ES2569391T3 - Tritocualina para uso en el tratamiento de la fibrosis quística - Google Patents

Abstract

Tritocualina para uso en el tratamiento de la enfermedad fibrosis quística o de al menos una de sus complicaciones asociadas.

Description

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DESCRIPCION

Tritocualina para uso en el tratamiento de la fibrosis qufstica Campo de la invencion

Esta invencion se refiere al campo de la biologfa, farmacia y medicina. Se refiere en particular a la tritocualina para uso en el tratamiento de la fibrosis qufstica o cualquier otra enfermedad fibrotica asociada con la IL-8. La invencion se refiere tambien al metodo para el tratamiento de la fibrosis qufstica o cualquier otra enfermedad fibrotica asociada con la IL-8 mediante la administracion de tritocualina. La invencion se puede utilizar para mejorar la condicion de los individuos con cualquier enfermedad fibrotica asociada con la IL-8, y en particular la fibrosis qufstica y cualquier complicacion de la misma.

Antecedentes de la invencion

La fibrosis qufstica afecta a 70.000 ninos y adultos en todo el mundo (Fundacion de la fibrosis qufstica). Aunque mas de 1400 mutaciones diferentes pueden llevar a defectos en el CFTR (regulador de la conductancia de transmembrana de la fibrosis qufstica), la mutacion mas comun es una delecion del residuo de fenilalanina en la posicion 508 de la protefna (DF508 CFTR). Esta mutacion es responsable de mas del 90 por ciento de los casos de fibrosis qufstica en todo el mundo.

La fibrosis qufstica (FQ) es un trastorno autosomico recesivo causado por mutaciones del gen regulador de la conductancia de transmembrana de la fibrosis qufstica (CFTR), que codifica una protefna transmembranal presente en una variedad de tipos de celulas y organelas. La mutacion mas comun del gen CFTR es una delecion de 3 pares de bases que da como resultado la delecion de la fenilalanina en la posicion 508, conocida como la mutacion F508del de CFTR. Aunque la fibrosis qufstica se caracteriza tfpicamente por la presencia de insuficiencia pancreatica e infecciones pulmonares recurrentes en ninos, se ha identificado un amplio espectro clfnico en adultos. La infeccion bacteriana cronica de las vfas respiratorias, la mucosa espesada de las vfas respiratorias, y la bronquiectasis caracteriza al pulmon con fibrosis qufstica. El exceso de mucosidad es causado en gran parte por la afluencia de neutrofilos, atrafdos al sitio por el aumento de la expresion de quimiocinas tales como interleucina-6 (IL- 6) e interleucina- 8 (IL-8), por productos bacterianos y citocinas inflamatorias.

Por ejemplo, la IL-8, producida por macrofagos, celulas epiteliales, y fibroblastos, es una potente quimiocina y activadora de los neutrofilos humanos y se considera que es una importante citocina proinflamatoria en la patogenesis de la fibrosis qufstica (E. Puchelle, S. De Bentzmann, C. Hubeau, J. Jacquot, and D. Gaillard, "Mechanisms involved in cystic fibrosis airway inflammation," Pediatric Pulmonology, vol. 32, no. 23, pp. 143-145, 2001). La IL-8 es inducida transcripcionalmente por una amplia variedad de estfmulos incluyendo el factor-alfa de necrosis tumoral (TNF-a), el shock hiperosmotico y productos bacterianos. La fibrosis qufstica causa un fenotipo pro- inflamatorio masivo en el pulmon, que se manifiesta en las vfas respiratorias por altos niveles de IL-8 y otras citocinas y quimiocinas pro-inflamatorias (Bhattacharyya S. et al., J. Biol. Chem. 2011 April 1; 286(13):11604-11615). Por lo tanto, parece que la IL8 es una importante citocina inflamatoria que desempena un papel clave en la fibrosis qufstica, en particular en los sfntomas nasales y bronquiales de la fibrosis qufstica.

La enfermedad pulmonar progresiva en la fibrosis qufstica (FQ) es debida en gran parte a la inflamacion persistente caracterizada por una abundancia de neutrofilos activados. Se ha crefdo tradicionalmente que la afluencia de neutrofilos en las vfas respiratorias en la FQ es una respuesta a una infeccion cronica con bacterias. Sin embargo, estudios recientes de lavado broncoalveolar (BAL) han documentado niveles elevados de neutrofilos en las vfas respiratorias inferiores de algunos ninos con fibrosis qufstica incluso en ausencia de infeccion detectable. Estas observaciones son consistentes con la hipotesis de que la inflamacion esta anormalmente regulada en las vfas respiratorias de la FQ. Se ha puesto el foco de atencion sobre la interleucina IL-8, una quimiocina que representa la mayor parte de la actividad quimiotactica para los neutrofilos del esputo de FQ y se encuentra repetidamente en concentraciones elevadas en las vfas respiratorias de pacientes con FQ. Una fuente potencialmente importante de IL-8 en las vfas respiratorias es el epitelio respiratorio. Puesto que el epitelio respiratorio manifiesta tambien la anormalidad fenotfpica mas importante de la FQ, las celulas epiteliales de las vfas respiratorias en la FQ sobreproducen la IL-8, y esto esta ligado a la funcion anormal del regulador de transmembrana de la fibrosis qufstica (CFTR). La produccion de IL-8 en los cultivos de celulas epiteliales nasales primarias de FQ y de no FQ en la lfnea base y despues de estimulacion con el factor-a de necrosis tumoral (TNF-a) o de la infeccion por el virus sincitial respiratorio (RSV) se utilizaron como modelos de IL-8 (el epitelio nasal tiene las mismas anormalidades de transporte ionico que el epitelio de las vfas respiratorias inferiores en la FQ).

Los tratamientos de la enfermedad FQ incluyen tfpicamente antibioticos, farmacos anti-inflamatorios, broncodilatadores, y fisioterapia de torax para ayudar a luchar contra la infeccion, la inflamacion neutrofflica y la obstruccion, y para aclarar las vfas respiratorias. La meta es por lo tanto mantener las funciones pulmonares lo mas cerca posible de las normales mediante el control de la infeccion respiratoria y la desobstruccion de las vfas respiratorias de mucosidades. Sin embargo, la naturaleza persistente, viscosa y toxica de las secreciones de las vfas respiratorias en la enfermedad fibrosis qufstica todavfa lleva al deterioro progresivo de la funcion pulmonar. A pesar de sus serias consecuencias clfnicas, no hay ninguna terapia aprobada para el tratamiento de la FQ excepto el

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ivacaftor (Kalydeco® de Vertex) registrado recientemente en Estados Unidos y que esta en revision en Europa como un potenciador del regulador de la conductancia de transmembrana de la fibrosis qrnstica (CFTR). El ivacaftor esta indicado para el tratamiento de la fibrosis qrnstica (FQ) en pacientes de 6 anos de edad y mayores que tienen una mutacion G551D en el gen CFTR. El ivacaftor solamente esta autorizado para tratar un pequeno subconjunto de pacientes de FQ, aquellos que tienen la mutacion G551D en el gen del regulador de transmembrana de la fibrosis qrnstica (CFTR) y se cree que solo el 4 % de pacientes de FQ tienen esta mutacion. En adicion, la patologfa relacionada con los senos se trata espedficamente de forma deficiente durante la FQ.

No hay disponible hasta ahora, ningun tratamiento de la fibrosis qrnstica que mejore significativamente la calidad de vida de los pacientes durante un largo penodo de tiempo.

Por consiguiente, existe la necesidad de tratamientos alternativos o adicionales para la FQ y cualquier complicacion de la misma.

La 7-amino-4,5,6-trietoxi-3-(4-metoxi-6-metil-7,8-dihidro-5H-[1,3]dioxolo[4,5-g]isoquinolin-5-il)-3H-isobenzofuran-1- ona o tritocualina es un farmaco, previamente formulado en comprimidos de 100 mg y comercializado en Europa para el tratamiento de la alergia. La tritocualina no es un producto puro, sino que esta disponible como una mezcla de isomeros.

El mecanismo de accion descrito de la tritocualina se refiere a la inhibicion de la biosmtesis de la histamina. Mas espedficamente, la tritocualina es un inhibidor de la enzima histidina-descarboxilasa (HDC), que cataliza la descarboxilacion de la histidina in vivo para producir histamina, una amina biogenica endogena, mas dioxido de carbono. Se propone la inhibicion de la produccion de histamina en el cuerpo para mejorar los smtomas de alergia y otras enfermedades que resultan de la alta produccion de histamina, tales como rinitis, dermatitis, eczema, urticaria, asma,

La tritocualina se ha descrito tambien en el documento WO2008100539 para el tratamiento de las condiciones de la enfermedad gastrointestinal mejoradas por el control de la histamina, incluyendo la enfermedad de reflujo gastro- esofagico (GERD), alergia alimentaria, smdrome de Zollinger-EIIison, ulcera peptica, dispepsia, gastroenteritis eosinofflica alergica, y mastocitosis con smtomas gastrointestinales.

En la solicitud de patente US20100144718, se describe la tritocualina (TRQ) (incluyendo derivados o isomeros de la misma) como un agonista del receptor H4 de histamina (H4R). La solicitud describe ademas el uso de agonistas de H4R, tales como tritocualina, para tratar enfermedades y/o condiciones patologicas moduladas por los agonistas de H4R. La enfermedad o condicion modulada por H4R es mas particularmente la enfermedad de obstruccion pulmonar cronica (EPOC) y/o el asma.

Sumario de la invencion

Ha sido descubierto por el inventor que la tritocualina es un modulador capaz de reducir la secrecion de IL8 en condiciones inflamatorias donde las celulas epiteliales, endoteliales, neutrofilos, basofilos, eosinofilos y/o mastocitos estan mas particularmente implicados. Todas estas celulas implicadas en procesos inflamatorios cronicos estan presentes en los tejidos pulmonares, nasales y mucosales, celulas epiteliales de la fibrosis qrnstica (patologfa multi organica), celulas hepaticas y celulas pancreaticas.

La tritocualina puede desempenar por lo tanto un papel clave en la reduccion de la secrecion de IL8 y desempenar una potente funcion anti-inflamatoria en las condiciones de la fibrosis qrnstica.

Sorprendentemente, la modulacion por la tritocualina de la IL- 8 se activa tambien independientemente del estimulo inicial de la liberacion de IL-8. Este impacto puede ser muy importante en la fibrosis qrnstica donde la infeccion desempena un importante papel en el proceso inflamatorio (secrecion de IL-8 post infeccion que mimetiza un estimuio, tal como Lipopolisacarido (LPS)).

En base a este descubrimiento, la presente invencion se refiere a tritocualina para uso en el tratamiento de la fibrosis qrnstica o de al menos una de sus complicaciones.

La presente invencion se refiere tambien al uso de tritocualina, para preparar una composicion farmaceutica destinada al tratamiento de la fibrosis qrnstica o de al menos una de sus complicaciones.

La presente invencion se refiere tambien a un metodo de tratamiento de una fibrosis qrnstica o de al menos una de sus complicaciones, en el cual se administra una cantidad terapeuticamente eficaz de una tritocualina a un sujeto que necesita dicho tratamiento.

Descripcion detallada de la invencion

La tritocualina (o TRQ), como se ha mencionado antes, es un farmaco previamente presente en el mercado para el tratamiento de la alergia. Tiene la siguiente formula:

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En la presente invencion, el termino tritocualina (o TRQ) incluye enantiomeros, diastereoisomeras y/o cualquier mezcla de los mismos. En efecto, y como se describe en el documento WO2007/117704, la estructura qmmica de la tritocualina presenta dos carbonos asimetricos. Por lo tanto, dependiendo del metodo de smtesis, se puede producir el ingrediente farmaceutico activo tritocualina como una o dos estructuras diastereoisomeras que consiste cada una en sus dos correspondientes imagenes en el espejo, enantiomeros. Por lo tanto, la tritocualina puede existir como dos o cuatro posibles estructuras isomericas. Utilizando la convencion de designacion R y S en cada carbono asimetrico, una de las dos posibles estructuras diastereoisomeras consistira en los enantiomeros RR y SS, y la otra en los enantiomeros RS y SR. El termino tritocualina en la presente invencion incluye tambien cualquier sal farmaceuticamente aceptable o forma hidratada de la misma.

Como se usa en la presente memoria, "sal farmaceuticamente aceptable" se refiere a derivados de la tritocualina descrita en donde el compuesto original se modifica para preparar sales de acido o de base del mismo. Los ejemplos de sales farmaceuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de acido mineral u organico de residuos basicos tales como aminas; sales alcalinas u organicas de residuos acidos tales como acidos carboxflicos; y similares. Las sales farmaceuticamente aceptables incluyen las sales convencionales no toxicas o las sales de amonio cuaternario del compuesto original formadas, por ejemplo, a partir de acidos inorganicos u organicos no toxicos. Por ejemplo, dichas sales convencionales no toxicas incluyen las derivadas de acidos inorganicos tales como acido clortndrico, bromtndrico, sulfurico, sulfamico, fosforico, mtrico y similares; y las sales preparadas de acidos organicos tales como acetico, propionico, succmico, glicolico, estearico, lactico, malico, tartarico, citrico, ascorbico, pamoico, maleico, hidroximaleico, fenilacetico, glutamico, benzoico, salicilico, sulfamlico, 2-acetoxibenzoico, fumarico, toluenosulfonico, metanosulfonico, etanodisulfonico, oxalico, isetionico, y similares.

Clmicamente, la fibrosis qrnstica (FQ) puede presentar varios tipos de complicaciones.

Por ejemplo, el CFTR deficiente da como resultado una disminucion de la secrecion de cloruro y un aumento de la reabsorcion de sodio y agua a traves de las celulas epiteliales. La reduccion resultante de la altura del fluido de revestimiento epitelial y la reduccion de la hidratacion de la mucosidad produce una mucosidad que es mas pegajosa para las bacterias, lo que promueve la infeccion y la inflamacion. Las secreciones en el tracto respiratorio, pancreas, tracto gastrointestinal (GI), glandulas sudonparas, y otros tejidos exocrinos tienen mayor viscosidad, lo que las hace diffciles de aclaramiento.

La mayor parte de los pacientes con fibrosis qrnstica tienen una enfermedad pulmonar cronica grave y/o insuficiencia pancreatica exocrina. Las manifestaciones adicionales incluyen las siguientes: poliposis nasal, pansinusitis, diarrea cronica, pancreatitis, cirrosis u otras formas de disfuncion hepatica.

Los pacientes con fibrosis qrnstica pueden tener tambien enfermedad sinusal: los iones cloruro no pueden ser excretados, el sodio se absorbe excesivamente, y el agua circula pasivamente. Esto deseca la superficie mucosal y altera la viscosidad de la envoltura de mucosidad normal, lo que solo puede llevar a la obstruccion de las vfas sinusales. Pueden existir anormalidades adicionales en los pacientes de FQ, incluyendo disfuncion ciliar, aumento de los mediadores inflamatorios, y aumento de la colonizacion con Pseudomonas aeruginosa, todas las cuales afectan ademas al aclaramiento y aireacion normal de los senos. La infeccion e inflamacion sinusal cronica son el resultado neto.

La mayor parte de las muertes asociadas con la fibrosis qrnstica resultan de una enfermedad pulmonar progresiva y en fase final. En los individuos con fibrosis qrnstica, los pulmones son normales en el utero, en el momento del nacimiento, y despues del nacimiento, antes del inicio de la infeccion y de la inflamacion. Poco despues del nacimiento, muchas personas con fibrosis qrnstica adquieren una infeccion pulmonar, lo que provoca una respuesta inflamatoria que lleva a la persistencia bacteriana con produccion del factor quimiotactico de neutrofilos interleucina IL-8 procedente de la degradacion de las celulas epiteliales y de la elastina que contribuye a la persistencia de la inflamacion y de la infeccion, al dano estructural, deterioro del intercambio gaseoso, y, finalmente, enfermedad pulmonar en fase final y muerte temprana.

La mayor parte de los pacientes con fibrosis qrnstica (90-95 %) tienen insuficiencia de la enzima pancreatica y

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presentan trastornos digestivos con poca ganancia de peso en asociacion con frecuentes deposiciones y dolor de colico despues de comer. La insuficiencia pancreatica disminuye la absorcion de los contenidos intestinales, la adhesion y la obstruccion intestinal mecanica.

La diabetes es una complicacion comun de la FQ en adultos. La principal causa de la diabetes relacionada con la FQ es la destruccion del pancreas debido a la fibrosis. Las celulas de los islotes que producen insulina estan por lo tanto agotadas. En realidad, la mayor parte de los adultos que viven con FQ tienen algun grado de diabetes o intolerancia a la glucosa.

Tambien son frecuentes los problemas hepatobiliares en la fibrosis qufstica incluyendo la cirrosis biliar focal especffica, que resulta de la obstruccion biliar y de la fibrosis periportal progresiva.

En una realizacion particular, la invencion se refiere a tritocualina para uso en el tratamiento de la enfermedad de fibrosis qufstica y/o complicaciones asociadas, y dichas complicaciones incluyen mas especfficamente infeccion, trastorno inflamatorio (mas especfficamente en el tracto respiratorio, pancreas, tracto gastrointestinal (GI), glandulas sudorfparas, u otros tejidos exocrinos), enfermedad pulmonar cronica grave, insuficiencia pancreatica, poliposis nasal, pansinusitis, diarrea cronica, pancreatitis, cirrosis u otras formas de disfuncion hepatica, enfermedad sinusal (p. ej., infeccion y/o inflamacion sinusal cronica), diabetes, o problemas hepatobiliares (p. ej., cirrosis biliar focal, obstruccion biliar y fibrosis periportal progresiva).

En una realizacion particular, la invencion se refiere a tritocualina para uso en el tratamiento de la enfermedad de fibrosis qufstica y/o de cualquiera de las complicaciones asociadas de las vfas respiratorias o nasales, tales como enfermedad pulmonar (p. ej., enfermedad pulmonar cronica severa), poliposis nasal, pansinusitis, o enfermedad sinusal (p. ej., infeccion y/o inflamacion sinusal cronica).

La invencion proporciona ademas metodos para el tratamiento de la fibrosis qufstica o de sus complicaciones (identificadas anteriormente) en un sujeto que necesite dicho tratamiento, en donde dichos metodos comprenden administrar al sujeto una cantidad eficaz de tritocualina.

La invencion proporciona ademas el uso de tritocualina para la preparacion de un medicamento o una composicion farmaceutica destinado al tratamiento de la fibrosis qufstica o de al menos una de sus complicaciones (identificadas anteriormente).

Dentro del contexto de la invencion, el termino “tratamiento” designa el tratamiento preventivo, curativo y paliativo, asf como el cuidado de los pacientes, la mejora de la calidad de vida, reduccion del sufrimiento, mejora de la esperanza de vida, desaceleracion del progreso de la enfermedad, alivio de los sfntomas, reduccion de los efectos de la enfermedad, por ejemplo, causando la regresion, o restaurando o reparando una funcion perdida, desaparecida o defectuosa, etc.

Ademas, el tratamiento se puede llevar a cabo en combinacion con otros agentes o tratamientos.

Como se usan en la presente memoria, los terminos "sujeto", "individual," "animal," y "paciente," utilizados aquf de modo intercambiable, se refieren a mamfferos, incluyendo los seres humanos, y tambien incluyen, pero no se limitan a, murinos, simios, felinos, caninos, equinos, bovinos, porcinos, ovinos, caprinos, conejos, animales mamfferos de granja, animales mamfferos para deportes, y animales mamfferos de companfa. En muchas realizaciones, los sujetos seran seres humanos. Los modelos animales pueden ser de interes para investigaciones experimentales, proporcionando un modelo para el tratamiento de una enfermedad humana.

El termino "efecto terapeutico deseable" significa tratar a un sujeto con tritocualina para prevenir o mejorar una enfermedad y/o condicion patologica.

El termino "cantidad eficaz" significa una cantidad de tritocualina o composicion segun la presente invencion, eficaz para producir el efecto terapeutico deseado.

Una dosis de tritocualina administrada a un sujeto puede ser aproximadamente 1, 5, 10, 20, 30, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600 mg/dfa. En otra realizacion, la dosis de tritocualina administrada a un sujeto puede ser aproximadamente 1 g/dfa. En una realizacion adicional, la dosis de tritocualina administrada a un sujeto puede ser aproximadamente 2 g/dfa. En otra realizacion mas, la dosis de tritocualina administrada a un sujeto puede ser aproximadamente 3 g/dfa. En otra realizacion, la dosis de tritocualina administrada a un sujeto puede ser aproximadamente 1 mg-4 g/dfa. Los expertos pueden adaptar las dosis administradas. Resulta evidente que se pueden realizar administraciones repetidas, posiblemente en combinacion con otros agentes activos o cualquier vehfculo que sea farmaceuticamente aceptable (p. ej., tampones, soluciones salinas, isotonicas, en presencia de agentes estabilizantes, etc.).

La frase "farmaceuticamente aceptable" se emplea en la presente memoria para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones, y/o formas farmaceuticas que son, dentro del alcance de un criterio medico razonable, adecuados para utilizar en contacto con los tejidos del sujeto sin excesiva toxicidad, irritacion, respuesta alergica, u otro problema o complicacion acorde con una relacion beneficio/riesgo razonable.

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La tritocualina utilizada dentro del marco de esta invencion generalmente se formula en una composicion farmaceutica que comprende un vehnculo o excipiente farmaceuticamente aceptable. En una realizacion adicional, la presente invencion trata de una composicion farmaceutica que comprende tritocualina y un vefnculo o excipiente farmaceuticamente aceptable, para uso en el tratamiento de la fibrosis qmstica o de al menos una de sus complicaciones (como se han definido anteriormente).

Se puede administrar topicamente, intravenosamente, subcutaneamente, por inhalacion o utilizando un nebulizador o en una forma disponible oralmente tal como comprimidos o capsulas, mas espedficamente oralmente o por inhalacion. La administracion se puede llevar a cabo por cualquier metodo conocido por los expertos en la tecnica, preferiblemente oralmente, por inhalacion o inyeccion, que es sistemica o local (formas inhaladas intranasales y/o bronquiales). La inyeccion se administra tfpicamente por via intra-ocular, intra-peritoneal, intra-cerebral, intravenosa, intra-arterial, sub-cutanea o intra-muscular. La administracion en aerosol de la tritocualina puede dar como resultado en una distribucion mas homogenea del ingrediente activo en el pulmon, de tal modo que se obtiene una administracion profunda al pulmon. De este modo, la dosis de aplicacion podna ser reducida a la presencia sostenida de tritocualina en el sitio de accion en el pulmon.

Las composiciones farmaceuticas que comprenden tritocualina segun la invencion se pueden presentar por lo tanto en la forma de comprimidos, soluciones o suspensiones inyectables o frascos multi-dosis, capsulas, pfldoras, sellos, polvos, supositorios o capsulas rectales, soluciones o suspensiones.

El vehnculo o excipiente farmaceuticamente aceptable se puede seleccionar de soluciones tampon, disolventes, aglutinantes, estabilizantes, emulsionantes, etc. Las soluciones tampon o disolventes son en particular fosfato de calcio, sulfato de calcio, lactosa, celulosa, caolm, manitol, cloruro de sodio, almidon, azucar extrafino e hidroxi-propil- metil-celulosa (HPMC) (para liberacion retardada). Los aglutinantes son por ejemplo almidon, gelatina y soluciones de envase tales como sacarosa, glucosa, dextrosa, lactosa, etc. Tambien se pueden utilizar gomas naturales o sinteticas, tales como en particular alginato, carboximetilcelulosa, metil celulosa, polivinilpirrolidona, etc.

Otros excipientes son por ejemplo celulosa, estearato de magnesio, ciclodextrinas o una mezcla de los mismos. Se pueden incorporar agentes estabilizantes a las formulaciones, tales como por ejemplo polisacaridos (goma arabiga, agar, acido algmico, goma guar y goma tragacanto, quitina o sus derivados y eteres de celulosa). Los disolventes o soluciones son por ejemplo solucion de Ringer, agua, agua destilada, tampones de fosfato, soluciones salinas fosfatadas, y otros fluidos convencionales.

Otros aspectos y ventajas de esta invencion se aclararan despues de la lectura de los siguientes ejemplos, que se deben considerar como ilustrativos y no limitantes.

Ejemplos

Efecto de la tritocualina sobre la liberacion de IL8 en un modelo humano ex vivo (celulas epiteliales procedentes de extraccion gingival humana mantenidas en supervivencia) despues de estimulacion de la liberacion de IL8

1) Preparacion de la mucosa gingival

Se mantuvieron en supervivencia ex vivo 13 fragmentos de mucosa gingival de diferentes donantes humanos (extraccion de las muelas del juicio de voluntarios sanos). Con este fin, se pusieron los fragmentos en insertos suspendidos ellos mismos por encima de los pocillos de cultivo. Se anadio el medio nutriente (antibioticos, FCS - suero fetal de ternera) al fondo de los pocillos, se realizo el pase por difusion lenta de los dos compartimentos por medio de una membrana porosa (0,45 mm). Se mantuvo el conjunto en cultivo de organos durante 24 horas en una estufa en atmosfera humeda a 37 °C en presencia de 5 % de CO2.

2) Modelo experimental de mucosa gingival estimulada por la sustancia P

Se alcanzo la inflamacion gingival por estimulacion de la mucosa con un neurotransmisor, sustancia P (10 microM) depositada en el medio de cultivo.

Se anadio tritocualina al medio de cultivo (efecto sistemico) a una concentracion de 20 microM, 10 minutos despues de la aplicacion de la sustancia P.

Se establece una comparacion de la modulacion de la inflamacion (dosis de citocina IL8) en:

control de la mucosa gingival

mucosa gingival estimulada por la sustancia P,

mucosa gingival estimulada por la sustancia P y tritocualina

Se midio la citocina inflamatoria, IL8, un potente factor quimiotactico de los neutrofilos, en los sobrenadantes de cultivo, 24 horas despues de la deposicion de la sustancia P.

3) Ensayo bioqufmico de una citocina proinflamatoria

Se midio la IL8 en ng/ml por inmunoensayos (kits Gen Probe, France) con un espectrofotometro a 450 nm.

4) Resultados y comentarios

La sustancia P aumenta significativamente la liberacion de IL8: 31,7 ng/ml frente a 29,6 ng/ml en el grupo control (p 5 = 0,04).

La tritocualina induce un descenso significativo de la liberacion de IL8 cuando el epitelio mucosal fue estimulado por la sustancia P (26,7 ng/ml frente a 31,7 ng/ml en el grupo estimulado por la sustancia P (p = 0,02).

Las celulas mucosales humanas fueron previamente estimuladas por la sustancia P, un compuesto pro-inflamatorio establecido capaz de aumentar significativamente la liberacion de IL8 sobre las celulas epiteliales, pero tambien 10 sobre otras celulas bronquiales o nasales. En este contexto, la tritocualina ha demostrado asf un impacto significativo sobre la liberacion de IL8 en el modelo de celulas epiteliales humanas ex vivo. La tritocualina, como una nueva propiedad anti-inflamatoria a traves de la reduccion de iL8, es por lo tanto particularmente interesante en las condiciones cronicas de las vfas respiratorias de la fibrosis qufstica donde la IL8 esta aumentando continuamente.

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES

   1) Tritocualina para uso en el tratamiento de la enfermedad fibrosis qufstica o de al menos una de sus complicaciones asociadas.

   2) La tritocualina para uso segun la reivindicacion 1, en donde las complicaciones de la fibrosis qufstica se 5 seleccionan de infeccion o trastornos inflamatorios.

   3) La tritocualina para uso segun las reivindicaciones 1 o 2, en donde las complicaciones de la fibrosis qufstica se seleccionan de infeccion o de trastornos inflamatorios en el tracto respiratorio, pancreas, tracto gastrointestinal, glandulas sudorfparas, u otros tejidos exocrinos.

   4) La tritocualina para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde las complicaciones de la 10 fibrosis qufstica se seleccionan de enfermedad pulmonar cronica grave, insuficiencia pancreatica, poliposis nasal,

   pansinusitis, diarrea cronica, pancreatitis, cirrosis u otras formas de disfuncion hepatica, enfermedad sinusal diabetes, o problemas hepatobiliares, mas especfficamente cirrosis biliar focal, obstruccion biliar y fibrosis periportal progresiva.

   5) La tritocualina para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el tratamiento de la enfermedad 15 fibrosis qufstica y/o cualquiera de las complicaciones asociadas de las vfas respiratorias o nasales.

   6) La tritocualina para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en donde la tritocualina se administra a un sujeto a la dosis de 1 mg-4 g/dfa.

   7) La tritocualina para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la tritocualina se administra a un sujeto a la dosis de 1, 5, 10, 20, 30, 50, 100, 200, 300, 400, 500, o 600 mg/dfa.

   20 8) La tritocualina para uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en donde la tritocualina se administra a

   un sujeto a la dosis de 1 g/dfa, 2 g/dfa, 3 g/dfa o 4 g/dfa.