ES2888126T3

ES2888126T3 - Sebelipasa alfa para su uso en fibrosis hepática y para tratar la deficiencia de lipasa ácida lisosomal en pacientes según el estadio de fibrosis de Ishak

Info

Publication number: ES2888126T3
Application number: ES17791485T
Authority: ES
Inventors: Anthony Quinn; Zachary Goodman; Barbara Burton; Andrew Rankin; Mark Friedman; Paresh Soni
Original assignee: Alexion Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Alexion Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2016-09-30
Filing date: 2017-09-28
Publication date: 2021-12-30
Anticipated expiration: 2037-09-28
Also published as: WO2018064303A1; US20200038491A1; JP7329441B2; EP3518962B1; JP2021178874A; JP2019529479A; EP3518962A1

Abstract

Sebelipasa alfa para su uso en un procedimiento para reducir la fibrosis hepática en un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL), que comprende administrar sebelipasa alfa al paciente, donde se ha determinado que el paciente tiene un estadio de fibrosis de Ishak de 1 o mayor antes de la administración, y donde al menos un punto de reducción en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración es indicativo de reducción de la fibrosis hepática.

Description

DESCRIPCIÓN

Sebelipasa alfa para su uso en fibrosis hepática y para tratar la deficiencia de lipasa ácida lisosomal en pacientes según el estadio de fibrosis de Ishak

SOLICITUDES RELACIONADAS

Esta solicitud reivindica el beneficio de las solicitudes de patente provisional de EE. UU. con n.° de serie 62/402183, depositada el 30 de septiembre de 2016, n.° de serie 62/420233, depositada el 10 de noviembre de 2016 y n.° de serie 62/456511, depositada el 8 de febrero de 2017.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL) (LAL-D) es una enfermedad de depósito lisosomal (EDL) poco común caracterizada por un fallo en la descomposición de los ásteres de colesterilo (EC) y triglicéridos (TG) en los lisosomas debido a una deficiencia de la enzima. La deficiencia de LAL se asemeja a otros trastornos de depósito lisosomal con acumulación de sustrato en un número de tejidos y tipos celulares. En la deficiencia de LAL, la acumulación de sustrato es más marcada en las células del sistema reticuloendotelial, que incluyen las células de Kupffer en el hígado, los histiocitos en el bazo y en la lámina propia del intestino delgado. Las células reticuloendoteliales expresan el receptor de manosa/N-acetil glucosamina de macrófagos (también conocido como receptor de manosa de macrófagos, MMR o CD206), que media la unión, la absorción celular y la internalización lisosomal de proteínas con GlcNAc o N-glucanos terminados en manosa, y proporciona una vía para la posible corrección de la deficiencia enzimática en estos tipos celulares clave.

La deficiencia de LAL es una enfermedad multisistémica que se manifiesta más comúnmente con complicaciones gastrointestinales, hepáticas y cardiovasculares y se asocia con una morbilidad y mortalidad significativas. Los efectos clínicos de la deficiencia de LAL se deben a una acumulación masiva de material lipídico en los lisosomas de un número de tejidos y a una profunda alteración en los mecanismos homeostáticos del colesterol y los lípidos, que incluye aumentos sustanciales de la síntesis de colesterol hepático. La deficiencia de LAL se presenta como al menos dos fenotipos: enfermedad de Wolman (EW) y enfermedad por depósito de ésteres de colesterilo (EDEC).

La enfermedad de Wolman, que lleva el nombre del médico que la describió por primera vez, es la presentación más agresiva de la deficiencia de LAL. Este fenotipo se caracteriza por manifestaciones gastrointestinales y hepáticas que incluyen retraso del crecimiento, malabsorción, esteatorrea, pérdida de peso grave, linfadenopatía, esplenomegalia y hepatomegalia. La enfermedad de Wolman progresa rápidamente e invariablemente es mortal, normalmente, durante el primer año de vida. La revisión de informes de casos indica que la supervivencia después de los 12 meses de edad es extremadamente poco común para los pacientes que presentan retraso del crecimiento debido a una deficiencia grave de LAL en el primer año de vida. En esta forma más agresiva, el retraso del crecimiento es la característica clínica predominante y es un factor clave que contribuye a la mortalidad temprana. La afectación hepática, evidenciada por el agrandamiento del hígado y la elevación de las transaminasas, también es común en los bebés.

El diagnóstico de la enfermedad de Wolman se establece mediante hallazgos físicos y análisis de laboratorio. Típicamente, se hospitaliza a los bebés en los primeros dos meses de vida debido a diarrea, vómitos persistentes, dificultad para alimentarse, retraso del crecimiento estatural y retraso del desarrollo. Los hallazgos físicos incluyen distensión abdominal con hepatomegalia y esplenomegalia, y el examen radiográfico, a menudo, revela calcificación de las glándulas suprarrenales. Las evaluaciones de laboratorio típicamente revelan niveles elevados de transaminasas séricas y actividad enzimática LAL endógena ausente o reducida de forma marcada. En algunos pacientes, se observan niveles elevados de colesterol y triglicéridos en sangre.

Los pacientes con deficiencia de LAL también se pueden presentar más adelante en la vida con afectación predominante del hígado y del sistema cardiovascular, y esto, a menudo, se denomina enfermedad por depósito de ésteres de colesterilo (EDEC). En la EDEC, el hígado se ve gravemente afectado con hepatomegalia marcada, necrosis de hepatocitos, elevación de transaminasas, cirrosis y fibrosis hepática. Debido al aumento de los niveles de EC y TAG, la afectación cardiovascular se puede caracterizar por hiperlipidemia. Se ha documentado una acumulación de depósitos de grasa en las paredes de las arterias (aterosclerosis) en algunos sujetos que padecen EDEC. Los depósitos estrechan la luz arterial y pueden llevar a la oclusión de los vasos, lo que aumenta el riesgo de episodios cardiovasculares importantes, como infarto de miocardio y accidentes cerebrovasculares. Sin embargo, no todos los sujetos que padecen deficiencia de LAL desarrollan aterosclerosis. Por ejemplo, los pacientes con enfermedad de Wolman están abrumados por otros síntomas asociados con la enfermedad, que incluyen agrandamiento del hígado y el bazo, linfadenopatía y malabsorción en el intestino delgado, pero la EW no se caracteriza en general por aterosclerosis (The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease (Scriver, C. R., Beaudet, A. L., Sly, W. S. y Valle D., eds) 7.a edición, volumen 2 p. 2570 McGraw-Hill, 1995). Asimismo, no todos los pacientes con EDEC exhiben aterosclerosis. Véase, Di Bisceglie y col., Hepatology 11: 764-772 (1990), Ameis y col., J. Lipid Res. 36: 241-250 (1995). La presentación de la EDEC es muy variable y no se le diagnostica a algunos pacientes hasta que las complicaciones se manifiestan al final de la edad adulta, mientras que otros pueden presentar disfunción hepática en la primera infancia. La EDEC se asocia con una vida más corta y una mala salud significativa. La esperanza de vida de las personas con EDEC depende de la gravedad de las complicaciones asociadas.

En la mayoría de los casos, la terapia para las deficiencias de LAL requiere un tratamiento de por vida. Por tanto, existe una gran necesidad de una terapia eficaz con una frecuencia de administración mínima para mejorar la calidad de vida de los pacientes.

RESUMEN DE LA INVENCIÓN

La presente descripción proporciona procedimientos para reducir la fibrosis hepática en un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL) que comprenden administrar sebelipasa alfa al paciente, donde se ha determinado que el paciente tiene al menos una reducción de un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) en el estadio (puntuación) de fibrosis de Ishak después de la administración de sebelipasa alfa en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración de sebelipasa alfa.

En una realización, el procedimiento para reducir la fibrosis hepática en un paciente humano con una deficiencia de LAL comprende (a) administrar sebelipasa alfa al paciente y (b) determinar si el paciente tiene al menos una reducción de un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción >2 puntos) en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración de sebelipasa alfa en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración de sebelipasa alfa, donde una reducción de al menos un punto es indicativo una reducción de la fibrosis hepática.

En otra realización, el procedimiento para reducir la fibrosis hepática en un paciente humano con LAL comprende (a) obtener una biopsia de hígado del paciente y asignar un estadio de fibrosis de Ishak inicial basado en la biopsia, (b) administrar sebelipasa alfa al paciente después de la biopsia, (c) obtener una segunda biopsia de hígado del paciente y asignar un estadio de fibrosis de Ishak después de la administración de sebelipasa alfa; y (d) determinar si el paciente tiene al menos una reducción de un punto en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración de sebelipasa alfa en comparación con el estadio de fibrosis de Ishak inicial, donde una reducción de al menos un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) es indicativo de reducción de la fibrosis hepática.

En otra realización, el procedimiento comprende diagnosticar y tratar a un paciente con LAL con fibrosis hepática diagnosticando al paciente con fibrosis hepática según un estadio de fibrosis de Ishak inicial de 1 o mayor (por ejemplo, un estadio de fibrosis de Ishak de 1,2, 3, 4, 5 o 6) antes de la administración de sebelipasa alfa, donde una reducción de al menos un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) en el estadio de fibrosis de Ishak después del tratamiento con sebelipasa alfa en comparación con antes de iniciar el tratamiento es indicativo de una reducción de la fibrosis hepática.

También se proporcionan procedimientos para tratar a un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL) que comprenden administrar sebelipasa alfa al paciente, donde se ha determinado que el paciente tiene al menos una reducción de un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración de sebelipasa alfa en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración de sebelipasa alfa. En una realización, el procedimiento comprende (a) administrar sebelipasa alfa al paciente y (b) determinar si el paciente tiene al menos una reducción de un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción >2 puntos) en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración de sebelipasa alfa en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración de sebelipasa alfa, donde una reducción de al menos un punto es indicativo del tratamiento.

En otra realización, el procedimiento para tratar a un paciente humano con deficiencia de LAL comprende (a) obtener una biopsia de hígado del paciente y asignar un estadio de fibrosis de Ishak inicial basado en la biopsia, (b) administrar sebelipasa alfa al paciente después de la biopsia, (c) obtener una segunda biopsia de hígado del paciente y asignar un segundo estadio de fibrosis de Ishak después de la administración de sebelipasa alfa; y (d) determinar si el paciente tiene al menos una reducción de un punto en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración de sebelipasa alfa en comparación con el estadio de fibrosis de Ishak inicial, donde una reducción de al menos un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) es indicativo del tratamiento.

En otra realización, el procedimiento comprende tratar a un paciente con LAL diagnosticando al paciente con fibrosis hepática según un estadio de fibrosis de Ishak inicial de 1 o mayor (por ejemplo, un estadio de fibrosis de Ishak de 1, 2, 3, 4, 5 o 6) antes de la administración de sebelipasa alfa, donde una reducción de al menos un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) en el estadio de fibrosis de Ishak después del tratamiento con sebelipasa alfa en comparación con antes del tratamiento es indicativo del tratamiento.

Los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una reducción de un punto. Por ejemplo, en una realización, los procedimientos dan lugar a una reducción del estadio 6 de fibrosis de Ishak al estadio 5 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción del estadio 5 de fibrosis de Ishak al estadio 4 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción del estadio 4 de fibrosis de Ishak al estadio 3 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción del estadio

3 de fibrosis de Ishak al estadio 2 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción del estadio 2 de fibrosis de Ishak al estadio 1 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción del estadio 0 de fibrosis de Ishak al estadio 0 de fibrosis de Ishak. En otra realización, la reducción es una reducción de >1 punto.

En otra realización, la reducción es una reducción de dos puntos. Por ejemplo, en una realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 6 de fibrosis de Ishak al estadio 4 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 5 de fibrosis de Ishak al estadio 3 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 4 de fibrosis de Ishak al estadio 2 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 3 de fibrosis de estadio 1 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 2 de fibrosis de Ishak al estadio 0 de fibrosis de Ishak. En otra realización, la reducción es una reducción de >2 puntos.

En otra realización, la reducción es una reducción de tres puntos. Por ejemplo, en una realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 6 de fibrosis de Ishak al estadio 3 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 5 de fibrosis de Ishak al estadio 2 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 4 de fibrosis de Ishak al estadio 1 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 3 de fibrosis de estadio 0 de fibrosis de Ishak. En otra realización, la reducción es una reducción de >3 puntos.

En una realización, la reducción de al menos un punto se produce en la semana 20 o hacia la semana 20. En otra realización, la reducción de al menos un punto se produce en la semana 30 o hacia la semana 30. En otra realización, la reducción de al menos un punto se produce en la semana 52 o hacia la semana 52. En otra realización, la reducción de >2 puntos se produce en la semana 52 o hacia la semana 52.

El estadio de fibrosis de Ishak se puede evaluar mediante cualquier técnica adecuada conocida en la técnica. En una realización, el estadio de fibrosis de Ishak se evalúa mediante biopsia de hígado. En una realización, el paciente tiene cirrosis antes de iniciar el tratamiento.

La sebelipasa alfa se puede administrar al paciente mediante cualquier medio adecuado conocido en la técnica. En una realización, la sebelipasa alfa se administra como infusión intravenosa. En una realización, la sebelipasa alfa se infunde durante al menos dos horas. En otra realización, la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de

1 mg/kg una vez cada dos semanas. En una realización particular donde la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 1 mg/kg una vez cada dos semanas, la sebelipasa alfa se administra en un volumen total de infusión de: (a) 10 ml para un paciente de 1 a 10,9 kg, (b) 25 ml para un paciente de 11 a 24,9 kg, (c) 50 ml para un paciente de 25 a 49,9 kg, (d) 100 ml para un paciente de 50 a 99,9 kg, o (e) 250 ml para un paciente de 100 a 120,9 kg. En otra realización, la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 3 mg/kg una vez a la semana. En otra realización, la sebelipasa alfa se administra al paciente a una dosis de 0,35 mg/kg una vez a la semana o cada dos semanas (por ejemplo, a un paciente pediátrico o en caso de problemas de tolerancia). En una realización particular, donde la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 3 mg/kg una vez a la semana, la sebelipasa alfa se administra en un volumen total de infusión de: (a) 25 ml para un paciente de 1 a 10,9 kg, (b) 50 ml para un paciente de 11 a 24,9 kg, (c) 100 ml para un paciente de 25 a 49,9 kg, (d) 250 ml para un paciente de 50 a 99,9 kg, o (e) 500 ml para un paciente de 100 a 120,9 kg.

En otra realización, al paciente se le administra una segunda opción terapéutica. La segunda opción terapéutica puede incluir, por ejemplo, un fármaco reductor del colesterol (por ejemplo, estatina o ezetimiba), un antihistamínico (por ejemplo, difenhidramina) o un inmunodepresor.

La eficacia de los procedimientos descritos en esta invención se puede evaluar mediante cualquier medio adecuado.

En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de colesterol unido a las lipoproteínas de baja densidad (C-LDL) (por ejemplo, una disminución de los niveles de C-LDL en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 5 %, un 10 %, un 15 %, un 20 %, un 25 %, un 30 % o un 35 % en los niveles de C-LDL en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a al menos aproximadamente una disminución de un 26 %, un 27 %, un 28 %, un 29 % o un 30 % en los niveles de C-LDL en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 52 o 76 semanas de tratamiento con SA).

En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de colesterol unido a las lipoproteínas de alta densidad (C-HDL) (por ejemplo, un aumento de los niveles de C-HDL en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un aumento de al menos aproximadamente un 5 %, un 10 %, un 15 %, un 20 %, un 25 %, un 30 % o un 35 % en los niveles de C-HDL en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un aumento de al menos aproximadamente un 18 %, un 19 %, un 20 %, un 21 %, un 22 %, un 23 %, un 24 % o un 25 % en los niveles de C-HDL en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 52 o 76 semanas de tratamiento con SA).

En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de colesterol no unido a las lipoproteínas de alta densidad (C-NO-HDL) (por ejemplo, una reducción de los niveles de C-NO-HDL en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a al menos aproximadamente una disminución de un 5 %, un 10 %, un 15 %, un 20 %, un 25 %, un 30 % o un 35 % en los niveles de C-NO-LDL en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a al menos aproximadamente una disminución de un 25 %, un 26 %, un 27 %, un 28 %, un 29 % o un 30 % en los niveles de C-NO-LDL en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 52 o 76 semanas de tratamiento con SA).

En otra realización, los procedimientos dan lugar a la reducción de (ALT), C-LDL, colágeno, inflamación portal, inflamación lobulillar, esteatosis macrovesicular, esteatosis microvesicular, macrófagos y/o niveles totales de contenido de grasa hepática en comparación con antes de iniciar el tratamiento.

En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una mejora en la función hepática. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención son suficientes para normalizar las pruebas hepáticas. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles séricos normales de transaminasas hepáticas, tales como la alanina aminotransferasa (ALT) y/o la aspartato transaminasa sérica (AST). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención son suficientes para disminuir la AST y/o la ALT. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 35 %, un 40 %, un 45 %, un 50 %, un 55 % o un 60 % en los niveles de ATL en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 51 %, un 52 %, un 53 %, un 54 %, un 55 %, un 56 % o un 57 % en los niveles de ALT en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 52 o 76 semanas de tratamiento con SA).

En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 35 %, un 40 %, un 45 %, un 50 %, un 55 % o un 60 % en los niveles de AST en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 42 %, un 43 %, un 44 %, un 45 %, un 46 %, un 47 %, un 48 %, un 49 %, un 50 % o un 51 % en los niveles de AST en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 52 o 76 semanas de tratamiento con SA).

En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención son suficientes para minimizar la hepatomegalia. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención son suficientes para disminuir el tamaño del hígado del paciente. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia el volumen hepático normal (por ejemplo, una reducción del volumen hepático en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 5 %, un 10 %, un 15 % o un 20 % en el volumen hepático en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 11 %, un 12 % o un 13 % en el volumen hepático en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 30, 52, o 76 semanas de tratamiento con SA).

En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de contenido de grasa hepática (fracción de grasa hepática) (por ejemplo, una reducción en el contenido de grasa hepática en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 10 %, un 15 %, un 20 % o un 25 % en la fracción de grasa hepática en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 21 %, un 22 %, un 23 %, un 24 %, un 25 %, un 26 %, un 27 %, un 28 % o un 29 % en la fracción de grasa hepática en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 30, 52 o 76 semanas de tratamiento con SA). En una realización, los niveles de contenido de grasa hepática se evalúan mediante resonancia magnética (RM).

En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención son suficientes para disminuir los niveles séricos de ferritina. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención son suficientes para disminuir los niveles séricos de lípidos, que incluyen, por ejemplo, ésteres de colesterilo (EC) y/o niveles de triglicéridos (TG). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de TG (por ejemplo, una reducción en los niveles de TG en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 5 %, un 10 %, un 15 %, un 20 %, un 25 %, un 30 % o un 35 % en los niveles de TG en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 16 %, un 17 %, un 18 %, un 19 %, un 20 %, un 21 %, un 22 %, un 23 %, un 24 % o un 25 % en los niveles de TG en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 52 o 76 semanas de tratamiento con SA).

En otra realización, el procedimiento da lugar a una reducción de: ALT en aproximadamente un 60 % o más, C-LDL en aproximadamente un 40 % o más, y/o contenido de grasa hepática en aproximadamente un 30 % o más, en comparación con antes de iniciar el tratamiento.

En otra realización, el paciente es un paciente pediátrico. En otra realización, el paciente tiene menos de 8 meses de edad al iniciar el tratamiento con SA. En otra realización, la SA se administra al paciente pediátrico en una dosis de 1 mg/kg una vez a la semana o cada dos semanas. En otra realización, la SA se administra al paciente pediátrico en una dosis de 3 mg/kg o 5 mg/kg una vez a la semana o cada dos semanas. En otra realización, la SA se administra al paciente pediátrico en una dosis de 0,35 mg/kg una vez a la semana o cada dos semanas. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una esperanza de vida de 40 meses o más (por ejemplo, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61,62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 meses o más) para un paciente pediátrico. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una mejora en el aumento de peso en un paciente pediátrico. Por ejemplo, en una realización, el paciente pediátrico está en el 45 % (por ejemplo, el 50 %, el 55 %, el 60 %, el 65 %, el 70 %, el 75 %, el 80 % o el 85 %) o un percentil mayor en la curva de crecimiento de peso por edad después del tratamiento con SA. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una mejora de los síntomas gastrointestinales (por ejemplo, una disminución de los vómitos y la diarrea) en un paciente pediátrico. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a niveles normales de albúmina en un paciente pediátrico. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a niveles normales de función hepática en un paciente pediátrico. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de ALT en un paciente pediátrico (por ejemplo, una reducción en los niveles de ALT en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de AST en un paciente pediátrico (por ejemplo, una reducción en los niveles de AST en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de hemoglobina en un paciente pediátrico (por ejemplo, un aumento en los niveles de hemoglobina en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de albúmina en un paciente pediátrico (por ejemplo, un aumento en los niveles de albúmina en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otras realizaciones, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un desarrollo normal en un paciente pediátrico.

También se proporcionan kits para reducir la fibrosis hepática en un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL), el kit comprende (a) una dosis de sebelipasa alfa; y (b) instrucciones para usar sebelipasa alfa en cualquiera de los procedimientos descritos en esta invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

La figura 1 representa gráficamente el diseño general del estudio.

La figura 2 representa gráficamente la frecuencia de la biopsia de hígado en ARISE.

La figura 3 representa gráficamente los cambios en el porcentaje de esteatosis hepática desde antes de iniciar el tratamiento hasta la semana 20 para sujetos con datos emparejados de biopsia de hígado (tinción HE).

La figura 4 representa gráficamente la mediana del cambio en el porcentaje de esteatosis para sujetos con datos emparejados de biopsia de hígado antes de iniciar el tratamiento y en la semana 20.

La figura 5 representa gráficamente el cambio en el estadio de Ishak en el grupo de SA durante el periodo con doble enmascaramiento (20 semanas de exposición a SA [n = 16]).

La figura 6 representa gráficamente el cambio en el estadio de Ishak en el grupo de SA durante el periodo sin enmascaramiento (52 semanas de exposición a SA [n = 12]).

La figura 7 representa gráficamente el cambio en el estadio de Ishak en el grupo de PBO durante el periodo con doble enmascaramiento (0 semanas de exposición a SA [n = 10]).

La figura 8 representa gráficamente el cambio en el estadio de Ishak una vez el grupo de PBO inició la SA en el periodo sin enmascaramiento (30 semanas de exposición a SA [n = 8]).

La figura 9 expone un resumen de los datos de ALT, AST, C-LDL, C-HDL, C-NO-HDL y TG después de 20 y 52 semanas de tratamiento con SA.

La figura 10 representa gráficamente el cambio medio en ALT a lo largo del tiempo por grupo de tratamiento (es decir, SA/SA y PBO/SA).

La figura 11 representa gráficamente el cambio medio desde antes de iniciar el tratamiento en los parámetros de lípidos a las 76 semanas de tratamiento con SA.

La figura 12 representa gráficamente las estadísticas de supervivencia del ensayo clínico pediátrico LAL-CL03.

La figura 13 muestra los gráficos de Kaplan-Meier de tiempo desde el nacimiento hasta la muerte (ensayo clínico LAL-CL03) y bebés con LAL-D no tratados con retraso del crecimiento (ensayo clínico LAL-NH01).

La figura 14 muestra la curva de crecimiento de peso por edad del paciente D.

Las figuras 15A-F muestran la curva de crecimiento de peso por edad para el paciente B (figura 15A), paciente C (figura 15B), paciente D (figura 15C), paciente E (figura 15D), paciente F (figura 15E) y paciente G (figura 15F).

Las figuras 16A-F muestran parámetros hepáticos y hematológicos (ALT (figura 16A), AST (figura 16B), hemoglobina (figura 16C), ferritina (figura 16D), albúmina (figura 16E) y plaquetas (figura 16F)) a lo largo del tiempo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

La presente descripción proporciona procedimientos para reducir la fibrosis hepática en un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL) que comprenden administrar sebelipasa alfa al paciente, donde se ha determinado que el paciente tiene al menos una reducción de un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración. También se proporcionan procedimientos para tratar a un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL) que comprenden administrar sebelipasa alfa al paciente, donde se ha determinado que el paciente tiene al menos una reducción de un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración.

Definiciones

Por conveniencia, ciertos términos empleados en la memoria descriptiva, ejemplos y reivindicaciones adjuntas se exponen en esta invención para ilustrar y definir el significado y alcance de los diversos términos usados para describir la presente invención.

"LAL", como se usa en esta invención, se refiere a "lipasa ácida lisosomal", y los dos términos se usan indistintamente en toda la memoria descriptiva. La LAL puede ser una proteína humana, es decir, lipasa ácida lisosomal humana. El término "SBC-102", como se usa en esta invención, se refiere a una lipasa ácida lisosomal humana recombinante. LAL también se denomina en la bibliografía como hidrolasa ácida de éster de colesterol, esterasa de colesterilo, lipasa A, LIPA y esterasa de esterol.

LAL cataliza la hidrólisis de ésteres de colesterol y triglicéridos a colesterol libre, glicerol y ácidos grasos libres. Por tanto, la "actividad de LAL" se puede medir, por ejemplo, mediante la escisión del sustrato fluorogénico, oleato de 4-metilumbeliferilo (4MUO). La escisión de 4MUO se puede detectar, por ejemplo, mediante excitación a aproximadamente 360 nm y emisión a 460 nm del fluoróforo liberado, 4-metilumbeliferona (4MU). Los resultados se pueden registrar en unidades de fluorescencia relativa (UFR). Por ejemplo, la cantidad de sustrato escindido en un ensayo de valoración de 30 minutos se puede cuantificar con respecto a una curva estándar de 4MU, y una unidad (U) de actividad se puede definir como la cantidad de enzima requerida para escindir 1 micromol de 4MUO por minuto a 37 °C. Por consiguiente, los fragmentos funcionales o variantes de lA l incluyen fragmentos o variantes que tienen actividad de LAL, por ejemplo, la capacidad de hidrolizar ésteres de colesterol y/o triglicéridos.

Como se usa en esta invención, "LAL exógena" se refiere a LAL no producida de forma natural por un paciente. Por ejemplo, LAL exógena incluye proteína LAL recombinante que se administra a un paciente, proteína LAL que se aísla de una persona o animal y se administra a un paciente, y proteína LAL que se produce (es decir, se expresa) en un paciente como resultado de administrar ARN que codifica LAL y/o ADN u otro tratamiento que aumenta la expresión de la proteína LAL endógena. En una realización, la LAL exógena es sebelipasa alfa.

Como se usa en esta invención, la sebelipasa alfa (KANUMA®) es una lipasa ácida lisosomal humana recombinante (rhLAL). La lipasa ácida lisosomal es una enzima glucoproteína lisosomal que cataliza la hidrólisis de ésteres de colesterilo a colesterol libre y ácidos grasos y la hidrólisis de triglicéridos a glicerol y ácidos grasos libres. La sebelipasa alfa se produce mediante tecnología de ADN recombinante en la clara de huevo de pollos modificados genéticamente. La sebelipasa alfa purificada es una glucoproteína monomérica que contiene 6 sitios de glucosilación con enlaces N-glucosídicos y tiene una masa molecular de aproximadamente 55.000 daltons. La secuencia de aminoácidos de la sebelipasa alfa es la misma que la secuencia de aminoácidos de la LAL humana. La actividad específica de la sebelipasa alfa es de 195 a 345 unidades/mg. Una unidad es la cantidad de actividad enzimática que cataliza la hidrólisis de 1 micromol del sustrato sintético de oleato de 4-metilumbeliferilo por minuto a 37 °C en condiciones de ensayo específicas. KANUMA® se suministra como una solución acuosa apirógena, estéril y sin conservantes en viales de un solo uso para infusión intravenosa. Cada vial contiene sebelipasa alfa 20 mg/10 ml. Cada ml de solución contiene sebelipasa alfa (2 mg), ácido cítrico monohidrato (1,57 mg), seroalbúmina humana (10 mg) y citrato trisódico dihidrato (13,7 mg) a pH 5,9.

La deficiencia de LAL es un trastorno de depósito lisosomal autosómico recesivo caracterizado por un defecto genético que da lugar a una disminución o pérdida marcada de la actividad de la enzima lipasa ácida lisosomal (LAL). El sitio de acción principal de la enzima LAL es el lisosoma, donde la enzima normalmente provoca la descomposición de las partículas lipídicas, que incluyen el c-LDL. La actividad deficiente de la enzima LAL da lugar a complicaciones progresivas debido a la acumulación lisosomal de ésteres de colesterilo y triglicéridos en múltiples órganos, que incluyen el hígado, el bazo, el intestino y las paredes de los vasos sanguíneos. La acumulación de lípidos resultante en el hígado puede llevar a un aumento del contenido de grasa hepática y a la progresión de la enfermedad hepática, que incluye fibrosis y cirrosis. La acumulación de lípidos en la pared intestinal lleva a una malabsorción y retraso del crecimiento. De forma paralela, la dislipidemia debido a la degradación alterada de lípidos lisosomales es común con c-LDL y triglicéridos elevados y colesterol de las HDL (c-HDL) bajo.

La sebelipasa alfa se une a los receptores de la superficie celular a través de los glucanos expresados en la proteína y, posteriormente, se internaliza en los lisosomas. La sebelipasa alfa cataliza la hidrólisis lisosomal de ésteres de colesterilo y triglicéridos a colesterol libre, glicerol y ácidos grasos libres.

"Inyección intravenosa", que a menudo se conoce médicamente como inyección intravenosa rápida o en bolo, se refiere a una vía de administración en la que se conecta una jeringa al dispositivo de acceso intravenoso y el medicamento se inyecta directamente, típicamente de forma rápida y, ocasionalmente, hasta un periodo de 15 minutos si puede provocar irritación de la vena o un efecto demasiado rápido. Una vez que se ha inyectado un medicamento en el flujo de líquido del tubo intravenoso, debe haber algún medio para garantizar que llegue del tubo al paciente. Normalmente, esto se logra permitiendo que el flujo de líquido fluya normalmente y, por lo tanto, lleve el medicamento al torrente sanguíneo. Sin embargo, en algunos casos, se usa una segunda inyección de líquido, a veces denominada "irrigación", después de la primera inyección para facilitar la entrada del medicamento en el torrente sanguíneo.

"Infusión intravenosa" se refiere a una vía de administración en la que se entrega la medicación durante un periodo de tiempo prolongado. Por ejemplo, la medicación se puede administrar a un paciente durante un periodo de tiempo entre 1 y 8 horas. La medicación también se puede administrar a un paciente durante un periodo de aproximadamente 1, aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 7 o aproximadamente 8 horas. Para llevar a cabo una infusión intravenosa, se puede usar un goteo intravenoso por gravedad o una bomba intravenosa. La infusión intravenosa se usa típicamente cuando un paciente requiere medicamentos solo en ciertos momentos y no requiere líquidos intravenosos adicionales (por ejemplo, soluciones acuosas que pueden contener sodio, cloruro, glucosa o cualquier combinación de los mismos), como los que restauran los electrolitos, azúcar en sangre y pérdida de agua.

El término "aviar", como se usa en esta invención, se refiere a cualquier especie, subespecie o raza de organismo de la clase taxonómica aves, tales como, pero sin limitarse a, pollo, pavo, pato, ganso, codorniz, faisanes, loros, pinzones, halcones, cuervos y ratites que incluyen avestruz, emú y casuario. El término incluye las diversas variedades conocidas de Gallus gallus, o pollos (por ejemplo, White Leghorn, Brown Leghorn, Barred-Rock, Sussex, New Hampshire, Rhode Island, Australorp, Minorca, Amrox, California Gray), así como variedades de pavos, faisanes, codornices, patos, avestruces y otras aves de corral que se crían comúnmente en cantidades comerciales. También incluye un organismo aviar individual en todas las etapas de desarrollo, que incluyen las etapas embrionaria y fetal.

El término "derivado de aves de corral" o "derivado aviar" se refiere a una composición o sustancia producida u obtenida a partir de aves de corral. "Aves de corral" se refiere a aves que se pueden criar como ganado, incluidos, entre otros, pollos, patos, pavos, codornices y ratites. Por ejemplo, "derivado de aves de corral" se puede referir a derivado de pollo, derivado de pavo y/o derivado de codorniz.

El término "paciente", como se usa en esta invención, se refiere a cualquier persona que recibe o que ha recibido o que va a recibir atención o tratamiento médico, por ejemplo, según lo indique un profesional sanitario.

"Dosis terapéuticamente eficaz", como se usa en esta invención, se refiere a la dosis (por ejemplo, cantidad y/o intervalo) de fármaco necesaria para producir una respuesta terapéutica prevista. Una dosis terapéuticamente eficaz se refiere a una dosis que, en comparación con un sujeto correspondiente que no ha recibido dicha dosis, da lugar a un mejor tratamiento, curación, prevención o mejoría de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o a una disminución en la tasa de aparición o avance de una enfermedad o trastorno. El término también incluye, dentro de su alcance, dosis eficaces para potenciar funciones fisiológicas normales.

Los términos "tratar" y "tratamiento" se refieren a procedimientos para aliviar, disminuir o mejorar una enfermedad o síntoma, prevenir un síntoma adicional, mejorar o prevenir una causa subyacente de un síntoma, inhibir una enfermedad o afección, parar el desarrollo de una enfermedad o afección, aliviar una enfermedad o afección, provocar la regresión de una enfermedad o afección, aliviar una afección provocada por la enfermedad o afección, o detener un síntoma de la enfermedad o afección ya sea de forma profiláctica y/o después de que se haya producido el síntoma.

Como se usa en esta invención con referencia a una dosis particular, "kg'1", "por kg", "/kg," y "por kilogramo" representan "por kilogramo de peso corporal" del mamífero y, por tanto, los términos se pueden usar indistintamente.

Como se usa en esta invención, una "dosis basada en el área de la superficie corporal (ASC)" se refiere a una dosis de un agente que se ajusta al área de la superficie corporal (ASC) del paciente individual. Se puede proporcionar una dosis basada en el ASC como mg/kg de peso corporal. Se han publicado diversos cálculos para llegar al ASC sin una medición directa, de los cuales el más usado es la fórmula de Du Bois (véase Du Bois D, Du Bois EF (junio de 1916) Archives of Internal Medicine 17 (6): 863-71; y Verbraecken, J. y col. (abril de 2006). Metabolism - Clinical and Experimental 55 (4): 515-24). Otras fórmulas del ASC ejemplares incluyen la fórmula de Mosteller (Mosteller RD. N Engl J Med., 1987; 317:1098), la fórmula de Haycock (Haycock GB, y col., J Pediatr 1978, 93:62-66), la fórmula de Gehan y George (Gehan EA, George SL, Cancer Chemother Rep 1970, 54:225-235), la fórmula de Boyd (Current, JD (1998), The Internet Journal of Anesthesiology 2 (2); y Boyd, Edith (1935), Universidad de Minnesota. The Institute of Child Welfare, Monograph Series, n.° x. Londres: Oxford University Press), la fórmula de Fujimoto (Fujimoto S, y col., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50), la fórmula de Takahira (Fujimoto S, y col., Nippon Eiseigaku Zasshi 1968;5:443-50) y la fórmula de Schlich (Schlich E, y col., Ernahrungs Umschau 2010;57:178-183).

Como se usa en esta invención, los términos "dosis fijada" y "dosis fija" se usan indistintamente y se refieren a una dosis que se administra a un paciente sin tener en cuenta el peso o el área de superficie corporal (ASC) del paciente. Por lo tanto, la dosis fijada o fija no se proporciona como una dosis mg/kg, sino como una cantidad absoluta del agente.

Como se usa en esta invención, el término "polipéptido" pretende abarcar un único "polipéptido", así como varios "polipéptidos" en plural, y se refiere a una molécula compuesta por monómeros (aminoácidos) unidos de manera lineal por enlaces de amida (también conocidos como enlaces peptídicos). El término "polipéptido" se refiere a cualquier cadena o cadenas de dos o más aminoácidos, y no se refiere a una longitud específica del producto. Por tanto, los péptidos, dipéptidos, tripéptidos, oligopéptidos, "proteínas, "cadenas de aminoácidos" o cualquier otro término usado para referirse a una cadena o cadenas de dos o más aminoácidos, se incluyen dentro de la definición de "polipéptido", y el término "polipéptido" se puede usar en vez de, o indistintamente con, cualquiera de estos términos. El término "polipéptido" también pretende hacer referencia a los productos de modificaciones post-expresión del polipéptido, incluyendo, sin limitación, glucosilación, acetilación, fosforilación, amidación, derivatización por grupos protectores/de bloqueo conocidos, escisión proteolítica o modificación por aminoácidos de origen no natural. Un polipéptido puede derivar de una fuente biológica natural o producirse mediante tecnología recombinantes, pero no se traduce necesariamente a partir de una secuencia de ácido nucleico designada. Se puede generar de cualquier forma, que incluye mediante síntesis química.

Como se usa en esta invención, el porcentaje de homología entre dos secuencias de aminoácidos o dos secuencias de nucleótidos es equivalente al porcentaje de identidad entre las dos secuencias. El porcentaje de identidad entre las dos secuencias es una función del número de posiciones idénticas que comparten las secuencias (es decir, % de homología = n.° de posiciones idénticas/n.° total de posiciones X 100), teniendo en cuenta el número de espacios y la longitud de cada espacio, que es necesario introducir para una alineación óptima de las dos secuencias. La comparación de secuencias y la determinación del porcentaje de identidad entre dos secuencias se puede lograr usando un algoritmo matemático, como se describe en los ejemplos no limitantes a continuación.

Por ejemplo, el porcentaje de identidad entre dos secuencias de nucleótidos se puede determinar usando del algoritmo de Meyers y Miller (Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988)), que se ha incorporado al programa ALIGN (versión 2.0), usando una tabla de residuos de peso PAM120, una penalización de longitud de espacio de 12 y una penalización de espacio de 4. Además, el porcentaje de identidad entre secuencias de aminoácidos se puede determinar usando el algoritmo de Needleman y Wunsch (J. Mol, Biol. 48:444-453 (1970)) que se ha incorporado al programa GAP en el paquete de software GCG (disponible en http://www.gcg.com), usando tanto una matriz Blossom 62 como una matriz PAM250, y un peso de espacio de 16, 14, 12, 10, 8, 6 o 4 y un peso de longitud de 1, 2, 3, 4, 5 o 6.

Por polipéptido "aislado" o un fragmento, variante, o derivado del mismo se entiende un polipéptido que no está en su medio natural. No se requiere ningún nivel de purificación particular. Por ejemplo, un polipéptido aislado puede retirarse de su entorno original o natural. Los polipéptidos y proteínas producidos de manera recombinante expresados en células huésped se consideran aislados como se describe en esta invención, al igual que los polipéptidos naturales o recombinantes que han sido separados, fraccionados, o purificados parcial o sustancialmente por cualquier técnica adecuada.

Otros polipéptidos descritos en esta invención son fragmentos, derivados, análogos o variantes de los polipéptidos anteriores, y cualquier combinación de los mismos. Los términos "fragmento", "variante", "derivado" y "análogo", cuando se refieren a cualquiera de los polipéptidos descritos en esta invención, incluyen cualquier polipéptido que conserva al menos parte de la actividad del polipéptido natural correspondiente (por ejemplo, fragmentos de polipéptido LAL, variantes, derivados y análogos que conversan la capacidad de hidrolizar los ésteres de colesterol y/o triglicéridos). Los fragmentos de polipéptidos incluyen, por ejemplo, fragmentos proteolíticos, así como fragmentos de eliminación. Las variantes de un polipéptido incluyen fragmentos, como se ha descrito anteriormente, y también polipéptidos con secuencias de aminoácidos alteradas debido a sustituciones, eliminaciones o inserciones de aminoácidos. Las variantes pueden ser de origen natural o no natural. Las variantes de origen no natural pueden producirse usando técnicas de mutagénesis conocidas en la técnica. Las variantes de polipéptidos pueden comprender sustituciones, eliminaciones o adiciones conservadoras o no conservadoras de aminoácidos. Los derivados son polipéptidos que han sido alterados para presentar características adicionales que no se encuentran en el polipéptido natural. Los ejemplos incluyen proteínas de fusión. Las variantes de polipéptidos también pueden denominarse en esta invención "análogos de polipéptidos". Como se usa en esta invención, un "derivado" de un polipéptido objeto puede contener uno o más residuos derivatizados químicamente por reacción de un grupo lateral funcional. También se incluyen como "derivados" aquellos péptidos que contienen uno o más derivados de aminoácidos de origen natural de los veinte aminoácidos estándar. Por ejemplo, la 4-hidroxiprolina se puede sustituir con prolina, la 5-hidroxilisina se puede sustituir con lisina; la 3-metilhistidina se puede sustituir con histidina; la homoserina se puede sustituir con serina; y/o la ornitina se puede sustituir con lisina.

El término "polinucleótido" pretende abarcar un único ácido nucleico, así como varios ácidos nucleicos, y se refiere a una molécula o construcción de ácido nucleico aisladas, por ejemplo, ARN mensajero (ARNm) o ADN plasmídico (ADNp). Un polinucleótido puede comprender un enlace de fosfodiéster convencional o un enlace no convencional (por ejemplo, un enlace de amida, tal como el encontrado en ácidos nucleicos peptídicos (PNA)). El término "ácido nucleico" se refiere a uno cualquiera o más segmentos de ácido nucleico, por ejemplo, fragmentos de ADN o ARN, presentes en un polinucleótido. Por ácido nucleico o polinucleótido "aislado" se refiere a una molécula de ácido nucleico, ADN o ARN, que se eliminó de su entorno nativo. Por ejemplo, un polinucleótido recombinante que codifica LAL contenida en un vector se considera aislado a los efectos de la presente invención. Los ejemplos adicionales de un polinucleótido aislado incluyen polinucleótidos recombinantes mantenidos en células huésped heterólogas o polinucleótidos purificados (parcial o sustancialmente) en solución. Las moléculas de ARN aisladas incluyen transcritos de a Rn in vivo o in vitro de polinucleótidos de la presente invención. Los polinucleótidos o ácidos nucleicos aislados según la presente invención incluyen además dichas moléculas producidas sintéticamente. Además, un polinucleótido o un ácido nucleico puede ser o puede incluir un elemento de regulación, tal como un promotor, sitio de unión a ribosomas, o un terminador de la transcripción.

Como se usa en esta invención, una "región codificante" es una porción del ácido nucleico que consiste en codones traducidos en aminoácidos. Aunque un "codón de terminación" (TAG, TGA o TAA) no se traduce en un aminoácido, se puede considerar parte de una región codificante, pero cualesquiera secuencias flanqueantes, por ejemplo promotores, sitios de unión a ribosoma, terminadores de transcripción, intrones y similares, no forman parte de una región codificante. Dos o más regiones codificantes de la presente invención pueden estar presentes en una construcción de un único polinucleótido, por ejemplo, en un vector individual, o en construcciones de polinucleótido separadas, por ejemplo, en vectores separados (diferentes). Además, cualquier vector puede contener una única región codificante o puede comprender dos o más regiones codificantes. Además, un vector, un polinucleótido o un ácido nucleico de la invención puede codificar regiones codificantes heterólogas, ya sea fusionadas o no fusionadas a un ácido nucleico que codifica una LAL, fragmento, variante, o derivado de la misma. Las regiones codificantes heterólogas incluyen, sin limitación, elementos o motivos especializados, tales como un péptido señal secretor o un dominio funcional heterólogo.

Los expertos en la técnica conocen una variedad de regiones de control de transcripción. Estas incluyen, sin limitación, regiones de control de transcripción que funcionan en células de vertebrados, tales como, pero no se limitan a, segmentos promotores y potenciadores de citomegalovirus (el promotor temprano inmediato, junto con el intrón-A), virus simio 40 (el promotor temprano) y retrovirus (tales como virus del sarcoma de Rous). Otras regiones de control de transcripción incluyen las derivadas de genes de vertebrados tales como actina, proteína de choque térmico, hormona de crecimiento bovino y p-globina de conejo, así como otras secuencias capaces de controlar la expresión génica en células eucariotas. Las regiones de control de transcripción adecuadas adicionales incluyen promotores y potenciadores específicos de tejido, así como promotores inducibles por linfocina (por ejemplo, promotores inducibles por interferones o interleucinas).

De manera similar, los expertos en la técnica conocen una variedad de elementos de control de traducción. Estos incluyen, pero no se limitan a, sitios de unión a ribosomas, codones de iniciación y terminación de traducción y elementos que provienen de picornavirus (en particular, un sitio de entrada a ribosoma interno, o IRES, también llamado secuencia CITE).

En otras realizaciones, un polinucleótido de la presente invención es ARN, por ejemplo, en forma de ARN mensajero (ARNm).

Las regiones codificantes de polinucleótidos y ácidos nucleicos de la presente invención pueden estar asociadas con regiones codificantes adicionales que codifican péptidos secretores o señal, que dirigen la secreción de un polipéptido codificado por un polinucleótido de la presente invención. Según la hipótesis de las señales, las proteínas secretadas por células de mamífero tienen un péptido señal o secuencia líder secretora que se escinde de la proteína madura una vez que se inició la exportación de la cadena de proteínas de crecimiento a lo largo del retículo endoplasmático rugoso. Los expertos en la técnica son conscientes de que los polipéptidos secretados por células de vertebrados, en general, tienen un péptido señal fusionado al extremo N del polipéptido, que se escinde del polipéptido completo o "de longitud completa" para producir una forma secretada o "madura" del polipéptido. En ciertas realizaciones, se usa el péptido señal natural, por ejemplo, el péptido señal MKMRFLGLVVClVlW t LHSEG (SEQ ID NO:2) de LAL humana, o un derivado funcional de esa secuencia que conserva la capacidad de dirigir la secreción del polipéptido que se asocia operativamente con el mismo. De forma alternativa, se puede usar un péptido señal heterólogo (por ejemplo, un péptido señal heterólogo de mamífero o ave), o un derivado funcional del mismo. Por ejemplo, la secuencia líder de tipo natural puede estar sustituida por la secuencia líder de activador de plasminógeno de tejido humano (TPA) o p-glucuronidasa de ratón.

"Vector" significa un polinucleótido compuesto de ADN o ARN monocatenario, bicatenario, circular o superenrollado. Un vector típico puede estar compuesto por los siguientes elementos unidos operativamente a distancias apropiadas para permitir la expresión génica funcional: origen de replicación, promotor, potenciador, secuencia líder de ARNm en 5', sitio de unión ribosomal, casete de ácido nucleico, sitios de terminación y poliadenilación y secuencias marcadoras seleccionables. Uno o más de estos elementos se pueden omitir en aplicaciones específicas. El casete de ácido nucleico puede incluir un sitio de restricción para la inserción de la secuencia de ácido nucleico que se va a expresar. En un vector funcional, el casete de ácido nucleico contiene la secuencia de ácido nucleico que se va a expresar, incluidos los sitios de inicio y terminación de la traducción. Opcionalmente, se puede incluir un intrón en la construcción, por ejemplo, en 5” a la secuencia codificante. Se construye un vector de modo que la secuencia codificante particular se ubique en el vector con las secuencias reguladoras apropiadas, el posicionamiento y orientación de la secuencia codificante con respecto a las secuencias de control son de modo que la secuencia codificante se transcriba bajo el "control" de las secuencias de control o reguladoras. Puede ser deseable la modificación de las secuencias que codifican la proteína particular de interés para lograr este fin. Por ejemplo, en algunos casos, puede ser necesario modificar la secuencia para que se pueda fijar a las secuencias de control con la orientación apropiada, o para mantener el marco de lectura. Las secuencias de control y otras secuencias reguladoras se pueden ligar a la secuencia codificante antes de la inserción en un vector. De forma alternativa, la secuencia codificante se puede clonar directamente en un vector de expresión que ya contiene las secuencias de control y un sitio de restricción apropiado que está en el marco de lectura con y bajo control regulador de las secuencias de control.

El término "expresión", como se usa en esta invención, se refiere a un procedimiento por el cual un gen produce un producto bioquímico, por ejemplo, un polipéptido. El proceso incluye cualquier manifestación de la presencia funcional del gen dentro de la célula incluyendo, sin limitación, la atenuación génica, así como también la expresión transitoria y la expresión estable. El mismo incluye, entre otras, la transcripción del gen a un ARN mensajero (ARNm), y la traducción de dicho ARNm en polipéptido(s). La expresión de un gen produce un "producto génico". Como se usa en esta invención, un producto génico puede ser un ácido nucleico, por ejemplo, un ARN mensajero producido por la transcripción de un gen o un polipéptido que se traduce de un transcrito. Los productos génicos descritos en esta invención incluyen además ácidos nucleicos con modificaciones posteriores a la transcripción, por ejemplo, poliadenilación, o polipéptidos con modificaciones posteriores a la traducción, por ejemplo, metilación, glucosilación, adición de lípidos, asociación con otras subunidades de proteína, escisión proteolítica y similares.

Como se usa en esta invención, "célula huésped" se refiere a células que alojan vectores construidos usando técnicas de ADN recombinante y codificando al menos un gen heterólogo.

Como se usa en esta invención, los términos "N-glucano", "oligosacárido", "estructura de oligosacárido", "patrón de glucosilación", "perfil de glucosilación" y "estructura de glucosilación" tienen esencialmente el mismo significado y cada uno se refiere a una o más estructuras que se forman a partir de residuos de azúcar y se fijan a proteínas glucosiladas.

Como se usa en esta invención, el término "composición farmacéutica" se refiere a una mezcla de un compuesto descrito en esta invención con otros componentes químicos, tales como vehículos, estabilizantes, diluyentes, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes y/o excipientes.

A. Fibrosis hepática y estadio de fibrosis de Ishak

La presente invención proporciona procedimientos para reducir la fibrosis hepática en un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL) que comprenden administrar sebelipasa alfa al paciente, donde se ha determinado que el paciente tiene al menos una reducción de un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración. También se proporcionan procedimientos para tratar a un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL) que comprenden administrar sebelipasa alfa al paciente, donde se ha determinado que el paciente tiene al menos una reducción de un punto (por ejemplo, una reducción de >1 punto o una reducción de >2 puntos) en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración.

En una realización, el estadio de fibrosis de Ishak se evalúa mediante biopsia de hígado. La biopsia de hígado es una parte importante de la evaluación de pacientes con una variedad de enfermedades hepáticas (véase, por ejemplo, Goodman, Journal of Hepatology 47 (2007) 598-607). Además de establecer el diagnóstico, la biopsia se usa a menudo para evaluar la gravedad de la enfermedad en términos de grado y estadio. El estadio en la mayoría de las enfermedades hepáticas crónicas se relaciona con el grado de cicatrización y el estadio final es la cirrosis con sus complicaciones clínicas. Específicamente, el estadio de una enfermedad es una medida de cuánto ha progresado en su evolución natural, y el estadio final da lugar a la muerte del paciente o a insuficiencia orgánica. El grado se relaciona con la gravedad del proceso de la enfermedad subyacente (con características que varían con los mecanismos patogénicos) y refleja la rapidez con la que la enfermedad está progresando hasta el estadio final. En la mayoría de las formas de enfermedad hepática crónica, el estadio final es la cirrosis con descompensación clínica, mientras que los estadios más tempranos tienen grados menores de fibrosis o cirrosis. Se puede considerar que el grado se relaciona con la gravedad de la enfermedad hepática subyacente, con características que varían con el tipo y patrón del daño. De forma ideal, tanto el grado como el estadio deberían predecir el pronóstico y guiar la intervención terapéutica.

Uno de los sistemas comúnmente usados para evaluar la fibrosis hepática es la estadificación (o puntuación) de Ishak, que se establece a continuación en la tabla 1 (véase, por ejemplo, Ishak y col., Journal or Hepatology 22 (1995) 696 699) y la tabla 7 del ejemplo 1 (véase, por ejemplo,RA Standish, y col., Gut 2006;55:569-578. Los estadios describen los cambios arquitectónicos asociados con diferentes grados de formación de cicatrices y son fáciles de comprender. Los estadios describen los cambios arquitectónicos asociados con diferentes grados de formación de cicatrices y son fáciles de comprender. Una ventaja de este sistema es su simplicidad de estadificación de 0 a 6 y sus estadios se pueden traducir fácilmente a otros tipos de estadios de evaluación, como lo describe Goodman (Journal of Hepatology 47 (2007) 598-607).

Tabla 1: estadificación/ untuación de Ishak

Los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una reducción de al menos un punto en el estadio de fibrosis de Ishak (puntuación). Por ejemplo, en una realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 6 de fibrosis de Ishak al estadio 5 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 5 de fibrosis de Ishak al estadio 4 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 4 de fibrosis de Ishak al estadio 3 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 3 de fibrosis de Ishak al estadio 2 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 2 de fibrosis de Ishak al estadio 1 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 0 de fibrosis de Ishak al estadio 0 de fibrosis de Ishak. En otra realización, la reducción es una reducción de >1 puntos.

En otra realización, la reducción es una reducción de dos puntos. Por ejemplo, en una realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 6 de fibrosis de Ishak al estadio 4 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 5 de fibrosis de Ishak al estadio 3 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 4 de fibrosis de Ishak al estadio 2 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 3 de fibrosis de Ishak al estadio 1 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 2 de fibrosis de Ishak al estadio 0 de fibrosis de Ishak. En otra realización, la reducción es una reducción de >2 puntos.

En otra realización, la reducción es una reducción de tres puntos. Por ejemplo, en una realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 6 de fibrosis de Ishak al estadio 3 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 5 de fibrosis de Ishak al estadio 2 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 4 de fibrosis de Ishak al estadio 1 de fibrosis de Ishak. En otra realización, los procedimientos dan lugar a una reducción en el estadio 3 de fibrosis de Ishak al estadio 0 de fibrosis de Ishak. En otra realización, la reducción es una reducción de >3 puntos.

B. Pacientes con actividad de LAL insuficiente

Sin desear limitar la descripción al tratamiento de ninguna afección o grupo de afecciones en particular, la descripción incluye el tratamiento de deficiencias de lipasa ácida lisosómica (LAL) en pacientes. Como se usa en esta invención, un paciente con una deficiencia de LAL es cualquier paciente que tiene una actividad de LAL insuficiente. La actividad de LAL insuficiente en el paciente puede ser, por ejemplo, el resultado de niveles bajos de ARN, niveles bajos de proteínas o una actividad proteica baja. La actividad de LAL insuficiente puede ser el resultado de una mutación en la secuencia codificante de LAL, una secuencia reguladora de LAL o en otro gen (por ejemplo, un gen que regula la LAL). La actividad de LAL insuficiente también puede ser el resultado de factores ambientales.

Una realización se centra en el tratamiento de enfermedades de depósito lisosomal (EDL) que dan lugar a una deficiencia en la lipasa ácida lisosomal, específicamente la enfermedad de Wolman (EW) y la enfermedad por depósito de ésteres de colesterilo (EDEC). Sin desear limitar la descripción a ninguna teoría o mecanismo de funcionamiento en particular, tanto la EW como la EDEC se pueden deber a mutaciones en el locus de LAL y dar lugar a una acumulación masiva de material lipídico en los lisosomas en un número de tejidos y una profunda alteración en los mecanismos homeostáticos del colesterol y los lípidos que se pueden tratar mediante la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) según los procedimientos de la descripción. Por tanto, en una realización, la deficiencia de LAL tratada es EW. En otra realización, la deficiencia de LAL es EDEC. En algunas realizaciones, un diagnóstico de EW o EDEC se basa en análisis genético (por ejemplo, identificación de una mutación funcional en una secuencia que codifica LAL). En otras realizaciones, un diagnóstico de EW o EDEC se basa en hallazgos clínicos (por ejemplo, exploración física y/o pruebas de laboratorio).

En algunas realizaciones, la LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) se puede usar para tratar complicaciones en una variedad de afecciones tales como esteatosis hepática no alcohólica (EHNA) y esteatohepatitis no alcohólica (ENA). EHNA se refiere a una enfermedad del hígado que tiene una histopatología similar a la enfermedad del hígado que se debe a la ingesta excesiva de alcohol. Se caracteriza por esteatosis macrovesicular que provoca agrandamiento del hígado. La EHNA puede progresar a ENA, que se refiere a una enfermedad hepática similar a la EHNA con la adición de inflamación y daño al hígado que puede llevar a fibrosis y cirrosis.

En algunas realizaciones, se puede usar LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) para tratar afecciones que incluyen pancreatitis, por ejemplo, pancreatitis crónica y/o pancreatitis aguda, así como daño pancreático inducido por alcohol, tal como pancreatitis inducida por el alcohol.

Se puede usar LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) producida por cualquier procedimiento útil para tratar enfermedades debidas a lesiones celulares inducidas por el alcohol, que incluyen, pero no se limitan a, las lesiones celulares inducidas por el alcohol que dan lugar a una acumulación de ésteres de lípidos en el tejido corporal, tal como, pero sin limitarse, hígado, bazo, intestino y tejido cardiovascular. Según la descripción, la malabsorción también se puede tratar administrando LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa). La LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) también es útil para el tratamiento de pacientes con la enfermedad de Tangier e hipoalfalipoproteinemia familiar. La enfermedad de Tangier/hipoalfalipoproteinemia familiar se asocia con la acumulación de ésteres de colesterol en macrófagos acompañada de hepatoesplenomegalia y/o linfadenopatía junto con niveles bajos de HDL que se pueden tratar mediante la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa). Por ejemplo, sin desear limitar la descripción a ninguna teoría ni mecanismo de funcionamiento en particular, la actividad de LAL alterada puede disminuir la expresión de ABCA1 y, a la inversa, una actividad de LAL aumentada obtenida por la administración de LAL exógena a un paciente con la enfermedad de Tangier/hipoalfalipoproteinemia familiar aumentará la expresión de ABCA1 para superar los efectos de un gen ABCA1 con una actividad funcional reducida como resultado del polimorfismo.

En algunas realizaciones, el nivel de actividad de LAL en un paciente antes del tratamiento es de aproximadamente un 1 %, aproximadamente un 2 %, aproximadamente un 3 %, aproximadamente un 5 %, aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 15 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, o aproximadamente un 80 % de los niveles normales de actividad de LAL. En una realización, el nivel de actividad de LAL en un paciente antes del tratamiento es aproximadamente un 50 % o menos de los niveles normales de actividad de LAL. En una realización, el nivel de actividad de LAL en un paciente antes del tratamiento es aproximadamente un 40 % o menos de los niveles normales de actividad de LAL. En algunas realizaciones, el nivel de actividad de LAL en un paciente antes del tratamiento es aproximadamente un 30 % o menos de los niveles normales de actividad de LAL. En algunas realizaciones, el nivel de actividad de LAL en un paciente antes del tratamiento es aproximadamente un 30 % o menos de los niveles normales de actividad de LAL. En algunas realizaciones, el nivel de actividad de LAL en un paciente antes del tratamiento es aproximadamente un 20 % o menos de los niveles normales de actividad de LAL. En algunas realizaciones, el nivel de actividad de LAL en un paciente antes del tratamiento es aproximadamente un 10 % o menos de los niveles normales de actividad de LAL. En algunas realizaciones, el nivel de actividad de LAL en un paciente antes del tratamiento es aproximadamente un 5 % o menos de los niveles normales de actividad de LAL. En algunas realizaciones, un paciente no muestra actividad de LAL medible antes del tratamiento.

En algunas realizaciones, el nivel de actividad de LAL se mide en fibroblasto cultivado obtenido de un paciente humano que padece deficiencia de LAL. En algunas realizaciones, el nivel de actividad de LAL se mide en linfocitos (por ejemplo, leucocitos) de un paciente humano que padece deficiencia de LAL. Los linfocitos incluyen, pero no se limitan a, células mononucleares de sangre periférica (CMSP). Los procedimientos para la medición se describen, por ejemplo, en Burton y col., (1980) Clinica Chimica Acta 101: 25-32, y en Anderson y col., (1999) Mol. Gineta. & Metab., 66: 333-345. Los pacientes con deficiencia de LAL que se van a tratar con LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) pueden presentar una actividad enzimática de LAL de fibroblastos inferior a aproximadamente 30, aproximadamente 20, aproximadamente 10, aproximadamente 5, aproximadamente 4, aproximadamente 3, aproximadamente 2 o aproximadamente 1 pmol/mg/min medido usando trioleína como sustrato. Los pacientes con deficiencia de LAL que se van a tratar con lA l exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) pueden presentar una actividad enzimática de LAL de leucocitos inferior a aproximadamente 30, aproximadamente 20, aproximadamente 10, aproximadamente 5, aproximadamente 4, aproximadamente 3, aproximadamente 2 o aproximadamente 1 pmol/mg/min medido con trioleína como sustrato. Los pacientes con deficiencia de LAL que se van a tratar con lA l exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) pueden presentar una actividad enzimática de LAL de fibroblastos inferior a aproximadamente 30, aproximadamente 20, aproximadamente 10, aproximadamente 5, aproximadamente 4, aproximadamente 3, aproximadamente 2 o aproximadamente 1 pmol/mg/min medido usando oleato de colesterilo como sustrato. Los pacientes con deficiencia de LAL que se van a tratar con LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) pueden presentar una actividad enzimática de LAL de leucocitos inferior a aproximadamente 30, aproximadamente 20, aproximadamente 10, aproximadamente 5, aproximadamente 4, aproximadamente 3, aproximadamente 2 o aproximadamente 1 pmol/mg/min medido usando oleato de colesterilo como sustrato.

C. Adm inistración de LAL exógena

Para el tratamiento de una afección, en general, la cantidad de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) administrada puede variar en función de factores conocidos, tales como la edad, la salud y el peso del receptor, el tipo de tratamiento simultáneo, la frecuencia del tratamiento y similares. Normalmente, una dosis de ingrediente activo puede ser de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg por kilogramo de peso corporal. En una realización, la dosis de LAL exógena de acuerdo con la invención es de aproximadamente 0,1 a 0,5 mg por kilogramo de peso corporal. En una realización, la dosis es de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 5,0 mg por kilogramo. En una realización, la dosis es de aproximadamente 0,1 mg a aproximadamente 5,0 mg por kilogramo. En una realización, la dosis es aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,2, aproximadamente 0,25, aproximadamente 0,30, aproximadamente 0,35, aproximadamente 0,40, aproximadamente 0,45, aproximadamente 0,50 mg por kilogramo. En una realización, la dosis es de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 5 mg por kilogramo. En una realización, la dosis es aproximadamente 1 mg por kilogramo. En una realización, la dosis es aproximadamente 3 mg por kilogramo. Por ejemplo, se pueden administrar 0,1 mg por kilogramo de peso corporal, 0,2 mg por kilogramo de peso corporal, 0,3 mg por kilogramo de peso corporal, 0,4 mg por kilogramo de peso corporal, 0,5 mg por kilogramo de peso corporal, 1 mg por kilogramo de peso corporal, 2 mg por kilogramo de peso corporal, 3 mg por kilogramo de peso corporal, 4 mg por kilogramo de peso corporal o 5 mg por kilogramo de peso corporal. En una realización, la dosis es de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 20 mg por kilogramo de peso corporal.

La invención también incluye otras dosificaciones cuando se emplea un programa de dosificación de la invención. Por ejemplo, de acuerdo con un programa de dosificación de la invención, se administra a un paciente entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 50 mg por kilogramo de peso corporal.

En algunas realizaciones, se administran de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 50 mg de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa), por ejemplo , a un paciente con enfermedad de Wolman a la edad de entre 1 mes y 24 meses. En una realización, el paciente tiene menos de 1 año de edad. En otra realización, el paciente tiene menos de 2 años de edad. En algunas realizaciones, se administran aproximadamente 0,1 mg, aproximadamente 0,2 mg, aproximadamente 0,3 mg, aproximadamente 0,4 mg, aproximadamente 0,5 mg, aproximadamente 1 mg, aproximadamente 2 mg, aproximadamente 3 mg, aproximadamente 5 mg, aproximadamente 10 mg, aproximadamente 15 mg, aproximadamente 20 mg, aproximadamente 25 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 35 mg, aproximadamente 40 mg o aproximadamente 45 mg de LAL exógena al paciente con enfermedad de Wolman. En algunas realizaciones, se administran de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 30 mg, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 20 mg, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 10 mg o de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 5 mg al paciente con enfermedad de Wolman. En algunas realizaciones, se administran de aproximadamente 1 a aproximadamente 30 mg, de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 mg, de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mg o de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 mg.

En algunas realizaciones, se administran de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 350 mg de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa), por ejemplo, a un paciente diagnosticado con EDEC. Por tanto, en algunas realizaciones, se administran aproximadamente 1, 5, 10, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325 o 350 mg de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) al paciente con EDEC. En algunas realizaciones, se administran de aproximadamente 5 a aproximadamente 350 mg, de aproximadamente 5 a aproximadamente 300 mg, de aproximadamente 5 a aproximadamente 250 mg, o de aproximadamente 5 a aproximadamente 200 mg al paciente con EDEC. En algunas realizaciones, se administran de aproximadamente 10 a aproximadamente 350 mg, de aproximadamente 10 a aproximadamente 300, de aproximadamente 10 a aproximadamente 250 o de aproximadamente 10 a aproximadamente 200 mg al paciente con EDEC.

En una realización, la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 1 mg/kg una vez cada dos semanas. En una realización particular donde la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 1 mg/kg una vez cada dos semanas, la sebelipasa alfa se administra en un volumen total de infusión de: (a) 10 ml para un paciente de 1 a 10,9 kg, (b) 25 ml para un paciente de 11 a 24,9 kg, (c) 50 ml para un paciente de 25 a 49,9 kg, (d) 100 ml para un paciente de 50 a 99,9 kg, o (e) 250 ml para un paciente de 100 a 120,9 kg. En otra realización, la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 3 mg/kg una vez a la semana. En una realización particular, donde la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 3 mg/kg una vez a la semana, la sebelipasa alfa se administra en un volumen total de infusión de: (a) 25 ml para un paciente de 1 a 10,9 kg, (b) 50 ml para un paciente de 11 a 24,9 kg, (c) 100 ml para un paciente de 25 a 49,9 kg, (d) 250 ml para un paciente de 50 a 99,9 kg, o (e) 500 ml para un paciente de 100 a 120,9 kg. En otra realización, la sebelipasa alfa se administra al paciente a una dosis de 0,35 mg/kg una vez a la semana o cada dos semanas (por ejemplo, a un paciente pediátrico y/o en caso de problemas de tolerancia).

D. Tratamientos combinados

Las proteínas terapéuticas descritas en esta invención se pueden usar en combinación con otros agentes terapéuticos. La descripción proporciona un procedimiento de pretratamiento para minimizar o prevenir cualquier posible reacción anafiláctica en la que se pueda incurrir mediante la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa). En una realización, para pretratar una posible reacción anafiláctica, se administra al paciente un antagonista del receptor de H-1, también conocido como antihistamínico (por ejemplo, difenhidramina). En una realización, el antagonista del receptor de H-1 se administra en una dosis de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal. Por ejemplo, se puede administrar un antihistamínico en una dosis de aproximadamente 5 mg por kilogramo. La administración del antihistamínico puede ser antes de la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) de acuerdo con la invención. En una realización, el antagonista del receptor de H-1 se administra de aproximadamente 10 a aproximadamente 90 minutos, por ejemplo, de aproximadamente 30 a aproximadamente 60 minutos antes de la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa). El antagonista del receptor de H-1 se puede administrar usando un sistema ambulatorio conectado a un puerto de acceso vascular. En una realización, el antihistamínico se administra aproximadamente 90 minutos antes de la administración de LAL exógena. En una realización, el antihistamínico se administra entre aproximadamente 10 y aproximadamente 60 minutos antes de la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa). En otra realización, el antihistamínico se administra entre aproximadamente 20 y aproximadamente 40 minutos antes de administrar LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa). En ejemplo, el antihistamínico se puede administrar 20, 25, 30, 35 o 40 minutos antes de la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa). En una realización, el antihistamínico administrado es difenhidramina. Se puede usar cualquier antihistamínico útil. Dichos antihistamínicos incluyen, sin limitación, clemastina, doxilamina, loratidina, desloratidina, fexofenadina, feniramina, cetirizina, ebastina, prometazina, clorfeniramina, levocetirizina, olopatadina, quetiapina, meclizina, dimenhidrinato, emborramina, dimetindeno y dexclorofenadina.

En una realización, el antihistamínico se administra en una dosis de entre aproximadamente 0,1 mg y aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal. En una realización, el antihistamínico se administra en una dosis de entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 5 mg por kilogramo de peso corporal. Por ejemplo, la dosis puede ser de 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg o 5 mg por kilogramo de peso corporal. El antihistamínico se puede administrar mediante cualquier procedimiento útil. En una realización, el antihistamínico se administra por vía intravenosa. En otra realización, el antihistamínico se administra en cápsulas farmacéuticamente aceptables.

En otra realización, con referencia a la infusión intravenosa, el potencial de reacciones anafilácticas se puede reducir administrando las infusiones usando un protocolo de aceleración. En este contexto, un protocolo de aceleración se refiere a aumentar lentamente la velocidad de la infusión durante el transcurso de la infusión con el fin de desensibilizar al paciente a la infusión del medicamento.

Los inmunodepresores tales como, pero sin limitarse a, antihistamínicos, corticosteroides, sirólimus, voclosporina, ciclosporina, metotrexato, anticuerpos dirigidos al receptor de IL-2, anticuerpos dirigidos al receptor de linfocitos T, anticuerpos dirigidos al TNF-alfa o proteínas de fusión (por ejemplo, infliximab, etanercept, o adalimumab), CTLA-4-Ig (por ejemplo, abatacept), los anticuerpos anti-OX-40 también se pueden administrar antes, durante o después de la administración de LAL exógena, por ejemplo, si se espera o se experimenta una reacción anafiláctica o una respuesta inmunitaria adversa por parte de un paciente.

La descripción también abarca la terapia que implica la administración de composiciones que contienen LAL exógena en combinación con uno o más agentes reductores del colesterol (por ejemplo, inhibidores de la HMG-CoA reductasa). Los ejemplos no limitantes de dichos agentes incluyen: atorvastatina (Lipitor® y Torvast®), fluvastatina (Lescol®), lovastatina (Mevacor®, Altocor®, Altoprev®), pitavastatina (Livalo®, Pitava®), pravastatina (Pravachol®, Selektine®, Lipostat®), rosuvastatina (Crestor®) y simvastatina (Zocor®, Lipex®).

E. Efectos de la LAL exógena

La presente invención proporciona una corrección o normalización de los síntomas relacionados con la enfermedad después del tratamiento. La progresión clínica (es decir, la mejora de la afección) en respuesta a la LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) se puede monitorizar mediante cualquier método o procedimiento útil.

En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) es suficiente para lograr una Cmáx de aproximadamente 200 ng/ml a aproximadamente 1500 ng/ml. En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena es suficiente para lograr una Cmáx de aproximadamente 200 ng/ml a aproximadamente 1000 ng/ml. En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena es suficiente para lograr una Cmáx de aproximadamente 200 ng/ml a aproximadamente 800 ng/ml. En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena es suficiente para lograr una Cmáx de aproximadamente 200 ng/ml, aproximadamente 300 ng/ml, aproximadamente 400 ng/ml, aproximadamente 500 ng/ml, aproximadamente 600 ng/ml, aproximadamente 700 ng/ml , aproximadamente 800 ng/ml, aproximadamente 900 ng/ml, aproximadamente 1000 ng/ml, aproximadamente 1250 ng/ml o aproximadamente 1500 ng/ml. En algunas realizaciones, la Cmáx se logra durante la infusión.

En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) es suficiente para lograr una semivida de LAL (t¹/²) que es inferior a 40 minutos. En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena es suficiente para lograr una semivida de LAL (t¹/²) que es inferior a 30 minutos. En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena es suficiente para lograr una semivida de LAL (t¹/²) que es inferior a 20 minutos. En algunas realizaciones, la administración de lA l exógena es suficiente para lograr una semivida de LAL (ti/²) que es inferior a 15 minutos. En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena es suficiente para lograr una semivida de LAL (t¹/²) que es inferior a 10 minutos. En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena es suficiente para lograr una semivida de LAL (t¹/²) de aproximadamente 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35 o 40 minutos.

En algunas realizaciones, la LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) aumenta la actividad de LAL en un paciente. La actividad de LAL se puede aumentar, por ejemplo, en el hígado, bazo, ganglios linfáticos, aorta, leucocitos de la sangre periférica y/o fibroblastos cutáneos. En algunas realizaciones, la actividad de LAL se mide en extractos de linfocitos aislados de muestras de sangre.

La LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) puede aumentar la actividad del LAL a al menos aproximadamente 1,5, aproximadamente 2, aproximadamente 2,5, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 7, aproximadamente 8, aproximadamente 9, aproximadamente 10, aproximadamente 15, o aproximadamente 20 veces la actividad antes de la administración de LAL. La LAL exógena puede aumentar la actividad de LAL a al menos aproximadamente 10, aproximadamente 11, aproximadamente 12, aproximadamente 13, aproximadamente 14, aproximadamente 15, aproximadamente 16, aproximadamente 17, aproximadamente 18, aproximadamente 19, aproximadamente 20 veces la actividad antes de la administración de LAL. La actividad de LAL se puede evaluar usando procedimientos conocidos en la técnica que incluyen, por ejemplo, ensayos que usan colesteril[1-14C]oleato, trioleína (glicerol tri [l-14C]oleato), sustratos de miristato de p-nitrofenilo o 4-MUO (oleato de 4-metilumbeliferilo).

En una realización, se emplea la caracterización y el volumen de órganos y tejidos para determinar la mejora de la afección después de la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) de acuerdo con la invención.

En una realización, la progresión clínica en la función/daño del hígado después de la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) se monitoriza mediante la cuantificación de las transaminasas en sangre, tales como la aminotransferasa del ácido aspártico (AST) y/o la alanina transaminasa (ALT), y/u otros biomarcadores, tales como albúmina, fosfatasa alcalina y bilirrubina (directa y total), a lo largo del tiempo.

En una realización, la progresión clínica se monitoriza usando tecnología de formación imágenes. Por ejemplo, y sin limitación, la tecnología de formación de imágenes usada puede ser ecografía, exploración por TAC, resonancia magnética y espectroscopia de resonancia magnética nuclear.

En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) con las dosis descritas en esta invención es suficiente para restaurar el crecimiento y/o aumentar el peso corporal en pacientes humanos. La administración de LAL exógena también puede aumentar la tasa de crecimiento (es decir, aumento de peso corporal) en un bebé o un paciente infantil que padece una deficiencia de LAL de aparición temprana. Por ejemplo, la administración de LAL exógena puede aumentar la tasa de aumento de peso corporal en al menos aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 %, aproximadamente un 400 % o aproximadamente un 500 % del tasa/velocidad de crecimiento observada antes de la administración. En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena restablece la tasa de crecimiento normal en un paciente infantil que padece deficiencia de LAL de aparición temprana (por ejemplo, enfermedad de Wolman) cuya edad está entre aproximadamente 1 mes y aproximadamente 24 meses. "Normal", en este contexto, se refiere a la tasa de crecimiento normal para el paciente que se está tratando según lo determinado por un profesional sanitario con experiencia ordinaria en la técnica de las ciencias médicas.

En una realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de alanina aminotransferasa (ALT), colesterol unido a las lipoproteínas de baja densidad (C-LDL), colágeno y/o contenido de grasa hepática. En otra realización, los procedimientos dan lugar a la reducción de la alanina aminotransferasa (ALT), colesterol unido a las lipoproteínas de baja densidad (C-LDL), colágeno, inflamación portal, inflamación lobulillar, esteatosis macrovesicular, esteatosis microvesicular, macrófagos y/o niveles totales de contenido de grasa hepática en comparación con antes de iniciar el tratamiento. En otra realización, el procedimiento da lugar a una reducción de: alanina aminotransferasa (ALT) en aproximadamente un 60 % o más, colesterol de las lipoproteínas de baja densidad (C-LDL) en aproximadamente un 40 % o más y/o contenido de grasa hepática en aproximadamente un 30 % o más, en comparación con antes de iniciar el tratamiento. En una realización, los niveles se evalúan mediante resonancia magnética (RM).

En una realización, por ejemplo, con referencia a la EW y la EDEC u otras deficiencias de LAL, la hepatomegalia se invierte de forma significativa y el tamaño del hígado vuelve a un tamaño que se encuentra dentro de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 60 % más grande de lo normal. "Normal", en este contexto, se refiere a un hígado de tamaño normal para el paciente que se está tratando según lo determine un profesional sanitario con experiencia ordinaria en la técnica de las ciencias médicas. En una realización, los procedimientos descritos en esta invención son suficientes para minimizar la hepatomegalia. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención son suficientes para disminuir el tamaño del hígado del paciente. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia el volumen hepático normal (por ejemplo, una reducción del volumen hepático en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En una realización, el tamaño del hígado se reduce entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 50 % más de lo normal. En otra realización, el tamaño del hígado se reduce entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 40 % más de lo normal. En una realización, el tamaño del hígado se reduce entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 30 % más de lo normal. En otra realización, el tamaño del hígado se reduce entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 20 % más de lo normal. En otra realización, el tamaño del hígado se reduce entre aproximadamente un 10 % y aproximadamente un 20 % más de lo normal. Por ejemplo, el hígado puede ser un 10 %, un 11 %, un 12 %, un 13 %, un 14 %, un 15 %, un 16 %, un 17 %, un 18 %, un 19 % o un 20 % más grande que el tamaño normal. En todavía otra realización, el tamaño del hígado se reduce entre aproximadamente un 0 % y aproximadamente un 10 % más de lo normal. Por ejemplo, el hígado puede ser un 0 %, un 1 %, un 2 %, un 3 %, un 4 %, un 5 %, un 6 %, un 7 %, un 8 %, un 9 % o un 10 % más grande que el tamaño normal del hígado. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 5 %, un 10 %, un 15 % o un 20 % en el volumen hepático en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 11 %, un 12 % o un 13 % en el volumen hepático en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 30, 52, o 76 semanas de tratamiento con SA).

El tratamiento con LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) también puede mejorar la función hepática. Por tanto, en algunas realizaciones, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para restaurar la función hepática normal y/o normalizar las pruebas de hígado. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles séricos normales de transaminasas hepáticas, tales como la alanina aminotransferasa (ALT) y/o la aspartato transaminasa sérica (AST). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención son suficientes para disminuir la AST y/o la ALT. En algunas realizaciones, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de las transaminasas hepáticas, por ejemplo, en al menos aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 % y/o al menos aproximadamente un 90 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de las transaminasas hepáticas en al menos aproximadamente un 40 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de las transaminasas hepáticas en al menos aproximadamente un 50 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de las transaminasas hepáticas en al menos aproximadamente un 60 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de las transaminasas hepáticas en al menos aproximadamente un 70 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de las transaminasas hepáticas en al menos aproximadamente un 80 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de las transaminasas hepáticas en al menos aproximadamente un 90 %.

En algunas realizaciones, la transaminasa hepática es alanina aminotransferasa (ALT). En una realización, la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) es suficiente para reducir la ALT sérica. Por ejemplo, la administración de LAL exógena puede reducir la ALT sérica, por ejemplo, en al menos aproximadamente un 50 %, un 60 %, un 70 %, un 80 % o un 90 %. El nivel de ALT sérica puede servir como una indicación de daño hepático. Por tanto, la presente invención también contempla procedimientos para reducir el daño hepático en un paciente humano que padece deficiencia de LAL mediante la administración de una cantidad eficaz de LAL exógena para reducir la ALT sérica. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 35 %, un 40 %, un 45 %, un 50 %, un 55 % o un 60 % en los niveles de ATL en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 51 %, un 52 %, un 53 %, un 54 %, un 55 %, un 56 % o un 57 % en los niveles de ALT en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 52 o 76 semanas de tratamiento con SA).

En algunas realizaciones, la transaminasa hepática es aspartato transaminasa sérica (AST). En una realización, la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) es suficiente para reducir la AST sérica. Por ejemplo, la administración de LAL exógena puede reducir la AST sérica, por ejemplo, en al menos aproximadamente un 50 %, un 60 %, un 70 %, un 80 % o un 90 %. El nivel de AST sérica puede servir como una indicación de daño hepático. Por consiguiente, la presente descripción también contempla un procedimiento para reducir el daño hepático en un paciente que padece deficiencia de LAL mediante la administración de una cantidad eficaz de LAL exógena para reducir la AST sérica. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 35 %, un 40 %, un 45 %, un 50 %, un 55 % o un 60 % en los niveles de AST en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20 o más semanas de tratamiento con SA). En una realización particular, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una disminución de al menos aproximadamente un 42 %, un 43 %, un 44 %, un 45 %, un 46 %, un 47 %, un 48 %, un 49 %, un 50 % o un 51 % en los niveles de AST en comparación con antes de iniciar el tratamiento (por ejemplo, después de 20, 52 o 76 semanas de tratamiento con SA).

En algunas realizaciones, el tratamiento con LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) puede disminuir los niveles de ferritina sérica. Por tanto, en algunas realizaciones, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir la ferritina sérica, por ejemplo, en al menos aproximadamente un 20 %, un 30 %, un 40 %, un 50 %, un 60 %, un 70 %, un 80 %, un 90 % o un 95 % en comparación con los niveles previos al tratamiento. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de ferritina en al menos un 50 %. En aún otra una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de ferritina en al menos aproximadamente un 60 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de ferritina en al menos aproximadamente un 70 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de ferritina en al menos aproximadamente un 80 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de ferritina en al menos aproximadamente un 90 %. En una realización, el tratamiento con LAL exógena es suficiente para disminuir los niveles séricos de ferritina en al menos aproximadamente un 95 %.

En una realización, por ejemplo, con referencia a la enfermedad de Wolman y EDEC u otras deficiencias de LAL, la esplenomegalia se invierte de forma significativa y el tamaño del bazo vuelve a un tamaño que se encuentra entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 60 % más grande que el normal. "Normal", en este contexto, se refiere a un bazo de tamaño normal para el paciente que se está estudiando según lo determinado por un profesional sanitario con experiencia ordinaria en la técnica de las ciencias médicas. En una realización, el tamaño del bazo se reduce entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 50 % más de lo normal. En otra realización, el tamaño del bazo se reduce entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 40 % más de lo normal. En una realización, el tamaño del bazo se reduce entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 30 % más de lo normal. En otra realización, el tamaño del bazo se reduce entre aproximadamente un 1 % y aproximadamente un 20 % más de lo normal. En otra realización, el tamaño del bazo se reduce entre aproximadamente un 10 % y aproximadamente un 20 % más de lo normal. Por ejemplo, el bazo puede ser un 10 %, un 11 %, un 12 %, un 13 %, un 14 %, un 15 %, un 16 %, un 17 %, un 18 %, un 19 % o un 20 % más grande que el tamaño normal. En todavía otra realización, el tamaño del bazo se reduce entre aproximadamente un 0 % y aproximadamente un 10 % más de lo normal. Por ejemplo, el bazo puede ser un 0 %, un 1 %, un 2 %, un 3 %, un 4 %, un 5 %, un 6 %, un 7 %, un 8 %, un 9 % o un 10 % más grande que el tamaño normal del bazo.

En una realización, la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) es suficiente para disminuir la linfadenopatía (es decir, ganglios linfáticos agrandados). Por tanto, en algunas realizaciones, los ganglios linfáticos se reducen a aproximadamente un tamaño que se encuentra dentro de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 60 % más grande de lo normal. "Normal", en este contexto, se refiere a unos ganglios linfáticos de tamaño normal para el paciente que se está estudiando según lo determinado por un profesional sanitario con experiencia ordinaria en la técnica de las ciencias médicas. En una realización, el tamaño de los ganglios linfáticos se reduce de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 50 % más de lo normal. En otra realización, el tamaño de los ganglios linfáticos se reduce de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 40 % más de lo normal. En una realización, el tamaño de los ganglios linfáticos se reduce de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 30 % más de lo normal. En otra realización, el tamaño de los ganglios linfáticos se reduce de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 20 % más de lo normal. En otra realización, el tamaño de los ganglios linfáticos se reduce entre aproximadamente un 10 % y aproximadamente un 20 % más de lo normal. Por ejemplo, los ganglios linfáticos pueden ser un 10 %, un 11 %, un 12 %, un 13 %, un 14 %, un 15 %, un 16 %, un 17 %, un 18 %, un 19 % o un 20 % más grandes que el tamaño normal. En todavía otra realización, el tamaño de los ganglios linfáticos se reduce entre aproximadamente un 0 % y aproximadamente un 10 % más de lo normal. Por ejemplo, los ganglios linfáticos pueden ser un 0 %, un 1 %, un 2 %, un 3 %, un 4 %, un 5 %, un 6 %, un 7 %, un 8 %, un 9 % o un 10 % más grandes que el tamaño normal de los ganglios linfáticos. En otra realización, el análisis de lípidos se realiza para monitorizar la mejora de la afección. Por ejemplo, se puede realizar un análisis de lípidos para evaluar el efecto terapéutico del LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa). El análisis de lípidos se puede llevar a cabo en una muestra de tejido de un paciente (por ejemplo, una muestra de sangre, una muestra de biopsia de hígado) mediante cualquier procedimiento útil, tal como, pero sin limitarse a, cromatografía de líquidos de alta resolución, cromatografía de gases, espectroscopia de masas o espectroscopía en capa fina o cualquier combinación de las mismas según lo considere apropiado un experto en la técnica. En una realización, los análisis de lípidos realizados de acuerdo con la descripción demuestran los niveles de colesterol total, triglicéridos, lipoproteínas de baja densidad, lipoproteínas de alta densidad y/o éster de colesterol.

En una realización, por ejemplo, con referencia a la enfermedad de Wolman y EDEC u otras deficiencias de LAL, el análisis de lípidos de un paciente tratado de acuerdo con la invención muestra una normalización de las concentraciones de lípidos en el hígado, bazo, intestino, ganglios linfáticos y/o aorta según lo determine un profesional sanitario con experiencia ordinaria en el campo de las ciencias médicas.

Los niveles de lípidos se pueden evaluar usando análisis de lípidos en plasma o análisis de lípidos en tejidos. En el análisis de lípidos en plasma, se puede recoger plasma sanguíneo y se pueden medir los niveles de colesterol libre en plasma total usando, por ejemplo, ensayos colorimétricos con un kit COD-PAP (Wako Chemicals), los triglicéridos plasmáticos totales se pueden medir usando, por ejemplo, un kit Triglycerides/GB (Boehringer Mannheim) y/o el colesterol plasmático total se puede determinar usando un kit Cholesterol/HP (Boehringer Mannheim). En el análisis de lípidos en tejidos, los lípidos se pueden extraer, por ejemplo, de muestras del hígado, bazo y/o intestino delgado (por ejemplo, usando el procedimiento de Folch proporcionado en Folch y col. J. Biol. Chem 226: 497-505 (1957)). Las concentraciones de colesterol total en los tejidos se pueden medir, por ejemplo, usando O-ftalaldehído.

En algunas realizaciones, la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) es suficiente para aumentar la absorción de nutrientes. En una realización, la administración de lA l exógena aumenta la absorción de nutrientes medida por los niveles de alfa tocoferol sérico, vitamina D 25OH, retinol sérico, didehidroretinol o transtiretina.

En algunas realizaciones, por ejemplo, con referencia a la EW y la EDEC u otras deficiencias de LAL, la administración de LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) es suficiente para aumentar los niveles de hemoglobina sérica (Hb). En una realización, el nivel de hemoglobina aumenta a al menos aproximadamente un 10 % o aproximadamente un 20 % en comparación con el observado antes de la administración con LAL exógena.

En algunas realizaciones, la LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) se puede administrar usando procedimientos para minimizar los efectos secundarios. Por ejemplo, la administración de LAL exógena puede minimizar las respuestas inmunitarias a la LAL exógena.

En otra realización, el paciente es un paciente pediátrico. En otra realización, el paciente tiene menos de 8 meses de edad al iniciar el tratamiento con SA. En otra realización, la SA se administra al paciente pediátrico en una dosis de 1 mg/kg una vez a la semana o cada dos semanas. En otra realización, la SA se administra al paciente pediátrico en una dosis de 3 mg/kg o 5 mg/kg una vez a la semana o cada dos semanas. En otra realización, la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 0,35 mg/kg una vez a la semana o cada dos semanas. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una esperanza de vida de 40 meses o más (por ejemplo, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55,56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70 meses o más) para un paciente pediátrico. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una mejora en el aumento de peso en un paciente pediátrico. Por ejemplo, en una realización, el paciente pediátrico está en el 45 % (por ejemplo, el 50 %, el 55 %, el 60 %, el 65 %, el 70 %, el 75 %, el 80 % o el 85 %) o un percentil mayor en la curva de crecimiento de peso por edad después del tratamiento con SA. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a una mejora de los síntomas gastrointestinales (por ejemplo, una disminución de los vómitos y la diarrea) en un paciente pediátrico. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a niveles normales de albúmina en un paciente pediátrico. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a niveles normales de función hepática en un paciente pediátrico. En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de ALT en un paciente pediátrico (por ejemplo, una reducción en los niveles de ALT en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de AST en un paciente pediátrico (por ejemplo, una reducción en los niveles de AST en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de hemoglobina en un paciente pediátrico (por ejemplo, un aumento en los niveles de hemoglobina en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otra realización, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un cambio hacia los niveles normales de albúmina en un paciente pediátrico (por ejemplo, un aumento en los niveles de albúmina en comparación con antes de iniciar el tratamiento). En otras realizaciones, los procedimientos descritos en esta invención dan lugar a un desarrollo normal en un paciente pediátrico.

F. LAL y composiciones farmacéuticas que comprenden LAL exógena

La presente divulgación abarca el tratamiento de cualquiera de las afecciones relacionadas con la deficiencia de LAL descritas en esta invención y otras afecciones no mencionadas previamente, pero que se beneficiarían del tratamiento. La LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) empleada de acuerdo con la invención incluye LAL recombinante que se puede producir en cualquier sistema de expresión de proteínas útil que incluye, sin limitación, cultivo celular (por ejemplo, células CHO, células COS), bacterias tales como E. coli, animales transgénicos tales como mamíferos y aves (por ejemplo, pollos, patos y pavos) y en sistemas vegetales (por ejemplo, lentejas de agua y plantas de tabaco). Un aspecto de la invención se refiere a LAL recombinante producida de acuerdo con la patente de EE. UU. n.° 7.524.626, depositada el 3 de octubre de 2006; las solicitudes de patente de EE. UU. n.° 11/973.853, depositada el 10 de octubre de 2007; 11/978.360, depositada el 29 de octubre de 2007; y 12/319.396, depositada el 7 de enero de 2009. Un aspecto de la invención se refiere a LAL recombinante producida como se describe en Du y col., (2005) Am. J. Hum. Gineta. 77: 1061-1074 y Du y col., (2008) J. Lipid Res., 49: 1646-1657. En una realización útil, la LAL exógena se produce en el oviducto de un ave transgénica (por ejemplo, un pollo transgénico), por ejemplo, según un procedimiento descrito en el documento WO 2011/133960 (PCT/US2011/033699), depositado el 23 de abril de 2011. En algunas realizaciones, la LAL recombinante se produce en una línea celular aviar. En algunas realizaciones, la LAL recombinante se produce en una línea celular de mamífero (por ejemplo, un ser humano).

En una realización, la lipasa ácida lisosomal exógena usada de acuerdo con la invención contiene glucanos que tienen estructuras sustanciales con enlaces N-glucosídicos terminadas en N-acetilglucosamina (GlcNAc) y manosa. Los glucanos terminados en manosa y GlcNAc en LAL exógena los pueden reconocer específicamente macrófagos y fibroblastos. La manosa-6-fosfato (M6P), que puede dirigir proteínas a los receptores de GlcNAc/manosa que se expresan en células implicadas en condiciones tratables mediante la administración de LAL exógena, también están presentes típicamente en LAL exógena usada de acuerdo con la invención.

Típicamente, la LAL exógena de la invención analizada y descrita en esta invención es LAL humana. En una realización, la LAL exógena tiene la secuencia de aminoácidos proporcionada en Genbank RefSeq NM_000235.2). En una realización, la LAL exógena madura tiene la secuencia de aminoácidos:

SGGKLTAVDPETNMNVSEIISYWGFPSEEYLVETEDGYILCLNRIPHGRKN

HSDKGPKPVVFLQHGLLADS SNWVTNLAN S S LG FILAD AGFDVWMGNSR

GNTWSRKHKTLS VS QDEFW AFS YDEMAKYDLP AS INFILNKTGQEQVYY

V GHS QGTTIGFIAF S QIPELAKRIKMFF ALGP V AS V AFCTS PM AKLGRLPD

HLIKDLFGDKEFLPQSAFLKWLGTHVCTHVILKELCGNLCFLLCGFNERN

LNMSRVDVYTTHSPAGTSVQNMLHWSQAVKFQKFQAFDWGSSAKNYF

HYN QS YPPTYNVKDMLVPT A VW S GGHDWLAD VYD VNILLTQITNLVFH

ESIPEWEHLDFIWGLDAPWRLYNKIINLMRKYQ (SEQ ID NO:l)

En algunas realizaciones, la LAL exógena comprende los aminoácidos 1-378 del SEQ ID NO:1, los aminoácidos 3 378 del SEQ ID NO:1, los aminoácidos 6-378 del SEQ ID NO:1 o los aminoácidos 7-378 del SEQ ID NO:1. En algunas realizaciones, la LAL exógena comprende una mezcla de al menos dos polipéptidos seleccionados del grupo que consiste en los aminoácidos 1-378 del SEQ ID NO:1, los aminoácidos 3-378 del SEQ ID NO:1, los aminoácidos 6-378 del SEQ ID NO:1 y los aminoácidos 7-378 del SEQ ID NO:1. En algunas realizaciones, la LAL exógena comprende una mezcla de un polipéptido que comprende los aminoácidos 1-378 del SEQ ID NO:1, un polipéptido que comprende los aminoácidos 3-378 del SEQ ID NO:1 y un polipéptido que comprende los aminoácidos 6-378 del SEQ ID n O:1. En algunas realizaciones, la LAL exógena comprende un polipéptido que es idéntico a los aminoácidos 1-378 del SEQ ID NO:1, los aminoácidos 3-378 del SEQ ID NO:1, los aminoácidos 6-378 del SEQ ID NO:1 o los aminoácidos 7-378 del SEQ ID NO:1. En otras realizaciones, la LAL exógena comprende un polipéptido que es al menos aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 75 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 85 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 95 %, aproximadamente un 96 %, aproximadamente un 97 %, aproximadamente un 98 % o aproximadamente un 99 % idéntico a los aminoácidos 1-378 del SEQ ID NO:1, los aminoácidos 3-378 del SEQ ID NO:1, los aminoácidos 6-378 del SEQ ID NO:1 o los aminoácidos 7-378 del SEQ ID NO:1. En algunas realizaciones, la LAL exógena comprende un polipéptido que es un fragmento funcional del SEQ ID NO:1 o es al menos aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 75 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 85 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 95 %, aproximadamente un 96 %, aproximadamente un 97 %, aproximadamente un 98 % o aproximadamente un 99 % idéntico a un fragmento funcional del SEQ ID NO:1.

En algunas realizaciones, la LAL exógena es una proteína LAL recombinante descrita en el documento WO 2011/133960 (PCT/US2011/033699), depositada el 23 de abril de 2011.

Se reconoce que las posiciones de los aminoácidos que no son idénticas, a menudo, difieren por sustituciones de aminoácidos conservadoras, donde los residuos de aminoácidos se sustituyen por otros residuos de aminoácidos con propiedades químicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobicidad) y, por lo tanto, no cambian las propiedades funcionales de la molécula. Cuando las secuencias difieren en sustituciones conservadoras, el porcentaje de identidad de la secuencia se puede ajustar hacia arriba para corregir la naturaleza conservadora de la sustitución. Los expertos en la técnica conocen bien los medios para hacer este ajuste. La puntuación de las sustituciones conservadoras se puede calcular según, por ejemplo, con el algoritmo de Meyers y Molineros, Computer Applic. Biol. Sci. 4:11-17 (1988).

Un "margen de comparación" se refiere a un segmento de posiciones contiguas, tales como entre aproximadamente 25 y aproximadamente 400 posiciones, o entre aproximadamente 50 a 200 posiciones, o entre aproximadamente 100 y 150 posiciones, en las que se puede comparar una secuencia con una secuencia de referencia del mismo número de posiciones contiguas después de que las dos secuencias se alineen óptimamente. Los procedimientos de alineación de secuencias para comparación se conocen bien en la técnica. La alineación óptima de secuencias para la comparación se puede llevar a cabo, por ejemplo, mediante un algoritmo de homología local (Smith y Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), mediante un algoritmo de alineación global (Needleman y Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), mediante la búsqueda de procedimientos de similitud (Pearson y Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU.

85:2444 (1988); Altschul y col., Nucl. Acids Res. 25:3389-402 (1997), mediante implementaciones computarizadas de estos algoritmos (por ejemplo, GAP, BESTFIT, FASTA y BLAST en el paquete de software de Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis., EE. UU.), típicamente, usando la configuración predeterminada, o mediante alineación manual e inspección visual (véase, por ejemplo, Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel y col. (eds.), 1994). Por ejemplo, las búsquedas de proteínas BLAST se pueden realizar usando el programa XBLAST, score=50, wordlength=3 para obtener secuencias de aminoácidos que sean más de un 80 % idénticas a la secuencia de aminoácidos del SEQ ID NO:1 o un fragmento de la misma.

Un ejemplo de una implementación de un algoritmo útil es PILEUP. PILEUP crea una alineación de secuencias múltiples a partir de un grupo de secuencias relacionadas usando alineaciones progresivas por pares. También puede trazar un árbol que muestre las relaciones de agolpamiento usadas para crear la alineación. PILEUP usa una simplificación del procedimiento de alineación progresiva de Feng y Doolittle, J. Mol. Evol. 35:351-360 (1987). El procedimiento es similar al descrito por Higgins y Sharp, CABIOS 5:151-3 (1989). El procedimiento de alineamiento múltiple comienza con el alineamiento por pares de las dos secuencias más similares, lo que produce un grupo de dos secuencias alineadas. Este grupo se alinea a continuación con la siguiente secuencia o grupo de secuencias alineadas con mayor relación. Se alinean dos grupos de secuencias mediante una extensión simple del alineamiento por pares de dos secuencias individuales. Una serie de estos alineamientos por pares que incluye secuencias y grupos de secuencias cada vez más diferentes en cada iteración produce la alineación final.

En algunas realizaciones, los polipéptidos de LAL exógena de la invención incluyen variantes de las secuencias de tipo natural. Estas variantes se clasifican en una o más de tres clases: variantes de sustitución, de inserción o de eliminación. Estas variantes pueden ser variantes alélicas o interespecie de origen natural o se pueden preparar mediante mutagénesis dirigida al sitio de nucleótidos en la proteína que codifica el ADN. La mutagénesis dirigida al sitio se puede realizar usando mutagénesis de casete o PCR u otras técnicas bien conocidas en la técnica para producir ADN que codifica la variante y, posteriormente, expresar el ADN en cultivo de células recombinantes. Los fragmentos de las variantes de proteína diana que tienen hasta aproximadamente 100-150 residuos de aminoácidos se pueden preparar mediante síntesis in vitro usando técnicas establecidas. Las tablas de sustituciones conservadoras que proporcionan aminoácidos funcionalmente similares se conocen bien en la técnica (Henikoff y Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919 (1992)).

Las sustituciones de aminoácidos son típicamente de residuos individuales. Normalmente, las inserciones serán del orden de entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20 residuos de aminoácidos, aunque se pueden tolerar inserciones considerablemente más grandes. Las eliminaciones oscilan de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 residuos, aunque en algunos casos, las eliminaciones pueden ser mucho más largas. Las sustituciones, eliminaciones e inserciones o cualquier combinación de las mismas se pueden usar para llegar a un derivado final.

En algunas realizaciones, la LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) tiene una actividad específica de al menos aproximadamente 100 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de al menos aproximadamente 200 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de al menos aproximadamente 250 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de aproximadamente 100 a aproximadamente 1000 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de aproximadamente 100 a aproximadamente 500 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de aproximadamente 100 a aproximadamente 350 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de aproximadamente 200 a aproximadamente 350 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de aproximadamente 250 a aproximadamente 350 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de aproximadamente 250 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de aproximadamente 275 U/mg. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene una actividad específica de aproximadamente 300 U/mg.

La LAL humana tiene 6 posibles sitios en su secuencia de aminoácidos para la glucosilación con enlaces N-glucosídicos: Asn36, Asn72, Asn101, Asn161, Asn273 y Asn321 como se expone en el SEQ ID NO:1. En algunas realizaciones, al menos 1, 2, 3, 4 o 5 de los sitios de glucosilación con enlaces N-glucosídicos están glucosilados. En algunas realizaciones, los seis sitios de glucosilación están glucosilados. En algunas realizaciones, Asn36, Asn101, Asn161, Asn273 y Asn321 están glucosilados. En algunas realizaciones, Asn36, Asn101, Asn161, Asn273 y Asn321 están glucosilados y Asn72 no está glucosilado. En algunas realizaciones, las estructuras de N-glucano comprenden estructuras bi, tri- y tetraantenarias con N-acetilglucosamina (GlcNAc), manosa y/o manosa-6-fosfato (M6P). En algunas realizaciones, la LAL exógena comprende N-glucanos modificados con M6P en Asn101, Asn161 y Asn273. En algunas realizaciones, la LAL exógena no comprende glucanos con enlaces O-glucosídicos. En algunas realizaciones, la LAL exógena no comprende ácido siálico. En algunas realizaciones, la LAL exógena tiene un patrón de glucosilación como se describe en el documento PCT/US2011/033699, depositado el 23 de abril de 2011.

En algunas realizaciones, el peso molecular de la LAL exógena es de aproximadamente 55 kD.

En ciertas realizaciones, un sujeto se puede tratar con una molécula de ácido nucleico que codifica LAL exógena, por ejemplo, en un vector. Las dosis de ácidos nucleicos que codifican polipéptidos oscilan de aproximadamente 10 ng a 1 g, de 100 ng a 100 mg, de 1 pg a 10 mg o 30-300 pg de ADN por paciente. Las dosis de vectores víricos infecciosos oscilan de 10 a 100, o más, viriones por dosis.

Aunque es posible que la proteína terapéutica proporcionada en esta invención, LAL recombinante, se administre en forma sin tratar, es preferible administrar la proteína terapéutica como parte de una formulación farmacéutica.

Las formulaciones farmacéuticas incluyen aquellas adecuadas para uso oral, rectal, nasal, tópico (que incluye bucal y sublingual), vaginal o parenteral. Las formulaciones farmacéuticas incluyen aquellas adecuadas para la administración mediante inyección, que incluye la administración intramuscular, subcutánea e intravenosa. Las formulaciones farmacéuticas también incluyen aquellas para administración por inhalación o insuflación. Las formulaciones se pueden presentar, cuando sea adecuado, de forma conveniente en formas de dosificación unitarias y se pueden preparar mediante cualquiera de los procedimientos bien conocidos en la técnica farmacéutica. Los procedimientos para producir las composiciones farmacéuticas incluyen típicamente la etapa de asociar las proteínas terapéuticas con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos o ambos y, a continuación, si es necesario, darle forma al producto en la formulación deseada.

Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para la administración oral se pueden presentar de forma conveniente como unidades separadas tales como cápsulas, obleas o comprimidos que contienen cada uno una cantidad predeterminada del principio activo; como polvo o gránulos; como solución; como suspensión o como una emulsión. El ingrediente activo también puede estar en forma de un bolo, electuario o pasta. Los comprimidos y cápsulas para administración oral pueden contener excipientes convencionales tales como agentes aglutinantes, cargas, lubricantes, desintegrantes o agentes humectantes. Los comprimidos se pueden recubrir según los procedimientos bien conocidos en la técnica. Las preparaciones orales líquidas pueden estar en forma de, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleosas, soluciones, emulsiones, jarabes o elixires, o se pueden presentar como un producto seco para su constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Dichas preparaciones líquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, agentes emulsionantes, vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles) o conservantes.

Las proteínas terapéuticas de la invención también se pueden formular para administración parenteral (por ejemplo, por inyección, por ejemplo, inyección en bolo o infusión continua) y se pueden presentar en forma de dosis unitaria en ampollas, jeringas precargadas, infusión de pequeño volumen o en envases multidosis con un conservante añadido. Las proteínas terapéuticas se pueden inyectar mediante, por ejemplo, inyecciones subcutáneas, inyecciones intramusculares e infusiones o inyecciones intravenosas (IV). En una realización, la LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) se administra por vía intravenosa mediante infusión intravenosa mediante cualquier procedimiento útil. En un ejemplo, la LAL exógena se puede administrar mediante infusión intravenosa a través de una vía periférica. En otro ejemplo, la LAL exógena se puede administrar mediante infusión intravenosa a través de un catéter central insertado periféricamente. En otro ejemplo, la LAL exógena se puede administrar mediante infusión intravenosa facilitada por una máquina de infusión ambulatoria unida a un puerto de acceso vascular venoso. En una realización, de infusión intravenosa, el medicamento se administra durante un periodo de 1 a 8 horas en función de la cantidad de medicación que se va a infundir y los antecedentes de reacciones previas relacionadas con la infusión del paciente, según lo determine un médico experto en la técnica. En otra realización, la LAL exógena se administra por vía intravenosa mediante inyección intravenosa. En otra realización, la LAL exógena se puede administrar mediante inyección intraperitoneal. En todavía otra realización más, la LAL exógena se administra mediante una cápsula farmacéuticamente aceptable de la proteína terapéutica. Por ejemplo, la cápsula puede ser una cápsula de gelatina con recubrimiento entérico.

En algunas realizaciones, la LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) se administra por infusión, y la infusión se puede producir durante un periodo de tiempo prolongado, por ejemplo, de 30 minutos a 10 horas. Por tanto, la infusión se puede producir, por ejemplo, durante un periodo de aproximadamente 1 hora, aproximadamente 2 horas, aproximadamente 3 horas, aproximadamente 4 horas o aproximadamente 5 horas. La infusión también se puede producir a diversas velocidades. Así, por ejemplo, la velocidad de infusión puede ser de aproximadamente 1 ml por hora a aproximadamente 20 ml por hora. En otra realización, la velocidad de infusión es de aproximadamente 125 ml por hora. En algunas realizaciones, la velocidad de infusión es de 5 ml a 10 ml por hora. En una realización, la velocidad de infusión es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 ml por hora. En una realización, la velocidad de infusión es de 0,1 a 5 mg/kg/h. En una realización, la velocidad de infusión es de aproximadamente 0,1, aproximadamente 0,2, aproximadamente 0,3, aproximadamente 0,5, aproximadamente 1,0, aproximadamente 1,5, aproximadamente 2,0, aproximadamente 3 mg/kg/h.

La LAL exógena (por ejemplo, sebelipasa alfa) puede adoptar formas como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos y puede contener agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilización y/o dispersión. La lA l exógena puede estar en forma de polvo, obtenido por aislamiento aséptico de sólido estéril o por liofilización de la solución, para constituir con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril, libre de pirógenos, antes de su uso.

Para la administración por vía tópica a la epidermis, la LAL exógena se puede formular como ungüentos, cremas o lociones, o como un parche transdérmico. Los ungüentos y cremas se pueden, por ejemplo, formular con una base acuosa u oleosa con la adición de agentes espesantes y/o gelificantes adecuados. Las lociones se pueden formular con una base acuosa u oleosa y, en general, también contendrán uno o más agentes emulsionantes, agentes estabilizantes, agentes dispersantes, agentes de suspensión, agentes espesantes o agentes colorantes.

Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen pastillas para chupar que comprenden el ingrediente activo en una base saborizante, normalmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina o sacarosa y acacia; y enjuagues bucales que comprenden el ingrediente activo en un vehículo líquido adecuado. Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para administración rectal donde el vehículo es un sólido se representan preferentemente como supositorios de dosis unitaria. Los vehículos adecuados incluyen manteca de cacao y otros materiales usados comúnmente en la técnica, y los supositorios se pueden formar de forma conveniente mediante una mezcla de un compuesto activo con los vehículos ablandados o derretidos y su posterior enfriamiento y moldeado en moldes.

Las formulaciones adecuadas para la administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o atomizadores que contienen además del ingrediente activo, dichos vehículos son como se conocen en la técnica como apropiados.

Para la administración intranasal, la LAL exógena se puede usar como un atomizador líquido o un polvo dispersable o en forma de gotas.

Las gotas se pueden formular con una base acuosa o no acuosa que también comprende uno o más agentes dispersantes, agentes solubilizantes o agentes de suspensión. Los atomizadores líquidos se entregan de forma conveniente desde envases presurizados.

Para la administración por inhalación, las proteínas terapéuticas según la invención se pueden entregar de forma conveniente desde un insuflador, nebulizador o un envase presurizado u otros medios convenientes para entregar un atomizador aerosol. Los envases presurizados pueden comprender un propulsor adecuado, tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación se puede determinar proporcionando una válvula para entregar una cantidad medida.

Para la administración por inhalación o insuflación, la LAL exógena puede adoptar la forma de una composición de polvo seco, por ejemplo, una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón. La composición en polvo se puede presentar en forma de dosis unitaria en, por ejemplo, cápsulas o cartuchos o, por ejemplo, gelatina o blísteres desde los cuales se puede administrar el polvo con la ayuda de un inhalador o insuflador. Cuando se desee, se pueden emplear las formulaciones descritas anteriormente adaptadas para proporcionar una liberación lenta del ingrediente activo.

Las composiciones farmacéuticas descritas en esta invención también pueden contener otros ingredientes activos tales como agentes antimicrobianos o conservantes.

En algunas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende LAL exógena comprende además un tampón. Los tampones ejemplares incluyen tampones acetato, fosfato, citrato y glutamato. Los tampones ejemplares también incluyen citrato de litio, citrato de sodio, citrato de potasio, citrato de calcio, lactato de litio, lactato de sodio, lactato de potasio, lactato de calcio, fosfato de litio, fosfato de sodio, fosfato de potasio, fosfato de calcio, maleato de litio, maleato de sodio, maleato de potasio, maleato de calcio, tartarato de litio, tartarato de sodio, tartarato de potasio, tartarato de calcio, succinato de litio, succinato de sodio, succinato de potasio, succinato de calcio, acetato de litio, acetato de sodio, acetato de potasio, acetato de calcio y mezclas de los mismos. En algunas realizaciones, el tampón es citrato trisódico dihidrato. En algunas realizaciones, el tampón es monohidrato de ácido cítrico. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica comprende citrato trisódico deshidratado y monohidrato de ácido cítrico.

En algunas realizaciones, una composición farmacéutica que comprende LAL exógena comprende además un estabilizante. Los estabilizantes ejemplares incluyen albúmina, trehalosa, azúcares, aminoácidos, polioles, ciclodextrinas, sales tales como cloruro de sodio, cloruro de magnesio y cloruro de calcio, lioprotectores y mezclas de los mismos. En algunas realizaciones, una composición farmacéutica comprende seroalbúmina humana.

La presente invención abarca cualquier vía de administración que facilite la captación de la LAL exógena en los lisosomas de los órganos y tejidos pertinentes.

F. Kits y formas de dosis unitarias

En esta invención, también se proporcionan kits que incluyen sebelipasa alfa en una cantidad terapéuticamente eficaz adaptada para su uso en los procedimientos anteriores. Los kits también pueden incluir opcionalmente instrucciones, por ejemplo, que comprenden programas de administración, para permitir que un profesional sanitario (por ejemplo, un médico, profesional de enfermería o paciente) administre sebelipasa alfa a un paciente. El kit también puede incluir una jeringa.

En una realización, la presente descripción proporciona un kit para reducir la fibrosis hepática en un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL), el kit comprende (a) una dosis de sebelipasa alfa; y (b) instrucciones para usar sebelipasa alfa en cualquiera de los procedimientos descritos en esta invención.

EJEMPLOS

Ejemplo 1

Cambio en la fibrosis hepática en niños y adultos con deficiencia de lipasa ácida lisosomal después de 52 semanas de sebelipasa alfa (ensayo ARISE)

A. Protocolo:

La deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL-D) es una enfermedad genética progresiva poco común que, con frecuencia, lleva a fibrosis, cirrosis micronodular y, en última instancia, insuficiencia hepática. En un modelo animal de LAL-D, la sebelipasa alfa (SA) mejoró la patología hepática con resolución de la hepatomegalia, fibrosis hepática y restauración de la arquitectura normal.

El estudio LAL-CL02 (también conocido como "ARISE" (NCT01757184)) es un estudio en fase 3 multicéntrico, aleatorizado y comparativo con placebo diseñado para evaluar la seguridad y eficacia de la sebelipasa alfa (SA) en niños y adultos con deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL). El estudio consiste en un periodo de selección de hasta 6 semanas, un periodo de tratamiento con doble enmascaramiento de 20 semanas, un periodo sin enmascaramiento de hasta 130 semanas (prolongado a 104 semanas adicionales para sujetos que reciben el fármaco en una región donde la SA no está registrada o no está disponible) y una llamada telefónica de seguimiento al menos 4 semanas después de la última dosis del fármaco del estudio. El diseño general del estudio se muestra en la figura 1. Los sujetos del grupo de placebo (PBO) reciben SA al entrar en el periodo sin enmascaramiento.

Se requería que los sujetos tuvieran >4 años de edad en el momento del consentimiento informado, tener una deficiencia de la actividad de la enzima LAL confirmada por gotas de sangre seca (DBS) y una alanina aminotransferasa (ALT) de >1,5 x el límite superior de la normalidad (LSN) en 2 medidas de selección consecutivas obtenidas con al menos una semana de diferencia.

Los sujetos elegibles se aleatorizaron a un tratamiento con doble enmascaramiento con SA o PBO. Los sujetos aleatorizados al tratamiento activo recibieron cada dos semanas (c2s) infusiones intravenosas (IV) de SA a una dosis de 1 mg/kg, para un total de 11 infusiones durante el periodo de tratamiento con doble enmascaramiento de 20 semanas. No se permitieron modificaciones de dosis durante el periodo con doble enmascaramiento. A los sujetos que demostraron evidencia de progresión clínica significativa con el fármaco del estudio enmascarado se les permitió suspender el periodo de tratamiento con doble enmascaramiento y hacer la transición al tratamiento sin enmascaramiento con SA en una dosis de 1 mg/kg c2s.

Durante el periodo sin enmascaramiento (a partir de la semana 22), todos los sujetos recibieron infusiones IV c2s de SA. Se permitieron modificaciones de dosis durante el periodo sin enmascaramiento. Se permitió un aumento de la dosis a 3 mg/kg c2s si el sujeto cumplía con los criterios de aumento de dosis definidos por el protocolo y se permitió una reducción de la dosis a 0,35 mg/kg c2s en caso de mala tolerabilidad. La biopsia de hígado es el estándar aceptado para la evaluación histológica de la actividad de la enfermedad hepática y la fibrosis, a pesar de limitaciones como la variabilidad del muestreo, las posibles complicaciones de una técnica invasiva y la puntuación subjetiva. Según el protocolo del estudio, las biopsias de hígado se debían obtener antes de iniciar el tratamiento, la semana 20 (final del periodo de tratamiento con doble enmascaramiento) y la semana 52 (periodo sin enmascaramiento). Los sujetos también podrían tener una biopsia de hígado opcional en cualquier momento entre la semana 104 y la semana 152. Se debían obtener biopsias de hígado en sujetos adultos a menos que estuviera médicamente contraindicado. Las biopsias de hígado eran opcionales en los pacientes pediátricos, con el consentimiento apropiado y donde lo permitieran las regulaciones locales y las normas de cada centro IRB/IEC. Se obtuvieron biopsias de hígado en 18 de 19 sujetos adultos (>18 años de edad) y en 15 de 47 sujetos pediátricos. De estos 33 sujetos que se sometieron a al menos 1 biopsia de hígado, 30 sujetos tenían datos iniciales válidos y al menos 1 biopsia de hígado válida después de la dosis.

Un patólogo independiente en unas instalaciones centrales que no conocía el punto temporal de la evaluación y la asignación del tratamiento durante el periodo de tratamiento con doble enmascaramiento evaluó todas las biopsias de forma semicuantitativa para detectar características histológicas tales como estadio de Ishak, inflamación portal, inflamación lobulillar, esteatosis macrovesicular y esteatosis microvesicular. Se usó morfometría asistida por ordenador para cuantificar el porcentaje de esteatosis, colágeno, fibrosis y macrófagos.

B. Disposición y datos demográficos de los sujetos con datos de biopsia de hígado

Las biopsias de hígado se obtuvieron antes de iniciar el tratamiento, la semana 20 (final del periodo de tratamiento con doble enmascaramiento) y la semana 52 (periodo sin enmascaramiento). También se obtuvieron biopsias de hígado opcionales de las semanas 104-152. La figura 2 representa gráficamente la frecuencia de biopsia de hígado para pacientes en los grupos de SA y PBO. Se obtuvieron biopsias de hígado en sujetos con >18 años de edad, a menos que estuviera médicamente contraindicado y, de forma opcional, en sujetos con <18 años de edad con el consentimiento de un padre o tutor legal (y consentimiento del sujeto, según correspondiera).

Se aleatorizó un total de 66 sujetos en el estudio LAL-CL02 ARISE. Treinta y seis (36) sujetos se aleatorizaron a sebelipasa alfa (SA) y 30 sujetos se aleatorizaron a PBO. De 19 sujetos adultos, la biopsia estuvo médicamente contraindicada en 1 sujeto. De 47 sujetos pediátricos, la biopsia estuvo médicamente contraindicada en 1 sujeto. Se obtuvo el consentimiento para las biopsias de 15 sujetos pediátricos. Por lo tanto, 33 sujetos (18 adultos y 15 sujetos pediátricos) tuvieron al menos 1 biopsia de hígado.

Treinta de los 33 sujetos con biopsia de hígado tenían datos emparejados (tanto una biopsia inicial válida como al menos una biopsia posterior a la dosis válida). Los 3 sujetos restantes no se incluyeron en los análisis por pares.

Para la disposición por grupo de tratamiento, la aleatorización fue la siguiente:

• 33 sujetos tuvieron al menos 1 biopsia de hígado

• 32 sujetos tenían datos de biopsia de hígado antes de iniciar el tratamiento

• 31 sujetos tenían datos de biopsia válidos antes de iniciar el tratamiento (los datos de biopsia de hígado de un sujeto se excluyeron de los análisis porque la biopsia de hígado de la semana 20 se tomó 1 día después de la dosis de la semana 22 del fármaco del estudio):

° 18 sujetos se aleatorizaron a SA

° 13 sujetos se aleatorizaron a PBO

• 30 sujetos tenían datos de biopsia válidos antes de iniciar el tratamiento y al menos 1 biopsia de hígado válida después de la dosis (véase la tabla 2):

° 18 sujetos se aleatorizaron a SA

° 12 sujetos se aleatorizaron a PBO

• De los sujetos aleatorizados al grupo de SA/SA:

° 10 sujetos tenían datos de biopsia antes de iniciar el tratamiento, la semana 20 y la semana 52

° 6 sujetos tenían datos de biopsia antes de iniciar el tratamiento y solo en la semana 20

° 2 sujetos tenían datos de biopsia antes de iniciar el tratamiento y solo en la semana 52

• De los sujetos aleatorizados al grupo de PBO/SA:

° 6 sujetos tenían datos de biopsia antes de iniciar el tratamiento, la semana 20 y la semana 52

° 4 sujetos tenían datos de biopsia antes de iniciar el tratamiento y solo en la semana 20

La disposición por periodo de tiempo fue la siguiente:

• 26 sujetos tenían datos emparejados de biopsia de hígado para el periodo con doble enmascaramiento (antes de iniciar el tratamiento y semana 20):

° 16 sujetos en el grupo de SA

° 10 sujetos en el grupo de PBO

• 20 sujetos tenían datos emparejados de biopsia de hígado antes de iniciar el tratamiento y de la semana 52:

° 12 sujetos en el grupo de SA/SA

° 8 sujetos en el grupo de PBO/SA

Tabla 2: su etos con datos válidos de bio sia de hí ado antes de iniciar el tratamiento des ués de la dosis

La edad es la edad del sujeto antes de iniciar el tratamiento, cuando se firmó el consentimiento informado. Hubo 9 sujetos que tuvieron aumentos de dosis según los criterios definidos por el protocolo (de 1 mg/kg c2s a 3 mg/kg c2s). Ningún sujeto con datos de biopsia de hígado tuvo un aumento de la dosis antes de la semana 52. En otras palabras, todos los sujetos con datos de biopsia de hígado hasta la semana 52 se expusieron solo a PBO y/o 1 mg/kg de SA.

Se obtuvieron biopsias de hígado en 15 de 47 sujetos pediátricos. Dos de estos 15 sujetos pediátricos tuvieron cada uno solo 1 biopsia de hígado, por lo que no se incluyeron en la cohorte de 13 sujetos pediátricos con datos emparejados de biopsia de hígado.

C. Evaluación de la biopsia de hígado

Se hicieron las siguientes evaluaciones usando muestras de histopatología de hígado:

1. Porcentaje de esteatosis por morfometría (tinción HE)

2. Estadio de Ishak (puntuación 0-6) (tinción HE)

3. Porcentaje de colágeno (tinción con rojo sirio)

4. Porcentaje de fibrosis (tinción AML)

5. Macrófagos (tinción CD68)

6. Inflamación portal (puntuación 0 a 4) (tinción HE)

7. Inflamación lobulillar (puntuación 0 a 4) (tinción HE)

8. Esteatosis macrovesicular (puntuación 0-4) (tinción HE)

9. Esteatosis microvesicular (puntuación 0-4) (tinción HE)

La evaluación del tejido hepático se basa en gran medida en un examen minucioso de las secciones teñidas con hematoxilina y eosina (HE). La tinción HE es la técnica de tinción más común usada en histología. Es la técnica principal para la evaluación de la morfología. Se usaron tinciones adicionales, como las que se describen a continuación, para identificar características que no se ven fácilmente en una tinción HE.

Actina de músculo liso (AML): el isotipo alfa de actina expresado por las células estrelladas hepáticas refleja su activación a células similares a miofibroblastos y se ha relacionado directamente con la fibrogénesis hepática experimental e, indirectamente, con la fibrosis humana en la enfermedad hepática crónica. In vivo, la expresión de alfa actina de músculo liso es un marcador fiable de la activación de las células estrelladas hepáticas que precede al depósito de tejido fibroso y podría ser útil para identificar los primeros estadios de la fibrosis hepática y monitorizar la eficacia de la terapia.

CD68: CD68 (clúster de diferenciación 68) es una glucoproteína lisosomal expresada en macrófagos, tales como las células de Kupffer que se encuentran en el hígado. La inmunohistoquímica para CD68 se usa para identificar células de Kupffer y otros macrófagos.

El rojo sirio es un colorante poliazo que se usa para la tinción selectiva de colágeno cuando se requiere una medición cuantitativa de la fibrosis por morfometría. El rojo sirio tiene afinidad por la mayoría de los colágenos hepáticos, que incluyen los tipos formadores de fibrillas (tipos I y III), de modo que la evaluación cuantitativa de la fibrosis se puede realizar de forma fiable y reproducible.

1. Porcentaje de esteatosis (tinción HE)

Se utilizó una evaluación cuantitativa basada en la morfometría de la histopatología hepática para la esteatosis hepática (medida en la sección con tinción HE). Los parámetros de la biopsia de hígado antes de iniciar el tratamiento se resumen en la tabla 3.

Tabla 3. Parámetros de la bio sia de hí ado antes de iniciar el tratamiento

El cambio desde antes de iniciar el tratamiento hasta la semana 20 en la esteatosis hepática se presenta en la tabla 4 y la figura 3. El análisis a posteriori mostró que, cuando se definieron a los que respondían como sujetos que mejoraron o no cambiaron desde antes de iniciar el tratamiento (con mejora o sin cambios definidos como aumento de <5 % de la esteatosis), en la semana 20, hubo significativamente más sujetos aleatorizados al grupo de SA que respondieron (15/16 sujetos, 94 %) en comparación con los sujetos aleatorizados al grupo de PBO (5/10 sujetos, 50 %; p = 0,0184). Los pacientes que recibieron Sa mostraron una mediana del porcentaje de mejora mayor en la esteatosis que los que recibieron PBO (-42,9 % frente a un 12,3 %, p = 0,061) (figura 4). En la cohorte que recibió 52 semanas de SA (n = 12), la mediana del porcentaje de esteatosis disminuyó en un 37 % desde antes de iniciar el tratamiento.

Tabla 4: cambios en la esteatosis hepática desde antes de iniciar el tratamiento hasta la semana 20 para su etos con datos em are ados de bio sia he ática tinción HE

Cuando se analizó la mediana del cambio porcentual en la esteatosis de los valores determinados morfométricamente de cada sujeto individual desde antes de iniciar el tratamiento hasta la semana 20, la tendencia fue que los sujetos tratados con SA mostraron una mejora más agregada en el porcentaje de esteatosis en comparación con los sujetos que recibieron PBO (tabla 5 y figura 4), aunque las diferencias no alcanzaron significación estadística (p = 0,0613).

Tabla 5: resumen de las estadísticas para el porcentaje de esteatosis hepática por punto temporal y grupo de tratamiento antes de iniciar el tratam iento semana 20

Se presentan estadísticas resumidas para el porcentaje de esteatosis para antes de iniciar el tratamiento, la semana 20 y la semana 52 para los sujetos aleatorizados a SA (tabla 6) y para los sujetos aleatorizados a PBO (tabla 7). Antes de iniciar el tratamiento, las puntuaciones morfométricas para el porcentaje de esteatosis evaluado mediante HE fueron comparables entre los 2 grupos de tratamiento (un 29,7 % en el grupo de SA frente a un 28,4 % en el grupo de PBO).

En la semana 20, los sujetos de SA/SA mostraron una disminución (mejora) media en el porcentaje de esteatosis de un 14,8 % y una mediana de la reducción (mejora) de un 13,05 %. Los sujetos de SA/PBO mostraron una disminución (mejora) media de un 6,1%, y una mediana del aumento (empeoramiento) de un 3,6 %.

En la semana 52, los sujetos de SA/SA mostraron una disminución (mejora) media en el porcentaje de esteatosis de un 11,2 %, una mediana de la reducción (mejora) de un 15,4 % y un cambio porcentual medio desde antes de iniciar el tratamiento de un 1,1 %. Los sujetos de PBO/SA mostraron una disminución (mejora) media en el porcentaje de esteatosis de un 3,1 %, una mediana de la reducción (mejora) de un 10,4 % y un cambio porcentual medio desde antes de iniciar el tratamiento de un 15,4 %. La tendencia de mejora desde antes de iniciar el tratamiento en el porcentaje de esteatosis en sujetos tratados con SA continuó hasta la semana 52. Esto resulta evidente tanto para los sujetos tratados con SA durante 52 semanas (sujetos aleatorizados a SA) como durante 30 semanas (sujetos aleatorizados a PBO).

Tabla 6: porcentaje de esteatosis por punto temporal: antes de iniciar el tratamiento, semana 20 y semana 52 ara su etos aleatorizados a SA tinción HE

Tabla 7: porcentaje de esteatosis por punto temporal: antes de iniciar el tratamiento, semana 20 y semana 52 para sujetos aleatorizados a PBO (tinción HE)

2. Estadio de Ishak (tinción HE)

La puntuación del estadio de Ishak oscila de 0 a 6 y se determina en función de la evaluación histopatológica de las biopsias de hígado (tabla 8).

Otros sistemas de estadificación descritos en la bibliografía (índice de actividad histológica de Knodell, estadio de Batts-Ludwig, Scheuter y METAVIR) se puntúan en escalas que van de 0 a 4. La escala de Ishak tiene mayor granularidad (los estadios van de 0 a 6), y cada estadio de fibrosis de Ishak refleja más cicatrices que el estadio anterior. En los últimos años, el sistema de estadificación de Ishak se ha usado ampliamente en ensayos clínicos, especialmente en Estados Unidos.

Debe tenerse en cuenta que no existe una relación lineal entre los estadios de Ishak y la fibrosis. Por ejemplo, los cambios de fibrosis de los estadios 1 a 2 son mucho más pequeños (de un 3,0 % a un 3,6 %) que los cambios de los estadios 4 a 5 (de un 13,7 % a un 24,3 %).

Tabla 8: descri ción de los estadios de Ishak

Los cambios desde antes de iniciar el tratamiento hasta la semana 20 y los cambios desde antes de iniciar el tratamiento hasta la semana 52 en las puntuaciones de Ishak se presentan en la tabla 9 (sujetos aleatorizados a SA) y la tabla 10 (sujetos aleatorizados a PBO).

Antes de iniciar el tratamiento, 32 pacientes con biopsias tenían fibrosis (estadio >1). Un 47 % tenía fibrosis en puente (estadio 3-4) y un 31 % tenía cirrosis (estadio 5-6). De los 20 pacientes con datos emparejados de biopsias desde antes de iniciar el tratamiento y la semana 52 del estudio, 8 pacientes estaban en estadio 5 o 6 de Ishak al inicio del estudio, indicativo de cirrosis temprana o establecida.

La figura 5 representa gráficamente el cambio en el estadio de Ishak en el grupo de SA durante el periodo con doble enmascaramiento (20 semanas de exposición a SA [n = 16]). La figura 6 representa gráficamente el cambio en el estadio de Ishak en el grupo de SA durante el periodo sin enmascaramiento (52 semanas de exposición a SA [n = 12]). En la cohorte de 12 pacientes que recibieron 52 semanas de SA, 8 tuvieron una reducción en el estadio de fibrosis (6 tuvieron una reducción de 2 puntos y 2 tuvieron una reducción de 1 punto) y 3 no tuvieron cambios. Un paciente tuvo un aumento.

La figura 7 representa gráficamente el cambio en el estadio de Ishak en el grupo de PBO durante el periodo con doble enmascaramiento (0 semanas de exposición a SA [n = 10]). La figura 8 representa gráficamente el cambio en el estadio de Ishak una vez el grupo de PBO inició la SA en el periodo sin enmascaramiento (30 semanas de exposición a SA [n = 8]). En la cohorte de 8 pacientes que recibieron 30 semanas de SA, 4 tuvieron una reducción de 1 punto en el estadio de fibrosis, 3 no tuvieron cambios y 1 tuvo un aumento.

En la semana 20, la mayoría de los sujetos en los grupos de SA y PBO (17 de 26) no tuvieron cambios desde antes de iniciar el tratamiento en las puntuaciones de Ishak.

Como se señaló anteriormente, en la semana 52, 6 sujetos tuvieron una reducción de >2 puntos en las puntuaciones de Ishak desde antes de iniciar el tratamiento (véase la figura 6). Los 6 sujetos tuvieron 52 semanas de exposición a SA, lo que enfatiza un mayor beneficio con una exposición más prolongada a SA. Cinco de los 6 sujetos con una reducción >2 puntos en las puntuaciones del estadio de Ishak desde antes de iniciar el tratamiento hasta la semana 52 tenían un estadio de Ishak de 3 antes de iniciar el tratamiento, lo que sugiere que, cuando el tratamiento se comienza antes de que la fibrosis esté bien establecida, hay un mayor beneficio del tratamiento. En general, en la semana 52, 18 de 20 sujetos (90 %) con datos emparejados de biopsias de hígado tenían puntuaciones de Ishak que habían mejorado o no habían progresado.

Más de la mitad de los pacientes que tuvieron una reducción de 1 punto en el estadio de Ishak, tenían cirrosis al inicio del estudio. De los seis (6) pacientes que tuvieron una reducción de 2 puntos en el estadio, uno (1) tenía cirrosis antes de iniciar el tratamiento. Cinco (5) de los seis (6) tenían estadio 3 antes de iniciar el tratamiento y experimentaron un cambio porcentual medio a las 52 semanas de -60,5 % en ALT, -40,3 % en C-LDL y -31,6 % en contenido de grasa hepática según lo evaluado por resonancia magnética. Durante las 52 semanas del estudio, sesenta y dos (62) pacientes tuvieron >1 acontecimiento adverso (AA), la mayoría de los cuales no estaban relacionados. Diez (10) pacientes tuvieron reacciones asociadas a la infusión (RAI). Cinco (5) pacientes tuvieron acontecimientos adversos (AA) graves, uno de los cuales se consideró relacionado con el tratamiento (un RAI). Se detuvo la SA y el paciente se reintrodujo a SA siguiendo un breve protocolo de desensibilización y permanece con el fármaco del estudio. Ningún paciente interrumpió el estudio debido a un AA.

De los doce (12) pacientes tratados con SA durante 52 semanas, 8 habían demostrado una reducción en el estadio de fibrosis, tres (3) no tuvieron cambios y uno (1) tuvo un aumento. La duración más prolongada del tratamiento tendió a mostrar mayores reducciones de la fibrosis. Estas reducciones vinieron acompañadas de reducciones en la grasa hepática, ALT y C-LDL. En la figura 9, se expone un resumen de los datos de ALT, AST, C-LDL, C-HDL, C-NO-HDL y TG. Estos datos apoyan el valor del tratamiento temprano y a largo plazo de SA en niños y adultos con LAL-D.

Tabla 9: cambios desde antes de iniciar el tratam iento hasta la semana 20 y hasta la semana 52 en las untuaciones de Ishak ara su etos aleatorizados a SA tinción HE

Tabla 10: cambios desde antes de iniciar el tratamiento hasta la semana 20 y hasta la semana 52 en las untuaciones de Ishak ara su etos aleatorizados a PBO tinción HE

Los 31 sujetos con biopsias iniciales tenían algo de fibrosis antes de iniciar el tratamiento (tabla 11 y tabla 12). Diez sujetos tenían puntuaciones de Ishak de 5 o 6 antes de iniciar el tratamiento, indicativo de cirrosis temprana o establecida. Para los sujetos aleatorizados a SA (tabla 9), las puntuaciones de Ishak mejoraron en la semana 20 y continuaron mejorando en la semana 52 (cuando un 21 % de los sujetos no tenían fibrosis), lo que sugiere que cuanto más prolongado es el tratamiento, más evidente era la mejora.

Tabla 11: untuaciones del estadio de Ishak or unto tem oral ara su etos aleatorizados a SA

Tabla 12: untuaciones del estadio de Ishak or unto tem oral ara su etos aleatorizados a PBO

3. Colágeno (tinción con rojo sirio)

Se presentan estadísticas resumidas para el porcentaje de colágeno para antes de iniciar el tratamiento y la semana 52 para los sujetos aleatorizados a SA (tabla 13) y para los sujetos aleatorizados a PBO (tabla 14). Antes de iniciar el tratamiento, las puntuaciones morfométricas para el porcentaje de colágeno evaluado por el rojo sirio fueron una media de un 9,2 % (mediana de un 8,1 %) en el grupo de SA y media de un 16,4 % (mediana de un 10,8 %) en el grupo de PBO.

En la semana 20, ambos grupos de tratamiento mostraron un pequeño aumento mediano (un 3,85 % para los sujetos con SA y un 3,35 % para los sujetos con PBO).

En la semana 52, los sujetos del grupo de tratamiento con SA/SA mostraron una mejora en el porcentaje de colágeno: el cambio medio desde antes de iniciar el tratamiento fue una disminución (mejora) de un 3,2 % para sujetos con SA/SA (mediana de la disminución de un 2,5 %). Los sujetos en el grupo de tratamiento con PBO/SA tuvieron un aumento medio (empeoramiento) desde antes de iniciar el tratamiento de un 0,6 % y una mediana del aumento (empeoramiento) de un 2,7 %.

Tabla 13. Porcentaje de colágeno: datos de biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a SA tinción con ro o sirio

Tabla 14: Porcentaje de colágeno: datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a PBO tinción son ro o sirio

4. Fibrosis (tinción AML)

Se presentan estadísticas resumidas para el porcentaje de fibrosis para antes de iniciar el tratamiento y la semana 52 para los sujetos aleatorizados a SA (tabla 15) y para los sujetos aleatorizados a PBO (tabla 16). Antes de iniciar el tratamiento, las puntuaciones morfométricas para el porcentaje de fibrosis evaluado por tinción AML fueron una media de un 6,1 % (mediana de un 4,05 %) en el grupo de SA y media de un 7,9 % (mediana de un 4,00 %) en el grupo de PBO. En la semana 20, el porcentaje de evaluaciones de fibrosis fue de un 5,9 % (mediana de un 6,05 %) en el grupo de SA y un 7,7 % (mediana de un 6,6 %) en el grupo de PBO.

En la semana 52, los sujetos de ambos grupos de tratamiento mostraron una mejora en el porcentaje de fibrosis: la disminución media (mejora) desde antes de iniciar el tratamiento fue de un 4,4 % para sujetos de SA/SA (la mediana fue de un 3,1 %) y un 2,4 % para sujetos de PBO/SA (la mediana fue un 2,9 %).

Tabla 15. Porcentaje de fibrosis: datos de biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a SA (tinción AML)

Tabla 16: Porcentaje de fibrosis: datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a PBO tinción AML

5. Macrófagos (inmunotinción de CD68)

Se presentan estadísticas resumidas para el porcentaje de macrófagos para antes de iniciar el tratamiento y la semana 52 para los sujetos aleatorizados a SA (tabla 17) y para los sujetos a PBO (tabla 18). Antes de iniciar el tratamiento, las puntuaciones morfométricas para el porcentaje de células CD68+ evaluado por inmunotinción de CD68+ fueron una media de un 9,1 % (mediana de un 7,4 %) en el grupo de SA y media de un 4,6 % (mediana de un 6,0 %) en el grupo de PBO.

En la semana 20, el grupo de SA había mejorado a una media de un 6,4 % (mediana de un 4,6 %). El grupo de PBO tuvo una media de un 7,1 % (mediana de un 6,2 %).

En la semana 52, los sujetos del grupo de SA/SA continuaron mostrando una mejora en el porcentaje de macrófagos: la disminución media (mejora) desde antes de iniciar el tratamiento fue de un 4,4 % (mediana de la disminución de un 1,6 %). Los sujetos en el grupo de PBO/SA tuvieron un aumento medio (empeoramiento) desde antes de iniciar el tratamiento de un 1,75 % y una mediana del aumento (empeoramiento) de un 1,8 %.

Tabla 17. Porcentaje de macrófagos: datos de biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a SA inmunotinción de CD68+

Tabla 18: Porcentaje de macrófagos: datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a PBO inmunotinción de CD68+

6. Inflamación portal

La inflamación portal se puntúa de 0 a 4; las puntuaciones se presentan por punto temporal (antes de iniciar el tratamiento, semana 20 y semana 52) en la tabla 19 para los sujetos aleatorizados a SA y en la tabla 20 para los sujetos aleatorizados a PBO. La inflamación portal estaba presente en casi todos los sujetos antes de iniciar el tratamiento (puntuaciones de 1 o 2, leve o moderada, para 30 de 31 sujetos). En la semana 20, 2 sujetos (ambos en el grupo de PBO) habían progresado a puntuaciones de 3 (inflamación portal moderada/marcada); ninguno de los sujetos de SA había progresado a una puntuación de 3. En la semana 52, la mayoría de los sujetos permanecían en las categorías leve o moderada de inflamación portal.

Tabla 19. Inflamación portal: datos de biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a SA tinción He

Tabla 20: Inflamación portal: datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a PBO tinción HE

7. Inflamación lobulillar

La inflamación lobulillar se puntuó de 0 a 4. Las puntuaciones se presentan por punto temporal (antes de iniciar el tratamiento, semana 20 y semana 52) en la tabla 21 para los sujetos aleatorizados a SA y en la tabla 22 para los sujetos aleatorizados a PBO. La inflamación lobulillar estaba presente en todos los sujetos antes de iniciar el tratamiento. La tendencia fue hacia una disminución con el tiempo de la inflamación lobulillar después del tratamiento con SA. En la semana 52, 2 sujetos (ambos en el grupo de SA/SA) habían mejorado a ninguna inflamación lobulillar (puntuación de 0).

Tabla 21: Inflamación lobulillar datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a SA tinción HE

Tabla 22: Inflamación lobulillar datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a PBO tinción HE

8. Esteatosis macrovesicular

La esteatosis macrovesicular se puntúa de 0 a 4. Las puntuaciones se presentan por punto temporal (antes de iniciar el tratamiento, semana 20 y semana 52) en la tabla 23 para los sujetos aleatorizados a SA y en la tabla 24 para los sujetos aleatorizados a PBO. La mayoría de los sujetos (27 de 31) no tenían esteatosis macrovesicular antes de iniciar el tratamiento, lo que era un hallazgo anticipado basado en la patología documentada de la enfermedad subyacente.

En la semana 52, la mayoría de los sujetos (15 de 21) no tenían esteatosis macrovesicular.

Tabla 23. Esteatosis macrovesicular: datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a SA tinción HE

Tabla 24: Esteatosis macrovesicular datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a PBO tinción HE

9. Esteatosis m icrovesicular

La esteatosis microvesicular se puntuó de 0 a 4. Las puntuaciones se presentan por punto temporal (antes de iniciar el tratamiento, semana 20 y semana 52) en la tabla 25 para los sujetos aleatorizados a SA y en la tabla 26 para los sujetos aleatorizados a PBO. La mayoría de los sujetos tenían esteatosis microvesicular antes de iniciar el tratamiento (30 de 31 sujetos), como se esperaba con la enfermedad subyacente. Asimismo, la mayoría (27 de 31 sujetos) tenía >66 % de afectación/reemplazo de hepatocitos, lo que demuestra y subyace a la gravedad de la enfermedad. En la semana 52, solo 12 de 21 sujetos tenían >66 % de afectación/reemplazo de hepatocitos, lo que refleja el efecto de SA sobre la reducción de grasa en los hepatocitos.

Tabla 25: Esteatosis microvesicular: datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a SA tinción HE

Tabla 26: Esteatosis microvesicular: datos de la biopsia de hígado por punto temporal para sujetos aleatorizados a PBO tinción HE

C. Discusión y conclusiones generales

La biopsia de hígado es el estándar aceptado para la evaluación histológica de la actividad de la enfermedad hepática y la fibrosis, a pesar de limitaciones como la variabilidad del muestreo, las posibles complicaciones de una técnica invasiva y la puntuación subjetiva.

Se obtuvieron biopsias de hígado en 18 de 19 sujetos adultos (>18 años de edad) y en 15 de 47 sujetos pediátricos. De estos 33 sujetos que se sometieron a al menos 1 biopsia de hígado, 30 sujetos tenían datos iniciales válidos y al menos 1 biopsia de hígado válida después de la dosis (en la semana 20 y/o la semana 52). La variabilidad del muestreo es una limitación del estudio, debido al pequeño número de sujetos con datos emparejados de biopsia de hígado.

Se utilizó una evaluación cuantitativa basada en la morfometría de la histopatología hepática para el porcentaje de esteatosis. Antes de iniciar el tratamiento, las puntuaciones morfométricas para el porcentaje de esteatosis fueron comparables entre los 2 grupos de tratamiento (un 29,7 % en el grupo de SA frente a un 28,4 % en el grupo de PBO). Cuando los que respondieron al tratamiento se definieron como sujetos que mejoraron o no cambiaron desde antes de iniciar el tratamiento, en la semana 20, hubo significativamente más sujetos aleatorizados al grupo de SA que respondieron (15/16 sujetos, un 94 %) en comparación con los sujetos aleatorizados al grupo de PBO (5/10 sujetos, un 50 %; p = 0,0184). Cuando se analizó la mediana del cambio porcentual en la esteatosis desde antes de iniciar el tratamiento hasta la semana 20, la tendencia fue que los sujetos tratados con SA mostraron más mejora en el porcentaje de esteatosis en comparación con los sujetos que recibieron PBO, aunque las diferencias no alcanzaron significación estadística (p = 0,061). Cuando se consideran sujetos con datos emparejados de biopsia de hígado antes de iniciar el tratamiento y en la semana 52, la tendencia de mejora desde antes de iniciar el tratamiento en el porcentaje de esteatosis en sujetos tratados con SA continuó hasta la semana 52. Esto resulta evidente tanto para sujetos tratados con SA durante 52 semanas (el cambio medio desde antes de iniciar el tratamiento fue de un 11,2 %) como durante 30 semanas (el cambio medio desde antes de iniciar el tratamiento fue de un 3,1 %), con una mejora media aparentemente mayor en los sujetos tratados durante 52 semanas, lo que sugiere una relación entre el beneficio y la duración del tratamiento.

Los 31 sujetos con biopsias iniciales y al menos 1 biopsia válida posterior a la dosis tenían algo de fibrosis antes de iniciar el tratamiento. De los 20 sujetos con datos emparejados antes de iniciar el tratamiento y en la semana 52, 10 sujetos tenían puntuaciones de Ishak de 5 o 6 antes de iniciar el tratamiento, indicativo de cirrosis temprana o establecida. En la semana 52, 18 de 20 sujetos (90 %) con datos emparejados de biopsias de hígado tenían puntuaciones de estadio de Ishak que habían mejorado o no habían progresado. Además de la mejora en los marcadores hepáticos y los parámetros lipídicos, el tratamiento a largo plazo con 52 semanas de SA mostró que un 92 % de los pacientes (11 de 12) tenían un estadio de fibrosis de Ishak mejorado o estable, y un 67 % tenía al menos una mejora en un estadio (8 de 12) y un 50 % (6 de 12) con una reducción de 2 puntos en las puntuaciones de estadio de Ishak desde antes de iniciar el tratamiento. Los 6 sujetos tuvieron 52 semanas de exposición a SA, lo que enfatiza un mayor beneficio con una exposición más prolongada a SA. Cinco de los 6 sujetos con una reducción >2 puntos en las puntuaciones del estadio de Ishak desde el inicio del estudio hasta la semana 52 tenían un estadio de Ishak de 3 al inicio del estudio, lo que sugiere que, cuando el tratamiento se inicia antes de que la fibrosis esté bien establecida, hay un mayor beneficio del tratamiento.

Para las características histológicas de colágeno, fibrosis, macrófagos, inflamación portal e inflamación lobulillar, todos los sujetos mostraron una mejora con respecto a antes de iniciar el tratamiento en la semana 52, y los sujetos tratados con SA durante 52 semanas (los aleatorizados a SA) mostraron más mejora que los sujetos aleatorizados a PBO (y, por tanto, tratados con SA durante 30 semanas).

Como se esperaba según la patología de la enfermedad subyacente, pocos (5/20) sujetos con datos emparejados de biopsia de hígado tenían esteatosis macrovesicular antes de iniciar el tratamiento, pero la mayoría (19/20) de los sujetos tenían esteatosis microvesicular. Al igual que con los otros parámetros histológicos, la esteatosis microvesicular mejoró con el tratamiento con SA, se observó más mejora en los sujetos tratados durante 52 semanas que durante 30 semanas.

La tendencia general respalda la mejora o la detención de la progresión del daño hepático en sujetos tratados con SA en comparación con antes de iniciar el tratamiento. Los resultados de los sujetos que se aleatorizaron a SA y que tienen datos de biopsia en los 3 puntos temporales (antes de iniciar el tratamiento, 20 semanas y 52 semanas) sugieren una mejora aumentada con un tiempo aumentado en SA. De forma similar, cuando se comparó a los sujetos en la semana 52, los tratados con SA durante 52 semanas (sujetos aleatorizados a SA) mostraron más mejora que los tratados durante 30 semanas (sujetos aleatorizados a PBO).

Ejemplo 2: resultados provisionales adicionales del ensayo ARISE

Lo que sigue es un resumen de los datos provisionales del ensayo ARISE en curso, que se llevó a cabo sustancialmente según el protocolo descrito anteriormente y complementa los datos del ejemplo 1. El objetivo de este análisis fue evaluar la fase sin enmascaramiento en curso del estudio ARISE para los parámetros clave del estudio clínico durante 76 semanas de tratamiento con sebelipasa alfa (SA).

Los pacientes aleatorizados inicialmente al grupo de SA recibieron SA durante 76 semanas (semanas de estudio 0 76). Los pacientes aleatorizados inicialmente al grupo de placebo, que, a continuación, entraron en el periodo sin enmascaramiento, recibieron SA durante 78 semanas (semanas de estudio 22-100). Los datos agregados se presentan como 76 semanas de tratamiento con SA.

Los acontecimientos adversos más comunes que se presentan con el tratamiento (incidencia >10 %) comunicados durante el periodo de extensión sin enmascaramiento se exponen a continuación en la tabla 27. Se administraron 3951 infusiones a 1 mg/kg y 248 infusiones a 3 mg/kg. La mayoría de los acontecimientos adversos (AA) fueron de intensidad leve o moderada. Ningún paciente abandonó debido a AA en el periodo sin enmascaramiento. Las reacciones asociadas a la infusión (RAI) durante el periodo de extensión sin enmascaramiento se produjeron en 13 pacientes (20 %); todos menos uno fueron de intensidad leve o moderada. 7 pacientes tuvieron AA graves. De estos, 1 era un RAI considerado relacionado con el tratamiento. El paciente interrumpió el tratamiento con SA durante 86 semanas, se sometió a un protocolo de desensibilización y, a continuación, retomó el tratamiento. Se detectaron anticuerpos antifármaco (AAF) en 7 pacientes (11 %). De estos 7, 2 pacientes tenían anticuerpos neutralizantes. El perfil de seguridad de los pacientes que dieron positivo en AAF fue congruente con el de la población general del estudio.

Tabla 27: acontecimientos adversos más comunes ue se resentaron con el tratamiento

Como se muestra en la figura 10, los niveles medios de ALT disminuyeron de 99,6 U/l antes de iniciar el tratamiento a 39,6 U/l con 76 semanas de tratamiento con SA. Esto representa un cambio porcentual medio de -56,1 %. Específicamente, un 87 % de los pacientes alcanzaron una ALT de <1,5x LSN. A las 76 semanas, un 51 % (31/61) había logrado la normalización de ALT.

Además, los niveles medios de AST en suero disminuyeron de 79,8 U/l antes de iniciar el tratamiento a 36,3 U/l con 76 semanas de tratamiento con SA, lo que representa un cambio porcentual medio de -50,7 %. Específicamente, un 95 % de los pacientes alcanzaron una AST de <1,5x LSN. A las 76 semanas, un 65 % (37/57) de los pacientes habían logrado la normalización de AST con el tratamiento con SA.

La figura 11 representa gráficamente el cambio medio desde antes de iniciar el tratamiento en los parámetros de lípidos en la semana 76 tratamiento con SA. Como se muestra en la figura 11, los niveles medios de C-LDL mejoraron de 199 a 142 mg/dl. Los niveles medios de C-NO-HDL mejoraron de 230 a 166 mg/dl. Los niveles medios de TG mejoraron de 155 a 123 mg/dl. Los niveles medios de C-HDL mejoraron de 33 a 40 mg/dl.

La resonancia magnética eco de gradiente multi-eco se realizó antes de iniciar el tratamiento, en la semana 20 del estudio y en la semana 52 del estudio (lo que representa 52 semanas de tratamiento con SA en el grupo de SA/SA y 30 semanas de tratamiento en el grupo de PBO/SA), para evaluar la fracción de grasa hepática y el volumen hepático. Con 52 semanas de tratamiento con SA, un 88 % de los pacientes (28/32) tuvo una reducción en la fracción de grasa hepática (reducción media -21 %, n = 32). Un 90 % de los pacientes (28/31) tuvo una reducción en el volumen hepático (reducción media -13 %, n = 31). Con 30 semanas de tratamiento con SA, un 88 % de los pacientes (21/24) tuvo una reducción en la fracción de grasa hepática (reducción media -28 %, n = 24). Un 96 % de los pacientes (25/26) tuvo una reducción en el volumen hepático (reducción media -11 %, n = 26).

En resumen, se observaron mejoras mantenidas en los marcadores de daño hepático, anomalías lipídicas, volumen hepático y contenido de grasa hepática durante 76 semanas de tratamiento con SA, lo que destaca el beneficio de la terapia a largo plazo. Además, los pacientes con LAL-D toleraron en general bien el tratamiento continuo con SA durante 76 semanas. Específicamente, el perfil de seguridad a largo plazo fue similar al del periodo con doble enmascaramiento y la mayoría de los acontecimientos adversos fueron de intensidad de leve a moderada.

Ejemplo 3: resultados provisionales del ensayo en pacientes pediátricos

Lo que sigue es un resumen de un estudio pediátrico (estudio LAL-CL03; clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01358370?term=LAL-1&rank=1), que se llevó a cabo sustancialmente según el protocolo descrito anteriormente y complementa los datos de los ejemplos 1 y 2. El objetivo de este análisis fue evaluar el efecto de SA sobre la supervivencia a los 3 años de edad y la función hepática en bebés con deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL-D) rápidamente progresiva.

Para este estudio, los pacientes pediátricos con LAL-D (es decir, bebés hasta los 3 años de edad) recibieron una dosis inicial de 0,35 mg/kg de SA semanalmente, con un aumento hasta 1 mg/kg. Se permitió un mayor aumento a 3,0 o 5,0 mg/kg según los criterios definidos por el protocolo. Los criterios de inclusión clave incluyeron: (1) <8 meses de edad a la edad de la primera infusión anticipada, (2) diagnóstico confirmado por laboratorio de LAL-D, y (3) retraso del crecimiento demostrado u otra evidencia de enfermedad rápidamente progresiva con aparición antes de los 6 meses de edad. La supervivencia fue la principal medida de eficacia, pero las mejoras en el peso y el desarrollo funcional, los efectos hematológicos y la seguridad/tolerabilidad también se evaluaron por encima de los 3 años.

Se inscribieron nueve pacientes que tenían más de 31 meses. Los datos demográficos de los pacientes se muestran en la tabla 28. Ocho de los nueve tenían problemas de crecimiento. Los nueve tenían diarrea o vómitos, calcificación suprarrenal, hepatomegalia y/o esplenomegalia. Los nueve requirieron una dieta especializada (por ejemplo, Monogen®), tres de los nueve recibieron una dieta reducida en grasas y dos de los nueve requirieron nutrición parenteral.

Tabla 28: datos demo ráficos de los acientes

Ningún paciente ha abandonado el estudio hasta la fecha. Se han administrado 1013 infusiones. Un paciente (paciente D) completó el estudio en mayo de 2016 y continúa recibiendo SA 3 mg/kg cada dos semanas.

Se produjeron 43 acontecimientos adversos graves (AAG) en los nueve pacientes. Durante el año anterior a esta evaluación, hubo dos AAG no relacionados (crup y malabsorción) [hipoalbuminemia] en dos pacientes diferentes) y una reacción asociada a la infusión (RAI) que fue leve y no provocó modificaciones en la terapia. La gran mayoría (95 %) de los acontecimientos adversos (AA) fueron leves/moderados.

Hubo 54 RAI en total en cinco pacientes, que incluyen cuatro acontecimientos comunicados también como AAG. 48 de los RAI se enumeraron como relacionados o posiblemente relacionados. 51 de los RAI fueron leves o moderados (por ejemplo, fiebre o vómitos). Se produjeron 3 RAI graves en el mismo paciente. Todas las reacciones se gestionaron y resolvieron con éxito con la práctica médica habitual.

Se obtuvieron resultados positivos de anticuerpos antifármaco (AAF) de 4/7 pacientes sometidos a ensayo. Dos de los pacientes positivos han sido positivos de forma congruente para AAF y anticuerpos neutralizantes, incluida la prueba más reciente. Los otros dos pacientes han sido positivos con menos frecuencia para AAF y solo uno con anticuerpos neutralizantes. Todos los pacientes positivos para AAF han experimentado RAI sin afectar al tratamiento y con una relación temporal no congruente con la presencia de anticuerpos.

Las estadísticas de supervivencia se muestran en la figura 12. Cinco pacientes han sobrevivido más allá de los 3 años de edad a 28 de agosto de 2016. La mediana de la edad (intervalo): 3 años, 11 meses (de 3 años, 6 meses a 5 años y 9 meses). La mediana de tiempo en el estudio fue de 3 años y 5 meses. El paciente de mayor edad ha estado recibiendo SA durante 5 años y 5 meses. Cuatro muertes no estaban relacionadas o probablemente no estaban relacionadas con la SA. Tres pacientes murieron después de recibir <4 dosis de SA (uno por paro cardíaco y otro por hemorragia intraperitoneal masiva). Otro paciente murió por insuficiencia hepática como resultado de la LAL-D. Un paciente completó el estudio, pero sigue en tratamiento. La figura 13 muestra los gráficos de Kaplan-Meier de tiempo desde el nacimiento hasta la muerte (estudio LAL-CL03 y bebés LAL-D no tratados con retraso del crecimiento (estudio LAL-NH01; clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01371825?term=LAL-CL03&rank=1).

La curva de crecimiento de peso por edad del paciente D se muestra en la figura 14. La curva de crecimiento de peso por edad para seis pacientes que sobrevivieron hasta los 12 meses de edad (pacientes B, C, D, E, F y G) se muestra en la figura 15.

El estado de la dosificación y el esquema de aumento de la dosis se establecen a continuación en la tabla 29.

Tabla 29: estado de la dosificación y aumento de la dosis

El peso, el hígado y los efectos hematológicos se indican a continuación en la tabla 30. Los parámetros hepáticos y hematológicos (ALT, AST, hemoglobina, ferritina, albúmina y plaquetas) a lo largo del tiempo se establecen en la figura 16. El percentil de la mediana del peso fue de un 3,1 % antes de iniciar el tratamiento y aumentó a un 37,0 % en la visita más reciente. El percentil de la mediana de la talla fue de un 1,8 % al inicio del estudio y aumentó a un 30,6 % en la visita más reciente.

Tabla 30: estado de la dosificación aumento de la dosis

En conclusión, 5 pacientes han sobrevivido hasta más de 3 años. La mediana de la supervivencia de los bebés en el estudio de la evolución natural fue de 3,7 meses. Todos los pacientes que sobrevivieron requirieron un aumento de la dosis a >3,0 mg/kg semanal. Las mejoras en el aumento de peso, los síntomas gastrointestinales, la hepatoesplenomegalia, la ALT, la AST y la hemoglobina se han mantenido a lo largo del tiempo. La mayoría de los pacientes han demostrado un desarrollo normal. La SA se toleró bien.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Sebelipasa alfa para su uso en un procedimiento para reducir la fibrosis hepática en un paciente humano con una deficiencia de lipasa ácida lisosomal (LAL), que comprende administrar sebelipasa alfa al paciente, donde se ha determinado que el paciente tiene un estadio de fibrosis de Ishak de 1 o mayor antes de la administración, y donde al menos un punto de reducción en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración es indicativo de reducción de la fibrosis hepática.

2. La sebelipasa alfa para su uso según la reivindicación 1, donde la reducción de al menos un punto se produce en la semana 20 o hacia la semana 20.

3. La sebelipasa alfa para su uso según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde la reducción de al menos un punto se produce en la semana 30 o hacia la semana 30.

4. La sebelipasa alfa para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el paciente tiene una reducción de >2 puntos en el estadio de fibrosis de Ishak después de la administración en comparación con un estadio de fibrosis de Ishak inicial obtenido del paciente antes de la administración, y la reducción de >2 puntos se produce en la semana 52 o hacia la semana 52.

5. La sebelipasa alfa para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el estadio de fibrosis de Ishak se evalúa mediante biopsia de hígado.

6. La sebelipasa alfa para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la sebelipasa alfa se administra como infusión intravenosa, opcionalmente, donde la sebelipasa alfa se infunde durante al menos dos horas.

7. La sebelipasa alfa para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 1 mg/kg una vez cada dos semanas.

8. La sebelipasa alfa para su uso según la reivindicación 7, donde la sebelipasa alfa se administra a un volumen total de infusión de:

a) 10 ml para un paciente de 1 a 10,9 kg;

b) 25 ml para un paciente de 11 a 24,9 kg;

c) 50 ml para un paciente de 25 a 49,9 kg;

d) 100 ml para un paciente de 50 a 99,9 kg; o

e) 250 ml para un paciente de 100 a 120,9 kg.

9. La sebelipasa alfa para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, donde la sebelipasa alfa se administra al paciente en una dosis de 3 mg/kg una vez a la semana.

10. La sebelipasa alfa para su uso según la reivindicación 9, donde la sebelipasa alfa se administra a un volumen total de infusión de:

a) 25 ml para un paciente de 100 a 120,9 kg.

b) 50 ml para un paciente de 11 a 24,9 kg;

c) 100 ml para un paciente de 25 a 49,9 kg;

d) 250 ml para un paciente de 50 a 99,9 kg; o

e) 500 ml para un paciente de 100 a 120,9 kg.

11. La sebelipasa alfa para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el paciente tiene cirrosis antes de iniciar el tratamiento.

12. La sebelipasa alfa para su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el procedimiento da lugar a un cambio hacia los niveles normales de alanina aminotransferasa (ALT), colágeno, macrófagos, colesterol unido a las lipoproteínas de baja densidad (C-LDL) y/o contenido de grasa hepática.

13. La sebelipasa alfa para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-12, donde el procedimiento da lugar a una reducción de la alanina aminotransferasa (ALT), colesterol unido a las lipoproteínas de baja densidad (C-LDL), colágeno, inflamación portal, inflamación lobulillar, esteatosis macrovesicular, esteatosis microvesicular, macrófagos y/o niveles totales de contenido de grasa hepática en comparación con antes de iniciar el tratamiento.

14. La sebelipasa alfa para su uso según la reivindicación 13, donde el procedimiento da lugar a una reducción de: alanina aminotransferasa (ALT) en aproximadamente un 60 % o más, colesterol de las lipoproteínas de baja densidad (C-LDL) en aproximadamente un 40 % o más y/o contenido de grasa hepática en aproximadamente un 30 % o más, en comparación con antes de iniciar el tratamiento.

15. La sebelipasa alfa para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 12-14, donde los niveles de contenido de grasa hepática se evalúan mediante resonancia magnética (RM).