ES2654413T3 - Anticuerpos a quetiapina y uso de los mismos - Google Patents

Abstract

Un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión de este, que se une a la quetiapina y que es un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión de este, que se selecciona de un grupo que se compone de: a) un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:19 (o identificador de secuencia nº 19) y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:20; b) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:23 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:24; o c) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:27 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:28.

Description

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Anticuerpos a quetiapina y uso de los mismos Campo de la invención

La presente invención está relacionada con el campo de los inmunoensayos y, más particularmente, con los anticuerpos que se unen a la quetiapina y que pueden usarse en los inmunoensayos para detectar la citada quetiapina.

Antecedentes de la invención

La esquizofrenia es un desorden psiquiátrico crónico y debilitante que afecta aproximadamente a un 0,45-1% de la población mundial (van Os, J.; Kapur, S.; 'Schizophrenia', Lancet, 2009, 374, 635-645). Los objetivos principales del tratamiento son obtener una remisión prolongada de los síntomas psicóticos, reducir el riesgo y las consecuencias de una recaída y mejorar el funcionamiento del paciente y su calidad de vida en general. Mientras que muchos pacientes con esquizofrenia son capaces de estabilizar sus síntomas gracias a los medicamentos antipsicóticos disponibles, la escasa observancia de la medicación es una razón habitual para la recaída en el caso de los medicamentos orales administrados a diario. Diversos estudios para investigar la falta de cumplimiento u observancia (Abdel-Baki, A.; Ouellet-Plamondon, C.; Malla, A.; 'Pharmacotherapy Challenges in Patients with First- Episode Psychosis”, Journal of Affective Disorders, 2012, 138, S3-S14) han demostrado que los pacientes con esquizofrenia que no toman su medicación de la forma prescrita tienen índices más elevados de recaídas, ingresos hospitalarios y suicidios, así como una mayor mortalidad. Se estima que entre un 40 y un 75% de los pacientes con esquizofrenia tienen dificultades para seguir adecuadamente un régimen de tratamiento oral que se administra a diario (Lieberman, J. A.; Stroup, T. S.; McEvoy, J. P.; Swartz, M. S.; Rosenheck, R. A.; érkins, D. O.; Keefe, R. S. E.; Davis, S. M.; Davis, C. E.; Lebowitz, B. D.; Severe, J.; Hsiao, J. K.; 'Effectiveness of Antipsychotic Drugs in Patients with Chronic Schizophrenia', New England Journal of Medicine, 2005, 353(12), 1209-1223).

La monitorización farmacoterapéutica o seguimiento farmacoterapéutico (TDM, por sus siglas en inglés) es la cuantificación de las concentraciones de los medicamentos o fármacos -incluyendo los medicamentos antipsicóticos- en el suero o el plasma a fin de monitorizar y optimizar un tratamiento. Por ejemplo, esta monitorización permite identificar a los pacientes que no están siguiendo correctamente su régimen de medicamentos, que no están obteniendo dosis terapéuticas, que no responden a las dosis terapéuticas, que tienen una tolerancia o tolerabilidad subóptima, que tienen interacciones farmacocinéticas entre fármacos, o que tienen un metabolismo anormal, lo que da como resultado unas concentraciones inadecuadas en el plasma. Existe una variabilidad individual considerable en lo referente a la capacidad de los pacientes para absorber, distribuir, matabolizar y excretar los fármacos antipsicóticos. Estas diferencias pueden estar causadas por otras enfermedades o medicaciones simultáneas, por la edad o por las peculiaridades genéticas. Las diferentes formulaciones de los fármacos también pueden influir en el metabolismo de los fármacos antipsicóticos. La TDM permite optimizar las dosis para los pacientes individuales, y mejora los resultados terapéuticos y funcionales. Además, la TDM permite que un médico clínico tenga la certeza de que se administrarán correctamente las dosis prescritas y se obtendrán unas concentraciones eficaces en el suero.

Hoy en día, los métodos para determinar los niveles de concentración en plasma o suero de los fármacos antipsicóticos incluyen el uso de cromatografía líquida (LC, por sus siglas en inglés) con detección mediante UV o espectrometría de masas, y de inmunoensayos (ver, por ejemplo, Woestenborghs et al., 1990, 'On the selectivity of some recently developed RlA's' en 'Methodological Surveys in Biochemistry and Analysis', 20:241-246. 'Analysis of Drugs and Metabolites, Including Anti-infective Agents'; Heykants et al., 1994, 'The Pharmacokinetics of Risperidone in Humans: A Summary', J Clin Psychiatry 55/5, supl:13-17; Huang et al., 1993, 'Pharmacokinetics of the novel antipsychotic agent risperidone and the prolactin response in healthy subjects', Clin Pharmacol Ther, 54:257-268). Los radioinmunoensayos detectan la risperidona o la paliperidona, o ambas. En la Patente de EE UU n° 8,088,594, Salamone et al. desvelan un inmunoensayo competitivo para la risperidona que usa anticuerpos que detectan tanto la risperidona como la paliperidona, pero no los metabolitos farmacológicamente inactivos. Los anticuerpos utilizados en el inmunoensayo competitivo se desarrollan en respuesta a un inmunógeno particular. ID Labs Inc. (London, Ontario, Canadá) suministra una ELISA para la olanzapina, otro fármaco antipsicótico, que también usa un formato competitivo. Las instrucciones de uso señalan que el ensayo está diseñado para funciones de detección o análisis y para usos forenses o de investigación, de manera que específicamente no está diseñado para su uso terapéutico. Las instrucciones recomiendan que todas las muestras positivas deben confirmarse mediante cromatografía con gas / espectrometría de masas (GC/MS, por sus siglas en inglés) y señalan que el anticuerpo utilizado detecta la olanzapina y la clozapina (ver ID Labs Inc., 'Instructions For Use Data Sheet IDEL-F083', fecha de revisión: 8 de agosto de 2011). Algunos de estos métodos, concretamente la HPLC y la GC/MS, pueden ser caros y laboriosos y, normalmente, solo se llevan a cabo en laboratorios grandes o especializados que disponen del equipamiento adecuado.

Existe una necesidad de disponer de otros métodos que determinan los niveles de fármacos antipsicóticos, en particular, métodos que pueden llevarse a cabo en una clínica médica (donde el tratamiento para un paciente individual puede ajustarse según corresponda y de forma mucho más adecuada) y en otros entornos médicos que carecen de equipamiento para una LC o una GC/MS o requieren unos resultados de pruebas rápidos.

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Resumen de la invención

La presente invención está dirigida a un anticuerpo aislado, o a un fragmento de unión de este, que se une a la quetiapina y que es un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que se selecciona de un grupo que se compone de: a) un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:19 (o identificador de secuencia n° 19) y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:20; b) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:23 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:24; o c) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:27 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:28.

Los anticuerpos de la presente invención pueden suministrarse en forma de kits de ensayo y dispositivos de ensayo, de manera que actualmente se prefiere un dispositivo que es un dispositivo de ensayo de flujo lateral que proporciona un análisis inmediato in situ.

Además, la invención proporciona un método para detectar quetiapina en una muestra. El método incluye: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención que está marcado con un marcador detectable, de manera que el anticuerpo marcado y la quetiapina presente en la muestra forman un compuesto marcado; y (ii) detectar el compuesto marcado a fin de detectar la quetiapina en la muestra.

Además, se proporciona un método de inmunoensayo competitivo para detectar quetiapina en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención, y con quetiapina o con un acompañante de unión competitiva con la quetiapina, de manera que el anticuerpo o la quetiapina -o el acompañante de unión competitiva con esta- queda marcado con un marcador detectable, y de manera que la quetiapina de la muestra compite con la quetiapina -o con un acompañante de unión competitiva con la quetiapina- para unirse con el anticuerpo; y (ii) detectar el marcador a fin de detectar la quetiapina de la muestra.

Otros objetivos, características y ventajas adicionales de la presente invención resultarán evidentes para las personas versadas en la materia gracias a la explicación detallada de las realizaciones preferidas que se ofrece a continuación.

Breve descripción de las ilustraciones

Las Figuras 1 y 2 (FIGs. 1 y 2) muestran los resultados de una ELISA competitiva generados con diversos hibridomas;

La Figura 3 muestra el formato de inmunoensayo competitivo utilizado en un dispositivo de ensayo de flujo lateral;

La Figura 4 muestra una curva típica de respuesta a una dosis, generada con los subclones de quetiapina 89-3, 89-13 y 89-15;

La Figura 5 muestra el diseño de un chip de un dispositivo de ensayo de flujo lateral de acuerdo con la presente invención;

La Figura 6 muestra una curva típica de respuesta a una dosis en relación con un control positivo de

aripiprazol generada con un anticuerpo 5C7 y un acompañante de unión competitiva de aripiprazol

marcado;

La Figura 7 muestra una curva típica de respuesta a una dosis en relación con un control positivo de

olanzapina generada con un anticuerpo 4G9-1 y un acompañante de unión competitiva de olanzapina

marcado;

La Figura 8 muestra una curva típica de respuesta a una dosis en relación con un control positivo de quetiapina generada con un anticuerpo 11 y un acompañante de unión competitiva de quetiapina marcado;

La Figura 9 muestra una curva típica de respuesta a una dosis en relación con un control positivo de risperidona generada con un anticuerpo 5-9 y un acompañante de unión competitiva de risperidona marcado;

La Figura 10 muestra una curva típica de respuesta a una dosis, en relación con una muestra que contiene aripiprazol, generada con un anticuerpo 5C7 de aripiprazol en presencia de un acompañante de unión competitiva de aripiprazol marcado, de manera que no hay una curva de respuesta a una dosis en el caso de olanzapina, quetiapina o risperidona en presencia de un acompañante de unión competitiva marcado

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para cada una de ellas;

La Figura 11 muestra una curva típica de respuesta a una dosis, en relación con una muestra que contiene olanzapina, generada con un anticuerpo 4G9-1 de olanzapina en presencia de un acompañante de unión competitiva de olanzapina marcado, de manera que no hay una curva de respuesta a una dosis en el caso de aripiprazol, quetiapina o risperidona en presencia de un acompañante de unión competitiva marcado para cada una de ellos;

La Figura 12 muestra una curva típica de respuesta a una dosis, en relación con una muestra que contiene quetiapina, generada con un anticuerpo 11 de quetiapina en presencia de un acompañante de unión competitiva de quetiapina marcado, de manera que no hay una curva de respuesta a una dosis en el caso de aripiprazol, olanzapina o risperidona en presencia de un acompañante de unión competitiva marcado para cada una de ellos;

La Figura 13 muestra una curva típica de respuesta a una dosis, en relación con una muestra que contiene risperidona, generada con un anticuerpo 5-9 de risperidona en presencia de un acompañante de unión competitiva de risperidona marcado, de manera que no hay una curva de respuesta a una dosis en el caso de aripiprazol, olanzapina o quetiapina en presencia de un acompañante de unión competitiva marcado para cada una de ellos;

La Figura 14 muestra una curva típica de respuesta a una dosis, en relación con una muestra que contiene

aripiprazol, generada con un anticuerpo 5C7 de aripiprazol en presencia de un acompañante de unión

competitiva de aripiprazol marcado, de manera que no hay una curva de respuesta a una dosis en el caso de olanzapina, quetiapina o risperidona en presencia de un anticuerpo y un acompañante de unión competitiva marcado para cada una de ellas;

La Figura 15 muestra una curva típica de respuesta a una dosis, en relación con una muestra que contiene

olanzapina, generada con un anticuerpo 4G9-1 de olanzapina en presencia de un acompañante de unión

competitiva de olanzapina marcado, de manera que no hay una curva de respuesta a una dosis en el caso de aripiprazol, quetiapina o risperidona en presencia de un anticuerpo y un acompañante de unión competitiva marcado para cada una de ellos;

La Figura 16 muestra una curva típica de respuesta a una dosis, en relación con una muestra que contiene quetiapina, generada con un anticuerpo 11 de quetiapina en presencia de un acompañante de unión competitiva de quetiapina marcado, de manera que no hay una curva de respuesta a una dosis en el caso de aripiprazol, olanzapina o risperidona en presencia de un anticuerpo y un acompañante de unión competitiva marcado para cada una de ellos;

[0027] La Figura 17 muestra una curva típica de respuesta a una dosis, en relación con una muestra que contiene risperidona, generada con un anticuerpo 5-9 de risperidona en presencia de un acompañante de unión competitiva de risperidona marcado, de manera que no hay una curva de respuesta a una dosis en el caso de aripiprazol, olanzapina o quetiapina en presencia de un anticuerpo y un acompañante de unión competitiva marcado para cada una de ellos;

La Figura 18 muestra una comparación entre la curva de respuesta a una dosis de aripiprazol generada como control positivo y la curva de respuesta a una dosis de aripiprazol generada en el formato múltiple;

La Figura 19 muestra una comparación entre la curva de respuesta a una dosis de olanzapina generada como control positivo y la curva de respuesta a una dosis de olanzapina generada en el formato múltiple;

La Figura 20 muestra una comparación entre la curva de respuesta a una dosis de quetiapina generada como control positivo y la curva de respuesta a una dosis de quetiapina generada en el formato múltiple; y

La Figura 21 muestra una comparación entre la curva de respuesta a una dosis de risperidona generada como control positivo y la curva de respuesta a una dosis de risperidona generada en el formato múltiple.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas

Los siguientes términos se usan para describir las relaciones de secuencias entre dos o más secuencias de polinucleótidos o aminoácidos: 'secuencia de referencia', 'ventana de comparación', 'identidad de secuencia', 'porcentaje de identidad de secuencia', 'identidad significativa (o sustancial)', 'similitud' y 'homólogo/a'. Una 'secuencia de referencia' es una secuencia definida que se utiliza como base para una comparación de secuencias; una secuencia de referencia puede ser un subconjunto o una secuencia más grande, por ejemplo, un segmento de un ADNc de longitud completa o una secuencia genética dada en una lista de secuencias, o puede comprender un ADNc completo o una secuencia genética completa; una secuencia de referencia puede comprender un segmento de una secuencia de aminoácidos completa que codifica una proteína de acuerdo con una lista de secuencias o

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puede comprender una secuencia de aminoácidos completa que codifica una proteína. Normalmente, una secuencia de referencia tiene una longitud de al menos 18 nucleótidos o 6 aminoácidos, con frecuencia tiene una longitud de al menos 24 nucleótidos u 8 aminoácidos, y a menudo tiene una longitud de al menos 48 nucleótidos o 16 aminoácidos. Puesto que dos secuencias de polinucleótidos o aminoácidos pueden (1) comprender, cada una, una secuencia (es decir, una parte o porción de la secuencia completa de nucleótidos o aminoácidos) que es similar en las dos moléculas, y (2) además pueden comprender una secuencia que es divergente en las dos secuencias de polinucleótidos o aminoácidos, normalmente las comparaciones de secuencia entre dos (o más) moléculas se realizan comparando secuencias de ambas moléculas a lo largo de una 'ventana de comparación' para identificar y comparar las zonas o regiones locales con similitud de secuencia. Tal y como se utiliza en el presente documento, una 'ventana de comparación' hace referencia a un segmento conceptual de al menos 18 posiciones de nucleótidos contiguas o de 6 aminoácidos, de manera que la secuencia de polinucleótidos o la secuencia de aminoácidos puede compararse con una secuencia de referencia de al menos 18 nucleótidos contiguos o de 6 aminoácidos, y de manera que la parte o porción de la secuencia de polinucleótidos o la secuencia de aminoácidos en la ventana de comparación puede comprender adiciones, eliminaciones (o supresiones), sustituciones y similares (por ejemplo, huecos) de un 20% o menos en comparación con la secuencia de referencia (que no contiene adiciones o eliminaciones) para obtener un alineamiento óptimo de las dos secuencias. Para alinear una ventana de comparación, el alineamiento óptimo de las secuencias puede realizarse mediante el algoritmo de homología local de Smith y Waterman, Adv. Appl. Math, 2:482 (1981), mediante el algoritmo de alineamiento homólogo de Needlemen y Wunsch, J. Mol. Biol., 48:443 (1970), mediante la búsqueda del método de similitud de Pearson y Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci., EE UU, 85:2444 (1988), mediante la implementación computerizada de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA y TFASTA en el lanzamiento 7.0 del pack de software de Wisconsin Genetics; Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wisconsin, EE UU; o en los packs de software Geneworks o MacVector), o mediante la inspección, de manera que se seleccionará el mejor alineamiento (es decir, aquel que tenga el mayor porcentaje de identidad a lo largo de la ventana de comparación) generado mediante los diversos métodos.

El término 'identidad de secuencia' (o 'igualdad de secuencia') significa que dos secuencias de polinucleótidos o aminoácidos son idénticas (es decir, basándose en la relación nucléotido-por-nucleótido o residuo-por residuo, en el caso de los aminoácidos) a lo largo de la ventana de comparación. El término 'porcentaje de identidad de secuencia' se calcula comparando dos secuencias óptimamente alineadas a lo largo de la ventana de comparación, determinando el número de posiciones en las que hay una base de ácido nucleico (es decir, A, T, C, G o U) o un residuo de aminoácido idénticos en ambas secuencias para obtener el número de posiciones coincidentes (o posiciones emparejadas), dividiendo el número de posiciones coincidentes por el número total de posiciones en la ventana de comparación (es decir, el tamaño de la ventana), y multiplicando el resultado por 100 para obtener el porcentaje de identidad de secuencia. Tal y como se utiliza en el presente texto, el término 'identidad sustancial' (o 'identidad significativa') denota una característica de una secuencia de polinucleótidos o aminoácidos, de manera que la secuencia de polinucleótidos o aminoácidos comprende una secuencia que tiene al menos un 85% de identidad de secuencia, preferiblemente al menos un 90-95% de identidad de secuencia, y más habitualmente al menos un 99% de identidad de secuencia si se compara con la secuencia de referencia a lo largo de una ventana de comparación de al menos 18 posiciones de nucleótidos (6 aminoácidos), y con frecuencia a lo largo de una ventana de comparación de al menos 24-48 posiciones de nucleótidos (8-16 aminoácidos), de manera que el porcentaje de identidad de secuencia se calcula comparando la secuencia de referencia con la secuencia que puede incluir eliminaciones y adiciones que hacen un total de un 20% o menos de la secuencia de referencia a lo largo de la ventana de comparación. La secuencia de referencia puede ser un subconjunto o una secuencia más grande. Cuando se usa para describir un polipéptido, el término 'similitud' se determina comparando la secuencia de aminoácidos, y las sustituciones de aminoácidos conservadas de un polipéptido, con la secuencia de un segundo polipéptido. Cuando se usa para describir un polipéptido, el término 'homólogo' indica que dos polinucleótidos, o las secuencias designadas de estos, son idénticos cuando se alinean óptimamente y se comparan, de manera que hay inserciones o eliminaciones adecuadas de nucleótidos en al menos un 70% de los nucleótidos, habitualmente en al menos entre alrededor de un 75% y un 99% de los nucleótidos, y más preferiblemente en al menos entre alrededor de un 98% y un 99% de los nucleótidos.

Tal y como se utiliza en el presente texto, un 'marcador', 'molécula detectora', 'reportero' o 'marcador detectable' es cualquier molécula que produce -o que puede regularse para que produzca- una señal detectable. El marcador puede conjugarse con un analito, un inmunógeno, un anticuerpo u otra molécula como un receptor o una molécula que puede unirse a un receptor, como un ligando, particularmente un hapteno o un anticuerpo. Un marcador puede unirse directa o indirectamente mediante un enlace o una fracción-puente (o fracción de unión). Entre los ejemplos no limitativos de marcadores se incluyen los isótopos radiactivos (por ejemplo, 125I), las enzimas (por ejemplo, I3- galactosidasa, peroxidasa), los fragmentos de enzimas, los sustratos de enzimas, los inhibidores de enzimas, las coenzimas, los catalizadores, los fluoróforos (por ejemplo, rodamina, isotiocianato de fluoresceína o FITC, o Dylight 649), los tintes o contrastes, los quimioluminiscentes y luminiscentes (por ejemplo, dioxetanos, luciferina) o los sensibilizadores.

La invención proporciona un anticuerpo aislado que se une a la quetiapina. Además, la invención proporciona un kit de ensayo y un dispositivo de ensayo que contiene el anticuerpo. Asimismo, se proporciona un método para detectar quetiapina en una muestra que incluye un método de inmunoensayo competitivo.

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En una realización, la presente invención está dirigida a un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión del mismo, que se une a la quetiapina y que: (i) es un anticuerpo que se selecciona de un grupo que se compone de: a) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:19 (o identificador de secuencia n° 19), SEQ ID NO:23 o SEQ ID NO:27; b) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena pesada que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ iD NO:20, SEQ ID NO:24 o SEQ ID NO:28; c) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:19 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:20; d) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:23 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:24; o e) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:27 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:28; o (ii) compite por un epítopo que es igual que un epítopo unido al anticuerpo de (i).

En una realización adicional, la presente invención está dirigida a un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión del mismo, que se une a la quetiapina y que comprende una región variable de cadena ligera que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80% de identidad de secuencia con SEQ ID nO:19, SEQ ID NO:23 o SEQ ID NO:27.

En una realización adicional, la presente invención está dirigida a un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión del mismo, que se une a la quetiapina y que comprende una región variable de cadena pesada que comprende una secuencia de aminoácidos que tiene al menos un 80% de identidad de secuencia con sEq ID nO:20, SEQ ID NO:24 o SEQ ID NO:28.

Las realizaciones que actualmente se prefieren del anticuerpo de la presente invención son: un anticuerpo que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:l9 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:20; un anticuerpo que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:23 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:24; y un anticuerpo que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:27 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos SEQ ID NO:28.

Otras realizaciones que actualmente se prefieren del anticuerpo de la presente invención son: 1) un anticuerpo que comprende una secuencia CDR1 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 43 a 58 de SEQ ID NO:l9; una secuencia CDR2 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de SEQ ID NO:19; una secuencia CDR3 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de SEQ ID NO:19; una secuencia CDR1 de cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de SEQ ID NO:20; una secuencia CDR2 de cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de SEQ ID NO:20; y una secuencia CDR3 de cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 118 a 129 de SEQ ID NO:20; 2) un anticuerpo que comprende una secuencia CDR1 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 43 a 58 de SEQ ID nO:23, una secuencia CDR2 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de SEQ ID NO:23, una secuencia CDR3 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de SEQ ID NO:23, una secuencia CDR1 de cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de SEQ ID NO:24, una secuencia CDR2 de cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de SEQ ID NO:24, y una secuencia CDR3 de cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 123 a 129 de SEQ ID NO:24; y 3) un anticuerpo que comprende una secuencia CDR1 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 43 a 58 de SEQ ID NO:27, una secuencia CDR2 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de SEQ ID NO:27, una secuencia CDR3 de cadena ligera que comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de SEQ ID NO:27, una secuencia CDR1 de cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de SEQ ID NO:28, una secuencia CDR2 de cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de SEQ ID NO:28, y una secuencia CDR3 de cadena pesada que comprende los residuos de aminoácidos 123 a 129 de SEQ ID NO:28.

En la sección 'Anticuerpos' que hay más adelante se ofrecen detalles adicionales sobre los anticuerpos de la presente invención.

Además, la presente invención proporciona un kit de ensayo que contiene el anticuerpo, así como un dispositivo de ensayo que contiene el anticuerpo. Preferiblemente, el dispositivo de ensayo es un dispositivo de ensayo de flujo lateral. En la sección 'Kits y dispositivos de ensayo' que hay más adelante se proporcionan detalles adicionales sobre los kits de ensayo y los dispositivos de ensayo.

Además, la invención proporciona un método para detectar quetiapina en una muestra. El método incluye: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención que está marcado con un marcador detectable, de manera que el anticuerpo marcado y la quetiapina presente en la muestra forman un

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compuesto marcado; y (ii) detectar el compuesto marcado a fin de detectar la quetiapina en la muestra. En la sección 'Inmunoensayos' que hay más adelante se ofrecen detalles adicionales sobre el método para detectar quetiapina de acuerdo con la presente invención.

Además, se proporciona un método de inmunoensayo competitivo para detectar quetiapina en una muestra. El método comprende: (i) poner en contacto una muestra con un anticuerpo de acuerdo con la presente invención, y con quetiapina o con un acompañante de unión competitiva de quetiapina, de manera que el anticuerpo o la quetiapina -o el acompañante de unión competitiva de esta- queda marcado con un marcador detectable, y de manera que la quetiapina de la muestra compite con la quetiapina -o con un acompañante de unión competitiva de quetiapina- para unirse con el anticuerpo; y (ii) detectar el marcador a fin de detectar la quetiapina de la muestra. En la sección 'Inmunoensayos' que hay más adelante se ofrecen detalles adicionales sobre el método para detectar quetiapina de acuerdo con la presente invención.

En una realización preferida de la presente invención, la detección de quetiapina se acompaña con la detección de uno o más analitos además de la quetiapina. Preferiblemente, los analitos son fármacos o medicamentos antipsicóticos diferentes a la quetiapina, y, más preferiblemente, estos fármacos antipsicóticos se seleccionan de un grupo que se compone de: aripiprazol, risperidona, paliperidona, olanzapina y metabolitos de estos compuestos.

Tal y como se ha explicado previamente, los anticuerpos de la presente invención pueden usarse en ensayos para detectar la presencia y/o la cantidad de fármacos antipsicóticos que hay en las muestras de los pacientes. Esta detección hace posible la monitorización de los fármacos terapéuticos y todos los beneficios que de ella se derivan. La detección de los niveles de fármacos antipsicóticos puede ser útil para muchos propósitos, y cada uno de dichos propósitos representa una realización de la presente invención, incluyendo: la posibilidad de determinar si un paciente sigue correctamente la terapia prescrita; su uso como una herramienta de decisión para determinar si un paciente debe cambiarse de un régimen oral de antipsicóticos a un régimen de antipsicóticos inyectables de larga duración; su uso como una herramienta de decisión para determinar si el nivel o el intervalo de las dosis de antipsicóticos orales o inyectables debe aumentarse o reducirse para garantizar que se obtienen o mantienen unos niveles farmacológicos seguros o eficaces; su uso como una ayuda para comenzar una terapia de fármacos antipsicóticos al aportar pruebas de que se han alcanzado unos niveles farmacocinéticos mínimos; su uso para determinar la bioquivalencia de los fármacos antipsicóticos en diversas formulaciones o a partir de múltiples fuentes; su uso para evaluar el impacto de la polifarmacia y las potenciales interacciones entre fármacos; y su uso como un indicio para determinar si un paciente debe incluirse en un ensayo clínico -o excluirse de él- y como una ayuda en la posterior monitorización o seguimiento para determinar si el paciente sigue correctamente los requisitos de la medicación del ensayo clínico.

ANTICUERPOS

La presente invención proporciona un anticuerpo aislado que se une a la quetiapina. El término 'anticuerpo' hace referencia a una proteína específica que tiene la capacidad de unirse a un antígeno o a una parte o porción de este - de acuerdo con la presente invención, que tiene la capacidad de unirse a un fármaco antipsicótico o a un metabolito de este-. Un anticuerpo se produce como respuesta a un inmunógeno que puede haberse introducido mediante inyección en un huésped, por ejemplo, un humano o un animal. El término genérico 'anticuerpo' incluye los anticuerpos policlonales, los anticuerpos monoclonales y los fragmentos de anticuerpos.

Los términos 'anticuerpo' o 'fragmento de anticuerpo que se une a un antígeno' hacen referencia a un anticuerpo intacto, o un fragmento de este, que compite con el anticuerpo intacto por un enlace o unión. Hablando en términos generales, se dice que un anticuerpo, o un fragmento de anticuerpo que se une a un antígeno, se une específicamente con un antígeno cuando la constante de disociación es menor o igual a 1 pm, preferiblemente menor o igual a 100 pm y más preferiblemente menor o igual a 10 pm. El enlace o unión puede medirse mediante métodos que son conocidos para aquellas personas versadas en la materia, por ejemplo, usando el instrumento BIAcore™.

Los anticuerpos se componen de dos cadenas pesadas y dos cadenas ligeras. Cada cadena pesada tiene una región o dominio variable (Vh) seguido de una región o dominio constante (Ch1), una región bisagra y dos regiones o dominios constantes más (Ch2 y Ch3). Cada cadena ligera tiene una región o dominio variable (Vl) y una región o dominio constante (Cl). Las regiones o dominios variables de las cadenas pesadas y ligeras forman el paratopo del anticuerpo (una estructura análoga a un seguro o candado), que es específico para cada epítopo particular (de manera similar, análogo a una llave), lo cual permite que el paratopo y el epítopo se unan con precisión. En el dominio variable, los bucles variables de cadenas-^ (o hebras-13), tres por cada cadena ligera y pesada, son los responsables de la unión con el antígeno. Estos bucles se denominan 'regiones determinantes de la complementariedad' ('CDRs', por sus siglas en inglés) y son, concretamente, la CDR1, la CDR2 y la CDR3.

Los fragmentos de anticuerpos contienen una parte o porción de un anticuerpo intacto, preferiblemente la región variable, o región de unión con un antígeno, del anticuerpo intacto. Los fragmentos de unión incluyen los siguientes: Fab, Fab', F(ab')2, y fragmentos de Fv; diacuerpos; minicuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpos monocatenarios (por ejemplo, scFV); y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos.

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Se entiende que cada sitio de unión de un anticuerpo que no sea 'biespecífico' o 'bifuncional' es idéntico.

Tal y como se utiliza en el presente texto, el término 'epítopo' incluye cualquier determinante proteico que sea capaz de una unión específica con una inmunoglobulina o un receptor de células T. Normalmente, los determinantes epitópicos se componen de agrupamientos superficiales de moléculas químicamente activos como aminoácidos o cadenas laterales de azúcares y, normalmente, tienen características estructurales tridimensionales específicas, así como características de carga específicas. Se dice que dos anticuerpos “se unen con el mismo epítopo” (“compiten”) si se demuestra que un anticuerpo compite con un segundo anticuerpo en un ensayo de unión competitiva, algo que se realiza mediante cualquiera de los métodos que son bien conocidos para las personas versadas en la materia (como el método BIAcore™ previamente mencionado). Con respecto a un hapteno (como la quetiapina u otro fármaco antipsicótico), se puede generar un anticuerpo contra la molécula de hapteno no antigénica conjugando el hapteno con un portador inmunogénico (o portador inmunógeno). Así, se crea un anticuerpo que reconoce un 'epítopo' definido por el hapteno.

Cuando se utiliza en relación con un anticuerpo, 'aislado' quiere decir 'alterado por la mano del hombre' respecto a cualquier estado natural; es decir, si existe en la naturaleza, ha sido cambiado o extraído de su entorno natural, o ambos. Por ejemplo, un anticuerpo que existe de forma natural, está presente de forma natural en un animal vivo y se encuentra en su estado natural no está 'aislado', pero si el mismo anticuerpo se separa de los materiales que coexisten con él en su estado natural, está 'aislado', tal y como dicho término se emplea en el presente documento. Puede haber anticuerpos en un compuesto o composición, como un reactivo para inmunoensayos, que no es un compuesto o composición que exista de forma natural, de forma que serán anticuerpos aislados, de acuerdo con el significado de ese término tal y como se utiliza en el presente texto.

La 'reactividad cruzada' (o 'reacción cruzada') hace referencia a la reacción de un anticuerpo con un antígeno que no se ha usado para inducir o activar dicho anticuerpo.

Preferiblemente, el anticuerpo de la presente invención se unirá con el fármaco o medicamento y con cualesquiera otros metabolitos farmacológicamente activos que se desee. Si se modifica el sitio de unión de un portador inmunógeno en un conjugado de fármacos, puede dotarse a los anticuerpos de 'selectividad' y 'reactividad cruzada' con los metabolitos y/o los fármacos relacionados. En el caso de la quetiapina, la reactividad cruzada con los metabolitos de quetiapina como N-desalquilquetiapina (norquetiapina), sulfóxido de quetiapina, O- desalquilquetiapina o 7-hidroxiquetiapina puede ser deseable o no. Pueden crearse anticuerpos que detectan simultáneamente muchos de estos fármacos y/o metabolitos, y también pueden crearse anticuerpos que detectan cada uno de ellos por separado (lo que determina las propiedades de 'unión específica' de los anticuerpos). Un anticuerpo se une específicamente con uno o más compuestos cuando su unión con uno o más compuestos es equimolar o básicamente equimolar.

Los anticuerpos de la presente invención se describen mediante las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de sus dominios variables. Cada uno de ellos se creó inoculando en un huésped un conjugado que contenía un fármaco antipsicótico conjugado con un portador inmunógeno. Al haber proporcionado ahora sus secuencias de nucleótidos y aminoácidos, los anticuerpos pueden producirse mediante métodos recombinantes como los que se describen en la Patente de EE. UU. N° 4,166,452.

También pueden crearse fragmentos de anticuerpos que contienen sitios de unión específicos para el fármaco antipsicótico. Estos fragmentos incluyen -pero no se limitan a- los fragmentos de F(ab')2 que pueden producirse mediante la digestión de la molécula del anticuerpo usando pepsina y los fragmentos Fab que pueden generarse reduciendo los puentes de disulfuro de los fragmentos de F(ab')2. De manera alternativa, pueden crearse bibliotecas sobre la expresión de los Fab para poder identificar de forma rápida y sencilla los fragmentos Fab monoclonales con la especificidad deseada (Huse et al., Science, 256:1270-1281 (1989)). Los fragmentos de anticuerpos Fab, Fv y ScFv pueden expresarse en y secretarse de Escherichia coli, lo cual hace posible la producción de grandes cantidades de estos fragmentos. De manera alternativa, los fragmentos Fab'-SH pueden extraerse directamente de E. coli y unirse químicamente para formar fragmentos F(ab')2 (Carter et al., BioTechnology, 10:163-167 (1992)). Hay otras técnicas para producir fragmentos de anticuerpos que resultan conocidas para las personas versadas en la materia. También se contemplan los fragmentos Fv monocatenarios (scFv) (ver las Patentes de EE. UU. nos 5,761,894 y 5,587,458). Los fragmentos Fv y sFv son los únicos con sitios de combinación intactos que están desprovistos de regiones constantes; por ello, es probable que muestren una unión no específica reducida. El fragmento de anticuerpo también puede ser un 'anticuerpo lineal', por ejemplo, como se describe en la Patente de EE. UU. n° 5,642,870. Estos fragmentos de anticuerpos lineales pueden ser monoespecíficos o biespecíficos.

DISPOSITIVOS Y KITS DE ENSAYO

Asimismo, puede proporcionarse un kit de ensayo (también denominado 'kit reactivo' o 'kit de reacción') que contiene un anticuerpo, tal y como se ha explicado previamente. Un kit reactivo representativo puede contener un anticuerpo que se une al fármaco antipsicótico, quetiapina, un compuesto que comprende un análogo de un fármaco antipsicótico, o un derivativo -o derivado- de este, unido a una fracción o segmento de marcado, y, opcionalmente,

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también puede comprender uno o más calibradores que contienen una cantidad conocida de un fármaco antipsicótico u otro producto estándar relacionado.

El término 'kit de ensayo' hace referencia a un conjunto de materiales y reactivos que se utilizan para llevar a cabo el ensayo. Los reactivos pueden proporcionarse en una disposición empaquetada y en el mismo envase o en envases separados, dependiendo de su estabilidad y su reactividad cruzada, y en forma líquida o liofilizada. Las cantidades y proporciones de los reactivos del kit pueden seleccionarse de tal manera que proporcionen unos resultados óptimos para una aplicación en particular. Un kit de ensayo que incorpore las características de la presente invención contiene anticuerpos que se unen a la quetiapina. Además, el kit puede contener acompañantes de unión competitiva de quetiapina y materiales de control y calibración.

El término 'material de control y calibración' hace referencia a cualquier material estándar o de referencia que contiene una cantidad conocida de un analito. Una muestra que se sospecha contiene un analito, y el correspondiente material de calibración, se someten a ensayo en circunstancias similares. La concentración de analito se calcula comparando los resultados obtenidos con la muestra desconocida y los resultados obtenidos con la estándar. Habitualmente, esto se realiza creando una curva de calibración.

Los anticuerpos que presentan las características de la presente invención pueden incluirse en un kit, envase, pack o dispensador junto con las instrucciones para su uso. Cuando los anticuerpos se suministran en un kit, los diferentes componentes del inmunoensayo pueden guardarse en envases separados y mezclarse antes de usarse. Envasar los componentes por separado permite un almacenamiento de larga duración y no atenúa de forma sustancial el funcionamiento de los componentes activos. Además, los reactivos pueden envasarse en entornos inertes, por ejemplo, bajo una presión positiva de gas nitrógeno, gas argón, o similares, lo cual se prefiere especialmente en el caso de los reactivos que son sensibles al aire y/o la humedad.

Los reactivos que se incluyen en los kits que presentan las características de la presente invención pueden suministrarse en envases de todo tipo, de manera que la actividad de los diversos componentes pueda preservarse sustancialmente a la vez que los propios componentes básicamente no se ven adsorbidos o alterados por los materiales del envase. Los envases o recipientes adecuados incluyen -pero no se limitan a- las ampollas, las botellas, los tubos de ensayo, los viales, los frascos, las jeringas, las fundas o sobres, por ejemplo, forrados de papel de aluminio, y similares. Los envases pueden estar compuestos de cualquier material adecuado, incluyendo -pero sin limitarse a- el cristal o el vidrio, los polímeros orgánicos, por ejemplo, el policarbonato, el poliestireno, el polietileno, etc., la cerámica, el metal, por ejemplo, el aluminio, las aleaciones de metal, etc., el acero, el corcho, y similares. Además, los envases pueden contener una o más vías de acceso esterilizadas, por ejemplo, para acceder a ellos mediante una aguja, y también puede proporcionarse un septo. Los materiales preferidos para los septos incluyen la goma y el politetrafluoroetileno del tipo que se vende con el nombre comercial TEFLON, de DuPont (Wilmington, Delaware, Estados Unidos). Además, los envases pueden comprender dos o más compartimentos separados mediante tabiques o membranas que pueden retirarse para que los componentes se puedan mezclar.

Los kits reactivos que presentan las características de la presente invención también pueden suministrarse junto con materiales de instrucciones. Las instrucciones pueden estar impresas, por ejemplo, en papel, y/o pueden proporcionarse en un medio de lectura electrónica. De forma alternativa, las instrucciones pueden proporcionarse dirigiendo a un usuario a una web de Internet, por ejemplo, mediante las especificaciones del fabricante o distribuidor del kit, y/o mediante correo electrónico.

El anticuerpo también puede proporcionarse como parte de un dispositivo de ensayo. Estos dispositivos de ensayo incluyen los dispositivos de ensayo de flujo lateral. El tipo habitual de dispositivo de ensayo de flujo lateral desechable incluye una zona o área para recibir o alojar la muestra líquida, una zona de conjugado y una zona de reacción. Estos dispositivos de ensayo se conocen normalmente como tiras de prueba de flujo lateral. Estas utilizan un material poroso, por ejemplo, nitrocelulosa, que delimita un paso o vía para el flujo de fluido que puede soportar un flujo capilar. Los ejemplos incluyen aquellos que se muestran en las Patentes de EE. UU. nos 5,559,041, 5,714,389, 5,120,643 y 6,228,660.

Otro tipo de dispositivo de ensayo es un dispositivo de ensayo no poroso que tiene salientes o protuberancias para provocar o estimular el flujo capilar. Los ejemplos de estos dispositivos de ensayo incluyen el dispositivo de flujo lateral abierto que se desvela en las Publicaciones Internacionales PCT nos WO 2003/103835, wO 2005/089082, WO 2005/118139 y WO 2006/137785.

En un dispositivo de ensayo no poroso, normalmente el dispositivo de ensayo tiene al menos una zona de adición de muestras, al menos una zona de conjugado, al menos una zona de reacción y al menos una zona de absorción. Las zonas forman una vía o recorrido de flujo por el que la muestra fluye desde la zona de adición de muestras hasta la zona de absorción. En la zona de reacción también se incluyen elementos de captura, como anticuerpos, que pueden unirse a los analitos, que se depositan opcionalmente en el dispositivo (por ejemplo, por medio de un recubrimiento); asimismo, se incluye material conjugado marcado que también es capaz de tomar parte en las reacciones que permiten determinar la concentración del analito, depositado en el dispositivo en la zona de conjugado, de manera que el material de conjugado marcado porta un marcador para la detección en la zona de

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reacción. El material de conjugado se disuelve a medida que la muestra fluye a través de la zona de conjugado formando un penacho conjugado de material de conjugado marcado disuelto y material de la muestra que fluye hacia abajo hacia la zona de reacción. A medida que el penacho de conjugado fluye hacia la zona de reacción, el material conjugado será capturado por los elementos de captura, por ejemplo, mediante un compuesto de material conjugado y analitos (como en un ensayo 'sandwich') o directamente (como en un ensayo 'competitivo'). El material de conjugado disuelto que queda suelto se verá arrastrado más allá de la zona de reacción hasta llegar a la -al menos una- zona de absorción. Estos dispositivos pueden incluir protuberancias o micropilares en la vía de flujo.

Un instrumento como el que se desvela en las Publicaciones de Patente de EE. UU. nos US20060289787A1 y US 20070231883A1, y en las Patentes de EE. UU. nos 7,416,700 y 6,139,800 es capaz de detectar el material conjugado y ligado -o unido- en la zona de reacción. Los marcadores habituales incluyen tintes fluorescentes que pueden detectarse por medio de instrumentos que excitan los tintes fluorescentes, e incorporan un detector que es capaz de detectar los tintes fluorescentes.

INMUNOENSAYOS

Los anticuerpos que se producen de este modo pueden usarse en inmunoensayos para reconocer/unirse al fármaco antipsicótico, detectando así la presencia y/o cantidad de fármaco presente en la muestra de un paciente. Preferiblemente, el formato del ensayo es un formato de inmunoensayo competitivo. Dicho formato y otros ensayos se describen, entre otros, en Hampton et al. ('Serological Methods, A Laboratory Manual', APS Press, Saint Paul, Minnesota, Estados Unidos, 1990) y Madox et al. (J. Exp. Med., 158:12111, 1983).

El término 'analito' hace referencia a cualquier sustancia, o grupo de sustancias, cuya presencia o cantidad ha de determinarse. Los analitos representativos de fármacos antipsicóticos incluyen -pero no se limitan a- la risperidona, la paliperidona, la olanzapina, el aripiprazol y la quetiapina.

El término 'acompañante o compañero de unión competitiva' ('competitive binding partner', en inglés) hace referencia a una sustancia o grupo de sustancias, como las que se pueden emplear en un inmunoensayo competitivo, que se comportan de manera similar a un analito en lo referente a su afinidad de unión con un anticuerpo. Los acompañantes de unión competitiva representativos incluyen -pero no se limitan a- los derivados de fármacos antipsicóticos y similares.

Cuando se usa en relación con un analito, el término 'de detección' (o 'para detectar') hace referencia a cualquier método cuantitativo, semicuantitativo o cualitativo, así como cualquier otro método, para determinar un analito en general y un fármaco antipsicótico en particular. Por ejemplo, un método que solamente detecta la presencia o la ausencia de un fármaco antipsicótico en una muestra entra dentro del alcance de la presente invención, y también lo hacen los métodos que proporcionan información sobre la cantidad o concentración del fármaco antipsicótico en la muestra. En el presente texto, los términos 'detectar', 'determinar', 'identificar' y similares se usan como sinónimos, y todos entran dentro del alcance de la presente invención.

Una realización preferida de la presente invención es un inmunoensayo competitivo en el que los anticuerpos que se unen al fármaco antipsicótico, o el fármaco o el acompañante de unión competitiva de este, están unidos a un soporte sólido (como la zona de reacción de un dispositivo de ensayo de flujo lateral); y un fármaco marcado o un acompañante de unión competitiva, o un anticuerpo marcado, respectivamente, y una muestra obtenida del huésped pasan por el soporte sólido, de manera que la cantidad de marcador que se detecta unida al soporte sólido puede equilibrarse o correlacionarse con la cantidad de fármaco en la muestra.

Cualquier muestra que se sospeche pueda contener un analito, por ejemplo, un fármaco antipsicótico, puede analizarse de acuerdo con los métodos de las realizaciones que se prefieren actualmente. La muestra puede tratarse previamente si así se desea y puede prepararse en cualquier medio adecuado que no interfiera con el ensayo. Preferiblemente, la muestra comprende un medio acuoso, como un fluido corporal de un huésped, más preferiblemente, plasma o suero.

Debe entenderse que todos los tipos de inmunoensayos que emplean anticuerpos se contemplan para su uso de acuerdo con las realizaciones que se prefieren actualmente, incluyendo los ensayos en los que los anticuerpos están unidos a fases sólidas y los ensayos en los que los anticuerpos se encuentran en medios líquidos. Los métodos de inmunoensayos que pueden usarse para detectar analitos, y que usan anticuerpos que presentan las características de la presente invención, incluyen -pero no se limitan a- los ensayos competitivos (de reactivos limitados) en los que un analito marcado (análogo del analito) y un analito de una muestra compiten por los anticuerpos, y ensayos inmunométricos de emplazamiento único en los que el anticuerpo está marcado; y similares.

Todos los ejemplos se desarrollaron usando técnicas estándares, que resultan rutinarias y bien conocidas para las personas versadas en la materia, con excepción de los casos en los que se indica lo contrario y que se describen de forma detallada. Las técnicas rutinarias de biología molecular de los siguientes ejemplos pueden llevarse a cabo tal y como se describe en los manuales de laboratorio estándares, como Sambrook et al., 'Molecular Cloning: A Laboratory Manual', 2a Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, Nueva York, Estados Unidos,

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(1989).

Existen solicitudes en tramitación tituladas 'Haptenos de Aripiprazol' (Expediente n° PRD2365USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,450, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Haptenos de Olanzapina' (Expediente n° PRD326USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,454, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Haptenos de Paliperidona' (Expediente n° PRD3267USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,459, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Haptenos de Quetiapina' (Expediente n° PRD3268USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,462, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Haptenos de Risperidona y Paliperidona' (Expediente n° PRD3269USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,469, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Anticuerpos para Haptenos de Aripiprazol y su Uso' (Expediente n° CDS5128USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,544, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Anticuerpos para Haptenos de Olanzapina y su Uso' (Expediente n° CDS5132USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,572, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Anticuerpos para Haptenos de Paliperidona y su Uso' (Expediente n° CDS5126USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,634, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Anticuerpos para Haptenos de Quetiapina y su Uso' (Expediente n° CDS5134USPSP, Solicitud de Patente Provisional de eE. UU. n° 61/691,598, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Anticuerpos para Haptenos de Risperidona y su Uso' (Expediente n° CDS5130USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,615, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Anticuerpos para Aripiprazol y su Uso' (Expediente n° CDS5129USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,522, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Anticuerpos para Olanzapina y su Uso' (Expediente n° CDS5133USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,645, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Anticuerpos para Paliperidona y su Uso' (Expediente n° CDS5127USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,692, presentada el 21 de agosto de 2012); 'Anticuerpos para Risperidona y su Uso' (Expediente n° CDS5131USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/691,675, presentada el 21 de agosto de 2012); y 'Anticuerpos para Risperidona y su Uso' (Expediente n° CDS5145USPSP, Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. n° 61/790,880, presentada el 15 de marzo de 2013).

EJEMPLO 1

Anticuerpos para el Aripiprazol

Anticuerpo 17.3 clon 3D7

El hibridoma denominado 17.3 clon 3D7 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se denomina 17.3 clon 3D7. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 17.3 clon 3D7 se denomina SEQ ID NO:41 (o identificador de secuencia n° 41) y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:42. Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 3D7, los nucleótidos 136-165 de SEQ ID NO:41 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 211-231 de SEQ ID NO:41 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 328-354 de SEQ ID NO:41 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 3D7, los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:42 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID NO:42 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-375 de SEQ ID NO:42 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 17.3 clon 3D7, y se denominan SEQ ID NO:43 (cadena ligera) y SEQ ID NO:44 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 3D7, los residuos de aminoácidos 46-55 de SEQ ID NO:43 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 71-77 de SEQ ID NO:43 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 110-118 de SEQ ID NO:43 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 3D7, los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:44 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:44 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-125 de SEQ ID NO:44 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 17.3 clon 5C7 (primero)

El hibridoma denominado 17.3 clon 5C7 (primero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se denomina 17.3 clon 5C7 (primero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 17.3 clon 5C7 (primero) se denomina SEQ ID NO:45 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:46. Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los nucleótidos 130-162 de SEQ ID NO:45 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de SEQ ID NO:45 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de SEQ ID NO:45 representan la tercera región determinante de la

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complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:46 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID NO:46 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352378 de SEQ ID NO:46 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 17.3 clon 5C7 (primero), y se denominan SEQ ID nO:47 (cadena ligera) y SEQ ID NO:48 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los residuos de aminoácidos 44-54 de SEQ ID NO:47 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de SEQ ID NO:47 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de SEQ ID NO:47 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 17.3 clon 5C7 (primero), los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:48 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:48 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-126 de SEQ ID NO:48 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 17.3 clon 5C7 (segundo)

El hibridoma denominado 17.3 clon 5C7 (segundo) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se denomina 17.3 clon 5C7 (segundo). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo) se denomina SEQ ID NO:49 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:50. Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los nucleótidos 130-174 de SEQ ID NO:49 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de SEQ ID NO:49 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de SEQ ID NO:49 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:50 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205255 de SEQ ID NO:50 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-390 de SEQ ID NO:50 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), y se denominan SEQ ID NO:51 (cadena ligera) y SEQ ID NO:52 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los residuos de aminoácidos 44-58 de SEQ ID NO:51 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de SEQ ID NO:51 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de SEQ ID NO:51 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 5C7 (segundo), los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:52 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:52 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-130 de SEQ ID NO:52 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 17.3 clon 5C7 (tercero)

El hibridoma denominado 17.3 clon 5C7 (tercero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para el aripiprazol. El anticuerpo se denomina 17.3 clon 5C7 (tercero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero) se denomina SEQ ID NO:53 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:54. Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los nucleótidos 130-162 de SEQ ID NO:53 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de SEQ ID NO:53 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de SEQ ID NO:53 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:54 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID NO:54 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352366 de SEQ ID NO:54 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), y se denominan SEQ ID NO:55 (cadena ligera) y SEQ ID NO:56 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los residuos de aminoácidos 44-54 de SEQ ID NO:55 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de SEQ ID NO:55 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de SEQ ID NO:55 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 17.3 clon 5C7 (tercero), los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:56 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:56 representan la segunda región determinante de la complementariedad

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(CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de SEQ ID NO:56 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

EJEMPLO 2

Anticuerpos para la Olanzapina

Anticuerpo 11.1 clon 35

El hibridoma denominado 11.1 clon 35 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se denomina 11.1 clon 35. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 11.1 clon 35 se denomina SEQ ID NO:9 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:10. Dentro de la Vl del mAb 11.1 clon 35, los nucleótidos 130-162 de SEQ ID NO:9 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de SEQ ID NO:9 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de SEQ ID NO:9 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 11.1 clon 35, los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:10 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID NO:10 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de SEQ ID NO:10 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 11.1 clon 35, y se denominan SEQ ID NO:11 (cadena ligera) y SEQ ID NO:12 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 11.1 clon 35, los residuos de aminoácidos 44-54 de SEQ ID NO:11 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de SEQ ID NO:11 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109117 de SEQ ID NO:11 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 11.1 clon 35, los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:12 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:12 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de SEQ ID NO:12 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 11.1 clon 61

El hibridoma denominado 11.1 clon 61 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se denomina 11.1 clon 61. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 11.1 clon 61 se denomina SEQ ID NO:13 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:14. Dentro de la Vl del mAb 11.1 clon 61, los nucleótidos 130-162 de SEQ ID NO:13 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de SEQ ID NO:13 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de SEQ ID NO:13 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 11.1 clon 61, los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:14 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID NO:14 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de SEQ ID NO:14 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 11.1 clon 61, y se denominan SEQ ID NO:15 (cadena ligera) y SEQ ID NO:16 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 11.1 clon 61, los residuos de aminoácidos 44-54 de SEQ ID NO:15 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de SEQ ID NO:15 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109117 de SEQ ID NO:15 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 11.1 clon 61, los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:16 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:16 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de SEQ ID NO:16 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 15.5 clon 3F11 (primero)

El hibridoma denominado 15.5 clon 3F11 (primero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se denomina 15.5 clon 3F11 (primero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 15.5 clon 3F11 (primero) se denomina SEQ ID NO:29 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:30. Dentro de la Vl del mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los nucleótidos 130-162 de SEQ ID NO:29 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de SEQ ID NO:29 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de SEQ ID NO:29 representan la tercera región determinante

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de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los nucleótidos 130-162 de SEQ ID NO:30 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205252 de SEQ ID NO:30 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 355-381 de SEQ ID NO:30 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 15.5 clon 3F11 (primero), y se denominan SEQ ID nO:31 (cadena ligera) y SEQ ID NO:32 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los residuos de aminoácidos 44-54 de SEQ ID NO:31 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de SEQ ID NO:31 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de SEQ ID NO:31 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 clon 3F11 (primero), los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:32 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-84 de SEQ ID NO:32 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 119-127 de SEQ ID NO:32 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 15.5 clon 3F11 (segundo)

El hibridoma denominado 15.5 clon 3F11 (segundo) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se denomina 15.5 clon 3F11 (segundo). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo) se denomina SEQ ID NO:33 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:34. Dentro de la Vl del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los nucleótidos 130-162 de SEQ ID NO:33 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208-228 de SEQ ID NO:33 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de SEQ ID NO:33 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:34 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205261 de SEQ ID NO:34 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 358-381 de SEQ ID NO:34 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), y se denominan SEQ ID nO:35 (cadena ligera) y SEQ ID NO:36 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los residuos de aminoácidos 44-54 de SEQ ID NO:35 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de SEQ ID NO:35 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de SEQ ID NO:35 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 clon 3F11 (segundo), los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:36 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-87 de SEQ ID NO:36 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 120-127 de SEQ ID NO:36 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 15.5 subclón 4G9-1

El hibridoma denominado 15.5 subclón 4G9-1 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la olanzapina. El anticuerpo se denomina 15.5 subclón 4G9-1. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 15.5 subclón 4G9-1 se denomina SEQ ID NO:37 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:38. Dentro de la Vl del mAb 15.5 subclón 4G9-1, los nucleótidos 130-162 de SEQ ID NO:37 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 208228 de SEQ ID NO:37 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 325-351 de SEQ ID NO:37 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 subclón 4G9-1, los nucleótidos 130-162 de SEQ ID NO:38 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-252 de SEQ ID NO:38 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 358-381 de SEQ ID NO:38 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 15.5 subclón 4G9-1, y se denominan SEQ ID NO:39 (cadena ligera) y SEQ ID NO:40 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 15.5 subclón 4G9-1, los residuos de aminoácidos 44-54 de SEQ ID NO:39 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 70-76 de sEq ID NO:39 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 109-117 de SEQ ID NO:39 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 15.5 subclón 4G9-1, los residuos de aminoácidos 44-54 de SEQ ID NO:40 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-84 de sEq ID NO:40 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de

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aminoácidos 120-127 de SEQ ID NO:40 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

EJEMPLO 3

Anticuerpos para la Quetiapina

Anticuerpo 13.2 subclón 89-3 (primero)

El hibridoma denominado 13.2 subclón 89-3 (primero) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la quetiapina. El anticuerpo se denomina 13.2 subclón 89-3 (primero). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 13.2 subclón 89-3 (primero) se denomina SEQ ID NO:17 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:18. Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclón 89-3 (primero), los nucleótidos 127-174 de SEQ ID NO:17 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de SEQ ID NO:17 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de SEQ ID NO:17 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 13.2 subclón 89-3 (primero), los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:18 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID NO:18 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-387 de SEQ ID NO:18 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 13.2 subclón 89-3 (primero), y se denominan SEQ ID NO:19 (cadena ligera) y SEQ ID NO:20 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclón 89-3 (primero), los residuos de aminoácidos 43-58 de SEQ ID NO:19 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de SEQ ID NO:19 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de SEQ ID NO:19 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 13.2 subclón 89-3 (primero), los residuos de aminoácidos 4554 de SEQ ID NO:20 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:20 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-129 de SEQ ID NO:20 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 13.2 subclón 89-3 (segundo)

El hibridoma denominado 13.2 subclón 89-3 (segundo) secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la quetiapina. El anticuerpo se denomina 13.2 subclón 89-3 (segundo). La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 13.2 subclón 89-3 (segundo) se denomina SEQ ID NO:21 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SEQ ID NO:22. Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclón 89-3 (segundo), los nucleótidos 127-174 de SEQ ID NO:21 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de SEQ ID NO:21 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de SEQ ID NO:21 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 13.2 subclón 89-3 (segundo), los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:22 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID NO:22 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 367-387 de SEQ ID NO:22 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 13.2 subclón 89-3 (segundo), y se denominan SEQ ID NO:23 (cadena ligera) y SEQ ID NO:24 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclón 89-3 (segundo), los residuos de aminoácidos 43-58 de SEQ ID NO:23 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de SEQ ID NO:23 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de SEQ ID NO:23 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 13.2 subclón 89-3 (segundo), los residuos de aminoácidos 4554 de SEQ ID NO:24 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:24 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 123-129 de SEQ ID NO:24 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 13.2 subclón 89-5

El hibridoma denominado 13.2 subclón 89-5 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la quetiapina. El anticuerpo se denomina 13.2 subclón 89-5. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 13.2 subclón 89-5 se denomina SEQ ID NO:25 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se

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denomina SEQ ID NO:26. Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclón 89-5, los nucleótidos 127-174 de SEQ ID NO:25 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 220-240 de SEQ ID nO:25 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 337-363 de SEQ ID NO:25 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 13.2 subclón 89-5, los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:26 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID NO:26 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 367-387 de SEQ ID NO:26 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 13.2 subclón 89-5, y se denominan SEQ ID NO:27 (cadena ligera) y SEQ ID NO:28 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 13.2 subclón 89-5, los residuos de aminoácidos 43-58 de SEQ ID NO:27 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 74-80 de sEq ID NO:27 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 113-121 de SEQ ID NO:27 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 13.2 subclón 89-5, los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:28 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:28 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 123-129 de SEQ ID NO:28 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

EJEMPLO 4

Anticuerpos para Risperidona/Paliperidona

Anticuerpo 5-9

El hibridoma denominado 5-9 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la risperidona (y su metabolito paliperidona). El anticuerpo se denomina 5-9. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 5-9 se denomina SEQ ID NO:1 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SeQ iD NO:2. Dentro de la Vl del mAb 5-9, los nucleótidos 130-180 de SEQ ID NO:1 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 226-246 de SEQ ID NO:1 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 343-369 de SEQ ID NO:1 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 5-9, los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:2 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID nO:2 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de SEQ ID NO:2 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 5-9, y se denominan SEQ ID NO:3 (cadena ligera) y SEQ ID NO:4 (cadena pesada). Dentro de la Vl del mAb 5-9, los residuos de aminoácidos 44-60 de SEQ ID NO:3 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 76-82 de SEQ ID nO:3 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 115-123 de SEQ ID NO:3 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 5-9, los residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:4 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:4 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de SEQ ID NO:4 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

Anticuerpo 5-5

El hibridoma denominado 5-5 secreta un anticuerpo monoclonal (mAb) específico para la risperidona (y su metabolito paliperidona). El anticuerpo se denomina 5-5. La secuencia de nucleótidos de la región variable de la cadena ligera (Vl) del mAb 5-5 se denomina SEQ ID NO:5 y la de la región variable de la cadena pesada (Vh) se denomina SeQ iD NO:6. Dentro de la Vl del mAb 5-5, los nucleótidos 130-180 de SEQ ID NO:5 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 226-246 de SEQ ID NO:5 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 343-369 de SEQ ID NO:5 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la VH del mAb 5-5, los nucleótidos 133-162 de SEQ ID NO:6 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los nucleótidos 205-255 de SEQ ID NO:6 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los nucleótidos 352-366 de SEQ ID NO:6 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

También se determinaron las correspondientes secuencias de aminoácidos previstas de las regiones variables de las cadenas de mAb 5-5, y se denominan SEQ ID NO:7 (cadena ligera) y SEQ ID NO:8 (cadena pesada). Dentro de

la Vl del mAb 5-5, los residuos de aminoácidos 44-60 de SEQ ID NO:7 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 76-82 de SEQ ID nO:7 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 115-123 de SEQ ID NO:7 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3). Dentro de la Vh del mAb 5-5, los 5 residuos de aminoácidos 45-54 de SEQ ID NO:8 representan la primera región determinante de la complementariedad (CDR1); los residuos de aminoácidos 69-85 de SEQ ID NO:8 representan la segunda región determinante de la complementariedad (CDR2); y los residuos de aminoácidos 118-122 de SEQ ID NO:8 representan la tercera región determinante de la complementariedad (CDR3).

10 EJEMPLO 5

Inmunoensayos Competitivos para Quetiapina e Inmunoensayos Competitivos Múltiples para Aripiprazol, Olanzapina, Quetiapina y Risperidona/Paliperidona

15 Tras diversas inmunizaciones con inmunógenos de quetiapina, se analizó sangre de colas de ratones para estudiar su reactividad usando ELISA. También se analizaron sobrenadantes de hibridomas, y los datos de ELISA que se ofrecen en las Tablas 1 y 2 de más adelante muestran la reactividad de diversos hibridomas (se usaron células NS0 como compañero de fusión).

20 Tabla 1

Dilución

9 10 11 12

400

79 89 90 95 Cmpd#9 (Compuesto#9)

400 1200

1200

3600 3600

10800

10800

Bi Sub

1,5858 1,3168 1,4302 0,0533 Cmpd#9

1,5111 1,0627 1,2186 0,0427

0,5578 0,4213 0,598 0,0219

0,554 0,4447 0,5353 0,0233

0,1932 0,1582 0,1868 0,0154

0,171 0,2111 0,1838 0,0132

0,0736 0,0722 0,0733 0,0107

0,0884 0,0774 0,086 0,0107

5

10

15

20

25

30

35

40

Tabla 2

Dilución

4C12 1A4 4G12 1F6

400

0,5467 0,2002 0,0144 0,1308

1200

0,1793 0,0619 0,01035 0,03905

3600

0,06655 0,026 0,00825 0,0192

10800

0,02755 0,0132 0,00765 0,01035

400

3,7296 0,24275 0,22585 0,00615

1200

2,4516 0,08695 0,0763 0,00685

3600

1,1575 0,0282 0,02875 0,00615

10800

0,4622 0,0147 0,0145 0,00645

Dilución

5E9 2F2 3E2

Después se analizó el sobrenadante mediante ELISA de competición para determinar si las señales eran específicas a la quetiapina. Las Figuras 1 y 2 muestran los resultados de los hibridomas representativos. Los datos muestran la reactividad específica a la quetiapina.

La Figura 3 muestra el formato de inmunoensayo competitivo utilizado en un dispositivo de ensayo de flujo lateral en el que el anticuerpo de captura, un clon de quetiapina, se depósito en un chip junto con un conjugado de detección que estaba compuesto de quetiapina conjugada con un fluoróforo. Tal y como se muestra en la Figura 3, en este formato competitivo, un bajo nivel de analito(s) (quetiapina) provoca una señal o respuesta elevada, mientras que un elevado nivel de analito(s) (quetiapina) provoca una respuesta o señal baja. La cantidad de quetiapina en la muestra puede calcularse mediante la pérdida de fluorescencia en comparación con una muestra de control que no tiene ningún fármaco o medicamento. En la Figura 4 se muestra una curva típica de respuesta a una dosis generada con los subclones de quetiapina 89-3, 89-13 y 89-5.

La Figura 5 muestra el diseño del chip de un dispositivo de ensayo de flujo lateral de acuerdo con una realización de la presente invención. El dispositivo incluye una zona o área para recibir o alojar la muestra, una zona de conjugado (que contiene el acompañante o compañero de unión competitiva marcado que se desee) y una zona de reacción (se señalan ocho áreas en la zona de reacción; cada área puede contener por separado un anticuerpo deseado). La muestra fluye desde la zona de muestras, a través de la zona de conjugado, hasta llegar a la zona de reacción.

Las Figuras 6-9 muestran las curvas típicas de respuesta a una dosis en relación con un control positivo de aripiprazol (una muestra que contiene aripiprazol) generado con un anticuerpo 5C7 depositado en la zona de reacción 2 y un acompañante de unión competitiva de aripiprazol marcado en la zona de conjugado (Figura 6), un control positivo de olanzapina (una muestra que contiene olanzapina) generado con un anticuerpo 4G9-1 depositado en la zona de reacción 4 y un acompañante de unión competitiva de olanzapina marcado en la zona de conjugado (Figura 7), un control positivo de quetiapina (una muestra que contiene quetiapina) generado con un anticuerpo 11 depositado en la zona de reacción 6 y un acompañante de unión competitiva de olanzapina marcado en la zona de conjugado (Figura 8), y un control positivo de risperidona (una muestra que contiene risperidona) generado con un anticuerpo 5-9 depositado en la zona de reacción 8 y un acompañante de unión competitiva de risperidona marcado en la zona de conjugado (Figura 9). Los acompañantes de unión competitiva marcados de la zona de conjugado compiten con los fármacos presentes en las muestras para unirse a los anticuerpos. Se detecta la cantidad de marcador y esto es un indicio de la cantidad de fármaco presente en la muestra (así, la cantidad o nivel de la señal es inversamente proporcional a la cantidad de fármaco presente en la muestra; ver Figura 3).

Para confirmar que los conjugados de los acompañantes de unión competitiva marcados no se unen a los anticuerpos depositados en las zonas de reacción, se realizaron controles negativos usando muestras que no contenían fármacos. En referencia a la Tabla 3, una muestra que no contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestras y se mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada, pero no aripiprazol marcado), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2. La

Tabla 3 de más abajo muestra los resultados, que confirman que no hay ninguna respuesta a la dosis y que los conjugados de olanzapina, quetiapina y risperidona que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no se unen al anticuerpo de aripiprazol.

5 Tabla 3

Aripiprazol-Clon 5C7-Modelo Matemático 1 (Conc. de 0 ng/mL)

Ensayo-MM

Conj. Zona de Reacción Zona de Estudio Área Media Máxima Altura Media Máxima Fondo Promedio

ARIP-MM1

OLAN, QUET, RISP ARIP 2 0,77 1,56 3,99

ARIP-MM1

OLAN, QUET, RISP 4 -0,02 0,06 4,14

ARIP-MM1

OLAN, QUET, RISP 6 0,09 0,10 4,29

ARIP-MM1

OLAN, QUET, RISP 8 0,13 0,12 4,61

Los demás conjugados no se unen al Aripiprazol

En referencia a la Tabla 4, una muestra que no contiene olanzapina se deposita en la zona de muestras y se mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene aripiprazol marcado, 10 quetiapina marcada y risperidona marcada, pero no olanzapina marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4. La Tabla 4 de más abajo muestra los resultados, que confirman que no hay ninguna respuesta a la dosis y que los conjugados de aripiprazol, quetiapina y risperidona que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no se unen al anticuerpo de olanzapina.

15

Tabla 4

OLAN-Clon 4G9-1-Modelo Matemático 1 (Conc. de 0 ng/mL)

Ensayo-MM

Conj. Zona de Reacción Zona de Estudio Área Media Máxima Altura Media Máxima Fondo Promedio

OLAN-MM1

ARIP, QUET, RISP 2 -0,03 0,05 4,38

OLAN-MM1

ARIP, QUET, RISP OLAN 4 0,74 1,10 4,56

OLAN-MM1

ARIP, QUET, RISP 6 0,06 0,09 4,79

OLAN-MM1

ARIP, QUET, RISP 8 0,11 0,13 5,17

Los demás conjugados no se unen a la Olanzapina

En referencia a la Tabla 5, una muestra que no contiene quetiapina se deposita en la zona de muestras y se mueve 20 debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene aripiprazol marcado, olanzapina marcada y risperidona marcada, pero no quetiapina marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De

nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de quetiapina (11) en la zona de reacción 6. La Tabla 5 de más abajo muestra los resultados, que confirman que no hay ninguna respuesta a la dosis y que los conjugados de aripiprazol, olanzapina y risperidona que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no se unen al anticuerpo de quetiapina.

5

Tabla 5

Quetiapina-Clon 11-Modelo Matemático 1 (Conc. de 0 ng/mL)

Ensayo-MM

Conj. Zona de Reacción Zona de Estudio Área Media Máxima Altura Media Máxima Fondo Promedio

QUET-MM1

ARIP- OLAN-RISP 2 -0,01 0,07 3,85

QUET-MM1

ARIP- OLAN-RISP 4 0,01 0,12 4,01

QUET-MM1

ARIP- OLAN-RISP QUET 6 0,03 0,08 4,24

QUET-MM1

ARIP- OLAN-RISP 8 0,04 0,07 4,56

Los demás conjugados no se unen a la Quetiapina

En referencia a la Tabla 6, una muestra que no contiene risperidona se deposita en la zona de muestras y se mueve 10 debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene aripiprazol marcado, olanzapina marcada y quetiapina marcada, pero no risperidona marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 6 de más abajo muestra los resultados, que confirman que no hay ninguna respuesta a la dosis y que los conjugados de aripiprazol, olanzapina y quetiapina que se mueven por acción capilar a través de la zona de reacción no se unen al 15 anticuerpo de risperidona.

Tabla 6

Risperidona-Clon 5-9-Modelo Matemático 1 (Conc. de 0 ng/mL)

Ensayo-MM

Conj. Zona de Reacción Zona de Estudio Área Media Máxima Altura Media Máxima Fondo Promedio

RISP-MM1

ARIP,OLAN, QUET 2 0,02 0,11 7,43

RISP-MM1

ARIP,OLAN, QUET 4 0,05 0,14 7,73

RISP-MM1

ARIP,OLAN, QUET 6 0,20 0,19 8,11

RISP-MM1

ARIP,OLAN, QUET RISP 8 1,97 3,23 8,85

Los demás conjugados no se unen a la Risperidona

Para confirmar que los conjugados de los acompañantes de unión competitiva marcados solo se unen a sus

respectivos anticuerpos depositados en las zonas de reacción, se realizaron controles negativos adicionales usando de nuevo muestras que no contenían fármacos. En referencia a la Tabla 7, una muestra que no contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestras y se mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene aripiprazol marcado), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción 5 contiene anticuerpos de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, además de anticuerpos de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpos de quetiapina (11) en la zona de reacción 6, y anticuerpos de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 7 de más abajo muestra los resultados, que confirman que no hay ninguna respuesta a la dosis, excepto en el caso de los anticuerpos de aripiprazol 5C7 (en la zona de reacción 2).

10 Tabla 7

Aripiprazol-Clon 5C7-Modelo Matemático 1 (Conc. de 0 ng/mL)

Ensayo-MM

Con¡. Zona de Zona de Área Media Altura Media Fondo

ARIP-MM1

ARIP,OLAN, ARIP 2 60,34 97,53 5,44

ARIP-MM1

ARIP,OLAN, 4 2,86 3,91 11,66

ARIP-MM1

ARIP,OLAN, 6 1,12 1,23 11,03

ARIP-MM1

ARIP,OLAN, 8 3,14 4,19 12,94

Solo hay unión en la zona de reacción del Aripiprazol

En referencia a la Tabla 8, una muestra que no contiene olanzapina se deposita en la zona de muestras y se mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene olanzapina marcada), 15 hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, además de anticuerpos de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpos de quetiapina (11) en la zona de reacción 6, y anticuerpos de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 8 de más abajo muestra los resultados, que confirman que no hay ninguna respuesta a la dosis, excepto en el caso de los anticuerpos de olanzapina 4G9-1 (en la zona de reacción 4).

20

Tabla 8

OLAN-Clon 4G9-1-Modelo Matemático 1 (Conc. de 0 ng/mL)

Ensayo-MM

Conj. Zona de Reacción Zona de Estudio Área Media Máxima Altura Media Máxima Fondo Promedio

OLAN-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP 2 0,02 0,08 4,86

OLAN-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP OLAN 4 34,23 51,80 5,39

OLAN-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP 6 0,22 0,32 5,39

OLAN-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP 8 0,15 0,17 5,59

Solo hay unión en la zona de reacción de olanzapina

En referencia a la Tabla 9, una muestra que no contiene quetiapina se deposita en la zona de muestras y se mueve 25 debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene quetiapina marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, además de anticuerpos de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpos de quetiapina (11) en la zona de reacción 6, y anticuerpos de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 9 de más abajo muestra los resultados, que confirman que no hay ninguna respuesta a la dosis, excepto en el caso de los 30 anticuerpos de quetiapina 11 (en la zona de reacción 6).

Tabla 9

Quetiapina-Clon 11-Modelo Matemático 1 (Conc. de 0 ng/mL)

Ensayo-MM

Conj. Zona de Reacción Zona de Estudio Área Media Máxima Altura Media Máxima Fondo Promedio

QUET-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP 2 0,13 0,41 10,02

QUET-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP 4 0,08 0,23 10,47

QUET-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP QUET 6 140,35 181,33 7,91

QUET-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP 8 1,58 2,61 11,53

Solo hay unión en la zona de reacción de quetiapina i

En referencia a la Tabla 10, una muestra que no contiene risperidona se deposita en la zona de muestras y se 5 mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene risperidona marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, además de anticuerpos de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpos de quetiapina (11) en la zona de reacción 6, y anticuerpos de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. La Tabla 10 de más abajo muestra los resultados, que confirman que no hay ninguna respuesta a la dosis, excepto en el caso de 10 los anticuerpos de risperidona 5-9 (en la zona de reacción 8).

Tabla 10

Risperidona-Clon 5-9-Modelo Matemático 1 (Conc. de 0 ng/mL)

Ensayo-MM

Conj. Zona de Reacción Zona de Estudio Área Media Máxima Altura Media Máxima Fondo Promedio

RISP-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP 2 1,03 1,51 9,07

RISP-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP 4 0,65 0,91 9,60

RISP-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP 6 2,61 6,39 10,48

RISP-MM1

ARIP,OLAN, QUET,RISP RISP 8 55,98 100,91 11,58

Solo hay unión en la zona de reacción de risperidona

15 Los resultados que se han mostrado previamente confirman que los conjugados de acompañantes de unión competitiva marcados sólo se unen a sus respectivos anticuerpos en la zona de reacción.

Las Figuras 10-13 muestran las curvas típicas de respuesta a una dosis en las zonas de reacción de anticuerpos específicos, y son la prueba de la respuesta a la dosis, dependiendo de una concentración baja/alta, de cada ensayo 20 específico en presencia de otros conjugados. En la Figura 10, una muestra que contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestras y se mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

contiene aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2. Tal y como se muestra en la Figura 10, se generó una curva típica de respuesta a una dosis solamente en el caso del aripiprazol, y no para la olanzapina, la quetiapina o la risperidona.

En la Figura 11, una muestra que contiene olanzapina se deposita en la zona de muestras y se mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4. Tal y como se muestra en la Figura 11, se generó una curva típica de respuesta a una dosis solamente en el caso de la olanzapina, y no para el aripiprazol, la quetiapina o la risperidona.

En la Figura 12, una muestra que contiene quetiapina se deposita en la zona de muestras y se mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de quetiapina (11) en la zona de reacción 6. Tal y como se muestra en la Figura 12, se generó una curva típica de respuesta a una dosis solamente en el caso de la quetiapina, y no para el aripiprazol, la olanzapina o la risperidona.

En la Figura 13, una muestra que contiene risperidona se deposita en la zona de muestras y se mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, en esta ocasión, contiene aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. Tal y como se muestra en la Figura 13, se generó una curva típica de respuesta a una dosis solamente en el caso de la risperidona, y no para el aripiprazol, la olanzapina o la quetiapina.

Las Figuras 14-17 muestran las curvas típicas de respuesta a una dosis de cada ensayo en presencia de otros conjugados y anticuerpos. En la Figura 14, una muestra que contiene aripiprazol se deposita en la zona de muestras y se mueve debido a la acción capilar a través de la zona de conjugado (que, de nuevo, contiene aripiprazol marcado, olanzapina marcada, quetiapina marcada y risperidona marcada), hasta llegar a la zona de reacción. De nuevo, la zona de reacción contiene anticuerpos de aripiprazol (5C7) en la zona de reacción 2, además de anticuerpos de olanzapina (4G9-1) en la zona de reacción 4, anticuerpos de quetiapina (11) en la zona de reacción 6, y anticuerpos de risperidona (5-9) en la zona de reacción 8. Tal y como se muestra en la Figura 14, se generó una curva típica de respuesta a una dosis en el caso del aripiprazol. Cuando una muestra que contenía olanzapina se depositó en la zona de muestras de este chip, se generó una curva típica de respuesta a una dosis para la olanzapina, tal y como se muestra en la Figura 15. Cuando una muestra que contenía quetiapina se depositó en la zona de muestras de este chip, se generó una curva típica de respuesta a una dosis para la quetiapina, tal y como se muestra en la Figura 16. Cuando una muestra que contenía risperidona se depositó en la zona de muestras de este chip, se generó una curva típica de respuesta a una dosis para la risperidona, tal y como se muestra en la Figura 17.

Las Figuras 18-21 muestran las comparaciones entre las curvas de respuesta a una dosis generadas como controles positivos (Figuras 6-9) y las curvas de respuesta a una dosis generadas en un formato múltiple (Figuras 14-17). La comparación del aripiprazol se muestra en la Figura 18; la de la olanzapina, en la Figura 19; la de la quetiapina, en la Figura 20; y la de la risperidona, en la Figura 21. Estas Figuras muestran que las curvas de los controles positivos son similares a las curvas múltiples.

Estos datos demuestran que el dispositivo de ensayo de flujo lateral de la presente invención puede utilizarse para detectar múltiples fármacos o medicamentos antipsicóticos usando una sola muestra de un paciente en un dispositivo portátil y en el centro de atención (in situ).

LISTADO DE SECUENCIAS

<110> Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. Janssen Pharmaceutica NV

<120> Anticuerpos a quetiapina y uso de los mismos

<130> CDS5135WOPCT

<150> US 61/691,659

<151> 2012-08-21

<160> 56

<170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 399 <212> ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 1

atggaatcac agactcaggt cctcatgtcc ctgctgctct ggatatctgg tacctatggg 60

gacattgtga tgacacagtc tccatcctcc ctgagtgtgg caacaggaga taaggtcact 120

atgagctgca agtccagtca gagtctgttc aacagtagaa accaaaagag ctacttggcc 180

tggtaccagc agaagccatg gcagcctcct aaactgctga tctacggggc atccactagg 240

gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg gaacagattt cactctcacc 300

atcagcagtg tgcaggctga agacctggca atttattact gtcagaatga ttatagttat 360

ccattcacgt tcggcacggg gacaaaattg gaaataaga 399

<210>2 <211> 399 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 2

atgggattca gcaggatctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctacaggtgt ccactcccag 60

gcttttctac aacaatctgg ggctgagctg gtgaggcctg gggcctcagt gaagatgtcc 120

tgcaaggcct ctggctccac atttaccagt tacaatatac actgggtcaa gcagacacct 180

agacagggcc tggaatggat tggagctatt tatccaggaa atggtgatac ttcctacaat 240

cagaagttca agggcagggc cacactgact atagacaaat cctccagcac agcctacatg 300

cagctcagca gcctgacatc tgaagactct gcggtctatt tctgtgctaa ctggggcttt 360

gagtactggg gtcaaggcac cactctctca gtctcctca 399

<210> 3 <211> 133 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 3

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Leu Met Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 15 10 15

Gly Thr Tyr Gly Asp lie Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30

Val Ala Thr Gly Asp Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser 35 40 45

Leu Phe Asn Ser Arg Asn Gln Lys Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln 50 55 60

Lys Pro Trp Gln Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ala Ser Thr Arg 65 70 75 80

Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95

Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala lie Tyr 100 105 110

Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr 115 120 125

Lys Leu Glu lie Arg 130

<210>4 <211> 133 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 4

Met Gly Phe Ser Arg lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Thr Gly 15 10 15

Val His Ser Gln Ala Phe Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg 20 25 30

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

imagen1

<210>5 <211> 399 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 5

atggaatcac agactcaggt cctcatgtcc ctgctgctct ggatatctgg tacctatggg gacattgtga tgacacagtc tccatcctcc ctgagtgtgg caacaggaga taaggtcact atgagctgca agtccagtca gagtctgttc aacagtagaa accaaaagag ctacttggcc tggtaccagc agaagccatg gcagcctcct aaactgctga tctacggggc atccactagg gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg gaacagattt cactctcacc atcagcagtg tgcaggctga agacctggca atttattact gtcagaatga ttatagttat ccattcacgt tcggcacggg gacaaaattg gaaataaga

<210> 6 <211> 399 <212> ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 6

60

120

180

240

300

360

399

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

atgggattca

gcttttctac

tgcaaggcct

agacagggcc

cagaagttca

cagctcagca

gagtactggg

gcaggatctt

tctcttcctc ctgtcagtaa ctacaggtgt ccactcccag 60

aacaatctgg

ggctgagctg gtgaggcctg gggcctcagt gaagatgtcc 120

ctggctccac

atttaccagt tacaatatac actgggtcaa gcagacacct 180

tggaatggat

tggagctatt tatccaggaa atggtgatac ttcctacaat 240

agggcagggc

cacactgact atagacaaat cctccagcac agcctacatg 300

gcctgacatc

tgaagactct gcggtctatt tctgtgctaa ctggggcttt 360

gtcaaggcac

cactctctca gtctcctca 399

<210>7 <211> 133 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 7

Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Leu Met Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 15 10 15

Gly Thr Tyr Gly Asp lie Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser 20 25 30

Val Ala Thr Gly Asp Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser 35 40 45

Leu Phe Asn Ser Arg Asn Gln Lys Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln 50 55 60

Lys Pro Trp Gln Pro Pro Lys Leu Leu lie Tyr Gly Ala Ser Thr Arg 65 70 75 80

Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp 85 90 95

Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala lie Tyr 100 105 110

Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Ser Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Thr Gly Thr

115

120

125

Lys Leu Glu lie Arg 130

5

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65

<210>8 <211> 133 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 8

imagen2

<210>9 <211> 381 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400>9

atggagtcac agactcaggt ctttgtattc gtgttgctct ggttgtctgg tggagatgga 60

gacattgtga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cactaggaga cagggtcagc 120

atcacctgca aggccagtca gaatgtggga atttatgttt cctggtatca acagaaacca 180

gggaaatctc ctaaagcact aatttactgg tcttcaaacc ggttcactgg agtccctgat 240

cgtttcacag gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcaccga tgtgcagtct 300

5

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20

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50

55

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65

gaagacttgg cagattattt ctgtgagcaa tatagcagcg atccgtatac gttcggatcg

gggaccaagc tggaaataaa a

<210> 10 <211> 399 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 10

atggaaagac actggatctt tctcttcctg ttgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag

gtccaactgc agcagtctgc ggctgaactg gcaagacctg gggcctcagt gaagatgtcc

tgcaagactt ctggctacac cttcactagc gaccggatgc actgggtaat acagaggcct

ggacagggtc tggagtggat tggatacatt cttcctagaa atgtttatac taaatacaat

aaaaagttca aggacaaggc cacattgact gcagacacat cctccagtat agcctacatc

caactgagca gcctgacatc tgaagactct gcagtctatt actgtgtaaa gtctgacggg

ggctactggg gccaaggcac cactctcaca gtctcctca

<210> 11 <211> 127 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 11

Met Glu 1

Gly Gly

Thr Ser

Val Gly 50

Ser

Gln Thr Gln Val Phe Val Phe Val Leu Leu

5 10

Asp

Gly Asp lie Val Met Thr Gln Ser Gln Lys

20 25

Leu

Gly Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala

35

40 45

lie

Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

Trp Leu Ser 15

Phe Met Ser 30

Ser Gln Asn

Lys Ser Pro

55

60

Lys Ala Leu lie Tyr Trp Ser Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp 65 70 75 80

Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Thr 85 90 95

Asp Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Glu Gln Tyr Ser 100 105 110

Ser Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 115 120 125

360

381

60

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240

300

360

399

5

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50

55

60

65

<210> 12 <211> 133 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 12

Met Glu Arg His Trp lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly 15 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Ala Ala Glu Leu Ala Arg 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Thr Ser Asp Arg Met His Trp Val lie Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60

Glu Trp lie Gly Tyr lie Leu Pro Arg Asn Val Tyr Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80

Lys Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Ser 85 90 95

lie Ala Tyr lie Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110

Tyr Tyr Cys Val Lys Ser Asp Gly Gly Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 115 120 125

Leu Thr Val Ser Ser 130

<210> 13 <211> 381 <212> ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 13

atggagtcac

gacattgtga

atcacctgca

gggaaatctc

cgcttcacag

gaagacttgg

gggaccaagc

agactcaggt

ctttgtattc gtgttgctct ggttgtctgg tggtgatgga 60

tgacccagtc

tcaaaaattc atgtccacat cactaggaga cagggtcagc 120

aggccagtca

gaatgtggga atttatgtat cctggtatca acagaaacca 180

ctaaagcact

aatttattgg gcatcaaacc ggttcactgg agtccctgat 240

gcagtggatc

tgggacagac ttcactctca ccatcaccaa tgtgcagtct 300

cagaatattt

ctgtgaacaa tatagcagcg atccgtatac gttcggatcg 360

tagaaataaa

a 381

5

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65

<210> 14 <211> 399 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 14

atggaaaggc actggatctt tctcttcctg ttgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag 60

gtccaactgc agcagtctgc ggctgaactg gtaagacctg gggcctcagt gaagatgtcc 120

tgcaagactt ctggctacat cttcactagc gaccggatgc actgggtaaa acagaggcct 180

ggacagggtc tggagtggat tggatacatt attcctagaa atttttatac taaatacaat 240

cagaaattca aggacaaggc cacattgact gcagacacat cctccaatac agcctacatg 300

cagttgagca gcctgacatc tgaagactct gcagtctatt actgtgtgaa atctgacggg 360

gcctactggg gccaaggcac cactctcaca gtctcctca 399

<210> 15 <211> 127 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 15

Met Glu Ser Gln Thr Gln Val Phe Val Phe Val Leu Leu Trp Leu Ser 15 10 15

Gly Gly Asp Gly Asp lie Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser 20 25 30

Thr Ser Leu Gly Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn 35 40 45

Val Gly lie Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 50 55 60

Lys Ala Leu lie Tyr Trp Ala Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp 65 70 75 80

Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Thr 85 90 95

Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Glu Gln Tyr Ser 100 105 110

Ser Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 115 120 125

5

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50

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65

<210> 16 <211> 133 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 16

Met Glu Arg 1

Val His Ser

Pro Gly Ala 35

His

Trp lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr

5 10

Gln

Val Gln Leu Gln Gln Ser Ala Ala Glu Leu

20

25 30

Ser

Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr

Ala Gly 15

Val Arg

lie Phe

40

45

Thr Ser Asp Arg Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60

Glu Trp lie Gly Tyr lie lie Pro Arg Asn Phe Tyr Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn 85 90 95

Thr Ala Tyr

Tyr Tyr Cys 115

Met 100

Gln Leu Ser Ser Leu 105 Thr Ser Glu Asp Ser 110

Val

Lys Ser Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly

Ala Val

Thr Thr

120

125

Leu Thr Val Ser Ser 130

<210> 17 <211> 393 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 17

atgaagttgc

gttgtgatga

tcttgttggt

ctgcagaagc

ggggtcccag

agagtggagg

acgttcggat

ctgttaggct

gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagtagtgat 60

cccaaactcc

actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120

ctagtcagag

ccttgtagac agttatggaa acacctattt acattggtat 180

caggccagtc

tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240

acaggttcag

tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300

ctgaggatct

gggaatttac ttttgctctc aaactacata tgttccgtat 360

cggggaccaa

gctggaaatg aaa 393

5

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65

<210> 18 <211> 420 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 18

atggaatgga cctgggtctt tctcttcctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag 60

gttcagctgc accagtctgg agctgagctg atgaagcctg gggcctcagt gaagatatcc 120

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gctaaattca agggcaaggc caccttcact gcagcaacat cctccaacac agcctacatg 300

caactcagca gtgtgacatc tgaagactct gccgtctatt tctgtgcaac ctggtacgat 360

gttaactacc gctatcttat ggactattgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 420

<210> 19 <211> 131 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 19

Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp lie Pro Ala 15 10 15

imagen3

<210> 20 <211> 140

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<212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 20

Met Glu Trp Thr Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly 15 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu His Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Ser Arg Tyr Trp lie Glu Trp lie Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu 50 55 60

Glu Trp lie Gly Glu Phe Leu Pro Gly Ser Gly Asn Ser Asn Tyr Asn 65 70 75 80

Ala Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Ala Thr Ser Ser Asn 85 90 95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Val Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110

Tyr Phe Cys Ala Thr Trp Tyr Asp Val Asn Tyr Arg Tyr Leu Met Asp 115 120 125

Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135 140

<210> 21 <211> 393 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 21

atgaagttgc

attgtgatga

tcttgcaggt

ctgcagaagc

ggggtccccg

agagtggagg

acgttcggat

ctgttaggct

gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60

cccaaactcc

actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120

ctagtcagag

ccttgtacgc agtaatggga acacctattt acattggtac 180

caggccagtc

tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240

acaggttcag

tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300

ctgaggatct

gggagtttat ttctgctctc aaagtacaca tgttccgtat 360

cggggaccaa

gctggaaata aaa 393

5

10

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65

<210> 22 <211> 420 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 22 atggaatgga

gttcagctgc

tgcaaggcta

ggacatggcc

gagaacttca

caactcaaca

ggtaattacc

<210> 23 <211> 131 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 23

Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp lie Pro Ala 15 10 15

cctgggtctt

tctcttcctc ctgtcagtaa ccgcaggtgt ccactcccag 60

agcagtctgg

agctgtactg atgaagcctg gggcctcagt gaagatatcc 120

ctggctacac

attcattagg tactggatag agtgggtaaa gaagaggcct 180

ttgactggat

tggagaaatt ttacctggaa gtggaagttc taactacaat 240

aggtcaaggc

cactttcact gtagatactt cctccaacac agcctacatg 300

gcctgacatc

tcaggactct gccgtctatt actgtgcaat ttggtacgat 360

gctctcttat

ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 420

Ser Ser Ser Asp lie Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val 20 25 30

Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu 35 40 45

Val Arg Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro 50 55 60

Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 65 70 75 80

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95

Leu Lys lie

Ser Gln Ser 115

Ser

Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr

100

105 110

Thr

His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Ser Gly

Thr

120 125

Phe Cys

Lys Leu

Glu lie Lys 130

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<210> 24 <211> 140 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 24

Met Glu Trp Thr Trp Val Phe Leu 1 5

Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln 20

Gln Ser Gly Ala Val Leu Met Lys 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

lie Arg Tyr Trp lie Glu Trp Val Lys Lys Arg Pro Gly His Gly Leu 50 55 60

Asp Trp lie Gly Glu lie Leu Pro Gly Ser Gly Ser Ser Asn Tyr Asn 65 70 75 80

Glu Asn Phe Lys Val Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Asn 85 90 95

Thr Ala Tyr

Tyr Tyr Cys 115

Tyr Trp Gly 130

<210> 25 <211> 393 <212> ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 25

Met

Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Gln Asp Ser

100

105 110

Ala

lie Trp Tyr Asp Gly Asn Tyr Arg Ser Leu

120 125

Gln

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

135 140

Ala Val

Met Asp

atgaagttgc attgtgatga tcttgcaggt ctgcagaagc ggggtccccg agagtggagg acgttcggat <210> 26

ctgttaggct

gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60

cccaaactcc

actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120

ctagtcagag

ccttgtacgc agtaatggaa acacctattt acattggtac 180

caggccagtc

tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240

acaggttcag

tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300

ctgaggatct

gggagtttat ttctgctctc aaagtacaca tgttccgtat 360

cggggaccaa

gctggaaata aaa 393

5

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<211> 420 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 26

atggaatgga cctgggtctt tctcttcctc gttcagctgc agcagtctgg agctgtactg tgcaaggcta ctggctacac attcattagg ggacatggcc ttgactggat tggagaaatt gagaacttca aggtcaaggc cactttcact caactcaaca gcctgacatc tcaggactct ggtaattacc gctctcttat ggactactgg

ctgtcagtaa ccgcaggtgt ccactcccag atgaagcctg gggcctcagt gaagatatcc tactggatag agtgggtaaa gaagaggcct ttacctggaa gtggaagttc taactacaat gtagatactt cctccaacac agcctacatg gccgtctatt actgtgcaat ttggtacgat ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca

<210> 27 <211> 131 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 27

imagen4

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<210> 28 <211> 140 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 28

Met Glu Trp 1

Val His Ser

Pro Gly Ala 35

Thr

Trp Val Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val

Thr

5 10

Gln

Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Val Leu

20

25 30

Ser

Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr

Ala Gly 15

Met Lys

Thr Phe

40

45

lie Arg Tyr Trp lie Glu Trp Val Lys Lys Arg Pro Gly His Gly Leu 50 55 60

Asp Trp lie Gly Glu lie Leu Pro Gly Ser Gly Ser Ser Asn Tyr Asn 65 70 75 80

Glu Asn Phe Lys Val Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Asn 85 90 95

Met

Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Gln Asp Ser

100

105 110

Ala

lie Trp Tyr Asp Gly Asn Tyr Arg Ser Leu

120 125

Gln

Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

135 140

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Gln Asp Ser Ala Val

Tyr Tyr Cys Ala lie Trp Tyr Asp Gly Asn Tyr Arg Ser Leu Met Asp 115

Tyr Trp Gly 130

<210> 29 <211> 381 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 29

atgagtgtgc ccactcaggt cctggcattg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt

gatatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc

atcacatgtc gagcaagtgg gaatattcac aattatttag catggtatca gcagaaacag

ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat gcaaaaacct tagcggaagg tgtgccatca

aggttcagtg gcagtggatc aggaacacaa tattctctca agatcaacag cctgcagcct

gaggattttg ggacttatta ctgtcttcat tattacaata ttccgctcac gttcggtgct gggaccacgc tggagctgaa a

60

120

180

240

300

360

381

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

<210> 30 <211> 414 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 30

atgagagtgc

cagcttcagg

actgtcactg

ggaaacaaac

tctctcaaaa

ctggattctg

acctactctg

tgattctttt

gtggctgttc acagcctttc ctggtttcct gtctgatgtg 60

agtcaggacc

tggcctggtg aaaccttctc agtctctgtc cgtcacctgc 120

gctactccat

catcagtggt tattactgga actggatccg gcagtttcca 180

tggagtggct

gggctccata cacaacagtg gtcgcactaa ctacaatcca 240

gtcgaatctc

tatcagtcga gacacatcca agaaccaatt cttcctgcag 300

tgactactga

ggacacagcc acatattact gtcacttggg ggacgatggt 360

ctatggacta

ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 414

<210> 31 <211> 127 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 31

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Ala Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 15 10 15

Asp Ala Arg Cys Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser 20 25 30

Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn 35 40 45

lie His Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro 50 55 60

Gln Leu Leu Val Tyr Asn Ala Lys Thr Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser 65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys lie Asn 85 90 95

Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Gly Thr Tyr Tyr Cys Leu His Tyr Tyr 100 105 110

Asn lie Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Glu Leu Lys 115 120 125

<210> 32 <211> 138

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

<212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 32

imagen5

<210> 33 <211> 381 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 33

atgaggaccc ctgctcagtt tcttggaatc ttgttgctct ggtttccagg tatcaagtgt 60

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aggttcagtg gcagtggatc tggacaagat tattctctca ccatcagcag cctggagtat 300

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5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

gactgaactg

tgtattcata gtttttctct taaaaggtgt ccagagtgaa 60

aggagtctgg

aggaggcttg gtacaacctg gaggatccat gaaactctcc 120

ctggattcat

tttcagtaac tactggatgg actggatccg ccagtctcca 180

ttgagtgggt

tgctcaaatt agattgagat ctaataatta tgcgacacat 240

ctttgaaagg

gaggttcacc atctcaagag atgattccaa aagtactgtc 300

tgaacagttt

aagaactgaa gactctggca tttattactg tacgaggact 360

cacccagcta

ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 414

<211> 414 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 34

atgtacttgg

gtgaaacttg

tgtgttgcct

gagaagggac

tatgcggagt

tacctgcaaa

atgattacga

<210> 35 <211> 127 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 35

Met Arg Thr Pro Ala Gln Phe Leu Gly lie Leu Leu Leu Trp Phe Pro 15 10 15

Gly lie Lys Cys Asp lie Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Tyr 20 25 30

Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr lie Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp 35 40 45

lie Asn Arg Tyr Leu Ser Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Lys Ser Pro 50 55 60

Lys Thr Leu 65

Arg Phe Ser

Ser Leu Glu

Glu Phe Pro 115

lie

Tyr Arg Thr Asn Arg Leu Val Asp Gly Val Pro Ser

70 75 80

Gly

Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser

85 90 95

Tyr

Glu Asp Leu Gly lie Tyr Tyr Cys Leu His Tyr Ala

100

105 110

Pro

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys

120

125

<210> 36 <211> 138 <212> PRT

5

10

15

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25

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50

55

60

65

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 36

Met Tyr Leu Gly Leu Asn Cys Val Phe lie Val Phe Leu Leu Lys Gly 15 10 15

Val Gln Ser Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30

Pro Gly Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe lie Phe 35 40 45

Ser Asn Tyr Trp Met Asp Trp lie Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60

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Tyr Ala Glu Ser Leu Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asp Ser 85 90 95

Lys Ser Thr

Gly lie Tyr 115

Gly Gln Gly 130

<210> 37 <211> 381 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 37

Val 100

Tyr Leu Gln Met Asn 105 Ser Leu Arg Thr Glu 110

Tyr

Cys Thr Arg Thr 120 Met lie Thr Thr Pro 125 Ser

Thr

Thr

Leu Thr 135 Val Ser Ser

Asp Ser

Tyr Trp

atgagtgtgc gatatccaga atcacatgtc ggaaaatctc aggttcagtg gcggattttg gggaccaagc <210> 38

ccactcaggt

cctggcattg ctgctgctgt ggcttacaga tgccagatgt 60

tgactcagtc

tccagcctcc ctatctgcat ctgtgggaga aactgtcacc 120

gagcaagtgg

gaatattcac aattatttag catggtatca gcagaaacag 180

ctcagctcct

ggtctataat acaaaatcct tggcggaagg tgtgccatca 240

gcagtggatc

aggaacacaa tattctctca agatctacag cctgcagcct 300

gggcttatta

ctgtcttcat tattataata ctccgctcac tttcggtgct 360

tagagctgag

a 381

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

<211> 414 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 38

atgagagtgc

cagcttcagg

actgtcactg

ggaaacaaac

tctctcaaaa

ttgagttctg

acctcctatg

tgattctttt

gtggctgttc acagcctttc ctggtatcct gtctgatgtg 60

agtcaggacc

tggcctggtg aaaccttctc agtctctgtc cgtcacctgc 120

gcttctccat

caccagtggt tattactgga actggatccg gcagtttcca 180

tggagtggat

gggctacata cacaacagtg gtcgcactaa ctacaatcca 240

gtcgaatctc

tatcactcga gacacatcca aaaaccagtt cttcctgcag 300

tgactaatgc

ggacacagcc acatattact gtcacttggg ggacgatggt 360

ctatggacta

ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 414

<210> 39 <211> 127 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo

<400> 39

Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Ala Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 15 10 15

Asp Ala Arg Cys Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser

20 25 30

Ala Ser Val Gly Glu Thr Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn 35 40 45

lie His Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro 50 55 60

Gln Leu Leu Val Tyr Asn Thr Lys Ser Leu Ala Glu Gly Val Pro Ser 65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys lie Tyr 85 90 95

Ser Leu Gln Pro Ala Asp Phe Gly Ala Tyr Tyr Cys Leu His Tyr Tyr 100 105 110

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5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

<210> 40 <211> 138 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 40

Met Arg Val Leu lie Leu Leu Trp Leu Phe Thr Ala Phe Pro Gly lie 15 10 15

Leu Ser Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro 20 25 30

Ser Gln Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Thr Gly Phe Ser lie Thr 35 40 45

Ser Gly Tyr Tyr Trp Asn Trp lie Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu 50 55 60

Glu Trp Met Gly Tyr lie His Asn Ser Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Pro 65 70 75 80

Ser Leu Lys Ser Arg lie Ser lie Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln 85 90 95

Phe Phe Leu Gln Leu Ser Ser Val Thr Asn Ala Asp Thr Ala Thr Tyr 100 105 110

Tyr Cys His Leu Gly Asp Asp Gly Thr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp 115 120 125

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 130 135

<210> 41 <211> 384 <212> ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

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atggattttc

agaggacaaa

atcaccctaa

tcaggcactt

tctcgcttca

gctgaagatg

ggggggacca

aggtgcagat

tttcagcttc ctgctaatca gtgcctcagt catactgtcc 60

ttgttctcac

ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctct gggggaggag 120

cctgcagtgc

cagctcgagt gtaaattaca tgcactggta ccagcagaag 180

ctcccaaact

cttgatttat agcacatcca acctggcttc tggagtccct 240

gtggcagtgg

gtctgggacc ttttattctc tcacaatcag cagtgtggag 300

ctgccgatta

ttactgccat cagtggagta gttatccgta cacgttcgga 360

agctggaaat

aaaa 384

<210> 42 <211> 408

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

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65

<212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 42

atggaatgga gttggatatt tctctttctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccactctgag

gtccagttgc agcagtctgg acctgagctg gtaaagcctg gggcttcagt gaagatgtcc

tgcaaggctt ctggatacac attcactaac tatgttattt actgggtgaa gcagaagcct

gggcagggcc ttgagtggat tggatatatt aatccttaca atgatggtac taagtacaat

gagaagttca aaggcaaggc cacactgact gcagacaaat cctccagcac agcctacatg

gagctcagta gcctgacctc tgaggactct gcggtctatt actgtgcctg taacttcctc

tatgctatgg actactgggg tcaaggaacc tcagtcaccg tctcctca

<210> 43 <211> 128 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 43

Met Asp Phe Gln Val Gln lie Phe Ser Phe Leu Leu lie Ser Ala Ser 15 10 15

Val lie Leu Ser Arg Gly Gln lie Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala lie 20 25 30

Met Ser Ala Ser Leu Gly Glu Glu lie Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser 35 40 45

Ser Ser Val Asn Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser 50 55 60

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 65 70 75 80

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Phe Tyr Ser Leu Thr lie 85 90 95

Ser Ser Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Asp Tyr Tyr Cys His Gln Trp 100 105 110

Ser Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 115 120 125

<210> 44 <211> 136 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial

60

120

180

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5

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55

60

65

<220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 44

Met Glu Trp Ser Trp lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr 15 10

Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr 35 40 45

Thr Asn Tyr Val lie Tyr Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln 50 55 60

Ala Gly 15

Val Lys Thr Phe Gly Leu

Glu Trp 65

Glu Lys

Thr Ala

Tyr Tyr

Gly Thr 130

lie

Gly Tyr lie 70 Asn Pro Tyr Asn Asp 75 Gly Thr Lys

Phe

Lys Gly 85 Lys Ala Thr Leu Thr 90 Ala Asp Lys Ser

Tyr

Met 100 Glu Leu Ser Ser Leu 105 Thr Ser Glu Asp Ser 110

Cys 115

Ala Cys Asn Phe Leu 120 Tyr Ala Met Asp Tyr 125 Trp

Ser

Val Thr Val Ser 135 Ser

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Ala Val

Gly Gln

<210> 45 <211> 381 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 45

atggagtcac

gacattgtga

atcacctgca

ggacaatctc

cgcttcacag

gaagacctgg

gggaccaagc

agattcaggc

atttgtattc gtgtttctct ggttgtctgg tgttgacgga 60

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aggccagtca

ggatgtgaat actgctgtag cctggtatca aaaaaaatta 180

ctaaactgct

gatttattgg gcatccaccc ggcacactgg agtccctgat 240

gcagtggatc

tgggacagat tatactctca ccatcagcag tgtgcaggct 300

cactttatta

ctgtcagcaa cattatagca ctccgtacac gttcggaggg 360

tggaaataaa

a 381

<210> 46 <211> 411

5

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55

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65

<212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 46

atgggatgga gctatatcat cctctttttg gtagcaacag ctacagatgt ccactcccag

gtccaactgc agcagcctgg ggctgaactg gtgacgcctg gggcttcagt gaagctgtcc

tgcaaggctt ctggctacac cttcaccagc tactggatgc actgggtgaa gcagaggcct

ggacaaggcc ttgagtggat tggagagatt aatcctggca acggtcgtac taactacaat

gataatttca tgatcagggc cacactgact gtggacaaat cctccagcac agcctacatg caactcagca gcctgacatc tgaggactct gcggtctatt actgtgcaag aagcctctac

ggtaccctct ttgcttcctg gggccaaggg actctggtca ctgtctctgc a

<210> 47 <211> 127 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 47

Met Glu Ser Gln lie Gln Ala Phe Val Phe Val Phe Leu Trp Leu Ser 15 10 15

Gly Val Asp Gly Asp lie Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser 20 25 30

Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser lie Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp 35 40 45

Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Lys Lys Leu Gly Gln Ser Pro 50 55 60

Lys Leu Leu lie Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp 65 70 75 80

Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser 85 90 95

Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr 100 105 110

Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 115 120 125

<210> 48 <211> 137 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

60

120

180

240

300

360

411

5

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50

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60

65

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 48

Met Gly Trp Ser Tyr lie lie Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Asp 15 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Thr 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Thr Ser Tyr Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60

Glu Trp lie Gly Glu lie Asn Pro Gly Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80

Asp Asn Phe Met lie Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser 85 90 95

Thr Ala Tyr

Tyr Tyr Cys 115

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Met 100

Gln Leu Ser Ser Leu 105 Thr Ser Glu Asp Ser 110

Ala

Arg Ser Leu Tyr 120 Gly Thr Leu Phe Ala 125 Ser

Leu

Val Thr Val 135 Ser Ala

Ala Val

Trp Gly

<210> 49 <211> 393 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 49

atggagacag acacactcct gctatgggtg ctgctgctct gggttccagg ttccactggt gacattgtac tgacacagtc tcctgtttcc ttaactattt ctctgggcca gagggccacc atctcatgca gggccagcca aagtgtcagt gcatctagct atagttatat gcactggtac caacagaaag caggacagcc acccaaactc ctcatcaagt atgcatccaa cctagaatct ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat cctgtggagg aggcggatac tgcaacatac tactgtcaac acaattggga ggttcctccg acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aag

<210> 50 <211> 423 <212> ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

60

120

180

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5

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30

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50

55

60

65

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 50

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gtgcagttgg tggagtctgg gggaggctta gtgcagcctg gagggtcccg gaaactctcc 120

tgtgcagcct ctggattcac gttcagtagc tttggaatgc actgggttcg tcaggctcca 180

gagaaggggc tggaatgggt cgcatatatt agtagtggca gtagtaccat ctactataga 240

gacacagtga agggccgatt caccatctcc agagacaatc ccaagaacac cctgttcctg 300

caaatgacca gtctaaggtc tgaggacacg gccatgtatt actgtgcaag agggggggta 360

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tea 423

<210> 51 <211> 131 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 51

imagen6

5

10

15

20

25

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35

40

45

50

55

60

65

<210> 52 <211> 141 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 52

Met Asp Ser Arg Leu Asn Leu Val Phe Leu Val Leu Val Leu Lys Gly 15 10 15

Val Gln Cys Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30

Pro Gly Gly Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45

Ser Ser Phe Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu 50 55 60

Glu Trp Val Ala Tyr lie Ser Ser Gly Ser Ser Thr lie Tyr Tyr Arg 65 70 75 80

Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn 85 90 95

Thr Leu Phe

Tyr Tyr Cys 115

Asp Tyr Trp 130

Leu

Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met

100

105 110

Ala

Arg Gly Gly Val Val Val Ser Lys Asp Gly Asn Phe

120 125

Gly

Gln Gly Thr Thr Leu Ala Val Ser Ser

135 140

<210> 53 <211> 381 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 53

atgatgtcct

gatatccaga

aycagttgca

gatggaactg

ctgctcagtt

ccttggyctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60

tgacacagac

tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 120

gtgcaagtca

gggcattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 180

ttaaactcct

gatctattac acatcaagtt tacactcagg agtcccatca 240

5

10

15

20

25

30

35

40

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50

55

60

65

aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagat tattctctca ccatcagcaa cctggaacct 300 gaagatattg ccacttacta ttgtcagcag tatagtaagc ttccgtacac gttcggaggg 360 gggaccaaac tggaaataaa a 381

<210> 54 <211> 399 <212>ADN

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 54

atggaaaggc actggatctt tctcttcctg ttgtcagtaa ctgcaggtgt ccactcccag 60

gtccaactgc agcagtctgc ggctgaactg gtaagacctg gggcctcagt gaagatgtcc 120

tgcaagactt ctggctacat cttcactagc gaccggatgc actgggtaaa acagaggcct 180

ggacagggtc tggagtggat tggatacatt attcctagaa atttttatac taaatacaat 240

cagaaattca aggacaaggc cacattgact gcagacacat cctccaatac agcctacatg 300

cagttgagca gcctgacatc tgaagactct gcagtctatt actgtgtgaa atctgacggg 360

gcctactggg gccaaggcac cactctcaca gtctcctca 399

<210> 55 <211> 127 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <220>

<221> misc_feature <222> (41)..(41)

<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 55

imagen7

lie

Ser Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val 50 55 60

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

Lys Leu Leu lie Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser 65 70 75 80

Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lie Ser 85 90 95

Asn Leu Glu Pro Glu Asp lie Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser 100 105 110

Lys Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 115 120 125

<210> 56 <211> 133 <212> PRT

<213> Secuencia Artificial <220>

<223> Secuencia de anticuerpo <400> 56

Met Glu Arg His Trp lie Phe Leu Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly 15 10 15

Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Ala Ala Glu Leu Val Arg 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lie Phe 35 40 45

Thr Ser Asp Arg Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu 50 55 60

Glu Trp lie Gly Tyr lie lie Pro Arg Asn Phe Tyr Thr Lys Tyr Asn 65 70 75 80

Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn 85 90 95

Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110

Tyr Tyr Cys Val Lys Ser Asp Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 115 120 125

Leu Thr Val Ser Ser 130

Claims (15)

1. 5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   55

   60

   65

   REIVINDICACIONES

   1. Un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión de este, que se une a la quetiapina y que es un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión de este, que se selecciona de un grupo que se compone de:

   a) un anticuerpo aislado, o un fragmento de unión de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ iD NO:19 (o identificador de secuencia n° 19) y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:20;

   b) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:23 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:24; o

   c) un anticuerpo aislado, o un fragmento de este, que comprende una región variable de una cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:27 y una región variable de una cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:28.
2. 2. El anticuerpo de la reivindicación 1, de manera que:

   a) la secuencia CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 43 a 58 de SEQ ID NO:19;

   b) la secuencia CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de SEQ ID NO:19;

   c) la secuencia CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de SEQ ID NO:19;

   d) la secuencia CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de SEQ ID NO:20;

   e) la secuencia CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de SEQ ID NO:20; y

   f) la secuencia CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 118 a 129 de SEQ ID NO:20.
3. 3. El anticuerpo de la reivindicación 1, de manera que:

   a) la secuencia CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 43 a 58 de SEQ ID NO:23;

   b) la secuencia CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de SEQ ID NO:23;

   c) la secuencia CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de SEQ ID NO:23;

   d) la secuencia CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de SEQ ID NO:24;

   e) la secuencia CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de SEQ ID NO:24; y

   f) la secuencia CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 123 a 129 de SEQ ID NO:24.
4. 4. El anticuerpo de la reivindicación 1, de manera que:

   a) la secuencia CDR1 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 43 a 58 de SEQ ID NO:27;

   b) la secuencia CDR2 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 74 a 80 de SEQ ID NO:27;

   c) la secuencia CDR3 de la cadena ligera comprende los residuos de aminoácidos 113 a 121 de SEQ ID NO:27;

   d) la secuencia CDR1 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 45 a 54 de SEQ ID NO:28;

   e) la secuencia CDR2 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 69 a 85 de SEQ ID NO:28; y

   f) la secuencia CDR3 de la cadena pesada comprende los residuos de aminoácidos 123 a 129 de SEQ ID NO:28.
5. 5. El anticuerpo de la reivindicación 1, de manera que el fragmento de anticuerpo se selecciona de un grupo de fragmentos que consta de fragmentos de Fv, F(ab'), F(ab')2, scFv, minicuerpos y diacuerpos.
6. 6. El anticuerpo de la reivindicación 1, de manera que el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal.
7. 7. Un kit de ensayo que contiene el anticuerpo de la reivindicación 1.

   5

   10

   15

   20

   25

   30

   35

   40

   45

   50

   55

   60

   65
8. 8. Un dispositivo de ensayo que contiene el anticuerpo de la reivindicación 1.
9. 9. El dispositivo de ensayo de la reivindicación 8, de manera que el dispositivo es un dispositivo de ensayo de flujo lateral.
10. 10. Un método para detectar quetiapina en una muestra, de manera que el método incluye:

    (i) poner en contacto una muestra y un anticuerpo de la reivindicación 1 que está marcado con un marcador detectable, de manera que el anticuerpo marcado y la quetiapina presente en la muestra forman un compuesto marcado; y

    (ii) detectar el compuesto marcado a fin de detectar la quetiapina presente en la muestra.
11. 11. Un método de inmunoensayo competitivo para detectar quetiapina en una muestra, de manera que el método incluye:

    (i) poner en contacto una muestra con el anticuerpo de la reivindicación 1, y con quetiapina o con un acompañante de unión competitiva de la quetiapina, de manera que el anticuerpo o la quetiapina -o el acompañante de unión competitiva de esta- se marca con un marcador detectable, y de manera que la quetiapina de la muestra compite con la quetiapina -o con un acompañante de unión competitiva de esta- para unirse con el anticuerpo; y

    (ii) detectar el marcador a fin de detectar la quetiapina de la muestra.
12. 12. El método de la reivindicación 11, de manera que:

    (i) la quetiapina, o el acompañante de unión competitiva de esta, se marca con el marcador detectable;

    (ii) el anticuerpo se marca con un marcador detectable; o

    (iii) el inmunoensayo se realiza en un dispositivo de ensayo de flujo lateral y la muestra se deposita en el dispositivo.
13. 13. El método de la reivindicación 10 u 11, que además incluye detectar la presencia de uno o más analitos además de la quetiapina.
14. 14. El método de la reivindicación 13, de manera que los analitos -uno o más- son otros fármacos o medicamentos antipsicóticos aparte de la quetiapina.
15. 15. El método de la reivindicación 14, de manera que los fármacos antipsicóticos aparte de la quetiapina se seleccionan de un grupo que consta de los siguientes: risperidona, paliperidona, aripiprazol, olanzapina y metabolitos de estos compuestos.