ES2886548T3

ES2886548T3 - Agentes de lavado y detergentes con una combinación de amilasa y proteasa

Info

Publication number: ES2886548T3
Application number: ES15804109T
Authority: ES
Inventors: Marouane Antir; Sabine Schümann; Thorsten Bastigkeit; Martina Seiler; Timothy O'connell
Original assignee: Henkel AG and Co KGaA
Current assignee: Henkel AG and Co KGaA
Priority date: 2014-12-10
Filing date: 2015-12-01
Publication date: 2021-12-20
Anticipated expiration: 2035-12-01
Also published as: AU2015359714B2; DE102014225473A1; KR20170093895A; RU2709994C2; AU2015359714A1; EP3230443B1; US20170342348A1; DK3230443T3; RU2017124004A; MX2017007554A; WO2016091650A1; RU2017124004A3; KR102426962B1; EP3230443A1; PL3230443T3

Abstract

Detergente o agente de limpieza que contiene una combinación de una α-amilasa y una proteasa, en donde la α- amilasa está caracterizada porque es idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO.1 sobre la totalidad de su longitud, en por lo menos 89% y con creciente preferencia en por lo menos 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, 99,5% y hasta 100%, y en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1 exhibe eliminaciones en una o varias de las posiciones 180, 181, 182, 183 y 184, y en donde la proteasa está caracterizada porque exhibe una secuencia de aminoácidos que es idéntica a la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO. 2 sobre la totalidad de su longitud, en por lo menos 80% y con creciente preferencia en por lo menos 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% y 99%, en donde la α- amilasa mejora la estabilidad y el desempeño de la proteasa en los detergentes y agentes de limpieza.

Description

DESCRIPCIÓN

Agentes de lavado y detergentes con una combinación de amilasa y proteasa

La invención se refiere a un agente de lavado y detergentes que contienen una combinación de enzimas de una amilasa y una proteasa, cuyas secuencias de aminoácidos fueron cambiadas en particular respecto al uso en detergentes y agentes de limpieza, y a todas las amilasas y proteasas suficientemente similares con un cambio correspondiente. La invención se refiere además a procedimientos y usos de estos detergentes y agentes de limpieza.

Las proteasas pertenecen en general a las enzimas técnicamente más importantes. Son las enzimas más largamente establecidas para detergentes y agentes de limpieza y presentes en prácticamente todos los detergentes y agentes de limpieza modernos y, eficientes. Causa la degradación de suciedades que contienen proteína en los elementos que van a limpiarse. Entre ellas son a su vez particularmente importantes las proteasas del tipo de subtilisina (subtilasas, subtilopeptidasas, EC 3.4.21.62) que, debido a los aminoácidos con eficacia catalítica son proteasas de serina. Actúan como endopeptidasas no específicas que hidrolizan cualesquier enlaces de amida de ácido que están en el interior de péptidos o proteínas. Su óptimo de pH está usualmente en el intervalo claramente alcalinos. Por ejemplo el artículo "Subtilases: subtilisin-like proteases" de R. Siezen, páginas 75-95 en "Subtilisin enzymes", editado por R. Bott y C. Betzel, Nueva York, 1996 ofrece una vista general sobre esta familia. Las subtilasas son formadas de manera natural de microorganismos. Entre ellas se mencionan en particular como grupo más importante la subtilisina formada y secretada por la especie Bacillus.

Son ejemplos de las proteasas del tipo de la subtilisina preferiblemente usadas en detergentes y agentes de limpieza, la subtilisina BPN' y Carlsberg, la proteasa PB92, la subtilisina 147 y 309, la proteasa de Bacillus lentus, en particular de Bacillus lentus DSM 5483, subtilisina DY y las enzimas termitasa, proteinasa K y las proteasas TW3 y TW7 que van a ser asignadas en sentido estricto a las subtilasas, aunque ya no a las subtilisinas, así como variantes de las proteasas mencionadas, que exhiben una secuencia de aminoácidos modificada respecto a la proteasa de partida. Las proteasas son modificadas de manera focalizada o por accidente mediante procedimientos conocidos a partir del estado de la técnica, y de este modo son optimizadas por ejemplo para el uso en detergentes y agentes de limpieza. A ellas pertenecen la mutagénesis puntual, mutagénesis de eliminación o inserción, o fusión con otras proteínas o partes de proteínas. De este modo, para la mayoría de las proteasas conocidas a partir del estado de la técnica, se conocen variantes optimizadas de manera correspondiente.

Otras enzimas utilizables en detergentes y agentes de limpieza son las amilasas. Para las amilasas pueden usarse conceptos sinónimos, por ejemplo 1,4-alfa-D-glucano-glucanohidrolasa o glicogenasa. Las amilasas preferidas de acuerdo con la invención son a-amilasas. Para determinar si una enzima es una a-amilasa en el sentido de la invención, es decisiva su capacidad para hidrolizar enlaces a-(1-4)-glicosídicos de la amilosa de los almidones.

Las amilasas conocidas en el estado de la técnica así como en particular también sus desarrollos mejorados para el uso en detergentes o agentes de limpieza, son ilustrados a continuación. Son amilasas adecuadas la a-amilasa de Bacillus licheniformis (obtenible como Termamyl® de Novozymes o Purastar®ST de la compañía Danisco/Genencor) y sus productos de desarrollo Duramyl® y Termamyl®ultra (Novozymes), Purastar®OxAm (Danisco/Genencor) y Keistase® (Daiwa Seiko Inc.), así como las a-amilasas de Bacillus amiloliquefaciens o de Bacillus stearothermophilus. La a-amilasa de Bacillus amiloliquefaciens es distribuida por la compañía Novozymes bajo el nombre BAN®, y variantes derivadas de la a-amilasa de Bacillus stearothermophilus bajo los nombres BSG® y Novamyil®, así como de la compañía Novozymes. Otras amilasas conocidas son la a-amilasa de Bacillus sp. A 7-7 (DSM 12368) y la ciclodextrina-glucanotransferasa (CGTasa) de Bacillus agaradherens (DSM 9948) así como los desarrollos de la aamilasa de Aspergillus niger y A. oryzae obtenibles bajo el nombre comercial Fungamyl®de la compañía Novozymes. Otros productos comerciales utilizables de manera ventajosa en detergentes y agentes de limpieza son por ejemplo la Amylase-LT® y Stainzyme® o Stainzyme ultra® o Stainzyme plus®, esta última así mismo de la compañía Novozymes. También pueden usarse en detergentes y agentes de limpieza, variantes de estas enzimas obtenibles mediante mutaciones puntuales. En las solicitudes de patente internacional publicadas WO 00/60060, WO 03/002711, WO 03/054177 y WO07/079938 se divulgan las amilasas preferidas de modo particular.

También, a partir de los documentos WO 2011/100410, EP 2679679, WO 2015/044448, EP 2100948 y WO 99/63040 se conocen amilasas y proteasas adecuadas para detergentes y agentes de limpieza. De modo sorprendente se estableció ahora que una a-amilasa de acuerdo con la invención mejora la estabilidad y el desempeño de una proteasa en un detergente y agente de limpieza.

Por ello, es objetivo de la presente invención un detergente y agente de lavado que contiene una combinación de una a-amilasa y una proteasa, en donde la a-amilasa está caracterizada porque es idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO.1 sobre la totalidad de su longitud, en por lo menos 89% y con creciente preferencia en por lo menos 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, 99,5% y hasta 100%, y en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1 exhibe una eliminación en una o varias de las posiciones 180, 181, 182, 183 y 184, y en donde la proteasa está caracterizada porque exhibe una secuencia de aminoácidos que es idéntica a la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO. 2 sobre la totalidad de su longitud, en por lo menos 80% y con creciente preferencia en por lo menos 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% y 99%, en donde la a-amilasa mejora la estabilidad y el desempeño de la proteasa en los detergentes y agentes de limpieza.

De modo particular se prefiere una eliminación de dos posiciones, elegidas de entre 180+181, 181 182, 182+183 y 183+184, de modo muy particular se prefieren eliminaciones en las posiciones 183+184 en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1, en particular se prefieren eliminaciones H183* G184*. Preferiblemente la a-amilasa de acuerdo con la invención exhibe en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1 además una sustitución de aminoácidos en una o varias de las posiciones 405, 421, 422 y 428. De modo particular se prefieren las sustituciones I405L; A421H, A422P y A428T.

En una forma de realización preferida de modo particular, la a-amilasa de acuerdo con la invención exhibe en la numeración de acuerdo con s Eq ID NO. 1 las eliminaciones H183* G184* y adicionalmente las sustituciones I405L, A421H, A422P y A428T.

La proteasa de acuerdo con la invención comprende una secuencia de aminoácidos, que es idéntica a la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO. 2 sobre la totalidad de su longitud, en por lo menos 80% y con creciente preferencia en por lo menos 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, o hasta 100%.

Se prefiere una proteasa, que exhibe una secuencia de aminoácidos, que es idéntica a la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO. 2 sobre la totalidad de su longitud, en por lo menos 80% y con creciente preferencia en por lo menos 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99% y en la posición 99 exhibe el aminoácido ácido glutámico (E).

De modo particular se prefiere una proteasa de acuerdo con SEQ ID NO.4.

Las posiciones de aminoácidos que son indicadas en el marco de la presente invención con la expresión "numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1", son entendidas de la siguiente manera: Las otras posiciones de aminoácidos son definidas mediante una alineación de la secuencia de aminoácidos de una amilasa o proteasa de acuerdo con la invención, con la secuencia de aminoácidos, como se indica en la SEQ ID NO. 1. Además, la asignación de las posiciones está determinada por la proteína madura (madura). Esta asignación es aplicada también en particular cuando la secuencia de aminoácidos de una proteína de acuerdo con la invención comprende un número mayor de radicales aminoácido, comparado con la amilasa o proteasa en SEQ ID NO. 1. Partiendo de las posiciones mencionadas en la secuencia de aminoácidos, las posiciones de cambio en una amilasa o proteasa de acuerdo con la invención son las que están asignadas precisamente a estas posiciones en una alineación.

La combinación de acuerdo con la invención de una a-amilasa de acuerdo con la invención, con una proteasa en detergentes y agentes de limpieza causa una eficiencia mejorada de limpieza del detergente y agente de limpieza, en por lo menos una suciedad sensible a la proteasa. Las a-amilasas de acuerdo con la invención tienen un efecto mejorador del desempeño sobre la proteasa presente así mismo en los detergentes y agentes de limpieza y hace posible en consecuencia, entre otros, debido a su efecto de estabilización de proteasa, una eliminación mejorada de por lo menos una, preferiblemente de varias suciedades sensibles a la proteasa, en textiles y/o superficies duras, por ejemplo vajillas. Formas preferidas de realización de detergentes y agentes de limpieza de acuerdo con la invención, muestran eficiencias de limpieza particularmente ventajosas sobre suciedades que contienen sangre, por ejemplo en la suciedad de sangre/leche/tinta: producto Nr. CFT C-05 obtenible de c Ft (Center For Testmaterials) B.V. Vlaardingen, Países Bajos.

Mediante formas preferidas de realización de la presente invención, se fabrican detergentes y agentes de limpieza con eficiencia mejorada de limpieza, de manera focalizada respecto a suciedades sensibles a proteasa.

Las formas preferidas de realización de combinaciones de amilasa y proteasa de acuerdo con la invención alcanzan tales eficiencias ventajosas de limpieza también ya a bajas temperaturas, en particular en los intervalos de temperatura entre 10 °C y 60 °C, preferiblemente entre 15 °C y 50 °C y de modo particular preferiblemente entre 20 °C y 40 °C. Otras formas preferidas de realización de combinaciones de amilasa y proteasa de acuerdo con la invención alcanzan tales eficiencias ventajosas de limpieza en un intervalo de temperatura, por ejemplo entre 15 °C y 90 °C, preferiblemente entre 20 °C y 60 °C.

En el marco de la invención, se entiende por eficiencia de limpieza a la eficiencia de aclaramiento sobre una o varias suciedades, en particular en ropa o vajillas. En el marco de la invención, tanto el detergente o agente de limpieza, que comprende la combinación de amilasa y proteasa o el licor de lavado o de limpieza formado por estos agentes, como también la proteasa y amilasa en sí mismas, exhiben una respectiva eficiencia de limpieza. La eficiencia de limpieza de la enzima contribuye con ello a la eficiencia de limpieza del agente o del licor de lavado o de limpieza formado por el agente. La eficiencia de limpieza es determinada preferiblemente como se indica en detalle abajo.

Para la presente invención, se examina especialmente la eficiencia de limpieza de la proteasa, en donde el efecto sinérgico de la a-amilasa de acuerdo con la invención es mostrado indirectamente por la eficiencia mejorada de limpieza de la proteasa sobre suciedades que contienen proteína.

Una proteasa exhibe una actividad proteolítica, es decir, tiene la capacidad para hidrolizar enlaces péptido de un polipéptido o proteína, en particular en un detergente o agente de limpieza. Por ello, una proteasa es una enzima que cataliza la hidrólisis de enlaces péptido y por ello está en capacidad de escindir péptidos o proteínas. Las amilasas y proteasas de acuerdo con la invención son preferiblemente la amilasa/proteasa madura (madura), es decir, la molécula catalíticamente activa sin péptido(s) de señal y/o propéptido(s). En tanto no se indique de otro modo, las secuencias indicadas se refieren también en cada caso a la enzima madura.

La determinación de la identidad de secuencias de ácidos nucleicos o de aminoácidos ocurre mediante una comparación de secuencia. Esta comparación de secuencias se basa en el algoritmo BLAST establecido en el estado de la técnica y usado comúnmente (véase por ejemplo Altschul, S.F., Gish, W., Miller, W., Myers, E.W. & Lipman, D.J. (1990) "Basic local alignment search tol." J. Mol. Biol. 215:403-410, y Altschul, Stefan F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Hheng Zhang, Webb Miller, and David J. Lipman (1997): "Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs"; Nucleic Acids Res., 25, S.3389-3402) y ocurre principalmente mediante la asignación mutua de sucesiones similares de nucleótidos o aminoácidos en las secuencias de ácidos nucleicos o aminoácidos. Una asignación tabular de las posiciones en cuestión es denominada como alineación. Otro algoritmo disponible en el estado de la técnica es el algoritmo FASTA. Las comparaciones de secuencias (alineaciones), en particular comparaciones múltiples de secuencias, son construidas comúnmente con programas de ordenador. Son frecuentemente usadas por ejemplo la serie Clustal (véase por ejemplo Chenna et al. (2003): Multiple sequence alignment with the Clustal series of programs. Nucleic Acid Research 31, 3497-3500), TCoffee (véase por ejemplo Notredame et al. (2000): T-Coffee: A novel method for multiple sequence alignments. J. Mol. Biol. 302, 205 217) o programas que se basan en estos programas o algoritmos. En el presente documento se construyeron todas las comparaciones de secuencia (alineaciones) con el programa de ordenador Vector NTI® Suite 10.3 (Invitrogen Corporation, 1600 Faraday Avenue, Carlsbad, California, EE.UU.) con los parámetros estándar preestablecidos, cuyo módulo AlignX para la comparación de secuencias se basan en ClustalW.

Tal comparación permite una declaración sobre la similitud de las secuencias comparadas una con otra. Ella es indicada comúnmente en identidad porcentual, es decir la fracción de nucleótidos o radicales aminoácido idénticos en la misma o en una alineación de posiciones mutuamente correspondientes. Los otros conceptos contenidos en la homología involucran en la consideración, para secuencias de aminoácidos, aminoácidos-intercambios conservados, por consiguiente aminoácidos con actividad química similar, puesto que dentro de la proteína estos ejercen usualmente actividades químicas similares. Por ello la similitud de las secuencias comparadas puede ser indicada también como homología porcentual o similitud porcentual. Los datos de identidad y/u homología pueden ser encontrados para polipéptidos o genes totales o sólo para ámbitos individuales. Los ámbitos homólogos o idénticos de diferentes secuencias de ácidos nucleicos o de aminoácidos son definidos por ello mediante coincidencias en las secuencias. Ellos exhiben frecuentemente funciones idénticas. Ellos pueden ser pequeños e incluir sólo pocos nucleótidos o aminoácidos. Frecuentemente tales ámbitos pequeños ejercen funciones esenciales para la actividad total de la proteína. Por ello, puede tener sentido correlacionar coincidencias de secuencias sólo sobre ámbitos pequeños, dado el caso, individuales. En tanto no se indique de otro modo, en el presente documento los datos de identidad o homología se refieren a la longitud total de la secuencia de ácidos nucleicos o aminoácidos indicada en cada caso.

La eficiencia de limpieza es determinada en un sistema de lavado que contiene un detergente en una dosificación entre 3,5 y 6,5 gramos por litro de licor de lavado, así como la proteasa y la amilasa. Las amilasas que van a ser comparadas son usadas a la misma concentración (referida a la proteína activa). La eficiencia de limpieza de la proteasa es determinada frente a una suciedad de sangre, mediante medición del grado de blancura del textil lavado. El procedimiento de lavado ocurre durante 70 minutos a una temperatura de 40°C, en donde el agua exhibe una dureza entre 13,5 y 16,5° (grados alemanes).

La concentración de la proteasa en los detergentes determinados para este sistema de lavado es de 0,001-0,1 % en peso, preferiblemente de 0,01 a 0,06 % en peso, referida a la proteína activa. La concentración de la amilasa en el detergente determinado para este sistema de lavado es de 0,001-0,15 % en peso, preferiblemente de 0,005 a 0,012 % en peso, referida a la proteína activa.

Un detergente líquido preferido para tal sistema de lavado está compuesto como sigue (todos los datos en porcentaje en peso): 0,3-0,5% de goma xantano, 0,2-0,4% de antiespumante, 6-7% de glicerina, 0,3-0,5% de etanol, 4-7% de FAEOS (sulfato de alcoholéter graso), 5-15% de tensioactivo no iónico, 5-15% de tensioactivo aniónico (LAS), 1% de ácido úrico, 1-4% de citrato de sodio (dihidrato), 2-4% de carbonato de sodio, 2-6% de ácidos grasos de coco, 0,5-2,5% de HEDP (ácido 1-hidroxietano-(1,1-di-fosfónico)), 0-0,4% de PVP (polivinilpirrolidona), 0-0,15% de aclarador óptico, 0-0,001% de colorante, el resto de agua desmineralizada. Preferiblemente la dosificación del detergente líquido está entre 3,5 y 6,0 gramos por litro de licor de lavado, por ejemplo 4,7, 4,9 o 5,9 gramos por litro de licor de lavado. Preferiblemente se lava en un intervalo de valor de pH entre pH 8 y pH 10,5, preferiblemente entre pH 8 y pH 9.

Un detergente en polvo preferido para tal sistema de lavado está compuesto como sigue (todos los datos en porcentaje en peso): 10% de alquilbencenosulfonato lineal (sal de sodio), 1,5% sulfato de alcohol graso C12-C18 (sal de sodio), 2,0% de alcohol graso C12-C18 con 7 EO, 20% de carbonato de sodio, 6,5% de hidrogenocarbonato de sodio, 4,0% de disilicato de sodio amorfo, 17% de peroxohidrato de carbonato de sodio, 4,0% de TAED, 3,0% de poliacrilato, 1,0% de carboximetilcelulosa, 1,0% de fosfonato, 27% de sulfato de sodio, el resto: inhibidores de espuma, aclarador óptico, sustancias aromatizantes. Preferiblemente la dosificación del detergente en polvo está entre 4,5 y 7,0 gramos por litro de licor de lavado, por ejemplo y de modo particular preferiblemente 4,7 gramos por litro de licor de lavado, o 5,5, 5,9 o 6,7 gramos por litro de licor de lavado. Preferiblemente se lava en un intervalo de valor de pH entre pH 9 y pH 11.

El grado de blancura, es decir el aclaramiento de las suciedades, como medida de la eficiencia de limpieza, es determinado preferiblemente con procedimientos ópticos de medición, preferiblemente fotométricamente. Un aparato adecuado para ello es por ejemplo el espectrómetro Minolta CM508d. Usualmente, los aparatos usados para la medición son calibrados previamente con un estándar blanco, preferiblemente un estándar blanco suministrado con el equipo.

La concentración de proteína puede ser determinada con ayuda de métodos conocidos, por ejemplo el método, BCA (ácido bicincónico; ácido 2,2'-biquinolil-4,4'-dicarboxílico) o el método de Biuret (A. G. Gornall, C. S. Bardawill y M.M. David, J. Biol. Chem., 177 (1948), pp. 751-766). La determinación de la concentración de proteína activa puede ocurrir respecto a esto mediante una titulación de los centros activos, usando un inhibidor irreversible adecuado (para proteasas por ejemplo fluoruro de fenilmetilsulfonilo (PMSF)) y determinación de la actividad restante (véase M. Bender et al., J. Am. Chem. Soc. 88, 24 (1966), pp. 5890-5913).

Adicionalmente a las modificaciones de aminoácidos ilustradas previamente, las amilasas y proteasas de acuerdo con la invención pueden exhibir otros cambios de aminoácidos, en particular sustituciones, inserciones o eliminaciones de aminoácidos. Tales amilasas y proteasas son desarrolladas por ejemplo mediante modificación genética focalizada, es decir, mediante procedimientos de mutagénesis, y optimizadas para determinados propósitos de uso o respecto a propiedades especiales (por ejemplo respecto a su actividad catalítica, estabilidad, etc.). Además, pueden incorporarse ácidos nucleicos de acuerdo con la invención en fragmentos de recombinación y con ello usarse para la generación amilasas y proteasas u otros polipéptidos de tipo completamente novedoso.

El objetivo es introducir en las moléculas conocidas mutaciones focalizadas, como sustituciones, inserciones o eliminaciones, para mejorar por ejemplo la eficiencia de limpieza de enzimas de acuerdo con la invención. Para ello pueden modificarse en particular las cargas superficiales y/o el punto isoeléctrico de la molécula, y mediante ello sus interacciones con el sustrato. De este modo puede modificarse por ejemplo la carga neta de la enzima, para influir mediante ello en la unión al sustrato, en particular para el uso en detergentes y agentes de limpieza. De modo alternativo o como complemento, mediante una o varias mutaciones correspondientes puede elevarse la estabilidad de la amilasa o proteasa y mediante ello mejorar su eficiencia de limpieza. Pueden complementarse propiedades ventajosas de mutaciones individuales, por ejemplo sustituciones individuales. Por ello, en el marco de la invención adicionalmente puede desarrollarse una amilasa o proteasa ya optimizada respecto a determinadas propiedades, por ejemplo respecto a su estabilidad frente a los tensioactivos y/o blanqueadores y/u otros componentes. Para la descripción de sustituciones que afectan exactamente a una posición de aminoácido (intercambio de aminoácidos), se aplica la siguiente convención: Primero se denomina el aminoácido presente de modo natural, en forma del código internacional convencional de una letra, luego sigue la posición de secuencia relacionada y finalmente el aminoácido insertado. Varios intercambios dentro de la misma cadena de polipéptido son separados uno del otro mediante barras oblicuas. Para las inserciones, después de la posición de secuencia se mencionan los aminoácidos adicionales. Para eliminaciones, el aminoácido faltante es reemplazado mediante un símbolo, por ejemplo una estrella o una línea. Por ejemplo A95G describe la sustitución de alanina en la posición 95 por glicina, A95AG describe la inserción de glicina después del aminoácido alanina en la posición 95 y A95* describe la eliminación de alanina en la posición 95. Esta nomenclatura es conocida por el experto en el campo de la tecnología de enzimas.

Por ello, otro objetivo de la presente invención es un detergente y agente de limpieza que contiene una combinación de una a-amilasa y una proteasa, en donde la a-amilasa está caracterizada porque es obtenible a partir de una amilasa de acuerdo con la invención como molécula de partida, mediante sustitución conservadora de aminoácidos simple o múltiple. El concepto de "sustitución conservadora de aminoácidos" significa el intercambio (sustitución) de un radical aminoácido, por otro radical aminoácido, en donde este intercambio no conduce a una modificación en la polaridad o carga en la posición del aminoácido intercambiado, por ejemplo el intercambio de un radical aminoácido apolar por otro radical aminoácido apolar. En el marco de la invención, las sustituciones conservadoras de aminoácidos comprenden por ejemplo: G=A=S, I=V=L=M, D=E, N=Q, K=R, Y=F, S=T, G=A=I=V=L=M=Y=F=W=P=S=T.

Por ello, es otro objetivo de la presente invención un detergente y agente de lavado que contiene una combinación de una a-amilasa y una proteasa, en donde la a-amilasa está caracterizada porque es obtenible a partir de una amilasa de acuerdo con la invención como molécula de partida, mediante fragmentación, mutagénesis de eliminación, de inserción o de sustitución y comprende una secuencia de aminoácidos, que coincide con la molécula de partida sobre una longitud de por lo menos 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 475, 480, 482, 484 o 485 aminoácidos contiguos.

De este modo, por ejemplo es posible eliminar aminoácidos individuales en los extremos o en los bucles de la enzima, sin que por ello se pierda o disminuya la actividad proteolítica. Además, mediante tal fragmentación, mutagénesis de eliminación, de inserción o de sustitución, por ejemplo también se disminuye la alergenicidad de las enzimas en cuestión y con ello se mejora en total su aptitud para el uso. De modo ventajoso, también después de la mutagénesis, las enzimas retienen su actividad proteolítica, es decir, su actividad proteolítica corresponde por lo menos a la del sistema de partida. También las sustituciones pueden mostrar efectos ventajosos. Pueden intercambiarse por otros aminoácidos, tanto aminoácidos individuales, como también varios aminoácidos contiguos.

Una amilasa de acuerdo con la invención puede ser estabilizada adicionalmente, en particular mediante una o varias mutaciones, por ejemplo sustituciones, o mediante acoplamiento a un polímero. Entonces, una elevación de la estabilidad al almacenamiento y/o durante el uso, por ejemplo en el proceso de lavado, conduce a que la actividad enzimática perdure por más tiempo y con ello mejore la eficiencia de limpieza. Básicamente, entran en consideración todas las posibilidades de estabilización descritas en la técnica y/o apropiadas. Se prefieren aquellas estabilizaciones que son alcanzadas en sí mismas mediante mutaciones de la enzima, puesto que tales estabilizaciones no requieren otras etapas de trabajo a continuación de la obtención de la enzima. Los cambios de secuencia adecuados para ello son conocidos a partir del estado de la técnica.

Son otras posibilidades de la estabilización, por ejemplo:

- Cambios del enlace de iones metálicos, en particular de las posiciones de enlace de calcio, por ejemplo mediante intercambio de uno o varios del/de los aminoácido(s) que participan en el enlace de calcio, por uno o varios aminoácidos cargados negativamente y/o por introducción de cambios de secuencia en por lo menos uno de los dos aminoácidos arginina/glicina;

- protección contra la influencia de agentes que desnaturalizan, como tensioactivos, por mutaciones, que causan una modificación de la secuencia de aminoácidos en o sobre la superficie de la proteína;

- intercambio de aminoácidos, que están cerca del extremo N, por aquellos que presumiblemente están en contacto con el resto de la molécula mediante interacciones no covalentes y con ello logran una contribución a la preservación de la estructura globular.

Son formas preferidas de realización aquellas en las cuales la enzima está estabilizada de varias formas, puesto que varias mutaciones que estabilizan actúan de manera aditiva o sinérgica.

Otro objetivo de la invención es una amilasa como se describió anteriormente, que está caracterizada porque, exhibe por lo menos una modificación química. Una amilasa con una modificación tal es denominada como derivada, es decir, la amilasa está transformada en un derivado.

De acuerdo con ello, en el sentido del presente documento se entiende por derivadas, aquellas proteínas cuya cadena pura de aminoácidos fue modificada químicamente. Tales formaciones de derivadas pueden ocurrir por ejemplo en vivo mediante la célula huésped, que expresa la proteína. Respecto a esto, se enfatizan de modo particular los acoplamientos de compuestos de bajo peso molecular, como de lípidos u oligosacáridos. Sin embargo, también pueden ejecutarse in vitro formaciones de derivadas, por ejemplo mediante conversión química de una cadena lateral de un aminoácido o mediante enlace covalente de otro compuesto, a la proteína. Por ejemplo, es posible el acoplamiento de aminas a grupos carboxilo de una enzima, para la modificación del punto isoeléctrico. Otro compuesto tal puede ser también otra proteína, que está unida por ejemplo a través de compuestos químicos bifuncionales a una proteína de acuerdo con la invención. Así mismo, bajo la formación de derivadas se entiende la unión covalente a un soporte macromolecular, o también una inclusión no covalente en estructuras de jaula macromoleculares adecuadas. Las formaciones de derivadas pueden por ejemplo influir en la especificidad de sustrato o la fortaleza del enlace al sustrato o precipitar un bloqueo temporal de la actividad enzimática, cuando la sustancia acoplada es un inhibidor. Esto puede tener sentido por ejemplo para el intervalo de tiempo del almacenamiento. Tales modificaciones pueden influir además en la estabilidad o la actividad enzimática. Además, pueden servir también para disminuir la alergenicidad y/o inmunogenicidad de la proteína y con ello elevar por ejemplo su compatibilidad con la piel. Por ejemplo, los acoplamientos con compuestos macromoleculares, por ejemplo polietilenglicol, pueden mejorar la proteína respecto a la estabilidad y/o compatibilidad con la piel.

En el sentido más amplio, pueden entenderse bajo derivadas de una proteína de acuerdo con la invención, también preparaciones de esta proteína. Dependiendo de la obtención, procesamiento o preparación, una proteína puede ser asociada con diversas otras sustancias, por ejemplo del cultivo de los microorganismos productores. También a una proteína puede haberse añadido de manera focalizada otras sustancias, por ejemplo para elevar su estabilidad al almacenamiento. Por ello, también todas las preparaciones de una proteína de acuerdo con la invención, están de acuerdo con la invención. Esto es también independiente de si en una determinada preparación, se despliega o no realmente esta actividad enzimática. Entonces, puede desearse que en el almacenamiento no posea o posea sólo baja actividad, y sólo hasta el momento de la aplicación despliegue su función enzimática. Esto puede ser controlado por ejemplo mediante correspondiente material asociado.

Entre los objetivos de la invención se cuentan todos los tipos imaginables de detergente o agente de limpieza, tanto concentrados como también agentes que van a ser aplicados no diluidos, para uso a escala comercial, en la lavadora automática o para el lavado o limpieza manual. A ellos pertenecen por ejemplo detergentes para textiles, alfombras o fibras naturales, para los cuales se usa la denominación de detergente. A ellos pertenecen por ejemplo también detergentes para vajillas para máquinas lavadoras de vajillas, o detergentes o limpiadores manuales para vajillas, para superficies duras como metal, vidrio, porcelana, cerámica, azulejos, piedra, superficies barnizadas, plástico, madera o cuero, para los cuales se usa la denominación de agente de limpieza, por consiguiente aparte de detergentes para vajillas en lavado automático y manual, por ejemplo también abrasivos, limpiadores de cristales, enjuagues con fragancia para sanitarios, etc.. Entre los detergentes y agentes de limpieza en el marco de la invención se cuentan además agentes auxiliares de lavado, que son dosificados al verdadero detergente para el lavado automático o manual de textiles, para alcanzar otro efecto. Además, entre los detergentes y agentes de limpieza en el marco de la invención se cuentan también agentes para el tratamiento previo y posterior de textiles, por consiguiente agentes, con los cuales la pieza de ropa es puesta en contacto antes del verdadero lavado, por ejemplo para disolver las suciedades persistentes, y también aquellos agentes que en una de las etapas subsiguientes al verdadero lavado del textil, imparten al material que va a lavarse otras propiedades deseadas como agradable sensación al tacto, ausencia arrugas o baja carga estática. En estos últimos agentes mencionados se cuentan entre otros los suavizantes para telas.

Los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención pueden contener otras enzimas. Como otras enzimas son utilizables por ejemplo lipasas o cutinasas, en particular debido a sus actividades de escisión de triglicéridos, pero también para generar in situ perácidos a partir de precursores adecuados. A ellos pertenecen por ejemplo las lipasas obtenibles originalmente a partir de Humicola lanuginosa (Thermomyces lanuginosus), o lipasas desarrolladas, en particular aquellas con el intercambio D96L de aminoácidos. A ellas pertenecen por ejemplo las lipasas obtenibles originalmente a partir de Humicola lanuginosa (Thermomyces lanuginosus), o lipasas desarrolladas, en particular aquellas con uno o varios de los siguientes intercambios de aminoácidos, partiendo de la lipasa mencionada en las posiciones D96L, T213Ry/o N233R, de modo particular preferiblemente T213Ry N233R. Además, son utilizables por ejemplo las cutinasas, que fueron aisladas originalmente a partir de Fusarium solani pisi y Humicola insolens. Además, son utilizables lipasas, o cutinasas, cuyas enzimas de partida fueron aisladas originalmente a partir de Pseudomonas mendocina y Fusarium solanii.

Los agentes de acuerdo con la invención pueden contener también celulasas o hemicelulasas como mananasas, xantanoliasas, pectinaliasas (=pectinasas), pectinesterasas, pectatoliasas, xiloglucanasas (=xilanasas), pululanasas o p-glucanasas.

Para elevar el efecto blanqueador pueden usarse oxidorreductasas de acuerdo con la invención, por ejemplo oxidasas, oxigenasas, catalasas, peroxidasas, como halo-, cloro-, bromo-, lignino-, glucosa- o manganeso-peroxidasas, dioxigenasas o lacasas (fenoloxidasas, polifenoloxidasas). De modo ventajoso se añaden adicionalmente preferiblemente compuestos orgánicos, de modo particular preferiblemente aromáticos, que van a interactuar con las enzimas, para reforzar (mejorador) la actividad de las oxidorreductasas en cuestión o para garantizar el flujo de electrones en potenciales rédox fuertemente diferentes entre las enzimas oxidantes y las suciedades.

Son utilizables como otras enzimas también las amilasas, en donde son adecuadas todas las amilasas ya descritas anteriormente.

Los detergentes o agentes de limpieza pueden contener, aparte de los ingredientes descritos anteriormente, sustancias son actividad limpiadora, en donde se prefieren sustancias de entre el grupo de los tensioactivos, sustancias estructurales, polímeros, inhibidores de corrosión del vidrio, inhibidores de corrosión, sustancias aromatizantes y vehículos de perfume. A continuación se describen en más detalles estos ingredientes preferidos.

Un componente preferido de los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención son los tensioactivos no iónicos, en donde se prefieren tensioactivos no iónicos de la fórmula general R¹-CH(OH)CH2O-(AO)w-(A'O)x-(A"O)y-(A"'O)z-R², en la cual preferiblemente

- R¹representa un radical alquilo o alquenilo C6-24 de cadena recta o ramificada, saturado o insaturado una o varias veces;

- R²representa un radical hidrocarburo lineal o ramificado con 2 a 26 átomos de carbono;

- A, A', A" y A"' representan, independientemente uno de otro, un radical de entre los grupos -CH2CH2, -CH2CH2-CH2, -CH2-CH(CHa), -CH2-CH2-CH2-CH2, -CH2-CH(CHa)-CH2-, -C H 2 -C H (C H 2 -C H s),

- w, x, y y z representan valores entre 0,5 y 120, en donde x, y y/o z pueden ser también 0.

Mediante la adición de los tensioactivos no iónicos mencionados anteriormente de la fórmula general R¹-CH(OH)CH2O-(AO)w-(A'O)x-(A"O)y-(A"'O)z-R², denominados a continuación también como "hidroxiéteres mixtos", puede mejorarse claramente la eficiencia de limpieza de preparaciones que tienen enzimas de acuerdo con la invención e incluso tanto en comparación con sistemas libres de tensioactivo, como también en comparación con sistemas que contienen tensioactivos no iónicos alternativos, por ejemplo de entre el grupo de los alcoholes grasos polialcoxilados.

Mediante el uso de estos tensioactivos no iónicos con uno o varios grupos hidroxilo libres, en uno o ambos radicales alquilo terminales, puede mejorarse claramente la estabilidad de las enzimas presentes en las preparaciones de detergente o agente de limpieza.

Se prefieren en particular aquellos niotensioactivos poli(oxialquilados) con grupos terminales bloqueados que, de acuerdo con la fórmula R'O[CH2CH2O]xCH2CH(OH)R², aparte de un radical R¹, que representa radicales hidrocarburo lineales o ramificados, saturados o insaturados, alifáticos o aromáticos con 2 a 30 átomos de carbono, preferiblemente con 4 a 22 átomos de carbono, exhiben además un radical hidrocarburo R²lineal o ramificado, saturado o insaturado, alifático o aromático con 1 a 30 átomos de carbono, en donde x representa valores entre 1 y 90, preferiblemente representa valores entre 30 y 80 y en particular representan valores entre 30 y 60.

De modo particular se prefieren los tensioactivos de la fórmula R¹O[CH2CH(CH3)O]x[CH2CH2O]yCH2CH(OH)R², en la cual R¹representa un radical hidrocarburo alifático lineal o ramificado con 4 a 18 átomos de carbono o mezclas de ellos, R²denomina un radical hidrocarburo lineal o ramificado con 2 a 26 átomos de carbono o mezclas de ellos, y x representa valores entre 0,5 y 1,5 así como y representa un valor de por lo menos 15.

En el grupo de estos tensioactivos no iónicos se cuentan por ejemplo los 2-hidroxialquiléteres-(PO)¹-(EO)¹⁵40 de alcoholes grasos C2-26, en particular también los 2-hidroxideciléteres-(PO)¹-(EO)²²-de alcoholes grasos C8-10.

De modo particular se prefieren además aquellos niotensioactivos poli(oxialquilados) con grupo terminal bloqueado, de la fórmula R¹O[CH2CH2O]x[CH2CH(R³)O]yCH2CH(OH)R², en la cual R¹y R²representan, independientemente uno de otro, un radical hidrocarburo lineal o ramificado, saturado o con una o varias insaturaciones con 2 a 26 átomos de carbono, R³es elegido, independientemente uno de otro, de entre -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2-CH3, -CH(CH3)2, sin embargo preferiblemente representa -CH3 , y x y y representan, independientemente uno de otro, valores entre 1 y 32, en donde se prefieren de modo muy particular los tensioactivos con R³= -CH3 y valores para x de 15 a 32 y y de 0,5 y 1,5.

Otros niotensioactivos utilizables preferiblemente son los niotensioactivos poli(oxialquilados) con grupos terminales bloqueados, de la fórmula R¹O[CH2CH(R³)O]x[CH2]kCH(OH)[CH2]jOR², en la cual R¹y R²representan radicales hidrocarburo lineales o ramificados, saturados o insaturados, alifáticos o aromáticos, con 1 a 30 átomos de carbono, R³representa H o un radical metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, 2-butilo o 2-metil-2-butilo, x representa valores entre 1 y 30, k y j representan valores entre 1 y 12, preferiblemente entre 1 y 5. Cuando el valor x > 2, cada R³en la fórmula anterior R¹O[CH2CH(R³)O]x[CH2]kCH(OH)[CH2]jOR²puede ser diferente. R¹y R²son preferiblemente radicales hidrocarburo lineales o ramificados saturados o insaturados, alifáticos o aromáticos con 6 a 22 átomos de carbono, en donde se prefieren particularmente radicales con 8 a 18 átomos de C. Para el radical R³se prefieren de modo particular H, -CH3 o -CH2CH3. Los valores particularmente preferidos para x están en el intervalo de 1 a 20, en particular de 6 a 15.

Como se describió anteriormente, cada R³en la fórmula presentada puede ser diferente, en caso que x > 2. Por ello, puede variar la unidad de óxido de alquileno en el paréntesis cuadrado. Si x representa por ejemplo 3, el radical R³puede ser elegido para formar unidades de óxido de etileno (R³= H) u óxido de propileno (R³= c H3), que pueden estar en colocadas juntas en cualquier orden, por ejemplo (EO)(PO)(EO), (EO)(e 0)(PO), (Eo )(e O)(EO), (PO)(EO)(PO), (PO)(PO)(EO) y (PO)(PO)(PO). El valor 3 para x ha sido elegido por ello ventajosamente y puede ser definitivamente mayor, en donde el ancho de variación aumenta con valores crecientes de x e incluye por ejemplo un número mayor de grupos (EO), combinado con un número menor de grupos (PO), o a la inversa.

Los alcoholes poli(oxialquilados) con grupos terminales bloqueados preferidos de modo particular, de la fórmula presentada anteriormente exhiben valores de k = 1 y j = 1, de modo que la fórmula anterior es simplificada a [CH2CH(R')O]xCH2CH(OH)CH2OR². En la última fórmula R¹, R²y R³son como se definió anteriormente y x representa números de 1 a 30, preferiblemente de 1 a 20 y en particular de 6 a 18. De modo particular se prefieren los tensioactivos en los cuales los radicales R¹y R²exhiben 9 a 14 átomos de C, R³representa H y x adopta valores de 6 a 15.

Finalmente, han probado ser particularmente eficaces los tensioactivos no iónicos de la fórmula general R¹-CH(OH)CH2O-(AO)w-R², en la cual

- R¹representa un radical alquilo o alquenilo C6-24 de cadena recta o ramificada, saturado o con una o varias insaturaciones;

- A representa un radical de entre el grupo de CH2CH2, -CH2CH2-CH2, -CH2-CH(CH3), y

- w representa valores entre 1 y 120, preferiblemente 10 a 80, en particular 20 a 40.

En el grupo de los tensioactivos no iónicos se cuentan por ejemplo los 2-hidroxialquiléteres-(EO)^10-80de alcohol graso C4-22, en particular también los 2-hidroxideciléteres -(EO)22 de alcohol graso C8-12 y los 2-hidroxialquiléteres (EO)40-80 de alcohol graso C4-22.

Los detergentes o agentes de limpieza preferidos se caracterizan porque el detergente o agente de limpieza contiene por lo menos un tensioactivo no iónico, preferiblemente un tensioactivo no iónico de entre el grupo de los hidroxiéteres mixtos, en donde la proporción en peso del tensioactivo no iónico en la totalidad del peso del detergente o agente de limpieza es preferiblemente 0,2 a 10 % en peso, preferiblemente 0,4 a 7,0 % en peso y en particular 0,6 a 6,0 % en peso.

Los detergentes o agentes de limpieza preferidos de acuerdo con la invención, para el uso en procedimientos de lavado automático de vajillas, contienen aparte de los tensioactivos no iónicos descritos anteriormente, otros tensioactivos, en particular tensioactivos anfóteros. La fracción de tensioactivos aniónicos en la totalidad del peso de este detergente o agente de limpieza esta sin embargo preferiblemente limitada. De este modo, los detergentes para lavado automático de vajillas preferidos se caracterizan porque estos, referidos a su peso total, están presentes en menos de 5, 0 % en peso, preferiblemente menos de 3,0 % en peso, de modo particular preferiblemente menos de 2,0 % en peso de tensioactivo aniónico. Al respecto, se renuncia al uso de tensioactivos aniónicos en mayores cantidades, en particular para evitar un desarrollo excesivo de espuma.

Otro componente preferido de los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención, son los formadores de complejos. Los formadores de complejos preferidos modo particular son los fosfonatos. Los fosfonatos que forman complejos comprenden, aparte del ácido 1-hidroxietano-1,1-difosfónico, una serie de diferentes compuestos, como por ejemplo ácido dietilentriaminopenta(metilenfosfónico) (DTPMP). En esta memoria se prefieren en particular los hidroxialcano- o aminoalcanofosfonatos. Entre los hidroxialcanofosfonatos, el 1-hidroxietano-1,1-difosfonato (HEDP) es de particular importancia como coauxiliar de lavado. Se usa preferiblemente la sal de sodio, en donde la sal de disodio tiene reacción neutra y la sal de tetrasodio tiene reacción alcalina (pH 9). Como aminoalcanofosfonatos entran en consideración preferiblemente etilendiaminotetrametilenfosfonato (EDTMP), dietilentriaminopentametilenfosfonato (DTPMP) así como sus homólogos superiores. Se usan preferiblemente en forma de la sal de sodio que tiene reacción neutra, por ejemplo como sal de hexasodio del EDTMP o como sal de hepta- y octasodio del DTPMP. Al respecto, preferiblemente se usa HEDP como auxiliar de lavado de la categoría de los fosfonatos. Los aminoalcanofosfonatos poseen además un pronunciado poder de enlace de metales pesados. De acuerdo con ello, en particular cuando el agente contiene también blanqueador, puede preferirse el uso de aminoalcanofosfonatos, en particular DTPMP o la aplicación de mezclas de los fosfonatos mencionados.

Un detergente o agente de limpieza preferido en el marco de esta memoria, contiene uno o varios fosfonato(s) de entre el grupo de

a) ácido aminotrimetilenfosfónico (ATMP) y/o sus sales;

b) ácido etilendiaminotetra(metilenfosfónico) (EDTMP) y/o sus sales;

c) ácido dietilentriaminopenta(metilenfosfónico) (DTPMP) y/o sus sales;

d) ácido 1-hidroxietano-1,1-difosfónico (HEDP) y/o sus sales;

e) ácido 2-fosfonobutano-1,2,4-tricarboxílico (PBTC) y/o sus sales;

f) ácido hexametilendiaminotetra(metilenfosfónico) (HDTMP) y/o sus sales;

g) ácido nitrilotri(metilenfosfónico) (NTMP) y/o sus sales.

De modo particular se prefieren los detergentes o agentes de limpieza, que como fosfonatos contienen ácido 1-hidroxietano-1,1-difosfónico (HEDP) o ácido dietilentriaminopenta(metilenfosfónico) (DTPMP). Evidentemente, los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención pueden contener dos o varios diferentes fosfonatos. Los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención preferidos se caracterizan porque el detergente o agente de limpieza contiene por lo menos un formador de complejos de entre el grupo de los fosfonatos, preferiblemente 1-hidroxietano-1,1-difosfonato, en donde la proporción en peso del fosfonato en el peso total del detergente o agente de limpieza es preferiblemente de 0,1 y 8,0 % en peso, preferiblemente 0,2 y 5,0 % en peso y en particular 0,5 y 3,0 % en peso.

Los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención contienen además preferiblemente sustancias estructurales. Entre las sustancias estructurales se cuentan al respecto en particular los silicatos, carbonatos, coauxiliares orgánicos de lavado y - donde frente a su uso no existen prejuicios ecológicos - también los fosfatos.

Las sustancias orgánicas coauxiliares de lavado pueden, en caso de desearse, estar presentes en cantidades de hasta 40 % en peso, en particular hasta 25 % en peso y preferiblemente de 1 % en peso a 8 % en peso.

Entre la multiplicidad de fosfatos obtenibles comercialmente, los fosfatos de metales alcalinos tienen bajo particular preferencia fosfato de pentasodio, NasPaO-iü (polifosfato de sodio) o trifosfato de pentapotasio, K5P3O10 (pólipos a tu de potasio) la máxima importancia para el agente de acuerdo con la invención. Si en el marco de la presente memoria se usan fosfatos como sustancias activas de limpieza en el detergente o agente de limpieza, entonces los agentes preferidos contienen este(os) fosfato(s), preferiblemente trifosfato de pentapotasio, en donde la proporción en peso del fosfato sobre el peso total del detergente o agente de limpieza está preferiblemente entre 5,0 y 40 % en peso, preferiblemente 10 y 30 % en peso y en particular 12 y 25 % en peso.

Como coauxiliares orgánicos de lavado se mencionan en particular policarboxilatos / ácidos policarboxílicos, policarboxilatos poliméricos, ácido asparagínico, poliacetales, dextrinas, otros coauxiliares orgánicos de lavado así como fosfonatos. A continuación se describen estas clases de sustancias.

Las sustancias estructurales orgánicas útiles son por ejemplo los ácidos policarboxílicos utilizables en forma del ácido libre y/o su sal de sodio, en donde se entiende por ácidos policarboxílicos aquellos ácidos carboxílicos, que portan más de una función ácido. Por ejemplo, estos son ácido cítrico, ácido adípico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido málico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido fumárico, ácidos sacáricos, ácidos aminocarboxílicos, ácido nitrilotriacético (NTA), en tanto un uso tal no sea objetable por motivos ecológicos, así como mezclas de estos. Los ácidos libres poseen, aparte de su efecto auxiliar de lavado, típicamente también la propiedad de un componente de acidificación y sirven con ello también para el ajuste de un valor más bajo y más suave de pH de los detergentes o agentes de limpieza. En particular se mencionan para ello ácido cítrico, ácido succínico, ácido glutárico, ácido adípico, ácido glucónico y cualquier mezcla de estos. Con particular preferencia, como sustancia estructural se usa el ácido cítrico o sales del ácido cítrico. Otras sustancias estructurales preferidas de modo particular son elegidas de entre ácido metilglicindiacético (MGDA), diacetato de ácido glutámico (GLDA), diacetato de ácido asparagínico (ASDA), hidroxietiliminodiacetato (HEIDA), iminodisuccinato (IDS) y etilendiamindisuccinato (EDDS), carboximetilinulina y poliaspartato.

Como sustancias estructurales son adecuados adicionalmente policarboxilatos poliméricos, estos son por ejemplo las sales de metales alcalinos del ácido poliacrílico o del ácido polimetacrílico, por ejemplo aquellos con una masa molecular relativa de 500 a 70000 g/mol.

Las masas molares indicadas para los policarboxilatos poliméricos son, en el sentido de esta memoria, promedios ponderados en peso de masas molares Mw de la respectiva forma ácida, que fueron determinadas básicamente por medio de cromatografía de permeación en gel (GPC), en donde se usó un detector de UV. La medición ocurrió al respecto contra un estándar externo de ácido poliacrílico el cual, debido a su parentesco estructural con los polímeros investigados, entrega valores realistas de peso molar. Estos datos se desvían claramente de los datos de peso molar, en los cuales se usan ácidos poliestirenosulfónicos como estándar. Las masas molares medidas contra ácidos poliestirenosulfónicos son por regla general claramente más altas que las masas molares indicadas en esta memoria.

Los polímeros adecuados son en particular poliacrilatos, que exhiben preferiblemente una masa molecular de 2000 a 20000 g/mol. Debido a su solubilidad superior, de este grupo pueden preferirse a su vez los poliacrilatos de cadena corta, que exhiben masas molares de 2000 a 10000 g/mol, y de modo particular preferiblemente de 3000 a 5000 g/mol.

Además son adecuados los policarboxilatos copoliméricos, en particular aquellos del ácido acrílico con ácido metacrílico y del ácido acrílico o ácido metacrílico con ácido maleico. Han probado ser particularmente adecuados los copolímeros del ácido acrílico con ácido maleico, que contienen de 50 a 90 % en peso de ácido acrílico y 50 a 10 % en peso de ácido maleico. Sus masas moleculares relativas, referidas al ácido libre, están en general de 2000 a 70000 g/mol, preferiblemente 20000 a 50000 g/mol y en particular 30000 a 40000 g/mol.

También son otros coauxiliares de lavado adecuados los oxidisuccinatos y otros derivados de disuccinatos, preferiblemente etilendiaminodisuccinato. Al respecto, se usa etilendiamino-N,N'-disuccinato (EDDS) preferiblemente en forma de sus sales de sodio o de magnesio. Además, en este contexto se prefieren también glicerindisuccinato y glicerintrisuccinato.

Para el mejoramiento de la eficiencia de limpieza y/o para el ajuste de la viscosidad, los detergentes o agentes de limpieza preferidos contienen por lo menos polímero modificado para que tenga comportamiento hidrófobo, preferiblemente un polímero que tiene grupos ácido carboxílico modificado para que tenga comportamiento hidrófobo, en donde la proporción en peso del polímero modificado para que tenga comportamiento hidrófobo en el peso total del detergente o agente de limpieza es preferiblemente de 0,1 a 10 % en peso, preferiblemente entre 0,2 y 8,0 % en peso y en particular 0,4 a 6,0 % en peso.

Como complemento a las sustancias estructurales descritas anteriormente, en el detergente o agente de limpieza pueden estar presentes polímeros con actividad de limpieza. La proporción en peso del polímero con actividad de limpieza sobre el peso total del detergente o agente de limpieza automática de acuerdo con la invención, es preferiblemente de 0,1 a 20 % en peso, preferiblemente 1,0 a 15 % en peso y en particular 2,0 a 12 % en peso.

Como polímeros con actividad de limpieza se usan preferiblemente polímeros que tienen grupos ácido sulfónico, en particular de entre el grupo de los copolímeros de polisulfonatos. Estos copolímeros de polisulfonato contienen, aparte de monómero(s) que tiene(n) grupos ácido sulfónico, al menos un monómero de entre el grupo de los ácidos carboxílicos insaturados.

Como ácido(s) carboxílico(s) insaturado(s) se usa(n) con particular preferencia ácidos carboxílicos insaturados de la fórmula R¹(R²)C=C(R³)COOH, en la cual R¹a R³representan, independientemente uno de otro, -H, -CH3, radical alquilo saturado de cadena recta o ramificada con 2 a 12 átomos de carbono, un radical alquenilo de cadena recta o ramificada, insaturado una o varias veces, con 2 a 12 átomos de carbono, con radicales alquilo o alquenilo como se definieron anteriormente sustituidos con -NH2, -OH o -COOH o representa -COOH o -COOR⁴, en donde R⁴es un radical hidrocarburo saturado o insaturado de cadena recta o ramificada con 1a 12 átomos de carbono.

Son ácidos carboxílicos insaturados preferidos de modo particular el ácido acrílico, ácido metacrílico, ácido etacrílico, ácido a-cloroacrílico, ácido a-cianoacrílico, ácido crotónico, ácido a-fenil-acrílico, ácido maleico, anhídrido maleico, ácido fumárico, ácido itacónico, ácido citracónico, ácido metilenmalónico, ácido sórbico, ácido cinámico o sus mezclas. Evidentemente son utilizables también los ácidos dicarboxílicos insaturados.

En los monómeros que tienen grupos ácido sulfónico se prefieren aquellos de la fórmula R⁵(R⁶)C=C(R⁷)-X-SO3H, en la cual R⁵a R⁷representan, independientemente uno de otro, -H, -CH3, un radical alquilo saturado de cadena recta o ramificada con 2 a 12 átomos de carbono, un radical alquenilo de cadena recta o ramificada, insaturado una o varias veces, con 2 a 12 átomos de carbono, radicales alquilo o alquenilo sustituidos con -NH2, -OH o -COOH o representa -COOH o -COOR⁴, en donde R⁴es un radical hidrocarburo saturado o insaturado, de cadena recta o ramificada, con 1 a 12 átomos de carbono, y X representa un grupo espaciador opcionalmente presente, que es elegido de entre -(CH2V con n = 0 a 4, -COO-(CH2)k- con k = 1a 6, -C(O)-NH-C(CH³)²-, -C(O)-NH-C(CH³)²-CH²- y -C(O)-NH-CH(CH²CH³)-.

Bajo estos monómeros se prefieren aquellos de las fórmulas H2C=CH-X-SO3H, H2C=C(CH3)-X-SO3H y HO3S-X-(R⁶)C=C(R⁷)-X-SO3H, en las cuales R⁶y R⁷son elegidos, independientemente uno de otro, de entre -H, -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2 y X representa un grupo espaciador opcionalmente presente, que es elegido de entre -(CH2)n- con n = 0 a 4, -COO-(CH2)k- con k = 1 a 6, -C(O)-NH-C(CH3)2-,-C(O)-NH-C(CH3)2-CH2- y -C(O)-NH-CH(CH²CH³)-.

Al respecto los monómeros que tienen grupos ácido sulfónico preferidos de modo particular son ácido 1-acrilamido-1-propanosulfónico, ácido 2-acrilamido-2-propanosulfónico, ácido 2-acrilamido-2-metil-1-propanosulfónico, ácido 2-metacrilamido-2-metil-1-propanosulfónico, ácido 3-metacrilamido-2-hidroxi-propanosulfónico, ácido alilsulfónico, ácido metalilsulfónico, ácido aliloxibencenosulfónico, ácido metaliloxibencenosulfónico, ácido 2-hidroxi-3-(2-propeniloxi)propanosulfónico, ácido 2-metil-2-propen-1-sulfónico, ácido estirenosulfónico, ácido vinilsulfónico, 3-sulfopropilacrilato, 3-sulfopropilmetacrilato, sulfometacrilamida, sulfometilmetacrilamida así como mezclas de los ácidos mencionados o sus sales solubles en agua.

En los polímeros, los grupos ácido sulfónico pueden estar presentes en forma total o parcialmente neutralizada. El uso de copolímeros que tienen grupos ácido sulfónico total o parcialmente neutralizados es preferido de acuerdo con la invención.

La masa molar de los sulfocopolímeros usados preferiblemente de acuerdo con la invención puede ser variada, para ajustar las propiedades de los polímeros al propósito deseado de aplicación. Los detergentes para lavado automático de vajillas preferidos se caracterizan porque los copolímeros exhiben masas molares de 2000 a 200.000 gmol^-1, preferiblemente de 4000 a 25.000 gmol^{' 1}y en particular de 5000 a 15.000 gmol^{' 1}.

En otra forma preferida de realización, los copolímeros comprenden, aparte de monómeros que tienen grupos carboxilo y monómeros que tienen grupos ácido sulfónico, además al menos un monómero no iónico, preferiblemente hidrófobo. Mediante el uso de estos polímeros modificados para que tengan comportamiento hidrófobo, podría mejorarse en particular la eficiencia de abrillantamiento de detergentes de acuerdo con la invención para lavado automático de vajillas.

De acuerdo con la invención se prefieren detergentes o agentes de limpieza, que contienen un polímero que comprende

i) monómero(s) que tiene(n) grupos ácido carboxílico

ii) monómero(s) que tiene(n) grupos ácido sulfónico

iii) monómero(s) no iónico(s).

Mediante el uso de estos terpolímeros podría mejorarse la eficiencia de abrillantamiento de detergentes de acuerdo con la invención para lavado automático de vajillas, frente a detergentes comparables para lavado de vajillas, que contienen sulfopolímeros sin adición de monómeros no iónicos.

Como monómeros no iónicos se usan preferiblemente monómeros de la fórmula general R¹(R²)C=C(R³)-X-R⁴, en la cual R¹a R³representan, independientemente uno de otro, -H, -CH3 o -C2H5, X representa un grupo espaciador opcionalmente presente que es elegido de entre -CH2-, -C(O)O- y -C(O)-NH-, y R⁴representa un radical alquilo saturado de cadena recta o ramificada con 2 a 22 átomos de carbono o representa un radical insaturado, preferiblemente aromático con 6 a 22 átomos de carbono.

Son monómeros no iónicos preferidos de modo particular buteno, isobuteno, penteno, 3-metilbuteno, 2-metilbuteno, ciclopenteno, hexeno, hexeno-1, 2-metilpenteno-1, 3-metilpenteno-1, ciclohexeno, metilciclopenteno, ciclohepteno, metilciclohexeno, 2,4,4-trimetilpenteno-1, 2,4,4-trimetilpenteno-2, 2,3-dimetilhexeno-1, 2,4-dimetilhexeno-1, 2,5-dimetilhexeno-1, 3,5-dimetilhexeno-1, 4,4-dimetilhexano-1, etilciclohexino, 1-octeno, a-olefinas con 10 o más átomos de carbono, como por ejemplo 1-deceno, 1-dodeceno, 1-hexadeceno, 1-octadeceno y a-olefina C22, 2-estireno, ametilestireno, 3-metilestireno, 4-propilestireno, 4-cidohexilestireno, 4-dodecilestireno, 2-etil-4-benzoilestireno, 1-vinilnaftaleno, 2,vinilnaftaleno, metiléster de ácido acrílico, etiléster de ácido acrílico, propiléster de ácido acrílico, butiléster de ácido acrílico, pentiléster de ácido acrílico, hexiléster de ácido acrílico, metiléster de ácido metacrílico, n-(metil)acrilamida, 2-etilhexiléster de ácido acrílico, 2-etilhexiléster de ácido metacrílico, n-(2-etilhexil)acrilamida, octiléster de ácido acrílico, octiléster de ácido metacrílico, n-(octil)acrilamida, lauriléster de ácido acrílico, lauriléster de ácido metacrílico, n-(lauril)acrilamida, esteariléster de ácido acrílico, esteariléster de ácido metacrílico, n-(estearil)acrilamida, beheniléster de ácido acrílico, beheniléster de ácido metacrílico y n-(behenil)acrilamida o sus mezclas.

La proporción en peso de los copolímeros que tienen grupos ácido sulfónico, sobre el peso total de los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención es preferiblemente de 0,1 a 15 % en peso, preferiblemente 1,0 a 12 % en peso y en particular 2,0 a 10 % en peso.

Los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención pueden estar presentes en las formas de confección conocidas por los expertos, por consiguiente por ejemplo en forma sólida o líquida, pero también como combinación de formas de oferta sólida y líquida. Como formas sólidas de oferta son adecuadas en particular polvos, granulados, extrudidos o compactados, en particular comprimidos.

Una sustancia, por ejemplo una composición o un agente, es sólida de acuerdo con la definición de la invención, cuando a 25 °C y 1013 mbar está presente en el estado sólido de agregación.

Una sustancia, por ejemplo una composición o un agente es líquido de acuerdo con la definición de la invención, cuando a 25 °C y 1013 mbar está presente en el estado líquido de agregación. Al respecto, líquido comprende también gelatinoso.

Los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención sólidos, en particular en polvo pueden contener, aparte de las enzimas de acuerdo con la invención, en principio todos los ingredientes conocidos y usuales en tales agentes, en donde en el agente está presente por lo menos otro ingrediente. Los agentes de acuerdo con la invención pueden contener en particular sustancias auxiliares de lavado, tensioactivos con actividad de superficie, agentes blanqueadores orgánicos y/o inorgánicos a base de compuestos de peroxígeno, activadores de blanqueo, solventes orgánicos miscibles en agua, enzimas, agentes de secuestración, electrolitos, reguladores de pH y otras sustancias auxiliares como aclaradores ópticos, inhibidores de percudimiento, reguladores de espuma así como colorantes y sustancias aromatizantes, así como combinaciones de ellos.

En una forma de realización, un detergente o agente de limpieza comprende además

- 5 % en peso a 70 % en peso, en particular 5 % en peso a 30 % en peso de tensioactivo y/o

-10 % en peso a 65 % en peso, en particular 12 % en peso a 60 % en peso de material auxiliar de lavado inorgánico soluble en agua o dispersable en agua y/o

- 0,5 % en peso a 10 % en peso, en particular 1 % en peso a 8 % en peso de sustancias auxiliares de lavado orgánicas solubles en agua y/o

- 0,01 a 15 % en peso de ácidos o sales ácidas orgánicos y/o inorgánicos y/o

- 0,01 a 5 % en peso de formadores de complejos para metales pesados y/o

- 0,01 a 5 % en peso de inhibidor de percudimiento y/o

- 0,01 a 5 % en peso de inhibidor de transferencia de color y/o

- 0,01 a 5 % en peso de inhibidor de espuma.

Opcionalmente, el agente puede comprender adicionalmente aclaradores ópticos, preferiblemente de 0,01 a 5 % en peso.

La fabricación de agentes sólidos de acuerdo con la invención no ofrece dificultades y puede ocurrir de manera conocida, por ejemplo mediante secado por atomización o granulación, en donde las enzimas y otros eventuales ingredientes térmicamente sensibles, como por ejemplo blanqueadores, dado el caso pueden ser añadidos posteriormente por separado. Para la fabricación de agentes de acuerdo con la invención con densidad aparente elevada, en particular en el intervalo de 650 g/l a 950 g/l, se prefiere un procedimiento que exhibe una etapa de extrusión.

Para la fabricación de agentes sólidos de acuerdo con la invención en forma de comprimidos, que pueden consistir en una fase o varias fases, tener un color o varios colores y en particular consistir en una capa o en varias, en particular en dos capas, se procede preferiblemente de modo que se mezclan mutuamente todos los componentes - dado el caso de cada capa - en un mezclador y se comprime la mezcla por medio de prensas para comprimidos convencionales, por ejemplo prensas excéntricas o prensas de curso circular, con fuerzas de compresión en el intervalo de aproximadamente 50 a 100 kN, preferiblemente a 60 a 70 kN. En particular para comprimidos de varias capas puede ser ventajoso cuando se comprime previamente por lo menos una capa. Esto es ejecutado preferiblemente a fuerzas de presión entre 5 y 20 kN, en particular a 10 a 15 kN. De este modo se obtienen sin problema comprimidos irrompibles y sin embargo, bajo las condiciones de aplicación, con solubilidad suficientemente rápida, con resistencias a la ruptura y a la flexión normalmente de 100 a 200 N, preferiblemente sin embargo por encima de 150 N. Preferiblemente un comprimido fabricado de este modo exhibe un peso de 10 g a 50 g, en particular de 15 g a 40 g. La forma espacial de los comprimidos es cualquiera y puede ser redonda, oval o angular, en donde también son posibles formas intermedias. Los ángulos y bordes son ventajosamente redondeados. Los comprimidos redondos exhiben preferiblemente un diámetro de 30 mm a 40 mm. En particular el tamaño de los comprimidos con diseño angular o cuadrado, que son introducidos predominantemente mediante el dispositivo de dosificación por ejemplo de la lavadora automática para vajillas, depende de la geometría y el volumen de este dispositivo de dosificación. Las formas de realización ventajosas preferidas exhiben una superficie base de (20 a 30 mm) x (34 a 40 mm), en particular de 26x36 mm o de 24x38 mm.

Un agente sólido de acuerdo con la invención contiene preferiblemente por lo menos un auxiliar de lavado orgánico y/o inorgánico, soluble en agua y/o insoluble en agua. A las sustancias auxiliares de lavado orgánicas solubles en agua pertenecen las sustancias estructurales orgánicas mencionadas anteriormente.

Como materiales auxiliares de lavado inorgánicos solubles en agua entran en consideración agentes sólidos, en particular silicatos alcalinos, carbonatos alcalinos y fosfatos alcalinos, que pueden estar presentes en forma de sus sales de sodio o potasio, alcalinas, neutras o ácidas. Los ejemplos de ellas están mencionados anteriormente en esta memoria.

Como materiales auxiliares de lavado inorgánicos dispersables en agua para agentes sólidos se usan en particular aluminosilicatos alcalinos cristalinos o amorfos, en cantidades de hasta 50 % en peso, preferiblemente no superiores a 40 % en peso y agentes líquidos en particular de 1 % en peso a 5 % en peso. Entre estos, se prefieren los aluminosilicatos de sodio cristalinos en calidad para detergente, en particular zeolitas A, P y dado el caso X, solos o en mezclas, por ejemplo en forma de un cocristalizado de las zeolitas A y X (Vegobond® A x , un producto comercial de la compañía Condea Augusta S.p.A.). En agentes sólidos en forma de partículas, se usan preferiblemente cantidades cercanas a los límites superiores mencionados anteriormente. Los aluminosilicatos adecuados no exhiben en particular partículas con un tamaño de grano mayor a 30 pm y consisten preferiblemente en al menos 80 % en peso de partículas con un tamaño inferior a 10 pm. Su poder de enlace del calcio, que puede ser determinado de acuerdo con los datos del documento alemán de patente DE 24 12837, está por regla general en el intervalo de 100 a 200 mg de CaO por gramo.

Los sustitutos o sustitutos parciales adecuados para el aluminosilicato mencionado son silicatos alcalinos cristalinos, que pueden estar presentes solos o en mezcla con silicatos amorfos. Los silicatos alcalinos utilizables como sustancias estructurales en los agentes de acuerdo con la invención exhiben preferiblemente una relación molar de óxido alcalino a SiO2 inferior a 0,95, en particular de 1:1,1 a 1:12 y pueden estar presentes de modo amorfo o cristalino. Son silicatos alcalinos preferidos los silicatos de sodio, en particular los silicatos de sodio amorfos, con una relación molar Na2O:SiO2 de 1:2 a 1:2,8. Como silicatos cristalinos que pueden estar presentes solos o en mezcla con silicatos amorfos, se usan preferiblemente silicatos en capas cristalinos de la fórmula general Na2SixO2x+1 ■ y H2O, en la cual x, el denominado módulo, es un número de 1,9 a 22, en particular 1,9 a 4 y y es un número de 0 a 33 y los valores preferidos para x son 2, 3 o 4. Los silicatos en capas cristalinos preferidos son aquellos en los cuales x en la fórmula general mencionada adopta los valores 2 o 3. En particular se prefieren tanto p- como también 5-disilicato de sodio (Na2Si2O5 ■ y H2O). En los agentes de acuerdo con la invención pueden usarse también silicatos alcalinos cristalinos de la fórmula general mencionada anteriormente, prácticamente anhidros, fabricados a partir de silicatos alcalinos amorfos, fórmula en la cual x es un número de 1,9 a 2,1. En otra forma preferida de realización de agentes de acuerdo con la invención se usa un silicato cristalino de sodio en capas con un módulo de 2 a 3, como puede ser fabricado a partir de arena y carbonato de sodio. Los silicatos cristalinos de sodio con un módulo en el intervalo de 1,9 a 3,5 son usados en otra forma preferida de realización de agentes de acuerdo con la invención. Los silicatos cristalinos en capas de la fórmula (I) indicada anteriormente son distribuidos por la compañía Clariant GmbH bajo el nombre comercial Na-SKS, por ejemplo Na-SKS-1 (Na2Si22O45H2O, keniaita), Na-SKS-2 (Na2Si-MO29-xH2O, magadiita), Na-SKS-3 (Na2SiaO17-xH2O) o Na-SKS-4 (Na2Si4Og-xH2O, macatita). De estos son adecuados sobre todo Na-SKS-5 (a-Na2Si2Og), Na-SKS-7 ( P ^ S h O g, natrosilita), Na-SKS-9 (NaHS¡²O⁵-3H²O), Na-SKS-10 (NaHS¡²O⁵-3H²O, canemita), Na-SKS-11 (t-Na2ShO5) y Na-SKS-13 (NaHShOs), en particular sin embargo Na-SKS-6 (5-Na²ShO⁵). En un acondicionamiento preferido de agentes de acuerdo con la invención, se usa un compuesto granular de silicato cristalino en capas y citrato, de silicato cristalino en capas y (co-)polímeros de ácido policarboxílico mencionados anteriormente, o de silicatos alcalinos y carbonatos alcalinos, como son obtenibles en el mercado por ejemplo bajo los nombres Nabion® 15.

Las sustancias auxiliares de lavado están presentes en los agentes sólidos de acuerdo con la invención, en cantidades de hasta 75 % en peso, en particular 5 % en peso a 50.

Como compuestos de peroxígeno adecuados para el uso en agentes sólidos de acuerdo con la invención, entran en consideración en particular perácidos orgánicos o sales perácidas de ácidos orgánicos, como ácido ftalimidopercaproico, ácido perbenzoico o sales del ácido diperdodecanodioico, peróxido de hidrógeno y sales inorgánicas que liberan peróxido de hidrógeno bajo las condiciones de lavado, a las cuales pertenecen perborato, percarbonato, persilicato y/o persulfato como caroato. En tanto debieran usarse compuestos sólidos de peroxígeno, estos pueden ser usados en forma de polvos o granulados, que también en principio pueden estar envueltos de manera conocida. En caso que un agente de acuerdo con la invención contenga compuestos de peroxígeno, estos están presentes en cantidades de preferiblemente hasta 50 % en peso, en particular de 5 % en peso a 30 % en peso. La adición de pequeñas cantidades de estabilizadores conocidos de blanqueador, como por ejemplo de fosfonatos, boratos o metaboratos y metasilicatos así como sales de magnesio como sulfato de magnesio puede ser conveniente.

Como activadores de blanqueo en los agentes sólidos pueden usarse compuestos que bajo condiciones de perhidrólisis dan como resultado ácidos peroxocarboxílicos alifáticos con preferiblemente 1 a 10 átomos de C, en particular 2 a 4 átomos de C, y/o ácido perbenzoico dado el caso sustituido. Son adecuadas sustancias que portan grupos acilo en O y/o en N del número mencionado de átomos de C y/o dado el caso grupos benzoilo sustituidos. Se prefieren alquilendiaminas aciladas varias veces, en particular tetraacetiletilendiamina (TAED), derivados acilados de triazina, en particular 1,5-diacetil-2,4-dioxohexahidro-1,3,5-triazina (DADHT), glicolurilos acilados, en particular tetraacetilglicolurilo (TAGU), N-acilimida, en particular N-nonanoilsuccinimida (NOSI), fenolsulfonatos acilados, en particular n-nonanoil- o isononanoiloxibencenosulfonato (n- o iso-NOBS), anhídridos carboxílicos, en particular anhídrido Itálico, alcoholes acilados varias veces, en particular triacetina, etilenglicoldiacetato, 2,5-diacetoxi-2,5-dihidrofurano y enolésteres así como sorbitol y manitol acetilados o sus mezclas descritas (SORMAN), derivados acilados de azúcar, en particular pentaacetilglucosa (PAG), pentaacetilfructosa, tetraacetilxilosa y octaacetillactosa así como glucamina y gluconolactona acetiladas, dado el caso N-alquilados, y/o lactamas N-aciladas, por ejemplo N-benzoilcaprolactama. Así mismo, preferiblemente se usan los acilacetales sustituidos de modo hidrofílico y las acillactamas. También pueden usarse combinaciones de activadores de blanqueo convencionales. Tales activadores de blanqueo pueden estar presentes, en particular en presencia de los blanqueadores que entregan peróxido de hidrógeno mencionados anteriormente, en el intervalo usual de cantidades, preferiblemente en cantidades de 0,5 % en peso a 10 % en peso, en particular 1 % en peso a 8 % en peso, referidas a la totalidad del agente, aunque muy preferiblemente fallan por uso de ácido percarboxílico como único blanqueador.

Adicionalmente a los activadores de blanqueo convencionales, o en su lugar, como los denominados catalizadores de blanqueo en los agentes sólidos pueden estar presentes, también sulfoniminas y/o sales de metales de transición o complejos de metales de transición que refuerzan el blanqueo.

Entre las formas de dosificación sólidas de acuerdo con la invención se cuentan extrudidos, granulados, comprimidos o bolsitas que contienen agentes sólidos, que pueden estar presentes empacados tanto en contenedores grandes como también en porciones. Alternativamente, el agente está presente como polvo que fluye libremente, en particular con una densidad aparente de 300 g/l a 1200 g/l, en particular 500 g/l a 900 g/l o 600 g/l a 850 g/l.

Las formas de realización de la presente invención comprenden todas las formas de dosificación sólidas, en polvo, líquidas, gelatinosas o pastosas del agente, que dado el caso pueden consistir también en varias fases, y estar presentes en forma comprimida o no comprimida. Por ello, los agentes que se caracterizan porque están presentes como sistema de un componente representan otra forma de realización de la invención. Tales agentes consisten preferiblemente en una fase. Sin embargo, evidentemente los agentes de acuerdo con la invención pueden consistir también en varias fases, por ejemplo dos fases líquidas, dos fases sólidas o una fase líquida y una sólida. Por ello, en otra forma de realización de la invención, el detergente o agente de limpieza se caracteriza porque está dividido en varios componentes.

Las formas líquidas de oferta a base de agua y/o solventes orgánicos pueden estar presentes espesos, en forma de geles.

Los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención están presentes preferiblemente en forma líquida. Los detergentes o agentes de limpieza preferidos contienen, referido a su peso total, más de 40 % en peso, preferiblemente entre 50 y 90 % en peso y en particular entre 60 y 80 % en peso de agua.

Como otro componente, los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención pueden contener un solvente orgánico. La adición de solventes orgánicos tiene repercusiones ventajosas en la estabilidad de la enzima y la eficiencia de limpieza de estos agentes. Los solventes orgánicos preferidos provienen del grupo de alcoholes monoo polivalentes, alcanolaminas o glicoléteres. Se prefieren los solventes elegidos de entre etanol, n- o i-propanol, butanol, glicol, propano- o butanodiol, glicerina, diglicol, propil- o butildiglicol, hexilenglicol, etilenglicolmetiléter, etilenglicoletiléter, etilenglicolpropiléter, eteilenglicolmono-n-butiléter, dietilenglicolmetiléter, di-etilenglicoletiléter, propilenglicolmetil-, -etil- o -propiléter, dipropilenglicolmetil-, o -etiléter, metoxi-, etoxi- o butoxitriglicol, 1-butoxietoxi-2-propanol, 3-metil-3-metoxibutanol, propilen-glicol-t-butiléter así como mezclas de estos solventes. La proporción en peso de estos solventes orgánicos en el peso total del detergente o agente de limpieza de acuerdo con la invención es preferiblemente de 0,1 a 10 % en peso, preferiblemente 0,2 a 8,0 % en peso y en particular 0,5 a 5,0 % en peso. Un solvente orgánico preferido de modo particular y particularmente eficaz respecto a la estabilización de los detergentes o agentes de limpieza, es la glicerina así como el 1,2 propilenglicol. De acuerdo con la invención, se prefieren los detergentes o agentes de limpieza líquidos que contienen por lo menos un poliol, preferiblemente del grupo de glicerina y 1,2-propilenglicol, en donde la proporción en peso del poliol en la totalidad del peso del detergente o agente de limpieza es preferiblemente 0,1 y 10 % en peso, preferiblemente 0,2 y 8,0 % en peso y en particular 0,5 y 5,0 % en peso.

Otros solventes orgánicos preferidos son las aminas y alcanolaminas orgánicas. Los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención contienen estas aminas preferiblemente en cantidades de 0,1 a 10 % en peso, preferiblemente de 0,2 a 8,0 % en peso y en particular de 0,5 a 5,0 % en peso, referidas en cada caso a su peso total. Una alcanolamina preferida de modo particular es la etanolamina.

Otro componente preferido de los detergentes o agentes de limpieza de acuerdo con la invención es un alcohol de azúcar (alditol). El grupo de los alditoles comprende polioles no cíclicos de la fórmula HOCH2[CH(OH)]nCH2OH. Entre los alditoles se cuentan por ejemplo manitol (manitol), isomaltol, lactitol, sorbitol (sorbitol) y xilitol (xilitol), treitol, eritritol y arabitol. El sorbitol ha probado ser particularmente ventajoso respecto a la estabilidad de la enzima. La proporción en peso del alcohol de azúcar en el peso total del detergente o agente de limpieza es preferiblemente de 1,0 a 10 % en peso, preferiblemente 2,0 a 8,0 % en peso y en particular 3,0 a 6,0 % en peso.

Los detergentes o agentes de limpieza líquidos de acuerdo con la invención son confeccionados preferiblemente en forma de varias fases, es decir mediante combinación de dos o más detergentes o agentes de limpieza líquidos diferentes separados uno del otro. Este tipo de confección eleva la estabilidad del detergente o agente de limpieza y mejora su eficiencia de limpieza. Un detergente o agente de limpieza preferido de acuerdo con la invención se caracteriza porque comprende un medio de empaque y dos detergentes o agentes de limpieza A y B líquidos separados uno del otro que se encuentran en este medio de empaque, en donde la composición A contiene

a) por lo menos una proteasa modificada de acuerdo con la invención;

b) por lo menos otra enzima diferente de la proteasa de acuerdo con la invención,

c) 10 a 84,9 % en peso de sustancia(s) estructural(es);

d) 15 a 89,9 % en peso de agua; y

la composición B contiene

e) 10 a 75 % en peso de sustancias estructural(es);

f) 25 a 90 % en peso de agua.

Otro objetivo de la invención es un procedimiento para la limpieza de textiles o superficies duras que está caracterizado porque en por lo menos una etapa del procedimiento se aplica un agente de acuerdo con la invención.

Entre ellos se encuentran procedimientos manuales y automáticos, en donde se prefieren los procedimientos automáticos. Los procedimientos para la limpieza de textiles se distinguen en general porque en varias etapas del procedimiento se aplican sobre los elementos que van a limpiarse, diferentes sustancias con actividades de limpieza, y son enjuagados después del tiempo de acción, o porque los elementos que van a limpiarse son tratados de otra manera con un detergente o una solución o dilución de este agente. Lo correspondiente es válido para procedimientos para limpieza de todos los otros materiales diferentes a textiles, en particular de superficies duras. Todos los procedimientos imaginables de lavado o limpieza pueden ser mejorados en al menos una de las etapas del procedimiento alrededor de la aplicación de un detergente o agente de limpieza de acuerdo con la invención o una combinación de acuerdo con la invención de amilasa y proteasa, y representan entonces formas de realización de la presente invención. Todas las circunstancias, objetivos y formas de realización, que se describen para la combinación de acuerdo con la invención de amilasa y proteasa y agentes que las contienen, son también aplicables en este objetivo de la invención. Por ello, en este pasaje se remite expresamente a la divulgación en los correspondientes pasajes, advirtiéndose que esta divulgación es válida también para el procedimiento anterior de acuerdo con la invención.

Las formas alternativas de realización de este objetivo de la invención representan también procedimientos para el tratamiento de materias primas textiles o para el cuidado de textiles, en los cuales en al menos una etapa del procedimiento está activa una proteasa de acuerdo con la invención. Entre ellos se prefieren procedimientos para materias primas textiles, fibras o textiles con componentes naturales, y de modo muy particular para aquellos con lana o seda.

Otro objetivo de la invención es el uso de un agente de acuerdo con la invención para la limpieza de textiles o de superficies duras, en particular tal que la combinación de amilasa y proteasa es usada en una cantidad de 40 |jg a 4 g, preferiblemente de 50 jg a 3 g, de modo particular preferiblemente de 100 jg a 2 g y de modo muy particular preferiblemente de 200 jg a 1 g.

Todas las circunstancias, objetivos y formas de realización que se describen para proteasas de acuerdo con la invención y agentes que las contienen, son aplicables también a este objeto de la invención. Por ello, en este pasaje se remite expresamente a la divulgación en los correspondientes pasajes, advirtiéndose que esta divulgación es válida también para el procedimiento anterior de acuerdo con la invención.

Ejemplo

El siguiente ejemplo aclara la invención, sin embargo sin limitarla:

Claims

REIVINDICACIONES

1. Detergente o agente de limpieza que contiene una combinación de una a-amilasa y una proteasa, en donde la aamilasa está caracterizada porque es idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO.1 sobre la totalidad de su longitud, en por lo menos 89% y con creciente preferencia en por lo menos 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, 99,5% y hasta 100%, y en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1 exhibe eliminaciones en una o varias de las posiciones 180, 181, 182, 183 y 184, y en donde la proteasa está caracterizada porque exhibe una secuencia de aminoácidos que es idéntica a la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO. 2 sobre la totalidad de su longitud, en por lo menos 80% y con creciente preferencia en por lo menos 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% y 99%, en donde la aamilasa mejora la estabilidad y el desempeño de la proteasa en los detergentes y agentes de limpieza.

2. Detergente o agente de limpieza de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la amilasa exhibe eliminaciones en por lo menos dos posiciones elegidas de entre las posiciones 180+181, 181 182, 182+183 y 183+184 en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1, y de modo muy particular preferiblemente en las posiciones 183+184 en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1.

3. Detergente o agente de limpieza de acuerdo con las reivindicaciones 1 y 2, en donde la amilasa exhibe las eliminaciones H183* G184* en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1.

4. Detergente o agente de limpieza de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 3, en donde la amilasa en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1 exhibe además sustituciones de aminoácidos en una o varias de las posiciones 405, 421, 422 y 428.

5. Detergente o agente de limpieza de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 4, en donde la amilasa en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1 exhibe las sustituciones I405L; A421H, A422P y A428T.

6. Detergente o agente de limpieza de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la proteasa exhibe una secuencia de aminoácidos, que es idéntica a la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO. 2 sobre su longitud total, en por lo menos 80% y con preferencia creciente en por lo menos 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% y 99% y exhibe el aminoácido ácido glutámico (E) en la posición 99 en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 2.

7. Detergente o agente de limpieza de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 6, en donde la proteasa es una proteasa de acuerdo con SEQ ID NO.4.

8. Detergente o agente de limpieza de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque la proteasa está presente en estos en una cantidad de 0,001-0,1 % en peso, preferiblemente de 0,01 a 0,06 % en peso y la amilasa está presente en estos en una cantidad de 0,001-0,15 % en peso, preferiblemente de 0,005 a 0,012 % en peso, referida al peso total del detergente o agente de limpieza.

9. Uso de un detergente o agente de limpieza de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-8 para el lavado de textiles o la limpieza de superficies duras.

10. Procedimiento para la limpieza de textiles o de superficies duras, caracterizado porque en por lo menos una etapa del procedimiento se usa un detergente o agente de limpieza de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-8.

11. Uso de una a-amilasa para el mejoramiento de la estabilidad y eficiencia de una proteasa en un detergente y agente de limpieza, en donde la a-amilasa está caracterizada porque es idéntica a la secuencia indicada en SEQ ID NO.1, sobre la totalidad de su longitud en por lo menos 89% y con creciente preferencia en por lo menos 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5%, 99%, 99,5% y hasta 100% y exhibe eliminaciones en una o varias de las posiciones 180, 181, 182, 183 y 184 en la numeración de acuerdo con SEQ ID NO. 1, y en donde la proteasa está caracterizada porque exhibe una secuencia de aminoácidos que es idéntica a la secuencia de aminoácidos indicada en SEQ ID NO. 2, sobre la totalidad de su longitud en por lo menos 80% y con creciente preferencia en por lo menos 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 90,5%, 91%, 91,5%, 92%, 92,5%, 93%, 93,5%, 94%, 94,5%, 95%, 95,5%, 96%, 96,5%, 97%, 97,5%, 98%, 98,5% y 99%.