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EP1631594A1 - Nouvel agent stimulant la liberation des beta-endorphines, compositions cosmetiques et/ou dermatologiques en contenant et leurs applications - Google Patents

Nouvel agent stimulant la liberation des beta-endorphines, compositions cosmetiques et/ou dermatologiques en contenant et leurs applications

Info

Publication number
EP1631594A1
EP1631594A1 EP03718827A EP03718827A EP1631594A1 EP 1631594 A1 EP1631594 A1 EP 1631594A1 EP 03718827 A EP03718827 A EP 03718827A EP 03718827 A EP03718827 A EP 03718827A EP 1631594 A1 EP1631594 A1 EP 1631594A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
rhamnose
molecule
polysaccharides
polysaccharide
endorphins
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP03718827A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Sophie Leclere
Jean-François MOLINA
Laurent Lassalle
Jean-Luc Philbe
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Societe La Biochimie Appliquee SOLABIA SAS
Original Assignee
Societe La Biochimie Appliquee SOLABIA SAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Societe La Biochimie Appliquee SOLABIA SAS filed Critical Societe La Biochimie Appliquee SOLABIA SAS
Publication of EP1631594A1 publication Critical patent/EP1631594A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/005—Preparations for sensitive skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/70—Biological properties of the composition as a whole
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/22—Klebsiella

Definitions

  • New agent stimulating the release of ⁇ -endorphins cosmetic and / or dermatological compositions containing them and their applications.
  • the present invention relates to the field of basic necessities of life and more particularly to the fields of cosmetology, pharmacy and more specifically dermatology.
  • the present invention relates to active compounds stimulating the release of ⁇ -endorphins by keratinocytes, comprising repetitive saccharide sequences and containing at least one rhamnose molecule attached in a branched manner.
  • Rli is a rhamnose molecule
  • Rh * is a rhamnose molecule linked in a branched manner to the neighboring element
  • O is a molecule of a hexosidic or pentosidic sugar
  • U is a molecule of uronic acid and n is between 1 and 100, preferably from 5 to 65.
  • the present invention also relates to the use of compounds comprising repetitive saccharide sequences containing at least one molecule of rhamnose attached in a branched manner and preferably containing predominantly rhamnose, as cosmetic and / or pharmaceutical agent, in particular dermatological, stimulating the release of ⁇ - endorphins.
  • the present invention also relates to cosmetic and / or pharmaceutical compositions which contain at least one of these new active compounds, of formula I, optionally in combination or in mixture with one or more excipients or vehicles cosmetics and / or pharmaceuticals suitable for application to the skin, mucous membranes or integuments.
  • compositions relate in particular to the care and / or treatment of the skin, including the lips and integuments (nails, hair, hair, etc.).
  • ⁇ -endorphins are neuropeptides derived from the pro-opiomelanocortin (POMC) precursor and have already been the subject of numerous studies published in the literature.
  • POMC pro-opiomelanocortin
  • keratinocytes are both sensitive to many neuromediators, in particular to ⁇ -endorphins, synthesized by nerve cells or by other epidermal cells, but are also capable of synthesizing them. This particular link between nervous and epidermal tissues could be explained by their common ectoblastic embryonic origin.
  • the ⁇ -endorphins synthesized by the skin represent more than 50% of the rate of circulating endorphins and are therefore particularly advantageous for attenuating or eliminating painful phenomena.
  • ⁇ -endorphins can be triggered in response to numerous signals, in particular in response to cellular stress, to the secretion of other mediators themselves induced by stress (IL-1, IL-6, TNF, etc. ..) or following significant physical effort.
  • IL-1, IL-6, TNF, etc. .. other mediators themselves induced by stress
  • IL-6 IL-6, TNF, etc. ..
  • other mechanisms of cellular release of ⁇ -endorphins exist in the absence of cellular stress.
  • ⁇ -endorphins are chemical analgesics naturally produced by the body which, by interacting with opiate receptors, bring the body a feeling of well-being. This sensation is accompanied by an immunomodulatory effect.
  • ⁇ -Endorphins are also responsible for the initiation of a number of biological reactions that manifest themselves at all levels of the body, for example, by stimulation of the vascular and cardiac system, or by muscle relaxation.
  • neuromediators thus constitute real “pleasure” molecules because their release is accompanied by a soothing or relieving effect, locally and generally.
  • the Applicant has unexpectedly discovered that polysaccharides and their derivatives, comprising saccharide repeating sequences containing at least one molecule of rhamnose attached in a branched manner, have the property of stimulating the cutaneous release of ⁇ -endorphins.
  • biological activities immunomodulation, anti-inflammation
  • oligosaccharides of 2 to 6 sugars containing at least two galactose units in particular those extracted from the Tephrosia plant in a cosmetic and / or dermatological composition to stimulate the release of ⁇ -endorphins from the skin.
  • new polysaccharides have been identified, quite unexpectedly, capable of stimulating, without cellular stress, the secretion of ⁇ -endorphins by keratinocytes.
  • These new cosmetic and / or dermatological agents are, unlike the prior art, made up of repeating elements containing at least one molecule of rhamnose attached in a branched manner, and preferably containing predominantly rhamnose which, in addition, their confer a high affinity for keratinocytes.
  • Rhamnose was also known for its ability to limit the biological phenomena leading to allergy of the immune type (patent FR-A1 -2756735) or used, in free form, obtained after hydrolysis of exopolysaccharides, as a flavoring agent or as flavorings (patent FR-A 1-2624522).
  • patent FR-A1 -2756735 a flavoring agent or as flavorings
  • none of these studies previously carried out on rhamnose made it possible to predict such a stimulating effect of rhamnose in the form attached in a branched manner to a saccharide chain, on the cutaneous secretion of endorphins.
  • the new active ingredients are characterized in that the repeating elements, mainly containing rhamnose, comprise at least the components of general formula I:
  • Rh is a molecule of rhamnose
  • Rh * is a molecule of rhamnose attached in a branched manner
  • O is a molecule of a hexosidic or pentosidic sugar
  • U is a molecule of uronic acid and n is between 1 and 100, preferably between 5 and 65.
  • the term “derivatives” groups together the hydrolysis products of the polysaccharides and also the sugar derivatives obtained by chemical modification of the structure of the saccharides according to the invention.
  • the derivative molecule to be active on the secretion of ⁇ -endorphins it is however necessary that the rhamnose branching and / or the rhamnose molecule attached in a ramified manner to the saccharide chain are not globally altered by the chemical reactions in order that the branched rhamnose remains accessible.
  • the rhamnose molecule initially in the branched position can quite, following a chemical modification, be located in the terminal position of the derivative molecule.
  • the new derivatives are defined as any compound of saccharide nature as long as it contains at least one accessible rhamnose molecule located at the end of the chain or branched and consists mainly of rhamnose.
  • the new derivatives according to the invention then have the same structure and / or are derived from the new polysaccharide according to the invention, which leads to compounds for which n has a lower value. It can therefore particularly be oligosaccharide hydrolysis products.
  • These hydrolysates or fractions can in particular be obtained from a polysaccharide of higher molecular weight, by known degradation techniques, in particular by enzymatic hydrolysis or chemical hydrolysis.
  • the sugar derivatives obtained by chemical modification can be amino, acid derivatives and saccharide salts and / or predefined hydrolysis products.
  • Sugar O can in particular be chosen from fucose, galactose, ribose, arabinose, xylose and mannose.
  • uronic acid U is meant any hexose oxidized on its primary alcohol function to carboxylic acid, in particular glucuronic acid, galacturonic acid, mannuronic acid or iduronic acid
  • the branched rhamnose molecule can be fixed by an osidic bond from its carbon 1 to a free carbon of a sugar O or uronic acid U or Rh rhamnose molecules.
  • the saccharide chain in particular on carbons 2 or 3.
  • the repeating elements can in particular consist of the sequence of general formula II:
  • Rh is a molecule of rhamnose
  • O is a molecule of a hexosidic or pentosidic sugar
  • U is a molecule of uronic acid
  • the ramification of rhamnose on the osm O is done according to an osidic bond (1 ⁇ 2) or (l- ⁇ 3).
  • the sugar O is galactose and the uronic acid U is glucuronic acid.
  • the sequence has a sequence containing 3 molecules of rhamnose, one of which is branched, 2 molecules of galactose and one molecule of glucuronic acid.
  • a particularly advantageous polysaccharide according to the invention has been identified and is presented in Example 1. According to formula II, n represents a value such that this polysaccharide has a molecular weight of the order of 50,000 daltons.
  • this polysaccharide has the rhamnose branching on the galactose in position V. It appears from the analyzes presented in Example 1 that this polysaccharide is more particularly made up of the following repeating unit: ⁇ 4) - ⁇ -L-Rha /? (l ⁇ 3) - ⁇ -D-Gal ⁇ (l- ⁇ 2) - ⁇ -L-Rha /?
  • repeating elements can in particular consist of the sequence of general formula III:
  • the sugar O is glucose and the uronic acid U is glucuronic acid, preferably according to a sequence containing 3 molecules of rhamnose including one branched, one molecule of glucose and one molecule of acid glucuronic.
  • Such a polysaccharide can in particular be obtained according to the method described below from a culture of bacteria of the Klebsiella planticola type, in particular the strain 1-2743 (N ° CNCM I-2743 - National Collection of Culture of Microorganisms).
  • this polysaccharide as described in Example 2 and called BEC291, has the rhamnose branching on the rhamnose in position III. It appears from the analyzes presented in Example 2 that this polysaccharide more particularly consists of the following repeating unit: ⁇ 3) - ⁇ -L- Rha /? (L ⁇ 4) - /? - D-Glcp (l ⁇ 2) - [ ⁇ -L-Rha /? (L ⁇ 3)] - -L-Rha (1 ⁇ 4) - ⁇ -D-Glc /? A ( ⁇ ⁇ - -
  • this polysaccharide also makes it possible to obtain a mixture of fractions of lower molecular weight, in particular the majority fraction of 5,000 daltons, optionally purifiable and particularly advantageous according to the invention.
  • the polysaccharides or saccharide derivatives can be of bacterial or vegetable origin, ... They can be obtained by conventional techniques for producing polysaccharides (chemical synthesis, enzymatic extraction of exopolysaccharides, etc.).
  • the polysaccharides are exopolysaccharides obtained by fermentation of a bacterial strain by producing, of the encapsulated bacteria type, according to a production process such as that detailed in patent FR-B 1-264522.
  • This process is defined in that a strain of Klebsiella type bacteria is cultured in a nutritive medium comprising a carbon source, a preferential nitrogen source and appropriate mineral salts, at a pH of approximately 6 to 8 , at a temperature of about 30 to 35 ° C, with stirring and aeration, for 4 to 12 days.
  • the carbon / nitrogen ratio is advantageously greater than 5 in order to promote the secretion of the polysaccharide.
  • the polysaccharide can then be isolated by subjecting the fermentation at a heat treatment at approximately 70-120 ° C, for 10 minutes to approximately 1 hour, then separating it, for example by centrifuging in the cold.
  • Exopolysaccharides and cellular polysaccharides are found entirely in the clear supernatant phase. If necessary, the polysaccharides can be purified by precipitation by adding a non-solvent organic liquid such as acetone or a lower alcohol such as ethanol or propanol, and separated by filtration or centrifugation before being dried.
  • a non-solvent organic liquid such as acetone or a lower alcohol such as ethanol or propanol
  • the isolated polysaccharides can thus easily be incorporated into a composition, as such or in hydrolyzed form.
  • the hydrolysis can be carried out before drying by common methods such as acid hydrolysis. It can be carried out using a proton donor usually used, such as hydrochloric acid, at a temperature ranging from 50 to 100 ° C. and for 30 minutes to 4 hours, depending on the desired size of the fractions.
  • a proton donor usually used such as hydrochloric acid
  • This protocol can be carried out using bacterial strains producing exopolysaccharides rich in rhamnose, in particular encapsulated bacteria.
  • a strain of Klebsiella bacteria preferably Klebsiella pneumoniae or Klebsiella planticola, is used.
  • polysaccharide alone or a mixture of heterogeneous polysaccharides and / or a mixture of their derivatives.
  • polysaccharides alone and / or the mixture of polysaccharides and / or their derivatives can also, in the context of the invention, be used as active ingredient in grafted form, in particular by chemical substitution means on the free carboxylic function uronic acid U, on a chemical, biochemical or biological residue which does not modify the stimulating effect of the secretion of ⁇ -endorphins.
  • they may be fatty chains containing from 6 to 30 carbon atoms or chains of amino acids. It is also possible to incorporate polysaccharides and / or their derivatives according to the invention in a cyclodextrin.
  • polysaccharides and / or their derivatives according to the invention have other remarkable properties, in particular of inhibition of the cellular adhesion of neutrophils to keratinocytes (40% inhibition at 2% of the compound described in Example 1) and have a very good affinity for keratinocytes, at least equal to that of rhamnose (60% inhibition of neoglycoprotein binding obtained with 8% of the compound described in Example 1). These two properties have been demonstrated in particular in Examples 4 and 5.
  • polysaccharides and / or their derivatives previously defined are therefore particularly suitable for use as a cosmetic and / or pharmaceutical and more particularly dermatological agent, in particular for stimulating the cutaneous release of ⁇ -endorphins.
  • a subject of the invention is therefore also cosmetic and / or pharmaceutical and in particular dermatological compositions comprising, as active principle, at least one polysaccharide compound and / or a derivative as defined above, optionally in combination or in mixture with a or more suitable cosmetic and / or pharmaceutical excipients or vehicles.
  • Said polysaccharides and / or derivatives can be incorporated into these compositions at a concentration varying between 0.001% and 20% by weight, and preferably between 0.01% and 10% by total weight of the composition.
  • the composition contains, as active principle, Rhamnosoft ® polysaccharide of Example 1 and / or BEC291 polysaccharide of Example 2.
  • compositions according to the invention may be in any form suitable for skin application, in particular in the form of a gel, of an emulsion, for example, an oil-in-water or water-in-oil emulsion, or in the form of a multiple emulsion, with liquid crystals or not. They can also be in the form of aqueous solution, lotion, milk, cream, mask, foam. It is also possible to use them in the form of patches.
  • the composition can also comprise the usual acceptable pharmaceutical and / or cosmetic excipients.
  • these excipients mention may in particular be made of sun protection agents, in particular for carrying out sun care, hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic active agents, gums, resins, surfactants, solvents, fillers such as as rice starch, pigments, preservatives, essential oils, antioxidants, dyes, pigments, pearlescent agents, glitter, perfumes, odor absorbers, pH regulating agents or neutralizing agents, penetrating agents, thickening agents, such as those usually used.
  • sun protection agents in particular for carrying out sun care, hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic active agents, gums, resins, surfactants, solvents, fillers such as as rice starch, pigments, preservatives, essential oils, antioxidants, dyes, pigments, pearlescent agents, glitter, perfumes, odor absorbers, pH regulating agents or neutralizing agents, penetrating agents, thick
  • the choice and / or the quantity of the ingredients complementary to the composition will naturally be determined by the choice of physical properties and of the desired consistency for the composition according to the invention.
  • the various adjuvants are used in proportions conventionally used in the field of cosmetics, namely for example from 0.01 to 20% of the total weight of the composition, the complement being constituted by a vehicle such as water or a water-alcohol mixture .
  • ⁇ -endorphins may also be incorporated in the composition according to the invention, including cocoa extract commercialized under the name ® Caobromine (CEP).
  • CEP Caobromine
  • the composition may also contain a second compatible active principle, in particular for dermatological use, in order to confer a double property on the composition or in order to limit the uncomfortable sensations linked to the application of this second active principle.
  • a second compatible active principle in particular for dermatological use, in order to confer a double property on the composition or in order to limit the uncomfortable sensations linked to the application of this second active principle.
  • active principles mention may in particular be made of local antiseptics such as benzoyl peroxide, local anti-acne drugs such as tretinoin, a local antibiotic such as sulfacetamide to reduce the side effects of local irritation, a local anti-inflammatory such as ibuprofen.
  • the second active ingredient is added to the composition in a usually effective therapeutic amount.
  • composition according to the invention can be produced in a conventional manner, according to the known methods usually used in the field of cosmetology and / or dermatology.
  • the compositions can be used for daily care and / or treatment and / or protection of the skin of the body and / or of the face and / or the integuments (nails, hair, hair, etc.).
  • these compositions By stimulating the production of ⁇ -endorphins, these compositions have soothing and calming properties, in particular skin discomfort which may result, for example, from irritations, aggressions of the skin, in particular by external agents such as certain therapeutic treatments. , climatic agents (wind, cold, sunburn, etc.), waxing, shaving, insect bites ... and thus provide a feeling of well-being. They can therefore be particularly used for the care of sensitive or sensitized skin.
  • compositions also provide a local analgesic effect and can also be used in the pharmaceutical and more particularly dermatological field to relieve skin and / or subcutaneous pain, to suppress the unpleasant perception of skin reactions, the feelings of discomfort. the skin which manifests itself in particular in the case of allergies, pruritus, itching, insect bites.
  • a subject of the invention is therefore also the use of the polysaccharide agents according to the invention for the production of a medicament intended to relieve skin and / or subcutaneous pain, and / or to suppress the sensations of discomfort of the skin (allergies, pruritus, irritations, skin pain linked to burns, stings, chapping, cuts ...) by local application.
  • the invention also relates to a cosmetic care process comprising the application to an affected area of the skin and / or integuments of at least one active compound previously defined in a cosmetically acceptable excipient or optionally in the form of one of the cosmetic compositions previously defined.
  • compositions according to the invention have no toxicity and do not cause any local intolerance. They are also not allergenic.
  • Example 1 Example of the structure of the repeating unit of the exopolysaccharide produced by Klebsiella pneumoniae 1-714 and called Rhamnosoft ® :
  • the composition of Rhamnosoft ® was studied by the analysis procedure by GC gas chromatography and by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC / MS) of the degradation products after permethylation of the native molecule.
  • the method of degradation of uronic acids by ⁇ -elimination after permethylation was used in particular to confirm the position and the nature of the substituents of the galactose residue.
  • the Rhamnosoft sequence was determined by nuclear magnetic resonance (NMR).
  • this polymer With a branched structure, this polymer with a molecular weight of the order of 50,000 daltons therefore has a saccharide sequence comprising three molecules of rhamnose (I, III, VI), two molecules of galactose (II, V), one molecule of acid glucuronic (IV). Rhamnose therefore constitutes 50% of the polysaccharide.
  • the polysaccharide has a rhamnose VI branch on the galactose in position V.
  • the structure of the repeating unit is in this case:
  • Example 2 Example of the structure of the repeating unit of the exopolysaccharide produced by Klebsiella planticola 1-2743 and called BEC 291:
  • the composition of BEC 291 was studied by the analysis procedure by GC gas chromatography and by gas chromatography coupled with mass spectrometry (GC / MS) of the degradation products after permethylation of the native molecule.
  • GC / MS gas chromatography coupled with mass spectrometry
  • the method of degradation of uronic acids by ⁇ -elimination after permethylation was used.
  • the BEC 291 sequence was determined by nuclear magnetic resonance (NMR).
  • this polymer therefore has a saccharide sequence comprising three molecules of rhamnose (I, III, V), a molecule of glucose (II), a molecule of glucuronic acid (IV).
  • This polysaccharide therefore has a rhamnose V branch on the rhamnose in position III.
  • the structure of the repeating unit in this case is:
  • Example 3 Study of the effect of the polysaccharides according to the invention containing 50% of rhamnose on the release of ⁇ -endorphins by the keratinocytes.
  • ⁇ Procedure Normal human keratinocytes are cultured for 48 hours. They are treated for 36 hours with the product to be tested. The supernatants, containing ⁇ -endorphin, are collected and stored at -20 ° C until assay. The control of the test is carried out by treating the keratinocytes with the excipient (butylene glycol 70%) at 2%. The assay is carried out with an ELISA kit (spectrophotometric assay at 450 nm). The results are expressed in programs per milliliter of synthesized ⁇ -endorphin. Prior cytotoxicity studies were systematically carried out in these examples in order to show that the effects of the product are not linked to a cytotoxic effect.
  • Rhamnosoft ® is tested at concentrations of 1% and 5%.
  • the hydrolyzed fractions of Rhamnosoft ® of 13 kdaltons and 5 kdaltons are mainly obtained during the acid hydrolysis of Rhamnosoft "carried out in the presence of hydrochloric acid at a concentration of the order of 0.1 to 2.5 mol / liter, at a temperature from 50 to 100 ° C for 30 minutes and 4 hours respectively. They can be purified if necessary by ethanolic precipitation or by physical methods.
  • BEC 291 has been tested at concentrations of 0.001% and 0.02%
  • polysaccharide BEC291 also has the capacity to stimulate the release of ⁇ -endorphins by human keratinocytes. Preliminary studies have demonstrated the absence of cytotoxicity with respect to keratinocytes, regardless of the concentrations of BEC 291. Here again, the effect of the polysaccharide BEC 291 on the secretion of ⁇ -endorphins is not due to cellular stress but indeed an interaction between the saccharide fractions and the keratinocyte receptors.
  • FrBEC 291 hydrolyzed fraction of BEC 291 of 5 kd.
  • This FrBEC291 fraction is mainly obtained by acid hydrolysis of BEC 291, carried out in the presence of hydrochloric acid at a concentration of the order of 0.1 to 2.5 mol / liter, at a temperature of 50 ° C to 100 ° C for 4 hours.
  • Example 4 Study of the affinity of keratinocytes with respect to polysaccharides according to the invention containing 50% of rhamnose.
  • NGP fluorescent neoglycoproteins
  • Experiment 2 Experiment 1 was repeated in the presence of Rhamnosoft ® in order to determine its inhibitory effect on the binding of fluorescent NGPs on human keratinocytes. To do this, human keratinocytes were pre-incubated for 15 min with different concentrations of Rhamnosoft ® . At the end of this period, the fluorescent NGPs were added to the concentration of 100 ⁇ g / ml and experiment 1 was "renewed.
  • Experiment 3 The specific binding of Rhamnosoft ® to human keratinocytes was studied by the technique of labeling Rhamnosoft ® with a fluorescent derivative and by the technique of fixing fluorescent latex beads impregnated with Rhamnosoft ".
  • Rhamnosoft ® has everything First marked with fluorine escheine isothiocyanate (FTC). Human keratinocytes were incubated in the presence of Rhamnosoft "thus polymerized, at different concentrations ranging in particular from 0.025% to 0.4%. Binding was determined by measuring the index fluorescence and binding obtained for a concentration of 0.4% of Rhamnosoft ® -FTC was visualized by fluorescence microscopy BioRad MRC1025 at 488nm and 520nm and phase contrast. The technique using latex beads was carried out using 0.2 ⁇ m diameter Polysciences latex beads in activated -COOH form.
  • FTC fluorine escheine isothiocyanate
  • Keratinocytes were incubated for 30 min at 37 ° C in the presence of beads on which Rhamnosoft ® was immobilized. The cells are then washed and fixed with paraformaldehyde (1% w / v in PBS) for 30 minutes at 20 ° C. The results were visualized using a Biorad MRC1025 fluorescence microscope at 488nm and 520nm and in phase contrast.
  • polysaccharide according to the invention binds specifically on the membrane receptors of human keratinocytes with a particularly high affinity.
  • the keratinocytes were pre-incubated for 24 hours in the presence of Rhamnosoft ® at different concentrations and in the presence of 3 ⁇ g / ml of lipopolysaccharides (LPS). Human neutrophils previously made fluorescent by treatment with calcein are then added. After 2 hours of contact, the keratinocytes are washed and lysed. The inhibition of neutrophil adhesion is determined by measuring the fluorescence index.
  • LPS is an agent that induces inflammation.
  • polysaccharide according to the invention induces an inhibition of the cellular adhesion of neutrophils to keratinocytes.
  • Example 6 Examples of cosmetic formulations according to the invention.
  • Example 7 Examples of dermatological formulations according to the invention.
  • Anti-mosquito wellness ointment

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Abstract

La présente invention se rapporte au domaine des nécessités de la vie et plus particulièrement aux domaines de la cosmétologie, de la pharmacie et plus spécifiquement de la dermatologie. La présente invention a plus particulièrement pour objet de nouveaux composés actifs stimulant la libération de ß-endorphines par les kératinocytes, constitués d'un polysaccharide et/ou d'un dérivé saccharidique comportant des unités répétitives saccharidiques contenant au moins une molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée, ladite séquence étant, de préférence, constituée majoritairement de rhamnose. La présente invention concerne également l'utilisation de tels composés polysaccharidiques pour stimuler la libération des ß-endorphines par les kératinocytes. La présente invention a également pour objet les compositions cosmétiques et/ou pharmaceutiques en particulier dermatologiques, qui contiennent ce composé actif, éventuellement en association ou en mélange avec un ou plusieurs excipients ou véhicules cosmétiques et/ou pharmaceutiques appropriés.De telles compositions trouvent une utilisation notamment pour les soins et/ou le traitement de la peau et/ou des phanères.

Description

Nouvel agent stimulant la libération des β-endorphines, compositions cosmétiques et/ou dermatologiques en contenant et leurs applications.
La présente invention se rapporte au domaine des nécessités de la vie et plus particulièrement aux domaines de la cosmétologie, de la pharmacie et plus spécifiquement de la dermatologie,.
La présente invention concerne des composés actifs stimulant la libération des β-endorphines par les kératinocytes, comportant des séquences répétitives saccharidiques et contenant au moins une molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée.
Plus précisément, l'invention a pour objet un polysaccharide et/ou un dérivé de celui-ci comportant des séquences répétitives saccharidiques, contenant au moins une molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée, ladite séquence étant constituée, dans son ensemble, majoritairement de rhamnose. Un tel polysaccharide et/ou dérivé est caractérisé en ce qu'il est formé d'éléments répétitifs comportant au moins trois molécules de rhamnose dont l'une est ramifiée, et deux autres sucres dont au moins l'un des deux est un acide uronique. Les nouveaux principes actifs selon l'invention sont caractérisés en ce que les éléments répétitifs, contenant majoritairement du rhamnose, comportent au moins les constituants suivants, et répondent à la formule générale I:
dans laquelle Rli est une molécule de rhamnose, Rh* est une molécule de rhamnose liée à l'élément voisin d'une manière ramifiée, O est une molécule d'un sucre hexosidique ou pentosidique, U est une molécule d'acide uronique et n est compris entre 1 et 100, de préférence de 5 à 65.
La présente invention concerne également l'utilisation de composés comportant des séquences répétitives saccharidiques contenant au moins une molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée et de préférence contenant majoritairement du rhamnose, comme agent cosmétique et/ou pharmaceutique, notamment dermatologique, stimulant la libération des β- endorphines.
La présente invention a également pour objet les compositions cosmétiques et/ou pharmaceutiques qui contiennent au moins un de ces nouveaux composés actifs, de formule I, éventuellement en association ou en mélange avec un ou plusieurs excipients ou véhicules cosmétiques et/ou pharmaceutiques appropriés, pour l'application sur la peau, les muqueuses ou les phanères.
De telles compositions se rapportent notamment au soin et/ou au traitement de la peau, y compris des lèvres et des phanères(ongles, poils, cheveux..).
Les β-endorphines sont des neuropeptides issus du précurseur pro-opiomélanocortine(POMC) et ont déjà fait l'objet de nombreuses études publiées dans la littérature. On a notamment mis en évidence la présence de β-endorphines et de leur récepteur μ au sein même de l'épiderme, et plus particulièrement au sein des kératinocytes (Bigliardi P.L, et coll., 1998). Ainsi, on a montré que les kératinocytes sont à la fois sensibles à de nombreux neuromédiateurs, notamment aux β-endorphines, synthétisés par des cellules nerveuses ou par d'autres cellules épidermiques, mais sont aussi capables de les synthétiser. Ce lien particulier existant entre les tissus nerveux et épidermiques pourrait s'expliquer par leur origine embryonnaire commune ectoblastique.
Les β-endorphines synthétisées par la peau représentent plus de 50% du taux d'endorphines circulantes et sont de ce fait particulièrement intéressantes pour atténuer ou supprimer les phénomènes douloureux.
La libération de β-endorphines peut être déclenchée en réponse à de nombreux signaux, notamment en réponse à un stress cellulaire, à la sécrétion d'autres médiateurs eux-mêmes induits par un stress (IL- 1 , IL-6, TNF , etc ..) ou à la suite d'un effort physique important. Par ailleurs, d'autres mécanismes de libération cellulaire de β-endorphines existent en l'absence de stress cellulaire.
D'un point de vue physiologique, les β-endorphines sont des analgésiques chimiques naturellement produits par l'organisme qui, en interagissant avec les récepteurs opiacés, apportent à l'organisme une sensation de bien-être. Cette sensation s'accompagne d'un effet immunomodulateur. Des travaux récents ont mis en évidence les nombreuses interconnections de P épidémie et du derme avec les systèmes immunitaire et nerveux qui lui sont associés, respectivement par l'intermédiaire, notamment, des cellules de Langerhans et des terminaisons nerveuses. Les β-endorphines sont également responsables de l'initiation d'un certain nombre de réactions biologiques qui se manifestent à tous les niveaux de l'organisme, par exemple, par la stimulation du système vasculaire et cardiaque, ou par une décontraction musculaire.
Ces neuromédiateurs constituent ainsi de véritables molécules "plaisir" car leur libération est accompagnée d'un effet apaisant ou de soulagement, au niveau local et général.
Ainsi, le développement de principes actifs susceptibles de stimuler, sans nécessiter de stress cellulaire, la libération de β-endorphines, est d'un grand intérêt.
On a déjà identifié, sans plus de précision, plusieurs extraits d'algues ou de plantes susceptibles d'induire la libération de β-endorphines. Ainsi, un extrait de cacao (Theobroma cacao), plus particulièrement sous la forme d'extrait hydroglycolique 30/70 titré en caféine et en théobromine et commercialisé sous la marque Caobromine®(CEP) est susceptible de déclencher une libération de β-endorphines. De même, on a décrit, dans le brevet FR-A1- 2774292, un extrait d'une algue Cyclotella capable de déclencher une libération de β- endorphines, 16 fois supérieure à celle d'un témoin.
Selon la présente invention, la Demanderesse a découvert de manière inattendue que les polysaccharides et leurs dérivés, comportant des séquences répétitives saccharidiques contenant au moins une molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée, ont la propriété de stimuler la libération cutanée des β-endorphines.
Les polysaccharides ainsi que leurs dérivés de faible poids moléculaire, d'origine végétale ou bactérienne, extraits d'algues ou produits par synthèse, présentent de nombreuses activités biologiques (immunomodulation, anti-inflammation, ...) et sont depuis de nombreuses années utilisés pour leurs propriétés potentielles dans de nombreux domaines d'application, par exemple en tant que gélifiant dans l'agroalimentaire, hydratant, démaquillant, texturant, etc... en cosmétique. Cependant, l'influence réelle de la composition et de la nature de ces principes actifs polysaccharidiques et/ou de leurs dérivés, sur lesdites propriétés biologiques, restait encore à déterminer.
On a déjà décrit, dans le document WO-A 1-0203945, l'utilisation d'oligosaccharides de 2 à 6 sucres contenant au moins deux motifs galactose, notamment ceux extraits de la plante Tephrosia dans une composition cosmétique et/ou dermatologique pour stimuler la libération de β-endorphines par la peau. Selon la présente invention, il a été identifié, de manière tout à fait inattendue, de nouveaux polysaccharides capables de stimuler, sans stress cellulaire, la sécrétion de β-endorphines par les kératinocytes. Ces nouveaux agents cosmétiques et/ou dermatologiques sont, à la différence de l'art antérieur, constitués d'éléments répétitifs contenant au moins une molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée, et de préférence contenant majoritairement du rhamnose ce qui, en outre, leur confèrent une haute affinité pour les kératinocytes.
Des études ont montré en effet que les kératinocytes humains présentent une affinité spécifique pour le rhamnose, supérieure à celle qu'ils peuvent avoir pour d'autres sucres comme le fucose, le galactose, la N-aeetylglucosamine, en raison de la présence à la surface des membranes des kératinocytes, de récepteurs lectines spécifiques du rhamnose (Cerdan et al., Bio. cell. (1991) 73, 35-42). Dans le document brevet WO-A1 -90/11069, on a en outre décrit l'utilisation du rhamnose dans une composition cosmétique et/ou dermatologique comme vecteur de fixation spécifique d'un composé actif sur la membrane d'un kératinocyte au moyen d'une liaison ligand-récepteur. Le rhamnose était par ailleurs également connu pour sa capacité à limiter les phénomènes biologiques aboutissant à l'allergie de type immunitaire (brevet FR-A1 -2756735) ou utilisé, sous forme libre, obtenue après hydrolyse d'exopolysaccharides, comme agent de saveur ou comme arômes (brevet FR-A 1-2624522). Cependant, aucune de ces études réalisées auparavant sur le rhamnose ne permettait de prévoir un tel effet stimulant du rhamnose sous la forme fixée de manière ramifiée à une chaîne saccharidique, sur la sécrétion cutanée d'endorphines.
Selon l'invention, les nouveaux principes actifs sont caractérisés en ce que les éléments répétitifs, contenant majoritairement du rhamnose, comportent au moins les composants de formule générale I :
dans laquelle Rh est une molécule de rhamnose, Rh* est une molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée, O est une molécule d'un sucre hexosidique ou pentosidique, U est une molécule d'acide uronique et n est compris entre 1 et 100 , de préférence entre 5 et 65.
Par éléments répétitifs contenant majoritairement du rhamnose, on entend un enchaînement ramifié contenant, environ, au moins 50% de rhamnose de série D et/ou L, ainsi que ses isomères α et/ou β. Selon l'invention, on regroupe sous le terme « dérivés », les produits d'hydrolyse des polysaccharides et également les dérivés des sucres obtenus par modification chimique de la structure des saccharides selon l'invention. Pour que la molécule dérivée soit active sur la sécrétion de β-endorphines, il est toutefois nécessaire que la ramification rhamnose et/ou la molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée sur l'enchaînement saccharidique ne soient- pas globalement altérées par les réactions chimiques afin que le rhamnose ramifié reste accessible. Pour que la molécule dérivé soit active, la molécule de rhamnose initialement en position ramifiée, peut tout à fait, suite à une modification chimique, se situer en position terminale de la molécule dérivée.
Ainsi, selon l'invention, les nouveaux dérivés sont définis comme tout composé de nature saccharidique pour autant qu'il contienne au moins une molécule de rhamnose accessible située en bout de chaîne ou ramifiée et soit constitué majoritairement de rhamnose. Les nouveaux dérivés selon l'invention ont alors la même structure que le nouveau polysaccharide selon l'invention et/ou en sont issus, ce qui conduit à des composés pour lesquels n a une valeur plus faible. Il peut donc particulièrement s'agir de produits d'hydrolyse oligosaccharidiques. Ces hydrolysats ou fractions peuvent notamment être obtenus à partir d'un polysaccharide de poids moléculaire plus élevé, par des techniques de dégradation connues, notamment par hydrolyse enzymatique ou hydrolyse chimique.
Les dérivés de sucres obtenus par modification chimique peuvent être des dérivés aminés, acides, et des sels de saccharides et/ou des produits d'hydrolyse prédéfinis.
Le sucre O peut notamment être choisi parmi le fucose, le galactose, le ribose, l'arabinose, le xylose et le mannose.
Par acide uronique U, on entend tout hexose oxydé sur sa fonction alcool primaire en acide carboxylique, notamment l'acide glucuronique, acide galacturonique, acide mannuronique ou l'acide iduronique
Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, la molécule de rhamnose ramifiée peut être fixée par une liaison osidique depuis son carbone 1 sur un carbone libre d'une des molécules de sucre O ou d'acide uronique U ou de rhamnose Rh de la chaîne saccharidique, notamment sur les carbones 2 ou 3. Selon un autre mode particulier de réalisation, les éléments répétitifs peuvent notamment être constitués par la séquence de formule générale II:
dans laquelle Rh est une molécule de rhamnose, O est une molécule d'un sucre hexosidique ou pentosidique, U est une molécule d'acide uronique et la ramification du rhamnose sur l'ose O se fait selon une liaison osidique (1→2) ou (l-→3).
Selon un mode de réalisation particulièrement intéressant, le sucre O est le galactose et l'acide uronique U est l'acide glucuronique. De préférence, la séquence présente un enchaînement contenant 3 molécules de rhamnose dont une est ramifiée, 2 molécules de galactose et une molécule d'acide glucuronique. Un polysaccharide particulièrement intéressant selon l'invention a été identifié et est présenté dans l'exemple 1. Selon la formule II, n représente une valeur telle que ce polysaccharide a un poids moléculaire de l'ordre de 50 000 daltons. Il peut être obtenu à partir de cultures de bactérie de type Klebsiella notamment Klebsiella pneumoniae et notamment la souche 1-714 (N°CNCM I-2743-Collection Nationale de Culture de Microorganismes) selon un procédé décrit ci-après. Avantageusement, ce polysaccharide présente la ramification rhamnose sur le galactose en position V. Il ressort des analyses présentées à l'exemple 1 que ce polysaccharide est plus particulièrement constitué de l'unité répétitive suivante : →4)- α-L-Rha/?(l→3)- ^-D-Gal^(l-→2)- α-L-Rha/?(l→4)- β-D- GlcpA(l→3)- [α-L-Rha/>(l→2)]- α-D-Galp(l— ». L'hydrolyse de ce polysaccharide permet en outre d'obtenir un mélange de fractions de poids moléculaire plus faible, notamment les fractions majoritaires de 5 000 daltons et de 13 000 daltons, éventuellement purifiables et Darticulièrement intéressantes selon l'invention.
Selon un autre mode particulier de réalisation, les éléments répétitifs peuvent notamment être constitués par la séquence de formule générale III:
Rh dans laquelle Rh est une molécule de rhamnose, O est une molécule d'un sucre hexosidique ou pentosidique, U est une molécule d'acide uronique et la ramification du rhamnose sur le rhamnose se fait selon une liaison osidique (1→3). Selon un mode de réalisation particulièrement intéressant, le sucre O est le glucose et l'acide uronique U est l'acide glucuronique, de préférence selon un enchaînement contenant 3 molécules de rhamnose dont une ramifiée, une molécule de glucose et une molécule d'acide glucuronique. Un tel polysaccharide peut notamment être obtenu selon le procédé décrit ci-après à partir d'une culture de bactérie du type Klebsiella planticola notamment la souche 1-2743 (N°CNCM I- 2743 -Collection Nationale de Culture de Microorganismes). Avantageusement, ce polysaccharide, tel que décrit dans l'exemple 2 etdénommé BEC291, présente la ramification rhamnose sur le rhamnose en position III. Il ressort des analyses présentées à l'exemple 2 que ce polysaccharide est plus particulièrement constitué de l'unité répétitive suivante : →3)- β-L- Rha/?(l→4)- /?-D-Glcp(l→2)- [α-L-Rha/?(l→3)]- -L-Rha (1→4)- α-D-Glc/?A(ι→-
L'hydrolyse de ce polysaccharide permet en outre d'obtenir un mélange de fractions de poids moléculaire plus faible, notamment la fraction majoritaire de 5 000 daltons, éventuellement purifiable et particulièrement intéressante selon l'invention.
D'une manière générale, les polysaccharides ou les dérivés saccharidiques peuvent être d'origine bactérienne ou végétale, ...Ils peuvent être obtenus par les techniques classiques de production des polysaccharides (synthèse chimique, extraction enzymatique d'exopolysaccharides..). Selon une réalisation avantageuse, les polysaccharides sont des exopolysaccharides obtenus par fermentation d'une souche bactérienne en produisant, de type bactéries encapsulées, selon un procédé de production tel que celui détaillé dans le brevet FR- B 1-264522. Ce procédé se définit en ce qu'une souche de bactéries de type Klebsiella est mise en culture dans un milieu nutritif comprenant une source de carbone, une source d'azote préférentielle et des sels minéraux appropriés, à un pH d'environ 6 à 8, à une température d'environ 30 à 35 °C, sous agitation et sous aération, pendant 4 à 12 jours. Le rapport carbone/azote est avantageusement supérieur à 5 afin de favoriser la sécrétion du polysaccharide. Le polysaccharide peut ensuite être isolé en soumettant le milieu de fermentation à un traitement thermique à 70-120°C environ, pendant 10 minutes à 1 heure environ, puis en le séparant, par exemple en le centrifugeant à froid. Les exopolysaccharides et les polysaccharides cellulaires se retrouvent intégralement dans la phase surnageante claire. Si nécessaire, les polysaccharides peuvent être purifiés par précipitation par addition d'un liquide organique non-solvant tel que l'acétone ou un alcool inférieur tel que Féthanol ou le propanol, et séparés par fïltration ou centrifugation avant d'être séchés.
Les polysaccharides isolés peuvent ainsi aisément être incorporés dans une composition, tels quels ou sous forme hydrolysée. Dans ce cas, l'hydrolyse peut être réalisée avant séchage par des méthodes comiues telles que l'hydrolyse acide. Elle peut être effectuée en utilisant un donneur de protons habituellement utilisé, tel que l'acide chlorhydrique, à une température allant de 50 à 100°C et pendant 30 minutes à 4 heures, selon la taille souhaitée des fractions. Les fractions oligosaccharidiques ainsi obtenues peuvent être récupérées et purifiées si besoin selon les méthodes classiques.
Ce protocole peut être réalisé à partir de souches bactériennes produisant des exopolysaccharides riches en rhamnose, en particulier les bactéries encapsulées. Selon une réalisation préférée de l'invention, on utilise une souche de bactéries Klebsiella, de préférence Klebsiella pneumoniae ou Klebsiella planticola.
Selon l'invention, on peut utiliser le polysaccharide seul ou un mélange de polysaccharides hétérogènes et/ou un mélange de leurs dérivés.
Les polysaccharides seuls et/ou le mélange de polysaccharides et/ou de leurs dérivés peuvent également, dans le cadre de l'invention, être utilisés en tant que principe actif sous forme greffée, notamment par des moyens chimiques de substitution sur la fonction carboxylique libre de l'acide uronique U, sur un reste chimique, biochimique ou biologique qui ne modifie pas l'effet stimulant de la sécrétion des β-endorphines. A titre d'exemple, il peut s'agir de chaînes grasses comportant de 6 à 30 atomes de carbone ou de chaînes d'acides aminés. On peut également incorporer des polysaccharides et/ou leurs dérivés selon l'invention dans une cyclodextrine.
En outre, il a été découvert que les polysaccharides et/ou leurs dérivés selon l'invention possèdent d'autres propriétés remarquables, notamment d'inhibition de l'adhésion cellulaire des neutrophiles aux kératinocytes (40%d' inhibition à 2% du composé décrit dans l'exemple 1) et présentent une très bonne affinité pour les kératinocytes, au moins égale à celle du rhamnose (60%d'inhibition de la fixation des néoglycoprotéines obtenue avec 8% du composé décrit dans l'exemple 1). Ces deux propriétés ont notamment été démontrées dans les exemples 4 et 5.
Les polysaccharides et/ou leurs dérivés précédemment définis conviennent donc particulièrement pour une utilisation comme agent cosmétique et/ou pharmaceutique et plus particulièrement dermatologique, notamment pour stimuler la libération cutanée de β- endorphines.
L'invention a donc également pour objet les compositions cosmétiques et/ou pharmaceutiques et en particulier dermatologiques comprenant, à titre de principe actif, au moins un composé polysaccharidique et/ou un dérivé tel que précédemment défini, éventuellement en association ou en mélange avec un ou plusieurs excipients ou véhicules cosmétiques et/ou pharmaceutiques appropriés. Lesdits polysaccharides et/ou dérivés peuvent être incorporés dans ces compositions à une concentration variant entre 0.001% et 20% en poids, et de préférence entre 0.01% et 10% en poids total de la composition.
Selon une réalisation particulièrement avantageuse, la composition contient, à titre de principe actif, le polysaccharide Rhamnosoft® de l'exemple 1 et/ou le polysaccharide BEC291 de l'exemple 2.
Les compositions selon l'invention peuvent se présenter sous toute forme appropriée pour l' application cutanée, notamment sous la forme d'un gel, d'une émulsion, par exemple, une émulsion huile-dans-eau ou eau-dans-huile, ou sous la forme d'une émulsion multiple, à cristaux liquides ou non. Elles peuvent également être sous la forme de solution aqueuse, de lotion, de lait, de crème, de masque, de mousse. Il est également possible de les utiliser sous la forme de patches.
Selon l'invention, la composition peut en outre comporter les excipients habituels pharmaceutiques et/ou cosmétiques acceptables appropriés. Parmi ces excipients, on peut notamment citer des agents de protection solaire notamment pour la réalisation de soins solaires, des agents gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des actifs hydrophiles ou lipophiles, des gommes, des résines, des agents tensioactifs, des solvants, des charges telles que l'amidon de riz, des pigments, des agents conservateurs, des huiles essentielles, des agents antioxydants, des colorants, des pigments, des nacres, des paillettes, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des agents régulateurs de pH ou des agents neutralisants, des agents pénétrants, des agents épaississants, tels que ceux habituellement utilisés.
Le choix et/ou la quantité des ingrédients complémentaires à la composition seront naturellement déterminés par le choix des propriétés physiques et de la consistance souhaitée pour la composition conforme à l'invention. On emploie les différents adjuvants dans des proportions classiquement utilisées dans le domaine de la cosmétique, à savoir par exemple de 0.01 à 20 % du poids total de la composition, le complément étant_constitué par un véhicule tel que l'eau ou un mélange eau-alcool.
Tout autre produit influençant positivement la libération de β-endorphines peut également être incorporé dans la composition selon l'invention, notamment l'extrait de cacao commercialisé sous le nom Caobromine® (CEP).
En outre, la composition peut encore contenir un deuxième principe actif compatible, notamment pour un usage dermatologique, afin de conférer une double propriété à la composition ou afin de limiter les sensations inconfortables liées à l'application de ce deuxième principe actif. A titre d'exemples de principes actifs, on peut notamment citer les antiseptiques locaux tels que le peroxyde de benzoyle, les anti-acnéiques locaux tels que la trétinoïne, un antibiotique local tels que le sulfacétamide pour réduire les effets secondaires d'irritation locale, un anti-inflammatoire local tel que l'ibuprofène. Le deuxième principe actif est ajouté à la composition en une quantité thérapeutique habituellement efficace.
La composition selon l'invention peut être réalisée de manière conventionnelle, selon les procédés connus habituellement utilisés dans le domaine de la cosmétologie et/ou de la dermatologie.
Dans le domaine cosmétique, les compositions peuvent être utilisées pour le soin quotidien et/ou le traitement et/ou la protection de la peau du corps et/ou du visage et/ou des phanères(ongles, poils, cheveux..). En stimulant la production de β-endorphines, ces compositions présentent des propriétés apaisantes, calmantes, notamment de l' inconfort cutané pouvant résulter par exemple d'irritations, d'agressions de la peau, en particulier par des agents extérieurs tels que certains traitements thérapeutiques, les agents climatiques (le vent, le froid, les coups de soleil, ..), les épilations, les rasages, les piqûres d'insectes... et procurent ainsi une sensation de bien-être. Elles peuvent donc particulièrement être utilisées pour le soin des peaux sensibles ou sensibilisées. De telles compositions procurent également un effet analgésique local et peuvent en outre être utilisées dans le domaine pharmaceutique et plus particulièrement dermatologique pour soulager les douleurs cutanées et/ou sous-cutanées, pour supprimer la perception désagréable des réactions cutanées, les sensations d'inconfort de la peau qui se manifestent notamment dans les cas d'allergies, de prurit, de démangeaisons, de piqûres d'insectes.
L'invention a donc également pour objet l'utilisation des agents polysaccharidiques selon l'invention pour la réalisation d'un médicament destiné à soulager des douleurs cutanées et/ou sous cutanées, et/ou à supprimer les sensations d'inconfort de la peau (allergies, prurit, irritations, douleurs cutanées liées à des brûlures, piqûres, gerçures, coupures ...) par application locale.
Selon un autre aspect, l'invention concerne également un procédé de soin cosmétique comprenant l'application sur une zone de la peau et/ou des phanères concernée d'au moins un composé actif précédemment défini dans un excipient cosmétiquement acceptable ou éventuellement sous la forme d'une des compositions cosmétiques précédemment définies.
Les compositions selon l'invention ne présentent aucune toxicité et n'entraînent aucune .ntolérance locale. Elles ne sont pas non plus allergisantes.
Les exemples et les préparations suivants illustrent l'invention sans la limiter aucunement. Dans les exemples et les préparations, les proportions indiquées sont des pourcentages en olume/volume.
Exemple 1 : Exemple de structure de l'unité répétitive de l'exopolysaccharide produit par Klebsiella pneumoniae 1-714 et dénommé Rhamnosoft®:
La composition de Rhamnosoft® a été étudiée par la procédure d'analyse par chromatographie en phase gazeuse GC et par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC/MS) des produits de dégradation après perméthylation de la molécule native. La méthode de dégradation des acides uroniques par β-élimination après perméthylation (décrite par Aspinall GO et al. Carbohydr Res. 1977 May;55:ll-9) a été utilisée notamment pour confirmer la position et la nature des substituants du résidu de galactose I La séquence Rhamnosoft a été déterminée par résonance magnétique nucléaire (RMN). De structure ramifiée, ce polymère de poids moléculaire de l'ordre de 50 000 daltons présente donc une séquence saccharidique comportant trois molécules de rhamnose (I, III, VI), deux molécules de galactose (II, V), une molécule d'acide glucuronique (IV). Le rhamnose constitue donc 50% du polysaccharide. Le polysaccharide présente une ramification rhamnose VI sur le galactose en position V.
La structure de l'unité de répétition est dans ce cas :
→4)- -L-Rha (l→3)- β-O-Ga\p(l→2)- -L-Rha;?(l→4)- /?-D-GlcpA(ι→3)- [α-L-
Rrιa/ l→2)]- a-O-Galp(l→.
Elle répond à la formule détaillée ci-après :
VI
)ans les tests suivants (exemples 3 à 7), le produit selon l'invention est utilisé en solution queuse de 2.5%(p/p) en matière sèche. Exemple 2 : Exemple de structure de l'unité répétitive de l'exopolysaccharide produit par Klebsiella planticola 1-2743 et dénommé BEC 291 :
La composition de BEC 291 a été étudiée par la procédure d'analyse par chromatographie en phase gazeuse GC et par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (GC/MS) des produits de dégradation après perméthylation de la molécule native. La méthode de dégradation des acides uroniques par β -élimination après perméthylation (décrite par Aspinall GO et al. Carbohydr Res. 1977 May;55:l l-9) a été utilisée. La séquence BEC 291 a été déterminée par résonance magnétique nucléaire (RMN).
De stmcture ramifiée, ce polymère présente donc une séquence saccharidique comportant trois molécules de rhamnose (I, III, V), une molécule de glucose (II), une molécule d'acide glucuronique (IV). Ce polysaccharide présente donc bien une ramification rhamnose V sur le rhamnose en position III.
La stmcture de l'unité de répétition dans ce cas est :
→3)- yS-L-Rha;?(l→4)- -D-Glçp(l→2 [α-L-Rha^(l→3)]- ct-L-Rhap(l→4)- α-D-
GlcpA(l→.
Elle répond à la formule détaillée ci-après :
Exemple 3 : Etude de l'effet des polysaccharides selon l'invention contenant 50% de rhamnose sur la libération de β-endorphines par les kératinocytes.
π Mode opératoire : Des kératinocytes humains normaux sont mis en culture pendant 48 heures. Ils sont traités pendant 36 heures avec le produit à tester. Les surnageants, contenant la β-endorphine, sont recueillis et conservés à -20°C jusqu'au dosage. Le témoin du test est réalisé en traitant les kératinocytes avec l'excipient (butylène glycol 70%) à 2%. Le dosage est effectué avec un kit ELISA (dosage spectrophotométrique à 450 nm). Les résultats sont exprimés en programmes par millilitre de β-endorphine synthétisée. Des études préalables de cytotoxicité ont été systématiquement effectuées dans ces exemples afin de montrer que les effets du produit ne sont pas liés à un effet cytotoxique. Un témoin positif de libération de β-endorphines a été réalisé en utilisant du PMA (Phorbol 12-Myristate 13-Acetate) qui, en tant qu'agent agressant des kératinocytes, induit la libération de β- endorphines par un mécanisme de stress cellulaire.
a) Effet de Rhamnosoft
Rhamnosoft® est testé aux concentrations de 1% et 5%.
Effet de Rhamnosoft sur la production de β-endorphines ((* : validation : moyenne significativement différente par rapport au témoin (p<0, 05))
Il ressort de ces résultats que Rhamnosoft®, aux concentrations de 1 et 5% provoque une sécrétion accme de β-endorphines par les kératinocytes. Les études préalables ont démontré l'absence de cytotoxicité de ce type de produit vis à vis des kératinocytes humains, et ce, quelles que soient les concentrations de Rhamnosoft® testées.
On peut considérer que l'effet de Rhamnosoft® sur les kératinocytes se produit donc par un mécanisme différent de celui précédemment décrit et indépendant du stress cellulaire.
b) Effet de fractions hydrolysées de Rhamnosoft® de 13 kdaltons et 5 kdaltons. Les fractions hydrolysées de Rhamnosoft® de 13kdaltons et de 5 kdaltons sont majoritairement obtenues lors de l'hydrolyse acide de Rhamnosoft" réalisée en présence d'acide chlorhydrique à une concentration de l'ordre de 0.1 à 2.5 mole/litre, à une température de 50 à 100°C pendant respectivement 30 minutes et 4 heures. Elles peuvent être purifiées si nécessaire par précipitation éthanolique ou par des méthodes physiques.
Effet de fractions hydrolysées de Rhamnosoft , respectivement de 13 kd et 5 kd, sur la production de β-endorphines ((* validation moyenne sign cativement différente par rapport au témoin (p<0, 05))
Il ressort nettement des résultats que les fractions 13 kd et 5 kd, produits d'hydrolyse de Rhamnosoft®, aux concentrations de 0.01 et 0.05% provoquent une augmentation importante de la libération de β-endorphines par les kératinocytes. Les études préalables ont montré l'absence de cytotoxicité et confirment donc que l'effet des fractions hydrolysées de Rhamnosoft®n'est pas dû à un stress cellulaire mais bien à une interaction des fractions saccharidiques avec les récepteurs des kératinocytes
c) Effet d'un polysaccharide de type BEC 291.
BEC 291 a été testé au concentrations de 0.001% et 0.02%
Tab 3 Effet du polysaccharide BEC 291 sur la production de β-endorphines ((* validation moyenne significativement différente par rapport au témoin (p<0, 05))
Il apparaît que le polysaccharide BEC291 présente également la capacité de stimuler la libération de β-endorphines par les kératinocytes humains. Les études préalables ont démontré l'absence de cytotoxicité vis à vis des kératinocytes et ce, quelles que soient les concentrations de BEC 291. Là encore, l'effet du polysaccharide BEC 291 sur la sécrétion de β-endorphines n'est pas dû à un stress cellulaire mais bien à une interaction entre les fractions saccharidiques et les récepteurs des kératinocytes.
d) Effet de FrBEC 291, fraction hydrolysée de BEC 291 de 5 kd. Cette fraction FrBEC291 est majoritairement obtenue par hydrolyse acide de BEC 291, réalisée en présence d'acide chlorhydrique à une concentration de l'ordre de 0.1 à 2.5 mole/litre, à une température de 50°C à 100°C pendant 4 heure.
Tab 3 Effet du pofysacchm ide BEC 291 sur la production de β-endorphines { ( * validation moyenne signiβcativement différente pat rapport au témoin (p<0, 05))
Il apparaît que la fraction oligosaccharidiqυe de BEC291, à toutes les concentrations testées, induit une forte stimulation de la libération de β-endorphines par les kératinocytes humains. Les études préalables ont également montré que cette fraction est dénuée d'effet cytotoxique. Son effet ne peut donc s'expliquer que par un mécanisme indépendant du stress cellulaire, véritablement lié à une interaction entre les fractions saccharidiques et les récepteurs des kératinocytes.
Par ailleurs, ces tests montrent que les polysaccharides et/ou leurs dérivés selon l'invention, contenant un rhamnose ramifié et suffisamment « riches » en rhamnose, et plus particulièrement contenant majoritairement du rhamnose, stimulent la libération de β- endorphines par les kératinocytes. Tous ces produits dénués de cytotoxicité vis à vis des kératinocytes agissent par un mécanisme d'action qui n'est pas lié au stress cellulaire.
Exemple 4 : Etude de l'affinité des kératinocytes vis à vis de polysaccharides selon l'invention contenant 50% de rhamnose.
Mode opératoire: Expérience 1 : La spécificité de reconnaissance osidique des récepteurs membranaires des kératinocytes a été déterminée en utilisant des néoglycoprotéines fluorescentes (NGP). Pour ce faire, les kératinocytes humains ont été incubés avec différents types de néoglycoprotéines. L'Albumine de Sérum Bovine (BSA) a été utilisée comme protéine support. La fixation des NGP a été déterminée en mesurant l'indice de fluorescence.
Expérience 2 : L'expérience 1 a été renouvelée en présence de Rhamnosoft® afin de déterminer son effet inhibiteur sur la fixation des NGP fluorescentes sur les kératinocytes humains. Pour ce faire, les kératinocytes humains ont été pré-incubés oendant 15 min avec différentes concentrations de Rhamnosoft®. A l'issue de cette période, 'es NGP fluorescentes ont été ajoutées à la concentration de 100 μg/ml et l'expérience 1 a été "enouvelée. Expérience 3 : La fixation spécifique de Rhamnosoft® sur les kératinocytes humains a été étudiée par la technique de marquage de Rhamnosoft® par un dérivé fluorescent et par la technique de fixation de billes de latex fluorescentes imprégnées de Rhamnosoft". Rhamnosoft® a tout d'abord été marqué à l'isothiocyanate de fluor escéine (FTC). Les kératinocytes humains ont été incubés en présence de Rhamnosoft" ainsi polymérisé, à différentes concentrations s'échelonnant notamment de 0.025% à 0.4%. La fixation a été déterminée en mesurant l'indice de fluorescence et la fixation obtenue pour une concentration de 0.4% de Rhamnosoft®-FTC a été visualisée en microscopie à fluorescence Biorad MRC1025 à 488nm et 520nm et en contraste de phase. La technique utilisant des billes de latex a été réalisée en utilisant des billes de latex Polysciences de 0.2 μm de diamètre sous forme -COOH activées. Les kératinocytes ont été incubés pendant 30 min à 37°c en présence de billes sur lesquelles le Rhamnosoft® a été immobilisé. Les cellules sont ensuite lavées et fixées par le paraformaldéhyde (1% w/v dans le PBS) pendant 30 minutes à 20°C. Les résultats ont été visualisés à l'aide d'un microscope à fluorescence Biorad MRC1025 à 488nm et 520nm et en contraste de phase.
Remarque : Dans toutes ces expériences, toutes les incubations avec des kératinocytes humains ont été effectuées pendant 20 minutes à 37°C, sauf mention contraire. Tous les tests ont été effectués en triplicate pour plusieurs concentrations du produit testé. L'indice de fluorescence indiquant la fixation a toujours été évalué par cytométrie de flux (FACS 440 Becton Dickinson).
Résultats :
-L 'expérience 1 a confirmé que les kératinocytes humains ont une affinité préférentielle pour le rhamnose. En effet, à des concentrations comprises entre 10 μg/ml et 200 μg/ml, l'indice de fluorescence de la néoglycoprotéine contenant du rhamnose est environ deux fois plus élevé que celui des autres néoglycoprotéines contenant notamment du fucose, du glucose, ou de la Nacétylglucosamine. Un phénomène de saturation des récepteurs est en outre apparu à partir ie 200μg/ml pour le rhamnose.
-L 'expérience 2 a permis de mettre en évidence l'affinité très élevée de Rhamnosoft® pour les kératinocytes. En effet, la fixation de tous les NGP a été inhibée d'environ 10%) à partir d'une ;oncentration de 3%v/v de Rhamnosoft®. En outre, cette action a été particulièrement .importante sur les NGP à rhamnose puisque 10% à 60% d'inhibition environ a été observée DOUΓ des concentrations respectives de 0.5% à 8%v/v de Rhamnosoft". -L 'expérience 3 a permis de vérifier que les résultats obtenus lors des expériences précédentes n'étaient pas dus à une interaction directe entre le Rhamnosoft® et les NGP. Les résultats sont les suivants :
De même, Rhamnosoft® a été nettement mis en évidence au niveau des membranes des kératinocytes, par fluorescence et par contraste de phase.
Bilan : Il apparaît ainsi clairement que le polysaccharide selon l'invention se fixe spécifiquement sur les récepteurs membranaires des kératinocytes humains avec une affinité particulièrement élevée.
Exemple 5 : Etude de l'effet des polysaccharides selon l'invention contenant 50% de rhamnose sur l'adhésion des neutrophiles aux kératinocytes
Mode opératoire : Les kératinocytes ont été pré-incubés pendant 24 heures en présence de Rhamnosoft® à différentes concentrations et en présence de 3 μg/ml de lipopolysaccharides(LPS). Des neutrophiles humains préalablement rendus fluorescents par traitement à la calcéine sont ensuite ajoutés. Après 2 heures de contact, les kératinocytes sont lavés et lysés. L'inhibition de l'adhésion des neutrophiles est déterminée par la mesure de l'indice de fluorescence.
Résultats :
Le LPS est un agent inducteur de l'inflammation.
Il apparaît donc que le polysaccharide selon l'invention induit une inhibition de l'adhésion cellulaire des neutrophiles aux kératinocytes. Exemple 6 : Exemples de formulations cosmétiques selon l'invention.
Ces préparations ont été obtenues par simple mélange des ingrédients.
Gelée hydratante peaux sensibles
Phase A :
Eau déminéralisée qsp 100%
Dihydrogenoéthylènediamine tetraacétate disodique 0,2%
Urée 3,00%
Glycérol 1,50%
Carbomer 1,00%
Rhamnosoft 3,00% conservateurs qsp triéthanolamine eqs
Phase B :
Mélange de PCA* de Sodium, de Magnésium, de Zinc et de Manganèse 1,00%
Polysorbate 20 3,00%
Parfum 0, 15%
Lait solaire
Phase A :
PEG-30 Dipolyhydroxystearate 2,00%
Isohexadecane 8,00%
Octylmethoxycinnamate 5,00%
Huile de monoï 4,00%
Butyl Methoxydibenzoylmethane 1,50% conservateurs qsp
Phase B :
Eau déminéralisée qsp 100%
Disodium Dihydrogenoéthylènediamine tetraacétate 0,2%
Glycérol 1,50%
Sulfate de magnésium heptahydrate 0,70%
Rhamnosoft® 3,00% conservateurs qsp
Phase C :
Eau déminéralisée 15,00%
Acide Phenylbenzimidazole Sulfonique 1,50%
Soude qs pH
Phase D :
Fucogel 1000 / Polysaccharide riche en fucose 4,00%
Phase E :
Silica Dimethyl Silylate 0,30%
: PCA=acide pyrrolidone-carboxylique
Exemple 7 : Exemples de formulations dermatologiques selon l'invention.
Ces préparations ont été obtenues par simple mélange des ingrédients.
Pommade bien-être anti-moustique :
Rhamnosoft 4% repellent 3535 (ethylbutylacetylaminopropionate) 15% filtre solaire UV B 2% essence de lavande 0.4% enoxolone 0.5% excipient qsp 100
Crème apaisante antibiotique cutanée pour peaux lésées ,infectées, panaris p-aminophényl sulfamide 2%
Rhamnosoft 3%
Butylhydroxyanisole 0.05%
Alcool cétylique 1%
Glycérol 0.75%
Paraffine liquide 2%
Sorbate de potassium 0.02%
Polysorbate 60 0.5%
Vaseline 0.4%
Eau purifiée qsp 100

Claims

REVENDICATIONS
1. Nouveaux polysaccharides stimulant la libération de β-endorphines, caractérisés en ce qu'ils sont constitués d'éléments répétitifs qui contiennent majoritairement du rhamnose et comportent au moins les composants suivants de formule générale I :
dans laquelle Rh est une molécule de rhamnose, Rh* est une molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée, O est une molécule d'un sucre hexosidique ou pentosidique, U est une molécule d'acide uronique et n est compris entre 1 et 100, et de préférence entre 5 et 65.
2. Polysaccharides selon la revendication 1, caractérisés en ce que la ramification du rhamnose Rh* se fait selon une liaison osidique (1→2 ) ou (1→3) sur la chaîne saccharidique.
3. Polysaccharides selon la revendication 1 ou 2, caractérisés en ce que le sucre O est choisi parmi le fucose, le galactose, le glucose, le ribose, l'arabinose, le xylose et le mannose.
4. Polysaccharides selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que les éléments répétitifs sont constitués par la séquence suivante de formule II:
Rh
dans laquelle Rh est une molécule de rhamnose, O est une molécule d'un sucre hexosidique ou pentosidique, U est une molécule d'acide uronique et la ramification du rhamnose sur l'ose O se fait selon une liaison osidique (1— >2) ou (1→3).
5. Polysaccharides selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisés en ce que l'élément répétitif est composé d'un enchaînement constitué de 3 molécules de rhamnose dont une ramifiée, de 2 molécules de galactose et d'une molécule d'acide glucuronique.
6. Polysaccharide selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que les éléments répétitifs ont la séquence suivante : →4)- α-L-Rhaj7(l— >3)- β-D-Galp(l→2)- -L- Rha ?(l→4)- ?-D-GlqcA(l→3)- [ -L-Rhap(l-→2)j- α-D-Galp(l— *., n représentant une valeur telle que le poids moléculaire soit d'environ 50 000 daltons.
7. Polysaccharides selon la revendication 6, caractérisés en ce que lesdits polysaccharides sont sous forme d'hydrolysat de fractions de 5 000 et/ou 13 000 daltons, purifiées ou en mélange.
8. Polysaccharides selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que les éléments répétitifs sont constitués par la séquence suivante de formule III:
Rh
dans laquelle Rh est une molécule de rhamnose, O est une molécule d'un sucre hexosidique ou pentosidique, U est une molécule d'acide uronique et la ramification du rhamnose sur le rhamnose se fait selon une liaison osidique (1→3).
9. Polysaccharides selon la revendication 8 ou selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisés en ce que l'élément répétitif est composé d'un enchaînement constitué de 3 molécules de rhamnose dont une ramifiée, d'une molécule de glucose et d'une molécule d'acide glucuronique.
10. Polysaccharide selon la revendication 9, caractérisé en ce que les éléments répétitifs ont la séquence suivante : →3)-/?-L-Rhaj?(l→4)- ?-D-Glcp(l→2)- [α-L-Rha (l—*3)j- α-L-Rhaj?(l→4)- α-D-GlcpA(l→.
11. Polysaccharides selon la revendication 8, caractérisés en ce que lesdits polysaccharides sont sous forme d'hydrolysat de fractions de 5 000 daltons, purifiées ou en mélange.
12. Polysaccharides selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce qu'ils sont obtenus par fermentation d'une bactérie du genre Klebsiella dans un milieu nutritif comprenant une source de carbone, une source d'azote préférentielle et des sels minéraux, suivi d'un traitement thermique et d'une séparation.
13. Oligosaccharides, dérivés des polysaccharides selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce qu'ils comportent au moins une molécule de rhamnose accessible en bout de chaîne ou fixée de manière ramifiée et en ce qu'ils sont majoritairement constitués de rhamnose.
14. Oligosaccharides selon la revendication 13, caractérisés en ce qu'ils sont obtenus par hydrolyse des polysaccharides selon l'une des revendications 1 à 11.
15. Oligosaccharides selon la revendication 14, caractérisés en ce qu'ils sont obtenus par hydrolyse du polysaccharide selon la revendication 6 et présentent un poids moléculaire de 5kDa ou 13kDa.
16. Oligosaccharides selon la revendication 14, caractérisés en ce qu'ils sont obtenus par hydrolyse du polysaccharide selon la revendication 10 et présentent un poids moléculaire de 5kDa.
17. Polysaccharides et/ou dérivés des polysaccharides selon l'une des revendications précédentes, caractérisés en ce qu'ils sont greffés sur des chaînes grasses de 6 à 30 atomes de carbone.
18. Composition cosmétique et/ou pharmaceutique en particulier dermatologique stimulant la libération de β-endorphines caractérisée en ce qu'elle contient au moins un composé actif de type polysaccharide et/ou un de ses dérivés selon l'une des revendications 1 à 17, seul ou en mélange avec un ou plusieurs excipient(s) ou véhicule(s) cosmétique(s) et/ou pharmaceutique(s) approprié(s).
19. Composition selon la revendication 18, caractérisée en ce qu'elle contient entre 0.001%o et 20%> dudit polysaccharide et/ou dérivé, en poids.
20. Composition selon la revendication 19, caractérisée en ce qu'elle contient entre 0.01% et 10% dudit polysaccharide et/ou dérivé, en poids.
21. Utilisation d'au moins un polysaccharide et/ou dérivé de celui-ci comportant des éléments répétitifs saccharidiques contenant au moins une molécule de rhamnose fixée de manière ramifiée et de préférence contenant majoritairement du rhamnose, comme agent cosmétique et/ou pharmaceutique, notamment dermatologique, stimulant la libération des β-endorphines.
22. Utilisation d'une composition telle que définie selon l'une des revendications 18 à 20 pour le soin des phanères et/ou de la peau en particulier des peaux sensibles.
23. Utilisation d'une composition selon l'une des revendications 18 à 20 pour le traitement cosmétique des réactions inconfortables de la peau et/ou des phanères.
24. Utilisation d'au moins un polysaccharide et/ou d'un dérivé selon l'une des revendications 1 à 17 pour la fabrication d'un médicament destiné à traiter les réactions inconfortables et/ou soulager des douleurs de la peau et/ou des phanères par application topique.
25. Procédé de soin cosmétique, caractérisé en ce qu'il comprend l'application sur une zone de la peau et/ou des phanères concernée, d'un polysaccharide et/ou d'un dérivé défini selon l'une des revendications 1 à 17 éventuellement en mélange avec un ou plusieurs excipients ou véhicules cosmétiques appropriés.
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