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ES2583652T3 - Composición que comprende un extracto de hierbas para la prevención o el tratamiento de trastornos neurodegenerativos - Google Patents

Composición que comprende un extracto de hierbas para la prevención o el tratamiento de trastornos neurodegenerativos Download PDF

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ES2583652T3
ES2583652T3 ES11861135.9T ES11861135T ES2583652T3 ES 2583652 T3 ES2583652 T3 ES 2583652T3 ES 11861135 T ES11861135 T ES 11861135T ES 2583652 T3 ES2583652 T3 ES 2583652T3
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rhizoma
nipponica
prevention
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Mi-Won Son
Sang-Zin Choi
Hye-Ju Kim
Ja-Young RYU
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Dong-A ST Co Ltd
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Dong A ST Co Ltd
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Abstract

Una composición farmacéutica para su uso en la prevención o el tratamiento de trastornos neurodegenerativos, que comprende extractos herbarios mixtos de Dioscorea Rhizoma y Dioscorea nipponica en una relación en peso de 3,5:1 (p/p) como principio activo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que la Dioscorea Rhizoma es un rizoma fresco de Dioscorea batatas Decaisne o Dioscorea japonica Thunberg, o un rizoma fresco de Dioscorea batatas Decaisne o Dioscorea japonica Thunberg que se ha tratado con vapor y secado.

Description

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<Ejemplo experimental 1> Efecto de los extractos herbarios sobre el aumento de la secreción del factor de crecimiento nervioso
Los efectos del aumento y potenciación de la secreción del NGF por el Ejemplo 1 se identificaron usando glioma C6, 5 una cepa de células de neuroglioma de ratas que producen NGF. Los ejemplos comparativos 1 a 10 eran los grupos de control de este experimento.
Se cultivaron células C6 en placas de cultivo celular de 24 pocillos con medio DMEM (añadiendo FBS al 5 %, Lglutamina 2 mM, HEPES 10 mM, piruvato sódico 1 mM, 50 µg de estreptomicina, 100 U/ml de penicilina;) a 37 ºC y
10 en CO2 al 5 %. Tras ajustar las células cultivadas a concentraciones de 2 x 105 células/pocillo, el Ejemplo 1, los Ejemplos Comparativos 1 a 10 se trataron con 100, 250, y 500 µg/ml. En las mismas condiciones de cultivo, las células se cultivaron durante 2 días y después se midió la concentración de NGF en el medio usando ELISA. (Véase la Tabla 5).
15 Tabla 5
[Tabla 5]
Efectos sobre el aumento de la secreción del NGF
D.Rhizoma:D.nipponica en comparación con el peso total
Concentración (µg/ml) Concentración de NGF (% de control)
Ejemplo 1
3,5:1 100 122
250
149
500
156
Ejemplo Comparativo 1
Extracto bruto de D. Rhizoma 100 112
250
126
500
135
Ejemplo Comparativo 2
Extracto bruto de D. nipponica 100 102
250
121
500
130
Ejemplo Comparativo 3
1:1 100 108
250
124
500
141
Ejemplo Comparativo 4
2:1 100 117
250
131
500
136:
Ejemplo Comparativo 5
5:1 100 115
250
129
500
134
Ejemplo Comparativo 6
10:1 100 112
250
129
500
134
Ejemplo Comparativo 7
1:2 100 107
250
116
500
129
Ejemplo Comparativo 8
1:3,5 100 106
250
118
500
130
imagen9
Tabla 6
[Tabla 6]
Efecto sobre la mejora de las capacidades cognitivas en un ensayo de evitación pasiva
D.Rhizoma:D.nipponica en comparación con el peso total
Cantidad (mg/kg) Tiempo de latencia (s)
Grupo de control
- 166,18 ± 13,83
Ejemplo 1
3,5:1 10 220,17 ± 25,63
100
275,87 ± 25,40
Ejemplo Comparativo 1
Extracto bruto de D. Rhizoma 10 202,84 ± 19,65
100
225,28 ± 20,21
Ejemplo Comparativo 2
Extracto bruto de D. nipponica 10 199,62 ± 17,01
100
218,24 ± 18,47
Ejemplo Comparativo 3
1:1 10 194,86 ± 9,43
100
204,19 ± 10,72
Ejemplo Comparativo 4
2:1 10 202,69 ± 11,24
100
231,42 ± 16,55
Ejemplo Comparativo 5
5:1 10 211,43 ± 18,21
100
235,71 ± 21,60
Ejemplo Comparativo 6
10:1 10 205,33 ± 15,08
100
219,93 ± 16,14
Ejemplo Comparativo 7
1:2 10 186,72 ± 1061
100
204,68 ± 14,32
Ejemplo Comparativo 8
1:3,5 10 196,93 ± 16,58
100
209,61 ± 14,41
Ejemplo Comparativo 9
1:5 10 205,89 ± 12,60
100
215,99 ± 18,96
Ejemplo Comparativo 10
1:10 10 193,53 ± 16,08
100
211,74 ± 20,57
5 Como se muestran en la Tabla 6, la latencia de retención en el grupo al que se administró Dioscorea Rhizoma era mayor que en el grupo al que se administró Dioscorea nipponica, el Ejemplo 1 (D.Rhizoma:D.nipponica=155:45) aumentaba la latencia de retención de un 8,9 a un 22,2 % respecto al Ejemplo Comparativo 1 (D. Rhizoma 200), aunque al Ejemplo 1 se le administró un 25 % menos de Dioscorea Rhizoma que al Ejemplo Comparativo 1 (D. Rhizoma 200).
10 Asimismo, el tiempo de latencia de acuerdo con el Ejemplo 1 aumentó de un 4,2 a un 19 % respecto al Ejemplo Comparativo 5 (D.Rhizoma:D.nipponica = 167:33, 5:1) en el que se inyectó un 7,7 % más de Dioscorea Rhizoma y aumentó más, de aproximadamente un 7,3 a un 25,6 %, que en el Ejemplo Comparativo 6 (D.Rhizoma:D.nipponica = 182:18, 10:1) en el que se inyectó un 17,4 % más de Dioscorea Rhizoma. El tiempo de latencia de acuerdo con el
15 Ejemplo 1 aumentó de un 8,9 a un 19 % respecto al Ejemplo Comparativo 4 (D.Rhizoma:D.nipponica = 133:67, 2:1) en el que se inyectó un 14,2 % menos de Dioscorea Rhizoma. Se demostró que la memoria aumentaba significativamente con respecto a los otros Ejemplos Comparativos.
Por tanto, se ha encontrado que una composición farmacéutica para los trastornos de la presente invención que
20 comprende un extracto mixto de Dioscorea Rhizoma y Dioscorea nipponica en una relación en peso de 3,5:1 tiene el efecto de mejorar las capacidades cognitivas en comparación con otras relaciones de mezclado.
<Ejemplo experimental 3> Efecto de los extractos herbarios sobre la potenciación de la generación de neuronas
Se extirpó el hipocampo de los ratones de cada grupo una vez completado el Ejemplo experimental 2. Después de deshidratar el hipocampo extirpado con peróxido de hidrógeno, se hizo reaccionar con 5-bromo-2-desoxiuridina
5 (BrdU, Santa Cruz, producido en rata 1:500) como primer anticuerpo durante una noche. Y a continuación, se usó anti-rata biotinilada (vector, producido en cabra) como segundo anticuerpo y se desarrolló el color usando diaminobencidina tras la reacción con ABC (kit ABC, vector). El efecto de potenciación de la generación de células neuronales se identificó mediante recuento de las células BrdU positivas en el área del giro dentado del hipocampo. Los resultados se muestran en la tabla 7.
10 Tabla 7
[Tabla 7]
Efecto de potenciación de la generación de células
D.Rhizoma:D.nipponica en comparación con el peso total
Cantidad (mg/kg) Células BrdU positivas (% del control)
Ejemplo 1
3,5:1 10 153,79 ± 15,24
100
158,59 ± 9,45
Ejemplo Comparativo 1
Extracto bruto de D. Rhizoma 10 123,81 ± 10,14
100
129,42 ± 11,36
Ejemplo Comparativo 2
Extracto bruto de D. nipponica 10 118,60 ± 8,37
100
121,59 ± 8,13
Ejemplo Comparativo 3
1:1 10 124,25 ± 10,93
100
125,86 + 9,06
Ejemplo Comparativo 4
2:1 10 128,44 ± 11,65
100
136,70 ± 13,28
Ejemplo Comparativo 5
5:1 10 129,54 ± 12,91
100
134,08 ± 14,61
Ejemplo Comparativo 6
10:1 10 121,08 ± 9,54
100
128,57 ± 11,77
Ejemplo Comparativo 7
1:2 10 120,68 ± 9,27
100
124,16 ± 11,36
Ejemplo Comparativo 8
1:3,5 10 126,39 ± 11,17
100
130,28 ± 13,49
Ejemplo Comparativo 9
1:5 10 124,70 ± 10,25
100
128,06 ± 11,59
Ejemplo Comparativo 10
1:10 10 121,84 ± 13,18
100
124,12 ± 12,85
15 Como se muestra en la Tabla 7, la Dioscorea Rhizoma (Ejemplo 1) mostraba un mayor número de células BrdU positivas que la Dioscorea nipponica (Ejemplo Comparativo 2) cuando se contaron las células BrdU positivas en el área del giro dentado del hipocampo. Aunque la cantidad de Dioscorea Rhizoma inyectada en el Ejemplo 1 era un 25 % menor que en el Ejemplo Comparativo 1, el número de células BrdU positivas era aproximadamente un 25 % mayor.
20 Además, el número de células BrdU positivas era aproximadamente un 25 % mayor en el Ejemplo 1 que en el Ejemplo Comparativo 5 en el que se inyectó un 7,7 % más de Dioscorea Rhizoma que en el Ejemplo 1 y que en el Ejemplo Comparativo 6 en el que se inyectó un 17,4 % más de Dioscorea Rhizoma que en el Ejemplo 1. El número de células BrdU positivas era aproximadamente un 20 % mayor en el Ejemplo 1 que en el Ejemplo Comparativo 4 en
el que se inyectó un 14,2 % menos de Dioscorea Rhizoma que en el Ejemplo 1. Esto demostró el aumento significativo del número de células BrdU positivas con respecto a los otros Ejemplos Comparativos.
Por tanto, se ha encontrado que una composición farmacéutica para los trastornos de la presente invención que
5 comprende un extracto mixto de Dioscorea Rhizoma y Dioscorea nipponica en una relación en peso de 3,5:1 tiene el efecto de potenciar la generación de células neuronales en el área del giro dentado en comparación con otras relaciones de mezclado.
<Ejemplo experimental 4> Efecto de los extractos herbarios sobre la diferenciación de las células neuronales y la 10 potenciación del crecimiento de neuritas
Se extirpó el hipocampo de los ratones de cada grupo una vez completado el Ejemplo experimental 2. Después de deshidratar el hipocampo extirpado con peróxido de hidrógeno, se hizo reaccionar con doblecortina (DCX, Santa Cruz, producido en cabra 1:500) como primer anticuerpo durante una noche. Y a continuación, se usó anti-cabra
15 biotinilada (vector, producido en caballo) como segundo anticuerpo y se desarrolló el color usando diaminobencidina tras la reacción con ABC (kit ABC, vector). El efecto sobre la diferenciación celular y la potenciación del crecimiento de neuritas se identificó mediante recuento de las células CDX positivas en el área del giro dentado del hipocampo. Los resultados se muestran en la tabla 8.
20 Tabla 8
[Tabla 8]
Efecto sobre la diferenciación celular y la potenciación del crecimiento de neuritas
D.Rhizoma:D.nipponica en comparación con el peso total
Cantidad (mg/kg) Células CDX positivas (% del control) Longitud de la neurita (% del control)
Ejemplo 1
3,5:1 10 156,24 ± 9,40 125,38 ± 2,82
100
183,04 ± 12,67 142,59 ± 1,66
Ejemplo Comparativo 1
Extracto bruto de D. Rhizoma 10 126,84 ± 7,05 115,42 ± 3,60
100
132,81 ± 9,69 121,34 ± 2,56
Ejemplo Comparativo 2
Extracto bruto de D. nipponica 10 118,60 ± 8,37 120,48 ± 3,74
100
121,59 ± 8,13 120,57 ± 2,36
Ejemplo Comparativo 3
1:1 10 127,19 ± 7,23 120,48 ± 3,74
100
132,16 ± 9,61 129,63 ± 2,16
Ejemplo Comparativo 4
2:1 10 130,80 ± 8,67 124,08 ± 2,48
100
141,64 ± 7,85 181,75 ± 1,81
Ejemplo Comparativo 5
5:1 10 132,54 ± 10,34 121,64 ± 1,34
100
144,10 + 9,32 130,12 ± 2,73
Ejemplo Comparativo 6
10:1 10 127,06 ± 11,46 123,39 ± 1,89
100
138,42 ± 9,29 129,61 ± 2,48
Ejemplo Comparativo 7
1:2 10 125,47 ± 14,38 119,42 ± 1,99
100
131,37 ± 11,94 126,74 ± 2,65
Ejemplo Comparativo 8
1:3,5 10 126,88 ± 10,43 120,74 ± 1,84
100
133,05 ± 9,59 122,38 ± 1,69
Ejemplo Comparativo 9
1:5 10 130,15 ± 9,29 125,42 ± 2,88
100
135,53 ± 10,74 131,41 ± 2,15
Ejemplo Comparativo 10
1:10 10 124,06 ± 9,86 121,72 ± 1,61
100
126,91 ± 10,34 124,63 ± 2,83
imagen10
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