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ES2807902T3 - Anticuerpos para olanzapina y uso de los mismos - Google Patents

Anticuerpos para olanzapina y uso de los mismos Download PDF

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ES2807902T3
ES2807902T3 ES13831110T ES13831110T ES2807902T3 ES 2807902 T3 ES2807902 T3 ES 2807902T3 ES 13831110 T ES13831110 T ES 13831110T ES 13831110 T ES13831110 T ES 13831110T ES 2807902 T3 ES2807902 T3 ES 2807902T3
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Spain
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seq
amino acid
olanzapine
acid residues
antibody
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ES13831110T
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English (en)
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Eric Hryhorenko
Banumathi Sankaran
Thomas R Decory
Theresa Tubbs
Linda Colt
Bart M Remmerie
Rhys Salter
Matthew Garrett Donahue
Yong Gong
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Janssen Pharmaceutica NV
Original Assignee
Janssen Pharmaceutica NV
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Abstract

Un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une a olanzapina y que se selecciona del grupo que consiste de: i) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende: a) la secuencia de la CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 11; b) la secuencia de la CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 11; c) la secuencia de la CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 11; d) la secuencia de la CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 12; e) la secuencia de la CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 12; y f) la secuencia de la CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 12; o ii) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende: a) la secuencia de la CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 15; b) la secuencia de la CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 15; c) la secuencia de la CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 15; d) la secuencia de la CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 16; e) la secuencia de la CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 16; y f) la secuencia de la CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 16.

Description

DESCRIPCIÓN
Anticuerpos para olanzapina y uso de los mismos
Campo de la invención
La presente invención se refiere al campo de los inmunoensayos, y en particular a los anticuerpos que se unen a la olanzapina que pueden usarse en inmunoensayos para la detección de la olanzapina.
Antecedentes
La esquizofrenia es un trastorno psiquiátrico crónico y debilitante que afecta aproximadamente al 0,45-1% de la población mundial (van Os, J.; Kapur, S. "Schizophrenia" Lancet 2009, 374, 635-645). Los objetivos principales del tratamiento son lograr una remisión sostenida de los síntomas psicóticos, reducir el riesgo y las consecuencias de una recaída y mejorar el funcionamiento del paciente y la calidad de vida en general. Aunque muchos pacientes con esquizofrenia son capaces de lograr la estabilidad de los síntomas con los medicamentos antipsicóticos disponibles, la mala adherencia a los medicamentos es una razón común de recaída con los medicamentos orales administrados diariamente. Varios estudios (Abdel-Baki, A.; Ouellet-Plamondon, C.; Malla, A. "Pharmacotherapy Challenges in Patients with First-Episode Psychosis” Journal of Affective Disorders 2012, 138, S3-S14) que investigan los resultados del incumplimiento han demostrado que los pacientes con esquizofrenia que no toman sus medicamentos según lo prescrito tienen mayores tasas de recaída, ingreso hospitalario y suicidio, así como una mayor mortalidad. Se estima que del 40 al 75% de los pacientes con esquizofrenia tienen dificultades para cumplir con un régimen de tratamiento oral diario (Lieberman, J. A.; Stroup, T. S.; McEvoy, J. P.; Swartz, M. S.; Rosenheck, R. A.; Perkins, D. O.; Keefe, R. S. E.; Davis, S. M.; Davis, C. E.; Lebowitz, B. D.; Severe, J.; Hsiao, J. K.“Effectiveness of Antipyschotic Drugs in Patients with Chronic Schizophrenia” New England Journal of Medicine 2005, 353(12), 1209-1223).
La monitorización terapéutica de fármacos (TDM) es la cuantificación de las concentraciones en suero o plasma de fármacos, incluyendo los fármacos antipsicóticos, para la monitorización y optimización del tratamiento. Dicha monitorización permite, por ejemplo, la identificación de pacientes que no se adhieren a su régimen de medicación, que no están logrando dosis terapéuticas, que no responden a dosis terapéuticas, que tienen tolerabilidad subóptima, que tienen interacciones fármaco-fármaco farmacocinéticas, o que tienen un metabolismo anormal que da como resultado concentraciones en plasma inapropiadas. Existe una considerable variabilidad individual en la capacidad del paciente para absorber, distribuir, metabolizar y excretar fármacos antipsicóticos. Dichas diferencias pueden estar provocadas por enfermedad concurrente, edad, medicación concomitante o peculiaridades genéticas. Las diferentes formulaciones de fármacos también pueden influir en el metabolismo de los fármacos antipsicóticos. La TDM permite la optimización de dosis para pacientes individuales, mejorando los resultados terapéuticos y funcionales. La TDM permite además que un médico que prescribe asegure el cumplimiento con las dosis prescritas y el logro de concentraciones séricas efectivas.
Hasta la fecha, los métodos para determinar los niveles de concentraciones en suero o en plasma de fármacos antipsicóticos implican el uso de cromatografía líquida (LC) con detección de espectrometría de masas o UV, y radioinmunoensayos (ver, por ejemplo, Woestenborghs et al., 1990 "On the selectivity of some recently developed RIA's" en Methodological Surveys in Biochemistry and Analysis 20:241-246. Analysis of Drugs and Metabolites, Including Anti-infective Agents; Heykants et al., 1994 "The Pharmacokinetics of Risperidone in Humans: A Summary", J Clin Psychiatry 55/5, suppl:13-17; Huang et al., 1993 "Pharmacokinetics of the novel anti-psychotic agent risperidone and the prolactin response in healthy subjects", Clin Pharmacol Ther 54:257-268). Los radioinmunoensayos detectan uno o ambos de risperidona y paliperidona. Salamone et al. en la Patente de Estados Unidos N° 8.088.594 divulgan un inmunoensayo competitivo para risperidona que usa anticuerpos que detectan tanto la risperidona como la paliperidona pero no metabolitos farmacológicamente inactivos. Los anticuerpos usados en el inmunoensayo competitivo se desarrollan contra un inmunógeno particular. ID Labs Inc. (Londres, Ontario, Canadá) comercializa un ELISA para la olanzapina, otro fármaco antipsicótico, que también utiliza un formato competitivo. Las Instrucciones de uso indican que el ensayo está diseñado para propósitos de detección y está destinado a uso forense o de investigación, y no está destinado específicamente para uso terapéutico. Las instrucciones recomiendan que todas las muestras positivas deberían confirmarse con cromatografía de gases/espectrometría de masas (GC-MS) e indican que el anticuerpo usado detecta la olanzapina y la clozapina (ver ID Labs Inc., "Instructions For Use Data Sheet IDEL-F083", Fecha de Rev. 8 de agosto de 2011). Algunos de estos métodos, concretamente HPLC y GC/MS pueden ser caros y requerir mucho trabajo, y generalmente solo se realizan en laboratorios grandes o de especialidades que tienen el equipo apropiado.
Existe una necesidad de otros métodos para determinar los niveles de fármacos antipsicóticos, particularmente métodos que puedan realizarse en el consultorio de un médico que prescribe (donde el tratamiento para un paciente individual puede ajustarse en consecuencia de una manera mucho más oportuna) y en otros entornos médicos que carecen de equipos LC o GC/MS o que requieren de resultados de pruebas rápidos.
Sumario de la invención
La presente invención se dirige a un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une a la olanzapina y que se selecciona del grupo que consiste de: i) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende:
a) la secuencia de la CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 11; b) la secuencia de la CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 11; c) la secuencia de la CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 11; d) la secuencia de la CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 12; e) la secuencia de la CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 12; y f) la secuencia de la CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 12; o ii) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende: a) la secuencia de la CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 15; b) la secuencia de la CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 15; c) la secuencia de la CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 15; d) la secuencia de la CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 16; e) la secuencia de la CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 16; y f) la secuencia de la CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 16.
Los anticuerpos de la presente invención pueden proporcionarse en kits de ensayo y dispositivos de ensayo, siendo un dispositivo actualmente preferido un dispositivo de ensayo de flujo lateral que proporciona análisis de punto de atención.
La invención proporciona además un método para detectar olanzapina en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención que está marcado con un marcador detectable, en donde el anticuerpo marcado y la olanzapina presentes en la muestra forman un complejo marcado; y (ii) detectar el complejo marcado para detectar olanzapina en la muestra.
Además se proporciona un método de inmunoensayo competitivo para detectar olanzapina en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención, y con olanzapina o un compañero de unión competitiva de la olanzapina, en donde uno del anticuerpo y la olanzapina o compañero de unión competitiva de la misma está marcado con un marcador detectable, y en donde la muestra de olanzapina compite con la olanzapina o el compañero de unión competitiva de la misma para unirse al anticuerpo; y (ii) detectar el marcador para detectar la muestra de olanzapina.
Breve descripción de los dibujos
Las Figs. 1-3 muestran resultados ELISA competitivos generados con tres hibridomas 11.1 de fusión de ratón diferentes;
La Fig. 4 muestra el formato de inmunoensayo competitivo usado en un dispositivo de ensayo de flujo lateral; La Fig. 5 muestra una curva de respuesta a la dosis típica generada con el clon 35 del anticuerpo de olanzapina;
La Fig. 6 muestra una curva de respuesta a la dosis típica generada con el clon 61 del anticuerpo de olanzapina;
La Fig. 7 muestra una curva de respuesta a la dosis típica generada con el anticuerpo 3F11 de olanzapina; La Fig. 8 muestra el diseño de chip de un dispositivo de ensayo de flujo lateral de acuerdo con la presente invención;
La Fig. 9 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para un control positivo de aripiprazol generado con el anticuerpo 5C7 y un compañero de unión competitiva de aripiprazol marcado;
La Fig. 10 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para un control positivo de olanzapina generado con el anticuerpo 4G9-1 y un compañero de unión competitiva marcado con olanzapina;
La Fig. 11 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para un control positivo de quetiapina generado con el anticuerpo 11 y un compañero de unión competitiva de quetiapina marcado;
La Fig. 12 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para un control positivo de risperidona generado con el anticuerpo 5-9 y un compañero de unión competitiva de risperidona marcado;
La Fig. 13 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para una muestra que contiene aripiprazol generado con el anticuerpo 5C7 de aripiprazol en presencia de un compañero de unión competitiva de aripiprazol marcado, sin curva de respuesta a la dosis para olanzapina, quetiapina o risperidona en presencia de un compañero de unión competitiva marcado para cada uno;
La Fig. 14 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para una muestra que contiene olanzapina generada con el anticuerpo 4G9-1 de olanzapina en presencia de un compañero de unión competitiva marcado con olanzapina, sin curva de respuesta a la dosis para aripiprazol, quetiapina o risperidona en presencia de un compañero de unión competitiva marcado para cada uno;
La Fig. 15 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para una muestra que contiene quetiapina generada con el anticuerpo 11 de quetiapina en presencia de un compañero de unión competitiva de quetiapina marcado, sin curva de respuesta a la dosis para aripiprazol, olanzapina o risperidona en presencia de un compañero de unión competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 16 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para una muestra que contiene risperidona generada con el anticuerpo de risperidona 5-9 en presencia de un compañero de unión competitiva de risperidona marcado, sin curva de respuesta a la dosis para aripiprazol, olanzapina o quetiapina en presencia de un compañero de unión competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 17 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para una muestra que contiene aripiprazol generado con el anticuerpo 5C7 de aripiprazol en presencia de un compañero de unión competitiva de aripiprazol marcado, sin curva de respuesta a la dosis para olanzapina, quetiapina o risperidona en presencia de anticuerpo y un compañero de unión competitivo marcado para cada uno;
La Fig. 18 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para una muestra que contiene olanzapina generada con el anticuerpo 4G9-1 de olanzapina en presencia de un compañero de unión competitiva marcado con olanzapina, sin curva de respuesta a la dosis para aripiprazol, quetiapina o risperidona en presencia de anticuerpo y un compañero de unión competitiva marcado para cada uno;
La Fig. 19 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para una muestra que contiene quetiapina generada con el anticuerpo de quetiapina 11 en presencia de un compañero de unión competitiva de quetiapina marcado, sin curva de dosis-respuesta para aripiprazol, olanzapina o risperidona en presencia de un anticuerpo y un compañero de unión competitiva marcado para cada uno;
La Fig. 20 muestra una curva de respuesta a la dosis típica para una muestra que contiene risperidona generada con el anticuerpo de risperidona 5-9 en presencia de un compañero de unión competitivo de risperidona marcado, sin curva de respuesta a la dosis para aripiprazol, olanzapina o quetiapina en presencia de anticuerpo y compañero de unión competitiva marcado para cada uno;
La Fig. 21 muestra una comparación de la curva de respuesta a la dosis de aripiprazol generada como control positivo con la curva de respuesta a la dosis de aripiprazol generada en el formato multiplex;
La Fig. 22 muestra una comparación de la curva de respuesta a la dosis de olanzapina generada como control positivo con la curva de respuesta a la dosis de olanzapina generada en el formato multiplex;
La Fig. 23 muestra una comparación de la curva de respuesta a la dosis de quetiapina generada como control positivo con la curva de respuesta a la dosis de quetiapina generada en el formato multiplex; y
La Fig. 24 muestra una comparación de la curva de respuesta a la dosis de risperidona generada como control positivo con la curva de respuesta a la dosis de risperidona generada en el formato multiplex.
Descripción detallada de las realizaciones preferidas
Los siguientes términos se usan para describir las relaciones de secuencias entre dos o más secuencias de polinucleótidos o aminoácidos: "secuencia de referencia", "ventana de comparación", "identidad de secuencia", "porcentaje de identidad de secuencia", "identidad sustancial", "similitud" y "homólogo". Una "secuencia de referencia" es una secuencia definida usada como base para una comparación de secuencias; una secuencia de referencia puede ser un subconjunto de una secuencia más grande, por ejemplo, un segmento de una secuencia de longitud completa de ADNc o gen dada en una lista de secuencias o puede comprender una secuencia completa de ADNc o gen; una secuencia de referencia puede comprender un segmento de una secuencia completa de aminoácidos que codifica una proteína como se proporciona en un listado de secuencias o puede comprender una secuencia completa de aminoácidos que codifica una proteína. Generalmente, una secuencia de referencia tiene por lo menos 18 nucleótidos o 6 aminoácidos de longitud, frecuentemente por lo menos 24 nucleótidos u 8 aminoácidos de longitud, y a menudo por lo menos 48 nucleótidos o 16 aminoácidos de longitud. Como dos secuencias de polinucleótidos o aminoácidos pueden (1) comprender una secuencia (es decir, una porción de la secuencia completa de nucleótidos o aminoácidos) que es similar entre las dos moléculas, y (2) pueden comprender además una secuencia que es divergente entre las dos secuencias de polinucleótidos o aminoácidos, las comparaciones de secuencias entre dos (o más) moléculas se realizan típicamente comparando secuencias de las dos moléculas sobre una "ventana de comparación" para identificar y comparar regiones locales de similitud de secuencia. Una "ventana de comparación", como se usa en la presente, se refiere a un segmento conceptual de por lo menos 18 posiciones contiguas de nucleótidos o 6 aminoácidos en donde la secuencia de polinucleótidos o la secuencia de aminoácidos puede compararse con una secuencia de referencia de por lo menos 18 nucleótidos contiguos o 6 aminoácidos y en donde la porción de la secuencia de polinucleótidos o la secuencia de aminoácidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones, deleciones, sustituciones y similares (es decir, huecos) del 20 por ciento o menos en comparación con la secuencia de referencia (que no comprende adiciones o deleciones) para un alineamiento óptimo de las dos secuencias. El alineamiento óptimo de secuencias para alinear una ventana de comparación puede realizarse mediante el algoritmo de homología local de Smith y Waterman, Adv. Appl. Math 2:482 (1981), mediante el algoritmo de alineamiento por homología de Needlemen y Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), mediante la búsqueda del método de similitud de Pearson y Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988), mediante implementaciones computarizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA y TFASTA en el paquete de software Wisconsin Genetics versión 7.0 (Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI), paquetes de software Geneworks o MacVector), o mediante inspección, y se selecciona el mejor alineamiento (es decir, que resulta en el porcentaje más alto de identidad sobre la ventana de comparación) generada por los varios métodos.
El término "identidad de secuencia" significa que dos secuencias de polinucleótidos o aminoácidos son idénticas (es decir, en una base de nucleótido por nucleótido o residuo de aminoácido por residuo) en la ventana de comparación. El término "porcentaje de identidad de secuencia" se calcula comparando dos secuencias alineadas óptimamente sobre la ventana de comparación, determinando el número de posiciones en las que se producen bases de ácidos nucleicos (por ejemplo, A, T, C, G o U) o residuos de aminoácidos idénticos en ambas secuencias para producir el número de posiciones coincidentes, dividiendo el número de posiciones coincidentes por el número total de posiciones en la ventana de comparación (es decir, el tamaño de la ventana) y multiplicando el resultado por 100 para obtener el porcentaje de identidad de secuencia. El término "identidad sustancial" como se usa en la presente denota una característica de una secuencia de polinucleótidos o aminoácidos, en donde la secuencia de polinucleótidos o aminoácidos comprende una secuencia que tiene por lo menos un 85 por ciento de identidad de secuencia, preferiblemente por lo menos de un 90 a un 95 por ciento de identidad de secuencia, más habitualmente por lo menos un 99 por ciento de secuencia identidad en comparación con una secuencia de referencia sobre una ventana de comparación de por lo menos 18 posiciones de nucleótidos (6 aminoácidos), frecuentemente sobre una ventana de por lo menos 24-48 posiciones de nucleótidos (8-16 aminoácidos), en donde el porcentaje de identidad de secuencia se calcula comparando la secuencia de referencia con la secuencia que puede incluir deleciones o adiciones que suman un 20 por ciento o menos de la secuencia de referencia en la ventana de comparación. La secuencia de referencia puede ser un subconjunto de una secuencia más grande. El término "similitud", cuando se usa para describir un polipéptido, se determina comparando la secuencia de aminoácidos y las sustituciones de aminoácidos conservadas de un polipéptido con la secuencia de un segundo polipéptido. El término "homólogo", cuando se usa para describir un polinucleótido, indica que dos polinucleótidos, o secuencias designadas de los mismos, cuando están óptimamente alineados y se comparan, son idénticos, con inserciones o deleciones de nucleótidos apropiadas, en por lo menos el 70% de los nucleótidos, habitualmente de aproximadamente el 75% al 99%, y más preferiblemente por lo menos aproximadamente del 98% al 99% de los nucleótidos.
Un "marcador", "molécula detectora", "informador" o "marcador detectable" como se usa en la presente es cualquier molécula que produce, o se le puede inducir que produzca, una señal detectable. El marcador puede conjugarse con un analito, inmunógeno, anticuerpo u otra molécula, como un receptor o una molécula que puede unirse a un receptor, como un ligando, particularmente un hapteno o anticuerpo. Un marcador puede unirse directa o indirectamente por medio de una fracción de enlace o de puente. Los ejemplos no limitativos de marcadores incluyen isótopos radiactivos (por ejemplo, 125I), enzimas (por ejemplo, p-galactosidasa, peroxidasa), fragmentos de enzimas, sustratos de enzimas, inhibidores de enzimas, coenzimas, catalizadores, fluoróforos (por ejemplo, rodamina, isotiocianato de fluoresceína o FITC, o Dylight 649), colorantes, quimioluminiscentes y luminiscentes (por ejemplo, dioxetanos, luciferina) o sensibilizadores.
La divulgación proporciona un anticuerpo aislado que se une a la olanzapina. La divulgación proporciona además un kit de ensayo y un dispositivo de ensayo que comprende el anticuerpo. Además, la divulgación proporciona un método para detectar olanzapina en una muestra, incluyendo un método de inmunoensayo competitivo.
La presente invención se dirige a un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une a la olanzapina y que se selecciona del grupo que consiste de: i) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende: a) la secuencia de la CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 11; b) la secuencia de la CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 11; c) la secuencia de la CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 11; d) la secuencia de la CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 12; e) la secuencia de la CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 12; y f) la secuencia de la CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 12; o ii) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende: a) la secuencia de la CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 15; b) la secuencia de la CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 15; c) la secuencia de la CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 15; d) la secuencia de la CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 16; e) la secuencia de la CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 16; y f) la secuencia de la CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 16.
En una realización adicional, la presente divulgación se dirige a un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une a la olanzapina y que comprende una región variable de la cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos un 80% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 35 o SEQ ID NO: 39.
En una realización adicional, la presente divulgación se dirige a un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une a la olanzapina y que comprende una región variable de la cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos un 80% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 36 o SEQ ID NO: 40.
Las realizaciones actualmente preferidas del anticuerpo de la presente invención son: un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 12; o un anticuerpo que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos la SEQ ID NO: 15 y una región variable de la cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 16.
Detalles adicionales de los anticuerpos de la presente invención se proporcionan en la sección siguiente titulada "Anticuerpos".
La presente invención proporciona además un kit de ensayo que comprende el anticuerpo, así como un dispositivo de ensayo que comprende el anticuerpo. Preferiblemente, el dispositivo de ensayo es un dispositivo de ensayo de flujo lateral. Detalles adicionales de los kits de ensayo y los dispositivos de ensayo se proporcionan a continuación en la sección titulada "Kits y dispositivos de ensayo".
La invención proporciona además un método para detectar olanzapina en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención que está marcado con un marcador detectable, en donde el anticuerpo marcado y la olanzapina presentes en la muestra forman un complejo marcado; y (ii) detectar el complejo marcado para detectar olanzapina en la muestra. Detalles adicionales del método de detección de olanzapina de acuerdo con la presente invención se proporcionan en la sección siguiente titulada "Inmunoensayos".
Además, se proporciona un método de inmunoensayo competitivo para detectar olanzapina en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención, y con olanzapina o un compañero de unión competitiva de la olanzapina, en donde uno del anticuerpo y la olanzapina o compañero de unión competitiva del mismo está marcado con un marcador detectable, y en donde la muestra de olanzapina compite con la olanzapina o el compañero de unión competitiva de la misma para unirse al anticuerpo; y (ii) detectar el marcador para detectar la muestra de olanzapina. En la sección siguiente titulada "Inmunoensayos" se proporcionan detalles adicionales del método de inmunoensayo competitivo para detectar olanzapina de acuerdo con la presente invención.
En una realización preferida de la presente invención, la detección de olanzapina está acompañada de la detección de uno o más analitos además de la olanzapina. Preferiblemente, el uno o más analitos son fármacos antipsicóticos distintos de la olanzapina, y más preferentemente los fármacos antipsicóticos distintos de la olanzapina se seleccionan del grupo que consiste de: aripiprazol, risperidona, paliperidona, quetiapina y metabolitos de los mismos.
Como se ha analizado anteriormente, los anticuerpos de la presente invención pueden usarse en ensayos para detectar la presencia y/o la cantidad del fármaco antipsicótico en muestras de pacientes. Dicha detección permite la monitorización terapéutica del fármaco permitiendo todos los beneficios del mismo. La detección de niveles de fármacos antipsicóticos puede ser útil para muchos propósitos, cada uno de los cuales representa otra realización de la presente invención, incluyendo: determinación de la adherencia o cumplimiento del paciente con la terapia prescrita; uso como herramienta de decisión para determinar si un paciente debe pasarse de un régimen antipsicótico oral a un régimen antipsicótico inyectable de acción prolongada; uso como herramienta de decisión para determinar si el nivel de dosis o el intervalo de dosificación de antipsicóticos orales o inyectables debe aumentarse o disminuirse para garantizar el logro o el mantenimiento de niveles de fármaco eficaces o seguros; uso como ayuda en el inicio de la terapia farmacológica antipsicótica al proporcionar evidencia del logro de niveles mínimos de pK; uso para determinar la bioequivalencia del fármaco antipsicótico en múltiples formulaciones o de múltiples fuentes; uso para evaluar el impacto de la polifarmacia y las potenciales interacciones fármaco-fármaco; y uso como una indicación de que un paciente debe excluirse o incluirse en un ensayo clínico y como ayuda en la monitorización posterior de la adherencia a los requisitos de medicación del ensayo clínico.
ANTICUERPOS
La presente invención proporciona un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismos que se une a la olanzapina como se define en las reivindicaciones. El término "anticuerpo" se refiere a una proteína específica capaz de unirse a un antígeno o una porción del mismo (de acuerdo con esta invención, capaz de unirse a un fármaco antipsicótico o metabolito del mismo). Un anticuerpo se produce en respuesta a un inmunógeno que puede haberse introducido en un huésped, por ejemplo, un animal o un humano, mediante inyección. El término genérico "anticuerpo" incluye anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales y fragmentos de anticuerpos.
"Anticuerpo" o "fragmento de anticuerpo de unión a antígeno" se refiere a un anticuerpo intacto, o un fragmento del mismo, que compite con el anticuerpo intacto por la unión. En términos generales, se dice que un anticuerpo o fragmento de anticuerpo de unión a antígeno se une específicamente a un antígeno cuando la constante de disociación es menor o igual a 1 j M, preferiblemente menor o igual a 100 nM y lo más preferible menor o igual a 10 nM. La unión puede medirse mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica, un ejemplo siendo el uso de un instrumento BIAcore™.
Los anticuerpos están compuestos por dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras. Cada cadena pesada tiene un dominio o región variable (Vh) seguida de un dominio o región constante (Ch1), una región bisagra y dos dominios o regiones constantes más (Ch2 y Ch3). Cada cadena ligera tiene un dominio o región variable (Vl) y un dominio o región constante (Cl). Los dominios o regiones variables de las cadenas pesada y ligera forman el parátopo del anticuerpo (una estructura análoga a una cerradura), que es específica para un epítopo particular (similarmente análogo a una llave), permitiendo que el parátopo y el epítopo se unan con precisión. Dentro del dominio variable, los giros variables de las cadenas p, tres en cada una de las cadenas ligera y pesada, son responsables de la unión al antígeno. Estos giros se denominan regiones determinantes de la complementariedad (c Dr , concretamente, CDR1, CDR2 y CDR3).
Los fragmentos de anticuerpos comprenden una porción de un anticuerpo intacto, preferiblemente la región variable o de unión al antígeno del anticuerpo intacto. Los fragmentos de unión incluyen fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 y Fv; diacuerpos; minicuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpos de cadena sencilla (por ejemplo, scFV); y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. Se entiende que un anticuerpo distinto de un anticuerpo "biespecífico" o "bifuncional" tiene cada uno de sus sitios de unión idénticos.
Como se usa en la presente, "epítopo" incluye cualquier determinante de proteína capaz de unirse específicamente a una inmunoglobulina o receptor de células T. Los determinantes epitópicos habitualmente consisten de agrupaciones de moléculas de superficie químicamente activas como aminoácidos o cadenas laterales de azúcar y habitualmente tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Se dice que dos anticuerpos "se unen al mismo epítopo" ("compiten") si un anticuerpo muestra que compite con el segundo anticuerpo en un ensayo de unión competitiva, por cualquiera de los métodos bien conocidos por los expertos en la técnica (como el método BIAcore™ referido anteriormente). En referencia a un hapteno (como la olanzapina u otro fármaco antipsicótico), puede generarse un anticuerpo contra la molécula de hapteno no antigénico conjugando el hapteno con un portador inmunogénico. Luego se genera un anticuerpo que reconoce un "epítopo" definido por el hapteno.
"Aislado" cuando se usa en el contexto de un anticuerpo significa alterado "por la mano del hombre" desde cualquier estado natural; es decir, que, si se produce en la naturaleza, se ha cambiado o eliminado de su entorno original, o ambos. Por ejemplo, un anticuerpo de origen natural presente de manera natural en un animal vivo en su estado natural no está "aislado", pero el mismo anticuerpo separado de los materiales coexistentes de su estado natural está "aislado", como el término se emplea en la presente. Los anticuerpos pueden aparecer en una composición, como un reactivo de inmunoensayo, que no son composiciones de origen natural, y en la misma permanecen anticuerpos aislados en el sentido de ese término tal como se emplea en la presente.
"Reactividad cruzada" se refiere a la reacción de un anticuerpo con un antígeno que no se usó para inducir ese anticuerpo.
Preferiblemente, el anticuerpo de la presente invención se unirá al fármaco y a cualquier metabolito farmacológicamente activo deseado. Al alterar la localización de la unión de un portador inmunogénico en un conjugado de fármacos, la selectividad y la reactividad cruzada con metabolitos y/o fármacos relacionados pueden modificarse en los anticuerpos. Para la olanzapina, la reactividad cruzada con el fármaco relacionado clozapina puede ser o no deseable, y la reactividad cruzada con metabolitos de olanzapina como 10-N-gluronida o 4-N-desmetil olanzapina puede ser o no deseable. Pueden generarse anticuerpos que detecten múltiples de estos fármacos y/o metabolitos, o pueden generarse anticuerpos que detecten cada uno por separado (definiendo por tanto las propiedades de "unión específica" del anticuerpo). Un anticuerpo se une específicamente a uno o más compuestos cuando su unión del uno o más compuestos es equimolar o sustancialmente equimolar.
Los anticuerpos en la presente se describen mediante las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de sus dominios variables. Cada uno se generó inoculando a un huésped con un conjugado que comprende un fármaco antipsicótico conjugado con un portador inmunogénico. Habiendo proporcionado ahora las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de los mismos, los anticuerpos pueden producirse mediante los métodos recombinantes como se describen en la Patente de Estados Unidos N° 4.166.452.
Pueden generarse también fragmentos de anticuerpos que contienen sitios de unión específicos para el fármaco antipsicótico. Tales fragmentos incluyen, entre otros, los fragmentos F(ab')2 que pueden producirse por digestión con pepsina de la molécula de anticuerpo y los fragmentos Fab que pueden generarse reduciendo los puentes disulfuro de fragmentos F(ab')2. Alternativamente, pueden construirse bibliotecas de expresión de Fab para permitir la identificación rápida y fácil de fragmentos Fab monoclonales con la especificidad deseada (Huse et al., Science 256:1270-1281 (1989)). Los fragmentos de anticuerpos Fab, Fv y ScFv pueden expresarse y secretarse todos a partir de Escherichia coli, lo que permite la producción de grandes cantidades de estos fragmentos. Alternativamente, los fragmentos Fab'-SH pueden recuperarse directamente de E. coli y acoplarse químicamente para formar fragmentos F(ab')2 (Carter et al., BioTechnology 10:163-167 (1992)). Los expertos en la técnica conocen otras técnicas para la producción de fragmentos de anticuerpos. También se prevén fragmentos de Fv de cadena sencilla (scFv) (ver las Patentes de Estados Unidos N° 5.761.894 y 5.587.458). Los fragmentos Fv y sFv son las únicas especies con sitios de combinación intactos que carecen de regiones constantes; por tanto, es probable que muestren una unión no específica reducida. El fragmento de anticuerpo también puede ser un "anticuerpo lineal", por ejemplo, como se describe en la Patente de Estados Unidos N° 5.642.870, por ejemplo. Tales fragmentos de anticuerpos lineales pueden ser monoespecíficos o biespecíficos.
KITS Y DISPOSITIVOS DE ENSAYO
Puede proporcionarse un kit de ensayo (también referido como kit de reactivos) que comprende un anticuerpo como se ha descrito anteriormente. Un kit de reactivos representativo puede comprender un anticuerpo que se une al fármaco antipsicótico, la olanzapina, un complejo que comprende un análogo de un fármaco antipsicótico o un derivado del mismo acoplado a una fracción marcadora, y opcionalmente también puede comprender uno o más calibradores que comprenden una cantidad conocida de un fármaco antipsicótico o un estándar relacionado.
La frase "kit de ensayo" se refiere a un conjunto de materiales y reactivos que se usa para realizar un ensayo. Los reactivos pueden proporcionarse en combinación envasados en el mismo recipiente o en recipientes separados, dependiendo de su reactividad cruzada y estabilidades, y en forma líquida o liofilizada. Las cantidades y proporciones de reactivos proporcionados en el kit pueden seleccionarse para proporcionar resultados óptimos para una aplicación particular. Un kit de ensayo que incorpora las características de la presente invención comprende anticuerpos que se unen a la olanzapina. El kit puede comprender además compañeros de unión competitiva de olanzapina y materiales de calibración y control.
La frase "material de calibración y control" se refiere a cualquier material estándar o de referencia que contenga una cantidad conocida de un analito. Una muestra sospechosa de contener un analito y el material de calibración correspondiente se analizan en condiciones similares. La concentración del analito se calcula comparando los resultados obtenidos para el espécimen desconocido con los resultados obtenidos para el estándar. Esto se hace comúnmente mediante la construcción de una curva de calibración.
Los anticuerpos que incorporan características de la presente invención pueden incluirse en un kit, recipiente, paquete o dispensador junto con instrucciones para su utilización. Cuando los anticuerpos se suministran en un kit, los diferentes componentes del inmunoensayo pueden envasarse en recipientes separados y mezclarse antes de su uso. Tal envasado de los componentes por separado puede permitir el almacenamiento a largo plazo sin disminuir sustancialmente el funcionamiento de los componentes activos. Además, los reactivos pueden envasarse en entornos inertes, por ejemplo, bajo una presión positiva de gas nitrógeno, gas argón o similares, lo que es especialmente preferido para los reactivos que son sensibles al aire y/o la humedad.
Los reactivos incluidos en los kits que incorporan características de la presente invención pueden suministrarse en todo tipo de recipientes de tal manera que las actividades de los diferentes componentes se conserven sustancialmente mientras que los propios componentes no se adsorben ni alteran sustancialmente por los materiales del recipiente. Los recipientes adecuados incluyen, pero no están limitados a, ampollas, botellas, tubos de ensayo, viales, matraces, jeringuillas, sobres, por ejemplo, revestidos con papel de aluminio y similares. Los recipientes pueden estar compuestos de cualquier material adecuado incluyendo, pero no limitados a, vidrio, polímeros orgánicos, por ejemplo, policarbonato, poliestireno, polietileno, etc., cerámica, metal, por ejemplo, aluminio, aleaciones de metal, por ejemplo, acero, corcho, y similares. Además, los recipientes pueden comprender uno o más puertos de acceso estériles, por ejemplo, para acceder a través de una aguja, como puede ser proporcionado por un tabique. Los materiales preferidos para tabiques incluyen caucho y politetrafluoroetileno del tipo vendido por DuPont (Wilmington, DE) con el nombre comercial TEFLON. Además, los recipientes pueden comprender dos o más compartimentos separados por particiones o membranas que pueden retirarse para permitir el mezclado de los componentes.
Los kits de reactivos que incorporan características de la presente invención también pueden suministrarse con materiales de instrucciones. Las instrucciones pueden imprimirse, por ejemplo, en papel y/o suministrarse en un medio legible electrónicamente. Alternativamente, pueden proporcionarse instrucciones dirigiendo a un usuario a un sitio web de Internet, por ejemplo, especificado por el fabricante o distribuidor del kit y/o por correo electrónico.
El anticuerpo también puede proporcionarse como parte de un dispositivo de ensayo. Dichos dispositivos de ensayo incluyen dispositivos de ensayo de flujo lateral. Un tipo común de dispositivo de ensayo de flujo lateral desechable incluye una zona o área para recibir la muestra líquida, una zona de conjugado y una zona de reacción. Estos dispositivos de ensayo son conocidos comúnmente como tiras reactivas de flujo lateral. Emplean un material poroso, por ejemplo, nitrocelulosa, que define una ruta para el flujo de fluido capaz de soportar el flujo capilar. Los ejemplos incluyen los mostrados en las Patentes de Estados Unidos N° 5.559.041, 5.714.389, 5.120.643 y 6.228.660.
Otro tipo de dispositivo de ensayo es un dispositivo de ensayo no poroso que tiene proyecciones para inducir el flujo capilar. Los ejemplos de tales dispositivos de ensayo incluyen el dispositivo de flujo lateral abierto como se divulga en las Publicaciones Internacionales de PCT N° WO 2003/103835, WO 2005/089082, WO 2005/118139 y WO 2006/137785.
En un dispositivo de ensayo no poroso, el dispositivo de ensayo generalmente tiene por lo menos una zona de adición de muestras, por lo menos una zona de conjugado, por lo menos una zona de reacción y por lo menos una zona de absorción. Las zonas forman una ruta de flujo por la cual fluye la muestra desde la zona de adición de muestras a la zona de absorción. También se incluyen elementos de captura, como anticuerpos, en la zona de reacción, capaces de unirse al analito, opcionalmente depositados en el dispositivo (como por recubrimiento); y un material conjugado marcado también capaz de participar en reacciones que permitirán la determinación de la concentración del analito, depositado en el dispositivo en la zona de conjugado, en donde el material conjugado marcado lleva un marcador para la detección en la zona de reacción. El material conjugado se disuelve a medida que fluye la muestra a través de la zona de conjugado formando un penacho conjugado de material conjugado marcado disuelto y muestra que fluye en sentido descendente hacia la zona de reacción. A medida que el penacho conjugado fluye hacia la zona de reacción, el material conjugado será capturado por los elementos de captura, como a través de un complejo de material conjugado y analito (como en un ensayo "sándwich") o directamente (como en un ensayo "competitivo"). El material conjugado disuelto no unido será barrido más allá de la zona de reacción hacia la por lo menos una zona de absorción. Tales dispositivos pueden incluir proyecciones o micropilares en la ruta de flujo.
Un instrumento como el divulgado en las Publicaciones de Patente de Estados Unidos N° US20060289787A1 y US 20070231883A1, y las Patentes de Estados Unidos N° 7.416.700 y 6.139.800, es capaz de detectar el material conjugado unido en la zona de reacción. Los marcadores comunes incluyen tintes fluorescentes que pueden ser detectados por instrumentos que excitan los tintes fluorescentes e incorporan un detector capaz de detectar los tintes fluorescentes.
INMUNOENSAYOS
Los anticuerpos así producidos pueden usarse en inmunoensayos para reconocer/unirse al fármaco antipsicótico, detectando de este modo la presencia y/o cantidad del fármaco en una muestra de paciente. Preferiblemente, el formato de ensayo es un formato de inmunoensayo competitivo. Tal formato de ensayo y otros ensayos se describen, entre otros sitios, en Hampton et al. (Serological Methods, A Laboratory Manual, APS Press, St. Paul, MN 1990) y Maddox et al. (J. Exp. Med. 158: 12111, 1983).
El término "analito" se refiere a cualquier sustancia o grupo de sustancias, cuya presencia o cantidad debe determinarse. Los analitos de fármacos antipsicóticos representativos incluyen, pero no están limitados a, risperidona, paliperidona, olanzapina, aripiprazol y quetiapina.
El término "compañero de unión competitiva" se refiere a una sustancia o grupo de sustancias, que puede emplearse en un inmunoensayo competitivo, que se comporta de manera similar a un analito con respecto a la afinidad de unión a un anticuerpo. Los compañeros de unión competitiva representativos incluyen, pero no están limitados a, derivados de fármacos antipsicóticos y similares.
El término "detectar" cuando se usa con un analito se refiere a cualquier método cuantitativo, semicuantitativo o cualitativo, así como a todos los demás métodos para determinar un analito en general, y un fármaco antipsicótico en particular. Por ejemplo, un método que simplemente detecta la presencia o ausencia de un fármaco antipsicótico en una muestra se encuentra dentro del alcance de la presente invención, al igual que los métodos que proporcionan datos sobre la cantidad o concentración del fármaco antipsicótico en el muestra. Los términos "detectar", "determinar", "identificar" y similares se usan como sinónimos en la presente, y todos se encuentran dentro del alcance de la presente invención.
Una realización preferida de la presente invención es un inmunoensayo competitivo en el que los anticuerpos que se unen al fármaco antipsicótico, o el fármaco o compañero de unión competitiva del mismo, se unen a un soporte sólido (como la zona de reacción en un dispositivo de ensayo de flujo lateral) y el fármaco marcado o la compañero de unión competitiva del mismo, o el anticuerpo marcado, respectivamente, y una muestra derivada del huésped se pasa sobre el soporte sólido y la cantidad de marcador detectada unida al soporte sólido puede correlacionarse con una cantidad de fármaco en la muestra.
Puede analizarse cualquier muestra que se sospeche que contenga un analito, por ejemplo, un fármaco antipsicótico, de acuerdo con los métodos de las realizaciones actualmente preferidas. La muestra puede pretratarse si se desea y puede prepararse en cualquier medio conveniente que no interfiera con el ensayo. Preferiblemente, la muestra comprende un medio acuoso como un fluido corporal de un huésped, lo más preferible plasma o suero. Debe entenderse que se contemplan todo tipo de inmunoensayos que emplean anticuerpos para su uso de acuerdo con las realizaciones actualmente preferidas, incluyendo ensayos en los que los anticuerpos están unidos a fases sólidas y ensayos en los que los anticuerpos están en medios líquidos. Los métodos de inmunoensayos que pueden usarse para detectar analitos usando anticuerpos que incorporan características de la presente invención incluyen, pero no se limitan a, ensayos competitivos (limitado por reactivos) en los que el analito marcado (análogo de analito) y el analito en una muestra compiten por anticuerpos y ensayos inmunométricos de sitio único en los que el anticuerpo está marcado; y similares.
Todos los ejemplos se llevaron a cabo usando técnicas estándar, que son bien conocidas y rutinarias para los expertos en la técnica, excepto donde se describa lo contrario con detalle. Las técnicas de biología molecular rutinarias de los siguientes ejemplos pueden llevarse a cabo como se describe en los manuales de laboratorio estándar, como Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a Ed., Cold Spring Habor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989))
EJEMPLO 1
Anticuerpos contra Aripiprazol
Anticuerpo 17.3 clon 3D7
El hibridoma designado 17.3 clon 3D7 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se designa 17.3 clon 3D7. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 17.3 clon 3D7 se designa con la SEQ ID NO: 41 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 42. Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 3D7, los nucleótidos 136-165 de la SeQ ID NO: 41 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 211-231 de la SEQ ID NO: 41 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 328-354 de la SEQ ID NO: 41 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 3D7, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 42 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 42 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-375 de la SEQ ID NO: 42 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 17.3 clon 3D7, y se designan SEQ ID NO: 43 (cadena ligera) y SEQ ID NO: 44 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 3D7, los residuos de aminoácidos 46-55 de la SEQ ID NO: 43 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 71-77 de la SEQ ID NO: 43 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 110-118 de la SEQ ID NO: 43 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro dela Vh del mAb 17.3 clon 3D7, los residuos de aminoácidos 45-54 de la s Eq ID NO: 44 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 44 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-125 de la SEQ ID NO: 44 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 17.3 clon 5C7 (primero)
El hibridoma designado 17.3 clon 5C7 (primero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se designa 17.3 clon 5C7 (primero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 17.3 clon 5C7 (primero) se designa con la SEQ ID NO: 45 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 46. Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO: 45 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO: 45 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO: 45 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 46 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 46 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-378 de la SEQ ID NO: 46 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 17.3 clon 5C7 (primero), y se designan con la SEQ ID NO: 47 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 48 (cadena pesada). Dentro de la VLdel mAb 17.3 clon 5C7 (primer), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO: 47 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO: 47 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 47 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 48 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 48 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-126 de la SEQ ID NO: 48 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 17.3 clon 5C7 (segundo)
El hibridoma designado 17.3 clon 5C7 (segundo) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para aripiprazol. El anticuerpo se designa 17.3 clon 5C7 (segundo). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo) se designa con la SEQ ID NO: 49 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 50. Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los nucleótidos 130-174 de la SEQ ID NO: 49 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de la SEQ ID NO: 49 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de la SEQ ID NO: 49 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 50 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 50 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-390 de la SEQ ID NO: 50 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 17.3,clon 5C7 (segundo) y se designan s Eq ID NO: 51 (cadena ligera) y SEQ ID NO: 52 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los residuos de aminoácidos 44-58 de la SEQ ID NO: 51 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de la SEQ ID NO: 51 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de la SEQ ID NO: 51 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los residuos de aminoácidos 45­ 54 de la SEQ ID NO: 52 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 52 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-130 de la SEQ ID NO: 52 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 17.3 clon 5C7 (tercero)
El hibridoma designado 17.3 clon 5C7 (tercero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se designa 17.3 clon 5C7 (tercero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero) se designa con la SEQ ID NO: 53 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 54. Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO: 53 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO: 53 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO: 53 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 54 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 54 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO: 54 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos correspondientes predichas de las regiones de cadena variable del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), y se designan con la SEQ ID NO: 55 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 56 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO: 55 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO: 55 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 55 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 56 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 56 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de la SEQ ID NO: 56 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
EJEMPLO 2
Anticuerpos contra la olanzapina
Anticuerpo 11.1 clon 35
El hibridoma designado 11.1 clon 35 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa como clon 11.1 35. La secuencia de nucleótidos de la región variable de cadena ligera (Vl) del mAb 11.1 clon 35 se designa con la SEQ ID NO: 9 y la de la región variable de cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 10. Dentro de la Vl del mAb 11.1 clon 35, los nucleótidos 130-162 de la SeQ ID NO: 9 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO: 9 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO: 9 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 11.1 clon 35, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 10 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 10 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO: 10 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 11.1 clon 35, y se designan SEQ ID NO: 11 (cadena ligera) y SEQ ID NO: 12 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 11.1 clon 35, los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO: 11 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO: 11 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 11 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 11.1 clon 35, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 12 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 12 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de la SEQ ID NO: 12 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 11.1 clon 61
El hibridoma designado 11.1 clon 61 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa como clon 61 11.1. La secuencia de nucleótidos de la región variable de cadena ligera (Vl) del mAb 11.1 clon 61 se designa con la SEQ ID NO: 13 y la de la región variable de cadena pesada (Vh) se designa SEQ ID NO: 14. Dentro de la Vl del mAb 11.1 clon 61, los nucleótidos 130-162 de la SEQ iD NO: 13 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO: 13 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO: 13 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 11.1 clon 61, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 14 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 14 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO: 14 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 11.1 clon 61, y se designan con la SEQ ID NO: 15 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 16 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 11.1 clon 61, los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO: 15 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO: 15 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 15 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 11.1 clon 61, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 16 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 16 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de la SEQ ID NO: 16 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 15.5 clon 3F11 (primero)
El hibridoma designado 15.5 clon 3F11 (primero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa como 15.5 clon 3F11 (primero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 15.5 clon 3F11 (primero) se designa con la SEQ ID NO: 29 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 30. Dentro de la Vl del mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO: 29 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO: 29 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO: 29 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO: 30 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-252 de la SEQ ID NO: 30 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 355-381 de la SEQ ID NO: 30 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 15.5 clon 3F11 (primero), y se designan con la SEQ ID NO: 31 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 32 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO: 31 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO: 31 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 31 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los residuos de aminoácidos 44­ 54 de la SEQ ID NO: 32 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-84 de la SEQ ID NO: 32 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 119-127 de la SEQ ID NO: 32 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 15.5 clon 3F11 (segundo)
El hibridoma designado 15.5 clon 3F11 (segundo) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa como 15.5 clon 3F11 (segundo). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo) se designa con la SEQ ID NO: 33 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 34. Dentro de la Vl del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO: 33 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO: 33 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO: 33 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 34 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-261 de la SEQ ID NO: 34 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 358-381 de la SEQ ID NO: 34 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), y se designan con la SEQ ID NO: 35 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 36 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO: 35 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO: 35 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 35 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los residuos de aminoácidos 45­ 54 de la SEQ ID NO: 36 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-87 de la SEQ ID NO: 36 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 120-127 de la SEQ ID NO: 36 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 15.5 subclon 4G9-1
El hibridoma designado 15.5 subclon 4G9-1 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se designa 15.5 subclon 4G9-1. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 15.5 subclon 4G9-1 se designa con la SEQ ID NO: 37 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 38. Dentro de la Vl del mAb 15.5 subclon 4G9-1, los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO: 37 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de la SEQ ID NO: 37 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de la SEQ ID NO: 37 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 subclon 4G9-1, los nucleótidos 130-162 de la SEQ ID NO: 38 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-252 de la SEQ ID NO: 38 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 358-381 de la SEQ ID NO: 38 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 15.5 subclon 4G9-1, y se designan con la SEQ ID NO: 39 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 40 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 15.5 subclon 4G9-1, los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO: 39 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de la SEQ ID NO: 39 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de la SEQ ID NO: 39 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 subclon 4G9-1, los residuos de aminoácidos 44-54 de la SEQ ID NO: 40 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-84 de la SEQ ID NO: 40 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 120-127 de la SEQ ID NO: 40 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
EJEMPLO 3
Anticuerpos contra la quetiapina
Anticuerpo 13.2 subclon 89-3 (primero)
El hibridoma designado 13.2 subclon 89-3 (primero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la quetiapina. El anticuerpo se designa 13.2 subclon 89-3 (primero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 13.2 subclon 89-3 (primero) se designa con la SEQ ID NO: 17 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la s Eq ID NO: 18) Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclon 89-3 (primer), los nucleótidos 127-174 de la SEQ ID NO: 17 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de la SEQ ID NO: 17 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de la SEQ ID NO: 17 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 13.2 subclon 89-3 (primero), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 18 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 18 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-387 de la SEQ ID NO: 18 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 13.2 subclon 89-3 (primero), y se designan con la SEQ ID NO: 19 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 20 (pesado cadena). Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclon 89-3 (primero), los residuos de aminoácidos 43­ 58 de la SEQ ID NO: 19 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de la SEQ ID NO: 19 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de la SEQ ID NO: 19 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 13.2 subclon 89-3 (primero), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 20 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 20 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-129 de la SEQ ID NO: 20 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 13.2 subclon 89-3 (segundo)
El hibridoma designado 13.2 subclon 89-3 (segundo) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la quetiapina. El anticuerpo se designa 13.2 subclon 89-3 (segundo). La secuencia de nucleótidos del mAb 13.2 subclon 89-3 (segundo) de la región variable de la cadena ligera (Vl) se designa con la SEQ ID NO: 21 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 22). Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclon 89-3 (segundo), los nucleótidos 127-174 de la SEQ ID NO: 21 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de la SEQ ID NO: 21 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de la SEQ ID NO: 21 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 13.2 subclon 89-3 (segundo), los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 22 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 22 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 367-387 de la SEQ ID NO: 22 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 13.2 subclon 89-3 (segundo), y se designan con la SEQ ID NO: 23 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 24 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclon 89-3 (segundo), los residuos de aminoácidos 43­ 58 de la SEQ ID NO: 23 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de la SEQ ID NO: 23 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de la SEQ ID NO: 23 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 13.2 subclon 89-3 (segundo), los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 24 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 24 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 123-129 de la SEQ ID NO: 24 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 13.2 subclon 89-5
El hibridoma designado 13.2 subclon 89-5 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la quetiapina. El anticuerpo se designa 13.2 subclon 89-5. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 13.2 subclon 89-5 se designa con la SEQ ID NO: 25 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 26. Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclon 89-5, los nucleótidos 127-174 de la SEQ ID NO: 25 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de la SEQ ID NO: 25 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de la SEQ ID NO: 25 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 13.2 subclon 89-5, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 26 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 26 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 367-387 de la SEQ ID NO: 26 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 13.2 subclon 89-5, y se designan con la SEQ ID NO: 27 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 28 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclon 89-5, los residuos de aminoácidos 43-58 de la SEQ ID NO: 27 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de la SEQ ID NO: 27 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de la SEQ ID NO: 27 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 13.2 subclon 89-5, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 28 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 28 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 123-129 de la SEQ ID NO: 28 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
EJEMPLO 4
Anticuerpos contra la risperidona/paliperidona
Anticuerpo 5_9
El hibridoma designado 5_9 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la risperidona (y su metabolito paliperidona). El anticuerpo se designa 5-9. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 5-9 se designa con la SEQ ID NO: 1 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 2. Dentro de la Vl del mAb 5-9, los nucleótidos 130-180 de la SeQ ID nO: 1 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 226-246 de la SEQ ID NO: 1 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 343-369 de la SEQ ID NO: 1 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 5-9, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 2 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 2 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO: 2 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 5-9, y se designan con la SEQ ID NO: 3 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 4 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 5-9, los residuos de aminoácidos 44-60 de la SEQ ID NO: 3 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 76-82 de la SEQ ID NO: 3 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 115­ 123 de la SEQ ID NO: 3 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 5-9, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 4 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO: 4 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de la SEQ ID NO: 4 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
Anticuerpo 5_5
El hibridoma designado 5_5 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la risperidona (y su metabolito paliperidona). El anticuerpo se designa 5-5. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 5-5 se designa con la SEQ ID NO: 5 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se designa con la SEQ ID NO: 6. Dentro de la Vl del mAb 5-5, los nucleótidos 130-180 de la SeQ ID nO: 5 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 226-246 de la SEQ ID NO: 5 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 343-369 de la SEQ ID NO: 5 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 5-9, los nucleótidos 133-162 de la SEQ ID NO: 6 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de la SEQ ID NO: 6 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de la SEQ ID NO: 6 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
También se determinaron las secuencias de aminoácidos predichas correspondientes de las regiones de cadena variable del mAb 5-5, y se designan con la SEQ ID NO: 7 (cadena ligera) y la SEQ ID NO: 8 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 5-5, los residuos de aminoácidos 44-60 de la SEQ ID NO: 7 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 76-82 de la SEQ ID NO: 7 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 115­ 123 de la SEQ ID NO: 7 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 5-5, los residuos de aminoácidos 45-54 de la SEQ ID NO: 8 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de la SEQ ID NO: 8 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de la SEQ ID NO: 8 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).
EJEMPLO 5
Inmunoensayos competitivos para olanzapina e inmunoensayo competitivo multiplex para aripiprazol, olanzapina, quetiapina y risperidona/paliperidona
Después de una serie de inmunizaciones con inmunógenos de olanzapina, se probaron hemorragias de cola de ratón para reactividad usando un ELISA. Los sobrenadantes de hibridoma también se probaron, y los datos de ELISA que se muestran en las Tablas 1 y 2 siguientes muestran la reactividad de varios hibridomas (el compañero de fusión era células NSO).
Tabla 1
P la c a 2
D ilución 1 2 3 - : 4 5- * 6 7 8 9 10 11 12
1400
1 /1200
1 /3600
1 /10800
1/400
1-1200
1 '3600
1 -10300
Figure imgf000016_0001
1 ’ 2 ’ ' 5 - 4 l | 6.. .....7 8 9 10 11 12
: 1 /400
1 /1200
; 1/3GQ0
1 /10800
1 /400
1 /1200
1 / 36 ®
1 /10800
Figure imgf000016_0002
Figure imgf000017_0001
El sobrenadante se probó luego mediante ELISA de competición para determinar si las señales eran específicas para la olanzapina. Las Figs. 1-3 muestran los resultados de tres hibridomas representativos resultantes de la fusión de ratón 11.1. Los datos muestran reactividad específica para la olanzapina con reactividad variada para la clozapina.
La Fig. 4 muestra el formato de inmunoensayo competitivo usado en un dispositivo de ensayo de flujo lateral en el que el anticuerpo de captura, un clon de olanzapina, se depositó en un chip junto con un conjugado de detección que consistía de olanzapina conjugada con un fluoróforo. En este formato competitivo como se muestra en la Fig. 4, un nivel bajo de analito (olanzapina) da como resultado una señal alta, mientras que un nivel alto de analito (olanzapina) da como resultado una señal baja. La cantidad de olanzapina en la muestra puede calcularse a partir de la pérdida de fluorescencia en comparación con una muestra de control sin fármaco presente. En la figura 5 se muestra una curva de respuesta a la dosis típica generada con el clon 35 de olanzapina, con el clon 61 de olanzapina mostrándose en la Fig. 6, y con el clon 3F11 de olanzapina mostrándose en la Fig. 7.
La Fig. 8 muestra el diseño de chip de un dispositivo de ensayo de flujo lateral de acuerdo con una realización de la presente invención. El dispositivo incluye una zona o área para recibir la muestra, una zona de conjugado (que contiene los compañeros de unión competitiva marcados deseados) y una zona de reacción (se indican ocho áreas dentro de la zona de reacción; cada área puede contener un anticuerpo deseado separado) La muestra fluye desde la zona de muestra a través de la zona de conjugado y hacia la zona de reacción.
Las Figs. 9-12 muestran curvas de respuesta a la dosis típicas para un control positivo de aripiprazol (muestra que contiene aripiprazol) generado con el anticuerpo 5C7 depositado en la zona de reacción 2 y un compañero de unión competitiva del aripiprazol marcado en la zona de conjugado (Fig. 9), un control positivo de olanzapina (muestra que contiene olanzapina) generada con el anticuerpo 4G9-1 depositado en la zona de reacción 4 y un compañero de unión competitiva marcado con olanzapina en la zona de conjugado (Fig. 10), un control positivo de quetiapina (muestra que contiene quetiapina) generado con el anticuerpo 11 depositado en la zona de reacción 6 y un compañero de unión competitiva de quetiapina marcado en la zona de conjugado (Fig. 11), y un control positivo de risperidona (muestra que contiene risperidona) generado con el anticuerpo 5-9 depositado en la zona de reacción 8 y un compañero de unión competitiva de risperidona marcado en la zona de conjugado (Fig. 12) Los compañeros de unión competitiva marcados en la zona de conjugado compiten con los fármacos presentes en las muestras para unirse a los anticuerpos. Se detecta la cantidad de marcador y es una indicación de al cantidad de fármaco presente en la muestra (la cantidad de señal siendo inversamente proporcional a la cantidad de fármaco en la muestra - ver Fig. 4).
Para confirmar que los conjugados de compañeros de unión competitiva marcados no se unen a los anticuerpos depositados en las zonas de reacción, se llevaron a cabo controles negativos usando muestras que no contenían fármacos. En referencia a la Tabla 3, una muestra que no contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada, pero no aripiprazol marcado) y a la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo el anticuerpo aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2. La Tabla 3 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis y que los conjugados de olanzapina, quetiapina y risperidona que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no se unen al anticuerpo aripiprazol.
Tabla 3
Aripiprazol-Clon 5C7-Modelo Matemático 1 (Conc. Ong/ml)
Zona de Posición Area Media Altura Media Fondo
Ensa o-MM Con Reacción de Lectura Máxima Máxima Medio
Figure imgf000018_0001
En referencia a la Tabla 4, una muestra que no contiene olanzapina se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, quetiapina marcada y risperidona marcada, pero no olanzapina marcada) y hacia zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo el anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4. La Tabla 4 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis y los conjugados de aripiprazol, quetiapina y risperidona que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no se unen al anticuerpo de olanzapina.
Tabla 4
OLAN-Clon 4G9-1-Modelo Matemático 1 (Conc. Ong/mD
Zona de Posición Area Media Altura Media Fondo
Ensayo-MM Conj Reacción de Lectura Máxima Máxima Medio
Figure imgf000019_0003
ros onuca os no se unen a anzapna
Figure imgf000019_0001
En referencia a la Tabla 5, una muestra que no contiene quetiapina se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada y risperidona marcada, pero no quetiapina marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6. La Tabla 5 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis y que los conjugados de aripiprazol, olanzapina y risperidona que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no se unen al anticuerpo quetiapina.
Tabla 5
Quetiapina-Clon 11-Modelo Matemático 1 Conc. Ong/mi)
Zona de Posición Area Media Altura Media Fondo
Ensayo-MM Con Reacción de Lectura Máxima Máxima Medio
Figure imgf000019_0002
Con referencia a la Tabla 6, una muestra que no contiene risperidona se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada y quetiapina marcada, pero no risperidona marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpos contra risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 6 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis y los conjugados de aripiprazol, olanzapina y quetiapina que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no se unen al anticuerpo de risperidona.
Tabla 6
Risperidona-Clon 5-9-Modelo Matemático 1 (Conc. Ong/ml)
Zona de Posición Area Media Altura Media Fondo
Ensayo-MM Conj Reacción de Lectura Máxima Máxima Medio
Figure imgf000019_0004
Para confirmar que los conjugados de compañeros de unión competitiva marcados se unen solo a sus anticuerpos respectivos depositados en las zonas de reacción, se llevaron a cabo controles negativos adicionales usando de nuevo muestras que no contienen fármacos. Con referencia a la Tabla 7, una muestra que no contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, así como anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6 y anticuerpo de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 7 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis excepto para el anticuerpo 5C7 de aripiprazol (en la zona de reacción 2).
Tabla 7
Aripiprazol-Clon 5C7-Modelo Matemático 1 (Conc. Ong/ml)
Area Altura
Zona de Posición de Media Media Fondo
Ensayo-MM Conj Reacción i Lectura Máxima Máxima Medio
Figure imgf000020_0004
Solo se une la Zona de Reacción de Aripiprazol
Figure imgf000020_0001
En referencia a la Tabla 8, una muestra que no contiene olanzapina se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo olanzapina marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, así como anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6 y anticuerpo de risperidona (5-9) en la reacción zona 8. La Tabla 8 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis excepto para el anticuerpo de olanzapina 4G9-1 (en la zona de reacción 4).
Tabla 8
OLAN-Clon 4G9-1-Modelo Matemático 1 (Conc. Ong/ml)
Area Altura
Zona de Posición de Media Media Fondo
Ensayo-MM Con Reacción Lectura Máxima Máxima Medio
Figure imgf000020_0005
Solo se Une la Zona de Reacción de Olanzap
Figure imgf000020_0002
En referencia a la Tabla 9, una muestra que no contiene quetiapina se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo quetiapina marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, así como anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6 y anticuerpo de risperidona (5-9) en la reacción zona 8. La Tabla 9 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis excepto para el anticuerpo 11 de quetiapina (en la zona de reacción 6).
Tabla 9
Quetiapina-Clon 11-Modelo Matemático 1 (Conc. Ong/ml)
Area Altura
Zona de Posición de Media Media Fondo
Ensayo-MM_________Conj_________ Reacción Lectura________ Máxima Máxima_______Medio
Figure imgf000020_0006
oo se une a ona e eacc n e ue apna
Figure imgf000020_0003
En referencia a la Tabla 10, una muestra que no contiene risperidona se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo risperidona marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, así como anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6 y anticuerpo de risperidona (5-9) en la reacción zona 8. La Tabla 10 siguiente muestra los resultados, confirmando que no hay respuesta a la dosis excepto para el anticuerpo de risperidona 5-9 (en la zona de reacción 8).
Tabla 10
Risperidona-CLon 5-9-Modelo Matemático 1 (Conc. Ong/ml)
Area Altura
Zona de Posición de Media Media Fondo
Ensa o-MM Con Reacción Lectura Máxima Máxima Medio
Figure imgf000021_0002
Solo se une la Zona de Reacción de Risperidoi
Figure imgf000021_0001
Los resultados mostrados anteriormente confirman que los conjugados de compañeros de unión competitiva marcados se unen solo a sus respectivos anticuerpos en la zona de reacción.
Las Figs. 13-16 muestran curvas típicas de respuesta a la dosis en zonas de reacción de anticuerpos específicos, y una prueba de concentración baja/alta de respuesta a la dosis para cada ensayo específico en presencia de otros conjugados. En la Fig. 13, una muestra que contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2. Se generó una curva de respuesta a la dosis típica como se muestra en la Fig. 13 solo para aripiprazol, y no para olanzapina, quetiapina o risperidona.
En la Fig. 14, una muestra que contiene olanzapina se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4. Se generó una curva de respuesta a la dosis típica como se muestra en la Fig. 14 solo para olanzapina, y no para aripiprazol, quetiapina o risperidona.
En la Fig. 15, una muestra que contiene quetiapina se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6. Se generó una curva de respuesta a la dosis típica como se muestra en la Fig. 15 solo para quetiapina, y no para aripiprazol, olanzapina o risperidona.
En la Fig. 16, una muestra que contiene risperidona se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (esta vez conteniendo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. Se generó una curva de respuesta a la dosis típica como se muestra en la Fig. 16 solo para risperidona, y no para aripiprazol, olanzapina o quetiapina.
Las Figs. 17-20 muestran curvas de respuesta a la dosis típicas para cada ensayo en presencia de otros conjugados y anticuerpos. En la Fig. 17, una muestra que contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestra y se mueve por acción capilar a través de la zona de conjugado (que contiene de nuevo aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada) y hacia la zona de reacción. La zona de reacción contiene de nuevo anticuerpo de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, así como anticuerpo de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpo de quetiapina (11) en la zona de reacción 6 y anticuerpo de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. Se generó una curva de respuesta a la dosis típica para aripiprazol, como se muestra en la Fig. 17. Cuando se depositó una muestra que contenía olanzapina en la zona de muestra de este chip, se generó una curva de respuesta a la dosis típica para olanzapina como se muestra en la Fig. 18. Cuando se depositó una muestra que contenía quetiapina en la zona de muestra de este chip, se generó una curva de respuesta a la dosis típica para quetiapina como se muestra en la Fig. 19. Cuando se depositó una muestra que contenía risperidona en la zona de muestra de este chip, se generó una curva de respuesta a la dosis típica para risperidona como se muestra en la Fig. 20.
Las Figs. 21-24 muestran comparaciones de las curvas de respuesta a la dosis generadas como controles positivos (Figs. 9-12) con las curvas de respuesta a la dosis generadas en el formato multiplex (Figs. 17-20). La comparación para aripiprazol se muestra en la Fig. 21; para olanzapina en la Fig. 22; para quetiapina en la Fig. 23; y para risperidona en la Fig. 24. Estas figuras muestran que las curvas de control positivo son similares a las curvas multiplex.
Estos datos muestran que un dispositivo de ensayo de flujo lateral de la presente invención puede usarse para detectar múltiples fármacos antipsicóticos usando una única muestra de un paciente en un dispositivo portátil de punto de atención.

Claims (12)

REIVINDICACIONES
1. Un anticuerpo aislado o un fragmento de unión del mismo, que se une a olanzapina y que se selecciona del grupo que consiste de:
i) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende:
a) la secuencia de la CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 11;
b) la secuencia de la CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 11;
c) la secuencia de la CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 11;
d) la secuencia de la CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 12;
e) la secuencia de la CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 12; y
f) la secuencia de la CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 12; o
ii) un anticuerpo aislado o un fragmento del mismo que comprende:
a) la secuencia de la CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 44 a 54 de la SEQ ID NO: 15;
b) la secuencia de la CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 70 a 76 de la SEQ ID NO: 15;
c) la secuencia de la CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 109 a 117 de la SEQ ID NO: 15;
d) la secuencia de la CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de la SEQ ID NO: 16;
e) la secuencia de la CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de la SEQ ID NO: 16; y
f) la secuencia de la CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 122 de la SEQ ID NO: 16.
2. El anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de la reivindicación 1.i) que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 11 y una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:12.
3. El anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de la reivindicación 1.ii) que comprende una región variable de la cadena ligera que tiene una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 15 y una región variable de la cadena pesada que tiene una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO:16.
4. El anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el fragmento de unión se selecciona del grupo de fragmentos que consiste de fragmentos Fv, F(ab'), F(ab')2, scFv, minicuerpo o diacuerpo.
5. Un kit de ensayo que comprende el anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1-3.
6. Un dispositivo de ensayo que comprende el anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, como en donde el dispositivo es un dispositivo de ensayo de flujo lateral.
7. Un método para detectar olanzapina en una muestra, el método comprendiendo:
i) poner en contacto una muestra con el anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1-3 marcado con un marcador detectable, en donde el anticuerpo aislado marcado o fragmento de unión del mismo y la olanzapina presentes en la muestra forman un complejo marcado; y (ii) detectar el complejo marcado para detectar olanzapina en la muestra.
8. Un método de inmunoensayo competitivo para detectar olanzapina en una muestra, el método comprendiendo:
(i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo de cualquiera de las reivindicaciones 1-3, y con olanzapina o un compañero de unión competitiva de la olanzapina, en donde uno del anticuerpo aislado o fragmento de unión del mismo y la olanzapina o compañero de unión competitiva de la misma está marcado con un marcador detectable, y en donde la muestra de olanzapina compite con la olanzapina o el compañero de unión competitiva de la misma para unirse al anticuerpo; y (ii) detectar el marcador para detectar la muestra de olanzapina.
9. El método de la reivindicación 8, en donde la olanzapina o el compañero de unión competitiva de la misma está marcado con el marcador detectable; o en donde el anticuerpo aislado o el fragmento de unión del mismo está marcado con un marcador detectable; o en donde el inmunoensayo se realiza en un dispositivo de ensayo de flujo lateral y la muestra se aplica al dispositivo.
10. El método de la reivindicación 7 u 8, que comprende además detectar la presencia de uno o más analitos además de la olanzapina.
11. El método de la reivindicación 10, en donde el uno o más analitos son fármacos antipsicóticos distintos de la olanzapina.
12. El método de la reivindicación 11, en donde los fármacos antipsicóticos distintos de la olanzapina se seleccionan del grupo que consiste de: risperidona, paliperidona, quetiapina, aripiprazol, y metabolitos de los mismos.
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