprender, consistir en, o consistir esencialmente en los elementos y las limitaciones esenciales de la invención descrita en la presente memoria, así como cualquier ingrediente, componente o limitación adicional u opcional descritos en la presente memoria o de otra manera útiles en las composiciones y los métodos del tipo general según se describe en la presente memoria.
5.2 5'-Adenosina difosfato de ribosa (ADPR)
Los usos y las composiciones dados a conocer en la presente memoria se refieren a la 5'-difosfato de adenosina de ribosa (ADPR; ADP-ribosa; 5 '^5-éster de adenosina 5'-(trihidrogenodifosfato) con D-ribosa; 5 '^5-éster de adenosina 5'-(trihidrogenopirofosfato) con D-ribofuranosa; éster de D-ribosa y adenosina 5'-difosfato; 5 '^5-éster de adenosina 5'-pirofosfato con D-ribofuranosa; ribofuranosa, 5-(adenosina 5'-pirfosforil)-D-ribosa; adenosina 5'-difosforribosa; adenosina difosfato ribosa; adenosina difosforribosa; adenosina pirofosfato de ribosa; adenosindifosfato de ribosa).
La ADPR es una molécula pequeña de origen natural que se conoce bien en la bibliografía química. A menudo se caracteriza por la fórmula general C15H23N5O14P2, e incluye, por ejemplo, varias sales, tales como la sal de sodio correspondiente a la siguiente estructura general de fórmula (I):
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La ADPR se puede preparar fácilmente mediante los métodos que se conocen bien en las técnicas químicas. También está disponible comercialmente como materia prima purificada, un ejemplo de la cual se puede comprar en Sigma o Sigma-Aldrich Co.
El compuesto de la ADPR para usar en un método de acuerdo con la invención incluye cualquier sal conocida o farmacéuticamente aceptable de la misma, cuyos ejemplos no limitantes incluyen acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato, digluconato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, fumarato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, 2-hidroxietansulfonato (isetionato), lactato, maleato, metansulfonato, nicotinato, 2-naftalensulfonato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, fosfato, glutamato, bicarbonato, ptoluensulfonato, undecanoato o combinaciones de los mismos.
El compuesto de la ADPR también puede incluir los derivados en los que los grupos que contienen nitrógeno básico se cuaternizan con materiales tales como haluros de alquilos inferiores tales como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo; haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo; haluros de arilalquilo como bromuros de bencilo y fenetilo, y muchos otros.
Los ejemplos de ácidos que pueden emplearse para formar las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de la ADPR incluyen ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico y ácido fosfórico, y ácidos orgánicos tales como ácido oxálico, ácido maleico, ácido succínico y ácido cítrico.
Las sales de adición de base se pueden preparar in situ durante el aislamiento final y la purificación de la ADPR al hacer reaccionar un resto ácido con una base adecuada, tal como, entre otros, el hidróxido, carbonato o bicarbonato de un ion metálico farmacéuticamente aceptable o con amoníaco o una amina orgánica primaria, secundaria o terciaria. Los ejemplos no limitantes de sales farmacéuticamente aceptables incluyen las basadas en metales alcalinos, metales alcalinotérreos, metales de transición o metales de postransición, tales como sales de litio (incluido el dilitio), sodio, potasio, calcio, magnesio, aluminio, zinc, cobalto, y cobre, y similares, y amoníaco cuaternario no tóxico y títulos de amina que incluyen amonio, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, trietilamina, dietilamina, etilamina y similares. Otras aminas orgánicas representativas útiles para la formación de sales de adición de base incluyen etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperidina, piperazina y similares.
En una realización, el compuesto de la ADPR para su uso en un método de acuerdo con la invención se sintetiza mediante la hidrólisis del dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD+) en presencia de una base alcalina, tal como, pero sin limitarse a ellos, hidróxido de litio o hidróxido de sodio. En tal realización, la ADPR así sintetizada se aísla en forma de su sal mono o di del ión metálico de la base correspondiente.
En una realización específica, el compuesto de la ADPR para usar en un método de acuerdo con la invención está en forma de su sal de sodio. En una realización, el compuesto de la ADPR está en forma de su sal monosódica. En otra realización, el compuesto de la ADPR está en forma de su sal disódica.
En otra realización específica, el compuesto de la ADPR para usar en un método de acuerdo con la invención está en forma de su sal de litio. En una realización, el compuesto de la ADPR está en forma de su sal de monolitio. En otra realización, el compuesto de la ADPR está en forma de su sal de dilitio.
En la presente memoria se describen además profármacos de la ADPR, o sales o estereoisómeros farmacéuticamente aceptables de la misma. Dichos profármacos proporcionan una vida media más prolongada y una distribución tisular más amplia después de la administración del fármaco, por ejemplo, a través de una infusión o inyección intravenosa, en el líquido cefalorraquídeo o en otro compartimento de líquido.
El profármaco puede ser poli-ADPR (con o sin una proteína, péptido o aminoácido aceptores). En tal concepto de profármaco, la poli-ADPR se usa como forma de efecto prolongado de la ADPR, de modo que la ADPR se libera lentamente gracias a las hidrolasas de la sangre, del líquido peritoneal, del líquido cefalorraquídeo, del humor vítreo, del humor acuoso, del líquido subcutáneo, del líquido intersticial, y de otros espacios no intracelulares para tratar enfermedades que responden a la ADPR. La estructura general de un profármaco de tipo poli-ADPR representativo (con una proteína aceptora) está representada por la fórmula (II):
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El profármaco de la ADPR puede ser la ADPR condensada con una o más moléculas de un ácido carboxílico, aminoácido, ácido graso o cualquier combinación de los mismos. En un ejemplo, la ADPR está condensada en uno o más de los grupos hidroxilo en el resto de la ribosa terminal, por ejemplo, como se representa por la estructura general de fórmula (III). Los ejemplos de ácidos grasos que se pueden usar en la preparación de profármacos de la ADPR incluyen, pero no se limitan a ellos, ácido palmítico, ácido linolénico, ácido esteárico, ácido oleico y otros. Los ejemplos de ácidos carboxílicos que pueden usarse en la preparación de profármacos de la ADPR incluyen, pero no se limitan a ellos, ácido 3-oxopentanoico, ácido 3-hidroxipentanoico, ácido acetoacético y ácido p-hidroxibutírico. Los ejemplos de aminoácidos que se pueden usar para preparar profármacos de la ADPR incluyen, pero no se limitan a ellos, ácido glutámico, ácido aspártico, lisina y arginina.
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En la presente memoria se describen de manera general métodos para tratar y/o prevenir una enfermedad o afección adenovírica, un trastorno ocular, cáncer o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación, que comprenden la administración de la ADPR o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable, o una composición farmacéutica de la misma, a un paciente que tiene, o que está en riesgo de desarrollar, una enfermedad o afección adenovírica, un trastorno ocular, cáncer o una enfermedad o afección causada por una infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación.
En la presente memoria se describen métodos para tratar o prevenir una enfermedad o afección adenovírica, un trastorno ocular, cáncer o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación, que comprenden administrar a un paciente que tiene, o que está en riesgo de desarrollar, una enfermedad o afección adenovírica, un trastorno ocular, cáncer o una enfermedad o afección causada por una infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación, una cantidad farmacéuticamente eficaz de la ADPR o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable.
En la presente memoria se dan a conocer métodos para tratar o prevenir una enfermedad o afección adenovírica, que comprenden administrar a un paciente que tiene una enfermedad o afección adenovírica, o a un paciente en riesgo de desarrollar una enfermedad o afección adenovírica, una cantidad farmacéuticamente eficaz de la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. En una realización, la enfermedad o afección adenovírica es una enfermedad o afección que afecta a cualquier parte del ojo, oído, boca, vías respiratorias superiores o vías respiratorias inferiores. En algunas realizaciones, la enfermedad o afección adenovírica se selecciona de, pero no se limita a ellas, enfermedad epibulbar, conjuntivitis, queratitis, queratoconjuntivitis, abrasión de la córnea, queratitis infecciosa ulcerosa, queratitis epitelial, queratitis estromal, uveítis, glaucoma agudo, blefaritis, otitis media, otitis externa, gingivitis, mucositis, faringitis, amigdalitis, rinitis, sinusitis, laringitis, laringotraqueítis, traqueítis, bronquitis, bronquiolitis, neumonía bronquiolar, neumonía, exacerbación del asma, exacerbación de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica o exacerbación de enfisema. En determinadas realizaciones, la enfermedad o afección adenovírica es conjuntivitis, queratitis, queratoconjuntivitis, faringitis, amigdalitis, laringitis, rinitis, sinusitis, bronquitis, bronquiolitis o neumonía. En una realización, la enfermedad o afección adenovírica es queratitis, conjuntivitis o queratoconjuntivitis. En otra realización, la enfermedad o afección adenovírica es bronquitis o bronquiolitis. En otra realización, la enfermedad o afección adenovírica es faringitis, amigdalitis o laringitis.
En la presente memoria se dan a conocer métodos para tratar o prevenir el cáncer, o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación, en donde dichos métodos comprenden la administración de una cantidad eficaz de la ADPR de dilitio o un solvato, hidrato o tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, a un paciente que tiene, o que está en riesgo de desarrollar, cáncer, o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación. En una realización, el compuesto de la ADPR se administra por vía de administración tópica, oral, parenteral, mucosa o por inhalación. En una realización, la ADPR para uso según la invención se administra mediante la administración tópica. En una realización, la administración tópica es sobre una superficie celular o tisular interna. En una realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es mediante aerosolización, pulverización, administración oral, infusión o un método similar a cualquier superficie de las vías respiratorias. En otra realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es por administración oral, infusión o enema a cualquier superficie del tubo digestivo (por ejemplo, desde la boca hasta el ano). En otra realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es mediante inyección o infusión parenteral a cualquier órgano interno. En otra realización, la administración tópica es sobre una superficie celular o tisular externa, que incluye, pero no se limita a ellas, la piel, los ojos, las uñas, el cabello o la oreja.
En determinadas realizaciones, en la presente memoria se dan a conocer métodos para el tratamiento o la profilaxis de un trastorno o enfermedad o afección ocular causada por una infección de al menos un tejido del ojo, que comprenden administrar al ojo de un paciente una o más dosis de la composición farmacéutica dada a conocer en la presente memoria. En una realización, la profilaxis es la profilaxis de la infección después de una abrasión de la córnea o una cirugía ocular. Según la invención, la ADPR está en forma de su sal de dilitio.
En una realización, el trastorno ocular afecta a cualquier región del segmento anterior del ojo que incluye, entre otros, la córnea, la conjuntiva, el iris, el humor acuoso (cámara anterior), el cristalino, la pupila, el cuerpo y músculo ciliares, el ligamento suspensorio, esclerótica, canal de Schlemm y zónula de Zinn.
En una realización, el trastorno ocular se selecciona del grupo que consiste en una infección por microorganismos de al menos un tejido del ojo, conjuntivitis, queratitis, queratoconjuntivitis, abrasión de la córnea, queratitis infecciosa ulcerosa, queratitis epitelial, queratitis estromal, uveítis, glaucoma agudo y blefaritis. En una realización específica, el trastorno ocular es la queratoconjuntivitis infecciosa.
En una forma de realización, la infección está provocada por un microorganismo. En una realización, el microorganismo es una bacteria, virus, hongo o ameba. En una realización, las bacterias son micobacterias.
En la presente memoria se dan a conocer métodos para tratar, manejar o prevenir una enfermedad o afección causada por infección, lesión física o inflamación, en donde dicho método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de la ADPR de dilitio o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, a un paciente que tiene, o que está en riesgo de desarrollar, dicha enfermedad o afección. En una realización específica, la enfermedad o afección está causada por una infección, lesión física o inflamación de la córnea y/o de la conjuntiva.
En la presente memoria se dan a conocer métodos para tratar, manejar o prevenir una enfermedad o afección causada por una lesión física, química, térmica o por radiación, en donde dicho método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de la ADPR de dilitio o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo, o polimorfo de la misma, a un paciente que tiene, o que está en riesgo de desarrollar, dicha enfermedad o afección.
En otro aspecto de la invención, en la presente memoria se dan a conocer métodos para tratar, manejar o prevenir el cáncer, que comprenden administrar al paciente una cantidad eficaz de la ADPR de dilitio o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, a un paciente que tiene, o que está en riesgo de desarrollar, cáncer.
En la presente memoria se describen métodos para tratar o prevenir el cáncer, que comprenden administrar a un paciente que tiene cáncer, o a un paciente con riesgo de desarrollar cáncer, una cantidad farmacéuticamente eficaz de la ADPR o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo, profármaco o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable. En una realización específica, la ADPR está en forma de su sal de dilitio.
Tal y como se usa en la presente memoria, y a menos que se especifique otra cosa, el término "cáncer" se refiere o describe la afección fisiológica de los mamíferos que se caracteriza típicamente por un crecimiento celular sin regulación. Los ejemplos de cáncer incluyen tumores sólidos y cáncer hemático. En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer primario, en otras, el cáncer hace metástasis.
Tal y como se usa en la presente memoria, "tumores sólidos" incluye, pero no se limita a ellos, cáncer de vejiga (que incluye, pero no se limita a él, cáncer de vejiga superficial), cáncer de mama (que incluye, pero no se limita a ellos, cáncer de mama de tipo luminal B, ER+, PR+ y Her2+), cáncer del sistema nervioso central (que incluye, entre otros, glioblastoma multiforme (GBM), glioma, meduloblastoma y astrocitoma), cáncer colorrectal, cáncer digestivo (que incluye, entre otros, cáncer de estómago, cáncer de esófago y cáncer de recto), cáncer endocrino (que incluye, entre otros, cáncer de tiroides y cáncer de glándula suprarrenal), cáncer de ojo (que incluye, entre otros, retinoblastoma), cáncer genitourinario femenino (que incluye, entre otros, cáncer de placenta, de útero, de vulva, de ovario, de cuello uterino), cáncer de cabeza y cuello (que incluye, entre otros, cáncer de faringe, de esófago y de lengua), cáncer de hígado, cáncer de pulmón (que incluye, entre otros, cáncer pulmonar no microcítico (NSCLC), cáncer pulmonar microcítico (SCLC), mucoepidermoide, broncogénico, carcinoma de células escamosas (SQCC) y analplásico/NSCLC), cáncer de piel (que incluye, entre otros, melanoma y SQCC), cáncer de partes blandas (que incluye, entre otros, sarcoma, sarcoma de Ewing y rabdomiosarcoma), cáncer de hueso (que incluye, entre otros, sarcoma, sarcoma de Ewing y osteosarcoma), cáncer epidermoide o de células escamosas (que incluye, entre otros, cáncer de pulmón, de esófago, de cuello uterino y de cabeza y cuello), cáncer de páncreas, cáncer de riñón (que incluye, pero no se limita a ellos, tumor renal de Wilm y carcinoma de células renales) y cáncer de próstata. En una realización, el tumor sólido no es un cáncer de mama triple negativo (TNBC). En algunas realizaciones, el tumor sólido es cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer de pulmón o cáncer de vejiga. En una de tales formas de realización, el tumor sólido es un cáncer de vejiga superficial. En otra, el tumor sólido es el carcinoma de células escamosas de pulmón. En otra realización más, el tumor sólido es cáncer de mama de tipo B luminal.
Tal y como se usa en la presente memoria, "cáncer hemático" incluye, pero no se limita a ellas, leucemia (que incluye, pero no se limita a ellas, leucemia linfocítica aguda (LLA), leucemia mieloide crónica (LMC), leucemia aguda de linfocitos T, leucemia de precursores de linfocitos B, leucemia aguda promielocítica (LAPM), leucemia de células plasmáticas, LAA mielomonoblástica/de linfocitos T, leucemia mielomonocítica B, eritroleucemia y leucemia mieloide aguda (LMA)), linfoma (que incluye, entre otros, linfoma de Hodgkin, linfoma no Hodgkin (LNH), linfoma de Burkitt) (LB), linfoma de linfocitos B, linfoma linfoblástico, linfoma folicular (LF), linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL), linfoma inmunoblástico de células grandes) y mieloma múltiple.
En una realización específica, en la presente memoria se dan a conocer métodos para tratar, manejar o prevenir el cáncer, que comprenden administrar a un paciente que tiene cáncer, o a un paciente con riesgo de desarrollar cáncer, una cantidad farmacéuticamente eficaz de la ADPR de dilitio o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, en donde el cáncer es cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma pulmonar no microcítico, cáncer de páncreas, adenocarcinoma de páncreas, glioma, glioblastoma multiforme o leucemia mieloide aguda.
En la presente memoria se describen métodos para aumentar la cantidad de ADPR o ATP libres en una célula deficiente en la ADPR o en el ATP en un estado de alto estrés citotóxico, que comprenden poner en contacto dicha célula con una cantidad de ADPR suficiente para restaurar el nivel fisiológico normal de la ADPR o la ATP en las células.
En una realización, la etapa de administración comprende administrar la ADPR y una sal metálica, en la que la cantidad total de la ADPR y de la sal metálica está en el intervalo de aproximadamente 0,001 mg a aproximadamente 5 mg por dosis. En una realización, cada dosis está entre 10 microlitros y 200 microlitros. En otra realización, cada dosis está entre 20 microlitros y 80 microlitros.
En una realización, la etapa de administración comprende administrar la composición farmacéutica de la invención en forma de solución. En una realización, la solución se administra al ojo de una a ocho veces al día. En una realización, la solución se administra al ojo de una a veinticuatro veces al día.
En una realización, el método comprende además la etapa de conservar la composición durante al menos un mes, al menos tres meses, al menos seis meses o al menos 1 año antes de la etapa de administración.
Se contempla que todos los compuestos descritos en la presente memoria se utilicen en los métodos descritos en la presente memoria y sobre todo en la prevención o el tratamiento de las enfermedades o afecciones adenovíricas, trastornos oculares, cáncer o enfermedades o afecciones causadas por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas, o por radiación.
5.4 Politerapia
En determinadas realizaciones, la ADPR o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, o una composición farmacéutica de la misma, puede administrarse en combinación con otro medicamento. Tal politerapia se puede lograr mediante la dosificación simultánea, secuencial o independiente de cada uno de los componentes del tratamiento. Además, cuando se administra como un componente de dicha politerapia, la ADPR según se describe en la presente memoria y el otro medicamento pueden ser sinérgicos, de modo que la dosis diaria de uno o ambos componentes puede reducirse con respecto a la dosis de cualquiera de los componentes que normalmente se administra como monoterapia. Como alternativa, cuando se administra como un componente de dicha politerapia, la ADPR según se describe en la presente memoria y el otro medicamento pueden ser aditivos, de modo que la dosis diaria de cada uno de los componentes sea similar o igual a la dosis de cualquiera de los componentes que normalmente se administraría como una monoterapia.
En determinadas formas de realización, el otro fármaco es un compuesto antivírico o una sal metálica. En algunas realizaciones, el otro fármaco es cidofovir, aciclovir o ganciclovir. En una realización específica, el otro fármaco es el cidofovir. En determinadas formas de realización, el otro fármaco es una sal de litio, de zinc, de cobalto o de cobre. En ciertas realizaciones, el otro fármaco se selecciona del grupo que consiste en benzoato de litio, bromuro de litio, cloruro de litio, sulfato de litio, tetraborato de litio, acetato de litio, cloruro de zinc, sulfato de zinc, bromuro de zinc, cloruro de cobalto, bromuro de cobalto, bromuro de cobre (CuBr2), cloruro de cobre (CuCb) y sulfato de cobre. En una realización específica, el otro fármaco es el cloruro de litio.
En una realización, cuando se usa la ADPR en combinación con el cidofovir, la concentración del cidofovir está en el intervalo de aproximadamente el 0,01 % a aproximadamente el 0,2 %. En algunas realizaciones, la concentración del cidofovir está en el margen de aproximadamente el 0,01 % a aproximadamente el 0,15 %, de aproximadamente el 0,01 % a aproximadamente el 0,1 %, de aproximadamente el 0,01 % a aproximadamente el 0,05 %, de aproximadamente el 0,05 % a aproximadamente el 0,2 %, de aproximadamente el 0,05 % a aproximadamente el 0,15 %, de aproximadamente el 0,05 % a aproximadamente el 0,1 %, de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 0,2 %, de aproximadamente el 0,1% a aproximadamente el 0,15 % o de aproximadamente el 0,15 % a aproximadamente el 0,2 %. En una realización específica, la concentración del cidofovir no es de más de aproximadamente el 0,1 %. En una realización específica, la concentración del cidofovir es de aproximadamente el 0,2 %, aproximadamente el 0,15 %, aproximadamente el 0,1 %, aproximadamente el 0,05 %, aproximadamente el 0,04 %, aproximadamente el 0,03 %, aproximadamente el 0,02 % o aproximadamente el 0,01 %.
En una realización, cuando se usa la ADPR en combinación con el cidofovir, la concentración del cidofovir está en el intervalo de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 10 mM. En algunas realizaciones, la concentración del cidofovir está en el margen de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 5 mM, de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 3 mM, de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 1 mM, de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 0,5 mM, de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 0,1 mM, de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 0,05 mM, de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 0,03 mM, de aproximadamente 0,01 mM a aproximadamente 0,02 mM, de aproximadamente 0,05 mM a aproximadamente 10 mM, de aproximadamente 0,05 mM a aproximadamente 5 mM, de aproximadamente 0,05 mM a aproximadamente 3 mM, de aproximadamente 0,05 mM a aproximadamente 1 mM, de aproximadamente 0,05 mM a aproximadamente 0,5 mM, de aproximadamente 0,05 mM a aproximadamente 0,1 mM, de aproximadamente 0,1 mM a aproximadamente 10 mM, de aproximadamente 0,1 mM a aproximadamente 5 mM, de aproximadamente 0,1 mM a aproximadamente 3 mM, de aproximadamente 0,1 mM a aproximadamente 1 mM, de aproximadamente 0,1 mM a aproximadamente 0,5 mM, de aproximadamente 0,5 mM a aproximadamente 10 mM, de aproximadamente 0,5 mM a aproximadamente 5 mM, de aproximadamente 0,5 mM a aproximadamente 3 mM, de aproximadamente 0,5 mM a aproximadamente 1 mM, de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 10 mM, de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 5 mM, de aproximadamente 1 mM a aproximadamente 3 mM, de aproximadamente 3 mM a aproximadamente 10 mM, aproximadamente 3 mM a aproximadamente 5 mM, aproximadamente 5 mM a aproximadamente 10 mM, de aproximadamente 5 mM a aproximadamente 7 mM, o de aproximadamente 7 mM a aproximadamente 10 mM. En una realización específica, el cidofovir se usa en una concentración de aproximadamente 0,01 mM, aproximadamente 0,02 mM, aproximadamente 0,03 mM, aproximadamente 0,05 mM, aproximadamente 0,1 mM, aproximadamente 0,2 mM, aproximadamente 0,5 mM, aproximadamente 0,7 mM, aproximadamente 1 mM, aproximadamente 1,5 mM, aproximadamente 2 mM, aproximadamente 2,5 mM, aproximadamente 3 mM, aproximadamente 3,5 mM, aproximadamente 4 mM, aproximadamente 4,5 mM, aproximadamente 5 mM, aproximadamente 5,5 mM, aproximadamente 6 mM, aproximadamente 6,5 mM, aproximadamente 7 mM, aproximadamente 7,5 mM o aproximadamente 8 mM.
En una realización, cuando se usa la ADPR en combinación con el cidofovir, la relación molar de ADPR:cidofovir está en el intervalo de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 10.000:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ADPR:cidofovir está en el intervalo de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 3.000:1, de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 1.000:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 3.000:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 1.000:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 3.000:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 1.000:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 3.000:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 1000:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 3.000:1, o de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 1.000:1.
En una realización, la relación molar de ADPR:cidofovir está en el intervalo de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 1.000:1. En algunas realizaciones , la relación molar de ADPR:cidofovir está en el intervalo de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 500:1, de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 200:1, de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 100:1 de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 50:1, de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 10:1 de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 5:1, de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 1:1, de aproximadamente 0,1:1 a aproximadamente 0,5:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 1000:1 de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 500:1 de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 200:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 100:1 de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 50:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 10:1 de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 5:1, de aproximadamente 0,5:1 a aproximadamente 1:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 1000:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 500:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 200:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 100:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 50:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 10:1, de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 5:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 1000:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 500:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 200:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 100:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 50:1, de aproximadamente 5:1 a aproximadamente 10:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 1000:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 500:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 200:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 100:1, de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 50:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 1.000:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 500:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 200:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 100:1, de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 1000:1, de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 500:1, de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 200:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 1000:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 500:1, de aproximadamente 500:1 a aproximadamente 1000:1, de aproximadamente 500:1 a aproximadamente 700:1, o de aproximadamente 700:1 a aproximadamente 1000:1.
En algunas realizaciones, la relación molar de ADPR:cidofovir está en el intervalo de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 10.000:1. En algunas realizaciones, la relación molar de ADPR:cidofovir está en el margen de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 1.000:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 500:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 200:1, de aproximadamente 50:1 a aproximadamente 100:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 1.000:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 200:1 a aproximadamente 500:1, de aproximadamente 500:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 500:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 500:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 500:1 a aproximadamente 1.000:1, de aproximadamente 500:1 a aproximadamente 700:1, de aproximadamente 1.000:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 1.000:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 1.000:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 1.000:1 a aproximadamente 3.000:1, de aproximadamente 2.000:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 2.000:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 2.000:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 2.000:1 a aproximadamente 3.000:1, de aproximadamente 3.000:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 3.000:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 3.000:1 a aproximadamente 5.000:1, de aproximadamente 3.000:.1 a aproximadamente 4.000:1, de aproximadamente 5.000:1 a aproximadamente 10.000:1, de aproximadamente 5.000:1 a aproximadamente 7.000:1, de aproximadamente 5.000:1 a aproximadamente 6.000:1, de aproximadamente 7.000:1 a aproximadamente 10.000:1. En una realización específica, la relación molar de ADPR:cidofovir es aproximadamente 0,1:1, aproximadamente 0,5:1, aproximadamente 1:1, aproximadamente 5:1, aproximadamente 10:1, aproximadamente 50:1, aproximadamente 100:1, aproximadamente 150:1, aproximadamente 160:1, aproximadamente 170:1 aproximadamente 180:1, aproximadamente 190:1, aproximadamente 200:1, aproximadamente 250:1 aproximadamente 300:1, aproximadamente 350:1, aproximadamente 400:1, aproximadamente 500:1 aproximadamente 600:1, aproximadamente 700:1, aproximadamente 800:1, aproximadamente 900:1, aproximadamente 1.000:1, aproximadamente 2.000:1, aproximadamente 5.000:1, aproximadamente 7.000:1 o aproximadamente 10.000:1.
5.5 Dosis y pauta posológica
Una enfermedad o afección adenovírica, un trastorno ocular, cáncer o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación, tal y como se describe en la presente memoria, puede tratarse al administrar a un paciente que padece una enfermedad o afección como las descritas en la presente memoria de aproximadamente 0,005 mg/kg a aproximadamente 1000 mg/kg, de aproximadamente 0,01 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg o de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 5,0 mg/kg de la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo, profármaco o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma.
En determinadas realizaciones, la enfermedad o afección adenovírica tal y como se describe en la presente memoria se trata al administrar a un paciente que tiene, o en riesgo de desarrollar, una enfermedad o afección como las descritas en la presente memoria una cantidad de aproximadamente 0,005 mg a aproximadamente 1000 mg, de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 10 mg, de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 1 mg, de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 0,1 mg, de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 10 mg, de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 5,0 mg, de 0,1 mg a aproximadamente 1 mg de la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma. En una realización, la concentración de la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma está en el intervalo de aproximadamente 0,05 mg/ml a aproximadamente 30 mg/ml. En otra realización, la concentración de la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma está en el intervalo de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml. En ciertas de tales realizaciones, la ADPR que se describe en la presente memoria se administra por vía de administración tópica, oral, parenteral, mucosa o por inhalación. En una realización, la ADPR que se describe en la presente memoria se administra mediante administración tópica. En una realización, la administración tópica es sobre una superficie celular o tisular interna. En una realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es mediante aerosolización, pulverización, administración oral, infusión, o un método similar, sobre cualquier superficie de las vías respiratorias. En otra realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es por administración oral, infusión o enema sobre cualquier superficie del tubo digestivo (por ejemplo, desde la boca hasta el ano). En otra realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es mediante inyección o infusión parenteral a cualquier órgano interno. En otra realización, la administración tópica es sobre una superficie celular o tisular externa, que incluye, pero no se limita a ellas, la piel, los ojos, las uñas, el cabello o las orejas. En una realización específica, la ADPR que se describe en la presente memoria se administra por vía tópica en una concentración que varía de aproximadamente 0,05 mg/ml a aproximadamente 30 mg/ml. En otra realización, la ADPR que se describe en la presente memoria se administra por vía tópica en una concentración que varía de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml.
En determinadas realizaciones, el trastorno ocular, el cáncer o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación, tal y como se describe en la presente memoria, se trata mediante la administración a un paciente que tiene, o que está en riesgo de desarrollar, una enfermedad o afección como las descritas en la presente memoria una dosis diaria de aproximadamente 0,005 mg a aproximadamente 1000 mg, de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 100 mg, de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 10 mg, de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 1 mg, de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 0,1 mg, de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 10 mg, de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 5,0 mg, de 0,1 mg a aproximadamente 1 mg de ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma. En una realización, la concentración de la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, está en el intervalo de aproximadamente 0,05 mg/ml a aproximadamente 30 mg/ml. En otra realización, la concentración de la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma está en el intervalo de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml. En ciertas de tales realizaciones, la ADPR de dilitio que se describe en la presente memoria se administra por vía de administración tópica, oral, parenteral, mucosa o por inhalación. En una realización, la ADPR de dilitio que se describe en la presente memoria se administra por administración tópica. En una realización, la administración tópica es sobre una superficie celular o tisular interna. En una realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es mediante aerosolización, pulverización, administración oral, infusión, o un método similar, sobre cualquier superficie de las vías respiratorias. En otra realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es por administración oral, infusión o enema sobre cualquier superficie del tubo digestivo (por ejemplo, desde la boca hasta el ano). En otra realización específica, la administración tópica sobre una superficie celular o tisular interna es mediante inyección o infusión parenteral a cualquier órgano interno. En otra realización, la administración tópica es sobre una superficie celular o tisular externa, que incluye, pero no se limita a ellas, la piel, los ojos, las uñas, el cabello o las orejas. En una realización específica, la ADPR de dilitio que se describe en la presente memoria se administra por vía tópica en una concentración que varía de aproximadamente 0,05 mg/ml a aproximadamente 30 mg/ml. En otra realización, la ADPR de dilitio que se describe en la presente memoria se administra por vía tópica en una concentración que varía de aproximadamente 1 mg/ml a aproximadamente 20 mg/ml.
La idoneidad de la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo, profármaco o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable, para el tratamiento o la prevención de una enfermedad o afección adenovírica, un trastorno ocular, cáncer o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesiones físicas, químicas, térmicas o por radiación, tal y como se describe en la presente memoria, puede confirmarse mediante los ensayos descritos en la presente memoria. Por ejemplo, el adenovirus se puede diagnosticar mediante cultivo de virus, reacción en cadena de la polimerasa o mediante una prueba rápida como Adenoplus® o una tecnología similar a partir de los líquidos corporales (esputo, lágrimas u otros líquidos extraídos mediante un hisopo o una técnica similar).
5.6 Composiciones farmacéuticas
Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden usarse en la preparación de formas de dosificación unitaria individuales. Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación de la presente invención comprenden la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables; en donde la cantidad de ADPR de dilitio en la composición farmacéutica está en el intervalo de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición farmacéutica. Las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación de la presente invención se pueden preparar mediante cualquier método conocido o si no eficaz para formular o fabricar la forma del producto seleccionada. En un ejemplo, la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo, profármaco o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable, se puede formular junto con los excipientes, diluyentes o vehículos habituales, y formar comprimidos, cápsulas, soluciones, suspensiones, emulsiones, microemulsiones, nanoemulsiones, jarabes, elixires, esprays, polvos, aerosoles (p. ej., aerosoles de polvo seco, aerosoles de líquido), medios de disolución (p. ej., comprimido, película, tira de disolución rápida), supositorios, ungüentos o cualquier otra forma de dosificación idónea. En una realización específica, la composición farmacéutica está en forma de solución.
Los ejemplos no limitantes de los excipientes, diluyentes y vehículos idóneos incluyen: cargas y extensores tales como almidón, azúcares, manitol y derivados silícicos; aglutinantes tales como carboximetilcelulosa y otros derivados de la celulosa, alginatos, gelatina y polivinilpirrolidona; humectantes tales como el glicerol; disgregantes tales como el carbonato de calcio y el bicarbonato de sodio; retardantes de la disolución tales como la parafina; aceleradores de la reabsorción tales como los compuestos de amonio cuaternario; tensioactivos tales como el alcohol acetílico y el monoestearato de glicerol; vehículos adsorbentes tales como el caolín y la bentonita; vehículos como el propilenglicol y el alcohol etílico, y lubricantes tales como talco, estearato de calcio y magnesio, y polietilglicoles sólidos.
Al igual que las cantidades y tipos de excipientes, la cantidad y el tipo específico del ingrediente activo (p. ej., la ADPR que se describe en la presente memoria) en una forma de dosificación pueden diferir en función de una serie de factores que incluyen, entre otros, la vía por la que se administrará a los pacientes. En determinadas realizaciones, la administración de la composición farmacéutica de la invención o la forma de dosificación puede ser por vía tópica, oral, parenteral, mucosa o por inhalación. Tal y como se usa en la presente memoria, el término "parenteral" incluye inyecciones intravítreas, intraoculares, intracorneales, subcutáneas, intradérmicas, intravasculares, tales como intravenosas, intraarteriales, intramusculares, intraluminales y cualquier otra técnica de inyección o infusión similar.
En ciertas realizaciones, la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de
la misma farmacéuticamente aceptable, se puede administrar por vía oral, tal como en un comprimido, cápsula o formulación líquida. En determinadas realizaciones, la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, puede administrarse por vía tópica. En determinadas realizaciones, la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma, se puede administrar por vía intranasal o por inhalación.
La administración tópica que se describe en la presente memoria incluye la aplicación de una cantidad farmacéuticamente eficaz de la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo, profármaco
o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable, a cualquier mucosa y/o superficie epitelial del cuerpo, que
incluye la asociada, pero sin limitación, a la piel, ojos, oídos, nariz, senos nasales, boca, labios, faringe, laringe, epiglotis, tráquea, bronquios, bronquiolos, alvéolos, esófago, estómago, intestinos, colon, recto, ano, vagina, cuello
uterino y cualquier otra parte dermatológica del tubo digestivo y las vías respiratorias y/o genitourinarias. En otra realización, la administración tópica que se describe en la presente memoria incluye la aplicación de una cantidad farmacéuticamente eficaz de la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo, profármaco
o polimorfo de la misma farmacéuticamente aceptable, a cualquier herida debida a una lesión, cirugía, infección, inflamación o cáncer.
Además, la ADPR, o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo, profármaco o polimorfo de la
misma farmacéuticamente aceptable, también se puede formular como formas de dosificación de liberación sostenida
o prolongada que incluyen una forma de dosificación que libera el ingrediente activo solo o preferiblemente en una
parte particular del tramo intestinal, preferiblemente durante un período de tiempo extendido o prolongado para mejorar aún más la eficacia. En una realización, la ADPR que se describe en la presente memoria se formula como una forma
de dosificación de liberación sostenida o prolongada que incluye una forma de dosificación que libera el ingrediente
activo solo o preferiblemente en una parte concreta de las vías respiratorias, preferiblemente durante un período de
tiempo extendido o prolongado para mejorar más la eficacia. Los recubrimientos, envolturas y matrices protectoras en
tal forma de dosificación se pueden fabricar, por ejemplo, a partir de sustancias poliméricas o ceras bien conocidas en
la técnica farmacéutica.
En la presente memoria se dan a conocer composiciones farmacéuticas que comprenden la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables, en los que la cantidad de la ADPR de dilitio en la composición farmacéutica está en el intervalo de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición farmacéutica. En una realización, la cantidad de la ADPR de dilitio en la composición farmacéutica de la invención está en el margen de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 7 % p/p, de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 5 % p/p, de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 3 % p/p, de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 1 % p/p, de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 0,5 % p/p, de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 0,1 % p/p, aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 0,05 % p/p, de aproximadamente el 0,001 % aproximadamente el 0,01 % p/p, de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 0,005 % p/p, de aproximadamente el 0,005 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p, de aproximadamente el 0,005 % p/p a aproximadamente el 7 % p/p, de aproximadamente el 0,005 % p/p a aproximadamente el 5 % p/p, de aproximadamente el 0,005 % p/p a aproximadamente el 3 % p/p, de aproximadamente el 0,005 % p/p a aproximadamente el 1 % p/p, de aproximadamente el 0,005 % p/p a aproximadamente el 0,5 % p/p, de aproximadamente el 0,005 % p/p a aproximadamente el 0,1 % p/p, de aproximadamente el 0,005 % p/p a aproximadamente el 0,05 % p/p, de aproximadamente el 0,005 % p/p a aproximadamente el 0,01 % p/p, de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p, de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 7 % p/p, de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 5 % p/p, de aproximadamente
el 0,01 % p/p a aproximadamente el 3 % p/p, de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 1 % p/p, de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 0,5 % p/p, de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 0,1 % p/p, de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 0,05 % p/p, de aproximadamente el 0,05 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p, de aproximadamente el 0,05 % p/p a aproximadamente el 7 % p/p, de aproximadamente el 0,05 % p/p a aproximadamente el 5 % p/p, de aproximadamente
el 0,05 % p/p a aproximadamente el 3 % p/p, de aproximadamente el 0,05 % p/p a aproximadamente el 1 % p/p, de aproximadamente el 0,05 % p/p a aproximadamente el 0,5 % p/p, de aproximadamente el 0,05 % p/p a aproximadamente el 0,1 % p/p, de aproximadamente el 0,1 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p, de aproximadamente el 0,1 % p/p a aproximadamente el 7 % p/p, de aproximadamente el 0,1 % p/p a aproximadamente
el 5 % p/p, de aproximadamente el 0,1 % p/p a aproximadamente el 3 % p/p, de aproximadamente el 0,1 % p/p a aproximadamente el 1 % p/p, de aproximadamente el 0,1 % p/p a aproximadamente el 0,5 % p/p, de aproximadamente
el 0,5 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p, de aproximadamente el 0,5 % p/p a aproximadamente el 7 % p/p, de aproximadamente el 0,5 % p/p a aproximadamente el 5 % p/p, de aproximadamente el 0,5 % p/p a aproximadamente
el 3 % p/p, de aproximadamente el 0,5 % p/p a aproximadamente el 1 % p/p, de aproximadamente el 1 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p, de aproximadamente el 1 % p/p a aproximadamente el 7 % p/p, de aproximadamente
el 1 % p/p a aproximadamente el 5 % p/p, de aproximadamente el 1 % p/p a aproximadamente el 3 % p/p, de aproximadamente el 3 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p, de aproximadamente el 3 % p/p a aproximadamente el 7 % p/p, de aproximadamente el 3 % p/p a aproximadamente el 5 % p/p, de aproximadamente el 5 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p, de aproximadamente el 5 % p/p a aproximadamente el 7 % p/p, o de aproximadamente el 7 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición farmacéutica.
En una realización, la cantidad de la ADPR de dilitio en la composición farmacéutica de la invención está en el intervalo de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición farmacéutica. En una realización, la cantidad de la ADPR de dilitio en la composición farmacéutica de la invención está en el intervalo de aproximadamente el 0,1 % p/p a aproximadamente el 2,5 % p/p de la composición farmacéutica. En otra realización, la cantidad de la ADPR de dilitio en la composición farmacéutica de la invención está en el intervalo de aproximadamente el 0,5 % p/p a aproximadamente el 2 % p/p de la composición farmacéutica.
En un ejemplo, en la presente memoria se describe una composición farmacéutica idónea para la administración tópica en el ojo, las vías respiratorias y/o el tubo digestivo eficaz para el tratamiento y/o profilaxis de una infección por microorganismos o un trastorno de al menos un tejido del ojo, de las vías respiratorias, y/o del tubo digestivo, en donde la composición farmacéutica comprende la ADPR, en donde la cantidad de la ADPR está en el intervalo de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición farmacéutica.
En la presente memoria se describe una composición farmacéutica idónea para la administración tópica en el ojo, las vías respiratorias y/o el tubo digestivo, eficaz para el tratamiento y/o la profilaxis de una infección por microorganismos o un trastorno de al menos un tejido del ojo, de las vías respiratorias o del tubo digestivo, en donde la composición farmacéutica comprende: a) ADPR, en donde la cantidad de ADPR está en el intervalo de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición farmacéutica; y b) una o más sales metálicas, en donde el metal se selecciona del grupo que consiste en litio, zinc, cobalto y cobre. En un ejemplo, la cantidad de sal metálica en la composición farmacéutica está en el intervalo de aproximadamente el 0,0001 % p/p a aproximadamente el 2 % p/p de la composición farmacéutica. En otro ejemplo, la cantidad de sal metálica en la composición farmacéutica está en el intervalo de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 1 % p/p de la composición farmacéutica.
En una realización, el microorganismo se selecciona del grupo que consiste en bacterias, virus, hongos y amebas. En una realización, las bacterias son micobacterias. En una realización, la profilaxis es la profilaxis de la infección después de una abrasión de la córnea o una cirugía ocular.
En una realización, la composición farmacéutica de la invención es idónea para la administración ocular. En una realización específica, la composición farmacéutica de la invención idónea para la administración ocular comprende además un anestésico tópico que alivia el dolor. En una realización, el anestésico tópico se selecciona del grupo que consiste en proparacaína, lidocaína, tetracaína y combinaciones de las mismas.
En una realización, la composición farmacéutica de la invención comprende además un potenciador de la penetración que mejora la penetración de la ADPR de dilitio en los tejidos del ojo, en las vías respiratorias o en el tubo digestivo. En una realización específica, el potenciador de la penetración es un anestésico tópico.
En una realización, la composición farmacéutica de la invención comprende además un conservante antimicrobiano. En una realización, el conservante antimicrobiano se selecciona del grupo que consiste en tetraborato de sodio, ácido bórico, cloruro de benzalconio, timerosal, clorobutanol, metilparabeno, propilparabeno, alcohol feniletílico, EDTA, ácido sórbico, Onamer M y combinaciones de los mismos. En una realización, la cantidad de conservante antimicrobiano en la composición farmacéutica de la invención está en el intervalo de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 1,0 % p/p en peso de la composición farmacéutica. En una realización específica, la composición farmacéutica de la invención está en forma de una solución.
En una realización, la composición farmacéutica de la invención comprende además un codisolvente/tensioactivo. En una realización, el codisolvente/tensioactivo se selecciona del grupo que consiste en polisorbato 20, polisorbato 60, polisorbato 80, Pluronic F68, Pluronic F84, Pluronic P103, ciclodextrina, tiloxapol y combinaciones de los mismos. En una realización, la cantidad de codisolvente/tensioactivo en la composición farmacéutica de la invención está en el intervalo de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 2 % p/p de la composición farmacéutica.
En una realización, la composición farmacéutica de la invención comprende además uno o más aumentadores de la viscosidad. En una realización, el aumentador de la viscosidad se selecciona del grupo que consiste en alcohol polivinílico, polivinilpirrolidona, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, carboximetilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, polietilenglicol y combinaciones de los mismos. En una realización, la cantidad de aumentador de la viscosidad en la composición farmacéutica de la invención está en el intervalo de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 2 % p/p de la composición farmacéutica. En una realización específica, la composición farmacéutica de la invención está en forma de una solución.
En una realización, la composición farmacéutica de la invención está en forma de solución, suspensión, emulsión, pomada, crema, gel o una formulación de liberación controlada o liberación sostenida. En una realización, la composición farmacéutica de la invención está en forma de solución acuosa.
5.6.1 Formulaciones oculares tópicas
En determinadas realizaciones, una composición farmacéutica como la dada a conocer más arriba puede ajustarse específicamente para la aplicación tópica en el ojo. En ciertos ejemplos específicos descritos en la presente memoria se encuentran formulaciones farmacéuticas que comprenden la ADPR que se describe en la presente memoria como soluciones o suspensiones oftálmicas tópicas (colirios), que normalmente están disponibles como una solución isotónica estéril (es decir, a un pH entre aproximadamente 3 y aproximadamente 8, entre aproximadamente 4 y aproximadamente 8, entre aproximadamente 7 y aproximadamente 8, o de aproximadamente 7,4), que comprende además opcionalmente un conservante y/o un potenciador de la viscosidad.
El término "colirios" tal y como se usa en la presente memoria se refiere a una formulación líquida farmacéutica que se administra en forma de gotas sobre la superficie externa del ojo y que tiene un efecto local en el segmento posterior del ojo, incluida la coroides, el epitelio pigmentario retiniano, la retina, la mácula, la fóvea, el nervio óptico y el humor vítreo.
Una formulación farmacéutica que comprende la ADPR que se describe en la presente memoria puede formularse con agua purificada y ajustarse a pH fisiológico e isotonicidad. Los ejemplos de agentes tamponantes para mantener o ajustar el pH incluyen, pero no se limitan a ellos, tampones de acetato, tampones de citrato, tampones de fosfato y tampones de borato. Los ejemplos de ajustadores de la tonicidad son cloruro de sodio, manitol y glicerina.
A continuación, la formulación de colirios se divide opcionalmente en alícuotas en una serie de cartuchos desechables estériles independientes, cada uno de los cuales es idóneo para la dosificación unitaria, o en un solo cartucho para la dosificación unitaria. Un solo cartucho desechable de este tipo puede ser, por ejemplo, un dispensador de volumen específico cónico o cilíndrico, con un recipiente cuyas paredes laterales se pueden comprimir en la dirección radial a un eje longitudinal para dispensar el contenido del recipiente desde el mismo en un extremo del recipiente. Dichos recipientes desechables se pueden usar para dispensar los colirios de 0,3 a 0,4 ml por dosis unitaria y son idealmente adaptables para la administración de colirios.
Las soluciones o suspensiones de gotas oftálmicas para los ojos también pueden envasarse en forma de dosis múltiples, por ejemplo, como un frasco de plástico con un gotero para los ojos. En tales formulaciones, se añaden opcionalmente conservantes para evitar la contaminación microbiana después de abrir el recipiente. Los conservantes idóneos incluyen, entre otros: tetraborato de sodio, ácido bórico, cloruro de benzalconio, timerosal, clorobutanol, metilparabeno, propilparabeno, alcohol feniletílico, edetato disódico, ácido sórbico, policuaternio-1 u otros agentes conocidos por los expertos en la técnica y todos ellos está contemplado que se puedan usar en la presente invención. Las formulaciones que contienen conservantes pueden comprender de aproximadamente el 0,001 % a aproximadamente el 1,0 % en peso/volumen del conservante.
Pueden añadirse polímeros a las soluciones o suspensiones oftálmicas para aumentar la viscosidad del vehículo, con lo que se prolonga el contacto de la solución o la suspensión con la córnea y se mejora la biodisponibilidad. En determinadas realizaciones, dichos polímeros se seleccionan de derivados de la celulosa (por ejemplo, metilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa o carboximetilcelulosa), dextrano 70, gelatina, polioles, glicerina, polietilenglicol 300, polietilenglicol 400, polisorbato 80, propilenglicol, alcohol de polivinilo y povidona, o una combinación de los mismos.
Las soluciones o suspensiones oftálmicas que se describen en la presente memoria pueden comprender además un estabilizador/solubilizador tal como una ciclodextrina. En ciertas de tales realizaciones, la ciclodextrina se selecciona entre a -ciclodextrina, p -ciclodextrina, Y-ciclodextrina, hidroxipropil-p -ciclodextrina, hidroxipropil-Y-ciclodextrina, dimetilp -ciclodextrina y dimetil-y-ciclodextrina.
En determinadas realizaciones, una formulación farmacéutica que se describe en la presente memoria, tal como una formulación farmacéutica que comprende la ADPR, para su uso de acuerdo con la invención, puede administrarse en una formulación de solución o suspensión oftálmica de liberación sostenida.
En ciertas realizaciones, una formulación farmacéutica que se describe en la presente memoria, tal como una formulación farmacéutica que comprende la ADPR, para su uso de acuerdo con la invención, puede formularse para su administración a través de un sistema de administración de fármacos oculares, tal como, pero sin limitación, una forma de dosificación coloidal, tales como nanopartículas, nanomicelas, liposomas, microemulsiones, geles bioadhesivos y estrategias basadas en selladores de fibrina para mantener constante la concentración del fármaco en el sitio deseado. Otros sistemas de administración de fármacos oculares incluyen las lentes de contacto liberadoras de fármacos, la administración de fármacos mediada por ultrasonidos, iontoforesis ocular y microagujas recubiertas con fármacos.
En determinadas formas de realización, la frecuencia de administración puede variar mucho. En función de las necesidades de cada sujeto y de la gravedad de la enfermedad a tratar, dicha administración puede ocurrir una vez cada 6 meses, una vez cada 5 meses, una vez cada 4 meses, una vez cada 3 meses, una vez cada 2 meses, una vez al mes, una vez cada 3 semanas, una vez cada 2 semanas, una vez a la semana, una vez cada 6 días, una vez cada 5 días una vez cada 4 días una vez cada 3 días, una vez cada 2 días o una vez al día.
En ciertas realizaciones, la frecuencia de administración puede variar mucho, en función de las necesidades de cada sujeto y de la gravedad de la enfermedad a tratar, en donde tal administración puede ser de aproximadamente una vez a la semana a aproximadamente diez veces al día, tal como de aproximadamente tres veces a la semana a aproximadamente tres veces al día, o una o dos veces al día.
Una composición oftálmica puede ser idónea para la administración tópica a un ojo, eficaz para el tratamiento y/o profilaxis de una infección por microorganismos o un trastorno de al menos un tejido del ojo, en donde la composición oftálmica comprende: a) la ADPR, en donde la cantidad de ADPR está en el intervalo de aproximadamente el 0,01 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición oftálmica, y b) el cidofovir. En un ejemplo, la composición oftálmica comprende: a) la ADPR, en donde la cantidad de ADPR está en el intervalo de aproximadamente el 0,3 % p/p a aproximadamente el 3 % p/p de la composición oftálmica; y b) el cidofovir, en donde la cantidad de cidofovir está en el intervalo de aproximadamente el 0,05 % p/p a aproximadamente el 2 % p/p de la composición oftálmica.
5.6.2 Formulaciones para la administración intranasal o por inhalación.
En determinadas realizaciones, la composición farmacéutica dada a conocer en la presente memoria se administra por vía intranasal o por inhalación en las vías respiratorias. La composición farmacéutica de la invención se puede dar a conocer en forma de aerosol o solución para su administración con un recipiente presurizado, bomba, espray, atomizador, tal como un atomizador que usa la electrohidrodinámica para producir una niebla fina, o nebulizador, solo o en combinación con un propulsor adecuado, tal como el 1,1,1,2-tetrafluoroetano o el 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano. La composición farmacéutica de la invención también se puede dar a conocer como un polvo seco para insuflación, solo o en combinación con un vehículo inerte como la lactosa o los fosfolípidos; y gotas nasales. Para el uso intranasal, el polvo puede comprender un agente bioadhesivo, que incluye el quitosano o la ciclodextrina.
Las soluciones o suspensiones para su uso en un recipiente presurizado, bomba, pulverizador, atomizador o nebulizador pueden formularse para que contengan etanol, etanol acuoso o un agente alternativo idóneo para dispersar, solubilizar o prolongar la liberación del ingrediente activo dado a conocer en la presente memoria; un propulsor como disolvente; y/o un tensioactivo, como el trioleato de sorbitano, el ácido oleico o un ácido oligoláctico.
La composición farmacéutica dada a conocer en la presente memoria se puede micronizar hasta un tamaño idóneo para la administración por inhalación, tal como aproximadamente 50 micrómetros o menos, o aproximadamente 10 micrómetros o menos. Las partículas de tales tamaños se pueden preparar con un método de trituración conocido por los expertos en la técnica, tal como la molienda por chorro en espiral, molienda por chorro en lecho fluido, procesamiento de fluido supercrítico para formar nanopartículas, homogeneización a alta presión o secado con espray.
Las cápsulas, ampollas y cartuchos para su uso en un inhalador o insuflador pueden formularse para que contengan una mezcla en polvo de las composiciones farmacéuticas dadas a conocer en la presente memoria; una base de polvo idónea, tal como la lactosa o el almidón; y un modificador del rendimiento, como la L-leucina, el manitol o el estearato de magnesio. La lactosa puede ser anhidra o estar en forma de monohidrato. Otros excipientes o vehículos idóneos incluyen, pero no se limitan a ellos, dextrano, glucosa, maltosa, sorbitol, xilitol, fructosa, sacarosa y trehalosa. Las composiciones farmacéuticas dadas a conocer en la presente memoria para la administración inhalada/intranasal pueden comprender además un saborizante idóneo, tal como el mentol y el levomentol; y/o edulcorantes, tal como la sacarina y la sacarina sódica.
5.6.3 Formulaciones orales
Las composiciones farmacéuticas de la invención que son idóneas para la administración oral se pueden dar a conocer como formas de dosificación independientes, tales como, entre otras, comprimidos (p. ej., comprimidos masticables), comprimidos oblongos, cápsulas y líquidos (por ejemplo, jarabes saborizados). Dichas formas de dosificación contienen cantidades predeterminadas de ingredientes activos y pueden prepararse mediante los métodos farmacéuticos bien conocidos por los expertos en la técnica.
Las formas de dosificación oral dadas a conocer en la presente memoria se preparan por combinación de los ingredientes activos en una mezcla íntima con al menos un excipiente de acuerdo con las técnicas de composición farmacéutica convencionales. Los excipientes pueden tomar una amplia variedad de formas en función de la forma de preparación deseada para la administración. Por ejemplo, los excipientes idóneos para su uso en formas de dosificación de aerosol o líquido oral incluyen, pero no se limitan a ellos, agua, glicoles, aceites, alcoholes, saborizantes, conservantes y colorantes. Los ejemplos de excipientes idóneos para su uso en formas sólidas de dosificación oral (p. ej., polvos, comprimidos, cápsulas y comprimidos oblongos) incluyen, entre otros, almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, granulantes, lubricantes, aglutinantes y disgregantes.
En una realización, las formas de dosificación oral son comprimidos o cápsulas, en cuyo caso se emplean excipientes sólidos. En otra realización, los comprimidos se pueden recubrir mediante técnicas acuosas o no acuosas estándares. Estas formas de dosificación se pueden preparar mediante cualquiera de los métodos farmacéuticos. En general, las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación se preparan mediante la mezcla uniforme e íntima de los ingredientes activos con vehículos líquidos, vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y luego se le da forma al producto en la presentación deseada si fuera necesario.
Por ejemplo, se puede preparar un comprimido mediante la compresión o el moldeo. Los comprimidos por compresión se pueden preparar al comprimir en una máquina idónea los ingredientes activos en una forma que fluye con libertad, tal como polvo o gránulos, opcionalmente mezclados con un excipiente.
Los ejemplos de excipientes que se pueden usar en las formas de dosificación oral dadas a conocer en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a ellos, aglutinantes, cargas, disgregantes y lubricantes. Los aglutinantes idóneos para su uso en las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación incluyen, entre otros, almidón de maíz, almidón de patata u otros almidones, gelatina, gomas naturales y sintéticas como goma arábiga, alginato de sodio, ácido algínico, otros alginatos, tragacanto en polvo, goma guar, celulosa y sus derivados (p. ej., etilcelulosa, acetato de celulosa, carboximetilcelulosa de calcio, carboximetilcelulosa de sodio), polivinilpirrolidona, metilcelulosa, almidón pregelatinizado, hidroxipropilmetilcelulosa (p. ej., nos. 2208, 2906, 2910), celulosa microcristalina y mezclas de los mismos.
Las formas idóneas de celulosa microcristalina incluyen, entre otras, los materiales vendidos como AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (disponible de FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) y mezclas de los mismos. Un aglutinante específico es una mezcla de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa de sodio vendida como AVICEL RC-581. Los excipientes o aditivos anhidros o de baja humedad idóneos incluyen AVICEL-PH-103™ y Starch 1500 LM. Otras formas idóneas de celulosa microcristalina incluyen, pero no se limitan a ellas, celulosa microcristalina silicificada, tales como los materiales vendidos como PROSOLV 50, PROSOLV 90, PROSOLV HD90, PROSOLV 90 LM y mezclas de los mismos.
Los ejemplos de carga idóneos para su uso en las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación dadas a conocer en la presente memoria incluyen, pero no se limitan a ellos, talco, carbonato de calcio (por ejemplo, gránulos o polvo), celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, caolín, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón, almidón pregelatinizado y mezclas de los mismos. El aglutinante o relleno en las composiciones farmacéuticas está, en una realización, presente en aproximadamente un 50 % a aproximadamente un 99 % en peso de la composición farmacéutica o de la forma de dosificación.
En determinadas realizaciones, la carga puede incluir, pero no se limitan a ellas, copolímeros de bloque de óxido de etileno y óxido de propileno. Dichos copolímeros de bloque se pueden vender como POLOXAMER o PLURONIC e incluyen, pero no se limitan a ellos, POLOXAMER 188 n F, POLOXAMER 237 NF, POLOXAMER 338 NF, POLOXAMER 437 NF y mezclas de los mismos.
En determinadas realizaciones, la carga puede incluir, pero no se limitan a ellas, isomalt, lactosa, lactitol, manitol, sorbitol xilitol, eritritol y mezclas de los mismos.
Se pueden usar disgregantes en las composiciones para dar a conocer comprimidos que se desintegran cuando se exponen a un entorno acuoso. Los comprimidos que contienen demasiado disgregante pueden desintegrarse durante el almacenamiento, mientras que los que contienen muy poco puede que no se disgreguen a la velocidad deseada o en las condiciones deseadas. Por tanto, se puede usar una cantidad suficiente de disgregante que no sea ni en exceso ni demasiado poco para alterar perjudicialmente la liberación de los ingredientes activos con los que se forman formas sólidas de dosificación oral. La cantidad de disgregante usada varía según el tipo de formulación y es fácilmente discernible por los expertos en la técnica. En una realización, las composiciones farmacéuticas de la invención comprenden de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 15 % en peso del disgregante, o de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 5 % en peso del disgregante.
Los disgregantes que se pueden usar en las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación incluyen, entre otros, agar-agar, ácido algínico, carbonato de calcio, celulosa microcristalina, croscarmelosa sódica, povidona, crospovidona, polacrilina potásica, glicolato de almidón sódico, almidón de patata o tapioca, otros almidones, almidones pregelatinizados, otros almidones, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas y mezclas de los mismos.
Los deslizantes que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas y las formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a ellos, estearato de calcio, estearato de magnesio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol, otros glicoles, ácido esteárico, estearilfumarato de sodio, laurilsulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soja), estearato de zinc, oleato de etilo, laureato de etilo, agar y mezclas de los mismos. Otros deslizantes más incluirían, por ejemplo, un gel de sílice Syloid® (AEROSIL200, fabricado por WR Grace Co. de Baltimore, MD), un aerosol coagulado de sílice sintético (comercializado por Degussa Co. de Plano, TX), CAB-O-SIL (un producto de dióxido de silicio coloidal pirogénico vendido por Cabot Co. de Boston, MA), y mezclas de los mismos. Si acaso se emplean, los deslizantes se pueden usar en una cantidad de menos de aproximadamente 1 por ciento en peso de las composiciones farmacéuticas o formas de dosificación en las que se incorporen.
Las formas de dosificación líquidas para la administración oral incluyen emulsiones, microemulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además del ingrediente activo, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes que se usan habitualmente en la técnica, tales como, por ejemplo, agua u otros solventes, solubilizantes y emulsionantes tales como alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, aceites (en concreto, aceites de semilla de algodón, cacahuete, maíz, germen, oliva, ricino y sésamo), glicerol, alcohol tetrahidrofurílico, polietilenglicoles y ésteres de ácidos grasos con sorbitano, y mezclas de los mismos.
Además de los diluyentes inertes, las composiciones orales también pueden incluir adyuvantes tales como humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, edulcorantes, saborizantes, colorantes, aromatizantes y conservantes.
Las suspensiones, además del inhibidor o inhibidores activos, pueden contener agentes de suspensión como, por ejemplo, alcoholes isoestearílicos etoxilados, ésteres de polioxietilensorbitol y sorbitano, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, y mezclas de los mismos.
6 EJEMPLOS
6.1 Ejemplo 1. Prueba de inhibición de las calvass de dos (2) compuestos contra adenovirus del serotipo 3 Antecedentes
La sal sódica de adenosina 5'-difosforribosa ("compuesto A" o ADPR, Sigma A0752-500 mg, lote SLBJ4805V, en un vial de 500 mg) y la nicotinamida ("compuesto N," Sigma N0636-100G, lote SLB0315V, en un vial de 100 g) ("compuesto N") se obtuvieron de Sigma. El compuesto A se solubilizó a 120 mg/ml en agua para irrigación y luego adicionalmente a las concentraciones deseadas de 6 mg/ml y 2 mg/ml en DMEM (medio Eagle modificado de Dulbecco), FBS al 2 % (suero bovino fetal; medio de crecimiento del virus). Se preparó un volumen de 10 ml de una solución de 240 mg/ml del compuesto N en agua para irrigación. Se prepararon otras diluciones más del compuesto N en DMEM, FBS al 2 %. Los ensayos de inhibición de las calvas de adenovirus se montaron el mismo día. El resto del compuesto A solubilizado se colocó a 4 °C en la oscuridad.
Diluciones
El compuesto A solubilizado se diluyó 1:20 o 1:60 en el medio de crecimiento del virus para hacer las diluciones de las muestras de 6 mg/ml y 2 mg/ml, respectivamente. Se hicieron diluciones del compuesto N en soluciones que ya contenían el compuesto A. El diseño del experimento con los grupos 1 a 5 se describe en el texto que viene a continuación y se presenta en la tabla 1. Los grupos 2, 3 y 4 consisten en mezclas de muestras a varias concentraciones, «muestras», del compuesto A y del compuesto N. El grupo 4 también contiene varias cantidades de cidofovir, un antivírico contra los adenovirus.
Grupo 1: Compuesto N a 0, 60, 600 y 6000 pg/ml
Grupo 2 : Compuesto A a 2000 pg/ml con el compuesto N a 0, 60, 600 y 6000 pg/ml
Grupo 3 : Compuesto A (como en el primer estudio) a 6000 pg/ml con el compuesto N a 0, 60, 600 y 6000 pg/ml
Grupo 4 : Compuesto A (como en el primer estudio) a 2000 pg/ml, cidofovir a 20 micromolar, con el compuesto N a 0, 60, 600 y 6000 pg/ml
Grupo 5 : Cidofovir a 0, 20 y 100 micromolar
Planteamiento
Las células A549 se sembraron en placas de 7 x 104 células por pocillo en placas de 6 pocillos. Al cabo de 18 horas, se eliminó el medio de crecimiento y se añadió 1 ml de cada mezcla de muestra. Después de incubar 1 h a 37 °C, se le añadieron aproximadamente 50-75 unidades formadoras de calvas de virus de la gripe Ad3 por pocillo.
Se permitió que el virus se adsorbiera a las células durante 2 horas y luego se aspiró el medio desde las monocapas y se reemplazó con el medio de crecimiento de Ad3 que contenía las diluciones de muestra según la tabla 1, y agarosa. Toxicidad
Se evaluó la toxicidad frente a los criterios que vienen a continuación y se usó para valorar los efectos de las diluciones de muestra en las monocapas de células al finalizar el ensayo el último día. Los valores se recogen en la tabla 1 como un valor T.
0 - Sin citotoxicidad
1 - Ligero adelgazamiento de las células en comparación con los pocillos de control de células
2 - Adelgazamiento moderado de las células en comparación con los pocilios de control de células, tinción de las células moderadamente menos intensa en comparación con los pocillos de control de células, las calvas de los virus resultan visibles
3 - De adelgazamiento extremo de las células en comparación con los pocillos de control de células a ausencia total de células, tinción de las células de extremadamente menos intensa en comparación con los pocillos de control de células a ausencia de tinción debido a la falta de células, las calvas víricas no resultan visibles.
Resultados
El tamaño de las calvas se redujo con el tratamiento del compuesto A a 2000 y 6000 pg/ml en comparación con el control, véanse los recuentos de calvas en la tabla 1 y en la figura 1. La adición de concentraciones crecientes de nicotinamida tuvo un efecto adicional que fue disminuir el número de calvas discernibles. Una concentración de 6000 pg/ml de nicotinamida era tóxica para la monocapa de células A549 en todos los grupos. A una concentración de 600 pg/ml de nicotinamida sola, las calvas de los adenovirus parecían mucho más grandes, posiblemente debido a su efecto sobre la monocapa de células. Cuando se mezclaron 600 pg/ml de nicotinamida con el compuesto A en el grupo 2 y en el grupo 3, disminuyó el número de calvas discernibles. La adición de cidofovir a 20 pM fue además inhibidora en el grupo 4 y tuvo un efecto sinérgico en comparación con el grupo 3. Estos resultados se confirmaron mediante el análisis de toma de imágenes convencional para determinar el porcentaje de área de las calvas (véase la figura 2). El análisis de las imágenes se realizó con Adobe Photoshop. Para realizar este análisis, el contraste se ajustó por igual en todas las placas de cultivo para identificar mejor la formación de las calvas de virus. Se seleccionó un área circular estándar de 78456 píxeles por placa en el centro de cada placa para evitar artefactos en los bordes relacionados con el cultivo celular. La función 'Gama de colores' se utilizó para identificar el número de píxeles blancos dentro del área circular y luego se dividió por el área total en píxeles para calcular el porcentaje de área de las calvas. Los resultados se analizaron en Microsoft Excel 2016. Se promediaron los valores de las placas por duplicado. El efecto inhibidor sinérgico del cidofovir (20 pM) con la ADPR (2000 pg/ml) se confirmó en el análisis de imagen (figura 2), de modo que la combinación tuvo un beneficio casi del tripe (0,25 % observado frente al 0,69 % esperado) sobre el efecto esperado si los compuestos fueran simplemente aditivos.
Tabla 1. Recuento de calvas, puntuación de la toxicidad y código de las placas
Figure imgf000022_0001
Fármaco de control
Se sabe que el cidofovir disminuye el tamaño de las calvas de adenovirus y se usó en las concentraciones según la tabla 1. El cidofovir hizo disminuir el tamaño y el número de las calvas a medida que aumentaba su concentración.
Materia prima
Tabla 2. Materia prima
Figure imgf000023_0001
6.2 Ejemplo 2. Inhibición de las calvas del adenovirus de serotipo 3 por ADPR y cloruro de litio
Antecedentes
La sal sódica de adenosina 5'-difosforribosa ("muestra A" o ADPR, Sigma A0752-500 mg, lote SLBJ4805V, en un vial de 500 mg) y el cloruro de litio ("muestra L," Amresco 0416-100 g, lote 3005C057, en un vial de 100 g) se recibieron en forma de polvo y se almacenaron hasta su uso. El día del ensayo, la muestra A se solubilizó a 120 mg/ml (200 mM) en agua para irrigación y luego a las concentraciones deseadas de 4 mM, 1,33 mM y 0,44 mM en el medio de crecimiento del virus (DMEM, suero bovino fetal al 2 % (FBS) y antibiótico, antimicótico). Se preparó una solución de 200 mM de la muestra L en agua para irrigación. Se hicieron más diluciones de la muestra L en el medio de crecimiento del virus para lograr las concentraciones deseadas de la tabla 3. El resto de la muestra A solubilizada se colocó a 4 °C en la oscuridad.
Diluciones
La muestra A y la muestra L solubilizadas se diluyeron 1:50, 1:150 y 1:450 en el medio de crecimiento del virus para hacer diluciones de las muestras. Se prepararon mezclas de las muestras A y L por dilución de las soluciones concentradas en el medio de crecimiento del virus.
Estrategia
Las células A549 se sembraron en placas a 7 x 1034 células por pocillo en placas de 6 pocillos. Al cabo de 18 horas, se eliminó el medio de cultivo y se le añadió 1 ml de cada mezcla de muestra. Después de incubar una hora a 37 °C, se le añadieron aproximadamente 50-75 unidades formadoras de calvas de Ad3 por pocillo. Se permitió que el virus se adsorbiera a las células durante 2 horas y luego se aspiró el medio de las monocapas y se reemplazó por el medio de crecimiento del virus que contenía las diluciones de las muestras según la tabla 3, y agarosa.
Toxicidad
La toxicidad se evaluó frente a los criterios que vienen a continuación y se usó para valorar los efectos de las diluciones de la muestra sobre las monocapas de células al finalizar el ensayo el último día. Los valores se recogen en la tabla 3 como un valor T.
0 - Sin citotoxicidad
1 - Ligero adelgazamiento de las células en comparación con los pocillos de control de células
2 - Adelgazamiento moderado de las células en comparación con los pocillos de control de células, tinción de las células moderadamente menos intensa en comparación con los pocillos de control de células, las calvas de virus resultan visibles
3 - De adelgazamiento extremo de las células en comparación con los pocillos del control de células a ausencia total de células, tinción de las células de extremadamente menos intensa en comparación con los pocillos de control de células a ausencia de tinción debido a la falta de células, las calvas víricas no son visibles.
Resultados
El tamaño de las calvas se redujo con el tratamiento de la muestra A a 0,44, 1,33 y 4,0 mM en comparación con el control. Las calvas de adenovirus aparecían mucho más grandes que el control a una concentración de 1,33 mM de la muestra L sola. Se observó un efecto sinérgico al combinar la muestra A y la muestra L a 4 mM cada una; se determinó que las calvas eran más pequeñas en promedio que los cultivos tratados con el control. Ninguna de las muestras fue citotóxica a las concentraciones analizadas. Los recuentos de calvas se muestran en la tabla 3 que viene a continuación, y las imágenes de las placas se muestran en la figura 3. En la figura 4 se representa el porcentaje de inhibición de las calvas del adenovirus de serotipo 3 por la muestra A (es decir, ADPR), la muestra L (es decir, LiCl) y la combinación de la muestra A y muestra L a una concentración de 4 mM. Este análisis se realizó mediante el análisis de imagen convencional para determinar el porcentaje del área de las calvas (véase la figura 4). El análisis de las imágenes se realizó con Adobe Photoshop. Para realizar este análisis, el contraste se ajustó por igual en todas las placas para identificar mejor la formación de las calvas. Se seleccionó un área circular estándar de 45621 píxeles por placa en el centro de cada placa para evitar artefactos en los bordes relacionados con el cultivo celular. La función 'Gama de colores' se utilizó para identificar el número de píxeles blancos dentro del área circular y luego se dividió por el área total de píxeles para calcular el porcentaje de área de las calvas. Los resultados se analizaron en Microsoft Excel 2016. Se promediaron los valores de las placas por duplicado. Tal y como se muestra en la figura 4, se observó un efecto sinérgico al combinar la muestra A y la muestra L a una concentración de 4 mM de cada muestra. La combinación tuvo una mejora del 31 % (6,31 % observado frente al 9,11 % esperado) sobre el efecto esperado si los compuestos fueran simplemente aditivos.
Tabla 3. Recuento de calvas, puntuación de la toxicidad y código de las placas
Figure imgf000024_0001
En este ensayo se utilizó la misma materia prima y fármaco de control que se describen en el ejemplo 1.
6.3 Ejemplo 3. Estudio piloto de prueba para desarrollar un modelo de conjuntivitis vírica en los conejos blancos de Nueva Zelanda
Propósito/Objetivo(s): El propósito de este estudio fue desarrollar un modelo de conjuntivitis vírica en los conejos blancos de Nueva Zelanda.
Protocolo
Preparación de los animales: Se anestesiaron tres animales con una inyección intramuscular de ketamina (hasta 50 mg/kg) y xilazina (hasta 10 mg/kg) para los procedimientos de inoculación del virus. Después de la anestesia, los ojos se limpiaron con betadine y luego se enjuagaron con solución salina básica (BSS). Se insertó un separador palpebral para retraer los párpados. Se aplicó una o dos gotas de proparacaína (0,5 %) en ambos ojos. La escarificación de la córnea se realizó el día 0. La capa epitelial de cada córnea se escarificó con un patrón de arañazos cruzados de 3 x 3 con una aguja estéril del calibre 25. Después de la escarificación corneal, ambas córneas de cada conejo se inocularon por vía tópica con 2 x 106 UFC de adenovirus, del serotipo 5 (Ad5). Para lograr esto, se administró por vía tópica 0,02 ml de la solución de 1,1 x 108 UFC de Ad5/ml con el uso de una pipeta estéril. Después de la inoculación con Ad5, los animales se recuperaron de la anestesia.
Artículo problema y de control
Se preparó el artículo problema, una formulación de adenosina-difosforribosa (sal sódica) al 2,0 % que contenía tetraborato al 0,057 %, ácido bórico al 1,20 % y PEG-300 al 0,02 %, y se ajustó su pH a 7,08. Se preparó el artículo de control, una solución taponada que contenía NaCl al 0,2 %, tetraborato al 0,057 %, ácido bórico al 1,20 % y PEG-300 al 0,02 %, y su pH era de 6,97.
Administración de los artículos problema y de control
Los tratamientos se administraron de acuerdo con la tabla de diseño del estudio que viene a continuación (véase la tabla 4). El artículo problema o de control se administró por vía tópica tres veces al día (25 pl por gota con dos gotas por dosis) (TID) mientras duró el estudio.
Tabla 4. Diseño del estudio
Figure imgf000025_0001
Resumen de los resultados
La exploración ocular que se basó en el sistema de puntuación McDonald-Shadduck mostró algo de supuración por encima de lo normal (puntuaciones de "1") desde el día 1 al 4, pero fue más abundante para todos los grupos en la exploración del día 7 (puntuaciones de "2"). Hacia el día 10, la supuración fue menor, excepto para el animal P7279 del grupo 2. La congestión de la conjuntiva no fue tan fuerte, aunque las puntuaciones del día 1 fueron las más altas (el 50 % de las puntuaciones fueron de "2") para los tres animales. Aunque la puntuación de la congestión de la conjuntiva para los días 7 y 10 fueron en su mayoría de "2", la congestión se limitó al tercer párpado. Cabe señalar que el tercer párpado es aún más sensible a los irritantes que la propia conjuntiva.
En las figuras 5 a 7 se resumen los cambios observados en la superficie de la córnea en el sitio de la inoculación del virus. Los rasguños de la córnea proporcionan la base para que el virus se pegara al epitelio de la córnea y fueron los sitios donde apareció la opacidad y el enturbiado de la córnea. Durante el transcurso del estudio, el animal n.° P7280 tratado con el artículo problema fue el que mejoró más, con disminución de la opacidad corneal tanto en los rasguños corneales como en las áreas de la superficie de la córnea.
Conclusión
La dosis A del artículo problema al 2% redujo la opacidad de la córnea en comparación con el vehículo y el control sin tratar.
6.4 Ejemplo 4. Síntesis de la ADPR de dilitio (LÍ 2ADPR)
La ADPR de dilitio (Li2ADPR) se sintetizó a partir del ácido libre del dinucleótido de nicotinamida y adenina (NAD+) en las condiciones de hidrólisis con hidróxido de litio. El esquema de síntesis se describe a continuación:
Esquema 1: Síntesis de la ADPR de dilitio (Li2ADPR)
Figure imgf000026_0001
Los parámetros de la instrumentación se muestran en la tabla 6.
Tabla 6. Parámetros de la instrumentación
Figure imgf000026_0002
El material de partida, el dinucleótido de p-nicotinamida y adenina (NAD+), se adquirió de Codexis como un ácido libre y se usó para la hidrólisis con hidróxido de litio para eliminar el grupo nicotinamida, lo que dio como resultado la sal de litio de la adenosina 5'-difosforribosa (ADPR). Se añadió un exceso de LiOH para mantener el pH de la solución de reacción entre 10 y 10,5. La hidrólisis se controló por HPLC. Se consideró que la hidrólisis estaba completa después de 8 días. El producto hidrolizado se aisló mediante trituración en MeOH, agua y EtOH para eliminar el exceso de LiOH y nicotinamida.
Experimento y resultados
Se disolvió el NAD+ (10,00 g, 15,07 mmol) en agua (250 l). Se le añadió LiOH sólido para ajustar la solución desde el pH 2,78 al 11,21. La cantidad de LiOHH2O añadida fue de 0,809 g. Se advirtió un ligero cambio de color a amarillo claro y se detectó un proceso ligeramente exotérmico. Se observó una disminución gradual del pH mientras continuaba la hidrólisis. La solución se agitó a temperatura ambiente (TA) durante 8 días, durante los cuales se le añadió el LÍOHH2O periódicamente para mantener el pH de la solución de reacción a 10-10,5. La cantidad total de LiOH-hbO utilizado para llevar la reacción hasta su finalización fue de 1,624 g (2,57 eq.). El progreso de la reacción se controló mediante análisis por HPLC. Al final de la reacción, la solución tenía un color vino tinto con una pequeña cantidad de precipitado blanco flotando en la solución. El sólido se retiró por filtración. Se le añadió carbón activado (~35 g). La mezcla se agitó a TA durante 20 h y se filtró para dar un filtrado de color amarillo claro. El filtrado se concentró mediante evaporación rotatoria. El residuo se suspendió en MeOH (100 ml), se agitó a TA durante 1 h y se filtró. Se disolvió en agua una alícuota del sólido de la filtración y su pH era de 10. Se evaporó el filtrado y se secó el sólido residual a alto vacío. Se disolvió una alícuota del sólido en agua y su pH fue de ~7. Este sólido se suspendió en EtOH (50 ml) y la suspensión se agitó a TA durante 2 días. El sólido se recogió por filtración, se enjuagó con EtOH (10 ml) y se secó adicionalmente a alto vacío para dar 3,246 g de un sólido de color amarillo claro.
Esta muestra sólida se sometió a análisis elemental y los resultados se muestran en la tabla 7, lo que confirma que el producto es una sal de dilitio con la fórmula molecular C15H21L¡2N5OuP2-1,1H2O. La ADPR se confirmó además mediante análisis por HPLC (véase la figura 8) y espectrometría de masas (véase la figura 9).
Tabla 7. Resultados del análisis elemental
Figure imgf000027_0001
6.5 Ejemplo 5. Eficacia de la ADPR de dilitio contra el adenovirus: estudio in vitro
Antecedentes
La ADPR de dilitio, 150 mg de polvo, se conservó en un vial de vidrio ("muestra A") a 4 °C en la oscuridad hasta su uso. El día del ensayo, la muestra A se solubilizó a 200 mg/ml en 750 gl de agua para irrigación y luego se diluyó adicionalmente hasta las concentraciones deseadas. El compuesto se disolvió fácilmente. Se analizó la muestra A solubilizada para determinar las propiedades inhibidoras de calvas contra el adenovirus 3 y el adenovirus 5 (Ad3 y Ad5).
Diluciones
La muestra A solubilizada se diluyó a 4 mg/ml, 2 mg/ml, 1 mg/ml y 0,5 mg/ml en el medio de crecimiento vírico (DMEM, suero bovino fetal (FBS) al 2 % y antibiótico, antimicótico).
Estrategia
Las células A549 se sembraron en placa a 7 x 104 células por pocillo en placas de 6 pocillos. Al cabo de 18 h, se retiró el medio de cultivo y se añadió 1 ml de cada mezcla de muestra por pocillo. Después de incubar durante 1 h a 37 °C, se añadieron por pocillo aproximadamente 50-75 unidades formadoras de calvas de Ad3 y, por separado, de Ad5. Se adsorbió el virus a las células durante 2 h y luego se aspiró el medio de las monocapas y se reemplazó por el medio de crecimiento vírico que contenía diluciones de la muestra A de 0, 0,5, 1,0, 2,0 y 4,0 mg/ml, y agarosa.
Resultados
Se redujeron el tamaño y el número de las calvas de Ad3 y Ad5 mediante la muestra A a 4 mg/ml y 2 mg/ml. Además, las monocapas mostraron un adelgazamiento moderado a 4 y 2 mg/ml en comparación con los pocillos de control con una tinción menos intensa que los pocillos de control. La monocapa delgada dificultaba la delimitación de las calvas. Eran visibles muy pocas calvas en comparación con el control. A diluciones de 1 mg/ml y 0,5 mg/ml, el tamaño y el número de calvas de Ad3 y Ad5 se redujeron en número y tamaño, y la monocapa mostró un ligero adelgazamiento en comparación con los pocillos de control de las células. La media de los recuentos de las calvas a las concentraciones de la muestra A fueron los siguientes:
Ad3: 4 mg/ml - 29; 2 mg/ml - 10; 1 mg/ml - 44; 0,5 mg/ml - 54; 0 mg/ml - 55
Ad5: 4 mg/ml - 7; 2 mg/ml - 7; 1 mg/ml - 25; 0,5 mg/ml - 53; 0 mg/ml - 65
Conclusión
Se ha demostrado que la ADPR de dilitio redujo eficazmente el efecto citopático, según lo indicado por el tamaño y el número de las calvas, causado por adenovirus (Ad3 y Ad5) cultivados en un cultivo celular de las células A549. Además, el adelgazamiento sensible a la dosis observado en la monocapa es coherente con la replicación reducida observada en otras líneas de células cancerosas descritas en el ejemplo 7.
6.6 Ejemplo 6. Eficacia en la queratoconjuntivitis: estudio in vivo
Este estudio se diseñó para evaluar la eficacia de la ADPR de dilitio en un modelo de conjuntivitis vírica en los conejos.
6.6.1 Diseño experimental
6.6.1.1 Sistema problema
Especie: Oryctolagus cuniculus
Cepa: conejos blancos de Nueva Zelanda
Sexo: Hembra
Edad: Acorde con el peso
Peso: Aproximadamente de 2,5 a 3,0 kilogramos al inicio del estudio
Número: 8 (nunca se han sometido a ninguna experimentación previa)
Método de identificación: etiqueta de oreja y marca de la jaula
Aclimatación mínima: 5 días
6.6.1.2 Alojamiento
Los animales se alojaron con las condiciones de nivel de bioseguridad 2 (NBS-2) para los animales después de la inoculación con el Ad5. Los animales se alojaron por separado antes y durante el estudio para disminuir la probabilidad de que los compañeros de jaula les provoquen lesiones oculares.
6.6.1.3 Artículos problema/de control
1. Inoculo - Adenovirus del serotipo 5 (Ad5)
(a) Características fisicoquímicas y descripción de la composición: virus propagado en las células A549 en DMEM con suero bovino fetal al 8 %. Células y sobrenadante recogidos, sonicados y clarificados por centrifugación a baja velocidad. Título infeccioso por TCID50: 5,0 x 109 unidades formadoras de calvas (UFC) por ml.
(b) Condición de almacenamiento: congelado de -60 a -80 °C
2. Artículo problema: ADPR de dilitio
(a) Masa molecular: aproximadamente 571,18
(b) Condiciones de conservación: refrigerado a 2-8 °C
3. Vehículo de control
(a) Composición: cloruro de sodio al 0,31 %, tetraborato de sodio al 0,1 %, ácido bórico al 1 %, polietilenglicol 300 (PEG-300) al 0,35 % en agua desionizada (DI)
(b) Condiciones de conservación: refrigerado a 2 °C-8 °C
4. Preparación del artículo problema/de control
(a) Se suministró el Ad5 en una única alícuota para ambos días de inoculación. Inmediatamente antes de la primera inoculación de virus el día -1, el virus se descongeló y se llevó a temperatura ambiente. Se diluyeron 0,05 ml (50 pl) de la solución de 5,0 x 109 UFC de Ad5/ml con 1,5 ml del medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) para crear una solución de 1,61 x 108 UFC de Ad5/ml. Después de la primera inoculación el día -1, la solución del virus restante se almacenó refrigerada a 2-8 °C hasta la segunda inoculación el día 0. La solución del virus no se volvió a congelar.
(b) Vehículo: Se pesaron 55,8 mg de cloruro de sodio, 18 mg de tetraborato de sodio, 180 mg de ácido bórico y 63 mg de PEG-300 en un vial. Se agregaron 14 ml de agua DI y el contenido del vial se batió, se agitó con vórtex y/o se sometió a ultrasonidos si era necesario hasta que se formó una solución transparente. El pH de la solución se analizó con tiras de prueba del pH y se ajustó a 7,0­ 7,2, si era necesario, con más hidróxido de sodio (NaOH) o ácido bórico. A continuación, el volumen se llevó hasta 18 ml con más agua desionizada para preparar una solución de cloruro de sodio al 0,31 %, tetraborato de sodio al 0,1 %, ácido bórico al 1 %, y PEG-300 al 0,35 %. El contenido del vial se esterilizó por filtración a través de un filtro de 0,2 o 0,22 gm.
(c) ADPR de dilitio a dosis alta: Se pesaron 240 mg de la ADPR de dilitio en un vial. En otro vial se pesaron 12 mg de tetraborato de sodio, 120 mg de ácido bórico y 42 mg de PEG-300. Se agregaron 7 ml de agua DI y el contenido del vial se batió, se agitó con vórtex y/o se sometió a ultrasonidos si era necesario hasta que se formó una solución transparente. La solución se transfirió al vial que contenía la ADPR de dilitio. El volumen se llevó hasta 9,5 ml con agua desionizada y el contenido del vial se batió, se agitó con vórtex y/o se sometió a ultrasonidos si era necesario hasta que se formó una solución transparente. El pH de la solución se analizó con tiras de prueba de pH y se ajustó a 7,0-7,2, si era necesario, con más hidróxido de sodio (NaOH) o ácido bórico. A continuación, el volumen se llevó hasta 12 ml con más agua desionizada para preparar una solución de ADPR de dilitio al 2,0 %. El contenido del vial se esterilizó por filtración a través de un filtro de 0,2 o 0,22 gm.
(d) ADPR de dilitio a dosis media: se mezclaron 1 parte de vehículo y 1 parte de la formulación de dosis alta para preparar una solución de ADPR de dilitio al 1,0 %.
(e) ADPR de dilitio a dosis baja: se mezclaron 3 partes de vehículo y 1 parte de la formulación de dosis alta para preparar una solución de ADPR de dilitio al 0,5 %.
(f) Las soluciones para dosificación se dividieron en alícuotas para cada una de las dosificaciones (3 viales por día) y se conservaron refrigeradas a 2-8 °C. Antes de la dosificación, se dejó que cada solución de dosificación alcanzara la temperatura ambiente. Después de la dosificación, las alícuotas se conservaron o desecharon en la habitación donde se encontraban los animales de estudio, y no se volvieron a transferir a la sala de formulación ni a ninguna otra sala del animalario.
6.6.1.4 Detalles de la administración del artículo problema/de control
1. Exploraciones previas al tratamiento
Antes de la colocación en el estudio, cada animal se sometió a una exploración oftálmica (biomicroscopía con lámpara de hendidura y oftalmoscopia indirecta) realizada por el director del estudio. Los hallazgos oculares se puntuaron de acuerdo con un sistema de puntuación de McDonald-Shadduck modificado (véase el apartado 6.6.1.5). El criterio de aceptación para la inclusión en el estudio fue una puntuación de "0" en todas las variables.
2. Anestesia
Los animales se anestesiaron con una inyección intramuscular de ketamina (hasta aproximadamente 50 mg/kg) y xilazina (hasta aproximadamente 10 mg/kg) para los procedimientos de inoculación del virus.
3. Procedimiento de escarificación de la córnea e inoculación del virus
Se inoculó el virus en ambos ojos a todos los animales del estudio los días -1 y 0. Los animales se anestesiaron como se describe más arriba. Los ojos se limpiaron con betadine (no se usó betadine el día 0) y luego se enjuagaron con solución salina básica (BSS). Se insertó un separador palpebral para retraer los párpados. Se aplicaron de una a dos gotas de proparacaína (0,5 %) en ambos ojos. Se pueden usar más anestésicos tópicos durante el procedimiento según sea necesario. La escarificación corneal se realizó en ambos ojos escarificando la capa de epitelio de cada córnea con un patrón de rasguños cruzados de 3 x 3 con una aguja estéril del calibre 25. Después de la escarificación de la córnea, se inocularon ambas córneas de cada conejo al administrarles 0,015 ml (15 gl) de la solución a 1,61 x 108 UFC de Ad5/ml por vía tópica en cada ojo para cada inoculación con una pipeta estéril, lo que da como resultado una dosis de 2,42 x 106 UFC de Ad5 por ojo. Después de cada inoculación de Ad5, los animales se recuperaron de la anestesia.
4. Asignación a los grupos
El día 1 antes de la dosificación, se evaluó la gravedad de la infección en todos los animales, y los animales se asignaron a uno de los 4 grupos experimentales (véase más abajo) basándose en la gravedad de la infección. A los animales se les asignó un rango numérico del 1 al 8 según la gravedad de la infección en orden decreciente (al animal con la infección más grave se le asignó un rango = 1). Luego se asignaron a los grupos experimentales de acuerdo con el siguiente esquema:
Tabla de asignación a los grupos
Figure imgf000029_0001
5. Administración de los artículos problema/de control
Los artículos problema/de control se administraron por vía tópica en ambos ojos (OU) como dos gotas de 25 pl tres veces al día (para completar en un día de 8 h; dosis de la mañana, del mediodía y de la tarde con una separación de ~3-4 horas) durante 7 días a partir del día 1 (~24 h después de la segunda inoculación del virus) de acuerdo con la tabla de diseño del estudio que viene a continuación:
Figure imgf000030_0001
OU: ambos ojos; NP: no procede; TID: tres veces al día
•La dosificación se realizó para un día de 8 h; las dosis a la mañana, al mediodía y a la tarde tenían una diferencia de al menos ~3-4 h.
••Las exploraciones y la fotografía del día 1 se realizaron antes de iniciar la dosificación; todas las demás exploraciones y fotografía se realizaron ~30 min después de la tercera dosis del día.
6. Observaciones y mediciones en vida
(a) Observaciones generales de salud: Se observaron los animales dentro de sus jaulas una vez al día durante el período de estudio. Se observó a cada animal en busca de cambios en la apariencia y el comportamiento general. Cualquier observación anómala fue notificada al director del estudio. Se realizaron y registraron las observaciones generales de salud a diario comenzando el día -1 y continuando durante todo el estudio (9 días en total).
(b) Masa corporal: los animales se pesaron antes de la inoculación y antes del sacrificio.
(c) Exploración clínica de los ojos: Las exploraciones clínicas de los ojos (solo biomicroscopia con lámpara de hendidura) se realizaron los días 1, 2, 3 y 7. El día 1, la exploración se realizó antes de iniciar la dosificación. En los demás días, las exploraciones se realizaron ~30 minutos después de la última dosis del día (es decir, de la tercera dosis). El día 7, se realizó la exploración inmediatamente antes del sacrificio de cada animal. El director del estudio realizó las exploraciones con la lámpara de hendidura. Los hallazgos oculares se puntuaron de acuerdo con un sistema de puntuación de McDonald-Shadduck modificado (véase el apartado 6.6.1.5 que viene a continuación).
(d) Fotografías con la lámpara de hendidura: se tomaron fotografías con la lámpara de hendidura los días 1, 3 y 7. El día 1, se tomaron las fotografías antes de iniciar la dosificación. En los demás días, se tomaron las fotografías ~30 min después de la última dosis del día (es decir, de la tercera dosis). El día 7, se tomaron las fotografías inmediatamente antes del sacrificio de cada animal.
6.6.1.5 Sistema de puntuación de McDonald-Shadduck modificado
A continuación, se ilustra un sistema de puntuación de McDonald-Shadduck modificado (véase T. McDonald y J. A. Shadduck, "Eye irration", en Advances in Modern Toxicology: Dermatoxicology, F. Marzulli y H. I. Maibach, Eds., págs.
579-582, Hemisphere Publishing Corporation, Washington, DC, EE. UU., 1977):
1. Exploración
1.1. Utilice la lámpara de hendidura para observar lo siguiente:
A. Supuración conjuntival
B. Congestión conjuntival
C. Hinchazón conjuntival
D. Córnea
E. Área de la superficie afectada en la córnea
F. Paño corneal
G. Respuesta pupilar
H. Turbidez acuosa
I. Célula acuosa
J. Afectación del iris
K. Cristalino
L. Turbidez vítrea
M. Célula vítrea
1.2. Utilice el oftalmoscopio indirecto para lo siguiente:
A. Vítreo
B. Hemorragia vítrea
C. Desprendimiento de retina
D. Hemorragia en la retina
E. Inflamación coroidea/retiniana
1.3. Prepare al animal para la observación con una de las tres soluciones para dilatar la pupila. Por lo general, son suficientes dos gotas de preparaciones oftálmicas de atropina, tropicamida o fenilefrina.
A. La elección del dilatador se suele describir en el protocolo del estudio.
1.4. Espere hasta que se dilate la pupila del animal. La dilatación de la pupila puede llegar a tardar hasta 60 min.
puración conjuntiva!
2.1. La Supuración se define como un precipitado gris blanquecino del ojo.
2.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Normal. Sin supuración.
B. 1 = Supuración superior a lo normal y presente en la parte interna del ojo, pero no en los párpados ni en el pelaje de los párpados.
C. 2 = La supuración es abundante, se observa fácilmente y se ha acumulado en los párpados y el pelaje de los párpados.
D. 3 = La supuración ha estado fluyendo sobre los párpados para mojar sustancialmente el pelaje de la piel que rodea el ojo.
ongestión conjuntiva!
3.1. La congestión hace que los vasos sanguíneos del ojo se agranden.
3.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Normal. Puede aparecer de blanqueado a rosa rojizo sin inyección perilimbal (excepto en las posiciones 12:00 y 6:00) con los vasos de la conjuntiva palpebral y bulbar fácilmente observables. B. 1 = Un rubor de color rojizo predominantemente confinado a la conjuntiva palpebral con alguna inyección perilimbal, pero confinado principalmente a las partes inferior y superior del ojo desde las posiciones de las 4:00 a las 7:00 y de las 11:00 a la 1:00.
C. 2 = Color rojo brillante de la conjuntiva palpebral con inyección perilimbal acompañante que cubre al menos el 75 % del perímetro de la región perilimbal.
D. 3 = Color rojo oscuro, carnoso, con congestión de la conjuntiva bulbar y palpebral junto con una inyección perilimbal pronunciada y la presencia de petequias en la conjuntiva. La petequia predomina generalmente a lo largo de la membrana nictitante y la conjuntiva palpebral superior. zón conjuntiva!
4.1. Definición: Hinchazón de la conjuntiva.
4.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Hinchazón normal o nula del tejido conjuntival
B. 1 = Hinchazón por encima de lo normal sin eversión de los párpados (se percibe fácilmente al notar que los párpados superior e inferior están colocados como en el ojo normal); la hinchazón generalmente comienza en el fondo del saco inferior cerca del canto interno.
C. 2 = Hinchazón con alineación incorrecta de la aproximación normal de los párpados superior e inferior; confinado principalmente al párpado superior, de modo que, en las etapas iniciales, la aproximación incorrecta de los párpados comienza por la eversión parcial del párpado superior. En esta etapa, la hinchazón se limita generalmente al párpado superior con algo de hinchazón en el fondo del saco inferior.
D. 3 = Hinchazón definida con eversión parcial de los párpados superior e inferior esencialmente equivalente. Esto se puede observar fácilmente mirando al animal de frente y observando la posición de los párpados; si los márgenes de los ojos no coinciden, se ha producido una eversión.
E. 4 = La eversión del párpado superior es pronunciada con una eversión menos pronunciada del párpado inferior. Es difícil retraer los párpados y observar la región perilimbal.
ción del iris
5.1. Revise el iris para ver si hay hiperemia de los vasos sanguíneos.
5.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Iris normal sin hiperemia de los vasos sanguíneos.
B. 1 = Inyección mínima de los vasos secundarios pero no de los terciarios. Generalmente uniforme, pero puede ser de mayor intensidad en la posición de 12:00 a 1:00 o 6:00. Si se limita a esta área, los vasos terciarios deben estar sustancialmente hiperémicos.
C. 2 = Inyección mínima de los vasos terciarios e inyección de mínima a moderada de los vasos secundarios.
D. 3 = Inyección moderada de los vasos secundarios y terciarios con leve hinchazón del estroma del iris (la superficie del iris aparece ligeramente rugosa, por lo general más predominante cerca de las posiciones de las 3:00 y las 9:00).
E. 4 = Inyección marcada de los vasos secundarios y terciarios con hinchazón marcada del estroma del iris. El iris parece rugoso; puede ir acompañado de hemorragia (hipema) en la cámara anterior.
6.1. Revise la córnea en busca de anomalías.
6.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Córnea normal
B. 1 = Alguna pérdida de transparencia. Solo están afectados el epitelio y/o la mitad anterior del estroma. Las estructuras subyacentes se ven con claridad, aunque es posible que se observe algo de enturbiado.
C. 2 = Afectación de todo el espesor del estroma. Con iluminación difusa, las estructuras subyacentes son apenas visibles (aunque se puede observar la turbidez, el iris, la respuesta de la pupila y el cristalino).
D. 3 = Afectación de todo el espesor del estroma. Con iluminación difusa, las estructuras subyacentes no se pueden ver.
e la superficie afectada en la córnea
7.1. Revise el ojo para ver si hay enturbiado en la región estromal.
7.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Normal
B. 1 = 1-25 % del área de enturbiado estromal.
C. 2 = 26-50 % del área de enturbiado estromal.
D. 3 = 51-75 % del área de enturbiado estromal.
E. 4 = 76-100 % del área de enturbiado estromal.
orneal
8.1. Compruebe la vascularización de la córnea
8.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Sin paño (vascularización de la córnea)
B. 1 = Vascularización presente, pero los vasos no han invadido todo el perímetro de la córnea. C. 2 = Los vasos han invadido 2 mm o más alrededor de toda la superficie de la córnea. esta pupilar
9.1. Compruebe si hay algún bloqueo o una respuesta lenta en la región pupilar.
9.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Respuesta normal de la pupila.
B. 1 = Respuesta de la pupila lenta o incompleta.
C. 2 = Sin respuesta de la pupila.
D. 3 = Sin respuesta de la pupila debido al bloqueo farmacológico.
dez acuosa
10.1. Ruptura de la barrera hematoacuosa.
10.2. El tamaño del campo es un haz de hendidura de 1 mm x 1 mm.
10.3. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera (según Jabs DA et al., 2005): A. 0 = Ninguna
B. 1 = Débil
C. 2 = Moderada (los detalles del iris y del cristalino son claros)
D. 3 = Marcada (los detalles del iris y del cristalino son borrosos)
E. 4 = Intensa (fibrina o plástico acuoso)
dez vítrea
11.1. Opacidad o enturbiado del humor vitreo.
11.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera (según Opremcak EM, 2012): A. 0 = Ninguna (capa de fibras nerviosas [CFN] claramente visible)
B. 1 = Débil (nervio óptico y vasos claros, CFN borrosa)
C. 2 = Moderada (nervio óptico y vasos borrosos)
D. 3 = Marcada (solo se ve el nervio óptico)
E. 4 = Intensa (no se ve ni el nervio óptico)
a acuosa
12.1. Observación de células en el humor acuoso.
12.2. El tamaño del campo es un haz de hendidura de 1 mm x 1 mm.
12.3. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera (según Jabs DA et al., 2005): A. 0 = Ninguna
B. 0,5 = Vestigios (1-5)
C. 1 = 6-15
D. 2 = 16-25
E. 3 = 26-50
F. 4 > 50
a vitrea
13.1. Observación de células en el humor vitreo.
13.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera (según Opremcak EM, 2012): A. 0 = Vestigios (0-10)
B. 1 = 11-20
C. 2 = 21-30
D. 3 = 31-100
E. 4 > 100
lino
14.1. Observe el cristalino en busca de cataratas.
14.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Cristalino transparente.
B. 1 = Anterior (cortical/capsular).
C. 2 = Nuclear.
D. 3 = Posterior (cortical/óptico).
E. 4 = Ecuatorial.
15.1. Observe el humor vitreo en busca de anomalías.
15.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Vitreo transparente.
B. 1 = Pocas opacidades dispersas, fondo de ojo intacto.
C. 2 = Opacidades moderadas dispersas, detalles del fondo de ojo algo oscurecidos. D. 3 = Muchas opacidades, difuminación marcada de los detalles del fondo de ojo. E. 4 = Opacidades densas, no se ve el fondo de ojo
16. Hemorragia vitrea
16.1. Observe el humor vitreo para detectar alguna hemorragia.
16.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Ninguna
B. 1 = 1-25 %
C. 2 = 26-50 %
D. 3 = 51-75 %
E. 4 = 76-100 %
17. Desprendimiento de retina
17.1. Durante un desprendimiento de retina, el sangrado de los vasos sanguíneos pequeños de la retina puede enturbiar el interior del ojo, que normalmente está lleno de humor vítreo.
17.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Ninguno
B. 1 = Regmatógeno (el desprendimiento de retina ocurre cuando el líquido subretiniano se acumula en el espacio potencial entre la retina neurosensorial y el epitelio pigmentario subyacente de la retina).
C. 2 = Exudativo (se produce debido a la inflamación, la lesión o las anomalías vasculares que provocan la acumulación de líquido debajo de la retina sin la presencia de un agujero, desgarro o rotura).
D. 3 = Por tracción (ocurre cuando hay tejido fibroso o fibrovascular, debido a una lesión, una inflamación o una neovascularización, que tira de la retina sensorial del epitelio pigmentario de la retina).
18. Hemorragia en la retina
18.1. Sangrado anómalo de los vasos sanguíneos de la retina.
18.2. La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Ninguna
B. 1 = 1-25 %
C. 2 = 26-50 %
D. 3 = 51-75 %
E. 4 = 76-100 %
19. Inflamación coroidal/ retiniana
19.1. Inflamación de la retina y/o coroides.
19.2 La puntuación se puede hacer de la siguiente manera:
A. 0 = Ninguna
B. 1 = Leve
C. 2 = Moderada
D. 3 = Intensa
6.6.1.6 Resultados
La lesión e infección combinadas con una escarificación corneal e inoculación con Ad5 fue muy exitosa para inducir una inflamación constante de la córnea y de la conjuntiva. La puntuación combinada mejoró significativamente (p < 0,01) en todos los grupos tratados los días 3 y 7 en comparación con la puntuación inicial del día 1. Estos resultados se muestran gráficamente en la figura 10.
Además, se efectuaron principalmente las subpuntuaciones de la congestión conjuntival y el área de superficie de la afectación de la córnea. Estas también mostraron una mejoría que fue estadísticamente significativa en todos los grupos tratados (p < 0,01 para la congestión conjuntival y p < 0,05 para el área de la superficie afectada en la córnea) los días 3 y 7 en comparación con la puntuación inicial del día 1. Los resultados se muestran gráficamente en las figuras 11A y 11B.
6.6.1.7 Conclusión
Los resultados demostraron una rápida resolución de los efectos combinados de las lesiones físicas y adenovíricas en los ojos tratados con la ADPR de dilitio en solución. Todas las dosis utilizadas (0,5 %, 1,0 % y 2,0 %) fueron eficaces, p < 0,01, con una reducción de más del 80 % en la puntuación combinada el día 7. El grupo de control con vehículo no mostró una mejora significativa el día 7.
6.7 Ejemplo 7. Eficacia en el cáncer: Ensayo de viabilidad celular (estudio in vitro)
La viabilidad celular se midió mediante el ensayo de viabilidad celular CellTiter-Glo® de Promega (Madison, Wis.). El ensayo de la viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo® es un método homogéneo para determinar el número de células viables en cultivo basado en la cuantificación del ATP presente, que indica la presencia de células metabólicamente activas. Después del tratamiento, se añadió CellTiter-Glo® a los pocillos del tratamiento y se incubó a 37 °C. Se midieron los valores de luminiscencia con un lector de microplacas Spectramax de Molecular Devices. Las células se cultivaron hasta un 70 % de confluencia, se tripsinizaron, se contaron y se sembraron en placas de 384 pocillos con fondo plano a una concentración final de 1,0 x 103 a 1,5 x 103 células/pocillo (día 0). Se dejó incubar las células en el medio de crecimiento durante 24 h para permitir la máxima adhesión. El tratamiento con los agentes de prueba comenzó el día 1 y continuó durante 72 h. En el momento de las 72 h, se eliminó el medio que contenía el tratamiento. El número de células viables se cuantificó mediante el ensayo de viabilidad celular CellTiter-Glo® como se describió más arriba. Se realizaron experimentos con concentraciones por triplicado para determinar la actividad inhibidora del crecimiento. Los resultados de estos estudios se utilizaron para calcular un valor de CI50 (concentración del fármaco que inhibe el crecimiento celular en un 50 por ciento respecto al control) para cada compuesto.
Recogida de los datos: para estudios con un solo agente y politerápicos, los datos de cada experimento se recogieron y se expresaron como el porcentaje de crecimiento celular mediante el siguiente cálculo:
(i) % de crecimiento celular = (fprueba/fvehículo) x 100
(ii) Donde fprueba es la luminiscencia de la muestra analizada, y fvehículo es la luminiscencia del vehículo en el que se disuelve el fármaco. Los gráficos de respuesta a la dosis y los valores de CI50 se generaron con el programa informático Prism 6 (GraphPad).
Se evaluaron los siguientes compuestos (concentraciones):
(i) Cloruro de litio (30, 300, 1000, 3000 pM y 6000 pM; 6000 pM solo se analizó en las células MV411) (ii) ADPR de dilitio (30, 300, 1000 y 3000 pM)
(iii) SN38 como control positivo (0,03, 0,1,0,3, 1,0, 3,0, 10 y 30 pM)
Se evaluaron las siguientes líneas celulares:
(i) AsPC1: adenocarcinoma de páncreas humano
(ii) H1437: adenocarcinoma de pulmón humano, carcinoma pulmonar no microcítico
(iii) U87-MG: glioblastoma cerebral humano
(iv) MV411: leucemia mielomonocítica humana
Los resultados se expresan como CI50 (pM, promedio de dos valores) en la siguiente tabla:
Figure imgf000036_0001
Conclusión: La inhibición de la replicación celular por ADPR de dilitio es notable ya que el ion litio en forma de cloruro de litio en concentraciones molares similares a la de la ADPR de dilitio no resultó eficaz, y no se sabe si la ADPR sola reduce la replicación celular. Esto indica que los dos componentes, el litio y la ADPR, se combinan de manera sinérgica para estabilizar estas líneas de células cancerosas y limitar su replicación.
6.8 Ejemplo 8. La ADPR sola (como sal de sodio) no reduce la replicación y/o no induce la citotoxicidad de las células A549
La sal sódica de la ADPR (Sigma AO752) se comprobó en el cultivo celular de A549 (adenocarcinoma alveolar humano) para determinar su efecto sobre la replicación. La ADPR se evaluó a cinco concentraciones mediante incubación durante 48 h con las células A549 (previamente cultivadas a una monocapa) a 37 °C. Después de la incubación, se añadió el colorante MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio) a cada pocillo y se midieron las células vivas mediante la incorporación del colorante azul.
Las concentraciones de la ADPR (sal de sodio) comprobadas fueron 24, 12, 6, 3, 1,5 y 0 mg/ml. La incorporación promedio de MTT medida por DO560 fue de 0,55 ± 0,02, 0,69 ± 0,01, 0,72 ± 0,04, 0,61 ± 0,09, 0,62 ± 0,08 y 0,67 ± 0,02 respectivamente.
La ADPR (sal de sodio) no redujo la incorporación de MTT hasta 12 mg/ml, y solo la redujo levemente a 24 mg/ml. Por lo tanto, la ADPR sola (como sal de sodio) no reduce la replicación celular en las células A549 hasta 12 mg/ml (igual a 21 mM), con solo una pequeña reducción a 24 mg/ml (igual a 42 mM). Por tanto, esto apoya además que la combinación de litio y de ADPR como ADPR de dilitio (como se muestra en los ejemplos 6 y 7) muestra una sinergia notable entre el litio y la ADPR.

Claims (14)

REIVINDICACIONES
1. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR), o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma para su uso en un método para tratar, manejar o prevenir una enfermedad o afección adenovírica en un paciente, en donde dicho método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de la 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR), o una sal, solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo farmacéuticamente aceptable de la misma; en donde el paciente tiene, o corre el riesgo de desarrollar, la enfermedad o afección adenovírica.
2. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la enfermedad o afección adenovírica es una enfermedad o afección que afecta a cualquier parte del ojo, oído, boca, vías respiratorias superiores o vías respiratorias inferiores.
3. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la enfermedad o afección adenovírica es enfermedad epibulbar, conjuntivitis, queratitis, queratoconjuntivitis, abrasión de la córnea, queratitis infecciosa ulcerativa, queratitis epitelial, queratitis estromal, uveítis, glaucoma agudo, blefaritis, otitis media, otitis externa, gingivitis, mucositis, faringitis, amigdalitis, rinitis, sinusitis, laringitis, laringotraqueítis, traqueítis, bronquitis, bronquiolitis, neumonía bronquiolar, neumonía, exacerbación del asma, exacerbación de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica o exacerbación del enfisema.
4. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la administración se realiza por vía de administración tópica, oral, parenteral, mucosa, por inhalación, infusión intravenosa, intraarterial o intraductal.
5. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la administración se realiza mediante administración tópica, en donde dicha administración tópica es para:
a. una superficie celular o tisular interna del paciente; o
b. una superficie celular o tisular externa, en la que opcionalmente la superficie celular o tisular externa es la superficie de la piel, ojo, uña, cabello u oreja.
6. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) para su uso de acuerdo con la reivindicación 5(a), en donde la administración tópica es mediante:
a. aerosolización, pulverización, administración oral, infusión intratraqueal, intrabronquial o infusión en una superficie de las vías respiratorias;
b. administración oral, infusión o enema en una superficie del tubo digestivo; o
c. inyección o infusión parenteral en un órgano interno.
7. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la ADPR está en forma de solución, suspensión, emulsión, microemulsión, nanoemulsión, jarabe, elixir, aerosol de polvo seco, aerosol de líquido, comprimido o medio de disolución, preferiblemente en donde el medio de disolución es un comprimido, película o tira de disolución rápida.
8. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) para su uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la ADPR se administra en combinación con otro medicamento, preferiblemente en donde el otro medicamento es un compuesto antivírico, cidofovir, aciclovir, ganciclovir o una sal metálica.
9. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) para su uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde la sal metálica es una sal de litio, zinc, cobalto o cobre, en donde opcionalmente la sal de litio es cloruro de litio.
10. La 5'-adenosina difosfato de ribosa (ADPR) para su uso según la reivindicación 1, en donde la ADPR está en forma de su sal de sodio, sal de litio o sal de dilitio.
11. Un compuesto que tiene la fórmula:
Figure imgf000039_0001
o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo del mismo.
12. Una composición farmacéutica que comprende (i) ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma, y (ii) uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables; en donde la cantidad de ADPR de dilitio en la composición farmacéutica está en el intervalo de aproximadamente el 0,001 % p/p a aproximadamente el 10 % p/p de la composición farmacéutica.
13. La ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma para su uso en un método para tratar, manejar o prevenir el cáncer en un paciente, en donde dicho método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de la ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma; en donde el paciente tiene, o corre el riesgo de desarrollar, cáncer, preferiblemente en donde el cáncer es cáncer de pulmón, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma pulmonar no microcítico, cáncer de páncreas, adenocarcinoma de páncreas, glioma, glioblastoma multiforme o leucemia mieloide aguda.
14. La ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma para su uso en un método para tratar, manejar o prevenir un trastorno ocular o una enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesión física, química, térmica o por radiación en un paciente, en donde dicho método comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de ADPR de dilitio, o un solvato, hidrato, tautómero, estereoisómero, isotopólogo o polimorfo de la misma; en donde el paciente tiene, o corre el riesgo de desarrollar, el trastorno ocular o la enfermedad o afección causada por infección, inflamación o lesión física, química, térmica o por radiación.
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