ES2342141A1 - NUTRACEUTICAL COMPOSITION AGAINST ANIMAL STATE DISORDERS AND INSOMNIA. - Google Patents
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Abstract
La presente invención es un producto neutracéutico útil contra los trastornos del estado anímico y el insomnio cuya generación está basada en el descubrimiento de que algunas variedades de cerezas Prunus avium, presentan un alto contenido en triptófano, serotonina y melatonina.The present invention is a useful neutraceutical product against mood disorders and insomnia whose generation is based on the discovery that some varieties of Prunus avium cherries have a high content of tryptophan, serotonin and melatonin.
Description
Composición nutracéutica contra trastornos del estado anímico y el insomnio.Nutraceutical composition against disorders of the mood and insomnia.
La presente invención se encuadra en el campo de los alimentos nutracéuticos. Especialmente los alimentos nutracéuticos a base de cerezas, sus procedimientos de preparación y usos.The present invention falls within the field of Nutraceutical foods. Especially food nutraceuticals based on cherries, their preparation procedures and applications.
Los ritmos biológicos o circadianos se definen como variaciones regulares de una función biológica en el curso del tiempo (Berger, 2004). Todos los organismos presentan ritmos circadianos en la mayor parte de sus funciones fisiológicas, y entre ellas sobresalen el sueño, la función inmune, la secreción de melatonina y la producción y liberación de numerosos neurotransmisores (Duffy y Czeisler, 2002; Barriga y cols., 2004).Biological or circadian rhythms are defined as regular variations of a biological function in the course of time (Berger, 2004). All organisms have rhythms circadians in most of their physiological functions, and between they excel sleep, immune function, secretion of melatonin and the production and release of numerous neurotransmitters (Duffy and Czeisler, 2002; Barriga et al., 2004).
En nutrición, es conocido que la ingesta de
determinados alimentos favorece el descanso nocturno mientras que el
consumo de otros no propicia un buen descanso. Así, existen
nutrientes que están relacionados con la vigilia y nutrientes
relacionados con el sueño. Dentro del primer grupo se encuentran la
vitamina B12 y las vitaminas antioxidantes. En individuos sanos, la
vitamina B12 mejora la alerta y la concentración y reduce la fase de
sueño durante el día (Mayer y cols., 1996). Las vitaminas
antioxidantes pueden ejercer un efecto estimulante de la actividad
diurna, por lo que se considera que actúan favoreciendo la
instauración del ritmo circadiano sueño-vigilia. En
el grupo de los nutrientes relacionados con el sueño, encontramos
los triglicéridos de cadena media, el triptófano, y la
melatonina.In nutrition, it is known that the intake of certain foods favors night rest while the consumption of others does not favor a good rest. Thus, there are nutrients that are related to wakefulness and sleep-related nutrients. Within the first group are vitamin B12 and antioxidant vitamins. In healthy individuals, vitamin B12 improves alertness and concentration and reduces the sleep phase during the day (Mayer et al., 1996). Antioxidant vitamins can exert a stimulating effect on daytime activity, which is why they are considered to favor the establishment of the circadian sleep-wake rhythm. In the group of sleep-related nutrients, we find the medium chain triglycerides, tryptophan, and the
melatonin
La hormona melatonina, sintetizada principalmente en la glándula pineal a partir del aminoácido triptófano vía serotonina, es uno de los factores clave en la función de sueño, de modo que al atardecer se inician cambios fisiológicos en el organismo que inducen la secreción de melatonina y el consiguiente descenso de la temperatura corporal (Dijk y Cajochen, 1997).The hormone melatonin, synthesized mainly in the pineal gland from the amino acid tryptophan via serotonin, is one of the key factors in the sleep function, so that at sunset changes begin physiological in the body that induce melatonin secretion and the consequent decrease in body temperature (Dijk and Cajochen, 1997).
Los ciclos circadianos de sueño/vigilia están sujetos a un mecanismo de adaptación que controla la secreción de melatonina en función de la luz según las estaciones (Turek, 1985). El envejecimiento, sin embargo, provoca alteraciones de los ciclos sueño/vigilia de manera no controlada por dicho mecanismo de adaptación. Con la edad, los ciclos sueño/vigilia sufren alteraciones que tienen su origen en una disminución en la secreción de melatonina y que llevan a la desincronización, acortamiento del periodo oscilador, la aparición de un patrón ultradiano y, en última instancia, a la pérdida del ritmo circadiano (Copinschi y cols., 1999).Circadian sleep / wake cycles are subject to an adaptation mechanism that controls the secretion of melatonin as a function of light according to the seasons (Turek, 1985). Aging, however, causes cycle alterations sleep / wakefulness not controlled by such mechanism adaptation. With age, sleep / wake cycles suffer alterations that have their origin in a decrease in secretion of melatonin and leading to desynchronization, shortening of oscillating period, the appearance of an ultradian pattern and, ultimately instance, to the loss of the circadian rhythm (Copinschi et al., 1999).
Actualmente se conoce que el descenso de los niveles nocturnos de melatonina durante el envejecimiento, afecta a la integridad de las estructuras circadianas y es un precursor de estados de enfermedad. La suplementación con melatonina, por tanto, ayudarla a prevenir procesos derivados del envejecimiento, tales como inmunodeficiencias asociadas con la edad o el crecimiento tumoral (Turek y cols., 2000).It is currently known that the decline of nocturnal levels of melatonin during aging, affects the integrity of circadian structures and is a precursor to disease states Melatonin supplementation, therefore, help it prevent aging processes, such as immunodeficiencies associated with age or growth tumor (Turek et al., 2000).
Los precursores de la melatonina son, como se ha mencionado, el triptófano y la serotonina. Se ha constatado que la ingestión de alimentos ricos en triptófano induce somnolencia (Demisch y cols., 1987). Por ejemplo, leches y cereales infantiles enriquecidos con triptófano favorecen el sueño de los niños (Cubero y cols., 2006a,b,c; Cubero y cols., 2007a; Sánchez y cols., 2008a). Algunos alimentos ricos en triptófano son los lácteos (leche, queso, yogur, requesón); cereales (arroz, soja, trigo, cebada); pescado (bacalao), marisco (gambas); carnes (vacuno, pollo, porcino); legumbres y hortalizas (judías, lentejas, garbanzos, lechuga, tomates); frutos secos (almendras, nueces, cacahuetes, dátiles); huevos, plátanos (Mahan y Scott-Stump, 1998). No obstante, las dietas con exceso de triptófano pueden producir anormalidades en el metabolismo de este aminoácido. Se estima que se deberían ingerir entre 25-60 mg de triptófano diarios ya que cantidades superiores a ésta pueden resultar perjudiciales para el organismo (Giles y cols, 2003; Mokady, 1990).The precursors of melatonin are, as has been mentioned, tryptophan and serotonin. It has been found that the ingestion of tryptophan-rich foods induces drowsiness (Demisch et al., 1987). For example, milk and baby cereal enriched with tryptophan favor children's sleep (Cubero et al., 2006a, b, c; Cubero et al., 2007a; Sánchez et al., 2008a). Some foods rich in tryptophan are dairy (milk, cheese, yogurt, cottage cheese); cereals (rice, soy, wheat, barley); fish (cod), seafood (prawns); meat (beef, chicken, pork); legumes and vegetables (beans, lentils, chickpeas, lettuce, tomatoes); nuts (almonds, nuts, peanuts, dates); eggs, bananas (Mahan and Scott-Stump, 1998). Do not However, diets with excess tryptophan can produce abnormalities in the metabolism of this amino acid. It is estimated that they should ingest between 25-60 mg of tryptophan daily since higher amounts may result harmful to the organism (Giles et al., 2003; Mokady, 1990).
Cuando una dieta es rica en triptófano y carbohidratos se produce un efecto sinérgico por acción de la insulina que favorece su transporte a través de la barrera hematoencefálica. Se sabe también que una dieta que favorezca la ingestión del triptófano o que facilite su paso a través de la barrera hematoencefálica, es recomendable en pacientes con tendencias depresivas (Campos, 1999).When a diet is rich in tryptophan and carbohydrates a synergistic effect is produced by the action of the insulin that favors its transport through the barrier blood brain It is also known that a diet that favors ingestion of tryptophan or that facilitates its passage through the blood brain barrier, it is recommended in patients with depressive tendencies (Campos, 1999).
En la glándula pineal, el triptófano se utiliza para la síntesis de serotonina y melatonina (Huether y cols., 1992). Los niveles de triptófano en el cerebro están regulados por la glándula pineal donde la enzima triptófano hidrolasa (TPH) transforma el triptófano en 5-hidroxitriptófano y este es descarboxilado por la enzima L-aminoácido aromático descarboxilasa (AADA) para producir serotonina. La serotonina se acumula en la glándula pineal durante el día pero sus niveles caen marcadamente durante la noche como consecuencia de su conversión a melatonina.In the pineal gland, tryptophan is used for the synthesis of serotonin and melatonin (Huether et al., 1992). Tryptophan levels in the brain are regulated by the pineal gland where the enzyme tryptophan hydrolase (TPH) transforms tryptophan into 5-hydroxytryptophan and this is decarboxylated by the L-amino acid enzyme aromatic decarboxylase (AADA) to produce serotonin. The serotonin accumulates in the pineal gland during the day but its levels fall sharply during the night as a result of their Melatonin conversion.
El neurotrasmisor serotonina circula en las redes nerviosas que contrarrestan a las de la dopamina y noradrenalina.The neurotransmitter serotonin circulates in the nerve networks that counteract those of dopamine and norepinephrine
Se sabe que la ingestión de serotonina ayuda a calmar emociones negativas de miedo, ansiedad, irascibilidad, tensión, agresividad, así como los trastornos del sueño y las actitudes obsesivo-compulsivas como la ingesta compulsiva de carbohidratos. El síndrome de deficiencia en serotonina se manifiesta con una amplia gama de alteraciones emocionales y del comportamiento que van desde el llamado síndrome premenstrual al suicidio.It is known that ingesting serotonin helps calm negative emotions of fear, anxiety, irascibility, tension, aggressiveness, as well as sleep disorders and obsessive-compulsive attitudes such as intake Carb compulsive. Deficiency syndrome in serotonin manifests itself with a wide range of alterations emotional and behavioral ranging from the so-called syndrome Premenstrual to suicide.
Entre los alimentos ricos en serotonina se encuentran las ortigas, plátanos, tomates, ciruelas, aguacates, berenjenas, nueces, las piñas y los dátiles.Among the foods rich in serotonin are they find nettles, bananas, tomatoes, plums, avocados, Eggplants, nuts, pineapples and dates.
Durante la noche, la serotonina se transforma en melatonina por acción de 2 enzimas de la glándula pineal cuya actividad aumenta exponencialmente durante la noche. Inicialmente, la enzima arilalquilamina N-acetiltransferasa (AA-NAT), que muestra un incremento de actividad de 30 a 70 veces, transforma la serotonina en N-acetilserotonina. Después, la enzima hidroxi-indol-O-metiltransferasa (HIOMT), metila la N-acetilserotonina para producir N-acetil-5-metoxitriptamina, más comúnmente conocida como melatonina.During the night, serotonin transforms into melatonin by action of 2 enzymes of the pineal gland whose Activity increases exponentially overnight. Initially, the enzyme arylalkylamine N-acetyltransferase (AA-NAT), which shows an increase in activity of 30 to 70 times, transform serotonin into N-Acetyl Serotonin Then the enzyme hydroxy-indole-O-methyltransferase (HIOMT), methylates N-acetylserotonin to produce N-acetyl-5-methoxytryptamine, more commonly known as melatonin.
La síntesis y liberación pineal de melatonina a la circulación está bajo la influencia del ciclo luz/oscuridad (Liebmann y cols., 1997), ya que la luz deprime rápidamente la actividad de las enzimas pineales.The synthesis and pineal release of melatonin a the circulation is under the influence of the light / dark cycle (Liebmann et al., 1997), since light rapidly depresses the Pineal enzyme activity.
Además de la glándula pineal, otros tejidos y órganos tienen la capacidad de sintetizar melatonina. Entre ellos destacan la médula ósea y las células del sistema inmune, los tejidos gonadales y el sistema digestivo.In addition to the pineal gland, other tissues and Organs have the ability to synthesize melatonin. Among them Bone marrow and immune system cells stand out, the gonadal tissues and the digestive system.
Además de su papel en los ciclos sueño/vigilia, la melatonina es también un potente antioxidante endógeno (Terrón y cols., 2001; Cubero 2007b; Paredes y cols, 2007b,d) ya que actúa como secuestrador de radicales libres, estimula e incrementa la acción de enzimas antioxidantes y disminuye el daño mitocondrial ocasionado por los radicales libres reduciendo la pérdida de electrones en la membrana interna mitocondrial (Reiter y cols., 2003). Además, la melatonina potencia el efecto de otros antioxidantes como las vitaminas E y C (Tan y cols., 2002; Guerrero y cols., 2007). De este modo, su eficacia es mucho mayor que si actuara de forma independiente, como ocurre con la mayoría de antioxidantes. Se ha descrito además que, sobre la piel, la melatonina es un protector eficaz contra la radiación ultravioeta (Shirazi et al., 2007 J. Radiat. Res. 48, 263-272).In addition to its role in the sleep / wake cycles, melatonin is also a potent endogenous antioxidant (Terrón et al., 2001; Cubero 2007b; Paredes et al., 2007b, d) as it acts as a free radical scavenger, stimulates and increases the action of antioxidant enzymes and decreases mitochondrial damage caused by free radicals reducing the loss of electrons in the mitochondrial inner membrane (Reiter et al., 2003). In addition, melatonin enhances the effect of other antioxidants such as vitamins E and C (Tan et al., 2002; Guerrero et al., 2007). Thus, its effectiveness is much greater than if it acted independently, as is the case with most antioxidants. It has also been described that, on the skin, melatonin is an effective protector against ultraviolet radiation ( Shirazi et al., 2007 J. Radiat. Res. 48, 263-272 ).
Dado que el estrés oxidativo es un notable agravante de un alto porcentaje de las enfermedades de mayor impacto en la sociedad actual (enfermedades cardiovasculares, neurodegenerativas y metabólicas), la medicina preventiva recomienda la ingestión de melatonina en la dieta para aumentar la capacidad de las células para combatir el daño oxidativo (Benot y cols., 1999; Terrón y cols., 2005a).Since oxidative stress is a remarkable aggravating of a high percentage of the diseases with the greatest impact in today's society (cardiovascular diseases, neurodegenerative and metabolic), preventive medicine recommends ingestion of melatonin in the diet to increase the ability to cells to combat oxidative damage (Benot et al., 1999; Terrón et al., 2005a).
Los alimentos ricos en melatonina son los tomates (11,2 a los 50,6 ng/100 g), plátanos (46,6 ng/100 g), cerezas (13,5 ng/g), pepinos (8,6 ng/100 g), remolacha (0,2 ng/100 g), semillas como las pipas de girasol (29 ng/g), y algunas plantas medicinales (Dubbels y cols., 1995; Chen y cols., 2003; Reiter y cols., 2007).Melatonin-rich foods are the tomatoes (11.2 at 50.6 ng / 100 g), bananas (46.6 ng / 100 g), cherries (13.5 ng / g), cucumbers (8.6 ng / 100 g), beets (0.2 ng / 100 g), seeds such as sunflower seeds (29 ng / g), and some plants Medicinal products (Dubbels et al., 1995; Chen et al., 2003; Reiter and cols., 2007).
De entre los alimentos de origen vegetal con riqueza en melatonina, las cerezas constituyen un caso especial, pues se ha observado que los antocianos presentes en las mismas poseen propiedades antioxidantes y antiinflamatorias, lo que unido a las propiedades cronobiológicas que posee la melatonina, sugiere que su consumo podría ser muy recomendable para la salud humana.Among the foods of plant origin with Rich in melatonin, cherries are a special case, since it has been observed that the anthocyanins present in them they have antioxidant and anti-inflammatory properties, which together with the chronobiological properties that melatonin possesses, suggests that Its consumption could be highly recommended for human health.
En nutrición se conocen varios tipos de cerezas
provenientes de especies vegetales distintas. El género
Prunus, perteneciente a la familia Rosaceae, presenta
más de 100 especies, muchas de las cuales dan frutos muy valorados
en la gastronomía. Entre ellos se encuentran las cerezas
(P. avium, p. cerasium, P. apétala, P. caroliniana, P.
cerasoides, P. emarginata, P. fruticosa, P. glandulosa, P. Grayana,
P. ilicifolia, P. incisa, P. laurocerasus, P. lusitanica, P. maaki,
P. mahaleb, P. maximowiczii, P. nipponica, P. Gadus, P.
pennsilvanyca P. prostata, P. pseudocerasus, P. pumila, P. serotina,
P. serrulata, P. speciosa, P. subhirtella, P. tomentosa, P.
virginiana, P. yedoensis), las ciruelas (P. doméstica,
P. cerasifera, P. alleghaniensis, P. americana, P. angustifolia, P.
geniculata, P. gracilis, P. hortelana. P. mandshurica, P. maritima,
P. mexicana, P. munsoniana, P. nigra, P. rivularis, P. salicina, P.
Simoni, P. subcordata, P. umbellata), los albaricoques
(P. armeniaca, P. brigantina, P. fremontii, P. sibirica), los
melocotones y las nectarinas (P. davidiana, P.
persica, P. andersonii), las almendras (P. dulcis, P.
fasciculata, P. jacquemontii, P. tenella)
etc.In nutrition several types of cherries from different plant species are known. The Prunus genus, belonging to the Rosaceae family, has more than 100 species, many of which bear fruit highly valued in gastronomy. Among them are cherries ( P. avium, P. cerasium, P. apétala, P. caroliniana, P. cerasoides, P. emarginata, P. fruticosa, P. glandulosa, P. Grayana, P. ilicifolia, P. incisa , P. laurocerasus, P. lusitanica, P. maaki, P. mahaleb, P. maximowiczii, P. nipponica, P. Gadus, P. pennsilvanyca P. prostata, P. pseudocerasus, P. pumila, P. serotina, P. serrulata, P. speciosa, P. subhirtella, P. tomentosa, P. virginiana, P. yedoensis ), plums ( P. domestica, P. cerasifera, P. alleghaniensis, P. americana, P. angustifolia, P. geniculata, P. gracilis, P. hortelana, P. mandshurica, P. maritima, P. mexicana, P. munsoniana, P. nigra, P. rivularis, P. salicina, P. Simoni, P. subcordata, P. umbellata ), apricots ( P. armeniaca, P. brigantina, P. fremontii, P. sibirica ), peaches and nectarines ( P. davidiana, P. persica, P. andersonii ), almonds ( P. dulcis, P. fasciculata, P jacquemontii, P. tenella )
etc.
Cada uno de los frutos de las distintas especies del género prunus tienen cualidades nutricionales y gastronómicas diferentes. Por ejemplo, los frutos de la especie P. doméstica se utilizan para superar problemas de transito intestinal como el estreñimiento, debido a su alto contenido en fibra y poder laxante. Los frutos de la especie P. cerasium, sin embargo, son apreciados por su poder antioxidante y su contenido en melatonina. La especie P. avium y sus variedades es muy apreciada gastronómicamente y presenta propiedades antioxidantes pero no laxantes; su contenido en melatonina es desconocido. La especie P. dulcis es muy apreciada por sus propiedades hidratantes y regenerativas de la piel, el cabello y las uñas; no se le atribuyen, sin embargo, propiedades antioxidantes y tampoco se conoce su contenido en melatonina.Each of the fruits of the different species of the genus prunus have different nutritional and gastronomic qualities. For example, the fruits of the P. domestic species are used to overcome intestinal transit problems such as constipation, due to their high fiber content and laxative power. The fruits of the P. cerasium species, however, are prized for their antioxidant power and their melatonin content. The species P. avium and its varieties is highly appreciated gastronomically and has antioxidant but not laxative properties; Its content in melatonin is unknown. The species P. dulcis is highly prized for its moisturizing and regenerative properties of the skin, hair and nails; It is not attributed, however, antioxidant properties and its melatonin content is not known.
Muchas especies de prunus dan cerezas. La cereza dulce (P. avium) se come fresca como cereza o como picota (sin pedúnculo) mientras que la cereza ácida (P. cerasium) no es apreciada fresca y se comercializa procesada, generalmente en confitura, conocida como guinda. La variedad de cereza ácida Montmorency, cultivada en Michigan, presenta un alto contenido en antioxidantes. Estudios pioneros realizados en EEUU por el Dr. Reiter revelaron que las cerezas Montmorency tenían elevados niveles de antocianinas, polifenoles y melatonina. Hay grandes diferencias entre las variedades de P. cerasium estudiadas, por ejemplo la cereza Montmorency tiene un contenido de melatonina de 13,5 ng/g, mientras que la cereza Balaton, de la misma especie, solamente contiene 2 ng/g (Burkhardt, S et al., J. Agrie Food Chem). Por lo tanto el posible contenido de melatonina en frutos de otras especies del género prunus es profundamente desconocido. Especies de familias taxonómicamente distantes como el tomate (Solanum lycopersicum) o la remolacha (Solanum melongena) dan frutos con alto contenido en melatonina; notablemente, el contenido en melatonina de estas dos especies del mismo género también es muy diferente. De nuevo, en un grupo tan distante como los monocotiledones encontramos un fruto rico en melatonina: El plátano (Musa Spp.). Se puede concluir, por lo tanto, que el contenido en melatonina de los frutos es impredecible.Many species of prunus give cherries. Sweet cherry ( P. avium ) is eaten fresh as cherry or as a pillory (without peduncle) while acidic cherry ( P. cerasium ) is not appreciated fresh and marketed processed, usually in jam, known as cherry. The Montmorency acid cherry variety, grown in Michigan, has a high antioxidant content. Pioneering studies conducted in the US by Dr. Reiter revealed that Montmorency cherries had high levels of anthocyanins, polyphenols and melatonin. There are large differences between the varieties of P. cerasium studied, for example the Montmorency cherry has a melatonin content of 13.5 ng / g, while the Balaton cherry, of the same species, only contains 2 ng / g ( Burkhardt, S et al., J. Agrie Food Chem ). Therefore the possible content of melatonin in fruits of other species of the genus prunus is deeply unknown. Species of taxonomically distant families such as tomatoes ( Solanum lycopersicum ) or beets ( Solanum melongena ) bear fruits with a high content of melatonin; Notably, the melatonin content of these two species of the same genus is also very different. Again, in a group as distant as monocotyledons we find a fruit rich in melatonin: Banana ( Musa Spp. ). It can be concluded, therefore, that the melatonin content of the fruits is unpredictable.
En el mercado existen complementos nutracéuticos, a base de cerezas Montmorency, para el suplemento en antioxidantes y reguladores del sueño. Sin embargo, dada la acidez de la materia prima, estos alimentos nutracéuticos pueden provocar problemas digestivos a largo plazo, tienen alto contenido en azucares y a veces se combinan con elementos adicionales como chocolate o han de tomarse en pastillas. Seria deseable, por tanto disponer de algún producto nutracéutico que fuera mejor aceptado por el sistema digestivo. Los inventores de la presente solicitud han descubierto que, sorprendentemente, algunas cerezas de la especie P. Avium poseen un alto contenido en triptófano, serotonina y melatonina. Por ello han desarrollado el producto nutraceútico que se describe a continuación para contribuir al campo de la técnica con un producto rico en triptófano, serotonina y melatonina que debido a su menor acidez no dañe el sistema digestivo debido a su ingestión durante periodos largos.In the market there are nutraceutical supplements, based on Montmorency cherries, for the supplement in antioxidants and sleep regulators. However, given the acidity of the raw material, these nutraceutical foods can cause long-term digestive problems, are high in sugars and are sometimes combined with additional elements such as chocolate or have to be taken in tablets. It would be desirable, therefore to have some nutraceutical product that was better accepted by the digestive system. The inventors of the present application have discovered that, surprisingly, some cherries of the P. Avium species have a high content of tryptophan, serotonin and melatonin. Therefore, they have developed the nutraceutical product described below to contribute to the field of technique with a product rich in tryptophan, serotonin and melatonin that due to its lower acidity does not damage the digestive system due to its ingestion for long periods.
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Figura 1: Cromatografía representativa del contenido en triptófano de la variedad de cereza P. avium navalinda.Figure 1: Representative chromatography of the tryptophan content of the cherry variety P. avium navalinda.
Figura 2: Cromatograma que refleja la cantidad de serotonina y melatonina presente en una muestra de cereza de la variedad Pico Negro.Figure 2: Chromatogram reflecting the quantity of serotonin and melatonin present in a cherry sample of the Pico Negro variety.
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La presente invención tiene como objeto proporcionar un producto nutracéutico rico en melatonina y bajo en acidez en forma de un producto universal, de posible uso generalizado para cualquier edad y tipo de población. En el sector agrícola del cultivo del cerezo, seria deseable dar salida a variedades que, siendo ricas en triptófano, serotonina y melatonina y otros compuestos relacionados, no tienen la mejor aceptación comercial como fruta fresca. Una ventaja de la presente invención es que, al estar basada en frutos de la especie P. avium, presenta mejores características organolépticas así como una mayor proporción de azucares naturales. Por lo tanto, una realización de la presente invención es un producto nutracéutico rico en triptófano, serotonina y melatonina que comprende extracto de cerezas de variedades de la especie Prunus avium a elegir entre Ambrunés, Bourlat, Navalinda, Pico Negro, Pico Colorado, Pico limón, Van y mezclas de estas.The present invention aims to provide a nutraceutical product rich in melatonin and low in acidity in the form of a universal product, of possible widespread use for any age and type of population. In the agricultural sector of cherry cultivation, it would be desirable to give way to varieties that, being rich in tryptophan, serotonin and melatonin and other related compounds, do not have the best commercial acceptance as fresh fruit. An advantage of the present invention is that, being based on fruits of the P. avium species, it has better organoleptic characteristics as well as a higher proportion of natural sugars. Therefore, an embodiment of the present invention is a nutraceutical product rich in tryptophan, serotonin and melatonin comprising cherry extract from varieties of the Prunus avium species to choose between Ambrunés, Bourlat, Navalinda, Pico Negro, Pico Colorado, Lemon Peak , Van and mixtures of these.
Sería conveniente, además, que la invención sea fácilmente asimilable por el sistema digestivo. Según esto, una realización de la presente invención es un extracto liquido, por ejemplo, un jugo concentrado de dichas variedades de cerezas.It would also be convenient for the invention to be easily assimilated by the digestive system. According to this, a embodiment of the present invention is a liquid extract, by for example, a concentrated juice of said varieties of cherries.
Asimismo, es objeto de la presente invención proporcionar un producto nutracéutico sólido con propiedades organolépticas adecuadas para su ingestión solo o incorporado a otros alimentos. Por lo tanto, una realización de la presente invención es también un extracto sólido de variedades de cerezas de la especie P. avium. Por ejemplo, frutos deshuesados frescos, deshidratados o liofilizados, incluyendo un extracto seco en polvo.It is also the object of the present invention to provide a solid nutraceutical product with suitable organoleptic properties for ingestion alone or incorporated into other foods. Therefore, an embodiment of the present invention is also a solid extract of cherry varieties of the P. avium species. For example, fresh, dehydrated or lyophilized boneless fruits, including a dried powder extract.
Con el fin de obtener un extracto líquido, otro aspecto de la presente invención es un procedimiento de preparación de un producto nutracéutico rico en triptófano, serotonina y melatonina que comprende el deshuesado y reducción de la carne del fruto, la obtención del jugo limpio mediante separación de la pulpa y la concentración por medios físicos a una temperatura máxima de 4ºC.In order to obtain a liquid extract, another aspect of the present invention is a preparation process of a nutraceutical product rich in tryptophan, serotonin and melatonin that includes boneless and reduced meat fruit, obtaining clean juice by separating the pulp and the concentration by physical means at a maximum temperature of 4 ° C.
Igualmente, para obtener un producto nutracéutico sólido que sea rico en triptófano, serotonina y melatonina, es otro aspecto de la presente invención un procedimiento de preparación de un producto nutracéutico que comprende el deshuesado y trituración de la fruta, la adición de un antiapelmazante, la adición de un antioxidante, su congelación, liofilización y envasado impermeable en atmósfera inerte. Una realización alternativa comprende además un paso adicional de trituración tras el liofilizado para obtener el producto en polvo.Likewise, to obtain a product solid nutraceutical that is rich in tryptophan, serotonin and melatonin, is another aspect of the present invention a procedure for preparing a nutraceutical product that includes the pitting and crushing of the fruit, the addition of a anti-caking, the addition of an antioxidant, its freezing, lyophilization and waterproof packaging in an inert atmosphere. A alternative embodiment further comprises an additional step of crushing after lyophilisate to obtain the product in powder.
El producto producido por el anterior
procedimiento contiene ventajosamente, altas concentraciones de
triptófano, serotonina y melatonina. En consecuencia, una
realización de la presente invención es un producto nutracéutico
caracterizado por presentar entre 20-40º Brix, una
concentración total de la suma de serotonina y melatonina de
entre
8 x 10^{-2} a 1,2 x 10^{-1} \mug/ml y una
concentración de triptófano de entre 1,4 x 10^{4} a 1,7 x 10^{4}
microgramos.The product produced by the above procedure advantageously contains high concentrations of tryptophan, serotonin and melatonin. Consequently, an embodiment of the present invention is a nutraceutical product characterized by having between 20-40 ° Brix, a total concentration of the sum of serotonin and melatonin between
8 x 10 -2 at 1.2 x 10 -1 / cup / ml and a tryptophan concentration of between 1.4 x 10 4 to 1.7 x 10 4 micrograms .
Según lo expuesto, un aspecto de la presente invención comprende el uso del producto nutracéutico rico en triptófano, serotonina y melatonina en un método de tratamiento contra el insomnio, los desórdenes anímicos o en la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de estos.As stated, one aspect of the present invention comprises the use of the nutraceutical product rich in tryptophan, serotonin and melatonin in a treatment method against insomnia, mood disorders or in the manufacture of a medicine intended for the treatment of these.
En nutrición, seria muy ventajoso disponer, a lo largo de todas las estaciones, de un producto alimenticio rico en melatonina que ayude a mejorar los ciclos del sueño y la vigilia. Por ello, otro aspecto de la presente invención comprende el uso del producto nutracéutico en la preparación de un alimento funcional, un producto dietético o un suplemento nutricional.In nutrition, it would be very advantageous to have, at throughout all seasons, of a food product rich in melatonin that helps improve sleep and wake cycles. Therefore, another aspect of the present invention comprises the use of nutraceutical product in the preparation of a functional food, a Dietary product or a nutritional supplement.
La utilización en cosmética del extracto de variedades de cerezas de la invención, aportarla un buen protector contra los efectos negativos de la radiación ultravioleta. Por ello, otro aspecto de la presente invención comprende el uso del producto nutracéutico rico en triptófano, serotonina y melatonina, que comprende extracto de cerezas de variedades de la especie Prunus avium a elegir entre Ambrunés, Bourlat, Navalinda, Pico Negro, Pico Colorado, Pico limón, Van y mezclas de estas en la preparación de una composición cosmética.The use in cosmetics of the extract of varieties of cherries of the invention, provide a good protector against the negative effects of ultraviolet radiation. Therefore, another aspect of the present invention comprises the use of the tryptophan, serotonin and melatonin-rich nutraceutical product, which comprises cherry extract from varieties of the Prunus avium species to choose between Ambrunés, Bourlat, Navalinda, Pico Negro, Pico Colorado, Lemon pea, Van and mixtures of these in the preparation of a cosmetic composition.
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La presente invención está fundamentada en el descubrimiento de que diferentes variedades de cerezas del Valle del Jerte presentan un alto contenido en triptófano, serotonina y melatonina. La ingestión 400 gramos frescos diarios de cerezas Prunus avium, resultó en sorprendentes mejoras del sueño de voluntarios maduros y ancianos, así como aumento de los niveles del metabolito de excreción de la melatonina (6-sulfatoximelatonina) en orina y de su capacidad antioxidante.The present invention is based on the discovery that different varieties of cherries from the Jerte Valley have a high content of tryptophan, serotonin and melatonin. The daily intake of 400 grams of fresh Prunus avium cherries resulted in surprising improvements in the sleep of mature and elderly volunteers, as well as increased levels of the metabolite excretion of melatonin (6-sulfatoxymelatonin) in urine and its antioxidant capacity.
Dado que las propiedades del triptófano, la serotonina y la melatonina no se pierden en la fruta seca, y puesto que la cereza es un fruto disponible únicamente durante la estación estival, la invención aporta un nuevo producto, disponible en cualquier época del año, de ingesta fácil, sabor y textura agradables, que comprende un producto derivado de extractos de los frutos de P. avium que puede ser un jugo concentrado o un extracto seco.Since the properties of tryptophan, serotonin and melatonin are not lost in dried fruit, and since cherry is a fruit available only during the summer season, the invention provides a new product, available at any time of the year, of easy intake, pleasant taste and texture, comprising a product derived from extracts of the fruits of P. avium that can be a concentrated juice or a dry extract.
De acuerdo con esto, una realización de la presente invención comprende un producto nutracéutico, rico en triptófano, serotonina y melatonina, que comprende extracto de variedades de cerezas de la especie Prunus avium.Accordingly, an embodiment of the present invention comprises a nutraceutical product, rich in tryptophan, serotonin and melatonin, comprising extract of varieties of cherries of the Prunus avium species.
Las cerezas utilizadas para la obtención de extractos pertenecen a las siguientes variedades:Cherries used to obtain Extracts belong to the following varieties:
- --
- Con pedúnculo: Bourlat, Navalinda y Van. With peduncle : Bourlat, Navalinda and Van.
- --
- Picotas: Ambrunés, Pico Limón, Pico Negro y Pico Colorado. Picotas : Ambrunés, Pico Limón, Pico Negro and Pico Colorado.
En la elaboración del producto nutracéutico de la presente invención, se utilizaron cerezas frescas que fueron proporcionadas por la Agrupación de Cooperativas "Valle del Jerte". En primer lugar, se llevó a cabo el deshuesado de una parte de las cerezas frescas para obtener un homogeneizado (triturado de pulpa y zumo sin hueso) que fue conservado a -28ºC hasta el momento de su utilización; muestras que se emplearon para la determinación de la concentración de triptófano presente en las distintas variedades de cerezas estudiadas.In the elaboration of the nutraceutical product of the present invention, fresh cherries were used which were provided by the Cooperative Association "Valle del Jerte. "First, the boning of a part of fresh cherries to obtain a homogenate (crushed pulp and juice without bone) which was stored at -28 ° C until the moment of its use; samples that were used to the determination of the tryptophan concentration present in the Different varieties of cherries studied.
Por otro lado, se tomó fruta fresca y se la sometió a un proceso de liofilización, previa trituración y congelación a -80ºC. Dicho liofilizado se utilizó para llevar a cabo la separación cromatográfica que servirla para la determinación cualitativa y valoración cuantitativa del contenido de melatonina y serotonina en las distintas variedades de cerezas estudiadas. Por último, otra parte de las distintas variedades de cerezas frescas fueron proporcionadas a los individuos voluntarios que participaron en el estudio, para poder de ese modo analizar los parámetros cronobiológicos de sueño así como valorar si su consumo contribuía a elevar los niveles de melatonina y antioxidantes en los sujetos participantes, mediante la cuantificación de 6-sulfatoximelatonina y capacidad antioxidante total en las orinas recogidas antes, durante y tras la ingesta de las cerezas. Estas cerezas fueron suministradas a los individuos inmediatamente tras su llegada (recogidas en el momento óptimo de maduración), para mantener las mejores condiciones nutricionales y funcionales del fruto.On the other hand, fresh fruit was taken and the underwent a lyophilization process, prior crushing and freezing at -80 ° C. Said lyophilisate was used to carry out the chromatographic separation that will serve to determine qualitative and quantitative assessment of melatonin content and serotonin in the different varieties of cherries studied. By last, another part of the different varieties of fresh cherries were provided to the volunteer individuals who participated in the study, in order to analyze the parameters Chronobiological sleep as well as assess whether its consumption contributed to raise melatonin and antioxidant levels in subjects participants, by quantifying 6-sulfate oximelatonin and antioxidant capacity total in the urine collected before, during and after the intake of the cherries. These cherries were supplied to individuals. immediately upon arrival (collected at the optimum time of maturation), to maintain the best nutritional conditions and Functional fruit.
La Tabla 1 muestra los valores de concentración de triptófano en cada una de las variedades de cerezas del Valle del Jerte estudiadas. Se observaron diferencias significativas entre unas variedades y otras, de modo que las variedades que presentaron menor concentración del aminoácido fueron Pico colorado y Pico negro, seguidas por Ambrunés, Bourlat, Pico limón y Van, con una concentración intermedia, siendo Navalinda la que mostró una concentración de triptófano significativamente mayor (p<0,05) respecto a todas las demás variedades. Cada valor representa la media \pm la desviación estándar de seis determinaciones realizadas por triplicado y en partes por millón (ppm o mg/l) y ng/100 g de comestible, a, b, c: Letras iguales indican que no existen diferencias significativas entre las concentraciones de triptófano de esas variedades. Diferentes letras indican diferencias estadísticamente significativas (p<0,05) entre las concentraciones de triptófano de esas variedades de cerezas. Dos letras en una misma variedad indican que no existen diferencias significativas entre la concentración de esa variedad y las del resto de variedades con cualquiera de las dos letras (Test de Tukey).Table 1 shows the concentration values of tryptophan in each of the cherry varieties of Valle del Jerte studied. Significant differences were observed between some varieties and others, so that the varieties they presented lowest concentration of the amino acid were Pico colorado and Pico black, followed by Ambrunés, Bourlat, Lemon Peak and Van, with a intermediate concentration, being Navalinda the one that showed a Tryptophan concentration significantly higher (p <0.05) Regarding all other varieties. Each value represents the mean ± the standard deviation of six determinations performed in triplicate and in parts per million (ppm or mg / l) and ng / 100 g of edible, a, b, c: Equal letters indicate no there are significant differences between the concentrations of Tryptophan of these varieties. Different letters indicate differences statistically significant (p <0.05) among Tryptophan concentrations of those varieties of cherries. Two letters in the same variety indicate that there are no differences significant between the concentration of that variety and those of other varieties with any of the two letters (Test of Tukey)
Las Tablas 2 y 3 muestran respectivamente los valores de concentración de serotonina y melatonina en cada una de las variedades de cerezas del Valle el Jerte estudiadas.Tables 2 and 3 show respectively the Serotonin and melatonin concentration values in each of the varieties of cherries from Valle el Jerte studied.
Se observaron diferencias significativas entre unas variedades y otras, de modo que las variedades que presentaron menor concentración de serotonina fueron Pico negro, Van y Bourlat, seguidas, con una concentración intermedia, por Pico limón y Navalinda, y siendo Pico colorado y Ambrunés las que presentaron significativamente (p<0,05) una mayor concentración de serotonina respecto a todas las demás variedades.Significant differences were observed between some varieties and others, so that the varieties they presented lower concentration of serotonin were Pico negro, Van and Bourlat, followed, with an intermediate concentration, by Lemon Peak and Navalinda, and being Pico colorado and Ambrunés those who presented significantly (p <0.05) a higher concentration of serotonin Regarding all other varieties.
Por otro lado, y tal como se muestra en la Tabla 3, las variedades que mostraron una menor concentración de melatonina fueron Ambrunés, Pico limón, Van y Pico colorado; Pico negro presentó una concentración intermedia, y fue Bourlat la que mostró una concentración de melatonina significativamente mayor (p<0,05) respecto a todas las demás variedades.On the other hand, and as shown in the Table 3, the varieties that showed a lower concentration of Melatonin were Ambrunés, Pico lemon, Van and Pico colorado; Peak black presented an intermediate concentration, and it was Bourlat who showed a significantly higher concentration of melatonin (p <0.05) with respect to all other varieties.
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En individuos sanos, la ingesta de las variedades seleccionadas produjo un aumento estadísticamente significativo de los valores de Tiempo Real de Sueño tanto en individuos maduros como ancianos, con respecto a sus correspondientes valores basales y a los obtenidos un día después de la última toma de las variedades seleccionadas.In healthy individuals, the intake of selected varieties produced a statistically increase significant of the Real-Time Dream values both in mature individuals as elders, with respect to their corresponding baseline values and those obtained one day after the last shot of the selected varieties.
En ambos grupos de edad, la ingesta de las variedades seleccionadas provocó además una disminución estadísticamente significativa de los valores de Actividad Total, con respecto a sus correspondientes valores basales y a los obtenidos un día después de la última toma.In both age groups, the intake of selected varieties also caused a decrease statistically significant of the Total Activity values, with respect to their corresponding baseline values and obtained one day after the last shot.
Asimismo, la ingesta de la mayoría de estas variedades, indujo un aumento estadísticamente significativo de los valores de Sueño Asumido en los individuos ancianos, con respecto a su correspondiente valor basal y al obtenido un día después de la última toma de las mismas. En individuos maduros, se observó un ligero aumento en los valores de Sueño Asumido con cualquiera de las variedades estudiadas. Por otro lado, se observó un ligero descenso de los valores de Latencia de Sueño y Número de Despertares tanto en los individuos maduros como ancianos, respecto a sus correspondientes valores basales. Igualmente, se produjo un aumento en los Minutos de Inmovilidad de individuos ancianos, con respecto a su correspondiente valor basal, siendo significativo con Ambrunés, Pico Negro y Pico Colorado. Finalmente, la Eficiencia de Sueño no se vio afectada de modo destacable por la ingesta de la mayoría de las variedades en ninguno de los dos grupos de edad estudiados.Also, the intake of most of these varieties, induced a statistically significant increase in Assumed Sleep values in elderly individuals, with respect to its corresponding baseline value and that obtained one day after the Last shot of them. In mature individuals, a slight increase in the values of Assumed Dream with any of the varieties studied. On the other hand, a slight decrease was observed of the values of Sleep Latency and Number of Awakenings both in mature individuals as elders, regarding their corresponding baseline values. Likewise, there was an increase in the Minutes of Immobility of elderly individuals, with respect to its corresponding baseline value, being significant with Ambrunés, Black Peak and Colorado Peak. Finally, Sleep Efficiency is not was significantly affected by the intake of most of the varieties in neither of the two age groups studied.
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Ejemplo 1Example one
Se valoraron y cuantificaron los niveles de aminoácido triptófano a partir de muestras trituradas y congeladas de las distintas variedades de cerezas del Jerte elegidas en este estudio. Para ello, el método analítico utilizado fue HPLC con detector fluorescente (Thermo® FL 3000), basándose los fundamentos técnicos-analíticos en el método empleado por Alegría y cols. (1996). Previamente al análisis cuantitativo, se procedió a la extracción del aminoácido. Para ello, se tomó 1 g de muestra de porción comestible (pulpa más piel sin hueso) recogida en criotubo previamente congelada a -28ºC. A continuación, se adicionaron 0,5 g de Ba(OH)_{2} para alcalinizar el medio de extracción. Además, se añadieron 0,5 ml de H_{2}O para una mejor dilución y se utilizó un agitador de balanceo para mezclar los distintos componentes durante 10 minutos. Posteriormente, se llevó a cabo una hidrólisis térmica en estufa a 100ºC durante 12 horas. Una vez finalizada, se centrifugó durante 15 minutos a 13.200 g y se separó el sobrenadante, puesto que es la fracción que contenía el triptófano. Seguidamente se filtró el sobrenadante con filtros Albet® de poro de 0,45 \mum y se recogió 1 ml del filtrado que se conservó a -28ºC hasta su análisis cromatográfico.The levels of amino acid tryptophan from crushed and frozen samples of the different varieties of Jerte cherries chosen in this study. For this, the analytical method used was HPLC with fluorescent detector (Thermo® FL 3000), basing the fundamentals technical-analytical in the method used by Joy et al. (nineteen ninety six). Prior to the quantitative analysis, proceeded to extract the amino acid. To do this, 1 g of sample of edible portion (pulp plus boneless skin) collected in previously frozen cryotube at -28 ° C. Then it added 0.5 g of Ba (OH) 2 to alkalize the extraction medium. In addition, 0.5 ml of H2O was added to a better dilution and a stirrer was used to mix the different components for 10 minutes. Subsequently carried out a thermal hydrolysis in an oven at 100 ° C for 12 hours. Once finished, it was centrifuged for 15 minutes at 13,200 g and the supernatant was separated, since it is the fraction that It contained tryptophan. The supernatant was then filtered with 0.45 µm Albet® pore filters and 1 ml of the filtrate was collected which was stored at -28 ° C until chromatographic analysis.
Para llevar a cabo el análisis, en primer lugar se ajustó cada muestra con acetato de Na/ácido acético a pH 5. Seguidamente, se inyectaron 20 \mul de muestra en la columna cromatográfica que presentaba como fase estacionaria una composición de 88% H_{2}O, 2% de acetonitrilo y 10% de metanol, y como fase móvil metanol puro. El tiempo de retención medio de la columna para el aminoácido triptófano fue de 7,9 \pm 0,2 minutos. La columna cromatográfica estaba acoplada a un detector de fluorescencia para la cuantificación de los niveles de triptófano. La longitud de onda de excitación del aminoácido fue de 284 nm y la de emisión de 340 nm.To carry out the analysis, first each sample was adjusted with Na acetate / acetic acid at pH 5. Next, 20 µl of sample was injected into the column chromatographic that presented as a stationary phase a composition of 88% H2O, 2% acetonitrile and 10% methanol, and as a phase Pure methanol mobile. The average retention time of the column for the amino acid tryptophan was 7.9 ± 0.2 minutes. The spine chromatographic was coupled to a fluorescence detector to the quantification of tryptophan levels. Wavelength The amino acid excitation was 284 nm and the emission of 340 nm.
Los valores resultantes de los análisis de cada muestra se obtuvieron por triplicado en partes por millón (ppm) que equivalen a mg/l y, posteriormente, se expresaron como mg/100 g de producto comestible. Dichos análisis se realizaron mediante el software informático Cromquest®. La figura 1 muestra un ejemplo representativo de cromatograma que refleja la cantidad de triptófano presente en una muestra de cereza de la variedad Navalinda.The resulting values of the analyzes of each sample were obtained in triplicate in parts per million (ppm) that equivalent to mg / l and subsequently expressed as mg / 100 g of edible product These analyzes were performed using the Cromquest® computer software. Figure 1 shows an example representative chromatogram that reflects the amount of tryptophan present in a sample of cherry of the Navalinda variety.
Se determinaron las cantidades de serotonina y melatonina presente en los liofilizados de cada una de las variedades de cerezas mediante HPLC-MS, ya que se ha comprobado que esta técnica es la más precisa para determinar la cantidad de serotonina y melatonina en plantas (Kolar y Machackova, 2005; Pape y Lüning, 2006). El método de extracción se basó en el propuesto por Burkhardt y cols. (2001), pero con modificaciones en cuanto a los volúmenes para optimizar la extracción de serotonina y melatonina hasta aproximadamente un 75%.The amounts of serotonin and melatonin present in lyophilisates of each of the varieties of cherries using HPLC-MS, since it has been proven that this technique is the most accurate to determine the amount of serotonin and melatonin in plants (Kolar and Machackova, 2005; Pape and Lüning, 2006). The extraction method was based on the proposed by Burkhardt et al. (2001), but with modifications in as for the volumes to optimize serotonin extraction and melatonin up to about 75%.
Se pesaron 2 gramos de muestra liofilizada y se les añadió 10 ml de tampón fosfato a pH 8; con ello se consiguió alcalinizar el medio de extracción para facilitar el posterior paso de los analitos de la fase acuosa al cloroformo. Seguidamente se homogenizó durante 1 minuto y se centrifugó a 15.320 g durante 10 minutos, se filtró el sobrenadante y se recogió en tubos Falcon. A continuación, se repitió el mismo proceso lavando el liofilizado con 5 ml de tampón fosfato.2 grams of lyophilized sample were weighed and added 10 ml of phosphate buffer at pH 8; with that it was achieved alkalize the extraction medium to facilitate the subsequent step of analytes from the aqueous phase to chloroform. Then it homogenized for 1 minute and centrifuged at 15,320 g for 10 minutes, the supernatant was filtered and collected in Falcon tubes. TO then the same process was repeated washing the lyophilisate with 5 ml phosphate buffer.
A cada tubo Falcon se le añadieron 3 ml de cloroformo, el cual se utilizó para la extracción de los analitos de la matriz. Este disolvente es fácilmente evaporable de modo que no interfiere con la fase móvil y además permite preconcentrar los analitos.To each Falcon tube 3 ml of chloroform, which was used for the extraction of analytes from matrix. This solvent is easily evaporable so that no interferes with the mobile phase and also allows you to pre-concentrate the analytes
Asimismo, se añadieron 50 \mul de KOH 1M para alcalinizar aún más el medio de extracción y asegurar que todos los analitos pasasen a la fase clorofórmica.Also, 50 µL of 1M KOH was added to further alkalize the extraction medium and ensure that all analytes passed to the chloroform phase.
Posteriormente, los tubos se agitaron en vortex durante 2 minutos y se eliminó la parte superior resultante tras dicha agitación. A continuación, se pasó la fase clorofórmica a un tubo de vidrio, se lavó con 1 ml de cloroformo y se filtró el contenido utilizando para ello un filtro de 0,45 \mum. El filtrado se recogió en otro tubo de vidrio y se evaporó con nitrógeno. Por último, se preconcentraron los analitos en un volumen de 200 \mul y se disolvieron en la fase móvil. Para realizar la separación cromatográfica se partió de una elución en gradiente con una composición de fase móvil del 95% de fase acuosa (ácido fórmico al 0,45%) y 5% de fase orgánica (acetonitrilo). Del minuto 0 al 5 se utilizo una composición constante de fase móvil (95% de fase acuosa y 5% de acetonitrilo). A partir del minuto 5, se empleo un gradiente lineal hasta el 100% de acetonitrilo, alcanzándose esta composición en el minuto 16. La separación cromatográfica fue seguida de 15 minutos de reequilibrio.Subsequently, the tubes were shaken in vortex for 2 minutes and the resulting upper part was removed after such agitation. Next, the chloroform phase was passed to a glass tube, washed with 1 ml of chloroform and the content using a 0.45 µm filter. Filtering It was collected in another glass tube and evaporated with nitrogen. By Finally, the analytes were preconcentrated in a volume of 200 µl and dissolved in the mobile phase. To perform the separation chromatographic was split from a gradient elution with a 95% mobile phase composition of aqueous phase (formic acid at 0.45%) and 5% organic phase (acetonitrile). From minute 0 to 5 it I use a constant composition of mobile phase (95% aqueous phase and 5% acetonitrile). After 5 minutes, a gradient was used linear up to 100% acetonitrile, reaching this composition at minute 16. The chromatographic separation was followed by 15 minutes of rebalancing.
La optimización de la separación cromatográfica se realizó con patrones de melatonina y serotonina, además se emplearon muestras de cerezas para tener en cuenta la heterogeneidad de la matriz. En estas condiciones, la elución de serotonina se produjo en el minuto 1,8 y la de melatonina en el minuto 11,5. Una vez finalizada la optimización del método, se inyectaron las muestras de las distintas variedades de cerezas en la columna de HPLC. Posteriormente, para llevar a cabo la detección de melatonina y serotonina se empleó un detector de masas en modo positivo y con los siguientes fragmentos de pesos moleculares:The optimization of chromatographic separation it was performed with melatonin and serotonin patterns, in addition to they used cherry samples to take into account heterogeneity of the matrix. Under these conditions, serotonin elution is produced in the 1.8 minute and melatonin in 11.5 minutes. A once the optimization of the method was completed, the samples of the different varieties of cherries in the column of HPLC Subsequently, to carry out the detection of melatonin and serotonin a mass detector was used in positive mode and with the following molecular weight fragments:
- 233 (pico principal) y 174 para la melatonina.233 (peak main) and 174 for melatonin.
- 177 (pico principal) y 160 para la serotonina.177 (peak main) and 160 for serotonin.
Dado que la concentración de melatonina en cerezas está en el rango de \mug/l, en primer lugar se estableció qué niveles mínimos de concentración pueden medirse con seguridad en nuestro método. Para ello, se elaboró una recta de calibrado con patrón entre 5 y 100 \mug/l de melatonina, encontrándose una correlación entre concentración y área de pico (r2 = 0, 9988). El limite de detección calculado fue de 2,21 \mug/l. Con respecto a la serotonina, se construyó la correspondiente recta de calibrado con patrón entre 5 y 100 \mug/l, encontrándose nuevamente una buena correlación entre concentración y área de pico (r2 = 0,9967). En este caso, el limite de detección calculado fue de 5,90 \mug/l.Since the concentration of melatonin in cherries is in the range of \ mug / l, it was first established what minimum concentration levels can be measured safely in our method For this, a calibration line with pattern between 5 and 100 µl / l of melatonin, finding a correlation between concentration and peak area (r2 = 0.9988). He Detection limit calculated was 2.21 µg / l. With respect to the serotonin, the corresponding calibration line was constructed with a pattern between 5 and 100 µl / l, again finding a Good correlation between concentration and peak area (R2 = 0.9967). In this case, the calculated detection limit was 5.90 \ mug / l.
Los valores resultantes de los análisis de cada muestra se obtuvieron por duplicado en \mug/l y, posteriormente, se expresaron como ng/100 g de comestible. Dichos análisis se llevaron a cabo mediante el software informático Chem Station®. La figura 2 muestra un cromatograma representativo que refleja la cantidad de serotonina y melatonina presente en una muestra de cereza de la variedad Pico Negro.The resulting values of the analyzes of each sample were obtained in duplicate in \ mug / l and subsequently they were expressed as ng / 100 g of edible. These analyzes are carried out using the Chem Station® software. The Figure 2 shows a representative chromatogram that reflects the amount of serotonin and melatonin present in a sample of Pico Negro variety cherry.
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Ejemplo 2Example 2
El producto liofilizado se prepara partiendo de cereza fresca o cereza ultracongelada. En cualquiera de los dos casos, los pasos a seguir son los siguientes:The lyophilized product is prepared starting from Fresh cherry or deep-frozen cherry. In either one cases, the steps to follow are the following:
- --
- Deshuesado de la frutaBoneless fruit
- --
- TrituraciónTrituration
- --
- Adición de maltodextrina (sustancia antiapelmazante) y ácido ascórbico a la papilla resultante tras la trituración. La formulación resultante de dicha mezcla es: 94 gramos de cereza, 5 gramos de maltodextrina y 1 gramo de ácido ascórbico.Adding maltodextrin (substance anti-caking) and ascorbic acid to the resulting porridge after trituration. The resulting formulation of said mixture is: 94 grams of cherry, 5 grams of maltodextrin and 1 gram of acid ascorbic
- --
- Congelación a -80ºCFreezing at -80ºC
- --
- LiofilizaciónLyophilization
- --
- Molido del liofilizado para obtener el producto en forma de polvoGround lyophilisate to obtain the product in powder form
- --
- Envasado en envases de film, como barrera a la humedad, y con atmósfera inerte.Packaged in film containers, such as moisture barrier, and inert atmosphere.
Este producto se administrará de forma que la cantidad consumida por dosis diaria (repartida en dos tomas), contenga el equivalente al menos a las cantidades de melatonina, serotonina y triptófano, presentes en 400 gramos de cereza fresca, o en su caso mayor concentración.This product will be administered so that the amount consumed per daily dose (divided into two doses), contain the equivalent of at least the amounts of melatonin, serotonin and tryptophan, present in 400 grams of fresh cherry, or in its case greater concentration.
La concentración media de serotonina y melatonina por cada 100 gramos de producto liofilizado es de 350 y 60 nanogramos (ng), respectivamente. Además, la concentración media de triptófano por cada 100 gramos de producto liofilizado es de 78 miligramos (mg), alcanzándose.The mean serotonin concentration and Melatonin per 100 grams of lyophilized product is 350 and 60 nanograms (ng), respectively. In addition, the average concentration of tryptophan per 100 grams of lyophilized product is 78 milligrams (mg), reaching.
La dosis diaria que se consuma de este producto
deberá contener una suma total de melatonina y serotonina en un
rango de 8 x 10^{-2} a 1,2 x 10^{-1} microgramos (en cantidad
absoluta), así como una cantidad de triptófano entre
1,4 x
10^{4} - 1,7 x 10^{4} microgramos (\mug), para obtener al
menos el mismo efecto fisiológico que 400 gramos diarios de cereza
fresca. Por tanto, consumiendo 40 gramos diarios de producto
liofilizado, repartidos en dos tomas, se aporta una cantidad de
triptófano, serotonina y melatonina al menos semejante a la ingesta
de 400 gramos diarios de cereza fresca.The daily dose consumed of this product should contain a total sum of melatonin and serotonin in a range of 8 x 10 -2 to 1.2 x 10 -1 micrograms (in absolute quantity), as well as an amount of tryptophan between
1.4 x 10 4 - 1.7 x 10 4 micrograms (mug), to obtain at least the same physiological effect as 400 grams of fresh cherry daily. Therefore, consuming 40 grams of lyophilized product daily, divided into two doses, provides an amount of tryptophan, serotonin and melatonin at least similar to the intake of 400 grams per day of fresh cherry.
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Ejemplo 3Example 3
Este estudio se ha llevado a cabo en individuos voluntarios sanos jóvenes (3 hombres y 3 mujeres de entre 18-25 años, n=6), maduros (3 hombres y 3 mujeres de entre 35-55 años, n=6) y ancianos (3 hombres y 3 mujeres de entre 65-85 años, n=6), bajo consentimiento, confidencialidad y autorización preceptivas (respetando los principios fundamentales de la Declaración de Helsinki, del Consejo de Europa relativos a los derechos humanos y biomedicina, y la Declaración Universal de la UNESCO sobre el genoma humano y los derechos humanos). Tras ensayos con diferentes proporciones del producto liofilizado, y considerando además las características del producto, su disolución, volumen final a tomar, etc., sin afectar a las concentraciones de triptófano, serotonina y melatonina se ha elegido, hasta el momento, como más idónea la cantidad de producto liofilizado que a continuación se detalla. Dichos individuos tomaron 28 gramos de producto liofilizado (lo que equivale en fruta fresca a 141 gramos), dos veces al día, en postre de comida y cena durante tres días. Asimismo, se realizó un estudio en condiciones control (antes de la ingesta del producto liofilizado) y un estudio post-ensayo (un día después de finalizar los tres días de ingesta).This study has been carried out in young healthy volunteers (3 men and 3 women between 18-25 years, n = 6), mature (3 men and 3 women between 35-55 years, n = 6) and elderly (3 men and 3 women between 65-85 years, n = 6), with mandatory consent, confidentiality and authorization (respecting the fundamental principles of the Declaration of Helsinki, of the Council of Europe concerning human rights and biomedicine, and the UNESCO Universal Declaration on the human genome and human rights). After tests with different proportions of the lyophilized product, and also considering the characteristics of the product, its dissolution, final volume to be taken, etc., without affecting the concentrations of tryptophan, serotonin and melatonin, it has been chosen, so far, as more suitable the amount of lyophilized product detailed below . These individuals took 28 grams of lyophilized product (equivalent to 141 grams of fresh fruit), twice a day, for lunch and dinner for three days. Likewise, a study was conducted under control conditions (before the intake of the lyophilized product) and a post-test study (one day after the end of the three days of intake).
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Para evaluar el efecto que producía la ingestión de cada una de las variedades de cerezas a estudiar, los individuos participantes en el estudio llevaron colocado durante todos los días que duró el estudio un activímetro de muñeca (Actiwatch®), el cual recogía los datos necesarios para el análisis del sueño. Aunque los registros se realizaron durante 24 horas, los valores analizados en el presente estudio han sido los correspondientes al periodo comprendido entre el momento en que el paciente se acostaba y el momento en que se levantaba. Estos datos fueron tomados según el siguiente protocolo experimental:To evaluate the effect produced by ingestion of each of the varieties of cherries to study, individuals study participants carried placed every day that the study lasted a wrist activimeter (Actiwatch®), which collected the necessary data for the analysis of sleep. Although records were made for 24 hours, the values analyzed in the present study have been those corresponding to the period between the moment the patient lay down and the moment he got up. These data were taken according to the following experimental protocol:
- --
- Tres días controles antes de la toma del liofilizado: Recogida de datos de sueño de cada una de las tres noches. Three days checks before taking lyophilisate : Collection of sleep data for each of the three nights.
- --
- Tres días ensayo (con ingesta de producto liofilizado de cerezas): Durante la toma del producto liofilizado se recogieron los registros de sueño de cada una de las tres noches. Three days trial (with intake of lyophilized cherry product) : During the intake of the lyophilized product, the sleep records of each of the three nights were collected.
- --
- Post-ensayo (post-ingesta): Se recogió el registro de sueño de la noche siguiente a la última toma de producto liofilizado. Post-test (post-intake) : The sleep record was collected the night after the last intake of lyophilized product.
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Tras la recogida de la actividad nocturna durante cada uno de los periodos de reposo y sueño nocturno, la información fue descargada en el ordenador para el posterior análisis de los parámetros de sueño-vigilia.After the collection of the night activity during each period of rest and nighttime sleep, the information was downloaded to the computer for later analysis of sleep-wake parameters.
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Son muchos los parámetros que se registraron durante el análisis a través del programa Sleep Analysis; sin embargo, se seleccionaron aquellos que ofrecían información más relevante acerca de la calidad del sueño, siendo éstos:There are many parameters that were recorded during the analysis through the Sleep Analysis program; without However, those that offered more information were selected relevant about the quality of sleep, these being:
- \bullet?
- Eficiencia de sueño: porcentaje de tiempo de sueño mientras el sujeto permanece en la cama. Sleep efficiency : percentage of sleep time while the subject remains in bed.
- \bullet?
- Tiempo real del sueño: equivalente al tiempo de sueño asumido menos el tiempo de vigilia; determinado por algoritmos. Real sleep time : equivalent to the assumed sleep time less waking time; determined by algorithms.
- \bullet?
- Número despertares: muestra el número de episodios de actividad elevada durante el periodo de sueño. Number of awakenings : shows the number of episodes of high activity during the sleep period.
- \bullet?
- Actividad total: pulsos totales de actividad durante el sueño. Total activity : total activity pulses during sleep.
- \bullet?
- Latencia de sueño: tiempo que transcurre desde que el individuo se acuesta hasta el inicio del sueño. Latency of sleep : time that elapses since the individual lies down until the beginning of sleep.
- \bullet?
- Sueño asumido: diferencia entre el final y el principio del sueño. Assumed dream : difference between the end and the beginning of the dream.
- \bullet?
- Minutos de inmovilidad: número total de minutos en los que el sujeto tiene movilidad cero, que se asume como tiempo de sueño. Minutes of immobility : total number of minutes in which the subject has zero mobility, which is assumed as sleep time.
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Una vez calculados todos estos parámetros para una noche, el procedimiento se repitió para cada día registrado.Once all these parameters have been calculated for One night, the procedure was repeated for each day registered.
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La cuantificación de los niveles del metabolito de la melatonina 6-SMT, se realizó mediante kit comercial de ELISA (IBL). Se cuantificó en la primera orina de la mañana de individuos jóvenes, maduros y ancianos recogida antes de comenzar con la ingestión del producto liofilizado (orinas controles), en la primera orina de la mañana siguiente a los tres días de la ingestión del producto (orina ensayo) así como en la primera orina de la mañana un día después de finalizar cada ensayo (orina post-ensayo).Quantification of metabolite levels of melatonin 6-SMT, was performed by kit Commercial of ELISA (IBL). It was quantified in the first urine of the morning of young, mature and elderly individuals collected before start with the ingestion of the lyophilized product (urine controls), in the first urine the next morning at three days of ingestion of the product (urine test) as well as in the first morning urine one day after finishing each test (post-test urine).
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Tras la medida de los valores de absorbancia, los resultados fueron calculados a partir de la siguiente expresión:After measuring the absorbance values, the results were calculated from the following expression:
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Finalmente, los valores obtenidos en la relación DO/DO_{max} de cada estándar se representaron frente al logaritmo de la concentración de 6-STM de cada muestra estándar, expresadas en ng/ml, obteniéndose una recta patrón, a partir de cuya ecuación pudo calcularse la concentración de 6-STM en las muestras problema.Finally, the values obtained in the relationship DO / DO_ {max} of each standard were plotted against the logarithm of the 6-STM concentration of each sample standard, expressed in ng / ml, obtaining a standard line, to from whose equation the concentration of 6-STM in the problem samples.
Dado que el volumen de orina es distinto para cada individuo, se normalizaron los datos de las concentraciones de 6-SMT con las concentraciones de creatinina, expresándolos en ng 6-SMT/mg de creatinina.Since the volume of urine is different for each individual, the data of the concentrations of 6-SMT with creatinine concentrations, expressing them in ng 6-SMT / mg creatinine.
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Este estudio se realizó mediante la utilización de un kit comercial para la determinación de los niveles de antioxidantes en orina (Cayman). Se cuantificó en las orinas de individuos jóvenes, maduros y ancianos antes de comenzar con la ingestión del producto, después de tres días de la ingestión del liofilizado, así como un día después de finalizar los ensayos, de igual forma que se ha indicado en el apartado anterior.This study was conducted using of a commercial kit for the determination of the levels of urine antioxidants (Cayman). It was quantified in the urine of young, mature and elderly individuals before starting with the ingestion of the product, after three days of ingestion of the lyophilized, as well as one day after the end of the tests, of the same way as indicated in the previous section.
Los valores obtenidos de absorbancia en cada estándar se representaron frente al logaritmo de la concentración de Trolox de cada muestra estándar, expresadas en ng/ml, obteniéndose una recta patrón, a partir de cuya ecuación pudo calcularse la concentración de antioxidantes en las muestras problemas.The absorbance values obtained in each standard were plotted against the logarithm of the concentration of Trolox of each standard sample, expressed in ng / ml, obtaining a standard line, from whose equation the antioxidant concentration in the samples problems.
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Finalmente, los resultados de la Capacidad Antioxidante Total (A) fueron calculados a partir de la siguiente expresión:Finally, the results of the Capacity Total Antioxidant (A) were calculated from the following expression:
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En relación con la metodología estadística se llevaron a cabo tres tipos de estudios:In relation to the statistical methodology, They carried out three types of studies:
1.- Descriptivo, calculando como valores representativos la media aritmética (X) y la desviación estándar (D.E.), según las fórmulas habituales, para el número de datos manejados. Todos los datos se expresaron como la media \pm desviación estándar del número de ensayos.1.- Descriptive , calculating as representative values the arithmetic mean (X) and the standard deviation (SD), according to the usual formulas, for the number of data handled. All data were expressed as the mean ± standard deviation of the number of trials.
2.- Test de hipótesis, mediante el siguiente test no paramétrico: test ANOVA de dos vías por adición de rangos de Friedman (muestras apareadas) para comparaciones múltiples.2.- Hypothesis test , using the following non-parametric test: two-way ANOVA test by adding Friedman ranges (paired samples) for multiple comparisons.
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Los parámetros cronobiológicos de sueño analizados tanto en individuos jóvenes como en maduros y ancianos se representan en la Tabla 4. Chronobiological sleep parameters analyzed in both young and mature and elderly individuals are represented in Table 4.
Mediante flechas, se muestra el aumento o descenso de cada parámetro respecto a su valor basal (100%). Las casillas en blanco (- -) indican que la ingesta del producto no afectó a dicho parámetro.Using arrows, the increase or decrease of each parameter with respect to its baseline value (100%). The blank boxes (- -) indicate that the intake of the product It did not affect that parameter.
El consumo de 28 g de producto liofilizado (equivalente a 141 gramos de fruta fresca) dos veces al día (mediodía y noche) produjo tanto en individuos jóvenes como en maduros y ancianos efectos positivos sobre el sueño de los mismos, aumentando de manera general el Tiempo Real de Sueño, el Sueño Asumido y los Minutos de Inmovilidad, además de disminuir la Actividad Total nocturna. Asimismo, se observó una mejora en la Eficiencia del Sueño en todos los grupos de edad analizados. Por último, es destacable la disminución de la latencia de sueño y el Número de Despertares tanto en individuos maduros como ancianos, donde son más comunes las alteraciones del ciclo sueño-vigilia.Consumption of 28 g of lyophilized product (equivalent to 141 grams of fresh fruit) twice a day (noon and night) produced both in young individuals and in mature and elderly positive effects on their sleep, generally increasing the Real Dream Time, the Dream Assumed and the Immobility Minutes, in addition to reducing the Total night activity. Likewise, there was an improvement in Sleep Efficiency in all age groups analyzed. By Finally, the decrease in sleep latency and the Number of awakenings in both mature and elderly individuals, where cycle alterations are more common sleep-wake
Es importante resaltar que el efecto fisiológico que se consigue es al menos igual o incluso mejor (como es el caso del Tiempo Real de Sueño y de los Minutos de Inmovilidad) que el hallado tras la ingesta de 400 gramos al día de distintas variedades de cerezas del Valle del Jerte analizadas en nuestro anterior estudio.It is important to highlight that the physiological effect that is achieved is at least the same or even better (as is the case of the Real Time of Dream and of the Minutes of Immobility) that the found after the intake of 400 grams per day of different varieties of cherries from the Jerte Valley analyzed in our previous study.
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La Tabla 5 muestra los valores de concentración de 6-SMT normalizados (ng 6-SMT/mg creatinina) en la orina de los individuos jóvenes, maduros y ancianos que realizaron el estudio. La tabla recoge los valores en condiciones basales, los obtenidos una vez finalizada la ingesta del producto liofilizado, así como los valores de un día después de la última ingesta del mismo (post-ensayo). Dicho estudio se realizó en orinas procedentes de individuos jóvenes, maduros y ancianos. Como puede apreciarse en dicha tabla, la ingesta del producto liofilizado mezcla de las variedades de P. avium que presentan más concentración de triptófano, serotonina y melatonina indujo un aumento significativo (p<0,05) de la concentración de 6-SMT en relación a sus correspondientes basales y post-ensayo. En este caso, los niveles de 6-SMT aumentan dos veces (jóvenes y maduros) y tres veces (ancianos) en relación a su correspondiente valor basal, lo que supone una ventaja con respecto a la ingesta de 400 gramos de cereza al día de cada una de las variedades de cerezas del Valle del Jerte analizadas en el estudio anterior, donde el aumento no llegó en ningún caso al doble del nivel basal.Table 5 shows the normalized 6-SMT concentration values (ng 6-SMT / mg creatinine) in the urine of the young, mature and elderly individuals who conducted the study. The table shows the values in baseline conditions, those obtained once the intake of the lyophilized product is finished, as well as the values of one day after the last intake of the same (post-test). This study was conducted in urine from young, mature and elderly individuals. As can be seen in this table, the intake of the lyophilized product mixture of the P. avium varieties that have a higher concentration of tryptophan, serotonin and melatonin induced a significant increase (p <0.05) in the concentration of 6-SMT in relation to to their corresponding baseline and post-test. In this case, the levels of 6-SMT increase twice (young and mature) and three times (elderly) in relation to their corresponding baseline, which is an advantage over the intake of 400 grams of cherry a day of each one of the varieties of cherries of the Jerte Valley analyzed in the previous study, where the increase never reached twice the baseline level.
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- Basal: muestras obtenidas antes de la ingesta del producto liofilizado.- Baseline : samples obtained before the intake of the lyophilized product.
- Cerezas: muestras obtenidas tras tres días de ingesta del producto liofilizado- Cherries : samples obtained after three days of freeze-dried product intake
- Post-ensayo: muestras obtenidas un día después de finalizar el estudio.- Post-test : samples obtained one day after the end of the study.
(*) Significativamente mayor a su correspondiente Basal.(*) Significantly greater than its corresponding Basal.
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La Tabla 6 muestra los valores de la capacidad antioxidante total de la orina (mM) procedente de los individuos jóvenes, maduros y ancianos que participaron en el estudio tanto en condiciones basales como al final de la ingesta del producto liofilizado, así como un día después de la última ingesta (post-ensayo). Como puede apreciarse, la ingestión del producto liofilizado indujo un aumento significativo (p<0,05) de la concentración de antioxidantes totales en orina en relación a sus correspondientes basales y post-ensayo en cada uno de los grupos de edad estudiados. Los niveles de antioxidantes totales aumentan significativamente con efecto fisiológico similar al observado en nuestro estudio anterior tras la ingesta de fruta fresca.Table 6 shows the values of the total antioxidant capacity of the urine (mM) from young, mature and elderly individuals who participated in the study both at baseline conditions and at the end of the intake of the lyophilized product, as well as one day later of the last intake (post-test). As can be seen, the ingestion of the lyophilized product induced a significant increase (p <0.05) in the concentration of total antioxidants in urine in relation to their corresponding baseline and post-test in each of the age groups studied. Total antioxidant levels increase significantly with physiological effect similar to that observed in our previous study after the intake of fresh fruit.
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- Basal: muestras obtenidas antes de la ingesta del producto liofilizado.- Baseline : samples obtained before the intake of the lyophilized product.
- Cerezas: muestras obtenidas tras tres días de ingesta del producto liofilizado- Cherries : samples obtained after three days of freeze-dried product intake
- Post-ensayo: muestras obtenidas un día después de finalizar el estudio.- Post-test : samples obtained one day after the end of the study.
(*) Significativamente mayor a su correspondiente Basal.(*) Significantly greater than its corresponding Basal.
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En vista de los resultados obtenidos, nuestro producto liofilizado de cerezas abrirla la posibilidad de profundizar sobre el papel de la melatonina en la prevención y/o tratamiento de enfermedades relacionadas con el estrés oxidativo y el envejecimiento, y sobre el desarrollo de modelos para el análisis de fármacos con vistas al tratamiento de enfermedades de amplia repercusión social como diversas patologías infecciosas, enfermedades y procesos ligados al envejecimiento y a patologías de origen neurodegenerativo de gran incidencia actual como el Parkinson o el Alzehimer.In view of the results obtained, our lyophilized cherry product open the possibility of deepen the role of melatonin in prevention and / or treatment of diseases related to oxidative stress and aging, and on the development of models for analysis of drugs with a view to the treatment of broad diseases social impact as various infectious pathologies, diseases and processes linked to aging and pathologies of Neurodegenerative origin of high current incidence such as Parkinson's or the Alzehimer.
Así, éste producto podría servir para potenciar los tratamiento suplementados con triptófano, serotonina y/o melatonina como beneficiosos para prevenir algunos problemas asociados al envejecimiento así como distintos desórdenes muy frecuentes en la población joven y madura como son los problemas de depresión y de insomnio.Thus, this product could serve to enhance treatments supplemented with tryptophan, serotonin and / or melatonin as beneficial to prevent some problems associated with aging as well as various disorders very frequent in the young and mature population as are the problems of depression and insomnia
Claims (12)
- a.to.
- Deshuesado y reducción de la carne del fruto.Boning and meat reduction fruit.
- b.b.
- Obtención del jugo limpio mediante separación de la pulpa.Obtaining clean juice by pulp separation.
- c.C.
- Concentración por medios físicos a una temperatura máxima de 4ºC.Concentration by physical means to a maximum temperature of 4ºC.
- a.to.
- Deshuesado y trituración de la frutaBoning and crushing of the fruit
- b.b.
- Adición de un antiapelmazanteAdding a anti-caking agent
- c.C.
- Adición de un antioxidanteAddition of an antioxidant
- d.d.
- CongelaciónFreezing
- e.and.
- LiofilizaciónLyophilization
- f.F.
- Envasado impermeable en atmósfera inerte.Waterproof packaging in atmosphere inert.
1,7 x 10^{4} \mug de triptófano.9. Melatonin-rich nutraceutical product comprising the cherry extract of claim 1, prepared according to the method of claim 6 or 7 and characterized by having between 20-40 ° Brix, where 40 g of the product contain between 8 x 10 ^ -2 -2 and 1.2 x 10 -1 total cups of the sum of serotonin and melatonin and between 1.4 x 10 4 and
1.7 x 10 4 tryptophan mug.
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| CN103875801B (en) * | 2014-03-21 | 2015-08-12 | 西北大学 | Epiphysin is used for application and the preservation method of preserving fruit and vegetable utilizing |
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