EA025471B1 - Способы получения тубулизинов - Google Patents

Abstract

Тубулизины представляют собой серию природных цитотоксических агентов, которые представляют интерес в качестве лекарственных средств противораковой терапии. Описаны способы и промежуточные соединения, пригодные для получения природных и не встречающихся в природе тубулизинов и их аналогов и производных.

Description

Изобретение, описанное в настоящем описании, относится к способам получения тубулизинов. Уровень техники и сущность изобретения

Тубулизины являются представителями нового класса природных продуктов, выделяемых из видов микробактерий (Р. 8а55е, е1 а1., 1. Αηίίϋίοΐ. 2000, 53, 879-885). В качестве взаимодействующих с цитоскелетом агентов тубулизины являются митотическими ядами, которые ингибируют полимеризацию тубулина и приводят к остановке клеточного цикла и апоптозу (Н. 81етте1/. е1 а1., СЬет. Ιηΐ. Еб. 2004, 43, 4888-4892; М. КЬаЫ, е1 а1., СЬетВюСЬет. 2006, 7, 678-683; С. Каиг, е1 а1., ВюеЬет. 1. 2006, 396, 235242). Тубулизины являются чрезвычайно мощными цитотоксическими молекулами, превосходящими по ингибированию клеточного роста клинически значимые традиционные химиотерапевтические средства, например, эпотилоны, паклитаксел и винбластин. Более того, они эффективны против клеточных линий с множественной устойчивостью к лекарственным средствам (Α. ЭотЪпд, е1 а1., Мо1. ОЬ'егЩу 2005, 9, 141147). Эти соединения обладают высокой цитотоксичностью, исследованной против панели раковых клеточных линий, с величинами 1С₅₀ в низком пикомолярном диапазоне; таким образом, они представляют интерес в качестве потенциальных лекарственных средств противораковых терапий.

Тубулизины описаны в настоящем описании. Структурно тубулизины часто имеют линейный тетрапептоидный каркас, включая иллюстративные соединения формулы Т

и их фармацевтически приемлемые соли;

где Аг₁ представляет собой необязательно замещенный арил;

Κι представляет собой водород, алкил, арилалкил или группу, образующую пролекарственное вещество;

К₂ выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила;

Κ4 представляет собой необязательно замещенный алкил или необязательно замещенный циклоалкил;

К₃ представляет собой необязательно замещенный алкил;

каждый из К₅ и К₆ независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила;

К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; и η равно 1, 2, 3 или 4.

Другая иллюстративная группа тубулизинов, описанных в настоящем описании, более конкретно, содержит один или несколько не встречающихся в природе или гидрофобных аминокислотных сегментов, таких как Ν-метилпипеколиновая кислота (Мер), изолейцин (11е),

тубуфенилаланин (Тир, аналог фенилаланина), и аналоги, и производные каждого из вышеуказанных. Общим признаком в молекулярной архитектуре более сильнодействующих, встречающихся в природе тубулизинов являются чувствительный к ки- 1 025471 слоте и/или основанию Ν-ацилоксиметильный заместитель (или Ν,Ο-ацеталь формальдегида), соответствующий К2-С(О) в формуле (Т).

Другой иллюстративной группой тубулизинов, описанных в настоящем описании, являются тубулизины формулы 1.

Формула 1. Структуры нескольких природных тубулизинов

Тубулизин	Кд	к2
А	он	СН2СН (СНз) г
в	он	СН2СН2СН3
С	он	СН2С7
ϋ	н	СН2СН(СН2)2
Е	н	сн2сн2сн3
Е	н	сн2сн2
с	он	СН=С(СНз)2
н	н	СН3
I	он	СНЭ

Описан общий синтез тубулизина Б, обладающего С-концевым тубуфенилаланином (К_А=Н) (Н. Ре1Оег, е1 а1., 1. Ат. Сйет. 8ос. 2006, 128, 16018-16019). Недавно описан модифицированный протокол синтеза для тубулизина В (К_А=ОН) (О. Рапбо, е1 а!., Огд. Ьей 2009, 11, 5567-5569). Однако попытки следовать опубликованным методикам для получения более высоких количеств тубулизинов были неуспешными, будучи затрудненными, частично, низкими выходами, сложностью удаления примесей, необходимостью в дорогостоящих хроматографических стадиях и/или отсутствием воспроизводимости нескольких стадий. Интерес использования тубулизинов для лекарственных средств противораковой опухоли определяет потребность в надежных и эффективных способах получения тубулизинов и их аналогов и производных. В настоящем описании описаны усовершенствованные способы получения природных тубулизинов или их аналогов или производных, включая соединения формулы (Т) и формулы (1).

В настоящем описании в одном из иллюстративных вариантов осуществления изобретения описаны способы получения природных тубулизинов или их аналогов или производных, включая соединения формулы (Т) и формулы (1). Способы включают одну или несколько стадий, описанных в настоящем описании. В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы В, где К₅ и К₆ являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, каждый из них независимо выбран из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; и К₈ представляет собой С₁-С₆ η-алкил; где способ включает стадию обработки соединения формулы А силилирующим агентом, таким как триэтилсилилхлорид, и основанием, таким как имидазол, в апротонном растворителе.

а в

Следует понимать, что каждый из К₅ и Кб может включать общепринятые защитные группы на необязательных заместителях.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы С, где К₅ и К₆ являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, каждый из них независимо выбран из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; К₈ представляет собой С₁-С₆ η-алкил; и К₂ является таким, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, он выбран из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; где способ включает стадию обработки соединения формулы В основанием и соединением формулы С1СН₂ОС(О)К₂ в апротонном растворителе при температуре ниже температуры окружающей среды, такой как температура в диапазоне от приблизительно -78°С до приблизительно 0°С; где молярное соотношение соединения формулы С1СН₂ОС(О)К₂ и соединения формулы В составляет от приблизительно 1 до приблизительно 1,5.

- 2 025471

Следует понимать, что каждый из К₂, К₅ и К₆ может включать общепринятые защитные группы на необязательных заместителях.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы Ό, где К₅ и К₆ являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, они выбраны из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; К₈ представляет собой С^С₆ η-алкил; К₂ является таким, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, он выбран из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; и К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; где способ включает стадии:

a) получения соединения формулы (Е1), где Χ₁ является уходящей группой, из соединения формулы Е; и

b) обработку соединения формулы С в восстанавливающих условиях в присутствии соединения формулы Е1.

Следует понимать, что каждый из К₂, К₅, К₆ и К₇ может включать общепринятые защитные группы на необязательных заместителях.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы Р, где К₅ и К₆ являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, они выбраны из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; К₂ является таким, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, он выбран из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; и К.7 представляет собой необязательно замещенный алкил; где способ включает стадию обработки соединения Ό ферментом гидролазой.

Следует понимать, что каждый из К₂, К₅, К₆ и К₇ может включать общепринятые защитные группы на необязательных заместителях.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы С, где К₅ и К₆ являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, они выбраны из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; К₂ является таким, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, он выбран из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; и К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; где способ включает стадию обработки силилового эфира соединения Р неосновным фторидсодержащим реагентом.

Следует понимать, что каждый из К₂, К₅, К₆ и К₇ может включать общепринятые защитные группы на необязательных заместителях.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы Н, где К₅ и К₆ являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, они выбраны из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; К₂ и Кд являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществле- 3 025471 ния, как например, они выбраны из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; и К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; где способ включает стадию обработки соединения формулы С ацилирующим агентом формулы К₄С(О)Х₂, где Х₂ представляет собой уходящую группу.

Следует понимать, что каждый из К₂, К₄, К₅, К₆ и К₇ может включать общепринятые защитные группы на необязательных заместителях.

В другом варианте осуществления описан способ получения тубулизина формулы (Т), где Ар представляет собой необязательно замещенный арил; К! представляет собой водород, необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный арилалкил или группу, образующую пролекарственное вещество; К₅ и К₆ являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, они выбраны из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; К₃ представляет собой необязательно замещенный алкил; К₂ и К₄ являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, они выбраны из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; и К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; где способ включает стадию образования активного сложноэфирного промежуточного соединения из соединения формулы Н; и реакцию активного сложноэфирного промежуточного соединения с соединением формулы I с получением соединения формулы Т.

Следует понимать, что каждый из Аг1, Κι, К₂, К₄, К₅, К₆ и К₇ может включать общепринятые защитные группы на необязательных заместителях.

Подробное описание

В одном варианте осуществления описан способ получения соединения формулы В, где К₅ и К₆ являются такими, как описано в настоящем описании для различных вариантов осуществления, как например, они выбраны из необязательно замещенного алкила или необязательно замещенного циклоалкила; и К₈ представляет собой С₁-С₆ η-алкил; где способ включает стадию обработки соединения формулы А триэтилсилилхлоридом и имидазолом в апротонном растворителе.

А В

Для описанных ранее способов получения промежуточного соединения силилового эфира формулы 2 описано использование большого избытка триэтилсилилтрифторметилсульфоната (ΤΕδΟΤί) и лутидина (см., например, Ре1йет, с1 а1., 2006). Было обнаружено, что описанный способ делает необходимым проведение стадии хроматографической очистки продукта реакции. В противоположность описанному в рамках настоящего изобретения было неожиданно обнаружено, что можно использовать менее реакционноспособный реагент ТЕ8С1. Также в рамках настоящего изобретения было неожиданно обнаружено, что, хотя ТЕ8С1 является менее реакционноспособным реагентом, его, тем не менее, можно использовать практически в стехиометрических количествах в способах, описанных в настоящем описании. Понятно, что использование менее реакционноспособного ТЕ8С1 также может быть преимущественным, когда способ выполняют в большем масштабе, где более реакционноспособные реагенты могут представлять угрозу безопасности. Также было обнаружено, что использование ТЕ8С1 в практически стехиометрических количествах делает стадию хроматографической очистки необязательной. В альтернативном варианте осуществления способ выполняют без последующей очистки. В другой альтернативе указанных выше вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₅ представляет собой изопропил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов

- 4 025471 осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₆ представляет собой втор-бутил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₈ представляет собой метил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, силиловый эфир представляет собой ТЕ8.

В иллюстративном примере способов, описанных в настоящем описании, описан способ получения силилового эфира 2 с высоким выходом, где соединение 1 обрабатывают 1,05 эквивалента ТЕ8С1 и 1,1 эквивалента имидазола.

В одной альтернативе вышеупомянутого примера соединение 2 не очищают хроматографией.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы С, где каждый из

К₅ и Кб независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; К₈ представляет собой С₁-С_б η-алкил; и К₂ выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; где способ включает стадию обработки соединения формулы В от приблизительно 1 эквивалента до приблизительно 1,5 эквивалента основания и от приблизительно 1 эквивалента до приблизительно 1,5 эквивалента соединения формулы С1СН₂ОС(О)К₂ в апротонном растворителе при температуре от приблизительно -78°С до приблизительно 0°С.

В другом варианте осуществления описан способ согласно предшествующему варианту осуществления, где соединения формул В и С имеют стереохимию, представленную на следующей схеме для В' и С'.

В другом иллюстративном варианте осуществления описан способ по любому из предшествующих вариантов осуществления, где используют от приблизительно 1 эквивалента до приблизительно 1,3 эквивалента соединения формулы С1СН₂ОС(О)К₂. В другом иллюстративном примере описан способ по любому из предшествующих вариантов осуществления, где используют приблизительно 1,2 эквивалента соединения формулы С1СН₂ОС(О)К₂. В другом иллюстративном примере описан способ по любому из предшествующих вариантов осуществления, где К₂ представляет собой η-пропил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₂ представляет собой СН₂СН(СН₃)₂, СН₂СН₂СН₃, СН₂СН₃, СН=С(СН₃)₂ или СН₃.

В иллюстративном примере способов, описанных в настоящем описании, описан способ получения Ν,Ο-ацеталя 3. В другом иллюстративном примере соединение 2 обрабатывают 1,1 эквивалента гексаметилдисилазана калия (ΚΗΜΌ8) и 1,2 эквивалента хлорметилбутаноата в апротонном растворителе при приблизительно -45°С. В другом иллюстративном примере продукт, полученный согласно любому из предшествующих примеров, можно использовать без хроматографической очистки.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы Ό, где каждый из К₅ и К₆ независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и циклоалкила; К₈ представляет собой С₁-С_б η-алкил; К₂ выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и циклоалкила; и К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; способ, включающий стадии

a) получения соединения формулы (Е1), где Х₁ представляет собой уходящую группу, из соединения формулы Е; и

b) обработку соединения формулы С в восстанавливающих условиях соединением формулы Е1.

- 5 025471

В одном иллюстративном примере смесь соединения 3 и пентафторфенилового эфира Ό-Νметилпипеколиновой кислоты восстанавливают с использованием Н₂ и катализатора палладия на угле (Р6/С) с получением соединения 4. В рамках изобретения было открыто, что эпимеризация активного эфира пипеколиновой кислоты может происходить в ходе реакции или в ходе его получения или в ходе восстановления в ранее описанных условиях реакции. Например, в противоположность предшествующим сообщениям, указывающим на то, что эпимеризация не происходит (см., например, РеШег, 2006), при повторении этих описанных способов в большем масштабе было открыто, что образовывались значительные количества эпимеризованных соединений. Кроме того, в рамках изобретения было обнаружено, что при использовании описанных способов образовывались значительные количества продуктов перегруппировки, образующихся путем перегруппировки бутирильной группы на соединение 8. Наконец, в рамках настоящего изобретения было обнаружено, что типичные выходы желаемых продуктов при использовании ранее описанных способов составляли только половину от описанных выходов. В рамках настоящего изобретения было обнаружено, что использование диизопропилкарбодиимида (Э1С) и короткого времени реакции снижает количество как нежелательного побочного продукта вследствие реакции эпимеризации, так и побочного продукта реакции перегруппировки. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, η равно 3. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К7 представляет собой метил.

В одном иллюстративном примере было обнаружено, что ограничение времени реакции получения пентафторфенил-Э^-метилпипеколата до приблизительно 1 ч снижает образование диастереомерного трипептида 9. Также было открыто, что использование сухого 10% Р6/С в качестве катализатора, вместо более часто используемого смоченного или влажного катализатора, снижает количество эпимера 9, образующегося в процессе реакции. Также было обнаружено, что использование сухого 10%Р/С и/или более короткого времени реакции также снижает образование перегруппированного амида 8.

Ранее было описано, что удаление защитной группы из вторичной гидроксильной группы приводит к неразделимой смеси желаемого продукта 5 и побочного продукта циклического Ο,Ν-ацеталя, как показано на схеме.

- 6 025471

Далее при повторении описанного способа было обнаружено, что удаление метилового сложного эфира с использованием основных условий с последующим ацетилированием гидроксильной группы приводит к дополнительному ранее не описанному побочному продукту изо-7. Этот дополнительный побочный продукт трудно выявить и трудно отделить от желаемого соединения 7. Без связи с теорией, в рамках настоящего изобретения полагают, что изо-7 является результатом перегруппировки бутиратной группы из Ν-гидроксиметильной группы на вторичную гидроксильную группу, как показано ниже.

Было обнаружено, что изменение порядка двух стадий удаления защитной группы и использование различных условий для каждой реакции удаления защитной группы приводит к увеличенным выходам соединений формулы Н, таких как соединение 7, после введения группы К₄СО на вторичную гидроксильную группу, как дополнительно описано ниже.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы Р, где каждый из К₅ и Кб независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; К₂ выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; и К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; где способ включает стадию обработки соединения Ό ферментом гидролазой.

В другом варианте осуществления предшествующего способа стадия обработки включает добавление раствора соединения Ό в смешивающемся с водой растворителе к забуференному раствору, содержащему фермент гидролазу со скоростью, которая минимизирует выпадение сложного эфира в осадок. В другом варианте осуществления сложный эфир добавляют на протяжении периода от приблизительно 24 ч до приблизительно 100 ч. В другом варианте осуществления сложный эфир добавляют в течение периода от приблизительно 48 ч до приблизительно 100 ч. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₈ представляет собой метил. В другом варианте осуществления описан вариант осуществления согласно любому из предшествующих вариантов осуществления, где фермент гидролаза представляет собой эстеразу. В другом варианте осуществления описан вариант осуществления согласно любому из предшествующих вариантов осуществления, где эстераза представляет собой эстеразу печени свиньи.

В иллюстративном примере раствор соединения 4 в диметилсульфоксиде (ΌΜδΟ) добавляют на протяжении периода 90 ч к забуференному раствору эстеразы печени свиньи. В другом иллюстративном примере буфер представляет собой фосфатный буфер. В другом иллюстративном примере раствор фермента имеет рН от 6,5 до 8,5. В другом иллюстративном примере раствор фермента имеет рН от 7,4 до 7,8. Понятно, что используемый буферный материал может представлять собой любой буфер, совместимый с ферментом гидролазой, используемым для удаления сложного эфира.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы С, где каждый из К₅ и К₆ независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; К₂ выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; и К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; где

- 7 025471 способ включает стадию обработки силилового эфира соединения Р неосновным фторидным реагентом. В рамках изобретения было открыто, что использование основных условий может привести к образованию побочного продукта вследствие перегруппировки сложноэфирной группы с получением соединения О'.

В иллюстративном примере соединение 6 обрабатывают Εΐ₃Ν·3ΗΡ для расщепления ΤΕδ-простого эфира с получением соответствующего спирта 6'. Следует понимать, что в способах и процессах, описанных в рамках изобретения, можно использовать другие неосновные фторидные реагенты для расщепления силильного эфира соединений Р, включая, но, не ограничиваясь ими, пиридишНР, и т.п. для расщепления ΤΕδ-простого эфира.

В другом варианте осуществления описан способ получения соединения формулы Н, где каждый из К₅ и К₆ независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; К₂ и Кд независимо выбраны из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; и К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; где способ включает стадию обработки соединения формулы О ацилирующим агентом формулы К-|С(О)Х₂. где Х₂ представляет собой уходящую группу. Понятно, что полученный продукт может содержать различные количества смешанного ангидрида соединения Н и К₄СО₂Н. В другом варианте осуществления способ, описанный в предшествующем варианте осуществления, дополнительно включает стадию обработки продукта реакции водой с получением Н, свободного или по существу свободного от ангидрида. В другом варианте осуществления описан способ согласно предшествующим вариантам осуществления, где Х₂ представляет собой К₄СО₂. В другом варианте осуществления описан способ согласно любому из предшествующих вариантов осуществления, где К₄ представляет собой С -С₄ алкил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₄ представляет собой метил. В другом варианте осуществления описан способ по любому из предшествующих вариантов осуществления, где К₆ представляет собой втор-бутил. В другом варианте осуществления описан способ по любому из предшествующих вариантов осуществления, где К₇ представляет собой метил. В другом варианте осуществления описан способ по любому из предшествующих вариантов осуществления, где К₅ представляет собой изопропил.

В иллюстративном примере, соединение 6' обрабатывают уксусным ангидридом в пиридине. В рамках настоящего изобретения было открыто, что укорочение времени для этой стадии способа повышает выход соединения Н вследствие ограничения количества ранее неописанных альтернативных побочных продуктов ацилирования, таких как соединение формулы 7а, которые образуются. Понятно, что полученный продукт может содержать различные количества смешанного ангидрида 7 и уксусной кислоты. В другом варианте осуществления обработка продукта реакции, полученного на предшествующей стадии, водой в диоксане дает соединение 7, свободное или по существу свободное от ангидрида. Следует понимать, что при гидролизе промежуточного смешанного ангидрида диоксан можно заменять другими растворителями. Альтернативно стадию можно проводить без растворителя.

- 8 025471

В другом варианте осуществления описан способ получения тубулизина Т, где Λη представляет собой необязательно замещенный арил; Κι представляет собой водород, алкил, арилалкил или группу, образующую пролекарственное вещество; каждый из К₅ и Кб независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; К₃ представляет собой необязательно замещенный алкил; К₂ и К₄ независимо выбраны из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; и К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; способ, включающий стадии

с) получения активного сложноэфирного промежуточного соединения из соединения формулы Н; и ά) реакции активного сложноэфирного промежуточного соединения с соединением формулы I.

В рамках изобретения было обнаружено, что, когда на этой стадии используют свободную кислоту I (где Κι представляет собой водород), как сообщалось ранее, желаемый продукт Т может реагировать с дополнительной аминокислотой I с образованием полиаминокислотных побочных продуктов, содержащих множество копий аминокислоты I, в побочной реакции, ранее не описанной. Также в рамках настоящего изобретения было открыто, что удаление избытка образующего активный сложный эфир агента перед добавлением соединения I уменьшает или устраняет эту побочную реакцию до приемлемых уровней. В одном варианте осуществления соединение Н обрабатывают избыточным количеством образующего активный сложный эфир агента и пентафторфенолом с образованием пентафторфенолового сложного эфира соединения Н с последующим удалением избытка образующего активный сложный эфир агента перед добавлением соединения I. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Аг₁ представляет собой фенил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Ау представляет собой замещенный фенил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Αη представляет собой 4замещенный фенил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Аг1 представляет собой К_Азамещенный фенил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Аг1 представляет собой 4гидроксифенил или его гидроксилзащищенную форму. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, КЗ представляет собой метил. В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К1 представляет собой водород.

В иллюстративном примере соединение 7 обрабатывают избыточным количеством полимерной версии карбодиимида и пентафторфенола с образованием пентафторфенилового сложного эфира 7, полимерный карбодиимид удаляют фильтрацией; и к раствору добавляют аминокислоту (§)-тубутирозин с получением тубулизина В. В другом варианте осуществления описан способ по любому из предшествующих вариантов осуществления, где полимерный карбодиимид представляет собой полистирол-СН₂Ы=С=М-циклогексан (Ρδ-ИСС).

- 9 025471

В другом варианте осуществления описано соединение формулы Ό, где соединение свободно или по существу свободно от соединения формулы С-1, где К₂, К₅, Кб, К₇ и К₈ являются такими, как описано в любом из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании. Без связи с теорией, в рамках настоящего описания полагают, что соединения С-1 образуются из соответствующих соединений С через ацильный перенос.

В другом варианте осуществления описано соединение 4, свободное или по существу свободное от соединения 8 и/или соединения 9. В другом варианте осуществления образуется оптически чистая форма соединения 4.

В другом варианте осуществления описано соединение Н, где соединение Н свободно или по существу свободно от соединения, имеющего формулу оксазин-2.

В другом варианте осуществления описано соединение Р, где К₂, К₅, К_б, К₇ и К₈ являются такими, как описано в любом из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании.

В другом варианте осуществления описано соединение формулы б.

В другом варианте осуществления описано соединение С, где соединение свободно или по существу свободно от соединения С', где К₂, К₅, К_б и К₇ являются такими, как описано в любом из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании.

В другом варианте осуществления описано соединение б', где соединение б' свободно или по существу свободно от изомера С', представленного ниже

В другом варианте осуществления описано соединение 7, где соединение 7 свободно или по существу свободно от соединения 7а:

- 10 025471

В другом варианте осуществления описано соединение Н, где К4 представляет собой Ме и К₂, К₅, К₆ и К₇ являются такими, как описано в любом из вариантов осуществления, описанных в настоящем описании; и соединение Н свободно или по существу свободно от соединения Н, где оба из Кд и К₂ представляют собой Ме.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₅ представляет собой изопропил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Кб представляет собой втор-бутил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₈ представляет собой метил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₂ представляет собой СН₂СН(СН₃)₂, СН2СН2СН₃, СН2СН3, СН=С(СНз)2 или СН3.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, η равно 3.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₇ представляет собой метил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К₈ представляет собой метил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Кд представляет собой метил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Аг₁ представляет собой фенил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Аг₁ представляет собой замещенный фенил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Аг₁ представляет собой 4-замещенный фенил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Άη представляет собой К_А-замещенный фенил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Αη представляет собой 4-гидроксифенил или его форму с защищенным гидроксилом.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, К3 представляет собой метил.

В другой альтернативе вышеуказанных вариантов осуществления и в каждом дополнительном варианте осуществления, описанном в настоящем описании, Κι представляет собой водород.

Иллюстративные варианты осуществления изобретения, кроме того, описаны с помощью следующих пронумерованных утверждений.

1. Способ получения соединения формулы

или его фармацевтически приемлемой соли; где Аг₁ представляет собой необязательно замещенный арил; К1 представляет собой водород, алкил, арилалкил или группу, образующую пролекарственное вещество; К2 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно заме- 11 025471 щенного циклоалкила; К₃ представляет собой необязательно замещенный алкил; К₄ представляет собой необязательно замещенный алкил или необязательно замещенный циклоалкил; каждый из К₅ и К₆ независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила и необязательно замещенного циклоалкила; К₇ представляет собой необязательно замещенный алкил; и η равно 1, 2, 3 или 4; где способ включает стадию обработки соединения формулы А триэтилсилилхлоридом и имидазолом в апротонном растворителе, где К₈ представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил

или стадию обработки соединения формулы В основанием и соединением формулы С1СН₂ОС(О)К₂ в апротонном растворителе при температуре от приблизительно -78°С до приблизительно 0°С; где молярное соотношение соединения формулы С1СН₂ОС(О)К₂ и соединения формулы В составляет от приблизительно 1 до приблизительно 1,5, где К._х представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил

или стадии а) получения соединения формулы (Е1), где Х₁ представляет собой уходящую группу, из соединения формулы Е

в₇ о К₇ О

Е Е1 и Ь) обработки соединения формулы С в восстанавливающих условиях в присутствии соединения формулы Е1, где К._х представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил

или стадию обработки соединения Ό ферментом гидролазой, где К₈ представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил

или стадию обработки силилового эфира соединения Р неосновным фторидным реагентом

или стадию обработки соединения формулы О ацилирующим агентом формулы К₄С(О)Х₂, где Х₂ представляет собой уходящую группу

или стадии с) образования активного сложноэфирного промежуточного соединения из соединения формулы Н

и ά) реакции активного сложноэфирного промежуточного соединения с соединением формулы I

- 12 025471

Αη

ΟΟϊΡι

ΝΗ₂ Вз или их комбинации.

1а. Способ согласно утверждению 1, где К₄ представляет собой необязательно замещенный алкил.

2. Способ согласно утверждению 1 или 1а, включающий стадию обработки соединения формулы А триэтилсилилхлоридом и имидазолом в апротонном растворителе, где К₈ представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил

3. Способ согласно утверждению 1 или 1а, включающий стадию обработки соединения формулы В основанием и соединением формулы С1СН₂ОС(О)К₂ в апротонном растворителе при температуре от приблизительно -78°С до приблизительно 0°С; где молярное соотношение соединения формулы С1СН₂ОС(О)К₂ и соединения формулы В составляет от приблизительно 1 до приблизительно 1,5, где К₈ представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил

4. Способ согласно утверждению 1 или 1а, включающий стадии а) получения соединения формулы (Е1), где Х₁ представляет собой уходящую группу, из соединения формулы Е

и Ь) обработки соединения формулы С в восстанавливающих условиях в присутствии соединения формулы Е1, где К₈ представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил

5. Способ согласно утверждению 1 или 1а, включающий стадию обработки соединения Ό ферментом гидролазой, где К₈ представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил

6. Способ согласно утверждению 1 или 1а, включающий стадию обработки соединения формулы О ацилирующим агентом формулы К₄С(О)Х₂, где Х₂ представляет собой уходящую группу

7. Способ согласно утверждению 1 или 1а, включающий стадии с) получения активного сложноэфирного промежуточного соединения из соединения формулы Н

и 6) реакции активного сложноэфирного промежуточного соединения с соединением формулы I

- 13 025471

ΝΗ₂ Нз

8. Способ согласно любому из утверждений 1-7 или 1а, где К₁ представляет собой водород, бензил или С₁-С₄ алкил. 9. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₁ представляет собой водород. 10. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₂ представляет собой С₁-С₈ алкил или С₃-С₈ циклоалкил. 11. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₂ представляет собой н-бутил. 12. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₃ представляет собой С₁-С₄ алкил. 13. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₃ представляет собой метил. 14. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где Аг₁ представляет собой фенил или гидроксифенил. 15. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где Ар представляет собой 4-гидроксифенил. 16. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₄ представляет собой С₁-С₈ алкил или С₃-С₈ циклоалкил. 17. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₄ представляет собой метил. 18. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₅ представляет собой разветвленный С₃-С₆ или С₃-С₈ циклоалкил. 19. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₅ представляет собой изопропил. 20. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где Кб представляет собой разветвленный С₃-С₆ или С₃-С₈ циклоалкил. 21. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₅ представляет собой втор-бутил. 22. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₇ представляет собой С₁-Сб алкил. 23. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₇ представляет собой метил. 24. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где К₂ представляет собой СН₂СН(СН₃)₂, СН₂СН₂СН₃, СН₂СН₃, СН=С(СН₃)₂ или СН₃. 25. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где Аг₁ представляет собой замещенный фенил. 26. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где Аг₁ представляет собой 4-замещенный фенил. 27. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где Ар представляет собой К_А-замещенный фенил. 28. Способ согласно любому из предшествующих утверждений, где Аг₁ представляет собой 4гидроксифенил или его форму с защищенным гидроксилом.

Следует понимать, что, как используют в рамках изобретения, термин тубулизин относится как в совокупности, так и индивидуально, к встречающимся в природе тубулизинам и аналогам и производным тубулизинов. Иллюстративные примеры тубулизина представлены в табл.1.

Как используют в рамках изобретения, термин тубулизин, главным образом, относится к соединениям, описанным в настоящем описании, и их аналогам и производным. Также следует понимать, что для каждого из вышеуказанных вариантов осуществления, также в иллюстративных вариантах, описанных в настоящем описании, включена любая соответствующая фармацевтически приемлемая соль.

Следует понимать, что такие производные могут включать пролекарства соединений, описанных в настоящем описании, соединения, описанные в настоящем описании, которые включают одну или несколько групп защиты или защитных групп, включая соединения, которые используют для получения других соединений, описанных в настоящем описании.

Кроме того, как используют в рамках изобретения, термин тубулизин также относится к пролекарственным производным соединений, описанных в настоящем описании, и включает пролекарства различных их аналогов и производных. Кроме того, как используют в рамках изобретения, термин тубулизин относится как к аморфной, так и к любой, и всем морфологическим формам каждого из соединений, описанных в настоящем описании. Кроме того, как используют в рамках изобретения, термин тубулизин относится к любому и всем гидратам, или другим сольватам, соединений, описанных в настоящем описании.

Следует понимать, что каждый из вышеуказанных вариантов осуществления можно комбинировать химически обоснованными путями для получения подгрупп вариантов осуществления, описанных в настоящем описании. Таким образом, кроме того, следует понимать, что все такие подгруппы также являются иллюстративными вариантами осуществления изобретения, описанными в настоящем описании.

Соединения, описанные в настоящем описании, могут содержать один или несколько хиральных центров, или в ином случае они могут быть способны существовать в качестве множества стереоизомеров. Следует понимать, что в одном варианте осуществления изобретение, описанное в настоящем описании, не ограничивается каким-либо конкретным стереохимиеским требованием, и что соединения, и композиции, способы, применения и лекарственные средства, которые включают их, могут быть оптически чистыми или они могут представлять собой любую из множества стереоизомерных смесей, включая рацемические и другие смеси энантиомеров, другие смеси диастереомеров и т.п. Также следует понимать, что такие смеси стереоизомеров могут включать одну стереохимическую конфигурацию по одному или нескольким хиральным центрам, также включая смеси стереохимических конфигураций по одному или нескольким другим хиральным центрам.

Аналогично, соединения, описанные в настоящем описании, могут включать геометрические центры, такие как цис, транс, (Е)- и (2)-двойные связи. Следует понимать, что в другом варианте осуществ- 14 025471 ления изобретение, описанное в настоящем описании, не ограничивается каким-либо конкретным требованием с точки зрения геометрического изомера, и что соединения и композиции, способы, применения и лекарственные средства, которые включают их, могут быть чистыми или они могут представлять собой любую из множества смесей геометрических изомеров. Также следует понимать, что такие смеси геометрических изомеров могут включать одну конфигурацию одной или нескольких двойных связей, также включая смеси геометрических изомеров по одной или нескольким другим двойным связям.

Как используют в рамках изобретения, термин апротонный растворитель относится к растворителю, который не дает протон растворенному веществу(веществам) в условиях реакции.

Иллюстративными примерами апротонных растворителей являются тетрагидрофуран (ТНР), 2,5диметилтетрагидрофуран, 2-метилтетрагидрофуран, тетрагидропиран, диэтиловый эфир, трет-бутилметиловый эфир, диметилформамид, Ν-метилпирролидинон (ΝΜΡ) и т.п. Понятно, что также в способах, описанных в настоящем описании, можно использовать смеси этих растворителей.

Как используют в рамках изобретения, эквивалентное количество реагента относится к теоретическому количеству реагента, необходимому для преобразования исходного материала в желаемый продукт, т.е. если теоретически требуется 1 моль реагента для преобразования 1 моль исходного материала в 1 моль продукта, тогда 1 эквивалент реагента соответствует 1 моль реагента; если X моль реагента теоретически требуется для преобразования 1 моль исходного материала в 1 моль продукта, тогда 1 эквивалент реагента соответствует X моль реагента.

Как используют в рамках изобретения, термин образующий активный сложный эфир агент, как правило, относится к любому реагенту или комбинациям реагентов, которые можно использовать для преобразования карбоновой кислоты в активный сложный эфир.

Как используют в рамках изобретения, термин активный сложный эфир, главным образом, относится к соединению сложного эфира карбоновой кислоты, где часть сложного эфира, представляющая собой двухвалентный кислород, является уходящей группой, что приводит к сложному эфиру, который является активированным для реакции с соединениями, содержащими функциональные группы, такими как амины, спирты или сульфгидрильные группы. Иллюстративными примерами образующих активный сложный эфир соединений являются Ν-гидроксисукцинимид, Ν-гидроксифталимид, фенолы, замещенные электроноакцепторными группами, такие как, но не ограничиваясь ими, 4-нитрофенол, пентафторфенол, Ν,Ν'-дизамещенные изомочевины, замещенные гидроксигетероарилы, такие как, но не ограничиваясь ими, 2-пиридинолы, 1-гидроксибензотриазолы, 1-гидрокси-7-азабензотриазолы, цианометанол и т.п. Иллюстративно, условия реакции для вытеснения активного сложного эфира соединением, имеющим амино, гидрокси или тиольную группу, являются мягкими. Иллюстративно, реакцию вытеснения сложного эфира соединением, имеющим амино, гидрокси или тиольную группу, проводят при температуре окружающей среды или ниже. Иллюстративно, реакцию вытеснения активного сложного эфира соединением, имеющим амино, гидрокси или тиольную группу, проводят без добавления сильного основания. Иллюстративно реакцию вытеснения активного сложного эфира соединением, имеющим амино, гидрокси или тиольную группу, проводят с добавлением основания, представляющего собой третичный амин, такого как основание, представляющее собой третичный амин, имеющее рКа сопряженной кислоты приблизительно 11 или менее, приблизительно 10,5 или менее и т.п.

Как используют в рамках изобретения, термин алкил включает цепь из атомов углерода, которая необязательно является разветвленной. Как используют в рамках изобретения, термин алкенил и алкинил включает цепь из атомов углерода, которая необязательно является разветвленной и включает по меньшей мере одну двойную связь или тройную связь, соответственно. Следует понимать, что алкинил также может включать одну или несколько двойных связей. Кроме того, следует понимать, что в определенных вариантах осуществления алкил преимущественно имеет ограниченную длину, включающую С₁ С₂₄, С₁-С₁₂, С₁-С₈, С₁-С₆ и С₁-С₄. Кроме того, следует понимать, что в определенных вариантах осуществления каждый из алкенила и/или алкинила может преимущественно иметь ограниченную длину, включающую С₂-С₂₄, С₂-С₁₂, С₂-С₈, С₂-С₆ и С₂-С₄. Понятно, что в рамках настоящего изобретения, более короткие алкильные, алкенильные и/или алкинильные группы могут добавлять меньше липофильности соединению и, таким образом, будут иметь отличающееся фармакокинетическое поведение. Иллюстративными алкильными группами являются, но не ограничиваясь ими, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, 2-пентил, 3-пентил, неопентил, гексил, гептил, октил и т.п.

Как используют в рамках изобретения, термин циклоалкил включает цепь из атомов углерода, которая необязательно является разветвленной, где по меньшей мере часть цепи является циклической. Следует понимать, что циклоалкилалкил является подклассом циклоалкилов. Следует понимать, что циклоалкил может быть полициклическим. Иллюстративный циклоалкил включает, но не ограничивается ими, циклопропил, циклопентил, циклогексил, 2-метилциклопропил, циклопентилэт-2-ил, адамантил и т.п. Как используют в рамках изобретения, термин циклоалкенил включает цепь атомов углерода, которая необязательно является разветвленной и включает по меньшей мере одну двойную связь, где по меньшей мере часть цепи является циклической. Следует понимать, что одна или несколько двойных связей могут быть в циклической части циклоалкенила и/или нециклической части циклоалкенила. Сле- 15 025471 дует понимать, что циклоалкенилалкилы и циклоалкилалкенилы являются подклассами циклоалкенилов. Следует понимать, что циклоалкил может быть полициклическим. Иллюстративный циклоалкенил включает, но не ограничивается ими, циклопентенил, циклогексилэтен-2-ил, циклогептенилпропенил и т.п. Кроме того, следует понимать, что цепь, образующая циклоалкил и/или циклоалкенил, преимущественно имеет ограниченную длину, включая С₃-С₂₄, С₃-С₁₂, С₃-С₈, С₃-С₆, и С₅-С₆. Понятно, что более короткие алкильные и/или алкенильные цепи, образующие циклоалкил и/или циклоалкенил, соответственно, могут добавлять меньше липофильности соединению и, таким образом, будут иметь отличающееся фармакокинетическое поведение.

Как используют в рамках изобретения, термин гетероалкил включает цепь атомов, которая включает как углерод, так и по меньшей мере один гетероатом, и необязательно является разветвленной. Иллюстративные гетероатомы включают азот, кислород и серу. В определенных вариантах иллюстративные гетероатомы также включают фосфор и селен. Как используют в рамках изобретения, термин циклогетероалкил, включающий гетероциклил и гетероцикл, включает цепь из атомов, которая включает как углерод, так и по меньшей мере один гетероатом, такой как гетероалкил, и необязательно является разветвленной, где по меньшей мере часть цепи является циклической. Иллюстративные гетероатомы включают азот, кислород и серу. В определенных вариантах иллюстративные гетероатомы также включают фосфор и селен. Иллюстративный циклогетероалкил включает, но не ограничивается ими, тетрагидрофурил, пирролидинил, тетрагидропиранил, пиперидинил, морфолинил, пиперазинил, гомопиперазинил, квинуклидинил и т.п.

Как используют в рамках изобретения, термин арил включает моноциклические и полициклические ароматические группы, включая ароматические карбоциклические и ароматические гетероциклические группы, каждая из которых может быть необязательно замещенной. Как используют в рамках изобретения, термин карбарил включает ароматические карбоциклические группы, каждая из которых может быть необязательно замещенной. Иллюстративные ароматические карбоциклические группы, описанные в настоящем описании, включают, но не ограничиваются ими, фенил, нафтил и т.п. Как используют в рамках изобретения, термин гетероарил включает ароматические гетероциклические группы, каждая из которых может быть необязательно замещенной. Иллюстративные ароматические гетероциклические группы включают, но не ограничиваются ими, пиридинил, пиримидинил, пиразинил, триазинил, тетразинил, хинолинил, хиназолинил, хиноксалинил, тиенил, пиразолил, имидазолил, оксазолил, тиазолил, изоксазолил, изотиазолил, оксадиазолил, тиадиазолил, триазолил, бензимидазолил, бензоксазолил, бензтиазолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил и т.п.

Как используют в рамках изобретения, термин амино включает группу ΝΗ₂, алкиламино и диалкиламино, где две алкильных группы в диалкиламино могут быть одинаковыми или отличающимися, т.е. алкилалкиламино. Иллюстративно, амино включает метиламино, этиламино, диметиламино, метилэтиламино и т.п. Кроме того, следует понимать, что, когда амино модифицирует или модифицирован другим термином, как например, аминоалкил или ациламино, описанные выше варианты термина амино включены в него. Иллюстративно, аминоалкил включает Η^-алкил, метиламиноалкил, этиламиноалкил, диметиламиноалкил, метилэтиламиноалкил и т.п. Иллюстративно, ациламино включает ацилметиламино, ацилэтиламино и т.п.

Как используют в рамках изобретения, термин амино и его производные включает амино, как описано в настоящем описании, и алкиламино, алкениламино, алкиниламино, гетероалкиламино, гетероалкениламино, гетероалкиниламино, циклоалкиламино, циклоалкениламино, циклогетероалкиламино, циклогетероалкениламино, ариламино, арилалкиламино, арилалкениламино, арилалкиниламино, ациламино и т.п., каждый из которых является необязательно замещенным. Термин аминопроизводное также включает мочевину, карбамат и т.п.

Как используют в рамках изобретения, термин гидрокси и его производные включает ОН и алкилокси, алкенилокси, алкинилокси, гетероалкилокси, гетероалкенилокси, гетероалкинилокси, циклоалкилокси, циклоалкенилокси, циклогетероалкилокси, циклогетероалкенилокси, арилокси, арилалкилокси, арилалкенилокси, арилалкинилокси, ацилокси и т.п., каждый из которых необязательно замещен. Термин гидроксипроизводное также включает карбамат и т.п.

Как используют в рамках изобретения, термин тио и его производные включает 8Η и алкилтио, алкенилтио, алкинилтио, гетероалкилтио, гетероалкенилтио, гетероалкинилтио, циклоалкилтио, циклоалкенилтио, циклогетероалкилтио, циклогетероалкенилтио, арилтио, арилалкилтио, арилалкенилтио, арилалкинилтио, ацилтио и т.п., каждый из которых необязательно является замещенным. Термин тиопроизводное также включает тиокарбамат и т.п.

Как используют в рамках изобретения, термин ацил включает формил и алкилкарбонил, алкенилкарбонил, алкинилкарбонил, гетероалкилкарбонил, гетероалкенилкарбонил, гетероалкинилкарбонил, циклоалкилкарбонил, циклоалкенилкарбонил, циклогетероалкилкарбонил, циклогетероалкенилкарбонил, арилкарбонил, арилалкилкарбонил, арилалкенилкарбонил, арилалкинилкарбонил, ацилкарбонил и т.п., каждый из которых является необязательно замещенным.

Как используют в рамках изобретения, термин карбоксилат и его производные включают группу СО₂Н и ее соли, и ее сложные эфиры и амиды, и СК

- 16 025471

Термин необязательно замещенный, как используют в рамках изобретения, включает замену атомов водорода другими функциональными группами на радикале, который необязательно замещен. Иллюстративно такие другие функциональные группы включают, но не ограничиваются ими, амино, гидроксил, галоген, тиол, алкил, галогеналкил, гетероалкил, арил, арилалкил, арилгетероалкил, нитро, сульфоновые кислоты и их производные, карбоновые кислоты и их производные и т.п. Иллюстративно, любой из амино, гидроксила, тиола, алкила, галогеналкила, гетероалкила, арила, арилалкила, арилгетероалкила и/или сульфоновой кислоты необязательно является замещенным.

Как используют в рамках изобретения, термин необязательно замещенный арил включает замену атомов водорода другими функциональными группами на ариле, который необязательно замещен. Иллюстративно такие другие функциональные группы включают, но не ограничиваются ими, амино, гидроксил, гало, тиол, алкил, галогеналкил, гетероалкил, арил, арилалкил, арилгетероалкил, нитро, сульфоновые кислоты и их производные, карбоновые кислоты и их производные и т.п. Иллюстративно любой из амино, гидроксила, тиола, алкила, галогеналкила, гетероалкила, арила, арилалкила, арилгетероалкила и/или сульфоновой кислоты необязательно является замещенным.

Иллюстративные заместители включают, но не ограничиваются ими, радикал -(ΟΗ₂)_ΧΖ^Χ, где х представляет собой целое число, равное 0-6, и Ζ^χ выбран из галогена, гидрокси, алканоилокси, включая С1-С6алканоилокси, необязательно замещенного ароилокси, алкила, включая С1-С6алкил, алкокси, включая С1-С6алкокси, циклоалкила, включая С3-С8циклоалкил, циклоалкокси, включая С3-С8циклоалкокси, алкенила, включая С2-С6алкенил, алкинила, включая С2-С6алкинил, галогеналкила, включая С1-С6 галогеналкил, галогеналкокси, включая С1-С6галогеналкокси, галогенциклоалкила, включая С3-С8 галогенциклоалкил, галогенциклоалкокси, включая С3-С8галогенциклоалкокси, амино, С1-С6алкиламино, (С1-С6 алкил) (С1-С6алкил)амино, алкилкарбониламино, Ы-(С1-С6алкил)алкилкарбониламино, аминоалкила, С1С6алкиламиноалкила, (С1-С6алкил) (С1-С6алкил) аминоалкила, алкилкарбониламиноалкила, Ы-(С1С6алкил) алкилкарбониламиноалкила, циано и нитро; или Ζ^χ выбран из -СО2К⁴ и -СОЫК⁵К⁶, где каждый из К⁴, К⁵ и К⁶ независимо выбран в каждом случае из водорода, С₁-С₆алкила и арил-С₁-С₆алкила.

Термин пролекарство, как используют в рамках изобретения, главным образом, относится к любому соединению, которое, при введении в биологическую систему, образует биологически активное соединение в результате одной или нескольких самопроизвольной химической реакции(ий), катализируемой ферментом химической реакции(ий), и/или метаболической химической реакции(ий) или их комбинации. Ιη νίνο, на пролекарство, как правило, действует фермент (такой как эстеразы, амидазы, фосфатазы и т.п.), простые биологические химические реакции или другие процессы ίη νίνο, высвобождающие или регенерирующие более фармакологически активное лекарственное вещество. Зга активация может происходить через воздействие эндогенного фермента хозяина или неэндогенного фермента, который вводят хозяину до, после или во время введения пролекарства. Дополнительные подробности применения пролекарств описаны в патенте США № 5627165; и Ра1Ьа1к с1 а1., Εηζνιηία рго!есйпд дгоир 1ссНп1цис5 ίη огдатс 5уп1Не515. §1егео8е1. Бюса!а1. 775-797 (2000). Понятно, что пролекарство преимущественно конвертируют в исходное лекарственное средство при условии достижения цели, такой как нацеленная доставка, безопасность, стабильность и т.п. с последующим быстрым выведением высвобожденных остатков группы, образующей пролекарство.

Пролекарства можно получать из соединений, описанных в настоящем описании, путем присоединения групп, которые в конечном итоге расщепляются на одну или несколько функциональных групп, присутствующих на соединении, таких как -ОН-, -δΗ, -СО₂Н, -ΝΚ₂. Иллюстративные пролекарства включают, но не ограничиваются ими, карбоксилатные сложные эфиры, где группа представляет собой алкил, арил, аралкил, ацилоксиалкил, алкоксикарбонилоксиалкил, а также сложные эфиры гидроксила, тиола и аминов, где присоединяемая группа представляет собой ацильную группу, алкоксикарбонил, аминокарбонил, фосфат или сульфат. Иллюстративные сложные эфиры, также называемые активными сложными эфирами, включают, но не ограничиваются ими 1-инданил, Ν-оксисукцинимид; ацилоксиалкильные группы, такие как ацетоксиметил, пивалоилоксиметил, β-ацетоксиэтил, β-пивалоилоксиэтил, 1(циклогексилкарбонилокси)проп-1-ил, (1-аминоэтил)карбонилоксиметил и т.п.;

алкоксикарбонилоксиалкильные группы, такие как этоксикарбонилоксиметил, α-этоксикарбонилоксиэтил, β-этоксикарбонилоксиэтил и т.п.; диалкиламиноалкильные группы, включающие ди-низшие алкиламино-алкильные группы, такие как диметиламинометил, диметиламиноэтил, диэтиламинометил, диэтиламиноэтил и т.п.; 2-(алкоксикарбонил)-2-алкенильные группы, такие как 2-(изобутоксикарбонил) пент-2-енил, 2-(этоксикарбонил)бут-2-енил и т.п.; и группы лактонов, такие как фталидил, диметоксифталидил и т.п.

Другие иллюстративные пролекарства содержат химическую часть, такую как амидная группа или фосфорсодержащая группа, функционирующие, повышая растворимость и/или стабильность соединений, описанных в настоящем описании. Другие иллюстративные пролекарства для аминогрупп включают, но не ограничиваются ими, (С₃-С₂₀) алканоил; галоген- (С₃-С₂₀) алканоил; (С₃-С₂₀)алкеноил; (С₄-С₇) циклоалканоил; (С₃-С₆) циклоалкил (С₂-С1₆)алканоил; необязательно замещенный ароил, такой как незамещенный ароил или ароил, замещенный 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из гало- 17 025471 гена, циано, трифторметансульфонилокси, (С₁-С₃) алкила и (С₁-С₃) алкокси, каждый из которых необязательно дополнительно замещен одним или несколькими из 1-3 атомов галогена; необязательно замещенный арил(С₂-С₁₆)алканоил, такой как арильный радикал, являющийся незамещенным или замещенный 13 заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, (С₁-С₃) алкила и (С₁-С₃) алкокси, каждый из которых необязательно дополнительно замещен 1-3 атомами галогена; и необязательно замещенный гетероарилалканоил, имеющий от одного до трех гетероатомов, выбранных из О, δ и N в гетероарильной части и от 2 до 10 атомов углерода в алканоильной части, такой как гетероарильный радикал, являющийся незамещенным или замещенный 1-3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, циано, трифторметансульфонилокси, (С₁-С₃)алкила и (С₁-С₃)алкокси, каждый из которых необязательно дополнительно замещен 1-3 атомами галогена. Проиллюстрированные группы представлены в качестве примеров, не исчерпывающих, и могут быть получены общепринятыми способами.

Понятно, что пролекарства сами по себе могут не обладать значительной биологической активностью, а вместо этого подвергаться одной или нескольким самопроизвольной химической реакции(ям), катализируемой ферментом химической реакции(ям) и/или метаболической химической реакции(ям) или их комбинациям после введения ίη νίνο с образованием соединения, описанного в настоящем описании, которое является биологически активным или является предшественником биологически активного соединения.

Однако понятно, что в некоторых случаях пролекарство является биологически активным. Также понятно, что пролекарства часто могут повышать эффективность лекарственного средства или безопасность вследствие повышения пероральной биодоступности, фармакодинамического времени полужизни и т.п. Пролекарства также относятся к производным соединений, описанных в настоящем описании, которые включают группы, которые просто маскируют нежелательные свойства лекарственных средств или увеличивают доставку лекарственных средств. Например, одно или несколько соединений, описанных в настоящем описании, могут проявлять нежелательное свойство, блокирование или минимизация которого могут быть преимущественными, поскольку оно может стать фармакологическим, фармацевтическим или фармакокинетическим препятствием применению лекарственного средства, таким как низкая пероральная всасываемость лекарственного средства, отсутствие участка специфичности, химическая нестабильность, токсичность и плохая восприимчивость пациента (плохой вкус, запах, боль в области инъекции и т.д), и другие. Понятно, что пролекарство или другая стратегия с использованием обратимых производных, могут быть полезными для оптимизации клинического применения лекарственного средства.

Как используют в рамках изобретения, термин обработка, контактирование или реакция при указании на химическую реакцию, означает добавление или смешение двух или более реагентов в соответствующих условиях с получением указанного и/или желаемого продукта. Следует понимать, что реакция, в которой образуется указанный и/или желаемый продукт, необязательно может быть результатом непосредственно комбинации двух реагентов, которые добавляли первоначально, т.е. могут существовать одно или несколько промежуточных соединений, которые образуются в смеси, которая в конечном итоге приводит к образованию указанного и/или желаемого продукта.

Как используют в рамках изобретения, термин композиция, главным образом, относится к любому продукту, содержащему определенные ингредиенты в определенных количествах, а также к любому продукту, который является результатом, непосредственно или косвенно, комбинаций определенных ингредиентов в определенных количествах. Следует понимать, что композиции, описанные в настоящем описании, можно получать из выделенных соединений, описанных в настоящем описании, или из солей, растворов, гидратов, сольватов и других форм соединений, описанных в настоящем описании. Также понятно, что композиции можно получать из различных аморфных, неаморфных, частично кристаллических, кристаллических и/или других морфологических форм соединений, описанных в настоящем описании. Также следует понимать, что композиции можно получать из различных гидратов и/или сольватов соединений, описанных в настоящем описании. Таким образом, следует понимать, что такие фармацевтические композиции, которые включают соединения, описанные в настоящем описании, включают каждую или любую комбинацию различных морфологических форм и/или форм сольватов или гидратов соединений, описанных в настоящем описании. Иллюстративно, композиции могут включать один или несколько носителей, разбавителей и/или эксципиентов. Соединения, описанные в настоящем описании, или композиции, содержащие их, могут быть включены в терапевтически эффективном количестве в состав любых общепринятых дозированных форм, подходящих для способов, описанных в настоящем описании. Соединения, описанные в настоящем описании, или содержащие их композиции, включающие такие составы, можно вводить широким множеством общепринятых путей, пригодных для способов, описанных в настоящем описании, и в широком множестве форматов дозировок с использованием известных процедур (см. главным образом, КепипдЮп: ТНе 8шепсе апб Ргасбсе οί РНагтасу, (2Г’¹ еб., 2005)).

- 18 025471

Примеры

Синтез дипептида 3.

1,9 г дипептида 1 (11,6 ммоль) растворяли в 60 мл дихлорметана, к полученному раствору добавляли имидазол (0,87 г, 12,7 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь немного нагревали до растворения всех твердых веществ, и повторно охлаждали до 0°С. Капельно добавляли ТЕ8С1 (2,02 мл, 12,1 ммоль) при 0°С, реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона, и нагревали до комнатной температуры в течение 2 ч. ТЬС (3: 1 гексан/ЕЮАс) показала завершение реакции. Реакционную смесь фильтровали для удаления соли имидазола с НС1, экстрагировали деионизированной водой и водную фазу обратно промывали дихлорметаном, объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили над №-ь8О₄. фильтровали для удаления №-ь8О₄, концентрировали при пониженном давлении, совместно упаривали с толуолом и сушили в высоком вакууме в течение ночи с получением 6,4 г неочищенного продукта 2 (против теоретического выхода 5,9 г).

Неочищенный продукт 2 вновь совместно упаривали с толуолом, и использовали без дальнейшей очистки. ТЕШзащищенный дипептид растворяли в 38 мл ТНР (безводный, не содержащий ингибитора) и охлаждали до -45°С и перемешивали в течение 15 мин, а затем капельно добавляли КНМБ8 (0,5 М в толуоле, 25,5 мл, 12,8 ммоль, 1,1 экв.). После завершения добавления КНМБ8 реакционную смесь перемешивали при -45°С в течение 15 мин и добавляли хлорметилбутират (1,8 мл, 1,2 экв., 14 ммоль). Реакционная смесь меняла цвет с желтого на голубоватый. ТЬС (20% ЕЮАс/петролейный эфир) показала, что большая часть исходного материала преобразовалась. БС-М8 показала, что осталось приблизительно 7% исходного материала. Реакционную смесь гасили добавлением 3 мл МеОН, смесь нагревали до комнатной температуры, и концентрировали при пониженном давлении до маслянистого осадка. Осадок растворяли в петролейном эфире, и пропускали через короткую вставку из диоксида кремния для удаления калиевой соли. Вставку промывали смесью 13% ЕЮЛс/петролейный эфир, и собранные элюаты объединяли и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный алкилированный продукт пропускали через дополнительную вставку с диоксидом кремния (продукт/диоксид кремния =1:50) и элюировали смесью 13% ЕЮЛс/петролейный эфир для удаления остаточного исходного материала с получением 5,7 г продукта 3 (две стадии, выход 76%).

Синтез трипептида 4

Алкилированный дипептид 3 (4,3 г, 7,0 ммоль), Ν-метилпипеколинат (МЕР) (4,0 г, 28,0 ммоль, 4 экв.) и пентафторфенол (5,7 г, 30,8 ммоль, 4,4 экв.) добавляли в колбу. К смеси добавляли Νметилпирролидон (ΝΜΡ, 86 мл). К смеси добавляли диизопропилкарбодиимид (Б1С, 4,77 мл, 30,8 ммоль, 4,4 экв.). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли Ρά/С (10%, сухой, 1,7 г). Колбу встряхивали в атмосфере водорода (30-35 фунт/кв. дюйм (207-241 кПа) ) в течение 5 ч. Реакционную смесь анализировали с помощью ВЭЖХ. Было выявлено, что исходный материал составляет менее 3%. Смесь фильтровали через диатомитовую землю. Диатомитовую землю экстрагировали 200 мл этилацетата. Фильтрат и экстракт этилацетата объединяли, и переносили в делительную воронку, и промывали раствором 1% NаΗСОз/10% №Ю1 (200 мл х4). Органический слой выделяли, и упаривали на роторном испарителе при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в 40 мл МеОН/Н2О (3:1). Раствор неочищенного продукта наносили на колонку ВЮаде С18 (Р1а8Й 65Ϊ, 350д, 450 мл, 65x200 мм) и элюировали буфером А [10 мМ NΗ₄ОΑс/ΑСN (1:1)] и В (ΑΟΝ, ацетонитрил). Фракции собирали, и органический растворитель удаляли выпариванием на роторном испарителе. В колбу добавляли 100 мл 10% раствора №Ю1 и 100 мл метил-трет-бутилового эфира (МТВЕ) и смесь переносили в делительную воронку. Органический слой выделяли и сушили над безводным №-ь8О₄, фильтровали и упаривали на роторном испарителе до сухого состояния. Получали 2,5 г трипептидного промежуточного соединения 4 (выход 50%).

- 19 025471

К 2 л 0,05 М фосфата (рН 7,4) при 30°С добавляли 3, 6 г эстеразы печени свиньи (17 единиц/мг). 3,0 г метилового сложного эфира 4 растворяли в 100 мл ΌΜδΟ. Первые 50 мл этого раствора добавляли со скоростью 1,1 мл/ч, а вторую половину добавляли со скоростью 1,2 мл/ч через шприцевой насос. После завершения добавления реакционной смеси позволяли перемешаться при 30°С в течение нескольких часов. ВЭЖХ экстракта реакционной смеси в ЕЮЛс показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь дренировали из реактора 1-л порциями, и экстрагировали ЕЮЛс (3x1 л). Объединенные экстракты промывали рассолом, сушили над Μ§₂δΟ₄, и концентрировали при пониженном давлении. Было выделено 2,8 г продукта 6 (95%). Продукт оказался чистым в анализе ИРЬС, за исключением пентафторфенола из предыдущей реакции.

Спектральные данные для промежуточного соединения 6: ЬСМ§ (ΕδΙ) [М+Н]+ 697,3; ¹Н ЯМР (С1ТО1)) 8,02 (с, 1Н), 5,94 (д, 1=12,3 Гц, 1Н), 5,48 (д, 1=12,3 Гц, 1Н), 4,93 (д, 1=8,2 Гц, 1Н), 4,65(д, 1=8,5 Гц, 1Н), 3,63 (с, шир., 1Н), 2,91 (шир., 1Н), 2,67 (с, 3Н), 2,53-2,14 (м, 3Н), 2,14-1,94 (м, 4Н), 1,94-1,74 (м, 4Н), 1,74-1,50 (м, 4Н), 1,28-1,17 (м, 1Н), 1,02-0,83 (м, 24Н), 0,71-0,55 (м, 6Н).

1,4 г (2,01 ммоль) трипептида 6 растворяли в 8,4 мл ТНР, и добавляли 32 7,4 мкл (2,01 ммоль) 3ΗΡ·ΝΕΐ₃ и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Анализ ЬС-Μδ (от 10% до 100% ацетонитрил, буфер рН 7) подтвердил полное удаление защитной группы ΤΕδ. ТНР удаляли при пониженном давлении. Осадок сушили в высоком вакууме в течение 5 мин. Неочищенный продукт растворяли в 8,4 мл сухого пиридина. Добавляли 2,85 мл (30,15 ммоль, 15 экв.) Ас₂О при 0°С. Полученный прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3,5 часов. Анализ ЬС-Μδ (от 10 до 100% ацетонитрил, рН 7,0) показал преобразование >98%. Добавляли 56 мл смеси диоксан/Н2О, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Осадок совместно упаривали с толуолом (3х) и сушили в высоком вакууме в течение ночи. Неочищенный продукт 7 использовали непосредственно для следующей реакции.

Спектральные данные для промежуточного соединения 7: ΡΤ,’Μδ (ΕδΙ) [М+Н]+ 625,2; ¹Н ЯМР (С1ТО1)) 8,00 (с, 1Н), 6, 00 (с, шир., 1Н), 5,84 (д, 1=12,1 Гц, 1Н), 5,40 (д, 1=12,1 Гц, 1Н), 4,63(д, 1=9,1 Гц, 1Н), 3,09 (шир., 1Н), 2,60-2,20 (м, 7Н), 2,12 (с, 3Н), 2,09-1,86 (м, 3Н), 1,80-1,63 (м, 3Н), 1,59(м, 5Н), 1,19 (м, 1Н), 1,03-0,81 (м, 15Н) ; ¹³С ЯМР (С1ТО1)) 176,2, 174,2, 172,1, 169,1, 155,5, 125,2, 71,4, 69,6, 56,6, 55,5, 44,3, 37,7, 37,1, 36,4, 32,0, 31,2, 25,6, 23,7, 21,0, 20,9, 20,7, 19,3, 16,5, 14,2, 11,0.

Способ А. Неочищенную трипептидную кислоту 7 растворяли в 28 мл ΕΐΟΑс (безводный) и добавляли 740 мг (4,02 ммоль, 2,0 экв.) пентафторфенола, а затем 1,04 г (5,03 ммоль, 2,5 экв.) ОСС. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Анализ ЬС-Μδ (от 5% до 80% ацетонитрил, рН 2,0, муравьиная кислота) показал преобразование >95%. Побочный продукт мочевину отфильтровывали, ΕΐΟΑс удаляли при пониженном давлении, и осадок сушили в высоком вакууме в течение 5 мин. Осадок растворяли в 8,4 мл ΌΜΡ, и добавляли хлористоводородную соль тубутирозина (Ти1-НС1, 678,7 мг, 2,61 ммоль, 1,3 экв.), а затем ΌΙΡΕΑ (2,28 мл, 13,07 ммоль, 6,5 экв.). Полученный прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционную смесь разбавляли ^ΜδΟ. и очищали на препаративной ВЭЖХ (колонка Х-Ьпйдс, 10 мМ NΗ₄ΟΑс, рН 6,3, от 25 до 100% ацетонитрил). Очищенные фракции объединяли, ацетонитрил удаляли при пониженном давлении, экстрагировали ΕΐΟΑс (3х),и осадок сушили в высоком вакууме в течение 1 ч с получением 513 мг желаемого продукта (31% объединенный выход из 6).

Способ В. Трипептид 7 (229 мг, 0,367 ммоль) растворяли в ΕΐΟΑс (безводный), добавляли 134,9 мг (0,733 ммоль, 2,0 экв.) пентафторфенола, а затем 970 мг (1,84 ммоль, 5,0 экв.) ЭСС на смоле. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Анализ ЬС-Μδ показал преобразование >96%. Реакционную смесь фильтровали, и концентрировали до сухого состояния,

- 20 025471 сушили в высоком вакууме в течение 5 мин. Осадок растворяли в 3,5 мл ΌΜΡ, добавляли ТШ-НС1 (123,9 мг, 0,477 ммоль, 1,3 экв.), а затем ΌΙΡΕΆ (0,42 мл, 2,38б ммоль, б,5 экв.). Полученный прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин. Реакционную смесь разбавляли ΌΜδΟ, очищали препаративной ВЭЖХ (колонка Х-Ъпйде, 10 мМ ΝΗ₄ΟΆο, от 25 до 100%, два прогона). Очищенные фракции объединяли, ацетонитрил удаляли при пониженном давлении, осадок экстрагировали ЕЮАс (2х) и объединенные экстракты ЕЮАс сушили над Να₂δΟ₄. ЕЮАс удаляли при пониженном давлении. Осадок сушили в высоком вакууме в течение 1 ч с получением 175 мг желаемого продукта (58% объединенный выход из б).

Крупномасштабный синтез дипептида 3

10,2 г дипептида 1 (25,б ммоль) растворяли в 130 мл дихлорметана, к полученному раствору добавляли имидазол (1,9 г, 2 8,1 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь немного нагревали для растворения всех твердых веществ, и повторно охлаждали до 0°С. Капельно добавляли ТЕ8С1 (4,5 мл, 2 б,8 ммоль) при 0°С, реакционную смесь перемешивали в атмосфере аргона, и нагревали до комнатной температуры в течение 2 ч. ТЬС (3:1 гексан/ЕЮАс) показала полное преобразование. Реакционную смесь фильтровали для удаления соли имидазола с НС1, экстрагировали деионизированной водой и водную фазу обратно промывали дихлорметаном, объединенную органическую фазу промывали рассолом, сушили над Να₂δΟ₄, фильтровали для удаления Να₂δΟ₄, концентрировали при пониженном давлении, совместно упаривали с толуолом и сушили в высоком вакууме в течение ночи с получением 12,2 г продукта 2.

Неочищенный продукт 2 вновь совместно упаривали с толуолом, и использовали без дальнейшей очистки. ТЕ§-защищенный дипептид растворяли в 80 мл ТНР (безводный, не содержащий ингибиторов) и охлаждали до -45°С и перемешивали в течение 15 мин, а затем капельно добавляли ΚΗΜΌδ (0,5 М в толуоле, 50 мл, 25,0 ммоль, 1,05 экв.). После завершения добавления ΚΗΜΌδ реакционную смесь перемешивали при -45°С в течение 15 мин и добавляли хлорметилбутират (3,б мл, 1,2 экв., 2 8,3 ммоль). Реакционная смесь меняла цвет с желтого на голубоватый. ТЬС (20% ЕЮАс/петролейный эфир) показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь гасили добавлением 20 мл МеОН, смесь нагревали до комнатной температуры, и концентрировали при пониженном давлении до маслянистого осадка. Осадок растворяли в петролейном эфире, и пропускали через короткую вставку из диоксида кремния для удаления калиевой соли. Вставку промывали смесью 13% ЕЮАс/петролейный эфир, и собранные элюаты объединяли, и концентрировали при пониженном давлении с получением 12,1 г продукта 3 (две стадии, выход 7б%).

Крупномасштабный синтез трипептида 4

Алкилированный дипептид 3 (7,б г, 12,4 ммоль), Ν-метилпипеколинат (МЕР) (7,0 г, 4 8,9 ммоль, 4 экв.) и пентафторфенол (10,0 г, 54,3 ммоль., 4,4 экв.) добавляли в колбу. К смеси добавляли Νметилпирролидон (ΝΜΡ, 152 мл). К смеси добавляли диизопропилкарбодиимид (Э1С, 8,43 мл, 54,4 ммоль, 4,4 экв.). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли Рй/С (10%, сухой, 3,0 г). Колбу встряхивали в атмосфере водорода (30-35 фунт/кв. дюйм (207-241 кПа)) в течение 5 часов. Реакционную смесь анализировали с помощью ВЭЖХ. Реакция завершилась. Смесь фильтровали через целит. Целит промывали 500 мл этилацетата. Растворы объединяли, и переносили в делительную воронку, и промывали раствором 1% №НСЮ₃,/10% №Ю1 (250 мл х 4). Органический слой выделяли, и упаривали на роторном испарителе при пониженном давлении. Неочищенный продукт растворяли в дихлорметане, и мочевину отфильтровывали. Неочищенный раствор продукта наносили на колонку Те1ейупе РеЙ18ер ЗШса Со1итп (330д) и очищали смесью ЕЮАс/петролейный эфир на системе флэшхроматографии СотЫР1а8Й. Фракции собирали, и органический растворитель удаляли выпариванием с получением 5,0 г трипептида (б1%). Данные ЯМР и масс-спектрометрии согласовывались с данными, измеренными для примера.

- 21 025471

Крупномасштабный синтез трипептидной кислоты 6

К 2 л 0,05 М фосфата (рН 7,4) при 30°С добавляли 3, 6 г эстеразы печени свиньи (17 единиц/мг). 3,0 г метилового сложного эфира 4 растворяли в 100 мл ΌΜδΘ. Первые 50 мл этого раствора добавляли со скоростью 1,1 мл/ч, и вторую половину добавляли со скоростью 1,2 мл/ч через шприцевой насос. После завершения добавления реакционной смеси позволяли перемешаться при 30°С в течение нескольких часов. ВЭЖХ экстракта реакционной смеси в ЕЮАс показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь дренировали из реактора 1-л частями и экстрагировали раствором 94% ЕЮАс-6% МеОН (об./об.) (3x1 л). Объединенные экстракты промывали рассолом, сушили над Να₂δΟ₄ и концентрировали при пониженном давлении. Было выделено 2,8 г продукта 6 (95%). Продукт оказался чистым в анализе ИРЬС, за исключением пентафторфенола из предшествующей реакции.

3,0 г (4,30 ммоль) трипептида 6 растворяли в 18 мл ТНР, и добавляли 0,70 мл (4,30 ммоль) 3ΗΡ·ΝΕΐ₃ и реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин. Анализ ЬС-Μδ (от 10 до 100% ацетонитрил, буфер рН 7) подтвердил полное удаление защитной группы ΤΕδ. ТНР удаляли при пониженном давлении. Осадок сушили в высоком вакууме в течение 5 мин. Неочищенный продукт растворяли в 18 мл сухого пиридина. Добавляли 6,11 мл (64,50 ммоль, 15 экв.) Ас₂О при 0°С. Полученный прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 5 ч. Анализ ЬС-Μδ (от 10% до 100% ацетонитрил, рН 7,0) показал преобразование >98%. Добавляли 117 мл смеси диоксан/Н₂О, и полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь концентрировали при пониженном давлении. Осадок совместно упаривали с толуолом (3х) и сушили в высоком вакууме в течение ночи. Неочищенный продукт 7 использовали непосредственно для следующей реакции. ΕΤ'Μδ (Εδ^ [М+Н]+ 625,2; спектральные данные ЯМР согласовывались со структурой 7.

Способ В. Неочищенный трипептид 7 (2,67 г, 4,3 ммоль) растворяли в 43 мл ИСМ (безводный), добавляли 1,59 г (8,6 ммоль, 2,0 экв.) пентафторфенола, а затем 9,33 г (21,5 ммоль, 5,0 экв.) ИСС на смоле. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 часов. Анализ ЬС-Μδ показал преобразование >96%. Реакционную смесь фильтровали, и концентрировали до сухого состояния, сушили в высоком вакууме в течение 5 минут. Осадок растворяли в 16,5 мл ΌΜΡ, добавляли ТШ-НС1 (1,45 г, 5,59 ммоль, 1,3 экв.), а затем ИФЕА (4,88 мл, 27,95 ммоль, 6,5 экв.). Полученный прозрачный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 10 минут. Реакционную смесь очищали с помощью препаративной ВЭЖХ (колонка Х-ЬгЛде, 50 мМ NΗ₄ΗСΟ₃, от 25% до 100%, шесть прогонов). Очищенные фракции объединяли, ацетонитрил удаляли при пониженном давлении, осадок экстрагировали ЕЮАс (2х) и объединенные экстракты ЕЮАс сушили над Να₂δΟ.₄. ЕЮАс удаляли при пониженном давлении. Осадок сушили в высоком вакууме в течение 1 ч с получением 1,35 г желаемого продукта (38% объединенный выход из 4). Спектральные данные ЯМР согласовывались с тубулизином В.

Claims (30)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ получения соединения формулы О или его фармацевтически приемлемой соли, где К₂ выбран С₁-С₁₂ алкила и С₃-С_!2 циклоалкила, где С₁-С₁₂ алкил и С₃-С_!2 циклоалкил необяза- 22 025471 тельно замещены путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С1-С12 алкила, С1-С12 галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

   каждый из К₅ и К₆ независимо выбран из С₁-С₁₂ алкила и С₃-С_!2 циклоалкила, где С₁-С₁₂ алкил и С₃С₁₂ циклоалкил необязательно замещены путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С1-С12 алкила, С1-С12 галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

   К₇ представляет собой С₁-С₁₂ алкил, необязательно замещенный путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата; и η равно 1, 2, 3 или 4;

   включающий обработку соединения формулы Ό ферментом гидролазой с получением соединения формулы Р с последующей обработкой силилового эфира формулы Р неосновным фторидным реагентом с получением соединения формулы О, где К₈ представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил.
2. 2. Способ по п.1, дополнительно включающий получение соединения формулы Ό, где получение соединения формулы Ό включает получение соединения формулы Е1, где Х₁ представляет собой уходящую группу, из соединения формулы Е и обработку соединения формулы С в восстанавливающих условиях в присутствии соединения формулы Е1 с получением соединения формулы Ό.
3. 3. Способ по п.2, дополнительно включающий получение соединения формулы С обработкой соединения формулы В основанием и соединением формулы С1СН₂ОС(О)К₂ в апротонном растворителе при температуре от приблизительно -78°С до приблизительно 0°С с получением соединения формулы С или его фармацевтически приемлемой соли;

   где молярное соотношение соединения формулы С1СН₂ОС(О)К₂ и соединения формулы В составляет от приблизительно 1 до приблизительно 1,5.
4. 4. Способ по п.3, дополнительно включающий получение соединения формулы В обработкой соединения формулы А

   - 23 025471 триэтилсилилхлоридом и имидазолом в апротонном растворителе.
5. 5. Способ получения соединения формулы Н или его фармацевтически приемлемой соли;

   включающий обработку соединения формулы О, полученного способом по любому из пп.1-4, ацилирующим агентом формулы Е_дС(О)Х₂, где Х₂ представляет собой уходящую группу, с получением соединения формулы Н, где Ед представляет собой С₁-С₁₂ алкил или С₃-С₁₂ циклоалкил, где С₁-С₁₂ алкил и С₃-С₁₂ циклоалкил необязательно замещены путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата, Е₂, Е₅, Е₆, Е- и η имеют значения, указанные в п.1.
6. 6. Способ получения соединения формулы Т или его фармацевтически приемлемой соли;

   включающий получение активного сложноэфирного соединения из соединения формулы Н, полученного способом по п.5, и его последующее взаимодействие с соединением формулы I νη₂ Пз

   I с получением соединения формулы Т, где Аг₁ представляет собой фенил, необязательно замещенный путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

   Е1 представляет собой водород, С1-С12 алкил или группу, образующую пролекарственное вещество, выбранную из 1-инданила, Ν-оксисукцинимида, ацетоксиметила, пивалоилоксиметила, β-ацетоксиэтила, β -пивалоилоксиэтила, 1 -(циклогексилкарбонилокси)проп-1 -ила, (1 -аминоэтил)карбонилоксиметила, этоксикарбонилоксиметила, α-этоксикарбонилоксиэтила, β-этоксикарбонилоксиэтила, диметиламинометила, диметиламиноэтила, диэтиламинометила, диэтиламиноэтила, 2-(изобутоксикарбонил)пент-2-енила, 2-(этоксикарбонил)бут-2-енила, фталидила и диметоксифталидила; и

   Е₃ представляет собой С₁-С₁₂ алкил, необязательно замещенный путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата; а

   Е₂, Ед, Е₅, Е₆, Е- и η, указанные в формуле Т, имеют значения, указанные в п.5.
7. 7. Способ по п.6, где К! представляет собой водород, бензил или С₁-С₄ алкил.
8. 8. Способ по п.6, где К! представляет собой водород.
9. 9. Способ по любому из пп.1-6, где К₂ представляет собой С₁-С₈ алкил или С₃-С₈ циклоалкил.
10. 10. Способ по любому из пп.1-6, где К₂ представляет собой н-пропил.
11. 11. Способ по п.6, где К₃ представляет собой С₁-С₄ алкил.
12. 12. Способ по п.6, где К₃ представляет собой метил.
13. 13. Способ по п.6, где Аг₁ представляет собой фенил или гидроксифенил.
14. 14. Способ по п.6, где Аг₁ представляет собой 4-гидроксифенил.
15. 15. Способ по п.5, где Ед представляет собой С₁-С₈ алкил или С₃-С₈ циклоалкил.
16. 16. Способ по п.5, где Ед представляет собой метил.
17. 17. Способ по любому из пп.1-6, где К₅ представляет собой разветвленный С₃-С₆ алкил или С₃-С₈

    - 24 025471 циклоалкил.
18. 18. Способ по любому из пп.1-6, где К₅ представляет собой изопропил.
19. 19. Способ по любому из пп.1-6, где К₆ представляет собой разветвленный С₃-С₆ алкил или С₃-С₈ циклоалкил.
20. 20. Способ по любому из пп.1-6, где Кб представляет собой втор-бутил.
21. 21. Способ по любому из пп.1-6, где К₇ представляет собой С₁-С₆ алкил.
22. 22. Способ по любому из пп.1-6, где К₇ представляет собой метил.
23. 23. Способ по п.1, дополнительно включающий получение соединения формулы Н обработкой соединения формулы О ацилирующим агентом формулы К₄С(О)Х₂, где Х₂ представляет собой уходящую группу; получение активного сложноэфирного промежуточного соединения из соединения формулы Н и его реакцию с соединением с получением соединения формулы Т где К₄ представляет собой С₁-С₁₂ алкил или С₃-С1₂ циклоалкил, где С₁-С₁₂ алкил и С₃-С1₂ циклоалкил необязательно замещены путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С1-С12 алкила, С1-С12 галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

    Аг₁ представляет собой фенил, необязательно замещенный путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

    К! представляет собой водород, С₁-С₁₂ алкил или группу, образующую пролекарственное вещество, выбранную из 1-инданила, Ν-оксисукцинимида, ацетоксиметила, пивалоилоксиметила, β-ацетоксиэтила, β -пивалоилоксиэтила, 1 -(циклогексилкарбонилокси)проп-1 -ила, (1 -аминоэтил)карбонилоксиметила, этоксикарбонилоксиметила, α-этоксикарбонилоксиэтила, β-этоксикарбонилоксиэтила, диметиламинометила, диметиламиноэтила, диэтиламинометила, диэтиламиноэтила, 2-(изобутоксикарбонил)пент-2-енила, 2-(этоксикарбонил)бут-2-енила, фталидила и диметоксифталидила;

    К₃ представляет собой С₁-С₁₂ алкил, необязательно замещенный путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата.
24. 24. Способ по п.1, дополнительно включающий обработку соединения формулы А триэтилсилилхлоридом и имидазолом в апротонном растворителе с получением соединения формулы В с последующей обработкой соединения формулы В основанием и соединением формулы С1СН₂ОС(О)К₂ в апротонном растворителе при температуре от приблизительно -78°С до приблизительно 0°С с получением соединения формулы С

    - 25 025471 где молярное соотношение соединения формулы С1СН₂ОС(О)К₂ и соединения формулы В составляет от приблизительно 1 до приблизительно 1,5;

    с последующей обработкой соединения формулы С в восстанавливающих условиях в присутствии соединения формулы Е1 где Х₁ представляет собой уходящую группу, с получением соединения формулы Ό, где соединение формулы Е1 получают из соединения формулы Е с последующей обработкой соединения формулы Ό ферментом гидролазой с получением соединения формулы Р;

    с последующей обработкой силилового эфира соединения Р неосновным фторидным реагентом с получением соединения формулы О;

    с последующей обработкой соединения формулы О ацилирующим агентом формулы Р.-|С(О)Х₂. где Х₂ представляет собой уходящую группу, с получением соединения формулы Н с последующим получением активного сложноэфирного промежуточного соединения из соединения формулы Н и реакцией активного сложноэфирного промежуточного соединения с соединением формулы I •МНг Из с получением соединения формулы Т где Кд представляет собой С₁-С₁₂ алкил или С₃-С₁₂ циклоалкил, где С₁-С₁₂ алкил и С₃-С₁₂ циклоалкил необязательно замещены путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

    Аг₁ представляет собой фенил, необязательно замещенный путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

    Κι представляет собой водород, С₁-С₁₂ алкил или группу, образующую пролекарственное вещество, выбранную из 1-инданила, Ν-оксисукцинимида, ацетоксиметила, пивалоилоксиметила, β-ацетоксиэтила, β -пивалоилоксиэтила, 1 -(циклогексилкарбонилокси)проп-1 -ила, (1 -аминоэтил)карбонилоксиметила, этоксикарбонилоксиметила, α-этоксикарбонилоксиэтила, β-этоксикарбонилоксиэтила, диметиламинометила, диметиламиноэтила, диэтиламинометила, диэтиламиноэтила, 2-(изобутоксикарбонил)пент-2-енила, 2-(этоксикарбонил)бут-2-енила, фталидила и диметоксифталидила;

    К₃ представляет собой С₁-С₁₂ алкил, необязательно замещенный путем независимой замены одного

    - 26 025471 или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата.
25. 25. Способ по п.1, дополнительно включающий получение соединения формулы Ό, где получение соединения формулы Ό включает получение соединения формулы Е1, где Х₁ представляет собой уходящую группу, из соединения формулы Е

    Аг⁰— Аг у

    Р₇ о ¥

    н₇ о

    Е Е1 путем взаимодействия соединения формулы Е с пентафторфенолом в присутствии диизопропилкарбодиимида в течение приблизительно 1 ч; и обработку соединения формулы С о п₅ отез сАч с в присутствии соединения формулы Е1 с сухим 10% Ρά/С с получением соединения формулы Ό.
26. 26. Способ по п.23 или 24, где Аг₁ представляет собой 4-гидроксифенил.
27. 27. Способ получения соединения формулы Т или его фармацевтически приемлемой соли; включающий обработку соединения формулы А триэтилсилилхлоридом и имидазолом в апротонном растворителе с получением соединения формулы В где К₈ представляет собой С₁-С₆ неразветвленный алкил;

    обработку соединения формулы В основанием и соединением формулы С1СН₂ОС(О)К₂ в апротонном растворителе при температуре от приблизительно -78°С до приблизительно 0°С с получением соединения формулы С где молярное соотношение соединения формулы С1СН2ОС(О)К2 и соединения формулы В составляет от приблизительно 1 до приблизительно 1,5;

    получение соединения формулы Е1 из соединения формулы Е, где Х₁ представляет собой уходящую группу н₇ о

    Е

    - Аг ¥

    Р₇ о

    Е1 обработку соединения формулы С в восстанавливающих условиях в присутствии соединения формулы Е1 с получением соединения форму лы Ό;

    получение соединения формулы Р из соединения формулы Ό и получение соединения формулы О из соединения формулы Р с использованием способа по п.1;

    обработку соединения формулы О ацилирующим агентом формулы К₄С’(О)Х₂. где Х₂ представляет

    - 27 025471 собой уходящую группу, с получением соединения формулы Н где Кд представляет собой С₁-С₁₂ алкил или С3-С12 циклоалкил, где С₁-С₁₂ алкил и С3-С12 циклоалкил необязательно замещены путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С-С₁₂ алкила, Ц-С^ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

    получение активного сложноэфирного промежуточного соединения из соединения формулы Н; и взаимодействие активного сложноэфирного промежуточного соединения с соединением формулы I с получением соединения формулы Т или его фармацевтически приемлемой соли, где Άτι представляет собой фенил, необязательно замещенный путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, Ц-С^ алкила, Ц-С^ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

    Κι представляет собой водород, Ц-С^ алкил или группу, образующую пролекарственное вещество, выбранную из 1-инданила, Ν-оксисукцинимида, ацетоксиметила, пивалоилоксиметила, β-ацетоксиэтила, β -пивалоилоксиэтила, 1 -(циклогексилкарбонилокси)проп-1 -ила, (1 -аминоэтил)карбонилоксиметила, этоксикарбонилоксиметила, α-этоксикарбонилоксиэтила, β-этоксикарбонилоксиэтила, диметиламинометила, диметиламиноэтила, диэтиламинометила, диэтиламиноэтила, 2-(изобутоксикарбонил)пент-2-енила, 2-(этоксикарбонил)бут-2-енила, фталидила и диметоксифталидила;

    К₃ представляет собой С₁-С₁₂ алкил, необязательно замещенный путем независимой замены одного или нескольких атомов водорода, присоединенных к нему, группой, выбранной из амино, гидроксила, галогена, тиола, С₁-С₁₂ алкила, С₁-С₁₂ галогеналкила, фенила, нитро, сульфоната и карбоксилата;

    К₂, К₅, Кб, К₇ и η имеют значения, указанные в п.1.
28. 28. Способ по п.27, где К! представляет собой водород, К₂ представляет собой С₁-С₈ алкил или С₃С₈ циклоалкил, К₃ представляет собой С₁-С₄ алкил, К4 представляет собой С₁-С₈ алкил или С₃-С₈ циклоалкил, К₅ представляет собой разветвленный С₃-С₆ алкил или С₃-С₈ циклоалкил, К₆ представляет собой разветвленный С₃-С₆ алкил или С₃-С₈ циклоалкил, К₇ представляет собой С₁-С₆ алкил и Аг₁ представляет собой фенил или гидроксифенил.
29. 29. Способ по п.27, где Κι представляет собой водород, К₂ представляет собой С₁-С₈ алкил или С₃С₈ циклоалкил, К₃ представляет собой С₁-С₄ алкил, К₄ представляет собой С₁-С₈ алкил или С₃-С₈ циклоалкил, К₅ представляет собой разветвленный С₃-С₆ алкил или С₃-С₈ циклоалкил, К₆ представляет собой разветвленный С₃-С₆ алкил или С₃-С₈ циклоалкил, К₇ представляет собой С₁-С₆ алкил.
30. 30. Способ по п.27, где соединение формулы Т представляет формулу