EA046894B1

EA046894B1 - Ингибиторы rho-ассоциированной, содержащей суперспираль протеинкиназы

Info

Publication number: EA046894B1
Application number: EA202090306
Authority: EA
Inventors: Эдуардас Сцукас; Кевин Джи. Лиу; Джи-Ин Ким; Маша В. Поюровски; Риген Мо; Джингиа Жанг
Original assignee: Кадмон Корпорейшн; Ллк
Priority date: 2017-07-21
Filing date: 2018-07-23
Publication date: 2024-05-07

Description

Область техники изобретения

Данное изобретение относится к соединениям, которые представляют собой ингибиторы ROCK1 и/или ROCK2. Также предложено применение ингибиторов ROCK1 и/или ROCK2 для лечения заболевания.

Уровень техники изобретения

Rho-ассоциированные содержащие суперспираль протеинкиназы (ROCK) являются представителями семейства сериновых/треониновых киназ. Были идентифицированы две изоформы - ROCK1 и ROCK2. Обе изоформы активируются ГТФ-связанными формами Rho-ГТФазы и при активации фосфорилируют ряд последующих субстратов. ROCK играют важные роли в многочисленных клеточных процессах, включая сокращение гладкомышечных клеток, пролиферацию, адгезию и миграцию клеток. Следовательно, ингибиторы ROCK потенциально терапевтически применимы при широком ряде патологических состояний, включая, например, астму, рак, эректильную дисфункцию, глаукому, инсулиновую резистентность, почечную недостаточность, легочную гипертензию, нейрональную дегенерацию и остеопороз.

ROCK является ключевым внутриклеточным регулятором цитоскелетной динамики и подвижности клеток. Rho-киназа регулирует ряд последующих мишеней RhoA посредством фосфорилирования, включая например, легкую цепь миозина, связывающую субъединицу фосфатазы легкой цепи миозина и LIMкиназу 2. Эти субстраты регулируют организацию и сократимость актиновых филаментов. В гладкомышечных клетках ROCK опосредует повышение чувствительности к кальцию и сокращение гладкой мускулатуры. Ингибирование ROCK блокирует 5-НТ и индуцированное адреналином сокращение мышц. При внесении в не-гладкомышечные клетки ROCK индуцирует образование стресс-волокон и необходима для клеточной трансформации, опосредованной RhoA. ROCK участвует в ряде клеточных процессов, включая, но не ограничиваясь этим, адгезию клеток, подвижность и миграцию клеток, регуляцию роста, сокращение клеток и цитокинез. ROCK также вовлечена в активацию транспортной системы с Na/Hобменом, образование стресс-волокон, активацию аддуцина и физиологические процессы, такие как сосудосужение, сокращение гладкой мускулатуры бронхов, пролиферацию клеток гладкой мускулатуры и эндотелия сосудов, агрегацию тромбоцитов и другие.

Ингибирование активности ROCK в животных моделях продемонстрировало ряд благоприятных эффектов ингибирования Rho-киназы для лечения человеческих заболеваний. Они включают модели сердечно-сосудистых заболеваний, таких как гипертензия, атеросклероз, рестеноз, гипертрофия сердца, внутриглазная гипертензия, ишемия головного мозга, спазм сосудов головного мозга, пенильная эректильная дисфункция, нарушения центральной нервной системы, такие как нейрональная дегенерация и повреждение спинного мозга, и неоплазию. Было показано, что ингибирование активности ROCK ингибирует рост опухолевых клеток и метастазирование, ангиогенез, артериальные тромботические нарушения, такие как агрегация тромбоцитов и агрегация лейкоцитов, астму, регуляцию внутриглазного давления и резорбцию костей. Ингибирование активности ROCK у пациентов оказывает благоприятный эффект на спазмы сосудов и ишемию головного мозга после субарахноидального кровоизлияния, снижение внутриглазного давления, повышение оттока влаги из глаз за счет релаксации ткани трабекулярной сети, улучшение притока крови к глазному нерву и защиту здоровых ганглионарных клеток.

Был создан значительный массив данных in vivo, сфокусированных на активности ROCK в ЦНС. Аномальная активация пути ROCK была зарегистрирована при многих нарушениях центральной нервной системы. Например, рост аксонов и синаптическая пластичность зависят от структурной регуляции актинового цитоскелета. Каскад Rho-ROCK играет ключевую роль в синаптической пластичности, в дендритном морфогенезе и стабильности, а также в подвижности и коллапсе конуса роста. Кроме того, множество молекул, ингибирующих рост аксонов, скапливаются на RhoA/ROCK в нейронах, что делает его привлекательным путем для вмешательства при нарушениях ЦНС.

Nogo-рецепторы (NgR) (наряду с другими представителями комплекса, включая LINGO-1) и их лиганды, возможно, являются наиболее хорошо изученными и эффективными ингибиторами роста нейритов. Некоторые из наиболее ранних событий после активации рецептора миелин-ассоциированными ингибиторами являются повышением регуляции RhoA и ROCK. Эти события приводят к повышению сократимости и оказывают сильный ингибирующий эффект на аксональный рост в зрелых нейронах. Таким образом, возможность ингибировать этот сигнальный каскад обеспечивает очень перспективную терапевтическую стратегию при повреждениях спинного мозга и оптического нерва. Нейродегенеративные патологические состояния, такие как болезнь Хантингтона и Альцгеймера (БА), также исследовали как восприимчивые к ингибированию сигнализации NgR. Представители семейства NgR не только связаны с процессингом АРР, но также в пораженном БА мозге происходит изменение субклеточной локализации NgR и Nogo.

Болезнь Альцгеймера (БА), наиболее распространенная причина деменции у пожилых людей, является прогрессирующим нейродегенеративным нарушением, которое включает постепенное снижение многих когнитивных функций, включая нарушение памяти (Selkoe, 2001). Потеря синапсов обычно наблюдается при патологии БА и является показателем синаптической дисфункции при БА (Tanzi and Bertram, 2005). Олигомеризованные пептиды β-амилоида были связаны с потерей синаптической пластично

- 1 046894 сти и дисфункцией нейронной сети. Синаптическая пластичность зависит от структурной регуляции актинового цитоскелета в дендритных шипиках. Каскад Rho-ROCK играет ключевую роль в синаптической пластичности, в дендритном морфогенезе и стабильности, а также в подвижности и коллапсе конуса роста (Govek et al., 2005; Linseman and Loucks, 2008). Несколько исследований продемонстрировали, что ROCK-киназы могут индуцировать генерацию токсического пептида β-амилоида и, кроме того, ингибирование ROCK может ингибировать процессинг токсического пептида. В механизме упреждающего нервного сигнала β-амилоид повышает активность Rho-ГТФазы, которая посредством активации ROCK ингибирует рост нейритов и образование синапсов (Petratos et al., 2008). Таким образом, ингибиторы ROCK могут иметь потенциал в отношении предотвращения синаптической и нейрональной деградации, а также в отношении стимуляции процессов регенерации при БА. В недавнем исследовании, проведенном Herskowitz et al., было показано, что нокдаун ROCK снижал уровни ав. Эти эффекты демонстрируют, что необходимы высокоселективные ингибиторы ROCK, чтобы обеспечить эффективное лечение болезни Альцгеймера (БА). Модельное соединение SR3677 исследовали в модели БА на грызунах в попытке продемонстрировать применение ингибирования ROCK в случае БА путем изменения распределения ВАСЕ-1 и перемещения белка-предшественника амилоида (АРР - от англ. amyloid precursor protein) в лизосомы. После прямой в/б инъекции в гиппокамп, вследствие своих плохих пероральных ФК-свойств (5%F и время полужизни < 1 ч) и отсутствия проникновения в головной мозг, SR3677 имело перспективный эффект снижения sAPPe.

Болезнь Хантингтона (БХ) является изнуряющим, неизлечимым, преимущественно наследуемым нейродегенеративным заболеванием, характеризуемым психическим расстройством, нарушением двигательной функции и деменцией. Неправильное сворачивание и агрегация белка Htt, продукта гена хантингтина, приводит к патологии БХ (Shao and Diamond, 2007). Было разработано очень мало терапевтических средств на основе механизма действия для лечения БХ. Хотя научные исследования до сих пор проводят, существует множество данных, позволяющих предположить, что ингибирование ROCK может стать эффективным лечением для БХ. В мышиных моделях БХ ингибирование ROCK существенно снижало уровни растворимого Htt, обращало образование агрегатов, ретракцию нейритов и защищало от гибели нейрональных клеток (Deyts et al., 2009; Li et al., 2009). Аналогичные результаты были получены в исследованиях на Drosophila, в которых ингибирование ROCK регулировало агрегацию Htt (Shao et al., 2008a; Shao et al., 2008b). Путь сигнализации ROCK является перспективной терапевтической мишенью в случае БХ.

Сигнализация ROCK также была связана с болезнью Паркинсона и амиотрофическим боковым склерозом (АБС). См., например, Tonges, L. et al. (2012). Inhibition of rho kinase enhances survival of dopaminergic neurons and attenuates axonal loss in a mouse model of Parkinson's disease. Brain. 135(11):335570.

ROCK фосфорилируют множество последующих субстратов, включая легкую цепь миозина (MLC, в треонине 18 и серине 19) и фосфатазу легкой цепи миозина (MYPT1, в треонине 853), для запуска полимеризации глобулярного G-актина в филаментный F-актин и сборки аппарата сокращения актомиозина. Было признано, что этот путь может быть связан с патогенезом нескольких нарушений ЦНС, таких как повреждение спинного мозга, инсульт и БА. В ЦНС взрослых поврежденные аксоны плохо регенерируют из-за присутствия миелин-ассоциированных ингибиторов аксонального роста. Миелинассоциированные ингибиторы, такие как миелин-ассоциированный гликопротеин (MAG), Nogo, олигодендроцитно-миелиновый гликопротеин (OMgp) и отталкивающая направляющая молекула (RGM), ограничивают регенерацию аксонов в поврежденном головном мозге и спинном мозге. Обычный механизм различных миелин-ассоциированных ингибиторов состоит в том, что все они активируют Rho и ее последующие эффекторные ROCK-киназы для ингибирования роста нейритов.

Блокировка пути Rho/ROCK малой молекулой является необходимой стратегией при нарушениях центральной нервной системы (ЦНС). Однако гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), хотя и играет ключевую роль в гомеостазе головного мозга, также существенно препятствует проникновению большинства низкомолекулярных ингибиторов. С учетом растущего интереса к разработке селективных и эффективных ингибиторов для лечения заболеваний ЦНС существует насущная потребность в ингибиторах ROCK 1 и/или ROCK 2, в частности тех, которые пересекают гематоэнцефалический барьер.

Сущность изобретения

В одном аспекте в данном изобретении предложено соединение, имеющее формулу I

где

А представляет собой

- 2 046894

R¹ выбран из группы, состоящей из низшего алкила, замещенного низшего алкила, С3-С6 циклоалкила, замещенного С3-С6 циклоалкила, R¹⁰R¹¹N(CR¹2R¹³)c-, R¹⁰O(CR¹²R¹³)c-, W(CR¹²R¹³)d- и R¹⁰R¹¹NC(=O)-(CR¹²R¹³)_c-;

каждый R¹⁰ независимо выбран из Н, низшего алкила и С3-С6 циклоалкила; каждый R¹¹ независимо выбран из Н, низшего алкила и С3-С6 циклоалкила; каждый R¹² независимо выбран из Н и низшего алкила; каждый R¹³ независимо выбран из Н и низшего алкила; в дополнительном или альтернативном варианте R¹² и R¹³, присоединенные к одному атому углерода, могут вместе образовывать С3-С6 циклоалкильную группу; W представляет собой 3-7-членное гетероциклическое кольцо, имеющее от 1 до 3 кольцевых гетероатомов, или 5-6-членное гетероарильное кольцо, имеющее от 1 до 3 кольцевых гетероатомов; с равен от 2 до 4; d равен от 1 до 4;

R² выбран из группы, состоящей из арила, гетероарила и гетероциклила, где гетероарил и гетероциклил могут быть 5- или 6-членными моноциклическими или 9- или 10-членным бициклическими кольцами, имеющими от 1 до 3 кольцевых гетероатомов, и каждый из арила, гетероарила и гетероциклила могут быть необязательно замещены 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, нитро, циано, С₁-С₃ перфторалкила, С₁-С₃перфторалкокси, RR'N-, RR'NCO-, RCONR'-, RO2C-, арила-О- и гетероарила-О-;

R³ выбран из Н, низшего алкила, замещенного низшего алкила и RR'N-(C_2-4алкила)-;

R⁴ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, нитро, циано, С₁-С₃ перфторалкила, С₁-С₃ перфторалкокси, RR'N-, RR'NCO-, RCONR'-, RR'N-(C_2-4алкила)- и RR'N-(C_2-4алкила)-О-;

R⁵ выбран из Н, низшего алкила и С₃-С₆ циклоалкила;

в альтернативном варианте R³ и R⁵ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, образуют циклическую группу, имеющую от 5 до 7 кольцевых атомов, в том числе 2-3 кольцевых гетероатома, причем циклическая группа не замещена или замещена 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, амино, нитро, циано, С₁-С₃перфторалкила, С₁-С₃ перфторалкокси, карбоксила, арила и гетероарила;

а равен 0 или 1;

b равен от 0 до 2 и каждый R и R' независимо выбран из Н, низшего алкила и С₃-С₆ циклоалкила или, в альтернативном варианте, R и R' вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо;

где низший алкил представляет собой С_1-4алкил;

замещенный низший алкил представляет собой С_1-4алкил, имеющий от одного до трех заместителей, выбранных из группы, состоящей из галогена, гидрокси, C₁-C₄ алкокси, амино, нитро, циано, перфтор С₁-С₄ алкила, перфтор С₁-С₄ алкокси, RR'NCO- и карбоксила;

низший алкокси представляет собой -О-С_1-4алкил;

карбоксил представляет собой -СО₂Н;

замещенный С3-С6 циклоалкил представляет собой С3-С6 циклоалкил, имеющий от одного до трех заместителей, выбранных из группы, состоящей из галогена, гидрокси, С_1-4алкила, С1-С₄алкокси, амино, нитро, циано, перфтор C1-C4 алкила, перфтор С1-С₄-алкокси и карбоксила;

арил представляет собой фенил;

гетероарил, если не указано иное, представляет собой 5- или 6-членную ароматическую группу, содержащую от одного до четырех гетероатомов; и гетероатом представляет собой азот, кислород или серу;

или его фармацевтически приемлемая соль.

В предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения предложено соединение, которое имеет формулу II

R² R³ (II) или его фармацевтически приемлемая соль.

В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения предложено соединение, которое имеет формулу V

- 3 046894

где

R¹ выбран из группы, состоящей из низшего алкила и замещенного низшего алкила;

каждый R²¹ независимо выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, нитро, циано, C₁-C3 перфторалкила, C₁-C3 перфторалкокси, карбоксила, RR'N-, RR'NCO-, RCONH-, RCONR'-, RO2C-, арила-О- и гетероарила-О-;

каждый R и R' независимо выбран из Н, низшего алкила и С3-С6 циклоалкила или, в альтернативном варианте, R и R' вместе образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо и n равен от 0 до 3;

или его фармацевтически приемлемая соль.

В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения предложено соединение, которое имеет формулу VI

где

каждый R²² независимо выбран из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, нитро, циано, С₁-С₃ перфторалкила, С₁-С₃ перфторалкокси, карбоксила, RR'N-, RR'NCO-, RCONH-, RCONR'-, RO2C-, арила-О- и гетероарила-О-;

каждый R и R' независимо выбран из Н, низшего алкила и С₃-С₆ циклоалкила или, в альтернативном варианте, R и R' вместе образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо;

и n равен от 0 до 3;

или его фармацевтически приемлемая соль.

В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения предложено соединение, которое имеет формулу

где

R¹ выбран из группы, состоящей из низшего алкила и низшего алкила, замещенного -О-С_1-4алкил, перфтор С₁-С₄ алкокси, -C(=O)-NH₂, -C(=O)-NH(C_1-^kk3) или -С^О^Ы^^алкил)^

R²² выбран из галогена, низшего алкила, низшего алкокси и -С(=О)-NH(C_1-4алкил) и n равен 1 или 2;

или его фармацевтически приемлемая соль.

В предпочтительном варианте указанное выше соединение представляет собой соединение, в котором: R¹ представляет собой низший алкил; или его фармацевтически приемлемую соль.

В предпочтительном варианте указанное выше соединение представляет собой соединение, в котором

R⁵ представляет собой Н;

R²² выбран из галогена, низшего алкила и низшего алкокси и n равно 1;

или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом предпочтительном варианте реализации настоящего изобретения предложено соединение, которое представляет собой

- 4 046894

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид; (R)-N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид; (8)-М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид; N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(2-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(4-метоксифенил)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(п-толил)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(4-фторфенил)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(м-толил)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(3-фторфенил)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-хлорфенил)-2-(этиламино)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-фторфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-фторфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(п-толил)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(этиламино)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3 -(дифторметокси)фенил)-2-(метиламино)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(метиламино)этил)амино)ацетамид; N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(2-метилбензо[с1]тиазол-6-ил)ацетамид; N(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-(диметиламино)фенил)-2-(метиламино)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(2-метоксипирид ин-4-ил)-2-(метиламино)ацетамид; Метил 3 -(2-((4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1 -(метиламино)-2-оксоэтил)бензоат;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-(диметиламино)фенил)-2-(метиламино)ацетамид;

-(2-((4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1 -(метиламино)-2-оксоэтил)бензойная кислота; N(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метил-1Н-индазол-6-ил)-2-(метиламино)ацетамид; Метил-4(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензоат;

Т4-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(2-метил-1Н-бензо[(1]имидазол-6-ил)-2(метиламино)ацетамид;

М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((3-метоксипропил)амино)ацетамид; N(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-этоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((3 -(диметиламино)пропил)амино)-2-(3 метоксифенил)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)-2-оксоэтил)амино)-2-(3 метоксифенил)ацетамид; М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-изопропоксиэтил)амино)-2-(3метоксифенил)ацетамид;

Т4-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-амино-2-оксоэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3 -метоксифенил)-2-((3 -(метиламино)пропил)амино)ацетамид; М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(('1-метокси-2-метилпропан-2ил)амино)-2-3-метоксифенил)ацетамид;

- 5 046894

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(метиламино)-2оксоэтил)амино)ацетамид;

2-((( 1 Η-пиразол-4-ил) метил )ам hho)-N-(4-(1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3 метоксифенил)ацетамид;

N-(4-(l Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этил(2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)(метил)амино)-2-(3 метоксифенил)ацетамид;

Х-(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил) ацетамид;

М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)-Мметил ацетамид;

М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-морфолиноэтил)амино)ацетамид; N(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2метоксиэтил)(метил)амино)-2-(3 -метоксифенил)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3 -метоксифенил)-2-((2-(пирролидин-1 ил)этил)амино)ацетамид;

N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(( 1 -(метокс иметил)циклопропил)амино)-2-(3 метоксифенил)ацетамид;

18Г-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(2,2,2трифторэтокси)этил)амино)ацетамид;

N-(3 -фтор-4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3 метоксифенил)ацетамид;

N-(3 -метокс и-4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3 метоксифенил)ацетамид;

(К)-Т4-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид; (S)-N-(4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3 -метоксифенил)ацетамид; (8)-18Г-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)этил)амино)-2-(3метоксифенил)ацетамид;

(К)-М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)этил)амино)-2-(3метоксифенил)ацетамид;

(К)-Т\Г-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2(метиламино)этил)амино)ацетамид;

(8)-М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2метил амино)этил)амино)ацетамид;

(8)-М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

(К)-М-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

- 6 046894

N-(2-фтор-5 -метокси-4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3 -метоксифенил)-2(метиламино)ацетамид;

3-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)-М-метилбензамид;

4-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензойная кислота;

4-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)-М-метилбензамид; Ν(2-(3 -(диметиламино)пропокси)-5 -фтор-4-( 1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3 -метоксифенил)-2(метиламино)ацетамид;

Т\Г-(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2(метиламино)ацетамид;

(К)-М-(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)2-(метиламино)ацетамид;

(8)-М-(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)2-(метиламино)ацетамид;

или его фармацевтически приемлемая соль.

В ещё одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество любого указанного выше соединения и фармацевтически приемлемый носитель.

В ещё одном аспекте настоящее изобретение относится к применению любого указанного выше соединения или указанной выше фармацевтической композиции для лечения фиброзного нарушения у субъекта.

При этом фиброзное нарушение выбрано из группы, состоящей из фиброза легких, кистозного и идиопатического фиброза легких, вызванного радиоактивным облучением повреждения легких, фиброза печени, цирроза, миокардиального фиброза, артериального фиброза, эндомиокардиального фиброза, перенесенного инфаркта миокарда, артериальной ригидности, атеросклероза, рестеноза, артрофиброза, болезни Крона, миелофиброза, болезни Пейрони, нефрогенного системного фиброза, прогрессирующего массивного фиброза, забрюшинного фиброза, склеродермы/системного склероза, медиастинального фиброза, келоидных и гипертрофических рубцов, рубцевания глиальной ткани и почечного фиброза.

В предпочтительном применении легочный фиброз представляет собой идиопатический легочный фиброз.

В ещё одном аспекте настоящее изобретение относится к применению любого указанного выше соединения или указанной выше фармацевтической композиции для лечения нарушения центральной нервной системы у субъекта

При этом нарушение центральной нервной системы выбрано из группы, состоящей из болезни Хантингтона, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, амиотрофического бокового склероза (АБС), болезни Баттена, деменции, спинальной мышечной атрофии, заболевания двигательных нейронов, спиноцеребеллярной атаксии, острой или хронической боли, нейрональной дегенерации, повреждения спинного мозга, спазма сосудов головного мозга и множественного склероза.

В ещё одном аспекте настоящее изобретение относится к применению любого указанного выше соединения или указанной выше фармацевтической композиции для лечения глаукомы у субъекта.

В ещё одном аспекте настоящее изобретение относится к применению любого указанного выше соединения или указанной выше фармацевтической композиции для лечения воспаления у субъекта.

Краткое описание фигур

Фиг. 1а: Репрезентативные результаты анализа Z'-Lyte. Ингибиторы ROCK по данному изобретению демонстрируют всего лишь однозначную наномолярную эффективность в отношении обеих изоформ ROCK.

Фиг. 1b: ИФА-анализ в клетках A7R5. Клетки A7R5 обрабатывали 9-точечным 2-кратным серийным разведением соединений и определяли уровни ppMlc (T18/S19), чтобы рассчитать клеточные значения IC50 соединений. Репрезентативные соединения по изобретению давали IC50 в клетках до 200 нМ.

Фиг. 1с: Ингибиторы ROCK можно эффективно упорядочить с помощью клеточного анализа управляемого промотором АСТА2 репортерного гена люциферазы. Клетки NIH3T3, стабильно экспрессирующие управляемую промотором АСТА2 люциферазу, высевали в 96-луночные планшеты до конфлюэнтности и обрабатывали 9-точечным серийным разведением соединений в комбинации в TGF$$1 в течение 24 ч. Измеряли активность люциферазы и рассчитывали IC50 соединений. Репрезентативные соединения по изобретению демонстрировали IC50 до 200 нМ.

Фиг. 1d: Вестерн-блот клеточных лизатов SVEC4-10 для визуализации уровней ppMlc (T18/S19) и pMYPT (T853) после обработки соединением из примера 2 в течение 120 мин. Клетки SVEC4-10 обрабатывали соединением и визуализировали фосфорилированные белки методом вестерн-блоттинга. Репре

- 7 046894 зентативные соединения эффективно блокировали фосфорилирование мишеней ROCK MLC и MYPT1 при 110 нМ.

Фиг. 2а и b: Ингибиторы ROCK дозозависимым образом стимулируют рост нейритов в человеческих клетках-предшественницах олигодендроцитов/нейронов в культуре. Человеческие клеткипредшественницы олигодендроцитов/нейронов культивировали in vitro с ингибитором ROCK или без него в течение 3 суток.

Фиг. 2с и d: Ингибиторы ROCK повышают дифференцировку и созревание нейрональных клеток. Человеческие клетки-предшественницы олигодендроцитов/нейронов культивировали в течение 14 суток. Ингибиторы ROCK существенно облегчали экспрессию маркера зрелых нейрональных клеток бета-Ш тубулина и улучшали рост нейритов. Фиг. 2с. Репрезентативные изображения; Фиг. 2d. Количественное определение длины нейритов.

Фиг. 2е, f и g: Ингибиторы ROCK блокируют ингибирующее действие хондроитинсульфат протеогликана (ХСПГ) на рост нейритов. Человеческие клетки-предшественницы олигодендроцитов/нейронов культивировали на покрытых 0,3 мг/мл ХСПГ планшетах в течение 3 суток. Количественное определение длины нейритов проводили с помощью модуля программного обеспечения IncuCyte NeuroTrack. Статистический анализ для момента времени 72 ч проводили, используя дисперсионный анализ ANOVA. Фиг. 2е: Репрезентативные изображения; Фиг. 2f: Временная динамика длины нейритов; Фиг. 2g: Количественное определение длины нейритов через 72 ч после обработки.

Фиг. 3а, b, с, d и е: Ингибиторы ROCK защищали нейрональные клетки от индуцированной Ав 1-42 клеточной гибели. Человеческие клетки-предшественницы олигодендроцитов/нейронов предварительно инкубировали с ингибиторами ROCK в течение 30 минут перед воздействием 10,5 мкМ Ав 1-42. В культуральную среду добавляли реагент аннексин V красный от IncuCyte, чтобы определить клеточный апоптоз. Длину нейритов и общую положительную в отношении аннексина V площадь анализировали, используя программное обеспечение IncuCyte S3. Фиг. 3а: Репрезентативные изображения человеческих клеток-предшественниц олигодендроцитов/нейронов, обработанных Ав 1-42 в комбинации с соединениями или без них; Фиг. 3b: Временная динамика общей положительной в отношении аннексина V площади; Фиг. 3с: Временная динамика длины нейритов; Фиг. 3d: Зависимость от дозы общей положительной в отношении аннексина V площади; Фиг. 3е: Количественное определение зависимости от дозы длины нейритов.

Фиг. 4: Ингибитор ROCK снижал индуцированную TGFe1 фиброзную генную экспрессию в линии клеток мышиных фибробластов NIH3T3. Клетки NIH3T3 в течение 24 ч обрабатывали TGFe1 в присутствии или отсутствие ингибитора ROCK, а экспрессию мРНК количественно определяли с помощью кПЦР Taqman. Фиг. 4а: aSMA; фиг. 4b. CTGF, фиг. 4с. мРНК CCN1.

Фиг. 4d: Ингибитор ROCK ингибировал индуцированную TGFe1 секрецию CCN1. Фибробласты легких человека CCD18Lu обрабатывали ингибитором ROCK и стимулировали TGFe1 в течение 40 ч перед измерением уровня CCN1 методом ИФА.

Фиг. 5а: Ингибитор ROCK является активным в мышиной модели легочного фиброза. Репрезентативные изображения срезов легких, окрашенных трихромом по Массону для визуализации фиброза в легких мышей после 21-суточной обработки ингибитором ROCK в модели индуцированного блеомицином повреждения легких.

Фиг. 5b: Количественное определение положительной активности ингибитора ROCK в in vivo модели фиброза легких. Показатели фиброза по Ашкрофту, процентная доля положительной в отношении a-гладкомышечного актина (aSMA) площади и общее число лейкоцитов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа, полученной из легких мышей в модели индуцированного блеомицином фиброза легких, обработанных соединением из примера 2.

Фиг. 6а: Ингибитор ROCK является терапевтически активным в мышиной модели фиброза легких. Репрезентативные изображения срезов легких, окрашенных трихромом по Массону для визуализации фиброза в легких мышей после терапевтической обработки ингибитором ROCK в модели индуцированного блеомицином повреждения легких.

Фиг. 6b: Количественное определение снижения показателя фиброза в гистопатологическом анализе изображений, полученных для обработанных ингибитором ROCK и базовым раствором мышей, в модели индуцированного блеомицином повреждения легких.

Фиг. 7а: Ингибирование ROCK стабилизирует функцию эндотелиального барьера в модели индуцированной гистамином сосудистой проницаемости у мышей. Репрезентативные изображения пропотевания красителя голубого Эванса, индуцированного гистамином, в коже обработанных ингибитором ROCK и базовым раствором мышей по сравнению с контрольным соединением (сальбутамолом). Ингибитор ROCK индуцирует стабилизацию сосудистого барьера после введения одной дозы соединения за 1 ч до инъекции гистамина.

Фиг. 7b: Количественное определение снижения размера площади пятна и количества красителя голубого Эванса в коже обработанных ингибитором ROCK мышей после индукции капиллярной утечки инъекцией гистамина.

- 8 046894

Подробное описание изобретения

Ингибиторы ROCK

Ингибиторы ROCK представляют собой соединения, имеющие формулу I

где

А представляет собой

R¹ выбран из группы, состоящей из низшего алкила, замещенного низшего алкила, С3-С6 циклоалкила, замещенного С3-С6 циклоалкила, R¹⁰R¹¹N(CR¹²R¹³)c-, R¹⁰O(CR¹²R¹³)c-, W(CR¹²R¹³)d- и R¹⁰R¹¹NC(=O)-(CR¹²R¹³)_c-;

каждый R¹⁰ независимо выбран из Н, низшего алкила и С3-С6 циклоалкила;

каждый R¹¹ независимо выбран из Н, низшего алкила и С3-С6 циклоалкила;

каждый R¹² независимо выбран из Н и низшего алкила;

каждый R¹³ независимо выбран из Н и низшего алкила;

в дополнительном или альтернативном варианте R¹² и R¹³, присоединенные к одному атому углерода, могут вместе образовывать С3-С6 циклоалкильную группу;

W представляет собой 3-7-членное гетероциклическое кольцо, имеющее от 1 до 3 кольцевых гетероатомов, или 5-6-членное гетероарильное кольцо, имеющее от 1 до 3 кольцевых гетероатомов;

с равен от 2 до 4;

d равен от 1 до 4;

R⁴ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, нитро, циано, C₁-C₃ перфторалкила, C1-C3 перфторалкокси, RR'N-, RR'NCO-, RCONR'-, ИИ'\-(С_2-4а.п<и.1а)- и ИИ'\-(Т_2-4алки.1а)-(')-;

в альтернативном варианте R³ и R⁵ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, образуют циклическую группу, имеющую от 5 до 7 кольцевых атомов, в том числе 2-3 кольцевых гетероатома, причем циклическая группа не замещена или замещена 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, амино, нитро, циано, C₁-C₃перфторалкила, C1-C3 перфторалкокси, карбоксила, арила и гетероарила;

а равен 0 или 1;

b равен от 0 до 2 и каждый R и R' независимо выбран из Н, низшего алкила и С3-С6 циклоалкила или, в альтернативном варианте, R и R' вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-6-членное гетероцик лическое кольцо;

замещенный низший алкил представляет собой С_1-4алкил, имеющий от одного до трех заместителей, выбранных из группы, состоящей из галогена, гидрокси, С1-С4 алкокси, амино, нитро, циано, перфтор С1-С4 алкила, перфтор С1-С4 алкокси, RR'NCO- и карбоксила;

низший алкокси представляет собой -О-С_1-4алкил; карбоксил представляет собой -СО₂Н;

замещенный С3-С6 циклоалкил представляет собой С3-С6 циклоалкил, имеющий от одного до трех заместителей, выбранных из группы, состоящей из галогена, гидрокси, С_1-4алкила, C1-C4 алкокси, амино, нитро, циано, перфтор C1-C4 алкила, перфтор С1-С₄-алкокси и карбоксила;

арил представляет собой фенил;

гетероарил, если не указано иное, представляет собой 5- или 6-членную ароматическую группу, содержащую от одного до четырех гетероатомов; и гетероатом представляет собой азот, кислород или серу; или их фармацевтически приемлемые соли.

В контексте данного документа термин алкил относится к радикалу насыщенных алифатических

- 9 046894 групп, включая неразветвленные алкильные группы, разветвленные алкильные группы, циклоалкильные (алициклические) группы, алкилзамещенные циклоалкильные группы и циклоалкилзамещенные алкильные группы. В предпочтительных вариантах реализации неразветвленный или разветвленный алкил имеет 8 или менее атомов углерода в своем остове (например, С1-С8 в случае неразветвленной цепи, С3-С8 в случае разветвленной цепи) и, более предпочтительно, 6 или менее. Аналогично, предпочтительные циклоалкилы имеют 3-8 атомов углерода в своей кольцевой структуре и более предпочтительно имеют 3-6 атомов углерода кольцевой структуре.

Если число атомов углерода специально не указано, в контексте данного документа низший алкил означает алкильную группу по определению выше, но имеющую от одного до четырех атомов углерода и, более предпочтительно, от одного до трех атомов углерода. В предпочтительных вариантах реализации заместитель, обозначенный в данном документе как алкил, представляет собой низший алкил. Низшие алкильные группы включают метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, трет-бутил, циклопропил и циклобутил.

Термин циклоалкил относится к насыщенным карбоциклическим группам, имеющим 3-8 атомов углерода в кольце. Циклоалкильные группы включают циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил.

Термин замещенный алкил относится к алкильной группе по определению выше, имеющей от одного до трех заместителей. Заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкокси, амино, низшего алкиламино, нитро, циано, низшего перфторалкила, низшего перфторалкокси и карбоксила.

Замещенный низший алкил относится к низшей алкильной группе по определению выше, имеющей от одного до трех заместителей. Заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкокси, амино, нитро, циано, низшего перфторалкила, низшего перфторалкокси и карбоксила.

Термин замещенный циклоалкил, такой как замещенный С₃-С₆ циклоалкил, относится к циклоалкильной группе по определению выше, имеющей от одного до трех заместителей. Заместители выбраны из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, амино, нитро, циано, низшего перфторалкила, низшего перфторалкокси и карбоксила.

В контексте данного документа термин галоген или гало обозначает -F, -Cl, -Br или -I и предпочтительно F, Cl или Br.

В контексте данного документа термины алкоксил или алкокси относятся к алкильной группе по определению выше, которая присоединена посредством атома кислорода. Репрезентативные алкоксильные группы включают метокси, этокси, пропилокси, трет-бутокси и т.п. Термин низший алкокси относится к заместителю алкокси, в котором низший алкил связан посредством атома кислорода, где фрагмент низшего алкила соответствует определению выше.

Термины амин и амино относятся как к незамещеным, так и к замещенным аминам, например, фрагменту, который может быть представлен общей формулой:

где R и R', каждый, независимо выбраны из Н и низшего алкила.

В контексте данного документа термин арил включает 5- и 6-членные однокольцевые ароматические группы, которые могут содержать от нуля до четырех гетероатомов, например, бензен, пирен, пиррол, фуран, тиофен, имидазол, оксазол, тиазол, триазол, пиразол, пиридин, пиразин, пиридазин и пиримидин и т. п. Те арильные группы, которые содержат в кольцевой структуре гетероатомы, могут также называться арильными гетероциклами или гетероарильными группами. Ароматическое кольцо может быть замещено в одном или более положениях кольца заместителями, такими как описанные выше. Термин арил также включает полициклические кольцевые системы, имеющие два или более циклических колец, в которых два или более атомов углерода являются общими для двух соединенных колец (кольца являются конденсированными кольцами), причем по меньшей мере одно из колец является ароматическим.

В контексте данного документа термин аралкил относится к алкильной группе, замещенной арильной группой. Предпочтительно алкильная группа представляет собой низший алкил, описанный выше.

Термин гетероцикл или гетероциклил относится к неароматическим гетероциклам, имеющим 47 кольцевых атомов и содержащим 1-3 кольцевых гетероатома.

В контексте данного документа термин гетероатом означает атом любого элемента, отличного от углерода или водорода. Предпочтительными гетероатомами являются азот, кислород и сера. Наиболее предпочтительными являются азот и кислород.

В контексте данного документа предполагается, что определение каждого выражения, например, алкил, m, n, R¹, R² и т.д., если оно появляется более одного раза в любой структуре, является независимым от его определения в другом месте в такой же структуре.

Следует понимать, что замена или замещенный включает непрямую оговорку, что такая замена

- 10 046894 осуществлена в соответствии с допустимой валентностью замещаемого атома и заместителя и что замена приводит к получению стабильного соединения, например, которое не подвержено спонтанным трансформациям, например, за счет перестройки, циклизации, элиминации и т.д.

В контексте данного документа подразумевается, что термин замещенный включает все допустимые заместители органических соединений. В широком аспекте допустимые заместители включают ациклические и циклические, разветвленные и неразветвленные, карбоциклические и гетероциклические, ароматические и неароматические заместители органических соединений. Иллюстративные заместители включают, например, описанные выше в данном документе. Допустимые заместители могут быть представлены одним или более и могут быть одинаковыми или разными для соответствующих органических соединений. В целях этого изобретения гетероатомы, такие как азот, могут содержать водородные заместители и/или любые допустимые заместители органических соединений, описанные в данном документе, которые удовлетворяют валентности гетероатомов. Подразумевается, что это изобретение не ограничено каким-либо образом допустимыми заместителями органических соединений.

В контексте данного документа выражение защитная группа означает временные заместители, которые защищают потенциально реакционноспособную функциональную группу от нежелательных химических трансформаций. Примеры таких защитных групп включают сложные эфиры карбоновых кислот, силильные эфиры спиртов, а также ацетали и кетали альдегидов и кетонов соответственно. Существует обзор области химии защитных групп (Greene T.W.; Wuts P.G.M. Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd ed.; Wiley: New York, 1991).

Определенные соединения по данному изобретению могут существовать в конкретной геометрической или стереоизомерной формах. Данное изобретение полагает все такие соединения, включая цис- и транс-изомеры, R- и S-энантиомеры, диастереомеры, (О)-изомеры. (Ь)-изомеры. их рацемические смеси, а также другие их смеси, входящими в объем изобретения. В заместителе, таком как алкильная группа, могут присутствовать дополнительные симметрические атомы углерода. Все такие изомеры, а также их смеси, включены в данное изобретение. Данное изобретение также подразумевает замену изотопами атомов для соединений, например, замену дейтерием водорода и т.д.

Предложенные в настоящем изобретении соединения являются ингибиторами ROCK. ROCK существует в двух формах, ROCK1 (ROCKe; p160-ROCK) и ROCK2 (ROCKa). В некоторых вариантах реализации предложенные соединение селективно ингибирует ROCK1. В некоторых вариантах реализации предложенные соединение селективно ингибирует ROCK2. В некоторых вариантах реализации предложенное соединение является неселективным в отношении ингибирования ROCK1 и ROCK2. В контексте этого изобретения селективность означает, что ингибитор демонстрирует IC50, которая по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 10 раз или по меньшей мере в 25 раз ниже для одной киназы по сравнению с IC50 для другой киназы.

Способы определения ингибирования киназ известны в данной области техники. Например, киназную активность фермента и ингибирующую способность исследуемого соединения можно определить, измеряя фермент-специфическое фосфорилирование субстрата. Для этого доступны и могут быть использованы коммерческие анализы и наборы. Например, ингибирование киназ можно определять, используя анализ ΙΜΑΡβ (Molecular Devices). Этот аналитический способ включает применение флуоресцентно меченного пептидного субстрата. Фосфорилирование меченного пептида представляющей интерес киназой стимулирует связывание пептида с трехвалентной металлической наночастицей за счет специфического высокоаффинного взаимодействия между фосфо-группой и трехвалентным металлом. Близость к наночастице приводит к повышению флуоресцентной поляризации. Ингибирование киназы ингибитором киназы препятствует фосфорилированию субстрата и, таким образом, ограничивает связывание флуоресцентно-меченного субстрата с наночастицей. Такой анализ может быть совместимым с микролуночным аналитическим форматом, что позволяет проводить одновременное определение IC₅₀ множества соединений.

Способы лечения заболеваний

В одном аспекте данного изобретения предложено применение соединений для лечения пациента, страдающего от заболевания. Лечение включает введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по данному изобретению. В контексте данного документа выражение терапевтически эффективное количество означает количество соединения, материала или композиции, содержащей соединение по данному изобретению, которое является эффективным для оказания некоторого желаемого терапевтического эффекта по меньшей мере в субпопуляции клеток в организме животного при приемлемом соотношении польза/риск, применимо к любому медицинскому лечению, например, при приемлемых побочных эффектах, применимо к любому медицинскому лечению.

Нарушения ЦНС

Предложенные в настоящем изобретении соединения демонстрируют эффективное проникновение через гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) и распределение по тканям центральной нервной системы. Таким образом, соединения по изобретению применимы для лечения нарушений центральной нервной

- 11 046894 системы, а также нарушений, таких как определенные глазные нарушения, в случае которых полезна способность пересекать ГЭБ. Такие нарушения могут включать нейрональную дегенерацию или физическое повреждение нервной ткани, включая, без ограничений, болезнь Хантингтона, болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, амиотрофический боковой склероз (АБС), болезнь Баттена, деменцию, спинальную мышечную атрофию, заболевания двигательных нейронов, спиноцеребеллярную атаксию, острую или хроническую боль, деменцию, нейрональную дегенерацию, повреждение спинного мозга, спазм сосудов головного мозга или множественный склероз.

Глаукома

В варианте реализации настоящего изобретения предложенные соединение применяют для лечения глаукомы. Два наиболее распространенных варианта, первичная октрытоугольная глаукома и острая закрытоугольная глаукома, характеризуются высоким внутриглазным давлением. Пигментная глаукома и врожденная глаукома также характеризуются сниженным оттоком жидкости и высоким внутриглазным давлением (ВГД). Считается, что глаукома с нормальным давлением связана с другим механизмом, в частности, плохим притоком крови к зрительному нерву. Вторичная глаукома может быть результатом повреждения, инфекции, воспаления, опухоли или катаракты и также связана с длительным приемом стероидов, системной гипертензией, диабетической ретинопатией и окклюзией центральной вены сетчатки. При глаукомах, которые имеют неоваскулярный компонент, может быть польза от введения ингибитора ангиогенеза в дополнение к ингибитору ROCK.

Воспаление

В варианте реализации настоящего изобретения предложенные соединение применяют для лечения воспаления у субъекта, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества соединения формул I-Х. Воспаление включает, без ограничений, астму, сердечно-сосудистое воспаление, почечное воспаление, атеросклероз и артериосклероз и сепсис. Другие воспалительные патологические состояния, которые можно лечить способами согласно изобретению, включают фиброзные состояния (включая, например, идиопатический фиброз легких, НАСГ, склеродерму, системный склероз и цирроз).

Фармацевтические композиции

В одном аспекте в данном изобретении предложены фармацевтически композиции, которые содержат терапевтически эффективное количество одного или более предложенных соединений, приготовленных вместе с одним или более фармацевтическими эксципиентами. Как описано ниже, фармацевтические композиции по данному изобретению могут быть приготовлены, в частности, в твердой или жидкой форме, включая адаптированные для следующего: (1) перорального введения, например, жидкие лекарственные формы (водные или неводные растворы или суспензии), таблетки, например, предназначенные для буккального, подъязычного и системного всасывания, болюсы, порошки, гранулы, пасты для нанесения на язык; (2) парентерального введения, например, путем подкожной, внутримышечной, внутривенной или эпидуральной инъекции в виде, например, стерильного раствора или суспензии, или формы с замедленным высвобождением; (3) местного применения, например, в виде крема, мази или пластыря с контролируемым высвобождением или спрея, наносимого на кожу; (4) интравагинального или интраректального применения, например, в виде пессария, крема или пены; (5) подъязычного применения; (6) глазного применения; (7) трансдермального применения; или (8) назального применения.

Выражение фармацевтически приемлемый используется в данном документе для обозначения тех соединений, материалов, композиций и/или дозированных форм, которые с медицинской точки зрения подходят для применения в контакте с тканями человека и животных и характеризуются токсичностью, раздражением, аллергическими реакциями или другими проблемами или осложнениями, соответствующими приемлемому соотношению польза/риск.

В контексте данного документа выражение фармацевтически приемлемый носитель означает фармацевтически приемлемый материал, композицию или базовый раствор, такой как жидкий или твердый наполнитель, разбавитель, эксципиент, вспомогательное вещество при производстве (например, лубрикант, тальк на основе силиката магния, стеарат кальция или цинка или стеариновая кислота) или инкапсулирующий растворитель материал, участвующий в переносе или транспорте данного соединения из одного органа или части тела в другой орган или другую часть тела. Каждый носитель должен быть приемлемым в смысле совместимости с другими ингредиентами лекарственной формы и не приносить вреда пациенту. Некоторые примеры материалов, которые могут служить фармацевтически приемлемыми носителями, включают: (1) сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; (2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; (3) целлюлозу и ее производные, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, этилцеллюлоза и ацетатцеллюлоза; (4) порошковый трагакант; (5) солод; (6) желатин; (7) тальк; (8) эксципиенты, такие как кокосовое масло и воски для суппозиториев; (9) масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло, подсолнечное масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; (13) агар; (14) буферные агенты, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновую кислоту; (16) апирогенную воду; (17) изотонический солевой раствор; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) рН-забуференные растворы; (21) сложные полиэфиры, поликарбонаты и/или полиангидриды; и (22) дру

- 12 046894 гие нетоксичные совместимые вещества, применяемые в фармацевтических формах.

Как указано выше, некоторые варианты реализации представленных соединений могут содержать основную функциональную группу, такую как амино или алкиламино, и следовательно, способны образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически приемлемыми кислотами. В этом отношении термин фармацевтически приемлемые соли относится к относительно нетоксичным, неорганическим и органическим солям присоединения кислот соединений по данному изобретению. Эти соли можно готовить in situ в процессе производства базового раствора для введения или дозированной формы или проводя отдельно реакцию очищенного соединения по изобретению в его свободной основной форме с подходящей органической или неорганической кислотой и выделяя полученную таким образом соль во время последующей очистки. Репрезентативные соли включают бромистоводородные, хлористоводородные, сульфатные, бисульфатные, фосфатные, нитратные, ацетатные, валератные, олеатные, пальмитатные, стеаратные, лауратные, бензоатные, лактатные, фосфатные, тозилатные, цитратные, малеатные, фумаратные, сукцинатные, тартратные, нафтилатные, мезилатные, глюкогептонатные, лактобионатные и лаурилсульфонатные соли и т.п. (см., например, Berge et al. (1977) Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Sci. 66:1-19).

Фармацевтически приемлемые соли рассматриваемых соединений включают традиционные нетоксичные соли или четвертичные аммониевые соли соединений, например, из нетоксичных органических или неорганических кислот. Например, такие традиционные нетоксичные соли включают полученные из неорганических кислот, таких как хлористоводородная, бромистоводородная, серная, сульфаминовая, фосфорная, азотная и т.п.; и соли, полученные из органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, пальмитиновая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфаминовая, 2-ацетоксибензойная, фумаровая, толуолсульфоновая, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая, изотионовая и т.п.

В других случаях соединения по данному изобретению могут содержать одну или более кислотных функциональных групп и, следовательно, способны образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически приемлемыми основаниями. В этих случаях термин фармацевтически приемлемые соли относится к относительно нетоксичным, неорганическим и органическим солям присоединения оснований соединений по данному изобретению. Эти соли аналогично можно готовить in situ в процессе производства базового раствора для введения или дозированной формы или проводя отдельно реакцию очищенного соединения по изобретению в его свободной кислой форме с подходящим основанием, таким как гидроксид, карбонат или бикарбонат фармацевтически приемлемого катиона металла, с аммонием или с фармацевтически приемлемым органическим первичным, вторичным или третичным амином. Репрезентативные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают соли лития, натрия, калия, кальция, магния и алюминия и т.п. Репрезентативные органические амины, пригодные для образования солей присоединения оснований, включают этиламин, диэтиламин, этилендиамин, этаноламин, диэтаноламин, пиперазин и т.п. (см., например, Berge et al., выше).

Также в композициях могут присутствовать смачивающие агенты, эмульсификаторы и лубриканты, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также красители, разделительные агенты, агенты для покрытия, подсластители, ароматизаторы и отдушки, консерванты и антиоксиданты.

Примеры фармацевтически приемлемых антиоксидантов включают: (1) водорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, цистеингидрохлорид, бисульфат натрия, метабисульфит натрия, сульфит натрия и т.п.; (2) маслорастворимые антиоксиданты, такие как аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол (БГА), бутилированный гидрокситолуол (БГТ), лецитин, пропилгаллат, альфа-токоферол и т.п. и (3) металлохелаторы, такие как уксусная кислота, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК), сорбит, винная кислота, фосфорная кислота и т.п.

Лекарственные формы по данному изобретению включают подходящие для перорального, назального, местного (включая буккальное и подъязычное), ректального, вагинального и/или парентерального введения. Лекарственные формы могут быть удобным образом представлены в единичной дозированной форме и их можно готовить любыми способами, хорошо известными в области фармации. Количество активного ингредиента, которое можно комбинировать с материалом носителя для получения единичной дозированной формы, будет варьироваться в зависимости от хозяина, лечение которого проводят, конкретного режима введения. Количество активного ингредиента, которое можно комбинировать с материалом носителя для получения единичной дозированной формы, в общем случае будет тем количеством соединения, которое дает терапевтический эффект. В общем случае из ста процентов это количество будет находиться в диапазоне от около 0,1 до около 99% активного ингредиента, предпочтительно от около 5 до около 70%, наиболее предпочтительно от около 10 до около 30%.

В определенных вариантах реализации лекарственная форма по данному изобретению содержит эксципиент, выбранный из группы, состоящей из циклодекстринов, целлюлоз, липосом, образующих мицеллы агентов, например, желчных кислот, и полимерных носителей, например, сложных полиэфиров и полиангидридов; и соединение по данному изобретению. В определенных вариантах реализации вышеуказанная лекарственная форма делает соединение по данному изобретению перорально биодоступ

- 13 046894 ным.

Способы приготовления лекарственных форм или композиций включают этапы объединения соединения по данному изобретению с носителем и, необязательно, одним или более вспомогательными ингредиентами. В общем случае лекарственные формы готовят путем равномерного и аккуратного объединения соединения по данному изобретению с жидкими носителями или измельченными твердыми носителями, или и теми и другими, и затем, при необходимости, формования продукта.

Лекарственные формы по изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в форме капсул, крахмальных капсул, пилюль, таблеток, леденцов, порошков, гранул или в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, или в виде жидкой эмульсии типа масло в воде или вода в масле, или в виде эликсира или сиропа, или в виде пастилок (с использованием инертной основы, такой как желатин или глицерин, или сахарозы и аравийской камеди) и/или в виде ополаскивателей для рта и т.п., которые все содержат заданное количество соединения по данному изобретению в качестве активного ингредиента. Соединение по данному изобретению также можно вводить в виде болюса, электуария или пасты.

В твердых дозированных формах по изобретению для перорального введения (капсулах, таблетках, пилюлях, драже, порошках, гранулах, таблетках для рассасывания и т. п.) активный ингредиент смешан с одним или более фармацевтически приемлемыми эксципиентами, включая фармацевтически приемлемый носитель, такой как цитрат натрия или дикальцийфосфат, и/или любым из следующего: (1) наполнители или расширители, такие как крахмалы, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и/или кремниевая кислота; (2) связующие вещества, такие как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и/или аравийская камедь; (3) увлажнители, такие как глицерин; (4) разрыхляющие агенты, такие как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, определенные силикаты и карбонат натрия; (5) замедлители застывания раствора, такие как парафин; (6) ускорители всасывания, такие как четвертичные соединения аммония, и поверхностноактивные вещества, такие как полоксамер и лаурилсульфат натрия; (7) смачивающие агенты, такие как, например, цетиловый спирт, глицеринмоностеарат и неионные поверхностно-активные вещества; (8) абсорбенты, такие как каолиновая и бентонитовая глина; (9) лубриканты, такие как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия, стеарат цинка, стеарат натрия, стеариновая кислота и их смеси; (10) красители и (11) агенты для контролируемого высвобождения, такие как кросповидон или этилцеллюлоза. В случае капсул, таблеток и пилюль фармацевтические композиции могут также содержать буферные агенты. Твердые композиции аналогичного типа также можно применять в качестве наполнителей в желатиновых капсулах с мягкой и твердой оболочкой, используя такие эксципиенты, как лактоза или молочные сахара, а также высокомолекулярные полиэтиленгликоли и т.п.

Таблетку можно получать путем прессования или формования, необязательно, с одним или более вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки можно готовить, используя связующее вещество (например, желатин или гидроксипропилметилцеллюлозу), лубрикант, инертный разбавитель, консервант, разрыхлитель (например, натрия крахмалгликолят или сшитую карбоксиметилцеллюлозу натрия), поверхностно-активный или диспергирующий агент. Формованные таблетки можно получать путем формования в подходящем устройстве смеси порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем.

На таблетки и другие твердые дозированные формы фармацевтических композиций по данному изобретению, такие как драже, капсулы, пилюли и гранулы, необязательно, можно наносить бороздки или готовить их с покрытиями или оболочками, такими как кишечнорастворимые покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области приготовления фармацевтических лекарственных форм. Их также можно готовить так, чтобы обеспечить замедленное или контролируемое высвобождения активного ингредиента, используя, например, гидроксипропилметилцеллюлозу в разных пропорциях, чтобы обеспечить необходимый профиль высвобождения, другие полимерные матрицы, липосомы и/или микрокапсулы. Их можно готовить для быстрого высвобождения, например, лиофилизировать. Их можно стерилизовать, например, путем фильтрации через задерживающий бактерии фильтр или путем включения стерилизующих агентов, в форме стерильных твердых композиций, которые можно растворять в стерильной воде или какой-либо другой стерильной среде для инъекций непосредственно перед применением. Эти композиции также могут необязательно содержать замутнители и могут иметь такой состав, что они высвобождают только активный (е) ингредиент(ы) или предпочтительно в определенной части желудочно-кишечного тракта, необязательно замедленным образом. Примеры капсулирующих композиций, которые можно использовать, включают полимерные вещества и воски. Активный ингредиент также может присутствовать в микроинкапсулированной форме, в случае необходимости, с одним или более из вышеописанных эксципиентов.

Жидкие дозированные формы для перорального введения соединений по изобретению включают фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. Кроме активного ингредиента, жидкие дозированные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной области техники, такие как, например, вода и другие растворители, со

- 14 046894 любилизирующие агенты и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное, масло зародышей пшеницы, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот и сорбитана и их смеси.

Помимо разбавителей пероральные композиции могут также содержать дополнительные эксципиенты, такие как смачивающие агенты, эмульсифицирующие и суспендирующие агенты, подсластители, ароматизаторы, красители, отдушки и консерванты.

Суспензии, помимо активных соединений, могут содержать суспендирующие агенты, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные эфиры сорбитана, микрокристаллическую целлюлозу, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант и их смеси.

Лекарственные формы фармацевтических композиций по изобретению для ректального или вагинального введения могут быть представлены в виде суппозитория, который можно готовить, смешивая одно или более соединений по изобретению с одним или более подходящими нераздражающими эксципиентами или носителями, содержащими, например, кокосовое масло, полиэтиленгликоль, воск для суппозиториев или салицилат, и который является твердым при комнатной температуре, но жидким при температуре тела и, следовательно, тает в ректальной или вагинальной полости и высвобождает активное соединение.

Лекарственные формы по данному изобретению, которые подходят для вагинального введения, также включают пессарии, тампоны, кремы, гели, пасты, пены или спреи, содержащие такие носители, которые являются подходящими, как известно в данной области техники.

Дозированные формы для местного или трансдермального применения соединения по этому изобретению включают порошки, спреи, мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, растворы, пластыри и ингаляторы. Активное соединение можно смешивать в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и с любыми консервантами, буферами или пропеллентами, которые могут быть необходимы.

Мази, пасты, кремы и гели могут содержать, помимо активного соединения по изобретению, эксципиенты, такие как животные и растительные жиры, масла, воски, парафины, крахмал, трагакант, производные целлюлозы, полиэтиленгликоли, силиконы, бентониты, кремниевая кислота, тальк и оксид цинка, или их смеси.

Порошки и спреи могут содержать, помимо соединения по этому изобретению, эксципиенты, такие как лактоза, тальк, кремниевая кислота, гидроксид алюминия, силикаты кальция и полиамидный порошок, или смеси этих веществ. Спреи могут дополнительно содержать традиционные пропелленты, такие как хлорфторуглеводороды и летучие незамещенные углеводороды, такие как бутан и пропан.

Трансдермальные пластыри имеют дополнительное преимущество обеспечения контролируемой доставки соединения по данному изобретению в организм. Такие дозированные формы можно получать путем растворения или диспергирования соединения в надлежащей среде. Также можно использовать усилители всасывания для повышения потока соединения через кожу. Скорость такого потока можно контролировать, устанавливая контролирующую скорость мембрану или диспергируя соединение в полимерной матрице или геле.

Офтальмологические лекарственные формы, глазные мази, порошки, растворы и т.п. также подразумеваются как входящие в объем этого изобретения.

Фармацевтические композиции по этому изобретению, подходящие для парентерального введения, содержат одно или более соединений по изобретению в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми стерильными изотоническими водными или неводными растворами, дисперсиями, суспензиями или эмульсиями, или стерильными порошками, которые можно восстанавливать в виде стерильных растворов или дисперсий для инъекции непосредственно перед применением, которые могут содержать сахара, спирты, антиоксиданты, буферы, бактериостатические средства, растворенные вещества, которые придают лекарственной форме изотоничность с кровью предполагаемого реципиента, или суспендирующие или загущающие агенты.

Примеры подходящих водных и неводных носителей, которые можно применять в фармацевтических композициях по изобретению, включают воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т.п.) и их подходящие смеси, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъекционные органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, используя материалы для покрытия, такие как лецитин, поддерживая необходимый размер частиц в случае дисперсий и используя поверхностно-активные вещества.

Эти композиции также могут содержать дополнительные эксципиенты, такие как консерванты, смачивающие агенты, эмульсифицирующие агенты и диспергирующие агенты. Предотвращение воздействия микроорганизмов на рассматриваемые соединения можно гарантировать включением различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабена, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты и т.п. Может возникать необходимость включения в композиции изотонических агентов, таких как сахара, хлорид натрия и т.п. Кроме того, продленное всасывание инъекционной фармацевтиче

- 15 046894 ской формы можно обеспечивать путем включения агентов, которые замедляют всасывание, таких как моностеарат алюминия и желатин.

В некоторых случаях, чтобы продлить эффект лекарственного препарата, необходимо замедлить всасывание лекарственного препарата после подкожной или внутримышечной инъекции. Это можно осуществить, используя жидкую суспензию кристаллического или аморфного материала, имеющего плохую растворимость в воде. Следовательно, скорость всасывания лекарственного препарата зависит от скорости растворения, которая, в свою очередь, может зависеть от размера кристаллов и кристаллической формы. В альтернативном варианте замедленное всасывание парентерально вводимого лекарственного препарата обеспечивают путем растворения или суспендирования лекарственного препарата в масляном носителе.

Инъекционные депо-формы получают путем формования микрокапсульных матриц рассматриваемых соединений в биоразлагаемых полимерах, таких как полилактид-полигликолид. В зависимости от соотношения лекарственного препарата к полимеру и природы конкретного применяемого полимера можно контролировать скорость высвобождения лекарственного препарата. Примеры других биоразлагаемых полимеров включают сложные поли(ортоэфиры) и поли(ангидриды). Инъекционные депо-формы также готовят путем заключения лекарственного препарата в липосомах или микроэмульсиях, которые являются совместимыми с тканями организма.

Когда соединения по данному изобретению вводят в виде фармацевтических средств людям и животным, их можно использовать сами по себе или в виде фармацевтической композиции, содержащей, например, от 0,1 до 99% (более предпочтительно от 10 до 30%) активного ингредиента в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем.

Пути введения и дозы

Препараты по данному изобретению можно применять перорально, парентерально, местно или ректально. Конечно, их применяют в формах, подходящих для каждого пути введения. Например, их вводят в форме таблеток или капсул, путем инъекции, ингаляции, в форме глазного лосьона, мази, суппозитория и т.д., введения путем инъекции, инфузии или ингаляции; местного введения посредством лосьона или мази; и ректального введения посредством суппозиториев. Предпочтительным является пероральное введение.

В контексте данного документа выражения парентеральное введение и вводимый парентерально означают режимы введения, отличные от энтерального и местного введения, обычно посредством инъекции, и включают, без ограничений, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, интракапсулярную, интраорбитальную, внутрисердечную, интрадермальную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, субкутикулярную, внутрисуставную, субкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную и внутригрудинную инъекцию и инфузию.

В контексте данного документа выражения системное введение, вводимый системно, периферическое введение и вводимый периферически означают введение соединения, лекарственного препарата или другого материала иначе, чем непосредственно в центральную нервную систему, так, чтобы они попадали в систему пациента и, таким образом, становились объектом метаболизма и подобных процессов, например, как в случае подкожного введения.

Эти соединения можно вводить людям и другим животным для терапии любым подходящим путем введения, включая, пероральный, назальный, например, с помощью спрея, ректальный, интравагинальный, парентеральный, интрацистернальный и местный, например, с помощью порошков, мазей или капель, в том числе буккальный и подъязычный.

Вне зависимости от выбранного пути введения соединения по данному изобретению, которые можно использовать в подходящей гидратированной форме, и/или фармацевтические композиции по данному изобретению готовят в виде фармацевтически приемлемых дозированных форм традиционными способами, известными специалистам в данной области техники.

Фактические уровни дозировок активных ингредиентов в фармацевтических композициях по этому изобретению можно варьировать так, чтобы получить количество активного ингредиента, которое является эффективным для достижения необходимого терапевтического ответа для конкретных пациента, композиции и режима введения, без токсичности для пациента.

Выбранный уровень дозировки будет зависеть от ряда факторов, включая активность конкретного применяемого соединения по данному изобретению или его сложного эфира, соли или амида, путь введения, время введения, скорость выведения или метаболизма конкретного применяемого соединения, скорость и степень всасывания, длительность лечения, другие лекарственные препараты, соединения и/или материалы, применяемые в комбинации с конкретным применяемым соединением, возраст, пол, массу, патологическое состояние, общее состояние здоровья и анамнез пациента, лечение которого проводят, и подобные факторы, хорошо известные в области медицины.

Врач или ветеринар, имеющий соответствующую квалификацию в данной области техники, может легко определить и прописать необходимое эффективное количество фармацевтической композиции. Например, врач или ветеринар может начать с доз соединений по изобретению, используемых в фармацевтической композиции, на уровнях ниже необходимого, чтобы получить желаемый терапевтический

- 16 046894 эффект, и постепенно повышать дозировку до достижения желаемого эффекта.

В общем случае подходящая суточная доза соединения по изобретению будет таким количеством соединения, которое является самой низкой дозой, эффективной для оказания терапевтического эффекта. Такая эффективная доза в общем случае будет зависеть от факторов, описанных выше. В общем случае пероральные, внутривенные, интрацеребровентрикулярные и подкожные дозы соединений по этому изобретению для пациента, в случае применения для указанного анальгетического эффекта, будут находиться в диапазоне от около 0,0001 до около 100 мг на килограмм массы тела в сутки.

В определенных вариантах реализации дозу соединения или композиции вводят субъекту каждые сутки, через сутки, через двое суток, через трое суток, один раз в неделю, дважды в неделю, трижды в неделю или один раз каждые две недели. При необходимости эффективную суточную дозу активного соединения можно вводить в виде двух, трех, четырех, пяти, шести или более частей дозы, вводимых отдельно через соответствующие интервалы в течение суток, необязательно, в единичных дозированных формах. В некоторых вариантах реализации дозу(ы) соединения или композиции вводят в течение 2 суток, 3 суток, 5 суток, 7 суток, 14 суток или 21 суток. В определенных вариантах реализации дозу соединения или композиции вводят в течение 1 месяца, 1,5 месяца, 2 месяцев, 2,5 месяца, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев, 6 месяцев или более.

Вышеописанные схемы введения приведены исключительно в иллюстративных целях и не должны считаться ограничивающими. Специалисту в данной области техники понятно, что все дозы входят в объем данного изобретения.

Пациент, получающий такое лечение, представляет собой любое животное, нуждающееся в нем, включая приматов, в частности, людей, и других млекопитающих, таких как лошади, крупный рогатый скот, свиньи и овцы; а также домашняя птица и домашние животные в целом.

Соединения для применения в способах по данному изобретению можно вводить сами по себе или в виде смесей с фармацевтически приемлемыми носителями, и также можно вводить в сочетании с противомикробными агентами, такими как пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды и гликопептиды. Таким образом, комбинированная терапия включает последовательное, одновременное и отдельное введение активного соединения таким образом, чтобы терапевтический эффект первого вводимого компонента полностью не исчезал во время введения последующего.

Добавление активного соединения по изобретению в корм для животных предпочтительно осуществляют путем приготовления соответствующей предварительной кормовой смеси, содержащей активное соединение в эффективном количестве, и включения предварительной кормовой смеси в полный рацион.

В альтернативном варианте в корм можно подмешивать промежуточный концентрат или кормовую добавку, содержащие активный ингредиент. Способ, которым можно готовить и применять такие предварительные кормовые смеси и полные рационы, описан в книгах (таких как Applied Animal Nutrition, W.H. Freedman and CO., San Francisco, U.S.A., 1969 или Livestock Feeds and Feeding О and В books, Corvallis, Ore., U.S.A., 1977).

Можно применять технологию микроэмульгации для улучшения биодоступности липофильных (нерастворимых в воде) фармацевтических агентов. Примеры включают Trimetrine (Dordunoo, S. K., et al., Drug Development and Industrial Pharmacy, 17(12), 1685-1713, 1991) и REV 5901 (Sheen, P. C, et al., J Pharm Sci 80(7), 712-714, 1991). Помимо прочего микроэмульгация обеспечивает повышение биодоступности за счет преимущественного всасывания в лимфатической системе вместо системы кровообращения, что позволяет миновать печень и предотвращает разложение соединений в гепатобилиарной системе циркуляции.

Контролируемое высвобождение

Характеристики высвобождения лекарственной формы по данному изобретению зависят от инкапсулирующего материала, концентрации инкапсулированного лекарственного препарата и присутствия веществ, модифицирующих высвобождение. Высвобождение можно сделать зависимым от рН, например, используя чувствительное к рН покрытие, которое обеспечивает высвобождение только при низком рН, таком как в желудке, или более высоком рН, таком как в кишечнике. Можно использовать кишечнорастворимое покрытие, чтобы предотвратить высвобождение ранее, чем после прохождения через желудок. Несколько типов покрытия или смеси цианамида, инкапсулированного в разных материалах, можно использовать для обеспечения начального высвобождения в желудке с последующим высвобождением в кишечнике. Высвобождение также можно регулировать путем включения солей или порообразующих агентов, которые могут повышать поглощение воды или высвобождение лекарственного препарата посредством диффузии из капсулы. Также можно использовать в эксципиенты, которые модифицируют растворимость лекарственного препарата, чтобы контролировать скорость высвобождения. Также можно включать агенты, которые усиливают распад матрицы или высвобождение из матрицы. Их можно добавлять к лекарственному препарату, добавлять в виде отдельной фазы (т.е. в виде частиц) или совместно растворять в полимерной фазе в зависимости от соединения. Некоторые типы усилителей распада включают неорганические соли, такие как сульфат аммония и хлорид аммония, органические кислоты, такие как лимонная кислота, бензойная кислота и аскорбиновая кислота, неорганические основания, такие как карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цинка и гидроксид цинка, и органические основания, такие

- 17 046894 как протаминсульфат, спермин, холин, этаноламин, диэтаноламин и триэтаноламин, а также поверхностно-активные вещества, такие как Твин® и Плюроник®. Порообразующие агенты, которые придают матрицам микроструктуру (т.е. водорастворимые соединения, такие как неорганические соли и сахара) добавляют в виде частиц. Их диапазон должен составлять от одного до тридцати процентов (масс/масс. полимера).

Поглощение также можно регулировать, изменяя время нахождения частиц в кишечнике. Это можно обеспечивать, например, путем покрытия частиц мукоадгезивным полимером или выбора его в качестве инкапсулирующего материала. Примеры включают большинство полимеров со свободными карбоксильными группами, такие как хитозан, целлюлозы и, в особенности, полиакрилаты (в контексте данного документа полиакрилаты относятся к полимерам, содержащим акрилатные группы и модифицированные акрилатные группы, таким как цианоакрилаты и метакрилаты).

Следует понимать и ожидать, что специалист в данной области техники может осуществлять вариации принципов описанного в данном документе изобретения, и подразумевается, что такие модификации включены в объем данного изобретения. Следующие примеры дополнительно иллюстрируют данное изобретение, но их не следует воспринимать, как ограничивающие каким-либо образом объем данного изобретения. Все ссылки, цитируемые в данном документе, в полном объеме включены посредством ссылки.

Примеры

Пример 1.

Все растворители и реагенты получали на коммерческой основе и использовали в том виде, в котором они были получены. Спектры 1Н ЯМР записывали на приборе Bruker (300 МГц или 400 МГц) в указанных дейтерированных растворителях. Значения химического сдвига приведены в м. д., а константы взаимодействия приведены в герцах. Все конечные соединения очищали методом флэш-хроматографии, используя силикагель с номером сита 220-400, или обращенно-фазовой ВЭЖХ с CHsCN/водой в качестве растворителей. Тонкослойную хроматографию проводили на силикагелевых планшетах 60 F-254 (толщиной 0,25 мм). Визуализацию осуществляли с помощью УФ-света и/или 10% фосфорномолибденовой кислоты в этаноле. Номинальные (низкого разрешения) масс-спектры снимали на масс-спектрометре Waters LCT или Applied Biosystems API 3000. Масс-спектры высокого разрешения (МСВР) снимали на масс-спектрометре Waters LCT или Agilent TOF. Все остальные ЖХ-МС эксперименты проводили на ВЭЖХ-системе Agilent 1100, сопряженной с одноквадрупольным масс-спектрометром Agilent. Чистоту соединения определяли методом ЖХ-МС с длинами волн 230 и 254 нм. Все конечные соединения, приведенные в данном документе, имеют чистоту >95%.

Общая процедура А.

ЭДКИ-сопряжение: соединение общей структуры 1 (1 экв.), ЭДКИ (1 экв.), HOBt (0,2 экв.) и ДИЭА (2 экв.) растворяли в ДМФ, перемешиваемом при 25°С, в течение 5 мин. Затем к смеси добавляли амин (1 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 16 ч. Смесь вливали в воду и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Этот остаток очищали методом колоночной хроматографии с получением соединения общей структуры 2.

HATU-сопряжение: соединение общей структуры 1 (1 экв.), HATU (1,25 экв.) и ДИПЭА (1,5 экв.) растворяли в ДМФ, перемешиваемом при 23°С, в течение 15 мин. В реакционную смесь вносили 1Hиндазол-5-амин (1 экв.) и продолжали перемешивать раствор при 23°С еще в течение 16 ч. Реакционную смесь разводили водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного материала, который очищали на силикагеле с получением необходимого соединения общей структуры 2.

Вос-удаление защиты: соединение общей структуры 2 растворяли в ДХМ и вносили в раствор 4 Н HCl в диоксане. Реакционную смесь перемешивали при 23 °С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенной реакционной смеси, которую очищали методом обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с получением необходимого соединения общей структуры 3.

Удаление бензиловой группы: соединение общей структуры 2 (1 экв.) и конц. HCl (1,2 экв.) растворяли в МеОН и добавляли 10% сухой Pd/C. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере Н₂ (1 атм.) при 50°С в течение 5 ч. Реакционную смесь фильтровали, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очищали методом обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с получением необходимого соединения общей структуры 3.

Общая процедура В.

- 18 046894

Соединение общей структуры 4 (1 экв.) растворяли в CCl₄ и при комнатной температуре добавляли АИБН (0,1 экв.), а после него - NBS (1,2 экв.). Температуру реакции поднимали до 60°С и продолжали перемешивание в течение 16 ч. Реакционную смесь отфильтровывали и удаляли растворитель при пониженном давлении. Неочищенный материал 5 использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.

Соединение общей структуры 5 (1 экв.) и алкиламин (2 экв.) в ТГФ перемешивали при 70°С в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали материал методом хроматографии на силикагеле с получением соединения общей структуры 6.

NaOH (2 экв.) вносили в реакционный сосуд, содержащий соединение общей структуры 6 (1 экв.), растворенное в смеси МеОН/Н₂О. Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 16 часов. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Неочищенный остаток растворяли в воде (10 мл) и аккуратно нейтрализовали 6 Н HCl до рН = 8. Суспензию фильтровали, а твердые вещества собирали и сушили с получением соединения общей структуры 7.

Соединение общей структуры 7 (1 экв.), HATU (1,25 экв.) и ДИПЭА (2 экв.) растворяли в ДМФ и перемешивали при 20°С в течение 15 мин. В реакционную смесь вносили Ш-индазол-5-амин (1 экв.) и перемешивали при 20°С в течение 15,8 ч. Реакционную смесь разводили водой и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором (15 мл), сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенную реакционную смесь очищали методом обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с получением соединения общей структуры 8.

Пример 2. №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общему протоколу А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (77%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,09 (шир. с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,62 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,27 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,08-7,04 (м, 2Н), 6,86 (дд, J=8,0, 2,4 Гц, 1H), 4,23 (с, 1H), 3,76 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н). МС (ЭР+) m/e 337,0 (М+Н)⁺.

Пример 3. (R)-N-(4-( 1 H-пирαзол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общему протоколу А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (77%). Энантиомеры разделяли методом СФХ (колонка Chiralpak AD-H). Подвижная фаза: 55% EtOH с 0,1% NH4OH в СО₂, скорость потока 70 г/мин. ¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ 10,09 (шир. с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,62 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,27 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,08-7,04 (м, 2Н), 6,86 (дд, J=8,0, 2,4 Гц, 1H), 4,23 (с, 1H), 3,76 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н). МС (ЭР+) m/е 337,0 (М+Н)⁺. [α]ρ = +102,3 (с=0,5, СН3ОН, 25°С).

Пример 4. ^)-М-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общему протоколу А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (77%). Энантиомеры разделяли методом СФХ

- 19 046894 (колонка Chiralpak AD-H). Подвижная фаза: 55% EtOH с 0,1% NH4OH в СО2, скорость потока 70 г/мин. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,09 (шир. с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,62 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,27 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,08-7,04 (м, 2Н), 6,86 (дд, J=8,0, 2,4 Гц, 1H), 4,23 (с, 1H), 3,76 (с, 3Н), 2,30 (с, 3Н). МС (ЭР+) m/е 337,0 (М+Н)⁺. [a]D = -97,2 (с=0,5, СН3ОН, 25°С).

Пример 5. 2-(4-Хлорфенил)-2-(метиламино)-№(4-(пиридин-4-ил)фенил)ацетамид

L ij ⁰

X

Реакцию проводили, следуя общему протоколу В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением 2-(4-хлорфенил)-2-(метиламино)-^(4-(пиридин-4ил)фенил)ацетамида в виде желтого твердого вещества (24%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ 11,06 (с, 1H), 9,62 (шир. с, 2Н), 8,78 (д, J=6,4 Гц, 2Н), 8,02 (д, J=7,2 Гц, 2Н), 7,96 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,77 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,62 (с, 4Н), 5,16 (с, 1H), 2,55 (с, 3Н). МС(ЭР+) m/е 352,0 (М+Н)⁺.

Пример 6. 2-(4-Метоксифенил)-2-(метиламино)-^(4-(пиридин-4-ил)фенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общему протоколу В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением 2-(4-метоксифенил)-2-(метиламино)-^(4-(пиридин-4ил)фенил)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (16%). ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ 10,93 (с, 1H), 9,66-9,27 (м, 2Н), 8,77 (д, J=6,4 Гц, 2Н), 8,02 (д, J=6,4 Гц, 2Н), 7,96 (д, J=8,7 Гц, 2Н), 7,78 (д,

J=8,7 Гц, 2Н), 7,52 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,08 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 5,03 (с, 1H), 3,79 (с, 3Н), 2,67 (с, 3Н). МС (ЭР+) m/е 348,0 (М+Н)⁺.

Пример 7. 2-(Метиламино)-№(4-(пиридин-4-ил)фенил)-2-(п-толил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общему протоколу В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением 2-(метиламино)-№(4-(пиридин-4-ил)фенил)-2-(птолил)ацетамида в виде белого твердого вещества (28%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ 10,25 (шир. с, 1H), 8,59 (дд, J=4,4, 1,6 Гц, 2Н), 8,32 (с, 1H), 7,81-7,76 (м, 4Н), 7,68 (дд, J=4,4, 1,6 Гц, 2Н), 7,37 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,16 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 4,21 (с, 1H), 2,29 (с, 3Н), 2,28 (с, 3Н). МС (ЭР+) m/е 332,1 (М+Н)⁺.

Пример 8. N-H-(J11-11иразол-4-ил)фе11ил)-2-(2-\1етоксифе11ил)-2-(>1ети.ла\1и11о)а11ета\1ид

Реакцию проводили, следуя общему протоколу В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(2-метоксифенил)-2(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (32%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ 9,98 (шир. с, 1H), 8,21 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,64 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,54 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,38 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,30 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,03 (д, J=8,4 Гц, 1H), 6,96 (т, J=7,2 Гц, 1H), 4,58 (с, 1H), 3,82 (с, 3Н), 2,33 (с, 3Н). МС (ЭР+) m/е 337,1 (м+Н)⁺.

Пример 9. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

- 20 046894

Реакцию проводили, следуя общему протоколу В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением N-(4-(111-11иразод-4-ид)фе11ил)-2-(4-мето1<сифе1ни1)-2(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (32%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,60 (с, 1H), 9,46-9,30 (м, 2Н), 8,01 (с, 2Н), 7,59-7,50 (м, 6Н), 7,07 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 4,95-4,94 (м, 1H), 3,79 (с, 3Н), 2,54 (с, 3Н). МС (ЭР+) m/е 337,1 (М+Н)⁺.

Пример 10. N-(4-(1 H-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(4-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением N-(4-(111-11иразод-4-ил)фе11ил)-2-(этилами11о)-2-(4метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (16%). 1H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,55 (с, 1H), 7,93 (с, 2Н), 7,59-7,51 (м, 6Н), 7,04 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 4,77 (с, 1H), 3,83 (с, 3Н), 2,98-2,83 (м, 2Н), 1,30 (т, J=7,2 Гц, 3Н). МС (ЭР+) m/е 351,1 (М+Н)⁺.

Пример 11. N-(4-(111-11иразоя-4-ил)фе11ил)-2-(этилами11о)-2-(11-толил)а11етамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(птолил)ацетамида в виде белого твердого вещества (8%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,19 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,59 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,38 (д, J=7,6 Гц, 2Н), 7,17 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 4,44 (с, 1H), 2,62-2,54 (м, 2Н), 2,28 (с, 3H), 1,09 (т, J=7,2 Гц, 3H). МС (ЭР+) m/e 335,1 (М+Н)⁺.

Пример 12. N-(4-(1 H-Пирαзол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(4-фторфенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращенно фазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(4фторфенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (20%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,76 (с, 1H), 9,53-9,47 (м, 2Н), 8,01 (с, 2Н), 7,69-7,60 (м, 2Н), 7,59-7,53 (м, 4Н), 7,37 (дд, J=8,8, 8,8 Гц, 2Н), 5,14 (с, 11), 2,96-2,83 (м, 2Н), 1,22 (т, J=7,2 Гц, 3H). МС (ЭР+) m/e 339,0 (М+Н)⁺.

Пример 13. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(3метоксифенил)ацетамида в виде розового твердого вещества (20%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,09 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,61 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,26 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,08

- 21 046894

7,04 (м, 2Н), 6,86-6,84 (м, 1Н), 4,33 (с, 1H), 3,76 (с, 3H), 2,56-2,53 (м, 2Н), 1,08 (т, J=7,2 Гц, 3H). МС (ЭР+) m/e 351,1 (М+Н)⁺.

Пример 14. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(м-толил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(мтолил)ацетамида в виде белого твердого вещества (14%). ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,05 (с, 1H),

8,20 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,63-7,61 (м, 2Н), 7,54-7,52 (м, 2Н), 7,29-7,09 (м, 3H), 7,10 (д, J=6,8 Гц, 1H), 4,18 (с, 1H), 2,31 (с, 3H), 2,28 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 321,1 (М+Н)⁺.

Пример 15. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(3-фторфенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращенно фазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(3фторфенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (20%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,14 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 8,00 (с, 2Н), 7,61-7,59 (м, 2Н), 7,55-7,53 (м, 2Н), 7,43-7,31 (м, 3H), 7,14-7,09 (м, 1H), 4,40 (с, 1H), 2,56-2,53 (м, 2Н), 1,07 (т, J=7,2 Гц, 3H). МС (ЭР+) m/e 339,1 (М+Н)⁺.

Пример 16. №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-хлорфенил)-2-(этиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-хлорфенил)-2(этиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (6%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,14 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 8,00 (с, 2Н), 7,62-7,53 (м, 5Н), 7,45-7,34 (м, 3H), 4,39 (с, 1H), 2,53 (м, 2Н), 1,07 (т, J=7,2 Гц, 3H). МС (ЭР+) m/e 355,1 (М+Н)⁺.

Пример 17. №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (8%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,11 (с, 1H), 8,21 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,62-7,60 (м, 2Н), 7,54-7,49 (м, 4Н), 7,43-7,41 (м, 2Н), 4,25 (с, 1H), 2,28 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 341,0 (М+Н)⁺.

Пример 18. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-фторфенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-фторфенил)-2

- 22 046894 (метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (23%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСОМ) δ 10,14 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,63-7,60 (м, 2Н), 7,55-7,53 (м, 2Н), 7,43-7,31 (м, 3H), 7,15-7,10 (м, 1H), 4,30 (с, 1h), 2,29 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 325,1 (М+н)⁺.

Пример 19. Х-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-фторфенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Х-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-фторфенил)-2(метиламино)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (25%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ 10,11 (с, 1H), 8,20 (с, 2Н), 7,99 (с, 2Н), 7,62-7,50 (м, 6Н), 7,21-7,17 (м, 2Н), 4,27 (с, 1H), 2,29 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 325,1 (М+Н)+.

Пример 20. Х-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Х-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-хлорфенил)-2(метиламино)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (3%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^6) δ 10,13 (с, 1H), 8,33 (с, 2Н), 7,99 (с, 2Н), 7,63-7,61 (м, 2Н), 7,56-7,53 (м, 3H), 7,45-7,34 (м, 3H), 4,26 (с, 1H), 2,28 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 341,0 (М+Н)+.

Пример 21. Х-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(п-толил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Х-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(птолил)ацетамида в виде желтого масла (12%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-de) δ 12,88 (с, 1H), 10,01 (с, 1H), 8,11 (с, 1H), 7,86 (с, 1H), 7,63-7,61 (м, 2Н), 7,54-7,52 (м, 2Н), 7,35 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 7,15 (д, J=8,0 Гц, 2Н), 4,16 (с, 1H), 2,28 (с, 6Н). МС (ЭР+) m/e 321,1 (М+Н)+.

Пример 22. Х-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(этиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Х-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2(этиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (6%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ 10,13 (с, 1H), 8,23 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,61-7,50 (м, 6Н), 7,43-7,41 (м, 2Н), 4,38 (с, 1H), 2,57-2,54 (м, 2Н), 1,07 (т, J= 7,2 Гц, 3H). МС (ЭР+) m/e 355,1 (М+Н)+.

Пример 23. Х-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

- 23 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-фтор-4-метоксифенил)2-(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (5%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 12,86 (с, 1H), 10,03 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,60 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,52 (д, J=8,8 Гц,2Н), 7,32 (д, J=12,8 Гц, 1H), 7,23 (д, J=8,8 Гц, 1H), 7,12 (т, J=8,8 Гц, 1H), 4,15 (с, 1H), 3,80 (с, 3H), 2,67 (с, 1H), 2,25 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 353,2 (М+Н)+.

Пример 24. N-(4-(111-11иразод-4-ид)фе11ид)-2-(3-(дифтормето1<си)фе11ид)-2-(метидами11о)а11етамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-(дифторметокси)фенил)-2-(метиламино)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (18%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,12 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,62-7,60 (м, 2Н), 7,55-7,53 (м, 2Н), 7,44-7,05 (м, 5Н), 4,28 (с, 1H), 2,29 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 373,3 (М+Н)+.

Пример 25. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (12%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^6) δ 10,18 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,61-7,53 (м, 4Н), 7,27 (т, J= 4,6 Гц, 1H), 7,06-7,03 (м, 2Н), 6,87-6,84 (м, 1H), 4,40 (с, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,44 (т, J=5,2 Гц, 2Н), 3,24 (с, 3H), 2,67 (т, J=5,2 Гц, 2Н). МС (ЭР+) m/e 381,3 (М+Н)+.

Пример 26. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(метиламино)этил)амино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2(метиламино)этил)амино)ацетамида в виде белого твердого вещества (29%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,49 (с, 1H), 7,91 (с, 2Н), 7,58-7,52 (м, 4Н), 7,31 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,10-7,08 (м, 2Н), 6,92-6,89 (м, 1H), 4,43 (с, 1H), 3,81 (с, 3H), 3,14-3,04 (м, 2Н), 2,92-2,81 (м, 2Н), 2,71 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 380,3 (М+Н)+.

Пример 27. №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(2-метилбензо[д]тиазол-6-ил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращенно

- 24 046894 фазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(2метилбензо[д]тиазол-6-ил)ацетамида в виде белого твердого вещества (6%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО d₆) δ 10,34 (с, 1H), 8,16 (д, J=6,4 Гц, 2Н), 8,00-7,94 (м, 3H), 7,63-7,54 (м, 5Н), 4,67 (с, 1H), 2,81 (с, 3H), 2,40 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 378,3 (М+Н)⁺.

Пример 28. N-(4-(1H-Пирaзол-4-ил)фенил)-2-(3-(диметилaмино)фенил)-2-(метилaмино)aцетaмид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-(диметиламино)фенил)2-(метиламино)ацетамида в виде желтого твердого вещества (17%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ 10,11 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 7,98 (с, 2Н), 7,62-7,51 (м, 4Н), 7,15 (т, J=8,0 Гц, 1H), 6,87 (с, 1H), 6,76 (д, J=7,2 Гц, 1H), 6,66-6,63 (м, 1H), 4,25 (с, 1H), 2,89 (с, 6Н), 2,32 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 350,3 (М+Н)⁺.

Пример 29. Ν-Η-(Ί11-11иразод-4-ид)фе11ид)-2-(2-мето1<си11ириди11-4-ид)-2-(метидами11о)а1 (етамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Ν-Η-(Ί11-11иразод-4-ид)фе11ид)-2-(2-мето1<си11ириди11-4-ид)2-(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (2%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ 10,12 (с, 1H), 8,15 (с, 1H), 8,12 (д, J=5,6 Гц, 1H), 7,98 (с, 2Н), 7,61-7,52 (м, 4Н), 7,07 (д, J=4,4 Гц, 1H), 6,91 (с, 1H), 4,24 (с, 1H), 3,83 (с, 3H), 2,28 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 338,2 (М+Н)⁺.

Пример 30. Метил 3-(2-((4-(1H-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензоат

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением метил 3-(2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1(метиламино)-2-оксоэтил)бензоата в виде белого твердого вещества (15%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ 10,71 (с, 1H), 9,65-9,51 (м, 2Н), 8,25 (с, 1H), 8,07 (д, J=8,0 Гц, 1H), 8,00 (с, 2Н), 7,86 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,69 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,59-7,52 (м, 4Н), 5,15 (с, 1H), 3,89 (с, 3H), 2,54 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 365,3 (М+Н)⁺.

Пример 31. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-(диметиламино)фенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-(диметиламино)фенил)2-(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (4%). 1H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,90 (с, 2Н), 7,57-7,50 (м, 4Н), 7,30 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 6,76 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 4,15 (с, 1H), 2,91 (с, 6Н), 2,37 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 350,3 (М+Н)⁺.

Пример 32. 3-(2-((4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензойная кислота

- 25 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением 3-(2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2оксоэтил)бензойной кислоты в виде белого твердого вещества (15%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,15 (с, 1H), 8,23 (с, 1H), 8,07 (с, 1H), 7,98 (с, 2Н), 7,86 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,70 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,61 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,47 (т, J=7,6 Гц, 1H), 4,33 (с, 1H), 2,29 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 351,3 (М+Н)⁺.

Пример 33. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метил-Ш-индазол-6-ил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метил-Ш-индазол-6ил)-2-(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (8%). 1H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,93 (с, 2Н), 7,89 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,78 (с, 1H), 7,58-7,54 (м, 4Н), 7,33 (д, J=8,8 Гц, 1H), 5,12 (с, 1H), 2,69 (с, 3H), 2,57 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 361,3 (М+Н)⁺.

Пример 34. Метил 4-(2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензоат

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением метил 4-(2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1(метиламино)-2-оксоэтил)бензоата в виде грязно-белого твердого вещества (11%). 1H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,17 (дд, J=6,8, 2,0 Гц, 2Н), 7,92 (с, 2Н), 7,74 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,58-7,53 (м, 4Н), 5,07 (с, 1H), 3,92 (с, 3H), 2,70 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 365,1 (М+Н)⁺.

Пример 35. №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(2-метил-Ш-бензо[д]имидазол-6-ил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(2-метил-Шбензо[д]имидазол-6-ил)-2-(метиламино)ацетамида в виде желтого масла (4%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,02 (д, J=1,2 Гц, 1H), 7,92 (с, 2Н), 7,86 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,75 (дд, J=8,0, 1,6 Гц, 1H), 7,59-7,52 (м, 4Н), 5,21 (с, 1H), 2,84 (с, 3H), 2,71 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 361,2 (М+Н)⁺.

Пример 36. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((3-метоксипропил)амино)ацетамид

- 26 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращенно фазовой препаративной ВЭЖХ с получением ^(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((3метоксипропил)амино)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (21%). 1H ЯМР (400 МГц,

CD3OD) δ 8,55 (с, 2Н), 7,72-7,65 (м, 4Н), 7,44 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,26-7,25 (м, 2Н), 7,09 (дд, J=8,0, 2,0 Гц, 1H), 5,15 (с, 1H), 3,85 (с, 3H), 3,51 (т, J=5,6 Гц, 2Н), 3,35 (с, 3H), 3,30-3,08 (м, 2Н), 2,03-1,98 (м, 2Н). МС (ЭР+) m/e 395,3 (М+Н)⁺.

Пример 37. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-этоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-этоксиэтил)амино)-2(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (8%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 12,89 (с, 1H), 10,09 (с, 1H), 8,12 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 7,60 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,54 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,27 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,04-7,02 (м, 2Н), 6,85 (дд, J=8,0, 2,0 Гц, 1H), 4,33 (с, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,48-3,41 (м, 4Н), 2,66-2,63 (м, 2Н), 1,11 (т, J=7,2 Гц, 3H). МС (ЭР+) m/e 395,3 (М+Н)+.

Пример 38. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((3-(диметиламино)пропил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((3(диметиламино)пропил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (4%). 1H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,93 (с, 2Н), 7,60-7,53 (м, 4Н), 7,30 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,09-7,08 (м, 2Н), 6,90 (дд, J=8,4, 1,6 Гц, 1H), 4,34 (с, 1H), 3,82 (с, 3H), 2,68-2,61 (м, 2Н), 2,48-2,42 (м, 2Н), 2,30 (с, 6Н), 1,831,74 (м, 2Н). МС (ЭР+) m/e 408,3 (М+Н)+.

Пример 39. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)-2-оксоэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением ^(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)-2оксоэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (7%). 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 12,87 (шир. с, 1H), 10,18 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,62 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,28 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,06-7,03 (м, 2Н), 6,87 (дд, J=8,0, 2,4 Гц, 1H), 4,38 (с, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,38 (м, 2Н), 2,87 (с, 3H), 2,84 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 408,3 (М+Н)+.

Пример 40. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-изопропоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)аце тамид

- 27 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Ы-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-изопропоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (28%). 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,03 (с, 2Н), 7,61-7,55 (м, 4Н), 7,44 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,23-7,20 (м, 2Н), 7,10-7,07 (м, 1H), 5,13 (с, 1H), 3,85 (с, 3H), 3,74-3,70 (м, 3H), 3,21-3,13 (м, 2Н), 1,22 (дд, J=6,4, 3,2 Гц, 6Н). МС (ЭР+) me 409,3 (М+н)⁺.

Пример 41. Ы-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-амино-2-оксоэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Ы-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-амино-2оксоэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (6%). 1H ЯМР (400

МГц, ДМСО^) δ 10,13 (с, 1H), 8,22 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,62-7,53 (м, 4Н), 7,45 (с, 1H), 7,28 (т, J=8,0 Гц,

1H), 7,12-7,01 (м, 3H), 6,87 (дд, J=8,0, 2,0 Гц, 1H), 4,34 (с, 1H), 3,76 (с, 3H), 3,04 (с, 2Н). МС (ЭР+) m/e 380,2 (М+Н)+.

Пример 42. Ы-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((3-(метиламино)пропил)амино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Ы-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((3(метиламино)пропил)амино)ацетамида в виде белого твердого вещества (6%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСОd6) δ 10,81 (с, 1H), 9,70 (с, 2Н), 8,65 (с, 2Н), 8,00 (с, 2Н), 7,56 (с, 4Н), 7,43 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,22-7,19 (м, 2Н), 7,06 (дд, J=8,0, 1,6 Гц, 1H), 5,11 (с, 1H), 3,79 (с, 3H), 2,96-2,90 (м, 4Н), 2,54 (с, 3H), 2,03-1,96 (м, 2Н). МС (ЭР+) m/e 394,3 (М+Н)+.

Пример 43. Ы-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((1-метокси-2-метилпропан-2-ил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением Ы-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((1-метокси-2метилпропан-2-ил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (17%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^ δ 10,60 (с, 1H), 9,23-9,19 (м, 2Н), 7,99 (с, 2Н), 7,58-7,52 (м, 4Н), 7,41 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,21-7,19 (м, 2Н), 7,04 (дд, J=8,8, 2,8 Гц, 1H), 5,22 (с, 1H), 3,79 (с, 3H), 3,42-3,35 (м, 2Н), 3,17 (с, 3H), 1,33 (с, 3H), 1,31 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 409,3 (М+Н)+.

Пример 44. Ы-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(метиламино)-2-оксоэтил)амино)ацетамид

- 28 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2(метиламино)-2-оксоэтил)амино)ацетамида в виде желтого твердого вещества (3%). 1H ЯМР (400 МГц,

CD3OD) δ 7,95 (с, 2Н), 7,59-7,53 (м, 4Н), 7,44 (т, J=8,4 Гц, 1H), 7,18-7,17 (м, 2Н), 7,16-7,10 (м, 1H), 5,12 (с, 1H), 3,84 (с, 3H), 3,68 (с, 2Н), 2,79 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 394,3 (М+Н)⁺.

Пример 45. 2-(((Ш-Пиразол-4-ил)метил)амино)-Ы-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением 2-(((Ш-пиразол-4-ил)метил)амино)-Ы-(4-(Ш-пиразол-4ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (1%). 1H ЯМР (400 МГц,

ДМСО-б6) δ 10,58 (с, 1H), 9,77 (с, 2Н), 7,99 (с, 2Н), 7,70 (с, 2Н), 7,57 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,51 (д, J=8,8 Гц,

2Н), 7,43 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,20-7,17 (м, 2Н), 7,06 (дд, J=8,0, 2,0 Гц, 1H), 4,91 (с, 1H), 4,01 (с, 2Н), 3,79 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 403,3 (М+Н)⁺.

Пример нил)ацетамид

46.

№(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(этил(2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифе-

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этил(2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (19%). 1H ЯМР (400 МГц, ацетон^) δ 11,21 (с, 1H), 8,01 (с, 2Н), 7,73 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,60 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,47-7,43 (м, 2Н), 7,37 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,11-7,09 (м, 1H), 6,03-6,01 (м, 1H), 3,93-3,80 (м, 5Н), 3,74-3,53 (м, 3H), 3,42 (м, 4Н), 1,44 (т, J=7,2 Гц, 3H). МС (ЭР+) m/e 409,3 (М+Н)⁺.

Пример 47. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)(метил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)(метил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (24%). 1H ЯМР (400 МГц, ацетон^) δ 10,85 (с, 1H), 8,01 (с, 2Н), 7,71 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,61 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,46 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,41 (с, 1H), 7,33 (д, J=7,6 Гц, 1Н), 7,11 (дд, J=8,0,2 Гц, 1Н), 5,80 (д, J=4,4 Гц, 1H), 3,953,92 (м, 2Н), 3,87 (с, 3H), 3,72-3,60 (м, 2Н), 3,42 (с, 3H), 3,06 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 395,3 (М+Н)⁺.

Пример 48. №(2-(2-(Диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

- 29 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Ы-(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (13%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-^) δ 9,94 (с, 1H), 9,92 (с, 1H), 9,66 (с, 2Н), 8,07 (с, 2Н), 7,87 (д, J=12,4 Гц, 1H), 7,46-7,39 (м, 2Н), 7,23-7,19 (м, 2Н), 7,07 (дд, J=8,0, 6,0 Гц, 1H), 5,36 (с, 1H), 4,44-4,35 (м, 2Н), 3,80 (с, 3H), 3,66-3,64 (м, 2Н), 3,63-3,49 (м, 2Н), 3,31 (с, 3H), 3,07-3,00 (м, 2Н), 2,76 (с, 6Н). МС (ЭР+) me 486,3 (М+Н)⁺.

Пример 49. Ы-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)-Ы-метил ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Ы-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2(3-метоксифенил)-Ы-метилацетамида в виде желтого твердого вещества (15%). 1H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,07 (с, 2Н), 7,48 (м, 2Н), 7,27-7,23 (м, 2Н), 6,95 (м, 2Н), 6,68 (д, J=6,8 Гц, 1H), 6,28 (с, 1H), 5,02 (с, 1H), 3,61 (м, 2Н), 3,52 (с, 3H), 3,30 (с, 3H), 3,24 (с, 3H), 3,15-3,11 (м, 1H), 3,02-2,97 (м, 1H). МС (ЭР+) m/e 395,3 (М+Н)⁺.

Пример 50. Ы-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-морфолиноэтил)амино)аце тамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Ы-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2морфолиноэтил)амино)ацетамида в виде белого твердого вещества (38%). ¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^ δ 10,72 (с, 1H), 8,00 (с, 2Н), 7,59-7,57 (м, 4Н), 7,42 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,21-7,17 (м, 2Н), 7,07-7,04 (м, 1H), 5,09 (с, 1H), 3,79 (м, 7Н), 3,31-3,12 (м, 8Н). МС (ЭР+) m/e 436,3 (м+Н)⁺.

Пример 51. Ы-(2-(2-(Диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)(метил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением Ы-(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)(метил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде желтого твердого вещества (31%). 1H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,04 (с, 2Н), 7,56-7,48 (м, 2Н), 7,19-7,14 (м, 4Н), 5,27 (с, 1H), 4,23-4,21 (м, 1H), 4,11-4,10 (м, 1h), 3,80 (м, 5Н), 3,50 (м, 2Н), 3,33 (м, 4Н), 3,19-3,16 (м, 1H), 2,82-2,62 (м, 9Н). МС (ЭР+) m/e 500,3 (М+Н)⁺.

Пример 52. Ы-(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(пирролидин-1-ил)этил)амино)ацетамид

- 30 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением ^(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2(пирролидин-1-ил)этил)амино)ацетамида в виде белого твердого вещества (35%). 1H ЯМР (400 МГц,

ДМСО-de) δ 10,64 (с, 1H), 8,00 (с, 2Н), 7,57 (м, 4Н), 7,41 (т, J=8,0, 1H), 7,19-7,16 (м, 2Н), 7,05-7,03 (м, 1H), 5,01 (с, 1H), 3,79 (с, 3H), 3,44-3,27 (м, 8Н), 1,94 (м, 4Н). МС (ЭР+) m/e 420,3 (М+Н)⁺.

Пример 53. ^(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((1-(метоксиметил)циклопропил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((1-(метоксиметил)циклопропил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (27%). ¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,65 (шир. с, 1H), 9,58 (шир. с, 1H), 8,00 (с, 2Н), 7,62-7,52 (м, 4Н), 7,42 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,24-7,15 (м, 2Н), 7,08-7,02 (м, 1H), 5,25 (с, 1H), 3,80 (с, 3H), 3,64 (д, J=11,6 Гц, 1H), 3,37 (д, J=11,6 Гц, 1H), 3,23 (с, 3H), 1,23-2,21 (м, 1H), 1,02-0,91 (м, 1H), 0,89-0,76 (м, 2Н). МС (ЭР+) m/e 407,3 (М+Н)⁺.

Пример 54. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(2,2,2-трифторэтокси)этил)амино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2(2,2,2-трифторэтокси)этил)амино)ацетамида в виде грязно-белого твердого вещества (6%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-de) δ 12,86 (с, 1H), 10,06 (с, 1H), 8,11 (с, 1H), 7,86 (с, 1H), 7,60-7,52 (м, 4Н), 7,26 (т, J=7,9 Гц, 1H), 7,05-7,02 (м, 2Н), 6,85 (дд, J=8,2, 1,8 Гц, 1H), 4,34 (д, J=7,6 Гц, 1H), 4,10-4,03 (м, 2Н), 3,75 (с, 3H), 3,69 (t, J=5,6 Гц, 2Н), 2,68 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 449,2 (М+Н)⁺.

Пример 55. №(3-Фтор-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(3-фтор-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде желтого твердого вещества (21%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-de) δ 10,97 (с, 1H), 9,64 (с, 2Н), 8,00 (д, J=1,6 Гц, 2Н), 7,70 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,62 (дд, J=13,2, 2,0 Гц, 1H), 7,41 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,32 (дд, J=8,4, 2,0 Гц, 1H), 7,24-7,19 (м, 2Н), 7,06-7,03 (м, 1H), 5,14 (с, 1H), 3,79 (с, 3H), 3,64-3,57 (м, 2Н), 3,29 (с, 3H), 3,09-3,00 (м, 2Н). МС (ЭР+) m/e 399,2 (М+Н)⁺.

Пример 56. ^(3-Метокси-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

- 31 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(3-метокси-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде желтого твердого вещества (17%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,79 (с, 1H), 9,62 (с, 2Н), 8,00 (с, 2Н), 7,58 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,41 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,32 (д, J=1,6 Гц, 1H), 7,26-7,21 (м, 3H), 7,06-7,02 (м, 1H), 5,13 (с, 1H), 3,84 (с, 3H), 3,79 (с, 3H), 3,64-3,59 (м, 2Н), 3,30 (с, 3H), 3,09-3,00 (м, 2Н). МС (ЭР+) m/e 411,3 (М+Н)⁺.

Пример 57. №(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)этил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2(диметиламино)этил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (41%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,18 (с, 1H), 8,25 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,60 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,27 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,05-7,02 (м, 2Н), 6,86 (дд, J=8,4, 2,4 Гц, 1H), 4,34 (с, 1H), 3,75 (с, 3H), 2,652,51 (м, 4Н), 2,30 (с, 6Н). МС (ЭР+) m/e 394,3 (М+Н)⁺.

Пример 58. ^)-№(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)аце тамид r-NH ⁰ ίι ίΓ

......Э

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением ^)-Щ4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (12%). Энантиомеры разделяли методом СФХ (колонка DAICEL CHIRALPAK AS). Подвижная фаза: 40% EtOH с 0,1% NH₄OH в СО₂, скорость потока 70 г/мин с получением необходимого соединения с 99% энантиомерной чистоты. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,18 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,61-7,53 (м, 4Н), 7,27 (т, J=4,6 Гц, 1H), 7,06-7,03 (м, 2Н), 6,87-6,84 (м, 1H), 4,40 (с, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,44 (т, J=5,2 Гц, 2Н), 3,24 (с, 3H), 2,67 (т, J=5,2 Гц, 2Н). МС (ЭР+) m/e 381,3 (М+Н)⁺. [α]²⁵°% = +114 (с=0,2 в МеОН).

Пример 59. ^)-№(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением ^)-М-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (12%). Энантиомеры разделяли методом СФХ (колонка DAICEL CHIRALPAK AS). Подвижная фаза: 40% EtOH с 0,1% NH₄OH в СО₂, скорость потока 70 г/мин с получением необходимого соединения с 99% энантиомерной чистоты. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,18 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,61-7,53 (м, 4Н), 7,27 (т, J=4,6 Гц, 1H), 7,06-7,03 (м, 2Н), 6,87-6,84 (м, 1H), 4,40 (с, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,44 (т, J=5,2 Гц, 2Н), 3,24 (с, 3H), 2,67 (т, J=5,2 Гц, 2Н). МС (ЭР+) m/e 381,3 (М+Н)⁺. ^)-Щ4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид. [a]²⁵°^CD = -103,5 (с=0,2 в МеОН).

- 32 046894

Пример 60. фенил)ацетамид

^)-№(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)этил)амино)-2-(3-метокси-

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением ^)-№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2 (диметиламино)этил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (41%).

Энантиомеры разделяли методом СФХ (колонка DAICEL CHIRALPAK AS). Подвижная фаза: 50% EtOH с 0,1% NH₄OH в СО₂, скорость потока 70 г/мин с получением необходимого соединения с 99% энантиомерной чистоты. ¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,18 (с, 1H), 8,25 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,60 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,27 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,05-7,02 (м, 2Н), 6,86 (дд, J=8,4, 2,4 Гц, 1H), 4,34 (с, 1H), 3,75 (с, 3H), 2,65-2,51 (м, 4Н), 2,30 (с, 6Н). МС (ЭР+) m/e 394,3 (М+Н)⁺. [a]²⁵°^C _D = +95,7 (с=0,2 в МеОН).

Пример 61. ^)-№(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)этил)амино)-2-(3-метоксифе нил)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре В. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением ^)-№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2(диметиламино)этил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамида в виде белого твердого вещества (41%). Энантиомеры разделяли методом СФХ (колонка DAICEL CHIRALPAK AS). Подвижная фаза: 50% EtOH с 0,1% NH4OH в СО2, скорость потока 70 г/мин с получением необходимого соединения с 99% энантиомерной чистоты. ¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,18 (с, 1H), 8,25 (с, 1H), 7,99 (с, 2Н), 7,60 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,53 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,27 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,05-7,02 (м, 2Н), 6,86 (дд, J=8,4, 2,4 Гц, 1H), 4,34 (с, 1H), 3,75 (с, 3Н), 2,65-2,51 (м, 4Н), 2,30 (с, 6Н). МС (ЭР+) m/e 394,3 (М+Н)⁺. [a]²⁵°^C _D = -92,8 (с=0,2 в МеОН).

Пример 62. ^)-№(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(метиламино)этил)амино)ацетамид

Этап 1: Соединение трет-бутил (2-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)этил)-(1-(3метоксифенил)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)карбамат растворяли в EtOH (0,15 М) и добавляли пара-толуолсульфокислоту (2 экв.). Раствор перемешивали в течение 20 часов при 15°С. Реакционную смесь гасили NaHCO₃ и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением трет-бутил (2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1(3-метоксифенил)-2-оксоэтил)(2-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)этил)карбамата в виде желтого твердого вещества с выходом 92%. Энантиомеры разделяли методом СФХ (колонка DAICEL CHIRALPAK OD). Подвижная фаза: 45% EtOH с 0,1% NH4OH в СО₂, скорость потока 70 г/мин с получением трет-бутил ^)-(2-((2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(3-метоксифенил)-2-оксоэтил)(трет-бутоксикарбонил)амино)этил)(метил)карбамата с 99% энантиомерной чистоты. ¹H ЯМР (400 МГц, ДМСО-с1₆) δ δ 12,84 (с, 1H), 10,19 (с, 1H), 8,04 (с, 2Н), 7,71-7,49 (м, 4Н), 7,37-7,33 (м, 1H), 7,03-6,89 (м, 3H), 6,02-5,33 (м, 1H), 3,76 (с, 3H), 3,42-2,70 (м, 7Н), 1,55-1,25 (м, 18Н).

Этап 2: Соединение трет-бутил ^)-(2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(3-метоксифенил)-2оксоэтил)(2-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)этил)карбамат растворяли в дихлорметане и добавляли 4 Н HCl в диоксане. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и концентрировали при пониженном давлении. Конечный остаток очищали методом обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с получением ^)-№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2(метиламино)этил)амино)ацетамида в виде белого твердого вещества (12%). ¹H ЯМР (400 МГц, CD3OD)

- 33 046894 δ δ 8,51 (с, 1H), 7,91 (с, 2Н), 7,58-7,51 (м, 4Н), 7,31 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,09-7,08 (м, 2Н), 6,91-6,89 (м, 1H), 4,42 (с, 1H), 3,81 (с, 3H), 3,14-3,04 (м, 2Н), 2,92-2,82 (м, 2Н), 2,72 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 380,4 (М+Н)⁺. [a]²⁵°^CD = -86,02 (0,5 в МеОН).

Пример 63. ^)-№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2(метиламино)этил)амино)ацетамид

а.

Этап 1: Соединение трет-бутил (2-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)этил)(1-(3-метоксифенил)2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)карбамат растворяли в EtOH (0,15 М) и добавляли пара-толуолсульфокислоту (2 экв.). Раствор перемешивали в течение 20 ч при 15°С. Реакционную смесь гасили NaHCO₃ и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фракции промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением трет-бутил (2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(3-метоксифенил)-2оксоэтил)(2-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)этил)карбамата в виде желтого твердого вещества с выходом 92%. Энантиомеры разделяли методом СФХ (колонка DAICEL CHIRALPAK OD). Подвижная фаза: 45% EtOH с 0,1% NH₄OH в СО₂, скорость потока 70 г/мин с получением трет-бутил (S)-(2-((2-((4(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(3-метоксифенил)-2-оксоэтил)(трет-бутоксикарбонил)амино)этил)(метил)карбамата с 99% энантиомерной чистоты. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ6) δ 5 12,84 (с, 1H), 10,19 (с, 1H), 8,04 (с, 2Н), 7,71-7,49 (м, 4Н), 7,37-7,33 (м, 1H), 7,03-6,89 (м, 3H), 6,02-5,33 (м, 1H), 3,76 (с, 3H), 3,422,70 (м, 7Н), 1,55-1,25 (м, 18Н). [a]²⁵°^CD = -92,8 (с = 0,2 в МеОН).

Этап 2: Соединение трет-бутил ^)-(2-((2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(3-метоксифенил)2-оксоэтил)(трет-бутоксикарбонил)амино)этил)(метил)карбамат растворяли в дихлорметане и добавляли 4 Н HCl в диоксане. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч и концентрировали при пониженном давлении. Конечный остаток очищали методом обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ с получением ^)-№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2(метиламино)этил)амино)ацетамида в виде белого твердого вещества (12%). 1H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,51 (с, 1H), 7,91 (с, 2Н), 7,58-7,51 (м, 4Н), 7,31 (т, J= 7,6 Гц, 1H), 7,09-7,08 (м, 2Н), 6,91-6,89 (м, 1H), 4,42 (с, 1H), 3,81 (с, 3H), 3,14-3,04 (м, 2Н), 2,92-2,82 (м, 2Н), 2,72 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 380,4 (М+Н)⁺. [a]²⁵°^CD = + 82,43 (0,7 в МеОН).

Пример 64. ^)-№(4-(Ш-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид

Этап 1: CbzNH₂ (3 экв.) растворяли в н-пропиловом спирте. В раствор добавляли 0,4 Н NaOH (3 экв.) с последующим добавлением трет-бутил-гипохлорита (1,05 экв.) одной частью. Через 5 мин в реакционную смесь одной частью добавляли раствор (DHQ)₂PHAL (0,05 экв.) в н-пропиловом спирте. Раствор соединения п-хлорстирола (1 экв.) в н-пропиловом спирте добавляли одной частью с последующим добавлением K₂OsO₂ (OH)₄ (0,03 экв.). Светло-зеленый раствор перемешивали при 20°С в течение часа. В реакционную смесь добавляли насыщенный раствор Na₂SO₃ и перемешивали смесь при 20°С в течение 10 мин. Органический слой отделяли, а водную фазу экстрагировали EtOAc. Объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили с безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия ТФК) и лиофилизировали с получением соединения бензил ^)-(1-(4-хлорфенил)-2-гидроксиэтил)карбамата (62%, 94,9% э. и.) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,34-7,31 (м, 7Н), 7,28-7,22 (м, 2Н), 5,64 (с, 1H), 5,13-5,05 (м, 2Н), 4,80 (с, 1H), 3,86-3,78 (м, 2Н), 2,24 (м, 1H).

Этап 2: В смесь соединения ^)-(1-(4-хлорфенил)-2-гидроксиэтил)карбамата (1 экв.) и имидазола (2 экв.) в ДМФ одной частью добавляли ТБС-Cl (1,5 экв.) при 30°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 30°С в течение 1 ч. Смесь вливали в воду и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили с Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эфир/EtOAc = 15/1) с получением бензил ^)-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-1-(4-хлорфенил)этил)карбамата (95%, 89,3% э.и.) в виде бесцветного масла. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,38-7,25 (м, 9Н), 5,59 (с, 1H), 5,16-5,07 (м, 2Н), 4,77

- 34 046894 (с, 1H), 3,95 (дд, J=10,0, 4,0 Гц, 1H), 3,75 (м, 1H), 0,89 (с, 9Н), -0,03 (с, 3H), -0,06 (с, 3H).

Этап 3: В раствор соединения ^)-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-1-(4хлорфенил)этил)карбамата (1 экв.) в ДМФ частями добавляли NaH (2 экв.) при 0°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин, а затем в смесь по капле добавляли раствор MeI (1,5 экв.) в ДМФ. Смесь нагревали до 20°С и перемешивали в течение 50 мин. Смесь вливали в насыщенный раствор NH₄Cl и экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Смесь очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эФир/ЕЮАс=20/1) с получением бензил ^)-(2-((третбутилдиметилсилил)окси)-1-(4-хлорфенил)этил)(метил)карбамата (93%, 94,4% э.и.) в виде бесцветного масла. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,36-7,19 (м, 9Н), 5,37-5,22 (м, 1H), 5,19-5,04 (м, 2Н), 4,05 (м, 2Н), 2,80 (с, 3H), 0,88 (с, 9Н), 0,07 (с, 6Н).

Этап 4:

В смесь соединения ^)-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-1-(4-хлорфенил)этил)(метил)карбамата (1 экв.) в МеОН/Н₂О (7:3) одной частью добавляли KHSO4 (4 экв.) при 20°С в атмосфере N2. В реакционную смесь добавляли воду и экстрагировали EtOAc. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эфир/EtOAc = 2/1) с получением соединения бензил (S)-(1-(4хлорфенил)-2-гидроксиэтил)(метил)карбамата (99%, 94% э.и.) в виде бесцветного масла. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,36-7,20 (м, 9Н), 5,33 (дд, J=8,0, 6,4 Гц, 1H), 5,20 (м, 2Н), 4,17-4,07 (м, 2Н), 2,78 (с, 3H).

Этап 5: Раствор соединения ^)-(1-(4-хлорфенил)-2-гидроксиэтил)(метил)карбамата (1 экв.) растворяли в насыщ. КН₂РО₄ и MeCN при 0°С. В реакционную смесь добавляли NaClO₂ (2 экв.) и TEMPO (0,2 экв.) при 0-5°С, с последующим добавлением по капле NaClO (2 экв.) при 0-5°С в атмосфере N2. Смесь становилась насыщенно-пурпурной, а реакционную смесь перемешивали при 10-15°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили Н₂О (100 мл) и экстрагировали смесь ДХМ (100 мл х 3). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (100 мл), сушили с безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эфир/EtOAc = 1/1, 0/1) с получением соединения ^)-2-(((бензилокси)карбонил)(метил)амино)-2-(4хлорфенил)уксусной кислоты (95%, 94% э.и.) в виде желтого масла.

Этап 6: В смесь соединения ^)-2-(((бензилокси)карбонил)-(метил)амино)-2-(4-хлорфенил)уксусной кислоты (1 экв.) и соединения 4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)анилина (1,1 экв.) в ТГФ одной частью добавляли ДМТ-ММ (1,05) при 10°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 20°С в течение 3 ч. Добавляли воду и экстрагировали смесь EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом препаративной ТСХ (петролейный эФир/ЕЮАс=2:1) с получением соединения бензил ((1S)-1 -(4-хлорфенил)-2-оксо-2-((4-( 1 -(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1 Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)(метил)карбамата (59%, 86% э.и.) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,75 (с, 1H), 7,71 (с, 1H), 7,40-7,31 (м, 4Н), 7,28-7,18 (м, 9Н), 5,88 (с, 1H), 5,41 (дд, J=8,8, 2,8 Гц, 1H), 5,16-5,09 (м, 2Н), 4,05-4,00 (м, 1H), 3,68-3,41(м, 1H), 2,80 (с, 3H), 2,09-2,04 (м, 2Н), 1,66-1,53 (м, 4Н).

Этап 7: В раствор соединения ((^)-1-(4-хлорфенил)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)(метил)карбамата (1 экв.) в MeCN добавляли ТМСИ (8 экв.) при 0°С в атмосфере N₂. Добавляли Н₂О и экстрагировали смесь петролейным эфиром. Водную фазу очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия МК) с получением ^)-М-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамида (9%, 87,5% э.и.) в виде белого порошка. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,08 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,98 (с, 2Н), 7,61-7,42 (м, 8Н), 4,24 (с, 1H), 2,27 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 341,0 (М+Н)⁺.

Пример 65. (R)-N-(4-( 1 H-Пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид

Этап 1: CbzNH₂ (3 экв.) растворяли в н-пропиловом спирте. В раствор добавляли 0,4 Н NaOH (3 экв.) с последующим добавлением трет-бутил-гипохлорита (1,05 экв.) одной частью. Через 5 мин в реакционную смесь одной частью добавляли раствор (DHQD)₂PHAL (0,05 экв.) в н-пропиловом спирте. Раствор соединения и-хлорстирола (1 экв.) в н-пропиловом спирте добавляли одной частью с последующим добавлением K₂OsO₂ (ОН)₄ (0,03 экв.). Светло-зеленый раствор перемешивали при 20°С в течение часа. В реакционную смесь добавляли насыщенный раствор Na₂SO₃ и перемешивали смесь при 20°С в течение 10 мин. Органический слой отделяли, а водную фазу экстрагировали EtOAc. Объединенный органический слой промывали солевым раствором, сушили с безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали

- 35 046894 в вакууме. Остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия ТФК) и лиофилизировали с получением соединения бензил ^)-(1-(4-хлорфенил)-2-гидроксиэтил)карбамата (71%, 94,5% э. и.) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСОД₆) δ 7,76 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,39-7,10 (м, 9Н), 5,05-4,97 (м, 2Н), 4,87 (т, J=5,6 Гц, 1H), 4,62-4,56 (м, 1H), 3,58-3,48 (м, 2Н).

Этап 2: В смесь соединения ^)-(1-(4-хлорфенил)-2-гидроксиэтил)карбамата (1 экв.) и имидазола (2 экв.) в ДМФ одной частью добавляли ТБС-Cl (1,5 экв.) при 30°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 30°С в течение 1 ч. Смесь вливали в воду и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили с Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эФир/ЕЮАс=15/1) с получением бензил ^)-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-1-(4-хлорфенил)этил)карбамата (71%, 90% э.и.) в виде бесцветного масла.

Этап 3: В раствор соединения ^)-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-1-(4хлорфенил)этил)карбамата (1 экв.) в ДМФ частями добавляли NaH (2 экв.) при 0°С в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин, а затем в смесь по капле добавляли раствор MeI (1,5 экв.) в ДМФ. Смесь нагревали до 20°С и перемешивали в течение 50 мин. Смесь вливали в насыщенный раствор NH4Cl и экстрагировали EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Смесь очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эФир/ЕЮАс=20/1) с получением бензил ^)-(2-((третбутилдиметилсилил)окси)-1-(4-хлорфенил)этил)(метил)карбамата (75%, 93% э.и.) в виде бесцветного масла.

Этап 4: В смесь соединения ^)-(2-((трет-бутилдиметилсилил)окси)-1-(4-хлорфенил)этил)(метил)карбамата (1 экв.) в МеОН/Н₂О (7:3) одной частью добавляли KHSO4 (4 экв.) при 20°С в атмосфере N2. В реакционную смесь добавляли воду и экстрагировали EtOAc. Органический слой промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эФир/ЕЮАс=2/1) с получением соединения бензил ^)-(1-(4-хлорфенил)-2-гидроксиэтил)(метил)карбамата (91%, 92% э.и.) в виде бесцветного масла.

Этап 5: Раствор соединения ^)-(1-(4-хлорфенил)-2-гидроксиэтил)(метил)карбамата (1 экв.) растворяли в насыщ. KH2PO4 и MeCN при 0°С. В реакционную смесь добавляли NaClO₂ (2 экв.) и TEMPO (0,2 экв.) при 0-5°С, с последующим добавлением по капле NaClO (2 экв.) при 0-5°С в атмосфере N2. Смесь становилась насыщенно-пурпурной, а реакционную смесь перемешивали при 10-15°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разводили Н₂О (100 мл) и экстрагировали смесь ДХМ (100 мл х 3). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (100 мл), сушили с безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эФир/ЕЮАс=1/1, 0/1) с получением соединения да-2-(((бензилокси)карбонил)(метил)амино)-2-(4хлорфенил)уксусной кислоты (94% э. и.) в виде желтого масла.

Этап 6: В смесь соединения ^)-2-(((бензилокси)карбонил)(метил)амино)-2-(4-хлорфенил)уксусной кислоты (1 экв.) и соединения 4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-4-ил)анилина (1,1 экв.) в ТГФ одной частью добавляли ДМТ-ММ (1,05) при 10°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 20°С в течение 3 ч. Добавляли воду и экстрагировали смесь EtOAc. Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом препаративной ТСХ (петролейный эФир/ЕЮАс=2:1) с получением соединения бензил ((^)-1-(4-хлорфенил)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)(метил)карбамата (83%, 87% э.и.) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,75 (с, 1H), 7,71 (с, 1H), 7,40-7,31 (м, 4Н), 7,28-7,18 (м, 9Н), 5,88 (с, 1H), 5,41 (дд, J=8,8, 2,8 Гц, 1H), 5,165,09 (м, 2Н), 4,05-4,00 (м, 1H), 3,68-3,41(м, 1H), 2,80 (с, 3H), 2,09-2,04 (м, 2Н), 1,66-1,53 (м, 4Н).

Этап 7: В раствор соединения ((^)-1-(4-хлорфенил)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)(метил)карбамата (1 экв.) в MeCN добавляли ТМСИ (8 экв.) при 0°С в атмосфере N₂. Добавляли Н₂О и экстрагировали смесь петролейным эфиром. Водную фазу очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия МК) с получением ^)-Н-(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамида (28%, 87% э.и.) в виде белого порошка. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСОd6) δ 10,15 (с, 1H), 8,14 (с, 1H), 7,98 (с, 2Н), 7,59 (д, J=8,8 Гц, 4Н), 7,54-7,49 (м, 4Н), 7,44-7,42 (м, 2Н), 4,32 (с, 1H), 2,30 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 341,3 (М+Н)⁺.

Пример 66. №(2-Фтор-5-метокси-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

- 36 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(2-фтор-5-метокси-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамида в виде желтого масла (1%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ₆) δ 12,91 (с, 1H), 9,91 (шир. с, 1H), 8,07 (с, 2Н), 7,74 (д, J=7,2 Гц, 1H), 7,58 (д, J=12,4 Гц, 1H), 7,27 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,04-7,01 (м, 2Н), 6,86 (дд, J=7,2, 1,6 Гц, 1H), 4,28 (с, 1H), 3,80 (с, 3H), 3,75 (с, 3H), 2,31 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 385,2 (М+Н)⁺.

Пример 67. 3-(2-((4-(1Н-Пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)-И-метилбензамид

Этап 1: В раствор соединения метил 3-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)бензоата (1 экв.) в МеОН и воде добавляли NaOH (2 экв.). Смесь концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия МК) с получением соединения 3-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)бензойной кислоты (58%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,21 (с, 1H), 8,27 (с, 1H), 8,15 (с, 1H), 7,957,90 (м, 2Н), 7,88 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,63-7,55 (м, 5Н), 7,27 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 6,89 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 5,38 (дд, J=10,4, 2,4 Гц, 1H), 4,33 (с, 1H), 3,92 (д, J=11,6 Гц, 1H), 3,73 (с, 3H), 3,66-3,63 (м, 1H), 3,51-3,42 (м, 2Н), 2,16-2,09 (м, 4Н), 1,94 (с, 2Н), 1,69-1,65 (м, 1H), 1,58-1,54 (м, 2Н).

Этап 2: В раствор соединения 3-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)бензойной кислоты (1 экв.), метиламина (1 экв.)) в CH₃CN добавляли Т₃Р (1,5 экв.), ДИПЭА (1,5 экв.) при 20°С. Смесь нагревали до 80°С и перемешивали в течение 15 ч. Реакционную смесь разводили Н₂О и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 3-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)-М-метилбензамида в виде белого твер дого вещества.

Этап 3: Смесь соединения 3-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)-1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)-М-метилбензамида в ТФК перемешивали при 75°С в течение 16 ч. Смесь концентрировали в вакууме с получением остатка. Остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия ТФК) с получением 3-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)2-оксоэтил)-№-метилбензамида в виде белого твердого вещества (43%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ₆) δ 10,69 (с, 1H), 9,61-9,47 (м, 2Н), 8,56 (д, J=4,8 Гц, 1H), 8,12 (с, 1H), 8,01 (с, 2Н), 7,93 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,73 (д, J=8,0 Гц, 1H), 7,63-7,54 (м, 5Н), 5,09 (с, 1H), 2,81 (с, 3H), 2,53 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 364,4 (М+Н)⁺.

Пример 68. 4-(2-((4-(1Н-Пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензойная кислота

Этап 1: Смесь соединения метил 4-(1-((4-метоксибензил)-(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)бензоата (1 экв.) в ТФК перемешивали при 70°С в течение 112 ч. Реакционную смесь разводили МеОН и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия ТФК) с получением соединения метил 4-(2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензоата (19%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,17 (дд, J=6,8, 2,0 Гц, 2Н), 7,92 (с, 2Н), 7,74 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,58-7,53 (м, 4Н), 5,07 (с, 1H), 3,92 (с, 3H), 2,70 (с, 3H).

Этап 2: В раствор соединения 4-(2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2

- 37 046894 оксоэтил)бензоата (1 экв.) в МеОН и Н2О добавляли NaOH (3 экв.). Смесь перемешивали при 30°С в течение 16 ч. Смесь подкисляли до рН = 5 с помощью 1 Н HCl. Полученную в результате смесь очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия МК) с получением 4-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1(метиламино)-2-оксоэтил)бензойной кислоты (18%) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 10,13 (с, 1H), 8,27 (с, 1H), 7,98 (с, 2Н), 7,90 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,65-7,50 (м, 6Н), 4,30 (с, 1H), 2,28 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 351,1 (М+Н)⁺.

Пример 69. 4-(2-((4-(1Н-Пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)-М-метилбензамид

Этап 1: В раствор соединения метил 4-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)бензоата (1 экв.) в МеОН и Н₂О добавляли NaOH (2 экв.). Смесь перемешивали при 35°С в течение 36 ч. Реакционную смесь разводили Н₂О. Полученный в результате раствор очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия МК) с получением соединения 4-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)бензойной кислоты (70%, 98% чистоты) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 12,92 (с, 1H), 10,19 (с, 1H), 7,97 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,88 (с, 1H), 7,69 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,65-7,60 (м, 2Н), 7,59-7,52 (м, 2Н), 7,28 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 6,90 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 5,38 (дд, J=10,0, 2,4 Гц, 1H), 4,33 (с, 1H), 3,94-3,92 (м, 1H), 3,74 (с, 3H), 3,68-3,58 (м, 1H), 3,54-3,40 (м, 2Н), 2,18-2,03 (м, 4Н), 2,00-1,87 (м, 2Н), 1,75-1,61 (м, 1H), 1,59-1,48 (м, 2Н).

Этап 2: В раствор соединения 4-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)бензойной кислоты (1 экв.) в MeCN добавляли Т₃Р (1,5 экв.), MeNH₂ (2,5 экв.) и ДИПЭА (4 экв.). Смесь перемешивали при 30°С в течение 36 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и гасили добавлением Н₂О при 15°С. Полученную в результате смесь разводили EtOAc и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 4-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2ил)-1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)-М-метилбензамида (98%, 87% чистоты) в виде белого твердого вещества.

Этап 3: В раствор соединения 4-(1-((4-метоксибензил)(метил)амино)-2-оксо-2-((4-(1-(тетрагидро2Н-пиран-2-ил)-1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)этил)-М-метилбензамида (1 экв.) в ТГФ и МеОН добавляли сухой Pd/C (0,1 экв.) и HCl (2 экв.). Смесь перемешивали при 50°С в течение 2 ч в атмосфере Н₂ (1 атм.). Смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия МК) с получением 4-(2-((4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)-Мметилбензамида (98% чистоты) в виде белого твердого вещества. 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆) δ 10,13 (с, 1H), 8,44-8,36 (м, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,98 (с, 2Н), 7,80 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,63-7,58 (м, 2Н), 7,57-7,51 (м, 4Н), 4,30 (с, 1H), 2,76 (д, J=4,4 Гц, 3H), 2,29 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 364,3 (М+Н)⁺.

Пример 70. №(2-(3-(Диметиламино)пропокси)-5-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(2-(3-(диметиламино)пропокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (13%). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,04 (д, J=12,8 Гц, 1H), 8,00 (с, 2Н), 7,30-7,23 (м, 2Н), 7,03-7,02 (м, 2Н), 6,88 (дд, J=8,4, 0,8 Гц, 1H), 4,20 (с, 1H), 4,16 (т, J=6,0 Гц, 2Н), 3,79 (с, 3H), 2,62-2,58 (м, 2Н), 2,45 (с, 3H), 2,30 (с, 6Н), 2,07-2,00 (м, 2Н). МС (ЭР+) m/e 456,4 (М+Н)⁺.

Пример 71. ^(2-(2-(Диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

- 38 046894

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (37%). 1Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,52 (с, 2Н), 8,04-8,0 (м, 3H), 7,42 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,28 (д, J=6,8 Гц, 1H), 7,247,19 (м, 2Н), 7,05 (дд, J=8,8, 2,4 Гц, 1H), 5,43 (с, 1H), 4,44-4,41 (м, 1H), 4,27-4,25 (м, 1H), 3,84 (с, 3H), 3,413,36 (м, 2Н), 2,81 (с, 6Н), 2,65 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 442,4 (М+Н)⁺.

Пример 72. ^)-Щ2-(2-(Диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (37%). Энантиомеры разделяли методом СФХ (колонка DAICEL CHIRALPAK AD). Подвижная фаза: 55% EtOH с 0,1% NH4OH в СО₂, скорость потока 70 г/мин с получением ^)-Щ2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамида с 99% энантиомерной чистоты. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ 11,05 (с, 1H), 10,59 (с, 1H), 9,98-9,96 (м, 1H), 9,72-9,69 (м, 1H), 8,08 (м, 2Н), 7,94 (д, J=12,4 Гц, 1H), 7,47 (с, 1H), 7,43-7,34 (м, 3H), 7,04-7,01 (м, 1H), 6,05 (т, J=6,4 Гц, 1H), 4,47-4,34 (м, 2Н), 3,79 (с, 3H), 3,58-3,49 (м, 2Н), 2,83 (дд, J=7,2, 5,2 Гц, 6Н), 2,48 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 442,3 (М+Н)⁺.

Пример 73. ^)-И-(2-(2-(Диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид

Реакцию проводили, следуя общей процедуре А. Конечный остаток очищали методом обращеннофазовой препаративной ВЭЖХ с получением №(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамида в виде белого твердого вещества (37%). Энантиомеры разделяли методом СФХ (колонка DAICEL CHIRALPAK AD). Подвижная фаза: 55% EtOH с 0,1% NH4OH в CO2, скорость потока 70 г/мин с получением ^)-М-(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамида с 99% энантиомерной чистоты. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСОЧ) δ 11,05 (с, 1H), 10,59 (с, 1H), 9,97-9,94 (м, 1H), 9,71-9,68 (м, 1H), 8,08 (м, 2Н), 7,94 (д, J=12,4 Гц, 1H), 7,47 (с, 1H), 7,43-7,36 (м, 3H), 7,04-7,02 (м, 1H), 6,05 (т, J=6,4 Гц, 1H), 4,484,34 (м, 2Н), 3,79 (с, 3H), 3,58-3,47 (м, 2Н), 2,83 (дд, J=7,2, 5,2 Гц, 6Н), 2,48 (с, 3H). МС (ЭР+) m/e 442,3 (М+Н)⁺.

Пример 74. 1-(4-(1Н-Пиразол-4-ил)фенил)-4-(циклопропилметил)-3-(3-метоксифенил)-1,4-диазепан2-он

Этап 1: В смесь соединения бензил 2-(3-метоксифенил)-3-оксо-1,4-диазепан-1-карбоксилата (1 экв.) и соединения 4-(4-йодофенил)-1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразола (1 экв.) в диоксане добавляли

- 39 046894

Cs₂CO₃ (4 экв.) и Xantphos-Pd-G3 (0,05 экв.) при 20°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 100°С в течение 16 ч. Смесь экстрагировали EtOAc (100 мл х 4). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (100 мл), сушили с безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эФир/ЕЮАс=2/1, 1/1) с получением соединения бензил 2-(3-метоксифенил)-3-оксо-4-(4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Шпиразол-4-ил)фенил)-1,4-диазепан-1-карбоксилата (25%) в виде желтого масла.

Этап 2: В раствор соединения бензил 2-(3-метоксифенил)-3-оксо-4-(4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)-1,4-диазепан-1-карбоксилата (1 экв.) в МеОН добавляли сухой Pd/C (0,1 экв.) в атмосфере N₂. Суспензию дегазировали в условиях вакуума и несколько раз продували Н₂. Смесь перемешивали в атмосфере Н₂ (15 фунт/кв. дюйм) при 20°С в течение 4 ч. Реакционную смесь фильтровали, а фильтрат концентрировали с получением остатка. Остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ (условия МК) с получением соединения 3-(3-метоксифенил)-1-(4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)1Н-пиразол-4-ил)фенил)-1,4-диазепан-2-она (67%) в виде белого твердого вещества.

Этап 3: В смесь соединения 3-(3-метоксифенил)-1-(4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4ил)фенил)-1,4-диазепан-2-она (1 экв.) и альдегида (2 экв.) в МеОН одной частью добавляли ТЭА (3) при 25°С в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при 25°С в течение 30 мин. В реакционную смесь добавляли NaBH(OAc)₃ (4 экв.) и перемешивали реакционную смесь при 25°С в течение 4 ч. Смесь вливали в воду и экстрагировали EtAOc. Объединенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эФир/ЕЮАс=2/1, 1/1) с получением соединения 4-(циклопропилметил)-3-(3-метоксифенил)-1-(4-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)-1,4-диазепан-2-она (32%) в виде бесцветного масла.

Этап 4: В смесь соединения 4-(циклопропилметил)-3-(3-метоксифенил)-1-(4-(1-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)-1,4-диазепан-2-она (1 экв.) в ДХМ добавляли ТФК при 0°С в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин и нагревали реакционную смесь до 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 0,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении при 45°С, а остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением 1-(4-(1Hпиразол-4-ил)фенил)-4-(циклопропилметил)-3-(3-метоксифенил)-1,4-диазепан-2-она (7%) в виде грязнобелого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,99 (с, 2Н), 7,69-7,65 (м, 2Н), 7,45 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,34-7,30 (м, 2Н), 7,26-7,24 (м, 2Н), 7,09 (дд, J=8,8, 1,6 Гц, 1H), 5,73 (с, 1H), 4,40 (м, 1H), 3,99-3,83 (м, 6Н), 3,38-3,32 (м, 1H), 3,31-3,20 (м, 1H), 2,38 (м, 2Н), 1,15-1,10 (м, 1H), 0,78-0,73 (м, 2Н), 0,38-0,34 (м, 2Н). МС (ЭР+) m/e 417,3 (М+Н)+.

Пример 75. 1-(4-(1Н-Пиразол-4-ил)фенил)-4-(2-(диметиламино)этил)-3-(3-метоксифенил)-1,4диазепан-2-он

Этап 1: В смесь соединения 3-(3-метоксифенил)-1-(4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4ил)фенил)-1,4-диазепан-2-она (1 экв.) и альдегида (2 экв.) в МеОН одной частью добавляли ТЭА (3) при 25°С в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при 25°С в течение 30 мин. В реакционную смесь добавляли NaBH(OAc)₃ (4 экв.) и перемешивали реакционную смесь при 25°С в течение 4 ч. Смесь вливали в воду и экстрагировали EtAOc. Объединенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эФир/ЕЮАс=2/1, 1/1) с получением соединения 4-(2-(диметиламино)этил)-3-(3-метоксифенил)-1-(4(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)-1,4-диазепан-2-она (13%) в виде бесцветного масла.

Этап 2: В смесь соединения 4-(2-(диметиламино)этил)-3-(3-метоксифенил)-1-(4-(1-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)-1,4-диазепан-2-она (1 экв.) в ДХМ добавляли ТФК при 0°С в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин и нагревали реакционную смесь до 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 0,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении при 45°С, а остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением 1-(4-(1Нпиразол-4-ил)фенил)-4-(2-(диметиламино)этил)-3-(3-метоксифенил)-1,4-диазепан-2-она (40%) в виде желтого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,00 (с, 2Н), 7,68 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,42 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,30 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,19-7,15 (м, 2Н), 6,98 (дд, J=8,0, 2,4 Гц, 1H), 5,06 (с, 1H), 3,93-3,86 (м, 4Н), 3,77-3,73 (м, 1H), 3,48-3,35 (м, 4Н), 3,22-3,14 (м, 2Н), 2,94 (с, 3H), 2,87 (с, 3H), 2,19-2,17 (м, 1H), 1,77 (м, 1H). МС (ЭР+) m/e 434,3 (М+Н)+.

- 40 046894

Пример 76. 1-(4-(1Н-Пиразол-4-ил)фенил)-3-(3-метоксифенил)-4-(2-(метиламино)этил)-1,4-диазепан-2-он

Этап 1: В смесь соединения 3-(3-метоксифенил)-1-(4-(1-(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-Ш-пиразол-4ил)фенил)-1,4-диазепан-2-она (1 экв.) и альдегида (2 экв.) в МеОН одной частью добавляли ТЭА (3) при 25°С в атмосфере N₂. Смесь перемешивали при 25°С в течение 30 мин. В реакционную смесь добавляли NaBH(OAc)₃ (4 экв.) и перемешивали реакционную смесь при 25°С в течение 4 ч. Смесь вливали в воду и экстрагировали EtAOc. Объединенный органический слой сушили над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали методом хроматографии на силикагеле (SiO₂, петролейный эФир/ЕЮАс= 2/1, 1/1) с получением соединения трет-бутил (2-(2-(3-метоксифенил)-3-оксо-4-(4-(1(тетрагидро-2Н-пиран-2-ил)-1 Н-пиразол-4-ил)фенил)-1,4-диазепан-1 -ил)этил)(метил)карбамата (77%) в виде грязно-белого масла.

Этап 2: В смесь соединения трет-бутил (2-(2-(3-метоксифенил)-3-оксо-4-(4-(1-(тетрагидро-2Нпиран-2-ил)-Ш-пиразол-4-ил)фенил)-1,4-диазепан-1-ил)этил)(метил)карбамата (1 экв.) в ДХМ добавляли ТФК при 0°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин и нагревали реакционную смесь до 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 0,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении при 45°С, а остаток очищали методом препаративной ВЭЖХ с получением 1 -(4-( 1 H-пиразол-4-ил)фенил)-3 -(3 -метоксифенил)-4-(2-(метиламино)этил)-1,4-диазепан-2-она (66%) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (400 МГц, CD3OD) δ 8,00 (с, 2Н), 7,67 (д, J=8,4 Гц, 2Н), 7,40 (т, J=8,0 Гц, 1H), 7,28 (д, J=8,8 Гц, 2Н), 7,16-7,13 (м, 2Н), 7,67 (дд, J=8,4, 2,4 Гц, 1H), 5,03 (с, 1H), 3,90-3,87 (м, 1H), 3,84 (с, 3H), 3,73-3,66 (м, 1H), 3,39-3,34 (м, 1H), 3,23-3,08 (м, 5Н), 2,73 (с, 3H), 2,17-2,14 (м, 1H), 1,71-1,68 (м, 1H). МС (ЭР+) m/e 420,3 (М+Н)⁺.

Пример 77.

Определение ингибирующей ROCK активности соединений in vitro (анализ Z'lyte): рекомбинантные белки ROCK1 (аминокислоты 1-535) и ROCK2 (аминокислоты 1-552) приобретали у ThermoFisher Scientific. Активность соединений определяли с помощью набора киназ Z'-lyte (ThermoFisher Scientific) и рассчитывали IC50.

Пример 78.

Определение ингибирующей ROCK активности соединений в клетках A7R5: клетки A7R5 линии клеток гладкой мускулатуры аорты крыс поддерживали в среде DMEM с 10% фетальной бычьей сыворотки. Клетки высевали при плотности 5000 клеток/лунка в 96-луночные планшеты на 24 ч и после этого обрабатывали 90 мин исследуемыми соединениями. Затем клетки фиксировали и обрабатывали в соответствии с руководством набора для внутриклеточного колориметрического определения методом ИФА (Thermo Scientific).

Пример 79.

Анализ клеток NIH3T3 с помощью управляемого промотором Acta2 репортерного гена люциферазы: Создавали линию клеток NIH3T3, стабильно экспрессирующую репортерный ген люциферазы, управляемый промотором человеческого гена АСТА2 (-1000-1 п. о.) (NIH3Т3-Acta2-люцифераза). Клетки высевали до конфлюэнтности и обрабатывали исследуемыми соединениями плюс TGFe1 в течение 24 ч.

Затем клетки лизировали и измеряли активность люциферазы, используя набор для люциферазы LightSwitch от Active Motif.

Пример 80.

Размораживание и пролиферация человеческих клеток-предшественниц олигодендроцитов/нейронов (КПО). Криоконсервированные человеческие клетки-предшественницы олигодендроцитов/нейронов (Millipore, кат. № CS204496) восстанавливали и культивировали в покрытых матригелем (BD, кат. № 356324) флаконах Т-25 в среде для размножения, содержащей базовую среду для КПО/нейронов, добавку к среде N21, рекомбинантные человеческие bFGF, PDGF-AA и NT-3. Когда клетки достигали 80% конфлюэнтности, наносили 3 мл аккутазы (Millipore SCR005) для пассирования клеток при соотношении 1:4. Субкультивируемые клетки поддерживали в среде для размножения для пролиферации.

Пример 81.

Спонтанная дифференцировка человеческих клеток-предшественниц олигодендроцитов/нейронов в 24-луночных и 96-луночных планшетах. Планшет покрывали 10 мкг/мл полиЖ-орнитина (Sigma, кат. № Р4957) на ночь при комнатной температуре. Раствор полиЖ-орнитина удаляли и промывали планшет 1X

- 41 046894

ФСБ, добавляли 10 мкг/мл ламинина (Millipore, кат. № СС095) и инкубировали при 37°С по меньшей мере в течение 2 ч. Клетки высевали на покрытые планшеты в среду для размножения и оставляли на ночь для присоединения. Не следующий день среду для размножения удаляли и замещали свежеприготовленной средой для спонтанной дифференцировки, содержащей только базовую среду для КПО/нейронов и добавку к среде N21. В случае 14-суточной культуры среду для дифференцировки меняли каждые 3-4 суток. Клетки визуализировали и анализировали длину нейритов с помощью системы для анализа живых клеток IncuCyte S3 каждые 4 ч. Через 14 суток дифференцировки клетки фиксировали 4% параформальдегидом и окрашивали ДАФИ и антителом к нейрон-специфическому β-III тубулину (R&D systems, NL1195R).

Пример 82.

Анализ с хондроитинсульфат протеогликаном (ХСПГ) человеческих клеток-предшественниц олигодендроцитов/нейронов в 96-луночном планшете. После инкубации в течение ночи с 10 мкг/мл поли-Lорнитина 96-луночные планшеты покрывали хорошо смешанным раствором 10 мкг/мл ламинина в комбинации с 0,3 мкг/мл ХСПГ (Millipore СС117) в течение по меньшей мере 2 ч при комнатной температуре. Клетки высевали на покрытые планшеты при плотности 6000 клеток на лунку в среду для размножения. На следующие сутки среду для размножения заменяли свежей средой для спонтанной дифференцировки, содержащей исследуемые соединения. Клетки визуализировали и анализировали длину нейритов с помощью системы для анализа живых клеток IncuCyte S3 каждые 4 ч.

Пример 83.

Анализ индуцированной Αβ 1-42 гибели клеток для человеческих клеток-предшественниц олигодендроцитов/нейронов в 96-луночном планшете. Клетки высевали на покрытые поли-Ь-орнитином и ламинином планшеты при плотности 8000 клеток на лунку и поддерживали в среде для размножения до 3-х суток, затем среду заменяли свежей средой для спонтанной дифференцировки, содержащей исследуемые соединения и реагент аннексин V красный IncuCyte (разведение 1:200) (Essen BioScience, кат. № 4641). После 30-минутного предварительного периода инкубации при 37°С непосредственно в предварительно обработанный раствор добавляли 10,5 мкМ Αβ 1-42 (Bachem Product, № Н-8146). Длину нейритов и общую положительную в отношении аннексина V площадь анализировали с помощью системы для анализа живых клеток IncuCyte S3 каждые 2 ч.

Пример 84.

Индуцированный блеомицином фиброз легких у мышей (терапевтическое введение): Самцов мышей линии C57B/L6 держали для акклиматизации в течение не менее 7 суток. После периода акклиматизации животных случайным образом распределяли по группам обработки. На 0 сутки мышей анестезировали 5% изофлураном путем ингаляции в течение 10-15 мин, а затем подвешивали за передние зубы на проволоке, присоединенной к зафиксированной операционной пластине для животных. Вводили 50 мкл физиологического раствора или блеомицина путем интратрахеального вливания. Мышам в группах обработки интратрахеально вливали 2,0 Е/кг (мг/кг) блеомицина гидрохлорида (БЛМ) в стерильном физиологическом растворе. На 7 сутки после введения блеомицина половину животных в группе обработки базовым раствором умерщвляли, чтобы установить базовый уровень фиброза на момент начала обработки. Мыши в нормальной контрольной группе получали физиологический раствор п/о один раз в сутки, с 7 суток по 20 сутки. Мыши в группе обработки перорально получали соединение один раз в сутки, с 7 суток по 20 сутки. На 20 сутки через 2-3 ч после последней дозы всех мышей умерщвляли. Легкие аккуратно промывали через трахеальную канюлю 0,8 мл ФСБ, содержащим 1% БСА и 0,6 мМ ЭДТК. После промывания ткани легких извлекали из каждого животного. Ткани легких делили на 3 части: большую долю правой части фиксировали 10% нейтральным формалином для заливки парафином и гистопатологии. Оставшиеся доли правых частей мгновенно замораживали и готовили белковые лизаты для анализа связывания с мишенью.

Пример 85.

Индуцированный блеомицином фиброз легких у мышей (профилактическое введение): Самцам мышей линии C57B/L6 ставили метку на ухо и взвешивали их перед началом исследования. Животных из группы обработки обрабатывали соединением на сутки -1 перед введением блеомицина и на все последующие сутки после введения блеомицина. На 0 сутки животные из групп заболевания получали дозу 1,5 Е/кг блеомицина орофарингеальным путем. Контрольная группа без блеомицина получала стерильный физиологический раствор. За животными ежесуточно тщательно следили до конца исследования. На 21 сутки после введения блеомицина всех животных умерщвляли и получали кровь, легкие и жидкость бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ). Образцы крови использовали для получения плазмы; в жидкости БАЛ подсчитывали общее количество лейкоцитов; а легкие фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине для гистопатологического анализа.

Пример 86

Модель индуцированной гистамином проницаемости сосудов у мышей: 7-8-недельных самок мышей линии Balb/c акклиматизировали в течение по меньшей мере 3 суток и случайным образом распределяли по группам. Животным делали в/в инъекцию 1% голубого Эванса в дозе 100 мкл/мышь. Через 10

- 42 046894 мин животным из групп заболевания делали интрадермальную инъекцию в спину 1 мкг гистамина в 20 мкл ФСБ и умерщвляли через 20 мин после введения. В спину животных из контрольной группы интрадермально инъецировали 20 мкл ФСБ. Дозирование базового раствора и исследуемых соединений проводили через желудочный зонд соответственно. Положительный контроль сальбутамол вводили за 15 мин до голубого Эванса. Через 20 мин после стимуляции гистамином животных умерщвляли. Затем кожу выворачивали, измеряли диаметр поражений. Рассчитывали площадь поражений и выражали в квадратных миллиметрах. После измерения диаметра из тканей кожи экстрагировали краситель голубой Эванса и измеряли оптическую плотность. Данные рассчитывали относительно пиковых данных на стандартной кривой голубого Эванса.

Пример 87.

Ингибиторы ROCK эффективно ингибируют активность ROCK-киназы in vitro и в клетках. Соединения по изобретению ингибировали ROCK в клетках согласно измерениям методом внутриклеточного ИФА-анализа для A7R5. Клетки A7R5 обрабатывали 9-точечным 2-кратным серийным разведением соединений и определяли уровни ppMlc (T18/S19), чтобы рассчитать клеточные значения IC50 соединений. Результаты приведены в табл. 1 ниже.

Таблица 1

Соединение	IC50 ppMlc (нМ)
Пример 2	86
Пример 8	517

В табл. 2, ниже, приведены данные по in vitro и клеточному ингибированию ROCK для соединений по изобретению. Активность соединений определяли с помощью набора киназ Z'-lyte (ThermoFisher Scientific). Процентный уровень ингибирования рассчитывали путем нормализации значения киназной активности, полученного при обработке 1 мкМ соединения, относительно значения ДМСО-контроля. IC50 рассчитывали, используя программное обеспечение GraphPad Prism и данные по киназной активности, которые были получены при обработке соединениями с 9-точечным серийным разведением. Ингибирование ROCK в клетках A7R5 и клетках NIH3T3 (Acta2-Luc) осуществляли, как описано выше.

Таблица 2

Экс. №	% ИНГ. ROCK2 (0,5 мкМ)	IC50 ROCK 2 (нМ)	% ИНГ. ROCK1 (0,5 мкМ)	IC50 ROCK1 (нМ)	IC50 pMLC (нМ), A7R5	NIH3T3, Acta2luc, IC50 (нМ)
8		3		12	517
4		3			108	ПО
2		4		17	120	352
3		12			222	157
9		15,4			355
10		21			255	1277
11		4			69	106
12		30			458	735
13		6,3			425	1568
14		6,8			353	496
15		24			655	1049
16		3,5			292	376
17	98% @0,5 мкМ	6,3	99% @ 0,5 мкМ		60	108

- 43 046894

18	89% @0,5 мкМ	10	92% @ 0,5 мкМ		504	464
19	90% @0,5 мкМ	4,8	96% @ 0,5 мкМ		355	190
20	94% @0,5 мкМ	1,7	98% @ 0,5 мкМ		263	157
21		3,1			47	66
22		8,9			169	155
23	91% @0,5 мкМ	21			435	252
24	97% @0,5 мкМ	22		88	334	1711
25		94			692	663
26		5,3			152	251
57		10			74	175
59		239		759	4173;5553	>5000
58		12		57	484	74
60		98		258	695	1413
61		2,9		7,7	35	48
27		65			1676	699
28		82			947	335
62		1,8		3	58	108
63		22		81	548	633
29		14			647	146
30		18			247	>5000
31		55			667	1229
32		31			>5000	>5000
33		29		85	913	1476
64		24			379	227
65		1,2			65	51
66		18		56	332	396
34		310			>5000	>5000
67		1,9			269	296
68		451			>5000	>5000
69		400			>5000	>5000

- 44 046894

35	486	>5000	>5000
70	7,7	134
71	3	57	301
36	16	1 577	1546
37	37	977	2314
38	8,7	338	1622
39	16	1 668	>5000
40	45	632	826
41	12	1248	>5000
42	6,5	359
43	47	1491
44	42	2 021	2229
45	53	1 358	1463
46	107	1 877	1200
47	30	321	465
48	67	314	1013
49	> 1000
74	> 1000
50	2,4	97	92
51	8,1	54	101
52	17	106	675
54	68	1 516	2666
53	31	759	1260
55	17	506	601
56	5,3	115	78
75	> 1000
72	46	382	984
73	1,6	15	122
76	950

Соединения по данному изобретению содержат алкильный заместитель (необязательно замещенный) в 2-аминогруппе (т.е. R¹ представляет собой алкил и т. д.), что связано с повышенной клеточной активностью ROCK по сравнению с соединениями, содержащими в этом положении первичную аминогруппу и, в частности, для низших алкильных аминов в 2-положении (т. е. R¹ представляет собой низший алкил).

Пример 88.

Ингибиторы ROCK проникают через гематоэнцефалический барьер.

Концентрации выбранных ингибиторов ROCK в головном мозге и плазме оценивали у мышей методом ВЭЖХ/МС/МС через 15 мин и 2 ч после в/в введения 2,5 мг/кг лекарственного препарата. Результаты приведены в табл. 3 ниже.

Таблица 3.

Соединение	Уровень дозы	Путь	Место	Средняя конц. через 0,25 ч (нг/мл) или (нг/г)	Средняя конц. через 2 ч (нг/мл) или (нг/г)	Среднее соотношение головной мозг/плазма через 0,25 ч	Среднее соотношение головной мозг/плазма через 2 ч
ПРИМЕР 2	2,5	в/в	Плазма	268	25,7	2,01	2,99
Головной мозг	541	76,6

Ингибиторы ROCK по изобретению эффективно ингибировали активность ROCK-киназы in vitro и в клетках.

Как проиллюстрировано на фиг. 1а, соединения по изобретению в концентрации менее 20 наномо

- 45 046894 лей эффективно ингибировали активность обеих изоформ ROCK in vitro согласно измерениям с помощью набора Z'-Lyte (ThermoFisher Scientific). Процентный уровень ингибирования рассчитывали путем нормализации значения киназной активности, полученного при обработке соединением, относительно значения ДМСО-контроля, а затем подставляли в уравнение [ДМСО - (соединение/ДМСО)] х 100%. IC₅₀рассчитывали, используя подобранную функцию нелинейной регрессионной кривой программного обеспечения GraphPad Prism и данные по киназной активности, полученные при обработке 9-точечным 2кратным серийным разведением соединений.

Внутриклеточный ИФА-анализ A7R5 проводили для определения ингибирования ROCK исследуемых соединений. Клетки A7R5 обрабатывали 9-точечным 2-кратным серийным разведением соединений и определяли уровни ppMlc (T18/S19), чтобы рассчитать клеточные значения IC₅₀ соединений. Соединения по изобретению демонстрировали активность с IC₅₀ до 200 нМ. Смотрите фиг. 1b. Клетки A7R5 обрабатывали 9-точечным 2-кратным серийным разведением соединений и определяли уровни ppMlc (T18/S19), чтобы рассчитать клеточные значения IC₅₀ соединений, используя подобранную функцию нелинейной регрессионной кривой программного обеспечения GraphPad Prism.

Ингибиторы ROCK можно эффективно упорядочить с помощью клеточного анализа управляемого промотором АСТА2 репортерного гена люциферазы. Клетки NIH3T3, стабильно экспрессирующие управляемый промотором АСТА2 ген люциферазы, использовали, чтобы измерить функциональное значение IC₅₀ соединений в отношении ROCK в клетках. Клетки высевали в 96-луночные планшеты до конфлюэнтности и обрабатывали 9-точечным серийным разведением соединений в комбинации в TGFe1 в течение 24 ч. Измеряли активность люциферазы и рассчитывали IC₅₀ соединений, используя подобранную функцию нелинейной регрессионной кривой программного обеспечения GraphPad Prism. Соединения по изобретению давали IC₅₀ в клетках до 200 нМ, см. фиг. 1с.

Активность соединений в отношении ROCK исследовали в дополнительных типах клеток. Мышиные эндотелиальные клетки Svec 4-10 обрабатывали соединением из примера 2 в течение 120 мин и визуализировали уровни ppMlc (T18/S19) и pMypt(T853) методом вестерн-блоттинга. Соединения из примера 2 при 110 нМ эффективно блокировали фосфорилирование мишеней ROCK MLC и MYPT1, см. фиг. 1d.

Пример 89. Ингибиторы ROCK стимулируют рост нейритов и нейрональную дифференцировку

Для нейронального развития необходима высококоординированная регуляция цитоскелета. Активация пути RhoA/ROCK приводит к изменениям цитоскелета, таким как увеличение обратного потока актина и снижение деполимеризации актина, и в конечном итоге приводит к коллапсу ростовых конусов, что в свою очередь подавляет рост и размножение нейритов. В данном документе мы показали, что ингибиторы ROCK облегчают разрастание нейронов и рост нейритов дозозависимым образом. На фиг. 2а, b продемонстрировано, что соединения из примера 2 и примера 17 существенно увеличивают длину нейритов при разных концентрациях в культуре человеческих клеток-предшественниц олигодендроцитов/нейронов. Соединения из примера 2 и примера 17 также облегчают дифференцировку и созревание нейронов, см. фиг. 2c, d.

Ингибиторы ROCK блокируют ингибирующее действие хондроитинсульфат протеогликана (ХСПГ) на рост нейритов. Нейроны ЦНС взрослых млекопитающих не способны к спонтанной регенерации после травматического повреждения или нейродегенерации. Это отсутствие регенерации было связано как с врожденной способностью к регенерации взрослых нейронов, так и с ингибирующим тканевым окружением. Основными препятствиями в благоприятном окружении являются хондроитинсульфат протеогликаны (ХСПГ), секретируемые реакционноспособными астроцитами, и миелин-ассоциированные ингибиторы, вырабатываемые олигодендроцитами. Эти ингибирующие рост молекулы глиальных клеток характеризуются повышенной экспрессией после нейронального повреждения, скапливаются ниже сигнального пути RhoA/ROCK и блокируют нейрорегенерацию. Для стимуляции регенерации необходима инактивация ингибирующих рост факторов из тканевого окружения. В данном документе мы показали, что путем блокирования пути Rho/ROCK, через который происходит сигнализация глиального ингибирующего рост фактора, можно обратить ингибирующий эффект ХСПГ на удлинение нейритов. На фиг. 2е проиллюстрированы репрезентативные изображения на 3 сутки. Как проиллюстрировано на фиг. 2f и 2g, как 1 мкМ, так и 3 мкМ соединений из примера 2 и примера 17 существенно противодействуют опосредованному 0,3 мг/мл ХСПГ ограничению роста нейритов в человеческих клетках-предшественницах олигодендроцитов/нейронов. Статистический анализ для момента времени 72 ч проводили, используя дисперсионный анализ ANOVA.

Пример 90.

Ингибиторы ROCK защищают нейрональные клетки от индуцированной Ав 1-42 клеточной гибели.

Кроме стимуляции нейрорегенерации ингибиторы ROCK, согласно имеющимся данным, оказывают нейрозащитный эффект и продлевают выживаемость нейронов. В данном документе мы исследовали нейрозащитный эффект ингибиторов ROCK против Ав 1-42. Человеческие клетки-предшественницы олигодендроцитов/нейронов предварительно инкубировали с ингибиторами ROCK в течение 30 мин перед воздействием 10,5 мкМ Ae1-42. В культуральную среду добавляли реагент аннексии V красный от Incu

- 46 046894

Cyte, чтобы определить клеточный апоптоз. Изображения получали с помощью IncuCyte S3, а общую положительную в отношении аннексина V площадь анализировали, используя программное обеспечение IncuCyte S3. Репрезентативные изображения проиллюстрированы на фиг. 3а. Длину нейритов количественно определяли, используя модуль программного обеспечения IncuCyte NeuroTrack, смотрите фиг. 3b и 3с. На фиг. 3е и 3f проиллюстрирован статистический анализ площади аннексина V и длины нейритов для момента времени 24 ч, который показывает, что 3 мкМ соединений из примера 2 и примера 17 существенно защищали от индуцированной Ав 1-42 гибели клеток, а 3 мкМ соединения из примера 17 стимулировали рост нейритов в присутствии Ав 1-42.

Пример 91.

Ингибиторы ROCK по изобретению снижали экспрессию профиброзных генов.

Экспрессия α-гладкомышечного актина (aSMA или Acta2) фибробластами является ключевым маркером, указывающим на трансдифференцировку фибробластов в более профиброзные миофибробласты, для которых характерна повышенная экспрессия фиброгенных факторов. Такие профиброзные факторы, включая сигнализацию TGFe, приводят к экспрессии aSMA и участвуют в дифференцировке, пролиферации и продлении выживаемости миофибробластов. Как проиллюстрировано на фиг. 4а, индуцированная TGFe1 экспрессия aSMA была существенно снижена ингибитором ROCK. Клетки NIH3T3 в течение 24 ч обрабатывали TGFe1 в комбинации ингибиторов ROCK, а экспрессию мРНК количественно определяли с помощью кПЦР Taqman.

Кроме экспрессии aSMA, миофибробласты, выделенные из легких пациентов с ИФЛ, демонстрировали признаки старения. Они устойчивы к апоптозу и имеют очень активный метаболизм, постоянно вырабатывая большие количества белков ВКМ для обеспечения развития фиброза. CCN1 (или CYR61) и CTGF принадлежат к этим классам белков. Обработка фибробластов легких человека ингибитором ROCK при индукции TGFe сильно ингибировала экспрессию CTGF и CCN1, смотрите фиг. 4b и с. Количество секретируемых белков CCN1, продемонстрированное ИФА-анализом клеточной культуральной среды, как проиллюстрировано на фиг. 4d, также было снижено ингибированием ROCK. Клетки фибробластов CCD18Lu обрабатывали ингибитором ROCK в комбинации с TGFe в течение 40 ч. Содержание CCN1 измеряли, используя набор для ИФА человеческих CCN1 от R&D Systems. Эти результаты позволяют предположить, что ингибиторы ROCK могут ослаблять отвечающие за выживаемость и старение сигналы миофибробластов в фиброзных условиях.

Пример 92.

Ингибитор ROCK эффективен в снижении некоторого количества фиброзных показателей в модели индуцированного блеомицином фиброза легких у мышей.

Учитывая сильную противофиброзную активность ингибиторов ROCK по этому изобретению, способность таких ингибиторов снижать степень фиброза в условиях in vivo оценивали в нескольких мышиных моделях фиброзных заболеваний, включая индуцированный блеомицином фиброз легких. После интратрахеального вливания блеомицина мышам перорально вводили ингибитор ROCK в дозе 3, 10 или 30 мг/кг. Контрольные животные получали только базовый раствор по такой же схеме введения раз в сутки. Через 20 суток обработки животных умерщвляли и удаляли легкие, взвешивали и фиксировали для гистопатологической оценки. На фиг. 5а приведены репрезентативные изображения окрашенных трихромом по Массону срезов легких с увеличением 10Х из каждой группы обработки. Тогда как в группах обработки все еще наблюдались образование фиброзной массы (конец стрелки), утолщение альвеолярных перегородок и узлоподобные образования (стрелка), все они были менее тяжелыми по сравнению с индуцированными блеомицином контрольными животными. (Б = бронхиола). В целом в этой модели ингибитор ROCK улучшал архитектуру легких и отложение коллагена дозозависимым образом. При этом мыши, получавшие дозы >10 мг/кг, демонстрировали явное и статистически значимое улучшение.

Улучшение общей степени фиброза легких, процентную положительную в отношении aгладкомышечного актина (aSMA) площадь и общее число лейкоцитов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа количественно определяли, применяя шкалу оценок Ашкрофта к гистопатологическим изображениям, количественное определение ИГС и проточную цитометрию соответственно. Введение >10 мг/кг ингибитора ROCK приводило к существенному снижению фиброза и меньшей инфильтрации воспалительных лейкоцитов по сравнению с обработанными базовым раствором контрольными животными, на что указывают меньшие средние по группе показатели фиброза, положительная в отношении aSMA площадь и общее число лейкоцитов в жидкости бронхоальвеолярного лаважа. См. фиг. 5b.

Пример 93.

Ингибирование ROCK эффективно в снижении оценки фиброза при терапевтическом введении в модели индуцированного блеомицином фиброза легких у мышей.

Активность ингибиторов ROCK в снижении степени фиброза легких при терапевтическом дозировании оценивали в индуцированной блеомицином модели после интратрахеального вливания блеомицина для индукции повреждения тканей легких и последующего фиброза легких. Через 7 суток после вливания блеомицина, что обеспечило развитие фиброза до начала обработки, мышей обрабатывали соеди

- 47 046894 нением или контрольным базовым раствором. Всех мышей умерщвляли на 20 сутки и получали легкие. Большую долю правого легкого фиксировали 10% нейтральным формалином, делали срезы и окрашивали трихромом по Массону. Явные противофиброзные эффекты наблюдали в группах обработки 10 и 30 мг/кг ингибитора ROCK, о чем свидетельствует более низкое содержание коллагена и снижение оценки окрашивания трихромом по Массону. См. фиг. 6а.

Улучшение общей степени фиброза легких количественно определяли для каждого животного в контрольной группе и группах обработки. См. фиг. 6b. Приведены окрашенные трихромом по Массону срезы легких от отдельных мышей со средними значениями по группе и стандартными погрешностями среднего (СПС). Оценки нормальных контрольных мышей составляли 0. Количество коллагена в легких обработанных соединением из примера 2 мышей было существенно меньшим.

Пример 94. Ингибирование ROCK стабилизирует функцию эндотелиального барьера в модели индуцированной гистамином сосудистой проницаемости у мышей.

Кроме повреждения, которому подвергается эпителий органов, при фиброзных заболеваниях повреждения также возникают в эндотелиальных клетках, приводя к дестабилизации эндотелиального барьера и пропотеванию капилляров, что является признаками фиброзных тканей. Путь сигнализации ROCK характеризуется повышенной регуляцией в поврежденных эндотелиальных клетках и приводит к дополнительной дестабилизации барьера и пропотеванию сосудов. Вовлеченность ROCK в индукцию пропотевания сосудов позволила нам предположить, что введение ингибитора ROCK может стабилизировать эту функцию сосудистого барьера in vivo. Мы исследовали эффективность блокирующей активности ингибитора ROCK после введения одной дозы в модели индуцированного гистамином пропотевания сосудов дермы у мышей. В этой модели интрадермальная инъекция гистамина быстро индуцировала пропотевание красителя голубого Эванса в месте введения гистамина. Введение ингибитора ROCK из примера 2 за 1 ч до инъекции гистамина блокировало проницаемость сосудов, индуцированную гистамином, дозозависимым образом, что позволяет предположить, что кроме противофиброзной активности ингибиторы ROCK по этому изобретению также можно использовать при заболеваниях, связанных с индуцированной проницаемостью сосудов. На фиг. 7а приведены репрезентативные изображения пропотевания красителя голубого Эванса, индуцированного гистамином.

Степень эффективности соединения количественно определяли, подсчитывая общую площадь пятна на коже и количество красителя голубого Эванса, проникшего в кожу. Через 20 мин после стимуляции гистамином животных умерщвляли, измеряли диаметр поражений. Рассчитывали площадь поражений и выражали в квадратных миллиметрах. После измерения диаметра из тканей кожи экстрагировали краситель голубой Эванса и измеряли оптическую плотность. Данные рассчитывали относительно пиковых данных на стандартной кривой голубого Эванса. ** р< 0,01 по сравнению с группой базового раствора с применением однофакторного дисперсионного анализа ANOVA с последующим апостериорным критерием Даннетта. См. фиг. 7b.

Claims

1. Соединение, имеющее формулу I

R¹ R² R³ (I) где

А представляет собой

R¹ выбран из группы, состоящей из низшего алкила, замещенного низшего алкила, С₃-С₆циклоалкила, замещенного С₃-С₆циклоалкила, R¹⁰R¹¹N(CR¹²R¹³)c-, R¹⁰O(CR¹²R¹³)c-, W(CR¹²R¹³)d- и R¹⁰R¹¹N-C(=O)-(CR¹²R¹³)c-;

каждый R¹⁰ независимо выбран из Н, низшего алкила и С₃-С₆циклоалкила;

каждый R¹¹ независимо выбран из Н, низшего алкила и С₃-С₆циклоалкила;

c равен от 2 до 4;

d равен от 1 до 4;

- 48 046894

R² выбран из группы, состоящей из арила, гетероарила и гетероциклила, где гетероарил и гетероциклил могут быть 5- или 6-членными моноциклическими или 9- или 10-членным бициклическими кольцами, имеющими от 1 до 3 кольцевых гетероатомов, и каждый из арила, гетероарила и гетероциклила могут быть необязательно замещены 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, нитро, циано, С₁-С₃перфторалкила, С₁-С₃перфторалкокси, RR'N-, RR'NCO-, RCONR'-, RO2C-, арила-О- и гетероарила-О-;

R³ выбран из Н, низшего алкила, замещенного низшего алкила и RR'N-(C_2-4 алкила)-;

R⁴ выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, нитро, циано, C₁-С₃перфторалкила, C₁-С₃перфторалкокси, RR'N-, RR'NCO-, RCONR'-, RR'N-(C_2-4алкила)- и RR'N-(C_2-4алкила)-О-;

R⁵ выбран из Н, низшего алкила и С₃-С₆циклоалкила;

в альтернативном варианте R³ и R⁵ вместе с атомами азота, к которым они присоединены, образуют циклическую группу, имеющую от 5 до 7 кольцевых атомов, в том числе 2-3 кольцевых гетероатома, причем циклическая группа не замещена или замещена 1-3 заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, амино, нитро, циано, С1-С₃перфторалкила, С1-С₃перфторалкокси, карбоксила, арила и гетероарила;

а равен 0 или 1;

b равен от 0 до 2 и каждый R и R' независимо выбран из Н, низшего алкила и С3-С6циклоалкила или, в альтернативном варианте, R и R' вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют 5-6-членное гетероцик лическое кольцо;

замещенный низший алкил представляет собой С_1-4алкил, имеющий от одного до трех заместителей, выбранных из группы, состоящей из галогена, гидрокси, С1-С₄алкокси, амино, нитро, циано, перфтор С1-С₄алкила, перфтор С1-С₄алкокси, RR'NCO- и карбоксила;

карбоксил представляет собой -СО2Н;

замещенный С₃-С₆циклоалкил представляет собой С₃-С₆циклоалкил, имеющий от одного до трех заместителей, выбранных из группы, состоящей из галогена, гидрокси, С_1-4алкила, С1-С₄алкокси, амино, нитро, циано, перфтор С1-С₄алкила, перфтор С1-С₄-алкокси и карбоксила;

арил представляет собой фенил;

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п.1, имеющее формулу II н

л £ /

3. Соединение по п.1, имеющее формулу V

где

каждый R²¹ независимо выбран из группы, состоящей из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, нитро, циано, С1-С₃перфторалкила, С1-С₃перфторалкокси, карбоксила, RR'N-, RR'NCO-, RCONH-, RCONR'-, RO2C-, арила-О- и гетероарила-О-;

каждый R и R' независимо выбран из Н, низшего алкила и С₃-С₆циклоалкила или, в альтернативном варианте, R и R' вместе образуют 5-6-членное гетероциклическое кольцо и n равен от 0 до 3;

или его фармацевтически приемлемая соль.

4. Соединение по п.1, имеющее формулу VI

- 49 046894

где

каждый R²² независимо выбран из галогена, гидрокси, низшего алкила, низшего алкокси, нитро, циано, C₁-С₃перфторалкила, C₁-С₃перфторалкокси, карбоксила, RR'N-, RR'NCO-, RCONH-, RCONR'-, RO2C-, арила-О- и гетероарила-О-;

или его фармацевтически приемлемая соль.

5. Соединение по п.1, имеющее формулу н

R⁵ О Г if 'Ϋ

C3~^(R22)n где

R¹ выбран из группы, состоящей из низшего алкила и низшего алкила, замещенного -О^^алкил, перфтор С₁-С₄алкокси, -C(=O)-NH₂, -С^ОДК^С^алкил) или -С^ОД^Сь^килД;

R²² выбран из галогена, низшего алкила, низшего алкокси и -С^О^ЩСь^кил) и n равен 1 или 2;

или его фармацевтически приемлемая соль.

6. Соединение по п.5, где R¹ представляет собой низший алкил; или его фармацевтически приемлемая соль.

7. Соединение по п.6, где R⁵ представляет собой Н;

или его фармацевтически приемлемая соль.

8. Соединение по п.1, где соединение представляет собой №(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид;

^)-№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(2-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(4-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(п-толил)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(4-фторфенил)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(м-толил)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этиламино)-2-(3-фторфенил)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-хлорфенил)-2-(этиламино)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-фторфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-фторфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(п-толил)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(этиламино)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-фтор-4-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-(дифторметокси)фенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(метиламино)этил)амино)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(метиламино)-2-(2-метилбензо^]тиазол-6-ил)ацетамид;

№(4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-(диметиламино)фенил)-2-(метиламино)ацетамид;

- 50 046894 №(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(2-метоксипиридин-4-ил)-2-(метиламино)ацетамид;

метил 3-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензоат;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-(диметиламино)фенил)-2-(метиламино)ацетамид;

3-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензойная кислота;

Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метил-1Н-индазол-6-ил)-2-(метиламино)ацетамид;

метил-4-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)бензоат;

Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(2-метил-1Н-бензоЩ|имидазол-6-ил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((3-метоксипропил)амино)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-этоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((3-(диметиламино)пропил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)-2-оксоэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-изопропоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-амино-2-оксоэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((3-(метиламино)пропил)амино)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((1-метокси-2-метилпропан-2-ил)амино)-2-3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(метиламино)-2-оксоэтил)амино)ацетамид; 2-(((1Н-пиразол-4-ил)метил)амино)-Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(этил(2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)(метил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3метокси(енил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)-Н-метилацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-морфолиноэтил)амино)ацетамид;

№(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)(метил)амино)-2-(3 -метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(пирролидин-1-ил)этил)амино)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((1-(метоксиметил)циклопропил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(2,2,2-трифторэтокси)этил)амино)ацетамид;

№(3-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

№(3-метокси-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид; ^)-Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

^)-Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-метоксиэтил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид;

^)-Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)этил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид; ^)-Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-((2-(диметиламино)этил)амино)-2-(3-метоксифенил)ацетамид; ^)-Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-(метиламино)этил)амино)ацетамид;

^)-Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-((2-метиламино)этил)амино)ацетамид;

^)-Н-(4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(4-хлорфенил)-2-(метиламино)ацетамид;

№(2-фтор-5-метокси-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2-(метиламино)ацетамид;

3-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)-Н-метилбензамид;

4-(2-((4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)амино)-1-(метиламино)-2-оксоэтил)-Н-метилбензамид;

№(2-(3-(диметиламино)пропокси)-5-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2(метиламино)ацетамид;

№(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(1Н-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2(метиламино)ацетамид;

^)-Н-(2-(2-(диметиламино)этокси)-5-фтор-4-(Ш-пиразол-4-ил)фенил)-2-(3-метоксифенил)-2(метиламино)ацетамид;

или его фармацевтически приемлемая соль.

9. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.

10. Применение соединения по любому из пп.1-8 или фармацевтической композиции по п.9 для лечения фиброзного нарушения у субъекта.

11. Применение по п.10, где фиброзное нарушение выбрано из группы, состоящей из фиброза легких, кистозного и идиопатического фиброза легких, вызванного радиоактивным облучением повреждения легких, фиброза печени, цирроза, миокардиального фиброза, артериального фиброза, эндомиокарди

- 51 046894 ального фиброза, перенесенного инфаркта миокарда, артериальной ригидности, атеросклероза, рестеноза, артрофиброза, болезни Крона, миелофиброза, болезни Пейрони, нефрогенного системного фиброза, прогрессирующего массивного фиброза, забрюшинного фиброза, склеродермы/системного склероза, медиастинального фиброза, келоидных и гипертрофических рубцов, рубцевания глиальной ткани и почечного фиброза.

12. Применение по п.11, где легочный фиброз представляет собой идиопатический легочный фиброз.

13. Применение соединения по любому из пп.1-8 или фармацевтической композиции по п.9 для лечения нарушения центральной нервной системы у субъекта

14. Применение по п.13, где нарушение центральной нервной системы выбрано из группы, состоящей из болезни Хантингтона, болезни Паркинсона, болезни Альцгеймера, амиотрофического бокового склероза (АБС), болезни Баттена, деменции, спинальной мышечной атрофии, заболевания двигательных нейронов, спиноцеребеллярной атаксии, острой или хронической боли, нейрональной дегенерации, повреждения спинного мозга, спазма сосудов головного мозга и множественного склероза.

15. Применение соединения по любому из пп.1-8 или фармацевтической композиции по п.9 для лечения глаукомы у субъекта.

16. Применение соединения по любому из пп.1-8 или фармацевтической композиции по п.9 для лечения воспаления у субъекта.