ES2349617T3 - Método inmunoestimulante. - Google Patents
Método inmunoestimulante. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2349617T3 ES2349617T3 ES06748068T ES06748068T ES2349617T3 ES 2349617 T3 ES2349617 T3 ES 2349617T3 ES 06748068 T ES06748068 T ES 06748068T ES 06748068 T ES06748068 T ES 06748068T ES 2349617 T3 ES2349617 T3 ES 2349617T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- use according
- baselineskip
- oligonucleotide
- previous
- steroid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/08—Bronchodilators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
- A61P5/44—Glucocorticosteroids; Drugs increasing or potentiating the activity of glucocorticosteroids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Uso de un oligonucleótido que tiene la secuencia 5'-Xm-CG-Yn-3' para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la resistencia a esteroides adquirida y la resistencia a esteroides primaria en un paciente, en el que X es A, T, C o G, Y es A, T, C o G; m = 1-100, n = 1-100 y en el que al menos un dinucleótido CG no está metilado y en el que dicho paciente está afectado por un estado inflamatorio.
Description
Método inmunoestimulante.
La presente invención se refiere a un método
inmunoestimulante. En particular, la presente invención se refiere a
un método en el que un oligonucleótido que contiene al menos un
dinucleótido CG no metilado se administra a un paciente dependiente
de, o que no responde a, esteroides afectado por un estado
inflamatorio.
La inflamación es una enfermedad compleja que
involucra muchos factores y tipos celulares. Desde una perspectiva
de la enfermedad, muchos años de investigaciones han enseñado que
los trastornos inflamatorios tales como asma, artritis reumatoide,
colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn y otros tienen un perfil de
citocinas inflamatorias definido. Estos perfiles son el resultado de
la naturaleza de los linfocitos de respuesta. En otras palabras, la
inflamación no puede considerarse como sólo "inflamación" si no
más bien como diferentes enfermedades inflamatorias asociadas con
diferentes citocinas secretadas que potencian la proliferación y la
diferenciación de ciertas subpoblaciones de células T
cooperadoras.
La naturaleza y la magnitud de una respuesta
inmunitaria están dictadas ampliamente por el perfil del antígeno
extraño al que se ha expuesto al sistema inmunitario. Este
acontecimiento pone en marcha una serie de acontecimientos que
finalmente conducen a la generación de inmunidad humoral y mediada
por células. Estas dos funciones efectoras diferentes están
provocados por la presencia de dos subpoblaciones de células T
cooperadoras (véase la figura 1). Tal como también se indica, pueden
diferenciarse diferentes enfermedades inflamatorias como que son o
bien Th1 o bien Th2, dependiendo del perfil de citocinas
observado.
En condiciones sanas "normales" existe un
equilibrio delicado entre las citocinas proinflamatorias típicas de
Th1 y las citocinas proinflamatorias típicas de Th2. Si se pierde
este equilibrio, existirá una polarización dando como resultado
inflamación de tipo Th1 o Th2 predominantemente y se producirá la
manifestación clínica de la
enfermedad.
enfermedad.
Algunas formas más recientes de agentes
terapéuticos ahora intentan restaurar el "equilibrio" por
ejemplo en enfermedades de tipo Th1 reduciendo el perfil de
citocinas de Th1 y de ese modo permiten que se produzca un perfil
más de Th2 (Neurath et al, 1995; Mannon et al, 2004).
Durante los últimos 5 años más o menos, muchos investigadores han
demostrado tanto in vitro como in vivo la validez del
uso de oligonucleótidos como agentes inmunoestimulantes en
aplicaciones de inmunoterapia. La observación de que los
oligonucleótidos con fosfodiéster e incluso con fosforotioato
modificado pueden inducir la inmunoestimulación ha creado un interés
creciente en desarrollar este efecto como una herramienta
terapéutica.
El ADN bacteriano tiene efectos
inmunoestimulantes que pueden activar células B y linfocitos
citolíticos naturales, pero el ADN de vertebrados no (revisado en
Krieg, 1998. Applied Oligonucleotide Technology, C. A. Stein y A. M.
Krieg, (Eds.), John Wiley and Sons, Inc., Nueva York, NY, págs.
431-448). Ahora se entiende que estos efectos
inmunoestimulantes del ADN bacteriano son el resultado de la
presencia de dinucleótidos CpG no metilados, en contextos de bases
particulares (motivos CpG), que son comunes en el ADN bacteriano,
pero están metilados y subrepresentados en el ADN de vertebrados
(Krieg et al, 1995). Los efectos inmunoestimulantes del ADN
bacteriano pueden imitarse con oligodesoxinucleótidos (ODN)
sintéticos que contienen estos motivos CpG. Tales ODN con CpG tienen
efectos altamente estimulantes sobre leucocitos humanos y murinos,
que inducen la proliferación de células B; la secreción de citocinas
y de inmunoglobulinas; la actividad lítica de linfocitos citolíticos
naturales (NK) y la secreción del IFN-gamma; y la
activación de células dendríticas (CD) y otras células presentadoras
de antígeno para expresar moléculas coestimulantes y secretar
citocinas, especialmente las citocinas de tipo Th1 que son
importantes en la promoción del desarrollo de respuestas de célula T
de tipo Th1. Estos efectos inmunoestimulantes del ODN con CpG con
esqueleto con fosfodiéster nativo son altamente específicos para CpG
porque se reducen drásticamente los efectos si se metila el motivo
CpG, se cambia por un GpC, o de lo contrario se elimina o se altera
(Krieg et al, 1995 y Hartmann
et al, 1999).
et al, 1999).
En estudios iniciales, se pensó que el motivo
CpG inmunoestimulante seguía la fórmula
purina-purina-CpG-pirimidina-pirimidina
(Krieg et al, 1995; Pisetsky, 1996 y Hacker et al.,
1998).
Actualmente existe una cantidad significativa de
datos publicados que indican que los oligonucleótidos que contienen
motivos CpG inducen ciertas citocinas, por ejemplo, las células
humanas y de ratón responden a los oligonucleótidos con motivo CpG
mediante la secreción potenciada de interferón-gamma
(IFN-gamma) (Iho et al., 1999: Cowdery et
al., 1996) IL-1, IL-6,
TNF-alfa e IL-12 (Stacey et
al., 1996; Jakob et al., 1998 y Sparwasser et al.,
1998).
Debido a la naturaleza de las citocinas
inducidas, se considera en gran parte que los oligonucleótidos que
contienen CpG inducen un perfil de Th1 tanto in vitro como
in vivo (Zimmermann et al., 1998; Kline, 2000).
\newpage
Además de la presencia de motivos CpG, los
investigadores también han observado que sintetizando
oligonucleótidos con un esqueleto de fosforotioato (PS) resistente a
nucleasa completo pueden potenciarse los efectos estimulantes de los
oligonucleótidos, porque estos oligonucleótidos fueron mucho más
potentes al estimular células B, mientras que la misma secuencia con
esqueleto de fosfodiéster nativo no tuvo ningún efecto (Zhao et
al., 1996).
Aunque la presencia de un motivo CpG dentro de
la secuencia de un oligonucleótido puede inducir una respuesta
fuerte a citocinas de Th1, debe considerarse esta respuesta en el
contexto global del estado de los compuestos de la modificación
química así como la estructura de secuencia general.
Tal como ya se indicó en la introducción de los
antecedentes a la inflamación, existe un perfil de citocinas
especifico que se vuelve prominente en diversos tipos de
enfermedades inflamatorias. Por ejemplo en pacientes asmáticos
existen niveles altos de IL-4 y niveles bajos de
IFN-gamma. Esta situación de citocinas indicará que
el asma es un tipo Th2 de enfermedad. La artritis reumatoide por el
contrario se asocia mejor con un tipo Th1 de inflamación
caracterizado porque se observan niveles altos de
IFN-gamma y niveles bajos de
IL-4.
El fenómeno de resistencia a corticosteroides se
ha estudiado más extensamente en pacientes asmáticos y con un menor
grado en colitis ulcerosa en el que se han acumulado evidencias a lo
largo de los años, que apuntan a varias anomalías de citocinas.
Ambas enfermedades se clasifican como de tipo Th2 y se han implicado
interferones así como IL-10 como que son factores
importantes en la patogénesis de la resistencia a
corticosteroides.
Puede ser posible que los oligonucleótidos
inmunoestimulantes que pueden inducir la producción endógena de
tales citocinas, tales como interferones e IL-10,
puedan influir en el estado inflamatorio de pacientes con
resistencia a esteroides o dependientes de esteroides de manera
beneficiosa.
La evidencia de que ciertas citocinas pueden
influir en la sensibilidad a esteroides se recoge de estudios
clínicos realizados en pacientes con colitis ulcerosa y asmáticos
resistentes a corticosteroides que también estaban todos en terapias
con corticosteroides. De hecho, este tipo de característica del
subgrupo de pacientes fue el único denominador común entre los
estudios clínicos descritos a continuación.
Los interferones (IFN) desempeñan papeles
cruciales en la regulación de una amplia variedad de respuestas
inmunitarias innatas y adaptativas. Los interferones de tipo I
(IFN-alfa/beta) son fundamentales para la defensa
del huésped frente a patógenos tales como virus, mientras que el
interferón de tipo II (IFN-gamma) contribuye
principalmente a la regulación mediada por células T de las
respuestas inmunitarias (Taniguchi y Takaoka, 2001). Los
interferones también han encontrado su lugar en el tratamiento
satisfactorio de diversas enfermedades humanas tales como
enfermedades neoplásicas benignas (Gili et al, 1995) y
virales (Niederau et al, 1996; Zeuzem et al,
2000).
En un estudio (Simón et al, 2003), a 10
pacientes con asma resistente a corticosteroides se les administró
IFN-alfa (3x10^{6} Ul/día) (Roferon A® Roche)
además de la dosis de prednisona que todos estaban recibiendo. El
ensayo demostró alta eficacia en estos pacientes y signos clínicos
de mejoría que se producían 1-2 semanas tras la
terapia con citocinas, permitiendo reducir la dosis de
corticosteroides. Los autores observaron además que el tratamiento
con IFN-alfa aumentó la capacidad de las células T
de sangre periférica de producir IFN-gamma,
sugiriendo que había habido un cambio desde una respuesta de tipo
Th2 (típico del asma y enfermedades alérgicas) hasta una respuesta
Th1.
Además, los autores mostraron que también hubo
un aumento en células T sanguíneas que secretaban
IL-10, en aquellos pacientes que habían recibido la
terapia con citocinas. Ya que los corticosteroides median sus
efectos antiinflamatorios, en parte, aumentando los niveles de
IL-10, los autores concluyen que la administración
de IFN-alfa exógeno rompió la resistencia a
corticosteroides en estos pacientes.
Musch et al (20 02) demostraron una alta
tasa de respuesta en pacientes con colitis ulcerosa que no
respondían a corticosteroides cuando se administraba
INF-beta i.v. El estudio piloto incluyó 25 pacientes
con colitis ulcerosa gravemente enfermos que demostraron que no
respondían a la medicación básica. Todos los pacientes recibían
corticosteroides en el momento del tratamiento con citocinas. Tras
el tratamiento, 22 de los 25 (88%) entraron en remisión en un plazo
de 3 semanas con una fuerte disminución en el índice de actividad
clínica (CAI) observada 1 semana tras el inicio del tratamiento. La
duración media de respuesta fue de 13 meses.
En otro estudio, Sumer et al, (1995),
notificaron una tasa de mejoría del 82% al tratamiento con citocinas
IFN-alfa s.c. en pacientes con colitis ulcerosa
resistentes a corticosteroides. Observaron además que los 23
pacientes respondieron a la terapia con citocinas con una rápida
mejoría (en el plazo de 15 días) y estaban en remisión clínica y
endoscópica completa tras 6 meses de terapia. Tres pacientes
entraron en remisión tras una terapia más larga; sin embargo, los 26
pacientes se observaron durante más de 2 años sin recibir terapia
adicional y permanecieron en remisión clínica y endoscópica total
durante este periodo.
Otra citocina que ha recibido interés en la
patogénesis de la resistencia a corticosteroides es la
IL-10. Se cree que esta citocina tiene efectos
antiinflamatorios potentes porque puede suprimir la producción de
citocinas proinflamatorias. También tiene amplias implicaciones en
el desarrollo de ciertas enfermedades inflamatorias, lo más
notablemente en alergia y asma (Hawrylowicz et al, 2005), así
como desempeña un papel fundamental en la regulación de respuestas
inmunitarias. Se cree que los corticosteroides ejercen sus efectos
antiinflamatorios en parte potenciando la producción de
IL-10 (Richards et al, 2005).
Numerosos estudios clínicos han indicado que
existe una falta general de niveles suficientes de
IL-10 en pacientes asmáticos que puede contribuir
potencialmente a una inflamación más intensa. En un estudio clínico
doble ciego aleatorio realizado en niños con asma atópico moderado,
Stelmach et al (2002) demostraron que el tratamiento con
triamcinolona, un corticosteroide, y montelukast, un
antileucotrieno, aumentaba significativamente los niveles de
IL-10 en el suero sanguíneo y además mejoraba
significativamente los síntomas clínicos.
En otro estudio clínico, se demostró que los
niveles de IL-10 y células productoras de
IL-10 se reducían significativamente en pacientes
con asma persistente grave cuando se comparó con asma leve (Tomitai
et al, 2002). Estas observaciones estuvieron de acuerdo con
hallazgos anteriores de que existe un defecto en la producción de
células que pueden producir IL-10 en sujetos
asmáticos (Tormey et al, 1998).
También se demostró que este defecto existía en
pacientes asmáticos resistentes a corticosteroides. En condiciones
normales, los corticosteroides provocarán un aumento de la
producción de IL-10 en pacientes sensibles a
corticosteroides. Sin embargo, Hawrylowicz et al (2002)
pudieron confirmar que en pacientes asmáticos resistentes a
corticosteroides, los corticosteroides no lograron inducir la
síntesis de IL-10. Estas observaciones sugieren una
fuerte relación entre la inducción de la síntesis de
IL-10 y la eficacia de los corticosteroides.
En un estudio publicado recientemente (Xystrakis
et al, 2006), los autores aislaron CMSP a partir de pacientes
asmáticos resistentes a corticosteroides y pudieron demostrar que la
adición de vitamina D3 con dexametasona a estos cultivos potenció la
síntesis de IL-10 hasta niveles observados en
células de pacientes sensibles a corticosteroides cultivadas con
dexametasona sola. Además, y quizás mas significativamente, el
tratamiento previo con IL-10 restauró totalmente la
síntesis de IL-10 en estas células en respuesta a la
dexametasona.
El uso de flora bacteriana humana para tratar
trastornos gastrointestinales (GI) no es un concepto novedoso, que
se ha practicado periódicamente durante más de 40 años (Eiseman
et al, 1958). Se han observado mejorías clínicas
significativas en numerosos trastornos GI incluyendo enfermedad
inflamatoria del intestino (EII) (Bennet y Brinkman 1989). Borody
et al. notificaron en 2003 que puede usarse bacterioterapia
humana para tratar la colitis ulcerosa (CU) resistente a
corticosteroides grave.
En un estudio pequeño, a 6 pacientes con CU
crónica que habían fallado previamente a terapias con
corticosteroides convencionales toleradas máximas se les administró
un único enema fecal concomitante a las terapias con
corticosteroides que recibían actualmente. Se logró una remisión
completa de la CU en los 6 pacientes tras la infusión rectal. Además
los autores mencionan que todos los pacientes dejaron la terapia
antiinflamatoria en el plazo de 6 semanas y permanecieron en
remisión en un caso durante hasta 13 años. El éxito aparente de la
bacterioterapia en pacientes con colitis ulcerosa resistente puede
deberse a la repoblación del colon con una flora bacteriana
"sana", pero igualmente como los autores sugieren, también
puede deberse a la instilación de una gran cantidad de ADN
bacteriano, que contiene abundantes motivos CpG, los que inducen un
efecto inmunomodulador beneficioso dando como resultado una remisión
completa de la enfermedad.
Un estudio en pacientes asmáticos comparó la
respuesta a un esteroide (prednisona) en pacientes tanto resistentes
a esteroides como sensibles a esteroides. En primer lugar se
proporcionó a los pacientes un periodo de "lavado" de una
semana antes de la administración del esteroide. Los perfiles de
citocinas antes de la administración y 1 semana después indicaron
que aquellos pacientes que respondieron al esteroide pasaron desde
un tipo Th2 hasta un estado más similar a Th1. Por el contrario,
aquellos pacientes que no lograron responder al esteroide
administrado permanecieron en el tipo Th2 (Naseer et al.,
1997).
Ikeda et al. (Am. J. Respir. Cell Mol.
Biol., Vol. 28, págs. 655-663, 2003) también se
refieren al asma y a la respuesta al tratamiento con esteroides. Se
estudió y se comparó la resolución de la inflamación de las vías
respiratorias mediante la administración de una secuencia de ADN
inmunoestimulante y un esteroide. Los autores encontraron un efecto
aditivo cuando se usaron juntos el ADN inmunoestimulante y el
esteroide en comparación con la administración separada.
Además sobre el uso de oligonucleótidos
inmunomoduladores, el documento US 2003/078223 (Raz Eyal et
al) da a conocer métodos para prevenir la aparición de, o
suprimir rápidamente, la inflamación estimulada por antígeno en un
huésped mediante la administración de una molécula de ácido nucleico
inmunomodulador para suprimir una respuesta inmunitaria Th2. El
documento también da a conocer métodos para mantener un aumento en
una respuesta inmunitaria Th1 en un individuo. El ácido nucleico
inmunomodulador puede administrarse sin la necesidad de la
coadministración de un antígeno para el cual el huésped esté
sensibilizado. También se dan a conocer métodos para proteger a un
huésped mamífero sensibilizado con el antígeno frente a la posterior
exposición a antígeno.
Aunque el motivo para la resistencia a
esteroides en pacientes asmáticos no está totalmente claro,
numerosos estudios en seres humanos han indicado que aquellos
pacientes que son resistentes a esteroides tienen altos niveles
persistentes de IL-2/4 que no se suprimen mediante
la acción de esteroides. Además, estudios in vitro indican
que cuando se coloca IL-2/4 en el medio de cultivo,
las células se vuelven resistentes a la acción de los esteroides
(Sousa AR et al., 2000; Hamid QA et al., 1999).
En artritis reumatoide se ha sugerido una
situación similar porque pacientes resistentes a esteroides
demuestran niveles altos de IL-4, que no pueden
reducirse cuando se exponen a esteroides (Chikanza et al.,
2004). Resultan interesantes los hallazgos de que
INF-gamma puede regular por disminución las
respuestas de IL-4 (Eul-Young et
al., 2000; Smeltz et al., 2002) al nivel de la
transcripción.
La dependencia de, o resistencia a, esteroides
sigue siendo un problema clínico importante para un gran número de
pacientes afectados por enfermedades inflamatorias puesto que las
terapias actuales se basan en el uso de inmunomoduladores potentes
que pueden inducir efectos secundarios graves. Un método sencillo y
directo para potenciar la eficacia de esteroides en un individuo que
no era sensible a esteroides con poco riesgo de efectos secundarios
no deseados mejoraría esencialmente el tratamiento antiinflamatorio,
mejorando por tanto la enfermedad en cuestión, y aumentando la
calidad y la duración de la vida para un gran número de
pacientes.
La presente invención está definida por las
reivindicaciones y se refiere al uso de un oligonucleótido para
potenciar la eficacia de esteroides del tratamiento de la
resistencia a esteroides adquirida o la resistencia a esteroides
primaria en un paciente afectado por un estado inflamatorio. Se
administra un oligonucleótido que tiene la secuencia
5'-X_{m}-CG-Y_{n}-3'
en una cantidad eficaz a dicho paciente. En la secuencia del
oligonucleótido X es A, T, C o G, Y es A, T, C o G, m =
1-100, n = 1-100 y al menos un
dinucleótido CG no está metilado.
La presente invención también se refiere al
oligonucleótido anterior para su uso en dicho tratamiento.
El conjunto adjunto de reivindicaciones se
incorpora en el presente documento en su totalidad.
La figura 1 es un gráfico que muestra el número
de células productoras de IL-10 en respuesta a 48
horas de estimulación con DIMS0150 en CMSP de cinco (n=5) donantes
sanos diferentes analizados mediante ELISpot. Se incubaron las CMSP
en medio (basal) o con concentraciones crecientes (0,1, 1, 5, 10,
25, 100, 150 ó 200 \muM) del DIMS0150 que contenía CpG o, su
control con GpC IDX0526, o los ODN con CpG, IDX0910
(0,1 ó 10 \muM) e IDX0900 (3 \muM) durante 48 horas antes
de la detección de manchas positivas para IL-10.
Cada barra del histograma representa los resultados promedio de
cinco donantes de sangre diferentes. Las muestras se realizaron y se
analizaron por triplicado para cada experimento/donante de sangre.
Obsérvese que se sometió a prueba IDX0900 en tres individuos
(n=3).
La figura 2 es un gráfico que muestra el número
de células productoras de IFN-gamma en respuesta a
72 horas de estimulación con DIMS0150 de CMSP de cinco (n=5)
donantes diferentes que se analizaron mediante ELISpot. Se incubaron
las CMSP en medio (basal) o con concentraciones crecientes (0,1, 1,
5, 10, 25, 50 100, 150 ó 200 \muM) del DIMS0150 que contiene CpG,
o su control con GpC IDX0526, o los ODN con CpG
IDX0910 (a 0,1 \muM) e IDX0900 (a 3 \muM) durante
72 horas antes de la detección de manchas positivas para
IFN-gamma. Cada barra del histograma representa los
resultados promedio de cinco donantes de sangre diferentes. Las
muestras se realizaron y se analizaron por triplicado para cada
experimento/donante de sangre. Obsérvese que se sometió a prueba
IDX0900 en tres individuos (n=3).
La figura 3 es un gráfico que muestra el número
de células productoras de IFN-alfa en respuesta al
DIMS0150 en 4 8 horas en CMSP de diez (n=10) donantes sanos
diferentes que se sometieron a ensayo mediante ELISpot. Se incubaron
las CMSP en medio (basal) o con concentraciones crecientes (0,1, 1,
5, 10, 25, 50, 100, 150 ó 200 \muM) del DIMS0150 que
contenía CpG, o su control con GpC IDX0526 (n=9) o el ODN con
CpG IDX0910 (0,1 \muM ó 10 \muM) durante 4 8 horas antes
de la detección de manchas positivas para IFN-alfa.
Cada barra del histograma representa los resultados promedio de diez
donantes de sangre diferentes. Las muestras se realizaron y se
analizaron por triplicado para cada experimento/donante de sangre.
Obsérvese que se sometió a prueba IDX0910 a 0,1 \muM en
ocho donantes y se sometieron a prueba 10 \muM en cuatro
individuos.
La figura 4A es un gráfico que muestra la
producción de IL-10 en respuesta a estimulación de
48 horas con DIMS0150 que se cuantificó mediante ELISA. Se incubaron
las CMSP con concentraciones crecientes (0,1, 1, 5, 10, 25, 50, 100,
150 ó 200 \muM) de DIMS0150 o su control con GpC
IDX0526. Como controles, se dejaron las células en medio
(basal) o se trataron con los ODN con CpG de IDX0910 (0,1
\muM) e IDX0900 (3 \muM). Este gráfico representa los
resultados de un experimento en CMSP de uno de los dos donantes que
se realizó y analizó por duplicado.
La figura 4B es un gráfico que muestra la
producción de IFN-gamma en respuesta a estimulación
de 48 horas con DIMS0150 que se cuantificó mediante ELISA. Se
incubaron las CMSP con concentraciones crecientes (0,1, 1, 5, 10,
25, 50, 100, 150, 200 ó 300 \muM) de DIMS0150 o su control con GpC
IDX0526. Como controles, se dejaron las células en medio
(basal) o se trataron con los ODN con CpG, IDX0910 (0,1
\muM y 1 \muM) o IDX0900 (3 \muM). Se realizó este
experimento en células de un donante de sangre y cada muestra se
realizó y se analizó por duplicado.
La figura 4C es un gráfico que muestra la
producción de IFN-alfa en respuesta a estimulación
de 4 8 horas con DIMS0150 que se cuantificó mediante ELISA. Se
incubaron las CMSP con diferentes concentraciones (0,1, 1, 5, 10,
25, 50, 100, 150, 200 ó 300 \muM) de DIMS0150 o su control
con GpC IDX0526. Como controles, se dejaron las células en
medio (basal) o se trataron con los ODN con CpG, IDX0910 (0,1
\muM y 1 \muM) e IDX0900 (3 \muM). Este gráfico
representa resultados de un experimento en CMSP de uno de dos
donantes que se realizó y analizó por duplicado.
La figura 5 es un gráfico que muestra la
comparación de la producción de IL-10 en CMSP
humanas tras la estimulación con una variedad de ODN con CpG y sus
controles invertidos que se cuantificaron mediante ELISA. Se
trataron las CMSP con concentraciones crecientes (de izquierda a
derecha, tal como se indica en el triángulo: 0,1, 1, 10 ó 100
\muM) de los ODN de DIMS0150, IDX0250, IDX0920 e
IDX0910 y sus respectivos ODN con GpC de control negativo
junto con el ODN que no contenía CpG IDX0304 durante 48 horas
antes de la recogida de los sobrenadantes y posterior análisis. Las
células que se dejaron sin tratar en medio presentaron el nivel
basal de IL-10 en CMSP. Se recogieron los
sobrenadantes tras 48 horas seguido por un análisis posterior. Se
realizó este experimento en células de un donante de sangre y todas
las muestras se realizaron y analizaron por duplicado.
La figura 6 es un gráfico que muestra la
comparación de la producción de IFN-gamma en CMSP
humanas tras la estimulación con una variedad de ODN con CpG que se
cuantificaron mediante ELISA. Se trataron las CMSP con
concentraciones crecientes (de izquierda a derecha, tal como se
indica mediante el triángulo: 0,1, 1, 10 ó 100 \muM) de los ODN de
DIMS0150, IDX0250, IDX0920 e IDX0910 y sus respectivos
ODN con GpC de control negativo junto con el ODN que no contenía CpG
IDX0304 durante 48 horas antes de la recogida de los
sobrenadantes y posterior análisis. Las células que se dejaron sin
tratar en medio presentaron el nivel basal de
IFN-gamma en CMSP. Se recogieron los sobrenadantes
tras 48 horas seguido por análisis posterior. Se realizó este
experimento en células de un donante de sangre y todas las muestras
se realizaron y analizaron por duplicado.
La figura 7 es un gráfico que muestra la
producción de IFN-gamma de esplenocitos de ratón en
respuesta a 4 8 horas de estimulación con CpG que se cuantificó
mediante ELISA. Se trataron los esplenocitos de ratón con
concentraciones crecientes (de izquierda a derecha, tal como se
indica en los triángulos: 0,1, 1, 10 ó 100 \muM) de los ODN de
DIMS0150, IDX0250, IDX0920, IDX0910 y sus respectivos ODN con
GpC de control negativo en comparación con el control de ODN que no
contenía CpG IDX0304 durante 48 horas antes de la recogida de
los sobrenadantes y posterior análisis. Las células que se dejaron
sin tratar en medio presentaron el nivel basal de
IFN-gamma en esplenocitos. Se recogieron los
sobrenadantes tras 48 horas de estimulación seguido por análisis
posterior. Obsérvese que se realizó este experimento en las células
de un bazo de ratón y todas las muestras se realizaron y analizaron
por duplicado.
La figura 8 es un gráfico que muestra la
producción de IL-10 de esplenocitos de ratón en
respuesta a 48 horas de estimulación con CpG que se cuantificó
mediante ELISA. Se trataron los esplenocitos de ratón con
concentraciones crecientes (de izquierda a derecha, tal como se
indica en el triángulo: 0,1, 1, 10 ó 100 \muM) de los ODN de
DIMS0150, IDX0250, IDX0920 e IDX0910 y sus respectivos
ODN con CpG de control negativo junto con el ODN que no contenía CpG
IDX0304 durante 48 horas antes de la recogida de los
sobrenadantes y posterior análisis. Las células que se dejaron sin
tratar en medio presentaron el nivel basal de IL-10
en esplenocitos. Se recogieron los sobrenadantes tras 48 horas
seguido por análisis posterior. Se realizó este experimento en
células de un bazo de ratón y todas las muestras se realizaron y
analizaron por duplicado.
Tal como se usa en el presente documento, las
expresiones "resistente a esteroides" y "que no responde a
esteroides" se refieren a pacientes que tienen enfermedades
inflamatorias en los que la administración del tratamiento con
esteroides, normalmente eficaz en pacientes que tienen tales
enfermedades, es ineficaz. En este contexto pacientes "resistentes
a esteroides" y "que no responden a esteroides" incluyen,
pero no se limitan a, pacientes que no responden o responden escasa
o inadecuadamente según se evalúa mediante parámetros fisiológicos
apropiados comunes a esteroides administrados por vía tópica o
sistémica. Se han descrito dos tipos de pacientes resistentes a
esteroides, es decir resistencia a esteroides adquirida (tipo I) y
resistencia a esteroides primaria (tipo II), ambos de los cuales
están comprendidos en la presente invención.
Tal como se usa en el presente documento, la
expresión "dependencia de esteroides", se refiere a pacientes
con la incapacidad de dejar de depender del tratamiento con
esteroides administrados por vía tópica o sistémica.
La bibliografía que describe la actividad
inmunoestimulante de polinucleótidos incluye, pero no se limita a,
Krug et al. (2001); Bauer et al. (2001); Klinman et
al. (1999); Jahn-Schmid et al. (1999) y
Tighe et al. (2000).
La bibliografía adicional que describe
secuencias inmunoestimulantes incluye: Tokunaga et al.
(1992); Yamamoto et al. (1992) y los documentos EP 4 68.520;
WO 96/02555; WO 97/28259; WO 98/16247; las patentes estadounidenses
n.^{os} 6.339.068, 6.406.705, 6.426.334 y 6.426.336.
Para los fines de la invención, el término
"oligonucleótido" se refiere a un polinucleósido formado a
partir de una pluralidad de unidades de nucleósido individuales
enlazadas. Tales oligonucleótidos pueden obtenerse a partir de
fuentes de ácido nucleico existentes, incluyendo ADNc o genómico,
pero se producen preferiblemente mediante métodos sintéticos. Los
residuos de nucleósido pueden acoplarse entre sí mediante cualquiera
de los numerosos enlaces entre nucleósidos conocidos. Tales enlaces
entre nucleósidos incluyen, sin limitación, la unión fosfodiéster
entre nucleósidos natural o de hecho entre nucleósidos modificados
tales como, pero sin limitarse a, enlaces entre nucleósidos con
fosforotioato, fosforoditioato, alquilfosfonato,
alquilfosfonotioato, fosfotriéster, fosforamidato, siloxano,
carbonato, carboalcoxilo, acetamidato, carbamato, morfolino, borano,
tioéter, fosforamidato en puente, fosfonato de metileno en puente,
fosforotioato en puente y sulfona. El término "oligonucleótido"
también abarca polinucleósidos que tienen uno o más enlaces entre
nucleósidos estereoespecíficos (por ejemplo, enlaces (Rp) o
(Sp)-fosforotioato, alquilfosfonato o
fosfotriéster). Tal como se usa en el presente documento, se
pretende expresamente que los términos "oligonucleótido" y
"dinucleótido" incluyan polinucleósidos y dinucleósidos que
tienen cualquier enlace entre nucleósidos de este tipo, tanto si el
enlace comprende un grupo fosfato como si no. En ciertas
realizaciones preferidas, estos enlaces entre nucleósidos pueden ser
enlaces fosfodiéster, fosforotioato o fosforoditioato, o
combinaciones de los mismos.
El término "oligonucleótido" también abarca
polinucleósidos que tienen sustituyentes adicionales incluyendo, sin
limitación, grupos de proteína, grupos lipófilos, agentes
intercalantes, diaminas, ácido fólico, colesterol y adamantano. El
término "oligonucleótido" también abarca cualquier otro
polímero que contiene nucleobases, incluyendo, sin limitación,
ácidos nucleicos peptídicos (PNA), ácidos nucleicos peptídicos con
grupos fosfato (PHONA), ácidos nucleicos cerrados (LNA),
oligonucleótidos con esqueleto de morfolino, y oligonucleótidos que
tienen secciones del esqueleto con conectores alquilo o conectores
amino.
Los oligonucleótidos de la invención pueden
incluir nucleósidos que se producen de manera natural, nucleósidos
modificados, o mezclas de los mismos. Tal como se usa en el presente
documento, la expresión "nucleósido modificado" es un
nucleósido que incluye una base heterocíclica modificada, un resto
de azúcar modificado, o una combinación de los mismos. En algunas
realizaciones, el nucleósido modificado es un nucleósido de purina o
pirimidina no natural, tal como se describe en el presente
documento. En algunas realizaciones, el nucleósido modificado es un
2'-sustituido-ribonucleósido, un
arabinonucleósido o un
2'-desoxi-2'-sustituido-arabinósido.
El término "oligonucleótido" incluye
oligonucleótidos quiméricos e híbridos. Un "oligonucleótido
quimérico" es un oligonucleótido que tiene más de un tipo de
enlace entre nucleósidos dentro de su estructura de secuencia. Un
ejemplo preferido de un oligonucleótido quimérico de este tipo es un
oligonucleótido quimérico que comprende una región de fosforotioato,
fosfodiéster o fosforoditioato y enlaces no iónicos tales como
enlaces alquilfosfonato o alquilfosfonotioato (Pederson et
al. patentes estadounidenses n.^{os} 5.635.377 y
5.366.878).
Un "oligonucleótido híbrido" es un
oligonucleótido que tiene más de un tipo de nucleósido. Un ejemplo
preferido de un oligonucleótido híbrido de este tipo comprende una
región de ribonucleótido o
2'-sustituido-ribonucleótido, y una
región de desoxirribonucleótido (Metelev y Agrawal, patentes
estadounidenses n.^{os} 5.652.355, 6.346.614 y 6.143.881).
Para los fines de la invención, la expresión
"oligonucleótido inmunomodulador" se refiere a un
oligonucleótido tal como se describió anteriormente que induce una
respuesta inmunitaria o bien estimulando el sistema inmunitario o
bien reprimiendo el sistema inmunitario o ambos en un organismo
cuando se administra a un vertebrado, tal como un mamífero. Tal como
se usa en el presente documento, el término "mamífero" incluye,
sin limitación ratas, ratones, gatos, perros, caballos, ganado,
vacas, cerdos, conejos, primates no humanos y seres humanos.
Preferiblemente, el oligonucleótido
inmunomodulador comprende al menos un fosfodiéster que se produce de
manera natural, o un enlace entre nucleósidos fosforotioato o
fosforoditioato modificado, sin embargo enlaces preferidos o de
hecho modificaciones del esqueleto incluyen, sin limitación,
metilfosfonatos, metilfosfonotioatos, fosfotriésteres,
fosfotiotriésteres, fosforotioatos, fosforoditioatos, profármacos
con triéster, sulfonas, sulfonamidas, sulfamatos, formacetal,
N-metilhidroxilamina, carbonato, carbamato,
morfolino, boranofosfonato, fosforamidatos, especialmente amino
primario-fosforamidatos,
N3-fosforamidatos y
N5-fosforamidatos, y enlaces estereoespecíficos (por
ejemplo, enlaces (Rp) o (Sp)-fosforotioato,
alquilfosfonato o fosfotriéster).
La expresión "respuesta inmunomoduladora"
describe el cambio de una respuesta inmunitaria cuando se expone a
un oligonucleótido inmunomodulador. Este cambio puede medirse a
menudo mediante la liberación de ciertas citocinas tales como
interferones así como otros parámetros fisiológicos tales como
proliferación. La respuesta también puede ser una que sirva para
estimular el sistema inmunitario así como para reprimir el sistema
inmunitario dependiendo de las citocinas inducidas por el
oligonucleótido inmunomodulador en cuestión.
En algunas realizaciones, el oligonucleótido
inmunomodulador comprende un dinucleótido inmunoestimulante de
fórmula
5'-Pyr-Pur-3', en la
que Pyr es un nucleósido de pirimidina natural o sintético y Pur es
un nucleósido de purina natural o sintético. En algunas
realizaciones preferidas, el oligonucleótido inmunomodulador
comprende un dinucleótido inmunoestimulante de fórmula
5'-Pur*-Pur-3', en la que Pur* es un
nucleósido de purina sintético y Pur es un nucleósido de purina
natural o sintético. En diversos lugares, el dinucleótido se expresa
como RpG, C*pG o YZ, en cuyo caso respectivamente, R, C* o Y
representan una purina sintética. una purina sintética
particularmente preferida es
2-oxo-7-desaza-8-metil-purina.
Cuando esta purina sintética está en la posición Pur* del
dinucleótido, se supera la especificidad de especie (dependencia de
secuencia) del efecto inmunoestimulante y se mejora el perfil de
citocinas. Tal como se usa en el presente documento, la expresión
"nucleósido de pirimidina" se refiere a un nucleósido en el que
el componente base del nucleósido es una nucleobase monocíclica. De
manera similar, la expresión "nucleósido de purina" se refiere
a un nucleósido en el que el componente base del nucleósido es una
nucleobase bicíclica. Para los fines de la invención, un nucleósido
de purina o pirimidina "sintético" incluye una base de purina o
pirimidina que no se produce de manera natural, un resto de azúcar
que no se produce de manera natural, o una combinación de los
mismos.
En algunas realizaciones, el resto de azúcar del
nucleósido puede ser un resto de azúcar que no se produce de manera
natural. Para los fines de la presente invención, un "resto de
azúcar que se produce de manera natural" es un resto de azúcar
que se produce de manera natural como parte de un ácido nucleico,
por ejemplo, ribosa y 2'-desoxirribosa, y un
"resto de azúcar que no se produce de manera natural" es
cualquier azúcar que no se produce de manera natural como parte de
un ácido nucleico, pero que puede usarse en el esqueleto para un
oligonucleótido, por ejemplo, pero sin limitarse a, hexosa. La
arabinosa y derivados de arabinosa son ejemplos de restos de azúcar
preferidos.
Los restos inmunoestimulantes preferidos según
la invención incluyen además nucleósidos que tiene modificaciones de
azúcares, incluyendo, sin limitación, azúcares de pentosa
2'-sustituida, sin limitación,
2'-O-metilribosa,
2'-O-metoxietilribosa,
2'-O-propargilribosa y
2'-desoxi-2'-fluororribosa;
azúcares de pentosa 3'-sustituida, incluyendo, sin
limitación, 3'-O-metilribosa;
1',2'-didesoxiribosa; arabinosa; azúcares de
arabinosa sustituida, incluyendo, sin limitación,
1'-metilarabinosa,
3'-hidroximetilarabinosa,
4'-hidroximetilarabinosa,
3'-hidroxiarabinosa y azúcares de arabinosa
2'-sustituida; azúcares de hexosa, incluyendo, sin
limitación, 1,5-anhidrohexitol; y
alfa-anómeros.
En otra realización, restos inmunoestimulantes
preferidos según la invención incluyen además oligonucleótidos que
tienen otras sustituciones y modificaciones del esqueleto de
hidratos de carbono, incluyendo ácidos nucleicos peptídicos (PNA),
ácidos nucleicos peptídicos con grupos fosfato (PHONA), ácidos
nucleicos cerrados (LNA), oligonucleótidos con esqueleto de
morfolino, y oligonucleótidos que tienen secciones conectoras de
esqueleto que tienen una longitud de desde aproximadamente 2
angstroms hasta aproximadamente 200 angstroms, incluyendo sin
limitación, conectores alquilo o conectores amino. El conector
alquilo puede estar ramificado o no ramificado, sustituido o no
sustituido, y ser quiralmente puro o una mezcla racémica. Lo más
preferiblemente, tales conectores alquilo tienen desde
aproximadamente 2 hasta aproximadamente 18 átomos de carbono. En
algunas realizaciones preferidas tales conectores alquilo tienen
desde aproximadamente 3 hasta aproximadamente 9 átomos de carbono.
Algunos conectores alquilo incluyen uno o más grupos funcionales
seleccionados del grupo que consiste en hidroxi, amino, tiol,
tioéter, éter, amida, tioamida, éster, urea y tioéter. Algunos
conectores alquilo funcionalizados son conectores de
polietilenglicol de fórmula
-O-(CH2-CH2-O-), (n =
1-9). Algunos otros conectores alquilo
funcionalizados son péptidos o aminoácidos.
En una realización adicional, restos
inmunoestimulantes preferidos según la invención incluyen además
isoformas de ADN, incluyendo, sin limitación,
L-desoxirribonucleósidos y
a-desoxirribonucleósidos. Los restos
inmunoestimulantes preferidos según la invención incorporan
modificaciones en 3', e incluyen además nucleósidos que tienen
posiciones de enlace entre nucleósidos no naturales, incluyendo, sin
limitación, enlaces 2'-5', 2'-2',
3'-3' y 5'-5'.
El oligonucleótido inmunomodulador según la
invención comprende al menos cinco nucleósidos enlazados por medio
de un enlace entre nucleósidos o un azúcar o nucleobase
funcionalizada por medio de un conector no nucleotídico. Para los
fines de la invención, un "conector no nucleotídico" es
cualquier resto que puede enlazarse a los oligonucleótidos por medio
de enlaces covalentes o no covalentes.
Los enlaces no covalentes incluyen, pero no se
limitan a, interacción electrostática, interacciones hidrófobas,
interacciones de apilamiento y puentes de hidrógeno. No se pretende
que la expresión "conector no nucleotídico" haga referencia a
un enlace entre nucleósidos, tal como se describió anteriormente,
por ejemplo un grupo funcional fosfodiéster, fosforotioato o
fosforoditioato, que conecta directamente los grupos
3'-hidroxilo de dos nucleósidos. Para los fines de
esta invención, un enlace 3'-3' directo (sin
participación de un conector) de este tipo se considera que es un
"enlace nucleotídico".
En algunas realizaciones, el conector no
nucleotídico es un metal, incluyendo, sin limitación, partículas de
oro. En algunas otras realizaciones, el conector no nucleotídico es
una perla de polímero biodegradable soluble o insoluble.
Aún en otras realizaciones, el conector no
nucleotídico es un resto orgánico que tiene grupos funcionales que
permiten la unión al oligonucleótido. Tal unión preferiblemente es
mediante cualquier enlace covalente estable.
En algunas realizaciones, el conector no
nucleotídico es una biomolécula, incluyendo, sin limitación,
polipéptidos, anticuerpos, lípidos, antígenos, alergenos y
oligosacáridos. En algunas otras realizaciones, el conector no
nucleotídico es una molécula pequeña. Para los fines de la
invención, una molécula pequeña es un resto orgánico que tiene un
peso molecular inferior a 1.000 Da.
En algunas realizaciones, la molécula pequeña es
un hidrocarburo alifático o aromático, cualquiera de los cuales
puede incluir opcionalmente, o bien en la cadena lineal que conecta
los oligonucleótidos o bien unido a ésta, uno o más grupos
funcionales seleccionados del grupo que consiste en hidroxi, amino,
tiol, tioéter, éter, amida, tioamida, éster, urea y tiourea. La
molécula pequeña puede ser cíclica o acíclica. Ejemplos de
conectores de molécula pequeña incluyen, pero no se limitan a,
aminoácidos, hidratos de carbono, ciclodextrinas, adamantano,
colesterol, haptenos y antibióticos. Sin embargo, para los fines de
la descripción del conector no nucleotídico, no se pretende que la
expresión "molécula pequeña" incluya un nucleósido.
En algunas realizaciones, el conector de
molécula pequeña es glicerol o un homólogo de glicerol de fórmula
HO-(CH2) o -CH-(OH)-(CH2)p-OH, en la que o y
p son independientemente números enteros desde 1 hasta
aproximadamente 6, desde 1 hasta aproximadamente 4, o desde 1 hasta
aproximadamente 3. En algunas otras realizaciones, el conector de
molécula pequeña es un derivado de
1,3-diamino-2-hidroxipropano.
Algunos derivados de este tipo tienen la fórmula
HO-(CH2)m-C(O)NH-CH2-CH(OH)-CH2-NHC(O)-m-OH,
en la que m es un número entero desde 0 hasta aproximadamente 10,
desde 0 hasta aproximadamente 6, desde 2 hasta aproximadamente 6 o
desde 2 hasta aproximadamente 4.
Se prefieren a menudo oligonucleótidos
sustituidos o modificados con respecto a las formas nativas debido a
propiedades deseables tales como, por ejemplo, captación celular
potenciada, afinidad potenciada por la diana de ácido nucleico y
estabilidad aumentada en presencia de nucleasas. Un oligonucleótido
está compuesto habitualmente por más de dos (2), y normalmente más
de diez (10) y hasta cien (100) o más desoxirribonucleótidos o
ribonucleótidos, aunque preferiblemente entre aproximadamente ocho
(8) y aproximadamente cuarenta (40), lo más preferiblemente entre
aproximadamente ocho (8) y aproximadamente veinte (20). El tamaño
exacto dependerá de muchos factores, que a su vez dependen del uso o
la función final del oligonucleótido. El oligonucleótido puede
generarse de cualquier manera, incluyendo síntesis química,
replicación de ADN, transcripción inversa o una combinación de los
mismos.
Los oligonucleótidos pueden administrarse
mediante cualquier vía de administración apropiada, tal como, pero
sin limitarse a, administración por inhalación, oftálmica,
intranasal, parenteral, oral, intradérmica y rectal. Si el paciente
también está en tratamiento con esteroides u otros tratamientos
antiinflamatorios tales como el uso de inmunomoduladores, los
esteroides e inmunomoduladores pueden administrarse junto con los
oligonucleótidos o por separado. La vía de administración de los
oligonucleótidos es independiente de la vía de administración de los
esteroides.
La expresión "cantidad terapéuticamente
eficaz" tal como se usa en el presente documento se refiere a una
cantidad suficiente para potenciar la eficacia de esteroides hasta
cierto grado beneficioso, preferiblemente para potenciarla en al
menos aproximadamente el 30 por ciento, más preferiblemente en al
menos el 50 por ciento, e incluso más preferible en al menos el 90
por ciento. Lo más preferiblemente se trata la resistencia a
esteroides.
El término "esteroide" se usa para abarcar
tanto corticosteroides como glucocorticosteroides. La expresión
"oligonucleótido que contiene CG" se usa para abarcar un
oligonucleótido que tiene al menos un dinucleótido CG no metilado
dentro de su longitud de secuencia completa y que tiene una longitud
preferiblemente de 8 a 100 bases de ácido nucleico.
La expresión "potenciar la eficacia de
esteroides" se usa en el presente documento para abarcar un
efecto ahorrador de esteroides, que se evidencia como una situación
clínica en la que se demuestra que un tratamiento simultáneo o
secuencial con un oligonucleótido que contiene CG, preferiblemente
un tratamiento previo, reduce la dosis de esteroides necesaria para
tratar la inflamación. También se pretende que la expresión
"potenciar la eficacia de esteroides" abarque un uso sinérgico
de un oligonucleótido que contiene CG y un esteroide, o bien
simultáneamente o de manera sustancialmente simultánea, o bien
secuencialmente o de manera sustancialmente simultánea, que se
demuestra que reduce la dosis de esteroides necesaria para tratar la
inflamación. Las expresiones "resistencia a esteroides" o
"que no responde a esteroides" se usan para abarcar un paciente
que no logra responder adecuadamente a un régimen terapéutico actual
que se considera que es normalmente eficaz y suficiente para tratar
la enfermedad en cuestión. La expresión "dependiente de
esteroides" se usa para abarcar un paciente con una incapacidad
observada de dejar de depender de la terapia actual sin comprometer
el estado del paciente o aumentar la gravedad de los síntomas de la
enfermedad en cuestión.
Se describen formulaciones farmacéuticas que
comprenden un oligonucleótido inmunomodulador y un vehículo
fisiológicamente aceptable. Tal como se usa en el presente
documento, la expresión "fisiológicamente aceptable" se refiere
a un material que no interfiere con la eficacia del oligonucleótido
inmunomodulador y es compatible con un sistema biológico tal como
una célula, un cultivo celular, un tejido o un organismo.
Preferiblemente, el sistema biológico es un organismo vivo, tal como
un vertebrado.
Tal como se usa en el presente documento, el
término "vehículo" abarca cualquier excipiente, diluyente,
carga, sal, tampón, estabilizante, solubilizante, lípido u otro
material bien conocido en la técnica para su uso en formulaciones
farmacéuticas. Se entenderá que las características del vehículo,
excipiente o diluyente dependerán de la vía de administración para
una aplicación particular. La preparación de formulaciones
farmacéuticamente aceptables que contienen estos materiales se
describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª
edición, ed. A. Gennaro, Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990.
La concentración de un oligonucleótido de
inmunomodulación en una mezcla farmacéuticamente aceptable variará
dependiendo de varios factores, incluyendo la dosificación del
compuesto que va a administrarse, las características
farmacocinéticas del/de los compuesto(s) empleado(s),
la edad, el sexo y el estado del paciente, así como la vía de
administración. Las cantidades eficaces de oligonucleótidos de
inmunomodulación para potenciar la eficacia de esteroides en un
paciente resistente a esteroides o dependiente de esteroides
oscilarán ampliamente entre aproximadamente 0,01 \mug y
aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal, preferiblemente de
aproximadamente 0,1 \mug a aproximadamente 10 mg, y lo más
preferiblemente de aproximadamente 1 \mug a aproximadamente 5 mg
por kg de peso corporal de un mamífero receptor.
En ciertas realizaciones preferidas, se
administra el oligonucleótido inmunomodulador según la invención en
combinación con, pero sin limitarse a, agentes antiinflamatorios
tales como anticuerpos para TNF, fármacos antiinflamatorios no
esteroideos (AINE) tales como ibuprofeno, naproxeno, aspirina y
otros salicilatos e inhibidores de la cox-2, tales
como celecoxib (Celebrex®), corticosteroides (inhalados, orales,
rectales), estabilizantes de mastocitos y fármacos modificadores de
leucotrienos.
Para los fines de este aspecto, la expresión
"en combinación con" significa en el transcurso del tratamiento
de la misma enfermedad en el mismo paciente, e incluye administrar
el oligonucleótido inmunomodulador en cualquier orden, incluyendo
administración simultánea, así como orden separado en el tiempo de
hasta varios meses de separación. Tal tratamiento de combinación
también puede incluir más de una única administración del
oligonucleótido inmunomodulador. Más preferible, el oligonucleótido
inmunomodulador de la invención se administra a un paciente
resistente a esteroides o dependiente de esteroides después de que
ese paciente haya iniciado terapia con esteroides, y esté en un
régimen de dosificación estable.
Una realización se refiere a un método para
potenciar la eficacia de esteroides en un paciente que no responde a
esteroides afectado por un estado inflamatorio que no responde o
responde escasa o inadecuadamente al tratamiento antiinflamatorio,
en el que se administra un oligonucleótido que tiene la
secuencia
5'-X_{m}-CG-Y_{n}-3'
en una cantidad eficaz a dicho
paciente y en el que X es A, T, C o G, Y es A, T, C o G, m =
1-100, n = 1-100 y en el que al
menos un dinucleótido CG no está metilado. En otra realización del
método de la invención m es 1-80 y n es
1-80, m es 1-60 y n es
1-60, m es 1-40 y n es
1-40, m es 1-20 y n es
1-20, m es 1-12 y n es
1-12, m es 1-10 y n es
1-10, m es 1-8 y n es
1-8, m es 1-6 y n es
1-6, m es 1-4 y n es
1-4 o m es 1-2 y n es
1-2.
Los oligonucleótidos que van a usarse según la
presente invención también se muestran a modo de ejemplo en la tabla
1.
En el método según la presente invención el
paciente está actualmente en tratamiento con corticosteroides, el
paciente es dependiente de esteroides y está actualmente en
tratamiento con corticosteroides o el paciente está actualmente en
tratamiento antiinflamatorio.
En una realización del método de la invención,
se administra el oligonucleótido en combinación con esteroides.
El método descrito es para potenciar la eficacia
de esteroides en un paciente afectado por un estado inflamatorio. El
estado inflamatorio se selecciona del grupo que consiste en colitis
ulcerosa (CU), enfermedad de Crohn (EC), artritis reumatoide,
psoriasis, enfisema, asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica
(EPOC). En una realización, el estado inflamatorio es colitis
ulcerosa y en otra realización el estado inflamatorio es enfermedad
de Crohn.
El oligonucleótido usado en el método de la
invención puede modificarse según métodos conocidos para el experto
y tal como se definió anteriormente. Por ejemplo, al menos un
nucleótido del oligonucleótido tiene una modificación del esqueleto
de fosfato, en el que la modificación del esqueleto de fosfato es
una modificación con fosforotioato o fosforoditioato. La
modificación puede producirse en uno o más nucleótidos en cualquier
posición a lo largo de la longitud completa del oligonucleótido. En
una realización, el esqueleto de ácido nucleico incluye la
modificación del esqueleto de fosfato en los enlaces entre
nucleótidos en 5'. Como alternativa, el esqueleto de ácido nucleico
incluye la modificación del esqueleto de fosfato en los enlaces
entre nucleótidos en 3'.
Además de ADN, el oligonucleótido puede estar
compuesto de un análogo o imitador de ADN, incluyendo, pero sin
limitarse a, los siguientes: metilfosfonato,
N3'->P5'-fosforamidato, morfolino, ácido
nucleico peptídico (PNA), ácido nucleico cerrado (LNA), ácido
nucleico con arabinosilo (ANA), ácido nucleico con
fluoro-arabinosilo (FANA), ácido nucleico con
metoxi-etilo (MOE).
Además, el oligonucleótido usado en el método de
la invención puede comprender al menos una nucleobase con resto de
azúcar modificado tal como se definió anteriormente. El resto de
azúcar modificado es, por ejemplo, un resto de
2'-O-metoxietil-azúcar.
La presente invención también se refiere al uso
de un oligonucleótido que tiene la secuencia:
5'-X_{m}-CG-Y_{n}-3'
para la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de la resistencia a esteroides
adquirida y la resistencia a esteroides primaria en el que X es A,
T, C o G, Y es A, T, C o G; m = 1-100, n =
1-100 y en el que al menos un dinucleótido CG no
está metilado y en el que el paciente está afectado por un estado
inflamatorio. En otra realización m es 1-80 y n es
1-80, m es 1-60 y n es
1-60, m es 1-40 y n es
1-40, m es 1-20 y n es
1-20, m es 1-12 y n es
1-12, m es 1-10 y n es
1-10, m es 1-8 y n es
1-8, m es 1-6 y n es
1-6, m es 1-4 y n es
1-4 o m es 1-2 y n es
1-2.
Los oligonucleótidos usados en el método tal
como se definió anteriormente también pueden usarse para la
fabricación del medicamento.
En el uso según la presente invención, el
paciente está actualmente en tratamiento con esteroides, el paciente
es dependiente de esteroides y está actualmente en tratamiento con
esteroides o el paciente está actualmente en tratamiento
antiinflamatorio. En una realización, se administra el
oligonucleótido en combinación con esteroides.
\newpage
El estado inflamatorio se selecciona del grupo
que consiste en colitis ulcerosa (CU), enfermedad de Crohn (EC),
artritis reumatoide, psoriasis, enfisema, asma y enfermedad pulmonar
obstructiva crónica (EPOC). En una realización, el estado
inflamatorio es colitis ulcerosa y en otra realización, el estado
inflamatorio es enfermedad de Crohn.
El oligonucleótido inmunomodulador de la
invención se ilustra por la SEQ. ID. NO 1 y sirve como ejemplo de
oligonucleótidos inmunomoduladores a base de ADN que contienen un
motivo CpG. La invención dio a conocer el hallazgo sorprendente de
que cuando se administra un oligonucleótido inmunomodulador de este
tipo tal como se denota por SEQ. ID. NO 1 a un paciente que padece
un estado inflamatorio del intestino (es decir colitis ulcerosa y
enfermedad de Crohn), y que igualmente no estaba respondiendo a
terapias con esteroides y estaba en terapia con esteroides
concomitante, habla una mejora pronunciada y rápida de tales
pacientes y podía reducirse la dosis de los esteroides
administrados. Por el contrario, cuando se administraba dicho
oligonucleótido inmunomodulador a pacientes que padecían colitis
ulcerosa en los que se excluyeron los esteroides y los pacientes
eran sensibles a esteroides, no se observó ninguna mejora en su
enfermedad. Esta observación sorprendente indicó claramente que
mediante mecanismos todavía no conocidos, los efectos
inmunomoduladores de un oligonucleótido que contenía CpG en el
contexto de la resistencia a esteroides indujeron una mejora de la
enfermedad que no resultaba evidente en los pacientes que no eran
resistentes a esteroides.
Los siguientes ejemplos confirman, en primer
lugar, que SEQ. ID. NO 1 funciona como oligonucleótido
inmunomodulador y que diversas longitudes de SEQ. ID. NO 1 conservan
su actividad. Los últimos ejemplos son resúmenes de datos clínicos
en pacientes con colitis ulcerosa y enfermedad de Crohn que
recibieron una única administración rectal de SEQ. ID. NO 1.
\vskip1.000000\baselineskip
Se usaron numerosos ODN para los experimentos de
estimulación usando monocitos de sangre periférica humana (CMSP) o
esplenocitos de ratón. Los ODN usados se indican en la tabla 1. En
algunos de los oligonucleótidos, el motivo de dinucleótido se
"invirtió", y como tal funcionaron como controles.
\vskip1.000000\baselineskip
Todos los ODN, excepto por DIMS0150 e IDX0250
sintetizados por Avecia, se sintetizaron y suministraron por
Biomers.net, Alemania.
En primer lugar se diluyeron los ODN
liofilizados usados (véase la tabla 1), todos excepto por DIMS0150
humano, en un volumen pequeño de agua destilada. Tras mezclar
completamente, se diluyó adicionalmente cada ODN con agua en una
serie de diferentes diluciones. Se determinó la densidad óptica (DO)
A260/A280 en al menos cinco o más muestras de cada dilución usando
un espectrofotómetro (SmartSpec 3000, BioRad). Se calculó la
concentración promedio de todas las lecturas, para todas las
diluciones, con el fin de determinar la concentración de la
disolución madre. Se almacenaron todas estas disoluciones madre a
-20ºC. Para todos los ODN, se diluyó adicionalmente una parte de la
disolución madre concentrada, con el fin de obtener una disolución
madre de alta concentración y una de baja concentración (1
\mug/\mul y 20 \mug/\mul respectivamente). Se determinó la
concentración de la misma manera, midiendo la DO usando un
espectrofotómetro tal como se mencionó anteriormente.
Se prepararon las diferentes disoluciones de
trabajo usadas en los experimentos; 0,1 \muM, 1 \muM, 3 \muM,
5 \muM, 10 \muM, 25 \muM, 50 \muM, 100 \muM, 150 \muM,
200 \muM y 300 \muM diluyendo los ODN adicionalmente en PBS
usando las disolución madre de alta concentración (20 \mug/\mul)
y la disolución madre de baja concentración (1 \mug/\mul).
Se diluyó DIMS0150 en agua destilada y se
determinó la concentración de una manera similar tal como se
mencionó para los ODN liofilizados.
\vskip1.000000\baselineskip
Se obtuvieron muestras de sangre de voluntarios
sanos. Se aislaron las CMSP mediante centrifugación en gradiente de
densidad usando Ficoll-Paque Plus (Pharmacia
Biotech, Uppsala, Suecia), se lavaron tres veces en solución salina
tamponada (PBS), y se resuspendieron en RPMI 1640 (Sigma) que
contenía suero de ternero fetal (FCS) inactivado con calor al 10%
(Life Technologies), penicilina 100 U/ml, estreptomicina 100
\mug/ml (Life Technologies), L-glutamina 2 mM
(Sigma), gentamicina (Sigma) y Hepes 5 mM (Gibco, Life
Technologies). Se contaron las células usando disolución de azul de
tripano al 0,4% (Sigma Aldrich).
\vskip1.000000\baselineskip
Para cada experimento se extrajo un bazo de un
ratón C57 BL/6 (los ratones se pidieron de la unidad de animales de
MTC, Karolinska Institutet) y se preparó una única suspensión de
células en condiciones estériles usando un filtro de células de
nailon (filtro de células de 100 \muM, BD Falcon). Entonces se
lavaron las células una vez en RPMI 1640 completo (RPMI 1640 que
contenía FCS inactivado con calor al 5%, L-glutamina
2 mM, penicilina 100 U/ml y estreptomicina 100 \mug/ml) a 1200 rpm
durante 7-10 minutos. Se decantó el sobrenadante y
se resuspendieron las células en 1 ml de tarapón de lisis de
glóbulos rojos (Sigma) y se incubó durante un máximo de dos minutos
a temperatura ambiente. Se añadieron otros 5 ml de medio completo
antes de realizar la centrifugación tal como se describió
anteriormente. Tras decantar el sobrenadante, se resuspendió el
sedimento celular en medio completo y se determinaron los números de
células en la disolución de azul de tripano al 0,4%.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sembraron las CMSP, tal como se describieron
anteriormente, en una placa de membrana basada en PVDF para ELISpot,
previamente recubierta (MABTech AB, Suecia). Antes de la adición de
células, se recubrió la placa de PDVF durante la noche a +4ºC con un
anticuerpo de recubrimiento específico para
IFN-alfa, IFN-gamma o
IL-10 (incluidos en los kits de ELISpot;
IFN-alfa, IFN-gamma e
IL-10 de MABTech AB, Suecia) respectivamente.
Entonces, se sembraron las CMSP a 500.000 células/pocillo en RPMIc
completo. Directamente tras sembrar, se trataron las células con los
oligonucleótidos (ODN) respectivos. Se añadió cada ODN a los
pocillos específicos dando concentraciones de ODN finales de 0,1, 1,
5, 10, 25, 50, 100, 150 y 200 \muM en un volumen total de 100
\mul/pocillo. Se prepararon las muestras por triplicado. Tras el
tratamiento, se incubaron las células en un incubador humidificado
con un 5% de dióxido de carbono a 37ºC. Se analizó el
IFN-alfa para 2, 10 y 3 donantes a 24, 48 y 72
horas, respectivamente. Se analizó el IFN-gamma para
2, 1 y 5 donantes a 24, 48 y 72 horas, respectivamente. Se analizó
la IL-10 para 5 y 4 donantes a 48 y 72 horas,
respectivamente. Se realizó la detección y el recuento de células
productoras de citocinas siguiendo el manual del fabricante. El
software de lectura de ELISpot fue AID 2.3.3 ubicado en el Center
for Molecular Medicine ("Centro de medicina molecular"), CMM,
Karolinska Hospital, Solna, Suecia.
\vskip1.000000\baselineskip
Se sembraron las CMSP, preparadas tal como se
describieron anteriormente, en una placa de cultivo celular de fondo
plano de 96 pocillos a 500.000 células/pocillo en RPMIc.
Directamente tras sembrar, se trataron las células con el ODN
respectivo. Se añadió cada ODN a los pocillos específicos dando
concentraciones de ODN finales entre 0,1, 1,5, 10, 25, 50, 100, 150,
200 y 300 \muM en un volumen total de 100 \mul/pocillo. Se
prepararon las muestras por duplicado. Tras el tratamiento, se
incubaron las células en un incubador humidificado con un 5% de
dióxido de carbono y a 37ºC durante 48 horas. Se guardaron los
sobrenadantes y se almacenaron a -20ºC antes de la determinación
del nivel de citocinas usando Quantikine ELISA específico siguiendo
el protocolo del fabricante (para experimentos en CMSP humanas se
usaron los siguientes kits de ELISA: IL-10 humana e
IFN-alfa humano. Para los experimentos de
esplenocitos de ratón; IL-10 murina,
IFN-alfa murino, R&D Systems, Abingdon,
R.U.).
\vskip1.000000\baselineskip
Se evaluó la actividad inmunoestimulante del ODN
que contenía CpG, DIMS0150, en CMSP humanas. La hipótesis era que
las CMSP incubadas con diferentes concentraciones de DIMS0150
durante diferentes periodos de tiempo estimularían la producción de
citocinas de una manera dependiente de CpG. Por esta razón, se
eligieron tres citocinas que se sabía bien que se producen en CMSP
en respuesta a ADN con CpG, concretamente IFN-alfa,
IL-10 e IFN-gamma. De hecho, las
CMSP de diferentes donantes sanos mostraron producción de citocinas
dependiente del tiempo (datos no mostrados) y de la dosis según se
analizó mediante ELISpot en respuesta a DIMS0150. Entre estas tres
citocinas sometidas a prueba, IL-10 fue la citocina
de mayor respuesta tras 48 horas de estimulación con DIMS015 0
(figura 1). A diferencia de IL-10, DIMS0150 fue
menos potente en la inducción de IFN-alfa e
IFN-gamma en CMSP en todas las concentraciones y
puntos de tiempo sometidos a prueba, representados en 72 horas para
IFN-gamma (véase la figura 2) y 48 horas para
IFN-alfa (véase la figura 3). También se incluyó una
forma invertida de CpG de DIMS0150, IDX0526, en todos los
experimentos con el fin de evaluar la dependencia de CpG de la
posible producción de citocinas. Las CMSP tratadas con IDX0526 no
mostraron producción o mostraron producción reducida de las tres
citocinas estudiadas en comparación con la estimulación con DIMS0150
(véanse las figuras 1, 2 y 3).
\vskip1.000000\baselineskip
Con el fin de cuantificar la cantidad de
citocinas producidas a partir de las células positivas observadas
mediante ELISpot, se realizaron análisis de ELISA. Se incubaron CMSP
con concentraciones crecientes de DIMS0150 y se analizaron los
sobrenadantes para los niveles de IL-10,
IFN-alfa e IFN-gamma. De acuerdo
con los resultados obtenidos mediante los datos de ELISpot, usando
concentraciones entre 0,1 y 200 \muM (o 300 \muM para
IFN-alfa e IFN-gamma) dieron como
resultado una respuesta dependiente de la dosis de CpG de todas las
citocinas tras 48 horas de incubación (véanse las figuras 4A, B y
C). Dado que ELISpot y ELISA miden diferentes parámetros (es decir
número de células que secretan una citocina particular frente a la
cantidad de citocina secretada), deben considerarse las mediciones
de ELISA como información complementaria con respecto a la cantidad
real que se produce a una concentración particular,
independientemente del número de células que secretan la citocina de
interés. Por tanto, el patrón de respuesta de dosis puede parecer
diferente cuando se comparan los resultados de estas técnicas
diferentes. Se ha estudiado menos exhaustivamente la variación
individual de la respuesta a DIMS0150 que se analiza mediante ELISA
cuantitativo (1-3 donantes), en comparación con
ELISpot.
\vskip1.000000\baselineskip
Se comparó una respuesta a la dosis de la
estimulación con DIMS0150 con la de ODN con CpG humanos y murinos
conocidos, IDX0 910 e IDX0 920, respectivamente. Además, también se
incluyó IDX0250 en esta configuración experimental, dado que esta
secuencia de ODN también contiene un dinucleótido de CpG y puede
actuar como ADN con CpG. Las bases de flanqueo de CpG en IDX0250
difieren ligeramente de DIMS0150 y esto puede influir sobre el nivel
de respuesta de citocinas en CMSP tras la estimulación. En esta
investigación, se trataron las CMSP durante 4 8 horas con los ODN
con CpG y sus controles con GpC invertidos respectivos antes que se
analizaran los sobrenadantes por duplicado usando ensayos de ELISA
cuantitativos para determinar IL-10 e
IFN-gamma, DIMS0150 y IDX0250 dieron lugar a una
respuesta de IL-10 similar a 100 \muM (figura 5)
pero a las concentraciones más bajas (de 0,1 \muM a 1 \muM),
ninguno de estos ODN estimuló la producción de IL-10
de las CMSP. En comparación, la incubación de las CMSP con IDX0910 o
IDX0920 alcanzó la mayor producción de IL-10 a las
menores concentraciones usadas. El análisis del
IFN-gamma de los sobrenadantes dio como resultado
menor secreción de esta citocina en comparación con
IL-10 (figura 6). Ninguno de los controles
invertidos con GpC o IDX0304 indujo IFN-gamma pero
se observaron ciertos niveles de secreción de IL-10
en CMSP con los dos ODN con GpC control, IDX0915 e IDX0925. Esto
puede deberse a la presencia de esqueleto completamente de
fosfotionato en estos ODN.
\vskip1.000000\baselineskip
Los seres humanos y los ratones responden a
diferentes ODN con CpG. Se comparó el efecto inmunoestimulante de
DIMS0150 con el mismo conjunto de ODN con CpG realizado en CMSP
(véase la figura 6) en un sistema de esplenocitos de ratón. Se
trataron los esplenocitos con los ODN con CpG y su respectivo
control con GpC negativo invertido durante 4 8 horas antes de que se
analizaran los sobrenadantes para determinar
IFN-gamma e IL-10 por duplicado
usando ensayos de ELISA cuantitativos. El tratamiento de los
esplenocitos con DIMS0150 dio como resultado una fuerte respuesta de
IFN-gamma a la concentración más alta usada. Sin
embargo, en este ensayo IDX0250 fue más potente que DIMS0150, lo que
indica que las secuencias que rodean al CpG también tienen un
impacto sobre el nivel de respuesta (figura 7). Los niveles de
IFN-gamma más pronunciados se encontraron en los
sobrenadantes de células estimuladas con el ODN con CpG, IDX092G a
las concentraciones más bajas usadas. Finalmente, el análisis de los
sobrenadantes para determinar los niveles de IL-10
(figura 8) mostró un patrón similar a lo que se observó cuando se
midió IFN-gamma. Ninguno de los controles de ODN
invertidos con GpC indujo IFN-gamma, pero IDX0 925
indujo cierto nivel de IL-10 también en el sistema
murino.
\vskip1.000000\baselineskip
La prueba piloto del estudio conceptual se
describe en su totalidad en el anexo I.
\vskip1.000000\baselineskip
Objetivo primario: Evaluar los asuntos de
seguridad con respecto al uso del oligonucleótido basado en ADN
representado como SEQ. ID. NO 1 en pacientes con colitis ulcerosa y
enfermedad de Crohn.
Objetivo secundario: Explorar la eficacia
clínica tal como se determina mediante las tasas de remisión/mejora
endoscópica y clínica, mejora histológica y cambios en parámetros de
laboratorio clínico.
El estudio se controló con placebo; de dosis
única, doble ciego y se consideraron a pacientes que no eran
sensibles a corticosteroides o eran dependientes de corticosteroides
que estaban en terapias con esteroides concomitantes.
Los niveles de dosis usados fueron 3 mg y 30 mg
proporcionados como administración rectal única. La respuesta
clínica en la semana 1
- i)
- SEQ. ID. NO 1 5/7 (71%) pacientes que responden al tratamiento.
- ii)
- Placebo 1/4 (25%) pacientes que responden al tratamiento.
\vskip1.000000\baselineskip
En general, este estudio piloto indicó buena
eficacia en ambos grupos de dosis tras una administración rectal
única. Tal vez más sorprendente fue la rapidez de la respuesta
porque todos los pacientes que respondieron al tratamiento lo
hicieron en el plazo de una semana desde recibir el fármaco de
estudio. Fue de interés el hallazgo de que dos de los 7 pacientes
que recibieron la SEQ. ID. NO 1 aún están actualmente en remisión y
libres de esteroides. Además, no se registraron acontecimientos
adversos graves.
\vskip1.000000\baselineskip
Objetivo primario: Evaluar la capacidad de cada
uno de los cuatro niveles de dosis (0,3 mg, 3 mg, 30 mg y 100 mg)
del oligonucleótido SEQ. ID. NO 1 como una terapia antiinflamatoria
para inducir la remisión clínica en pacientes con colitis ulcerosa
(CU) de leve a moderadamente activa, en comparación con placebo.
Objetivo secundario: Evaluar la tolerancia de
dosis rectales únicas del oligonucleótido SEQ. ID. NO 1 y evaluar
además la eficacia y seguridad del oligonucleótido SEQ. ID. NO 1 en
cuatro niveles de dosis y evaluar la farmacocinética del
oligonucleótido SEQ. ID. NO 1 tras la administración rectal, en
comparación con placebo.
\vskip1.000000\baselineskip
Respuesta clínica en la semana 1, población
ITT/de seguridad
De la tabla, la tasa de respuesta con respecto a
los que recibieron el fármaco activo fue del 22% (26/119), el
placebo fue del 38% (11/29). Este estudio no pudo confirmar que una
dosis única del oligonucleótido SEQ. ID. NO 1 en dosis desde 0,3
hasta 100 mg en un número limitado de pacientes, pueda inducir
remisiones clínicas, endoscópicas o histopatológicas o respuestas
durante un periodo de 12 semanas, sin embargo, este estudio demostró
un buen perfil de seguridad del fármaco.
En comparación las tasas de respuesta clínica en
la semana 1
Es evidente que los pacientes del estudio piloto
tuvieron una tasa de respuesta mucho mejor que la observada en la
fase II. También queda claro que aunque a los pacientes del estudio
piloto se les permitieron esteroides como medicamentos concomitantes
y eran resistentes a, o dependientes de, corticosteroides, esto fue
un criterio de exclusión en la fase II. No se permitieron esteroides
durante la duración del estudio de fase II y los pacientes no eran
resistentes a, ni dependientes de, las terapias con esteroides.
Los resultados divergentes entre el estudio
piloto y el estudio de fase II más grande sugerirían que los
pacientes que son resistentes a, o dependientes de, corticosteroides
y están en terapia con corticosteroides concomitante responden más
favorablemente a una dosis rectal única de SEQ. ID. NO 1 que los
pacientes que no lo son. La razón de esta diferencia sorprendente en
el resultado clínico no es clara. Sin embargo, la acción
inmunomoduladora de los oligonucleótidos que contienen CpG podría
inducir cambios beneficiosos en el sistema inmunitario del paciente
tal que los pacientes resistentes a esteroides o dependientes de
esteroides podían responder a esteroides de nuevo. En otras
palabras, los oligonucleótidos inmunomoduladores pueden inducir una
resensiblización de los pacientes a los efectos antiinflamatorios de
los esteroides.
Los ejemplos proporcionados confirman que los
oligonucleótidos inmunomoduladores que contienen un dinucleótido de
CpG dentro de sus secuencias tales como por ejemplo SEQ. ID. NO 1,
pueden inducir determinadas citocinas para las que existen
evidencias de sus papeles en la modulación de la sensibilidad a
esteroides, tal como se menciona en la técnica anterior. A la vista
de esto, los oligonucleótidos inmunomoduladores que inducen la
producción de interferones e IL-10, por ejemplo,
pueden ser beneficiosos.
Aunque en el presente documento se han dado a
conocer realizaciones particulares en detalle, esto se ha realizado
a modo de ejemplo para fines solamente de ilustración, y no se
pretende que sean limitativas con respecto al alcance de las
siguientes reivindicaciones adjuntas.
\vskip1.000000\baselineskip
Bauer M, Redecke V, Ellwart
JW, Scherer B, Kremer JP, Wagner H,
Lipford GB. Bacterial CpG-DNA triggers
activation and maturation of human CD11c-, CD123+ dendritic cells.
J Immunol. 2001 Apr 15; 166(8):
5000-7.
Bennet JD and Brinkman M
(1989) Treatment of ulcerative colitis by implantation of
normal colonic flora. Lancet 1:164.
\newpage
Borody TJ, Warren EF, Leis
S, Surace R, Ashman O. Treatment of ulcerative colitis
using fecal bacteriotherapy. J Clin Gastroenterol. 2003 Jul;
37(1): 42-7.
Chikanza IC and Kozaci DL.
Corticosteroid resistance in rheumatoid arthritis: molecular and
cellular perspectives. Rheumatology 2004 43:
1337-1345.
Cowdery JS, Chace JH, Yi
AK, Krieg AM. Bacterial DNA induces NK cells to produce
IFN-gamma in vivo and increases the toxicity
of lipopolysaccharides. J Immunol 1996 Jun 15;
156(12): 4570-5.
Eiseman B, Silen W, Bascom
GS et al (1958) Fecal enema as an adjunct in the
treatment of pseudomembranous enterocolitis. Surgery. 44:
854-859.
Eui-Young So,
Hyun-Hee Park and
Choong-Eun Lee. IFN-gamma and
IFN-alpha post transcriptionally down regulate the
IL-4 induced IL-4 receptor gene
expression. J of Immunology, 2000 165:
5472-5479.
Gill PS, Harrington W Jr,
Kaplan MH, Ribeiro RC, Bennett JM,
Liebman HA, Bernstein-Singer M,
Espina BM, Cabral L, Allen S, et al
(1995) Treatment of adult T-cell
leukemia-lymphoma with a combination of interferon
alfa and zidovudine. N Engl J Med. 332:
1744-8.
Hacker H, Mischak H,
Miethke T, Liptay S, Schmid R,
Sparwasser T, Heeg K, Lipford GB, Wagner
H. CpG-DNA-specific activation of
antigen-presenting cells requires stress kinase
activity and is preceded by non-specfic endocytosis
and endosomal maturation. EMBO J. 1998 Nov 2; 17(21):
6230-40.
Hamid QA, Wenzel SE, Hauk
PJ, Tsicopoulos A, Wallaert B, Lafitte JJ,
Chrousos GP, Szefler SJ, Leung DY Increased
glucocorticoid receptor beta in airway cells of
glucocorticoid-insensitive asthma. Am J Respir
Crit Care Med. 1999 May; 159(5 Pt 1):
1600-4.
Hartmann G, Krieg AM. Mechanism
and function of a newly identified CpG DNA motif in human primary B
cells. J Immunol 2000 Jan 15; 164(2):
944-53.
Hartmann G, Weiner GJ,
Krieg AM. CpG DNA: a potent signal for growth, activation,
and maturation of human dendritic cells. Proc Natl Acad Sci
USA. 1999 Aug 3; 96(16): 9305-10.
Hawrylowicz CM, O'Garra A
(2005) Potential role of
interleukin-10-secreting regulatory
T cells in allergy and asthma. Nat Rev Immunol. 5:
271-83.
Hawrylowicz CM, Richards D,
Loke TK, Corrigan C, Lee T (2002) A
defect in corticosteroid-induced
IL-10 production in T lymphocytes from
corticosteroid-resistant asthmatic patients. J
Allergy Clin Immunol. 109: 369-70.
Iho S, Yamamoto T,
Takahashi T, Yamamoto S. Oligodeoxynucleotides
containing palindrome sequences with infernal
5'-CpG-3' act directly on human NK
and activated T cells to induce IFN-gamma production
in vitro. J Immunol 1999 Oct 1; 163(7):
3642-52.
Jahn-Schmid B,
Wiedermann U, Bohle B, Repa A, Kraft D,
Ebner C. Oligodeoxynucleotides containing CpG motifs modulate
the allergic TH2 response of BALB/c mice to Bet v 1, the major birch
pollen allergen. J Allergy Clin Immunol. 1999 Nov;
104(5): 1015-23.
Jakob T, Walker PS, Krieg
AM, Udey MC, Vogel JC Activation of cutaneous
dendritic cells by CpG-containing
oligodeoxynucleotides: a role for dendritic cells in the
augmentation of Th1 responses by immunostimulatory DNA. J
Immunol 1998 Sep 15; 161(6): 3042-9.
Kline JN. Effects of CpG DNA on Th1/Th2
balance in asthma. Curr Top Microbiol Immunol. 2000;
247: 211-25.
Klinman DM, Barnhart KM,
Conover J. CpG motifs as immune adjuvants. Vaccine.
1999 Jan; 17(1): 19-25.
Krieg. Applied Oligonucleotide
Technology. C.A. Stein and A. M. Krieg (Eds.), John Wiley and
Sons, Inc., New York, Ny, 1998, pp.
431-448.
Krieg AM, Yi AK, Matson S,
Waldschmidt TJ, Bishop GA, Teasdale R,
Koretzky GA, Klinman DM. CpG motifs in bacterial DNA
trigger direct B-cell activation. Nature 1995
Apr 6; 374 (6522): 546-9.
Krieg AM, Matson S, Fisher
E. Oligodeoxynucleotide modifications determine the magnitude of B
cell stimulation by CpG motifs. Antisense Nucleic Acid Drug
Dev 1996 Summer; 6(2): 133-9.
Krug A, Towarowski A,
Britsch S, Rothenfusser S, Homung V,
Bals R, Giese T, Engelmann H, Endres S,
Krieg AM, Hartmann G. Toll-like
receptor expression reveals CpG DNA as a unique microbial stimulus
for plasmacytoid dendritic cells which synergizes with CD40 ligand
to induce high amounts of IL-12. Eur J
Immunol. 2001 Oct; 31(10): 3026-37.
Mannon PJ, Fuss IJ, Mayer
L, Elson CO, Sandborn WJ, Present D,
Dolin B, Goodman N, Groden C, Homung RL,
Quezado M, Neurath MF, Salfeld J,
Veldman GM, Schwertschlag U, Strober W;
Anti-IL-12 Crohn's Disease Study
Group. Anti-interteukin-12 antibody
for active Crohn's disease. N Engl J Med. 2004 Nov 11;
351(20): 2069-79.
Musch E, Andus T, Malek M.
Induction and maintenance of clinical remission by
interferon-beta in patients with
steroid-refractory active ulcerative
colitis-an open long-term pilot
trial. Aliment Pharmacol Ther. 2002 Jul; 16(7):
1233-9.
Naseer T, Minshall EM,
Leung DY, Laberge S, Ernst P, Martin RJ,
Hamid Q. Expression of IL-12 and
IL-13 mRNA in asthma and their modulation in
response to steroid therapy. Am J Respir Crit Care Med. 1997
Mar; 155(3): 845-51.
Neurath MF, Fuss I, Kelsall
BL, Stuber E, Strober W. Antibodies to interleukin 12
abrógate established experimental colitis in mice. J Exp Med.
1995 Nov 1; 182{5): 12 81-90.
Niederau C, Heintges T,
Lange S, Goldmann G, Niederau CM, Mohr
L, Haussinger D. Long-term
follow-up of HBeAgpositive patients treated with
interferon alfa for chronic hepatitis B. N Engl J Med. 1996
May 30; 334(22): 1422-7.
Pisetsky DS. The immunologic properties
of DNA. J Immunol. 1996 Jan 15; 156(2):
421-3.
Richards DF, Fernandez M,
Caulfield J, Hawrylowicz CM (2005)
Glucocorticoids drive human CD8(+) T cell differentiation towards a
phenotype with high IL-10 and reduced
IL-4, IL-5 and IL-13
production. Eur J Immunol. 30: 2344-54.
Simon HU, Seelbach H,
Ehmann R, Schmitz M (2003) Clinical and
immunological effects of low-dose
IFN-alpha treatment in patients with
corticosteroid-resistant asthma. Allergy. 58:
1250-5.
Smeltz RB, Chen J, Ehrhardt
R, Shevach EM. Role of IFN-gamma in Th1
differentiation: IFN-gamma regulates
IL-18R alpha expression by preventing the negative
effects of IL-4 and by inducing/maintaining
IL-12 receptor beta 2 expression. J Immunol.
2002 Jun 15; 168 (12): 6165-72.
Sousa AR, Lane SJ,
Cidlowski JA, Staynov DZ, Lee TH Glucocorticoid
resistance in asthma is associated with elevated in vivo
expression of the glucocorticoid receptor
beta-isoform. J Allergy Clin Immunol. 2000
May; 105(5): 943-50.
Sparwasser T, Koch ES,
Vabulas RM, Heeg K, Lipford GB, Ellwart
JW, Wagner H. Bacterial DNA and immunostimulatory CpG
oligonucleotides trigger maturation and activation of murine
dendritic cells. Eur J Immunol 1998 Jun; 28(6):
2045-54.
Stacey KJ, Sweet MJ, Hume
DA. Macrophages ingest and are activated by bacterial DNA. J
Immunol 1996 Sep 1; 157(5): 2116-22.
Stelmach I, Jerzynska J,
Kuna P (2002) A randomized,
double-blind trial of the effect of glucocorticoid,
antileukotriene and beta-agonist treatment on
IL-10 serum levels in children with asthma. Clin
Exp Allergy. 32: 264-9.
Sumer N, Palabiyikoglu M
(1995) Induction of remission by
interferon-alpha in patients with chronic active
ulcerative colitis. Eur J Gastroenterol Hepatol. 7:
597-602.
Taniguchi T and Takaoka A
(2001) A weak signal for strong responses:
interferons-alpha/beta revisited. Nat Rev Mol
Cell Biol 2: 378-386.
Tighe H, Takabayashi K,
Schwartz D, Marsden R, Beck L, Corbeil
J, Richman DD, Eiden JJ Jr, Spiegelberg HL,
Raz E. Conjugation of protein to immunostimulatory DNA
results in a rapid, long-lasting and potent
induction of cell-mediated and humoral immunity.
Eur J Immunol. 2000 Jul; 30(7):
1939-47.
Tokunaga T, Yano O,
Kuramoto E, Kimura Y, Yamamoto T,
Kataoka T, Yamamoto S. Synthetic oligonucleotides with
particular base sequences from the cDNA encoding proteins of
Mycobacterium bovis BCG induce interferons and activate natural
killer cells. Microbiol Immunol. 1992; 36(1):
55-66.
Tomitai K, Lim S, Hanazawa
T, Usmani O, Stirling R, Chung KF, Bames
PJ, Adcock IM (2002) Attenuated production of
intracellular IL-10 and IL-12 in
monocytes from patients with severe asthma. Clin Immunol.
102: 258-66.
Tormey VJ, Leonard C, Faul
J, Bernard S, Burke CM, Poulter LW
(1998) Deregulations of monocyte differentiation in asthmatic
subjects is reversed by IL-10. Clin Exp
Allergy. 28: 992-8.
Xystrakis E, Kusumakar S,
Boswell S, Peek E, Urry Z, Richards DF,
Adikibi T, Pridgeon C, Dallman M, Loke
TK, Robinson DS, Barrat FJ, O'Garra A,
Lavender P, Lee TH, Corrigan C,
Hawrylowicz CM. Reversing the defective induction of
IL-10-secreting regulatory T cells
in glucocorticoid-resistant asthma patients. J
Clin Invest. 2006 Jan; 116(1): 146-55.
Epub 2005 Dec 8.
Yamamoto S, Yamamoto T,
Kataoka T, Kuramoto E, Yano O, Tokunaga
T. Unique palindromic sequences in synthetic oligonucleotides are
required to induce IFN [correction of INF] and augment
IFN-mediated [correction of INF] natural killer
activity. J Immunol. 1992 Jun 15; 148 (12):
4072-6.
Zhao Q, Temsamani J,
ladarola PL, Jiang Z, Agrawal S Effect of
different chemically modified oligodeoxynucleotides on immune
stimulation. Biochem Pharmacol 1996 Jan 26; 51(2):
173-82.
Zeuzem S, Feinman SV,
Rasenack J, Heathcote EJ, Lai MY, Gane
E, O'Grady J, Reichen J, Diago M, Lin A,
Hoffman J, Brunda MJ. Peginterferon
alfa-2a in patients with chronic hepatitis C. N
Engl J Med. 2000 Dec 7; 343(23):
1666-72.
Zimmermann S, Egeter O,
Hausmann S, Lipford GB, Rocken M, Wagner
H, Heeg K. CpG oligodeoxynucleotides trigger protective and
curative Th1 responses in lethal murine leishmaniasis. J
Immunol. 1998 Apr 15; 160(8):
3627-30.
<110> Index Pharmaceuticals AB
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Método para modular la respuesta a
esteroides
\vskip0.400000\baselineskip
<130> AH 56169
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn versión 3.3
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(19)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggaacagttc gtccatggc
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(19)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggaacagttg ctccatggc
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(19)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipagctgagtag cctatagac
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> mise feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(20)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggtgcatcga tgcagggggg
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(24)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(24)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptgctgctttt gtgcttttgt gctt
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(19)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgaaacagatc gtccatggt
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(19)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgaaacagatg ctccatggt
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(20)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptccatgacgt tcctgacgtt
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Artificial
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> oligonucleótido
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(20)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptccatgagcttcctgagctt
\hfill20
Claims (26)
1. Uso de un oligonucleótido que tiene la
secuencia
5'-X_{m}-CG-Y_{n}-3'
para la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de la resistencia a esteroides
adquirida y la resistencia a esteroides primaria en un paciente, en
el que X es A, T, C o G, Y es A, T, C o G; m =
1-100, n = 1-100 y en el que al
menos un dinucleótido CG no está metilado y en el que dicho paciente
está afectado por un estado
inflamatorio.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Uso según la reivindicación 1, en el que m es
1-80 y n es 1-80.
3. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 y 2, en el que m es 1-60 y n es
1-60.
4. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que m es 1-40 y n
es 1-40.
5. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que m es 1-20 y n
es 1-20.
6. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que m es 1-12 y n
es 1-12.
7. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que m es 1-10 y n
es 1-10.
8. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que m es 1-8 y n
es 1-8.
9. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que m es 1-6 y n
es 1-6.
10. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que m es 1-4 y n
es 1-4.
11. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que m es 1-2 y n
es 1-2.
12. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que dicho paciente está
actualmente en tratamiento con esteroides.
13. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que dicho paciente es dependiente
de esteroides y está actualmente en tratamiento con esteroides.
14. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que dicho paciente está
actualmente en tratamiento antiinflamatorio.
15. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que el estado inflamatorio se
selecciona del grupo que consiste en colitis ulcerosa (CU),
enfermedad de Crohn (EC), artritis reumatoide, psoriasis, enfisema,
asma y enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC).
16. Uso según la reivindicación 15, en el que el
estado inflamatorio es colitis ulcerosa.
17. Uso según la reivindicación 15, en el que el
estado inflamatorio es enfermedad de Crohn.
18. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que el oligonucleótido comprende
al menos un nucleótido que tiene una modificación del esqueleto.
19. Uso según la reivindicación 18, en el que la
modificación del esqueleto es una modificación del esqueleto de
fosfato.
20. Uso según la reivindicación 19, en el que la
modificación del esqueleto de fosfato es una modificación con
fosforotioato o fosforoditioato.
21. Uso según la reivindicación 19, en el que la
modificación del esqueleto de fosfato está comprendida en los
enlaces entre nucleótidos en 5' o en los enlaces entre nucleótidos
en 3'.
22. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que dicho oligonucleótido es un
oligonucleótido compuesto por ADN o un análogo o imitador de ADN
seleccionado del grupo que consiste en metilfosfonato,
N3'->P5'-fosforamidato, morfolino, ácido nucleico
peptídico (PNA), ácido nucleico cerrado (LNA), ácido nucleico con
arabinosilo (ANA), ácido nucleico con
fluoro-arabinosilo (FANA) y ácido nucleico con
metoxi- etilo (MOE).
23. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que dicho oligonucleótido
comprende al menos una nucleobase con resto de azúcar
modificado.
24. Uso según la reivindicación 23, en el que el
resto de azúcar modificado es un resto de
2'-O-metoxietil-azúcar.
25. Uso según una cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en el que el oligonucleótido se
administra en combinación con esteroides.
26. Oligonucleótido que tiene la secuencia
5'-X_{m}-CG-Y_{n}-3'
para su uso en el tratamiento de la
resistencia a esteroides adquirida y la resistencia a esteroides
primaria en un paciente, en el que X es A, T, C o G, Y es A, T, C o
G; m = 1-100, n = 1-100 y en el que
al menos un dinucleótido CG no está metilado y en el que dicho
paciente está afectado por un estado
inflamatorio.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US69617305P | 2005-07-01 | 2005-07-01 | |
| US696173P | 2005-07-01 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2349617T3 true ES2349617T3 (es) | 2011-01-07 |
Family
ID=37604739
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES06748068T Active ES2349617T3 (es) | 2005-07-01 | 2006-06-29 | Método inmunoestimulante. |
| ES11166835.6T Active ES2442090T3 (es) | 2005-07-01 | 2006-06-29 | Método inmunoestimulante |
| ES10162989.7T Active ES2450593T3 (es) | 2005-07-01 | 2006-06-29 | Método inmunoestimulante |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES11166835.6T Active ES2442090T3 (es) | 2005-07-01 | 2006-06-29 | Método inmunoestimulante |
| ES10162989.7T Active ES2450593T3 (es) | 2005-07-01 | 2006-06-29 | Método inmunoestimulante |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US8258107B2 (es) |
| EP (3) | EP1901759B1 (es) |
| JP (3) | JP5074392B2 (es) |
| AT (1) | ATE476193T1 (es) |
| AU (1) | AU2006266503B2 (es) |
| CA (1) | CA2612162C (es) |
| CY (1) | CY1114965T1 (es) |
| DE (1) | DE602006015963D1 (es) |
| DK (2) | DK2380584T3 (es) |
| ES (3) | ES2349617T3 (es) |
| PL (2) | PL2269622T3 (es) |
| PT (1) | PT2269622E (es) |
| SI (2) | SI2269622T1 (es) |
| WO (1) | WO2007004977A1 (es) |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2349617T3 (es) * | 2005-07-01 | 2011-01-07 | Index Pharmaceuticals Ab | Método inmunoestimulante. |
| ES2330884T3 (es) * | 2005-07-01 | 2009-12-16 | Index Pharmaceuticals Ab | Modulacion de la respuesta a los esteroides. |
| US8895522B2 (en) | 2005-10-28 | 2014-11-25 | Index Pharmaceuticals Ab | Composition and method for the prevention, treatment and/or alleviation of an inflammatory disease |
| CN101820908A (zh) * | 2007-10-09 | 2010-09-01 | 科利制药公司 | 包含改性糖部分的免疫刺激寡核苷酸类似物 |
| EP2220489B1 (en) * | 2007-12-14 | 2015-02-18 | Index Pharmaceuticals AB | Method for predicting re-sensitization to steroid therapy |
| CA2728276A1 (en) * | 2008-06-18 | 2009-12-23 | Index Pharmaceuticals Ab | Combination therapies against cancer |
| AU2009311753B2 (en) * | 2008-11-04 | 2015-01-15 | Index Pharmaceuticals Ab | Compounds and methods for the treatment of inflammatory diseases of the CNS |
| US9920317B2 (en) | 2010-11-12 | 2018-03-20 | The General Hospital Corporation | Polycomb-associated non-coding RNAs |
| AU2011325956B2 (en) | 2010-11-12 | 2016-07-14 | The General Hospital Corporation | Polycomb-associated non-coding RNAs |
| EP2596806A1 (en) * | 2011-11-25 | 2013-05-29 | Index Pharmaceuticals AB | Method for prevention of colectomy |
| EP2850189B8 (en) | 2012-05-16 | 2019-01-23 | Translate Bio MA, Inc. | Compositions and methods for modulating gene expression |
| JP2015518712A (ja) | 2012-05-16 | 2015-07-06 | ラナ セラピューティクス インコーポレイテッド | Ｍｅｃｐ２発現を調節するための組成物及び方法 |
| US10837014B2 (en) | 2012-05-16 | 2020-11-17 | Translate Bio Ma, Inc. | Compositions and methods for modulating SMN gene family expression |
| WO2016070060A1 (en) | 2014-10-30 | 2016-05-06 | The General Hospital Corporation | Methods for modulating atrx-dependent gene repression |
| US10900036B2 (en) | 2015-03-17 | 2021-01-26 | The General Hospital Corporation | RNA interactome of polycomb repressive complex 1 (PRC1) |
| EP3548005A4 (en) | 2016-11-29 | 2020-06-17 | Puretech Health LLC | EXOSOMES FOR THE ADMINISTRATION OF THERAPEUTIC AGENTS |
| GB201707500D0 (en) * | 2017-05-10 | 2017-06-21 | Index Pharmaceuticals Ab | New therapy |
| GB201707501D0 (en) * | 2017-05-10 | 2017-06-21 | Index Pharmaceuticals Ab | New therapy 2 |
| GB201707503D0 (en) * | 2017-05-10 | 2017-06-21 | Index Pharmaceuticals Ab | New Therapy 3 |
| GB201807312D0 (en) * | 2018-05-03 | 2018-06-20 | Index Pharmaceuticals Ab | Formulation |
Family Cites Families (68)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5149797A (en) | 1990-02-15 | 1992-09-22 | The Worcester Foundation For Experimental Biology | Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides |
| EP0468520A3 (en) | 1990-07-27 | 1992-07-01 | Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. | Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences |
| US6346614B1 (en) | 1992-07-23 | 2002-02-12 | Hybridon, Inc. | Hybrid oligonucleotide phosphorothioates |
| TW244371B (es) | 1992-07-23 | 1995-04-01 | Tri Clover Inc | |
| US5652355A (en) | 1992-07-23 | 1997-07-29 | Worcester Foundation For Experimental Biology | Hybrid oligonucleotide phosphorothioates |
| CA2105595A1 (en) | 1992-09-23 | 1994-03-24 | Ramaswamy Narayanan | Antisense polynucleotides |
| US5849719A (en) | 1993-08-26 | 1998-12-15 | The Regents Of The University Of California | Method for treating allergic lung disease |
| US6207646B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-03-27 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| ATE420171T1 (de) | 1994-07-15 | 2009-01-15 | Univ Iowa Res Found | Immunomodulatorische oligonukleotide |
| US6429199B1 (en) | 1994-07-15 | 2002-08-06 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules for activating dendritic cells |
| US6239116B1 (en) | 1994-07-15 | 2001-05-29 | University Of Iowa Research Foundation | Immunostimulatory nucleic acid molecules |
| WO1997028259A1 (en) | 1996-01-30 | 1997-08-07 | The Regents Of The University Of California | Gene expression vectors which generate an antigen specific immune response and methods of using the same |
| US20030078223A1 (en) * | 1996-01-30 | 2003-04-24 | Eyal Raz | Compositions and methods for modulating an immune response |
| SE9602300D0 (sv) * | 1996-06-11 | 1996-06-11 | Karolinska Innovations Ab | New composition and methods |
| WO1998016247A1 (en) | 1996-10-11 | 1998-04-23 | The Regents Of The University Of California | Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates |
| AU738513B2 (en) | 1997-02-28 | 2001-09-20 | University Of Iowa Research Foundation, The | Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide in the treatment of LPS-associated disorders |
| EP2172216A3 (en) | 1997-03-10 | 2010-11-24 | Ottawa Hospital Research Institute | Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant |
| US6406705B1 (en) | 1997-03-10 | 2002-06-18 | University Of Iowa Research Foundation | Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant |
| US6426334B1 (en) | 1997-04-30 | 2002-07-30 | Hybridon, Inc. | Oligonucleotide mediated specific cytokine induction and reduction of tumor growth in a mammal |
| EP1003531B1 (en) | 1997-05-20 | 2007-08-22 | Ottawa Health Research Institute | Processes for preparing nucleic acid constructs |
| US6589940B1 (en) | 1997-06-06 | 2003-07-08 | Dynavax Technologies Corporation | Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof |
| US6133246A (en) | 1997-08-13 | 2000-10-17 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense oligonucleotide compositions and methods for the modulation of JNK proteins |
| ATE356630T1 (de) | 1998-04-03 | 2007-04-15 | Univ Iowa Res Found | Verfahren und produkte zur stimulierung des immunsystems mittels immunotherapeutischer oligonukleotide und zytokine |
| WO1999056755A1 (en) | 1998-05-06 | 1999-11-11 | University Of Iowa Research Foundation | Methods for the prevention and treatment of parasitic infections and related diseases using cpg oligonucleotides |
| DE69927495T2 (de) | 1998-05-14 | 2006-07-06 | Coley Pharmaceutical Group, Inc., Wellesley | Verfahren zur regulieren der hämatopoese mit hilfe von cpg-oligonukleotiden |
| PT1733735T (pt) | 1998-05-22 | 2017-06-16 | Ottawa Hospital Res Inst | Métodos e produtos para induzir imunidade mucosal |
| US6562798B1 (en) | 1998-06-05 | 2003-05-13 | Dynavax Technologies Corp. | Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof |
| CA2333854A1 (en) | 1998-07-27 | 2000-02-10 | University Of Iowa Research Foundation | Stereoisomers of cpg oligonucleotides and related methods |
| BR0014236A (pt) | 1999-09-25 | 2002-10-15 | Univ Iowa Res Found | cidos nucléicos imunoestimuladores |
| US6949520B1 (en) | 1999-09-27 | 2005-09-27 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Methods related to immunostimulatory nucleic acid-induced interferon |
| ATE333284T1 (de) | 1999-09-27 | 2006-08-15 | Coley Pharm Group Inc | Verfahren mittels durch nukleinsäuren induziertes immunostimulatorisches interferon |
| EP1688147A1 (en) | 1999-09-27 | 2006-08-09 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Methods Related to Immunostimulatory Nucleic Acid-Induced Interferon |
| US7223398B1 (en) | 1999-11-15 | 2007-05-29 | Dynavax Technologies Corporation | Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof |
| US7585847B2 (en) | 2000-02-03 | 2009-09-08 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of asthma and allergy |
| US20020156033A1 (en) | 2000-03-03 | 2002-10-24 | Bratzler Robert L. | Immunostimulatory nucleic acids and cancer medicament combination therapy for the treatment of cancer |
| US20040131628A1 (en) | 2000-03-08 | 2004-07-08 | Bratzler Robert L. | Nucleic acids for the treatment of disorders associated with microorganisms |
| US20020107212A1 (en) | 2000-03-10 | 2002-08-08 | Nest Gary Van | Methods of reducing papillomavirus infection using immunomodulatory polynucleotide sequences |
| US6649341B1 (en) | 2000-04-19 | 2003-11-18 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Human glucocorticoid receptor 1A promoter and splice variants |
| SI1296714T1 (sl) | 2000-06-22 | 2010-01-29 | S For Entpr University Of Iowa | Kombinacija CpG-ja in protiteles, usmerjenih proti CD19, CD20, CD22 ali CD40 za zdravljenje ali preprečevanje raka |
| US20020198165A1 (en) | 2000-08-01 | 2002-12-26 | Bratzler Robert L. | Nucleic acids for the prevention and treatment of gastric ulcers |
| DK1366077T3 (da) | 2000-09-15 | 2011-09-12 | Coley Pharm Gmbh | Fremgangsmåde til screening i store mængder af CpG-baserede immunoagonister/-antagonister |
| US6294382B1 (en) | 2000-11-27 | 2001-09-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of SRC-1 expression |
| AU2002248185A1 (en) | 2000-12-14 | 2002-07-16 | Coley Pharmaceutical Group, Inc. | Inhibition of angiogenesis by nucleic acids |
| JP2002257827A (ja) | 2001-03-01 | 2002-09-11 | Jenokkusu Soyaku Kenkyusho:Kk | ステロイド応答性の検査方法 |
| US20030050268A1 (en) | 2001-03-29 | 2003-03-13 | Krieg Arthur M. | Immunostimulatory nucleic acid for treatment of non-allergic inflammatory diseases |
| AU2002256359A1 (en) * | 2001-04-24 | 2002-11-05 | Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense and anti-inflammatory based compositions to treat respiratory disorders |
| JP2005505284A (ja) | 2001-10-05 | 2005-02-24 | コリー ファーマスーティカル ゲーエムベーハー | Ｔｏｌｌ様受容体３シグナリングアゴニストおよびアンタゴニススト |
| JP2005508945A (ja) | 2001-10-06 | 2005-04-07 | メリアル リミテッド | Ｃｐｇ配合物及び関連方法 |
| JP2005526497A (ja) | 2002-02-04 | 2005-09-08 | ビオミラ，インコーポレーテッド | 免疫刺激性、共有結合性脂質化オリゴヌクレオチド |
| EP1499187B1 (en) * | 2002-04-04 | 2015-06-17 | Zoetis Belgium S.A. | Immunostimulatory g,u-containing oligoribonucleotides |
| US20060257851A1 (en) | 2002-11-26 | 2006-11-16 | Itzhak Bentwich | Bioinformatically detectable group of novel viral regulatory genes and uses thereof |
| PT1992635E (pt) | 2002-12-23 | 2012-03-20 | Dynavax Tech Corp | Oligonucleótidos de sequência imunoestimuladora e métodos de utilização dos mesmos |
| WO2004058159A2 (en) | 2002-12-23 | 2004-07-15 | Dynavax Technologies Corporation | Branched immunomodulatory compounds and methods of using the same |
| EP1601789A4 (en) | 2003-01-16 | 2007-10-31 | Idera Pharmaceuticals Inc | MODULATION OF IMMUNOSTIMULATORY PROPERTIES OF OLIGONUCLEOTIDE-BASED COMPOUNDS USING MODIFIED IMMUNOSTIMULATORY DINUCLEOTIDES |
| EP1606398A1 (en) | 2003-03-26 | 2005-12-21 | Cytos Biotechnology AG | Melan-a peptide analogue-virus-like-particle conjugates |
| US20040235770A1 (en) | 2003-04-02 | 2004-11-25 | Coley Pharmaceutical Group, Ltd. | Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations and related methods of use |
| EP1628531A4 (en) | 2003-05-16 | 2010-06-30 | Idera Pharmaceuticals Inc | SYNERGISTIC TREATMENT OF CANCER BY COMMON USE OF IMMUNOMER AND CHEMOTHERAPEUTICS |
| US20050175630A1 (en) | 2003-12-23 | 2005-08-11 | Eyal Raz | Immunogenic compositions and methods of use thereof |
| US20050158325A1 (en) | 2003-12-30 | 2005-07-21 | 3M Innovative Properties Company | Immunomodulatory combinations |
| SE0400399D0 (sv) | 2004-02-20 | 2004-02-20 | Index Pharmaceuticals Ab | Methods and compositions for the treatment or prevention of secondary ischemic injury |
| AU2005216075B2 (en) | 2004-02-20 | 2011-03-10 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Potent mucosal immune response induced by modified immunomodulatory oligonucleotides |
| CN1918293A (zh) | 2004-02-20 | 2007-02-21 | 莫洛根股份公司 | 用于对人及高等动物进行治疗性和预防性免疫刺激的取代的非编码核酸分子 |
| EE200700003A (et) | 2004-06-15 | 2007-06-15 | Idera Pharmaceuticals, Inc. | Immunostimuleeriv oligonukleotiid ning selle kasutamine |
| WO2006015560A1 (de) | 2004-08-09 | 2006-02-16 | Mologen Ag | Immunmodulierendes mittel in verbindung mit chemotherapeutischen massnahmen |
| EP2305693B1 (en) | 2004-09-01 | 2015-07-15 | Dynavax Technologies Corporation | Methods and compositions for inhibition of innate immune responses and autoimmunity |
| BRPI0610449A2 (pt) | 2005-04-08 | 2012-01-10 | Coley Pharm Group Inc | métodos para tratar asma exarcebada por doença infecciosa |
| ES2330884T3 (es) * | 2005-07-01 | 2009-12-16 | Index Pharmaceuticals Ab | Modulacion de la respuesta a los esteroides. |
| ES2349617T3 (es) * | 2005-07-01 | 2011-01-07 | Index Pharmaceuticals Ab | Método inmunoestimulante. |
-
2006
- 2006-06-29 ES ES06748068T patent/ES2349617T3/es active Active
- 2006-06-29 DK DK11166835.6T patent/DK2380584T3/da active
- 2006-06-29 PL PL10162989T patent/PL2269622T3/pl unknown
- 2006-06-29 WO PCT/SE2006/050229 patent/WO2007004977A1/en active Application Filing
- 2006-06-29 PL PL11166835T patent/PL2380584T3/pl unknown
- 2006-06-29 DK DK10162989.7T patent/DK2269622T3/en active
- 2006-06-29 ES ES11166835.6T patent/ES2442090T3/es active Active
- 2006-06-29 PT PT101629897T patent/PT2269622E/pt unknown
- 2006-06-29 JP JP2008519234A patent/JP5074392B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-29 AT AT06748068T patent/ATE476193T1/de not_active IP Right Cessation
- 2006-06-29 SI SI200631755T patent/SI2269622T1/sl unknown
- 2006-06-29 EP EP06748068A patent/EP1901759B1/en not_active Not-in-force
- 2006-06-29 US US11/917,482 patent/US8258107B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-29 ES ES10162989.7T patent/ES2450593T3/es active Active
- 2006-06-29 AU AU2006266503A patent/AU2006266503B2/en not_active Ceased
- 2006-06-29 EP EP11166835.6A patent/EP2380584B1/en active Active
- 2006-06-29 SI SI200631723T patent/SI2380584T1/sl unknown
- 2006-06-29 CA CA2612162A patent/CA2612162C/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-06-29 DE DE602006015963T patent/DE602006015963D1/de active Active
- 2006-06-29 EP EP10162989.7A patent/EP2269622B1/en active Active
-
2012
- 2012-07-03 JP JP2012149378A patent/JP5945176B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-07-03 JP JP2012149379A patent/JP2012232989A/ja not_active Withdrawn
- 2012-07-09 US US13/544,353 patent/US8592390B2/en active Active
-
2014
- 2014-03-07 CY CY20141100187T patent/CY1114965T1/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2012232988A (ja) | 2012-11-29 |
| AU2006266503A1 (en) | 2007-01-11 |
| CA2612162A1 (en) | 2007-01-11 |
| PT2269622E (pt) | 2014-03-20 |
| JP5074392B2 (ja) | 2012-11-14 |
| PL2380584T3 (pl) | 2014-03-31 |
| JP5945176B2 (ja) | 2016-07-05 |
| CY1114965T1 (el) | 2016-12-14 |
| EP1901759B1 (en) | 2010-08-04 |
| DK2269622T3 (en) | 2014-03-24 |
| ATE476193T1 (de) | 2010-08-15 |
| ES2450593T3 (es) | 2014-03-25 |
| SI2380584T1 (sl) | 2014-04-30 |
| US20100234449A1 (en) | 2010-09-16 |
| ES2442090T3 (es) | 2014-02-10 |
| AU2006266503B2 (en) | 2011-12-08 |
| EP2380584A1 (en) | 2011-10-26 |
| CA2612162C (en) | 2016-05-17 |
| DE602006015963D1 (de) | 2010-09-16 |
| EP2269622B1 (en) | 2013-12-25 |
| JP2008544983A (ja) | 2008-12-11 |
| EP1901759A1 (en) | 2008-03-26 |
| EP2269622A1 (en) | 2011-01-05 |
| EP2380584B1 (en) | 2013-10-16 |
| US8592390B2 (en) | 2013-11-26 |
| DK2380584T3 (da) | 2014-01-20 |
| SI2269622T1 (sl) | 2014-05-30 |
| WO2007004977A1 (en) | 2007-01-11 |
| JP2012232989A (ja) | 2012-11-29 |
| US8258107B2 (en) | 2012-09-04 |
| US20120277293A1 (en) | 2012-11-01 |
| PL2269622T3 (pl) | 2014-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2349617T3 (es) | Método inmunoestimulante. | |
| ES2435531T3 (es) | Modulación de la capacidad de respuesta a los esteroides | |
| CA2892203C (en) | Method for prevention of colectomy | |
| US8895522B2 (en) | Composition and method for the prevention, treatment and/or alleviation of an inflammatory disease | |
| AU2012200661B2 (en) | Immunostimulatory method |