ES2274302T3 - Benzimidazoles y benzotiazoles como inhibidores de la map quinasa. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de **Fórmula**, donde X es N(R4) o S; R0 es (a) seleccionado del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C1-C6, ciano, (alquilen C1-C4)-R11, 3-hidroxiprop-2-il, (1-fenil)-2-hidroxiet-1-ilo, (1-ciclohexil)-3-hidroxiprop-2-ilo, 4-metoxibencilo, 1, 4-dioxoaspiro[4, 5]dec-8-ilo, tetrahidropirano, 2, 2, 6, 6-tetrametilpiperidin-4-ilo, y ciclohexan-1-on-4-ilo, (b) fenilo sustituido opcionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por un nitro y amino, (c) piperidin-4-ilo sustituido opcionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por alquilo C1-C4, alcoxicarbonilo C1-C4, y bencilo, o (d) cicloalquilo C3-C6, opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por alcoxicarbonilamino C1-C4, amino, hidroxi, y alquilen-OH C1-C4.

Description

Bencimidazoles y benzotiazoles como inhibidores de la MAP quinasa.

Antecedentes de la invención

La quinasa p38 es una proteína quinasa activada por mitógeno (MAP) que pertenece a la superfamilia de las serina/treonina quinasas. Esta quinasa se activa por estrés extracelular, como es el calor, luz UV, y estrés osmótico, además de por estímulo inflamatorio como son los lipopolisacáridos. Cuando se activa, la quinasa p38 fosforila sustratos de proteína intracelular que regulan la biosíntesis de las citoquinas pro-inflamatorias, factor \alpha de necrosis tumoral (TNF-\alpha) e interleuquina-1\beta (IL-1\beta). Estas citoquinas están implicadas en la patología de distintos trastornos inflamatorios crónicos (Lee, et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, 149-170 (1993); Muller-Ladner, Curr. Opin. Rheumatol., 8, 210-220 (1996)), trastornos del nervioso central y cardiovascular (Salituro, et al., Current Medicinal Chemistry, 6, 807-823 (1999)), y trastornos auto-inmunes (Pargellis, et al., Nature Structural Biology, 9(4), 268-272 (2002)).

Se han identificado distintos compuestos con las plataformas estructurales de piridinilimidazol (documentos
WO 9621452, WO9640143, WO9725045, US5656644, US5686455, US5717100, WO9712876, WO9821957, WO
9847892, WO99903837, WO9901449, WO0061576, WO0010563, WO0172737; Revesz, et al.; Bioorganic and Med. Chem. Lett., 10, 1261-1264 (2000)) y de pirimidinil-imidazol (documentos WO9725048, WO9901452, WO9725046, WO 9932121, WO9901131, WO9901130, WO9901136, WO9807452, WO9747618, WO9856788, WO9857996), como inhibidores de la quinasa p38 o como inhibidores de citoquinas. El documento WO02072576 (publicado el 19 de septiembre de 2002) identifica así mismo una serie de compuestos identificados como inhibidores de la quinasa p38. Los inhibidores selectivos de la quinasa p38 se conocen por suprimir la expresión de TNF-\alpha e IL-1\beta (McKenna, et al., J. Med. Chem., 45 (11), 2173-2184 (2002)). Se ha demostrado actividad anti-inflamatoria para los compuestos con la plataforma estructural del pirimidinilimidazol (Lantos, et al., J. Med. Chem., 27, 72-75 (1984)), y se encuentran bajo investigación activa varios inhibidores de la quinasa p38, para el tratamiento de distintos trastornos (Boehm and Adams, Exp. Opin. Ther. Patents, 10(1), 25-37 (2000)). Se mantiene una necesidad de tratamiento en este campo, por compuestos que son supresores de las citoquinas, es decir, compuestos que pueden inhibir la quinasa p38.

La presente invención proporciona nuevos inhibidores de la quinasa p38, útiles para el tratamiento de condiciones resultantes de la producción excesiva de citoquina.

Breve resumen de la invención

La presente invención proporciona compuestos de Fórmula I:

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1

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donde:

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2

3

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4

X es N(R^{4}) o S;

R^{0} es

(a) seleccionado del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, ciano, (alquilen C_{1}-C_{4})-R^{11}, 3-hidroxiprop-2-il, (1-fenil)-2-hidroxiet-1-ilo, (1-ciclohexil)-3-hidroxiprop-2-ilo, 4-metoxibencilo, 1,4-dioxoaspiro[4,5]dec-8-ilo, tetrahidropirano, 2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-ilo, y ciclohexan-1-on-4-ilo,

(b) fenilo sustituido opcionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por un nitro y amino,

(c) piperidin-4-ilo sustituido opcionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{4}, y bencilo, o

(d) cicloalquilo C_{3}-C_{6}, opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por alcoxicarbonilamino C_{1}-C_{4}, amino, hidroxi, y alquileno-OH C_{1}-C_{4};

R^{1} es

(a) seleccionado del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{4}, halo, amino, azido, formilo, 1-(alcoxicarbonil C_{1}-C_{4})eten-2-ilo, 1-(alcoxicarbonil C_{1}-C_{4})etilo, 1-(carboxi C_{1}-C_{4})etilo, (alquilen C_{1}-C_{4})benciloxi, trifluorometilo, trimetilsililetinilo, but-3-in-1-ol, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, tetrahidropiran-4-ilo, hidroximetilo, 2-(piperidin-1-ilo)metilo, N,N',N'-[trimetil]-2-(aminoetilamino)metilo, (morfolin-4-il)metilo, dimetiloaminometilo, N-[2-(piperidin-1-il)et-1-il]aminometilo, N',N'-dimetil-2-(aminoetilamino)metilo, piridinilo, tiazolilo, triazolilo, benzo(1,3)dioxolan-5-ilo, e imidazol-2-ilo.

(b) fenilo sustituido opcionalmente con uno o tres sustituyentes seleccionados independientemente del grupo constituido por alquilo C_{1}-C_{4}, halo, nitro, amino, alcoxi C_{1}-C_{4}, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluorometilsulfanilo, metilsulfonilo, metilsulfonamidilo, pirrolidin-1-ilo, morfolin-4-ilo, 4-(alquil C_{1}-C_{4})-piperazin-1-ilo, -NR^{6}R^{7}, y alcoxi C_{1}-C_{4} opcionalmente sustituidos con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por piperidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, morfolin-4-ilo, acepin-4-ilo, y di(alquil C_{1}-C_{4})amino,

(c) tienilo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por halo, amino, y alquilo C_{1}-C_{4}, o

(d) piperidin-4-ilo opcionalmente sustituido en la posición 1 del grupo constituido por alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{4}, benciloxicarbonilo, y (alquilen C_{1}-C_{4})-R^{8}.

Alternativamente, R^{0} y R^{1} pueden tomarse juntos para formar una cadena de carbono C_{3}-C_{4} totalmente saturada, o una cadena de carbono C_{3}-C_{4} totalmente insaturada, opcionalmente sustituida con halo o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{2} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, o_{ }bencilo;

R^{3} es tienilo o fenilo, opcionalmente sustituidos con de uno a dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo constituido por halo, alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxi C_{1}-C_{4}, y trifluorometilo;

R^{4} es hidrógeno, (alquil C_{1}-C_{4})sulfonilo, o (cicloalquil C_{3}-C_{6})sulfonilo; o (alquil C_{1}-C_{4})_{2}N-sulfonilo;

R^{5} es halo, hidrógeno, o -NR^{9}R^{10};

R^{6} y R^{7} son seleccionados individualmente cada vez que esté presente, del hidrógeno, carbonilo, o alquilo C_{1}-C_{4}, con la condición de que al menos uno de R^{6} y R^{7} sea hidrógeno;

R^{8} es hidroxi, trifluorometilo, dimetilamino, fenilo, piridinilo, o 1-metilimidazol-2-ilo;

R^{9} es, independientemente cada vez que esté presente, hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{10} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, o bencilo;

R^{11} es alcoxi C_{1}-C_{4}, hidroxi, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{4}, alcoxicarbonilamino C_{1}-C_{4}, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, fenilo opcionalmente sustituido con de uno a dos sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por alcoxi C_{1}-C_{4} y halo, morfolin-4-ilo, o piridinilo;

Con la condición de que cuando W sea

5

entonces

(a) al menos uno de R^{0} y R^{1} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6}; o

(b) R^{0} y R^{1} pueden tomarse juntos para formar una cadena C_{3}-C_{4} de carbono totalmente saturada, o una cadena de carbono C_{3}-C_{4} totalmente insaturada, opcionalmente sustituidos con halo o alquilo C_{1}-C_{4};

además, con la condición de que, cuando X es S, W es

31

o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención proporciona un procedimiento para inhibir la quinasa p38 en un mamífero, procedimiento que comprende la administración a un mamífero que necesita dicho tratamiento, de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del
mismo.

La presente invención también proporciona un procedimiento para suprimir la producción del factor \alpha de necrosis tumoral (TNF-\alpha) en un mamífero, procedimiento que comprende la administración a un mamífero que necesita dicho tratamiento, de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención proporciona además un procedimiento para suprimir la producción de interleuquina-1\beta (IL-1 \beta) en un mamífero, procedimiento que comprende la administración a un mamífero que necesita dicho tratamiento, de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención también proporciona un procedimiento para tratar condiciones resultantes de la producción excesiva de citoquinas en un mamífero, procedimiento que comprende la administración a un mamífero que necesita dicho tratamiento, de una cantidad supresora de citoquinas, de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención proporciona además un procedimiento para inhibir el crecimiento de un neoplasma susceptible en un mamífero, procedimiento que comprende la administración a un mamífero que necesita dicho tratamiento, de una cantidad inhibidora de p38 de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención proporciona también un procedimiento para inhibir la metástasis en un mamífero, procedimiento que comprende la administración a un mamífero que necesita dicho tratamiento, de una cantidad inhibidora de p38 de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención proporciona igualmente un procedimiento para tratar la artritis reumatoide en un mamífero, procedimiento que comprende la administración a un mamífero que necesita dicho tratamiento, de una cantidad inhibidora de p38 de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

La presente invención proporciona asimismo una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un vehículo, diluyente o excipiente adecuados.

Esta invención incluso proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento que inhiba la quinasa p38. Adicionalmente, esta invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibición de la quinasa p38 en mamíferos. Además, esta invención proporciona una composición farmacéutica adaptada para la inhibición de la quinasa p38, que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un o más excipientes, vehículos, o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la supresión de la producción de factor \alpha de necrosis tumoral (TNF-\alpha). Adicionalmente, esta invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la supresión de la producción de factor \alpha de necrosis tumoral (TNF-\alpha) en mamíferos. Además, esta invención proporciona una composición farmacéutica adaptada para la supresión de la producción de factor \alpha de necrosis tumoral (TNF-\alpha), que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con uno o más excipientes, vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la supresión de la producción de interleuquina-1\beta (IL-1\beta). Adicionalmente, esta invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la supresión de la producción de interleuquina-1\beta (IL-1\beta) en mamíferos. Además, esta invención proporciona una composición farmacéutica adaptada para la supresión de la producción de interleuquina-1\beta (IL-1\beta), que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con uno o más excipientes, vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de condiciones resultantes de la producción excesiva de citoquinas. Adicionalmente, esta invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de condiciones resultantes de la producción excesiva de citoquinas en mamíferos. Además, esta invención proporciona una composición farmacéutica adaptada para el tratamiento de condiciones resultantes de la producción excesiva de citoquinas, que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con uno o más excipientes, vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la inhibición del crecimiento de un neoplasma susceptible. Adicionalmente, esta invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibición del crecimiento de un neoplasma susceptible en mamíferos. Además, esta invención proporciona una composición farmacéutica adaptada para la inhibición del crecimiento de un neoplasma susceptible, que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con uno o más excipientes, vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la inhibición de la metástasis. Adicionalmente, esta invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la inhibición de la inhibición de la metástasis en mamíferos. Además, esta invención proporciona una composición farmacéutica adaptada para la inhibición de la metástasis, que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con uno o más excipientes, vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide. Adicionalmente, esta invención proporciona un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de la artritis reumatoide en mamíferos. Además, esta invención proporciona una composición farmacéutica adaptada para el tratamiento de la artritis reumatoide, que comprende un compuesto de Fórmula I, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con uno o más excipientes, vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Descripción detallada de la invención

Los términos químicos generales utilizados en las fórmulas anteriores, tienen sus significados habituales. Por ejemplo, el término "alquilo C_{1}-C_{6}" incluye los grupos funcionales metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo y hexilo. El término "alquilo C_{1}-C_{4}" está incluido en el significado de "alquilo C_{1}-C_{6}", e incluye los grupos funcionales metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo y ter-butilo. El término "alcoxi C_{1}-C_{4}" quiere decir un grupo alquilo C_{1}-C_{4} unido a la molécula principal a través de un átomo de oxígeno, e incluye los grupos metoxi, etoxi, isopropoxi, y similares. El término "cicloalquilo C_{3}-C_{6}" incluye los grupos funcionales ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, y ciclohexilo. El término "halo" incluye flúor, cloro, bromo y yodo.

El término "(alquilen C_{1}-C_{4})-R^{8}" se refiere a una cadena de alquileno lineal o ramificada, sustituida en cualquier átomo de carbono con la variable R^{8}, e incluye, por ejemplo, cadenas alquilo lineales o ramificadas, y grupos funcionales bencilo y \alpha-metilbencilo. Asimismo, el término "(alquilen C_{1}-C_{4})-R^{12}" se refiere a una cadena de alquileno lineal o ramificada, sustituida en cualquier átomo de carbono con la variable R^{12}, e incluye, por ejemplo, cadenas alquilo ramificadas, y grupos funcionales bencilo y \alpha-metilbencilo.

El término "alquilen-OH C_{1}-C_{4}" se refiere a una cadena de alquileno, lineal o ramificada, sustituida en cualquier átomo de carbono con un grupo hidroxi.

El término "1,4-dioxaspiro[4.5]dec-8-ilo" se refiere a la siguiente fórmula:

6

El término "cadena de carbono C_{3}-C_{4} totalmente saturada" se refiere a una cadena de 3 o 4 grupos metileno. La frase "cadena de carbono C_{3}-C_{4} totalmente insaturada" se refiere a una cadena de 3 carbonos que contiene un doble enlace carbono-carbono, o a una cadena de 4 carbonos con dos dobles enlaces carbono-carbono.

El término "quinasa p38" se refiere a las isoformas de la quinasa, p38\alpha y/o p38\beta.

El término "supresión de la producción de TNF-\alpha (IL-1\beta, citoquina)" se refiere a la disminución de los niveles excesivos in vivo de TNF-\alpha, IL-1\beta, u otras citoquinas, en un mamífero, hasta niveles normales, o por debajo de los normales. Esto se puede conseguir mediante la inhibición de la liberación in vivo de TNF-\alpha, IL-1\beta, u otras citoquinas, por todas las células, incluso los macrófagos; mediante la regulación, a nivel genómico, de los niveles in vivo excesivos de TNF-\alpha, IL-1\beta, u otras citoquinas, en un mamífero, hasta llevarlos a niveles normales o por debajo de los normales; mediante la inhibición de la síntesis de TNF-\alpha, IL-1\beta, u otras citoquinas, como un evento posterior a la traducción; o mediante la regulación de TNF-\alpha, IL-1\beta, u otras citoquinas, en un nivel transcripcional o de traducción.

El experto en la técnica apreciará que ciertos compuestos de Fórmula I contienen al menos un centro quiral. La presente invención considera todos los enantiómeros o diastereómeros individuales, además de las mezclas de los enantiómeros y diastereómeros de dichos compuestos, que incluyen los racematos. Se prefiere que los compuestos de Fórmula I que contienen al menos un centro quiral, existan como enantiómeros y diastereómeros sencillos. Los enantiómeros y diastereómeros sencillos pueden prepararse comenzando con re-agentes quirales, o mediante técnicas sintéticas estereoselectivas o estereoespecíficas. Alternativamente, los enantiómeros o diastereómeros sencillos pueden ser aislados a partir de mezclas mediante técnicas estándar cromatográficas o de cristalización quirales. El experto en la técnica apreciará también que los compuestos de la presente invención pueden existir como tautómeros. La presente invención considera todas las formas tautoméricas.

Además, ciertos compuestos de Fórmula I pueden existir como isómeros geométricos cis- y trans-. La presente invención considera todos los isómeros geométricos individuales, además de las mezclas de los isómeros geométricos de dichos compuestos. Se prefiere que los compuestos de Fórmula I existan como isómeros geométricos sencillos. Los isómeros individuales pueden prepararse selectivamente mediante procedimientos conocidos por el experto en la técnica, o pueden separarse mezclas de los isómeros mediante técnicas estándar cromatográficas o de cristalización.

El lector experto entenderá que la mayoría de, o todos los compuestos de la presente invención, son capaces de formar sales. En todos los casos, las sales farmacéuticamente aceptables de todos los compuestos, se incluyen en los nombres de los mismos. Los compuestos de la presente invención son aminas, y de acuerdo con eso, reaccionan con cualquiera de los muchos ácidos orgánicos e inorgánicos para formar sales de adición a ácido, farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables preferidas son las formadas con ácido clorhídrico, ácido maleico, o ácido metanosulfónico.

El lector experto también entenderá que los solvatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de Fórmula I son considerados como parte de esta invención, y pueden prepararse mediante procedimientos convencionales como es disolviendo los compuestos de Fórmula I en disolventes como el agua, metanol, etanol, etc., y recristalizando mediante distintas técnicas de recristalización.

Aunque todos los compuestos de Fórmula I son inhibidores útiles de la quinasa p38, se prefieren ciertas clases de compuestos. Los siguientes párrafos describen esas clases preferidas:

a)

R^{0} es hidrógeno;

b)

R^{0} es metilo;

c)

R^{0} es ciclopropilo;

d)

R^{0} es ciclohexilo;

e)

R^{1} es fenilo, opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados individualmente del grupo constituido por halo y trifluorometilo;

f)

R^{1} es fenilo sustituido con cloro;

g)

R^{1} es fenilo sustituido con dos moléculas de cloro;

h)

R^{1} es fenilo sustituido dos moléculas de flúor;

i)

R^{1} es fenilo sustituido con flúor y cloro;

j)

R^{1} es fenilo sustituido con trifluorometilo;

k)

R^{1} es 4-clorofenilo;

l)

R^{1} es 2,6-diclorofenilo;

m)

R^{1} es 2,6-difluorofenilo;

n)

R^{1} es 2-cloro-6-fluorofenilo;

o)

R^{1} es 2-cloro-6-trifluorometilo;

p)

R^{1} es metilo;

q)

R^{1} es etilo;

r)

R^{1} es ter-butilo;

s)

R^{1} es isopropilo;

t)

R^{1} es 2,2-dimetilpropilo;

u)

R^{1} es ciclopropilo;

v)

R^{1} es ciclohexilo;

w)

R^{1} es hidrógeno;

x)

R^{2} es hidrógeno;

y)

R^{3} es fenilo;

z)

R^{3} es fenilo sustituido con un flúor;

aa)

R^{3} es fenilo sustituido con dos moléculas de flúor;

bb)

R^{3} es fluorofenilo;

cc)

R^{3} es 2,4-difluorofenilo;

dd)

R^{4} es (alquil C_{1}-C_{4})sulfonilo;

ee)

R^{4} es isopropilsulfonilo;

ff)

R^{4} es ter-butilsulfonilo;

gg)

R^{4} es (cicloalquil C_{3}-C_{6})sulfonilo;

hh)

R^{4} es ciclopentilsulfonilo;

ii)

R^{4} es ciclohexilsulfonilo;

jj)

R^{4} es dimetilaminosulfonilo;

kk)

R^{5} es NR^{9}R^{10};

ll)

R^{5} es -NH_{2};

mm)

R^{5} es hidrógeno;

nn)

W es

7

\newpage

oo)

W es

8

pp)

W es

9

qq)

W es

10

rr)

X es N(R^{4});

ss)

X es N(isopropilsulfonil), R^{5} es NH_{2}, W es

11

\quad

o

12

R^{3} es fenilo, y R^{1} es fenilo sustituido opcionalmente con uno o dos halo o alquilo C_{1}-C_{4};

tt)

el compuesto de Fórmula I es una base libre;

uu)

el compuesto de Fórmula I es un solvato;

vv)

el compuesto de Fórmula I es una sal farmacéuticamente aceptable;

ww)

el compuesto de Fórmula I es la sal hidrocloruro;

xx)

el compuesto de Fórmula I es la sal napadisilato;

yy)

el compuesto de Fórmula I es la sal dimaleato;

zz)

el compuesto de Fórmula I es la sal metanosulfonato.

Las formas preferidas de realización de la presente invención incluyen todas las combinaciones de a) a zz).

Los compuestos de Fórmula I son inhibidores de la quinasa p38. Por lo tanto, la presente invención también proporciona un procedimiento para inhibir la quinasa p38 en un mamífero, procedimiento que comprende la administración a un mamífero que necesita dicho tratamiento, de una cantidad inhibidora de quinasa p38, de un compuesto de Fórmula I. Se prefiere que el mamífero a ser tratado con la administración de los compuestos de Fórmula I, sea humano.

Como inhibidores de la quinasa p38, los compuestos de la presente invención son útiles para la supresión de la producción de las citoquinas pro-inflamatorias, el factor \alpha de necrosis tumoral (TNF-\alpha) y la interleuquina-1\beta (IL-1\beta), y por tanto son útiles para el tratamiento de trastornos resultantes de la excesiva producción de citoquinas. Los presentes compuestos son útiles, por tanto, para tratar trastornos inflamatorios, incluyendo eccema, dermatitis atópica, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria intestinal, y síndrome del choque tóxico. Se considera que los compuestos de la presente invención también son útiles para el tratamiento de trastornos cardiovasculares, como el infarto agudo de miocardio, el fallo cardiaco crónico, ateroesclerosis, miocarditis viral, rechazo del aloinjerto cardiaco, y disfunción cardiaca asociada con la sepsis. Además, los compuestos de la presente invención son útiles también para el tratamiento de trastornos del sistema nervioso central, como la meningitis meningocócica, la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, y esclerosis múltiple.

Muchos tumores sólidos aumentan su masa a través de la proliferación de células malignas y estromales, incluyendo células endoteliales. Para que un tumor crezca más de 2-3 milímetros de diámetro, este tiene que formar una vasculación, un proceso llamado angiogénesis. Se ha informado de la supresión de angiogénesis inducida por tumor, mediante angiostatin y endostatin, que han dado lugar a actividad antitumoral (O'Reilly, et al., Cell, 88, 277-285(1991)). Se ha demostrado que el inhibidor selectivo de la quinasa p38, el SB22025, inhibe la angiogénesis (J.R. Jackson, et al., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 284, 687 (1998)). Puesto que la angiogénsis es un componente crítico de la expansión de la masa en muchos tumores sólidos, el desarrollo de los nuevos inhibidores de la quinasa p38 para la inhibición de este proceso, representa una aproximación prometedora para la terapia antitumoral. Esta aproximación a la terapia antitumoral puede carecer de los efectos secundarios tóxicos o de las propiedades de resistencia inducida a los fármacos, que tiene la quimioterapia convencional (Judah Folkman, Endogenous Inhibitors of Angiogenesis, The Harvey Lectures, Series 92, pages 65-82, Wiley-Liss Inc., (1998)).

Como inhibidores de la quinasa p38, lo compuestos de la presente invención son útiles también en la inhibición del crecimiento de neoplasmas susceptibles. Schultz, R.M. Potential of p38 MAP kinase inhibitors in the treatment of cancer. In: E: Jucker (ed.), Progress in Drug Research, 60, 59-92m (2003). Un neoplasma susceptible se define como un neoplasma que depende de la quinasa p38 para sobrevivir, crecer o generar metástasis. Los neoplasmas susceptibles incluyen los tumores cerebrales, del tracto genitourinario, del sistema linfático, de estómago, laringe, y pulmón (documento U.S. Patent #5,717,100). Preferiblemente, el término "neoplasmas susceptibles" tal como se utiliza en la presente solicitud, incluye cánceres humanos que incluyen al carcinoma de pulmón sin células pequeñas (A. Greenberg, et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 26, 558 (2002)), carcinoma de pecho (J. Chen, et al., J. Biol. Chem., 276, 47901 (2001); B. Salh, et al., Int. J. Cancer, 98, 148 (2002); y S. Xiong, et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001)), carcinoma gástrico (Y.D. Jung, et al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 43, 9 (2002)), carcinoma colorectal (S. Xiong, et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001)), y melanoma maligno (C. Denkert, et al., Clin. Exp. Metastasis, 19, 79 (2002)).

La inhibición de la angiogénesis por supresión del TNF-\alpha también se ha demostrado útil en la inhibición o prevención de la metástasis (U.S. Patent #6,414,150; U.S. Patent #6,335,336). Además, la supresión del TNF-\alpha también está indicada para el tratamiento y la prevención de la caquexia, un síndrome experimentado por la mitad de todos los pacientes de cáncer (T. Moneda, et al., J. Clin. Invest., 87, 977 (1991)).

Además, la inhibición de la quinasa p38 puede ser eficaz en el tratamiento de ciertas condiciones virales, como es la gripe (K. Kujime, et al., J. Immunology., 164, 3222-3228 (2000)), rinovirus (S. Griego, et al., J. Immunology., 165, 5211-5220 (2000)), y el VIH (L. Saphiro, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 7422-7426, (1998)).

Los compuestos de Fórmula I donde W es imidazol (i) o (ii), y R^{5} es -NH_{2}, pueden prepararse tal como se ilustra en el siguiente esquema, donde "TBS" es ter-butildimetilsilil, y todas las otras variables son tal como se han definido previamente. En el siguiente esquema, solo se ilustra W=imidazol (i). No se intenta limitar el alcance en ningún sentido.

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Esquema I

13

Se calienta una mezcla del \alpha-cetosililéter (a) con un aldehído apropiado, en presencia de acetato de cobre (II) y de acetato de amonio, en un disolvente apropiado, típicamente ácido acético. El ácido se neutraliza, y se extrae y aísla el imidazol (Ia) deseado mediante técnicas estándar de extracción y cromatografía.

El \alpha-cetosililéter (a) requerido puede prepararse tal como se describe en el siguiente esquema, donde "TBS" se define como ter-butilidometilsilil, R^{5} es -NH_{2}, y todas las otras variables son tal como se definieron previamente.

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Esquema II

14

Se convierte un \alpha-hidroxiácido (b) apropiado en la correspondiente amida Weinreb (c) bajo condiciones estándar. Brevemente, el \alpha-hidroxiácido (b) se convierte en el correspondiente metiléster, y este éster reacciona después con hidrocloruro de N-metil-O-metilhidroxilamina, en presencia de trimetilaluminio en un disolvente apropiado. Después se trata la \alpha-hidroxiamida (c) con ter-butildimetilsililtriflato, en presencia de una base, bajo condiciones estándar, para proporcionar la \alpha-sililéter amida (d) (Tius, et al. (Tetrahedron, 56, 3339-3351 (2000)). El compuesto (d) es posteriormente emparejado con 6-yodobencimidazol o 6-yodobenzo tiazol (e) en presencia de cloruro de isopropilmagnesio, para proporcionar el compuesto deseado (a). El yodobencimidazol (e) requerido puede prepararse a partir del 2-aminobencimidazol tal como se describe en Mitchell, et al., (Journal of Organic Chemistry, 63, 5050-5058 (1998)).

Alternativamente, puede convertirse el ácido 3,4-dinitrobenzoico (f) para ser la correspondiente amida Weinreb (g), convirtiendo el ácido benzoico en el correspondiente haluro de benzoilo, preferiblemente mediante reacción con cloruro de oxalilo, y después reaccionando el cloruro de benzoilo con N-metil-O-metilhidroxilamina en presencia de una base apropiada, típicamente piridina, para proporcionar la correspondiente amida. La amida (g) se somete después a condiciones de hidrogenación catalítica para proporcionar la correspondiente diamina, que es tratada entonces con un haluro de sulfonilo apropiado, en presencia de una base, típicamente piridina, para proporcionar la correspondiente sulfonamida (h). Esta sulfonamida se trata primero con una base, y después se la hace reaccionar con bromuro de cianógeno en un disolvente apropiado, para proporcionar el aminobencimidazol (j). El aminobencimidazol (j) reacciona con el anión generado a partir del silil éter (k) y el ter-butilitio, para proporcionar el producto intermedio deseado (a). El sililéter requerido puede ser preparado a partir del correspondiente alcohol bajo condiciones estándar (ver, Greene, et al., Protective Groups in Oganic Síntesis, John Wiley and Sons Ed., 1981).

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Esquema III

15

Alternativamente, los compuestos de Fórmula I donde W es el imidazol (i), pueden prepararse tal como se ilustra en el siguiente esquema, donde R^{5} es -NH_{2}, R^{2} es hidrógeno, y todas las otras variables se han definido previamente.

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Esquema IV

16

Se hace reaccionar a la dicetona (I) con acetato amónico, y un aldehído apropiado en un disolvente apropiado, preferiblemente ácido acético, para proporcionar el correspondiente bencimidazol de imidazolilo, o el benzotiazol de imidazolilo. Las dicetonas (I) requeridas pueden prepararse tal como se describe en el siguiente esquema, donde todas las variables son las que se definieron previamente.

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Esquema V

17

El alquinilo apropiado se empareja con 6-yodobencimidazol o con 6-yodobenzotiazol (e), y después se oxida para proporcionar el compuesto de dicetona (I) deseado, mediante el procedimiento de Khan, et al. (JOC, 17, 1063-1065 (1952)).

Alternativamente, el compuesto de dicetona deseado puede prepararse comenzando a partir del \alpha-cetosililéter (a), hidrolizando el grupo silil, seguido de oxidación.

Los compuestos de Fórmula I donde W es imidazol (ii) pueden prepararse tal como se describe en el siguiente esquema, donde R^{5} es -NH_{2} y todas las demás variables son las definidas previamente.

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Esquema VI

18

Se hace reaccionar el yoduro de heteroarilo (e) con fenil litio, seguido de ter-butil litio, a baja temperatura. Se apaga el di-anión con dimetilformamida, y se aísla el correspondiente aldehído (m) bajo condiciones estándar. Este aldehído se hace reaccionar después con una amina apropiada (n) en un disolvente indicado, típicamente dimetilformamida, para formar la correspondiente imina (o). Después se hace reaccionar esta imina con un isocianato de p-toluenosulfonilmetilo (p) apropiadamente sustituido, en metanol, con una alquil amina primaria, bajo reflujo, para proporcionar el compuesto deseado (Ib). Las aminas requeridas (n) pueden conseguirse comercialmente o pueden prepararse mediante procedimientos bien conocidos por el experto en la técnica. Los isocianatos de p-toluenosulfonilmetilo (p) pueden prepararse tal como se describe en el siguiente esquema, donde todas las variables son las definidas previamente.

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Esquema VII

19

Se combinan una mezcla de ácido p-toluenosulfínico, formamida, y un aldehído apropiado, y se calientan juntos en presencia de un ácido indicado, para proporcionar la N-formil-p-toluenosulfonilmetilamina (q). Se hace reaccionar el producto intermedio (q) con un agente deshidratador apropiado, típicamente oxicloruro de fósforo, para proporcionar la isocianida (p). Los aldehídos requeridos están disponibles comercialmente, o se pueden preparar mediante procedimientos estándar bien conocidos en la materia.

Los compuestos de Fórmula I donde W es tiazol (vii) pueden prepararse tal como se ilustra en el siguiente esquema donde R^{5} es -NH_{2}, y todas las demás variables son las definidas previamente.

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Esquema VIII

20

Se hace reaccionar una \alpha-halocetona apropiada (r) con una tioamida (s) apropiada, en un disolvente apto, para proporcionar tiazol (t). Este tiazol se trata con n-butil litio, y el anión resultante se hace reaccionar con cloruro de tributiltin para proporcionar el derivado tin (u). Este producto intermedio se empareja con 1-(isopropilsulfonil)-2-amino-6-yodobencimidazol, o con 2-amino-6-yodobenzotiazol (e) en presencia de un catalizador de paladio, bajo condiciones estándar, para proporcionar el compuesto deseado (Ic).

Las \alpha-halocetonas requeridas están disponibles tanto comercialmente como preparándolas mediante condiciones estándar, a partir del correspondiente compuesto carbonilo, por ejemplo, tal como describe House (H.O. House, Modern Synthetic Reactions, W.A. Benjamín, Inc., Menlo Park, California (1972), pages 459-478) y Larock (R.C. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VHC Publishers, Inc., New Cork, New Cork (1989), pages 369-471, 755). Las tioamidas requeridas están disponibles comercialmente, o pueden prepararse mediante procedimientos estándar bien conocidos por el experto en la técnica, por ejemplo, mediante el tratamiento de una amida apropiada con [2,4-bis(4-metoxifenil)-1,3-ditia-2,4-difosfetan-2,4-disulfida] (Re-agente de Lawesson).

Los compuestos de Fórmula I donde W es el pirazol (v) pueden prepararse tal como se ilustra en el siguiente esquema, donde R^{5} es -NH_{2}, y todas las demás variables son las definidas previamente.

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Esquema IX

21

La pirazol-5-ona apropiada se hace reaccionar con bromo, mediante un agente brominante apropiado, como es el oxibromuro de fósforo, para obtener el 5-bromo-1H-pirazol apropiado. Después se empareja el pirazol con el ácido bencimidazol 6-borónico indicado, para llegar al bencimidazol de pirazolilo apropiado.

Alternativamente, los compuestos donde W=(iv) pueden prepararse tal como se ilustra en el siguiente esquema, donde R^{5} es -NH_{2}, y todas las demás variables son las definidas previamente.

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Esquema X

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22

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Se empareja un alquinilo apropiado con un compuesto de cloruro indicado, y después se oxidan para formar la cetona. La cetona se hace reaccionar con hidracina anhídrido y un aldehído apropiado, en un disolvente apropiado, para formar el pirazol. El grupo nitro se reduce, y se cierra el anillo para llegar al benzamidazol de pirazolilo
apropiado.

Los compuestos de Fórmula I donde W es la pirazolona (vi) pueden prepararse tal como se ilustra en el siguiente esquema, donde R^{5} es -NH_{2} y todas las demás variables son las definidas previamente.

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Esquema XI

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23

El di-anión del 6-yodobencimidazol (e) se prepara mediante tratamiento secuencial con fenil litio, seguido de ter-butil litio, a baja temperatura. El di-anión se apaga con dimetilformamida, y se aísla el correspondiente aldehído (m) bajo condiciones estándar. Después se hace reaccionar este aldehído con un etil acetato apropiado, seguido de una oxidación para obtener el dicetobenzamidazol. El dicetobenzamidazol se hace reaccionar con el compuesto de hidracina apropiado, y se somete a reflujo en presencia de tolueno para obtener el bencimidazol de pirazolona
deseado.

Los compuestos de Fórmula I donde W es un imidazol (viii) y X=N(R^{4}) pueden prepararse tal como se ilustra en el siguiente esquema, donde todas las variables son las definidas previamente. Por favor, nótese que el 2-fenilo unido al imidazol se muestra sin sustituir, pero puede de hecho estar sustituido.

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Esquema XII

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24

Se empareja la parametoxi-bencilmetilamina con un cloruro de sulfonilo apropiado. Posteriormente la amina se protege y el compuesto resultante se empareja con el 2-fenil imidazol-3-ilo. La amina se desprotege, y se construye el bencimidazol tal como se muestra en el Esquema III.

Los compuestos de Fórmula I donde W es un triazol (ix) pueden prepararse tal como se ilustra en el siguiente esquema, donde R^{5} es -NH_{2} y todas las variables son las definidas previamente.

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Esquema XIII

25

Se nitrata el dibromobenceno, seguido de aminación. Posteriormente se empareja la nitroanilina resultante con un fenilacetileno apropiado, para proporcionar el correspondiente difenilacetileno. La sulfonamida se forma por adición de un haluro de sulfonilo apropiado, y el triazol se forma por adición de una fuente de azida, típicamente azida sódica. Después se prepara el bencimidazol tal como se describió previamente.

Muchos de los compuestos de la presente invención no son solo inhibidores de la quinasa p38, sino que también son productos intermedios útiles para la preparación de compuestos adicionales de la presente invención. Por ejemplo, las aminas primarias y secundarias pueden ser acilatadas, alquilatadas o emparejadas con ácidos carboxílicos, o aminoácidos, bajo condiciones estándar de unión de péptidos. Además, los grupos funcionales éster pueden ser reducidos hasta los correspondientes alcoholes, o pueden ser convertidos en amidas, bajo condiciones estándar. Los alcoholes pueden ser activados y desplazados por varios nucleófilos, para proporcionar otros compuestos de la invención. Estos grupos incluyen, aunque no quedan limitados a, haluros, iones oxonio, percloratos de alquilo, ésteres de amonioalcanosulfonato, fluorosulfonatos de alquilo, nonaflatos, tresiflatos, triflatos, y ésteres sulfónicos, preferiblemente el metano sulfonato o tosilato. Las técnicas para la introducción de esos grupos son bien conocidas por el experto en la técnica; ver, por ejemplo, March, Advanced Organic Chemistry, 5^{th} Ed., John Wiley and Sons, New Cork, pg. 445-449 (2001). Adicionalmente, el grupo 2-amino del núcleo de bencimidazol puede ser diazotizada y desplazada para proporcionar los correspondientes derivados halo bajo condiciones estándar. Esos compuestos pueden reaccionar después con distintas aminas, bajo condiciones estándar, para proporcionar compuestos adicionales de Fórmula I. Además, los compuestos de diazoamonio pueden ser reducidos para proporcionar los correspondientes compuestos sin sustituir.

El experto en la técnica también apreciará que no todos los sustituyentes en los compuestos de Fórmula I tolerarán ciertas condiciones de reacción empleadas para sintetizar los compuestos. Esos grupos funcionales pueden ser introducidos en un punto conveniente de la síntesis, o pueden ser protegidos, y después desprotegidos, tal como sea necesario o deseado. El experto en la técnica apreciará que los grupos protectores pueden ser eliminados en cualquier punto conveniente durante la síntesis de los compuestos de la presente invención. Procedimientos para introducir y eliminar grupos protectores de nitrógeno u oxígeno son bien conocidos en el arte; ver, por ejemplo, Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^{rd} Ed., John Wiley and Sons, New Cork, Chapter 7 (1999). Además, el experto en la técnica apreciará que en muchas circunstancias, el orden en el cual se introducen dichos grupos funcionales, no es crítico. El orden particular de los pasos requeridos para producir los compuestos de Fórmula I depende del compuesto en particular a ser sintetizado, el compuesto de inicio, y la labilidad relativa de los grupos funcionales sustituidos.

Preparación 1

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-formilbencimidazol

Se añade fenil litio (750 ml, 1,8 M en ciclohexano/éter, 70/30) durante 1 hora, a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-yodobencimidazol (150 g, 0,41 mol) en tetrahidrofurano (5,6 l) a -76ºC. Se agita durante 15 minutos y después se añade ter-butil litio (750 ml, 1,7 M en pentano). Tras 1 hora, se añade lentamente dimetilformamida (250 ml) durante 1 hora, y se calienta hasta los 0ºC. Se apaga la reacción vertiendo la mezcla de reacción en una mezcla de cloruro amónico acuoso saturado frío (500 g, 5 l) y ácido clorhídrico concentrado (300 ml). Se separan las capas, se lava la fase orgánica con agua, y se concentra bajo presión reducida. Se suspende el residuo en metanol (500 ml), se filtra el precipitado amarillo, y se seca para proporcionar 85 g (76%) del compuesto del título.

^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \NAK9,89 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,43 (s, 2H), 7,37 (d, 1H), 3,98 (m, 1H), 1,35 (m, 6H).

Preparación 2

\alpha-(p-toluenosulfonil)bencilisocianida

Paso A

N-[formil] \alpha-(p-toluenosulfonil)bencilamina

Procedimiento A

Se añade ácido clorhídrico concentrado (3 ml) gota a gota sobre una solución de sal sódica de ácido p-tolueno-sulfínico en agua (20 ml) y ter-butilmetiléter (10 ml). Se agita durante 10 minutos, y se separan las capas. Se lava la capa orgánica con cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico y se concentra bajo presión reducida para proporcionar 5 g de ácido p-toluenosulfínico. Se combina este ácido con benzaldehído (4,75 g, 44,8 mmol), formamida (4,9 g, 0,11 mol), y ácido canforsulfónico (0,86 g, 3,7 mmol), y se calienta hasta los 60ºC durante 18 horas. Se quita la reacción del calor, y se suspende el sólido blanco en hexanos:metanol 3:1. Se filtra la suspensión para proporcionar 7,6 g (82%) del producto deseado en forma de sólido blanco. ^{1}H-NMR (DMSO-d_{6}): \NAK9,75 (d, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,53 (d, 2H), 7,39 (m, 5H), 6,36 (d, 1H), 2,38 (s, 1H).

Procedimiento B

Se trata una solución de sal sódica de ácido p-toluenosulfínico (6,0 g, 33,7 mmol) en H_{2}O (20 ml) y ter-metil butil éter (10 ml) gota a gota, con HCl concentrado (3 ml), y se agita durante 10 minutos. Se separa la solución en un embudo separador, y se lava la capa orgánica con cloruro sódico acuoso saturado. Se seca la capa orgánica sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra, y se elimina el solvente para proporcionar 5,2 g (cuantitativos) de ácido p-toluenosulfínico. Se combina el ácido con benzaldehído (2,4 g, 22,5 mmol), formamida (3,8 g, 84,2 mmol), y trimetilsilicloruro (TMSCl) (4,0 g, 37,0 mmol) en 30 ml de una disolución 1:1 de tolueno/acetonitrilo. Se calienta la reacción hasta los 50ºC y se agita durante 5 horas. Se enfría la reacción y se diluye en H_{2}O (100 ml) y ter-butil-metiléter (TBME) (30 ml). Se enfría la solución en un baño de hielo, y se filtra para dar 4,5 g (70%) del producto deseado. Se seca el sólido bajo vacío durante toda la noche, para eliminar cualquier resto de agua residual. ^{1}H-NMR (DMSO): 9,75 (d, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,69 (d, 2H), 7,53 (d, 2H), 7,39 (m, 5H), 6,36 (d, 1H), 2,38 (s, 1H).

Paso B

Deshidratación

Se enfría una solución de N-[formil] \alpha-(p-toluenosulfonil)bencilamina (7,0 g, 0,024 mol) en dimetoxietano (200 ml) hasta llegar a los -10ºC. Se añade oxicloruro de fósforo (5,6 ml, 0,06 mol) seguido de la adición, gota a gota, de trietilamina (16,8 ml, 0,12 mol) en dimetoxietano (10 ml), manteniendo una temperatura de reacción por debajo de los -5ºC. Se calienta la mezcla de reacción gradualmente durante 1 hora, se añade agua y se extrae con etil acetato. Se separan las capas, se lava la fase orgánica con bicarbonato sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida para proporcionar 6,5 g del compuesto del título. MS(ES^{-}): m/z = 270,1
(M-H^{-})

Los compuestos de las Preparaciones 3 a 4 se preparan esencialmente tal como se describe en la Preparación 2, utilizando el Procedimiento A en el primer paso.

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Los compuestos de las Preparaciones 5 a 8 se preparan esencialmente tal como se describe en la Preparación 2, utilizando el Procedimiento B en el primer paso.

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Preparación 9

N-[1-(etoxicarbonil)piperidin-4-il] ((1-isopropilsulfonil-2-amino-6-formil)-bencimidazol)-imina

Se combina 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-formilbencimidazol (1,0 g, 3,7 mmol) con 1-(etoxicarbonil)-4-aminopiperidina (0,64 g, 3,7 mmol) en dimetilformamida (5 ml), y se agita a temperatura ambiente durante toda la noche. Se diluye la mezcla de reacción con etil acetato (50 ml) y se lava secuencialmente con agua (2 x 10 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (2 x 10 ml). Se seca la fase orgánica remanente sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida para proporcionar 1,5 g (95%) del compuesto del título. MS(ES^{-}): m/z = 422,2 (M-H)^{-}.

Los compuestos de las Preparaciones 10 a 41 se preparan esencialmente tal como se describe en la Preparación 9. En algunos ejemplos, se necesita la adición de un equivalente de trietilamina para obtener la conversión completa de la imina derivada.

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Preparación 42

N-[metil] N-[metoxi] 1-(isopropilsulfonil)-2-aminobencimidazol-6-carboxamida A. N-[metil]-N-[metoxi] 3,4-dinitrobenzamida

Se enfría una mezcla de ácido 3,4-dinitrobenzoico (195 g, 0,92 moles), 1,3 l de diclorometano seco, y 2 ml de dimetilformamida, todo a -12ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. Se añade cloruro de oxalilo (134 ml, 1,54 moles) gota a gota, mediante un embudo de adición, durante 35 minutos, y se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente, bajo una atmósfera de nitrógeno, durante toda la noche. Se elimina de la mezcla de reacción el exceso de cloruro de oxalilo mediante ciclos repetitivos de concentración de una solución de diclorometano de la mezcla de reacción, bajo presión reducida. Se enfría una mezcla de el residuo en 1 l de diclorometano a -5ºC bajo una atmósfera de nitrógeno, y se añade hidrocloruro de N,O-dimetilhidroxilamina (98,7 g, 1,01 moles), seguido de la cuidadosa adición de 209 ml (2,62 moles) de piridina seca en porciones. Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 4 horas, y después se concentra dos veces bajo presión reducida. Se suspende el residuo en 500 ml de diclorometano, y se concentra dos veces bajo presión reducida. Se suspende el residuo en 500 ml de diclorometano y se filtra. Se almacena el filtrado durante 3 días, a -13ºC, se filtra el sólido y se enjuaga con diclorometano frío. Se diluye el filtrado con agua (40 ml) y se almacena otra vez a -13ºC, para proporcionar una segunda recogida. Se secan las recolecciones combinadas, bajo presión reducida, para proporcionar 182 g (77%) del compuesto deseado.

B. N-[metil] N-[metoxi] 3,4-diaminobenzamida

Se añaden 18,0 g de catalizador Pd/C 10% en peso, a una solución de N-[metil] N-[metoxi] 3,4 dinitrobenzamida (182 g, 0,712 moles) en 900 ml de tetrahidrofurano y 900 ml de etanol, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se hidrogena a temperatura ambiente durante 6 horas bajo 60 p.s.i. Se filtra la mezcla a través de un Celite® y se concentra el filtrado bajo presión reducida. Se suspende el residuo en 500 ml de diclorometano, se concentra bajo presión reducida y se seca el residuo bajo presión reducida para proporcionar 135 g (97%) del compuesto deseado.

C. N-[metil] N-[metoxi] 3-(isopropilsulfonil)amino-4-aminobenzamida

Se añade piridina seca (234 ml, 2,94 moles) a una solución fría (0ºC) de N-[metil] N-[metoxi] 3,4-diaminobenzamida (135 g, 0,69 moles) en 1 litro de diclorometano seco, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se añade cloruro de isopropilsulfonilo (85,4 ml, 0,76 moles) a 0ºC durante 30 minutos, se agita la mezcla a 0ºC durante otros 30 minutos, y se deja a temperatura ambiente durante toda la noche. Se concentra la mezcla de reacción bajo presión reducida, y se divide el residuo con dietil éter (1 l) y ácido clorhídrico 5 N (1 l). Se separan las capas, se descarta la capa de dietil éter, se añade etil acetato (1,5 l) a la capa acuosa, y se agita mientras se añade carbonato sódico, hasta que el pH = 6.5. Se extrae la capa acuosa usando etil acetato, se lavan las capas orgánicas combinadas, se seca sobre sulfato magnésico y se concentra bajo presión reducida. Se somete el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de etil acetato:hexano 65:3, hasta el 100% de etil acetato, para proporcionar un rendimiento del 40% del compuesto deseado.

D. Formación del anillo de imidazol

Se añade durante 1 hora, hidróxido sódico 5 N (55 ml) a una suspensión de N-[metil] N-[metoxi] 3-(isopropilsulfo-
nil)amino-4-aminobenzamida (83 g, 0,28 moles) en 550 ml de alcohol de isopropilo y 28 ml de agua. Se agita la mezcla de reacción durante una hora adicional, y después se enfría hasta los 3ºC. Se añade bromuro de cianógeno (29,0 g, 0,27 moles) en porciones, y se agita a temperatura ambiente durante toda la noche, bajo reflujo durante 5 horas, y después a temperatura ambiente durante toda la noche. Se añade etil acetato (1,5 l). se agita vigorosamente, y se filtra la suspensión resultante. Se lava el filtrado con cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato magnésico y se concentra hasta aproximadamente ¼ del volumen. Se filtra la suspensión y se lava el sólido con etil acetato frío. Se concentra el filtrado bajo presión reducida, y se cristaliza el residuo a partir del etil acetato, para proporcionar una segunda recolección. Las recolecciones combinadas proporcionan un rendimiento del 60% del compuesto del título. MS(FD^{+}): m/z = 326 (M+H)^{+}.

Preparación 43

N-[metil] N-[metoxi] 2-(ter-butildimetilsilil)oxi-2-(4-fluorofenil)acetamida A. Metil p-fluoromandelato

Se añade carbonato potásico (12 g, 87 mmol), seguido de yodometano (7,37 ml, 118 mmol) a una solución a 0ºC de ácido p-fluoromandélico (79 mmol, 13,4 g) en 160 ml de dimetilformamida seca, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita la mezcla resultante a 0ºC durante 1 hora, y a temperatura ambiente durante toda la noche. Se vierte la mezcla de reacción sobre hielo, se diluye con agua y etilacetato, y se extrae tres veces la capa acuosa con etilacetato. Se lavan las capas orgánicas combinadas con agua fría y cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico y se concentra bajo presión reducida para proporcionar 12,7 g (87%) del compuesto deseado en forma de sólido amarillo claro.

B. N-[metil] N-[metoxi] 2-hidroxi-2-(4-fluorofenil)acetamida

Se enfría una mezcla de hidrocloruro de N-metil-O-metil hidroxilamina (118 mmol) y tolueno (125 ml) a -5ºC. Se añade lentamente trimetilaluminio (2 M en heptano, 59,2 ml, 118 mmol) a la mezcla durante 20 minutos, manteniendo la temperatura de reacción entre -1 y 8ºC. Después de unos 5 minutos, se calienta la mezcla lentamente hasta la temperatura ambiente, y se agita durante 1,5 horas. Se añade una solución de metil p-fluoromandelato (11,1 g, 60 mmol) en 75 ml de tolueno, durante 30 minutos sin enfriamiento externo. Se enfría la reacción a 0ºC y se apaga con ácido clorhídrico al 10%. Se extrae con etil acetato (4 x 250 ml). Se lavan las capas combinadas de etil acetato de manera secuencial, con agua y cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico y se concentra bajo presión reducida para proporcionar 12,1 g (82%) del compuesto deseado.

C. O-sililación

Se añade trietilamina (17,2 ml, 123 mmol) seguido de ter-butildimetilsilil triflato (20,8 ml, 90 mmol), a un solución a 0ºC de N-[metil] N-[metoxi] 2-hidroxi-2-(4-fluorofenil)acetamida (12,1 g, 62 mmol) en 180 ml de diclorometano bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita la mezcla de reacción a 0ºC durante 1 hora, y a temperatura ambiente durante 4 horas. Se añade una solución acuosa saturada de cloruro amónico y se diluye con dietil éter. Se lava la capa orgánica, de manera secuencial, con agua y cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico seco, y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice, fluyendo con hexano:etil acetato 9:1, para proporcionar el compuesto del título, con forma de aceite amarillo con un rendimiento del 55%.

Preparación 44

N-[metil] N-[metoxi] 2-(ter-butildimetilsilil)oxi-2-(4-(trifluorometil)fenil)acetamida

Comenzando con el ácido p-(trifluorometil)mandélico, se prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describe en la Preparación 43.

Preparación 45

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-a-(fenil)acetil)-bencimidazol

Se añade cloruro de isopropilmagnesio (2,0 M en THF, 235 ml, 470 mmol) durante 15 minutos a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-yodobencimidazol (42,9 g, 118 mmol) en tetrahidrofurano (850 ml) a -70ºC, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita durante 1 hora a 0ºC, y después se añade una solución de N-[metil] N-[metoxi] 2-(ter-butildimetilsilil)oxi-2-(fenil)acetamida (90,0 g, 294 mmol) (Tius, et al., Tetrahedron, 56, 3339-3351 (2000)) en tetrahidrofurano (150 ml) por medio de una cánula. Se agita la suspensión resultante a 0-5ºC durante 1 hora, y después a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se enfría la mezcla a 10ºC y después se añade cloruro amónico acuoso saturado. Se agita la mezcla durante 15 minutos y se separan las capas. Se extrae la capa acuosa con etil acetato (400 ml), se secan las capas orgánicas combinadas sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice, se eluye con acetonitrilo 1-10% en diclorometano que contiene 0,5% de trietilamina, para proporcionar un rendimiento del 50% del compuesto del título, en forma de un sólido blanco.

MS(ES^{+}): m/z = 488,1 (M+H)^{+}.

Los compuestos de las preparaciones 46-47 se preparan esencialmente tal como se describió en la Preparación 45.

105

Preparación 48

Síntesis alterna de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-\alpha-(fenil)acetil)bencimidazol

Se añade lentamente ter-butil litio (solución 1,5 M, 5,8 ml, 8,65 mmol) a una solución de O-(ter-butildimetil)silil bencil alcohol (1,9 g, 8,54 mmol) en 40 mol de tetrahidrofurano anhidro a -78ºC, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita la solución durante 3,5 horas, permitiendo que la reacción se caliente hasta los -25ºC. Se enfría hasta los -35ºC y se añade una solución de N-[metil] N-[metoxi] 1-isopropilsulfonil-2-aminobencimidazol-6-carboxamida (0,7 g, 2,13 mmol) en 24 ml de tetrahidrofurano anhidro. Se agita la reacción durante 1 hora mientras se calienta lentamente hasta los 0ºC. Se añade cloruro amónico acuoso saturado, y se diluye con etil acetato. Se extrae la capa acuosa con etil acetato, se lavan las capas orgánicas combinadas de manera secuencial con agua y cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice, fluyendo con diclorometano:acetonitrilo 5:1, para proporcionar 730 mg (70%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 488,1 (M+H)^{+}.

Preparación 49

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-\alpha-(3-(trifluorometil)fenil)acetil)-bencimidazol

Comenzando con O-(ter-butildimetil)silil-3-(trifluorometil)bencil alcohol, se prepara el título del compuesto, esencialmente tal como se describió en la Preparación 48 (rendimiento del 83%). MS(ES^{+}): m/z = 556,2 (M+H)^{+}.

Preparación 50

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-hidroxi)-\alpha-(4-fluorofenil)acetil)-bencimidazol

Se añade ácido fluorhídrico (48% ac., 14,6 ml) a una suspensión de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-\alpha-(4-fenil)acetil)-bencimidazol (7,3 g, 14,4 mmol) en acetonitrilo (60 ml), a temperatura ambiente. La solución transparente se agita durante 2,5 horas a temperatura ambiente. Se recoge mediante filtrado el sólido blanco resultante, y se lava con acetonitrilo adicional (25 ml). Se seca el sólido blanco bajo vacío, para proporcionar 5,49 g (97%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 392 (M+H)^{+}.

Preparación 51

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(4-fluorofenil)-etan-1,2-diona)-bencimidazol

Se añade 1-hidroxi-1,2-benzoyodooxol-3(1H)-ona-1-oxido (IBX) (2,83 g, 10,11 mmol) a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-hidroxi)-\alpha-(4-fluorofenil)acetil)-bencimidazol (3,16 g, 8,08 mmol) en dimetilsulfóxido anhidro (25 ml). Después de 2 horas, se añade tiosulfato sódico (solución acuosa saturada, 50 ml) y se agita a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se añade agua y se extrae con etil acetato. Se lava la capa orgánica con cloruro sódico saturado acuoso, y se seca (MgSO_{4}). Después de la evaporación del solvente, se purifica el crudo mediante una columna de cromatografía, para proporcionar 2,08 g (rendimiento del 74%) del compuesto del título, en forma de un sólido amarillo pálido. MS(ES^{+}): m/z = 390 (M+H)^{+}.

Preparación 52

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(feniletinil)-bencimidazol

Se combinan, bajo una atmósfera de nitrógeno, 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-yodobencimidazol (400 g, 1,095 moles), bis(trifenilfosfina) paladio (II) acetato (32,8 g, 0,044 moles), y CuI (41,7 g, 0,219 moles), seguido de DMSO (8,4 l) y trietilamina (317 g, 3,133 moles). Se agita la mezcla resultante, de 20 a 25ºC durante 15 minutos, seguido de la adición de fenilacetileno (168 g, 1,645 moles) durante 30 minutos, dando una elevación de la temperatura hasta los 34ºC. Se enfría la reacción lentamente hasta los 20 o 25ºC, y tras 15 horas, se apaga una alícuota de la reacción dentro de agua, y se diluye con CH_{3}CN para realizar un análisis HPLC. El cromatograma HPLC (Columna: Zorbax SB-C8, 4,6 x 250 mm, 5 micrómetros UV = 218 nm, gradientes acetonitrilo/tampón) muestra la completa consumición del yoduro, con la producción de dos nuevos productos menos polares (el producto deseado y el dímero fenilacetileno). Se añade agua (4 l) a la reacción durante 1 hora, dando una elevación de la temperatura hasta los 40ºC, y dando un precipitado oscuro (principalmente catalizador). Se filtra la reacción a través de una capa delgada de Celite ® (24 cm de diámetro), sin lavado de la pasta residual del catalizador. Se vuelve a filtrar hasta el reactor, y se añaden 4 l adicionales de agua durante 1 hora, para dar una temperatura de finalización de 45ºC, y una suspensión amarilla. Se deja enfriar la mezcla durante toda la noche, hasta los 20 o 25ºC mientras se agita. Se recogen los sólidos mediante filtración de vacío, y se lava con agua (4 l). Se secan los sólidos a 60ºC bajo vacío hasta llevarlos a peso constante. Rendimiento = 319 g (86%) de sólido granular de color amarillo claro. MS(ES^{+}): m/z = 340,2 (M+H)^{+}.

Preparación 53

1-ciclopentilsulfonil-2-amino-6-(feniletinil) bencimidazol

Comenzando con el 1-ciclopentilsulfonil-2-amino-6-yodo bencimidazol, se prepara el título del compuesto esencialmente tal como se describió en la Preparación 52 (44% de rendimiento). MS(APC^{+}): m/z = 366,2 (M+H)^{+}.

Preparación 54

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-fenil-etano-1,2-diona)-bencimidazol

Se combina agua (4 l), NaHCO_{3} (30 g, 0,357 moles), y MgSO_{4} (145 g, 1,205 moles) entre 20 y 25ºC, y se agita hasta ser homogéneo (exotérmico a 30,5ºC). Se añade acetona (4 l) a la reacción para dar una mezcla turbia, seguida de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(feniletinil)-bencimidazol (200 g, 0,590 moles). Se trata la suspensión resultante con KMnO_{4} (360 g, 2,278 moles) para dar una exotermia gradual, hasta llegar a los 40ºC, durante 1 hora. Tras 1 hora adicional (35ºC), se diluye una alícuota de la mezcla de reacción con CH_{3}CN para realizar un análisis HPLC. El cromatograma HPLC demuestra la completa consumición del material de comienzo, con producción limpia de un producto ligeramente más polar. Se añade Na_{2}SO_{3} (400 g) a la mezcla de reacción, seguido de EtOAc (3 l). Se añade H_{2}SO_{4} al 20% en agua (300 ml) a la mezcla de reacción durante 25 minutos (intervalo de temperatura de 30 a 40ºC, gran cantidad de MnO_{2} sólido producido). Se permite la separación de las fases, y se recoge una alícuota de la fase orgánica más elevada para realizar análisis HPLC (el cromatograma HPLC mostró un producto limpio). Se separa la fase orgánica y se clarifica mediante filtración, a través de Celite ®. Se vuelve a extraer la fase acuosa (negra y gruesa) con EtOAc (2 l) y se clarifica la fase orgánica resultante mediante filtración, a través de Celite ®. Se usa EtOAc (1 l) para enjuagar el Celite ®. Se combinan las fases orgánicas y se concentran (se eliminan 7 l) a 40ºC bajo vacío, provocando la formación de dos fases. Se añade EtOAc (2 l a la mezcla, seguidos de agua (0,5 l) y NaCl (30 g)). Se separan las capas, y se vuelve a extraer la fase acuosa con EtOAc (0,5 l). Se combinan las fases orgánicas, se secan con MgSO_{4}, y se usa EtOAc (2 l) para la lavar el MgSO_{4}. Se elimina el solvente bajo vacío, a 40ºC, para dar 189 g de sólidos amarillos. Se secan los sólidos bajo vacío a 60 ºC, hasta llevarlos a peso constante, para dar un peso final de 182 g (83%). Se prepara analíticamente el producto final puro mediante recristalización a partir del EtOAc. MS(ES^{+}): m/z = 372,2 (M+H)^{+}.

Preparación 55

1-ciclopentilsulfonil-2-amino-6-(2-fenil-etano-1,2-diona)-bencimidazol

Comenzando con 1-ciclopentil-2-amino-6-(feniletinil)-bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describió en la Preparación 54, dando 1,29 g de un sólido amarillo (99% de rendimiento). MS(APC^{+}): m/s = 398,8 (M+H)^{+}.

Preparación 56

Ácido 1-isopropilsulfonil-2-amino-bencimidazol-borónico

Se carga un frasco de fondo redondo, equipado con hielo seco/baño de acetona, atmósfera de nitrógeno, agitador mecánico, termopar, y embudo adicional con septo; con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-yodo bencimidazol (125 g, 342 mmol) y THF (1,2 l), y se enfría hasta los -77ºC (dando lugar a una suspensión). Se le añade a esta suspensión PhLi (1,8 M en c-hexano/éter, 599 ml, 1078 mmol) durante 25 minutos, manteniendo la temperatura por debajo de los -67ºC. Después de agitar la suspensión verde resultante durante 20 minutos, mientras se enfría hasta los -77ºC, se añade t-BuLi (1,7 M en pentano, 503 ml, 856 mmol) durante 25 minutos, manteniendo la temperatura de la reacción por debajo de los -67ºC. Se agita la mezcla a -75ºC durante 40 minutos, y después se añade borato de triisopropilo (276 ml, 1198 mmol) durante 15 minutos, manteniendo la temperatura por debajo de los -65ºC. Se calienta lentamente la suspensión resultante hasta los 0ºC durante 2 horas, después se añade una mezcla de HCl concentrado (ac.) y agua (400 ml) hasta que se alcanza el pH 2. Se agita la mezcla durante 1 hora, y después se ajusta el pH > 12 con NaOH 5 N, mientras se mantiene la temperatura por debajo de 10ºC. Se añade agua (1 l), y se separan las capas. Se lava la capa acuosa con EtOAc (300 ml), y después se ajusta hasta pH 6 con HCl concentrado (ac.). Se extrae la mezcla con EtOAc (2 x 700 ml), y se secan los extractos combinados (Na_{2}SO_{4}), se filtran, y se concentran al vacío para formar una pasta naranja (116 g). Se disuelve la pasta 2-propanol (360 ml) caliente (aproximadamente 60ºC), y después se añade agua (1,4 l). Se enfría la solución hasta los 0ºC en 3 horas. Se recoge el sólido resultante mediante filtración, se lava con agua, y se seca al aire hasta que alcanza un peso constante, para producir el compuesto del título (34,9 g, rendimiento del 36%) en forma de cristales de color canela claro. Se obtiene una segunda recolección a partir del filtrado (4,95 g, rendimiento total del 41%). MS(ES^{+}): m/z = 284 (M+H)^{+}.

Preparación 57

2,4-(dibromo)-5-(fenil)-imidazol

Se añade bromo (39,9 ml, 778 mmol), gota a gota, a una suspensión de 4-fenilimidazol (51,0 g, 354 mol) en AcOH (450 ml), a temperatura ambiente bajo nitrógeno, a una tasa tal que se mantiene la temperatura interna de menos de 30ºC utilizando un baño de hielo para enfriar. Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 22 horas (tiempo tras el cual el análisis mediante LC-MS indica que el producto intermedio monobromo aún está presente). Se añade bromo adicional (12 ml), y se agita la reacción durante 24 horas, después se diluye con agua (1600 ml). Se extrae la mezcla con éter (800 y después 400 ml), y se lavan las capas orgánicas combinadas con NaHSO_{3} (5%, 1000 ml), agua (2 x 1000 ml), y después NaCOH_{3} (500 ml). Se seca la capa orgánica (Na_{2}SO_{4}), se filtra y se concentra parcialmente al vacío. Se añaden hexanos (500 ml), y se concentra la mezcla parcialmente, de nuevo al vacío, hasta ca. 600-700 ml. Se recoge el sólido mediante filtración y se deja secar al aire hasta que se obtienen los compuestos del título (70,9 g, rendimiento del 66%) en forma de polvo amarillo pálido. MS(ES^{+}): m/z = 301 (M+H).

Preparación 58

1-(trimetilsililetoximetil)-2,5-(dibromo)-4-(fenil)-imidazol

Se le añade a una solución de 2,4-(dibromo)-5-(fenil)-imidazol (73,86 g, 244,6 mmol) en THF seco (800 ml), enfriada a 1ºC bajo nitrógeno, NaH poco a poco (60% sin lavar en aceite mineral, 11,25 g, 281 mmol) manteniendo la temperatura de reacción por debajo de 10ºC. Se enfría la mezcla hasta los -7ºC y después se añade el cloruro de sililetoximetilo (SEMCI) (42,0 g, 252 mmol) gota a gota (2ºC). Se agita la mezcla durante 2,5 horas (10ºC) y después se diluye con agua (1400 ml) y se extrae con éter (2 x 600 ml). Se secan las capas orgánicas combinadas (Na_{2}SO_{4}), se filtran y se concentran al vacío. Se filtra el material crudo a través de un tapón de gel de sílice (700 g), eluído con hexanos (3 l), y después con EtOAc/hexanos al 10% (3 l) y al 20% (3 l), para proporcionar material que es recristalizado a partir de alcohol de isopropilo caliente (500 ml), que es enfriado hasta temperatura ambiente durante 2 horas, y después hasta los 5ºC durante 30 minutos. Se recoge el sólido mediante filtración, lavando con alcohol de isopropilo frío, y se seca al aire, para obtener 54,2 g (51% de rendimiento) en forma de cristales blancos. MS(ES^{+}): m/z = 431 (M+H)^{+}.

Preparación 59

1-(trimetilsililetoximetil)-2-(formil)-5-(bromo)-4-(fenil)-imidazol

Se le añade gota a gota a una solución de 1-(trimetilsililetoxi)-2,5-(dibromo)-4-(fenil)-imidazol (60,3 g, 140 mmol) en THF seco (600 ml), enfriado a -11ºC bajo nitrógeno, una solución de cloruro de isopropilmagnesio (THF 2 M, 87,2 ml, 174 mmol), dando lugar una exotermia a 1ºC. Se agita la mezcla a esta temperatura durante 30 minutos, y después se añade DMF seco (32,4 ml 419 mmol) (8ºC), y se mezcla durante 45 minutos. Se añade solución acuosa saturada de NH_{4}Cl (500 ml) y agua (100 ml), se separan las capas, y se extrae la capa acuosa con etil acetato (300 ml). Se secan las capas orgánicas combinadas (Na_{2}SO_{4}), se filtran y se concentran al vacío, y se purifica el residuo mediante cromatografía (Biotage 75 long; eluído con EtOAc/hexanos al 5%), para proporcionar 33,6 g (rendimiento del 63%) en forma de un aceite amarillo. MS(ES^{+}): m/z = 323 (M+H)^{+}.

Preparación 60

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(trimetilsililetoximetil)-2-(formil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se añade PdCl_{2}(PPh_{3})_{2} (49 mg, 0,0697 mmol) en una porción, a una solución de 1-(trimetilsililetoximetil)-2-(formil)-5-(bromo)-4-(fenil)-imidazol (532 mg, 1,39 mmol) en tolueno seco (9 ml) previamente burbujeado mediante una corriente de nitrógeno. Después de 5 minutos, se añade una suspensión de ácido-bencimidazol 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-borónico (472 mg, 1,67 mmol) en etanol (6 ml), previamente burbujeado con una corriente de nitrógeno, seguido de carbonato sódico (2 M en agua, 3,4 ml, 6,95 mmol). Se agita la mezcla durante 2,5 horas a 90ºC, se enfría a temperatura ambiente y se diluye con agua (20 ml). Se extrae la mezcla con EtOAc (3 x 30 ml) y se lavan las capas orgánicas combinadas, con cloruro sódico acuoso saturado (30 ml), se seca (Mg_{2}SO_{4}) y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}; eluyente: hexano/EtOAc 1:1 hasta 1:3), para obtener un sólido marrón, 384 mg, rendimiento de 51%. MS(ES^{+}): m/z = 540,2 (M+H)^{+}.

Preparación 61

1-bencil-2,4,5-tribromo-imidazol

Se combinan 2,4,5-tribromoimidazol (15,29 g, 0,050 mol), carbonato de cesio (18,0 g, 0,055 mol), bromuro de bencilo (6,3 ml, 0,053 mol) y dimetilformamida (100 ml), y se agita a 20ºC durante 18 horas. Se filtran los sólidos y se concentran bajo presión reducida. Se suspende en diclorometano, se filtra a través de una almohadilla de 2 cm de gel de sílice, y se lava con diclorometano (1 l). Se concentran los filtrados bajo presión reducida. Se re-disuelve en diclorometano (15 ml), se añade HCl 4 M en dioxano (12,5 ml, 0,050 mol), se enfría hasta los -20ºC, y se filtran los sólidos. Se concentra el filtrado, se disuelve en etil éter, se añade HCl/éter 1 M (20 ml) y hexano (40 ml), se enfría hasta los -20ºC y se filtra. Se combinan los sólidos y se seca bajo presión reducida, para dar 19,6 g (90%, 0,045 mol) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 393,0 (M+H)^{+}.

Preparación 62

1-bencil-4,5-dibromo-2-(2,4-difluoro-fenil)-imidazol

Se somete a reflujo una mezcla de 1-bencil-2,4,5-tribromoimidazol (1,043 g, 2,42 mmol), ácido 2,4-difluorofenil borónico (0,682 g, 4,32 mmol), acetato de paladio (0,027 g, 0,12 mmol), R(+)-2,2'-bis(di-p-tolil-fosfino)1,1'-binaftilo (0,098 g, 0,14 mmol), carbonato sódico 2 M (3.6 ml, 4,83 mmol), metanol (3,6 ml) y tolueno (36 ml), durante 18 horas. Se enfría a temperatura ambiente y se diluye con etil acetato. Se lava con carbonato sódico saturado, cloruro sódico saturado, se seca con sulfato de magnesio y se purifica el residuo en gel sílice, eluyendo con mezclas de hexano/etil acetato, para proporcionar 1-bencil-4,5-dibromo-2-(2,4-difluoro-fenil)-1H-imidazol (0,39 g). MS(ES^{+}): m/z = 461,1 (M+H)^{+}.

Preparación 63

1-bencil-4-bromo-5-(3,5-difluoro-fenil)-2-(2,4-difluoro-fenil)-imidazol

Se somete a reflujo a una mezcla de 1-bencil-4,5-dibromo-2-(2,4-difluoro-fenil)-imidazol (0,386 g, 0,90 mmol), ácido 3,5-difluorofenil borónico (0,15 g, 0,945 mmol), trans-diclorobis(trifenilfosfin) paladio (II) (0,065 g, 0,09 mmol), carbonato sódico 2 M (0,90 ml), metanol (1,5 ml) y tolueno (10 ml) durante 18 horas, después se enfría a temperatura ambiente. Se diluye con etilacetato y se lava con bicarbonato sódico saturado, cloruro sódico saturado, se seca con sulfato magnésico, y se filtran y eliminan los solventes, bajo presión reducida. Se purifica el residuo en gel de sílice, eluyendo con mezclas de hexano/acetato de etilo para proporcionar 1-bencil-4-bromo-5-(3,5-difluoro-fenil)-2-(2,4-difluoro-fenil)-1H-imidazol (0,19 g). MS(ES^{+}): m/z = 461,0 (M+H)^{+}.

Preparación 64

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(bencil)-5-(3,5-difluorofenil)-2-(2,4-difluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Se somete a reflujo a una mezcla de 1-bencil-4-bromo-5-(3,5-difluoro-fenil)-2-(2,4-difluoro-fenil)-imidazol (0,061 g, 0,13 mmol), ácido 1-isopropilsulfonil-2-amino-bencimidazol-6-borónico (0,113 g, 0,40 mmol) (descrito en la Preparación 56), trans-diclorobis(trifenilfosfina)paladio (II) (0,009 g, 0,013 mmol), carbonato sódico 2 M (0,20 ml) y 1,2-dimetoxietano (5 ml) durante 18 horas. Se enfría a temperatura ambiente, se diluye con etil acetato, y se lava con bicarbonato sódico saturado, cloruro sódico saturado, se seca con sulfato magnésico, se filtra y eliminan los solventes bajo presión reducida. Se purifica en gel de sílice con mezclas de diclorometano/metanol para proporcionar el compuesto del título (0,084 g). MS(ES^{+}): m/z = 620,1 (M+H)^{+}.

Preparación 65

1-bencil-4,5-dibromo-2-metil-imidazol

A una solución de 4,5-dibromo-2-metilimidazol (3,0 g, 12,5 mmol) en 25 ml de DMF, se le añaden carbonato sódico (2,0 g, 18,8 mmol) y bromuro de bencilo (1,64 ml, 13,8 mmol). Se agita la solución a temperatura ambiente durante 72 horas. Se vierte la reacción en agua, y se extrae con EtOAc. Se lava la capa orgánica con agua, cloruro sódico acuoso saturado, y se seca sobre sulfato sódico. Se filtra la mezcla y se concentra hasta tener 3,8 g de aceite en crudo. Se purifica el aceite mediante cromatografía radial, eluyendo con EtOAc al 40% en hexanos. Se concentran las fracciones apropiadas hasta obtener 3,1 g (75%) del compuesto del título, en forma de aceite incoloro. MS(ES^{+}):
m/z = 331,0 (M+H)^{+}

Preparación 66

1-bencil-4-bromo-5-(2,4-difluorofenil)-2-metil-imidazol

A una solución de 1-(bencil)-4,5-(dibromo)-2-(metil)-imidazol (1,71 g, 5,18 mmol) en 8 ml DME, se le añade ácido 2,4-difluorofenil borónico (0,90 g, 5,70 mmol). Se añade carbonato sódico (1,65 g, 15,5 mmol) disuelto en 1 ml de agua, y trans-diclorobis(trifenilfosfin)paladio (II) (1,09 g, 1,55 mmol). Se calienta la mezcla hasta los 100ºC, con agitado bajo nitrógeno. El producto crudo se purifica mediante cromatografía radial, eluyendo con EtOAc al 35%, CH_{2}Cl_{2} al 1% en hexanos, para dar un rendimiento de 1,12 g (60%) del compuesto del título, en forma de un aceite amarillo. Es compuesto se usa directamente, sin purificación posterior. MS(ES^{+}): m/z = 364,0 (M+H)^{+}.

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Preparación 67

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(bencil)-5-(2,4-difluorofenil)-2-(metil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

A una solución de 1-(bencil)-4-(bromo)-5-(2,4-difluorofenil)-2-(metil)-imidazol (1,12 g, 3,08 mmol) en 8 ml de DME, se le añade ácido 1-isopropilsulfonil-2-amino-bencimidazol-6-borónico (2,62 g, 9,25 mmol) (descrito en la Preparación 58). Se añade carbonato sódico (0,98 g, 9,25 mmol) disuelto en agua (1 ml) y trans-diclorobis(trifenilfosfin) paladio (II) (0,65 g, 0,93 mmol). Se calienta la mezcla hasta los 100ºC con agitado, bajo nitrógeno. Después de 3 horas, se enfría la solución y se filtra sobre una almohadilla de Celite y sulfato sódico. Se purifica el residuo mediante cromatografía radial, eluyendo con metanol al 3% en CH_{2}Cl_{2}, con un gradiente a metanol al 10%. Se realiza una segunda purificación mediante cromatografía radial, eluyendo con metanol al 4% en CH_{2}Cl_{2} con un gradiente a metanol al 6%, para producir 390 mg (24%) del compuesto del título, en forma de un sólido amarillo. MS(ES^{+}):
m/z = 522,0 (M+H)^{+}.

Preparación 68

5-bromo-3-metil-1-fenil-pirazol

A una solución de 3-metil-1-fenil-2-pirazol-5-ona (2,0 g, 11,5 mmol) en 5 ml de acetonitrilo anhidro, se le añade oxibromuro de fósforo (9,9 g, 34,5 mmol). Se calienta la mezcla hasta llevarla a reflujo durante 3 horas bajo nitrógeno. Se enfría la reacción hasta 0ºC, y se diluye con etil acetato y agua. Se seca la capa orgánica sobre sulfato de magnesio, se filtra, y se concentra hasta obtener un aceite en crudo de color amarillo, que contiene una mezcla 1:1 de productos mono a dibrominados. Se purifica el residuo mediante cromatografía radial, eluyendo con cloruro de metileno, hasta producir 677 mg (25%) en forma de un aceite incoloro. Se aíslan 925 g del producto dibrominado menos polar, en forma de sólido blanco. MS(ES^{+}): m/z = 238,0 (M+H)^{+}.

Preparación 69

5-bromo-3-ter-butil-1-fenil-pirazol

A una solución de 3-ter-butil-1-fenil-2-pirazol-5-ona (1,0 g, 4,6 mmol) en 6 ml de acetonitrilo anhidro, se le añade oxibromuro de fósforo (2,0 g, 6,9 mmol). Se calienta la mezcla hasta reflujo durante 3 horas, bajo nitrógeno. Se enfría la reacción hasta 0ºC, y se diluye con etil acetato y agua. Se seca la capa orgánica sobre sulfato de magnesio, se filtra, y se concentra hasta obtener un aceite en crudo sin color. Se purifica el compuesto del título mediante cromatografía radial, eluyendo con cloruro de metileno:hexanos 70:30, hasta producir 1,1 g (86%) de un aceite incoloro. MS(ES^{+}):
m/z = 280,0 (M+H)^{+}.

Preparación 70

2-fenilimidazol[1,2-a]piridina

Se agita una solución de 2-bromoacetofenona (1 g, 5,024 mmol) y 2-aminopiridina (591 g, 6,280 mmol) en etanol (4 ml) que contiene NaHCO_{3} (658 g, 7,837 mmol) a temperatura ambiente, durante 6 horas. Se diluye la mezcla con agua (15 ml) y se extrae con éter (3 x 20 ml). Se lavan las capas orgánicas combinadas con cloruro sódico acuoso saturado (25 ml), se seca (Mg_{2}SO_{4}) y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}; eluyente: hexano/EtOAc 4:1) para dar un sólido blanco, con un rendimiento del 79%. MS(ES^{+}): m/z = 195,1
(M+H)^{+}.

Preparación 71

8-metil-2-fenilimidazol[1,2-a]piridina

Comenzando con 2-amino-3-metilpiridina, se prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describe en la Preparación 70, rendimiento del 73%. MS(ES^{+}): m/z = 195,1 (M+H)^{+}.

Preparación 72

3-yodo-2-fenilimidazol[1,2-a]piridina

Se trata una solución de 2-fenilimidazol[1,2-a]piridina (50 mg, 0,257 mmol) en acetonitrilo (1,25 ml) con N-yodosuccinimida (NIS) (69 mg, 0,309 mmol) a temperatura ambiente durante 5 horas. Se diluye la mezcla con éter (10 ml), se lava con solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (15 ml) y NaHSO_{3} (40%, 15 ml), se seca (Na_{2}SO_{4}) y se concentra al vacío. Se obtiene un sólido amarillo, 80 mg, rendimiento del 97%. MS(ES^{+}): m/z = 321,0 (M+H)^{+}.

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Preparación 73

3-yodo-8-metil-2-fenilimidazol[1,2-a]piridina

Comenzando con 8-metil-2-fenilimidazol[1,2-a]piridina, se prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describió en la Preparación 72, con un rendimiento del 65. MS(ES^{+}): m/z = 335,0 (M+H)^{+}.

Preparación 74

2-fenil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[1,2-a]imidazol

Se prepara hidrocloruro de 2-iminopirrolidina (6,98 g, 57,8 mmol) de acuerdo con Callahan, et al., J. Med. Chem. 2002, 45, 999-1001, y se combina 2-bromoacetofenona (3,8 g, 19,3 mmol) con Na_{2}CO_{3} (8,2 g, 77,2 mmol) en DMF seco (25 ml), y se calienta a 80ºC durante 18 horas. Después, se enfría la mezcla a temperatura ambiente, se añade agua (60 ml), y se extrae con EtOAc (3 x 100 ml). Se concentran las capas orgánicas combinadas, al vacío, se diluye el residuo con éter (100 ml), y se lava con agua enfriada (3 x 80 ml). Se concentra la capa orgánica al vacío, para dar un sólido blanco, 3,2 g, rendimiento del 89%. MS(ES^{+}): m/z = 185,1 (M+H)^{+}.

Preparación 75

2-(4-fluorofenil)-6,7-dihidro-5H-pirrolo[1,2-a]imidazol

Comenzando con hidrocloruro de 2-iminopirrolidina y con 2-fluoroacetofenona, se prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describió en la Preparación 74, con un rendimiento del 99%.

Preparación 76

3-bromo-2-fenil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[1,2-a]imidazol

Se añade lentamente bromo (1,0 ml, 20,2 mmol) a una solución de 2-fenil-6,7-dihidro-5H-pirrolo[1,2-a]imidazol (3,38 g, 18,3 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (113 ml) seco, y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 1,5 horas. Se añade a una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (100 ml) y se extrae con CH_{2}Cl_{2} (3 x 100 ml). Se lavan las capas orgánicas combinadas con NaHSO_{3} (40%, 30 ml), se seca (MgSO_{4}) y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}, eluyente: CH_{2}Cl_{2} a CH_{2}Cl_{2}/MeOH 20:1) para producir un sólido rojo, 3,54 g, rendimiento del 73%. MS(ES^{+}): m/z = 263,0 (M+H)^{+}.

Preparación 77

3-bromo-2-(4-fluorofenil)-6,7-dihidro-5H-pirrolo[1,2-a]imidazol

Comenzando con 2-/4-fluorofenil)-6,7-dihidro-5H-pirrolo[1,2-a]imidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describió en la Preparación 76, con un rendimiento del 95%.

Preparación 78

2-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-imidazol[1,2-a]piridina

Se combina hidrocloruro de 2-iminopiperidina (4,9 g, 36,4 mmol, 3 equivalentes) y 2-bromoacetofenona (2,4 g, 12,1 mmol) con Na_{2}CO_{3} (5,1 g, 48,4 mmol) en DMF seco (15 ml), y se calienta la mezcla a 80ºC durante 16 horas. Después se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente, se añade agua (200 ml) y se extrae con éter (3 x 100 ml). Se lavan las capas orgánicas combinadas con agua (2 x 50 ml), y se re-extrae la capa acuosa con éter (2 x 50 ml). Se lavan las capas orgánicas combinadas con cloruro sódico acuoso saturado (100 ml), se secan (Mg_{2}SO_{4}), y se concentran al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}; eluyente: CH_{2}Cl_{2} hasta CH_{2}Cl_{2}:MeOH 50:1) para obtener un sólido de color marrón, 1,7 g, rendimiento del 71%. MS(ES^{+}): m/z = 199,1 (M+H)^{+}.

Preparación 79

3-bromo-2-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-imidazol[1,2-a]piridina

Se añade lentamente bromo (0,5 ml, 9,8 mmol) a una solución de 2-fenil-5,6,7,8-tetrahidro-imidazo[1,2-a]piridina (1,7 g, 8,9 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (55 ml) seco, y se agita a temperatura ambiente durante 3 horas. Después, se añade una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (100 ml) y se extrae con CH_{2}Cl_{2} (3 x 100 ml). Se lavan las capas orgánicas combinadas con NaHCO_{3} (40%, 30 ml), seguido de cloruro sódico acuoso saturado (50 ml), se secan (MgSO_{4}), y se concentran al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}, eluyente: CH_{2}Cl_{2} hasta CH_{2}Cl_{2}/MeOH 20:1) para obtener un sólido marrón, 2,0 g, rendimiento del 82%. MS(ES^{+}): m/z = 277,0 (M+H)^{+}.

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Preparación 80

3-etoxicarbonil-2-fenil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[1,2-b]pirazol

Se añade etilbenzoilacetato (4,3 ml, 25 mmol), seguido de piridina (10 ml), a una solución de hidrocloruro de 1-amino-pirrolidin-2-ona (3,8 g, 27,8 mmol) (documento WO 02/094833), a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 20 horas, y después se diluye con agua (50 ml) y se extrae con tolueno (2 x 50 ml). Se secan las capas orgánicas combinadas (MgSO_{4}) y se concentran al vacío para dar un aceite marrón, 6,23 g, rendimiento del 82%, y se tratan con NaOEt (preparado recientemente, 3,1 g, 45,4 mmol, 2 equivalentes) en tolueno, a 120ºC durante 8 horas. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente y se añade agua (100 ml), y HCl concentrado hasta alcanzar un pH de 4. Se extrae la mezcla con EtOAc (3 x 200 ml) y se secan (MgSO_{4}) la capas orgánicas combinadas, y se concentran al vacío. Se purifica el residuo en un sistema Biotage (eluyente: CH_{2}Cl_{2}/MeOH 40:1) para obtener un sólido amarillo, 1,8 g, rendimiento del 36%. MS(ES^{+}): m/z = 257,1 (M+H)^{+}.

Preparación 81

3-bromo-2-fenil-5.6-dihidro-4H-pirrolo[1,2-b]pirazol A. 3-carboxi-2-fenil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[1,2-b]pirazol

Se añade una solución de NaOH (15%, 40 ml) seguido de acetonitrilo (5 ml) a una solución de 3-etoxicarbonil-2-fenil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[1,2-b]pirazol (2,1 g, 8,2 mmol) en MeOH (20 ml), y se agita a 50ºC durante 3 horas. Se enfría la mezcla a temperatura ambiente, y después se añade HCl (10%) hasta que se alcanza un pH de 3. Se enfría la mezcla con EtOAc (3 x 100 ml), y se lava con cloruro sódico acuoso saturado (100 ml), se seca (MgSO_{4}), y se concentra al vacío para dar un sólido amarillo, 1,82 g, rendimiento del 97%, MS(ES^{+}): m/z = 229,1 (M+H)^{+}.

B. 3-bromo-2-fenil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[1,2-b]pirazol

Se añade N-bromosuccinimida (NBS) (702,8 mg, 3,95 mmol) a una solución de 3-carboxi-2-fenil-5,6-dihidro-4H-pirrolo[1,2-b]pirazol (820 mg, 3,59 mmol) en DMF seco (15 ml), y se agita a temperatura ambiente durante 18 horas. Después se diluye con EtOAc (80 ml) y se lava con agua enfriada (5 x 10 ml). Se seca la fase orgánica (MgSO_{4}), y se concentra al vacío para obtener un sólido amarillo, 1,0 g. MS(ES^{+}): m/z = 263,0 (M+H)^{+}.

Preparación 82

1-(4-metoxibencil)-4-fenilimidazol

Se le añade poco a poco NaH (95%, 2,56 g, 101 mmol) a una solución de 4-fenilimidazol (7,49 g, 51,9 mmol) en DMF (30 ml) enfriada hasta 0ºC bajo nitrógeno. Tras 10 minutos, se añade cloruro de p-metoxibencilo (PMBCl) (7,50 ml, 55,3 mmol) gota a gota. Se agita durante 5 horas, se apaga con MeOH (5 ml), se diluye con agua (100 ml), y se extrae con CH_{2}Cl_{2} (2 x 100 ml). Se secan las capas orgánicas combinadas (Na_{2}SO_{4}) y se concentra al vacío, hasta alcanzar un volumen de 80 ml, produciendo 12,2 g (rendimiento del 89%) tras la cristalización. MS(ES^{+}): m/z = 265,0 (M+H)^{+}.

Preparación 83

1-(4-metoxibencil)-2-formil-4-fenilimidazol

Se añade gota a gota una solución de n-butil litio (hexano 1,6 M, 5,60 ml, 8,96 mmol) a una solución de 1-(4-metoxibencil)-4-fenilimidazol (2,00 g, 7,56 mmol) en THF (20 ml), enfriado a -78ºC bajo nitrógeno. Se agita la mezcla a esta temperatura durante 10 minutos, y después se añade DMF (1,43 ml, 18,5 mmol) gota a gota, y se continúa agitando durante 30 minutos. Se añade una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl (50 ml), se eleva la temperatura hasta temperatura ambiente, y se extrae la capa acuosa con CH_{2}Cl_{2} (150 ml), se seca (Na_{2}SO_{4}) y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}, hexano/EtOAc 9:1) para proporcionar 1,75 g (rendimiento del 79%). MS(ES^{+}): m/z = 293,0 (M+H)^{+}.

Preparación 84

1-(4-metoxibencil)-2-hidroximetil-4-fenilimidazol

Se trata una solución de 1-(4-metoxibencil)-2-formil-4-fenilimidazol (1,75 g, 5,99 mmol) en CH_{2}Cl_{2}/MeOH (1:1, 60 ml) con NaBH_{4} (480 mg, 12,7 mmol) a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se apaga con H_{2}O (50 ml), se extrae con CH_{2}Cl_{2} (2 x 100 ml), se seca (Na_{2}SO_{4}) y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}, CH_{2}Cl_{2}/MeOH 20:1 \rightarrow 7:1) para proporcionar 1,69 g (rendimiento del 96%). MS(ES^{+}): m/z = 295,0 (M+H)^{+}.

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Preparación 85

1-(4-metoxibencil)-2-ter-butildimetilsililoximetil-4-fenilimidazol

Se trata una solución de 1-(4-metoxibencil)-2-hidroximetil-4-fenilimidazol (1,68 g, 5,71 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (35 ml) con N,N-diisopropiletilamina (3,2 ml, 18,4 mmol) y cloruro de ter-butildimetilsililo (TBSCl) (1,46 g, 9,69 mmol) a temperatura ambiente, durante 60 horas. Se apaga con H_{2}O (40 ml), se extrae con CH_{2}Cl_{2} (100 ml), se seca (Na_{2}SO_{4}) y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}, hexano/EtOAc 20:1 \rightarrow 9:1) para proporcionar 2,09 g (rendimiento del 90%). MS(ES^{+}): m/z = 409,0 (M+H)^{+}.

Preparación 86

1-(4-metoxibencil)-2-ter-butildimetilsililoximetil-4-fenil-5-yodoimidazol

Se trata una solución de 1-(4-metoxibencil)-2-ter-butildimetilsililoximetil-4-fenilimidazol (2,08 g, 5,09 mmol) en MeCN (25 ml) con N-yodosuccinimida (NIS) (1,35 g, 6,00 mmol) a temperatura ambiente durante 24 horas. Se diluye la mezcla con Et_{2}O (100 ml), se lava con NaHCO_{3} saturado (25 ml), se seca (Na_{2}SO_{4}), y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}, hexano/EtOAc 20:1 \rightarrow 9:1) para proporcionar 2,30 g (rendimiento del 85%). MS(ES^{+}): m/z = 535,0 (M+H)^{+}.

Preparación 87

1-(benciloxicarbonil)-4-formilpiperidina

Se añade hidruro de diisobutil aluminio (1 M en tolueno, 30 ml, 30 mmol) durante 5 minutos a una solución de 1-(benciloxicarbonil)-4-(etoxicarbonil)piperidina (7 g, 24 mmol) en diclorometano anhidro (150 ml) a -78ºC, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita la mezcla de reacción a esta temperatura, durante 30 minutos, y después se añade tartrato sódico acuoso al 10% (100 ml) seguido de diclorometano. Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante toda la noche. Se separan las fases y se extrae la fase acuosa con diclorometano. Se lavan de forma secuencial las fases orgánicas combinadas, con tartrato sódico, acuoso, al 10%, agua, y cloruro sódico acuoso saturado. Se seca sobre sulfato sódico y se concentra bajo presión reducida. Se somete el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con hexanos:etil acetato 3:1 para proporcionar 3,15 g (53%) del compuesto del
título.

Preparación 88

1-(ter-butoxicarbonil)-4-formilpiperidina

Comenzando con 1-(ter-butoxicarbonil)-4-(etoxicarbonil)piperidina, se prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describió en la Preparación 51.

Preparación 89

4-formil tetrahidropirano

Comenzando con el 4-(metoxicarbonil)tetrahidropirano, se prepara el título del compuesto esencialmente tal como se describió en la Preparación 87.

Preparación 90

4-(N-ter-butoxicarbonil-N-etil-amino)-benzaldehído A. Protección N-BOC

Se añade trietilamina (7,345 ml, 52,8 ml), gota a gota, a una solución del metil éster del ácido 4-amino-benzoico (4 g, 26,4 mmol), (Boc)_{2}º (8,67 g, 39,6 mmol), y DMAP (0,322 mg, 2,64 mmol), en 50 ml de acetonitrilo, y se agita durante toda la noche a temperatura ambiente. Se disuelve el precipitado en etil acetato, y se trata con HCl 3%, se extrae con etil acetato, y se lavan las capas orgánicas con una solución saturada de bicarbonato sódico y cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico, y se concentra para obtener 5,3 g de producto. Rendimiento del 80%.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 300 MHz): 8,07 (d, 2H, J = 8,8); 7,53 (d, 2H, J = 8,8); 6,78 (s, 1H); 4,00 (s, 3H); 1,64 (s, 9H).

B. N-alquilación

Se añade lentamente metil éster del ácido 4-ter-butoxicarbonilamino-benzoico (3,24 g, 12,9 mmol) y yoduro de etilo (1,206 ml, 1,1 mmol), a una suspensión de hidruro sódico al 60% (595 mg, 1,1 eq.) en DMF seco, y bajo atmósfera de argón, mediante una jeringa, y se deja agitando toda la noche. Se añade etil acetato, y se lava la solución resultante con cloruro amónico saturado y con cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico, y se concentra. Se purifica el residuo mediante cromatografía, eluyendo con hexano/ etil acetato al 16%, para obtener 2,85 g de producto puro. Rendimiento del 79%.

^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 300 MHz): 8,11 (dd, J = 8,5, 2,0 Hz, 2H); 7,40 (dd, J = 8,5, 2,0 Hz, 2H); 4,02 (s, 3H); 3,84 (q, J = 6,9 Hz, 2H); 1,56 (s, 9H); 1,28 (t, J = 6,9 Hz, 3H).

C. Reducción del éster

Se añade, gota a gota, hidruro de diisobutil aluminio (DIBAL-H) 1 M en tolueno (12,77 ml, 12,77 mmol), a una solución del metil éster del ácido 4-(N-ter-butoxicarbonil-N-etil-amino)-benzoico (2,85 mg, 10,2 mmol), en 65 ml de tolueno fresco, bajo una atmósfera de argon, y a -78ºC. Se agita la mezcla durante 1 hora. Se añade tartrato sódico, para eliminar el baño y se agita la mezcla durante toda la noche. Se extrae la capa orgánica con etil acetato, y se lavan las capas orgánicas con cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico y se concentra. Se purifica el residuo mediante cromatografía, eluyendo con hexano/acetato (16%) para obtener 1,24 g de alcohol puro. Rendimiento del 54%., ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 300 MHz): 7,45 (d, J = 8,5, 2H); 7,30 (d, J = 8,5 Hz, 2H); 4,80 (d, = 6,1 Hz, 2H); 3,78
(q, J = 7,3 Hz, 2H); 1,78 (7, J = 6,1 Hz, 1H); 1,55 (s, 9H); 1,25 (t, J = 7,3 Hz, 3H).

D. Oxidación del alcohol

Se disuelve 4-(N-ter-butoxicarbonil-N-etil-amino)-bencil alcohol (1,24 g, 5,52 mmol), en acetonitrilo 50 ml. Se añade a esto, una solución de dióxido de manganeso, y se agita la mezcla durante 2 días a temperatura de ambiente. Se filtra el residuo a través de Celite ® y se concentra el solvente para dar 632 mg de 4-(N-ter-butoxicarbonil-N-etil-amino)benzaldehído. Rendimiento del 52%. ^{1}H-NMR (CDCl_{3}, 300 MHz): 9,95 (s, 1H); 7,83 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 7,39 (d, J = 8,7 Hz, 2H); 3,74 (q, J = 7,0 Hz, 2H); 1,45 (s, 9H); 1,18 (t, J = 7,0 Hz, 3H).

Preparación 91

2,6-difluoro-4-(pirrolidin-1-il-etoxi)-benzaldehído A. 1-(3,5-difluoro-fenoximetil)-pirrolidina

Se añade hidrocloruro de pirrolidin-1-il-etanol (1,5 g) a una mezcla de difluorofenol (1,0 g), carbonato de cesio (8,78 g), yoduro sódico (1,15 g) en dimetilformamida seca (20 ml). Se agita a temperatura ambiente durante toda la noche. Se concentra bajo presión reducida, y se purifica el residuo mediante cromatografía, eluyendo con etil acetato:hexano (1:1) para proporcionar (0,8 g, 50%) de un aceite.

B. 2,6-difluoro-4-(pirrolidin-1-il-etoxi)-benzaldehído

Se enfría una mezcla de 1-(3,5-difluoro-fenoximetil)-pirrolidina (0,1 g) e tetrahidrofurano seco (5 ml), hasta llegar a los -78ºC, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se añade butil litio (0,29 ml, 1,6 M en tetrahidrofurano), y N,N,N',N'-tetrametiletilendiamina (0,5 ml), y se agita durante 30 minutos. Después se añade dimetilformamida (0,07 ml) y se agita a temperatura ambiente durante 60 minutos. Se apaga vertiendo la mezcla de reacción en una mezcla de cloruro amónico acuoso saturado frío, y etil acetato. Se separan las capas, se lava la fase orgánica con agua, y se concentra bajo presión reducida, para proporcionar (0,10 g, 94%) de el compuesto del título, en forma de un aceite.

Preparación 92

2-fluoro-4-nitro-benzaldehído

Se añade complejo borano-tetrahidrofurano (16,21 ml, 1 M) a una mezcla de ácido 2-fluoro-4-nitro-benzoico (1,2 g) y tetrahidrofurano (10 ml) a 0ºC. Se calienta a 80ºC durante 3 horas. Se enfría a temperatura ambiente, y se añade ácido clorhídrico acuoso 1N (20 ml), y se extrae con etil acetato. Se lava con bicarbonato sódico acuoso saturado, y se seca la fase orgánica remanente sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida, para proporcionar (0,91 g, 83%) de un aceite. Se añade (2-fluoro-4-nitro-fenil)-metanol (0,91 g) a una mezcla de dióxido de manganeso (1,1 g) en 20 ml de diclorometano. Se agita a temperatura ambiente durante toda la noche, y se filtra a través de Celite ®. Se concentra bajo presión reducida para proporcionar (0,27 g, 30%) del compuesto del título, en forma de un aceite.

Preparación 93

4-formil-N-metil-bencenosulfonamida A. 4-hidroximetil-N-metil-bencenosulfonamida

Se añade metilamina (4,5 ml, 2M en diclorometano) a una mezcla de ácido 4-clorosulfonil benzoico (0,5 g) y diclorometano (20 ml). Se agita a temperatura ambiente durante toda la noche. Se apaga la reacción vertiendo la mezcla en una mezcla de cloruro amónico acuoso saturado y etil acetato. Se separan las capas, se lava la fase orgánica con agua, se seca la fase orgánica remanente sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida para proporcionar (0,40 g, 82%) de un aceite. Se añade complejo borano-tetrahidrofurano (7,44 ml, 1 M) a una mezcla de ácido 4-metilsulfamoil-benzoico (0,4 g) y tetrahidrofurano (10 ml) a 0ºC. Se calienta hasta los 80ºC durante 3 horas. Se enfría a temperatura ambiente, y se añade ácido clorhídrico acuoso 1 N (20 ml), y se extrae con etil acetato. Se lava con bicarbonato sódico acuoso saturado, y se seca la fase orgánica remanente sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida para proporcionar (0,28 g, 75%) de un aceite.

B. 4-formil-N-metil-bencenosulfonamida

Se añade 4-hidroximetil-N-metil-bencenosulfonamida (0,28 g) a una mezcla de dióxido de manganeso (2,8 g) en 20 ml de diclorometano. Se agita a temperatura ambiente durante toda la noche y se filtra sobre Celite ®. Se concentra bajo presión reducida para proporcionar (0,11 g, 40%) del compuesto del título, en forma de un aceite.

Preparación 94

2-fluoro-4-metilamino-benzaldehído

Se añade diazometano (22.3 ml, 2 M en éter) a una mezcla de ácido 2-fluoro-4-nitrobenzoico (4,14 g) y éter (50 ml). Se agita a temperatura ambiente durante toda la noche. Se concentra bajo presión reducida para proporcionar (4,08 g, 92%) de un aceite.

Se somete a reflujo la mezcla del metil éster del ácido 2-fluoro-4-nitro-benzoico (0,85 g), formato amónico (1,1 g) y Pd/C (10%, 0,32 g) en etanol (20 ml), a 95ºC durante 6 horas. Se filtra sobre Celite ® y se concentra bajo presión reducida para proporcionar (0,64 g, 89%) de un sólido gris.

Se añade formaldehído (0,15 g) a una mezcla del metil éster ácido 2-fluoro-4-amino-benzoico (0,62 g), ácido acético (2,1 ml) y 1,2-dicloroetano (20 ml). Se agita a temperatura ambiente durante toda la noche. Se añade triacetoxiborohidruro sódico (1,15 g) y se agita a temperatura ambiente durante 2 horas. Se apaga vertiendo la mezcla de reacción en una mezcla de bicarbonato sódico acuoso saturado y etil acetato. Se separan las capas, se lava la fase orgánica con agua, se seca la fase orgánica remanente sobre sulfato sódico, y después se concentra bajo presión reducida. El residuo se purifica mediante cromatografía, eluyendo con etil acetato:hexano (1:4) para proporcionar el metil éster del ácido 2-fluoro-4-metilamino benzoico (0,10 g, 15%) en forma de aceite.

Se añade hidruro de diisobutil aluminio (1,0 ml, 1 M en tolueno), gota a gota, a una mezcla del metil éster del ácido 2-fluoro-4-metilamino benzoico (0,09 g) y tolueno seco (7 ml), a -78ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita la mezcla durante 2 horas a temperatura ambiente. Se apaga vertiendo la mezcla de reacción en una mezcla de tartrato sódico acuoso saturado (20 ml) y etil acetato (20 ml). Se separan las capas, se lava la fase orgánica con agua, se seca la fase orgánica remanente sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida, para proporcionar (0,07 g, 88%) de un aceite.

Se añade perrutenato de tetrapropilamonio (0,35 g) a una mezcla de (2-fluoro-4-metilamino-fenil)-metanol (0,18 g), N-óxido de 4-metilmorfolina (0,38 g) y tamices moleculares en polvo activados recientemente (0,30 g), en diclorometano seco (10 ml), a temperatura ambiente, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita durante 30 minutos y se añade más diclorometano, y se filtra a través de una almohadilla florisil-Celite ®. Se concentra bajo presión reducida para proporcionar (0,25 g, 76%) del compuesto del título en forma de aceite.

Preparación 95

1-isopropilsulfonil-2-cloro-6-yodobencimidazol

Se añade 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-yodobencimidazol (0,20 g, 0,55 mmol) en tres porciones durante 5 minutos, a una suspensión de cloruro de cobre (II) (0,089 mg, 0,66 mmol) y ter-butilnitrito (0,085 g, 0,1 ml, 0,82 mmol) en 2 ml de acetonitrilo a 65ºC. Tras 30 minutos, se vierte la solución verde resultante en agua, y se extrae la capa acuosa con etil acetato (3 x 25 ml). Se lavan de manera secuencial las fases orgánicas combinadas con agua (2 x 15 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (15 ml), se seca sobre sulfato sódico, se filtra y se concentra bajo presión reducida para proporcionar el compuesto del título (0,18 g, 85%).

Preparación 96

2-(ter-butil-dimetil-sililoxi)-1-[2-cloro-3-(isopropilsulfonil)-3H-bencimidazol-5-il]-2-fenil-etanona

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se añade ter-butil nitrito (2,44 ml, 18,45 mmol, 1,5 equiv.), gota a gota, a una suspensión agitada de CuCl_{2} (2,20 g, 14,76 mmol) en 43 ml de CH_{3}CN. Se calienta la mezcla resultante hasta los 65ºC, y se añade lentamente 1-[2-amino-3-(propano-2-sulfonil)-3H-benzoimidazol-5-il]-2-(ter-butil-dimetil-sililoxi)-2-fenil-etanona (6 g, 12,3 mmol, 1 equiv.) en porciones, durante un período total de 10 minutos. Se agita la mezcla durante 30 minutos, se enfría hasta temperatura ambiente, se vierte sobre unos 200 ml de agua, y se diluye con 200 ml de EtOAc. Se separan las fases, y se vuelve a extraer la fase orgánica con más EtOAc (tres veces). Se secan las fases orgánicas combinadas sobre MgSO_{4}, se filtra y se concentra al vacío para producir un producto crudo que se purifica mediante cromatografía, utilizando CH_{2}Cl_{2} como eluyente. Rendimiento del 42%. MS(ES^{+}): m/z = 507,1 (M+H)^{+}.

Preparación 97

1-[2-bencilamino-3-(propano-2-sulfonil)-3H-bencimidazol-5-il]-2-(ter-butil-dimetil-sililoxi)-2-fenil-etanona

Se añade, gota a gota, bencilamina (0,4 ml, 3,48 mmol, 3 equiv.) a una solución agitada para comenzar, 2-(ter-butil-dimetil-sililoxi)-1-[2-cloro-3-(propano-2-sulfonil)-3H-bencimidazol-5-il]-2-fenil-etanona (588 mg, 1,16 mmol, 1 equiv.) en 2 ml de THF seco. Se calienta la solución amarilla resultante a 40ºC durante 30 minutos, se enfría a temperatura ambiente, y se añade agua y CH_{2}Cl_{2}. Se separan las fases y se vuelve a extraer la fase orgánica con más CH_{2}Cl_{2} (tres veces). Se secan las fases orgánicas combinadas sobre MgSO_{4}, se filtra, y se concentra al vacío para proporcionar un producto crudo. Se purifica mediante cromatografía, usando CH_{2}Cl_{2}:hexanos (3:1) para dar el compuesto del título (rendimiento del 80%). MS(ES^{+}): m/z = 578,2 (M+H)^{+}.

Preparación 98

2-(ter-butil-dimetil-sililoxi)-1-[2-etilamino-3-(propano-2-sulfonil)-3H-benzoimidazol-5-il]-2-fenil-etanona

Se prepara esencialmente tal como se describió en la preparación previa (Preparación 97), comenzando a partir de 2-(ter-butil-dimetil-sililoxi)-1-[2-cloro-3-(propano-2-sulfonil)-3H-bencimidazol-5-il]-2-fenil-etanona (760 mg, 1,50 mmol), etilamina (0,25 ml, 4,50 mmol, 3 equiv.) en 2 ml de THF. Rendimiento: 84%. MS(ES^{+}): m/z = 516,3
(M+H)^{+}.

Preparación 99

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-etoxicarbonil)-1-hidroxi-2-feniletil)-bencimidazol

Se añade hexametildisilazano de litio (LHDMS) (0,5, M en THF, 22,2 mmol, 6 equiv.), a -78ºC, a una solución agitada de etil fenilacetato (18,5 mmol, 5 equiv.) en THF seco (20 ml). Se agita la mezcla bajo nitrógeno durante 30 minutos, y después se añade a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-formilbencimidazol (Preparación 1, 1 g, 3,7 mmol) en THF (60 ml). Se agita la reacción a -78ºC y sigue por TLC. Después se añade NH_{4}Cl saturado (20 ml) y etil acetato (100 ml). Se separan las fases y se extrae la capa acuosa con etil acetato (3 x 50 ml). Se secan las fases orgánicas combinadas (Na_{2}SO_{4}) y se concentran al vacío. Se lava el producto crudo con hexano y se lava el sólido remanente mediante diclorometano, para producir el compuesto correspondiente (0,75 g, rendimiento del
62%).

Preparación 100

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-((1-hidroxi)-\alpha-(fenil)acetil)-bencimidazol

Se añade a una solución agitada de IBX (3,48 mmol) en DMSO (5 ml), 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-etoxicarbonil)-1-hidroxi-2-feniletil)-bencimidazol (2,32 mmol, 1,5 equiv.) a temperatura ambiente, y se agita la mezcla durante toda la noche (16 horas). Después se añade una solución saturada de NaCl (50 ml) seguidos de etil acetato (100 ml). Se separan las fases y se extrae la capa acuosa con etil acetato (3 x 50 ml). Se lava la fase orgánica con Na_{2}S_{2}O_{3} (25 ml) y se secan las fases orgánicas combinadas (Na_{2}SO_{4}). Se realiza cromatografía utilizando hexano:etil acetato 1:4 para producir el correspondiente compuesto (rendimiento del 90%).

Preparación 101

N-[isopropilsulfonil]-4-metoxi-bencilamina

Se añade 4-metoxi-bencilamina (11,7 m, 89,5 mmol) a una solución de cloruro de isopropil sulfonilo (5,0 ml, 44,74 mmol) en diclorometano (100 ml), y se agita durante 18 horas a temperatura ambiente. Se lava la solución con ácido clorhídrico 1 N (3 x 100 ml), se seca son sulfato de magnesio y se concentra. Se purifica en gel de sílice con mezclas de hexano/etil acetato, para dar 4,73 g (43%) del compuesto del título en forma de sólido blanco. MS(ES^{+}): m/z = 242,1 (M+H)^{+}.

Preparación 102

N-[isopropilsulfonil]-N-[5-fluoro-2-nitrofenil]-4-metoxibencilamina

Se suspende hidruro de sodio (60% en aceite mineral, 0,85 g, 21,2 mmol) en tetrahidrofurano (100 ml). Se añade 1 N-[isopropilsulfonil]-4-metoxi-bencilamina (4,73 g, 19,45 mmol) en tetrahidrofurano (400 ml), y se calienta hasta los 70ºC. Se agita durante 10 minutos, y se añade 2,4-difluoronitrobenceno (3,2 ml, 29,2 mmol) en una porción, y se agita durante 18 horas a 70ºC. Se enfría hasta temperatura ambiente y se eliminan los solventes bajo presión reducida. Se disuelve en etil acetato y se lava dos veces con HCl acuoso 1 N, tres veces con hidrógeno carbonato sódico saturado, con carbonato sódico saturado, HCl acuoso 1 N, se seca con sulfato de magnesio, se filtra y eliminan los solventes bajo presión reducida. Se purifica sobre gel de sílice con mezclas de diclorometano/hexano, para dar 5,395 g (72%) del compuesto del título.

Preparación 103

N-[isopropilsulfonil]-N-[5-(2-fenilimidazol-1-il)-2-nitrofenil]-4-metoxibencilamina

Se disuelve N-[isopropilsulfonil]-N-[5-fluoro-2-nitrofenil-4-metoxibencilamina] (0,36 g, 0,94 mmol) y 2-fenil-imidazol (0,20 g, 1,41 mmol) en N,N-dimetil formamida (4 ml). Se añade hidruro sódico (60% en aceite mineral, 0,056 g, 1,41 mmol) y se calienta hasta los 90ºC durante 30 minutos. Se enfría a temperatura ambiente y se eliminan los solventes bajo presión reducida. Se purifica sobre gel de sílice con mezclas de diclorometano/etil acetato para dar 0,31 g (65%) del compuesto del título.

Preparación 104

N-[isopropilsulfonil]-N-[5-(2-fenil-imidazol-1-il)-2-nitrofenil]-amina

Se enfría un frasco que contiene N-[isopropilsulfonil]-N-[5-(2-fenilimidazol-1-il)-2-nitrofenil]-4-metoxibencil
amina (0,30 g, 0,58 mmol) en un baño de hielo, y se le añade ácido trifluoroacético frío, en hielo, (5 ml), después se calienta hasta temperatura ambiente, y se agita durante 18 horas. Se elimina el solvente bajo presión reducida. Se disuelve en diclorometano, y se lava con hidrógeno carbonato sódico saturado, se seca con sulfato magnésico, se filtra y purifica en gel de sílice con mezclas de diclorometano/etil acetato para proporcionar 0,21 g (92%) de 1-isopropilsulfonil-[2-nitro-5-(2-fenil-imidazol-1-il)-fenil]-amida. MS(ES^{+}): m/z = 387,1 (M+H)^{+}.

Preparación 105

N-[isopropilsulfonil]-N-[2-amino-5-(2-fenil-imidazol-1-il)-fenil]-amida

Se añade N-[isopropilsulfonil]-N-[5-(2-fenil-imidazol-1-il)-2nitrofenil]-amina (0,20 g, 0,52 mmol), paladio al 10% sobre carbono (0,02 g), metanol (10 ml) y se hidrogena bajo un balón de gas hidrógeno durante 2 horas. Se filtra y eliminan los solventes bajo presión reducida. Se purifica en gel de sílice con mezclas de diclorometano/etil acetato, para dar 0,12 g (63%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 357,1 (M+H)^{+}.

Preparación 106

2-amino-benzotiazol-6-carboxaldehído

Bajo atmósfera de nitrógeno, se añade lentamente fenil litio (5 ml, 9,16 mmol, 2,1 equiv. A partir de una solución 1,8 M en ciclohexano/éter 70/30) a una solución fría (-78ºC) del comercialmente disponible 2-bromo benzotiazol en 30 ml de THF. Después de que la adición se haya completado, se agita la mezcla durante 5 minutos, y se añade ter-butil litio (5,6 ml, 9,16 mmol, 2,1 equiv. A partir de una solución 1,7 M en pentano). La mezcla cambiará de un color blanco cremoso a un color verde, tras 1 hora. En este punto, se añade rápidamente formil piperidina (2,4 ml, 21,8 mmol, 5 equiv.) gota a gota, y se calienta la mezcla lentamente (durante más de 1 hora) hasta llegar a 0ºC. Se apaga la reacción en una mezcla de NH_{4}Cl saturado, frío, y se extrae con EtOAc. Se separan las fases y se vuelve a extraer la fase orgánica con más EtOAc (tres veces). Se secan las fases orgánicas combinadas sobre MgSO_{4}, se filtra y se concentra al vacio, para producir el aldehído (rendimiento del 50%).

Preparación 107

2,4-dibromonitrobenceno

Se añade 1,3-dibromobenceno (25 g) sobre ácido sulfúrico fumante (20 ml). Se agita durante 5 horas a temperatura ambiente, y después se vierte en agua helada, se extrae con etil acetato, se lava con cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato magnésico, y se concentra bajo presión reducida. Se cristaliza el residuo con metanol, para proporcionar (26,8 g, 90%) de le producto deseado, un sólido de color amarillo claro. MS(ES^{+}): m/z = 281,90
(M+H)^{+}.

Preparación 108

(5-bromo-2-nitro-fenil)amina

En un tubo de reacción sellado, se añade con cuidado 6 ml de solución acuosa de amoníaco (32%) a una solución de 2,4-dibromonitrobenceno (1,6 g) en 2 ml de DMSO. Se agita durante 18 horas a 100ºC y se enfría a temperatura ambiente. Se vierte la mezcla heterogénea en agua, y se filtra el compuesto del título (1m1 g, 92%) en forma de sólido amarillo.

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Preparación 109

3-amino-4-nitro-1-feniletinil-fenil

Se añade Pd(OAc)_{2} (31 mg), CuI (43 mg) y PPh_{3} (48 mg) a una mezcla de 5-bromo-2-nitro-fenil amina (0,5 g) en 6 ml de Et_{3}N. Se inyectan burbujas de nitrógeno durante 5 minutos y se añade fenilacetileno (0,37 ml). Se agita la mezcla a 90ºC durante 1 hora, y se enfría hasta temperatura ambiente. Se elimina la trietilamina al vacío y se divide el residuo entre cloruro sódico acuoso saturado, y EtOAc. Se separan las fases, se seca la fase orgánica sobre MgSO_{4}, se filtra y se evapora. Se purifica el residuo mediante cromatografía, eluyendo con un mezcla 8:1 de hexano:EtOAc, para dar el compuesto del título (0,49 g, 90%), en forma de sólido amarillo.

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Preparación 110

3-isopropilsulfonamidil-4-nitro-1-feniletinil fenil

Se añade cloruro de isopropil sulfonilo (0,93 ml) y 1,8-diazabiciclo(5,4,0)undec-7-eno (DBU) (2,48 ml) a una solución de 3-amino-4-nitro-1-feniletinil-fenil (1 g) en 40 ml de CH_{2}Cl_{2}. Se agita a 45ºC durante 17 horas, y se enfría a temperatura ambiente. Se diluye con más CH_{2}Cl_{2} y se lava con solución acuosa de HCl 10%, y agua. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con hexano:CH_{2}Cl_{2} 1:1 para proporcionar el compuesto del título (0,76 g, 53%) en forma de sólido amarillo.

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Preparación 111

3-isopropil-4-nitro-1-(fenil-etanona)-fenilo

Se añaden 30 ml de una solución acuosa de HgO (624 mg) en 100 ml de H_{2}SO_{4} al 4%, a una solución de 3-isopropilsulfonamidil-4-nitro-1-feniletinilfenilo (1,48 g) en 40 ml de metanol. Se agita a 100ºC durante 17 horas, y se enfría a temperatura ambiente. Se neutraliza la mezcla con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, y se extrae con CH_{2}Cl_{2} (dos veces). Se separan las fases, se seca la fase orgánica sobre sulfato magnésico y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con hexano:CH_{2}Cl_{2} 1:2, para proporcionar el compuesto del título (1,2 g, 79%), en forma de una sólido amarillo. MS(ES^{-}): m/z = 361,3
(M-H)^{-}.

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Preparación 112

3-isopropilsulfonamidil-4-nitro-1-(5-fenil)-pirazol-4-il

Se añade dimetilformamida (DMF)-dimetilacetal (0,9 ml) a una solución agitada de 3-isopropilsulfonamidil-4-nitro-1-(fenil-etanona)-fenilo (0,5 g) en 1,5 ml de DMF seco. Se calienta la mezcla a 80ºC durante 1 hora y 45 minutos, se enfría hasta temperatura ambiente, y se eliminan los solventes al vacío. Se disuelve el residuo en 8 ml de EtOH y se añade 0,5 ml de hidracina anhidra. Se agita durante 17 horas y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}:MeOH al 5% para proporcionar el compuesto del título (0,5 g, 86%) en forma de un sólido rojo. MS(ES^{+}): m/z = 387,4 (M+H)^{+}.

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Preparación 113

3-isopropilsulfonamidil-4.amino-1-(5-fenil)-pirazol-4-il-fenil

Se añade calatalizador Pd/C 10% en peso (250 mg) a una suspensión agitada de nitroanilina (0,5 g) en 10 ml de EtOH. Se purga la suspensión con hidrógeno durante 5 minutos, y se agita la mezcla bajo atmósfera de hidrógeno (1 atm) durante 3 horas. Se concentra bajo presión reducida y se somete el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con CH_{2}Cl_{2:}MeOH para proporcionar el compuesto del título (0,3 g, 70%) en forma de un sólido. MS(ES^{+}): m/z = 357,1 (M+H)^{+}.

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Preparación 114

3-isopropilsulfonamidil-4-nitro-1-(5-fenil)-1,2,3-triazol-4-il

Se añade azida sódica (0,033 g) a una solución de 3-isopropilsulfonamidil-4-nitro-1-feniletinil (0,173 g) en 5 ml de dimetoxietano. Se calienta hasta reflujo (80ºC) durante 2 horas, después se enfría a temperatura ambiente. Se añaden 10 ml de ácido clorhídrico 1 N y se extrae con etil-acetato (20 ml), y se lava con cloruro sódico acuoso saturado (2 x 10 ml). Se seca la fase orgánica remanente sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía, eluyendo con etilacetato:hexano (1:1) hasta proporcionar (0,10 g, 50%) del compuesto del título en forma de sólido amarillo. MS(ES^{+}): m/z = 388,42 (M+H)^{+}.

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Preparación 115

3-isopropilsulfonamidil-4-amino-1-(5-fenil)-1,2,3-triazol-4-il

Se añade dihidrato de tin(II)cloruro (0,350 g) a una mezcla de 3-isopropilsulfonamidil-4-nitro-1-(5-fenil)-1,2,3-triazol-4-il (0,10 g), etanol (5 ml) y etil acetato (10 ml). Se calienta la mezcla hasta los 70ºC durante 3 horas. Se vierte la mezcla en agua helada. Se añade bicarbonato sódico acuoso saturado y se extrae con etil acetato. Se separan las capas, se secan sobre sulfato sódico y se concentran bajo presión reducida. Se somete el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con etil acetato:hexano 1:1 para proporcionar (0,084 g, 92%) del compuesto del título, en forma de sólido blanco. MS(ES^{+}): m/z = 358,4 (M+H)^{+}.

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Preparación 116

1-dimetilaminosulfonil-2-amino-bencimidazol

Se añade acetonitrilo (44 ml) a una solución de hidróxido sódico (1,8 g) en agua (9 ml). A esta solución, se le añade 2-aminobencimidazol (3,0 g, 22,5 mmol) y cloruro de dimetilsulfamoil (2,4 ml, 22,5 mmol). Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente, durante toda la noche. Después se enfría la mezcla a 0ºC y el producto se cristaliza a partir de la solución. Se filtra el producto y se seca al vacío, para proporcionar 5,0 g (rendimiento del 90%) del compuesto del título, en forma de sólido blanco. MS(ES^{+}): m/z = 241,1 (M+H)^{+}.

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Preparación 117

1-dimetilaminosulfonil-2-amino-6-yodobencimidazol

Se añade 1-dimetilaminosulfonil-2-amino-bencimidazol (1,0 g, 4,2 mmol) a ácido acético (10 ml) para formar una solución. A esta solución, se le añade N-yodosuccinimida (0,945 g, 4,2 mmol) y se calienta la mezcla de reacción a 55ºC durante toda la noche. Se enfría la mezcla a 0ºC, y se añade agua. El producto cristaliza a partir de la solución. Se filtra el sólido y se seca al vacío para proporcionar 1,5 g (99%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 366,9 (M+H)^{+}.

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Preparación 118

1-dimetilaminosulfonil-2-amino-6-(feniletinil)bencimidazol

Comenzando con 1-dimetilaminosulfonil-2-amino-6-yodobencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describió en la Preparación 52. (Rendimiento del 88%). MS(ES^{+}): m/z = 341,0 (M+H)^{+}.

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Preparación 119

1-dimetilaminosulfonil-2-amino-6-(2-fenil-etano-1,2-dionel)bencimidazol

Comenzando con 1-dimetilaminosulfonil-2-amino-6-(feniletinil)bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describió en la Preparación 54. (Rendimiento del 72%). MS(ES^{+}): m/z = 373,0 (M+H)^{+}.

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Ejemplo 1 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(tien-2-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol metanosulfonato

Se añade tiofeno-2-carboxaldehído (3,16 ml, 33,8 mmol) a una mezcla en agitación de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-\alpha-(fenil)acetil)-bencimidazol (15,0 g, 30,8 mmol), acetato de cobre (II) (11,2 g, 61,5 mmol), y acetato de amonio (23,7 g, 308 mmol) en ácido acético (300 ml). Se calienta la mezcla a 95-100ºC y se agita vigorosamente durante 2 horas. Se enfría la mezcla hasta 15ºC, se vierte en una mezcla de 750 ml de cloruro amónico acuoso saturado, y de 250 ml de hidróxido amónico concentrado. Se ajusta la mezcla hasta un pH 10 con hidróxido amónico pre-enfriado a 5ºC, y después se añade 4 l de etil acetato:metanol 4:1. Se separan las capas y se lava la capa orgánica con cloruro amónico acuoso saturado (500 ml), se seca sobre sulfato magnésico y se concentra bajo presión reducida. Se somete al residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con diclorometano que contiene entre 15 y 50% de acetonitrilo, 0,5% de trietilamina. Se suspende en etanol (75 ml) el material recuperado, se calienta a 55-60ºC durante 30 minutos, se enfría a -10ºC durante 30 minutos, se filtra, se lava secuencialmente con etanol frío, seguido de dietil éter. Se seca bajo presión reducida para proporcionar el compuesto del título, con un rendimiento del 40%, en forma de un polvo de color amarillo oscuro. MS(ES^{+}): m/z = 464,1 (M+H)^{+}.

A una solución homogénea de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(tien-2-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (0,4 g, 0,86 mmol) en metanol/diclorometano al 10% (10 ml), se le añade una solución de ácido metano sulfónico 1 N en la misma mezcla de reacción (metanol/diclorometano 10%) (0,86 ml, 1 equivalente). Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas, se eliminan los solventes bajo presión reducida, se tritura el residuo y se agita con dietil éter (80 ml) durante 3 horas. Se filtra el sólido y se seca bajo vacío, para producir un sólido de color crema pálida. Rendimiento del 97%. MS(ES^{+}): m/z = 464,1 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los Ejemplos 2 a 62 pueden prepararse esencialmente tal como se describe en el Ejemplo 1, tanto en forma de base libre como en forma de sal de metanosulfonato. La sal de dimetanosulfonato puede prepararse también utilizando esencialmente el mismo procedimiento descrito en el Ejemplo 1, con 2,0 equivalentes de ácido metanosulfónico.

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Ejemplo 63 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2-fluoro-4-aminofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Se somete a reflujo una mezcla de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2-fluoro-4-nitrofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (0,59 g), formato amónico (0,29 g) y Pd/C (10%, 0,12 g) en etanol (20 ml) a 95ºC durante 6 horas. Se filtra sobre Celite ® y se concentra el filtrado bajo presión reducida para proporcionar el compuesto del título (0,41 g, 75%). MS(ES^{+}): m/z = 491,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 64 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-((4-etilamino)fenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

A una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-\alpha-(fenil)acetil)bencimidazol (1,16 mg, 2,37 mmol), en 20 ml de ácido acético glacial, se le añade acetato de cobre (II) (861 mg, 4,74 mmol), acetato amónico (2,92 g, 28,44 mmol) y 4-(N-ter-butoxicarbonil-N-etil-amino)benzaldehído (630 mg, 2,84 mmol). Se agita la mezcla de reacción a 80ºC durante 3 horas. Se concentra el solvente y se disuelve el residuo en etil acetato/metanol (20%), se vierte en solución de cloruro amónico acuoso saturado/amoníaco al 30% 3:1, y se extrae con etil acetato; se lavan las capas orgánicas con cloruro amónico saturado, cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico, y se concentra. Se disuelven 1,43 g del residuo en 40 ml de diclorometano y se añaden 1,82 ml de ácido trifluoroacético (TFA). Se agita la mezcla a temperatura ambiente bajo atmósfera de argón durante 3 horas. Después se concentra el solvente, se disuelve el residuo en etil acetato/metanol (20%), y se lava con bicarbonato sódico saturado y cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico, y se concentra. Se purifica el sólido obtenido mediante cromatografía, eluyendo con diclorometano/metanol (2%) para obtener 273 mg del compuesto del título. Rendimiento del 27%. MS(ES^{+}): m/z = 501,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 65 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(4-(2-(piperidin-1-il)-etoxi)fenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol trifluoroacetato

A una solución de 4-(2-piperidin-1-il)-etoxibenzaldehído (0,42 g, 1,8 mmol) en ácido acético (18 ml) (Kaliappa G., Tetrahedron Setter, 34(35), 5631-4; (1993)) se le añade 1-(isopropilsulfonil)-2-amino-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-\alpha-(fenil)acetil)bencimidazol (0,88 g, 1,8 mmol), acetato de amonio (1,39 g, 18 mmol), acetato de cobre (II) (0,65 g, 3,6 mmol) bajo nitrógeno. Se calienta la mezcla de reacción resultante hasta los 100ºC, y se agita durante 2 horas. Se enfría hasta temperatura ambiente, y se concentra el ácido acético. Se disuelve el residuo en metanol, se pasa la solución de metanol a través de una columna SCX, se lava con metanol, y después con amoníaco 2 N en metanol. Se concentra el solvente. Se purifica el residuo mediante HPLC para dar el compuesto del título en forma de sal de ácido trifluoroacético (0,17 g, 23%). MS(ES^{+}): m/z = 585,3 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los ejemplos 66 a 75 pueden prepararse esencialmente tal como se describe en el Ejemplo 65.

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Ejemplo 76 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-oxazol-4-il)-bencimidazol

A una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-\alpha-(fenil)acetil)-bencimidazol (5,84 g, 12,0 mmol) en ácido acético (glacial, 100 ml) se le añade acetato amónico (9,26 g, 120 mmol) y acetato de cobre (I) (4,31 g, 23,7 mmol), seguido de 2,6-difluorobencilaldehído (1,41 ml, 13,1 mmol), y se agita la mezcla a 100ºC durante 4 horas. Se enfría la mezcla a 0ºC y se vierte lentamente sobre una mezcla de NH_{4}Cl/NH_{4}OH 3:1, pH = 9. Se diluye la mezcla con H_{2}O (200 ml), se extrae con EtOAc (3 x 200 ml), se lava con NaCl acuoso saturado (150 ml), se seca (Na_{2}SO_{4}), y se concentra al vacío. Se purifica el residuo en un sistema Biotage (eluyente: CH_{2}Cl_{2}/MeCN 5:1), y después mediante HPLC, para dar lugar a un sólido amarillo, 675 mg, rendimiento del 11%. MS(ES^{+}): m/z = 495,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 77 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol y 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol etanolato

Bajo una atmósfera de nitrógeno, se combina 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(diceto-(2-fenil)etil)-bencimidazol (225 g, 0,606 moles), NH_{4}OAc (700,4 g, 9,08 moles), butanol (4,5 l), y 2,6-difluorobenzaldehído (172,2 g, 1,212 moles). Se calienta la mezcla resultante hasta los 55ºC para dar una suspensión amarilla. Se enfría la mezcla de reacción hasta los 15ºC y se añade agua (2,5 l). Tras mezclar durante 15 minutos, se separan las capas y se vuelve a extraer la fase orgánica con agua (2,5 l). Se separa la fase orgánica, y se concentra al vacío a 55ºC, para dar 513 g de aceite negro. Se disuelve el aceite en MeOH (505 ml) a 5ºC, y se añade metil ter-butil éter (MTBE) (2,25 l) a la mezcla durante 1,5 horas. Se enfría la suspensión resultante, lentamente, hasta los 22ºC, y se agita durante toda la noche. Se filtran los sólidos de color marrón claro, y se lava con MTBE (750 ml). Se aplica vacío sobre los sólidos durante 1,5 horas para dar 239 g de sólido. Se disuelven los sólidos en EtOAc (3,85 l) a 50ºC, y se añade gel de sílice (250 g) a la mezcla. Tras 0,5 horas, se enfría la mezcla hasta los 35ºC, se aplica un filtro de vacío sobre el gel de sílice (250 g humedecido con EtOAc), y se enjuaga con EtOAc (6 l). Se concentra la mezcla resultante bajo vacío a 50ºC para dar un sólido de color marrón claro (233,6 g, 78%; HPLC>99 área%; ^{1}HNMR indica que el EtOAc está incluido en el sólido; DSC comienza en 106,65ºC, máximo es 116,79ºC, 18,67 J/g).

Se prepara el compuesto etanolato de la siguiente manera: se disuelven 395 g del compuesto en EtOH (2 l) a 53ºC, y se aplica destilación al vacío hasta que queda seco (este procedimiento puede repetirse para eliminar del compuesto EtOAc residual; y puede confirmarse mediante ^{1}HNMR). Se suspenden los sólidos resultantes en EtOH (1,185 l) a 50ºC durante unos pocos minutos, y se enfría lentamente hasta los 22ºC durante toda la noche. Se enfría la suspensión resultante hasta los -3ºC o 0ºC, y se mantiene durante 1 hora. Se filtran los cristales resultantes, se lava con EtOH (395 ml, 0ºC) y se seca bajo vacío a 50ºC hasta llegar a peso constante. Se aísla el solvato de etanol (324 g, 84%) como un sólido de color rosáceo claro. El HPLC indica que el producto es puro en un 99,5 área%. MS(ES^{+}): m/z = 492,3 (M+H)^{+}.

Ejemplo 78 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol 1,5 naftaleno disulfonato

Se pesan 247 mg de la base libre y se suspenden en 4 ml de EtOH al 95%. Se disuelven de manera separada 181 mg de tetrahidrato de ácido naftalenodisulfónico en 2 ml de EtOH 95%. Se añade la solución ácida a la suspensión en incrementos de 0,2 ml durante un intervalo de 5 minutos, con fases de mezclado entre las adiciones. Se siembra la solución con cristales obtenidos de una selección de sal realizada recientemente, y en unos pocos minutos sucede la precipitación. Se permite que el vial se quede quieto durante 2 horas, con agitado ocasional. Se filtra el precipitado y se seca al aire para obtener 325 mg de cristales blancos.

La "siembra" del napadisilato se hace de la siguiente manera:

Se configura una matriz de monitorización de sal de 24 contraiones y 4 solventes, utilizando un software Library Design^{TM} desarrollado por Symyx Technologies, Inc. La solución de base libre y las soluciones de contrapones se añaden utilizando un manipulador de líquido Cavro^{TM}. Los líquidos se eliminan usando una centrífuga de vacío Genvac^{TM}. Los sólidos se ponen en un equipo de cristalización automatizada Symyx, que: 1) añade solventes a los pocillos, 2) calienta, 3) filtra y; 4) añade un filtrado para separar los estados de cristalización (evaporación, precipitación y enfriado). A partir de esos estados de procesamiento de la separación, se descubrió que había en las placas de cristal, pequeñas cantidades (< 2 mg) de material cristalino para la sal de napadisilato. Los sistemas solventes, que dieron el material cristalino, eran etanol 95% y etil acetato.

Ejemplo 79 1-ciclopentilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-ciclopentilsulfonil-2-amino-6-(diceto-(2-feniletil))-bencimidazol (1,29 g), se prepara esencialmente tal como se describió en el Ejemplo 77, para obtener 0,46 g (rendimiento del 28%) en forma de sólido amarillo. MS(APC^{+}), m/z = 520,2 (M+H)^{+}. Se prepara el dimetanosulfonato comenzando a partir de 0,23 g de la base libre, para producir 0,25 g (rendimiento del 78%) en forma de sólido blanco. MS(trampa de ión/ES^{+}): m/z = 520,1 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los ejemplos 80 a 84 pueden prepararse esencialmente tal como se describió en el Ejemplo 77, como una base libre. Las sales de metanosulfonato o dimetanosulfonato pueden ser preparadas también usando esencialmente el mismo procedimiento del Ejemplo 1, y 1,0 o 2,0 equivalentes de ácido metanosulfónico.

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Ejemplo 85 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(isopropil)-5-(4-fluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol metanosulfonato

Se añade isobutiraldehído (0,25 ml, 3,3 mmol) a una mezcla en agitación de 1-(6-(1-isopropilsulfonil)-2-amino bencimidazol)-2-(4-fluoro)fenil-etano-1,2-diona (0,5 g, 1,28 mmol) y de acetato amónico (1,48 g, 19,2 mmol), en n-BuOH (10 ml). Se calienta la mezcla hasta los 80-90ºC y se agita vigorosamente durante 2 horas en un tubo sellado. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente, y se concentra bajo presión reducida. Se añade etil acetato y se lava con agua. Se separan las capas y se lava la capa orgánica con cloruro sódico acuoso saturado (50 ml), se seca sobre sulfato de magnesio, y se concentra bajo presión reducida. Se somete al residuo a cromatografía en gel de sílice (Biotage) eluyendo con diclorometano:metanol, de 40:1 a 20:1, para proporcionar 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(isopropil)-5-(4-fluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol. MS(ES^{+}): m/z = 442,1 (M+H^{+}).

Se suspende en dietil éter el 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(isopropil)-5-(4-fluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol recuperado, se filtra, se lava con dietil éter frío. Se seca bajo presión reducida para proporcionar el compuesto del título en 59% en forma de polvo blanco. MS(ES^{+}): m/z = 442,1 (M+H^{+}).

Se añade ácido metanosulfónico (0,68 ml, 1 M en diclorometano:metanol 95:5 preparado recientemente) de una vez, a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(isopropil)-5-(4-fluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (0,299 g, 0,68 mmol) en 10 ml de diclorometano:metanol, 95:5. Después de 5 minutos, se elimina el solvente mediante vapor de nitrógeno, y se finaliza el secado bajo vacío. Se tritura el material crudo con dietil éter (20 ml) durante toda la noche. Se recoge la sal mediante filtración y se lava con dietil éter adicional para proporcionar 0,353 mg (rendimiento del 97%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 442,1 (M+H^{+}).

Ejemplo 86 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(isopropil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidizol metanosulfonato

Se añade isobutiraldehído (0,73 ml, 8,1 mmol) a una mezcla en agitación, de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(diceto-(2-fenil)etil))bencimidazol (1,5 g, 4,04 mmol), y acetato amónico (3 g, 40,4 mmol) en ácido acético (20 ml). Se calienta la mezcla hasta los 80-90ºC y se agita vigorosamente durante 2 horas en un tubo sellado. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente, y se concentra bajo presión reducida. Se añade hielo y se agita la mezcla vigorosamente durante 15 minutos. Se añade una mezcla pre-enfriada (baño de hielo) 4/1 (v/v) de cloruro amónico acuoso saturado/hidróxido amónico concentrado (50 ml). Se añaden 125 ml de etil acetato:metanol 4:1. Se separan las capas y se lava la capa orgánica con cloruro amónico acuoso saturado (50 ml), se seca sobre sulfato magnésico, y se concentra bajo presión reducida. Se somete al residuo a cromatografía en gel de sílice eluyendo con diclorometano:metanol 25:1 para proporcionar 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(isopropil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidizol. MS(ES^{+}): m/z = 424,1 (M+H^{+}).

Se suspende el 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(isopropil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidizol recuperado, en dietil éter, se filtra, se lava con dietil éter frío. Se seca bajo presión reducida para proporcionar la base libre en 28%, en forma de polvo blanco. MS(ES^{+}): m/z = 424,1 (M+H)^{+}.

Se añade ácido metanosulfónico (0,2 ml, 1 M en CH_{2}Cl_{2}:MeOH 95:5 preparado recientemente) de una vez, a una solución de 1-ispropilsulfonil-2-amino-6-(2-(isopropil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidizol (90 mg, 0,2 mmol) en CH_{2}Cl_{2}:MeOH 8:10 ml, 95:5. Después de 5 minutos, se elimina el solvente mediante vapor de nitrógeno, y se finaliza el secado bajo vacío. Se tritura el material crudo con dietil éter (20 ml) durante toda la noche. Se recoge la sal mediante filtración y se lava con dietil éter adicional para proporcionar 88 mg (rendimiento del 81%) del compuesto del título.

Los compuestos de los Ejemplos 87 a 93 se preparan esencialmente de la misma manera que se describió en los Ejemplos 85 y 86.

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Ejemplo 94 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(formil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Se añade a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(trimetilsililetoximetil)-2-(formil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (100 mg, 0,185 mmol) en etanol (4 ml), HCl (37%, 4 ml) y se agita a temperatura ambiente durante 4 horas. Se diluye la mezcla con agua (20 ml) y se lava con EtOAc (3 x 10 ml). Se añade NaOH (15%) a la fase acuosa, hasta que se alcanza pH = 6-7, y se extrae la mezcla con EtOAc (3 x 20 ml). Se secan (MgSO_{4}) las capas orgánicas combinadas y se concentra al vacío. Se purifica el residuo en un cartucho de extracción de la fase sólida (SPE) (Oasis^{TM}), y después mediante HPLC, para obtener un sólido blanco, 8 mg, rendimiento 10%. MS(ES^{+}): m/z = 410 (M+H)^{+}.

Ejemplo 95 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2-(piperidin-1-il)metil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol A. Aminación reductiva

A una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(trimetilsililetoximetil)-2-(formil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-
bencimidazol (200 mg, 0,37 mmol) y piperidina (0,037 ml, 0,37 mmol) en 1,2-dicloroetano (5 ml) se le añade triacetoxiborohidruro de sodio (110 mg, 0,52 mmol) en una porción, y se agita a temperatura ambiente durante 5 horas. Después, se añade agua (50 ml) y se extrae con EtOAc (3 x 50 ml). Se lavan las capas orgánicas combinadas con cloruro sódico acuoso saturado (50 ml), se seca (MgSO_{4}) y se concentra al vacío, para obtener un sólido amarillo, 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(trimetilsililetoximetil)-2-((2-piperidin-1-il)metil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)bencimidazol, 251 mg. MS(ES^{+}): m/z = 609,2 (M+H)^{+}.

B. Desprotección

A una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-trimetilsililetoximetil-2-((2-piperidin-1-il)metil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (0,37 mmol) en acetonitrilo (0,1 M) se le añade ácido fluorhídrico (HF) (48%, 53,7 mmol) y se agita a 50 C durante 3 horas. Después se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente y se añade una solución acuosa saturada de NaHCO_{3}, hasta que el pH = 8. Se extrae la mezcla con EtOAc (3 x 20 ml) y se secan (Mg_{2}SO_{4}) las capas orgánicas combinadas, y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante columna SCX, y después mediante HPLC para obtener un sólido amarillo, 46 mg, rendimiento del 28%. MS(ES^{+}): m/z = 479,2 (M+H)^{+}.

Se prepara la sal de metanosulfonato del compuesto del título, tal como se describió previamente (rendimiento del 89%). MS(ES^{+}): m/z = 479,2 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los Ejemplos 96 a 98 se preparan esencialmente tal como se describió en el Ejemplo 95.

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Ejemplo 99 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(N-[2-(piperidin-1-il)et-1-il]-aminometil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol A. Aminación reductiva

A una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(trimetilsililetoximetil)-2-(formil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-
bencimidazol (200 mg, 0,37 mmol) en metanol (8 ml), se añaden tamices moleculares de 4 Armstrongs y 2-(N-piperidinil)-etilamina (0,37 mmol, 1 equivalente), y se deja agitando toda la noche. Después se añade borohidruro sódico (70 mg, 1,85 mmol, 5 equivalentes) en dos porciones, y se agita a temperatura ambiente durante 1 hora. Se diluye la mezcla con metanol (20 ml) y se filtra a través de una almohadilla de Celite ® y SiO_{2}. Se concentran los filtrados al vacío y se purifica el residuo mediante una columna SCX para obtener un sólido amarillo con un rendimiento del 97%. MS(ES^{+}): m/z = 652,3 (M+H)^{+}

B. Desprotección

Se lleva a cabo siguiendo el procedimiento para el Ejemplo 95. MS(ES^{+}): m/z = 522 (M+H)^{+}.

El compuesto del Ejemplo 100 se prepara esencialmente tal como se describió en el Ejemplo 99.

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Ejemplo 101 y 102

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(1-(etoxicarbonil)eten-2-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

y

1-isopropilsulfonil-6-(2-(2-carboxietil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol A. Condensación Horner-Emmonds

A una solución de trietilfosfonoacetato (0,081 ml, 0,407 mmol) en THF seco (0,8 ml), se le añade gota a gota una solución de bis(trimetilsilil)amida de potasio (HHMDS) (0,5 M en tolueno, 0,85 ml) a -78ºC bajo nitrógeno. Se agita la mezcla durante 30 minutos y se elimina el baño. Después de 5 minutos, se enfría la mezcla hasta -78ºC durante la adición de una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(trimetilsililetoximetil)-2-(formil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (100 mg, 0,185 mmol) en THF seco (1 ml), y se calienta lentamente a 0ºC durante 2 horas. Después, se añade una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl (10 ml) y se extrae la mezcla con EtOAc (3 x 15 ml). Se secan (MgSO_{4}) las capas orgánicas combinadas y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}; eluyente: hexano/EtOAc 1:2) para obtener un sólido amarillo, 97 mg, rendimiento del 86%. MS(ES^{+}): m/z = 610 (M+H)^{+}.

B. Reducción

A una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(trimetilsililetoximetil)-2-(2-(etoxicarbonil)eten-2-il)-5-(fe-
nil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (97 mg, 0,159 mmol). En MeOH (5 ml), se le añade Pd/C (20% en peso, 19,4 mg). Se inyectan burbujas de hidrógeno a temperatura ambiente durante 5 minutos. Se agita a temperatura ambiente durante 20 horas bajo hidrógeno, y se filtra a través de una almohadilla de Celite ®. Se concentran los filtrados al vacío para dar un sólido amarillo, 91 mg, rendimiento del 93%. MS(ES^{+}): m/z = 612 (M+H)^{+}.

C. Desprotección

A una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(trimetilsililetoximetil)-2-(1-(etoxicarbonil)etil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (91 mg, 0,14 mmol) en etanol (3 ml), se le añade HCl (37%, 3 ml) y se agita a temperatura ambiente durante 24 horas. Después se diluye la mezcla en agua (10 ml) y se añade a una solución de NaOH (15%) hasta que el pH = 6.7. Se extrae la mezcla con EtOAc (3 x 30 ml) y se secan (MgSO_{4}) las capas orgánicas combinadas, y se concentran al vacío. Se purifica el residuo mediante HPLC para dar 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(trimetilsililetoximetil)-2-(etoxicarboniletil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-benzimidazol, en forma de sólido blanco, 11 mg, rendimiento del 16%. FIA MS(ES^{+}): m/z = 482 (M+H)^{+}. También se obtiene 1-isopropilsulfonil-6-(2-(2-carboxietil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol en forma de sólido blanco, 3 mg, rendimiento del 5%. MS(ES^{+}): m/z = 454 (M+H)^{+}.

Los compuestos en los Ejemplos 103 a 108 se preparan esencialmente tal como se describió en el Ejemplo 102.

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Ejemplo 109 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(4-metoxibencil)-2-(hidroximetil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

A una solución de 1-(4-metoxibencil)-2-ter-butildimetilsililoximetil-4-(fenil)-5-yodoimidazol (50 mg, 0,0935
mmol) en tolueno seco (0,8 ml) previamente sometida a burbujeo con un vapor de nitrógeno, se le añade PdCl_{2}(PPh_{3})_{2}
(4,5 mg, 0,00641 mmol) en una porción. Después de 5 minutos, se añade una suspensión de ácido 1-isopropilsulfonil-2-amino-bencimidazol-6-borónico (40 mg, 0,141 mmol) en etanol (0,8 ml) previamente sometido a burbujeo con un vapor de nitrógeno, seguido de carbonato sódico (2M en agua, 0,32 ml, 0,640 mmol). Se agita la mezcla durante 2,5 horas a 100ºC, se enfría a temperatura ambiente, se diluye con HCl 10% (5 ml), se extrae con EtOAc (15 ml), se seca (Na_{2}SO_{4}) y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}, CH_{2}Cl_{2}/MeOH 19:1 \rightarrow 5:1), se disuelve el material obtenido, en MeCN (0,5 ml), y se trata con HF (48% en H_{2}O, 0,12 ml, 3,31 mmol) a temperatura ambiente durante 4 horas. Se diluye la mezcla de con EtOAc (15 ml); se lava con NaHCO_{3} saturado (5 ml), se seca (Na_{2}SO_{4}), y se concentra al vacío. Se purifica el residuo mediante cromatografía flash (SiO_{2}, CH_{2}Cl_{2}/MeCN/MeOH 85:15:5) para proporcionar 18 mg (rendimiento del 36%). MS(ES^{+}): m/z = 532 (M+H)^{+}.

Ejemplo 110 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(1-(ter-butoxicarbonil)piperidin-4-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se añade ter-butilamina (0,125 g, 1,7 mmol) a una solución de N-[1-(etoxicarbonil)-piperidin-4-il](1-isopropilsulfonil-2-amino-6-formilbencimidazol)-imina (0,36 g, 0,86 mmol) y \alpha-(p-toluenosulfonil)bencilisocianida (0,463 g, 1,7 mmol) en metanol (10 ml). Se calienta la mezcla de reacción hasta reflujo, y se agita durante toda la noche. Se enfría hasta temperatura ambiente, se concentra bajo presión reducida, y se divide el residuo entre diclorometano (50 ml) y agua (50 ml). Se separan las capas, se lava la capa orgánica con cloruro sódico acuoso saturado (2 x 15 ml), se seca sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida. Se somete al residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con etil acetato:hexanos 9:1, para proporcionar 0,130 g (28%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 537,2 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los Ejemplos 111 al 171 pueden prepararse esencialmente tal como se describió en el Ejemplo 110.

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Ejemplo 172 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-4-(2-fluorofenil))-imidazol-5-il) bencimidazol metanosulfonato

Se añade ácido metanosulfónico (0,029 ml, 0,455 mmol) a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-ciclopropil)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)bencimidazol (0,200 g, 0,455 mmol) preparada siguiendo el procedimiento del Ejemplo 110 en metanol/diclorometano 10% (3 ml). Se eliminan los solventes bajo presión reducida, para 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-ciclopropil)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)bencimidazol metanosulfonato (0,25 g). MS(ES^{+}): m/z = 440,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 173 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(5-(3-fluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Se trata el 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-formilbencimidazol (0,3 g, 1,1 mmol) en THF (5 ml), con hidróxido de amonio (0,39 ml, 3,4 mol), y se agita durante 3 horas a temperatura ambiente. Se trata la reacción con 3-fluorofenil-tolilsulfonometilisocianida (0,23 g, 0,8 mmol) y piperazina (0,096 g, 1,1 mmol). Se agita la reacción durante 5 horas y después se diluye en EtOAc. Se lava la fase orgánica con agua y cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico, se filtra, y se elimina el solvente al vacío. Se suspende el residuo en EtOAc frío, y se filtra para obtener 0,195 g (44%) del producto deseado. MS(ES^{+}): m/z = 400,2 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los Ejemplos 174 a 176 han sido preparados esencialmente tal como se describe en el Ejemplo 173.

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Ejemplo 177 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-p-nitrofenil-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se añade a un tubo de reacción, p-nitroanilina (0,138 g, 1 mmol), 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-formilbencimidazol (Preparación 1, 0,627 g, 1 mmol), ácido acético (10 ml) y tolueno (2 ml). Se sella la vasija de la reacción y se calienta la suspensión hasta los 120ºC durante 24 horas. Se la va la imina cruda con CHCl_{3} y se seca al vacío para producir 300 mg de polvo amarillo. MS(ES^{+}): m/z = 388,1 (M+H)^{+}.

El NaH suspendido (65 mg, 60% aceite mineral) estaba en dimetoxietano (DME) (2 ml) a temperatura ambiente. Se añade \alpha-(p-toluenosulfonil)bencilisocianida (Preparación 2, 0,135 g, 0,5 mmol) a la suspensión, se agita durante 5 minutos, y se añade la imina (0,116 g, 0,3 mmol). Tras 2 horas, se introduce agua y EtOAc en la reacción, y rápidamente se agitan los contenidos durante 1 o 2 minutos, se transfiere a un embudo separador, se lava la fase orgánica con agua, y entonces se lava con cloruro sódico acuoso saturado. Se seca la capa orgánica sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra, y se concentra para obtener el producto deseado. Se purifica mediante cromatografía de separación sobre una pequeña columna de gel de sílice, usando MeCl_{2}/MeCN 3:2, más MeOH 10%, parta obtener 138 mg del producto deseado. MS(ES^{+}): m/z = 503,3 (M+H)^{+}.

Ejemplo 178 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(4-amino)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

A 0,025 g (0,05 mmol) de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-p-nitrofenil-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol en EtOH (1 ml) a temperatura ambiente, se le añade dihidrato de SnCl_{2} (50 mg, 0,22 mmol). Después de 3 horas, se trata la reacción del crudo con H_{2}O (1 ml), se agita durante otros 25 minutos, y después se añade Na_{2}CO_{3} para llevar el pH hasta aproximadamente el valor de 10. Se transfiere la mezcla de reacción a un embudo separador y se diluye con EtOAc y agua. Se re-extrae la capa acuosa 3 veces con EtOAc, se lavan con cloruro sódico acuoso saturado, las capas orgánicas combinadas, se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra al vacío para dar lugar al producto en crudo. Se purifica mediante cromatografía utilizando TLC preparativo (Silica, 20 x 20 cm x 1 mm, MeCl_{2}/MeOH 20:1) para producir 6 mg del producto deseado. MS(ES^{+}): m/z = 473,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 179 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(metil)-4-(fenil)-tiazol-5-il)-bencimidazol A. 2-metil-4-feniltiazol

Se añade tioacetamida (0,09 g, 1,2 mmol) a una solución de 2-bromoacetofenona (0,2 g, 1,0 mmol) en dioxano 30 ml. Se agita a temperatura ambiente durante 4 horas, se diluye con etil acetato, se lava de manera secuencial con carbonato sódico acuoso (3 x 15 ml) y agua (3 x 20 ml). Se seca la fase orgánica sobre sulfato sódico, se concentra bajo presión reducida, y se somete al residuo a la cromatografía en gel de sílice, eluyendo con hexano que contiene etil acetato 10% para proporcionar el compuesto deseado, con un rendimiento del 78%. MS(ES^{+}): m/z = 176,1
(M+H)^{+}.

B. 2-metil-4-fenil-5-(tributilestanil)tiazol

Se añade n-butil litio (0,46 ml, 0,74 mmol, 1,6 M en tetrahidrofurano) a una solución de 2-metil-4-feniltiazol (0,13 g, 0,74 mmol) en tetrahidrofurano (7 ml) enfriada hasta -78ºC bajo una atmósfera de nitrógeno. Se agita a -78ºC durante 45 minutos, se añade cloruro de tributiltina (0,2 ml, 0,74 mmol), y se agita durante 2 horas, mientras la mezcla de reacción se calienta hasta temperatura ambiente. Se añade cloruro amónico acuoso y después se divide la mezcla entre etilacetato y agua. Se extrae la fase acuosa con etil acetato. Se lavan de manera secuencial las capas orgánicas combinadas, con agua y cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida. Se somete el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con hexano que contiene etil acetato 10%, para proporcionar el compuesto deseado, con un rendimiento del 68%. MS(ES^{+}): m/z = 466,1 (M+H)^{+}.

C. Emparejado

Se agita una mezcla de 2-metil-4-fenil-5-(tributilestanil)tiazol (0,1 g, 0,21 mmol), 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-yodobencimidazol (0,07 g, 0,21 mmol) y cloruro de (acetonitrilo)paladio (II) (0,021 mmol) en dimetilformamida seca (2 ml), a 100ºC durante 4 horas, bajo una atmósfera de nitrógeno. Se enfría hasta temperatura ambiente y se diluye con etil acetato (20 ml). Se lava de manera secuencial con agua (3 x 5 ml) y cloruro sódico acuoso saturado (3 x 5 ml), se seca sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida. Se somete el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con diclorometano:acetonitrilo 7:1 para proporcionar el compuesto del título en forma de un sólido blanco, con un rendimiento del 2%. MS(ES^{+}): m/z = 413,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 180 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2,4-difenil-tiazol-5-il)-bencimidazol

Comenzando con tiobenzamida y 2-bromoacetofenona, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Ejemplo 179, con un rendimiento del 12%. MS(ES^{+}): m/z = 474,8 (M+H)^{+}.

Ejemplo 181 2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Se agita una mezcla de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (0,07 g, 0,142 mmol) y 1,42 ml de hidróxido sódico 1 N en agua:acetonitrilo 1:1 a 60ºC durante 1 hora. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente, y se diluye con agua y etil acetato. Se extrae la fase acuosa con etil acetato (3 veces). Se lavan de forma secuencial las fases orgánicas combinadas, con agua y cloruro sódico acuoso saturado, se secan sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida. Se somete al residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con diclorometano:metanol 2:1, para proporcionar el compuesto del título con un rendimiento del 93%. MS(ES^{+}): m/z = 388,0 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los ejemplos 182 y 183 pueden preparase esencialmente como se describió en el Ejemplo 181.

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Ejemplo 184 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(4-aminofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Se purga una suspensión de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(4-nitrofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (0,149 g, 0,3 mmol) y paladio en carbono al 10% (0,03 mmol), en metanol con hidrógeno durante 10 minutos, y después se agita bajo una atmósfera de hidrógeno durante 6 horas. Se filtra a través de un lecho de Celite ® y se concentra el residuo bajo presión reducida. Se somete al residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con metanol 4% en diclorometano, para proporcionar el compuesto del título, con un rendimiento del 28%. MS(ES^{+}): m/z = 473,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 185 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2-aminotien-5-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2-nitrotien-5-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Ejemplo 184, con un rendimiento del 22%. MS(ES^{+}): m/z = 479,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 186 y 187

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(metil)-2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

y

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(metil)-2-(2,6-difluorofenil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se añade carbonato de cesio (0,134 mmol) y yoduro de metilo (0,134 mmol) a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il-bencimidazol (0,12 mmol) en dimetilformamida seca (2,5 ml) a 0ºC. Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas, se diluye con agua y etil acetato, y se separan las capas. Se extrae la fase acuosa con etil acetato (3 veces). Se lavan de manera secuencial las fases orgánicas combinadas, con agua fría (5 veces) y con cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida. Se somete al residuo a cromatografía en gel de sílice. Se disuelve el mezcla de isómero en diclorometano, y se somete a esta mezcla a HPLC preparativa (Kromasil Si60, 7 \mum, 20 x 250 mm ID), eluyendo con diclorometano que contiene metanol 4% (100 ml/min) para proporcionar 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(metil)-2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (11,1 minutos), con un rendimiento del 22%. MS(ES^{+}): m/z = 508,2 (M+H)^{+}; y 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(metil)-2-(2,6-difluorofenil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (16,1 min), con un rendimiento del 33%. MS(ES^{+}): m/z = 508,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 188 y 189

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(metil)-2-(tien-2-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

y

1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(metil)-2-(tien-2-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-tien-2-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol y 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-metil-2-(tien-2-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol y 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-((1-metil-2-(tien-2-il)-4-fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Ejemplo 187. MS(ES^{+}): m/z = 478,2 (M+H)^{+}.

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Ejemplo 190 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(piperidin-4-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Se agita vigorosamente una mezcla de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(1-(benciloxicarbonil)piperidin-4-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (0,74 g, 1,24 mmol), formato amónico (4,94 mmol), y paladio sobre carbono 10% (0,12 mmol), en 30 ml de etanol absoluto, en reflujo durante 5 horas. Se enfría la mezcla de reacción hasta temperatura ambiente, se filtra a través de un lecho de Celite ®, y se concentra el filtrado bajo presión reducida. Se somete al residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con diclorometano:metanol 19:1, para proporcionar el compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 465,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 191 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(piperidin-4-il)-5-(5-(4-fluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol di-trifluoroacetato

Se añade cloruro de hidrógeno en etil acetato a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-((2-(1-(ter-butoxicarbonil)-piperidin-4-il)-5-(4-fluorofenil))-imidazol-4-il)-bencimidazol (0,05 mmol) en etil acetato (2 ml), y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante toda la noche. Se filtra la suspensión resultante y se lava con dietil éter para proporcionar el compuesto del título, con un rendimiento del 25%. Se disuelve el sólido en dimetilsulfóxido:acetonitrilo 1:1, y se somete a HPLC (YMC C18, 5 \mum, 20 x 50 mm ID), eluyendo con un gradiente de agua más ácido trifluoroacético:acetonitrilo 0,05% más ácido trifluoroacético 0,05%, del 90:10 al 45:55 en 15 minutos (9 ml/min), para proporcionar el compuesto el título, rendimiento del 25%, 9,33 min. MS(ES^{+}): m/z = 483,2,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 192 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(piperidin-4-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se calienta una mezcla de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(1-(etoxicarbonil)piperidin-4-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (55 mg) en ácido clorhídrico concentrado, a reflujo durante 24 horas. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente, se añade hidróxido sódico 5 N, hasta que la mezcla sea básica, y se extrae con diclorometano. Se concentra la fase orgánica bajo presión reducida, y se somete a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con diclorometano, seguido de diclorometano:metanol 1:1 para proporcionar 20 mg (43%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 465,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 193 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(piperidin-4-il)-4-(4-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(1-(etoxicarbonil)piperidin-4-il)-4-(4-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Ejemplo 192. MS(ES^{+}): m/z = 483,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 194 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(1-(etil)piperidin-4-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Se agita una mezcla de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-piperidin-4-il)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol
(0,574 g, 1,23 mmol), trietilamina (3,1 mmol), y yodoetano (1,54 mmol), en dimetilformamida anhidra (5 ml) a temperatura ambiente, durante 6 horas. Se divide la mezcla entre etil acetato y agua. Se extrae la capa acuosa con etil acetato (3 veces). Se lavan de manera secuencial las capas orgánicas combinadas, con agua fría (5 veces) y con cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida. Se somete al residuo a cromatografía en gel de sílice, para proporcionar el compuesto del título, con un rendimiento del 76%. MS(ES^{+}):
m/z = 493,2 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los Ejemplos 195 a 203 pueden prepararse esencialmente como se describió en el Ejemplo 194.

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124

Ejemplo 204 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(1-(metil)piperidin-4-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se añade formaldehído acuoso (37% p/p, 0,15 mmol) a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(piperi-
din-4-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (75 mg) en metanol (10 ml). Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 30 minutos, después se enfría hasta 0ºC. Se añade ácido acético (0,3 ml) seguido de cianoborohidruro de sodio (18 mg) y se agita durante toda la noche, a temperatura ambiente. Se concentra la mezcla bajo presión reducida, y después se disuelve el residuo en etil acetato. Se lava la solución dos veces con hidróxido sódico 1 N, y se concentra la fase orgánica bajo presión reducida, para proporcionar 60 mg (79%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 479,6 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los Ejemplos 205 y 206 pueden prepararse esencialmente tal como se describió en el Ejemplo 204.

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Ejemplo 207 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-((1-(ciclohexan-1-on-4-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se agita una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(1,4-dioxaspiro[4,5]dec-8-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (0,05 g, 0,1 mmol) en ácido clorhídrico 3 N (5 ml) durante 3 días a temperatura ambiente. Se añade hidróxido sódico 5 N para neutralizar la mezcla, y se extrae con diclorometano (3 x 10 ml). Se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida, para proporcionar 0,038 g (83%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 478,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 208 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(4-hidroxiciclohex-1-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se añade una solución de borohidruro sódico (0,28 g) en metanol (5 ml), a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(cliclohexan-1-on-4-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (0,35 g, 0,7 mmol) en 10 ml de tetrahidrofurano y 10 ml de metanol. Se agita la mezcla de reacción durante 30 minutos a temperatura ambiente, se diluye con agua (50 ml), y se extrae con etil acetato (2 x 15 ml). Se lavan los extractos orgánicos combinados con cloruro sódico acuoso saturado, se secan sobre sulfato sódico, y se concentran bajo presión reducida, para proporcionar 0,345 g (98%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 480,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 209 Hidrocloruro de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(4-aminociclohex-1-il)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se agiota una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(4-(-N-[ter-butoxicarbonil]amino)ciclohex-1-il)-4-(fe-
nil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (0,14 g, 0,2 mmol) en cloruro de hidrógeno 1 M en ácido acético (5 ml), a temperatura ambiente durante 1 hora. Se filtra la suspensión y se seca el sólido para proporcionar 0,017 g (15%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 479,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 210 1-isopropilsulfonil-2-aminobencil-6-(4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-aminobencil-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-\alpha-(fenil)acetil)bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en Ejemplo 1. Rendimiento del 12%. MS(ES^{+}): m/z = 472,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 211 2-aminobencil-6-(4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-aminobencil-6-(4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente tal comos e describió en el Ejemplo 181. Rendimiento del 91%. MS(ES^{+}): m/z = 366,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 212 y 213

1-isopropilsulfonil-2-aminoetil-6-(2-(2,6-(difluoro)fenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

y

2-aminoetil-6-(2-(2,6-(difluoro)fenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-aminoetil-6-(\alpha-((ter-butildimetilsilil)oxi)-\alpha-(fenil)acetil)bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Ejemplo 1. Rendimiento: 42%. MS(ES^{+}):
m/z = 522,1 (M+H)^{+}. Junto con el producto deseado, se aisló un 12% del producto desulfonilatado, 2-aminoetil-6-(2-(2,6-(difluoro)fenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol. MS(ES^{+}): m/z = 416,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 214 1-isopropilsulfonil-6-(1-(4-(metoxi)bencil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol A. 1-isopropilsulfonil-2-cloro-6-(1-(4-metoxi-bencil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(4-metoxi-bencil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol, se
prepara el compuesto del título esencialmente tal como se describió en la Preparación 100. Rendimiento del 14%. MS(ES^{+}): m/z = 512,2 (M+H)^{+}.

B. Reducción

A una suspensión agitada del derivado de inicio 2-clorobencimidazol (30 mg, 0,057 mmol, 1 equivalente) en 3 ml de MeOH, se le añade Et_{3}N (0,04 ml) gota a gota, seguido por la adición de catalizador Pd/C 10% en peso (100 mol%). Se purga la suspensión con hidrógeno durante 5 minutos. Se agita la mezcla bajo atmósfera de hidrógeno (1 atm) durante toda la noche. Se filtra el catalizador a través de una almohadilla de Celite ® y se enjuaga varias veces con EtOAc. Se concentran los solventes al vacío y se purifica el residuo mediante cromatografía de gel de sílice, eluyendo con CH_{2}Cl_{2}:MeOH 3%, para producir el compuesto del título (rendimiento del 44%). MS(ES^{+}): m/z = 487,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 215 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(bromo)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se añade bromo (0,34 ml, 6,545 mmol) gota a gota, durante 5 minutos, a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (2,61 g, 5,95 mmol) en cloroformo (0,7 l), y se agita durante 18 horas. Se lava con agua, bicarbonato sódico saturado, se seca con sulfato de magnesio, se filtra y se eliminan los solventes bajo presión reducida. Se purifica el residuo en gel de sílice, eluyendo con mezclas de etil acetato/diclorometano, para proporcionar el compuesto del título (2,41 g). MS(ES^{+}): m/z = 518,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 216 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(4-clorofenil)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol metanosulfonato

Se combina 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(bromo)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (0,214 g, 0,41 mmol), ácido 4-clorofenil borónico (0,077 g, 0,50 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)-paladio (0,0234 g, 0,021 mmol), carbonato sódico 2 M (0,62 ml), metanol (2,0 ml) y tolueno (20 ml), y se calienta hasta alcanzar reflujo, durante 3 horas. Se enfría a temperatura ambiente, se diluye con etil acetato, se lava con agua, carbonato sódico saturado, cloruro sódico saturado, se seca con sulfato magnésico, se filtra y se elimina los solventes, bajo presión reducida. Se purifica el residuo sobre gel de sílice, eluyendo con mezclas de diclorometano/metanol, para proporcionar 0,196 g de la base libre. Se trata con ácido metanosulfónico tal como se describió previamente, para proporcionar el compuesto del título (0,232 g). MS(ES^{+}): m/z = 550,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 217 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(2,4-difluorofenil)-4-(2-fluorofenil))-imidazol-5-il)-bencimidazol metanosulfonato

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(bromo)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Ejemplo 216 (0,179 g). MS(ES^{+}): m/z = 552,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 218 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(trimetilsililetinil)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se combina 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(bromo)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (0,332 g, 0,64 mmol), trimetilsililacetileno (0,36 ml, 2,56 mmol), tetrakis(trifenilfosfina)-paladio (0,150 g, 0,128 mmol), trietilamina (2 ml) y dimetilformamida (4 ml), y se calienta a 70ºC durante 18 horas. Se enfría hasta temperatura ambiente y se eliminan los solventes bajo presión reducida. Se purifica el residuo sobre gel de sílice, eluyendo con mezclas de acetonitrilo/diclorometano, para proporcionar el compuesto del título (0,295 g). MS(ES^{+}): m/z = 536,2 (M+H)^{+}.

Ejemplo 219 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-(2-but-3-in-1-ol)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol metanosulfonato

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(bromo)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol, se prepara la base libre esencialmente tal como se describió en el Ejemplo 218. Se trata con ácido metanosulfónico como se describió previamente, para proporcionar el compuesto del título (0,096 g). MS(ES^{+}): m/z = 508,4 (M+H)^{+}.

Ejemplo 220 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(etinil)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol metanosulfo- nato

Se añade fluoruro de tetra-n-butilamonio 1 M (0,15 ml, 0,15 mmol) a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(trimetilsililetinil)-4-(2-fluorofenil))-imidazol-5-il)-bencimidazol (0,054 g, 0,101 mmol) en tetrahidrofurano (4 ml), y se agita durante 5 minutos. Se diluye con etil acetato, se lava con agua, cloruro sódico saturado 50%, se seca con sulfato magnésico, se filtra y se eliminan los solventes bajo presión reducida. Se purifica el residuo sobre gel de sílice, eluyendo con mezclas de hexano/etil acetato, para proporcionar la base libre (0,037 g). Se trata con ácido metanosulfónico tal como se describió previamente, para proporcionar el compuesto del título (0,045 g). MS(ES^{+}): m/z = 464,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 221 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(etil)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol metanosulfonato

Se añade paladio sobre carbono 10% (0,010 g) a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(etinil)-4-(2-fluorofenil))-imidazol-5-il)-bencimidazol (0,074 g, 0,16 mmol) en metanol (15 ml), y se hidrogena bajo 1 atmósfera de hidrógeno durante 1,5 horas. Se filtran y eliminan los solventes bajo presión reducida. Se purifica el residuo sobre gel de sílice. Se trata con ácido metanosulfónico tal como se describió previamente, para proporcionar el compuesto del título (0,087 g). MS(ES^{+}): m/z = 468,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 222 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(1,2,3-triazol-4-il)-4-(2-fluoro-fenil)-imidazol-5-il)-bencimida- zol metanosulfonato

Se combinan 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(etinil)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol (0,114 g, 0,247 mmol), trimetilsililazida (0,165 ml, 1,23 mmol) y 1,4-dioxano (2 ml), y se calienta bajo irradiación de microondas a 140ºC durante 1 hora. Se enfría a temperatura ambiente, se añade metanol (5 ml), y se eliminan los solventes bajo presión reducida. Se purifica el residuo sobre gel de sílice, eluyendo con mezclas de diclorometano/metanol. Se trata con ácido metanosulfónico, tal como se describió previamente, para proporcionar el compuesto del título (0,088 g). MS(ES^{+}): m/z = 507,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 223 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-azido-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Se combinan fenil litio 1,9 M (0,42 ml, 0,80 mmol) gota a gota, a una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(bromo)-4-(2-fluorofenil))-imidazol-5-il)-bencimidazol (0,103 g, 0,20 mmol) en tetrahidrofurano (3 ml) a -78ºC, y se agita durante 20 minutos. Se añade ter-butil litio 1,7 M (0,28 ml, 0,48 mmol) gota a gota durante 5 minutos, y se agita durante 60 minutos. Se añade p-toluenosulfonilazida (0,064 g, 0,323 mmol) en tetrahidrofurano (0,4 ml), gota a gota, durante 2 minutos, y se agita a -78ºC durante 1 hora. Se calienta hasta los 0ºC, se diluye con etil acetato, y se lava con cloruro sódico saturado. Se neutraliza con cloruro sódico acuoso, se lava con ácido clorhídrico 1 N acuoso, y se vuelve a extraer con etil acetato. Se combinan las capas orgánicas, y se secan con sulfato magnésico, se filtran y eliminan los solventes, bajo presión reducida. Se purifica el residuo en gel de sílice, eluyendo con mezclas de acetonitrilo/diclorometano, para proporcionar el compuesto del título (0,035 g). MS(ES^{+}): m/z = 481,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 224 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(amino)-4-(2-fluorofenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol metanosulfonato

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclopropil)-2-(nitro)-4-(2-fluorofenil))-imidazol-5-il)-bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Ejemplo 221 (0,031 g). MS(ES^{+}): m/z = 455,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 225 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-ciclohexil-2-(bromo)-4-(2-fluorofenil))-imidazol-5-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclohexil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Ejemplo 215, MS(ES^{+}): m/z = 543,9 (M+H)^{+}.

Ejemplo 226 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclohexil)-2-(etinil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-bencimidazol

Comenzando con 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(ciclohexil)-2-(bromo)-4-(fenil)-imidazol-5-il)bencimidazol,
se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en lo Ejemplos 218 y 220; MS(ES^{+}): m/z = 488,1 (M+H)^{+}.

Ejemplo 227 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,4-difluorofenil)-5-(3,5-difluorofenil))-imidazol-4-il)-bencimidazol

Se hidrogena una mezcla de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(bencil)-2-(2,4-difluorofenil)-5-(3,5-difluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (0,084 g, 0,778 mmol), paladio negro (0,084 g) y metanol (50 ml), a 50ºC con gas hidrógeno (55 psi), durante 18 horas. Se enfría la reacción hasta temperatura ambiente, se filtra, y se elimina el solvente bajo presión reducida. Se purifica el residuo en gel de sílice, eluyendo con mezclas de diclorometano/metanol para proporcionar el compuesto del título (0,025 g). MS(ES^{+}): m/z = 530,0 (M+H)^{+}.

Las bases libres de los Ejemplos 228 a 231 se preparan esencialmente como se describió en las Preparaciones 66 y 67, y en Ejemplo 227. Las sales de metanosulfonatos se preparan disolviendo la base libre en metanol/diclorometano 10%, añadiendo 1,0 equivalente de ácido metanosulfónico, y eliminando los solventes bajo presión reducida, para proporcionar las sales de metanosulfonato.

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Las bases libres de los Ejemplos 232 a 235 se preparan esencialmente como se describió en la Preparación 67 y en el Ejemplo 227. Las sales de metanosulfonato se preparan disolviendo la base libre en metanol/diclorometano 10%, añadiendo 1,0 equivalente de ácido metanosulfónico, y eliminando los solventes bajo presión reducida para proporcionar las sales de mono-metanosulfonato.

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Ejemplo 236 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-metil)-5-(2,4-difluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol metanosulfonato

A una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(bencil)-2-(metil)-5-(2,4-difluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (390 mg, 0,75 mmol) en 100 ml de metanol, se le añade paladio negro (390 mg), y gas hidrógeno a 50ºC durante toda la noche, a 60 psi. La solución se filtra y purifica mediante cromatografía radial, eluyendo con metanol 8% en cloruro de metileno, para producir 152 mg (47%) del compuesto del título, en forma de un sólido de color blanco. MS(ES^{+}): m/z = 432,0 (M+H)^{+}.

A una solución de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(metil)-5-(2,4-difluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol (152 mg, 0,35 mmol) en 5 ml de cloruro de metileno, con metanol 3%, se le añade un equivalente de ácido metanosulfónico (23 ml) y se seca hasta llegar a los 186 mg (100%) del compuesto del título, en forma de un sólido de color canela. MS(ES^{+}): m/z = 432,0 (M+H)^{+}.

El compuesto del Ejemplo 237 puede preparase esencialmente como se describió en el Ejemplo 236.

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Ejemplo 238 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(3-(metil)-1-(fenil)-pirazol-5-il)-bencimidazol

A una solución de 5-(bromo)-3-(metil)-1-(fenil)-pirazol (264 mg, 1,11 mmol) en 6 ml de DME, se le añade ácido 1-isopropilsulfonil-2-amino-benzimidazol-6-borónico (694 mg, 2,45 mmol). Se añade carbonato sódico (354 mg, 3,34 mmol) disuelto en 0,5 ml de agua y trans-diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (234 mg, 0,33 mmol). Se calienta la mezcla hasta los 100ºC con agitado, bajo nitrógeno. Después de 2 horas, se enfría y filtra sobre una almohadilla de Celite ® y sulfato sódico. Se purifica el producto crudo mediante cromatografía radial, eluyendo con metanol 4% en CH_{2}Cl_{2}, para producir 201 mg (46%) del compuesto del título. MS(ES^{+}): m/z = 396,0 (M+H)^{+}.

Los compuestos de los Ejemplos 239 y 240 pueden prepararse esencialmente tal como se describió en el Ejemplo 238.

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Ejemplo 241 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2,4-(difenil)-1,2-dihidro-pirazol-3-on-5-il)-bencimidazol

A una solución agitada de 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(\alpha-((1-hidroxi)-\alpha-(fenil)acetil)-bencimidazol (0,25 mmol, 1 equivalente) en tolueno seco (3 ml), se le añade fenilhidracina (0,27 mmol, 1,1 equiv.), y se calienta la mezcla hasta llegar a reflujo, bajo nitrógeno, seguido de TLC. Se concentra la mezcla de reacción y se realiza cromatografía usando diclorometano:metanol 30:1 para dar el compuesto del título (rendimiento del 24%). MS(ACP^{+}): m/z = 474,2
(M+H)^{+}.

El compuesto de los Ejemplos 242 a 245 puede prepararse esencialmente como se describió en el Ejemplo 241.

131

Ejemplo 246 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(1-(bencil)-2-(metil)-5-(2,4-difluorofenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol

A una solución de 1-(bencil)-4-(bromo)-5-(2,4-difluorofenil)-2-(metil)-imidazol (1,12 g, 3,08 mmol) en 8 ml de DME, se añade ácido 1-isopropilsulfonil-2-amino-bencimidazol-6-borónico (2,62 g, 9,25 mmol). Se añade carbonato sódico (0,98 g, 9,25 mmol) disuelto en 1 ml de agua, y trans-diclorobis(trifenilfosfina) paladio (II) (0,65 g, 0,93 mmol). Se calienta la mezcla hasta los 100ºC con agitado, bajo nitrógeno. Después de 3 horas, se enfría la solución y se filtra sobre una almohadilla de Celite ® y sulfato sódico. Se purifica el residuo mediante cromatografía radial, eluyendo con metanol 3% en CH_{2}Cl_{2} con un gradiente hasta metanol 10%. Se realiza una segunda purificación mediante cromatografía radial eluyendo con metanol 4% en CH_{2}Cl_{2}, con un gradiente hasta metanol 6%, para producir 390 mg (24%) del compuesto del título, en forma de sólido amarillo. MS(ES^{+}): m/z = 522,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 247 2-amino-6-(5-fenilimidazol-4-il)-benzotiazol

Comenzando con 2-amino-benzotiazol-6-carboxaldehído, se prepara el compuesto del título, esencialmente como se describió en el Ejemplo 182. Rendimiento (16%). MS(ES^{+}): m/z = 293,0 (M+H)^{+}.

Ejemplo 248 2-amino-6-(1-(ciclohexil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-benzotiazol

Comenzando con 2-amino-benzotiazol-6-carboxaldehído y ciclohexilamina, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Ejemplo 247. Rendimiento (68%). MS(ES^{+}): m/z = 375,1 (M+H)^{+}.

Procedimiento general A

Reacción de Sandmeyer

Se añade un equivalente de benzotiazol en tres porciones durante 5 minutos, a una suspensión de un equivalente de cloruro de cobre (II), y 1,5 equivalentes de ter-butilnitrito en 1 ml de acetonitrilo a 65ºC. Se añaden 0,1 ml de etilendiamina, se vierte la mezcla de reacción en agua, y se extrae con etil acetato (3 x 25 ml). Se lavan las capas orgánicas combinadas, de manera secuencial, con agua (2 x 15 ml) seguido de cloruro sódico acuoso saturado (15 ml), se seca sobre sulfato sódico, y se concentra bajo presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de hexano que contiene entre el 25 y el 50% de etil acetato.

Ejemplo 249 2-cloro-6-(1-(ciclohexil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-benzotiazol

Comenzando con 2-amino-6-(1-(ciclohexil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-benzotiazol, se prepara el compuesto del título esencialmente como se describió en el Procedimiento General A: Reacción de Sandmeyer, siendo el rendimiento del 24%. MS(ES^{+}): m/z = 394,1 (M+H)^{+}.

Procedimiento general B

Se añade un equivalente de amina a una solución de tres equivalentes de benzotiazol en 1 ml de tetrahidrofurano. Después de 24 horas, se concentra la mezcla de reacción bajo presión reducida. Se purifica el residuo mediante cromatografía en gel de sílice, eluyendo con hexano que contiene etil acetato 25%.

Ejemplo 250 2-aminoetil-6-(1-(ciclohexil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-benzotiazol

Comenzando con 2-cloro-6-(1-(ciclohexil)-4-(fenil)-imidazol-5-il)-benzotiazol y etil amina, se prepara el compuesto del título, esencialmente tal como se describió en el Procedimiento General B. MS(ES^{+}): m/z = 403,1

\hbox{(M+H) ^{+} .}

Ejemplo 251 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(5-(fenil)-1,2,3-(triazol-4-il))-bencimidazol

Se combina y agita una mezcla de 3-isopropilsulfonamidil-4-amino-1-(5-fenil)-1,2,3-triazol-4-il, metóxido de litio (0,013 g) y bromuro de cianógeno (0,053 g), en diclorometano (5 ml), bajo nitrógeno, durante 48 horas. Se purifica el residuo mediante un cartucho de extracción Oasis ® HLB de 60 \muM(LP), para dar un sólido blanco (0,050 g, 30%). MS(ES^{+}): m/z = 382,44 (M+H)^{+}.

Ejemplo 252 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(5-(fenil)-pirazol-4-il)-bencimidazol

Se añade metóxido de litio (21 mg) y bromuro de cianógeno (89 mg) a una solución de 3-isopropilsulfonamidil-4-amino-1-(5-fenil)-pirazol-4-il-fenil, en 4,5 ml de CH_{2}Cl_{2}. Se agita bajo nitrógeno durante 18 horas. Se diluye con 2 ml de THF u 0,25 ml de MeOH, para disolver los sólidos y lavar con NaHCO_{3} 5%. Se vuelve a extraer la fase acuosa con una solución 9:1 de CH_{2}Cl_{2}:MeOH. Se separan las fases y se seca la fase orgánica sobre el sulfato de magnesio, y se concentra bajo presión reducida. Se somete el residuo a cromatografía en gel de sílice, eluyendo con un gradiente de CH2Cl2:MeOH entre el 2 y el 3,5%, para dar un sólido blanco (34 mg, 31%). MS(ES^{+}): m/z = 382,5 (M+H)^{+}

Ejemplo 253 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol dimaleato

Se disuelven 2,50 g (5,0 mmol) en 15 ml de metanol, y se añaden 1,20 g (10,0 mmol) de ácido maleico. Se calienta la mezcla de reacción hasta los 40ºC, con agitado durante 10 minutos. Se filtra la mezcla de reacción. Se calienta el filtrado hasta los 40\sim4ºC, mientras se añade 35 ml de etil acetato. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente, con agitado continuo. El producto precipita lentamente. Se recoge el producto sólido mediante filtración, se lava con etil acetato, y se seca a 50ºC en una horno de vacío, dando 3,25 g, rendimiento del 92,8%. ^{1}HNMR (500 MHz, CD3OD) \delta 7,75 (m, 1H); 7,62 (s, 1H); 7,54 (d, J=7,0 Hz, 2H); 7,48 (s, 1H); 7,46 (d, J=7,0 Hz, 2H); 7,38 (d, J=7,0 Hz, 1H); 7,38 (dd, J=7,00 Hz, 2H); 6,29 (s, 4H); 3,60 (m, 1H); 1,26 (d, J=7,0 Hz, 6H).

La capacidad de los compuestos de la presente invención para inhibir la quinasa p38 se demuestra mediante ensayos estándar bien conocidos por el experto en la técnica, y son brevemente descritos en los siguientes párrafos.

Inhibición de la quinasa p38 Preparaciones de solución estándar

Se prepara la solución tampón quinasa mediante la combinación de 2,5 ml de Tris-HCl 1 M (pH 7.5), 0,1 ml de ditiotreitol 1 M, 1,0 ml de cloruro magnésico 1 M, y 300 \mul de Triton X-100 1%, y se diluye a 100 ml con agua. 84 ml de esta solución tampón quinasa se combina con 16 ml de dimetilsulfóxido, para preparar la solución DMSO 16%.

La solución ATP 200 \muM se prepara añadiendo 102,6 \mul de ATP acuoso 10 mM, 25 \mul de ^{33}P-ATP, y 163,5 \mul de Péptido 661-681 del Factor Epidérmico de Crecimiento (Biomol, Catalog #P-121) 4 mM, en 5 ml de solución tampón quinasa.

La solución de enzima quinasa p38 se prepara disolviendo 9,5 \mul de solución concentrada de enzima (250 ng de enzima p38/\mul de solución tampón quinasa) en 1536 \mul de solución tampón quinasa.

Preparación de la muestra

Se prepara una solución de 80 \muM de cada compuesto de prueba y cada compuesto control, disolviendo 2 \mul de una solución de reserva 10 mM de los respectivos compuestos en dimetilsulfóxido, en 248 \mul de la solución DMSO 16%, en una placa Costar de 96 pocillos. La placa se coloca en el manipulados automatizado Tecan Genesis para una hacer diluciones seriadas 1:3.

Ensayo

Se colocan 10 \mul del compuesto diluido serialmente, con un manipulador de líquidos automatizado de 96 pocillos, Beckman Multimek, en la placa de ensayo. Se añaden 20 \mul de solución ATP 200 \muM, con un manipulador de líquidos de 8 canales Titertek Multidrop. Se transfieren 10 \mul de solución de enzima quinasa p38 hacia la placa de ensayo, usando el Multimek. Se deja que le mezcla reaccione durante 40 minutos a 30ºC, y después se detiene la reacción añadiendo 60 \mul de ácido acético glacial al 5%, preparado recientemente. Se hace con el Multidrop. Se transfieren 80 \mul de esta solución a una placa "MAPH" usando el Multimek. Se permite que las placas reposen durante 30 minutos a temperatura ambiente, y después se lavan o aspiran en el extractor Titertk MAP, mediante ácido acético glacial 0,5% preparado recientemente (1 x 300 \mul, 2 x 200 \mul). Los pocillos se secan y se les añade 100 \mul de fluido de centelleo MicroScint-20 (Packard Bioscience), mediante el Multidrop. Se deja que las placas reposen durante 30 minutos, y se realiza el conteo en un contador de centelleo PE/Wallac Microbeta Trilux, para el isótopo ^{33}P.

Todos los compuestos ejemplificados fueron testados inicialmente en 10 concentraciones (20 \muM - 1 nM usando diluciones seriadas 1:3). Los compuestos con valores de IC_{50} menores de 25 nM, fueron re-testados en una concentración inicial de 2 \muM a 0,1 nM (diluciones seriadas 1:3). Los valores de IC_{50} se calcularon (IDBS Activity Base software) para cada compuesto, usando regresión no lineal. Todos los compuestos ejemplificados fueron testados esencialmente tal como se describió previamente, y se descubrió que para inhibir la enzima quinasa p38, hacía falta una IC_{50} de al menos 5 \muM.

Inhibición de TNF-\alpha in vitro Macrófagos peritoneales de ratón

Se inyecta 1 ml de caldo de tioglicolato (5,0 g de extracto de levadura, 15,0 g de casitone o tripticasa, 5,0 g de dextrosa, 2,5 g de cloruro sódico, 0,75 g de L-cistina. 0,5 g de tioglicolato sódico, 1,0 mg de resazurina, y 0,75 g de agar, en 1,0 l de agua destilada) en la cavidad peritoneal de cada ratón Balb/C hembra. En los días 4 o 5 tras la inyección, se sacrifica al ratón y se le inyecta i.p. con 4 ml de tampón salino fosfato de Dulbecco (Bio Whittaker), y se retiran los macrófagos peritoneales mediante una jeringa.

Producción de citoquinas

Se cuentan los macrófagos peritoneales del ratón mediante un hemocitómetro, y se ajusta el medio completo a 2,5 x 10^{6} células/ml (medio RPMI-1640 que contiene suero fetal bovino 10%). Las células se ubican en placas de 96 pocillos de fondo plano, con 5 x 10^{5} células por 200 \mul por pocillo, y se las permite asentarse y adherirse al fondo del pocillo, durante al menos 3 horas. Las células son pre-tratadas con un compuesto de test o con inhibidor de quinasa p38 estándar, usando una serie de 8 concentraciones durante 1 hora, a 37ºC (20 \mul/pocillo). Después se trata a las células con una mezcla de 50 ng/ml de lipopolisacárido (LPS) y 10 U/ml de interferón-g durante 18 horas, a 37ºC (20 \mul/pocillo). Se cosecha el medio condicionado y se mide la producción de TNF-\alpha usando el procedimiento Luminex.

Ensayo Luminex de detección de TNF-\alpha para estudiar la inhibición del TNF-\alpha in vitro (Bio-Rad Bio-Plex Kit - Catalog #171-G12221)

Se reconstituye el TNF-\alpha estándar premezclado y liofilizado (1 tubo estándar/2 placas de 96 pocillos), con 50 \mul de agua estéril (500.000 pg/ml). Se someten las muestras a vórtex durante 5 segundos, se incuban en hielo durante 30 minutos, y se someten a vórtex durante 5 segundos antes de usarlas. Se etiqueta un set de doce tubos de 1,5 ml, con #1 hasta #12, y a continuación se añaden las cantidades de medio celular indicadas más abajo, en los tubos apropiados (las concentraciones estándar son las que siguen: 50.000; 25.000; 12.500; 6.250; 3.125; 1.562.5; 781,3; 390,6; 195,3; 97,7; 48,8; y 24,4 pg/ml). Las gotas conjugadas anti-citoquinas pre-mezcladas se someten a vórtex (25 x) vigorosamente durante 30 segundos. Las gotas conjugadas anti-citoquinas se diluyen hasta una concentración 1x utilizando un tampón de ensayo 1x Bio-Plex. Para cada placa, se añaden 240 \mul de las gotas pre-mezcladas a 5760 \mul del tampón de ensayo Bio-Plex. Se bloquea una placa de filtro Millipore de 96 pocillos, usando un tampón de bloqueo de 100 \mul/por pocillo. El tampón de bloqueo se filtra usando un sistema de filtrado Millipore, y después se seca. Se realizan dos lavados en la placa de filtrado, con 100 \mul/pocillo de tampón de ensayo Bio-Plex, y se seca. Las gotas 1x conjugadas anti-citoquinas se someten a vórtex durante 15 segundos, y se añaden 50 \mul en cada pocillo. Esto se filtra y seca. Se realizan dos lavados en las placas, con 100 \mul/pocillo del tampón de lavado Bio-Plex. Otra vez, se filtra y se seca. Se añade 50 \mul de muestra o estándar en cada pocillo para las muestras. Se incuba durante 60 segundos a temperatura ambiente, en un agitador protegido de la luz en el ajuste 6, y después durante 30 minutos, en el ajuste 3, y después se coloca en el refrigerador durante toda la noche. Se realizan 3 lavados con el tampón de lavado Bio-Plex, después se filtra y se seca. El anticuerpo para detectar la citoquina está preparado (\sim10 minutos antes de su uso) para cada placa, y se añade 60 \mul de la reserva de anticuerpos de detección de citoquina premezclada a 5940 \mul del diluyente de detección de anticuerpos Bio-Plex. Se añaden 50 \mul de anticuerpos de detección de citoquinas, y se incuban durante 60 segundos a temperatura ambiente en un agitador protegido de la luz en el ajuste 6, y después durante 30 minutos en el ajuste 3. Se realizan 3 lavados con el tampón de lavado Bio-Plex. Se filtran y secan. El Strept-PE (\sim10 minutos antes de su uso) está preparado para cada placa, y se añaden 60 \mul a los 5940 \mul del tampón de ensayo Bio-Plex. Se añaden 50 \mul de Streptavidin-PE en cada placa, y se incuba durante 60 segundos a temperatura ambiente, en un agitador protegido de la luz en el ajuste 6, y después 10 minutos más en el ajuste 3. Se realizan 3 lavados con tampón de lavado Bio-Plex. Se filtra. Las gotas son re-suspendidas en 100 \mul/pocillo de tampón de ensayo Bio-Plex. Se leen los estándares y la muestras en una máquina Luminex. Las lecturas de intensidad se convierten a unidades de picogramo/mililitro, basadas en una curva estándar de 12 puntos, creada en duplicado, usando un método de regresión logística de cuatro parámetros (Bio-Plex Manager, Versiones 2.0 y 3.0, Bio-Rad), y se calcula la IC_{50}.

Los compuestos de los Ejemplos 1, 6, 16 y 17 se testaron esencialmente tal como se describe más arriba, y se suprimió el TNF-\alpha in vitro, con una IC_{50} menor de 100 nM.

Inhibición de TNF-\alpha in vivo

Los compuestos se administran p.o. (100, 30, 10 y 3 mg/kg) al ratón hembra Balb/c (5 ratones/dosis). Después de 2 horas, se administran i.v. lipopolisacáridos (LPS, serotipo E. coli 0111:B4, 5 mg/kg), en la vena de la cola de cada ratón. Una hora más tarde de la administración de LPS, se sacrifican los ratones mediante inhalación de CO_{2}, y se recoge sangre mediante punción cardiaca. Se analiza el suero para ver los niveles de TNF-\alpha mediante procedimiento Luminex.

Ensayo Luminex de detección de TNF-\alpha para estudiar la inhibición del TNF-\alpha in vivo (Bio-Rad Bio-Plex Kit - Catalog #171-G12221)

Se reconstituyen los estándares TNF-\alpha premezclados liofilizados (1 tuboi estándar/2 placas de 96 pocillos) con 50 \mul de agua estéril (500,000 pg/ml). Se aplica con cuidado el vórtex durante 5 segundos, se incuba en hielo durante 30 minutos, y se aplica vórtex 5 segundos antes de usarlos. Se etiqueta un set de doce tubos de 1,5 ml, con #1 hasta #12, y después se añaden las cantidades de diluyente estándar de suero de ratón, mostradas abajo, en los tubos apropiados (las concentraciones estándar son las siguientes: 50.000; 25.000; 12.500; 6.250; 3.125; 1.562.5; 781,3; 390,6; 195,3; 97,7; 48,8; y 24,4 pg/ml). Se aplica vórtex a las gotas (25x) conjugadas anti-citoquinas premezcladas, de manera vigorosa durante 30 segundos. Se diluyen las gotas conjugadas anti-citoquinas hasta una concentración 1x, usando un tampón de ensayo Bio-Plex 1x. Para cada placa, se añaden 240 \mul de las gotas pre-mezcladas a 5760 \mul del tampón de ensayo Bio-Plex. Se bloquea una placa de filtro Millipore de 96 pocillos, usando un tampón de bloqueo de 100 \mul/por pocillo. El tampón de bloqueo se filtra usando un sistema de filtrado Millipore, y después se seca. Se realizan dos lavados en la placa de filtrado, con 100 \mul/pocillo de tampón de ensayo Bio-Plex, y se seca. Las gotas 1x conjugadas anti-citoquinas se someten a vórtex durante 15 segundos, y se añaden 50 \mul en cada pocillo. Esto se filtra y seca. Se realizan dos lavados en las placas, con 100 \mul/pocillo del tampón de lavado Bio-Plex. Se filtra y se seca. Se añade 25 \mul de muestra de suero y 25 \mul de diluyente (Bio-Rad), o 50 \mul de estándar en cada pocillo para las muestras. Se incuba durante 60 segundos a temperatura ambiente, en un agitador protegido de la luz en el ajuste 6, y después durante 30 minutos, en el ajuste 3, y después se coloca en el refrigerador durante toda la noche. Se realizan 3 lavados con el tampón de lavado Bio-Plex, después se filtra y se seca. El anticuerpo para detectar la citoquina está preparado (\sim10 minutos antes de su uso) para cada placa, y se añade 60 \mul de la reserva de anticuerpos de detección de citoquina premezclada a 5940 \mul del diluyente de detección de anticuerpos Bio-Plex. Se añaden 50 \mul de anticuerpos de detección de citoquinas, y se incuban durante 60 segundos a temperatura ambiente en un agitador protegido de la luz en el ajuste 6, y después durante 30 minutos en el ajuste 3. Se realizan 3 lavados con el tampón de lavado Bio-Plex. Se filtran y secan. El Strept-PE (\sim10 minutos antes de su uso) está preparado para cada placa, y se añaden 60 \mul a los 5940 \mul del tampón de ensayo Bio-Plex. Se añaden 50 \mul de Streptavidin-PE en cada placa, y se incuba durante 60 segundos a temperatura ambiente, en un agitador protegido de la luz en el ajuste 6, y después 10 minutos más en el ajuste 3. Se realizan 3 lavados con tampón de lavado Bio-Plex. Se filtra. Las gotas son re-suspendidas en 100 \mul/pocillo de tampón de ensayo Bio-Plex. Se leen los estándares y la muestras en una máquina Luminex. Las lecturas de intensidad se convierten a unidades de picogramo/mililitro, basadas en una curva estándar de 12 puntos, creada en duplicado, usando un método de regresión logística de cuatro parámetros (Bio-Plex Manager, Versiones 2.0 y 3.0, Bio-Rad), y se calcula la IC_{50}.

Los compuestos de los Ejemplos 1, 6, y 16 se testaron esencialmente tal como se describe más arriba, y se suprimió \varepsilon\lambda TN\Phi-\alpha in vivo, con una IC_{50} menor de 100 mg/kg.

Efecto sobre los LPS intra-articulares, inducido por TNF-\alpha

La inyección intra-articular de LPS en tobillos de rata, induce la síntesis de TNF-\alpha, lo que puede ser medido en fluido sinovial. Los altos niveles de TNF-\alpha son detectables a las 2 horas. Puesto que la articulación es el sitio donde se desarrolla la artritis, este modelo puede determinar rápidamente si un compuesto administrado oralmente tiene un efecto sobre una respuesta inflamatoria en el sinovio.

Se colocaron seis ratas Lewis hembra (150-200 g) en cada grupo de tratamiento. Se les dio oralmente a los animales, vehículo (NaCarboximetilcelulosa 1%-Tween 80 0,25%) o Ejemplo 77 (base libre) (1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg, y 30 mg/kg). Una hora más tarde, se administró 10 \mul de LPS (10 \mug) de manera intra-articular en el tobillo derecho de cada rata, mientras que el tobillo izquierdo recibe de 10 \mul salino. Después de 2 horas, se lava cada tobillo con 100 \mul de salino. El lavado se recoge y almacena a -80ºC.

Grupo#1: Vehículo (NaCMC 1%-Tween 80 0,25%, 1 ml, PO)

Grupo#2: Ejemplo 77 (base libre) (1 mg/kg, 1 mL, PO)

Grupo#2: Ejemplo 77 (base libre) (3 mg/kg, 1 mL, PO)

Grupo#2: Ejemplo 77 (base libre) (10 mg/kg, 1 mL, PO)

Grupo#2: Ejemplo 77 (base libre) (30 mg/kg, 1 mL, PO).

Se midió el TNF-\alpha con un kit ELISA (R&D, RTA00) disponible comercialmente. El tratamiento con el Ejemplo 77 produjo una inhibición de síntesis de TNF-\alpha dependiente de la dosis, tal como se midió en el lavado de fluido sinovial. En este ensayo, el TMED50 = 10 mg/kg para el Ejemplo 77.

Modelo de eficacia del melanoma diana B16F10 (MAPKAP-K2) y de metástasis del melanoma B16F10 Inhibición de la metástasis del melanoma de pulmón B16F10

La línea celular del melanoma B16F10 se obtiene a partir de la American Type Culture Collection, Rockville, MD. Las células son cultivadas en medio RPMI-1640 complementado con suero fetal de ternero al 10%. Las células que crecen in vitro son recolectadas durante su fase exponencial de crecimiento, mediante una suave tripsinización, se lavan dos veces en el medio, y se resuspenden en medio RPMI-1640 libre de suero. El número de células viables monodispersas se determina usando un hemocitómetro, y se ajusta a 1 x 10^{6} células/ml. Las células tumorales se inyectan intravenosamente en la vena de la cola de un ratón normal C57B16, con un volumen de inoculación de 0,2 ml, conteniendo 200.000 células. Los ratones se tratan con un compuesto e test, o con un vehículo control, comenzando un día antes de la inoculación intravenosa del tumor. El Ejemplo 77 (base libre) se prepara como una formulación en suspensión en NaCMC 1%/polisorbato 80 0,25%, y se sondea con ultrasonidos en un volumen de inyección de 1% del peso corporal (p.e. el nivel de dosis de 30 mg/kg se prepara a 3 mg/ml y se administraron 0,2 c.c. por ratón de 20 g). Los ratones se tratan oralmente con el compuesto con 30, 10, y 3 mg/kg (90, 30, y 9 mg/kg/día) durante los días -1 hasta el 16 después de la inoculación de las células tumorales. Los ratones control reciben el vehículo solo, de idéntica manera. En el día 16, se sacrifican los ratones, se recogen los pulmones y se fijan en paraformaldehído 3%. Las heridas en los pulmones son cuantificadas mediante conteo manual bajo un microscopio de disección.

El compuesto de test fue testado en el modelo de metástasis del melanoma de pulmón B16F10, oralmente a 3, 10 y 30 mg/kg, tres veces al día desde un día antes hasta 16 días después de la inoculación i.v. del tumor (dosis totales de 9, 30 y 90 mg/kg/día). Los pulmones se recogieron durante el día 16, y se cuantificaron las lesiones en el pulmón. El compuesto testado causó una inhibición de la formación de metástasis en el pulmón, del 54%, 73% y 95%, para los niveles de dosis 3, 10 y 30 mg/kg respectivamente (p<0,001 en cada uno de los tres niveles).

Estudios de la diana B16F10 (MAPKAPK-2 fosforilado)

La línea celular del melanoma B16F10 se obtiene a partir de la American Type Culture Collection, Rockville, MD. Las células son cultivadas en medio RPMI-1640 complementado con suero fetal de ternero al 10%. Las células que crecen in vitro son recolectadas durante su fase exponencial de crecimiento, mediante una suave tripsinización, se lavan dos veces en el medio, y se resuspenden en medio RPMI-1640 libre de suero. El número de células viables se determina usando un hemocitómetro, y se ajusta a 1 x 10^{7} células/ml. Las células tumorales se inyectan subcutáneamente en ratones normales C57B16. El volumen de inoculación por ratón es de 0,2 ml (2.000.000 de células). Cuando los tumores alcanzan los 300-500 mg, los ratones se usan para estudiar la inhibición de las dianas, tanto a una hora fijada (2,5 horas) después de la aplicación del compuesto del tratamiento, como para hacer estudios farmacodinámicos donde los tumores se recolectan en distintos puntos temporales (p.e. 3, 6, 9, 12, 15 y 18 horas) después de la aplicación del compuesto del tratamiento.

Extracción de proteínas y análisis de inmuno-transferencia

Los tumores recolectados tal como se describió más arriba, son inmediatamente congelados en nitrógeno líquido y almacenados a -80ºC. Los tejidos tumorales son homogeneizados en hielo usando un homogeneizador Daunce en un tampón de extracción (25 mM Tris pH 7.5, que contiene los siguientes inhibidores de proteasas: 10 \mug/ml de leupeptina, 10 \mug/ml de inhibidor de trip-quimotripsina de soja, 10 \mug/ml de N-tosil-L-fenilalanina clorometil cetona, 10 \mug/ml de aprotinina, N\alpha-p-tosil-N-arginina metil éster, benzamidina 7 mM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo 0,3 mM, y dos pastillas de cocktail completo inhibidor de proteasa Roche; los siguientes inhibidores de fosfatasa: beta-glicerofosfato 60 mM; vanadato sódico 1 mM; fluoruro sódico 10 mM; p-nitrofenil fosfato 20 mM; ácido ocadaico 1 \muM; microcistina 1 \muM; pirofosfoato sódico 2,5 mM; y ditiotreitol 1 mM, EDTA 15 mM, EGTA 5 mM, Triton X100 1% y cloruro sódico 150 mM). Los lisados titulares se eliminan mediante centrifugación en una microcentrífuga refrigerada, a 14.000 rpm y a 1ºC durante 20 minutos. Se transfieren los sobrenadantes a tubos de microfuga recientes, pre-enfriados en hielo, y se vuelve a congelar en nitrógeno líquido o hielo seco. Después de una rápida descongelación, completa hasta casi el 80% en agua tibia, se colocan las muestras en hielo, hasta que se derrita totalmente. Las muestras se centrifugan nuevamente a 14.000 rpm, a 1ºC durante 15 minutos. Se transfiere el sobrenandante a tubos de microfuga pre-enfriados, y se miden las concentraciones de proteína usando re-agentes de análisis de proteínas Bio-Rad, mediante albúmina de suero bovino como proteína estándar.

Se ecualizan los extractos de proteína respecto al tampón de extracción. Se añade un volumen igual de tampón de muestra 2x SDS a los extractos de proteína, y se hierve en un baño durante 5 minutos. Se usan 100 \mug de extracto de proteína por muestra para la electroforesis, en un gradiente del 4 al 20% en gel SDS-PAGE, y se transfieren a membranas de nitrocelulosa (NC). Las membranas NC se bloquean en BSA 5% en TBST (Tris 20 mM pH 7.5, cloruro sódico 500 mM, Tween 20 0,05% y azida sódica 0,02%) durante al menos 1 hora. Las membranas son incubadas después en anticuerpo primario a 1:1.000, con BSA 5% en TBST durante toda la noche, en un agitador con 80 rpm a 4ºC. Las membranas se lavan 4 x, 10 minutos cada vez, con TBST. Después se incuban durante 40 minutos con un anticuerpo secundario HRP (peroxidasa de rábano), conjugado en una dilución 1:10.000 en leche desnatada 3% en TBST, y se lava otra vez, 4 veces con TBST, 10 minutos cada vez. Las inmuno-transferencias se visualizan entonces mediante quimiluminiscencia potenciada (ECL, Amersham), según las instrucciones del fabricante. Todos los anticuerpos primarios se consiguieron de Cell Signaling, y los conjugados de anticuerpos secundarios de HRP se obtuvieron de Amersham. Los geles, membranas y aparatos usados en la electroforesis y en el Westtern-blot se consiguieron de Invitrogen. Las bandas de proteínas de interés se cuantifican en las películas, usando Kodak Image Station 1000.

El compuesto del Ejemplo 77 mostró excelente actividad dependiente de la dosis contra MAPK p38 en tumores recolectados 2,5 horas tras la dosificación, lo que implica una inhibición dependiente de la dosis, de la fosforilación de MAPKAPK-2. MAPKAPK-2 es un sustrato fisiológico del MAPK p38. La inhibición apreciable de la fosforilación de MAPKAPK-2 por el compuesto del Ejemplo 77 se observó en dosis tan bajas como 0,3 mg/kg, y el TMED50 se determinó por ANOVA, siendo 3 mg/kg. El compuesto del Ejemplo 77, en dosis > 30 mg/kg redujo el nivel de fosforilación de MAPKAPK-2 en los tumores en más del 80% (P<0,001). Durante el tiempo del estudio, el compuesto del Ejemplo 77 se administró en dosis de 30 mg/kg, y se extrajeron los tumores en distintos intervalos de tiempo tras aplicar la dosis, hasta las 18 horas posteriores. El análisis Westtern-blot de la fosforilación de MAPKAPK-2 mostró que el compuesto del Ejemplo 77 inhibió la actividad MAPK del p38 durante 9 horas. Hacia las 12 horas después de la dosificación, el nivel de fosforilación de MAPKAPK-2 en los tumores tratados, había vuelto a un nivel similar al del vehículo control.

El compuesto del Ejemplo 77 fue testado oralmente en el modelo de metástasis del melanoma B16F10 de pulmón, en dosis de 3, 10, y 30 mg/kg, tres veces al día, desde el día anterior hasta 16 días después de la inoculación del tumor i.v. (dosis total de 9, 30 y 90 mg/kg/día). Los pulmones fueron recolectados el día 16, y se cuantificaron las lesiones en los pulmones. El compuesto del Ejemplo 77 causó una inhibición de la formación de metástasis en pulmón del 54%, 73% y 95%, para los niveles de dosis de 3, 10 y 30 mg/kg respectivamente (p<0,001 en los tres niveles de dosificación).

Modelo de tumor P815

En ratones hembra DBA/2 (con una edad de 6 a 8 semanas) (Taconic) se implantaron subcutáneamente, en la región del flanco trasero, células P815 (0,5 x 10^{6} células en 200 ml de RPMI 1640) a partir del día 0. Las células tumorales P815 se consiguen del ATCC y son cultivadas en medio RPMI 1640, complementado con glutamina y suero bovino 10% a 37ºC en una incubadora de cultivo celular CO_{2} 5%. Los animales con los tumores son tratados con administración oral del Ejemplo 77 (base libre), a diferentes dosis o vehículos, con una frecuencia de tres veces por día, comenzando el día de la implantación. El crecimiento del tumor es monitorizado cada 2 días midiendo diámetros perpendiculares. El volumen del tumor expresado en miligramos (mg) se determina por el producto del diámetro más largo (a) y su perpendicular (b) de acuerdo con la fórmula [volumen del tumor = a x b^{2} x 0,536].

Estudio de la inhibición in vivo de la diana en el modelo de mastocitoma P815

La inhibición de la diana in vivo se determina midiendo el efecto del tratamiento inhibidor sobre la fosforilación de MAPKAPK2 espresado en tejidos tumorales P815. Los tumores en ratones DBA/2 que recibieron implantación subcutánea de células P815, se dejaron crecer hasta un tamaño de 300-500 mg sin tratamiento. Los ratones con tumores recibieron entonces administración oral del Ejemplo 77 (base libre) o vehículo. Para investigar el curso temporal relacionado con la inhibición de la diana por el Ejemplo 77 (base libre), los tumores se recolectaron de animales sacrificados con CO_{2} en momentos indicados (3 horas, 6 horas, 12 horas, y 18 horas), después de que se dosificara el compuesto a 30 mg/kg. La inhibición dependiente de la dosis, de la diana por parte del Ejemplo 77 (base libre) se investiga recolectando tumores 3 horas después de que se administren oralmente distintas dosis del Ejemplo 77 (base libre) o vehículo. Los tumores recolectados son inmediatamente congelados en hielo seco, pulverizados, homogeneizados y lisados en tampón de lisis frío, que contiene inhibidores de proteinasas y fosfatasas. Tras la centrifugación para eliminar restos celulares, los sobrenadantes que contienen 100 microgramos totales de proteínas, se resuspenden en 2 x tampón de carga Tris-Glicina, y son sometidos a electroforesis con dodecil sulfato sódico en gel de poliacrilamida (Tris-Glicina 10%) bajo condiciones reductoras. Las proteínas son posteriormente transferidas a una membrana PDVF y se bloquearon en leche con PBS 5%, que contiene Tween-20 0,1%, durante 1 hora a temperatura ambiente. Después se incuba la membrana con anticuerpo primario (anti-fosfo-MAPKAPK2, Cell Signaling) a 4ºC durante toda la noche, seguido de incubación con anticuerpo secundario (HRP anti-conejo-IgG conjugado) a temperatura ambiente, durante 1 hora. El nivel de expresión de fosfo-MAPKAPK2 se visualiza mediante un sistema de detección Phospho-Image, después de que se haya usado la quimioluminiscencia potenciada (ECL) para reflejar la presencia de proteínas en las transferencias PVDF. El nivel de expresión de la fpsfo-MAP kinasa p38 y de la MAP kinasa p38 total, es monitorizado también por un procedimiento similar de western-blot.

Inhibición, por el Ejemplo 77 (base libre), de la fosforilación de MAPKAPK2, dependiente del tiempo y de la dosis, en tumores P815 in vivo

El efecto de la administración oral de una única dosis de Ejemplo 77 (base libre) sobre la fosforilación de MAPKAPK2, se evaluó en ratones DBA/2 con tumores P815. La administración del Ejemplo 77 (base libre) a 30 mg/kg causó una inhibición de la fosforilación de MAPKAPK2 dependiente del tiempo. Este efecto inhibidor del compuesto, ocurrió a las 3 horas e aplicarles la dosis a los animales, y se extendió hasta las 12 horas. Fue evidente que la fosforilación de MAPKAPK2 se recuperó completamente a las 18 horas después de la dosificación. Cuando se les dio a los animales con tumores P815 el Ejemplo 77 a distintas dosis (3, 10 y 30 mg/kg), y se recolectaron sus tumores para medir la expresión de la proteína 3 horas después de la administración de la dosis, se demostró una significativa inhibición de la fosforilación de MPKAPK2 dependiente de la dosis. En estos animales, los estudios del Ejemplo 77 (base libre) no alteraron ni la fosforilación de la MAP quinasa p38, ni la expresión in vivo de la MAP quinasa p38.

Inhibición del crecimiento in vivo del tumor P815

La actividad in vivo del Ejemplo 77 (base libre) fue valorada sobre el crecimiento de los tumores P815 injertados subcutáneamente en ratones DBA/2. La administración oral del Ejemplo 77 (base libre), en dosis entre 0,1 y 30 mg/kg, dieron lugar a inhibición, dependiente de la dosis, del crecimiento del tumor P815, con un 67% de inhibición del volumen del tumor con una dosis de 30 mg/kg (p<0,01, tres estudios independientes), 55% de inhibición con 3 mg/kg (p<0,05, dos estudios independientes), y 30 a 14% de inhibición para dosis más bajas.

Eficacia del modelo de artritis inducida en colágeno de rata

Las ratas Lewis hembra (unos 190 g, Charles River Labs) están inmunizadas con el colágeno bovino tipo II (2 mg/ml), emulsionado con un volumen igual de coadyuvante (hidróxido de aluminio), cuando se usa. Las ratas son inmunizadas con aproximadamente 0,3 mg de la emulsión, de manera intradermal en la espalda, cerca de la base de la cola. Todos los animales son re-inmunizados 7 días después, de acuerdo con el mismo protocolo. Las ratas comienzan a desarrollar la artritis (caracterizada por hinchazón y enrojecimiento de una o ambos tobillos) a los 12 o 14 días después de la primera inmunización. Las ratas se distribuyen de modo igualitario en cinco grupos de tratamiento en cuanto aparecen los primeros signos de artritis, y el tratamiento se inicia con cada rata dosificando dos veces al día durante 14 días.

Grupos de tratamiento:

Grupo 1

Vehículo (NaCarboximetilcelulosa 1% + Tween 80 0,25%) 1 ml, PO, dos veces al día, durante 14 días

Grupo 2

Ejemplo 77 (base libre), 5 mg/kg, 1 ml, PO, dos veces al día x 14

Grupo 3

Ejemplo 77 (base libre), 15 mg/kg, 1 ml, PO, dos veces al día x 14

Grupo 4

Ejemplo 77 (base libre), 30 mg/kg, 1 ml, PO, dos veces al día x 14

Grupo 5

Prednisolona, 10 mg/kg, 1 ml, PO, una vez al día x 14.

El diámetro del tobillo se mide con calibres durante 5 días a la semana, y se toman los datos. El dato se expresa como el área bajo la curva (AUC) generada a partir de la composición de los resultados de la inflamación, y los análisis estadísticos realizados. Con todas las dosis del Ejemplo 77 hubo una reducción significativa en el diámetro del tobillo, con una reducción máxima del 46% con la dosis de 30 mg/kg (p>0,0001). La prednisolona redujo la inflamación hasta niveles pre-artríticos.

Al finalizar el estudio, se sacrificaron los animales y se recogieron los tobillos para una evaluación histológica. La puntuación histológica está basada en una escala de 0 a 5 para 4 parámetros (inflamación, pannus, daño en el cartílago, reabsorción del hueso). En animales tratados con el Ejemplo 77, se observó una inhibición de la patología articular dependiente de la dosis. Se obtuvo una reducción significativa en todas las marcas referentes a la articulación, en animales tratados con el Ejemplo 77, con las dosis entre los 15 mg/kg y los 30 mg/kg (p<0,03 y p= 0,0031 respectivamente).

Se prefiere la administración oral de los compuestos de la presente invención. Sin embargo, la administración oral no es la única ruta, ni es la única ruta preferida. Por ejemplo, la administración transdérmica puede ser muy aconsejable para pacientes que suelen olvidarse, o no quieren tomar el medicamento oral, y la ruta intravenosa puede preferirse como una cuestión de conveniencia, o para evitar potenciales complicaciones relacionadas con la administración oral. Los compuestos de Fórmula I pueden ser administrados también de modo percutáneo, intramuscular, intranasal o intrarrectal, en circunstancias particulares. La vía de administración puede variar mucho, estando limitada por las propiedades físicas de los fármacos, por la facilidad del paciente y su cuidador, y por otras circunstancias relevantes (Remington's Pharmaceutical Sciences), 18th Edition, Mack Publishing Co.

Las composiciones farmacéuticas se preparan de un modo bien conocido en el arte farmacéutico. El vehículo o excipiente puede ser un material sólido, semi-sólido, o líquido, que puede servir como vehículo o medio para el ingrediente activo. Los vehículos o excipientes apropiados son bien conocidos en el arte. La composición farmacéutica puede estar adaptada para el uso oral, inhalación, uso parenteral, o uso tópico, y puede administrarse al paciente en forma de pastillas, cápsulas, aerosoles, inhaladores, supositorios, soluciones, suspensiones, o similares.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse oralmente, por ejemplo, con un diluyente inerte, o cápsulas, o comprimidos en pastillas. Para la administración terapéutica oral, los compuestos pueden incorporarse con excipientes, y pueden ser usados en forma de pastillas, tabletas, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, chicles, y similares. Esas preparaciones deberían contener al menos un 4% del compuesto de la presente invención, el ingrediente activo, pero puede variar, dependiendo de la forma particular, y puede encontrarse convenientemente entre el 4% y el 70% del peso de la unidad. La cantidad de compuesto presente en las composiciones es tal que se obtendrá una dosis apropiada. Pueden determinarse las composiciones y preparaciones preferidas de la presente invención mediante procedimientos bien conocidos por el experto en la técnica.

Las pastillas, píldoras, cápsulas, tabletas, y similares, pueden contener también un o mas de los siguientes coadyuvantes: aglomerantes como son la povidona, hidroxipropil celulosa, celulosa microcristalina, o gelatina; excipiente o diluyentes como: almidón, lactosa, celulosa microcristalina, o fosfato dicálcico; agentes desintegradotes, como: croscarmelosa, crospovidona, glicolato sódico de almidón, almidón de maíz, y similares; lubricantes como: estearato magnésico, ácido esteárico, talco o aceite vegetal hidrogenado; glidantes como dióxido de silicona coloidal; agentes humectantes como: laurel sulfato sódico y polisorbato 80; y agentes edulcorantes como: sacarosa, aspartamo o sacarina, pueden ser añadidos, o un agente del sabor como: menta, metil salicilato, o sabor a naranja. Cuando la forma de dosificación es una cápsula, esta puede contener, además de los materiales explicados arriba, un vehículo líquido como el polietilen glicol, o aceite graso. Otras formas de dosificación pueden contener distintos materiales que modifican la forma física de la unidad de dosificación, por ejemplo, las coberturas. De este modo, las pastillas o píldoras pueden estar recubiertas por azúcar, hidroxipropil metilcelulosa, polimetacrilatos, u otros agentes cobertores. Los jarabes pueden contener, además de los presentes compuestos, sacarosa como agente edulcorante, y ciertos conservantes, tinturas y colorantes y agentes del sabor. Los materiales utilizados en la preparación de estas composiciones deben ser farmacéuticamente puras, y no-tóxicas en las cantidades utilizadas.

Los compuestos de Fórmula I son generalmente eficaces en un amplio intervalo de dosificación. Por ejemplo, las dosis por día normalmente estarán en un intervalo de entre 0,0001 y 30 mg/kg de peso corporal. En algunos casos, los niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado arriba, pueden ser más adecuados, mientras que en otros casos, pueden emplearse incluso dosis superiores, sin causar ningún efecto secundario perjudicial, y por lo tanto el intervalo mencionado arriba no tiene la intención de limitar el alcance de la invención, de ninguna manera. Se entenderá que la cantidad del compuesto realmente administrada, estará determinado por le médico, a la luz de las circunstancias relevantes, incluyendo la condición a ser tratada, la ruta de administración escogida, el compuesto o compuestos realmente administrados, la edad, peso, y la respuesta del paciente individual, y la severidad de los síntomas del paciente.

Claims (10)

1. Un compuesto de Fórmula I:

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donde:

W es

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X es N(R^{4}) o S;

R^{0} es

(a) seleccionado del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, ciano, (alquilen C_{1}-C_{4})-R^{11}, 3-hidroxiprop-2-il, (1-fenil)-2-hidroxiet-1-ilo, (1-ciclohexil)-3-hidroxiprop-2-ilo, 4-metoxibencilo, 1,4-dioxoaspiro[4,5]dec-8-ilo, tetrahidropirano, 2,2,6,6-tetrametilpiperidin-4-ilo, y ciclohexan-1-on-4-ilo,

(b) fenilo sustituido opcionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por un nitro y amino,

(c) piperidin-4-ilo sustituido opcionalmente con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{4}, y bencilo, o

(d) cicloalquilo C_{3}-C_{6}, opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por alcoxicarbonilamino C_{1}-C_{4}, amino, hidroxi, y alquilen-OH C_{1}-C_{4};

R^{1} es

(a) seleccionado del grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{6}, alquinilo C_{2}-C_{4}, halo, amino, azido, formilo, 1-(alcoxicarbonil C_{1}-C_{4})eten-2-ilo, 1-(alcoxicarbonil C_{1}-C_{4})etilo, 1-(carboxi C_{1}-C_{4})etilo, (alquilen C_{1}-C_{4})benciloxi, trifluorometilo, trimetilsililetinilo, but-3-in-1-ol, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, tetrahidropiran-4-ilo, hidroximetilo, 2-(piperidin-1-ilo)metilo, N,N',N'-[trimetil]-2-(aminoetilamino)metilo, (morfolin-4-il)metilo, dimetiloaminometilo, N-[2-(piperidin-1-il)et-1-il]aminometilo, N',N'-dimetil-2-(aminoetilamino)metilo, piridinilo, tiazolilo, triazolilo, benzo(1,3)dioxolan-5-ilo, e imidazol-2-ilo.

(b) fenilo sustituido opcionalmente con uno o tres sustituyentes seleccionados independientemente del grupo constituido por alquilo C_{1}-C_{4}, halo, nitro, amino, alcoxi C_{1}-C_{4}, trifluorometilo, trifluorometoxi, trifluorometilsulfanilo, metilsulfonilo, metilsulfonamidilo, pirrolidin-1-ilo, morfolin-4-ilo, 4-(alquil C_{1}-C_{4})-piperazin-1-ilo, -NR^{6}R^{7}, y alcoxi C_{1}-C_{4} opcionalmente sustituidos con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por piperidin-1-ilo, pirrolidin-1-ilo, morfolin-4-ilo, acepin-4-ilo, y di(alquil C_{1}-C_{4})amino,

(c) tienilo opcionalmente sustituido con un sustituyente seleccionado del grupo constituido por halo, amino, y alquilo C_{1}-C_{4}, o

(d) piperidin-4-ilo opcionalmente sustituido en la posición 1 del grupo constituido por alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{4}, benciloxicarbonilo, y (alquilen C_{1}-C_{4})-R^{8}.

Alternativamente, R^{0} y R^{1} pueden tomarse juntos para formar una cadena de carbono C_{3}-C_{4} totalmente saturada, o una cadena de carbono C_{3}-C_{4} totalmente insaturada, opcionalmente sustituida con halo o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{2} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, o_{ }bencilo;

R^{3} es tienilo o fenilo, opcionalmente sustituidos con de uno a dos sustituyentes seleccionados independientemente del grupo constituido por halo, alquilo C_{1}-C_{4}, alcoxi C_{1}-C_{4}, y trifluorometilo;

R^{4} es hidrógeno, (alquil C_{1}-C_{4})sulfonilo, o (cicloalquil C_{3}-C_{6})sulfonilo; o (alquil C_{1}-C_{4})_{2}N-sulfonilo;

R^{5} es halo, hidrógeno, o -NR^{9}R^{10};

R^{6} y R^{7} son seleccionados individualmente cada vez que están presentes, del hidrógeno, carbonilo, o alquilo C_{1}-C_{4}, con la condición de que al menos uno de R^{6} y R^{7} sea hidrógeno;

R^{8} es hidroxi, trifluorometilo, dimetilamino, fenilo, piridinilo, o 1-metilimidazol-2-ilo;

R^{9} es, independientemente cada vez que están presentes, hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{10} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, o bencilo;

R^{11} es alcoxi C_{1}-C_{4}, hidroxi, alcoxicarbonilo C_{1}-C_{4}, alcoxicarbonilamino C_{1}-C_{4}, cicloalquilo C_{3}-C_{6}, fenilo opcionalmente sustituido con de uno a dos sustituyentes independientemente seleccionados del grupo constituido por alcoxi C_{1}-C_{4} y halo, morfolin-4-ilo, o piridinilo;

Con la condición de que W sea

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entonces

(a) al menos uno de R^{0} y R^{1} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{6}; o

(b) R^{0} y R^{1} pueden tomarse juntos para formar una cadena C_{3}-C_{4} de carbono totalmente saturada, o una cadena de carbono C_{3}-C_{4} totalmente insaturada, opcionalmente sustituidos con halo o alquilo C_{1}-C_{4};

además, con la condición de que, cuando X es S, W es

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o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

2. Un compuesto de la Reivindicación 1, W es

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3. Un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 o 2, donde X es N(isopropilsulfonil) y R^{5} es -NH_{2}.

4. Un compuesto de cualquiera de las Reivindicaciones 1 o 2, donde R^{4} es ter-butilsulfonil.

5. Un compuesto de una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 4, donde R^{1} es ter-butil.

6. Un compuesto de la Reivindicación 1, que es 1-isopropilsulfonil-2-amino-6-(2-(2,6-difluorofenil)-5-(fenil)-imidazol-4-il)-bencimidazol, o una sal farmacéuticamente aceptable, o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.

7. Una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 6, y un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

8. El uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de afecciones resultantes de la producción excesiva de citoquinas.

9. El uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para la inhibición del crecimiento de un neoplasma susceptible.

10. El uso de un compuesto de acuerdo con una cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 6, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la artritis reumatoide.