ES2224366T3 - Piridazinonas como inhibidores de ciclooxigenasa-2. - Google Patents
Piridazinonas como inhibidores de ciclooxigenasa-2.Info
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Abstract
La invención se refiere a compuestos de piridacina-3-ona, de la fórmula (I) así como procedimientos para tratar enfermedades por medio de la ciclooxigenasa-2 que comprenden la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz y no tóxica de un compuesto de fórmula (I) a un paciente que necesite de este tratamiento. La invención se refiere también a ciertos compuestos farmacéuticos para el tratamiento de enfermedades mediante la ciclooxigenasa-2 que incluye los compuestos de fórmula (I).
Description
Piridazinonas como inhibidores de
ciclooxigenasa-2.
Esta invención se refiere a procedimientos de
tratamiento de enfermedades mediadas por ciclooxigenasa y a ciertas
composiciones farmacéuticas para las mismas.
Los fármacos antiinflamatorios no esteroideos
ejercen la mayor parte de su actividad antiinflamatoria, analgésica
y antipirética e inhiben las contracciones uterinas inducidas por
hormonas y ciertos tipos de crecimiento cancerígeno mediante la
inhibición de la prostaglandina G/H sintasa, también conocida como
ciclooxigenasa. Inicialmente, sólo se conocía una forma de la
ciclooxigenasa, correspondiéndose esta con la
ciclooxigenasa-1 (COX-1) o el
enzima constitutivo, tal como se identificó originalmente en
vesículas seminales bovinas. Más recientemente se ha clonado,
secuenciado y caracterizado el gen para una segunda forma inducible
de la ciclooxigenasa, la ciclooxigenasa-2
(COX-2) en un principio a partir de fuentes de
pollo, ratón y humanas. Este enzima es distinto de la
COX-1 que se ha clonado, secuenciado y caracterizado
a partir de varias fuentes que incluyen la oveja, el ratón y el
hombre. La segunda forma de la ciclooxigenasa, la
COX-2, es inducible rápida y fácilmente mediante un
número de agentes que incluyen los mitogenes, endotoxina, hormonas,
citoquinas y factores de crecimiento. Debido a que las
prostaglandinas desempeñan funciones tanto fisiológicas como
patológicas, se ha concluido que el enzima constitutivo, la
COX-1, es responsable, en gran parte, de la
liberación basal endógena de las prostaglandinas y de ahí que sea
importante en sus funciones fisiológicas tales como el
mantenimiento de la integridad gastrointestinal y el flujo sanguíneo
renal. Por el contrario, se ha concluido que la forma inducible, la
COX-2, es principalmente responsable de los efectos
patológicos de las prostaglandinas en donde tuviese lugar la
inducción rápida del enzima en respuesta a agentes tales como
agentes inflamatorios, hormonas, factores de crecimiento y
citoquinas. Así pues, un inhibidor selectivo de la
COX-2 tendrá propiedades antiinflamatorias,
antipiréticas y analgésicas similares a un fármaco antiinflamatorio
no esteroideo convencional, y además inhibiría las contracciones
del útero inducidas por hormonas y presentaría efectos
anti-cancerígenos potenciales, pero presentará una
capacidad disminuida para inducir algunos de los efectos
secundarios basados en el mecanismo. De forma particular, un
compuesto como este debería presentar un potencial reducido en
cuanto a toxicidad gastrointestinal, un potencial reducido en
cuanto a efectos secundarios renales, un efecto reducido en los
tiempos de hemorragia y posiblemente una capacidad disminuida para
inducir los ataques de asma en los sujetos asmáticos sensibles a la
aspirina.
Además, un compuesto como este también inhibirá
la contracción del músculo liso inducido por prostanoides mediante
la prevención de la síntesis de prostanoides contráctiles y de ahí
que puedan ser de uso en el tratamiento de la dismenorrea, parto
prematuro, asma y trastornos relacionados con el eosinófilo. Será
también de uso en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, para
la reducción de la pérdida ósea, de forma particular en mujeres
post-menopáusicas (es decir, tratamiento de la
osteoporosis) y para el tratamiento de glaucoma.
Se da una breve descripción de la utilidad
potencial de los inhibidores de ciclooxigenasa-2 en
un artículo de John Vane, Nature, volumen 367, páginas 215 -
216, 1994 y en un artículo en Drug News and Perspectives,
volumen 7, páginas 501 - 512, 1994.
Los documentos WO 96/41626 y WO 96/41645
describen amplias clases de compuestos como inhibidores de la
COX-2, pero no describen o sugieren los compuestos
de la presente invención.
La invención comprende el compuesto nuevo de
fórmula I así como también un procedimiento de tratamiento de
enfermedades mediadas por la ciclooxigenasa-2 que
comprende la administración a un paciente que necesita tal
tratamiento de una cantidad terapéuticamente efectiva no tóxica de
un compuesto de fórmula I.
La invención también comprende ciertas
composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades
mediadas por la ciclooxigenasa-2 que comprenden
compuestos de fórmula I.
La invención comprende el compuesto nuevo de
fórmula I así como también un procedimiento de tratamiento de las
enfermedades mediadas por la ciclooxigenasa-2 que
comprende la administración a un paciente que necesita tal
tratamiento de una cantidad terapéuticamente efectiva no tóxica de
un compuesto de fórmula I.
o una sal farmacéuticamente
aceptable del
mismo
en la
que:
X se selecciona del grupo formado
por
- (a)
- un enlace,
- (b)
- (CH_{2})_{m}, m = 1 ó 2,
- (c)
- CO,
- (d)
- O,
- (e)
- S, y
- (f)
- N(R^{5}),
R^{1} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- CH_{3},
- (b)
- NH_{2},
- (c)
- NHC(O)CF_{3},
R^{2} se selecciona del grupo
(CR^{6}R^{7})_{n}R^{8}, n = 1; en el que R^{6},
R^{7} se seleccionan cada uno independientemente del grupo formado
por
- (a)
- hidrógeno,
- (b)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (c)
- fluoroalquilo C_{1}-_{10},
R^{8} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (b)
- fenilo o naftilo mono-, di o tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{10},
- (4)
- alquil C_{1}-_{10}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{6},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (8)
- N_{3},
- (c)
- heteroarilo mono-, di- o tri-sustituido, siendo el heteroarilo un anillo aromático monocíclico de 5 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es S, O o N y opcionalmente 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales; o siendo el heteroarilo un anillo monocíclico de 6 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es N, y de forma opcional 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{10},
- (4)
- alquil C_{1}-_{10}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{6},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (8)
- N_{3},
R^{3} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (b)
- fenilo o naftilo mono-, di- o tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{10},
- (4)
- alquil C_{1}-_{10}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{6},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (8)
- N_{3},
- (c)
- heteroarilo mono-, di- o tri-sustituido, siendo el heteroarilo un anillo aromático monocíclico de 5 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es S, O o N y opcionalmente 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales; o siendo el heteroarilo un anillo monocíclico de 6 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es N, y de forma opcional 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{10},
- (4)
- alquil C_{1}-_{10}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{6},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (8)
- N_{3},
R^{4} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- hidrógeno,
- (b)
- halo,
- (c)
- alquilo C_{1}-_{6},
R^{5} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- hidrógeno,
- (b)
- alquilo C_{1}-_{6},
Una realización preferida de la invención es
aquella en la que X es un enlace.
Otra realización preferida de la invención es
aquella en la que X es O.
Ora realización preferida de la invención es
aquella en la que R^{1} es CH_{3}.
Otra realización preferida de la invención es
aquella en la que R^{4} es hidrógeno.
En otro aspecto, la invención también comprende
una composición farmacéutica para el tratamiento de una enfermedad
inflamatoria susceptible de tratar con un agente
anti-inflamatorio no esteroideo que comprende: una
cantidad terapéuticamente efectiva no tóxica de un compuesto de
fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, la invención también comprende
una composición farmacéutica para el tratamiento de enfermedades
mediadas por la ciclooxigenasa tratadas de forma ventajosa por un
agente activo que inhibe de forma selectiva la COX-2
con preferencia a la COX-1 que comprende: una
cantidad terapéuticamente efectiva no tóxica de un compuesto de
fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto la invención también comprende un
procedimiento de tratamiento de una enfermedad inflamatoria
susceptible de tratar con un agente
anti-inflamatorio no esteroideo que comprende:
administración a un paciente que necesita tal tratamiento de una
cantidad terapéuticamente efectiva no tóxica de un compuesto de
fórmula I y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto, la invención también comprende
un procedimiento de tratamiento de enfermedades mediadas por la
ciclooxigenasa tratadas de forma ventajosa mediante un agente activo
que inhiba de forma selectiva la COX-2 con
preferencia a la COX-1 que comprende: administración
a un paciente que necesita tal tratamiento de una cantidad
terapéuticamente efectiva no tóxica de un compuesto de fórmula
I.
En otro aspecto la invención también comprende el
uso de un compuesto de fórmula I o una composición farmacéutica en
la preparación de un medicamento para el tratamiento de una
enfermedad inflamatoria susceptible de tratar con un agente
anti-inflamatorio no esteroideo.
La invención se ilustra mediante los compuestos
de los ejemplos descritos en esta invención así como los compuestos
de la tabla I.
Las siguientes abreviaturas presentan los
significados indicados.
AA = ácido araquidónico
Ac = acetilo
AIBN =
2,2-azobisisobutironitrilo
Bn = bencilo
CHO = ovario de hámster chino
CMC =
1-ciclohexil-3-(2-morfolinoetilo)carbodiimidometo-p-toluenosulfonato
COX = ciclooxigenasa
DBU =
diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno
DMAP = 4-(dimetilamino)piridina
DMF = N,N-dimetilformamida
DMSO = dimetilsulfóxido
Et_{3}N = trietilamina
HBSS = solución salina equilibrada de Hanks
HEPES =
N-(2-hidroxietil)piperazin-N^{1}-[acido
2-etanosulfónico]
HWB = sangre completa humana
IPA = alcohol isopropílico
KHMDS = hexametildisilazano de potasio
LDA = diisopropilamida de litio
LPS = lipopolisacárido
mCPBA = ácido metacloroperbenzoico
MMPP = monoperoxiftalato de magnesio
Ms = metanosulfonilo = mesilo
Ms0 = metanosulfonato = mesilato
NBS = N-bromosuccinimida
NCS = N-clorosuccinimida
NIS = N-yodosuccinimida
AINE = fármaco anti-inflamatorio
no esteroideo
ODCB = o-diclorobenceno
Oxone® = peroximonosulfato de potasio
PCC = clorocromato de piridinio
PDC = dicromato de piridinio
r.t. = temperatura ambiente
rac. = racémica
Tf = trifluorometanosulfonilo = triflilo
TFAA = anhídrido trifluoroacético
Tf0 = trifluorometanosulfonato = triflato
THF = tetrahidrofurano
TLC = cromatografía en capa fina
TMPD =
N,N,N',N'-tetrametil-p-fenilendiamina
Ts = p-toluenosulfonilo =
tosilo
TsO = p-toluenosulfonato =
tosilato
Tz = 1H(o
2H)-tetrazol-5-ilo
SO_{2}Me = metilsulfona (también
SO_{2}CH_{3})
SO_{2}NH_{2} = sulfonamida
| Abreviaturas de grupo alquilo | Abreviaturas de dosis |
| Me = metilo | bid = bis in die = dos veces al día |
| Et = etilo | qid = quater in die = cuatro veces al día |
| n-Pr = propilo normal | |
| i-Pr = isopropilo | id = ter in die = tres veces al día |
| n-Bu = butilo normal | |
| i-Bu = isobutilo | |
| s-Bu = butilo secundario | |
| t-Bu = butilo terciario | |
| c-Pr = ciclopropilo | |
| c-Bu = ciclobutilo | |
| c-Pen = ciclopentilo | |
| c-Hex = ciclohexilo |
Para los fines de esta memoria descriptiva
"alquilo" significa estructuras lineales ramificadas y
cíclicas, y combinaciones de las mismas, que contienen el número
indicado de átomos de carbono. Ejemplos de grupos alquilo incluyen,
metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, s- y
t-butilo, pentilo, hexilo, heptilo, octilo, nonilo,
undecilo, dodecilo, tridecilo, tetradecilo, pentadecilo, eicosilo,
3,7-dietil-2,2-dimetil-4-propilnonilo,
ciclopropilo, ciclopentilo, cicloheptilo, adamantilo,
ciclododecilmetilo,
2-etil-1-biciclo(4.4.0)decilo
y similares.
Para los fines de esta memoria descriptiva
"fluoroalquilo" significa grupos alquilo en los que uno o más
hidrógenos están reemplazados por flúor. Ejemplos son -CF_{3},
-CH_{2}CH_{2}F, -CH_{2}CF_{3},
c-Pr-F_{5},
c-Hex-F_{11} y similares.
Para los fines de esta memoria descriptiva
"alcoxi" significa grupos alcoxi del número de átomos de
carbonos indicado de una configuración lineal, ramificada o cíclica.
Ejemplos de grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, propoxi,
isopropoxi, ciclopropiloxi, ciclohexiloxi y similares.
Para los fines de esta memoria descriptiva
"alquiltio" significa grupos alquiltio del número indicado de
átomos de carbono de una configuración lineal, ramificada o cíclica.
Ejemplos de grupos alquiltio incluyen metiltio, propiltio,
isopropiltio, cicloheptiltio, etc. A modo de ilustración, el grupo
propiltio significa -SCH_{2}CH_{2}CH_{3}.
Para los fines de esta memoria descriptiva
"Halo" significa F, Cl, Br o I.
Ejemplos de la invención son:
(3)
2-ciclopropilmetil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(4)
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-piridazin-3-ona,
(5)
2-bencil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(6)
2-isopropil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(7)
2-ciclopropilmetil-4-(3,4-difluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(8)
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2-(2-piridilmetil)-2H-piridazin-3-ona,
(9)
2-bencil-4-(3,4-difluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(10)
2-(4-fluorobencil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(11)
2-carbometoximetil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(12)
2-bencil-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(13)
2-(4-carbometoxibencil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(14)
2-ciclopropilmetil-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(15)
2-(3-fluorobencil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(16)
2-(4-fluorobencil)-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(17)
2-(2-fluorobencil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(19)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-piridazin-3-ona,
(20)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(4-piridilmetil)-2H-piridazin-3-ona,
(21)
2-bencil-4-(2-propoxi)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(22)
2-bencil-4-(4-fluorofenoxi)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(23)
2-bencil-4-(5-cloro-2-piridiloxi)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(24)
2-(2,2-dimetilpropil)-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(25)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(1-fenil-etil)-2H-piridazin-3-ona,
(27)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(tiofen-2-il-metil)-2H-piridazin-3-ona,
(28)
2-bencil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(3-piridil)-2H-piridazin-3-ona,
(29)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(4,4,4-trifluorobutil)-2H-piridazin-3-ona,
(30)
2-bencil-4-(6-metil-3-piridil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(31)
4-(4-fluorofenil)-2-(2-metilpropil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(32)
2-ciclobutilmetil-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(33)
2-(2-fenetil)-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(34)
2-bencil-4-(5-bromo-2-piridiloxi)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(35)
2-bencil-4-(4-metilfenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
y
(36)
2-ciclohexilmetil-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona.
Algunos de los compuestos descritos en esta
invención contienen uno o más centros asimétricos y pueden, por
tanto, dar lugar a diastereómeros e isómeros ópticos. La presente
invención se entiende que comprende tales posibles diastereómeros
así como también sus formas racémicas y resueltas y
enantioméricamente puras y sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos.
Algunos de los compuestos descritos en esta
invención contienen dobles enlaces olefínicos, y a menos que se
especifique de otra forma, se entiende que incluyen los isómeros
geométricos E y Z.
En una segunda realización, la invención
comprende composiciones farmacéuticas para la inhibición de la
ciclooxigenasa y para el tratamiento de enfermedades mediadas por la
ciclooxigenasa como se describe en esta invención, que comprenden un
vehículo farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente
efectiva no tóxica del compuesto de fórmula I como se describió
anteriormente.
Dentro de esta realización la invención comprende
composiciones farmacéuticas para la inhibición de la
ciclooxigenasa-2 y para el tratamiento de
enfermedades mediadas por la ciclooxigenasa-2, tal
como se describen en esta invención, que comprenden un vehículo
farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente efectiva
no tóxica de un compuesto de fórmula I como se describió
anteriormente.
En una tercera realización, la invención
comprende un procedimiento de inhibición de la ciclooxigenasa y
tratamiento de enfermedades mediadas por la ciclooxigenasa, tratadas
de forma ventajosa por un agente activo que inhibe de forma
selectiva la COX-2 con preferencia a la
COX-1 como se describe en esta invención que
comprende: administración a un paciente que necesita tal tratamiento
de una cantidad terapéuticamente efectiva no tóxica de un compuesto
de fórmula I como se describe en esta invención.
Las composiciones farmacéuticas de la presente
invención comprenden un compuesto de fórmula I como un ingrediente
activo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y pueden
también contener un vehículo farmacéuticamente aceptable y de forma
opcional otros ingredientes terapéuticos. El término "sales
farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a
partir de bases no tóxicas farmacéuticamente aceptables que incluyen
bases inorgánicas y bases orgánicas. Las sales derivadas de bases
inorgánicas incluyen sales de aluminio, amonio, calcio, cobre,
férricas, ferrosas, litio, magnesio, sales mangánicas, manganosas,
de potasio, sodio, cinc y similares. Se prefieren de forma
particular las sales de amonio, calcio, magnesio, potasio y sodio.
Las sales derivadas de bases no tóxicas orgánicas farmacéuticamente
aceptables incluyen sales de aminas primarias, secundarias y
terciarias, aminas sustituidas que incluyen aminas sustituidas de
origen natural, aminas cíclicas tales como arginina, betaína,
cafeína, colina, N,N-dibenciletilendiamina,
dietilamina, 2-dietilaminoetanol,
2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina,
N-etilmorfolina, N-etilpiperidina,
glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina,
lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, resinas
de poliamida, procaína, purines, teobromo, trietilamina,
trimetilamina, tripropilamina, trometamina y similares y resinas de
intercambio iónico básicas.
Se entenderá que en la descripción de los
procedimientos de tratamiento que siguen, las referencias a los
compuestos de fórmula I también incluyen las sales farmacéuticamente
aceptables.
El compuesto de fórmula I es útil para el alivio
del dolor, fiebre e inflamación de una variedad de afecciones que
incluyen la fiebre reumática, síntomas asociados con la gripe u
otras infecciones víricas, resfriado común, dolor lumbar y
cervical, dismenorrea, dolor de cabeza, dolor de muelas,
dislocaciones y esguinces, miositis, neuralgia, sinovitis, artritis,
incluyendo artritis reumatoide, enfermedades de articulación
degenerativa (osteoartritis), gota y espondilitis alquilosante,
bursitis, quemaduras, heridas tras procedimientos quirúrgicos y
dentales. Además, un compuesto como este puede inhibir las
transformaciones neoplásicas celulares y el crecimiento tumoral
metastásico y por ello se puede usar en el tratamiento del cáncer.
También puede ser de uso el compuesto I en el tratamiento y/o
prevención de trastornos proliferativos mediados por la
ciclooxigenasa tal como los que pueden tener lugar en retinopatía
diabética y angiogénesis tumoral.
El compuesto I también inhibirá la contracción
del músculo liso inducida por prostanoides mediante la prevención de
la síntesis de prostanoides contráctiles y por ello puede ser útil
en el tratamiento de la dismenorrea, parto prematuro, asma y
trastornos relacionados con eosinófilos. También puede ser útil en
el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer y para la prevención de
la pérdida ósea (tratamiento de la osteoporosis) y para el
tratamiento del glaucoma.
En virtud de su alta actividad sobre la
ciclooxigenasa-2 (COX-2) y/o su
especificidad por la ciclooxigenasa-2 frente a la
ciclooxigenasa-1 (COX-1), el
compuesto I se demostrará útil como una alternativa a los fármacos
antiinflamatorios no esteroideos convencionales (AINE) de forma
particular cuando tales fármacos antiinflamatorios no esteroideos
puedan estar contraindicados, tal como en pacientes con úlceras
pépticas, gastritis, enteritis regional, colitis ulcerosa,
diverticulitis o con un historial recurrente de lesiones
gastrointestinales; hemorragia GI, trastornos de coagulación
incluyendo anemia, tal como hipoprotrombinemia, hemofilia u otros
problemas hemorrágicos; enfermedad del riñón; aquellos trastornos
previos a la cirugía o a la toma de anticoagulantes.
De forma similar, el compuesto I, será útil como
un sustituto parcial o completo para los AINE convencionales en
preparaciones en las que actualmente se administran conjuntamente
con otros agentes o ingredientes. Así pues, en aspectos adicionales,
la invención comprende composiciones farmacéuticas para el
tratamiento de enfermedades mediadas por la
ciclooxigenasa-2, tal como se definieron
anteriormente, que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva
no tóxica del compuesto de fórmula I como se definió anteriormente y
uno o más ingredientes tales como aliviadores del dolor incluyendo
acetominofeno o fenacetina; un potenciador que incluye cafeína; un
antagonista H_{2}, aluminio o hidróxido de magnesio, simeticona,
un descongestionante incluyendo fenilefrina, fenilpropanolamina,
pseudofedrina, oximetazolina, epinefrina, nafazolina,
xilometazolina, propilhexedrina o
levo-desoxiefedrina; un antitusivo que incluye
codeína, hidrocodona, caramifeno, carbetapenteno o dextrametorfán;
una prostaglandina que incluye misoprostol, enprostilo, rioprostilo,
ornoprostol o rosaprostol; un diurético, una histamina sedante o no
sedante. Además, la invención comprende un procedimiento de
tratamiento de enfermedades mediadas por la ciclooxigenasa que
comprende: administración a un paciente que necesita tal tratamiento
de una cantidad terapéuticamente efectiva no tóxica del compuesto de
fórmula I, de forma opcional administrado conjuntamente con uno o
más de ingredientes tales como se citaron inmediatamente antes.
Para el tratamiento de cualquiera de estos
trastornos mediados por la ciclooxigenasa, el compuesto I se puede
administrar por vía oral, tópica, parenteral, mediante aerosol por
inhalación o por vía rectal en formulaciones unitarias de
dosificación que contienen vehículos, adyuvantes y portadores
farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales. El término
parenteral tal como se usa en esta invención incluye inyecciones
subcutáneas, intravenosas, intramusculares, inyección intrasternal o
técnicas de infusión. Además del tratamiento de animales de sangre
caliente tales como ratones, ratas, caballos, ovejas, ganado bovino,
ovejas, perros, gatos, etc. el compuesto de la invención es efectivo
en el tratamiento de humanos.
Como se indicó anteriormente las composiciones
farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades mediadas por la
ciclooxigenasa-2, tal como se definieron, pueden
incluir de forma opcional uno o más ingredientes como los citados
anteriormente.
\newpage
Las composiciones farmacéuticas que contienen el
ingrediente activo pueden estar en una forma adecuada para uso oral,
por ejemplo, como comprimidos, trociscos, grageas, suspensiones
acuosas o aceitosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones,
cápsulas duras o blandas, o jarabes o elixires. Las composiciones
que se pretenden para uso oral se pueden preparar de acuerdo con
cualquier procedimiento conocido en la técnica para la preparación
de composiciones farmacéuticas y tales composiciones pueden contener
uno o más agentes seleccionados del grupo formado por agentes
edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes
conservantes con el fin de proporcionar preparaciones
farmacéuticamente elegantes y agradables al paladar. Los comprimidos
contienen el ingrediente activo en mezcla con excipientes
farmacéuticamente aceptables no tóxicos, los cuales son adecuados
para la preparación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser,
por ejemplo, diluyentes inertes, tales como el carbonato de calcio,
carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio;
agentes de granulación y disgregantes, por ejemplo, almidón de maíz
o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo almidón,
gelatina o goma arábiga y agentes lubricantes, por ejemplo,
estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos
pueden estar no recubiertos o se pueden recubrir mediante técnicas
conocidas para retardar la disgregación y la absorción en el tracto
gastrointestinal y con lo cual proporcionan una acción sostenida
durante un periodo de tiempo mayor. Por ejemplo, se puede emplear un
material de retardo temporal tal como el monoestearato de glicerilo
o el diestearato de glicerilo. Estos también pueden ser recubiertos
mediante la técnica descrita en las patentes de Estados Unidos
4.256.108; 4.166.452 y 4.265.874 para formar comprimidos
terapéuticos osmóticos para liberación controlada.
Las formulaciones para uso oral también pueden
estar presentes como cápsulas de gelatina dura en las que el
ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por
ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como
cápsulas de gelatina blanda en las que los ingredientes activos se
mezclan con agua o disolventes miscibles tales como el
propilenglicol, PEG y etanol, o un medio aceitoso, por ejemplo
aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.
Las suspensiones acuosas contienen el material
activo en mezcla con excipientes adecuados para la preparación de
suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión,
por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa,
hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona,
goma de tragacanto y goma arábiga; los agentes de dispersión o
humectantes pueden ser una fosfatida de origen natural, por ejemplo
lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con
ácidos grasos, por ejemplo, el estearato de polioxietileno, o
productos de condensación del óxido de etileno con alcoholes
alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol o
productos de condensación del óxido de etileno con ésteres parciales
derivados de ácidos grasos y un hexitol tal como el monooleato de
polioxietilensorbitol o productos de condensación del óxido de
etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y
anhídridos de hexitol, por ejemplo, el monooleato de
polietilensorbitán. Las suspensiones acuosas pueden contener también
uno o más conservantes, por ejemplo,
p-hidroxibenzoato de etilo o
n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más
agentes aromatizantes y uno o más agentes edulcorantes, tales como
la sacarosa, sacarina o aspartamo.
Se pueden formular suspensiones aceitosas
mediante la suspensión del ingrediente activo en un aceite vegetal,
por ejemplo, aceite de maní, aceite de oliva, aceite de sésamo o
aceite de coco, o en aceite mineral tal como parafina líquida. Las
suspensiones aceitosas pueden contener un agente espesante, por
ejemplo, cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Se pueden
añadir agentes edulcorantes, tales como aquellos indicados
anteriormente, y agentes aromatizantes para proporcionar una
preparación oral agradable al paladar. Estas composiciones se pueden
conservar mediante la adición de un anti-oxidante
tal como el ácido ascórbico.
Los polvos y gránulos dispersables, adecuados
para la preparación de una suspensión acuosa con la adición de agua,
proporcionan el ingrediente activo en mezcla con un agente
dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más
conservantes. Los agentes dispersantes o humectantes y agentes de
suspensión adecuados se ejemplifican mediante los ya indicados
anteriormente. También pueden estar presentes excipientes
adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, aromatizantes y
colorantes.
Las composiciones farmacéuticas de la invención
pueden estar también en forma de una emulsión
aceite-en-agua. La fase de aceite
puede ser un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de oliva o aceite
de maní, o un aceite mineral, por ejemplo, parafina líquida o
mezclas de estos. Agentes emulsionantes adecuados pueden ser
fosfatidas de origen natural, por ejemplo, haba de soja, lecitina y
ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos
de hexitol, por ejemplo, monooleato de sorbitán y productos de
condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por
ejemplo, monooleato de polioxi-etilensorbitán. Las
emulsiones pueden contener también agentes edulcorantes y
aromatizantes.
Se pueden formular jarabes y elixires con agentes
edulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilenglicol, sorbitol o
sacarosa. Tales formulaciones pueden contener también un emoliente,
un conservante y agentes aromatizantes y colorantes. Las
composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una suspensión
acuosa u oleagenosa inyectable estéril. Esta suspensión se puede
formular de acuerdo con la técnica conocida usando aquellos agentes
dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados que se
han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril
puede también ser una solución o suspensión inyectable estéril en un
diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico, por
ejemplo, como una solución en
1,3-butano-diol. Entre los vehículos
y disolventes aceptables que se pueden usar se encuentran el agua,
solución de Ringer y solución de cloruro de sodio isotónica. También
se pueden usar disolventes conjuntos tales como etanol,
propilenglicol o polietilenglicoles. Además, se usan de forma
convencional aceites fijados estériles como un disolvente o medio de
suspensión. Para este fin se puede usar cualquier aceite fijado
blando incluyendo mono- o diglicéridos. Además, los ácidos grasos
tales como el ácido oleico se usan en la preparación de
inyectables.
Se puede administrar también el compuesto I en
forma de un supositorio para la administración rectal del fármaco.
Estas composiciones se pueden preparar mediante mezcla del fármaco
con un excipiente no irritante adecuado, el cual es sólido a
temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura del recto y
se fundirá, por tanto, en el recto para liberar el fármaco. Tales
materiales son la mateca cacao y los polietilenglicoles.
Para uso tópico se usan cremas, ungüentos, geles,
soluciones o suspensiones, etc., que contienen el compuesto de
fórmula I. (Para los fines de esta solicitud la aplicación tópica
incluirá colutorios y gargarismos). Las formulaciones tópicas pueden
estar constituidas generalmente por un vehículo farmacéutico,
co-disolvente, emulsionante, potenciador de
penetración, sistema conservante y emoliente.
Son usuales niveles de dosificación del orden de
aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 140 mg/kg de peso corporal
por día en el tratamiento de las afecciones anteriormente indicadas,
o de forma alternativa de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 7
g por paciente por día. Por ejemplo, la inflamación se puede tratar
de forma efectiva mediante la administración de aproximadamente 0,01
a 50 mg del compuesto por kilogramo de peso corporal por día, o de
forma alternativa de aproximadamente 0,5 mg a aproximadamente 3,5 g
por paciente por día.
La cantidad de ingrediente activo que se puede
combinar con los materiales vehículo para producir una forma de
dosificación simple variará dependiendo del huésped tratado y del
modo particular de administración. Por ejemplo, una formulación que
se pretenda para administración oral de humanos puede contener de
0,5 mg a 5 g de agente activo compuesto con una cantidad apropiada y
conveniente de material vehículo, que puede variar de
aproximadamente el 5 a aproximadamente el 95 por ciento de la
composición total. Las formas unitarias de dosificación contendrán
por lo general entre aproximadamente 1 mg y aproximadamente 500 mg
de un ingrediente activo, de forma típica de 25 mg, 50 mg, 100 mg,
200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 800 mg o 1000 mg.
Se entenderá, no obstante, que el nivel de dosis
específico para cualquier paciente concreto dependerá de una
variedad de factores que incluyen la edad, peso corporal, salud
general, sexo, dieta, tiempo de administración, ruta de
administración, velocidad de excreción, combinación del fármaco y de
la gravedad de la enfermedad particular que se somete a terapia.
Los compuestos de la presente invención se pueden
preparar de acuerdo con los siguientes procedimientos.
Procedimiento
A
Se hace reaccionar una
5-hidroxi-4-(4-metilsulfonil)fenil-5H-furan-2-ona
sustituida en la posición 3 de forma apropiada II (documento WO
9636623) con hidracina en un disolvente alcohólico, tal como etanol,
bajo condiciones de reflujo para dar el intermedio III, el cual se
alquila a continuación con un electrófilo adecuado en presencia de
una base alcalina tal como el hidróxido de sodio en un disolvente
tal como DMF para dar la piridazinona IV.
Y = halógeno,
sulfonato
Procedimiento
B
Se hace reaccionar una
5-hidroxi-4-(4-metilsulfonil)fenil-5H-furan-2-ona
sustituida en la posición 3 de forma apropiada II con una hidracina
sustituida de forma apropiada o su sal clorhidrato en un disolvente
alcohólico, tal como etanol, bajo condiciones de reflujo para dar
la piridazinona IV.
Procedimiento
C
Se broma una
4-(metilsulfonil)fenil-5H-furan-2-ona
sustituida en la posición 3 de forma apropiada V (documento WO
9500501) con NBS en un disolvente clorado o con bromo en HOAc. Se
transforma el bromuro VI en el intermedio hidroxi II en THF \cdot
H_{2}O con una cantidad catalítica de ácido, tal como HOAc, bajo
condiciones de reflujo. Se transforma luego el intermedio II en la
piridazinona IV seguido del procedimiento A o procedimiento B.
\vskip1.000000\baselineskip
Procedimiento
D
Se alquila la
4,5-dibromo-2H-piridazin-3-ona
VII con un electrófilo apropiado en presencia de una base alcalina,
tal como carbonato de cesio o hidróxido de sodio, en un disolvente
tal como DMF. Se hace reaccionar luego el intermedio alquilado VIII
con un hidróxido alcalino bajo condiciones de transferencia de fase
para dar el intermedio hidroxi IX. Se prepara el correspondiente
triflato del compuesto IX bajo condiciones convencionales y luego se
acopla con el ácido 4-(metilito)fenilborónico en presencia
de catalizador de paladio (0) y una base tal como carbonato de
sodio y se sigue de oxidación con mCPBA o MMPP para dar el
intermedio mono-bromo X. El acoplamiento del
compuesto X con un ácido borónico apropiado en presencia de un
catalizador de paladio (0) y una base, tal como el carbonato de
sodio, da lugar a la piridazinona IV.
Procedimiento
E
Se hace reaccionar una
4-bromo-2H-piridazin-3-ona
sustituida de forma apropiada X con un nucleófilo apropiado en
presencia de una base alcalina, tal como carbonato de cesio, para
dar la piridazinona I.
Procedimiento
F
El intermedio mono-bromo X
también se prepara mediante el acoplamiento catalizado con paladio
(0) del ácido 4-(metilito)fenilborónico con el intermedio
dibromo VIII para dar una mezcla del regio-isómero
deseado, el otro regio-isómero y el producto de
acoplamiento bis. El regio-isómero deseado se separa
mediante cromatografía ultrarrápida en columna seguida de oxidación
con un agente oxidante tal como mCPBA, oxona o MMPP para dar el
intermedio X.
Procedimiento
G
Se transforma el ácido tetrónico XI en la
bromolactona XII mediante tratamiento con bromuro de oxalilo y luego
se acopla con el ácido 4-(metilito)fenilborónico en
presencia de un catalizador de paladio (0) y una base tal como
carbonato de sodio para dar el intermedio XIII. La brominación de
XIII en un disolvente tal como CH_{2}Cl_{2} seguida de oxidación
con un agente oxidante, tal como el MMPP, proporciona la
3-bromolactona XIV. La bromolactona XIV se bromina
luego con NBS en un disolvente clorado, tal como el CHCl_{3}, y a
continuación se hidroliza el intermedio 5-bromo en
THF \cdot H_{2}O con una cantidad catalítica de ácido, tal como
HOAc, para dar la
5-hidroxi-3-bromolactona
XV. Se hace reaccionar la lactona XV con hidracina en disolvente
alcohólico a reflujo, tal como EtOH, para dar la
4-bromo-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona
XVI. La reacción con un electrófilo apropiado proporciona el
intermedio 4-bromo-piridazinona
X.
La tabla I ilustra compuestos nuevos de la
presente invención
\vskip1.000000\baselineskip
El compuesto I se puede comprobar usando los
siguientes ensayos para determinar su actividad de inhibición de la
ciclooxigenasa-2.
Se usan para el ensayo líneas celulares de ovario
de hámster chino (CHO), las cuales se han transfectado de forma
estable con un vector de expresión eucariótico pCDNAIII que contiene
bien ADN de COX-1 o bien de COX-2
humano. Estas líneas celulares se designan como
[hCOX-1] de CHO y [hCOX-2] de CHO
respectivamente. Para los ensayos de la ciclooxigenasa se recogen
mediante centrifugación (300 x g, 10 minutos) células
[hCOX-1] de CHO de los cultivos en suspensión y
células [hCOX-2] de CHO preparadas mediante
tripsinización de cultivos adherentes y se lavan una vez en HBSS que
contiene HEPES 15 mM, pH 7,4, y se suspenden nuevamente en HBSS,
HEPES 15 mM, pH 7,4, a una concentración de células de 1,5 x
10^{6} células/ml. Se disuelven los fármacos que se van a probar
en DMSO hasta 66,7 veces la concentración de fármaco de prueba
máxima. Se prueban los compuestos típicamente a 8 concentraciones
por duplicado usando diluciones en serie en DMSO de 3 veces la
concentración de fármaco máxima. Se preincuban las células (0,3 x
10^{6} células en 200 \mul) con 3 \mul del fármaco de prueba
o vehículo DMSO durante 15 minutos a 37ºC. Se preparan soluciones
de trabajo de peróxido libre de AA (AA 5,5 \muM y 110 \muM para
los ensayos de [hCOX-1] de CHO y
[hCOX-2] de CHO, respectivamente) mediante una
dilución de 10 veces de una solución de AA concentrada en etanol en
HBSS que contiene HEPES 15 mM, pH 7,4. Se exponen luego las células
a presencia o ausencia de fármaco con la solución AA/HBSS para dar
una concentración final de AA de 0,5 \muM en el ensayo de
[hCOX-1] de CHO y una concentración final de AA de
10 \muM en el ensayo de [hCOX-2] de CHO. Se
finaliza la reacción mediante la adición de 10 \mul de HCl 1 N
seguido de neutralización con 20 \mul de NaOH 0,5 N. Se
centrifugan las muestras a 300 x g a 4ºC durante 10 minutos y se
diluye aproximadamente una alícuota del sobrenadante clarificado
para la determinación de los niveles de PGE_{2} usando un
inmunoensayo relacionado con el enzima para el PGE_{2} (kit de
inmunoensayo del enzima PGE_{2} correlacionado, Assay Designs,
Inc.). Se determina la actividad de la ciclooxigenasa en ausencia
de compuestos de prueba como la diferencia en los niveles de
PGE_{2} de células expuestas con ácido araquidónico frente a los
niveles de PGE_{2} en células expuestas a medio fingido con
vehículo etanol. Se calcula la inhibición de la síntesis de
PGE_{2} por parte de los compuestos de prueba como el porcentaje
de actividad en presencia de fármaco frente a la actividad en las
muestras de control positivo.
Se sedimentan células U 937 mediante
centrifugación a 500 x g durante 5 minutos y se lavan una vez con
solución salina tamponada con fosfato y se agregan de nuevo. Se
suspenden nuevamente las células en tampón de homogenización formado
por Tris-HCl 0,1 M, pH 7,4, EDTA 10 mM, leupeptina 2
\mug/ml, inhibidor de la tripsina de haba de soja 2 \mug/ml,
aprotinina 2 \mug/ml y fluoruro de fenilmetilsulfonilo 1 mM. Se
somete a ultrasonidos la suspensión de células 4 veces durante 10
segundos y se centrifuga a 10.000 x g durante 10 minutos a 4ºC. Se
centrifuga el sobrenadante a 100.000 x g durante 1 hora a 4ºC. Se
suspende nuevamente el sedimento microsomal a 100.000 x g en
Tris-HCl 0,1 M, pH 7,4, EDTA 10 mM hasta
aproximadamente 7 mg de proteína / ml y se almacena a -80º C.
Se descongelan preparaciones microsomales
inmediatamente antes de su uso, se someten brevemente a ultrasonidos
y luego se diluyen hasta una concentración de proteína de 125
\mug/ml en tampón de Tris-HCl 0,1 M, pH 7,4, que
contiene EDTA 10 mM, fenol 0,5 mM, glutationa reducida 1 mM y
hematina 1 \muM. Se llevan a cabo ensayos por duplicado en un
volumen final de 250 \mul. Inicialmente se añaden 5 \mul de
vehículo de DMSO o fármaco en DMSO a 20 \mul de tampón
Tris-HCl 0,1 M, pH 7,4, que contiene EDTA 10 mM en
pocillos de una placa de títulos de polipropileno de 96 pocillos. Se
añaden luego 200 \mul de la preparación microsomal y se preincuba
durante 15 minutos a temperatura ambiente antes de la adición de 25
\mul de ácido araquidónico 1 M en Tris-HCl 0,1 M
y EDTA 10 mM, pH 7,4. Se incuban las muestras durante 40 minutos a
temperatura ambiente y se detiene la reacción mediante la adición de
25 \mul de HCl 1 N. Se neutralizan las muestras con 25 \mul de
NaOH 1 N antes de la cuantificación del contenido en PGE_{2}
mediante ensayo radioinmune (Dupont-NEN o kits de
ensayo Amersham). Se define la actividad de la ciclooxigenasa como
la diferencia entre los niveles de PGE_{2} en muestra incubadas
en presencia de ácido araquidónico y vehículo de etanol.
Se mide la actividad del enzima usando un ensayo
cromogénico basado en la oxidación de la
N,N,N',N'-tetrametil-p-fenilendiamina
(TMPD) durante la reducción de PGG_{2} a PGH_{2} mediante la
COX-2 (Copeland y col. (1994) Proc. Natl. Acad.
Sci. 91, 11202 - 11206). Se purifica la COX-2
recombinante humana a partir de células Sf9 como se describió
previamente (Percival y col. (1994) Arch. Biochem. Biophys. 15, 111
- 118). La mezcla de ensayo (180 \mul) contiene fosfato de sodio
100 mM, pH 6,5, genapol X-100 2 mM, hematina 1
\muM, gelatina 1 mg/ml, 80 - 100 unidades de enzima purificado
(una unidad de enzima se define como la cantidad de enzima requerida
para producir un cambio O.D. de 0,001 / min a 610 nm) y 4 \mul del
compuesto de prueba en DMSO. Se preincuba la mezcla a temperatura
ambiente (22ºC) durante 15 minutos antes del inicio de la reacción
enzimática mediante la adición de 20 \mul de una solución
sometida a ultrasonidos de ácido araquidónico 1 mM (AA) y TMPD 1 mM
en tampón de ensayo (sin enzima o hematina). Se mide la actividad
enzimática mediante estimación de la velocidad inicial de la
oxidación de TMDP durante los primeros 36 segundos de la reacción.
Se observa una velocidad no específica de oxidación en ausencia de
enzima (0,007 - 0,010 O. D. / min) y se sustrae antes del cálculo
del % de inhibición. Los valores de CI_{50} se derivan de un
análisis de regresión no lineal por míninos cuadrados de 4
parámetros de la representación de log-dosis frente
a inhibición en %.
La sangre completa humana proporciona un medio
rico en proteína y células apropiado para el estudio de la eficacia
bioquímica de compuestos anti-inflamatorios, tales
como los inhibidores de la COX-2 selectivos. Los
estudios han mostrado que la sangre humana normal no contiene el
enzima COX-2. Esto está de acuerdo con la
observación de que los inhibidores de la COX-2 no
presentan efecto sobre la producción de PGE_{2} en la sangre
normal. Estos inhibidores son activos sólo tras incubación de sangre
completa humana con LPS, lo cual induce la COX-2.
Este ensayo se puede usar para evaluar el efecto inhibitorio de los
inhibidores de la COX-2 selectivos sobre la
producción de PGE_{2}. Así mismo, las plaquetas en sangre completa
contienen una gran cantidad del enzima COX-1.
Inmediatamente tras la coagulación de la sangre se activan las
plaquetas mediante un mecanismo mediado por la trombina. Esta
reacción da lugar a la producción de tromboxano B_{2} (TxB_{2})
mediante la activación de la COX-1. Así pues, se
puede examinar el efecto de los compuestos de prueba sobre los
niveles de TxB_{2} tras la coagulación sanguínea y usar como un
índice para la actividad de la COX-1. Por lo tanto,
el grado de selectividad por parte del compuesto de prueba se puede
determinar mediante la medida de los niveles de PGE_{2} tras la
inducción con LPS (COX-2) y TxB2 tras la coagulación
sanguínea (COX-1) en el mismo ensayo.
Se recoge sangre fresca en tubos heparinizados
mediante punción en vena de voluntarios tanto masculinos como
femeninos. Los sujetos no presentan aparentemente afecciones
inflamatorias y no había tomado AINE alguno durante al menos 7 días
antes de la extracción de sangre. Se obtiene plasma de forma
inmediata a partir de una alícuota de 2 ml para usar como blanco
(cantidad basal de PGE_{2}). Se incuba la sangre restante con LPS
(concentración final de 100 \mug/ml, Sigma Chem,
#L-2630 de E. coli; diluido con BSA al 0,1%
(solución salina tamponada con fosfato) durante 5 minutos a
temperatura ambiente. Se incuban alícuotas de quinientos \mul de
sangre bien con 2 \mul de vehículo (DMSO) o con 2 \mul de un
compuesto de prueba a concentraciones finales que varían de 10 nM a
30 \muM durante 24 horas a 37ºC. Al final de la incubación se
centrifuga la sangre a 12.000 x g durante 5 minutos para obtener el
plasma. Se mezcla una alícuota de 100 \mul de plasma con 400
\mul de metanol para la precipitación de la proteína. Se obtiene
el sobrenadante y se analiza en cuanto a PGE_{2} usando un kit de
ensayo radioinmune (Amersham, RPA#530) tras conversión de PGE_{2}
en su derivado de oximato de metilo de acuerdo con el procedimiento
del fabricante.
Se recoge sangre fresca en tubos vacutainer que
no contienen anticoagulantes. Se transfieren alícuotas de 500 \mul
de forma inmediata a tubos de microcentrífuga siliconizados
cargados previamente con 2 \mul bien de DMSO o de un compuesto de
prueba a concentraciones finales que varían de 10 nM a 30 \muM. Se
centrifugan los tubos y se incuban a 37ºC durante 1 hora para dejar
que la sangre se coagule. Al final de la incubación se obtiene suero
mediante centrifugación (12.000 x g durante 5 minutos). Se mezcla
una alícuota de 100 \mul de suero con 400 \mul de metanol para
la precipitación de la proteína. Se obtiene el sobrenadante y se
analiza en cuanto a TxB_{2} usando un kit de inmunoensayo de
enzima (Cayman, #519031) de acuerdo con la instrucción del
fabricante.
Se mantienen en ayunas ratas
Sprague-Dawley macho (150 - 200 g) durante la noche
y se administra, por vía oral, bien vehículo (metocel al 1% o Tween
80 al 5%) o un compuesto de prueba. Una hora después, se traza una
línea usando un marcador permanente a la altura por encima del
tobillo en una pata trasera para definir el área de la pata a
controlar. El volumen de la pata (V_{0}) se mide usando un
pletismómetro (Ugo-Basile, Italia) basado en el
principio del desplazamiento de agua. Se inyectan luego los animales
subplantalmente con 50 ml de solución de carragenina al 1% en
solución salina (FMC Corp, Maine) en la pata usando una jeringuilla
de insulina con una aguja calibre 25 (es decir, 500 mg de
carragenina por pata). Tres horas después se mide el volumen de la
pata (V_{3}) y se calcula el aumento en el volumen de la pata
(V_{3}-V_{0}). Se sacrifican los animales
mediante asfixia con CO_{2} y se valora la ausencia o presencia
de lesiones en el estómago. Se comparan los datos con los valores
del vehículo-control y se calcula la inhibición en
porcentaje. Se codifican todos los grupos de tratamiento para
eliminar sesgos del
observador.
observador.
Se mantienen en ayunas ratas
Sprague-Dawley macho (150 - 200 g) durante 16 - 18
horas antes del uso. A aproximadamente las 9:00 a.m., se colocan los
animales temporalmente en dispositivos de restricción de movimientos
de plexiglás y se registra su temperatura del recto basal usando una
sonda de temperatura flexible (YSI serie 400) conectada a un
termómetro digital (modelo 08502, Cole Parmer). Se usan la misma
prueba y termómetro para todos los animales para reducir el error
experimental. Se devuelven los animales a sus jaulas tras las
medidas de temperatura. En tiempo cero se inyectan las ratas por vía
intraperitoneal bien con solución salina o con LPS (Sigma Chem, 2
mg/kg) y se mide la temperatura del recto a las 5, 6 y 7 horas tras
la inyección con LPS. Después de la medida a las 5 horas, cuando el
aumento en temperatura ha alcanzado una meseta, se administra a las
ratas inyectadas con LPS bien el vehículo (metocel al 1%) o un
compuesto de prueba por vía oral para determinar si el compuesto
podría revertir la pirexia. Se calcula la reversión en porcentaje de
la pirexia usando la temperatura del recto obtenida a las 7 horas en
el grupo de control (tratado con vehículo) como el punto de
referencia (reversión nula). Se toma como reversión completa de la
pirexia al valor basal previo a LPS como el 100%.
Se implantaron sondas de temperatura
quirúrgicamente bajo la piel abdominal en un grupo de monos ardilla
(Saimiri sciureus) (1,0 - 1,7 kg). Esto permite el
seguimiento de la temperatura corporal en monos sin movimiento
restringido conscientes mediante un sistema sensor telemétrico (Data
Sciences International, Minnesota). Se mantuvieron los animales en
ayunas y se colocaron en jaulas individuales para aclimatación 13 -
14 horas antes del uso. Se instalaron receptores electrónicos en el
lateral de las jaulas los cuales recogen las señales de las sondas
de temperatura implantadas. A aproximadamente las 9:00 a.m. en el
día del experimento se restringió el movimiento de los monos
temporalmente en sillas de adiestramiento y se les administró un
bolo por inyección intravenosa de LPS, (6 mg/kg, disuelto en
solución salina estéril). Se devolvieron los animales a sus jaulas
y se registró la temperatura corporal de forma continua cada 5
minutos. Dos horas después de la inyección de LPS, cuando la
temperatura corporal había aumentado en 1,5 - 2ºC, se dosificaron
los monos por vía oral bien con vehículo (metocel al 1%) o un
compuesto de prueba (3 mg/kg). Cien minutos después se determinó la
diferencia entre la temperatura corporal y el valor basal. Se
calculó la inhibición en porcentaje tomando el valor en el grupo de
control como inhibición
del 0%.
del 0%.
Se llevaron a cabo los experimentos usando ratas
Sprague-Dawley macho (90 - 110 g). Se indujo la
hiperalgesia a compresión mecánica de la pata trasera mediante
inyección intraplantal de carragenina (4,5 mg en una pata trasera) 3
horas previamente. Los animales de control recibieron un volumen
equivalente de solución salina (0,15 ml intraplantal). Se administró
un compuesto de prueba (0,3 - 30 mg/kg, suspendido en metocel al
0,5% en agua destilada) o vehículo (metocel al 0,5%) por vía oral (2
ml/kg) dos horas después del carragenina. Se midió la respuesta de
vocalización a compresión de la pata trasera una hora después usando
un algesiómetro Ugo Basile.
Se llevó a cabo el análisis estadístico para la
hiperalgesia inducida por carragenina usando un ANOVA de una vía
(BMDP Statistical Software Inc.). Se determina la hiperalgesia
mediante la sustracción del umbral de vocalización en ratas
inyectadas con solución salina inyectada del obtenido en animales
inyectados con carragenina. Las valoraciones de hiperalgesia para
ratas tratadas con fármaco se expresaron como un porcentaje de esta
respuesta. Los valores DI_{50} (la dosis que produce el 50% de la
respuesta máxima observada) se calcularon luego mediante análisis de
regresión por mínimos cuadrados no lineal de datos medios usando
GraFit (Erithacus Software).
Se pesaron setenta ratas Lewis hembra de 6,5 -
7,5 semanas (peso corporal aproximadamente 146 - 170 g), se marcaron
en la oreja y se asignaron a grupos (un grupo de control negativo en
el que no se indujo la artritis, un grupo de control con vehículo,
un grupo de control positivo a los que se administró indometacina a
una dosis diaria total de 1 mg/kg y se administró a cuatro grupos
compuesto de prueba a dosis diarias totales de 0,10 - 3,0 mg/kg) de
modo que los pesos corporales eran equivalentes dentro de cada
grupo. Se inyectaron seis grupos de 10 ratas cada uno en la pata
trasera con 0,5 mg de Mycobacterium butyricum en 0,1 ml de
aceite mineral ligero (adyuvante), y no se inyectó un grupo de
control negativo de 10 ratas con adyuvante. Se determinaron los
pesos corporales, los volúmenes de la pata contralateral
(determinados mediante pletismografía por desplazamiento de
mercurio) y radiografías laterales (obtenidas con anestesia de
cetamina y xilazina) antes (día -1) y 21 días después de la
inyección de adyuvante, y se determinaron los volúmenes de la pata
primarios antes (día -1) y en los días 4 y 21 tras la inyección de
adyuvante. Se anestesiaron las ratas con una inyección intramuscular
de 0,03 - 0,1 ml de una combinación de cetamina (87 mg/kg) y
xilazina (13 mg/kg) para las radiografías e inyección de adyuvante.
Se hicieron radiografías de las patas traseras tanto el día 0 como
el día 21 usando el Faxitron (45 kVp, 30 segundos) y película Kodak
X-OMAT TL, y se desarrollaron en un procesador
automatizado. Se evaluaron las radiografías en cuanto a cambios en
tejidos blandos y duros por parte de un investigador que era ajeno
al tratamiento experimental. Se graduaron los siguientes cambios
radiográficos numéricamente de acuerdo con la gravedad: mayor
volumen de tejido blando (0-4), estrechamiento o
ensanche de los espacios de articulaciones (0-5),
erosión subcondral (0-3), reacción periosteal
(0-4), osteolisis (0-4), subluxación
(0-3) y cambios de articulaciones degenerativos
(0-3). Se usaron criterios específicos para
establecer el grado numérico de gravedad para cada cambio
radiográfico. La valoración máxima posible por pie fue de 26. Se
administraron un compuesto de prueba a dosis diaria total de 0,1,
0,3, 1 y 3 mg/kg/día, indometacina a una dosis diaria total de 1
mg/kg/día, o vehículo (metocel al 0,5% en agua estéril) dos veces al
día por vía oral comenzando tras la inyección del adyuvante y
continuando durante 21 días. Se prepararon los compuestos
semanalmente, se refrigeraron en oscuridad hasta su uso y se
mezclaron con agitación de forma inmediata antes de la
administración.
administración.
Se aplicó un análisis de dos factores
("tratamiento" y "tiempo") de la varianza con medidas
repetidas en el "tiempo" a los cambios en % para el peso
corporal y volúmenes del pie y a las valoraciones totales
radiográficas transformadas a escala. Se llevó a cabo un ensayo de
Dunnett post hoc para comparar el efecto de los tratamientos
respecto en el vehículo. Se aplicó un ensayo de una vía de la
varianza a los pesos del timo y del bazo seguido de un ensayo de
Dunnett para comparar el efecto de los tratamientos respecto en el
vehículo. Se ajustan curvas dosis - respuesta para la inhibición en
% en volúmenes del pie en los días 4, 14 y 21 mediante una función
logística de 4 parámetros usando una regresión de mínimos cuadrados
no lineal. Se define la DI_{50} como la dosis que se corresponde
con una reducción del 50% respecto del vehículo y se deriva
mediante interpolación a partir de la ecuación de
4-parámetros
ajustada.
ajustada.
- Se alojan, se alimentan y cuidan los animales de acuerdo con las Directrices del Consejo Canadiense del Cuidado de los Animales.
- Se mantienen en ayunas ratas Sprague-Dawley macho (325 - 375 g) durante la noche antes de cada estudio de nivel en sangre en administración PO (por vía oral).
- Se colocan las ratas en el dispositivo de restricción de movimientos una de cada vez y se asegura la caja firmemente.
- Se obtiene la muestra sanguínea inicial mediante un corte de un trozo pequeño (1 mm o menos) de la punta de la cola. La cola se escurre luego con un movimiento firme pero suave desde la parte superior hasta la inferior para extraer la sangre.
- Se recoge aproximadamente 1 ml de sangre en un tubo vacutainer heparinizado.
Se preparan los compuestos como se requiere en un
volumen de dosificación convencional de 10 ml/kg y se administran
por vía oral mediante paso de una aguja de calibre 16 de 3 pulgadas
(7,62 cm) dentro del estómago.
Las sangrías subsiguientes se recogen de la misma
manera que la sangría inicial excepto que no hay necesidad de cortar
la cola de nuevo. Se limpia la cola con un trozo de gasa y se
extrae/escurre como se describe anteriormente dentro de los tubos
marcados de forma apropiada.
Inmediatamente después del muestreo se centrifuga
la sangre, se separa se pone en viales claramente marcados y se
almacena en un refrigerador hasta ser analizada.
Los puntos de tiempo típicos para la
determinación de niveles en sangre de rata tras dosificación por vía
oral son:
0, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6
h
Después de la sangría en el punto de tiempo de 4
horas se proporciona alimento a las ratas a voluntad. Se proporciona
agua en todo momento durante el estudio.
Se pueden usar los siguientes vehículos en las
determinaciones de nivel de sangre en rata en administración PO
| PEG 200/300/400: | restringido a 2 ml/kg |
| Metocel al 0,5% - 1,0%: | 10 ml/kg |
| Tween 80: | 10 ml/kg |
Los compuestos para los niveles en sangre en
administración PO pueden estar en forma de suspensión. Para una
mejor disolución la solución se puede colocar en un baño de
ultrasonidos durante aproximadamente 5 minutos.
Para el análisis se diluyen alícuotas con un
volumen igual de acetonitrilo y se centrifugan para eliminar el
precipitado de proteína. Se inyecta el sobrenadante directamente
sobre una columna de HPLC (cromatografía líquida de alta resolución)
C-18 con detección por radiación UV. Se realiza la
cuantificación de forma relativa respecto a una muestra sanguínea
limpia con una cantidad conocida de trazas de fármaco. Se determina
la biodisponibilidad (F) mediante comparación del área bajo la curva
(AUC) por vía intravenosa frente vía oral
F =
\frac{AUCp.o.}{AUCi.v.} \ x \ \frac{DOSISi.v.}{DOSISp.o.} \ x \
100
Las velocidades de aclaramiento se calculan a
partir de la siguiente relación:
CL =
\frac{DOSISi.v.(mg /
kg)}{AUCi.v.}
Las unidades de CL son ml/h\cdotkg (mililitros
por hora kilogramo)
Se alojan, alimentan y cuidan los animales de
acuerdo con las Directrices del Consejo Canadiense del Cuidado de
los Animales.
Se colocan ratas Sprague-Dawley
macho (325 - 375 g) en jaulas tipo caja de zapatos de plástico con
una planta suspendida, tapa de jaula, botella de agua y
alimento.
Se prepara el compuesto como se requiera en un
volumen de dosificación convencional de 1 ml/kg.
Se extrae sangre de las ratas para la muestra de
sangre inicial y se dosifican bajo sedación con CO_{2}. Se colocan
las ratas, de una en una, en una cámara alimentada con CO_{2} y
se retiran tan pronto como pierden su reflejo de enderezamiento. La
rata se coloca luego en una placa de restricción de movimientos, se
coloca una máscara de nariz con liberación de CO_{2} sobre el
hocico y se ata la rata a la tabla con cintas elásticas. Se deja
expuesta con la ayuda de tenazas y tijeras la vena yugular y se
toma la muestra inicial, seguido de una dosis medida de compuesto
que se inyecta en la vena yugular. Se aplica una ligera presión con
los dedos en el lugar de la inyección y se retira la máscara de
nariz. Se anota el tiempo. Este constituye el punto de tiempo
inicial.
La sangría de 5 minutos se lleva a cabo mediante
el corte de una pieza (1-2 mm) de la punta de la
cola. Se escurre luego la cola con un movimiento firme pero suave
desde la parte superior hasta la parte inferior para extraer la
sangre de la cola. Se recoge aproximadamente 1 ml de sangre en un
vial de recogida heparinizado. Se recogen sangrías subsiguientes de
la misma forma, excepto en que no es necesario el corte de la cola
de nuevo. La cola se limpia con un trozo de gasa y se hace sangrar,
como se describió anteriormente, en tubos marcados de forma
apropiada.
Los puntos de tiempo típicos para la
determinación de niveles en sangre de rata tras dosificación
intravenosa son:
0,5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h,
6
h
o 0,5 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6
h
Se pueden usar los siguientes vehículos en las
determinaciones de nivel en sangre de rata por vía intravenosa:
| Dextrosa: | 1 ml/kg |
| Moleculosol al 25%: | 1 ml/kg |
DMSO (dimetilsulfóxido):
restringido a un volumen de dosis de 0,1 ml por
animal
PEG 200: no más del 60% mezclado
con agua estéril al 40% - 1
ml/kg
Con la dextrosa se puede añadir bien bicarbonato
de sodio o carbonato de sodio si la solución es turbia.
Para el análisis se diluyen alícuotas con un
volumen igual de acetonitrilo y se centrifugan para eliminar el
precipitado de proteína. Se inyecta el sobrenadante directamente a
una columna de HPLC C-18 con detección por radiación
UV. Se realiza la cuantificación respecto a una muestra de sangre
limpia con una cantidad conocida de trazas de fármaco. Se determina
la biodisponibilidad (F) mediante la comparación del área bajo la
curva (AUC) por vía intravenosa frente a vía oral.
F =
\frac{AUCp.o.}{AUCi.v.} \ x \ \frac{DOSISi.v.}{DOSISp.o.} \ x \
100
Las velocidades de aclaramiento se calculan a
partir de la siguiente relación:
CL =
\frac{DOSISi.v.(mg /
kg)}{AUCi.v.}
Las unidades de CL son ml/h\cdotkg (mililitros
por hora kilogramo)
El principal efecto secundario de los AINE
convencionales es su capacidad para producir lesiones gástricas en
el hombre. Se piensa que esta acción es provocada por la inhibición
de la Cox-1 en el tracto gastrointestinal. Las ratas
son particularmente sensibles a las acciones de los AINE. De hecho,
se han usado modelos de rata comúnmente en el pasado para evaluar
los efectos secundarios gastrointestinales de los AINE
convencionales actuales. En el presente ensayo se observa daño
gastrointestinal inducido por AINE mediante la medida de excreción
de ^{51}Cr fecal tras inyección sistémica de células sanguíneas
rojas marcadas con ^{51}Cr. La excreción de ^{51}Cr fecal es
una técnica bien establecida y sensible para detectar la integridad
gastrointestinal en animales y en el hombre.
Se administra por vía oral a ratas
Sprague-Dawley macho (150 - 200 g) un compuesto de
prueba bien una vez (dosificación aguda) o dos veces al día durante
5 días (dosificación crónica). Inmediatamente tras la administración
de la última dosis se inyectan las ratas por una vena de la cola con
0,5 ml de glóbulos rojos marcados con ^{51}Cr de una rata donante.
Se colocan los animales individualmente en jaulas de metabolismo con
alimento y agua a voluntad. Se recogen las heces durante un periodo
de 48 horas y se calcula la excreción de ^{51}Cr fecal como un
porcentaje de la dosis inyectada total. Se preparan glóbulos rojos
marcados con ^{51}Cr usando los siguientes procedimientos. Se
recogen diez ml de sangre en tubos heparinizados por la vena cava de
una rata donante. Se elimina el plasma mediante centrifugación y se
rellena con igual volumen de HBSS. Se incuban los glóbulos rojos con
400 Ci de ^{51}cromato de sodio durante 30 minutos a 37ºC. Al
final de la incubación se lavan los glóbulos rojos dos veces con 20
ml de HBSS para eliminar el ^{51}cromato de sodio libre. Los
glóbulos rojos se reconstituyen finalmente en 10 ml de HBSS y se
inyecta por rata 0,5 ml de la solución (aproximadamente 20 Ci).
La gastropatía con pérdida de proteínas
(manifestada como la aparición de células circulantes y proteínas
del plasma en el tracto gastrointestinal) es una respuesta adversa
significativa y limitativa de la dosis a fármacos anti-
inflamatorios no esteroideos convencionales (AINE). Esto se puede
determinar de forma cuantitativa mediante la administración por vía
intravenosa de solución de ^{51}CrCl_{3}. Este ion isotópico se
puede unir de modo ávido a las globinas del suero y al retículo
endoplásmico celular. La medida de la radiactividad que aparece en
las heces recogidas durante 24 h tras administración del isótopo
proporciona, por tanto, un índice sensible y cuantitativo de la
gastropatía con pérdida de proteínas.
Se tratan grupos de monos ardilla macho (de 0,8 a
1,4 kg) mediante toma bien de metocel al 1% o de Tween 80 al 5% en
vehículos de H_{2}O, (3 mg/kg dos veces al día) o compuestos de
prueba a dosis de 1 - 100 mg/kg dos veces al día durante 5 días. Se
administra por vía intravenosa ^{51}Cr (5 Ci/kg en solución
salina tamponada con fosfato 1 ml/kg (PBS)) una hora después de la
última dosis de fármaco/vehículo, y las heces recogidas durante 24
horas en una jaula de metabolismo se analizan en cuanto a ^{51}Cr
mediante conteo gamma. Se toma muestras de sangre de la vena 1 hora
y 8 horas tras la última dosis de fármaco y se miden mediante
RP-HPLC (cromatografía líquida de alta resolución en
fase inversa) las concentraciones en plasma de fármaco.
Los compuestos de la presente invención son
inhibidores de la ciclooxigenasa-2 y son por lo
tanto útiles en el tratamiento de enfermedades mediadas por la
ciclooxigenasa-2 como se mencionaron anteriormente.
Las actividades de los compuestos frente a la ciclooxigenasa se
pueden ver en los resultados representativos mostrados a
continuación. En el ensayo, se determina la inhibición mediante la
medida de la cantidad de prostaglandina E_{2} (PGE_{2})
sintetizada en presencia de ácido araquidónico,
ciclooxigenasa-1 o ciclooxigenasa-2
y un inhibidor putativo. Los valores CI_{50} representan la
concentración del inhibidor putativo requerida para volver a una
síntesis de PGE_{2} del 50% de la obtenida en comparación con el
control no inhibido.
Los resultados para algunos de los ensayos
biológicos se pueden ver en la tabla II.
La invención se ilustrará ahora mediante los
siguientes ejemplos en los que, a menos que se indique otra
cosa:
- (i)
- todas las operaciones se llevan a cabo a temperatura del entorno o ambiente, esto es, a una temperatura en el intervalo de 18 - 25ºC;
- (ii)
- la evaporación del disolvente se lleva a cabo usando un evaporador rotatorio a presión reducida (600 - 4000 pascales: 4,5 - 30 mm de Hg) con una temperatura del baño de hasta 60ºC;
- (iii)
- el curso de las reacciones fue seguido mediante cromatografía en capa fina (TLC) y los tiempos de reacción se dan solo a título ilustrativo;
- (iv)
- los puntos de fusión no están corregidos y "d" indica descomposición; los puntos de fusión dados son aquellos obtenidos para los materiales preparados como se describe; el polimorfismo puede dar lugar al aislamiento de materiales con diferentes puntos de fusión en algunas preparaciones;
- (v)
- la estructura y pureza de todos los productos finales se confirma mediante al menos una de las siguientes técnicas: TLC, espectrometría de masas, espectrometría de resonancia magnética nuclear (RMN) o datos microanalíticos;
- (vi)
- los rendimientos se dan sólo a título ilustrativo;
- (vii)
- cuando se dan, los datos de RMN están en la forma de valores delta (d) para los protones de diagnóstico principales, dados en partes por millón (ppm) respecto al tetrametilsilano (TMS) como patrón interno, determinado a 300 MHz o 400 MHz usando el disolvente indicado; las abreviaturas convencionales usadas para la forma de la señal son: s, singlete; d, doblete; t, triplete; m, multiplete; a, ancho; etc.; además "Ar" significa una señal aromática;
- (viii)
- los símbolos químicos presentan sus significados usuales; también se han usado las siguientes abreviaturas v (volumen), p (peso), p.e. (punto de ebullición), P.F. (punto de fusión), l (litro(s)), ml (mililitros), g (gramo(s)), mg (miligramo(s)), mol (moles), mmol (milimoles), eq (equivalente(s)).
(Referencia)
Se somete a reflujo durante la noche una mezcla
de
5-hidroxi-4-(4-metilsulfonil)fenil-3-fenil-5H-furan-2-ona
(330 mg, 1,0 mmol) y fenilhidracina (150 ml, 1,5 mmol) en EtOH (5
ml). Después de enfriar a temperatura ambiente se diluye la mezcla
con H_{2}O y se acidifica con HCl 6 M acuoso. Se recoge el
precipitado formado, se lava con H_{2}O y se seca a presión
reducida para dar el compuesto del título como un polvo amarillo
claro (120 mg, 30%).
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
8,16 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,75 (d, 2H), 7,60 - 7,40 (m, 5H),
7,30 (m, 5H), 3,12 (s, 3H).
(Referencia)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 1, se prepara el compuesto del título a partir de
5-hidroxi-4-(4-metilsulfonil)fenil-3-fenil-5H-furan-2-ona
y metilhidracina.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
7,94 (s, 1H), 7,86 (d, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,25 (m, 5H), 3,79 (s,
3H), 3,10 (s, 3H).
EM (FAB^{+}): m/z 341 (M^{+} + 1).
Etapa
1
Se somete a reflujo una mezcla de
5-hidroxi-4-(4-metilsulfonil)fenil-3-fenil-5H-furan-2-ona
(610 mg, 1,9 mmol) e hidracina (80 ml, 2,6 mmol) en EtOH (10 ml)
durante 4 horas. Después de enfriar hasta temperatura ambiente se
diluye la mezcla con H_{2}O, se acidifica con HCl 6M acuoso y se
agita durante 30 minutos. Se recoge el precipitado formado, se lava
con H_{2}O y se seca a presión reducida para dar el compuesto del
título como un polvo marrón claro (460 mg, 76%).
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
12,32 (sa, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,52 (d, 2H), 7,24 (m,
5H), 3,10 (s, 3H).
Etapa
2
Se añade a una solución de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona
(100 mg, 0,31 mmol) en DMF (1 ml) a temperatura ambiente NaOH 10 M
acuoso (35 ml, 0,35 mmol) seguido de (bromometil)ciclopropano
(50 ml, 0,51 mmol). Se agita la mezcla a temperatura ambiente
durante 1 hora y luego se somete a cromatografía sobre gel de
sílice, se eluye con hexanos:EtOAc (1:1) y se agita con Et_{2}O
para dar el compuesto del título como un polvo blanco (60 mg,
51%).
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
7,98 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,52 (d, 2H), 7,25 (m, 5H), 4,06 (d,
2H), 3,10 (s, 1H), 1,40 (m, 1H), 0,60 - 0,40 (m, 4H).
EM (FAB^{+}): m/z 381 (M^{+} + 1).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 1, se prepara el compuesto del título a partir de
5-hidroxi-4-(4-metilsulfonil)fenil-3-fenil-5H-furan-2-ona
y 2,2,2-trifluoroetilhidracina.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
8,09 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,25 (m, 5H),5,00 (c,
2H), 3,11 (s, 3H).
EM (FAB^{+}): m/z 409 (M^{+} + 1).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2; se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona
y bromuro de bencilo.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
7,99 (s, 1H), 7,85 (d, 2H), 7,60 - 7,20 (m, 12H), 5,38 (s, 2H),
3,10 (s, 3H).
EM (FAB^{+}): m/z 417 (M^{+} + 1)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2; se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona
y 2-yodopropano.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
8,02 (s, 1H), 7,85 (d, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,25 (m, 5H), 5,30 (m,
1H), 3,11 (s, 3H), 2,04 (d, 6H).
EM (FAB^{+}): m/z 369 (M^{+} + 1).
Etapa
1
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 1; se prepara el compuesto del título a partir de
3-(3,4-difluorofenil)-5-hidroxi-4-(4-metilsulfonil)fenil-5H-furan-2-ona
e hidracina.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
12,5 (sa, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,94 (d, 2H), 7,58 (d, 2H), 7,40 -
6,90 (m, 3H), 3,12 (s, 3H).
Etapa
2
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2; se prepara el compuesto del título a partir de
4-(3,4-difluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona
y (bromometil)ciclopropano.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
7,93 (s, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,57 (d, 2H), 7,35 (m, 1H), 7,18 (m,
1H), 6,96 (m, 1H), 4,05 (d, 2H), 3,13 (s, 3H), 1,40 (m, 1H), 0,60 -
0,40 (m, 4H).
EM (FAB^{+}): m/z 417 (M^{+} + 1)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2; se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona
y clorhidrato de cloruro de 2-picolilo (se usa base
extra para el neutralizar la sal clorhidrato).
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
8,52 (m, 1H), 8,02 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,76 (m, 1H), 7,54 (d,
2H), 7,38 (d, 1H), 7,25 (m, 6H), 5,50 (s, 2H), 3,10 (s, 3H).
EM (FAB^{+}): m/z 418 (M^{+} + 1)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2; se prepara el compuesto del título a partir de
4-(3,4-difluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-pirdazin-3-ona
y bromuro de bencilo.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
8,02 (s, 1H), 7,92 (d, 2H), 7,56 (d, 2H), 7,54 - 6,95 (m, 8H), 5,40
(s, 2H), 3,10 (s, 3H).
EM (FAB^{+}): m/z 453 (M^{+} + 1)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona
y bromuro de 4-fluorobencilo.
EM (APCI) m/z 435 (M+H)^{+}
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 3,10 (3H, s),
5,37 (2H, s), 7,12 (2H, t), 7,20 - 7,25 (5H, m), 7,49 (2H, d), 7,55
(2H, m), 7,85 (2H, d), 7,99 (1H, s).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona
y bromoacetato de metilo.
EM (APCI) m/z 399 (M+H)^{+}
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 3,11 (3H, s),
3,76 (3H, s), 4,94 (2H, t), 7,23 - 7,26 (5H, m), 7,53 (2H, d), 7,88
(2H, d), 8,01 (1H, s).
Etapa
1
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 1; se prepara el compuesto del título a partir de
3-(4-fluorofenil)-5-hidroxi-4-(4-metilsulfonil)fenil-5H-furan-2-ona
e hidracina.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
12,38 (sa, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,52 (d, 2H), 7,30 (m,
2H), 7,00 (m, 2H), 3,12 (s, 3H).
Etapa
2
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2; se prepara el compuesto del título a partir de
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona
y bromuro de bencilo.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
8,00 (s, 1H), 7,89 (d, 2H), 7,51 (d, 2H), 7,50 - 7,00 (m, 9H), 5,38
(s, 2H), 3,11 (s, 3H).
EM (FAB^{+}): m/z 435 (M^{+} + 1)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona
y bromuro de 4-carbometoxibencilo.
EM (APCI) m/z 474 (M+H)^{+}
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 3,10 (3H, s),
3,87 (3H, s), 5,46 (2H, s), 7,22 - 7,25 (5H, m), 7,50 (2H, d), 7,59
(2H, d), 7,86 (2H, d), 8,00 (3H, m).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2; se prepara el compuesto del título a partir de
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona
y (bromometil)ciclopropano.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
7,97 (s, 1H), 7,89 (d, 2H), 7,52 (d, 2H), 7,28 (m, 2H), 7,00 (m,
2H), 4,05 (d, 2H), 3,11 (s, 3H), 1,40 (m, 1H), 0,60 - 0,40 (m,
4H).
EM (FAB^{+}): m/z 399 (M^{+} + 1)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona
y cloruro de 3-fluorobencilo.
EM (APCI) m/z 435 (M+H)^{+}
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 3,10 (3H, s),
5,40 (2H, s), 7,08 (1H, m), 7,23 - 7,42 (8H, m), 7,51 (2H, d), 7,86
(2H, d), 8,02 (1H, s).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2; se prepara el compuesto del título a partir de
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona
y bromuro de 4-bromobencilo.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
8,00 (s, 1H), 7,89 (d, 2H), 7,60 - 7,00 (m, 10H), 5,36 (s, 2H),
3,10 (s, 3H).
EM (FAB^{+}): m/z 453 (M^{+} + 1)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona
y cloruro de 2-fluorobencilo.
EM (APCI) m/z 435 (M+H)^{+}, P.F.
167ºC
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 3,10 (3H, s),
5,46 (2H, s), 7,17 - 7,25 (7H, m), 7,37 (1H, m), 7,46 (1H, m), 7,52
(2H, d), 7,86 (2H, d), 8,00 (1H, s).
\newpage
(Referencia)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 1, se prepara el compuesto del título a partir de
3-(4-fluorofenil)-5H-furan-2-ona
y clorhidrato de ciclopropilhidracina (se usa Et_{3}N para
neutralizar la sal clorhidrato).
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
7,81 (s, 1H), 7,77 (d, 2H), 7,52 (m, 2H), 7,43 (d, 2H), 7,30 (m,
2H), 3,50 (m, 1H), 3,06 (s, 3H), 1,10 (m, 2H), 0,88 (m, 2H).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(4-fluorofenil)-2H-piridazin-3-ona
y yoduro de 3,3,3-trifluoropropilo.
EM (APCI) m/z 441 (M+H)^{+}
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 2,87 (2H, s),
3,11 (3H, s), 4,48 (2H, t), 7,03 (2H, t), 7,29 (2H, dd), 7,89 (2H,
d), 8,03 (1H, s).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, se prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(4-fluorofenil)-2H-piridazin-3-ona
y clorhidrato de 4-clorometilpiridina.
EM (APCI) m/z 436 (M+H)^{+}
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 3,11 (3H, s),
5,42 (2H, s), 7,02 (2H, t), 7,28 (2H, dd), 7,37 (2H, d), 7,53 (2H,
d), 7,90 (2H, d), 8,04 (1H, s), 8,54 (2H, d).
Etapa
1
Se calienta una mezcla de
4,5-dibromopiridazin-2H-piridazin-3-ona
(10 g, 40 mmol), bromuro de bencilo (6,84 g, 40 mmol), KOH 8N (5 ml,
40 mmol) y DMF (40 ml) hasta los 50ºC y se hace reaccionar durante
0,5 horas. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente, se vierte
sobre H_{2}O (500 ml) y se extrae dos veces con Et_{2}O (200
ml). Se lavan las capas orgánicas reunidas con salmuera, se seca
con MgSO_{4} y se elimina el disolvente a presión reducida para
dar el compuesto del título que se usa en la siguiente etapa sin más
purificación.
De forma alternativa, se calienta una suspensión
de ácido mucobrómico (80 g, 310 mmol) y diclorhidrato de
bencilhidracina (60 g, 310 mmol) en etanol a reflujo durante 16
horas. Se enfría hasta temperatura ambiente y se añade agua (50 ml)
bajo agitación vigorosa. Se enfría la suspensión en un baño de hielo
y luego se filtra. Se lava el sólido con etanol acuoso al 95% y se
seca al aire. Se agita en hexanos (200 ml) y éter etílico (25 ml),
se filtra y se seca al aire para dar el compuesto del título (58
g).
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 5,30 (2H, s),
7,20 - 7,40 (5H, m), 8,0 (1H, s).
Etapa
2
Se disuelve el resido de la etapa 1 en HMPA (50
ml) y se añade KOH 8N (65 ml). Se calienta la mezcla a
120 - 125ºC y se agita vigorosamente durante 16 horas. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente, se separa la capa acuosa, se diluye con H_{2}O (500 ml) y se acidifica a pH 6 con HCl 6 N bajo agitación vigorosa. Tras enfriamiento en un baño de hielo se recoge el sólido y se seca en aire. Se disuelve en NaOH 1N caliente y se lava una vez con EtOAc. Se acidifica la capa acuosa hasta pH 6 con HCl 6N y se enfría de nuevo en un baño de hielo. Se filtra el sólido y se seca en aire para dar el compuesto del título (4,4 g, 40%).
120 - 125ºC y se agita vigorosamente durante 16 horas. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente, se separa la capa acuosa, se diluye con H_{2}O (500 ml) y se acidifica a pH 6 con HCl 6 N bajo agitación vigorosa. Tras enfriamiento en un baño de hielo se recoge el sólido y se seca en aire. Se disuelve en NaOH 1N caliente y se lava una vez con EtOAc. Se acidifica la capa acuosa hasta pH 6 con HCl 6N y se enfría de nuevo en un baño de hielo. Se filtra el sólido y se seca en aire para dar el compuesto del título (4,4 g, 40%).
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 5,20 (2H, s),
7,20 - 7,35 (5H, m), 7,75 (1H, s), 12,0 - 12,4 (1H, sa).
Etapa
3
Se añade a una solución a 0ºC del alcohol de la
etapa 2 (4,4 g, 16,6 mmol), trietilamina (3 ml, 22 mmol) y
diclorometano (80 ml) gota a gota anhídrido trifluorometanosulfónico
(3,2 ml, 19 mmol) y se hace reaccionar la mezcla a 0ºC durante 1,5
horas. Se vierte la mezcla sobre HCl diluido glacial y se extrae dos
veces con CH_{2}Cl_{2}. Se lavan las capas orgánicas reunidas
con NaHCO_{3} al 10%, salmuera, se seca con MgSO_{4} y se
elimina el disolvente a presión reducida para dar el derivado
sulfonato que se usa de forma inmediata. Se desgasifica una
suspensión del sulfonato, ácido 4-(metilito)fenilborónico
(3,1 g, 18,5 mmol), Na_{2}CO_{3} 2 M (18,5 ml) y THF (100 ml)
mediante paso de un flujo de nitrógeno por la suspensión durante
0,25 horas y se añade Pd(PPh_{3})_{4} (1,09 g,
0,95 mmol). Se calienta la mezcla a reflujo en N2 durante 1,5 horas
y luego se enfría hasta temperatura ambiente. Se vierte sobre agua
(300 ml) y se extrae dos veces con EtOAc. Se lavan las capas
orgánicas reunidas con salmuera, se secan con MgSO_{4} y se
elimina el disolvente a presión reducida. Se purifica el residuo
mediante cromatografía sobre SiO_{2} usando EtOAc y hexanos (1:5)
y dio lugar al compuesto del título (2,37 g, 37%).
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 2,55 (3H, s),
5,35 (2H, s), 7,25 - 7,55 (9H, m), 7,80 (1H, d).
Etapa
4
2-Bencil-4-bromo-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona
Se añade a una suspensión a 0ºC del sulfuro de la
etapa 3 (2,36 g, 6,09 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (30 ml) y metanol
(30 ml) monoperoxiftalato de magnesio (4 g, 6,5 mmol) y se calienta
la mezcla lentamente hasta temperatura ambiente y se agita durante
16 horas. Se vierte sobre H_{2}O glacial (200 ml) y se extrae dos
veces con CH_{2}Cl_{2}. Se lavan las capas orgánicas reunidas
con NaHCO_{3} al 10%, salmuera, se seca con MgSO_{4} y se
elimina el disolvente a presión reducida para dar el compuesto del
título esencialmente puro (1,72 g, 68%).
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 3,20 (3H, s),
5,40 (2H, s), 7,20 - 7,50 (5H, m), 7,80 - 7,90 (3H, m), 8,10 - 8,20
(2H, m).
Etapa
5
Se calienta una suspensión del bromuro de la
etapa 4 (0,419 g, 1 mmol), isopropanol (1 ml), en DMF (5 ml) y
Cs_{2}CO_{3} (0,975 g, 3 mmol) a 70 - 80ºC y se hace reaccionar
durante 3 horas. Se enfría hasta temperatura ambiente, se vierte
sobre H_{2}O (20 ml) y se extrae dos veces con EtOAc. Se lavan las
capas orgánicas reunidas con salmuera, se seca sobre MgSO_{4} y se
elimina el disolvente a presión reducida. Se purifica el residuo
mediante cromatografía sobre SiO_{2} usando EtOAc y hexanos (1:1)
y se agita en Et_{2}O para dar el compuesto del título (0,12 g,
30%).
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 1,10 - 1,20
(6H, d), 3,20 (3H, s), 5,30 (2H, s), 5,40 - 5,60 (1H, m), 7,20 -
7,50 (5H, m), 7,85 - 8,10 (5H, m).
EM (Cl, CH_{4}) m/z 399 (M+H)^{+}
Se calienta una suspensión del bromuro de la
etapa 4, ejemplo 21 (0,419 g, 1 mmol), 4-fluorofenol
(0,135 g, 1,2 mmol), DMF (5 ml) y Cs_{2}CO_{3} (0,975 g, 3 mmol)
a 70 - 80ºC y se hace reaccionar durante 3 horas. Se enfría hasta
temperatura ambiente, se vierte sobre H_{2}O (20 ml) y se extrae
dos veces con EtOAc. Se lavan las capas orgánicas reunidas con
salmuera, se seca con MgSO_{4} y se elimina el disolvente a
presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía
sobre SiO_{2} usando EtOAc y hexanos (1:1) y se agita en Et_{2}O
para dar el compuesto del título (0,22, 49%).
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 3,15 (3H, s),
5,30 (2H, s), 6,95 - 7,45 (9H, m), 7,90 (2H, m), 8,05 (2H, m), 8,15
(1H, s).
EM (Cl, CH_{4}) m/z 451 (M+H)^{+}
Se calienta una suspensión del bromuro de la
etapa 4, ejemplo 21 (0,419 g, 1 mmol),
5-cloro-2-piridinol
(0,194 g,
1,5 mmol), CH_{3}CN (5 ml) y DBU (0,304 g, 2 mmol) a 70 - 80ºC y se hace reaccionar durante 4 horas. Se enfría hasta temperatura ambiente, se vierte sobre H_{2}O (20 ml) y se extrae dos veces con EtOAc. Se lavan las capas orgánicas reunidas con salmuera, se seca con MgSO_{4} y se elimina el disolvente a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía sobre SiO_{2} usando EtOH y EtOAc (1:100) para dar una mezcla de los derivados unidos a O y unidos a N. Se purifica de nuevo la mezcla mediante cromatografía sobre SiO_{2} usando EtOAc y hexanos (1:2) para dar el compuesto del título (0,038 g, 8%).
1,5 mmol), CH_{3}CN (5 ml) y DBU (0,304 g, 2 mmol) a 70 - 80ºC y se hace reaccionar durante 4 horas. Se enfría hasta temperatura ambiente, se vierte sobre H_{2}O (20 ml) y se extrae dos veces con EtOAc. Se lavan las capas orgánicas reunidas con salmuera, se seca con MgSO_{4} y se elimina el disolvente a presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía sobre SiO_{2} usando EtOH y EtOAc (1:100) para dar una mezcla de los derivados unidos a O y unidos a N. Se purifica de nuevo la mezcla mediante cromatografía sobre SiO_{2} usando EtOAc y hexanos (1:2) para dar el compuesto del título (0,038 g, 8%).
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 3,15 (3H, s),
5,30 (2H, s), 7,10 (1H, m), 7,25 - 7,45 (5H, m), 7,90 (3H, m), 8,05
(2H, m), 8,10 (1H, s), 8,15 (1H, s).
EM (Cl, CH_{4}) m/z 468 (M+H)^{+}
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, usando carbonato de cesio como una base, se
prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(4-fluorofenil)-2H-piridazin-3-ona
y bromuro de 2,2-dimetilpropilo.
RMN ^{1}H (CD_{3}COCD_{3}) d 1,03 (9H, s),
3,11 (3H, s), 4,09 (2H, s), 7,02 (2H, t), 7,27 (2H, dd), 7,52 (2H,
d), 7,89 (2H, d), 7,97 (1H, s).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2; se prepara el compuesto del título a partir de
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona
y (1-bromoetil)benceno.
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
8,04 (s, 1H), 7,88 (d, 2H), 7,55 - 7,20 (m, 9H), 7,00 (m, 2H), 6,37
(c, 1H), 3,11 (s, 3H), 1,81 (d, 3H).
EM (FAB^{+}): m/z 449 (M^{+} + 1).
(Referencia)
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 1, se prepara el compuesto del título a partir de
5-hidroxi-4-(4-metilsulfonil)fenil-3-fenil-5H-furan-2-ona
y clorhidrato de 3-fluorofenilhidracina (se usa
Et_{3}N para neutralizar la sal clorhidrato).
RMN ^{1}H (acetona-d_{6}) d
8,16 (s, 1H), 7,90 (d, 2H), 7,60 (m, 5H), 7,35 - 7,15 (m, 6H), 3,12
(s, 3H).
EM (FAB^{+}): m/z 421 (M^{+} + 1).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, usando carbonato de cesio como una base, se
prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(4-fluorofenil)-2H-piridazin-3-ona
y 2-bromometiltiofeno.
EM (APCI) m/z 441 (M+H)^{+},
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 3,11 (3H, s),
5,53 (2H, s), 7,02 (3H, m), 7,26 (3H, m), 7,42 (1H, d), 7,53 (2H,
d), 7,89 (2H, d), 7,99 (1H, s).
\newpage
Etapa
1
Se añade a una solución de
3-bromopiridina (39,5 g) en éter (800 ml) a -90ºC
(temperatura interna) n-BuLi (100 ml, 2,5 M) a una
velocidad tal que la temperatura interna no supere los -78ºC. Se
agita la mezcla resultante durante 1 hora a -78ºC y luego se añade
triisopropoxi-borato (59 ml) y se calienta la mezcla
resultante a 0ºC. Se añade metanol y se evapora la mezcla tres veces
a partir del metanol y luego dos veces a partir de
n-propanol. Se bombea el residuo a alto vacío
durante 3 días y se usa la espuma resultante (76 g de una mezcla 1:1
del compuesto del título:n-propanol) como tal en la
siguiente reacción.
Etapa
2
Se enfría una solución de
2-bencil-4-bromo-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
ejemplo 21, etapa 3 (50 mg),
[1,1'-bis(difenilfosfino)-ferrocen]dicloropaladio
(II), complejo de diclorometano (5 mg),
tri-2-propoxi-3-piridinilboronato
de litio (39 mg) en N,N-dimetilformamida (1 ml) y
Na_{2}CO_{3} 2M (0,25 ml) en un baño de acetona helada seca y se
bombea a alto vacío durante 5 minutos, luego se deja que la mezcla
se calienta hasta temperatura ambiente, este proceso se repite dos
veces. Se calienta luego la solución a 80ºC durante 45 minutos. Se
extrae la mezcla con acetato de etilo, se lava con salmuera (3
veces), se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se evapora el
disolvente a presión reducida. La purificación mediante
cromatografía sobre gel de sílice dio lugar a 26 mg del compuesto
del título.
EM (APCI) m/z 418 (M+H)^{+},
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 3,11 (3H, s),
5,39 (2H, s), 7,27 - 7,38 (4H, m), 7,50 (2H, d), 7,56 (2H, d), 7,69
(1H, d), 7,91 (2H, d), 8,04 (1H, s), 8,35 (1H, s), 8,46 (1H,
d).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, usando carbonato de cesio como una base, se
prepara el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(4-fluorofenil)-2H-piridazin-3-ona
y yoduro de 4,4,4-trifluorobutilo.
EM (APCI) m/z 555 (M+H)^{+}, P.F.
125ºC
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 2,12 (2H, m),
2,39 (2H, m), 3,11 (3H, s), 4,32 (2H, t), 7,04 (2H, t), 7,28 (2H,
dd), 7,52 (2H, d), 7,90 (2H, d), 8,01 (1H, s).
Etapa
1
Siguiendo el procedimiento descrito en el ejemplo
28, etapa 1, pero sustituyendo la
2-bromo-5-metilpiridina
por la 3-bromopiridina, se obtiene el compuesto del
título.
Etapa
2
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 28, se prepara el compuesto del título usando
(tri-2-propoxi)-5-metil-2-piridilboronato
de litio.
EM (APCI) m/z 432 (M+H)^{+}, P.F.
155,7ºC
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 2,43 (3H, s),
3,12 (3H, s), 5,39 (2H, s), 7,14 (1H, d), 7,29 - 7,37 (3H, m), 7,49
(2H, d), 7,56 (3H, d), 7,91 (2H, d), 8,00 (1H, s), 8,23 (1H, s).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, usando carbonato de cesio como base, se prepara
el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(4-fluorofenil)-2H-piridazin-3-ona
y yoduro de 2-metilpropilo.
EM (APCI) m/z 401 (M+H)^{+}, P.F.
120,0ºC
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 0,97 (6H, d),
2,30 (1H, m), 3,11 (3H, s), 4,02 (2H, d), 7,01 (2H, t), 7,27 (2H,
t), 7,51 (2H, d), 7,89 (2H, d), 7,97 (1H, s).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, usando carbonato de cesio como base, se prepara
el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(4-fluorofenil)-2H-piridazin-3-ona
y bromometilciclobutano.
EM (APCI) m/z 413 (M+H)^{+}, P.F.
168,1ºC
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 1,93 (6H, m),
2,92 (1H, m), 3,11 (3H, s), 4,23 (2H, d), 7,02 (2H, t), 7,28 (2H,
dd), 7,50 (2H, d), 7,89 (2H, d), 7,95 (1H, s).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, usando carbonato de cesio como base, se prepara
el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(4-fluorofenil)-2H-piridazin-3-ona
y bromuro de 2-feniletilo.
EM (APCI) m/z 449 (M+H)^{+}, P.F.
172,1ºC
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 3,11 (3H, s),
3,15 (2H, t), 4,42 (2H, t), 7,02 (2H, t), 7,22 - 7,32 (7H, m), 7,50
(2H, d), 7,89 (2H, d), 7,96 (1H, s).
Se calienta una suspensión del bromuro de la
etapa 4, ejemplo 21 (0,419 g, 1 mmol), la sal potásica de
5-bromo-2-piridinol
(0,424 g, 2,0 mmol) en DMF (5 ml) a 65ºC y se hace reaccionar
durante 3 horas. Se enfría hasta temperatura ambiente, se vierte
sobre H_{2}O (20 ml) y se extrae dos veces con EtOAc. Se lavan las
capas orgánicas reunidas con salmuera, se seca con MgSO_{4} y se
elimina el disolvente a presión reducida. Se purifica el residuo
mediante cromatografía sobre SiO_{2} usando EtOAc y hexanos (1:1)
y se agita en Et_{2}O para dar el compuesto del título (0,285
g,
56%).
56%).
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 3,15 (3H, s),
5,45 (2H, s), 7,10 (1H, m), 7,25 - 7,45 (5H, m), 7,90 (2H, m), 8,00
(3H, m), 8,10 (1H, s), 8,20 (1H, s).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 28, se prepara el compuesto del título usando el ácido
14-metilborónico.
EM (APCI) m/z 431 (M+H)^{+}, P.F.
179,6ºC
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 2,12 (3H, s),
3,08 (3H, s), 5,39 (2H, s), 6,92 (1H, d), 7,01 (1H, m), 7,17 (2H,
d), 7,28 - 7,37 (3H, m), 7,47 (4H, m), 7,83 (2H, d), 8,02 (1H,
s).
Siguiendo el procedimiento descrito para el
ejemplo 3, etapa 2, usando carbonato de cesio como base, se prepara
el compuesto del título a partir de
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(4-fluorofenil)-2H-piridazin-3-ona
y bromometilciclohexano.
EM (APCI) m/z 441 (M+H)^{+}, P.F.
175,1ºC
RMN ^{1}H (CD_{3}CDCD_{3}) d 1,03 - 1,28
(6H, m), 1,64 - 1,76 (5H, m), 3,11 (3H, s), 4,04 (2H, d), 7,01 (2H,
t), 7,27 (2H, m), 7,51 (2H, d), 7,89 (2H, d), 7,96 (1H, s).
Claims (14)
1. Un compuesto de fórmula I
en el que X se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- un enlace,
- (b)
- (CH_{2})_{m}, m = 1 ó 2,
- (c)
- CO,
- (d)
- O,
- (e)
- S, y
- (f)
- N(R^{5}),
R^{1} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- CH_{3},
- (b)
- NH_{2},
- (c)
- NHC(O)CF_{3},
R^{2} se selecciona del grupo
(CR^{6}R^{7})_{n}R^{8}, n = 1; en el que
R^{6},R^{7} se seleccionan cada uno independientemente del grupo
formado
por
- (a)
- hidrógeno,
- (b)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (c)
- fluoroalquilo C_{1}-_{10},
R^{8} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (b)
- fenilo o naftilo mono-, di o tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{10},
- (4)
- alquil C_{1}-_{10}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{6},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (8)
- N_{3},
- (c)
- heteroarilo mono-, di- o tri-sustituido, siendo el heteroarilo un anillo aromático monocíclico de 5 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es S, O o N y opcionalmente 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales; o siendo el heteroarilo un anillo monocíclico de 6 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es N, y de forma opcional 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{10},
- (4)
- alquil C_{1}-_{10}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{6},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (8)
- N_{3},
R^{3} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (b)
- fenilo o naftilo mono-, di- o tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{10},
- (4)
- alquil C_{1}-_{10}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{6},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (8)
- N_{3},
- (c)
- heteroarilo mono-, di- o tri-sustituido, siendo el heteroarilo un anillo aromático monocíclico de 5 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es S, O o N y opcionalmente 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales; o siendo el heteroarilo un anillo monocíclico de 6 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es N, y de forma opcional 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{10},
- (4)
- alquil C_{1}-_{10}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{6},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{10},
- (8)
- N_{3},
R^{4} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- hidrógeno,
- (b)
- halo,
- (c)
- alquilo C_{1}-_{6},
R^{5} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- hidrógeno,
- (b)
- alquilo C_{1}-_{6},
2. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que X es un enlace.
3. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que X es O.
4. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que R^{1} es CH_{3}.
5. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que R^{4} es hidrógeno.
6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que R^{6} y R^{7} son cada uno independientemente
hidrógeno.
7. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que R^{8} es fenilo mono, di- o
tri-sustituido.
8. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
1, en el que X se selecciona del grupo formado por
- (a)
- un enlace,
- (b)
- O,
R^{1} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- CH_{3},
- (b)
- NH_{2},
R^{2} se selecciona del grupo
(CR^{6}R^{7})_{n}R^{8}, n = 1; en el que R^{6},
R^{7} se seleccionan cada uno independientemente del grupo formado
por
- (a)
- hidrógeno,
- (b)
- alquilo C_{1}-_{4},
R^{8} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- alquilo C_{1}-_{4},
- (b)
- fenilo o naftilo mono-, di o tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{4},
- (4)
- alquil C_{1}-_{4}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{4},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{4},
- (c)
- heteroarilo mono-, di- o tri-sustituido, siendo el heteroarilo un anillo monocíclico de 6 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es N, y opcionalmente 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales, en el que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{4},
- (4)
- alquil C_{1}-_{4}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{4},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{4},
R^{3} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- alquilo C_{1}-_{6},
- (b)
- fenilo o naftilo mono-, di- o tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{4},
- (4)
- alquil C_{1}-_{4}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{4},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{4},
- (8)
- N_{3},
- (c)
- heteroarilo mono-, di- o tri-sustituido, siendo el heteroarilo un anillo monocíclico de 6 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es N, y opcionalmente 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales, en el que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{4},
- (4)
- alquil C_{1}-_{4}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{4},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{4},
R^{4} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- hidrógeno,
- (b)
- halo,
- (c)
- alquilo C_{1}-_{6},
9. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
8, en el que X se selecciona del grupo formado por
- (a)
- un enlace,
- (b)
- O,
R^{1} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- CH_{3},
- (b)
- NH_{2},
R^{2} se selecciona del grupo
(CH_{2})_{n}R^{8}, n = 1; en el que R^{8} se
selecciona del grupo formado
por
- (a)
- alquilo C_{1}-_{3},
- (b)
- fenilo o naftilo mono-, di o tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{4},
- (4)
- alquil C_{1}-C_{4}-tio,
- (5)
- CN,
- (6)
- fluoroalquilo C_{1}-_{4},
- (7)
- alquilo C_{1}-_{4},
- (c)
- heteroarilo mono-, di- o tri-sustituido, siendo el heteroarilo un anillo monocíclico de 6 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es N, y opcionalmente 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales, en el que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{3},
- (4)
- fluoroalquilo C_{1}-_{3},
- (5)
- alquilo C_{1}-_{3},
R^{3} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- alquilo C_{1}-_{4},
- (b)
- fenilo o naftilo mono-, di- o tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{3},
- (4)
- fluoroalquilo C_{1}-_{3},
- (5)
- alquilo C_{1}-_{3},
- (c)
- heteroarilo mono-, di- o tri-sustituido, siendo el heteroarilo un anillo monocíclico de 6 átomos, presentando dicho anillo un heteroátomo que es N, y opcionalmente 1, 2 ó 3 átomos de N adicionales, en el que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alcoxi C_{1}-_{3},
- (4)
- fluoroalquilo C_{1}-_{3},
- (5)
- alquilo C_{1}-_{3},
R^{4} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- hidrógeno,
- (b)
- halo,
- (c)
- metilo.
10. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación
9, en el que X se selecciona del grupo formado por
- (a)
- un enlace,
- (b)
- O,
R^{1} es
CH_{3},
R^{2} se selecciona del grupo
-CH_{2}R^{8}, en el que R^{8} se selecciona del grupo formado
por
fenilo o naftilo mono-, di o
tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se
seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alquilo C_{1}-_{3},
R^{3} se selecciona del grupo
formado
por
- (a)
- alquilo C_{1}-_{4},
- (b)
- fenilo o naftilo mono-, di- o tri-sustituidos, en los que los sustituyentes se seleccionan del grupo formado por
- (1)
- hidrógeno,
- (2)
- halo,
- (3)
- alquilo C_{1}-_{3},
R^{4} es
hidrógeno,
11. Un compuesto seleccionado del grupo formado
por
(3)
2-ciclopropilmetil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(4)
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2-(2,2,2-trifluoroetil)-2H-piridazin-3-ona,
(5)
2-bencil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(6)
2-isopropil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(7)
2-ciclopropilmetil-4-(3,4-difluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(8)
5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2-(2-piridilmetil)-2H-piridazin-3-ona,
(9)
2-bencil-4-(3,4-difluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(10)
2-(4-fluorobencil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(11)
2-carbometoximetil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(12)
2-bencil-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(13)
2-(4-carbometoxibencil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(14)
2-ciclopropilmetil-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(15)
2-(3-fluorobencil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(16)
2-(4-fluorobencil)-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(17)
2-(2-fluorobencil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-fenil-2H-piridazin-3-ona,
(19)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(3,3,3-trifluoropropil)-2H-piridazin-3-ona,
(20)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(4-piridilmetil)-2H-piridazin-3-ona,
(21)
2-bencil-4-(2-propoxi)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(22)
2-bencil-4-(4-fluorofenoxi)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(23)
2-bencil-4-(5-cloro-2-piridiloxi)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(24)
2-(2,2-dimetilpropil)-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(25)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(1-fenil-etil)-2H-piridazin-3-ona,
(27)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(tiofen-2-il-metil)-2H-piridazin-3-ona,
(28)
2-bencil-5-(4-metilsulfonil)fenil-4-(3-piridil)-2H-piridazin-3-ona,
(29)
4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2-(4,4,4-trifluorobutil)-2H-piridazin-3-ona,
(30)
2-bencil-4-(6-metil-3-piridil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(31)
4-(4-fluorofenil)-2-(2-metilpropil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(32)
2-ciclobutilmetil-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(33)
2-(2-fenetil)-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(34)
2-bencil-4-(5-bromo-2-piridiloxi)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
(35)
2-bencil-4-(4-metilfenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona,
y
(36)
2-ciclohexilmetil-4-(4-fluorofenil)-5-(4-metilsulfonil)fenil-2H-piridazin-3-ona.
12. Una composición farmacéutica que comprende un
compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 y un vehículo
farmacéuticamente aceptable.
13. Uso de un compuesto de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11 en la preparación de un medicamento para el
tratamiento de una enfermedad inflamatoria susceptible de tratar con
un agente anti-inflamatorio no esteroideo.
14. Un compuesto de cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 11 para uso en terapia.
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|---|---|---|---|
| US4079197P | 1997-03-14 | 1997-03-14 | |
| US40791P | 1997-03-14 | ||
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| GB9707487 | 1997-04-14 |
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| Publication Number | Publication Date |
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|---|---|---|---|
| ES98910544T Expired - Lifetime ES2224366T3 (es) | 1997-03-14 | 1998-03-12 | Piridazinonas como inhibidores de ciclooxigenasa-2. |
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| US6525053B1 (en) * | 1997-08-22 | 2003-02-25 | Abbott Laboratories | Prostaglandin endoperoxide H synthase biosynthesis inhibitors |
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| AU773237B2 (en) * | 1997-08-22 | 2004-05-20 | Abbott Laboratories | Prostaglandin endoperoxide H synthase biosynthesis inhibitors |
| HUP0100059A3 (en) | 1997-11-19 | 2002-08-28 | Kowa Co | Novel pyridazine derivatives and drugs containing the same as the active ingredient |
| TWI241295B (en) | 1998-03-02 | 2005-10-11 | Kowa Co | Pyridazine derivative and medicine containing the same as effect component |
| KR100666838B1 (ko) * | 1998-10-27 | 2007-01-11 | 아보트 러보러터리즈 | 프로스타글란딘 엔도퍼옥사이드 ｈ 신타제 생합성 억제제 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 |
| US6465509B2 (en) | 2000-06-30 | 2002-10-15 | Merck Frosst Canada & Co. | Pyrones as inhibitors of cyclooxygenase-2 |
| US6664256B1 (en) | 2000-07-10 | 2003-12-16 | Kowa Co., Ltd. | Phenylpyridazine compounds and medicines containing the same |
| EP1303265B1 (en) | 2000-07-20 | 2007-07-11 | Lauras AS | Use of cox-2 inhibitors as immunostimulants in the treatment of hiv or aids |
| AU2003209321A1 (en) * | 2002-01-18 | 2003-07-30 | Pharmacia Corporation | Substituted pyridazinones as inhibitors of p38 |
| WO2004083188A1 (ja) | 2003-03-18 | 2004-09-30 | Kowa Co., Ltd. | 水溶性フェニルピリダジン誘導体及びこれを含有する医薬 |
| PL1745791T3 (pl) | 2003-05-07 | 2013-11-29 | Osteologix As | Leczenie chorób chrząstki/kości za pomocą rozpuszczalnych w wodzie soli strontu |
| DE10322844A1 (de) * | 2003-05-19 | 2004-12-16 | Clariant Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Pyridin-2-boronsäureestern |
| WO2005007632A1 (en) * | 2003-07-18 | 2005-01-27 | Pharmacia Corporation | Substituted pyridazinones as inhibitors of p38 |
| EP1916240A1 (en) * | 2006-10-25 | 2008-04-30 | Syngeta Participations AG | Pyridazine derivatives |
| WO2011017261A1 (en) | 2009-08-07 | 2011-02-10 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Fungicidal diphenyl-substituted pyridazines |
| FR2969606B1 (fr) * | 2010-12-22 | 2013-01-11 | Pf Medicament | Derives de diarylpyridazinones, leur preparation et leur application en therapeutique humaine |
| AU2014318837B2 (en) | 2013-09-12 | 2019-05-30 | Janssen Biopharma, Inc. | Pyridazinone compounds and uses thereof |
| WO2021186458A1 (en) * | 2020-03-19 | 2021-09-23 | Abida | 6-oxo-3-phenylpyridazine based cyclooxygenase-2 inhibitors for the treatment of inflammatory diseases |
| CA3209491A1 (en) | 2021-03-15 | 2022-09-22 | Saul Yedgar | Hyaluronic acid-conjugated dipalmitoyl phosphatidyl ethanolamine in combination with non-steroidal anti-inflammatory drugs (nsaids) for treating or alleviating inflammatory disease |
| CN113735804B (zh) * | 2021-10-08 | 2023-07-18 | 浙江大学 | 一种丁烯内酯类化合物的合成方法 |
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| US5474995A (en) * | 1993-06-24 | 1995-12-12 | Merck Frosst Canada, Inc. | Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors |
| BR9408478A (pt) * | 1994-01-10 | 1997-08-26 | Merck Frosst Canada Inc | Composto composição farmacéutica processos de tratmento de uma doença suscetível ao tratamento com agente anti-inflamatório não esteroidal e de tratamento de doenças medidas pela ciclo-oxigenase, sal farmaceuticamente eficaz e uso de um composto |
| US5521213A (en) * | 1994-08-29 | 1996-05-28 | Merck Frosst Canada, Inc. | Diaryl bicyclic heterocycles as inhibitors of cyclooxygenase-2 |
| US5686470A (en) * | 1995-02-10 | 1997-11-11 | Weier; Richard M. | 2, 3-substituted pyridines for the treatment of inflammation |
| WO1996041645A1 (en) * | 1995-06-12 | 1996-12-27 | G.D. Searle & Co. | Combination of a cyclooxygenase-2 inhibitor and a leukotriene b4 receptor antagonist for the treatment of inflammations |
| EP0833622B8 (en) * | 1995-06-12 | 2005-10-12 | G.D. Searle & Co. | Compositions comprising a cyclooxygenase-2 inhibitor and a 5-lipoxygenase inhibitor |
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