ES2540052T3 - Inhibidores del virus de la hepatitis C - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula (I)**Fórmula** o una sal de este aceptable del mismo el punto de vista farmacéutico, en donde R1 se selecciona de hidrógeno, metilo y flúor; R2 se selecciona de hidrógeno y metilo; R3 y R4 son, cada uno, hidrógeno; o R3 y R4, junto con los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo ciclopropilo; y R5 se selecciona de hidrógeno y metilo.

Description

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19-06-2015

DESCRIPCIÓN

Inhibidores del virus de la hepatitis C

5 En general, la presente descripción se refiere a compuestos antivirales, y más específicamente, a compuestos que pueden inhibir la función de la proteína NS5A codificada por el virus de la hepatitis C (HCV), las composiciones que comprenden dichos compuestos y métodos para inhibir la función de la proteína NS5A.

El HCV es un patógeno humano de gran importancia que se calcula infecta a alrededor de 170 millones de personas

10 en todo el mundo -aproximadamente cinco veces la cantidad de infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1. Una fracción considerable de estos individuos infectados con HCV desarrolla enfermedad hepática progresiva grave, que incluye cirrosis y carcinoma hepatocelular.

En la actualidad, el tratamiento de referencia contra HCV, que utiliza una combinación de ribavirin e interferón

15 pegilado, presenta una tasa de éxito que no es óptima para lograr una respuesta viral sostenida, y provoca varios efectos secundarios. Por ello, desde hace tiempo existe una necesidad clara de desarrollar terapias eficaces para atender esta necesidad médica insatisfecha.

El HCV es un virus de ARN de cadena positiva. En función de una comparación de la secuencia de aminoácidos

20 deducida y la gran similitud en la región 5' no traducida, el HCV se clasificó como un género separado en la familia Flaviviridae. Todos los miembros de la familia Flaviviridae tienen viriones envueltos que contienen un genoma de ARN de cadena positiva que codifica todas las proteínas específicas del virus conocidas mediante la traducción de un marco de lectura abierto simple, ininterrumpido.

25 Existe una importante heterogeneidad en el nucleótido y la secuencia de aminoácidos codificada en todo el genoma de HCV debido a una alta tasa de error de la ARN polimerasa dependiente de ARN codificado que carece de capacidad de corrección de errores. Se caracterizaron al menos seis genotipos principales, y se describieron más de 50 subtipos con distribución en todo el mundo. La importancia clínica de la heterogeneidad genética del HCV demostró propensión a mutaciones durante el tratamiento con monoterapia; por ello, se necesitan opciones de

30 tratamiento adicionales. El posible efecto modulador de los genotipos en la patogénesis y la terapia continúan aún son difíciles de dilucidar.

El genoma de ARN de HCV monocatenario tiene, aproximadamente, 9500 nucleótidos de longitud y tiene un marco de lectura abierto (ORF) simple que codifica una gran poliproteína simple de alrededor de 3000 aminoácidos. En las 35 células infectadas, esta poliproteína se escinde en múltiples sitios mediante proteasas celulares y virales para producir las proteínas estructurales y no estructurales (NS). En el caso de HCV, la generación de proteínas no estructurales maduras (NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B) se lleva a cabo mediante dos proteasas virales. Se cree que la primera es una metaloproteasa y se escinde en la unión NS2-NS3; la segunda es una serina proteasa que se encuentra en la región del terminal N de NS3 (en la presente, también denominada NS3 proteasa) y media 40 todas las escisiones posteriores corriente abajo de NS3, tanto en cis, en el sitio de escisión NS3-NS4A, como en trans, para los sitios NS4A-NS4B, NS4B-NS5A, NS5A-NS5B restantes. Se cree que la proteína NS4A cumple varias funciones actuando como cofactor para NS3 proteasa y colaborando en la localización de membranas de NS3 y otros componentes de la replicasa viral. Es necesaria la formación de un complejo NS3-NS4A para la actividad de proteasa adecuada, lo que resulta en una mayor eficacia proteolítica de los eventos de escisión. La proteína NS3

45 también muestra actividades de nucleósido-trifosfatasa y ARN helicasa. NS5B (en la presente, también denominada HCV polimerasa) es una ARN polimerasa dependiente de ARN que participa en la replicación del genoma del HCV con otras proteínas de HCV, inclusive NS5A, en un complejo de replicasa.

Se pretende obtener compuestos útiles para tratar a los pacientes infectados con HCV, que inhiben selectivamente

50 la replicación viral de HCV. En particular, se pretende obtener compuestos que sean eficaces para inhibir la función de la proteína NS5A. La proteína HCV NS5A se describe, por ejemplo, en las siguientes referencias: S. L. Tan, et al., Virology, 284:1-12 (2001); K.-J. Park, et al., J. Biol. Chem., 30711-30718 (2003); T. L. Tellinghuisen, et al., Nature, 435, 374 (2005); R. A. Love, et al., J. Virol, 83, 4395 (2009); N. Appel, et al., J. Biol. Chem., 281, 9833 (2006); L. Huang, J. Biol. Chem., 280, 36417 (2005); C. Rice, et al., WO2006093867.

55 Bachand, et. al. en WO2008/021927, publicado el 21 de febrero de 2008, describen una serie de compuestos de bifenilo útiles para el tratamiento del virus de la hepatitis C. Los nuevos compuestos de la presente descripción están comprendidos en la definición de Fórmula en WO2008/021927 y no se describen en Bachand, et al. De manera sorprendente, se descubrió que estos compuestos tienen atributos únicos que los hacen útiles para el tratamiento

60 del virus de la hepatitis C.

En un primer aspecto, la presente descripción provee un compuesto de la Fórmula (I)

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o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en donde R1 se selecciona de hidrógeno, metilo y flúor;

5 R2 se selecciona de hidrógeno y metilo; R3 y R4 son, cada uno, hidrógeno; o R3 y R4, junto con los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo de ciclopropilo; y R5 se selecciona de hidrógeno y metilo.

10 En una primera forma de realización del primer aspecto, la presente descripción provee un compuesto de la Fórmula

(I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en donde R1 es hidrógeno.

En una segunda forma de realización del primer aspecto, la presente descripción provee un compuesto de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en donde R1 es flúor. En una tercera

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15 forma de realización, R, Ry Rson, cada uno, hidrógeno, y Res metilo.

En una cuarta forma de realización del primer aspecto, la presente descripción provee un compuesto de la Fórmula

(I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en donde R1 es metilo. En una quinta forma de

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realización, R, Ry Rson, cada uno, hidrógeno, y Res metilo. 20 En un segundo aspecto, la presente descripción provee un compuesto seleccionado de

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o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

En un tercer aspecto, la presente descripción provee una composición que comprende un compuesto de la Fórmula

10 (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, y un vehículo aceptable desde el punto de vista farmacéutico. En una primera forma de realización del tercer aspecto, la composición también comprende uno, dos o tres compuestos adicionales que tienen actividad contra el HCV. En una segunda forma de realización del tercer aspecto, al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o ribavirin. En una tercera forma de realización, el interferón se selecciona de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso,

15 interferón alfa 2A, interferón lambda e interferón tau linfoblastoide.

En una cuarta forma de realización del tercer aspecto, la presente descripción provee una composición que comprende un compuesto de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, un vehículo aceptable desde el punto de vista farmacéutico y uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad

20 contra el HCV, en donde al menos uno de los compuestos adicionales se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que mejora el desarrollo de la respuesta de los linfocitos T helper (linfocitos T auxiliares) tipo 1, ARN de interferencia, ARN antisentido, imiqimod, ribavirin, un inhibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadine y rimantadine.

25 En una quinta forma de realización del tercer aspecto, la presente descripción provee una composición que comprende un compuesto de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, un

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vehículo aceptable desde el punto de vista farmacéutico y uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el HCV, en donde al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa de HCV, serina proteasa de HCV, polimerasa de HCV, Helicasa de HCV, proteína NS4B de HCV, entrada de HCV, montaje de HCV, egreso de HCV, proteína NS5A de HCV e IMPDH para el

5 tratamiento de infección por HCV.

En un cuarto aspecto, la presente descripción provee un compuesto de Fórmula (I), o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, para su uso en un método para tratar una infección por HCV en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula (I) o 10 una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico. En una primera forma de realización del cuarto aspecto el compuesto de Fórmula (I), o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, para su uso en un método también comprende administrar 1, 2 o 3 compuestos adicionales que tienen actividad contra el HCV antes, durante o después de la administración del compuesto de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico. En una segunda forma de realización del cuarto aspecto, al menos uno de los

15 compuestos adicionales es un interferón o ribavirin. En una tercera forma de realización del cuarto aspecto, el interferón se selecciona de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A, interferón lambda e interferón tau linfoblastoide.

En una cuarta forma de realización del cuarto aspecto, la presente descripción provee un compuesto de Fórmula (I),

20 o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, para su uso en un método para tratar una infección por HCV en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, y uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el HCV antes, durante o después de la administración del compuesto de la Fórmula (I) o una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en donde al menos uno de los

25 compuestos adicionales se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que mejora el desarrollo de la respuesta de los linfocitos T helper tipo 1, ARN de interferencia, ARN antisentido, imiqimod, ribavirin, un inhibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadine y rimantadine.

En una quinta forma de realización del cuarto aspecto, la presente descripción provee un compuesto de Fórmula (I),

30 o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, para su uso en un método para tratar una infección por HCV en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico, y uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad contra el HCV antes, durante o después de la administración del compuesto de la Fórmula (I) o una sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en donde al menos uno de los

35 compuestos adicionales es eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa de HCV, serina proteasa de HCV, polimerasa de HCV, helicasa de HCV, proteína NS4B de HCV, entrada de HCV, montaje de HCV, egreso de HCV, proteína NS5A de HCV e IMPDH para el tratamiento de infección por HCV.

En otro aspecto, la presente descripción provee un compuesto que es 40

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o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

45 Otras formas de realización de la presente descripción pueden comprender combinaciones adecuadas de dos o más de las formas de realización y/o aspectos que se describen en la presente.

Sin embargo, otras formas de realización y aspectos de la descripción serán evidentes de acuerdo con la descripción que se provee más adelante.

50 Los compuestos de la presente descripción también existen como tautómeros; por lo tanto, la presente descripción también comprende todas las formas tautoméricas.

La descripción de la presente descripción se debe interpretar de acuerdo con las leyes y los principios de la unión 55 química.

Se debe tener en cuenta que los compuestos incluidos en la presente descripción son aquellos que son adecuadamente estables para usar como agentes farmacéuticos.

60 En caso de inconsistencia, la presente descripción, incluso sus definiciones, prevalecerá.

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Como se usan en la presente memoria descriptiva, los siguientes términos tienen los significados indicados:

Como se usan en la presente, las formas singulares “un”, “una” y “el/la” incluyen la referencia al plural a menos que el contexto indique claramente lo contrario.

En los compuestos de la presente descripción existen centros asimétricos. Estos centros se indican con los símbolos “R” o “S”, según la configuración de los sustituyentes alrededor del átomo de carbono quiral. Se debe tener en cuenta que la descripción abarca todas las formas isoméricas estereoquímicas, o sus mezclas, que tienen la capacidad de inhibir NS5A. Los estereoisómeros individuales de los compuestos se pueden preparar sintéticamente de materiales de inicio disponibles en el comercio que contienen centros quirales o mediante la preparación de mezclas de productos esteroisoméricos, seguido de separación, tal como la conversión en una mezcla de diastereómeros, seguido de separación o recristalización, técnicas cromatográficas, o separación directa en columnas cromatográficas quirales. Los compuestos de inicio de estereoquímica particular están disponibles en el comercio o pueden prepararse y resolverse mediante técnicas conocidas en el arte.

Ciertos compuestos de la presente descripción también pueden existir en diferentes formas conformacionales estables que se pueden separar. La asimetría de torsión causada por la rotación restringida alrededor de un enlace simple asimétrico, por ejemplo, por impedimento estérico o tensión del anillo, puede permitir la separación de diferentes confórmeros. La presente descripción incluye cada isómero conformacional de estos compuestos y sus mezclas.

La expresión "compuestos de la presente descripción", y expresiones equivalentes, abarcan compuestos de la Fórmula (I), y enantiómeros, diastereómeros y sales de estos aceptables desde el punto de vista farmacéutico. De manera similar, las referencias a intermediarios pretenden abarcar sus sales, cuando el contexto lo permita.

Se pretende que la presente descripción incluya todos los isótopos de átomos que ocurren en los presentes compuestos. Los isótopos incluyen aquellos átomos que tienen el mismo número atómico, pero diferentes números másicos. A fin de brindar ejemplos generales y sin limitación, los isótopos de hidrógeno incluyen deuterio y tritio. Los isótopos de carbono incluyen 13C y 14C. Por lo general, los compuestos de la invención rotulados de manera isotópica se pueden preparar mediante técnicas convencionales conocidas por los expertos en el arte o mediante procesos análogos a los que se describen en la presente, usando un reactivo adecuado rotulado de manera isotópica en lugar de un reactivo no rotulado. Dichos compuestos pueden tener diversos usos posibles, por ejemplo, como estándares y reactivos para determinar la actividad biológica. En el caso de isótopos estables, es posible que dichos compuestos tengan el potencial de modificar favorablemente propiedades biológicas, farmacológicas o farmacocinéticas.

Los compuestos de la presente descripción pueden existir como sales aceptables desde el punto de vista farmacéutico. Como se usa en la presente, la expresión “sal aceptable desde el punto de vista farmacéutico” representa sales o formas zwitteriónicas de los compuestos de la presente descripción que son solubles o dispersables en agua o aceite, que son adecuadas, dentro del alcance del criterio médico sensato, para usar en contacto con los tejidos de los pacientes sin provocar excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica ni otros problemas o complicaciones proporcionales con una relación beneficio/riesgo razonable, y eficaces para el uso previsto. Las sales se pueden preparar durante el aislamiento y la purificación finales de los compuestos o, en forma separada, mediante la reacción de un átomo de nitrógeno adecuado con un ácido adecuado. Las sales de adición ácida representativas incluyen acetato, adipato, alginato, citrato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, bisulfato, butirato, canforato, canforsulfonato; digluconato, dibromhidrato, diclorhidrato, diyodhidrato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, formiato, fumarato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietansulfonato, lactato, maleato, mesitilensulfonato, metansulfonato, naftilensulfonato, nicotinato, 2-naftalensulfonato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilproprionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tricloroacetato, trifluoroacetato, fosfato, glutamato, bicarbonato, para-toluensulfonato y undecanoato. Los ejemplos de ácidos que se pueden usar para formar sales de adición aceptables desde el punto de vista farmacéutico incluyen ácidos inorgánicos, tales como ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico y fosfórico, y ácidos orgánicos, tales como ácido oxálico, maleico, succínico y cítrico.

Cuando sea posible que, para usar en terapia, se puedan administrar cantidades terapéuticamente eficaces de un compuesto de la Fórmula (I) y las sales de este aceptables desde el punto de vista farmacéutico como producto químico sin tratar, es posible presentar el ingrediente activo como una composición farmacéutica. En consecuencia, la descripción también provee composiciones farmacéuticas, que incluyen cantidades terapéuticamente eficaces de compuestos de la Fórmula (I), o sales de estos aceptables desde el punto de vista farmacéutico, y uno o más vehículos, diluyentes o excipientes aceptables desde el punto de vista farmacéutico. La expresión “cantidad terapéuticamente eficaz”, como se usa en la presente, se refiere a la cantidad total de cada componente activo que es suficiente para mostrar un beneficio significativo para el paciente, por ejemplo, una reducción de la carga viral. Cuando se aplica a un ingrediente activo individual, administrado solo, la expresión se refiere a ese ingrediente solo. Cuando se aplica a una combinación, la expresión se refiere a cantidades combinadas de ingredientes activos que producen el efecto terapéutico, ya sea que se administren de manera combinada, serial o simultánea. Los compuestos de la Fórmula (I) y sales de estos aceptables desde el punto de vista farmacéutico, son como se

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describieron anteriormente. El/los vehículo(s), diluyente(s) o excipiente(s) deben ser aceptables en el sentido de ser compatibles con los otros ingredientes de la formulación y no perjudiciales para su receptor. De acuerdo con otro aspecto de la presente descripción, también se provee un proceso para preparar una formulación farmacéutica, que incluye mezclar un compuesto de la Fórmula (I) o una sal de este aceptable desde el punto de vista farmacéutico,

5 con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes aceptables desde el punto de vista farmacéutico. Como se usa en la presente, la expresión “aceptable desde el punto de vista farmacéutico” se refiere a los compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del criterio médico sensato, son adecuados para usar en contacto con los tejidos de los pacientes sin provocar excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica ni otros problemas o complicaciones proporcionales con una relación beneficio/riesgo razonable, y eficaces para el uso previsto.

Las formulaciones farmacéuticas pueden presentarse en formas de unidad de dosificación que contienen una cantidad predeterminada de ingrediente activo por unidad de dosis. Los niveles de dosificación de alrededor de 0,01 a alrededor de 250 miligramos por kilogramo ("mg/kg") de peso corporal por día, preferentemente, de alrededor de 15 0,05 a alrededor de 100 mg/kg de peso corporal por día de los compuestos de la presente descripción son típicos en una monoterapia para la prevención y el tratamiento de la enfermedad mediada por HCV. Por lo general, las composiciones farmacéuticas de esta descripción se administrarán de alrededor de 1 a alrededor de 5 veces por día o, de manera alternativa, como una infusión continua. Dicha administración puede usarse como terapia crónica o aguda. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales vehículos para producir una forma de dosificación única variará según la afección que se trate, la gravedad de la afección, el tiempo de administración, la vía de administración, la tasa de excreción del compuesto que se utiliza, la duración del tratamiento, y la edad, el sexo, el peso y la afección del paciente. Las formulaciones de unidad de dosificación preferidas son las que contienen una dosis o subdosis diaria, como se indicó anteriormente en la presente, o una fracción de adecuada de estas, de un ingrediente activo. El tratamiento puede iniciarse con pequeñas dosis que

25 sean considerablemente menores que la dosis óptima del compuesto. Posteriormente, la dosis se aumenta mediante pequeños incrementos hasta alcanzar el efecto óptimo según las circunstancias. En general, con máxima preferencia, el compuesto se administra a un nivel de concentración que, con frecuencia, brindará resultados antivirales eficaces sin causar ningún efecto secundario dañino ni perjudicial.

Cuando las composiciones de esta descripción comprenden una combinación de un compuesto de la presente descripción y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional, por lo general, están presentes en niveles de dosificación de alrededor de 10 a 150 % y, con mayor preferencia, de alrededor de 10 a 80 % de la dosis que habitualmente se administra en un régimen de monoterapia.

35 Las formulaciones farmacéuticas se pueden adaptar para la administración mediante cualquier vía adecuada, por ejemplo, por vía oral (incluso, bucal o sublingual), rectal, nasal, tópica (incluso bucal, sublingual o transdérmica), vaginal o parenteral (incluso, infusiones o inyecciones subcutáneas, intracutáneas, intramusculares, intraarticulares, intrasinoviales, intraesternales, intratecales, intralesionales, intravenosas o intradérmicas). Las formulaciones se pueden preparar mediante cualquier método conocido en el arte de la farmacia, por ejemplo, asociando el ingrediente activo con el vehículo o excipiente. Se prefieren la administración oral o la administración por inyección.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración oral se pueden presentar como unidades diferenciadas, tales como cápsulas o comprimidos; polvos o gránulos; soluciones o suspensiones en líquidos acuosos o no acuosos; espumas o batidos comestibles; o en emulsiones líquidas de aceite-agua o emulsiones de

45 agua-aceite.

Por ejemplo, para la administración oral en forma de comprimido o cápsula, el componente de fármaco activo se puede combinar con un vehículo oral, no tóxico, aceptable desde el punto de vista farmacéutico e inerte, tal como etanol, glicerol, agua y similares. Los polvos se preparan al pulverizar el compuesto hasta obtener un tamaño fino adecuado y mezclarlo con un vehículo farmacéutico triturado de modo similar, tal como un hidrato de carbono comestible, por ejemplo, almidón o manitol. También puede haber saborizantes, conservantes, dispersantes y colorantes.

Las cápsulas se obtienen al preparar una mezcla en polvo, como se describió anteriormente, y rellenar las vainas de

55 gelatina formadas. Se pueden agregar deslizantes o lubricantes, tales como sílice coloidal, talco, estearato de magnesio, estearato de calcio o polietilenglicol sólido a la mezcla en polvo antes de la operación de relleno. También se puede agregar un agente desintegrante o solubilizante, tal como agar-agar, carbonato de calcio o carbonato de sodio, para mejorar la disponibilidad del medicamento al momento de ingerir la cápsula.

Además, cuando se desee o sea necesario, también se pueden incorporar en la mezcla aglutinantes, lubricantes, agentes de desintegración y colorantes adecuados. Los aglutinantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, tales como glucosa o beta-lactosa, endulzantes de maíz, gomas naturales y sintéticas, tales como acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol y similares. Los lubricantes que se usan en estas formas de dosificación incluyen oleato de sodio, cloruro de sodio y similares. Los desintegrantes incluyen, sin 65 limitación, almidón, metilcelulosa, agar, betonita, goma xantana y similares. Los comprimidos se formulan, por ejemplo, mediante la preparación de una mezcla en polvo, la granulación o compresión (slugging), la adición de un

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lubricante y desintegrante, y el prensado en forma de comprimidos. Una mezcla en polvo se prepara al mezclar el compuesto, triturado de modo adecuado, con un diluyente o una base, como se describió anteriormente, y como opción, con un aglutinante, tal como carboximetilcelulosa, un aliginato, agente de gelificación o polivinilpirrolidona, un retardador de la solución, tal como parafina, un acelerador de la resorción, tal como una sal cuaternaria, y/o un 5 agente de absorción, tal como betonita, caolín o fosfato dicálcico. La mezcla en polvo se puede granular al humedecerla con un aglutinante, tal como jarabe, pasta de almidón, mucílago de acacia o soluciones de materiales celulósicos o poliméricos, y hacerla pasar a través de un tamiz. Como alternativa a la granulación, la mezcla en polvo se puede hacer correr a través de la máquina formadora de comprimidos para obtener trozos con forma imperfecta que se quiebran en gránulos. Los gránulos se pueden lubricar para evitar que se peguen a los moldes formadores de comprimidos mediante la adición de ácido esteárico, una sal de estearato, talco o aceite mineral. La mezcla lubricada luego se compacta en comprimidos. Los compuestos de la presente descripción también se pueden combinar con un vehículo inerte de flujo libre y compactar en forma de comprimidos directamente sin recurrir a las etapas de granulación o compresión. Se puede proveer un recubrimiento protector transparente u opaco, que consiste en una capa selladora de laca, un recubrimiento de azúcar o material polimérico y un recubrimiento de cera.

15 Se pueden agregar colorantes a estos recubrimientos para distinguir las diferentes unidades de dosificación.

Se pueden preparar fluidos orales, tales como soluciones, jarabes y elixires, en forma de unidad de dosificación, de manera que una cierta cantidad contenga una cantidad predeterminada del compuesto. Los jarabes se pueden preparar al disolver el compuesto en una solución acuosa adecuadamente saborizada, mientras que los elixires se pueden preparar mediante el uso de un vehículo no tóxico. También se pueden agregar solubilizantes y emulgentes, tales como alcoholes de isoestearilo etoxilados y éteres de polioxietilensorbitol, conservantes, aditivos saborizantes, tales como aceite de menta o endulzantes naturales, o sacarina u otros endulzantes artificiales y similares.

Cuando correspondiese, las formulaciones de unidad de dosificación para la administración oral se pueden

25 microencapsular. La formulación también se puede preparar para prolongar o mantener la liberación, por ejemplo, mediante el recubrimiento o la inclusión del material particulado en polímeros, ceras o similares.

Los compuestos de la Fórmula (I) y las sales de estos aceptables desde el punto de vista farmacéutico también se pueden administrar en forma de sistemas de suministro de liposomas, tales como vesículas unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas multilamelares. Los liposomas se pueden formar de varios fosfolípidos, tales como colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas.

Los compuestos de la Fórmula (I) y las sales de estos aceptables desde el punto de vista farmacéutico también se pueden suministrar mediante el uso de anticuerpos monoclonales como vehículos individuales con los que se unen

35 las moléculas del compuesto. Los compuestos también se pueden acoplar con polímeros solubles como vehículos de fármacos direccionables. Esos polímeros pueden incluir polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidafenol, polihidroxietilaspartamidafenol o polietilenóxidopolilisina sustituida con residuos de palmitoílo. Además, los compuestos se pueden acoplar a una clase de polímeros biodegradables útiles para lograr la liberación controlada de un fármaco, por ejemplo, ácido poliláctico, polepsilon caprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales, polidihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros en bloque reticulados o anfipáticos de Hidrogeles.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración transdérmica se pueden presentar como parches diferenciados que se pretende permanezcan en contacto directo con la epidermis del receptor durante un período

45 prolongado. Por ejemplo, el ingrediente activo se puede suministrar desde el parche mediante iontoforesis, como se describe, en general, en Pharmaceutical Research 1986, 3(6), 318.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración tópica se pueden formular como ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, sprays, aerosoles o aceites.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración rectal se pueden presentar como supositorios o enemas.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración nasal, en las que el vehículo es un sólido,

55 incluyen un polvo grueso que tiene un tamaño de partícula, por ejemplo, en el rango de 20 a 500 micrómetros, que se administra de la manera en que se proporciona el medicamento, es decir, mediante la rápida inhalación a través del pasaje nasal desde un recipiente del polvo sostenido cerca de la nariz. Las formulaciones adecuadas para la administración como pulverizador nasal o gotas para la nariz, en las que el vehículo es un líquido, incluyen soluciones acuosas u oleosas del ingrediente activo.

Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración por inhalación incluyen vaporizaciones o polvillos de partículas finas, que se pueden generar mediante varios tipos de aerosoles, nebulizadores o insufladores dosificadores.

65 Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones pulverizables.

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Las formulaciones farmacéuticas adaptadas para la administración parenteral incluyen soluciones para inyección estériles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostáticos y solutos que hacen que la formulación se vuelva isotónica con la sangre del receptor previsto; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones se pueden presentar

5 en recipientes de dosis única o de múltiples dosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y se pueden almacenar en condiciones se secado por congelación (liofilizadas) que solo requieren la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua para inyecciones, inmediatamente antes de usarlas. Las soluciones y suspensiones para inyección extemporáneas se pueden preparar de polvos, gránulos y comprimidos estériles.

10 Se debe tener en cuenta que, además de los ingredientes mencionados en particular anteriormente, las formulaciones pueden incluir otros agentes convencionales en el arte teniendo en cuenta el tipo de formulación en cuestión; por ejemplo, los que sean adecuados para la administración oral pueden incluir agentes saborizantes.

El término "paciente" incluye seres humanos y otros mamíferos.

15 El término "tratar" se refiere a: (i) prevenir una enfermedad, un trastorno o una afección en un paciente que puede tener predisposición a la enfermedad, el trastorno y/o la afección, pero que aún no se le ha diagnosticado; (ii) inhibir la enfermedad, el trastorno o la afección, es decir, detener su desarrollo; y (iii) aliviar la enfermedad, el trastorno o la afección, es decir, causar la regresión de la enfermedad, del trastorno o de la afección.

20 Los compuestos de la presente descripción también pueden administrarse con ciclosporina, por ejemplo, ciclosporina A u otros análogos que actúan mediante un mecanismo similar. En ensayos clínicos, se demostró que la ciclosporina A es eficaz contra HCV (Hepatology 2003, 38, 1282; Biochem. Biophys. Res. Commun. 2004, 313, 42;

J. Gastroenterol. 2003, 38, 567).

25 En la siguiente Tabla 1 se enumeran algunos ejemplos de compuestos que pueden administrarse con los compuestos de esta descripción. Los compuestos de la descripción pueden administrarse con otros compuestos activos contra el HCV en una terapia de combinación, ya sea de manera conjunta o separada, o combinando los compuestos en una composición.

30

Tabla 1

Nombre comercial

Clase fisiológica Tipo de inhibidor o diana Empresa de origen

NIM811

Inhibidor de ciclofilina Novartis

Zadaxin

Inmunomodulador Sciclone

Suvus

Azul de metileno Bioenvision

Actilon (CPG10101)

Agonista de TLR9 Coley

Batabulin (T67)

Anticancerígeno Inhibidor de β-tubulina Tularik Inc., South San Francisco, CA

ISIS 14803

Antiviral antisentido ISIS Pharmaceuticals Inc, Carlsbad, CA/Elan Phamaceuticals Inc., Nueva York, NY

Summetrel

Antiviral antiviral Endo Pharmaceuticals Holdings Inc., Chadds Ford, PA

GS-9132 (ACH-806)

Antiviral Inhibidor de HCV Achillion / Gilead

Compuestos de pirazolopirimidina y sales de WO-2005047288 26 de mayo de 2005

Antiviral Inhibidores de HCV Arrow Therapeutics Ltd.

Levovirin

Antiviral Inhibidor de IMPDH Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA

Merimepodib (VX-497)

Antiviral Inhibidores de IMPDH Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA

XTL-6865 (XTL-002)

Antiviral Anticuerpo monoclonal XTL Biopharmaceuticals Ltd., Rehovot, Israel

Telaprevir (VX-950, LY-570310)

Antiviral Inhibidor de serina proteasa de NS3 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA/ Eli Lilly and Co. Inc., Indianápolis, IN

E12704582

19-06-2015 E12704582

HCV-796

Antiviral Inhibidor de NS5B replicasa Wyeth / Viropharma

NM-283

Antiviral Inhibidor de NS5B replicasa Idenix / Novartis

GL-59728

Antiviral Inhibidor de NS5B replicasa Gene Labs / Novartis

GL-60667

Antiviral Inhibidor de NS5B replicasa Gene Labs / Novartis

2’C MeA

Antiviral Inhibidor de NS5B replicasa Gilead

PSI 6130

Antiviral Inhibidor de NS5B replicasa Roche

R1626

Antiviral Inhibidor de NS5B replicasa Roche

2’C Metil adenosina

Antiviral Inhibidor de NS5B replicasa Merck

JTK-003

Antiviral Inhibidor de RdRp Japan Tobacco Inc., Tokio, Japón

Levovirin

Antiviral Ribavirin ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, CA

Ribavirin

Antiviral Ribavirin Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

Viramidine

Antiviral Profármaco Ribavirin Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA

Heptazyme

Antiviral Ribozima Ribozyme Pharmaceuticals Inc., Boulder, CO

BILN-2061

Antiviral Inhibidor de serina proteasa Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim, Alemania

SCH 503034

Antiviral Inhibidor de serina proteasa Schering Plough

Zadazim

Inmunomodulador Inmunomodulador SciClone Pharmaceuticals Inc., San Mateo, CA

Ceplene

Inmunomodulador Inmunomodulador Maxim Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA

CellCept

Inmunosupresor Inmunosupresor de IgG de HCV F. Hoffmann-La Roche LTD, Basilea, Suiza

Civacir

Inmunosupresor Inmunosupresor de IgG de HCV Nabi Biopharmaceuticals Inc., Boca Raton, FL

Albuferon -α

Interferón Albúmina IFN-α2b Human Genome Sciences Inc., Rockville, MD

Infergen A

Interferón IFN alfacon-1 InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA

Omega IFN

Interferón IFN-ω Intarcia Therapeutics

IFN-β y EMZ701

Interferón IFN-β y EMZ701 Transition Therapeutics Inc., Ontario, Canadá

Rebif

Interferón IFN-β1a Serono, Ginebra, Suiza

Roferon A

Interferón IFN-α2a F. Hoffmann-La Roche LTD, Basilea, Suiza

Intron A

Interferón IFN-α2b Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

19-06-2015 E12704582

Intron A y Zadaxin

Interferón IFN-α2b/α1-timosina RegeneRx Biopharma. Inc., Bethesda, MD/ SciClone Pharmaceuticals Inc, San Mateo, CA

Rebetron

Interferón IFN-α2b/ribavirin Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

Actimmune

Interferón INF-γ InterMune Inc., Brisbane, CA

Interferon-β

Interferón Interferón-β-1a Serono

Multiferon

Interferón IFN de larga duración Viragen/ Valentis

Wellferon

Interferón IFN-αn1 linfoblastoide GlaxoSmithKline plc, Uxbridge, Reino Unido

Omniferon

Interferón IFN-α natural Viragen Inc., Plantation, FL

Pegasys

Interferón IFN-α2a PEGilado F. Hoffmann-La Roche LTD, Basilea, Suiza

Pegasys y Ceplene

Interferón IFN-α2a PEGilado / inmunomodulador Maxim Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA

Pegasys y Ribavirin

Interferón IFN-α2a PEGilado /ribavirin F. Hoffmann-La Roche LTD, Basilea, Suiza

PEG-Intron

Interferón IFN-α2b PEGilado Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

PEG-Intron / Ribavirin

Interferón IFN-α2b PEGilado /ribavirin Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

IP-501

Protección Hepática Antifibrótico Indevus Pharmaceuticals Inc., Lexington, MA

IDN-6556

Protección Hepática Inhibidor de caspasa Idun Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA

ITMN-191 (R-7227)

Antiviral Inhibidor de serina proteasa InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA

GL-59728

Antiviral Inhibidor de NS5B replicasa Genelabs

ANA-971

Antiviral Agonista de TLR-7 Anadys

Boceprevir

Antiviral Inhibidor de serina proteasa Schering Plough

TMS-435

Antiviral Inhibidor de serina proteasa Tibotec BVBA, Mechelen, Bélgica

BI-201335

Antiviral Inhibidor de serina proteasa Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim, Alemania

MK-7009

Antiviral Inhibidor de serina proteasa Merck

PF-00868554

Antiviral Inhibidor de replicasa Pfizer

ANA598

Antiviral Inhibidor de NS5B polimerasa no nucleósido Anadys Pharmaceuticals, Inc., San Diego, CA, EE.UU.

IDX375

Antiviral Inhibidor de replicasa no nucleósido Idenix Pharmaceuticals, Cambridge, MA, EE.UU.

BILB 1941

Antiviral Inhibidor de NS5B polimerasa Boehringer Ingelheim Canada Ltd R&D, Laval, QC, Canadá

19-06-2015

PSI-7851

Antiviral Inhibidor de polimerasa nucleósido Pharmasset, Princeton, NJ, EE.UU.

PSI-7977

Antiviral Inhibidor de NS5B polimerasa nucleótido Pharmasset, Princeton, NJ, EE.UU.

VCH-759

Antiviral Inhibidor de NS5B polimerasa ViroChem Pharma

VCH-916

Antiviral Inhibidor de NS5B polimerasa ViroChem Pharma

GS-9190

Antiviral Inhibidor de NS5B polimerasa Gilead

Peg-interferon lamda

Antiviral Interferón ZymoGenetics/Bristol-Myers Squibb

INX-189

Antiviral Inhibidor de NS5B polimerasa nucleótido Inhibitex

Los compuestos de la presente descripción también pueden usarse como reactivos de laboratorio. Los compuestos pueden ser útiles a la hora de brindar herramientas de investigación para el diseño de ensayos de replicación viral, la validación de sistemas de ensayos en animales y estudios de biología estructural, con el fin de obtener más

5 información sobre los mecanismos de la enfermedad por HCV. Además, los compuestos de la presente descripción son útiles para establecer o determinar el sitio de unión de otros compuestos antivirales, por ejemplo, mediante inhibición competitiva.

Los compuestos de la presente descripción también pueden usarse para tratar o prevenir la contaminación viral de

10 materiales y, por ende, para reducir el riesgo de infección viral del personal médico, del personal del laboratorio, o de pacientes que están en contacto con tales materiales, por ejemplo, sangre, tejido, vestimenta e instrumentos quirúrgicos, vestimenta e instrumentos de laboratorio, y aparatos y materiales de extracción o transfusión de sangre.

La presente descripción pretende abarcar compuestos que tienen la Fórmula (I) cuando se preparan mediante

15 procesos sintéticos o metabólicos, que incluyen los que ocurren en el cuerpo humano o animal (in vivo), o en procesos que ocurren in vitro.

Las abreviaturas que se usan en la presente solicitud, incluidas, en particular, en los siguientes ejemplos, son conocidas por los expertos en el arte. Algunas de las abreviaturas que se usan son las siguientes: h para horas; 20 EtOAc para acetato de etilo; hex para hexanos; DCM para diclorometano; DEAD para azodicarboxilato de dietilo; Ph3P para trifenilfosfina; Et2O para dietiléter; THF para tetrahidrofurano; LiHMDS para hexametildisilazida de litio; Ph para fenilo; DIEA, DIPEA o iPr2EtN para diiosopropiletilamina; EtOH para etanol; MeOH para metanol; DMSO para dimetilsulfóxido; RT, Rt, rt o Rt para temperatura ambiente o tiempo de retención (según el contexto); ON u o/n para durante la noche; min para minutos; DCM para diclorometano; HATU para hexafluorofosfato de O-(7

25 azabenzotriazol-1-il)-N,N,N’,N’-tetrametiluronio; DMF para N,N-dimetilformamida; TFA para ácido trifluoroacético; HOBt o HOBT para hidroxibenzotriazol; DME para 1,2-dimetoxietano; y DMAP para N,N-dimetilaminopiridina.

Terminación 1

imagen5

Terminación 1, etapa a

imagen6

35

Se disolvió 2,6-dimetil-4H-piran-4-ona (15 g, 121 mmol) en etanol (300 ml), y se agregó 10 % de Pd/C (1,28 g, 1,21 mmol). La mezcla se hidrogenó en un agitador Parr en H2 (70 psi) a temperatura ambiente durante 72 h. La mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de tierra diatomácea (Celite®) y se lavó con etanol. El 40 filtrado se concentró al vacío, y el residuo se purificó mediante cromatografía flash (de 10 % a 30 % de EtOAc/Hex).

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10

15

20

25

30

35

40

45

Se aislaron dos fracciones de aceites transparentes. Las primeras fracciones de elución eran una mezcla de (2R,4r,6S)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-ol (Terminación 1 [Cap-1], etapa a) y (2R,4s,6S)-2,6-dimetiltetrahidro-2Hpiran-4-ol (1,2 g), mientras que las últimas fracciones de elución correspondieron solo a la Terminación 1, etapa a (10,73 g). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 3,69 -3,78 (1 H, m), 3,36 -3,47 (2 H, m), 2,10 (1 H, br. s.), 1,88 (2 H, dd, J=12,05, 4,73 Hz), 1,19 (6 H, d, J=6,10 Hz), 1,10 (2 H, q, J=10,70 Hz). 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 71,44 (2 C), 67,92 (1 C), 42,59 (2 C), 21,71 (2 C).

Terminación 1, etapa b

imagen7

Se agregó por goteo DEAD (166 ml, 330 mmol) a una solución de la Terminación 1, etapa a (10,73, 82 mmol), ácido 4-nitrobenzoico (48,2 g, 288 mmol) y Ph3P (86 g, 330 mmol) en benceno (750 ml). Se detectó evolución de calor, y la solución ámbar resultante se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. El solvente se retiró a presión reducida, y el residuo se trituró con Et2O (200 ml) para retirar óxido de trifenilfosfina (10 g). La mezcla restante se purificó mediante Biotage® (de 0 a 5 % EtOAc/Hex; 300 g de columna x 4). Se aisló un sólido blanco correspondiente a la Terminación 1, etapa b (19,36 g). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 8,27 -8,32 (2 H, m), 8,20 -8,24 (2 H, m), 5,45 (1 H, quin, J=2,82 Hz), 3,92 (2 H, dqd, J=11,90, 6,10, 1,53 Hz), 1,91 (2 H, dd, J=14,80, 2,29 Hz), 1,57 (2 H, dt, J=14,65, 3,05 Hz), 1,22 (6 H, d, J=6,10 Hz). 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 163,81 (1 C), 150,55 (1 C), 135,94 (1 C), 130,64 (2 C), 123,58 (2 C), 70,20 (1 C), 68,45 (2 C), 36,95 (2 C), 21,84 (2 C). LC-MS: Anal. calc. para [M]+ C14H17NO5: 279,11; encontrado 279,12.

Terminación 1, etapa c

imagen8

Se agregó una solución de LiOH (8,30 g, 347 mmol) en agua (300 ml) a una solución de la Terminación 1, etapa b (19,36 g, 69,3 mmol) en THF (1000 ml), y la mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Se retiró THF a presión reducida, y la capa acuosa se diluyó con más agua (200 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron al vacío. Se recuperó un residuo oleoso con un sólido blanco. La mezcla se trituró con hexanos, y el sólido se retiró mediante filtración para obtener un aceite transparente correspondiente a la Terminación 1, etapa c (8,03 g). 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 4,21 (1 H, quin, J=2,82 Hz), 3,87 -3,95 (2 H, m), 1,72 (1 H, br. s.), 1,63 (2 H, dd, J=14,34, 2,14 Hz), 1,39 1,47 (2 H, m), 1,17 (6 H, d, J=6,41 Hz). 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 67,53 (2 C), 64,71 (1 C), 39,99 (2 C), 21,82 (2 C).

Terminación 1, etapa d

imagen9

Se agregó cloruro de p-tosilo (23,52 g, 123 mmol) a una solución de la Terminación 1, etapa c (8,03 g, 61,7 mmol) y piridina (19,96 ml, 247 mmol) en CH2Cl2 (750 ml) a temperatura ambiente y se agitó durante 36 h. Debido a que la reacción no se completó, se retiró CH2Cl2 a presión reducida, y se continuó la agitación durante 48 h más. Luego, la mezcla se agregó a CH2Cl2 (100 ml) y agua (100 ml), y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla se separó, y la capa orgánica se lavó intensamente con HCI acuoso 1 N (2 X 50 ml). Luego, la capa orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se concentró. Se aisló un aceite amarillo correspondiente a la Terminación 1, etapa d (14,15 g), que se solidificó al vacío como un sólido blancuzco. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 7,80 (2 H, d, J=8,24 Hz), 7,35 (2 H, d, J=7,93 Hz), 4,88 (1 H, quin, J=2,82 Hz), 3,79 -3,87 (2 H, m), 2,46 (3 H, s), 1,76 (2 H, dd, J=14,50, 2,59 Hz), 1,36 (2 H, ddd, J=14,34, 11,60, 2,75 Hz), 1,12 (6 H, d, J=6,10 Hz). 13C NMR (126 MHz, CDCl3) δ ppm 144,64 (1 C), 134,24 (1 C), 129,82 (2 C), 127,61 (2 C), 77,34 (1 C), 67,68 (2 C), 37,45 (2 C), 21,61 (1 C), 21,57 (2 C). LC-MS: Anal. calc. para [2M+H]+ C28H41O8S2: 569,22; encontrado 569,3.

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Terminación 1, etapa e

imagen10

Se agregó LiHMDS (29,7 ml, 29,7 mmol, 1 M en THF) a una solución de la Terminación 1, etapa d (7,05 g,

5 24,8 mmol) y 2-(difenilmetilenamino)acetato de bencilo (8,57 g, 26,0 mmol) en tolueno (80 ml) a temperatura ambiente en un tubo a presión, y la mezcla resultante luego se agitó durante 5 h a 100 ºC. La reacción se inactivó con agua (100 ml), se extrajo con EtOAc, se lavó con agua, se secó en mgSO4, se filtró y se concentró al vacío. El residuo se purificó mediante Biotage® (de 0 % a 15 % EtOAc/Hex; 240 g de columna), y se aisló un aceite amarillo correspondiente a la Terminación 1, etapa e (8,76 g)como una mezcla racémica. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm

10 7,62 -7,71 (2 H, m), 7,30 -7,45 (11 H, m), 7,05 (2 H, dd, J=7,65, 1,63 Hz), 5,13 -5,22 (2 H, m), 3,89 (1 H, d, J=6,78 Hz), 3,46 (2 H, dquind, J=11,27, 5,90, 2,01 Hz), 2,34 -2,45 (1 H, m), 1,58 -1,66 (1 H, m), 1,34 -1,43 (1 H, m), 1,19 (3 H, d, J=6,02 Hz), 1,03 -1,16 (4 H, m), 0,83 -0,97 (1 H, m) . 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ ppm 170,84 (1 C), 170,68 (1 C), 139,01 (1 C), 135,96 (1 C), 135,51 (1 C), 130,04 (1 C), 128,49 (2 C), 128,20 (1 C), 128,09 (4 C), 127,97 (2 C), 127,85 (1 C), 127,67 (2 C), 127,47 (2 C), 72,76 (1 C), 72,46 (1 C), 69,77 (1 C), 65,99 (1 C), 39,11 (1 C),

15 35,90 (1 C), 35,01 (1 C), 21,74 (1 C), 21,65 (1 C). LC-MS: Anal. calc. para [2M+Na]+ C58H62N2NaO6: 905,45; encontrado 905,42.

Terminación 1, etapa f

imagen11

Se disolvió la Terminación 1, etapa e (8,76 g, 19,84 mmol) en THF (100 ml) y se trató con HCl 2 N en agua (49,6 ml, 99 mmol). La solución transparente resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h, y luego, se retiró THF a presión reducida. La capa acuosa restante se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml) y se concentró al vacío para obtener la 25 amina cruda correspondiente. El residuo se absorbió en CH2Cl2 (100 ml) y se cargó con DIEA (11,8 ml, 67,6 mmol) y cloroformiato de metilo (1,962 ml, 25,3 mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se diluyó con CH2Cl2 (50 ml) y se lavó con agua (100 ml) y salmuera (100 ml). La capa orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se concentró. El residuo se purificó mediante Biotage® (de 15 % a 25 % EtOAc/Hex; 80 g de columna). Se recuperó un aceite incoloro transparente correspondiente a la Terminación 1, 30 etapa f, racémica (5,27 g). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,32 -7,41 (5 H, m), 5,13 -5,28 (3 H, m), 4,36 (1 H, dd, J=8,16, 4,64 Hz), 3,69 (3 H, s), 3,30 -3,47 (2 H, m), 2,00 -2,16 (1 H, m), 1,52 (1 H, d, J=12,55 Hz), 1,33 (1 H, d, J=12,30 Hz), 1,15 (6 H, dd, J=6,02, 5,02 Hz), 0,88 -1,07 (2 H, m). 13C NMR (101 MHz, CDCl3) δ ppm 171,39 (1 C), 156,72 (1 C), 135,20 (2 C), 128,60 (2 C), 128,57 (1 C), 128,52 (2 C), 72,77 (1 C), 72,74 (1 C), 67,16 (1 C), 57,81 (1 C), 52,40 (1 C), 38,85 (1 C), 35,56 (1 C), 34,25 (1 C), 21,94 (2 C). LC-MS: Anal. calc. para [M+H]+ C18H26NO5:

35 336,18; encontrado 336,3.

Se desarrolló un método quiral para separar la mezcla racémica usando 20 % de etanol como modificador en una columna CHIRALPAK® AS-H (50 x 500 mm, 20 µm) (longitud de nm; velocidad de flujo = 100 ml/min durante 22 min; solvente A = 0,1 % de dietilamina en heptanos; solvente B = EtOH). Los dos isómeros separados

40 correspondieron a 2-((2R,4r,6S)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-((metoxicarbonil)amino)acetato de (S)-bencilo (Terminación 1, etapa f.1) (tiempo de reacción = 9,8 min, 2,2 g)y 2-((2R,4r,6S)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2((metoxicarbonil)amino)acetato de (R)-bencilo (Terminación 1, etapa f.2) (tiempo de reacción = 16,4 min, 2,1 g), y cada uno de ellos exhibió los mismos datos analíticos que la mezcla correspondiente (véase más atrás).

45 Terminación 1

Se disolvió 2-((2R,4r,6S)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-((metoxicarbonil)amino)acetato de (S)-bencilo

E12704582

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(Terminación 1, etapa f.1) (2,2 g, 6,6 mmol) en MeOH (50 ml) en una botella Parr y se cargó con 10 % de Pd/C (0,349 g, 0,328 mmol). Luego, la suspensión se colocó en un agitador Parr, y la mezcla se purgó con N2 (3X), se colocó en 40 psi de H2 y se agitó a temperatura ambiente durante 15 h. El catalizador se filtró a través de una almohadilla de tierra diatomácea (Celite®), y el solvente se retiró a presión reducida para obtener un sólido ámbar 5 correspondiente a la Terminación 1 (1,6 g). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12,74 (1 H, br. s.), 7,35 (1 H, d, J=6,10 Hz), 3,85 (1 H, br. s.), 3,53 (3 H, s), 3,35 (2 H, ddd, J=15,95, 9,99, 6,10 Hz), 1,97 (1 H, br. s.), 1,48 (2 H, t, J=13,28 Hz), 1,06 (6 H, d, J=6,10 Hz), 0,82 -1,00 (2 H, m). 13C NMR (101 MHz, DMSO-d6) δ ppm 176,93 (1 C), 156,72 (1 C,), 72,10 (1 C), 71,92 (1 C), 58,54 (1 C), 51,35 (1 C), 36,88 (1 C), 35,82 (1 C), 34,71 (1 C), 21,90 (2 C). Nota: La estereoquímica absoluta de la Terminación 1 se determinó mediante análisis de rayos X de cristal único de

10 un análogo de éster preparado de la Terminación 1 y (S)-fenetanol.

Terminación 2

imagen12

15 Ácido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acético Terminación 2, etapa a

imagen13

20 Referencia: S. Danishefsky; et al. J. Org. Chem, 1982, 47, 1597.

Se agregó por goteo trifluoruro de boro eterato (3,81 ml, 30,5 mmol) a una solución agitada y enfriada (-78 ºC) de (E)-(4-metoxibuta-1,3-dien-2-iloxi)trimetilsilano (5,0 g, 29 mmol) y acetaldehído (3,28 ml, 58,0 mmol) en dietiléter (100 ml) en nitrógeno. La reacción se agitó a -78 ºC durante 2,5 h y, luego, se inactivó con NaHCO3 acuoso saturado 25 (40 ml), se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Las capas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con dietiléter (2 x 50 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron hasta obtener un aceite amarillo/naranja. El aceite crudo se purificó con Biotage® Horizon (110 g de SiO2, 25-40 % EtOAc/hexanos) para obtener 2-metil-2H-piran-4(3H)-ona racémica (Terminación 2, etapa a) (2,2 g)como un aceite amarillo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ ppm 7,35 (d, J=6,0 Hz, 1 H), 5,41 (dd, J=6,0, 1,0 Hz,

30 1 H), 4,51 -4,62 (m, 1 H), 2,41 -2,57 (m, 2 H), 1,47 (d, J=6,3 Hz, 3 H).

Terminación 2, etapa b

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35 Referencia: Reddy, D. S.; et al. J. Org. Chem. 2004, 69, 1716-1719.

Se agregó una solución de metil litio 1,6 M en dietiléter (20,9 ml, 33,4 mmol) a una suspensión agitada de yoduro de cobre(I) (4,25 g, 22,30 mmol) en dietiléter (30 ml) a 0 ºC y en nitrógeno. La reacción se agitó a 0 ºC durante 20 min, y luego, se agregó 2-metil-2H-piran-4(3H)-ona racémica (1,25 g, 11,2 mmol) en dietiléter (12,0 ml) durante 10 min. La 40 reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. La mezcla de reacción se vertió en NH4Cl (acuoso) saturado y se agitó durante 20 min. La solución se extrajo con dietiléter (4 x 60 ml), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera (~ 80 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron para obtener (2R,6R)-2,6-dimetildihidro-2H-piran-4(3H)-ona racémica (Terminación 2, etapa b) (1,34 g)como un aceite naranja. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4,28 -4,39 (m, 2 H), 2,55 (ddd, J=14,1, 4,8, 1,5 Hz, 2 H), 2,24 (ddd, J=14,1, 6,5,

45 1,5 Hz, 2 H), 1,28 (d, J=6,3 Hz, 6 H).

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Terminación 2, etapa c

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Se agregó borohidruro de sodio (0,354 g, 9,36 mmol) en porciones a una solución agitada de (2R,6R)-2,6dimetildihidro-2H-piran-4(3H)-ona racémica (Terminación 2, etapa b) (1,2 g, 9,4 mmol) en MeOH (30 ml) a 0 ºC. La solución se agitó durante 10 min a 0 ºC, se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 1 h. La reacción se vertió en NH4Cl saturado (~50 ml), se agitó durante 20 min y luego se concentró parcialmente (a ~1/2 de volumen). Se formó un precipitado, se agregó agua hasta que se volvió homogéneo, y luego, la solución se extrajo con DCM (3 x 60 ml). La capa acuosa se acidificó con HCl 1 N y luego se extrajo con DCM (3 x 60 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron con Na2SO4, se filtraron y se concentraron para formar un aceite amarillo turbio (1,08 g). El aceite crudo se disolvió en DCM (8,0 ml), y luego, se agregaron p-tosil-Cl (2,68 g, 14,0 mmol) y piridina (1,51 ml, 18,7 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 d. La reacción se diluyó con NH4Cl saturado (~ 60 ml) y se extrajo con DCM (3 x 30 ml). La fase orgánica combinada se secó (MgSO4), se filtró y se concentró para obtener un aceite marrón. El aceite se purificó en Biotage® Horizon (80 g de SiO2, 10-25 % EtOAc/hexanos) para obtener 4-metilbencensulfonato de (2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-ilo racémico (Terminación 2, etapa c) (1,63 g)como un aceite incoloro transparente viscoso. Tiempo de retención de LC-MS: 3,321 min; m/z 284,98 [M+H]+. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0 % de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min, cuando el solvente A fue 5 % de MeOH / 95 % de H2O / 10 mM de acetato de amonio, y el solvente B fue 5 % de H2O / 95 % de MeOH / 10 mM de acetato de amonio. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7,81 (d, J=8,3 Hz, 2 H), 7,36 (d, J=8,0 Hz, 2 H), 4,81 -4,92 (m, 1 H), 4,17 -4,26 (m, 1 H), 3,78 -3,87 (m, 1 H), 2,47 (s, 3 H), 1,91 -1,99 (m, 1 H), 1,78 -1,86 (m, 1 H), 1,65 -1,72 (m, 1 H), 1,46 (ddd, J=12,9, 9,4, 9,3 Hz, 1 H), 1,20 (dd, J=6,5, 4,8 Hz, 6 H).

La mezcla racémica se separó en los enantiómeros individuales en múltiples inyecciones usando purificación SFC preparativa quiral (columna preparativa Chiralpak AD-H, 30 x 250 mm, 5 µm, 10 % 1:1 de EtOH/heptano en CO2, 70 ml/min durante 10 min) para obtener 4-metilbencenesulfonato de (2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-ilo (Terminación 2, etapa c.1) (577 mg) como el primer pico de elución y 4-metilbencenesulfonato de (2S,6S)-2,6dimetiltetrahidro-2H-piran-4-ilo (Terminación 2, etapa c.2) (588 mg) como el segundo pico de elución. Cada enantiómero se aisló como un aceite incoloro transparente que se solidificó para obtener un sólido blanco después del reposo.

Terminación 2, etapa d

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En un tubo a presión de 48 ml, se agitaron 4-metilbencensulfonato de (2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-ilo (Terminación 2, etapa c.1) (575 mg, 2,02 mmol) y 2-(difenilmetilenamino)acetato de bencilo (733 mg, 2,22 mmol) en THF (2 ml) y tolueno (10 ml). La solución incolora transparente se purgó con nitrógeno, luego se agregó LiHMDS (1,0 M en THF) (2,22 ml, 2,22 mmol), y el recipiente se selló y se calentó a 100 ºC durante 8 h. La reacción se enfrió a temperatura ambiente, se vertió en 1/2 de NH4Cl saturado (acuoso) (~50 ml) y se extrajo con EtOAc (3 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron hasta obtener un aceite naranja crudo. El aceite se purificó en Biotage® Horizon (40 g de SiO2, 10-25 % EtOAc/hexanos)

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para obtener el producto deseado impuro (501 mg) como un aceite naranja. Este material se volvió a purificar en Biotage® Horizon (25 g de SiO2, 6-12 % EtOAc/hexanos) para obtener una mezcla ~1:1 de diastereómeros (Terminación 2, etapa d) (306 mg) como un aceite naranja viscoso.

La mezcla se separó en los diastereómeros individuales en múltiples inyecciones usando purificación SFC preparativa quiral (columna preparativa Chiralcel OJ-H, 30 x 250 mm, 5 µm, 10 % 1:1 EtOH/heptano en CO2 a 150 bar, 70 ml/min durante 10 min) para obtener 2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2(difenilmetilenamino)acetato de (R)-bencilo (Terminación 2, etapa d.1) (124 mg) como el primer pico de elución y 2((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(difenilmetilenamino)acetato de (S)-bencilo (Terminación 2, etapa d.2) (129 mg) como el segundo pico de elución. Se aisló cada diastereómero como un aceite amarillo viscoso.

Datos analíticos para 2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(difenilmetilenamino)acetato de (R)-bencilo (Terminación 2, etapa d.1): 1H NMR (400 MHz, D4-MeOH) δ ppm 7,57 -7,61 (m, 2 H), 7,41 -7,48 (m, 4 H), 7,33 7,40 (m, 7 H), 7,03 -7,08 (m, 2 H), 5,22 (d, J=12,1 Hz, 1 H), 5,16 (d, J=12,1 Hz, 1 H), 4,09 -4,19 (m, 1 H), 3,84 (d, J=6,8 Hz, 1 H), 3,75 -3,83 (m, 1 H), 2,53 -2,64 (m, 1 H), 1,58 -1,65 (m, 1 H), 1,33 -1,43 (m, 1 H), 1,26 -1,32 (m, 1 H), 1,24 (d, J=7,0 Hz, 3 H), 1,10 (d, J=6,0 Hz, 3 H), 0,98 -1,08 (m, 1 H). Tiempo de retención de LC-MS: 4,28 min; m/z 442,16 [M+H]+. Los datos LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0 % de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min, cuando el solvente A fue 5 % de MeOH / 95 % de H2O / 10 mM de acetato de amonio, y el solvente B fue 5 % de H2O / 95 % de MeOH / 10 mM de acetato de amonio. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray.

Datos analíticos para 2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(difenilmetilenamino)acetato de (S)-bencilo (Terminación 2, etapa d.2): 1H NMR (400 MHz, D4-MeOH) δ ppm 7,57 -7,61 (m, 2 H), 7,41 -7,50 (m, 4 H), 7,33 7,40 (m, 7 H), 7,04 -7,08 (m, 2 H), 5,22 (d, J=12,1 Hz, 1 H), 5,16 (d, J=12,1 Hz, 1 H), 4,20 (qd, J=6,4, 6,3 Hz, 1 H), 3,86 (d, J=6,5 Hz, 1 H), 3,74 -3,83 (m, 1 H), 2,53 -2,64 (m, 1 H), 1,60 (td, J=12,7, 5,6 Hz, 1 H), 1,38 -1,51 (m, 2 H), 1,26 (d, J=7,0 Hz, 3 H), 1,04 (d, J=6,0 Hz, 3 H), 0,79 -0,89 (m, 1 H). Tiempo de retención de LC-MS: 4,27 min; m/z 442,17 [M+H]+. Los datos LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0 % de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min, cuando el solvente A fue 5 % de MeOH / 95 % de H2O / 10 mM de acetato de amonio, y el solvente B fue 5 % de H2O / 95 % de MeOH / 10 mM de acetato de amonio. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray.

Terminación 2, etapa e

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Se disolvió 2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(difenilmetilenamino)acetato de (S)-bencilo (Terminación 2, etapa d.2) (129,6 mg, 0,294 mmol) en THF (2 ml) y luego se trató con HCl 2 N (1,0 ml, 2,1 mmol) en agua. La reacción se agitó durante 2 h y luego se concentró en un flujo de nitrógeno durante la noche. El residuo crudo se disolvió en DCM (2 ml) y DIPEA (0,21 ml, 1,2 mmol), luego se trató con cloroformiato de metilo (0,032 ml, 0,41 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. La reacción se diluyó con agua (~ 2,5 ml) y se extrajo con DCM (4 x 2 ml). La fase orgánica combinada se concentró en un flujo de nitrógeno durante la noche, y el residuo se purificó con Biotage® Horizon (4 g de SiO2, 10-50 % EtOAc/hexanos) para obtener 2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acetato de (S)-bencilo (Terminación 2, etapa e) (56 mg) como un vidrio incoloro. Tiempo de retención de LC-MS: 3,338 min; m/z 335,99 [M+H]+. Los datos LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0 % de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min, cuando el solvente A fue 5 % de MeOH / 95 % de H2O / 10 mM de acetato de amonio, y el solvente B fue 5 % de H2O / 95 % de MeOH / 10 mM de acetato de amonio. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray. 1H NMR (400 MHz, D4-MeOH) δ ppm 7,29 -7,42 (m, 5 H), 5,28 (d, J=12,0 Hz, 1 H), 5,09 (d, J=12,0 Hz, 1 H), 4,10 -4,20 (m, 2 H), 3,68 -3,78 (m, 1 H), 3,65 (s, 3 H), 2,22 -2,36 (m, 1 H), 1,42 -1,54 (m, 2 H), 1,29 -1,38 (m, 1 H), 1,17 (d, J=6,8 Hz, 3 H), 1,04 (d, J=6,0 Hz, 3 H), 0,89 -1,00 (m, 1 H).

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Terminación 2

Se disolvió 2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acetato de (S)-bencilo (Terminación 2, etapa e) (56 mg, 0,167 mmol) en MeOH (4 ml) y luego se trató con 10 % de Pd/C (12 mg, 5 0,012 mmol). La mezcla de reacción se purgó al vacío con nitrógeno (4 x) y luego con hidrógeno (4 x), y se agitó en un globo de hidrógeno durante la noche . La reacción se filtró a través de Celite® y se concentró para obtener ácido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acético (Terminación 2) (41 mg) como un aceite incoloro. 1H NMR (400 MHz, D4-MeOH) δ ppm 4,22 (quin, J=6,4 Hz, 1 H), 4,04 -4,11 (m, 1 H), 3,78 -3,87 (m, 1 H), 3,66 (s, 3 H), 2,26 -2,39 (m, 1 H), 1,63 (d, J=13,1 Hz, 1 H), 1,51 -1,60 (m, 1 H), 1,42 -1,49 (m, 1 H), 1,27 (d,

10 J=7,0 Hz, 3 H), 1,11 (d, J=6,3 Hz, 3 H), 0,97 -1,08 (m, 1 H). Nota: La estereoquímica absoluta de la Terminación 2 se determinó mediante análisis de rayos X de cristal único de un análogo de amida preparado de un epímero de la Terminación 2 (ácido (R)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2Hpiran-4-il)-2-((metoxicarbonil)amino)acético) y (S)-1-(naftalen-2-il)etanamina.

15 En el Esquema 1, se ilustra una síntesis alternativa de la Terminación 2. Las primeras cuatro etapas que dan como resultado (R)-2-metil-2H-piran-4(3H)-ona se realizaron con adaptaciones de un procedimiento informado (Anderson,

K. R; et al. Org. Proc. Res. Dev. 2010, 14, 58). La conversión de (R)-2-metil-2H-piran-4(3H)-ona en (2R,6R)-2,6dimetildihidro-2H-piran-4(3H)-ona se logró con adaptaciones de un procedimiento informado (Reddy, D. S.; et al. J. Org. Chem. 2004, 69, 1716). A continuación se brindan más detalles.

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3-(ter-butildimetilsililoxi)butanoato de (R)-etilo

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Se agregó ter-butilclorodimetilsilano (547 g, 3,63 mol) a una solución agitada de 3-hidroxibutanoato de (R)-etilo (400 g, 3,03 mol) en DCM (800 ml) en nitrógeno a 0 ºC. A la mezcla de reacción, se agregó imidazol (412 g, 6,05 mol) en porciones durante 20 min; en ese tiempo, la mezcla se volvió una suspensión blanca espesa. Se 30 agregó más DCM (175 ml), y la mezcla se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. El sólido blanco se retiró mediante filtración, se enjuagó con DCM (500 ml), se dividió en agua (1 l) y DCM (500 ml), y la capa acuosa se volvió a extraer con más DCM (500 ml). El filtrado se combinó con las capas orgánicas, se lavó con agua (500 ml) y salmuera, se secó en mgSO4 y se filtró. El producto se concentró y se secó en alto vacío para obtener 3-(ter

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butildimetilsililoxi)butanoato de (R)-etilo (777,5 g), que contenía impurezas no identificadas. Los datos analíticos del producto crudo se recopilaron con los datos informados en la literatura. El material se usó sin purificación adicional.

(R)-3-(ter-butildimetilsililoxi)-N-metoxi-N-metilbutanamida

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Se agregó, por goteo, una solución de cloruro de isopropilmagnesio 2 M en THF (800 ml, 1,60 mol) mediante una cánula durante 60 min a una solución agitada de 3-(ter-butildimetilsililoxi)butanoato de (R)-etilo (131 g, 532 mmol) y 10 N,O-dimetilhidroxilamina/HCl (80 g, 824 mmol) en THF seco (850 ml) mientras se mantenía la temperatura interna entre -30 ºC y -20 ºC. La suspensión se agitó durante 3 h entre -20 y -10 ºC y se inactivó mientras estaba fría con solución de cloruro de amonio acuoso saturado (400 ml). La mezcla de reacción se dividió en agua (200 ml) y dietiléter (500 ml), y la fase acuosa se extrajo adicionalmente con dietiléter (1 l). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en mgSO4, se filtraron, se concentraron y se secaron en alto vacío para obtener

15 (R)-3-(ter-butildimetilsililoxi)-N-metoxi-N-metilbutanamida. La reacción se repitió 6 veces para obtener un total de 717 g de material. Los datos analíticos se recopilaron con los datos informados en la literatura. El material se usó sin purificación adicional.

N-etilidenpiperidin-1-amina

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Para referencias pertinentes, véase: (a) Marques-Lopez, E.; et al. Eur. J. Org. Chem. 2008, 20, 3457. (b) Corey, E.; et al. Chem. Ber. 1978, 111, 1337. (c) Chudek, J. A. et al. J. Chem. Soc. Perkin Trans 2 1985, 8, 1285.

25 Se agregó por goteo piperidin-1-amina (754 ml, 6,99 mol) durante 60 min a acetaldehído mantenido a 0 ºC (304 ml, 5,38 mol) mientras se agitaba en nitrógeno. [Precaución: La adición es exotérmica. En esta escala, el embudo de goteo que contenía piperidin-1-amina se volvió caliente debido al acetaldehído que se Había evaporado y condensado en el embudo de goteo]. Después de 1 h a 0 ºC y 1 h a temperatura ambiente, se equipó el recipiente de reacción con un condensador de reflujo de 16

30 pulgadas, se calentó a 40 ºC y se agitó durante 20 h. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente y se dividió en dietiléter (700 ml) y salmuera (300 ml). La capa orgánica se lavó con agua, y la capa acuosa se extrajo con dietiléter (2 x 500 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en mgSO4, se filtraron y se concentraron en alto vacío durante 8 h para obtener (E)-N-etilidenpiperidin-1-amina (772 g)(contenía impurezas) como un aceite amarillo. Los datos analíticos se recopilaron con los datos informados en la literatura. El material se

35 usó sin purificación adicional.

(E)-5-((R)-ter-butildimetilsililoxi)-1-(piperidin-1-ilimino)hexan-3-ona

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40 Se agregó n-BuLi en hexanos (2,5 M, 644 ml, 1,61 mol) durante 40 min a una solución agitada de diisopropilamina (245 ml, 1,72 mol) en THF seco (23 l) a 0 ºC en nitrógeno. La mezcla se agitó a 0 ºC durante 30 min, y luego se agregó por goteo una solución de (E)-N-etilidenpiperidin-1-amina (203 g, 1,61 mol) en THF seco (100 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0 ºC durante 2 h, y la suspensión se enfrió a -78 ºC y se trató por goteo con una solución de

45 (R)-3-(ter-butildimetilsililoxi)-N-metoxi-N-metilbutanamida (280,4 g, 1,073 mol) en THF seco (100 ml). La mezcla de reacción se agitó durante 3 h a -78 ºC, se calentó lentamente a temperatura ambiente y luego se agitó durante 16 h. La mezcla de reacción se dividió en agua (600 ml) y dietiléter (1,5 l), y la capa acuosa se volvió a extraer con dietiléter. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron en mgSO4, se filtraron y se concentraron para obtener un aceite color ámbar. El aceite crudo se purificó a través de una columna corta (3lde gel

50 de sílice en un embudo de vidrio aglomerado de 4lpreviamente equilibrado con 5 % de EtOAc/hexanos; luego, el aceite crudo se disolvió en 50 ml de DCM/hexanos (1:5), se cargó en la parte superior del gel de sílice y, finalmente,

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la columna se eluyó con 5-40 % EtOAc/hexanos) para obtener (E)-5-((R)-ter-butildimetilsililoxi)-1-(piperidin-1ilimino)hexan-3-ona. Las fracciones impuras se combinaron, se concentraron y se volvieron a purificar con Biotage® Horizon (300 g de SiO2, 15-45 % EtOAc/hexanos) para obtener más producto (230 g total). Los datos analíticos se recopilaron con los datos informados en la literatura. El material se usó sin purificación adicional.

(R)-2-metil-2H-piran-4(3H)-ona

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Se agregó en una porción Amberlyst-15 (122 g, 372 mmol) (forma seca, perlas marrón pálido, Alfa Aesar, Stock # 89079 o L14146) a una solución agitada de (E)-5-((R)-ter-butildimetilsililoxi)-1-(piperidin-1-ilimino)hexan-3-ona (121 g, 372 mmol) en THF seco (1,2 l). La mezcla se sometió a reflujo durante 2,5 h, se enfrió, se filtró y se concentró hasta obtener un líquido color ámbar. El líquido crudo se purificó a través de una columna corta (el producto crudo se disolvió en 30 ml de 5% EtOAc/hexanos y se cargó en la parte superior de 1,5lde gel de sílice en un embudo de vidrio aglomerado de 4lpreviamente equilibrado con 5 % EtOAc/hex; la columna se eluyó con 5-50 % EtOAc/hexanos) para obtener enona (R)-2-metil-2H-piran-4(3H)-ona. Nota: El solvente se retiró mediante evaporación giratoria cuidadosa (la temperatura del baño fue menor o igual a la temperatura ambiente), pero se detectó cierto producto deseado en la trampa de recuperación. Este material se concentró para retirar el solvente usando una columna Vigreux de 20 pulgadas con un cabezal de destilación y se combinó con el material original. El producto total deseado se volvió a purificar mediante destilación para obtener un aceite incoloro (17,8 g)con un punto de ebullición de 68-70 ºC a 10 mm de Hg. Rotación óptica: +212,8 a c = 0,46 g/100 ml CHCl3.

(2R,6R)-2,6-dimetildihidro-2H-piran-4(3H)-ona

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Se agregó metilitio en dietiléter (1,6 M, 218 ml, 349 mmol) en porciones de ~10 ml durante 20 min a una suspensión agitada de yoduro de cobre (I) (44,3 g, 233 mmol) en dietiléter (350 ml) enfriada a 0 ºC en nitrógeno. La mezcla de reacción se agitó a 0 ºC durante 30 min, y luego se agregó por goteo (R)-2-metil-2H-piran-4(3H)-ona (13,5 g, 116 mmol) en dietiléter (150 ml) durante 30 min. Se retiró el baño frío, y la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 3 h. La mezcla de reacción se agregó lentamente (durante ~5 min) a una solución agitada de NH4Cl saturado (acuoso) (~ 750 ml) y hielo. Se agregaron más dietiléter (~500 ml) y agua (~150 ml), y la solución, que contenía un precipitado gris, se agitó durante la noche. Las capas orgánicas se separaron, y la capa acuosa se extrajo con dietiléter (500 ml) y DCM (500 ml). La fase orgánica combinada se secó (MgSO4), se filtró y se concentró (la temperatura del baño evaporador giratorio se mantuvo a temperatura ambiente

o a una temperatura inferior a esta) hasta obtener un aceite naranja. El aceite crudo se purificó con Biotage® Horizon (240 g de SiO2, 1-4 % de dietiléter en DCM; la columna se equilibró previamente con DCM) para obtener (2R,6R)-2,6-dimetildihidro-2H-piran-4(3H)-ona (13,4 g, 86 % de pureza mediante 1H-NMR) como un aceite amarillo claro. [Nota: El material se concentró cuidadosamente y se observó que contenía 10 % p/p de DCM mediante 1H-NMR. El análisis por 1H-NMR también indicó que el material estaba contaminado con ~2,5 % de TBDMSOH acumulado de una reacción previa y 1,6 % de (2R,6S)-2,6-dimetildihidro-2H-piran-4(3H)-ona]. Los datos analíticos del producto se recopilaron con los datos informados en la literatura, y el material se usó sin purificación adicional. 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 4,41-4,25 (m, 2 H), 2,55 (ddd, J = 14,1, 4,8, 1,4 Hz, H), 2,24 (ddd, J = 14,1, 6,5, 1,5 Hz, 2 H), 1,28 (d, J = 6,5 Hz, 6 H).

2-((2R,6R)-2,6-dimetil-2H-piran-4(3H,5H,6H)-iliden)-2-formamidoacetato de etilo

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50 Se agregó óxido cuproso (2,21 g, 15,4 mmol) a una solución agitada de 2-isocianoacetato de etilo (12,7 ml, 116 mmol) en dietiléter (300 ml), y la suspensión se agitó vigorosamente durante 10 min. Se agregó (2R,6R)-2,6dimetildihidro-2H-piran-4(3H)-ona (15,2 g, 103 mmol, 87 % de pureza con 13 % p/p de DCM) en dietiléter (100 ml)

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durante 15 min, y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción se enfrió a 0 ºC y se trató con KO-tBu 1 M (116 ml, 116 mmol) en THF, que se agregó en porciones de 10 ml durante ~ 15 min y luego se agitó a 0 ºC durante 1 h. Se agregó una solución de ácido acético (6,66 ml, 116 mmol) en DCM (60 ml), y la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción cruda se dividió en agua (~300 ml) y dietiléter (~300 ml), y la capa acuosa se volvió a extraer con DCM (300 ml). La fase orgánica combinada se secó (MgSO4), se filtró y se concentró hasta obtener un aceite rojo oscuro, que se solidificó al vacío. El producto crudo se purificó con cromatografía Biotage® Horizon (300 g de SiO2; se cargó en una columna usando una cantidad mínima de DCM; se eluyó con 40-60 % EtOAc/hexanos, que se mantuvo al 40 % para cuatro volúmenes de columna). Las fracciones tempranas del producto deseado también contenían la versión de los estereosiómeros cis del producto deseado como impureza. Estas fracciones impuras se combinaron, se concentraron para obtener 8,9 g de un aceite amarillo claro que se volvió a purificar con cromatografía Biotage® Horizon (240 g de gel de sílice; se eluyó con 40-65 % EtOAc/hexanos, que se mantuvo al 40 % para cinco volúmenes de columna). Todas las fracciones con producto deseado puro de ambas purificaciones, según se determinó por TLC, se combinaron y se concentraron para obtener 2-((2R,6R)-2,6-dimetil-2H-piran-4(3H,5H,6H)iliden)-2-formamidoacetato de etilo (18,8 g)como un sólido amarillo claro contaminado con <1 % (HPLC) de la variante isomérica de dimetilo cis.

Los datos de 1H-y 13C-NMR del material puro presentan una mezcla 2:1 de rotámeros de amida: 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 8,24 (d, J = 1,3 Hz, 0,66 H), 7,98 (d, J = 11,5 Hz, 0,33 H), 6,71 (br. s., 0,66 H), 6,56 (d, J = 12,0 Hz, 0,33 H), 4,32-4,00 (m, 4 H), 3,05 (dd, J = 14,3, 4,3 Hz, 0,33 H), 2,92 (d, J = 5,3 Hz, 1,33 H), 2,82 (dd, J = 14,3, 6,5 Hz, 0,33 H), 2,62 (dd, J = 13,9, 3,9 Hz, 0,33 H), 2,45 (dd, J = 14,1, 3,8 Hz, 0,66 H), 2,24 (dd, J = 13,8, 7,3 Hz, 0,33 H), 2,14-2,04 (m, 0,66 H), 1,37-1,29 (m, 3 H), 1,28-1,18 (m, 6 H). 13C-NMR (101 MHz, CDCl3) δ 164,5 (0,66 C), 163,9 (0,33 C), 163,8 (0,33 C), 159,3 (0,66 C), 147,5 (0,33 C), 147,0 (0,66 C), 120,3 (0,33 C), 118,6 (0,66 C), 68,1 (0,66 C), 67,8 (0,33 C), 67,4 (0,33 C), 66,8 (0,66 C), 61,1 (0,33 C), 60,9 (0,66 C), 38,2 (0,66 C), 37,4 (0,33 C), 36,2 (0,33 C), 36,0 (0,66 C), 20,5 (0,66 C), 20,1 (0,33 C), 19,5 (0,33 C), 19,2 (0,66 C), 13,8 (s, 1 C). Tiempo de retención de LC-MS: 1,85 min; m/z 242,45 (M+H)+. Los datos LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3µ C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0 % de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min. El solvente A fue 10 % de acetonitrilo/ 90 % de H2O / 0,1 % de ácido trifluoroacético, y el solvente B fue 10 % de H2O / 90 % de acetonitrilo / 0,1 % de ácido trifluoroacético. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray.

2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-formamidoacetato de (S)-etilo

O

H

Oimagen26N O

imagen27

O

Se hizo burbujear nitrógeno a través de una solución de 2-((2R,6R)-2,6-dimetil-2H-piran-4(3H,5H,6H)-iliden)-2formamidoacetato de etilo (17,0 g, 70,5 mmol) en MeOH (480 ml) durante 10 min en un recipiente de hidrogenación Parr de 2,5 l. Luego, se agregó tetrafluoroborato de (-)-1,2-bis((2S,5S)-2,5-dimetilfosfolano)etan(ciclooctadien)-rodio

(I) (0,706 g, 1,27 mmol), y el recipiente de reacción se selló, se purgó al vacío con nitrógeno (4 x) y luego con hidrógeno (4x). La solución de reacción se agitó a 60 psi de hidrógeno durante 3 d, se retiró del agitador y se concentró hasta obtener un aceite rojo oscuro. El aceite crudo se purificó con cromatografía Biotage® Horizon (300 g de SiO2, 50-75 % EtOAc/hexanos) para obtener 2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-formamidoacetato de (S)-etilo (17,4 g, contiene 5,9 % p/p de solventes (EtOAc y DCM) mediante 1H-NMR) como un aceite viscoso amarillo claro. Los datos de 1H-NMR indican una mezcla 10:1 de dos rotámeros de amida. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,26 (s, 0,9 H), 8,01 (d, J = 11,8 Hz, 0,1 H), 6,15 (d, J = 8,5 Hz, 0,9 H), 5,96-5,84 (m, 0,1 H), 4,68 (dd, J = 9,0, 5,0 Hz, 0,9 H), 4,33-4,17 (m, 3 H), 3,87 (dd, J = 10,2, 6,4 Hz, 0,1 H), 3,75 (dqd, J = 11,5, 6,0, 2,0 Hz, 1 H), 2,412,29 (m, 0,9 H), 2,29-2,19 (m, 0,1 H), 1,72-1,28 (m, 3 H), 1,28-1,23 (m, 6 H), 1,17-1,10 (m, 3 H), 1,09-0,96 (m, 1 H). 13C-NMR (101 MHz, CDCl3) δ 170,6, 160,3, 68,1, 64,0, 61,4, 54,2, 36,0, 33,1, 30,6, 21,9, 16,7, 13,9. Tiempo de retención de LC-MS: 1,64 min; m/z 244,25 (M+H)+. Los datos LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3µ C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0 % de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min. El solvente A fue 10 % de acetonitrilo/ 90 % de H2O / 0,1 % de ácido trifluoroacético, y el solvente B fue 10 % de H2O / 90 % de acetonitrilo / 0,1 % de ácido trifluoroacético. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray.

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2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonil-amino)acetato de (S)-etilo

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En un recipiente de 1 equipado con un condensador que se tapó con un tabique y se ventiló con una aguja, se calentó una solución de 2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-formamidoacetato de (S)-etilo (17,6 g, 72,3 mmol) en etanol (409 ml) y HCl 1,5 N (acuoso) (409 ml) en un baño de aceite previamente equilibrado a 52 ºC durante 7,5 h. El componente volátil se retiró al vacío, y el residuo se azeotropó con EtOH (2 x 50 ml) y se secó al vacío durante la noche para obtener una espuma blanca. La espuma blanca se disolvió en DCM (409 ml), y se agregaron por goteo N,N-diisopropiletilamina (38,0 ml, 218 mmol) durante 10 min y, luego, clorocarbonato de metilo (8,40 ml, 109 mmol) durante 10 min. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4,5 h y luego se inactivó cuidadosamente con HCl 1 N (100 ml). Las capas se separaron, y la capa orgánica se lavó con HCl 1 N (50 ml) y luego con solución básica acuosa (50 ml de agua + 2 ml de NaHCO3 saturado). La capa orgánica se secó (MgSO4), se filtró y se concentró. El residuo se purificó con Biotage® (300 g de SiO2; la muestra se cargó en una columna con una cantidad mínima de cloroformo y se eluyó con 30 % EtOAc/hexanos) para obtener 2-((2R,6R)-2,6dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonil-amino)acetato de (S)-etilo (13,8 g)como un aceite amarillo viscoso. 1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ 5,23 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 4,34-4,15 (m, 4 H), 3,81-3,72 (m, 1 H), 3,70 (s, 3 H), 2,35-2,23 (m, 1 H), 1,63-1,51 (m, 2 H), 1,34-1,27 (‘m’ y ‘t’ superpuestos, J = 7,0 Hz, 1 H & 3 H), 1,25 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,14 (d, J = 6,0 Hz, 3 H), 1,11-0,99 (m, 1 H). Tiempo de retención de LC-MS: 2,89 min; m/z 296,23 (M+Na)+. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3µ C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0 % de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min. El solvente A fue 10 % de MeOH / 90 % de H2O / 0,1 % de ácido trifluoroacético, y el solvente B fue 10 % de H2O / 90 % de MeOH / 0,1 % de ácido trifluoroacético. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray. Nota adicional: el producto anterior se volvió a purificar mediante cromatografía SFC (180 mg/inyección, con un rendimiento de 7,2 g/h) antes de la etapa de hidrólisis para retirar una pureza no identificada. Condiciones:

Columna: ChiralPak AD-H 25 X 3cm , 5µ Temperatura de la columna: 25 ºC Velocidad de flujo: 150 ml/min Fase móvil: CO2/MeOH= 93/7 Volumen de inyección: 1,0 ml (180 mg/ml) Modelo de inyección: Apilado (inyección/tiempo de ejecución (min) = 1,47/3,0) Longitud de onda del detector: 220 nm Solvente de muestra: CH3OH/CH3CN=1:1(v/v)

Ácido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acético (Terminación 2)

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Se agregó por goteo hidróxido de litio hidrato (8,51 g, 203 mmol) en H2O (270 ml) a una solución agitada de 2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonil-amino)acetato de (S)-etilo (27,7 g, 101 mmol) en THF (405 ml) durante 65 min, mientras se mantenía la temperatura interna <5 ºC. La mezcla de reacción se agitó en un baño de hielo durante 40 min y luego en un baño de agua a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla de reacción se concentró parcialmente para retirar THF y luego se dividió en agua (250 ml) y DCM (250 ml). La capa acuosa se ajustó a pH = 2 con HCl 1 N (205 ml) y luego se extrajo con acetato de isopropilo (7 x 250 ml). Los extractos combinados se lavaron con salmuera (1 x 600 ml), se secaron (MgSO4), se filtraron y se concentraron. El aceite viscoso resultante se trató con tolueno (100 ml) y éter (75 ml), se evaporó y se secó al vacío para obtener la

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Terminación 2 (25,8 g, con 0,33 eq. de tolueno) como una espuma blanca. Pureza mediante SFC quiral >99,9 % (Chiralpak AD-H (25 x 0,46 cm, 5 µm) 5 % de EtOH en CO2, 3 ml/min, 35 oC, 220 nm, 100 bar). Pureza mediante HPLC 95,6 % (columna: Sunfire C8 75 x 4,6 mm ID; 2,5 µm; 40 ºC; fase móvil: A = agua c/ 0,1 % ácido fórmico; B = CH3CN c/ 0,1 % ácido fórmico). LC/MS (ES+) 228,1 (M+H -H2O)+. Mediante 1H-NMR se observó que el material

5 contenía alrededor de 0,33 eq. de tolueno. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,29 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 4,46-4,25 (m, 2 H), 3,82 (dd, J = 9,7, 5,9 Hz, 1 H), 3,74 (s, 3 H), 2,46-2,30 (m, 1 H), 1,76-1,55 (m, 2 H), 1,51-1,35 (m, 1 H), 1,29 (d, J = 6,8 Hz, 3 H), 1,18 (d, J = 6,2 Hz, 3 H), 1,18-1,06 (m, 1 H). 13C-NMR (101 MHz, CDCl3) δ 174,1, 156,7, 68,3, 64,4, 57,5, 52,2, 35,8, 32,6, 30,3, 21,6, 16,7.

10 Ejemplo 1

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(4,4'-bifenildiilbis(1H-imidazol-4,2-diil((2S,5S)-5-metil-2,1-pirrolidindiil)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran15 4-il)-2-oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo

Ejemplo 1, etapa a

Boc 20 El compuesto anterior se sintetizó de acuerdo con un protocolo de la literatura (J. Med. Chem., 2006, 49, 3520) con las siguientes modificaciones de purificación: el material crudo se recristalizó de EtOAc/hexanos a temperatura ambiente para obtener el Ejemplo 1, etapa a, como un cristal blanco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4,32 (br m, 1 H), 3,89 (br m, 1 H), 2,40 (br m, 1 H), 2,00 (m, 2 H), 1,65 (m, 1 H), 1,45 (s, 9 H), 1,20 (d, J= 5,6, 3 H). LC/MS: 25 Anal. calc. para [M+Na]+ C11H20NO4Na: 252,12; encontrado 252,21.

Ejemplo 1, etapa b

imagen31Boc CH3

ON

imagen32O

O

imagen33O

O

Nimagen34O

H3C Boc 30 A una mezcla del Ejemplo 1, etapa a (7,12 g, 31,1 mmol) y 1,1'-(bifenil-4,4'-diil)bis(2-bromoetanona) (6,0 g, 15 mmol) en acetonitrilo (100 ml), se agregó por goteo i-Pr2EtN (5,56 ml, 31,8 mmol), y la reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El componente volátil se retiró al vacío, y el residuo se dividió en CH2Cl2 (100 ml) y NaHCO3

acuoso saturado (100 ml). La capa orgánica se separó y se lavó con agua y salmuera, se secó (Na2SO4), se filtró y 35 se concentró al vacío para obtener el Ejemplo 1, etapa b como una espuma blanca (9,83 g), que se usó en la siguiente etapa sin purificación. 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ ppm 8,01 (4 H, t, J=7,32 Hz), 7,73 (4 H, d, J=6,71 Hz),

5,18 -5,66 (4 H, m), 4,51 (1 H, t, J=7,17 Hz), 4,42 (1 H, t, J=7,32 Hz), 4,06 (1 H, d, J=3,36 Hz), 3,95 (1 H, d, J=5,19 Hz), 2,27 -2,37 (4 H, m), 2,01 -2,17 (2 H, m), 1,67 -1,82 (2 H, m), 1,39 -1,52 (18 H, m), 1,32 (6 H, t, J=6,56 Hz). LC-MS: Anal. calc. para [M+H]+ C38H49N2O10 693,34; encontrado 693,34.

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Ejemplo 1, etapa c

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5 Se calentó una mezcla del Ejemplo 1, etapa b (9,83 g, 14,19 mmol) y acetato de amonio (10,94 g, 142 mmol) en xileno (160 ml) en un tubo a presión a 140 ºC durante 4 horas. El componente volátil se retiró al vacío, y el residuo se dividió en CH2Cl2 (140 ml) y agua (100 ml). La capa orgánica se lavó con NaHCO3 saturada (100 ml), se secó (Na2SO4) y se concentró al vacío. El material crudo resultante se purificó con Biotage® (de 20% a 50% de EtOAc/Hex; 300 g de columna) para obtener el Ejemplo 1, etapa c como un sólido marrón claro (4,3 g). 1H NMR

10 (500 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11,73 (2 H, br. s.), 7,83 (3 H, d, J=7,63 Hz), 7,62 -7,76 (5 H, m), 7,27 -7,55 (2 H, m), 4,82 (2 H, br. s.), 3,89 (2 H, br. s.), 2,10 (6 H, d, J=15,26 Hz), 1,58 -1,89 (2 H, m), 1,11 -1,52 (24 H, m). LC/MS: Anal. calc. para [M+H]+ C38H49N6O4: 653,37; encontrado 653,60.

Procedimiento alternativo: una mezcla del Ejemplo 1, etapa b (157 g, 227 mmol), acetato de amonio (332 g,

15 4310 mmol) e imidazol (54,1 g, 795 mmol) en tolueno (1,2 l) se calentó a 80 ºC durante 1 h mientras se barría el espacio de cabeza con nitrógeno. Se aumentó la temperatura a 85 ºC, y la mezcla de reacción se agitó durante 18 h. Se retiró el solvente, y el residuo se disolvió en DCM (2 l), se lavó con agua (1 l) y NaHCO3 saturado (3 l), y luego se secó (MgSO4), se filtró y se concentró. El residuo se disolvió en MeOH (4 l), se concentró a ~900 ml y se dejó reposar a temperatura ambiente. Después de 2 h, el sólido precipitado se recolectó mediante filtración, se lavó con

20 MeOH y se secó para obtener un sólido blanco. Este material se recristalizó de metanol (se disolvió en 4 l, luego se redujo a ~0,9 l) y se secó para obtener el Ejemplo 1, etapa c como un sólido blanco (99,5 g). El compuesto crudo del licor madre se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (300 g de SiO2, 20-50 % de EtOAc/hexanos) para obtener un producto adicional como un sólido blanco (13,0 g).

25 Ejemplo 1, etapa d

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Se agregó por goteo HCl 4 N en dioxano (8,23 ml, 32,9 mmol) a una solución de CH2Cl2 (100 ml) del Ejemplo 1,

30 etapa c (4,3 g, 6,6 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas. El retiro del componente volátil al vacío produjo la sal de HCl del Ejemplo 1, etapa d como un sólido amarillo (3,6 g). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10,55 (2 H, br. s.), 9,73 (2 H, br. s.), 8,12 -8,26 (2 H, m), 8,03 (4 H, d, J=8,03 Hz), 7,92 (4H, d, J=6,02 Hz), 5,07 (2 H, m, J=7,53 Hz), 3,82 (2 H, br. s.), 2,53 -2,65 (4 H, m), 2,27 (2 H, dd, J=12,42, 6,40 Hz), 1,85 -1,99 (2 H, m), 1,45 (6 H, d, J=6,27 Hz). LC/MS: Anal. calc. para [M+H]+ C28H33N6: 453,28;

35 encontrado 453,21.

El nivel de pureza del producto desprotegido anterior se podría mejorar mediante la aplicación del siguiente procedimiento de recristalización: Se agregó 2-propanol (242 ml) mediante un embudo de adición durante 15 min a una solución del Ejemplo 1, etapa d (60,5 g, pureza de 98,9 % mediante HPLC) en agua (121 ml) con agitación a

40 60 ºC, mientras se mantenía la temperatura interna entre 50 ºC y 60 ºC. La solución se agitó durante 5 min más, se retiró el manto de calor, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. El sólido precipitado se recolectó mediante filtración, se lavó con 2-propanol y se secó al vacío durante la noche para obtener un sólido amarillo (54,4 g)con pureza de 99,7 % mediante HPLC (columna: BEH C18 150 mm (L) x 2,1 mm (ID), 1,7 µm, fase móvil: A: 0,05 % de TFA en agua; B: 0,05 % de TFA en ACN). KF 15,3 % en peso (6,0 mol de H2O).

45

Ejemplo 1

Se agregó HATU (1,60 g, 4,21 mmol) a una solución de una sal de HCl del Ejemplo 1, etapa d (1,2 g, 2,0 mmol), Terminación 1 (1,01 g, 4,11 mmol) y DIEA (2,1 ml, 12 mmol) en DMF (20 ml), y la solución amarilla resultante se 50 agitó a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla se diluyó con EtOAc (75 ml) y se lavó con agua (100 ml). La capa acuosa se volvió a extraer con EtOAc (75 ml), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con 50 % de solución de NaHCO3 acuoso saturado (100 ml), agua (100 ml) y salmuera (100 ml). Luego se secó (MgSO4), se filtró y se concentró. El residuo restante se diluyó con CH3OH y se sometió a purificación mediante HPLC de fase inversa:

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Solvente A: 5 % de MeCN / 95 % de agua / 10 nM de NH4OAc; solvente B: 95 % de MeCN / 5 % de agua / 10 nM de NH4OAc; columna: Sunfire Prep C18 50 x 300 mm 10 u; longitud de onda: 220 nM; velocidad de flujo: 150 ml/min; gradiente: 0 % de B a 70 % de B durante 25 min con un tiempo de mantenimiento de 5 min. La concentración al vacío produjo (4,4'-bifenildiilbis(1H-imidazol-4,2-diil((2S,5S)-5-metil-2,1-pirrolidindiil)((1S)-1-((2R,6R)-2,65 dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo (Ejemplo 1) como una espuma blancuzca (1,2 g). La cristalización de EtOAc/éter de petróleo produjo un sólido blancuzco amorfo. 1H NMR (500MHz, DMSO-d6) (de la sal de TFA) δ 7,92 (br. s., 8 H), 7,59 (d, J=7,9 Hz, 2 H), 5,03 (t, J=8,5 Hz, 2 H), 4,69 4,60 (m, 2 H), 4,00 (t, J=8,4 Hz, 2 H), 3,55 (s, 6 H), 3,36 (br. s., 1 H), 3,33 -3,26 (m, 2 H), 3,21 (br. s., 2 H), 2,37 (br. s., 1 H), 2,26 (d, J=11,3 Hz, 1 H), 1,95 -1,81 (m, 3 H), 1,65 (d, J=10,7 Hz, 2 H), 1,48 (d, J=6,4 Hz, 6 H), 1,28 -1,23

10 (m, 4 H), 1,10 -0,99 (m, 16 H), 0,90 -0,75 (m, 4 H)

LC/MS: Anal. calc. para [M+H]+ C50H67N8O8: 907,51; encontrado 907,8. Tiempo de retención = 3,99 min y >95 % de índice de homogeneidad en las siguientes condiciones de LC --Columna: Phenomenex-Luna 2,0 X 50 mm 3 µm; inicio % B = 0; final % B = 100; tiempo de gradiente = 10 min; velocidad de flujo = 4 ml/min; longitud de

15 solventeA =H2O:ACN95%:5%10mmdeacetatodeamonio;solventeB =H2O:ACN5%:95%10mmde acetato de amonio.

Ejemplo 2

imagen38

(4,4'-bifenildiilbis(1H-imidazol-4,2-diil((2S,5S)-5-metil-2,1-pirrolidindiil)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran

4-il)-2-oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo

25 Se agregó HATU (63,6 mg, 0,167 mmol) a una solución agitada de ácido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2Hpiran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acético (Terminación 2) (41 mg, 0,17 mmol) y la sal de HCl del Ejemplo 1, etapa d (45,5 mg, 0,076 mmol) en DMF (0,9 ml) y DIPEA (0,11 ml, 0,61 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y luego se concentró en un flujo de nitrógeno durante la noche. El residuo se disolvió en MeOH, se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2) 100 x 30 mm, 10 micrómetros;

30 MeOH/agua c/ amortiguador de TFA) para obtener la sal de TFA de (4,4'-bifenildiilbis(1H-imidazol-4,2-diyl((2S,5S)-5metil-2,1-pirrolidindiil)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo (Ejemplo 2) (62,5 mg) como un sólido amarillo claro. 1H NMR indica la presencia de una mezcla de rotámeros; para el rotámero principal: 1H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ 8,02 -7,93 (m, 3 H), 7,88 (br s, 7 H), 5,18 (dd, J=10,7, 7,2 Hz, 2 H), 4,77 (quin, J=6,6 Hz, 2 H), 4,27 -4,17 (m, 2 H), 4,15 (d, J=9,3 Hz, 2 H), 3,72 -3,66 (m, 2 H),

35 3,67 (s, 6 H), 2,72 -2,50 (m, 2 H), 2,48 -2,16 (m, 6 H), 1,99 (dd, J=12,2, 5,6 Hz, 2 H), 1,76 -1,59 (m, 2 H), 1,57 (d, J=6,5 Hz, 6 H), 1,52 -1,40 (m, 2 H), 1,30 (dd, J=9,7, 6,7 Hz, 2 H), 1,22 (d, J=6,8 Hz, 6 H), 1,06 (d, J=6,0 Hz, 6 H), 0,97 (app q, J=12,0 Hz, 2 H). Tiempo de retención de LC-MS: 3,84 min; m/z 905,38 [M-H] -. Los datos de LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las

40 condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0 % de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min, cuando el solvente A fue 5 % de MeOH / 95 % de H2O / 10 mM de acetato de amonio, y el solvente B fue 5 % de H2O / 95 % de MeOH / 10 mM de acetato de amonio. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray.

45 Alternativamente, el Ejemplo 2 se puede preparar de la siguiente manera:

Una mezcla de ácido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acético (Terminación 2) (25,1 g, 91,0 mmol), 1-óxido de 2-hidroxipiridina (10,12 g, 91 mmol) y EDC (19,0 g, 99,0 mmol) en DMSO (400 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. A esta solución se agregó el Ejemplo 1, etapa d (sal de HCl; 29,2 g, 50 41,4 mmol), y la solución amarilla resultante se enfrió a 10 ºC con un baño de agua/hielo. Luego, se agregó i-Pr2EtN (26,7 g, 207 mmol) a la mezcla de reacción y, una vez que se completó la adición, se retiró el baño de hielo. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 25,5 h antes de inactivarla vertiéndola en una mezcla de hielo (1600 g)y agua (400 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. El sólido blanco se recolectó en un embudo Buchner mediante filtración y luego se secó al vacío con un flujo de nitrógeno que pasaba a 55 través de la parte superior del embudo de filtro durante la noche para obtener un sólido húmedo (124 g). El sólido húmedo se disolvió en DCM (500 ml), se lavó con agua (3 x 250 ml), se secó (MgSO4), se filtró y se concentró para obtener un sólido marrón claro (39,5 g). Este material se combinó con un material similar de otro lote (total 44,4 g) y

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se purificó mediante cromatografía usando un dispositivo ISCO (2 x 330 g de gel de sílice, 0-30 % de MeOH/DCM) para obtener el Ejemplo 2 (38,1 g)como un sólido marrón con una pureza de 98,6 % mediante HPLC. El material se descoloró de la siguiente manera: Se disolvieron 43,1 g de material en EtOH (500 ml) y luego se trató con carbón activado (8,6 g). La mezcla se calentó a 50 ºC durante 1 h, el carbón se retiró mediante filtración (3 capas de papel

5 de filtro), y la torta de filtrado se trató con más EtOH (300 ml). El filtrado se evaporó hasta secarse y se secó al vacío con un baño de agua caliente para obtener un sólido blancuzco (43,0 g). El producto se pudo purificar adicionalmente con un protocolo SFC:

Condiciones de purificación de SFC:

10 Rendimiento: 1,2 g/h Amt por inyecciones 30 mg Columna: Princeton CN 25 X 3 cm, 5 µ Temperatura de la columna: 45 ºC

15 Velocidad de flujo: 200 ml/min Fase móvil: CO2/[MeOH/DCM = 1:1 (en v/v)] = 80/20 Volumen de inyección: 2,5 ml (12 mg/ml) Modelo de inyección: Apilado (inyección/tiempo de ejecución (min) = 1,5/3,2) Longitud de onda del detector: 316 nm

20 Solvente de muestra: CH3OH/DCM = 1:1 (v/v)

Ejemplo 3

imagen39

((3-metil-4,4'-bifenildiil)bis(1H-imidazol-4,2-diil((2S,5S)-5-metil-2,1-pirrolidindiil)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro2H-piran-4-il)-2-oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo

30 Ejemplo 3, etapa a

imagen40

A una solución de ácido 4-bromo-2-metilbenzoico (10 g, 46,5 mmol) en DMF (150 ml), se agregó clorhidrato de N, O

35 dimetilhidroxilamina (5,44 g, 55,8 mmol) a temperatura ambiente y luego HOBT (8,55 g, 55,8 mmol). Luego, se agregó EDC (10,7 g, 55,8 mmol) seguido de DIPEA (24,4 ml, 140 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. Luego, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (150 ml), se lavó con agua (3 x 250 ml) y salmuera (150 ml), se secó en Na2SO4, se filtró y se concentró al vacío para obtener el Ejemplo 3, etapa a, crudo (9,5 g), que se usó como tal en la siguiente etapa. 1H NMR (CDCl3, δ = 7,26 ppm, 400 MHz): δ 7,37

40 (d, J= 1,6 Hz, 1 H), 7,34 (dd, J= 8,0, 1,6 Hz, 1 H), 7,14 (d, J= 8,0 Hz, 1 H), 3,47 (s, 3 H), 3,30 (s, 3 H), 2,31 (s, 3 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+H]+ C10H13 81BrNO2: 260,01; encontrado 260,0.

Ejemplo 3, etapa b

imagen41

El Ejemplo 3, etapa a (9,5 g, 36,8 mmol) se disolvió en dietiléter (150 ml) y se enfrió a 0 ºC. Luego, se agregó yoduro de metilmagnesio (3,0 M en dietiléter, 24,54 ml, 73,6 mmol) por goteo durante 10 minutos. La reacción se agitó durante 6 h a 40 ºC y, luego, se llevó a temperatura ambiente y se agitó durante 12 h. La mezcla de reacción se

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enfrió a 0 ºC, se inactivó con hielo y luego con HCl 1,5 N (50 ml). La capa orgánica de separó, y la capa acuosa se extrajo con metiléter de ter-butilo (2 x 100 ml), se secó en Na2SO4 y se concentró a presión reducida. El producto crudo se purificó mediante cromatografía flash (gel de sílice, 60-120, EtOAc: éter de petróleo, 2:98) para obtener el Ejemplo 3, etapa b (6,25 g) como un líquido pálido. 1H NMR (CDCl3, δ = 7,26 ppm, 400 MHz): δ 7,55 (d, J= 8,0 Hz, 1 H), 7,41 (s, 1 H), 7,40 (d, J= 8,0 Hz, 1 H), 2,55 (s, 3 H), 2,50 (s, 3 H).

Ejemplo 3, etapa c

imagen42

10 Se agregó ácido 4-acetilfenilborónico (5,39 g, 32,9 mmol) a un tubo sellado que contiene el Ejemplo 3, etapa b (7,0 g, 32,9 mmol) en MeOH (75,0 ml), y la mezcla de reacción se purgó con nitrógeno durante 10 minutos. Luego, se agregó K2CO3 (9,08 g, 65,7 mmol), seguido de Pd(Ph3P)4 (1,139 g, 0,986 mmol), y la mezcla de reacción se purgó con nitrógeno durante 10 minutos más. La mezcla de reacción se calentó a 75 ºC durante 12 h. Luego, se concentró

15 a presión reducida, y el residuo se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con agua (2 x 100 ml) y salmuera (50 ml), se secó en Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante combiflash (Silicycle, SiO2, 10-15 % EtOAc/éter de petróleo) para obtener el Ejemplo 3, etapa c (6,5 g)como un sólido blanco. 1H NMR (CDCl3, δ = 7,26 ppm, 400 MHz): δ 8,06-8,04 (m, 2 H), 7,81 (d, J= 8,0 Hz, 1 H), 7,72-7,70 (m, 2 H), 7,54-7,49 (m, 2 H), 2,65 (s, 3 H), 2,63 (s, 6 H).

20

Ejemplo 3, etapa d

imagen43

25 Se agregó lentamente bromo (1,12 ml, 21,8 mmol) (diluido en 10 ml de dioxano) (durante 10 minutos) a una solución del Ejemplo 3, etapa c (2,75 g, 10,90 mmol) en dioxano (50 ml) a 10 ºC, y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. La reacción se inactivó con 10 % de NaHCO3 (25 ml) y se extrajo con DCM (50 ml). La fase orgánica se secó en Na2SO4 y se concentró a presión reducida para obtener el Ejemplo 3, etapa d, crudo (5,0 g), que se usó como tal en la siguiente etapa sin purificación. LC/MS: Anal. Calc. para [M+H]C17H15 Br2O2: 410,94; encontrado

+ 79/81

30 411,0.

Ejemplo 3, etapa e

imagen44O imagen45O

OBoc

imagen46

N

imagen47 imagen48 imagen49Me Me

imagen50OO

imagen51N

Boc O

35 A una solución del Ejemplo 3, etapa d, crudo (5,1 g, 12 mmol) en acetonitrilo (75 ml), se agregó ácido (2S,5S)-1-(terbutoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2-carboxílico (Ejemplo 1, etapa a) (5,70 g, 24,9 mmol) seguido de DIPEA (8,69 ml, 49,7 mmol) a 0 ºC. Después de 10 minutos, la temperatura se elevó a temperatura ambiente y se agitó durante 2 h. Luego, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con 10 % de NaHCO3 (50 ml) y salmuera

40 (50 ml), se secó en Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante combiflash (Silicycle, SiO2, 25-30 % EtOAc/éter de petróleo) para obtener el Ejemplo 3, etapa e (5,8 g) como un aceite amarillo pálido. 1H NMR (CDCl3, δ = 7,26 ppm, 400 MHz): δ 8,00 (app bd, 2 H), 7,71 (app d, 3 H), 7,53-7,51 (m, 2 H), 5,615,34 (m, 2 H), 5,29-5,04 (m, 2 H), 4,51-4,36 (m, 2 H), 4,09-3,91 (m, 2 H), 2,59 (s, 3 H), 2,35-2,21 (m, 4 H), 2,15-2,04 (m, 2 H), 1,80-1,63 (m, 2 H), 1,47/1,44 (s, 18 H), 1,35-1,27 (m, 6 H). LC/MS: Anal. calc. para [M-H] -C39H49N2O10:

45 705,35; encontrado 705,30.

imagen52

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Ejemplo 3, etapa f

imagen53

5 A una solución del Ejemplo 3, etapa e (5,6 g, 7,92 mmol) en xilenos (75 ml), se agregó NH4OAc (12,21 g, 158 mmol), y la mezcla de reacción se purgó con nitrógeno durante 10 minutos. Después de calentarla durante 18 h a 130 ºC, la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, y los componentes volátiles se retiraron a presión reducida. Luego, la mezcla de reacción se diluyó con EtOAc (100 ml) y se lavó con 10 % de NaHCO3 (50 ml) y salmuera

(50 ml), se secó en Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante combiflash

10 (columna Redi Sep, C-18, 30-40 % acetonitrilo :10 mM bicarbonato de amonio) para obtener el Ejemplo 3, etapa f (2,3 g) como un sólido amarillo pálido. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,50 ppm, 400 MHz): δ 12,27/12,0/11,77/11,71 (s, 2 H), 7,92-7,63 (m, 5 H), 7,58-7,47 (m, 3 H), 7,24 (br s, 1 H), 4,90-4,75 (m, 2 H), 3,92-3,84 (m, 2 H), 2,54 (s, 3 H), 2,20-2,01 (m, 6 H), 1,73-1,65 (m, 2 H), 1,48-1,12 (m, 24 H). LC/MS: Anal. calc. para [M-H] -C39H49N6O4: 665,39; encontrado 665,4.

15

Ejemplo 3, etapa g

imagen54

20 A una solución del Ejemplo 3, etapa g (1,55 g, 2,32 mmol) en MeOH (10 ml), se agregó HCl/MeOH (4 N, 58,1 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Los componentes volátiles se retiraron al vacío, y el residuo se coevaporó con DCM seco (3 x 25 ml). El sólido resultante se expuso a alto vacío para obtener la sal de HCl del Ejemplo 3, etapa g (1,3 g)como un sólido amarillo pálido. 1H NMR (MeOD, δ = 3,34 ppm, 400 MHz): δ 8,06 (br s, 1 H), 7,98 (d, J= 8,4 Hz, 2 H), 7,90 (d, J= 8,4 Hz, 2 H), 7,86 (br s, 1 H), 7,78 (br s, 1 H), 7,74 (d, J= 8,4 Hz, 1 H),

25 7,71 (d, J= 8,4 Hz, 1 H), 5,27-5,20 (m, 2 H), 4,04-4,00 (m, 2 H), 2,80-2,67 (m, 4 H), 2,59 (s, 3 H), 2,55-2,46 (m, 2 H), 2,15-2,06 (m, 2 H), 1,60 (d, J= 6,4, 6 H). LC/MS: Anal. calc. para [[M+H]+ C29H35N6: 467,28; encontrado 467,2.

Ejemplo 3

30 Se agregó HATU (60,5 mg, 0,159 mmol) a una solución agitada de ácido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2Hpiran-4-il)-2-(metoxicarbonilamino)acético (Terminación 2) (39 mg, 0,16 mmol) y la sal de HCl del Ejemplo 3, etapa g (44,3 mg, 0,072 mmol) en DMF (0,9 ml) y DIPEA (0,10 ml, 0,58 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se concentró en un flujo de nitrógeno durante la noche. El residuo se diluyó con MeOH, se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2) 100 x 30 mm, 10 micrómetros; MeOH/agua

35 con amortiguador de TFA) para obtener la sal de TFA de ((3-metil-4,4'-bifenildiil)bis(1H-imidazol-4,2-diil((2S,5S)-5metil-2,1-pirrolidindiil)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo (Ejemplo 3) (60,2 mg) como un sólido blancuzco. 1H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ 8,01 -7,84 (m, 5 H), 7,78 7,54 (m, 4 H), 5,75 (d, J=6,0 Hz, 0,4 H), 5,19 (ddd, J=10,7, 6,9, 4,0 Hz, 1,6 H), 4,84 -4,72 (m, 2 H), 4,36 -4,12 (m, 4 H), 3,85 -3,58 (m, 8 H), 2,69 -1,95 (m, 13 H), 1,75 -1,40 (m, 10 H), 1,37 -1,02 (m, 14 H), 0,96 (app q, J=12,2 Hz,

40 2 H). Tiempo de retención de LC-MS: 4,050 min; m/z 461,31 [1/2M+H]+. Los datos LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0% de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de

45 análisis de 5 min, cuando el solvente A fue 5 % de MeOH / 95 % de agua / 10 mM de acetato de amonio, y el solvente B fue 5 % de agua / 95 % de MeOH / 10 mM de acetato de amonio. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray.

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Ejemplo 4

imagen55

5 ((3-fluoro-4,4'-bifenildiil)bis(1H-imidazol-4,2-diil((2S,5S)-5-metil-2,1-pirrolidindiil)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro2H-piran-4-il)-2-oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo

Ejemplo 4, etapa a

Br

10 A una solución de 1-(4-bromo-2-fluorofenil)etanona (5,0 g, 23 mmol) en dioxano (150 ml) y éter (150 ml) en un baño de agua helada a 0 ºC, se agregó bromo (1,18 ml, 23,0 mmol) por goteo. La reacción se agitó durante 1 h, se calentó a temperatura ambiente y se agitó durante 16 h. La mezcla se dividió entre EtOAc (50 ml) y NaHCO3 saturado

15 (50 ml), y la capa orgánica se lavó con agua y se secó en Na2SO4. El componente volátil se evaporó al vacío, y el sólido se secó al vacío durante la noche para obtener el Ejemplo 4, etapa a (6,94 g)como un sólido blanco. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 7,87-7,79 (m, 2 H), 7,62-7,60 (m, 1 H), 4,84 (s, 2 H).

Ejemplo 4, etapa b

20

imagen56

imagen57

Boc

A una solución del Ejemplo 4, etapa a (2,58 g, 8,72 mmol) y ácido (2S,5S)-1-(ter-butoxicarbonil)-5-metilpirrolidin-2carboxílico (2,00 g, 8,72 mmol) en acetonitrilo (50 ml), se agregó DIEA (2,285 ml, 13,08 mmol), y la mezcla se agitó a

25 temperatura ambiente durante 64 h. El solvente se retiró al vacío, y el residuo se dividió entre EtOAc (40 ml) y agua (30 ml). La capa orgánica se lavó con NaHCO3 saturado y salmuera, se secó con Na2SO4 y se evaporó al vacío para obtener el Ejemplo 4, etapa b (3,8 g)como un sólido amarillo. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 7,87 (m, 1 H), 7,44 (m, 2 H), 5,42-5,09 (m, 2 H), 4,53-4,40 (m, 1 H), 4,10-3,95 (m, 1 H), 2,31 (m, 2 H), 2,09 (m, 1 H), 1,75 (m, 1 H), 1,49-1,46 (dos singuletes, 9 H), 1,33 (m, 3 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+Na]+ C19H24 BrNNaO5: 466,06; encontrado: 466,03.

30

Ejemplo 4, etapa c

imagen58

35 A un tubo de presión que contenía una solución del Ejemplo 4, etapa b (3,8 g, 8,6 mmol) en xilenos (40 ml), se agregó acetato de amonio (6,59 g, 86 mmol), y el recipiente de reacción se tapó y se calentó a 140 ºC durante 6 h. El componente volátil se evaporó al vacío, y el residuo se dividió entre DCM (80 ml) y agua (50 ml). La capa orgánica se separó, se lavó con NaHCO3 saturado y se secó con Na2SO4. El retiro del solvente al vacío dio como resultado un aceite rojo que se purificó mediante cromatografía flash (0-40 % EtOAc/hexano) para obtener el Ejemplo 4, etapa c

40 (2,3 g) como un sólido marrón. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 7,98 (app. t, J =8,4 Hz, 1 H), 7,65 (dd, J

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= 11, 1,9 Hz, 1 H), 7,45 (dd, J= 8,3, 2, 1 H), 7,36 (m, 1 H), 4,85 (m, 1 H), 3,90 (m, 1 H), 2,15-2,07 (m, 3 H), 1,73 (m, 1 H), 1,40-1,17 (m, 12 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+Na]+ C19H23 79BrFN3NaO2: 446,09; encontrado: 446,00.

Ejemplo 4, etapa d

imagen59

Boc

A una solución de 2-bromo-1-(4-bromofenil)etanona (2,425 g, 8,72 mmol) y ácido (2S,5S)-1-(ter-butoxicarbonil)-5

metilpirrolidin-2-carboxílico (2 g, 8,72 mmol) en acetonitrilo (50 ml), se agregó DIEA (1,524 ml, 8,72 mmol), y la 10 mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. El solvente se retiró al vacío, y el residuo se

dividió entre EtOAc (40 ml) y agua (30 ml). La fase orgánica se lavó con NaHCO3 saturado y salmuera, y se secó

con Na2SO4. Al retirar el componente volátil al vacío, se obtuvo el Ejemplo 4, etapa d (1,74 g) como un sólido

amarillo claro, que se usó sin purificación adicional. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 7,95-7,90 (m, 2 H),

7,81 (m, 1 H), 7,79 (m, 1 H), 5,63-5,44 (m, 2 H), 4,36 (m, 1 H), 3,99 (m, 1 H), 2,27 (m, 1 H), 2,09 (m, 2 H), 1,63 (m, 15 1 H), 1,41-1,37 (dos singuletes, 9 H), 1,19 (m, 3 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+Na]+ C19H24BrNNaO5: 448,07;

encontrado: 448,06.

Ejemplo 4, etapa e

H imagen60N

N Br

Boc N

20

A un tubo de presión que contenía una solución del Ejemplo 4, etapa d (3,4 g, 8,0 mmol) en xilenos (40 ml), se agregó acetato de amonio (6,15 g, 80 mmol), y la mezcla se calentó a 140 ºC durante 6 h. El componente volátil se retiró al vacío, el residuo se dividió cuidadosamente entre DCM (60 ml) y NaHCO3 saturado (30 ml), y la capa

25 orgánica se separó y se secó con Na2SO4. El solvente se retiró al vacío para obtener un sólido rojo, que se purificó mediante cromatografía flash (5-50 % EtOAc/Hexano) para obtener el Ejemplo 4, etapa e (2,65 g)como un sólido marrón claro. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 7,73-7,71 (m, 2 H), 7,59-7,50 (m, 3 H), 4,80 (m, 1 H), 3,89 (m, 1 H), 2,10 (m, 3 H), 1,71 (m, 1 H), 1,40-1,17 (m, 12 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+Na]+ C19H24BrN3NaO2: 428,09; encontrado: 428,07.

30

Ejemplo 4, etapa f

imagen61

35 A una solución del Ejemplo 4, etapa e (2,64 g, 6,50 mmol) y 4,4,4',4',5,5,5',5'-octametil-2,2'-bi(1,3,2-dioxaborolano) (3,30 g, 13,0 mmol) en dioxano (40 ml), se agregó acetato de potasio (1,594 g, 16,24 mmol). La mezcla se desgasificó mediante burbujeo de nitrógeno durante 10 min, se agregó Pd(Ph3P)4 (0,375 g, 0,325 mmol) y se continuó con el desgasificado durante 15 min más. Luego, el recipiente de reacción se selló y se calentó a 80 ºC durante 16 h. El componente volátil se evaporó al vacío, y el residuo se dividió entre DCM (100 ml) y NaHCO3

40 parcialmente saturado (50 ml). La capa orgánica se separó, se secó con Na2SO4 y se evaporó al vacío para obtener un aceite rojo crudo que se purificó mediante cromatografía flash (10-90 % EtOAc/hexanos). Se obtuvo el Ejemplo 4, etapa f (2,7 g) como una espuma amarilla. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 7,77 (d, J = 8,3 Hz, 2 H), 7,64-7,53 (m, 3 H), 4,80 (m, 1 H), 3,88 (m, 1 H), 2,09 (m, 3 H), 1,73 (m, 1 H), 1,43-1,08 (m, 24 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+H]+ C25H37BrBN3O4: 454,29; encontrado: 454,23.

45

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Ejemplo 4, etapa g

imagen62

5 A un tubo de presión que contenía una solución del Ejemplo 4, etapa f (2,70 g, 5,96 mmol) y Ejemplo 4, etapa c (2,30 g, 5,42 mmol) en DME (70 ml), se agregó agua (17,50 ml) y bicarbonato de sodio (2,27 g, 27,1 mmol). La mezcla se desgasificó mediante burbujeo de nitrógeno durante 15 min, se agregó Pd(Ph3P)4 (0,313 g, 0,271 mmol) y se continuó con el desgasificado durante 15 min más. El recipiente de reacción se selló y se calentó a 80 ºC durante 15 h. El solvente se evaporó al vacío, y el residuo se dividió entre DCM (100 ml) y agua (50 ml). La capa orgánica se

10 separó, se secó con Na2SO4, el componente volátil se retiró al vacío, y el sólido crudo rojo resultante se purificó mediante cromatografía flash (30-100 % EtOAc/Hexano). Se obtuvo el Ejemplo 4, etapa g (1,95 g)como un sólido amarillo. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 8,10 (m, 1 H), 7,87-7,71 (m, 4 H), 7,61-7,55 (m, 3 H), 7,37 (m, 1 H), 4,85 (m, 2 H), 3,91 (m, 2 H), 2,11 (m, 6 H), 1,76 (m, 2 H), 1,42-1,08 (m, 24 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+H]+ C35H48FN6O4: 671,37; encontrado: 671,35.

15

Ejemplo 4, etapa h

imagen63

20 A una suspensión del Ejemplo 4, etapa g (1,95 g, 2,91 mmol) en dioxano (10 ml), se agregó HCl 4 N en dioxano (9,72 ml, 320 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. Se agregó metanol (1 ml) y se continuó agitando durante 1 h. El componente volátil se retiró al vacío, y el residuo se secó al vacío durante la noche. La sal de HCl del Ejemplo 4, etapa H (1,7 g) se recolectó como un sólido amarillo. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 10,34/10,29/9,43/9,08 (cuatro S amplios, ~4 H), 8,16 (t, J= 8,3 Hz, 1 H), 8,10 (br s, 1 H), 8,00 (d,

25 J= 8,3 Hz, 2 H), 7,92 (d, J= 8,3 Hz, 2 H), 7,78-7,72 (m, 3 H), 4,99-4,89 (m, 2 H), 3,80 (m, 2 H), 2,53-2,42 (m, 4 H), 2,25 (m, 2 H), 1,87 (m, 2 H), 1,44 (d, J = 6,5, 3 H), 1,43 (d, J = 6,5, 3 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+H]+ C28H32FN6: 471,27; encontrado: 471,17.

Ejemplo 4

30 Se agregó HATU (59,4 mg, 0,156 mmol) a una solución de ácido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2((metoxicarbonil)amino)acético (Terminación 2) (38,3 mg, 0,156 mmol) y la sal de HCl del Ejemplo 4, etapa h (43,8 mg, 0,071 mmol) en DMF (0,9 ml) y DIPEA (0,10 ml, 0,57 mmol). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y se concentró en un flujo de nitrógeno durante la noche. El residuo se disolvió en

35 MeOH (3 ml), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2) 100 x 30 mm, 10 micrómetros; MeOH/agua con amortiguador de TFA) para obtener la sal de TFA de ((3-fluoro-4,4'-bifenildiil)bis(1Himidazol-4,2-diil((2S,5S)-5-metil-2,1-pirrolidindiil)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-oxo-2,1etandiil)))biscarbamato de dimetilo (Ejemplo 4) (67,2 mg) como un sólido blancuzco. 1H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ 8,10 -7,84 (m, 7 H), 7,77 -7,69 (m, 2 H), 5,78 -5,71 (m, 0,4 H), 5,19 (td, J=10,6, 7,2 Hz, 1,6 H), 4,83 -4,74 (m, 2 H),

40 4,36 -4,12 (m, 4 H), 3,85 -3,62 (m, 8 H), 2,72 -1,95 (m, 10 H), 1,76 -1,40 (m, 10 H), 1,35 -1,02 (m, 14 H), 0,96 (app q, J=12,2 Hz, 2 H). Tiempo de retención de LC-MS: 4,031 min; m/z 463,28 [1/2M+H]+. Los datos LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de

45 solvente B a 0% de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min, cuando el solvente A fue 5 % de MeOH / 95 % de agua / 10 mM de acetato de amonio, y el solvente B fue 5 % de agua / 95 % de MeOH / 10 mM de acetato de amonio. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray.

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Ejemplo 5

imagen64

(4,4'-bifenildiilbis(1H-imidazol-4,2-diil((1R,3S,5R)-5-metil-2-azabiciclo[3,1.0]hexan-3,2-diil)((1S)-1-((2R,6R)-2,6dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo

Ejemplo 5, etapa a

imagen65

Boc

imagen66O 10 El éster anterior se preparó como una mezcla diastereomérica a partir de (S)-1-ter-butil 2-metil 5-oxopirrolidin-1,2dicarboxilato de acuerdo con el procedimiento descrito en Tetrahedon Letters, 2003, 3203-3205. 15 Ejemplo 5, etapa b

imagen67

imagen68

Boc imagen69O

A una solución enfriada (-50 °C) de tolueno (45 ml) del Ejemplo 5, etapa a (4,75 g, 18,5 mmol), se agregó

20 Superhydride (19,20 ml de 1M/THF, 19,20 mmol) por goteo durante 10 min. Se agregó base de Hunig (13,6 ml, 78 mmol), y se agitó durante 10 min; se agregó DMAP (0,122 g, 0,997 mmol) como un sólido, se agitó durante 15 min; y se agregó anhídrido trifluoroacético (2,98 ml, 21,1 mmol) por goteo durante 15 min; se retiró el baño de enfriamiento y se continuó agitando durante 4 h, mientras se calentaba a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lavó con agua (50 ml), NaCl saturado (30 ml), y la fase orgánica se concentró al vacío. El material crudo

25 resultante se purificó con cromatografía flash (8-60 % EtOAc/Hexano) para obtener el Ejemplo 5, etapa b como un aceite amarillo (2,85 g). 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 6,36 (s, 0,5 H), 6,25 (s, 0,5 H), 4,70-4,57 (m, 1 H), 3,78 (s, 3 H), 2,96 (m, 1 H), 2,54 (m, 1 H), 1,70 (s, 3 H), 1,50 (s, 4,5 H), 1,44 (s, 4,5 H).

Ejemplo 5, etapa c

30

imagen70

Se agregó dietilzinc (1,1 M en tolueno, 59,1 ml, 65,0 mmol) por goteo durante 20 min a una solución de tolueno enfriada (-23 ºC) (60 ml) del Ejemplo 5, etapa b (5,23 g, 21,7 mmol), y se agitó durante 10 min. Se agregó 35 cloroiodometano (9,44 ml, 130 mmol) por goteo durante 10 min, y la mezcla de reacción se agitó a -21 ºC durante 16 h. Se agregó NaHCO3 saturado (60 ml) a la mezcla de reacción, se retiró el baño de enfriamiento, y la mezcla se agitó durante 10 min. Luego, se filtró, y la torta de filtrado se lavó con tolueno (50 ml). El filtrado se dividió, y la capa

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orgánica se secó con Na2SO4 y se concentró al vacío. El material crudo resultante se purificó con cromatografía flash (2-10 % EtOAc/Hexano) para obtener el Ejemplo 5, etapa c.1 (primera elución; aceite incoloro; 2,88 g)y el Ejemplo 5, etapa c.2 (segunda elución; aceite incoloro; 1,01 g). La asignación estereoquímica relativa se realizó en función de estudios NOE. Ejemplo 5, etapa c.1: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 4,65-4,52 (m, 1 H), 3,72 (s, 3 H), 3,283,17 (m, 1 H), 2,44-2,32 (m, 1 H), 2,16-2,10 (m, 1 H), 1,51-1,42 (dos s, 9 H), 1,24 (s, 3 H), 1,07 (m, 1 H), 0,69-0,60 (m, 1 H). Ejemplo 5, etapa c.2: 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 4,0 (m, 1 H), 3,76 (s, 3 H), 3,32-3,16 (m, 1 H), 2,43 (m, 1 H), 2,01 (m, 1 H), 1,44 (s, 9 H), 1,35 (s, 3 H), 0,76-0,66 (m, 2 H).

Ejemplo 5, etapa d

imagen71

10

A una solución del Ejemplo 5, etapa c.1 (2,88 g, 11,3 mmol) en etanol (20 ml), se agregó una solución de LiOH

(0,324 g, 13,5 mmol) en agua (10,00 ml), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. La

mayor parte del componente volátil se retiró al vacío, y el residuo se dividió entre agua (20 ml) y éter (20 ml). La 15 capa acuosa se enfrió en un baño de agua helada, se acidificó con HCl 1 N Hacia una región de pH de 2 y se extrajo

con EtOAc (30 ml, 4 X). La fase orgánica combinada se secó con Na2SO4 y se evaporó al vacío para obtener el

Ejemplo 5, etapa d.1 como un sólido pegajoso (2,55 g). 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 4,64 (m, 1 H), 3,25 (appt s, 1 H),

2,70-2,40 (m, 1 H), 2,14 (m, 1 H), 1,54-1,44 (m, 9 H), 1,27 (s, 3 H), 1,10-0,80 (m, 1 H), 0,67 (m, 1 H). El Ejemplo 5,

etapa d.2 se preparó de manera similar del Ejemplo 5, etapa c.2. 1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 4,13 (app br s, 1 H), 20 3,06 (app br s, 1 H), 2,55/2,41 (superposición app br s, 2 H), 1,51 (s, 9 H), 1,27 (s, 3 H), 0,76 (app t, J= 5,6 Hz, 1 H),

0,60 (app br s, 1 H).

Ejemplo 5, etapa e

imagen72

Boc

25 A una suspensión del Ejemplo 5, etapa d.2 (1,09 g, 4,52 mmol) y 1,1'-(bifenil-4,4'-diil)bis(2-bromoetanona) (0,869 g, 2,19 mmol) en acetonitrilo (40 ml), se agregó DIEA (0,789 ml, 4,52 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. El componente volátil se retiró al vacío, y el residuo se dividió entre EtOAc (70 ml) y agua

30 (50 ml). La capa orgánica se lavó con NaHCO3 saturado (50 ml), se secó con Na2SO4, se evaporó al vacío y se secó al vacío para obtener el Ejemplo 5, etapa e (1,54 g)como una espuma blanca. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 8,13 (d, J=8,3 Hz, 4 H), 7,99 (d, J=8,5 Hz, 4 H), 5,70-5,54 (m, 4 H), 4,17 (m, 2 H), 3,13-3,11 (m, 2 H), 2,58-2,46 (m, 2 H), 2,19 (m, 2 H), 1,42-1,37 (dos s, 18 H), 1,24 (s, 6 H), 0,76-0,70 (m, 4 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+Na]+ C40H48N2NaO10: 739,32; encontrado: 739,52.

35

Ejemplo 5, etapa f

imagen73

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A un tubo de presión que contenía una solución del Ejemplo 5, etapa e (1,54 g, 2,15 mol) en xilenos (40 ml), se agregó acetato de amonio (1,656 g, 21,48 mmol), y el recipiente se tapó y se calentó a 140 ºC durante 5 h. El componente volátil se retiró al vacío, y el residuo se dividió cuidadosamente entre DCM (50 ml) y agua (50 ml) mientras se agregaba suficiente NaHCO3 saturado, de modo que al final de la división, la capa acuosa fuera neutra o

5 básica. La capa orgánica se secó con Na2SO4, se evaporó al vacío, y el material crudo resultante se purificó mediante cromatografía flash (10-100 % EtOAc/Hexano) para obtener Ejemplo 5, etapa f (0,65 g)como un sólido marrón. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 7,84-7,65 (m, 8 H), 7,55-7,54 (m, 1,7 H), 7,32-7,30 (m, 0,3 H), 4,60 (m, 2 H), 3,20 (m, 2 H), 2,48-2,43 (m, 2 H), 2,12 (m, 2 H), 1,45-1,07 (m, 24 H), 0,77 (m, 2 H), 0,69 (m, 2 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+H]+ C40H49N6O4: 677,38; encontrado: 677,45.

10

Ejemplo 5, etapa g

imagen74

15 A una solución del Ejemplo 5, etapa f (0,65 g, 0,960 mmol) en dioxano (5 ml), se agregó HCl 4 N en dioxano (5,84 ml, 192 mmol), y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 6 h. El componente volátil se retiró al vacío y se secó al vacío durante la noche para obtener la sal de HCl del Ejemplo 5, etapa g (0,6 g)como un sólido marrón. 1H NMR (DMSO-d6, δ = 2,5 ppm, 400 MHz): 10,5-10 (br s, ~3,2 H), 7,99 (br s, 2 H), 7,95 (d, J = 8,5, 4 H), 7,85 (d, J = 8,5 Hz, 4 H), 4,76 (m, 2 H), 3,18 (m, 2 H), 2,61-2,46 (m, 4 H; se superpone con una señal de solvente),

20 1,35 (s, 6 H), 1,30 (m, 2 H), 0,82 (app br t, J = 7,1, 2 H). LC/MS: Anal. calc. para [M+H]+ C30H33N6: 477,28; encontrado: 477,22.

Ejemplo 5

25 Se agregó HATU (68,2 mg, 0,179 mmol) a una solución agitada de ácido (S)-2-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2Hpiran-4-il)-2-((metoxicarbonil)amino)acético (Terminación 2) (44 mg, 0,18 mmol) y la sal de HCl del Ejemplo 5, etapa g (50,8 mg, 0,083 mmol) en DMF (0,8 ml) y DIPEA (0,12 ml, 0,67 mmol). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y se concentró en un flujo de nitrógeno durante la noche. El residuo se disolvió en MeOH (~ 2,5 ml), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2) 100 x 30 mm, 10

30 micrómetros; MeOH/agua con amortiguador de TFA) para obtener la sal de TFA de (4,4'-bifenildiilbis(1H-imidazol4,2-diil((1R,3S,5R)-5-metil-2-azabiciclo[3,1,0]hexan-3,2-diil)((1S)-1-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo (Ejemplo 5) (49,5 mg) como un sólido amarillo. 1H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ 7,93 (s, 2 H), 7,90 -7,82 (m, 8 H), 5,02 (t, J=8,5 Hz, 2 H), 4,48 (d, J=8,0 Hz, 2 H), 4,26 -4,18 (m, 2 H), 3,80 -3,71 (m, 2 H), 3,68 (s, 6 H), 3,60 (d, J=3,3 Hz, 2 H), 2,77 (dd, J=13,4, 9,2 Hz, 2 H), 2,28 (dd, J=13,1, 7,8 Hz,

35 4 H), 1,56 -1,44 (m, 6 H), 1,42 (s, 6 H), 1,25 (d, J=6,8 Hz, 6 H), 1,09 (d, J=6,0 Hz, 6 H), 1,06 -0,91 (m, 6 H). Tiempo de retención de LC-MS: 3,900 min; m/z 466,29 [1/2M+H]+. Los datos LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0% de solvente A / 100 %

40 de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min, cuando el solvente A fue 5 % de MeOH / 95 % de agua / 10 mM de acetato de amonio, y el solvente B fue 5 % de agua / 95 % de MeOH / 10 mM de acetato de amonio. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray.

45 Ejemplo 6

imagen75

(4,4'-bifenildiilbis(1H-imidazol-4,2-diil(2S)-2,1-pirrolidindiil((1S)-1-((2R,6R)-2,6-dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-oxo

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15

25

35

45

55

2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo

Se agregó HATU (81 mg, 0,212 mmol) a una solución agitada de la sal de HCl de 4,4'-bis(2-((S)-pirrolidin-2-il)-1Himidazol-5-il)-1,1'-bifenilo (preparada en WO2008/021927) (56,2 mg, 0,099 mmol) y ácido (S)-2-((2R,6R)-2,6dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-((metoxicarbonil)amino)acético (Terminación 2) (52 mg, 0,21 mmol) en DMF (1,0 ml) y DIPEA (0,14 ml, 0,79 mmol). La solución de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 h y luego se concentró en un flujo de nitrógeno. El residuo se disolvió en MeOH (~ 5 ml), se filtró y se purificó mediante HPLC preparativa (Phenomenex Luna C18(2) 100 x 30 mm, 10 micrómetros; MeOH/agua con amortiguador de TFA) para obtener la sal de TFA de (4,4'-bifenildiilbis(1H-imidazol-4,2-diil(2S)-2,1-pirrolidindiil((1S)-1-((2R,6R)-2,6dimetiltetrahidro-2H-piran-4-il)-2-oxo-2,1-etandiil)))biscarbamato de dimetilo (Ejemplo 6) (83 mg) como un sólido amarillo claro. 1H NMR (400MHz, MeOH-d4) δ 7,96 (s, 2 H), 7,91 -7,84 (m, 8 H), 5,26 (t, J=7,5 Hz, 2 H), 4,24 -4,09 (m, 6 H), 3,93 -3,84 (m, 2 H), 3,74 -3,68 (m, 2 H), 3,67 (s, 6 H), 2,63 -2,55 (m, 2 H), 2,39 -2,12 (m, 8 H), 1,57 (d, J=11,0 Hz, 2 H), 1,51 -1,41 (m, 2 H), 1,32 -1,25 (m, 2 H), 1,22 (d, J=7,0 Hz, 6 H), 1,05 (d, J=6,0 Hz, 6 H), 0,98 (app q, J=12,3 Hz, 2 H). Tiempo de retención de LC-MS: 1,660 min; m/z 879,8 [M+H]+. Los datos LC se registraron en un cromatógrafo de líquidos Shimadzu LC-10AS equipado con una columna Phenomenex-Luna 3u C18 2,0 x 50 mm usando un detector SPD-10AV UV-Vis con una longitud de onda del detector de 220 nM. Para las condiciones de elución se usaron velocidad de flujo de 0,8 ml/min, gradiente de 100 % de solvente A / 0 % de solvente B a 0 % de solvente A / 100 % de solvente B, tiempo de gradiente de 4 min, tiempo de mantenimiento de 1 min y tiempo de análisis de 5 min, cuando el solvente A fue 10 % de acetonitrilo / 90 % de agua / 0,1% de ácido trifluoroacético y el solvente B fue 10 % de agua / 90 % de acetonitrilo / 0,1 % de ácido trifluoroacético. Los datos de MS se determinaron con una plataforma Micromass para LC en modo electrospray.

Actividad biológica

En la presente descripción, se usó un ensayo de replicación de HCV que se preparó, se condujo y se validó como se describe en el PCT/US2006/022197 de propiedad conjunta y en O’Boyle et. al. Antimicrob Agents Chemother. 2005 Apr; 49(4):1346-53. También se usaron, como se describió, métodos de ensayo recomendados que incorporan informantes de luciferasa de fuentes comerciales (Apath.com).

Se usaron células replicón de HCV-neo y células replicón que contenían sustituciones de resistencia en la región NS5A para evaluar la familia de compuestos descrita en la presente. Se determinó que los compuestos tenían distintos grados de actividad inhibidora reducida en células que contenían mutaciones, en comparación con la potencia inhibidora correspondiente contra las células de tipo silvestre. Por ello, los compuestos de la presente descripción pueden ser eficaces para inhibir la función de la proteína NS5A del HCV y se entiende que son eficaces en las combinaciones antes descritas en la solicitud PCT/US2006/022197 y WO/04014852 de propiedad conjunta. Debe tenerse en cuenta que los compuestos de la presente descripción puede inhibir varios genotipos del HCV. La Tabla 2 muestra los valores EC50 (concentración inhibidora eficaz al 50 %) de los compuestos representativos de la presente descripción contra el genotipo 1b del HCV de tipo silvestre, el genotipo 1b LV/YH del HCV mutante de doble resistencia, el genotipo 1a del HCV y el genotipo 1a YH mutante de resistencia simple.

Los compuestos de la presente descripción pueden inhibir el HCV mediante mecanismos adicionales a la inhibición de NS5A o diferentes. En una forma de realización, los compuestos de la presente descripción inhiben el replicón del HCV y, en otra forma de realización, los compuestos de la presente descripción inhiben la NS5A. Los compuestos de la presente descripción pueden inhibir varios genotipos del HCV que contienen múltiples variantes de las secuencias de NS5A.

Estudios farmacocinéticos de dosis única intravenosa (IV) y oral (PO) en ratas

La farmacocinética de los Ejemplos 1 a 6 y el compuesto A (WO2008/021927) se caracterizaron en ratas macho Sprague-Dawley (260 -310 g)(véase la Tabla 2). En estos estudios, dos grupos de animales (N = 3 por grupo) recibieron una infusión intravenosa (IV) (2 mg/kg durante 10 minutos) a través de la vena yugular o por gavaje oral (5 mg/kg) en un vehículo de 100 % de PEG 400 o 90:5:5 de PEG 400:etanol:TPGS, respectivamente. Las ratas del grupo de dosificación oral se sometieron a ayuno durante la noche. Las muestras de sangre en serie se obtuvieron a 0,17 (IV únicamente), 0,25; 0,5; 0,75; 1, 2; 4; 6; 8 y 24 h después de la dosis. Las muestras de sangre (~0,3 ml) se recolectaron de la vena yugular en tubos que contenían K3EDTA y, luego, se centrifugaron a 4 ºC (1500-2000xg) para obtener plasma. Las muestras de plasma se almacenaron a -20 ºC hasta el análisis mediante LC/MS/MS.

Se desarrolló un método bioanalítico mediante el uso de separación por cromatografía de líquidos, y luego, la detección por espectrometría de masa en tándem (LC/MS/MS) para el análisis de compuestos en plasma de rata. La detección se realizó mediante el control de la reacción seleccionada. Se seleccionaron iones que representan las especies precursoras (M+H)+ en cuadripolo 1 y se disociaron por colisión con N2 para generar iones de productos específicos, que se controlaron posteriormente mediante cuadripolo 3. Las curvas estándares se prepararon en plasma de ratas macho y se procesaron de la misma manera que las muestras de prueba para generar datos cuantitativos.

Los parámetros farmacocinéticos se calcularon usando métodos no compartimentales mediante Kinetica. No se

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19-06-2015

usaron valores por debajo del límite de cuantificación (LLOQ) en los cálculos. El área debajo de la curva (AUC) se calculó usando la regla trapezoidal lineal.

imagen76

Tabla 2

PK 24 h rata (Auc, nM.h; biodisponibilidad oral)

EC50 (uM) G 1a (CC50, uM)

G 1b tipo silvestre

G 1b LV/YH G 1a tipo silvestre G 1a YH

Compuesto-A

103; 1,3 % 1,19E-04 0,020 5,11E-05 0,013 63,90

Ejemplo 1

1603; 15 % 3,96E-06 3,19E-03 5,48E-06 9,77E-04 8,46

Ejemplo 2

2219; 12 % 8,03E-06 1,15E-04 6,43E-06 1,58E-04 5,89

Ejemplo 3

4486; 17 % 6,41E-06 1,91E-04 5,20E-06 1,08E-03 6,15

Ejemplo 4

1729; 16 % 4,15E-06 4,36E-04 5,95E-06 4,02E-04 7,75

Ejemplo 5

539; 6,3 % 6,85E-06 9,85E-06 3,72E-06 6,07E-05 5,34

Ejemplo 6

1356; 5 % 3,67E-05 6,59E-04 1,62E-05 3,83E-04 15,42

Claims (14)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un compuesto de Fórmula (I)

   imagen1

   o una sal de este aceptable del mismo el punto de vista farmacéutico, en donde R1 se selecciona de hidrógeno, metilo y flúor;

   10 R2 se selecciona de hidrógeno y metilo; R3 y R4 son, cada uno, hidrógeno; o R3 y R4, junto con los átomos de carbono a los que están unidos, forman un anillo ciclopropilo; y R5 se selecciona de hidrógeno y metilo.

   15 2. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal del mismo aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en donde R1 es hidrógeno.
2. 3. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal del mismo aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en

   1

   donde Res flúor. 20
3. 4. El compuesto de la reivindicación 3, o una sal del mismo aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en donde

   R2, R3 y R4 son cada uno hidrógeno; y

   5

   25 Res metilo.
4. 5. El compuesto de la reivindicación 1, o una sal del mismo aceptable desde el punto de vista farmacéutico, en

   1

   donde R es metilo.

   30 6. El compuesto de la reivindicación 5, en donde R2, R3 y R4 son cada uno hidrógeno; y

   5

   Res metilo.

   35 7. Un compuesto de la reivindicación 1 seleccionado de:

   imagen2

   37

   imagen3

   y

   imagen4

   o una sal del mismo aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
5. 8. Un compuesto que es

   38

   imagen5

   5 9. Una composición que comprende un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal del mismo aceptable desde el punto de vista farmacéutico, y un vehículo aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
6. 10. La composición de la reivindicación 9, que comprende además uno, dos o tres compuestos adicionales que 10 tienen actividad contra HCV.
7. 11. La composición de acuerdo con la reivindicación 10, en donde al menos uno de los compuestos adicionales es un inerferón o un ribavirin.

   15 12. La composición de acuerdo con la reivindicación 11, en donde el interferón se selecciona de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A, interferón lambda e interferón tau linfoblastoide.
8. 13. La composición de la reivindicación 10, en donde al menos uno de los compuestos adicionales se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que mejora el desarrollo de la respuesta de los linfocitos

   20 T helper tipo 1, ARN de interferencia, ARN antisentido, imiqimod, ribavirin, un inhibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadine y rimantadine.
9. 14. La composición de la reivindicación 10, en donde al menos uno de los compuestos adicionales es eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa de HCV, serina proteasa de HCV, polimerasa de

   25 HCV, helicasa de HCV, proteína NS4B de HCV, entrada de HCV, montaje de HCV, egreso de HCV, proteína NS5A de HCV e IMPDH para el tratamiento de infección por HCV.
10. 15.Un compuesto como se define en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal del mismo aceptable

    desde el punto de vista farmacéutico, para su uso en un método para tratar una infección por HCV en un paciente. 30
11. 16. El compuesto para el uso de la reivindicación 15 que además comprende administrar uno, dos o tres compuestos adicionales con actividad contra HCV antes, después o al mismo tiempo que el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, o una sal del mismo aceptable desde el punto de vista farmacéutico.

    35 17. El compuesto para el uso de la reivindicación 16, en donde al menos uno de los compuestos adicionales es un interferón o un ribavirin.
12. 18. El compuesto para el uso de la reivindicación 17, en donde el interferón se selecciona de interferón alfa 2B,

    interferón alfa pegilado, interferón consenso, interferón alfa 2A, interferón lambda e interferón tau linfoblastoide. 40
13. 19. El compuesto para el uso de la reivindicación 16, en donde al menos uno de los compuestos adicionales se selecciona de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que mejora el desarrollo de una respuesta de los linfocitos T helper de tipo 1, ARN de interferencia, ARN antisentido, imiqimod, ribavirin, un inhibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadine y rimantadine.

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14. 20. El compuesto para el uso de la reivindicación 16, en donde al menos uno de los compuestos es eficaz para inhibir la función de una diana seleccionada de metaloproteasa de HCV, serina proteasa de HCV, polimerasa de HCV, helicasa de HCV, proteína NS4B de HCV, entrada de HCV, montaje de HCV, egreso de HCV, proteína NS5A de HCV e IMPDH para el tratamiento de infección por HCV.

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