EA046642B1

EA046642B1 - 4Н-ПИРРОЛО[3,2-с]ПИРИДИН-4-ОНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ

Info

Publication number: EA046642B1
Application number: EA202192881
Authority: EA
Inventors: Штефан ЗИГЕЛЬ; Франциска Зигель; Фолькер Шульце; Маркус Бергер; Кит Грэм; Детлеф ЗЮЛЬЦЛЕ; Ульф Бёмер; Даниэль Корр; Йенс Шрёдер; Урзула Мённинг; Михаэль Нихус; Мэттью Мейерсон; Хайди Гройлих; Бетани Каплан
Original assignee: Байер Акциенгезельшафт; Дзе Брод Инститьют, Инк.; Дэйна-Фарбер Кэнсер Инститьют, Инк.
Priority date: 2019-04-24
Filing date: 2020-04-22
Publication date: 2024-04-03

Description

Изобретение относится к замещенным 4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-оновым соединениям, способу их получения и вариантам их применения.

Предпосылки создания изобретения

Семейство тирозинкиназ рецептора эпидермального фактора роста (EGFR или EGF-рецептор) состоит из 4 членов: EGFR (Erbb1, Her1), ERBB2 (Her2), ERBB3 (Her3) и ERBB4 (Her4). EGFR опосредует активацию сигнальных путей MAPK и PI3K и тем самым регулирует пролиферацию, дифференциацию, миграцию и выживаемость клеток (Pao и др., 2010). Амплификация, сверхэкспрессия и мутации гена EGFR часто наблюдаются при различных признаках злокачественного новообразования и связаны с плохим прогнозом (Gridelli и др., 2015).

При аденокарциноме легких, мутации EGFR распространены у приблизительно 15% западных пациентов и вплоть до 50% восточноазиатских пациентов (Paez и др., 2004). Эти мутации типично встречаются в одном из четырех экзонов - в экзонах 18-21 - в киназном домене EGFR (Paez и др., 2004). Наиболее распространенными активирующими мутациями в EGFR являются точечная мутация в экзоне 21, приводящая к замене лейцина на аргинин (L858R), и мелкая делеция внутри рамки считывания в экзоне 19, которая приводит к удалению четырех аминокислот (del19/del746-750) (Pao и др., 2010). Одобренные управлением по контролю за продуктами и лекарствами США ингибиторы гефитиниб, эрлотиниб и афатиниб, нацеленные на мутации в экзонах 18, 19 и 21 EGFR, эффективны у пациентов, но ответ часто бывает непродолжительным (Mok и др., 2009; Sequist и др., 2013). Резистентность у таких пациентов часто возникает в ответ на приобретение второй мутации, T790M (Pao и др., 2005). Ингибиторы второго поколения, например, афатиниб, необратимо нацелены на эту мутацию, но по-прежнему являются мощными ингибиторами EGFR дикого типа, что приводит к ограничивающей дозу токсичности и недостаточной эффективности у пациентов. Необратимый ингибитор третьего поколения, осимертиниб, который максимизирует активность в отношении T790M при минимизации активности в отношении EGFR дикого типа, эффективен у пациентов с мутантом T790M и в настоящее время является стандартным лечением для T790M-положительных пациентов (Mok и др., 2017). Осимертиниб также одобрен в качестве терапии первой линии для пациентов с мутациями EGFR в экзонах 19 или 21 (Soria и др., 2018).

Однако, у пациентов также развивается резистентность к необратимым ингибиторам EGFR третьего поколения, таким как осимертиниб. Одним из основных выявленных механизмов резистентности к осимертинибу является появление мутации цистеина в положении 797, заключающейся в его замене на серин, что приводит к потере ковалентно взаимодействующего цистеина и потере чувствительности к необратимым ингибиторам EGFR, после чего прогрессирующим пациентам в настоящее время доступны только ограниченные возможности лечения (Thress и др., 2015; Oxnard и др., 2018). Такие мутации C797S также могут возникать при применении осимертиниба в качестве терапии первой линии при отсутствии мутации T790M (Ramalingham и др., 2018a; Ramalingham и др., 2018b). Новая направленная терапия, которая способна конкретно воздействовать на приобретенную резистентную мутацию EGFR-C797S, будет очень полезна для таких пациентов.

В противоположность этому, и за исключением A763_Y764insFQEA, мелкие инсерции внутри рамки считывания в экзоне 20 EGFR резистентны ко всем клинически одобренным ингибиторам EGFR в дозах, достижимых у пациентов с раком легких, и составляют неудовлетворенную медицинскую потребность (Yasuda и др., 2013).

Пациенты с инсерциями в экзоне 20 EGFR, такими как V769_D770insASV, D770_N771insSVD, D770_N771insNPG, N771_P772insH, H773_V774insH, H773_V774insNPH, V774_C775insHV, демонстрируют особенно низкие показатели ответной реакции на все одобренные в настоящее время направленные на EGFR способы терапии, что приводит к значительному снижению выживаемости без прогрессирования, а также общей выживаемости (Chen и др., 2016). Это было показано для ингибиторов первого поколения эрлотиниба и гефитиниба, а также для ингибитора второго поколения афатиниба (Chen и др., 2016; Yang и др., 2015).

Таким образом, стандартным лечением для пациентов с инсерциями в экзоне 20 EGFR в настоящее время является химиотерапия.

Такой же профиль резистентности наблюдался для инсерционных мутаций в экзоне 20 в ERBB2 (например, ERBB2 A775_G776insYVMA имеет наибольший показатель распространенности), еще одного члена семейства рецепторов EGF (Arcila и др., 2012), и некоторых необычных мутаций EGFR, таких как L681Q (Chiu и др., 2015).

Несколько необратимых ингибиторов в настоящее время проходят клинические испытания для лечения пациентов с инсерцией в экзоне 20 EGFR: осимертиниб, первоначально одобренный для лечения пациентов с T790M мутантом NSCLC (Floc'h и др., 2018); позиотиниб (HM-781-36B), неутвержденный ингибитор pan-Her, нацеленный на EGFR, Her2/neu и Her4 (Robichaux и др., 2018); а также TAK-788 (AP32788) (Doebele и др., ASCO 2018). Среди них, первые клинические данные были опубликованы для позиотиниба и TAK-788. Оба соединения четко демонстрируют клиническую эффективность у пациентов с инсерцией в экзоне 20 EGFR. Однако в случае обоих клинических испытаний сообщалось о серьезных нежелательных явлениях, опосредованных ингибированием EGFR дикого типа, и эти нежелатель

- 1 046642 ные явления могут ограничить клиническую применимость.

Относительно недавно были опубликованы новые данные доклинических исследований для двух дополнительных соединений, демонстрирующих активность в отношении EGFR с инсерцией в экзоне 20: TAS6417 (TCP-064) и соединение 1a (Hasako и др., 2018; Jang и др., 2018). Для этих двух соединений клинические результаты пока отсутствуют.

Таким образом, мутант EGFR является многообещающей мишенью для лекарственных препаратов для лечения злокачественных новообразований. В частности, пациенты с первичной резистентностью, развившейся вследствие инсерций в экзоне 20 EGFR, к одобренным способам, нацеленным на EGFR, на сегодняшний день имеют лишь несколько вариантов лечения, и существует большая потребность в новых альтернативных и/или улучшенных терапевтических средствах с целью обеспечения таких пациентов эффективными и хорошо переносимыми способами терапии (Oxnard и др., 2013). Таким образом, мощные ингибиторы мутанта EGFR, в частности, мутанта EGFR с инсерционными мутациями в экзоне 20, которые демонстрируют селективность, улучшенную в сопоставлении с EGFR дикого типа, представляют собой ценные соединения, которые должны дополнять возможности терапевтического лечения либо в виде отдельных средств, либо в комбинации с другими лекарственными препаратами.

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает соединения, которые ингибируют мутант EGFR; в особенности, EGFR, включающий один или несколько инсерционных мутаций в экзоне 20, мутацию L858R или мелкую делецию внутри рамки считывания в экзоне 19, в присутствии или отсутствие мутации C797S. Эти соединения, кроме того, обладают пониженной активностью по отношению к EGFR дикого типа.

Было обнаружено, что соединения настоящего изобретения обладают неожиданными и выгодными свойствами.

В частности, неожиданно было обнаружено, что указанные соединения настоящего изобретения эффективно ингибируют мутант EGFR с инсерционными мутациями в экзоне 20, в частности, с D770_N771ins SVD инсерцией в экзоне 20 с IC₅₀ ниже 5 нМ. Более того, неожиданно было обнаружено, что указанные соединения дополнительно демонстрируют клеточную активность ниже 1 мкМ в клеточных линиях BA/F3, заякоривающих EGFR с V769_D770insASV, D770_N771insSVD, D770_N771insNPG, N771_P772insH или H773_V774insNPH инсерциями в экзоне 20. Более того, описанные в данной заявке соединения активны в клеточных линиях BA/F3, заякоривающих D770_N771insSVD C797S. Кроме того, описанные в данной заявке соединения эффективно ингибируют пролиферацию клеточных линий BA/F3, несущих активирующие мутации EGFR с или без мутаций C797S приобретенной резистентности (EGFR E746_A750del, L858R, E746_A750del C797S, L858R C797S), необычных мутаций EGFR (EGFR L681Q), или ERBB2 инсерции в экзоне 20 A775_G776insYVMA.

Неожиданно эти соединения дополнительно проявляют по меньшей мере 5-ти кратную селективность в антипролиферативном анализе с клеточными линиями BA/F3, заякоривающими EGFR с D770_N771ins SVD инсерцией в экзоне 20, в сопоставлении с клетками BA/F3 дикого типа, заякоривающими EGFR, и вследствие этого их можно применять для лечения или профилактики заболеваний неконтролируемого(ой) роста клеток, пролиферации и/или выживаемости, неподходящих клеточных иммунных ответов, или неподходящих клеточных воспалительных ответов или заболеваний, которые сопровождаются неконтролируемым(ой) ростом клеток, пролиферацией и/или выживаемостью, неподходящими клеточными иммунными ответами, или неподходящими клеточными воспалительными ответами, опосредованными мутантом EGFR с инсерционными мутациями в экзоне 20, и/или уменьшения (или блокировки) пролиферации клеток, заякоривающих EGFR с инсерционными мутациями в экзоне 20, например, таких как гематологические опухоли, солидные опухоли, и/или их метастазы, например, лейкемии и миелодиспластический синдром, злокачественные лимфомы, опухоли головы и шеи, включая опухоли головного мозга и метастазы в головной мозг, опухоли грудной клетки, включая немелкоклеточные и мелкоклеточные опухоли легкого, гастроинтестинальные опухоли, эндокринные опухоли, опухоли молочной железы и другие гинекологические опухоли, урологические опухоли, включая ренальные опухоли, опухоли мочевого пузыря и предстательной железы, опухоли кожи и саркомы, и/или их метастазы.

- 2 046642

Описание изобретения

В соответствии с первым аспектом, изобретение относится к соединению формулы (I)

(I), в которой R¹ представляет собой метил, этил, трифторметил, 2,2-дифторэтил, циано, хлор, бром, метокси или дифторметокси;

R² представляет собой водород, метил, этил, фтор, хлор или бром;

R³ представляет собой водород или фтор;

R⁴ представляет собой водород или метил;

R⁵ независимо в каждом случае представляет собой водород, трифторметил или ^-^-алкил, причем

R⁵ присоединен к любому атому углерода кольца;

R⁶ независимо в каждом случае представляет собой водород, ^-^-алкил или C₁-C₃-гαлогеналкил;

R⁷ представляет собой C₁-C₃-αлкuл или ^-^-галогеналкил;

R⁸ представляет собой C₁-C₃-алкuл или ^-^-галогеналкил;

X представляет собой NR или O;

Y представляет собой NR⁸ или O;

m представляет собой 0, 1, 2 или 3;

n представляет собой 0 или 1;

или N-оксиду, соли или таутомеру указанного соединения, или соли указанного N-оксида или таутомера.

В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере две R⁵ группы являются геминальными группами (т.е. группами, присоединенными к одному и тому же атому углерода).

Во втором аспекте изобретение относится к соединению формулы (I), как описано выше, где

R¹ представляет собой метил, этил, хлор, метокси или дифторметокси;

R² представляет собой метил, этил, фтор или хлор;

R³ представляет собой водород или фтор;

R⁴ представляет собой водород или метил;

R⁵ представляет собой водород, метил или трифторметил, причем

R⁶ представляет собой водород, метил или трифторметил;

R⁷ представляет собой C₁-C₂-aлкuл или C₂-C₃-фторалкuл;

R⁸ представляет собой C₁-C₂-алкuл или C₂-C₃-фторалкuл;

X представляет собой NR⁷ или O;

Y представляет собой NR⁸ или O;

m представляет собой 0, 1 или 2;

n представляет собой 0 или 1;

В третьем аспекте изобретение относится к соединению формулы (I), как описано выше, где

R¹ представляет собой метил, этил, хлор или метокси;

R² представляет собой фтор или хлор;

R³ представляет собой водород или фтор;

R⁴ представляет собой водород;

R⁵ представляет собой водород или метил, причем

R⁶ представляет собой водород;

R⁷ представляет собой метил;

- 3 046642

R⁸ представляет собой метил, 2,2,2-трифторэтил или 2,2-дифторэтил;

X представляет собой NR⁷ или O;

Y представляет собой NR⁸ или O;

m представляет собой 0, 1, или 2;

n представляет собой 0 или 1;

В четвертом аспекте изобретение относится к соединению формулы (I), как описано выше, которое выбирают из группы, состоящей из:

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(25)-1,4-диоксан-2ил] метокси }пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(27?)-1,4-диоксан-2ил] метокси }пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-3-(3-фтор-2метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{[(25)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{[(27?)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(2,3-дихлоранилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(2,3-дихлоранилино)-2-(3-{[(25)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4ил)-1,5,6,7-тетрагидро-477-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(2,3-дихлоранилино)-2-(3-{[(27?)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(37?)-4-метилморфолин-3ил] метокси }пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(27?)-4-метилморфолин-2ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(25)-4-метилморфолин-2ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(27?)-4-метилморфолин-2ил] метокси }пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(25)-4-метилморфолин-2ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

- 4 046642

3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[4-метилморф олин-2ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-477-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[1,4-диоксан-2ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(35')-4-метилморфолин-3ил] метокси} пирид ин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(35)-4-метилморфолин-3ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-477-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 2-(3-{ [(25)-4-(2,2-дифторэтил)морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(25)-4-(2,2,2-трифторэтил)морфолин-2ил] метокси} пирид ин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4//-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[2-(4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4ил}-1,5,6,7-тетрагидро-477-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{2-[(2К)-1,4-диоксан-2ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{2-[(25)-1,4-диоксан-2ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(25)-4-метилморфолин-2ил] метокси} пирид ин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4//-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{ [(25)-4-(2,2,2трифторэтил)морфолин-2-ил] метокси} пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4//-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(27?)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил] метокси} пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{ [(25)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 2-(3-{[(2К)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 2-(3-{[(25)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 2-(3-{2-[(27?)-1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 2-(3-{2-[(25)-1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(37?)-4-метилморфолин-3ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

- 5 046642

2-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2метиланилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{ [(25)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-2-{3-[(1,4-диоксан-2ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-2-(3-{[(25)-4-метилморфолин-2ил] метокси }пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(25)-4-метилморфолин-2ил] метокси }пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(37?)-4-метилморфолин-3ил] метокси }пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил)метокси]пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(25)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил]метокси)пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она 3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(27?)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил]метокси)пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2метиланилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{[(25)-1,4-диоксан-2-ил]метокси)пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2метиланилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{ [(27?)-1,4-диоксан-2-ил] метокси }пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2метиланилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(25)-1,4-диоксан-2-ил]метокси)пиридин4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(27?)-1,4-диоксан-2-ил]метокси)пиридин4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(25)-1,4-диоксан-2-ил]метокси)пиридин-4ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(27?)-1,4-диоксан-2-ил]метокси)пиридин-4· ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

- 6 046642

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(27?)-4-метилморфолин-2ил]метокси} пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(25)-4-метилморфолин-2ил]метокси} пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{ 1-[1,4-диоксан-2-ил]этокси} пиридин-4ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{(1Х)-1-[(25')-1,4-диоксан-2ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{(1Х)-1-[(27?)-1,4-диоксан-2ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{(17?)-1-[(25)-1,4-диоксан-2ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{(17?)-1-[(27?)-1,4-диоксан-2ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-фтор-2-метиланилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-фтор-2-метиланилино)-2-(3-{[(27?)-4-метилморфолин-2ил] метокси }пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4/7-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-фтор-2-метиланилино)-2-(3-{[(2Х)-4-метилморфолин-2ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Я-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{[(2К)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{[(28)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{[(2К)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2этил-3-фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

2-(3-{[(2S)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил] метокси} пиридин-4-ил)-3-(2этил-3-фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({1-[4-метилморфолин-2ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({(1К)-1-[(2К)-4-метилморфолин-2ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({(18)-1-[(28)-4-метилморфолин-2ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({(1К)-1-[(28)-4-метилморфолин-2ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({(18)-1-[(2К)-4-метилморфолин-2ил]этил }окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4она.

Дополнительный аспект изобретения относится к соединениям формулы (I), которые представлены в виде их солей.

Следует понимать, что настоящее изобретение относится к любой подкомбинации в рамках любого из вариантов осуществления или аспектов настоящего изобретения - соединений общей формулы (I), как указано выше.

Еще более конкретно, настоящее изобретение охватывает соединения общей формулы (I), которые раскрыты в разделе Примеры данного текста ниже.

В соответствии с другим аспектом, настоящее изобретение охватывает способы получения соединений настоящего изобретения, которые включают стадии, как описано в Экспериментальном разделе данного описания.

- 7 046642

Другим вариантом осуществления изобретения являются соединения, раскрытые в разделе Формула изобретения, или раскрытые аналоги приведенных в качестве примеров соединений и их подкомбинации.

Определения.

Следует понимать, что раскрытые в настоящей заявке варианты осуществления не следует понимать как отдельные варианты осуществления, которые не связаны друг с другом. Признаки, обсуждаемые в одном варианте осуществления или аспекте изобретения, предназначены для раскрытия также в связи с другими вариантами осуществления или аспектами изобретения, показанными в настоящей заявке. Если в одном случае конкретный признак раскрывается не в одном варианте осуществления или аспекте изобретения, а в другом, специалисту в данной области будет понятно, что это не обязательно означает, что указанный признак не предназначен для раскрытия в указанном ином варианте осуществления или аспекте изобретения. Специалисту в данной области будет понятно, что суть настоящей заявки состоит в том, чтобы раскрыть упомянутый признак также и для иного варианта осуществления или аспекта изобретения, но только для целей ясности и сохранения настоящего описания в объеме, не выходящем за разумные рамки. Например, следует понимать, что все аспекты, варианты осуществления, фармацевтические композиции, комбинации, применения и/или способы настоящего изобретения, определенные в настоящей заявке для соединений формулы (I), также относятся к более конкретным вариантам осуществления соединений формулы (I), таким как, но не ограничиваясь ими, соединения формулы (Ia), и наоборот.

Кроме того, следует понимать, что содержание документов, которые упоминаются в настоящей заявке, полностью включено посредством ссылки, например, для целей обеспечения преемственности опыта, как, например, в случае обсуждения способа, детали которого описаны в указанном документе. Такой подход позволяет сохранить настоящее описание в объеме, не выходящем за разумные рамки.

Структурные составляющие, которые являются необязательно замещенными, как указано в данной заявке, могут быть замещены, если не указано иначе, один или несколько раз независимо друг от друга в любом возможном положении. Когда какая-либо переменная встречается более одного раза в какой-либо структурной составляющей, каждое определение является независимым. Например, когда R¹, R^1a, R^1b, R^1c, R², R³ и/или R⁴ встречаются более одного раза в любом соединении формулы (I), каждое определение R¹, R^1a, R^1b, R^1c, R², R³ и R⁴ является независимым.

Если структурная составляющая состоит из более чем одной части, как, например, G-G-алкоксиG-G-алкил, возможный заместитель может находиться в любой из этих частей в любом подходящем положении. Дефис в начале или в конце структурной составляющей обозначает место присоединения к остальной части молекулы. Если кольцо является замещенным, заместитель может находиться в любом подходящем положении кольца, а также на атоме азота кольца, если это является подходящим.

Термин включающий (содержащий), при применении в описании охватывает состоящий из.

Если в рамках описания используется выражение как упомянуто выше или упомянуто выше, как указано выше, речь идет о любом из раскрытий, сделанных в рамках описания на любой из предыдущих страниц.

Если в рамках описания используется выражение как упомянуто в данной заявке, описано в данной заявке, обеспечено в данной заявке или как упомянуто в настоящем тексте, или указано в данной заявке, речь идет о любом из раскрытий, сделанных в рамках описания на любой из предыдущих или последующих страниц.

Подходящий в смысле изобретения означает химическую возможность быть полученным способами в рамках знаний специалиста в данной области.

Термины, как упомянуто в настоящем тексте, могут иметь следующие значения:

Термин атом галогена, галоген- или Hal- следует понимать как означающий атом фтора, хлора, брома или йода.

Термин G-G-алкил следует понимать как означающий линейную или разветвленную, насыщенную, одновалентную углеводородную группу, имеющую 1, 2, 3, 4, 5, или 6 атомов углерода, например, группу метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, изопропил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, изопентил, 2-метилбутил, 1-метилбутил, 1-этилпропил, 1,2-диметилпропил, неопентил, 1,1-диметилпропил, 4метилпентил, 3-метилпентил, 2-метилпентил, 1-метилпентил, 2-этилбутил, 1-этилбутил, 3,3диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 1,1-диметилбутил, 2,3-диметилбутил, 1,3-диметилбутил или 1,2диметилбутил, или ее изомер. В частности, указанная группа имеет 1, 2, 3 или 4 атома углерода (C₁-C₄алкил), например, означает группу метил, этил, пропил, бутил, изопропил, изобутил, втор-бутил, третбутил, более конкретно 1, 2 или 3 атома углерода (G-G-алкил), например, означает группу метил, этил, н-пропил или изопропил.

Термин G-G-галогеналкил следует понимать как означающий линейную или разветвленную, насыщенную, одновалентную углеводородную группу, где термин G-G-алкил определен выше, и в которой один или несколько атомов водорода заменены на атомы галогена, одинаково или по-разному, т.е. один атом галогена не зависит от другого. В частности, указанный атом галогена означает F. Указанная G-G-галогеналкильная группа означает, например, -CF₃, -CHF₂, -CH₂F, -CF₂CF₃, -CH₂CH₂F,

- 8 046642

-CH2CHF2, -CH2CF3, -CH2CH2CF3 или -CH(CH2F)2.

Термин С₂-С₃-фторалкил следует понимать как означающий линейную или разветвленную, насыщенную, одновалентную углеводородную группу, где термин О-О-алкил определен выше, и в которой один или несколько атомов водорода заменены на атом фтора. Указанная О-О-фторалкильная группа означает, например, -CF₂CF₃, -CH₂CH₂F, -CH₂CHF₂, -CH₂CF₃, -CH₂CH₂CF₃ или -CH(CH₂F)₂.

Термин C.'i-C-1-алкокси следует понимать как означающий линейную или разветвленную, насыщенную, одновалентную, углеводородную группу формулы -O-алкил, где термин алкил определен выше, например, группу метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, изобутокси, трет-бутокси или втор-бутокси, или ее изомер.

Если не дано иное определение, термин 5-6-членный гетероциклоалкил или 5-6-членное гетероциклическое кольцо следует понимать как означающий насыщенное, одновалентное, моноциклическое углеводородное кольцо, которое содержит 4 или 5 атомов углерода и одну содержащую гетероатом группу, выбранную из O и NR, где R означает атом водорода, Cj-C.'3-алкильную или C1-C3галогеналкильную группу, причем указанная гетероциклоалкильная группа может быть присоединена к остальной части молекулы через любой из атомов углерода.

В частности, не ограничиваясь перечисленным, указанный гетероциклоалкил может представлять собой, например, 5-членное кольцо, такое как тетрагидрофуранил, пиразолидинил, или 6-членное кольцо, такое как тетрагидропиранил, пиперидинил.

Термин C₁-C₆, используемый по всему тексту, например, в контексте определения C₁-C₆-алкила или О-О-галогеналкила, следует понимать как означающий алкильную группу, имеющую конечное число атомов углерода от 1 до 6, т.е. 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода. Кроме того, следует понимать, что указанный термин C1-C6 следует интерпретировать как любой содержащийся в нем поддиапазон, например, C₁-C₆, C₂-C₆, C₃-C₆, C₁-C₂, C₁-C₃, в частности C₁-C₂, C₁-C₃, C₁-C₄.

Термин C₁-C₄, используемый по всему тексту, например, в контексте определения О-О-алкила, О-О-галогеналкила, О-О-алкокси или О-О-галогеналкокси, следует понимать как означающий алкильную группу, имеющую конечное число атомов углерода от 1 до 4, т.е. 1, 2, 3 или 4 атома углерода. Кроме того, следует понимать, что указанный термин C₁-C₄ следует интерпретировать как любой содержащийся в нем поддиапазон, например, C₁-C₄, C₂-C₄, C₃-C₄, C₁-C₂, C₁-C₃, в частности, C₁-C₂, C₁-C₃, C₁C₄, а в случае О-О-галогеналкила или О-О-галогеналкокси еще более конкретно C₁-C₂.

Более того, термин C3-C6, используемый по всему тексту, например, в контексте определения C₃C.'6-циклоалкила, следует понимать как означающий циклоалкильную группу, имеющую конечное число атомов углерода от 3 до 6, т.е. 3, 4, 5 или 6 атомов углерода. Кроме того, следует понимать, что указанный термин C3-C6 следует интерпретировать как любой содержащийся в нем поддиапазон, например, C3-C6, C4-C5, C3-C5, C3-C4, C4-C6, C5-C6; в частности C3-C6.

Термин замещенный означает, что один или несколько атомов водорода на обозначенном атоме замещены заместителями, выбранными из указанной группы, при условии, что нормальная валентность обозначенного атома при существующих обстоятельствах не превышается, и что замещение приводит к стабильному соединению. Допустимы только такие комбинации заместителей и/или переменных, какие приводят к получению стабильных соединений.

Термин необязательно замещенный означает необязательное замещение оговоренными группами, радикалами или фрагментами.

Заместитель кольцевой системы означает заместитель, присоединенный к ароматической или неароматической кольцевой системе, который, например, заменяет доступный водород на такой кольцевой системе.

Используемый в данной заявке термин один или несколько, например, в определении заместителей соединений общих формул настоящего изобретения, понимают как означающий один, два, три, четыре, пять и т.п., в частности, один, два, три или четыре, более конкретно один, два или три, еще более конкретно один или два.

Соединения общей формулы (I) могут существовать в виде изотопных вариантов. Таким образом, изобретение включает один или несколько изотопных вариантов соединений общей формулы (I), в частности, содержащие дейтерий соединения общей формулы (I).

Термин изотопный вариант соединения или реагента определяют как соединение, демонстрирующее не природное относительное содержание одного или нескольких изотопов, которые составляют такое соединение.

Термин изотопный вариант соединения общей формулы (I) определяют как соединение общей формулы (I), демонстрирующее не природное относительное содержание одного или нескольких изотопов, которые составляют такое соединение.

Выражение не природное относительное содержание следует понимать как означающее относительное содержание такого изотопа, которое является более высоким, чем его распространенность в природе. Сведенья касательно распространенностей изотопов в природе, упоминаемых в данном контексте, описаны в документе Isotopic Compositions of the Elements 1997, Pure Appl. Chem., 70(1), 217-235, 1998.

Примеры таких изотопов включают стабильные и радиоактивные изотопы водорода, углерода, азо

- 9 046642 та, кислорода, фосфора, серы, фтора, хлора, брома и йода, такие как ²Н (дейтерий), ³Н (тритий), C. ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁷O,¹⁸O,³²P, ³³P, ³³S, ³⁴S, ³⁵S, ³⁶S, ¹⁸F, ³⁶Cl, ⁸²Br, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I, ¹²⁹I и ¹³¹I соответственно.

Что касается лечения и/или профилактики нарушений, указанных в данной заявке, изотопные варианты соединений общей формулы (I) в одном варианте осуществления содержат дейтерий (содержащие дейтерий соединения общей формулы (I)). Изотопные варианты соединений общей формулы (I), в которые были включены один или несколько радиоактивных изотопов, таких как ³H или ¹⁴C, являются полезными, например, для изучения распределения лекарственного средства и/или субстрата в ткани. Эти изотопы являются особенно предпочтительными благодаря легкости их включения и способности к обнаружению. Позитронно-активные изотопы, такие как ¹⁸F или ¹¹C, также могут быть включены в соединение общей формулы (I). Такие изотопные варианты соединений общей формулы (I) являются полезными для применения в in vivo визуализации. Содержащие дейтерий и содержащие ¹³C соединения общей формулы (I) можно применять в масс-спектрометрических анализах (H. J. Leis и др., Curr. Org. Chem., 1998, 2, 131) в контексте доклинических или клинических исследований.

Изотопные варианты соединений общей формулы (I) обычно можно получить способами, известными специалисту в данной области, такими как методы, описанные на схемах и/или в примерах в данной заявке, путем замены реагента на изотопный вариант указанного реагента, а в одном варианте осуществления - на реагент, содержащий дейтерий. В зависимости от желательных мест дейтерирования, в некоторых случаях дейтерий из D₂O может быть введен либо непосредственно в соединения, либо в реагенты, которые являются полезными для синтеза таких соединений (Esaki и др., Tetrahedron, 2006, 62, 10954; Esaki и др., Chem. Eur. J., 2007, 13, 4052). Газообразный дейтерий также является полезным реагентом для введения дейтерия в молекулы. Быстрым путем для введения дейтерия является каталитическое дейтерирование олефиновых связей (H. J. Leis и др., Curr. Org. Chem., 1998, 2, 131; J. R. Morandi и др., J. Org. Chem., 1969, 34 (6), 1889) и ацетиленовых связей (N. H. Khan, J. Am. Chem. Soc., 1952, 74 (12), 3018; S. Chandrasekhar и др., Tetrahedron, 2011, 52, 3865). Металлические катализаторы (т.е. Pd, Pt, и Rh) в присутствии газообразного дейтерия можно применять для прямого обмена водорода на дейтерий в функциональных группах, содержащих углеводородные фрагменты (J. G. Atkinson и др., патент США: 3966781). Множество дейтерированных реагентов и структурных элементов для синтеза являются коммерчески доступными от таких компаний, как, например, C/D/N Isotopes, Квебек, Канада; Cambridge Isotope Laboratories Inc., Андовер, Массачусетс, США; и CombiPhos Catalysts, Inc., Принстон, Нью-Джерси, США. Дополнительная информация о уровне техники относительно обмена водорода на дейтерий приведена, например, в следующих документах: Hanzlik и др., J. Org. Chem. 55, 3992-3997, 1990; R. P. Hanzlik и др., Biochem. Biophys. Res. Commun. 160, 844, 1989; P. J. Reider и др., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987; M. Jarman и др., Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993; J. Atzrodt и др., Angew. Chem., Int. Ed. 2007, 46, 7744; K. Matoishi и др., J. Chem. Soc., Chem. Commun. 2000, 1519-1520; K. Kassahun и др., WO2012/112363.

Термин содержащее дейтерий соединение общей формулы (I) определяют как соединение общей формулы (I), в котором один или несколько атомов водорода заменен(ы) на один или несколько атомов дейтерия и где относительное содержание дейтерия в каждом дейтерированном положении такого соединения общей формулы (I) выше, чем распространенность дейтерия в природе, которая составляет приблизительно 0.015%. В частности, в содержащем дейтерий соединении общей формулы (I) относительное содержание дейтерия в каждом дейтерированном положении такого соединения общей формулы (I) составляет выше чем 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% или 80%, в одном варианте осуществления выше чем 90%, 95%, 96% или 97%, а в других вариантах осуществления в указанном(ых) положении(ях) содержание дейтерия составляет выше чем 98% или 99%. Следует понимать, что относительное содержание дейтерия в каждом дейтерированном положении не зависит от относительного содержания дейтерия в другом(их) дейтерированном(ых) положении(ях).

Селективное введение одного или нескольких атомов дейтерия в соединение общей формулы (I) может изменить физико-химические свойства (такие как, например, кислотность [A. Streitwieser и др., J. Am. Chem. Soc., 1963, 85, 2759; C. L. Perrin, и др., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129, 4490], основность [C. L. Perrin, и др., J. Am. Chem. Soc., 2003, 125, 15008; C. L. Perrin in Advances in Physical Organic Chemistry, 44, 144; C. L. Perrin и др., J. Am. Chem. Soc., 2005, 127, 9641], липофильность [B. Testa и др., Int. J. Pharm., 1984, 19(3), 271]) и/или метаболический профиль молекулы, и может привести к изменениям отношения количеств исходного соединения к метаболитам или количеств образующихся метаболитов. Такие изменения могут привести к определенным терапевтическим преимуществам и, следовательно, могут быть предпочтительными при некоторых обстоятельствах. Сообщалось о снижении скорости метаболизма и метаболическом переключении, при котором было изменено соотношение метаболитов (D. J. Kushner и др., Can. J. Physiol. Pharmacol., 1999, 77, 79; A. E. Mutlib и др., Toxicol. Appl. Pharmacol., 2000, 169, 102). Эти изменения в воздействии исходного лекарственного средства и метаболитов могут иметь важные последствия относительно фармакодинамики, переносимости и эффективности содержащего дейтерий соединения общей формулы (I). В некоторых случаях, замещение на дейтерий уменьшает или устраняет образование нежелательного или токсичного метаболита и увеличивает образование целевого метаболита (например, Nevirapine: A. M. Sharma и др., Chem. Res. Toxicol., 2013, 26, 410; Uetrecht и др., Chemical

- 10 046642

Research in Toxicology, 2008, 21, 9, 1862; Efavirenz: A. E. Mutlib и др., Toxicol. Appl. Pharmacol., 2000, 169, 102). В других случаях, основным эффектом дейтерирования является снижение скорости системного клиренса. В результате этого биологическое время полужизни соединения увеличивается. Потенциальные клинические преимущества будут включать способность к поддержанию одинакового системного воздействия с уменьшенными пиковыми уровнями и повышенными остаточными уровнями. Это может привести к уменьшению побочных действий и повышению эффективности, в зависимости от соотношения фармакокинетических/фармакодинамических свойств конкретного соединения. Примерами для такого действия дейтерия являются препараты индиплон (A. J. Morales и др., Abstract 285, 15-я североамериканская конференция Международного общества по изучению ксенобиотиков, Сан-Диего, Калифорния, 12-16 октября 2008 г.), ML-337 (C. J. Wenthur и др., J. Med. Chem., 2013, 56, 5208) и оданакатиб (K. Kassahun и др., WO2012/112363). Сообщалось также о других случаях, в которых сниженные скорости метаболизма приводят к увеличению воздействия лекарственного препарата без изменения скорости системного клиренса (например, рофекоксиб: F. Schneider и др., Arzneim. Forsch. Drug. Res., 2006, 56, 295; Telaprevir: F. Maltais и др., J. Med. Chem., 2009, 52, 7993). Дейтерированные лекарственные препараты, демонстрирующие это действие, могут характеризоваться пониженными требованиями к дозировке (например, меньшее число доз или более низкая доза для достижения желаемого действия) и/или могут приводить к снижению метаболических нагрузок.

Соединение общей формулы (I) может иметь несколько потенциальных мест атаки для протекания метаболизма. Для оптимизации вышеописанных воздействий на физико-химические свойства и метаболический профиль могут быть выбраны содержащие дейтерий соединения общей формулы (I), которые имеют определенную схему обмена одного или нескольких атомов дейтерий-водород. В частности, атом(ы) дейтерия содержащего(их) дейтерий соединения(й) общей формулы (I) присоединяют к атому углерода и/или располагают в тех положениях такого соединения общей формулы (I), которые являются местами атаки метаболизирующих ферментов, таких как, например, цитохром P₄₅₀.

Если в настоящей заявке используется форма множественного числа для слова соединения, соли, полиморфы, гидраты, сольваты и т.п., то это также следует понимать как одно соединение, соль, полиморф, изомер, гидрат, сольват или т.п.

Выражение стабильное соединение или стабильная структура означает соединение, которое является достаточно устойчивым, чтобы выдержать выделение до приемлемой степени чистоты из реакционной смеси, и приготовление из него эффективного терапевтического средства.

Соединения настоящего изобретения могут содержать один или несколько асимметричных центров, в зависимости от местоположения и природы различных желаемых заместителей. Асимметричные атомы углерода могут находиться в (R) или (S) конфигурации, что приводит к рацемическим смесям в случае одного асимметричного центра, и диастереомерным смесям в случае нескольких асимметричных центров. В некоторых случаях, асимметрия также может присутствовать из-за ограниченного вращения вокруг данной связи, например, центральной связи, прилегающей к двум замещенным ароматическим кольцам оговоренных соединений.

Заместители на кольце также могут присутствовать либо в цис-, либо в транс-форме. Предполагается, что все такие конфигурации (включая энантиомеры и диастереомеры), включены в рамки настоящего изобретения.

Предпочтительными соединениями являются те, которые продуцируют более желательную биологическую активность. Отделенные, чистые или частично очищенные изомеры и стереоизомеры или рацемические или диастереомерные смеси соединений данного изобретения также включены в рамки настоящего изобретения. Очистку и разделение таких веществ можно осуществить с помощью стандартных методов, известных в данной области техники.

Оптические изомеры можно получить путем разделения рацемических смесей в соответствии с обычными способами, например, путем образования диастереоизомерных солей с использованием оптически активной кислоты или основания, или образования ковалентных диастереомеров. Примерами подходящих кислот являются винная, диацетилвинная, дитолуоилвинная и камфорсульфоновая кислота. Смеси диастереоизомеров могут быть разделены на их отдельные диастереомеры на основе их физических и/или химических различий с помощью методов, известных в данной области, например, посредством хроматографии или фракционной кристаллизации. Оптически активные основания или кислоты затем высвобождают из разделенных диастереоизомерных солей. Иной способ разделения оптических изомеров включает использование хиральной хроматографии (например, хиральных ВЭЖХ колонок), с обычной дериватизацией, оптимально выбранной для максимального разделения энантиомеров, или без нее. Подходящие хиральные ВЭЖХ колонки производит фирма Diacel, например, Chiracel OD и Chiracel OJ, среди многих других, обычно выбираемых. Также пригодны методы ферментативного разделения, с дериватизацией или без нее. Оптически активные соединения данного изобретения также можно получить с помощью хирального синтеза, используя в нем оптически активные исходные вещества.

С целью разграничить друг от друга различные типы изомеров, дается ссылка на правила ИЮПАК, раздел E (Pure Appl Chem 45, 11-30, 1976).

Настоящее изобретение включает все возможные стереоизомеры соединений настоящего изобрете

- 11 046642 ния в виде отдельных стереоизомеров или в виде любой смеси указанных стереоизомеров, например, Rили S-изомеров, или E- или Z-изомеров, в любом соотношении. Выделения отдельного стереоизомера, например, отдельного энантиомера или отдельного диастереомера, соединения настоящего изобретения можно достичь с помощью любого подходящего метода уровня техники, такого как, например, хроматография, в особенности, хиральная хроматография.

Более того, соединения настоящего изобретения могут существовать в виде таутомеров. Например, любое соединение настоящего изобретения, которое содержит пиразольный фрагмент в качестве гетероарильной группы, например, может существовать в виде 1H таутомера или 2H таутомера, или даже смеси любых количеств двух таутомеров, или триазольный фрагмент, например, может существовать в виде 1H таутомера, 2H таутомера или 4H таутомера, или даже смеси любых количеств указанных 1H, 2H и 4H таутомеров, а именно:

Настоящее изобретение включает все возможные таутомеры соединений настоящего изобретения в виде отдельных таутомеров или в виде любой смеси указанных таутомеров, в любом соотношении.

Более того, соединения настоящего изобретения могут существовать в виде N-оксидов, которые определяются тем, что по меньшей мере один атом азота соединений настоящего изобретения окислен. Настоящее изобретение включает все такие возможные N-оксиды.

Настоящее изобретение также относится к пригодным формам соединений, раскрытых в настоящей заявке, таким как метаболиты, гидраты, сольваты, пролекарства, соли, в частности, фармацевтически приемлемые соли, и продукты совместного осаждения.

Соединения настоящего изобретения могут существовать в виде гидрата или в виде сольвата, где соединения настоящего изобретения содержат полярные растворители, в частности, воду, метанол или этанол, например, в качестве структурного элемента кристаллической решетки соединений. Количество полярных растворителей, в частности, воды, может находиться в стехиометрическом или нестехиометрическом соотношении. В случае стехиометрических сольватов, например, гидрата, возможны геми- (полу-), моно-, сескви-, ди-, три-, тетра-, пента- и т.д. сольваты или гидраты соответственно. Настоящее изобретение включает все такие гидраты или сольваты.

Более того, соединения настоящего изобретения могут существовать в свободном виде, например, в виде свободного основания или в виде свободной кислоты, или в виде цвиттериона, или могут существовать в виде соли. Указанная соль может быть любой солью, либо органической, либо неорганической солью присоединения, в частности, любой фармацевтически приемлемой органической или неорганической солью присоединения, обычно используемой в фармацевтическом деле.

Термин фармацевтически приемлемая соль относится к относительно нетоксичной соли присоединения неорганической или органической кислоты к соединению настоящего изобретения. Например, см. S. M. Berge, и др. Pharmaceutical Salts J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19.

Подходящая фармацевтически приемлемая соль соединений настоящего изобретения может представлять собой, например, соль присоединения кислоты к соединению настоящего изобретения, несущему атом азота, например, в цепи или в кольце, который является достаточно основным, такую как соль присоединения с неорганической кислотой, такой как, например, соляная, бромистоводородная, йодистоводородная, серная, бисерная, фосфорная или азотная кислота, или с органической кислотой, такой как, например, муравьиная, уксусная, ацетоуксусная, пировиноградная, трифторуксусная, пропионовая, масляная, гексановая, гептановая, ундекановая, лауриновая, бензойная, салициловая, 2-(4гидроксибензоил)бензойная, камфорная, коричная, циклопентанпропионовая, диглюконовая, 3-гидрокси2-нафтойная, никотиновая, памоевая, пектиновая, надсерная, 3-фенилпропионовая, пикриновая, пивалевая, 2-гидроксиэтансульфоновая, итаконовая, сульфаминовая, трифторметансульфоновая, додецилсерная, этансульфоновая, бензолсульфоновая, пара-толуолсульфоновая, метансульфоновая, 2нафталинсульфоновая, нафталиндисульфоновая, камфорсульфоновая кислота, лимонная, винная, стеариновая, молочная, щавелевая, малоновая, янтарная, яблочная, адипиновая, альгиновая, малеиновая, фумаровая, D-глюконовая, миндальная, аскорбиновая, глюкогептановая, глицерофосфорная, аспарагиновая, сульфосалициловая, гемисерная или тиоциановая кислота.

Более того, другая подходящая фармацевтически приемлемая соль соединения настоящего изобретения, которое является в достаточной мере кислым, представляет собой соль щелочного металла, например, соль натрия или калия, соль щелочноземельного металла, например, соль кальция или магния, соль аммония или соль с органическим основанием, которое дает физиологически приемлемый катион, например, соль с N-метилглюкамином, диметилглюкамином, этилглюкамином, лизином, дициклогексиламином, 1,6-гексадиамином, этаноламином, глюкозамином, саркозином, серинолом, трисгидроксиметиламинометаном, аминопропандиолом, основанием Совака, 1-амино-2,3,4-бутантриолом. Кроме того, группы, содержащие основной азот, могут быть кватернизованы такими реагентами, как

- 12 046642 низшие алкилгалогениды, такие как метил-, этил-, пропил- и бутил-хлориды, -бромиды и -йодиды; диалкилсульфаты, подобные диметил-, диэтил- и дибутил-сульфату; и диамилсульфаты; длинноцепочечные галогениды, такие как децил-, лаурил-, миристил- и стеарил-хлориды, -бромиды и -йодиды, аралкилгалогениды, подобные бензил- и фенетил-бромидам, и другие.

Специалисты в данной области техники далее признают, что соли присоединения кислот к заявленным соединениям могут быть получены по реакции соединений с подходящей неорганической или органической кислотой с помощью любого из ряда известных методов. Альтернативно, соли щелочных и щелочноземельных металлов с кислыми соединениями изобретения получают по реакции соединений в соответствии с изобретением с подходящим основанием с помощью множества известных методов.

Настоящее изобретение включает все возможные соли соединений настоящего изобретения в виде отдельных солей, или в виде любой смеси указанных солей, в любом соотношении.

В настоящем тексте, в частности, в экспериментальном разделе, в случае синтеза промежуточных соединений и примеров настоящего изобретения, когда соединение упоминается в виде солевой формы с соответствующим(ей) основанием или кислотой, точный стехиометрический состав указанной солевой формы, полученной с помощью соответствующего способа получения и/или очистки, является, в большинстве случаев, неизвестным.

Если не указано иное, суффиксы к химическим названиям или структурным формулам, такие как гидрохлорид, трифторацетат, натриевая соль, или х HCl, х CF3COOH, х Na⁺, например, следует понимать не как стехиометрическую характеристику, а исключительно как указание на солевую форму.

Это аналогично применимо и к случаям, в которых промежуточные соединения синтеза или иллюстративные соединения или их соли были получены, с помощью описанных способов получения и/или очистки, в виде сольватов, таких как гидраты с (если он определенного типа) неизвестным стехиометрическим составом.

Соли включают нерастворимые в воде соли и, в особенности, растворимые в воде соли.

Более того, производные соединений формулы (I) и их соли, которые превращаются в соединение формулы (I) или его соль в биологической системе (биопредшественники или пролекарства) также охватываются настоящим изобретением. Указанная биологическая система представляет собой, например, организм млекопитающего, в частности, человека. Биопредшественник, например, превращается в соединение формулы (I) или его соль посредством метаболических процессов.

Используемый в настоящей заявке термин гидролизующийся in vivo сложный эфир понимают как означающий гидролизующийся in vivo сложный эфир соединения настоящего изобретения, содержащего карбоксильную или гидроксильную группу, например, фармацевтически приемлемый сложный эфир, который гидролизуется в организме человека или животного с получением исходной(го) кислоты или спирта. Подходящие фармацевтически приемлемые сложные эфиры в случае карбоксильной группы включают, например, алкиловые, циклоалкиловые и необязательно замещенные фенилалкиловые, в частности, бензиловые сложные эфиры, C₁-C₆-алкоксиметиловые сложные эфиры, например, метоксиметиловые, C₁-C₆-алканоилоксиметиловые сложные эфиры, например, пивалоилоксиметиловые, фталидиловые сложные эфиры, C₃-C₈-циклоалкоксикарбонилокси-C₁-C₆-алкиловые сложные эфиры, например, 1циклогексилкарбонилоксиэтиловые; 1,3-диоксолен-2-онилметиловые сложные эфиры, например, 5метил-1,3-диоксолен-2-онилметиловые; и C₁-C₆-алкоксикарбонилоксиэтиловые сложные эфиры, например, 1-метоксикарбонилоксиэтиловые, и могут быть образованы с вовлечением любой карбоксильной группы в соединениях данного изобретения.

Г идролизующиеся in vivo сложные эфиры соединения настоящего изобретения, содержащего гидроксильную группу, включают неорганические сложные эфиры, такие как сложные эфиры фосфорной кислоты, и [альфа]-ацилоксиалкиловые эфиры и родственные соединения, которые в результате in vivo гидролиза сложноэфирной группы расщепляются с получением исходной гидроксильной группы. Примеры [альфа]-ацилоксиалкиловых эфиров включают ацетоксиметокси и 2,2диметилпропионилоксиметокси. Перечень выбираемых групп, образующих гидролизующийся in vivo сложный эфир в случае гидрокси, включает алканоил, бензоил, фенилацетил и замещенный бензоил и фенилацетил, алкоксикарбонил (c получением алкилкарбонатных сложных эфиров), диалкилкарбамоил и №(диалкиламиноэтил)-Ы-алкилкарбамоил (c получением карбаматов), диалкиламиноацетил и карбоксиацетил. Настоящее изобретение охватывает все такие сложные эфиры.

Кроме того, настоящее изобретение включает все возможные кристаллические формы, или полиморфы, соединений настоящего изобретения, или в виде отдельного полиморфа, или в виде смеси из более чем одного полиморфа, в любом соотношении.

В контексте свойств соединений настоящего изобретения термин фармакокинетический профиль означает один единственный параметр или комбинацию параметров, включая проницаемость, биодоступность, воздействие и фармакодинамические параметры, такие как продолжительность или величина фармакологического действия, измеренные в подходящем эксперименте. Соединения с улучшенным фармакокинетическим профилем, например, можно применять в более низких дозах для достижения того же эффекта, либо позволяют достичь более длительного действия, либо позволяют достичь комбинации

- 13 046642 обоих эффектов.

Термин комбинация в настоящем изобретении применяется в качестве известного специалистам в данной области техники и может быть представлен в виде фиксированной комбинации, нефиксированной комбинации или набора компонентов.

Термин фиксированная комбинация в настоящем изобретении применяется в качестве известного специалистам в данной области техники и его определяют как комбинацию, в которой указанный первый активный компонент и указанный второй активный компонент присутствуют вместе в одной единичной лекарственной форме или в форме единого целого. Одним из примеров фиксированной комбинации является фармацевтическая композиция, в которой указанный первый активный компонент и указанный второй активный компонент присутствуют в смеси для одновременного введения, как, например, в составе. Другим примером фиксированной комбинации является фармацевтическая комбинация, в которой указанный первый активный компонент и указанный второй активный компонент присутствуют в одной единице в не смешанном состоянии.

Термин нефиксированная комбинация или набор компонентов в настоящем изобретении применяется в качестве известного специалистам в данной области техники и его определяют как комбинацию, в которой указанный первый активный компонент и указанный второй активный компонент присутствуют в более, чем одной единице. Одним из примеров нефиксированной комбинации или набора компонентов является комбинация, в которой указанный первый активный компонент и указанный второй активный компонент присутствуют раздельно. Компоненты нефиксированной комбинации или набора компонентов могут быть введены раздельно, последовательно, одновременно, параллельно или хронологически смещено. Любая такая комбинация соединения формулы (I) настоящего изобретения с противоопухолевым средством согласно приведенному ниже определению является одним вариантом осуществления изобретения.

Термин (химиотерапевтические) противоопухолевые средства относится к любому средству, которое снижает выживаемость или пролиферацию раковых клеток, и включает, но не ограничивается ими: 131I-chTNT, абареликс, абиратерон, акларубицин, адотрастузумаб эмтансин, афатиниб, афлиберцепт, алдеслейкин, алемтузумаб, алендроновая кислота, алитретиноин, алтретамин, амифостин, аминоглутетимид, гексил аминолевулинат, амрубицин, амсакрин, анастрозол, анцестим, анетол дитиолетион, ангиотензин II, антитромбин III, апрепитант, арцитумомаб, арглабин, триоксид мышьяка, аспарагиназа, акситиниб, азацитидин, базиликсимаб, белотекан, бендамустин, белиностат, бевацизумаб, бексаротен, бикалутамид, бисантрен, блеомицин, бортезомиб, бусерелин, босутиниб, брентуксимаб ведотин, бусульфан, кабазитаксел, кабозантиниб, фолинат кальция, левофолинат кальция, капецитабин, капромаб, карбоплатин, карфилзомиб, кармофур, кармустин, катумаксомаб, целекоксиб, целмолейкин, церитиниб, цетуксимаб, хлорамбуцил, хлормадинон, хлорметин, цидофовир, цинакалцет, цисплатин, кладрибин, клодроновая кислота, клофарабин, копанлисиб, крисантаспас, циклофосфамид, ципротерон, цитарабин, дакарбазин, дактиномицин, дарбепоэтин альфа, дабрафениб, дасатиниб, даунорубицин, децитабин, дегареликс, денилейкин дифтитокс, деносумаб, депреотид, деслорелин, дексразоксан, диброспидий хлорид, диангидрогалактитол, диклофенак, доцетаксел, доласетрон, доксифлуридин, доксорубицин, доксорубицин + эстрон, дронабинол, экулизумаб, эдреколомаб, элиптиний ацетат, элтромбопаг, эндостатин, эноцитабин, энзалутамид, эпирубицин, эпитиостанол, эпоетин альфа, эпоетин бета, эпоетин зета, эптаплатин, эрибулин, эрлотиниб, эсомепразол, эстрадиол, эстрамустин, этопосид, эверолимус, эксеместан, фадрозол, фентанил, филграстим, флуоксиместерон, флоксуридин, флударабин, фторурацил, флутамид, фолиновая кислота, форместан, фосапрепитант, фотемустин, фулвестрант, гадобутрол, гадотеридол, гадотеровая кислота - меглумин, гадоверсетамид, гадоксетовая кислота, нитрат галлия, ганиреликс, гефитиниб, гемцитабин, гемтузумаб, глукарпидас, глутоксим, GM-CSF, госерелин, гранисетрон, колониестимулирующий фактор гранулоцитов, дигидрохлорид гистамина, гистрелин, гидроксикарбамид, зерна I-125, лансопразол, ибандроновая кислота, ибритумомаб тиуксетан, ибрутиниб, идарубицин, ифосфамид, иматиниб, имиквимод, импросульфан, индисетрон, инкадроновая кислота, ингенол мебулат, интерферон альфа, интерферон бета, интерферон гамма, иобитридол, иобенгуан (123I), иомепрол, ипилимумаб, иринотекан, итраконазол, иксабепилон, ланреотид, лапатиниб, ясохолин, леналидомид, ленограстим, лентинан, летрозол, леупрорелин, левамисол, левоноргрестел, натрия левотироксин, лисурид, лобаплатин, ломустин, лонидамин, масопрокол, медроксипрогестерон, мегестрол, меларсопрол, мелфалан, мепитиостан, меркаптопурин, месна, метадон, метотрексат, метоксален, метиламинолевулинат, метилпреднизолон, метилтестостерон, метирозин, мифамуртид, милтефозин, мириплатин, митобронитол, митогуазон, митолактол, митомицин, митотан, митоксантрон, могамулизумаб, молграмостим, мопидамол, гидрохлорид морфина, сульфат морфина, набилон, набиксимолз, нафарелин, налоксон + пентазоцин, налтрексон, нартограстим, недаплатин, неларабин, неридроновая кислота, ниволумабпентетреотид, нилотиниб, нилутамид, ниморазол, нимотузумаб, нимустин, нитракрин, ниволумаб, обинутузумаб, октреотид, офатумумаб, омацетаксин мепесуцинат, омепразол, ондансетрон, опрелвекин, орготейн, орилотимод, осимертиниб, оксалиплатин, оксикодон, оксиметолон, озогамицин, р53 генная терапия, паклитаксел, палифермин, зерна палладия-103, палоносетрон, памидроновая кислота, панитумумаб, пантопразол, пазопаниб, пэгаспаргаза, ПЭГ -эпоетин бета (метокси ПЭГ-эпоетин бета), пембролизумаб, пэгфилграстим, пэгинтерферон альфа-2К пеметрек

- 14 046642 сед, пентазоцин, пентостатин, пепломицин, перфлубутан, перфосфамид, пертузумаб, пицибанил, пилокарпин, пирарубицин, пиксантрон, плериксафор, пликамицин, полиглусам, фосфат полиэстрадиола, поливинилпирролидон + гиалуронат натрия, полисахарид-K, помалидомид, понатиниб, натрий порфимер, позиотиниб, пралатрексат, преднимустин, преднизон, прокарбазин, прокодазол, пропранолол, хинаголид, рабепразол, ракотумумаб, хлорид радия-223, радотиниб, ралоксифен, ралтитрексед, рамосетрон, рамуцирумаб, ранимустин, расбурикас, разоксан, рефаметиниб, регорафениб, ризедроновая кислота, этидронат рения-186, ритуксимаб, ромидепсин, ромиплостим, ромуртид, ронициклиб, самарий (153Sm) лексидронам, сарграмостим, сатумомаб, секретин, сипулейцел-T, сизофиран, собузоксан, натрия глицидидазол, сорафениб, станозолол, стрептозоцин, сунитиниб, талапорфин, тамибаротен, тамоксифен, тапентадол, тасонермин, тецелейкин, технеций (99mTc) нофетумомаб-мерпентан, 99mTc-HYNIC-[Tyr3]-октреотид, тегафур, тегафур + гимерацил + отерацил, темопорфин, темозоломид, темсиролимус, тенипозид, тестостерон, тетрофосмин, талидомид, тиотепа, тималфасин, тиротропин альфа, тиогуанин, тоцилизумаб, топотекан, торемифен, тоситумомаб, трабектедин, трамадол, трастузумаб, трастузумаб эмтансин, треосульфан, третиноин, трифлуридин + типирацил, трилостан, трипторелин, траметиниб, трофосфамид, тромбопоэтин, триптофан, убенимекс, валатиниб, валрубицин, вандетаниб, вапреотид, вемурафениб, винбластин, винкристин, виндесин, винфлунин, винорелбин, висмодегиб, вориностат, ворозол, стеклянные микросферы иттрия-90, зиностатин, зиностатин стималамер, золедроновая кислота, зорубицин.

Под полипептидом рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) подразумевается полипептид, имеющий идентичность аминокислотной последовательности к последовательности, представленной в UniProt под номером доступа P00533-1, или ее фрагменту, которая составляет по меньшей мере приблизительно 95%. В некоторых вариантах осуществления, EGFR фрагмент связывает лиганд EFGR и/или обладает киназной активностью. Полипептиды мутанта EGFR включают полипептиды, имеющие инсерцию между, например, аминокислотами V769 и D770 или между D770 и N771. В других вариантах осуществления, идентичность аминокислотной последовательности к последовательности с номером доступа в UniProt P00533-1 составляет 96, 97, 98, 99 или 100%.

Иллюстративная полноразмерная последовательность EGFR человека, в которой V769, D770 и N771 обозначены жирным шрифтом, представлена в записи UniProt под номером доступа P00533-1, ко торая репродуцируется ниже:

10	20	30	40	50
MRPSGTAGAA	LLALLAALCP	ASRALEEKKV	CQGTSNKLTQ	LGTFEDHFLS
60	70	80	90	100
LQRMFNNCEV	VLGNLEITYV	QRNYDLSFLK	TIQEVAGYVL	IALNTVERIP
110	120	130	140	150
LENLQIIRGN	MYYENSYALA	VLSNYDANKT	GLKELPMRNL	QEILHGAVRF
160	170	180	190	200
SNNPALCNVE	SIQWRDIVSS	DFLSNMSMDF	QNHLGSCQKC	DPSCPNGSCW
210	220	230	240	250
GAGEENCQKL	TKIICAQQCS	GRCRGKSPSD	CCHNQCAAGC	TGPRESDCLV
260	270	280	290	300
CRKFRDEATC	KDTCPPLMLY	NPTTYQMDVN	PEGKYSFGAT	CVKKCPRNYV

- 15 046642

310	320	330	340	350
VTDHGSCVRA	CGADSYEMEE	DGVRKCKKCE	GPCRKVCNGI	GIGEFKDSLS
360	370	380	390	400
INATNIKHFK	NCTSISGDLH	ILPVAFRGDS	FTHTPPLDPQ	ELDILKTVKE
410	420	430	440	450
ITGFLLIQAW	PENRTDLHAF	ENLEIIRGRT	KQHGQFSLAV	VSLNITSLGL
460	470	480	490	500
RSLKEISDGD	VIISGNKNLC	YANTINWKKL	FGTSGQKTKI	ISNRGENSCK
510	520	530	540	550
ATGQVCHALC	SPEGCWGPEP	RDCVSCRNVS	RGRECVDKCN	LLEGEPREFV
560	570	580	590	600
ENSECIQCHP	ECLPQAMNIT	CTGRGPDNCI	QCAHYIDGPH	CVKTCPAGVM
610	620	630	640	650
GENNTLVWKY	ADAGHVCHLC	HPNCTYGCTG	PGLEGCPTNG	PKIPSIATGM
660	670	680	690	700
VGALLLLLW	ALGIGLFMRR	RHIVRKRTLR	RLLQERELVE	PLTPSGEAPN
710	720	730	740	750
QALLRILKET	EFKKIKVLGS	GAFGTVYKGL	WIPEGEKVKI	PVAIKELREA
760	770	780	790	800
TSPKANKEIL	DEAYVMASVD	NPHVCRLLGI	CLTSTVQLIT	QLMPFGCLLD
810	820	830	840	850
YVREHKDNIG	SQYLLNWCVQ	IAKGMNYLED	RRLVHRDLAA	RNVLVKTPQH
860	870	880	890	900
VKITDFGLAK	LLGAEEKEYH	AEGGKVPIKW	MALESILHRI	YTHQSDVWSY
910	920	930	940	950
GVTVWELMTF	GSKPYDGIPA	SEISSILEKG	ERLPQPPICT	IDVYMIMVKC
960	970	980	990	1000
WMIDADSRPK	FRELIIEFSK	MARDPQRYLV	IQGDERMHLP	SPTDSNFYRA
1010	1020	1030	1040	1050
LMDEEDMDDV	VDADEYLIPQ	QGFFSSPSTS	RTPLLSSLSA	TSNNSTVACI
1060	1070	1080	1090	1100
DRNGLQSCPI	KEDSFLQRYS	SDPTGALTED	SIDDTFLPVP	EYINQSVPKR
1110	1120	ИЗО	1140	1150
PAGSVQNPVY	HNQPLNPAPS	RDPHYQDPHS	TAVGNPEYLN	TVQPTCVNST
1160	1170	1180	1190	1200
FDSPAHWAQK	GSHQISLDNP	DYQQDFFPKE	AKPNGIFKGS	TAENAEYLRV
1210
APQSSEFIGA

Иллюстративный полинуклеотид, кодирующий EGFR, предоставлен в NCBI эталонной последовательности NM_001346897.1, которая репродуцируется ниже:

- 16 046642 gtccgggcag cccccggcgc agcgcggccg cagcagcctc cgccccccgc acggtgtgag 61 cgcccgacgc ggccgaggcg gccggagtcc cgagctagcc ccggcggccg ccgccgccca 121 gaccggacga caggccacct cgtcggcgtc cgcccgagtc cccgcctcgc cgccaacgcc

181 acaaccaccg cgcacggccc cctgactccg tccagtattg atcgggagag ccggagcgag

241 ctcttcgggg agcagcgatg cgaccctccg ggacggccgg ggcagcgctc ctggcgctgc

301 tggctgcgct ctgcccggcg agtcgggctc tggaggaaaa gaaagtttgc caaggcacga

361 gtaacaagct cacgcagttg ggcacttttg aagatcattt tctcagcctc cagaggatgt

421 tcaataactg tgaggtggtc cttgggaatt tggaaattac ctatgtgcag aggaattatg

481 atctttcctt cttaaagacc atccaggagg tggctggtta tgtcctcatt gccctcaaca

541 cagtggagcg aattcctttg gaaaacctgc agatcatcag aggaaatatg tactacgaaa

601 attcctatgc cttagcagtc ttatctaact atgatgcaaa taaaaccgga ctgaaggagc

661 tgcccatgag aaatttacag ggccaaaagt gtgatccaag ctgtcccaat gggagctgct

721 ggggtgcagg agaggagaac tgccagaaac tgaccaaaat catctgtgcc cagcagtgct

781 ccgggcgctg ccgtggcaag tcccccagtg actgctgcca caaccagtgt gctgcaggct

841 gcacaggccc ccgggagagc gactgcctgg tctgccgcaa attccgagac gaagccacgt

901 gcaaggacac ctgcccccca ctcatgctct acaaccccac cacgtaccag atggatgtga

961 accccgaggg caaatacagc tttggtgcca cctgcgtgaa gaagtgtccc cgtaattatg

1021 tggtgacaga tcacggctcg tgcgtccgag cctgtggggc cgacagctat gagatggagg

1081 aagacggcgt ccgcaagtgt aagaagtgcg aagggccttg ccgcaaagtg tgtaacggaa

1141 taggtattgg tgaatttaaa gactcactct ccataaatgc tacgaatatt aaacacttca

1201 aaaactgcac ctccatcagt ggcgatctcc acatcctgcc ggtggcattt aggggtgact

1261 ccttcacaca tactcctcct ctggatccac aggaactgga tattctgaaa accgtaaagg

1321 aaatcacagg gtttttgctg attcaggctt ggcctgaaaa caggacggac ctccatgcct

1381 ttgagaacct agaaatcata cgcggcagga ccaagcaaca tggtcagttt tctcttgcag

1441 tcgtcagcct gaacataaca tccttgggat tacgctccct caaggagata agtgatggag

1501 atgtgataat ttcaggaaac aaaaatttgt gctatgcaaa tacaataaac tggaaaaaac

1561 tgtttgggac ctccggtcag aaaaccaaaa ttataagcaa cagaggtgaa aacagctgca

1621 aggccacagg ccaggtctgc catgccttgt gctcccccga gggctgctgg ggcccggagc

1681 ccagggactg cgtctcttgc cggaatgtca gccgaggcag ggaatgcgtg gacaagtgca

1741 accttctgga gggtgagcca agggagtttg tggagaactc tgagtgcata cagtgccacc

1801 cagagtgcct gcctcaggcc atgaacatca cctgcacagg acggggacca gacaactgta

1861 tccagtgtgc ccactacatt gacggccccc actgcgtcaa gacctgcccg gcaggagtca

1921 tgggagaaaa caacaccctg gtctggaagt acgcagacgc cggccatgtg tgccacctgt

1981 gccatccaaa ctgcacctac ggatgcactg ggccaggtct tgaaggctgt ccaacgaatg

2041 ggcctaagat cccgtccatc gccactggga tggtgggggc cctcctcttg ctgctggtgg

2101 tggccctggg gatcggcctc ttcatgcgaa ggcgccacat cgttcggaag cgcacgctgc

- 17 046642

2161 ggaggctgct gcaggagagg gagcttgtgg agcctcttac acccagtgga gaagctccca 2221 accaagctct cttgaggatc ttgaaggaaa ctgaattcaa aaagatcaaa gtgctgggct 2281 ccggtgcgtt cggcacggtg tataagggac tctggatccc agaaggtgag aaagttaaaa 2341 ttcccgtcgc tatcaaggaa ttaagagaag caacatctcc gaaagccaac aaggaaatcc 2401 tcgatgaagc ctacgtgatg gccagcgtgg acaaccccca cgtgtgccgc ctgctgggca 2461 tctgcctcac ctccaccgtg cagctcatca cgcagctcat gcccttcggc tgcctcctgg 2521 actatgtccg ggaacacaaa gacaatattg gctcccagta cctgctcaac tggtgtgtgc 2581 agatcgcaaa gggcatgaac tacttggagg accgtcgctt ggtgcaccgc gacctggcag 2641 ccaggaacgt actggtgaaa acaccgcagc atgtcaagat cacagatttt gggctggcca 2701 aactgctggg tgcggaagag aaagaatacc atgcagaagg aggcaaagtg cctatcaagt 2761 ggatggcatt ggaatcaatt ttacacagaa tctataccca ccagagtgat gtctggagct 2821 acggggtgac tgtttgggag ttgatgacct ttggatccaa gccatatgac ggaatccctg 2881 ccagcgagat ctcctccatc ctggagaaag gagaacgcct ccctcagcca cccatatgta 2941 ccatcgatgt ctacatgatc atggtcaagt gctggatgat agacgcagat agtcgcccaa 3001 agttccgtga gttgatcatc gaattctcca aaatggcccg agacccccag cgctaccttg 3061 tcattcaggg ggatgaaaga atgcatttgc caagtcctac agactccaac ttctaccgtg 3121 ccctgatgga tgaagaagac atggacgacg tggtggatgc cgacgagtac ctcatcccac 3181 agcagggctt cttcagcagc ccctccacgt cacggactcc cctcctgagc tctctgagtg 3241 caaccagcaa caattccacc gtggcttgca ttgatagaaa tgggctgcaa agctgtccca 3301 tcaaggaaga cagcttcttg cagcgataca gctcagaccc cacaggcgcc ttgactgagg 3361 acagcataga cgacaccttc ctcccagtgc ctggtgagtg gcttgtctgg aaacagtcct 3421 gctcctcaac ctcctcgacc cactcagcag cagccagtct ccagtgtcca agccaggtgc 3481 tccctccagc atctccagag ggggaaacag tggcagattt gcagacacag tgaagggcgt 3541 aaggagcaga taaacacatg accgagcctg cacaagctct ttgttgtgtc tggttgtttg 3601 ctgtacctct gttgtaagaa tgaatctgca aaatttctag cttatgaagc aaatcacgga 3661 catacacatc tgtgtgtgtg agtgttcatg atgtgtgtac atctgtgtat gtgtgtgtgt 3721 gtatgtgtgt gtttgtgaca gatttgatcc ctgttctctc tgctggctct atcttgacct 3781 gtgaaacgta tatttaacta attaaatatt agttaatatt aataaatttt aagctttatc 3841 cagaaaaaaa aaaaaaaaa

Промежуточные соединения, применяемые для синтеза соединений по пунктам 1-4, как описано ниже, а также их применение для синтеза соединений по пунктам 1 -4, представляют собой один дополнительный аспект настоящего изобретения. Предпочтительными промежуточными соединениями являются Примеры промежуточных соединений, раскрытые ниже.

Общие методики.

Соединения в соответствии с изобретением можно получить в соответствии со следующими схемами 1-4.

Схемы и методики, описанные ниже, иллюстрируют пути синтеза соединений общей формулы (I) изобретения и не предназначены для ограничения его объема. Специалисту в данной области техники является очевидным, что порядок превращений, приведенный в качестве примера на схемах, может быть модифицирован различными путями. Вследствие этого, порядок превращений, приведенный в качестве примера на схемах, не предназначен для ограничения объема. Кроме того, взаимопревращение любых заместителей, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶ и PG, можно успешно выполнить до и/или после приведенных в качестве примеров превращений. Эти модификации могут быть такими, как введение защитных групп, отщепление защитных групп, восстановление или окисление функциональных групп, галогенирование, металлирование, замещение или другие реакции, известные специалисту в данной области техники. Эти превращения включают те реакции, которые вводят функции, которые позволяют дополнительное взаимопревращение заместителей. Подходящие защитные группы и их введение и отщепление хорошо известны(о) специалисту в данной области техники. Конкретные примеры описываются в последующих параграфах.

- 18 046642

Схема 1

Схема 1. Путь получения соединений общей формулы (I), где R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, X, Y, m и n имеют значения, приведенные для общей формулы (I), и PG может означать водород или, необязательно, подходящую защитную группу, например, трет-бутоксикарбонил (Boc).

Соединения формул 1, 2 и 4 либо доступны для приобретения, либо могут быть получены в соответствии с методиками, доступными из открытых источников, как понятно специалисту в данной области техники. Конкретные примеры описываются в последующих параграфах.

Подходящим образом замещенные пиперидин-2,4-дионы общей формулы (соединение формулы 1), такие как, например, 2,4-пиперидиндион, можно подвергнуть реакции с подходящим образом замещенным изотиоцианатом (соединение формулы 2), таким как, например, 3-фторфенилизотиоцианат, в подходящей системе растворителей, такой как, например, ацетонитрил, в присутствии подходящего основания, такого как, например, триэтиламин или DBU, при температурах в диапазоне от -78°C до +100°C, причем в некоторых вариантах осуществления реакцию проводят при 0°C или +100°C, с получением продукта общей формулы (3). Проведение подобных реакций описано в литературе (D. E. Worrall, J. Am. Chem. Soc., 1940, 62, 675).

Промежуточные соединения общей формулы (3) можно превратить в промежуточные соединения общей формулы (5) по реакции с подходящим амином (соединения общей формулы 4), таким как, например, 4-(аминометил)пиридин, в подходящей системе растворителей, такой как, например, этанол и этилацетат, при температурах в диапазоне от комнатной температуры до температуры кипения соответствующих растворителей, причем в некоторых вариантах осуществления реакцию проводят при температуре кипения соответствующих растворителей, во время чего воду, образовавшуюся в результате реакции, удаляют из реакционной смеси методами, известными специалистам в данной области техники, такими как, например, азеотропное удаление воды (условия Дина-Старка) или использование молекулярных сит, с получением продукта общей формулы (5).

Промежуточные соединения общей формулы (3) и промежуточные соединения общей формулы (5), в которых PG представляет собой защитную группу, можно превратить в промежуточные соединения, в которых PG представляет собой атом водорода, используя стандартные условия снятия защиты, которые известны специалистам в данной области техники. Когда PG означает защитную группу, такую как, например, трет-бутоксикарбонил (Boc), снятие защиты можно проводить с использованием кислот, таких как, например, хлористоводородная кислота и трифторуксусная кислота, в подходящей системе растворителей, такой как, например, дихлорметан и диоксан, при температуре от 0°C до температуры кипения соответствующих растворителей, причем в одном варианте осуществления реакцию проводят при комнатной температуре, с получением соединений общей формулы (3) и промежуточных соединений общей формулы (5), где PG означает атом водорода.

Промежуточные соединения общей формулы (5) подвергают реакции с основанием и/или окисляющим реагентом, причем в одном варианте осуществления с окислителем, таким как, например, пероксид водорода или SIBX (стабилизированная йодоксибензойная кислота), в подходящей системе растворителей, такой как, например, метанол, при температурах в диапазоне от -30°C до температуры кипе

- 19 046642 ния соответствующего растворителя, причем в одном варианте осуществления реакцию проводят при температуре кипения соответствующего растворителя, с получением соединений общей формулы (I). Необязательно, такие реакции можно проводить с добавкой, такой как, например, кислота или основание, как, например, уксусная кислота или трифторуксусная кислота (не ограничиваясь ими), и триэтиламин или диизопропилэтиламин (не ограничиваясь ими).

Промежуточные соединения общей формулы (5) можно превратить в соединения общей формулы (I) путем их термического нагревания в подходящем растворителе при повышенных температурах, которые могут быть выше температуры кипения указанного растворителя, как, например, в диапазоне от КТ до +250°C. Эти реакции необязательно можно проводить в сосуде, благодаря чему давление может быть повышенным, как, например, в автоклаве. Промежуточные соединения общей формулы (5) также можно превратить в соединения общей формулы (I) путем термического нагревания в присутствии металлического катализатора, такого как, например, палладий на активированном угле, в подходящем растворителе, таком как, например, ДМФА, DMA, EtOH, MeOH, NMP (не ограничиваясь ими), при повышенных температурах, как, например, от КТ до +150°C. Необязательно, такие реакции можно проводить с добавкой, такой как, например, кислота или основание, как, например, уксусная кислота или трифторуксусная кислота (не ограничиваясь ими), и триэтиламин или диизопропилэтиламин (не ограничиваясь ими), с получением соединений общей формулы (I).

Схема 2

LG

Схема 2. Способ получения соединений общей формулы (4), где R⁴, R⁵, R⁶, X, Y, m и n имеют значения, приведенные для общей формулы (I).

Соединения общей формулы (6) можно превратить в соединения общей формулы (7) путем обработки подходящим нуклеофилом, таким как, например, амины, спирты, алкоголяты металлов, азиды, тиолы или тиоляты металлов, в основных, нейтральных, кислотных, каталитических условиях, в одном варианте осуществления в основной среде, в подходящем растворителе, или с использованием в качестве растворителя нуклеофила, такого как, например, ДМФА, тетрагидрофуран (ТГФ), при температурах в диапазоне от -78°C до температуры кипения соответствующего растворителя, причем в одном варианте осуществления реакцию проводят в диапазоне от -10°C до температуры кипения соответствующего растворителя, с получением продукта общей формулы (7). О таких реакциях замещения сообщалось ранее (Clark и др., J. Med. Chem., 2008, 51, 6631 - 6634; Guo и др., Tetrahedron Letts., 2013, 54, 3233 - 3237; Watterson и др., J. Med. Chem., 2007, 50, 3730 - 3742; Bellale и др., J. Med. Chem., 2014, 57, 6572 - 6582; Klimesova и др., Eur. J. Med. Chem., 1996, 31, 389 - 395; Leroy и др., Synth. Commun., 1997, 27, 2905 2916; LaMattina и др., J. Org. Chem., 1981, 46, 4179 - 4182; Beugelmans и др., Tetrahedron, 1983, 39, 4153 4162).

Соединения общей формулы (7) можно превратить в соединения общей формулы (4) с помощью ряда методов восстановления, которые известны специалистам в данной области техники, с использованием множества различных реагентов и реакционных условий; такие методы восстановления включают использование реагентов, таких как гидриды металлов, такие как, например, алюмогидрид лития в ТГФ (Bullock и др., J. Am. Chem. Soc., 1956, 78, 490, Wang и др., J. Org. Chem., 2006, 71, 4021 - 3160), или цинк в уксусной кислоте (Rabe, Chem. Ber., 1913, 46, 1024), или диборан (De Munno и др., Heterocycles, 1996, 43, 1893 - 1900), или использование условий каталитического гидрирования, например, водорода и палладия на угле в кислой среде (Stokker и др., J. Med. Chem., 1981, 24, 115 - 117; Bertini и др., J. Med. Chem., 2005, 48, 664 - 670), водорода и никеля в основной среде (Walpole и др., J. Med. Chem., 1993, 36, 2362 2372, Kuramochi и др., Bioorg. Med. Chem., 2005, 13, 4022 - 4036.)

- 20 046642

Схема 3

Схема 3. Способ получения соединений общей формулы 2, где R^1a представляет собой метил или дифторметил, соответствующий R¹ в общей формуле (I) со значением метокси и дифторметокси. Синтез соединений 9 и 10 относится к алкокси замещению на фенильном кольце. Однако, продукт 2, содержащий изотиоцианатную группу, и его синтез (т.е. 10 ^ 2 или 11 ^ 2) являются общими для групп R¹ в соответствии с общей формулой (I).

Соединения общей формулы (8) можно превратить в соединения общей формулы (9) с использованием различных методов, которые известны специалистам в данной области техники. Такие превращения могут представлять собой, например, алкилирование фенолоспирта алкилирующими реагентами, такими как, например, алкилгалогениды, алкилсульфонаты, где эти алкильные группы могут необязательно содержать атомы фтора, алкоксильные группы. Такие реакции алкилирования известны специалистам в данной области техники и включают использование ряда методов: i) K₂CO₃ в растворителе, таком как ДМФА, ацетон, ДМФА (см. методику Muro и др., J. Med. Chem., 2009, 52, 7974 и WO2009/20990 A1); ii) KOH в EtOH (см. методику Macias и др., J. Agric. Food Chem., 2006, 54, 9843); iii) реакция Мицунобу (см. методику US2006/122168 A1 и EP2151431 A1), с получением промежуточных соединений общей формулы (9).

Соединения общей формулы (9) можно превратить в соединения общей формулы (10) с помощью методов восстановления, которые известны специалистам в данной области техники. Такие реакции восстановления можно провести, используя: i) газообразный водород и катализатор (для Pd/C в качестве катализатора см. методику Chan и др., J. Am. Chem. Soc., 2011, 133, 2989; для платины см. методику Niemann и др., J. Am. Chem Soc., 1941, 63, 2204; для никеля Ренея см. методику US2009/253767 A1); ii) железо и хлорид аммония (см. методику Sweeney и др., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2008, 18, 4348); iii) дитионит натрия (см. методику Chong и др., J. Med. Chem., 2012, 55, 10601); iv) цинк и хлорид аммония (см. методику WO2010/42699 A1), с получением промежуточных соединений общей формулы (10).

Соединения общей формулы (10) можно превратить в соединения общей формулы (2), используя такие реагенты, как, например, тиофосген, дисульфид углерода, 1,1-тиокарбонилди-2(Ш)-пиридон или 1,1'-тиокарбонилдиимидазол, в одном варианте осуществления - тиофосген, в основной среде, в подходящем растворителе, таком как, например, дихлорметан, хлороформ, ацетон, или двухфазные смеси, такие как, например, дихлорметан, хлороформ с водным основным раствором, в другом варианте осуществления - дихлорметан с водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия или карбоната натрия, при температурах в диапазоне от -78°C до температуры кипения соответствующего растворителя, причем в другом варианте осуществления реакцию проводят при температурах в диапазоне от 0°C до комнатной температуры, с получением соединений общей формулы (2). О таких реакциях сообщалось ранее (Harris и др., J. Med. Chem., 2005, 48, 1610; Degorce и др., Tetrahedron Lett., 2011, 52, 6719; WO2016/91845 A1; Fairhurst и др., Org. Lett., 2005, 7, 4697; Chaskar и др., Synth. Comraun, 2008, 38, 16940; US2004/122237 A1).

- 21 046642

Схема 4

Схема 4. Путь получения соединений общей формулы (I), где R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, X, Y, m и n имеют значения, приведенные для общей формулы (I), и PG представляет собой водород или подходящую защитную группу, например, трет-бутоксикарбонил (Boc).

Соединения, подобные соединениям общей формулы 12, известны специалистам в данной области техники и пути их синтеза были описаны в литературе (см. методику Voss и др., WO2015/22073 A1; Hart и др., WO2016/100166 A1; Anderson и др., J. Med. Chem., 2007, 50, 2647; Vanotti и др., J. Med. Chem., 2008, 51, 487).

Соединения общей формулы (12) можно превратить в соединения общей формулы (13), используя стандартные методы бромирования, которые известны специалистам в данной области техники (WO2016/100166 A1). Такие реакции бромирования можно провести, используя бромирующий реагент, такой как, например, N-бромсукцинимид, в подходящем растворителе, таком как, например, ДМФА, при температурах в диапазоне от -78°C до температуры кипения указанного растворителя, причем в одном варианте осуществления температуру поддерживают в диапазоне от 0°C до КТ.

Промежуточные соединения общей формулы (13) можно подвергнуть реакции с подходящими анилинами, такими как, например, 2-дифторметоксианилин, в присутствии основания, такого как, например, бис(триметилсилил)амид лития (LHMDS), в присутствии катализатора, такого как, например, подходящий лиганд, в одном варианте осуществления 2-(ди-трет-бутилфосфино)-2',4',6'-триизопропил-3,6диметокси-1,1'-бифенил (tBuBrettPhos), и в присутствии предкатализатора, такого как, например, палладиевый предкатализатор, в другом варианте осуществления - хлор[2-(дициклогексилфосфино)-3,6диметокси-2',4',6'-триизопропил-1,1 '-бифенил] [2-(2-аминоэтил)фенил]палладий(П) (BrettPhos-PreCat, аддукт с MTBE эфиром), в подходящей системе растворителей, такой как, например, тетрагидрофуран (ТГФ), при температуре в диапазоне от 0°C до 200°C. В одном варианте осуществления реакцию проводят при 80°C с получением соединений общей формулы (I). Подобные превращения уже были проведены и раскрыты (WO2015/193339 A1).

ют значения, приведенные для общей формулы (I), и PG представляет собой водород или подходящую защитную группу, например, трет-бутоксикарбонил (Boc).

Соединения, подобные соединениям общей формулы (14), можно получить в соответствии с методикой, описанной на Схеме 1, с использованием 4-(аминометил)-3-гидроксипиридина взамен промежуточного соединения (4). Промежуточные соединения общей формулы (14) можно превратить в соединения общей формулы (I) по реакции с подходящим спиртом в условиях реакции Мицунобу (метод Oyo Mitsunobu, Synthesis, 1981, 1-28 или Tsunoda и др., Tetrahedron Lett., 1994, 35, 5081), таким как, например, оксетан-3-илметанол, в присутствии (трибутилфосфоранилиден)ацетонитрила или трифенилфосфина

- 22 046642 вместе с диизопропил азодикарбоксилатом в подходящей системе растворителей, такой как, например, диоксан или ТГФ, при температурах в диапазоне от комнатной температуры до температуры кипения соответствующих растворителей.

Специалисту в данной области техники известно, что, если на исходном или промежуточном соединении присутствует ряд реакционных центров, может существовать необходимость во временной блокировке одного или нескольких реакционных центров с помощью защитных групп с целью позволить реакции пройти конкретно на желаемом реакционном центре.

Соединения в соответствии с изобретением выделяют и очищают по существу известным способом, например, путем дистилляции растворителя в вакууме и перекристаллизации полученного остатка из подходящего растворителя или введения его в один из обычных методов очистки, таких как хроматография на подходящем веществе-подложке. Кроме того, можно использовать препаративную ВЭЖХ с обращенной фазой. Соединения настоящего изобретения, которые обладают достаточно основной или кислой функцией, могут приводить к образованию соли, такой как, в случае соединения настоящего изобретения, которое является достаточно основным, например, трифторацетат или формиат, или, в случае соединения настоящего изобретения, которое является достаточно кислым, например, аммониевая соль. Соли этого типа можно превратить либо в форму свободного основания, либо в форму свободной кислоты, соответственно, различными способами, известными специалисту в данной области техники, либо соединения в последующих биологических анализах можно использовать в виде солей. Кроме того, процесс сушки во время выделения соединений настоящего изобретения может не полностью удалить следы сорастворителей, в особенности, таких как муравьиная кислота или трифторуксусная кислота, с получением сольватов или комплексов включения. Специалист в данной области техники определит, какие сольваты или комплексы включения приемлемы для применения в последующих биологических анализах. Следует понимать, что конкретная форма (например, соль, свободное основание, свободная кислота, сольват, комплекс включения) соединения настоящего изобретения в качестве выделенной и описанной в данной заявке, не обязательно является единственной формой, в которой указанное соединение можно использовать в биологическом анализе с целью количественного определения специфической биологической активности.

Соли соединений формулы (I) в соответствии с изобретением могут быть получены путем растворения свободного соединения в подходящем растворителе (например, кетоне, таком как ацетон, метилэтилкетон или метилизобутилкетон, эфире, таком как диэтиловый эфир, тетрагидрофуран или диоксан, хлорированном углеводороде, таком как метиленхлорид или хлороформ, или низкомолекулярном алифатическом спирте, таком как метанол, этанол или изопропанол), который содержит желаемую кислоту или основание, или к которому желаемую кислоту или основание добавляют позже. Кислоту или основание при получении соли можно использовать, в зависимости от того, моно- или много-основная кислота или -кислотное основание представляет интерес, и в зависимости от того, какая соль требуется, либо в эквимолярном соотношении, либо в отличном от него. Соли получают путем фильтрования, повторного осаждения, осаждения с помощью осадителя для соли или путем упаривания растворителя. Полученные соли могут быть превращены в свободные соединения, которые, в свою очередь, могут быть превращены в соли. Таким образом, фармацевтически неприемлемые соли, которые могут быть получены, например, в качестве продукта способа получения, осуществляемого в промышленном масштабе, могут быть превращены в фармацевтически приемлемые соли с помощью способов, известных специалисту в данной области техники. Особенно предпочтительными являются гидрохлориды и способ, использованный в разделе Примеры.

Чистые диастереоизомеры и чистые энантиомеры соединений и солей в соответствии с изобретением могут быть получены, например, путем асимметричного синтеза, путем использования хиральных исходных соединений в синтезе, и путем разделения энантиомерных и диастереоизомерных смесей, полученных в синтезе.

Энантиомерные и диастереоизомерные смеси могут быть разделены на чистые энантиомеры и чистые диастереоизомеры с помощью методов, известных специалисту в данной области техники. В одном варианте осуществления, диастереоизомерные смеси разделяют с помощью кристаллизации, в частности, фракционной кристаллизации, или хроматографии. Энантиомерные смеси могут быть разделены, например, с помощью образования диастереоизомеров с хиральным вспомогательным агентом, разделения полученных диастереоизомеров и удаления хирального вспомогательного агента. В качестве хиральных вспомогательных агентов, например, хиральные кислоты, такие как, например, миндальная кислота, могут использоваться для разделения энантиомерных оснований, и хиральные основания могут использоваться для разделения энантиомерных кислот посредством образования диастереоизомерных солей. Кроме того, диастереоизомерные производные, такие как диастереоизомерные сложные эфиры, могут быть образованы из энантиомерных смесей спиртов или энантиомерных смесей кислот, соответственно, используя в качестве хиральных вспомогательных агентов хиральные кислоты или хиральные спирты соответственно. Кроме того, для разделения энантиомерных смесей можно использовать диастереоизомерные комплексы или диастереоизомерные клатраты. Альтернативно, энантиомерные смеси могут быть разделены путем хроматографии с использованием хиральных разделительных колонок. Другой подхо

- 23 046642 дящий метод выделения энантиомеров представляет собой ферментативное разделение.

Одним предпочтительным аспектом изобретения является способ получения соединений по пунктам 1-4 в соответствии с примерами, а также промежуточные соединения, применяемые для их получения.

Необязательно, соединения формулы (I) можно превратить в их соли, или, необязательно, соли соединений формулы (I) можно превратить в свободные соединения. Соответствующие способы являются обычными для специалиста в данной области.

Коммерческая ценность.

Как упомянуто выше, неожиданно было обнаружено, что соединения настоящего изобретения эффективно ингибируют мутант EGFR в клетке (например, опухолевой клетке), которая контактирует с соединением, индуцируя тем самым гибель клетки (например, апоптоз), и вследствие этого их можно применять для лечения или профилактики заболеваний неконтролируемого(ой) роста клеток, пролиферации и/или выживаемости, неподходящих клеточных иммунных ответов, или неподходящих клеточных воспалительных ответов, или заболеваний, которые сопровождаются неконтролируемым(ой) ростом клеток, пролиферацией и/или выживаемостью, неподходящими клеточными иммунными ответами, или неподходящими клеточными воспалительными ответами, в частности, где неконтролируемый(ая) рост клеток, пролиферация и/или выживаемость, неподходящие клеточные иммунные ответы, или неподходящие клеточные воспалительные ответы опосредуется мутантом EGFR, таких как, например, доброкачественная и злокачественная неоплазия, более конкретно, гематологические опухоли, солидные опухоли, и/или их метастазы, например, лейкемии и миелодиспластический синдром, злокачественные лимфомы, опухоли головы и шеи, включая опухоли головного мозга и метастазы в головной мозг, опухоли грудной клетки, включая немелкоклеточные и мелкоклеточные опухоли легкого, гастроинтестинальные опухоли, эндокринные опухоли, опухоли молочной железы и другие гинекологические опухоли, урологические опухоли, включая ренальные опухоли, опухоли мочевого пузыря и предстательной железы, опухоли кожи и саркомы, и/или их метастазы, в особенности, гематологические опухоли, солидные опухоли, и/или их метастазы, такие как опухоли молочной железы, мочевого пузыря, кости, головного мозга, центральной и периферической нервной системы, шейки матки, ободочной кишки, желез внутренней секреции (например, щитовидной железы и коры надпочечника), эндокринные опухоли, опухоли эндометрия, пищевода, гастроинтестинальные опухоли, опухоли зародышевых клеток, почки, печени, легкого, гортани и гипофаринкса, мезотелиома, опухоли яичника, поджелудочной железы, предстательной железы, прямой кишки, ренальные опухоли, опухоли тонкой кишки, мягких тканей, желудка, кожи, мужских половых желез, мочеточника, влагалища и вульвы, а также злокачественные неоплазии, включая первичные опухоли в указанных органах и соответствующие вторичные опухоли в отдаленных органах (метастазы опухолей). Примерами гематологических опухолей могут являться, например, агрессивные и индолентные формы лейкемии и лимфомы, а именно неходжкинская болезнь, хроническая и острая миелоидная лейкемия (ХМЛ/ОМЛ), острая лимфобластная лейкемия (ОЛЛ), болезнь Ходжкина, множественная миелома и Т-клеточная лимфома. Также включены миелодиспластический синдром, плазмоклеточная неоплазия, паранеопластические синдромы, и типы рака неизвестной первичной локализации, а также СПИД-ассоциированные злокачественные новообразования.

Дополнительным аспектом изобретения является применение соединений в соответствии с формулой (I) для лечения рака легких, в частности, рака легких, заякоривающего мутант EGFR с инсерционными мутациями в экзоне 20, более конкретно рака легких, заякоривающего V769_770ins ASV и/или D770_N771ins SVD инсерции в экзоне 20, и/или его метастазов, включающее введение эффективного количества соединения формулы (I).

Дополнительным аспектом изобретения является применение соединений в соответствии с формулой (I) для лечения рака легких, в частности, рака легких, заякоривающего мутант EGFR с делециями внутри рамки считывания в экзоне 19 (такими как EGFR E746_A750del) или точковыми мутациями в экзоне 21 (например, L858R), и/или его метастазов.

Дополнительным аспектом изобретения является применение соединений в соответствии с формулой (I) для лечения рака легких, в частности, рака легких, заякоривающего мутант EGFR с приобретенной резистентной мутацией D770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S или L858R C797S, и/или его метастазов.

Дополнительным аспектом изобретения является применение соединений в соответствии с формулой (I) для лечения рака легких, в частности, рака легких, заякоривающего мутант ERBB2 с инсерционными мутациями в экзоне 20 (такими как ERBB2 A775_G776insYVMA), и/или его метастазов.

Таким образом, в соответствии с одним аспектом настоящего изобретения, изобретение относится к соединению общей формулы I, или N-оксиду, соли, таутомеру или стереоизомеру указанного соединения, или соли указанного N-оксида, таутомера или стереоизомера, в частности, его фармацевтически приемлемой соли, или смеси таковых, как описано и определено в данной заявке, для применения для лечения или профилактики заболевания, в особенности, для применения для лечения заболевания.

Таким образом, другим отдельным аспектом настоящего изобретения является применение соединения общей формулы I, описанного выше, или его стереоизомера, таутомера, N-оксида, гидрата, сольва

- 24 046642 та или соли, особенно его фармацевтически приемлемой соли, или смеси таковых, для профилактики или лечения гиперпролиферативного нарушения или нарушения, реагирующего на индукцию гибели клеток, т.е. апоптоз.

Под гиперпролиферативным заболеванием подразумевается заболевание, такое как злокачественное новообразование, ассоциированное с неподходяще высокими уровнями деления клеток, неподходяще низкими уровнями апоптоза, и тем, и другим. Термин неподходящий в контексте настоящего изобретения, в частности, в контексте выражений неподходящие клеточные иммунные ответы, или неподходящие клеточные воспалительные ответы, используемых здесь, следует в общем понимать как означающий ответ, который является меньше или больше нормального, и который ассоциирован с, ответственен за, или приводит к патологии указанных заболеваний.

В отдельных вариантах осуществления, применение осуществляют для лечения или профилактики заболеваний, в особенности, лечения, где заболевания представляют собой гематологические опухоли, солидные опухоли и/или их метастазы.

Другим аспектом является применение соединения формулы (I) для профилактики и/или лечения рака легких, в частности, рака легких, заякоривающего мутант EGFR с инсерционными мутациями в экзоне 20, более конкретно рака легких, заякоривающего V769_770ins ASV и/или D770_N771ins SVD инсерции в экзоне 20, и/или его метастазов, особенно предпочтительно для его лечения.

Другим аспектом настоящего изобретения является применение соединения формулы (I) или его стереоизомера, таутомера, N-оксида, гидрата, сольвата или соли, в частности, его фармацевтически приемлемой соли, или смеси таковых, как описано в данной заявке, для производства лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания, где такое заболевание представляет собой гиперпролиферативное нарушение или нарушение, реагирующее на индукцию гибели клеток, например, апоптоз. В одном варианте осуществления заболевание представляет собой гематологическую опухоль, солидную опухоль и/или их метастазы. В другом варианте осуществления заболевание представляет собой рак легких, в частности, рак легких, заякоривающий мутант EGFR с инсерционными мутациями в экзоне 20, более конкретно рак легких, заякоривающий V769_770ins ASV и/или D770_N771ins SVD инсерции в экзоне 20, и/или его метастазы.

Способ лечения гиперпролиферативных нарушений.

Настоящее изобретение относится к способу применения соединений настоящего изобретения и их композиций для лечения гиперпролиферативных нарушений у млекопитающих. Соединения можно использовать для ингибирования, блокирования, уменьшения, снижения и т.д. пролиферации клеток и/или деления клеток, и/или продуцирования гибели клеток, например, апоптоза. Этот метод включает введение млекопитающему, которое нуждается в этом, включая человека, количества соединения данного изобретения или его фармацевтически приемлемой соли, изомера, полиморфа, метаболита, гидрата, сольвата или сложного эфира; и т.д., которое является эффективным для лечения нарушения. Гиперпролиферативные нарушения включают, но не ограничиваются перечисленными, например, псориаз, келоиды и другие гиперплазии, поражающие кожу, доброкачественную гиперплазию предстательной железы (ДГПЖ), солидные опухоли, такие как рак молочной железы, дыхательных путей, головного мозга, репродуктивных органов, пищеварительного тракта, мочевых путей, глаза, печени, кожи, головы и шеи, щитовидной железы, паращитовидной железы и их отдаленные метастазы. Такие нарушения также включают лимфомы, саркомы, и лейкемии.

Примеры рака молочной железы включают, но не ограничиваются перечисленными, инвазивную дуктальную карциному, инвазивную лобулярную карциному, дуктальную карциному in situ и лобулярную карциному in situ.

Примеры типов рака дыхательных путей включают, но не ограничиваются перечисленными, мелкоклеточную и немелкоклеточную карциному легкого, а также аденому бронха и плевропульмонарную бластому.

Примеры типов рака головного мозга включают, но не ограничиваются перечисленными, глиому ствола головного мозга и гипофтальмичную глиому, астроцитому мозжечка и мозга, медуллобластому, эпендимому, а также нейроэктодермальную опухоль и опухоль пинеальной области.

Опухоли мужских репродуктивных органов включают, но не ограничиваются перечисленными, рак предстательной железы и яичка. Опухоли женских репродуктивных органов включают, но не ограничиваются перечисленными, рак эндометрия, шейки матки, яичника, влагалища и вульвы, а также саркому матки.

Опухоли пищеварительного тракта включают, но не ограничиваются перечисленными, анальный рак, рак ободочной кишки, колоректальный рак, рак пищевода, желчного пузыря, желудка, поджелудочной железы, ректальный рак, рак тонкой кишки и слюнной железы.

Опухоли мочевых путей включают, но не ограничиваются перечисленными, рак мочевого пузыря, мужского полового члена, почки, почечной лоханки, мочеточника, уретры и человеческий папиллярный ренальный рак.

Глазные типы рака включают, но не ограничиваются перечисленными, внутриглазную меланому и ретинобластому.

- 25 046642

Примеры типов рака печени включают, но не ограничиваются перечисленными, гепатоцеллюлярную карциному (карцинома клеток печени с фиброламеллярным вариантом или без него), холангиокарциному (внутрипеченочная карцинома желчных протоков), и смешанную гепатоцеллюлярную холангиокарциному.

Типы рака кожи включают, но не ограничиваются перечисленными, плоскоклеточную карциному, саркому Капоши, злокачественную меланому, синоназальную инвертированную папиллому, синоназальную плоскоклеточную карциному, ассоциированную с синоназальной инвертированной папилломой, рак кожи клеток Меркеля, и немеланомный рак кожи.

Типы рака головы и шеи включают, но не ограничиваются перечисленными, гортанный, гипофарингеальный, назофарингеальный, орофарингеальный рак, синоназальную инвертированную папиллому, синоназальную плоскоклеточную карциному, ассоциированную с синоназальной инвертированной папилломой, рак губ и ротовой полости и плоскоклеточный рак. Лимфомы включают, но не ограничиваются перечисленными, связанную со СПИДом лимфому, неходжкинскую лимфому, кожную Т-клеточную лимфому, лимфому Беркита, болезнь Ходжкина, и лимфому центральной нервной системы.

Саркомы включают, но не ограничиваются перечисленными, саркому мягких тканей, остеосаркому, злокачественную волокнистую гистиоцитому, лимфосаркому и рабдомиосаркому.

Лейкемии включают, но не ограничиваются перечисленными, острую миелоидную лейкемию, острую лимфобластную лейкемию, хроническую лимфоцитарную лейкемию, хроническую миелогенную лейкемию и волосатоклеточную лейкемию.

Эти нарушения были хорошо охарактеризованы у людей, но также существуют с подобной этиологией у других млекопитающих, и могут лечиться путем введения фармацевтических композиций настоящего изобретения.

Термин лечение или лечить, указанный везде по этому документу, использован традиционно, например, подразумевает ведение пациента или уход за пациентом с целью борьбы с состоянием, облегчения, снижения, освобождения, улучшения состояния, и т.д., болезни или нарушения, такого как карцинома.

Настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у субъекта, который включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I), как определено в настоящей заявке.

Настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у субъекта, где злокачественное новообразование является устойчивым или приобрело устойчивость к терапия антителами против рецепторов EGF, который включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I), как определено в настоящей заявке.

Настоящее изобретение относится к способу повышения эффективности терапии антителами против рецепторов EGF, который включает проведение субъекту терапии антителами против рецепторов EGF в комбинации с соединением общей формулы (I), как определено в настоящей заявке.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у субъекта, где злокачественное новообразование выбирают из группы, состоящий из лейкемии, миелодиспластического синдрома, злокачественной лимфомы, опухолей головы и шеи, опухолей грудной клетки, гастроинтестинальных опухолей, эндокринных опухолей, опухолей молочной железы и других гинекологических опухолей, урологических опухолей, опухолей кожи и сарком, который включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I), как определено в настоящей заявке.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у субъекта, где злокачественное новообразование выбирают из группы, состоящий из синоназальной инвертированной папилломы или синоназальной плоскоклеточной карциномы, ассоциированной с синоназальной инвертированной папилломой, который включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I), как определено в настоящей заявке.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у субъекта, где опухоль грудной клетки представляет собой немелкоклеточный рак легких, который включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I), как определено в настоящей заявке.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у субъекта, где злокачественное новообразование представляет собой рак легких, в частности, рак легких, заякоривающий мутант EGFR с делециями внутри рамки считывания в экзоне 19 (такими как EGFR E746_A750del) или точковыми мутациями в экзоне 21 (например, L858R), и/или его метастазы, который включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I), как определено в настоящей заявке.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у субъекта, где злокачественное новообразование представляет собой рак легких, в частности, рак легких, заякоривающий мутант EGFR с приобретенной резистентной мутацией D770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S или L858R C797S, и/или его метастазы, который

- 26 046642 включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I), как определено в настоящей заявке.

В дополнительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу лечения злокачественного новообразования у субъекта, где злокачественное новообразование представляет собой рак легких, в частности, рак легких, заякоривающий мутант ERBB2 с инсерционными мутациями в экзоне 20 (такими как ERBB2 A775_G776insYVMA) и/или его метастазы, который включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I), как определено в настоящей заявке.

Настоящее раскрытие также относится к способу отбора пациента для лечения злокачественного новообразования соединением общей формулы (I), включающему обнаружение мутации в экзоне 20 гена, кодирующего EGF-рецептор, в биологическом образце субъекта, тем самым определяя, что пациента следует лечить указанным соединением. В некоторых вариантах осуществления, EGFR включает aD770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S или L858R C797S приобретенную резистентную мутацию. В некоторых вариантах осуществления, способ отбора пациента для лечения злокачественного новообразования соединением общей формулы (I) может включать обнаружение наличия делеций внутри рамки считывания в экзоне 19 или точковых мутаций в экзоне 21 гена, кодирующего EGF-рецептор, в биологическом образце субъекта, тем самым определяя, что пациента следует лечить указанным соединением. Например, делеция внутри рамки считывания в экзоне 19 может представлять собой EGFR E746_A750del, или точковая мутация в экзоне 21 может представлять собой L858R. В некоторых вариантах осуществления, способ отбора пациента для лечения злокачественного новообразования соединением общей формулы (I) может включать обнаружение мутации в экзоне 20 гена, кодирующего ERBB2 в биологическом образце субъекта, тем самым определяя, что пациента следует лечить указанным соединением. В некоторых вариантах осуществления, ERBB2 включает ERBB2 A775 или_G776insYVMA инсерционную мутацию. Более того, способы лечения пациента со злокачественным образованием могут включать введение субъекту соединения общей формулы (I) (например, в комбинации с терапией антителами против рецепторов EGF), где субъект для терапии выбирают путем обнаружения мутации в EGFR в биологическом образце субъекта. Обнаружение мутации в экзоне 20 находится в пределах компетенции специалиста в данной области.

В некоторых вариантах осуществления, обнаружение мутации (например, в EGFR, или мутации в экзоне 20 гена, кодирующего EGFR) можно выполнить с помощью секвенирования (например, секвенирование по Сэнгеру, секвенирование нового поколения) или метода, выбранного из группы, состоящей из иммуноблоттинга, масс-спектрометрии, иммунопреципитации и количественной ПЦР, нозерн-блота, микроматричного анализа, иммуносорбентного анализа с ферментной меткой (ELISA), гибридизации in situ и их комбинации.

Способы лечения киназных нарушений.

Настоящее изобретение также обеспечивает способы лечения нарушений, ассоциированных с аберрантной активностью митогенной внеклеточной киназы, включая, но не ограничиваясь перечисленным, удар, сердечную недостаточность, гепатомегалию, кардиомегалию, диабет, болезнь Альцгеймера, фиброзно-кистозную дегенерацию, симптомы отторжения ксенотрансплантата, септический шок или астму.

Эффективные количества соединений настоящего изобретения можно применять для лечения таких нарушений, включая и заболевания (например, злокачественное новообразование), которые упомянуты в разделе Предпосылки создания изобретения выше. Тем не менее, такие злокачественные новообразования и другие болезни можно лечить с помощью соединений настоящего изобретения, независимо от механизма действия и/или взаимосвязи между киназой и нарушением.

Фраза аберрантная киназная активность или аберрантная активность тирозинкиназы включает любую патологичную экспрессию или активность гена, кодирующего киназу, или полипептида, который он кодирует. Примеры такой аберрантной активности, включают, но не ограничиваются перечисленным, сверхэкспрессию гена или полипептида; генную амплификацию; мутации, которые продуцируют конститутивно-активную или гиперактивную киназную активность; генные мутации, делеции, замены, дополнения, и т.д.

Настоящее изобретение также обеспечивает способы ингибирования киназной активности, особенно митогенной внеклеточной киназы, включающие введение эффективного количества соединения настоящего изобретения, включая его соли, полиморфы, метаболиты, гидраты, сольваты, пролекарства (например: сложные эфиры), и его диастереоизомерные формы. Киназная активность может быть ингибирована в клетках (например, in vitro), или в клетках субъекта - млекопитающего, особенно пациента человека, который нуждается в лечении.

Способы лечения ангиогенных нарушений.

Настоящее изобретение также обеспечивает способы лечения нарушений и болезней, связанных с чрезмерным и/или патологичным ангиогенезом.

Неподходящая и смещенная экспрессия ангиогенеза может быть вредной для организма. Многие патологические состояния ассоциированы с ростом посторонних кровеносных сосудов. Они включают, например, диабетическую ретинопатию, ишемическую окклюзию вен сетчатки и ювенильную ретинопатию [Aiello и др. New Engl. J. Med. 1994, 331, 1480; Peer и др. Lab. Invest. 1995, 72, 638], возрастную ма

- 27 046642 кулярную дегенерацию [AMD; см. Lopez и др. Invest. Opththalmol. Vis. Sci. 1996, 37, 855], неоваскулярную глаукому, псориаз, ретролентальные фиброплазии, ангиофиброму, воспаление, ревматоидный артрит (РА), рестеноз, рестеноз в стенте, рестеноз сосудистого трансплантата, и т.д. Кроме того, увеличенное кровоснабжение, ассоциированное со злокачественной и неопластической тканью, способствует росту, что приводит к быстрому распространению опухоли и метастазам. Кроме того, рост новых кровеносных и лимфатических сосудов в опухоли обеспечивает запасной выход для клеток-изменниц, способствуя метастазам и последующему распространению рака. Таким образом, соединения настоящего изобретения можно применять для лечения и/или профилактики любого из вышеупомянутых нарушений ангиогенеза, например, путем ингибирования и/или уменьшения формирования кровеносных сосудов; путем ингибирования, блокирования, уменьшения, снижения, и т.д. пролиферации эндотелиальных клеток или других типов клеток, вовлеченных в ангиогенез, а также вызывая гибель клеток, например, апоптоз таких типов клеток.

В различных вариантах осуществления, заболевания указанного способа представляют собой гематологические опухоли, солидные опухоли и/или их метастазы.

Соединения настоящего изобретения можно применять, в частности, для терапии и предотвращения, то есть профилактики, в особенности, для терапии роста опухоли и метастазов, в особенности, в случае солидных опухолей всех показаний и стадий с или без предварительным(ого) лечением(я) роста опухолей.

Фармацевтические композиции соединений в соответствии с изобретением.

Данное изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим одно или несколько соединений настоящего изобретения. Эти композиции можно применять для достижения желательного фармакологического действия путем введения пациенту, который нуждается в этом. Пациент, для целей данного изобретения, является млекопитающим, включая человека, который нуждается в лечении конкретного состояния, нарушения или заболевания.

Таким образом, настоящее изобретение включает фармацевтические композиции, которые состоят из фармацевтически приемлемого носителя или вспомогательного средства и фармацевтически эффективного количества соединения настоящего изобретения или его соли.

Другим аспектом изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически эффективное количество соединения формулы (I) и фармацевтически приемлемое вспомогательное средство, для лечения упомянутого выше заболевания, в особенности, для лечения гематологических опухолей, солидных опухолей и/или их метастазов.

Фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное средство могут представлять собой носитель, который является нетоксичным и безвредным для пациента при концентрациях, соответствующих эффективной активности активного компонента таким образом, чтобы любые побочные действия, приписываемые носителю, не искажали благоприятные действия активного компонента. Носителями и вспомогательными средствами являются всевозможные добавки, помогающие композиции быть пригодной для введения.

Фармацевтически эффективное количество соединения может представлять собой такое количество, которое приводит к результату или оказывает желаемое влияние на конкретное состояние, которое подвергается лечению.

Соединения настоящего изобретения можно вводить с фармацевтически приемлемыми носителями или вспомогательными средствами, хорошо известными в данной области, используя любые эффективные обычные единичные дозированные формы, включая препараты с немедленным, замедленным и контролируемым по времени высвобождением, перорально, парентерально, местно, назально, офтальмически, оптически, сублингвально, ректально, вагинально и т.п.

Для перорального введения соединения могут быть составлены в твердые или жидкие препараты, такие как капсулы, пилюли, таблетки, пастилки, таблетки для рассасывания, плавленые формы, порошки, растворы, суспензии или эмульсии, которые могут быть приготовлены в соответствии с методами, известными в данной области для производства фармацевтических композиций. Твердые единичные дозированные формы могут представлять собой капсулу, которая может быть стандартного желатинового типа с твердой или мягкой оболочкой, содержащую вспомогательные средства, например, поверхностноактивные вещества, смазывающие вещества, и инертные вещества наполнители, такие как лактоза, сахароза, фосфат кальция и кукурузный крахмал.

В другом варианте осуществления соединения данного изобретения могут быть таблетированы с обычными таблеточными основаниями, такими как лактоза, сахароза и кукурузный крахмал, в комбинации со связывающими веществами, такими как аравийская камедь, кукурузный крахмал или желатин, разрыхлителями, предназначенными для того, чтобы способствовать распаду и растворению таблетки после введения, такими как картофельный крахмал, альгиновая кислота, кукурузный крахмал и гуаровая смола, трагакантовая камедь, аравийская камедь, смазывающими веществами, предназначенными для улучшения текучести при гранулировании таблеток и для предотвращения прилипания таблеточного вещества к поверхностям таблеточного пресса и пуансонов, как, например, тальк, стеариновая кислота или стеарат магния, кальция или цинка, красителями, окрашивающими средствами и ароматизирующими

- 28 046642 средствами, такими как мятное масло, масло гаультерии или ароматизатор вишня, предназначенными для того, чтобы повысить эстетические качества таблеток и сделать их более приемлемыми для пациента. Подходящие наполнители для применения в пероральных жидких дозированных формах включают фосфат дикальция и разбавители, такие как вода и спирты, например, этанол, бензиловый спирт и полиэтиленовые спирты, либо с добавлением фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества, суспендирующего средства или эмульгирующего средства, либо без них. Различные другие вещества могут присутствовать в качестве покрытий или для модификации иным образом физической формы единицы дозирования. Например, таблетки, пилюли или капсулы могут быть покрыты шеллаком, сахаром или и тем, и другим.

Диспергируемые порошки и гранулы являются подходящими для приготовления водной суспензии. Они обеспечивают активный компонент в смеси с диспергирующим или смачивающим средством, суспендирующим средством и одним или несколькими консервантами. Подходящие диспергирующие или смачивающие средства и суспендирующие средства иллюстрируются уже упомянутыми выше. Также могут присутствовать дополнительные наполнители, например, подслащающие, ароматизирующие и окрашивающие средства, описанные выше.

Фармацевтические композиции данного изобретения могут также находиться в форме эмульсий масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как жидкий парафин или смесь растительных масел. Подходящие эмульгирующие средства могут представлять собой (1) природные смолы, такие как гуммиарабик и трагакантовая камедь, (2) природные фосфатиды, такие как фосфатиды соевых бобов и лецитин, (3) сложные эфиры или частичные сложные эфиры, полученные из жирных кислот и гекситол ангидридов, например, сорбитан моноолеат, (4) продукты конденсации указанных частичных сложных эфиров с этиленоксидом, например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. Эмульсии могут также содержать подслащивающие и ароматизирующие средства.

Масляные суспензии могут быть составлены путем суспендирования активного компонента в растительном масле, таком как, например, арахисовое масло, оливковое масло, сезамовое масло или кокосовое масло, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут содержать загуститель, такой как, например, пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Суспензии могут также содержать один или несколько консервантов, например, этил или н-пропил пгидроксибензоат; одно или несколько окрашивающих средств; одно или несколько ароматизирующих средств; и одно или несколько подслащивающих средств, таких как сахароза или сахарин.

Сиропы и эликсиры могут быть составлены с подслащивающими средствами, такими как, например, глицерин, пропиленгликоль, сорбит или сахароза. Такие составы могут также содержать средство, уменьшающее раздражение, и консервант, такой как метил- и пропилпарабены и ароматизирующие и окрашивающие средства.

Соединения данного изобретения можно также вводить парентерально, то есть, подкожно, внутривенно, интраокулярно, интрасиновиально, внутримышечно или интраперитонеально, в виде инъекционных дозировок соединения в, например, физиологически приемлемом разбавителе с фармацевтическим носителем, который может представлять собой стерильную жидкость или смесь жидкостей, таких как вода, физиологический раствор, водные растворы декстрозы и родственных Сахаров, спирт, такой как этанол, изопропанол или гексадециловый спирт, гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль, глицеринкетали, такие как 2,2-диметил-1,1-диоксолан-4-метанол, простые эфиры, такие как поли(этиленгликоль) 400, масло, жирная кислота, сложный эфир жирной кислоты или глицерид жирной кислоты, или ацетилированный глицерид жирной кислоты, с добавлением фармацевтически приемлемого поверхностно-активного вещества, такого как мыло или детергент, суспендирующего средства, такого как пектин, карбомеры, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза или карбоксиметилцеллюлоза, или эмульгирующих средств и других фармацевтических адъювантов, или без них.

Примеры масел, которые можно применять в парентеральных составах данного изобретения, представляют собой таковые из нефти, животного, растительного или синтетического происхождения, например, арахисовое масло, соевое масло, сезамовое масло, хлопковое масло, кукурузное масло, оливковое масло, вазелин и минеральное масло. Подходящие жирные кислоты включают олеиновую кислоту, стеариновую кислоту, изостеариновую кислоту и миристиновую кислоту. Подходящими сложными эфирами жирных кислот являются, например, этилолеат и изопропилмиристат. Подходящие мыла включают соли жирной кислоты и щелочного металла, аммония и триэтаноламина, и подходящие детергенты включают катионоактивные детергенты, например, галогениды диметилдиалкиламмония, галогениды алкилпиридиния и алкиламинацетаты; анионные детергенты, например, алкил-, арил- и олефинсульфонаты, алкил-, олефин-, простой эфир- и моноглицеридсульфаты и сульфосукцинаты; неионные детергенты, например, оксиды жирных аминов, алканоламиды жирных кислот, и поли(оксиэтилен- оксипропилен)ы или сополимеры этиленоксида или пропиленоксида; и амфотерные детергенты, например, алкилбета-аминопропионаты и четвертичные аммониевые соли 2-алкилимидазолина, а также смеси.

Парентеральные композиции данного изобретения будут типично содержать от приблизительно 0.5% до приблизительно 25 мас.% активного компонента в растворе. Также могут преимущественно использоваться консерванты и буферы. Чтобы минимизировать или устранить раздражение в участке инъ

- 29 046642 екции, такие композиции могут содержать неионное поверхностно-активное вещество, имеющее в одном варианте осуществления гидрофильно-липофильный баланс (HLB) от приблизительно 12 до приблизительно 17. Количество поверхностно-активного вещества в таком составе в одном варианте осуществления находится в диапазоне от приблизительно 5% до приблизительно 15 мас.%. Поверхностно-активное вещество может быть одним компонентом, имеющим вышеупомянутый HLB, или может представлять смесь двух или больше компонентов, имеющих желательный HLB.

Примеры поверхностно-активных веществ, используемых в парентеральных составах, представляют собой класс сложных эфиров полиэтиленсорбитана и жирной кислоты, например, сорбитан моноолеат, и высокомолекулярные аддукты этиленоксида с гидрофобным основанием, образованные конденсацией пропиленоксида с пропиленгликолем.

Фармацевтические композиции могут находиться в форме стерильных инъекционных водных суспензий. Такие суспензии могут быть составлены в соответствии с известными методами с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих средств и суспендирующих средств, таких как, например, натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и гуммиарабик; диспергирующих или смачивающих средств, которые могут представлять собой природный фосфатид, такой как лецитин, продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой, например, полиоксиэтиленстеарат, продукт конденсации этиленоксида с длинноцепочечным алифатическим спиртом, например, гептадекаэтиленоксицетанол, продукт конденсации этиленоксида с частичным сложным эфиром, полученным из жирной кислоты и гекситола, такой как полиоксиэтиленсорбитмоноолеат, или продукт конденсации этиленоксида с частичным сложным эфиром, полученным из жирной кислоты и гекситолангидрида, например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат.

Стерильный инъекционный препарат может также представлять собой стерильный инъекционный раствор или суспензию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе. Разбавителями и растворителями, которые могут использоваться, являются, например, вода, раствор Рингера, изотонические растворы хлорида натрия и изотонические растворы глюкозы. Кроме того, стерильные нелетучие масла традиционно используются в качестве растворителей или суспендирующих сред. С этой целью может использоваться любое мягкое, нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, при приготовлении инъекционных форм можно применять жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.

Композицию в соответствии с настоящим изобретением можно также вводить в форме суппозиториев для ректального введения лекарственного средства. Эти композиции можно получить путем смешивания лекарственного средства с подходящим нераздражающим наполнителем, который является твердым при обычных температурах, но становится жидким при ректальной температуре и будет поэтому таять в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Такими веществами являются, например, масло какао и полиэтиленгликоль.

Составы с контролируемым высвобождением для парентерального введения, включают липосомальные составы, составы с полимерными микросферами и полимерные гелевые составы, которые известны в данной области техники.

Может быть желательно или необходимо вводить фармацевтическую композицию пациенту через механическое устройство доставки. Конструкция и применение механических устройств доставки для доставки фармацевтических средств хорошо известны в данной области техники. Прямые методы для введения, например, введения лекарственного средства непосредственно в головной мозг, обычно включают размещение катетера для доставки лекарственного средства в систему желудочков пациента, чтобы обойти гемоэнцефалический барьер. Одна такая имплантируемая система доставки, используемая для транспорта средств в определенные анатомические участки организма, описана в патенте США № 5,011,472, опубликованном 30 апреля 1991 г.

Композиции в соответствии с настоящим изобретением могут также содержать другие обычные фармацевтически приемлемые компоненты, в общем обозначаемые как носители или разбавители, по мере необходимости или по желанию. Можно использовать обычные методики приготовления таких композиций в пригодных дозируемых формах.

Такие компоненты и методики включают описанные в следующих ссылочных источниках, каждый из которых включен в данное описание путем ссылки: Powell, M.F. и др., Compendium of Excipients for Parenteral Formulations PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1998, 52(5), 238-311; Strickley, R.G Parenteral Formulations of Small Molecule Therapeutics Marketed in the United States (1999)-часть1 PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1999, 53(6), 324-349; и Nema, S. и др., Excipients and Their Use in Injectable Products PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 1997, 51(4), 166171.

Обычно используемые фармацевтические компоненты, которые можно применять как пригодные для составления композиции для ее намеченного пути введения, включают:

подкисляющие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, уксусную кислоту, лимонную кислоту, фумаровую кислоту, соляную кислоту, азотную кислоту);

- 30 046642 подщелачивающие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, раствор аммиака, карбонат аммония, диэтаноламин, моноэтаноламин, гидроксид калия, борат натрия, карбонат натрия, гидроксид натрия, триэтаноламин, троламин);

адсорбенты (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, порошкообразную целлюлозу и активированный древесный уголь);

аэрозольные пропелленты (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, углекислый газ, CC^, F2ClC-CClF2 и CCIF3);

средства для вытеснения воздуха (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, азот и аргон);

противогрибковые консерванты (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, бензойную кислоту, бутилпарабен, этилпарабен, метилпарабен, пропилпарабен, бензоат натрия);

антибактериальные консерванты (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, хлорид бензалкония, хлорид бензэтония, бензиловый спирт, хлорид цетилпиридиния, хлорбутанол, фенол, фенилэтиловый спирт, нитрат фенилртути и тимерозал);

антиоксиданты (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, аскорбиновую кислоту, аскорбилпальмитат, бутилированный гидроксианизол, бутилированный гидрокситолуол, гипофосфорную кислоту, монотиоглицерин, пропилгаллат, аскорбат натрия, бисульфит натрия, формальдегидсульфоксилат натрия, метабисульфит натрия);

связывающие вещества (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, блокполимеры, природный и синтетический каучук, полиакрилаты, полиуретаны, силиконы, полисилоксаны и сополимеры бутадиенстирола);

буферные средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, метафосфат калия, фосфат дикалия, ацетат натрия, безводный цитрат натрия и дигидрат цитрата натрия);

средства-носители (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, сироп из аравийской камеди, ароматический сироп, ароматический эликсир, вишневый сироп, сироп какао, апельсиновый сироп, сироп, кукурузное масло, минеральное масло, арахисовое масло, сезамовое масло, бактериостатический натрия хлорид для инъекций и бактериостатическую воду для инъекций);

хелатирующие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, динатрия эдетат и эдетовую кислоту);

красители (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, FD&C Красный № 3, FD&C Красный № 20, FD&C Желтый № 6, FD&C Синий № 2, D&C Зеленый № 5, D&C Оранжевый № 5, D&C Красный № 8, карамель и оксид железа красный);

просветляющие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, бентонит);

эмульгирующие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, аравийскую камедь, цетомакрогол, цетиловый спирт, глицерилмоностеарат, лецитин, сорбитан моноолеат, полиоксиэтилен 50 моностеарат);

инкапсулирующие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, желатин и ацетат-фталат целлюлозы);

ароматизаторы (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, анисовое масло, коричное масло, какао, ментол, апельсиновое масло, мятное масло и ванилин);

увлажняющие вещества (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, глицерин, пропиленгликоль и сорбит);

отмучивающие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, минеральное масло и глицерин);

масла (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, арахисовое масло, минеральное масло, оливковое масло, арахисовое масло, сезамовое масло и растительное масло);

основания мазей (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, ланолин, гидрофильную мазь, полиэтиленгликолевую мазь, вазелин, гидрофильный вазелин, белую мазь, желтую мазь и мазь с розовой водой);

усиливающие проницаемость средства (трансдермальная доставка) (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, моногидрокси- или полигидроксиспирты, моно- или поливалентные спирты, насыщенные или ненасыщенные жирные спирты, насыщенные или ненасыщенные жирные сложные эфиры, насыщенные или ненасыщенные дикарбоновые кислоты, эфирные масла, фосфатидильные производные, цефалин, терпены, амиды, простые эфиры, кетоны и мочевины);

пластификаторы (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, диэтилфталат и глицерин);

растворители (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, этанол, кукурузное масло, хлопковое масло, глицерин, изопропанол, минеральное масло, олеиновую кислоту, арахисовое масло, очищенную воду, воду для инъекций, стерильную воду для инъекций и стерильную воду для ирригаций);

усиливающие жесткость средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, цетиловый спирт, цетиловые сложные эфиры, воск, микрокристаллический воск, парафин, стеариловый

- 31 046642 спирт, белый воск и желтый воск);

основания суппозиториев (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, масло какао и полиэтиленгликоли (смеси));

поверхностно-активные вещества (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, хлорид бензалкония, ноноксинол 10, окстоксинол 9, полисорбат 80, натрия лаурилсульфат и сорбитанмонопальмитат);

суспендирующие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, агар, бентонит, карбомеры, натрий карбоксиметилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, каолин, метилцеллюлозу, трагакант и вигум);

подслащивающие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, аспартам, декстрозу, глицерин, маннит, пропиленгликоль, натрий сахарин, сорбит и сахарозу);

таблеточные антиадгезивные вещества (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, стеарат магния и тальк);

таблеточные связывающие вещества (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, аравийскую камедь, альгиновую кислоту, натрий карбоксиметилцеллюлозу, прессуемый сахар, этилцеллюлозу, желатин, жидкую глюкозу, метилцеллюлозу, несшитый поливинилпирролидон и прежелатинизированный крахмал);

разбавители для таблеток и капсул (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, двухосновный фосфат кальция, каолин, лактозу, маннит, микрокристаллическую целлюлозу, порошкообразную целлюлозу, осажденный карбонат кальция, карбонат натрия, фосфат натрия, сорбит и крахмал);

покровные вещества для таблеток (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, жидкую глюкозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, этилцеллюлозу, ацетатфталат целлюлозы и шеллак);

наполнители для прямого прессования таблеток (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, двухосновный фосфат кальция);

таблеточные разрыхлители (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, альгиновую кислоту, кальций карбоксиметилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, полакриллин калий, поперечно сшитый поливинилпирролидон, альгинат натрия, натрия крахмалгликолят и крахмал);

таблеточные скользящие вещества (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, коллоидный силикагель, кукурузный крахмал и тальк);

таблеточные смазывающие вещества (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, стеарат кальция, стеарат магния, минеральное масло, стеариновую кислоту и стеарат цинка);

светонепроницаемые средства для таблеток/капсул (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, диоксид титана);

таблеточные полирующие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, карнаубский воск и белый воск);

загустители (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, воск, цетиловый спирт и парафин);

средства, регулирующие тоничность (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, декстрозу и хлорид натрия);

увеличивающие вязкость средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, альгиновую кислоту, бентонит, карбомеры, натрий карбоксиметилцеллюлозу, метилцеллюлозу, поливинилпирролидон, альгинат натрия и трагакант); и смачивающие средства (примеры включают, но не ограничиваются перечисленными, гептадекаэтиленоксицетанол, лецитины, сорбитмоноолеат, полиоксиэтиленсорбитмоноолеат и полиоксиэтиленстеарат).

Фармацевтические композиции в соответствии с настоящим изобретением могут быть иллюстрированы следующим образом:

Стерильный в/в раствор: 5 мг/мл раствор желательного соединения данного изобретения можно приготовить с использованием стерильной инъекционной воды, и, в случае необходимости, проводят коррекцию pH. Раствор разводят для введения до концентрации 1-2 мг/мл с помощью стерильной 5% декстрозы и вводят в виде в/в инфузии в течение приблизительно 60 минут.

Лиофилизированный порошок для в/в введения: стерильный препарат можно приготовить с использованием (i) 100 - 1000 мг желательного соединения данного изобретения в виде лиофилизированного порошка, (ii) 32-327 мг/мл цитрата натрия, и (iii) 300 - 3000 мг Декстрана 40. Состав восстанавливают с помощью стерильного, инъекционного физиологического раствора или 5% декстрозы до концентрации 10-20 мг/мл, которую дополнительно разбавляют с помощью физиологического раствора или 5% декстрозы до 0.2 - 0.4 мг/мл, и вводят либо в/в болюсом, либо в/в инфузией в течение 15-60 минут.

Внутримышечная суспензия: следующий раствор или суспензию можно приготовить для внутримышечной инъекции:

- 32 046642 мг/мл желательного, водонерастворимого соединения данного изобретения;

мг/мл натрий карбоксиметилцеллюлозы;

мг/мл ТВИН 80;

мг/мл хлорида натрия;

мг/мл бензилового спирта.

Капсулы с твердой оболочкой: большое количество капсул готовят путем заполнения в стандартные двойные твердые желатиновые капсулы по 100 мг порошкообразного активного компонента, 150 мг лактозы, 50 мг целлюлозы и 6 мг стеарата магния.

Мягкие желатиновые капсулы: готовят смесь активного компонента в перевариваемом масле, таком как соевое масло, хлопковое масло или оливковое масло, и вводят с помощью насоса положительного вытеснения в размягченный желатин с образованием мягких желатиновых капсул, содержащих 100 мг активного компонента. Капсулы промывают и высушивают. Активный компонент может быть растворен в смеси полиэтиленгликоля, глицерина и сорбита с получением смешивающейся с водой лекарственной смеси.

Таблетки: большое количество таблеток готовят в соответствии с обычными способами так, чтобы единица дозирования составляла 100 мг активного компонента, 0.2 мг коллоидного кремния диоксида, 5 мг стеарата магния, 275 мг микрокристаллической целлюлозы, 11 мг крахмала и 98.8 мг лактозы. Могут наноситься соответствующие водные и неводные покрытия для увеличения вкусовой привлекательности, улучшения элегантности и стабильности или задержки всасывания.

Таблетки/капсулы с немедленным высвобождением: они представляют собой твердые пероральные дозированные формы, полученные с помощью стандартных и новых способов. Эти единицы принимают перорально без воды для немедленного растворения и доставки лекарственного препарата. Активный компонент перемешивают в жидкости, содержащей компонент, такой как сахар, желатин, пектин и подсластители. Эти жидкости отверждают в твердые таблетки или каплеты путем сушки вымораживанием и методами экстракции из твердого состояния. Соединения лекарственных средств могут быть спрессованы с вязкоупругими и термоэластичными сахарами и полимерами или шипучими компонентами с получением пористых матриц, предназначенных для немедленного высвобождения без необходимости запивать водой.

Доза и введение.

На основании стандартных лабораторных методов, известных для оценки соединений, пригодных для лечения гиперпролиферативных нарушений и ангиогенных нарушений, с помощью стандартных тестов на токсичность и стандартных фармакологических анализов для определения параметров лечения состояний, идентифицированных выше, у млекопитающих, и путем сравнения этих результатов с результатами известных лекарственных средств, которые используются для лечения этих состояний, может быть легко определена эффективная дозировка соединений настоящего изобретения для лечения каждого желательного показания. Количество активного компонента, подлежащее введению при лечении одного из этих состояний, может широко варьироваться согласно таким рассматриваемым факторам, как конкретное соединение и используемая единица дозирования, способ введения, период лечения, возраст и пол пациента, подвергающегося лечению, и природа и степень состояния, подвергающегося лечению.

Общее количество активного компонента, подлежащее введению, обычно будет варьироваться от приблизительно 0.001 мг/кг до приблизительно 200 мг/кг массы тела в сутки, и, в отдельных вариантах осуществления, от приблизительно 0.01 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг массы тела в сутки. Клинически пригодные схемы дозирования будут колебаться от дозирования один - три раза в сутки до дозирования один раз каждые четыре недели. Кроме того, перерывы в приеме лекарственного средства, когда пациенту не дозируют лекарственное средство на протяжении определенного промежутка времени, могут быть выгодными для общего равновесия между фармакологическим действием и переносимостью. Единица дозировки может содержать приблизительно от 0.5 мг до приблизительно 1500 мг активного компонента, и может вводиться один или несколько раз в сутки или меньше одного раза в сутки. Средняя суточная дозировка для введения путем инъекции, включая внутривенные, внутримышечные, подкожные и парентеральные инъекции, и использование методик инфузии, в других вариантах осуществления будет составлять от 0.01 до 200 мг/кг общей массы тела. Режим среднего суточного ректального дозирования в отдельных вариантах осуществления будет составлять от 0.01 до 200 мг/кг общей массы тела. Режим среднего суточного вагинального дозирования в других вариантах осуществления будет составлять от 0.01 до 200 мг/кг общей массы тела. Режим среднего суточного местного дозирования в следующих вариантах осуществления будет составлять от 0.1 до 200 мг, которые применяют один - четыре раза в сутки. Трансдермальная концентрация в других вариантах осуществления будет такой, которая необходима для поддержания суточной дозы от 0.01 до 200 мг/кг. Режим среднего суточного ингаляционного дозирования в других вариантах осуществления будет составлять от 0.01 до 100 мг/кг общей массы тела.

Несомненно, определенный начальный и продолжающийся режим дозирования для каждого пациента будут варьироваться в зависимости от природы и тяжести состояния, определенного лечащим диагностом, активности определенного используемого соединения, возраста и общего состояния пациента, времени введения, пути введения, скорости выведения лекарственного средства из организма, комбина

- 33 046642 ций лекарственных средств, и т.п. Желательный способ лечения и количество доз соединения настоящего изобретения или его фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира или их композиции могут быть установлены квалифицированными специалистами в данной области, используя обычные тесты лечения.

Методы комбинированной терапии.

Соединения данного изобретения можно вводить в виде единственного фармацевтического средства или в комбинации с одним или несколькими другими фармацевтическими средствами, где комбинация не вызывает неприемлемых побочных действий. Указанными комбинированными фармацевтическими средствами могут быть другие средства, имеющие антипролиферативное действие, такие как, например, предназначенные для лечения гематологических опухолей, солидных опухолей и/или их метастазов, и/или средства для лечения нежелательных побочных действий. Настоящее изобретение также относится к таким комбинациям.

Другие антигиперпролиферативные средства, пригодные для применения с композицией изобретения, включают, без ограничения перечисленным, те соединения, которые признаны для применения для лечения неопластических заболеваний в издании Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics (девятое издание), редактор Molinoff и др., опубл. McGraw-Hill, страницы 1225-1287, (1996), которое таким образом включено в настоящую заявку посредством ссылки, в особенности, (химиотерапевтические) противоопухолевые средства, определенные выше. Комбинация, в зависимости от конкретного случая, может представлять собой нефиксированную комбинацию или комбинацию фиксированных доз.

Методы тестирования конкретного фармакологического или фармацевтического свойства хорошо известны специалистам в данной области техники.

Иллюстративные испытательные эксперименты, описанные в настоящем описании, служат для иллюстрации настоящего изобретения и изобретение не ограничивается приведенными примерами.

Как будет понятно специалистам в данной области техники, изобретение не ограничивается отдельными вариантами осуществления, описанными здесь, а охватывает все модификации указанных вариантов, которые находятся в рамках сущности и объема изобретения, определенных в прилагаемой формуле изобретения.

Следующие примеры иллюстрируют изобретение более подробно, без его ограничения. Дальнейшие соединения в соответствии с изобретением, получение которых не описано детально, могут быть получены аналогичным образом.

Соединения, которые упоминаются в примерах, и их соли представляют собой предпочтительные варианты осуществления изобретения, также как и формула изобретения охватывает все подкомбинации остатков соединения формулы (I), как раскрыто конкретными примерами.

Термин в соответствии с в рамках экспериментального раздела используется в том смысле, что упомянутая методика должна быть использована аналогично.

Экспериментальный раздел

Химические названия генерировали с использованием программного обеспечения ACD/Name от ACD/Labs. В некоторых случаях вместо названий, сгенерированных ACD/Name, использовали общепринятые названия коммерчески доступных реагентов.

В следующей табл. 1 перечислены сокращения, используемые в этом параграфе и в разделе Примеры, поскольку они не поясняются в основном тексте. Другие сокращения имеют значения, по существу, обычные для специалиста в данной области.

- 34 046642

Таблица 1 Сокращения

Сокращение ACN АсОН Ьг d DAD DAST DBU ДХМ dd DIPEA DMA DMAP ДМФА ДМСО EDC.HC1 ESI EtOAc EtOH 4 HC1 ВЭЖХ ЖХ-МС m MeCN MeOH мин MC MTBE MWD	Значение Ацетонитрил Уксусная кислота Широкий сигнал (ЯМР) Дублет (ЯМР) Диодно-матричный детектор Трифторид диэтиламиносеры 1,8-Диазабицикло(5.4.0)ундец-7-ен Дихлорметан Дублет дублетов (ЯМР) Диизопропилэтиламин Ν,Ν-диметил ацетамид 4-Диметиламинопиридин Ν,Ν-диметилформамид Диметил сульфоксид Хлористоводородная соль Х-(3-диметиламинопропил)-Х'этилкарбодиимида Ионизация методом электрораспыления Этилацетат Этанол Час(-ы) Хлороводород, хлористоводородная кислота Высокоэффективная жидкостная хроматография Жидкостная хроматография - масс-спектрометрия Мультиплет (ЯМР) Ацетонитрил Метанол Минута(-ы) Масс-спектрометрия Метил-от/?еот-бутиловый эфир Многоволновой детектор
ЯМР	Спектроскопия Ядерного Магнитного Резонанса: химические сдвиги (δ) приведены в м.д. Химические сдвиги корректировали путем установки сигнала ДМСО на 2.50 м.д., если не указано иное.
q	Квартет (ЯМР)
KT	Комнатная температура
R_t, Rt	Время удержания
s	Синглет (ЯМР)
насыщ.	Насыщенный
СФХ	Сверхкритическая флюидная хроматография
t	триплет (ЯМР)
td	триплет дублета (ЯМР)
TEA	Триэтиламин
ТФУ	Трифторуксусная кислота
ТГФ	Тетрагидрофуран
δ	Химический сдвиг

Другие сокращения имеют значения, по существу, обычные для специалиста в данной области.

Различные аспекты изобретения, описанного в данной заявке, иллюстрируются следующими примерами, которые не предназначены для ограничения изобретения каким-либо образом.

Иллюстративные тестовые эксперименты, описанные в данной заявке, служат для иллюстрации настоящего изобретения и изобретение не ограничено приведенными примерами.

Экспериментальный раздел - общая часть

Все реагенты, для которых синтез не описан в экспериментальном разделе, либо доступны для приобретения, либо являются известными соединениями, либо могут быть образованы известными способами из известных соединений специалистом в данной области.

Соединения и промежуточные соединения, полученные в соответствии со способами изобретения, могут требовать очистки. Очистка органических соединений хорошо известна специалисту в данной области и может существовать несколько путей очистки одного и того же соединения. В некоторых случаях очистка может не потребоваться. В некоторых случаях соединения можно очистить с помощью кристаллизации. В некоторых случаях примеси можно удалить путем растирания, используя подходящий растворитель.

В некоторых случаях соединения можно очистить с помощью хроматографии, в частности, колоночной флэш-хроматографии, используя, например, предварительно заполненные силикагелевые картриджи, например, Biotage SNAP картриджи KP-Sil® или KP-NH® в комбинации с системой автоматической очистки Biotage (SP4® или Isolera Four®) и элюентами, такими как градиенты гексан/этилацетат или ДХМ/метанол. При выполнении колоночной флэш-хроматографии можно использовать немодифи

- 35 046642 цированный (обычный) силикагель, а также функционализированный аминофазой силикагель. Если в экспериментальном разделе ссылка дается на колоночную флэш-хроматографию или на флэшхроматографию без указания стационарной фазы, использовали обычный силикагель

В некоторых случаях соединения можно очистить с помощью препаративной ВЭЖХ, используя, например, автоочистительное устройство Waters, оснащенное диодно-матричным детектором и/или масс-спектрометром с ионизацией методом электрораспыления, работающим в режиме реального времени, в комбинации с подходящей предварительно заполненной обращенно-фазовой колонкой, и элюенты, такие как градиенты воды и ацетонитрила, которые могут содержать добавки, такие как трифторуксусная кислота, муравьиная кислота или водный аммиак.

В некоторых случаях, методы очистки, как описано выше, могут обеспечить соединения настоящего изобретения, которые обладают достаточно основной или кислой функцией, в форме соли, такой как, в случае соединения настоящего изобретения, которое является достаточно основным, например, трифторацетат или формиат, или, в случае соединения настоящего изобретения, которое является достаточно кислым, например, аммониевая соль. Соль этого типа можно превратить либо в форму свободного основания, либо в форму свободной кислоты, соответственно, различными способами, известными специалисту в данной области техники, либо соединение в последующих биологических анализах можно использовать в виде солей. Следует понимать, что конкретная форма (например, соль, свободное основание и т.д.) соединения настоящего изобретения, выделенная и описанная в данной заявке, не обязательно является единственной формой, в которой указанное соединение может использоваться в биологическом анализе с целью количественного определения специфической биологической активности.

Методы аналитической ЖХ-МС.

Метод 1.

Прибор: Waters Acquity UPLCMS SingleQuad; колонка: Acquity UPLC BEH C18 1.7 мкм, 50x2.1 мм; элюент A: вода + 0.1 об.% муравьиной кислоты (99%), элюент B: ацетонитрил; градиент: 0-1.6 мин. 199% B, 1.6-2.0 мин. 99% B; поток 0.8 мл/мин; температура: 60°C; ДМД сканирование: 210-400 нм.

Метод 2.

Прибор: Waters Acquity UPLCMS SingleQuad; колонка: Acquity UPLC BEH C18 1.7 мкм, 50x2.1 мм; элюент A: вода + 0.2 об.% водного аммиака (32%), элюент B: ацетонитрил; градиент: 0-1.6 мин. 1-99% B, 1.6-2.0 мин. 99% B; поток 0.8 мл/мин; температура: 60°C; ДМД сканирование: 210-400 нм.

Метод 3.

Прибор: Waters Acquity UPLC H-Class system; колонка: Acquity CSH C18 1.7 мкм 2.1x50 мм; элюент A: вода + 0.1 об.% муравьиной кислоты, элюент B: ацетонитрил, элюент C: 2 об.% аммиака (28%) в воде, элюент D: 2 об.% муравьиной кислоты в воде; градиент: 0-1.2 мин 2-95% B с A и 5% D на всех этапах, 1.2-1.4 мин. 95% B; поток 0.8 мл/мин; температура: 40°C; ФДМД: 215-350 нм.

Метод 4.

Прибор: Waters Acquity UPLC H-Class system; колонка: XBridge BEH C18 2.5 мкм 2.1x50 мм; элюент A: вода + 0.1 об.% муравьиной кислоты, элюент B: ацетонитрил, элюент C: 2 об.% аммиака (28%) в воде, элюент D: 2 об.% муравьиной кислоты в воде; градиент: 0-1.2 мин 2-95% B с A и 5% C на всех этапах, 1.2-1.4 мин 95% B; поток 0.8 мл/мин; температура: 40°C; ФДМД: 215-350 нм.

Метод 5.

МС прибор: SHIMADZU LCMS-2020; ВЭЖХ прибор: LabSolution Version 5.72; колонка: Kinetex@5 мкм EVO C18 30x2.1 мм; элюент A: 0.0375% ТФУ в воде (об./об.), элюент B: 0.01875% ТФУ в ацетонитриле: градиент: 0.0 мин 0% B ^ 3.00 мин 60% B ^ 3.50 мин 60% B ^ 3.51 мин 0% B ^ 4.00 мин 0% B; скорость потока: 0.8 мл/мин; температура термостата: 50°C; УФ-детектирование: 220 нм & 254 нм.

Метод 6.

Прибор: Agilent 1290 UPLCMS 6230 TOF; колонка: BEH C 18 1.7 мкм, 50x2.1 мм; элюент A: вода+ 0.05% муравьиной кислоты (99%); элюент B: ацетонитрил + 0.05% муравьиной кислоты (99%); градиент: 0-1.7 2-90% B, 1.7-2.0 90% B; поток: 1.2 мл/мин; температура: 60°C; ДМД сканирование: 190-400 нм.

Методы препаративной ЖХ-МС:

Метод 7.

Прибор: Waters Autopurification MS SingleQuad; колонка: Waters XBrigde C18 5 мк 100x30 мм; элюент A: вода + 0.2 об.% водного аммиака (32%), элюент B: ацетонитрил; градиент: 0-5.5 мин. 5-100% B; поток 70 мл/мин; температура: 25°C; ДМД сканирование: 210-400 нм.

Метод 8.

Прибор: Waters Autopurification MS SingleQuad; колонка: Waters XBrigde C18 5 мк 50x50 мм; элюент A: вода + 0.1 об.% муравьиной кислоты, элюент B: метанол; градиент: 0-0.50 мин. 20% B; поток 50 100 мл/мин, 0.50-8.00 мин. 20 -60% B; поток 100 мл/мин, температура: 25°C; ДМД сканирование: 210-400 нм.

Метод 9.

Прибор: Labomatic HD-5000, насосная головка HDK-280, модуль градиента NDB-1000, отборник фракций Labomatic Labocol Vario 2000, Knauer УФ-детектор Azura UVD 2.1S, программное обеспечение

- 36 046642

Prepcon 5. Колонка: Chromatorex C18 10 мкм 120x30 мм; элюент A: вода + 0.1% муравьиной кислоты; элюент B: ацетонитрил; градиент: приведен для промежуточных соединений и примеров, скорость потока 150 мл/мин, температура 25°C; УФ 220 нм.

Метод 10.

Прибор: Labomatic HD-5000, насосная головка HDK-280, модуль градиента NDB-1000, отборник фракций Labomatic Labocol Vario 2000, Knauer УФ-детектор Azura UVD 2.1S, программное обеспечение Prepcon 5. Колонка: Chromatorex C18 10 мкм 120x30 мм; элюент A: 0.1% аммиака в воде; элюент B: ацетонитрил; градиент: приведен для промежуточных соединений и примеров, скорость потока 150 мл/мин, температура 25°C; УФ 250 нм.

Метод 11.

Прибор: Labomatic HD-5000, насосная головка HDK-280, модуль градиента NDB-1000, отборник фракций Labomatic Labocol Vario 2000, Knauer УФ-детектор Azura UVD 2.1S, программное обеспечение Prepcon 5. Колонка: Chromatorex C18 10 мкм 300x50 мм; элюент A: 0.1% аммиака в воде; элюент B: ацетонитрил; градиент: приведен для промежуточных соединений и примеров, скорость потока 250 мл/мин, температура 25°C; УФ 250 нм.

Спектры ЯМР.

Мультиплетности сигналов протонов в спектрах 1H ЯМР, приведенные в следующих параграфах, отражают наблюдаемую форму сигнала и не учитывают какие-либо проявления сигнала более высокого порядка. Как правило, данные химического сдвига относятся к центру рассматриваемого сигнала. В случае широких мультиплетов, указан интервал. Сигналы, скрытые растворителем или водой, либо приписаны ориентировочно, либо не перечислены. Сильно расширенные сигналы - например, вызванные быстрым вращением фрагментов молекулы или обменом протонов - также либо приписаны ориентировочно (часто их называют широким мультиплетом или широким синглетом), либо не показаны.

Данные ¹Н-ЯМР выбранных соединений перечислены в форме перечней пиков ¹Н-ЯМР. В них, для каждого пика сигнала сначала приведено значение 5 в м.д., а затем - значение интенсивности сигнала, указанное в круглых скобках. Пары значение 5 - интенсивность сигнала от разных пиков разделены запятыми. Таким образом, перечень пиков описывается следующей общей формой: δ1 (интенсивность^, δ₂(интенсивность^), ..., δ₁ (интенсивность^, ..., δ_Ώ (интенсивность^).

Интенсивность острого сигнала коррелирует с высотой (в см) сигнала в печатном варианте ЯМР спектра. При сравнении с другими сигналами, эти данные можно сопоставить с реальными отношениями интенсивностей сигналов. В случае широких сигналов, показаны несколько пиков, или центр сигнала вместе с их относительной интенсивностью, по сравнению с наиболее интенсивным сигналом, отображаемым в спектре. Перечень пиков ¹Н-ЯМР подобен классическому ¹Н-ЯМР представлению данных, и таким образом, обычно содержит все пики, перечисленные в классической интерпретации ЯМР. Более того, подобно классическим печатным вариантам ¹Н-ЯМР, перечни пиков могут отображать сигналы растворителей, сигналы, полученные от стереоизомеров конкретного целевого соединения, пики примесей, сателлитные пики ¹³С, и/или боковые полосы вращения. Пики стереоизомеров и/или пики примесей обычно отображаются с более низкой интенсивностью по сравнению с пиками целевого соединения (например, с чистотой >90%). Такие стереоизомеры и/или примеси могут быть типичными для конкретного способа получения, и поэтому их пики могут помочь идентифицировать воспроизведение данного способа получения на основании отпечатков побочных продуктов. Эксперт, который рассчитывает пики целевого соединения известными методами (MestReC, ACD моделирование, или с использованием эмпирически оцененных ожидаемых значений), может при необходимости выделить пики целевого соединения, необязательно с использованием дополнительных фильтров интенсивностей. Такая операция была бы подобна отбору пиков в классической интерпретации ¹Н-ЯМР. Подробное описание представления данных ЯМР в форме перечней пиков можно найти в публикации Citation of NMR Peaklist Data within Patent Applications (см. http://www.researchdisclosure.com/searching-disclosures, Research Disclosure Database Number 605005, 2014, 01 августа 2014 г.). При обычной операции отбора пиков, описанной в базе данных Research Disclosure Database Number 605005, параметр Минимальная высота можно устанавливать между значениями 1 и 4%. Однако, в зависимости от химической структуры и/или в зависимости от концентрации анализируемого соединения, может оказаться разумным установить параметр Минимальная высота <1%.

Синтезы промежуточных соединений 1.

Промежуточное соединение 1-1.

3-[( 1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-карбонитрил

3-Хлорпиридин-4-карбонитрил (CAS 68325-15-5, 1.40 г, 10.1 ммоль) и (1,4-диоксан-2-ил)метанол (CAS 143669-41-4, 1.31 г, 11.1 ммоль) растворяли в ТГФ (45 мл). Добавляли трет-бутилат калия (1.03 г,

- 37 046642

9.14 ммоль), и смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°C. Реакционную смесь медленно разбавляли на сыщ. раствором хлорида аммония и экстрагировали с помощью EtOAc (3х). Органическую фазу промывали с помощью соляного раствора и фильтровали через гидрофобный фильтр, концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, гексан / EtOAc, градиент 0-100%; EtOAc / EtOH, градиент 0-35%) с получением 1.18 г указанного в заголовке соединения (выход 53%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 8.72 (s, 1H), 8.23 - 8.46 (m, 1H), 7.68 - 7.86 (m, 1H), 4.32 (d, 2H), 3.40 - 3.99 (m, 7H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.77 мин; МС (ESI положит.): m/z = 221 [M+H]+.

Промежуточное соединение 1-2.

3-{[(3R)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-карбонитрил сн₃

К раствору [(3S)-4-метилморфолин-3-ил]метанола (CAS 1620510-50-0, 1.00 г, 7.62 ммоль) в ТГФ (20 мл) при 0°C медленно добавляли гидрид натрия (366 мг, 9.15 ммоль, чистота 60%). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при КТ. Добавляли 3-хлорпиридин-4-карбонитрил (CAS 68325-15-5, 1.06 г, 7.62 ммоль) в ТГФ (10 мл), и смесь перемешивали в течение ночи. Реакционную смесь гасили с помощью 1 н. HCl до pH = 7. Суспензию фильтровали через гидрофобную фильтровальную бумагу и осадок на фильтре промывали с помощью EtOAc. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (основный силикагель, гексан / EtOAc, градиент 0-100%) с получением 355 мг указанного в заголовке соединения (выход 20%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆): δ [м.д.] = 8.75 (s, 1H), 8.40 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 4.44 (dd, 1H), 4.23 (dd, 1H), 3.87 (dd, 1H), 3.71 (dt, 1H), 3.50 (td, 1H), 3.35 -3.41 (m, 1H), 2.65 - 2.71 (m, 1H), 2.45 - 2.49 (m, 1H), 2.29 - 2.35 (m, 3H), 2.24 (ddd, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.72 мин; МС (ESI положит.): m/z = 234.2 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 1-3.

3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-карбонитрил

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-1, с 3-хлорпиридин4-карбонитрилом (CAS 68325-15-5, 764 мг, 5.51 ммоль) и [4-метилморфолин-2-ил]метанолом (CAS 40987-46-0, 940 мг, 7.17 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 836 мг (чистота 90%, выход 59%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆): δ [м.д.] = 1.893 (0.97), 1.920 (1.44), 1.947 (1.07), 1.954 (0.50), 1.962 (0.54), 1.983 (1.01), 1.991 (1.03), 2.011 (0.58), 2.019 (0.52), 2.197 (16.00), 2.518 (0.41), 2.589 (0.80), 2.593 (0.82), 2.617 (0.73), 2.621 (0.74), 2.766 (0.66), 2.770 (0.95), 2.794 (0.63), 2.798 (0.89), 3.513 (0.60),3.520 (0.73), 3.541 (1.36), 3.547 (1.39), 3.570 (0.80), 3.575 (0.67), 3.793 (0.74), 3.796 (1.10), 3.801 (1.12),3.805 (0.92), 3.808 (0.85), 3.814 (0.79), 3.821 (1.18), 3.826 (1.18), 3.833 (1.27), 3.839 (0.66), 4.316 (5.03),4.329 (4.72), 7.772 (2.40), 7.774 (2.63), 7.785 (2.49), 8.381 (3.41), 8.393 (3.28), 8.714 (4.32).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.70 мин; МС (ESI положит.): m/z = 234.2 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 1-4.

3-{[^)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-карбонитрил

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-2, с 3-хлорпиридин4-карбонитрилом (CAS 68325-15-5, 1.00 г, 7.24 ммоль) и [(3R)-4-метилморфолин-3-ил]метанолом (1.00 г, чистота 95%, 7.24 ммоль; CAS 1620510-51-1) в качестве исходных веществ, получали 823 мг (чистота 99%, выход 48%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 2.211 (0.52), 2.219 (0.64), 2.236 (0.66), 2.240 (0.68),2.245 (0.68), 2.249 (0.72), 2.266 (0.69), 2.274 (θ.63), 2.306 (16.00), 2.472 (0.48), 2.475 (0.50), 2.518 (1.22),2.522 (0.71), 2.658 (0.56), 2.664 (1.27), 2.671 (0.67), 2.687 (0.47), 2.694 (0.96), 2.701 (0.47), 3.356 (1.17),3.378 (1.16), 3.384 (1.30), 3.406 (1.20), 3.472 (0.50), 3.478 (0.58), 3.499 (0.80), 3.506 (0.81), 3.525 (0.71),3.532

- 38 046642 (0.61), 3.685 (0.44), 3.692 (0.86), 3.698 (0.45), 3.720 (0.66), 3.856 (0.80), 3.864 (0.81), 3.884 (0.73), 3.892 (0.72), 4.209 (1.03), 4.223 (1.01), 4.234 (1.29), 4.249 (1.23), 4.417 (1.25), 4.429 (1.28), 4.443 (1.03), 4.454 (0.99), 7.778 (2.39), 7.780 (2.38), 7.790 (2.45), 7.792 (2.50), 8.391 (3.23), 8.403 (3.11), 8.745 (3.91).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.70 мин; МС (ESI положит.): m/z = 234 [M+H]+.

Промежуточное соединение 1-5.

трет-бутил ДО)-2-{[(4-цианопиридин-3-ил)окси]метил}морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-1, с 3-хлорпиридин4-карбонитрилом (CAS 68325-15-5, 2.55 г, 18.4 ммоль) и трет-бутил ДО)-2-(гидроксиметил)морфолин-4карбоксилатом (CAS 135065-76-8, 4.00 г, 18.4 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 4.82 г (чистота

90%, выход 74%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 1.41 (s, 9H), 2.72 - 3.05 (m, 2H), 3.46 (br d, 1H), 3.67 - 3.82 (m, 2H), 3.82 - 3.88 (m, 1H), 4.00 (s, 1H), 4.37 (br d, 2H), 7.79 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 8.73 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.06 мин; МС (ESI положит.): m/z = 320 [M+H]⁺

Промежуточное соединение 1-6.

3-[2-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-карбонитрил N

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-2, с 3-хлорпиридин4-карбонитрилом (CAS 68325-15-5, 2.10 г, 15.1 ммоль) и 2-(1,4-диоксан-2-ил)этан-1-олом (CAS 15172004-6, 2.00 г, 15.1 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 2.89 г (чистота 99%, выход 81%) ука занного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^) δ [м.д.]: 1.754 (0.63), 1.768 (1.37), 1.774 (0.82), 1.781 (0.98), 1.790 (2.18), 1.803 (3.39), 1.810 (2.10), 1.817 (1.93), 1.824 (3.23), 1.838 (2.78), 1.855 (2.41), 1.867 (2.45), 1.869 (2.40), 1.874 (2.53), 1.886 (2.23), 1.902 (0.99), 1.910 (0.87), 1.922 (0.67), 2.326 (0.72), 2.668 (0.69),3.223 (4.26), 3.247 (5.57), 3.250 (5.62), 3.276 (5.26), 3.428 (1.77), 3.434 (1.89), 3.455 (4.59), 3.462 (4.80),3.483 (3.76), 3.489 (3.97), 3.530 (3.36), 3.535 (3.38), 3.558 (4.71), 3.564 (5.40), 3.585 (1.93), 3.592 (3.08),3.626 (4.58), 3.631 (4.33), 3.654 (3.70), 3.659 (4.02), 3.668 (1.98), 3.673 (1.97), 3.680 (2.77), 3.687 (2.85),3.693 (2.89), 3.706 (6.98), 3.712 (6.06), 3.724 (1.75), 3.735 (3.40), 3.759 (4.77), 3.766 (4.02), 3.788 (4.04),3.794 (3.73), 4.315 (0.93), 4.329 (1.18), 4.339 (3.54), 4.354 (6.92), 4.359 (5.21), 4.370 (6.49), 4.384 (3.79),4.392 (1.47), 4.408 (0.68), 7.778 (9.22), 7.790 (9.58), 8.380 (10.88), 8.392 (10.45), 8.698 (16.00).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.64 мин; МС (ESI положит.): m/z = 235 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 1-7.

3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-карбонитрил

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-2, с 3-хлорпиридин4-карбонитрилом (CAS 68325-15-5, 948 мг, 6.84 ммоль) и (5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метанолом (1.00 г, 6.84 ммоль; CAS 54321-57-2) в качестве исходных веществ, получали 1.31 г (чистота 95%, выход 73%) указанного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОЧ): δ [м.д.] = 1.014 (0.69), 1.048 (16.00), 1.172 (0.55), 1.200 (0.51),1.263 (13.01), 1.987 (0.92), 2.518 (0.62), 2.523 (0.43), 3.313 (1.67), 3.340 (2.27), 3.342 (2.21), 3.542 (2.95),3.570 (2.39), 3.604 (1.50), 3.627 (1.97), 3.734 (1.24), 3.760 (3.08), 3.781 (2.25), 3.787 (2.73), 3.791 (1.58),3.796 (0.77), 3.802 (0.63), 4.356 (3.63), 4.365 (4.41), 7.780 (3.42), 7.792 (3.63), 8.387 (4.49), 8.399 (4.29),8.715 (5.54).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.75 мин; МС (ESI положит.): m/z = 249 [M+H]⁺.

- 39 046642

Промежуточное соединение 1-8.

3-{[(2S)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-карбонитрил

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-1, с 3-хлорпиридин4-карбонитрилом (CAS 68325-15-5, 1.00 г, 7.22 ммоль) и [(2R)-1,4-диоксан-2-ил]метанолом (CAS40691388-0, 938 мг, 7.94 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 490 мг (чистота 95%, выход 29%) указанного в заголовке соединения.

Оптическое вращение: [a]D = - 1.68° +/- 0.35° (c = 7 мг/мл, метанол).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^б): δ м.д.= 3.41 - 3.53 (m, 2H), 3.59 - 3.72 (m, 2H), 3.75 - 3.81 (m, 1H), 3.82 - 3.87 (m, 1H), 3.87 - 3.95 (m, 1H), 4.27 - 4.37 (m, 2H), 7.77 - 7.80 (m, 1H), 8.38 - 8.41 (m, 1H), 8.71 - 8.73 (m, 1H).

Промежуточное соединение 1-9.

трет-бутил (3R)-3 - {[(4-цианопиридин-3 -ил)окси]метил} морфолин-4-карбоксилат

К раствору трет-бутил ^)-3-(гидроксиметил)морфолин-4-карбоксилата (4.30 г, 19.8 ммоль) в ТГФ (28 мл) при 0°C медленно добавляли гидрид натрия (1.55 г, чистота 55%, 35.6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч. Добавляли 3-фторпиридин-4-карбонитрил (CAS 113770-88-0, 2.42 г, 19.8 ммоль) в ТГФ (14 мл), и смесь перемешивали в течение 4 ч при 0°C. Реакционную смесь гасили с помощью 2 н. HCl до pH = 6 - 7 и экстрагировали с помощью ЭЭ. Органический слой фильтровали через гидрофобную фильтровальную бумагу и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-7%) с получением 4 г указанного в заголовке соединения (выход 70%).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.95 мин; МС (ESI положит.): m/z = 264 [M+H]+.

Промежуточное соединение 1-10.

трет-бутил (2R)-2-{[(4-цианопиридин-3-uл)окси]метил}морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-1, с 3-хлорпиридин4-карбонитрилом (CAS 68325-15-5, 3.25 г, 23.5 ммоль) и трет-бутил (2R)-2-(гидроксиметил)морфолин-4карбоксилатом (CAS 135065-71-3, 5.10 г, 23.5 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 6.92 г (чистота 90%, выход 83%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 1.41 (s, 9H), 2.73 - 3.00 (m, 2H), 3.39 - 3.50 (m, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.82 - 3.89 (m, 1H), 3.95 - 4.00 (m, 1H), 4.37 (br d, 2H), 7.79 (d, 1H), 8.40 (d, 1H), 8.73 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.04 мин; МС (ESI положит.): m/z = 320 [M+H]+.

Промежуточное соединение 1-11.

3-[(^)-1-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-карбонитрил

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-9, с 3-фторпиридин4-карбонитрилом (878 мг, 7.19 ммоль) и (^)-1-[1,4-диоксан-2-ил]этан-1-олом (CAS 1372875-59-6, 950 мг, 7.19 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 1.68 г (чистота 95%, выход 95%) указанного в заголовке соединения.

- 40 046642

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ м.д.= 0.988 (0.85), 1.004 (0.92), 1.056 (0.59), 1.071 (0.60), 1.154 (4.47), 1.166 (0.63), 1.172 (9.29), 1.189 (4.59), 1.276 (12.44), 1.292 (12.55), 1.325 (11.08), 1.341 (11.16), 1.987 (16.00), 2.518 (1.63), 2.522 (1.05), 3.300 (0.46), 3.396 (1.81), 3.421 (2.99), 3.424 (2.99), 3.429 (1.78), 3.450 (5.06), 3.457 (3.42), 3.472 (1.97), 3.478 (1.62), 3.485 (2.38), 3.497 (2.19), 3.500 (1.91), 3.525 (2.26), 3.552 (1.16), 3.559 (1.31), 3.582 (2.48), 3.588 (2.91), 3.611 (1.70), 3.616 (2.62), 3.638 (4.15), 3.642 (3.63),3.664 (3.89), 3.671 (4.01), 3.676 (1.93), 3.683 (1.76), 3.685 (1.80), 3.689 (1.79), 3.695 (1.76), 3.701 (1.17),3.704 (1.27), 3.707 (1.26), 3.710 (1.28), 3.744 (1.82), 3.750 (3.32), 3.757 (1.01), 3.778 (3.94), 3.784 (2.19),3.807 (1.47), 3.813 (1.33), 3.906 (1.40), 3.912 (1.35), 3.935 (1.24), 3.941 (1.18), 3.999 (1.24), 4.016 (3.72),4.034 (3.66), 4.052 (1.20), 4.804 (0.41), 4.821 (1.95), 4.836 (3.43), 4.852 (2.64), 4.864 (1.34), 7.755 (3.58),7.757 (3.60), 7.769 (4.33), 7.771 (3.80), 7.783 (3.28), 7.785 (3.20), 8.351 (4.95), 8.363 (4.90), 8.368 (4.48),8.380 (4.17), 8.749 (6.40), 8.772 (5.46).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.64 мин; МС (ESI положит.): m/z = 235 [M+H]+.

Промежуточное соединение 1-12.

3-{(1 R)-1-[1,4-диоксан-2-ил] этокси} пиридин-4-карбонитрил

N

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-9, с 3-фторпиридин4-карбонитрилом (905 мг, 7.42 ммоль) и (^)-1-[1,4-диоксан-2-ил]этан-1-олом (CAS 1372881-98-5, 980 мг, 7.42 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 1.39 г (чистота 95%, выход 76%) указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ м.д = 1.274 (0.82), 1.289 (0.87), 1.322 (16.00), 1.337 (15.97), 1.984 (0.48), 2.331 (0.56), 2.673 (0.57), 3.427 (2.95), 3.448 (3.45), 3.455 (3.30), 3.471 (3.27), 3.482 (2.59), 3.496 (3.79), 3.499 (3.36), 3.524 (3.41), 3.580 (1.59), 3.586 (1.80), 3.609 (2.32), 3.615 (2.92), 3.636 (5.12),3.662 (3.60), 3.668 (3.70), 3.680 (2.08), 3.687 (1.49), 3.693 (1.53), 3.698 (1.52), 3.704 (1.41), 3.746 (3.19),3.754 (1.74), 3.775 (2.26), 3.903 (2.52), 3.909 (2.44), 3.932 (2.24), 3.937 (2.13), 4.818 (0.65), 4.833 (2.08),4.845 (2.30), 4.849 (2.22), 4.861 (2.00), 4.876 (0.57), 7.766 (5.15), 7.778 (5.29), 8.348 (0.42), 8.365 (6.23),8.377 (6.01), 8.743 (0.51), 8.765 (9.13).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.67 мин; МС (ESI положит.): m/z = 235 [M+H]+.

Промежуточное соединение 1-71.

3-[1-(4-метилморфолин-2-ил)этокси]изоникотинонитрил

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 1-9, с 3-фторпиридин4-карбонитрилом (824 мг, 6.75 ммоль) и 1-(4-метилморфолин-2-ил)этанолом (980 мг, 6.75 ммоль, CAS 1540922-49-3) в качестве исходных веществ, 817 мг (чистота 99%, выход 48%) указанного в заголовке соединения получали после колоночной хроматографии с использованием Biotage Isolera.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: 1.285 (4.44), 1.300 (4.47), 1.318 (5.38), 1.333 (5.31), 1.848 (0.57), 1.874 (0.94), 1.901 (0.63), 1.927 (0.93), 1.933 (0.66), 1.953 (2.04), 1.961 (1.23), 1.981 (1.32), 1.990 (0.60), 2.188 (16.00), 2.518 (1.33), 2.522 (0.90), 2.572 (0.89), 2.600 (0.79), 2.718 (0.54), 2.746 (0.52), 2.839 (0.64), 2.867 (0.60), 3.485 (0.78), 3.488 (0.66), 3.491 (0.85), 3.516 (1.00), 3.522 (0.92), 3.544 (0.48), 3.550 (0.42), 3.562 (0.44), 3.568 (0.54), 3.573 (0.73), 3.578 (0.77), 3.587 (0.81), 3.593 (0.83), 3.598 (0.85),3.604 (0.71), 3.772 (0.51), 3.777 (0.56), 3.781 (0.78), 3.786 (0.61), 3.789 (0.59), 3.794 (0.56), 3.800 (0.46),3.805 (0.46), 3.809 (0.64), 3.814 (0.50), 3.817 (0.45), 4.818 (0.60), 4.833 (0.97), 4.848 (0.79), 4.858 (0.65),4.862 (0.67), 4.874 (0.57), 7.746 (1.41), 7.760 (2.88), 7.772 (1.71), 8.341 (1.93), 8.355 (2.69), 8.368 (2.12),8.745 (2.34), 8.766 (2.68).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.32 мин; МС (ESI положит.): m/z = 248 [M+H]+.

Синтезы промежуточных соединений 2.

Промежуточное соединение 2-1.

1-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4-ил} метанамин

В автоклав загружали 3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-карбонитрил (промежуточное со- 41 046642 единение 1-1, 1.17 г, 5.34 ммоль), аммиак (19 мл, 7.0 М в метаноле, 850 ммоль) и никель Ренея (CAS 7440-02-0, 783 мг, 50% влажн.), и смесь перемешивали в атмосфере водорода под давлением 25 бар при КТ в течение 22 ч. Смесь фильтровали через набивку целита, элюировали метанолом и объединенные фильтраты концентрировали при пониженном давлении. Остаток непосредственно использовали на следующей стадии без дополнительной очистки (1.13 г, выход 94%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-ds): δ [м.д.] = 8.24 (s, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.38 (d, 1H), 4.09 (d, 2H), 3.73 3.91 (m, 3H), 3.59 - 3.73 (m, 4H), 3.46 - 3.52 (m, 2H), 3.39 - 3.45 (m, 2H). 2.06 (br., 2H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.54 мин; МС (ESI положит.): m/z = 225 [M+H]+.

Промежуточное соединение 2-2.

1-(3-{[(3R)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамин сн₃(Tv СГ NH₂

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с 3-{[(3R)-4метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-карбонитрилом (промежуточное соединение 1-2, 355 мг, 1.52 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 350 мг (выход 89%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОЧ,): δ [м.д.] = 8.24 - 8.31 (m, 1H), 8.17 (d, 1H), 7.39 (d, 1H), 4.18 - 4.27 (m, 1H), 4.00 (dd, 1H), 3.86 (dd, 1H), 3.63 - 3.75 (m, 3H), 3.42 - 3.55 (m, 1H), 3.36 - 3.41 (m, 1H), 2.67 (dq, 1H), 2.40 - 2.47 (m, 1H), 2.19 -2.31 (m, 4H), 1.63 - 2.19 (m, 2H).

Промежуточное соединение 2-3.

1-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамин

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с 3-{[4метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-карбонитрилом (промежуточное соединение 1-3, 836 мг, 3.58 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 860 мг (чистота 90%, выход 91%) указанного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 1.68 - 1.84 (br s, 2H), 1.85 - 1.94 (t, 1H), 1.94 - 2.05 (td, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.57 - 2.64 (d, 1H), 2.73 - 2.83 (d, 1H), 3.46 -3.63 (t, 1H), 3.63 - 3.73 (s, 2H), 3.73 - 3.86 (m, 3H), 4.10 (br d, 2H), 7.34 - 7.44 (d, 1H), 8.10 - 8.20 (d, 1H), 8.21 - 8.30 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.56 мин; МС (ESI положит.): m/z = 238 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 2-4.

1-(3-{[^)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамин

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с 3-{[(3S)-4метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-карбонитрилом (промежуточное соединение 1-4, 823 мг, 3.53 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 798 мг (чистота 90%, выход 86%) указанного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОЧ): δ [м.д.] = 1.865 (0.49), 2.199 (0.64), 2.210 (1.08), 2.228 (0.99), 2.233 (0.96), 2.236 (0.96), 2.254 (0.85), 2.263 (0.81), 2.269 (0.55), 2.284 (16.00), 2.327 (0.53), 2.430 (0.78), 2.439 (0.81), 2.447 (0.65), 2.518 (2.11), 2.523 (1.42), 2.649 (0.75), 2.654 (1.38), 2.660 (0.91), 2.669 (0.65), 2.674 (0.60), 2.678 (0.83), 2.684 (1.22), 2.690 (0.66), 3.361 (1.52), 3.365 (1.53), 3.388 (1.10), 3.469 (0.59),3.474 (0.65), 3.496 (1.15), 3.502 (1.16), 3.523 (0.75), 3.528 (0.68), 3.683 (2.49), 3.690 (2.42), 3.712 (0.79),3.719 (1.11), 3.846 (1.01), 3.853 (1.04), 3.873 (0.94), 3.880 (0.91), 3.982 (0.79), 3.997 (0.86), 4.007 (1.03),4.021 (0.96), 4.215 (1.01), 4.226 (1.09), 4.240 (0.86), 4.250 (0.84), 7.379 (0.99), 7.389 (1.01), 8.168 (1.06),8.179 (1.11), 8.259 (1.53).

- 42 046642

Промежуточное соединение 2-5.

трет-бутил (2S)-2-({[4-(аминометил)пиридин-3-ил]окси}метил)морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с трет-бутил (2S)2-{[(4-цианопиридин-3-ил)окси]метил}морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 1-5, 5.75 г, 18.0 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 6.00 г (чистота 95%, выход 98%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОЧ): δ [м.д.] = 1.41 (s, 9H), 3.16 (s, 2H), 3.39 - 3.49 (m, 2H), 3.66 - 3.79 (m, 5H), 3.79 - 3.98 (m, 3H), 4.07 - 4.20 (m, 3H), 7.39 (d, 1H), 8.19 (d, 1H), 8.27 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.84 мин; МС (ESI положит.): m/z = 324 [M+H]+.

Промежуточное соединение 2-6.

1-{3- [2-( 1,4-диоксан-2-ил)этокси] пиридин-4-ил}метанамин

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с 3-[2-(1,4диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-карбонитрилом (промежуточное соединение 1-6, 2.89 г, 12.3 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 2.22 г (чистота 90%, выход 68%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^: δ [м.д.] = 1.536 (0.40), 1.729 (1.99), 1.751 (3.41), 1.765 (5.01), 1.785 (6.00), 1.804 (5.59), 1.817 (5.34), 1.834 (4.06), 1.852 (2.92), 1.870 (2.15), 2.326 (1.02), 2.669 (1.04), 3.159 (0.53), 3.208 (5.54), 3.235 (8.67), 3.261 (7.11), 3.424 (3.46), 3.430 (3.63), 3.451 (7.09), 3.457 (7.51),3.479 (5.43), 3.485 (5.78), 3.528 (4.90), 3.534 (5.03), 3.557 (6.69), 3.563 (7.65), 3.584 (3.06), 3.590 (4.57),3.622 (8.16), 3.653 (8.66), 3.688 (14.98), 3.697 (16.00), 3.731 (13.03), 3.759 (6.36), 4.136 (7.05), 4.152 (13.01),4.167 (8.38), 7.385 (5.36), 7.394 (5.58), 8.163 (5.21), 8.172 (5.56), 8.224 (7.44).

Промежуточное соединение 2-7.

1-{3-[(5,5 - диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4-ил }метанамин

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с 3-[(5,5-диметил1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-карбонитрилом (промежуточное соединение 1-7, 1.30 г, 5.24 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 1.26 г (чистота 90%, выход 86%) указанного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^) δ [м.д.]: 1.014 (0.96), 1.049 (16.00), 1.201 (0.72), 1.262 (13.58), 1.751 (0.48), 2.518 (2.17), 2.523 (1.47), 3.308 (2.76), 3.539 (2.43), 3.567 (1.99), 3.601 (1.13), 3.623 (1.75), 3.694 (1.97), 3.720 (2.07), 3.746 (2.38), 3.783 (0.46), 4.128 (3.01), 4.136 (2.80), 7.386 (0.85), 8.181 (0.83), 8.237 (0.96).

Промежуточное соединение 2-8.

1-(3-{[(2S}-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамин

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с 3-{[(2S)-1,4диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-карбонитрилом (промежуточное соединение 1-8, 1.24 г, 5.63 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 1.56 г (чистота 80%, выход 99%) указанного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 1.232 (0.52), 1.845 (1.06), 2.518 (2.37), 2.523 (1.54), 3.159 (14.24), 3.171 (14.33), 3.376 (0.69), 3.379 (0.65), 3.404 (2.41), 3.419 (0.41), 3.428 (3.79), 3.431 (3.86), 3.439 (0.59), 3.447 (0.69), 3.455 (2.71), 3.465 (1.97), 3.474 (0.57), 3.486 (2.71), 3.493 (2.97), 3.508 (1.01), 3.520 (2.61), 3.592 (0.45), 3.601 (1.92), 3.608 (2.10), 3.630 (2.77), 3.636 (3.65), 3.659 (5.73), 3.661 (5.45), 3.683

- 43 046642 (16.00), 3.700 (1.95), 3.754 (3.49), 3.762 (2.18), 3.784 (2.51), 3.794 (0.57), 3.812 (0.61), 3.823 (2.48), 3.829 (3.16), 3.842 (0.81), 3.849 (2.07), 3.856 (6.45), 3.868 (1.93), 3.874 (1.37), 3.880 (1.69), 3.887 (1.30), 3.892 (1.13), 3.899 (0.89), 4.087 (11.44), 4.099 (10.46), 4.111 (2.62), 4.125 (1.15), 7.380 (4.02), 7.391 (4.11), 7.411 (0.67), 7.423 (0.67), 8.168 (6.28), 8.179 (6.26), 8.184 (1.58), 8.196 (1.02), 8.230 (10.21), 8.274 (1.76).

Промежуточное соединение 2-9.

трет-бутил (3R)-3-({[4-(аминометил)пиридин-3-ил]окси}метил)морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с трет-бутил (3R)3-{[(4-цианопиридин-3-ил)окси]метил}морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 1-9, 4.00 г, 12.5 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 3.65 г (выход 86%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg): δ [м.д.] = 1.038 (0.41), 1.055 (0.77), 1.073 (0.44), 1.363 (10.92),1.754 (6.47), 2.200 (1.02), 2.325 (1.05), 2.330 (1.42), 2.334 (1.05), 2.521 (5.72), 2.526 (3.72), 2.667 (0.88),2.672 (1.22), 2.676 (0.89), 3.057 (1.02), 3.068 (1.10), 3.087 (1.65), 3.090 (1.62), 3.097 (1.89), 3.101 (1.73),3.120 (2.21), 3.130 (2.39), 3.168 (16.00), 3.210 (1.86), 3.235 (0.59), 3.240 (1.07), 3.258 (1.25), 3.265 (1.40),3.286 (1.75), 3.294 (2.07), 3.316 (3.15), (1.43), 3.503 (3.53), 3.534 (2.78), (1.93), 3.855 (0.89), 3.859 (1.19), (2.79), 3.893 (4.31), 3.899 (3.39),

3.365

3.682

3.865

3.902 (3.67), 3.372 (3.73), 3.395 (7.14), 3.764 (1.68), 3.774 (1.80), 3.869 (2.32), 3.873 (2.87), 3.927 (2.09), 4.111 (1.88), 3.402 (1.68), 3.462 (1.41), 3.470 (1.81), 3.792 (3.17), 3.802 (2.81), 3.820 (3.62), 3.882 (2.64), 3.886 (3.02), 3.889 (1.76), 4.227 (3.64), 4.303 (0.96), 4.315 (1.37), 4.329 (3.71), 4.331 (3.43), 4.338 (1.95), 4.345 (2.50), 7.401 (2.60), 8.192 (2.81), 8.337 (2.91). ЖХ-МС (метод 1): Rt = 0.49 мин; МС (ESI положит.): m/z = 324 [M+H]+.

Промежуточное соединение 2-10.

трет-бутил (2R)-2-({[4-(аминометил)пиридин-3-ил]окси}метил)морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с трет-бутил (2R)2-{[(4-цианопиридин-3-ил)окси]метил}морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 1-10, 6.92 г, 21.7 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 6.95 г (чистота 90%, выход 89%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg): δ [м.д.] = 1.41 (s, 9H), 2.70 - 3.01 (m, 2H), 3.17 (d, 3H), 3.41 - 3.52 (m, 1H), 3.63 - 3.70 (m, 2H), 3.70 - 3.81 (m, 2H), 3.82 - 4.00 (m, 2H), 4.08 - 4.18 (m, 3H), 7.39 (d, 1H), 8.18 (d, 1H), 8.25 (s, 1H).

Промежуточное соединение 2-11.

1-{3-[(1S)-1-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил} метанамин

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с 3-[(1S)-1-(1,4диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-карбонитрилом (промежуточное соединение 1-11, 1.68 г, 7.17 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 1.49 г (чистота 90%, выход 78%) указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.2 мин; МС (ESI положит.): m/z = 239 [M+H]+.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-dg) δ [м.д.]: 0.990 (0.87), 1.006 (0.89), 1.058 (0.73), 1.073 (0.73), 1.165 (0.76), 1.216 (15.68), 1.232 (16.00), 1.256 (14.15), 1.272 (13.96), 1.755 (9.46), 1.917 (0.88), 3.240 (0.43), 3.265

- 44 046642 (0.46), 3.276 (0.41), 3.293 (0.54), 3.302 (0.81), 3.325 (0.68), 3.338 (0.50), 3.350 (0.56), 3.371 (0.56),3.378 (0.58), 3.400 (2.78), 3.412 (2.79), 3.426 (5.84), 3.438 (5.24), 3.453 (6.52), 3.459 (6.28), 3.466 (5.96),3.479 (2.46), 3.486 (3.26), 3.493 (2.78), 3.521 (0.49), 3.529 (0.67), 3.535 (0.58), 3.564 (2.05), 3.572 (2.72),3.580 (2.41), 3.600 (6.11), 3.609 (5.52), 3.617 (4.09), 3.634 (11.25), 3.637 (11.05), 3.756 (8.08), 3.785 (6.75),3.889 (2.49), 3.894 (2.48), 3.917 (2.26), 3.922 (2.16), 4.540 (1.04), 4.555 (3.05), 4.569 (4.27), 4.580 (2.83),4.584 (2.84), 7.369 (3.21), 7.379 (4.91), 8.135 (3.33), 8.146 (5.23), 8.157 (3.20), 8.261 (4.69), 8.275 (4.23).

Промежуточное соединение 2-12.

1-{3-[(^)-1-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}метанамин

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с 3-{(1R)-1-[1,4диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-карбонитрилом (промежуточное соединение 1-12, 1.39 г, 5.93 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 1.36 г (чистота 95%, выход 91%) указанного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de) δ [м.д.]: 1.216 (0.81), 1.232 (0.99), 1.255 (15.91), 1.271 (16.00), 1.753 (0.71), 3.290 (0.44), 3.399 (0.54), 3.412 (2.42), 3.424 (0.71), 3.437 (3.81), 3.440 (3.42), 3.453 (0.77), 3.459 (2.72), 3.465 (5.00), 3.485 (1.48), 3.494 (2.02), 3.573 (1.45), 3.580 (1.70), 3.598 (2.00), 3.603 (3.43),3.609 (3.84), 3.616 (2.24), 3.622 (2.04), 3.628 (1.97), 3.634 (4.41), 3.638 (4.68), 3.645 (2.04), 3.662 (5.32),3.672 (6.05), 3.713 (0.63), 3.757 (2.28), 3.764 (2.39), 3.787 (1.75), 3.790 (1.84), 3.887 (2.14), 3.894 (2.12),3.916 (1.94), 3.922 (1.85), 4.535 (0.53), 4.550 (1.85), 4.564 (2.15), 4.566 (2.17), 4.579 (1.80), 4.595 (0.50),7.381 (3.18), 7.393 (3.14), 8.144 (4.36), 8.156 (4.13), 8.257 (0.50), 8.272 (6.58).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.21 мин; МС (ESI положит.): m/z = 239 [M+H]+.

Промежуточное соединение 2-71.

1-{3-[1-(4-метилморфолин-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}метанамин

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 2-1, с 3-({1-[4метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-карбонитрилом (промежуточное соединение 1-71, 815 мг, 3.30 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 810 мг (чистота 99%, выход 97%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de) δ [м.д.]: 1.227 (3.82), 1.242 (3.97), 1.254 (4.80), 1.270 (4.60), 1.850 (1.08), 1.862 (1.12), 1.876 (1.43), 1.888 (1.42), 1.903 (0.90), 1.915 (1.07), 1.928 (0.67), 1.937 (0.65), 1.945 (0.81), 1.957 (1.14), 1.965 (0.95), 1.973 (0.53), 1.985 (0.64), 1.993 (0.48), 2.152 (0.51), 2.183 (16.00),2.332 (0.45), 2.518 (2.14), 2.522 (1.29), 2.575 (1.38), 2.602 (1.24), 2.673 (0.44), 2.692 (0.68), 2.720 (0.63),2.834 (0.79), 2.862 (0.75), 3.475 (0.48), 3.480 (0.56), 3.487 (0.60), 3.504 (1.27), 3.508 (1.56), 3.514 (1.44),3.536 (1.04), 3.542 (1.01), 3.563 (0.49), 3.568 (0.50), 3.575 (0.48), 3.588 (0.47), 3.667 (1.61), 3.793 (1.27),3.821 (1.05), 4.561 (0.97), 7.374 (1.24), 8.138 (1.27), 8.267 (1.31).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.11 мин; МС (ESI положит.): m/z = 252 [M+H]+.

Синтезы промежуточных соединений 3.

Промежуточное соединение 3-1.

1-хлор-3-изотиоцианато-2-метоксибензол

3-хлор-2-метоксианилин (CAS 51114-68-2, 8.4 мл, 63 ммоль) растворяли в ДХМ (100 мл) и добавляли насыщ. раствор бикарбоната натрия (100 мл). К охлажденной льдом смеси медленно добавляли тиофосген (5.4 мл, 70 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 ч. При КТ ДХМ слой отделяли и промывали насыщ. раствором бикарбоната натрия, фильтровали через гидрофобный фильтр и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (12.97 г, выход 100%), которое непосредственно использовали на следующей стадии.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 7.51 (dd, 1H), 7.35 (dd, 1H), 7.20 (t, 1H), 3.85 - 3.91 (m, 3H).

- 45 046642

Промежуточное соединение 3-4.

1-фтор-3-изотиоцианато-2-метоксибензол

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 3-1, с 3-фтор-2метоксианилином (CAS 437-83-2, 5.00 г, 35.4 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 6.24 г (выход 96%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 7.32 (m, 1H), 7.10 - 7.19 (m, 2H), 3.96 (d, 3H).

Промежуточное соединение 3-18.

1-хлор-5-фтор-3-изотиоцианато-2-метоксибензол

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 3-1, с 3-хлор-5-фтор2-метоксианилином (1.00 г, 5.70 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 1.17 г (чистота 95%, выход 90%) указанного в заголовке соединения.

1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 3.86 (s, 3H) 7.38 (dd, 1H) 7.58 (dd, 1H).

Промежуточное соединение 3-29.

-хлор-2-этил-3 -изотиоцианатобензол

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 3-1, с 3-хлор-2этиланилином (5.00 г, чистота 85%, 27.3 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 6.29 г (чистота 85%, выход 99%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 1.009 (7.50), 1.027 (16.00), 1.046 (7.55), 1.090 (0.44), 1.109 (0.89), 1.128 (0.44), 2.590 (2.26), 2.608 (6.71), 2.627 (6.58), 2.646 (2.00), 5.199 (6.39), 6.533 (4.44), 6.539 (4.27), 6.553 (5.20), 6.559 (4.97), 6.821 (3.47), 6.841 (5.70), 6.861 (2.75), 7.056 (0.43), 7.060 (0.52).

Промежуточное соединение 3-65.

2-этил- 1-фтор-3 -изотиоцианатобензол

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 3-1, с 2-этил-3фторанилином (2.50 г, 18.0 ммоль, CAS 1139437-61-8) в качестве исходного вещества, получали 3.0 г (чистота 90%, выход 83%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de) δ [м.д.]: 1.108 (7.13), 1.127 (16.00), 1.146 (7.13), 2.462 (0.95), 2.483 (1.27), 2.517 (0.79), 2.522 (0.48), 2.637 (0.95), 2.641 (1.11), 2.655 (3.17), 2.659 (3.17), 2.674 (3.17), 2.678 (3.17), 2.693 (0.95), 2.697 (0.95), 3.461 (0.48), 3.477 (0.63), 3.484 (0.63), 3.506 (1.11), 3.528 (2.06),3.537 (2.69), 3.625 (3.01), 3.648 (1.11), 3.663 (0.63), 3.669 (0.63), 7.185 (1.11), 7.189 (1.11), 7.205 (1.58),7.209 (2.53), 7.212 (1.27), 7.229 (1.43), 7.233 (1.74), 7.243 (1.27), 7.246 (1.43), 7.263 (3.80), 7.266 (2.38),7.282 (2.53), 7.296 (2.38), 7.301 (2.38), 7.317 (2.53), 7.322 (0.79), 7.337 (0.79).

Синтезы промежуточных соединений 4.

Промежуточное соединение 4-1.

трет-бутил 5-[(3-хлор-2-метоксифенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин1 (2Н)-карбоксилат

К охлажденному льдом раствору 1-хлор-3-изотиоцианато-2-метоксибензола (промежуточное со

- 46 046642 единение 3-1, 4.00 г, 20.0 ммоль) и трет-бутил 2,4-диоксопиперидин-1-карбоксилата (CAS 845267-78-9, 4.27 г, 20.0 ммоль) в ацетонитриле (92 мл) по каплям добавляли DBU (4.5 мл, 30 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при КТ в течение ночи. К реакционной смеси добавляли воду со льдом (200 мл) и конц. HCl (2 мл). Смесь перемешивали в течение 20 мин. и экстрагировали с помощью ДХМ. Органическую фазу фильтровали через гидрофобный фильтр, концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, гексан / EtOAc, градиент 0-50%) с получением 6.54 г указанного в заголовке соединения (выход 71%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 13.36 (br s, 1H), 7.73 (d, 1H), 7.47 (dd, 1H), 7.22 (t, 1H), 3.76 3.82 (m, 5H), 2.88 (t, 2H), 1.48 (s, 9H).

ЖХ-МС (метод 1): Rt = 1.49 мин; МС (ESI положит.): m/z = 413.1 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 4-4.

трет-бутил 5-[(3-фтор-2-метоксифенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин- (2Н)-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 4-1, с трет-бутил 2,4диоксопиперидин-1-карбоксилатом (CAS 845267-78-9, 7.26 г, 34.1 ммоль) и 1-фтор-3-изотиоцианато-2метоксибензолом (промежуточное соединение 3-4, 6.24 г, 34.1 ммоль) в качестве исходных веществ, 9.49 г (выход 67%) указанного в заголовке соединения получали после перемешивания продукта в MeOH, фильтрования и сушки осадка в вакууме.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 13.37 (br s, 1H), 7.58 (br d, 1H), 7.23 - 7.30 (m, 1H), 7.09 7.21 (m, 1H), 4.10 (br s, 1H), 3.78 (t, 2H), 3.17 (s, 3H), 2.88 (brt, 2H), 1.48 (s, 9H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.66 мин; МС (ESI положит.): m/z = 397.3 [M+H]+.

Промежуточное соединение 4-7.

трет-бутил 5-[(2,3-дихлорфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2Н)карбоксилат

1,2- Дихлор-3-изотиоцианатобензол (CAS 6590-97-2, 5.00 г, 24.5 ммоль) и трет-бутил 2,4диоксопиперидин-1-карбоксилат (CAS 845267-78-9, 5.22 г, 24.5 ммоль) растворяли в ацетонитриле (55 мл), осторожно добавляли DBU (5.5 мл, 37 ммоль) при 0°C в атмосфере аргона, и смесь перемешивали в течение ночи при КТ. Реакционную смесь разбавляли HCl (200 мл, 1 н. в воде) и перемешивали в течение 30 мин. при КТ. Полученное в результате твердое вещество отфильтровывали, осадок на фильтре промывали водой и сушили при 50°C в вакуумной печи в течение ночи с получением 9.40 г указанного в заголовке соединения (выход 92%).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 1.467 (16.00), 1.484 (0.56), 1.622 (0.34), 1.644 (0.25),1.661 (0.20), 1.674 (0.17), 1.898 (0.19), 1.913 (0.31), 1.927 (0.19), 2.075 (0.20), 2.327 (0.18), 2.518 (0.60),2.523 (0.39), 2.621 (0.30), 2.647 (0.32), 2.665 (0.24), 2.669 (0.29), 2.673 (0.25), 3.249 (0.25), 3.459 (0.23),3.473 (0.39), 3.487 (0.22), 3.538 (0.28), 3.561 (0.29), 3.727 (0.50), 7.357 (0.17), 7.377 (0.36), 7.383 (0.28),7.397 (0.28), 7.544 (0.27), 7.547 (0.33), 7.560 (0.29), 7.564 (0.31), 7.568 (0.25), 7.580 (0.18).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.70 мин; МС (ESI положит.): m/z = 416 [M-H]^-.

Промежуточное соединение 4-10.

трет-бутил 5-[(3-хлор-2-метилфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2Н)карбоксилат

В соответствии с методом, описанным для промежуточного соединения 4-1, с 1-хлор-3изотиоцианато-2-метилбензолом (CAS 19241-35-1; 2.50 г, 13.6 ммоль) и трет-бутил 2,4диоксопиперидин-1-карбоксилатом (CAS 845267-78-9, 2.9 г, 13.6 ммоль) в качестве исходных веществ, 4.68 г (выход 78%) указанного в заголовке соединения получали после добавления HCl, фильтрования и сушки осадка в вакууме.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^: δ [м.д.] = 15.73 (s, 1H), 12.77 (br s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.30 (t, 1H), 7.19

- 47 046642 (d, 1H), 3.78 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.48 (s, 9H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.72 мин; МС (ESI положит.): m/z = 397.3 [M+H]+.

Промежуточное соединение 4-18.

трет-бутил

- [(3 -хлор-5 -фтор-2-метоксифенил)карбамотиоил] -4-гидрокси-6-оксо-3,6 дигидропиридин-1 (2Н)-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 4-1, с трет-бутил 2,4диоксопиперидин-1-карбоксилатом (CAS 845267-78-9, 1.15 г, 5.38 ммоль) и 1-хлор-5-фтор-3изотиоцианато-2-метоксибензолом (промежуточное соединение 3-18, 1.17 г, 5.38 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 1.42 г (чистота 75%, выход 46%) указанного в заголовке соединения.

‘Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-ds): δ [м.д.] = 1.154 (0.88), 1.172 (1.70), 1.189 (0.80), 1.484 (16.00), 1.987 (3.28), 2.518 (0.89), 2.522 (0.61), 2.883 (0.73), 2.899 (0.40), 3.359 (0.69), 3.644 (4.46), 3.760 (7.94), 3.774 (0.44), 3.782 (1.03), 3.798 (0.53), 4.017 (0.69), 4.035 (0.69), 6.400 (0.60), 6.405 (0.53), 6.427 (1.00), 7.498 (0.41).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.73 мин; МС (ESI положит.): m/z = 431 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 4-29.

трет-бутил 5-[(3-хлор-2-этилфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2Н)карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 4-1, с трет-бутил 2,4диоксопиперидин-1-карбоксилатом (CAS 845267-78-9, 5.77 г, 27.0 ммоль) и 2-хлор-1-этил-3изотиоцианатобензолом (промежуточное соединение 3-29, 6.29 г, чистота 85%, 27.0 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 6.35 г (чистота 85%, выход 49%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^: δ [м.д.] = 1.063 (0.89), 1.082 (2.14), 1.100 (0.95), 1.362 (0.65),1.478 (16.00), 1.486 (1.29), 2.518 (0.64), 2.523 (0.44), 2.631 (0.70), 2.650 (0.69), 2.850 (0.41), 2.866 (0.78),2.883 (0.43), 3.775 (0.51), 3.791 (0.90), 3.807 (0.46), 7.212 (0.46), 7.214 (0.44), 7.232 (0.62), 7.234 (0.61),7.293 (0.62), 7.313 (1.08), 7.332 (0.53), 7.440 (0.61), 7.443 (0.62), 7.460 (0.49), 7.463 (0.45).

Промежуточное соединение 4-38.

трет-бутил 5-[(3-фтор-2-метилфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2Н)карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 4-1, с трет-бутил 2,4диоксопиперидин-1-карбоксилатом (CAS 845267-78-9, 8.19 г, 38.4 ммоль) и 1-фтор-3-изотиоцианато-2метилбензолом (CAS 363179-58-2, 6.42 г, 38.4 ммоль) в качестве исходных веществ, 11.1 г (чистота 95%, выход 72%) указанного в заголовке соединения получали после перемешивания продукта в MeOH, фильтрования и сушки осадка в вакууме.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 1.479 (16.00), 2.084 (2.80), 2.088 (2.74), 2.834 (0.58), 2.850 (1.12), 2.866 (0.61), 3.768 (0.64), 3.784 (1.16), 3.800 (0.59), 7.073 (0.61), 7.093 (0.71), 7.186 (0.59), 7.299 (0.45), 7.316 (0.42).

- 48 046642

Промежуточное соединение 4-40.

трет-бутил 5-{[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторфенил]карбамотиоил}-4-гидрокси-6-оксо-3,6дигидропиридин-1 (2Н)-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 4-1, с трет-бутил 2,4диоксопиперидин-1-карбоксилатом (CAS 845267-78-9, 7.85 г, 36.8 ммоль) и 2-(2,2-дифторэтил)-1-фтор-3изотиоцианатобензолом (CAS 2311902-79-9, 8.00 г, 36.8 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 12.1 г (чистота 95%, выход 72%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 1.471 (16.00), 2.518 (0.65), 2.523 (0.43), 2.788 (0.47), 2.804 (0.87), 2.820 (0.50), 3.166 (3.72), 3.754 (0.60), 3.770 (1.08), 3.786 (0.57), 7.149 (0.62), 7.169 (0.70), 7.271 (0.58), 7.446 (0.46), 7.462 (0.43).

Промежуточное соединение 4-65.

трет-бутил 5-[(2-этил-3-фторфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2Н)карбоксилат

СН₃ О О S ^НзС< 1 1 1 1 Л ^СН₃

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 4-1, с трет-бутил 2,4диоксопиперидин-1-карбоксилатом (CAS 845267-78-9, 7.85 г, 36.8 ммоль) и 2-этил-1-фтор-3изотиоцианатобензолом (промежуточное соединение 3-65, 3.00 г, 16.6 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 5.46 г (чистота 95%, выход 79%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОЧ) δ [м.д.]: 1.066 (1.02), 1.085 (2.41), 1.104 (1.06), 1.477 (16.00), 1.486 (1.04), 2.074 (0.65), 2.518 (1.12), 2.522 (0.92), 2.538 (0.61), 2.858 (0.69), 3.771 (0.55), 3.787 (0.98), 3.803 (0.50), 7.092 (0.50), 7.112 (0.55), 7.186 (0.45), 7.311 (0.44), 7.327 (0.41). ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.72 мин; МС (ESI положит.): m/z = 395 [M+H]+.

Синтезы промежуточных соединений 5.

Промежуточное соединение 5-1.

№(3-хлор-2-метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

К раствору трет-бутил 5-[(3-хлор-2-метоксифенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилата (промежуточное соединение 4-1, 6.54 г, 15.8 ммоль) в дихлорметане (94 мл) добавляли ТФУ (12 мл, 160 ммоль), и смесь перемешивали в течение 1.5 ч при КТ. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток растворяли в EtOAc и промывали насыщ. раствором бикарбоната натрия и соляным раствором. Органический слой фильтровали через гидрофобный фильтр и фильтрат сушили досуха. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, гексан / EtOAc, градиент 20-100%) с получением 4.06 г указанного в заголовке соединения (выход 78%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а6): δ [м.д.] = 16.45 (d, 1H), 14.69 (s, 1H), 14.33 (s, 1H), 9.37 (br s, 1H), 8.18 (br s, 1H), 7.76 - 7.87 (m, 1H), 7.37 - 7.45 (m, 1H), 7.15 - 7.23 (m, 1H), 3.73 - 3.76 (m, 3H), 3.43 (td, 1H), 3.27 - 3.32 (m, 1H), 2.79 (t, 1H), 2.59-2.69 (m, 1H).

ЖХ-МС (метод 1): R_t = 1.19 мин; МС (ESI положит.): m/z = 313 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 5-4.

^(3-фтор-2-метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 5-1, с трет-бутил 5[(3 -фтор-2-метоксифенил)карбамотиоил] -4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1 (2Н)-карбоксилатом

- 49 046642 (промежуточное соединение 4-4, 9.49 г, 23.9 ммоль) в качестве исходного вещества, 6.98 г (выход 89%) указанного в заголовке соединения получали спустя 15 мин перемешивания и использовали на следующих стадиях без дополнительной очистки.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 16.48 (d, 1H), 14.63 (s, 0.5H), 14.28 (s, 0.5H), 9.34 (br s, 0.5H), 8.16 (br s, 0.5H), 7.65 (t, 1H), 6.97 - 7.37 (m, 2H), 3.79 -3.85 (m, 3H), 3.35 - 3.46 (m, 1H), 3.26 - 3.32 (m, 1H), 2.78 (t, 1H), 2.63 (t, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.46 мин; МС (ESI положит.): m/z = 297.1 [M+H]+.

Промежуточное соединение 5-7.

№(2,3-дихлорфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 5-1, с трет-бутил 5[(2,3-дихлорфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилатом (промежуточное соединение 4-7, 9.40 г, 22.5 ммоль) в качестве исходного вещества, 5.71 г (выход 62%) указанного в заголовке соединения получали после перемешивания в течение ночи.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 1.018 (1.18), 1.050 (1.33), 1.072 (0.81), 1.102 (0.59),1.132 (0.81), 1.154 (1.84), 1.172 (3.17), 1.189 (1.84), 1.199 (0.88), 1.231 (1.92), 1.259 (1.40), 1.486 (0.66),1.593 (1.33), 1.626 (1.18), 1.695 (1.25), 1.727 (1.18), 1.907 (2.14), 1.987 (5.97), 2.322 (3.17), 2.326 (4.28),2.331 (3.17), 2.518 (15.85), 2.522 (9.44), 2.638 (11.06), 2.664 (7.82), 2.669 (7.52), 2.673 (5.53), 2.798 (8.11),3.436 (9.81), 4.017 (1.18), 4.035 (1.11), 5.560 (1.33), 5.579 (1.25), 7.392 (4.42), 7.410 (10.03), 7.430 (9.22), 7.565 (12.24), 7.585 (16.00), 7.605 (9.51), 8.134 (0.74), 8.197 (4.35), 9.418 (3.91), 14.273 (6.93), 14.665 (6.64), 16.114 (1.03), 16.295 (9.95), 16.352 (5.82), 16.503 (1.11).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.55 мин; МС (ESI положит.): m/z = 316 [M-H]^-.

Промежуточное соединение 5-10.

№(3-хлор-2-метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 5-1, с трет-бутил 5[(3-хлор-2-метилфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2Н)-карбоксилатом (промежуточное соединение 4-10, 4.67 г, 11.8 ммоль) в качестве исходного вещества, 3.54 г (выход 91%) указанного в заголовке соединения получали спустя 3 часа и использовали на следующих стадиях без дополнительной очистки.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 16.42 (d, 1H), 14.01 - 14.37 (m, 1H), 8.14 - 9.40 (m, 1H), 7.43 (br t, 1H), 7.16 - 7.32 (m, 2H), 3.42 - 3.48 (m, 1H), 3.26 -3.34 (m, 1H), 2.78 (t, 1H), 2.60 - 2.68 (m, 1H), 2.12 2.21 (m, 3H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.60 мин; МС (ESI положит.): m/z = 297.4 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 5-18.

№(3-хлор-5-фтор-2-метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 5-1, с трет-бутил 5[(3-хлор-5-фтор-2-метоксифенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2Н)карбоксилатом (промежуточное соединение 4-18, 1.42 г, 3.30 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 690 мг (чистота 95%, выход 60%) указанного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 2.61 - 2.70 (m, 1H), 2.80 (m, 1H), 3.25 - 3.32 (m, 1H), 3.38 3.47 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 7.39 - 7.62 (m, 1H), 7.83 - 8.02 (m, 1H), 8.20 - 8.33 (s, 0,5H), 9.33 - 9.57 (s, 0,5H), 14.53 (s, 0,5H), 14.93 (s, 0,5H), 16.29 (s, 0,5H), 16.36 (s, 0,5H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.57 мин; МС (ESI отрицат.): m/z = 329 [M-H]^-.

- 50 046642

Промежуточное соединение 5-29.

№(3-хлор-2-этилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 5-1, с трет-бутил 5[(3-хлор-2-этилфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилатом (промежуточное соединение 4-29, 2.35 г, чистота 75%, 4.29 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 1.22 г (чистота 95%, выход 87%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 1.048 (7.06), 1.067 (16.00), 1.086 (7.43), 1.107 (1.58), 1.124 (1.32), 1.143 (0.50), 1.154 (1.34), 1.172 (2.43), 1.190 (1.24), 1.232 (0.50), 1.988 (4.56), 2.318 (0.47), 2.323 (1.05), 2.327 (1.56), 2.332 (1.11), 2.336 (0.47), 2.518 (5.61), 2.523 (4.03), 2.581 (2.03), 2.600 (6.41),2.619 (6.62), 2.642 (4.59), 2.661 (2.69), 2.669 (1.90), 2.673 (1.27), 2.678 (0.58), 2.771 (2.35), 2.789 (4.82),2.807 (2.58), 3.287 (1.61), 3.294 (1.79), 3.305 (3.11), 3.312 (3.14), 3.323 (2.06), 3.330 (2.35), 3.415 (1.53),3.422 (1.66), 3.433 (2.56), 3.441 (2.45), 3.452 (1.40), 3.459 (1.24), 4.017 (1.03), 4.035 (1.00), 7.166 (0.95),7.176 (0.58), 7.179 (0.58), 7.248 (0.71), 7.259 (6.30), 7.268 (3.58), 7.275 (4.43), 7.287 (7.20), 7.294 (3.90),7.303 (3.56), 7.324 (0.87), 7.392 (1.85), 7.400 (1.37), 7.407 (1.85), 7.415 (1.74), 7.419 (2.40), 7.426 (1.77),7.436 (1.77), 7.443 (1.45), 8.174 (1.77), 9.335 (1.42), 14.111 (2.98), 14.452 (2.74), 16.428 (7.88), 16.441 (7.38).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 1.28 мин; МС (ESI положит.): m/z = 311 [M+H]+.

Промежуточное соединение 5-38.

№(3-фтор-2-метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 5-1, с трет-бутил 5[(3-фтор-2-метилфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилатом (промежуточное соединение 4-38, 11.1 г, 29.1 ммоль) в качестве исходного вещества, 7.25 г (выход 84%) указанного в заголовке соединения получали спустя 15 мин перемешивания и использовали на следующих стадиях без дополнительной очистки.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 1.172 (0.55), 1.987 (1.05), 2.063 (16.00), 2.518 (1.49), 2.523 (1.01), 2.612 (1.94), 2.631 (3.67), 2.649 (2.11), 2.761 (1.99), 2.779 (4.22), 2.798 (2.26), 3.280 (1.36), 3.287 (1.47), 3.298 (2.58), 3.305 (2.57), 3.315 (1.39), 3.322 (1.33), 3.410 (1.40), 3.417 (1.48), 3.428 (2.27),3.435 (2.22), 3.446 (1.27), 3.454 (1.15), 7.112 (1.56), 7.119 (0.96), 7.132 (2.25), 7.141 (3.30), 7.161 (2.66),7.168 (2.15), 7.192 (1.12), 7.243 (0.73), 7.262 (1.15), 7.272 (0.99), 7.279 (1.25), 7.292 (1.27), 7.308 (1.21),7.328 (0.45), 8.150 (1.43), 9.317 (1.16), 14.003 (2.32), 14.321 (2.05), 16.439 (5.35), 16.468 (4.62).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.47 мин; МС (ESI положит.): m/z = 281 [M+H]+.

Промежуточное соединение 5-40.

№[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторфенил]-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 5-1, с трет-бутил 5{[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторфенил]карбамотиоил}-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2H)карбоксилатом (промежуточное соединение 4-40, 12.1 г, 28.0 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 8.81 г (чистота 95%, выход 90%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 1.145 (0.50), 1.154 (1.98), 1.172 (3.87), 1.190 (1.88), 1.441 (0.60), 1.987 (7.01), 2.323 (1.39), 2.327 (1.98), 2.332 (1.39), 2.518 (8.20), 2.523 (5.52), 2.617 (6.21), 2.635 (11.74), 2.653 (7.04), 2.665 (3.21), 2.669 (3.14), 2.673 (2.21), 2.769 (5.92), 2.786 (10.81), 2.803 (6.18), 3.059 (7.57), 3.067 (7.93), 3.104 (15.40), 3.111 (15.40), 3.148 (7.93), 3.307 (9.36), 3.434 (8.96), 4.000 (0.56), 4.017 (1.65), 4.035 (1.65), 4.053 (0.53), 6.057 (3.27), 6.067 (6.55), 6.077 (2.98), 6.198 (6.18), 6.208 (13.09), 6.217 (6.12), 6.339 (2.81), 6.348 (6.12), 6.358 (3.01), 7.165 (5.62), 7.185 (7.24), 7.207 (6.64), 7.227 (8.53), 7.242 (9.39), 7.265 (9.26), 7.288 (3.31), 7.393 (2.38), 7.413 (5.55), 7.430 (6.51), 7.459 (4.53), 7.479 (1.45), 8.152 (5.29), 9.352 (4.96), 14.013 (9.02), 14.389 (7.90), 16.346 (15.47), 16.353 (16.00).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.48 мин; МС (ESI положит.): m/z = 331.1 [M+H]+.

- 51 046642

Промежуточное соединение 5-65.

№(2-этил-3-фторфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 5-1, с трет-бутил 5[(2-этил-3-фторфенил)карбамотиоил]-4-гидрокси-6-оксо-3,6-дигидропиридин-1(2H)-карбоксилатом (промежуточное соединение 4-65, 5.46 г, чистота 71%, 9.83 ммоль) в качестве исходного вещества, получали 4.0 г (чистота 70%, выход 97%) указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^ дельта [м.д.]: 1.052 (6.61), 1.071 (16.00), 1.089 (6.75), 1.116 (0.56), 1.224 (4.60), 1.734 (1.58), 2.326 (0.43), 2.472 (1.56), 2.518 (2.10), 2.523 (1.69), 2.647 (0.85), 2.659 (0.85), 2.664 (0.98), 2.668 (1.03), 2.673 (0.80), 2.782 (0.89), 3.423 (0.82), 4.037 (0.62), 7.160 (2.35), 7.288 (0.98), 8.170 (0.48), 14.073 (0.46), 14.414 (0.52).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 1.18 мин; МС (ESI положит.): m/z = 295 [M+H]+.

Синтезы промежуточных соединений 6.

Промежуточное соединение 6-1.

№(3-хлор-2-метоксифенил)-4-[({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2-оксо1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Смесь №(3-хлор-2-метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамида (промежуточное соединение 5-1, 498 мг, 1.59 ммоль) и 1-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метанамина (промежуточное соединение 2-1, 0.5 г, 2.23 ммоль) перемешивали в течение 4 ч при 120°C. Реакционную смесь очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-30%) с получением 325 мг указанного в заголовке соединения (выход 39%).

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^: δ [м.д.] = 14.79 (s, 1H), 13.69 (t, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 7.81 (dd, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.26 - 7.33 (m, 2H), 7.11 (t, 1H), 4.67 (d, 2H), 4.16 (t, 2H), 3.84 - 3.95 (m, 2H), 3.74 3.79 (m, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.59 -3.70 (m, 2H), 3.45 - 3.54 (m, 2H), 3.11 - 3.20 (m, 2H), 2.78 (t, 2H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.07 мин; МС (ESI положит.): m/z = 519.2 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-2.

№(3-хлор-2-метоксифенил)-4-{[(3-{[^)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-2оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Смесь №(3-хлор-2-метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамида (промежуточное соединение 5-1, 866 мг, 2.77 ммоль) и 1-(3-{[(2S)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4ил)метанамина (промежуточное соединение 2-8, 776 мг, чистота 80%, 2.77 ммоль) в ACN (22 мл) обрабатывали ^С-бис(триметилсилил)ацетамидом (2.05 мл, 8.6 ммоль, CAS 10416-59-8) и перемешивали при 80°C в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-20%) с получением 1.23 г (чистота 95%, выход 81%) указанного в заголовке соединения.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ [м.д.] = 2.78 (t, 2H), 3.16 (td, 2H), 3.40 -3.54 (m, 3H), 3.59 - 3.69 (m, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.73 - 3.79 (m, 1H), 3.83 - 3.95 (m, 2H), 4.16 (t, 2H), 4.67 (d, 2H), 7.11 (t, 1H), 7.27 - 7.33 (m, 2H), 7.73 (br s, 1H), 7.81 (dd, 1H), 8.24 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 13.69 (s, 1H), 14.79 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.09 мин; МС (ESI положит.): m/z = 519 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-4.

4-[({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]Х-(3-фтор-2-метоксифенил)-2-оксо1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

- 52 046642

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-φτορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-4, 179 мг, 604 мкмоль) и 1-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метанамином (промежуточное соединение 2-1, 190 мг, 845 мкмоль) в качестве исходных веществ, 120 мг (выход 34%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 2 ч и очистки с помощью флэшхроматографии (аминофазный силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-10%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆): δ [м.д.] = 14.74 (s, 1H), 13.70 (br t, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 7.64 7.73 (m, 2H), 7.30 (d, 1H), 7.02 - 7.14 (m, 2H), 4.67 (d, 2H), 4.13 - 4.21 (m, 2H), 3.84 - 3.95 (m, 2H), 3.59 3.77 (m, 4H), 3.40 - 3.53 (m, 2H), 3.13 - 3.22 (m, 2H), 2.68 - 2.80 (m, 2H), 1.59 (br s, 1H), 0.93 - 1.39 (m, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.01 мин; MC (ESI положит.): m/z = 503 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-7.

№(2,3-дихлорфенил)-4- [({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4-ил} метил)амино)] -2-оксо1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

CI

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с N-(2,3дихлорфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-7, 160 мг, 504 мкмоль) и 1-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метанамином (промежуточное соединение 2-1, 158 мг, 706 мкмоль) в качестве исходных веществ, 110 мг (выход 35%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 2 ч и очистки с помощью флэшхроматографии (аминофазный силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-10%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 14.90 (s, 1h), 13.66 (t, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 7.75 (br s, 1H), 7.55 (dd, 1H), 7.51 (dd, 1H), 7.28 - 7.38 (m, 3H), 4.68 (d, 3H), 4.14 - 4.21 (m, 2H), 3.87 - 3.90 (m, 1H),

3.72 - 3.76 (m, 1H), 3.64 - 3.67 (m, 1H), 3.58 - 3.63 (m, 1H), 3.35 - 3.53 (m, 3H), 2.79 (t, 2H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.08 мин; МС (ESI положит.): m/z = 523 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-10.

№(3-хлор-2-метилфенил)-4-[({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2-оксо1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с №(3-хлор-2метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-10, 189 мг, 637 мкмоль) и 1-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метанамином (промежуточное соединение 2-1, 200 мг, 892 мкмоль) в качестве исходных веществ, 180 мг (выход 56%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 2 ч и очистки с помощью флэшхроматографии (аминофазный силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-10%).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 14.54 (s, 1H), 13.64 (br t, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 7.69 (br s, 1H), 7.28 - 7.37 (m, 2H), 7.13 - 7.26 (m, 2H), 4.65 (d, 2H), 4.14 - 4.20 (m, 2H), 3.74 - 3.88 (m, 3H), 3.63 3.71 (m, 2H), 3.42 - 3.53 (m, 2H), 3.14 - 3.31 (m, 2H), 2.77 (t, 2H), 2.16 (s, 3H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.09 мин; МС (ESI положит.): m/z = 501 [M+H]+.

- 53 046642

Промежуточное соединение 6-11.

N-(3 -хлор-2-метоксифенил)-4-{ [(3 - {[(3R)-4-метилмоρφолин-3 -ил]метокси}пиридин-4ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-χλορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-1, 142 мг, 407 мкмоль) и 1-(3-{[(3R)-4-метилмоρφолин-3-ил]метокси}пиρидин-4ил)метанамином (промежуточное соединение 2-2, 116 мг, 489 мкмоль) в качестве исходных веществ, 85.6 мг (выход 36%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 3 ч и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 30% B, 0.50 - 6.00 мин 30 70% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 14.79 (s, 1H), 13.67 (br t, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 7.81 (dd, 1H), 7.73 (br s, 1H), 7.28 - 7.33 (m, 2H), 7.11 (t, 1H), 4.67 (br d, 2H), 4.31 (dd, 1H), 4.05 (dd, 1H), 3.90 (dd, 1H), 3.67 - 3.73 (m, 4H), 3.50 (td, 1H), 3.34 - 3.40 (m, 1H), 3.13 - 3.21 (m, 2H), 2.79 (t, 2H), 2.63 - 2.70 (m, 1H), 2.19 - 2.33 (m, 4H), 1.46 - 1.76 (m, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.08 мин; МС (ESI положит.): m/z = 532.5 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-12.

№(3-фтор-2-метоксифенил)-4-(((3-гидроксипиридин-4-ил)метил)амино)-2-оксо-1,2,5,6тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Смесь 4-(аминометил)пиридин-3-ола (CAS 20485-35-2, 75 г, 0.604 моль) и №(3-фтор-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамида (промежуточное соединение 5-4, 150 г, 0.506 моль) в DMA (1.2 л) перемешивали при 120°C в течение 2.5 ч под азотом. Смесь концентрировали в вакууме с удалением большей части растворителя. Темно-коричневый раствор медленно добавляли к EtOAc (8 л) при перемешивании. Полученную в результате смесь промывали водой (2.5 л) и соляным раствором (2.5 л х 2). Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток суспендировали в EtOAc (300 мл) и фильтровали. Осадок на фильтре сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (87 г, выход 47%) в виде желтого твердого вещества.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОО: δ [м.д.] = 14.73 (s, 1H), 13.69 (t, 1H), 10.28 (s, 1H), 8.21-8.13 (m, 2H), 7.67-7.66 (m, 2H), 7.10 (br.s, 1H), 7.09-7.04 (m, 2H), 4.61 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.16 (t, 2H), 2.77 (t, 2H).

Промежуточное соединение 6-15.

N-(3 -хлор-2-метоксифенил)-4-[( {3- [(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил } метил)амино] 2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-φτορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-4, 100 мг, 320 мкмоль) и 1-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамином

- 54 046642 (промежуточное соединение 2-3, 114 мг, 480 мкмоль) в качестве исходных веществ, 74.3 мг (чистота 80%, выход 35%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 4 ч и очистки с помощью флэш-хроматографии (аминофазный силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-10%).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: 1.880 (0.45), 2.176 (4.07), 2.186 (0.73), 2.191 (0.45),2.518 (1.66), 2.523 (1.13), 2.787 (0.65), 2.799 (0.61), 3.162 (0.56), 3.169 (0.54), 3.533 (0.46), 3.539 (0.45),3.711 (9.24), 3.819 (0.47), 3.823 (0.40), 4.149 (0.65), 4.161 (1.12), 4.176 (0.61), 4.655 (0.80), 4.670 (0.82),5.759 (16.00), 7.086 (0.63), 7.107 (1.27), 7.127 (0.73), 7.283 (0.77), 7.287 (0.81), 7.302 (0.77), 7.306 (1.39),7.318 (0.80), 7.723 (0.53), 7.803 (0.59), 7.806 (0.60), 7.823 (0.57), 7.827 (0.53), 8.234 (1.27), 8.246 (1.26),8.392 (1.87), 14.791 (1.01).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.84 мин; МС (ESI положит.): m/z = 532 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-18.

^(3-хлор-5-фтор-2-метоксифенил)-4-[({3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-χλορ-5фтор-2-метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-18, 100 мг, 302 мкмоль) и 1-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4ил)метанамином (промежуточное соединение 2-3, 108 мг, 453 мкмоль) в качестве исходных веществ, 166 мг (чистота 70%, выход 70%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью флэш-хроматографии (аминофазный силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-10%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 1.881 (0.59), 1.908 (0.51), 1.984 (0.51), 1.991 (0.55),2.174 (5.75), 2.185 (0.88), 2.191 (2.53), 2.518 (2.46), 2.523 (1.65), 2.581 (0.55), 2.609 (0.49), 2.785 (0.52),2.798 (0.96), 2.815 (0.60), 3.096 (0.44), 3.161 (0.55), 3.168 (0.51), 3.387 (0.97), 3.535 (0.57), 3.542 (0.68),3.700 (7.75), 3.786 (0.69), 3.791 (0.73), 3.795 (0.71), 3.810 (0.63), 3.815 (0.70), 3.823 (0.75), 4.115 (0.52),4.119 (0.55), 4.128 (0.53), 4.154 (0.77), 4.166 (0.94), 4.181 (0.60), 4.672 (0.76), 4.687 (0.77), 5.759 (16.00), 7.267 (0.58), 7.275 (0.65), 7.287 (0.58), 7.295 (0.63), 7.313 (0.77), 7.325 (0.74), 7.792 (0.49), 8.046 (0.50), 8.053 (0.50), 8.073 (0.47), 8.080 (0.47), 8.238 (1.20), 8.250 (1.12), 8.267 (0.55), 8.279 (0.66), 8.399 (1.72), 15.080 (0.94).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.11 мин; МС (ESI положит.): m/z = 550 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 6-19.

№(3-хлор-5-фтор-2-метоксифенил)-4-[({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-χλορ-5фтор-2-метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-18, 100 мг, 302 мкмоль) и 1-(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамином (промежуточное соединение 2-1, 94.9 мг, 423 мкмоль) в качестве исходных веществ, 160 мг (чистота 90%, выход 89%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью флэшхроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-30%).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de) δ [м.д.]: 0.821 (0.41), 0.904 (0.45), 1.035 (8.84), 1.052 (16.00), 1.070 (9.56), 1.154 (1.90), 1.172 (3.66), 1.189 (1.72), 1.987 (6.85), 2.518 (1.36), 2.522 (0.92), 2.790 (0.61), 3.157 (0.42), 3.404 (1.39), 3.417 (1.49), 3.421 (4.01), 3.434 (4.35), 3.439 (4.40), 3.452 (4.43), 3.457 (1.21),3.461 (0.53), 3.469 (1.28), 3.501 (0.40), 3.652 (0.66), 3.655 (0.65), 3.702 (7.42), 3.750 (0.43), 3.785 (0.67),3.788 (0.43), 3.890 (0.58), 3.999 (0.46), 4.017 (1.36), 4.035 (1.39), 4.053 (0.47), 4.156 (0.56), 4.165 (0.77),4.179 (0.54), 4.343 (2.52), 4.356 (4.91), 4.368 (2.35), 4.683 (0.68), 4.697 (0.68), 7.272 (0.48), 7.280 (0.60),7.293

- 55 046642 (0.51), 7.300 (0.64), 7.305 (0.63), 7.317 (0.62), 7.800 (0.42), 8.032 (0.40), 8.040 (0.42), 8.059 (0.41), 8.066 (0.40), 8.242 (0.98), 8.254 (0.94), 8.394 (1.43), 15.078 (0.82).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.14 мин; МС (ESI положит.): m/z = 537 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-20.

№(3-фтор-2-метоксифенил)-4- {[(3-{ [(3 S)-4-метилморфолин-3-ил]метокси} пиридин-4ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с №(3-фтор-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-4, 200 мг, 675 мкмоль) и 1-(3-{[(3S)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамином (промежуточное соединение 2-4, 208 мг, 877 мкмоль) в качестве исходных веществ, 105 мг (чистота 99%, выход 30%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 3 ч и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 2.195 (0.50), 2.203 (0.62), 2.221 (0.73), 2.224 (0.80), 2.229 (0.79), 2.232 (0.77), 2.250 (0.69), 2.258 (0.63), 2.287 (16.00), 2.322 (0.48), 2.326 (0.65), 2.331 (0.46), 2.518 (2.86), 2.522 (1.80), 2.645 (0.60), 2.651 (1.24), 2.658 (0.75), 2.664 (0.58), 2.668 (0.75), 2.673 (0.96),2.680 (1.16), 2.687 (0.56), 2.760 (1.14), 2.776 (2.31), 2.793 (1.34), 3.134 (0.86), 3.142 (0.98), 3.152 (1.59),3.158 (1.51), 3.167 (0.87), 3.175 (0.73), 3.347 (1.31), 3.371 (1.26), 3.375 (1.37), 3.398 (1.19), 3.473 (0.50),3.480 (0.60), 3.501 (0.98), 3.507 (0.98), 3.527 (0.72), 3.533 (0.60), 3.677 (0.56), 3.683 (1.07), 3.690 (0.58),3.704 (0.46), 3.711 (0.82), 3.718 (0.41), 3.780 (13.85), 3.783 (13.72), 3.884 (0.99), 3.892 (0.99), 3.912 (0.89), 3.920 (0.88), 4.029 (0.98), 4.044 (1.01), 4.054 (1.17), 4.070 (1.12), 4.291 (1.18), 4.302 (1.21), 4.317 (1.03),4.327 (0.97), 4.658 (1.87), 4.674 (1.89), 7.044 (0.58), 7.049 (1.31), 7.065 (1.59), 7.069 (2.63), 7.075 (1.64),7.085 (1.41), 7.090 (0.58), 7.096 (1.44), 7.101 (1.44), 7.117 (0.56), 7.122 (0.41), 7.296 (2.20), 7.308 (2.24),7.653 (1.44), 7.658 (0.89), 7.670 (1.15), 7.676 (0.86), 7.704 (1.58), 8.236 (3.27), 8.247 (3.17), 8.411 (4.92), 13.661 (0.56), 13.676 (1.10), 13.690 (0.53), 14.736 (2.92).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.62 мин; МС (ESI положит.): m/z = 516 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-21.

N-(3 -хлор-2-метоксифенил)-4- {[(3-{ [(3 S)-4-метилморфолин-3 -ил]метокси} пиридин-4ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-χλορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-1, 200 мг, 639 мкмоль) и 1-(3-{[^)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамином (промежуточное соединение 2-4, 197 мг, 831 мкмоль) в качестве исходных веществ, 102 мг (чистота 99%, выход 30%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 3 ч при 120°C и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ [м.д.]: 2.288 (3.78), 2.327 (0.47), 2.518 (1.87), 2.523 (1.27), 2.651 (0.43), 2.665 (0.45), 2.669 (0.59), 2.673 (0.55), 2.679 (0.47), 2.769 (0.69), 2.786 (1.40), 2.803 (0.81), 3.141 (0.53), 3.148 (0.61), 3.157 (0.97), 3.164 (0.93), 3.174 (0.53), 3.181 (0.44), 3.346 (0.55), 3.372 (0.52), 3.506 (0.45), 3.684 (0.50), 3.712 (16.00), 3.883 (0.44), 3.891 (0.53), 3.912 (0.42), 4.293 (0.54), 4.304 (0.56), 4.319 (0.47), 4.329 (0.44), 4.663 (1.08), 4.679 (1.10), 7.088 (1.04), 7.108 (2.24), 7.128 (1.28), 7.285 (1.42), 7.289 (1.49), 7.301 (1.47), 7.305 (1.46), 7.309 (1.44), 7.312 (1.47), 7.726 (0.92), 7.794 (1.07), 7.797 (1.08), 7.814

- 56 046642 (1.02), 7.818 (0.96), 8.238 (1.81), 8.250 (1.65), 8.413 (3.11), 13.667 (0.68), 14.787 (1.82).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.68 мин; МС (ESI положит.): m/z = 532 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-22.

трет-бутил ДО)-2-[({4-[({5-[(3-фтор-2-метоксифенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил}амино)метил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с №(3-фтор-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-4, 1.00 г, 3.37 ммоль) и трет-бутил (2S)-2-({[4-(аминометил)пиридин-3ил]окси}метил)морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 2-5, 1.53 г, 4.72 ммоль) в качестве исходных веществ, 1.43 г (чистота 70%, выход 49%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 6 ч и очистки с помощью флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-20%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 1.035 (6.69), 1.052 (16.00), 1.070 (7.70), 1.394 (4.63), 1.401 (2.39), 1.405 (3.46), 2.331 (0.41), 2.518 (1.92), 2.523 (1.41), 2.673 (0.42), 3.404 (1.10), 3.417 (1.21),3.422 (3.66), 3.435 (3.78), 3.440 (3.26), 3.452 (3.33), 3.457 (1.19), 3.469 (1.18), 3.780 (2.11), 3.782 (2.08),3.797 (0.42), 3.857 (0.84), 3.860 (0.83), 4.219 (0.41), 4.231 (0.42), 4.344 (2.52), 4.356 (4.87), 4.369 (2.35),8.241 (0.54), 8.253 (0.53), 8.402 (0.81), 14.735 (0.40).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.19 мин; МС (ESI положит.): m/z = 602 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 6-24.

№(3-хлор-2-метоксифенил)-4-[({3-[2-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2-оксо1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-χλορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-1, 200 мг, 639 мкмоль) и 1-(3-{2-[1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)метанамином (промежуточное соединение 2-6, 198 мг, 831 мкмоль) в качестве исходных веществ, 110 мг (чистота 96%, выход

31%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 3 ч при 130°C и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: 1.792 (0.45), 1.812 (0.43), 1.838 (0.40), 1.850 (0.42),2.518 (1.13), 2.523 (0.78), 2.763 (0.87), 2.771 (0.86), 2.780 (0.52), 2.786 (0.47), 3.140 (0.51), 3.148 (0.57),3.156 (0.97), 3.164 (0.96), 3.173 (0.50), 3.181 (0.43), 3.197 (0.60), 3.224 (0.94), 3.227 (0.95), 3.253 (0.64),3.445 (0.75), 3.452 (0.83), 3.471 (0.48), 3.480 (0.60), 3.545 (0.45), 3.551 (0.53), 3.573 (0.70), 3.580 (0.81),3.605 (0.86), 3.611 (1.14), 3.617 (0.53), 3.638 (0.55), 3.644 (0.47), 3.689 (0.92), 3.697 (1.10), 3.712 (16.00), 3.718 (2.12), 3.744 (0.88), 3.749 (0.65), 4.203 (0.84), 4.219 (1.35), 4.232 (0.58), 4.238 (0.56), 4.656 (1.44),4.670 (1.43), 7.089 (1.01), 7.110 (2.16), 7.130 (1.25), 7.286 (1.37), 7.289 (1.46), 7.306 (2.13), 7.310 (1.42),7.317 (1.10), 7.726 (0.93), 7.802 (1.03), 7.806 (1.05), 7.823 (0.99), 7.826 (0.93), 8.225 (1.23), 8.237 (1.18),8.373 (1.98), 13.695 (0.65), 14.792 (1.75).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.90 мин; МС (ESI положит.): m/z = 533 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 6-27.

трет-бутил (28)-2-[({4-[({5-[(3-хлор-5-фтор-2-метоксифенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6

- 57 046642 тетрагидропиридин-4-ил}амино)метил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-χλορ-5фтор-2-метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-18, 225 мг, 680 мкмоль) и трет-бутил ^)-2-({[4-(аминометил)пиридин-3ил]окси}метил)морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 2-5, 308 мг, 952 мкмоль) в качестве исходных веществ, 150 мг (чистота 80%, выход 28%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 6 ч и очистки с помощью флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-20%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ [м.д.]: 1.035 (2.70), 1.052 (5.86), 1.070 (3.02), 1.232 (0.46), 1.389 (16.00), 1.405 (6.16), 1.419 (1.21), 2.331 (0.75), 2.430 (0.47), 2.447 (0.51), 2.518 (3.46), 2.523 (2.53), 2.673 (0.75), 2.772 (0.61), 2.789 (1.14), 2.805 (0.74), 3.137 (0.46), 3.145 (0.53), 3.154 (0.79), 3.161 (0.75), 3.405 (0.58), 3.417 (0.72), 3.422 (1.54), 3.435 (1.70), 3.440 (1.70), 3.445 (0.63), 3.452 (1.56), 3.457 (0.61),3.469 (0.63), 3.655 (0.79), 3.699 (12.68), 3.719 (0.53), 3.732 (0.75), 3.738 (0.84), 3.757 (0.49), 3.764 (0.44), 3.787 (2.07), 3.821 (0.49), 3.842 (0.93), 3.870 (0.40), 4.225 (1.58), 4.237 (1.60), 4.344 (0.84), 4.357 (1.63),4.370 (0.82), 4.681 (1.14), 4.696 (1.11), 5.759 (0.75), 7.267 (0.93), 7.275 (1.12), 7.287 (0.96), 7.295 (1.05),7.311 (0.79), 7.323 (0.79), 7.799 (0.77), 8.031 (0.67), 8.038 (0.68), 8.057 (0.67), 8.065 (0.63), 8.245 (1.81),8.257 (1.63), 8.290 (0.54), 8.410 (2.60), 13.671 (0.58), 15.074 (1.58).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.30 мин; МС (ESI положит.): m/z = 636 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-29.

№(3-хлор-2-этилфенил)-4-[({3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3 -карботиоамид н

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-χλορ-2этилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-29, 300 мг, 965 мкмоль) и 1-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамином (промежуточное соединение 2-3, 321 мг, 1.35 ммоль) в качестве исходных веществ, 300 мг (чистота 80%, выход 47%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 6 ч и очистки с помощью флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-20%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 0.798 (0.84), 0.814 (0.93), 0.821 (0.93), 0.840 (0.43), 0.886 (0.53), 0.904 (1.07), 0.922 (0.50), 1.035 (9.51), 1.052 (16.00), 1.066 (1.09), 1.070 (9.08), 1.073 (1.50), 1.232 (0.45), 1.874 (0.59), 1.901 (0.47), 1.907 (0.59), 1.983 (0.41), 1.990 (0.52), 2.178 (5.56), 2.195 (1.38),2.202 (0.47), 2.331 (0.74), 2.518 (3.86), 2.522 (2.50), 2.580 (0.57), 2.591 (1.05), 2.610 (1.21), 2.673 (0.95),2.784 (0.95), 2.817 (0.50), 3.162 (0.41), 3.172 (0.69), 3.179 (0.65), 3.404 (1.33), 3.417 (1.38), 3.421 (3.41),3.434 (3.43), 3.439 (3.91), 3.452 (4.01), 3.457 (1.15), 3.469 (1.19), 3.529 (0.57), 3.535 (0.57), 3.735 (0.55),3.784 (0.47), 3.788 (0.47), 3.792 (0.47), 3.812 (0.64), 3.816 (0.62), 4.111 (0.41), 4.123 (0.48), 4.138 (0.83),4.149 (0.83), 4.154 (0.88), 4.168 (0.74), 4.343 (2.64), 4.356 (5.06), 4.368 (2.39), 4.636 (0.93), 4.651 (0.93),7.205 (1.50), 7.208 (1.38), 7.218 (2.69), 7.296 (1.02), 7.305 (1.02), 7.308 (1.05), 7.315 (1.17), 7.327 (0.55),7.701 (0.64), 8.228 (1.50), 8.240 (1.38), 8.282 (0.47), 8.385 (2.07), 13.654 (0.43), 14.636 (1.17).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.14 мин; МС (ESI положит.): m/z = 530 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 6-30.

№(3-хлор-2-метоксифенил)-4-[({3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

- 58 046642

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-χΛορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-1, 200 мг, 639 мкмоль) и 1-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метанамином (промежуточное соединение 2-7, 210 мг, 831 мкмоль) в качестве исходных веществ, 55.0 мг (чистота 98%, выход 15%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 3 ч при 130°C и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 1.042 (9.29), 1.249 (8.31), 2.518 (2.85), 2.523 (1.83), 2.752 (0.79), 2.768 (1.57), 2.785 (0.95), 3.147 (0.74), 3.156 (1.18), 3.164 (1.13), 3.299 (1.11), 3.533 (1.90), 3.562 (1.50), 3.628 (0.50), 3.648 (1.21), 3.658 (1.28), 3.667 (1.26), 3.691 (1.55), 3.713 (16.00), 3.720 (1.14),3.795 (0.51), 3.806 (0.64), 3.817 (0.52), 4.154 (0.42), 4.164 (0.43), 4.180 (1.25), 4.191 (1.23), 4.198 (1.31),4.212 (1.18), 4.225 (0.43), 4.663 (1.86), 4.678 (1.86), 7.088 (1.13), 7.108 (2.42), 7.128 (1.39), 7.286 (1.58),7.290 (1.68), 7.305 (2.17), 7.310 (1.58), 7.316 (1.59), 7.729 (1.16), 7.799 (1.26), 7.803 (1.27), 7.819 (1.18),7.823 (1.14), 8.241 (1.91), 8.253 (1.81), 8.397 (3.02), 13.669 (0.43), 13.683 (0.81), 14.792 (2.17).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 1.04 мин; МС (ESI положит.): m/z = 547 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-33.

4-[({3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-№(3-фтор-2метоксифенил) -2 -оксо -1,2,5,6 -тетр агидропиридин-3 -кар ботио амид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с №(3-фтор-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-1, 200 мг, 675 мкмоль) и 1-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метанамином (промежуточное соединение 2-7, 221 мг, 877 мкмоль) в качестве исходных веществ, 130 мг (чистота 96%, выход 35%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 2 ч при 130°C и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ [м.д.]: 1.043 (15.59), 1.251 (13.74), 2.518 (2.60), 2.523 (1.78), 2.742 (1.25), 2.759 (2.52), 2.775 (1.52), 3.134 (1.00), 3.142 (1.15), 3.152 (1.86), 3.158 (1.79), 3.167 (1.02), 3.175 (0.86), 3.300 (1.91), 3.535 (3.14), 3.563 (2.56), 3.622 (0.60), 3.630 (0.81), 3.650 (1.97), 3.659 (2.07),3.668 (2.14), 3.692 (2.45), 3.722 (1.19), 3.782 (15.81), 3.785 (16.00), 3.796 (0.91), 3.808 (1.03), 3.819 (0.82), 3.832 (0.62), 4.155 (0.57), 4.165 (0.61), 4.181 (1.80), 4.192 (1.83), 4.198 (1.91), 4.212 (1.68), 4.225 (0.61),4.238 (0.55), 4.658 (2.20), 4.672 (2.17), 7.029 (0.54), 7.045 (0.69), 7.050 (1.65), 7.065 (1.84), 7.069 (2.29),7.071 (2.14), 7.077 (2.06), 7.085 (1.65), 7.093 (0.69), 7.098 (1.72), 7.103 (1.74), 7.119 (0.69), 7.124 (0.54),7.307 (0.94), 7.317 (0.99), 7.657 (1.74), 7.662 (1.08), 7.676 (1.36), 7.681 (1.03), 7.708 (1.84), 8.254 (0.72),8.404 (0.81), 13.678 (0.65), 13.693 (1.25), 13.707 (0.60), 14.741 (3.47).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.94 мин; МС (ESI положит.): m/z = 531 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 6-35.

4-{[(3-{2-[1,4-диоксан-2-ил] этокси} пиридин-4-ил)метил] амино }-N-(3 -фтор-2-метоксифенил)-2оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

- 59 046642

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-φτορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-4, 200 мг, 675 мкмоль) и 1-(3-{2-[1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)метанамином (промежуточное соединение 2-6, 209 мг, 877 мкмоль) в качестве исходных веществ, получали 137 мг (чистота

96%, выход 38%) указанного в заголовке соединения.

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.83 мин; МС (ESI положит.): m/z = 517 [M+H]+.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: 1.757 (0.42), 1.778 (0.61), 1.793 (0.89), 1.813 (0.86), 1.822 (0.55), 1.826 (0.49), 1.833 (0.54), 1.840 (0.80), 1.852 (0.85), 1.857 (0.64), 1.868 (0.60), 2.518 (2.52), 2.523 (1.61), 2.674 (0.45), 2.735 (0.74), 2.752 (1.68), 2.761 (1.69), 2.769 (1.02), 2.777 (0.89), 3.134 (1.00),3.142 (1.11), 3.151 (1.92), 3.159 (1.89), 3.168 (0.98), 3.175 (0.85), 3.198 (1.19), 3.224 (1.91), 3.228 (1.91),3.254 (1.24), 3.421 (0.47), 3.425 (0.68), 3.446 (1.52), 3.453 (1.67), 3.472 (0.99), 3.481 (1.19), 3.545 (0.92),3.552 (1.09), 3.574 (1.39), 3.580 (1.60), 3.606 (1.73), 3.612 (2.26), 3.618 (1.04), 3.639 (1.07), 3.645 (0.93),3.690 (1.77), 3.697 (2.11), 3.709 (0.79), 3.719 (3.54), 3.728 (1.41), 3.735 (0.73), 3.744 (1.71), 3.751 (1.33),3.782 (15.79), 3.784 (16.00), 4.203 (1.78), 4.219 (2.73), 4.232 (1.20), 4.237 (1.18), 4.653 (2.89), 4.667 (2.88), 7.030 (0.49), 7.046 (0.68), 7.051 (1.63), 7.067 (1.82), 7.070 (3.31), 7.077 (2.11), 7.086 (1.65), 7.092 (0.71), 7.098 (1.72), 7.103 (1.73), 7.119 (0.68), 7.124 (0.52), 7.303 (1.99), 7.314 (2.03), 7.660 (1.68), 7.665 (1.06), 7.677 (1.35), 7.683 (1.07), 7.703 (1.84), 8.226 (1.84), 8.237 (1.79), 8.373 (2.98), 13.689 (0.64), 13.704 (1.28), 13.718 (0.60), 14.740 (3.42).

Промежуточное соединение 6-37.

N-(3 -фтор-2-метоксифенил)-4-{ [(3 - {[(3R)-4-метuлмоρφолин-3 -ил]метокси}пиридин-4ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с №(3-фтор-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-4, 200 мг, 675 мкмоль) и 1-(3-{[(3R)-4-метилмоρφолин-3-ил]метокси}пиρидин-4ил)метанамином (промежуточное соединение 2-2, 224 мг, 945 мкмоль) в качестве исходных веществ, 134 мг (выход 38%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 1 ч при 124°C и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 -55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ [м.д.] = 2.205 (0.86), 2.226 (1.57), 2.254 (1.23), 2.290 (15.27), 2.327 (1.28), 2.654 (2.07), 2.681 (1.95), 2.762 (2.11), 2.779 (3.81), 2.795 (2.41), 3.155 (3.13), 3.374 (3.80), 3.401 (2.16), 3.482 (0.97), 3.504 (1.80), 3.531 (1.16), 3.686 (1.75), 3.714 (1.51), 3.784 (16.00), 3.888 (1.65),3.916 (1.59), 4.031 (1.27), 4.047 (1.48), 4.057 (1.61), 4.073 (1.47), 4.294 (1.53), 4.304 (1.57), 4.320 (1.45),4.328 (1.29), 4.661 (3.52), 4.675 (3.54), 7.031 (0.48), 7.052 (1.50), 7.070 (3.26), 7.087 (1.82), 7.099 (1.95),7.122 (0.79), 7.299 (2.83), 7.311 (2.84), 7.655 (2.12), 7.672 (2.11), 7.706 (2.52), 8.239 (3.08), 8.250 (2.98),8.414 (5.21), 13.678 (1.85), 14.738 (3.80).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.64 мин; МС (ESI положит.): m/z = 516 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-38.

4-[[3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]-4-пиридил]метиламино]-№-(3-фтор-2-метилфенил)-6оксо-2,3-дигидро-1 Н-пиридин-5 -карботиоамид

- 60 046642

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-φτορ-2метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-38, 350 мг, 1.25 ммоль) и 1-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метанамином (промежуточное соединение 2-7, 315 мг, 1.25 ммоль) в качестве исходных веществ, 192 мг (выход 27%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 3 ч при 120°C и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 11, градиент: 0.00 - 2.00 мин 30% B, 2.00 - 14.00 мин 30 - 70% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ [м.д.] = 1.046 (16.00), 1.253 (14.02), 2.045 (8.35), 2.050 (8.21), 2.063 (1.09), 2.521 (2.37), 2.525 (1.62), 2.741 (1.29), 2.757 (2.61), 2.774 (1.60), 3.145 (1.01), 3.152 (1.15), 3.161 (1.90), 3.168 (1.80), 3.178 (0.99), 3.185 (0.85), 3.298 (1.92), 3.534 (3.17), 3.562 (2.60), 3.617 (0.65),3.626 (0.83), 3.647 (2.00), 3.656 (2.10), 3.666 (2.13), 3.690 (2.57), 3.719 (1.29), 3.780 (0.43), 3.793 (0.82),3.803 (1.04), 3.814 (0.83), 3.828 (0.60), 4.148 (0.72), 4.159 (0.78), 4.174 (2.17), 4.186 (2.01), 4.194 (2.14),4.208 (2.03), 4.220 (0.76), 4.234 (0.69), 4.647 (3.08), 4.662 (3.06), 7.040 (0.87), 7.061 (1.78), 7.074 (1.74),7.085 (1.37), 7.094 (2.40), 7.189 (0.89), 7.208 (1.38), 7.225 (1.30), 7.244 (0.54), 7.295 (2.49), 7.307 (2.52),7.686 (1.77), 8.237 (2.54), 8.249 (2.42), 8.393 (3.97), 13.662 (1.07), 14.520 (2.54).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.98 мин; МС (ESI положит.): m/z = 515 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-40.

№[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторфенил]-4-[[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]метиламино]-6оксо-2,3-дигидро-1 H-пиρидин-5-каρботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с N-[2-(2,2дифторэтил)-3-фторфенил]-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-40, 100 мг, 303 мкмоль) и 1-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метанамином (промежуточное соединение 2-1, 95.0 мг, 424 мкмоль) в качестве исходных веществ, 19.5 мг (выход 10%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью флэшхроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-10%).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.07 мин; МС (ESI положит.): m/z = 537 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 6-41.

трет-бутил ^)-2-{[(4-{[(5-{[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторфенил]карбамотиоил}-6-оксо-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил)амино]метил}пиридин-3-ил)окси]метил}морфолин-4-карбоксилат

- 61 046642

Смесь

№[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторфенил]-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3 карботиоамида (промежуточное соединение 5-40, 200 мг, 605 мкмоль) и трет-бутил (2S)-2-({[4(аминометил)пиридин-3-ил]окси}метил)морфолин-4-карбоксилата (промежуточное соединение 2-5, 274 мг, 848 мкмоль) в ACN (2.5 мл) обрабатывали НО-бис-(триметилсилил)ацетамидом (111 мкл, 0.6 ммоль, CAS 10416-59-8) и перемешивали при 80°C в течение 5 ч. Реакционную смесь обрабатывали другим эквивалентом (111 мкл, 0.6 ммоль) НО-бис-(триметилсилил)ацетамида и перемешивали при 80°C в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли посредством ДХМ и очищали с помощью флэшхроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-20%) с получением 255 мг указанного в заголовке соединения (выход 45%).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.25 мин; МС (ESI положит.): m/z = 636 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-42.

трет-бутил

^)-2-[({4-[({5-[(3-хлор-2-метилфенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6 тетрагидропиридин-4-ил}амино)метил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с №(3-хлор-2метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-10, 350 мг, 1.18 ммоль) и трет-бутил ДО)-2-({[4-(аминометил)пиридин-3ил]окси}метил)морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 2-5, 381 мг, 1.18 ммоль) в качестве исходных веществ, 208 мг (чистота 99%, выход 29%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 3 ч и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 11, 0.00-1.00 мин 30% B, 1.00-12.74 мин 30-68.9% B, 12.74 - 14.19 мин 68.9 B, 14.19 - 14.45 мин 68.9 - 70% B).

‘H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-^): δ [м.д.] = 1.396 (16.00), 2.077 (0.96), 2.158 (7.73), 2.520 (2.53), 2.525 (1.63), 2.542 (0.50), 2.747 (0.68), 2.763 (1.35), 2.780 (0.85),3.146 (0.96), 3.434 (0.57), 3.441 (0.60), 3.710 (0.46), 3.723 (0.54),3.730 (0.45), 3.837 (0.42), 4.213 (1.89), 4.225 (1.86), 4.648 (1.39),4.663 (0.92), 7.216 (1.36), 7.236 (0.59), 7.294 (0.89), 7.306 (0.92),7.326 (0.53), 3.153 (0.62), 3.162 (0.99), 3.169 (0.70), 3.737 (0.68), 3.749 (0.56), 3.756 (1.40), 7.153 (0.57), 7.170 (1.15), 7.196 (1.13), 7.329 (1.10), 7.346 (0.85), 7.349 (0.79), 7.691 (0.91), 8.237 (2.11), 8.249 (1.94), 8.399 (3.05), 13.653 (0.59), 14.540 (1.38).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 1.17 мин; МС (ESI положит.): m/z = 602 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 6-43.

трет-бутил (3R)-3-[({4-[({5- [(3 -хлор-2-метилфенил)карбамотиоил] -6-оксо-1,2,3,6тетрагидропиридин-4-ил}амино)метил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат

- 62 046642

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-1, с Ν-(3-χλορ-2метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-10, 350 мг, 1.18 ммоль) и трет-бутил (3R)-3-({[4-(аминометил)пиридин-3ил]окси}метил)морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 2-9, 381 мг, 1.18 ммоль) в качестве исходных веществ, 184 мг (чистота 99%, выход 26%) указанного в заголовке соединения получали после нагревания в течение 3 ч и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 11, 0.00-1.00 мин 30% B, 1.00-12.74 мин 30-68.9% B, 12.74 - 14.19 мин 68.9 B, 14.19 - 14.45 мин 68.9 - 70% B).

‘И-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d,.): δ [м.д.] = 1.339 (2.92), 2.087 (1.31), 2.161 (16.00), 2.521 (1.63), 2.525 (1.08), 2.676 (0.52), 2.708 (0.66), (2.44), 3.163 (2.41), 3.319 (0.58), (1.00), 3.651 (0.51), 3.797 (0.72), (0.83), 4.625 (2.12), 4.639 (2.15), (1.19), 7.301 (1.19), 7.329 (2.50),

2.725

3.365

3.821

7.160

7.332 (1.74), 2.742 (1.82), 2.757 (0.75), 3.140 (1.42), 3.147 (1.59),3.156 (1.06), 3.372 (1.25), 3.395 (0.56), 3.402 (0.54), 3.478 (0.92),3.507 (0.64), 3.957 (0.67), 3.985 (0.59), 4.236 (1.53), 4.415 (0.46),4.441 (1.07), 7.178 (2.26), 7.200 (2.08), 7.220 (3.03), 7.239 (1.27),7.291 (2.34), 7.349 (1.83), 7.352 (1.71), 7.691 (1.99), 8.240 (3.22),8.252 (3.11), 8.489 (2.72), 13.669 (0.94), 14.536 (3.05).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 1.17 мин; МС (ESI положит.): m/z = 602 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-44.

№(3-хлор-2-метилфенил)-4-[[3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]-4-пиридил]метиламино]-6оксо-2,3 -дигидро-1 Н-пиридин-5 -кар ботио амид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Ν-(3-χλορ-2метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-10, 200 мг, 674 мкмоль) и 1-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метанамином (промежуточное соединение 2-7, 200 мг, чистота 85%, 674 мкмоль) в качестве исходных веществ, получали 328 мг указанного в заголовке соединения (чистота 97%, выход 89%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 1.047 (14.25), 1.253 (12.85), 2.077 (16.00), 2.162 (14.45), 2.520 (1.87), 2.525 (1.19), 2.742 (1.21), 2.759 (2.44), 2.775 (1.45), 3.147 (0.98), 3.154 (1.11), 3.163 (1.80),

3.170 (1.74), 3.180 (0.98), 3.186 (0.82), 3.297 (1.66), 3.327 (2.92), 3.533 (2.87), 3.561 (2.30), 3.617 (0.55),

3.626 (0.77), 3.646 (1.84), 3.655 (1.96), 3.664 (1.91), 3.689 (2.20), 3.718 (1.12), 3.791 (0.79), 3.802 (0.97),

3.812 (0.78), 3.826 (0.56), 4.147 (0.62), 4.158 (0.66), 4.173 (1.85), 4.184 (1.77), 4.193 (1.88), 4.206 (1.73),

4.220 (0.66), 4.233 (0.60), 4.644 (2.79), 4.659 (2.74), 7.158 (1.13), 7.175 (2.37), 7.200 (1.72), 7.220 (2.58),

7.239 (1.09), 7.298 (1.31), 7.310 (1.39), 7.328 (2.08), 7.332 (2.01), 7.348 (1.56), 7.351 (1.42), 7.689 (1.69),

8.245 (0.80), 8.399 (1.03), 13.621 (0.57), 13.635 (1.07), 14.542 (2.54).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 1.06 мин; МС (ESI положит.): m/z = 531 [M+H]+.

- 63 046642

Промежуточное соединение 6-47.

4-[[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]метиламино]-Ы-(3-фтор-2-метилфенил)-6-оксо-2,3дигидро-1Н-пиридин-5-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Х-(3-фтор-2метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-38, 300 мг, 1.07 ммоль) и 1-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метанамином (промежуточное соединение 2-1, 240 мг, 1.07 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 156.3 мг (чистота 93%, выход 71%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 0.000 (0.70), 1.998 (0.55), 2.033 (16.00), 2.038 (15.45), 2.064 (3.23), 2.508 (3.78), 2.513 (2.36), 2.737 (2.61), 2.754 (5.23), 2.771 (2.96), 3.142 (2.39), 3.151 (3.71), 3.158 (3.53), 3.168 (2.07), 3.393 (2.34), 3.418 (3.51), 3.421 (3.41), 3.446 (3.16), 3.461 (1.34), 3.482 (2.56),3.488 (2.76), 3.506 (1.42), 3.516 (2.71), 3.579 (1.64), 3.585 (1.94), 3.608 (2.49), 3.614 (2.79), 3.641 (5.03),3.670 (1.97), 3.735 (2.71), 3.744 (2.66), 3.769 (2.09), 3.837 (2.39), 3.844 (2.81), 3.871 (4.35), 3.883 (1.72),3.890 (1.32), 3.895 (1.57), 3.902 (1.32), 3.907 (1.44), 3.914 (1.14), 3.926 (0.62), 4.108 (0.85), 4.120 (0.95),4.134 (3.73), 4.145 (6.69), 4.158 (3.48), 4.171 (0.87), 4.184 (0.75), 4.624 (4.75), 4.639 (4.68), 7.028 (1.64),7.050 (3.46), 7.062 (3.48), 7.073 (2.79), 7.081 (4.60), 7.179 (1.62), 7.198 (2.71), 7.215 (2.51), 7.235 (1.00),7.333 (1.12), 7.676 (3.41), 8.321 (0.42), 13.651 (2.04), 14.509 (4.80).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.85 мин; МС (ESI положит.): m/z = 487 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-50.

Х-(3-хлор-2-метилфенил)-4-[[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]метиламино]-6-оксо-2,3дигидро-Ш-пиридин-5-карботиоамид

CI

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Х-(3-хлор-2метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-10, 200 мг, 674 мкмоль) и 1-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метанамином (промежуточное соединение 2-1, 151 мг, 674 мкмоль) в качестве исходных веществ, получали 150.0 мг (чистота 96%, выход 42%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 2.077 (1.64), 2.162 (16.00), 2.520 (2.60), 2.525 (1.64), 2.751 (1.41), 2.768 (2.82), 2.784 (1.63), 3.156 (1.22), 3.165 (1.94), 3.172 (1.87), 3.404 (1.32), 3.429 (1.94),3.432 (1.93), 3.457 (1.81), 3.472 (0.72), 3.493 (1.40), 3.500 (1.50), 3.518 (0.79), 3.528 (1.45), 3.591 (0.91),3.597 (1.05), 3.619 (1.35), 3.626 (1.54), 3.650 (2.14), 3.653 (2.65), 3.660 (0.95), 3.682 (1.04), 3.748 (1.44),3.756 (1.54), 3.781 (1.16), 3.849 (1.30), 3.855 (1.59), 3.883 (2.54), 3.894 (0.99), 3.901 (0.68), 3.906 (0.89),3.913 (0.76), 3.918 (0.79), 3.925 (0.62), 3.930 (0.51), 4.118 (0.55), 4.129 (0.59), 4.144 (2.26), 4.155 (4.42),4.168 (2.30), 4.181 (0.52), 4.194 (0.48), 4.648 (3.19), 4.663 (3.19), 7.159 (1.24), 7.176 (2.55), 7.203 (1.84),7.222 (2.83), 7.242 (1.22), 7.290 (2.72), 7.302 (2.78), 7.330 (2.22), 7.333 (2.19), 7.349 (1.69), 7.353 (1.54),7.691 (1.83), 8.233 (4.07), 8.245 (3.96), 8.383 (6.40), 13.623 (0.61), 13.637 (1.14), 14.544 (2.74).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.94 мин; МС (ESI положит.): m/z = 503 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 6-52.

Х-(3-хлор-2-этилфенил)-4-[[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]метиламино]-6-оксо-2,3дигидро-1Н-пиридин-5-карботиоамид

- 64 046642

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Ν-(3-χΛορ-2этилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-29, 150 мг, 483 мкмоль) и 1-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метанамином (промежуточное соединение 2-1, 108 мг, 483 мкмоль) в качестве исходных веществ, 150.0 мг (чистота 90%, выход 54%) указанного в заголовке соединения получали с использованием флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 1-13%).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ м.д.= 1.01 - 1.11 (m, 4H), 2.56 - 2.65 (m, 2H), 2.73 - 2.81 (m, 2H), 3.12 - 3.22 (m, 2H), 3.39 - 3.54 (m, 3H), 3.58 - 3.69 (m, 2H), 3.73 - 3.80 (m, 1H), 3.88 (s, 2H), 4.09 - 4.23 (m, 2H), 4.11 - 4.15 (m, 1H), 4.57 - 4.71 (m, 2H), 7.16 - 7.25 (m, 2H), 7.28 - 7.36 (m, 2H), 7.32 (s, 1H), 7.66 - 7.75 (m, 1H), 8.07 - 8.11 (m, 1H), 8.21 - 8.26 (m, 1H), 8.33 - 8.43 (m, 1H), 13.60 -13.70 (m, 1H), 14.59 - 14.67 (m, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.15 мин; МС (ESI положит.): m/z = 517 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-53.

N-(3 -хлор-2-этилфенил)-4- {[(3-{ [(2S)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метил] амино }-2оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид сн₃ ci

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с №(3-хлор-2этилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-29, 210 мг, 676 мкмоль) и 1-(3-{[^)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамином (промежуточное соединение 2-8, 185 мг, чистота 90%, 743 мкмоль) в качестве исходных веществ, 320.0 мг (выход 86%) указанного в заголовке соединения получали с использованием флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 1-15%).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 1.036 (8.39), 1.040 (4.03), 1.053 (16.00), 1.059 (9.01), 1.071 (8.71), 1.078 (3.84), 2.066 (0.41), 2.518 (1.19), 2.523 (0.81), 2.577 (0.95), 2.596 (2.98), 2.614 (2.87), 2.632 (0.86), 2.757 (1.69), 2.774 (3.38), 2.790 (1.92), 3.152 (1.31), 3.159 (1.49), 3.169 (2.36), 3.174 (2.23),3.185 (1.26), 3.403 (1.67), 3.405 (1.77), 3.418 (1.45), 3.423 (4.19), 3.427 (2.48), 3.430 (2.54), 3.435 (4.26),3.440 (3.60), 3.453 (4.76), 3.457 (2.12), 3.470 (1.96), 3.492 (1.59), 3.498 (1.73), 3.516 (0.85), 3.526 (1.70),3.589 (1.03), 3.594 (1.21), 3.617 (1.57), 3.623 (1.85), 3.651 (3.24), 3.679 (1.31), 3.745 (1.75), 3.754 (1.70),3.779 (2.03), 3.847 (1.59), 3.853 (1.84), 3.880 (2.81), 3.893 (1.13), 3.900 (0.84), 3.905 (1.04), 3.912 (0.89),3.917 (0.95), 3.924 (0.75), 3.929 (0.59), 3.936 (0.44), 4.116 (0.64), 4.127 (0.69), 4.142 (2.65), 4.154 (5.01),4.167 (2.53), 4.180 (0.60), 4.193 (0.55), 4.343 (2.64), 4.356 (5.10), 4.369 (2.52), 4.647 (3.70), 4.662 (3.66),7.209 (5.05), 7.211 (4.85), 7.222 (8.23), 7.231 (0.55), 7.293 (2.86), 7.307 (4.24), 7.319 (3.43), 7.331 (1.67),7.706 (2.31), 8.234 (3.16), 8.246 (3.01), 8.383 (5.19), 13.642 (0.84), 13.657 (1.55), 13.672 (0.72), 14.639 (4.11).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.17 мин; МС (ESI положит.): m/z = 517 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 6-55.

трет-бутил (2R)-2-[({4-[({5-[(3-χлоρ-2-этилфенил)каρбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6-тетρагидρопиρидин4-ил}амино)метил] пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат

- 65 046642

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Ν-(3-χλορ-2этилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-29, 300 мг, 965 мкмоль) и трет-бутил (2R)-2-({[4-(аминометил)пиρидин-3ил]окси}метил)морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 2-10, 312 мг, 965 мкмоль) в качестве исходных веществ, 476.0 мг (чистота 95%, выход 76%) указанного в заголовке соединения получали с использованием флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 1-10%).

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 1.036 (1.51), 1.055 (3.57), 1.073 (1.55), 1.393 (16.00),2.518 (1.71), 2.523 (1.10), 2.590 (1.19), 2.609 (1.16), 2.751 (0.68), 2.769 (1.33), 2.785 (0.84), 3.165 (0.96),3.171 (0.92), 3.431 (0.55), 3.438 (0.59), 3.729 (0.71), 3.749 (0.48), 3.756 (0.41), 3.835 (0.41), 4.210 (1.81),4.222 (1.76), 4.646 (1.35), 4.662 (1.35), 5.758 (7.84), 7.202 (2.06), 7.214 (2.99), 7.296 (1.00), 7.304 (1.58),7.316 (1.60), 7.328 (0.75), 7.703 (0.94), 8.236 (1.90), 8.248 (1.81), 8.398 (2.84), 13.671 (0.64), 14.632 (1.67).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.32 мин; МС (ESI положит.): m/z = 616 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-56.

трет-бутил ^)-2-[({4-[({5-[(3-хлор-2-этилфенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин4-ил}амино)метил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Ν-(3-χλορ-2этилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-29, 300 мг, 965 мкмоль) и трет-бутил^)-2-({[4-(аминометил)пиридин-3-ил]окси}метил) морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 2-5, 312 мг, 965 мкмоль) в качестве исходных веществ, 479.0 мг (чистота 95%, выход 77%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 1-10%).

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 14.55 - 14.67 (m, 1H), 13.60 - 13.72 (m, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.24 (d, 1H), 7.70 (br s, 1H), 7.16 - 7.36 (m, 4H), 5.70 - 5.80 (m, 1H), 5.66 - 5.81 (m, 1H), 4.59 - 4.73 (m, 2H), 4.12 4.27 (m, 2H), 3.80 - 3.99 (m, 2H), 3.65 - 3.78 (m, 2H), 3.37 - 3.50 (m, 1H), 3.10 - 3.22 (m, 2H), 2.70 - 2.99 (m, 4H), 2.55 - 2.64 (m, 2H), 1.30 - 1.46 (m, 9H), 1.01-1.12 (m, 3H).

Промежуточное соединение 6-57.

№(3-хлор-2-метоксифенил)-4-([{3-[(^)-1-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3 -карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Ν-(3-χΛορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-1, 300 мг, 959 мкмоль) и 1-{3-[(^)-1-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}метанамином (промежуточное соединение 2-11, 251 мг, 1.06 ммоль) в качестве исходных веществ, 384 мг (чистота 99%, выход 74%) указанного в заголовке соединения получали в виде смеси диастереоизомеров.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 0.064 (0.95), 1.239 (2.82), 1.255 (2.83), 1.279 (2.06),1.295 (2.09), 2.518 (1.11), 2.523 (0.82), 2.761 (0.76), 2.777 (0.86), 3.141 (0.52), 3.148 (0.60), 3.157 (1.00),3.164 (0.99), 3.181 (0.43), 3.417 (0.87), 3.443 (0.88), 3.455 (0.44), 3.462 (0.47), 3.470 (0.68), 3.476 (0.41),3.591 (0.40), 3.597 (0.65), 3.620 (0.88), 3.632 (0.76), 3.639 (0.41), 3.647 (0.54), 3.653 (0.56), 3.672 (0.40),3.678 (0.44), 3.711 (16.00), 3.732 (0.56), 3.766 (0.89), 3.772 (0.52), 3.794 (0.57), 4.651 (1.27), 4.665 (1.31), 4.682 (0.58), 7.090 (0.70), 7.110 (1.53), 7.131 (0.88), 7.287 (1.67), 7.289 (1.87), 7.300 (1.26), 7.305 (1.12), 7.309

- 66 046642 (1.02), 7.314 (0.67), 7.726 (0.98), 7.791 (0.95), 7.794 (0.96), 7.811 (0.90), 7.815 (0.85), 8.198 (1.34), 8.211 (1.99), 8.223 (0.91), 8.416 (1.88), 8.432 (1.35), 13.666 (0.43), 13.675 (0.50), 14.790 (1.61).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.96 мин и Rt = 0.98 мин; МС (ESI положит.): m/z = 533.2 [M+H]+. Промежуточное соединение 6-60.

N-(3-хлор-2-метоксифенил)-4- {[(3-{(1 R)-1-[1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)метил]амино } 2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Ν-(3-χλορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-1, 300 мг, 959 мкмоль) и 1-{3-[(^)-1-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}метанамином (промежуточное соединение 2-12, 251 мг, 1.06 ммоль) в качестве исходных веществ, получали 346 мг (чистота 99%, выход 67%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 1.278 (5.25), 1.294 (5.21), 2.073 (0.98), 2.331 (0.40), 2.518 (2.02), 2.522 (1.36), 2.673 (0.42), 2.749 (0.74), 2.765 (0.56), 2.775 (0.83), 2.792 (0.42), 3.140 (0.62), 3.147 (0.73), 3.156 (1.17), 3.164 (1.16), 3.417 (0.81), 3.441 (1.16), 3.445 (1.15), 3.469 (1.68), 3.475 (0.85),3.503 (0.74), 3.570 (0.47), 3.576 (0.55), 3.598 (0.72), 3.604 (0.82), 3.631 (1.87), 3.638 (0.97), 3.646 (0.63),3.652 (0.78), 3.657 (1.02), 3.663 (0.93), 3.670 (0.52), 3.677 (0.47), 3.710 (16.00), 3.758 (0.87), 3.767 (0.74),3.790 (0.67), 3.920 (0.78), 3.926 (0.76), 3.949 (0.72), 3.955 (0.66), 4.646 (1.57), 4.653 (1.48), 4.662 (1.63),4.682 (0.73), 7.092 (1.08), 7.112 (2.33), 7.133 (1.33), 7.287 (1.60), 7.290 (1.60), 7.302 (1.73), 7.306 (1.61),7.310 (1.69), 7.314 (1.68), 7.725 (1.16), 7.791 (1.23), 7.794 (1.22), 7.811 (1.17), 7.814 (1.08), 8.210 (2.42),8.222 (2.24), 8.430 (3.36), 13.651 (0.41), 13.665 (0.79), 14.786 (2.12).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.96 мин; МС (ESI положит.): m/z = 533 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-62.

№(3-фтор-2-метилфенил)-4-{[(3-{[^)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с №(3-фтор-2метилфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (промежуточное соединение 5-38, 197 мг, 704 мкмоль) и 1-(3-{[-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамином (промежуточное соединение 2-3, 167 мг, 704 мкмоль) в качестве исходных веществ, 170 мг (чистота 93%, выход 45%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ (основная среда).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 1.035 (0.65), 1.053 (1.08), 1.070 (0.68), 1.848 (1.00), 1.876 (1.47), 1.901 (1.11), 1.953 (0.45), 1.962 (0.59), 1.982 (1.04), 1.990 (1.08), 2.010 (0.69), 2.019 (0.57), 2.040 (7.36), 2.044 (6.91), 2.177 (16.00), 2.518 (1.64), 2.522 (1.10), 2.578 (0.88), 2.607 (0.81), 2.756 (0.84), 2.770 (1.72), 2.789 (2.10), 2.817 (1.02), 3.149 (0.83), 3.156 (0.97), 3.166 (1.67), 3.173 (1.63), 3.182 (0.94), 3.318 (0.50), 3.501 (0.55), 3.507 (0.70), 3.529 (1.25), 3.535 (1.29), 3.557 (0.76), 3.563 (0.62), 3.784 (0.93),3.788 (0.90), 3.791 (0.76), 3.812 (1.29), 3.815 (1.26), 3.829 (0.63), 3.837 (0.57), 4.112 (0.53), 4.124 (0.56),4.138 (1.82), 4.150 (1.97), 4.154 (2.08), 4.168 (1.68), 4.180 (0.56), 4.194 (0.52), 4.636 (2.30), 4.651 (2.34),7.034 (0.71), 7.055 (1.49), 7.070 (1.47), 7.079 (1.12), 7.089 (1.98), 7.185 (0.72), 7.204 (1.19), 7.221 (1.13),7.241 (0.44), 7.295 (2.26), 7.306 (2.30), 7.679 (1.46), 8.227 (3.76), 8.239 (3.55), 8.383 (5.45), 13.662 (0.88), 14.516 (2.06).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.62 мин; МС (ESI положит.): m/z = 500 [M+H]+.

- 67 046642

Промежуточное соединение 6-65.

4-{[(3-{[1,4-диоксан-2-ил] метокси}пиридин-4-ил)метил] амино } -№(2-этил-3-фторфенил)-2-оксо1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Ν-(2-ύγηλ-3фторфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (300 мг, 1.02 ммоль) и 1(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамином (229 мг, 1.02 ммоль) в качестве исходных веществ, 218 мг (чистота 90%, выход 38%) указанного в заголовке соединения получали после упаривания растворителя, отфильтровывания и промывки твердого вещества с помощью ACN.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^) δ [м.д.]: 0.057 (1.12), 1.042 (7.32), 1.061 (16.00), 1.080 (7.29), 1.231 (0.88), 1.751 (0.58), 2.074 (6.86), 2.522 (5.66), 2.753 (3.09), 2.770 (6.11), 2.787 (3.52), 3.156 (2.86), 3.166 (4.42), 3.172 (4.30), 3.181 (2.51), 3.402 (2.65), 3.427 (3.92), 3.430 (3.92), 3.455 (3.70), 3.471 (1.62),3.491 (2.84), 3.498 (3.08), 3.516 (1.51), 3.526 (2.87), 3.589 (1.80), 3.594 (1.99), 3.617 (2.79), 3.623 (3.19),3.650 (5.74), 3.679 (2.35), 3.745 (3.17), 3.754 (3.06), 3.778 (2.46), 3.846 (2.80), 3.853 (3.24), 3.881 (4.78),3.893 (1.98), 3.900 (1.58), 3.905 (1.80), 3.911 (1.59), 3.918 (1.69), 3.925 (1.36), 3.936 (0.73), 4.117 (1.01),4.129 (1.14), 4.143 (4.20), 4.155 (7.71), 4.168 (3.95), 4.181 (1.08), 4.194 (0.91), 4.632 (5.48), 4.646 (5.40),7.029 (2.23), 7.051 (3.97), 7.074 (2.84), 7.091 (3.92), 7.110 (5.33), 7.191 (2.31), 7.207 (2.86), 7.211 (3.55),7.228 (3.42), 7.248 (1.35), 7.351 (1.30), 7.701 (4.14), 8.329 (0.48), 8.476 (0.42), 13.662 (1.51), 13.676 (2.76), 13.691 (1.37), 14.588 (6.37).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.92 мин; МС (ESI положит.): m/z = 501 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-68.

4-{[(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-№(2-этил-3фторфенил)-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Ν-(2-ύγηλ-3фторфенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамидом (300 мг, 1.02 ммоль) и 1(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метанамином (257 мг, 1.02 ммоль) в качестве исходных веществ, 360 мг (чистота 93%, выход 62%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью колоночной хроматографии.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^) δ [м.д.]: 1.014 (0.69), 1.044 (16.00), 1.061 (7.08), 1.080 (3.30), 1.172 (0.52), 1.200 (0.60), 1.251 (13.22), 1.987 (0.87), 2.745 (1.36), 2.761 (2.65), 2.779 (1.61), 3.164 (2.11), 3.170 (2.09), 3.295 (1.79), 3.532 (2.73), 3.560 (1.79), 3.688 (2.07), 3.718 (1.01), 3.778 (0.65), 4.156 (0.71), 4.172 (1.96), 4.182 (3.11), 4.658 (3.10), 7.029 (0.86), 7.050 (1.52), 7.225 (1.39), 7.245 (0.52), 7.295 (2.19), 3.615 (0.45), 3.789 (1.95), 4.191 (1.63), 7.074 (2.40), 7.306 (0.59), 3.624 (0.91), 3.801 (2.02), 4.205 (1.12), 7.091 (2.41), 7.700 (0.79), 3.644 (1.91), 3.653 (2.05), 3.664 (1.07), 3.812 (0.86), 3.824 (0.63), 4.145 (1.76), 4.218 (0.69), 4.231 (0.59), 4.644 (1.71), 7.111 (2.37), 7.189 (0.89), 7.208 (1.92), 8.235 (3.11), 8.247 (2.98), 8.389 (5.24), 13.661 (0.71), 13.675 (1.32), 13.688 (0.68), 14.587 (3.04).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 1.03 мин; МС (ESI положит.): m/z = 529 [M+H]+.

Промежуточное соединение 6-71.

N-(3 -хлор-2-метоксифенил)-4-( {[3-({1- [4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4ил]метил}амино)-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид

- 68 046642

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 6-41, с Ν-(3-χΛορ-2метоксифенил)-4-гидрокси-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3 -карботиоамидом (промежуточное соединение 5-1, 300 мг, 959 мкмоль) и 1-[3-({1-[4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]метанамином (промежуточное соединение 2-71, 265 мг, 1.06 ммоль) в качестве исходных веществ, 360 мг (чистота 93%, выход 62%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью колоночной хроматографии.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: 1.014 (0.69), 1.044 (16.00), 1.061 (7.08), 1.080 (3.30), 1.172 (0.52), 1.200 (0.60), 1.251 (13.22), 1.987 (0.87), 2.745 (1.36), 2.761 (2.65), 2.779 (1.61), 3.164 (2.11), 3.170 (2.09), 3.295 (1.79), 3.532 (2.73), 3.560 (2.19), 3.615 (0.59), 3.624 (0.79), 3.644 (1.91), 3.653 (2.05),3.664 (1.79), 3.688 (2.07), 3.718 (1.01), 3.778 (0.45), 3.789 (0.91), 3.801 (1.07), 3.812 (0.86), 3.824 (0.63),4.145 (0.65), 4.156 (0.71), 4.172 (1.96), 4.182 (1.95), 4.191 (2.02), 4.205 (1.76), 4.218 (0.69), 4.231 (0.59),4.644 (3.11), 4.658 (3.10), 7.029 (0.86), 7.050 (1.63), 7.074 (1.12), 7.091 (1.71), 7.111 (2.37), 7.189 (0.89),7.208 (1.52), 7.225 (1.39), 7.245 (0.52), 7.295 (2.40), 7.306 (2.41), 7.700 (1.92), 8.235 (3.11), 8.247 (2.98),8.389 (5.24), 13.661 (0.71), 13.675 (1.32), 13.688 (0.68), 14.587 (3.04).

Промежуточное соединение 12.

3-((3-фтор-2-метоксифенил)амино)-2-(3-гидроксипиридин-4-ил)-6,7-дигидро-1Н-пирроло[3,2с]пиридин-4(5Н)-он

F

К суспензии №(3-фтор-2-метоксифенил)-4-(((3-гидроксипиридин-4-ил)метил)амино)-2-оксо-1,2,5,6тетрагидропиридин-3-карботиоамида (промежуточное соединение 6-12, 41 г, 101.88 ммоль) в MeOH (410 мл) добавляли ТФУ (0.75 мл, 10.13 ммоль) с последующей обработкой пероксидом водорода (18 мл, 30% в воде). Смесь нагревали до 60°C и перемешивали в течение 16 ч. Добавляли дополнительное количество ТФУ (6.8 мл, 91.84 ммоль) и пероксида водорода (1.5 мл, 30% в воде). Суспензию перемешивали при 60°C в течение еще 3 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и оставляли стоять в течение ночи. Суспензию объединяли со второй партией, которую получали таким же образом. Объединенную суспензию фильтровали и осадок на фильтре промывали водой (250 мл) и MeOH (150 мл), и затем суспендировали в MeOH (150 мл). Суспензию фильтровали. Осадок на фильтре промывали с помощью MeOH (75 мл) и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (25.4 г, выход 33.8%) в виде желтого твердого вещества.

¹Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ = 11.45 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.39 (d, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.67 (t, 1H), 6.54 (t, 1H), 6.04 (d, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.40 (t, 2H), 2.90 (t, 2H).

ЖХ-МС (метод 5): Rt =1.851 мин; m/z = 369.0 (М +H)+.

Промежуточное соединение 22-1.

трет-бутил ^)-2-[({4-[3-(3-фтор-2-метоксианилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2c]пиρидин-2-ил]пиρидин-3-ил}окси)метил]моρфолин-4-каρбоксилат

- 69 046642

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с трет-бутил (2S)-2-|([4-|({5-|(3-(|)Top-2метоксифенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}амино)метил]пиридин-3ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 6-22, 1.43 г, 2.38 ммоль) в качестве исходного вещества, 572 мг (чистота 80%, выход 34%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-10%).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ [м.д.]: 1.035 (0.86), 1.053 (1.99), 1.071 (0.88), 1.380 (0.83), 1.401 (6.79), 1.409 (16.00), 2.518 (1.63), 2.523 (1.18), 2.842 (0.65), 2.859 (1.16), 2.877 (0.76), 3.178 (0.95), 3.301 (0.60), 3.398 (0.50), 3.404 (0.61), 3.415 (0.94),3.418 (0.50), 3.553 (0.42), 3.560 (0.43), 3.750 (0.64),3.760 (6.63), 3.936 (0.57), 3.939 (0.59), 3.950 (0.46),4.343 (0.76), 6.485 (0.50), 6.489 (0.49), 6.492 (0.42),6.513 (0.82), 3.422 (1.10), 3.435 (0.77), (0.40), 3.851 (0.50), 3.858 (0.40), (0.56), 4.356 (0.65), 5.759 (1.09), (0.45), 6.516 (0.42), 6.627 (0.54),

3.440 (0.72), 3.452

3.873 (0.46), 3.906

5.993 (0.75), 6.013

6.642 (0.52), 7.147 (0.86), 7.280 (1.09), 7.293 (1.13), 7.509 (0.98), 8.025 (1.38), 8.038 (1.27), 8.401 (2.10), 11.020 (0.61). ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.12 мин; МС (ESI положит.): m/z = 568 [M+H]+.

Промежуточное соединение 22-2.

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[ДО)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

Трет-бутил ДО)-2-[({4-[3-(3-фтор-2-метоксианилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2с]пиридин-2-ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат (промежуточное соединение 22-1, 572 мг, 1.01 ммоль) растворяли в дихлорметане (7.2 мл) и добавляли ТФУ (780 мкл, 10 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 ч при КТ. Смесь упаривали и очищали с помощью флэш-хроматографии (аминофазный силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-20%) с получением 352 мг (чистота 95%, выход 71%) указанного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 2.53 - 2.78 (m, 4H), 2.80 - 2.90 (m, 3H), 3.38 - 3.47 (m, 3H), 3.55 - 3.66 (m, 1H), 3.83 - 3.90 (m, 1H), 3.91 - 3.95 (s, 3H), 4.07 - 4.16 (m, 1H), 4.29 - 4.39 (m, 1H), 6.01 (d, 1H), 6.44 - 6.56 (m, 1H), 6.65 (dt, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.53 (s, 1H), 8.01 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 11.10 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.84 мин; МС (ESI положит.): m/z = 468 [M+H]+.

Промежуточное соединение 27-1.

трет-бутил ДО)-2-[({4-[3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Нпирроло[3,2-с]пиридин-2-ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат

- 70 046642

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с трет-бутил ^)-2-[({4-[({5-[(3-хлор-5фтор-2-метоксифенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}амино)метил]пиридин-3ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 6-27, 150 мг, 236 мкмоль) в качестве исходного вещества, получали 73.5 мг (чистота 90%, выход 47%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 1.40 (s, 9H), 2.52 - 2.53 (m, 2H), 2.70 - 3.03 (m, 1H), 2.87 (br t, 2H), 3.42 (td, 2H), 3.46 - 3.61 (m, 1H), 3.71 - 3.79 (m, 1H), 3.82 (s, 4H), 3.93 (br d, 1H), 4.20 (m, 1H), 4.27 4.33 (dd, 1H), 5.85 (dd, 1H), 6.55 (dd, 1H), 7.11 (s, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.60 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.44 (s, 1H), 11.17 (s, 1H).

Промежуточное соединение 27-2.

3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[^)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетраг 'идро-411-i шрроло [3,2-c] пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 22-2, с трет-бутил (2S)-2-[({4-[3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1H-пирроло[3,2-c]пиридин-2ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 27-1, 73.0 мг, 121 мкмоль) в качестве исходного вещества, 56.3 мг (чистота 95%, выход 88%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью флэш-хроматографии (аминофазный силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-15%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 2.51 - 2.58 (m, 2H), 2.61 - 2.75 (m, 2H), 2.77 - 2.94 (m, 3H), 3.38 - 3.48 (m, 1H), 3.56 (td, 1H), 3.76 - 3.92 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 4.10 (dd, 1H), 4.29 (dd, 1H), 5.85 (dd, 1H), 6.57 (dd, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 8.09 (d, 1H), 8.43 (s, 1H), 11.22 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.93 мин; МС (ESI положит.): m/z = 502 [M+H]+.

Промежуточное соединение 41-1.

трет-бутил

^)-2-{[(4-{3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н пирроло[3,2-с]пиридин-2-ил}пиридин-3-ил)окси]метил}морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с трет-бутил (2S)-2-{[(4-{[(5-{ [2-(2,2

- 71 046642 дифторэтил)-3-фторфенил]карбамотиоил}-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4ил)амино]метил}пиридин-3-ил)окси]метил}морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 641, 266 мг, 418 мкмоль) в качестве исходного вещества, 33.0 мг (чистота 65%, выход 9%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 30% B, 0.50-6.00 мин 30-70% B).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.16 мин; МС (ESI отрицат.): m/z = 600 [M-H]^-.

Промежуточное соединение 41-2.

3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-2-(3-{[ДО)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро^Н-пирроло^Д-Дпиридин^-он

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 22-2, с трет-бутил (2S)-2-{[(4-{3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1H-пирроло[3,2-c]пиридин2-ил}пиридин-3-ил)окси]метил}морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 41-1, 33.0 мг, 54.9 мкмоль) в качестве исходного вещества, 22.0 мг (чистота 65%, выход 52%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью флэш-хроматографии (аминофазный силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-10%).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.92 мин; МС (ESI отрицат.): m/z = 500 [M-H]^-.

Промежуточное соединение 42-1.

трет-бутил

ДО)-2-[({4-[3-(3-хлор-2-метиланилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2-

c] пиридин-2-ил] пиридин-Зил } окси) метил] морфолин-4 -карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с трет-бутил (2S)-2-[({4-[({5-[(3-хлор-2метилфенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил} амино)метил]пиридин-3 ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 6-42, 207 мг, 344 мкмоль) в качестве исходного вещества, 27.8 мг (чистота 90%, выход 13%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 9, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-4.65 мин 15-44.9% B, 4.65 - 5.94 мин 44.9% B, 5.94 - 7.29 мин 44.9 - 55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d..): δ [м.д.] = 1.414 (16.00), 2.349 (5.99), 2.520 (0.82), 2.525 (0.50), 2.853 (0.68), 2.870 (1.29), 2.887 (0.75), 3.405 (0.49), 3.410 (0.53), 3.422 (0.95),3.428 (0.43), 3.554 (0.43), 3.560 (0.45), 4.294 (0.43), 4.304 (0.45), 6.191 (0.69),6.195 (0.69), 6.719 (0.48), 6.735 (1.31), 6.738 (1.11), 6.747 (0.85), 6.767 (0.82),7.175 (0.93), 3.439 (0.48), 3.445 (0.66), 6.211 (0.71), 6.214 (0.83), 7.232 (0.92), 7.245 (0.92), 7.351 (0.48), 7.998 (1.24), 8.010 (1.16), 8.378 (1.84), 11.016 (0.78).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.92 мин; МС (ESI положит.): m/z = 568 [M+H]+.

Промежуточное соединение 42-2.

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[ДО)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2-c] пиридин-4-он

- 72 046642 ci

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 22-2, с трет-бутил ^)-2-[({4-[3-(3-хлор-2-метиланилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-Ш-пирроло[3,2-с]пиридин-2ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 42-1, 30.0 мг, 52.8 мкмоль) в качестве исходного вещества, 19.0 мг (чистота 92%, выход 71%) указанного в заголовке соединения получали после фильтрования через колонку SCX-2 (промывание с помощью MeOH с последующим элюированием 1 М аммиаком в MeOH).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 1.235 (1.09), 2.334 (1.58), 2.338 (0.84), 2.362 (16.00), 2.520 (7.24), 2.525 (4.55), 2.545 (1.21), 2.570 (1.33), 2.575 (1.40), 2.601 (1.20), 2.676 (1.83), 2.680 (1.06), 2.705 (1.02), 2.713 (0.99), 2.732 (1.01), 2.740 (0.93), 2.758 (1.50), 2.787 (0.62), 2.846 (1.74), 2.863 (4.52),2.880 (2.07), 2.894 (1.12), 3.300 (4.30), 3.410 (1.44), 3.416 (1.55), 3.427 (2.54), 3.433 (2.52), 3.445 (1.29),3.585 (0.65), 3.593 (0.77), 3.612 (1.20), 3.620 (1.22), 3.640 (0.69), 3.646 (0.62), 3.851 (0.59), 3.868 (0.92),3.875 (0.91), 3.902 (1.40), 3.930 (1.00), 4.073 (1.20), 4.090 (1.18), 4.098 (1.63), 4.116 (1.39), 4.274 (1.41),4.282 (1.45), 4.299 (1.18), 4.307 (1.08), 5.528 (0.41), 6.196 (1.85), 6.200 (1.81), 6.215 (2.00), 6.219 (1.86),6.726 (1.04), 6.730 (1.33), 6.746 (3.44), 6.750 (2.92), 6.761 (2.53), 6.780 (2.58), 6.800 (0.88), 7.192 (2.31),7.231 (3.82), 7.244 (3.92), 7.364 (4.42), 7.980 (4.81), 7.993 (4.51), 8.370 (6.73), 8.397 (0.45), 11.102 (2.40).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.52 мин; МС (ESI положит.): m/z = 468 [M+H]+.

Промежуточное соединение 43-1.

трет-бутил (3R)-3-[({4-[3-(3-хлор-2-метиланилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1H-пирроло[3,2c]пиридин-2-ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат CI

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с трет-бутил (3R)-3-[({4-[({5-[(3-xtop-2метилфенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}амино)метил]пиридин-3ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (180 мг, 299 мкмоль) в качестве исходного вещества, 35.1 мг (чистота 90%, выход 19%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 9, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-4.23 мин 15-41.9% B, 4.23 - 5.60 мин 41.9% B, 5.60 - 7.37 мин 41.9 - 55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 1.344 (16.00), 2.357 (14.22), 2.520 (2.49), 2.525 (1.70),2.891 (0.42), 2.923 (1.43), 3.384 (1.03), 3.405 (2.12), 3.412 (2.73), 3.417 (2.74), 3.435 (1.48), 3.555 (0.76),3.577 (0.85), 3.680 (1.24), 3.709 (1.06), 3.840 (1.02), 3.860 (0.92), 3.952 (1.42), 3.982 (1.23), 4.301 (0.62),6.161 (1.64), 6.165 (1.44), 6.179 (1.77), 6.184 (1.67), 6.725 (0.94), 6.740 (3.11), 6.745 (3.77), 6.765 (1.40),6.785 (0.46), 7.187 (1.94), 7.309 (2.75), 7.322 (2.75), 7.351 (4.78), 7.971 (1.97), 7.983 (1.88), 8.445 (5.01), 11.063 (1.60).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.92 мин; МС (ESI положит.): m/z = 568 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 43-2.

-(3 -хлор-2-метиланилино)-2-(3 - {[(3R)-морфолин-3 -ил] метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7 -тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

- 73 046642

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 22-2, с трет-бутил (3R)-3-[({4-[3-(3-хлор-2-метиланилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1H-пирроло[3,2-c]пиридин-2ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 43-1, 30.0 мг, 52.8 мкмоль) в качестве исходного вещества, 25.3 мг (чистота 97%, выход 99%) указанного в заголовке соединения получали после фильтрования через колонку SCX-2 (промывание с помощью MeOH с последующим элюированием 1 М аммиаком в MeOH).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-бб): δ [м.д.] = 1.235 (0.47), 2.334 (1.10), 2.338 (0.53), 2.367 (16.00), 2.383 (0.45), 2.520 (5.15), 2.525 (3.36), 2.676 (1.09), 2.680 (0.50), 2.825 (1.81), 2.842 (3.79), 2.860 (2.41), 2.888 (0.56), 2.945 (0.90), 2.976 (0.54), 3.155 (0.67), 3.371 (1.08), 3.398 (1.36), 3.416 (2.04), 3.426 (3.16),3.433 (2.75), 3.444 (2.06), 3.450 (1.95), 3.471 (0.57), 3.720 (1.01), 3.747 (0.86), 3.794 (1.03), 3.816 (0.90),4.192 (0.59), 4.208 (0.66), 4.218 (1.25), 4.232 (1.21), 4.252 (1.38), 4.261 (1.46), 4.277 (0.69), 4.286 (0.59),6.222 (1.82), 6.225 (1.83), 6.241 (1.98), 6.245 (1.89), 6.731 (1.15), 6.735 (1.43), 6.751 (3.26), 6.754 (2.74),6.769 (2.24), 6.790 (2.51), 6.809 (0.87), 7.172 (2.36), 7.217 (2.75), 7.230 (2.77), 7.391 (4.55), 7.941 (1.75),7.953 (1.66), 8.359 (2.93), 12.612 (0.40).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.53 мин; МС (ESI положит.): m/z = 468 [M+H]+.

Промежуточное соединение 55-1.

трет-бутил (2R)-2-[({4-[3-(3-хлор-2-этиланилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1H-пирроло[3,2c]пиридин-2-ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с трет-бутил ^R^-^^-^^-^-xrop^этилфенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}амино)метил]пиридин-3ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 6-55, 473 мг, 768 мкмоль) в качестве исходного вещества; 57.0 мг (чистота 95%, выход 12%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 10% B, 0.5011.05 мин 10-34.4% B, 11.05 - 12.46 мин 34.4% B, 12.46 - 24.12 мин 34.4 - 60% B) с последующей флэшхроматографией (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-12%).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.26 мин; МС (ESI положит.): m/z = 582 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 55-2.

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(2R)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2-c] пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 22-2, с трет-бутил (2R)-2-[({4-[3-(3-хлор-2-этиланилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1H-пирроло[3,2-c]пиридин-2ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 55-1, 70.4 мг, 121 мкмоль) в качестве исходного вещества, 58.0 мг (чистота 95%, выход 95%) указанного в заголовке со

- 74 046642 единения получали после очистки с помощью флэш-хроматографии (силикагель, ДХМ / EtOH + триэтиламин, градиент 1-40%).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆): δ [м.д.] = 10.96 - 11.17 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.69 - 8.02 (m, 1H), 7.37 7.51 (m, 1H), 7.19 (s, 2H), 6.65 - 6.86 (m, 2H), 6.15 - 6.24 (m, 1H), 6.12 - 6.31 (m, 1H), 4.26 - 4.36 (m, 1H), 4.06 - 4.14 (m, 1H), 3.85 - 3.96 (m, 2H), 3.58 - 3.67 (m, 1H), 3.40 - 3.46 (m, 2H), 3.35 - 3.39 (m, 1H), 2.69 2.96 (m, 7H), 2.56 - 2.64 (m, 1H), 1.19-1.27 (m, 6H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.99 мин; МС (ESI отрицат.): m/z = 480 [M-H]^-.

Промежуточное соединение 56-1.

трет-бутил ^)-2-[({4-[3-(3-хлор-2-этиланилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-пирроло[3,2c]пиридин-2-ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилат

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с трет-бутил (2S)-2-[({4-[({5-[(3-xtop-2этилфенил)карбамотиоил]-6-оксо-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил}амино)метил]пиридин-3ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 6-56, 476 мг, 772 мкмоль) в качестве исходного вещества, 68.0 мг (чистота 95%, выход 14%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 20% B, 0.5012.99 мин 20-40% B, 12.99 - 15.46 мин 40% B, 15.46 - 24.12 мин 40 - 55% B) с последующей флэшхроматографией (силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 0-12%).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.26 мин; МС (ESI положит.): m/z = 582 [M+H]+.

Промежуточное соединение 56-2.

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[^)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3 ,2-с]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для промежуточного соединения 22-2, с трет-бутил (2S)-2-[({4-[3-(3-хлор-2-этиланилино)-4-оксо-4,5,6,7-тетрагидро-1H-пирроло[3,2-c]пиридин-2ил]пиридин-3-ил}окси)метил]морфолин-4-карбоксилатом (промежуточное соединение 56-1, 70.4 мг, 121 мкмоль) в качестве исходного вещества, 46.9 мг (чистота 95%, выход 78%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью флэш-хроматографии (аминофазный силикагель, ДХМ / EtOH, градиент 1-35%).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^₆): δ [м.д.] = 11.09 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.46 (s, 1H), 7.19 (d, 2H), 6.68 - 6.84 (m, 2H), 6.23 (dd, 1H), 4.24 - 4.34 (m, 1H), 4.03 - 4.16 (m, 1H), 3.82 - 3.96 (m, 2H), 3.57 - 3.65 (m, 1H), 3.39 - 3.48 (m, 2H), 2.82 - 2.94 (m, 5H), 2.64 - 2.79 (m, 2H), 2.54 - 2.60 (m, 1H), 1.23 (t, 3H).

- 75 046642

Примеры

Пример 1.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2-c] пиридин-4-он

суспензии ^-(3-хлор-2-метоксифенил)-4-[({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4 ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамида (промежуточное соединение 6-1, 140 мг, 240 мкмоль) в MeOH (2.7 мл) добавляли ТФУ (42 мкл, 540 мкмоль) с последующим добавлением водного раствора пероксида водорода (94 мкл, чистота 35%, 1.08 ммоль), и смесь нагревали при 50°C в течение 17 ч. Реакционной смеси давали охладиться до КТ и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.506.00 мин 15-55% B) с получением 70 мг указанного в заголовке соединения (выход 51%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 2.86 (t, 2H), 3.37 - 3.57 (m, 4H), 3.70 - 3.90 (m, 4H), 3.88 (s, 3H), 3.92 - 4.08 (m, 1H), 4.10 - 4.20 (m, 1H), 4.28 (dd, 1H), 6.15 (t, 1H), 6.68 (d, 2H), 7.16 (br s, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.52 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 11.07 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.98 мин; МС (ESI положит.): m/z = 485 [M+H]⁺.

Пример 2.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[^)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро^Н-пирролоР^-^пиридин^-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 1 соединение (140 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 27 мг при R_t= 14.0 - 17.0 мин) и энантиомера 2 (25 мг при R_t = 20.0 - 24.8 мин, см. пример 3).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Labomatic HD5000, Labocord-5000; Gilson GX-241, Labcol Vario 4000; колонка: Cellulose SB 5 мк, 250x30 мм; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина (99%); элюент B: 2-пропанол; изократический режим: 50% A + 50% B; поток 50 мл/мин; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Agilent HPLC 1260; колонка: Cellulose SB 3 мк, 100x4.6 мм; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина (99%); элюент B: 2-пропанол; изократический режим: 50% A + 50% B, поток 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 4.49 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 1.7° +/- 0.98° (c = 3.6 мг/2 мл, метанол).

Энантиоселективный синтез подтвердил, что указанное в заголовке соединение представляет собой 3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[^)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он. 872 мг (чистота 95%, выход 72%) указанного в заголовке соединения получали по аналогии с примером 1, используя №(3-хлор-2-метоксифенил)-4-{[(3-{[^)-1,4-диоксан-2ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид (промежуточное соединение 6-2, 1.23 г, 2.36 ммоль) в качестве исходного вещества с последующей очисткой с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B).

’H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de,): δ [м.д.] = 2.86 (t, 2H), 3.38 - 3.47 (m, 3H), 3.53 (td, 1H), 3.69 - 3.78 (m, 2H), 3.83 (dd, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.90 (m, 1H), 3.98 -4.08 (m, 1H), 4.12 - 4.18 (m, 1H), 4.28 (dd, 1H), 6.12 6.17 (quin, 1H), 6.66 - 6.71 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.52 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 11.07 (s, 1H).

- 76 046642

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 4.46 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -12.5° +/- 0.52° (c = 5.6 мг/мл, хлороформ).

Пример 3.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 1. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 2) приводило к получению 25 мг указанного в заголовке соединения (при R_t = 20.0 - 24.8 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 2): Rt = 6.56 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -3.0° +/- 1.03° (c = 3.2 мг/2 мл, метанол).

Оптическое вращение: [a]D = 22.8° +/- 6.1° (c = 6.3 мг/мл, хлороформ).

Пример 4.

2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

По аналогии с примером 1 4-[({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-Ы-(3фтор-2-метоксифенил)-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид (промежуточное соединение 6-4, 120 мг, 239 мкмоль) использовали для получения после нагревания в течение 25 часов и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B) 25.7 мг (выход 21%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 2.86 (t, 2H), 3.37 - 3.57 (m, 4H), 3.66 - 3.89 (m, 4H), 3.91 (s, 3H), 3.98 - 4.09 (m, 1H), 4.09 - 4.20 (m, 1H), 4.28 (dd, 1H), 6.00 (d, 1H), 6.45 - 6.54 (m, 1H), 6.64 (m, 1H), 7.16 (br s, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.53 (s, 1H), 8.04 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 11.05 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.92 мин; МС (ESI положит.): m/z = 469 [M+H]⁺.

Пример 5.

2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 4 соединение (26 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 11 мг, при R_t = 8.2 - 9.1 мин, выход 10%) и энантиомера 2 (12 мг, при R_t = 9.7 - 10.7 мин, см. пример 6).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Labomatic HD5000, Labocord-5000; Gilson GX-241, Labcol Vario 4000; колонка: Cellulose SB 5 мк, 250x30 мм; элюент A: MTBE + 0.1 об.% диэтиламина (99%); элюент B: ацетонитрил; градиент: 260% B в течение 20 мин; поток 50 мл/мин; УФ: 280 нм.

- 77 046642

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Agilent HPLC 1260; колонка: Cellulose SB 3 мк, 100x4.6 мм; элюент A: MTBE + 0.1 об.% диэтиламина (99%); элюент B: ацетонитрил; градиент: 2-60% B в течение 7 мин, поток 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 4.34 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -0.5° +/- 0.87° (c = 7.5 мг/2 мл, метанол).

Пример 6.

2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 4. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 5) приводило к получению 12 мг указанного в заголовке соединения (при R_t = 9.7 - 10.7 мин, выход 11%).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 5): R_t = 5.11 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -0.1° +/- 0.89° (c = 6.3 мг/3 мл, метанол).

Пример 7.

-(2,3-дихлоранилино)-2- {3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4-ил} -1,5,6,7-тетраг 'идро-411пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

По аналогии с примером 1 №(2,3-дихлорфенил)-4-[({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид (промежуточное соединение 6-7, 110 мг, 210 мкмоль) использовали для получения после нагревания в течение 25 часов и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B) 34.6 мг (выход 32%) указанного в заголовке соединения.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 2.86 (br t, 2H), 3.35 - 3.45 (m, 3H), 3.47 - 3.56 (m, 1H), 3.65 3.75 (m, 2H), 3.75 - 3.88 (m, 2H), 3.93 - 4.04 (m, 1H), 4.06 - 4.20 (m, 2H), 6.27 (dd, 1H), 6.83 - 6.91 (m, 2H), 7.17 (br s, 1H), 7.26 (d, 1H), 7.66 (s, 1H), 8.08 (d, 1H), 8.38 (s, 1H), 11.21 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.01 мин; МС (ESI положит.): m/z = 489 [M+H]⁺.

Пример 8.

-(2,3-дихлоранилино)-2- {3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4-ил} -1,5,6,7-тетрагидро-4Нпирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 7 соединение (27 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 10 мг) и энантиомера 2 (12 мг, см. пример 9).

- 78 046642

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 5.11 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 1.4° +/- 0.69° (c = 5.8 мг/2 мл, метанол).

Пример 9.

3-(2,3-дихлоранилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Hпирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 7. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 8) приводило к получению 12 мг указанного в заголовке соединения.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 8): R_t = 6.74 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -14.9° +/- 3.16° (c = 5.6 мг/мл, метанол).

Пример 10.

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Hпирроло [3,2-с]пиридин-4-он

По аналогии с примером 1 №(3-хлор-2-метилфенил)-4-[({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид (промежуточное соединение 6-10, 180 мг, 358 мкмоль) использовали для получения после нагревания в течение 25 часов и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B) 12.1 мг (выход 7%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^: δ [м.д.] = 2.35 (s, 3H), 2.86 (br t, 2H), 3.37 -3.47 (m, 3H), 3.55 (br dd, 1H), 3.67 - 3.85 (m, 3H), 3.89 (br d, 1H), 4.01 (br dd, 1H), 4.08 - 4.18 (m, 1H), 4.24 (dd, 1H), 6.20 (d, 1H), 6.71 - 6.80 (m, 2H), 7.19 (br s, 1H), 7.24 (d, 1H), 7.37 (s, 1H), 8.01 (d, 1H), 8.37 (s, 1H), 11.05 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.02 мин; МС (ESI положит.): m/z = 469 [M+H]⁺.

Пример 11.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(3R)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло [3,2-с]пиридин-4-он

- 79 046642

По аналогии с примером 1 N-(3-хлор-2-метоксифенил)-4-{[(3-{[(3R)-4-метилморфолин-3ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид (промежуточное соединение 6-11, 82 мг, 139 мкмоль) использовали для получения после нагревания в течение 17 часов и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B) 11 мг (выход 15%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 11.51 - 12.57 (m, 1H), 8.40 (br s, 1H), 8.04 (br s, 1H), 7.62 (br s, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.19 (br s, 1H), 6.71 (br d, 2H), 6.15 (dd, 1H), 4.40 (br s, 2H), 3.90 (s, 4H), 3.85 (br s, 1H), 3.60 (br d, 3H), 3.40 -3.51 (m, 3H), 3.01 (br s, 1H), 2.74 - 2.96 (m, 3H), 2.22 - 2.43 (m, 2H).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.55 мин; МС (ESI положит.): m/z = 498.2 [M+H]+.

Оптическое вращение: [a]D = -82.0° +/- 0.41° (c = 5.8 мг/мл, метанол).

Пример 12.

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

-(3 -Фтор-2-метоксианилино)-2-(3 -гидроксипиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло [3,2с]пиридин-4-он (промежуточное соединение 12, 150 мг, 407 мкмоль) растворяли в диоксане (4.8 мл). Реакционную смесь дегазировали аргоном. Затем добавляли (трибутилфосфанилиден)ацетонитрил (384 мкл, 1.5 ммоль, CAS 157141-27-0) и (4-метилморфолин-2-ил)метанол (CAS 40987-46-0, 80.0 мг, 610 мкмоль), и смесь перемешивали при 50°C в течение 30 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении и добавляли насыщ. раствор бикарбоната натрия. Смесь экстрагировали с помощью ДХМ. Органическую фазу фильтровали через гидрофобный фильтр, концентрировали при пониженном давлении и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 1% B, 0.50 - 27.40 мин 1 50% B) с получением 16.2 мг указанного в заголовке соединения (выход 8%).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^: δ [м.д.] = 11.05 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.64 (td, 1H), 6.50 (ddd, 1H), 6.01 (d, 1H), 4.34 (dd, 1H), 4.15 (dd, 1H), 3.88 - 4.00 (m, 5H), 3.67 (td, 1H), 3.37 - 3.47 (m, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.77 (br d, 1H), 2.66 - 2.70 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.04 (td, 1H), 1.91 (t, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.92 мин; МС (ESI положит.): m/z = 482.3 [M+H]⁺.

Пример 13.

-(3 -фтор-2-метоксианилино)-2-{ 3 - [(4-метилморфолин-2-ил)метокси] пиридин-4-ил }-1,5,6,7 тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 12 соединение (19 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 6 мг, при Rt = 6.7 - 8.7 мин, выход 3%) и энантиомера 2 (7 мг, при R_t = 8.9 - 11.9 мин, см. пример 14).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: Chiralcel OD-H 5 мк, 250x20; элюент A: ацетонитрил + 0.1 об.% диэтиламина (99%); элюент B: этанол; изократический режим: 93% A + 7% B; поток 20 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: Chiralcel OD-H 5 мк, 100x4.6; элюент A: этанол + 0.1 об.% диэтиламина (99%); элюент B: этанол; изократический режим: 90% A + 10% B, поток 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 2.91 мин.

- 80 046642 ¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 11.05 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.64 (td, 1H), 6.50 (t, 1H), 6.01 (d, 1H), 4.34 (dd, 1H), 4.15 (dd, 1H), 3.89 - 3.99 (m, 5H), 3.67 (td, 1H), 3.38 - 3.46 (m, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.77 (br d, 1H), 2.61 - 2.71 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.98 - 2.16 (m, 1H), 1.91 (t, 1H).

Пример 14.

-(3 -фтор-2-метоксианилино)-2- {3- [(4-метилморфолин-2-ил)метокси] пиридин-4-ил }-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 12. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 13) приводило к получению 7 мг указанного в заголовке соединения (при Rt = 8.9 - 11.9 мин, выход 3%).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 13): Rt = 3.70 мин.

'H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 11.05 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.02 (br d, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.16 (br s, 1H), 6.59 - 6.70 (m, 1H), 6.50 (br t, 1H), 6.01 (br d, 1H), 4.34 (br dd, 1H), 4.15 (br dd, 1H), 3.86 - 4.00 (m, 5H), 3.60 - 3.74 (m, 1H), 3.40 - 3.48 (m, 2H), 2.85 (br t, 2H), 2.77 (br d, 1H), 2.63 - 2.70 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 1.99 - 2.09 (m, 1H), 1.91 (br t, 1H).

Пример 15.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4И-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

По аналогии с примером 1

N-(3 -хлор-2-метоксифенил)-4-[( {3- [(4-метилморфолин-2 ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид (промежуточное соединение 6-15, 74.0 мг, 139 мкмоль) использовали для получения после нагревания в течение 18 часов и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B) 24.1 мг (чистота 90%, выход 31%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 1.86 - 1.95 (t, 1H), 2.00 - 2.09 (td, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.66 (br d, 1H), 2.73 - 2.81 (br d, 1H), 2.86 (t, 2H), 3.42 (td, 2H), 3.61 - 3.73 (td, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.91 - 4.02 (m, 2H), 4.16 (dd, 1H), 4.33 (dd, 1H), 6.15 (t, 1H), 6.69 (d, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.28 (d, 1H), 7.53 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 8.40 (s, 1H), 11.07 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 0.97 мин; МС (ESI положит.): m/z = 498 [M+H]+.

Пример 16.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 15 соединение (24.1 мг) разделяли на энантиомеры с помощью пре

- 81 046642 паративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 8 мг, при R_t = 17.4 - 21.8, выход 11%) и энантиомера 2 (7 мг, при Rt = 12.5 - 14.5 мин, см. пример 17).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: Chiralpak IF 5 мк, 250x30; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол + 0.1 об.% диэтиламина; изократический режим: 50% A + 50% B; поток: 40 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: Chiralpak IF 3 мк, 100x4.6; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол; изократический режим: 50% A + 50% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 4.55 мин.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ [м.д.] = 1.232 (1.95), 1.259 (0.49), 1.888 (0.59), 1.914 (1.04), 1.941 (0.65), 2.016 (0.40), 2.037 (0.73), 2.045 (0.70), 2.065 (0.49), 2.206 (9.36), 2.327 (0.42), 2.518 (1.60), 2.523 (1.15), 2.540 (16.00), 2.646 (0.75), 2.670 (0.96), 2.673 (0.98), 2.758 (0.81), 2.787 (0.77), 2.841 (1.13),2.858 (2.36), 2.876 (1.27), 3.405 (0.89), 3.410 (0.98), 3.422 (1.69), 3.428 (1.67), 3.439 (0.85), 3.445 (0.77),3.638 (0.41), 3.644 (0.49), 3.666 (0.89), 3.672 (0.89), 3.694 (0.54), 3.700 (0.52), 3.883 (15.90), 3.933 (0.86),3.952 (0.89), 3.960 (1.15), 3.976 (0.47), 3.983 (0.40), 4.137 (0.82), 4.154 (0.74), 4.163 (1.02), 4.179 (0.84),4.315 (0.97), 4.324 (1.01), 4.341 (0.80), 4.349 (0.72), 6.139 (1.35), 6.151 (2.23), 6.163 (1.38), 6.681 (4.49), (3.40), 6.694 (3.35), 7.163 (1.58), 7.274 (1.81), 7.287 (1.83), 7.533 (3.41), 8.021 (1.20), 8.034 (1.14), (1.87), 11.066 (1.70).

Пример 17.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 15. Разделение

6.692

8.402 энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 16) приводило к получению 7 мг указанного в заголовке соединения (при R_t = 12.5 - 14.5 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 16): R_t = 2.93 мин.

Пример 18.

3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло [3,2-c] пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с №(3-хлор-5-фтор-2-метоксифенил)-4[({3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3карботиоамидом (промежуточное соединение 6-18, 166 мг, 302 мкмоль) в качестве исходного вещества, 13.0 мг (чистота 95%, выход 8%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 1.88 (t, 1H), 1.93 - 2.05 (dt, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.60 - 2.66 (d, 1H), 2.70 - 2.77 (d, 1H), 2.86 (t, 2H), 3.37 - 3.48 (m, 2H), 3.56 - 3.68 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.90 (br d, 2H), 4.15 (m, 1H), 4.27 (dd, 1H), 5.85 (dd, 1H), 6.56 (dd, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.64 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.43 (s, 1H), 11.18 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.00 мин; МС (ESI положит.): m/z = 516 [M+H]⁺.

- 82 046642

Пример 19.

3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с \-(3-хлор-5-фтор-2-метоксифенил)-4[({3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4-ил}метил)амино] -2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3 карботиоамидом (промежуточное соединение 6-19, 160 мг, 298 мкмоль) в качестве исходного вещества; 3.90 мг (чистота 90%, выход 2%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОЩ₆): δ [м.д.] = 2.86 (t, 2H), 3.37 - 3.45 (m, 3H), 3.47 - 3.61 (m, 1H), 3.62 3.77 (m, 3H), 3.77 - 3.87 (m, 6H), 3.94 - 4.01 (m, 1H), 4.07 - 4.20 (m, 1H), 4.24 (dd, 1H), 5.85 (dd, 1H), 6.56 (dd, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.60-7.66 (d, 1H), 8.11 (brd, 1H), 8.42 (s, 1H), 11.19 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.01 мин; МС (ESI положит.): m/z = 503 [M+H]⁺.

Пример 20.

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[^)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с \-(3-фтор-2-\1етоксифенил)-4-[[(3{[^)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин3-карботиоамидом (промежуточное соединение 6-20, 102 мг, 197 мкмоль) в качестве исходного вещества, 27.9 мг (чистота 90%, выход 26%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 10% B, 0.50 - 6.00 мин 10 - 50% B).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.51 мин; МС (ESI положит.): m/z = 482 [M+H]+. ’H-ЯМР (400 МГц, ДМСО^) δ [м.д.]: 2.274 (13.29), 2.304 (1.76), 2.318 (0.88), 2.434 (0.91), 2.449 (5.99), 2.523 (4.32), 2.775 (0.79), 2.908 (1.13), 2.938 (0.58), 3.459 (0.55), 3.546 (0.43), 2.454 (0.88), 2.458 (1.03), 2.463 (1.43),2.468 (0.40), 2.798 (0.70), 2.815 (1.49), 2.822 (0.88),2.832 (1.00), 3.294 (0.43), 3.406 (0.64), 3.423 (1.46),3.429 (1.13), 3.573 (1.76), 3.589 (1.13), 3.594 (1.22), 3.600 (0.55), 2.404 (1.37), 2.473 (0.91), 2.841 (1.19), 3.438 (1.28), 3.618 (0.46), (1.55), (1.16), (1.37), (0.61),

2.426

2.518

2.858

3.453

3.816 (0.94), 3.840 (1.83), 3.847 (1.95), 3.868 (2.71), 4.414 (0.46), 6.011 (1.89), 6.031 (1.19), 6.545 (0.94), 6.562 (1.19), 6.565 (0.82), 6.711 (0.67), 7.176 (2.07), 7.310 (1.06), (1.89), (1.06), (3.71),

3.875 (0.97), 3.938 (16.00), 3.951 (2.07), 4.374 (1.67), 4.386

6.514 (1.03), 6.518 (0.97), 6.535 (1.28), 6.539 (1.34),

6.655 (0.97), 6.670 (1.03), 6.675 (1.70), 6.691 (1.55),

7.323 (3.68), 7.514 (0.43), 7.527 (0.52), 7.533 (0.58),

6.541

6.696

7.601 (4.56), 7.977 (5.29), 7.990 (4.50), 8.067 (0.61), 8.080 (0.55), 8.358 (6.27), 8.439 (0.73), 12.011 (2.13).

Пример 21.

-(3 -хлор-2-метоксианилино)-2-(3 - {[(3 S)-4-метилморфолин-3 -ил] метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

- 83 046642

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с №(3-хлор-2-метоксифенил)-4-{[(3{[(3 S)-4-метилморфолин-3 -ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин3-карботиоамидом (промежуточное соединение 6-21, 99.5 мг, 187 мкмоль) в качестве исходного вещества, 4.70 мг (чистота 98%, выход 5%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 10% B, 0.50 - 6.00 мин 10 - 50% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ [м.д.] = 1.232 (0.45), 2.276 (9.36), 2.426 (0.63), 2.434 (0.67), 2.456 (0.51), 2.464 (0.76), 2.472 (0.79), 2.518 (1.95), 2.523 (1.26), 2.539 (9.95), 2.806 (0.54), 2.823 (1.37), 2.841 (1.19), 2.860 (0.60), 2.910 (0.85), 2.940 (0.76), 3.408 (0.49), 3.425 (1.12), 3.431 (0.95), 3.441 (1.04),3.454 (0.49), 3.460 (0.44), 3.544 (0.71), 3.572 (1.31), 3.588 (0.84), 3.594 (0.92), 3.599 (0.96), 3.617 (0.47),3.817 (0.72), 3.841 (1.23), 3.847 (1.34), 3.868 (0.69), 3.875 (0.63), 3.912 (16.00), 3.924 (0.49), 4.376 (1.24),4.387 (2.11), 6.151 (1.35), 6.162 (2.22), 6.175 (1.39), 6.718 (3.50), 6.720 (3.93), 6.731 (4.23), 7.179 (1.54),7.299 (2.18), 7.312 (2.21), 7.614 (3.34), 7.983 (1.76), 7.995 (1.68), 8.362 (2.68), 12.027 (1.61).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.54 мин; МС (ESI положит.): m/z = 498 [M+H]+.

Пример 22.

2-(3-{[^)-4-(2,2-дифторэтил)морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

F ^Нз9

3-(3-Фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[ДО)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (промежуточное соединение 22, 50.0 мг, 107 мкмоль) растворяли в ДМФА (1.6 мл), добавляли триэтиламин (89 мкл, 640 мкмоль) и 2,2дифторэтилтрифторметансульфонат (64 мкл, 480 мкмоль), и смесь перемешивали в течение 1 ч при КТ. Смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B) с получением 11.3 мг (чистота 90%, выход 18%) целевого соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 2.24 (t, 1H), 2.34 - 2.40 (dd, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.78 - 2.81 (m, 1H), 2.83 (m, 1H), 2.85 - 2.90 (t, 2H), 2.90 - 2.97 (d, 1H), 3.38 - 3.47 (m, 2H), 3.68 (dt, 1H), 3.89 - 3.92 (s, 3H), 3.92 - 4.03 (m, 2H), 4.17 (dd, 1H), 4.29 (dd, 1H), 5.97 - 6.02 (d, 1H), 6.02 - 6.34 (tt, 1H), 6.47 - 6.54 (m, 1H), 6.64 (td, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.29 (d, 1H), 7.54 (s, 1H), 8.02 (d, 1H), 8.40 (s, 1H), 11.03 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.04 мин; МС (ESI положит.): m/z = 532 [M+H]⁺.

Пример 23.

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[^)-4-(2,2,2-трифторэтил)морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4ил)-1,5,6,7-теmрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пириgин-4-он

F F

Используя метод, аналогичный описанному для примера 22, с 3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3{[(2S)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-оном (промежуточное соединение 22, 35.0 мг, 74.9 мкмоль) и 2,2,2-трифторэтилтрифторметансульфонатом (CAS 6226-25-1, 16 мкл, 110 мкмоль) в качестве исходных веществ, 11.9 мг (чистота 95%, выход 27%) указанного в заголовке соединения получали после препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 0.50 мин 30% B, 0.50 - 6.00 мин 30 - 70% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 1.231 (0.47), 1.264 (0.47), 2.326 (2.22), 2.331 (1.58),2.359 (0.93), 2.387 (1.69), 2.414 (1.15), 2.518 (7.61), 2.522 (5.31), 2.668 (2.30), 2.673 (1.58), 2.805 (1.18),2.836 (2.55), 2.853 (3.44), 2.870 (1.79), 2.936 (1.26), 2.964 (1.11), 3.196 (0.54), 3.205 (0.61), 3.221 (1.54),3.230 (1.58), 3.247 (1.51), 3.255 (1.47), 3.271 (0.61), 3.281 (0.54), 3.400 (1.26), 3.406 (1.33), 3.417 (2.37),3.423

- 84 046642 (2.26), 3.434 (1.15), 3.440 (1.08), 3.654 (0.54), 3.660 (0.65), 3.674 (0.72), 3.683 (1.18), 3.688 (1.15),3.711 (0.68), 3.912 (16.00), 3.934 (1.11), 3.966 (1.11), 3.983 (0.72), 3.999 (0.75), 4.008 (0.65), 4.157 (1.04),4.174 (1.00), 4.183 (1.51), 4.199 (1.22), 4.277 (1.40), 4.286 (1.36), 4.303 (1.04), 4.312 (0.86), 5.989 (1.94),6.010 (1.97), 6.472 (0.86), 6.475 (0.86), 6.493 (1.26), 6.497 (1.26), 6.502 (0.93), 6.520 (1.18), 6.523 (1.04),6.611 (0.90), 6.626 (1.04), 6.632 (1.54), 6.647 (1.51), 6.652 (0.75), 6.668 (0.65), 7.161 (2.22), 7.278 (3.52),7.291 (3.55), 7.535 (4.77), 8.018 (4.38), 8.030 (4.02), 8.391 (6.17), 11.018 (2.48).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.09 мин; МС (ESI положит.): m/z = 550 [M+H]+.

Пример 24.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[2-(4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4HпиРРОло[3,2-с]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с №(3-хлор-2-метоксифенил)-4-[({3-[2(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3карботиоамидом (промежуточное соединение 6-24, 105 мг, 197 мкмоль) в качестве исходного вещества, 43.5 мг (чистота 95%, выход 42%) указанного в заголовке соединения получали после препаративной ВЭЖХ (метод 7).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 1.817 (0.39), 1.834 (1.18), 1.849 (1.57), 1.861 (1.08),1.876 (0.49), 2.518 (3.04), 2.522 (2.06), 2.673 (0.59), 2.833 (0.88), 2.846 (1.87), 2.863 (0.98), 3.204 (0.88),3.231 (1.47), 3.260 (1.08), 3.312 (1.28), 3.396 (1.67), 3.408 (2.16), 3.413 (2.16), 3.426 (1.28), 3.456 (1.18),3.462 (1.08), 3.484 (0.98), 3.490 (0.98), 3.521 (0.79), 3.525 (0.88), 3.549 (1.08), 3.554 (1.18), 3.582 (0.69),3.625 (1.28), 3.648 (1.37), 3.668 (2.45), 3.678 (0.98), 3.693 (1.37), 3.716 (1.28), 3.745 (0.98), 3.858 (16.00), 4.226 (1.37), 4.241 (2.94), 4.257 (1.37), 6.103 (1.47), 6.115 (2.06), 6.127 (1.47), 6.640 (5.60), 6.650 (3.63), 7.108 (1.77), 7.287 (2.65), 7.299 (2.75), 7.458 (3.93), 8.020 (3.04), 8.033 (2.85), 8.350 (4.32), 11.191 (1.96).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.68 мин; МС (ESI положит.): m/z = 499 [M+H]+.

Пример 25.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[2-(4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Hпирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 24 соединение (40 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 18.0 мг, при Rt = 18.8 - 21.3 мин, чистота 96%) и энантиомера 2 (17 мг, при Rt = 21.7 - 24.5 мин, см. пример 26).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: YMC Cellulose SB 5 мк, 250x30; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: ацетонитрил + 0.1 об.% диэтиламина; градиент: 0-20 мин 2-60% B; поток: 40 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: YMC Cellulose SB 3 мк, 100x4.6; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: ацетонитрил; градиент: 0-7 мин 2-60% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 4.94 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -1.6° +/- 1.63° (c = 2,8 мг/мл в метаноле).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.] = 1.835 (1.01), 1.851 (1.31), 1.862 (0.93), 1.877 (0.41), 2.518

- 85 046642 (1.52), 2.522 (0.99), 2.834 (0.77), 2.846 (1.61), 2.852 (1.47), 2.864 (0.82), 2.869 (0.80), 3.205 (0.76),3.231 (1.30), 3.235 (1.27), 3.261 (0.85), 3.391 (0.83), 3.397 (0.91), 3.408 (1.57), 3.415 (1.62), 3.430 (0.98),3.457 (0.99), 3.463 (1.01), 3.485 (0.84), 3.491 (0.79), 3.522 (0.72), 3.527 (0.76), 3.551 (0.96), 3.556 (1.07),3.584 (0.57), 3.624 (1.00), 3.649 (1.11), 3.654 (1.11), 3.671 (1.96), 3.680 (0.81), 3.687 (0.53), 3.695 (1.23),3.718 (1.09), 3.723 (1.01), 3.747 (0.79), 3.859 (16.00), 4.227 (1.22), 4.242 (2.58), 4.258 (1.21), 6.105 (1.40), 6.118 (1.81), 6.129 (1.46), 6.641 (5.45), 6.651 (3.33), 6.654 (3.12), 7.110 (1.60), 7.288 (2.35), 7.300 (2.36), 7.306 (0.49), 7.462 (3.57), 8.023 (2.38), 8.035 (2.27), 8.353 (3.43), 11.186 (1.77).

Пример 26.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[2-(4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Нпирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 24. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 25) приводило к получению 25 мг указанного в заголовке соединения (при R_t = 21.7 - 24.5 мин, выход 19%).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 25): R_t = 5.49 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 2.5° +/- 1.93° (c = 2,7 мг/мл в метаноле).

Пример 27.

3-(3 -хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3 - {[ДО)-4-метилморфолин-2-ил] метокси } пиридин-4-ил)1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

3-(3-Хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[^)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (промежуточное соединение 27, 24.0 мг, 47.8 мкмоль) растворяли в метаноле (650 мкл), добавляли формальдегид (7.2 мкл, чистота 37%, 96 мкмоль) и уксусную кислоту (2.7 мкл, 48 мкмоль), и смесь перемешивали в течение 15 мин при КТ. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (15.2 мг, 71.7 мкмоль), и смесь перемешивали в течение 1 ч при КТ. Смесь разбавляли метанолом, фильтровали через SCX колонку и промывали метанолом и аммиаком (7 М в метаноле). Фильтрат упаривали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 9, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B) с получением 17.3 мг (чистота 95%, выход 61%) указанного в заголовке соединения в виде его формиатной соли.

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.01 мин; МС (ESI положит.): m/z = 516 [M+H]⁺.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^6) δ [м.д.]: 2.189 (13.49), 2.330 (5.06), 2.729 (5.60), 2.861 (7.86), 3.348 (16.00), 3.419 (15.57), 3.624 (4.81), 3.830 (14.46), 3.908 (6.49), 7.633 (4.30), 8.098 (4.59), 8.146 (8.39).

Формиат 3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-[3-[[^)-4-метилморфолин-4-ий-2-ил]метокси]-4пиридил]-1,5,6,7-тетрагидропирроло ^^-^пиридин^-она растворяли в ДХМ и промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ и соляным раствором с получением 9.00 мг (чистота 90%, выход 33%) целевого соединения в виде свободного основания.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО^): δ [м.д.] = 1.79 - 1.96 (t, 1H), 1.97 - 2.05 (td, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.63 (br d, 1H), 2.71 - 2.82 (br d, 1H), 2.86 (t, 2H), 3.43 (td, 2H), 3.58 - 3.67 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.87 - 4.01 (m, 2H), 4.14 (dd, 1H), 4.29 (dd, 1H), 5.85 (dd, 1H), 6.56 (dd, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 8.07 - 8.12 (d, 1H), 8.43 (s, 1H), 11.18 (s, 1H).

Пример 28.

3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[^)-4-(2,2,2-трифторэтил)морфолин-2ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

- 86 046642

Используя метод, аналогичный описанному для примера 22, с 3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)2-(3-{[^)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-оном (промежуточное соединение 27, 25.0 мг, 49.8 мкмоль) и 2,2,2- трифторэтилтрифторметансульфонатом (CAS 6226-25-1, 11 мкл, 75 мкмоль) в качестве исходных веществ, 15.1 мг (чистота 95%, выход 49%) указанного в заголовке соединения получали после препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 30% B, 0.50 - 6.00 мин 30 - 70% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОЛ6): δ [м.д.] = 2.35 (t, 1H), 2.77 - 2.95 (m, 4H), 3.21 (dd, 2H), 3.42 (td, 2H), 3.60 - 3.69 (m, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.88 - 4.01 (m, 2H), 4.14 - 4.28 (m, 2H), 5.84 (dd, 1H), 6.56 (dd, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.32 (d, 1H), 7.62 -7.66 (m, 1H), 8.10 (d, 1H), 8.43 (s, 1H), 11.16 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.19 мин; МС (ESI положит.): m/z = 584 [M+H]+.

Пример 29.

-(3 -хлор-2-этиланилино)-2-{ 3 - [(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил }-1,5,6,7 -тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с №(3-хлор-2-этилфенил)-4-[({3-[(4метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3карботиоамидом (промежуточное соединение 6-29, 300 мг, 566 мкмоль) в качестве исходного вещества, 3.00 мг (чистота 85%, выход 1%) указанного в заголовке соединения получали после препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 30% B, 0.50 - 6.00 мин 30 - 70% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^: δ [м.д.] = 0.851 (0.47), 1.210 (0.41), 1.230 (2.24), 1.352 (0.41), 2.206 (1.49), 2.331 (2.92), 2.336 (1.36), 2.518 (16.00), 2.522 (10.31), 2.539 (1.02), 2.673 (3.05), 2.678 (1.42), 2.864 (0.41), 6.728 (0.41), 6.735 (0.47), 7.188 (0.47), 7.201 (0.47), 7.962 (0.54), 7.975 (0.47), 8.365 (0.68).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.07 мин; МС (ESI положит.): m/z = 496 [M+H]⁺.

Пример 30.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с №(3-хлор-2-метоксифенил)-4-[({3[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин3-карботиоамидом (промежуточное соединение 6-30, 55.0 мг, 101 мкмоль) в качестве исходного вещества, 28.00 мг (чистота 98%, выход 53%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 30% B, 0.50 - 6.00 мин 30 - 70% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d^: δ [м.д.] = 1.066 (9.57), 1.234 (8.81), 2.074 (0.42), 2.326 (1.06),2.331 (0.74), 2.518 (3.90), 2.522 (2.65), 2.668 (1.04), 2.673 (0.76), 2.819 (1.08), 2.837 (2.21), 2.853 (1.18),3.398 (1.96), 3.409 (1.62), 3.416 (1.61), 3.427 (2.05), 3.580 (0.57), 3.588 (0.65), 3.609 (1.17), 3.618 (1.13),3.629 (1.85), 3.654 (1.43), 3.657 (1.70), 3.679 (1.32), 3.709 (0.74), 3.868 (16.00), 3.894 (0.49), 3.902 (0.53),3.910

- 87 046642 (0.64), 3.918 (0.58), 3.927 (0.42), 4.155 (0.76), 4.171 (0.72), 4.181 (1.01), 4.198 (0.88), 4.295 (0.97),4.304 (0.99), 4.322 (о.76), 4.330 (0.67), 6.143 (1.4θ), 6.155 (1.71), 6.167 (1.4θ), 6.653 (θ.46) 6.663 (5.26),6.673 (3.14), 6.676 (2.88), 7.138 (1.48), 7.270 (2.51), 7.283 (2.51), 7.475 (3.39), 8.033 (3.36), 8.045 (2.98),8.404 (4.26), 11.073 (1.66).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.80 мин; МС (ESI положит.): m/z = 513 [M+H]⁺.

Пример 31.

-(3 -хлор-2-метоксианилино)-2- {3- [(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 30 соединение (26.3 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 11.00 мг, при Rt = 10.7 - 13.4 мин) и энантиомера 2 (10 мг, при Rt = 14.0 - 19.9 мин, см. пример 32).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: Chiralcel OD-H 5 мк, 250x20; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол + 0.1 об.% диэтиламина; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 20 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: Chiralcel OD-H 5 мк, 100x4.6; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 6.72 мин.

Пример 32.

-(3 -хлор-2-метоксианилино)-2- {3- [(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 30. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 31) приводило к получению 10 мг указанного в заголовке соединения (при Rt = 14.0 - 19.9 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 31): Rt = 10.04 мин.

Пример 33.

2-(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7тетрагидро^^пирроло [3,2-c] пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с 4-{[(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-М-(3-фтор-2-метоксифенил)-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин

- 88 046642

3-карботиоамидом (промежуточное соединение 6-33, 125 мг, 236 мкмоль) в качестве исходного вещест ва, 15.00 мг (чистота 80%, выход 10%) указанного в заголовке соединения получали после препаратив ной ВЭЖХ (метод 7).

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ [м.д.]: 1.068 (15.53), 1.236 (15.37), 2.517 (2.98), 2.522 (2.00), 2.817 (1.52), 2.834 (3.10), 2.851 (1.65), 2.903 (0.47), 2.921 (0.89), 2.936 (0.48), 3.402 (2.87), 3.408 (2.55),3.415 (2.29), 3.431 (3.39), 3.580 (0.97), 3.588 (1.12), 3.609 (2.52), 3.618 (2.17), 3.633 (3.03), 3.651 (2.10),3.661 (2.34), 3.677 (2.32), 3.706 (1.26), 3.900 (16.00), 3.917 (5.39), 3.933 (0.80), 3.942 (0.71), 4.147 (1.18), 4.163 (1.12), 4.173 (1.56), 4.189 (1.34), 4.294 (1.63), 4.302 (1.37), 4.320 (1.26), 4.329 (0.93), 4.769 (0.55),4.780 (0.55), 4.787 (0.58), 4.797 (0.52), 5.696 (0.85), 5.759 (1.92), 5.985 (0.55), 6.000 (1.88), 6.020 (1.84),6.455 (0.97), 6.476 (1.43), 6.479 (1.49), 6.503 (1.30), 6.597 (0.86), 6.612 (1.11), 6.618 (1.49), 6.625 (0.60),6.633 (1.47), 6.638 (0.71), 6.653 (0.62), 7.141 (2.11), 7.277 (3.15), 7.289 (3.21), 7.297 (1.00), 7.479 (4.43),7.531 (1.26), 8.030 (3.74), 8.042 (3.54), 8.399 (6.35), 11.053 (2.30), 11.085 (0.73).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.71 мин; МС (ESI положит.): m/z = 497 [M+H]+.

2-(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7 тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 33 соединение (15.0 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 5.00 мг, при Rt = 10.9 - 13.1 мин, выход 32%) и энантиомера 2 (4 мг, при Rt = 13.5 - 18.3 мин, см. пример 34).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: Chiralcel OD-H 5 мк, 250x20; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 20 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 6.58 мин.

Оптическое вращение: [a]_D = 2.6° +/- 1.66° (c = 2,3 мг/мл в метаноле).

Пример 34.

2-(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 33. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 33) приводило к получению 4 мг указанного в заголовке соединения (при Rt = 13.5 - 18.3 мин, выход 24%).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 33): Rt = 9.21 мин.

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆) δ [м.д.]: 1.046 (0.67), 1.068 (13.52), 1.108 (0.86), 1.185 (0.55), 1.236 (13.07), 1.259 (0.64), 2.084 (0.44), 2.331 (0.49), 2.518 (2.88), 2.523 (1.93), 2.673 (0.47), 2.817 (1.52), 2.834 (3.11), 2.851 (1.67), 3.403 (2.57), 3.409 (2.57), 3.416 (2.39), 3.431 (2.89), 3.581 (0.83), 3.589 (0.95), 3.611 (1.68), 3.618 (1.66), 3.633 (2.61), 3.652 (1.72), 3.661 (2.23), 3.678 (1.86), 3.707 (1.00), 3.901 (16.00),3.917 (1.07), 3.926 (0.91), 3.934 (0.65), 3.943 (0.58), 4.148 (1.01), 4.165 (0.96), 4.174 (1.36), 4.190 (1.18),4.294 (1.36), 4.303 (1.36), 4.320 (1.03), 4.329 (0.91), 6.000 (1.83), 6.021 (1.91), 6.455 (0.83), 6.459 (0.87),6.476 (1.19), 6.480 (1.27), 6.486 (0.94), 6.503 (1.10), 6.506 (1.01), 6.597 (0.86), 6.612 (1.01), 6.618 (1.47),6.633

- 89 046642 (1.44), 6.638 (0.75), 6.654 (0.61), 7.141 (2.15), 7.277 (2.70), 7.290 (2.68), 7.479 (4.53), 8.030 (2.67), 8.043 (2.48), 8.400 (4.07), 11.054 (2.33).

Пример 35.

2-(3-{2-[1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 1) сн₃о

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с 4-{[(3-{2-[1,4-диоксан-2ил]этокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-Х-(3-фтор-2-метоксифенил)-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3карботиоамидом (промежуточное соединение 6-35, 130 мг, 252 мкмоль) в качестве исходного вещества, 30.0 мг (чистота 90%, выход 22%) указанного в заголовке рацемического соединения получали после препаративной ВЭЖХ (метод 7).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ [м.д.] = 1.229 (0.48), 1.827 (0.71), 1.843 (1.74), 1.859 (2.06), 1.869 (1.50), 1.885 (0.63), 2.331 (0.40), 2.517 (2.30), 2.522 (1.50), 2.539 (4.51), 2.669 (0.55), 2.673 (0.48), 2.831 (1.19), 2.842 (2.22), 2.848 (2.06), 2.858 (1.19), 2.865 (1.11), 3.162 (1.27), 3.174 (0.71), 3.207 (1.35),3.233 (2.14), 3.236 (2.14), 3.262 (1.58), 3.406 (4.44), 3.412 (3.88), 3.428 (2.22), 3.456 (1.90), 3.462 (1.82),3.484 (1.50), 3.490 (1.50), 3.522 (1.27), 3.527 (1.35), 3.550 (1.66), 3.556 (1.90), 3.578 (0.95), 3.583 (1.27),3.624 (2.22), 3.651 (2.14), 3.671 (3.25), 3.681 (1.50), 3.695 (2.22), 3.700 (1.98), 3.716 (2.06), 3.721 (1.98),3.728 (1.35), 3.745 (1.50), 3.780 (0.71), 3.862 (0.95), 3.889 (16.00), 3.906 (1.19), 4.074 (0.71), 4.222 (2.14),4.238 (3.96), 4.253 (1.82), 4.754 (0.55), 5.960 (1.98), 5.981 (1.98), 6.430 (0.95), 6.433 (0.95), 6.451 (1.43),6.455 (1.43), 6.461 (0.95), 6.478 (1.19), 6.482 (1.11), 6.572 (0.95), 6.587 (1.11), 6.593 (1.58), 6.608 (1.58),6.613 (0.79), 6.628 (0.63), 7.108 (2.30), 7.292 (2.77), 7.305 (2.77), 7.455 (4.67), 8.017 (2.61), 8.030 (2.46),8.344 (4.04), 11.175 (2.46).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.63 мин; МС (ESI положит.): m/z = 483 [M+H]+.

Рацемический 2-(3-{2-[1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метоксианилино)1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (25.0 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 12.00 мг, при Rt= 15.1 - 17.0 мин) и энантиомера 2 (4 мг, при Rt = 19.8 - 26.8 мин, см. пример 36).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: Chiralpak IF 5 мк, 250x30; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол + 0.1 об.% диэтиламина; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 50 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: Chiralpak IF 3 мк, 100x4.6; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 4.68 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -12.9° +/- 1.72° (c = 1,4 мг/мл в метаноле).

Пример 36.

2-(3-{2-[1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 35. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 35) приводило к получению 4

- 90 046642 мг указанного в заголовке соединения (при R_t = 19.8 - 26.8 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 35): R_t = 6.58 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -21.4° +/- 1.94° (c = 1,3 мг/мл в метаноле).

Пример 37.

-(3 -фтор-2-метоксианилино)-2-(3 - {[(3R)-4-метилморфолин-3 -ил]метокси} пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с №(3-фтор-2-метоксифенил)-4-{[(3{[(3R)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин3-карботиоамидом (промежуточное соединение 6-37, 130 мг, 252 мкмоль) в качестве исходного вещества, 35.00 мг (чистота 92%, выход 27%) указанного в заголовке соединения получали после препаративной ВЭЖХ (метод 7).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 2.277 (13.00), 2.292 (1.54), 2.307 (0.96), 2.324 (0.70), 2.329 (0.89), 2.334 (0.66), 2.407 (0.69), 2.428 (1.27), 2.435 (1.36), 2.520 (2.98), 2.525 (1.88), 2.667 (0.63), 2.671 (0.83), 2.676 (0.62), 2.777 (0.67), 2.801 (0.82), 2.818 (1.61), 2.825 (0.99), 2.835 (1.02), 2.844 (1.23),2.860 (0.82), 2.911 (1.23), 2.940 (1.09), 3.388 (0.53), 3.408 (0.96), 3.425 (1.66), 3.431 (1.41), 3.441 (1.54),3.455 (0.69), 3.548 (1.12), 3.576 (1.89), 3.592 (1.35), 3.597 (1.35), 3.602 (1.33), 3.621 (0.70), 3.626 (0.70),3.783 (1.37), 3.785 (1.33), 3.818 (1.11), 3.843 (1.97), 3.849 (2.06), 3.870 (1.11), 3.878 (0.99), 3.941 (16.00),3.954 (1.12), 4.078 (0.56), 4.349 (0.43), 4.358 (0.42), 4.376 (1.85), 4.388 (2.91), 4.416 (0.47), 6.013 (1.90),6.034 (1.91), 6.516 (0.95), 6.520 (0.92), 6.537 (1.27), 6.541 (1.33), 6.547 (0.95), 6.564 (1.12), 6.568 (1.03),6.657 (0.94), 6.672 (1.04), 6.678 (1.61), 6.693 (1.51), 6.698 (0.80), 6.714 (0.65), 7.180 (2.21), 7.313 (3.72),7.325 (3.57), 7.605 (4.51), 7.980 (4.40), 7.993 (4.17), 8.360 (6.21), 8.414 (0.59), 12.014 (2.24).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.51 мин; МС (ESI положит.): m/z = 482 [M+H]+.

Пример 38.

2-[3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]-4-пиридил]-3-(3-фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7тетрагидропирроло [3 ,2-с]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с 4-[[3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил)метокси] -4 -пиридил] метиламино] -N-(3 -фтор-2-метилфенил)-6-оксо-2,3 -дигидро-1 Н-пиридин-5 карботиоамидом (промежуточное соединение 6-38, 190 мг, 369 мкмоль) в качестве исходного вещества, 30.2 мг (чистота 98%, выход 17%) указанного в заголовке соединения получали после препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 5.59 мин 15 - 51.7% B, 5.59 - 5.88 мин 51.7% B, 5.88 - 5.93 мин 51.7 -52.1% B, 5.93 - 5.95 мин 52.1% B, 5.95 - 6.32 мин 52.1-55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 1.073 (16.00), 1.243 (14.37), 2.177 (9.43), 2.180 (9.37), 2.520 (3.20), 2.525 (2.30), 2.542 (0.63), 2.826 (1.74), 2.843 (3.73), 2.861 (2.01), 3.406 (3.15), 3.417 (2.63), 3.424 (2.71), 3.434 (3.36), 3.569 (0.91), 3.577 (1.10), 3.598 (1.87), 3.607 (1.84), 3.643 (4.40), 3.671 (4.37),3.699 (1.24), 3.881 (0.69), 3.890 (0.81), 3.898 (1.03), 3.907 (0.94), 3.915 (0.67), 3.923 (0.65), 4.121 (1.26),4.137 (1.17), 4.147 (1.71), 4.163 (1.45), 4.265 (1.62), 4.274 (1.65), 4.291 (1.24), 4.300 (1.11), 6.059 (2.34),6.080 (2.42), 6.427 (1.06), 6.449 (1.94), 6.470 (1.21), 6.721 (0.73), 6.742 (1.51), 6.759 (1.47), 6.779 (0.63),7.168 (2.42), 7.232 (4.19), 7.244 (4.24), 7.308 (4.82), 7.997 (5.22), 8.009 (4.80), 8.373 (6.80), 11.029 (2.61).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.74 мин; МС (ESI положит.): m/z = 481 [M+H]+.

Пример 39.

2-[3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]-4-пиридил]-3-(3-фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7

- 91 046642 тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 38 соединение (30.2 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 10.00 мг, R_t = 30.4 - 36.0 мин, выход 5%) и энантиомера 2 (9 мг, R_t = 45.9 - 51.7 мин).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ: NPB

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: Chiralpak IF 5 мк, 250x30; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол + 0.1 об.% диэтиламина; изократический режим: 90% A + 10% B; поток: 50 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ: NPB

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: Chiralpak IF 3 мк, 100x4.6; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол; изократический режим: 90% A + 10% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 11.60 мин.

Оптическое вращение: [a]D = - 6.4° +/- 0.47° (c = 6,2 мг/мл в ДМСО).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 0.700 (5.10), 0.744 (1.84), 0.764 (1.85), 0.836 (0.93), 0.854 (1.20), 1.073 (15.11), 1.152 (5.69), 1.235 (8.54), 1.243 (16.00), 1.296 (2.78), 1.350 (0.95), 1.378 (0.62), 1.672 (0.88), 2.179 (9.59), 2.525 (2.28), 2.827 (1.75), 2.844 (3.61),2.861 (2.72), 3.434 (3.38), 3.570 (0.86), 3.578 (1.00), 3.599 (1.76),3.607 (1.09), 3.882 (0.67), 3.890 (0.80), 3.899 (1.00), 3.907 (0.92),3.915 (1.06), 4.147 (1.50), 4.164 (1.30), 4.267 (1.44), 4.275 (1.48),4.292 (2.31), 6.428 (1.04), 6.450 (1.90), 6.472 (1.17), 6.722 (0.70),6.742 (0.44), 7.170 (2.40), 7.201 (0.51), 7.222 (0.55), 7.234 (1.95),7.246 (1.08), 8.375 (1.57), 11.031 (2.61).

(1.95), 3.407 (3.22), 3.418 (2.68), 3.424 (1.71), 3.644 (4.10), 3.671 (4.05), 3.700 (0.66), 3.924 (0.61), 4.121 (1.09), 4.138 (1.11), 4.301 (1.01), 6.060 (2.24), 6.080 (1.49), 6.759 (1.45), 6.780 (0.58), 6.959 (1.95), 7.309 (4.47), 7.999 (1.12), 8.010

Пример 40.

3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-2-[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]-1,5,6,7тетрагидропирролоРД-^пиридин^-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с №[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторфенил]4-{[(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3карботиоамидом (промежуточное соединение 6-40, 19.5 мг, 36.3 мкмоль) в качестве исходного вещества, 3.80 мг (чистота 92%, выход 19%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 30% B, 0.50 - 6.00 мин 30 - 70% B).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОЧ): δ [м.д.] = 2.86 (t, 2H), 3.22 - 3.30 (m, 1H), 3.39 - 3.48 (m, 3H), 3.50 3.58 (td, 1H), 3.67 - 3.93 (m, 5H), 3.97 - 4.06 (m, 1H), 4.09 - 4.18 (m, 1H), 4.25 - 4.31 (dd, 1H), 6.07 - 6.17 (d, 1H), 6.29 - 6.63 (q, 2H), 6.83 - 6.94 (m, 1H), 7.10 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.37 (d, 2H), 8.00 (d, 1H), 8.38 (s, 1H), 11.07 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.99 мин; МС (ESI положит.): m/z = 503 [M+H]⁺.

Пример 41.

3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-2-(3-{[(2S)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)^^Д-тетрагидро^Н-пирролоРД-Дпиридин^-он

- 92 046642

3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-2-(3-{[^)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он (промежуточное соединение 41, 22.0 мг, 43.9 мкмоль) суспендировали в MeOH и добавляли формальдегид (6.6 мкл, чистота 37%, раствор в воде, 88 мкмоль) и уксусную кислоту (2.5 мкл, 44 мкмоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 15 мин при комнатной температуре. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (13.9 мг, 65.8 мкмоль), и смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смесь фильтровали через SCX колонку и промывали с помощью MeOH и аммиака (7М в MeOH). Аммиачный фильтрат упаривали и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B) с получением 8.8 мг (чистота 90%, выход 35%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 2.07 (m, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.63 -2.83 (m, 2H), 2.86 (t, 2H), 3.27 - 3.31 (m, 1H), 3.35 - 3.38 (m, 1H), 3.42 (td, 2H), 3.68 (td, 1H), 3.91 - 4.00 (m, 2H), 4.12 - 4.19 (dd, 1H), 4.33 (dd, 1H), 6.13 (d, 1H), 6.29 - 6.64 (m, 1H), 6.89 (q, 1H), 7.07 - 7.14 (m, 1H), 7.33 - 7.40 (t, 2H), 7.99 (d, 1H), 8.39 (s, 1H), 11.07 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 0.98 мин; МС (ESI положит.): m/z = 516 [M+H]+.

Пример 42.

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[^)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло [3,2-с]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 41, с 3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3{[(2S)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-оном (промежуточное соединение 42, 18.0 мг, 38.5 мкмоль) в качестве исходного вещества, 10.9 мг (чистота 94%, выход 55%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-^): δ [м.д.] = 1.234 (0.45), 1.874 (1.12), 1.901 (1.88), 1.928 (1.19), 2.006 (0.51), 2.015 (0.63), 2.035 (1.18), 2.043 (1.18), 2.064 (0.68), 2.072 (0.56), 2.207 (15.79), 2.324 (0.67), 2.329 (0.91), 2.334 (0.71), 2.338 (0.45), 2.357 (16.00), 2.374 (1.16), 2.520 (2.98), 2.525 (1.85), 2.647 (1.22),2.671 (1.61), 2.676 (1.69), 2.736 (1.32), 2.764 (1.23), 2.847 (1.67), 2.865 (3.57), 2.882 (1.86), 3.411 (1.24),3.417 (1.33), 3.428 (2.40), 3.434 (2.36), 3.445 (1.17), 3.451 (1.06), 3.639 (0.62), 3.645 (0.95), 3.667 (1.35),3.672 (1.38), 3.695 (0.78), 3.701 (0.66), 3.937 (1.97), 3.960 (1.51), 4.111 (1.22), 4.128 (1.10), 4.137 (1.63), (1.36), 4.253 (1.46), 4.262 (1.52), 4.279 (1.14), 4.287 (1.03), 6.190 (1.81), 6.194 (1.78), 6.209 (1.99), (1.81), 6.722 (0.90), 6.726 (1.25), 6.742 (3.67), 6.746 (2.96), 6.753 (2.81), 6.773 (2.59), 6.792 (0.84), (2.30), 7.232 (3.39), 7.244 (3.38), 7.377 (4.48), 7.990 (3.43), 8.003 (3.19), 8.370 (5.23), 11.051 (2.53).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.52 мин; МС (ESI положит.): m/z = 482 [M+H]+.

Пример 43.

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(3R)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло [3,2-с]пиридин-4-он

4.153

6.213

7.190

- 93 046642

Используя метод, аналогичный описанному для примера 41, с 3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3{[(3R)-морфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-оном (30.0 мг, 64.1 мкмоль) в качестве исходного вещества, 7.0 мг (чистота 94%, выход 21%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 15% B, 0.50 - 6.00 мин 15 - 55% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-ds): δ [м.д.] = -0.002 (3.00), 0.879 (0.57), 2.085 (5.27), 2.272 (14.21), 2.318 (0.47), 2.382 (16.00), 2.397 (1.43), 2.423 (1.05), 2.431 (1.10), 2.460 (1.63), 2.518 (5.17), 2.523 (3.38), 2.660 (0.46), 2.810 (0.81), 2.828 (2.27), 2.845 (1.96), 2.864 (0.87), 2.909 (1.32),2.938 (1.64), 3.435 (1.37), 3.444 (1.50), 3.464 (0.63), 3.540 (1.08), 3.568 (2.41),3.595 (1.11), 3.844 (2.09), 3.864 (1.06), 3.872 (0.93), 4.357 (1.94), 4.368 (3.51),4.395 (1.85), 6.228 (1.98), 6.232 (1.91), 6.756 (1.10), 6.760 (1.40), 6.776 (3.46),6.779 (2.75), 6.833 (0.95), 7.200 (2.25), 7.250 (3.55), 7.263 (3.70), 7.431 (4.31),7.946 (5.51), 12.003 (2.32).

3.428

3.818

6.212

6.813

8.338 (1.16), 3.411 (0.70), (2.18), 3.620 (0.70), (0.46), 6.209 (1.79), (2.93), 6.793 (2.52), (3.93), 7.958 (3.66),

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.57 мин; МС (ESI положит.): m/z = 512 [M+H]+.

Пример 44.

3-(3 -хлор -2 -метиланилино)-2-[3 -[(5,5 -диметил-1,4-диоксан-2 -ил)метокси] -4 -пиридил] -1,5,6,7тетрагидропирролоРР-^пиридин-4-он

По аналогии с примером 1, №(3-хлор-2-метилфенил)-4-[[3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил)метокси]-4-пиридил]метиламино]-6-оксо-2,3-дигидро-Ш-пиридин-5-карботиоамид (промежуточное соединение 6-44, 320 мг, 603 мкмоль) использовали для получения после перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-5.92 мин 15-54.2% B, 5.92 - 7.34 мин 54.2% B, 7.34 -7.42 мин 54.2 - 55% B) 32 мг (чистота 98%, выход 10%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 1.072 (14.59), 1.241 (13.05), 2.325 (0.47), 2.329 (0.73), 2.344 (16.00), 2.520 (1.82), 2.525 (1.27), 2.671 (0.54), 2.828 (1.59), 2.845 (3.40), 2.862 (1.80), 3.402 (2.68), 3.417 (2.39), 3.423 (2.57), 3.431 (2.75), 3.565 (0.87), 3.574 (1.01), 3.595 (1.70),3.603 (4.15), 3.697 (1.17), 3.872 (0.64), 3.880 (0.75), 3.888 (0.95), 3.897 (0.88),3.905 (1.12), 4.139 (1.05), 4.149 (1.54), 4.165 (1.34), 4.254 (1.47), 4.263 (1.52),4.281 (1.81), 6.199 (1.76), 6.215 (1.97), 6.218 (1.81), 6.705 (0.97), 6.709 (1.30),6.725 (2.56), 6.757 (2.50), 6.778 (0.82), 7.165 (2.26), 7.230 (3.85), 7.243 (3.87),7.323 (4.69), 8.374 (6.56), 11.049 (2.45).

(1.65), (0.63), (1.10), (3.57), (4.45), (3.45), (0.58), (0.98), (2.82), (5.13),

3.640

3.914

4.289

6.729

8.004

3.668

4.122

6.196

6.738

8.016

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.79 мин; МС (ESI положит.): m/z = 497 [M+H]+.

Пример 45.

3-(3 -хлор -2 -метиланилино)-2-[3 -[(5,5 -диметил-1,4-диоксан-2 -ил)метокси] -4 -пиридил] -1,5,6,7тетрагидропирролоРР-^пиридин^-он (стереоизомер 1)

- 94 046642

Указанное в заголовке примера 44 соединение (32.0 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 15.50 мг, Rt = 12.1 - 14.2 мин) и энантиомера 2 (12.6 мг, Rt = 14.5 - 19.0 мин, см. пример 46).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ: POB

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: Chiralcel OD-H 5 мк, 250x20; элюент A: этанол + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: метанол; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 10 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ: POB

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: Chiralcel OD-H 5 мк, 100x4.6; элюент A: этанол + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: метанол; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 3.52 мин.

Оптическое вращение: [a]_D = 30.31° +/- 1.05° (c = 2,7 мг/мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 1.050 (0.51), 1.070 (14.54), 1.119 (0.40), 1.137 (0.77), 1.155 (0.80), 1.190 (0.47), 1.239 (13.63), 2.085 (0.73), 2.318 (0.77), 2.323 (1.71), 2.327 (2.48), 2.332 (2.11), 2.342 (16.00), 2.518 (7.25), 2.523 (5.03), 2.660 (0.73), 2.665 (1.64), 2.669 (2.30), 2.673 (1.60), 2.679 (0.73), 2.825 (1.60), 2.842 (3.43), 2.859 (1.86), 3.306 (0.95), 3.399 (2.77), 3.415 (2.44), 3.421 (2.59), 3.429 (2.84), 3.563 (0.87), 3.572 (1.02), 3.592 (1.71), 3.601 (1.68), 3.638 (3.46), 3.665 (4.15), 3.695 (1.17), 3.869 (0.77),3.878 (0.77), 3.886 (0.95), 3.894 (0.87), 3.903 (0.62), 3.911 (0.58), 4.120 (1.13), 4.137 (1.06), 4.147 (1.53),4.163 (1.31), 4.252 (1.46), 4.261 (1.53), 4.278 (1.09), 4.287 (0.98), 6.193 (1.82), 6.197 (1.75), 6.212 (1.93),6.216 (1.82), 6.703 (0.98), 6.707 (1.28), 6.723 (3.50), 6.727 (2.81), 6.736 (2.59), 6.756 (2.51), 6.775 (0.84),7.162 (2.22), 7.228 (3.64), 7.241 (3.64), 7.321 (4.48), 8.002 (4.30), 8.014 (4.01), 8.372 (5.94), 11.046 (2.48).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.80 мин; МС (ESI положит.): m/z = 497 [M+H]+.

Пример 46.

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-[3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]-4-пиридил]-1,5,6,7тетрагидропирроло^^-^пиридинЛ-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 44. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 45) приводило к получению 12.6 мг указанного в заголовке соединения (R_t = 14.5 - 19.0 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 45): R_t = 4.43 мин.

Оптическое вращение: [a]_D = - 26.44° +/- 1.41° (c = 2,9 мг/мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 0.748 (0.44), 0.764 (0.44), 1.053 (0.52), 1.070 (14.81), 1.154 (1.45), 1.239 (13.86), 2.085 (1.85), 2.318 (0.46), 2.323 (0.99), 2.327 (1.45), 2.332 (1.39), 2.342 (16.00), 2.518 (4.03), 2.523 (2.82), 2.540 (0.54), 2.665 (0.89), 2.669 (1.25), 2.673 (0.85), 2.825 (1.61), 2.843 (3.39), 2.859 (1.81), 3.399 (2.78), 3.415 (2.48), 3.421 (2.64), 3.429 (2.88), 3.563 (0.83), 3.572 (0.99), 3.593 (1.69),3.601 (1.67), 3.638 (3.49), 3.665 (4.15), 3.695 (1.15), 3.869 (0.83), 3.878 (0.77), 3.886 (0.95), 3.895 (0.89),3.903 (0.64), 3.912 (0.58), 4.120 (1.09), 4.137 (1.03), 4.147 (1.53), 4.163 (1.33), 4.252 (1.45), 4.261 (1.51),4.278 (1.09), 4.287 (0.97), 6.193 (1.77), 6.197 (1.75), 6.212 (1.97), 6.216 (1.85), 6.703 (0.95), 6.707 (1.27),6.723 (3.51), 6.727 (2.82), 6.736 (2.58), 6.756 (2.54), 6.775 (0.85), 7.162 (2.26), 7.228 (3.10), 7.241 (3.12),7.321 (4.45), 8.002 (2.54), 8.015 (2.36), 8.372 (3.89), 11.046 (2.46).

- 95 046642

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.80 мин; МС (ESI положит.): m/z = 497 [M+H]+.

Пример 47.

2-[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]-3-(3-фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7тетрагидропирроло [3,2-с]пиридин-4-он

По аналогии с примером 1 4-[[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]метиламино]-М-(3-фтор-2метилфенил)-6-оксо-2,3-дигидро-Ш-пиридин-5-карботиоамид (промежуточное соединение 6-47, 399 мг, 820 мкмоль) использовали для получения после перемешивания в течение ночи при 60°C и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 9, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B) 135 мг (чистота 97%, выход 35%) указанного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ [м.д.]: 1.154 (4.20), 1.172 (8.22), 1.189 (3.94), 1.987 (16.00),2.185 (2.36), 2.189 (2.36), 2.518 (0.75), 2.522 (0.47), 2.843 (0.44), 2.860 (0.94), 2.877 (0.50), 3.398 (0.42),3.425 (1.01), 3.451 (0.56), 3.709 (0.44), 3.740 (0.57), 3.999 (1.26), 4.017 (3.61), 4.035 (3.57), 4.053 (1.15),4.125 (0.48), 4.230 (0.43), 4.239 (0.42), 5.758 (0.88), 6.052 (0.58), 6.072 (0.60), 6.459 (0.48), 7.186 (0.59),7.234 (1.00), 7.247 (1.01), 7.345 (1.17), 7.990 (1.32), 8.002 (1.20), 8.361 (1.76), 11.030 (0.60).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.65 мин; МС (ESI положит.): m/z = 453 [M+H]+.

Пример 48.

2-[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]-3-(3-фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7тетрагидропирроло^Д-^пиридинЛ-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 47 соединение (15.0 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 3.0 мг, R_t = 5.5 - 6.2 мин) и энантиомера 2 (2.0 мг, R_t = 9.0 - 9.9 мин, см. пример 49).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ: MTBE

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: YMC Cellulose SB 5 мк, 250x30; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: ацетонитрил; изократический режим: 55% В+45% А; поток: 80 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ: MTBE

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: YMC Cellulose SB 3 мк, 100x4.6; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.2 об.% диэтиламина; элюент B: ацетонитрил; изократический режим: 50% A + 50% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 280 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 2.90 мин.

Оптическое вращение: [a]D = - 19.1° +/- 1.65° (c = 2,19 мг/мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6): δ [м.д.] = -0.008 (0.55), 0.000 (16.00), 0.008 (0.53), 0.700 (0.57), 0.752 (0.76), 0.770 (0.76), 1.140 (1.18), 1.160 (2.36), 1.234 (1.64), 1.296 (0.42), 2.189 (11.55), 2.191 (11.53), 2.521 (2.85), 2.525 (1.90), 2.846 (2.15), 2.863 (4.59), 2.880 (2.42), 3.401 (1.96), 3.410 (1.71), 3.417 (1.88), 3.428 (4.95), 3.444 (1.64), 3.454 (2.68), 3.505 (0.67), 3.510 (0.82), 3.532 (1.56), 3.539 (1.58), 3.560 (1.14),3.569 (1.03), 3.712 (2.13), 3.721 (1.35), 3.743 (2.76), 3.750 (1.24), 3.771 (1.14), 3.778 (0.84), 3.800 (1.69),3.806 (1.85), 3.829 (1.52), 3.835 (1.54), 3.885 (1.66), 3.912 (1.22), 3.992 (0.42), 4.001 (0.68), 4.008 (1.01),4.017 (1.14), 4.025 (1.10), 4.033 (0.93), 4.042 (0.78), 4.049 (0.53), 4.103 (1.71), 4.119 (1.24), 4.129 (2.26),4.145 (1.73), 4.233 (2.09), 4.243 (2.05), 4.259 (1.54), 4.269 (1.33), 6.056 (2.82), 6.076 (2.91), 6.440 (1.29),6.463 (2.36), 6.484 (1.46), 6.734 (0.89), 6.754 (1.85), 6.771 (1.77), 6.792 (0.72), 7.187 (2.91), 7.237 (3.80),7.250 (3.82), 7.348 (5.65), 7.994 (2.64), 8.006 (2.47), 8.365 (4.17), 11.029 (3.12).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.66 мин; МС (ESI положит.): m/z = 453 [M+H]+.

Пример 49.

2-[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]-3-(3-фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7- 96 046642 тетрагидропирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 47. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 48) приводило к получению 2.0 мг указанного в заголовке соединения (Rt = 9.0 - 9.9 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 48): Rt = 4.67 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 24.3° +/- 7.66° (c = 1,29 мг/мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: -0.008 (0.54), 0.000 (16.00), 0.008 (0.54), 0.700 (0.74), 0.752 (0.54), 0.771 (0.57), 0.854 (0.52), 1.139 (0.91), 1.160 (1.70), 1.234 (2.19), 1.296 (0.52), 2.087 (0.66), 2.189 (11.26), 2.191 (11.28), 2.521 (4.55), 2.525 (3.00), 2.846 (2.09), 2.863 (4.47), 2.880 (2.36), 3.401 (1.99), 3.410 (1.67), 3.417 (1.87), 3.428 (4.87), 3.444 (1.65),3.454 (1.55), 3.560 (1.13), 3.569 (1.03), 3.712 (2.09),3.721 (0.81), 3.800 (1.67), 3.806 (1.77), 3.829 (1.50),3.835 (0.66), 4.009 (0.98), 4.017 (1.11), 4.025 (1.08),4.033 (1.20), 4.129 (2.19), 4.145 (1.72), 4.233 (2.04),4.243 (2.85), 6.440 (1.25), 6.463 (2.31), 6.484 (1.45),6.734 (2.65), 3.505 (0.69), 3.510 (0.84), 3.532 (1.52),3.539 (1.35), 3.744 (2.70), 3.750 (1.23), 3.771 (1.16),3.778 (1.52), 3.885 (1.62), 3.912 (1.20), 3.992 (0.42),4.001 (0.91), 4.042 (0.76), 4.049 (0.54), 4.103 (1.70),4.119 (2.04), 4.259 (1.52), 4.269 (1.33), 6.055 (2.75),6.076 (0.86), 6.754 (1.79), 6.772 (1.72), 6.792 (0.74),7.187 (2.83), 7.237 (3.37), 7.250 (3.42), 7.349 (5.43), 7.994 (2.24), 8.007 (2.14), 8.365 (3.56), 11.030 (3.02).

Пример 50.

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[ДО)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 1, с №(3-хлор-2-метилфенил)-4-[[3-(1,4диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]метиламино]-6-оксо-2,3-дигидро-Ш-пиридин-5-карботиоамидом (промежуточное соединение 6-50, 150 мг, 298 мкмоль) в качестве исходного вещества, 35.0 мг (выход 25%) указанного в заголовке рацемического соединения получали после препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-6.00 мин 15-55% B).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.71 мин; МС (ESI положит.): m/z = 469 [M+H]⁺.

Рацемический 3 -(3 -хлор-2-метиланилино)-2-[3 -(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил] -1,5,6,7тетрагидропирроло^Д-^пиридин^-он (35.0 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 12.5 мг, Rt = 14.3 16.6 мин) и энантиомера 2 (13.4 мг, Rt = 21.1 - 25.3 мин, см. пример 51).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ: MTBE

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: YMC Cellulose SB 5 мк, 250x30; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол; градиент; поток: 40 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ: MTBE

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: YMC Cellulose SB 3 мк, 100x4.6; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол; градиент; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 3.23 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -20.5° +/- 1.23° (c = 2,7 мг/мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 1.234 (0.41), 2.338 (0.44), 2.355 (16.00), 2.520 (2.76), 2.524 (1.87), 2.847 (1.60), 2.864 (3.40), 2.882 (1.80), 3.398 (1.50), 3.410 (1.20), 3.416 (1.35), 3.427 (3.93), 3.432 (2.41), 3.444 (1.16), 3.451 (2.30), 3.502 (0.46), 3.508 (0.60), 3.530 (1.13), 3.537 (1.16), 3.558 (0.85),3.566 (0.78), 3.711 (1.87), 3.718 (1.04), 3.740 (2.36), 3.768 (0.89), 3.775 (0.60), 3.796 (1.27), 3.802 (1.36),3.825 (1.15), 3.831 (1.16), 3.883 (1.23), 3.909 (0.88), 3.994 (0.48), 4.001 (0.77), 4.009 (0.80), 4.018 (0.79),4.025

- 97 046642 (0.69), 4.033 (0.55), 4.104 (1.32), 4.120 (0.96), 4.130 (1.76), 4.146 (1.34), 4.223 (1.59), 4.232 (1.56),4.249 (1.15), 4.258 (1.00), 6.190 (1.73), 6.194 (1.69), 6.210 (2.01), 6.213 (1.79), 6.718 (0.97), 6.722 (1.27),6.738 (3.59), 6.742 (2.81), 6.751 (2.54), 6.771 (2.47), 6.790 (0.80), 7.184 (2.17), 7.234 (3.49), 7.247 (3.51),7.364 (4.36), 7.999 (3.35), 8.012 (3.08), 8.365 (4.78), 11.044 (2.32).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.70 мин; МС (ESI положит.): m/z = 469 [M+H]+.

Энантиоселективный синтез исходя из 1-(3-{|(2S)-1,4-диоксан-2-ил|метокси}11иридин-4ил)метанамина (промежуточное соединение 2-8) подтвердил, что указанное в заголовке соединение представляет собой 3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[ДО)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он.

Пример 51.

-(3 -хлор-2-метиланилино)-2-(3 - {[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-он

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 50. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 50) приводило к получению 13.4 мг указанного в заголовке соединения (Rt = 21.1 - 25.3 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 50): Rt = 5.22 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 20.4° +/- 1.23° (с = 2,69 мг/мл в хлороформе).

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 1.173 (0.44), 1.234 (0.51), 2.355 (16.00), 2.521 (2.29), 2.525 (1.50), 2.848 (1.58), 2.865 (3.44), 2.882 (1.83), 3.346 (0.44), 3.399 (1.49), 3.410 (1.19), 3.416 (1.34), 3.428 (3.98), 3.432 (2.45), 3.444 (1.19), 3.452 (2.35), 3.503 (0.46), 3.508 (0.62), 3.531 (1.13), 3.538 (1.20),3.558 (0.84), 3.567 (0.81), 3.711 (1.90), 3.718 (1.09), 3.740 (2.39), 3.768 (0.88), 3.775 (0.62), 3.797 (1.26),3.803 (1.39), 3.825 (1.14), 3.832 (1.17), 3.883 (1.25), 3.910 (0.90), 3.995 (0.49), 4.001 (0.76), 4.010 (0.82),4.018 (0.79), 4.026 (0.71), 4.035 (0.56), 4.042 (0.40), 4.104 (1.30), 4.121 (0.95), 4.130 (1.77), 4.147 (1.36),4.224 (1.60), 4.233 (1.58), 4.250 (1.15), 4.259 (0.99), 6.191 (1.74), 6.195 (1.73), 6.210 (1.96), 6.214 (1.81),6.719 (0.94), 6.723 (1.27), 6.738 (3.57), 6.743 (2.82), 6.752 (2.56), 6.771 (2.49), 6.791 (0.81), 7.185 (2.19),7.235 (3.09), 7.248 (3.12), 7.365 (4.33), 8.000 (2.48), 8.013 (2.34), 8.366 (3.75), 11.045 (2.33).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.70 мин; МС (ESI положит.): m/z = 469 [M+H]⁺.

Пример 52.

-(3 -хлор-2-этиланилино)-2-[3 -(1,4-диоксан-2-илметокси)-4-пиридил]-1,5,6,7тетрагидропирроло [3,2-с]пиридин-4-он

По аналогии с примером 1, №(3-хлор-2-этилфенил)-4-[[3-(1,4-диоксан-2-илметокси)-4пиридил]метиламино]-6-оксо-2,3-дигидро-1Н-пиридин-5-карботиоамид (промежуточное соединение 652, 150 мг, 290 мкмоль) использовали для получения после перемешивания в течение 4 ч при 60°C и очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 10% B, 0.50-8.06 мин 10-20% B, 8.06-9.02 мин 20% B, 9.02-24.12 мин 20-50% B, 24.12-27.44 мин 50% B) 23.2 мг (чистота 95%, выход 16%) указанного в заголовке соединения.

‘И-ЯМР (400 МГц, ДМСОЧ): δ м.д.= 1.23 (t, 3H), 2.86 (s, 4H), 3.38 - 3.46 (m, 4H), 3.49 - 3.58 (m, 1H), 3.68 - 3.78 (m, 2H), 3.78 - 3.85 (m, 1И), 3.86 - 3.92 (m, 1H), 3.98 - 4.06 (m, 1И), 4.09 - 4.17 (m, 1И), 4.21 - 4.28 (m, 1H), 6.22 (dd, 1H), 6.67 - 6.78 (m, 2H), 7.20 (d, 2H), 7.45 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 8.32 - 8.39 (m, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R, = 1.08 мин; МС (ESI положит.): m/z = 483 [M+H]⁺.

Пример 53.

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[ДО)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4H-пирроло [3,2-с]пиридин-4-он

- 98 046642

Указанное в заголовке примера 52 соединение (23.2 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (энантиомер 1, 6.0 мг, Rt = 6.6 - 7.-3 мин) и энантиомера 2 (5.0 мг, Rt = 10.7 - 11.6 мин, см. пример 54).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ: MTBE

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: YMC Cellulose SB 5 мк, 250x30; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: ацетонитрил; изократический режим: 50% A + 50% B; поток: 60 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ: MTBE

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: YMC Cellulose SB 3 мк, 100x4.6; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: ацетонитрил; изократический режим: 50% A + 50% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 2.40 мин.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ [м.д.] = 1.23 (t, 3H), 2.81 - 2.91 (m, 4H), 3.40 -3.45 (m, 3H), 3.53 (dt, 1H), 3.69 - 3.79 (m, 2H), 3.79 - 3.85 (m, 1H), 3.86 - 3.93 (m, 1H), 3.99 - 4.06 (m, 1H), 4.12 (dd, 1H), 4.24 (dd, 1H), 6.23 (dd, 1H), 6.69 - 6.78 (m, 2H), 7.15 - 7.23 (m, 2H), 7.43 - 7.47 (m, 1H), 7.98 (d, 1H) 8.36 (s, 1H), 11.03 (br s, 1H).

Энантиоселективный синтез подтвердил, что указанное в заголовке соединение представляет собой 3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(2S)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Hпирроло[3,2-с]пиридин-4-он. По аналогии с примером 1, указанное в заголовке соединение (25 мг, выход 7.6%) получали, используя №(3-хлор-2-этилфенил)-4-{[(3-{[ДО)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамид (промежуточное соединение 6-53, 320 мг, 0.62 ммоль) в качестве исходного вещества с последующей очисткой с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 5% B, 0.50-7.99 мин 5-60% B, 7.99-11.20 мин 60% B).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 11.03 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.98 (d, 1H), 7.43 - 7.49 (m, 1H), 7.15 - 7.24 (m, 2H), 6.68 - 6.80 (m, 2H), 6.14 - 6.28 (m, 1H), 4.21 - 4.33 (m, 1H), 4.10 - 4.17 (m, 1H), 4.00 4.05 (m, 1H), 3.70 - 3.92 (m, 4H), 3.51 - 3.59 (m, 1H), 3.39 - 3.47 (m, 3H), 2.81 - 2.90 (m, 4H), 1.23 (t, 3H).

Пример 54.

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 52. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 53) приводило к получению 5.0 мг указанного в заголовке соединения (Rt = 10.7 - 11.6 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 53): Rt = 3.22 мин.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСОЧ): δ [м.д.] = 1.14 - 1.34 (m, 6H), 2.81 - 2.91 (m, 4H), 3.38 - 3.48 (m, 3H), 3.55 (dd, 1H), 3.69 - 3.85 (m, 3H), 3.85 - 3.93 (m, 1H), 3.99 - 4.06 (m, 1H), 4.09 - 4.17 (m, 1H), 4.25 (dd, 1H), 6.23 (dd, 1H), 6.69 - 6.79 (m, 2H), 7.14 - 7.23 (m, 2H), 7.39 - 7.49 (m, 1H), 7.91 - 8.04 (m, 1H), 8.31 - 8.40 (m, 1H), 10.97 - 11.12 (m, 1H).

- 99 046642

Пример 55.

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(2R)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 41, с 3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3 {[(2R)-морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-оном (промежуточное соединение 55, 58.0 мг, 120 мкмоль) в качестве исходного вещества, 27.5 мг (чистота 95%, выход 44%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 30% B, 0.50 - 7.00 мин 30 - 70% B).

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-de): δ [м.д.] = 1.23 (t, 3H), 1.90 (t, 1H), 1.99 - 2.09 (td, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.63 - 2.71 (d, 1H), 2.73 - 2.78 (d, 1H), 2.78 - 2.89 (m, 4H), 3.40 - 3.47 (td, 2H), 3.67 (td, 1H), 3.92 - 3.98 (m, 2H), 4.14 (dd, 1H), 4.27 (dd, 1H), 6.23 (dd, 1H), 6.71 - 6.78 (m, 2H), 7.16 - 7.21 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.97 (d, 1H), 8.36 (s, 1H), 11.04 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): Rt = 1.10 мин; МС (ESI положит.): m/z = 496 [M+H]+.

Пример 56.

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[^)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 41, с 3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[^)морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-оном (промежуточное соединение 56, 68.0 мг, 141 мкмоль) в качестве исходного вещества, 37.8 мг (чистота 95%, выход 51%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00 - 0.50 мин 30% B, 0.50 - 7.00 мин 30 - 70% B).

Ή-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06): δ [м.д.] = 1.23 (t, 3H), 1.90 (t, 1H), 2.00 - 2.08 (td, 1H), 2.21 (s, 3H), 2.63 - 2.72 (d, 1H), 2.72 - 2.81 (d, 1H), 2.81 - 2.90 (m, 4H), 3.44 (td, 2H), 3.67 (td, 1H), 3.91 - 3.99 (m, 2H), 4.13 (dd, 1H), 4.29 (dd, 1H), 6.23 (dd, 1H), 6.71 - 6.78 (m, 2H), 7.16 - 7.21 (m, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.97 (d, 1H), 8.36 (s, 1H), 11.04 (s, 1H).

ЖХ-МС (метод 2): R_t = 1.10 мин; МС (ESI положит.): m/z = 496 [M+H]+.

Пример 57.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(^)-1-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

В микроволновой печи раствор

N-(3 -хлор-2-метоксифенил)-4-([{ 3-[(1S)-1-(1,4-диоксан-2 ил)этокси]пиридин-4-ил}метил)амино]-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамида (промежуточное соединение 6-57, 380 мг, 713 мкмоль) в метаноле (1.5 мл) обрабатывали ТФУ (55 мкл, 710 мкмоль) с последующей обработкой пероксидом водорода (9.2 мкл, 0.106 ммоль), нагревали до 60°C и

- 100 046642 перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь концентрировали досуха при пониженном давлении, растворяли в ДМСО и очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-5.00 мин 15-50% B, 5.00-8.00 мин 50% B) с получением после сушки вымораживанием целевого продукта (174 мг, выход 44%) в виде смеси двух стереоизомеров.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-0б): δ [м.д.] = 1.176 (0.47), 1.192 (0.46), 1.245 (3.61), 1.261 (3.63), 1.326 (5.41), 1.342 (5.34), 2.074 (0.90), 2.518 (2.00), 2.523 (1.30), 2.832 (0.58), 2.853 (1.78), 2.871 (2.29), 2.889 (1.20), 3.374 (0.58), 3.402 (1.93), 3.412 (1.77), 3.419 (2.47), 3.427 (2.74), 3.435 (1.67), 3.442 (1.31),3.455 (1.30), 3.464 (0.88), 3.485 (1.04), 3.493 (0.81), 3.500 (0.81), 3.522 (0.58), 3.614 (0.42), 3.643 (1.28),3.650 (1.69), 3.669 (0.97), 3.699 (1.00), 3.725 (1.81), 3.734 (0.89), 3.748 (1.07), 3.754 (0.91), 3.768 (0.44),3.777 (0.54), 3.783 (0.42), 3.806 (1.65), 3.813 (2.16), 3.823 (1.17), 3.836 (1.62), 3.843 (1.75), 3.850 (1.00),3.863 (9.50), 3.890 (16.00), 3.919 (0.92), 3.948 (0.61), 4.068 (2.33), 4.626 (0.70), 4.630 (0.86), 4.643 (1.15),4.653 (0.66), 4.658 (0.86), 6.133 (0.95), 6.143 (2.18), 6.148 (0.96), 6.151 (1.32), 6.158 (1.98), 6.167 (1.48),6.638 (1.70), 6.643 (2.02), 6.653 (3.46), 6.678 (0.58), 6.690 (6.05), 6.699 (2.71), 6.706 (2.31), 7.122 (0.98),7.161 (1.50), 7.264 (0.72), 7.285 (0.52), 7.294 (1.80), 7.299 (2.64), 7.307 (1.85), 7.312 (2.64), 7.440 (2.17),7.519 (3.36), 7.631 (0.44), 7.998 (3.33), 8.011 (3.08), 8.031 (2.20), 8.044 (1.98), 8.396 (4.10), 8.411 (2.66), 11.072 (1.20), 11.085 (1.69).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.72 мин; МС (ESI положит.): m/z = 499 [M+H]+.

Пример 58.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(^)-1-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

сн₃

Указанное в заголовке примера 57 соединение (170 мг) разделяли на стереоизомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (стереоизомер 1, 58 мг, Rt = 16.2-18.8 мин) и стереоизомера 2 (35 мг, Rt = 19.3-21.6 мин, см. пример 60).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: YMC Cellulose SC 5 мк, 250x30; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол + 0.1 об.% диэтиламина; градиент: 0-15 мин 20-30% B; поток: 40 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: YMC Cellulose SC 3 мк, 100x4.6; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 5.19 мин.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 1.157 (0.42), 1.326 (5.83), 1.342 (5.94), 2.518 (2.45), 2.523 (1.64), 2.854 (1.00), 2.872 (2.23), 2.889 (1.30), 3.159 (0.76), 3.172 (0.81), 3.403 (0.88), 3.409 (0.98), 3.420 (1.66), 3.427 (1.98), 3.435 (0.89), 3.456 (1.40), 3.469 (0.49), 3.485 (1.09), 3.493 (0.89), 3.500 (0.89),3.522 (0.63), 3.530 (0.42), 3.699 (1.04), 3.725 (1.77), 3.748 (1.00), 3.755 (0.79), 3.777 (0.55), 3.783 (0.42),3.806 (1.16), 3.812 (1.76), 3.824 (0.88), 3.836 (1.39), 3.843 (1.20), 3.850 (0.51), 3.890 (16.00), 3.919 (1.02), 3.948 (0.70), 4.631 (0.81), 4.646 (0.95), 4.659 (0.80), 6.143 (1.46), 6.151 (1.29), 6.159 (1.42), 6.167 (1.47),6.679 (0.61), 6.691 (6.25), 6.699 (2.81), 6.706 (2.43), 6.727 (0.42), 7.159 (1.65), 7.298 (2.69), 7.311 (2.69),7.518 (3.71), 7.998 (3.52), 8.010 (3.22), 8.395 (4.49), 11.084 (1.82).

Оптическое вращение: [a]D = 30.21° +/- 0.60° (c = 1.0 г/100 мл хлороформ).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.72 мин; МС (ESI положит.): m/z = 499 [M+H]⁺.

- 101 046642

Пример 59.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(^)-1-(1,4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Указанное в заголовке примера 57 соединение (170 мг) разделяли на стереоизомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения стереоизомера 2 (35 мг, R_t = 19.3-21.6 мин, метод разделения см. пример 58).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 5.91 мин.

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 0.798 (0.48), 0.815 (0.56), 0.822 (0.55), 0.905 (0.48), (0.46), 1.137 (0.84), 1.156 (0.69), 1.233 (1.00), 1.246 (6.21), 1.261 (6.32), 2.084 (0.60), 2.332 (0.57), (3.49), 2.522 (2.23), 2.673 (0.60), 2.833 (1.01), 2.850 (2.05), 2.867 (1.22), 3.308 (0.48), 3.373 (0.98), (2.29), 3.412 (2.05), 3.418 (2.16), 3.427 (2.02), 3.435 (1.84),3.442 (0.62), 3.643 (2.17), 3.670 (1.14), 3.726 (0.62), 3.732 (0.73),3.738 (0.63), 3.762 (0.57), 3.768 (0.57), 3.805 (1.25), 3.815 (1.51),3.821 (1.08), 3.863 (16.00), 3.889 (0.74), 4.625 (0.83), 4.637 (0.87),4.641 (1.44), 6.147 (1.32), 6.157 (1.50), 6.639 (2.71), 6.643 (3.20),6.653

1.084

2.518

3.402

3.614

3.757

3.850

6.143

7.294 (1.19), 3.465 (0.79), 3.607 (0.46), (0.65), 3.744 (0.72), 3.751 (0.57), (1.12), 3.834 (1.01), 3.844 (1.36), (0.90), 4.653 (0.81), 6.133 (1.40), (5.57), 6.663 (0.45), 7.120 (1.71), (2.55), 7.307 (2.61), 7.438 (3.73), 8.031 (2.89), 8.043 (2.69), 8.411 (4.05), 11.071 (1.88).

Оптическое вращение: [a]D = 19.87° +/- 0.91° (c = 1.0 г/100 мл хлороформ).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.72 мин; МС (ESI положит.): m/z = 499 [M+H]⁺.

Пример 60.

Используя метод, аналогичный описанному для примера 57, с №(3-хлор-2-метоксифенил)-4-{[(3 {(^)-1-[1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3карботиоамидом (промежуточное соединение 6-60, 340 мг, 638 мкмоль) в качестве исходного вещества, 76.0 мг (чистота 99%, выход 24%) указанного в заголовке соединения (стереоизомер 1, R_t = 18.7-22.0 мин) получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (метод 10, градиент: 0.00-0.50 мин 15% B, 0.50-5.00 мин 15-50% B, 5.00-8.00 мин 50% B) с последующей хиральной преп. ВЭЖХ. Дополнительно выделяли 7 мг стереоизомера 2 (пример 61) (R_t = 16.5-17.9 мин).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: YMC Cellulose SB 5 мк, 250x30; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол + 0.1 об.% диэтиламина; изократический режим: 80% A + 20% B; поток: 60 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: YMC Cellulose SB 3 мк, 100x4.6; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: этанол; изократический режим: 80% A + 20% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 6.96 мин.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-а₆): δ [м.д.] = 1.245 (5.93), 1.261 (5.97), 2.518 (0.96), 2.522 (0.61), 2.833 (0.89), 2.850 (1.81), 2.868 (1.07), 3.374 (0.88), 3.398 (1.92), 3.402 (2.05), 3.412 (1.84), 3.418 (1.88), 3.427 (1.81), 3.435 (1.62), 3.442 (1.07), 3.465 (0.71), 3.608 (0.45), 3.614 (0.62), 3.643 (2.07), 3.669 (1.04),3.726 (0.57), 3.733 (0.70), 3.736 (0.65), 3.744 (0.69), 3.751 (0.53), 3.757 (0.58), 3.762 (0.53), 3.768 (0.55),3.805 (1.12), 3.815 (1.32), 3.821 (0.99), 3.834 (0.89), 3.844 (1.24), 3.850 (0.97), 3.864 (16.00), 3.890 (0.81),4.068

- 102 046642 (0.46), 4.626 (0.76), 4.637 (0.80), 4.641 (0.83), 4.653 (0.76), 6.133 (1.41), 6.143 (1.51), 6.148 (1.26), 6.158 (1.48), 6.638 (2.78), 6.643 (3.34), 6.653 (5.70), 6.663 (0.46), 7.122 (1.57), 7.294 (2.67), 7.307 (2.70), 7.440 (3.53), 8.031 (3.75), 8.044 (3.34), 8.411 (4.42), 11.072 (1.72).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.72 мин; МС (ESI положит.): m/z = 499 [M+H]+.

Пример 61.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{(^)-1-[(1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке соединения в виде смеси двух диастереомеров см. пример 60. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 60) приводило к получению 7.0 мг указанного в заголовке соединения (R_t = 9.4 - 10.8 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 60): R_t = 6.10 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -3.38° +/- 0.78° (c = 3,7 мг/мл, хлороформ).

Пример 62.

3-(3-фтор-2-метиланилино)-2-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

К раствору N-(3 -фтор-2-метилфенил)-4- {[(3-{ [4-метилморфолин-2-ил]метокси} пиридин-4ил)метил]амино}-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3-карботиоамида (промежуточное соединение 6-62, 110 мг, 220 мкмоль) в уксусной кислоте (1.1 мл) добавляли водный раствор пероксида водорода (45 мкл, чистота 30%, 440 мкМ), и смесь нагревали при 80°C в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили с помощью насыщенного раствора тиосульфата натрия и значение pH доводили до 7 путем добавления 4М водного раствора гидроксида натрия. После добавления ДХМ смесь перемешивали в течение 15 мин при КТ. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью ДХМ. Объединенные органические слои сушили с помощью гидрофобной фильтровальной бумаги и концентрировали при пониженном давлении. Смесь очищали с помощью преп. ВЭЖХ (метод 10) с получением 28 мг (чистота 97%, выход 26%) ука занного в заголовке соединения.

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 1.877 (1.11), 1.904 (1.76), 1.931 (1.15), 2.007 (0.48), 2.016 (0.62), 2.036 (1.18), 2.044 (1.14), 2.064 (0.65), 2.074 (0.91), 2.188 (9.04), 2.191 (9.20), 2.204 (16.00), 2.326 (0.50), 2.518 (1.93), 2.522 (1.23), 2.647 (1.09), 2.669 (1.06), 2.673 (1.34), 2.743 (1.21), 2.770 (1.13), 2.844 (1.64), 2.861 (3.54), 2.878 (1.85), 3.410 (1.18), 3.415 (1.29), 3.426 (2.35), 3.432 (2.33), 3.443 (1.13),3.449 (1.04), 3.642 (0.55), 3.648 (0.70), 3.670 (1.28), 3.675 (1.30), 3.698 (0.76), 3.703 (0.63), 3.935 (1.65),3.942 (1.53), 3.951 (0.92), 3.962 (1.44), 3.967 (1.29), 4.109 (1.20), 4.126 (1.08), 4.135 (1.56), 4.151 (1.27),4.276 (1.43), 4.285 (1.48), 4.301 (1.18), 4.310 (1.07), 6.056 (2.20), 6.076 (2.25), 6.442 (1.00), 6.464 (1.83),6.486 (1.13), 6.735 (0.68), 6.755 (1.42), 6.772 (1.36), 6.793 (0.57), 7.188 (2.26), 7.230 (3.88), 7.242 (3.85),7.346 (4.43), 7.979 (5.07), 7.991 (4.58), 8.368 (6.78), 11.029 (2.41).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.46 мин; МС (ESI положит.): m/z = 466 [M+H]+.

Пример 63.

3-(3-фтор-2-метиланилино)-2-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

- 103 046642

Указанное в заголовке примера 62 соединение (21 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (стереоизомер 1, 7.0 мг, R_t = 7.1-8.1 мин) и стереоизомера 2 (9.0 мг, R_t = 9.4 - 10.8 мин, см. пример 64).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 2.60 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 21.60° +/- 1.04° (c = 1.0 г/100 мл хлороформ).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 1.232 (0.89), 1.877 (1.15), 1.904 (1.74), 1.931 (1.14), 2.008 (0.48), 2.016 (0.62), 2.036 (1.17), 2.044 (1.15), 2.064 (0.65), 2.073 (0.56), 2.188 (9.17), 2.191 (9.34), 2.204 (16.00), 2.322 (0.45), 2.327 (0.62), 2.332 (0.45), 2.518 (2.49), 2.523 (1.54), 2.646 (1.12), 2.669 (1.21), 2.673 (1.46), 2.743 (1.23), 2.770 (1.15), 2.844 (1.60), 2.861 (3.42), 2.878 (1.82), 3.410 (1.23), 3.415 (1.32), 3.426 (2.40), 3.432 (2.38), 3.444 (1.15), 3.449 (1.07), 3.641 (0.56), 3.648 (0.70), 3.670 (1.28), 3.675 (1.31),3.698 (0.76), 3.703 (0.61), 3.935 (1.67), 3.942 (1.57), 3.951 (0.95), 3.962 (1.45), 4.109 (1.14), 4.126 (1.03),4.135 (1.51), 4.152 (1.21), 4.276 (1.39), 4.285 (1.43), 4.301 (1.14), 4.310 (1.03), 6.056 (2.16), 6.076 (2.23),6.442 (1.01), 6.464 (1.85), 6.486 (1.14), 6.735 (0.67), 6.755 (1.42), 6.772 (1.37), 6.793 (0.56), 7.188 (2.29),7.230 (3.04), 7.243 (3.00), 7.345 (4.40), 7.979 (3.05), 7.991 (2.83), 8.368 (4.67), 11.030 (2.40).

Пример 64.

3-(3-фтор-2-метиланилино)-2-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 63. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 63) приводило к получению 9.0 мг указанного в заголовке соединения (R_t = 9.4 - 10.8 мин).

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 63): R_t = 3.37 мин.

Оптическое вращение: [a]D = - 20.75° +/- 1.29° (c = 1.0 г/ 100 мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66): δ [м.д.] = 1.232 (0.99), 1.877 (1.12), 1.904 (1.80), 1.931 (1.15), 2.008 (0.49), 2.016 (0.64), 2.036 (1.17), 2.044 (1.15), 2.065 (0.66), 2.073 (0.57), 2.188 (9.36), 2.191 (9.48), 2.204 (16.00), 2.323 (0.47), 2.327 (0.62), 2.332 (0.47), 2.518 (2.39), 2.522 (1.44), 2.647 (1.15), 2.669 (1.24), 2.673 (1.48), 2.743 (1.24), 2.770 (1.16), 2.844 (1.63), 2.861 (3.47), 2.878 (1.82), 3.410 (1.27), 3.415 (1.36), 3.426 (2.43), 3.432 (2.39), 3.443 (1.17), 3.449 (1.07), 3.642 (0.56), 3.648 (0.70), 3.670 (1.30), 3.675 (1.30),3.698 (0.75), 3.703 (0.63), 3.935 (1.71), 3.942 (1.60), 3.962 (1.47), 4.109 (1.17), 4.126 (1.03), 4.135 (1.51),4.152 (1.22), 4.276 (1.40), 4.285 (1.45), 4.301 (1.13), 4.310 (1.03), 6.056 (2.19), 6.076 (2.26), 6.442 (1.05),6.464 (1.87), 6.486 (1.15), 6.735 (0.70), 6.755 (1.43), 6.772 (1.38), 6.793 (0.56), 7.188 (2.30), 7.230 (3.03),7.243

- 104 046642 (3.07), 7.346 (4.46), 7.979 (3.01), 7.992 (2.84), 8.368 (4.73), 11.030 (2.43).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.46 мин; МС (ESI положит.): m/z = 466 [M+H]+.

Пример 65.

2-(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Нпирроло [3,2-с]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 62, с 4-{[(3-{[1,4-диоксан-2ил] метокси}пиридин-4-ил)метил] амино } -N-(2-этил-3-фторфенил)-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3 карботиоамидом (промежуточное соединение 6-65, 215 мг, 429 мкмоль) в качестве исходного вещества, 76.0 мг (чистота 95%, выход 36%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (основная среда).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) дельта [м.д.]: 1.097 (0.45), 1.206 (6.70), 1.225 (16.00), 1.244 (6.93),

2.322 (0.88), 2.327 (1.21), 2.332 (0.88), 2.518 (4.46), 2.522 (2.73), 2.664 (1.18), 2.669 (1.70), 2.673 (2.02),

2.697 (3.88), 2.715 (3.73), 2.732 (1.31), 2.847 (3.66), 2.864 (7.84), 2.881 (4.11), 3.404 (3.38), 3.415 (2.84),

3.420 (3.17), 3.432 (8.74), 3.437 (5.90), 3.449 (2.86), 3.457 (4.93), 3.506 (1.16), 3.511 (1.46), 3.533 (2.58),

3.540 (2.78), 3.562 (2.02), 3.570 (1.77), 3.711 (3.25), 3.719 (1.53), 3.726 (2.41), 3.738 (2.86), 3.749 (3.64),

3.756 (2.33), 3.777 (2.11), 3.783 (1.59), 3.804 (2.97), 3.810 (3.25), 3.833 (2.65), 3.839 (2.67), 3.887 (2.80),

3.915 (2.07), 4.005 (0.73), 4.013 (1.16), 4.021 (1.72), 4.029 (1.94), 4.036 (1.90), 4.045 (1.57), 4.054 (1.36),

4.061 (0.97), 4.106 (3.19), 4.123 (2.20), 4.132 (4.05), 4.149 (3.10), 4.246 (3.66), 4.255 (3.60), 4.272 (2.73),

4.281 (2.45), 6.084 (4.91), 6.104 (5.10), 6.433 (2.28), 6.454 (4.07), 6.476 (2.61), 6.720 (1.92), 6.741 (3.81),

6.758 (3.70), 6.778 (1.62), 7.180 (5.15), 7.199 (8.92), 7.212 (8.89), 7.427 (9.02), 7.964 (12.58), 7.976 (11.33), 8.358 (15.85), 11.012 (5.43).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.70 мин; МС (ESI положит.): m/z = 467 [M+H]+.

Пример 66, пример 67.

2-(3-{ [(2R)-1,4-диоксан-2-ил] метокси}пиридин-4-ил)-3 -(2-этил-3 -фторанилино)-1,5,6,7 -тетрагидро4Н-пирроло [3,2-c] пиридин-4-он

2-(3-{[ДО)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2-c] пиридин-4-он

Пример 66.

2-(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Нпирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

Указанное в заголовке примера 65 соединение (74 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (стереоизомер 1, 30 мг, R_t= 4.5-5.3 мин) и стереоизомера 2 (31 мг, Rt = 5.3-6.2 мин, см. пример 67).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC; колонка: YMC Cellulose SB 10 мк, 250x50; элюент A: метилтрет-бутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: метанол; изократический режим: 90% A + 10% B; поток: 150 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: YMC Cellulose SB 3 мк, 100x4.6; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: метанол; изократический режим: 90% A + 10% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 4.41 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -21.9° +/- 0.60° (c = 1.0 г/100 мл хлороформ).

- 105 046642

1Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: 1.097 (0.44), 1.104 (0.61), 1.206 (6.68), 1.225 (16.00), 1.243 (7.03), 2.074 (3.21), 2.322 (1.00), 2.326 (1.39), 2.332 (1.01), 2.518 (6.14), 2.522 (3.75), 2.664 (1.33), 2.669 (1.92), 2.673 (2.17), 2.696 (3.92), 2.715 (3.83), 2.732 (1.29), 2.846 (3.62), 2.864 (7.78), 2.881 (4.15),3.404 (3.29), 3.414 (2.85), 3.420 (3.24), 3.431 (8.73), 3.437 (6.06), 3.448 (2.90), 3.457 (4.88), 3.505 (1.14),3.511 (1.37), 3.533 (2.57), 3.540 (2.76), 3.562 (1.97), 3.570 (1.73), 3.711 (3.19), 3.719 (1.56), 3.726 (2.37),3.738 (2.90), 3.749 (3.58), 3.755 (2.31), 3.777 (1.96), 3.783 (1.46), 3.804 (2.93), 3.810 (3.13), 3.833 (2.59),3.839 (2.71), 3.887 (2.80), 3.914 (2.06), 4.013 (1.15), 4.020 (1.68), 4.029 (1.97), 4.036 (1.90), 4.045 (1.59),4.053 (1.40), 4.060 (0.95), 4.106 (3.06), 4.122 (2.09), 4.132 (3.85), 4.148 (2.90), 4.245 (3.58), 4.255 (3.47),4.271 (2.68), 4.280 (2.36), 6.083 (4.88), 6.104 (5.09), 6.433 (2.24), 6.454 (4.08), 6.476 (2.56), 6.720 (1.80),6.741 (3.65), 6.758 (3.54), 6.778 (1.53), 7.179 (5.11), 7.199 (8.20), 7.211 (8.15), 7.426 (8.99), 7.963 (9.54),7.976 (8.80), 8.357 (13.39), 11.012 (5.48).

ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.70 мин; МС (ESI положит.): m/z = 467 [M+H]+.

Пример 67.

2-(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3 -фторанилино)-1 ^^Д-тетра^дро^^ пиРРОло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

F

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 65. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 66) приводило к получению 31 мг указанного в заголовке соединения.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 63): R_t = 4.49 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 22.51° +/- 0.86° (c = 1.0 г/ 100 мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: 1.104 (0.57), 1.164 (0.90), 1.206 (6.89), 1.225 (16.00), 1.244 (7.18), 2.322 (0.60), 2.326 (0.81), 2.332 (0.59), 2.518 (3.44), 2.522 (2.12), 2.665 (0.84), 2.669 (1.32), 2.677 (1.68), 2.696 (3.95), 2.715 (3.83), 2.732 (1.33), 2.847 (3.68), 2.864 (7.81), 2.881 (4.16), 3.404 (3.21),3.415 (2.88), 3.421 (3.23), 3.432 (8.92), 3.437 (6.02), 3.449 (2.91), 3.457 (4.87), 3.506 (1.11), 3.511 (1.37),3.533 (2.61), 3.540 (2.72), 3.562 (2.00), 3.570 (1.74), 3.712 (3.25), 3.719 (1.51), 3.726 (2.32), 3.738 (2.93),3.749 (3.59), 3.756 (2.31), 3.777 (1.96), 3.784 (1.44), 3.804 (2.94), 3.810 (3.18), 3.833 (2.64), 3.839 (2.70),3.887 (2.87), 3.915 (2.12), 4.005 (0.70), 4.014 (1.17), 4.020 (1.70), 4.029 (2.01), 4.037 (1.92), 4.045 (1.57),4.053 (1.42), 4.060 (0.95), 4.106 (3.05), 4.123 (2.12), 4.132 (3.86), 4.148 (2.88), 4.246 (3.51), 4.255 (3.49),4.271 (2.68), 4.281 (2.35), 6.084 (4.92), 6.105 (5.14), 6.433 (2.23), 6.454 (4.07), 6.476 (2.59), 6.720 (1.81),6.741 (3.64), 6.758 (3.58), 6.778 (1.55), 7.180 (5.16), 7.199 (7.86), 7.212 (7.80), 7.426 (9.02), 7.963 (7.86),7.976 (7.32), 8.358 (12.12), 11.012 (5.54).

Пример 68.

2-(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

F

Используя метод, аналогичный описанному для примера 62, с 4-{[(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2ил]метокси}пиридин-4-ил)метил]амино}-М-(2-этил-3-фторфенил)-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3карботиоамидом (промежуточное соединение 6-68, 350 мг, 662 мкмоль) в качестве исходного вещества, 82 мг (чистота 85%, выход 21%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (основная среда).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ [м.д.]: 1.051 (1.89), 1.073 (11.18), 1.171 (0.57), 1.182 (0.76),1.197 (3.04), 1.216 (5.73), 1.234 (3.31), 1.243 (10.52), 2.326 (0.46), 2.518 (1.69), 2.522 (1.07), 2.539 (16.00),2.669 (0.94), 2.673 (0.76), 2.688 (1.36), 2.706 (1.38), 2.828 (1.23), 2.845 (2.62), 2.862 (1.40), 3.412 (2.22),3.422 (1.93), 3.428 (1.91), 3.440 (2.37), 3.574 (0.81), 3.582 (0.90), 3.604 (1.34), 3.612 (1.29), 3.629 (0.40),3.646

- 106 046642 (2.91), 3.674 (3.37), 3.703 (0.90), 3.896 (0.52), 3.903 (0.59), 3.912 (0.74), 3.920 (0.70), 3.929 (0.49),3.938 (0.47), 4.129 (0.89), 4.146 (0.81), 4.155 (1.16), 4.172 (1.00), 4.284 (1.20), 4.292 (1.15), 4.310 (0.88),4.319 (0.81), 5.758 (2.21), 6.089 (1.68), 6.110 (1.75), 6.420 (0.77), 6.443 (1.38), 6.464 (0.88), 6.709 (0.64),6.729 (1.28), 6.746 (1.24), 6.767 (0.55), 7.165 (1.72), 7.200 (2.88), 7.213 (2.92), 7.249 (0.48), 7.369 (0.47),7.382 (0.67), 7.392 (2.91), 7.972 (3.81), 7.985 (3.48), 8.067 (0.61), 8.080 (0.54), 8.372 (5.10), 8.439 (0.78), 11.018 (1.92).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.79 мин; МС (ESI положит.): m/z = 495 [M+H]+.

Пример 69, пример 70.

2-(3-{[(2R)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7тетрагидро^Н-пирроло^Д-^пиридин^-он;

2-(3-{[(28)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторавилино)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он.

Пример 69.

2-(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 1)

F

Указанное в заголовке примера 68 соединение (32 мг) разделяли на энантиомеры с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ с получением указанного в заголовке соединения (стереоизомер 1, 13 мг, Rt = 36.8-46.0 мин) и стереоизомера 2 (10 мг, Rt = 21.9-26.4 мин., см. пример 70)

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC-4; колонка: Chiralcel OD-H 5 мк, 250x20; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: 2-пропанол; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 10 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Thermo Fisher UltiMate 3000; колонка: Chiralcel OD-H 5 мк, 100x4.6; элюент A: гексан + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: 2-пропанол; изократический режим: 70% A + 30% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 7.38 мин.

Оптическое вращение: [a]_D = -24.42° +/- 0.72° (c = 1.0 г/100 мл хлороформ).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ [м.д.]: 0.698 (1.11), 0.742 (0.61), 0.834 (0.47), 0.851 (0.63), 1.072 (16.00), 1.147 (1.48), 1.195 (4.00), 1.214 (8.27), 1.233 (6.80), 1.242 (15.37), 1.294 (0.70), 2.322 (0.63), 2.326 (0.85), 2.331 (0.63), 2.517 (3.89), 2.522 (2.40), 2.664 (1.17), 2.668 (1.54), 2.673 (1.19), 2.687 (1.95), 2.705 (1.86), 2.722 (0.66), 2.826 (1.78), 2.843 (3.74), 2.860 (2.02), 3.411 (3.06), 3.420 (2.79), 3.427 (2.73),3.440 (3.33), 3.573 (0.89), 3.581 (1.05), 3.603 (1.84), 3.611 (1.82), 3.646 (3.73), 3.674 (4.44), 3.703 (1.16),3.893 (0.70), 3.901 (0.84), 3.910 (1.06), 3.918 (0.98), 3.926 (0.71), 3.935 (0.66), 4.126 (1.20), 4.143 (1.14),4.152 (1.62), 4.169 (1.39), 4.281 (1.52), 4.290 (1.61), 4.307 (1.22), 4.316 (1.10), 6.088 (2.37), 6.108 (2.47),6.417 (1.08), 6.440 (1.96), 6.461 (1.24), 6.707 (0.87), 6.728 (1.74), 6.745 (1.70), 6.765 (0.75), 7.159 (2.50),7.197 (3.08), 7.209 (3.08), 7.378 (4.32), 7.967 (2.35), 7.980 (2.25), 8.368 (3.77), 11.014 (2.75).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.78 мин; МС (ESI положит.): m/z = 495 [M+H]⁺.

Пример 70.

2-(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7тетрагидро^Н-пирроло^Д-^пиридин^-он (стереоизомер 2)

F

WV^Hs ^V_O CH₃

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 68. Разделение энантиомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 69) приводило к получению 10

- 107 046642 мг указанного в заголовке соединения.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 69): Rt = 5.50 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 33.52° +/- 1.07° (c = 1.0 г/ 100 мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: 0.852 (0.50), 1.072 (16.00), 1.147 (0.81), 1.195 (3.63), 1.214 (8.06), 1.233 (5.99), 1.242 (15.29), 2.322 (0.67), 2.326 (0.93), 2.331 (0.67), 2.518 (4.20), 2.522 (2.70), 2.664 (1.19), 2.668 (1.61), 2.673 (1.22), 2.687 (1.88), 2.705 (1.81), 2.722 (0.65), 2.826 (1.76), 2.843 (3.72), 2.860 (1.98), 3.411 (2.99), 3.420 (2.72), 3.427 (2.69), 3.440 (3.28), 3.573 (0.90), 3.582 (1.04), 3.603 (1.85),3.611 (1.82), 3.646 (3.73), 3.674 (4.50), 3.703 (1.19), 3.893 (0.69), 3.901 (0.82), 3.910 (1.04), 3.918 (0.98),3.927 (0.70), 3.935 (0.65), 4.126 (1.23), 4.143 (1.15), 4.152 (1.63), 4.169 (1.40), 4.281 (1.53), 4.290 (1.62),4.307 (1.24), 4.316 (1.12), 6.088 (2.36), 6.108 (2.47), 6.419 (1.10), 6.440 (1.96), 6.461 (1.24), 6.707 (0.90),6.728 (1.77), 6.744 (1.72), 6.765 (0.75), 7.159 (2.47), 7.196 (3.38), 7.209 (3.41), 7.378 (4.36), 7.967 (2.84),7.980 (2.69), 8.368 (4.39), 11.014 (2.71).

Пример 71.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({1-[4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он

Используя метод, аналогичный описанному для примера 62, с К-(3-хлор-2-метоксифенил)-4-({[3({1-[4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]метил}амино)-2-оксо-1,2,5,6-тетрагидропиридин-3карботиоамидом (промежуточное соединение 6-71, 420 мг, 769 мкмоль) в качестве исходного вещества, 139 мг (чистота 95%, выход 33%) указанного в заголовке соединения получали после очистки с помощью препаративной ВЭЖХ (основная среда).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) δ [м.д.]: 1.277 (4.27), 1.293 (4.32), 1.333 (0.47), 1.350 (0.67), 1.358 (4.99), 1.374 (4.94), 1.824 (0.55), 1.851 (0.91), 1.878 (0.61), 1.893 (0.74), 1.906 (0.40), 1.920 (1.17), 1.934 (0.70), 1.947 (0.76), 1.956 (0.54), 1.965 (0.55), 1.987 (0.64), 1.995 (0.65), 2.128 (0.82), 2.159 (7.74),2.180 (8.74), 2.322 (0.51), 2.326 (0.68), 2.332 (0.49), 2.518 (2.39), 2.522 (1.49), 2.577 (0.56), 2.606 (0.54),2.642 (0.72), 2.665 (0.85), 2.669 (1.29), 2.673 (1.01), 2.748 (1.31), 2.775 (1.22), 2.835 (0.82), 2.852 (2.10),2.867 (2.15), 2.882 (1.06), 3.403 (1.26), 3.414 (1.72), 3.420 (2.29), 3.437 (1.06), 3.546 (0.63), 3.551 (0.64),3.640 (0.42), 3.663 (1.06), 3.668 (1.07), 3.680 (0.51), 3.691 (0.88), 3.696 (0.73), 3.712 (0.46), 3.717 (0.51),3.724 (0.46), 3.729 (0.51), 3.738 (0.48), 3.743 (0.44), 3.750 (0.47), 3.754 (0.43), 3.867 (12.16), 3.891 (16.00), 3.969 (0.62), 3.993 (0.54), 4.637 (0.80), 4.650 (1.17), 4.659 (0.74), 4.665 (1.09), 4.675 (0.61), 6.146 (2.23),6.155 (2.15), 6.162 (1.69), 6.170 (2.32), 6.642 (2.11), 6.647 (2.51), 6.657 (4.69), 6.667 (0.52), 6.672 (0.41),6.680 (0.65), 6.692 (5.88), 6.701 (2.71), 6.709 (2.25), 7.122 (1.19), 7.160 (1.40), 7.290 (2.01), 7.300 (2.69),7.303 (2.35), 7.313 (2.45), 7.426 (0.41), 7.435 (2.71), 7.520 (3.23), 7.989 (3.33), 8.002 (3.13), 8.019 (2.70),8.031 (2.40), 8.402 (3.96), 8.421 (3.26), 11.070 (1.28), 11.110 (1.54).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.54 мин; МС (ESI положит.): m/z = 512 [M+H]⁺.

Пример 72, пример 73, пример 74, пример 75.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({(1R)-1-[(2R)-4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({(^)-1-[^)-4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({(1S)-1-[(2R)-4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он.

Пример 72.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({1-[4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он(стереоизомер 1)

- 108 046642

Указанное в заголовке примера 71 соединение (135 мг) разделяли на четыре стереоизомера с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ. Указанное в заголовке соединение стереоизомер 1 (20 мг, R_t = 6.8-7.6 мин) получали наряду со стереоизомером 2 (27 мг, R_t = 9.6-10.9 мин., см. пример 73), стереоизомером 3 (37 мг, см. пример 74) и стереоизомером 4 (37 мг, см. пример 75).

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: PrepCon Labomatic HPLC 4; колонка: YMC Cellulose SB 10 мк, 250x50; элюент A: метилтрет-бутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: ацетонитрил; изократический режим: 80% A + 20% B; поток: 140 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Waters Alliance 2695; колонка: YMC Cellulose SB 3 мк, 100x4.6; элюент A: метил-третбутиловый простой эфир + 0.1 об.% диэтиламина; элюент B: ацетонитрил; изократический режим: 80% A + 20% B; поток: 1.4 мл/мин; температура: 25°C; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: R_t = 3.85 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 16.84° +/- 0.40° (c = 1.0 г/100 мл хлороформ).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) дельта [м.д.]: 1.137 (0.95), 1.159 (0.63), 1.232 (0.54), 1.277 (5.83), 1.293 (5.97), 1.826 (0.63), 1.853 (1.16), 1.880 (0.71), 1.907 (0.46), 1.928 (0.77), 1.935 (0.78), 1.956 (0.45),2.160 (9.53), 2.326 (0.58), 2.522 (2.28), 2.579 (0.94), 2.608 (0.86), 2.665 (0.41), 2.669 (0.54), 2.673 (0.40),2.748 (0.95), 2.776 (0.90), 2.835 (1.17), 2.852 (2.46), 2.869 (1.37), 3.402 (1.17), 3.413 (1.92), 3.419 (1.92),3.431 (0.97), 3.523 (0.52), 3.545 (0.95), 3.551 (0.92), 3.573 (0.56), 3.660 (0.71), 3.670 (0.67), 3.690 (0.73),3.866 (16.00), 3.891 (0.61), 4.649 (0.83), 4.659 (0.85), 4.664 (0.85), 4.675 (0.80), 5.758 (1.51), 6.145 (1.46), 6.155 (1.45), 6.159 (1.36), 6.169 (1.48), 6.643 (2.83), 6.647 (3.21), 6.657 (5.61), 6.667 (0.55), 7.123 (1.81), 7.291 (2.03), 7.303 (2.10), 7.435 (3.81), 8.018 (1.65), 8.031 (1.59), 8.420 (2.63), 11.071 (2.01).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.53 мин; МС (ESI положит.): m/z = 512 [M+H]⁺.

Пример 73.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({1-[4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 2)

Н₃С—N\__j

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 71. Разделение стереоизомеров с помощью препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 72) приводило к получению 27 мг указанного в заголовке соединения стереоизомера 2.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ (метод см. пример 72): R_t = 5.24 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 16.84° +/- 0.40° (c = 1.0 г/ 100 мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) дельта [м.д.]: 1.137 (0.95), 1.159 (0.63), 1.232 (0.54), 1.277 (5.83), 1.293 (5.97), 1.826 (0.63), 1.853 (1.16), 1.880 (0.71), 1.907 (0.46), 1.928 (0.77), 1.935 (0.78), 1.956 (0.45),2.160 (9.53), 2.326 (0.58), 2.522 (2.28), 2.579 (0.94), 2.608 (0.86), 2.665 (0.41), 2.669 (0.54), 2.673 (0.40),2.748 (0.95), 2.776 (0.90), 2.835 (1.17), 2.852 (2.46), 2.869 (1.37), 3.402 (1.17), 3.413 (1.92), 3.419 (1.92),3.431 (0.97), 3.523 (0.52), 3.545 (0.95), 3.551 (0.92), 3.573 (0.56), 3.660 (0.71), 3.670 (0.67), 3.690 (0.73),3.866 (16.00), 3.891 (0.61), 4.649 (0.83), 4.659 (0.85), 4.664 (0.85), 4.675 (0.80), 5.758 (1.51), 6.145 (1.46), 6.155 (1.45), 6.159 (1.36), 6.169 (1.48), 6.643 (2.83), 6.647 (3.21), 6.657 (5.61), 6.667 (0.55), 7.123 (1.81), 7.291 (2.03), 7.303 (2.10), 7.435 (3.81), 8.018 (1.65), 8.031 (1.59), 8.420 (2.63), 11.071 (2.01). ЖХ-МС (метод 6): R_t = 0.53 мин; МС (ESI положит.): m/z = 512 [M+H]⁺.

- 109 046642

Пример 74.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({1-[-4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-он (стереоизомер 3)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 71. Для разделения стереоизомера 3 и стереоизомера 4 (см. пример 75) сначала проводили препаративную хиральную ВЭЖХ с использованием метода, описанного в примере 72. Одну фракцию (R_t = 5.5-6.5 мин.) дополнительно разделяли с помощью другой препаративной хиральной ВЭЖХ, используя следующий метод с получением 37 мг указанного в заголовке соединения стереоизомера 3.

Метод препаративной хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Sepiatec: Prep SFC100; колонка: Chiralpak IG 5 мк 250x30 мм; элюент A: CO2; элюент B: 2пропанол + 0.4 об.% диэтиламина; изократический режим: 40% B; поток: 100 мл/мин; температура: 40°C; BPR: 150 бар; УФ: 254 нм.

Метод аналитической хиральной ВЭЖХ.

Прибор: Agilent: 1260, СФХ-модуль Aurora; колонка: Chiralpak IG 5 мк 100x4.6 мм; элюент A: CO2; элюент B: 2-пропанол + 0.4 об.% диэтиламина; изократический режим: 40% B; поток: 4 мл/мин; температура: 37.5°C; BPR: 100 бар; УФ: 254 нм.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 3.98 мин.

Оптическое вращение: [a]D = 30.08° +/- 0.91° (c = 1.0 г/ 100 мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) дельта [м.д.]: 0.697 (0.90), 1.026 (1.27), 1.042 (1.28), 1.088 (0.45), 1.137 (0.56), 1.232 (1.77), 1.293 (0.50), 1.358 (5.47), 1.374 (5.50), 1.893 (0.68), 1.920 (1.22), 1.947 (0.76), 1.959 (1.07), 1.966 (0.44), 1.987 (0.74), 1.995 (0.74), 2.016 (0.44), 2.180 (9.88), 2.327 (0.45), 2.523 (1.85),2.643 (0.83), 2.669 (1.19), 2.749 (0.84), 2.776 (0.82), 2.847 (0.81), 2.865 (1.90), 2.882 (1.25), 3.409 (0.92),3.419 (1.42), 3.425 (1.62), 3.439 (0.79), 3.640 (0.45), 3.663 (0.82), 3.668 (0.85), 3.691 (0.49), 3.712 (0.49),3.718 (0.58), 3.724 (0.55), 3.730 (0.61), 3.738 (0.58), 3.744 (0.54), 3.750 (0.58), 3.755 (0.50), 3.891 (16.00), 3.970 (0.75), 3.993 (0.66), 4.638 (0.75), 4.653 (0.92), 4.666 (0.75), 6.146 (1.43), 6.154 (1.30), 6.162 (1.45),6.170 (1.48), 6.681 (0.60), 6.693 (6.14), 6.701 (2.75), 6.709 (2.40), 6.729 (0.44), 7.162 (1.65), 7.301 (1.65),7.313 (1.71), 7.521 (3.68), 7.990 (1.16), 8.002 (1.10), 8.403 (1.76), 11.111 (1.82).

ЖХ-МС (метод 6): Rt = 0.53 мин; МС (ESI положит.): m/z = 512 [M+H]+.

Пример 75.

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({1-[-4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-он (стереоизомер 4)

Для получения указанного в заголовке рацемического соединения см. пример 71. Для разделения стереоизомера 3 (см. пример 74) и стереоизомера 4 (пример 75) сначала проводили препаративную хиральную ВЭЖХ с использованием метода, описанного в примере 72. Одну фракцию (Rt = 5.5-6.5 мин.) дополнительно разделяли с помощью другой препаративной хиральной ВЭЖХ (метод см. пример 74) с получением 37 мг указанного в заголовке соединения стереоизомера 4.

Аналитическая хиральная ВЭЖХ: Rt = 7.23 мин.

Оптическое вращение: [a]D = -24.97° +/- 0.50° (c = 1.0 г/ 100 мл в хлороформе).

¹Н-ЯМР (400 МГц, ДМСО-06) дельта [м.д.]: 0.697 (2.05), 0.742 (1.32), 0.760 (1.30), 0.832 (0.55), 0.851 (0.74), 0.973 (0.66), 0.984 (0.67), 0.991 (0.96), 0.999 (0.64), 1.009 (0.72), 1.026 (0.75), 1.042 (0.77), 1.070 (0.82), 1.088 (1.27), 1.106 (1.27), 1.151 (4.27), 1.232 (4.01), 1.293 (1.22), 1.358 (5.91), 1.373 (6.07), 1.894

- 110 046642 (0.71), 1.921 (1.28), 1.948 (0.80), 1.959 (1.52), 1.988 (0.82), 1.995 (0.85), 2.017 (0.51), 2.181 (10.00), 2.322 (0.74), 2.326 (0.99), 2.331 (0.74), 2.522 (4.96), 2.643 (0.98), 2.669 (1.77), 2.749 (0.99), 2.777 (0.93), 2.849 (0.99), 2.865 (2.18), 2.882 (1.43), 3.408 (1.14), 3.424 (1.91), 3.640 (0.51), 3.663 (0.93), 3.668 (0.95), 3.692 (0.56), 3.718 (0.67), 3.730 (0.69), 3.743 (0.64), 3.750 (0.64), 3.891 (16.00), 3.969 (0.87), 3.993 (0.79), 4.638 (0.82), 4.653 (1.03), 4.667 (0.80), 6.145 (1.44), 6.154 (1.38), 6.161 (1.41), 6.169 (1.51), 6.681 (0.63), 6.693 (5.87), 6.701 (2.92), 6.709 (2.49), 6.729 (0.47), 7.162 (1.85), 7.300 (1.91), 7.313 (1.96), 7.520 (3.80), 7.990 (1.46), 8.002 (1.40), 8.402 (2.29), 11.110 (1.99).

Экспериментальный раздел - биологические анализы

Фармакологическую активность соединений в соответствии с изобретением можно оценить с использованием анализов in vitro и/или in vivo, известных специалисту в данной области техники. Следующие ниже примеры описывают биологическую активность соединений в соответствии с изобретением, не ограничивая его объем каким-либо образом.

Примеры - соединения в соответствии с изобретением тестировали в выбранных биологических анализах один или несколько раз. В случаях, когда тестирование выполняли более одного раза, данные сообщаются либо в виде средних значений, либо в виде медианных значений, где среднее значение, также называемое средним арифметическим значением, означает сумму полученных значений, деленную на число проведенных тестов, и медианное значение означает срединное число группы значений при ранжировке в порядке возрастания или убывания. Если число значений в массиве данных нечетное, медиана является срединным значением. Если число значений в массиве данных четное, медиана является средним арифметическим двух срединных значений.

Примеры синтезировали один или несколько раз. Когда синтез проводили более чем один раз, данные из биологических анализов представляют собой средние значения или медианные значения, рассчитанные с использованием массивов данных, полученных при тестированиях одной или нескольких партий синтеза.

Активность in vitro соединений настоящего изобретения может быть продемонстрирована в следующих анализах:

Экспрессия и очистка белков EGFR, используемых в биохимических анализах киназной активности Различные белки EGFR, используемые в биохимических анализах ингибирования киназной активности, получали своими силами, осуществляя экспрессию в клетках насекомых с использованием бакуловирусной системы и последующую очистку, как описано в следующих параграфах.

Экспрессионные конструкции:

молекулы кДНК, кодирующие различные последовательности белков из EGFR человека (P00533) оптимизировали для экспрессии в эукариотических клетках и синтезировали с помощью GeneArt Technology в Life Technologies.

Эти последовательности ДНК кодировали следующие последовательности.

Конструкция EGFR #1, аминокислоты R669 - A1210.

Конструкция EGFR #2, аминокислоты R669 - A1210 и инсерцию аминокислотной последовательности ASV между V769 и D770.

Конструкция EGFR #3, аминокислоты R669 - A1210 и инсерцию аминокислотной последовательности SVD между D770 и N771.

Дополнительно все конструкции EGFR #1 - #3 кодировали: на N-конце сайт расщепления протеазой TEV (вирус гравировки табака) (DYDIPTTENLYFQG), на C-конце два стоп-кодона и дополнительно 5' и 3' последовательности att-ДНК для клонирования с помощью системы Gateway.

Каждую из четырех конструкций EFGR субклонировали с использованием технологии Gateway в вектор назначения pD-Ins1. Вектор pD-Ins1 представляет собой бакуловирусный трансферный вектор (на основе вектора pVL1393, Pharmingen), который обеспечивает N-концевое слияние GST-метки с интегрированной генной конструкцией. Соответствующие трансферные векторы были названы pD-Ins1_ EGFR #1, pD-Ins1_ EGFR #2, pD-Ins1_ EGFR #3.

- 111 046642

Аминокислотные последовательности EGFR:

GST-EGFR #1 (Дикий тип)

MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGL EFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYG VSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDA LDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFG GGDHPPKSDPITSLYKKAGSDYDIPTTTENLYFQGRRRHIVRKRTLRRLLQEREL VEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAI KELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPFGCLL DYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKTPQHV KITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSYGVTV WELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRP KFRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDA DEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYS SDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHY QDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFP KEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA

GST-EGFR #2 (ASV между V769 и D770)

MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGL EFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYG VSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDA LDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFG GGDHPPKSDPITSLYKKAGSDYDIPTTTENLYFQGRRRHIVRKRTLRRLLQEREL VEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAI KELREATSPKANKEILDEAYVMASVASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPF GCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKT PQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSY GVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDA D SRPKFRELIIEF SKM ARDPQR YL VIQ GDERMHLP SPTD SNF YRALMDEEDMDD VVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFL QRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSR DPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQ DFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA

GST-EGFR #3 (SVD между D770 и N771)

MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKKFELGL EFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRYG VSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDA LDVVLYMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFG GGDHPPKSDPITSLYKKAGSDYDIPTTTENLYFQGRRRHIVRKRTLRRLLQEREL VEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAI KELREATSPKANKEILDEAYVMASVDSVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPF GCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKT PQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSY GVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDA D SRPKFRELIIEF SKM ARDPQR YL VIQ GDERMHLP SPTD SNF YRALMDEEDMDD VVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFL

- 112 046642

QRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSR DPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQ DFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA

Получение рекомбинантного бакуловируса.

В отдельных подходах каждый из трех трансферных векторов котрансфицировали в клетках Sf9 посредством ДНК бакуловируса (Flashbac Gold DNA, Oxford Expression Technologies) с использованием Fugene HD (Roche). Через 5 дней супернатант трансфицированных клеток, содержащих рекомбинантный бакуловирус, кодирующий различные EGFR белки, использовали для дальнейшего инфицирования клеток Sf9 для амплификации вируса, при этом титр вируса контролировали с помощью кПЦР.

Экспрессия EGFR в клетках Sf9 с использованием биореактора.

Клетки Sf9, культивируемые (среда Insect-xpress, Lonza, 27°C) в биореакторе Wave с одноразовым культуральным мешком инфицировали при плотности клеток 106 клеток/мл одним из исходных рекомбинантных бакуловирусов при множественности инфицирования 1 и инкубировали в течение 48 ч. Вслед за этим клетки собирали с помощью центрифугирования и клеточную массу замораживали при -80°C.

Очистка слитых белков GST-EGFR.

Очистку слитых белков GST-EGFR успешно выполняли с помощью аффинной хроматографии с использованием глутатион-сефарозной матрицы Glutathion Sepharose 4B (GE Healthcare Life Sciences).

Осажденные центрифугированием клетки (из 4 л клеточной культуры) ресуспендировали в лизирующем буфере (50 мМ HEPES pH 7.4, 150 мМ NaCl, 5% глицерина, 1 мМ MgCl₂, 1 мМ MnCl₂, 0.5 мМ Na₃VO₄) и лизировали, выполняя цикл замораживания и оттаивания с последующим инкубированием на льду в течение 60 мин. Супернатант центрифугировали при 4000 х g в течение 30 мин. при 4°C. Затем супернатант инкубировали с глутатион-сефарозной матрицей Glutathion Sepharose 4B (в стеклянном бутле, вращающемся в течение 16 часов при 4°C) для связывания слитого белка GST EGFR, промывали промывочным буфером и в заключение связанный белок элюировали, используя элюирующий буфер (лизирующий буфер плюс 25 мМ глутатиона), и подвергали шоковой заморозки жидким азотом.

Анализ киназной активности WT-EGFR.

Ингибирующую активность соединений настоящего изобретения по отношению к рецептору эпидермального фактора роста (EGFR) дикого типа количественно оценивали с использованием EGFR анализа на основе TR-FRET, как описано в следующих параграфах.

Рекомбинантный слитый белок N-концевой глутатион^-трансферазы (GST) и фрагмента EGFR человека (аминокислоты R669 - A1210), экспрессированный в Sf9 клетках насекомых и очищенный с помощью аффинной хроматографии с использованием глутатион-сефарозы, как описано выше, использовали в качестве киназы. В качестве субстрата для киназной реакции использовали биотинилированный пептид биотин-Ahx-AEEEEYFELVAKKK (C-конец в амидной форме), который можно приобрести, например, у компании Biosynthan GmbH (Берлин-Бух, Германия).

Для проведения анализа 50 нл 100-кратно концентрированного раствора тестируемого соединения в ДМСО пипетировали либо в черный малообъемный 384-луночный микротитровальный планшет, либо в черный 1536-луночный микротитровальный планшет (оба - Greiner Bio-One, Фриккенхаузен, Германия), добавляли 2 мкл раствора EGFR в водном буфере для анализа [50 мМ Hepes pH 7.0, 10 мМ MgCl₂, 1 мМ дитиотреитол, 0.5 мМ EGTA, 0.3 мМ активированный ортованадат натрия, 0.005% (мас./об.) бычьего сывороточного альбумина, 0.005% (об./об.) твин-20], и смесь инкубировали в течение 15 мин при 22°C для обеспечения предварительного связывания тестируемых соединений с ферментом перед началом киназной реакции. Затем киназную реакцию запускали путем добавления 3 мкл раствора аденозинтрифосфата (АТФ, 3.33 мМ => конечная конц. в 5 мкл объема для анализа составляла 2 мМ) и субстрата (1.67 мкМ => конечная конц. в 5 мкл объема для анализа составляла 1 мкМ) в буфер для анализа, и полученную в результате смесь инкубировали в течение времени реакции 30 мин при 22°C. Концентрацию EGFR корректировали в зависимости от активности партии фермента и выбирали подходящей для обеспечения осуществления анализа в линейном диапазоне, типичная концентрация составляла 7.6 пг/мкл. Реакцию останавливали путем добавления 3 мкл раствора HTRF реагентов для детектирования (83.3 нМ стрептавидин-XL665 [Cisbio Bioassays, Кодоле, Франция] и 1.67 нМ PT66-Tb-криптат, меченное криптатом тербия антитело к фосфотирозину от Cisbio Bioassays [взамен PT66 Tb криптата также можно использовать PT66 Eu хелат от Perkin Elmer]) в водном растворе ЭДТА (133.3 мМ ЭДТА, 0.2% (мас./об.) бычьего сывороточного альбумина в 50 мМ HEPES pH 7.5).

Полученную в результате смесь инкубировали в течение 1 ч при 22°C, чтобы обеспечить связывание биотинилированного фосфорилированного пептида со стрептавидином-XL665 и PT66-Tb-криптатом. Вслед за этим количество фосфорилированного субстрата оценивали путем измерения резонансного переноса энергии от PT66-Tb-криптата к стрептавидину-XL665. Таким образом, испускание флуоресценции на длинах волн 620 нм и 665 нм после возбуждения на 337 нм измеряли в HTRF считывающем устройстве, например, Pherastar (BMG Labtechnologies, Оффенбург, Германия) или Viewlux (Perkin-Elmer). Соотношение значений испускания на длинах волн 665 нм и 622 нм принимали в качестве меры количества фосфорилированного субстрата. Данные нормализовали (ферментативная реакция без ингибитора =

- 113 046642

0% ингибирование, все другие компоненты для анализа, но без фермента = 100% ингибирование). Обычно тестируемые соединения тестировали на одном и том же микротитровальном планшете в 11 различных концентрациях в диапазоне от 20 мкМ до 0.07 нМ (20 мкМ, 5.7 мкМ, 1.6 мкМ, 0.47 мкМ, 0.13 мкМ, 38 нМ, 11 нМ, 3.1 нМ, 0.9 нМ, 0.25 нМ и 0.07 нМ, серии разведений, приготовленные отдельно перед анализом, исходя из уровня 100-кратно концентрированных растворов в ДМСО путем серийных разведений, точные концентрации могут варьироваться в зависимости от используемых устройств для пипетирования) в дублирующих значениях для каждой концентрации, и значения IC₅₀ рассчитывали с использованием программного обеспечения Genedata Screener™.

Анализ киназной активности мутанта EGFR по экзону 20 (D770_N771insSVD).

Ингибирующую активность соединений настоящего изобретения по отношению к рецептору эпидермального фактора роста (EGFR) с инсерцией аминокислотной последовательности SVD между D770 и N771 количественно оценивали с использованием анализа киназной активности на основе TR-FRET, как описано в следующих параграфах.

Рекомбинантный слитый белок N-концевой глутатион^-трансферазы (GST) и фрагмента варианта EGFR человека (аминокислоты R669 - A1210 с инсерцией аминокислотной последовательности SVD между D770 и N771 (EGFR ins SVD), экспрессированный в Sf9 клетках насекомых и очищенный с помощью аффинной хроматографии с использованием глутатион-сефарозы, как описано выше, использовали в качестве киназы. В качестве субстрата для киназной реакции использовали биотинилированный пептид биотин-Ahx-AEEEEYFELVAKKK (C-конец в амидной форме), который можно приобрести, например, у компании Biosynthan GmbH (Берлин-Бух, Германия).

Для проведения анализа 50 нл 100-кратно концентрированного раствора тестируемого соединения в ДМСО пипетировали либо в черный малообъемный 384-луночный микротитровальный планшет, либо в черный 1536-луночный микротитровальный планшет (оба - Greiner Bio-One, Фриккенхаузен, Германия), добавляли 2 мкл раствора EGFR в водном буфере для анализа [50 мМ Hepes pH 7.0, 10 мМ MgCl₂, 1 мМ дитиотреитол, 0.5 мМ EGTA, 0.3 мМ активированный ортованадат натрия, 0.005% (мас./об.) бычьего сывороточного альбумина, 0.005% (об./об.) твин-20], и смесь инкубировали в течение 15 мин при 22°C для обеспечения предварительного связывания тестируемых соединений с ферментом перед началом киназной реакции. Затем киназную реакцию запускали путем добавления 3 мкл раствора аденозинтрифосфата (АТФ, 3.33 мМ => конечная конц. в 5 мкл объема для анализа составляла 2 мМ) и субстрата (1.67 мкМ => конечная конц. в 5 мкл объема для анализа составляла 1 мкМ) в буфер для анализа, и полученную в результате смесь инкубировали в течение времени реакции 30 мин при 22°C. Концентрацию EGFR корректировали в зависимости от активности партии фермента и выбирали подходящей для обеспечения осуществления анализа в линейном диапазоне, типичная концентрация составляла 15 пг/мкл. Реакцию останавливали путем добавления 3 мкл раствора HTRF реагентов для детектирования (83.3 нМ стрептавидин-^665 [Cisbio Bioassays, Кодоле, Франция] и 1.67 нМ PT66-Tb-kриптат, меченное криптатом тербия антитело к фосфотирозину от Cisbio Bioassays [взамен PT66 Tb криптата также можно использовать PT66 Eu хелат от Perkin Elmer]) в водном растворе ЭДТА (133.3 мМ ЭДТА, 0.2% (мас./об.) бычьего сывороточного альбумина в 50 мМ HEPES pH 7.5).

Полученную в результате смесь инкубировали в течение 1 ч при 22°C, чтобы обеспечить связывание биотинилированного фосфорилированного пептида со сmреnmавидином-XL665 и PT66-Tb-kрипτаτом. Вслед за этим количество фосфорилированного субстрата оценивали путем измерения резонансного переноса энергии от PT66-Tb-криптата к сmрептавидину-XL665. Таким образом, испускание флуоресценции на длинах волн 620 нм и 665 нм после возбуждения на 337 нм измеряли в HTRF считывающем устройстве, например, Pherastar (BMG Labtechnologies, Оффенбург, Германия) или Viewlux (Perkin-Elmer). Соотношение значений испускания на длинах волн 665 нм и 622 нм принимали в качестве меры количества фосфорилированного субстрата. Данные нормализовали (ферментативная реакция без ингибитора = 0% ингибирование, все другие компоненты для анализа, но без фермента = 100% ингибирование). Обычно тестируемые соединения тестировали на одном и том же микротитровальном планшете в 11 различных концентрациях в диапазоне от 20 мкМ до 0.07 нМ (20 мкМ, 5.7 мкМ, 1.6 мкМ, 0.47 мкМ, 0.13 мкМ, 38 нМ, 11 нМ, 3.1 нМ, 0.9 нМ, 0.25 нМ и 0.07 нМ, серии разведений, приготовленные отдельно перед анализом, исходя из уровня 100-кратно концентрированных растворов в ДМСО путем серийных разведений, точные концентрации могут варьироваться в зависимости от используемых устройств для пипетирования) в дублирующих значениях для каждой концентрации, и значения IC₅₀ рассчитывали с использованием программного обеспечения Genedata Screener™.

Анализ киназной активности мутанта EGFR по экзону 20 (V769_D770insASV).

Ингибирующую активность соединений настоящего изобретения по отношению к рецептору эпидермального фактора роста (EGFR) с инсерцией аминокислотной последовательности ASV между V769 и D770 количественно оценивали с использованием анализа киназной активности на основе TR-FRET, как описано в следующих параграфах.

Рекомбинантный слитый белок N-концевой глутатион^-трансферазы (GST) и фрагмента варианта EGFR человека (аминокислоты R669 - A1210 с инсерцией аминокислотной последовательности ASV

- 114 046642 между V769 и D770 (EGFR ins ASV), экспрессированный в Sf9 клетках насекомых и очищенный с помощью аффинной хроматографии с использованием глутатион-сефарозы, как описано выше, использовали в качестве киназы. В качестве субстрата для киназной реакции использовали биотинилированный пептид биотин-Ahx-AEEEEYFELVAKKK (C-конец в амидной форме), который можно приобрести, например, у компании Biosynthan GmbH (Берлин-Бух, Германия).

Для проведения анализа 50 нл 100-кратно концентрированного раствора тестируемого соединения в ДМСО пипетировали либо в черный малообъемный 384-луночный микротитровальный планшет, либо в черный 1536-луночный микротитровальный планшет (оба - Greiner Bio-One, Фриккенхаузен, Германия), добавляли 2 мкл раствора EGFR в водном буфере для анализа [50 мМ Hepes pH 7.0, 10 мМ MgCl₂, 1 мМ дитиотреитол, 0.5 мМ EGTA, 0.3 мМ активированный ортованадат натрия, 0.005% (мас./об.) бычьего сывороточного альбумина, 0.005% (об./об.) твин-20], и смесь инкубировали в течение 15 мин при 22°C для обеспечения предварительного связывания тестируемых соединений с ферментом перед началом киназной реакции. Затем киназную реакцию запускали путем добавления 3 мкл раствора аденозинтрифосфата (АТФ, 3.33 мМ => конечная конц. в 5 мкл объема для анализа составляла 2 мМ) и субстрата (1.67 мкМ => конечная конц. в 5 мкл объема для анализа составляла 1 мкМ) в буфер для анализа, и полученную в результате смесь инкубировали в течение времени реакции 30 мин при 22°C. Концентрацию EGFR корректировали в зависимости от активности партии фермента и выбирали подходящей для обеспечения осуществления анализа в линейном диапазоне, типичная концентрация составляла 2.5 пг/мкл. Реакцию останавливали путем добавления 3 мкл раствора HTRF реагентов для детектирования (83.3 нМ стрептавидин-XL665 [Cisbio Bioassays, Кодоле, Франция] и 1.67 нМ PT66-Tb-криптат, меченное криптатом тербия антитело к антифосфотирозину от Cisbio Bioassays [взамен PT66 Tb криптата также можно использовать PT66 Eu хелат от Perkin Elmer]) в водном растворе ЭДТА (133.3 мМ ЭДТА, 0.2% (мас./об.) бычьего сывороточного альбумина в 50 мМ HEPES pH 7.5).

Полученную в результате смесь инкубировали в течение 1 ч при 22°C, чтобы обеспечить связывание биотинилированного фосфорилированного пептида со стрептавидином-XL665 и PT66-Tb-криптатом. Вслед за этим количество фосфорилированного субстрата оценивали путем измерения резонансного переноса энергии от PT66-Tb-криптата к стрептавидину-XL665. Таким образом, испускание флуоресценции на длинах волн 620 нм и 665 нм после возбуждения на 337 нм измеряли в HTRF считывающем устройстве, например, Pherastar (BMG Labtechnologies, Оффенбург, Германия) или Viewlux (Perkin-Elmer). Соотношение значений испускания на длинах волн 665 нм и 622 нм принимали в качестве меры количества фосфорилированного субстрата.

Данные нормализовали (ферментативная реакция без ингибитора = 0% ингибирование, все другие компоненты для анализа, но без фермента = 100% ингибирование). Обычно тестируемые соединения тестировали на одном и том же микротитровальном планшете в 11 различных концентрациях в диапазоне от 20 мкМ до 0.07 нМ (20 мкМ, 5.7 мкМ, 1.6 мкМ, 0.47 мкМ, 0.13 мкМ, 38 нМ, 11 нМ, 3.1 нМ, 0.9 нМ, 0.25 нМ и 0.07 нМ, серии разведений, приготовленные отдельно перед анализом, исходя из уровня 100кратно концентрированных растворов в ДМСО путем серийных разведений, точные концентрации могут варьироваться в зависимости от используемых устройств для пипетирования) в дублирующих значениях для каждой концентрации, и значения IC₅₀ рассчитывали с использованием программного обеспечения Genedata Screener™. В табл. 2 показаны результаты ингибирования в биохимическом анализе с использованием мутанта EGFR.

Таблица 2

Пример №	Анализ киназной активности mutEGFR (D770 N771insSVD) IC₅₀ [моль/л]
1	1.59 Е-10
2	< 7.25 Е-11 7.79 Е-11 7.87 Е-11 9.12 Е-11 1.65 Е-10 2.00 Е-10
3	1.37 Е-10
4	2.56 Е-10
5	< 7.25 Е-11 8.51 Е-11 1.12 Е-10 1.14 Е-10 1.20 Е-10 1.24 Е-10 1.36 Е-10

- 115 046642

6	1.00 E-10
7	1.37 E-10
8	7.99 E-ll
9	8.91 E-ll
10	6.69 E-10
11	2.86 E-10
12	7.94 E-ll
13	1.39 E-10
14	1.30 E-10
15	1.51 E-10
16	2.28 E-10
17	1.56 E-10
18	1.47 E-10
19	1.13 E-10
20	8.72 E-ll
21	1.26 E-10
22	1.53 E-10
23	1.69 E-10
24	2.61 E-10
25	2.82 E-10
26	2.13 E-10
27	1.18 E-10
28	2.49 E-10
29	5.47 E-10
30	3.96 E-10
31	1.33 E-10
32	1.27 E-10
33	2.13 E-10
34	1.93 E-10
35	8.73 E-ll
36	1.14 E-10
37	4.00 E-10
38	1.19 E-10
39	3.04 E-10
40	1.15 E-10
41	2.91 E-10
42	1.55 E-10
43	2.25 E-10
44	1.50 E-10
45	4.92 E-10
46	4.33 E-10
47	< 7.25 E-ll 1.69 E-10 2.27 E-10 2.30 E-10
48	2.49 E-10
49	1.70 E-10
50	1.70 E-10
51	1.36 E-10
52	2.26 E-10
53	4.26 E-10
54	5.71 E-10

- 116 046642

55	2.57 Е-10
56	2.58 Е-10
57	2.69 Е-10
58	1.70 Е-10 2.15 Е-10 < 2.54 Е-10 3.64 Е-10
59	2.35 Е-10
60	3.05 Е-10
61	9.35 Е-10
62	2.37 Е-10
63	2.65 Е-10
64	1.87 Е-10
65	1.36 Е-10
66	1.82 Е-10
67	2.17 Е-10
68	2.67 Е-10
69	2.33 Е-10
70	1.68 Е-10
71	4.05 Е-10
72	1.41 Е-9
73	1.12 Е-9
74	6.61 Е-10
75	4.99 Е-9

Анализ киназной активности Bubl при высокой концентрации АТФ.

Ингибирующую активность соединений настоящего изобретения в отношении Bub1 при высокой концентрации АТФ количественно оценивали с использованием TR-FRET анализа Bub1 киназной активности при высокой концентрации АТФ, как описано в следующих параграфах.

N-концевой His₆-меченный рекомбинантный каталитический домен Bub1 человека (аминокислоты 704-1085), экспрессированный в клетках насекомых (Hi5) и очищенный с помощью Ni-NTA афинной хроматографии и последующей эксклюзионной хроматографии по размеру, использовали в качестве фермента. В качестве субстрата для киназной реакции использовали биотинилированный пептид биотинAhx-VLLPKKSFAEPG - SEQ ID 5 (C-конец в амидной форме), который можно приобрести, например, у компании Biosyntan (Берлин, Германия).

Для проведения анализа 50 нл 100-кратно концентрированного раствора тестируемого соединения в ДМСО пипетировали либо в черный малообъемный 384-луночный микротитровальный планшет, либо в черный 1536-луночный микротитровальный планшет (оба - Greiner Bio-One, Фриккенхаузен, Германия), добавляли 3 мкл раствора аденозинтрифосфата (АТФ, 3.33 мМ => конечная конц. в 5 мкл объема для анализа составляла 2 мМ) и субстрата (1.67 мкМ => конечная конц. в 5 мкл объема для анализа составляла 1 мкМ) в водном буфере для анализа [50 мМ Tris/HCl pH 7.5, 10 мМ хлорид магния (MgCl₂), 200 мМ хлорид калия (KCl), 1.0 мМ дитиотреитол (DTT), 0.1 мМ ортованадат натрия, 1% (об./об.) глицерина, 0.01% (мас./об.) бычьего сывороточного альбумина (BSA), 0.005% (об./об.) тритона X-100 (Sigma), и 1x не содержащей ЭДТА полной смеси ингибиторов протеаз (Roche)]. Затем киназную реакцию запускали путем добавления 2 мкл раствора Bub1 в буфере для анализа, и полученную в результате смесь инкубировали в течение времени реакции 60 мин при 22°C. Концентрацию Bub1 корректировали в зависимости от активности партии фермента и выбирали подходящей для обеспечения осуществления анализа в линейном диапазоне, типичная концентрация составляла приблизительно 200 нг/мл. Реакцию останавливали путем добавления 3 мкл раствора TR-FRET реагентов для детектирования (0.167 мкМ стрептавидинXL665 [Cisbio Bioassays, Кодоле, Франция] и 1.67 нМ антитело к антифосфосерину [Merck Millipore, кат. # 35-002] и 0.67 нМ LANCE EU-W1024 - меченное антитело к мышиному IgG [Perkin-Elmer, номер продукта AD0077, в качестве альтернативы можно использовать меченное криптатом тербия антитело к мышиному IgG от Cisbio Bioassays]) в водном растворе ЭДТА (83.3 мМ ЭДТА, 0.2% (мас./об.) бычьего сывороточного альбумина в 100 мМ HEPES pH 7.5).

Полученную в результате смесь инкубировали в течение 1 ч при 22°C, чтобы позволить образование комплекса между фосфорилированным биотинилированным пептидом и реагентами для детектирования. Вслед за этим количество фосфорилированного субстрата оценивали путем измерения резонансного переноса энергии от Eu-хелата к стрептавидину-XL. Таким образом, испускание флуоресценции на длинах волн 620 нм и 665 нм после возбуждения на 350 нм измеряли в TR-FRET считывающем устройстве, например, Pherastar или Pherastar FS (оба от BMG Labtechnologies, Оффенбург, Германия) или Viewlux (Perkin-Elmer). Соотношение значений испускания на длинах волн 665 нм и 622 нм принимали в качестве меры количества фосфорилированного субстрата. Данные нормализовали (ферментативная реакция без ингибитора = 0% ингибирование, все другие компоненты для анализа, но без фермента = 100% ингибирование). Обычно тестируемые соединения тестировали на одном и том же микротитровальном планшете в 11 различных концентрациях в диапазоне от 20 мкМ до 0.7 нМ (20 мкМ, 5.7 мкМ, 1.6 мкМ,

- 117 046642

0.47 мкМ, 0.13 мкМ, 38 нМ, 11 нМ, 3.1 нМ, 0.9 нМ, 0.25 нМ и 0.07 нМ, серии разведений, приготовленные отдельно перед анализом, исходя из уровня 100-кратно концентрированных растворов в ДМСО путем серийных разведений, точные концентрации могут варьироваться в зависимости от используемых устройств для пипетирования) в дублирующих значениях для каждой концентрации, и значения IC₅₀ рассчитывали путем 4-параметрической подгонки. В табл. 3 показаны результаты ингибирования Bub1 в анализе киназной активности при высокой концентрации АТФ.

Таблица 3

Пример №	Bubl при высокой концентрации АТФ (2 мМ) 1С₅о [моль/л]
1	3.36 Е-6
2	6.04 Е-6
3	3.33 Е-6
4	1.13 Е-5
5	1.29 Е-5
6	6.31 Е-6
7	1.06 Е-5
8	7.88 Е-6
9	4.23 Е-6
10	1.78 Е-6
11	4.33 Е-6
12	> 2.00 Е-5
13	> 2.00 Е-5
14	> 2.00 Е-5
15	> 2.00 Е-5
16	> 2.00 Е-5
17	> 2.00 Е-5
18	> 2.00 Е-5
19	1.14 Е-5
20	9.53 Е-6
21	3.79 Е-6
22	> 2.00 Е-5
23	> 2.00 Е-5
24	1.94 Е-6
25	> 2.00 Е-5
26	1.08 Е-6
27	>2.00 Е-5
28	> 2.00 Е-5
29	1.72 Е-5
30	> 2.00 Е-5
33	> 2.00 Е-5
34	> 2.00 Е-5
35	> 2.00 Е-5
36	2.82 Е-6
37	1.90 Е-5
38	> 5.71 Е-6
39	> 2.00 Е-5
40	8.62 Е-6
41	> 2.00 Е-5
42	> 2.00 Е-5
43	2.41 Е-6
45	> 5.71 Е-6
46	1.30 Е-5
47	5.01 Е-6
48	1.22 Е-5
49	3.93 Е-6

- 118 046642

50	3.54 Е-6
51	1.52 Е-6
52	7.29 Е-7
53	1.36 Е-6
54	9.94 Е-7
55	7.59 Е-6
56	1.65 Е-5
57	1.40 Е-5
58	1.39 Е-5
59	1.22 Е-5
60	1.64 Е-5
62	> 2.00 Е-5
63	> 2.00 Е-5
64	> 2.00 Е-5
65	3.58 Е-6
66	5.04 Е-6
67	2.08 Е-6
68	> 2.00 Е-5
69	> 2.00 Е-5
70	> 2.00 Е-5
71	> 2.00 Е-5
72	>2.00 Е-5
73	> 2.00 Е-5
74	> 2.00 Е-5
75	> 2.00 Е-5

Соединения настоящего изобретения могут проявлять еще и другие выгодные свойства, такие как более мощное ингибирование мутанта EGFR с инсерцией в экзоне 20, в сопоставлении с ингибированием EGFR дикого типа, что может быть полезно для снижения потенциальной токсичности, возникающей изза чрезмерного ингибирования EGFR дикого типа.

Описание клеточных данных (WT, insSVD).

Клетки 293T из ATCC трансфицировали экспрессионными конструкциями pBABEpuro для WT EGFR или EGFR-insSVD и pCL-Eco упаковывающим вектором с использованием реагента для трансфекции Fugene-6 от Promega. Планшеты инкубировали при 37°C в течение 48 ч. Ретровирус собирали путем фильтрования супернатанта среды через 0.45 мкм фильтр.

Клетки Ba/F3, приобретенные у DSMZ, выращивали в RPMI + 10% FBS + 10 нг/мл IL-3 и инфицировали отфильтрованным ретровирусным супернатантом при разведении 1:2. Полибрен добавляли до концентрации 8 мкг/мл, планшеты вращали в течение 90 мин, и инкубировали в течение ночи при 37°C. Через 24 ч после инфицирования к инфицированным клеткам добавляли 2 мкг/мл пуромицина, и клетки непрерывно выращивали в присутствии пуромицина и 10 нг/мл IL-3. Были созданы следующие стабильно экспрессирующие клеточные линии Ba/F3: Ba/F3-EGFR-WT, Ba/F3-EGFR-insSVD, (Ba/F3 - векторконтроль).

Для анализов выживаемости клеток, клетки Ba/F3 выращивали до плотности 1-2 миллиона клеток на мл, центрифугировали и ресуспендировали в среде без IL-3, и повторно высевали при концентрации 200,000-500,000 клеток на мл. Клетки, эктопически экспрессирующие WT EGFR или EGFR-insSVD высевали с 10 нг/мл Millipore Culture grade EGF. Клетки, эктопически экспрессирующие пустой вектор pBABEpuro, высевали с 10 нг/мл IL-3.

Спустя 2 дня клетки высевали в объеме 50 мкл в 384-луночный планшет при концентрации 4000 клеток на лунку в случае клеток, анализируемых в отсутствие IL-3, и 2000 клеток на лунку в случае клеток, анализируемых в присутствии IL-3. 100 нл соединения добавляли в каждую лунку с использованием 100 нл устройства Pin Head, и планшеты инкубировали при 37°C в течение 48 ч.

Выживаемость клеток измеряли путем добавления 20 мкл реагента Cell Titer-Glo Luminescent Cell Viability Reagent, разведенного 1:3 в PBS. Планшеты герметично закрывали Perkin Elmer Top-Seal, несколько раз переворачивали для перемешивания, и сразу же центрифугировали при 1000 об/мин в течение 2 мин. Планшеты инкубировали в условиях низкой освещенности в течение 8-10 мин и измеряли люминесценцию. Значения IC₅₀ для примеров показаны в табл. 4.

- 119 046642

Таблица 4

Пример №	BA/F3 (insSVD) IC50 \|моль/л!	BA/F3 (дикий тип) IC50 [моль/л]
1	9.80 Е-9	3.66 Е-7
2	7.12 Е-9	2.92 Е-7
3	2.28 Е-8	7.55 Е-7
4	1.95 Е-8	4.52 Е-7
5	9.73 Е-9	2.62 Е-7
6	5.03 Е-8	7.85 Е-7
7	1.80 Е-8	2.92 Е-7
8	8.18 Е-9	1.21 Е-7
9	3.27 Е-8	3.03 Е-7
10	1.11 Е-8	4.96 Е-7
11	1.87 Е-8	7.01 Е-7
12	2.28 Е-8	5.74 Е-7
13	1.57 Е-7	1.52 Е-6
14	1.05 Е-8	3.87 Е-7
15	1.53 Е-8	4.26 Е-7
16	1.26 Е-7	1.05 Е-6
17	9.53 Е-9	2.31 Е-7
18	2.79 Е-8	5.79 Е-7
19	2.91 Е-8	5.32 Е-7
20	8.25 Е-9	3.13 Е-7
21	8.49 Е-9	3.41 Е-7
22	4.19 Е-8	5.44 Е-7
23	7.10 Е-8	6.48 Е-7
24	3.46 Е-8	4.44 Е-7
25	1.83 Е-8	3.49 Е-7
26	8.99 Е-8	8.39 Е-7
27	1.69 Е-8	5.02 Е-7
28	1.26 Е-7	1.24 Е-6
29	3.36 Е-8	6.21 Е-7
30	1.93 Е-8	4.07 Е-7
33	1.02 Е-7	5.57 Е-7
34	1.20 Е-8	2.04 Е-7
35	2.15 Е-8	2.61 Е-7
36	6.81 Е-8	8.45 Е-7
37	3.57 Е-8	3.48 Е-7
38	2.93 Е-8	4.19 Е-7
39	4.40 Е-8	6.30 Е-7
40	1.19 Е-7	8.67 Е-7
41	7.75 Е-8	6.95 Е-7
42	1.98 Е-8	5.96 Е-7
43	6.05 Е-8	1.25 Е-6
44	2.57 Е-8
45	1.11 Е-7	1.64 Е-6
46	1.01 Е-8	3.76 Е-7
47	4.16 Е-8	7.15 Е-7
48	1.88 Е-8	3.79 Е-7
49	5.36 Е-8	7.85 Е-7
50	8.82 Е-9	3.61 Е-7

- 120 046642

51	4.67 Е-8	7.42 Е-7
52	1.34 Е-8	5.47 Е-7
53	2.13 Е-8	4.08 Е-7
54	8.09 Е-8	9.17 Е-7
55	1.24 Е-7	1.31 Е-6
56	1.19 Е-8	4.35 Е-7
57	2.80 Е-8	5.39 Е-7
58	2.98 Е-8	5.19 Е-7
59	1.86 Е-8	3.36 Е-7
60	5.27 Е-8	9.46 Е-7
61	3.00 Е-7	3.77 Е-6
62	2.67 Е-8	6.97 Е-7
63	1.47 Е-7	1.37 Е-6
64	7.58 Е-9	2.71 Е-7
65	1.34 Е-8	2,87 Е-7
66	7.52 Е-9	2,52 Е-7
67	2.90 Е-8	1,98 Е-7
68	3.73 Е-8	6,44 Е-7
69	7.17 Е-9	3,12 Е-7
70	6.79 Е-8	7,14 Е-7
71	1.32 Е-7	1,42 Е-6
72	6.73Е-8	9.57 Е-7
73	7.80 Е-8	1.28 Е-6
74	5.11 Е-8	8.28 Е-7
75	5.71 Е-7	3,90 Е-6

В отличие от заявленных соединений данного изобретения, соединения, заявленные в ближайшем аналоге WO 2016/120196, не проявляют выгодных комбинированных свойств, описанных выше. Это показано в табл. 5.

Таблица 5

WO 2016/120196 Пример №	Анализ киназной активности mutEGFR (D770 N771insSVD) IC50 [моль/л]	BA/F3 (insSVD) IC50 [моль/л]	BA/F3 (дикий тип) 1С₅₀ [моль/л]
38	2,24 Е-7	> 2,00 Е-6	5,91 Е-6
41	3,43 Е-8	> 2,00 Е-6	5,02 Е-6
45	1,28 Е-8	> 2,00 Е-6	4,04 Е-6

Описание клеточных данных (клетки Ba/F3, сверхэкспрессирующие мутант EGFR, отличный от insSVD).

Клетки 293T из ATCC трансфицировали экспрессионными конструкциями pBABEpuro для мутанта EGFR (V769_D770insASV, D770_N771insNPG, N771_P772insH, H773_V774insNPH, E746_A750del, L858R, D770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S, L858R C797S, L861Q) или мутанта ERBB2 (A775_G776insYVMA) и pCL-Eco упаковывающим вектором с использованием реагента для трансфекции Fugene-6 от Promega. Планшеты инкубировали при 37°C в течение 48 ч. Ретровирус собирали путем фильтрования супернатанта среды через 0.45 мкм фильтр.

Клетки Ba/F3, приобретенные у DSMZ, выращивали в RPMI + 10% FBS + 10 нг/мл IL-3 и инфицировали отфильтрованным ретровирусным супернатантом при разведении 1:2. Полибрен добавляли до концентрации 8 мкг/мл, планшеты вращали в течение 90 мин, и инкубировали в течение ночи при 37°C. Через 24 ч после инфицирования к инфицированным клеткам добавляли 2 мкг/мл пуромицина, и клетки непрерывно выращивали в присутствии пуромицина и 10 нг/мл IL-3. Были созданы следующие стабильно экспрессирующие клеточные линии Ba/F3: Ba/F3-EGFR-V769_D770insASV, Ba/F3-EGFRD770_N771insNPG, Ba/F3-EGFR-N771_P772insH, Ba/F3-EGFR-H773_V774insNPH, Ba/F3-EGFRE746_A750del, Ba/F3-EGFR-L858R, Ba/F3-EGFR-D770_N771insSVD C797S, Ba/F3-EGFR-E746_A750del C797S, Ba/F3-EGFR-L858R C797S, Ba/F3-EGFR L861Q и Ba/F3-ERBB2-A775_G776insYVMA (Ba/F3 вектор-контроль).

Для анализов выживаемости клеток, клетки Ba/F3 выращивали до плотности 1-2 миллиона клеток на мл, центрифугировали и ресуспендировали в среде без IL-3, и повторно высевали при концентрации 200,000-500,000 клеток на мл. Клетки, эктопически экспрессирующие WT EGFR, высевали с 10 нг/мл Millipore Culture grade EGF, и клетки Ba/F3, содержащие мутант EGFR или мутант ERBB2, выращивали без EGF. Клетки, эктопически экспрессирующие пустой вектор pBABEpuro, высевали с 10 нг/мл IL-3.

Выживаемость клеток измеряли путем добавления 20 мкл реагента Cell Titer-Glo Luminescent Cell

- 121 046642

Viability Reagent, разведенного 1:3 в PBS. Планшеты герметично закрывали Perkin Elmer Top-Seal, несколько раз переворачивали для перемешивания, и сразу же центрифугировали при 1000 об/мин в течение 2 мин. Планшеты инкубировали в условиях низкой освещенности в течение 8-10 мин и измеряли люминесценцию. Значения IC50 для примеров показаны в табл. 6, 7, 8 и 9.

Описание клеточных данных (клетки PC9, EGFRexl9del).

Клетки PC9 были приобретены в ATCC. 400 клеток PC9 на лунку высевали в среду для выращивания (DMEM, 10% FCS) в 384-луночный планшет (CORNING #3571). Контрольный планшет для определения нулевого момента времени засевали в тот же день. Все планшеты инкубировали в течение ночи при 37°C. Через 24 часа добавляли тестируемое соединение в 7-ступенчатом разведении с использованием HP Compound printer и инкубировали при 37°C в течение 72 ч. Через 3 дня в каждую лунку добавляли 30 мкл/лунку раствора CTG (раствор Promega Cell Titer Glo; кат. № G755B и G756B), смесь инкубировали в течение 30 минут и планшет считывали на приборе PheraStar. Пролиферацию рассчитывали после вычитания значений люминесценции в нулевой момент времени из значений дня 4 и сравнения с необработанными лунками.

Значения IC₅₀ определяли с использованием четырехпараметрической подгонки. Значения IC₅₀ для примеров показаны в табл. 9.

Описание клеточных данных (клетки HCC-827, EGFRexl9del).

Клетки HCC-827 были приобретены в ATCC. 400 клеток HCC-829 на лунку высевали в среду для выращивания (RPMI1640, 10% FCS) в 384-луночный планшет (CORNING #3571). Контрольный планшет для определения нулевого момента времени засевали в тот же день. Все планшеты инкубировали в течение ночи при 37°C. Через 24 часа тестируемое соединение добавляли в 7-ступенчатом разведении с использованием HP Compound printer, и инкубировали при 37°C в течение 72 ч. Через 3 дня в каждую лунку добавляли 30 мкл/лунку раствора CTG (раствор Promega Cell Titer Glo; кат. № G755B и G756B), смесь инкубировали в течение 30 минут и планшет считывали на приборе PheraStar. Пролиферацию рассчитывали после вычитания значений люминесценции в нулевой момент времени из значений дня 4 и сравнения с необработанными лунками.

Таблица 6 (инсерционные мутации в экзоне 20 EGFR)

Пример №	BA/F3 (insNPG) IC50 [моль/л]	BA/F3 (ASV) 1С₅₀ [моль/л]	BA/F3 (EGFR N771_772 insH) IC50 [моль/л]	BA/F3 (EGFR Н773 774 insNPH) IC50 [моль/л]
2	4.44 Е-9	4.66 Е-9	7.48 Е-9	2.82 Е-8
5	2.63 Е-8	2.87 Е-8	1.15 Е-8	7.93 Е-8
8	1.16 Е-8	9.62 Е-9	4.91 Е-9	2.31 Е-8
14	1.25 Е-8	1.64 Е-8	7.60 Е-9	6.58 Е-8
20	1.47 Е-8	1.17 Е-8	6.59 Е-9	5.67 Е-8
21	5.65 Е-9	7.78 Е-9	4.22 Е-9	2.76 Е-8
32	9.38 Е-9	1.32 Е-8	1.10 Е-8	4.73 Е-8
42	1.20 Е-8	1.41 Е-8	6.01 Е-9	4.85 Е-8
46	1.43 Е-8	1.17 Е-8	5.77 Е-9	3.89 Е-8
48	4.24 Е-8	4.18 Е-8	1.76 Е-8	1.42 Е-7
50	1.13 Е-8	1.04 Е-8	7.42 Е-9	4.03 Е-8
56	6.96 Е-9	1.41 Е-8	7.36 Е-9	4.89 Е-8

Таблица 7 (классические активирующие и редкие мутации EGFR)

Пример №	BA/F3 (EGFR E746_A750del) IC50 [моль/л]	BA/F3 (EGFR L858R) IC50 [моль/л]	BA/F3 (EGFRL861Q) 1С₅₀ [моль/л]
2	< 1.58 Е-10	5.25 Е-10	1.48 Е-8
5	7.39 Е-10	2.03 Е-9	3.09 Е-8
8	< 1.58 Е-10	7.01 Е-10	1.37 Е-8
14	1.72 Е-9	1.22 Е-9	2.01 Е-8
20	3.32 Е-10	9.64 Е-10	1.62 Е-8
21	2.03 Е-10	6.44 Е-10	7.34 Е-9
32	2.89 Е-9	1.06 Е-9	1.74 Е-8
42	4.86 Е-10	1.51 Е-9	1.88 Е-8
46	1.05 Е-9	9.57 Е-10	1.58 Е-8
48	1.43 Е-9	2.36 Е-9	3.97 Е-8
50	1.10 Е-9	1.07 Е-9	2.40 Е-8
56	8.92 Е-10	1.34 Е-9	2.95 Е-8

- 122 046642

Таблица 8 (пределы приобретенной резистентности)

Пример №	BA/F3 (EGFR 0770 N771 insSVD C797S) IC50 [моль/л]	BA/F3 (EGFR Е746 A750del C797S) IC50 [моль/л]	BA/F3 (EGFR L858R C797S) IC50 [моль/л]
2	8.22 Е-9	2.20 Е-10	6.03 Е-10
5	3.70 Е-8	6.68 Е-10	2.67 Е-9
8	1.46 Е-8	2.47 Е-10	1.20 Е-9
14	2.49 Е-8	3.79 Е-10	1.91 Е-9
20	1.22 Е-8	3.49 Е-10	7.91 Е-10
21	7.84 Е-9	2.59 Е-10	4.44 Е-10
32	1.58 Е-8	5.11 Е-10	1.12 Е-9
42	1.93 Е-8	4.94 Е-10	1.63 Е-9
46	1.85 Е-8	4.00 Е-10	1.13 Е-9
48	5.66 Е-8	7.76 Е-10	2.56 Е-9
50	2.07 Е-8	3.48 Е-10	1.60 Е-9
56	1.40 Е-8	4.23 Е-10	1.31 Е-9

Таблица 9 (мутанты ERBB2, PC9, HCC-827)

Пример №	BA/F3 (ERBB2 А775 G776 insYVMA) IC50 [моль/л]	РС9 IC50 [моль/л]	НСС-827 IC50 [моль/л]
2	8.31 Е-9	6.73 Е-10	< 3,00 Е-9
5	3.18 Е-8	1.94 Е-9	< 3,00 Е-9
8	1.31 Е-8	7.38 Е-10	< 3,00 Е-9
14	1.36 Е-8	2.12 Е-9	< 3,00 Е-9
20	2.35 Е-8	2.68 Е-9	< 3,00 Е-9
21	1.34 Е-8	1.16 Е-9	< 3,00 Е-9
32	1.67 Е-8	1.70 Е-9	< 3,00 Е-9
42	1.32 Е-8	4.03 Е-9	< 3,00 Е-9
46	1.10 Е-8	2.89 Е-9	< 3,00 Е-9
48	3.98 Е-8	3.40 Е-9	< 3,00 Е-9
50	1.03 Е-8	6.82 Е-9	< 3,00 Е-9
56	1.35 Е-8	1.74 Е-9	< 3,00 Е-9

- 123 046642

Ссылочная литература

Arcila и др., 2012: Arcila и др., Clin Cancer Res., 15 сент. 2012 г.; 18(18): 4910-8

Chen и др., 2016: Chen и др., Onco Targets Ther., 8 июля 2016 г.; 9: 4181-6 Chiu и др., 2015: Chiu и др., J Thorac Oncol. 2015 г.; 10: 793-799 Doebele и др., 2018: Doebele и др., постер 338, представленный на 54-й ежегодной встрече Американского общества клинической онкологии, 1-5 июня 2018 г, Чикаго, Иллинойс

Floc'h и др., 2018: Floc'h и др., Mol Cancer Ther., май 2018 г., 17(5): 885-896 Hasako и др., 2018: Hasako и др., Mol Cancer Ther., авг. 2018 г.; 17(8): 16481658

Jang и др., 2018: Jang и др., Angew Chem, Международное изд. на англ, яз., 3 сент. 2018 г.; 57(36): 11629-11633

Мок и др., 2009: Мок и др., N Engl J Med., 3 сент. 2009 г.; 361(10): 947-57 Мок и др., 2017: Мок и др., N Engl J Med. 16 фев. 2017 г.; 376(7): 629-640 Oxnard и др., 2013: Oxnard и др., J Thorac Oncol., фев. 2013 г.; 8(2): 179-184 Oxnard и др., 2018: Oxnard и др., JAMA Oncol. 2018 г.; 4(11): 1527-1534 Paez и др., 2004: Paez и др., Science, 4 июня 2004 г.; 304(5676): 1497-500 Рао и др., 2005: Рао и др., PLoS Med., март 2005 г.; 2(3): е73

Рао и др., 2010: Рао и Chmielecki, Nat Rev Cancer., ноябрь 2010 г.; 10(11): 760-74

Ramalingam и др., 2018а: Ramalingam и др., J Clin Oncol., 20 марта 2018 г.; 36(9): 841-849.

Ramalingam и др., 2018b: Ramalingam и др., ESMO 2018; Annals Oncol., οκτ. 2018 г.: 29 (Дополнение 8)

Robichaux и др., 2018: Robichaux и др., Nat Med., май 2018 г.; 24(5): 638-646 Sequist и др., 2013: Sequist и др., J Clin Oncol., 20 сент. 2013 г.; 31(27): 3327-34

Soria и др., 2018: Soria и др., N Engl J Med., 11 янв. 2018 г.; 378(2): 113-125 Thress и др., 2015: Thress и др., Nat Med., июнь 2015 г.; 21(6): 560-562 Yang и др., 2015: Yang и др., Lancet Oncol., июль 2015 г.; 16(7):830-8 Yasuda, 2013: Yasuda, Sci Transl Med., 18 дек. 2013 г.; 5(216): 216ral77.

Claims

1. Соединение формулы (I)

в которой R¹ представляет собой метил, этил, трифторметил, 2,2-дифторэтил, циано, хлор, бром, метокси или дифторметокси;

R³ представляет собой водород или фтор;

R⁴ представляет собой водород или метил;

R⁵ независимо в каждом случае представляет собой водород, трифторметил или C₁-C₃-αлкил, причем

R⁶ независимо в каждом случае представляет собой водород, С1-С₃-алкил или C₁-C₃-галогеналкил;

R⁷ представляет собой С_гС₃-алкил или C₂-C₃-галогеналкил;

R⁸ представляет собой С1-С₃-алкил или С₂-С₃-галогеналкил;

X представляет собой NR⁷ или O;

Y представляет собой NR⁸ или O;

m представляет собой 0, 1, 2 или 3;

n представляет собой 0 или 1;

или N-оксид, соль или таутомер указанного соединения, или соль указанного N-оксида или таутомера.

2. Соединение формулы (I) по п.1, где

R³ представляет собой водород или фтор;

R⁴ представляет собой водород или метил;

R⁷ представляет собой С1-С₂-алкил или С₂-С₃-фторалкил;

R⁸ представляет собой С1-С₂-алкил или С₂-С₃-фторалкил;

X представляет собой NR⁷ или O;

Y представляет собой NR⁸ или O;

m представляет собой 0, 1 или 2;

n представляет собой 0 или 1;

3. Соединение формулы (I) по п.1 или 2, где

R² представляет собой фтор или хлор;

R³ представляет собой водород или фтор;

R⁴ представляет собой водород;

R⁶ представляет собой водород;

R⁷ представляет собой метил;

X представляет собой NR⁷ или O;

Y представляет собой NR⁸ или O;

m представляет собой 0, 1, или 2;

n представляет собой 0 или 1;

- 136 046642

4. Соединение формулы (I) по любому из пп.1-3, которое выбирают из группы, состоящей из:

3 -(3 -хлор-2-метоксианилино)-2-{ 3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси] пиридин-4-ил}-1,5,6,7 -тетрагидро4Н-пиРРОло [3 ,2<]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(2S)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3 ,2<]пиридин-4-она;

2-(3-{[(28)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-она;

2-(3-{[(2К)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метоксианилино)-1,5,6,7- тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(2,3-дихлоранилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Hпирроло [3 Д-ДпиридинЧ-она;

3-(2,3-дихлоранилино)-2-(3-{[(2S)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Hпирроло [3 Д-ДпиридинЧ-она;

3-(2,3-дихлоранилино)-2-(3-{[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4Hпирроло [3 Д-ДпиридинЧ-она;

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Hпирроло [3 Д-ДпиридинЧ-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(3R)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(2R)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(2S)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(2R)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(2S)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(3S)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(3S)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

2-(3-{[(2S)-4-(2,2-дифторэтил)морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3 -(3-фтор-2метоксианилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-она;

3-(3-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{ [(2S)-4-(2,2,2-трифторэтил)морфолин-2-ил]метокси}пиридин-4ил)-1,5,6,7-теmрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[2-(4-диоксан-2-ил)этокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Hпирроло [3 Д-ДпиридинЧ-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{2-[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{2-[^)-1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло ^^-^пиридинТ-она;

3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{ [(2S)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)1,5,6,7-теmрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-5-фтор-2-метоксианилино)-2-(3-{[^)-4-(2,2,2-трифторэтил)морфолин-2ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро-4H-пирроло[3,2-c]пиридин-4-она;

3 -(3 -хлор-2-этиланилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2<]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4H-пирроло [3,2-c]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{[(2R)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)- 137 046642

1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-меmоксианилино)-2-(3-{[(2S)-5,5-димеmил-1,4-диоксан-2-ил]меmокси}nиридин-4-ил)1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[(2К)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3 -(3-фтор-2-метоксианилино)1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[(28)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метоксианилино)1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{2-[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]эmокси}nиридин-4-ил)-3-(3-фmор-2-меmоксианилино)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{2-[(2S)-1,4-диоксан-2-ил]эmокси}nиридин-4-ил)-3-(3-фmор-2-меmоксианилино)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-фmор-2-меmоксианилино)-2-(3-{[(3R)-4-меmилморфолин-3-ил]меmокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-3-(3-фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[(28)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метиланилино)1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-[2-(2,2-дифторэтил)-3-фторанилино]-2-(3-{[(2S)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(2S)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(3R)-4-метилморфолин-3-ил]метокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-{3-[(5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(2S)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(2R)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-3-(3-фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Нпирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[(2S)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[(2К)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(3-фтор-2-метиланилино)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[^)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метиланилино)-2-(3-{[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-{3-[(1,4-диоксан-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7-тетрагидро-4Нпирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(2S)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(2R)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-этиланилино)-2-(3-{[(2S)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{1-[1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{(^)-1-|(2,5')-1,4-диоксан-2-ил|этокси;пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{(1S)-1-[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]этокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{(1R)-1-[(2S)-1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-(3-{(1R)-1-[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]этокси}пиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-фтор-2-метиланилино)-2-{3-[(4-метилморфолин-2-ил)метокси]пиридин-4-ил}-1,5,6,7

- 138 046642 тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-фтор-2-метиланилино)-2-(3-{[(2R)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-фтор-2-метиланилино)-2-(3-{[(2S)-4-метилморфолин-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро-4Нпирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[(2R)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7-тетрагидро4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[(28)-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7-те^,трагидро4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3-(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[(2R)-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}nиридин-4-ил)-3 -(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

2-(3-{[(25}-5,5-диметил-1,4-диоксан-2-ил]метокси}пиридин-4-ил)-3 -(2-этил-3-фторанилино)-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло [3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({1-[4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил]-1,5,6,7тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({(1R)-1-[(2R)-4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)nиридин-4-ил]1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-|3-({(^)-1-|(2,5')-4-метилморфолин-2-ил|этил}окси)пиридин-4-ил|1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

3-(3-хлор-2-метоксианилино)-2-[3-({(1R)-1-[(2S)-4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)nиридин-4-ил]1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она;

3 -(3 -хлор-2-метоксианилино)-2-[3 -({(1 S)-1-[(2R)-4-метилморфолин-2-ил]этил}окси)пиридин-4-ил] 1,5,6,7-тетрагидро-4Н-пирроло[3,2-с]пиридин-4-она.

5. Применение соединения общей формулы (I) по любому из пп.1-4 для лечения или профилактики гиперпролиферативных заболеваний и/или нарушений, реагирующих на индукцию гибели клеток.

6. Применение по п.5, где гиперпролиферативные заболевания и/или нарушения, реагирующие на индукцию гибели клеток, представляют собой гематологические опухоли, солидные опухоли и/или их метастазы.

7. Применение по п.6, где опухоль представляет собой опухоль, заякоривающую мутант EGFR.

8. Применение по п.7, где опухоль, заякоривающая мутант EGFR, представляет собой рак легких, заякоривающий мутант EGFR с инсерционной мутацией в экзоне 20, с делециями внутри рамки считывания в экзоне 19 или с точковыми мутациями в экзоне 21.

9. Применение по п.8, где мутант EGFR с инсерционной мутацией в экзоне 20 представляет собой ERBB2 A775_G776insYVMA, мутант EGFR с делециями внутри рамки считывания в экзоне 19 представляет собой EGFR E746_A750del, и мутант EGFR с точковыми мутациями в экзоне 21 представляет собой L858R.

10. Применение по п.7, где опухоль, заякоривающая мутант EGFR, представляет собой рак легких, заякоривающий мутант EGFR с приобретенной резистентной мутацией D770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S или L858RC797S.

11. Фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно соединение общей формулы (I) по любому из пп.1-4, вместе с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым вспомогательным средством.

12. Композиция по п.11 для лечения гематологических опухолей, солидных опухолей и/или их метастазов.

13. Комбинация для лечения или профилактики гиперпролиферативных заболеваний и/или нарушений, реагирующих на индукцию гибели клеток, содержащая один или несколько первых активных компонентов, выбранных из соединений общей формулы (I) по любому из пп.1-4, и один или несколько вторых активных компонентов, выбранных из химиотерапевтических противоопухолевых средств и мишень-специфических противоопухолевых средств.

14. Способ ингибирования активности киназы EGF-рецепторов в опухолевой клетке, который включает приведение в контакт опухолевой клетки с соединением общей формулы (I) по любому из пп.1-4.

15. Способ по п. 14, где опухолевая клетка представляет собой клетку in vitro или in vivo.

16. Способ снижения выживаемости опухолевой клетки или индуцирования гибели опухолевой клетки, который включает приведение в контакт опухолевой клетки, содержащей мутацию в EGFрецепторе, с соединением общей формулы (I) по любому из пп.1-4.

17. Способ по любому из пп.14-16, где EGF-рецептор содержит мутацию в экзоне 20.

18. Способ по любому из пп.14-17, где опухолевая клетка происходит из злокачественного новообразования, выбранного из группы, состоящий из лейкемии, миелодиспластического синдрома, злокаче

- 139 046642 ственной лимфомы, опухолей головы и шеи, гастроинтестинальных опухолей, эндокринных опухолей, опухолей молочной железы и других гинекологических опухолей, урологических опухолей, опухолей кожи и саркомы.

19. Способ по п.18, где опухолевая клетка происходит из злокачественного новообразования, выбранного из группы, состоящий из синоназальной инвертированной папилломы или синоназальной плоскоклеточной карциномы, ассоциированной с синоназальной инвертированной папилломой.

20. Способ лечения злокачественного новообразования у субъекта, который включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I) по любому из пп.1-4.

21. Способ лечения злокачественного новообразования у субъекта, где злокачественное новообразование является устойчивым или приобрело устойчивость к терапии антителами против рецепторов EGF, который включает введение субъекту эффективного количества соединения общей формулы (I) по любому из пп.1-4.

22. Способ повышения эффективности терапии антителами против рецепторов EGF злокачественного новообразования, который включает проведение субъекту терапии антителами против рецепторов EGF в комбинации с соединением общей формулы (I) по любому из пп.1-4.

23. Способ по любому из пп.20-22, где злокачественное новообразование выбирают из группы, состоящей из лейкемии, миелодиспластического синдрома, злокачественной лимфомы, опухолей головы и шеи, опухолей грудной клетки, гастроинтестинальных опухолей, эндокринных опухолей, опухолей молочной железы и других гинекологических опухолей, урологических опухолей, опухолей кожи и сарком.

24. Способ по п.23, где злокачественное новообразование выбирают из группы, состоящий из синоназальной инвертированной папилломы или синоназальной плоскоклеточной карциномы, ассоциированной с синоназальной инвертированной папилломой.

25. Способ по п.23, где опухоль грудной клетки представляет собой немелкоклеточный рак легких.

26. Способ по любому из пп.14-25, где EGF-рецептор содержит мутацию.

27. Способ по п.26, где EGF-рецептор содержит мутацию в экзоне 20.

28. Способ по п.27, где EGF-рецептор содержит инсерцию в экзоне 20.

29. Способ по п.28, где EGF-рецептор содержит инсерцию между аминокислотами V769-D770 и/или между D770-N771.

30. Способ по п.29, где инсерция представляет собой ASV и/или SVD инсерцию.

31. Способ по п.28, где EGF-рецептор содержит ASV инсерцию между аминокислотами V769-D770 и/или SVD инсерцию между аминокислотами D770-N771.

32. Способ отбора пациента для лечения злокачественного новообразования соединением общей формулы (I) по любому из пп.1-4, который включает обнаружение мутации в экзоне 20 EGF-рецептора в биологическом образце субъекта, тем самым определяя, что пациента следует лечить указанным соединением.

33. Способ лечения пациента со злокачественным образованием, который включает проведение субъекту терапии антителами против рецепторов EGF в комбинации с соединением общей формулы (I) по любому из пп.1-4, где субъект для терапии выбирают путем обнаружения мутации в экзоне 20 EGFрецептора в биологическом образце субъекта.

34. Способ по п.32 или 33, где EGF-рецептор содержит инсерцию в экзоне 20.

35. Способ по п.34, где EGF-рецептор содержит инсерцию между аминокислотами V769-D770 и/или между аминокислотами D770-N771.

36. Способ по п.35, где инсерция представляет собой ASV и/или SVD инсерцию.

37. Способ по п.34, где EGF-рецептор содержит ASV инсерцию между аминокислотами V769-D770 и/или SVD инсерцию между аминокислотами D770-N771.

38. Способ по любому из пп.14, 16, 22, 32 и 33, где злокачественное новообразование представляет собой рак легких, в частности рак легких, заякоривающий мутант EGFR с делециями внутри рамки считывания в экзоне 19 или точковыми мутациями в экзоне 21, и/или его метастазы.

39. Способ по п.38, где рак легких, заякоривающий мутант EGFR с делециями внутри рамки считывания в экзоне 19, представляет собой EGFR E746_A750del или точковыми мутациями в экзоне 21 представляет собой L858R.

40. Способ по любому из пп.14, 16, 22, 32 и 33, где злокачественное новообразование представляет собой рак легких, в частности рак легких, заякоривающий мутант EGFR с приобретенной резистентной мутацией D770_N771insSVD C797S, E746_A750del C797S или L858R C797S, и/или его метастазы.

41. Способ по любому из пп.14, 16, 22, 32 и 33, где злокачественное новообразование представляет собой рак легких, в частности рак легких, заякоривающий мутант ERBB2 с инсерционными мутациями в экзоне 20, и/или его метастазы.

42. Способ по п.41, где рак легких, заякоривающий мутант ERBB2 с инсерционными мутациями в экзоне 20, представляет собой ERBB2 A775_G776insYVMA.