ES2684178A1 - Obtención de fosfolípidos a partir de cefalópodos mediante extracción secuencial con fluidos supercríticos - Google Patents

Abstract

Obtención de fosfolípidos a partir de cefalópodos mediante extracción secuencial con fluidos supercríticos. La presente invención se relaciona con un procedimiento para la obtención de una composición que comprende fosfolípidos a partir de productos de cefalópodos mediante la extracción secuencial en dos etapas con fluidos supercríticos y con la composición que comprende fosfolípidos obtenible mediante dicho procedimiento.

Description

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DESCRIPCIÓN

Obtención de fosfolípidos a partir de cefalópodos mediante extracción secuencial con fluidos supercríticos

Campo de la invención

La presente invención está relacionada con procedimientos de extracción de fosfolípidos de forma secuencial a partir de subproductos de cefalópodos mediante el empleo de fluidos supercríticos, así como con el producto obtenible mediante dichos procedimientos.

Antecedentes de la invención

La pesca y el sector transformador de los productos del mar generan un gran volumen de subproductos. Estos subproductos son ampliamente utilizados para la producción de harinas y aceites de pescado y constituyen también una fuente de otros productos de alto valor añadido con aplicaciones para la industria farmacéutica y cosmética, como péptidos de colágeno, gelatina, pigmentos, sustancias antimicrobianas y enzimas. Los aceites de pescado han sido tradicionalmente la principal fuente de ácidos grasos omega-3, de los cuales el ácido eicosapentaenoico (EPA) y el ácido docosahexaenoico (DHA), han sido ampliamente reconocidos por sus numerosos beneficiosos para la salud [Narayan, B., et al., Food Reviews International, 2006, 22(3), 291-307; Riediger, N. D., et al., Journal of the American Dietetic Association, 2009, 109(4), 668-67]. Estos ácidos grasos (AGs) son obtenidos

fundamentalmente a partir de fuentes marinas.

Por otro lado, la gestión de los subproductos generados en el sector transformador de productos del mar supone un elevado coste debido a que los procesos actuales de valorización no están optimizados para esta tipología de material.

Entre los componentes de interés dentro de estos subproductos marinos encontramos los fosfolípidos (PLs), cuyo consumo ha aumentado en los últimos años debido a su potencial en la prevención de la obesidad, enfermedades cardiovasculares e hipercolesterolemia [Blokland, A., et al., Nutrition, 1999, 15(10), 778-783; Stamler, C.J., et al., Journal of Lipid Research, 2000, 41(8), 1214-1221; Pandey, N.R. and D.L. Sparks, Current Opinion in Investigational Drugs, 2008, 9(3), 281-285; Sahebkar, A., Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular and Cell

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Biology of Lipids, 2013, 1831(4), 887-893]. Diversos estudios han demostrado la capacidad de ciertos fosfolípidos para disminuir los lípidos en plasma e hígado, y además, también se ha detallado la prevención de enfermedades relacionadas con obesidad, proporcionada por fosfatidilcolina conteniendo ácidos grasos omega 3 de cadena larga [Buang, Y., et al., Nutrition, 2005, 21(7), 867-873; Buckley, J.D. and P.R.C., Howe, Obesity Reviews, 2009, 10(6), p. 648659]. Además, el consumo de fosfolípidos ha mostrado una mejora de las funciones cognitivas, estrés y depresión [Vakhapova, V., et al., Dementia and Geriatric Cognitive Disorders, 2014, 38(1-2), 39-45] y se ha observado su potencial como mediadores de inflamación e inmunidad [Feige, E., et al., Current Opinion in Lipidology, 2010, 21(6), 525-529; Schmitz, G. and Ruebsaamen K., Atherosclerosis, 2010, 208(1), 10-18; Banskota, A. H., et al., Phytochemistry, 2014, 101, 101-108].

Además de su actividad biológica, los fosfolípidos poseen numerosas aplicaciones tecnológicas como estabilizadores, texturizantes, dispersantes, emulsionantes o antioxidantes.

Para la producción de mezclas de fosfolípidos de origen marino habitualmente se emplean tanto biomasas secas como húmedas, como por ejemplo krill, usando diferentes procesos de extracción basados principalmente en el uso de disolventes orgánicos tóxicos y contaminantes. Además, la pesca masiva de krill también conlleva un alto impacto ecológico, ya que es fuente fundamental de alimentación de peces y otros organismos marinos.

Los cefalópodos son un alimento tradicional en la dieta española, siendo el segundo mercado consumidor de estas especies a nivel mundial. En el año 2013 el consumo "per cápita” de calamares y potas congelados fue 0,44 Kg/persona y de pulpo congelado 0,13 Kg/persona. Esto hace que, dentro del sector de transformación de productos marinos, el procesado de cefalópodos tenga relevancia.

La piel de cefalópodos y más en particular la piel de pota (Illex argentinus), es un subproducto marino con un contenido relativamente alto en fosfolípidos ricos en AGs omega-3 (en particular, EPA y DHA). Sin embargo, el aprovechamiento de dicho subproducto marino plantea dificultades ya que se trata de un material inadecuado para su procesado, tanto en forma de harinas de pescado (salida más habitual e inmediata para los subproductos de origen marino) como para la obtención de lípidos bioactivos, debido al bajo rendimiento de los procesos de decantación habitualmente utilizados. Es por ello que estos subproductos suelen ser eliminados por incineración con una nula recuperación y revalorización [Martínez, J.J.

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Secretaría de la Comisión Nacional de Subproductos de origen animal no destinados al consumo humano. LIBRO blanco subproductos de origen animal no destinados al consumo humano. Madrid: Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación. Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación: Secretaría General Técnica: Centro de Publicaciones, 2007. 392 p.; il. col., graf.; 27 cm.: ISBN 978-84-491-0774-0; Nam, K. A., et al., Journal of Food Science, 2008, 73(4), 249-255; Kader, A., et al., Aquaculture Research, 2012, 43(10), 1427-1438]. Este hecho supone un coste adicional de gestión para las empresas que generan dichos subproductos, así como el desperdicio de un importante recurso marino ya que, en la transformación de las especies de cefalópodos como por ejemplo pota y sepia, alrededor de un 10% del peso entero está constituido por la piel.

Además, en el campo de la extracción de lípidos, gran parte de los procesos de extracción habitualmente utilizados carecen de la suficiente selectividad y extraen conjuntamente lípidos neutros (glicéridos, ácidos grasos y colesterol) y fosfolípidos, lo que da lugar a productos de baja pureza y menor valor añadido [Sahena, F., et al., Journal of Food Engineering, 2010, 99(1), 63-69; Rubio-Rodríguez, N., et al., Journal of Food Engineering, 2012, 109(2), 238-248].

En este sentido, el empleo de CO2 supercrítico para extraer lípidos ha demostrado tener propiedades muy interesantes, especialmente teniendo en cuenta que es una tecnología respetuosa con el medio ambiente, que no deja residuos en el producto final después de la separación, no es inflamable, no es tóxico, es inerte a la mayoría materiales, es barato, y puede ser usado en condiciones operativas relativamente suaves, evitándose oxidaciones y procesos hidrolíticos. Además, la extracción con CO2 supercrítico es una técnica muy adecuada para el fraccionamiento de materiales de partida de naturaleza lipídica, debido a la baja polaridad del CO2. Sin embargo, se ha descrito que el CO2 supercrítico solo es capaz de extraer lípidos neutros y es necesario añadir un cosolvente, como por ejemplo etanol en cantidades superiores al 5% en peso, para la extracción de fosfolípidos [Catchpole, O.J., et al., Journal of Supercritical Fluids, 2009, 47, 591-597]. Además, se ha descrito que la extracción de lípidos neutros se ve dificultada según aumenta la fracción de lípidos polares [Catchpole, O.J., et al., Journal of Supercritical Fluids, 2009, 47, 591-597] y que la solubilidad de los lípidos polares se reduce cuando los lípidos neutros han sido extraídos [Cocero, M.J., Calvo, L., Journal of the American Oil Chemists’ Society, 1996, 73(11), 1573-1578]. Estos hechos dificultan el aprovechamiento de subproductos marinos, en particular de piel de cefalópodos, ya que en dichos subproductos marinos los lípidos neutros son minoritarios frente a los lípidos polares (fosfolípidos).

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Por todo ello, existe una necesidad de disponer de procedimientos de extracción selectivos, eficientes y respetuosos con el medioambiente que permitan obtener fosfolípidos a partir de subproductos marinos que comprenden tanto dichos fosfolípidos como lípidos neutros, y así conseguir un mejor aprovechamiento y valorización de dichos subproductos marinos.

Sumario de la invención

Los autores de la presente invención han encontrado un procedimiento de extracción secuencial de lípidos a partir de subproductos marinos, en particular de piel de cefalópodos, selectivo, eficiente y respetuoso con el medioambiente mediante el empleo de fluidos supercríticos. En particular, los autores de la presente invención han encontrado que la extracción de lípidos a partir de subproductos marinos, en particular de piel de cefalópodos, utilizando fluidos supercríticos no modificados (por ejemplo CO2 supercrítico) y una celda de extracción con agitación, sorprendentemente logra una extracción prácticamente cuantitativa de lípidos neutros a tiempos reducidos en presencia de concentraciones elevadas de fosfolípidos. En una segunda etapa de extracción utilizando como disolvente de extracción un fluido supercrítico (por ejemplo CO2 supercrítico) modificado con pequeñas cantidades de alcohol (por ejemplo etanol), se logran extraer los fosfolípidos de forma cuantitativa y con alta pureza, donde además, dichos fosfolípidos pueden llegar a comprender un porcentaje importante de ácidos grasos omega-3, en particular, ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA) y ácido docosahexaenoico (DHA).

El procedimiento de la presente invención es, por tanto, selectivo y eficaz en la extracción de lípidos neutros y fosfolípidos a partir de subproductos marinos, en particular de piel de cefalópodos. De este modo, se convierte un subproducto de origen marino con reducido valor industrial en una fuente de productos de alto valor añadido, orientados hacia mercados emergentes, planteando estrategias que implican el uso de tecnologías limpias y respetuosas con el medio ambiente. Con ello se incrementa el potencial de valorización de estos subproductos del sector transformador de productos del mar para su posible uso en alimentación humana.

Por ello, el primer aspecto de la invención está relacionado con un procedimiento para la obtención de una composición que comprende fosfolípidos a partir de un producto de

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cefalópodos que comprende fosfolípidos y lípidos neutros, donde dicho procedimiento comprende:

(a) proporcionar un producto de cefalópodos seco y particulado que comprende lípidos neutros y fosfolípidos;

(b) someter el producto de la etapa (a) a extracción con un fluido supercrítico aplicando agitación para obtener un residuo que comprende menos de un 30% en peso de lípidos neutros respecto al peso total de lípidos neutros y fosfolípidos en dicho residuo; y

(c) someter el residuo de la etapa (b) a extracción con disolvente, donde dicho disolvente comprende un fluido supercrítico y del 1% al 10% en volumen con respecto al volumen total del fluido supercrítico de un alcohol C1-C4, para obtener un extracto que comprende al menos el 80% en peso de fosfolípidos respecto al peso de fosfolípidos presente en el producto de la etapa (a).

En una realización particular, el procedimiento para la obtención de una composición que comprende fosfolípidos a partir de un producto de cefalópodos que comprende fosfolípidos y lípidos neutros, comprende:

(a) proporcionar un producto de cefalópodos seco y particulado que comprende lípidos neutros y fosfolípidos;

(b) poner en contacto el producto de cefalópodos de la etapa (a) con un fluido supercrítico mediante agitación;

(c) separar el fluido supercrítico que contiene los componentes solubles de los componentes insolubles;

(d) poner en contacto los componentes insolubles de la etapa (c) con un disolvente que comprende un fluido supercrítico y del 1% al 10% en volumen con respecto al volumen total del fluido supercrítico de un alcanol C1-C4 mediante agitación;

(e) separar el disolvente que contiene los componentes solubles de los componentes insolubles; y

(f) aislar los componentes solubles de la mezcla de componentes solubles y disolvente obtenida en la etapa (e).

Otro aspecto de la invención está relacionado con una composición que comprende fosfolípidos obtenible mediante el procedimiento definido en el primer aspecto.

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Breve descripción de las figuras

La Figura 1 muestra la cantidad de lípidos extraídos respecto al tiempo de extracción para la piel de Illex argentinus liofilizada y molida, mediante CO2 supercrítico a 350 bares de presión, caudal de CO2 de 16 g/min y temperatura de 40°C.

La Figura 2 muestra la cantidad de lípidos extraídos respecto al tiempo de extracción para la piel de Illex argentinus parcialmente desgrasada, mediante CO2 supercrítico usando 5% de etanol como modificador, y 350 bares de presión, caudal de CO2 de 25 g/min y temperatura de 40°C.

Descripción detallada de la invención

Definiciones

Por "fosfolípido” se entiende un lípido anfipático compuesto por una molécula de glicerol o de esfingosina a la que se encuentran unidos dos ácidos grasos y un grupo fosfato unido mediante un enlace fosfodiéster a otro grupo como por ejemplo colina, etanolamina. Ejemplos de fosfolípidos son fostatidilcolina (PC), lisofosfatidilcolina (PLC), fosfatidiletanolamina (PE) y esfingomielina (SM).

Por "lípido neutro” se entiende un lípido apolar, sin carga, principalmente hidrofóbico. Ejemplos de estos lípidos incluyen ácidos grasos, acilglicéridos como mono, di y triglicéridos, céridos, colesterol y ésteres de colesterol.

Por "cefalópodo” se entiende una clase de invertebrados marinos que comprende, entre otros sepias (por ejemplo Sepia pharaonis y Sepia officinalis), calamares (por ejemplo Illex argentinus), pulpos y nautilos.

Por "producto de cefalópodo” se entiende una o más partes de uno o varios cefalópodos, como por ejemplo, la piel, las vísceras, mezclas de piel y vísceras, o el cefalópodo en su totalidad.

Por "seco” se entiende que comprende menos del 15% en peso de agua respecto al peso total del producto de cefalópodo, preferiblemente menos del 10%, más preferiblemente menos del 5%, aún más preferiblemente menos del 1%.

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Por “particulado” se entiende un producto sólido en forma de partículas en donde el 90% en peso de las partículas presentan un tamaño de partícula inferior a 5 mm, preferiblemente inferior a 3 mm. De forma preferida, el 95% en peso de las partículas presentan un tamaño de partícula inferior a 5 mm, preferiblemente inferior a 3 mm. De forma aún más preferida, el 99% en peso de las partículas presentan un tamaño de partícula inferior a 5 mm, preferiblemente inferior a 3 mm. Para determinar el porcentaje de partículas con un tamaño de partícula inferior a un valor concreto, por ejemplo 5 mm o 3 mm se puede someter al material a caracterización granulométrica mediante el uso de una serie de tamices mecánicos de tamaños de partícula concretos, como por ejemplo de 5 mm o 3 mm y determinar el peso de partículas que pasan dicho tamiz.

Por “fluido supercrítico” se entiende cualquier sustancia que se encuentre en condiciones de presión y temperatura superiores a su punto crítico. Por encima, pero próximo a dicho punto, la sustancia se encuentra en estado fluido pero comparte las propiedades de un líquido y un gas. Así, el fluido tiene una densidad similar a la de un líquido, mientras que su viscosidad y difusividad son similares a las de un gas. Un ejemplo de fluido supercrítico es CO2 supercrítico.

Por alcanol C1-C4 se entiende un radical alquilo lineal o ramificado de entre 1 a 4 átomos de carbono unido a un grupo hidroxilo. Ejemplos de alcanoles C1-C4 son metanol, etanol, n- propanol, iso-propanol, n-butanol, iso-butanol, sec-butanol y terc-butanol.

Procedimiento de la invención

El primer aspecto de la invención está relacionado con un procedimiento para la obtención de una composición que comprende fosfolípidos a partir de un producto de cefalópodos que comprende fosfolípidos y lípidos neutros, donde dicho procedimiento comprende:

(a) proporcionar un producto de cefalópodos seco y particulado que comprende lípidos neutros y fosfolípidos;

(b) someter el producto de la etapa (a) a extracción con un fluido supercrítico aplicando agitación para obtener un residuo que comprende menos de un 30% en peso de lípidos neutros respecto al peso total de lípidos neutros y fosfolípidos presentes en dicho residuo; y

(c) someter el residuo de la etapa (b) a extracción con disolvente, donde dicho disolvente comprende un fluido supercrítico y del 1% al 10% en volumen con respecto al volumen

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total del fluido supercrítico de un alcanol C1-C4 para obtener un extracto que comprende al menos el 80% en peso de fosfolípidos respecto al peso de fosfolípidos presente en el producto de la etapa (a).

El producto de cefalópodos preferiblemente es un producto de sepia (por ejemplo Sepia pharaonis y Sepia officinalis), de calamar (por ejemplo Illex argentinus), o mezcla de los mismos; más preferiblemente de calamar, aún más preferiblemente de Illex argentinus. El producto de cefalópodos, preferiblemente se selecciona del grupo que consiste en vísceras, pieles y mezclas de vísceras y pieles. De forma preferida, el producto de cefalópodos se selecciona del grupo que consiste en vísceras, pieles y mezcla de vísceras y pieles de Illex argentinus; más preferiblemente es piel de Illex argentinus.

El producto de cefalópodos de la etapa (a) está seco y particulado.

El contenido en agua del producto de cefalópodos seco y particulado de la etapa (a) es inferior al 15% en peso, más preferiblemente inferior al 10% en peso, aún más preferiblemente inferior al 10% en peso, aún más preferiblemente inferior al 5% en peso, lo más preferido con un contenido en agua inferior al 1% en peso.

El 90% en peso de las partículas de las partícula del producto de cefalópodos seco y particulado de la etapa (a) presentan un tamaño de partícula inferior a 5 mm, preferiblemente inferior a 3 mm. Preferiblemente el 95% en peso de las partículas presentan un tamaño de partícula inferior a 5 mm, preferiblemente inferior a 3 mm. De forma aún más preferida, el 99% en peso de las partículas presentan un tamaño de partícula inferior a 5 mm, preferiblemente inferior a 3 mm.

Si el producto de cefalópodos presenta un contenido en agua o un tamaño de partícula superior a los valores requeridos en la etapa (a), dicho producto de cefalópodos se somete a una(s) etapa(s) previa de acondicionamiento en donde se reduce el contenido en agua y/o se disminuye el tamaño de partícula. De forma ventajosa, el contenido en agua se puede reducir mediante liofilización ya que dicha técnica evita el deterioro del producto. Para reducir el tamaño de partícula el producto de cefalópodos se puede trocear y/o moler hasta obtener el tamaño deseado.

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En una realización particular, el producto de cefalópodos seco y particulado de la etapa (a) se homogeneiza antes de someterlo a la extracción de la etapa (b), por ejemplo mediante mezcla o agitación del producto.

El producto de cefalópodos comprende fosfolípidos y lípidos neutros. Preferiblemente, los lípidos neutros se seleccionan del grupo que consiste en triglicéridos, ácidos grasos, colesterol, ésteres de colesterol y mezclas de los mismos. Preferiblemente, los fosfolípidos se seleccionan del grupo que consiste en fosfatidilcolina, lisofosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, esfingomielina y mezcla de los mismos. Una parte de los fosfolípidos presentes en los cefalópodos contienen ácidos grasos omega-3 como ácidos grasos. Dichos ácidos grasos omega-3 son preferiblemente ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA) y ácido docosahexaenoico (DHA). El contenido más alto en dichos ácidos grasos se encuentra en las pieles de calamar, en particular de Illex argentinus, y de sepia. Por ello, dichos productos de cefalópodos son especialmente ventajosos como material de partida del procedimiento de la presente invención.

En la etapa (b) del procedimiento de la invención, se somete el producto de cefalópodos de la etapa (a) a extracción con un fluido supercrítico aplicando agitación. Para ello, el producto de cefalópodos se pone en contacto con dicho fluido supercrítico a la vez que se aplica agitación. De esta manera se obtiene una fracción soluble (extracto) que comprende fundamentalmente lípidos neutros y una fracción insoluble (residuo), donde dicha fracción insoluble o residuo comprende menos de un 30% en peso de lípidos neutros respecto al peso total de lípidos neutros y fosfolípidos presentes en dicho residuo.

En una realización preferente, dicho residuo comprende menos de un 15% en peso de lípidos neutros con respecto al peso total de lípidos neutros y fosfolípidos presentes en dicho residuo.

Por su parte, la fracción soluble o extracto contiene menos del 5% en peso de fosfolípidos respecto al peso de lípidos neutros, preferiblemente menos del 1%, más preferiblemente menos del 0,5%, aún más preferiblemente menos del 0,1%, aún más preferiblemente menos del 0,05%, lo más preferido un 0%, es decir, los fosfolípidos están ausentes del extracto obtenido tras esta primera extracción o etapa (b) del procedimiento de la invención.

El experto en la materia puede determinar la cantidad de fosfolípidos y lípidos neutros mediante técnicas habituales, como por ejemplo mediante cromatografía líquida de alta resolución

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(HPLC), neutralización de la acidez libre o cromatografía de gases utilizando patrones puros de cada una de las clases de lípidos y la cuantificación mediante rectas de calibrado de cada uno de los lípidos detectados. La cantidad de lípidos neutros se pueden determinar mediante HPLC acoplado a un detector evaporativo de dispersión de luz según el método previamente descrito por Torres et al. [Journal of Chromatography A, 2005, 1078(1), 28-34]. La cantidad de lípidos polares se pueden determinar mediante HPLC acoplado a un detector evaporativo de dispersión de luz según la metodología descrita por Casado et al. [Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 2014, 99, 14-19].

Esta etapa permite, por tanto, la extracción selectiva de lípidos neutros respecto a los fosfolípidos. Este hecho resulta sorprendente ya que se conoce que la extracción de lípidos neutros se ve dificultada según se aumenta la fracción de lípidos polares. En el producto de cefalópodos generalmente los lípidos neutros son minoritarios frente a los lípidos polares, y sin embargo, mediante el procedimiento de la presente invención, los lípidos neutros son extraídos casi cuantitativamente en la etapa (b) del procedimiento.

La etapa (b) del procedimiento de la invención preferiblemente se lleva a cabo en una celda de extracción dotada de un sistema de agitación, preferiblemente un agitador mecánico. La extracción con agitación es ventajosa ya que permite reducir los tiempos de extracción y evita la formación de caminos preferenciales del fluido supercrítico durante la extracción. De este modo también se evita tener que dispersar el producto de cefalópodos en un material inerte (por ejemplo arena de mar) que dificultaría su posterior recuperación y utilización en posteriores procesos. Además, dicha agitación permite homogeneizar el tamaño de partícula del residuo obtenido que posteriormente se someterá a la segunda extracción (etapa (c) del procedimiento de la invención). Así, el residuo de la etapa (b) se recupera y se utiliza directamente en la siguiente etapa de extracción sin someterlo a un cribado adicional.

En una realización particular, el producto de cefalópodos de la etapa (a) se introduce en la celda de extracción dotada del sistema de agitación y se pone en contacto con el fluido supercrítico. Preferiblemente el fluido supercrítico pasa de forma continua a través de la celda de extracción. En una realización particular, el caudal de dicho fluido supercrítico es de 10 a 30 g/minuto, preferiblemente de 10 a 20 g/min, más preferiblemente de 13 a 19 g/min, aún más preferiblemente de 15 a 17 g/min, lo más preferido aproximadamente 16 g/min. Preferiblemente, la extracción de la etapa (b) se realiza a una presión de entre 150 y 400 bares, más preferiblemente de entre 300 y 400 bares, aún más preferiblemente entre 325 y 375

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bares, aún más preferiblemente entre 340 y 360 bares, lo más preferido aproximadamente 350 bares. Preferiblemente, la extracción de la etapa (b) se realiza a una temperatura de entre 30 y 50 °C, más preferiblemente de entre 35 y 45 °C, lo más preferido de aproximadamente 40 °C.

De forma preferida, el fluido supercrítico utilizado en la etapa (b) es CO2 supercrítico.

Como ventaja adicional, y derivado fundamentalmente de la aplicación de agitación durante el proceso de extracción, esta extracción selectiva puede realizarse en tiempos reducidos, por ejemplo entre 20 y 120 minutos, entre 30 y 120 minutos, entre 40 y 120 minutos, entre 50 y 120 minutos, entre 60 y 120 minutos, entre 70 y 120 minutos, entre 80 y 120 minutos, entre 20 y 90 minutos, entre 30 y 90 minutos, entre 40 y 90 minutos, entre 50 y 90 minutos, entre 60 y 90 minutos, entre 70 y 90 minutos, entre 80 y 90 minutos, preferiblemente entre 60 y 120 minutos, más preferiblemente entre 70 y 90 minutos, aún más preferiblemente en aproximadamente 80 minutos.

Una vez finalizada la extracción de la etapa (b) se obtiene un extracto con los lípidos neutros y un residuo. Los lípidos neutros se pueden separar del fluido supercrítico utilizado en la extracción mediante despresurización, lo que provoca su precipitación y facilita su recuperación. Dichos lípidos neutros se pueden utilizar en la industria farmacéutica, alimentaria y cosmética, en particular como precursores de hormonas esteroideas en la industria farmacéutica y también en la elaboración de liposomas para su estabilización. Dichos lípidos neutros son ricos en colesterol.

De forma ventajosa, el residuo de la etapa (b) se puede utilizar directamente en la siguiente etapa de extracción, etapa (c) del procedimiento de la invención, ya que no es necesario utilizar ningún material inerte para dispersar el material de partida de la etapa (b) (es decir, el producto de cefalópodos provisto en la etapa (a)) y, por tanto, no es necesario separar dicho material inerte del residuo de la etapa (b) antes de realizar la extracción de la etapa (c). Además, dado que la agitación aplicada durante la primera extracción (etapa (b)) permite homogeneizar el tamaño de partícula, tampoco es necesario moler o triturar dicho residuo antes de realizar la extracción de la etapa (c).

El residuo obtenido tras la etapa (b) del procedimiento de la invención contiene un porcentaje en peso de materia grasa que oscila entre el 5 y 20% en peso con respecto al peso total del

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residuo, más preferiblemente entre 10 y 15% en peso de materia grasa. Por materia grasa se entiende la suma de lípidos neutros y fosfolípidos.

La siguiente etapa del procedimiento de la invención es la etapa (c). En dicha etapa del procedimiento se somete el residuo de la etapa (b) a extracción con disolvente. Para ello, dicho residuo se pone en contacto con un disolvente, donde dicho disolvente comprende un fluido supercrítico y del 1% al 10% en volumen con respecto al volumen total del fluido supercrítico de un alcanol C1-C4. Mediante esta etapa se obtiene un extracto que comprende al menos un 80% en peso de fosfolípidos respecto al peso total de fosfolípidos presentes en el producto de la etapa (a), preferiblemente al menos el 90% en peso de los fosfolípidos respecto al peso total de fosfolípidos presentes en el producto de la etapa (a). El experto en la materia puede determinar la cantidad de fosfolípidos mediante técnicas habituales, como por ejemplo mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), tal como se ha descrito anteriormente.

Resulta sorprendente que con el procedimiento de la presente invención se logre extraer de forma casi cuantitativa los lípidos polares (fosfolípidos) utilizando cantidades bajas de alcanol C1-C4 ya que es conocido que la solubilidad de lípidos polares (por ejemplo fosfolípidos) se reduce cuando los lípidos neutros han sido extraídos.

La etapa (c) del procedimiento de la invención preferiblemente se lleva a cabo en una celda de extracción dotada de un sistema de agitación, preferiblemente un agitador mecánico. La extracción con agitación es ventajosa ya que permite reducir los tiempos de extracción y evita la formación de caminos preferenciales del disolvente durante la extracción. De este modo también se evita tener que dispersar el residuo de la etapa (b) en un material inerte (por ejemplo arena de mar) que dificultaría su posterior recuperación y utilización en posteriores procesos.

Para la extracción de la etapa (c), el residuo de la etapa (b) se introduce en la celda de extracción dotada del sistema de agitación, preferiblemente agitación mecánica, y se pone en contacto con el disolvente. De forma ventajosa, en la presente invención no es necesario realizar ningún cribado adicional tras la extracción de la etapa (b) para separar, por ejemplo, materiales inertes de dispersión que en la presente invención no se han tenido que añadir para lograr una extracción selectiva y eficiente de lípidos neutros. Preferiblemente el disolvente pasa de forma continua a través de la celda de extracción. En una realización particular, el caudal de dicho fluido supercrítico es de 10 a 40 g/minuto, preferiblemente de 15 a 35 g/min, más

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preferiblemente de 20 a 30 g/min, aún más preferiblemente de 23 a 27 g/min, lo más preferido aproximadamente 25 g/min. Preferiblemente, la extracción de la etapa (c) se realiza a una presión de entre 150 y 400 bares, más preferiblemente de entre 200 y 300 bares, aún más preferiblemente entre 225 y 275 bares, aún más preferiblemente entre 240 y 260 bares, lo más preferido aproximadamente 250 bares. Preferiblemente, la extracción de la etapa (c) se realiza a una temperatura de entre 30 y 50 °C, más preferiblemente de entre 35 y 45 °C, lo más preferido de aproximadamente 40 °C.

En una realización, el disolvente de la etapa (c) comprende del 1% al 8% en volumen con respecto al volumen total del fluido supercrítico de un alcanol, preferiblemente del 1% al 5%, más preferiblemente del 2% al 5%, aún más preferiblemente del 2,5% al 5%, lo más preferiblemente aproximadamente el 5%. De forma preferida, el fluido supercrítico utilizado en la etapa (c) es CO2 supercrítico. De forma preferida el alcanol C1-C4 utilizado en la etapa (c) es etanol. De forma particularmente preferida el disolvente de la etapa (c) es CO2 supercrítico y del 1% al 10% en volumen con respecto al volumen total del CO2 supercrítico de etanol, preferiblemente CO2 supercrítico y del 1% al 8% en volumen con respecto al volumen total del CO2 supercrítico de etanol, más preferiblemente CO2 supercrítico y del 1% al 5% en volumen con respecto al volumen total del CO2 supercrítico de etanol, más preferiblemente CO2 supercrítico y del 2% al 5% en volumen con respecto al volumen total del CO2 supercrítico de etanol, aún más preferiblemente CO2 supercrítico y del 2,5% al 5% en volumen con respecto al volumen total del CO2 supercrítico de etanol, lo más preferido CO2 supercrítico y aproximadamente el 5% en volumen con respecto al volumen total del CO2 supercrítico de etanol.

Como ventaja adicional, y derivado fundamentalmente de la aplicación de agitación durante el proceso de extracción, esta extracción prácticamente cuantitativa puede realizarse en tiempos reducidos, por ejemplo entre 20 y 120 minutos, entre 30 y 120 minutos, entre 40 y 120 minutos, entre 50 y 120 minutos, entre 60 y 120 minutos, entre 70 y 120 minutos, entre 80 y 120 minutos, entre 20 y 90 minutos, entre 30 y 90 minutos, entre 40 y 90 minutos, entre 50 y 90 minutos, entre 60 y 90 minutos, entre 70 y 90 minutos, entre 80 y 90 minutos, preferiblemente entre 60 y 120 minutos, más preferiblemente entre 70 y 90 minutos, aún más preferiblemente en aproximadamente 80 minutos.

Una vez finalizada la extracción de la etapa (c) se obtiene un extracto con los fosfolípidos y un residuo. Los fosfolípidos se pueden separar o aislar del fluido supercrítico utilizado en la

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extracción mediante despresurización y evaporación del alcanol C1-C4, preferiblemente mediante evaporación a presión reducida (por ejemplo inferior a 10 mbar) y temperatura no superior a 40 °C, obteniéndose así una composición que comprende fosfolípidos.

Dicha composición comprende preferiblemente al menos un 70% en peso de fosfolípidos respecto al peso total de la composición, más preferiblemente al menos un 75% en peso, aún más preferiblemente al menos un 80% en peso. Los fosfolípidos de la composición de la invención, preferiblemente se seleccionan del grupo que consiste en fosfatidilcolina, lisofosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, esfingomielina y mezcla de los mismos. Preferiblemente, la composición comprende de 55% a 75% en peso de fosfatidilcolina, de 3% a 10% en peso de lisofosfatidilcolina, de 3% a 10% en peso de fosfatidiletanolamina y de 5% a 12% en peso de esfingomielina, en donde los porcentajes en peso se expresan respecto al peso total de la composición. Dicha composición que comprende fosfolípidos se puede utilizar en la industria farmacéutica, alimentaria y cosmética. El residuo de la etapa (c) se puede utilizar en la industria farmacéutica, alimentaria y cosmética, en particular para la obtención de colágeno e hidrolizados proteicos.

El peso (en gramos) de producto de cefalópodos que se introduce en la celda de extracción en la etapa (b) como en la etapa (c) puede ser igual o diferente, preferiblemente es de entre 0,05 y 0,5 veces el volumen (en mililitros) de la celda de extracción, más preferiblemente entre 0,05 y 0,2 veces, más preferiblemente entre 0,05 y 0,1 veces, aún más preferiblemente entre 0,05 y 0,2 veces, lo más preferido entre 0,05 y 0,1 veces.

Extracto y composición de la invención

En otro aspecto, la presente invención se relaciona con un extracto obtenible según el procedimiento definido en el primer aspecto. Dicho extracto contiene al menos un 80% en peso de fosfolípidos respecto al peso total de fosfolípidos presentes en el producto de la etapa (a), preferiblemente al menos el 90% en peso de los fosfolípidos respecto al peso total de fosfolípidos presentes en el producto de la etapa (a)

En un aspecto adicional, la invención se refiere a una composición que comprende fosfolípidos, siendo dicha composición obtenible mediante el procedimiento de la invención que además comprende la etapa de aislar o separar los componentes solubles del extracto del disolvente empleado en la segunda extracción.

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Esta composición, preferiblemente comprende al menos un 70% en peso de fosfolípidos respecto al peso total de la composición, más preferiblemente al menos un 75% en peso, aún más preferiblemente al menos un 80% en peso. La composición también puede comprender una parte minoritaria de lípidos neutros, preferiblemente inferior al 15% en peso respecto al peso total de la composición, más preferiblemente inferior al 10% en peso, aún más preferiblemente inferior al 5% en peso. Dicha composición también puede contener otros componentes, como por ejemplo agua y opcionalmente xantomatina [Williams, T. L. et al., 2016, Langmuir, 2016, 32(15), 3754-3759].

Los fosfolípidos de la composición de la invención, preferiblemente se seleccionan del grupo que consiste en fosfatidilcolina, lisofosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, esfingomielina y mezcla de los mismos. Preferiblemente, la composición comprende de 55% a 75% en peso de fosfatidilcolina, de 3% a 10% en peso de lisofosfatidilcolina, de 3% a 10% en peso de fosfatidiletanolamina y de 5% a 12% en peso de esfingomielina, en donde los porcentajes en peso se expresan respecto al peso total de la composición.

Los fosfolípidos de la composición de la invención preferiblemente contienen ácidos grasos omega-3 como ácidos grasos que se encuentran unidos al glicerol o esfingosina de dichos fosfolípidos. Preferiblemente, los grasos omega-3 son ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA), ácido docosahexaenoico (DHA) o mezcla de los mismos.

Dicha composición se pueden utilizar en la industria farmacéutica, alimentaria y cosmética.

Ejemplos

Los siguientes ejemplos se aportan a efectos ilustrativos, y no suponen una limitación de la presente invención.

Materiales y métodos

Los productos de cefalópodos fueron cedidos por la empresa CEFRICO S.L consistieron en pieles de pota de la especie Illex argentinus procedente de Argentina.

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El CO2 fue adquirido y suministrado por la empresa Carburos Metálicos en forma líquida y formato de botella con sifón o espadín y pureza del 99,98%.

Las extracciones con fluidos supercríticos se realizaron en el equipo TharSFC (Thar SFC, a Waters company). La celda de extracción posee una capacidad en volumen de 104 mL, y en su parte superior alberga un eje de agitación que puede ser opcionalmente activado o no. El CO2 es vehiculizado hacia el interior de la celda a través de varios orificios. La presión de trabajo del CO2 oscila entre 73 bar y 400 Bar y está controlada mediante un regulador de presión (Automated Back Pressure Regulator TharSFC) y el caudal de trabajo definido es mantenido por acción de una bomba hidráulica (High pressure P-series pump TharSFC) estando establecido en un rango entre 10 y 50 g/min. La temperatura del proceso se controla mediante una resistencia eléctrica. El CO2 es pre-enfriado para licuarlo previamente a su bombeo mediante un criostato (Huber CC508) y posteriormente calentado a la temperatura del proceso mediante un intercambiador de calor (Heat exchanger TharSFC).

El etanol absoluto utilizado como co-solvente o modificador se obtuvo de AppliChem Panreac (Barcelona, Spain), con una pureza del 99,5%.

La concentración de ácidos grasos libres se determinó mediante su neutralización con hidróxido potásico en presencia de fenolftaleína.

El análisis de lípidos neutros mediante cromatografía de gases se realizó usando un cromatógrafo de gases Agilent (6890N Network GC System) acoplado a un detector de triple eje (5975C) y a un muestreador automático (Agilent 7683B). Para ello se utilizo el método previamente descrito por Torres et al [Chromatographia, 2009, 69(7-8), 729-734].

El análisis de lípidos neutros también se realizó mediante HPLC usando un cromatógrafo Agilent Technologies Serie 1200 (Santa Clara, CA, EE.UU.) acoplado a un detector evaporativo de dispersión de luz (ELSD) (Agilent 1260 Infinity) según el método previamente descrito por Torres et al. [Journal of Chromatography A, 2005, 1078(1), 28-34].

El análisis de lípidos polares mediante HPLC Agilent Technologies Serie 1200 (Santa Clara, CA, EE.UU.) acoplado a un detector evaporativo de dispersión de luz (ELSD) (Agilent 1260 Infinity) según la metodología descrita por Casado et al. [Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic, 2014, 99, 14-19].

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Acondicionamiento del producto de cefalópodos

Para el acondicionamiento del producto, las pieles Illex argentinus fueron inicialmente congeladas y almacenadas en una cámara congeladora a -20°C hasta su posterior liofilización. El producto congelado se colocó en bandejas de acero inoxidable y se introdujo en un liofilizador durante 4 días. Se partió de 6 kg de pieles Illex argentinus y se obtuvo un peso de liofilizado de 720 g.

A continuación, el material liofilizado se troceó y molió utilizando un molino de martillos con tamiz de 3 mm. El material molido se sometió a caracterización física por granulometría mediante el uso de una serie de 4 tamices mecánicos de tamaños de partícula de 3 mm, 1 mm, 500 ^m y 250 ^m.

El material molido se homogeneizó y conservó protegido de la luz, envasado al vacío y a temperatura de refrigeración de 4°C para su posterior extracción con fluidos supercríticos dividida en dos etapas.

EJEMPLO 1. Estudio de los tiempos de extracción de la etapa (b)

Se extrajo el producto de Illex argentinus acondicionado (10 g) con CO2 supercrítico a 350 bar de presión, caudal de CO2 de 16 g/min y temperatura de 40°C a distintos tiempos con el fin de definir el tiempo necesario para la extracción completa de los lípidos neutros. Los resultados se muestran en la Figura 1.

Ese primer extracto de lípidos neutros se cuantificó y caracterizó químicamente mediante neutralización de la acidez libre, cromatografía de gases y cromatografía líquida alta eficacia (HPLC acoplado a un detector evaporativo de dispersión de luz). La identificación se realizó utilizando patrones puros de cada una de las clases de lípidos y la cuantificación mediante rectas de calibrado de cada uno de los lípidos detectados, dando como resultado la composición que se muestra en la Tabla 3. Es posible observar la total ausencia de lípidos polares en estos primeros extractos, lo cual indica la selectividad del método secuencial de extracción de la invención.

Tabla 3: Porcentaje en peso de lípidos neutros

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Lípidos neutros

Media DE

Ácidos grasos libres

16,2 0,79

Colesterol

78,4 4,96

Triglicéridos y ésteres de colesterol

14,8 0,57

DE = desviación estándar

EJEMPLO 2. Estudio de los tiempos de extracción de la etapa (c)

Se extrajo el producto de Illex argentinus parcialmente desgrasado procedente del ejemplo 1 (7,5 g) con CO2 supercrítico usando 5% de etanol como modificador a 350 bar de presión, caudal de CO2 de 25 g/min y temperatura de 40°C a distintos tiempos con el fin de definir el tiempo necesario para la extracción completa de los lípidos polares. Los resultados se muestran en la Figura 2.

El extracto obtenido en esta segunda etapa se cuantificó y caracterizó químicamente mediante HPLC acoplado a un detector evaporativo de dispersión de luz. La identificación de los lípidos polares se realizó utilizando patrones comerciales de distintos fosfolípidos, como fosfatidilcolina (PC), lisofosfatidilcolina (PLC), fostatidiletanolamina (PE) y esfingomielina (SM). La cuantificación de los mismos se realizó mediante rectas de calibrado de cada uno de los lípidos detectados, dando como resultado la composición que se muestra en la Tabla 4.

Tabla 4: Porcentaje en peso de fosfolípidos

Fosfolípidos

Media DE

PC

63,8 3,18

PLC

5,8 0,63

PE

6,2 0,6

SM

7,7 0,39

DE = desviación estándar

El balance de materia se cerró con una pequeña fracción (10% aprox.) correspondiente principalmente a lípidos neutros que no fueron extraídos en la primera etapa de extracción.

El extracto obtenido presentó elevada coloración, que podría ser debido a la presencia de xantomatina (omocromo) residual, un pigmento presente en la piel de algunos cefalópodos, como el Illex argentinus. Además esta sustancia podría proteger al propio extracto de su oxidación tras el proceso de extracción con CO2 supercrítico.

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El estado de oxidación de estos extractos fue determinado mediante la medida del índice de peróxidos utilizando el equipo de medida rápida "Food-Lab Fat”. Los resultados del índice de peróxidos determinados muestran un bajo estado de oxidación en estos extractos, siendo de media aproximadamente 1,3±0,21 mEq/Kg.

EJEMPLO 3. Desgrasado de piel de Illex argentinus molida mediante CO2 supercrítico en celda con agitación

Se partió de 10 g de la piel de Illex argentinus acondicionada previamente. La granulometría obtenida para este material fue del 7,9% de partícula menor de 250 ^m, un 7,8% entre 500 y 250 ^m, un 18,2% entre 500 ^m y 1 mm y un 66% entre 1 y 3 mm. Este material se introdujo en la celda de extracción del equipo TharSFC y se extrajo con agitación mecánica. La presión del CO2 aplicada fue de 350 bar, caudal de CO2 circulado 16 g/min y temperatura del proceso 40°C. El tiempo de la extracción fue de 80 min. En estas condiciones se obtuvo un residuo de 416,9±15,50 mg, que representa el 4,17% del material deshidratado de partida.

EJEMPLO 4. Desgrasado de piel de Illex argentinus molida mediante CO2 supercrítico en celda sin agitación (ejemplo comparativo)

Se partió de 10 g de la piel de pota molida acondicionada previamente. La granulometría obtenida para este material fue del 7,9% de partícula menor de 250 ^m, un 7,8% entre 500 y 250 ^m, un 18,2% entre 500 ^m y 1 mm y un 66% entre 1 y 3 mm. Este material se introdujo en la celda de extracción del equipo TharSFC sin aplicar agitación mecánica. Se extrajo en unas condiciones de presión de CO2 de 350 bar, caudal de CO2 circulado 16 g/min, temperatura de 40°C y tiempo de extracción de 80 min. Se obtuvo un residuo de aproximadamente 354 mg, que representa el 3,54% del material deshidratado de partida.

EJEMPLO 5. Extracción de la fracción de fosfolípidos presentes en la piel de Illex argentinus molida y desgrasada mediante la aplicación de CO2 supercrítico y 5% de etanol como modificador

Se partió de 7,5 g de piel de Illex argentinus molida parcialmente desgrasada obtenida en el ejemplo 3, que se introdujo en la celda de extracción con agitación del equipo TharSCF. La granulometría obtenida para este material fue del 8,8% de partícula menor de 250 ^m, un 19,1% entre 500 y 250 ^m, un 37,9% entre 500 ^m y 1 mm y un 33,6% entre 1 y 3 mm. El

proceso de extracción se realizó del mismo modo que el definido en el Ejemplo 3, con la diferencia de que en esta ocasión se bombeó junto con el CO2 una cantidad de etanol correspondiente al 5% del volumen de CO2 utilizado, usando una bomba hidráulica Dosapro Milton Roy, para que mediante la mezcla de estos dos solventes en una cámara de premezcla 5 sea posible la extracción de los fosfolípidos presentes en el material de partida. Los parámetros de trabajo fueron: presión 350 bar, caudal de CO2 25 g/min, caudal de etanol 1,58 mL/min, y 40°C. El tiempo de la extracción fue de 80 min. El etanol presente en el extracto obtenido se evaporó en condiciones de vacío (menor a 10 mbar) y temperatura máxima de 40°C, para evitar la oxidación del mismo. Se obtuvo en estas condiciones un peso de extracto de 10 826,6±8,13 mg, que representa el 11,02% de la piel de Illex argentinus molida desgrasada.

EJEMPLO 6. Extracción de la fracción de fosfolípidos presentes en la piel de Illex argentinus molida desgrasada mediante la aplicación de CO2 supercrítico y 2,5% de etanol como modificador 15

Se partió de 7,5 g de piel de Illex argentinus molida parcialmente desgrasada obtenida en el ejemplo 3, que se introdujo en la celda de extracción con agitación del equipo TharSCF. El proceso de extracción se realizó durante 80 min, del mismo modo que el definido en el Ejemplo 5, utilizando esta vez 2,5% de etanol. Los parámetros de trabajo fueron: presión del CO2 350 20 bar, caudal de CO2 25 g/min, caudal de etanol 0,79 mL/min, y 40°C. El peso del extracto obtenido fue de aproximadamente 605,56 mg, que representa el 8,06% de la piel de pota molida desgrasada.

Claims (35)

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   REIVINDICACIONES

   1. Un procedimiento para la obtención de una composición que comprende fosfolípidos a partir de un producto de cefalópodos que comprende fosfolípidos y lípidos neutros, donde dicho procedimiento comprende:

   (a) proporcionar un producto de cefalópodos seco y particulado que comprende lípidos neutros y fosfolípidos;

   (b) someter el producto de la etapa (a) a extracción con un fluido supercrítico aplicando agitación para obtener un residuo que comprende menos de un 30% en peso de lípidos neutros respecto al peso total de lípidos neutros y fosfolípidos en dicho residuo; y

   (c) someter el residuo de la etapa (b) a extracción con disolvente, donde dicho disolvente comprende un fluido supercrítico y del 1% al 10% en volumen con respecto al volumen total del fluido supercrítico de un alcanol C1-C4 para obtener una composición que comprende al menos el 80% en peso de fosfolípidos respecto al peso de fosfolípidos presente en el producto de la etapa (a).
2. 2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que los lípidos neutros se seleccionan del grupo que consiste en triglicéridos, ácidos grasos, colesterol, ésteres de colesterol y mezclas de los mismos.
3. 3. Procedimiento según la reivindicación 1 o 2, en el que los fosfolípidos se seleccionan del grupo que consiste en fosfatidilcolina, lisofosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, esfingomielina y mezcla de los mismos.
4. 4. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el producto de cefalópodos se selecciona de entre piel y vísceras de cefalópodos.
5. 5. Procedimiento según la reivindicación 4, en el que el producto de cefalópodos es piel de cefalópodos.
6. 6. Procedimiento según la cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el cefalópodo se selecciona de entre sepia y calamar.
7. 7. Procedimiento según la reivindicación 6, en el que el cefalópodo es Illex argentinus.

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8. 8. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el producto de cefalópados seco y particulado de la etapa (a) definida en la reivindicación 1 comprende un 90% de partículas con un tamaño de partícula inferior a 3 mm.
9. 9. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el fluido supercrítico es CO2 supercrítico.
10. 10. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el disolvente de la etapa (c) comprende del 1% al 8% en volumen con respecto al volumen total del fluido supercrítico de un alcanol C1-C4.
11. 11. Procedimiento según la reivindicación 10, en el que el disolvente de la etapa (c) comprende del 1% al 8% en volumen con respecto al volumen total del fluido supercrítico de un alcanol C1-

    C4.
12. 12. Procedimiento según la reivindicación 11, en el que el disolvente de la etapa (c) comprende del 2% al 5% en volumen con respecto al volumen total del fluido supercrítico de un alcanol C1-

    C4.
13. 13. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que el alcanol C1- C4 es etanol.
14. 14. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que tras la etapa (b) definida en la reivindicación 1 se obtiene un residuo con menos de un 15% en peso de lípidos neutros respecto al peso total de lípidos neutros y fosfolípidos en dicho residuo.
15. 15. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la etapa (b) definida en la reivindicación 1 se lleva a cabo durante al menos 60 minutos.
16. 16. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la etapa (b) definida en la reivindicación 1 se lleva a cabo durante un periodo de tiempo de entre 60 minutos y 120 minutos.
17. 17. Procedimiento según la reivindicación 16, en el que el periodo de tiempo es de entre 70 minutos y 90 minutos.

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18. 18. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la extracción de la etapa (b) definida en la reivindicación 1 se realiza a una presión de entre 150 y 400 bares.
19. 19. Procedimiento según la reivindicación 18, en el que la extracción de la etapa (b) definida en la reivindicación 1 se realiza a una presión de entre 300 y 400 bares.
20. 20. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la extracción de la etapa (b) definida en la reivindicación 1 se realiza a una temperatura de entre 30 y 50 °C.
21. 21. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que tras la etapa (c) definida en la reivindicación 1 se obtiene una composición que comprende al menos el 90% en peso de los fosfolípidos respecto al peso total de fosfolípidos presentes en el producto de la etapa (a).
22. 22. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la etapa (c) definida en la reivindicación 1 se lleva a cabo durante al menos 60 minutos.
23. 23. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la etapa (c) definida en la reivindicación 1 se lleva a cabo durante un periodo de tiempo de entre 60 minutos y 120 minutos.
24. 24. Procedimiento según la reivindicación 23, en el que el periodo de tiempo es de entre 70 minutos y 90 minutos.
25. 25. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la extracción de la etapa (c) definida en la reivindicación 1 se realiza a una presión de entre 150 y 400 bares.
26. 26. Procedimiento según la reivindicación 25, en el que la extracción de la etapa (c) definida en la reivindicación 1 se realiza a una presión de entre 200 y 300 bares.
27. 27. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la extracción de la etapa (c) definida en la reivindicación 1 se realiza a una temperatura de entre 30 y 50 °C.

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28. 28. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que además comprende tras la etapa (c), aislar los componentes solubles del extracto del disolvente empleado en la etapa (c).
29. 29. Un extracto que comprende fosfolípidos obtenible mediante el procedimiento definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 27.
30. 30. Extracto según la reivindicación 29, donde los fosfolípidos comprenden ácidos grasos omega-3.
31. 31. Extracto según la reivindicación 30, donde los ácidos grasos omega-3 se seleccionan entre ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA), ácido docosahexaenoico (DHA) y mezcla de los mismos.
32. 32. Una composición que comprende fosfolípidos obtenible mediante el procedimiento definido en la reivindicación 28.
33. 33. Composición según la reivindicación 32, que comprende al menos un 80% en peso de fosfolípidos.
34. 34. Composición según cualquiera de las reivindicaciones 32 o 33, donde los fosfolípidos comprenden ácidos grasos omega-3.
35. 35. Composición según la reivindicación 34, donde los ácidos grasos omega-3 se seleccionan entre ácido eicosapentaenoico (EPA), ácido docosapentaenoico (DPA), ácido docosahexaenoico (DHA) y mezcla de los mismos.