ES2323309T3 - Uso de n-(3-metoxi-5-metilpirazin-2-il)-2-(4-(1,3,4-oxadiazol-2-il)fenil)piridina-3-sulfonamida en el tratamiento de cancer. - Google Patents

Abstract

La utilización de N-(3-metoxi-5-metilpirazin-2-il)-2-(4-[1,3,4-oxadiazol-2-il]fenil)piridina-3-sulfonamida, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en el tratamiento de cáncer en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

Description

Uso de N-(3-metoxi-5-metilpirazin-2-il)-2-(4-[1,3,4-oxadiazol-2-il]fenil)piridina-3-sulfonamida en el tratamiento de cáncer.

La presente solicitud se refiere a N-(3-metoxi-5-metilpirazin-2-il)-2-(4-[1,3,4-oxadiazol-2-il]fenil)piridina-3-sulfonamida, o a una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en lo sucesivo "Compuesto (I)", y a su utilización en el tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente tal como el hombre. La invención también se refiere a la utilización de composiciones farmacéuticas que contienen el Compuesto (I), o a una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en un método de tratamiento de cáncer en un animal de sangre caliente tal como el hombre, y a la utilización del Compuesto (I), o a una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de medicamento para su utilización en un método de tratamiento de cáncer en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

El cáncer afecta a unos 10 millones de personas en el mundo. Esta cifra incluye frecuencia, extensión y mortalidad. Más de 4,4 millones de casos de cáncer se presentan en Asia, incluyendo 2,5 millones de casos del Este de Asia, que tiene la tasa de frecuencia más alta en el mundo. En comparación, Europa tiene 2,8 millones de casos, Norteamérica 1,4 millones de casos y África 627.000 casos.

En el Reino Unido y Estados Unidos, por ejemplo, más de una de cada tres personas desarrollará cáncer en algún momento de su vida. Se estima que la mortalidad por cáncer en EE.UU. asciende a aproximadamente 600.000 al año, aproximadamente una de cada cuatro muertes, segunda sólo después de la cardiopatía en porcentaje de todas las muertes, y segunda después de los accidentes como causa de muerte de niños de 1-14 años de edad. La frecuencia del cáncer estimada en EE.UU. es ahora aproximadamente 1.380.000 nuevos casos al año, excluyendo aproximadamente 900.000 casos de cáncer de piel no melánico (células basales y escamosas).

El cáncer también es una causa principal de morbilidad en el Reino Unido con casi 260.000 nuevos casos (excluyendo cáncer de piel de tipo no melanoma) registrados en 1997. El cáncer es una enfermedad que afecta principalmente a la gente mayor, que se produce en el 65% de los casos en los mayores de 65. Puesto que la esperanza de vida en el Reino Unido casi se ha duplicado desde mediados del siglo diecinueve, ha aumentado la población con riesgo de cáncer. Las tasas de muerte por otras causas de muerte, tales como la cardiopatía, han disminuido en los últimos años, mientras que las muertes por cáncer han continuado relativamente estables. El resultado es que a 1 de cada 3 personas se les diagnosticará cáncer durante su vida y 1 de cada 4 personas morirá de cáncer. En las personas menores de 75 años, las muertes por cáncer exceden a las muertes por enfermedades del sistema circulatorio, incluyendo la enfermedad cardiaca isquémica y el accidente cerebrovascular. En 2000 hubo 151.200 muertes por cáncer. Aproximadamente una quinta parte (22 por ciento) de estas fueron por cáncer de pulmón, y una cuarta parte (26 por ciento) por cánceres del intestino grueso, pecho y próstata.

En el mundo, las tasas de frecuencia y mortalidad de determinados tipos de cáncer (de estómago, mama, próstata, piel y demás) presentan grandes diferencias geográficas que se atribuyen a influencias raciales, culturales y en especial medioambientales. Hay alrededor de 200 tipos diferentes de cáncer pero los cuatro tipos principales, pulmón, mama, próstata y colorrectal, representan alrededor de la mitad de todos los casos diagnosticados en el Reino Unido y EE.UU. El cáncer de próstata es el cuarto tumor maligno más común entre los hombres en el mundo, con un cálculo de 400.000 casos nuevos diagnosticados cada año, que representan el 3,9 por ciento de todos los casos nuevos de cáncer.

Las opciones actuales para tratar los cánceres incluyen la resección quirúrgica, la terapia con haz de radiación externo y/o la quimioterapia generalizada. Estas son parcialmente satisfactorias en algunas formas de cáncer, pero no son satisfactorias en otras. Existe una clara necesidad de nuevos tratamientos terapéuticos.

Recientemente, se han identificado antagonistas del receptor A de la endotelina como de valor potencial en el tratamiento del cáncer (Cancer Research, 56, 663-668, 15 de febrero, 1996 y Nature Medicine, Volumen 1, número 9, septiembre 1999, 944-949).

Las endotelinas son una familia de péptidos endógenos de 21 aminoácidos que comprenden tres isoformas, endotelina-1, endotelina-2 y endotelina-3. Las endotelinas se forman por escisión del enlace Trp^{21}-Val^{22} de sus correspondientes proendotelinas por una enzima convertidora de endotelina. Las endotelinas están entre los vasoconstrictores más potentes conocidos y tienen una característica de larga duración de actuación. Presentan una amplia variedad de otras actividades incluyendo la proliferación celular y mitogénesis, extravasado y quimiotaxia, y también interaccionan con numerosos otros agentes vasoactivos.

Las endotelinas se desprenden de una variedad de tejidos y fuentes celulares incluyendo el endotelio vascular, el músculo liso vascular, el riñón, el hígado, el útero, las vías respiratorias, los intestinos y los leucocitos. El desprendimiento puede estimularse por hipoxia, fuerza de cizallamiento, lesión física y una amplia variedad de hormonas y citocinas. Se han encontrado niveles elevados de endotelina en numerosos estados patológicos en el hombre, incluyendo los cánceres.

La presente invención se refiere al sorprendente descubrimiento que el Compuesto (I) es un anticanceroso agente particularmente potente. El compuesto (I) se describe como un antagonista receptor de endotelina en el documento WO 96/40681, y aunque en el documento WO 96/40681 se reconoce que se han encontrado concentraciones elevadas de endotelina en numerosos enfermedades en el hombre incluyendo determinados cánceres, no existe ningún indicio ni indicación de que este compuesto posea las características eficaces beneficiosas, metabólicas e toxicológicas específicas que le hacen dicho potente agente anticanceroso. El documento WO 96/40681 reivindica los receptores de endotelina descritos en la presente memoria solamente para enfermedades cardiovasculares. Por ejemplo en la introducción se expone que estos compuestos son útiles en el tratamiento de enfermedades o afecciones incluyendo "hipertensión, hipertensión pulmonar, enfermedad circulatoria cardíaca o cerebral y nefropatía". Las reivindicaciones listan las siguientes enfermedades médicas "hipertensión, hipertensión pulmonar, insuficiencia cardíaca congestiva, dislipidemia, aterosclerosis, restenosis, insuficiencia renal aguda y crónica, ictus isquémico, hemorragia subaracnoide, claudicación intermitente, isquemia crítica de la extremidad, asma o insuficiencia orgánica tras intervención quirúrgica general o trasplante". No existe ningún indicio ni sugerencia en el documento WO 96/40681 de que este compuesto posea las características específicas, beneficiosas, eficaces, metabólicas y toxicológicas que le convierten en dicho agente anticancerígeno potente. De hecho, los presentes inventores han demostrado sorprendentemente que el Compuesto (I) es un antagonista de endotelina-A (ET_{A}) específico y no tiene actividad mensurable contra endotelina B (ET_{B}).

Se ha demostrado que el receptor ET_{A}, por una variedad de mecanismos, es el receptor patológico más importante de los dos receptores de endotelina identificados en oncología: en la reducción de la proliferación celular anormal (Bagnato et. al., (1995), Clin. Cancer Res. 1, 1059-1066); como antiapoptósico (Wu Wang et. al., (1997), Biochem. J. 328, 733-737); como agente antiangiogénico (Spinella et al., (2002), J. Biol. Chem., 227(31), 27850-27855); y como inhibidor de metástasis ósea (Guise et. al., ASCO (2000) resumen 331 y Nelson, et. al., (1999), Urology 53, 1063-1069) además de mediar en el dolor que es una comorbilidad en el cáncer. Se ha demostrado (Dahlof et al., (1990), J. Hypertens., 8, 811- 817) que grandes dosis de endotelina-1 producen dolor, y producen sensibilización al dolor, pero que éste puede inhibirse por un antagonista de ET_{A} (p. ej. Davar et al., (1998), Neuroreport 9, 2279-2283 y De Mello et al., (1998), Pain, 77, 261-269).

Por el contrario, existen pruebas recientes (p. ej. Cattaruzza et. al., (2002), FASEB J. 14(7), 991-998 y Okazawa et. al., (1998), J. Biol. Chem., 273, 12581-12592) de que el receptor ET_{B} está implicado en la señalización apoptósica. El bloqueo de la serie de reacciones proapoptósicas sería indeseable en el tratamiento del cáncer, por consiguiente un compuesto que haga diana específicamente en el receptor ET_{A} mientras que deje el receptor ET_{B} inafectado sería de la mayor utilidad en el tratamiento del cáncer. Dicho compuesto es el compuesto (I).

El Compuesto (I) actuando específicamente sobre el receptor ET_{A} tiene muchas ventajas sobre los antagonistas de endotelina que también tienen actividad mensurable de ET_{B}. Por ejemplo el Compuesto (I) podría administrarse a un paciente sin que el director médico o el médico de familia necesite valorar la dosis de Compuesto (I) buscando señales de actividad de ET_{B} (por ejemplo edema). Además, podrían administrarse potencialmente dosis mayores porque no existirían efectos secundarios de ET_{B}.

Otro inconveniente de la inhibición de ET_{B} es que produce un aumento en la endotelina en el plasma. Potencialmente, durante el transcurso del tratamiento, para un inhibidor de ET_{A}/ET_{B} mezclado, o un compuesto que se dirige selectivamente al receptor de ET_{A}, pero todavía tenía actividad mensurable de ET_{B}, esto produciría dosis cada vez mayores de inhibidor necesarias para tener los mismos efectos beneficiosos de ET_{A}. Un inhibidor específico de ET_{A} no tropezaría con este problema.

Por consiguiente según la presente invención, se proporciona el Compuesto (I), de una de sus sales farmacéuticamente aceptable, para su utilización en el tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En un aspecto, cuando se hace referencia al Compuesto (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, se refiere solo al compuesto. En otro aspecto, éste se refiere a una sal farmacéuticamente aceptable del Compuesto (I).

Según otra característica de la presente invención, se proporciona el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en el tratamiento del cáncer, en un animal de sangre caliente, tal como el ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención se proporciona un método de tratamiento del cáncer que comprende administrar una cantidad eficaz del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente tal como un ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, para su utilización en el tratamiento del cáncer en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la reducción de la proliferación anormal en una célula cancerosa o induciendo diferenciación de una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en la reducción de la proliferación anormal en una célula cancerosa o induciendo diferenciación de una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona un método para reducir la proliferación anormal en una célula cancerosa o induciendo diferenciación de una célula cancerosa que comprende administrar una cantidad eficaz de Compuesto (I) o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención se proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable para su utilización en la reducción de la proliferación anormal en una célula cancerosa o que induce diferenciación de una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención, se proporciona el Compuesto (I), de una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la inducción de la apoptosis en una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en la inducción de la apoptosis en una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

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En otro aspecto de la invención se proporciona un método de inducir apoptosis en una célula cancerosa que comprende administrar una cantidad eficaz del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, para su utilización en la inducción de la apoptosis en una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, como agente antiangiogénico y de reconocimiento vascular en vasos sanguíneos que suministra una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización como agente antiangiogénico y de reconocimiento vascular en vasos sanguíneos que suministra una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona un método de proporcionar un agente antiangiogénico y de reconocimiento vascular en vasos sanguíneos que suministra una célula cancerosa que comprende administrar una cantidad eficaz de Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención se proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable para su utilización como agente antiangiogénico y de reconocimiento vascular en vasos sanguíneos que suministra una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

Por la expresión "agente de reconocimiento vascular" debe sobreentenderse que la zona de actuación del Compuesto (I) estaría en el propio sistema vascular en lugar de en el tumor.

En otro aspecto de la invención, se proporciona el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, como agente antiangiogénico en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización como agente antiangiogénico en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona un método de proporcionar un efecto antiangiogénico que comprende administrar una cantidad eficaz del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, para su utilización como agente antiangiogénico en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, como inhibidor de la metástasis ósea y un inhibidor de invasión en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización como inhibidor de la metástasis ósea y un inhibidor de invasión en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona un método de inhibición de la metástasis ósea e inhibición de la invasión que comprende administrar una cantidad eficaz del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, para su utilización como inhibidor de metástasis ósea y un inhibidor de invasión en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

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En otro aspecto de la invención, se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, como inhibidor de metástasis ósea en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización como inhibidor de metástasis ósea en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona un método de inhibición de la metástasis ósea que comprende administrar una cantidad eficaz del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, para su utilización como inhibidor de metástasis ósea en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención, se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la prevención de metástasis ósea en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en la prevención de la metástasis ósea en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona un método de prevención de la metástasis ósea que comprende administrar una cantidad eficaz del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, para su utilización en la prevención de la metástasis ósea en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención, se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en el tratamiento de la metástasis ósea en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona la utilización del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en el tratamiento de la metástasis ósea en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En otro aspecto de la invención se proporciona un método de tratamiento de la metástasis ósea que comprende administrar una cantidad eficaz del Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, a un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

Según una característica adicional de este aspecto de la invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable, para su utilización en el tratamiento de la metástasis ósea en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

En un aspecto adicional de la invención, se proporciona la inhibición, el tratamiento y/o la prevención de la metástasis ósea, tal como se describe en la presente memoria, en el que las metástasis óseas son como resultado de cáncer renal, de tiroides, de pulmón, de mama o de próstata.

Cuando se hace referencia al cáncer, se refiere en particular al cáncer esofágico, mieloma, cáncer hepatocelular, pancreático, de cuello de útero, tumor de Ewing, neuroblastoma, sarcoma de Kaposi, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, melanoma, cáncer de pulmón, cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) y cáncer de pulmón microcítico (SCLC), cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer renal, linfoma y leucemia. Más en particular, se refiere al cáncer de próstata. Además, más en particular, se refiere al CPCP, CPCNP, cáncer colorrectal, cáncer de ovario y/o cáncer de pecho. Además, más en particular se refiere a CPCP. Además, más en particular se refiere a CPCNP. Además, más en particular se refiere a cáncer colorrectal. Además, más en particular se refiere a cáncer de ovario. Además, más en particular se refiere a cáncer de pecho. Además, más en particular se refiere a cáncer de vejiga, cáncer esofágico, cáncer gástrico, melanoma, cáncer de cuello de útero y/o cáncer renal. Además, se refiere a cáncer de endometrio, hígado, estómago, tiroides, rectal y/o cerebral. En otro aspecto de la invención, el cáncer no es melanoma. En otra realización de la invención, en particular el cáncer está en un estado metastásico, y más en particular el cáncer produce metástasis ósea. En una realización adicional de la invención, en particular el cáncer está en un estado metastásico, y más en particular el cáncer produce metástasis en la piel. En una realización adicional de la invención, en particular el cáncer está en un estado metastásico, y más en particular el cáncer produce metástasis linfática. En una realización adicional de la invención, el cáncer está en un estado no metastásico.

Debe sobreentenderse que cuando el cáncer está en estado metastásico, este Compuesto (I) actúa tanto en la zona primaria del tumor como en la metástasis. El Compuesto (I) tanto previene como trata e inhibe las metástasis.

Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen, por ejemplo, sales con metales alcalinos (tales como sodio, potasio o litio), metales alcalinotérreos (tales como calcio o magnesio), sales de amonio y sales con bases orgánicas que dan cationes fisiológicamente aceptables, tales como sales con metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina y morfolina. Además, las sales farmacéuticamente aceptables incluyen, sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables con haluros de hidrógeno, ácido sulfúrico, ácido fosfórico y con ácidos orgánicos tales como ácido cítrico, ácido maleico, ácido metansulfónico y ácido p-toluensulfónico.

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Leyendas de las Figuras

Figura 1: Es una inmunotransferencia Western que presenta la inhibición de la fosforilación de MAPK inducida por ET-1 con el Compuesto (I) en la estirpe celular MC3T3.E1/J1 de osteoblasto del estudio 2 a continuación. Las proteínas se han introducido en un gel y a continuación se han transferido sobre una membrana de nitrocelulosa, donde se sondan para utilizar los anticuerpos primarios y secundarios. Se han utilizado las siguientes abreviaturas:

SCM:

medio que contiene suero

SFM:

medio exento de suero

Figura 2: Es un gráfico que representa la inhibición de la fosforilación de MAPK inducida por ET-1 con el Compuesto (I) en la estirpe celular MC3T3.E1/J1 de osteoblasto también del estudio 2.

Los siguientes estudios in vivo e in vitro pueden utilizarse para determinar la eficacia del Compuesto (I) en oncología.

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1) Ensayo de fijación del receptor humano de endotelina

Receptores de ET_{A} o ET_{B} recombinantes humanos se expresaron en células y membranas eritroleucémicas de ratón (MEL) preparadas para estudios de competición de fijación utilizando ET-1 marcado con ^{125}I como radioligando. Se realizaron incubaciones por triplicado en presencia del Compuesto (I), 10^{-10} - 10^{-4} M en incrementos semilogarítmicos, y la inhibición de la fijación de ET-1 se expresó como media geométrica del valor de pIC_{50} con el 95% de los límites de confianza.

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Resultados

El pIC_{50} (log negativo de la concentración de compuesto requerida para desplazar el 50% del ligando) para el Compuesto (I) en el receptor ET_{A} fue de 8,27 [8,23 = 8,32] (n=4). Las curvas de desplazamiento fueron normales con pendientes próximas a la unidad. El Compuesto (I) no tenía afinidad mensurable por el receptor ET_{B} con un desplazamiento medio de 1,2 \pm 0,7% (n=3) a una concentración de 10^{-4}M, una cifra comprendida dentro de los límites de sensibilidad del ensayo.

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Conclusión

El Compuesto (I) es un ligando de gran afinidad para el receptor ET_{A} humano y es específico para ET_{A}, no teniendo afinidad significativa del receptor ET_{B}.

2) Compuesto (I) como tratamiento para el cáncer metastásico: Datos de osteoblasto - Inhibición de la estimulación de MAPK inducida por ET-1 con el Compuesto (I)

El Compuesto (I) bien puede tener una función en el tratamiento no solamente de tumores primarios sino también de los tumores metastásicos y en la producción patológica de hueso nuevo en y alrededor de los depósitos metastásicos. A continuación se describe un experimento que demuestra la utilidad del Compuesto (I) en el tratamiento de la patología osteoblástica del hueso.

La importante patología clínica observada en las zonas óseas metastásicas de pacientes con cáncer de próstata avanzado presenta como una estimulación osteoblástica inapropiada, es decir, la presencia de metástasis de tumor de próstata en los huesos da como resultado la producción neta de nuevos huesos y opcionalmente un aumento en la densidad del hueso alrededor del depósito metastásico (estudiado en Cancer Metastasis Rev. 2001; 20(3-4):333-49). El mecanismo supuesto detrás de esta patología es una liberación de ET-1 desde las células metastásicas de próstata en la creación prematura del tumor óseo secundario.

La simulación de ET-1 del osteoblasto se ha descrito como la etapa clave en la formación patológica de nuevos huesos en la metástasis ósea de la próstata (Invest. New Drugs. 2002; 20(2):173-82). Se ha demostrado que ET-1 actúa para inducir directamente la proliferación y diferenciación del osteoblasto, así como estimular al osteoblasto a producir otros factores de crecimiento, por simulación del receptor ET_{A} y la fosforilación posterior de la MAP cinasa (Bone. 1999; 24(4):315-20 y J. Bone Miner. Res. 2002; 17(10):1774-84). De esta manera la estimulación del receptor ET_{A} produce tanto el crecimiento del hueso como también, por liberación de factores de crecimiento en el medio local, la supervivencia y el crecimiento de la célula metastásica tumoral. Las células tumorales y las células osteoblásticas en un depósito metastásico participan por consiguiente en un "círculo vicioso" en el que sus respuestas proliferantes se apoyan entre sí, superando los mecanismos reguladores normales que controlan y limitan la formación del hueso (Nat. Rev. Cancer. 2002; 2 (8): 584-93).

En los experimentos descritos a continuación los presentes inventores demuestran en primer lugar la capacidad de ET-1 para estimular la MAP cinasa en las células osteoblásticas. Esta estimulación favorece la proliferación de las células y la activación de la serie de reacciones mostrada por ser importante en la liberación de factores de crecimiento del osteoblasto.

Los inventores a continuación demuestran que el Compuesto (I), antagonista de ET_{A} es un antagonista eficaz de esta estimulación de ET-1.

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Método

La MC3T3. Se aisló la estirpe celular E1/J1 procedente de una estirpe celular parental, MC3T3-E1 (disponible en Invitrogen), que a su vez procedía de la bóveda craneal de ratón C57BL/6 recién nacido. La estirpe MC3T3 E1/J1 se describe como estirpe osteoblástica. Para iniciar los experimentos descritos a continuación, se colocaron en placas células MC3T3.E1/J1 a una densidad de 2,4x10^{4} células/pocillo (placas de 24 pocillos) en medio que contenía suero y se incubaron durante 48 horas. Se lavaron las células dos veces en PBS y se volvieron a incubar durante aproximadamente 17 horas en medio de suero de ayuno.

En esta etapa, las células se incubaron a continuación con o sin Compuesto (I) durante 30 minutos y a continuación se estimularon con el factor de crecimiento (PDGF o ET-1) durante 3 minutos. Todos los medios se eliminaron a continuación y las células se lisaron y se almacenaron a -20ºC para electroforesis/inmunotransferencia western, que localizó MAPK fosforilado y Akt fosforilado sondando con los anticuerpos anti-fosfo-p44/42 MAPK (Thr 202/204) y anti-fosfo AKT (Ser 473) (ambos comercialmente disponibles en Cell Signalling Technology). Las bandas de proteína se cuantificaron por densitometría, y se representaron en unidades arbitrarias de densitometría. Las concentraciones de MAPK fosforilado se normalizaron a concentraciones MAPK total.

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Resultados

La estimulación de células con ET-1 durante 3 minutos produjo aumento de fosforilación de MAPK en la estirpe celular MC3T3.E1/J1 de osteoblasto. La estimulación de las células con un factor de crecimiento estándar, PDGF, también produjo aumento de la fosforilación de MAPK. El Compuesto (I) inhibió la fosforilación de MAPK inducida por ET-1 en osteoblastos.

TABLA 1 Inhibición de la fosforilación de MAPK inducida por ET-1 con el Compuesto (I) en la estirpe celular MC3T3.E1/J1 de osteoblasto

1

Este dato está representado en las Figuras 1 y 2.

Nota: El experimento anterior no está basado en la utilización de la estirpe celular MC3T3.E1/J1 específica, podría,
{}\hskip1,3cm por ejemplo, realizarse utilizando la estirpe celular MC3T3-E1 parental comercialmente disponible.

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3) Compuesto (I) como inhibidor de angiogénesis

La activación del receptor ET_{A} por ET-1 contribuye al crecimiento y evolución del tumor, mediada por varios mecanismos en la bibliografía para sugerir que inhibiendo específicamente ET_{A} producirá efectos beneficiosos en los tumores primarios completamente separadas de sus efectos en metástasis óseas. Estos mecanismos incluyen anti-apoptosis, activación directa e indirecta del crecimiento y activación de la movilidad celular (Nat. Rev. Cancer. 2003; 3 (2):110-6).

De más reciente y creciente interés es la función de ET-1 mediada por el receptor ET_{A} como actores clave en angiogénesis tumoral (J. Cardiovasc. Pharmacol. 2000; 36:S135-9). Estudios mecanísticos han demostrado ahora que el receptor ET_{A} es importante en la producción del potente factor angiogénico VEGF (Life Sci. 1998; 63 (6):477-84) por inducción directa de un factor inducible de hipoxia, HIF-1\alpha (J. Biol. Chem. 2002; 277:27850-5). La creciente bibliografía para apoyar la función de la endotelina y del receptor ET_{A} en la angiogénesis tumoral fue revisada muy recientemente por Bagnato y Spinella, (Trends Endocrinol. Metab. 2003; 14 (1):44-50).

En el experimento descrito a continuación se demuestra el efecto del Compuesto (I) sobre la angiogénesis inducida por tumores recién formados después de inoculación de células de tumor humano en modelos animales.

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Método

Se inocularon células de tumor por vía intradérmica en ratones lampiños, 25 o 50 mg/kg del Compuesto (I) o vehículo se administraron una vez al día p.o. con la primera dosis administrada el día después de la implantación celular y los ratones se sacrificaron 5 días después. Se examinó un área de 1 cm^{2} con el tumor en el centro y se hizo el recuento del número de bifurcaciones de vasos sanguíneos dentro de esta área que aportan al tumor. El número de vasos que aportan a los tumores de los animales tratados con el fármaco de prueba y vehículo se comparó y el efecto del Compuesto (I) se calculó como reducción en porcentaje del recuento de vasos.

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Resultados

El Compuesto (I) produjo reducción en la densidad de vasos sanguíneos alrededor de los tumores en animales tratados comparados con los vehículos de referencia. Se observan reducciones en los recuentos de vasos por el Compuesto (I) alrededor de los tumores inducidas tanto por estirpes celulares de colon y próstata en cinco estudios in vivo.

TABLA 2 Inhibición de angiogénesis en tumores primarios producida por el Compuesto (I)

2

Las anteriores estirpes celulares están disponibles en el mercado. Una fuente es la ATCC (American Type Culture Collection). LOVO tiene un nº ATCC = CCL-229. DU145 tiene un nº ATCC = HTB-81.

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Exposición

Los inventores han demostrado que, in vitro, el Compuesto (I) es un inhibidor eficaz de la activación de MAP cinasa en osteoblastos mediada por ET-1 así como que es eficaz para inhibir la angiogénesis en tumores primarios in vivo. Esto confirma el potencial de este agente como terapia en el cáncer metástasico de próstata ya que puede tener efectos beneficiosos en la prevención de aumentos patológicos de la densidad ósea (por inhibición de la proliferación osteoblástica), mediados por la serie de reacciones MAPK así como inhibiendo la liberación de factores de crecimiento que soportan la supervivencia y el crecimiento de las células tumorales en el micromedio óseo además del efecto antiangiogénico en el tumor primario.

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4) Compuesto (I) como antagonista receptor de endotelina en el sistema de endotelina humano

El flujo sanguíneo del antebrazo humano puede evaluarse impidiendo temporalmente el drenaje venoso a partir del brazo mediante la aplicación de un brazalete neumático en el brazo superior, que se infla entonces exactamente por encima de la presión venosa. El flujo arterial resultante en el brazo sin el drenaje venoso correspondiente conduce a la congestión e hinchazón del antebrazo, que puede detectarse con calibres sensibles a la tensión. La infusión del vasoconstrictor arterial ET-1 en la arteria humeral conduce a una reducción en la distensión del antebrazo debida una disminución de la afluencia arterial. Esta vasoconstricción está mediada por los receptores de endotelina en el endotelio vascular y asociada al músculo liso.

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Método

Se llevó a cabo un estudio para investigar la capacidad del Compuesto (I) para antagonizar el efecto vasoconstrictor de ET-1 por los receptores de endotelina en este modelo en individuos masculinos sanos de 18 a 65 años de edad. Ocho individuos recibieron dosis orales individuales de 10 mg de Compuesto (I), 30 mg de Compuesto (I) y placebo de manera aleatoria, doble a ciegas en un estudio de al menos 7 días aparte. Se evaluó la vasoconstricción del antebrazo en respuesta a ET1 entre 2 y 4 horas después de la dosificación con el Compuesto (I).

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Resultados

En general, el Compuesto (I) produjo una reducción estadísticamente significativa en el flujo sanguíneo del antebrazo en respuesta a ET-1 infundido en comparación con el placebo (p=0,0210) con pruebas de una respuesta a la dosis entre las dosis investigadas. Esto demuestra que el Compuesto (I) es un antagonista receptor de endotelina en el sistema de endotelina humano.

5) Compuesto (I) en un estudio con aumento de la dosis para evaluar la tolerancia y la farmacocinética del Compuesto (I) administrado por vía oral una vez al día en un paciente con cáncer metastásico de próstata

El estudio siguiente puede emprenderse para determinar la dosis máxima bien tolerada (MWTD) de Compuesto (I) en individuos con cáncer metastásico de próstata. Este estudio permitirá observar el efecto del Compuesto (I) sobre el antígeno específico de la próstata (PSA), observar el efecto del Compuesto (I) en un biomarcador serológico de metástasis ósea y proporcionar caracterización farmacocinética del Compuesto (I) en individuos con cáncer metastásico de próstata.

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Método

Pueden utilizarse para este estudio pacientes con cáncer de próstata que tienen metástasis ósea documentada (confirmada por exploración ósea en 3 meses de comienzo del estudio). El Compuesto (I) puede administrarse por vía oral una vez al día en forma de comprimido. Pueden utilizarse 120 mg como dosis de partida. Puede administrase a los individuos la medicación del estudio durante 28 días o hasta que se reúnan los criterios de abstinencia. Cada nivel de dosis puede incorporar hasta tres individuos con cáncer metastásico de próstata.

Puede hacerse una evaluación formal de tolerancia en cada individuo después de una semana de administración del Compuesto (I). El aumento de la dosis puede ocurrir cuando dos individuos en cualquier cohorte no han experimentado toxicidad limitativa de la dosis (TLD) después de una semana de administración continua del Compuesto (I). La dosis puede aumentar por un factor de dos en cada etapa. Si un individuo a un determinado nivel de dosis tiene un TLD, entonces dos individuos más al mismo nivel de dosis no deben experimentar TLD con objeto de aumentar hasta el siguiente nivel de dosis.

Los individuos pueden continuar la terapia durante veintiocho días a menos que se reúnan los criterios de abstinencia. Cuando a un mínimo de dos individuos en cualquier cohorte se les ha administrado una dosis que se considera que no es bien tolerada en cualquier punto de tiempo después de la administración, el aumento de la dosis finalizará, y la dosis más próxima por debajo de ésta se tomará como MWTD.

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Pueden observarse los siguientes resultados:

\ding{226}

Frecuencia y gravedad de casos desfavorables;

\ding{226}

Concentración de PSA (total y relación de libre a total) a 1, 2 y 4 semanas en individuos tratados con el Compuesto (I);

\ding{226}

Cambio en PSA (total y relación de libre a total) desde antes de la administración del Compuesto (I) hasta 1, 2 y 4 semanas después de la administración del Compuesto (I);

\ding{226}

Cambio en un marcador de suero de afectación ósea metastásica (fosfatasa alcalina del hueso) desde el nivel de administración antes del Compuesto (I) a niveles después de 1, 2 y 4 semanas de la administración del Compuesto (I); y

\ding{226}

Concentraciones y variables en el plasma del Compuesto (I) después de una sola dosis y múltiples dosis en estado estacionario.

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En una realización adicional de la presente invención el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, se administra a una célula o individuo antes del desarrollo del cáncer. Por ejemplo, una persona en situación de riesgo de desarrollar cáncer puede ser tratada con el Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, para prevenir o inhibir el desarrollo del cáncer y/o para prevenir el desarrollo de metástasis.

El Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, puede administrarse para utilización terapéutica o profiláctica a un animal de sangre caliente tal como el hombre por métodos conocidos en la técnica. La administración puede ocurrir directamente en la zona del tumor, o particularmente, administración generalizada.

El Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, puede administrarse para utilización terapéutica o profiláctica a un animal de sangre caliente tal como el hombre en forma de composiciones farmacéuticas convencionales. La composición puede estar en una forma adecuada para administración oral, por ejemplo, en forma de un comprimido o cápsula, para inyección parenteral (incluyendo intravenosa, subcutánea, intramuscular, intravascular o infusión) en forma de una solución, suspensión o emulsión estéril, para administración tópica en forma de una pomada o crema o para administración rectal en forma de supositorio. En general las composiciones anteriores se pueden preparar de una forma convencional usando excipientes convencionales. Por ejemplo, el Compuesto (I) se puede formular en forma de comprimido utilizando los excipientes siguientes:

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Compuesto (I);

Monohidrato de lactosa (carga);

Croscarmelosa sódica (disgregador);

Povidona (aglutinante);

Estearato de magnesio (lubricante);

Hipromelosa (componente de revestimiento de la película);

Polietilenglicol 300 (componente de revestimiento de la película); y

Dióxido de titanio (componente de revestimiento de la película).

La cantidad de Compuesto (I), o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, administrada debería ser suficiente para proporcionar el efecto farmacéutico deseado. Por ejemplo, el Compuesto (I) podría administrarse a un animal de sangre caliente por vía oral, a una dosis unitaria menor de 1 g diario. En particular, el Compuesto (I) podría administrarse a un animal de sangre caliente, con una dosis unitaria menor de 250 mg al día. En otro aspecto de la invención, el Compuesto (I) podría administrarse a un animal de sangre caliente, con una dosis unitaria menor de 130 mg al día. En un aspecto adicional de la invención, el Compuesto (I) podría administrarse a un animal de sangre caliente, con una dosis unitaria menor que 50 mg al día.

Claims (22)

1. La utilización de N-(3-metoxi-5-metilpirazin-2-il)-2-(4-[1,3,4-oxadiazol-2-il]fenil)piridina-3-sulfonamida, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en el tratamiento de cáncer en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

2. La utilización del compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en la reducción de la proliferación anormal en una célula cancerosa o induciendo diferenciación de una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el hombre.

3. La utilización del compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, según la reivindicación 1, en la preparación de un medicamento para su utilización en la inducción en una célula cancerosa en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

4. La utilización del compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización como agente antiangiogénico y de reconocimiento vascular en los vasos sanguíneos que suministran una célula cancerosa en un animal de sangre caliente, tal como el hombre.

5. La utilización del compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización como agente antiangiogénico en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

6. La utilización según la reivindicación 1, en la que el cáncer, es cáncer esofágico, mieloma, cáncer hepatocelular, pancreático, de cuello de útero, tumor de Ewing, neuroblastoma, sarcoma de Kaposi, cáncer de ovario, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, cáncer de vejiga, melanoma, cáncer de pulmón, cáncer de pulmón no microcítico (NSCLC) y cáncer de pulmón microcítico (SCLC), cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer renal, linfoma y leucemia.

7. La utilización según la reivindicación 1, en el que cáncer es cáncer de próstata.

8. La utilización según la reivindicación 1, en la que el cáncer es SCLC, NSCLC, cáncer colorrectal, cáncer de ovario y/o cáncer de mama.

9. La utilización según la reivindicación 1, en la que el cáncer es cáncer de vejiga, cáncer esofaríngeo, cáncer gástrico, melanoma, cáncer cervical y/o cáncer renal.

10. La utilización según la reivindicación 1, en la que el cáncer es de endometrio, de hígado, de estómago, de tiroides, rectal y/o cáncer cerebral.

11. La utilización según la reivindicación 1, en la que el cáncer es SCLC.

12. La utilización según la reivindicación 1, en la que el cáncer es NSCLC.

13. La utilización según la reivindicación 1, en la que el cáncer es cáncer colorrectal.

14. La utilización según la reivindicación 1, en la que el cáncer es cáncer de ovario.

15. La utilización según la reivindicación 1, en la que el cáncer es cáncer de mama.

16. La utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 6 a 15, en la que el cáncer es un cáncer metastásico.

17. La utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 6 a 15, en la que el cáncer es un cáncer no metastásico.

18. La utilización según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 6 a 15, en la que el cáncer es cáncer renal, de tiroides, de pulmón, de mama o de próstata que está produciendo metástasis óseas.

19. La utilización del compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización como inhibidor de invasión en un animal de sangre caliente, tal como el ser humano.

20. La utilización del compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización como inhibidor de metástasis óseas en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

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21. La utilización del compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en la prevención de metástasis óseas en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.

22. La utilización del compuesto según la reivindicación 1, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la preparación de un medicamento para su utilización en el tratamiento de metástasis óseas en un animal de sangre caliente tal como el ser humano.