EA029771B1 - Химические соединения - Google Patents

Abstract

Описаны химические соединения, выбранные из соединений формулы (I)где R, Rи m имеют значения, перечисленные в описании, и их фармацевтически приемлемые соли, сольваты и стереоизомеры, которые являются ингибиторами ATR и потенциально могут применяться в лечении раковых заболеваний. Также описаны фармацевтические композиции данных химических соединений, комбинированные продукты, содержащие данные химические соединения, применение описанных композиций в качестве терапевтических средств и способы лечения с применением описанных композиций.

Description

Настоящее изобретение касается также фармацевтических композиций, содержащих такие химические соединения, и их применения.

Предшествующий уровень техники

Трициклические химические соединения по настоящему изобретению представляют собой ингибиторы АТК и имеют ряд терапевтических применений, в частности в лечении раковых заболеваний.

Раковые заболевания являются следствием неконтролируемого роста клеток в широком ряде различных тканей. Во многих случаях новые клетки проникают в существующие ткани или дают метастазы в удаленные органы. Раковые заболевания наблюдаются в широком ряде органов и часто развиваются специфическим образом, в зависимости от поражаемой ткани. Поэтому термин «раковое заболевание» является обобщенным термином, описывающим большую группу определенных заболеваний различных органов, тканей и типов клеток.

В 2008 году раковые заболевания были диагностированы у более чем 12 миллионов людей во всем мире. В том же году примерно 7.5 миллионов случаев смерти были вызваны этими заболеваниями (О1оЬоеаи 2008 Керой). Только в США в 2012 году прогнозировалось более 1.6 миллионов новых случаев и более 500000 смертей вследствие раковых заболеваний. Большинство этих новых случаев относятся к раку толстого кишечника (~100000), легких (~230000), груди (~230000) и простаты (~240000) (Ашейсап Сапсег 8ос1е1у. Сапсег Рас18 ап4 Идигек 2012).

Многие современные методы лечения рака, включая химиотерапевтические средства и ионизирующее излучение, вызывают повреждение ДНК и нарушение репликативной вилки, тем самым активируя пути контрольных точек клеточного цикла и приводя к остановке клеточного цикла. Многие исследования показали, что такой ответ является важным механизмом, помогающим раковым клеткам выживать после лечения. Эти результаты послужили толчком к разработке новых средств, нацеленных на сигнальные пути ответа на повреждение ДНК.

АТК относится к семейству фосфатидилинозитоло-киназосвязанных киназ (ΡΙΚΚ) и активируется при различных повреждениях ДНК. В частности, АТК необходима при координации ответа на репликативный стресс (К8), которым называют патологическое накопление одноцепочечной ДНК (δδΌΝΑ). Рекомбиногенная природа 88ΌΝΑ приводит к хромосомным перестройкам, являющимся отличительными особенностями раковых заболеваний. В ответ на К8, АТК запускает остановку клеточного цикла на стадиях 8 и О2/М путем фосфорилирования СНК1.

АТК может предотвращать развитие ракового заболевания, поскольку АТК ответ в контрольной точке может ограничить экспансию предраковых клеток, испытывающих К8 в результате активации онкогена. Более того, поскольку направление АТК-СНК1 контрольной точки предназначено для выживания клетки после К8, нормальный и здоровый тип АТК-СНК1 контрольной точки может быть механизмом резистентности к химиотерапии и может давать возможность раковым клеткам выживать при высоких эндогенных уровнях К8.

Ингибирование компонентов направления АТК-СНК1 потенциально может повысить эффективность ингибиторов репликации. Кроме того, ингибирование АТК может, в частности, быть токсично для клеток с высоким уровнем К8, таких как клетки, экспрессирующие онкогены или испытывающие недостаток опухолевых супрессоров. В таких клетках сильное ограничение активности АТК (например, при использовании ингибитора АТК) генерировало бы летальные количества К8, приводящие к гибели клеток.

Потенциальное преимущество такой сенсибилизации клеток заключается в снижении дозировки ингибиторов репликации. Это может уменьшать токсичность в отношении, среди прочих, гематологической и желудочно-кишечной систем органов, если нормальные клетки не сенсибилизируются в такой же степени. Специфичности ингибитора репликации в плане гибели раковых клеток может способствовать тот факт, что нетрансформировавшиеся клетки имеют более устойчивые контрольные точки 8 и О2, чем опухолевые клетки. Например, многие виды раковых заболеваний имеют мутации по р53 или другим компонентам сигнального пути р53, что приводит к зависимости от контрольных точек 8 и О2 в плане остановки клеточного цикла, репаративного синтеза и выживания. Поэтому ингибирование контрольных точек 8 и О2 может приводить к предпочтительной гибели таких р53-дефицитных опухолевых клеток.

Перечисление или обсуждение ранее опубликованных документов в настоящем тексте не обязательно следует считать признанием того, что такой документ является частью предшествующего уровня техники или является общеизвестным фактом.

Наблюдается недостаток эффективных ингибиторов АТК. Поэтому есть потребность в химических соединениях, селективно ингибирующих АТК, для клинического применения или для дальнейшего исследования АТК-ответа.

Сущность изобретения

Изобретение касается серии трициклических химических соединений, представляющих собой ингибиторы АТК. Эти химические соединения демонстрируют хорошую селективность к АТК и потенци- 1 029771

ально могут применяться в лечении раковых заболеваний. Настоящее изобретение касается также фармацевтических композиций с указанными химическими соединениями, применения данных композиций в качестве терапевтических средств и способов лечения с применением описанных композиций.

В одном аспекте, в настоящем изобретении описаны химические соединения, выбранные из соединений формулы (I)

К₂ выбран из ЫРз$О₂Рз, алкила, циклоалкила, арила и гетероарила;

где Κ₃, в каждом случае независимо, выбран из Н, алкила, циклоалкила и гетероциклоалкила; и т равен 1 или 2;

алкил представляет собой линейный насыщенный углеводород, содержащий до 10 атомов углерода (С₁-С₁₀) или разветвленный насыщенный углеводород, содержащий 3-10 (т.е. от 3 до 10) атомов углерода (С3-С10);

циклоалкил представляет собой моно- или бициклический насыщенный С₃-С₁₀ углеводород, который может быть необязательно сопряжен с арильной группой; или

циклоалкил представляет собой адамантил;

гетероциклоалкил представляет собой С-связанное или Ν-связанное 3-10-членное насыщенное моно- или бициклическое кольцо, которое содержит 1, 2, 3 или 4 гетероатомов в цикле, независимо выбранных из Ν, δ и О, где атом N или δ в цикле может иметь в качестве заместителя атом кислорода, формируя Ν-оксидную, сульфоксидную или сульфоновую группу;

арил представляет собой фенил, бифенил или нафтил; и

гетероарил представляет собой 5, 6, 9 или 10, 12, 13 или 14-членное моно-, би- или трициклическое ароматическое кольцо, которое может содержать 1, 2, 3 или 4 гетероатомов в цикле, независимо выбранных из Ν, δ и О;

и их фармацевтически приемлемые соли, сольваты и стереоизомеры.

Когда любой из Κ₁, К₂ и К₃ выбран из алкила, циклоалкила, гетероциклоалкила, арила и гетероарила, в соответствии с представленной выше формулой (I), то такая группа может быть замещенной или незамещенной. Если группа замещенная, то в целом может присутствовать от 1 до 5 заместителей, предпочтительно 1, 2 или 3 заместителя.

Заместители для указанных алкила, гетероциклоалкила, циклоалкила, если не указано иное, могут быть независимо выбраны из атома галогена, ОН, ΟΝ, СООК₄, СЕ₃, ΝΚ₄Κ₄, ΝΚ^ΟΚ^ (ΝΡ₄)_ηδΟ₂Κ₄, где η равен 0 или 1, алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О-алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или два заместителя у одного атома могут быть объединены с атомом, к которому они присоединены, с образованием циклической структуры, выбранной из циклоалкила и гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, С(О)С₁-С₄ алкила, С(О)О-(С₁-С₄ алкил) и С₁-С₄ алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена; и

где Κ4 в каждом случае независимо выбран из Н, алкила, арила, гетероарила, циклоалкила и гетероциклоалкила, где алкил, арил, гетероарил, циклоалкил и гетероциклоалкил необязательно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из атома галогена, алкила, О-алкила, Н(С₁-С₄алкил)₂, Н(С₁-С₄алкил) СОС₁-С₄алкила, или две группы Κ4 в заместителе объединены с атомом(-ами), к которым они присоединены, формируя гетероциклоалкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена, или, когда заместитель, представляющий собой Κ4 группу, присутствует в алкиле, циклоалкиле или гетероциклоалкиле, К₄ группа объединена с заместителем на этом алкиле, циклоалкиле или гетероциклоалкиле с образованием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

Заместители для указанных арила и гетероарила могут быть независимо выбраны из атома галогена, ОН, СН, СООК₄, СЕ₃, ΝΚ₄Κ₄, НЩСОРл, (НР₄)^О₂К4, где η равен 0 или 1, ΝΗΚ₅, алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, О-алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена;

где Κ5 независимо выбран из СОалкила, СОарила или СОгетероарила.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, заместители для указанных алкила, гетероциклоалкила, циклоалкила, если не указано иное, могут быть независимо выбраны из атома галогена, ОН, СН, СООК₄, СЕ₃, ΝΚ₄Κ₄, НК₄СОК₄, (НКЦ^О^, где η равен 0 или 1, алкила, необязательно за- 2 029771

мещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О-алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или два заместителя у одного атома могут быть объединены с атомом, к которому они присоединены, с образованием циклической структуры, выбранной из циклоалкила и гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, и С₁-С₄ алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

Настоящее изобретение охватывает все таутомеры, изомеры, стереоизомеры (включая энантиомеры, диастереомеры и рацемические и скалемические смеси) описанных в настоящем тексте соединений формулы (I), и их фармацевтически приемлемые соли и пролекарства.

В другом аспекте в настоящем изобретении описаны Ы-оксиды описанных в настоящем тексте соединений формулы (I), и их таутомеры, изомеры, стереоизомеры (включая энантиомеры, диастереомеры и рацемические и скалемические смеси), а также из фармацевтически приемлемые соли и пролекарства.

Следует понимать, что некоторые химические соединения по настоящему изобретению могут существовать в сольватированных, например гидратированных, а также негидратированных формах. Следует понимать, что настоящее изобретение охватывает все такие сольватированные формы.

Настоящее изобретение также охватывает представленные далее аспекты, альтернативы и комбинации. Предпочтения и опции для каждого отдельного аспекта, отличительной особенности или параметра настоящего изобретения следует, если не указано иное, понимать как описанное в комбинации с любым и каждым предпочтениями и опциями для всех других аспектов, отличительных особенностей и параметров настоящего изобретения. Например, частные определения группы К₁, данные в настоящем тексте, могут комбинироваться с частными определениями группы К₂.

В одном аспекте настоящего изобретения, К₁ представляет собой гетероарил. В частности, К₁ представляет собой бициклический гетероарил.

В одном аспекте настоящего изобретения К₁ выбран из

и, в частности, из

где каждый из К₆, К₇, К₈, К₉, К₁₁ и К₁₂ независимо выбран из Н, атома галогена, циклоалкила, ОН, СЫ, СООК₄, СР₃, ЫК₄К₄, ЫК₄СОК₄, К₁₀ и ОК₁₀, где К₁₀ представляет собой (С₁-С₆)алкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена.

Предпочтительно К₆ выбран из атома галогена или Н, более предпочтительно Р или Н.

Предпочтительно К₇, К₈ и К₉ каждый независимо выбраны из СЫ или, в частности, Н, атома галогена, К₁₀ и ОК₁₀, более предпочтительно из Н, атома галогена и К₁₀.

Предпочтительно К₇ выбран из атома галогена, (С₁-С₆)алкила и О(С₁-С₆)алкила, в частности из атома галогена и О(С₁-С₆)алкила, конкретнее из атома галогена и ОМе, конкретнее из Р и ОМе.

Предпочтительно К₇ выбран из атома галогена, СЫ, О(С₁-С₆)алкила и (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1-3 атомами галогена, в частности из атома галогена, СЫ, О(С₁-С₄)алкила и (С₁-С₄)алкила, необязательно замещенного 1-3 атомами галогена, конкретнее из атома галогена, СЫ, Ме, СР₃ и ОМе, конкретнее из С1, Р, СЫ, Ме, СР₃ и ОМе.

Предпочтительно К₁₁ выбран из Н, К₁₀, ЫК₄К₄ и ЫК₄СОК₄, например из морфолинила, Ы(С_1-4алкил) С_1-4алкила, или в частности Н, (С₁-С₆)алкила, ЫН₂, ЫНС_1-4алкила и ЫНСОС_1-4алкила, конкретнее из Н, Ме, ЫНМе, Ы(Ме)₂, ЫНЕ!, ЫН(изо-пропил), ЫН(н-пропил), ЫН₂ и морфолин-4-ила. Более предпочтительно, К₁₁ выбран из (С_1-С₆)алкила, ЫК₄К₄ и ЫК₄СОК₄, более предпочтительно из ЫК₄К₄, в частности из ЫНМе, Ы(Ме)₂, ЫНЕ!, ЫН(изо-пропил), ЫН(п-пропил), ЫН₂ и морфолин-4-ила.

Предпочтительно К₁₂ выбран из Н, атома галогена, К₁₀ или ОК₁₀, в частности из Н, атома галогена или К₁₀, или конкретнее из Н или К₁₀.

- 3 029771

В частности Кб и К₉, каждый независимо, могут быть выбраны из Р или Н;

К- и К₈, каждый независимо, могут быть выбраны из Н, атома галогена, Кю и ОКю;

К₁₁ может быть выбран из Н, К₁₀, ΝΚ4Κ4 и ЫКдСОКд; и

К₁₂ выбран из Н, атома галогена, К₁₀ или ОК₁₀.

Альтернативно Кб и К₉ каждый независимо могут быть выбраны из Р или Н;

К- и К₈, каждый независимо, могут быть выбраны из Н, атома галогена, СН, К₁₀ и ОК₁₀;

К₁₁ может быть выбран из Н, К₁₀, НК^ и Н^СОК, и

К₁₂ выбран из Н, атома галогена, К₁₀ или ОК₁₀.

Альтернативно Кб может быть выбран из атома галогена или Н, в частности из Р или Н;

К₇, К₈ и К₉ могут быть, каждый независимо, выбраны из Н, атома галогена, К₁₀ и ОК₁₀;

К₁₁ может быть выбран из Н, К₁₀, НК-К, и Н^СОК,

где К4, в каждом случае независимо, выбран из Н или алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или группы К. объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена; и

К₁₂ может быть выбран из Н или К₁₀.

В другом альтернативном варианте, К_б может быть выбран из атома галогена или Н, в частности из Р или Н;

К₇, К₈ и К₉ могут быть каждый независимо выбраны из Н, атома галогена, СН К₁₀ и ОК₁₀;

К₁₁ может быть выбран из Н, К₁₀, НК-,К·, и НК-СОК-,;

где К₄, в каждом случае независимо, выбран из Н или алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или группы К4 объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена; и

К12 может быть выбран из Н, атома галогена или К10.

В частности, Кб может быть выбран из атома галогена или Н, в частности из Р или Н;

К₇, К₈ и К₉ могут быть каждый независимо выбраны из Н, атома галогена, (С_1-б)алкила и О(С_1-б)алкила;

К₁₁ может быть выбран из Н, (С_1-б)алкил, НК₄К₄ и НКСОК,

где К₄, в каждом случае независимо, выбран из Н или алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или группы К₄ объединены с атомом(-ами) углерода, к которым они присоединены, с образованием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена; и

К₁₂ может быть выбран из Н, (С_1-б)алкила или О(С_1-б)алкила.

Альтернативно Кб может быть выбран из атома галогена или Н, в частности из Р или Н;

К₇, К₈ и К₉ могут быть, каждый независимо, выбраны из Н, атома галогена, СН, О(С_1-б)алкила и (С₁б) алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена;

К₁₁ может быть выбран из Н, (С_1-б)алкила, НК-,К·, и НК-СОК-,;

где К4, в каждом случае независимо, выбран из Н или алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или группы К4 объединены с атомом(-ами) углерода, к которым они присоединены, с образованием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена; и

К₁₂ может быть выбран из Н, атома галогена, (С_1-б)алкила или О(С_1-б)алкила.

В частности, К_б может быть выбран из атома галогена или Н, в частности из Р или Н;

К₇, К₈ и К₉ могут быть каждый независимо выбраны из Н, атома галогена, (С_1-б)алкила и О(С_1-б)алкила;

К₁₁ может быть выбран из Н, (С₁-С_б)алкила, ΝΗ₂, ННС_1-,алкила и ННСО(С_1-,)алкила; и

К₁₂ может быть выбран из Н или К₁₀.

Альтернативно, Кб может быть выбран из атома галогена или Н, в частности из Р или Н;

К₇, К₈ и К₉ могут быть каждый независимо выбраны из Н, атома галогена, СН, О(С_1-б)алкила и (С_1-б) алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена;

К₁₁ может быть выбран из Н, (С₁-С_б)алкила, НН₂, ННС_1-4алкила, Н(С_1-4алкил)₂, морфолинила и ННСО(С_1-4)алкила; и

К₁₂ может быть выбран из Н, атома галогена или К₁₀.

Альтернативно, К_б, К₇, К₈, К₉ и К₁₂ могут представлять собой Н; и К₁₁ может быть

выбран из (С₁-С_б)алкила, НК₄К₄ и НК-СОК-,, в частности из НК^.К,,. конкретнее из ННМе, Н(Ме)₂,

ННЕ1. НН(изо-пропил), НН(н-пропил), НН₂ и морфолин-4-ила, конкретнее из ННМе;

где К_-, в каждом случае независимо, выбран из Н или алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3

атомами галогена, или группы К- объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

Альтернативно К₁₁ может быть выбран из (С₁-С_б)алкила, НК₄К₄ и НК-СОК-,; один из К_б, К₇, К₈, К₉ и К₁₂ присутствует и не является Н; и оставшиеся из К_б, К₇, К₈, К₉ и К₁₂, в случае их присутствия, представляют собой Н.

Альтернативно К_б, К₈, К₉, К₁₁ и К₁₂ могут представлять собой Н; и К₇ может быть выбран из атома галогена, (С₁-С_б)алкила и О(С₁-С_б)алкила, в частности из атома галогена и О(С₁-С_б)алкила, конкретнее из атома галогена и ОМе.

- , 029771

В другом альтернативном варианте Кб, К₉, Кп и К₄₂ могут представлять собой Н; и К₇ может быть выбран из атома галогена, СЫ, О(С1-С₆)алкила и (С1-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, в частности из атома галогена, СЫ, Ме, СР₃ и ОМе.

Альтернативно Кб, К₇, К₈, К₉, К₁₁ и К₁₂ могут все представлять собой Н.

В одном аспекте настоящего изобретения К₂ выбран из ЫК₄3О₂К₄, алкила, циклоалкила, арила и гетероциклоалкила, где алкил и циклоалкил необязательно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из 1, 2 или 3 заместителей, выбранных из (ЫК₄)_п3О₂К₄, ОН и СЫ, и дополнительно необязательно замещенных 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₁-С₆)алкил, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и дополнительно необязательно замещены (ί) 2 заместителями у одного атома, которые объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием циклической структуры, выбранной из циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена и С₁-С₄ алкила, или (ίί) заместителем, который объединен с одной из групп К4 с формированием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена;

и где арил и гетероциклоалкил необязательно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из 1, 2 или 3 заместителей, выбранных из (ЫК₄)_п3О₂К₄, ОН и СЫ, и дополнительно необязательно замещенных 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

В другом аспекте настоящего изобретения К₂ выбран из ЫК₃3О₂К₃, алкила, циклоалкила, арила и гетероарила, где алкил и циклоалкил необязательно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из (ΝΚ₄)_η3Ο₂Κ₄, ОН и СЫ, и дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, (С1-С6)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С1-С6)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и дополнительно необязательно замещены (ί) 2 заместителями у одного атома, которые объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием циклической структуры, выбранной из циклоалкила и гетероциклоалкила, которые оба необязательно замещены 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, С1-С4 алкила, С(О)С1-С₄ алкила и С(О)О-С1-С₄ алкила, или (ίί) заместителем, который объединен с одной из групп К₄ (в случае наличия) с формированием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена;

и где арил и гетероарил необязательно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из (ЫК₄)_п3О₂К₄, ОН и СЫ, и дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, (С1-С6)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С1-С6)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

В частности, К₂ выбран из ЫК₄3О₂К₄, алкила и циклоалкила, где алкил и циклоалкил опционально замещены описанным в предыдущем абзаце образом;

в частности, где алкил и циклоалкил замещены по меньшей мере одним заместителем, выбранным из (ЫК₄)_п3О₂К₄, где η равен 0 или 1, ОН и СЫ, и где алкил и циклоалкил дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, СЫ, СООК-|. СР₃, (С₄-С₆) алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С1-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или 2 заместителями у одного атома, которые объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием циклической структуры, выбранной из циклоалкила и гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена и С1-С4 алкила.

В частности, К₂ выбран из ЫК₃3О₂К₃, алкила и циклоалкила, где алкил и циклоалкил опционально замещены описанным в предыдущем абзаце образом;

в частности, где алкил и циклоалкил замещены по меньшей мере одним заместителем, выбранным из (ЫК₄)_п3О₂К₄, где η равен 0 или 1, ОН и СЫ, и где алкил и циклоалкил дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, СЫ, СООК^ СР₃, (С₄-С₆) алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С1-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или 2 заместителями у одного атома, которые объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием циклической структуры, выбранной из циклоалкила и гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, С₄-С₄ алкила, С(О)С₄-С₄ алкила и С(О)О-С1-С₄ алкила.

В частности, К2 может представлять собой алкил, замещенный по меньшей мере одним заместителем, выбранным из (ЫК₄)_п3О₂К₄, ОН и СЫ, и дополнительно необязательно замещенный 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, (С1-С6)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₄-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и дополнительно необязательно замещен- 5 029771

ный (ί) 2 заместителями у одного атома, которые объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием циклической структуры, выбранной из циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена и С₁-С₄ алкила, или (ίί) заместителем, который объединен с одной из групп Кд с формированием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

В частности, К₂ может представлять собой алкил, замещенный по меньшей мере одним заместителем, выбранным из (ΝΚ₄)_ηδΟ₂Κ₄, ОН и ΟΝ, и дополнительно необязательно замещенный 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, (С1-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и дополнительно необязательно замещенный (ί) 2 заместителями у одного атома, которые объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием циклической структуры, выбранной из циклоалкила и гетероциклоалкила, которые оба необязательно замещены 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, С1-С₄алкила, 0(Ο)0ι-0₄ алкила и 0(Ο)Ο-Οι -С₄ алкила, или (ίί) заместителем, который объединен с одной из групп Кд (в случае наличия) с формированием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

В частности, К₂ может представлять собой (СН₂)_рС(К₁₃)₂(СН₂)_чЦ, где О представляет собой (ΝΚ₄)_ηδΟ₂Κ₄, ОН или СЫ, в частности где О представляет собой §Ο₂Κ₄, где р и у независимо равны 0, 1 или 2, и где (ί) К₁₃ независимо выбран из группы, состоящей из Н и (С1-С₄)алкила, в частности где обе К₁₃ группы представляют собой Н, где обе К₁₃ группы представляют собой метил, или (ίί) один К₁₃ выбран из группы, состоящей из Н и (С1-С₄)алкила, а другой К₁₃ объединен с К₄, в случае его наличия, с формированием 3-6-членного гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена и С₁-С₄ алкила, или (ίίί) К₁₃ группы объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием циклической структуры, выбранной из (С3-С6)циклоалкила и 3-6членного гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена и С₁-С₄ алкила, в частности циклопропанила, тетрагидропиранила, пиперидинила или Νметилпиперидинила.

В частности, К₂ может представлять собой (СН₂)_рС(К₁₃)₂(СН₂)_чЦ, где О представляет собой (ΝΚ₄)_η8Ο₂Κ₄, ОН или СЫ, в частности где О представляет собой §Ο₂Κ₄, где р и у независимо равны 0, 1 или 2, и где (ί) К₁₃ независимо выбран из группы, состоящей из Н и (С₁-С₄)алкила, в частности где обе К₁₃ группы представляют собой Н, где обе К₁₃ группы представляют собой метил, или (ίί) один К₁₃ выбран из группы, состоящей из Н и (С₁-С₄)алкила, а другой К₁₃ объединен с К₄, в случае его наличия, с формированием 3-6-членного гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или (ίίί) группы К₁₃ объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием циклической структуры, выбранной из (С₃-С₆)циклоалкила и 3-6-членного гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, С₁-С₄ алкила, Ο(Ο)Οι-Ο₄ алкила и Ο(Ο)Ο-Οι-Ο₄ алкила, в частности циклопропанила, циклобутила, тетрагидропиранила, пиперидинила, Νметилпиперидинила или Ν-этоксикарбонилпиперидинила.

Альтернативно К₂ может быть выбран из ΝΚ₃8Ο₂Κ₃.

В данном и других аспектах настоящего изобретения, К₃ может представлять собой Н или (С₁-С₄) алкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена, в частности Н или (С₁-С₄)алкил, конкретнее Н или Ме.

В некоторых аспектах настоящего изобретения К₄ может представлять собой (С₁ -С₄)алкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена, или (С3-С6)циклоалкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена. В частности, Κ4 может представлять собой метил, циклопропил или трифторметил.

В другом аспекте настоящего изобретения, К₂ выбран из (ΝΚ₄)_ηδΟ₂Κ4, алкила, циклоалкила, арила и гетероарила, где алкил, циклоалкил, арил и гетероарил замещены (ΝΚ4)_ηδΟ₂Κ₄,

и где алкил и циклоалкил дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, СН, ί'.ΌΟΚ·|. СР₃, (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₁С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или двумя заместителями на одном атоме, которые объединены с атомом углерода, к которому они присоединены, с образованием циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена и С₁-С₄ алкила,

и где арил и гетероарил дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, СМ, СΟΟΚ4, СР₃, (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₁-С₆) алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

В другом аспекте настоящего изобретения К₂ выбран из ΝΚ₃8Ο₂Κ₃, алкила, циклоалкила, арила и гетероарила, где алкил, циклоалкил, арил и гетероарил замещены (ΝΚ₄)_η8Ο₂Κ₄,

и где алкил и циклоалкил дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, ΟΝ, ί',ΌΟΚ-μ СР₃, (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₁- 6 029771

С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или двумя заместителями на одном атоме, которые объединены с атомом углерода, к которому они присоединены, с образованием циклоалкила или гетероциклоалкила, которые оба необязательно замещены 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, С₁-С₄ алкила, С(О)С₁-С₄ алкила и С(О)О-С₁-С₄ алкила,

и где арил и гетероарил дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, СЫ, СООК₄, СГ₃, (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₁С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

Например, К₂ может быть выбран из ЫК₃ЗО₂К₃, алкила, циклоалкила, арила и гетероарила, где алкил, циклоалкил, арил и гетероарил замещены (ЫК₄)_П8О₂К₄,

и где алкил, циклоалкил, арил и гетероарил дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, СЫ, СГ₃, (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.

Стереохимическая конфигурация хирального центра в химическом соединении формулы (I) (т.е. хирального центра, соединенного с группой -(СН)_т-) может быть δ. В частности, когда η равен 1, стереохимическая конфигурация хирального центра может быть δ. Конкретнее, когда т равен 1, стереохимическая конфигурация хирального центра может быть δ.

Стереохимическая конфигурация хирального центра может быть К. В частности, когда η равен 2, стереохимическая конфигурация хирального центра может быть К. Конкретнее, когда т равен 2, стереохимическая конфигурация хирального центра может быть К.

В одном аспекте, настоящее изобретение охватывает соединение, выбранное из группы, состоящей из

- 7 029771

- 8 029771

- 9 029771

- 10 029771

и их таутомеров, фармацевтически приемлемых солей, сольватов и стереоизомеров.

Терапевтические применения

Как указано выше, химические соединения по настоящему изобретению представляют собой эффективные и селективные ингибиторы ЛТК. Поэтому они могут применяться в лечении заболеваний, для которых гиперактивность АТК является причинным фактором, или когда активность АТК, в частности, необходима для выживания нездоровых клеток.

Соответственно, в настоящем изобретении описано соединение формулы (I) для использования в медицине.

В настоящем изобретении также описано использование соединения формулы (I) для производства лекарственного средства для лечения или профилактики заболевания или состояния, в котором затрагивается активность АТК.

В настоящем изобретении также описано соединение формулы (I) для использования в лечении или профилактике заболевания или состояния, в котором затрагивается активность АТК.

В настоящем изобретении также описан способ лечения заболевания или состояния, в котором затрагивается активность АТК, включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I).

В одном аспекте заболевание или состояние в котором затрагивается активность АТК, представляет собой раковое заболевание.

В одном аспекте заболевание или состояние в котором затрагивается активность АТК, представляет собой рак легких, рак простаты, меланому, рак яичника, рак груди, рак эндометрия, рак почек, рак желудка, саркомы, рак головы и шеи, опухоли центральной нервной системы и их метастазы, а также для лечения пациентов с острым миелоидным лейкозом.

Другие заболевания и состояния, в которых затрагивается активность АТК, включают (но не ограничиваются только ими) злокачественные заболевания системы крови, такие как лейкемия, множественная миелома, лимфомы, такие как болезнь Ходжкина, неходжкинские лимфомы (включая лимфому из клеток мантии), и миелодиспластический синдром, а также солидные опухоли и их метастазы, такие как рак груди, рак легких (немелкоклеточный рак легких (ЖС1.С), мелкоклеточный рак легких (8СЬС), плоскоклеточная карцинома), рак эндометрия, опухоли центральной нервной системы, такие как глиомы, дизэмбриопластическая нейроэпителиальная опухоль, мультиформная глиобластома, смешанные глиомы, медуллобластома, ретинобластома, нейробластома, герминома и тератома, раковые заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как рак желудка, рак пищевода, гепатоклеточная (печеночная) карцинома, холангиокарцинома, карцинома кишечника и прямой кишки, рак тонкого кишечника, рак поджелудочной железы, раковые заболевания кожи, такие как меланома (в частности, метастатическая меланома), рак щитовидной железы, раковые заболевания головы и шеи и рак слюнных желез, простаты, яичек, яичника, рак шейки матки, рак матки, рак вульвы, рак мочевого пузыря, рак почек (включая почечно-клеточную карциному, светлоклеточную и ренальную онкоцитому), плоскоклеточный рак, саркомы, такие как остеосаркома, хондросаркома, лейомиосаркома, саркома мягких тканей, саркома Юинга, гастроинтестинальная стромальная опухоль (СТЗТ), саркома Капоши и детские раковые заболевания, такие как рабдомиосаркома и нейробластома.

Химические соединения по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с другими терапевтическими средствами. В частности, химические соединения по настоящему изобретению можно вводить в комбинации с цитотоксическими средствами. При использовании комбинированной терапии, химические соединения по настоящему изобретению и указанные агенты, применяемые в комбинации, могут присутствовать в составе одной или разных фармацевтических композиций, и могут вводиться

- 11 029771

отдельно, последовательно или одновременно. Химические соединения по настоящему изобретению и другие терапевтические средства могут присутствовать в комбинации в любом соотношении. Например, комбинированный продукт может содержать от 0,01 до 99.99 вес.% химических соединений по настоящему изобретению, и может также содержать от 0,01 до 99.99 вес.% других терапевтических средств.

Подходящие агенты для использования в комбинации включают следующие:

(ί) антипролиферативные/противоопухолевые лекарственные средства и их комбинации, применяемые в медицинской онкологии, такие как метилирующие агенты (например, цис-платин, карбоплатин, циклофосфамид, азотистый иприт, мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан и нитрозомочевины); антиметаболиты (например, антифолаты, такие как фторпиримидины, например 5-фторурацил и тегафур, ратитрексед, метотрексат, цитозин арабинозид, гидроксимочевина и гемцитабин); противоопухолевые антибиотики (например, антрациклины, такие как адриамицин, блеомицин, доксорубицин, дауномицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С, дактиномицин и митрамицин); антимитотические средства (например, алкалоиды барвинка, такие как винкристин, винбластин, виндезин и винорелбин, и таксоиды, такие как паклитаксел и таксотер); и ингибиторы топоизомеразы (например, эпиподофиллотксины, такие как этопозид и тенипозид, амсакрин, топотекан и камптотецины);

(ίί) цитостатические агенты, такие как антиэстрогены (например, тамоксифен, тореифен, ралоксифен, дролоксифен и иодоксифен), ингибиторы эстрогенового рецептора (например, фулвестрант), антиандрогены (например, бикалутамид, флутамид, нилутамид и ципротерона ацетат), ЬНКН антагонисты или ЬНКН агонисты (например, госерелин, лейпрорелин и бусерилин), прогестогены (например, мегестрола ацетат), ингибиторы ароматазы (например, анастрозол, летрозол, воразол и эксеместан) и ингибиторы 5а-редуктазы, такие как финастерид;

(ίίί) антиинвазионные агенты (например ингибиторы семейства е-8ге киназ, такие как 4-(6-хлор-2,3метилендиоксианилино)-7-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]-5-тетрагидропиран-4-илоксихиназолин (ΆΖΌ0530; Медународная заявка на патент АО 01/94341) и Ы-(2-хлор-6-метилфенил)-2-{6-[4-(2гидроксиэтил)пиперазин-1 -ил] -2-метилпиримидин-4-иламино }тиазол-5-карбоксамид (дасатиниб, ВМ8354825; 1. Мей. Сйеш. 2004, 47, 6658-6661), и ингибиторы металлопротеаз, такие как маримастат и ингибиторы рецептора активатора плазминогена урокиназного типа);

(ίν) ингибиторы фактора роста: например, такие ингибиторы включают антитела к фактору роста и антитела к рецептору гормона роста (например, анти-егЬВ2 антитело трастузумаб [Герцептин™] и антиегЬВ1 антитело цетуксимаб [С225]); такие ингибиторы включают также, например, ингибиторы тирозинкиназ, например, ингибиторы семейства фактора роста эпидермиса (например, ингибиторы семейства ЕОРК тирозинкиназ, такие как Ы-(3-хлор-4-фторфенил)-7-метокси-6-(3-морфолинопропокси)хиназолин4-амин (гефитиниб, ΖΌ 1839), Ы-(3-этинилфенил)-6,7-бис(2-метоксиэтокси)хиназолин-4-амин (эрлотиниб, О81-774) и 6-акриламидо-Ы-(3-хлор-4-фторфенил)-7-(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (С1 1033) и ингибиторы егЬВ2 тирозинкиназы, такие как лапатиниб), ингибиторы семейства фактора роста гепатоцитов, ингибиторы семейства фактора роста тромбоцитов, такие как иматиниб, ингибиторы серин/треонин киназ (например, ингибиторы Как/КаТ сигнального пути, такие как ингибиторы фарнезил трансферазы, например сорафениб (ВАУ 43-9006)) и ингибиторы системы клточных сигналов через МЕК и/или через ΡΙ3Κ, тТОК и АКТ киназный путь;

(ν) антиангиогенные агенты, такие как ингибирующие действие фактора роста сосудистого эндотелия [например, антитело к фактору роста сосудистого эндотелия бевацизумаб (АуакОп¹™) и ингибиторы УЕОР рецепторной тирозинкиназы, такие как 4-(4-бром-2-фторанилино)-6-метокси-7-(1-метилпиперидин-4-илметокси)хиназолин (ΖΌ6474; пример 2 в АО 01/32651), 4-(4-фтор-2-метилиндол-5-илокси)-6метокси-7-(3-пирролидин-1-илпропокси)хиназолин (ΑΖΌ2171; пример 240 в АО 00/47212), ваталаниб (РТК787; АО 98/35985) и 8И1 1248 (сунитиниб; АО 01/60814), и соединения, работающие по другим механизмам (например, линомид, ингибиторы работы интегрина ανβ3 и ангиостатин)];

(νί) сосудо-поражающие агенты, такие как комбретастатин А4 и соединения, описанные в Международных заявках на патент АО 99/02166, АО 00/40529, АО 00/41669, АО 01/92224, АО 02/04434 и АО 02/08213;

(νίί) средства антисмысловой терапии, например, нацеленные на перечисленные выше мишени, такие как Ι8Ι8 2503, анти-гак антисмысловое средство;

(νίίί) подходы генной терапии, включая методы замены аберрантных генов, таких как аберрантный р53 или аберрантный ВКСА1 или ВКСА2, ΟΌΕΡΤ (нацеленная на гены ферментная пролекарственная терапия), например с использованием цитозин деаминазы, тимидин киназы или бактериальной нитроредуктазы, и подходы с повышением толерантности пациента к химиотерапии или радиотерапии, такие как генная терапия мультирезистентности;

(ίχ) иммунотерапевтические методы, включая ех-νίνο и ίη-νίνο подходы для увеличения иммуногенности опухолевых клеток пациента, такие как трансфекция цитокинов, таких как интерлейкин 2, интерлейкин 4 или гранулоцитарно-маркрофагальный колониестимулирующий фактор, способы уменьшения анергии Т-клеток, подходы с использованием трансфицированных иммунных клеток, таких как цитокин-трансфицированные дендритные клетки, подходы с использованием цитокин-трансфицированных

- 12 029771

опухолевых клеток и подходы с использованием антиидиопатических антител; и

(х) хроматин-модифицирующие агенты, позволяющие отменить эпигенетические изменения, участвующие в канцерогенезе, например, ДНК-деметилирующие агенты, такие как 5'-азацитидин и децитабин (5-аза-2'-деоксицитидин, дезоцитидин) и ингибиторы деацетилазы, такие как вориностат (субероиланилид гидроксамовой кислоты, Золинза) и депсипептид (ромидепсин, Истодакс).

В другом аспекте настоящего изобретения описан комбинированный продукт, содержащий:

(A) соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, сольват или стереоизомер, как описано выше; и

(B) другое терапевтическое средство, которое применимо в лечении рака и/или пролиферативного заболевания,

где каждый из компонентов (А) и (В) входит в состав препарата вместе с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.

Такие комбинированные продукты служат для введения соединения по настоящему изобретению вместе с другим терапевтическим средством, и могут иметь вид раздельных препаратов, где по меньшей мере один из препаратов содержит соединение по настоящему изобретению, и по меньшей мере один содержит другое терапевтическое средство, или они могут быть представлены (т.е. иметь вид) комбинированного препарата (т.е. представленного в виде одного препарата, содержащего соединение по настоящему изобретению и другое терапевтическое средство).

Таким образом, в настоящем изобретении также описан:

(1) фармацевтический препарат, содержащий соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, сольват или стереоизомер, как описано выше, другое терапевтическое средство, которое применимо в лечении рака и/или пролиферативного заболевания, и фармацевтически приемлемый адъювант, разбавитель или носитель; и

(2) набор из частей, содержащий компоненты:

(a) фармацевтический препарат, содержащий соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, сольват или стереоизомер, как описано выше, в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем; и

(b) фармацевтический препарат, содержащий другое терапевтическое средство, которое применимо в лечении рака и/или пролиферативного заболевания, в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем, где компоненты (а) и (Ь) каждый представлены в форме, подходящей для введения совместно с другим.

В настоящем изобретении также описан способ получения описанного выше комбинированного продукта, который включает объединение соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли, сольвата или стереоизомера, как описано выше, с другим терапевтическим средством, которое применимо в лечении рака и/или пролиферативного заболевания, и по меньшей мере одного фармацевтически приемлемого адъюванта, разбавителя или носителя.

Под "объединением" в настоящем понимается, что два указанных компонента переходят в состояние, подходящее для их совместного введения.

Так, в отношении способа получения упомянутого выше набора из частей, термин "объединение" двух компонентов включает, что указанные два компонента набора из частей могут быть:

(ί) произведены в виде отдельных препаратов (т.е. независимых друг от друга), которые впоследствии объединяют в ходе комбинированной терапии; или

(ίί) упакованы и выпущены вместе как отдельные компоненты "комбинированного набора" для совместного применения в ходе комбинированной терапии.

Определения

Термин "алкил" охватывает остатки насыщенных углеводородов, включая:

линейные группы, содержащие 1-10 атомов углерода (С₁-С₁₀), или 1-6 атомов углерода (С₁-С₆), или 1-4 атомов углерода (С1-С4). Примеры таких алкильных групп включают (но не ограничиваются только ими) С1 (метил), С₂ (этил), С₃ (пропил) и С₄ (бутил);

разветвленные группы, содержащие от 3 до 10 (т.е. 3-10) атомов углерода (С₃-С₁₀), или до 7 атомов углерода (С₃-С₇), или до 4 атомов углерода (С₃-С₄).

Примеры таких алкильных групп включают (но не ограничиваются только ими) С₃ (1-метилэтил), С₄ (1-метилпропил, 2-метилпропил, 1,1-диметилэтил) и С₅ (1,1-диметилпропил, 2,2-диметилпропил, 3метилбутил, пентан-2-ил, пентан-3-ил), каждая из которых опционально замещена, как описано выше.

Если не указано иное, галоген выбран из Р, С1, Вг и I; в частности, галоген представляет собой Р.

Циклоалкил соответствует данному выше определению. Циклоалкильные группы могут содержать от 3 до 10 атомов углерода, или от 4 до 10 атомов углерода, или от 5 до 10 атомов углерода, или от 3 до 6 атомов углерода. Примеры подходящих моноциклических циклоалкильных групп включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил. Примеры подходящих бициклических циклоалкильных групп включают декагидронафталин и октагидро-1Н-инден. Циклоалкил может быть сопряжен с арилом. Примеры подходящих циклоалкильных групп, в случае сопряжения с арилом, включают инданил и 1,2,3,4-тетрагидронафтил.

- 13 029771

Гетероциклоалкил представляет собой С-связанное или Ν-связанное 3-10-членное насыщенное, моно- или бициклическое кольцо, где указанное гетероциклоалкильное кольцо может содержать 1, 2, 3 или 4 гетероатомов, независимо выбранных из 8, N и О, где атом N или δ в цикле может иметь в качестве заместителя атом кислорода, формируя Ν-оксидную, сульфоксидную или сульфоновую группу. Примеры подходящих гетероциклоалкильных групп включают тетрагидротиофен и, в частности, оксиранил, азиридинил, азетидинил, тетрагидрофуранил, пирролидинил, тетрагидропиранил, пиперидинил, Νметилпиперидинил, морфолинил, Ν-метилморфолинил, пиперазинил, Ν-метилиепразинил, азепанил, оксазепанил и диазепанил.

Арил соответствует данному выше определению. В типичном случае, арил необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями. Опциональные заместители выбраны из перечисленных выше. Примеры подходящих арильных групп включают фенил и нафтил (каждый из которых опционально замещен, как описано выше).

Гетероарил соответствует данному выше определению. В типичном случае, гетероарильные группы содержат 5, 6, 9, 10, 12, 13 или 14 членов в цикле, где 1, 2, 3 или 4 члена цикла независимо выбраны из О, δ и Ν. В одном варианте осуществления, гетероарильная группа может представлять собой 5, 6, 9 или 10членное, например, 5-членное моноциклическое, 6-членное моноциклическое, 9-членное сопряженное бициклическое или 10-членное сопряженное бициклическое кольцо.

Моноциклические гетероароматические группы включают гетероароматические группы, содержащие 5-6 членов в цикле, где 1, 2, 3 или 4 членов в цикле независимо выбраны из О, δ и Ν.

Примеры подходящих гетероарильных групп включают индазолил, пирролопиридинил и, в частности, тиенил, фуранил, пирролил, пиразолил, имидазолил, оксазолил, изоксазолил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, тетразолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, индолил, бензимидазолил, бензотриазолил, хинолинил и изохинолинил (необязательно замещенные, как описано выше).

Термин "С-связанный", например как в "С-связанный гетероциклоалкил", означает, что гетероциклоалкильная группа соединена с остальной частью молекулы через атом углерода в цикле.

Термин "Ν-связанный", например как в "Ν-связанный гетероциклоалкил", означает, что гетероциклоалкильная группа соединена с остальной частью молекулы через атом азота в цикле.

Термин "О-связанный", например как в "О-связанный остаток углеводорода", означает, что остаток углеводорода соединен с остальной частью молекулы через атом кислорода.

"Фармацевтически приемлемая соль" означает физиологически или токсикологически переносимую соль и включает, где это применимо, фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли и фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли. Например (ί) когда соединение по настоящему изобретению содержит одну или больше кислотных групп, например карбокси-групп, то способные к формированию фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли включают соли натрия, калия, кальция, магния и аммония, или соли с органическими аминами, такими как диэтиламин, Νметилглюкамин, диэтаноламин или аминокислоты (например, лизин) и т.п.; (ίί) когда соединение по настоящему изобретению содержит основную группу, такую как аминогруппа, то способные к формированию фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли включают гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, фосфаты, ацетаты, цитраты, лактаты, тартраты, мезилаты, сукцинаты, оксалаты, фосфаты, эзилаты, тозилаты, бензосульфонаты, нафталиндисульфонаты, малеаты, адипаты, фумараты, гиппураты, камфораты, ксинафоаты, п-ацетамидобензоаты, дигидроксибензоаты, гидроксинафтоаты, сукцинаты, аскорбаты, олеаты, бисульфаты и т.п.

Также могут формироваться полусоли кислот и оснований, например, гемисульфаты и гемикальциевые соли.

Обзор подходящих солей смотри в книге "НапбЬоок οί РЬаттасеибса1 8а11к: Рторетйек, 8е1есбоп апб Ике" Ьу 81аЫ апб ХУегтЩЬ (\УПеу-УСН. ХУетЬеип. Сеттапу, 2002). "Пролекарство" означает соединение, которое может превращаться ш νί\Ό метаболически (например, путем гидролиза, восстановления или окисления) в соединение по настоящему изобретению. Подходящие группы для формирования пролекарств описаны в работе ’ТЬе Ртасбсе οί Мебюша1 СЬет1к1ту, 2^пб Еб. рр561-585 (2003) и в работе Ρ. ί. ЕештеЬет, Эгид Ме1аЬ. Кек., 1987, 18, 379.

Химические соединения по настоящему изобретению могут существовать как в несольватированной, так и в сольватированной формах. Термин "сольват" применяется в настоящем тексте для описания молекулярного комплекса, содержащего соединение по настоящему изобретению и стехиометрическое количество одной или больше молекул фармацевтически приемлемого растворителя, например, этанола. Термин "гидрат" используют в случае, когда растворителем является вода.

Химические соединения по настоящему изобретению существуют в одной или больше геометрических, оптических, энантиомерных, диастереомерных и таутомерных формах, включая (но не ограничиваясь только ими) цис- и транс-формы, Е- и Ζ-формы, К-, 8- и мезо-формы, кето- и енольные формы. Если не указано иное, упоминание конкретного соединения включает все такие изомерные формы, включая их рацемические и другие смеси. Где это приемлемо, такие изомеры можно выделять из их смесей, применяя или адаптируя известные методы (например, хроматографические методики и методики перекри- 14 029771

сталлизации). Где это приемлемо, такие изомеры можно получать, применяя или адаптируя известные методы (например, асимметрический синтез).

В контексте настоящего изобретения, упоминание "лечения" относится к радикальному, паллиативному и профилактическому лечению.

Общие методы

Химические соединения формулы (I) необходимо оценить по их биофармацевтическим свойствам, таким как растворимость и устойчивость в растворе (при разных значениях рН), проницаемость и т.д., для подбора наиболее подходящих дозированных форм и способа введения для лечения при указанных показаниях. Их можно вводить поодиночке или в комбинации с одним или больше другими химическими соединениями по настоящему изобретению или в комбинации с одним или больше другими лекарственными средствами (или с любыми их комбинациями). В целом, их водят в виде препарата совместно с одним или больше фармацевтически приемлемыми наполнителями. Термин "наполнитель" используется в настоящем тексте для описания любого ингредиента, отличного от соединения(-ий) по настоящему изобретению, которые могут обуславливать функциональные (т.е. контроль скорости высвобождения лекарственного средства) и/или нефункциональные (т.е. вспомогательное вещество или разбавитель) характеристики препаратов. Выбор наполнителя в большой степени зависит от таких факторов, как конкретный способ введения, влияние наполнителя на растворимость и устойчивость, и природа дозированной формы.

Химические соединения по настоящему изобретению, предназначенные для применения в фармацевтике, можно вводить в твердом или жидком виде, таком как таблетки, капсулы или раствор. Фармацевтические композиции, подходящие для введения химических соединений по настоящему изобретению, и методы их приготовления будут очевидны для квалифицированных специалистов в данной области. Такие композиции и методы их приготовления можно найти, например, в книге РеттдЮп'х Ркагтасеийса1 Заспссх. 19ΐΗ Εάίΐίοη (Маск РиЬйкФид Сотрапу, 1995).

Соответственно, в настоящем изобретении описана фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель. Соединение формулы (I) (или его фармацевтически приемлемая соль, сольват или стереоизомер) и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель могут присутствовать в композиции в любом соотношении. Например, фармацевтическая композиция может содержать от 0,01 до 99.99 вес.% соединения формулы (I), и, аналогично, может содержать от 0,01 до 99.99 вес.% фармацевтически приемлемого носителя, разбавителя или наполнителя. Когда т равен 1, (З)-энангиомер соединения формулы (I) может присутствовать в композиции с энантиомерным избытком 90% или больше, предпочтительно, с энантиомерным избытком 95% или больше. Когда т равен 2, (К)-энантиомер соединения формулы (I) может присутствовать в композиции с энантиомерным избытком 90% или больше, предпочтительно, с энантиомерным избытком 95% или больше.

Химические соединения по настоящему изобретению можно вводить также напрямую в кровеносную систему, в подкожную ткань, в мышцу или во внутренний орган. Подходящие методы парэнтерального введения включают внутривенное, внутриартериальное, интраперитонеальное, интратекальное, интравентрикулярное, интрауретральное, внутригрудинное, внутричерепное, внутримышечное, внутрисуставное и подкожное. Подходящие устройства для парэнтерального введения включают инъекционные устройства с иглой (включая микроиглу), безыгольные устройства для инъекций и инфузионные методики.

Парэнтеральные препараты обычно представляют собой водные или масляные растворы. Когда раствор водный, применяют такие наполнители, как сахара (включая, но не ограничиваясь только ими: глюкоза, маннит, сорбит и т.д.), соли, углеводы и буферные агенты (предпочтительно для поддержания рН от 3 до 9), но в некоторых областях применения более подходящими препаратами являются стерильные неводные растворы или сухие формы для использования совместно с подходящим носителем, таким как стерильная апирогенная вода.

Парэнтеральные препараты могут включать импланты из разлагаемых полимеров, таких как полиэфиры (т.е. полимолочная кислота, полилактид, полилактид-со-гликолид, поликапролактон, полигидроксибутират), полиортоэфиры и полиангидриды. Перечисленные препараты можно вводить через хирургический разрез в подкожную ткань, мышечную ткань или непосредственно в отдельные органы.

Приготовление парэнтеральных препаратов в стерильных условиях, например посредством лиофилизации, можно легко осуществить с применением стандартных фармацевтических методик, хорошо известных квалифицированным специалистам в данной области.

Растворимость химических соединений формулы (I), применяемых для приготовления парэнтеральных растворов, можно повысить путем использования подходящих методик приготовления препаратов, таких как введение сорастворителей и/или агентов, усиливающих растворимость, таких как поверхностно-активные вещества, мицеллярные структуры и циклодекстрины.

В одном варианте осуществления, химические соединения по настоящему изобретению можно вводить перорально. Пероральное введение может включать проглатывание, так что соединение попадает в желудочно-кишечный тракт, и/или буккально, лингвально или сублингвально, когда соединение попада- 15 029771

ет в кровеносную систему непосредственно из ротовой полости.

Препараты, подходящие для перорального введения, включают твердые прессованные массы, твердые микрочастицы, полутвердые формы и жидкости (включая многофазные или диспергированные системы), такие как таблетки; мягкие или твердые капсулы, содержащие мульти- или нанопартикуляты, жидкости, эмульсии или порошки; таблетки для рассасывания (включая наполненные жидкостью); жевательные формы; гели; быстро диспергируемые дозированные формы; пленки; суппозитории; спреи и буккальные/адгезивные к слизистой пластыри.

Препараты, подходящие для перорального введения, могут также доставлять химические соединения по настоящему изобретению по типу немедленного высвобождения или по типу замедленного высвобождения, где профиль высвобождения может быть замедленным, пульсирующим, контролируемым, пролонгированным, или замедленным и пролонгированным, или модифицированным таким образом, чтобы оптимизировать терапевтическую эффективность указанных химических соединений. Способы доставки химических соединений по типу замедленного высвобождения хорошо известны квалифицированным специалистам в данной области и включают полимеры, медленно высвобождающие лекарственные средства, которые можно вводить в состав препаратов с указанными химическими соединениями для управления скоростью их высвобождения.

Примеры полимеров, пролонгирующих высвобождение, включают разлагаемые и неразлагаемые полимеры, которые могут применяться для высвобождения указанных химических соединений посредством их диффузии или комбинации диффузии и разрушения полимера. Примеры полимеров, пролонгирующих высвобождение, включают гидроксипропил метилцеллюлозу, гидроксипропил целлюлозу, метил целлюлозу, этил целлюлозу, натрия карбоксиметил целлюлозу, поливиниловый спирт, поливинил пирролидон, ксантановую камедь, полиметакрилаты, полиэтиленоксид и полиэтиленгликоль.

Жидкие (включая мультифазные и диспергированные системы) препараты включают эмульсии, растворы, сиропы и эликсиры. Такие препараты могут присутствовать в качестве заполнителя для мягких или твердых капсул (изготовленных, например, из желатина или гидроксипропилметилцеллюлозы) и обычно содержат носитель, например, воду, этанол, полиэтиленгликоль, пропиленгликоль, метилцеллюлозу или подходящее масло, и один или больше эмульгирующих и/или суспендирующих агентов. Жидкие препараты можно также готовить разведением твердого вещества, например из пакета-саше.

Химические соединения по настоящему изобретению могут также использоваться в быстрорастворимых, быстрораспадающихся дозированных формах, таких как описано в работе Папд апй СЬеп, Ехрей Оргшоп ίη ТЬегареийс Ра1ей8, 2001, 11 (6), 981-986. Препараты в форме таблеток обсуждаются в работе РЬагтасеиИса1 Эохаде Рогтз: ТаЬ1е18, Уо1. 1, Ьу Н. ЫеЬегтап апй Ь. ЬасЬтап (Магсе1 Эеккег Ые\у Уогк, 1980).

Для введения человеку, общая дневная дозировка химических соединений по настоящему изобретению обычно составляет от 0,01 до 1000 мг, или от 0,1 до 250 мг или от 1 до 50 мг, в зависимости от курса и способа введения.

Суммарную дозу можно вводить в виде одной дозировки или нескольких разделенных дозировок, и она может, по решению лечащего врача, находиться за пределами приведенного выше типичного интервала значений. Указанные дозировки основаны на расчете для среднего человека, имеющего вес от 60 кг до 70 кг. Лечащий врач может без труда определить дозировки для пациентов, вес которых находится за пределами указанного диапазона, таких как дети или пожилые люди.

Методы синтеза

Химические соединения по настоящему изобретению можно получить согласно методикам из приведенных далее схем и примеров, с использованием подходящих соединений, и методы синтеза дополнительно проиллюстрированы частными примерами, описанными ниже. Кроме того, с помощью описанных в настоящем тексте методик, квалифицированный специалист в данной области легко может получить дополнительные химические соединения, входящие в объем настоящего изобретения. Проиллюстрированные в примерах химические соединения, однако, не ограничивают объем настоящего изобретения. Приведенные примеры дополнительно иллюстрируют подробности получения химических соединений по настоящему изобретению. Квалифицированному специалисту в данной области будет понятно, что известные вариации условий и процессов описанных далее методик получения могут использоваться для получения указанных химических соединений.

Химические соединения по настоящему изобретению можно выделять в форме их фармацевтически приемлемых солей, таких как описаны выше в настоящем тексте.

Может оказаться необходимым защищать реакционно-способные функциональные группы (например, гидрокси-группы, аминогруппы или карбоксильные группы) в промежуточных продуктах, использующихся для получения химических соединений по настоящему изобретению, во избежание их нежелательного участия в реакциях, приводящих к получению описанных химических соединений. Можно использовать общеупотребимые защитные группы, например, описанные в работе Т. А. Огеепе апй Р. О. М. Аи18 "Рго1ес11уе дгоирз ш огдашс сЬет181гу" 1оЬп Айеу апй δоη8, 4* ЕйШоп, 2006. Например, распространенной защитной группой для аминогрупп, подходящих для применения по настоящему изобретению, является трет-бутоксикарбонильная (Вос) группа, которая легко удаляется при обработке кислотой,

- 16 029771

такой как трифторуксусная кислота или хлороводород в органическом растворителе, таком как дихлорметан. Альтернативно, в качестве защитной группы для аминогрупп может применяться бензилоксикарбонильная (Ζ) группа, которую можно удалить гидрированием на палладиевом катализаторе в атмосфере водорода, или 9-флуоренилметилоксикарбонильная (Ршос) группа, которую можно удалить раствором вторичного органического амина, такого как диэтиламин или пиперидин, в органических растворителях. Карбоксильные группы обычно защищают через их сложные эфиры, такие как метальный, этильный, бензильный или трет-бутильный, которые можно удалять гидролизом в присутствии оснований, таких как гидроксид лития или натрия. Бензильные защитные группы можно также удалять гидрированием на палладиевом катализаторе в атмосфере водорода, а трет-бутильные группы можно удалить действием трифторуксусной кислоты. Альтернативно, трихлорэтильные сложноэфирные группы удаляют действием цинка в уксусной кислоте. Часто использующимися защитными группами для гидроксильных групп, подходящими для применения в настоящем изобретении, является метиловый эфир, условия удаления которого включают кипячение в 48%-ном водном растворе НВг в течение 1-24 ч, или перемешивание с трибромидом бора в дихлорметане в течение 1-24 ч. Альтернативно, в случае если гидроксильная группа защищена посредством формирования бензилового эфира, условия ее удаления включают гидрирование на палладиевом катализаторе в атмосфере водорода.

Химические соединения общей формулы (I) можно получить общеизвестными методами синтеза, например (но не ограничиваясь только ими) способами, кратко просуммированными на схеме 1.

Методы синтеза других соединений, отвечающих формуле (I), будут очевидны для квалифицированных специалистов в данной области.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 показано ингибирование ЛТК в живых клетках химическими соединениями из Примера 1, Примера 2, Примера 3 и Примера 1, а также действие кофеина, ингибитора АТК.

На фиг. 2(А) показано влияние химических соединений из Примера 1 и Примера 2, отдельно или в комбинации с гидроксимочевиной (НИ), на концентрацию хроматин-связанного КРА (репликативный белок А). На фиг. 2(В) показано влияние химических соединений из Примера 3 и Примера 11 на концентрацию хроматин-связанного КРА.

На фиг. 3(А) показано влияние химических соединений из Примера 1 и Примера 2, отдельно или в комбинации с НИ, на прохождение клеток через контрольную точку Θ2/Μ. На фиг. 3(В) показано влияние химических соединений из Примера 3 и Примера 11 на прохождение клеток через фазу 8.

На фиг. 4(А) показано влияние химических соединений из Примера 1 и Примера 2, отдельно или в комбинации с НИ, на формирование ядерных очагов ДНК-репарирующего белка 53ВР1. На фиг. 4(В) показано влияние химических соединений из Примера 3 и Примера 11 на формирование ядерных очагов ДНК-репарирующего белка 53ВР1.

На фиг. 5 показано влияние химического соединения из Примера 11 на фармакокинетический профиль.

На фиг. 6 показано влияние химического соединения из Примера 3 на фармакокинетический профиль.

- 17 029771

На фиг. 7 показано влияние химического соединения из Примера 11 на объем опухоли у мышей, которые инъекционно вводили клетки Εμ-тус лимфомы.

На фиг. 8 показано влияние химического соединения из Примера 3 на объем опухоли у мышей, которые инъекционно вводили клетки Εμ-тус лимфомы.

Осуществление изобретения Примеры

Настоящее изобретение проиллюстрировано приведенными ниже неограничивающими примерами синтеза, характеризации и биологического тестирования, в которых используются следующие аббревиатуры и определения:

Далее по тексту, термин "ДХМ" означает дихлорметан, "СНС1₃" означает хлороформ, "МеОН" означает метанол, "ЕЮН" означает этанол, "ЕЮЛс" означает этилацетат, "ТГФ" означает тетрагидрофуран, "ЛсСЫ" означает ацетонитрил, "ДМАП" означает 4-диметиламинопиридин, "ΌΙΡΕΑ" означает диизопропилэтиламин, "ДМФА" означает диметилформамид, "ДМЭ" означает диметоксиэтан, "ДМА" означает диметилацетамид, "ДМСО" означает диметилсульфоксид, "Е1₂О" означает диэтиловый эфир, "гекс" означает гексан, "ЕЮАс" означает этилацетат, "ВА/ВЕ" означает бороновую кислоту/эфир, "Рб(РРЬ₃)₄" означает тетракис(трифенилфосфин)палладий, "Рб(РЬ₃Р)₂С1₂" означает дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(П), "Рб(бррГ)С1₂.ДХМ" означает комплекс 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроценпалладий(П) дихлорида с дихлорметаном, "СНГ означает карбонилдиимидазол, "Ыа₂8О₄" означает динатрия сульфат, "Мд§О₄" означает сульфат магния, "К₂СО₃" означает карбонат калия, "Ыа₂СО₃" означает карбонат натрия, "ЫаНСО₃" означает бикарбонат натрия, "ΝαΗ" означает гидрид натрия, "ТЭА" означает триэтиламин, "РОС1₃" означает оксихлорид фосфора, "ТФУК" означает трифторуксусную кислоту, "ТВАР" означает тетрабутиламмония фторид, "насыщ." означает насыщенный, "водн." означает водный, "Аг" означает аргон, "ВЭЖХ" означает высокоэффективную жидкостную хроматографию, "1_К" означает время удерживания, "М§" означает масс-спектрометрию, "ТСХ" означает тонкослойную хроматографию, "К_Г" означает коэффициент удерживания, "г" означает грамм(ы), "ммоль" означает миллимоль(миллимоли), "экв" означает эквивалент(ы), "мл" означает миллилитр(ы), "мин" означает минуты, "час" означает час(ы), "й" означает комнатная температура.

Характеризация

ЯМР спектры записывали на спектрометре Вгикег Ауапсе II 300 и Вгикег Ауапсе II 700, оснащенных 5мм ^XI 700 §4 обращенно-фазным, Ζ-градиентным блоком и блоком контроля и изменения температуры.

ВЭЖХ эксперименты проводили с помощью НР 1100 от Адйей ТесЬпо1од1е8, имеющего насос (бинарный) с дегазатором, автодозатор, колоночный термостат, диодно-матричный детектор (ОАЭ) и колонку, указанные ниже при описании соответствующих методов. Поток из колонки разделяли и направляли часть потока в МС-спектрометр. Масс-детектор был снабжен источником электроспреевой ионизации или АРЕАРСГ В качестве газа-распылителя использовали азот. Сбор и анализ данных осуществляли с помощью программного обеспечения СЬеш§1а1юп ЬС/ΜδΌ сщай.

ВЭЖХ метод 1 (ЬС-М§1): Обращенно-фазную ВЭЖХ проводили на СетииЛХ С18 (100x2.0 мм; 5мкм), Растворитель А: вода с 0.1% муравьиной кислоты; Растворитель В: ацетонитрил с 0.1% муравьиной кислоты. Градиент: от 5% В до 100% В в течение 8 мин при 50°С, ОАЭ.

ВЭЖХ метод 2 (ЪС-М§2): Обращенно-фазную ВЭЖХ проводили на СетииЛХ С18 (100x2.0 мм; 5мкм), Растворитель А: вода с 0.1% муравьиной кислоты; Растворитель В: ацетонитрил с 0.1% муравьиной кислоты. Градиент: от 50% В до 100% В в течение 8 мин при 50°С, ОАО.

ВЭЖХ метод 3 (ЬС-М§3): Обращенно-фазную ВЭЖХ проводили на СетииЛХ С18 (100x2.0 мм; 5мкм), Растворитель А: вода с 0.1% муравьиной кислоты; Растворитель В: ацетонитрил с 0.1% муравьиной кислоты. Градиент: от 5% В до 40% В в течение 8 мин при 50°С, ОАО.

ВЭЖХ метод 4 (ЬС-М§4): Обращенно-фазную ВЭЖХ проводили на колонке Оет1ш С18 (50x2 мм, 3 мкм); Растворитель А: вода с 0.1% муравьиной кислоты; Растворитель В: ацетонитрил с 0.1% муравьиной кислоты. Градиент: 10-95 % В в течение 4 мин при скорости потока 0.5 мл/мин, затем 2 мин 100% В при 0.8 мл/мин, температура 50°С, ОАО.

ВЭЖХ метод 5 (ЬС-М§5): Обращенно-фазную ВЭЖХ проводили на колонке Оет1ш С18 (50x2 мм, 3 мкм); Растворитель А: вода с 10мМ бикарбоната аммония; Растворитель В: ацетонитрил. Градиент: 20100 % В в течение 3 мин при скорости потока 0.5 мл/мин, затем 2 мин 100 % В при 0.8 мл/мин, температура 40°С, ОАО.

ВЭЖХ метод 6 (ЬС-М§6): Обращенно-фазную ВЭЖХ проводили на СетииЛХ С18 (100x2.0 мм; 5мкм), Растворитель А: вода с 0.1% муравьиной кислоты; Растворитель В: ацетонитрил с 0.1% муравьиной кислоты. Градиент: от 0% В до 30% В в течение 8 мин при 50°С, ОАО.

"Обнаруженная масса" относится к наиболее распространенному изотопу при детектировании в ходе ВЭЖХ-МС анализа.

Оптическое вращение: Оптическое вращение измеряли на цифровом приборе Реткш Е1тег 241 при длине ячейки 1 дм.

- 18 029771

Смесь интермедиата X (100 мг, 0.30 ммоль) с пинаколовым эфиром индол-4-бороновой кислоты (90 мг, 0.37 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладием(П) (40 мг) и 2М водным раствором Ыа₂СО₃ (0.4 мл) в диоксане (2 мл) нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением в течение 3 ч. Смесь темного цвета охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (2x15 мл). Органические слои промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали сначала методом флэшхроматографии (1зо1и1е δΐ II 5 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 50% до 100% ЕЮАс) и 7М раствором ΝΗ₃ в смеси МеОН/ДХМ (от 0% до 10% ΝΗ₃). Целевой продукт получали в виде кремового твердого вещества, которое несколько раз растирали в диэтиловом эфире, получая 12 мг Примера 1.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.89 (д, 1 = 7.4 Гц, 1Η), 7.44 (д, 1 = 8.0 Гц, 1Η), 7.36 (д, 1 = 2.8 Гц, 1Η), 7.24 (д, 1 = 2.8 Гц, 1Η), 7.11 (т, 1 = 7.8 Гц, 1Η), 4.53 (д, 1 = 12.6 Гц, 1Η), 4.33 (д, 1 = 10.9 Гц, 1Η), 4.00 (д, 1 = 11.4 Гц, 1Η), 3.89-3.82 (м, 2Н), 3.70 (д, 1 = 9.8 Гц, 1Η), 3.50 (т, 1= 10.6 Гц, 1Η), 3.19-3.02 (м, 2Н), 2.89 (с, 3Η), 1.83 (с, 3Η), 1.81 (с, 3Η). БС-М81: 1К= 4.88 мин, М+1 = 429.0.

К охлажденному (-5°С) раствору интермедиата IX (100 мг, 0.3 ммоль) в ДМФА (1 мл) добавляли трет-бутоксид натрия (35 мг, 0.3 ммоль) и Ме1 (20 мкл, 0.3 ммоль). После 10 мин перемешивания добавляли ещё трет-бутоксид натрия (35 мг, 0.3 ммоль) и Ме1 (35 мкл, 0.3 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 0°С 1 ч и при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь разбавляли дихлорметаном (5 мл), промывали 1М водным раствором ΗΟ (2x15 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Να₂δΟ₄ и упаривали в вакууме. Полученный желтый остаток представлял собой целевой продукт X, который использовали далее без дополнительной очистки (75 мг).

Смесь интермедиата VIII (800 мг, 2.1 ммоль) и метансульфината натрия (200 мг, 3.8 ммоль) в ДМФА (8 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь гасили добавлением 1М водного раствора Να₂δΟ₃. Смесь экстрагировали дихлорметаном (3x25 мл). Объединенные органические экстракты сушили над Να₂δΟ₄ и упаривали в вакууме, получая целевой продукт в виде кремового твердого вещества, интермедиат IX (550 мг).

Интермедиат IX можно также получить напрямую из интермедиата VI и VII. Смесь VI и VII (400 мг) с метансульфинатом натрия (150 мг, 1.4 ммоль) в АсС^ДМФА (10 мл, 4:1) нагревали при 80°С в течение 18 ч. Реакционную смесь гасили добавлением насыщ. водн. раствора Να₂δ₂Ο₃ и три раза экстрагировали дихлорметаном (3x20 мл). Объединенные органические экстракты сушили над Να₂δΟ₄ и упаривали в вакууме. Кремовое твердое вещество, интермедиат IX, использовали в следующей стадии без дополнительной очистки, 320 мг.

- 19 029771

Смесь VI, VII (800 мг) и иодида лития (730 мг, 5.4 ммоль) в диоксане (6 мл) кипятили 3 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду и насыщенный водный раствор хлорида натрия. Смесь экстрагировали этилацетатом (3x20 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме. Полученный продукт использовали далее без дополнительной очистки как интермедиат VIII (1 г, количественный выход).

К раствору интермедиата V (800 мг) в ДХМ (20 мл) с ТЭА (0.650 мл, 4.6 ммоль) прикапывали метансульфонилхлорид (0.290 мл, 3.7 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре 1 ч и гасили добавлением насыщ. раствора ЫаНСО₃. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали дихлорметаном (3x15 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия (30 мл), сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме. Полученный остаток (800 мг) представлял собой смесь интермедиата VI и VII, но его использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

В два раствора интермедиата IV (400 мг, 1.4 ммоль) в ТГФ (40 мл), охлажденные до 0°С, добавляли 2М раствор боргидрид лития в ТГФ (1 мл). Полученные смеси перемешивали при 0°С 15 мин и при комнатной температуре 1 ч. Полученные две смеси гасили добавлением воды, смешивали и экстрагировали этилацетатом (3x50 мл). Объединенные органические слои промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме. Целевой продукт получали в виде белого твердого вещества, интермедиат V (800 мг), и использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

К раствору интермедиата II (1.860 г, 5.7 ммоль) в ТГФ (280 мл) добавляли в один прием ЫаН (60%ная суспензия в минеральном масле, 276 мг). Полученную смесь перемешивали при 60°С 5 ч, добавляли ещё ЫаН (60 мг), продолжая нагревание в течение 3 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили добавлением смеси вода/лед и частично удаляли растворители на роторном испарителе. Смесь разбавляли некоторым количеством воды и экстрагировали этилацетатом (3x20 мл). Объединенный органический слой промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме.

Полученный сырой продукт растирали в МеОН, отфильтровывали, и фильтрат упаривали в вакууме. Фильтрат очищали методом флэш-хроматографии, элюируя смесью растворителей ЕЮЛс/циклогексан (от 25 до 100% ЕЮЛс), но было получено очень малое количество целевого продукта IV (30 мг).

Водный слой подкисляли и экстрагировали дихлорметаном (3x50 мл). Объединенные органические экстракты сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме, получая белое твердое вещество, представляющее собой интермедиат III (1.2 г).

К суспензии интермедиата III (500 мг) в МеОН (25 мл) добавляли 2М раствор (триметилсилил)диазометана в ТГФ (3 мл). Полученные смеси перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов и добавляли ещё 2М раствор триметилсилилдиазометана в ТГФ (2.5 мл). Перемешивание при комнатной температуре продолжали в течение 5 ч. Реакции гасили добавлением воды, объединяли и экстрагировали этилацетатом (2x50 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия (20 мл), сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме, получая целевой продукт как интермедиат IV, светло-кремовое твердое вещество (740 мг, 70%).

Интермедиат IV можно синтезировать также из интермедиата II с использованием карбоната цезия в качестве основания в ЛсСЫ, при нагревании до завершения реакции.

- 20 029771

Смесь I (1.5 г, 6.2 ммоль) и (рац) 3-гидроксиметилморфолина (875 мг, 7.4 ммоль) с Э^ЕА (1.6 мл, 9.3 ммоль) в ЕЮН (30 мл) нагревали при 75°С 1.5 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и удаляли растворители в вакууме. Маслянистый остаток снова растворяли в ДХМ (20 мл), промывали насыщ. раствором \аНСО₃ (3x20 мл), насыщенным водным раствором хлорида натрия (30 мл), сушили над \а₂8О₄ и упаривали в вакууме. Целевой продукт, интермедиат II (1.860 г, 93%), использовали далее без дополнительной очистки.

Оксихлорид фосфора (150 мл) прикапывали к метил 5-хлор-2,6-диоксо-3Г-пиримидин-4карбоксилату (5 г, 24 ммоль) с помощью воронки с противодавлением в течение 30 мин при 0°С. Затем добавляли \,\-диэтиланилин (5 мл, 32 ммоль). Полученную смесь нагревали до комнатной температуры и кипятили в течение 18 ч. Коричневую смесь охлаждали до комнатной температуры, и избыток РОС1₃ удаляли при пониженном давлении. Маслянистый остаток выливали в смесь лед/вода и экстрагировали диэтиловым эфиром (3x20 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над \а₂8О₄ и упаривали в вакууме. Коричневое твердое вещество растирали в циклогексане, получая коричнево-розовое твердое вещество, интермедиат I (4 г, 78%).

Пример 2 синтезировали по методике, аналогичной примеру 1, путем сочетания интермедиата XI с пинаколовым эфиром индол-4-бороновой кислоты.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.88 (д, I = 7.4 Гц, 1Н), 7.44 (д, I = 8.0 Гц, 1Н), 7.35 (д, I = 3.0 Гц, 1Н), 7.24 - 7.03 (м, 2Н), 4.56 (д, I = 12.3 Гц, 1Н), 4.31 (дд, I = 10.8, 3.1 Гц, 1Н), 4.00 (д, 1= 11.3 Гц, 1Н), 3.85-3.78 (м, 5Н), 3.52-3.58 (м, 1Н), 3.31 - 3.02 (м, 6Н), 2.89 (с, 3Н) 2.10-2.02 (м, 2Н). БС-М81: 1К= 4.54 мин, М+1 = 471.0.

К охлажденному (0°С) раствору интермедиата IX (75 мг, ммоль) в ДМФА (3 мл) с бис(2бромэтил)овым эфиром (75 мкл, ммоль) добавляли в один прием *ВиО\а (55 мг). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Добавляли ещё *ВиО\а (25 мг) и перемешивали при комнатной температуре 22 ч. Смесь разбавляли этилацетатом и водой. Органический слой отделяли и промывали водой (3x10 мл), сушили над \а₂8О₄ и упаривали в вакууме. Сырой продукт, интермедиат XI (100 мг), использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

- 21 029771

Пример 3 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 1, путем сочетания интермедиата XII с пинаколовым эфиром индол-4-бороновой кислоты.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.14 (с, 1Н), 7.87 (д, 1 = 7.5 Гц, 1Н), 7.44 (д, 1 = 7.5 Гц, 1Н), 7.42 (ушир.с, 1Н), 7.23 (ушир.с, 1Н), 7.16 (д, 1 = 7.8 Гц, 1Н), 4.55 (д, 1 = 12.9 Гц, 1Н), 4.31 (дд, 1 = 10.7, 3.2 Гц, 1Н), 4.00 (д, 1 = 11.2 Гц, 1Н), 3.93 - 3.62 (м, 5Н), 3.51 (т, 1 = 10.6 Гц, 1Н), 3.23-3.05 (м, 5Н), 2.79 (с, 3Н), 2.11-2.05 (м, 2Н). БС-М81:1К= 4.55 мин, М+1 = 471.0. [α]_ο= +40 (с 0.273, СНС1₃/МеОН 9:1).

Интермедиат XII

Интермедиат XII синтезировали по методике, аналогичной описанной для синтеза интермедиата XI, но используя на стадии 1 гидрохлорид 3(К)-гидроксиметилморфолина. Интермедиат XIV, [α]_ο= +29 (с 0.52, СНС13/МеОН 9:1).

Пример 4 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 1, путем сочетания интермедиата XVI с пинаколовым эфиром индол-4-бороновой кислоты.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.12 (с, 1Н), 7.91 (д, 1 = 7.6 Гц, 1Н), 7.41 (д, 1 = 7.9 Гц, 1Н), 7.35 (ушир.с, 1Н), 7.27 (ушир.с, 1Н), 7.09 (т, 1 = 7.8 Гц, 1Н), 4.53 (д, 1 = 12.1 Гц, 1Н), 4.32 (дд, 1 = 11.0, 3.3 Гц, 1Н), 3.98 (д, 1 = 8.0 Гц, 1Н), 3.92 - 3.74 (м, 2Н), 3.69-3.65 (м, 1Н), 3.49-3.44 (м, 1Н), 3.21-2.96 (м, 2Н), 2.652.60 (м, 1Н), 1.88 (с, 6Н), 0.92 - 0.67 (м, 4Н). БС-М81:1К= 5.18 мин, М+1 = 455.0.

Интермедиат XVI синтезировали по методике, аналогичной описанной для Интермедиата X, путем реакции алкилирования интермедиата XVII метилиодидом.

Интермедиат XVII синтезировали по методике, аналогичной описанной для Интермедиата IX, реакцией VIII с циклопропансульфинатом натрия.

Соединение 5 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Продукта 1, путем сочетания интермедиата XVIII с пинаколовым эфиром индол-4-бороновой кислоты.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.93 (д, 1 = 7.4 Гц, 1Н), 7.45 (д, 1 = 7.9 Гц, 1Н), 7.39-7.32 (м, 2Н), 7.12 (т, 1 = 7.8 Гц, 1Н), 4.58 - 4.35 (м, 2Н), 4.01 (д, 1 = 8.5 Гц, 1Н), 3.89-3.84 (м, 2Н), 3.74-3.70 (м, 1Н), 3.65-3.55 (м, 2Н), 3.53-3.50 (м, 1Н), 3.27 - 3.02 (м, 2Н). БС-М81:1К= 5.29 мин, М+1 = 455.0.

Интермедиат XVIII получали реакцией интермедиата VIII с трифторметансульфинатом натрия в ДМФА при 80°С в течение 2 ч.

Пример 6 синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для Примера 27, применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

БС-М81: 1К= 4.77 мин, М+1 = 427.1. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.21 (с, 1Н), 7.98 (д, 1= 7.4 Гц, 1Н), 7.48 (д, 1= 7.9 Гц, 1Н), 7.45 - 7.31 (м, 2Н), 7.16 (т, 1= 7.8 Гц, 1Н), 4.53 (м, 1Н), 4.43 (м, 1Н), 4.06 (м, 1Н), 4.05 - 3.90 (м, 2Н), 3.74 (м, 1Н), 3.56 (м, 1Н), 3.29 - 3.11 (м, 2Н), 3.09 (с, 3Н), 1.71 (м, 2Н), 1.43 (м, 2Н).

- 22 029771

Пример 7 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 1, путем сочетания интермедиата IX с пинаколовым эфиром индол-4-бороновой кислоты.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.96 (д, I = 7.4 Гц, 1Η), 7.49 (д, I = 8.0 Гц, 1Η), 7.39 (д, I = 3.0 Гц, 1Η), 7.35 (д, I = 3.0 Гц, 1Η), 7.16 (т, I = 7.8 Гц, 1Η), 4.64 - 4.31 (м, 4 Н), 4.11 - 4.00 (м, 1Η), 4.02 - 3.84 (м, 2Н), 3.77-3.74 (м, 1Η), 3.57 (т, I = 11.7 Гц, 1Η), 3.22 (т, I = 10.9 Гц, 1Η), 3.15 (с, 3Η), 3.13-3.03 (м, 1Η). ΕΟ-Μδ1: ίΚ= 3.64 мин, М+1 = 401.2.

Смесь интермедиата X (50 мг, 0.14 ммоль) и N-метил-1Η-1,3-бензодиазол-2-амина (45 мг, 0.28 ммоль) с С§₂СО₃ (140 мг, 0.43 ммоль) в ДМА (2 мл) нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением в течение 7 дней. Смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали и упаривали в вакууме. Маслянистый остаток снова растворяли в ЕЮАс (25 мл), промывали водой (3x20 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (30 мл). Органический слой сушили над Νί+δίΓ и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии (1§о1и!е δί II 5 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 50% до 100% ЕЮАс). Пример 8 получали в чистом виде (10 мг, 15%).

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.14 (кв, I = 4.8 Гц, 1Η), 8.00 (д, I = 7.8 Гц, 1Η), 7.25 (д, I = 7.7 Гц, 1Η), 7.07 (т, I = 7.5 Гц, 1Η), 6.98 (т, I = 7.7 Гц, 1Η), 4.44-4.38 (м, 2Н), 4.15 - 3.77 (м, 4Н), 3.57 (т, I = 10.8 Гц, 1Η), 3.23 (т, I = 10.8 Гц, 2Н), 3.03 (с, 3Η), 3.02 (д, I = 5.0 Гц, 3Η), 1.83 (с, 3Η), 1.82 (с, 3Η). ΕΟ-Μδ1: ίΚ= 3.03 мин, М+1 = 459.0.

Пример 9 (формиатная соль) синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 1, путем сочетания интермедиата XI с В-1Н-пирроло[2,3-с]пиридин-4-илбороновой кислотой ^Αδ 1312368-90-3).

¹Η ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.68 (с, 1Η), 8.90 (с, 1Η), 8.72 (с, 1Η), 8.30 (с, 1Η, НСООН), 7.62 (с, 1Η), 7.12 (с, 1Η), 4.63 (д, I = 13.0 Гц, 1Η), 4.43 - 4.37 (м, 1Η), 4.09-3.53 (м, 7Н), 3.33-3.15 (м, 6Н), 2.87 (с, 3Η), 2.18-1.95 (м, 2Н). ЬС-ΜδΓ ίΚ= 2.36 мин, М+1 = 472.1.

Пример 10 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 1, путем сочетания интермедиата XXI с пинаколовым эфиром индол-4-бороновой кислоты. Интермедиат XXI синтезировали по методике, аналогичной использованной для синтеза интермедиата XII, но используя 3(δ)гидроксиметилморфолин на стадии 1.

¹Η ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.21 (с, 1Η), 7.94 (д, 1 = 7.3 Гц, 1Η), 7.48 (д, 1 = 8.0 Гц, 1Η), 7.42 (с, 1Η), 7.23 (с, 1Η), 7.16 (т, 1 = 7.8 Гц, 1Η), 4.63 (д, 1 = 12.8 Гц, 1Η), 4.38 (дд, 1 = 10.7, 3.1 Гц, 1Η), 4.07 (д, 1 = 11.4 Гц, 1Η), 3.99-3.68 (м, 5Н), 3.58 (т, 1 = 10.7 Гц, 1Η), 3.30 - 3.07 (м, 6Н), 2.86 (с, 3Η), 2.23 - 2.04 (м, 2Н). БС-М81: Ж= 4.58 мин, М+1 = 471.3. [α]₀= -36 (с 0.32, СНС^/МеОН 9:1).

Оптическое вращение одного из прекурсоров в синтезе:

- 23 029771

Пример 11 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 8, из интермедиата XX в ДМФА.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.14 (кв, I = 4.8 Гц, 1Н), 8.00 (д, I = 7.8 Гц, 1Н), 7.25 (д, I = 7.7 Гц, 1Н), 7.07 (т, I = 7.5 Гц, 1Н), 6.98 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), 4.44-4.38 (м, 2Н), 4.15 - 3.77 (м, 4Н), 3.57 (т, I = 10.8 Гц, 1Н), 3.23 (т, I = 10.8 Гц, 2Н), 3.03 (с, 3Н), 3.02 (д, I = 5.0 Гц, 3Н), 1.83 (с, 3н), 1.82 (с, 3Н). БС-М81: 1К= 2.95 мин, М+1 = 459.1. [α]ρ= +49 (с 0.233, СНСЬ/МеОН 9:1).

Интермедиат XX синтезировали по схемам синтеза, описанным в настоящем тексте, и применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолина гидрохлорид.

Пример 12 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 8, из интермедиата XI в смеси АсСИ и ДМФА.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.96 (д, I = 7.9 Гц, 1Н), 7.89 (кв, I = 4.9 Гц, 1Н), 7.25 (д, I = 7.6 Гц, 1Н), 7.07 (т, I = 7.5 Гц, 1Н), 6.98 (т, I = 7.5 Гц, 1Н), 4.50 - 4.31 (м, 2Н), 4.07 (д, I = 11.7 Гц, 1Н), 4.00 - 3.76 (м, 5Н), 3.59 (т, I = 10.6 Гц, 1Н), 3.32-3.20 (м, 6Н), 3.00 (д, I = 4.8 Гц, 3Н), 2.94 (с, 3Н), 2.18 - 2.06 (м, 2Н). ЬСМ81: 1К= 2.82 мин, М+1 = 501.1.

К Интермедиату XXII (80 мг) в ТГФ (3 мл) добавляли ТВЛГ (2 мл; 2 ммоль; 1М в ТГФ). После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре реакция заканчивалась. Затем добавляли воду, и смесь экстрагировали дихлорметаном, органическую фазу сушили над М§30₄, фильтровали и упаривали, получая остаток, который очищали методом автоматизированной хроматографии в смеси ЕЮЛе/циклогексан (от 50% до 75% ЕЮАс). Пример 13 получали в виде белого твердого вещества (7 мг).

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.24 (с, 1Н), 7.56 - 7.30 (м, 2Н), 6.97 (дд, I = 11.3, 8.8 Гц, 1Н), 6.79 (с, 1Н), 4.55 - 4.31 (м, 2Н), 4.05 - 3.74 (м, 6Н), 3.53 (т, I = 10.5 Гц, 1Н), 3.27 -3.00 (м, 5Н), 2.85 (с, 3Н), 2.181.94 (м, 3Н). БС-М81: 1К= 4.51 мин, М+1 = 489.0.

Интермедиат XXII

Смесь интермедиата XI (50 мг), [1-(трет-бутил-диметил-силанил)-5-фтор-1Н-индол-4-ил]бороновой кислоты (45 мг, 0.15 ммоль), РбС1₂(РРй₃)₂ (18 мг), 2М водного раствора Иа₂С0₃ (0.250 мл) в диоксане (1 мл) нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением в течение 2 ч. Смесь темного цвета фильтровали через слой целита, промывая дихлорметаном. Фильтрат упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии на 8ΐ0₂, элюируя смесью растворителей ЕЮЛе/циклогексан (от 25% до 75% ЕЮЛе). Целевое соединение XXII получали в виде белого твердого вещества, (80 мг).

- 24 029771

Пример И синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 13.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.30 (с, 1Н), 7.53 - 7Л5 (м, 2Н), 7.0, (дд, I = ПЛ, 9.0, 1Н), б.87 (с, 1Н), ,.5, - ,43 (м, 2Н), ,.09 - 3.78 (м, ,Н), 3.58 (т, I = 10.9 Гц, 1Н), 3.2б (т, I = 10.8 Гц, 1Н), 3.13 (дт, I = 12.9, 3.0 Гц, 1Н), 3.03 (с, 3Н),1.90 (с, 3Н), 1.88 (с, 3Н). ЬС-М81: 1К= ,.71 мин, М+1 = „7.0.

Интермедиат XXIII синтезировали реакцией сочетания X с [1-(трет-бутил-диметил-силанил)-5фтор-1Н-индол-,-ил]бороновой кислотой по той же методике, которая применялась для интермедиата XXII.

Пример 15 синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для Примера 1, применяя в качестве прекурсора 3(8)-гидроксиметилморфолин.

ЬС-М81: 1К= ,.88 мин, М+1 = ,29.0. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.13 (с, 1Н), 7.89 (д, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.,1 (д, I = 7.8 Гц, 1Н), 7.3, (ушир.с, 1Н), 7.2, (с, 1Н), 7.09 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), ,.53 (д, I = 12.2 Гц, 1Н), ,.33 (дд, I = 10.9, 3.3 Гц, 1Н), 3.99 (д, I = 8., Гц, 1Н), 3.93 - 3.75 (м, 2Н), 3.73 - 3.б, (м, 1Н), 3.,9 (т, I = 10.7 Гц, 1Н), 3.23 - 3.00 (м, 2Н), 2.88 (с, 3 Н), 1.82 (с, 3Н), 1.81 (с, 3Н).

Смесь интермедиата X 00 мг, 0.115 ммоль) с ,-(,,,,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Нпирроло[2,3-Ь]пиридином (3, мг, 0.138 ммоль), РйС1₂(РРН₃)₂ (12 мг, 0.017 ммоль) и 2М водным раствором На₂СО₃ (0.23 мл) в диоксане (1.2 мл) кипятили в пробирке для проведения реакций под давлением , час. Темную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой целита, промывая дихлорметаном. Фильтрат упаривали в вакууме, и полученный остаток очищали методом флэш-хроматографии (8ΐΘ₂), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 20% до 50% ЕЮЛс). Пример 1б получали в виде кремового твердого вещества (31 мг).

1.С-М81 1К =3.б0б, М8: ,30.0 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.73 (с, 1Н), 8.30 (д, I = 5.0 Гц, 1Н), 7.88 (д, I = 5.0 Гц, 1Н), 7.б2 - 7.51 (м, 1Н), 7.23 (дд, I = 3.3, 1.9 Гц, 1Н), ,.59 (д, I = 12.0 Гц, 1Н), ,43 (дд, I = 10.9, 3., Гц, 1Н), ,.0б (д, I = 8.5 Гц, 1Н), 3.97 - 3.73 (м, 3Н), 3.57 (т, I = 10., Гц, 1Н), 3.28 -3.10 (м, 2Н), 2.95 (с, 3Н), 1.90 (с, 3Н), 1.88 (с, 3Н).

Пример 17 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 1, путем сочетания интермедиата XI с пинаколовым эфиром индол б-фтор-,-бороновой кислоты.

1.С-М81 1К= ,.78 мин, М8: ,89.5 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.22 (с, 1Н), 7.б5 (д, I = 13.7 Гц, 1Н), 7.,2 - 7.30 (м, 1Н), 7.25 - 7.12 (м, 2Н), ,.5, (д, I = 1,.8 Гц, 1Н), ,.32 (д, I = 10.б Гц, 1Н), ,.00 (д, I = 11.7 Гц, 1Н), 3.95 - 3.78 (м, ,Н), 3.78 - 3.бб (м, 1Н), 3.51 (т, I = 10.9 Гц, 1Н), 3.22 - 3.03 (м, бН), 2.80 (с, 3Н), 2.11- 2.02 (м, 2Н).

Пример 18

- 25 029771

Пример 18 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 1, путем сочетания интермедиата XI с 4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-пирроло[2,3-Ь]пиридином.

ЬС-М81 ίΚ= 3.42 мин, М3: 472.5 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.75 (с, 1Н), 8.29 (д, I = 5.0 Гц, 1Н), 7.87 (д, I = 5.1 Гц, 1Н), 7.55 (с, 1Н), 7.15 (с, 1Н), 4.62 (д, I = 12.6 Гц, 1Н), 4.41 (дд, I = 10.8, 3.2 Гц, 1Н), 4.08 (д, I = 11.2 Гц, 1Н), 4.02 - 3.76 (м, 5Н), 3.59 (т, I = 10.7 Гц, 1Н), 3.30 - 3.11 (м, 6Н), 2.87 (с, 3Н), 2.23 - 2.07 (м, 2Н).

Пример 19 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 1, путем сочетания интермедиата XI с 6-метокси-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил-1Н-индолом, СА3: 95597912-1.

ГС-М31 ίΚ= 4.53 мин, М3: 501.6 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 10.96 (с, 1Н), 7.53 (с, 1Н), 7.22 (с, 1Н), 7.08 (с, 1Н), 6.97 (с, 1Н), 4.56 (д, I = 13.6 Гц, 1Н), 4.34 (д, I = 10.4 Гц, 1Н), 4.03 (д, I = 11.0 Гц, 1Н), 3.98 -3.79 (м, 5Н), 3.75 (с, 3Н), 3.54 (т, I = 12.1 Гц, 1Н), 3.23 - 3.05 (м, 6Н), 2.81 (с, 3Н), 2.18 -2.02 (м, 2Н).

Пример 20 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 1, путем сочетания интермедиата XI с 2-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1Н-индолом, СА3:95597922-3.

ГС-М31 ίΚ= 4.77 мин, М3: 485.6 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.03 (с, 1Н), 7.88 (д, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.34 (д, I = 7.8 Гц, 1Н), 7.05 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), 6.89 (с, 1Н), 4.62 (д, I = 12.3 Гц, 1Н), 4.37 (дд, I = 10.8, 3.1 Гц, 1Н), 4.07 (д, I = 11.3 Гц, 1Н), 4.02 - 3.70 (м, 5Н), 3.58 (т, I = 11.9 Гц, 1Н), 3.31-3.08 (м, 6Н), 2.85 (с, 3Н), 2.42 (с, 3Н), 2.22 - 2.06 (м, 2Н).

Пример 21 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 15 путем сочетания интермедиата XXIV с гидрохлоридом индазол-4-бороновой кислоты.

БС-М31: ίΚ= 5.169 мин, М+1 = 430.10. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 13.18 (с, 1Н), 8.75 (с, 1Н), 8.05 (д, I = 7.2 Гц, 1Н), 7.63 (д, I = 8.2 Гц, 1Н), 7.49 - 7.38 (м, 1Н), 4.60 (д, I = 12.1 Гц, 1Н), 4.41 (дд, I = 10.9, 3.3 Гц, 1Н), 4.07 (дд, I = 11.4, 2.9 Гц, 1Н), 3.99 - 3.71 (м, 3Н), 3.77 (т, I = 9.4 Гц, 1Н), 3.57 (т, I = 10.6 Гц, 1Н), 3.28-3.10 (м, 2Н), 2.96 (с, 3Н), 1.90 (с, 3Н), 1.88 (с, 3Н).

- 26 029771

Смесь интермедиата 2-1 (80 мг), пинаколового эфира индол-4-бороновой кислоты (60 мг, 0.25 ммоль), РбС1₂(брр1) (25 мг) и 2М водного раствора Ыа₂СО₃ (0.4 мл,0.8 ммоль) в диоксане (1 мл) нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением при 85°С в течение 3 ч. Темную реакционную смесь фильтровали через слой целита, промывая дихлорметаном. Удаляли растворители в вакууме, и остаток очищали методом флэш-хроматографии (1зо1и!е δΐ II, 5 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 25% до 100% ЕЮЛс). Целевой продукт получали в виде белого твердого вещества как соединение 22 (8 мг).

ЬСМ81, ΐΚ= 4.75 мин, М8: 485.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.24 (с, 1Н), 7.97 (д, I = 7.3 Гц, 1Н), 7.50 (д, I = 8.0 Гц, 1Н), 7.43 (т, I = 2.6 Гц, 1Н), 7.23 (с, 1Н), 7.17 (т, I = 7.8 Гц, 1Н), 4.24 (т, I = 5.5 Гц, 2Н), 4.11 - 3.70 (м, 8Н), 3.53 - 3.46 (м, 1Н), 3.30 - 3.09 (м, 4Н), 2.85 (с, 3Н), 2.24 - 1.93 (м, 4Н). [α]_ο= -15 (с 0.204, СНС1₃/МеОН 9:1) с энантиомерным избытком примерно 60%.

К охлажденной смеси интермедиата 2-П (80 мг) и бис(2-бромэтил)ового эфира (75 мкл, 0.6 ммоль) в ДМФА (4 мл) добавляли в один прием трет-бутоксид натрия (70 мг, 0.7 ммоль). Темно-коричневую смесь перемешивали при той же температуре 30 минут и при комнатной температуре в течение 18 ч. После этого добавляли в смесь ещё трет-бутоксид (30 мг), продолжая перемешивание ещё 2 ч. Смесь гасили добавлением воды и три раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме. Целевой продукт получали в виде кремово-желтого твердого вещества, представляющего собой целевой продукт 24 (80 мг).

Смесь интермедиата 2-Ш (210 мг) и метансульфината натрия (0.90 мг, 0.89 ммоль) в смеси АсСЫ:ДМФА (4:1, 2.5 мл) нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением при 100°С в течение 18 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, гасили добавлением 1М водного раствора Ыа₂8₂О₃ и экстрагировали дихлорметаном три раза. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия (25 мл), сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме. Остаток, представляющий собой интермедиат 2-П (165 мг), использовали далее на следующей стадии.

В смесь интермедиата 2-РУ (190 мг) в ДХМ (10 мл) и ТЭА (0.150 мл, 1.0 ммоль) прикапывали метансульфонилхлорид (70 мкл, 0.9 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1.5 ч до исчезновения исходного вещества. Реакционную смесь гасили добавлением воды и экстрагировали дихлорметаном (3x20 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Ыа₂8О₄ и упаривали в вакууме. Кремово-оранжевое твердое кристаллическое вещество, интермедиат 2-Ш (210 мг), использовали далее без дополнительной очистки.

К охлажденному раствору интермедиата 2-У (0.275 г) в ТГФ (8 мл) добавляли 2М раствор ЫВН₄ в ТГФ (0.6 мл, 0.12 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 0°С 30 минут и при комнатной темпера- 27 029771

туре 2 ч. Реакционную смесь гасили добавлением воды и экстрагировали этилацетатом три раза. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над \а₂8О₄ и упаривали в вакууме. Продукт, интермедиат 2-ΐν, получали в виде кремово-оранжевого твердого вещества (190 мг) и использовали далее без дополнительной очистки.

Смесь интермедиата 2-νΐ (869 мг) с Сз₂СО₃ (2.6 мг, 8.1 ммоль) в АсС\ (120 мл) кипятили (85°С) в течение 18 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры и удаляли растворители в вакууме. Остаток снова растворяли в ДХМ и промывали 1М водным раствором НС1 (3x25 мл). Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над \₂8О₄ и упаривали в вакууме, получая светло-оранжевое твердое вещество, интермедиат 2-ν (275 мг), который использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

Смесь метил 2,5,6-трихлор-4-пиримидинкарбоксилата (700 мг, 2.8 ммоль) и (К)-2-(морфолин-3ил)этанола гидрохлорида (600 мг, 3.5 ммоль, 60% энантиомерный избыток (ее)) в ЕЮН (10 мл) и ΌΙΡΕΑ (1.5 мл; 8.6 ммоль) кипятили 2 ч. Светло-желтую смесь охлаждали до комнатной температуры и удаляли растворители в вакууме. Полученное светло-желтое масло снова растворяли в ДХМ (60 мл), промывали насыщ. водн. \аНСО₃ (2x50 мл), водой (2x50 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органическую фазу сушили над \а₂8О₄ и упаривали в вакууме, получая целевой продукт в виде светло желтого масла, интермедиат 2-νΐ (860 мг), который использовали далее без дополнительной очистки.

Пример 23 синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для соединения 2-1, но используя (8)-2-(морфолин-3-ил)этанола гидрохлорид (60% ее) в качестве исходного вещества на стадии

1.

ЬСМ81, 1К= 4.71 мин, Μ8: 485.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.24 (с, 1Н), 7.97 (д, ά = 7.4 Гц, 1Н), 7.50 (д, ά = 8.0 Гц, 1Н), 7.43 (с, 1Н), 7.23 (с, 1Н), 7.17 (т, ά = 7.8 Гц, 1Н), 4.24 (т, ά = 5.4 Гц, 2Н), 4.09 - 3.70 (м, 8Н), 3.50 (дд, > 11.3, 7.0 Гц, 1Н), 3.30-3.11 (м, 4Н), 2.85 (с, 3Н), 2.24-1.93 (м, 4Н). [α]_ο= +8 (с 0.227, СНС1₃/МеОН 9:1) с энантиомерным избытком примерно 60%.

Смесь интермедиата 2-νΐΙ (50 мг), пинаколового эфира индол-4-бороновой кислоты (40 мг, 0.16 ммоль), РйС1₂(дрр1) (15 мг) и 2М водного раствора \а₂СО₃ (0.3 мл, 0.6 ммоль) в диоксане (2 мл) нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением при 85°С 3 ч. Темную реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали через слой целита, промывая дихлорметаном, и фильтрат упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии (1зо1и1е 8ι II 5 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 50% до 100% ЕЮАс). Объединяли фракции, содержащие целевой продукт, и упаривали в вакууме. Указанное в заголовке соединение получали в виде кремового твердого вещества, которое дважды растирали с диэтиловым эфиром и сушили в вакууме,

- 28 029771

получая целевой продукт, Пример 24, в виде белого твердого вещества (6 мг).

ЬСМ81, 1К= 5.01 мин, Μδ: 443.2 [М+Н]+. Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.16 (с, 1Н), 7.92 (д, I = 7.5

Гц, 1Н), 7.43 (д, I = 8.0 Гц, 1Н), 7.37 (с, 1Н), 7.24 (с, 1Н), 7.11 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), 4.18 (т, I = 5.8 Гц, 2Н), 4.00 (д, I = 13.0 Гц, 1Н), 3.90 - 3.79 (м, 1Н), 3.79 - 3.66 (м, 3Н), 3.61 - 3.48 (м, 1Н), 3.37 (т, I = 10.2 Гц, 1н), 2.88 (с, 3Н), 2.08 - 1.89 (м, 2Н), 1.84 (с, 6Н). [α]_ο= +6 (с 0.215, СНС1₃/МеОН 9:1) с энантиомерным избытком примерно 60%.

К охлажденному (0°С) раствору 2-УШ (80 мг) в ДМФА (2 мл) добавляли сначала трет-бутоксид натрия (25 мг, 0.25 ммоль), и после 5 минут перемешивания - иодметан (16 мкл, 0.25 ммоль). Полученную смесь перемешивали 15 минут и осуществляли второе добавление трет-бутоксида натрия (25 мг, 0.25 ммоль) и подметана (16 мкл, 0.25 ммоль). Смесь перемешивали 2 ч и гасили добавлением воды. Смесь экстрагировали дихлорметаном три раза. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Ν₂δΟ₄. Сырой продукт, интермедиат 2-У11 (50 мг), использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

Повторяли методику синтеза, использованную для Примера 24, используя интермедиат ХЫ, для получения Примера 25.

ЬСМ81, Ж= 4.99 мин, Μδ: 443.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.23 (с, 1Н), 7.98 (д, I = 7.4 Гц, 1Н), 7.50 (д, I = 8.0 Гц, 1Н), 7.43 (т, I = 2.5 Гц, 1Н), 7.31 (с, 1Н), 7.17 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), 4.25 (т, I = 5.6 Гц, 2Н), 4.07 (д, 1 = 13.6 Гц, 1Н), 3.97 - 3.87 (м, 1Н), 3.87 - 3.72 (м, 3Н), 3.69 - 3.56 (м, 1Н), 3.44 (т, I = 10.3 Гц, 1Н), 2.95 (с, 3Н), 2.12 - 1.96 (м, 2Н), 1.91 (с, 6Н). [α]_Β= -6 (с 0.317, СНС1₃/МеОН 9:1) с энантиомерным избытком примерно 60%.

Пример 26 синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для Примера 14, применяя в качестве прекурсора 3(8)-гидроксимстилморфолин.

ЬС-М81: 1К= 4.77 мин, М8: = 447.1 [М+Н]+. ^!Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.23 (с, 1Н), 7.51 - 7.34 (м, 2Н), 6.97 (дд, I = 11.2, 8.8 Гц, 1Н), 6.80 (с, 1Н), 4.49 - 4.35 (м, 2Н), 4.02 - 3.63 (м, 4Н), 3.50 - 3.37 (м, 1Н), 3.21-3.09 (м, 1Н), 3.09-2.91 (м, 1Н), 2.96 (с, 3Н), 1.83 (с, 3Н), 1.81 (с, 3Н).

Смесь интермедиата XXV (15 мг, 0.043 ммоль) с пинаколовым эфиром индол-4-бороновой кислоты (13 мг, 0.052 ммоль), дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(11) (6 мг, 0.009 ммоль) и 2М водный раствор \а₂СО₃ (0.1 мл) в диоксане (0.5 мл) нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением в течение 3 ч. Смесь темного цвета охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (2x10 мл). Органические слои промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Ν₂δΟ₄ и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом флэш- 29 029771

хроматографии (Го1и1е δί II 5 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 50 до 100% ЕЮАс), получая 3 мг конечного продукта, Примера 27.

ЬС-М81:1К= 4.08 мин; М+1 =427.1. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.14 (с, 1Н), 7.91 (д, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.41 (д, I = 8.0 Гц, 1Н), 7.35 (ушир.с, 1Н), 7.28 (с, 1Н), 7.09 (т, I = 7.8 Гц, 1Н), 4.47 (м, 1Н), 4.36 (м, 1Н), 3.98 (м, 1Н), 3.86 (м, 2Н), 3.67 (м, 1Н), 3.50 (м, 1Н), 3.21-3.01 (м, 2Н), 3.02 ( 5, 3Н), 1.64 (ушир.с, 2Н), 1.35 (ушир.с, 2Н).

Свежеприготовленный раствор \аОН (4н.) (0.547 мл) добавляли к раствору интермедиата IX (70 мг, 0.219 ммоль), дибромэтана (0.038 мл, 0.438 ммоль) и ТВАВ (14 мг, 0.044 ммоль) в толуоле (3 мл). Смесь перемешивали при 80°С в микроволновой пробирке в течение 2 ч, и при 110°С (песчаная баня) в микроволновой пробирке 16 часов. После охлаждения реакционную смесь разбавляли этилацетатом и промывали водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия. Органический слой сушили над \а₂8О₄ и упаривали в вакууме. Сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии ЦзоЫе δί II 5 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 20 до 80% ЕЮАс), получая 15 мг целевого интермедиата XXV.

Пример 28 синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для Примера 17, применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

ЬС-Μδ!. 1К= 4.76 мин, Μδ: 489.1 [М+Н]+. ^ХН ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.22 (с, 1Н), 7.65 (д, I = 13.7 Гц, 1Н), 7.42 - 7.30 (м, 1Н), 7.25 - 7.12 (м, 2н), 4.54 (д, I = 14.8 Гц, 1Н), 4.32 (д, I = 10.6 Гц, 1Н), 4.00 (д, I = 11.7 Гц, 1Н), 3.95 - 3.78 (м, 4Н), 3.78 - 3.66 (м, 1Н), 3.51 (т, I = 10.9 Гц, 1Н), 3.22 - 3.03 (м, 6Н), 2.80 (с, 3Н), 2.11- 2.02 (м, 2Н).

Пример 29 синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для Примера 19, применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

Εϋ-Μδ1, Ж=4.5 мин, Μδ: 501 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.01 (с, 1Н), 7.57 (д, I = 2.2 Гц, 1Н), 7.29 - 7.24 (м, 1Н), 7.12 (с, 1Н), 7.01 (д, I = 1.8 Гц, 1Н), 4.60 (д, 1 = 13.1 Гц, 1Н), 4.38 (дд, 1 = 10.7, 3.1 Гц, 1Н), 4.07 (дд, 1 = 11.4, 2.7 Гц, 1Н), 4.00 - 3.83 (м, 5Н), 3.80 (с, 3Н), 3.58 (тд, 1 = 11.7, 1.9 Гц, 1Н), 3.30 3.09 (м, 6Н), 2.86 (с, 3Н), 2.17 - 2.03 (м, 2Н).

Пример 30 синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для Примера 18, применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

^Μδ1, 1К=3.3 мин. Μδ: 472.5 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.69 (с, 1Н), 8.23 (д, 1 = 5.0 Гц, 1Н), 7.80 (д, 1 = 5.0 Гц, 1Н), 7.53 - 7.37 (м, 1Н), 7.14 - 6.98 (м, 1Н), 4.56 (д, 1 = 12.8 Гц, 1Н), 4.34 (дд, I = 10.8, 3.1 Гц, 1Н), 4.01 (дд, I = 11.6, 3.0 Гц, 1Н), 3.96 - 3.79 (м, 4Н), 3.78 - 3.67 (м, 1Н), 3.52 (т, 1 = 10.7 Гц, 1Н), 3.26-3.03 (м, 6Н), 2.80 (с, 3Н), 2.14-1.95 (м, 2Н).

- 30 029771

К суспензии интермедиата 2-УП (90 мг, 0.249 ммоль) в АСЫ (1.5 мл) и ДМФА (0.15 мл) добавляли Ы-метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амин (73 мг, 0.497 ммоль) и Сз₂СО₃ (400 мг, 1.244 ммоль). Реакционную смесь нагревали в герметично закрытой пробирке при 130°С 3 дня. После охлаждения добавляли Н₂О (50 мл), и смесь экстрагировали этилацетатом (2x40 мл). Органические слои сушили, фильтровали и упаривали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (от 20% до 80% ЕЮАс в ДХМ) и растирали в Е1₂О, получая конечный продукт 31 в виде белого твердого вещества (50 мг).

ЬСМ81, 1К= 3.12 мин, М3: 473.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.17 (кв, I = 4.9 Гц, 1Н), 8.01 (д, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.25 (д, I = 7.3 Гц, 1Н), 7.07 (т, I = 7.0 Гц, 1Н), 6.97 (т, I = 7.6 Гц, 1Н), 4.26 (м, 2Н), 3.99 (м, 3Н), 3.87 - 3.72 (м, 2Н), 3.60 (м, 1Н), 3.47 (м, 1Н), 3.01 (м, 6Н), 2.22 - 1.95 (м, 2Н), 1.85 (м, 6Н).

К раствору 2-Х (90 мг, 0.270 ммоль) в ДМФА (2.2 мл) при 0°С добавляли К*ВиО (32 мг, 0.566 ммоль) и Ме1 (18 мкл). Реакционную смесь перемешивали при 0°С 15 мин и добавляли КВиО (32 мг, 0.566 ммоль) и Ме1 (18 мкл). Смесь перемешивали при комнатной температуре 1 ч. Добавляли 1М НС1 (20 мл), и смесь экстрагировали дихлорметаном (3x40 мл). Органические слои сушили над Ыа₂3О₄, фильтровали и упаривали. Сырой продукт, интермедиат 2-ΙΧ (100 мг), использовали в следующей стадии без дополнительной очистки.

Интермедиат 2-Х

Интермедиат 2-Х синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для интермедиата 2-ΙΙ, но используя рацемический 2-(морфолин-3-ил)этанола гидрохлорид в качестве исходного вещества на стадии 1.

К суспензии интермедиата 2-ΧΙ (70 мг, 0.173 ммоль) в АСЫ (1.5 мл) и ДМФА (0.15 мл) добавляли Ы-метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амин (51 мг, 0.347 ммоль) и Сз₂СО₃ (282 мг, 0.867 ммоль). Реакционную смесь нагревали в герметично закрытой пробирке при 130°С 40 ч. После охлаждения добавляли Н₂О (50 мл) и ЕЮАс (40 мл). На границе раздела фаз появлялось твердое вещество, его отфильтровывали и промывали ЕЮАс и Е1₂О, получая конечный продукт 32 в виде белого твердого вещества (35 мг).

ЬС-М81, 1К= 3.98 мин, М3: 515.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.97 (д, I = 7.6 Гц, 1Н), 7.88 (кв, I = 4.9 Гц, 1Н), 7.25 (д, I = 7.3 Гц, 1Н), 7.07 (т, I = 7.1 Гц, 1Н), 6.98 (т, I = 7.6 Гц, 1Н), 4.43 - 4.29 (м, 1Н), 4.24 (м, 1Н), 4.10 - 3.76 (м, 8Н), 3.56 (м, 1Н), 3.46 - 3.36 (м, 2Н), 3.03 (м, 1Н), 2.99 (д, I = 4.9¾ 3Н), 2.94 (с, 3Н), 2.89 (м, 1Н), 2.30 - 1.96 (м, 4Н).

К охлажденной смеси интермедиата 2-Х (280 мг, 0.839 ммоль) и бис(2-бромэтил)ового эфира (265 мкл, 2.097 ммоль) в ДМФА (4 мл) добавляли в один прием трет-бутоксид натрия (282 мг, 2.517 ммоль).

- 31 029771

Темно-коричневую смесь перемешивали при 0°С 30 минут и при комнатной температуре 20 ч. По истечении этого времени добавляли ещё трет-бутоксид (140 мг), и перемешивание продолжали ещё 20 ч. Смесь гасили добавлением воды (25 мл) и НС1 1М (15 мл), и смесь три раза экстрагировали этилацетатом (75 мл). Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над №₂БО₄ и упаривали в вакууме. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (от 10 до 20% ЕЮАс/ДХМ), получая промежуточный продукт 2-XI в виде желтого твердого вещества (170 мг).

Смесь 4-бром-6-фтор-1Н-индола (32 мг, 0.149 ммоль), бис(пинаколато)диборона (79 мг, 0.309 ммоль), КОАс (36 мг, 0.371 ммоль) и РйС1₂(йрр£) (20 мг, 0.025 ммоль) в диоксане (1.3 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°С 3 ч. После охлаждения добавляли интермедиат 2-XI (50 мг, 0.124 ммоль), Рй(РРй₃)₄ (14 мг, 0.012 ммоль) и 2М раствор №₂СО₃ (0.25 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°С 20 ч. После охлаждения смесь очищали методом флэш-хроматографии (от 5 до 20% ЕЮАс в ДХМ) и растирали в Е1₂О, получая конечное соединение 33 в виде белого твердого вещества (30 мг).

ЕС-МБ1, ΐΚ= 4.95 мин, МБ: 503.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.32 (с, 1Н), 7.74 (д, I = 11.4 Гц, 1Н), 7.45 (с, 1Н), 7.30 (д, I = 9.4 Гц, 1Н), 7.23 (с, 1Н), 4.26 (с, 2Н), 4.05-3.71 (м, 8Н), 3.52 (м, 1Н), 3.56-3.09 (м, 4Н), 2.86 (с, 3Н), 2.27-1.96 (м, 4Н).

Пример 34 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 33, реакцией сочетания соединения 2-ХП (САБ:393553-55-4).

ЬСМБ1, ΐΚ= 4.72 мин, МБ: 515.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.04 (с, 1Н), 7.59 (д, I = 2.2 Гц, 1Н), 7.29 (с, 1Н), 7.12 (с, 1Н), 7.03 (с, 1Н), 4.24 (м, 2Н), 4.11 - 3.79 (м, 8Н), 3.79 (с, 3Н), 3.56 - 3.44 (м, 1Н), 3.21 (м, 4Н), 2.85 (с, 3Н), 2.14 (м, 4Н).

Смесь интермедиата XXVI (40 мг, 0.125 ммоль), пинаколового эфира индол-4-бороновой кислоты (40 мг, 0.162 ммоль), РйС1₂(РРй₃)₂ (18 мг, 0.025 ммоль) и 2М раствора №₂СО₃ (0.25 мл) в диоксане (1 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°С 4 ч. После охлаждения смесь очищали методом флэш-хроматографии (от 0% до 10% МеОН в ДХМ), получая конечный продукт 35 в виде желтого твердого вещества (10 мг).

ЬС-МБ1: ΐΚ= 4.17 мин, М+1 = 402.5. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.11 (с, 1Н), 7.85 (д, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.44 - 7.28 (м, 4Н), 7.08 (т, I = 7.8 Гц, 1Н), 4.38 (м, 1Н), 4.30 (м, 1Н), 3.96 (м, 1Н), 3.84 (м, 2Н), 3.53 (м, 2Н), 3.34 (с, 4Н), 3.22-3.12 (м, 2Н), 3.00 (с, 1Н).

К раствору интермедиата XXVII (30 мг, 0.124 ммоль) в ДМФА (1 мл) добавляли ЫаН 60% (12 мг, 0.309 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали 20 мин и добавляли МеБО₂С1 (20 мкл, 0.247 ммоль). Реакционную смесь оставляли нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 20 ч. По истечении этого времени добавляли ещё МеБО₂С1 (20 мкл, 0.247 ммоль), и смесь перемешивали 30 мин. До- 32 029771

бавляли воду (20 мл) и этилацетат (2x20 мл). Органические слои сушили над Ха₂8О₄, фильтровали и упаривали, получая промежуточный продукт XXVI в виде оранжевого масла (50 мг).

Интермедиат XXVII

Смесь интермедиата XXVIII (50 мг, 0.169 ммоль), АсОН (0.5 мл) и Н₂О (0.5 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°С 30 мин. После охлаждения осторожно добавляли насыщенный раствор Ха11СХ)₃ (20 мл), и смесь экстрагировали этилацетатом (2x15 мл). Органические слои сушили над Ха₂8О₄, фильтровали и упаривали, получая промежуточный продукт XXVII в виде белого твердого вещества (30 мг).

Интермедиат XXVIII

К суспензии интермедиата XXIX (75 мг, 0.259 ммоль) в ацетоне (2 мл) прикапывали раствор ХаХ (50 мг, 0.776 ммоль) в Н₂О (0.2 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1.5 ч. Добавляли воду (5 мл), и смесь экстрагировали этилацетатом (2x20 мл). Органические слои сушили над Ха₂8О₄, фильтровали и упаривали, получая промежуточный продукт XXVIII в виде желтого маслянистого твердого вещества (50 мг). Интермедиат XXIX

К суспензии интермедиата XXX (70 мг, 0.258 ммоль) в ДХМ (2 мл) добавляли ДМФА (1 капля). Через 5 мин добавляли оксалилхлорид (2М раствор в ДХМ) (26 мкл) при комнатной температуре. Через 1 ч добавляли ещё оксалилхлорид (2М раствор в ДХМ) (0.15 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 10 мин и упаривали, получая промежуточный продукт XXIX в виде желтого твердого вещества (75 мг).

К суспензии интермедиата IV (200 мг, 0.700 ммоль) в ТГФ (0.2 мл) добавляли 0.5н. раствор ХаОН (1.7 мл, 0.840 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли конц. НС1 до рН~4-5, суспензию отфильтровывали и промывали осадок водой, получая интермедиат XXX в виде белого твердого вещества (70 мг). Фильтрат экстрагировали этилацетатом (30 мл) и смесью СНС1₃: ,РгОН (2x30 мл). Органические слои сушили, фильтровали и упаривали, получая интермедиат XXX в виде белого твердого вещества (130 мг).

Смесь интермедиата XXXI (30 мг, 0.074 ммоль), пинаколового эфира индол-4-бороновой кислоты (25 мг, 0.1 ммоль), РйС1₂(РРЬ₃)₂ (10 мг, 0.015 ммоль) и 2М водного раствора Ха₂СО₃ (0.150 мл) в диоксане (1 мл) нагревали при 100°С в герметично закрытой пробирке в атмосфере аргона. Смесь темного цвета охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой целита, промывая дихлорметаном. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (от 25 до 100% циклогексана в ЕЮАс) и затем 7М ХН₃ в смеси МеОН/ДХМ (от 0 до 10%), получая конечный продукт Пример

- 33 029771

36 в виде кремового твердого вещества (1.5 мг).

БС-М81: ΐΚ= 3.55 мин, М+1 = 484.2. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.17 (с, 1Н), 7.89 (д, I = 7.4 Гц, 1Н), 7.42 (д, I = 7.9 Гц, 1Н), 7.39 - 7.32 (м, 1Н), 7.18 (м, 1Н), 7.09 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), 4.55 (м, 1Н), 4.33 (м, 1Н), 4.00 (м, 1Н), 3.90 - 3.64 (м, 4Н), 3.59 - 3.41 (м, 4Н), 3.21 - 2.91 (м, 2Н), 2.77 (с, 3Н), 1.99 (с, 3Н), 1.98 1.88 (м, 2Н), 1.78 (м, 2Н).

К раствору интермедиата IX (50 мг, 0.156 ммоль) и мехлорэтамина гидрохлорида (75 мг, 0.391 ммоль) в ДМФА (3 мл), охлажденному до 0°С, порциями добавляли трет-бутоксид натрия (75 мг, 0.782 ммоль). Полученную смесь перемешивали при 0°С 30 мин и при комнатной температуре в течение 18 ч. По истечении этого времени добавляли ещё трет-бутоксид натрия (70 мг, 0.728 ммоль) в один прием. Полученную темную смесь перемешивали 1 ч, гасили добавлением воды, и три раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Να₂8Ο₄ и упаривали в вакууме, получая интермедиат XXXI (30 мг).

К раствору интермедиата XXXII (30 мг, 0.046 ммоль) в ТГФ (1 мл) добавляли 1М раствор ТВЛГ в ТГФ (55 мкл, 0.055 ммоль). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили добавлением воды и три раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над Να₂8Ο₄ и упаривали в вакууме. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (от 25 до 100% циклогексана в ЕЮАс), получая конечный продукт Пример 37 в виде белого твердого вещества (4 мг).

БС-М81: ΐΚ= 4.68 мин, М+1 = 501.2. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.25 (с, 1Н), 7.87 (д, I = 8.3 Гц, 1Н), 7.24 (т, I = 2.6 Гц, 1Н), 7.14 (с, 1Н), 6.67 (д, I = 8.3 Гц, 1Н), 4.55 (м, 1Н), 4.29 (м, 1Н), 4.01 (м, 1Н), 3.90 (с, 3Н), 3.89 - 3.64 (м, 5Н), 3.51 (м, 1Н), 3.28-3.09 (м, 6Н), 2.79 (с, 3Н), 2.13 - 1.98 (м, 2Н).

Интермедиат XXXII

Смесь интермедиата XI (50 мг, 0.128 ммоль), бис(пинаколато)диборона (81 мг, 0.321 ммоль), КСАс (38 мг, 0.385 ммоль) и РТС1₂(Трр!)₂ (11 мг, 0.013 ммоль) в диоксане (1.5 мл) нагревали при 100°С 3 ч. Смесь темного цвета охлаждали до комнатной температуры и добавляли 4-бром-7-метокси-1триизопропилсиланил-1Н-индол (50 мг, 0.154 ммоль), РТ(РРГ₃)₄ (13 мг, 0.013 ммоль) и 2М водный раствор Nа₂СΟ₃ (0.2 мл). Полученную смесь нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением при 100°С в течение 18 ч. Смесь темного цвета охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через слой целита. Фильтрат упаривали в вакууме. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (от 10 до 60% циклогексана в ЕЮАс), получая интермедиат XXXII в виде кремового твердого вещества (30 мг).

Смесь интермедиата XXXIII (45 мг, 0.157 ммоль), пинаколового эфира индол-4-бороновой кислоты

- 34 029771

(50 мг, 0.205 ммоль), РТС1₂(РРН₃)₂ (22 мг, 0.031 ммоль) и №₂ТО₃ 2М (0.32 мл) в диоксане (1 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°С 5 ч. После охлаждения смесь очищали методом флэшхроматографии (от 0% до 5% МеОН в ДХМ), получая конечный продукт, Пример 38, в виде белого твердого вещества (10 мг).

ЬС-М81: Ж= 2.87 мин, М+1 = 367.1. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.24 (с, 1Η), 7.97 (д, I = 7.5 Гц, 1Η), 7.48 (д, I = 8.0 Гц, 1Η), 7.44 (т, I = 2.7 Гц, 1Η), 7.20 (с, 1Η), 7.16 (т, I = 7.8 Гц, 1Η), 5.51 (с, 1Η), 4.52 (м, 1Η), 4.41 (м, 1Η), 4.05 (м, 1Η), 3.99 - 3.86 (м, 2Н), 3.72 (с, 1Η), 3.57 (м, 1Η), 3.17 (м, 3Η), 1.51 (с, 6Н).

К суспензии интермедиата IV (100 мг, 0.350 ммоль) в ТГФ (1.5 мл) при 0°С прикапывали МеМгВг (3М раствор в Е120, 0.29 мл, 0.875 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С 15 мин и при комнатной температуре 1 ч. Реакционную смесь выливали в насыщенный раствор ΝαΙΙίΌ; (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (2x20 мл). Органические слои сушили над №₂3Ο₄, фильтровали и упаривали, получая интермедиат XXXIII в виде желтого твердого вещества (95 мг).

К суспензии интермедиата XXXIII (45 мг, 0.157 ммоль) в АСN (1 мл) и ДМФА (0.1 мл) добавляли ^метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амин (46 мг, 0.315 ммоль) и Сз₂ТО₃ (257 мг, 0.787 ммоль). Реакционную смесь нагревали в герметично закрытой пробирке при 130°С 40 ч. После охлаждения добавляли воду (35 мл), и смесь экстрагировали этилацетатом (2x30 мл). Органические слои сушили над №₂3Ο₄, фильтровали и упаривали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (от 0% до 30% ЕЮАс в ДХМ и от 0 до 5% МеОН в ДХМ), получая конечный продукт, Пример 39, в виде белого твердого вещества (38 мг).

ЬС-М81: ΐΚ= 3.02 мин, М+1 = 397.2. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.89 (д, I = 4.9 Гц, 1н), 8.14 (д, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.24 (д, I = 7.2 Гц, 1Н), 7.07 (т, I = 7.0 Гц, 1Н), 6.97 (т, I = 7.1 Гц, 1Н), 5.22 (с, 1Н), 4.50 - 4.28 (м, 2Н), 4.07 (м, 1Н), 4.01 - 3.90 (м, 1Н), 3.86 (м, 1Н), 3.79 (м, 1Н), 3.58 (м, 1Н), 3.23 (м, 2Н), 3.05 (м, 3Н), 1.52 (с, 5Н).

В дегазированную смесь интермедиата XXXIV (45 мг, 0.153 ммоль), пинаколового эфира индол-4бороновой кислоты (50 мг, 0.198 ммоль) и 2М водного раствора МьССГ (0.5 мл) в диоксане (1.5 мл) добавляли дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(П) (21 мг, 0.031 ммоль). Смесь нагревали в герметично закрытом сосуде при кипячении в течение 3 ч. Добавляли воду (35 мл), и смесь экстрагировали смесью ДХМ/МеОН 9:1. Органические слои сушили над №₂3Ο₄, фильтровали и упаривали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (от 0% до 6% ДХМ в МеОН), получая конечный продукт Пример 40 (15 мг).

В смесь интермедиата XXXV (50 мг, 0.187 ммоль) и МеI (0.05 мл, 0.803 ммоль) в сухом ДМФА (1 мл) при 0°С добавляли ΝαίχΒιι (60 мг, 0.562 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли насыщенный раствор NаΗСΟ₃, и смесь экстрагировали этилацетатом. Органические слои сушили над №₂3Ο₄, фильтровали и упаривали, получая интермедиат XXXIV (45

- 35 029771

мг).

К раствору интермедиата VI (200 мг, 0.596 ммоль) в ДМФА (4 мл) добавляли NаСN (35 мг, 0.715 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После добавления воды отфильтровывали твердый осадок, и фильтрат экстрагировали этилацетатом. Органические слои сушили над №₂8О₄, фильтровали и упаривали, получая интермедиат XXXV (50 мг).

Смесь интермедиата XXXVI (134 мг, 0.372 ммоль), пинаколового эфира индол-4-бороновой кислоты (109 мг, 0.447 ммоль), РдС1₂(РРН₃)₂ (52 мг, 0.074 ммоль) и 2М водного раствора Ж₂СО₃ (0.745 мл) в 1,4-диоксане (2.55 мл) нагревали при 110°С в герметично закрытой пробирке на песчаной бане 3 ч. После охлаждения реакционную смесь разделяли между Н₂О и ДХМ. Водный слой экстрагировали 3 раза дихлорметаном. Объединенные органические экстракты сушили (№₂8О₄), фильтровали и упаривали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии, сначала (от 0 до 10% МеОН в ДХМ) и затем (от 0 до 100% ЕЮАс в циклогексане), получая конечный продукт Пример 41 в виде светло-желтого твердого вещества (30 мг).

ЬС-М8: ПК 4.92 & 5.00 мин, М+1 = 441.3. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.23 (с, 1Н), 8.03 (д, 1 = 7.5 Гц, 1Н), 7.49 (д, 1 = 8.0 Гц, 1Н), 7.43 (т, 1 = 2.5 Гц, 1Н), 7.31 (с, 1Н), 7.17 (т, 1 = 7.8 Гц, 1Н), 4.57 (м, 1Н), 4.43 - 4.30 (м, 1Н), 4.11-3.99 (м, 1Н), 3.93 (м, 1Н), 3.73 (м, 1Н), 3.56 (м, 1Н), 3.44 - 3.32 (м, 2Н), 3.28 -3.07 (м, 4Н), 2.25-2.06 (м, 3Н), 1.73 (с, 3Н).

№ОрВи (54 мг, 0.557 ммоль) добавляли в смесь интермедиата XXXVI (142 мг, 0.371 ммоль) и ДМФА (37 мл) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали 30 мин при 0°С и при комнатной температуре ещё 30 мин. Дополнительное количество ШС/Ви (24 мг, 0.248 ммоль) добавляли в реакционную смесь, после чего добавляли МеI (0.023 мл, 0.371 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали 30 мин при 0°С и затем при комнатной температуре ещё 2 ч. Добавляли в реакционную смесь воду и экстрагировали этилацетатом (х3). Объединенные органические экстракты сушили (№₂8О₄), фильтровали и упаривали, получая интермедиат XXXVII (134 мг).

В смесь интермедиата XXXVIII (209 мг, 0.597 ммоль) в диоксане (18.40 мл) и НЮ (4.60 мл), добавляли тСРВА (113 мг, 0.656 ммоль), и затем КМпО₄ (127 мг, 0.776 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 5 ч. Дополнительное количество тСРВА (50 мг, 0.290 ммоль) и КМпО₄ (60 мг, 0.367 ммоль) добавляли в реакционную смесь и перемешивали при комнатной температуре 16 ч. Дополнительное количество тСРВА (20 мг, 0.116 ммоль) и КМпО₄ (30 мг, 0.184 ммоль) добавляли в реакционную смесь и перемешивали при комнатной температуре ещё 3 часа. Реакционную смесь гасили 10%-ным водным раствором №₂8₂О₃ и 3 раза экстрагировали ЕЮАс. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили (№₂8О₄), фильтровали и упаривали, получая интермедиат XXXV (230 мг).

- 36 029771

Смесь интермедиатов VI и VII (200 мг, 0.596 ммоль), 3-хлор-1-пропантиола (79 мг, 0.715 ммоль) и ΌΙΡΕΑ (0.21 мл, 1.198 ммоль) в ДХМ (11 мл) нагревали при 50°С в герметично закрытой пробирке на песчаной бане 16 ч. Дополнительное количество 3-хлор-1-пропантиола (40 мг, 0.362 ммоль) и ΌΓΡΕΑ (0.1 мл, 0.570) добавляли в реакционную смесь и нагревали при 50°С 72 ч. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и промывали насыщенным водным раствором ЫаНСО₃ и насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой сушили над Ыа^О₄, фильтровали и упаривали, получая интермедиат XXXVIII (209 мг).

Смесь интермедиата XXXIX (30 мг, 0.114 ммоль), пинаколового эфира индол-4-бороновой кислоты (33 мг, 0.137 ммоль), РйС1₂(РРЬ₃)₂ (12 мг, 0.017 ммоль) и Ыа₂СО₃ 2М (0.175 мл, 0.343 ммоль) в диоксане (0.7 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°С 1 ч. После охлаждения смесь очищали методом флэш-хроматографии (от 0% до 5% МеОН в ДХМ), получая конечный продукт, Пример 42, в виде белого твердого вещества (10 мг).

ГС-Μδ: ΐ_κ= 3.34 мин, М+1 = 424.2. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.20 (с, 1Н), 11.16 (с, 1Н), 8.09 (д, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.48 (т, I = 7.3 Гц, 2Н), 7.41 (м, 4Н), 7.19 (м, 2Н), 6.60 (с, 1Н), 4.61 (м, 1Н), 4.31 (м, 1Н), 4.11 (м, 1Н), 3.95 (м, 2Н), 3.78 (м, 1Н), 3.63 (м, 1Н), 3.26 (м, 2Н).

Интермедиат XXXIX

К раствору интермедиата XXVII (100 мг, 0.412 ммоль) в ДХМ (8 мл) прикапывали триметилхлорсилан (470 мкл, 3.709 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 мин, прикапывали изопентил нитрит (170 мкл, 1.236 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре 90 мин. Смесь упаривали, и остаток очищали методом флэш-хроматографии (от 0 до 2% МеОН в ДХМ), получая интермедиат XXVII (65 мг).

Смесь интермедиата XXXIX (35 мг, 0.134 ммоль), пинаколового эфира индол-4-бороновой кислоты (32 мг, 0.134 ммоль), РйС1₂(РРЬ₃)₂ (14 мг, 0.020 ммоль) и Ыа₂СО₃ 2М (0.2 мл) в диоксане (0.8 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°С 90 мин. Добавляли РйС1₂(РРЬ₃)₂ (14 мг, 0.020 ммоль) и 3(метилсульфонил)фенилбороновую кислоту (32 мг, 0.160 ммоль), и смесь нагревали при 100°С 90 мин. После охлаждения смесь очищали методом флэш-хроматографии, сначала (от 0 до 5% МеОН в ДХМ) и затем методом преп-ВЭЖХ, получая Пример 43 в качестве минорного продукта, белое твердое вещество (7 мг).

^^δ: ΐ_κ= 4.89 мин, М+1 = 463.1. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.22 (с, 1Н), 8.79 (с, 1Н), 8.66 (д, I = 7.9 Гц, 1Н), 8.52 -8.45 (м, 1Н), 8.12 - 8.07 (м, 1Н), 8.00 (д, I = 8.4 Гц, 1Н), 7.76 (т, I = 7.8 Гц, 1Н), 7.50 (д, I = 8.1 Гц, 1Н), 7.45 - 7.33 (м, 2Н), 7.19 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), 6.59 (с, 1Н), 4.63 (д, I = 12.5 Гц, 1Н), 4.35 (дд, I = 11.1, 3.3 Гц, 1Н), 4.08 (д, I = 8.7 Гц, 1Н), 4.03 - 3.91 (м, 2Н), 3.78 (с, 1Н), 3.59 (д, I = 11.9 Гц, 1Н), 3.26 (с, 3Н), 3.14 (с, 1Н).

- 37 029771

Пример 44 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для Примера 38, применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

ЬС-Μδί, !_К= 2.92 мин. Μδ: 367.1 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.24 (с, 1Η), 7.97 (д, I = 6.8 Гц, 1Η), 7.55 - 7.38 (м, 2Н), 7.18 (дд, 1= 14.1, 6.3 Гц, 2Н), 5.51 (с, 1Η), 4.53 (д, 1= 11.5 Гц, 1Η), 4.42 (дд, 1= 11.0, 3.3 Гц, 1Η), 4.06 (д, I = 8.0 Гц, 1Η), 3.99 - 3.86 (м, 2Н), 3.72 (с, 1Η), 3.57 (т, I = 10.5 Гц, 1Η), 3.30 -3.03 (м, 2Н), 1.52 (с, 6Н).

Смесь 4-бром-6-фтор-1Н-индола (36 мг, 0.168 ммоль), бис(пинаколато)диборона (90 мг, 0.350 ммоль), ацетата калия (41 мг, 0.420 ммоль) и РйС1₂(йрр1) (23 мг, 0.028 ммоль) в диоксане (1 мл) нагревали в герметично закрытой пробирке при 100°С 3 ч. После охлаждения добавляли интермедиат X^ (40 мг, 0.140 ммоль) в диоксане (1 мл), тетракис(трифенилфосфин)палладий(0) (16 мг, 0.014 ммоль) и Nа₂СΟ₃ 2Μ (0.21 мл). Реакционную смесь нагревали при 100°С 19 ч. После охлаждения смесь очищали сначала методом флэш-хроматографии (от 5 до 10% ЕЮАс в ДХМ) и затем методом преп-ВЭЖХ, получая конечный продукт, Пример 45, в виде белого твердого вещества (12 мг).

Εϋ-Μδ1, ί_Κ= 4.04 мин. Μδ: 385.2 [М+Н]+. ¹Η ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.30 (с, 1Η), 7.79 (д, I = 11.4 Гц, 1Η), 7.44 (с, 1Η), 7.26 (д, I = 15.4 Гц, 2Н), 5.34 (с, 1Η), 4.47 (дд, I = 27.0, 10.9 Гц, 2Н), 4.05 (д, I = 8.2 Гц, 1Η), 3.93 (т, I = 10.1 Гц, 2Н), 3.72 (с, 1Η), 3.58 (с, 1Η), 3.20 (дд, I = 24.7, 13.8 Гц, 3Η), 1.52 (с, 7Н).

Интермедиат X^

Интермедиат X^ синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для интермедиата XXXIII, применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

Пример 46 синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для Примера 45, реакцией сочетания по Сузуки интермедиата X^ с 4-бром-6-метокси-1Н-индолом в присутствии бис(пинаколато)диборона и палладиевого катализатора.

Εϋ-Μδ1, !_К= 3.38 мин. Μδ: 397.2 [М+Н]+. ¹Η ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.03 (с, 1Η), 7.60 (д, I = 2.2 Гц, 1Η), 7.29 (с, 1Η), 7.10 (с, 1Η), 7.02 (с, 1н), 5.44 (с, 1Η), 4.59 - 4.35 (м, 2Н), 4.07 (с, 1Η), 3.92 (т, I = 9.7 Гц, 2Н), 3.81 (с, 3Η), 3.77 - 3.65 (м, 1Η), 3.57 (с, 1Η), 3.22 (с, 2Н), 1.52 (с, 6Н).

Пример 47. Клеточный тест ингибирования АТК.

Активность АТК ограничивается реплицирующимися клетками, и многие ее мишени могут также фосфорилироваться другими РП<К. Эти ограничения затрудняли разработку селективных клеточных тестов в прошлом. Для преодоления указанных ограничений была использована разработанная ранее клеточная система, в которой АТК, и только АТК, можно активировать по желанию в каждой клетке (То1ейо е! а1 Оеие^ Оеу. 22, 297-302 2008). В этой системе добавление 4-гидрокситамоксифена (4-ОНТ) промотирует ядерное перемещение фрагмента ТорВР1, который затем активирует АТК. Фосфорилирование Н2АХ, которое следует за добавлением 4-ОНТ в данных клетках, представляет собой прямое и селектив- 38 029771

ное считывание активности ЛТК, на которое не влияют остальные ΡΙΚΚ. Эта система использовалась в прошлом как скрининговая платформа для соединений с потенциалом ингибирования АТК (То1еко е! а1. ΝαΙ §1тис1 Мо1 Βίο1 2011). На фиг. 1 проиллюстрирован процесс количественной оценки активности АТК с помощью данной системы, и описано вычисление значения 1С₅₀ для четырех репрезентативных соединений из разработанной серии (соединения из Примеров 1, 2, 3 и 11). Использовавшаяся линия клеток представляла собой клон линии клеток рака груди МСР7, устойчиво экспрессирующих АТКактивирующий фрагмент ТорВР1 (описано в работе То1еко е! а1 Сепек Эеу 2008).

Ингибирование АТК в живых клетках соединениями из Примеров 1, 2, 3 и 11 проиллюстрировано на фиг. 1. Ниже описаны детали:

(A) Изображение иллюстрирует клеточную систему для активации АТК, использовавшуюся в данном тесте, которая была описана в работе То1еко. Ь. I., е! а1. Сепек Эеу. 22, 297-302 (2008). Вкратце, АТКактивирующий фрагмент белка ТорВР1 слит с фрагментом эстрогенового рецептора. Полученный гибридный белок сохраняется в цитоплазме, но перемещается в ядро в присутствии 4-гидрокситамоксифена (ОНТ), где активирует АТК.

(B) ОНТ-индуцированная активация в данной системе приводит к общему фосфорилированию гистона Н2АХ (γΗ2ΑΧ), мишени АТК. Важно, и как описано в работе То1еко, Ь.1 е! а1. Сепек Эеу. 22, 297302 (2008), формирование "/Н2АХ в данной системе строго зависит от АТК, и на него не влияют другие родственные киназы, такие как ДНК-ΡΚ или АТМ. Изображение иллюстрирует тип ','Н2АХ сигнала, наблюдающегося в данной системе. ТорВР1-ЕК ретровирусная конструкция несет 1КЕ8-СРР репортерную группу для идентификации инфицированных клеток. Отметим, что каждая инфицированная (зеленая) клетка отвечает на ОНТ массированной выработкой ','Н2АХ.

(C) Иллюстрация высокопроизводительного микроскопического скрининга, использующегося для ίη се11и1о оценки ингибиторов АТК, по работе То1еко, Ь. I. е! а1. Ν;·ιΙ. §1тис1.Мо1. Вю1. 18, 721-727 (2011). Вкратце, клетки, экспрессирующие ТорВР1-ЕК, подвергают воздействию ОНТ для активации АТК в 96луночных планшетах, и затем обрабатывают для ','Н2АХ иммунофлуоресценции. Затем регистрируют сигнал с помощью высокопроизводительного микроскопа Орега (Реткт Е1тег), и анализируют сигнал ядерного "_;'Н2АХ для каждой лунки. Усредненный сигнал для каждой лунки кодируют цветом (черный = нет сигнала; красный = максимальный сигнал).

(Ό) Пример поведения в данном анализе хорошо известного ингибитора АТК (кофеин). Слева данные из лунок с клетками, экспрессирующими ТОРВР1-ЕК, с добавлением или без добавления ОНТ (500 нМ). Справа - действие кофеина на клетки, обработанные добавлением 500 нМ ОНТ. Как можно видеть, повышающиеся концентрации кофеина приводят к постепенному уменьшению усредненного сигнала ядерного "_;'Н2АХ на лунку, в соответствии с ингибированием АТК ([кофеин] = 0.1, 0.2, 0.5, 1, 2 и 5 мМ).

(Е) Действие увеличивающихся концентраций соединения из Примера 1 и 2 на ОНТиндуцированный γΜΑΧ, измеренный как в (Ό). (Концентрации: 0.0003, 0.001, 0.003, 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1 и 3 мкМ). Показаны дупликаты для каждого набора условий.

(Р) Необработанные данные, показывающие интенсивность ','Н2АХ на отдельное ядро, полученные в эксперименте, показанном в (Е), на клетках, обработанных ОНТ (500 нМ) и увеличивающимися концентрациями соединения из Примера 1. Каждая точка соответствует интенсивности ','Н2АХ на отдельное ядро. Черные столбики показывают усредненные значения.

(С) Сигмоидальные кривые, представляющие данные, полученные в (Е), были использованы для вычисления значений 1С₅₀ для каждого соединения.

(H) Действие увеличивающихся концентраций Примера 3 и Примера 11 на ОНТ-индуцированный γΜΑΧ, замерявшееся как описано в (Ό). (Концентрации: 0.0003, 0.001, 0.003, 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1 и 3 мкМ). Показаны дупликаты для каждого набора условий.

(I) Необработанные данные, показывающие интенсивность ','Н2АХ на отдельное ядро, полученные в эксперименте, показанном в (Н), на клетках, обработанных ОНТ (500 нМ) и увеличивающимися концентрациями соединения из Примера 11. Каждая точка соответствует интенсивности ','Н2АХ на отдельное ядро. Черные столбики показывают усредненные значения.

(Κ) Сигмоидальные кривые, представляющие данные, полученные в (Н), были использованы для вычисления значений 1С₅₀ для каждого соединения.

В дополнение к описанной выше селективной системе, описанные в настоящем изобретении соединения из Примеров скринировали на их способность ингибировать внутриклеточный АТК с использованием иммуноблоттинга для детектирования фосфорилирования АТК субстрата СНК1(8345) в клетках, обработанных гидроксимочевиной. Клетки НТ29 высевали с концентрацией 500000 клеток на лунку в 6лучных планшетах в среде КРМ1 (§1§та К6504) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (§1§та Р7524), раствора пенициллин/стрептомицин в разбавлении 1: 100 (СЪсо 15070-063) и фунгизона (СЪсо, 15290-018), и оставляли на ночь при 37°С в атмосфере 5% СО₂. Затем добавляли в клеточную среду соединения из финальной концентрации 10 мкМ в 3-кратных серийных разбавлениях, и клетки инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО₂. Через 15 мин добавляли гидроксимочевину (§1дта Н8627) до финальной концентрации 2.5 мМ. После 30 мин обработки гидроксимочевиной, клетки промывали в РВ8,

- 39 029771

лизировали добавлением 50 мкл лизирующего буфера (50 мМ Тпз рН 7.5, 150 мМ ЫаС1, 1% 1ОЕРАБ СО630 (зфта, КеТ. 542334-100О-А), Рйозрйо З1ор (Косйе, КеТ. 04906837001) и Сотр1е1е Μιηΐ ЕЭТА Тгее (Косйе, КеТ. 11836170001)). Содержание белка в лизатах определяли модифицированным методом Брэдфорда (Зфта, КеТ. В6916). Белки отделяли на ЗЭЗ-РАОЕ и переносили на нитроцеллюлозную мембрану (УАК 1п1егпа1юпа1 Еиго1аЬ, КеТ. 732-4007). Мембраны инкубировали в течение ночи при 4°С с антителами, специфичными к общим СНК1 (Зап1а Ρπιζ Вю1есйпо1оду, зс-8404), фосфосерин-345 СНК1 (Се11 Зфпа1т§ Тесйпо1оду #2348), их промывали и затем инкубировали с 1КЭуе800 конъюгированными антимышиными (Р1егсе/Си11ек, 35521) и А1еха Р1иог 680 козьими антикроличьими 1дО вторичными антителами (1пй1годеп, А21076). Полосы визуализировали и количественно оценивали с помощью инфракрасной системы формирования изображений Обуззеу (БРСог Вюзшепсез). Процент фосфорилированного СНК1 относительно общего СНК1 в клетках с гидроксимочевиной принимали за 100 процентов фосфорилирования. Процент СНК1 фосфорилирования финально откладывали на графике в зависимости от концентрации каждого соединения и вычисляли значения ЕС₅₀ для внутриклеточного ингибирования АТК с помощью АсЧуЧуВаке от ЮВЗ.

Биологическая активность соединений в АТК клеточном тесте представлена в приведенных ниже таблицах полуколичественными результатами: ЕС₅₀ >1 мкМ (*), 100нМ< ЕС₅₀<1 мкМ (**) или ЕС₅₀ <100 нМ (***).

Таблица 1

Пример	АТК ЕСУо
1	***
2	***
3	***
4	***
5	**
6	**
7	**
8	***
9	**
10	**
11	***
12	**
13	**
14	**
15	**
16	**
17	***
18	***
19	***
20	**
21	*
22	**
23	**
24	**
25	**
26	*
27	**
28	***
29	***
30	**

- 40 029771

31	***
32	*
33	**
34	**
35	*
36	*
37	**
38	**
39	**
40	**
41	**
42	**
43	**
44	**
45	**
46	**
61	**
62	**
63	***
64	**
65	***
66	**
67	***
68	**
69	**
70	**
71	***
72	**
73	*
74	**
75

- 41 029771

76	*
77	***
78	***
79	**
80	*
81	*
82	**
83	**
86	*
87	*
92	***
93	**
94	*
95	*
96	**
97	**
101	**
102	*
103	**
105	**
106	*
108	**
109	**
110	*
112	**
113	*

114

Пример 48. Клеточный тест ингибирования АТК и АТМ.

АТМ и АТК демонстрируют различающиеся и перекрывающиеся ответы на повреждение ДНК. Они должны работать совместно, и их ответы должны быть скоординированы. Оба пути могут активироваться ионизирующим излучением и УФ-излучением. Поскольку УФ-излучение непрактично для использования в высокопроизводительном клеточном тесте, был выбран УФ-миметик 4\'(')О (Зщта) для активации путей ответа АТК и АТМ на повреждение ДНК.

СН1\1. расположенная по ходу транскрипции протеинкиназа АТК, играет ключевую роль в контрольной точке повреждения ДНК, так же как и Сйк2, расположенная по ходу транскрипции АТМ. В активации СЬк1 участвует фосфорилирование 3ег317 и 3ег345 (рассматриваемые в качестве предпочтительной мишени для фосфорилирования/активации посредством АТК), и активация СЬк2 включает фосфорилирование ТЬг68 (наиболее заметный субстрат для АТМ). В настоящем тесте замеряется уменьшение фосфорилирования СЬк1 (Зег 345) и Сйк1 (ТЬг 68) в клетках аденокарциномы толстого кишечника НТ29 после обработки соединением и УФ-миметиком 4ЫЦО. Соединения в концентрации 1 мМ получали разбавлением в 100%-ном ДМСО и затем разводили 1:100 в среде для проведения теста (КРМТ 10% РСЗ, 1% глутамин). Клетки высеивали в 6-луночные планшеты Со§1аг в концентрации 5х10⁵ клеток на мл в 2 мл КРМТ 10% РСЗ, 1% глутамина, и выращивали в течение 24 ч. После добавления соединения, клетки инкубировали 60 мин. Затем добавляли финальную концентрацию 3мкМ 4\'(')О (приготовлено в 100%-ном ДМСО), и клетки инкубировали ещё 60 мин. Затем клетки лизировали, и анализировали рСЬк1 3ег345 и рСНК2 ТЬг68 (Се11 ЗщпаНпд ТесЬио1оду, #2661) относительного общего СНК1 и СНК2 (Зап1а Οήζ Вю1есЬио1оду, §с-5278) соответственно методом иммуноблоттинга, как описано выше. Процент фосфорилированного СНК1 относительно общего СНК1 или р-СНК2 относительно общего СНК2 в клетках, обработанных 4ЫЦО, принимали за 100 процентов фосфорилирования. Процент СНК1 или СНК2 фосфорилирования в итоге откладывали на графике относительно концентрации для каждого со- 42 029771

единения, и вычисляли значения ЕС₅о для внутриклеточного ингибирования ЛТК с помощью ΑοίΐνΐίγВазе от ГОВ5.

Селективность некоторых соединений к АТК в сравнении с АТМ показана в табл. 2.

Таблица 2

Пример	Ингибирование СНК1Р УФ-миметиком при 10 мкМ (%)	Ингибирование СНК2Р У Ф-миметиком при 10 мкМ (%)
1	99	0
2	98	0
3	98	0
5	98	0
8	98	25
10	95	25
АТМ ингибитор Ки-60019	38	99

Пример 49. Ση νίΐΐΌ тест пролиферации клеток.

Ση νΐίΓΟ активность соединений замеряли в описанном выше тесте пролиферации клеток; СеПТНегО1о® люминисцентном анализе жизнеспособности клеток, коммерчески доступном от Рготеда Согр., МасРзоп, 'ΨΕ Этот гомогенный метод анализа основан на рекомбинантном экспрессировании Со1еор1ега люциферазы (υδ 5583024; υδ 5674713; ϋδ 5700670) и определяет число жизнеспособных клеток в культуре на основе количественного определения присутствующей АТФ, индикатора метаболически активных клеток (СгоисЬ еί а1. (1993) Σ. ^типоЕ МеШ. 160:81-88; υδ 6602677). Се11ТйегО1о® анализ проводили в 96-луночных планшетах, что позволяло провести автоматизированный высокопроизводительный скрининг (I ΓΙ'δ) (Сгее еί а1. (1995) АпЁСапсег Эгидз 6:398-404).

Методика гомогенного анализа включает добавление одного реагента (Се11Тйег-О1о® КеадепР) непосредственно в клетки, культивируемые на сывороточной среде. Не требуется стадий промывки клеток, удаления среды и многочисленных отмеров пипеткой. Данная система способна детектировать всего 15 клеток/лунку в 96-луночном формате через 10 минут после добавления реагента и перемешивания.

Гомогенный формат "добавь-смешай-измерь" приводит к лизису клеток и генерированию люминисцентного сигнала, пропорционального количеству присутствующей АТФ. Количество АТФ прямо пропорционально числу клеток, присутствующих в культуре. Анализ Се11Тйег-О1о® генерирует "светящийся" люминисцентный сигнал, продуцируемый реакцией люциферазы, которая имеет время полужизни более пяти часов, в зависимости от использующегося типа клеток и среды. Число жизнеспособных клеток выражается в относительных люминисцентных единицах (КЬи). Субстрат, люциферин жуков, окислительно декарбоксилируется рекомбинантной люциферазой светлячка с одновременным превращением АТФ в АМФ и генерацией фотонов. Длительный период полужизни устраняет необходимость использования инжекторов реагента и дает возможность обрабатывать большое количество планшетов непрерывным или прерывным образом. Данный тест пролиферации клеток можно использовать с различными многолуночными форматами, например в 96-луночном или 384-луночном формате. Данные можно регистрировать люминометром или системой формирования изображения с ПЗС-камерой. Мощность люминисценции выражена в относительных световых единицах (КЬи), измеренных с течением времени.

Пример 50. Анализ комбинаций.

Можно проанализировать показатель аддитивности (СЦ комбинаций некоторых соединений из Примеров и различных химиотерапевтических средств в ΐη νίΐΐΌ тестах пролиферации клеток. Показатель аддитивности вычисляют по методу СЬои и Та1а1ау (программа Сакт+уп, ВюзоП). Силу синергии оценивают по шкале оценок СЬои и Та1а1ау: О ниже 0.8 означает синергию, О между 0.8 и 1.2 означает аддитивность, и О выше 1.2 означает антагонизм.

Вычисляют также значения ЕС₅₀ для репрезентативных комбинаций. Сравнивают измеренные индивидуально значения ЕС₅₀ для химиотерапевтического средства и примеров соединений со значением ЕС50 для комбинации. Клеточные линии относятся к опухолевому типу. Анализы комбинаций проводят как описано в работе "Р1т 1 ктазе т1иЫ1о1' ЕТР-45299 зирргеззез се11и1аг ргоПктаНоп ап1 зупстт/ез χνίΐΐι РВК тЬЪШоп". В1апсо-Арапсю, еί а1. Сапсег Ьей. 2011, 300(2), 145-153.

Пример 51. Анализ активности РПК.

Активность киназы замеряли с использованием продажной тест-системы А1)Р Нип1ег^ш Р1из, доступной от ^^зсоνеКx (#33-016), которая представляет собой гомогенный анализ для измерения накопления АДФ, универсального продукта киназной активности. Фермент, РПК (р110а/р85а) приобретали у Сагпа Вюзаепсез (#07СВδ- 0402А). Анализ проводили в соответствии с рекомендациями производителя с небольшими изменениями, в основном касающимися того, что киназный буфер заменяли на 50 мМ НЕРЕδ, рН 7.5, 3 мМ МдС1₂, 100 мМ ИаС1, 1 мМ ЕОТА, 0.04% СНΑРδ, 2 мМ ТСЕР и 0.01 мг/мл ВОО. РЕ3К анализировали в ходе титрационного эксперимента с определением оптимальной концентрации

- 43 029771

белка для анализа ингибирования. Чтобы вычислить значения КУ, для тестируемых соединений, серийные 1:5 разбавления соединений добавляли к ферменту в фиксированной концентрации (2.5 мкг/мл). Фермент преинкубировали с ингибитором и 30 мкМ РР2 субстратом (Р9763, Б1дта) в течение 5 мин и затем добавляли АТФ до финальной концентрации 50 мкМ. Реакционную смесь выдерживали 1 ч при 25°С. Последовательно добавляли в лунки реагенты А и В, и планшеты инкубировали 30 мин при 37°С. Показатели флуоресценции замеряли на приборе Ую1ог (Регкт Е1тег) с рекомендованными настройками (544 и 580 нм в качестве длины волны возбуждения и испускания, соответственно). Значения нормализовывали относительно активности контрольного образца, включенного для каждого фермента (т.е. 100%ная активность РЮ киназы, без добавления соединения). Полученные значения откладывали на графике относительно концентрации ингибитора и строили сигмоидную кривую зависимости ответа от дозировки с применением модельного сигмоидального инструмента Роиг-Рагате1ег Ьод1з1с для программы Ас11У11у Базе.

Пример 52. Тест активности тТОК.

Ферментную активность тТОК замеряли с использованием теста активности киназы Ьап1БаБсгееи™ (ЧпуПгодеп). Фермент приобретали у ШуЦгодеп (РV4754), так же как и ОРР-меченый субстрат (4ЕВР1-СРР; РV4759) и ТЬ-апИр4ЕВР1(рТБг46) антитело (РV4757). Анализ проводили в 50 мМ НЕРЕБ буфере, рН 7.5, содержащем 1.5 мМ МпС1₂, 10 мМ МдС1₂, 1 мМ ЕОТА, 2.5 мМ ОТТ и 0.01% Тиееп-20. Концентрации компонентов в тесте были следующими: 0.24 нМ тТОК киназы, 400 нМ 4ЕВР1-ОРР, 10 мМ АТФ и серийные разбавления исследуемого соединения (ингибитора). После 1 ч инкубирования при комнатной температуре, использовали 20 мМ ЭДТА для остановки реакции, и добавляли тербий-меченое антитело (4 нМ) для детектирования фосфорилированного продукта. Антитело дает ассоциат с фосфорилированным продуктом, что приводит к увеличению значения ТК-РКЕТ. Значение ТК-РКЕТ (безразмерная величина) вычисляли как соотношение сигнала акцептора (ОРР, испускание при 520 нм) к сигналу донора (тербий, испускание при 495 нм). Полученные значения откладывали на графике относительно концентрации ингибитора и строили сигмоидную кривую зависимости ответа от дозировки с применением модельного сигмоидального инструмента Роиг-Рагате1ег Ьод1з1с для программы АсИуНу Базе.

Пример 53. Анализ активности ПЫАРК.

Активность данной киназы замеряли с использованием теста активности киназы АЭР Нип1ег™ Р1из, коммерчески доступного от О1зсоуеК\ (#90-0083), который представляет собой гомогенный анализ для измерения накопления АДФ, универсального продукта киназной активности. Фермент, ДНК-РК приобретали у Рготеда (#У5811). Анализ проводили в соответствии с рекомендациями производителя с небольшими изменениями. Главным образом, киназный буфер заменяли на 15 мМ НЕРЕБ, рН 7.5, 10 мМ МдС1₂, 20 мМ ЫаС1, 1 мМ ЕОТА, 0.1 мг/мл ВОО, 0.02% Т\уееп 20. ДНК-РК анализировали в ходе титрационного эксперимента с определением оптимальной концентрации белка для анализа ингибирования. Чтобы вычислить значения КУ, для тестируемых соединений, серийные 1:3 разбавления соединений добавляли к ферменту в фиксированной концентрации (2 Ед/мкл). Фермент преинкубировали с ингибитором и 200 мкМ ДНК субстратом, и затем добавляли АТФ до финальной концентрации 75 мкМ. Реакционную смесь выдерживали 1 ч при 37°С. Последовательно добавляли в лунки реагенты А и В, и планшеты инкубировали 30 мин при комнатной температуре. Показатели флуоресценции замеряли на приборе ЕпУ151оп (Регкт Е1тег) с рекомендованными настройками (550 и 590 нм в качестве длины волны возбуждения и испускания, соответственно). Значения нормализовывали относительно активности контрольного образца, включенного для каждого фермента (т.е., 100%-ная активность ДНК РК киназы, без добавления соединения). Полученные значения откладывали на графике относительно концентрации ингибитора и строили сигмоидную кривую зависимости ответа от дозировки с применением модельного сигмоидального инструмента Роиг-Рагате1ег Ьод1з1с для программы АсйуНу Базе.

Пример 54. Ингибирование фосфорилирования АКТ (метод ЕЫБА).

Ингибирование фосфорилирования АКТ (метод ЕЫБА) можно использовать как показатель активности РЕК и тТОК в клетках. Активность измеряют как эндогенные концентрации фосфо-АкИ (Бег473) белка. Клетки остеосаркомы И2ОБ высеивали в 96-луночные микропланшеты с поли-Э-лизиновым покрытием (18000 клеток/лунка). После обработки серийными разбавлениями исследуемых соединений в течение 3 часов, клетки фиксировали непосредственно в лунках 4%-ным параформальдегидом.

После фиксирования, отдельные ячейки проходили через ту же серию стадий, которая применятся в обычном иммуноблоте: включая блокирование 5%-ным ВБА, инкубирование с 1/1000 первичного антитела-АКТ (Бег 74) в РВБ, содержащем 5% ВБА при 4°С, в течение ночи (Се11 Б1дпаШп§), промывание и инкубирование со вторым антителом НКР-антимышиный !§О 1 час при комнатной температуре (АтегзБат). После добавления БирегБ1дпа1 ЕЫБА Рет1о максимально чувствительного хемилюминисцентного субстрата (Р1егсе), результаты считывали с помощью люминисцентного планшет-ридера (У1с1ог). Вычисляли значения ЕС'У, для протестированных соединений.

Биологическая активность некоторых соединений в биохимическом тесте с РВКа, тТОК и ПЫАРК показана в табл. 3.

- 44 029771

Таблица 3

Пример	ΡΙ3Κα 1С5о (мкМ)	шТОК 1С5о (мкМ)	ΌΝΑΡΚ 1С5о (мкМ)
1	1.7	0.146	17.3
2	13.3	2.72	25.00
3	4.9	1.86	25.00
4	2.4	0.274	10.00
5	14.9	0.194	25.00
6	4.5	0.558	4.52
7	6.6	1.62	10.00
8	2.8	0.588	1.96
9	2.0	3.27	25.00
10	11.5	10.00	10.00
11	1.9	0.604	1.51
12	50.0	10.00	10.00
13	21.0	10.00	10.00
14	7.9	2.19	10.00
15	1.1	0.851	2.86
16	0.67	0.852	2.82
17	6.0	2.62	10.00
18	8.5	10.00	10.00
19	5.0	1.76	10.00
20	10.3	1.82	25.00
21	0.4	5.58	4.15
22	50.0	10.00	25.00
23	50.0	10.00	6.37
24	19.3	1.67	10.00
25	23.4	0.582	10.00
26	2.7	10.00	10.00
27	2.5	0.55	25.00
28	4.7	0.785	25.00
29	3.8	0.435	25.00
30	2.5	4.68	25.00
31	6.5	0.586	1.88
32	50.0	3.09	10.00
33	>10	1.93	25.00
34	23.3	0.808	25.00
35	6.95	2.35	10.00
36	12.5	10.00	25.00
37	16.9	4.4	25.00
38	2.39	0.275	7.21
39	2.17	1.24	3.18
40	1.67	0.279	10.00

- 45 029771

41	6.9	0.381	10.00
42	6.55	0.412	10.00
43	10.6	>10	5.04
44	1.18	0.044	3.06
45	2.27	0.053	0.886
46	0.48	0.038	2.82
61	3.22	0.228	10.00
62	16.2	6.6	10.00
63	6.61	0.252	4.3
64	2.65	0.505	0.196
65	6.25	0.921	6.65
66	7.17	0.854	2.41
67	3.16	0.151	10.00
68	7.38	2.08	10.00
69	1.98	0.336	4.93
70	0.87	0.226	0.741
71	1.08	0.0993	10.00
72	0.82	0.0453	1.6
73	50.0	10.00	10.00
74	2.24	0.152	0.989
75	2.52	0.093	1.83
76	50.0	10.00	10.00
77	5.36	>10	10.00
78	4.49	0.047
79	28.6	10.00	10.00
80	13.1	0.501	10.00
81	50.0	5.55	10.00
82	5.6	1.59	10.00
83	12.2	2.47	3.11
86	50.0	3.41	10.00
87	50.0	10.00	0.21
92	2.75	1.24	6.15
93	7.44	0.117	10.00
94	50.0	4.48	10.00
95	50.0	10.00	10.00
96	50.00	6.08	10.00
97	50.0	6.8	6.8
101	12.6	0.227	10.00
102	50.0	1.82	0.10
103	3.16	0.058	10.00
105	28.9	1.99	10.00
106	50.0	10.00	1.16
108	15.4	0.579	1.75
109	5.69	0.224	10.00
110	50.0	10.00	10.00
112	19.5	0.235	10.00
114	50.00	10.00	10.00

Пример 55. Оценка способности соединений генерировать одноцепочечные ДНК.

Главной функцией АТК в клетках является подавление Εδ (Ьоре7-Соп1тега5, А. I. & Регпапде/СарейНо, О. Г)\А Кера1г (Ашз!.) 9, 1249-1255 (2010)). На молекулярном уровне, Ηδ определяют как накопление больших фрагментов одноцепочечной ДНК. В клетках 55ДНК быстро покрывается репликативным белком А (КРА). Поэтому концентрацию хроматин-связанного КРА можно использовать как суррогатный маркер 55ДНК (То1едо, Ь. I. е! а1. \а1. δί^исί.Μо1. В!о1. 18, 721-727 (2011); Ьоре7-Соп1гега8, А. I. е! а1. 1оигпа1 о£ Ехрепшеп!;а1 МеЛсте (2012). дот 10.1084/)еш.20112147).

Влияние соединений из Примеров 1, 2, 3 и 11 на концентрацию хроматин-связанного КРА показано на фиг. 2(А) и 2(В).

Детали описаны ниже:

(А) На фиг. 2(А) показано влияние Примера 1 и Примера 2 (1 мкМ) на концентрацию хроматинсвязанного КРА. Соединения использовали по отдельности или в комбинации с Ни, ингибитором рибонуклеотид редуктазы, который расщепляет дНТФ пул и представляет собой известный индуктор репликативного стресса. Хроматин-связанный КРА количественно оценивали методом высокопроизводительной микроскопии, как описано выше. В соответствии с ингибированием АТК, указанные три соединения

- 46 029771

могут повышать концентрацию хроматин-связанного КРА, и это действие значительно усиливается в присутствии НИ.

(В) На фиг. 2(В) показано влияние Примера 3 и Пример 11 (1 мкМ) на увеличение концентрации хроматин-связанного КРА. Это действие количественно оценивали методом высокопроизводительной микроскопии, как описано выше. В соответствии с ингибированием АТК, указанные два соединения могут повышать концентрацию хроматин-связанного КРА.

Пример 56. Оценка активности в предотвращении коллапса остановившихся репликативных вилок.

Одной из наиболее известных функций АТК является предотвращение двухнитевых разрывов (Ό8Β) ДНК в остановившихся репликативных вилках (Ьоре7-Соп1гега8, А. I. & Регпап0е7-СареЫ1о, О. ЭКА Кераи (Ашз!) 9, 1249-1255 (2010)). Для тестирования этой активности, проводили два анализа (А, В). Оба теста показывают, что соединения из Примера 1, Примера 2, Примера 3 и Примера 11 способны активно промотировать разрыв НИ-остановленных репликативных вилок, что находится в соответствии с их АТК-ингибирующей способностью.

a) В первом анализе, человеческие клетки ϋ2Ο8 подвергали (или не подвергали) воздействию 2 мМ НИ для развития остановки репликативных вилок. Затем клетки помещали в среду, содержащую 1 мкМ соединений из Примера 1 и Примера 2 на 16 ч и анализировали содержание ДНК методом поточной цитометрии, измеряя интенсивность флуоресценции пропидия иодида. Контрольные клетки обрабатывали таким же объемом дмсо.

Результаты показаны на фиг. 3(А) для соединений из Примеров 1 и 2. Генерирование ДНКразрывов в репликативных вилках активировало следующую контрольную точку клеточного цикла - 02, приводя к остановке клеточного цикла и накоплению клеток, находящихся в фазе 02. В соответствии с этим, соединения из Примера 1 и Примера 2 приводили к накоплению клеток, находящихся в фазе 02, и этот эффект значительно усиливался при предварительном воздействии НИ.

Результаты показаны на фиг. 3(В) для соединений из Примеров 3 и 11. Интенсивное генерирование ДНК-разрывов в реплицирующихся клетках препятствовало прохождению клеток через фазу 8, приводя к накоплению клеток, находящихся на данной фазе клеточного цикла. В соответствии с этим, оба соединения приводили к накоплению клеток, находящихся в фазе 8.

b) Генерирование разрывов двухцепочечной ДНК, являющееся следствием коллапса репликативных вилок, также оценивали количественно по формированию ядерных очагов ДНК-репарирующего белка 53ВР1. Такую оценку ингибирования АТК проводили способами, описанными в литературе (То1еОо е! а1. Иа1. 81гис1. Мо1. Вю1. 2011). На фиг. 4(А) показано число очагов 53ВР1, присутствующих в клетках, обработанных ингибиторами АТК (для Примеров 1 и 2) с добавлением или без добавления НИ, как в а. Как можно видеть на фиг. 4(А), присутствие 1 мкМ соединения из Примера 1 или Примера 2 приводило к интенсивному образованию очагов 53ВР1 в клетках, обработанных НИ (2 мМ).

На фиг. 4(В) показано число очагов 53ВР1, присутствующих в клетках, обработанных ингибиторами АТК (для Примеров 3 и 11). Как видно по изображениям для клеток, обработанных как в а, присутствие 1 мкМ соединения из Примера 3 или Примера 11 приводило к интенсивному образованию очагов 53ВР1. В соответствии с их АТК-ингибирующей способностью, оба анализа показывают, что соединения 3 и 11 могут активно способствовать остановке и разрыву репликативных вилок.

Пример 57. Анализ связывания с ЬЕКО.

Г ен ЬЕКО кодирует белок ионных каналов сердца. Они участвуют в координировании сердцебиения благодаря своей способности проводить электрический ток. Взаимодействие с ЬЕКО каналами может вызывать удлинение интервала ОТ. Такое удлинение может приводить к желудочковой аритмии. Поэтому соединения по настоящему изобретению были протестированы описанным далее методом.

Тестовый набор РгеШсЬог ЬЕКО приобретали в (СагНЬад, СА). Анализ связывания проводили в соответствии с инструкциями к набору. Измерение флуоресцентной поляризации осуществляли с использованием планшет-ридера ЕпУНюп от Регкт-Е1тег ЬщНитепК Значения поляризации вычисляли автоматически с использованием программы АсЮЬу Ьа8е. Описание теста опубликовано в работе Р1рег, е! а1. А88ау & Эгид ^еν. ТесЬ. 6, 213 (2008). Значения Ю₅₀ (в микромолях) для некоторых соединений приведены в табл. 4.

Таблица 4

Соединение	ЬЕКО 1С5о (мМ)
Пр. 3	6
Пр. 11	4

Пример 58. Анализ ингибирования СУР.

Цитохромы Р450 (СУР450) представляют собой надсемейство ферментов, катализирующих окислительный метаболизм широкого набора гидрофобных химических веществ, включая большинство применяющихся в терапии лекарственных средств. В анализе Р450-01о с использованием люциферазы (Рготеда, Υ9770, Υ9790, Υ9880, Υ9890, Υ9770) применяют люминогенные СУР450 маркерные субстра- 47 029771

ты (Люциферин-1РА, Люциферин-МЕ, Люциферин-Н, Люциферин-ВЕ, Люциферин-МЕ ЕОЕ, Люциферин-Н ЕОЕ и Люциферин-РРХЕ), являющиеся производными люциферина жуков, субстрата для ферментов люцифераз. Указанные производные не являются субстратами для люциферазы, но превращаются при воздействии Р450 в люциферин, который в свою очередь реагирует с люциферазой, вырабатывая количество света, прямо пропорциональное активности Р450. В настоящем анализе замеряется дозозависимое ингибирование СУР испытуемыми соединениями, в сравнении с рекомбинантными ферментами СУР, экспрессированными в клетках насекомых. СУР реакцию проводят путем инкубирования люминогенного СУР субстрата с ферментом СУР и системой регенерации НАДФН, после чего добавляют проявляющий реагент восстановленного люциферина. Этот реагент одновременно останавливает СУР реакцию и инициирует люминисцентный сигнал в виде свечения, с периодом полужизни более 4 ч. Люциферазная реакция свечения дает устойчивый сигнал, который снимает потребность детектирования люминисценции в жестких временных рамках.

Тестировали пять СУР изоформ (0.5 пкмоль), а именно 1А2, 2С9, 2С19, 2Ό6 и 3А4 (каждую изоформу тестировали в отдельном аналитическом планшете). Каждый аналитический планшет содержал несколько соединений в 2 концентрациях (10 мкМ и 1 мкМ), в двух повторах для каждой концентрации, или небольшое число соединений на планшет для анализа зависимости ответа от дозировки, в двух повторах (50, 16.5, 5.4, 1.8, 0.6, 0.2, 0.066, 0.022, 0.007 мкМ). Кроме того, каждый аналитический планшет содержал 8 разных концентраций изоформ-специфичного ингибитора (фурафиллин, сульфафеназол, Ы-3бензилнирванол, хинидин и кетоконазол как ингибиторы для СУР 1А2, 2С9, 2С19, 2Ό6 и 3А4, соответственно), в двух повторах для каждой концентрации. Испытуемые соединения и референсные ингибиторы тестировали в финальных ДМСО концентрациях 0.5%. Аналитический планшет включал также 8 повторов контроля-носителя, содержащего 0.5% ДМСО/Н₂О. Мембраны, содержащие СУз, испытуемое соединение и субстрат пре-инкубировали 10 минут при 37°С в отсутствие НАДФН, затем добавляли НАДФН и инкубировали 60 мин при 37°С, останавливали реакцию добавлением люциферин-детектирующего реагента. После 20 мин инкубирования при 37°С, аналитический планшет считывали на ридере ЕпМзюп 2104. Полученные значения нормализовали относительно активности контрольного образца, включенного для каждого СУР. Полученные значения откладывали на графике относительно концентрации ингибитора и строили сигмоидную кривую зависимости ответа от дозировки с применением модельного сигмоидального инструмента Роиг-Рагаше1ег ЕощЛс для программы Аси\Лу базе.

Изменение СУР3А4 ингибирования со временем

Микросомы печени человека (0.1 мг/мл) и испытуемое соединение (0.01, 0.1, 0.4, 1, 4, 10, 50 мкМ, финальная концентрация ДМСО 0.2%) или ДМСО либо пре-инкубировали 30 минут в отсутствии или в присутствии НАДФН, либо пре-инкубирование составляло 0 минут. Затем добавляли в инкубированные образцы мидазолам (2.5 мкМ). Через 5 минут добавляли метанол с внутренними стандартами. Образцы анализировали методом БС/М3/М3 для мониторинга формирования 1 '-гидроксимидазолама. Определяли значения 1С₅₀. Значения 1С₅₀ (в микромолях) для пяти СУР изоформ показаны для некоторых соединений в табл. 5.

Таблица 5

Соединение	Р450-1А2	Р450-2С19	Р450-2С9	Ρ450-2Ό6	Р450-ЗА4
Пр.З	>50	>50	>50	>50	>50
Пр. 11	>50	>50	34	>50	39

Пример 59. Фармакокинетика.

Для определения направления преобразований полученных соединений ΐη νίνο, проводили фармакокинетические исследования на самках мышей ВАЕВ-с 10-недельного возраста. Соединения растворяли в выбранных носителях в концентрациях, вычисленных для введения выбранной дозировки в 0.1 мл. Соединения вводили животным внутривенно и перорально (принудительное питание) и выводили из эксперимента через различные промежутки времени (п=3 в каждую точку времени). Точки времени составляли 0.08, 0.25, 0.5, 1, 4 и 8 ч для внутривенного введения, и 0.08, 0.16, 0.25, 0.5, 1, 4, 8 и 24 ч для внутривенного введения. Отбирали образцы крови и отделяли плазму, которую анализировали и количественно оценивали методом тандемной масс-спектрометрии/жидкостной хроматографии. Фармакокинетические параметры определяли, выстраивая по экспериментальным данным камерную модель с использованием программы Αΐπηοπίΐπ для фармакокинетического анализа. Оцениваемыми параметрами были следующие: площадь под кривой (АИС); время полужизни продукта в плазме (ΐ¹/₂); плазменный клиренс (С1); объем распределения (У4); МКТ (среднее время удержания); биодоступность (Р%); максимальная концентрация в плазме крови после перорального введения (С_макс); время наступления С_макс (Т_макс).

На фиг. 5 показаны фармакокинетические параметры и профиль для мышей Ва1бс после внутривенного (1 мг/кг) и перорального (10 мг/кг) введения Примера 11 в виде препарата в смеси 10% Ы-Метил-2пирролидона, 50% полиэтиленгликоля 300 и 40% физиологического раствора. В каждую временную точку выводили из эксперимента 3 мыши.

На фиг. 6 показаны фармакокинетические параметры и профиль для мышей Ва1бс после внутривен- 48 029771

ного и перорального введения Примера 3 в виде препарата в смеси 10% ^Метил-2-пирролидона, 50% полиэтиленгликоля 300 и 40% физиологического раствора. В каждую временную точку выводили из эксперимента 3 мыши.

Пример 60. Оценка эффективности т νίνο.

Эффективность соединений по настоящему изобретению по отдельности или в комбинации с химиотерапевтическими средствами замеряли т νίνο путем имплантирования аллотрансплантантов или ксенотрансплантантов раковых клеток грызунам и введения животным с опухолями исследуемых соединений по отдельности или в комбинации с химиотерапевтическими соединениями. Были получены различающиеся результаты, зависящие, среди прочего, от линии клеток, наличия или отсутствия репликативного стресса или определенных мутаций к опухолевых клетках, последовательности введения соединения и химиотерапевтического средства, а также от режима дозирования.

На фиг. 7 показан объем опухоли через 33 дня у группы С57ВБ/6 мышей возраста 8-10 недель, которым внутривенно вводили клетки Εμтус лимфомы. У мышей-реципиентов мониторили формирование опухоли в присутствии опухолевых клеток в крови (ББН измерение), и дважды в неделю пальпацией предлопаточных и шейных лимфоузлов, один раз в неделю ультразвуковым исследованием размера грудных лимфоузлов. Мышей группировали (8 мышей на группу) и вводили перорально носитель (10% ^Метил-2-пирролидон, 90% полиэтиленгликоль 300) и 25 и 50 мг/кг Примера 11, разведенного в таком же носителе, один раз в день, в течение 2 дней на первой неделе и 5 дней на второй и третьей неделе. Эффективность лечения оценивали по относительному весу всех опухолевых тканей (селезенка, слюнные лимфоузлы, маммарные лимфоузлы, вилочковые и кишечные лимфоузлы) относительно веса тела, за минусом относительного веса аналогичных нормальных тканей. Столбцы показывают относительную ошибку измерения (п=8).

Введение средств проводили в День 12 после введения опухолевых клеток, когда все мыши продемонстрировали рост значений ББН в крови в сравнении с мышами, которым введение не проводилось. По сравнению с контрольными образцами, которым вводили только носитель, дозировки Примера 11 вызывали замедление роста опухоли, и замедление увеличивалось при увеличении дозировок. При самой низкой дозировке 25 мг/кг наблюдалось ингибирование роста опухоли (ТО^ на 53% в день 33, по сравнению с носителем, а при самой высокой дозировке 50 мг/кг наблюдалось ТО! равное 74%.

На фиг. 8 показан объем опухолей через 22 дня у групп мышей С57ВБ/6 возрастом 8-10 недель, которым внутривенно вводили клетки Εμтус лимфомы и перорально вводили один раз в день (2 дня в неделю в первую неделю, 5 дней в неделю во вторую неделю и 2 дня в неделю в третью неделю) в течение 13 дней, начиная со дня 0: носитель (10% ^Метил-2-пирролидон, 90% полиэтиленгликоль 300) и 25 мг/кг Примера 3 в том же носителе (7 мышей в группе).

Введение средств проводили в День 10 после введения опухолевых клеток, когда все мыши продемонстрировали рост значений ББН в крови в сравнении с мышами, которым введение не проводилось. По сравнению с контрольными образцами, которым вводили только носитель, дозировки Примера 3 вызывали замедление роста опухоли. При дозировке 25 мг/кг наблюдалось ТОI на 46% в день 23, по сравнению с носителем.

Пример 61 синтезировали по той же схеме синтеза, которая использовалась для Примера 4, применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

БС-М31: 1_к= 5.26 мин, М§: 455.2 [М+Н]+. Υ ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.20 (с, 1Н), 7.98 (д, I = 7.4 Гц, 1Н), 7.52 - 7.39 (м, 2Н), 7.34 (с, 1Н), 7.16 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), 4.59 (д, I = 13.0 Гц, 1Н), 4.39 (дд, I = 10.9, 3.2 Гц, 1Н), 4.13 - 4.00 (м, 1Н), 3.99 - 3.81 (м, 2Н), 3.74 (т, I = 9.4 Гц, 1Н), 3.56 (т, I = 10.6 Гц, 1Н), 3.19 3.12 (м,2Н), 2.72 -2.67 (м, 1Н), 1.92 (д, I = 3.7 Гц, 6Н), 1.01 - 0.77 (м, 4Н).

Пример 62 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для Примера 31, но используя интермедиат ХЫ с ^метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амином.

- 49 029771

БС-М81: 1_К= 2.92 мин, М8: 473.3 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.19-8.14 (кв, I = 4.7 Гц, 1Н), 8.01 (д, I = 7.7 Гц, 1Н), 7.25 (д, I = 7.6 Гц, 1Н), 7.07 (тд, I = 7.6, 1.0 Гц, 1Н), 6.97 (тд, I = 7.8, 1.1 Гц, 1н), 4.33 - 4.20 (м, 2Н), 4.08 - 3.90 (м, 3Н), 3.86-3.75 (м, 2Н), 3.60 (ддд, I = 12.5, 9.1, 3.4 Гц, 1Н), 3.47 (дд, I =

11.5, 7.9 Гц, 1Н), 3.01 (с, 3Н), 3.01 (д, I = 4.8 Гц, 3Н), 2.21 - 2.09 (м, 1Н), 2.05 - 1.96 (м, 1Н), 1.85 (с, 3Н), 1.84 (с, 3Н).

Интермедиат XI .I

Интермедиат XI.! синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для интермедиата 2ШП, алкилированием хирального интермедиата 2-П иодметаном в присутствии трет-бутоксида.

В смесь интермедиата XX (70 мг, 0.2 ммоль) в ацетонитриле (1.0 мл) добавляли (1Н-бензоимидазол2-ил)-изопропиламин (65 мг, 0.4 ммоль) и С8₂СО₃ (200 мг, 0.6 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 120°С в пробирке для проведения реакций под давлением в течение 6 дней. Смесь охлаждали до комнатной температуры и удаляли растворитель в вакууме. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (Ьо^е 8ΐ II 5 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 50% до 100% ЕЮАс). Целевой продукт получали в виде белого твердого вещества, и растирали его в диэтиловом эфире. Нерастворимый твердый осадок отфильтровывали и сушили в вакууме (33 мг, 33%).

БС-М81: 1_К= 3.34 мин, М8: 487.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.91 (д, I = 7.9 Гц, 2Н), 7.17 (д, I = 7.7 Гц, 1Н), 6.99 (т, I = 7.5 Гц, 1Н), 6.90 (дд, I = 11.1, 4.2 Гц, 1Н), 4.40-4.23 (м, 2Н), 4.17 - 3.71 (м, 5Н), 3.50 (т, I = 11.7 Гц, 1Н), 3.18 (дд, 1= 19.4, 8.6 Гц, 2Н), 2.94 (с, 3Н), 1.78 (с, 3Н), 1.76 (с, 3Н), 1.20 (д, I = 6.4 Гц, 6Н).

Интермедиат XX

Интермедиат XX синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для интермедиата X, но применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

В смесь интермедиата XX (80 мг, 0.2 ммоль) в ацетонитриле (1.0 мл) добавляли интермедиат X^Π (75 мг. 0.4) и Ск₂СО₃ (225 мг, 0.7 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 120°С в пробирке для проведения реакций под давлением 3 дня. Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой и ЕЮАс. Слои разделяли, и органическую фазу промывали дважды насыщенным раствором №11СО₃, один раз насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над №₂8О₄ и упаривали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (ЬоЫе 8ΐ II 5 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 25 до 100% ЕЮАс), и очищали ещё раз методом полупрепаративной ВЭЖХ. Целевой продукт получали в виде белого твердого вещества.

БС-М81: 1К= 3.19 мин, М8: 473.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.09 (т, I = 4.1 Гц, 1Н), 7.93 (д, I = 7.9 Гц, 1Н), 7.17 (д, I = 7.7 Гц, 1Н), 7.00 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), 6.90 (т, I = 7.6 Гц, 1Н), 4.43 - 4.25 (м, 2Н), 4.00 (дд, I = 11.7, 3.6 Гц, 1Н), 3.95 - 3.70 (м, 3Н), 3.58 - 3.32 (м, 3Н), 3.22 - 3.08 (м, 2Н), 2.96 (с, 3Н),

- 50 029771

2.02-1.84 (м, 1Н), 1.77 (с, 3Н), 1.75 (с, 3Н), 1.17 (т, 1 = 7.1 Гц, 3Н).

Интермедиат ХИ1

Смесь 2-хлорбензимидазола (150 мг, 0.9 ммоль) и 70%-ного водного раствора этиламина (0.4 мл) в ΑСN (0.5 мл) нагревали в микроволновой печи 45 мин при 160°С (Вкладе, АЬк. Ьеуе1 νΗ). Удаляли растворители в вакууме. Полученный сырой продукт суспендировали в смеси растворителей 1:1 СНС1₃ЛРгОН. Объединенные органические экстракты сушили над Nа₂δΟ₄ и упаривали в вакууме, получая прозрачное масло (75 мг; 65%).

В смесь интермедиата XX (75 мг, 0.2 ммоль) и ацетонитрила (2.0 мл) добавляли интермедиат ХЫП (76 мг, 0.4) и Ск₂СО₃ (210 мг, 0.6 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 115°С в пробирке для проведения реакций под давлением 3 дня. Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой и ЕЮАс. Слои разделяли и органическую фазу промывали дважды насыщенным раствором ^НСО^ один раз насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над ΝρδΟι и упаривали. Остаток очищали методом флэш-хроматографии (1ко1и!е δΐ II 5г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 25 до 100% ЕЮАс), и очищали ещё раз методом полупрепаративной ВЭЖХ. Целевой продукт получали в виде белого твердого вещества.

ЬС-М81: Ц= 3.32 мин, М8: 487.2 [М+Н]+. Д ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.12 (т, 1 = 5.7 Гц, 1Н), 7.93 (д, 1 = 7.7 Гц, 1Н), 7.17 (д, 1 = 7.6 Гц, 1Н), 6.99 (т, 1 = 7.5 Гц, 1Н), 6.89 (т, 1 = 7.6 Гц, 1Н), 4.42 - 4.21 (м, 2Н), 3.99 (д, 1 = 11.5 Гц, 1Н), 3.96 -3.69 (м, 3Н), 3.50 (т, 1 = 10.6 Гц, 1Н), 3.38 - 3.31 (м, 2Н), 3.20 - 3.13 (м, 2Н), 2.95 (с, 3Н), 1.77 (с, 3Н), 1.75 (с, 3Н), 1.59 (дд, 1 = 14.5, 7.3 Гц, 2Н), 0.87 (т, 1 = 7.4 Гц, 3Н).

Интермедиат X^Ш

Смесь 2-хлорбензимидазола (100 мг, 0.6 ммоль) и пропиламина (0.3 мл, 3.2 ммоль) в ацетонитриле (0.4 мл) нагревали в микроволновой печи 50 мин при 160°С (Вкладе, АЬк. Ьеуе1 νΗ). Удаляли растворители в вакууме, полученный сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии (1ко1и1ек δΐ 5 г), элюируя смесью растворителей МеОН/ДХМ (от 0 до 5% МеОН). Целевой финальный продукт получали в виде бесцветного масла (90 мг; 78%).

Пример 66 синтезировали по методике, аналогичной описанной для Примера 8, из интермедиата X^IV в ацетонитриле в качестве растворителя.

ЬС-М81: Ц= 3.00 мин, М8: 457.2 [М+Н]+. Ή ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.14 (кв, 1 = 4.3 Гц, 1Н), 7.99 (д, 1 = 7.8 Гц, 1Н), 7.19 (д, 1 = 7.6Гц, 1Н), 7.01 (т, 1 = 7.5Гц, 1н), 6.91 (т, 1 = 7.5Гц, 1Н), 4.37 (дд, 1 = 11.0,3.3 Гц, 1Н), 4.26 (д, 1 = 13.0 Гц, 1Н), 4.00 (д, 1 = 11.6 Гц, 1Н), 3.94 - 3.82 (м, 2Н), 3.82 - 3.69 (м, 1Н), 3.50 (т, 1 = 11.9 Гц, 1Н), 3.18 (дд, 1 = 22.2, 11.6 Гц, 2Н), 2.99 (с, 3Н), 2.97 (д, 1 = 4.8 Гц, 3Н), 1.63 (с, 2Н), 1.36 (с, 2Н).

- 51 029771

Интермедиат X^IV

Интермедиат X^IV синтезировали по методике, аналогичной описанной для Интермедиата XXV, применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

Смесь интермедиата X^VII (100 мг, 0.30 ммоль), пинаколового эфира индол4-бороновой кислоты (81 мг, 0.33 ммоль), Р0С1₂(Р0РРй₃)₂ (20 мг, 0.03) и 0.б мл На₂СО₃ (2М водный раствор) в диоксане (2.0 мл) нагревали при 100°С 5 ч. Смесь темного цвета фильтровали через слой целита, промывая дихлорметаном. Фильтрат упаривали в вакууме, и остаток очищали клоночной флэш-хроматографией Б1о!а§е, элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 25 до 75% ЕЮАс). Целевой продукт ещё раз очищали методом преп-ВЭЖХ. Целевое конечное соединение б7 получали в виде белого твердого вещества.

БС-М81: 1_К= 5.05 мин, М8: „1.1 [М+Н]+. Ίί ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.М (с, 1Н), 7.93 (д, I = 74 Гц, 1Н), 7.„ (д, I = 8.0 Гц, 1Н), 7.33 (д, I = 2.3 Гц, 1Н), 7.2, (с, 1Н), 7.09 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), ,49 (д, I = 12.9 Гц, 1Н), ,.29 (дд, I = 10.9, 3.1 Гц, 1Н), 3.98 (д, I = 11.5 Гц, 1Н), 3.87 - 3.80 (м, 2Н), 3.б7 (т, I = 9.5 Гц, 1Н), 3.50 (т, I = 10.б Гц, 1Н), 3.23 - 3.00 (м, 2Н), 2.99 - 2.80 (м, ,Н), 2.79 (с, 3Н), 2.09 -2.07 (м, 1Н), 1.85 1.80 (м, 1Н).

Смесь интермедиата (30 мг, 0.1 ммоль), 1,3-дибромпропана (22 мкл, 0.21 ммоль), ТВАВ (б мг) и 10М водного раствора НОН (0.1 мл) в толуоле (1 мл) нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением при 110°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли смесью этилацетат/вода. Слои разделяли, и водную фазу экстрагировали два раза этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над На₂8О, и упаривали в вакууме. Желтый остаток представлял собой интермедиат X^VII.

Интермедиат X^VI

Интермедиат XIVI синтезировали по методике, аналогичной описанной для Интермедиата IX, применяя в качестве прекурсора 3(К)-гидроксиметилморфолин.

Смесь интермедиата X^VIII (110 мг, 0.2, ммоль), пинаколового эфира индол4-бороновой кислоты (70 мг, 0.28 ммоль), Р0С1₂(Р0РРй₃)₂ (17 мг, 0.02) и 0.5 мл На₂СО₃ (2М водный раствор) в диоксане (2.0 мл) нагревали при 100°С , ч. Смесь темного цвета фильтровали через слой целита, промывая дихлорметаном. Фильтрат упаривали в вакууме, и остаток очищали методом флэш-хроматографии (Ьо^е 8ΐ II 5 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 15 до 100% ЕЮАс). Пример б8 получали в виде

- 52 029771

белого твердого вещества.

ЬС-М81: 1_К= 5.14 мин, Μ8: 542.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.23 (с, 1Н), 7.96 (д, 1 = 7.5 Гц, 1Н), 7.49 (д, 1 = 7.9 Гц, 1Н), 7.43 (с, 1Н), 7.24 (с, 1Н), 7.16 (т, 1 = 7.8 Гц, 1Н), 4.62 (д, 1 = 12.3 Гц, 1Н), 4.39 (дд, 1 = 10.9, 3.2 Гц, 1Н), 4.09 - 3.07 (м, 7Н), 3.78 (т, 1 = 10.8 Гц, 1Н), 3.57 (т, 1 = 12.8 Гц, 1Н), 3.32 3.08 (м, 5Н), 2.89 (с, 3Н), 2.80 (дд, 1 = 15.3, 11.7 Гц, 1Н), 2.06 - 1.84 (м, 2Н), 1.16 (т, 1 = 7.0 Гц, 3Н).

Смесь интермедиата ХРУ! (200 мг, 0.6 ммоль), эфира бис-(2-хлор-этил)-карбаминовой кислоты (335 мкл, 1.5 ммоль), ТВАВ (40 мг) и 10М водного раствора \аОН (0.6 мл) в толуоле (2 мл) нагревали в пробирке для проведения реакций под давлением при 110°С в течение 18 ч. Смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли водой и ЕЮАс. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали два раза этилацетатом. Объединенные органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над \а₂8О₄ и упаривали в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии ЦзоЫгё 8ι II 10 г), элюируя смесью растворителей ЕЮАс/циклогексан (от 25 до 75% ЕЮАс). Целевое финальное соединение ХЬУШ получали в виде кремового твердого вещества (100 мг, 33%).

Смесь 68 (60 мг, 0.11 ммоль) и ЫОН (60 мг, 1.4 ммоль) в смеси растворителей МеОН/2-пропанол (1:1, 2 мл) нагревали в микроволновой печи 150 мин при 160°С (Вю1а§е АЪз. Ьеуе1 ν^. Удаляли растворители в вакууме. Полученный сырой продукт очищали методом флэш-хроматографии ЦзоЫе 8ι II 5 г), элюируя смесью растворителей: сначала МеОН/ДХМ (от 0% до 5% МеОН) и затем \Н₃ в смеси МеОН/ДХМ (5% 7н. раствора \Н₃ в МеОН). Целевой финальный продукт 69 получали в виде белого твердого вещества (15 мг, 28%).

ЬС-М81: 1_К= 2.54 мин; 2.71 мин, М8: 470.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.15 (с, 1Н), 7.88 (д, 1 = 7.5 Гц, 1Н), 7.41 (д, 1 = 7.9 Гц, 1Н), 7.35 (с, 1Н), 7.19 (с, 1Н), 7.09 (т, 1 = 7.7 Гц, 1Н), 4.55 (д, 1 = 12.7 Гц, 1Н), 4.31 (дд, 1 = 10.5, 2.9 Гц, 1Н), 4.00 (д, 1 = 8.6 Гц, 1Н), 3.93 - 3.64 (м, 3Н), 3.51 (т, 1 = 11.3 Гц, 1Н), 3.19-3.06 (м, 4Н), 2.91 (д, 1 = 12.4 Гц, 2Н), 2.74 (с, 3Н), 2.40 - 2,33 (м, 2Н), 1.94 - 182 (м, 2Н).

Соединение 70 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 11, реакцией хирального интермедиата XX с 2 аминобензимидазолом (растворитель ацетонитрил, 130°С, 3 дня).

БС-М81: 1_К= 2.983 мин, М8 445.20 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.97 (д, 1 = 7.7 Гц, 1Н), 7.39 (ушир.с, 2Н), 7.18 (д, 1 = 7.5 Гц, 1Н), 7.05 (тд, 1 = 7.5, 1.0 Гц, 1Н), 6.99 - 6.92 (м, 1Н), 4.40 (дт, 1 = 15.1, 7.7 Гц, 2Н), 4.05 (дд, 1= 11.5, 3.2 Гц, 1Н), 3.99- 3.79 (м, 3Н), 3.56 (тд, 1= 11.6, 2.3 Гц, 1Н), 3.21 (м, 2Н), 3.01 (с, 3Н), 1.83 (с, 3Н), 1.81 (с, 3Н).

- 53 029771

Соединение 71 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 1, по реакции сочетания хирального интермедиата XX с пинаколовым эфиром 6-фтор индол-4-бороновой кислоты.

ЬС^1: 1_К= 5.14 мин; Μδ: 447.2 [М+Н]+. ¹Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-Й6): δ 11.29 (ушир.с, 1Н), 7.74 (дд, I = 11.4, 2.2 Гц, 1Н), 7.43 (ушир.т, I = 2.5 Гц, 1Н), 7.31 (ушир.с, 1Н), 7.26 (дд, I = 9.3, 2.2 Гц, 1Н), 4.57 (ушир.д, I = 12.6 Гц, 1Н), 4.40 (дд, I = 10.8, 3.3 Гц, 1Н), 4.05 (ушир.д, I = 11.2 Гц, 1Н), 3.96-3.86 (м, 2Н), 3.80-3.73 (м, 1Н), 3.55 (ушир.т, I = 11.2 Гц, 1Н), 3.25-3.09 (м, 2Н), 2.95 (с, 3Н), 1.89 (с, 3Н), 1.87 (с, 3Н) м.д.

Соединение 72 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 1, по реакции сочетания хирального интермедиата XX с пинаколовым эфиром 6-метокси индол-4бороновой кислоты.

ЬС^1: 1к= 4.89 мин; Μδ: 459.3 [М+Н]+. ¹Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-Й6): δ 11.00 (ушир.с, 1Н), 7.60 (д, I = 2.3 Гц, 1Н), 7.27 (ушир.т, I = 2.5 Гц, 1Н), 7.19 (ушир.с, 1Н), 7.00 (д, I = 2.3 Гц, 1Н), 4.56 (ушир.д, I = 12.6 Гц, 1Н), 4.39 (дд, 1= 10.8, 3.3 Гц, 1Н), 4.06 (ушир.д, I = 11.5 Гц, 1Н), 3.96-3.85 (м, 2Н), 3.81 (с, 3Н), 3.81-3.70 (м, 1Н), 3.56 (ушир.т, I = 11.6 Гц, 1Н), 3.25-3.08 (м, 2Н), 2.95 (с, 3Н), 1.88 (с,3Н), 1.86 (с, 3Н) м.д.

Соединение 73 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 11, реакцией хирального интермедиата XX с 2-морфолин-4-ил-1Н-бензимидазолом (растворитель ацетонитрил, 130°С, 3 дня).

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.65 (д, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.38 (д, I = 7.5 Гц, 1Н), 7.12 (тд, I = 7.6, 1.1 Гц, 1Н), 7.06 - 6.97 (м, 1Н), 4.43 (дд, I = 15.6, 8.1 Гц, 2Н), 4.06 - 3.77 (м, 4Н), 3.65 (с, 4Н), 3.56 - 3.44 (м, 1Н), 3.27 - 3.07 (м, 6Н), 2.99 (с, 3Н), 1.83 (с, 3Н), 1.81 (с, 3Н).

ЬС^1:1_К= 3.167 мин, Μδ: 515.30 [М+Н]+.

Соединение 74 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 6, по реакции сочетания хирального интермедиата X^IV с пинаколовым эфиром 6-фтор индол-4бороновой кислоты.

^СΜδ 1= Г 4.825 мин, Μδ: 445.2 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.05 (с, 1Н), 7.53 (дд, 1=

11.5, 2.4 Гц, 1Н), 7.25-7.16 (м, 1Н), 7.13 (с, 1Н), 7.04 (дд, I = 9.1, 2.1 Гц, 1Н), 4.29 (д, 1= 11.8 Гц, 1Н), 4.21 (дд, 1= 11.0, 3.4 Гц, 1Н), 3.89 - 3.79 (м, 1Н), 3.72 (дд, I = 13.4, 6.2 Гц, 2Н), 3.52 (т, I = 9.7 Гц, 1Н), 3.34 (дд, 1= 11.9, 9.2 Гц, 1Н), 3.07-2.88 (м, 2Н), 2.85 (с, 3Н), 1.55 - 1.43 (м, 2Н), 1.20- 1.19 (м, 2Н).

Соединение 75 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера

- 54 029771

6, по реакции сочетания хирального интермедиата X^IV с пинаколовым эфиром 6-метокси индол-4бороновой кислоты.

ЬСМ3 1= 1_К= 4.311 мин, М3: 457.1 [М+Н]+. ²Н ЯМР (300МГц, ДМСО) δ 11.19 (с, 1Н), 7.81 (д, 1 = 2.3Гц, 1Н), 7.51 - 7.35 (м, 2Н), 7.20 (д, 1 = 2.1 Гц, 1Н), 4.70 (д, 1 = 11.8 Гц, 1Н), 4.62 (дд, 1 = 11.0, 3.4 Гц, 1Н), 4.25 (д, 1 = 8.5 Гц, 1Н), 4.18 - 4.06 (м, 2Н), 4.00 (с, 3Н), 3.97 - 3.86 (м, 1Н), 3.75 (т, 1 = 10.7 Гц, 1Н), 3.47 - 3.29 (м, 2Н), 3.28 (с, 3Н), 1.89 (д, 1 = 3.5 Гц, 2Н), 1.61 (д, 1 = 3.8 Гц, 2Н).

Соединение 76 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 67, по реакции сочетания хирального интермедиата с пинаколовым эфиром 7-фтор индол-4бороновой кислоты.

БС-М31, Ю= 6.09 мин, М3: 459.1 [М+Н]+. ²Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 10.96 (с, 1Н), 8.07 (дд, 1 = 8.4, 5.4 Гц, 1Н), 7.53 (м, 1Н), 6.90 (дд, 1 = 10.1, 8.4 Гц, 1Н), 6.58 (дд, 1 = 2.9, 2.3 Гц, 1Н), 4.60 (дд, 1 = 13.1, 1.4 Гц, 1Н), 4.36 (дд, 1 = 11.0, 3.4 Гц, 1Н), 4.03 (дд, I = 11.5, 3.2 Гц, 1Н), 3.92 (м, 2Н), 3.75 (дт, I = 9.5, 3.3 Гц, 1Н), 3.55 (м, 1Н), 3.20 (т, I = 10.8 Гц, 1Н), 3.11 (тд, I = 12.8, 3.8 Гц, 1Н), 2.94 (м, 4Н), 2.89 (с, 3Н), 2.18 (м, 1Н), 1.87 (м, 1Н).

Соединение 77 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 67, по реакции сочетания хирального интермедиата с пинаколовым эфиром 6-фтор индол-4бороновой кислоты.

ЬС-М31, 1_Е= 5.24 мин, М3: 459.1 [М+Н]+. ²Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.28 (с, 1Н), 7.77 (дд, I =

11.5, 2.4 Гц, 1Н), 7.41 (м, 1Н), 7.31 (т, I = 2.1 Гц, 1Н), 7.26 (дд, I = 9.2, 2.3 Гц, 1Н), 4.55 (дд, I = 13.2, 1.5 Гц, 1Н), 4.36 (дд, I = 10.9, 3.3 Гц, 1Н), 4.05 (дд, I = 11.5, 3.2 Гц, 1Н), 3.92 (м, 2Н), 3.75 (м, 1Н), 3.56 (тд, I = 12.1, 2.2 Гц, 1Н), 3.15 (м, 2Н), 2.95 (м, 4Н), 2.86 (с, 3Н), 2.14 (м, 1Н), 1.88 (м, 1Н).

Соединение 78 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 67, по реакции сочетания хирального интермедиата с пинаколовым эфиром 6-метокси индол-4бороновой кислоты.

ЬС-М31, 1_К= 4.95 мин, М3: 471.1 [М+Н]+. ²Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.00 (с, 1Н), 7.63 (д, I = 2.4 Гц, 1Н), 7.20 (м, 1Н), 7.17 (м, 1Н), 7.00 (д, I = 2.0 Гц, 1Н), 4.53 (д, I = 11.5 Гц, 1Н), 4.35 (дд, I = 10.9, 3.3 Гц, 1Н), 4.05 (дд, I = 11.6, 3.2 Гц, 1Н), 3.91 (м, 2Н), 3.80 (с, 3Н), 3.73 (м, 1Н), 3.56 (тд, I = 11.7, 2.4 Гц, 1Н),

3.15 (м, 2Н), 2.95 (м, 4Н), 2.85 (с, 3Н), 2.14 (м, 1Н), 1.88 (м, 1Н).

Соединение 79 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 11, реакцией хирального интермедиата XX с К,К-диметил-1Н-бензимидазол-2-амином (растворитель ацетонитрил, 130°С, 3 дня).

- 55 029771

ЬС-ΜδΕ !к= 2.820 мин, Μδ: 473.30 [М+Н]+. ¹Η ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.51 (д, I = 7.9 Гц, 1Η), 7.30 (д, I = 7.7 Гц, 1Η), 7.07 (т, I = 7.6 Гц, 1Η), 6.94 (т, I = 7.6 Гц, 1Η), 4.39 (дд, I = 25.1, 11.5 Гц, 2Н), 4.03 3.87 (м, 3Η), 3.82 (т, I = 9.1Гц, 1Η), 3.51 (т, 1= 11.4 Гц, 1Η), 3.26 - 3.17 (м, 1Η), 3.11 (дд, I = 12.7, 2.8 Гц, 1Η), 3.00 (с, 3Η), 2.87 (с, 6Н), 1.81 (с, 3Η), 1.79 (с, 3Η).

Соединения 80 и 81 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 11, реакцией хирального интермедиата XX с 5-хлор-N-[-метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амином.

Пример 80.

ЕС-ΜδΕ ΐ_κ= 3.602 мин, Μδ: 493.10 [М+Н]+. ¹Η ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.25 (с, 1Η), 8.04 (д, I = 2.0 Гц, 1Η), 7.25 (д, I = 8.3 Гц, 1Η), 7.12 (д, I = 8.3 Гц, 1Η), 4.43 (дд, I = 10.7, 3.1 Гц, 1Η), 4.31 (д, I = 13.0 Гц, 1Η), 4.07 (дд, 1= 11.5, 3.4 Гц, 1Η), 4.00-3.81 (м, 3Η), 3.65 - 3.54 (м, 1Η), 3.30 - 3.20 (м, 2Н), 3.04 (с, 6Н), 1.84 (с, 3Η), 1.82 (с, 3Η).

Пример 81.

Π3-Μδ1: !к= 3.651 мин, Μδ 493.10 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.37 (д, I = 4.8 Гц, 1Η), 7.96 (д, I = 8.5 Гц, 1Η), 7.26 (д, I = 2.0 Гц, 1Η), 6.98 (дд, I = 8.5, 2.0 Гц, 1Η), 4.42 (дд, I = 10.6, 2.9 Гц, 1Η), 4.33 (д, I = 12.3 Гц, 1Η), 4.08 - 3.78 (м, 4Н), 3.56 (дд, I = 11.7, 9.6 Гц, 1Η), 3.27 - 3.16 (м, 2Н), 3.03 (ушир.с, 6Н), 1.82 (с, 3Η), 1.80 (с, 3Η).

Соединения 82 и 83 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 11, реакцией хирального интермедиата XX с 5-фтор-N-метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амином.

Пример 82.

¹Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-46): δ= 7.98 (кв, I = 5.0 Гц, 1Η), 7.68 (дд, I = 9.9, 2.5 Гц, 1Η), 7.12 (дд, I =

8.7, 5.1 Гц, 1Η), 6.86-6.79 (м, 1Η), 4.33 (дд, I = 10.8, 4.2 Гц, 1Η), 4.23 (ушир.д, 1= 12.9 Гц, 1Η), 3.98 (дд, I =

11.7, 3.3 Гц, 1Η), 3.89-3.69 (м, 3Η), 3.52-3.44 (м, 1Η), 3.20-3.07 (м, 2Н), 2.94 (с, 3Η), 2.91 (д, I = 5.0 Гц, 3Η), 1.74 (с, 3Η), 1.72 (с, 3Η) м.д. ЬС-Μδ 1: ΐκ= 3.18 мин; Μδ: 477.1 [М+Н]+.

Пример 83.

¹Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-46): δ= 8.29 (кв, I = 4.8 Гц, 1Η), 7.97 (дд, I = 8.7, 5.1 Гц, 1Η), 7.04 (дд, I = 9.6, 2.4 Гц, 1Η), 6.78 (тд, I = 8.7, 2.4 Гц, 1Η), 4.44-4.34 (м, 2Н), 4.09-3.78 (м, 4Н), 3.61-3.49 (м, 1Η), 3.313.16 (м, 2Н), 3.03 (с, 3Η), 3.02 (д, I = 4.8 Гц, 3Η), 1.82 (с, 3Η), 1.81 (с, 3Η) м.д. ЬС-Μδ 1: ΐκ= 3.27 мин; Μδ:

477.1 [М+Н]+.

Соединения 84 и 85 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 11, реакцией хирального интермедиата XX с 5-метил-N-метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амином.

- 56 029771

Соединения 86 и 87 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 66, реакцией хирального интермедиата КПУ с 5-хлор-№метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амином.

Пример 86.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 7.98 (д, I = 4.9 Гц, 1Н), 7.86 (д, I = 1.9 Гц, 1Н), 7.03 (д, I = 8.4 Гц, 1Н), 6.90 (дд, I = 8.4, 2.0 Гц, 1Н), 4.23 (д, I = 7.8 Гц, 1Н), 4.05 (д, I = 12.6 Гц, 1Н), 3.86 (д, I = 8.1 Гц, 1Н), 3.82 3.70 (м, 2Н), 3.71 - 3.53 (м, 1Н), 3.38 (дд, I = 14.7, 7.9 Гц, 1Н), 3.05 (дд, I = 19.6, 13.6 Гц, 2Н), 2.90-2.79 (м, 6Н), 1.48 (с, 2Н), 1.21 (с, 2Н). ЬСМЗ 1 = 1_К= 3.53 мин, МЗ: 491.1 [М+Н]+.

Пример 87.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.34 (д, I = 4.8 Гц, 1Н), 8.03 (д, I = 8.5 Гц, 1Н), 7.27 (д, I = 2.0 Гц, 1Н), 6.99 (дд, 1= 8.5, 2.1 Гц, 1Н), 4.44 (дд, 1= 10.9, 3.3 Гц, 1Н), 4.31 (д, 1= 12.5 Гц, 1Н), 4.05 (д, 1= 8.0 Гц, 1Н), 4.01 - 3.89 (м, 2Н), 3.89 - 3.73 (м, 1Н), 3.57 (т, 1= 11.8 Гц, 1Н), 3.29 - 3.13 (м, 2Н), 3.10 - 3.00 (м, 6Н), 1.69 (с, 2Н), 1.42 (с, 2Н). ЬСМЗ 1: 1_к= 3.59 мин, МЗ: 491.1 [М+Н]+.

Соединения 88 и 89 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 66, реакцией хирального интермедиата КПУ с 5-фтор-№метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амином.

Соединения 90 и 91 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 66, реакцией хирального интермедиата КПУ с 5-метил-№метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амином.

Соединение 92 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примеров 90, 91, реакцией хирального интермедиата X^VII с №метил-1Н-1,3-бензодиазол-2-амином.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.12 (д, I = 4.9 Гц, 1Н), 8.05 (д, I = 7.4 Гц, 1Н), 7.25 (д, I = 6.9 Гц, 1Н), 7.07 (м, 1Н), 6.98 (дд, I = 11.5, 3.8 Гц, 1Н), 4.36 (м, 2Н), 4.06 (м, 1Н), 3.93 (дд, I = 10.9, 8.4 Гц, 2Н), 3.83 (м, 1Н), 3.58 (т, I = 10.5 Гц, 1Н), 3.22 (т, I = 10.8 Гц, 2Н), 3.01 (д, I = 4.8 Гц, 3Н), 2.91 (с, 3Н), 2.85 (м, 4Н),

2.16 (дд, I = 19.0, 10.1 Гц, 1Н), 1.90 (м, 1Н). ЬСМЗ1: 1_к= 3.19мин; МЗ= 471.0 [М+Н]+.

Соединение 93 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 67, по реакции сочетания хирального интермедиата с пинаколовым эфиром 2-метил индол-4бороновой кислоты.

БС-МЗ1, К1= 5.13 мин, МЗ: 455.1 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.02 (с, 1Н), 7.95 (дд, I = 7.6, 0.8 Гц, 1Н), 7.33 (д, I = 7.9 Гц, 1Н), 7.05 (т, I = 7.7 Гц, 1Н), 7.00 (с, 1Н), 4.55 (дд, I = 13.0, 1.3 Гц, 1Н), 4.34 (дд, I = 11.0, 3.3 Гц, 1Н), 4.05 (дд, I = 11.4, 3.0 Гц, 1Н), 3.90 (м, 2Н), 3.73 (т, I = 9.6 Гц, 1Н), 3.56 (дд, I = 12.0, 9.1 Гц, 1Н), 3.21 (т, I = 10.8 Гц, 1Н), 3.12 (м, 1Н), 2.97 (м, 4Н), 2.85 (с, 3Н), 2.41 (с, 3Н), 2.13 (м, 1Н), 1.88 (м, 1Н).

- 57 029771

Соединения 94 и 95 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примеров 90, 91, реакцией хирального интермедиата X^VII с 5-хлор-Ы-метил-1Н-1,3-бензодиазол-2амином.

Пример 94.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.24 (кв, Ί = 4.7 Гц, 1Н), 8.02 (д, Ί = 8.5 Гц, 1Н), 7.27 (д, Ί = 2.1 Гц, 1Н), 6.99 (дд, .1 = 8.5, 2.1 Гц, 1Н), 4.37 (дд, 1= 11.0, 3.5 Гц, 1Н), 4.32 (д, ,1 11.8 Гц, 1Н), 4.05 (д, .1 = 8.2 Гц, 1Н), 3.93 (м, 2Н), 3.81 (м, 1Н), 3.57 (т, ,1 = 10.5 Гц, 1Н), 3.22 (т, ,1 = 10.9 Гц, 2Н), 3.02 (д, ,1 = 4.8 Гц, 3Н), 2.91 (с, 3Н), 2.84 (м, 4Н), 2.16 (дд, Ί = 19.2, 10.0 Гц, 1Н), 1.89 (с, 1Н). ^СΜδ1: 1_К=3.88 мин; Μδ = 505.1 [М+Н]+.

Пример 95.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.11 (д, I = 4.9 Гц, 1Н), 8.07 (д, I = 2.1 Гц, 1Н), 7.24 (д, I = 8.4 Гц, 1Н), 7.10 (дд, I = 8.4, 2.1 Гц, 1Н), 4.38 (дд, I = 11.0, 3.3 Гц, 1Н), 4.26 (д, I = 11.6 Гц, 1Н), 4.07 (дд, I = 11.6, 3.4 Гц, 1Н), 3.94 (дд, I = 11.0, 8.2 Гц, 2Н), 3.83 (м, 1Н), 3.59 (тд, I = 12.0, 2.6 Гц, 1Н), 3.25 (м, 2Н), 3.02 (д, I = 4.8 Гц, 3Н), 2.91 (с, 3Н), 2.85 (м, 4Н), 2.17 (м, 1Н), 1.90 (м, 1Н). ^СΜδ1: ΐ_κ= 3.81мин; Μδ= 505.0 [М+Н]+.

Соединения 96 и 97 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примеров 90, 91, реакцией хирального интермедиата X^VII с 5-фтор-Ы-метил-1Н-1,3-бензодиазол-2амином.

Пример 96.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.03 (кв, I = 4.4 Гц, 1Н), 7.82 (дд, ,1 = 10.1, 2.6 Гц, 1Н), 7.22 (дд, I = 8.6,

5.1 Гц, 1Н), 6.92 (м, 1Н), 4.38 (дд, Ί = 10.9, 3.3 Гц, 1Н), 4.28 (д, .1 = 12.8 Гц, 1Н), 4.08 (дд, .1 = 11.6, 3.4 Гц, 1Н), 3.94 (м, 2Н), 3.81 (м, 1Н), 3.58 (м, 1Н), 3.24 (м, 2Н), 3.00 (д, Ί = 4.8 Гц, 3Н), 2.91 (с, 3Н), 2.84 (м, 4Н),

2.17 (дд, .1 = 19.7, 9.2 Гц, 1Н), 1.90 (м, 1Н). ЬС-М81, К1 = 3.36 мин, Μδ= 489.1 [М+Н]+.

Пример 97.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.24 (кв, I = 4.7 Гц, 1Н), 8.02 (дд, I = 8.8, 5.2 Гц, 1Н), 7.05 (дд, .1 = 9.8, 2.6 Гц, 1Н), 6.78 (м, 1Н), 4.36 (м, 2Н), 4.06 (дд, Ί = 11.7, 3.3 Гц, 1Н), 3.93 (т, .1 = 10.0 Гц, 2Н), 3.81 (м, 1Н), 3.58 (м, 1Н), 3.22 (т, .1 = 10.8 Гц, 2Н), 3.02 (д, Ί = 4.8 Гц, 3Н), 2.91 (с, 3Н), 2.85 (м, 4Н), 2.17 (м, 1Н), 1.89 (м, 1Н). ЬС-М81, К1 = 3.46 мин, Μδ = 489.1 [М+Н]+.

Соединения 98 и 99 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примеров 90, 91, реакцией хирального интермедиата X^VII с 5-метил-Ы-метил-1Н-1,3-бензодиазол-2амином.

Соединение 100 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 1, по реакции сочетания хирального интермедиата XX с пинаколовым эфиром 6-циано индол-4бороновой кислоты.

- 58 029771

Пример 101

Соединение 101 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 1, по реакции сочетания хирального интермедиата XX с пинаколовым эфиром б-трифторметил индол,-бороновой кислоты.

*Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-дб): δ 11.б8 (ушир.с, 1Н), 8.18 (ушир.с, 1Н), 7.81 (ушир.с, 1Н), 7.б9 (ушир.т, I = 2.7, 1Н), 7.,3 (ушир.с, 1Н), ,.55 (ушир.д, I = 11.7 Гц, 1Н), ,41 (дд, I = 11.1, 3.б Гц, 1Н), ,.07 (дд, I = 11.,, 3 Гц, 1Н), 3.97-3.88 (м, 2Н), 3.81-3.73 (м, 1Н), 3.б1-3.52 (м, 1Н), 3.25-3.11 (м, 2Н), 2.95 (с, 3Н), 1.89 (с, 3Н), 1.88 (с, 3Н) м.д. БС-М8 1: 1_К= 5.б5 мин; М8 = ,97.2 [М+Н]+.

Пример 102

Соединение 102 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 1, по реакции сочетания хирального интермедиата XX с пинаколовым эфиром 7-фтор индол-,бороновой кислоты.

*Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-дб): δ = 11.,5 (ушир.с, 1Н), 8.0б (дд, I = 8.,, 5., Гц, 1Н), 7.52 (ушир.т, I = 2.7 Гц, 1Н), б.91 (дд, I = 10.2, 8., Гц, 1Н), б.б0 (ушир.т, I = 2.7 Гц, 1Н), ,.б3 (ушир.д, I = 11.7 Гц, 1Н), ,43 (дд, I = 10.8, 3.3 Гц, 1Н), ,.0б-3.89 (м, 3Н), 3.82-3.73 (м, 1Н), 3.б0-3.52 (м, 1Н), 3.21 (т, I = 10.8, 1Н), 3.1б3.02 (м, 1Н), 3.05 (с, 3Н), 1.88 (с, 3Н), 1.87 (с, 3Н) м.д. БС-М8 1: 1_К= 5.98 мин; М8 = „7.1 [М+Н]+.

Соединение 103 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 1, по реакции сочетания хирального интермедиата XX с пинаколовым эфиром 2-метил индол-,бороновой кислоты.

*Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-аб): δ 11.00 (ушир.с, 1Н), 7.87 (д, I = 7.б Гц, 1Н), 7.30 (д, I = 7.б Гц, 1Н), 7.02 (т, I = 7.б Гц, 1Н), б.9б (ушир.с, 1Н), ,.5б (ушир.д, I = 12.0 Гц, 1Н), ,.3б (дд, I = 10.8, 3.5 Гц, 1Н), ,.03 (ушир.д, I = 11.б Гц, 1Н), 3.93-3.82 (м, 2Н), 3.7б-3.б8 (м, 1Н), 3.53 (ушир.т, I = 11.б Гц, 1Н), 3.22-3.05 (м, 2Н), 2.92 (с, 3Н), 2.39 (с, 3Н), 1.8б (с, 3Н), 1.8, (с, 3Н) м.д. БС-М81:1_К= 5.12 мин; М8: „3.0 [М+Н]+.

Соединение 10, синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 3, реакцией сочетания хирального интермедиата XII с пинаколовым эфиром б-циано индол-,бороновой кислоты.

- 59 029771

Соединение 105 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 3, реакцией сочетания хирального интермедиата XII с пинаколовым эфиром 6-трифторметил индол-4бороновой кислоты.

'Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.69 (с, 1Н), 8.15 (с, 1Н), 7.81 (с, 1Н), 7.69 (т, I = 2.7 Гц, 1Н), 7.34 (с, 1Н), 4.58 (д, I = 12.0 Гц, 1Н), 4.39 (м, 1Н), 4.08 (д, I = 11.4 Гц, 1Н), 3.93 (м, 4Н), 3.79 (м, 1Н), 3.58 (т, I = 10.6 Гц, 1Н), 3.27-3.13 (м, 6Н), 2.88 (с, 3Н), 2.10 (м, 2Н). ЬСМ81: ίκ= 5.39мин; М3 = 539.2 [М+Н]+.

Соединение 106 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 3, реакцией сочетания хирального интермедиата XII с пинаколовым эфиром 7-фтор индол-4бороновой кислоты.

'Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.04 (с, 1Н), 8.00 (дд, I = 8.3, 5.3 Гц, 1Н), 7.52 (д, I = 2.6 Гц, 1Н), 6.91 (дд, I = 10.1, 8.4 Гц, 1Н), 6.59 (м, 1Н), 4.66 (д, I = 13.2 Гц, 1Н), 4.39 (дд, I = 10.9, 3.3 Гц, 1Н), 4.04 (д, I = 11.5 Гц, 1Н), 3.93 (м, 4Н), 3.79 (м, 1н), 3.58 (т, I = 10.5 Гц, 1Н), 3.24 (м, 4Н), 3.07 (д, 1= 13.7 Гц, 2Н), 2.93 (с, 3Н), 2.14 (м, 2Н). ЕСМ81: ί_κ= 5.62мин; М8 = 489.1 [М+Н]+.

Соединение 107 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 6, по реакции сочетания хирального интермедиата XIЛУ с 6 пинаколовым эфиром -циано индол-4бороновой кислоты.

Соединение 108 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 6, по реакции сочетания хирального интермедиата X^IV с пинаколовым эфиром 6-трифторметил индол-4-бороновой кислоты.

'Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.68 (с, 1Н), 8.20 (д, 1= 1.4 Гц, 1Н), 7.81 (с, 1Н), 7.69 (т, 1= 2.7 Гц, 1Н), 7.47 (с, 1Н), 4.46 (дд, 1= 18.7, 7.6 Гц, 2Н), 4.08 (д, 1= 8.2 Гц, 1Н), 4.02 -3.90 (м, 2Н), 3.83 - 3.68 (м, 1Н), 3.57 (т, 1= 10.6 Гц, 1Н), 3.32 - 3.13 (м, 2Н), 3.08 (с, 3Н), 1.77 - 1.67 (м, 2Н), 1.44 - 1.43 (м, 2Н). ЬСМ8 1 = ίκ 5.38 мин; М8 = 495.1 1 [М+Н]+.

Соединение 109 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 6, по реакции сочетания хирального интермедиата X^IV с пинаколовым эфиром 2-метил индол-4бороновой кислоты.

ЬСМ8 1 = ίΚ =4.141 мин, М8: 441.1 [М+Н]+. 'Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 10.80 (с, 1Н), 7.70 (дд, I = 7.5, 0.9 Гц, 1Н), 7.11 (д, I = 7.9 Гц, 1Н), 6.90 - 6.69 (м, 2Н), 4.30 (д, I = 11.8 Гц, 1Н), 4.19 (дд, I = 11.0,3.3 Гц, 1Н), 3.83 (дд, I = 14.5, 5.1 Гц, 1Н), 3.78 - 3.65 (м, 2Н), 3.51 (т, I = 9.7 Гц, 1н), 3.34 (дд, I = 12.0, 9.2 Гц,

- 60 029771

1Н), 3.08-2.91 (м, 2Н), 2.87 (с, 3Н), 2.20 (с, 3Н), 1.54-1.46 (м, 2Н), 1.20-1.17 (м, 2Н).

Соединение 110 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 6, по реакции сочетания хирального интермедиата ХЫУ с пинаколовым эфиром 7-фтор индол-4бороновой кислоты.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.17 (с, 1Н), 8.10 (дд, 1= 8.4, 5.4 Гц, 1Н), 7.61 - 7.50 (м, 1Н), 6.92 (дд, 1= 10.1, 8.4 Гц, 1Н), 6.64 - 6.56 (м, 1Н), 4.59 (д, 1= 11.4 Гц, 1Н), 4.44 (дд, I = 11.0,3.5 Гц, 1Н), 4.11-3.87 (м, 3Н), 3.85 -3.70 (м, 1Н), 3.85 - 3.68 (м, 1Н), 3.56 (т, 1= 10.5 Гц, 1Н), 3.32 - 3.10 (м, 2Н), 3.08 (с, 3Н), 1.79 1.70 (м, 2Н), 1.51-1.42 (м, 2Н). ЬСМ5 1 = Κί = 5.77 мин, Μδ = 445.1 [М+Н]+.

Соединение 111 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 67, по реакции сочетания хирального интермедиата Х1У11 с пинаколовым эфиром 6-циано индол-4бороновой кислоты.

Соединение 112 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 67, по реакции сочетания хирального интермедиата ХЬУН с пинаколовым эфиром 6-трифторметил индол-4-бороновой кислоты.

БС-М81, Κί = 5.74 мин, Μδ = 509.1 [М+Н]+. ¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 11.67 (с, 1Н), 8.22 (д, I =

1.2 Гц, 1Н), 7.81 (д, I = 0.5 Гц, 1Н), 7.68 (м, 1Н), 7.43 (с, 1Н), 4.51 (д, I = 11.4 Гц, 1Н), 4.36 (м, 1Н), 4.05 (м, 1Н), 3.94 (м, 2Н), 3.75 (м, 1Н), 3.57 (м, 1Н), 3.21 (м, 2Н), 2.95 (м, 4Н), 2.86 (с, 3Н), 2.13 (м, 1Н), 188 (м, 1Н).

Соединения 113 и 114 синтезировали по схеме синтеза, аналогичной использованной для синтеза Примера 11, реакцией хирального интермедиата XX с 5-карбонитрил-Ы-метил-1Н-1,3-бензодиазол-2амином.

Пример 113.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.36 (д, I = 4.8 Гц, 1Н), 8.22 (с, 1Н), 7.45 (д, I = 8.3 Гц, 1Н), 7.31 (д, I =

8.2 Гц, 1Н), 4.37 (дд, I = 10.8, 3.1 Гц, 1Н), 4.26 (д, I = 11.7 Гц, 1Н), 4.07 -3.71 (м, 4Н), 3.53 (т, I = 10.7 Гц, 1Н), 3.25 - 3.12 (м, 2Н), 3.00 (д, I = 4.8 Гц, 3Н), 2.97 (с, 3Н), 1.76 (д, I = 5.2 Гц, 6Н). ^Μδ1: Κί 4.01 мин; Μδ = 483.9 [М+Н]+.

Пример 114.

¹Н ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ 8.25 (д, I = 4.8 Гц, 1Н), 8.05 (д, I = 8.3 Гц, 1Н), 7.61 (с, 1Н), 7.33 (дд, I = 8.3, 1.5 Гц, 1Н), 4.48 - 4.19 (м, 2Н), 4.11 - 3.72 (м, 4Н), 3.50 (т, I = 10.7 Гц, 1Н), 3.30-3.14 (м, 2Н), 2.97 (д, I = 2.9 Гц, 6Н), 1.75 (д, I = 5.0 Гц, 6Н). ^Μδ1: Κί 3.78 мин; Μδ: 483.9 [М+Н]+.

- 61 029771

Claims (21)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Химическое соединение, выбранное из соединения формулы (I)

   (I)

   где К₁ выбран из

   где К₆ выбран из атома галогена и Н;

   К₇, К₈ и К₉, каждый независимо, выбраны из Н; атома галогена; ίΝ; К₁₀ и ОК₁₀; где К₁₀ представляет собой (С₁-С₆)алкил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 атомами галогена;

   К₁₁ выбран из Н, К₁₀, ΝΚ₄Κ₄ и МК₄СОК₄;

   где К₄, в каждом случае независимо, выбран из Н или алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или группы К₄ объединены с атомом(ами), к которым они присоединены, с образованием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена; и

   К₁₂ выбран из Н, атома галогена, ОК₁₀ или К₁₀;

   К₂ выбран из NΚ₃δΟ₂Κ₃, алкила и циклоалкила;

   где алкил и циклоалкил замещены по меньшей мере одним заместителем, выбранным из ^КД^О^, где η равен 0 или 1, ОН и СЭД и

   где алкил и циклоалкил дополнительно необязательно замещены 1 или 2 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, СИ СООК₄, СЕ₃, (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и О(С₁С6)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или 2 заместителями у одного атома, которые объединены с атомом, к которому они присоединены, с формированием циклической структуры, выбранной из циклоалкила и гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, С₁-С₄ алкила, С(О)С₁-С₄ алкила и С(О)О-С₁-С₄ алкила;

   где К₃, в каждом случае, независимо выбран из Н, алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена и гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена; и

   т равен 1 или 2;

   алкил представляет собой линейный насыщенный углеводород, содержащий до 10 атомов углерода (С₁-С₁₀), или разветвленный насыщенный углеводород, содержащий 3-10 атомов углерода (С₃-С₁₀);

   циклоалкил представляет собой моно- или бициклический насыщенный С₃-С₁₀ углеводород, который может быть необязательно сопряжен с арильной группой; или циклоалкил представляет собой адамантил;

   гетероциклоалкил представляет собой С-связанное или Ν-связанное 3-10-членное насыщенное моно- или бициклическое кольцо, которое содержит 1, 2, 3 или 4 гетероатомов в цикле, независимо выбранных из Ν, δ и О, где атом Ν или δ в цикле может иметь в качестве заместителя атом кислорода, формируя Ν-оксидную, сульфоксидную или сульфоновую группу;

   арил представляет собой фенил, бифенил или нафтил; и

   гетероарил представляет собой 9-членное бициклическое ароматическое кольцо, которое может содержать 1 или 2 гетероатома в цикле, независимо выбранных из Ν;

   где указанный алкил, гетероциклоалкил и циклоалкил могут в каждом случае быть необязательно

   - 62 029771

   замещены 1, 2, 3, 4 или 5 заместителями, где указанные заместители независимо выбраны из атома галогена, ОН, СН СООК₄, СР₃, ΝΚ4Κ4, НЩСОЩ, (НК^ЗОгЩ, где п равен 0 или 1, алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, О-алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и где два заместителя у одного атома могут быть объединены с атомом, к которому они присоединены, с образованием циклической структуры, выбранной из циклоалкила и гетероциклоалкила, необязательно замещенных 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, С(О)С₁-С₄ алкила, С(О)О-(С₁-С₄ алкил) и С₁-С₄ алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена;

   указанный арил и гетероарил в каждом случае может быть независимо замещен 1, 2, 3, 4 или 5 заместителями, независимо выбранными из атома галогена, ОН, СН СООК₄, СР₃, ΝΚ₄Κ₄, НК₄СОК₄, (НК^ЗО^, где п равен 0 или 1, ННК₅, алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, О-алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, циклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, и гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена;

   К₄, в каждом случае независимо, выбран из Н, алкила, арила, гетероарила, циклоалкила и гетероциклоалкила, где алкил, арил, гетероарил, циклоалкил и гетероциклоалкил необязательно замещены 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из атома галогена, алкила, О-алкила, Н(С_ГС₄ алкил)₂, ^С_ГС₄ алкил)СОС₁-С₄ алкила, или группы К₄ объединены с атомом(ами) углерода, к которым они присоединены, с образованием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или, когда заместитель, представляющий собой группу К₄, присутствует в алкиле, циклоалкиле или гетероциклоалкиле, группа К₄ может быть объединена с заместителем в этом алкиле, циклоалкиле или гетероциклоалкиле с формированием гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена; и

   К₅ независимо выбран из СОалкила, СОарила или СОгетероарила; и его фармацевтически приемлемые соли и стереоизомеры.
2. 2. Химическое соединение по п.1, где

   Кб выбран из Н и атома галогена;

   К₇, К₈ и К₉ выбраны из Н, атома галогена, СН О(С₁-С₆)алкила и (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного одним или больше атомами галогена;

   К₁₁ выбран из Н, (С₁-С₆)алкила, ΝΚ₄Κ₄ и НК₄СОК₄; и

   К₁₂ выбран из Н, атома галогена, (С₁-С₆)алкила и О(С₁-С₆)алкила.
3. 3. Химическое соединение по п.1, где Кб, К₇, К₈, К₉ и К₁₂ представляют собой Н; и К₁₁ выбран из (С₁-С₆)алкила, ΝΚ₄Κ₄ и НК₄СОК₄.
4. 4. Химическое соединение по п.1, где К₆, К₈, К₉, К₁₁ и К₁₂ представляют собой Н; и К₇ выбран из атома галогена, СН, О(С₁-С₆)алкила и (С₁-С₆)алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена.
5. 5. Химическое соединение по п.1, где К₆, К₇, К₈, К₉, К₁₁ и К₁₂ представляют собой Н.
6. 6. Химическое соединение по п.1, где К₂ представляет собой (СН₂)_рС(К₁₃)₂(СН₂^, где О представляет собой (НК₄)_п§О₂К₄, ОН или СН, где р и ς независимо равны 0, 1 или 2, и где (ΐ) К₁₃, в каждом случае независимо, выбран из группы, состоящей из Н и (С₁-С₄)алкила, или (ίί) один К₁₃ выбран из группы, состоящей из Н и (С₁-С₄)алкила, или другой К₁₃ объединен с К₄, в случае его наличия, с формированием 36-членного гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 атомами галогена, или (ίίί) группы К₁₃ объединены с атомом углерода, к которому они присоединены, с образованием циклической структуры, выбранной из (С₃-С₆)циклоалкила и 3-6-членного гетероциклоалкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 группами, выбранными из атома галогена, С₁-С₄ алкила, С(О)С₁-С₄ алкила и С(О)О-С₁-С₄ алкила.
7. 7. Химическое соединение по п.6, где обе группы К₁₃ представляют собой Н, где обе группы К₁₃ представляют собой метил или где группы К₁₃ объединены с атомом углерода, к которому они присоединены, с образованием циклопропанила, циклобутила, тетрагидропиранила, пиперидинила, Νэтоксикарбонилпиперидинила или Ν-метилпиперидинила.
8. 8. Химическое соединение по п.6, где О представляет собой §О₂К₄.
9. 9. Химическое соединение по любому из предшествующих пунктов, в котором когда т равен 1, то хиральный центр в химическом соединении формулы (I) имеет (§) конфигурацию, и в котором когда т равен 2, то хиральный центр в химическом соединении формулы (I) имеет (К) конфигурацию.
10. 10. Химическое соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из:

    - 63 029771

    - 64 029771

    - 65 029771

    - 66 029771

    и его фармацевтически приемлемые соли и стереоизомеры.
11. 11. Химическое соединение, выбранное из группы, состоящей из

    и его фармацевтически приемлемые соли и стереоизомеры.
12. 12. Фармацевтическая композиция, ингибирующая АТК, содержащая химическое соединение по любому из пп.1-11 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
13. 13. Применение химического соединения по любому из пп.1-11 в медицине в противораковой терапии.
14. 14. Способ лечения заболевания или состояния, в котором затрагивается активность АТК, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества химического соединения по любому из пп.1-11.
15. 15. Применение химического соединения по любому из пп.1-11 в способе лечения заболевания или состояния, в котором затрагивается активность АТК.
16. 16. Применение химического соединения по любому из пп.1-11 для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания или состояния, в котором затрагивается активность АТК.
17. 17. Способ по п.14, где заболевание или состояние, в котором затрагивается активность АТК, представляет собой заболевание или состояние, связанное с усиленной пролиферацией, такое как рак.
18. 18. Применение по п.15 или 16, где заболевание или состояние, в котором затрагивается активность

    - 67 029771

    АТК, представляет собой заболевание или состояние, связанное с усиленной пролиферацией, такое как рак.
19. 19. Способ по п.17, где заболевание или состояние, в котором затрагивается активность АТК, представляет собой рак эндометрия, рак толстой кишки или рак желудка.
20. 20. Применение по п.18, где заболевание или состояние, в котором затрагивается активность АТК, представляет собой рак эндометрия, рак толстой кишки или рак желудка.
21. 21. Комбинированный продукт, содержащий:

    (A) химическое соединение по любому из пп.1-11; и

    (B) другое терапевтическое средство, выбранное из списка, состоящего из следующих: цис-платин, карбоплатин, циклофосфамид, азотистый иприт, мелфалан, хлорамбуцил, бусульфан,

    нитрозомочевина, 5-фторурацил, тегафур, ратитрексед, метотрексат, цитозин арабинозид, гидроксимочевина, гемцитабин, адриамицин, блеомицин, доксорубицин, дауномицин, эпирубицин, идарубицин, митомицин-С, дактиномицин, митрамицин, винкристин, винбластин, виндезин, винорелбин, паклитаксел, таксотер, этопозид, тенипозид, амсакрин, топотекан, камптотецин, тамоксифен, тореифен, ралоксифен, дролоксифен, иодоксифен, фулвестрант, бикалутамид, флутамид, нилутамид, ципротерона ацетат, госерелин, лейпрорелин, бусерилин, мегестрола ацетат, анастрозол, летрозол, воразол, эксеместан, финастерид, 4-(6-хлор-2,3-метилендиоксианилино)-7-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)этокси]-5-тетрагидропиран-4илоксихиназолин (А2Э053 0), N-(2-хлор-6-метилфенил)-2-{6-[4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1 -ил] -2метилпиримидин-4-иламино}тиазол-5-карбоксамид (дасатиниб), маримастат, трастузумаб [Герцептин™], цетуксимаб [С225], №(3-хлор-4-фторфенил)-7-метокси-6-(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (гефитиниб), N-(3 -этинилфенил)-6,7-бис(2-метоксиэтокси)хиназолин-4-амин (эрлотиниб), 6-акриламидо-№ (3-хлор-4-фторфенил)-7-(3-морфолинопропокси)хиназолин-4-амин (С 1033), лапатиниб, иматиниб, сорафениб (ВАУ 43-9006), бевацизумаб (Ауазйп™) 4-(4-бром-2-фторанилино)-6-метокси-7-(1метилпиперидин-4-илметокси)хиназолин (ΖΌ6474), 4-(4-фтор-2-метилиндол-5-илокси)-6-метокси-7-(3пирролидин-1-илпропокси)хиназолин (АΖ^2171), ваталаниб (РТК787), БИ1 1248 (сунитиниб), линомид, комбретастатин А4, 2503, 5'-азацитидин, децитабин (5-аза-2'-деоксицитидин), вориностат (субероиланилид гидроксамовой кислоты) и депсипептид (ромидепсин),

    где каждый из компонентов (А) и (В) входит в состав в смеси с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем или носителем.