ES2895957T3 - Igmesina para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano que lo necesite, en donde el método comprende administrar la igmesina como una monoterapia en un intervalo de 1 a 20 mg por día.

Description

DESCRIPCIÓN

Igmesina para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano que lo necesite, en donde el método comprende administrar la igmesina en un intervalo de 1 a 20 mg por día.

Antecedentes de la invención

Los receptores sigma son sitios de unión no opioides, no fenciclidina (PCP) que modulan la supervivencia y la excitabilidad celular. Los receptores sigma son proteínas asociadas a la membrana distribuidas ampliamente en el cerebro de los mamíferos, las neuronas periféricas y los órganos viscerales. Se han identificado dos subtipos, sigma-1 y sigma-2, según sus perfiles farmacológicos (Seth P et al. (1998) J Neurochem. 70:922-931). Ambos subtipos de receptores sigma están ampliamente distribuidos en el sistema nervioso central (SNC). El receptor sigma-1 (sigma-1 R) es una proteína chaperona localizada en el retículo endoplásmico (ER) y en la interfaz ER-mitocondria en los tejidos cerebrales, donde regula la señalización ER-mitocondria Ca(2+) y la diafonía del núcleo ER a través del receptor de prostaciclina (IP) (Hayashi T et al., 2007 Cell 131:596-610). En humanos, sigma-1R está codificado por el gen SIGMA1R. El receptor sigma-2 (sigma-2R) se encuentra en varias áreas del cerebro, incluso en el cerebelo, la corteza motora y la sustancia negra. Su posición aún no se ha localizado en el cromosoma humano.

Varios estudios han indicado que sigma-1 R tiene actividad neuroprotectora. Por ejemplo, los estudios in vitro han mostrado efectos protectores para los agonistas sigma-1R en una variedad de células, incluidas las neuronas cerebrales primarias, las células ganglionares de la retina y las células del cristalino. Además, la eliminación de sigma-1R aumenta la vulnerabilidad de las células al péptido amiloide Ap25-35 altamente tóxico, el estrés oxidativo, el estrés ER y la privación de glucosa (Hall AA et al. (2009) Glia 57(7): 744-754; Schroder M et al. (2005). Mutation Res. 569(1-2): 29-63). Los agonistas de Sigma-1R también han demostrado eficacia contra el estrés oxidativo y vulnerabilidad al péptido AP25-35 en modelos animales. El potente ligando sigma-1, 4-fenil-1 -(4-fenilbutil) piperidina (PPBP), atenuó el volumen de infarto en la corteza cerebral y el cuerpo estriado inducido por oclusión / reperfusión de la arteria cerebral media en animales de experimentación y producción de óxido nítrico notablemente atenuado (NO) en estirato esquemático y no isquémico (Goyagi et al. (2001) Stroke 32(7): 1613-1620). Además, un agonista selectivo de sigma-1R, PRE-084, atenuó la peroxidación lipídica inducida por el péptido AP25-35 en el hipocampo murino (Meunier J et al. (2006). Br J Pharmacol 149(8): 998-1012).

La evidencia acumulada sugiere que Sigma-1R desempeña una función tanto en la fisiopatología de las enfermedades neuropsiquiátricas como en la acción mecanicista de algunos fármacos terapéuticos (Nitsu T et al. (2012) Curr Phar Des.

18:875-83). Se ha sugerido el sigma-1 R como objetivo para la intervención terapéutica en diversas afecciones basándose en sus supuestas actividades neuroprotectoras y/o antiinflamatorias. Por ejemplo, se han sugerido ligandos del receptor sigma para el tratamiento de los trastornos del movimiento provocados por la metanfetamina (Matsumoto RR et al. (2008) Eur. Neuropsychopharmacology 18(12): 871-881). Los agonistas del receptor sigma que incluyen M-(N-bencilpiperidin-4-il)-4-yodobenzamida (4-IBP), PRE-084, [N-(1,4-difenil-1-etil-3-buten-1-il)-N-hidrocloruro de metil-ciclopropanometamina (igmesina), OPC-14523, BD-737 y N-bencil-N'-(2-hidroxi-3,4-dimetoxibencil)-piperazina (BHDP) también se han propuesto para tratar o prevenir enfermedades neurodegenerativas causadas por accidente cerebrovascular isquémico, enfermedad de Alzheimer, neuropatía periférica diabética, neuropatía inducida por terapia del cáncer, esclerosis múltiple, esclerosis lateral amiotrófica, lesión cerebral traumática, lesión de la médula espinal, enfermedad de Huntington o enfermedad de Parkinson (US2005/0020483). US 2005/0070524 describe composiciones de un inhibidor selectivo de ciclooxigenasa-2 y un agente anticonvulsivo para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central, y la igmesina se incluye entre los posibles agentes anticonvulsivos. US 5,665,725 describe ciertos derivados de piperidina que son ligandos del receptor sigma y que se dice que son útiles en el tratamiento de ansiedad, psicosis, epilepsia, convulsiones, trastornos del movimiento, alteraciones motoras, amnesia, enfermedades cerebrovasculares, demencia senil de tipo Alzheimer y enfermedad de Parkinson. US 2007/0123556 describe métodos de tratamiento posterior a un accidente cerebrovascular en puntos de tiempo retrasados con agonistas del receptor sigma que incluyen 1,3-di-o-toliguanidina (DTG), carbetapentano, (+)-pentazocina, PRE-084, rimcazole, L-687,384, BD-737 e igmesina. Un artículo reciente informa sobre la mejora de la memoria por parte de los agonistas del receptor sigma-1 PRE-84 y ANAVEX2-73 en un modelo de ratón de deterioro de la memoria inducido por p-amiloide, y actividad sinérgica con donepezil cuando los compuestos se administran de manera preventiva y sintomática (Maurice T (2016) Behavioural Brain Res. 296: 270-278). Sin embargo, no se proporcionan datos que muestren el efecto de los agonistas sigma-1R sobre la neuroprotección asociada con la mejora de la memoria.

La igmesina (JO-1784) es un agonista sigma-1R potente y altamente selectivo con IC50 de 39 8 nM, (Roman FJ et al. (1990) J. Pharm. Pharmacology 42(6): 439-440). Esta afinidad es similar a la del haloperidol (24 6 nM), que es uno de los compuestos más activos para este sitio (Largent BL, et al. (1986) J. Pharmacology Exp. Therap. 238(2): 739-748). JO-1783, el estereoisómero inactivo de la igmesina (JO-1784), era diez veces menos potente que la igmesina, lo que indica un cierto grado de estereoespecificidad del compuesto para la unión.

La igmesina tiene efectos neuroprotectores en el modelo jerbo de isquemia cerebral global a dosis efectivas de 50, 75 y 100 mg/kg. (O'Neill M et al. (1995) Eur. J. Pharmacol.283(1-3): 217-225) y también ha mostrado efectos beneficiosos sobre el deterioro de la memoria relacionado con la edad en el modelo de ratón con senescencia acelerada a dosis efectivas de 0,1 a 3 mg/kg en un paradigma de tratamiento agudo. (Maurice T et al. (1996) Brain Research 733(2): 219­ 230. US 5,034,419) (L'Oreal) describe la igmesina y compuestos relacionados y, basándose en la afinidad encontrada in vitro por los receptores sigma, propone su uso en terapia para trastornos neurológicos y/o mentales en general, incluyendo a modo de ejemplo estados depresivos, alteraciones de la memoria y/o del comportamiento, esquizofrenia, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y demencia senil. Sin embargo, no se proporcionan datos que respalden la eficacia terapéutica en ninguna de estas afecciones.

La eficacia antidepresiva de la igmesina se sugirió en algunos modelos animales preclínicos (Kinsora JJ Jr et al. (1998) Neurosci. Abstr. 24, 291.3; Matsuno K et al. (1996) Eur. J. Pharmacol. 312(3): 267-271; Song C et al. (1997). Neuropsychobiology 35(4): 200-204; Urani A et al. (2001) J. Pharmacol. Exp. Therap. 298(3): 1269-1279) y actividad antidepresiva también se observó en los ensayos clínicos (Pande AC et al. (1998). Int. J. Neuropsychopharmacol. 1: S8-S9; Pande AC et al. (1999) Eur. Neuropsychopharmacol. 9: S138; Leadbetter R, et al. (1999) Biol. Psychiatry, 45 (Suppl) p. 76S (Abs. Z44)). Varias solicitudes de patente describen los métodos para tratar la depresión utilizando igmesina. Por ejemplo, WO 2000/041684 describe métodos para tratar la depresión mediante la administración de una combinación de un agonista sigma-1R, por ejemplo, igmesina, y un inhibidor de la recaptación de serotonina, por ejemplo, fluoxetina. WO 2001/015685 describe un efecto beneficioso sobre la actividad antidepresiva de la igmesina cuando se administra a animales con deficiencia de esteroides. La Igmesina también se ha descrito como útil en el tratamiento de la depresión cuando se administra en combinación con un inhibidor de la recaptación de serotonina, por ejemplo, en US 6,436,938 (Pfizer).

US 2003/0013699 (Schering Corp.) describe métodos para tratar la enfermedad de Alzheimer usando ciertos compuestos definidos por sus fórmulas químicas y su uso en terapia de combinación, enumerando ligandos del receptor sigma entre los muchos agentes posibles que teóricamente podrían usarse en dicha terapia de combinación.

WO 2004/110387 describe el uso de ligandos sigma en el tratamiento de una enfermedad neurodegenerativa, como la enfermedad de Alzheimer. Aunque SA 4503 es el compuesto preferido, también se indica que son adecuados otros ligandos sigma, incluida la igmesina.

Hasta la fecha, no se han publicado datos que describan el efecto terapéutico de la igmesina en la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis lateral amioptrófica, la esclerosis múltiple, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington o la degeneración frontotemporal.

Compendio

La presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano que lo necesite, en donde el método comprende administrar la igmesina como una monoterapia en un intervalo de 1 a 20 mg por día. La invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano que lo necesite, en donde el método comprende administrar la igmesina en un intervalo de 1 a 20 mg por día y comprende además administrar al menos un ingrediente farmacéutico activo adicional. La invención se refiere además a formas de dosificación unitarias que comprenden de 1 a 20 mg de hidrocloruro de igmesina y de 1 a 6 mg de donepezilo.

La invención está definida por las reivindicaciones. Cualquier materia objeto que quede fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona solo con fines informativos. Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento, diagnóstico o cirugía se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento, diagnóstico o cirugía del cuerpo humano o animal mediante terapia.

La presente invención se basa, en parte, en el sorprendente hallazgo de que la igmesina tiene potentes efectos neuroprotectores en el modelo de ratón AP25-35 de la enfermedad de Alzheimer, como lo demuestra su capacidad para prevenir o reducir sustancialmente la neurotoxicidad inducida por AP25-35 en este sistema modelo, como lo demuestra, por ejemplo, la prevención de los déficits de aprendizaje y memoria característicos de la neurotoxicidad inducida por AP25-35, así como por indicadores celulares y bioquímicos, como la reducción de la apoptosis de las células neuronales, la reducción del estrés del retículo endoplásmico (RE), la reducción de la neuroinflamación , reduciendo la carga de betaamiloide e inhibiendo la hiperfosforilación de la proteína tau. La presente invención también se basa, en parte, en el hallazgo de que la igmesina es capaz de prevenir la aparición de déficits de aprendizaje y memoria provocados por la neurotoxicidad inducida por AP25-35 y que están asociados tanto con la memoria de trabajo espacial como con la memoria contextual a largo plazo. El intervalo de dosis efectiva para la igmesina fue del orden de 10 a 100 veces menor que el intervalo de dosis efectiva previamente observado en humanos, por ejemplo, en relación con sus efectos antidepresivos, y en roedores, por ejemplo, en relación con sus efectos neuroprotectores en modelos de isquemia cerebral global. Además, la presente invención se basa, en parte, en el hallazgo de que la igmesina actúa de forma sinérgica con otros agentes terapéuticos para prevenir o reducir sustancialmente la neurotoxicidad inducida por AP25-35. La presente invención también se basa, en parte, en la capacidad de la igmesina para reducir o prevenir la apoptosis de células neuronales. La presente invención también se basa, en parte, en la capacidad de la igmesina para promover la actividad acompañante de los receptores sigma-1 para atenuar la acumulación de proteínas mal plegadas que subyacen a patologías neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis lateral amiotrófica (ELA), la enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson y degeneración frontotemporal.

Por consiguiente, la presente divulgación proporciona composiciones y métodos para tratar una enfermedad o trastorno neurodegenerativo usando igmesina, ya sea sola o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales se selecciona de un inhibidor de la colinesterasa, un agente reductor de la toxicidad de Ap, un agente de reemplazo hormonal, un agente reductor de lípidos, un agente modulador de secretasa, un inhibidor de la agregación de Ap, un inhibidor neurofibrilar, un inhibidor de la monoaminooxidasa (MAO) y un inhibidor del catabolismo p-amiloide. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un inhibidor de colinesterasa. En realizaciones, el inhibidor de la colinesterasa es donepezilo. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un agente antiinflamatorio. En realizaciones, el agente antiinflamatorio es un agente antiinflamatorio no esteroideo. En una realización, el agente antiinflamatorio es ibuprofeno. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un agente reductor de lípidos. En realizaciones, el agente reductor de lípidos es una estatina. En realizaciones, la estatina es simvastatina o atorvastatina. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un inhibidor de MAO. En realizaciones, el inhibidor de MAO se selecciona de rasagilina, selegilina y tranilcipromina. En realizaciones, el inhibidor de MAO es un inhibidor de MAO-B. En realizaciones, el inhibidor de MAO-B es la selegilina.

En una realización, la presente divulgación proporciona una composición para su uso en el tratamiento de una enfermedad o trastorno neurológico en un sujeto humano que lo necesite, estando adaptada la composición para una dosificación una o dos veces al día y que comprende una cantidad de igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, eficaz para mejorar o retrasar la aparición de una o más características fisiopatológicas de la enfermedad o trastorno, o mejorar o retrasar la aparición de al menos un síntoma clínico de la enfermedad o trastorno, en donde la cantidad de igmesina en la composición está en el intervalo de 1 a 20 mg o de 1 a 15 mg, preferiblemente de 1 a 10 mg o de 1 a 5 mg.

En una realización, la divulgación proporciona un método para tratar una enfermedad o trastorno neurológico en un sujeto humano que lo necesita, el método comprende administrar al sujeto una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, siendo la cantidad de igmesina eficaz para mejorar o retrasar la aparición de una o más características fisiopatológicas de la enfermedad o trastorno, o mejorar o retrasar la aparición de al menos un síntoma clínico de la enfermedad o trastorno, y la cantidad de igmesina está en el intervalo de 1 a 20 mg, preferiblemente de 1 a 10 mg.

En realizaciones, la enfermedad o trastorno neurológico se selecciona entre enfermedad de Alzheimer, ELA, enfermedad de Huntington, esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson y degeneración frontotemporal.

En una realización, la divulgación proporciona una composición para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano, la composición que comprende clorhidrato de igmesina en una cantidad de 1 a 100 mg, de 1 a 20 mg, de 1 a 10 mg, de 1 a 5 mg, o de 1 a 3 mg, y uno o más agentes terapéuticos adicionales. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales se selecciona de un inhibidor de colinesterasa, un agente antiinflamatorio, un agente reductor de lípidos y un inhibidor de MAO. En realizaciones, el inhibidor de la colinesterasa es donepezilo. En realizaciones, la cantidad de donepezil en la composición es de 1 a 6 mg. En realizaciones, el agente antiinflamatorio es un agente antiinflamatorio no esteroideo. En una realización, el agente antiinflamatorio es ibuprofeno. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un agente reductor de lípidos. En realizaciones, el agente reductor de lípidos es una estatina. En realizaciones, la estatina es simvastatina o atorvastatina. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un inhibidor de MAO. En realizaciones, el inhibidor de MAO se selecciona de rasagilina, selegilina y tranilcipromina. En realizaciones, el inhibidor de MAO es un inhibidor de MAO-B. En realizaciones, el inhibidor de MAO-B es la selegilina.

En una realización, la divulgación proporciona un método para tratar la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano que lo necesita, el método comprende administrar al sujeto una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, siendo la cantidad de igmesina eficaz para mejorar o retrasar la aparición de una o más características fisiopatológicas de la enfermedad de Alzheimer, o mejorar o retrasar la aparición de al menos un síntoma clínico de la enfermedad de Alzheimer, estando la cantidad de igmesina en el intervalo de 1 a 100 mg, de 1 a 50 mg , de 1 a 20 mg, de 1 a 10 mg, o de 1 a 5 mg. En realizaciones, la composición comprende además uno o más agentes terapéuticos adicionales, además de la igmesina. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales se selecciona de un inhibidor de colinesterasa, un agente antiinflamatorio, un agente reductor de lípidos y un inhibidor de MAO. En realizaciones, el inhibidor de la colinesterasa es donepezilo. En realizaciones, la cantidad de donepezil en la composición es de 1 a 6 mg. En realizaciones, el agente antiinflamatorio es un agente antiinflamatorio no esteroideo. En una realización, el agente antiinflamatorio es ibuprofeno. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un agente reductor de lípidos. En realizaciones, el agente reductor de lípidos es una estatina. En realizaciones, la estatina es simvastatina o atorvastatina. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un inhibidor de MAO. En realizaciones, el inhibidor de MAO se selecciona de rasagilina, selegilina y tranilcipromina. En realizaciones, el inhibidor de MAO es un inhibidor de MAO-B. En realizaciones, el inhibidor de MAO-B es la selegilina.

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones de métodos o composiciones descritas en este documento, la sal farmacéuticamente aceptable de igmesina puede ser la sal hidrocloruro.

En realizaciones, el sujeto que lo necesita es un paciente humano diagnosticado con la enfermedad o trastorno neurológico.

En realizaciones, la enfermedad o trastorno neurológico se selecciona entre enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica (ELA), esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington y degeneración frontotemporal.

En una realización, la enfermedad o trastorno neurológico es la enfermedad de Alzheimer. En realizaciones, la una o más características fisiopatológicas de la enfermedad de Alzheimer se seleccionan de neuroinflamación, apoptosis, estrés ER, carga de placa amiloidea, hiperfosforilación de la proteína tau y peroxidación de lípidos En realizaciones, el al menos un síntoma clínico de la enfermedad de Alzheimer es un déficit de aprendizaje o memoria asociado con uno o más de la memoria de trabajo, la memoria a corto plazo y la memoria a largo plazo. En realizaciones, el al menos un síntoma clínico de la enfermedad de Alzheimer es la memoria reforzada positivamente o la memoria espacial y contextual, o ambas.

En realizaciones, una composición farmacéutica que comprende igmesina como se describe en este documento comprende además una cantidad eficaz de al menos un ingrediente farmacéutico activo adicional ("API"), que también puede denominarse indistintamente en el presente documento como "agente activo" o "agente terapéutico". En realizaciones, el al menos un API adicional se selecciona del grupo que consiste en un inhibidor de la colinesterasa, un agente reductor de la toxicidad de Ap, un agente de reemplazo hormonal, un agente reductor de lípidos, un agente modulador de secretasa, un inhibidor de la agregación de Ap, un inhibidor neurofibrilar o un p -inhibidor del catabolismo amiloide y combinaciones de los mismos. En realizaciones, el al menos un API adicional se selecciona de un inhibidor de colinesterasa, un agente antiinflamatorio, un agente reductor de lípidos y un inhibidor de MAO. En realizaciones, el inhibidor de la colinesterasa es donepezilo. En realizaciones, la cantidad de donepezil en la composición es de 1 a 6 mg. En realizaciones, el agente antiinflamatorio es un agente antiinflamatorio esteroideo o no esteroideo. En una realización, el agente antiinflamatorio es ibuprofeno. En realizaciones, el al menos un API adicional es un agente reductor de lípidos. En realizaciones, el agente reductor de lípidos es una estatina. En realizaciones, la estatina es simvastatina o atorvastatina. En realizaciones, el al menos un API adicional es un inhibidor de MAO. En realizaciones, el inhibidor de MAO se selecciona de rasagilina, selegilina y tranilcipromina. En realizaciones, el inhibidor de MAO es un inhibidor de MAO-B. En realizaciones, el inhibidor de MAO-B es la selegilina.

En realizaciones, el al menos un API adicional es un inhibidor de colinesterasa. En realizaciones, el inhibidor de colinesterasa está presente en una cantidad que es al menos 2 veces, preferiblemente al menos 4 veces menor que la cantidad terapéuticamente eficaz del inhibidor de colinesterasa en ausencia de clorhidrato de igmesina. En realizaciones, el inhibidor de la colinesterasa es donepezilo. En realizaciones, la cantidad eficaz de donepezilo es de 1 a 6 mg.

En realizaciones, la composición es una forma de dosificación oral o una forma de dosificación adecuada para la administración intravenosa.

En realizaciones, la divulgación proporciona una forma de dosificación unitaria adaptada para la administración oral que comprende clorhidrato de igmesina y donepezilo. En realizaciones, la cantidad de clorhidrato de igmesina en la forma de dosificación unitaria es de 1 a 100 mg, de 1 a 20 mg o de 1 a 10 mg, y la cantidad de donepezil es de 1 a 6 mg.

En realizaciones, la divulgación proporciona una forma de dosificación unitaria adaptada para la administración oral que comprende clorhidrato de igmesina e ibuprofeno. En realizaciones, la cantidad de clorhidrato de igmesina en la forma de dosificación unitaria es de 1 a 100 mg, de 1 a 20 mg o de 1 a 10 mg, y la cantidad de ibuprofeno es de 1 a 400 mg.

En realizaciones, la divulgación proporciona una forma de dosificación unitaria adaptada para la administración oral que comprende clorhidrato de igmesina y simvastatina. En realizaciones, la cantidad de clorhidrato de igmesina en la forma de dosificación unitaria es de 1 a 100 mg, de 1 a 20 mg o de 1 a 10 mg, y la cantidad de simvastatina es de 20 a 80 mg.

En realizaciones, la divulgación proporciona una forma de dosificación unitaria adaptada para la administración oral que comprende clorhidrato de igmesina y atorvastanina. En realizaciones, la cantidad de clorhidrato de igmesina en la forma de dosificación unitaria es de 1 a 100 mg, de 1 a 20 mg o de 1 a 10 mg, y la cantidad de atorvastanina es de 1 a 80 mg.

En realizaciones, la divulgación proporciona una forma de dosificación unitaria adaptada para la administración oral que comprende clorhidrato de igmesina y selegilina. En realizaciones, la cantidad de clorhidrato de igmesina en la forma de dosificación unitaria es de 1 a 100 mg, de 1 a 20 mg o de 1 a 10 mg, y la cantidad de selegilina es de 1 a 10 mg.

En realizaciones, la divulgación proporciona una composición para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la esclerosis lateral amiotrófica o la enfermedad de Huntington, en un sujeto humano, la composición que comprende clorhidrato de igmesina en una cantidad de 2,5 a 10 mg por dosis, en donde la composición es para administración una, dos o tres veces al día. En realizaciones, la composición comprende además donepezil en una cantidad de 1 a 15 mg; o ibuprofeno en una cantidad de 50 a 150 mg; o selegilina en una cantidad de 5 a 15 mg; o atorvastatina en una cantidad de 1 a 5 mg

Descripción de las figuras.

Figura 1. Efecto de la igmesina agonista de sigma-1R (AMY002, 0,1, 0,3, 1 mg/kg) sobre la alternancia espontánea inducida por Ap25-35 en ratones. Los ratones a los que se administró Igmesina fue i.p. 20 minutos antes de la inyección intracerebroventricular (i.c.v.) de péptido Ap revuelto (Sc.Ap) o AP25-35 (9 nmol) y se evaluó el comportamiento de alternancia espontánea de los ratones usando el laberinto en Y 7 días después de la inyección de igmesina. Veh, solución de vehículos; DPZ, donepezilo (1 mg/kg). *** p < 0,001 frente al grupo Veh-más Sc.Ap; ### p < 0,001 frente al grupo Veh más AP25-35; n=12). Los datos se analizaron mediante la prueba post hoc de Dunnett. Todas las dosis del tratamiento en este experimento se expresan en mg/kg.

Figura 2. Efectos de la igmesina (AMY002) sobre la evitación pasiva inducida por AP25.35 en ratones: (A) la latencia de paso y (B) la latencia de escape se determinaron durante la sesión de retención. A los ratones se les administró igmesina i.p. 20 min antes de inyección i.c.v. de AP25-35 y los ratones se probaron para evaluar el déficit cognitivo después de la inyección de igmesina o/DPZ. Veh, solución de vehículo. *** p < 0,001 frente al grupo Sc.Ap tratado con Veh; ### p < 0,001 frente al grupo tratado con AP25-35; Prueba de Dunnett. Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 3. El efecto protector de la igmesina (AMY002) sobre la elevación inducida por AP25-35 de los niveles de peroxidación lipídica del hipocampo (LPO) en comparación con el donepezilo (DPZ). Se inyectó Igmesina IP 20 min antes de la inyección de AP25-35. Veh, solución de vehículo. *** p < 0,001 frente al grupo Sc.AP tratado con Veh; ### p < 0,001 frente al grupo AP25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett. Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 4. Efecto neuroprotector de la igmesina (AMY002) sobre los déficits de alternancia espontánea inducidos por AP25-35 en ratones 7 días después de la inyección de igmesina. Efecto comparado del donepezil (DPZ). Los compuestos se inyectaron desde el día 1 después de la inyección de AP25-35 hasta el día 6. Veh, solución de vehículo. *** p < 0,001 frente al grupo Sc.AP tratado con V; ### p < 0,001 frente al grupo AP25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett. Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 5. Efectos protectores de la igmesina (AMY002) o el donepezilo (DPZ) sobre los déficits de evitación pasiva inducidos por AP25-35 en ratones: (A) se determinó la latencia de paso 8 días después de la inyección del péptido AP25-35 y (B) se midió la latencia de escape durante la sesión de retención de 24 horas el día 9. La Igmesina se inyectó desde el día 1 después de la inyección de AP25-35 hasta el día 6. Veh, solución de vehículo. * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001 frente al grupo Sc.AP tratado con V; ## p< 0,01, ### p < 0,001 frente al grupo tratado con AP25-35; Prueba de Dunnett. Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 6. Efecto de igmesina (AMY002) o donepezil (DPZ) sobre la elevación inducida por AP25-35 de los niveles de LPO del hipocampo en ratones. Los niveles de LPO se utilizaron como marcador del estrés oxidativo. Se inyectó Igmesina 24 horas después de la inyección de AP25-35 y una vez al día hasta el día 6 y se recogieron cerebros de ratón después de la prueba de evitación pasiva el día 9. Todos los resultados expresados como porcentaje del grupo Sc.AP (% de Sc.AP). Veh, solución de vehículo. *** p < 0,001 frente al grupo Sc.AP tratado con Veh; ### p < 0,001 frente al grupo AP25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett. Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 7. Efecto de la igmesina (AMY002) sobre la elevación inducida por AP25-35 de los niveles de proteína ácida fibrilar glial cortical (GFAP) en ratones. Los niveles de GFAP se utilizaron como marcador como un daño neurológico. Se inyectó Igmesina 24 horas después de la inyección de AP25-35 hasta el día 6 y se recolectaron cerebros después de la prueba de evitación pasiva el día 9. Todos los resultados expresados como porcentaje del grupo Sc.AP (% de Sc.AP). Veh, solución de vehículo. *** p < 0,001 frente al grupo Sc.AP tratado con Veh; ### p < 0,001 frente al grupo AP25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett.

Figura 8. El efecto protector de la igmesina (AMY002) sobre la elevación inducida por AP25-35 de los niveles de caspasa cortical 12 en ratones. Los niveles de caspasa se utilizaron como un marcador de estrés ER. Se inyectó Igmesina 24 horas después de la inyección de AP25-35 hasta el día 6 y se recolectaron cerebros después de la prueba de evitación pasiva el día 9. Todos los resultados expresados como porcentaje del grupo Sc.AP (% de Sc.AP). Veh, solución de vehículo. *** p < 0,001 frente al grupo Sc.AP tratado con Veh; ### p < 0,001 frente al grupo AP25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett.

Figura 9. Efecto de la igmesina (AMY002) sobre la elevación inducida por AP25-35 de los niveles de AP1-40 y AP1 -42 en la corteza del ratón. Se inyectó Igmesina 24 horas después de la inyección de AP25-35 hasta el día 6 y se recolectaron cerebros después de la prueba de evitación pasiva el día 9. Todos los resultados expresados como porcentaje del grupo Sc.AB (% de Sc.AB). Veh, solución de vehículo. ***p < 0,001 frente al grupo Sc.AP tratado con Veh; ### p < 0,001 frente al grupo AP25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett.

Figura 10. El efecto protector de la igmesina (AMY002) sobre la elevación inducida por Ap25-35 de la proteína Tau cortical fosforilada en la serina 199 (pTauS199). Los niveles de p-tau se utilizaron como biomarcador de la enfermedad de Alzheimer. Se inyectó Igmesina 24 horas después de la inyección de Ap25-35 hasta el día 6 y se recolectaron cerebros después de la prueba de evitación pasiva el día 9. Todos los resultados expresados como porcentaje del grupo Sc.Ap (% de Sc.Ap). Veh, solución de vehículo. ***p < 0,001 frente al grupo Sc.Ap tratado con Veh; ### p < 0,001 frente al grupo AP25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett.

Figura 11. Efecto de la igmesina (AMY002, 1 mg/kg) sobre la elevación inducida por AP25-35 de la proporción cortical Bax/Bcl2. La proporción Bax/Bcl2 se utilizó como marcador de apoptosis asociada con el progreso de la enfermedad. Se inyectó Igmesina 24 horas después de la inyección de AP25-35 hasta el día 6 y se recolectaron cerebros después de la prueba de evitación pasiva el día 9. Todos los resultados expresados como porcentaje del grupo Sc.Ap (% de Sc.Ap). Veh, solución de vehículo. ***p < 0,001 frente al grupo Sc.Ap tratado con Veh; ### p < 0,001 frente al grupo Ap25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett.

Figura 12. Efecto de la igmesina (AMY002) en combinación con los agonistas de sigma-1R donepezil (DPZ) (A) o con memantina (MEM) (B) sobre los déficits de alternancia espontánea inducidos por Ap25-35 en ratones. Veh, solución de vehículo. *** p < 0,001 frente al grupo Sc.Ap tratado con Veh; # p< 0,05, ### p < 0,001 frente al grupo Ap25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett.. Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 13: Efecto de la igmesina (AMY002) en combinación con los agonistas de sigma-1R donepezil (DPZ) (A) o con memantina (MEM) (B) sobre los déficits de evitación pasiva inducidos por Ap25-35 en ratones. La prueba de evitación pasiva fue para evaluar la memoria a corto o largo plazo en ratones. Veh, solución de vehículo. * p < 0,05, **p < 0,01, ***p < 0,001 frente al grupo Sc.Ap tratado con Veh.; ### p < 0,001 frente al grupo tratado con Ap25-35; Prueba de Dunnett. Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 14. Efecto de la igmesina (AMY002) en combinación con los agonistas de sigma-1R donepezil (A) o memantina (B) sobre la elevación inducida por Ap25-35 de los niveles de LPO del hipocampo. La igmesina y el donepezilo se inyectaron i.p. 20 min antes de la inyección de Ap25-35. Veh, solución de vehículo. ***p < 0,001 frente al grupo Sc.Ap tratado con Veh; ## p< 0,01, ### p < 0,001 frente al grupo Ap25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett.. Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 15. El efecto protector de la igmesina (AMY002) en combinación con el ibuprofeno (IBU) sobre Ap25-35 indujo déficits de alternancia espontánea en ratones. Se inyectaron igmesina e ibuprofeno IP 24 horas después de la inyección de Ap25-35 hasta el día 6 y se recolectaron cerebros después de la prueba de evitación pasiva el día 9. Veh, solución de vehículo. *** p <0,001 frente al grupo Sc.Ap tratado con Veh; # p <0,05 ### p <0,001 frente al grupo Ap25-35 tratado con Veh; p <0,05 frente al grupo Ap25-35 tratado con IBU 50; ++ p <0,001 frente al grupo Ap25-35 tratado con IBU 25; Prueba de Dunnett ._ Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 16. El efecto protector de la igmesina (AMY002) en combinación con selegilina (SGL) sobre Ap25-35 indujo déficits de alternancia espontánea en ratones. Se inyectaron igmesina e ibuprofeno IP 24 horas después de la inyección de Ap25-35 hasta el día 6 y se recolectaron cerebros después de la prueba de evitación pasiva el día 9. V, solución de vehículo. **p < 0,01, ***p < 0,001 frente al grupo Sc.Ap tratado con Veh; ##p< 0,01 ###p < 0,001 frente al grupo Ap25-35; tratado con Veh.; Prueba de Dunnett.. Todas las dosis expresadas en mg/kg.

Figura 17. Efecto protector de la igmesina (AMY002) en combinación con un medicamento para reducir el colesterol atorvastatina (ATOR) sobre los déficits de alternancia espontánea inducidos por Ap25-35 (AB) en ratones. Se inyectaron igmesina y atorvastatina IP 24 horas después de la inyección de Ap25-35 hasta el día 6 y se recolectaron cerebros después de la prueba de evitación pasiva el día 9. V, solución de vehículo. *** p < 0,001 frente al grupo Sc.Ap tratado con V; ### p < 0,001 frente al grupo Ap25-35; tratado con V; Prueba de Dunnett.

Figura 18. Efecto de la igmesina (AMY002) sobre la supervivencia del cultivo de neuronas dopaminérgicas primarias murinas lesionadas por un compuesto sintético neurotóxico 6-hidroxidopamina o 2,4,5-trihidroxifenetilamina (6-OHDA, 20 mM, 48 h). El número de neuronas vivas se expresó en porcentaje de control no tratado (% de CTRL). (media 6 s.e.m; ** p <0,01 6 OHDA y control; #p <0,05; ## p <0,01 grupo de igmesina o BDNF frente a 6OHDA; ANOVA de una vía seguido de la prueba de Dunnett. El número de neuronas TH positivas (marcadas con un anticuerpo secundario acoplado a Alexa 488) se redujo significativamente mediante la aplicación de 6OHDA.

Figura 19. Efecto de la igmesina (AMY002) sobre la supervivencia de neuronas espinosas medianas primarias (MSN) lesionadas por una alta concentración de glutamato (40 mM, 20 min) expresada en porcentaje de control (% de CTRL). El número de neuronas vivas se expresó en porcentaje de control no tratado (% de CTRL). Los datos se calcularon como media 6 s.e.m. utilizando ANOVA de una vía seguida de la prueba de Dunnett. ***p < 0,001 Glutamato frente a grupo de control. #p < 0,05; ##p < 0,01 igmesina o BDNF frente al grupo de Glutamato. El glutamato indujo una disminución grande y significativa del número de neuronas positivas a DARPP32.

Figura 20. Efecto de la igmesina (AMY002) sobre la supervivencia de las motoneuronas primarias lesionadas por glutamato (40 mM, 20 min) expresado en porcentaje de control (% de CTRL). (media 6 s.e.m; *** p <0,001 glutamato frente al grupo de control; # p <0,05; ## p <0,01; ### p <0,001 igmesina o BDNF frente al grupo de glutamato; ANOVA de una vía seguido de la prueba de Dunnett). El glutamato (40 mM, 20 min) indujo una disminución grande y significativa del número de neuronas motoras ISLOTE 1/2.

Figura 21. Efecto de la igmesina (AMY002, 1 mM y 10 mM) sobre la disociación de la proteína inmunoglobulina de unión (BiP) del receptor sigma-1 y antagonismo del efecto de disociación por NE100 10 mM. * p <0,05, *** p <0,001 frente al grupo de control (Veh); ### p <0,001 frente al grupo de igmesina 10 mM; Prueba de Dunnett.

Descripción de las realizaciones ejemplares

La presente divulgación se basa, en parte, en el hallazgo de que la igmesina tiene un efecto terapéutico pronunciado a dosis bajas (1 mg/kg) en un modelo de roedor agudo de toxicidad por enfermedad de Alzheimer, el modelo de ratón con péptido AP25-35. Sorprendentemente, la igmesina previno el desarrollo de diversas patologías asociadas a la enfermedad de Alzheimer incluso cuando el tratamiento se inició 24 horas después de la exposición al péptido AP25-35. Cuando se administró igmesina después de la exposición, sus efectos fueron claramente neuroprotectores más que preventivos. Este resultado es diferente al descrito para otros ligandos sigma como PRE-084 y ANAVEX 2-73 evaluados en el mismo modelo, pero utilizando tratamiento preventivo y sintomático. Esta particularidad es extremadamente importante cuando se considera el valor de traslación del modelo experimental. La limitación de la eficacia de un tratamiento terapéutico a un tratamiento preventivo tiene un valor muy limitado teniendo en cuenta que los pacientes necesitan medicación cuando se les diagnostica la enfermedad de Alzheimer. Además, los únicos tratamientos disponibles en la actualidad son los tratamientos sintomáticos como Aricept™ o Ebixa™ y se reconoce en gran medida que la limitación de dichos tratamientos es que su beneficio no puede mantenerse a largo plazo. Todos los pacientes con enfermedad de Alzheimer eventualmente superan los efectos de la farmacoterapia a medida que su condición empeora.

El modelo experimental usado en el Ejemplo 1 reproduce una posible causa de la enfermedad de Alzheimer, que es una producción excesiva de oligómeros Ap en el cerebro. De hecho, el péptido AP25-35 es uno de los más tóxicos que se han encontrado en el cerebro de pacientes con demencia después de la autopsia. Estos resultados indican que la igmesina puede mostrar eficacia incluso cuando estos péptidos tóxicos ya se han inyectado en el cerebro en grandes cantidades. Así, este experimento imita en un protocolo agudo la exposición crónica a tales péptidos tóxicos en humanos durante los 15 o 20 años antes de que Aparezcan los signos de demencia. Con estas propiedades, la igmesina está totalmente indicada para su uso como modificador de la enfermedad, por ejemplo, en pacientes que han sido diagnosticados en las primeras etapas de la enfermedad de Alzheimer, o aquellos con alto riesgo de desarrollar la enfermedad de Alzheimer, con el fin de reducir o incluso detener la progresión de la patología. Además, mostramos aquí que la igmesina mejoró sinérgicamente la actividad terapéutica de un inhibidor de la colinesterasa, donepezil. Esta actividad sinérgica se observó con dosis muy bajas de igmesina (0,1 mg/kg) combinadas con una dosis baja de donepezilo, en un rango aproximadamente 4 veces menor que su dosis terapéuticamente eficaz típica para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. La eficacia de la igmesina en dosis bajas, tanto sola como en combinación con inhibidores de la colinesterasa, es inesperada en base a trabajos previos con igmesina tanto en modelos animales como en humanos. La posibilidad de limitar tanto como sea posible la exposición a ambos fármacos para obtener la máxima eficacia es un hallazgo extremadamente valioso. Las dosis sinérgicas son mucho más bajas que las dosis ya conocidas para una seguridad aceptable en humanos. Dado que la combinación está destinada a ser utilizada en personas que necesitan un tratamiento para un tratamiento a muy largo plazo desde el diagnóstico temprano y durante el resto de su vida, la seguridad del medicamento debe considerarse como una prioridad más que en cualquier otra indicación.

La presente divulgación proporciona que la igmesina tiene potentes efectos neuroprotectores en el modelo de ratón Ap25-35 de la enfermedad de Alzheimer, como lo demuestra su capacidad para prevenir o reducir sustancialmente la neurotoxicidad inducida por AP25-35 en este sistema modelo. Por lo tanto, como se analiza con más detalle más adelante, la igmesina fue eficaz para prevenir los déficits de aprendizaje y memoria característicos de la neurotoxicidad inducida por Ap25-35. La igmesina también fue capaz de reducir o mejorar varios indicadores celulares y bioquímicos clave de neurotoxicidad en este sistema modelo. Por consiguiente, la divulgación proporciona métodos para reducir, retrasar el inicio o mejorar una o más características patofisiológicas de la enfermedad de Alzheimer, tales como apoptosis de células neuronales, neuroinflamación, carga de beta-amiloide e hiperfosforilación de la proteína tau.

La presente invención también se basa, en parte, en el hallazgo de que la igmesina es capaz de prevenir la aparición de déficits de aprendizaje y memoria provocados por la neurotoxicidad inducida por AP25-35 y que están asociados tanto con la memoria de trabajo espacial como con la memoria contextual a largo plazo. En consecuencia, la divulgación proporciona métodos para reducir, retrasar la aparición o mejorar al menos un síntoma clínico de la enfermedad de Alzheimer, como un déficit de aprendizaje o memoria asociado con uno o más de la memoria de trabajo, la memoria a corto plazo, la memoria a largo plazo, memoria reforzada positivamente, memoria espacial y contextual, o cualquier combinación de las anteriores.

La presente invención también se basa, en parte, en el hallazgo de que los efectos neuroprotectores de la igmesina se manifestaron en un intervalo de dosificación del orden de 10 a 100 veces menor que el intervalo de dosis eficaz observado previamente en seres humanos, por ejemplo, en relación con sus efectos antidepresivos, y en roedores, por ejemplo, en relación con sus efectos neuroprotectores en modelos de isquemia cerebral global. Por consiguiente, la divulgación proporciona métodos y composiciones relacionadas para tratar una enfermedad o trastorno neurológico usando una dosis eficaz de igmesina que es de 10 a 100 veces menor que las dosis utilizadas previamente, por ejemplo, en estudios clínicos de fase I de igmesina.

Además, la presente invención se basa, en parte, en el hallazgo de que la igmesina actúa de forma sinérgica con otros agentes terapéuticos para prevenir o reducir sustancialmente la neurotoxicidad inducida por AP²⁵-³⁵. Por consiguiente, la divulgación proporciona métodos y composiciones relacionadas para tratar la enfermedad de Alzheimer usando igmesina en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales. En realizaciones, la enfermedad de Alzheimer es una enfermedad de aparición temprana. En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales se selecciona del grupo que consiste en un inhibidor de la colinesterasa, un inhibidor de la MAO, un agente antiinflamatorio, un agente reductor de la toxicidad de Ap, un agente de reemplazo hormonal, un agente reductor de lípidos, un agente modulador de secretasa, un inhibidor de la agregación de Ap, un inhibidor neurofibrilar, un inhibidor del catabolismo p-amiloide y combinaciones de los mismos.

En realizaciones adicionales para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el uno o más agentes terapéuticos adicionales se selecciona de un inhibidor de colinesterasa, un agente antiinflamatorio, un agente reductor de lípidos y un inhibidor de MAO. En realizaciones, el inhibidor de la colinesterasa es donepezilo. En realizaciones, la cantidad de donepezil en la composición es de 1 a 6 mg. En realizaciones, el agente antiinflamatorio es un agente antiinflamatorio esteroideo o no esteroideo. En una realización, el agente antiinflamatorio es ibuprofeno o aspirina.

En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un agente reductor de lípidos. En realizaciones, el agente reductor de lípidos es una estatina. En realizaciones, la estatina se selecciona del grupo que consiste en atorvastatina, risuvostatina, simvastatina, pravastatina y sus sales o profármacos farmacéuticamente aceptables. En una realización, la estatina es simvastatina o atorvastatina.

En realizaciones, el uno o más agentes terapéuticos adicionales es un inhibidor de MAO. En realizaciones, el inhibidor de MAO se selecciona de rasagilina, selegilina y tranilcipromina. En realizaciones, el inhibidor de MAO es un inhibidor de MAO-B. En realizaciones, el inhibidor de MAO-B es la selegilina.

La presente invención también se basa, en parte, en la capacidad de la igmesina para reducir o prevenir la apoptosis de las células neuronales y, además, en la capacidad de la igmesina para promover la actividad acompañante de los receptores sigma-1 y atenuar así la acumulación de proteínas mal plegadas que subyacen a la patología de la enfermedad. Por consiguiente, la presente divulgación proporciona composiciones y métodos para tratar una enfermedad o trastorno neurodegenerativo usando igmesina, ya sea sola como monoterapia o en combinación con uno o más agentes terapéuticos o regímenes terapéuticos adicionales, como se describe en este documento. En realizaciones, la enfermedad o trastorno neurodegenerativo puede seleccionarse de la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis laterial amiotrófica (ELA), la enfermedad de Huntington, la esclerosis múltiple, la enfermedad de Parkinson y la degeneración frontotemporal. En realizaciones, la enfermedad o trastorno neurodegenerativo es la enfermedad de Alzheimer. En realizaciones, la enfermedad de Alzheimer es una enfermedad de aparición temprana.

En realizaciones de los métodos terapéuticos descritos en este documento, la igmesina se administra a una dosis terapéuticamente efectiva de desde 1 a 100 mg, de 1 a 50 mg, de 1 a 20 mg, de 1 a 10 mg, o de 1 a 5 mg por día en un sujeto humano adulto que tiene un peso de aproximadamente 70 kg. Preferiblemente, la vía de administración para la dosificación es oral y, lo más preferiblemente, la forma de dosificación está adaptada para la administración una vez al día de la dosis eficaz.

Como se analiza con más detalle más adelante, la divulgación también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden igmesina y uno o más agentes terapéuticos adicionales, en presencia de uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. En realizaciones, la igmesina está presente en la misma forma de dosificación que uno o más agentes terapéuticos adicionales. En realizaciones, la igmesina está presente en una forma de dosificación diferente a la del uno o más agentes terapéuticos adicionales. La divulgación también proporciona una forma de dosificación unitaria que contiene igmesina, ya sea sola o en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales. En realizaciones, la dosis unitaria contiene de 1 a 100 mg, de 1 a 50 mg, de 1 a 20 mg, de 1 a 10 mg, de 1 a 5 mg o de 3 a 10 mg de igmesina, preferiblemente clorhidrato de igmesina.

Como se usa a lo largo de la presente divulgación, el término "igmesina" puede referirse a la propia igmesina (base libre), o puede abarcar sales, solvatos, clatratos, hidratos, polimorfos, profármacos, análogos o derivados de igmesina farmacéuticamente aceptables, como se describe a continuación. En cualquiera de las realizaciones de los métodos y composiciones aquí descritos, una realización preferida de igmesina es clorhidrato de igmesina. La igmesina contiene un átomo de carbono asimétrico tetrasustituido adyacente a la función amina, lo que da como resultado la existencia de formas racémicas, levorrotatorias y dextrorrotatorias. A menos que se indique lo contrario, el término "igmesina" se refiere al enantiómero dextrorrotatorio (+) identificado como JO-1784 o AMY002.

La estructura de la base libre de igmesina se muestra a continuación:

El nombre IUPAC de igmesina es: (+)-(E)-N-(ciclopropilmetil)-N-metil-3,6-difenilhex-5-en-3-amina y el número CAS es 140850-73-3 (que es la base libre del (+) enantiómero).

La igmesina está disponible comercialmente y se puede preparar, por ejemplo, de acuerdo con los métodos descritos en la patente de EE.UU. número 5.034.419, que también describe las sales, solvatos, clatratos, hidratos, polimorfos, profármacos, análogos y derivados de igmesina farmacéuticamente aceptables.

Como se usa en este documento, el término "sal farmacéuticamente aceptable" es una sal formada, por ejemplo, por adición de ácido con la función amina de la igmesina. Los ejemplos no limitantes de ácidos que pueden usarse para preparar tales sales de adición incluyen acético, bencensulfónico, canfosulfónico, cítrico, etanosulfónico, fumárico, bromhídrico, clorhídrico, láctico, maleico, málico, metanosulfónico, mucico, nítrico, pamoico, fosfórico, salicílico, ácidos esteárico, succínico, sulfúrico y tartárico.

Las sales de igmesina se pueden sintetizar a partir del compuesto original mediante métodos químicos convencionales, como los métodos descritos en Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Hemrich Stalil (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Agosto 2002. Generalmente, tales sales se pueden preparar haciendo reaccionar el compuesto original con el ácido apropiado en agua o en un disolvente orgánico, o en una mezcla de los dos.

Una forma de sal de un compuesto descrito en este documento se puede convertir en la base libre y, opcionalmente, en otra forma de sal mediante métodos bien conocidos por los expertos. Por ejemplo, la base libre se puede formar pasando la solución salina a través de una columna que contiene una fase estacionaria de amina (por ejemplo, una columna Strata-NH2). Alternativamente, se puede tratar una solución de la sal en agua con bicarbonato de sodio para descomponer la sal y precipitar la base libre. A continuación, la base libre se puede combinar con otro ácido utilizando métodos de rutina.

El término "polimorfo" se refiere a formas sólidas cristalinas de un compuesto (por ejemplo, igmesina) o un complejo del mismo. Diferentes polimorfos del mismo compuesto pueden exhibir diferentes propiedades físicas, químicas y/o espectroscópicas. Las diferentes propiedades físicas incluyen, entre otras, la estabilidad (por ejemplo, al calor o la luz), la compresibilidad y la densidad (importante en la formulación y la fabricación del producto) y las tasas de disolución (que pueden afectar la biodisponibilidad). Las diferencias en la estabilidad pueden resultar de cambios en la reactividad química (por ejemplo, oxidación diferencial, de modo que una forma de dosificación se decolora más rápidamente cuando está compuesta por un polimorfo que cuando está compuesta por otro polimorfo) o características mecánicas (por ejemplo, las tabletas se desmoronan durante el almacenamiento como un factor cinéticamente favorecido polimorfo se convierte en un polimorfo termodinámicamente más estable) o ambos (por ejemplo, las tabletas de un polimorfo son más susceptibles de descomponerse a alta humedad). Las diferentes propiedades físicas de los polimorfos pueden afectar su procesamiento. Por ejemplo, es más probable que un polimorfo forme solvatos o podría ser más difícil de filtrar o lavar libre de impurezas que otro debido, por ejemplo, a la forma o distribución de tamaño de las partículas del mismo.

El término "hidrato" se refiere a un compuesto (por ejemplo, igmesina) o una sal del mismo, que además incluye una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de agua unida por fuerzas intermoleculares no covalentes.

El término "clatrato" se refiere a un compuesto (por ejemplo, igmesina) o una sal del mismo en forma de una red cristalina que contiene espacios (por ejemplo, canales) que tienen una molécula huésped (por ejemplo, un disolvente o agua) atrapada en su interior.

El término "profármaco" se refiere a un derivado de un compuesto descrito en este documento (por ejemplo, igmesina) que puede hidrolizarse, oxidarse o reaccionar de otro modo en condiciones biológicas (in vitro o in vivo) para proporcionar un compuesto de la invención. Los profármacos solo pueden volverse activos tras dicha reacción en condiciones biológicas, o pueden tener actividad en sus formas sin reaccionar. Los ejemplos de profármacos contemplados en esta invención incluyen, pero no se limitan a, análogos o derivados de un compuesto descrito en este documento (por ejemplo, igmesina) que comprenden restos biohidrolizables tales como amidas biohidrolizables, ésteres biohidrolizables, carbamatos biohidrolizables, carbonatos biohidrolizables, ureidos biohidrolizables y análogos de fosfato biohidrolizables. Otros ejemplos de profármacos incluyen derivados de compuestos de cualquiera de las fórmulas descritas en el presente documento que comprenden restos -NO, -NO2, -ONO o -ONO2. Los profármacos se pueden preparar típicamente usando métodos bien conocidos, tales como los descritos por Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5a ed.).

El término "solvato" o "solvato farmacéuticamente aceptable" se refiere a un solvato formado a partir de la asociación de una o más moléculas de disolvente a uno de los compuestos descritos en este documento (por ejemplo, igmesina). El término solvato incluye hidratos (por ejemplo, hemihidrato, monohidrato, dihidrato, trihidrato, tetrahidrato y similares).

El término "análogo" se refiere a un compuesto químico que es estructuralmente similar a otro, pero difiere ligeramente en composición (como en el reemplazo de un átomo por un átomo de un elemento diferente o en presencia de un grupo funcional particular, o el reemplazo de un grupo funcional por otro grupo funcional). Por lo tanto, un análogo es un compuesto que es similar o comparable en función y apariencia, pero no en estructura u origen al compuesto de referencia. Como se usa en este documento, el término "derivado" se refiere a compuestos que tienen una estructura central común y están sustituidos con varios grupos como se describe en este documento.

Métodos de tratamiento

La presente divulgación proporciona métodos para el tratamiento de una enfermedad o trastorno neurológico en un sujeto que lo necesita administrando al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende igmesina, o una sal, solvato, clatrato, hidrato, polimorfo, profármaco, análogo farmacéuticamente aceptable de la misma. En una realización, la composición comprende clorhidrato de igmesina. La presente invención proporciona además el uso de igmesina para la preparación de un medicamento útil para el tratamiento de una enfermedad o trastorno neurológico, como se describe en este documento.

En el contexto de los métodos descritos en este documento, la cantidad de igmesina administrada al sujeto es una cantidad terapéuticamente eficaz. El término "cantidad terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad suficiente para tratar, mejorar un síntoma, reducir la gravedad, retrasar la aparición de uno o más síntomas clínicos de la enfermedad o trastorno neurológico en el sujeto que está siendo tratado, o mejorar o potenciar el efecto terapéutico de otra terapia, o aliviar o retrasar la aparición de una o más características fisiopatológicas de la enfermedad o trastorno. En realizaciones, la cantidad terapéuticamente eficaz de igmesina es de 1 a 100 mg, de 1 a 50 mg, de 1 a 20 mg, de 1 a 10 mg, o de 1 a 5 mg por día en un ser humano adulto que pesa 70 kg. La vía de administración preferida es la oral.

De acuerdo con los métodos descritos en este documento, un "sujeto que lo necesita" es un sujeto que ha sido diagnosticado con una enfermedad o trastorno neurológico. En realizaciones, la enfermedad o trastorno neurológico se selecciona de enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Alzheimer de inicio temprano, esclerosis lateral amiotrófica, esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington y degeneración frontotemporal.

Terapia de combinación

La presente divulgación también proporciona métodos que comprenden una terapia de combinación. Como se usa en el presente documento, "terapia de combinación" o "co-terapia" incluye la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de igmesina con al menos un agente activo adicional, como parte de un régimen de tratamiento específico destinado a proporcionar un efecto beneficioso de la co-acción de la igmesina y el agente activo adicional. La "terapia de combinación" no pretende abarcar la administración de dos o más compuestos terapéuticos como parte de regímenes de monoterapia separados que, de forma casual y arbitraria, dan como resultado un efecto beneficioso que no se pretendía ni se predijo.

El al menos un agente activo adicional puede ser un agente terapéutico o un agente no terapéutico y combinaciones de los mismos. Los términos "agente terapéutico" e "ingrediente farmacéutico activo ("API") se usan indistintamente en este documento. Con respecto a los agentes terapéuticos, el efecto beneficioso de la combinación incluye, pero no se limita a, la coacción farmacocinética o farmacodinámica resultante de la combinación de compuestos terapéuticamente activos. Con respecto a los agentes no terapéuticos, el efecto beneficioso de la combinación puede relacionarse con la mitigación de una toxicidad, efecto secundario o evento adverso asociado con un agente terapéutico en la combinación.

En realizaciones, el al menos un agente adicional es un agente no terapéutico que mitiga uno o más efectos secundarios de la igmesina o un segundo API incluidos en la composición. El uno o más efectos secundarios pueden seleccionarse entre náuseas, vómitos, dolor de cabeza, mareos, aturdimiento, somnolencia y estrés.

En realizaciones, el agente terapéutico o API es un inhibidor de colinesterasa, un agente antiinflamatorio, un inhibidor de MAO, un antagonista del receptor de NMDA, un agente reductor de la toxicidad de Ap, un agente de reemplazo hormonal, un agente reductor de lípidos, un agente modulador de secretasa, un inhibidor de la agregación de Ap, un inhibidor neurofibrilar o un inhibidor del catabolismo p-amiloide. En realizaciones, el agente terapéutico o API es un inhibidor de colinesterasa, un agente antiinflamatorio, un inhibidor de MAO o un agente reductor de lípidos.

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas aquí relacionadas con el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el inhibidor de colinesterasa puede seleccionarse del grupo que consiste en fisostigmina, neostigmina, piridostigmina, ambenonio, demecario, rivastigmina, galantamina, donepezilo, tacrina (tetrahidroaminoacridina), edrofonio, huperzina A, ladostigil, ungeremina y lactucopicrin. En realizaciones, el inhibidor de la colinesterasa es donepezilo.

En realizaciones, el inhibidor de colinesterasa se selecciona del grupo que consiste en tacrina, amiridina, donepezil y sus derivados TAK-147 y CP-118'954, minaprina, rivastigmina, galantamina, huperzina, huprina, bis-tetrahidroaminoacridina (bis-THA ) y sus derivados tales como bis (7)-tacrina, imidazoles, 1,2,4-tiadiazolidinona, derivados de benzazepina, 4,4-bipiridina indenoquinolinilamina, decametonio, edrofonio, BW284C51, fisostigmina, eptastigmina, metrifonato, propidio, fasciculinas, organofosforados, carbamatos, imino 1, 2, 3, 4-tetrahidrociclopent[b]indol carbamatos (híbridos del inhibidor de la AChE fisostigmina y el inhibidor de la MAO selegilina y tranilcipromina), derivados de N-pirimidina 4-acetilanilina, derivados de 7-ariloxicumarina, propargiaminocarbamatos como N-propargilaminoindanos y N-propargilfenetilaminas, vitamina E, inhibidores de la n Os , precursores como colina y pirrolidinecolina, y agonistas del receptor colinérgico particularmente a7 y muscarínico).

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas aquí relacionadas con el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el agente antiinflamatorio puede ser un agente antiinflamatorio esteroideo o no esteroideo. En realizaciones, el agente antiinflamatorio se selecciona del grupo que consiste en adrenocorticoides, corticosteroides (por ejemplo, beclometasona, budesonida, flunisolida, fluticasona, triamcinolona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, hidrocortisona), glucocorticoides y esteroides. En realizaciones, el agente antiinflamatorio no esteroideo se selecciona del grupo que consiste en aspirina, ibuprofeno, diclofenaco e inhibidores de COX-2. En realizaciones, el agente antiinflamatorio se selecciona de antagonistas de leucotreína (por ejemplo, montelukast, metilxantinas, zafirlukast y zileuton), agonistas beta2 (por ejemplo, albuterol, biterol, fenoterol, isoetarina, metaproterenol, pirbuterol, salbutamol, terbutalina formoterol, salmeterol y salbutamol terbutalina), agentes anticolinérgicos (por ejemplo, bromuro de ipratropio y bromuro de oxitropio), sulfasalazina, penicilamina, dapsona, antihistamínicos, agentes antipalúdicos (por ejemplo, hidroxicloroquina), agentes antivirales y antibióticos (por ejemplo, dalicinomicina actinomicina), bleomicina, eritomicina, penicilina, mitramicina y antramicina (AMC).

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas aquí relacionadas con el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el inhibidor de MAO puede seleccionarse de rasagilina, selegilina y tranilcipromina. En realizaciones, el inhibidor de MAO es un inhibidor de MAO-B. En realizaciones, el inhibidor de MAO-B es la selegilina.

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas aquí relacionadas con el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el agente de reemplazo hormonal puede seleccionarse entre prefest, premarin, vivelle, estrasorb, enjuvia, delestrogen, climara y alora.

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas aquí relacionadas con el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el agente reductor de la toxicidad Ap puede seleccionarse de un fármaco antiinflamatorio no esteroideo, un inhibidor de la proteína quinasa asociada a la muerte (DAPK) (por ejemplo, derivados de 3-amino piridazina), un inhibidor de ciclooxigenasas (COX-1 y -2), un antioxidante (por ejemplo, vitaminas C y E), un modulador de NMDA (por ejemplo, memantina) y un inhibidor de MAO (por ejemplo, rasagilina, selegilina y tranilcipromina). En realizaciones, el agente es un fármaco antiinflamatorio no esteroideo seleccionado entre ibuprofeno, indometacina y sulfuro de sulindaco.

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas aquí relacionadas con el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el agente hipolipemiante puede seleccionarse entre inhibidores de la 3-hidroxi-3-metiglutaril coenzima A (HMG-CoA) reductasa y estatinas. En realizaciones, el agente se selecciona de metil-p-ciclodextrina, 7-deshidrocolesterol reductasas (por ejemplo, BM15.766), inhibidores de acil coenzima A: colesterol aciltransferasa (ACAT), inhibidores de P13K como wortmanina, lovastatina, pravastatina, atorvastatina, simvastatina, fluvastatina, cerivastatina, rosuvastatina, compactina, mevilonina, mevastatina, visastatina, velostatina, sinvinolina, rivastatina, itavastatina y pitavastatina.

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas aquí relacionadas con el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el inhibidor de secretasa puede seleccionarse entre inhibidores de p- e y-secretasa. En realizaciones, el inhibidor de secretasa se selecciona del grupo que consiste en tripéptido aldehído 1, SIB -1281, OM99-2, Stat-Val, tetralinas sustituidas con alcoxi, compuestos basados en difluorocetona, SIB-1405, péptido urea hidroxi sustituido, derivados de alanina-fenilglicina, caprolactamas, benzodiazepinas y hexanamidas, sulfonamida de enquilamina, sulfonamida bicíclica e isocumarina, sulfonamida, diaril acetileno, imidazopiridina y estructuras aromáticas polioxigenadas, activadores de proteína quinasa C, glutamato, carbacol, agonistas muscarínicos, AIT-082 (Neotrophin™), agentes neurotróficos, compuestos que contienen cobre (II) y agentes que reducen el colesterol.

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas aquí en relación con el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, los inhibidores de la agregación de Ap pueden seleccionarse entre inhibidores de peptidilo (por ejemplo, inhibidores de pentapéptidos), análogos de los colorantes de unión a amiloide rojo Congo y tioflavina T, análogos del agente anticanceroso doxorrubicina (por ejemplo, antraciclina -4'-desoxi-4'- yododoxcorubicina (IDOX)), anticuerpos como rifampicina o análogos de la misma y clioquinol, benzofuranos (por ejemplo, SKF-74652), inhibidores de la proteína amiloide sérica (SAP) como captopril (por ejemplo, CPHPC) y quelación de metales mediante la adición de Cu2+, ZN2+ o Fe3+.

De acuerdo con cualquiera de las realizaciones descritas aquí relacionadas con el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, el inhibidor neurofibrilar puede seleccionarse entre inhibidores de GSK3p tales como inhibidores de LICI, GSK3p y cdk5 tales como indirrubinas y paulonas e inhibidores de calpaína.

En realizaciones, se administra una composición que comprende igmesina junto con al menos un agente activo adicional en una forma de dosificación única o en formas de dosificación separadas. En una realización, la forma de dosificación es una forma de dosificación oral. En otra realización, la forma de dosificación es adecuada para administración intravenosa.

En el contexto de la terapia de combinación, la administración de la igmesina puede ser simultánea o secuencial a la administración de uno o más agentes activos adicionales. En otra forma de realización, la administración de los diferentes componentes de una terapia de combinación puede realizarse a diferentes frecuencias. El uno o más agentes activos adicionales se pueden formular para la coadministración con igmesina en una única forma de dosificación, como se describe con mayor detalle en este documento. El uno o más agentes activos adicionales se pueden administrar por separado de la forma de dosificación que comprende el compuesto de la presente invención. Cuando el agente activo adicional se administra por separado de la composición de igmesina, puede ser por la misma vía de administración o por una diferente que la composición de igmesina.

Preferiblemente, la administración de igmesina en combinación con uno o más agentes adicionales proporciona una respuesta sinérgica en el sujeto que está siendo tratado. En este contexto, el término "sinérgico" se refiere a que la eficacia de la combinación es más eficaz que los efectos aditivos de cualquiera de las terapias individuales por sí solas. El efecto sinérgico de una terapia de combinación según la invención puede permitir el uso de dosis más bajas y/o la administración menos frecuente de al menos un agente en la combinación en comparación con su dosis y/o frecuencia fuera de la combinación. Los efectos beneficiosos adicionales de la combinación pueden manifestarse evitando o reduciendo los efectos secundarios adversos o no deseados asociados con el uso de cualquiera de las terapias en la combinación sola (también denominada monoterapia).

La "terapia de combinación" también abarca la administración de los compuestos de la presente invención en combinación adicional con terapias no farmacológicas (por ejemplo, cirugía o tratamiento con radiación). Cuando la terapia de combinación comprende además un tratamiento no farmacológico, el tratamiento no farmacológico puede realizarse en cualquier momento adecuado siempre que se logre un efecto beneficioso de la coacción de la combinación de los compuestos terapéuticos y el tratamiento no farmacológico. Por ejemplo, en casos apropiados, el efecto beneficioso aún se logra cuando el tratamiento no farmacológico se retira temporalmente de la administración de los compuestos terapéuticos, quizás en días o incluso semanas.

De acuerdo con cualquiera de los métodos descritos en este documento, una cantidad terapéuticamente eficaz de igmesina, por ejemplo, clorhidrato de igmesina, puede variar de 1 a 20 mg para un ser humano adulto, administrada una vez al día. En realizaciones, la cantidad terapéuticamente eficaz de igmesina es de 1 a 20 mg, de 1 a 15 mg, de 1 a 10 mg, de 1 a 5 mg, de 1 a 3 mg o de 1 a 2 mg.

En realizaciones en las que la igmesina se combina con un inhibidor de colinesterasa, generalmente es eficaz un intervalo de dosis más bajo de igmesina. Por ejemplo, la cantidad terapéuticamente eficaz de igmesina en combinación con donepezil puede ser de 1 a 10 mg, de 1 a 8 mg, de 1 a 6 mg, de 1 a 5 mg, de 1 a 4 mg, de 1 a 3 mg, o de 1 a 2 mg, por día. Las dosis efectivas también variarán, como reconocen los expertos en la técnica, dependiendo de las enfermedades tratadas, la vía de administración, el uso de excipientes y la posibilidad de uso conjunto con otros tratamientos terapéuticos tales como el uso de otros agentes.

Preferiblemente, se administra una cantidad terapéuticamente eficaz de igmesina una o dos veces al día. La vía de administración preferida es la oral, pero se contemplan otras vías y el experto en la materia puede calcular fácilmente la dosis apropiada para otras vías basándose en la guía de este documento utilizando métodos estándar.

Un "sujeto", como se usa en el contexto de los métodos descritos en este documento, es preferiblemente un sujeto humano, pero también puede incluir otros mamíferos. El mamífero puede ser, por ejemplo, cualquier mamífero, por ejemplo, un ser humano, primate, vertebrado, pájaro, ratón, rata, ave, perro, gato, vaca, caballo, cabra, camello, oveja o cerdo. El término "paciente" se refiere a un sujeto humano.

La presente invención también proporciona una monoterapia para el tratamiento de una enfermedad o trastorno neurológico como se describe en este documento. Como se usa en este documento, "monoterapia" se refiere a la administración de un único agente activo (también denominado agente terapéutico), por ejemplo, igmesina, y en realizaciones, clorhidrato de igmesina, a un sujeto que lo necesite.

Como se usa en este documento, "tratamiento", "tratando" o "tratar" describe el manejo y cuidado de un paciente con el propósito de combatir la enfermedad o trastorno e incluye aliviar uno o más síntomas o complicaciones de la enfermedad o trastorno.

En las realizaciones, la administración de una composición como se describe en este documento conduce a la eliminación de un síntoma o complicación de la enfermedad o trastorno que se está tratando, sin embargo, no se requiere la eliminación. En una realización, la gravedad del síntoma disminuye o su aparición se retrasa, o ambas cosas.

Composiciones y formulaciones farmacéuticas

La presente invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden igmesina, o una sal, solvato, clatrato, hidrato, polimorfo, profármaco, análogo o derivado de la misma farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas son adecuadas para su uso en un mamífero, preferiblemente un ser humano. En este contexto, las composiciones pueden comprender además al menos un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable. En las realizaciones, las composiciones comprenden una cantidad eficaz de igmesina, en donde la cantidad es eficaz para el tratamiento de una enfermedad o trastorno neurológico. La cantidad eficaz de igmesina por dosis unitaria para una composición oral destinada a un sujeto humano adulto es generalmente menos de 20 mg o menos de 10 mg, y generalmente en el intervalo de aproximadamente 1 a 20 mg, preferiblemente 1 a 10 mg. Como se describió anteriormente, cuando la composición comprende igmesina y un API adicional, como un inhibidor de colinesterasa, la cantidad de igmesina en la composición puede estar en el extremo inferior de su intervalo de dosis eficaz, por ejemplo, de 1 a 10 mg, preferiblemente de 1 a 5 mg, o menos de 5 mg.

En realizaciones, la composición de igmesina comprende clorhidrato de igmesina.

En realizaciones, la composición de igmesina se combina con al menos un API en una única forma de dosificación. En realizaciones, el al menos un API adicional se selecciona del grupo que consiste en un inhibidor de la colinesterasa, un agente reductor de la toxicidad de Ap, un agente de reemplazo hormonal, un agente reductor de lípidos, un agente modulador de secretasa, un inhibidor de la agregación de Ap, un inhibidor neurofibrilar y un inhibidor del catabolismo pamiloide. En realizaciones, uno o más agentes terapéuticos adicionales es un inhibidor de colinesterasa.

En realizaciones, el inhibidor de colinesterasa se puede seleccionar del grupo que consiste en fisostigmina, neostigmina, piridostigmina, ambenonio, demecario, rivastigmina, galantamina, donepezilo, tacrina (tetrahidroaminoacridina), edrofonio, huperzina A, ladostigil, ungeremina y lactucopicrin. En realizaciones, el inhibidor de la colinesterasa es donepezilo.

En realizaciones, el agente de reemplazo hormonal puede ser un estrógeno o un compuesto estrogénico. En las realizaciones, el agente de reemplazo hormonal puede seleccionarse del agente de reemplazo hormonal que puede seleccionarse entre prefest, premarin, vivelle, estrasorb, enjuvia, delestrogen, climara y alora.

En realizaciones, el agente reductor de la toxicidad Ap puede seleccionarse de un fármaco antiinflamatorio no esteroideo, un inhibidor de la proteína quinasa asociada a la muerte (DAPK) (por ejemplo, derivados de 3-amino piridazina), un inhibidor de ciclooxigenasas (COX-1 y -2), un antioxidante (por ejemplo, vitaminas C y E), un modulador de NMDA (por ejemplo, memantina) y un inhibidor de MAO (por ejemplo, rasagilina, selegilina y tranilcipromina). En realizaciones, el agente es un fármaco antiinflamatorio no esteroideo seleccionado entre ibuprofeno, indometacina y sulfuro de sulindaco.

En realizaciones, el agente reductor de lípidos puede seleccionarse entre inhibidores de la 3-hidroxi-3-metiglutaril coenzima A (HMG-CoA) reductasa y estatinas. En realizaciones, el agente se selecciona de metil-p-ciclodextrina, 7-deshidrocolesterol reductasas (por ejemplo, BM15.766), inhibidores de acil coenzima A: colesterol aciltransferasa (ACAT), inhibidores de P13K como wortmanina, lovastatina, pravastatina, atorvastatina, simvastatina, fluvastatina, cerivastatina, rosuvastatina, compactina, mevilonina, mevastatina, visastatina, velostatina, sinvinolina, rivastatina, itavastatina y pitavastatina.

En realizaciones, el inhibidor de secretasa puede seleccionarse de inhibidores de p- e y-secretasa. En realizaciones, el inhibidor de secretasa se selecciona del grupo que consiste en tripéptido aldehído 1, SIB-1281, OM99-2, Stat-Val, tetralinas sustituidas con alcoxi, compuestos basados en difluorocetona, SIB-1405, péptido urea hidroxi sustituido, derivados de alaninafenilglicina, caprolactamas, benzodiazepinas y hexanamidas, sulfonamida de enquilamina, sulfonamida bicíclica e isocumarina, sulfonamida, diaril acetileno, imidazopiridina y estructuras aromáticas polioxigenadas, activadores de proteína quinasa C, glutamato, carbacol, agonistas muscarínicos, AIT-082 (compuestos Neotrophin™), agentes neurotróficos, compuestos que contienen cobre (II) y agentes que reducen el colesterol.

En realizaciones, los inhibidores de la agregación de Ap pueden seleccionarse entre inhibidores de peptidilo (por ejemplo, inhibidores de pentapéptidos), análogos de los colorantes de unión a amiloide rojo Congo y tioflavina T, análogos del agente anticanceroso doxorrubicina (por ejemplo, antraciclina -4'-desoxi-4'- yododoxcorubicina (IDOX)), anticuerpos como rifampicina o análogos de la misma y clioquinol, benzofuranos (por ejemplo, SKF-74652), inhibidores de la proteína amiloide sérica (SAP) como captopril (por ejemplo, CPHPC) y quelación de metales mediante la adición de Cu2+, ZN2+ o Fe3+.

En realizaciones, el inhibidor neurofibrilar puede seleccionarse de inhibidores de GSK3p tales como inhibidores de LICI, GSK3p y cdk5 tales como indirrubinas y paulonas, e inhibidores de calpaína.

En realizaciones, el al menos un agente activo adicional es un agente no terapéutico seleccionado para mejorar uno o más efectos secundarios de la igmesina o el API adicional.

Una "composición farmacéutica" es una formulación que contiene los compuestos descritos en este documento en una forma farmacéuticamente aceptable adecuada para la administración a un sujeto, preferiblemente un sujeto humano. Como se usa en este documento, la frase "farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellos compuestos, materiales, composiciones, portadores y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del buen juicio médico, son adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad excesiva, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, acorde con una proporción beneficio/riesgo.

"Excipiente farmacéuticamente aceptable" significa un excipiente que es útil para preparar una composición farmacéutica que es generalmente segura, no tóxica y ni biológica ni de otra manera indeseable, e incluye un excipiente que es aceptable para uso veterinario, así como para uso farmacéutico humano. Los ejemplos de excipientes farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, líquidos estériles, agua, solución salina amortiguada, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido y similares), aceites, detergentes, agentes de suspensión, carbohidratos (por ejemplo, glucosa, lactosa, sacarosa o dextrano), antioxidantes (por ejemplo, ácido ascórbico o glutatión), agentes quelantes, proteínas de bajo peso molecular o mezclas adecuadas de los mismos.

Se puede proporcionar una composición farmacéutica a granel o en forma de unidad de dosificación. Es especialmente ventajoso formular composiciones farmacéuticas en forma de unidad de dosificación para facilitar la administración y la uniformidad de la dosificación. El término "forma de dosificación unitaria” como se usa en este documento incluye unidades físicamente discretas adecuadas como dosificaciones unitarias para el sujeto a tratar; cada unidad contiene una cantidad predeterminada de compuesto activo calculada para producir el efecto terapéutico deseado en asociación con el portador farmacéutico requerido. Las especificaciones para las formas de dosificación unitaria de la invención están dictadas y dependen directamente de las características únicas del compuesto activo y del efecto terapéutico particular que se desea lograr. Una forma de dosificación unitaria puede ser una ampolla, un vial, un supositorio, una gragea, una tableta, una cápsula, una bolsa intravenosa o una sola bomba en un inhalador de aerosol.

En Aplicaciones terapéuticas, las dosis varían dependiendo del agente, la edad, el peso y el estado clínico del paciente receptor, y la experiencia y el criterio del médico o médico que administra la terapia, entre otros factores que afectan la dosis seleccionada. Generalmente, la dosis debe ser una cantidad terapéuticamente eficaz. Las dosis se pueden proporcionar en unidades de medida mg/kg/día (la dosis se puede ajustar al peso del paciente en kg, la superficie corporal en m2 y la edad en años). Una cantidad eficaz de una composición farmacéutica es aquella que proporciona una mejora objetivamente identificable según lo observado por el médico u otro observador calificado. Por ejemplo, aliviar un síntoma de un trastorno, enfermedad o afección. Como se usa en este documento, el término "forma de dosificación eficaz" se refiere a la cantidad de una composición farmacéutica para producir el efecto biológico deseado en un sujeto o célula.

En realizaciones, la forma de dosificación unitaria puede comprender de 1 a 20 mg o de 1 a 10 mg de igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. En realizaciones, la dosis unitaria contiene 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 mg de igmesina. En realizaciones, la dosis unitaria contiene 12, 15 o 20 mg de igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma.

Las composiciones farmacéuticas pueden tomar cualquier forma adecuada (por ejemplo, líquidos, aerosoles, soluciones, inhalantes, neblinas, aerosoles; o sólidos, polvos, ungüentos, pastas, cremas, lociones, geles, parches y similares) para la administración por cualquier vía deseada ( por ejemplo, pulmonar, por inhalación, intranasal, oral, bucal, sublingual, parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, intrapleural, intratecal, transdérmica, transmucosa, rectal y similares). Por ejemplo, una composición farmacéutica de la invención puede estar en forma de solución acuosa o polvo para administración en aerosol por inhalación o insuflación (ya sea por la boca o la nariz); en forma de tableta o cápsula para administración oral; en forma de una solución o dispersión acuosa estéril adecuada para la administración por inyección directa o por adición a fluidos de infusión estériles para infusión intravenosa; o en forma de loción, crema, espuma, parche, suspensión, solución o supositorio para administración transdérmica o transmucosa.

Una composición farmacéutica puede estar en forma de una forma de dosificación oral aceptable que incluye, pero no se limita a, cápsulas, comprimidos, formas bucales, pastillas, grageas y líquidos orales en forma de emulsiones, suspensiones acuosas, dispersiones o soluciones. Las cápsulas pueden contener mezclas de un compuesto de la presente invención con cargas inertes y/o diluyentes tales como almidones farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, almidón de maíz, patata o tapioca), azúcares, agentes edulcorantes artificiales, celulosas en polvo, tales como celulosas cristalinas y microcristalinas, harinas, gelatinas, gomas, etc. En el caso de tabletas para uso oral, los portadores que se usan comúnmente incluyen lactosa y almidón de maíz. También se pueden añadir agentes lubricantes, como estearato de magnesio. Para la administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz seco. Cuando se administran suspensiones y/o emulsiones acuosas por vía oral, el compuesto de la presente invención puede suspenderse o disolverse en una fase aceitosa que se combina con agentes emulsionantes y/o de suspensión. Si se desea, se pueden añadir ciertos agentes edulcorantes y/o aromatizantes y/o colorantes.

Una composición farmacéutica puede estar en forma de tableta. La tableta puede comprender una dosis unitaria de un compuesto de la presente invención junto con un diluyente o vehículo inerte, tal como un azúcar o alcohol de azúcar, por ejemplo, lactosa, sacarosa, sorbitol o manitol. La tableta puede comprender además un diluyente no derivado de azúcar como carbonato de sodio, fosfato de calcio, carbonato de calcio o una celulosa o derivado de los mismos como metilcelulosa, etilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa y almidones como almidón de maíz. La tableta puede comprender además agentes aglutinantes y granulantes como polivinilpirrolidona, desintegrantes (por ejemplo, polímeros reticulados hinchables como carboximetilcelulosa reticulada), agentes lubricantes (por ejemplo, estearatos), conservantes (por ejemplo, parabenos), antioxidantes (por ejemplo, BHT), agentes amortiguadores (por ejemplo, fosfato). o amortiguadores de citrato) y agentes efervescentes tales como mezclas de citrato/bicarbonato.

La tableta puede ser una tableta recubierta. El recubrimiento puede ser un recubrimiento de película protectora (por ejemplo, una cera o barniz) o un recubrimiento diseñado para controlar la liberación del agente activo, por ejemplo, una liberación retardada (liberación del activo después de un tiempo de retraso predeterminado después de la ingestión) o liberación en un lugar particular en el tracto gastrointestinal. Esto último se puede lograr, por ejemplo, usando recubrimientos de película entérica como los que se venden bajo la marca Eudragit®.

Las formulaciones de tabletas se pueden preparar mediante métodos convencionales de compresión, granulación húmeda o granulación seca y utilizan diluyentes, aglutinantes, lubricantes, desintegrantes, agentes modificadores de superficie (incluidos tensioactivos), agentes de suspensión o estabilizantes farmacéuticamente aceptables, que incluyen, entre otros, estearato de magnesio, ácido esteárico, talco, lauril sulfato de sodio, celulosa microcristalina, carboximetilcelulosa cálcica, polivinilpirrolidona, gelatina, ácido algínico, goma de acacia, goma xantano, citrato de sodio, silicatos complejos, carbonato de calcio, glicina, dextrina, sacarosa, fosfato de sorio, sulfato de calcio, lactosa, caolín, manitol, cloruro de sodio, talco, almidones secos y azúcar en polvo. Los agentes modificadores de superficie preferidos incluyen agentes modificadores de superficie no iónicos y aniónicos. Los ejemplos representativos de agentes modificadores de superficie incluyen, pero no se limitan a, poloxámero 188, cloruro de benzalconio, estearato de calcio, alcohol cetoestearílico, cera emulsionante de cetomacrogol, ésteres de sorbitán, dióxido de silicio coloidal, fosfatos, dodecilsulfato de sodio, silicato de aluminio y magnesio y trietanolamina.

Una composición farmacéutica puede estar en forma de cápsula de gelatina dura o blanda. De acuerdo con esta formulación, el compuesto de la presente invención puede estar en forma sólida, semisólida o líquida.

Una composición farmacéutica puede estar en forma de una solución o dispersión acuosa estéril adecuada para administración parenteral. El término parenteral, como se usa en este documento, incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intracutánea, intravenosa, intramuscular, intraarterial, intraarterial, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intralesional e intracraneal.

Una composición farmacéutica puede estar en forma de una solución o dispersión acuosa estéril adecuada para la administración por inyección directa o por adición a fluidos de infusión estériles para infusión intravenosa, y comprende un medio de dispersión o disolvente que contiene agua, etanol, un poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), mezclas adecuadas de los mismos, o uno o más aceites vegetales. Las soluciones o suspensiones del compuesto de la presente invención como una base libre o una sal farmacológicamente aceptable se pueden preparar en agua mezclada adecuadamente con un tensioactivo. A continuación, se dan ejemplos de tensioactivos adecuados. También se pueden preparar dispersiones, por ejemplo, en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos en aceites.

Las composiciones farmacéuticas para usar en los métodos de la presente invención pueden comprender además uno o más aditivos además de cualquier portador o diluyente (tal como lactosa o manitol) que esté presente en la formulación. El uno o más aditivos pueden comprender o consistir en uno o más tensioactivos. Los tensioactivos tienen típicamente una o más cadenas alifáticas largas, como los ácidos grasos, que les permite insertarse directamente en las estructuras lipídicas de las células para mejorar la penetración y absorción del fármaco. Un parámetro empírico comúnmente utilizado para caracterizar la hidrofilicidad e hidrofobicidad relativas de los tensioactivos es el equilibrio hidrófilo-lipófilo (valor "HLB"). Los tensioactivos con valores de HLB más bajos son más hidrófobos y tienen mayor solubilidad en aceites, mientras que los tensioactivos con valores de HLB más altos son más hidrófilos y tienen mayor solubilidad en soluciones acuosas. Por lo tanto, se considera generalmente que los tensioactivos hidrófilos son aquellos compuestos que tienen un valor de HLB superior a aproximadamente 10, y los tensioactivos hidrófobos son generalmente aquellos que tienen un valor de HLB inferior a aproximadamente 10. Sin embargo, estos valores de HLB son simplemente una guía, ya que, para muchos tensioactivos, los valores de HLB pueden diferir hasta en aproximadamente 8 unidades de HLB, dependiendo del método empírico elegido para determinar el valor de HLB.

Entre los tensioactivos para usar en las composiciones de la invención se encuentran polietilenglicol (PEG) -ácidos grasos y mono y diésteres de PEG-ácidos grasos, ésteres de glicerol de PEG, productos de transesterificación de alcohol-aceite, ácidos grasos de poliglicerilo, ésteres de ácidos grasos de propilenglicol, esterol y derivados de esteroles, ésteres de ácidos grasos de polietilenglicol y sorbitán, éteres alquílicos de polietilenglicol, azúcar y sus derivados, alquilfenoles de polietilenglicol, copolímeros en bloque de polioxietilen-polioxipropileno (POE-POP), ésteres de ácidos grasos de sorbitán, tensioactivos iónicos, vitaminas liposolubles y sus sales, vitaminas hidrosolubles y sus derivados anfifílicos, aminoácidos y sus sales y ácidos orgánicos y sus ésteres y anhídridos.

La presente invención también proporciona envases y kits que comprenden composiciones farmacéuticas para su uso en los métodos de la presente invención. El kit puede comprender uno o más recipientes seleccionados del grupo que consta de una botella, un vial, una ampolla, un blíster y una jeringa. El kit puede incluir además una o más instrucciones para su uso en el tratamiento y/o prevención de una enfermedad, afección o trastorno neurológico como se describe en este documento, una o más jeringas, uno o más aplicadores o una solución estéril adecuada para reconstituir una composición farmacéutica de la presente invención.

Todos los porcentajes y proporciones usados en este documento, a menos que se indique lo contrario, son en peso. Otras características y ventajas de la presente invención son evidentes a partir de los diferentes ejemplos. Los ejemplos proporcionados ilustran diferentes componentes y metodología útiles en la práctica de la presente invención. Los ejemplos no limitan la invención reivindicada. Basándose en la presente divulgación, el experto en la materia puede identificar y emplear otros componentes y metodología útiles para poner en práctica la presente invención.

EJEMPLOS

Se ha demostrado que el estrés ER causa la rápida regulación positiva de los receptores sigma-1 y se ha informado que los receptores sigma-1 están regulados negativamente en el putamen de pacientes en la etapa temprana de la enfermedad de Parkinson, así como en el cerebro de pacientes con enfermedad de Alzheimer (Jansen KL, et al. 1993. Brain Res.

623(2): 299-302; Mishina M, et al. 2005. Acta neurologica Scandinavica 112(2): 103-107; Toyohara J, et al. 2009. Central nervous system agents in medicinal chemistry 9(3): 190-196). Los niveles reducidos del receptor sigma-1 observados en estos sujetos podrían aumentar la susceptibilidad del cerebro al estrés ER. Los agonistas sigma-1 que aumentan la actividad acompañante innata de los receptores sigma-1 pueden por tanto ejercer un potencial terapéutico en el tratamiento de enfermedades neurológicas en las que el estrés ER está implicado en la fisiopatología. La sobreproducción de radicales libres también está fuertemente implicada en la fisiopatología de los trastornos neurodegenerativos, como lo demuestran los hallazgos de que las cadenas laterales de proteínas son modificadas por ROS o especies de nitrógeno reactivo (RNS), o por los productos de la peroxidación de lípidos en el tejido cerebral de pacientes que han fallecido a causa de estos trastornos. Por ejemplo, en los cerebros de pacientes con enfermedad de Alzheimer, aumentan el hierro (Fe2+) y el cobre (Cu2+) (Jomova K, et al. 2010. Mol.Cell. Biochem. 345(1-2): 91-104). Ambos cationes son capaces de estimular la formación de radicales libres. En conjunto, hallazgos recientes sugieren que la acción principal de las chaperonas sigma-1 puede ser regular el estrés ER y la función mitocondrial. Sin embargo, la regulación de los dos orgánulos intracelulares y sus comunicaciones parecen contribuir en gran medida a la supresión de ROS y el estrés oxidativo. Como consecuencia, las señales corriente abajo relacionadas con ROS que incluyen muchas transcripciones de genes trabajan en colaboración para prevenir la apoptosis y la inflamación.

En consecuencia, investigamos si la igmesina era eficaz o no en un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer aguda. Antes del presente estudio, ningún estudio ha informado de un efecto de la igmesina en características de patología de la enfermedad tales como neuroinflamación, apoptosis de células neuronales, carga de placa amiloide, hiperfosforilación de la proteína tau o estrés oxidativo. Como se analiza a continuación, los resultados presentados aquí demuestran que el tratamiento con igmesina fue capaz de prevenir eficazmente el desarrollo de estas características de la enfermedad, incluso cuando el tratamiento con igmesina se inició 24 horas después de la exposición al péptido AP^25-35 que induce la neurotoxicidad. Los efectos neuroprotectores de la igmesina contra el desarrollo de las características relacionadas con la enfermedad en este sistema modelo se demuestran mediante la normalización tanto del rendimiento de la memoria en los animales tratados como de los parámetros bioquímicos neuronales.

Es importante destacar que los efectos protectores de la igmesina se encontraron en un intervalo de dosis sorprendentemente bajo de aproximadamente 0,1 a 1 mg/kg en el ratón. Esta dosis efectiva está muy por debajo de la requerida para los efectos antidepresivos de la igmesina, que estaba en el intervalo de 30 a 60 mg/kg en el ratón. Además, demostramos que la igmesina actuó de forma sinérgica con el inhibidor de la colinesterasa donepezil, lo que permitió que donepezil exhibiera sus efectos terapéuticos en un intervalo de dosificación 4 veces menor que el intervalo terapéuticamente eficaz típico, que es de 5 a 23 mg/día en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en humanos. Aquí se muestran efectos sinérgicos similares con el inhibidor de monoamino oxidasa-B, selegilina, el compuesto antiinflamatorio no esteroideo, ibuprofeno, y el agente hipolipemiante, atorvastatina. El sinergismo observado con la igmesina permitió el uso de ibuprofeno y selegilina en dosis 3 veces más bajas y atorvastatina en dosis 10 veces más bajas que las dosis habituales de cada uno que generalmente se prescriben para sus indicaciones primarias. En consecuencia, estos resultados indican que la igmesina en combinación con cada uno de estos agentes puede proporcionar nuevos regímenes de tratamiento para la EA que, en virtud de las bajas dosis de igmesina y estos agentes adicionales, se espera que aumente la eficacia al tiempo que disminuyen los efectos secundarios sistémicos asociados con estos agentes cuando se utilizan en dosis más altas, aumentando así el índice terapéutico de estos fármacos cuando se utilizan en terapia de combinación como se describe en este documento.

Basándonos en los resultados descritos aquí, estimamos el intervalo de dosis efectiva en humanos de la siguiente manera. En los estudios de fase I de igmesina realizados en relación con su actividad antidepresiva, las dosis efectivas fueron de 25 mg y 100 mg por día. Teniendo en cuenta la eficacia mucho mayor (cambio de 100 veces) observada en ratones en el Ejemplo 1, estimamos que las dosis efectivas para la neuroprotección usando igmesina sola (como monoterapia) están en el intervalo de aproximadamente 2,5 mg a 10 mg en un ser humano de peso medio (alrededor de 70 kg), o alrededor de 0,035 mg/kg a 0,14 mg/kg al día. Las dosis de donepezilo siguen un cálculo similar, ya que las dosis habituales en humanos son de 5, 10 y 23 mg/día y la eficacia es 4 veces mayor cuando se asocia con igmesina. Por consiguiente, esperamos que la dosis eficaz de donepezil en combinación con igmesina esté en el intervalo de 1 a 15 mg/día, preferiblemente alrededor de 1, 2, 3 o 4 mg/día.

Ejemplo 1: Efectos neuroprotectores de la igmesina en el modelo de ratón AP^25-35 de la enfermedad de Alzheimer

Lo siguiente demuestra que la igmesina, pero no la memantina, muestra efectos neuroprotectores en el modelo de ratón AP25-35 de la enfermedad de Alzheimer (EA). Los resultados muestran que a dosis 100 veces más bajas que las dosis activas en la depresión, la igmesina es capaz de proteger a los animales de los déficits de aprendizaje/memoria y de las profundas alteraciones bioquímicas del tejido cerebral producidas por la inyección intracerebroventricular (i.c.v) del péptido tóxico AP25-35. Este efecto protector se observó cuando se administró igmesina como tratamiento agudo preventivo (es decir, 20 minutos antes de la inyección del péptido) pero también como tratamiento curativo crónico que comienza 1 día después de la inyección del péptido y se detiene 1 día antes de las pruebas de memoria. Estos resultados demuestran que la igmesina actúa como un neuroprotector capaz de proteger a las neuronas de los efectos tóxicos del péptido y no simplemente como un potenciador de la memoria. Los resultados presentados aquí sugieren que la igmesina podría beneficiar a los pacientes en las primeras etapas de la enfermedad de Alzheimer, o aquellos considerados en alto riesgo de desarrollar la enfermedad, al ralentizar o incluso detener la progresión de la patología de la enfermedad.

El propósito del estudio fue determinar si la igmesina (AMY-002) puede aliviar la patología inducida en ratones inyectados intracerebroventricularmente (icv) con péptido oligomérico amiloide-p25-35 (AP25-35) y determinar si el fármaco podría inducir efectos sinérgicos con otros medicamentos de referencia, inhibidor de la acetilcolinesterasa (AChEl) donepezil (Aricept®), el antagonista del receptor NMDA memantina (Ebixa®), el inhibidor de MAO-B selegilina (Deprenyl), el medicamento antiinflamatorio no esteroideo (AINE) ibuprofeno (Advil) o el inhibidor de la 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG CoA) reductasa atorvastatina (Lipitor).

La eficacia del compuesto se evaluó 7 días después de la administración del péptido sobre la atenuación de los déficits de aprendizaje inducidos por AP25-35 (memoria de trabajo espacial usando la alternancia espontánea en la prueba del laberinto en Y, y memoria contextual a largo plazo usando la prueba de evitación pasiva).

En el Experimento 1, a doce ratones por grupo experimental se les administró igmesina, donepezil o vehículo i.p. 20 min antes de inyección i.c.v. de AP25-35 o péptido revuelto (Sc.Ap). Los ratones se probaron 7 días después de la inyección o en los puntos de tiempo indicados.

En el Experimento 2, se administró a doce ratones por grupo experimental Sc.Ap o péptido amiloide AP25-35 el día 0 mediante inyección i.c.v. Se administró Igmesina, donepezilo o vehículo i.p. desde el día 1 al día 6 después de la inyección de AP25-35. Los animales se probaron el día 7 y más tarde.

En el Experimento 3, a doce ratones por grupo experimental se les administró péptido amiloide Sc.Ap o AP25-35- mediante inyección i.c.v. 20 minutos antes de la inyección i.p. con dos dosis diferentes de cada una de igmesina (0,1 mg/kg y 0,3 mg/kg), donepezilo (0,25 mg/kg y 0,5 mg/kg) y memantina (0,5 mg/kg y 1 mg/kg). También se probaron las combinaciones de dosis más bajas: igmesina 0,1 mg/kg donepezilo 0,25 mg/kg o igmesina 0,1 mg/kg memantina 0,5 mg/kg, para determinar el efecto sinérgico de los fármacos en la neuroprotección. Cada una de estas dosis fue, por sí sola, incapaz de producir ningún efecto protector. La sinergia/aditividad/antagonismo se evaluó calculando el índice de combinación. El día 0, se inyectaron i.p. igmesina, donepezil, memantina, cada combinación o la solución del vehículo, 20 min antes de la inyección i.c.v. y todos los días hasta el día 7. A continuación, los animales se probaron el día 7 y más tarde.

En el Experimento 4 , se administró igmesina o vehículo a doce ratones y a seis ratones se les administró ibuprofeno (25 mg/kg), selegilina (1 mg/kg) o atorvastatina (1 mg/kg) en combinación con una dosis baja de igmesina (0,1 mg/kg) comenzando 24 h después de la inyección de AP25-35 (día 1) y todos los días hasta el día 6 como en el experimento 2. Los animales se probaron el día 7 y más tarde. A las dosis probadas aquí, todos los compuestos no pudieron por sí mismos producir ningún efecto protector. Para cada uno de los Experimentos 1-4 , en el día 7 , todos los animales se probaron para determinar el rendimiento de alternancia espontánea en la prueba del laberinto en Y, un índice de la memoria de trabajo espacial. En los días 8 y 9, se evaluó la memoria contextual a largo plazo de los animales utilizando el procedimiento de evitación pasiva de tipo paso a paso. El día 9, inmediatamente después de la sesión de retención, los animales se sacrificaron por decapitación y se disecaron el hipocampo y la corteza. La peroxidación lipídica se analizó en el hipocampo, mientras que la neuroinflamación, la apoptosis, la carga de amiloide y la hiperfosforilación de la proteína tau se analizaron en la corteza.

Tabla 1. Grupos de tratamiento en el experimento 1.

Tabla 2. Grupos de tratamiento en el experimento 2.

Tabla 3 Grupos de tratamiento en el experimento 3.

Tabla 4. Grupos de tratamiento en el experimento 4.

La igmesina (AMY002), el donepezilo, la memantina, el ibuprofeno, la selegilina y la atorvastatina procedían de fuentes comerciales. Una vez recibido, el fármaco y la documentación adjunta fueron inspeccionados, registrados y almacenados a la temperatura recomendada. Los fármacos se prepararon recientemente justo antes de cada administración. No se preparó ninguna solución madre. Las soluciones se prepararon en solución salina fisiológica. Todas las soluciones se administraron en un volumen de 100 ml por 20 g de peso.

Péptidos amiloide-p

Ap25-35:

Denominación: proteína amiloide-p (25-35), humano, ratón, rata

CAS: 131602-53-4

Proveedor: Polipéptidos (Francia)

Referencia: Sc 489

Lote: AW13285A

Peso molecular: 1060.28

Temperatura de almacenamiento: -20°C

Apariencia: polvo blanco

Sc.Ap:

Denominación: proteína amiloide-p mezclada (25-35), humano, ratón, rata

CAS: NA

Proveedor: Polipéptidos (Francia)

Referencia: Sc 942

Lote: AW13157A

Peso molecular: 1060.26

Temperatura de almacenamiento: -20°C

Apariencia: polvo blanco

La preparación oligomérica homogénea del péptido AP^25-35 se realizó de acuerdo con el propio procedimiento de AMYLGEN. Cada ratón se anestesió con isoflurano al 2,5% y se inyectó i.c.v. con péptido AP^25-35 (9 nmol/ratón) o péptido Sc.Ap (9 nmol/ratón), en un volumen final de 3 ml/ratón, según el método descrito anteriormente (Maurice T, et al. (1996). Brain Res. 706(2): 181-193, Maurice T, et al. (1998) Neuroscience 83(2): 413-428, Meunier J, et al. (2006) British J. Pharmacol. 149(8): 998-1012, Villard V, et al. (2009) Neuropsychopharmacology 34(6): 1552-1566, Villard V, et al. (2011) J. Pharmacol. Sci. 115(3): 279-292).

Animales: Se alojaron ratones suizos machos, de 6 semanas de edad y con un peso de 30-35 g, de JANVIER (Saint Berthevin, Francia), y los experimentos se llevaron a cabo dentro del edificio de la instalación de animales de la Universidad de Montpellier 2 (CECEMA, acuerdo de la Oficina de Servicios Veterinarios # B-34-172-23). Los animales se alojaron en grupos con acceso a comida y agua ad libitum, excepto durante los experimentos de comportamiento. Se mantuvieron en una instalación para animales con temperatura y humedad controladas en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h/12 h (luces apagadas a las 07:00 pm). Los ratones se numeraron marcando su cola con marcadores permanentes. Todos los procedimientos con animales se llevaron a cabo en estricto cumplimiento de la directiva de la Unión Europea del 22 de septiembre de 2010 (2010/63/UE). Los informes de compendio de diagnóstico de JANVIER se adjuntaron al informe del estudio.

Aleatorización de los animales: En cada jaula (n = 8-10), cada animal recibió un régimen de tratamiento diferente. La cirugía animal se realizó el día 0 de forma aleatoria por un experimentador que no participó en los experimentos de comportamiento y bioquímicos. Los animales se codificaron como sigue: código del experimentador número de jaula (letra) número de ratón en la jaula.

Mortalidad: La mortalidad aguda o retardada se controló todos los días. Ningún ratón murió durante el estudio.

Sacrificio: Al final de la sesión de retención de evitación pasiva, el día 9, los animales fueron sacrificados por decapitación. El hipocampo y la corteza frontal se disecaron y se mantuvieron a -80 °C hasta la medición de la peroxidación lipídica y otros marcadores.

Rendimiento de alternancia espontánea: El rendimiento de la memoria de trabajo inmediata se evaluó registrando el comportamiento de alternancia espontánea durante una sola sesión en un laberinto en Y, como se describió anteriormente (Itoh J, et al. (1993) Eur J Pharmacol 236(3): 341-345; Hiramatsu M and Inoue K (1999) Br J Pharmacol 127(3): 655-660). El laberinto en Y está hecho de cloruro de polivinilo gris. Cada brazo del laberinto en Y tenía 40 cm de largo, 3 cm de ancho y 13 cm de alto en la parte inferior, 10 cm de ancho en la parte superior y convergían en un ángulo igual. Cada ratón se colocó al final de un brazo y se le permitió moverse libremente por el laberinto durante una sesión de 8 minutos. La serie de entradas de brazos, incluidas las posibles devoluciones en el mismo brazo, se verificó visualmente. Una alternancia se definió como entradas en los tres brazos en ocasiones consecutivas. El número de alternancias máximas es, por lo tanto, el número total de entradas de brazo menos dos y el porcentaje de alternancia se calculó como (alternancias reales/alternancias máximas) x 100. Los parámetros incluyeron el porcentaje de alternancia (índice de memoria) y el número total de entradas de brazos (índice de exploración). Los animales que mostraron un comportamiento extremo (porcentaje de alternancia <20% o > 90% o número de entradas de brazos <10 se descartaron del cálculo).

Prueba de evitación pasiva: La tarea de evitación pasiva se utilizó para evaluar el aprendizaje y la memoria en ratones tratados con igmesina. El aparato es una caja de dos compartimentos (15 x 20 x 15 cm de alto), uno iluminado con paredes de cloruro de polivinilo blanco y el otro oscurecido con paredes de cloruro de polivinilo negro y piso de rejilla. Una puerta de guillotina separa cada compartimento. Una lámpara de 60 W colocada a 40 cm por encima del aparato ilumina el compartimento blanco durante el experimento. Se entregaron descargas eléctricas aleatorias (0,3 mA durante 3 s) al suelo de la rejilla mediante un aleatorizador de generador de descargas (Lafayette Instruments, La puerta de la guillotina se cerró inicialmente durante la sesión de entrenamiento. Durante la sesión de entrenamiento, cada ratón se colocó en el compartimento blanco. Después de 5 s, se levantó la puerta. Cuando el ratón entró en el compartimento oscuro y colocó todas sus patas en el suelo de la rejilla, la puerta se cerró y la descarga se produjo durante 3 s. Se registró la latencia de paso, es decir, la latencia gastada para ingresar al compartimiento oscuro, y el número de vocalizaciones. La prueba de retención se realizó 24 h después del entrenamiento. Cada ratón se colocó de nuevo en el compartimento blanco. Después de 5 s, se levantó la puerta. Las latencias de paso y escape (correspondientes a la salida del compartimento oscuro) se registraron hasta 300 s. (Meunier J, et al. (2006). British J. Pharmacol. 149(8): 998-1012, Villard V, et al. (2009). Neuropsychopharmacology 34(6): 1552-1566, Villard V, et al. (2011). J. Psychopharmacology 25(8): 1101-1117). Los animales que mostraron latencias inferiores a 10 s durante las sesiones de entrenamiento y retención se consideraron que no respondieron al procedimiento y se descartaron de los cálculos.

Medición de la peroxidación lipídica: El día 24, se utilizaron 6 hipocampos de cada grupo. Después de descongelar, los homogeneizados se homogeneizaron en metanol frío (1/10 p/v), se centrifugaron a 1,000 g durante 5 min y el sobrenadante se colocó en un tubo Eppendorf. El volumen de reacción de cada homogeneizado se añadió a FeSO4 1 mM, H2SO4 0,25 M, xilenol naranja 1 mM y se incubó durante 30 min a temperatura ambiente. Después de leer la absorbancia a 580 nm (A5801 ), se añadieron a la muestra 10 ml de hidroperóxido de cumeno (CHP) 1 mM y se incubó durante 30 min a temperatura ambiente, para determinar el nivel máximo de oxidación. La absorbancia se midió a 580 nm (A5802). El nivel de peroxidación lipídica se determinó como equivalentes de CHP de acuerdo con: CHPE = A580¹ /A580² x [CHP (nmol)] y expresado como equivalentes de CHP por peso húmedo de tejido y como porcentaje de los datos del grupo de control (ratones administrados con Sc.Ap tratados con Veh).

Ensayos de ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA): Los contenidos en GFAP, Caspasa 12, Amiloide-beta 1-40, Amiloide-beta 1-42, Tau total y pTau en Ser199 se analizaron utilizando un kit de ensayo ELISA comercial.

GFAP: Proveedor: USCNK #Ref: SEA068Mu

Tau total: Proveedor: Novex #Ref: KMB7011

pTau (S199): Proveedor: Novex #Ref: KMB7041

Beta amiloide 1-40: Proveedor: Novex #Ref: KMB3481

Beta amiloide 1-42: Proveedor: Novex #Ref: KMB3441

Caspasa-12: Proveedor: LSBio #Ref: LS-F11023

BAX: Proveedor: Euromedex#Ref: SEB343Mu

BCL2: Proveedor: Euromedex #Ref: SEA778Mu

Para todos los ensayos, las cortezas se homogeneizaron después de descongelarlas en solución amortiguadora Tris 50 mM-NaCl 150 mM, pH 7,5, y se sonicaron durante 20 s. Después de la centrifugación (16,100 g durante 15 min, 4 °C), se recogieron los sobrenadantes y se usaron adicionalmente para ensayos ELISA de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Para cada ensayo, se leyó la absorbancia a 450 nm y se calculó la concentración de la muestra usando una curva estándar. Los resultados se expresaron en pg o ng del marcador proteico por mg de tejido. Las cortezas de seis ratones por grupo experimental (n=36/kit ELISA) se ensayaron por duplicado.

Análisis estadísticos: Se realizaron análisis estadísticos en las diferentes condiciones utilizando ANOVA de una vía (valor F), seguido de la prueba de comparación múltiple post-hoc de Dunnett. Todos los valores, excepto las latencias de evitación pasiva, se expresaron como media 6 S.E.M. Las latencias de evitación pasiva no siguen una distribución gaussiana, ya que se establecen tiempos de corte superiores. Por lo tanto, se analizaron utilizando un ANOVA no paramétrico de Kruskal-Wallis (valor H), seguido de una prueba de comparación múltiple de Dunn. p <0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Experimento 1 (pre-treatamiento): Resultados

Alternancia espontánea en el laberinto en Y: El tratamiento con AP^25-35 indujo déficits de alternancia espontáneos muy significativos en comparación con los ratones inyectados con Sc.Ap/Veh (Figura 1A). El pretratamiento de igmesina previno de forma dependiente de la dosis los déficits inducidos por AP²⁵-³⁵, siendo las dos dosis activas 0,3 y 1 mg/kg (Figura 1A). No se observó ningún efecto sobre la locomoción (Figura 1B).

Prueba de evitación pasiva: El tratamiento con AP^25-35 indujo déficits de evitación pasiva altamente significativos en comparación con los ratones inyectados con Sc.Ap/Veh, tanto en términos de latencia de paso (Figura 2A) como de latencia de escape (Figura 2B) durante la sesión de retención

El pretratamiento de igmesina previno de manera dependiente de la dosis los déficits inducidos por AP²⁵-³⁵, con una prevención significativa en las dos dosis más altas probadas en el parámetro de latencia de paso (Figura 2A) y en la dosis más alta en la latencia de escape (Figura 2B).

Tenga en cuenta que los tratamientos afectaron marginalmente la latencia de paso y no afectaron la sensibilidad al choque durante la sesión de entrenamiento.

Peroxidación lipídica: El tratamiento con AP^25-35 indujo un aumento muy significativo de LPO en comparación con los ratones inyectados con Sc.Ap/Veh. El tratamiento con igmesina normalizó completamente los niveles de LPO a la dosis de 1 mg/kg (Figura 3).

Experimento 2 (6 días después del tratamiento): Resultados

Alternancia espontánea en el laberinto en Y: El tratamiento con AP^25-35 indujo déficits de alternancia espontáneos muy significativos en comparación con los ratones inyectados con Sc.AP/Veh. El postratamiento con igmesina previno los déficits inducidos por AP^25-35 a las dosis más altas probadas (Figura 4). No se observó ningún efecto sobre la locomoción (no se muestran los resultados).

Prueba de evitación pasiva: El tratamiento con AP^25-35 indujo déficits de evitación pasiva altamente significativos en comparación con los ratones inyectados con Sc.AP/Veh, tanto en términos de latencia de paso (Figura 5A) como de latencia de escape (Figura 5B) durante la sesión de retención El postratamiento de igmesina previno de forma dependiente de la dosis los déficits inducidos por AP²⁵-³⁵, con una prevención significativa a la dosis más alta probada en el parámetro de latencia de paso (Figura 5A) y latencia de escape (Figura 5B). Tenga en cuenta que los tratamientos no afectaron la latencia de paso y la sensibilidad al impacto durante la sesión de entrenamiento.

Peroxidación lipídica: El tratamiento con AP^25-35 indujo un aumento muy significativo de LPO en comparación con los ratones inyectados con Sc.AP/Veh. El tratamiento con igmesina normalizó completamente los niveles de LPO a la dosis de 1 mg/kg (Figura 6).

GFAP: El tratamiento con AP^25-35 indujo un aumento muy significativo de GFAP, una de las características más conocidas de los astrocitos reactivos. El tratamiento con igmesina normalizó completamente la elevación de GFAP producida por el tratamiento con AP^25-35 a la dosis de 1 mg/kg (Figura 7).

Caspasa 12: El tratamiento con AP^25-35 indujo un aumento muy significativo de la caspasa 12, un marcador de estrés del retículo endoplásmico. El tratamiento con igmesina normalizó completamente la elevación de caspasa 12 a la dosis de 1 mg/kg (Figura 8).

Procesamiento de beta amiloide: El tratamiento con AP^25-35 indujo un aumento muy significativo de AP^1-42 pero no de los contenidos corticales de AP¹-⁴⁰. El tratamiento con igmesina normalizó completamente la elevación de AP^1-42 producida por el tratamiento de AP^25-35 (Figura 9).

Procesamiento Tau: El tratamiento con AP^25-35 indujo un aumento muy significativo de la proteína Tau cortical fosforilada en Serina 199 (pTauS199) en comparación con los ratones inyectados con Sc.AP/Veh. El tratamiento con igmesina normalizó completamente la elevación de la proteína Tau fosforilada en Serina 199 (pTauS199) producida por el tratamiento con AP^25-35 (Figura 10).

Apoptosis: El tratamiento con AP^25-35 indujo un aumento cortical muy significativo de Bax/Bcl-2 en comparación con los ratones inyectados con Sc.AP/Veh. Las proteínas Bcl-2 son una familia de proteínas relacionadas evolutivamente que participan principalmente en la regulación de la muerte celular programada (apoptosis). Bax es el miembro de la familia más estudiado y tiene actividad proapoptótica, mientras que el propio Bcl-2 es el miembro de la familia más investigado con actividad antiapoptótica. Tratamiento con AM002 elevación de la proporción Bax/Bcl-2 completamente normalizada.

(Figura 11).

Experimento 3 (estudio de combinación con donepezilo y memantina): Resultados

Alternancia espontánea en el laberinto en Y: El tratamiento con AP^25-35 indujo déficits de alternancia espontáneos muy significativos en comparación con los ratones inyectados con Sc.Ap/Veh (Figura 12).

Las dos dosis probadas para cada compuesto permitieron determinar la dosis subactiva más alta: 0,1 mg/kg para igmesina, 0,25 mg/kg para donepezil y 0,5 mg/kg para memantina. Luego se probaron las combinaciones basadas en estas dosis. La mezcla de (igmesina+donepezilo) dio lugar a una protección muy significativa. La mezcla (igmesine+memantina) no lo hizo.

Prueba de evitación pasiva: El tratamiento con AP^25-35 indujo déficits de evitación pasiva altamente significativos en comparación con los ratones inyectados con Sc.Ap/Veh en términos de latencia de paso (Figura13) durante la sesión de retención. Las dos dosis probadas para cada compuesto permitieron la determinación de las dosis subactivas de igmesina y memantina. La mezcla de (igmesina+donepezilo) dio lugar a una protección muy significativa. La mezcla (igmesine+memantina) no lo hizo.

Peroxidación lipídica: El tratamiento con AP^25-35 indujo un aumento muy significativo de LPO en comparación con los ratones inyectados con Sc.Ap/Veh. El tratamiento con igmesina a una dosis subactiva de 0.1 mg/kg se sinergizó con la dosis subactiva de donepezil (0,25 mg/kg) mientras que dicha sinergia no estuvo presente con la memantina (Figura 14).

Experimento 4 (estudio de combinación con ibuprofeno, selegilina y atorvastatina): Resultados

El ibuprofeno, la selegilina y la atorvastatina fueron capaces de proteger a los ratones de las lesiones producidas por el tratamiento con AP^25-35 de una manera dependiente de la dosis. Cuando se seleccionaron dosis subactivas de los tres compuestos para asociarlas a la igmesina a 0,1 mg/kg, inactiva por sí misma, se observó una reversión muy significativa de los déficits de memoria como se muestra en las Figura 15, Figura 16 y Figura 17.

Discusión

Los datos actuales demuestran que, utilizando un modelo agudo de toxicidad de la enfermedad de Alzheimer, la igmesina es neuroprotectora. El fármaco previno la aparición de déficits de aprendizaje y memoria en dos procedimientos que evalúan diferentes tipos de procesos de memoria: memoria de trabajo espacial para la prueba del laberinto en Y y memoria contextual a largo plazo para la prueba de evitación pasiva. Tanto el pretratamiento como el postratamiento mostraron una eficacia significativa. Este efecto protector observado sobre las capacidades de memoria se correlacionó con un efecto protector similar sobre dos efectos del estrés oxidativo que pudimos medir: peroxidación lipídica (niveles de LPO) y estrés ER (caspasa 12). Un análisis posterior mostró que el tratamiento con igmesina fue capaz de regular la activación de la neuroinflamación, como lo demuestra la disminución de GFAP, un marcador de activación de astrocitos, así como la activación de la apoptosis mediante el uso de la elevación de la proporción Bax/Bcl2 como un marcador. En nuestro modelo también se normalizaron dos marcadores importantes de la patología: Elevación AP^1-42 y pTauS199.

El efecto de la igmesina se observó en dosis tan bajas como 0,3 mg/kg, cuando se administra como tratamiento preventivo, o 1 mg/kg como tratamiento curativo (comenzando 1 día después de la inducción de la toxicidad) para compararlo con los efectos antidepresivos que se ha informado que ocurre a dosis superiores a 30 mg/kg. Se determinó que la eficacia de la igmesina era de 30 a 100 veces mayor en la neuroprotección en modelos de ratón de enfermedad de Alzheimer (EA) que en modelos de ratón de depresión. Además, cuando se utilizó en combinación con donepezilo, ibuprofeno, selegilina o atorvastatina, el fármaco mostró un claro efecto sinérgico que no se observó con la memantina. Estas combinaciones permitieron usar igmesina a una dosis 300 veces menor que la dosis activa para la depresión. La dosis de donepezilo podría reducirse 4 veces cuando se asocia a igmesina.

De manera similar, la coadministración de ibuprofeno o atorvastatina con dosis muy bajas de igmesina dio como resultado una neuroprotección total a dosis 3 veces o 10 veces más bajas, respectivamente, que las dosis usualmente prescritas para ibuprofeno o atorvastatina en humanos (calculadas a partir de los valores obtenidos después del escalado alométrico cálculo de ratón a humano). La selegilina mostró efectos protectores a las mismas dosis utilizadas para el tratamiento de la depresión en humanos. Además de sus propios efectos neuroprotectores, la igmesina en dosis bajas abre nuevas vías para el tratamiento de la EA al ampliar la ventana de seguridad de otras posibles herramientas terapéuticas.

Ejemplo 2 : Efecto de la igmesina en un modelo de enfermedad de Parkinson: Lesión por 6OHDA en neuronas dopaminérgicas primarias de rata

Cultivos primarios de rata de neuronas dopaminérgicas

Se cultivaron neuronas dopaminérgicas de rata como se describe (Schinelli S, et al. Journal of neurochemistry 50(6): 1900-1907). En breve se sacrificaron ratas hembras preñadas de 15 días de gestación mediante dislocación cervical (Rats Wistar; Janvier) y se extrajeron los fetos del útero. Los mesencéfalos embrionarios se extrajeron y se colocaron en medio helado de Leibovitz 15 (L15; PanBiotech, Ref P04-27055, Lote: 8810315) que contiene 2% de penicilina-estreptomicina (PS; PanBiotech, ref: P06-07100, Lote: 7511015) y 1% de albúmina de suero bovino (BSA; PanBiotech, Ref: P06-1391100, Lote: H140904). Sólo las porciones ventrales del ángulo mesencefálico se utilizaron para las preparaciones celulares, ya que esta región del cerebro en desarrollo es rica en neuronas dopaminérgicas. Los mesencéfalos se disociaron mediante tripsinización durante 20 minutos (min) a 37 °C (Tripsina EDtA 1X; PanBiotech, Ref: P10-023100, lote: 1670415). La reacción se detuvo mediante la adición de medio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM; PanBiotech, Ref: P04-03600, Lote: 9021115) que contiene DNasa I grado II (0,1 mg/ml; PanBiotech, Ref: P60-37780100, Lote: H140508) y 10% de suero de ternero fetal (FCS; Invitrogen,). A continuación, las células se disociaron mecánicamente mediante 3 pasadas a través de una pipeta de 10 ml. A continuación, las células se centrifugaron a 180 x g durante 10 min a 4°C sobre una capa de BSA (3,5%) en medio L15. El sobrenadante se descartó y los sedimentos celulares se resuspendieron en un medio de cultivo definido que consiste en Neurobasal (Invitrogen, Ref: 21103, Lote: 1754639) suplementado con B27 (2%; Invitrogen, ref: 17504, lote: 1799273), L-glutamina (2 mM; PanBiotech, Ref: P04-80100, Lote: 6620314) y 2% de PS, 10ng/mL de BDNF (PanBiotech, Ref: CB-1115002, Lote: 121027) y Ing/mL de GDNF (PanBiotech, Ref: CB-1116001, Lote: H151004). Las células viables se contaron en un citómetro Neubauer usando la prueba de exclusión con azul tripán. Las células se sembraron a una densidad de 4 x 104 células/pocillo en placas de 96 pocillos (prerrevestidas con poli-D-lisina; Greiner, Ref: E150033VJ) y se cultivaron a 37 °C en una atmósfera de aire humidificado (95%) /CO2 (5%). La mitad del medio se cambió cada 2 días con medio fresco. En estas condiciones, después de 5 días de cultivo, los astrocitos están presentes en el cultivo y liberan factor de crecimiento que permite la diferenciación neuronal. Del cinco al seis por ciento de la población de células neuronales eran neuronas dopaminérgicas.

Efecto neuroprotector de la igmesina sobre las neuronas dopaminérgicas de rata

Brevemente, el día 6 de cultivo, las células se pretrataron durante 1 h con el compuesto de prueba o el compuesto de referencia y luego se intoxicaron con 6OHDA (20 mM) durante 48 h.

Se realizaron las siguientes condiciones:

□ _Control (DMSO 0,1%)

□ _+ 6OHDA (20 ^|JM, 48 h) / DMSO 0.1%

□ _+ 6OHDA (20 j M, 48 h BDNF (50 ng/ml) como un compuesto de referencia

□ _+ 6OHDA (20 j M, 48 h) Igmesina (0,1 j M, 0,3 j M, 1 j M, 3 j M, 10 j M, 30 j M, 100 j M)

Se realizó un cultivo con 6 pocillos por condición.

Evaluación del punto final: medida del número total de neuronas dopaminérgicas de rata

Después de 48 horas de intoxicación en presencia o ausencia del compuesto de prueba, las células se fijaron con una solución de paraformaldehído al 4% (Sigma, ref 6148, lote: SLBH4356V) durante 20 min a temperatura ambiente, se fijaron las condiciones de control siguiendo el mismo procedimiento. A continuación, las células se permeabilizaron y los sitios no específicos se bloquearon con una solución de solución salina amortiguada con fosfato (PBS; PanBiotech; ref: P04-36500, Lote: 7250616) que contiene 0,1% de saponina (Sigma; ref: S7900, Lote: BCBJ8417V) y suero fetal bovino (FCS) al 1% durante 15 min a temperatura ambiente. Las células se incubaron con anticuerpo monoclonal anti-tirosina hidroxilasa producido en ratón (TH, anticuerpos-Sigma; ref: T1299, Lote: 101M4796) PBS que contiene 1% de FCS, 0,1% de saponina, durante 2 horas a temperatura ambiente. Anticuerpo contra la neurona dopaminérgica teñida.

El anticuerpo fue revelado con IgG anti-ratón de cabra Alexa Fluor 488 (sonda molecular, ref: A11001, Lote: 1752514) n PBS con FCS al 1%, saponina al 0,1%, durante 1 h a temperatura ambiente. Los núcleos de células se etiquetaron con un marcador fluorescente (solución de Hoechst, Sigma; ref: B1155, Lote: 011M4004V) en la misma solución.

Para cada condición, se tomaron 20 fotografías por pocillo usando InCell AnalyzerTM 2000 (GE Healthcare) con un aumento de 20x. Se tomaron imágenes de cada pocillo de cultivo en las mismas condiciones. El análisis de los cuerpos celulares de las neuronas TH positivas se realizó utilizando el software Developer (GE healthcare). Se proporcionaron un total de 6 datos por condición experimental

Estadísticas

Los datos se expresaron como media de s.e.m. (de 6 datos por condición, 1 cultivo). Los datos se analizaron mediante un análisis de varianza unidireccional (ANOVA) seguido de la prueba de Dunnett y p <0,05 se consideró estadísticamente significativo.

Resultados

Según la Figura 18, la 6OHDA Aplicada a 20 j M durante 48 h indujo una disminución grande y significativa de neuronas TH positivas (**, p <0,01, 57,14% del control). La aplicación de BDNF (50 ng/mL) muestra un efecto protector contra la lesión por 6OHDA (# p <0,05, 91,03% del control). Este resultado valida el estudio. La igmesina (AMY002) a 0,3 j M, 1 |jM (## p <0,01,94,58% y 100,49% del control, respectivamente) y 3 jM (#p <0,05, 87,68% del control), muestra un efecto protector significativo contra 6OHDA. El número de neuronas TH positivas (marcadas con un anticuerpo secundario acoplado a Alexa 488) se redujo significativamente mediante la aplicación de 6OHDA. La igmesina protegió a las neuronas de la muerte celular inducida por el tratamiento con 6OHDA.

Conclusión

La igmesina a 0,3 jM , 1 jM y 3 jM muestra un efecto protector sobre la supervivencia de las neuronas dopaminérgicas lesionadas por 6OHDA (20 jM , 48 h). Estos resultados sugieren que la igmesina puede tener un interés terapéutico en el tratamiento de la enfermedad de Parkinson.

Ejemplo 3 : Efecto de la igmesina en un modelo de la enfermedad de Huntington: supervivencia de neuronas GABAérgicas de rata después de lesiones por glutamato en cultivo.

Cultivos primarios de rata de neuronas espinosas medianas

Los MSN de rata del cuerpo estriado se cultivaron como se describe (Ivkovic S, et al, (1999) The Journal of neuroscience: the official journal of the Society for Neuroscience 19(13): 5409-5419).

En breve se sacrificaron ratas hembras preñadas de 15 días de gestación mediante dislocación cervical (Rats Wistar; Janvier) y se extrajeron los fetos del útero. Los mesencéfalos embrionarios se extrajeron y se colocaron en medio helado de Leibovitz 15 (L15; PanBiotech, Ref P04-27055, Lote: 8810315) que contiene 2% de penicilina-estreptomicina (PS; PanBiotech, ref: P06-07100, Lote: 7511015) y 1% de albúmina de suero bovino (BSA; PanBiotech, Ref: P06-1391100, Lote: H140904). Sólo las porciones ventrales del ángulo mesencefálico se utilizaron para las preparaciones celulares, ya que esta región del cerebro en desarrollo es rica en neuronas dopaminérgicas. Los mesencéfalos se disociaron mediante tripsinización durante 20 minutos (min) a 37 °C (Tripsina EDtA 1X; PanBiotech, Ref: P10-023100, lote: 1670415). La reacción se detuvo mediante la adición de medio Eagle modificado-(DMEM; PanBiotech, Ref: P04-03600, Lote: 9021115) que contiene DNasa I grado II (0,1 mg/ml; PanBiotech, Ref: P60-37780100, Lote: H140508) y 10% de suero de ternero fetal (FCS; Invitrogen, Ref: 10270-098, Lote: 41G8542K). A continuación, las células se disociaron mecánicamente mediante 3 pasadas a través de una pipeta de 10 ml. A continuación, las células se centrifugaron a 180 x g durante 10 min a 4°C sobre una capa de BSA (3,5%) en medio L15. El sobrenadante se descartó y los sedimentos celulares se resuspendieron en un medio de cultivo definido que consiste en Neurobasal (Invitrogen, Ref: 21103, Lote: 1754639) suplementado con B27 (2%; Invitrogen, ref: 17504, lote: 1799273), L-glutamina (2 mM; PanBiotech, Ref: P04-80100, Lote: 6620314) y 2% de PS. Las células viables se contaron en un citómetro Neubauer usando la prueba de exclusión con azul tripán. Las células se sembraron a una densidad de 7000 células/pocillo en placas de 96 pocillos (prerrevestidas con poli-D-lisina; Greiner, Ref: E150033VJ) y se cultivaron a 37 °C en una atmósfera de aire humidificado (95%) /CO2 (5%). La mitad del medio se cambió cada 2 días con medio fresco. En estas condiciones, después de 5 días de cultivo, los astrocitos están presentes en el cultivo y liberan factor de crecimiento que permite la diferenciación neuronal. Del cinco al seis por ciento de la población de células neuronales eran neuronas dopaminérgicas.

Efecto neuroprotector de la igmesina (AMY002) en los MSN de rata

Brevemente, después de 11 días de cultivo, se retiró el medio y se añadió medio fresco con el compuesto de prueba 2 horas antes de la intoxicación. Luego se añadió glutamato (40 mM, durante 20 min), con el compuesto de prueba. Después de 20 min de intoxicación, se cambió el sobrenadante con medio de cultivo sin glutamato y con igmesina durante las siguientes 24 horas después de la intoxicación por glutamato. Se realizaron las siguientes condiciones:

□ _Control del medio durante 20 min y durante las próximas 24 horas

□ _Glutamato (40 jM), durante 20 min y medio control durante las siguientes 24 horas.

□ _Glutamato (40 jM ) igmesina (0,1 jM , 0,3 jM , 1 jM , 3 jM , 10 jM , 30 jM , 100 jM ) durante 20 min y medio de control igmesina (0,1 jM , 0,3 jM , 1 jM , 3 jM , 10 jM , 30 jM , 100 jM ) durante las siguientes 24 horas.

□ _Glutamato (40 jM ) BDNF (10 ng/ml) durante 20 min y medio control BDNF (10 jg/m l) durante las siguientes 24 horas.

Se realizó un cultivo con 6 pocillos por condición.

Evaluación del punto final: medida del número total de neuronas DARPP32

Al final de la intoxicación, las células se fijaron con una solución de paraformaldehído al 4% (Sigma, ref 6148, lote: SLBH4356V) durante 20 min a temperatura ambiente, se fijaron las condiciones de control siguiendo el mismo procedimiento. A continuación, las células se permeabilizaron y los sitios no específicos se bloquearon con una solución de solución salina amortiguada con fosfato (PBS; PanBiotech; ref: P04-36500, Lote: 7250616) que contiene 0,1% de saponina (Sigma; ref: S7900, Lote: BCBJ8417V) y suero fetal bovino (FCS) al 1% durante 15 min a temperatura ambiente. Las células se incubaron con un anticuerpo primario policlonal de conejo anti-DARPP32 (Millipore) y con un anticuerpo primario monoclonal de ratón anti-MAP2 (Sigma) en PBS que contenía FCS al 1%, saponina al 0,1%, durante 2 h a temperatura ambiente. Estos anticuerpos se revelaron con Alexa Fluor 488 de cabra anti IgG de ratón (sonda molecular, ref: A11001, Lote: 011M4004V) y Alexa Fluor 568 cabra anti-conejo (Sonda molecular, ref: A11011, Lote: 1670154) n PBS con FCS al 1%, saponina al 0,1%, durante 1 h a temperatura ambiente. Los núcleos de células se etiquetaron con un marcador fluorescente (solución de Hoechst, Sigma; ref: B1155, Lote: 011M4004V) en la misma solución.

Para cada condición, se tomaron 20 fotografías por pocillo usando InCell AnalyzerTM 2000 (GE Healthcare) con un aumento de 20x. Se tomaron imágenes de cada pocillo de cultivo en las mismas condiciones. El análisis de los cuerpos celulares de las neuronas DARPP32 positivas se realizó utilizando el software Developer (GE healthcare). Se proporcionaron un total de 6 datos por condición experimental.

Estadísticas

Los datos se expresaron como media de s.e.m. (de 6 datos por condición, 1 cultivo). Se realizó un análisis global de los datos utilizando un análisis de varianza unidireccional (ANOVA) seguido de la prueba de Dunnett. El nivel de significancia se fijó en p <0,05.

Resultados

Según la Figura 19, el glutamato aplicado a 40 mM durante 20 min indujo una disminución grande y significativa de neuronas positivas para DARPP32 (***p <0,001, 53,00% del control). La aplicación de BDNF (10 ng/mL) muestra un efecto protector contra la lesión por 6OHDA (## p <0,01, 90,14% del control). Este resultado valida el estudio. La igmesina (AMY002) a 0,3 mM y 1 mM muestra un efecto protector significativo contra el glutamato (## p <0,01, 89,28% del control y #p <0,05, 81,60% del control). El glutamato indujo una disminución grande y significativa del número de neuronas positivas a DARPP32 (células etiquetadas con MAP2 y DARPP32). La igmesina a 0,3 pM y 1 pM protegió a las neuronas de la muerte celular inducida por glutamato.

Conclusión

La igmesina a 0,3 pM y 1 pM muestra un efecto protector sobre la supervivencia de las MSN lesionadas por glutamato (40 pM, 20 min), lo que indica un interés potencial del compuesto para el tratamiento de la enfermedad de Huntington.

Ejemplo 4: Evaluación del efecto neuroprotector de la igmesina (AMY002) sobre la supervivencia de las neuronas motoras después de una lesión por glutamato: un modelo para estudiar la patogénesis de la MND/ALS (enfermedades de las neuronas motoras/esclerosis lateral amiotrófica).

Cultivo de neuronas motoras:

Las neuronas motoras de rata se cultivaron como se describe en (Camu et al. (1994) Journal of the neurological sciences 124 Suppl: 73-74). En breve se sacrificaron ratas hembras preñadas de 14 días de gestación mediante dislocación cervical (Rats Wistar; Janvier Lab) y se extrajeron los fetos del útero. Se extrajo la médula espinal y se colocó en PBS helado. Los segmentos de tejido se centrifugaron, se incubaron en 0,025% (p/v) de tripsina-EDTA (Panbiotech, Ref: P10-023100) durante 10 min a 37°C. Los fragmentos se transfirieron a 1 mL de medio Leibovitz completo que contenía BSA (0,4%, Dustcher, Ref: P06-1391100) y DNasa1 grado II (0.1 mg/ml, Panbiotech, ref: P60-37780100). A continuación, las células se disociaron mediante varias rondas de trituración, se centrifugaron durante 5 min a 470 g en una almohadilla de BSA al 4% y se resuspendieron en 2 ml de medio L15 suplementado. Las neuronas motoras se contaron en un citómetro Neubauer usando la prueba de exclusión con azul tripán. Las células se cultivaron a una densidad de 1,5 x 104 células/pocillo de una placa de 96 pocillos en una monocapa de astrocitos en Neurobasal (Invitrogen, ref: 21103) que contiene 1% deB27 (Invitrogen, ref: 17504), 2 mM L-Glutamina (Panbiotech, ref: P04-80100), 1% de solución PS, 25 mM 2-mercaptoetanol (Invitrogen, ref: 31350-010), suero de caballo al 2% (Invitrogen, Ref: 16050-122), 1 ng/ml de factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF, PanBiotech, Ref: CB-1115002) y 1 ng/ml de factor neurotrófico derivado de Glial (GDNF, Dustcher, Ref: CB-1116001) a 37 °C en una atmósfera de aire humidificado (95%)/CO2 (5%).

Intoxicación por glutamato y tratamiento farmacológico.

Brevemente, después de 10 días de cultivo, se retiró el medio y se añadieron 100 ml de medio fresco (suplementado con Neurobasal sin factor neurotrófico) sin o con el compuesto de prueba 1 h antes de la intoxicación por glutamato. Luego, se agregará glutamato a 40 mM en ausencia o presencia del compuesto de prueba en el medio de cultivo y se incubará durante 20 min. Las células se enjuagaron con solución de incubación (3 lavados) y se dejaron en el medio neurobasal que contenía compuestos o medio de control durante 24 h.

Las siguientes fueron las condiciones experimentales:

□ _Medio de control estimulado con medio vehicular

□ _Medio de control estimulado con Glutamato (40 pM, 20 min)

□ Jgmesina (AMY002) a 7 concentraciones (por definir) estimulada con glutamato (40 pM, 20 min)

□ _BDNF a 50 ng/mL estimulado con glutamato (40 pM, 20 min)

Evaluación del punto final: medida del número total de neuronas motoras positivas Islote 1/2

Al final de la intoxicación, las células se fijaron con una solución de paraformaldehído al 4% (Sigma, ref 6148, lote: SLBH4356V) durante 20 min a temperatura ambiente, se fijaron las condiciones de control siguiendo el mismo procedimiento. A continuación, las células se permeabilizaron y los sitios no específicos se bloquearon con una solución de solución salina amortiguada con fosfato (PBS; PanBiotech; ref: P04-36500, Lote: 1871016) que contiene 0,1% de saponina (Sigma; ref: S7900, Lote: BCBJ8417V), suero de cabra al 4% (Gibco, Ref: 16210072, lote: 1517955) y 1% BSA (Dutsher, Ref: P06-1391100, lote: H140904) durante 15 minutos a temperatura ambiente. Las células se incubaron con un anticuerpo primario de ratón anti-islote 1/2 (banco de hibridomas, Ref: 39.4D5-c, lote: 2/25/16-311 Ag/mL) y con un anticuerpo primario de pollo anti-MAP2 (Abcam, Ref: ab5392, lote: GR286806-3) en PBS que contiene suero de cabra al 4%, BSA al 1%, saponina al 0,1%, durante la noche a temperatura ambiente. Estos anticuerpos se revelaron con Alexa Fluor 488 de cabra anti IgG de ratón (sonda molecular, ref: A11001, Lote: 1752514) y Alexa Fluor 633 anti-pollo de cabra (Sonda molecular, ref: A21449, Lote: 1698677) en PBS con suero de cabra al 4%, BsA al 1%, saponina al 0,1%, durante 1 ha temperatura ambiente. Los núcleos de las células se marcaron con un marcador fluorescente (DAPI, Sigma; ref: B1155, Lote: 011M4004V) en la misma solución.

Para cada condición, se tomaron 20 fotografías por pocillo usando InCell AnalyzerTM 2000 (GE Healthcare) con un aumento de 20x. Se tomaron imágenes de cada pocillo de cultivo en las mismas condiciones. El análisis de los cuerpos celulares de las neuronas Islote 1/2 positivas se realizó utilizando el software Developer (GE healthcare). Se proporcionaron un total de 6 datos por condición experimental.

Procesamiento de datos/análisis estadístico

Los datos se expresaron como media de s.e.m (de 6 datos por condición, 1 cultivo). Se realizó un análisis global de los datos utilizando un análisis de varianza unidireccional (ANOVA) seguido de la prueba de Dunnett. El nivel de significación estadística se establece en p <0,05.

Resultados

Según la Figura 20, el glutamato aplicado a 40 mM durante 20 min indujo una disminución grande y significativa (***p <0,001, 47,17% del control) de las neuronas positivas Islote 1/2 marcadas en rojo. La aplicación de BDNF (50 ng/mL) muestra un efecto protector (##p <0,01, 96,43% del control). Este resultado valida el estudio.

La igmesina (AMY002) a 0,1 pM, 0,3 pM, 1 pM, 3 pM y 10 pM muestra un efecto protector significativo contra el glutamato. Su acción es la más fuerte a 10 pM (###p <0,00l, 126% del control). Curiosamente, la supervivencia de las neuronas motoras fue mayor (pero no significativa) cuando el compuesto de ensayo se Aplicó a 3 pM y 10 pM incluso en presencia de intoxicación por glutamato que en la condición de control.

Conclusión:

La igmesina a 0,1 pM, 0,3 pM, 1 pM y 3 pM y 10 pM muestra un efecto protector sobre la supervivencia de las neuronas motoras lesionadas por glutamato (40 pM, 20 min). Estos resultados sugieren fuertemente el interés potencial del compuesto para el tratamiento de MND/ALS.

Ejemplo 5: Efecto de la igmesina en la respuesta de proteína desplegada (UPR)

A continuación se demuestra que la igmesina promueve la disociación del receptor sigma-1 de otra proteína de unión a la cadena pesada de inmunoglobulina chaperona ER (BiP)/GRP78. Cuando el receptor sigma-1 forma un complejo con BiP, la actividad chaperona se minimiza. Por el contrario, el receptor sigma-1 disociado de BiP ejerce la máxima actividad de chaperona para las proteínas mal plegadas responsables de la UPR.

Material y Métodos

Se cultivaron células CHO en placas de 6 pocillos y se trataron con los compuestos en medio de cultivo a 37°C durante 30 min a una concentración final de 1 pM y 10 pM. La reacción se detuvo mediante la eliminación del medio y la adición de 3 ml de PBS a 37°C. Se recolectaron células CHO y se suspendieron en HEPES 50 mM (pH 7,4) seguido de reticulación con 50 pg/ml de propionato de ditio (bis) succinimidilo (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) durante 30 min a 4°C. La reacción se detuvo añadiendo Tris-HCl (pH 8,8, final 50 mM). Quince minutos después de la incubación en hielo, las células se lisaron con solución amortiguadora de RIPA [Tris 50 mM (pH 7,4), NaCl 150 mM, Triton X-100 al 1%, desoxicolato de sodio al 0,3%, SDS al 0,1%, cóctel inhibidor de proteasa (Roche Complete)]. Después de centrifugar a 12.000 g, 1 min, el sobrenadante se incubó durante la noche a 4 °C con anticuerpo Sig-1 R (Abcam). El lisado celular se incubó con proteína A de Sepharose (Invitrogen) durante 90 min. Después de centrifugar a 12.000 g, 1 min, se descartó el sobrenadante y se lavó el sedimento en 0,5 ml de solución amortiguadora de RIPA. Después de una segunda centrifugación a 12,000 g, 20 min, se descartó el sobrenadante y se lavó el sedimento en 0,5 ml de solución amortiguadora de muestra 2 x solución amortiguadora de bMCE. Después de una tercera centrifugación a 12,000 g, 1 min, el sobrenadante se analizó mediante un ensayo ELISA, de acuerdo con el protocolo del fabricante (USCNK #SEC343Mu).

Resultados y discusión

Como se muestra en la Figura 21, la igmesina produjo la disociación de BiP del receptor sigma-1 de una manera dependiente de la dosis. Esta disociación fue evitada por el antagonista de sigma NE100.

Estos resultados demuestran que la igmesina es capaz de promover la disociación del receptor sigma-1 de BiP. Esta disociación promueve la actividad acompañante de los receptores sigma-1, atenuando así la acumulación de proteínas mal plegadas en las células. Tales proteínas mal plegadas, que se dejan acumular, iniciarían la respuesta de proteína desplegada (UPR), que conduce a la activación de las vías de muerte celular. En consecuencia, la regulación negativa de la UPR por el receptor sigma-1 limita la apoptosis celular inducida por la acumulación de proteínas mal plegadas. El efecto agonista de la igmesina sobre la actividad acompañante de los receptores sigma-1 hace que la igmesina sea un candidato terapéutico viable para enfermedades y trastornos neurodegenerativos como la enfermedad de Alzheimer, la esclerosis lateral amiotrófica, la esclerosis múltiple, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington y la degeneración frontotemporal. Además, el mismo mecanismo de acción indica que la igmesina también puede ser activa contra las encefalopatías priónicas transmisibles como la enfermedad de Creutzfeldt-Jacod, estos trastornos difieren en las proteínas que se pliegan mal y el grupo de neuronas que se ven afectadas.

Claims (16)

REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano que lo necesite, en donde el método comprende administrar la igmesina como una monoterapia en un intervalo de 1 a 20 mg por día.

2. La composición para el uso de la reivindicación 1, en donde la igmesina se administra en un intervalo de 1 a 10 mg por día, opcionalmente de 1 a 5 mg por día.

3. La composición para el uso de la reivindicación 1 o 2, en donde la sal farmacéuticamente aceptable es una sal hidrocloruro.

4. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el sujeto que la necesita es un paciente humano diagnosticado con la enfermedad de Alzheimer.

5. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la composición está adaptada para una dosificación una vez al día.

6. Una composición farmacéutica que comprende igmesina, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, para su uso en un método de tratamiento de la enfermedad de Alzheimer en un sujeto humano que lo necesite, en donde el método comprende administrar la igmesina en un intervalo de 1 a 20 mg por día, y en donde el método comprende además administrar al menos un ingrediente farmacéutico activo adicional ("API"), en donde al menos un API adicional se selecciona del grupo que consiste en un inhibidor de la colinesterasa, un agente reductor de la toxicidad de Ap, un agente de reemplazo hormonal, un agente reductor de lípidos, un agente modulador de la secretasa, un inhibidor de la agregación de Ap, un inhibidor neurofibrilar, un agente antiinflamatorio, un inhibidor de la monoaminooxidasa, un inhibidor del catabolismo p-amiloide y combinaciones de los mismos.

7. La composición para el uso de la reivindicación 6, en donde el al menos un API adicional es

a) un inhibidor de colinesterasa, en donde opcionalmente el inhibidor de colinesterasa es donepezil, y además opcionalmente en donde el donepezil está presente en una cantidad de 1 a 15 mg, de 1 a 10 mg, o de 1 a 5 mg, b) un agente antiinflamatorio, preferiblemente un agente antiinflamatorio no esteroideo, en donde opcionalmente el agente antiinflamatorio no esteroideo es ibuprofeno, y además opcionalmente en donde el ibuprofeno está presente en una cantidad de 50 a 150 mg,

c) un inhibidor de monoaminooxidasa, en donde opcionalmente el inhibidor de monoaminooxidasa se selecciona de rasagilina, selegilina o tranilcipromina, además opcionalmente en donde el inhibidor de monoaminooxidasa B es selegilina, y todavía además opcionalmente en donde la selegilina está presente en una cantidad de 5 a 15 mg, o d) o un agente reductor de lípidos, preferiblemente una estatina, en donde opcionalmente la estatina se selecciona de simvastatina o atorvastatina, además opcionalmente en donde el agente reductor de lípidos es atorvastatina, y aún más opcionalmente en donde la atorvastatina está presente en una cantidad de 1 a 5 mg.

8. La composición para el uso de la reivindicación 6 o 7, en donde la igmesina y el al menos un API adicional están en formas de dosificación separadas.

9. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en donde la composición es una forma de dosificación oral.

10. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 6 a 10, en donde la composición comprende clorhidrato de igmesina en una cantidad de 1 a 10 mg, preferiblemente de 1 a 5 mg, y el al menos un API adicional es un inhibidor de colinesterasa.

11. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde el método comprende inhibir la neuroinflamación en la enfermedad de Alzheimer.

12. La composición para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, en donde la enfermedad de Alzheimer es la enfermedad de Alzheimer de aparición temprana.

13. La composición para el uso de la reivindicación 1, en donde la composición comprende clorhidrato de igmesina en una cantidad de 2,5 a 10 mg por dosis, en donde la composición es para administración una, dos o tres veces al día, al sujeto humano.

14. La composición para el uso de la reivindicación 6, que comprende clorhidrato de igmesina en una cantidad de 2,5 a 10 mg por dosis, en donde la composición es para administración una, dos o tres veces al día, al sujeto humano y la composición comprende además:

a) donepezilo en una cantidad de 1 a 15 mg,

b) ibuprofeno en una cantidad de 50 a 150 mg,

c) selegilina en una cantidad de 5 a 15 mg, o

d) atorvastatina en una cantidad de 1 a 5 mg.

15. Una forma de dosificación unitaria que comprende de 1 a 20 mg de clorhidrato de igmesina y de 1 a 6 mg de donepezil.

16. La forma de dosificación unitaria de la reivindicación 15, que comprende de 1 a 10 mg o de 1 a 5 mg de clorhidrato de igmesina.