DK166805B1 - Threo-isomeren af 3'-azido-3'-deoxythymidin til anvendelse ved behandling af eller profylakse for humane retrovirusinfektioner, anvendelse af forbindelsen til fremstilling af et laegemiddel med naevnte indikation og farmaceutisk praeparat indeholdende forbindelsen - Google Patents

Description

DK 166805 B1

Opfindelsen angår threo-isomeren af 3'-azido-3'-deoxythymidin til anvendelse ved behandling af eller profylakse for humane retrovirusinfektioner, anvendelse af forbindelsen til fremstilling af et lægemiddel med 5 nævnte indikation og farmaceutisk præparat indeholdende forbindelsen.

På det forholdsvis nye område med antiviral kemoterapi findes kun nogle få lægemidler, der effektivt bekæmper virus’en per se, som følge af vanskeligheden 10 ved at angribe virus'en, samtidigt med at værtcellerne lades ubeskadigede. Det er nyligt erkendt, at visse stadier af virus-livscyklus'en, hvilke stadier varierer fra art til art, specificeres af virus'en selv. Disse stadier kan vise sig modtagelige for angreb, hvor de 15 afviger tilstrækkeligt fra enhver tilsvarende værtcellefunktion. Som følge af stor lighed mellem virale funktioner og værtfunktioner har effektive behandlinger imidlertid vist sig meget vanskelige af identificere.

En gruppe af vira, der nyligt har fået særlig 20 betydning, er retrovira. Retrovira danner en subgruppe af RNA-vira, der for at replikere først må foretage "omvendt transkription" af RNA'et fra deres genom til DNA ("transkription" beskriver almindeligvis syntesen af KNA ud fra DNA). Når først det virale genom foreligger 25 i form af DNA, inkorporeres det i værtcelle-genomet, hvorved det får mulighed for i fuld udstrækning at drage nytte af værtcellens transkription/translations-maskineri med henblik på replikation. Når først det virale DNA er inkorporeret, er det så at sige 30 uskelneligt fra vært-DNA'et, og i denne tilstand kan virus'en bestå lige så længe som cellen lever. Da virus'en i denne form er så at sige uimodtagelig for angreb, må enhver behandling rettes mod et andet stadium af virus-livcyclus1 en og må, om nødvendigt, fortsættes, 35 indtil alle virus-inficerede aeller er døde.

HTLV-I og HTLV-II er begge retrovirus og vides at være agenser, der forårsager leukæmi hos mennesker.

HTLV-I-infektioner er navnlig vidt udbredte og er ansvarlige for mange dødsfald verden over hvert år.

2 DK 166805 B1

En retrovirus-art er også isoleret reproducerbart fra patienter med AIDS. Virus'en er karakteriseret og har fået det internationalt anerkendte navn "Human Immundefekt Virus" (HIV). Denne virus har vist sig fortrins- 4 5 vis at inficere og ødelægge T-celler, der bærer OKT -overflademarkøren, og er nu generelt accepteret som det ætiologiske agens for AIDS. Patienten mister progressivt dette sæt af T-celler, hvilket forstyrrer den totale balance i immunsystemet, 10 nedsætter patientens evne til at bekæmpe andre infektioner og prædisponerer patienten for opportunistiske infektioner, der hyppigt viser sig dødelige. Den sædvanlige dødsårsag hos AIDS-ofre er således opportunistiske infektioner, såsom pneumonia eller viralt inducerede 15 cancerformer, og ikke direkte HIV-infektionen.

Senere er HIV også vundet fra andre vævtyper, 4 inklusive B-celler, der eksprimerer T -markøren, macrophager og ikke-blodforbundne væv i centralnervesystemet. Denne infektion af netralnervesystemet er 20 fundet hos patienter, der viser klassiske AIDS-symptomer, og er forbundet med progressiv demyelinisation, der fører til hentæring og sådanne symptomer som encephalo-pati, progressiv dysarthri, ataxia og disorientering. Yderligere tilstande forbundet med HIV-infektion er 25 den asymptomatiske smittebæretilstand, progressiv generaliseret lymphadenopati (PGL) og AIDS-relateret kompleks (ARC).

Der findes rapporter, der beskriver afprøvning af forbindelser mod diverse retrovira, f.eks. Friend 30 leukæmivirus (FLV), en retrovirus hos mus. F.eks. fandt Krieg et al. (Exp. Cell Res., 116 (1978) 21-29), at 3'-azido-3'-desoxythymidin ved in vitro eksperimenter påvirkede frigivelsen af C-type partikler og forøgede dannelsen af A-type partikler af et FLV kompleks, og 35 Ostertag et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. (1974) 71, 4980-85) overfortolkede forsøg med det ovenfor nævnte FLV kompleks som antiviral aktivitet og foreslog på baggrund af dette og mangel på cellulær giftighed, at 3 DK 166805 B1 31-azido-31-desoxythymidin "på fordelagtig vis kunne erstatte bromdesoxyuridin ved medicinsk behandling af sygdomme forårsaget af DNA vira". Imidlertid fastslog De Clerq et al. (Biochem. Pharm. (1980) 29, 1849-1851) seks 5 år senere, at 3'-azido-3'-desoxythymidin ikke udviste nogen mærkbar aktivitet over for nogensomhelst vira ved deres afprøvninger, omfattende vaccinia, HSV I og varicella zoster virus (VZV).

Matsuda et al., J. Org. Chem 1980, 45, 3274-3278, 10 beskriver fremstillingen af den threo-isomere af 3'-azido-3'-deoxythymidin, men kun som et mellemprodukt ved fremstillingen af visse analoge. Nævnte isomer er ikke tillagt nogen medicinsk anvendelighed.

Det har nu vist sig, at den threoisomere af 15 3'-azido-3'-deoxythymidin har en overraskende høj aktivitet over for en række humane retrovirusinfektioner, der gør forbindelsen anvendelig ved medicinsk og veterinær terapi.

I overensstemmelse hermed angår opfindelsen threo-20 isomeren af 3'-azido-3'-deoxythymidin med formlen (I): 0 /Vy CH.

HN 3 25 (J*\Nx (I) “»i

.. \fiJ

hvori 3'-azidogruppen har threo-konfiguration, eller et farmaceutisk acceptabelt salt eller en farmaceutisk acceptabel ester deraf til anvendelse til behandling af eller profylakse for humane retrovirusinfektioner.

35 In vitro-testning har vist, at de omhandlede forbindelser har særlig god aktivitet over for de vira, der er retrovira, især HTLV-I, HTLV-II og HIV, og også de DNA-vira, der ligesom retrovira er inkorporeret i 4 DK 166805 B1 værtgenomet under deres livscyclus/ dvs. retrovirus-lig-nende DNA-vira. Der er således yderligere tilvejebragt den omhandlede forbindelse til anvendelse ved behandling af eller profylakse for HTLV-I-, HTLV-II- eller HIV-5 infektioner samt ved behandling af eller profylakse for AIDS.

Yderligere angår opfindelsen anvendelse af en forbindelse som ovenfor defineret til fremstilling af et lægemiddel til behandling af eller profylakse for humane 10 retrovirusinfektioner, især HTLV-I, HTLV-II- og HIV-in-fektion samt til behandling af eller profylakse for AIDS.

Kliniske fase I-forsøg har vist, at threo-isomeren af 3 ‘ -azido-3' -deoxythymidin er i stand til at passere blod/hjeme-barrieren i klinisk effektive mængder. Denne egenskab 15 er både usædvanlig og værdifuld for behandling og forebyggelse af CNS-infektioner forårsaget af for eksempel retrovira.

De farmaceutisk acceptable salte eller estere er ved indgift til recipienten i stand til (direkte eller 20 indirekte) at tilvejebringe den omhandlede forbindelse eller en anti-retroviralt aktiv metabolit eller rest deraf.

Foretrukne estre af forbindelsen med formlen (I) omfatter carboxylsyreestre, hvori ikke-carbonyIdelen 25 af estergruppen er valgt blandt ligekædet eller forgrenet alkyl, alkoxyalkyl (f.eks. methoxymethyl), aralkyl (f.eks. benzyl), aryloxyalkyl (f.eks. phenoxy-methyl), aryl (f.eks. phenyl eventuelt substitueret med halogen, (C^-C^)alkyl eller (C^-C^)alkoxy), 30 sulfonatestre, såsom alkyl- eller aralkylsulfony1 (f.eks. methansulfonyl), og mono-, di- eller tri-phosphatestre.

Enhver henvisning til enhver af ovennævnte forbindelser omfatter også en henvisning til et 35 farmaceutisk acceptabelt salt deraf.

Hvad angår de ovenfor beskrevne estre, inde- 5 DK 166805 B1 holder enhver tilstedeværende alkyldel, med mindre andet er angivet, fortrinsvis 1-18 C-atomer, navnlig 1-4 C-atomer. Enhver i sådanne estre tilstedeværende aryldel indeholder med fordel' en phenylgruppe.

5 Eksempler på farmaceutisk acceptable salte af forbindelserne med formlen (I) omfatter basesalte, f.eks. afledt af en passende base, såsom alkalimetalsalte (f.eks. af natrium), jordalkalimetalsalte (f.eks. af magnesium), ammonium 10 og NX^ (hvor X er (C^C^j) alkyl) .

Opfindelsen tilvejebringer således ydeligere de hidtil ukendte farmaceutisk acceptable derivater af forbindelserne med formlen (I).

Specifikke eksempler på farmaceutisk acceptable 15 derivater af forbindelserne med formlen (I), der kan anvendes ifølge den foreliggende opfindelse, omfatter mononatriumsaltet og de følgende 5'-estre: monophosphat, dinatriummonophosphat, diphosphat, triphosphat, acetat, 3-methyl-butyrat, octanoat, palmitat, 3-chlor-benzoat, 20 benzoat, 4-methyl-benzoat, hydrosuceinat, pivalat og mesylat.

De omhandlede forbindelser, der også heri er betegnet som den aktive bestanddel, kan anvendes til terapi ad en hvilken som helst egnet vej, omfattende oral, rectal, nasal, topisk (inklusive buccal og 25 sublingual), vaginal og parenteral (inklusive subcutan, intramuskulær, intravenøs og intradermal) vej. Det vil forstås, at den foretrukne vej vil variere med recipientens tilstand og alder, infektionens art og den valgte aktive bestanddel.

30 I almindelighed vil en egnet dosis ligge i området fra 3,0 til 120 mg pr. kg legemsvægt hos recipienten pr. dag, fortrinsvis i området fra 6 til 90 mg pr. kg pr. dag og navnlig i området 15 til 60 mg pr. kg legemsvægt pr. dag. Den ønskede dosis foreligger 35 fortrinsvis som to, tre, fire, fem, seks eller flere subdoser, der anvendes med passende mellemrum i dagens løb. Disse subdoser kan anvendes i enhedsdosisformer, for eksempel indeholdende 10 til 1500 mg, fortrinsvis 6 DK 166805 B1 20 til 1000 mg og navnlig 50 til 700 mg aktiv bestanddel pr. enhedsdosisform.

Porsøg med omhandlede . forbindelse lader formode, at der til opnåelse af spids-plasmakoncentrationer 5 skal indgives en dosis af den aktive forbindelse på fra ca. 1 til ca. 75 μΜ, fortrinsvis ca. 2 til 50 μΜ, navnlig ca. 3 til ca. 30 μΜ. Dette kan for eksempel opnås ved intravenøs injektion af en 0,1 til 5% opløsning af den aktive bestanddel, eventuelt i saltopløsning, eller ind-10 givet oralt som en bolus indeholdende ca. 1 til ca.

100 mg/kg af den aktive bestanddel. Ønskelige blodniveauer kan opretholdes ved kontinuert infusion til tilvejebringelse af ca. 0,01 til ca. 5,0 mg/kg/time eller ved intermitterende infusioner indeholdende 15 ca. 0,4 til ca. 15 mg/kg af den aktive bestanddel.

Selvom det er muligt at anvende den aktive bestanddel alene, foretrækkes det at anvende den som et farmaceutisk præparat. Præparaterne ifølge opfin delsen indeholder mindst én aktiv bestanddel, som oven-20 for defineret, sammen med én eller flere acceptable bærere og eventuelt andre terapeutiske midler. Hver bærer skal være "acceptabel" i den forstand, at den skal være kompatibel med de andre bestanddele i præparatet og uskadelig for patienten. . Præparater omfatter sådan-25 ne, der er egnede for oral, rectal, nasal, topisk (inklusive buccal og sublingual), vaginal eller parenteral (inklusive subcutan, intramuskulær, intravenøs og intradermal ) anvendelse. Præparaterne kan hensigtsmæssigt foreligge i enhedsdosisform og kan fremstilles 30 ved enhver inden for farmacien kendt metode. Sådanne metoder omfatter det trin, at den aktive bestanddel bringes sammen med den bærer, der udgør én eller flere hjælpebestanddele. I almindelighed fremstilles præparaterne ved ensartet og grundigt at sammenbringe den 35 aktive bestanddel med flydende bærere eller findelte faste bærere eller begge dele og derefter, om nødvendigt, forme produktet.

DK 166805 B1 . 7

Præparater ifølge opfindelsen, der er egnede for oral anvendelse, kan foreligge som separate enheder, såsom kapsler, oblatkapsler eller tabletter, hver indeholdende en forud fastsat mængde af den aktive bestand-5 del, eller som et pulver eller granuler, som en opløsning eller en suspension i en vandig eller ikke-vandig væske, eller som en flydende olie-i-vand-emulsion eller vand-i-olie-emulsion. Den aktive bestanddel kan også foreligge som en bolus, latværge eller pasta.

10 En tablet kan fremstilles ved kompression eller formning, eventuelt med én eller flere hjælpebestanddele. Komprimerede tabletter kan fremstilles ved i en egnet maskine at komprimere den aktive bestanddel i en fritstrømmende form, såsom et pulver eller granuler, 15 eventuelt blandet med et bindemiddel (f.eks. povidon, gelatine, hydroxypropylmethylcellulose), smøremiddel, indifferent fortyndingsmiddel, præserveringsmiddel, disintegrationsmiddel (f.eks. natriumstivelseglycollat, tværbundet povidon, tværbundet natriumcarboxymethylcel-20 lulose)., overfladeaktivt middel eller dispergeringsmid-del. Formede tabletter kan laves ved i en passende maskine at forme en blanding af den pulverformige forbindelse befugtet med et indifferent flydende fortyndingsmiddel. Tabletterne kan eventuelt belægges eller forsy-25 nes med kærv og kan sammensættes således, at der opnås langsom eller styret frigøring af den indeholdte aktive bestanddel, idet der hertil kan anvendes for eksempel hydroxypropylmethylcellulose i varierende mængder til opnåelse af den ønskede frigøringsprofil.

30 Præparater egnede til topisk anvendelse i mun den omfatter bolcher indeholdende den aktive bestanddel i en smagsstofholdig basis, sædvanligvis sucrose og acacia eller tragant, ' pastiller indeholdende den aktive bestanddel i en indifferent basis, såsom gelatine og 35 glycerol, eller sucrose og acacia, og mundskyllevæsker indeholdende den aktive bestanddel i en egnet flydende bærer.

8 DK 166805 B1

Præparater egnet til rectal anvendelse kan foreligge som en stikpille ’ med en egnet basis indeholdende for eksempel cacaosmør eller et salicylat.

Præparater egnede til vaginal anvendelse kan 5 foreligge som vagitorier, tampon'en, cremer, geler, pastaer, skumprodukter eller sprayprodukter, der foruden den aktive bestanddel indeholder sådanne bærere, der er kendt som egnede til formålet.

Præparater egnede til parenteral anvendelse 10 omfatter vandige og ikke-vandige isotoniske sterile injektionsopløsninger, der kan indeholde antioxidanter, puffere, bakteriostater og opløste stoffer, der gør kompositionen isotonisk med recipientens blod, og vandige og ikke-vandige sterile suspensioner, der kan indeholde 15 suspenderingsmidler og fortykningsmidler. Præparaterne kan foreligge i forseglede enhedsdosis- eller multi-dosis-beholdere, for eksempel ampuller og medicinflasker, og kan lagres i frysetørret (lyofiliseret) tilstand, der kun kræver tilsætning af en flydende steril bærer, 20 for eksempel injektionsvand, umiddelbart før brug. Injektionsopløsninger og suspensioner fremstillet på bestilling kan fremstilles ud fra sterile pulvere, granuler og tabletter af den ovenfor beskrevne art.

Foretrukne enhedsdosis præparater er dem, der 25 indeholder en daglig dosis eller enhed, daglig subdosis, som ovenfor omtalt, eller en passende fraktion deraf, af en aktiv bestanddel.

De anvendte bestanddele kan også benyttes terapeutisk i kombination med andre medikamenter, såsom 9— [ C2— 3 0 hydroxy-1- (hydroxymethyl) ethoxy ] methyl ] guanin, 9-(2 -hy-droxyethoxymethyDguanin (acyclovir), 2-amino-9-(2-hy-droxyethoxymethyUpurin, interferon, f.eks. a-interferon, interleukin II og phosphonoformiat, eller i kombination med anden immun-modulerende terapi omfattende benmarv-35 eller lymphocyt-transplanter eller medikamenter, såsom levamisol eller thymosin, der vil forøge lymfocyttal og/eller -funktion, som passende.

9 DK 166805 B1

Det skal forstås, at de omhandlede præparater foruden de ovenfor specielt omtalte bestanddele kan omfatte andre konventionelle midler for den omhandlede kompositionstype, idet for eksempel kompositioner til 5 oral anvendelse kan indeholde sådanne yderligere midler som sødestoffer, fortykningsmidler og smagsstoffer.

Forbindelserne med fomlen (I) og deres farmaceutisk acceptable derivater kan fremstilles på konventionel måde, for eksempel som beskrevet i følgende publika-10 tioner, eller ved dermed analoge fremgangsmåder: J.R.

Horwitz et al·, J. Org. Chem. 29_, (juli 1964) 2076-2078; M. Imazawa et al., J. Org. Chem. '43 (15). (1978). 3044-3048; K.A. Watanabe et al., J. Org. Chem., £5, 3274 (1980); R.P. Glinski et al., J. Chem. Soc. Chem. Commun., 15 915 (1970), og A. Matsuda et al., J. Org. Chem. 45, 3274 (1980), såvel som ved de i eksemplerne beskrevne fremgangsmåder .

Således kan den omhandlede forbindelse fremstilles ved en fremgangsmåde, hvorved 20 (A) en forbindelse med formlen (IV): o HK CH3 25 HO _ ' (IV) Y_/ 30 (hvor M er en precursorgruppe for 3'-azido-gruppen) eller et derivat (f.eks. en ester eller et salt) deraf, omsættes med et middel eller under betingelser, der tjener til at omdanne nævnte precursorgruppe til den ønskede azidogruppe, eller 35 (B) en forbindelse med den almene formel (V): 10 DK 166805 B1 HN^YCH3 0^\N/- 5 E - O <V) 10 (hvor R er en precursorgruppe for hydroxygruppen, eller for en farmaceutisk acceptabel derivatgruppe deraf) omsættes med et middel eller under betingelser, der tjener til at omdanne nævnte precursorgruppe til den tilsvarende ønskede gruppe, eller 15 (c) en forbindelse med formlen (VI): 0 ΗΝ'^γ CH3 20 λ o h (vi) eller en funktionel ækvivalent deraf, omsættes med en 25 forbindelse, der tjener til at indføre den ønskede ribo-furanosylring ved 1-stillingen af forbindelsen med formlen (IV), eller (D) en forbindelse med den almene formel (VII): ” . ^Sr"· (hvor R^ er hydroxy eller R som ovenfor defineret) , omsættes med et middel eller under betingelser, der tjener DK 166805 B1 1 1 til at omdanne nævnte forbindelse til en forbindelse ifølge opfindelsen, og at der derefter, eller samtidigt dermed, gennemføres én eller flere af følgende bireaktioner: 5 (i) når der er dannet en forbindelse med formlen (I), om dannelse af denne til et farmaceutisk acceptabelt salt eller ester deraf, (ii) når der er dannet et farmaceutisk acceptabelt salt el-ller ester af en forbindelse med formlen (li, omdannelse 10 af nævnte derivat til forbindelsen med formlen (I) eller et andet salt eller ester deraf.

Ved den ovenfor beskrevne fremgangsmåde vil precursor-forbindelserne med formlerne (IV) og (V) såvel som de ovennævnte midler og betingel-^5 ser blive valgt blandt dem, der er kendt fra den syntetiske nucleosid-kemi. Eksempler på sådanne omdannelsesprocesser er beskrevet i det følgende til orientering, og det forstås, at de kan modificeres på konventionel måde alt efter den ønskede forbindelse med formlen (I).

20 Navnlig kan, hvor der er beskrevet en omdannelse, som normalt ville resultere i uønsket reaktion af labile grupper, sådanne grupper beskyttes på konventionel måde og beskyttelsesgrupperne igen fjernes efter endt omdannelse. Således kan i fremgangsmåde (A) gruppen M i for-25 bindeisen med formlen (IV) for eksempel repræsentere et halogen (såsom chlor), hydroxy eller organosulfonyloxy, f.eks. trifluormethylsulfonyloxy, methansulfonyloxy eller p-toluensulfonyloxy.

Således kan en forbindelse med formlen (IV), hvor 30 gruppen M er en hydroxygruppe i erythro-konfiguration (hvor 5'-hydroxygruppen med fordel er beskyttet, f.eks. med en tri tylgruppe) , behandles for eksempel med triphenylphosphin, carbontetrabromid og lithiumazid. Alternativt kan M være en eliminerbar organosulfonyloxygruppe i erythro-35 konfiguration, der kan omdannes til en azidogruppe i threo-konfiguration ved behandling for eksempel med lithium- eller natriumazid, idet 5'-hydroxygruppen er beskyttet på tilsvarende måde som ovenfor beskrevet.

12 DK 166805 B1

Fjernelse af 5'-trityl-beskyttelsesgruppen kan derefter gennemføres, f.eks. ved behandling under milde sure betingelser eller zinkbromid.

Hvad angår fremgangsmåde (B), kan R være en be-5 skyttet hydroxygruppe, f.eks. en estergruppe af den type, der ovenfor er omtalt med relation til formlen (I), navnlig acetoxy, eller en ethergruppe, såsom en trialkylsilyloxygruppe, f.eks. t-butyldimethylsilyloxy, eller en aralkoxygruppe, f.eks. triphenylmethoxy.

10 Sådanne grupper kan omdannes for eksempel ved hydrolyse til den ønskede hydroxygruppe, eller ved transesterifi-cering til en alternativ estergruppe.

Med hensyn til fremgangsmåde (C) kan denne gennemføres for eksempel ved at behandle den passende pyrimi-15 din med formlen (IV) eller et salt eller beskyttet derivat deraf, med en forbindelse med formlen: B 'Vt a 20 (hvor Ά er en eliminerbar gruppe, f.eks. acetoxy eller benzoyloxy eller halogen, f.eks. chlor, og B er en eventuelt beskyttet hydroxygruppe, f.eks. en p-toluensul-25 fonyloxygruppe) og derefter fjerne eventuelle beskyttelsesgrupper.

Med hensyn til fremgangsmåde (D) kan repræsentere en precursorgruppe som ovenfor beskrevet for R i formlen (V). Forbindelsen med formlen (I) kan deref-2q ter for eksempel vindes ved omsætning med et alkalime-talazid, f.eks. lithiumazid, med fordel i et passende 13 DK 166805 B1 opløsningsmiddel, såsom fugtig DMF, efterfulgt af syreeller basehydrolyse med fordel under milde betingelser.

Denne proces er navnlig anvendelig til fremstilling af 31-azido-3'-deoxythymidin på threoformen.

5 En forbindelse med formlen (I) kan omdannes til en farmaceutisk acceptabel phosphatester eller anden ester ved omsætning med henholdsvis et phosphorylerings-middel, f.eks. P0C13, eller et passende esterificerings-middel, f.eks. et syrehalogenid eller -anhydrid. For-10 bindeisen med formlen (I), inklusive estre deraf, kan omdannes til farmaceutisk acceptable salte deraf på konventionel måde, f.eks. ved behandling med en passende base. En ester eller et salt af en forbindelse med formlen (I) kan omdannes til stamforbindelsen, f.

15 eks. ved hydrolyse.

Opfindelsen beskrives nærmere gennem følgende eksempler. Ved angivelsen "aktiv bestanddel" anvendt i eksemplerne skal forstås en forbindelse med formlen (I) eller et farmaceutisk acceptabelt salt eller ester deraf.

20

Eksempel 1

Tablet- præparater

De følgende præparater A og B blev fremstillet ved vådgranulering af bestanddelene med en opløsning af povidon, efterfulgt af tilsætning af magnesium-25 stearat og kompression.

Præparat A mg/tablet mg/tablet (a) Aktiv bestanddel 250 250 (b) Lactose B.P. 210 26 2Q (c) Povidon B.P. 15 9 (d) Natriumstivelseglycollat 20 12 (e) Magnesiums tear at 5 3 500 300 14 DK 166805 B1

Prsparat B mg/tablet mg/tablet (a) Aktiv bestanddel 250 250 (b) Lactose 150 (c) Avice^PH 101 60 26 5 (d) Povidon B.P. 15 9 (e) Natriumstivelseglycollat 20 12 (f) Magnesiumstearat 5 3 500 3Q0 ]_0 Prsparat c, mg/tablet

Aktiv bestanddel 100

Lactose 200

Stivelse 50

Povidon 5 ^ Magnesiumstearat 4 359

De følgende præparater D og E blev fremstillet ved direkte kompression af de sammenblandede bestanddele. Lactosen anvendt i prsparat E var af den direkte 20 kompressionstype (Dairy Crest-"Zeparox”).

Præparat n mg/kapsel

Aktiv bestanddel 250

Prægelatineret stivelse NF 15 150 25 400 . Præparat E mg/kapsel

Aktiv bestanddel 250

Lactose 150 2Q Avicel ® 100 500

Præparat F (med kontrolleret frigivelse)

Præparatet blev fremstillet ved vådgranulering af bestanddelene (anført nedenfor) med en opløsning af povidon efterfulgt af tilsætning af magnesiumstearat og kompression.

35 15 DK 166805 B1 mg/tablet (a) Aktiv bestanddel 500 (b) Hydroxypropylmethylcellulose 112 (Methocei^C4M Premium) 5 (c) Lactose B.P. 53 (d) Povidon B.P.C. 28 (e) Magnesiumstearat 7 700 Lægemiddelfrigivelse fandt sted over en periode på ca. 6-8 timer og var tilendebragt efter 12 timer.

Eksempel 2

Kapselpræparater Præparat ·&

Et kapselpræparåt blev fremstillet ved at blande bestanddelene fra præparat d i Eksempel 1 ovenfor og indfylde i en todelt hård gelatinekapsel.

Præparat B (nedenfor) blev fremstillet på til-20 svarende måde.

Præparat B mg/kapsel (a) Aktiv bestanddel 250 (b) Lactose B.P. 143 25 (c) Natriumstivelseglycollat 25 (d) Magnesiumstearat 2 420

Præparat C . mg/kapsel (a) Aktiv bestanddel 250 (b) Macrogol 4000 BP 350 600

Kapsler blev fremstillet ved at smelte Macrogol 4000 BP, dispergere den aktive bestanddel i smelten og

OC

indfylde smelten i en todelt hård gelatinekapsel.

DK 166805 B1 16

Prsparat D ittg/kapsel

Aktiv bestanddel 250

Lecithin 100

Arachisolie 1QQ

5 450

Kapsler blev fremstillet ved at dispergere den aktive bestanddel i lecithinet og arachisolien og indfylde dispersionen i bløde, elastiske gelatinekapsler.

10 Præparat E (med kontrolleret frigivelse)

Det følgende kapselpræparat med kontrolleret frigivelse blev fremstillet ved at ekstrudere bestanddelene a, b og c med et ekstruderingsapparat efterfulgt af sfæ-ronisering af ekstrudatet og tørring. De tørrede pellets 15 blev derefter belagt med frigivelseskontrollereftde membran.

(d) og indfyldt i en todelt hård gelatinekapsel.

mg/kapsel (a) Aktiv bestanddel 250 2ø (b) Mikrokrystallinsk cellulose 125 (c) Lactose BP 125 (d) Ethylcellulose 13 513 25 Eksempel 3

Injicerbart prsparat

Præparat A

Aktiv bestanddel 0,200 g

Saltsyreopløsning, 0,1M til pH 4,0-7,0 30 Natriumhydroxidopløsning, 0,lM til pH 4,0-7,0

Sterilt vand til 10 ml

Den aktive bestanddel blev opløst i det meste af vandet (35-40°C), og pH blev indstillet til mellem 4,0 35 og 7,0 med saltsyre eller natriumhydroxid, som passende.

17 DK 166805 B1

Chargen blev derefter fyldt op til volumen med vandet og filtreret gennem et sterilt mikroporefilter ned i en steril 10 ml's ravfarvet glas-medicinflaske (type 1) og forseglet med sterile hætter og overforseglinger.

5

Præparat B

Aktiv bestanddel 0,125 g

Steril, pyrogen-fri, pH 7 phosphat-puffer, til 25 ml j_q Eksempel 4

Intramuskulær injektion

Aktiv bestanddel 0,20 g

Benzylalkohol 0,10 g

Glycofurol 75 1,45 g

Injektionsvand til 3,00 ml 15

Den aktive bestanddel blev opløst i glycofurolet. Benzylalkoholen blev derefter tilsat og opløst, og vand blev tilsat til 3 ml. Blandingen blev derefter filtreret gennem et sterilt mikropore-filter og forseglet i 20 sterile 3 ml's ravfarvede glasmedicinflasker (type 1).

Eksempel 5

Sirup

Aktiv bestanddel 0,2500 g 25

Sorbitol-opløsning 1,5000 g

Glycerol 2,0000 g

Natriumbenzoat 0,0050 g

Smagsstof, Fersken 17.42.3169 0,0125 ml

Renset vand til 5,0000 ml 30

Den aktive bestanddel blev opløst i en blanding af glycerolet og det meste af det rensede vand. En vandig opløsning af natriumbenzoatet blev derefter sat til opløsningen efterfulgt af tilsætning af sorbitolopløs-35 ningen og til slut smagsstoffet. Voluminet blev fyldt op med renset vand, og der blev blandet godt.

18 DK 166805 B1

Eksempel 6

Stikpille mg/s tikpi Ile

Aktiv bestanddel (63 ym)x 250 Hårdt fedt, BP (Witepso3^kl5-2 Dynamit NoBel) '177 0 2020 x) Den aktive bestanddel anvendtes som et pulver, hvori mindst 90% af partiklerne havde en diameter på 63 μια eller mindre.

En femtedel af Witepso!p^Hl5 blev smeltet i en med dampkappe udstyret skål ved maksimalt 45°C. Den aktive bestanddel blev sigtet gennem en 200 ym sigte og sat til den smeltede base under blanding med en med skærehoved udstyret silverson, indtil der var opnået en glat dis- 15 o persion. Idet blandingen holdtes ved 45 C blev resten (§> af Witepsol H15 sat til suspensionen og omrørt for at sikre en homogen blanding. Hele suspensionen blev ledt gennem et 250 ym rustfrit stålgitter og fik under stadig omrøring lov at afkøle til 40°C. Ved en temperatur på ^ 38-40°C blev 2,02 g af blandingen fyldt i passende, 2 ml1 s formstofforme. Stikpillerne blev henstillet til afkøling til stuetemperatur.

Eksempel 7 7 5

Vagitorier mg/yagitorier

Aktiv bestanddel (63 ym) 250

Vandfri dextrose 380

Kartoffelstivelse 363

Magnesiumstearat 7 30 1000

De ovennævnte bestanddele blev blandet direkte, og der blev fremstillet vagitorier ved direkte kompression af den resulterende blanding.

19 DK 166805 B1

Præparationseksempler Eksempel A

1-(3'-Azido-2',3'-dideoxy-g-D-threo-pentofuranosyl)thy-min.

5 Lithiumazid (7,3 g, 0,15 mmol, 3 ækv.) blev opløst i DMP (260 ml) og anbragt i et 75-80°C oliebad. 3'-Mesyl-51-tritylthymidin (28 g, 0,05 mmol) blev tilsat. Reaktionen blev fortsat i 24 timer og derefter hældt i isvand.

Det resulterende bundfald blev frafiltreret og vasket 1 0 med vand. 51 -Hydroxygruppen blev afbeskyttet ved opvarmning i 80% eddikesyre ved 80°C i 45 minutter. Efter afkøling til stuetemperatur udfældede tritylcarbinol. De faste stoffer blev frafiltreret, og opløsningsmidlerne blev fjernet fra filtratet, hvorved vandtes det rå pro-15 dukt. Chromatografi på silicagel elueret med CHCl^iMeOH (9:1 vol/vol) gav det rene produkt. Titelforbindelsen vandtes som et skum ved fjernelse af opløsningsmidlerne fra de passende fraktioner.

Smp. = 57-60°C

20 UV pH 1 max267 e=9500, min235 e=2400 pH 13 max267 e=7700, min245 e=4700 NMR taget i DMSO-d6 NMR: 67,51(d,IH,J5 g = 1,2 Hz, 6H), 66,03(dd,lH,J1( 2,=3,7 og 7,8 Hz,l*H), 25 65,09(t,lH,J5,OH,5'CH2 = 5,3 Hz, 5ΌΗ) , 64,54-4,41 (m,lH,3'H), 64,10-3,94 (m,lH,4 Ή), 63,76-3,65(m,2H,5'CH2), 62,90-2,58 og 2,17-1,92(m,2H,2Ή), 61,80(d,3H,J5 g = 3Q l,2Hz,5CH3) CHN beregnet for cioH13N5°4 ~ 1/1° Η2° beregnet: C:44,64, H:4,92, N:26,03 fundet : C:44,56, H:4,94, N:26,15 35 DK 166805 B1 20

Eksempel B

1-{3,-Azido-2',3'-dideoxy-3-D-threo-pentofuranosyl)thy-min-5'-monophosphat-dinatriumsalt.

200 mg (0,75 mmol) 1-(31-Azido-2’, 3'-dideoxy^-D-5 threo-pentofuranosyl)thymin (J.Org.Chem. (1980) 45, 3274-3278) blev opløst i 5 ml triethylphosphat og afkølet kraftigt til -8°C. 274 pi (3 mmol, 4 ækv.). phos-phoroxychlorid blev tilsat på én gang. TLC (n-Pr0H:H20:-konc.NH^OH, 7:1:3 på cellulose) indikerede produkt-10 dannelse, men ukomplet reaktion efter 3 timer. Reaktionsblandingen blev lagret i en -5°C fryser natten over.

Den næste morgen viste TLCet 80-90% fuldendt reaktion. Reaktionsblandingen blev hældt i 15-20 ml isvand, og pH blev indstillet på 7. Den vandige opløsning blev ek-15 straheret med chloroform (2x) og ether (2x). Sporene af organiske opløsningsmidler blev fjernet ved forsigtig stripning på en rota-vap. Frisk fremstillet deaktiveret trækul blev sat til den vandige opløsning, indtil UV-prøve viste, at 90% af nucelotidet var absorberet.

20 Blandingen blev filtreret og vasket med vand, indtil der i filtratet ikke fandtes UV-absorption. Forbindelsen blev vasket fra trækullet ved opslemning i 50% vandig ethanol indeholdende 2% kone.NH^OH og filtrering. Vask-ningen blev gentaget endnu en gang. Ethanolen og NH^OH 25 blev fjernet ved fordampning. pH-Værdien blev indstillet på 7. Opløsningen blev ledt gennem 10 ml DOW 50 (Na+), hvorved vandtes forbindelsen som dinatriumsaltet. Opløsningen blev frysetørret. Titelforbindelsen vandtes som et fast stof, der var én spids ved HPLC.NMR H 67,77 30 (d*J6,5=l,2Hz 6H) 66,18(dd,Jl',2a'=3,OHz,Jl',2b'=7,7Hz l’H), 64,64-4,45(m,3Ή), 64,45-4,28(m,4'H), 64,28-4,08 (m,5*Hl, 63,06-2,70(m,2a’H), 62,50-2,24(m,2b'H), 61,95 (d,J5,6=l,2Hz,5CH3), NMR 31p 62,33 (JPH=6,3).

35 DK 166805 B1 21

Eksempel C

1-(3'-Azido-2', 3'-dideoxy-3-D-threo-5'-O-phenoxyacetyl)-thymin.

Threo-B'-azido-S'-deoxythymidin (1,0 g, 3,7 mmol) 5 blev opløst i pyridin (10 ml). . Vand blev fjernet ved - kogning af opløsningen, indtil temperaturen af dampen, der afgik, nåede 115°C. Reaktionsblandingen blev afkølet kraftigt til 0°C. Phenoxyacetylchloridet (1 ml, 7,4 mmol, 2 ækv.) blev tilsat på én gang. Reaktionen fik 10 lov at fortsætte i tre timer. Efter udhældning i isvand (350 ml) udskilte produktet fra opløsningen som en olie.

Den vandige fase blev dekanteret, og olien blev opløst i ethylacetat. Efter tørring med MgSO^ og filtrering blev opløsningsmidlet fjernet. Den resulterende olie blev 1 5 flash-chromatograferet på silicagel elueret med chloroform: methanol (40:1 vol/vol).

NMR taget i DMSO-dg: NMR: 611,3(s,lH,3-NH), 67,50(d,lH,Jg,5 = 1,2 Hz, 6H), 67,41-6,86 (m,5H,5'-phenoxy), 66,10(dd, IH;Jn, 0 , 20 J. /za = 4,5 Hz, 2b, = 7,5 Hz, l'H), 64,86 (s,2H,CH2 af 5'-acetyl), 64,57-4,21 (m, 4H; 3Ή, 4Ή, 5Ή), 62,75-2,21 (m,2H,2'H), 61,79 (d,3H,J5 g = 1,0Hz, 5CH3) 25 CHN beregnet for cygHy9N5°g beregnet: C:53,86, H:4,77, N:17,45 fundet : C:53,80, H:4,82, N:17,35

Eksempel D

3q De følgende forbindelser (a) og (b) blev frem stillet på en måde analog med den i Eksempel C beskrevne.

1-[3'-Azido-5'-O-(2-methoxyacetyl)-21,31-dideoxy-Ø-D-threo-pentofuranosyl]thymin.

35 UV: pH 1 max 267 e=10400, min'235 e=3700 pH 13 max 266 e=9800, min 245 e=5100 DK 166805 Bl 22 NMR taget i DMSO-d6 NMR: 67,50(d,lH,J5 g = 1,7 Hz, 6H), 56,06(dd,IH,J = 3,9,7,6 Hz, 1Ή) , 54,61-4,57(m,IH,3'H} , 54,42-4*35 (m,2H,5'CH2), 54,26-4,21(m,lH,4Ή), 54,1(s,3H,5'-5 acetyl-CH2), 52,79-2,70 og 2,18-2,11(m,2H,2Ή), 51,8(d,3H,Jg 5*1,7 Hz, 5CH3) CHN beregnet for C]_3H]_7N5°g“1/4 H20 beregnet: C:45,42, H:5,13, N:20,37 10 fundet : C:45,34, H:5,09, N:20,28 1- (51 -O-acetyl-31 -azido-2 1,31 -dideoxy-|3-D-threo-pentofu-ranosyl)thymin.

UV: pH 1 max 267 e=9100, min 235 e=2300 pH 13 max 267 e=7600, min 243 e=4600 i o NMR taget i DMS0-d6 NMR: 57,48(d,IH,J5 g = 1,2 Hz, 6H), 56,05(dd,lH,Jlt 2,= 3,6, 7,6 Ηζ,Ι'Η), 54,59-4,55(m,lH,3'H), 54,3-4*2 (m,3H,4Ή og 5'-CH2), 52,8-2,65 og 2,2-2,l(m,2H, 20 21H), 52,06 (s,3H,5«-acetyl CH3>,5l,81(d,3H,J5 Q =

1,2 Hz, 5CH3J

CHN beregnet for ci2Hl5N5°5 beregnet: C:46,60, H:4,89, N:22,65 fundet : C:46,47, H:4,91, N:22,61 25

Biologiske forsøg Toxicitetsprøve

Threo-3'-azido-3'-deoxythymidin blev givet til 30 både mus og rotter. LD^Q-værdien lå over 750 mg/kg.

Anti-HIV-aktivitet

Ved undersøgelse af aktiviteten af threo-3'-azides’ -deoxythymidin fandt man en IC^Q-værdi på.13,2 μΜ.

Claims (7)

1. Threo-isomeren af 3'-azido-3'-deoxythymidin med formlen (I): 0 CH. HN I 3

2. Forbindelse ifølge krav 1 til anvendelse ved behandling af eller profylakse for HTLV-I- eller HTLV-II-infektioner.

3. Forbindelse ifølge krav 1 til anvendelse ved behandling af eller profylakse for AIDS.

4. Forbindelse ifølge krav 1 til anvendelse ved behandling af eller profylakse for HIV-infektion.

5. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav 1 til fremstilling af et lægemiddel til behandling af eller profylakse for humane retrovirusinfektioner, især

25 HTLV-I-, HTLV-I I- og HIV-infektion,.

5. J (I) HO 0___ ,o Y_y hvori 3'-azidogruppen har threo-konfiguration, eller et farmaceutisk acceptabelt salt eller en farmaceutisk acceptabel ester deraf til anvendelse til behandling af eller profylakse for humane retrovirusinfektioner.

6. Anvendelse ifølge krav 5, hvor lægemidlet er til behandling af eller profylakse for AIDS.

7. Farmaceutisk præparat, fortrinsvis i form af en tablet eller en kapsel, kendetegnet ved, 30 at det som aktiv bestanddel indeholder 1 — (3'-azido-2',3'-dideoxy-g-D-threo-pentofuranosyl)thymin eller et farmaceutisk acceptabelt salt eller en farmaceutisk acceptabel ester deraf, samt en farmaceutisk acceptabel bærer.