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ES2646444T3 - Composiciones antiinflamatorias que comprenden malvidin-3-O-beta glucósido y un extracto de propóleo - Google Patents

Composiciones antiinflamatorias que comprenden malvidin-3-O-beta glucósido y un extracto de propóleo Download PDF

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ES2646444T3 ES12756729.5T ES12756729T ES2646444T3 ES 2646444 T3 ES2646444 T3 ES 2646444T3 ES 12756729 T ES12756729 T ES 12756729T ES 2646444 T3 ES2646444 T3 ES 2646444T3
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Abstract

Composición antiinflamatoria, que comprende: a. un extracto vegetal que comprende al menos 5% en peso, preferiblemente de 5 a 20% en peso, ventajosamente de 5 a 15% en peso, de malvidin-3-O-b-glucósido; y b. un extracto de propóleo que comprende ácido cafeico o uno de sus ésteres, ácido ferúlico, galangina y pinocembrina; y una proporción en peso a/b de extracto vegetal/extracto de propóleo que va de 1/4 a 4/1.

Description

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[0127] El FlowCytomix humano es un sistema de inmunoensayo con microesferas fluorescentes para la detección cuantitativa por citometría de flujo de interferón-γ, interleucina-1β, interleucina-2, interleucina-4, interleucina-5, interleucina-6, interleucina-8, interleucina-10, interleucina-12p70 y el factor α y β de necrosis tumoral en los sobrenadantes de cultivo.
5 [0128] Las microesferas se recubrieron con anticuerpos dirigidos específicamente contra cada citocina detectados por el sistema multiplex. Las microesferas pueden ser diferenciadas por su tamaño y su emisión espectral. Una mezcla de cada microesfera recubierta para cada citocina se incubó con la muestra o el intervalo de patrón. Las citocinas presentes en la muestra se unen al anticuerpo unido a la microesfera fluorescente. Un segundo anticuerpo
10 acoplado a la biotina se añadió a la mezcla, este anticuerpo específico se une a la citocina capturada por el primer anticuerpo.
[0129] Se añadió estreptavidina-ficoeritrina, se une al conjugado de biotina y emite una señal fluorescente.
15 [0130] Ensayo de la prostaglandina E2: Las rutas de transducción de la señal de los eicosanoides son altamente conservadas y están implicadas en muchos procesos fisiopatológicos. Las prostaglandinas se sintetizan a partir del ácido araquidónico por las ciclooxigenasas (COX-1 y COX-2), que convierte el ácido en prostaglandina H2 (PGH2). Esta última se transforma a continuación por prostaglandina sintasas microsomales o citosólicas en prostaglandinas E2 (PGE2) o en varios otros prostanoides.
20 [0131] La PGE2 se produce por una amplia variedad de tejidos y en muchas afecciones patofisiológicas, incluyendo inflamación, artritis, fiebre, tejido dañado, endometriosis y muchos tipos de cáncer.
[0132] La PGE2 se ensayó en los sobrenadantes de cultivo usando un kit de ensayo ELISA (Tebu-Bio, Le Perray en 25 Yvelines, Francia).
[0133] Cuarenta y ocho horas después de la activación por LPS de PBMC, se muestrean 100 µl de sobrenadante celular y se ensayan inmediatamente para la determinación de PGE2.
30 [0134] La Tabla 1 presenta los resultados obtenidos y muestra los efectos de diferentes composiciones sobre la tasa de mediadores proinflamatorios.
Tabla 1
Compuesto
µg/ml TNF-α* IL-1β IL-6 PGE2 IL-10 IL-8 IFN-γ NO
Anthos-vin
8 72 70 67 - 0 51 0 0
16
66 70 67 - 5 66 0 0
33
63 72 69 - 41 69 39 0
Extracto de propóleo
25 16 32 27 - 50 3 100 15
50
55 52 55 - 100 2 100 55
100
97 87 92 - 100 27 94 90
Extracto de arándanos
25 15 5 7 - 0 6 5 0
50
20 4 0 - 0 6 0 0
100
31 9 0 - 0 11 16 0
Anthos-vin + extracto de propóleo
8 + 25 0 75 34 40 71 11 - -
16 + 50
50 92 82 64 94 0 - -
33 + 100
73 98 98 94 100 39 - -
Anthos-vin + extracto de propóleo + extracto de arándanos
8 + 25 + 25 0 76 72 61 98 0 94 -
16 + 50 + 50
100 99 97 76 100 0 100 -
33 + 100 + 100
95 99 99 82 100 41 89 -
*Porcentaje de inhibición en relación con las células activadas en ausencia de extractos
[0135] Estos resultados muestran que la composición según la invención que asocian Anthos-vin y propóleo tiene un efecto antiinflamatorio mejor en general las que comprenden Anthos-vin o propóleo solos.
11
imagen10
Genes
Nombres Regulado por incremento Regulado por disminución
IL1B
interleucina 1, beta -116,81
IL1A
interleucina 1, alfa -57,20
C3
componente de complemento 3 -45,82
IL6
interleucina 6 (interferón, beta 2) -40,73
CCL3
ligando 3 de quimiocina (unidad C-C) -21,53
IL1RN
antagonista de receptor de interleucina 1 -18,74
IL8
interleucina 8 -5,23
TGFB2
factor de crecimiento transformante, beta 2 +17,78
HSP90AA2
proteína de choque térmico de 90 kDa alfa (citosólica), miembro 2 de la clase A +12,75
HSPB1
proteína 1 de choque térmico de27 kDa +11,41
HSP90AB1
proteína de choque térmico de 90 kDa alfa (citosólica), miembro 1 de la clase B +8,77
TNF
factor de necrosistumoral (superfamilia de TNF, miembro 2) +8,47
BAX
proteína X asociada a BCL-2 +6,24
IFNA2
interferón, alfa 2 +5,99
SOD1
superóxido dismutasa 1, soluble (esclerosis lateral amiotrófica 1 (adulto)) +5,00
BCL2
CLL/linfoma 2 de células B +3,19
IL2
interleucina 2 +3,49
[0151] Los resultados muestran que los genes relacionados con la inflamación son en su mayoría inhibidos (IL-1, C3, IL-6 y IL-8).
5 [0152] Además, en presencia de una composición según la invención, aumenta la transcripción de TGFβ2 y de interferón-α, que son dos moléculas bien conocidas por su acción antiinflamatoria.
[0153] Además, los resultados también muestran que el ARN que codifica las proteínas de protección de las células (HSP, DAX, BCL-2, SOD1) se incrementa, lo que confirma la ausencia de toxicidad de la composición según la 10 invención en las células humanas.
Ejemplo 12: Estudio de la actividad antiinflamatoria in vivo de una composición según la invención.
[0154] Este estudio se realizó con el objetivo de confirmar los resultados del estudio in vitro. Para esto, se ensayaron
15 varias composiciones in vivo según la invención en el modelo de rata artrítica. Este modelo consiste en el desarrollo de un ataque de inflamación crónica en ratas jóvenes mediante la inyección de antígeno bacteriano. Este modelo tiene la ventaja de tener muchas similitudes con los síntomas de la poliartritis reumatoide en seres humanos: simetría en las articulaciones implicadas, articulaciones periféricas que están afectadas preferentemente, hiperplasia sinovial, infiltración de células inflamatorias, erosión marginal y mayor susceptibilidad a la enfermedad en las
20 mujeres. A diferencia de la poliartritis reumatoide humana, no se detectan trazas de factores reumatoides en el suero.
[0155] Cabe señalar que la afección inflamatoria de las ratas es muy avanzado (en comparación con los seres humanos) y requiere dosis terapéuticas 10-20 veces mayor que las utilizadas en los seres humanos (ensayos 25 llevados a cabo con corticoterapia), especialmente por la vía oral.
[0156] Se inmunizaron ratas de Lewis hembras de seis semanas de vida mediante inyección intradérmica en la base de la cola, de 60 mg de Mycobacterium butyricum muerto por calor y emulsionado en una solución oleosa.
13
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imagen12

Claims (1)

  1. imagen1
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