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ES2977619T3 - Compuestos para el tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos y otros trastornos del SNC - Google Patents

Compuestos para el tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos y otros trastornos del SNC Download PDF

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Publication number
ES2977619T3
ES2977619T3 ES18728316T ES18728316T ES2977619T3 ES 2977619 T3 ES2977619 T3 ES 2977619T3 ES 18728316 T ES18728316 T ES 18728316T ES 18728316 T ES18728316 T ES 18728316T ES 2977619 T3 ES2977619 T3 ES 2977619T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
hydrogen
epilepsy
group
compound
isoxazole
Prior art date
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Active
Application number
ES18728316T
Other languages
English (en)
Inventor
Johan Griffioen
Katrien Princen
Dooren Tom Van
Arnaud Marchand
Amuri Kilonda
Sara Allasia
Patrick Chaltin
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Remynd N V
Katholieke Universiteit Leuven
reMYND NV
Original Assignee
Remynd N V
Katholieke Universiteit Leuven
reMYND NV
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Publication date
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Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

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Abstract

La presente invención se refiere a un compuesto de fórmula (I) o un tautómero del mismo, en la que R1, R2, R3, R4 y R5 tienen el mismo significado que el definido en las reivindicaciones y la descripción. La presente invención también se refiere a composiciones, en particular productos farmacéuticos, que comprenden dichos compuestos, y a usos de dichos compuestos y composiciones para la prevención y/o el tratamiento de la epilepsia y/o enfermedades neurodegenerativas. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos para el tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos y otros trastornos del SNC
Campo de la invención
La presente invención se refiere a nuevos compuestos y a los nuevos compuestos para su uso como medicamento para la prevención o el tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos y otros trastornos del SNC. La presente invención también se refiere al uso de dichos compuestos para la fabricación de medicamentos útiles para tratar la epilepsia. La presente invención se refiere además a métodos para la preparación de dichos nuevos compuestos.
Antecedentes de la invención
La epilepsia es un trastorno neurológico en el que los pacientes afectados están predispuestos a generar epilepsias epilépticas que pueden variar desde un movimiento espasmódico incontrolado hasta algo tan sutil como una pérdida momentánea de conciencia. La epilepsia tiene una prevalencia de aproximadamente el 1 % y es independiente del estado socioeconómico, la edad o el sexo. Las causas subyacentes de la epilepsia (epileptogénesis) son heterogéneas e incluyen factores de riesgo genéticos y no genéticos (tales como accidente cerebrovascular o infección).
Uno de los mecanismos subyacentes a este trastorno es el aumento de la actividad de los canales de calcio dependientes del voltaje (VGCC), lo que provoca un aumento de la liberación de neurotransmisores, la dishomeostasis del Ca2+ y la hiperactividad neuronal, que puede ser la causa, al menos en parte, de los ataques epilépticos, la fosforilación de TAU y la posterior degeneración neuronal y muerte neuronal.
TAU es una proteína intracelular con la capacidad de unirse y, por consiguiente, estabilizar y definir la estructura y función de los microtúbulos. Además de esta función fisiológica tau también juega un papel directo en trastornos caracterizados por agregados insolubles o polímeros de tau que se forman por autopolimerización de monómeros de tau. Los mecanismos moleculares precisos implicados en la agregación de TAU no se conocen pero parece implicar una desnaturalización (parcial) o un plegamiento incorrecto de TAU en conformaciones con una alta tendencia a autoorganizarse en estructuras de orden superior.
Un aspecto importante de la agregación de TAU es su citotoxicidad inherente que reduce la integridad celular o incluso desencadena la muerte celular. Un aspecto importante de la agregación tóxica de TAU en la enfermedad es la hiperfosforilación de determinados residuos de aminoácidos de la proteína de TAU. La hiperfosforilación de TAU parece facilitar el proceso de agregación citotóxica. Algunas de las cinasas involucradas directa o indirectamente en hiperfosforilación de TAU son cinasas mitogenactivadas ERK1 y/o ERK2. El Ca2+ intracelular es un desencadenante importante de la activación de la actividad de ERK1 y/o ERK2 y, de este modo, el Ca2+ puede potenciar la agregación tóxica de TAU.
Aunque en la actualidad existen multitud de opciones terapéuticas para la epilepsia, aproximadamente el 30 % de la población de pacientes es resistente al tratamiento, lo que ilustra una gran necesidad médica. Además, los AED actuales (fármacos antiepilépticos) tienen efectos secundarios tales como un rendimiento cognitivo deteriorado que tiene un gran impacto negativo en la calidad de vida de los pacientes tratados. Finalmente, los tratamientos actuales son meramente sintomáticos y no retrasan o detienen la epileptogénesis o la degeneración neuronal después de una lesión primaria. El documento WO 2010/142801 describe derivados de amida de indol y compuestos relacionados para su uso en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas.
Por tanto, existe la necesidad en la técnica de diseñar fármacos mejorados y más potentes para tratamientos terapéuticos dirigidos al mecanismo molecular subyacente de la epilepsia, en particular tratamientos que reduzcan la hiperactividad neuronal con propiedades neuroprotectoras y/o sin perjudicar el rendimiento cognitivo.
Resumen de la invención
Un primer aspecto de la presente invención proporciona un compuesto de Fórmula (I) o un tautómero del mismo,
en donde,
- R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno; y F;
- R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, y F;
- R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, y F;
- R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, y F;
- R5 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, y F;
con la condición de que al menos uno de R1, R2, R3, R4 o R5 no sea hidrógeno;
con la condición de que dicho compuesto de Fórmula (I) no sea N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]-5-[(3-fluorofenil)metil]isoxazol-3-carboxamida,
o un solvato, un hidrato o una sal del mismo.
Según un segundo aspecto, la presente invención también abarca una composición farmacéutica que comprende uno o más excipientes farmacéuticos y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según el primer aspecto de la invención o una sal del mismo.
Según un tercer aspecto, la presente invención también abarca un compuesto según el primer aspecto de la invención, o un solvato, un hidrato o una sal del mismo, o una composición farmacéutica según el segundo aspecto de la invención, para su uso como un medicamento.
Según un cuarto aspecto, la presente invención también abarca un compuesto según el primer aspecto de la invención, o un solvato, un hidrato, o una sal del mismo, o una composición farmacéutica según el segundo aspecto de la invención, para su uso como medicamento para la prevención y/o tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos de dolor, trastornos de ansiedad, depresión, trastorno bipolar, psicosis, síndrome de abstinencia, abstinencia de tabaco, pérdida de memoria, demencia, esquizofrenia, pánico.
Según un quinto aspecto, la presente invención también abarca un compuesto según el primer aspecto de la invención, o un solvato, un hidrato, o una sal del mismo, o una composición farmacéutica según el segundo aspecto de la invención, para su uso como medicamento para la prevención y/o tratamiento de la epilepsia, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad difusa con cuerpos de Lewy, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Niemann-Pick, síndrome de Hallervorden-Spatz, síndrome de Down, distrofia neuroaxonal, atrofia multisistémica, enfermedad de Huntington, degeneración lobar frontotemporal (DLFT), atrofia multisistémica, fibrosis quística, enfermedad de Creutzfeld-Jacob. La presente invención se describirá ahora adicionalmente. En los siguientes pasajes, se definen con más detalle diferentes aspectos de la invención. Cada aspecto así definido puede combinarse con cualquier otro aspecto o aspectos a menos que se indique claramente lo contrario. En particular, cualquier característica indicada como preferida o ventajosa puede combinarse con cualquier otra característica o características indicadas como preferidas o ventajosas. Las reivindicaciones independientes y dependientes establecen características particulares y preferidas de la invención. Las características de las reivindicaciones dependientes pueden combinarse con características de las reivindicaciones independientes u otras dependientes según sea apropiado.
Breve descripción de las figuras
La siguiente descripción de las Figuras de realizaciones específicas de la invención es meramente de naturaleza ejemplar y no pretende limitar las presentes enseñanzas, su aplicación o usos.
La Figura 1 representa un gráfico que representa el porcentaje de LDH que se filtra en el medio por cada una de las células M17-TAU P301L (P301L TAU) y células M 17-3,1 (vector) en presencia y ausencia de ácido retinoico todo trans (RA). La sección B representa un gráfico que representa los niveles relativos de calcio citosólico en la células M17-TAU P301L en presencia y ausencia de ácido retinoico (RA). **** indica p<0,0001.
La Figura 2 representa un gráfico que traza el porcentaje de actividad LDH filtrada al medio por las células M17-TAU P301L en presencia de AR en función de la concentración de isradepina añadida a las células.
La Figura 3 representa un gráfico que traza los niveles relativos de calcio citosólico en células M17-TAU P301L, tras ser desafiadas con ácido retinoico, en presencia del vehículo o del compuesto 6 ejemplar a 625 nM. *** indica p<0,001. La Figura 4 representa un gráfico que representa el número relativo de neuronas primarias viables después de ser desafiadas con ligandos difusibles derivados de amiloide (ADDL), en presencia del vehículo o del compuesto 6 ejemplar. * indica p<0,05 y ** indica p<0,01.
La Figura 5 representa un gráfico de los niveles de Ca2+ citosólico en neuronas primarias tras la despolarización con KCI 45 mM en presencia del vehículo o del compuesto 6 ejemplar. ****indica p<0,0001.
La Figura 6 representa gráficos que trazan cuantificaciones de especies de TAU fosforiladas patológicamente determinadas por inmunotransferencias de tipo Western de extractos cerebrales de ratones APP transgénicos tratados con vehículo o con el compuesto 6 ejemplar. Los gráficos representan las señales de TAU normalizadas medias ± EEM. ** indican p<0,01 en relación con los animales tratados con vehículo. Las señales de TAU se obtuvieron mediante el uso de anticuerpos dirigidos:
(A) AT8 p-TAU, indica que el anticuerpo reconoce p-TAU fosforilada en serina 202 y treonina 205 (B) AD2 p-TAU, indica el anticuerpo que reconoce p-TAU fosforilada en serinas 396 y 404 (C) TAU fosforilada en T231
(D) TAU fosforilada en S262.
La Figura 7 muestra el resultado de una prueba de laberinto de agua de Morris en ratones transgénicos APP tratados con el compuesto 6 ejemplar. (A) muestra la longitud de la ruta de búsqueda durante la fase de entrenamiento. El valor de p se refiere al tratamiento de ratones transgénicos APP con el compuesto 6 ejemplar frente al vehículo. La sección B muestra el índice de cruce del anillo (frecuencia relativa de cruce de una región imaginaria de la plataforma) a partir de la prueba de la sonda. ** indica p<0,01.
La Figura 8 representa un gráfico de la tasa de disparo neuronal de ratones de tipo natural y tgAPP en función de la estimulación eléctrica (intensidad de paso (pA)) para el compuesto 6 ejemplar. * y **** indican p<0,05 y p<0,0001, respectivamente, de los ratones APP de tipo natural frente a los transgénicos. # indica p<0,05 de ratones APP transgénicos tratados con vehículo frente al compuesto 6.
La Figura 9 representa un gráfico de la amplitud de la poshiperpolarización (AHP) de los potenciales de acción individuales mediante registros de pinza de corriente somática usando rodajas de cerebro de ratón incubadas con vehículo o con el compuesto 6. * indica p<0,05.
Descripción detallada de la invención
Antes de que se describa la presente invención, debe entenderse que esta invención no se limita a procesos, métodos y compuestos particulares descritos, ya que tales procesos, métodos y compuestos pueden, por supuesto, variar. También debe entenderse que la terminología usada en la presente descripción no pretende ser limitativa, ya que el alcance de la presente invención estará limitado solo por las reivindicaciones adjuntas.
Cuando se describen los compuestos y procesos de la invención, los términos utilizados deben interpretarse según las siguientes definiciones, a menos que un contexto indique lo contrario.
Tal como se usa en la memoria y las reivindicaciones adjuntas, las formas singulares “ un” , “ una” y “ el/la” incluyen referentes tanto en singular como en plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario. A modo de ejemplo, “ un compuesto” significa un compuesto o más de un compuesto.
Los términos “ que comprende” , “ comprende” y “ compuesto por” tal como se usan en la presente memoria son sinónimos de “ que incluye” , “ incluye” o “ que contiene” , “ contiene” , y son inclusivos o abiertos y no excluyen miembros, elementos o pasos del método adicionales y no repetidos. Los términos “ que comprende” , “ comprende” y “ compuesto por” también incluyen el término “ consistente en” .
El término “ aproximadamente” , tal como se usa en la presente memoria al referirse a un valor medible, como un parámetro, una cantidad, una duración temporal, y similares, se entiende que abarca variaciones de /-10 % o menos, preferiblemente /-5 % o menos, más preferiblemente /-1 % o menos, y aún más preferiblemente /-0,1 % o menos del valor especificado, en la medida en que tales variaciones sean apropiadas para llevar a cabo en la invención descrita. Debe entenderse que el valor al que se refiere el modificador “ aproximadamente” también se revela de forma específica y preferente.
Tal como se usa en la presente memoria, el término “ y/o” , cuando se utiliza en una lista de dos o más elementos, significa que cualquiera de los elementos de la lista puede emplearse por sí mismo o que puede emplearse cualquier combinación de dos o más de los elementos de la lista. Por ejemplo, si se describe una lista que comprende el grupo A, B y/o C, la lista puede comprender A solo; B solo; C solo; A y B en combinación; A y C en combinación, B y C en combinación; o A, B y C en combinación.
La mención de intervalos numéricos por puntos finales incluye todos los números enteros y, cuando sea apropiado, las fracciones subsumidas dentro de ese intervalo (por ejemplo, 1 a 5 pueden incluir 1, 2, 3, 4 cuando se refieren, por ejemplo, a un número de elementos, y también pueden incluir 1,5, 2, 2,75 y 3,80, cuando se refieren, por ejemplo, a mediciones). La mención de puntos finales también incluye los propios valores de punto final (por ejemplo, de 1,0 a 5,0 incluye tanto 1,0 como 5,0). Cualquier intervalo numérico mencionado en la presente memoria pretende incluir todos los subintervalos incluidos en el mismo.
La referencia a lo largo de esta memoria descriptiva a “ una realización” o “ una realización” significa que un rasgo, estructura o característica particular descrito en relación con la realización está incluido en al menos una realización de la presente invención. Por tanto, las frases “ en una realización” o “ en una realización” que aparecen en varios lugares de esta especificación no se refieren necesariamente a la misma realización, pero pueden hacerlo. Además, las características, estructuras o características particulares pueden combinarse de cualquier manera adecuada, como sería evidente para un experto en la técnica a partir de esta descripción, en una o más realizaciones. Además, aunque algunas realizaciones descritas en la presente memoria incluyen algunas, pero no otras características incluidas en otras realizaciones, las combinaciones de características de diferentes realizaciones están destinadas a estar dentro del alcance de la invención, y forman diferentes realizaciones, tal como comprenderían los expertos en la técnica. Por ejemplo, en las siguientes reivindicaciones, cualquiera de las realizaciones reivindicadas puede usarse en cualquier combinación.
A menos que se defina lo contrario, todos los términos usados en la descripción de la invención, que incluyen términos técnicos y científicos, tienen el significado que comúnmente entiende un experto en la técnica a la que pertenece esta invención. Por medio de orientación adicional, se incluyen definiciones para los términos utilizados en la descripción para apreciar mejor las enseñanzas de la presente invención.
Cuando se describe la presente invención, los términos usados deben interpretarse según las siguientes definiciones, a menos que un contexto indique lo contrario.
Los términos descritos anteriormente y otros utilizados en la memoria descriptiva son bien entendidos por los expertos en la técnica.
Siempre que se utilice en la presente invención el término “ compuestos de la invención” o un término similar se entenderá que incluye los compuestos de fórmula general (I) y cualquier subgrupo de los mismos. Este término también se refiere a los compuestos como se representa en la tabla 1 y sus derivados, N-óxidos, sales, solvatos, hidratos, formas tautoméricas, análogos, profármacos, ésteres y metabolitos, así como sus análogos de nitrógeno cuaternizados. Las formas N-óxido de dichos compuestos están destinadas a comprender compuestos en los que uno o varios átomos de nitrógeno están oxidados al denominado N-óxido.
Las declaraciones preferidas (características) y las realizaciones de los compuestos y procesos de esta invención se exponen ahora. Cada declaración y realizaciones de la invención así definidas pueden combinarse con cualquier otra declaración y/o realizaciones a menos que se indique claramente lo contrario. En particular, cualquier característica indicada como preferida o ventajosa puede combinarse con cualquier otra característica o características indicadas como preferidas o ventajosas. A este fin, la presente invención se captura en particular por una cualquiera o cualquier combinación de una o más de las siguientes realizaciones con cualquier otro aspecto y/o realización.
La presente invención se refiere a un compuesto de Fórmula (I) o un tautómero del mismo,
en donde,
- R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno; y F;
- R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, y F;
- R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, y F;
- R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, y F;
- R5 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, y F;
con la condición de que al menos uno de R1, R2, R3, R4 o R5 no sea hidrógeno;
con la condición de que dicho compuesto de Fórmula (I) no sea N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]-5-[(3-fluorofenil)metil]isoxazol-3-carboxamida,
o un solvato, un hidrato o una sal del mismo.
En algunas realizaciones, el compuesto tiene cualquiera de Fórmula (II), (III), (IV), (V) o (VI)
en donde R1, R2, R3 y R4 tiene el mismo significado que se define en la presente memoria.
En algunas realizaciones, R2, R3, R4 y R5 son hidrógeno y R1 es F.
En algunas realizaciones, R1, R2, R4 u R5 son hidrógeno y R3 es F.
En algunas realizaciones, R2, R4 y R5 son hidrógeno y R1 y R3 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; y F.
En algunas realizaciones, R3, R4 y R5 son hidrógeno y R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno; y F.
En algunas realizaciones, R2, R3 y R5 son hidrógeno y R1 y R4 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
En algunas realizaciones, R2, R3 y R5 son hidrógeno y R1 y R5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
En algunas realizaciones, R1, R4 y R5 son hidrógeno y R2 y R3 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
En algunas realizaciones, R1, R3 y R5 son hidrógeno y R2 y R4 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
En algunas realizaciones, R1, R3 y R4 son hidrógeno y R2 y R5 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
En algunas realizaciones, R1, R2, R3, R4y R5 se seleccionan independientemente entre hidrógeno y F.
En algunas realizaciones, el compuesto se selecciona del grupo que consiste en:
- 5-[(2,4-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida;
- N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]-5-[(4-fluorofenil)metil]isoxazol-3-carboxamida;
- 5-[(2,3-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida;
- 5-[(2,5-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida;
- N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]-5-[(2-fluorofenil)metil]isoxazol-3-carboxamida;
- 5-[(3,4-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida; y
- 5-[(3,5-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida.
La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende uno o más excipientes farmacéuticos y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto tal como se describe en la presente memoria y un solvato, un hidrato o una sal del mismo.
La presente invención también se refiere a un compuesto como se define en la presente memoria o una composición farmacéutica como se describió anteriormente para su uso como medicamento.
La presente invención también se refiere a un compuesto descrito en la presente memoria o a una composición farmacéutica descrita en la presente memoria anteriormente para su uso como medicamento para la prevención y/o el tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos del dolor, trastornos de ansiedad, depresión, trastorno bipolar, psicosis, síndrome de abstinencia, abstinencia de tabaco, pérdida de memoria, demencia, esquizofrenia y pánico.
En algunas realizaciones, la epilepsia se selecciona del grupo que consiste en epilepsia resistente, síndrome de West, síndrome de Doose, epilepsia rolándica benigna, síndrome de Rasmussens, síndrome de Lennox-Gastaut, síndrome de West, síndrome de Sturge-Weber, epilepsia mioclónica juvenil, epilepsia de ausencia infantil, epilepsias idiopáticas relacionadas con la localización, epilepsia del lóbulo temporal, epilepsias parciales, epilepsias parciales simples, epilepsias tónicas, epilepsias tónico-clónicas, epilepsias clónicas, epilepsias mioclónicas, epilepsias de ausencia, epilepsias atónicas, epilepsia del lóbulo frontal, epilepsia con epilepsias gran-mal, epilepsia generalizada, epilepsia idiopática, epilepsia sintomática y epilepsia criptogénica.
En algunas realizaciones, el trastorno neurodegenerativo se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad difusa con cuerpos de Lewy, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Niemann-Pick, síndrome de Hallervorden-Spatz, síndrome de Down, distrofia neuroaxonal, atrofia multisistémica, enfermedad de Huntington, degeneración lobar frontotemporal (DLFT), fibrosis quística y enfermedad de Creutzfeld-Jacob.
En algunas realizaciones, el trastorno del dolor se selecciona del grupo que consiste en dolor agudo, dolor persistente, dolor crónico, dolor inflamatorio y dolor neuropático.
En algunas realizaciones, el trastorno de ansiedad se selecciona del grupo formado por ataque de pánico, agorafobia o fobias específicas, trastornos obsesivo-compulsivos, trastorno de estrés postraumático, trastorno de estrés agudo, trastorno de ansiedad generalizada, trastorno alimentario, trastorno de ansiedad inducido por sustancias y trastorno de ansiedad no especificado.
La presente invención también se relaciona con un compuesto como se define en la presente memoria para su uso en un método de prevención y/o tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos del dolor, trastornos de ansiedad, depresión, trastorno bipolar, psicosis, síndrome de abstinencia, abstinencia de tabaco, pérdida de memoria, demencia, esquizofrenia, pánico, que comprende la administración de una cantidad eficaz de un compuesto como se describe en la presente memoria, o una composición farmacéutica como se describe en la presente memoria a un sujeto que lo necesita. En algunas realizaciones, la epilepsia se selecciona del grupo que consiste en epilepsia resistente, Síndrome de West, síndrome de Doose, epilepsia rolándica benigna, síndrome de Rasmussens, síndrome de Lennox-Gastaut, síndrome de West, síndrome de Sturge-Weber, epilepsia mioclónica juvenil, epilepsia de ausencia infantil, epilepsias idiopáticas de localización, epilepsia del lóbulo temporal, epilepsias parciales, epilepsias parciales simples, epilepsias tónicas, epilepsias tónico-clónicas, epilepsias clónicas, epilepsias mioclónicas, epilepsias de ausencia y epilepsias atónicas. En algunas realizaciones, el trastorno neurodegenerativo se selecciona del grupo que consiste en la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de cuerpos de Lewy difusa, la esclerosis lateral amiotrófica, la enfermedad de Niemann-Pick, el síndrome de Hallervden-Spatz, el síndrome de Down, la distrofia neuroaxonal, la atrofia del sistema múltiple, la enfermedad de Huntington, la degeneración lobular frontotemporal (FTLD), la atrofia de múltiples sistemas, la fibrosis quística y la enfermedad de Creutzfeld-Jacob. En algunas realizaciones, el trastorno del dolor se selecciona del grupo que consiste en dolor agudo, dolor persistente, dolor crónico, dolor inflamatorio y dolor neuropático. En algunas realizaciones, el trastorno de ansiedad se selecciona del grupo formado por ataque de pánico, agorafobia o fobias específicas, trastornos obsesivocompulsivos, trastorno de estrés postraumático, trastorno de estrés agudo, trastorno de ansiedad generalizada, trastorno alimentario, trastorno de ansiedad inducido por sustancias y trastorno de ansiedad no especificado.
Los compuestos de la invención pueden estar en forma de sales, preferiblemente sales farmacéuticamente aceptables, como se describe generalmente a continuación. Algunos ejemplos preferidos, pero no limitantes de ácidos orgánicos y/o inorgánicos farmacéuticamente aceptables adecuados son como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido acético y ácido cítrico, así como otros ácidos farmacéuticamente aceptables conocidos per se (para los cuales se hace referencia a la técnica anterior a la que se hace referencia a continuación).
Cuando los compuestos de la invención contienen un grupo ácido, así como un grupo básico, los compuestos de la invención también pueden formar sales internas, y dichos compuestos están dentro del alcance de la invención. Cuando los compuestos de la invención contienen un heteroátomo donador de hidrógeno (por ejemplo, NH), la invención también cubre sales y/o isómeros formados por transferencia de dicho átomo de hidrógeno a un grupo o átomo básico dentro de la molécula.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula (I) y cualquier subgrupo de los mismos incluyen la adición de ácido y las sales de base de las mismas. Las sales de adición de ácido adecuadas están formadas a partir de ácidos que forman sales no tóxicas. Los ejemplos incluyen el acetato, adipato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, ciclamato, edisilato, esilato, formiato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, hidrocloruro/cloruro, hidrobromuro/bromuro, hidroyoduro/yoduro, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato de hidrógeno/fosfato de dihidrógeno, piroglutamato, sacarato, estearato, succinato, tanato, tartrato, tosilato, trifluoroacetato y sales de xinofoato. Las sales de base adecuadas se forman a partir de bases que forman sales no tóxicas. Los ejemplos incluyen sales de aluminio, arginina, benzatina, calcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnesio, meglumina, olamina, potasio, sodio, trometamina y zinc. También pueden formarse emisiones de ácidos y bases, por ejemplo, sales de hemisulfato y hemicalcio. Para una revisión sobre las sales adecuadas, véase Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, 2002).
Los compuestos de la invención pueden existir en un continuo de estados sólidos que varían desde completamente amorfo hasta completamente cristalino. El término “ amorfo” se refiere a un estado en el que el material carece de orden de largo alcance a nivel molecular y, dependiendo de la temperatura, puede presentar las propiedades físicas de un sólido o un líquido. Normalmente, estos materiales no presentan patrones de difracción de rayos X característicos y, aunque muestran las propiedades de un sólido, se describen más formalmente como un líquido. Al calentarse, se produce un cambio de propiedades de sólido a líquido que se caracteriza por un cambio de estado, normalmente de segundo orden (“transición vítrea” ). El término “ cristalino” se refiere a una fase sólida en la que el material tiene una estructura interna ordenada regular a nivel molecular y da un patrón de difracción de rayos X distintivo con picos definidos. Cuando se calientan lo suficiente, estos materiales también presentan las propiedades de un líquido, pero el paso de sólido a líquido se caracteriza por un cambio de fase, normalmente de primer orden (“ punto de fusión” ).
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula (I) pueden prepararse mediante uno o más de estos métodos:
(i) haciendo reaccionar el compuesto de Fórmula (I) con el ácido deseado;
(ii) haciendo reaccionar el compuesto de Fórmula (I) con la base deseada;
(iii) retirando un grupo protector lábil a ácidos o bases de un precursor adecuado del compuesto de Fórmula (I) o mediante apertura de anillo de un precursor cíclico adecuado, por ejemplo, una lactona o lactama, usando el ácido deseado; o
(iv) convirtiendo una sal del compuesto de Fórmula (I) a otra por reacción con un ácido apropiado o por medio de una columna de intercambio iónico adecuada.
Todas estas reacciones se llevan a cabo típicamente en solución. La sal, puede precipitar de la solución y recogerse por filtración o puede recuperarse por evaporación del disolvente. El grado de ionización en la sal puede variar desde completamente ionizado hasta casi no ionizado.
Los compuestos de la invención también pueden existir en formas no solvatadas y solvatadas. El término “ solvato” se usa en la presente memoria para describir un complejo molecular que comprende el compuesto de la invención y una o más moléculas disolventes farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, etanol. El término “ hidrato” se emplea cuando dicho disolvente es agua.
Un sistema de clasificación actualmente aceptado para los hidratos orgánicos es el que define los hidratos de sitio aislado, de canal o coordinados por iones metálicos - véase Polymorphism in Pharmaceutical Solids de K. R. Morris (Ed. H. G. Britain, Marcel Dekker, 1995). Los hidratos de sitio aislado son aquellos en los que las moléculas de agua están aisladas del contacto directo entre sí por moléculas orgánicas intermedias. En los hidratos de canal, las moléculas de agua se encuentran en canales reticulares junto a otras moléculas de agua. En los hidratos coordinados con iones metálicos, las moléculas de agua están unidas al ion metálico.
Cuando el disolvente o el agua están fuertemente ligados, el complejo tendrá una estequiometría bien definida e independiente de la humedad. Sin embargo, cuando el disolvente o el agua están débilmente ligados, como en los solvatos de canal y los compuestos higroscópicos, el contenido de agua/disolvente dependerá de la humedad y de las condiciones de secado. En tales casos, la no estequiometría será la norma.
También se incluyen en el ámbito de la invención los complejos multicomponentes (distintos de sales y solvatos) en los que el fármaco y al menos otro componente están presentes en cantidades estequiométricas o no estequiométricas. Los complejos de este tipo incluyen los clatratos (complejos de inclusión de huéspedes) y los cocristales. Estos últimos se definen típicamente como complejos cristalinos de constituyentes moleculares neutros que están unidos mediante interacciones no covalentes, pero también podrían ser un complejo de una molécula neutra con una sal. Los cocristales pueden prepararse por cristalización en fusión, por recristalización a partir de disolventes o por molienda física de los componentes - véase Chem Commun, 17, 1889-1896, de O. Almarsson y M. J. Zaworotko (2004). Para una revisión general de los complejos multicomponentes, véase J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288, de Haleblian (agosto de 1975).
Los compuestos de la invención también pueden existir en un estado mesomórfico (mesofase o cristal líquido) cuando se someten a condiciones adecuadas. El estado mesomórfico es intermedio entre el estado cristalino verdadero y el estado líquido verdadero (ya sea fundido o solución). El mesomorfismo que surge como resultado de un cambio de temperatura se describe como “ termotrópico” y el que resulta de la adición de un segundo componente, como agua u otro disolvente, se describe como “ lipotrópico” . Los compuestos que tienen el potencial de formar mesofases lipotrópicas se describen como “ anfifílicos” y consisten en moléculas que poseen un grupo de cabeza polar iónico (como -COO'Na+, -COO'K+ o -SO<3>-Na+) o no iónico (como -N'N+(CH<3>)<3>). Para más información, véase Crystals and the Polarizing Microscope de N. H. Hartshorne y A. Stuart, 4a edición (Edward Arnold, 1970).
Todas las referencias a compuestos de Fórmula (I) o a cualquiera de sus subgrupos incluyen referencias a sales, solvatos, complejos multicomponentes y cristales líquidos de los mismos y a solvatos, complejos multicomponentes y cristales líquidos de sales de los mismos.
Los compuestos de la invención incluyen compuestos de Fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos tal como se definen más adelante, incluidos todos los polimorfos y hábitos cristalinos de los mismos y sus isómeros (incluidos los isómeros ópticos, geométricos y tautoméricos) tal como se definen más adelante y los compuestos de Fórmula (I) marcados isotópicamente.
Además, aunque generalmente, con respecto a las sales de los compuestos de la invención, se prefieren las sales farmacéuticamente aceptables, cabe señalar que la invención en su sentido más amplio también incluye sales no farmacéuticamente aceptables, que pueden por ejemplo utilizarse en el aislamiento y/o purificación de los compuestos de la invención.
Dentro del alcance de la presente invención se incluyen todos los isómeros geométricos y formas tautoméricas de los compuestos de Fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos, incluyendo compuestos que presentan más de un tipo de isomería y mezclas de uno o más de los mismos. También se incluyen las sales de adición ácida o de base en las que el contraión es ópticamente activo, por ejemplo, d-lactato o /-lisina, o racémico, por ejemplo, d/-tartrato o d/-arginina.
Los isómeros cis/trans pueden separarse mediante técnicas convencionales bien conocidas por los expertos en la materia, por ejemplo, cromatografía y cristalización fraccionada.
Las técnicas convencionales para la preparación/aislamiento de enantiómeros individuales incluyen la síntesis quiral a partir de un precursor ópticamente puro adecuado o la resolución del racemato (o el racemato de una sal o derivado) utilizando, por ejemplo, cromatografía de líquidos quiral de alta resolución (HPLC).
Los compuestos de Fórmula (I) o cualquier subgrupo de los mismos pueden prepararse tal como se describe en la sección experimental a continuación usando métodos y productos químicos con los que estarán familiarizados los expertos en la técnica.
La presente invención también abarca una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de la presente invención. La presente invención también abarca una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto de la invención y al menos un portador, excipiente o diluyente aceptable para fines farmacéuticos.
En algunas realizaciones, la presente invención se refiere al uso de al menos un compuesto de Fórmula (I), o a cualquier subgrupo del mismo, en (la preparación de una composición para) la prevención y/o el tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos del dolor, trastornos de ansiedad, depresión, trastorno bipolar, psicosis, síndrome de abstinencia, abstinencia de tabaco, pérdida de memoria, demencia, esquizofrenia y pánico.
En algunas realizaciones, la presente invención se refiere a un compuesto tal como se define en la presente memoria para su uso en un método de prevención y/o tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos del dolor, trastornos de ansiedad, depresión, trastorno bipolar, psicosis, síndrome de abstinencia, abstinencia de tabaco, pérdida de memoria, demencia, esquizofrenia, pánico, que comprende administrar a un sujeto que lo necesita una cantidad eficaz de al menos un compuesto de Fórmula (I), o cualquier subgrupo del mismo, o una composición farmacéutica que comprende dicho al menos un compuesto de Fórmula (I) o cualquier subgrupo del mismo.
En algunas realizaciones, la presente invención se refiere al uso de al menos un compuesto de Fórmula (I), o a cualquier subgrupo del mismo, en (la preparación de una composición para) la prevención y/o el tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos del dolor, trastornos de ansiedad, depresión, trastorno bipolar, psicosis, síndrome de abstinencia, abstinencia de tabaco, pérdida de memoria, demencia, esquizofrenia, pánico; más preferiblemente, la epilepsia y los trastornos neurodegenerativos comprenden la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de cuerpos de Lewy difusa, la esclerosis lateral amiotrófica, la enfermedad de Niemann-Pick, el síndrome de Hallervden-Spatz, el síndrome de Down, la distrofia neuroaxonal, la atrofia del sistema múltiple, la enfermedad de Huntington, la degeneración lobular frontotemporal (FTLD), la atrofia de múltiples sistemas, la fibrosis quística, la enfermedad de Creutzfeld-Jacob; aún más preferiblemente para la prevención y/o el tratamiento de la epilepsia y/o la enfermedad de Alzheimer.
En algunas realizaciones, la presente invención se refiere al uso de al menos un compuesto de Fórmula (I), o cualquier subgrupo del mismo, en (la preparación de una composición para) la prevención y/o el tratamiento de la epilepsia, preferiblemente en donde la epilepsia se selecciona del grupo que consiste en epilepsia resistente, síndrome de West, síndrome de Doose, epilepsia rolándica benigna, síndrome de Rasmussens, síndrome de Lennox-Gastaut, síndrome de West, síndrome de Sturge-Weber, epilepsia mioclónica juvenil, epilepsia de ausencia infantil, epilepsias idiopáticas relacionadas con la localización, epilepsia del lóbulo temporal, epilepsias parciales, epilepsias parciales simples, epilepsias tónicas, epilepsias tónico-clónicas, epilepsias clónicas, epilepsias mioclónicas, epilepsias de ausencia, epilepsias atónicas, epilepsia del lóbulo frontal, epilepsia con epilepsias granmal, epilepsia generalizada, epilepsia idiopática, epilepsia sintomática y epilepsia criptogénica.
En algunas realizaciones, la presente invención se refiere al uso de al menos un compuesto de Fórmula (I), o cualquier subgrupo del mismo, en (la preparación de una composición para) la prevención y/o tratamiento de trastornos del dolor, preferiblemente en el que el trastorno del dolor se selecciona del grupo que consiste en dolor agudo, dolor persistente, dolor crónico, dolor inflamatorio y dolor neuropático.
En algunas realizaciones, la presente invención se refiere al uso de al menos un compuesto de Fórmula (I), o cualquier subgrupo del mismo, en (la preparación de una composición para) la prevención y/o el tratamiento de trastornos de ansiedad, preferiblemente en el que el trastorno de ansiedad se selecciona del grupo que consiste en ataque pánico, agorafobia o fobia específico, trastornos obsesivos-compulsivos, trastorno de estrés postraumático, trastorno de estrés agudo, trastorno de ansiedad generalizada, trastorno de comer, trastorno de ansiedad inducida por sustancia y trastorno de ansiedad no especificado.
El término “ sujeto” tal como se usa en la presente memoria se refiere a un mamífero. El sujeto será preferiblemente un ser humano, pero también puede ser un animal doméstico de granja, de laboratorio o de compañía.
En algunas realizaciones, se usa al menos un compuesto de Fórmula (I) (para la preparación de un medicamento) para prevenir y/o tratar una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos del dolor, trastornos de ansiedad, depresión, trastorno bipolar, psicosis, síndrome de abstinencia, abstinencia de tabaco, pérdida de memoria, demencia, esquizofrenia y pánico y/o para prevenir, tratar y/o aliviar complicaciones y/o síntomas asociados con el mismo.
Tal como se usa en la presente memoria, el término “ cantidad eficaz” se refiere a la cantidad de un fármaco o agente farmacéutico que provocará la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que busca, por ejemplo, un investigador o clínico.
El término “ cantidad terapéuticamente eficaz” se refiere a cualquier cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no haya recibido dicha cantidad, produzca una mejora en el tratamiento, curación, prevención o mejora de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o una disminución de la tasa de avance de una enfermedad o trastorno. El término también incluye dentro de su alcance cantidades eficaces para mejorar la función fisiológica normal.
Para su uso en terapia, pueden administrarse cantidades terapéuticamente eficaces de un compuesto de Fórmula (I), así como tautómeros, sales, hidratos o solvatos de los mismos, como el producto químico en bruto. Además, el principio activo puede presentarse como una composición farmacéutica.
Por consiguiente, la invención proporciona además composiciones farmacéuticas que incluyen cantidades efectivas de compuestos de Fórmula (I), o tautómeros, sales, hidratos o solvatos de los mismos, y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de Fórmula (I) o tautómeros, sales, hidratos o solvatos de los mismos, son tal como se describen en la presente memoria.
Los compuestos según la invención pueden administrarse como el único principio activo o juntos, es decir, en una combinación fija o libre, con otros agentes terapéuticos usados en la práctica clínica para el tratamiento de esas enfermedades enumeradas anteriormente.
Los compuestos según la invención y los otros agentes activos farmacéuticos pueden administrarse juntos o por separado y, cuando se administran por separado, la administración puede producirse simultánea o secuencialmente, en cualquier orden. Las cantidades de los compuestos según la invención y los otros agentes farmacéuticamente activos y los tiempos relativos de administración se seleccionarán para lograr el efecto terapéutico combinado deseado. La administración en combinación de un compuesto de Fórmula (I) o un tautómero, sal, hidrato o solvato del mismo, con otros agentes de tratamiento puede estar en combinación por administración de forma concomitante en: (1) una composición farmacéutica unitaria que incluye ambos compuestos; o (2) composiciones farmacéuticas separadas, incluyendo cada una uno de los compuestos. Alternativamente, la combinación puede administrarse por separado de manera secuencial en donde un agente de tratamiento se administra primero y el otro o viceversa. Tal administración secuencial puede ser cercana en el tiempo o a distancia en el tiempo.
Para uso farmacéutico, los compuestos de la invención pueden usarse como ácido o base libre, y/o en forma de sal de adición de ácido y/o de adición de base farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, obtenida con ácido o base orgánicos o inorgánicos no tóxicos), en forma de hidrato, solvato y/o complejo, y/o en forma de profármaco o profármaco previo, como un éster. Tal como se usa en la presente memoria y a menos que se mencione lo contrario, el término “ solvato” incluye cualquier combinación que puede formarse mediante un compuesto de esta invención con un disolvente inorgánico adecuado (por ejemplo hidratos) o disolvente orgánico, tal como, pero sin limitarse a, alcoholes, cetonas, ésteres y similares. Tales sales, hidratos, solvatos, etc. y su preparación serán claras para el experto; se hace referencia, por ejemplo, a las sales, hidratos, solvatos, etc. descritos en los documentos US-A-6.372.778, US-A-6.369.086, US-A-6.369.087 y US-A-6.372.733.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos según la invención, es decir, en forma de productos solubles en agua, solubles en aceite, incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario que se forman, por ejemplo, de ácidos o bases inorgánicos u orgánicos. Los ejemplos de tales sales de adición ácida incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hidrocloruro, hidrobromuro, hidroyoduro, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftaleno-sulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Las sales de base incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos como sales de sodio y potasio, sales de metales alcalinotérreos como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas como sales de diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina y sales con aminoácidos como arginina, lisina, etcétera. Además, los grupos básicos que contienen nitrógeno pueden cuaternizarse con agentes tales como haluros de alquilo inferiores, tales como cloruro, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; dialquil sulfatos como dimetilo, dietilo, dibutilo; y sulfatos de diamilo, haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo como bencilo y fenetil-bromuros y otros. Otras sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales etanolato de sal de sulfato y sulfato.
Generalmente, para uso farmacéutico, los compuestos de las invenciones pueden formularse como una preparación farmacéutica que comprende al menos un compuesto de la invención y al menos un portador, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable y/o adyuvante, y opcionalmente uno o más compuestos farmacéuticamente activos adicionales.
Por medio de ejemplos no limitativos, una formulación de este tipo puede estar en una forma adecuada para la administración oral, para administración parenteral (tal como por inyección intravenosa, intramuscular o subcutánea o infusión intravenosa), para administración tópica (incluyendo ocular), para la administración por inhalación, por un parche de piel, por un implante, mediante un supositorio, etc. Tales formas de administración adecuadas, que pueden ser sólidas, semisólidas o líquidas, dependiendo de la manera de administración, así como de los métodos y portadores, diluyentes y excipientes para su uso en la preparación de los mismos, serán claros para el experto; se hace referencia nuevamente a, por ejemplo, US-A-6.372.778, US-A-6.369.086, US-A-6.369.087 y US-A-6.372.733, así como a los manuales convencionales, tales como la última edición de Remington's Pharmaceutical Sciences.
Algunos ejemplos preferidos, pero no limitativos, de tales preparaciones incluyen comprimidos, píldoras, polvos, pastillas, sobres, sellos, elixires, suspensiones, emulsiones, soluciones, jarabes, aerosoles, ungüentos, cremas, lociones, cápsulas de gelatina blanda y dura, supositorios, gotas, soluciones inyectables estériles y polvos estériles envasados (que generalmente se reconstituyen antes de su uso) para administración en bolo y/o para administración continua, que pueden formularse con portadores, excipientes y diluyentes adecuados per se para dichas formulaciones, como lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma acacia, fosfato cálcico, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato cálcico, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, polietilenglicol, celulosa, agua (estéril), metilcelulosa, metilpropilhidroxibenzoatos, talco, estearato de magnesio, aceites comestibles, aceites vegetales y aceites minerales o mezclas adecuadas de los mismos. Las formulaciones pueden contener opcionalmente otras sustancias farmacéuticamente activas (que pueden o no conducir a un efecto sinérgico con los compuestos de la invención) y otras sustancias que se usan comúnmente en formulaciones farmacéuticas, tales como agentes lubricantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes dispersantes, disgregantes, agentes espesantes, cargas, agentes conservantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, reguladores del flujo, agentes de liberación, etc. Las composiciones también pueden formularse para proporcionar una liberación rápida, sostenida o retardada del compuesto o compuestos activos contenidos en el mismo, por ejemplo, usando liposomas o matrices poliméricas hidrófilas basadas en geles naturales o polímeros sintéticos. Para mejorar la solubilidad y/o la estabilidad de los compuestos de una composición farmacéutica según la invención, puede ser ventajoso emplear a, p o Y-ciclodextrinas o sus derivados. Además, los codisolventes tales como alcoholes pueden mejorar la solubilidad y/o la estabilidad de los compuestos. En la preparación de composiciones acuosas, la adición de sales de los compuestos de la invención puede ser más adecuada debido a su mayor solubilidad en agua.
Las ciclodextrinas apropiadas son a, p o Y-ciclodextrinas (CD) o éteres y éteres mixtos de los mismos en donde uno o más de los grupos hidroxilo de las unidades de hidroglucosa de la ciclodextrina están sustituidos con alquilo, particularmente metilo, etilo o isopropilo, por ejemplo, p-CD; hidroxialquilo, particularmente hidroxietilo, hidroxipropilo o hidroxibutilo; carboxialquilo, particularmente carboximetilo o carboxietilo; alquilcarbonilo, particularmente acetilo; alcoxicarbonilalquilo o carboxialcoxialquilo, particularmente carboximetoxipropilo o carboxietoxipropilo; alquilcarboniloalquilo, particularmente 2-acetiloxipropilo. Especialmente destacables como complejantes y/o solubilizantes son la p-CD, la p-CD metilada aleatoriamente, la 2,6-dimetil-p-CD, la 2-hidroxietil-p-CD, la 2-hidroxietil-Y-CD, la 2-hidroxipropil-Y-CD y la (2-carboximetoxi)propil-p-CD, y en particular la 2-hidroxipropil-p-CD (2-HP- p-CD). El término éter mixto indica derivados de ciclodextrina en donde al menos dos grupos hidroxilo de ciclodextrina se eterifican con diferentes grupos tales como, por ejemplo, hidroxipropilo e hidroxietilo. Una forma interesante de formular los compuestos en combinación con una ciclodextrina o un derivado de la misma se ha descrito en el documento EP-A-721.331. Aunque las formulaciones descritas en la misma son con principios activos antifúngicos, son igualmente interesantes para formular los compuestos. Dichas formulaciones también pueden hacerse más apetecibles añadiendo edulcorantes y/o aromas farmacéuticamente aceptables. En particular, la presente invención abarca una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto según la invención con una ciclodextrina farmacéuticamente aceptable. La presente invención también abarca complejos de ciclodextrina que consisten en un compuesto según la invención y una ciclodextrina.
Se hace especial referencia a las composiciones, formulaciones (y portadores, excipientes, diluyentes, etc. para su uso en las mismas), vías de administración, etc., que son conocidas per se, como las descritas en US-A-4.997.834 y EP-A-0.370.498.
Más en particular, las composiciones pueden formularse en una formulación farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de partículas que consisten en una dispersión sólida de los compuestos de la invención y uno o más polímeros solubles en agua farmacéuticamente aceptables.
El término “ dispersión sólida” define un sistema en estado sólido (en contraposición a un estado líquido o gaseoso) que comprende al menos dos componentes, en el que un componente está disperso más o menos uniformemente en el otro componente o componentes. Cuando dicha dispersión de los componentes es tal que el sistema es química y físicamente uniforme u homogéneo en su totalidad o consta de una sola fase, tal como se define en termodinámica, dicha dispersión sólida se denomina “ solución sólida” . Las soluciones sólidas son los sistemas físicos preferidos porque sus componentes suelen ser fácilmente biodisponibles para los organismos a los que se administran. El término “ una dispersión sólida” también comprende dispersiones que son menos homogéneas en su totalidad que las soluciones sólidas. Tales dispersiones no son químicamente y físicamente uniformes en todas partes o comprenden más de una fase.
El polímero soluble en agua es convenientemente un polímero que tiene una viscosidad aparente de 1 a 100 mPa.s cuando se disuelve en una solución acuosa al 2 % a 20 °C. Los polímeros solubles en agua preferidos son hidroxipropilmetilcelulosas o HPMC. La HPMC que tiene un grado de sustitución metoxilo de aproximadamente 0,8 a aproximadamente 2,5 y una sustitución molar de hidroxipropilo de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 3,0 son generalmente solubles en agua. El grado de sustitución de oxilo se refiere al número promedio de grupos metil éter presentes por unidad de glucosa anhidra de la molécula de celulosa. La sustitución molar de hidroxi-propilo se refiere al número promedio de moles de óxido de propileno que han reaccionado con cada unidad de glucosa anhidra de la molécula de celulosa.
Además, puede ser conveniente formular los compuestos en forma de nanopartículas que tengan un modificador de superficie adsorbido en su superficie en una cantidad suficiente para mantener un tamaño de partícula promedio eficaz de menos de 1000 nm. Los modificadores de superficie adecuados pueden seleccionarse preferiblemente de excipientes farmacéuticos orgánicos e inorgánicos conocidos. Tales excipientes incluyen diversos polímeros, oligómeros de bajo peso molecular, productos naturales y tensioactivos. Los modificadores de la superficie preferidos incluyen tensioactivos no iónicos y aniónicos.
Otra forma interesante de formular los compuestos según la invención implica una composición farmacéutica mediante la cual los compuestos se incorporan en polímeros hidrófilos y aplicar esta mezcla como una película de recubrimiento sobre muchas perlas pequeñas, produciendo así una composición con buena biodisponibilidad que puede fabricarse convenientemente y que es adecuada para preparar formas farmacéuticas para administración oral. Tales perlas comprenden (a) un núcleo central, redondeado o esférico, (b) una película de recubrimiento de un polímero hidrófilo y un agente antirretroviral y (c) una capa de polímero de recubrimiento de sello. Los materiales adecuados para su uso como núcleos en las perlas son colector, siempre que dichos materiales sean farmacéuticamente aceptables y tengan dimensiones y firmeza apropiadas. Ejemplos de tales materiales son polímeros, sustancias inorgánicas, sustancias orgánicas y sacáridos, y derivados de los mismos.
Las preparaciones pueden prepararse de una manera conocida per se, que generalmente implica mezclar el al menos un compuesto según la invención con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables, y, si se desea, en combinación con otros compuestos farmacéuticos activos, cuando sea necesario en condiciones asépticas. Se hace referencia de nuevo a los documentos US-A-6.372.778, US-A-6.369.086, US-A-6.369.087 y US-A-6.372.733 y al estado de la técnica mencionado anteriormente, así como a los manuales estándar, como la última edición de Remington's Pharmaceutical Sciences.
Los preparados farmacéuticos de la invención se presentan preferiblemente en forma de dosis unitaria, y pueden envasarse adecuadamente, por ejemplo, en una caja, blíster, vial, frasco, sobre, ampolla o en cualquier otro soporte o recipiente monodosis o multidosis adecuado (que puede estar debidamente etiquetado); opcionalmente, con uno o más prospectos con información sobre el producto y/o instrucciones de uso. Generalmente, tales dosificaciones unitarias contendrán entre 1 y 1000 mg, y generalmente entre 5 y 500 mg, del al menos un compuesto de la invención, por ejemplo aproximadamente 10, 25, 50, 100, 200, 300 ó 400 mg por dosificación unitaria.
Los compuestos pueden administrarse por una variedad de vías que incluyen las vías oral, ocular, rectal, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular o intranasal, dependiendo principalmente de la preparación específica usada y de la afección a tratar o prevenir, y con la administración oral e intravenosa generalmente se prefieren. El al menos un compuesto de la invención se administrará generalmente en una “ cantidad eficaz” , entendiéndose por tal cualquier cantidad de un compuesto de Fórmula (I) anterior que, tras una administración adecuada, sea suficiente para lograr el efecto terapéutico o profiláctico deseado en el sujeto al que se administra. Por lo general, dependiendo de la afección que deba prevenirse o tratarse y de la vía de administración, dicha cantidad eficaz estará comprendida entre 0,01 y 1000 mg por kilogramo, más a menudo entre 0,1 y 500 mg, como por ejemplo entre 1 y 250 mg, por ejemplo unos 5, 10, 20, 50, 100, 150, 200 o 250 mg, por kilogramo de peso corporal del paciente y día, que pueden administrarse como dosis única diaria, dividida en una o más dosis diarias, o de forma esencialmente continua, por ejemplo mediante infusión por goteo. La(s) cantidad (s) a administrar, la vía de administración y el régimen de tratamiento adicional pueden determinarse por el médico tratante, dependiendo de factores tales como la edad, el sexo y el estado general del paciente y la naturaleza y gravedad de la enfermedad/síntomas a tratar. Se hace referencia de nuevo a los documentos US-A-6.372.778, Us -A-6.369.086, US-A-6.369.087 y US-A-6.372.733 y al estado de la técnica mencionado anteriormente, así como a los manuales estándar, como la última edición de Remington's Pharmaceutical Sciences.
Según el método de la presente invención, dicha composición farmacéutica puede administrarse por separado en diferentes momentos durante el curso de la terapia o simultáneamente en formas de combinación divididas o únicas. Por tanto, debe entenderse que la presente invención abarca todos estos regímenes de tratamiento simultáneo o alterno y el término “ administrar” debe interpretarse en consecuencia.
Para una forma de administración oral, las composiciones de la presente invención pueden mezclarse con aditivos adecuados, como excipientes, estabilizantes o diluyentes inertes, y llevarse mediante los métodos habituales a las formas de administración adecuadas, como comprimidos, comprimidos recubiertos, cápsulas duras, soluciones acuosas, alcohólicas u oleosas. Ejemplos de portadores inertes adecuados son la goma arábiga, la magnesia, el carbonato de magnesio, el fosfato de potasio, la lactosa, la glucosa o el almidón, en particular, el almidón de maíz. En este caso, la preparación puede realizarse tanto en forma de gránulos secos como húmedos. Los excipientes o disolventes oleosos adecuados son los aceites vegetales o animales, como el aceite de girasol o el aceite de hígado de bacalao. Los disolventes adecuados para las soluciones acuosas o alcohólicas son el agua, el etanol, las soluciones azucaradas o sus mezclas. Los polietilenglicoles y los polipropilenglicoles también son útiles como auxiliares adicionales para otras formas de administración. Como comprimidos de liberación inmediata, estas composiciones pueden contener celulosa microcristalina, fosfato dicálcico, almidón, estearato de magnesio y lactosa y/u otros excipientes, aglutinantes, extensores, desintegrantes, diluyentes y lubricantes conocidos en la técnica.
Cuando se administran por aerosol nasal o inhalación, estas composiciones pueden prepararse según técnicas bien conocidas en el arte de la formulación farmacéutica y pueden prepararse como soluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservantes adecuados, promotores de absorción para mejorar la biodisponibilidad, fluorocarbonos y/u otros agentes solubilizantes o dispersantes conocidos en el arte. Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para la administración en forma de aerosoles o pulverizaciones son, por ejemplo, soluciones, suspensiones o emulsiones de los compuestos de la invención o sus sales fisiológicamente tolerables en un disolvente farmacéuticamente aceptable, como etanol o agua, o una mezcla de dichos disolventes. Si es necesario, la formulación puede contener además otros auxiliares farmacéuticos como tensioactivos, emulgentes y estabilizantes, así como un propulsor.
Para la administración subcutánea o intravenosa, el compuesto según la invención, si se desea con las sustancias habituales por lo tanto, tales como solubilizantes, emulsionantes o auxiliares adicionales se ponen en solución, suspensión o emulsión. Los compuestos de la invención también pueden liofilizarse y los liofilizados obtenidos utilizarse, por ejemplo, para la producción de preparados para inyección o infusión. Los disolventes adecuados son, por ejemplo, agua, solución salina fisiológica o alcoholes, por ejemplo etanol, propanol, glicerol, además también soluciones azucaradas como soluciones de glucosa o manitol, o alternativamente mezclas de los diversos disolventes mencionados. Las soluciones o suspensiones inyectables pueden formularse según la técnica conocida, utilizando diluyentes o disolventes adecuados, no tóxicos y aceptables para los padres, como manitol, 1,3-butanodiol, agua, solución de Ringer o solución isotónica de cloruro sódico, o agentes dispersantes o humectantes y suspensores adecuados, como aceites fijos estériles y suaves, incluidos mono o diglicéridos sintéticos, y ácidos grasos, incluido el ácido oleico.
Cuando se administran por vía rectal en forma de supositorios, estas formulaciones pueden prepararse mezclando los compuestos según la invención con un excipiente no irritante adecuado, como manteca de cacao, ésteres de glicéridos sintéticos o polietilenglicoles, que son sólidos a temperaturas ordinarias, pero se licúan y/o disuelven en la cavidad rectal para liberar el fármaco.
Las composiciones son valiosas en el campo veterinario, que a efectos de la presente memoria no sólo incluye la prevención y/o el tratamiento de enfermedades en animales, sino también -para animales económicamente importantes como ganado vacuno, cerdos, ovejas, pollos, peces, etc. - mejorar el crecimiento y/o el peso del animal y/o la cantidad y/o la calidad de la carne u otros productos obtenidos del animal. Por tanto, en otro aspecto, la invención se refiere a una composición (farmacéutica) para uso veterinario que contiene al menos un compuesto de la invención y al menos un portador adecuado (es decir, un portador adecuado para uso veterinario). La invención también se refiere al uso de un compuesto de la invención en la preparación de una composición de este tipo.Ejemplos
Los siguientes ejemplos se proporcionan con el fin de ilustrar la presente invención y, por ningún medio, deben interpretarse para limitar el alcance de la presente invención.
La parte A representa la preparación de los compuestos (productos intermedios y finales), mientras que la parte B representa los ejemplos farmacológicos.
Parte A
Los compuestos se prepararon siguiendo dos rutas sintéticas diferentes, ilustradas en el esquema 1 y el esquema 2, que se muestran a continuación.
Una solución de 2-cloro-2-(hidroxiimino)acetato de etilo (37,6 g, 240,66 mmol) en 200 ml de acetato de etilo se añadió gota a gota a temperatura ambiente a una mezcla de 3-bromoprop-1-ino (91 ml; 845 mmol), bicarbonato de sodio (71,48 g; 842 mmol), acetato de etilo (1200 ml) y agua (12 ml) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 108 horas. El sólido se separó por filtración y el filtrado se lavó dos veces con agua, se secó sobre sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice utilizando un gradiente de acetato de etilo (5-40 %) en heptano para dar 46,1 g (82 %) de 5-(bromometil)isoxazol-3-carboxilato de etilo como sólido blanco. 1H RMN (CLOROFORMO-d) 5: 6,74 (s, 1H), 4,50 (s, 2H), 4,45 (q, 2H), 1,42 (t, 3H).
Producto intermedio II - preparación de 5-(2,5-difluorobencil)isoxazol-3-carboxilato de etilo.
Se cargaron individualmente viales de microondas con 5-(bromometil)isoxazol-3-carboxilato de etilo (1,2 g; 5,13 mmol), ácido 2,5-difluorofenilborónico (0,928 g; 5,64 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,297 g; 0,256 mmol), carbonato de sodio (1,09 g; 10,25 mmol) y se añadió una mezcla de agua (2 ml) y 1,2-dimetoxietano (8 ml). Los viales se sellaron y se calentaron a 130 °C en un horno de microondas durante 20 min. El contenido de los veinticinco viales se combinó, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con agua. La fase orgánica se concentró a presión reducida y el residuo se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice utilizando un gradiente de acetato de etilo (5-40%) en heptano para dar 18,47 g (54 %) de 5-(2,5-difluorobencil)isoxazol-3-carboxilato de etilo como aceite amarillo. 1H RMN (CLOROFORMO-d) 5: 6,90 -7,12 (m, 3H), 6,42 (s, 1H), 4,42 (q, 2H), 4,15 (s, 2H), 1,40 (t, 3H). ESI/APCI(+): 268 (M+H), 290 (M+Na).
Producto intermedio III - preparación del ácido 5-(2,5-difluorobencil)isoxazol-3-carboxílico.
Una solución de hidróxido de sodio 1 M (206 ml; 206 mmol) a una solución de 5-(2,5-difluorobencil)isoxazol-3-carboxilato de etilo (18,30 g; 68,48 mmol) en etanol (20 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas. La solución se acidificó a pH 1 añadiendo una solución de ácido clorhídrico 12 N. El precipitado se recogió por filtración y se secó a presión reducida para dar 14,60 g (89% ) de ácido 5-(2,5-difluorobencil)isoxazol-3-carboxílico como sólido blanco. 1H RMN (DMSO-d6) 5: 7,17 - 7,34 (m, 3H), 6,59 (s, 1H), 4,27 (s, 2H).
Producto intermedio IV - preparación de 5-(hidroximetil)isoxazol-3-carboxilato de etilo.
Se añadió alcohol propargílico (11,42 ml; 191,36 mmol) a una mezcla de 2-doro-2-(hidroxümino)acetato de etilo (14,50 g; 95,68 mmol) e hidrogenocarbonato de sodio (16,08 g; 191,36 mmol) en acetato de etilo (400 ml) y agua (40 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas. Las dos fases se separaron y la capa orgánica se concentró a presión reducida. La mezcla bruta se purificó mediante cromatografía ultrarrápida sobre sílice (eluyente 1 a 10 % de acetato de etilo en diclorometano) para obtener 8,67 g (53 %) de 5-(hidroximetil)isoxazol-3-carboxilato de etilo como aceite.
Producto intermedio V - preparación del ácido 5-(hidroximetil)isoxazol-3-carboxílico.
Una solución de hidróxido de sodio en agua (2 M; 50 ml) se añadió a una mezcla de 5-(hidroximetil)isoxazol-3-carboxilato de etilo (8,67 g; 50,66 mmol) en etanol (30 ml) y se agitó enérgicamente durante 2 horas. La solución se concentró a presión reducida, se diluyó en agua y se extrajo con diclorometano. La fase acuosa se acidificó a pH 1 con ácido clorhídrico 6 N y se extrajo varias veces con acetato de etilo. La fase orgánica se secó y se concentró a presión reducida para obtener 5,43 g (75 %) de ácido 5-(hidroximetil)isoxazol-3-carboxílico como sólido blanco. Producto intermedio VI - preparación de N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-5-(hidroximetil)isoxazol-3-carboxamida.
Se añadió N,N diisopropiletilamina (10,75 ml; 58,23 mmol) a la mezcla de clorhidrato de 2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etanamina (5,00 g; 23,29 mmol), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N'N'-tetrametiluronio (8,86 g; 23,29 mmol) y ácido 5-(hidroximetil)isoxazol-3-carboxílico (3,67 g; 25,62 mmol) en DMF seco (40 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida y se diluyó en acetato de etilo, se lavó posteriormente con una solución acuosa de hidrogenosulfato de potasio (1 M) y una solución acuosa de carbonato de sodio (1 M). La fase orgánica se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. El residuo bruto se purificó mediante cromatografía flash en columna sobre sílice (eluyente metanol 0 % a 10 % en diclorometano) para producir 5,26 g (74 %) de N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-5-(hidroximetil)isoxazol-3-carboxamida como sólido amarillento pegajoso.
Producto intermedio VII - preparación de 5-(bromometil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida
Una solución de N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-5-(hidroximetil)isoxazol-3-carboxamida (5,30 g; 17,48 mmol) en THF (10 ml) a una solución de perbromometano (8,69 g; 26,21 mmol) y trifenilfosfina (6,88 g; 26,21 mmol) en THF (60 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. El sólido se separó por filtración y la solución se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash en columna sobre sílice (eluyente acetato de etilo 15 a 100 % en heptano) para obtener 2,64 g (41 %) de 5-(bromometil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida como sólido blanco. ESI/APCI(+): 366, 368 (M+H). ESI/APCI(-): 366, 364(M-H).
Preparación de compuestos de la invención
Ejemplo 1 - preparación de 5-(2,5-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida
Se añadióN-etildiisopropilamina (25,65 ml; 148,37 mmol) a una mezcla agitada de clorhidrato de 2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etan-1-amina (13,00 g; 59,35 mmol), ácido 5-(2,5-difluorobencil)isoxazol-3-carboxílico (14,19 g; 59,35 mmol), y hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (22,57 g; 59,35 mmol.) en DMF seco (90 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 60 horas y después se concentró a presión reducida. El residuo se disolvió en acetato de etilo y la solución se lavó con agua y salmuera, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró, y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash sobre gel de sílice usando un gradiente de acetato de etilo (1-10 %) en diclorometano para dar 20,02 g de un sólido amarillento que se recristalizó en una mezcla de diclorometano y n-heptano para dar 19,06 g (80 %) de 5-(2,5-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carbono. 06 g (80%) de 5-(2,5-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida como sólido blanco o 5-(bromometil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida (0,150 g; 0,409 mmol) se disolvió en DME (3 ml) y agua (1 ml) con ácido (2,5-difluorofenil)borónico (0,068 g; 0,430 mmol), carbonato de sodio (0,086 g; 0,430 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,024 g; 0,020 mmol) y se calentó durante la noche a 90 °C. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con agua y acetato de etilo, la fase orgánica se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. La mezcla bruta se purificó mediante cromatografía flash en columna sobre sílice (eluyente acetato de etilo al 0-10% en diclorometano) para producir 0,038 g (23%) de 5-(2,5-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida como sólido blanco.
1H RMN (DMSO-d6) 5: 10,92 (s. a., 1H), 8,82 (t, 1H), 7,1 -7,38 (m, 6H), 6,90 (td, 1H), 6,53 (s, 1H), 4,26 (s, 2H), 3,48 (q, 2H), 2,88 (t, 2H). ESI/APCI(+): 400 (M+H). ESI/APCI(-): 398 (M-H).
Ejemplo 2 - preparación de 5-(2,4-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida
5-(bromometil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida (0,150 g; 0,409 mmol) se disolvió en<d>M<e>(3 mL) y agua (1 ml) con ácido (2,4-difluorofenil)borónico (0,068 g; 0,430 mmol), carbonato de sodio (0,086 g; 0,430 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,024 g; 0,020 mmol) y se calentó durante la noche a 90 °C. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con agua y acetato de etilo, la fase orgánica se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. La mezcla bruta se purificó mediante cromatografía flash en columna sobre sílice (eluyente acetato de etilo 0 a 10 % en diclorometano) para producir 0,0462 g (28 %) de 5-(2,4-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida como sólido blanco. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6): 5 10,92 (s. a., 1H); 8,82 (t, 1H); 7,39 - 7,57 (m, 1H); 7,21 - 7,36 (m, 4H); 7,11 (td, 1H); 6,90 (td, 1H); 6,50 (s, 1H); 4,24 (s, 2H); 3,49 (q, 2H); 2,89 (t, 2H). ESI/APCI(+): 400 (M+H).ESI/APCI(-): 398 (M-H). Ejemplo 3 - preparación de 5-(3,4-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida
5-(bromometil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida (0,150 g; 0,409 mmol) se disolvió en DME (3 ml) y agua (1 ml) con ácido (3,4-difluorofenil)borónico (0,068 g; 0,430 mmol), carbonato de sodio (0,086 g; 0,430 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,024 g; 0,020 mmol) y se calentó durante la noche a 90 °C. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con agua y acetato de etilo, la fase orgánica se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. La mezcla bruta se purificó mediante cromatografía flash en columna sobre sílice (eluyente acetato de etilo al 0-10% en diclorometano) para obtener 0,065 g (40%) de 5-(3,4-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida como sólido amarillo pálido. 1H RMN (300 MHz, DMSO-CÍ6) 5 ppm 10,92 (s. a., 1H); 8,81 (t, 1H) 7,36-7,49 (m, 2H); 7,28-7,35 (m, 2H); 7,25 (d, 1H); 7,12-7,21 (m, 1 H); 6,90 (td, 1 H); 6,54 (s, 1 H); 4,23 (s, 2 H); 3,48 (q, 2 H); 2,89 (t, 2 H). ESI/APCI(+): 400 (M+H). ESI/APCI(-): 398 (M-H).
Ejemplo 4 - preparación de 5-(3,5-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida
5-(bromometil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida (0,150 g; 0,409 mmol) se disolvió en<d>M<e>(3 ml) y agua (1 ml) con ácido (3,5-difluorofenil) borónico (0,068 g; 0,430 mmol), carbonato de sodio (0,086 g; 0,430 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)paladio(0) (0,024 g; 0,020 mmol) y se calentó durante la noche a 90 °C. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con agua y acetato de etilo, la fase orgánica se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. La mezcla bruta se purificó mediante cromatografía flash en columna sobre sílice (eluyente acetato de etilo 0 a 10 % en diclorometano) para producir 0,068 g (41 %) de 5-(3,5-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida como sólido blanco. 1H RMN (300 MHz, DMSO-CÍ6) 5 ppm 10,93 (s. a., 1 H.); 8,83 (t, 1 H); 7,03-7,42 (m, 6 H); 6,91 (td, 6 H); 6,59 (s, 1 H); 4,27 (s, 2 H); 3,50 (q, 2 H); 2,90 (t, 2 H). ESI/APCI(+): 400(M H). ESI/APCI(-): 398 (M-H).
Ejemplo 5 - preparación de N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-5-(4-fluorobencil)isoxazol-3-carboxamida
5-(bromometil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida (0,150 g; 0,409 mmol) se disolvió en DME (3 ml) y agua (1 ml) con ácido (4-fluorofenil)borónico (0,086 g; 0,430 mmol), N,N diisopropiletilamina (0,151 ml; 0,819 mmol), [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(N) (0,033 g; 0,040 mmol) y se calentó durante la noche a 90 °C. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con agua y acetato de etilo, la fase orgánica se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. La mezcla bruta se purificó mediante cromatografía flash en columna sobre sílice (eluyente acetato de etilo 0 a 10% en diclorometano) para obtener 0,088 g (57%) de N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-5-(4-fluorobencil)isoxazol-3-carboxamida como sólido blanco. 1H RMN (300 MHz, DMSO-cfe) 5 ppm 10,92 (s. a, 1H,); 8,80 (t, 1 H); 7,11-7,42 (m; 7H); 6,81-6,99 (m, 1H); 6,51 (s, 1H); 4,21 (s, 2H); 3,48 (q, 2H); 2,88 (t, 2H). ESI/APCI(+): 382 (M+H).
ESI/APCI(-): 380 (M-H).
Ejemplo 6 - preparación de 5-(2,3-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida.
5-(bromometil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida (0,200 g; 0,546 mmol) se disolvió en DME (3 ml) y agua (1 ml) con ácido (2,3-difluorofenil)borónico (0,129 g; 0,819 mmol), N,N diisopropiletilamina (0,201 ml; 1,09 mmol), bis(difenilfosfino)ferroceno]didoropaladio(N) (0,045 g; 0,056 mmol) y se calentó durante la noche a 90 °C. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con agua y acetato de etilo, la fase orgánica se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. La mezcla bruta se purificó mediante cromatografía flash en columna sobre sílice (eluyente acetato de etilo al 20-100% en heptano) para producir 0,015 g (7%) de 5-(2,3-difluorobencil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida como sólido blanco. 1H RMN (300 m Hz, Dm SO-q6) 5 ppm 10,85 - 11,04 (m,1 H); 8,82 (t, 1H); 7,45-7,30 (1H, m); 7,28-7,36 (m, 2H); 7,17-7,27 (m, 3 H); 6,90 (td, 1H); 6,55 (s; 1H); 4,33 (s; 2H); 3,48 (d, 2H); 2,88 (t, 2H).
ESI/APCI(+): 400 (M+H).ESI/APCI(-): 398 (M-H).
Ejemplo 7 - preparación de N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-5-(2-fluorobencil)isoxazol-3-carboxamida.
5-(bromometil)-N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)isoxazol-3-carboxamida (0,150 g; 0,409 mmol) se disolvió en DME (3 ml) y agua (1 ml) con ácido (2-fluorofenil)borónico (0,086 g; 0,430 mmol), N,N diisopropiletilamina (0,151 ml; 0,819 mmol), bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio(N) (0,033 g; 0,040 mmol) y se calentó durante la noche a 90 °C. Después de enfriar hasta TA, la mezcla de reacción se diluyó con agua y acetato de etilo, la fase orgánica se secó con sulfato de magnesio y se concentró a presión reducida. La mezcla bruta se purificó mediante cromatografía flash en columna sobre sílice (eluyente acetato de etilo 0 a 10% en diclorometano) para obtener 0,068 g (44%) de N-(2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil)-5-(2-fluorobencil)isoxazol-3-carboxamida como sólido blanco. 1H RMN (300 MHz, DMSO-cí6) 5 ppm 10,93 (s. a., 1H); 8,66-8,96 (m, 1H); 7,13-7,52 (m, 1H); 6,79-7,00 (m, 1H); 6,51 (s, 1H); 4,26 (s, 2H); 3,49 (q, 2H); 2,89 (t, 2H). ESI/APCI(+): 382 (M+H).
ESI/APCI(-): 380 (M-H).
Parte B
Ejemplo 8 - Construcción de una línea celular de sobreexpresión del gen TAU
Se construyó un plásmido de expresión de TAU subclonando el ADNc de TAU-P301L humano (que codifica para TAU con la prolina 301 sustituida por un residuo de leucina) en el vector de expresión de mamíferos pcDNA3.1, lo que dio lugar al plásmido pcDNA3.1-TAU P301L. Los plásmidos pcDNA3.1 y pcDNA3.1-TAU P301L se transfectaron en células de neuroblastoma humano (BM17; ATCC n.° CRL-2267) y se seleccionaron líneas clonales independientes con los plásmidos integrados de forma estable en el genoma. Se obtuvieron así líneas celulares denominadas M17-3.1 y M17-TAU(P301L) (transfectadas con pcDNA3.1 y pcDNA3.1-TAU P301L, respectivamente). La expresión de los genes TAU P301L en las líneas celulares se confirmó mediante análisis de tipo Western.
Ejemplo 9 - Uso de células que expresan P301L TAU como modelo de degeneración neuronal
Se observó que la expresión de TAU P301L en las células M17-TAU(P301L) confería una mayor toxicidad en relación con las células de control que expresaban TAU de tipo natural (M17-TAUwt).
En las células degeneradas o muertas, la lactato deshidrogenasa (LDH) se escapa de las células al medio extracelular debido a la pérdida de integridad de la membrana plasmática. Este principio se usó para determinar la citotoxicidad cuantificando el nivel de LDH filtrada en el medio de crecimiento en relación con la suma de la actividad LDH total de las células vivas y las células muertas.
El método detallado para determinar la citotoxicidad fue el siguiente: A partir de precultivos apropiados de M17-3.1 y M17-TAU(P301L) se sembraron células a 2500 células/cm2 en Suero Optimem Reducido sin rojo fenol (Gibco, Cat.
31985-047) suplementado con 1 % de suero fetal de ternera, 1 mM de piruvato de sodio, 1 x de aminoácidos no esenciales, 500 ^g/ml de G418 0,5 x de antibiótico/antimicótico. Después de 3 horas de incubación a 37 °C/5 % de CO2 1 volumen de Suero Optimem Reducido (igual al descrito anteriormente; excepto sin suero fetal de ternera) suplementado con 2,5 ^M de ácido transretinoico total (ATRA). Las células se incubaron adicionalmente durante 7 días. Posteriormente, se determinó la actividad LDH mediante el ensayo de citotoxicidad no radiactiva Promega Cytotox 96, (cat. G1780) según las instrucciones del proveedor.
La Figura 1A muestra que de las células M17-TAU P301L, pero no de las células M 17-3,1 muestran un nivel relativamente alto de LDH filtrado en el medio que demuestra la toxicidad que provoca específicamente la TAU P301. Resaltar la sensibilidad de una TAU(301) que expresa la línea celular de neuroblastoma a la diferenciación mediada por ácido retinoico. Ejemplo 10 - uso de las células que expresan P301L TAU como modelo para la dishomeostasis del calcio
El calcio cistósico se midió cargando las células con un medio que contenía Fura-2 AM (Sigma-Aldrich), una sonda fluorescente permeable a las células para Ca2+. Fura-2-AM se disolvió en DMSO más 20 % de ácido plurónico (F-127) (Invitrogen) en una razón 1:1 y se diluyó en medio hasta una concentración final de 0,5 pM. A este medio de carga se añadió probenecid (Sigma-Aldrich) hasta una concentración final de 2,5 mM. A continuación, el medio de cultivo se sustituyó por medio de carga y, tras incubar durante 1 hora a 37 °C, las células se lavaron dos veces y se sustituyeron por H<b>SS (Gibco) suplementado con 0,2 % de FBS y 0,02 M de HEPES. A continuación, se midieron los cambios en el calcio citosólico utilizando un lector de microplacas FlexStation 3 (Molecular Devices) y se cuantificaron ratiométricamente, calculando los cambios en la cantidad de Ca2+ citosólico unido a Fura-2 (intensidad de fluorescencia a 340 nm) en relación con la cantidad de Ca2+ no unido a Fura-2 (intensidad de fluorescencia a 380 nm). Los datos se procesaron con el programa SoftMax Pro 5.4.6 (Molecular Devices).
La Figura 1B muestra que en las células que expresan P301L TAU en la que la toxicidad fue inducida por ATRA según el método del ejemplo 9, mostró niveles aumentados de calcio citosólico.
Ejemplo 11 - uso de las células que expresan P301L TAU como modelo de neurodegeneración en el cribado de compuestos para el tratamiento de la epilepsia.
El modelo de línea celular de citotoxicidad inducida por TAU permite identificar compuestos que pueden utilizarse en animales transgénicos y pacientes humanos para el tratamiento de la epilepsia. La isradepina es un inhibidor de los canales de calcio dependientes del voltaje (VGCC), una diana bien establecida para el tratamiento de la epilepsia, y la iradepina es activa en modelos de epilepsia. La Figura 2 muestra la toxicidad se reduce de las células incubadas con RA que se trataron con el canal de calcio regulado por tensión (VGCC) de forma simultánea. Ejemplo 12 - uso de las células que expresan TAU en el cribado de compuestos ejemplares de esta invención. La línea celular M17-TAU P301L permitió evaluar la capacidad de los nuevos compuestos para contrarrestar la citotoxicidad de TAU. Se comprobó que los inhibidores activos de la citotoxicidad de TAU inhibían la fuga de LDH de las células M17-TAU P301L tratadas como se describe en el ejemplo 9. La eficacia (potencia) de los compuestos se determinó probando los compuestos a diferentes concentraciones que iban desde no eficaces (por tanto, a una concentración relativamente baja) hasta una concentración eficaz en cuanto a su capacidad para reducir la actividad LDH de las células M17-TAU P301L incubadas con ácido retinoico. Estas mediciones se utilizaron para calcular los valores de CE<50>.
En la tabla 1 se muestran compuestos ejemplares de la presente invención, con su estructura química y su valor CE<50>(expresado en pg/ml) determinado a partir del Ejemplo 12 en el experimento de toxicidad inducida por TAU. Tabla 1
Además, se probaron compuestos para reducir los elevados niveles de calcio citosólico. En presencia de los compuestos, estos niveles de calcio citosólico disminuyeron. La Figura 3 muestra que los compuestos mitigan la dishomeostasis del calcio en condiciones de toxicidad en el modelo de línea celular M17-TAU P301L descrito en el ejemplo 9.
Ejemplo 13 - Inhibición ex vivo de la toxicidad de la beta amiloide oligomérica
Se ensayó un compuesto ejemplar de esta invención para determinar su capacidad de inhibir la toxicidad provocada por beta amiloide oligomérico (Apo). Se cosecharon y cultivaron neuronas de embriones de rata utilizando métodos estándar (como los utilizados en Schlager y col., 2014. Cell reports, 8(5), págs.1248-56.). Las neuronas diferenciadas fueron desafiadas con Apo y se cuantificó la viabilidad. El tratamiento con Apo condujo a una viabilidad neuronal severamente reducida, mientras que la viabilidad fue fuertemente rescatada en las neuronas tratadas con Apo en presencia de 100ng/ml de compuesto 6 (Figura 4). Estos resultados demuestran que el compuesto 6 mitiga fuertemente la muerte celular neuronal instigada por Apo.
Métodos detallados:
En el día in vitro 19 días después del aislamiento se transfectaron neuronas hipocampales primarias con Marcks-GFP para visualizar las neuronas con microscopía de fluorescencia.
Preparación de ADDL para generar Apo:
La preparación de ADDL (ligandos difusibles derivados de Abeta) (que representan Apo) se realizó según Klein (Klein, 2002. Neurochemistry international, 41(5), págs. 345-52.). Abeta 1-42 se adquirió de AnaSpec Inc. y se disolvió en HFIP para homogeneizar el péptido. A continuación, el HFIP se evaporó en un speedvac y la película de Abeta se secó a -20 °C durante la noche sobre desecante. A continuación, la película de Abeta se resolubilizó en DMSO al 100 % y se diluyó de nuevo (1/25) en medio F12 de Ham. Los blancos se prepararon añadiendo cantidades iguales de DMSO al medio F12 de Ham. Las soluciones Abeta y en blanco se incubaron durante la noche a 4 °C.
La solución se centrifugó a 14.000xg durante 10 min a 4 °C y los sobrenadantes se transfirieron a tubos nuevos y se determinó la concentración de proteínas mediante NanoDrop®.
Tratamiento celular.
En el día in vitro 21, las neuronas primarias del hipocampo de rata se trataron con un volumen igual de solución Blank/ADDL de 0 y 1000 nM ADDL. Los cultivos se mantuvieron a 37 °C 5 % CO2 durante 24 h antes de la fijación con PFA. La viabilidad se evaluó mediante el ensayo Live-Dead de Thermo Fisher con número de catálogo: L3224.
Fijación.
Las neuronas se fijaron en 4 %PFA/sacarosa durante 10 minutos a temperatura ambiente. Las células se permeabilizaron usando un tampón que contenía 0,1 % de Triton-X/0,1 % de NaCit/PBS. Tras el lavado, los cubreobjetos que contenían neuronas se invirtieron sobre una gota de medio de montaje (H1000, Vector Laboratories) (sin DAPI), se secaron a TA y se sellaron.
Ejemplo 14 - Inhibición ex vivo de la actividad VGCC.
Se comprobó la capacidad del compuesto 6 para inhibir la actividad VGCC en neuronas primarias. Se cosecharon y cultivaron neuronas de embriones de ratón utilizando métodos estándar (como los utilizados en Schlager y col., 2014. Cell reports, 8(5), págs.1248-56). Para estimular la actividad VGCC, se despolarizaron las neuronas utilizando 45 mM de KCI y se incubaron con vehículo o compuesto a una concentración de 1,5 pm. El influjo de calcio se midió utilizando el reactivo fluorescente de detección de Ca2+ citosólico Fura2. La Figura 5 muestra que en las neuronas tratadas con el compuesto el influjo de Ca2+ tras la despolarización KCI se redujo significativamente, lo que indica que el compuesto inhibe la actividad VGCC.
Métodos detallados.
Los cambios en las concentraciones citosólicas de Ca2+ se midieron tras cargar las células con Fura-2 AM (Sigma-Aldrich), una sonda fluorescente permeable a las células para Ca2+. Brevemente, Fura-2-AM se disolvió en DMSO más 20 % de ácido plurónico (F-127) (Invitrogen) en una razón 1:1 y se diluyó en medio hasta una concentración final de 0,5 pM. A este medio de carga se añadió probenecid (Sigma-Aldrich) a una concentración final de 2,5 mM. A continuación, el medio de cultivo se sustituyó por medio de carga y, tras incubar durante 1 hora a 37 °C, las células se lavaron dos veces y se sustituyeron por HBSS (Gibco) suplementado con 0,2 % de FBS y 0,02 M de HEPES. A continuación, se midieron los cambios en el calcio citosólico utilizando un lector de microplacas FlexStation 3 (Molecular Devices) y se cuantificaron ratiométricamente, calculando los cambios en la cantidad de Ca2+ citosólico unido a Fura-2 (intensidad de fluorescencia a 340 nm) en relación con la cantidad de Ca2+ no unido a Fura-2 (intensidad de fluorescencia a 380 nm). Los datos se procesaron con el programa SoftMax Pro 5.4.6 (Molecular Devices).
Ejemplo 15 - Inhibición in vivo de patologías inducidas por TAU.
Ratones humanos transgénicos APP*PS1 de 5 meses de edad (The Journal of Neuroscience, 1 de septiembre de 2000, 20(17):6452-6458) fueron tratados diariamente por vía subcutánea con 20 mg/kg de compuesto 6 durante 2 semanas.
Al final del periodo de tratamiento, los ratones fueron sacrificados y los cerebros correspondientes se utilizaron para análisis bioquímicos. El análisis de tipo Western de los extractos cerebrales utilizando anticuerpos específicos fosfo-TAU mostró que, en comparación con los ratones tratados con vehículo, el compuesto 6 redujo más eficazmente la fosforilación de TAU, lo que demuestra un efecto de reducción in vivo de las especies patológicas de TAU en el cerebro por el compuesto 6 (Figura 6).
Ejemplo 16 - Efectos in vivo sobre la cognición en un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer.
Ratones APP transgénicos humanos de 4 meses de edad (THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY vol. 274, n.° 10, emisión del 5 de marzo, págs. 6483-6492, 1999) fueron tratados por vía subcutánea, diariamente durante 8 semanas con el compuesto 6 a 20 mg/kg. La cognición se evaluó mediante la prueba del laberinto acuático de Morris. Durante la fase de entrenamiento, que evalúa el rendimiento del aprendizaje, los ratones presentaban con el tiempo una trayectoria de búsqueda reducida en comparación con los ratones tratados con vehículo (Figura 7, sección A). Después de la fase de aprendizaje, se realizó una prueba de sondeo en la que se retiró la plataforma del baño de agua para evaluar la memoria espacial de la ubicación de la plataforma. Esta prueba reveló (Figura 7, sección B) una mayor puntuación del índice de cruce del anillo (que representa el número de nados sobre el sitio de la plataforma en el área objetivo ajustado por los nados sobre las áreas correspondientes en otros cuadrantes) que los animales tratados con vehículo.
Ambos índices indican que los ratones tratados con compuestos presentan una mejora del rendimiento cognitivo casi idéntica a la de los controles de tipo natural en comparación con los ratones tratados con vehículos.
Ejemplo 17 - Normalización de la hiperactivación neuronal ex vivo en un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer.
Se incubaron cortes de cerebro de ratones de tipo natural y tgAPP con DMSO o con el compuesto 6. Las neuronas se estimularon con corrientes crecientes y se midió la frecuencia de potenciales de acción (tasa de disparo).
En los ratones tgAPP, la frecuencia de potenciales de acción a estímulos más altos fue mayor. La incubación de los cortes con el compuesto 6 ilustrativo redujo significativamente la frecuencia hacia el nivel de tipo natural (Figura 8). Estos datos demuestran que en ratones tgAPP la actividad neuronal es menor o no restringida como se observa en los ratones de tipo natural y que el compuesto reduce esta hiperactividad neuronal en ratones tgAPP.
Elementos cerebrales agudos:
Se prepararon cortes sagitales agudos de cerebro de ratones WT o hAPP por decapitación de los ratones tras anestesia con isoflurano. Los cerebros se extrajeron rápidamente y se sumergieron durante 3-4 minutos en líquido cefalorraquídeo artificial de corte recién preparado y helado (aCSF de corte) que contenía (en mM) 214 sacarosa,2,5 KCI, 2 CaCl2, 2 MgSO4, 1,25 NaH2PO2, 26 NaHCO3 y 10 glucosa y se oxigenó con 95 % O2/5 % de CO2. Se generaron cortes sagitales de 350 |jm utilizando un vibratomo (VT 1000S; Leica Microsystems) y se incubaron en aCSF carboxigenado convencional (en mM: 125 NaCl, 2,5 KCI, 2 CaCl2, 2 MgSO4, 1,25 NaH2PO2, 26 NaHCO3 y 10 glucosa, osmolaridad 305 mOsm) a 34 °C durante 20 min. La incubación continuó a temperatura ambiente (TA) durante otra hora antes de que cada corte se transfiriera a una cámara de registro sumergida y se perfundiera continuamente con aCSF carboxigenado.
Registro de pinzamiento zonal de un solo potencial de acción de CA1 (sAP) y velocidad de disparo:
Los registros de pinzamiento de corriente somática o dendrítica (>200 jm desde el soma) se realizaron a RT (24 a 28 °C) y los cortes se perfundieron continuamente con aCSF estándar carboxigenado, suplementado con el artículo de control o de prueba REM0043039 a 2 jM . Para los registros de células enteras, las pipetas de parche se llenaron con una solución que contenía (en mM) 140 K-gluconato, 5 NaCl, 2 MgCl2, 10<h>EP<e>S, 0,5 EGTA, 2 MgATP, 0,4 NaGTP, osmolaridad 305, pH ajustado a 7,25 con KOH. Se identificó el soma o la dendrita de las neuronas piramidales CA1 grandes y se les aplicó un patchclamp tras la aproximación visual de la pipeta de registro utilizando una combinación de luz infrarroja y óptica de contraste de interferencia diferencial (DIC). Los electrodos de pinzamiento tenían una resistencia de alrededor de 5 y 14 MQ cuando se llenaron para el registro somático y dendrítico, respectivamente. Los registros finalizaron cuando las resistencias en serie superaron los 40 MQ. Las señales se digitalizaron y se filtraron de paso bajo a 10 kHz. La señal se amplificó con un amplificador Axopatch 200B, se digitalizó con una interfaz Digidata 155 y se muestreó con Clampex 10 (Molecular Devices, CA).
Se provocó una única espiga inyectando un pulso de corriente despolarizante de 2 ms (35 pA) y los parámetros del potencial de acción (PA) fueron los iniciales y tras 25 min de perfusión de vehículo o compuesto.
Se registró la tasa de disparo dendrítico de las células CA1 en respuesta a pasos de hiperpolarización y despolarización ( 0,4 a 0,45 nA, pasos de 0,05 nA) tras una perfusión de 1 hora con vehículo o compuesto a 2 jM . El número medio de potenciales de acción (tasa de disparo) se representó en función de la intensidad del paso de corriente.
Ejemplo 18 - Ensayo de compuestos en el modelo de epilepsia kainita
Los compuestos se probaron en el modelo de epilipsia kainita de rata.
La evaluación farmacológica de la actividad antiepiléptica de los compuestos se realiza en un modelo de ratón de ácido kainico (KA) (Groticke y col., 2008, Experimental Neurology, 213, págs. 71-83; Dietrich y col., Aug 2016, Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc., págs. 4005-4008). Este modelo muestra crisis recurrentes tras un estado epiléptico (SE) inicial inducido por KA y una fase epileptógena latente de 2 a 3 semanas.
Se inyecta KA en el área CA1 del hipocampo dorsal seguido de una implantación quirúrgica ipsilateral de electrodos bipolares para el registro EEG. En función de la aparición de un SE no convulsivo inducido por KA, se seleccionan los ratones para su inclusión en el estudio. Para registrar las descargas del hipocampo (HPD) a lo largo del tiempo se utiliza una monitorización de vídeo-EEG de una o dos veces a la semana durante 1 hora. La gravedad de las convulsiones conductuales (convulsiones) se califica según RacineRacine RJ, 1972, Electroencefogr Clin Neurofisiol., 38(1):1-12).
La administración subcutánea diaria del compuesto (25 mg/kg) o el tratamiento con vehículo comienza antes o después de la SE inicial inducida por kainato. Los ratones tratados con el compuesto muestran una disminución de más del 20 % en la HPD inducida por kainato y/o en las convulsiones espontáneas en comparación con los ratones tratados con vehículo.
Ejemplo 19 - El compuesto aumenta la poshiperpolarización de los potenciales de acción
La mejora de la corriente de potasio de tipo A tiene potencial terapéuti
excitabilidad de las neuronas.
Se analizaron los potenciales de acción (PA) tras la estimulación eléctrica de cortes de cerebro de ratón (Figura 9). La posthipolarización de los PA de las rodajas incubadas con el compuesto 6 aumentó, lo que indica que el compuesto facilita la repolarización neuronal a un estado de reposo.
El experimento se realizó como se describe esencialmente en el Ejemplo 17.
Ejemplo 20 - Uso del modelo de dishomeostasis del calcio de células que sobreexpresan TAU.P301L en el cribado de compuestos de esta invención.
Se probaron compuestos para reducir los niveles elevados de Ca2+ citosólico en el modelo celular de dishomeostasis del calcio (Figura 1B), como se describe en el Ejemplo 10. La eficacia (potencia) de los compuestos se determinó probando compuestos a diferentes concentraciones, desde concentraciones no efectivas a efectivas, por su capacidad para reducir el nivel de Ca2+ citosólico unido a Fura-2 (intensidad de fluorescencia a 340 nm) en relación con la cantidad de Ca2+ no unido a Fura-2 (intensidad de fluorescencia a 380 nm).
En la tabla 2 se muestran compuestos ejemplares de la presente invención, con su estructura química y su valor CE5o de disminución del Ca2+ citosólico (expresado en pg/ml).
Tabla 2
EJEMPLO 21 - Uso del modelo ex vivo de afluencia de calcio inducida por KCI en el cribado de compuestos para el tratamiento de la epilepsia y otras enfermedades neurodegenerativas que implican dishomeostasis del calcio.
Se probó la capacidad de los compuestos a 10 pM para inhibir la afluencia de Ca2+ en neuronas primarias (Figura 5) como se describe en el Ejemplo 14. Las neuronas primarias tratadas con vehículo en el que no se disolvió ningún compuesto se utilizaron como control sin efecto. Se calculó el porcentaje (%) de inhibición del influjo de Ca2+ en relación con las neuronas tratadas con vehículo. Los resultados se muestran en la tabla 3.
Tabla 3.

Claims (15)

  1. REIVINDICACIONES 1. Un compuesto de Fórmula (I) o un tautómero del mismo,
    en donde, - R1 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y F; - R2 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y F; - R3 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y F; - R4 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y F; - R5 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno y F; con la condición de que al menos uno de R1, R2, R3, R4 o R5 no sea hidrógeno; con la condición de que dicho compuesto de Fórmula (I) no sea N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]-5-[(3 fluorofenil)metil]isoxazol-3-carboxamida, o un solvato, un hidrato o una sal del mismo.
  2. 2. El compuesto según la reivindicación 1, que tiene una cualquiera de Fórmula (II), (III), (IV), (V) o (VI)
    en donde R1, R2, R3 y R4 tiene el mismo significado que se define en la reivindicación 1.
  3. 3. El compuesto según las reivindicaciones 1 o 2, en donde R2, R3, R4 y R5 son hidrógeno y en donde R1 es F.
  4. 4. El compuesto según las reivindicaciones 1 o 2, en donde R1, R2, R4 y R5 son hidrógeno y R3 es F.
  5. 5. El compuesto según las reivindicaciones 1 o 2, en donde R2, R4y R5 son hidrógeno y R1 y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
  6. 6. El compuesto según las reivindicaciones 1 o 2, en donde R1, R4y R5 son hidrógeno y R2y R3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
  7. 7. El compuesto según las reivindicaciones 1 o 2, en donde R1, R3y R5 son hidrógeno y R2y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
  8. 8. El compuesto según las reivindicaciones 1 o 2, en donde R3, R4y R5 son hidrógeno y R1 y R2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
  9. 9. El compuesto según las reivindicaciones 1 o 2, en donde R2, R3 y R5 son hidrógeno y R1 y R4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste en hidrógeno y F.
  10. 10. El compuesto según la reivindicación 1, seleccionado del grupo que consiste en: - 5-[(2,4-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida; - N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]-5-[(4-fluorofenil)metil]isoxazol-3-carboxamida; - 5-[(2,3-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida; - 5-[(2,5-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida; - N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]-5-[(2-fluorofenil)metil]isoxazol-3-carboxamida; - 5-[(3,4-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida; y - 5-[(3,5-difluorofenil)metil]-N-[2-(5-fluoro-1H-indol-3-il)etil]isoxazol-3-carboxamida.
  11. 11. Una composición farmacéutica que comprende uno o más excipientes farmacéuticos y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o un solvato, un hidrato o una sal del mismo.
  12. 12. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o una composición farmacéutica según la reivindicación 11 para su uso como medicamento.
  13. 13. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10 o una composición farmacéutica según la reivindicación 11 para su uso como medicamento para la prevención y/o el tratamiento de la epilepsia, trastornos neurodegenerativos, trastornos del dolor, trastornos de ansiedad, depresión, trastorno bipolar, psicosis, síndrome de abstinencia, abstinencia de tabaco, pérdida de memoria, demencia, esquizofrenia y pánico.
  14. 14. El compuesto para uso según la reivindicación 13, en donde la epilepsia se selecciona del grupo que consiste en epilepsia resistente, síndrome de West, síndrome de Doose, epilepsia rolándica benigna, síndrome de Rasmussens, síndrome de Lennox-Gastaut, síndrome de Sturge-Weber, epilepsia mioclónica juvenil, epilepsia de ausencia infantil, epilepsias idiopáticas relacionadas con la localización, epilepsia del lóbulo temporal, epilepsias parciales, epilepsias parciales simples, epilepsias tónicas, epilepsias tónico-clónicas, epilepsias clónicas, epilepsias mioclónicas, epilepsias de ausencia, epilepsias atónicas, epilepsia del lóbulo frontal, epilepsia con epilepsias gran-mal, epilepsia generalizada, epilepsia idiopática, epilepsia sintomática y epilepsia criptogénica.
  15. 15. El compuesto para uso según la reivindicación 13, en donde el trastorno neurodegenerativo se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, enfermedad difusa con cuerpos de Lewy, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Niemann-Pick, síndrome de Hallervorden-Spatz, síndrome de Down, distrofia neuroaxonal, atrofia multisistémica, enfermedad de Huntington, degeneración lobar frontotemporal (DLFT), fibrosis quística y enfermedad de Creutzfeld-Jacob.
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Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990005723A1 (en) 1988-11-24 1990-05-31 Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. Trans-4-amino(alkyl)-1-pyridylcarbamoyl-cyclohexane compounds and their medicinal use
IS2334B (is) 1992-09-08 2008-02-15 Vertex Pharmaceuticals Inc., (A Massachusetts Corporation) Aspartyl próteasi hemjari af nýjum flokki súlfonamíða
EG20677A (en) 1993-10-01 1999-11-30 Astra Ag Method and an apparatus for micronizing the particle size
US6043358A (en) 1995-11-01 2000-03-28 Merck & Co., Inc. Hexahydro-5-imino-1,4-heteroazepine derivatives as inhibitors of nitric oxide synthases
GB9718913D0 (en) 1997-09-05 1997-11-12 Glaxo Group Ltd Substituted oxindole derivatives
AU2012199A (en) 1997-12-24 1999-07-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Prodrugs of aspartyl protease inhibitors
AU2010299A (en) 1997-12-24 1999-07-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Prodrugs os aspartyl protease inhibitors
US6436989B1 (en) 1997-12-24 2002-08-20 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Prodrugs of aspartyl protease inhibitors
AP2000001856A0 (en) 1997-12-24 2000-09-30 Vertex Pharma Prodrugs of aspartyl protease inhibitors.
US6369087B1 (en) 1999-08-26 2002-04-09 Robert R. Whittle Alkoxy substituted benzimidazole compounds, pharmaceutical preparations containing the same, and methods of using the same
US20050182125A1 (en) 2003-05-16 2005-08-18 Ambit Biosciences Corporation Pyrrole compounds and uses thereof
WO2004110998A1 (en) 2003-05-16 2004-12-23 Ambit Biosciences Corporation Pyrrole compounds and uses thereof
WO2006110918A1 (en) * 2005-04-13 2006-10-19 Ambit Biosciences Corporation Pyrrole compounds and uses thereof
EP2002834A1 (de) 2007-06-13 2008-12-17 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Aryl/Hetarylamide als Modulatoren des EP2-Rezeptors
EP2203427A2 (en) 2007-09-20 2010-07-07 Abbott Healthcare Products B.V. 5-aryl-4,5-dihydro-(1h)-pyrazoles as cannabinoid cb1 receptor agonists
EP2149552A1 (de) 2008-07-30 2010-02-03 Bayer Schering Pharma AG 5,6 substituierte Benzamid-Derivate als Modulatoren des EP2-Rezeptors
GB0910003D0 (en) * 2009-06-11 2009-07-22 Univ Leuven Kath Novel compounds for the treatment of neurodegenerative diseases
CA2784744A1 (en) 2009-12-16 2011-07-14 Neuropore Therapies, Inc. Compound
EP3013341A4 (en) 2013-06-26 2017-02-08 Proteostasis Therapeutics, Inc. Methods of modulating cftr activity
EP3634407A1 (en) 2017-05-11 2020-04-15 Remynd N.V. Inhibitors of pde6delta for use in the prevention and/or treatment of epilepsy and/or neurodegenerative disorders

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