DK156252B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af di-, tri- eller tetrapeptidderivater eller salte deraf - Google Patents

Description

DK 156252 B

Den foreliggende opfindelse angâr en analogifremgangsmâde til frem-stilling af hidtil ukendte di-, tri- eller tetrapeptider eller farmaceutisk tolerable salte deraf, hvilke forbindelser har farmakologisk virkning.

5 Baggrunden for den foreliggende opfindelse er opdagelsen af et nyt aktivt peptid, nemlig stoffet FR-900156. Stoffet FR-900156 blev forst og for nylig isoleret i ren form fra en dyrkningsvæske, der var vundet ved fermentering af en hidtil ukendt stamme horende til arten Streptomyces og karakteriseret ved sine fysisk-kemiske egenskaber.

10 Sora et résultat af indgâende studier er stoffet FR-900156's kemiske struktur blevet bestemt ved fysiske og kemiske teknikker til at hâve formlen If OH CH, I I 3

CH,CHCONHCHCONHCHCOOH 3 I

CH, I 2 CH2 éoNHCHCONHCH,COOH If I 2 CH2 (FR-900156) CH, iH2

H2NéHCOOH

og det antages, at stoffets stereoisomere struktur er som angivet i formlen le ?H fH3 (D)

CH,CHCONHCHCONHCHCOOH

h) ai · I 2 ?H2(L) CONHCHCONHCH,COOH le I 2 CH2 (D-Lactyl-L-alanyl- ςΗ Y-D-glutamyl-(L)-me- l 2 so-diaminopimelyl(L)- ÇH2 glycin)

H-NCHCOOH

^(D)

DK 156252B

2

Efter den strukturelle belysning af stoffet FR-900156 er der blevet udfert yderligere studier af totalsyntesen af forbindelsen med formlen If, herunder forbindelsen med formlen le, og herved er det lykkedes at tilvejebringe industrielt fordelagtige og anvendelige 5 syntesefremgangsmâder til fremstilling af forbindelsen, og i forbindelse hermed er der blevet syntetiseret en lang række beslægtede forbindelser.

De ifolge opfindelsen fremstillede peptider har den almene formel I R1-(HNCHCO) -HNCH-RP

k <{v„ COHNCH-R2

ÇH2 I

ÇH2 CH- r · 2 a R -HNCH-Rq hvor 10 r! betegner hydrogen eller acyl, der er valgt blandt ^g-alkanoyl, som kan bære én eller flere substituenter, som kan v®re hydroxy, lavere-alkanoyloxy eller lavere-alkoxy, phenyl-lavere-alkanoyl, phenoxy-lavere-alkanoyl, thienyl-lavere-alkanoy1, tert.butoxycarbonyl, arachidonoyl, 6-amino-6-carboxyhexanoyl, 15 benzoyl, mandelyl, phenylacetoxyacetyl, phenylcarbamoyl, benzyloxycarbonyl, adamantan-carbonyl, benzyloxybenzoyl, salicyloyl, diphenylacetyl, cinnamoyl, benzensulfonyl, O-stearoyl-lactoyl, benziloyl, O-acetylbenziloyl, nicotinoyl, N-benzyloxycarbonyl-L-5-oxo-2-pyrrolidincarbonyl, 5-oxo-2-pyrrolidincarbonyl, retinoyl, 5-(N-20 benzyloxycarbonyl-5-oxo-4-oxazolidinyl)-valeryl, 10-(2,3-dimethoxy-5-methyl-1,4-benzoquino-6-yl)decanoyl, 10-(2,3,4-trimethoxy-6-methylphenyl)decanoyl, l-N-hexyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidoyl, l-N-benzyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidoyl, 1-N-lauryl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidoyl, 1-N-benzyl-D-

DK 156252 B

3 glucaramidoyl, 1-N-hexyl-D-glucaramidoyl, 1-N-lauryl-D-glucaramidoyl, 2,3,4,6-diisopropyliden-L-2-ketogulonoyl og 2-keto-L-gulonoyl; betegner hydrogen, methyl, isopropyl, hydroxymethyl, benzyl-oxymethyl eller benzyl; 5 og R^ hver for sig betegner hydrogen, carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl, carbazoyl, 3-tert.butoxycarbonylcarbazoyl, 3-benzyloxycarbonylcarbazoyl eller en gruppe med den almene formel -CON(Ra)(R§), hvor r£ betegner mono-eller dicarboxy-lavere-alkyl, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, 10 isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl-lavere-alkyl, phenyl-lavere-alkoxycarbonyl-lavere-alkyl eller phenylcarboxy-lavere-alkyl, hvor phenyldelen kan være substitueret med hydroxy, og R^ betegner hydrogen eller lavere-alkyl; RP betegner hydrogen, carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, 15 isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl eller phenyl-C^ alkoxycarbonyl;

Rr betegner hydrogen, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, butoxy-, tert.butoxy- eller tert.pentoxycarbonyl eller benzyloxycarbonyl; m betegner et helt tal 1-3; 20 og n betegner et helt tal 0-2; med det forbehold, at nâr det ene af symbolerne R^ og R1! betegner hydrogen, betegner det andet carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl, carbazoyl, 3-tert.butoxycarbonylcarbazoyl, 3-benzyloxycarbonylcarbazoyl eller en 25 gruppe med den almene formel -C0N(r|)(R^), hvor r| og R^ har den ovenfor anforte betydning; nâr R^- betegner hydrogen, tert.butoxycarbonyl eller benzyloxycarbonyl, 1 o R]j betegner methyl, m betegner 2, og n betegner 1, da betegner R^ og 30 R^ hver for sig hydrogen eller en gruppe med den almene formel-2 2 2 C0N(Ra)(R^), hvor Ra betegner mono- eller dicarboxy-C^- eller -C^ g-alkyl, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl-C^- eller -C3-alkyl, α-carboxyethyl, phenyl-lavere-alkoxycarbonyl-C^- eller -C3-alkyl eller phenyl-carboxy- 35 lavere-alkyl, hvor phenyldelen kan være substitueret med hydroxy; og 2 R^ har den ovenfor anferte betydning; og nâr R^· betegner hydrogen eller acyl som ovenfor defineret,

4 DK 156252 B

n betegner 1, betegner methyl, RP betegner carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl eller phenyl-C^ ^-alkoxycarbonyl, R2 betegner carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, 5 butoxy- eller tert.butoxycarbonyl, carbazoyl, 3-tert.butoxycarbonylcarbazoyl, 3-benzyloxycarbonylcarba- 2 2 2 zoyl eller en gruppe med den almene formel -CON(Ra) (Rf,), hvor Ra betegner monocarboxy-lavere-alkyl, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl-lavere-alkyl eller 10 phenyl-lavere-alkoxycarbonyl-lavere-alkyl, Rj2 betegner hydrogen, og m betegner 2, da betegner ikke hydrogen; fremgangsmâden ifelge opfindelsen er ejendommelig ved, at a) til fremstilling af en forbindelse med den almene formel la

Ri-(HNCHCO) -HNÇH-R? c | « n | * 4 «fV· .

COHNCH-R* <F¥* Ia

Rj-HNCH-Rq hvor r£ betegner acyl som ovenfor defineret, RÇ betegner hydrogen,

15 methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl eller phenyl-C^-alkoxycarbonyl, Rf betegner methoxy-, ethoxy-, propoxy-, butoxy-, tert.butoxy- eller tert.pentoxycarbonyl eller benzyloxycarbonyl og r|, n, m, R2 og R^ har den ovenfor anferte betydning, eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf omsættes en 20 forbindelse med den almene formel II

R^-(HNÇHCO) -HNÇH-Rj C li η l . * < W» COOH 11 5

DK 1562S2B

eller et farraaceutisk tolerabelt sait deraf med en forbindelse med den almene formel III

HgNCH-R2

(CH2)« III

r l ‘î

RjHNCH-Rq eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf, i hvilke almene formler II og III symbolerne har den ovenfor anforte 5 betydning, og, om onsket, til fremstilling af en forbindelse med den almene formel Id R^HNÇHCO) -HNCH-rÇ

Il Π I à *b <ρν· ,, COHNCH- Rz id H2NCH-Rq hvor R§ betegner hydrogen eller carboxy, R og R^ hver betegner hydrogen, carboxy eller en gruppe med den almene formel -CON(R|)(R^), hvor r| betegner mono- eller dicarboxy-lavere-alkyl 10 eller phenyl(carboxy)-lavere-alkyl, hvor phenyldelen kan være substi-tueret med hydroxy, R^ har den ovenfor anforte betydning, og R1, Rj, n og m har den ovenfor anforte betydning, eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf underkastes en pâ den ovenfor beskrevne mâde vundne forbindelse la en reaktion til fjernelse af beskyttelsesgrup-15 perne, eller

DK 156252B

6 b) til fremstilling af en forbindelse med den almene formel la'

Rj-(HNÇHCO)n-HNÇH-Rp *b <PVm .

COHNCH- R* 4H2>3 Ia' R[-HNCH-Rq eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf omsættes en forbindelse med den almene formel Ib H-(HNCHCO)n-HNCH-Rp S , COHNCH- ΈΓ (ch2)3 Ib R[-HNCH-Rq eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf med et acyleringsmiddel 5 med den almene formel 4-oh hvor r| har den ovenfor anferte betydning, eller et reaktivt dérivât deraf, i hvilke almene formler symbolerne har den ovenfor angivne betydning, eller

DK 156252 B

7 c) til fremstilling af en forbindelse med den almene formel Id R^CHNCHCO) -HNCH-R? k 2, COHNCH-R^ <K>« «

HgNCH-R^ hvor R§ betegner hydrogen eller carboxy, R og R^ hver betegner hydrogen, carboxy eller en gruppe med den almene formel -CON(r|)(R^), hvor r| betegner mono- eller dicarboxy-lavere-alkyl eller phen-5 yl(carboxy)-lavere-alkyl, hvor phenyldelen kan vare substitueret med hydroxy, R^ har den ovenfor anferte betydning, og R^, R^, n og m hver har den ovenfor anforte betydning, eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf underkastes en forbindelse med den almene formel le R^CHNCHCO) -HNCH-R? I ! η i 1 *b «pvu , COHNCH-R* (ρν3 Ic

Rr-HNCH-Rq hvor symbolerne har den ovenfor anforte betydning, forudsat at mindst 10 én af RÇ, R^, R*ï og Rr er eller indeholder en beskyttelsesgruppe, eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf en reaktion til fjernelse af beskyttelsesgrupper.

De ovenfor anforte definitioner forklares nærmere nedenfor:

DK 156252B

8 ^g-alkanoyl kan f.eks. være formyl, acetyl, propionyl, butyryl, isobutyryl, valeryl, isovaleryl, pivaloyl, hexanoyl, a-ethylhexanoyl, heptanoyl, lauroyl, stearoyl, docosanoyl, 2-heneicosylpentacosanqyl, hexacosanoyl (CI^iCI^g^GO), 2-hexadecyloctadecanoyl ((CH3-5 (ΟΗ2)^^>2^ΗΟΟ), n-tetracosanoyl (013(^2)22^®^ °g 2-docosylte- tracosanoyl ((ΟΗ3(ΟΗ2)2^)2^ΗΟΟ); cycloalkancarbonyl (f.eks. cyclopentancarbonyl, cyclopropancarbonyl, cyclohexancarbonyl eller cycloheptancarbonyl); og alicycliske carbonylforbindelser med brodannelse sâsom bicyclisk 10 eller tricyclisk alkan- eller alkencarbonyl (f.eks. norbornancarbonyl eller adamantancarbonyl).

I de ovenfor som eksempler angivne aliphatiske acylgrupper kan den aliphatiske carbonhydriddel, eventuelt indeholde én eller flere egnede substituenter, f.eks. hydroxy, lavere-alkoxy (f.eks. methoxy, 15 ethoxy eller propoxy), eller lavere-alkanoyloxy (f.eks. acetoxy eller propoxy).

Phenyl-lavere-alkanoyl er f.eks. phenylacetyl, og phenoxy-lavere-alk-anoyl er f.eks. phenoxyacetyl.

Thienyl-lavere-alkanoyl er f.eks. thienylacetyl.

20 Hvis de ovenfor som eksempler nævnte acylgrupper indeholder en funktionel gruppe sâsom hydroxy, kan en sâdan gruppe være beskyttet med sædvanlige beskyttelsesgrupper.

I aile symbolforklaringer, hvori udtrykket "lavere-alkyl" eller "lavere-alkoxy" indgàr, skal disse udtryk forstâs sâledes, at de 25 omfatter henholdsvis alkylgrupper med 1-6 carbonatomer sâsom methyl, ethyl, propyl, butyl og tert.butyl og alkoxygrupper med 1-6 carbonatomer sâsom methoxy, ethoxy, propoxy, butoxy, tert.butoxy, etc,

Med hensyn til de ovenfor angivne beskyttelsesgrupper R^, RP, Rj og 30 R*! er det underforstâet, at denne gruppe kan hâve denne betydning ikke kun ved den syntetiske fremstilling af den omhandlede

DK 156252 B

9 forbindelse ved kemiske fremgangsmâder, men ogsâ i forbindelse med forbindelsens fysiologiske og farmaceutiske egenskaber.

Dette vil sige, at en fri carboxygruppe R^, RP, rÇ og R^ ved den syntetiske fremstilling kan omdannes til en "beskyttet carboxygruppe" 5 som anfort ovenfor, fer fremgangsmâden (-mâderne) udfores, for at forhindre éventuelle uenskede sidereaktioner, og den "beskyttede carboxygruppe" i den resulterende forbindelse kan omdannes til en fri carboxygruppe efter endt reaktion. Dette fremgâr klart af forklarin-gen af fremgangsmâderne nedenfor.

10 Pâ den anden side kan en forbindelse bærende en beskyttet carboxygruppe som ovenfor defineret R^, RP, Rj og/eller R^ eventuelt anvendes i stedet for den fysiologisk og farmaceutisk virksomme forbindelse per se, nâr der er taie om den omhandlede forbindelses fysiologiske og farmaceutiske egenskaber. Her kan som et foretrukket 15 eksempel pâ en beskyttet carboxygruppe især nævnes forestret carboxy som ovenfor defineret. Som egnede eksempler pâ forestrede carboxygrupper foretrækkes lavere-alkoxycarbonylforbindelser (f.eks. methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, propoxycarbonyl, isopropoxycarbonyl, butoxycarbonyl og tert.butoxycarbonyl).

20 Gruppen -C0N(r|)(r|) som betydning af R^ og R^:

Egnede eksempler pâ lavere-alkyl R^ og lavere-alkyldele i mono- eller dicarboxy-lavere alkyl og pâ phenyl-(carboxy)-lavere-alkyl r| er grupper med 1-6 carbonatomer, f.eks. methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutÿl, pentyl og isopentyl.

25 I denne forbindelse skal det bemærkes, at "phenyl-(carboxy)-lavere-alkyl" alternativt kan udtrykkes som "lavere-alkyl", der er substitueret med carboxy og phenyl.

Carboxy i "mono- eller dicarboxy-lavere-alkyl" som betydning af r| og "phenyl-(carboxy)-lavere-alkyl, hvis phenyldel kan være substitueret 30 med hydroxy", som betydning af r| kan være beskyttet med en sædvanlig Λ beskyttelsesgruppe; dvs. at definitionen for R£ ogsâ omfatter beskyttet carboxy-lavere-alkyl og phenyl-(beskyttet carboxy)-lavere-

DK 156252B

10

alkyl, som kan være substitueret med hydroxy. Egnede eksempler pâ sâdanne beskyttede carboxygrupper er som ovenfor eksemplificeret i forbindelse med RP og R5L

Særlig foretrukne eksempler pâ grupper med formlen -C0N(r|)(R^) er: ^3 Ρ*3 -CONHCHgCOOH, -C0NHCHC00H,-C0NHCHC00H, -CONHCH,CH-COOH, L D 22

D 9¾ D

-C0NHCH2CH2CH2C00H, -C0NHCHCH2CH, COKHCHÇOOH,

C00H CH3 Îh2CH2C00H

^3 D D.

-C0N-CH2C00H, -conhchcooh, -cohnchcooh,

“jrÔ t-O'0H

og de tilsvarende grupper, hvor carboxygruppen er beskyttet som ovenfor defineret.

Hydroxygruppen i hydroxymethyl som betydning af R^ kan være beskyttet 10 med en sædvanlig hydroxybeskyttelsesgruppe; dvs. r£ omfatter ogsâ benzyloxymethyl.

Aminobeskyttelsesgrupper Rr og r£:

Aminobeskyttelsesgrupper omfatter sædvanllge beskyttelsesgrupper til midlertidig beskyttelse af en aminogruppe, der anvendes inden for 15 aminosyre- og peptidkemiomrâdet, nemlig lavere-alkoxycarbonyl og phenyl-lavere-alkoxycarbonyl. Det er klart, at det i peptidsyntesen til binding af en ensket "reaktiv" aminogruppe (-15¾) med en ensket "reaktiv" carboxygruppe (-C00H) til dannelse af en ensket peptid-binding (-C0NH-) dem imellem foretrækkes midlertidigt at beskytte den 20 anden uenskede "reaktive" aminogruppe ved at omdanne den til en ikke-reaktiv eller mindre reaktiv beskyttet aminogruppe under reaktionen for at undgâ sidereaktioner mellem den uenskede "reaktive” aminogruppe og de enskede "reaktive" carboxygrupper. Det er endvidere

DK 156252 B

11 klart, at det foretrakkes, at en beskyttelsesgruppe i en sâdan beskyttet aminogruppe let kan elimineres, ait afhængig af den pâfol-gende behandling af det enskede peptid. Aminobeskyttelsesgrupper, der opfylder de ovenstâende krav, kan derfor anvendes og skal 5 hensigtsmæssigt vælges ait efter arten af og egenskaberne ved den forbindelse, der anvendes ifelge opfindelsen.

Som foretrukne eksempler pâ aminobeskyttelsesgrupper kan nævnes: lavere-alkoxycarbonyl (f.eks. methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, prop-oxycarbonyl, butoxycarbonyl, tert.butoxycarbonyl eller tert.pentoxy-10 carbonyl) og benzyloxycarbonyl.

Farmaceutisk tolerable salte af de hidtil ukendte peptider med form-len I omfatter salte med uorganiske eller organiske baser, f.eks. et alkalimetalsalt (f.eks. natrium- eller kaliumsaltet), et jordalkali-metalsalt (f.eks. calciumsaltet), ammoniumsalt, ethanolaminsalt, tri-15 ethylaminsalt eller dicyclohexylaminsalt, og syreadditionssalte med organiske eller uorganiske syrer, f.eks. methansulfonat, hydrochlo-rid, sulfat, nitrat eller phosphat.

' Med hensyn til formlen I for de forbindelser, der fremstilles ved fremgangsmâden ifelge den foreliggende opfindelse, skal felgende 20 bemærkes:

Delformlen R^-(HNCHC0)n - i formlen I betyder: *b rA-, nâr n er 0, 25 R*--NHCH(Rb)C0-, nâr n er 1, og R1-HNCH(Rb)CO-HNCH(Rb)CO-, nâr n er 2.

Endvidere angiver delformlen -(CH2)m- i formlen I

-CH2-, nâr m er 1, -CH2-CH2*, nâr m er 2, og 30 -CH2-CH2-CH2-, nâr m er 3.

12 DK 156252 B

I forhold til den forbindelse, der er beskrevet i Biochemical and Biophysical Research Communications, vol. 59, nr. 4, 1974, nemlig

L D

HoNCHC0NHCH-C00H

Ί I

CH3 (ch2)2 I L /«3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

<c«2> 3

HjNCHCOOH

D

udmærker en repræsentativ forbindelse med formlen I, nemlig

L D

H0NCHCONHCH-COOH

I l CH3 <ch2)2 I 1

CONHCHCONHCH-COOH

(CH,)3

H2NCHCOOH

D

DK 156252B

13 sig ved at yde bedre beskyttelse mod injektion hos mus. Forbindel-sernes evne til at virke beskyttende mod en eksperimentelt fremkaldt infektion hos mus blev undersegt, og det viste sig, at efter administration af en forbindelse med formlen I i en mængde pà 0,1 mg/kg var 5 overlevelsesgraden 80%, hvorimod den kun var 40%, nâr den kendte forbindelse blev administreret.

Forbindelser med formlen I, herunder FR-900156, eller farmaceutisk tolerable salte deraf fremstilles ved fremgangsmâden ifolge opfindel-sen, som nærmere beskrives nedenfor.

10 (1) Fremgangsmâdevariant a), forste del: Peptidbindingsdannelse R2- (HNCHC01 -HNCH-R? H,NCH-R2 c I. n | 1 2 | *b (CHz5» + .

C°0H rJhnch-r** (II) (III) R2-(HNCHC0)n-HNCH-R5 -► *b COHNCH-R2 (OU),

Rj-HNCH-Rq

Cia)

DK 156252 B

14 (2) Fremgangsmâdevariant b): Acylering

H-(HNCHCO)n-HNCH-Rp R*-(HNCHCO)n-HNCH-RP

k (¾). £“ T*5» ,

COHNCH-R2 COHNÇH-R

(ÇH2)j (p2Jî

Rj-HNCH-Rq Rj-HNCH-Rq (Ib) (Irf) (3) Fremgangsmâdevariant c): Eliminering af beskyttelsesgrupper R1-(HNCHCO) -HNCH-R? R1-(HNCHCO) -HNCH-RP I, n I 11 n I 2 RS CŒj).—^ «b ««Λ , COHNCH-R2 COHNÇH-R2 I (CH-), ,(Ic) *9*2*3 (Id) | r I α h2nch-r3

Rr-HNCH-Rq 2 '

Fremgangsmâden til fremstilling af de hidtil ukendte peptider med formlen I beskrives nærmere nedenfor: 5 (1) Forste del af fremgangsmâdevariant a): Peptidbindingsdannelse:

Forbindelse II + forbindelse III ·+ forbindelse la.

Ved denne fremgangsmâdevariant fremstilles en forbindelse la ved omsætning af en forbindelse II eller et sait deraf med en forbindelse III eller et sait deraf.

DK 156252 B

15

Derme fremgangsmâdevariant kan udfores pà folgende raâde: I det ene tilfælde aktiveres i forste trin carboxygruppen i forbindelse II eller et sait deraf sædvanligvis pâ konventionel raàde, i form af f.eks. syrehalogenidet, azidet, syreanhydridet, et blandet 5 anhydrid eller en aktiveret ester, og omsættes med forbindelse III til dannelse af forbindelse la, og i det andet tilfælde omsættes forbindelse II eller et sait deraf direkte med forbindelse III eller et sait deraf i nærværelse af et sædvanligt kondensationsmiddel sâsom Ν,Ν-dicyclohexylcarbodiimid. Af disse aktiveringsmetoder vælges den 10 foretrukne aktiveringsmetode for carboxygruppen i forbindelse II til dannelse af den aktiverede form og det foretrukne kondensationsmiddel som anfert ovenfor ait efter carboxybeskyttelsesgruppen (-grupperne) i forbindelse II og III og efter reaktionsbetingelserne (dvs. arten af reaktionsoplesningsmiddel og reaktionstemperatur).

15 Denne reaktion udferes fortrinsvis i et oplosningsmiddel sâsom meth-ylenchlorid, chloroform, tetrahydrofuran, dioxan, ethylacetat, meth-anol, éthanol eller vand ved en temperatur, der ligger mellem isafko-ling og stuetemperatur, og reaktionen i nærværelse af et kondensationsmiddel udfores normalt under vandfrie betingelser, men dette er 20 ikke kritisk.

2) Fremgangsmâdevariant c):

4 - OH

-> forbindelse Ib -> forbindelse la

Ved denne fremgangsmâdevariant fremstilles en forbindelse la ved 25 omsætning af en forbindelse Ib med et acylerihgsmiddel.

Det acyleringsmiddel, der anvendes ved denne reaktion, er f.eks. en organisk syre (4-OH, hvor 4 er en acylgruppe), f.eks. en monobasisk eller dibasisk organisk carboxylsyre, en organisk carbonsyre eller en organisk carbaminsyre og den tilsvarende thiosyre eller imidsyre; 30 eller en organisk sulfonsyre, og navnlig en aliphatisk, aromatisk eller heterocyclisk carboxylsyre og den tilsvarende carbonsyre,

DK 156252 B

16 carbaminsyre, thiocarboxylsyre, thiocarbonsyre, thiocarbaminsyre, carboximidsyre, carbamimidsyre og sulfonsyre samt de reaktive derivater deraf, ligesom der ogsâ kan anvendes et isocyanat (f.eks. et kalium-, alkyl- eller arylisocyanat), isothiocyanat (f.eks. et 5 alkylisothiocyanat) og et isothiourinstof (ethylisothiourinstof).

Egnede eksempler pâ sâdanne organiske syrer (Rç-OH, hvor r£ er en acylgruppe) er de organiske syrer, der svarer til de syrer, som omfatter en acylgruppe som ovenfor eksemplificeret i forbindelse med beskrivelsen af egnede eksempler pâ acylgrupper R^- og r£ i 10 forbindelse I.

Denne organiske syre kan som acyleringsmiddel anvendes i form af en aktiveret organisk syre, dvs. som et reaktivt dérivât af syren. Som sâdanne reaktive derivater af sâdanne organiske syrer kan navnes syrehalogenider, syreazider, syreanhydrider, aktiverede amider og 15 aktiverede estere samt isocyanater og isothiocyanater, der fortrinsvis anvendes som reaktive derivater af henholdsvis carbaminsyre og thiocarbaminsyre.

Foretrukne eksempler pâ sâdanne reaktive derivater er: syrehalogenider (f.eks. syrechloridet eller syrebromidet); 20 syreazider; syreanhydrider, herunder blandede syreanhydrider med en syre sâsom dialkylphosphorsyre, phenylphosphorsyre, diphenylphosphorsyre, dibenzylphosphorsyre, halogeneret phosphorsyre, dialkylphos-phorsyrling, svovlsyrling, thiosvovlsyre, svovlsyre, monoalkylcar-25 bonsyre, aliphatisk carboxylsyre (f.eks. eddikesyre, pivalinsyre, pentansyre, isopentansyre, 2-ethylsmorsyre eller trichloreddikesyre) eller aromatiske carboxylsyrer (f.eks. benzoesyre), og symmetrlske syreanhydrider; aktiverede amider med pÿrazol, imidazol, 4-substitueret imidazol, 30 dimethylpyrazol, triazol eller tetrazol; og aktiverede estere, f.eks. substituerede eller usubstituerede alkyl-thioestere (f.eks. methylthio- eller carboxymethylthioesteren), substituerede eller usubstituerede arylthioestere (f.eks. phenylthioesteren, p-nitrophenylthioesteren eller p-35 cresylthioesteren), heterocycliske estere (f.eks. pyranylesteren, pyridylesteren, piperidylesteren eller 8-quinolylthioesteren) eller

DK 156252B

17 estere med Ν,Ν-dimethylhydroxylamin, l-hydroxy-2-(1H)-pyridon, N-hydroxysuccinimid, N-hydroxyphthalimid eller l-hydroxy-6-chlorbenzotriazol.

De ovennævnte reaktive derivater udvælges ait afhængig af arten af 5 den syre, der skal anvendes.

Nàr den frie syre anvendes som acyleringsmiddel ved denne reaktion, kan acyleringsreaktionen fortrinsvis udfores i nærværelse af et kon-densationsmiddel, f.eks. en carbodiimidforbindelse (f.eks. Ν,Ν'-di-cyclohexylcarbodiimid, N-cyclohexyl-N'-morpholinethylcarbodiimid, N-10 cyclohexyl-N'-(4-diethylaminocyclohexyl)carbodiimid, N,N'-diethyl-carbodiimid, N,N'-diisopropylcarbodiimid eller N-ethyl-N'-(3-dime-thylaminopropyl)carbodiimid, N,N'-carbonyldi(2-methylimidazol), pen-tamethylenketen-N-cyclohexylimin, diphenylketen-N-cyclohexylimin, alkoxyacetylen, 1-alkoxy-l-chlorethylen, trialkylphosphit, ethylpoly-15 phosphat, isopropylpolyphosphat, en phosphorforbindelse (f.eks.

phosphoroxychlorid eller phosphortrichlorid), thionylchlorid, oxalyl-chlorid, et 2-ethyl-7-hydroxybenzisoxazoliumsalt, 2-ethyl-5-(m-sulfo-phenyl)isoxazoliumhydroxid, (chlormethylen)dimethylammoniumchlorid, 2,2,4,4,6,6-hexachlor-1,3,5,2,4,6-triazatriphosphorin, 1-benzensul-20 fonyloxy-6-chlor-lH-benzotriazol, p-toluensulfonylchlorid eller iso-propoxybenzensulfoxylchlorid; eller et blandet kondensationsmiddel, f.eks. en blanding af triphenylphosphin og et carbontetrahalogenid (f.eks. carbontetrachlorid eller carbontetrabromid) eller et complex af Ν,Ν-dimethylformaraid med phosphorylchlorid, phosgen eller thio-25 nylchlorid.

Reaktionen udferes sædvanligvis i et oplesningsmiddel, f.eks. vand, alkohol (f.eks. methanol, éthanol eller propanol), acetone, diethyl-ether, dioxan, acetonitril, ethylacetat, Ν,Ν-dimethylformamid, dîme thylsulfoxid, tetrahydrofuran, dichlormethan, chloroform, pyridin, 30 N-methylmorpholin, N-methylpyrrolidin eller andre sædvanlige oples-ningsmidler eller blandinger deraf.

Reaktionen kan ogsâ fortrinsvis udfores i nærværelse af en organisk eller uorganisk base, f.eks. alkalimetal (f.eks. natrium eller kalium), jordalkalimetal (f.eks. calcium), alkalimetal- eller

DK 156252 B

18 jodalkalimetalhydrid (f.eks. natriumhydrid eller calciumhydrid), alkalimetal- eller jordalkalimetalhydroxid (f.eks. natriumhydroxid, kaliumhydroxid eller calciumhydroxid), alkali- eller jordalkalimetalcarbonat eller -hydrogencarbonat (f.eks.

5 natriumcarbonat, kaliumcarbonat, natriumhydrogencarbonat eller lithiumcarbonat), alkalimetal- eller jordalkalimetalalkoxid (f.eks. natriumethoxid, lithiummethoxid eller magnesiummethoxid), trialkylamin (f.eks. triethylamin), pyridin eller en bicyclodi-azaforbindelse (f.eks. l,5-diazabicyclo[3,4,0]nonen-5 eller 1,5-10 diazabicyclo[5,4,0]undecen-5). Blandt disse baser kan en flydende base ogsâ anvendes som oplosningsmiddel.

Der er ingen begransning med hensyn til reaktionstemperaturen, og reaktionen kan fortrinsvis udferes ved en temperatur, der ligger mellem afkeling og stuetemperatur.

15 En forbindelse Ib eller et sait deraf fremstilles ved selektivt at fjerne en acylgruppe r| i forbindelse la eller et sait deraf.

Denne fremgangsmâde anvendes i de tilfalde, hvor acylgruppen udviser andre kemiske egenskaber end aminobeskyttelsesgruppen Rj over for enhver art af fjernelsesmetoder og selektivt kan fjernes ved en 20 valgt metode.

Denne reaktion udfores pâ ssdvanlig mâde, f.eks. ved en katalytisk reduktionsmetode, en flydende ammoniak-alkalimetalmetode, en syre-metode, en zink/syre-metode, en basemetode eller en hydrazinmetode.

Af disse metoder foretrækkes sâdanne, som passer til arten af acyl-25 gruppen r£ i forbindelse la.

Hver af de ovennævnte metoder forklares nedenfor: i) Den katalytiske reduktionsmetode:

Denne metode anvendes fortrinsvis i de tilfalde, hvor acylgruppen R^ i forbindelse la er en sâdan, som kan fjernes ved katalytisk reduk-30 tion.

DK 156252 B

19

Denne katalytiske reduktion udfores pâ sædvanlig màde, og egnede katalysatorer til denne katalytiske reduktion er sædvanlige katalysa-torer sâsom platinkatalysatorer (f.eks. platinplade, platinsvamp, platinsort, kolloidt platin, platinoxid eller platintrâd), 5 palladiumkatalysatorer (f.eks. palladiumsvamp, palladiumsort, palladiumoxid, palladium/kul, kolloidt palladium, palladium/bariumsulfat eller palladium/bariumcarbonat), nikkelkatalysatorer (f.eks. reduceret nikkel, nikkeloxid eller Raney-nikkel), cobaltkatalysatorer (f.eks. reduceret cobalt eller Raney-10 cobalt), jernkatalysatorer (f.eks. reduceret jern eller Raney-jern) og kobberkatalysatorer (f.eks. reduceret kobber, Raney-kobber eller Ullman-kobber).

Denne reduktion udfores sædvanligvis i et oplosningsmiddel. Som egnede oplosningsmidler kan f.eks. nævnes vand, methanol, éthanol, 15 propanol, ethylacetat, tetrahydrofuran, dioxan, N,N-dimethylformamid, eddikesyre, en blanding af vand og alkohol (f.eks. methanol eller éthanol), tetrahydrofuran, dioxan eller ethylacetat, samt andre sædvanlige organiske oplosningsmidler eller blandinger deraf. Re-duktionen udfores endvidere fortrinsvis i nærværelse af en syre, 20 f.eks. eddikesyre.

Reaktionen udfores fortrinsvis under noget mildere betingelser, f.eks. under afkoling eller opvarmning.

Hvis R*ï er en gruppe med formlen -CONHNHY, og aminobeskyttel-sesgruppen Y er den samme som acylgruppen Rç, fjernes en sâdan 25 aminobeskyttelsesgruppe ved denne metode ogsâ samtidig til dannelse af en forbindelse Ib, hvor er en gruppe med formlen -CONHNH2. Hvis en beskyttet carboxygruppe RP f.eks. er af typen substitueret eller usubstitueret aralkylester (f.eks. benzylester, p-nitrobenzylester, p-chlorbenzylester eller p-phenylazobenzylester), fjernes en sâdan 30 beskyttelsesgruppe ogsâ samtidig ved denne fremgangsmâde til dannelse af en forbindelse Ib, hvor RP er carboxy.

DK 156252B

20 i i) Syremetode: ii)-l: Anvendelse af trifluoreddikesyre eller myresyre:

Denne metode anvendes fortrinsvis i de tilfælde, hvor acylgruppen r| er en sâdan, som kan fjernes ved behandling med trifluoreddikesyre 5 eller myresyre, f.eks. tert.butoxycarbonyl.

Denne reaktion udferes sædvanligvis i et oplesningsmiddel sâsom methylenchlorid, chloroform, eddikesyre eller vand i nærværelse af trifluoreddikesyre eller myresyre, og der tilssttes fortrinsvis anisol.

10 Trifluoreddikesyre og myresyre anvendes ogsâ som oplesningsmiddel.

Denne reaktion udfores sædvanligvis ved en temperatur, der ligger mellem isafkoling og stuetemperatur.

Hvis R5 er en gruppe med formlen -CONHNHY, og aminobeskyttel-sesgruppen Y er den samme som acylgruppen R^, fjernes en sâdan 15 aminobeskyttelsesgruppe ved denne metode ogsâ samtidig til dannelse . af en forbindelse Ib, hvor R^ er en gruppe med formlen -CONHNH2· Hvis den beskyttede carboxygruppe RP f.eks. er en forgrenet alkylester (f.eks. en tert.butylester) eller en substitueret eller usubstitueret aralkylester (f.eks. diphenylmethylester eller p-methoxÿbenzylester), 20 fjernes en sâdan beskyttelsesgruppe ogsâ samtidig til dannelse af en forbindelse Ib, hvor RP er carboxy.

ii)-2: Anvendelse af saltsyre eller p-toluensulfonsyre:

Denne metode anvendes fortrinsvis i de tilfælde, hvor acylgruppen r| er en sâdan, som fjernes ved behandling med saltsyre eller p-toluen-25 sulfonsyre.

Et foretrukket eksempel pâ en sâdan acylgruppe er tert.butoxycarbonyl ud over de grupper, som er illustreret ovenfor under ii)-l.

DK 156252 B

21

Denne reaktion udfores i et oplesningsmiddel sâsom ethylacetat, meth-ylenchlorid, chloroform eller tetrahydrofuran i nærværelse af en uorganisk eller organisk stærk syre, f.eks. saltsyre eller p-tolu-ensulfonsyre, og der tilsættes fortrinsvis anisol.

5 Denne reaktion udferes fortrinsvis ved en temperatur, der ligger mellem isafkoling og stuetemperatur.

Hvis R*} er en gruppe med formlen -CONHNHY, og aminobeskyttel-sesgruppen Y er den samme som acylgruppen r|, fjernes en sâdan aminobeskyttelsesgruppe ved denne metode ogsâ samtidig til dannelse 10 af en forbindelse Ib, hvor R*ï er en gruppe med formlen -CONHNH2. Hvis en beskyttet carboxygruppe RP f.eks. er en forgrenet alkylester (f.eks. tert.butylester) eller en substitueret eller usubstitueret aralkylester (f.eks. diphenylmethylester eller p-methoxybenzylester), fjernes en sâdan beskyttelsesgruppe ogsâ samtidig til dannelse af en 15 forbindelse Ib, hvor RP er carboxy.

ii)-3: Anvendelse af hydrogenbromid:

Denne metode anvendes fortrinsvis i de tilfælde, hvor acylgruppen r£ er en sâdan, som kan fjernes ved behandling med hydrogenbromid.

Et foretrukket eksempel pâ en sâdan acylgruppe er benzyloxycarbonyl, 20 foruden de grupper, der er anfert som eksempler under ii)-l og ii)-2.

Denne reaktion udfores sædvanligvis i et oplesningsmiddel sâsom ethylacetat, eddikesyre eller trifluoreddikesyre i nærværelse af hydrogenbromid.

Denne reaktion udfores fortrinsvis ved en temperatur, der ligger 25 mellem isafkeling og stuetemperatur.

Hvis R*ï er en gruppe med formlen -CONHNHY, og aminobeskyttel-sesgruppen Y er den samme som acylgruppen R^, fjernes en sâdan aminobeskyttelsesgruppe ved denne metode ogsâ samtidig til dannelse af en forbindelse Ib, hvor R^ er en gruppe med formlen -CONHNH2. Hvis 30 en beskyttet carboxygruppe RP f.eks. er en forgrenet alkylester

DK 156252 B

22 (f.eks. tert.butylester) eller en substitueret eller usubstitueret aralkylester (f.eks. diphenylmethylester eller p-methoxybenzylester), fjernes en sâdan beskyttelsesgruppe samtidig til dannelse af en for-bindelse Ib, hvor RP er carboxy.

5 iii) Flydende ammoniak-alkalimetalmetode:

Denne metode anvendes fortrinsvis i de tilfælde, hvor acylgruppen r£ er en sâdan, som kan fjernes ved behandling med flydende ammoniak-alkalimetal.

Et foretrukket eksempel pâ en sâdan acylgruppe er benzyloxycarbonyl.

10 Denne reaktion udferes sædvanligvis ved at oplese en forbindelse la i flydende ammoniak og derefter tilsætte alkalimetal.

Denne reaktion udferes fortrinsvis ved lavere temperatur, f.eks. en temperatur mellem -78°C og flydende ammoniaks kogepunkt.

Hvis R*î er en gruppe med formlen -CONHNHY, og aminobeskyttel-15 sesgruppen Y er den samme som acylgruppen R^, fjernes en sâdan aminobeskyttelsesgruppe ved denne metode samtidig til dannelse af en forbindelse Ib, hvor R*î er en gruppe med formlen -CONHNH2.

iv) Hydrazinmetoden:

Denne metode anvendes fortrinsvis i de tilfælde, hvor acylgruppen r| 20 er en sâdan, som kan fjernes ved behandling med en hydrazinfor- bindelse. Foretrukne eksempler pâ sâdanne acylgrupper er formyl og acetoacetyl.

Foretrukne eksempler pâ hydrazinforbindelser er hydrazin, methyl-hydrazin og phenylhydrazin og foretrukne eksempler pâ aminofor-25 bindelser er hydroxylamin eller dialkylaminoalkylamin (f.eks. N,N-dimethylaminopropylamin).

Denne reaktion udferes sædvanligvis ved at behandle forbindelse la med hydrazinforbindelsen eller aminoforbindelsen i et

DK 156252 B

23 opl0sningsmiddel sâsom vand, alkohol (f.eks. methanol eller éthanol), tetrahydrofuran eller dioxan ved en temperatur, der ligger mellem stuetemperatur og tilbagesvalingstemperaturen.

Hvis er en gruppe med formlen -CONHNHY, og aminobeskyttel-5 sesgruppen Y er den samme soin acylgruppen R^, fjernes en sâdan aminobeskyttelsesgruppe ved denne metode samtidig til dannelse af en forbindelse Ib, hvor R^ er en gruppe med formlen -C0NHNH2- vi): Basemetoden:

Denne metode anvendes fortrinsvis i de tilfælde, hvor acylgruppen Rç 10 er en sâdan, som kan fjernes ved behandling med en base.

Foretrukne eksempler pâ sâdanne acylgrupper er substitueret eller usubstitueret alkoxycarbonyl og substitueret eller usubstitueret aryloxycarbonyl. *

Denne metode udfores i nærværelse af en base ved en temperatur, der 15 ligger mellem isafkeling og stuetemperatur.

Egnede baser er uorganiske baser sâsom alkalimetalhydroxider, jord-alkalimetalhydroxider, de tilsvarende carbonater og hydrogencarbo-nater (f.eks. natriumhydroxid, kaliumhydroxid, natriumcarbonat, kaliumcarbonat, lithiumcarbonat, natriumhydrogencarbonat, calcium-20 hydroxid eller magnesiumhydroxid) og ammoniakvand samt organiske baser sâsom alkoxider eller phenoxider af de ovennævnte metaller (f.eks. natriumethoxid, natriummethoxid eller lithiumphenoxid), ami-noforbindelser sâsom mono-, di- eller tri-alkylaminer (f.eks. methyl-amin, ethylamin, propylamin, isopropylamin, butylamin, N,N-dimethyl-25 1,3-propandiamin, trimethylamin eller triethylamin), usubstituerede eller mono- eller disubstituerede arylaminer (f.eks. anilin, N-methylanilin eller Ν,Ν-dimethylanilin), heterocycliske baser (f.eks. pyrrolidin, morpholin, N-methylmorpholin, N-methylpiperidin, N,N-dimethylpiperazin eller pyridin) eller basiske ionbytterharpikser.

30 Denne metode udfores fortrinsvis under noget mildere betingelser, f.eks. under afkeling eller opvarmning, og sædvanligvis i et hvilket

DK 156252 B

24 som helst oplasningsmiddel, som ikke har ugunstig indflydelse pâ reaktionen, f.eks. vand, et hydrofilt oplasningsmiddel sâsom alkohol (f.eks. methanol, éthanol eller propanol), N.N-dimethylformamid, tetrahydrofuran, dioxan, dimethylsulfoxid eller blandinger deraf. Nâr 5 de ovennævnte baser er i flydende fora, kan de ogsâ anvendes som oplasningsmiddel.

Hvis Ri er en gruppe med formlen -CONHNHY, og aminobeskyttel-sesgruppen Y er den samme som acylgruppen R^, fjernes en sâdan aminobeskyttelsesgruppe ved denne metode samtidig til dannelse af en 10 forbindelse Ib, hvor Ri er en gruppe med formlen -CONHNH2. Nâr en beskyttet carboxygruppe RP i en forbindelse la f.eks. er en alkylester (f.eks. methylester eller ethylester), fjernes en sâdan beskyttelsesgruppe ogsâ samtidig til dannelse af en forbindelse Ib, hvor RP er carboxy.

15 3) Fremgangsmâdevariant c): Eliminering af beskyttelsesgrupper, dels forbindelse le -> forbindelse Id, dels generel fjernelse af be skyttelsesgrupper med den fakultative del af fremgangsmâdevariant a).

Forbindelsen Id fremstilles ved at underkaste en forbindelse le en reaktion til fjernelse af beskyttelsesgrupper pâ beskyttede carboxy-20 grupper RP og Ri og/eller aminobeskyttelsesgrupper Rr, hvilket nærmere forklares nedenfor:

Eliminering af aminobeskyttelsesgruppen Rr,

Eliminering af en aminobeskyttelsesgruppe Rr udfares pâ i det væ-sentlige samme mâde som beskrevet ovenfor i forbindelse med fremstil-25 lingen af forbindelse Ib, hvorfor der henvises til omtalen af denne fremgangsmâdevariant.

Fjernelse af carboxybeskyttelsesgrupper fra beskyttede carboxygrupper RP og Ri.

Reaktionen til fjernelse af beskyttelsesgrupper fra de beskyttede 30 carboxygrupper udfores pâ sædvanlig mâde, f.eks. ved hydrolyse eller reduktion, som nærmere forklaret nedenfor.

DK 156252B

25 i) Ved hydrolyse forstâs det samme som solvolyse, der f.eks. omfatter acidolyse, alkoholyse, aminolyse og hydroxinolyse:

Hydrolyse udfores fortrinsvis i nærværelse af en syre eller base.

Egnede syrer omfatter uorganiske syrer (f.eks. saltsyre, brombrin-5 tesyre eller svovlsyre), organiske syrer (f.eks. myresyre, eddike-syre, trifluoreddikesyre, propionsyre, benzensulfonsyre eller p-tolu-ensulfonsyre) og sure ionbytterharpikser.

Egnede baser omfatter uorganiske baser, f.eks. alkalimetal- eller jordalkalimetalhydroxider eller de tilsvarende carbonater eller 10 hydrogencarbonater (f.eks. natriumhydroxid, kaliumhydroxid, natri- umcarbonat, kaliumcarbonat, lithiumcarbonat, natriumhydrogenarbonat, caleiumhydroxid eller magnesiumhydroxid) eller ammoniakvand; organiske baser sâsom alkoxider eller phenoxider af de ovennævnte me-taller (f.eks. natriumethoxid, natriummethoxid eller lithium-15 phenoxid), aminer sâsom mono-, di- eller trialkylaminer (f.eks. methylamin, ethylamin, propylamin, isopropylamin, butylamin, N,N-dimethyl-1,3-propandiamin, trimethylamin eller triethylamin), usubstituerede, mono- eller disubstituerede arylaminer (f.eks. anilin, N-methylanilin eller Ν,Ν-dimethylanilin), heterocycliske 20 baser (f.eks. pyrrolidin, morpholin, N-methylmorpholin, N-methyl-piperidin, Ν,Ν-dimethylpiperazin eller pyridin) eller hydraziner (f.eks. hydrazin, methylhydrazin eller ethylhydrazin) ; og basiske ionbytterharpikser.

Hydrolysen udfores fortrinsvis under noget mildere betingelser, 25 f.eks. afkoling eller opvarmning, og sædvanligvis i et oplosnings- middel, som ikke har ugunstig indflydelse pâ reaktionen, f.eks. vand, et hydrofilt oplosningsmiddel sâsom alkohol (f.eks. methanol, éthanol eller propanol), acetone, Ν,Ν-dimethylformamid, tetrahydrofuran, dioxan eller dimethylsulfoxid eller blandinger deraf, ligesom der som 30 oplosningsmiddel ogsâ kan anvendes andre hydrofobe oplesningsmidler sâsom benzendiethylether. En flydende syre eller base som ovenfor anfert kan ogsâ anvendes som oplosningsmiddel.

DK 156252 B

26 ii) Reduktion:

Reduktion, herunder kemisk reduktion og katalytisk reduktion, udfores pâ sædvanlig mâde.

Egnede reduktionsmidler til anvendelse ved kemiske reduktioner er 5 metaller (f.eks. tin, zink eller jern) eller en kombination af et sâdant métal og/eller en metallisk forbindelse (f.eks. chromchlorid eller chromacetat) og en organisk eller uorganisk syre (f.eks. myresyre, eddikesyre, propionsyre, trifluoreddikesyre, p-toluensulfonsyre, saltsyre eller brombrintesyre).

10 Egnede katalysatorer til anvendelse ved katalytiske reduktioner er sædvanlige katalysatorer, f.eks. platinkatalysatorer (f.eks. platin-plade, platinsvamp, platinsort, kolloidt platin, plationoxid eller platintrâd), palladiumkatalysatorer (f.eks. palladiumsvamp, palladiumsort, palladiumoxid, palladium/kul, kolloidt palladium, 15 palladium/bariumsulfat eller palladium/bariumcarbonat), nikkelkatalysatorer (f.eks. reduceret nikkel, nikkeloxid eller Raney-nikkel), cobaltkatalysatorer (f.eks. reduceret cobalt eller Raney-cobalt), jernkatalysatorer (f.eks. reduceret jern eller Raney-jern) eller kobberkatalysatorer (f.eks. reduceret kobber, Raney-kobber 20 eller Ullman-kobber).

Reduktionen udfares sædvanligvis i et oplosningsmiddel. Som egnede oplesningsmidler kan f.eks. anvendes vand, alkohol (f.eks. methanol, éthanol eller propanol) og andre sædvanlige organiske oplesnings-midler eller blandinger deraf. Desuden kan de flydende syrer, der 25 anvendes ved den kemiske reduktion, ogsâ anvendes som oplesnings-middel. Yderligere egnede oplesningsmidler til katalytiske reduktioner er f.eks. de ovennævnte oplosningsmidler og andre sædvanlige oplesningsmidler, f.eks. diethylether, dioxan eller tetrahydrofuran eller blandinger deraf.

30 Reaktionen udfores fortrinsvis under noget mildere betingelser, f.eks. afkeling eller opvarmning.

DK 156252 B

27

Af disse metoder til fjernelse af beskyttelsesgrupper skal de fore-trukne og egnede kombinationsmetoder vælges ait afhængig af arten af de beskyttelsesgrupper pâ carboxy og amino, soin skal fjernes.

Det skal beroærkes, at denne fremgangsmâdevariant omfatter folgende 5 tilfælde, hvor carboxybeskyttelsesgrupper og aminobeskyttelsesgrupper fjernes, nemlig det tilfælde, hvor aile carboxybeskyttelsesgrupper RP og og aminobeskyttelsesgruppen Rr i forbindelse le fjernes samtidig, og det andet tilfælde, hvor carboxybeskyttelsesgrupperne og aminobeskyttelsesgruppen fjernes successivt og trinvist ved metoder, 10 som vælges ait afhængig af arten af de beskyttelsesgrupper, der skal fjernes.

Fjernelse af hydrazinogruppen.

En beskyttet carbazoylgruppe med formlen -CONHNHY, hvor Y er en aminobeskyttelsesgruppe, kan fjernes ved forst at underkaste for-15 bindelse le den ovenfor beskrevne reaktion til eliminering af aminobeskyttelsesgruppen (dvs. Y) til dannelse af gruppen -CONHNH2 og derefter underkaste reaktionsproduktet en reaktion til dannelse af en -COOH-gruppe. Denne reaktion beskrives nærmere nedenfor:

Dette reaktionstrin udfores pâ sædvanlig mâde ved at behandle for-20 bindelse le med et sædvanligt oxidationsmiddel, som er i stand til at oxidere en gruppe med formlen -CONHNH2 til dannelse af en gruppe med formlen -COOH, og foretrukne eksempler pâ sâdanne oxidationsmidler er halogen, f.eks. iod eller brom; en perhalogensyre sàsom periodsyre eller et sait deraf (f.eks. natriumsaltet eller kaliumsaltet), 25 perchlorsyre, et N-halogenimid sâsom N-bromsuccinimid, tetraacetat, hydrogenperoxid eller et sait deraf (f.eks. nikkelperoxid), et metaloxid sâsom mercurioxid, mangandioxid eller nikkelperoxid eller en cupriforbindelse (f.eks. cupriacetat eller cuprisulfat).

Denne reaktion udfores sædvanligvis i et oplosningsmiddel sâsom vand, 30 eddikesyre, methanol, éthanol, tetrahydrofuran eller dioxan eller blandinger deraf, som vælges ait afhængig af arten af det oxidationsmiddel , der anvendes.

DK 156252 B

28

Demie reaktion udferes sædvanligvis ved en temperatur mellem is-afkeling og stuetemperatur eller under kogning under tilbagesvaling.

I forbindelse med fremgangsmâdevariant d) og den fakultative del af fremgangsmâdevariant a) til eliminering af beskyttelsesgrupper skal 5 det bemærkes, at nâr acylgruppen rA har én eller flere beskyttelsesgrupper for hydroxy og/eller carboxy, kan sâdanne beskyttelsesgrupper fjernes samtidig, og et sâdant tilfælde ligger inden for denne fremgangsmâdevariants omfang.

Fremstilling af udgangsforbindelser II og III.

10 Formlerne II og III omfatter begge hidtil ukendte forbindelser, som kan fremstilles ved de iiedenfor beskrevne metoder. Blandt forbindelser med formlen III kan en hidtil ukendt forbindelse illustreres med nedenstàende almene formel: îb R^HNCHCON-R, I „ a (ÇH2)j RTHNCHRq hvor R^-, r|, r£, R3 og Rr har den ovenfor anforte betydning, under 15 den forudsætning, at nâr R*- betegner hydrogen eller tert.butyl, og R§ betegner hydrogen, er r| mono- eller dicarboxy-lavere alkyl med 1 og 3-6 carbonatomer, α-carboxyethyl eller phenyl-(carboxy)-lavere-alkyl, hvis phenyldel kan være substitueret med hydroxy.

Fremstillingen af udgangsforbindelserne med formlerne II og III frem-20 gâr i detaljer af nedenstàende reaktionsskema

DK 156252 B

29 r2 p2 »2 R^NHÇHR^ hP-R^ R^HNCHCO.'N-R* (Procès- 2S)^ H2NCHCoJï-R* Æ3 r ψν». fe \ h 1=) Λ (V-l) (III-l) (III-2) 2 (Procès CC^V. f fî . r ^ >VjBC0JMî (Pro- À f e|hNCEC0.B-^ (pro.^HHCHC0.S-Ra (Pro- CÇH2>3

RTHNCHC00H ces ^CH (CH*), ces .(CH ) JJ*. rJhNCHRS

(Ay, . H^COOH 0&.φΙ*1 ^ τ I 2 3 I 2 3 2 Ν&ί^. 2 . '1, S HNCHCOOH CB (111-4)^1, <in-l«> (ΙΠ-3) ,V-2) =\ >° · V r . fl 2 > iÇHNCHCO.lî-R*. .

— » (CH«) , (VI-7) . s r L2 *

(Procès: 5 ) R£HNCHCOOH

*2r l : 2 ““V- 31s) 22S) f>\ 2 >%- r N' H.NCHCO, "N-R^ (Pro- HNÇHCO .N-R R,HNCHC0 .N-R' 2 i · a -s% Γ a 2 I i (ch2)3 'ee-?- }> (çh2)3 (cér φ*2>3 ' * H2nIhr| R^HNCHr| 85) ^HNCHR^ H^CHCONHNHÏ . (III“5) (III'6) (ΙΠ"10λ (CH2)3 (Procès 7S) η.νΑηοονηνηυ * r? r? 2 . r 1 ° 2 I® 2 /TTT .. R,HNCHCO.N-R H-NCHCO Jî-R · (VI-8) 2 | a 2 j a (ch2)3 (çh2)3

(Procès E2NCHR3 R^HNCHCONHNHY

23S) (III-7) (III-16) y ^(Procès 32*

. . E-NCHCOOH (Procès 24s)v rJhnCHCOOH (Procès J

(CHj)3 (ch2)3 -2¾ H^CHCONHNHY rïjhnchconhnhy \gf* m-9) (VI-10) (CH2)3 (Pro- r|hNCHCONHHHÎ h3nchcooh *-CRS 26 r ifys

RJHNCHCONHNHY

rvi-12)

DK 156252 B

30 R^HNCHR^ E-NÇHK’ 2 , ' 2 --5^5

2,L ? h5bhçœS

1 2;3 {p H NCHCOHNNHI * ,< f H,NCHCOHNNHY />o0ft .. _ ΊΤ3

Ctt) (7Ι_1) - H^HHCHCOMNHÏ =2^3 CVI-3) (ÇV, Z'"" ^HNŒCOHKNm^^^^^ (Procès 14 ) (VI-2) ^ ÇjoÿS^ · ^SCBe'1.

S? r |b RTHNCHCOHNNH- ^ŒÇHCO.M* · (VI.4) (çh2)3 - ^HNCHCOHNNHÏ / (Proces (m-s) e / (Procès I8S) / * / iÇhnchr^ / (Κ53 R^HNCHCOOH R^HNCHB* / R^HNCHCO; N-R^ r ^3 · (IIT ' <K>3 ^ 2 R£HKCHCONHNHY 17s) R£HNCHCONHNHY (III-ll)

(VI-5) (VI-€) I

| (Procès 16s) R^HNCHCOOH RjHNCHR| * (Procès H.NCHR? 2 i (pr°- 2 ! 5 2os) 2 I 3 (CH J. ces. (CE,). -(CH,), _ | 2 3 ,» toS\ -r l” Λ 2T I 2 2 2

R£HBCHC0°3!-R* — -> H£HNCH£X>ir»E. H2NCHC0>ÏJ-R

k ‘ 'fc * k * (111-12) (111-13) £1X1-5) 2 2 r 2 ^ro“ r " ?** 2*

• R-HNCHCQ-îï-R ces -ïLHNCHCO.N-R

2 | - a 27S) 2 I - a (ch2)3 ((¾ Ε^ΕΝ^ΗΟΟΝΗΝΗΓ Ε^ΗΝ^ΕαΟΝΗΝΗΥ .

(XXX-9) (IIX-9')

DK 156252 B

31

RrHNCHCON-R2 RrHNCHCON-R2 1 * 2 a s I «2 a _!f;c!s:„ 3f (çh2.^

RrHNCHCONHNH2 RrHNCHR| (III-17) (III-18)

RrHNCHCON-R2 RrHNCHCON-R2 | »2 a I '2 a (CH~)?b Procès 38s (CH,)?b \ ___» | z K2NCHr| RrHlJCHR| (III-19) (IIX-20)

DK 156252B

32

Fremstilling af forbindelse II: i) Procès 33S

5 RÎ-OH + HCHNCHCO) -HNCHRP

I -* K .

COOH

Cii-i) 10

rÎ- (HNCHCO) -HNCHRP

c *! I

S C(JH2^m

• COOH

15 CH)

ii) Procès 34S

20

R1-fHNCHCOl OH + H„NCHRP

c L 11 2 | *

Rb

COOH

25 (II-2) (I1-5} RÎ-(HNCHCO)„-HNCHRp

c U n I

RT Cch7 3 30 U I Z m

COOH

(II) 35 III) Procès 35s 33

DK 156252 B

£

R*-HNCHCOOH + H,NCHCOHNCHRp c 2 Ij. I

. H W.

èoOH

CII-43 (II-5) ' _* rJ-*CHNÇHC0)2-HNCHRp *b· i°y»

(II) COOH

I de ovenfor anforte formler betegner R£ methoxy-, ethoxy-, propoxy-, butoxy-, tert.butoxy- eller tert.-pentoxycarbonyl eller benzyloxycarbonyl, 5 R2' mono- eller di-(beskyttet carboxy)-lavere-alkyl eller phenyl-(be- skyttet carboxy)-lavere-alkyl, hvis phenyldel kan være substitueret med hydroxy, R§ betegner eventuelt beskyttet carboxy, undtagen beskyttet carb-azoyl, 10 R§ betegner esterificeret carboxy, og R|, Rj, Rp, Rf, R?. R|. Y, n og n har den ovenfor anforte betydning.

Udtrykket "beskyttet carboxy" betegner methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl, carbazoyl, 3-tert.butoxycarbonylcarbazoyl eller 3-benzyloxycarbonylcarbazoyl.

15 Nærmere forklaring af definitioneme pâ R$ og r|* og foretrukne eksempler herpâ er som angivet for heriholdsvis R J og r|, og foretrukne eksempler pâ esterificeret carboxy som betydning af R§ er de samme som for R§, R^ og R$.

DK 156252 B

34 1) Procès 1s: Forbindelse V-l + forbindelse IV —^ forbindelse lll-l.

Ved den procès fremstiiles en forbindelse lll-l ved at omsætte en forbindelse V-l eller et sait deraf med en forbindelse IV eller et sait deraf.

5 Formlen V-l omfatter kendte forbindelser, der f.eks. er beskrevet i Biochemistry, vol. 9, side 823 - 831, 1971, og hidtil ukendte forbindelser, som kan fremstiiles ved den metode, som er beskrevet i nævnte litteratursted.

Dennë reaktion udfpres pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet 10 for fremgangsmâdevariant a).

2) Procès 2S: Forbindelse lll-l ^ forbindelse III-2.

Ved denne procès fremstiiles forbindelser III-2 ved at underkaste forbindelser lll-l en reaktion til eliminering af begge aminobeskyt-telsesgrupper R^ og R^.

15 Denne procès anvendes i tiifælde, hvor begge aminobeskyttelses-

Μ M

grupper og R2 er sâdanne, som kan fjernes ved den her anvendte metode.

Denne reaktion udfores pi sædvanlig mâde, f.eks. ved en katalytisk reduktionsmetode, en flydende ammoniak-alkalimetalmetode, en syre-20 metode, en zink/syremetode, en basemetode eller en hydrazinmetode.

Blandt disse metoder udvælges den foretrukne metode ait afhængig af η m arten af aminobeskyttelsesgrupperne R^ og R2 i forbindelser lll-l.

Denne reaktion udfpres pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet for fremstilling af forbindelsen lb ovenfor.

25 3) Procès 3S: Forbindelse lll-l —^ forbindelse 111-3.

Ved denne procès fremstiiles forbindelser II 1-3 eller salte deraf ved selektivt at fjerne en aminobeskyttelsesgruppe RÎj fra forbindelser lll-l eller salte deraf.

35

DK 156252 B

Denne procès anvendes i tilfælde, hvor aminobeskyttelsesgruppen r£ udviser andre kemiske egenskaber end over for hver af de fjer-nelsesmetoder, som er nævnt ovenfor i forbindelse med fremstilling af forbindelsen Ib, og den kan fjernes selektivt ved den her anvendte 5 metode.

Denne reaktion udfpres pâ sædvanlig mâde som forklaret i forbindelse med fremstilling af forbindelsen Ib. Blandt disse metoder udvælges den foretrukne metode ait afhængig af arten af aminobeskyttelses-gruppen R2. Hver af sâdanne metoder og arten af sâdanne amino-10 beskyttelsesgrupper er forklaret i forbindelse med fremgangsmide-variant b).

4) Procès 4S: Forbindelse II 1-1 forbindelse II 1-4.

Ved denne procès fremstilles forbindelser II 1-4 eller salte deraf ved selektivt at fjerne aminobeskyttelsesgruppen R^ fra forbindelser lll-l 15 eller salte deraf.

Denne procès anvendes i de tilfælde, hvor aminobeskyttelsesgruppen R^ og aminobeskyttelsesgruppen i den beskyttede carbazoylgruppe R^ indbyrdes har samme kemiske egenskaber og har egenskaber, som adskiller sig fra de egenskaber, som r£ har over for hver af de 20 fjernelsesmetoder, som er nævnt ovenfor i forbindelse med fremstilling af forbindelsen Ib, og de kan fjernes selektivt ved den her anvendte metode.

S v 5) Procès 5 : Forbindelse 111-4—v forbindelse 111-5.

Ved denne procès fremstilles forbindelser II 1-5 eller salte deraf ved at 25 fjerne en aminobeskyttelsesgruppe R^ fra forbindelser II 1-4 eller et sait deraf.

Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde, som ovenfor er beskrevet for procès 3S.

\

DK 156252 B

36 6) Procès 6S: Forbindelse 111-5—^ Forbindelse HI-6.

Ved denne procès fremstilles forbindelser II 1-6 ved at omsætte for-bindelser II 1-5 med et aminobeskyttelsesmiddel.

Aminobeskyttelsesmidlerne omfatter organiske carboxylsyrer, sulfon-5 syrer, sulfinsyrer, phosphorsyrer og carbonsyrer, aldehyder og ketonforbindelser, som er sammensat af samme beskyttelsesgrupper som defineret for aminobeskyttelsesgrupperne R , Rj og Y og reak-tive derivater deraf.

De reaktive derivater omfatter sædvanlige derivater sasom haloge-10 nider, aktiverede amider, aktiverede estere og syreazider.

Nlr en fri syreform af et sâdant aminobeskyttelsesmiddel anvendes, udfores reaktionen fortrinsvis i nærværelse af et kondensationsmiddel, som normalt anvendes pi aminosyre- og peptidkemiomrâdet.

Denne reaktion udfores i vand eller et vandigt organisk oplosnings-15 middel i nærværelse af en metalforbindelse sâsom cuprichlorid, cupri-sulfat, cupricarbonat eller cupriacetat.

7) Procès 7S: Forbindelse 111-5 ^ forbindelse 111-7.

Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-7 ved at omsætte forbindelser Il 1-5 med et aminobeskyttelsesmiddel.

20 De aminobeskyttelsesmidler, der kan anvendes ved denne reaktion, er g de samme som beskrevet i forbindelse med procès 6 .

Denne reaktion udfpres i et sædvanligt oplosningsmiddel, fortrinsvis i pH-omrâdet 6 - 9, navnlig ved en omtrentlig neutral pH-værdi, under en temperatur, der ligger mellem isafkoling og stuetemperatur.

DK 156252 B

37 8) Procès 8S: Forbindelse III-6—^ forbindelse 111-10.

Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-10 ved at omsætte for-bindelser lli-6 med et aminobeskyttelsesmiddel.

Aminobeskyttelsesmidlerne er de samme som beskrevet i forbindelse g 5 med procès 6 , og reaktionsbetingelserne er de samme som beskrevet for fremgangsmldevariant b).

9) Procès 9S: Forbindelse VI * forbindelse VI-1.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-1 ved at omsætte forbindelser VI med et aminobeskyttelsesmiddel.

10 Ved denne reaktion er det nodvendigt, at den aminobeskyttelses-gruppe, som skal indfflres i den ene af de to aminogrupper i forbin-delsen VI, adskiller sig fra aminobeskyttelsesgruppen Y, hvis der skal dannes en stereospecifik forbindelse.

De aminobeskyttelsesmidier, der kan anvendes, er de samme som 15 beskrevet i forbindelse med procès 6 .

»

Reaktionen udfpres pâ i det væsentlige samme mide som procès 6 .

10) Procès 10s: Forbindelse VI ^ forbindelse VI-2.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-2 ved at omsætte forbindelser VI med et aminobeskyttelsesmiddel.

20 Ved denne reaktion kan den aminobeskyttelsesgruppe, der skal ind-fores i aminogruppen, være den samme som eller forskellig fra Y.

Foretrukne eksempler pâ aminobeskyttelsesmidier er som beskrevet i g forbindelse med procès 6 . *

Denne reaktion udfpres i vand eller i et vandigt organisk oplpsnings-25 middel, fortrinsvis inden for pH-omrâdet mellem 6 og 9, navnlig ved 38 ! DK 156252 B j i omtrentlig neutral pH-værdi, ved en temperatur, der ligger mellem isafkpling og stuetemperatur.

11) Procès 11s: Forbindelse Vl-l ? forbindelse VI-3.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-3 ved at omsætte for-5 bindelser VI-1 med et aminobeskyttelsesmiddel.

Ved denne reaktion er det nodvendigt, den aminobeskyttelsesgruppe, der skal indfpres i aminogruppen, adskiller sig fra R2 i forbindelse VI-1, hvis der skal fremstilles stereospecifikke forbindelser, men den kan være den samme som Y.

10 Denne reaktion udfpres fortrinsvis under neutrale-alkaliske betin-gelser, og de ovrige reaktionsbetingelser er som beskrevet i forbindelse med fremgangsmâdevariant b).

12) Procès 12S: Forbindelse VI-2 ^ forbindelse VI-3.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-3 ved at omsætte for-15 bindelser VI-2 med et aminobeskyttelsesmiddel.

Ved denne reaktion er det npdvendigt, at den aminobeskyttelsesgruppe, der skal indfpres i aminogruppen i forbindelser VI-3, adskiller sig fra og Y i forbindelser VI-2, hvis der skal fremstilles stereospecifikke forbindelser.

20 Reaktionsbetingelserne er de samme som beskrevet i forbindelse med procès 11s.

13) Procès 13s: Forbindelse VI-3—^ forbindelse 111-8.

Ved denne procès fremstilles forbindelser II 1-8 ved at omsætte for- 2' 2 bindelser VI-3 med en forbindelse med formlen IV HN(R )(R, ) eller a d 25 et sait deraf.

39

DK 156252 B

Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet for fremgangsmâdevariant a).

14) Procès 14s: Forbindelse VI-3 ~^ forbindelse VI-4.

Ved denne procès fremstilles forbindelser IV-4 ved selektivt at fjerne 5 en aminobeskyttelsesgruppe Y fra forbindelser VI-3.

Denne procès anvendes i de tilfælde, hvor aminobeskyttelsesgruppen Y har andre kemiske egenskaber end R^ og R^ over for hver af de fjernelsesmetoder, som er nævnt î forbindelse med fremstilling af forbindelsen Ib, og den kan fjernes selektivt ved den her anvendte 10 metode.

Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet for fremstilling af forbindelsen Ib.

15) Procès 15s: Forbindelse VI-4 forbindelse 111-11.

Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-11 ved at omsætte for- 15 bindelser VI-4 eller salte deraf med en forbindelse med den almene formel HN(R^)(R?) eller et sait deraf. a d

Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet for procès 1s.

16) Procès 16s: Forbindelse 111-11 —? forbindelse II 1-5.

20 Ved denne procès fremstilles forbindelser III-5 ved at fjerne begge aminobeskyttelsesgrupperne og R^ fra forbindelser 111-11.

Denne reaktion udfores pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet for procès 2S.

DK 156252B

40 17) Procès 17S: Forbindelse VI-5 ^ forbindelse VI-6.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-6 ved at omsætte for-bindelser VI -5 med et esterificerende middel.

Esterificeringsmidler til anvendelse ved denne reaktion er sædvanlige 5 esterificeringsmidler, f.eks. en alkohol (f.eks. methanol, éthanol, propanol, butanol eller benzylalkohol) eller reaktive ækvivalenter dertil (f.eks. halogenider, sulfater, aliphatiske eller aromatiske sul-fonater eller tilsvarende diazoforbindelser).

Denne reaktion udfores pâ sædvanlig mâde, og nâr der anvendes en 10 alkohol som esterificerende middel, udfores reaktionen sædvanligvis i nærvsrelse af en syre, f.eks. saltsyre, svovlsyre eller methansulfon-syre, og nâr der anvendes et alkylhalogenid som esterificerende middel, udfores reaktionen sædvanligvis i nærværelse af en base som anfort under fremgangsmidevariant b).

15 18) Procès 18s: Forbindelse VI-6—^ forbindelse VI-4.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-4 ved selektivt at fjerne en aminobeskyttelsesgruppe Y fra forbindelser VI-6.

Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet β for procès 14 .

20 19) Procès 19s: Forbindelse 111-12 —^ forbindelse 111-13.

Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-13 ved at omsætte forbindelser 111-12 med et esterificerende middel.

De esterificerende midler, der kan anvendes ved denne procès, er de samme som beskrevet for procès 17s.

25 Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet for procès 17s.

DK 156252 B

41 20) Procès 20s: Forbindelse 111-13 ^ forbindelse II 1-5.

Ved denne procès fremstilles forbindelser II 1-5 ved at fjerne begge p p aminobeskyttelsesgrupperne R2 og fra forbindelser 111-13.

Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet 5 for procès 16s.

21) Procès 21S: Forbindelse V-2 ^ forbindelse VI-7.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-7 ved at omsætte forbindelser V-2 med et halogeneringsmiddel.

Det halogeneringsmiddel, der skal anvendes ved denne reaktion, skal 10 være et sâdant, som er i stand til at halogenere en carboxygruppe til dannelse af det tilsvarende syrehalogenid, og det kan f.eks. være et sædvanligt halogeneringsmiddel sâsom phoshortrihalogenid (f.eks. phosphortrichlorid), phosphorpentahalogenid (f.eks. phosphorpenta-chlorid), thionylhalogenid (f.eks. thionylchlorid) eller phosgen.

15 Ved denne reaktion skal fplgende bemærkes: Nâr der som udgangs-forbindelse anvendes en forbindelse V-2, hvor begge grupperne R er carboacylgrupper (f.eks. alkoxycarbonyl), kan aile de ovenfor anfprte halogeneringsmidler anvendes, og reaktionen udfpres ved at omsætte forbindelsen V-2 med halogeneringsmidlet under opvarmning. Nâr der 20 som udgangsforbindelse anvendes en forbindelse V-2, hvor begge p symbolerne R betegner hydrogen, kan kun phosgen anvendes som halogeneringsmiddel, og reaktionen udfpres ved at omsætte forbindelsen V-2 med phosgen under afkpling eller opvarmning.

22) Procès 22s: Forbindelse VI-7 * forbindelse VI-8.

25 Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-8 ved at omsætte forbindelser VI-7 eller et sait deraf med en forbindelse med formlen F^NNHY eller et sait deraf.

DK 156252B

42

Denne reaktion udf0res fortrinsvis i nærværelse af en svag syre, f.eks. eddikesyre eller oxalsyre. Reaktionen udf0res i et sædvanligt oplesningsmiddel ved en temperatur, der ligger mellem isafkpling og stuetemperatur.

5 23) Procès 23s: Forbindelse VI-8 ^ forbîndelse VI-9.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-9 ved at omsætte for-bindelser VI-8 med en sædvanlig leucinaminopeptidase.

Denne reaktion udfores fortrinsvis i et sædvanligt optosningsmiddel, f.eks. vand eller et hydrofilt oplesningsmiddel sâsom alkohol (f.eks.

10 methanol eller éthanol), acetone eller en blanding deraf, i pH-omrâdet mellem 7 og 10, fortrinsvis mellem 8 og 9, ved 20 - 40°C, fortrinsvis 37°C.

24) Procès 24s: Forbindelse VI-9 -> forbindelse VI-10.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-10 ved omsætning af 15 forbindelser VI-9 med et amînobeskyttelsesmiddel.

Som aminobeskyttelsesmidler an vendes de samme som beskrevet i forbindelse med procès 6S.

Denne reaktion udfpres pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet for fremgangsmâdevariant b).

20 25) Procès 25s: Forbindelse VI-10—? forbindelse VI-11.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-11 ved at omsætte forbindelser VI-10 med et halogeneringsmiddel.

Som halogeneringsmidler an vendes de samme som beskrevet i forbin- g delse med procès 21 .

25 Denne reaktion udfpres pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet » for procès 21 . I denne sammenhæng skal det bemærkes, at hvis der 43

DK 156252 B

p som udgangsforbindelse anvendes en forbindelse VI-10, hvor er carboacyl (f.eks. alkoxycarbonyl), kah der anvendes aile de haloge-neringsmidler, som er anfort i forbindelse med beskrivelsen af procès 21s.

5 26) Procès 26s: Forbindelse VI-11 ^ forbindelse VI-12.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-12 ved at underkaste forbindelser VI-11 hydrolyse.

Denne reaktion udfores pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i forbindelse med fremgangsmâdevariant c).

10 27) Procès 27s: Forbindelse 111-9 ^ forbindelse 111-9'.

Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-9' ved at omsætte forbindelser Il 1-9 med et esterificerende middel.

Anvendelige esterificerende midler er som beskrevet i forbindelse med procès 17s.

15 Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet g for procès 17 .

28) Procès 28s: Forbindelse 111-3 ^ forbindelse 111-14'.

Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-14' ved at omsætte forbindelser 111-3 med et aminobeskyttelsesmiddel.

c 20 Anvendelige aminobeskyttelsesmidler er som beskrevet for procès 6 .

Denne reaktion udf0res pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet for procès 8S.

DK 156252B

44 29) Procès 29s: Forbindelse 111-14' ^ forbindelse III-4.

Ved denne procès fremstilles forbindelser II 1-4 ved selektivt at fjerne p en aminobeskyttelsesgruppe Rj.

Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet g 5 for procès 4 .

30) Procès 30s: Forbindelse 111-4 £ forbindelse 111-15.

Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-15 ved at omsætte forbindelser Il 1-4 med et aminobeskyttelsesmiddel.

g

Anvendelige aminobeskyttelsesmidler er som beskrevet for procès 6 .

10 Denne reaktion udf0res pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet for procès 8S.

31) Procès 31s: Forbindelse 111-15 ^ forbindelse 111-6.

Ved denne procès fremstilles forbindelser II 1-6 ved selektivt at fjerne en aminobeskyttelsesgruppe R^· 15 Denne reaktion udfores pâ î det væsentlige samme mâde som beskrevet for procès 3S.

32) Procès 32s: Forbindelse VI-11 —? forbindelse 111-16.

Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-16 ved at omsætte for- 2 2 bindelser VI-11 med en forbindelse HN(R )(R. ) eller et sait deraf.

a b 20 Denne reaktion udfpres pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet for procès 22s.

DK 156252 B

45 R1 -OH c

33) Procès 33s: Forbindelse 11-1 ^ forbindelse II

acylering

Ved denne procès fremstilles forbindelser II ved at omsætte forbin-5 delser 11-1 med et acyleringsmiddel.

Formlen ll-l omfatter kendte forbindelser (jfr. f.eks. Journal of Med. Chemistry, vol. 9, 971 (1966)) og hidtil ukendte forbindelser, og de hidtil ukendte forbindelser kan fremstilles pâ den i litteraturen be-skrevne mâde.

10 De til denne reaktion anvendelige acyleringsmidler er de samme som beskrevet for fremgangsmidevariant b).

Acyleringen udfpres pl i det væsentlige samme mâde som beskrevet i forbindelse med fremgangsmâdevariant b).

34) Procès 34s: Forbindelse 11-2 + forbindelse 11-3 —^ forbindelse 15 II.

Ved denne procès fremstilles forbindelser II eller salte deraf ved at omsætte forbindelser 11-2 eller salte deraf med forbindelser 11-3 eller salte deraf.

Denne reaktion udfpres pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet 20 for fremgangsmâdevariant a) ovenfor.

35) Procès 35 : Forbindelse 11-4 + forbindelse 11-5 7 forbindelse II.

Ved denne procès fremstilles forbindelser II eller salte deraf ved at omsætte forbindelser H-4 eller salte deraf med forbindelser 11-5 eller 25 salte deraf.

DK 156252B

46

Denne reaktion udf0res pâ i det væsentlige samme mide som beskrevet for fremgangsmâdevariant a).

36) Procès 36S: Forbindelse VI-3 ^ forbindelse VI-2.

Ved denne procès fremstilles forbindelser VI-2 eller salte deraf ved 5 selektivt at fjerne en aminobeskyttelsesgruppe fra forbindelser VI-3.

Denne reaktion udfores pl i det væsentlige samme mâde som beskrevet g for procès 3 , og der henvises til den detaljerede forklaring af procès 3S.

10 37) Procès 37s: Forbindelse 111-17 ^ forbindelse 111-18.

Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-18 ved at omsætte forbindelser 111-17 med et oxidationsmiddel i nærværelse af alkohol.

De oxidationsmidler, der kan anvendes ved denne procès, er de samme som beskrevet i forbindelse med fremgangsmâdevariant c).

15 Den i denne procès anvendte alkohol er en sædvanlig alkohol, f.eks. methanol, éthanol, propanol, butanol eller benzylalkohol.

Reaktionen udfores pl i det væsentlige samme mâde som beskrevet for fremgangsmâdevariant c).

38) Procès 38S: Forbindelse 111-19 ^ forbindelse 111-20.

20 Ved denne procès fremstilles forbindelser 111-20 ved at omsætte forbindelser 111-19 med et aminobeskyttelsesmiddel.

Anvendelige aminobeskyttelsesmidler er som beskrevet i forbindelse med procès 6S.

Denne reaktion udfores pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet 25 for procès 8S.

DK 156252 B

47

Forbindelser med formlen I og udgangsforbindelser med formlerne II og III, som fremstilles ved de ovennævnte processer, omfatter én eller flere stereoisomerer pi grund af asymmetriske carbonatomer i moleky-let, og aile sâdanne isomerer ligger inden for opfindelsens omfang.

5 De hidtil ukendte peptider I og farmaceutisk tolerable salte deraf har vist sig at kunne forpge immunresponsets aktivitet (dvs. forpge aktiviteten af den cellulære immunitet og den humorale antistofproduk-tion) ligesom forbindelserne forpger aktiviteten af det reticuloendo-theriale system, har mitogen aktivitet, inducerer interferonaktivitet, 10 har beskyttende virkning mod eksperimentelle infektioner og har anti-cancervirkning.

De hidtil ukendte peptider med formlen I og farmaceutisk tolerable salte deraf kan derfor anvendes i den terapeutiske behandling af infektionssygdomme, der er forârsaget af patogene mikroorganismer, 15 især gramnegative bakterier, grampositive bakterier og fungi, ligesom de kan anvendes til behandling af cancer hos mennesker og dyr.

Forbindelser II og III er nyttige mellemprodukter til fremstilling af forbindelser I, som har biologisk aktive egenskaber som nævnt oven-for.

20 Den farmaceutiske anvendelighed af de hidtil ukendte peptider med formlen I illustreres nedenfor ved angivelse af farmakologiske test-data.

1. Rensning af blodstrommen for kulpartikler ("blood stream clearance of carbon").

25 Reagenser: 1) Carbonsuspension: Rotring tegnetusch (170 mg carbon/ml) for-tyndes til 1/5 af den oprindelige koncentration i saltvand indehol-dende 1% gélatine.

2) 0,1%'s vandig natriumcarbonatoplosning.

DK 156252B

48

Teknik: 5-6 uger garnie hanmus (DDY) fik via halevenen injiceret en kul-dosis pi 0,01 ml/g legemsvægt. Der blev udtaget blodprpver ved hjælp af en tilspidset kapillærpipette, der var kalibreret til at inde-5 holde 50 jiliter, og som i forvejen var vasket i heparin. Denne blev stukket ind i den retroorbitale ven0se sinus ved 0jets næsevinkel. Pr0verne blev udtaget efter 3 og 6 minutters forlpb. Blodet blev 0jeblikkelig hældt ud i 3,0 ml af natriumcarbonatopl0sningen. Dette hæmolyserede blodet og tillod maling af carbonindholdet. Prpverne 10 blev derefter aflæst i et spectrofotometer ved 660 nm, og den loga-ritmiske koncentration blev bestemt ud fra en i forvejen fremstillet standardkurve. Clearanceværdien K kan bestemmes ved at afbilde den logaritmiske carbon koncentration som en funktion af tiden efter fpl-gende ligning: 15 (log C^-log K =- t2 - T, hvortil T.j og T2 angiver tiden i minutter, da pr0ven blev udtaget, og og C2 angiver carbonkoncentrationen i blodet pâ tidspunktet 20 henholdsvis og T2.

Underspgelse af virkningen af det hidtil ukendte peptid pi carbon-clea rance.

En vandig opl0sning af testforbindelsen blev administreret subcutant til mus. 24 timer senere blev blodstr0mmens carbonclearance malt. De 25 fra behandlede mus vundne K-værdier blev sammenlignet med værdier fra kontrolmus. Testresultaterne er anfprt i nedenstâende tabeller I - III.

DK 156252 B

49

Testforbindelse 1.

*1 *2

R1 - (HNCHCO)n- HNCHCOOH

5 | *1 ÇH2 I *3 9 COHN CHCONH-R^ I a 10 CH9 I ^ ?H2 CH2 h„n6hcooh ù *4

Tabel I

50

DK 156252 B

K Reference 5 R1 r! n R2 *1 *2 *3 *4 Dosis J>ehandlef forbindelse D 3 ίτηρ*/ ** jj. kontrol behandlet

K

kontrol 10 OH CH„ I 1 CH„CHCO CH„ 1 CHCOOH L D L D 1 1,3 1,3 D ά L 0,1 1,0 0,9 " ” " CH2-C6H5- L D L D 1 1,6 1,3 15 CHCOOH 0,1 1,1 0,9

D

fH3 " " " CH-COOH L D L D 1 2,8 2,3 D 0,1 2,6 1,2 20 H - 0 CHpCOOH- D L D 100 1,8 1 1,5 2,4 CH3CO " " » L D L D 1 1,2 1,0 0,1 0,8 0,8 Μ I " " " L D L D 1 1,8 1,8 25 6 Ψ \ 0>1 1,9 1,9 U i C0

Jl " " L D L D 100 1,7 [ \L 1 1,5 1,8 0 h 00 fH3 H » " CHCOOH L D L D 100 2,7 D 1 1,1 1,8

OH

CÆ-CHCO " " L D L D 1 1,6 1,8 6 5 D 0,1 1,7 1,7 35 ΟΗΛΟΗ,^Ο)" » " LDLD1 1,9 1,8 325 0,1 2,5 1,1 CH„(CH„). nCO" " ·· L D L D 1 1,7 1,8 3 2 10 0,1 2,1 1,9

DK 156252 B

51

Tabel I fortsat CHq(CH9).fiCO

CH„ 1 CH9C00HL D L D 1 1,5 1,3 0 Z 0,1 1,2 5 C-H.-CO *'2 " L D L D 1 1,3 1,3 b D 0,1 1,5 0,9 CHLCO *' " " L D L D 100 4,2 1 4,7 4,5 Γ 10 CHnUHCO H 1 " L D L D 100 2,0 1 0,9 2,0 " CH0OH " ” L D L D 100 2,3 Δ 1 1,1 2,0 CH.

15 » CH^CH" " L D L D 100 2,3 6 1 1,7 2,0 ” CH9-CfiH, " " L D L D 100 2,9 Z b b 1 1,6 2,3

CA

on °^CHCO CHq " " L D L D 1 1,4 1,8

CgH^ 0 0,1 1,8 1,9 /“"V* »· .... L D L D 1 2,0 1,8 0,1 1,6 1,2 Z~\ « " " L D L D 100 2,2 cAN/ CO 1 !>8

25 U H

C-.Ht.-SOo » " ” L D L D 1 1,2 1,8 b b ^ 0,1 1,6 1,7 CLH.-CH^HCO " " L D L D 1 2,0 1,8 b b 0,1 1,3 1,9

on OH COOH

30 f CH„CHCO " " CH9CH9 L D L D 1 1,8 1,8 **D Z Δ 0,1 1,5 1,7

CH9CHoC00H

I 2 2 « « "-CHCOOH L D L D 1 1,8 1,8 35 D 0,1 1,2 1,9 HOCH9CO CH„ 1 CH„COOH L D L D 100 2,5 1 ά Δ 1 0,9 2,1

DK 156252 B

52

Tabe! I fortsat OH

CHoCHC0 " " " L D L D 1 2,3 2,4 SL 0,1 1,5 1,4 5 NH9 CH„CHCO " " " L D L D 100 2,0 3D 1 1,8 2,0 /~VcH0CO" " " L D L D 100 1,6 XS/ A 1 1,9 2,2 " « " L D L D 100 2,1 W/ 1 1,9 2,2 CVcHo0C0 " " " L D L D 100 1,6 / 2 1 2,2 1,7 1S (CH.J-CCO" '' " L D L D 100 2,9 15 3 * 1 2,3 1,8 /Λ " " n L D L D 100 2,1 N^y 1 2,0 2,2 CH,(CH9)inCO" " L D L D 1 1,7 1,3 ό Δ 1U 0,1 1,6 0,9 20 λ-, ( VCO " " " L D L D 1 1,6 1,3 0,1 1,2 0,9

^OH

CHq(CH9)„CHC0 " " L D L D 1 3,0 3,6 3 2 3| 0,1 1,7 1,6 C2H5 25 Ci_/ C° " " L D L D 1 2,1 1,6 0,1 1,0 1,1 H CH3 1 CHpCOOH L D L D 100 2,1 1 0,8 2,1

OH

30 J

CH„CHCO " " " L D L D 100 1,0 D 1 0,7 1,0 " " » « L D L L 10 4,3 5,0 1 1,2 4,5

Tabel I fortsat 53

DK 156252 B

" " L L L D 100 2,8 1 1,4 3,6

OH

5 I

CH„CHCO " " " L D L D 100 2,6 1 2,4 2,2

OH

CH„CHCO " " n D D L D 1 2,2 1,8 10 D 0,1 1,9 1,2 CH„CH0CO " " " L D L D 100 2,0 0 * 1 1,6 2,1 CH„CO " " " L D L D 100 2,0 ό 1 1,1 2,2 15 CH„(CH„),CO " L D L D 1 2,3 2,0 ώ z ü 0,1 1,4 1,1 CH3^ ^CHCO" " " L D L D 100 2,0 CHg 1 2,4 1,7 9n CÆ.--CO ” " " L D L D 100 2,3 20 6 5 1 2,0 2,6

OH

CLH,-CHCO" " " L D L D 1 2,5 2,0 b 0 D 0,1 1,3 1,1 25 OCH, i 3 CH„CHCO " " " L D L D 100 1,5 ^DL 1 1,3 1,4

CcH,-OCH0CO" » " L D L D 100 1,5 6 5 2 1 1,3 1,4 30

DK 156252B

54

NB: Referenceforbindelsen er den forbindelse, hvor R^ er OH

CH3CHCO, er CHg, n er 1, er C^COOH, *1 er L, D *2 er D, *3 er L og *4 er D.

5 Tabel II

Medikament Dosis

K K

(mg/mus) behandlet/ kontrol

Krestin 10 1,1 10 1 1,0

Levamisol 10 - (d0d) 1 0,5

Tuftsîn 400 1,4 125 1,0 15 Stoffet FR-900156 0,25 2,9 0,06 1,5

Kontrol (saltvand) 1,0 2) Testforbindelse 2.

?H <TH3 *3

CH.CHCONHCHCONHCHCOOH

**1 *2 1 ch9 I * CH2 *4 CONHCHCONHCH0COOH I & f«2 ?»2 H-NCHCOOH z *5

Tabel III

55

DK 156252 B

Testforbindelse Dosis ^behandlet Reference- *1 *2 *3 *4 *5 (mg/kg) Kkontrol forbindelse FR-900156 5 D L L L D 100 2,0 1 0,9 1,9 D D L L D ÏÔÔ 1/7 1 1 1/6 10 _ D L D L L 100 2,7 1 0,9 2,5 L L D L D ÏÔÔ 2^6 : 15 1 2,4 2,2 D D D [ D î 272 Γδ 0,1 1,9 1,2 20 Det fremgêr af de ovenstâende tabeller, at de fagocytiske koefficien-ter var forhojede hos mus, der var behandlet med forbindelser med formlen I, hvilket indikerer, at de omhandlede forbindelser har den virkning, at de forpger fagocytolysen i uvedkommende stoffer sâsom patogene bakterier, hvorfor de kan anvendes f.eks. som antimikrobi-25 elle midler.

2. Forpgelse i aktiviteten af den cellulære immunitet og den humorale antistofproduktion.

Til marsvin i grupper pâ fem blev givet 0,1 ml Freund's ukomplette adjuvans-emulsion indeholdende 500 yg ovalbumin, som blev indgivet i 30 trædepuderne pâ begge bagben. Kontrolgrupperne fik kun antigen i Freund's ukomplette adjuvans, hvorimod testgrupperne fik antigen sammen med nedenstâende testforbindelser i Freund's ukomplette adjuvans. Dyrene blev hudtestet den 14. dag, og blev tappet for blod den 16. dag.

DK 156252 B

56 1) Testforbindelse (1)

Rb D

R1-(HNCHCO) -HNCHCOOH

n r 5 L ÇH2

çh2 L

COHNCHCONH-R? I a fH2 fH2 10 CH2

HgN CHCOOH D

15 Tabel IV

^ ^ 2 Dosis Cellulær *1 Humoral Immunitet R Rj~ n R^ (pg/ immunitet hæmagg.- hæmolysin- sted) hudreaktion titer+ titer (mm diam. (M - S.E. (M - S.E.

20 M - S.E.) log2)*2 log2)*2 H CH3 1 CHgCOOH 1 1,8χ0,7 *3 11,9χ0,5 *3 5,6^0,5 10 8,9-0,9 *3 12,3χ0,2 *3 6,6^0,3 100 10,8-3,3 *3 12,0-0,3 *3 6,7^0,5 CH CR CO CH« 1 CHGCOOH 1 2,0χ2,0 12,3χ0,2 *3 7,3^0,4 *3 25 ά 10 8,6-1,0 *3 11,4χ0,5 *3 7,8^0,3 *3 100 3,1-1,3 *3 9,7-0,4 7,2^0,3 *3 HOCH CO » » " 1 10,4χ2,4 *3 11,β|θ,5 *3 7,4-0,6 *3 10 14,6-1,1 *3*2 12,4χ0,5 *3 7,3χ0,5 *3 100 6,6-1,1 *3 10,8-0,2 *3 6,0^0,2 30 Kontrol 0 0 9,4^0,4 5,4^0,5 CH„?HCO CH„ 1 CH9C00H 1 6,7χ0,8 *3 8,2χ0,1 *3 L A 10 10,2-1,6 *3 7,6-0,5 *3 f\-CO " " " 1 8,7|l,8 *3 8,9χ0,2 *3 35 \=y 10 7,7-2,4 *3 8,7-0,2 *3

Kontrol M " " 0 0 6,8-0,3 57

DK 156252 B

Tabel IV fortsat OH

a CH CO CH„ 1 CH„COOH 1 11,5±2,1 *3*1 10,8^0,3 *3 7,1;0,4 *3 D d 2 10 11,ΐ|θ,7 *3*2 12,3-0,5 *3 8,5-0 *3 5 100 1,1-1,1 9,1-0,6 4,3-0,6 *3

Kontrol 0 0 9,2-0,3 5,9-0,1

OH

I + * + in CHQCHCO H 1 CH0COOH 1 10,0t0,3 *3 5,9-0,3 10 3D 2 10 9,6^0,3 6,9;0,5 *3 100 10,0-0,4 7,0-0,4 *3

CH

" 3v'CH " " 1 10,6^0,3 *3 6,9;0,3 *3 CH„/ 10 9,9^1,0 *3 7,0-0,4 *3 d 100 10,5-0,4 *3 6,3-0,5 *3 15 » HOCH„ ” " 1 ΙΟ,ΙχΙ,Ι *3*2 10,5^0,2 *3 7,8j0,3 *3 1 10 10,7jl,3 *3 9,8-0,4 7,3-0,3 *3 100 5,4-2,2 9,6-0,4 7,1-0,2 *3

Kontrol 0 0,9-0,9 8,5-0,5 5,5-0,3 20 NH„ I 2 CH«CHCO CH„ " CH„COOH 1 5,0^2,2 8,5^0,2 *3 3D à Z 1Q 7,1-0,9 *3 7,9-0,4 *3

Kontrol 0 0 5,8-0,3 25 -—-——

CH„(CH„)_CO

ύ 2 °CHq 1 CH COOH 1 10,0^1,2 *3 9,5±0,4 *3 10 7,5-2,2 *3 9,2-0,6 *3 CH~ *^CHCO " " » 1 5,5jl,4 *3 8,7^0,5 *3 30 CH3/ 10 8,5-1,0 *3 7,4-0,6 *3

Kontrol 0 0 6,6-0,6

Tabel IV fortsat 58

DK 156252 B

/~~VoCH9CO CH, 1 CH COOH 1 10,2^1,1 *3 8,3^0,3 *3 \=y 10 6,3-1,3 *3 7,7-0,3 *3 CH CO CH 2 " 1 9,0^1,0 *3 7,7^0,5 5 0 D à 10 8,1-2,5 *3 8,4-0,5 *3

L

j>CH3 CH,CHCO CH, 1 " 1 8,θ|ΐ,1 *3 8,8^0,3 *3 DL 0 10 11,9-2,5 *3 8,3*0,3 *3 10 Kontrol 0 0 7,40,1 /Γ-Λ CH„ 1 CH9COOH 0,1 ll,2|l,l *3 10,4^0,3 *3 f \)-CH9OCO a Δ 1 7,6^2,2 *3 10,2^0,3 *3 \=/ 10 6,4-2,5 9,3-0,2 *3 15 /~VcH9CO " " " 0,1 6,42,7 9,9^0,5 *3 XS' Z 1 10,2^2,6 *3 10,6|0,3 *3 10 8,6-1,8 *3 10,6-0,3 *3 Ο-NHCO " " " 0,1 10,5^2,9 *3 9,l|o,4 1 9,3^0,7 *3 9,l|0,4 10 4,2-1,3 9,8-0,2 20 Kontrol 0 0,9-0,9 8,5-0,4 CH,CO - 0 CHcCOOH 1 6,4±2,1 *3 8,8^0,3 3 2 10 8,7-1,0 *3 9,1-0,4 OH CH, I l 3 25 CH,CHCO CH„ 1 CHCOOH 1 13,7^1,6 *3 11,4θ,5 D ^ L 10 10,8-0,9 *3 10,7*0,3 59

DK 156252 B

2) Testforbindelse (2) OH CHq I I 3 *3 CH„CHCOHNCHCOHNCHCOOH 5 *1 *2 | (?H2>2 I *4 COHN CH COHN CH0COOH I 2 W3 10 H„NCHCOOH Δ *5

15 Tabel V

Testforbindelse Dosis Cellulær *1 Humoral Immunitet *1 *2 *3 *4 *5 (l·Jg/ immunitet hæmagg.- hæmolysin- sted) hudreaktion titer titer (mm diam. (M - S.E. (M - S.E.

20 M - S.E.) log2)*2 log2)*2 D L D L D 0 0 9,1^0,19 4,5^0,45 0,1 8,2^2,8 *3 9,9^0,10*3 6,4^0,76 1 14,5^2,1 *3 11,5^0,61*3 7,7ÿ,64 *3 10 11,θ|ΐ,3 *3 12,2|θ,56*3 7,1^0,58 25 100 4,2-1,7 *3 10,0-1,01 5,9-0,89 D L L L D 0 0,9^0,9 8,5|θ,4 1 2,4|l,5 10,4^0,5 *3 10 7,9-2,1 *3 11,0-0 *3 30 D L D DL 0 Q 9,2|θ,3 5,9^0,1 1 4,3^1,8 *3 10,2^1,1 *3 6,5;0,4 10 9,θ|3,2 *3 10,4|θ,3 *3 7,5^1,2 *3 100 6,4-1,7 *3 10,9-0,2 *3 6,7-1,2 *3 L L D L D 0 0 6,8^0,3 35 1 6,7^0,8 *3 8,2^0,1 *3 10 10,2-1,6 *3 7,6-0,5 *3

DK 156252B

60 NB: °1: Hudtesten blev udfprt pâ ryggen ved intradermal injektion af 5 yg antigen oplpst i 0,1 ml saltvand. Hudreaktionen pâ teststedet blev malt efter 48 timers forldb.

5 °2: Antistofbestemmelsen blev udf0rt pâ f0lgende mâde:

Ovalbuminovertrukne rode blodceller fra fâr blev prepareret med chromchlorid.

Antistoftiteren blev udtrykt som den reciprokke værdi af den hpjeste fortynding af sérum, som fremkaldte tærskelhæmagglutination og 10 -hæmolysin.

Resultaterne blev omsat til log2~enheder.

°3: Signifikans blev beregnet ved Student's t-test; P[0,05.

*1: 2/5 af dyrene, central nekrose.

1/5 af dyrene, central nekrose.

15 Som det fremgâr af de ovenstâende tabeller for0ger de ved frem-gangsmâden ifolge opfindelsen fremstillede forbindelser den cellulære immunitetsvirkning og produktionen af humorale antistoffer, hvilket indikerer, at de omhandlede forbindelser kan anvendes som immuno-forstærkende middel.

20 3. Mitogen aktivitet i miltceller fra mus (materialer og metoder).

1) Dyr: De til dette forspg anvendte mus var 13 uger garnie hanmus af stammen BALB/C (test 1) eller 9 uger garnie hunmus af stammen BALB/C (test 2). 1 Vævskulturmedium: Det anvendte vævskulturmedium var et komplet 25 medium betegnet "Roswell Park Memorial Institute (RPMD-1640". Aile anvendte medier indeholdt 100 enheder/ml penicillin G, 100 yg/ml streptomycin-sulfat og 10% fptalt kalveserum.

DK 156252 B

61 3) Cellepræparering: Miltene blev udtaget under stérile betingelser og vasket med Hanks opl0sning og derefter udrevet i vævskulturmediet. Cellerne blev suspenderet i vævskulturmediet sâledes, at dette inde-holdt 8 x 10® celler/ml.

5 4) Kulturbetingelser: I hvert hul i en Microtest Il-vævskulturplade (8 x 12 huiler) (fremstilles af Falcon Plastics Co.) blev hældt 0,1 ml af den ovennævnte cellesuspension og 0,1 ml af det foreskrevne koncentrat af testforbindelsen som beskrevet nedenfor, hvorefter kulturene blev inkuberet (in triplo) ved 37°C i fugtig atmosfære (95% 10 luft, 5% CC^) i 48 timer.

Kontrolkulturen indeholdt 0,1 ml af kulturmediet i stedet for mediet indeholdende testforbindelsen.

5) (3H)-Thymidinoptagelse: I aile tests blev der hældt 20 yliter 10 mikrocurie (y Ci)/ml tritieret thymidin (3H-thymidin) i hvert hul I de 15 sidste 24 timer af dyrkningstiden. Efter endt dyrkning blev de re-sulterende celler filtreret med filtrerpapir Whatman GF83 og vasket fprst med saltvand og derefter med 5%’s trichloreddikesyre. Filtrerpa-piret blev torret og anbragt i en scintillator (1 liter toluen indeholdende 0,1 g p-bis(5-phenyloxazoyl)benzen og 4 ‘g 2,5-dichlorphenyl-20 oxazoyl), og den i DNA inkorporerede 3H-thymidinmængde blev malt.

6) Stimulationsindex: 3H-thymidinoptagelse (netto cpm) ved behandling

Stimulationsindex s - 25 3H-thymidinoptagelse (netto cpm) ved kontrol 7) Testforbindelse (1) R1

R1-NHCHCO-v-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH

L

DK 156252 B

62

Resultater: (1) Test 1.

5 Tabel VI

- 2 Koncen- 3H-Thymidin- Stimula- R1 Br tration optagelse+netto tions- (pg/ml) cpm:gns.-S.E. index 3.0 - CH„(CH9),-CO CH, 100 2728x 73 5,2 à * 0 0 10 2660χ 45 5,0 1 2899-126 5,5

OH

l CH CHCO C H.CH 100 2174χ142 4,1 15 D ί 10 154?+ 7g 2,9 1 1103- 76 2,1 CHg + ^CHCO CH, 100 2234^170 4,2 CH,^ ά 10 2046χ138 3,9 ύ 1 1378-112 2,6 on + C-H^-CHnOCO CH, 100 2312x158 4,4 b ° & . 0 10 2388χ 97 4,5 1 1775- 94 3,4

Kontrol - - 528- 28 1,0

25 OH

[ 100 2306x 54 5,5 C-H--CHCO CH 10 1788|314 4,3 ü D 1 1928- 87 4,6 HOCH CO CH, 100 2605χ117 6,2 ύ 10 1725χ 86 4,1 30 1 1120- 55 2,7 CH,CH0CO CH, 100 2023x142 4,9 Λ Δ 6 10 1474χ 44 3,5 1 732- 28 1,8 OH .

| 100 1541χ 73 3,7 35 CH,CHCO H 10 1119- 63 2,7 1 937- 30 2,2 63

DK 156252 B

Tabel VI fortsat OH

I CH3^ + CH-CHCO ^CH 100 1675; 22 4,0 D CHq 10 1679- 98 4,0 5 ύ 1 1019 2,4 OH .

| 100 1541; 41 3,7.

CH^CHCO HOCH9 10 1468; 12 3,5 D Δ 1 927- 33 2,2 10 NH2 + | 100 1635;192 3,9 CH„CHCO CH„ 10 1573; 69 3,8 D ό 1 1001Î 73 2,4

Kontrol - - 417^ 13 1,0 15

CfiH,-OCH9CO CH„ 100 1979χ174 5,0 b b 1 6 10 2343; 22 5,9 1 1469-224 3,7 OCH„ l 20 CH„CHCO CH„ 100 1537^113 3,9 DL ύ 10 1788; 30 4,5 1 1144-142 2,9 fH3 CH CONHCHCO CH„ 100 1627; 38 4,1 D 10 1837;138 4,6 25 1 1338- 74 3,4 CRHc-NHCO CH9 100 1528;122 3,8 b b A 10 1225; 42 3,1 1 866- 37 2,2 /{ H-CHoCO CH„ 100 1588;167 4,0 g0 \S/ λ λ 10 1469+ 8? 3,7 1 1065- 89 2,7

Kontrol - 399^ 51 1,0 (2) Test 1.

DK 156252B

64

Tabel VII

Koncen- 3H-Thymidin- Stimula- 5 R1 Rz tration optagelse+netto tions- (pg/ml) cpm:gns.- S.E. index CH, CO CH, 100 1920^135 4,2 d 0 10 1067χ 63 2,4 1 785- 33 1,7

10 OH

CH,CHCO CH, 100 2772χ215 6,1 àL 10 2326^140 5,1 1 1713-102 3,8

CcHc-CO CH, 100 2979χ199 6,6 15 b 5 0 10 21771 66 4,8 1 1477- 46 3,3

Kontrol - 452- 30 1,0 CH, 100 4227χ217 4,2 on | 10 3664J122 3,7 20 CcH[--COHNCHCO CH, 1 2809- 83 2,8 6 5 D 3 CH,(CH„)inCO CH, 100 4027χ 87 4,0 ^ 1 0 10 3963χ198 4,0 1 4210-255 4,2 25 fC yr CH* 100 3967χ348 4,0 I J-SJ 10 2933^126 2,9 1 2134- 32 2,1

Kontrol - 1000- 94 1,0

DK 156252 B

65 8) Testforbindelse (2).

<?H CH3 *3

CH„CHCONHCHCONHCHCOOH

5 *2 ÇH2 ÎH2 *4

CONHÇHCONHCHgCOOH

ch9 ch9 I 2 10 ch9 t i h9nchcooh Δ *5

15 Tabel VIII

Testforbindelse Koncen- 3H-Thymidinop- Stimula- *1 *2 *3 *4 *5 Test tration tagelse netto cpm: tions- (ygf/ml) gns.-S.E. index 20 _ D L D L D 1 100 2028^ 89 4,9 10 1486-120 3,6 1 835- 64 2,0 0 417Î 13 1,0 25 2 100 3666- 42 4,1 10 3223-402 3,6 1 2741-319 3,0 0 901-105 1,0 30__ D L D DL 1 100 1284-131 3,1 10 1414- 38 3,4 1 996- 35 2,4 35 0 417Î 13 1,0

Tabel VIII fortsat

DK 156252B

66 L L D L D 2 100 2772-215 6,1 10 2326-140 5,1 1 1713-102 3,8 0 452- 30 1,0 D L D L L 1 100 1271^ 29 3,2 10 1003- 50 2,5 1 742- 61 1,9 0 399- 51 1,0

Som det fremgâr af de ovenstâende tabeller forogede de ved frem-gangsmâden ifplge opfindelsen fremstillede forbindelser inkorporerin-gen af mærket thymldin i en cellekultur med musemiltceller, hvilket 5 indikerer, at de omhandlede forbindelser kan anvendes som îmmuno-forstærkende middel.

67

DK 156252 B

Tabel Villa

Testforbindelse eksempel nr. Koncentration Stimulations- (trin nr.) (pg/ml) indeks ï i Tfl (2) 10 3,5 100 4,9 _ - _ (2) 10 2,4 100 4,2 3 î 5^5 (2) 10 5,0 100 5,2 4 î 2fi (2) 10 3,9 100 4,2 5 ï 3^3 (2) 10 4,8 100 6,6 6 î 4^6 (2) 10 4,3 100 5,5 7 ï 2$ (2) 10 4,5 100 3,9

8 ï 3J

(2) 10 5,9 100 5,0

9 î 2J

(3) 10 4,1 100 6,2 10 1 3,8 (2) 10 5,1 100 6,1 68

DK 156252 B

_ _ _ (4) 10 3,8 100 3,9 _ - — (4) 10 2,7 100 3,7 Ï3 î 2£ (2) 10 3,5 100 3,7 14 ï 2Â (4) 10 4,0 100 4,0

15 ï 2J

(2) 10 3,7 100 4,0 _ . _ (2) 10 3,1 100 3,8 Ï7 ï 3^4 (3) 10 4,5 100 4,4 _ _ _ (3) 10 2,9 100 4,1 — - __ (2) 10 1,1 100 2,0 — - _ (2) 10 2,9 100 4,0 2Ï î 4^2 (2) 10 4,0 100 4,0 22 ï 2^4 (2) 10 2,4 100 2,2 69

DK 156252 B

23 1 2,3 (2) 10 2,3 100 2,2 24 ï ZÂ (2) 10 2,5 100 2,2 25 ï 2^5 (2) 10 2,5 100 1,9 26 ï 2β (3) 10 3,7 100 4,2 27 î 3Â (3) 10 4,6 100 4,1 32 ï 3Λ (2) 10 5,3 100 5,2 33 î 2fl (2) 10 2,4 100 2,0 34 î 5fl (4) 10 6,1 100 6,0

35 î M

(4) 10 6,4 100 7,5 36 ï ÏÆ (4) 10 2,6 100 4,0 37 ï (4) 10 1,6 100 2,0 _ . _ (4) 10 1,4 100 1,7 39 ï 4^ (4) 10 5,0 100 6,2 40 1 1,8 (2) 10 3,1 100 3,5 70

DK 156252 B

4Ï ï 13 (5) 10 2,1 100 2,9 42 ï Ï3 (4) 10 1,9 100 2,6 43 ï 4Ü : (4) 10 3,0 100 2,7 44 î 53 (2) 10 8,2 100 6,4 45 î 57 (2) 10 7,9 100 5,8 46 ï 8^4 (2) 10 7,8 100 6,4 47 ï 63 (2) 10 6,3 100 6,2 48 i 27 (4) 10 2,4 100 1,7 49 î 63 (4) 10 6,4 100 2,1 — - _ (2) 10 4,9 100 3,6 52 ï 53 (2) 10 5,5 100 3,1 53 î 53 (2) 10 5,2 100 2,7 54 ï 17 (3) 10 2,2 100 3,4

DK 156252 B

71

55 ï ÏJ

(3) 10 2,3 100 2,5 _ - _ (2) 10 1,1 100 1,5 57 ~Ί 13 (2) 10 2,7 100 3,2 58 ï 1^2 (4) 10 1,5 100 2,3

59 ï 2J

(3) 10 3,6 100 3,1 — - — (4) 10 7,3 100 4,2 — - — (5) 10 8,1 100 5,7 62 i Tfl (2) 10 5,9 100 5,0 63 î 6£ (3) 10 6,9 100 1,6 72 ï 2£ 10 3,4 100 3,1 79 î 1^9 10 2,5 100 3,2 — - — (3) 10 1,7 100 2,3

82 î ÏJ

(3) 10 1,4 100 2,4 83 î 2^5 (3) 10 2,7 100 2,3 72

DK 156252 B

84 ï 5fi (2) 10 5,4 100 4,2 85 ï 40 (3) 10 5,7 100 2,9 87 î Ï"j3 (2) 10 1,1 100 0,9 86 ï Ta (3) 10 1,2 100 1,8 90 ï (3) 10 1,6 100 1,4 _ . _ (2) 10 1,0 100 1,2 92 ï 4/î (2) 10 7,2 100 9,0

93 î V

(3) 10 2,1 100 2,2 94 î Î3 (3) 10 4,4 100 2,8 95 ï TÂ (3) 10 1,9 100 2,7

96 i M

(3) 10 3,7 100 3,2

97 ï ÏJ

(2) 10 1,8 100 1,6 98 ï 1^2 (3) 10 1,6 100 · 1,7 99 1 3,5 (3) 10 2,9 100 3,1 73

DK 156252 B

— - — (3) 10 4,7 100 3,2 - — (3) 10 4,1 100 3,7 ÏÔ4 ï 3£ (4) 10 2,8 100 0,6

ÏÔ3 ï 2jB

(3) 10 3,8 100 3,0 — . _ (4) 10 1,9 100 0,6 ÏÔ6 ï 4£ (2) 10 4,4 100 2,9 — . _ (2) 10 3,4 100 2,5 Tïï ï (4) 10 2,2 100 2,4 — ~ — (2) 10 1,3 100 1,1 — 1·..................... 2^4 (2) 10 2,7 100 2,3 ÏÏ4 î 1^3 (3) 10 1,3 100 1,1

ÏÏ5 ï 2J

(2) 10 2,9 100 1,9 ÏÏ6 ï 3^4 (3) 10 3,1 100 3,1 ÏÏ8 ï 43 (2) 10 5,0 100 2,9 74

DK 156252B

ÏÏ9 ~Ί 4J “ (2) 10 4,6 100 3,6 Ï2Ô î 33 (2) 10 3,1 100 1,2 Î2Ï î 23 (2) 10 2,6 100 2,4

Ï22 ï 2J

(2) 10 4,0 100 1,7 Ï23 i 23 (2) 10 2,9 100 2,0 Ï24 î Ï3 (2) 10 1,7 100 1,7 Ï25 î (2) 10 2,2 100 1,9 _ _ _ (2) 10 1,4 100 1,5 Ï27 ï Ta (2) 10 1,4 100 1,5 Ï28 ΐ 13 (2) 10 1,4 100 1,2 Ï29 ï 23 (3) 10 4,5 100 1,6 _ .

(3) 10 2,3 100 2,0 Ï3Ï ï 43 (3) 10 4,4 100 3,1 75

DK 156252 B

Ï32 ï 3Æ (3) 10 4,7 100 3,7 _ - — (3) 10 3,5 100 1,6 — - _ (3) 10 3,5 100 1,8 _____ __ _ _ (2) 10 2,9 100 3,3 _ - — (2) 10 5,0 100 1,6 Ï47 î 4/î (3) 10 4,3 100 2,9 Î48 î 4^ (3) 10 4,1 100 2,5 Ï49 i 3^9 (3) 10 4,6 100 2,7 _ _ _ (2) 10 3,3 100 2,5 — - — (2) 10 3,1 100 3,6 Ï52 î 2fi (2) 10 4,0 100 3,3 Ï53 ' ï 2^3 (3) 10 1,8 100 1,8 Ï54 î 2^6 (3) 10 2,7 100 3,4 Ï58 î 2^8

DK 156252B

76 (2) 10 2,4 100 1,8 Ï6Ï ï 2£ (2) 10 4,1 100 2,1 162 ï 3Â (2) 10 3,9 100 3,5 — . _ _ (2) 10 3,0 100 2,6 Ï67 î 4Â 10 4,8 100 0,3 Ï65 ï 3^4 (3) 10 3,2 100 0,5 Ï74 î 2|9 (3) 10 2,6 100 1,2 — ï 2^3 (2) 10 2,2 100 1,3 187 î 3£ (2) 10 4,8 100 1,7 Ï89 ï 2^3 (2) 10 4,8 100 2,2

DK 156252B

77 4. Beskyttende virkning mod eksperimentel infektion i mus.

1) Til bestemmelse af den beskyttende virkning mod eksperimentelle infektioner i mus blev testforbindelsen oplost i og fortyndet med steriit saitvand til dannelse af de foreskrevne medikamentkoncen-5 trationer.

4 uger garnie hanmus af stammen ICR blev anvendt i grupper pâ 10. Escherichia coli 22 blev dyrket natten over ved 37°C pl trypticase-sojaagar og blev derefter suspenderet i steriit saitvand til dannelse af . 7 en mikrobiel cellekoncentration pâ 9,0 x 10 CFU/ml. Til rausene blev 10 der intraperitonealt administreret 0,2 ml af suspensionen. Hvert testmedikament blev givet intraperitonealt i forskellige doser til en gruppe pâ ti mus 24 timer for infektionen.

Overlevelsesprocenten blev beregnet ud fra antallet af overlevende dyr fire dage efter injektionen. Resultaterne er anfort i tabel IX.

I) Testforbindelse (1): R2 i l

R1-NHCHCO-v-D-GluC«-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH

L

DK 156252B

Tabel IX

78

Overlevelsesprocent - „ Dosis Dosis R R 10 mg/kg 1 mg/kg 5 CH3(CH2)5CO CHg 60 70 (CH3)3CCO CHg 70 70 CH3(CH2)1(}CO CHg 50 60 10 fH3 CH-COHN CHCO CH„ 100 88,9 0 D _ a OCH, 15 | 3 CH.CHCO CH„ 88,9 100 dDL 3 C6H5-OCH2CO CHg 100 88,9

OH

20 CrH,-CHCO CH„ 87,5 75,0 6 5 D 3

CgHg-CO CHg 30 50 CH3\ ύ ^CHCO CH„ 20 60 25 CH3^ 3

CgHg-CHgOCO CHg 50 30

CgHg-NHCO CHg 70 70 30 ^\^CO CH o 50 50 fH3

CeHj--COHNCHCO CH0 50 50 35 6 5 D 3 V_7 CO CH„ 80 60 ^OH 3 79

DK 156252 B

Tabel IX fortsat OH

CH„l?HCO CH--CLH.. 60 60 ùjj ù oo 5 — CH2CO CHg 40 70 HOCHgCO CH3 75 100 1Q CH3CH2CO CH3 100 87,5 OH CH, CH,CHCO dvCH 87,5 100 D CH3/

ÇH

CH,CHCO HOCH„ 87,5 87,5 15 3D 2

pH

CH«CHCO H 100 100

3D

OH

20 CHaCHCO CHs 87,5 62,5 CHq?H&) CHa 100 87,5 CH3CO CH3 62,5 25,0 2) Testforbindelse (2).

80

DK 156252B

1 *1 *2

R -(HNCHCO)n -HNCHCOOH

5 ! I

Ri çh2 ?H2 *3 COHNCHCONH-R^ I a ch9 I * 10 CHg I " <fH2

H-NCHCOOH

ù *4 15

Tabel X

Overlevelses% Dosis Dosis 20 R1 R* n R^ *1 *2 *3 *4 10 m%/ 1 mg/ kg kg (C6H5)2CHCO CH3 1 CHgCOOH L D L D 75,0 50,0 25 / V CHq 1 CH0COOH L D L D 87,5 75,0 //\Aï 3 ê î 30 //\κ/άθ " " " L D L D 75,0 87,5 Ο ή

CgHg-SOg " " " L D L D 75,0 87,5

Il II II

C6H5-CH=CHCO L D L D 87,5 62,5 35

OH COOH

1 I

CHgCHCO " " -CH2CH2 L D L D 87,5 87,5

D

Tabel X fortsat 81

DK 156252 B

OH CH.

I I 3 CH,CHCO " CHCOOH L D L D 70,0 70,0

5 D L

" " "CH^CgHg L D L D 90,0 80,0

CHCOOH D

10 CH.

I 3 » " "CH-COOH L D L D 60 60

D

15 H - 0 CHgCOOH- D L D 66,6 22,2 CH.CO " " " D L D 100 88,9 ô 20 Æho » D L D 87,5 75,0

0 Z

/ \ - " CHgCOOH D L D 87,5 50,0 O T co

25 H

CH, I 3 H " " -CHCOOH D L D 75,0 87,5

D

30 OH

CeHc-CHCO " " " - D L D 62,5 50,0

O O

D

CH3(CH2)5COM " '* - D L D 62,5 62,5 35 CH3(CH2)10COh ° " D L D 87,5 100

Tabel X fortsat 82

DK 156252 B

H " " CHgCOOH - D L D 87,5 100

5 DL

ch3(ch2)3chco SH5 CHg 1 ” L D L D 87,5 50,0 10

OH

CHgiHCO » " " L D L L 100 88,9

D

15 » " " » L L L D 50,0

OH

CHgiHCO » " " D L L D 100 87,5

D

20

OH

CHgCHCO " " CH2COOH D D L D 75,0 75,0

D

25 CH3(CH2)5CO CHg " " CHCOOH L D L D 100 44,4

D

3) Testforbindelse (3).

5 83

DK 156252 B

*1 *2

Ri-(HNCHCO)n-HNCHCOOH

Rb (CH2}2 *3 COHNCHRg (ch2)3

10 H0N ^HCOOH

Δ *4

15 Tabel XI

Overlevelses% Dosis Dosis R1 R* n R2 *1 *2 *3 *4 10 mg/ 1 mg/ 20 kg kg ch3(ch2)5co CH3 1 COOH L D L D 66,6 88,9 25 " - 0 " - D L D 88,9 100 H " " " - D L D 88,9 88,9

30 OH

CHgCHCO CHg 1 " L D L D 100 62,5

D

CH, I 3 " " " CONCOOH L D L D 87,5 75,0 35 " " " H L D - D 40,0 60,0

84 DK 156252B

2) Til bestemmelse af den beskyttende virkning mod eksperimentelle infektioner i mus blev stoffet FR-900156 oplpst og fortyndet i sterilt vand til dannelse af tredobbelte koncentrationer af medikament til afprpvning.

5 Seks uger garnie hanmus af stammen DDY og med en gennemsnitsvægt pâ 24 - 26 g blev anvendt i grupper pâ hver 4 mus.

Kulturer af Escherichia coli nr. 22, som var dyrket natten over i Difco næringsvæske, blev fortyndet til 1/100 i frisk medium og inku-beret ved 30°C under rystning. Da der var opniet en celletæthed pâ

O

10 1 x 10 /ml, blev 0,2 ml af kulturen injiceret intraperitonealt. Aile de dyr, som blev inficeret og ikke behandlet med medikamentet, dpde i iobet af 48 timer efter infektionen.

0,2 ml af oplpsningen af stoffet FR-900156 blev injiceret subcutant 1, 4, 5 og 6 dage fpr infektionen.

15 To dage efter infektionen blev testen anset for afsluttet, og der blev foretaget tælling af overlevende dyr. Testresultaterne er anfprt i tabel XII.

Tabel XII

Dosîs (mg/mus/dag) Overlevede/inficerede 20 _ _ 0,01 10/10 0,003 10/10 0,001 10/10 0,0003 8/10 25 0,0001 4/10

Kontrol 0/10 89

DK 156252 B

5. Anticancervirkning.

Seks uger garnie hunrotter af stammen Donru blev anvendt i grupper pi hver 3 rotter.

En suspension af ascites hepatoma AH 66 i 0,5 ml Hank's oplosning . 4 5 blev transplanteret intraperitonealt i en mængde pa 5 x 10 celler/-rotte. Ca. 13 dage senere var aile kontroldyrene dode af ascites. Forlængelse af overlevelsestiden i sammenligning med kontrollen er kriterium for virkning.

Terapi blev givet 5, 6, 7, 8 og 9 dage for tumortransplanteringen.

10 Stoffet FR-900156 blev oplpst og fortyndet i sterilt saltvand til dan-nelse af tredobbelte fortyndinger til afprpvning, og denne stérile saltvandsoplosning af stoffet FR-900156 blev givet intraperitonealt til dyrene. Testresultaterne er anfort i tabel XIII.

Tabel XIII

15 Dosis (mg/rotte/dag) Levetid (dage) 1,0 14 >30 >30 0,3 13 >30 >30 0,1 13 >30 >30 20 0,03 13 13 13

Kontrol (saltvand) 13 13 13 6) Antitumorvirkning.

Der blev anvendt methylcholanthlen-induceret fibrosarcoma (meth-A).

5

En blanding af tumorcellerne (1 x 10 ) og testforbindelsen blev sus-25 penderet i en 0,5%'s methylceliulose-saltvandsoplpsning. Suspensionen blev podet intradermalt i hanmus af stammen BALB/C.

Fire uger efter podningen blev tumorstprrelsen milt. Resultaterne er anfort i nedenstiende tabel XIV.

Testforbindelse: 86

DK 156252B

ÇHg D

R-HNCHCONHCHCOORp L (ÇH2)2 CHg I L 2

CONHCHCONHCHCOOR

Ia

D

(CH,), i 2 3 n

HgN- CH-COORq D

Tabel XIV

Testforbindelse Dosis Undertrykkelse R^ Rp Rg R0* vg/sted af meth-A-vækst 5 _ CH3(CH2)16CO H H H 10 8/10

Kontrol - 1/20 CH3(CH2)16CO H CH3 CH3 100 10/10 10 Kontrol - 1/20 CH3(CH2)21)2 CHCO CH2C6H5 CH3 CH3 100 7/10

Kontrol - 1/20 15 NB: Vaerdierne angiver antal af tumorfrie mus/antal testede mus, idet dog de dyr, hvor den lodrette diameter af tumoren var mindre end 5 mm, blev angivet som tumorfrie.

87

DK 156252 B

7. Induktion af interferonaktîvitet.

Testforbindelse: OH ÇH3 *3 CH„ CHCONHCHCONHCHCOOH d*3 *2 L· I 2

CONHCHCONHCHgCOOH

............h <?H2 çh2 H0N CHCOOH ù *5 4-6 uger garnie hanmus af stammen ICR blev anvendt ved disse fors0g. Musenes milt blev fjernet, og miltcellernes evne til at pro-5 ducere interferon in vitro ved behandling med testforbindelsen blev afprpvet.

Der blev fremstillet enkeltcellesuspensioner af miltceller i RPMI-1640- medium suppleret med 100 Z/ml streptomycin, 100 Jf/ml penicillin G, 1% -5 glutamin og 5 x 10 M 2-mercaptoethanol.

10 Suspensionerne blev dyrket ved 37°C ved en koncentration pâ 4 x 10^ celler/ml med eller uden testforbindelse oplost i kulturmediet (dosis: 100, 10 og 1 yg/ml). Efter 24 timer blev disse kulturers overstlende væsker opsamlet, og interferonaktiviteten blev titreret ved "cytopathic effect (CPE) inhibition test" i L-celle-VSV-system. Antiviraltiteren 15 blev udtrykt i lU/ml baseret pâ standardinterferon.

Resultaterne er anfort i nedenstâende tabel XV.

DK 156252B

88

Tabel XV

Testforbindelse Dosis *1 *2 *3 *4 *5 (με/ml) IF-Titer (IU/ml) D L D L D 100 14 10 16 1 10 0 <6,5 D L D DL 100 62 10 40 1 39 0 7,5 D D D L D 100 29 10 23 1 11 0 <11 D D L L D 100 38 10 11 1 <11 0 <11 8. Akut toxicitet af FR-900156 i mus.

1 g/kg intravenost: ingen toxicitet.

9. Celletoxicitet (muse-L-celler) af FR-900156.

5 500 vg/ml: ingen toxisk virkning.

De omhandlede farmaceutiske præparater kan anvendes i f.eks. fast, halvfast eller flydende form, som indeholder et aktivt stof ifplge opfindelsen i blanding med et organisk eller uorganisk bærestof

DK 156252 B

89 eller en organisk eller uorganisk excipiens, der er egnet til extern, enterai eller parentéral applikation. Den aktive bestanddel kan f.eks. blandes med sædvanlige ikke-toxiske, farmaceutisk tolerable bære-stoffer til tabletter, piller, kapsler, suppositorier, oplosninger, 5 emulsioner, suspensioner eller enhver anden form, der er egnet til anvendelse. Anvendelige baerestoffer er vand, glucose, lactose, aca-ciagummi, gélatine, mannitol, stivelsespasta, magnesiumtrisilicat, talkum, majsstivelse, keratin, kolloidt siliciumdioxid, kartoffelstivelse, urinstof og andre baerestoffer, der er egnede til anvendelse ved 10 fremstilling af præparater i fast, halvfast eller flydende form, og de kan desuden indeholde hjælpestoffer, stabiliseringsmidler, fortykkel-sesmidler, farvestoffer og aromastoffer. De farmaceutiske præparater kan ogsâ indeholde konserveringsmidler eller bacteriostatiske midler for at holde den aktive bestanddel i de 0nskede præparater stabile 15 med hensyn til aktivitet. Den aktive forbindelse inkorporeres i det farmaceutiske præparat i en mængde, der er tilstrækkelig til at frem-kalde den ônskede terapeutiske virkning pi sygdommens forlob eller natur.

Nâr af præparaterne skal administreres til mennesker, foretrækkes det 20 at anvende intravenos, intramusculær eller oral administration. Selv om dosen eller den terapeutisk virksomme mængde af den omhandlede forbindelse varierer efter og ogsâ afhænger af hver enkelt patients aider og tilstand, gives sædvanligvis en daglig dosis pi ca. 2 - 100 mg af den aktive bestanddel/kg legemsvægt for mennesket eller dyret 25 til behandling af sygdomme, og generelt administreres en gennemsnit-lig enkeltdosis pi ca. 50 mg, 100 mg, 250 mg eller 500 mg.

Fremgangsmâden ifolge opfindelsen belyses nærmere ved nedenstâende eksempler, hvor der for udgangsforbindelser og slutprodukter an-vendes folgende forkortelser: 30 Lac : lactyl

Ala : alanyl

Glu : glutamyl

Gly : glycyl DAP: α,ε-diaminopimelyl

DK 156252 B

90 Z : benzyloxycarbonyl

Boc : tert.butoxycarbonyl

Bzl : benzyl

Me : methyl 5 Et : ethyl

Su : N-hydroxysuccinimid

Bzh : benzhydryl

Ac : acetyl

Val : valyl 10 Ser : seryl

Phe : phenylalanyl

Asp : aspargyl

Lys : lysyl

Leu : leucyl 15 Sar : sarcosyl ï-Abu : Y-aminobutyryl Aad r 2-aminoadipyl

Tyr: tyrosyl

Tfa : trifluoracetyl 20 Fremgangsmâdevariant a), forste del, er illustreret i eksempel nr: 11-1, 12-1, 13-1, 14-1, 17-1, 18-1, 26-1, 27-1, 31-1, 34-1, 35-1, 36-1, 37-1, 38-1, 39-1, 41-1, 42-1, 43-1, 49-1, 50-1, 55-1, 56-1, 57-1, 58-1, 60-1, 61-1, 63-1, 64-1, 65, 66, 67, 77, 80-1, 81-1, 82-1, 83-1, 86-1, 87-1, 88-1, 89-1, 90-2, 91-1, 93-1, 94-1, 95-1, 96-1, 98, 25 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 107, 108, 109, 110, 112, 113-1, 114-1, 122-1, 124-1, 125-1, 126-1, 127-1, 129-1, 130-1, 131-1, 132-1, 134, 137, 142-1, 144-1, 146-1, 147-1, 148-1, 149-1, 150-1, 151-1, 152-1, 153-1, 154-1, 158-1, 159-1, 160-1, 161-1, 162-1, 163-1, 164-1, 166-1, 168-1, 169, 170-1, 171-1, 174-1, 175-1, 177-1, 178, 179-1, 30 180-1, 181-1, 182-1, 183-1, 186-1, 187-1, 189-1, 190-1, 191-1, 192-1, 193-1, 201-1 og 202-1.

91

DK 156252 B

Fremgangsmâdevariant b) er illustreret i eksempel nr: 1-1, 2-1, 3-1, 4-1, 5-1, 6-1, 7-1, 8-1, 9-1, 10-1, 15-1, 16-1, 19-1, 20-1, 21-1, 22-1, 23-1, 24-1, 25-1, 32-1, 33-1, 40-1, 41-3, 43-3, 44-1, 45-1, 46-1, 47-1, 48-1, 48-3, 49-3, 51-1, 52-1, 53-1, 59-2, 5 60-3, 61-3, 62-1, 63-3, 84-1, 85-1, 88-3, 92-1, 97-1, 104-3, 105-3, 115-1, 116-1, 117-1, 118-1, 119-1, 120-1, 121-1, 141-1, 155-1, 156-1, 157-1, 176-1, Î84-1, 185-1, 188-1, 195-1, 196-1, 197-1 og 198-1.

Fremgangsmâdevariant c) og det fakultative trin i fremgangsmldevari-ant a) er belyst i eksempel nr: 10 1-2, 2-2, 3-2, 4-2, 5-2, 6-2, 7-2, 8-2, 9-2, 9-3, 11-2, 11-3, 11-4, 12-2, 12-3, 12-4, 13-2, 13-3, 13-4, 14-2, 14-3, 14-4, 15-2, 16-2, 17-2, 17-3, 18-2, 18-3, 19-2, 20-2, 21-2, 22-2, 23-1, 24-2, 25-3, 26-2, 26-3, 27-2, 28, 29, 30-1, 30-2, 31-2, 32-2, 33-2, 33-3, 34-2, 34-3, 34-4, 35-2, 35-3, 35-4, 36-2, 36-3, 36-4, 37-2, 37-3, 37-4, 15 38-2, 38-3, 38-4, 39-2, 39-3, 39-4, 40-2, 41-2, 41-4, 42-2, 42-3, 42-4, 43-4, 44-2, 45-2, 46-2, 47-2, 48-4, 49-4, 51-2, 52-2, 53-2, 54-1, 54-2, 55-2, 55-3, 55-4, 56-2, 57-2, 58-2, 58-3, 59-3, 60-4, 61-4, 61-5, 62-2, 63-4, 64-2, 68, 69, 70, 71-1, -2, -3, 72, 73, 74, 75, 76, 78, 79, 80-2, 80-3, 81-2, 81-3, 82-2, 82-3, 83-2, 83-3, 84-2, 20 85-2, 85-3, 86-1, 86-3, 87-2, 88,4, 89-2, 90-3, 91-2, 92-2, 93-2, 93-3, 94-2, 94-3, 95-2, 95-3, 96-2, 96-3, 97-2, 98-2, 98-3, 99-2, 99-3, 100-2, 100-3, 101-2, 101-3, 102-2, 102-3, 103-2, 103-3, 104-4, 105-4, 106-2, 107-2, 108-2, 108-3, 109-2, 109-3, 110-2, 110-3, 111-2, 111-3, 111-4, 112-2, 113-2, 114-2, 114-3, 115-2, 116-2, 116-3, 117-2, 25 117-3, 118-2, 119-2, 120-2, 121-2, 122-2, 123-2, 124-2, 125-2, 126-2, 127-2, 128-2, 129-2, 129-3, 130-2, 130-3, 131-2, 131-3, 132-2, 132-3, 133-3, 135, 136, 138, 139, 141-2, 141-3, 142-3, 143-2, 144-2, 146-3, 147-2, 147-3, 148-2, 148-3, 149-2, 149-3, 150-2, 151-2, 152-2, 153-2, 153-3, 154-2, 154-3, 155-2, 156-2, 157-2, 158-2, 159-2, 159-3, 160-2, 30 160-3, 161-2, 162-2, 163-2, 164-2, 165-2, 165-3, 166-3, 167, 168-3, 168-4, 170-2, 171-2, 172-3, 173-2, 174-2, 175-2, 176-2, 176-3, 176-4, 177-2, 179-2, 180-2, 180-3, 181-2, 181-3, 182-2, 183-2, 184-2, 184-3, 184-4, 185-2, 185-3, 185-4, 187-2, 188-2, 189-2, 190-2, 191-2, 192-2, 193-2, 194, 195-2, 196-2, 197-2, 198-2, 199-1, 199-2, 200, 201-2 og 35 202-2.

DK 156252 B

92

Eksempel 1.

1) Trin 1:

p3 D

H,NCHCONHÇHCOOH

L Wl' I i

CONHCHCONHCH-COOH

I 2 Cçh2)3 ----h

Boc.HNCHCOHNNH.Boc D.

CD -

fH3 D

CH3CH2CONHCHCONH(jHCOOH .

I L

• CÛNHCHCONHCH-, COOH

I 2 Wj ·

Boc·HNCHCONHNH.Boc

D

(2) 662 mg L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (1) oplpses i 8 ml 50%'s vandigt acetone, og til optesningen 5 sættes 168 mg natriumhydrogencarbonat. Til blandingen sættes 408 mg propionsyrechlorid ved 0°C, og den resulterende blanding omsættes ved denne temperatur i 1 time, medens pH-værdien holdes pâ 7,8 med natriumhydrogencarbonat. Reaktionsblandingen indstiMes pâ pH-værdi 3,0 med IN saltsyre og inddampes til ca. 2 ml i vakuum. Til den 10 vundne remanens sættes 150 ml ethylacetat, 10 ml methanol og 30 ml

DK 156252B

93 saltvand. Den organiske fase fraskilles, tprres over natriumsulfat og inddampes til tprhed i vakuum. Koncentratet behandles med ether, hvorved der fâs 400 mg L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (2) som et hvidt pulver.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250, 1720 (skulder) og 1650 cm NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 1,0 - 2,5 (36H, m), 3,97 (2H, s), 3,90 - 4,60 (4H, m) ppm.

Trin 2:

<rH3 D

Forbindelse (2) -> CH0CH0CONHCHCONH CHCOOH

32 L f <CH2>2

L

CONHÇHCONHCH2COOH

<fH2>3 h9nchcooh

(3) D

1,8 ml trifluoreddikesyre sættes til 350 mg propionyl-L-Ala-ï-D-Glu-10 (a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (2), og blan-dingen lades henstâ ved stuetemperatur i 15 minutter. Reaktionsblan-dingen inddampes i vakuum, og den som remanens vundne olie tri-tureres med ether, hvorved der fâs et hvidt fast stof. Det faste stof oplpses i 10 ml vand, og til opl0sningen sættes 12,2 ml 0,1 N svovlsy-15 reoplpsning og en oplpsning af 260 mg natriumperiodat i 4 ml vand under omr0ring og isafk0ling. Omrpringen fortsættes i 2 timer, og der sættes natriumbisulfit til reaktionsblandîngen, indtil iodfarven for-svinder. Den resulterende blanding inddampes til ca. 3 ml, og kon-centratets pH-værdi sættes pâ 2,5 med IN saltsyre, hvorefter det 20 chromatograferes pi 50. ml af en makroporos ikke-ionisk adsorptions-harpiks, "HP20"® (Mitsubishi Chemical Industry Co., Ltd.)· Eluering udfpres med en blanding af vand og methanol i forholdet 9:1. De fraktioner, som indeholder den 0nskede forbindelse (3), isoleres og frysetorres, hvorved der fis 102 mg propionyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-25 (L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (3) i form af et hvidt fast stof.

DK 156252 B

94 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,11 (3H, t, J=8Hz), 1,39 (3H, d, J=8Hz), 2,31 (2H, q, J=8Hz), 3,81 (1H, t, J=8Hz), 3,96 (2H, s), 4,15 - 4,40 (3H, m) ppm.

[“]q = -37,0° (c = 0,20 i vand).

5 De nedenfor anfprte forbindelser fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i henholdsvis trin 1 og 2 i eksempel 1.

Eksempel 2.

1) Trin 1 :

Acetyl-L-Ala-Y-D-Glu (α-OH) - (L) -Boc- (D) -mesoDAP- (D) -NHNHBoc-10 (L)-GlyOH.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3250, 1720, 1630 og 1525 cm \ NMR-Spektrum (CD^OD): δ = 2,00 (3H, s), 3,91 (2H, s) ppm.

2) Trin 2:

Acetyl-L-Ala-ï-D-GI u (a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH, smeltepunkt 15 110 - 114°C (spnderdeling).

[a]p = -28,3° (c = 0,36 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,39 (3H, d, J=7Hz), 2,03 (3H, s), 3,79 (1H, t, J=7Hz), 4,02 (2H, s), 4,20 - 4,50 (3H, m) ppm.

Eksempel 3.

20 1) Trin 1 :

Heptanoyl- L-Ala-ï-D-Glu (α-OH) - (L) -Boc- (D) -mesoDAP- (D)-NHNH-Boc-(L)-G!yOH.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3280, 1720, 1650 og 1520 cm NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 0,70 - 1,07 (3H, t), 3,92 (2H, s), 25 4,15 - 4,60 (3H, m) ppm.

2) Trin 2:

Heptanoyl-L-Ala-5f-D-Glu(o-OH)-(L) -mesoDAP-(L)-GlyOH, smeltepunkt 175 - 180°C.

DK 156252 B

95 NMR-Spektrum (D2O + natriumhydrogencarbonat) : δ = 0,83 (3H, t), 1,40 (3H, d, J=8Hz), 3,77 (2H, s), 4,1 - 4,5 (3H, m) ppm.

Eksempel 4.

1) Trin 1: 5 lsobutyryl-L-Ala-?f-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-.Bo.c-(L)-GlyOH. ·.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3260, 1720 og 1650 cm \ ΓΠ3Χ NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 1,13 (3H, d, J=7Hz), 1,24 (3H, d, J=7Hz), 3,96 (2H, s) ppm.

10 2) Trin 2: lsobutyryl-L-Ala-3f-D-Glu(ot-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,07 (6H, d, J=7Hz), 1,31 (3H, d, J=7Hz), 2,50 (1 H, hept, J=7Hz), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 3,98 (2H, s), 4,2 - 4,5 (3H, m) ppm.

15 [a]|-j = -31,2° (c = 0,17 i vand).

Eksempel 5.

1) Trin 1:

Benzoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc- (L)-GlyOH.

20 IR-Spektrum (Nujol): 3260, 1720, 1640 (bred) og 1530 cm ^ NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 3,94 (2H, s), 7,45 - 7,70 (3H, m), 7,88 - 8,04 (2H, m) ppm.

2) Trin 2:

Benzoyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

25 [o]D =-4,2° (c = 0,19 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,53 (3H, d, J=7Hz), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 3,98 (2H, s), 4,15 - 4,60 (3H, m), 7,40 - 7,65 (3H, m), 7,70 - 7,90 (2H, m) ppm.

DK 156252 B

96

Eksempel 6.

1) Trin 1 : D-Mandelyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-

Boc-(L)-GlyOH.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3280, 1720, 1650 og 1520 cm NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 3,94 (2H, s), 4,25 - 4,55 (3H, m), 5,12 (1H, s), 7,40 (5H, m) ppm.

2) Trin 2: D-MandelyI-L-Ala-y-D-GIu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

10 [a]D = -40,5° Ce = 0,19 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,46 (3H, d, J=7Hz), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 3,97 (2H, s), 4,13 - 4,50 (3H, m), 5,23 (1H, s), 7,48 (5H, s) ppm.

Eksempel 7.

1) Trin 1: 15 2-MethoxypropionyI-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-N H N H Boc- ( L) -G lyOH.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 3,41 (3H, s), 3,80 (1 H, q, J=7Hz), 3,95 (2H, s), 4,25 - 4,55 (3H, m) ppm.

2) Trin 2: 20 2-MethoxypropionyI-L-Ala-îf-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

[α]P = -30,0° (c = 0,21 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,33 (3H, d, J=7Hz), 1,41 (3H, d, J=7Hz), 3,36 (3H, s), 3,75 - 4,03 (2H, m), 3,96 (2H, s), 4,2 - 4,5 (3H, m) ppm.

DK 156252 B

97

Eksempel 8.

1) Trin 1:

Phenoxyacetyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NH- NHBoc-(L)-GlyOH.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3280, 1650 og 1520 cm NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 3,92 (2H, s), 4,58 (2H, s), 6,85 - 7,10 (3H, m), 7,20 - 7,40 (2H, m) ppm.

2) Trin 2:

Phenoxyacetyl- L-Ala-ï-D-Glu (ct-OH) - ( L) -mesoDAP- ( L) -G lyOH.

10 [et] D =-19,6° (c = 0,23 i vand).

NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,43 (3H, d, J=7Hz), 3,82 (1 H, t, J=7Hz), 3,96 (2H, s), 4,20 - 4,55 (3H, m), 4,64 (2H, s), 6,97 - 7,15 (3H, m), 7,30 - 7,43 (2H, m) ppm.

Eksempel 9.

15 1) Trin 1: CKL D I 3

H„NCHCONHCHCOOH * L

w2

I L

CONHCHCONHCH0COOH I 2

Boc. HNCHCONHNH. Boc D

(D

,CH 3 D

-> CH„COOCH„CONHCHCONHCHCOOH

ό Δ l W2

I L

CONH CH CONH CH„ COOH I 2 (fH2}3

Boc. HNCHCONHNH. Boc D

DK 156252 B

98 570 mg acetyloxyacetyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (2) fremstilles ud fra 794 mg L-Ala-Y-D-GIu(o-OH)-CL)-Boc-(D)-mesoD AP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (1) og 246 mg acetylglycolsyrechlorid pâ i det væsentlige samme mâde som be-5 skrevet i trin 1 i eksempel 1.

IR-Spektrum (Nujol): v__v = 3270, 1710, 1650 og 1525 cm \

ITidX

NMR-Spektrum (DMDO-dg) : δ = 1,24 (3H, d, J=7Hz), 2,08 (3H, s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (2) -> HOCH„CONHCHCONHCHCOOH

L I

(°¾½

L

CONHCHCONHCH0COOH I 2 <FVs

Boc. HNCHCONHNH. Boc D

(3) 10 490 mg acetyIoxyacetyl-L-AIa-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP- (D)-NHNHBoc-(l_)-GlyOH (2) oplpses i 20 ml 50%'s vandigt methanol, og oplpsningen indstilles pâ pH-vaerdi 9,0 med 5%'s kaliumcarbonat og lades derefter henstâ ved stuetemperatur I 1 time. Oplpsningen indstilles pâ pH-værdi 5 og inddampes i vakuum, hvorefter der til kon-15 centratet sættes 1 ml vand. Blandingen indstilles pâ pH-værdi 2,5 med IN saltsyre og chromatograferes pâ en kolonne af 20 ml makro-porps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks HP-20. Efter vask af kolonnen med vand udfpres elueringen med 50%'s vandigt methanol. De frakti-oner, der indeholder den pnskede forbindelse (3), opsamles og ind-20 dampes, hvorved der fâs 370 mg hydroxyacetyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3) i form af et hvidt fast stof.

IR-Spektrum (Nujol): v s 3300, 1720 (skulder), 1650 og 1530

ΙΙΙα X

cm \ 25 NMR-Spektrum (D2O): δ = 3,95 (2H, s), 4,11 (2H, s) ppm.

99

DK 156252 B

3) Trin 3:

<fH3 D

Forbindelse (3) -> HOCH0CONHCHCONHCHCOOH

À L

(CH2>2

L

CONHCHCONHCH0COOH I 2 W3

H„NCHCOOH

- ........... .................. .................. , Δ D

(4) 234 mg Hydroxyacetyl-L-Ala-îf-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (4) fremstilles ud fra 345 mg hydroxyacetyl-L-Ala-ï-D-GIu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3) pi i det væ-5 sentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 1.

[a]p = -25,2° (c = 0,21 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,43 (3H, d, J=7Hz), 3,91 (ÎH, t, J=7Hz), 3,99 (2H, s), 4,15 (2H, s), 4,20 - 4,55 (3H, m) ppm.

Eksempel 10.

10 Nedenstâende forbindelser fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 og 2 i eksempel 1: 1) Trin 1 : L-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH- (D)-NHNHBoc.

15 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1720 og 1650 cm NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 2,13 (3H, s), 3,93 (2H, s) ppm.

2) Trin 2: L-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(et-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH, smeltepunkt 170 - 174°C (spnderdeling).

« 100

DK 156252 B

[α]ρ = -33,2° (c = 0,25 i vand).

NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,38 (3H, d; J=7Hz), 1,45 (3H, d, J=7Hz), 3,89 (1H, t, J=7Hz), 4,01 (2H, s), 4,20 - 4,55 (4H, m) ppm.

Eksempel 11.

5 1) Trin 1:

L

H„N CHCOHN CH0COOH CH, CH,

2 | 2 t 3 i 3 D

(ÇH2)3 + BocHN CH COHN CH COHN <pH COOB zl

BocHNCHCOHNNHBoc D L (CH,)„ D èoosu

Cl) (2)

<fH3 fH3 D

-> BocHN CHCOHN CHCOHN CHCOOBzl D L ^H2>2

L

COHNCHCOHN CH,COOH I 2 (?H2>3 (3) Boc. HN CHCOHNNH. Boc

D

Til en blanding af 0,922 g Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH

(1) og 0,202 g triethylamin i 30 ml 50%'s vandigt dioxan sættes Boc-D-Ala-L-Ala-D-Glu(OSu)OBzl. Den resulterende blanding omr0res ved stuetemperatur natten over, hvorefter den inddampes. Remanensen 10 indstilles pl pH-værdi 8 med fortyndet natriumhydrogencarbonatoplos-ning og vaskes med ethylacetat. Den vandige fase syrnes til pH-værdi 1 med fortyndet saltsyre og ekstraheres derefter med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, terres over magnesiumsulfat og inddampes. Remanensen krystalliseres af en blanding af ethylacetat og 15 ether, hvorefter den filtreres. Krystallerne vaskes med ether, hvor-

DK 156252 B

101 ved der fâs 1,45 g Boc-D-L-Ala-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3).

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,29 (3H, d, J=7Hz), 1,32 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (27H, s), 3,87 - 4,47 (4H, m), 5,14 (2H, s), 7,32 (5H, 5 s) ppm.

2) Trin 2:

<fH3 pH3 D

Forbindelse (3) -> Boc. HNCHCOHNCHCOHNCHCOOH

D L

L

COHN(pHCOHNCH2COOH

<fH2>3

Boc. HNCHCOHNNH. Boc D

(4)

En oplpsning af 1,2 g Boc-D-Ala-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)~GlyOH (3) i 25 ml af en blanding af methanol og vand i forholdet 2:1 hydrogeneres over 0,2 g 5%'s palla-10 diumsort ved to atmosfærers hydrogentryk. Efter endt reaktion fra-filtreres katalysatoren, og filtratet inddampes. Remanensen pulverise-res med isopropylether og filtreres, hvorved der fâs 1,1 g Boc-D-Ala-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (4).

15 NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 1,24 (3H, d, J=7Hz), 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,44 (27H, s), 1,34 - 2,50 (10H, m), 3,94 (2H, s), 3,87 -4,50 (4H, m) ppm.

DK 156252 B

102 3) Trin 3:‘

fHS fCH3 D

Forbindelse (4) -> H9NCHCOHNCHCOHNCHCOOH

D L <ch2)2

L

(JOHN CHCOHN CH„COOH I 2 (Çh2)3 H9N CHCONHNH„ Z Ώ Δ (5) 1,0 g Boc-D-Ala-L“Ala-y-D-Glu(o-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (4) opl0ses î 5 ml trifluoreddikesyre, og op-losningen omrpres ved stuetemperatur I 30 minutter. Reaktionsblan-5 dingen inddampes, og remanensen pulveriseres med ethylacetat og filtreres, hvorved der fâs 0,81 g D-Ala-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-NHNH2~(L)-GlyOH (5)-trifluoreddikesyresalt.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,42 (3H, d, J=7Hz), 1,57 (3H, d, J=7Hz), 1,34 - 2,50 (10H, m), 3,74 (2H, s), 3,67 - 4,27 (4H, m) ppm.

10 4) Trin 4:

fH3 |CH3 D

Forbindelse (5) -> H9NCHCOHNCHCOHNÇHCOOH

D L (ch2)2

L

COHNCHCOHNCHgCOOH

ΦΗ2>3 h9nchcooh

1 D

(6) 178 mg N-bromsuccinimid sættes til en oplpsning af 532 mg D-Ala-L-Ala-r-D-Glu(a-OHML)-mesoDAP-(D)-NHNH2-(L)-GlyOH (5)-trifluor-eddikesyresalt i 10 ml 50%'s vandigt dioxan. Blandingen omrores ved stuetemperatur i 1 time og indstilles pâ pH-værdi 3,5 med fortyndet 103

DK 156252 B

natriumhydrogencarbonat, hvorefter den inddampes. Remanensen oploses i vand og chromatograferes pâ en kolonne af 150 mg makropo-rps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks HP-20, hvorefter den elueres med vand. De eluater, der indeholder den onskede forbindelse (6), sam-5 menhældes og inddampes. Remanensen vaskes med methanol og oploses i vand. Oplpsningen indstilles pâ pH-værdi 3,0 og chromatograferes igen pâ en spjle af 100 ml makroporps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks HP-20 og elueres med vand. De fraktioner, der indeholder den 0n-skede forbindelse (6), sammenhældes og inddampes til et fast stof.

10 Det faste stof opipses i vand og lyofiliseres, hvorved der fâs 120 mg D-Ala-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-meso-DAP-(L)-GlyOH (6).

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,45 (3H, d, J=7Hz), 1,57 (3H, d, J=7Hz), 1,34 - 2,34 (10H, m), 3,88 (2H, s), 3,74 - 4,50 (4H, m) ppm.

Eksempel 12.

15 1) Trin 1:

L

H2NÇHCOHNCH2COOH OAc d (ch2)3 + CH3CHCOHNCH2COHNCHCOOBZl B ocHN CH COHNNHBoc D (CH0)_ D I 1 2

COOH

(D (2)

ÇAc D

-> CH„CHCOHN CH0COHN CHCOOB zl

όΏ 1 J

(^H2>2 I L

COHN CHCOHN CH„COOH

I Δ (ch9)„

I ù O

Boc.HNCHCOHNNH.Boc D

(3) 104

DK 156252 B

1,20 g D-Lac(OAc)-Gly-ï'-D-GluOBzl-dicyclohexylaminsalt (2) oplpses i en blanding af 40 ml ethylacetat og 10 jnl methylenchlorid. Til oplos-ningen sættes 2 ml 1N saltsyre, og det sâledes dannende bundfald frafiltreres. Den organiske fase vaskes med vand, terres over mag-5 nesiumsulfat og inddampes til dannelse af en olieagtig remanens. Remanensen oplpses i 20 ml methylenchlorid, og til oplpsningen sættes 200 mg N-methylmorpholin og 270 mg isobutyl-chlorcarbonat ved 0°C. Blandingen omsættes ved samme temperatur i 20 minutter. Til reakti-onsblandingen sættes en oplesning af 860 mg Boc-(D)-mesoDAP-(D)-10 NHNHBoc-(L)-GlyOH (1) i en blanding af 40 ml methylenchlorid og 50 ml dimethylformamid indeholdende 2 ml bis(trimethylsilyl)acetamid ved 0°C. Den resulterende blanding omr0res ved samme temperatur i 2 timer og inddampes i vakuum til dannelse af en olieagtig remanens. Remanensen oplpses i ethylacetat, og oplesningen vaskes med 2%’s 15 saltsyreopl0sning. Den organiske fase vaskes successivt med vand og mættet vandig natriumchloridoplesning, terres og inddampes. Remanensen vaskes grundigt med ether og isoleres ved filtrering, hvorved der fâs 1,0 g D-Lac(OAc)-Gly-Y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3).

20 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dç): 6 = 0,80 - 2,60 (3H, m), 2,06 C3H, s), 3,76 (4H, bred s), 3,60 - 4,52 (3H, m), 5,00 (1H, q, J=7Hz), 5,12 (2H, s), 6,70 (1H, d, J=7Hz), 7,38 (5H, s), 7,80 - 8,80 (5H, m), 9,58 (1H, s) ppm.

2) Trin 2:

OAe D

Forbindelse (3) -> CHQCHCOHNCH0COHNCHCOOH

(ch2)2

L

COHNCHCOHNCH2COOH

(ch2)3

Boc. HNCHCOHNNH .Boc D

(4)

DK 156252 B

105 0,9 g D-Lac(OAc)-Gly-ï-D-Glu(a-OBz!)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3) oplpses i 9 ml iseddike og hydrogeneres over 200 mg 10%’s palladiumsort ved stuetemperatur i 1,5 time. Katalysato-ren frafiltreres, og filtratet inddampes i vakuum til dannelse af en 5 olieagtig remanens, som pulveriseres med ether, hvorved der fis 0,76 g D-Lac(OAc)-Gly-3f-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-GlyOH (4).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxîd -dg): δ = 0,80 - 2,80 (31 H, m), 2,08 (3H, s), 3,72 (4H, bred s), 3,60 - 4,36 (3H, m), 5,00 (1H, q, 10 J=7Hz), 6,76 (1H, m), 7,72 - 8,40 (5H, m), 8,70 (1H, m), 9,60 (1H, s) ppm.

3) Trin 3:

OH D

Forbindelse (4) -> CHQCHCOHNCH„COHNCHCOOH

D (CH2)2

L

COHNCHCOHNCHgCOOH

(ch2)3

Boc. HNCHCOHNNH. Boc D

(5) 0,70 g D-Lac(OAc)-Gly-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (4) oplpses i 20 ml 50%'s vandigt methanol, og 15 oplosningen indstilles pi pH-værdi 9,0 med 5%'s vandig kaliumcarbo-natoplpsning. Opl0sningen lades henstâ ved stuetemperatur i 3 timer og indstilles pi pH-værdi 7,0 med 5%'s saltsyreoplpsning. Oplosningen chromatograferes pi en kolonne af 25 ml makroporps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks HP-20 og elueres successivt med 100 ml vand og 20 100 ml 50%’s vandigt methanol. Den sidste fraktion inddampes, hvor ved der fis en dejagtig remanens, som pulveriseres med ether til dannelse af 0,40 g D-Lac-Gly-r-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (5), IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1730, 1690 og 1650 (bred) cm’1.

25 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,0 - 2,60 (31 H, m), 4,00 (4H, s), 4,20 - 4,60 (4H, m) ppm.

DK 156252B

106

4) Trin 4: oH D

Forbindelse (5) —> CHgCHCOHNCHgCOHNÇHCOOH

D CCH2)2

L

i ÜOHN CHCOHNCHgCOOH

(9Η2}3 H„NCHCOOH Δ D

(6) 335 mg D-Lac-Gly-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-GlyOH (5) oplpses i 3 ml trifluoreddikesyre, og oplpsningen omrpres ved stuetemperatur i 15 minutter. Oplpsningen inddampes i 5 vakuum, og den sâledes vundne remanens pulveriseres med ether til danneise af et hvidt pulver. Pulveret oplpses i en blanding af 8 ml vand og 11,6 ml 0,1 N svovlsyreoplpsning, og oplpsningen afkples i isbad. Til oplpsningen sættes en vandig natriummetaperiodatoplpsning (240 mg i 3 ml vand), og blandingen lades reagere ved 0°C i 1 time.

10 Den resulterende reaktionsbianding behandles med en vandig oplps-ning af natriumhydrogencarbonat, indtil oplpsningens purpurfarve forsvinder. Oplpsningen indstilles pl pH-værdi 3,0 og inddampes til ca. 3 ml. Koncentratet indstilles pl pH-værdi 2,0 og chromatograferes derefter pl en kolonne af 80 ml makroporps, ikke-ionisk adsorptions-15 harpiks HP-20 og elueres med vand. De fraktioner, der indeholder den pnskede forbindelse (6), isoleres og inddampes i vakuum, hvor-ved der fis en dejagtig remanens, som oplpses i vand og iyofiliseres, hvorved der fis 0,150 g D-Lac-Gly-3f-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (6).

20 [et]p = -5,0° (c = 0,2 i vand).

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,60 (10H, m), 3,82 Cl H, t, J=7Hz), 3,96 (2H, s), 4,00 (2H, s), 3,68 - 4,52 (3H, m) ppm.

107

DK 156252 B

Eksempel 13.

1) Trin 1 : , OAc CHgOBzl

L D

H0N CH COHN CH0COOH + CH-CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl 2 I 2 3D L 1 (çh2)3 u l (çh2)2

Boc. HNCHCOHNNH. Boc COOH

D

(1) (2) OAc ÇHgOBzl

| I D

-> CH „ CH COHN CH COHN CH COOB zl 3D T 1 (ch2)2

L

COHNCHCOHNCH2COOH

(ÎH2}3

Boc. HNCHCOHNNH. Boc D

(3) 1,40 g D-Lac(OAc)L-Ser(OBzl)-D-GluOBzl-(2)-dicyclohexylaminsalt oplpses ί en blanding af 40 ml ethylacetat og 10 ml chloroform. Til 5 oplpsningen sættes 2 ml 1H saltsyre, og det sâledes dannede bundfald frafiltreres. Den organiske fase fraskilles, vaskes med vand, tprres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fis 1,08 g af en olieagtig remanens. Remanensen oplpses i 20 ml methylenchlorid, og oplpsningen behandles med 198 mg N-methylmorpholin og afkples til 10 -10°C, hvorefter der tilsættes 270 mg isobutylchlorcarbonat. Til

blandingen sættes 860 mg Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH

(1) i en blanding af 40 ml methylenchlorid og 50 ml dimethylformamid indeholdende 2 ml bis(trimethylsilyl)acetamid. Den resulterende blanding lades reagere ved -10°C i 2 timer. Reaktionsblandingen inddam-15 pes i vakuum, hvorved der fis en olieagtig remanens, som oplpses i ethylacetat. Oplpsningen vaskes med 2%'s vandig saltsyre, og ethyl-acetatfasen fraskilles, vaskes med vand og tprres over magnésium- 108

DK 156252 B

sulfat, hvorefter den inddampes. Den sâledes vundne krystallinské remanens vaskes med ether, hvorved der fis 1,55 g D-Lac-(OAc)-L-Ser(OBzl)-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH C3).

5 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,00 - 2,36 (10H, m), 1,38 (18H, s), 1,32 C3H, d, J=7Hz), 2,04 (3H, s), 3,44 - 4,84 (8H, m), 4,48 C2H, s), 5,06 (1H, q, J=7Hz), 5,14 (2H, s), 6,72 (1H, bred s), 7,34 (5H, s), 7,40 (5H, s), 7,92 (1H, bred s), 8,04 - 8,44 (4H, m), 8,72 (1H, bred s), 9,60 (1H, s) ppm.

10 De nedenfor anfprte forbindelser fremstilles pl i det væsentlige samme mlde som beskrevet i trin 2) - 4) i eksempe! 12: 2) Trin 2: D-Lac(OAc)-L-Ser(OH)-3f-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)- NHNHBoc-(L)-GlyOH.

15 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,00 - 2,40 (10H, m), 1,38 (18H, s), 1,32 (3H, d, J=7Hz), 2,08 (3H, s), 3,40 - 4,52 (8H, m), 5,06 (1H, q, J=7Hz), 6,76 (1H, d, J=7Hz), 7,64 - 8,32 (4H, m), 8,72 (1H, s), 9,60 (1H, s) ppm.

3) Trin 3: 20 D-Lac-L-Ser-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,00 - 2,60 (10H, m), 1,42 (3H, d, J=7Hz), 1,44 (18H, s), 3,60 - 5,00 (9H, m) ppm.

4) Trin 4: 25 D-Lac-L-Ser-Ï-D-Glu (α-OH) - (L) -mesoDAP- (L) -GlyOH.

[a]p = -18,5° (c = 0,2 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,20 - 2,60 (10H, m), 1,40 (3H, d, J=7Hz), 3,60 - 5,10 (7H, m), 3,98 (2H, s) ppm.

Eksempel 14.

109

DK 156252 B

1) Trin 1: CIÎ3 /CH3

L PAC TH D

H0N CHCOHN CH0 COOH + CH„CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl 2 | 2 3D L 1 (pH2}3 (pH2^2

B oc. HNCHCOHNNH. B oc COOH

(D (2)

<®3 /CH3 OAc ^CH D

-> CH CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl D L <CH2>2

L

COHN CHCOHNCH-COOH I 2 (fH2}3

Boc .HNCHCOHNNH .Boc D

(3) 1,20 g D-Lac(OAc)-L-Val-y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3) fremstilles ud fra 800 mg Boc-(D)-me-5 soDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (1) og 0,90 g D-Lac(OAc)-L-Val-ï-D-GluOBzl (2) pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1) i eksempel 12.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,80 (3H, d, J=7Hz), 0,84 (3H, d, J=7Hz), 1,83 (18H, s), 1,0 - 2,40 (14H, m), 2,04 (3H, s), 10 3,60 - 4,48 (6H, m), 5,08 (1H, q, J=7Hz), 5,14 (5H, s), 6,74 (1H, d, J=7Hz), 7,36 (5H, s), 7,80 - 8,40 (5H, m), 8,68 (1H, s), 9,54 (1H, s) ppm.

Derefter fremstilles de nedenfor anfprte forbindelser pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2) - 4) i eksempel 12.

DK 156252 B

110 2) Trin 2: D-Lac(OAc)-L-Val-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NH N H-Boc-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg) : δ = 0,82 (3H, d, J=7Hz), 0,86 5 (3H, d, J=7Hz), 1,00 - 2,40 (14H, m), 2,04 (3H, s), 3,60 - 4,40 (6H, m), 5,04 (1H, q, J=7Hz), 6,76 (1H, d, J=7Hz), 7,80 - 8,40 (4H, m), 8,70 (1H, s), 9,60 OH, s) ppm.

3) Trin 3: D-Lac-L-Val-ï-D-Glu(a-OH)-(!_)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-N HNHBoc-10 (L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (D20): δ = 0,96 (6H, d, J=7Hz), 1,12 - 2,56 (32H, m), 3,96 (2H, s), 3,80 - 4,52 (5H, m) ppm.

4) Trin 4: D- Lac- L-Val-ï-D-Glu (α-OH) - ( L) -mesoDAP- ( L)-GlyOH.

15 [a]D = -28,0° (c = 0,2 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 0,96 (6H, d, J=7Hz), 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,60 (11H, m), 3,96 (2H, s), 3,68 - 4,50 (5H, m) ppm.

De nedenfor anf0rte forbindelser fremstilles pâ i det vassentlige samme made som beskrevet i henholdsvis trin 1) og 2) i eksempel 1.

20 Eksempel 15.

1) Trin 1 :

Thienylacetyl-L-Ala-2r-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-

Boc-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 3,76 (2H, s), 3,87 (2H, s), 4,15 - 4,40 25 (3H, m), 6,90 (2H, m), 7,20 (1H, m) ppm.

2) Trin 2:

Thienylacetyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

[o]p = -33,5° (c = 0,20 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,40 (3H, d, J=7Hz), 3,81 (3^ t, J=7Hz), 30 3,89 C2H, s), 3,97 (2H, s), 4,13 - 4,44 (3H, m), 7,02 (2H, m), 7,35 (1H, m) ppm.

Eksempel 16.

DK 156252 B

111 1) Trin 1 :

Phenylcarbamoyl-L-Ala-ï-D-GluCa-OhO-tlO-Boc-iDJ-mesoDAP-ÎD)- NHNHBoc-(L)-GlyOH.

5 IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1730, 1650, 1595 og 1540 cm **.

ΓΠ3 X

NMR-Spektrum (CD^OD): 6 = 3,95 (2H, s), 4,2 - 4,6 (3H, m), 6,9 - 7,1 (5H, m) ppm.

2) Trin 2:

Phen y I carbamoy I -L-A la - 3f- D -G luCa- OH ) - mesoD A P-(L)-GlyOH.

10 [°0q = "38,5° (c = 0,20 i dimethylsulfoxid).

NMR-Spektrum (D20 + NaHC03): 6 = 1,43 (3H, d, J=7Hz), 3,96 (1H, m), 3,76 (2H, s), 4,05 - 4,5 (3H, m), 7,35 (5H, m) ppm.

Eksempel 17.

1) Trin 1:

L

CHg D H2N<j)HCONHCH2COOH

c6h5-ch2ocohnchcohnchcoobzi + (ch2)3

(CH0)0 Boc. HNCHCONHNH. Boc là D

COSu (D (2) 112

DK 156252 B

Fs D

-> C_H_-CH,OCOHNCHCOHNCHCOOBzJ

6 5 2 y I

<ch2)2 I l CONHCHCONHCH0COOH Γ 2 (<ΡΗ2}3

Boc. HNCHCONHNH. Boc D

(3) 720 mg triethylamin og 3,51 g benzyloxycarbonyl-L-Ala-D-Glu(OSu)-OBzl (1) sættes til en opl0sning af 3,00 g Boc-(D)-meso-DAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (2) i en blanding af 90 ml dioxan og 70 ml vand.

Den resulterende blanding Îades henstâ ved stuetemperatur i 18 timer 5 og inddampes til ca. 50 ml. Koncentratet indstilles pl pH-værdi 3 med IN saltsyre og ekstraheres med 300 ml ethylacetat indeholdende 20 ml methanol. Den organiske fase vaskes med 100 ml saltvand, tprres over natriumsulfat og inddampes derefter i vakuum. Remanensen vaskes med ether og filtreres, hvorved der fis 5,53 g benzyloxycarbonyl-L-10 Ala-y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH

(3).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,07 (3H, d, J=7Hz), 3,64 - 4,48 C6H, m), 5,04 (2H, s), 5,12 (2H, s), 6,56 (1H, d, J=8Hz), 7,35 (10H, s), 7,95 (1H, d, J=8Hz), 8,15 (1H, m), 8,35 (1H, 15 d, J=8Hz), 8,70 (1H, s), 9,56 (1H, s) ppm.

2) Trin 2:

fH3 D

Forbindelse (3) -> CgHg-CHgOCONHCHCONHÇHCOOBzl L ^«2>2

L

CONHCHCONHCH0COOH I 2

(?H2>3 H0NCHCCX)H Z D

(4)

DK 156252B

113 1,43 g benzyloxycarbonyl-L-Ala-Y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3) sættes til 6 ml trifluoreddikesyre, og blandingen lades henstâ ved stuetemperatur i 1 time. Blandingen inddampes i vakuum, og den som remanens vundne olie tritureres med 5 isopropylether til dannelse af et fast stof. Det faste stof opl0ses i en blanding af 35 ml vand og 10 ml methanol. Til denne oplpsning sættes 40 ml IN svovlsyre og 860 mg natriumperiodat ved 0°C. Blandingen omrpres ved samme temperatur i 1,5 time, inddampes til 10 ml og indstilles pi pH-værdi 4 med IN natriumhydroxidoplosning. Det slle-10 des vundne bundfald isoleres og tomes over phosphorpentoxid, hvor-ved der fis 1,09 g benzyloxycarbonyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (4).

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3300, 1700, 1660 og 1540 cm NMR-Spektrum (D20 + NaHC03): δ = 3,78 (2H, s), 5,04 (2H, s), 15 5,13 (2H, s), 7,40 (10H, m) ppm.

3) Trin 3:

fH3 D

Forbindelse (4) -> CeH,-CH0OCONHCHCONHCHCOOH

O O et |> | <CH2>2

L

CONHCHCONHCH2COOH

4¾½

HftNCHCOOH Δ D

(5)

Til en suspension af 600 mg benzyloxycarbonyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-mesoDAP-(L)-G!yOH (4) i 10 ml vand sættes 35 ml 1N natriumhydroxidoplosning. Blandingen lades henstâ ved stuetempe-20 ratur i 1 time. Reaktionsblandingen indstilles pâ pH-værdi 2,0 med IN saltsyre og inddampes til ca. 3 ml. Den som remanens vundne oplps-ning chromatograferes pâ en kolonne af 60 ml makroporps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks HP-20 og elueres med en blanding af vand og methanol i forholdet 7:3. Den fraktion, som indeholder den onskede 25 forbindelse, isoleres og inddampes til tprhed ί vakuum, hvorved der fis 190 mg benzyloxycarbonyl-L-Ala-y-D-Glufa-OHI-carbonyl-L-Ala-

DK 156252 B

114 carbonyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-(L)-GlyOH (5), smeltepunkt 205 - 207°C.

[a]D = 12,1° (c = 0,19 i vend).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,37 (3H, d, J=7Hz), 3,78 (1H, m), 3,93 5 C2H, s), 4,05 - 4,40 (3H, m), 5,14 (2H, s), 7,45 (5H, s) ppm.

Eksempel 18.

1) Trin 1: pAc CH2C6H5

L I D

H9NCHC0HNCH9C00H + CH9 CHCOHNCHCOHNCHCOOB zl

Z | ί “η t I

(«VS (ÇH2>2

Boc. HNCHCONHNH. Boc COOH

(D (2) f2C6H5

PAc I D

-> CH» CHCOHN CHCONHCHCOOBzl

D L (ÇH2}2 I L

COHNCHCOHNCH2COOH

Φν3

Boc. HNCHCONHNH. Boc D

(3) 1,0 g D-Lac(OAc)-L-Phe-D-GluOBzI (2) oploses i 40 ml methylen-chlorid, og der tilsættes 200 mg N-methylmorpholin. Oplpsningen 10 omrpres og afkples tll -10°C i et is/salt-bad, der tilsættes 270 mg îsobutylchlorcarbonat, og blandingen lades reagere ved denne tem-peratur i 20 minutter. Til reaktionsblandingen sættes den silylester, der fremstilles ud fra 920 mg Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (1) i en blanding af 20 ml methylenchlorid og 10 ml dimethyl- 115

DK 156252 B

formamid indeholdende 2 ml bis(trimethylsilyl)acetamid. Reaktions-blandingen omrpres i 2 timer og inddampes under reduceret tryk, hvorved der fis en olieagtig remanens, som oploses i ethylacetat og vaskes med 2%'s saltsyre. Den organiske fase vaskes successivt med 5 vand og mættet natriumchloridoplpsning, hvorefter den t0rres. Ved afdampning af oplosningsmidlet fis en remanens, som vaskes grundigt med ether og isoleres ved filtrering, hvorved der fis 1,660 g D-Lac-(OAc)-L-Phe-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3).

10 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,10 (2H, d, J=7Hz), 1,23 - 2,43 (28H, m), 2,00 (3H, s), 2,86 - 3,23 (2H, m), 3,73 - 4,70 (6H, m), 5,17 (2H, s), 7,23 (5H, s), 7,36 (5H, s), 7,70 - 8,90 (5H, m), 9,60 (1H, s) ppm.

2) Trin 2: OH ÇH2C6H5

I I D

Forbindelse (3) —> CH„CHCOHNCHCONHCHCOOH

D L <K>2

I L

COHNtjHCOHNCHgCOOH

4H2}3

Boc. HNCHCONHNH. Boc D

(4) 15 1,50 g D-Lac(OAc)-L-Phe-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-<(D)-mesoDAP- (D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3) oploses i 20 ml 50%'s vandigt methanol.

Til denne oplosning sættes 5 ml IN natriumhydroxidoplpsning, og den resulterende oplosning lades henstâ ved stuetemperatur i 2 timer. Oplpsningen inddampes til ca. 3,0 ml efter indstilling af pH-værdien i 20 opl0sningen pl 7,0. Opl0sningens pH-værdi indstilles igen pl ca. 2,0, og det slledes vundne bundfald ekstraheres med ethylacetat. Den organiske fase vaskes med mættet natriumchloridoplosning og torres over magnesiumsulfat, hvorefter opl0sningsmidlet afdampes, hvorved der fis 0,960 g D-Lac(OH)-L-Phe-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-meso-25 DAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (4).

DK 156252B

116 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 - 1,12 C3H, d, J=7Hz), 1,0 - 2,32 (28H, m), 2,72 - 3,20 (2H, m), 3,60 - 4,80 (7H, m), 6,72 (1H, m), 7,20 (5H, s), 7,48 - 8,80 (5H, m), 9,52 (1H, s) ppm.

« 3) Trin 3: OH CH-CLHj.

!i 2 6 5

I D

Forbindelse (4) -> CH,CHCOHNCHCONHCHCOOH

•*tj t I

W

I L

COHNCHCOHNCH2COOH

4H2}3

HgNCHCOOH

C5) 5 D-Lac(OH)-L-Phe-r-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-GlyOH (4) oploses i 5 ml trifluoreddikesyre, og opl0sningen omrores ved stuetemperatur i 15 minutter. Ved afdampning af op-losningsmidlet under reduceret tryk fis en olieagtig remanens, som pulverlseres med ether til dannelse af et hvidt pulver. Pulveret 10 oploses i en blandlng af 15 ml vand og 0,IN svovlsyre, og oplosnin-gen afkoles i isbad. Til denne omrorte oplosning sættes en vandig oplosning af 528 mg natriumperiodat i 8 ml vand, og blandingen lades reagere ved samme temperatur i 1 time. Den resulterende reaktions-blanding behandles med natriumbisulfit, indtil btandingens brune 15 farve forsvinder, og pH-værdien i oplosningen indstilles pi ca. 3,0. Derefter inddampes oplosningen til ca. 4 ml, og pH-værdien i oplosningen indstilles igen pi 2,0. Oplosningen hældes pâ en kolonne af 60 ml makroporos, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20, og elueres med vand. Ved inddampning af de fraktioner, der indeholder den onskede 20 forbindelse (5), fis 0,45 g D-Lac(OH)-L-Phe-1f-D-Glu(a-OH)-(L)-me-soDAP-(L)-GlyOH (5).

[a]p = -5,0° (c = 0,2 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,28 (3H, d, J=7Hz), 1,32 - 2,28 (10H, m), 3,08 (2H, ABq, J=16Hz), 3,80 (1H, t, J=7Hz), 3,96 (2H, s), 25 4,0 - 4,44 (4H, m), 7,32 (5H, s) ppm.

DK 156252 B

117

De nedenfor anfprte forbindelser fremstilles pâ i det væsentlige samme made som beskrevet i trin 1) og 2) i eksempel 1:

Eksempel 19.

l) Trin 1: 5 Pivaloyl-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (CD^OD): δ = 1,22 (9H, s), 1,38 (2H, d, J=7Hz), 1,48 (18H, s), 1,34 - 2,42 (10H, m), 3,95 (2H, s), 4,27 - 4,60 (4H, m) ppm.

10 2) Trin 2:

Pivaloyl-L-Ala-3r-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (D2O): δ = 1,20 (9H, s), 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,34 -2,42 (10H, m), 3,80 (2H, s), 4,10 - 4,45 (4H, m).

Eksempel 20.

15 1) Trin 1:

Adamantan-1-carbonyl-L-Ala-lT-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP- (D)-NHNHBoc-(U-GlyOH.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3280, 1720 (skulder), 1630 og 1520 ms x -1 cm .

20 2) Trin 2:

Adamantan-l-carbonyl-L-Ala-ff-D-GMa-OHI-CU-mesoDAP-dJ-GlyOH.

[a] p = -18,9° (c = 0,18 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,46 (3H, d, J=7Hz), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 3,98 (2H, s), 4,25 - 4,5 (3H, m) ppm.

118

DK 156252 B

Eksempel 21.

1 ) Trin Ί :

Lauroyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc- (L)-GIyOH.

5 IR-Spektrum (Nujol): υ = 3300, 1730 (skulder), 1650 og 1520 ΠΊ3Χ -i cm .

NMR-Spektrum (CD^OD): δ = 0,96 (3H, m), 3,96 (2H, s) ppm.

2) Trin 2:

Lauroyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

10 [a]D = -30,0° (c = 0,14 i IN NaOH).

NMR-Spektrum (D20 + NaHCC>3): δ = 0,88 (3H, m), 3,65 - 3,85 (3H, m), 4,10 - 4,60 (3H, m) ppm.

Eksempel 22.

1) Trin 1: 15 Salicyloyl(OBzl)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,42 (9H, s), 1,44 (9H, s), 3,87 (2H, s), 5,23 (2H, s), 6,93 - 7,55 (8H, m), 7,94 (1H, d,d, J=2 og 7Hz) ppm.

20 2) Trin 2:

Salicyloyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

[e]D = 4,6° (c = 0,13 i vand).

NMR-Spektrum (ϋ2<0): δ =1,51 (3H, d, J=7Hz), 3,77 (1H, t, J=7Hz), 3,91 (2H, s), 6,97 - 7,10 (2H, m), 7,40 - 7,55 (1H, m), 7,71 - 7,79 25 (1H, m) ppm.

Eksempel 23.

1) Trin 1 : a-Ethylhexanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(!_)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH.

119

DK 156252 B

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 0,88 (6H, t, J=7Hz), 1,42 (9H, s), 1,54 (9H, s), 1,80 - 2,36 (Ί9Η, m), 3,94 (2H, s) ppm.

2) Trin 2: cx-Ethylhexanoyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

5 [a]D = -46,7 (c = 0,12 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 0,81 (6H, t, J=7Hz), 1,37 (2H, d, J=7Hz), 3,81 (1H, t, J=7Hz), 3,96 (2H, s), 4,2 - 4,5 (3H, m) ppm.

Eksempel 24.

1) Trin 1: 10 Nicotinoyl-L-Ala-y-D-Glu(cc-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,40 (18H, m), 3,90 (2H, s), 7,50 (1H, d,d, J=8 og 5Hz), 8,31 (1H, m), 8,69 (1H, m), 9,11 (1H, m) ppm.

2) Trin 2: 15 Nicotinoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

[a]D = -7,7° (c = 0,22 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,56 (3H, d, J=7Hz), 3,83 (1H, t, J=6Hz), 3,95 (2H, s), 7,94 (1H, d,d, J=8 og 4Hz), 8,85 (1H, m), 9,10 (ΊΗ, m) ppm.

20 Eksempel 25.

1) Trin 1:

Stea royl-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1720, 1630 og 1530 cm \ ma x NMR-Spektrum (CD3OD + CDCI3): δ = 0,80 (3H, m), 3,95 (2H, s) 25 ppm.

2) Trin 2:

Stea royl-L-Ala-y-D-Glu(c£-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

[a]D = -30,8° (c = 0,13 i 1N NaOH).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3280, 1730, 1630 og 1530 cm max

DK 156252 B

120 NMR-Spektrum (NaOD + D20): 6 = 0,83 (3H, m), 3,24 (1H, m), 3,82 (2H, s) ppm.

Eksempel 26.

1) Trin 1:

L

HgN <pHCOHN CHgCOOH CH3 CHg β

(<pH2)3 + CgHg- COHN CHCOHN CHCOHN CHCOOBzI

BocHNCHCONHNNHBoc D L (CH0)0 D l 1 Δ COOSu

Cl) (2) çh3 çh3 d

-> C „HC - COHN CHCOHN CHCOHN CHCOOBzI

65 D L '

<W2 I L

COHN CHCOHN CH„COOH I 2 (?Η2}3

BocHN CHCOHNNHBoc D

(3) 5 Til en blanding af 0,46 g Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GJyOH og 0,11 g triethylamin i 20 ml af en blanding af dioxan og vand i forholdet 2:1 saettes 0,58 g benzoyI-D-AIa-L-Ala-D-Glu(Y-OSu)-OBzl (2).

Den resulterende blanding omrores ved stuetemperatur i 18 timer.

10 Efter afdampning af dioxanet syrnes den som remanens vundne van-dige fase med fortyndet saltsyre, indtil pH-værdien er 1, og ekstra-heres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, tprres og ind-dampes. Remanensen tritu reres med ether, hvorved der fâs 0,64 g benzoyl-D-Ala-L-AIa-y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-15 N H N H Boc- ( L) -G lyOH (3).

IR-Spektrum (Nujol): v v =3290, 1720, 1680 og 1640 cm'1.

ΓΠ3Χ

DK 156252 B

121 2) Trin 2:

ÇH3 <ΤΗ3 D

Forbindelse (3) -> CfiHK-COHNCHCOHNCHCOHNCHCOOH

6 5 D t i ü L (ch9)9

I I

COHNCHCOHNCH2COOH

(?H2}3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4)

Til en oplosning af 0,58 g benzoyl-D-Ala-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3) i 30 ml af en blanding af methanol og vand i forholdet 2:1 sættes 10%'s palladium/-5 kul, og blandingen rystes i 3 timer under hydrogen ved tre atmos-færers tryk. Katalysatoren frafiltreres, og filtratet inddampes. Re-manensen tritureres med ether, hvorved der fis 0,44 g benzoyl-D-Ala-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (4).

10 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250, 1720, 1660 - 1360 cm-1.

3) Trin 3: CH„ CH„ n

| o i 3 D

Forbindelse (4) -> CfiHK-COHNCHCOHNCHCOHNCHCOOH

6 5 D L 1 CCH2)2

L

cohnchcohnch2cooh (?H2}3 h9nchcooh

1 D

(5) 0,40 g benzoyl-D-Ala-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (4) oplpses i 6 ml trifluoreddikesyre ved 0°C, og oplpsningen omrpres ved samme temperatur i 1 time. Efter 15 afdampning af trifluoreddikesyren sættes en Mlle mængde benzen

DK 156252 B

122 til remanensen, og blandingen inddampes. Remanensen oplpses i 3 ml vand, og oplpsningen syrnes med 0,5 ml IN svovlsyreoplpsning. Til oplpsningen dryppes en oplpsning af 0,14 g natriumperiodat i 3 ml vand ved 0°C. Efter omroring i 1 time tilsættes natriumbisulfit, indtil 5 reaktionsblandingens farve bliver klar. Efter indstilling af pH-værdien pâ 3,2 inddampes reaktionsblandingen til ca. 4 ml. Koncentratet hældes pi en kolonne af 20 ml makroporps, ikke-ionisk adsorptions-harpiks, HP-20, vaskes med vand og elueres med 30%'s vandigt meth-anol. De fraktioner, som indeholder den pnskede forbindelse (5), 10 inddampes, og koncentratet lyofiliseres, hvorved der fis 120 mg benzoyl-D-AIa-L-Ala-Y-D-Glu (α-OH) - (L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (5). NMR-Spektrum (D2O): δ = 1,50 (3H, d, J=7Hz), 1,57 (3H, d, J=7Hz), 1,42 - 2,42 (10H, m), 3,95 (2H, s), 3,37 - 4,67 (5H, m), 7,54 - 7,95 (5H, m) ppm.

15 De nedenfor anfprte forbindelser fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1) - 3) i eksempel 26:

Eksempel 27.

1) Trin 1 :

Acetyl-D-Ala-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NH-20 NHBoc-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,40 (18H, s), 1,33 (6H, d, J=7Hz), 1,92 (3H, s), 1,84 - 2,30 (10H, m), 3,88 (2H, s), 3,84 - 4,25 (5H, m), 5,12 (2H, s), 7,30 (5H, m) ppm.

2) Trin 2: 25 Acetyl-D-Ala-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,32 (6H, d, J=7Hz), 1,34 - 2,32 (10H, m), 1,90 (3H, s), 3,79 - 4,25 (5H, m), 3,89 (2H, s), 5,12 (2H, s), 7,30 (5H, s) ppm.

3) Trin 3: 30 Acetyl-D-Ala-L-Ala-Ï-D-Glu (α-OH) - (L) -mesoDAP- (L) -GlyOH.

123

DK 156252 B

NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,32 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,25 - 2,38 (10H, m), 3,80 (1H, t, J=6Hz), 3,96 (2H, s), 4,24 - 4,42 (4H, m) ppm.

Eksempel 28.

fH3 D

.H2NCHC0HNCHC00H

t Cch2)2

.X

C0HNÇHC0HNCH2C00H -—^ ^H2^3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

•Cl) · .

.CH- D

I * H2NCHCOHNCHCOOH L ·

L

:ohnchcohnch2cooh

Cf2)3

H2NCHCOOH

D

(2) 5 662 mg L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc- (L)-GlyOH (1) sættes til 4 ml trifluoreddikesyre, og blandingen omr0res ved stuetemperatur i 50 minutter. Efter fjernelse af trifluor-eddikesyren ved afdampning oploses remanensen i 20 ml vand og 124

DK 156252 B

afkoles til 0°C. Til denne afkolede oplosning sættes 25 ml 0,1 N svovl-syre og en oplosning af 535 mg natriumperlodat i 5 ml vand. Blan-dingen omr0res ved samme temperatur ί 1 tlme, I hvîlket tldsrum reaktionsopl0sningen bliver m0rkebrun. Der tilsaettes natriumbisulfat, 5 indtil farven forsvinder, og blandingen indstilles pâ pH-værdi 3 med fortyndet natriumhydrogencarbonatoplosning. Efter inddampning af blandingen opl0ses remanensen ί en lille smule vand og indstilles igen pl pH-værdi 3. Opl0sningen hældes pi en kolonne af 130 ml makro-por0s, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20, og elueres med vand.

10 Den fraktion, som indeholder den onskede forbindelse (2), inddampes.

Denne chromatografiske operation gentages, og den fraktion, som indeholder den onskede forbindelse (2), lyofiliseres, hvorved der fis 220 mg af et amorft fast stof. 180 mg af det faste stof renses yder-ligere ved kolonnechromatografi pl 20 ml aktivkul og eluéres med en 15 blanding af vand og acetone i forholdet 4:1. Eluatet inddampes, og remanensen pulveriseres med acetone, hvorved der fis 90 mg L-AJa-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (2).

[et]d = -10,6 (c = 0,34 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ =1,55 (3H, d, J=7Hz), 3,75 (1H, t, J=7Hz), 20 3,86 C2H, s), 4,05 - 4,45 (m) ppm.

Eksempel 29.

Fs ' D

ZNHCHCONHCHCOQH

L [Αη2)2

Il -^

C0NHCHC0NHCH-COOH

cAh2)3

HjNCHCOOH

D

(1)

DK 156252 B

125

?H3 D

H^NCHCONHCHCOOH

L CÇH2)2 I l

CONHCHCONHCH2COOH

Wî

BocHNCHCOOH ’ D

(2)

Til en oplpsning af 2,04 g Z-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (1) og 890 mg natriumhydrogencarbonat i 40 ml 50%'s vandigt dioxan saettes 1,53 g di-tert.butyldicarbonat. Efter omrpring I 4 timer ved stuetemperatur tilsættes yderligere 770 mg di-tert.butyldicarbonat 5 og 0,6 ml IN natriumhydroxidoplpsning, og blandingen omrpres i 2,5 timer. Til blandingen saettes 5 ml eddikesyre, og den resulterende blanding hydrogeneres over 300 mg 10%'s palladiumsort med hydrogen ved atmosfæretryk. Efter frafiltrering af katalysatoren inddampes filtratet i vakuum. Remanensen oplpses i 5 ml vand og hældes pi en 10 kolonne af 120 ml makroporps, ikke-ionisk adsorptîonsharpiks, HP-20.

De fraktioner, som er elueret med en blanding af vand og methanol i forholdet 7:3, sammenhældes og inddampes, hvorved der fis 1,17 g L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (2).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3280, 1650 (skulder), 1520 (skulder) ΓΠαΧ 15 cm l NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,42 (9H, s), 1,55 (3H, d, J=7Hz), 3,93 (2H, s), 4,04 - 4,50 (4H, m) ppm.

DK 156252 B

126

Eksempel 30.

CH t D

/"\-CH20C0HNCHC0HNCHC00B2l W L. CCH2)2 . L.

:onh(j:hconhch2cooh CÇV,

BocHNCHCQ$HNHBoc CD a.

ôî3 d

-> / y-CH20C0HNCHC0HNCHC00H

W ^ Cçh2)2

I L

, CONHCHCONHCH.COOH

fai

BocHNCHCONHNHBoc

D

(2)

Ti! en suspension af 4,43 g benzyloxycarbonyl-L-Ala-Y-D-Glu(a-OBzl) -(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (1) i en blan-ding af 50%'s vandigt methanol sættes Π ml 1N natriumhydroxid ved 5 0°C. Efter omrpring i 1 time ved samme temperatur inddampes reak- tionsblandingen til ca. 30 ml, indstilles pi pH-værdi 2 med IN salt-syre og ekstraheres derefter med 300 ml ethylacetat. Den organiske fase vaskes med 30 ml 0,5N saltsyre og saltvand, torres over mag-nesiumsulfat og inddampes derefter i vakuum til dannelse af et hvidt 10 pulver, som vaskes med ether. Pulveret isoleres ved filtrering, hvor- 127

DK 156252 B

ved der fâs 3,46 g benzyloxycarbonyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (2).

NMR-Spektrum (CD^OD): δ = 1,50 (18H, s), 3,98 (2H, s), 4,00 -4,70 (4H, m), 5,17 (2H, s), 7,40 (5H, s) ppm.

5 2) Trin 2:

PS D

Forbindelse (2) —> C.Hc-CH„OCOHNCHCOHNCHCOOH

DO ά J I

(CH2)2

L

......... ................ · · GONHCHCONHCH2COOH

<fH2>3 H0NCHCOOH L D

(3) 3,30 g benzyloxycarbonyl-L-Ala-îr-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (2) sættes til 15 ml trifluoreddikesyre, og blandingen lades henstâ ved stuetemperatur i 30 minutter, Blan-dingen inddampes i vakuum, og den som remanens vundne olie tri-10 tu reres med ether, hvorved der fis 3,38 g pulver. Det faste stof oplpses i 60 ml vand, og til oplpsningen sættes IN svovlsyre og 1,78 g natriumperiodat ved 0°C. Efter omrpring ved samme temperatur i 1 time behandles reaktionsblandingen med natriumbisulfit, inddampes til ca. 5 ml, indstilles pâ pH-værdi 2 med 1N natriumhydroxidoplpsning 15 og hældes pâ en kolonne af 400 ml makroporps, ikke-ionisk adsorpti-onsharpiks, HP-20. De fraktioner, som er elueret med en blanding af vand og methanol i forholdet 6:4, sammenhældes og inddampes i vakuum, hvorved der fâs 1,03 g benzyloxycarbonyl-L-Ala-ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (3), smeltepunkt 205 - 207°C.

20 NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,37 (3H, d, J=7Hz), 3,78 (1H, m), 3,93 (2H, s), 4,05 - 4,40 (3H, m), 5,14 (2H, s), 7,45 (5H, s) ppm.

DK 156252B

128

Eksempe! 31.

1) Trin 1:

L

CH0 ~ H„N CHCONHCH0COOH

I 3 D 2 i 2 ZHN CHCOHN ÇHCOOBzl + (ÇH2)3 L (CH9)9 Boc . NHCHCONHNH. Boc

I Δ Δ D

COOSu u (1) (2)

CH3 D

--> ZHNCHCOHNCHCOOBzl L (ch2)2

L

CONHCHCONHCHgCOOH

(9H2}3

Boc. HNCHCONHNH. Boc D

(3) 720 mg triethylamin og 3,51 g Z-L-Ala-D-Glu(OSu)OBzl (1) sættes til en oplosning af 3,00 g Boc-(D)-meso-DAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH 5 (2) i en blanding af 90 ml dioxan og 70 ml vand. Den resulterende blanding lades henstâ ved stuetemperatur i 18 timer og inddampes til ca. 50 ml. Koncentratet indstilles pâ pH-værdi 3 med IN saltsyre og ekstraheres med 300 ml ethylacetat indeholdende 20 ml methanol. Den organiske fase vaskes med 100 ml saltvand, tprres over natriumsulfat 10 og inddampes derefter i vakuum. Remanensen vaskes med ether og filtreres, hvorved der fâs 5,53 g Z-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,07 (3H, d, J=7Hz), 3,64 - 4,48 (6H, m), 5,04 (2H, s), 5,12 (2H, s), 6,56 (1H, d, 15 J=8Hz), 7,35 (10H, s), 7,95 (1H, d, J=8Hz), 8,15 (1H, m), 8,35 C1H, d, J=8Hz), 8,70 (1H, s), 9,56 (1H, s) ppm.

DK 156252 B

129 2) Trin 2:

fH3 D

Forbindelse (3) -> H0NCHCONHCHCOOH

2 L I

Wî

I L

C0NHCHC0NHCHoC00H ί 2

Ws

BocHN CHCONHNHBoc D

(4)

En opl0sning af 5,26 g af forbindelse (3) i 120 ml eddikesyre hy-drogeneres over 2,0 g 10%'s palladiumsort med hydrogen ved atmos-færetryk. Katalysatoren frafiltreres og vaskes med eddikesyre, og 5 filtratet og vaskevæskerne sammenhældes og inddampes i vakuum. Den som remanens vundne olie tritureres med ether, hvorved der fâs 3,90 g L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-Gly-OH (4).

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250, 1660 (skulder) og 1515 cm 10 NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,54 (3H, d, J=8Hz), 3,88 (2H, s), 3,95 -4,50 (4H, m) ppm.

De nedenfor anfprte forbindelser fremstilles pâ i det væsentMge samme mâde som beskrevet i trin 1) og 2) i eksempel 1:

Eksempel 32.

15 1) Trin 1 :

Diphenylacetyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-

Boc-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,42 (18H, s), 3,92 (2H, s), 3,83 -4,52 (4H, m), 5,08 (1H, s), 7,29 10H, s) ppm.

20 2) Trin 2:

Diphenylacetyl-L-Ala-y-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH.

DK 156252B

130 NMR-Spektrum (D20 + NaHCOg): δ = 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,25 (10H, m), 3,71 (1H, m), 3,80 (2H, s), 4,10 - 4,50 (3H, m), 5,17 (1H, s), 7,35 (10H, s) ppm.

Eksempel 33.

5 1) Trin 1: N-(N-Benzyloxycarbonyl-L-5-oxo-2-pyrrolidincarbonyl)-L-Ala-y-D-Glu-(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH.

NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 1,47 (18H, s), 3,97 (2H, s), 5,27 (2H, s), 7,39 (5H, s) ppm.

10 2) Trin 2: N-(N-BenzyloxycarbonyI-L-5-oxo-2-pyrrolidincarbonyl)-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L) -mesoDAP- ( L) -G lyOH.

[a] p = -55,0° (c = 0,14 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,18 (3H, d, J=7Hz), 1,3 - 2,8 (14H, m), 15 3,80 (1H, t, J=7Hz), 3,94 (2H, s), 5,19 (2H, ABq), 7,39 (5H, s) ppm.

3) Trin 3: L-5-Oxo-2-pyrrolidincarbonyI-L-Ala-î'-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP- (L)-GlyOH.

20 NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,42 (3H, d, J=7Hz), 3,79 (1H, t, J=7Hz), 3,95 (2H, s), 4,15 - 4,50 (4H, m) ppm.

Eksempel 34.

1) Trin 1:

L

H0NCHCONHCH0CH0COOH OAc CH„

Δ \ Δ Δ I | O JJ

(CH2)3 + CH3CHCOHNCHCOHNCHCOOB2l

BocHN èliCONHNHBoe D L (CH9)0

D ioOR

(D (2)

DK 156252 B

131 ?AC PH3 D CH» CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl

D L <fH2>2 I L

-> CONH^HCONHCHgCHgCOOH

Ws

BocHN CHCONHNHBoc D

(3) D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-p-AlaOH (3) fremstilles pâ i væsentlige samme mâde som i trin 1) i eksempel 12 ud ira forbindelse 1) og 2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,9 - 2,6 (16H, m), 1,38 5 (18H, s), 2,05 (3H, s), 2,9 - 4,7 (8H, m), 5,00 (1H, q, J=7Hz), 5,14 (2H, s), 6,5 - 6,7 (1H, m), 7,39 (5H, s), 7,7 - 8,4 (4H, m), 8,65 Cl H, bred s), 9,55 (1 H, bred s) ppm.

2) Trin 2: OH CH» n

I I 3 D

Forbindelse (3) -> CH„CHCONH CHCONHCHCOOH

D L

I L

CONHCHCONHCH0CH0COOH

| Δ Δ «j»2)s

BocHNCHCONHNHBoc

D

(4) D-Lac-L-Ala-r-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-10 (L)-6-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mêde som i trin 2) i eksempel 12 ud fra forbindelse 3).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,1 - 2,8 (16H, m), 1,38 (18H, s), 2,55 (2H, t, J=7Hz), 3,43 (2H, t, J-7Hz), 3,8 - 4,5 (5H, m) ppm.

DK 156252 B

132 3) Trin 3:

OH CH, ‘ n I | 3 D

Forbindelse (4) —> CH, CHCONHCHCONHCHCOOH

° L «2 I L

CONHCHCONHCHgCHgCOOH

4H2}3 h0nchconhnh9 z d z (5)

Di-trifluoreddikesyresaltet af D-Lac-L-Ala-3f-D-Glu(a-OH)-(L)-meso-DAP-(D)-NHNH2-(L)-3-AlaOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mide som i trin 3) i eksempel 12 ud fra forbindelse (4).

5 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,1 - 2,8 (10H, m), 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (3H, d, J=7Hz), 2,58 (2H, t, J=6Hz), 3,47 (2H, t, J=6Hz), 2,9 - 4,6 (5H, m) ppm.

4) Trin 4:

OH CHg D

Forbindelse (5) -> CH,tHCONH CHCONHCHCOOH

D L (ch2)2

L

CONHCHCONHCH2CH2COOH

(fH2}3 H„NCHCOOH * D

(6) D-Lac-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-&-AlaOH (6) fremstilles 10 pi î det væsentlige samme mide som i trin 4) i eksempel 12 ud fra forbindelse (5).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,44 (3H, d, J=7Hz), 1,2 - 2,7 (10H, m), 2,61 (2H, t, J=7Hz), 3,47 (2H, t, J=7Hz), 3,83 (1H, t, J=6Hz), 4,0 - 4,6 (4H, m) ppm.

DK 156252 B

133

Eksempel 35.

1) Trin 1:

L D

H2NCHCONHÇH2COOH OAc ch3 d I (CH„)0 + CH„ CHCONHCHCONHCHCOOBzl

Δ / O-p, t I

(CH2)3 d l (ch2)2

I COOH

BocHN CHCONHNHBoc COOH

D

(D (2) OAc CH3 d -> CH„CHCONHCHCONHCHCOOBzl D L (^H2}2

I L COOH

CONHCHCONHCHCH0CH0COOH | D 2 2 (CH2}3

BocHN <f;HCONHNHBoc D

(3) D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-D-GluOH (3) fremstilles pâ i det vaesentlige samme mâde som i 5 trin 1) i eksempel 12 ud fra forbindelser (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,9 - 2,5 (14H, m), 1,40 (18H, s), 2,07 (3H, s), 3,6 - 4,6 (5H, m), 4,99 (1H, q, J=7Hz), 5,15 (2H, s), 6,5 - 6,9 (1H, m), 7,39 (5H, s), 7,7 - 9,1 (5H, m), 9,55 (1H, bred s) ppm.

DK 156252B

134 2) Trin 2:

?H 7¾ D

Forbindelse (3) -> CH- CHCONHCHCONHCHCOOH

D L (CH2)2

| \ COOH

CONHCHCONHiHCH9CH9COOH j D

(?H2}3

BocHN CHCONHNHBoc D

(4) D-Lac(OH-L-Ala-y-D-Glu(ct-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-GluOH (4) fremstilles pê i det væsentlige samme mâde som i trin 2) i eksempel 12 ud fra forbindelse (3).

5 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,3 - 2,8 (14H, m), 1,45 (18H, s), 3,9 - 4,6 (6H, m) ppm.

3) Trin 3:

?H 7¾ D

Forbindelse (4) —> CH-CHCONHCHCONHCHCOOH

D L <W2

I L Ç°0H

CONHCHCONHCHCH0CH0COOH

i j* 4 Δ (?H2}3 H9N CHCONHNHo 42 D ^ (5)

Di-trifluoreddikesyresalt af D-Lac-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-meso-DAP-(D)-NHNH2-(L)-GIuOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme 10 mâde som i trin 3) i eksempel 12 ud fra forbindelse (4).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,1 - 2,7 (m), 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (3H, d, J=7Hz), 3,9 - 4,6 (6H, m) ppm.

DK 156252 B

135 4) Trin 4: OH CH„ n

I [ 3 D

Forbindelse (5) -> CHq CHCONHCHCONHCHCOOH

D L

I L ?°°H CONHCHCONHCHCH0CH0COOH I n ^ ^ (fH2>3

H„NCHCOOH * D

(6) D-Lac-L-Ala-y-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GluOH (6) fremstilles pl ί det væsentlige samme mâde sorti i trin 4) i eksempel 12 ud fra forbindelse (5).

5 Eksempel 36.

1) Trin 1: L ?H3

HgNCHCONHCHCOOH OAc CH3 D

L + CHgCHCONH^HCONHCHCOOBzl (ÇHgJs D L (ÇH2)2

BocHN CHCONHNHBoc COOH

D

(D (2)

DK 156252 B

136

?Ac fH3 D

-> CH„ CHCONHCHCONHCHCOOBzl ° L <?H2>2 I L VH3

CONHÇHCONHCHCOOH

L

(ch2)3

BocHN CHCONHNHBoc D

(3) D-Lac(OAc)-L-Ala-r-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NH-NHBoc-(L)-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1) i eksempel 12 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg) : δ = 1,0 - 2,4 (19H, m), 1,43 5 (T8H, s), 2,10 (3H, s), 3,8 - 4,8 (5H, m), 5,04 (1H, q, J=7Hz), 5,19 (2H, s), 6,5 - 7,0 (1H, m), 7,42 (5H, s), 7,7 - 8,9 (5H, m), 9,61 (IH, bred s) ppm.

2) Trin 2: 0H CHs d

Forbindelse (3) -> CH„CHCONH éliCONHCHCOOH

D L (ch2)2

L ?H3 CONHCHCONHCHCOOH

(ÇH2>3 L

BocHNCHCONHNHBoc •..........D.......

(4) D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-10 Boc-(L)-L-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2) i eksempel 12.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,3 - 2,8 (19H, m), 1,45 (18H, s), 3,9 - 4,6 (6H, m) ppm.

DK 156252 B

137 3) Trin 3:

• ?H <îH3 D

Forbindelse (4) -> CH, CHCONHCHCONHCHCOOH

D L (CH2>2 I L <rH3

CONHCHCONHCHCOOH

(j»2>S L

h2nchconhnh2 / D Δ (5)

Di-trifluoreddikesyresalt af D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-NHNH2~(L)-L-Ala(OH) (5) fremstilles pâ i det væsent-lige samme mâde som i trin 3) i eksempel 12 ud fra forbindelse (4).

5 NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,2 - 2,7 (10H, m), 1,39 (3H, d, J=7Hz), 1,44 (6H, d, J=7Hz), 3,9 - 4,7 (6H, m) ppm.

4) Trin 4:

?H D

Forbindelse (5) -> CH« CHCONHCHCONHCHCOOH

D L <ch2)2 L ^3

CONHCHCONHCHCOOH I L

(?H2}3 H0NCHCOOH Δ D

(6) D-Lac(OH)-L-Ala-Y-D-Glu(cx-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-L-Ala(OH) (6) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 4) i eksempel 12 10 ud fra forbindelse (5).

DK 156252 B

138 [a] p = -41,0 (c = 0,42 ί vand).

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,43 (6H, d, J=7Hz), 1,2 - 2,5 (10H, m), 3,8 (1H, t, J=6Hz), 4,1 - 4,5 (5H, m) ppm.

Eksempel 37.

5 1) Trin 1: ?6H5 L fH2

HgN CHCONHCHCOOH OAc CHg D

(CH2)3 D + CHg iHCONHCHCONHCHCOOBzl

BocHNCHCONHNHBoc D L (CH0)0

u COOH

(D (2) OAc CH3 d CH„ CHCONHCHCONHCHCOOBzl D L (™2>2 <Τ6Η5 L ÇH2

-> CONHCHCONHCHCOOH

I n (<rH2}3

BocNHCHCONHNHBoc

D

(3) D-Lac(OAc)-L-Ala-y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-CL)-D-Phe(OH) (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som ί trin 1) i eksempel 12 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ s 1,0 - 2,4 (16H, m), 1,39 10 (18H, s), 2,05 (3H, s), 2,8 - 3,2 (2H, m), 3,7 - 4,7 (5H, m), 4,99 C1H, q, J=7Hz), 5,16 (2H, s), 6,65 (1H, bred d, J=8Hz), 7,23 (5H, s), 7,39 (5H, s), 7,6 - 8,9 (5H, m), 9,56 (1H, bred s) ppm.

DK 156252 B

139 2) Trin 2:

?H fH3 D

Forbindelse (3) —> CHg CHCONHCHCONHCHCOOH

° L ÇA

I L j®2 CONHCHCONHCHCOOH I fi (fVs

BocHNCHCONHNHBoc

D

(4) D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-

Boc-(L)-D-PheOH (4) fremstilles pl i det væsentlige samme mâde som i trin 2) i eksempel 12 ud fra forbindelse (3).

5 IR-Spektrum (Nujol): = 3270, 1720 (skulder), 1645 (bred) og max 1520 (bred) cm 3) Trin 3:

?H fH3 D

Forbindelse (4) -> CHg CHCONHCHCONHCHCOOH

D L (CH2}2 C6Hs L j 2

CONHCHCONHCHCOOH

I 15 (VH2}3

HoNCHC0NHNHo 1 D

(5)

Di-trifluoreddikesyresaltet af D-Lac(OH)-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-NHNH2-(L)-D-PheOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige 10 samme mâde som i trin 3) i eksempel 12 ud fra forbindelse (4).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,1 - 2,7 (10H, m), 1,46 (3H, d, J=7Hz), 1,50 (3H, d, J=7Hz), 2,8 - 3,5 (2H, m), 3,9 - 4,7 (6H, m), 7,41 (5H, s) ppm.

DK 156252B

140 4) Trin 4:

?H PH3 O

Forbindelse (5) -> CHgCHCONHCHCONHCHCOOH

D L (CH2)2 c6h5 L | H2 CONHCHCONHCHCOOH I n (fH2}3

HgNCHCOOH

(6) D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-PheOH (6) fremstilles pi i det væsentlige samme màde som i trin 4) i eksempel 12 ud fra forbindelse (5).

5 [“]p = -28,6° (c = 0,511 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,1 - 2,5 (10H, m), 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (3H, d, J=7Hz), 3,14 (2H), 4,0 - 4,5 (5H, m), 7,1 - 7,5 (5H, m) ppm.

Eksempel 38.

10 1) Trin 1: L CH-

I. ^ · **...... '"'"ÛftC"' PTT D

H-NCHCONCH-COOH \ | 3 » 4 + CH-CHCONHCHCONHCHCOOBzl

(ÇH2>3 3 I

BocHNCHCONHNHBoc D L ^2*2

D COOH

(D (2)

DK 156252B

141

OAC CH3 D

--> CH , (^HCONHCHCQNHCHCOOBzl

3 I

D L (CH2)2L CH3

NCONHCHCONCH2COOH

2

BocHNCHCONHNHBoc

' D

D-Lac(OAc)-L-Ala-Y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-SarOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1) i eksempel 12 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxîd -dg): δ = 1,0 - 2,4 (16H, m), 1,35 5 (18H, s), 2,03 (3H, s), 2,80 og 3,05 (3H, et par singletter), 3,6 - 4,5 (6H, m), 4,98 (1H, q, J=7Hz), 5,13 (2H, s), 6,5 - 7,0 (1H, m), 7,3 (1H, m), 7,35 (5H, s), 7,7 - 9,0 (4H, m) ppm.

2) Trin 2:

°H 9H3 D

Forbindelse (3) -> CH„ CH CONHCHCONHÇHCOOH

D L <CH2>2 L ?H3

CONH CH CON CH„ COOH D

BocHNCHCONHNHBoc

D

(4) D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-10 Boc-(L)-SarOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2) i eksempel 12 ud fra forbindelse (3).

NMR-Spektrum (D20): « * 1,1 - 2,5 (16H, m), 1,41 (9H, s), 1,43 (9H, s), 2,93 og 3,18 (3H, et par singletter), 3,7 - 4,5 (7H, m) ppm.

DK 156252 B

142 3) Trin 3:

?H fH3 D

Forbindelse (4) -> CH. CH CONHCHCONHÇHCOOH

D L

I L ?H3 CONHijîHCON CHgCOOH (fH2}3 H.N CHCONHNH.

Δ D

(5)

Di-trifluoreddikesyresaltet af D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-NHNH2"(L)-SarOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3) i eksempel 12 ud fra forbindelse (4).

5 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,0 - 2,6 (10H, m), 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,41 (3H, d, J=7Hz), 2,93 og 3,17 (3H, et par singletter), 3,8 - 4,6 (7H, m) ppm.

4) Trin 4:

?H f»3 D

Forbindelse (5) -> CH. CH CONHCHCONHCHCOOH

D L (CH2>2 L ?H3

CONH(j;HCONCH2COOH

CÇH2)3 H.NCHCOOH 1 D

(6) D-Lac(OH)-L-Ala-y-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-SarOH (6) frem-10 stilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 4) i eksempel 12 ud fra forbindelse (5).

Ί43

DK 156252 B

[a] D = -37,6° (c = 0,402 i vand).

NMR-Spektrum (D20): 6 * 1,1 - 2,5 (10H, m), 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,41 (3H, d, J=7Hz), 2,96 og 3,20 (3H, et par singletter), 3,70 - 4,0 (1H, m), 4,0 - 4,6 (6H, m) ppm.

5 Eksempel 39.

1) Trin 1: L ÇH3

.....HgNCHCOHNCHCOOH OAc CHg D

(CH2)3 + CH3 CH CONHCHCONHCHCOOBzl

BocNHCHCONHNHBoc D L (CH0)0

u COOH

(D (2)

<?Ac <?H3 D

CH,CH CONHCHCONHCHCOOBzl 3D T 1 (W2

L

-> COHNCHCOHNCHCOOH

I r> (?H2}3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3) D-Lac(OAcH_-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det vaesentlige samme mâde som i trin 1) i eksempel 12 ud fra forbindelse (1) og (2).

10 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,9 - 2,6 (37H, m), 2,10 (3H, s), 3,7 - 4,7 (5H, m), 5,01 (1H, q, J=7Hz), 5,19 (2H, s), 6,6 - 7,0 (1H, m), 7,42 (5H, s), 7,7 - 8,9 (5H, m), 9,60 (1H, bred s) ppm.

DK 156252B

144 2) Trin 2:

?H fH3· D

Forbindelse (3) -> CH CH CONHCHCONHCHCOOH

D L

I L fH3 CONHCHCONHCHCOOH I Π (?Η2}3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(4) D-Lac(OH)-L-Ala-ir-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-D-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2) i eksempel 12 ud fra forbindelse (3).

5 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,3 - 2,7 (19H, m), 1,48 (18H, s), 3,9 -4,7 (6H, m) ppm.

3) Trin 3: OH CH3 d

Forbindelse (4) -> CH„ CH CONH<iHCOHNCHCOOH

° L (ΊΗ2>2 I L· ?H3 CONHCHCONHCHCOOH I n (fH2}3 H2NCHCONHNH2 (5)

Di-trifluoreddikesyresaltet af D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-NHNH2-(L)-D-AlaOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige 10 samme mâde som i trin 3) i eksempel 12 ud fra forbindelse (4).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,41 (6H, d, J=7Hz), 1,1 - 2,7 (10H, m), 3,9 - 4,7 (6H, m) ppm.

DK 156252 B

145 4) Trin 4: ?H fH3 0

Forbindelse (5) —> CH. CH CONHCHCONHCHCOOH

T 1 L (CH2)2 L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOH

* T) (οη2)3

h0nc!hcooh 1 D

(6) D-Lac(OH)-L-Aia-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (6) frem-stiIles pi i det væsentlige samme mâde som i trin 4) i eksempel 12.

[“][) = "17,4° (c = 0,305 i vand).

5 NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,38 (3H, d, J= 7Hz), 1,41 (3H, d, J=7Hz), 1,44 (3H, d, J=7Hz), 1,2 - 2,6 (10H, m), 3,84 (1H, t, J=6Hz), 4,1 - 4,6 (5H, m) ppm.

De nedenfor anfprte forbindelser fremstilles pl i det væsentlige samme mâde som i henholdsvis trin 1) og 2) i eksempel 1.

10 Eksempel 40.

1) Trin 1: Çh3 d ÇH3 l

nh„ CHCONHCHCOOH CHq(CH0),CONHCHCONHCHCOOH

"T | Ô Δ Ό ·. \ <™2>2 -> conhÎhcooh conhçhcooh (çh2)3 (ch2)3

Boc .NHCHCONHNHBoc Boc. NHCHCONHNHBoc

D D

146

DK 156252 B

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,80 - 2,40 (44H, m), 3,67 - 4,67 (4H, m), 6,70 (1H, d, J=7Hz), 7,83 (1H, d, J=7Hz), 8,03 (2H, d, J=7Hz), 8,60 (1H, s), 9,53 (1H, s) ppm.

2) Trin 2:

PH3 D

Forbindelse (2) -> CHg (CH2)5 CONHCHCONH<pHCOOH

L (¾½

I L

CONHCHCOOH

(PH2}3

NH0CHCOOH

ZD

(3) 5 NMR-Spektrum (D20): δ = 0,84 (3H, t, J=7Hz), 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,0 - 2,60 (20H, m), 3,80 (1H, t, J=7Hz), 4,10 - 4,52 (3H, m) ppm.

Eksempel 41.

1 ) Trin 1 :

fH3 D ǻ3 D

Z.NHCHCONHCHCOOBzl L Z.NHCHCONHCHCOOBzl L (çh2)2 nh2çhcooh l (ch2)2

COOSu + (ÇH2)3 —> I L

BocNHCHCONHNHBoc CONHCHCOOH

D

BocHN CHCONHNHBoc D

(D (2) (3) 147

DK 156252 B

Forbindelse (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i.trin 1) i eksempel 12.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,00 - 2,40 (10H, m), 1,24 (3H, t, J=7Hz), 1,40 (18H, s), 3,80 - 4,48 (4H, m), 5,04 (2H, s), 5 5,12 (2H, s), 6,74 (1H, d, J=7Hz), 7,36 (10H, s), 8,04 (1H, d, J=7Hz), 8,32 (1 H, d, J=7Hz), 8,68 (1H, bred s), 9,60 (1H, s) ppm.

2) Trin 2:

¥H3 D

Forbindelse (3) -> NH^ CHCONHCHCOOH

AcOH L ‘ (ch2)2

I L

CONHCHCOOH

(?H2>3

BocNHCHCONHNHBoc

D

(4)

Forbindelse (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2) i eksempel 12.

10 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,36 - 2,66 (13H, m), 1,43 (18H, s), 3,83 - 4,43 (4H, m) ppm.

3) Trin 3: <rH3 d

Forbindelse (4) —> ZNHCHCONHCHCOOH

L

I L

CONHCHCOOH

(0¼¼

BocNHCHCONHNHBoc

D

(5)

DK 156252 B

148

Forbindelse (5) fremstilles pâ i det vaasentlige samme mâde som i trîn l) i eksempel 1.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = Ί <25 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (18H, s), 1,30 - 2,40 (10H, m), 3,83 - 4,50 (4H, m), 5,06 (2H, s), 5 6,76 (1H, d, J=7Hz), 7,38 (5H, s), 8,13 (2H, d, J=7Hz), 8,70 (1H, bred s), 9,60 (1H, s) ppm.

4) Trin 4:

fHs D

Forbindelse (5) —> ZNHCHCONHCHCOOH

L <Wl

I L

CONHCHCOOH

<H>3 nh9chcooh (6)

Forbindelse C6) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 4) i eksempel 12.

10 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,34 (3H, d, J=7Hz), 1,10 - 2,43 (10H, m) , 3,71 C1H, t, J=7Hz), 3,91 - 4,30 (3H, m), 5,10 (2H, s), 7,40 (5H, s) ppm.

5) Trin 5:

CH3 D

Forbindelse (61 —> NH,CHCONHCHCOOH

L

I l

CONH(jlHCOOH

(fVs

NHoCHCOOH (7) ZD

DK 156252 B

149

Forbindelse (7) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som j trin 2) i eksempel 11.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,52 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,52 (10H, m), 3,76 (1H, t, J=7Hz), 4,00 - 4,40 (3H, m) ppm.

5 De nedenfor anforte forbindelser fremstilles P| j det væsentlige samme mâde som i henholdsvis trin 1) - 4) i eksempel 12:

Eksempel 42.

1) Trin 1: D-Lac(OAc)-L-Ala-2’-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-10 Boc.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,1 - 2,5 (16H, m), 1,38 (18H, s), 2,04 (3H, s), 3,8 - 4,7 (4H, m), 4,95 (1H, q, J=7Hz), 5,10 (2H, s), 7,30 (5H, s), 8,08 (2H, bred t, J=8Hz) ppm.

2) Trin 2: 15 D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc. IR-Spektrum (Nujol): v = 1720, 1650 og 1525 cm.

lilaX

3) Trin 3: D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-NHNH2 (trifluor-eddikesyresalt).

20 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,45 (3H, d, J=7Hz), 1,2 - 2,7 (10H, m), 4,0 - 4,7 (5H, m) ppm.

4) Trin 4: D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(cc-OH)-(L)-me$oDAP.

[a]D = -21,3° (c = 0,258 i vand).

25 NMR-Spektrum (D20): δ * 1,1 - 2,5 (10H, m), 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (3H, d, J=7Hz), 3,88 (1H, t, J=6Hz), 4,0 - 4,5 (4H, m) ppm.

DK 156252B

150

Eksempel 43.

1) Trin 1:

Benzyloxycarbonyl-L-Ala-y-D-GIu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)- NHNHBoc-(L)-D-AlaOH.

5 IR-Spektrum (Nujol): v =3290, 1720, 1650, 1630 og 1530 cm \

ΓΠ3 X

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,39 (18H, s), 3,75 - 4,55 (5H, m), 5,06 (2H, s), 5,12 (2H, s), 7,23 (10H, s) ppm.

2) Trin 2: L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-10 AlaOH, smeltepunkt 174°C (spnderdeling).

IR-Spektrum (Nujol): v =3300, 1655 og 1525 cm

ΓΠ3 X

NMR-Spektrum (D2O): 6 = 1,45 (18H, s), 3,98 - 4,60 (5H, m) ppm.

3) Trin 3:

Heptanoyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-15 (L)-D-AlaOH.

IR-Spektrum (Nujol): v =3300, 1720, (skulder) og 1650 cm

IllaX

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 0,88 (3H, t, J=7Hz), 1,0 - 2,4 (44H, m), 4,0 - 4,6 (5H, m) ppm.

4) Trin 4: 20 Heptanoyl-L-Ala-3f-D-G lu (a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH.

[o]D = -26,0° (c = 0,2 i vand).

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3250, 1720 og 1640 cm max NMR-Spektrum (D2O): S - 0,86 (3H, t, J=7Hz), 1,0 - 2,5 (26H, m), 3,84 (1H, t, J=7Hz), 4,2 - 4,56 (4H, m) ppm.

25 De nedenstâende forbindelser fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 1, henholdsvis trin 1 og trin 2.

Eksempel 44.

1) Trin 1:

Acetoxyacetyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-30 Boc- ( L) -D-AlaOH.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3280, 1720, 1650 og 1520 cm nia x

DK 156252 B

151 NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 1,47 (18H, s), 2,14 (3H, s), 4,07 - 4,70 (5H, m), 4,63 (2H, s) ppm.

2) Trin 2:

Glycoloyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH.

5 IR-Spektrum (Nujol): v = 3280, 1720, 1630 og 1530 cm NMR-Spektrum (D20): δ = 1,41 (3H, d, j=7Hz), 1,43 (3H, d, J=7Hz), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 4,14 (2H, s), 4,2 - 4,55 (4H, m) ppm.

Eksempel 45·..· ···· .......

1 ) Trin 1 : 10 0-AcetyI-D-mandelyl-L-Ala-2f-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(D-D-AiaOH.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3280, 1720, 1650 og 1520 cm ^.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,39 (18H, s), 2,15 (3H, s), 3,9 - 4,6 (5H, m), 5,87 (1H, s), 7,38 (5H, s) ppm.

15 2) Trin 2: D-Mandelyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3270, 1715, 1640 og 1520 cm \ NMR-Spektrum (D20): δ = 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (3H, d, J=7Hz), 3,80 (1H, t, J=7Hz), 4,1 - 4,5 (4H, m), 5,18 (1H, s), 7,32 (5H, s) 20 ppm.

Eksempel 46.

1) Trin 1:

Phenylacetyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-

Boc-(L)-D-AlaOH.

25 IR-Spektrum (Nujol): v = 3280, 1720, (skulder), 1650 og 1520

ΓΠα X

-1 cm .

NMR-Spektrum (CD-gOD): δ = 1,40 (18H, s), 3,59 (2H, s), 3,94 - 4,50 (5H, m), 7,27 (5H, s) ppm.

DK 156252 B

152 2) Trin 2:

Phenylacetyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250, 1715, 1640 og 1530 cm'1.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (3H, d, j=7h 5 3,65 (2H, s), 3,80 OH, t, J=7Hz), 4,20 - 4,55 (4H, m), 7/36 ' s) ppm.

Eksempel 47.

1) Trin 1 :

Benzyloxyca rbonyI-L-Ala-îf-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP- 10 NHNHBoc-(L)-D-AlaOH.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3270, 1715 (skulder), 1650 0g 1520 cm"1.

NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 1,41 (18H, s), 3,95 - 4,50 (5H, m), 5.07 (2H, s), 7,28 (5H, s) ppm.

15 2) Trin 2:

Benzyloxyca rbonyl-L-Ala-JT-D-Glu (a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH.

[a] p = -57,4° (c s 0,24 i vand).

IR-Spektrum (Nujol): = 3250, 1700 (skulder), 1640 og 1520

moX

cm*1.

20 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,40 (6H, d, J=8Hz), 3,86 (1H, t, J=6Hz), 4.07 - 4,50 (4H, m), 5,10 (2H, s), 7,40 (5H, s) ppm.

Eksempel 48.

1) Trin 1:

Benzyloxyca rbonyl-ï-D-GI u(e-OBzl)-(L)- Boc- ( D) -mesoDAP- ( L) -G lyOH.

25 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3260, 1730 - 1630 (bred) cm"1.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,20 - 2,40 (10H, m), 1,40 (18H, s), 3,76 (2H, d, J*7Hz), 4,0 - 4,5 (3H, m) 5,08 (2H, s), 5,15 (2H, s), 7,40 (10H, s) ppm.

2) Trin 2: 30 ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH.

DK 156252 B

153 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250 (bred), 1720 - 1620 (bred) cm'1. NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,20 - 2,70 (28H, m), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 3,94 (2H, s), 4,0 - 4,5 (2H, m) ppm.

3) Trin 3: 5 Heptanoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250, 1720 (skulder), 1650 (bred) cm"1. NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 0,86 (3H, t, J=7Hz), 1,0 - 2,4 (38H, m), 3,70 (2H, d, J=7Hz), 4,0 - 4,5 (3H, m) ppm.

10 4) Trin 4:

Heptanoyl-Ï-D-Glu (a-OH) - ( L) -mesoDAP- ( L) -GlyOH.

[a]p = -18,0° (c = 0,2 i vand).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1720, 1640 (bred) cm’1.

Πια X

NMR-Spektrum (D20): δ = 0,84 (3H, t, J=7Hz), 1,0 - 2,60 (20H, m), 15 3,80 (1H, t, J=7Hz), 3,96 (2H, s), 4,20 - 4,48 (2H, m) ppm.

Eksempel 49.

1) Trin 1: t CH„ n

L | 3 D

H„NCHCONHCHCOOH + Z-HNCHCOOBzl ->

1 D

(0¾½ (CH2)2

BocHNCHCOOH COOSu

D

(D (2)

D

Z-HNCHCOOBzl (ch2)2

L CHs COHNCHCOHNCHCOOH D

(ch2)3

BocHNCHCOOH

D (3)

DK 156252B

154

Til en blanding af 361 mg Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (1) og 202 mg triethylamin i 20 ml 50%'s vandigt dioxan sættes 440 mg Z-D-Glu-(OSu)OBzl (2), og reaktionsblandingen inddampes og vaskes med ethylacetat. Den organiske fase syrnes med fortyndet saltsyre og 5 ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, terres over magnesiumsulfat og inddampes til en skumagtig remanens, som pulveriseres med isopropylether og isoleres ved filtrering, hvorved der fâs 520 mg Z-Y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH

(3) i form af et hvidt pulver.

10 IR-Spektrum (Nujol): vm v = 3300, 1720, 1690, 1640 og 1530 cm"1.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 5 = 1,38 (9H, s), 1,00 - 2,66 (13H, m), 3,66 - 4,50 (4H, m), 5,07 (2H, s), 5,15 (2H, s), 7,38 (10H, s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) —> H2NCHCOOH

(CH2>2

L fH3 COHN ÇHCOHN CHCOOH D

(fH2}3

BocHN CHCOOH D

(4) 15 502 mg Z-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-tL)-D-AlaOH (3) opleses i 20 ml eddikesyre og hydrogeneres over 100 mg 10%’s pal-ladium/kul. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og filtratet inddampes til en olie, til hvilken der sættes toluen, og den inddampes til dannelse af en dejagtig remanens. Denne remanens opleses i vand og 20 underkastes kolonnechromatografi pâ 50 ml HP-20, en makropores, ikke-ionisk adsorptionsharpiks. Kolonnen elueres successivt med vand og methanol-vand i forholdet 1:4. Ved inddampning af de sidstnævnte fraktioner fâs et hvidt skum, som opleses i vand og lyofiliseres, hvorved der fâs 290 mg ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-25 AlaOH (4) i form af et hvidt pulver.

155

DK 156252 B

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3250, 1720 - 1630 (bred) 09 1530 cm"1. NMR-Spektrum (D20): δ = 1,48 (9H, s), 1,10 - 2,66 (13H, m), 3,77 (1H, t, Js7Hz), 4,00 - 4,66 (3H, m) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CH3(CH2>16 COHNpHCOOH

«FA

I L <TH3

COHN CH COHN CHCOOH

............ ................................ ""..... D

(¾¾¼

BocHNCHCOOH

D

(5) 5 Til en blanding af 280 mg ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (4) og 175 mg triethylamin î 5 ml methanol sættes en oplps-ning af 478 mg stearinsyreanhydrid i 10 ml chloroform, og blandingen holdes i 3 dage ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen inddampes, og remanensen oplpses i ethylacetat. Ethylacetatfasen vaskes succès-10 sivt med fortyndet saltsyre og vand, tprres over magnesiumsulfat og inddampes til en skumagtig remanens, som pulveriseres med ether og isoleres, hvorved der fis 310 mg stearoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3300, 1710, 1695, 1660, 1620 (bred) og

ma X

15 1540 cm"1.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 0,90 (3H, t, J=5Hz), 1,33 (30H, s), 1,44 (9H, s), 1,16 - 2,66 (15H, m), 3,66 - 4,66 (4H, m) ppm.

D

4) Trin 4: 156

DK 156252 B

Forbindelse (5) -> CHo(CHo)1tsC0HNCHC00H

ό δ lo j (CH2>2

L ?H3 COHN CHCOHN CHCOOH D

(fH2}3 H 0NCHCOOH Z D

(6)

308 mg stearoyl-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH

(5) sættes til 5 ml trifluoreddikesyre, og blandingen omrpres i 1 time ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen inddampes og tritureres med 5 ether, hvorved der fâs et hvidt pulver, som vaskes med ether og methanol, hvorved der fâs 230 mg stearoyl-2f-D-Glu(a-OH)-(L)-meso-DAP-(L)-D-AlaOH (6) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1730, 1640 og 1530 cm \ NMR-Spektrum (DjO + NaOD): 6 “ 0,86 (3H, t, J=6Hz), 1,30 (30H, 10 m), 1,00 - 2,66 (15H, m), 3,21 (1H, t, J=7Hz), 4,00 - 4,20 (3H, m) ppm.

*

Eksempel 50.

157

DK 156252 B

1) Trin 1: D L f 3

ZHNCHCOOBzl + H0NCHCOHNCHCOOH

I I ° (çh2) (çh2)3 COO-N BocHN CHCONHNHBoc

VJ D

(1) (2)

D

ZHNCHCOOBzl <CH2>2 L fa

-> CONH CH CONH CH COOH

D

(ch2)3

BocHN CHCONHNHBoc D

(3) 4,75 g af forbindelse (2) oploses i en blanding af 30 ml dioxan og 30 ml vand indeholdende 1,01 g triethylamin. Til denne oplosning sættes 5 4,4 g af forbindelse (1), og den resulterende oplpsning lades henstâ i 1 dag ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen inddampes, og kon-centratet ekstraheres med ethylacetat. Den organiske fase vaskes med vand, torres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fâs en skumagtig remanens, som pulveriseres med diisopropylether og isole-10 res ved filtrering, hvorved der fâs 5,77 g af forbindelse (3) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3270, 1730 - 1620 (bred) cm'1.

ΓΤια X

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ ~ 1,37 (18H, s), 1,18 -2,33 (13H, m), 3,66 - 3,84 (4H, m), 5,06 (2H, s), 5,16 (2H, s), 7,36 15 (10H, s) ppm.

2) Trin 2:

D

DK 156252 B

158

Forbindelse (3) -> HgN CHCOOH

(Ôh2)2 L ^3

CONHCHCONHCHCOOH D

(ch2)3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(4) 3,88 g af forbindelse (3) opl0ses i 100 ml eddikesyre og hydrogeneres over 300 mg palladium/kul. Palladium/kul-katalysatoren fjernes ved filtrering, og filtratet inddampes under reduceret tryk, hvorved der 5 fâs en olieagtig pasta, til hvilken der sættes toluen. Den resulterende oplosning inddampes, hvorved der fâs en hvid pulveragtig remanens, som vaskes med diisopropylether og isoleres ved filtrering, hvorved der fâs 2,10 g af forbindelse (4) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): υ = 3300 - 2300 (bred), 1720 - 1620 (bred) rnax 10 cm \ NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,47 (18H, s), 1,33 - 2,66 (13H, m), 3,66 - 4,50 (4H, m) ppm.

Eksempel 51.

159

DK 156252 B

1) Trin 1 :

D

HgN (jJHCOOH

(ch2)2 <CH3(CH2)5C0)2° + L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

D

(2) (ÇH2)3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(1)

D

-> CH3(CH2)5CONHÇHCOOH

<CH2>2 L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

(ch2>3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3) 596 mg af forbindelse (1) oplpses i 30 ml methanol, og til denne oplosning sættes successivt 202 mg triethylamin og 363 mg heptan-5 syreanhydrid (2). Reaktionsblandingen holdes ί 3 dage ved stuetem-peratur, hvorefter den inddampes. Koncentraterne ekstraheres med ethylacetat. Den organiske fase vaskes med 10%'s vandig saltsyre-oplosning og vand, tprres over magnesiumsulfat og inddampes, hvor-ved der fâs en skumagtig remanens, som pulveriseres med ether og 10 isoleres ved filtrering, hvorved der fis 470 mg af forbindelse (3) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): v „ = 3300, 1740 - 1730 (bred) cm \ NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid *dg): 6 = 0,89 (3H, t, J=7Hz), 1,00 - 2,40 (23H, m), 3,66 - 4,66 (4H, m) ppm.

DK 156252 B j 2) Trin 2: 160 D ;

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)5 CONHCHCOOH

(K>2 |l Çh3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

4H2}3 ί

H-NCHCOOH Δ D

i

(4) I

430 mg af forbindelse (3) oplpses i 10 ml trifluoreddikesyre, og oplos-ningen holdes i 30 minutter ved stuetemperatur. Oplpsningen ind-5 dampes til en olieagtig pasta, som oplpses i 13 m! 0,1N svovlsyre og 8 ml vand og afkoles i isbad. Til denne oplpsning sættes 278 mg NalO^ i 5 ml vand under omrpring, og omrpringen fortsættes i 1 time.

Den vundne reaktionsblandîng behandles med vandig natriumsulfit-oplosning, indtil oplpsningens purpurfarve forsvinder. Oplpsningen 10 indstilles pâ neutral pH=-værdi ved tilsætning af vandig natriumhy-drogencarbonatoplpsning, og oplpsningens rumfang koncentreres. Oplpsningens pH-værdi indstilles igen pâ 2,0, og hele oplpsningen underkastes kolonnechromatografi pâ 50 ml HP-20-harpiks. Kolonnen elueres med vand og derefter med methanol-vand i forholdet 1:2. De 15 sidstnævnte fraktioner in'dd'ampès fil dannélsë af et hvidt skumagtigt stof, som opioses i vand, hvorefter oplosningen lyofiliseres til dan-nelse af 240 mg af forbindelse (4) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum CNujol): vmax = 3250, 1740, 1666 - 1640 (bred) cm-1. NMR-Spektrum (D20): δ - 0,82 C3H, t, J=6Hz), 1,00 - 2,60 (20H, 20 m), 1,35 (3H, d, J=8Hz), 3,81 (1H, t, J=7Hz), 4,40 - 4,80 (3H, m) ppm.

Eksempel 52.

161

DK 156252 B

υ Tnn 1: h2nçhcooh (ch2)2 <CH3(CH2>10CO)2O + L fH3

CONHCHCONHCHCOOH

I 0 (2) (ÇH2)3

BocHN CHCONHNHBoc D

(1)

D

-> CH3(CH2)10CONHpHCOOH

(CH2)2

L fH3 CONHCHCONHCHCOOH D

(ÇH2}3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3) 596 mg af forbindelse (1) oplpses i 30 ml methanol og 5 ml chloroform, og til derme oplosning sættes 202 mg triethylamin og derefter 609 mg 5 laurinsyreanhydrid (2). Reaktionsblandingen behandles derefter pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1) i eksempel 51, hvorved der fâs 570 mg af forbindelse (3) î form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3250, 1725 - 1610 (bred) cm \ NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 0,84 (3H, t, J=7Hz), 1,30 10 (18H, s), 1,00 - 2,40 (33H, m), 3,80 - 4,40 (3H, m) ppm.

2) Trin 2:

D

162

DK 156252 B

Forbindelse (3) -> CHgCCHg)^ CONHCHCOOH

|H2^2 I L <fH3

CONHCHCONHCHCOOH

D

<fH2>3 HoNCHCOOH ù D

(4) 510 mg af forbindelse (3) oplpses i 10 ml trifluoreddikesyre, og oplos-ningen holdes i 30 minutter ved stuetemperatur. Derefter behandles reaktionsblandingen pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i 5 trin 2) i eksempel 51, hvorved der fâs 250 mg af forbindelse (4) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1720, 1660 - 1620 (bred) cm-1. NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 0,90 (3H, t, J=7Hz), 1,00 - 2,60 (33H, m), 3,75 (1H, t, J=7Hz), 4,20 - 4,80 (3H, m) ppm.

10 Eksempel 53.

1) Trin 1 : —

D D

C^CHCO O H2NCHCOOH

\ /> + <CI%

C° J 2 L

CONHCHCONHCHCOOH

(2) D

VA

BocHN CHCONHNHBoc D

(D

163

DK 156252 B

D D

-> CeHc CHCONHCHCOOH

6 5 i | OH (CH2)2 L fH3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

<?Η2>3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3) 596 mg af forbindelse (1) oplpses i 30 ml methanol, og til denne oplpsning sættes fprst 202 mg triethylamin og derefter 267 mg man-delsyreanhydrid (2). Reaktionsblandingen behandles pâ I det væsent-lige samme mâde som i trin 1) i eksempel 51, hvorved der fis 330 mg 5 af forbindelse (3) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vm v = 3300, 1730 - 1640 (bred) cm"1.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,39 (18H, s), 1,16 - 2,33 (13H, m), 3,70 - 4,50 (4H, m), 5,00 (1H, bred s), 7,40 (5H, bred s) ppm.

10 2) Trin 2:

D D

Forbindelse (3) -> CcHcCHCONHCHCOOH

D O | OH (CH2)2 L PH3

CONHCHCONHCHCOOH D

(ch2)3

H«NcHCOOH A D

(4) 479 mg af forbindelse (3) oplpses I 10 ml trifluoreddikesyre, og oplps-ningen holdes i 30 minutter ved stuetemperatur. Herefter behandles reaktionsblandingen pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2) i eksempel 52, hvorved der fâs 190 mg af forbindelse (4) i form af et 15 hvidt pulver.

DK 156252 B

164 IR-Spektrum (Nujol): vmgx =3250, 1720, 1660 - 1620 (bred) cm NMR-Spektrum (D20): δ = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,60 (10H, m), 3,80 Cl H, t, J=6Hz), 4,10 - 4,60 (3H, m), 5,20 (1H, s), 7,42 (5H, s) ppm.

5 Eksempel 54.

1) Trin 1:

D D

ZHN CHCOOCHgCgHg ZHNÇHCOOH

(CH2)2 (çh2)2 I L P4

T CH„ -> CONH CHCONHCHCOOH

L \ 3 I D

CONHCHCONHCHCOOH

D (CH^ (CH2)3 BocHN ^HCONHNHBoc

BocHNCHCONHNHBoc D

D

(D (2) 1,51 g af forbindelse (1) oploses i en blanding af 15 ml methanol og 10 ml vand. Til denne oplesning sættes 4,0 ml IN natriumhydro-xidoplosning, og oplesningen ho.ldes i 2 timer ved stuetemperatur.

10 Reaktionsblandingen inddampes efter indstilling af oplosningens pH-værdi pl 7,0. Den som remànéns vündne vandige oplesning fortyndes med vand. Efter ekstraktion med ether syrnes den vandige fase til pH-værdi 2 med IN saltsyre, hvorved der udskilles et olieagtigt produkt, som ekstraheres med ethylacetat. Den organiske fase vaskes 15 med vand og terres over magnesiumsulfat. Ved afdampning af oples-ningsmidlet fis et hvidt skum, som pulveriseres med diisopropylether, hvorved forbindelse (2) fis som 1,16 g af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): v =3250, 1740 - 1620 (bred) cm~\

iDdX

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,36 (18H, s), 1,00 - 2,40 20 (13H, m), 3,66 - 4,50 (4H, m), 5,03 (2H, s), 7,36 (5H, s) ppm.

165

DK 156252 B

2) Trin 2:

D

Forbindelse (2) -> ZHNÇHCOOH

• (ch2)2 L ÎH3

CONHCHCONHCHCOOH D

«PVs

HLNCHCOOH L D

(3) 1,03 g af forbindelse (2) oplpses i 10 ml trifluoreddikesyre, og oplps-ningen holdes ved stuetemperatur i 30 minutter. Derefter behandles reaktionsblandingen pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i 5 trin 2) i eksempel 2, hvorved der fâs 0,6 g af forbindelse (3) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1700, 1660 - 1620 (bred) cm NMR-Spektrum (D20): δ = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,60 (10H, m), 3,76 (1H, t, J=7Hz), 3,96 - 4,50 (3H, m), 5,08 (2H, s), 7,40 10 (5H, s) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (3) -> HgNCHCOOH

4¾½ i L CHg

CONHCHCONHCHCOOH D

(K}3

H^NCHCOOH 1 D

(4) 166

DK 156252 B

374 mg af forbindelse (3) oploses i 30 ml eddikesyre og hydrogeneres over 100 mg palladium/kul. Katalysatoren fjernes ved filtrerîng, og filtratet inddampes under reduceret tryk, hvorved der fis en ofie-agtig pasta, til hvilken der sættes toiuen. Ved afdampning af toluenet 5 fis en remanens i form af et hvidt pulver. Remanensen oploses i vand og underkastes kolonnechromatografi pà 100 ml HP-20-harpiks. Kolon-nen elueres med vand. Ved inddampning af de fraktioner, som inde-holder produktet, fis en pastaagtig remanens, som oploses i vand, hvorefter oplosningen lyofiliseres til dannelse af 200 mg af forbindelse 10 (4) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3250 - 2500 (bred) 1680 - 1500 (bred)

ΓΠα X

cm \ NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,60 (10H, m), 3,75 (1H, t, J=7Hz), 3,80 (1H, t, J=7Hz), 4,00 - 4,50 (2H, m) 15 ppm.

Eksempel 55.

1) Trin 1:

D L

/ )-CONHCHCOOBzl H -NCHCONHCH.COOH

/y i + I

° >z CÇh2)2 (çh2)3 COOH BocHN CHCONHNHBoc

D

CD ' (2)

0L D

_CONHCHCOOBzl o z cch2)2

L

CONHCHCONHCH0COOH I 2

CfH2)s

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3)

DK 156252B

167

Forbindelse (1) opl0ses i 20 ml dichlormethan, og der tilsættes 308 mg N-methylmorpholin. Denne oplpsning afkples i et tpris-acetone-bad til en temperatur mellem -17 og -19°C under omrpring, og til oplpsningen sættes 417 mg isobutylchlorcarbonat. Reaktionsblandingen lades om-5 sætte i 20 minutter ved samme temperatur. Til den resulterende blanding sættes en oplosning af 1,41 g af forbindelse (2) i en blan-ding af 40 ml dichlormethan og 4 ml Ν,Ν-dimethylformamid indehol-dende 3 ml bis(trimethylsilyl)acetamid. Reaktionsblandingen omrores i 2 timer ved en temperatur mellem -18 og -10°C og inddampes under 10 reduceret tryk, hvorved der fâs en olieagtig remanens, som oploses i 100 ml ethylacetat og vaskes med 0,5N saltsyreoplpsning. Den orga-niske fase vaskes med saltvand og tprres over magnesiumsulfat. Ved afdampning af oplpsningsmidlet fâs et hvidt skum, som vaskes grun-digt med ether, hvorved der fâs 2,42 g af forbindelse (3) i form af 15 et hvidt pulver, smeltepunkt 145 - 149°C (spnderdeling).

IR-Spektrum (Nujol): vmax -3280, 1780, 1720 og 1650 cm*1.

NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 3,93 (2H, s), 5,18 (4H, s), 7,38 (10H, s) ppm.

20 2) Trin 2:

/—\L D

Forbindelse (3) -> / )-CONHÇHCOOH

/y ° Z <CH2>2

L

CONHCHCONHCH2COOH

(fH2}3

BocHN CHCONHNHBoc D

C4)

Til en oplosning af 2,36 g af forbindelse (3) i 25 ml methanol sættes 5,6 ml IN NaOH, og blandingen omrpres i 5 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen inddampes i vakuum, til remanensen sættes 6 ml IN saltsyre, og oplpsningen ekstraheres med ethylacetat. Den orga-

DK 156252 B

168 niske fase vaskes med 30 ml 0,5N saltsyre, t0rres over magnesium-sulfat og inddampes i vakuum. Den som remanens vundne olie be-handles med diethylether, hvorved der fis 1,86 g af forbindelse (4) i form af et hvidt pulver.

5 IR-Spektrum (Nujol): v =3300, 1680 (bred) og 1625 cm ΠΊ3Χ NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,46 (18H, s), 3,95 (2H, s), 4,00 - 4,50 (4H, m), 5,13 (2H, s), 7,45 (5H, s) ppm.

3) Trin 3:

/“V· D

Forbindelse (4) -> X /-CONHCHCOOH

//\f | ° z <Wi

I L

CONH ÇHCONHCH2COOH

4H2>3

H0N CHCOOH Δ D

(5) 1,8 g af forbindelse (4) saettes til 10 ml trifluoreddikesyre, og blan-10 dingen lades henstâ i 100 minutter ved stuetemperatur. Reaktions-blandingen inddampes, og remanensen tritureres med ethylether, hvorved der fis et fast stof. Det faste stof oplpses i 45 ml vand. Til den ne oplpsning sættes 4,4 ml IN svovlsyre og 930 mg NalO^ ved 0°C. Efter omrpring i 2 timer ved 0°C behandles reaktionsblandingen 15 med vandigt NaHSO^, inddampes til ca. 10 ml, indstilles pi pH-værdi 2 med IN natriumhydroxid og chromatograferes pi 200 ml HP-20-har-piks. Kolonnen elueres med vand-methanol i forholdet 3:2, og frak-tionerne sammenhældes og inddampes, hvorefter remanensen lyofilise-res til dannelse af 680 mg af forbindelse (5).

20 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3270, 1700, 1640 og 1520 cm'1.

NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,3 - 2,6 (14H, m), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 3,95 (2H, s), 4,05 - 4,50 (3H, m), 5,11 (2H, s), 7,40 (5H, s) ppm.

DK 156252 B

169 4) Trin 4.

/~\L D

Forbindelse (5) -> X )-CONHCHCOOH

/y | o · 1 H <ciy2

L

CONH CHCONHCH2COOH

^H2}3 H«NCHCOOH * D

(6)

En oplpsning af 550 mg af forbindelse (5) i 6 ml vand hydrogeneres over 180 mg 10%'s palladium/kul med hydrogen ved atmosfæretryk.

Efter frafiltrering af katalysatoren inddampes filtratet i vakuum og 5 lyofiliseres, hvorved der fâs 450 mg af forbindelse (6).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3250, 1720 (skulder), 1630 og 1530

ΓΠ3 X

cm \ NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,3 - 2,6 (14H, m), 3,74 (1H, t, J=6Hz), 3,85 (2H, s), 3,99 - 4,50 (3H, m) ppm.

10 Eksempel 56.

1) Trin 1:

L

D H2NÇHCONHCH2COOH

BocHNÇHCOOBzl + (CH9)9 B ocH N CH CONHNHBoc \ ύ Δ COOH υ (D (2)

D

170

DK 156252 B

-> BocHN CHCOOB zl (CH2)2

L

CONHÇHCONHCH2COOH

(^h2>3 (3)

BocHN CHCONHNHBoc D

Til en blanding af 674 mg af forbindelse (1) og 202 mg N-methyl-morpholîn î 30 ml dichlormethan saettes 273 mg chlormyresyre-iso-butylester ved en temperatur mellem -15 og -20°C, og blandingen omrpres i 30 minutter ved denne temperatur. Blandingen afkoles til 5 -40°C, og der tilsættes trimethylsilylesteren af forbindelse (2), som er fremstillet ud fra 910 mg af forbindelse (2) og 3 ml bis(trimethyl- silyl)acetamid ved omroring i en blanding af 20 ml dichlormethan og 2 ml N,N-dimethylformamid. Denne blanding omrores i 1 time ved en . temperatur mellem -15 og -20°C, hvorefter oplosningsmidlet afdampes, 10 og remanensen oploses i 100 ml ethylacetat. Oplosningen vaskes suc- cessivt med 2%'s HCl og vand, terres over magnesiumsulfat og ind- dampes. Remanensen pulveriseres med isopropylether, hvorved der fâs 1,25 g af forbindelse (3).

NMR-Spektrum (CDCÿ: δ = 1,43 (27H, s), 1,3 - 2,4 (10H, m), 15 3,8 - 4,5 (5H, m), 5,13 (2H, s), 7,33 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) —> HgNCHCOOH

W2 I Ii CONHCHCONHCH0COOH I 2 (?Η2}3 h9nchcooh

Δ D

(4) 171

DK 156252 B

Til en oplpsning af 1,08 g af forbindelse (3) i 10 ml 50%'s vandigt methanol sættes 3 ml 1N natriumhydroxidoplpsning, og blandingen omrpres i 3 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen neutra-liseres med 3 ml IN saltsyreoplpsning og inddampes. Remanensen 5 oplpses i 5 ml trifluoreddikesyre og omrpres i 15 minutter ved stuetemperatur. Efter afdampning af trlfluoreddikesyren pulveriseres remanensen med diethylether. Det sâledes vundne pulver oplpses i 10 ml vand, og der tilsættes 1,7 ml IN saltsyreoplpsning. Til denne oplpsning sættes en oplpsning af 354 mg Na'IO^ i 2 ml vand ved 0°C, 10 og blandingen omrores i 1 time ved denne temperatur. Efter spn-derdeling af overskydende NalO^ ved tilsætning af natriumsulfit indstilles reaktionsblandingen pl pH-værdi 4 med 1N vandig natri-umhydroxidoplpsning, hvorefter den inddampes til ca. 3 ml. Kon-centratet underkastes spjlechromatografi pâ 60 ml ikke-ionisk ad-15 sorptionsharpiks "Diaion"® HP-20 (Mitsubishi Chemical Industries Ltd.) og elueres med vand. De fraktioner, der indeholder den pn-skede forbindelse, lyofiliseres, hvorved der fâs 140 mg af forbindelse (4).

IR-Spektrum (KBr): v = 3500 - 2500, 1720 og 1650 cm"^.

max 20 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,3 - 2,7 (10H, m), 3,90 - 4,50 (3H, m), 4,00 (2H, s) ppm.

Eksempel 57.

1) Trin 1 :

D L

CHg CONHCHCOOBzl HgN CHCONH CHgCOOB zl (ÇH2>2 + ( j H2}3 COOH BocHNCHCONHNHBoc

D

(1) (2)

D

DK 156252B

172 --> CHgCONHCHCOOBzl

<ÇH2>2 I L

CONHCHCONHCHgCOOBzl

4»2>S

BocHNCHCONHNHBoc D (3) ΤΠ en blanding af 560 mg af forbindelse (1) og 202 mg N-methylmor-pholin i 30 ml dichlormethan sættes 273 mg chlormyresyre-isobu-tylester ved en temperatur mellem -15 og -20°C, og blandingen om-rores i 30 minutter ved denne temperatur. Blandingen afkples til 5 -40°C og tilsættes trimethylsilylesteren af forbindelse (2), som er fremstillet ud fra 910 mg af forbindelse (2) og 3 ml bis(trimethyl-silyDacetamid ved omroring i en blanding af 20 ml dichlormethan og 2 ml Ν,Ν-dlmethylformamid. Blandingen omrores i 1 time ved en temperatur mellem -15 og -20°C og behandles derefter pâ samme mâde 10 som beskrevet i eksempel 56, trin 1) til dannelse af 1,08 g af forbindelse (3).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1740 og 1660 cm \ max NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,58 (18H, s), 1,95 (3H, s), 1,50 - 2,50 (10H, m), 3,88 (2H, s), 3,8 - 4,5 (3H, m) ppm.

15 2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CHgCONHiJHCOOH

<ÇH2>2

I L

CONHCHCONHCHgCOOH

((¾ h9nchcooh Δ D (4) 0,95 mg af forbindelse (3) sættes til 5 ml trifluoreddikesyre, og oplosningen omrores i 15 minutter ved stuetemperatur. Trifluored-

DK 156252 B

173

dikesyren afdampes, remanensen oplpses i 10 ml vand, og 1,7 ml IN

saltsyre tilsættes. Denne oplpsning afkples til 0°C, og der tilsættes en oplpsning af 364 mg NalO^ i 5 ml vand, og blandingen omrpres i 1 time ved denne temperatur. Overskud af reagenset spnderdeles ved 5 tilsætning af natriumsulfit, hvorefter blandingen neutraliseres til pH-værdi 3 med IN NaOH og chromatograferes pi 20 ml HP-20-ko- lonne. Efter vask med vand elueres kolonnen med methanol og vand i forholdet 1:1. De relevante fraktioner inddampes, og remanensen oplpses i 10 ml 50%'s vandig eddikesyre og hydrogeneres over 100 mg 10 10%’s palladium/kul. Efter fjernelse af katalysatoren inddampes filtra- tet. Remanensen oplpses i vand og inddampes for at fjerne spor af eddikesyre. Denne operation gentages to gange. Remanensen lyofili- seres , hvorved der fis 200 mg af forbindelse (4).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3250, 1715 og 1640 cm V

max 15 NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,5 - 2,1 (10H, m), 2,1 (3H, s), 3,8 -4,5 (3H, m), 4,0 (2H, s) ppm.

Eksempel 58.

1) Trin 1:

L

D H2N(jJHCOOH

Z-HN CHCOOBzl + (01¾ (<pi2)2 BocHN CH COHNNHB oc

COOH D

(D (2)

D

-> Z-HN CHCOOBzl <™2>2

I L

COHNCHCOOH

4H2}3 (3)

BocHN CHCOHNNHBoc D

DK 156252 B

174

Til en afkolet blanding af 2,43 g af forbindelse (1) og 0,71 g N-me-thylmorpholin i 40 ml methylenchlorid sættes drâbevis 960 mg chlor-myresyre-isobutylester, og blandingen omrpres i 20 minutter ved 0°C.

Til denne blanding sættes en oplpsning af 2,83 g af forbindelse (2) i 5 en blanding af 20 ml methylenchlorid og 10 ml dimethylformamid inde-holdende 2 ml bis(trimethylsilyl)acetamid. Reaktionsblandingen omrores 1 2 timer og inddampes, hvorved der fis en olieagtig remanens, som opleses i ethylacetat, vaskes med vand og terres over magnesiumsul-fat. Ved afdampning af oplesningsmidlet fis et hvidt skum, som 10 pulveriseres med isopropylether, hvorved der fis 420 g af forbindelse (3) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1740 - 1640 (bred) cm ma x NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,37 (18H, s), 1,17 - 2,40 ( 10H, m), 3,70 - 4,40 (3H, m), 5,03 (2H, s), 5,17 (2H, s), 7,37 15 ( 10H, s) ppm.

2) Trin 2:

D

D Z-HNÇHCOOH

Z-HNCHCOOBzl + (°¾½ <W2

L L

COHNCHCOOH -> COHNCpHCOOH

(9H2}3 (ÇH2>3

BocHN CHCOHNNHBoc BocHN CHCOHNNHBoc (3) D D (4)

Til en oplpsning af 1,46 g af forbindelse (3) i 10 ml 50%’s vandigt methanol sættes 4,10 ml IN natriumhydroxidoplesning, og blandingen omreres i 2 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen inddampes, 20 og den resulterende vandige oplpsning fortyndes med vand. Efter vask med ether syrnes den vandige fase med IN saltsyre til pH-værdi 2 og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og terres over magnesiumsulfat, hvorved der fis et hvidt skum, som pulveriseres med isopropylether, hvorved der fis 1,20 g af forbin- 25 delse (4) som et hvidt pulver.

DK 156252 B

175 IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3400, 1740, 1650 (bred) cm'1.

ma x NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,37 (18H, s), 1,17 - 2,40 (10H, m), 3,70 - 4,33 (3H, m), 5,03 (2H, s), 7,37 (5H, s).

3) Trin 3:

D

D Z-HNCHCOOH

Z-HNÇHCOOH + (CH„)„

Wi

' L L

COHNÇHCOOH -> COHNCHCOOH

(PV3 (rà2)3

BocHN CHCOHNNHBoc H0NCHCOOH

M) D D (5) 5 1,05 g af forbindelse (4) oplpses i 5 ml trifluoreddikesyre og omrpres i 15 minutter ved stuetemperatur. Oplpsningsmidlet afdampes til dan-nelse af en olieagtig remanens, hvortil der saettes toluen og inddam-pes. Remanensen oplpses i 35 ml 0,1 N svovlsyreoplpsning og afkples i isbad. Til denne oplpsning saettes en oplpsning af 640 mg natrium- 10 periodat i 5 ml vand, og blandingen omrpres i 1 time ved samme temperatur. Reaktionsblandingen behandles med vandig natriumbi-sulfitoplpsning, indtil oplpsningens mprkebrune farve forsvinder.

Efter indstilling af oplpsningens pH-værdi pâ 4,0 inddampes oplps-ningen til ca. 4 ml, og pH-værdien indstilles pê 2,0. Denne oplpsning 15 hældes pâ en kolonne af 60 ml HP-20 og elueres med vand. Ved pâfplgende eluering med 50%'s vandigt methanol fâs fraktioner in-deholdende den pnskede forbindelse, og de sammenhældes og inddampes til dannelse af en pastaagtig remanens. Denne remanens oplpses i vand og lyofiliseres, hvorved der fâs 0,453 g af forbindelse (5) som 20 et hvidt pulver.

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,17 - 2,70 (10H, m), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 4,0 - 4,60 (2H, m), 5,13 (2H, s), 7,43 (5H, s) ppm.

D

DK 156252B

176 4) Trin 4:

D HgNCHCOOH

Z-HN CHCOOH + (CH2>2

L L

COHN CHCOOH -> COHNCHCOOH

(ÇH2>3 (CH2)s h9nchcooh h9n(Î:hcooh (5) D D (6) 0,40 g af forbindelse (5) oploses i 20 ml vand og hydrogeneres over 50 mg 10%'s palladium/kuî. Katalysatoren frafiltreres, og filtratet haeldes pâ 50 ml af en kolonne af HP-20 og elueres med vand. Ved 5 inddampning af de fraktioner, som indeholder den pnskede forbindelse, fis en pastaagtig remanens, som opleses i vand og lyofiliseres, hvorved der fis 260 mg af forbindelse (6) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3500 - 2500 (bred), 1710 (skulder) og 1620 cm"1.

10 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,20 - 2,60 (10H, m), 3,60 - 3,92 (2H, m), 4,0 - 4,20 (1H, m) ppm.

Eksempel 59.

1) Trin 1 :

D

^ H9NCHCOOH

D 2 | Z-HNCHCOOBzl + (°¾½ (0Η2)2

L L

CONHCHCOOH -> CONHCJHCOOH

(^3 (H}3

BocHNCHCONHNHBoc BocHNCHCONHNHBoc (1) D D (2)

DK 156252 B

177 2,30 g af forbindelse (1) opl0ses i 40 ml eddikesyre og hydrogeneres over 300 mg 10%'s palladium/kul. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og filtratet inddampes under reduceret tryk, hvorved der fis en olieagtig pasta, hvortil der sættes toluen. Ved afdampning af toluenet 5 fis en hvid pulverremanens, som vaskes grundigt diisopropylether og isoleres ved filtrermg, hvorved der fis 1,70 g af forbindelse (2) som et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3500 - 2500 (bred), 1740 - 1650 (bred) -1 cm .

10 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,50 (18H, s), 1,16 - 2,83 (10H, m), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 4,0 - 4,50 (2H, m) ppm.

2) Trin 2: (CH3(CH2)5C0)20 + Forbindelse (2)

D

-> CH3(CH2)5CONH(j:HCOOH

(CH2)2

L

CONHCHCOOH

(ÇH2)3 (3)

BocHN CH CONHNHBoc D

800 mg af forbindelse (2) oploses i 10 ml methanol, og der tilsættes 380 mg heptansyreanhydrid. Reaktionsblandingen holdes natten over 15 ved stuetemperatur. Ved afdampning af oplosningsmidlet fis en olieagtig pasta, som tritureres med diisopropylether, hvorved der fis 800 mg af forbindelse (3) som et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1740 - 1650 (bred) cm”^.

ma X

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 0,83 - 2,40 (41H, m), 20 3,83 - 4,50 (3H, m) ppm.

D

DK 156252B

3) Trin 3: 178

Forbindelse (3) -> CH„ (CH„)c CONHCHCOOH

ό Δ o | W2

I L

CONH CHCOOH

elnchcooh

Δ D

(4) 750 mg af forbindelse (3) opl0ses i 4 ml trifluoreddikesyre og holdes i 15 minutter ved stuetemperatur. Ved afdampning af trifluoreddike-syren fâs en olieagtîg pasta, som suspenderes i toluen. Ved afdamp-5 ning af toluenet fis en hvid skumagtig remanens, som opioses i 30 ml 0,1 N svovlsyreoplosning og afkoles i isbad. Til denne omrprte oplps-ning sættes vandigt NalO^ (350 mg i 10 ml vand), og omr0ringen fortsættes i 1 time. Den resulterende reaktionsblanding behandles med vandlg natriumhydrogensulfitoplosning, indtil oplpsningens purpur-10 farve forsvinder. Oplpsningen indstilles pl neutral pH-værdi ved tilsætning af fast natriumhydrogencarbonat, og hele rumfanget ind-dampes til ca. 5 ml. Opl0sningens pH-værdi indstilles igen pl 2,0, og hele oplosningen haeldes pl en kolonne med 100 ml HP-20-harpiks. Kolonnen elueres med vand og derefter med methanol-vand i forholdet 15 4:6. Ved inddampning af de sîdstnævnte opsamlede fraktioner fis et hvidt skum, som oplpses i vand og lyofiliseres, hvorved der fis 180 mg af forbindelse (4) som et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3300 - 2400 (bred), 1720 og 1630 cm'1. NMR-Spektrum (D20): δ = 0,84 (3H, t, J=7Hz), 1,0 - 2,60 (20H, m), 20 3,80 (1H, t, J=7Hz), 4,20 - 4,40 (2H, m) ppm.

DK 156252 B

179

Eksempel 60.

1) Trin 1 : t ÇHo CH. Π

L· | ο I ô U

H.NCHCOHNCHCOOH + Z-HNCHCOHNCHCOOBzl Z D L J

(ch2)3 .......... (çh2)2

BocHNCHCOOH COOSu

D

(1) (2) fH3 D

Z -HNCHCOHNCHCOOBzl L ή«2>2 I L f3

-> COHN CHCOHN CHCOOH

D

(<fH2}3

BocHNCHCOOH

D (3)

Til en blanding af 3,40 g Boc-(D)-mesoDAP^(L)-D-AlaOH (1) og 1,90 g triethylamin i 80 ml 50%'s vandigt dioxan sættes 5,10 g 5 Z-L-Ala-D-Glu(Jf-OSu)OBzI (2), og blandingen lades henstâ natten ©ver ved stuetemperatur. Efter afdampning af dioxanet syrnes den som remanens vundne vandige oplosning med IN saltsyre og ekstra-heres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, torres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fâs 7,30 g Z-L-Ala-Ï-10 D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) som et hvidt skum.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3300, 2600 - 2400, 1710 og 1650 cm-1. NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg) : δ = 1,0 - 2,50 (25H, m), 3,80 - 4,50 (5H, m), 5,05 (2H, s), 5,15 (2H, s), 7,40 (10H, s).

DK 156252 B

180 2) Trin 2:

<rH3 D

Forbindelse (3) -> H0N CHCOHNCHCOOH

L I

<CH2>2

L fH3 COHN CHCOHN CHCOOH D

(ch2)3

BocHN CHCOOH (4) D

En oplosning af 7,0 g Z-L-Ala-y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(L)-D-AlaOH (3) i 60 ml eddikesyre hydrogeneres over 0,50 g 10%'s palladium/kul. Katalysatoren frafiltreres, og filtratet inddampes 5 til dannelse af et hvidt skum, som oplpses i 40 ml vand og hældes pâ en kolonne med 150 ml HP-20. Kolonnen vaskes med vand og elueres med methanol-vand I forholdet 3:7. Eluatet inddampes og lyofiliseres, hvorved der fis 4,30 g L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (4) som et hvidt pulver.

10 IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 2600 - 2400, 1720 (skulder), 1660 max (bred) cm ^.

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,20 - 2,50 (10H, m), 1,40 (9H, s), 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,54 (3H, d, J=7Hz), 3,90 - 4,50 (4H, m).

3) Trin 3:

?H3 D

Forbindelse (4) —> CH,(CH-),.COHNCHCOHNCHCOOH

à & JLO γ | «rH2>2 I L f3

COHNCHCOHNCHCOOH

I D

w,

BocHN CHCOOH (5) D

DK 156252 B

181

Stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) fremstilles ud fra L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (4) og stearinsyreanhydrid pl i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1) i eksempel 1.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3300, 1710, 1635 og 1520 cm”1.

ma X

NMR-Spektrum (CD^OD - CDCIg); 6 = 0,90 (3H, t, J=7Hz), 1,33 (30H, s), 1,43 (9H, s), 1,00 - 2,66 (18H, m), 3,60 - 4,60 (5H, m).

4) Trin 4:

<?H3 D

Forbindelse (5) -> CHgC CH2)16COHNCTCOHNCHCOOH

L (™2>2 L CHs

COHN GHCOHN CHCOOH

I D

HrtNCHCOOH

(6) D

Stearoyl-L-Ala-îf-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (6) frem-10 stilles ud fra stearoyl-L-Ala-î’-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2) i eksempel 1.

IR-Spektrum (Nujol): vmax s 3300, 1730, 1650 - 1620 og 1530 cm"1. NMR-Spektrum (D20 ♦ NaOD): d - 0,90 (3H, t, J=7Hz), 1,00 - 2,66 15 (51H, m), 3,24 (1H, t, J=7Hz), 4,00 - 4,66 (4H, m).

DK 156252 B

182

Eksempel 61.

1) Trin 1: L fH3 Çh3 d H9NCHCOHNCHCOOH + Z-HN CHCOHN ÇHCOOBzl D L (CH,),

(ÇH2)3 I

BocHN CHCOHNNHBoc COOSu

D

(1) (2)

FH3 D

Z -HNCHCOHNCHCOOBzl D (ÇH2>2 I L ^3

-> COHN CHCOHN CHCOOH

D

(9Η2}3

BocHN CHCOHNNHBoc

(3) D

Z-D-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles ud fra Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-5 D-AlaOH (1) og Z-D-Ala-3f-D-Glu(y-OSu)OBzl (2) pl i det væsentlige samme mâde som i trin 1) i eksempel 1.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 2600 (skulder), 1730, 1670 og 1630 ΙΤιβΧ cm NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,00 - 2,60 (34H, m), 10 3,88 - 4,40 (5H, m).

2) Trin 2: 183

DK 156252 B

CH, r»

I 3 D

Forbindelse (3) -> H0NHCHCOHNCHCOOH

D I

(ch2)2 L fH3

COHN CHCOHN CHCOOH

D

.......... " (ch2)3

BocHN CHCOHNNHBoc (4) D

D-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (4) fremstilles ud fra Z-D-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AIaOH (3) pl i det væsentlige samme 5 mâde som beskrevet i trin 2) i eksempel 60.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 2600 - 2400 (skulder), 1720 (skul-

ma X

der) og 1660 cm ^.

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,00 - 2,60 (34H, m), 3,88 - 4,40 (5H, m).

10 3) Trin 3:

?AC fH3 D

Forbindelse (4) -> CH COHN CH COHN CHCOOH

D D «j"A

T CHQ

I L i 3

COHN CHCOHN CHCOOH

Wj D

BocHN CHCOHNNHBoc D

(5)

Til en afkolet oplosning af 1,35 g D-Ala-lf-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D“AlaOH (4) i 10 ml 50%’s vandigt acetone sættes 1N natriumhydroxidoplosning. 0,61 g O-acetyl-D-mandelylchlorid tildryppes ved 0°C, medens pH-værdien holdes ved 15 8,0 - 9,0. Efter omroring i 1 time indstilles reaktionsblandingen pâ pH-værdi 7,0 med IN saltsyreoplosning, og acetonet afdampes. Den

DK 156252B

184 resulterende vandige oplosning indstilles pâ pH-værdi 2,0 med IN saltsyre og ekstraheres med ethylacetat.' Ekstrakten vaskes med vand, terres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fâs en rema-nens, som pulveriseres med ether, hvorved der fâs 1,35 g O-acetyî-5 D-mandelyl-d-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-D-AlaOH (5) som et fast stof.

!R-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1720, 1650 og 1520 cm 1.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,43 (18H, s), 1,00 - 2,66 (16H, m), 2,15 C3H, s), 4,00 - 5,00 C5H, m), 5,95 (1H, s), 7,35 (5H, s).

10 4) Trin 4:

?H D

Forbindelse (5) -> CcHc-CHCOHNCHCOHNCHCOOH

6 5 D D 1 (?H2)2 I L CHs

COHNÇHCOHNCHCOOH

(f2>3 D

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(6)

Til en oplosning af 1,25 g 0-acetyl-D-mandelyl-D-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (6) i en blan-ding af 20 ml methanoi og 10 m! vand sættes 4,5 ml IN natriumhydr-oxidoplesning. Efter omrering af blandingen » 1 time ved stuetempe-15 ratur indstilles pH-værdien i blandingen pâ 6,0. Efter afdampning af methanoi indstilles den resulterende vandige oplosning pâ pH-værdi 2,0 med IN saltsyre og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, terres over magnesiumsulfat og inddampes. Rema-nensen vaskes med ether, hvorved der fâs 0,96 g D-mandelyl-D-Ala-20 ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (6) som et fast stof.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3280, 1720 - 1650 og 1520 cm"1.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,43 (18H, s), 1,00 - 2,66 (16H, m), 3,83 - 4,66 (5H, m), 5,10 (1H, s), 7,17 - 7,66 (5H, m).

5) Trin 5: 185

DK 156252 B

?H î«8 D

Forbindelse (6) -> CcH,- CHCOHNCHCOHNÇHCOOH

6 5 n D | <FV* I L fH3

COHN CH COHN CHCOOH

<^3 D

HLNCHCOOH 1 D

(7) D-Mandelyl-D-Ala-îT-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (7) fremstilles ud fra D-mandelyl-D-Ala-ï-D-GluCa-Of-O-fLI-Boc-CD)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (6) pâ j det væsentlige samme 5 mide som beskrevet i trin 2) i eksempel 1.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3280, 1720, 1630 - 1610 og 1520 cm \ NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,32 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,40 (10H, m), 3,74 (1H, t, J=6Hz), 4,00 - 4,50 (4H, m), 5,18 (1H, s), 7,42 (5H, s).

10 Eksempel 62.

1) Trin 1 : CH,' D ' I 3

H2NCHCOHNCHCOOH

D «|H2>2 CH, I ’ L | 4 COENCHCOHNCHCOOH -;-^ (|H2>3 °

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(D

DK 156252 B

186 CH, D i 3· ch3(ch2)5cohnchcohnchcoqh D ψ2>2 CH,

Il I 3

COHNCHCOHNCHCOOH (CH,)3 D

i

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(2)

Heptanoyl-D-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-D-AlaOH (2) fremstilles ud fra D-Ala-ï-D-Glu(o-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (1) pl i det væsentlige samme mlde som beskrevet i trin 1) i eksempel 1.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250, 1720, 1660 - 1640 og 1530 cm'1.

NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 0,90 (3H, t, J=7Hz), 1,00 - 2,60 (44H, m), 3,90 - 4,60 (5H, m).

2) Trin 2: CH3 d

Forbindelse (2) -> CH,(CH„)K COHNCHCOHNCHCOOH

ύ Δ o r» | <ch2)2 L CH3

CONHCHCONHCHCOOH D

<ÇH2>3 H9NCHCOOH ά D

(3)

Heptanoyl-D-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) frem-10 stilles ud fra heptanoyl-D-Ala-îf-D-Glu(o-OH)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(L)-D-AlaOH (2) pl i det væsentlige samme mlde som beskrevet i trin 2) i eksempel 1.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1720, 1620 og 1520 cm'1.

NMR-Spektrum (D20): 6 = 0,80 (3H, t, J=6Hz), 1,36 (6H, d, J=7Hz), 15 1,00 - 2,60 (18H, m), 3,76 (1H, t, J=7Hz), 4,00 - 4,50 (4H, m).

187

DK 156252 B

Eksempel 63.

1) Trin 1:

L CH3 D

h„nchconhch9cooh + zhn Ôhcohn CH COOB zl * * L | '· (ÇH2)3............. (ÇH2)2

BocHNCHCOOH COOSu D (D (2)

fH3 D

-> ZHN CH COHN CH COOB zl L <CH2>2

L

COHNÇHCOHNCHgCOOH

(fH2)3

BocHNCHCOOH

D (3) Z-L-Ala-Y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (3) fremstilles ud fra Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (1) og Z-L-Ala-(D)-5 Glu(a-Osu)OBzl (2) pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1) i eksempel 60.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3300, 2600 - 2400, 1720, 1690 og 1650

md X

cm’^.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid _dg): δ = 1,30 (3H, d, J-7Hz), 10 1,10 - 2,50 C19H, m), 3,80 (2H, d, J=7Hz), 3,80 - 4,50 (4H, m), 5,05 (2H, s), 5,18 (2H, s), 7,40 (Ί0Η, s) ppm.

DK 156252B

188 ”,r"î», »

Forbindelse (3)-> H9NCHCOHNCHCOOH

L (¾½

L

COHNCHCOHNCHgCOOH

4H2}3

BocHN CHCOOH D

(4) L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (4) fremstilles ud fra Z-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (3) pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2) i eksempel 5 60.

IR-Spektrum (Nuiol): v = 3300, 2600 - 2400 (bred), 1720 og 1650 max (bred) cm ^.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,56 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (9H, s), 1,20 - 2,50 (10H, m), 3,92 (2H, s), 4,0 - 4,40 (4H, m) ppm.

10 3) Trin 3:

Forbindelse (4) -> Çh3 d

CH3(CH2)4-(CH=CH-CH2)4-(CH2)2COHN CHCOHN CHCOOH

L <ÇH2>2

I L

COHNCHCOHNCHCOOH

4H2}3

BocHN CHCOOH D

(5)

Arachidony!-L-Ala-ï-D-Giu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH

(5) fremstilles ud fra L-Ala-ï-D-Glu(e-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GluOH (4) og N-hydroxyphthalimidoesteren af arachidonsyre

DK 156252 B

189 pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3) i eksempel 60.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3300, 1720, 1640 og 1530 cm’^.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,83 (3H, m), 1,1 - 2,9 5 (42H, m), 3,82 (2H, s), 4,05 - 4,50 (4H, m), 5,20 - 5,50 (8H, m) ppm.

4) Trin 4:

Forbindelse (5) ->

CH3 D

CH3(CH2)4-(CH=CH-CH2)4-(CH2)2COHNCHCOHNCHCOOH

L «H2)2 I L

COHN CH COHN CHoC00H I 2 (CH2)3

H0NCHCOOH

1 D

(6)

Arachidonyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (6) fremstilles ud fra arachidonyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-10 mesoDAP-(L)-GlyOH (5) pl i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2) i eksempel 1.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3270, 1720, 1635 og 1530 cm NMR-Spektrum (D20=NaOD): 6 = 0,85 (3H, m), 1,1 - 2,9 ((33H, m), 3,23 (1H, t, J=7Hz), 3,76 (2H, s), 4,1 - 4,5 (3H, m), 5,32 15 (8H, m) ppm.

190

DK 156252 B

Eksempel 64.

T OAc CHq n

L j I 3 D

H«N CHCONH CH 0COOH + CH„CHCONHCHCOHNCHCOOBzl 2 i 2 t I

(ch2)3 d l (ch2)2

BocHNbHCONHNHBoc COOSu

D

(1) (2)

OAc CHg D

-> CH„CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl SD L f

I L

COHN CHCOHN CH0COOH I 2 (ΡΗ2}3

BocHN CHCOHNNHBoc D

(3) 1) Trin 1: 7,7 g Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHBoc (1) opleses i 150 ml vand, og oplpsningen indstilles pâ pH-værdi 8 med N-methylmor-5 pholin. Til oplpsningen sasttes 180 ml af en dîoxanopl0sning af D-Lac(OAc)-L-Ala-y-D-Glu(a-OBzl) (OSu) (2) (indeholdende 26,7 millimol af forbindelse (2) som aktiveret ester). Blandingen omrpres i 4 timer ved stuetemperatur. Dioxanet afdestilleres under reduceret tryk, og den resulterende blanding vaskes med 100 ml ether og 10 indstilles pl pH-værdi 3 med 5%rs vandig saltsyreoplpsning. Oplpsnin-gen ekstraheres med 300 ml og 150 ml ethylacetat, og ekstrakten vaskes med vand og terres over vandfrit magnesiumsulfat, hvorefter den inddampes til terhed. Remanensen krystaliiseres af en blanding af chloroform og ether i forholdet 1:3, hvorved der fis 10,8 g 15 D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHBoc (3), smeltepunkt 105 - 113°C (senderdeling). NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 1,3 - 1,8 (30H, m), 2,08 (3H, s), 2,1 - 2,4 (4H, m), 3,92 (2H, s), 4,2 - 4,6 (4H, m), 4,8 - 5,1 (1H, m), 5,17 (2H, s), 7,33 (5H, s) ppm.

191

DK 156252 B

2) Trin 2: 5,2 g D-Lac(0Ac)-L-AIa-îf-D-Glu(0H)0B2l oploses i 60 ml methylen-chlorid, og der tilsættes 1,10 g N-methylmorpholin. Til blandingen dryppes 1,50 g chlormyresyre-isobutylester ved en temperatur mellem 5 -10 og -15°C, og blandingen omrores ved denne temperatur i 30 mi- nutter. Til blandingen sættes en oplpsning, der er fremstillet ved oplpsning af 9 ml bis(trimethylsilyl)acetamid og 4,60 g Boc(D)meso-*DAP-(L)^GJyQH:v(D)*NHNBB©c (1} 1 en blanding af 50 ml methylen-chlorid og 10 ml dimethylformamid. Den resulterende oplpsning omrp-10 res ved en temperatur mellem -10 og -15°C i 2 timer og derefter ved 0°C i 1 time, hvorefter den inddampes til ca. 30 ml. Til koncentratet sættes 200 ml ethylacetat og 100 ml 2%'s vandig saltsyreoplosning. Ethylacetatfasen fraskilles, vaskes med vand og torres over vandfrit magnesiumsulfat. Ethylacetatfasen inddampes til tprhed under reduce-15 ret tryk, og den sâledes vundne remanens vaskes med ether, hvorved der fâs 8,2 g D-Lac(OAc)-L-Ala-Y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHBoc (3), hvis NMR-spektrum er identisk med det ifolge trin 1 fremstillede produkts.

Eksempel 65.

OAc ÇH3 „ H„NCHCOHNCH,COOH + CH.CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl (ch2)3 υ L (CH2)2 ZHNCHCOOH COOSu (meso+DL) (1) (2)

?Ac <P3 D

-> CH« CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl

D L ^H2>2 I L

COHN CHCOHN CH0COOH I 2 <?H2>3

ZHNCHCOOH

(3)

DK 156252 B

192 80 mg ZDAP(OH)GlyOH (1) sættes til en oplosning af 59 mg D-Lac-(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(OSu)OBzl (2) i 4 ml dimethylformamid indehol-dende 0,03 ml triethylamin ved 0°C. Blandingen omrpres natten over ved stuetemperatur, hvorefter den inddampes til tprhed. Til den 5 sâledes vundne remanens sættes fortyndet saltsyre, hvorefter der ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og inddampes til tprhed. Remanensen omkrystalliseres af en blanding af hexan og chloroform, hvorved der fis 86 mg D-Lac-(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-Z-DAP(OH)GlyOH (3).

10 NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,43 C3H, d, J=7Hz), 1,3 - 2,2 (8H, m), 2,12 (3H, s), 2,30 (2H, m), 3,95 (2H, s), 4,0 - 4,6 (4H, m), 5,12 (2H, s), 5,18 (2H, s), 7,36 (10H, s) ppm,

Eksempel 66.

°Ac % D

H„NCHCOHNCH,COOH + CH.CHCONHCHCONHCHCOOBzl (ÇH2)3 υ L (CH2)2

ZHNCHCOOH iûOH

(meso) (D (2)

OAc CHq n I I 3 D

-> CH3 CHCOHNCHCONHÇHCOOBzl D L «?Η2>2

COHN(j:HCOHNCH2COOH

<fH2>3

ZHNCHCOOH

(3) 15 1,23 g Z-meso-DAPGlyOH (1) og 4,00 g bis(trimethylsilyl)acetamid suspenderes i 50 ml methylenchlorid, og suspensionen omrpres ved stuetemperatur i 4 timer. Pâ den anden side oploses 2,34 g af di-cyclohexylaminsaltet af D-Lac(OAc)-L-AIa-Y-D-Glu(OH)OBzl (2) i 30 ml methylenchlorid, og 0,54 g triethylamin-hydrochloridsalt sættes 20 under omrpring til oplpsningen ved stuetemperatur. Omrprin- 193

DK 156252 B

gen fortsættes i 2 timer, reaktionsblandingen afkples til -30°C, og en opiesning af 0,53 g chlormyresyre-isobutylester i 50 ml methy-lenchlorid tildryppes. Den resulterende blanding omsættes i 20 minutter ved samme temperatur. Til reaktionsblandingen dryppes 5 den pi den ovenfor beskrevne méde fremstillede methylenchlorid- oplosning af Z-meso-DAPGlyOH, og den resulterende blanding omreres ved -30°C i 1 time. Reaktionsblandingen omsættes ved stuetemperatur i 4 timer og filtreres. Filtratet vaskes med 10%'s vandig saltsyre og inddampes under reduceret tryk, og den slledes 10 vundne remanens ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatfasen vaskes med vand, tprres over vandfrit magnesiumsulfat og inddampes under reduceret tryk, hvorved der fis 3 g olieagtigt D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-GI u (α-OBzl)-Z-meso-DAPGlyOH.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,43 (3H, d, 15 J=7Hz), 1,3 - 2,2 (8H, m), 2,12 (3H, s), 2,30 (2H, m), 3,95 (2H, s), 4,0 - 4,6 (4H, m), 5,12 (2H, s), 5,18 (2H, s), 7,36 (10H, s) ppm.

Eksempel 67.

D fAc D

H„N CH CONHCH0COOH + CH0CHCONHCHCONHCHCOOBzl i I 4 y | (Çh2)3 U (ÇH2)2

ZHNCHCOOH COOH

L (2) (1)

OAc CH, n I I 3 D

-> CH« CHCONHCHCONHCHCOOBzl D L (°¾½

D

COHNÇHCOHNCHgCOOH

(fH2}3

ZHNCHCOOH

L

(3) 194

DK 156252 B

Til en blanding af '653 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(OH)(a-OBzl) (1) og 178 mg N-hydroxysuccinimid i 7 ml dioxan sættes 320 mg Ν,Ν'-dicyclohexylcarbodiimid. Blandingen omrpres ved 10°C i ti minutter og omrores yderligere ved stuetemperatur i 14 timer.

5 Reaktionsblandingen filtreres, filtratet inddampes til t0rhed, og remanensen opl0ses i 4,5 ml dioxan. 3 ml af denne oplosning sættes til en blanding af 270 mg Z-(L)-mesoDAP-(D)GlyOH og 156 yliter N-methylmorpholin i 4 ml dioxan, og blandingen omrores ved stuetemperatur. Efter 4,5 timer tilsættes 0,9 ml af den ovennævnte 10 dioxanoplosning og 100 yliter N-methylmorpholin, og blandingen omrores ved samme temperatur. Efter 4,5 timer tilsættes yderligere 0,6 ml af den ovennævnte dioxanoplosning, og blandingen omr0res i 1,25 time. Reaktionsblandingen vaskes med ether, syrnes til pH-værdi 2 med fortyndet vandig saltsyreoplosning og ekstraheres 15 med en blanding af ethylacetat og methylenchlorid indeholdende IN saltsyre, vand og saltvand, torres over magnesiumsulfat og inddam-pes, hvorved der fis 660 mg af et amorft fast stof, som opl0ses i chlorform og tritureres med ether, hvorved der fâs 450 mg D-Lac-(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(D)-Z-(L)-mesoDAP-(D)-GlyOH (3).

20 NMR-Spektrum (CDCI3 - CD-jOD): δ = 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,45 (3H, d, J=7Hz), 1,2 - 1,9 (6H, m), 2,0 - 2,5 (4H, m), 3,93 (2H, bred s), 4,1 - 4,7 (3H, m), 5,10 (2H, s), 5,17 (2H, s) ppm.

Eksempel 68.

OAc CH„ n i i j υ CH„CHCONHCHCONHCHCOOBzl D L ^H2>2

1 L

COHNCHCOHNCH2COOH

(fH2}3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(D

195

DK 156252 B

OAc CH, n

I | 3 D

-> CH,CHCONHCHCONHCHCOOH

D L (CH 2)2

L

COHNCHCOHNCH2COOH

(ÇVg

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(2) 9,4 g D-Lac(OAc)-L-Ala-2T-D-Glu(o-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHBoc (1) hydrogeneres i 100 ml eddikesyre over 2,0 g 10%’s palladîumsort i 2 timer under 1,5 atmosfæres hydrogentryk ved stuetemperatur. Efter endt reaktion frafiltreres katalysatoren, og 5 filtratet inddampes til tprhed under reduceret tryk. Remanensen tritureres med ether, hvorved der fâs 7,50 g D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHboc (2).

NMR-Spektrum (CD^OD): δ = 1,3 - 1,9 (m), 2,10 (3H, s), 2,1 - 2,4 (4H, m), 3,90 (2H, s), 4,2 - 4,6 (4H, m), 4,8 - 5,1 (1H, m) ppm.

10 Eksempel 69.

OAc CH, j,

1 î 3 D

CH.CHCOHNCHCOHNCHCOOH 3D T I

W2

I L

COHNCHCOHNCHgCOOH

(ÇH2>3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(1)

DK 156252B

196

OH CH, n I I 3 D

-> CH, CHCOHNCHCOHNCHCOOH

D L <k>2

I L

COHNCHCOHNCH2COOH

(ÇH2>3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(2) 1,65 g D-Lac(OAc) -L-Ala-Y-D-Glu (α-OH) -(L) -Boc- CD) -mesoDAP- (L) -GlyOH-(D)-NHNHBoc (1) oploses i 32 ml 50%'s vandigt methanol, og oplosningen omrpres i 2,5 timer ved stuetemperatur, medens pH-vær-dien holdes pâ 9,0 med 5%'s vandig kaliumcarbonatoplosning. Oplos-5 ningen inddampes til torhed under reduceret tryk. Remanensen ind-stüles pâ pH-værdi 3 med 5%’s vandig saltsyre og hældes derefter gennem en kolonne, der er pakket med 500 ml af en makropor0s, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20. Harpiksen vaskes med 200 ml vand og elueres med en blanding af methanol og vand i volumen-10 forholdet 1:1. Eluatet inddampes til torhed, og remanensen vaskes med ether, hvorved der fis 1,24 g D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHBoc (2).

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3270, 3200 - 2600, 1720 og 1640 cm"1. NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,47 (18H, s), 3,93 (2H, s) ppm.

15 Eksempel 70.

OAc CH, n

I i 3 D

CH,CHCONHCHCONHCHCOOBzl

D L (?H2>2 I L

COHNCHCOHNCH2COOH -> (ch2)3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(D

DK 156252 B

197

OH CH„ n i I 3 D

CH„CHCONHCHCONHCHCOOH

D L (CH2>2

L

COHNCHCOHNCHgCOOH

(ch2)3

B ocHN CH COHNNHB oc D

(2) 1,0 g D-Lac(OAc)-L-Ala-3f-D-Glu(a-OBzI)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHBoc (1) oploses i 20 ml 50%'s vandigt methanol, og der tilsættes 3,7 ml IN vandig natriumhydroxidoplpsning. Den resulterende oplpsning omr0res i 2 timer ved stuetemperatur og ind-5 dampes til ca. 5 ml. Koncentratet indstilles pâ pH-værdi 3 og hældes gennem en kolonne, der er pakket med 24 ml af en makroporps, ikke-ionisk adsorptionharpiks, HP-20. Kolonnen vaskes med 100 ml vand og elueres med en blanding af methanol og vand i forholdet 1:1, og eluatet inddampes til tprhed under reduceret tryk. Den sâledes 10 vundne remanens vaskes med ether, hvorved der fâs 660 mg D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(o-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH“(D)-NHNHBoc (2), som er identïsk med det ifplge eksempel 70 fremstillede produkt.

Eksempel 71.

?H ?H3 D CH.CHCOHNCHCOHNCHCOOH

T 1 (ch2)2

L

COHN CH COHN CHLCOOH ->

Ojxÿs

BocHNCHCONHNHBoc

D

(D

OH CH„ n

1 | 3 D

CH„ CHCOHNCHCOHNCHCOOH

198

DK 156252 B

D L <CH2>2

L

COHNCHCOHNCHgCOOH

(fH2}3 h9nchcooh

Δ D

(2) 1) 200 mg D-Lac-L-Ala-Y-D-Glu(ct-OH)-(L.)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHBoc (1) oploses i 1 ml trifluoreddikesyre, og oplps-ningen omrpres i 15 minutter ved stuetemperatur. Oplpsningen ind-dampes tll tprhed under reduceret tryk, og remanensen tritureres 5 med ether. Det sâledes vundne pulver oplpses i 5 ml vand, og der tilsættes 6,8 ml1N vandfri svovlsyreoplpsning. Til blandingen dryp-pes en oplpsning af 146 mg natriumperiodat ί 2 ml vand. Blandingen omrpres i 1 time under isafkpling, hvorefter overskydende reagens spnderdeles med natriumbisulfit. Den resulterende oplpsning indstilles 10 pi pH-vaerdi 3 med mættet vandig natriumhydrogencarbonatoplpsning og inddampes til 1 ml under reduceret tryk. Koncentratet hældes gennem en kolonne pakket med en makroporps, ikke-ionisk adsorpti-onsharpiks, HP-20, og elueres med vand. Eluatet lyofiliseres, hvorved der fis 86 mg D-Lac-L-Ala-3f-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH 15 (2) som et fast stof.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,46 (3H, d, J=7Hz), 3,88 (1H, t, J=5Hz), 4,02 (2H, s) ppm.

[a]p = -30,0° (c = 0,4 i vand).

2) 220 mg D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OHML)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-20 GlyOH-(D)-NHNHBoc (1) oplpses i 1,5 ml trifluoreddikesyre, og oplpsningen omrpres i 15 minutter ved stuetemperatur. Trifluored-dikesyreoplpsningen inddampes til tprhed under reduceret .tryk, og den siledes vundne remanens tritureres med ether. Pulveret oplpses i en blanding af 5 ml vand og 7 ml dioxan, under isafkpling tilsættes 25 110 mg N-bromsuccinimid, og oplpsningen omrpres i 1 time. Reak- tionsblandingen inddampes til ca. 1 ml, og koncentratet indstilles 199

DK 156252 B

pâ pH-værdi 2,5 med 5%'s vandig natriumhydrogencarbonatoptpsning. Opl0sningen hældes gennem en kolonne, der er pakket med 16 ml af en makroporos, ïkke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20, elueringen udfpres med vand, og eluatet lyofiliseres, hvorved der fâs 150 mg 5 D-Lac-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (2), som er identisk med det ifplge 1) vundne produkt.

3) 200 mg D-Lac-L-Ala-2f-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-

GlyOH-(D)-NHNHBoc (1) opl0ses i 1 ml trifluoreddikesyre, og oplps-ningen omrores ved stuetemperatur i 15 minutter. Trifluoreddikesyre-10 oplosningen inddampes til t0rhed under reduceret tryk. Den sâledes vundne remanens tritureres, og pulveret oploses i 15 ml 60%’s vandig eddikesyreoplpsning. Til oplosningen sættes 65 mg mangandioxid under omrpring ved stuetemperatur, og blandingen omrpres ved samme temperatur i 1,5 time. Uoplpseligt stof frafiltreres, hvorefter filtratet 15 inddampes til torhed under reduceret tryk. Den sâledes vundne remanens oplpses i 50%'s vandigt éthanol, afkoles til en temperatur mellem -10 og -20°C og indstilles derefter pê pH-værdi 9 med vandig ammoniakoplosning. Oplpsningen lades henstâ ved samme temperatur i 2 timer. Uoplpseligt stof frafiltreres, og filtratet inddampes til terhed 20 under reduceret tryk. Remanensen hældes gennem en kolonne, der er pakket med 10 ml aktivkul. Kolonnen vaskes med 30 ml vand og elueres med 70%'s vandigt acetone. De fraktioner, som indeholder den pnskede forbindelse, isoleres og inddampes til tprhed under reduceret tryk. Remanensen pulveriseres med en blanding af methanol og ether, 25 hvorved der fis 84 mg D-Lac-L-Ala-îT-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (2), hvis struktur ved sammenligning af data bekræftes at være identisk med det ifplge 1) fremstillede produkt.

OAc CH, n

j I 3 D

CH CHCOHNCHCOHNÇHCOOBzl

Eksempel 72.

200

DK 156252 B

° L 4H2>2 COHNCHCOHNCHgCOOH -> <ÇH2>3

ZHNCHCOOH

(1) OH CH, n

i I 3 D

CH, CHCOHN CHCOHN CHCOOH SD I > <?V2

COHNCHCOHNCHgCOOH

(pv3

HgNCHCOOH

(2) 2,80 g D-Lac(OAc)-L-Ala-Y-D-Glu(a-OBzl)-ZDAP(OH)GlyOH (1) de-hydrogeneres i 15 ml eddikesyre over 0,50 g 10%'s palladiumsort ved to atmosfærers hydrogentryk i 6 timer. Reaktionsblandingen filtreres, 5 og filtratet inddampes til en olie. Olien oplpses i vand, og oplpsningen indstilles pâ pH-værdi 9,0 - 9,5 med fortyndet vandig kaliumcarbonat-oplpsning, hvorefter den omrpres under isafkpling I 4 timer. Reaktionsblandingen indstilles pâ pH-værdi 7 med fortyndet saltsyre og inddampes. Koncentratet oplpses i methanol, og uoplpseligt stof fra-10 filtreres. Det methanoliske filtrat inddampes til tprhed under reduce-ret tryk, og remanensen oplpses i 3 ml vand, indstilles pâ pH-værdi 3 - 3,2, hældes gennem en kolonne, der er pakket med 200 ml makro-porps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20, og elueres derefter med vand. De fraktioner, som indeholder den pnskede forbindelse, isoleres 15 og inddampes, hvorved der fâs 400 mg af et pulver. Pulveret oplpses i vand, og oplpsningen ledes igen igennem en kolonne, der er pakket med 100 ml af en makroporps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20. Elueringen udfpres med vand, og de fraktioner, som indeholder den pnskede forbindelse, isoleres og inddampes, hvorved der fâs 100 mg 20 D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)DAP(OH)GlyOH (2), hvis struktur ved sammenligning af data bekræftes at være identisk med det ifplge eksempel 71, 1) fremstillede produkt.

Eksempel 73.

DK 156252B

201 OAc CH„ n

I I 3 D

CH0CHCONHCHCONHCHCOOH 3n T 1 D <CH2>2

D

COHNCHCOHNCHgCOOH ->

W

H9NCHC00H Δ L

(1)

OH CH„ n CHnCHCONHCHCONHCHCOOH

D L <CIV2

D

COHNCHCOHNCHgCOOH

(VH2}3

H0NCHCOOH Δ L

(2) 3,25 ml 5%'s vandig kaliumhydrogencarbonatoplpsning sættes til en oplpsning af 278 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(D)-meso-DAP-(D)-GlyOH (1) i 6 ml 5%’s vandigt methanol ved stuetemperatur.

5 Blandingen omrpres ved stuetemperatur under lejlighedsvis tilsætning af 5%’s vandig kaliumhydrogencarbonatoplpsning for at holde pH-vær-dien pâ 9. Reaktionsblandingen syrnes til pH-værdi 3,5 med IN vandig saltsyreoplpsning og inddampes til tprhed. Remanensen oploses i vand, og oplpsningen inddampes til 2 ml. Koncentratet chromatogra-10 feres pâ 15 ml makroporps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20, og elueringen udfpres med vand. De fraktioner, som indeholder den ©nskede forbindelse, inddampes, og remanensen oplpses i en tille smule vand og lyofiliseres, hvorved der fâs 135 mg DLac-L-Ala-ï-D-

DK 156252B

202

Glu(a-OH)-(D)-mesoDAP-(D)-GlyOH, hvis struktur ved sammenligning af data bekræftes at være identisk med det produkt, som fremstilles ifplge eksempel 71, 1).

Eksempël 74.

?Ac <rH3 D CH CHCONHCHCONHCHCOOBzl D L <CH2>2

D

COHNÇHCOHNCH2COOH -> <PV3

ZHNCHCOOH

L

(D

OAc CH» τ-

Ι | 3 D

CH»CHCONHCHCONHCHCOOH L I

Wl

I D

COHNCHCOHNCHgCOOH

CH}3

H»NCHCOOH

L

(2) 5 En blanding af 440 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(D)-Z-(O-mesoDAP-(D)-GlyOH (1) og 90 mg 10%’s palladiumsort i 5 ml eddikesyre omrpres under hydrogenatmosfære i 4 timer. Der sættes yderligere 60 mg 10%'s palladiumsort og 3 ml eddikesyre til reaktions-blandingen, og omroringen fortsættes under hydrogenatmosfære i 4 10 timer. Reaktionsblandingen filtreres, filtratet inddampes under redu-ceret tryk, og remanensen oplpses i vand. Den vandige oplpsning inddampes til tprhed, og remanensen oplpses igen i vand og inddampes. Koncentratet lyofiliseres, hvorved der fâs 301 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(D)-mesoDAP-(D)-GlyOH (2).

203

DK 156252 B

NMR-Spektrum (D2O): δ = 1,42 (3H, d, J=7Hz), 1,47 (3H, d, J=7Hz), 2,14 (3H, s), 1,0 - 2,8 (Ί0Η, m), 3,80 (1H, t, J=7Hz), 3,94 (2H, $), 4,1 - 4,6 (3H, m), 5,02 (1H, q, J=7Hz) ppm.

Eksempel 75.

OAc CH„ n

I I 3 D

CH „ CH COHN CH COHN CH COOBzl D L (CH2)2

D

COHNCHCOHNCHgCOOH -> 4H2}3

ZHNCHCOOH

(D

OAc CH„ n

1 r 3 D

CH„CHCOHNCHCOHNCHCOOH

D L ΦΗ2>2 COHN CH COHN CH „COOH I 2 (CH2}3

HgNCHCOOH

(2) 5 En oplosning af 20 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-Z-DAP-(OH)GlyOH (1) i methanol hydrogeneres over 50 mg 10%’s palladium-sort. Reaktionsblandingen filtreres, og filtratet inddampes til torhed, hvorved der fis 10 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-DAP(OH)-GlyOH (2), hvis struktur bekræftes ved sammenligning af data at 10 være identisk med det ifolge eksempel 74 vundne produkt.

OAc CH, _

l I 3 D

CH,CHCOHNCHCOHNCHCOOH

Eksempel 76.

204

DK 156252 B

D L <«V2 COHNCHCOHNCHgCOOH ->

H2NCHCOOH

(1)

?H ,CH3 D

CH,CHCOHNCHCOHNCHCOOH

dT\ t I

COHNCHCOHNCHgCOOH

4H2}3

HgNCHCOOH

C2) 10 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-DAP(OH)GlyOH (1) sættes til 0,6 ml af en 0,05M oplpsning af kaliumcarbonat i 70% methanol ved 0°C, og blandingen omrpres ved stuetemperatur i 1 time. Reaktions-5 blandingen neutraliseres med eddikesyre og inddampes, hvorved der fâs en remanens, som renses ved chromatografi pâ en kulspjle. Elue-ringen udfores med 50%'s vandigt acetone, hvorved der fis 7 mg D-Lac-L-Ala-ï-D-GluCa-OH)-DAPCOH)GlyOH (2), hvis struktur ved sammenlîgning af data bekræftes at værè identisk med det ifelge 10 eksempel 71, 1) vundne produkt.

Eksempel 77.

?Ac <rH3 D L

CHgCH COHN CH COHN ÇHCOOB zl + H„NCHCOHNCH0COOH D L J 2 I 2 <fH2>2 (<pH2)3

COOH ZHNCHCOOH

L

CD (2)

DK 156252 B

205 OAc CH*

I I 3 D

CH-CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl L 1 «Ptt

I L

-- COHNCHCOHNCH2COOH

(K}3

ZHNCHCOOH

L

(2)

Til en blanding af 2,45 g D-Lac(OAc)-L-Ala-D-Glu(OH)OBz( (1) og 740 mg ravsyre i 20 m! dioxan sættes 1,25 g Ν,Ν’-dicyclohexylcarbo-diimid ved 12°C, og blandingen omrpres ved stuetemperatur i 16 timer. Reaktionsblandingen filtreres, og Ν,Ν'-dicyclohexylurinstoffet 5 vaskes med dioxan. Filtratet og vaskevæskerne sammenhældes og inddampes, og koncentratet oplpses i 18 ml dioxan. Denne oplosning anvendes til næste reaktion. Til en blanding af 1,21 g Z-(a)-L-DAP-(s)-GlyOH (2) og 1,02 ml N-methylmorpholin i 20 ml vand sættes den ovennævnte oplosning ved 5°C, og blandingen omrores ved samme 10 temperatur i 40 minutter og ved stuetemperatur i 4 timer. Der sættes yderligere 0,2 ml N-methylmorpholin til reaktionsblandingen, og den resulterende blanding omrores ved samme temperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen inddampes, og koncentratet fortyndes med vand. Oplosningen vaskes med ether og syrnes til pH-værdi 2 med fortyndet 15 saltsyreoplosning. Til oplpsningen sættes en blanding af methylenchlo-rid og ethylacetat, og blandingen rystes og filtreres for at adskille uoplpseligt stof og den organiske fase. Den organiske fase vaskes med vand, torres over magnesiumsulfat og inddampes. Remanensen hældes sammen med det ovennævnte uoplpselige stof og oploses i en blanding 20 af chloroform og methanol i forholdet 1:1. Oplpsningen inddampes, og koncentratet tritureres med en blanding af ethylacetat og ether i forholdet 1:2, hvorved der fâs 1,8 g af et pulver, som oplpses ί en blanding af chloroform, methanol og ethylacetat i forholdet 1:1:1 og inddampes. Koncentratet tritureres med en blanding af ethylacetat og 25 ether i forholdet 5:1, hvorved der fâs 1,654 g D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(o)-Z-(s)-L-DAP-(o)-GlyOH (3).

NMR-Spektrum (CDCIg - CD3OD): 6 = 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,46 (3H, d, J=7Hz), 2,11 (3H, s), 1,2 - 2,6 (10H, m), 3,95 (2H, s), 4,0 -

DK 156252B

206 4,6 (4H, m), 4,96 (1H, q, J=7Hz), 5,08 (2H, s), 5,15 (2H, s), 7,33 (10H, s) ppm.

Eksempel 78.

?AC ?H3 D

CH» CH COHN CH COHN CHCOOB zl

D L <fH2 h I L

COHN CHCOHN CH»COOH -> I 2 «ΓΗ2>3

ZHNCHCOOH

L

(D

?AC ?H3 D

CH»CHCOHNCHCOHNCHCOOH

D L <ch2>2

L

COHNÇHCOHNCHgCOOH

{fE2>3 H»NCHCOOH ά L

(2)

En oplosning af 1,59 g D-LacCOAc)-L-Ala-3T-D-Glu(a-OBzl)-(a)-Z-5 (e)-L-DAP-(a)-GlyOH (1) i 40 ml eddikesyre hydrogeneres over 500 mg 10%'s palladiumsort i 4 timer. Reaktionsblandingen filtreres, og filterkagen vaskes med 50%'s vandigt methanol. Filtratet og vaske-væskerne sammenhældes og inddampes under vakuum, hvorved der fâs 1,5 g remanens. Forurenet eddikesyre fjernes ved afdestiilation med 10 vand, og denne operation gentages yderligere én gang. Remanensen oploses i vand og lyofiliseres, hvorved der fâs 1,10 g D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(a)-L-DAP-(o)-GlyOH C2).

207

DK 156252 B

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,43 (3H, d, J=7Hz), 1,48 (3H, d, J=7Hz), 1,3 - 2,7 (10H, m), 2,15 (3H, s), 3,80 (1H, bred t, J=6Hz), 3,95 (2H, s), 4,0 - 4,6 (3H, m), 5,05 (1H, q, J=7Hz) ppm.

Eksempel 79.

?Ae 7*8 D CHjCHCOHNCHCOHNCHCOOH

” .........'.......

L

COHNCHCOHNCHgCOOH -> ΦΗ2>3

H9NCHC00H * L

(D

?H fH3 D CH„CH COHN CH COHN CH COOH

D L <CH2>2

L

COHNCpiCOHNCHgCOOH

(?H2)3 H0NCHCOOH 1 L

(2) 5 Til en oplpsning af D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(c)-L-DAP- (a)-GlyOH (1) i en blanding af 15 ml methanol og 5 ml vand sættes 7,5 ml IN natriumhydroxidoplosning ved 5°C. Oplpsningen omrores ved samme temperatur i 30 minutter og ved stuetemperatur i 2,25 timer.

10 Den resulterende oplpsning syrnes til pH-værdi 4 med 3N saltsyre og inddampes. Koncentratet fortyndes med vand til 10 ml, syrnes med 3N saltsyre til pH-værdi 2,2 og chromatograferes pê en kolonne med 135

DK 156252B

208 mg af en makropor0s, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20. Eluering udfores med vand, og eluatet inddampes og lyofiliseres, hvorved der fis 681 mg D-Lac-L-Ala-r-D-Glu(a-OH)-(a)-L-DAP-(a)-GlyOH (2), smeltepunkt 130°C (sonderdeling).

5 NMR-Spektrum CD2O): 6 = 1,39 (3H, d, J=7Hz), 1,45 (3H, d, J=7Hz), 1,1 - 2,6 (10H, m), 3,86 (1H, t, J=6Hz), 4,00 (2H, s), 4,1 - 4,6 (4H, m) ppm.

[a]Jj5 = -23,3° (c = 0,322 i vand).

Eksempel 80.

10 l)Trinl:

t OAc CH, T

I | 3 L

HgN (jüHCONHCHgCOOH + CHgCHCONHCHCOHNCHCOOBzl

<?H2>3 D L

BocHN CHCONHNHBoc COOSu

D

(D (2)

OAc CH, T

I | o -> CH, CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl D L <CV2

L

COHNCHCOHNCH2COOH

(3) 4¾¼

BocHNCHCOHNNHBoc

D

D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-L-Glu(o-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-Gly-OH-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles ud fra Boc(D)-mesoDAP-(L)-Gly-OH-(D)-NHNHBoc (1) og D-Lac(OAc)-L-Ala-L-Glu(a-OBzl) pi i det væsentlige samme mide som beskrevet i eksempel 64, 1).

15 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1735, 1695 og 1645 cm NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 1,40 (9H, s), 1,42 (9H, s), 2,08 (3H, s), 3,90 (2H, bred s), 4,00 - 5,00 (5H, m), 5,10 (2H, s), 7,30 (5H, s) ppm.

DK 156252 B

209 2) Trin 2:

OH CH„ T I I 3 L

Forbindelse (3) -> CH„ CH CONHCHCONHCHCOOH

3D T · (ch2)2

L

COHNCHCOHNCH2COOH

(<ΓΗ2}3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4) D-Lac(OH)-L-Ala-ï-L-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHBoc (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme rnêde som beskrevet i eksempel 70.

5 NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,44 (9H, s), 1,46 (9H, s), 3,90 (2H, bred s), 4,00 - 4,60 (5H, m) ppm.

3) Trin 3: OH CH« t

I I 3 L

Forbindelse (4) -> CH,,CHCONHCHCONHCHCOOH

D L rrH

CCH2)2

L

cohnchcohnch2cooh

^H2}3 Η9Ν^Η000Η ù D

(5) D-Lac(OH)-L-Ala-ï-L-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)GlyOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 71 -10 1.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,00 - 2,60 (10H, m), 3,98 (2H, s), 3,84 (1H, t, J=7Hz), 4,1 - 4,5 (4H, m) ppm.

[a]p = 34,7° (c = 0,15 i vand).

DK 156252 B

210

Eksempe! 81.

1) Trin 1: L OAc CH3 d H0N CHCONHCH0COOH + CH„CHCONHCHCOHNCHCOOBzl (ÇHgJg L L (CH2)2

BocHNCHCONHNHBoc fcoOSu

D

(1) (2)

OAc CHq n I I 3 D

-> CHQCHCOHNCHCOHNCHCOOBzl

“T T I

<CH2>2

L

COHNCHCOHNCHgCOOH

4¾

BocHN CHCOHNNHBoc D

(3) L-Lac(OAC)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-Gly-OH-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles ud fra Boc-(D)-mesoDAP-(L)-Gly-5 OH-(D)-NHNHBoc (1) og L-Lac(OAc)-L-Ala-D-Glu(oc-OBzl) (2) pâ i det væsentlige samme mide som beskrevet i eksempel 64-1.

2) Trin 2:

?H <?H3 D

Forbindelse (3) -> CH„ CH CONHCHCONHCHCOOH

L L (¾½

L

COHNCHCOHN CHoC00H I 2 <fH2)3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4) 211

DK 156252 B

L-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHBoc (4) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 70.

3) Trin 3:

OH CH, n I I 3 D

Forbindelse (4) -> CH,CHCONHCHCONHCHCOOH

T i <CH2)2

L

COHNCHCOHNCHgCOOH

(CH2}3 η0ν6ηοοοη

* D

(5) 5 L-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)GlyOH (5) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 71 -1, smeltepunkt 170 - 174°C (sonderdeling).

[o]D = 33,2° (c = 0,25 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,38 (3H, J=7Hz), 1,45 (3H, J=7Hz), 3,89 10 (1H, t, J=7Hz), 4,01 (2H, s), 4,20 4,55 (m) ppm.

Eksempel 82.

1) Trin 1:

L fAc L

H9NCHC0NHCHoCO0H + CH „ CH CONH CH COHN CH COOB zl

2 i 2 3n D I

(fH2}3 (CH2}2

BocHNCHCONHNHBoc COOSu

D

(D (2)

DK 156252 B

212

OAc CH, T

I j 3 L

-> CH, CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl D D <CH2>2

L

COHNCHCOHNCH0COOH I 2 ifVs

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(3) D-Lac(OAc)-D-AIa-ï-L-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-Gly-OH-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles ud fra Boc(D)-mesoDÀP-(L)-Gly-OH-(D)-NHNHBoc (1) og D-Lac(OAc)-L-Ala-L-Glu(a-OBzl) pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 64-1.

5 NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,40 (9H, s), 1,42 (9H, s), 2,06 (3H, s), 3,90 (2H, bred s), 3,90 - 5,00 (5H, m), 5,15 (2H, s), 7,35 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

OH CH, T I | 3 L

Forbindelse (3) -> CH, CH CONHCHCONHCHCOOH

° D (¾¾

L

COHNCHCOHNCH2COOH

(fH2}3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4) D-Lac(OH)-D-Ala-ï-L-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-10 (D)-NHNHBoc (4) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet » eksempel 70.

IR-Spektrum (Nujolj: vmav = 3300, 1740, 1690 og 1740 (bred)

ΓΠα X

-i cm .

NMR-Spektrum (CD^OD): δ = 3,90 (2H, bred s), 4,00 - 4,60 (5H, 15 m) ppm.

3) Trin 3: 213

DK 156252 B

OH CHq t I I 3 L

Forbindelse (4) -> CH„CHCONHCHCONHCHCOOH

D ° <{*2)2 1 l COHN CH COHN CH0COOH I 2 (CH2}3

H0NCHCOOH 2 D

(5) D-Lac(QH)-D-Ala-ï-L-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)GlyOH (5) frem-stiIles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 71 -1.

5 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,00 - 2,60 (10H, m), 3,80 (1H, t, J=7Hz), 3,90 (2H, s), 4,10 - 4,5 (4H, m) ppm.

[a] p = +0,76° (c s 0,35 i vand).

Eksempel 83.

10 1) Trin 1:

L fAc fH3 D

H9NCHCONHCH9COOH + CH„ CHCONH CH COHN CHCOOB zl (ÇH2)3 D L (ÇH2)2

BocHN CHCONHNHBoc COOSu

D

(D (2)

DK 156252 B

214

OAc CH, n I | 3 D

-> CH, CHCOHNCHCOHNÇHCOOBzl D D (°η2)2

L

COHNCHCOHNCH0COOH i 4 (ÇH2>3

BocHN CHCOHNNHBoc D

(3) D-Lac(OAc)-D-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NH-NHBoc-(L)-GlyOH (3) fremstilles ud fra Boc(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-GlyOH (1) og D-Lac(OAc)-D-Ala-D-Glu(a-OBzl) (2) pi i det væsentlige samme made som beskrevet î eksempel 64-1.

5 NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 1,41 (18H, s), 2,12 (3H, s), 3,92 (2H, ' bred s), 4,00 - 5,10 (5H, m), 5,16 (2H, s), 7,36 (5H, s) ppm.

2) Trin 2: OH CH, n

I I 3 D

Forbindelse (3) -> CH, CHCONHCHCONHCHCOOH

D D <W2

I L

COHN CHCOHN CH«COOH l 2 (CH2>3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4) D-Lac(OH)-D-Ala-r-D-Glu(a-OH)-CL)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-GlyOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mlde som 10 beskrevet i eksempel 70.

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,41 (18H, s), 3,92 (2H, bred s), 4,00 - 4,60 (5H, m) ppm.

3) Trin 3: 215

DK 156252 B

OH CH3 d

Forbindelse (4) -> ΟΗ„ΟΗΟΟΝΗ^ΗΟΟΝΗΟΗΟΟΟΗ .

3d d ,'rv, (rH2)2

I L

COHNCHCOHNCHgCOOH

(CH2}3

H0N^HCOOH 1 D

. . ............................ ...... ....... (5) D-Lac(OH)-D-Ala-Y-D-Glu(a-OHML)-mesoDAP-(L)-GlyOH (5) frem- stilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 71 - 1.

5 [α]^ = 11,6° (c = 0,25 i vand).

NMR-Spektrum (CD^OD): 6 = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,44 (3H, d, J=7Hz), 1,00 - 2,60, (10H, m), 3,88 (1H, t, J=7Hz), 3,98 (2H, bred s), 4,10 - 4,50 (5H, m) ppm.

De nedenfor anfprte forbindelser fremstilles pâ i det væsentlige samme 10 mâde som beskrevet i trin 1 og trin 2 i eksempel 1:

Eksempel 84.

1) Trin 1:

Benzensulfonyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesopAP-(D)-NH- NHBoc-(L)-GlyOH.

15 NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 1,24 (3H, d, J=7Hz), 1,47 (18H, s), 1,25 - 2,46 (10H, m), 3,94 (2H, s), 3,82 - 4,54 (4H, m), 7,55 - 8,00 (5H, m) ppm.

DK 156252B

216 2) Trin 2:

Benzensulfonyl-L-Ala-y-D-Glu (α-ΟΗ) - ( L) -mesoDAP- (L)-GlyOH. NMR-Spektrum (D20): δ = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,5 - 2,42 (10H, m), 3,67 - 4,42 (4H, m), 4,10 (2H, s), 7,54 - 7,97 (5H, m) ppm.

5 Eksempel 85.

1) Trin 1:

Cin namoyl-L-Ala-ï-D-Glu (a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-

Boc-(L)-GlyOH fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som be-skrevet i trin 1 i eksempel 1.

10 NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,34 (13H, m), 1,44 (18H, s), 3,95 (2H, s), 3,90 - 4,67 (4H, m), 6,74 (1H, d, J=7Hz), 7,57 (1H, d, J=16Hz), 7,32 - 7,70 (5H, m) ppm.

2) Trin 2:

Cinnamoyl-L-Ala-ï-D-G!u(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-NHNH2-(L)-GlyOH 15 fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 11.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,47 (3H, d, J=7Hz), 1,34 - 2,42 (10H, m), 3,95 (2H, s), 3,78 - 4,58 (4H, m), 6,64 (1H, d, J=16Hz), 7,37 - 7,70 (6H, m) ppm.

20 3) Trin 3:

Cinnamoyl-L-Ala-Y-D-Glu (a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 4 i eksempel 11. NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,46 (3H, d, J=7Hz), 1,28 - 2,44 (10H, m), 3,72 (1H, t, J=7Hz), 3,88 (2H, s), 4,20 - 4,46 (4H, m), 6,67 25 (1H, d, J=7Hz), 7,38 - 7,46 (6H, m) ppm.

217

DK 156252 B

Eksempel 86.

1)Trml: OAc ÇHg D

H0N (CHn). + CH„ CH CONH CH COHN CH COOB zl

^ I “ ’ •’n L I

ZHNCHCOOH u (CH9)9

D <W

(1) (2)

OAc CH„ n I I 3 D

-> CH „ CH COHN CH COHN CH COOB zl D L (CH,), CONHCHg

<K} 3 ZHNCHCOOH D

(3)

Til en blanding af 1,20 g D-Lac(OAc)-L-Ala-D-GluOBzl (2) og 0,28 ml N-methylmorpholin i 17 ml methylenchlorid sættes 0,33 ml isobutyl-5 chlorcarbonat. Den resulterende blanding omrpres ved en temperatur mellem -15 og -10°C i 30 minutter og afkoles derefter til -40°C. Til den resulterende blanding sættes en blanding af 725 ml Z-D-LysOH

(1) og 3 ml bis(trimethylsilyl)acetamid i 3 ml dimethylformamid og 8 ml methylenchlorid ved -40°C. Den resulterende blanding omrpres ved en 10 temperatur mellem -15 og -10°C i 1 time og lades derefter gradvis opvarme til stuetemperatur. Den resulterende blanding inddampes, optages i 80 ml ethylacetat og vaskes med fortyndet saltsyre, vand og saltvand i den anfprte rækkefplge. Koncentratet torres over mangesi-umsulfat, og oplesningsmidlet afdestilleres til dannelse af en olie, som 15 krystalliseres af en blanding af chloroform og isopropylether, hvorved der fâs 1,60 g D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(ct-OBzl)-E-Z-D-LysOH (3). NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,28 (3H, d, J=7Hz), 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,0 - 2,4 (10H, m), 2,10 (3H, s), 3,1 (2H, m), 4,0 (1H, m), 4,40 (2H, bred t, J=7Hz), 5,05 (1H, q, J=6,5Hz), 5,10 20 (2H, s), 5,20 (2H, s), 7,42 (10H, s), 7,3 - 8,0 (2H, m), 8,0 - 8,4 (2H, m) ppm.

DK 156252 B

218 2) Trin 2: OAc CHL n

| , 3 D

Forbindelse (3) -> CH-CHCONHCHCONHCHCOOH

D L 4H2}2 conh(çh2)4

H0NCHCOOH * D

(4)

En oplosning af 1,50 g D-Lac(OAc)-L-Ala-y-D-Glu(o-OBzl)-e-Z-D-LysOH (3) i 40 ml eddikesyre hydrogeneres over 500 mg 10%’s palla-diumsort ved stuetemperatur og med hydrogen ved atmosfæretryk.

5 Reaktionsblandingen filtreres, og katalysatoren vaskes med 50%'s vandigt methanol. Filtraterne sammenhældes og inddampes. Eddike-syren fjernes ved afdestillation med vand. Remanensen oploses i vand og lyofiliseres, hvorved der fâs 1,00 g D-Lac(OAc)-L-Ala-i-D*-Glu-(a-OH)-s-D-LysOH (4).

10 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,42 (3H, d, J=7Hz), 1,47 (3H, d, J=7Hz), 2,16 (3H, s), 1,2 - 2,5 (10H, m), 3,0 - 3,4 (2H, m), 3,83 (1H, t, J=6Hz), 4,1 - 4,6 C2H, m), 5,07 (1H, q, J=7Hz) ppm.

3) Trin 3: OH CH„ n

l l 3 D

Forbindelse (4) -> CH.CHCONHCHCONHCHCOOH

D L rCH

C|2)2 conh(çh2)4

H0NCHCOOH * D

(5)

Til en oplosning af 930 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-E-D-15 LysOH (4) i en blanding af 9 ml methanol og 3 ml vand dryppes 6 ml IN natriumhydroxidoplosning. Den resulterende oplosning omrpres ved 5°C i 1 time og ved stuetemperatur i 2 timer.

DK 156252 B

219

Reaktionsblandingen neutraliseres til pH-værdi 7 med IN saltsyre og inddampes. Koncentratet indstilles pâ pH-værdi 2,2 med IN saltsyre og chromatograferes pi 90 ml af en makroporps, ikke-ionisk adsorp-tionsharpiks, HP-20, og elueres med vand. Fraktioner, som indeholder 5 den pnskede forbindelse (5), sammenhældes, inddampes og lyofilise-res, hvorved der fis 700 mg D-Lac(OH)-L“Ala-ï-D-Glu(a-OH)-s-D-LysOH (5).

[o]D = -17,1° (c “ 0,509 î vand).

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (3H, d, J=7Hz), 10 1,1 - 2,6 (10H, m), 3,19 (2H, bred t, J=7Hz), 3,83 (1H, t, J=6Hz), 4,1 - 4,5 (3H, m) ppm.

Eksempel 87.

1) Trin 1: _ OAc CH„ _

L i I 3 D

H0NCHCONHCH0COOH + CH.CHCONHCHCOHNCHCOOBzl Z I Z >>T) t · (çh2)3 u u ch2

BocHNCHCONHNHBoc COOH

D

(2) (1)

OAc CHg D

-> CH„ CHCOHNCHCOHNCHCOOB zl D L (CHj)

L

COHNCHCOHNCH2COOH

^H2}3

BocHN CHCOHNNHBoc C3) D

D-Lac(OAc)-L-Ala-3-D-Asp(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH- 15 Boc-(L)-GlyOH (3) fremstilles ud fra D-Lac(OAc)-L-Ala-D-Asp(OH)-OBzl (1) og Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (2) pi i det vaesentlige samme mide som beskrevet i eksempel 65, smeltepunkt 120 - 123°C (sonderdeling).

DK 156252 B

220 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3550, 3300, 1730, 1650 og 1550 cm"^. NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg) : δ = 1,0 - 1,9 (30H, m), 2,06 (3H, s), 3,0 - 5,0 C13H, m), 3,18 (2H, s), 5,14 (2H, s), 6,63 (1H, m), 7,40 (5H, s), 7,9 - 8,6 (6H, m), 9,56 (1H, s) ppm.

5 2) Trin 2: 0H CHs d

Forbindelse (3) -> CH« CH CONHCHCONHÇHCOOH

D L ch2

L

COHN CHCOHN CH„COOH l * ............... · - (ÇH2)3 h9nchcooh

1 D

(4)

Til en suspension af 0,74 g D-Lac(OAc)-L-Ala-3-D-Asp(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3) i 10 ml vand sættes 3,0 ml IN natriumhydroxidoplosning ved 0°C, og blandingen omrores i 1 time ved samme temperatur. Reaktionsblandingen neutraliseres til 10 pH-værdi 3 med 3,0 ml IN saltsyreoplpsning og inddampes, hvorved der fâs en olie, som oploses i 3 ml vand og hældes pâ en kolonne med 20 ml HP-20. Kolonnen vaskes med vand og elueres med methanol:-vand i forholdet 7:3, og eluatet inddampes til dannelse af 0,42 g af en olie, som oplpses i 5 ml trifluoreddikesyre og omrpres i 15 minutter 15 ved stuetemperatur. Efter afdampning af trifluoreddikesyren pulveri-seres den vundne remanens med ether og filtreres, hvorved der fis et pulver, som oplpses i 2,5 ml IN svovlsyre, og der tilsættes 0,09 g natriumperiodat ved 0°C. Efter omrpring i 10 minutter ved samme temperatur behandles reaktionsblandingen med 0,2 ml 0,5N vandig 20 natriumhydrogensulfitoplosning. Denne oplpsning neutraliseres til pH-værdi 2 med 1,4 ml IM natriumcarbonatoplosning og inddampes, 3 ml methanol tilsættes, og uoplpseligt stof frafiltreres. Filtratet inddampes til dannelse af 0,30 g af en olie, som oploses i en lille mængde vand og hældes pâ en kolonne med 40 ml HP-20. Kolonnen elueres med 25 vand, og eluatet inddampes til dannelse af 140 mg af en olie, som igen hældes pâ en kolonne med 60 ml HP-20 og elueres med vand.

DK 156252 B

221

Eluatet inddampes, og remanensen oplpses i en Mlle mængde vand og lyofiliseres, hvorved der fàs 120 mg D-Lac-L.-Ala-3-D-Asp(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (4) i form af et hvidt pulver.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3270, 1720, 1640 og 1520 cm 5 NMR-Spektrum (DjO): 6 = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,2 - 2,1 (6H, m), 2,6 - 3,0 (2H, m), 3,87 (1H, t, J=6Hz), 3,95 (2H, s), 4,1 - 4,5 (4H, m) ppm.

Eksempel 88·.

1) Trin 1:

L

ÇHg D HgN ÇHCOHNCHgCOOEt

BocHNCHCOHNCHOOMe + (°¾½ L (ch2)2 zhnch2

COOH

(D (2)

CH3 D

-> BocH N C HCOHN CHCOOMe

L (?H2>2 I L

COHNCHCOHNCHgCOOEt ZHNCHg (3) 10 Til en blanding af 1,94 g Boc-L-Ala-D-Glu(OH)OMe (1), 1,67 g L-Lys(e-Z)-GlyOEt (2) og 1,72 g 1-(4-chlorbenzensulfonyloxy)-6-chlor-benzotriazol i 100 ml methylenchlorid sættes 1,01 g N-methyl-morpholin, og blandingen omrores I 2 dage ved stuetemperatur. Re-aktionsblandingen vaskes successivt med 5%’s vandig natriumhydro-15 gencarbonatoplosning, vand, 5%’s saltsyreoplosning og .vand og torres over magnesiumsulfat. Efter afdampning af oplosningsmidlet filtreres

DK 156252B

222 den resulterende krystallinske masse og vaskes med ether, hvorved der fâs 1,34 g Boc-L-Ala-ï-D-Glu(o-OMe)-L-Lys(s-Z)-GlyOEt (3), smeltepunkt 126 - 127°C.

IR-Spektrum (Nujol): v - 3550, 3255, 1750, 1720, 1700, 1680,

lllaX

5 1660, 1650 og 1640 cm'1.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,22 (3H, t, J=7Hz), 1,30 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (9H, s), 1,34 - 1,60 (6H, m), 2,70 (2H, t, J=7Hz), 3,08 (2H, m), 3,68 (3H, s), 3,92 (2H, s), 4,15 (2H, q, J=7Hz), 4,00 - 4,42 (3H, m), 5,07 (2H, s), 7,34 (5H, s) ppm.

10 2) Trin 2: CH,

I 3 D

Forbindelse (3) -> H0N CH COHNCHCOOMe Δ L 1

I L

COHNCHCOHNCH2COOEt ZHNCH2 (4)

Til en oplpsning af 1,20 g Boc-L-Ala-Y-D-Glu(a-OMe)-L-Lys(e-Z)-GiyOEt (3) i en bianding af 20 ml ethylacetat og 5 ml methanol sættes en mættet oplosning af hydrogenchlorid i 20 ml ethylacetat ved 0°C, og blandingen omrpres i 20 minutter ved samme temperatur og i 30 15 minutter ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen inddampes til dannelse af et pulver, som vaskes med ethylacetat og derefter med ether, hvorved der fâs 0,97 g L-Ala-Y-D-Glu(a-OMe)-L-Lys(s-Z)-GlyOEt, HCl (4).

NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,25 (3H, t, J=7Hz), 1,62 (3H, t, J=7Hz), 20 1,34 - 1,84 (8H, m), 2,44 (2H, t, J=6Hz), 3,17 (2H, t, J=6Hz), 3,82 (3H, s), 4,04 (2H, s), 4,12 (2H, q, J=7Hz), 4,17 - 4,68 (3H, m), 5,12 (2H, s), 7,42 (5H, s) ppm.

223

DK 156252 B

3) Trin 3:

?AC fH3 D

Forbindelse (4) -> CH.CHCONHCHCONHCHCOOMe

3D T I

<ÇH2)2 I L

COHNÇHCOHNCHgCOOEt <ÇH2>3 zhnch2 (5)

Til en blanding af 0,90 g L-Ala-Y-D-Glu(a-OMe)-L-Lys(s-Z)-GlyOEt, HCl (4) og 0,17 g triethylamin i 15 ml methylenchlorid sættes en oplosning af 0,26 g acetyl D-lactylchlorid i 5 ml methylenchlorid ved 5 5°C, og blandingen omrores i 1 time ved samme temperatur. Reakti- onsblandingen vaskes successivt med 5%'s vandig natriumhydrogencar-bonatoplpsning, vand, 5%’s saltsyreoplpsning og vand, tprres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fâs en krystallinsk masse, som vaskes med ethylacetat til dannelse af 0,97 g D-Lac(OAc)-10 L-Ala-ï-D-Glu(a-OMe)-L-Lys(s-Z)-GlyOEt (5).

JR-Spektrum (Nujol): vmax = 3400, 1730 - 1640 (bred) cm NMR-Spektrum (D20): δ = 1,17 (3H, t, J=7Hz), 1,45 (3H, d, J=7Hz), 1,34 - 1,67 (8H, m), 2,04 (3H, s), 1,96 - 2,13 (2H, m), 3,07 - 2,87 (2H, m), 3,64 (3H, s), 4,07 (2H, d, J=7Hz), 4,25 (2H, q, J=7Hz), 15 3,57 - 4,34 (3H, m), 5,00 (2H, s), 7,34 (5H, s), 8,25 - 7,84 (4H, m) ppm.

4) Trin 4:

0H SH3 D

Forbindelse (5)-> CH„ 6hCOHNCHCOHNCHCOOH

T »

Wî I L

COHN CHCOHN CH„COOH

i 2 (¾ H2NCH2 (6)

DK 156252 B

224

Til en oplpsning af 0,90 g D-Lac(OAc)-L-AIa-2T-D-Glu-L-Lys(s-Z)-

GlyOEt (5) i 15 ml methanol sættes 30 ml 1N natriumhydroxidoplpsning ved 5°C, og blandingen omrores i 4 timer ved samme temperatur og natten over ved stuetemperatur. Methanolet afdampes, og den resul- 5 terende vandige fase indstilles pi pH-værdi 5,5 med fortyndet salt- syreoplesning og vaskes med ethylacetat. Den vandige fase syrnes til pH-værdi 1 med fortyndet saltsyreoplpsning og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med mættet vandig natriumchloridop- losning, torres over magnesiumsulfat og inddampes til dannelse af 10 0,50 g af et amorft fast stof. Dette faste stof oploses i 15 ml methanol og hydrogeneres over 0,10 g 5%'s palladium/kul. Efter fjernelse af katalysatoren ved filtrering inddampes filtratet, og den vundne rema- nens pulveriseres med acetone, hvorved der fis 0,25 g D-Lac-L-

Ala-2r-D-Glu(e-OH)-L-Lys-GlyOH i form af et pulver.

15 IR-Spektrum (Nujol): v = 3350, 1710 og 1670-1640 cm ma x NMR-Spektrum (D^+NaHCC^) : 6 = 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,44 (3H, d, J=7Hz), 1,34 - 2,00 (8H, m), 1,84 - 2,25 (2H, m), 3,04 (2H, t, J=7Hz), 3,79 (2H, s), 4,17 - 4,50 (3H, m) ppm.

Eksempel 89.

1) Trin 1:

L

CH3 d H2NCHCOHNCH2COOEt

BocH N C HCOHN CHCOOMe + (CH2)3 L BocHNCH2

COOH

(D (2) 225

DK 156252 B

CH3 D

-> BocHNCHCOHNCHCOOMe L Wi

I L

COHN CHCOHN CHcCOOEt I 2 (VH2}3

BocHNCHg (3)

Til en blanding af 1,33 g Boc-L-Ala-D-Glu(OH)OMe (1), 2,02 g L-LysU-Boc)-GlyOEt (2) og 1,38 g l-(4-chlorbenzensulfonyloxy)-6-chlorbenzotriazol i 50 ml methylenchlorid sættes 0,808 g N-methyl-morphoiin ved 0°C, og blandingen omrpres ved denne temperatur i 30 5 minutter og i 2 dage ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen vaskes successivt med 5%'s vandig natriumhydrogencarbonatoplpsning, vand, 5%'s saltsyreoplpsning og vand, torres over magnesiumsulfat og ind-dampes, hvorved der fis en krystallinsk masse, som vaskes med ether til dannelse af 1,96 g Boc-L-Ala-ï-D-Glu(a-OMe)-L-Lys(e-Boc)-GlyOEt 10 (3), smeltepunkt 163 - 164°C.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3550, 3275, 1740, 1690 og 1650 cm"1. NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,17 (3H, t, J=7Hz), 1,32 (3H, d, J=7Hz), 1,35 (18H, s), 1,42 - 1,54 (8H, m), 2,08 - 2,18 (2H, m), 3,25 - 2,82 (2H, m), 3,62 (3H, s), 3,80 (2H, d, J=6Hz), 15 4,07 (2H, q, J=7Hz), 3,80 - 4,07 (3H, m), 6,58 - 6,77 (2H, m), 7,83 - 8,25 (3H, m) ppm.

2) Trin 2: CH„ n

I O U

Forbindelse (3)-> HgN CH COHNÇHCOOH

L <?H2^2 I L

COHNCHCOHNCHgCOOH

(CH2>3 H2NCH2 (4) 226

DK 156252 B

Til en opl0sning af 0,50 g Boc-L-Ala-Y-D-GIu(a-OMe)-L-Lys(s-Boc)-GlyOEt (3) i 5 ml methanol sættes 2 ml ΊΝ natriumhydroxidoplpsning ved 0°C, og blandingen omrpres i 1 time ved samme temperatur og natten over ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen inddampes, og 5 remanensen oplpses i vand og vaskes med ethylacetat. Den vandige fase syrnes med fortyndet saltsyre til pH-vaerdi 2 og ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand, tprres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fis 0,37 g af en olie. Denne olie oplpses i 10 ml ethylacetat, og ved 0°C tilsættes 5 ml af en mættet oplpsning af 10 hydrogenchlorid i ethylacetat. Blandingen omrpres i 10 minutter ved samme femperatur og i 30 minutter ved stuetemperatur. Det vundne bundfald filtreres og vaskes med ethylacetat, hvorved der fis 0,17 g L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-L-Lys-GlyOH (4) i form af et pulver.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3450, 3200, 1730, 1680 og 1660 - 1640

ΓΠ3 X

-1 15 cm .

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,65 (3H, d, J=7Hz), 1,92 - 1,42 (8H, m), 2,34 (2H, t, J=6Hz), 2,64 (2H, t, J=6Hz), 3,95 (2H, s), 4,10 - 4,67 (3H, m) ppm.

Eksempel 90.

20 1) Trin 1: OAC ' CH3 d CH„ lüHCOCl + Η,,Ν AhCOHNCHCOOB zl ->

Δ t I

<?H2>3

COOH

(D (2) OAc CHS d

CHnCHCOHN CHCOHN CHCOOBzl D L

COOH

(3)

DK 156252B

227 D-Lac(OAc)-L-Ala-D-Aad(OH)OBzl (3) fremstilles ud fra O-acetyl-D-lactylchlorid (1) og L-Ala-D-GluOBzI (2) pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 1.

IR-Spektrum (CHCL): v = 3400, 3300, 1730, 1710 og 1665 cm-1.

Ο ΓΠ3 X

5 NMR-Spektrum (CDCI3): δ - 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,41 (3H, d, J=7Hz), 1,4 - 2,0 (4H, m), 2,08 (3H, s), 2,2 - 2,4 (2H, m), 4,4 - 4.7 (2H, m), 4,9 - 5,2 (1H, m), 5,10 (2H, s), 6,96 (1H, d, J=8Hz), 7,15 (1H, d, J=8Hz), 7,20 (5H, s), 7,4 - 8,2 (1H, bred s) ppm.

2) Trin 2:

L

Forbindelse (3) -> CH COHNCHgCOOH

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4)

?AC fH3 D

CH,, CH COHN CHCOHN CH COOB zl D L Ψ*

I L

COHNCHCOHNCHgCOOH

(<ΓΗ2}3

BocHNCHCOHNNHBoc (5) 10 D-Lac(OAc)-L-Ala-6-D-Aad(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NH- NHBoc-(L)-GlyOH (5) fremstilles ud fra D-Lac(OAc)-L-Ala-D-Aad-(OH)-OBzl (3) og Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (4) pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 65. Smeltepunkt 108 - 110°C.

15 IR-Spektrum (Nujol): v = 3260, 1725, 1670, 1650, 1630, 1540 og

ΓΠα X

1520 cm ^.

NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,4 - 2,0 (13H, m), 1,44 (18H, s), 2,10 (3H, s), 2,1 - 2,5 (2H, m), 3,90 (2H, s), 3.8 - 4,2 (1H, m), 4,3 - 4,6 (3H, m), 4,7 - 5,1 (1H, m), 5,12 (2H, 20 s), 7,30 (5H, s) ppm.

3) Trin 3: 228

DK 156252 B

OH CH, n i I 3 D

Forbindelse (5) -> CH, CH COHNCHCOHNCHCOOH

D L «3

I L

COHN CHCOHN CH„COOH I 2

(fH2}3 H0NCHCOOH Δ D

(6) D-Lac-L-Ala-6-D-Aad(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (6) fremstilles ud fra D-Lac(OAc)“L-AIa-6-D-Aad-(o-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (5) pè i det væsentlîge samme mâde som 5 beskrevet i trin 2 i eksempel 87.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3270, 1720, 1620 og 1530 cm"1.

fïiâX

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,43 (3H, d, J=7Hz), 1,5 - 2,1 (10H, m), 2,2 - 2,5 (2H, m), 3,84 (1H, t, J=6Hz), 3,96 (2H, s), 4,1 - 4,5 (4H, m) ppm.

10 Eksempel 91.

L OAc CH3

H2NCHCOHNCH2COOH + CH3CHCONHCHCONH(CH2)3COOH

(çh2)3 d l

BocHNCHCOHNNHBoc

D

OAc CH3 l

-> CH0CHCONHCHCONH (CH0), COHNCHCONHCH, COOH

4-p. T Δ ό [ Δ ^H2}3

BocHN CHCONHNHBoc D

(3)

DK 156252 B

229 D-Lac(OAc)-L-AIa-y-Abu-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 65.

NMR-Spektrum (CDCLj): δ = 1,2 - 2,0 (4H, m), 1,42 (18H, s), 2,0 -5 2,5 (2H, m), 2,15 (3H, s), 3,1 - 3,4 (2H, m), 3,8 - 4,1 (2H, m), 4,3 - 4,7 ( 1H, m), 4,9 - 5,2 (1H, m), 5,5 - 6,0 (2H, m), 7,3 - 7,6 (2H, m), 7,6 - 8,1 (2H, m) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

OH CHg L

CH„(Î?HCOHN CHCOHN ( CH0)«COHN CHCOHNCH-COOH 3n γ 2 o i *

(<rH2>3 H0NCHCOOH * D

(4) D-Lac(OH)-L-Ala-ï-Abu-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (4) fremstilles pi i 10 det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 87.

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,39 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,5 - 2,1 (8H, m), 2,33 (2H, t, J=7Hz), 3,21 (2H, t, J=7Hz), 3,79 (1H, t, J=7Hz), 3,95 (2H, s), 4,1 - 4,5 (4H, m) ppm.

De nedenfor anfprte forbindelser fremstilles pâ i det væsentlige samme 15 mâde som beskrevet i henholdsvis trin 1 og trin 2 i eksempel 1.

Eksempel 92.

1) Trin 1 :

Thienylacetyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid _dg): δ = 1,36 (18H, s), 1,00 - 2,33 20 (10H, m), 3,66 (2H, s), 3,83 - 4,33 (3H, m), 6,87 (2H, m), 7,27 (1H, m), 7,83 - 8,66 (3H, m), 9,02 (2H, bred s) ppm.

2) Trin 2: 230

DK 156252 B

Thienylacetyl-ï-D-Glu (a-OH) - (L) -mesoDAP.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,20 - 2,60 (10H, m), 3,78 OH, t, J=7Hz), 3,86 (2H, s), 4,28 OH, t, J=7Hz), 7,04 (2H, m), 7,32 (2H, 5 m) ppm.

Eksempel 93.

1) Trin 1:

D L

CftHcOCH0CONHCHCOOBzl + HoNCHC00H

O D 2 | 2 | <PV2 <ÇH2>3 COOH BocHN CHCONHNHBoc

D

(1) (2)

D

-> CeHc O CH„CONH CHCOOBzl 6 5 2 i W2

I L

CONHCHCOOH

(fH2}3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3) 742 mg phenoxyacetyl-D-Glu(a-OBzl) (1) oplpses i methylenchlorid, og der tilsaettes 202 mg N-methylmorpholin. Oplpsningen afkoles i tpris/-10 carbontetrachlorid, og der tilsaettes 274 mg chlormyresyre-isobutyles-ter. Blandingen lades reagere i 60 minutter ved samme temperatur.

Til den vundne reaktionsblanding sættes en oplosning af 808 mg Boc-(D)mesoDAP-(D)-NHNHBoc (2) i en btanding af 20 ml methylen-chforîd, 2 ml dimethylformamid og 2 ml bis(trimethylsilyl)acetamid.

DK 156252 B

231

Reaktionsblandingen omrpres i 2 timer og inddampes i vakuum, hvor-ved der fis en olieagtig remanens, som oplpses i ethylacetat, vaskes med IN saltsyreopl0sning og saltvand og tprres over magnesiumsulfat.

Ved afdampning af opl0sningsmidlet fis et hvidt skum, som pulveri-5 seres med isopropylether, hvorved der fis 1,21 g phenoxyacetyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (3).

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,42 (18H, s), 3,9 - 4,6 (3H, m), 4,54 (2H, s), 5,17 (2H, s), 6,85 - 7,30 (5H, m), 7,35 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CcHc0CHoC0NHCHC00H

oo i | (ch2)2

L

CONHCHCOOH

BocHN CHCONHNHBoc D

(4) 10 1,13 g phenoxyacetyl-3r-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)- NHNHBoc (3) opl0ses i 20 ml methanol, og ved stuetemperatur tilsæt-tes 3,0 ml IN natriumhydroxidopl0sning, Reaktionsblandingen omrores i 4 timer ved samme temperatur og inddampes under reduceret tryk, hvorved der fis en olieagtig remanens, som opl0ses i en blandîng af 15 60 ml ethylacetat, 10 ml vand og 4 ml IN saltsyreopl0sning. Den organiske fase vaskes med saltvand, tprres over magnesiumsulfat og inddampes i vakuum, hvorved der fis 670 mg phenoxyacetyl-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (4).

NMR-Spektrum (CD-jOD): δ = 1,43 (18H, s), 4,00 - 4,70 (3H, m), 20 4,60 (2H, s), 7,24 - 7,50 (5H, m) ppm.

DK 156252 B

232 3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CgHgOCHgCONHÇHCOOH

(CH2)2

L

CONHCHCOOH

(fH2}3 h9nchcooh

* D

(5) 615 mg phenoxyacetyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (4) oplpses i 3 ml trifluoreddikesyre, og oplpsningen holdes i 1 time ved stuetemperatur. Oplpsningsmidlet afdestilleres til dannelse 5 af en olieagtig pasta, som pulveriseres med ether til dannelse af et hvidt pulver. Pulveret oplpses i en blanding af 25 ml vand og IN svovlsyre, og oplpsningen afkples i isbad. Til oplpsningen sættes 300 mg natriumperiodat, og blandingen omrpres i 2 timer ved 0°C. Blan-dingen behandles med vandig natriumbisulfitoplpsning og hældes 10 derefter gennem en kolonne, der er pakket med en makroporps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20. Elueringen udfpres med en blanding af vand og methanol i forholdet 7:3, og eluatet inddampes î vakuum til dannelse af et hvidt pulver, som oplpses i vand og lyofi-liseres, hvorved der fâs 150 mg phenoxyacetyl-y-D-Glu(o-OH)-(L)-15 mesoDAP (5).

NMR-Spektrum (D20+NaHCC>3) : δ = 1,25 - 2,35 (10H, m), 3,72 (1H, t, J=6Hz), 4,00 - 4,35 (2H, m), 4,63 (2H, s), 7,0 - 7,5 (5H, m) ppm.

Eksempel 94.

233

DK 156252 B

1) Trin 1: D L ?H3

CH„ (CH_)_CONHCHCOOBzl + H0NCHCONHCHCOOH

ύ * b j Z I n <ch2)2 (ch2)3 ioOH BocHNCHCONHNHBoc

D

(D (2)

D

-> CH3 ( CH2)6 CONH CHCOOBzl Wî I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

(?H2}3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3) n-Octanoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-(D)-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som 5 beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelserne (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg+D20): δ = 0,83 (3H, t, J=6Hz), 1,37 (18H, s), 3,80 - 4,50 (4H, m), 5,08 (2H, s), 7,33 (5H, s), 7,66 - 8,33 (6H, m), 9,20 (1H, bred s) ppm.

DK 156252 B

234 2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)6CONHCHCOOH

4H2}2 I L fa

CONHCHCONHCHCOOH

I D (CH2)3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(4) n-Octanoyl-ï-D-Glu(-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-(D)-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som be-skrevet i trin 2 i eksempel 93 ud fra forbindelse (3).

5 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg+DjO): δ = 0,87 (3H, t, J=6Hz), 1,35 (18H, s), 4,00 - 4,66 (4H, m), 7,66 - 8,33 (6H, m), 9,55 (2H, bred s) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CH0( CH0)fi CONH CHCOOH

o a D | (<fH2)2 I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH • D

(fH2}3 H«NCHCOOH z D

C5) n-Octanoyl-Jf-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) fremstilles 10 pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 93 ud fra forbindelse (4).

NMR-Spektrum (D20): δ = 0,88 (3H, t, J=7Hz), 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,00 - 2,50 (22H, m), 3,80 (1H, t, J=7Hz), 4,00 - 4,50 (3H, m) ppm.

Eksempel 95.

235

DK 156252 B

1) Trjn 1:

D L

CLHcNH COHNCHCOOBzI + H„NCHCOOH

6 5 I 2 | <fH2}2 (fH2}3 COOH BocHNCHCONHNHBoc

D

(1) (2) 'i

D

-> CcHcNHCONHCHCOOBzl

6 5 I

<w2

I L

CONHCHCOOH

(çh2)3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3)

Phenylcarbamoyl-y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)“mesoDAP-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 5 i eksempel 93 ud fra forbindelserne (1) og (2).

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,41 (18H, s), 3,90 - 4,62 (3H, m), 5,19 (2H, s), 6,95 - 7,52 (10H, m) ppm. .

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CgHgNHCOHNCHCOOH

w2

I L

CONHCHCOOH

(çh2)3

BocHN CHCOHNNHBoc D

(4)

DK 156252B

236

Pheny!carbamoyI-îr-D-Glu(o-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (4) fremstilies pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 93 ud fra forbindelse (3).

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,48 (18H, s), 3,95 - 4,55 (3H, m), 5 7,32 (5H, s) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> C„HcNHCOHNCHCOOH

6 5 I

ÎJV2

CONHCHCOOH

(K>3

HgNCHCOOH

(5)

PhenylcarbamoyI-3f-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (5) fremstilies pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 93 ud fra forbindelse (4).

10 NMR-Spektrum (D20+NaOD): 6 = 1,1 - 2,6 (10H, m), 3,16 (1H, m), 4,00 - 4,20 (2H, m), 7,00 - 7,45 (5H, m) ppm.

Eksempel 96.

1) Trin 1:

D L

CH3(CH2)3CHCOHNCHCOOBzl + HNCHCOOH

CHsH <W2 COOH BocHNCHCONHNHBoc

D

(D (2)

DK 156252B

237

D

-> CH„(CH0)o CHCOHNCHCOOBzl CH3CH2 (ÇH2)2

I L

COHNCHCOOH

(9H2}3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(3) a-EthyIhexanoyl-îf-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 0,86 (6H, m), 1,45 (18H, s), 3,90 -5 4,30 (3H, m), 5,16 (2H, s), 7,36 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CHg(CH2)3CHCOHNCHCOOH

ch3ch2 (ch2)2

I L

COHNCHCOOH

(fH2}3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4) a-Ethylhexanoyl-ï-D-G!u(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (4) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 93 ud fra forbindelse (3).

10 NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 0,88 (6H, m), 1,43 (18H, s), 4,02 (1H, m), 4,36 (2H, m) ppm.

DK 156252 B

238 3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CH3(CH2)3ÇHCOHNÇHCOOH

ch3ch2 (ch2)2

L

COHNCHCOOH

4Η2}3

H0NCHCOOH ù D

(5) a-Ethylhexanoy!-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mide soin beskrevet i trin 3 i eksempel 93 ud fra forbindelse (4).

5 NMR-Spektrum (D20): δ = 0,83 (6H, m), 1,08 - 2,56 (19H, m), 3,82 (1H, t, J=7Hz), 4,23 - 4,48 (2H, m) ppm.

Eksempel 97.

1) Trin 1:

D D

HgNÇHCOOH -> γ >-CONHCHCOOH

(ch2)2 (ch2)2

Il II

CONHCHCOOH CONHCHCOOH

(çh2)3 (çh2)3

BocHN CHCONHNHBoc BocHN CHCONHNHBoc

D D

(D (2)

Til en oplosning af 800 mg y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-10 (D)-NHNHBoc (1) i en blanding af 8 ml vand og 8 ml dioxan sættes 330 mg N-hydroxysuccinylnicotinat og 364 mg triethylamin. Reak-tionsblandingen lades henstâ i 20 timer ved stuetemperatur og ind-dampes derefter i vakuum. Til remanensen sættes 3 ml IN sait-

DK 156252B

239 syreoplpsning, og blandingen hældes gennem en kolonne, der er pakket med 120 ml af en makroporps, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20.

Den fraktion, som elueres med en blanding af vand og methanol i 5 forholdet 2:3, inddampes i vakuum, hvorved der fis nicotinoyl-îf-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (2).

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,44 (18H, s), 3,9 - 4,6 (3H, m), 7,59 (1H, d.d., J=8 & 5Hz), 8,35 (1H, m), 8,75 (1H, d, J=5Hz), 9,11 (1H, m) ppm. .....- .....

10 2) Trin 2:

Forbindelse (2) -> f^VcONHCHC09H

UuJ (CH2)2

I L CONHCHCOgH

4H2}3

H0NCHCO„H Δ D

(3)

Nicotinoyl-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (3) fremstilles pâ i det væsent-lige samme mlde som beskrevet î trin 2 i eksempel 93 ud fra forbindelse (2).

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,25 - 2,60 (10H, m), 3,87 OH, t, 15 Js6Hz), 4,23 (1H, m), 4,51 (1H, m), 7,98 (1H, d.d., J=6 & 8Hz), 8/71 OH, d, J=8Hz), .8,88 (1H, d, J=6Hz), 9,10 (1H, s) ppm.

DK 156252B

Eksempel 98.

240 1) Trin 1:

PAc D L

CHgCHCONHCHCOOBzl + H^^HCOOH

° <^H2}2 (fH2}3 toOH BocHNCHCONHNHBoc

D

(1) (2)

?AC D

-> CHgCHCONHCHCOOBzl 3D · <CH2>2

I L

CONHCHCOOH

4H2}3 (3) BocHN CHCONHNHBoc D-Lac(OAc)-îf-D-Glu(a-OBzI)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i 5 eksempel 58 ud fra forbindelse (1) og forbindelse (2).

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3280, 1730, 1660 og 1530 cm-1.

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,38 (18H, s), 2,05 (3H, s), 3,85 - 4,60 (3H, m) ppm.

2) Trin 2:

?H D

Forbindelse (3) -> CH.CHCONHCHCOOH

3D 1

I L

CONHCHCOOH

(ÇHps

BocHNCHCONHNHBoc

D

(4)

DK 156252 B

241

Til en opl0sning af 1,14 g D-Lac(OAc)-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (4) i 15 ml methanol sættes 6,2 ml IN natriumhydroxidoplosning. Reaktionsblandingen lades henstâ i 3,5 timer ved stuetemperatur, og der tilsættes 6,2 ml 1N saltsyreoplps-5 ning. Blandingen inddampes i vakuum, og remanensen hældes pl en kolonne, som er pakket med 100 ml af en makroporps ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20, og elueres med en blanding af vand og methanol i forhoidet 1:1. De fraktioner, som indeholder den pnskede forbindelse (4), isoleres og inddampes i vakuum, hvorved der fâs 510 10 mg D-Lac(OH)-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (4).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1720 (sh), 1650 og 1520 cm max NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 1,45 (18H, s), 3,97 - 4,70 (4H, m) PPm.

15 3) Trin 3:

?H O

Forbindelse (4) -> CH„ CH CONHCHCOOH

<?H2>2 I L

CONHCHCOOH

ΦΗ2}3

H0NCHCOOH Z D

(5) D-Lac(OH)-y-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP (5) fremstilles pi I det væ-sentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 58 ud fra forbindelse (4).

IR-Spektrum (Nujol): vmgx - 3250 (sh), 1720, 1650 og 1530 cm 20 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,25 - 2,50 (10H, m), 1,36 (3H, d, J=7Hz), 3,91 (1H, t, J=7Hz), 4,28 - 4,45 (3H, m) ppm.

DK 156252B

Eksempel 99.

242 1) Trin 1: D L <?Η3

CH„(CH0)_ CHCOHNCHCOOBzl + H0NCHCOHNCHCOOH

3 2 3( , 2 | n

ch3ch2 (ôh2)2 (çh2)3 U

COOH BocHNCHCOHNNHBoc

D

(D (2)

D

CHQ(CH0)n CHCOHNCHCOOBzl ch33Ôh2 cch2)2 L ÇH3 COHNCHCOHNCHCOOH I n (<fH2}3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(3) a-Ethylhexanoyl-ï-D-Glu(o-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP*(D)-NHNH-Boc-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som 5 beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dîmethylsulfoxid -dg-^O): 6 = 0,80 - 1,00 (6H, m), 1,40 (18H, s), 1,00 - 2,33 (22H, m), 4,00 - 4,50 (4H, m), 5,10 (2H, s), 7,33 (5H, s), 7,66 - 8,33 (6H, m), 9,50 (1H, bred s) ppm.

243

DK 156252 B

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CHgCCHg^ÇHCOHNÇHCOOH

CH3CH2 (ÇH2)2 I L <fH3 COHN CH COHN CH COOH I n (VH2}3

BocHN CHCOHNNHBoc D

(4) a-Ethylhexanoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-D-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 93 ud fra forbindelse (3).

5 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg+D20): δ = 0,83 - 1,00 (6H, m), 1,43 (18H, s), 1,00 - 2,33 (22H, m), 3,50 - 4,66 (4H, m), 7,66 - 8,33 (6H, m), 9,53 (2H, bred s) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CH,(CH„)„CHCOHNCHCOOH

ch3ch2 <ch2)2 L CH3

COHN CHCOHN (ÎîHCOOH

(CH2)3 d

H„NCHCOOH Z D

(5) a-Ethylhexanoyl-2f-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) frem-10 stilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 93 ud fra forbindelse (4).

NMR-Spektrum (D20): δ = 0,84 (6H, t, J=7Hz), 1,24 - 2,30 (19H, m), 1,36 (3H, t, J=7Hz), 3,82 (1H, t, J=6Hz), 4,25 - 4,44 (3H, m) ppm.

Eksempel 100.

DK 156252B

244 1) Trin 1: D L <rH3 CH„(CH0).COHNCHCOOBzl + H0NCHCOHNCHCOOH-> à ύ ‘i l & | T-| ^H2}2 (fH2}3 COOH BocHN CHCOHNNHBoc

D

(1) (2)

D

CH3(CH2)4 COHNÇHCOOBzl W2 I L ?H3

COHN CHCOHN CHCOOH ({^3)3 D

BocHNCHCOHNNHBoe

D

(3)

Hexanoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet 5 i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg+D20): δ = 0,83 (3H, t, J=7Hz), 1,44 (18H, s), 3,83 - 4,50 (4H, m), 5,13 (2H, s), 7,33 (5H, s), 7,73 - 8,73 (5H, m), 9,56 (1H, bred s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2>4COHNCHCOOH

ή*2>2 I L CHs

COHNCHCOHNCHCOOH 1 D

(0¾) 3 U

BocHNCHCOHNNHBoe

D

(4)

DK 156252 B

245

Hexanoyl-Y-D-Glu(ct-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde sorti beskrevet i trin 2 i eksempel 93.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg+D20): 6 = 0,86 (3H, t, J=7Hz), 5 1,37 (18H, s), 3,83 - 4,33 (4H, m), 7,66 - 8,77 (6H, rn) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CH3(CH2)4COHNCHCOOH

Wî I L ?H3

COHN CHCOHN CHCOOH D

(fH2}3

HnNCHCOOH

Δ D

(5)

Hexanoyl-ï-D-Glu(e-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 93 ud fra forbindelse (4).

10 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg+D20): δ = 0,80 (3H, t, J=7Hz), 1,38 (5H, d, J=7Hz), 1,28 - 2,40 (18H, m), 3,75 (1H, t, J=7Hz), 4,20 - 4,35 (3H, m) ppm.

Eksempel 101.

1) Trin 1: D L f«3

C _HC OCH0COHN CHCOOBzl + H_NÇHCOHNCHCOOH

6 5 Z | *· | ta (CH2)2 (çh2)3 COOH BocHNCHCOHNNHBoc

D

(1) (2)

DK 156252B

246

D

-> c6h5och2cohnchcoobzi (ch2)2 L ?H3

COHN CHCOHN CHCOOH

I D

(CH2}3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(3)

Phenoxyacetyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg+D20): δ = 1,38 (18H, s), 3,66 -5 4,50 (4H, m), 4,53 (2H, s), 5,15 (2H, s), 6,87 - 7,33 (5H, m), 7,37 (5H, s), 7,85 - 8,60 (6H, m), 9,57 (1H, bred s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CgHgOCHgCOHNCHCOOH

(ch2)2 L fH3

COHN CHCOHN CHCOOH D

CÇH2>3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4)

Phenoxyacetyl-lf-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AIaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mide som 10 beskrevet i trin 2 i eksempel 93 ud fra forbindelse (3).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg+D20): 6 = 1,40 (18H, s), 3,73 - 4,50 (4H, m), 4,53 (2H, s), 6,90 - 7,43 (5H, m), 7,73 - 8,66 (6H, m), 9,50 (2H, bred s) ppm.

3) Trin 3: 247

DK 156252 B

D

Forbindelse (4) -> CcHcOCHnCOHNCHCOOH

b b 2 I

W2 I L ÇH3

COHN CH COHN CH COOH D

...... <FVs

HJïCHCOOH 1 D

(5)

Phenoxyacetyl-2f-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) frem-stilles pâ i det væsentlige samme made som beskrevet i trin 3 i ek-sempel 93 ud fra forbindelse (4).

5 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,39 (3H, d, J=7Hz), 1,60 - 2,50 (10H, m), 3,85 (1H, t, J=7Hz), 4,00 - 4,50 (3H, m), 4,64 (2H, s), 6,80 - 7,50 (5H, m) ppm.

Eksempel 102.

1) Trin 1 : D L 9H3 C6H5HNCOHNCHCOOBz1 + HnNCHCOHNCHCOOH->

D

(?H2>2 (ÇH2)3 COOH BocHN CHCOHNNHBoc

D

(i) (2)

DK 156252B

248

D

-> CcHc NH COHNCHCOOBzl

6 5 I

(ch2)2 L ^3

COHNCHCOH NCHCOOH D

^H2>3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(3)

Phenylcarbamoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNK-Boc-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pl i det væsentlige samme mâde som beskrevet î trin 1 i eksempei 93 ud fra forbindelse (1) og forbindelse (2).

5 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg^^O): δ = 1,37 (18H, s), 3,83 - 4,50 (4H, m), 5,13 (2H, s), 7,33 (5H, s), 6,50 - 7,20 (5H, m), 7,33 - 8,50 (7H, m), 9,50 (1H, bred s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CgH^NH COHNÇHCOOH

(ch2)2

L ?H3 COHN CHCOHN CHCOOH D

(Ch2)3

BocHN tHCONHNHBoc D

Phenylcarbamoyl-ï-D-GIu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-10 Boc-(L)-D-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mlde som beskrevet i trin 2 i eksempei 93 ud fra forbindelse (3), NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg-^O): δ =1,42 (18H, s), 3,83 - 4,20 (4H, m), 6,40 - 7,50 (5H, m), 7,66 - 8,60 (7H, m), 9,50 (2H, bred s) ppm.

3) Trin 3:

DK 156252 B

249

D

Forbindelse (4) -> CcHcNHCOHNCHCOOH

6 5 I

w2 I L fH3

COHNCHCOHNCHCOOH

I D

(fH2}3 H,NCHCOOH z D

(5)

Phenylcarbamoyl-y-D-Glu(o-OH) -(L)-mesoDAP- (L) -D-AlaOH (5) fremstilles pâ ί det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 93.

5 NMR-Spektrum (D20): δ * 1,40 (5H, d, J=7Hz), 1,30 - 2,50 (10H, m), 3,76 (1H, t, J=7Hz), 4,20 - 4,50 (3H, m), 7,00 - 7,70 (5H, m) ppm.

Eksempel 103.

1) Trin 1:

L °Ac D

H9NCHCOHNCHCOOH + CKLCHCOHNCHCOOBzl 1 | D _> (ÇH2)3 (ch2)2

BocHNCHCOHNNHBoc COOH

D

(2) (1) 250

DK 156252 B

OAc D

-> CH„ CH CO HNCHCOOB2I

3D 1 <CH2>2 L <®3

COHN CHCOHN CHCOOH D

CÇh2)3

BocHN CHCOHNNHBoc D

(3) D-Lac(OAc)-r-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg+D20): δ = 1,40 (18H, s), 2,06 5 (3H, s), 1,10 - 2,30 (16H, m), 3,66 - 4,57 (5H, m), 5,13 (2H, s), 7,37 (5H, s), 7,66 - 8,38 (6H, m), 9,56 (1H, bred s) ppm.

2) Trin 2:

?H D

Forbindelse (3) -> CH0CHCOHNCHCOOH

SD 1 <CH2>2 L f*3

COHN CHCOHN CHCOOH D

(ch2)3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4) D-Lac(OH)-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet 10 i trin 2 i eksempel 93 ud fra forbindelse (3).

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,40 (9H, s), 1,43 (9H, s), 1,33 - 2,50 (16H, m), 3,83 - 4,66 (5H, m) ppm.

251

DK 156252 B

3) Trin 3:

?H D

Forbindelse (4) -> CH„ CH COHNCHCOOH

“ <K>2 L ?H3

COHN CHCOHN CH COOH ........................ D

iÇVs

H0NCHCOOH 1 D

(5) D-Lac(OH)-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) fremstilles pi i det væsentlige samme rnide som beskrevet i trin 3 i eksempel 93 ud fra forbindelse (4).

5 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,32 (3H, d, J=7Hz), 1,33 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,40 (1 OH, m), 3,82 (1H, t, J=7Hz), 4,20 - 4,44 (4H, m) ppm.

Eksempel 104.

1) Trin 1: f»3 D L FH3

ZNH CHCOHN CHCOOBzl + H0NCHCOHN CHCOOH

T I 2 | d (°Η2)2 <CH2}3

COOSu TfaHNiHCOOH

D

(D (2)

f»3 D

-> ZNH CHCO HNCHCOOBzl L <CH2>2 L ^3 COHN CHCOHN CHCOOH l n (?Η2}3

TfaHN CHCOOH (3) D

DK 156252B

252 Z-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Tfa-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme.mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 31 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,23 (6H, d, J=7Hz), 5 1,20 - 2,30 (10H, m), 4,0 - 4,63 (5H, m), 5,07 (2H, s), 5,15 (2H, s), 7,40 (5H, s), 7,73 - 8,50 (3H, m), 9,63 (1H, d, J=7Hz) ppm.

2) Trin 2: Çh3 d

Forbindelse (3) -> HLNCHCOHNCHCOO H

t i

L

COHNCHCOHNCHCOOH

D

(ÎH2}3

TfaHNCHCOOH

D

(4) L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Tfa-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i ek-10 sempel 31 ud fra forbindelse (3).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,43 (3H, d, J=7Hz), 1,60 (3H, d, J=7Hz), 1,40 - 2,70 (10H, m), 4,00 - 4,50 (5H, m) ppm.

3) Trin 3:

9H3 ?H3 f3 D

H3C 5H3 1 ^CONHCHCONHCHCOOH

Tl I

Ml (ίΗ2>2 Γ3

I L I

CONHCHCONHCHCOOH

I D

Forbindelse (4) -> (CH2)3

TfaHNCHCOOH

D

(5)

DK 156252B

253 810 mg L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Tfa-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (4) oploses i en blanding af 30 ml methylenchlorid, 3 ml methanol og 594 mg triethylamin. Til denne oplosning sættes 584 mg retinsyre-N-hy-droxysuccinimidester, og blandingen omsættes i 2 dage ved stuetem-5 peratur. 150 mg triethylamin sættes til reaktionsblandingen og lades reagere i yderligere 1 dag. Den resulterende blanding inddampes, og den olieagtige remanens ekstraheres med ethylacetat efter syrning med IN svovlsyre. Den organiske fase vaskes med vand, torres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fâs 1,10 g af en gui 10 skumagtig remanens, som vaskes grundigt med en blanding af ethyl-ether og isopropylether, hvorved der fis 940 mg retinoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Tfa-(D)-mesoDAP-(L)-AlaOH (5).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 1,00 (6H, s), 1,03 (3H, d, J=7Hz), 1,23 (3H, d, J=7Hz), 1,0 - 2,40 (16H, m), 1,66 (3H, s), 15 1,93 (3H, s), 2,25 (3H, s), 4,0 - 4,50 (5H, m), 5,83 - 6,50 (5H, m), 6,70 - 7,30 (1H, m), 7,70 - 8,40 (4H, m) ppm.

A) Tcin 4: CH ch {*3 d

3 I I . CONHCHCONHCHCOOH

‘ f.·, r,

J CONHCHCONHCHCOOH

I D

Forbindelse (5) —:-> (ÇH9)-,

(6) I J

H^CHCOOH

0,90 g retinoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Tfa-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) oploses i en blanding af 15 ml vand og 4,50 ml 1N natri-20 umhydroxidoplosning. Den resulterende oplosning holdes i 2 timer ved stuetemperatur og syrnes derefter med 1N svovlsyre. Blandingen ekstraheres med 100 ml n-butanol, og den organiske fase vaskes tre gange med 20 ml vand og inddampes, hvorved der fâs en gui fast remanens, som vaskes grundigt med ethylether, hvorved der fâs 25 retinoyl-L-Ala-ï-D-Glu(e-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-AlaOH (6).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,06 (6H, s), 1,20 (3H, d, J=7Hz), 1,30 (3H, d, J=7Hz), 1,73 (3H, s), 2,00 (3H, s), 2,30 (3H, s), 1,00 - 2,50 (16H, m), 3,30 - 3,70 (1H, m), 4,00 - 4,66 (4H, m),

DK 156252 B

254 5,86 - 6,50 (5H, m), 6,70 - 7,30 (1H, m), 7,70 - 8,30 (4H, m) ppm.

Eksempel 105.

1) Trin 1 :

CH3 D L

ZNHCHCONHCHCOOBzl + H^CHCONHCHgCOOH

L 4H2>2 4¾

COOSu TfaHNCHCOOH

D

(1) (2) Çh3 d -> ZNHCHCONHCHCOOBzl

L (“A

I L

COHNCHCONHCH0COOH f 2 (fH2}3

TfaHNCHCOOH

D

(3) Z-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Tfa-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (3) frem-5 stilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 104 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 1,23 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,50 (10H, m), 3,75 (2H, d, J=6Hz), 4,0 - 4,60 (4H, m), 5,03 (2H, s), 5,13 (2H, s), 7,10 - 7,30 (1H, bred), 7,33 (10H, s), 7,83 -10 8,50 (3H, m), 9,60 (1H, d, J=7Hz) ppm.

DK 156252 B

255 2) Trin 2:

PH3 D

Forbindelse (3) -> H9NCHC0NHCHC00 H

^ T. I

(ch2)2

L

COHN CH CONHCHgCOOH

TfaHNCHCOOH

D

(4) L-Ala-ï"D-Glu(o-OH)-(L)-Tfa-(D)-mesôDAP-(L)-GlyOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme made som beskrevet i trin 2 i eksempel 104 ud fra forbindelse (3).

5 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,56 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,63 (10H, m), 3,95 (2H, s), 4,00 - 4,50 (4H, m) ppm.

3) Trin 3:

CH

H C CH Cf3 C.H3 I 3 D

3Γ / 3 I I ^ CONHCHCONHCHCOOH

0>H Pî

CONHCHCONHCH„COOH

I B2 (CH.),

Forbindelse (4) -> I 2 3

TfaHNCHCOOH

D

(5)

Retinoyl-L-Ala-y-D-Glu(o-OH)-(L)-Tfa-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i 10 eksempel 104 ud fra forbindelse (4).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 1,00 (6H, s), 1,06 (3H, d, J=7Hz), 1,00 - 2,40 (16H, m), 1,66 (3H, s), 1,90 (3H, s), 2,33 (3H, s), 3,70 (2H, bred), 4,0 - 4,50 (4H, m), 5,83 - 6,50 (5H, m), 6,70 - 7,30 (1H, m), 7,70 - 8,40 (4H, m) ppm.

DK 156252B

256 4) Trin 4: _ CH, H C CH I ^ ®

3 I I / CONHCHCONHCHCOOH

1 h

CONHCHCONHCHCOOH

I ©

Forbindelse (5)-> (6) <çh2) 3

H.NCHCOOH 2 D

Retinoyl-L-Ala-2T-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (6) fremstilles pâ i det væsentlige samme made som beskrevet i trin 4 i eksempel 104 ud fra forbindelse (5).

5 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,00 (6H, s), 1,23 (3H, d, J=7Hz), 1,70 (3H, s), 1,96 (3H, s), 2,26 (3H, s), 1,00 - 2,50 (18H, m), 3,50 (1H, bred s), 3,76 (2H, bred s), 4,0 - 4,50 (4H, m}, 5,70 - 7,30 (6H, m), 7,70 - 8,30 (4H, m) ppm.

Eksempel 106.

10 1) Trin 1:

HjNCHCOOH + COHNCHCOOH

(ch2)2 (ch2)2 L ^3 L fH3

COHNCH COHNCHCOOH-> COHNCHCOHNCHCOOH

(ÇH2)3 d <ch2)3 d

BocHNCHCOHNNHBoc BocHNCHCOHNNHBoc

D D

(1) (2)

Nicotinoyl-r-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-AlaOH (2) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 97 ud fra forbindelse (1).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,43 (18H, s), 1,35 - 2,66 (13H, m), 3,87 15 (1H, t, J=7Hz), 4,00 - 4,66 (3H, m), 7,90 (1H, m), 8,50 - 9,20 (3H, m) ppm.

2) Trin 2: 257

DK 156252 B

D

Forbindelse (2) -> < ^-COHNCHCOOH

^ <W2 I L fH3

COHN CHCOHN CHCOOH D

(çh2)3

H,NCHCOOH 1 D

(3)

Nicotinoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pl i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 97 ud fra forbindelse (2).

5 NMR-Spektrum (Na0D-D20): δ = 1,33 (3H, d, J=8Hz), 1,20 - 2,50 (10H, m), 3,20 (1H, t, J=6Hz), 4,04 - 4,60 (3H, m), 7,64 (1H, dd, j =4 & 8 Hz), 8,33 Cl H, dd, J=2 & 8Hz), 8,72 (1H, dd, J=2 & 4Hz), 8,94 (1H, dd, J=1,5 & 2Hz) ppm.

Eksempel 107.

10 D Trin 1: γ OAc CH,

^ j | 3 D

H„N CH COHN CH0COOH + CH,CHCOHNCHCOHNCHCOOBzl 1 ά 3d l _ (CH2)3 (çh2)2

ZHN CHCONHNHZ COOH

D

(2) (1)

DK 156252 B

258

?Ac fH3 D

-> CH, CHCO NHCHCONHCHCOOBzl D L «*2>2

L

CONHCHCONHCHgCOOH

(fH2}3

ZHN CHCONHNHZ D

(3) D-Lac(OAc)-L-Ala-y-D-GIu(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHZ-(L)-GlyOH (3) fremstilles pâ i det vaesentlige samme mâde som be-skrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,44 (3H, d, 5 J=7Hz), 2,07 (3H, s), 1,3 - 2,4 (10H, m), 3,92 (2H, s), 4,1 - 4,6 (4H, m), 5,07 (2H, s), 5,13 (2H, s), 5,15 (2H, s), 7,32 (15H, s) ppm.

2) Trin 2: OH CH„

l i 3 D

Forbindelse (3) -> CH,CHCOHNCHCOHNCHCOOH

D L (¾¾

L

COHNCHCOHNCH2COOH

4¾½ h9nchcooh

z D

(4) 180 mg D-LacCOAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzI)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-10 NHNHZ-(L)-GlyOH (3) hydrogeneres i 25 ml eddikesyre over 150 mg 10%'s palladiumsort i 3,5 timer under et hydrogentryk pâ to atmosfæ-rer og ved stuetemperatur. Efter endt reaktion frafiltreres katalysa-toren, og filtratet inddampes til t0rhed under reduceret tryk, hvor-efter remanensen oplpses i 10 ml vand. Til oplpsningen sættes 0,4 ml 15 IN saltsyre og derefter en oplpsnîng af 84 mg natriumperiodat ί 1 ml vand. Blandingen omr0res i 30 minutter under isafkeling, hvorefter

DK 156252B

259 overskydende reagens sonderdeles med natriumbisulfit. Den vundne opl0sning indstiIles pâ pH-værdi 2 med ΊΝ natriumhydroxidoplpsning og inddampes til 5 ml under reduceret tryk. Koncentratet hældes gennem en kolonne, der er pakket med 5 ml aktivkul. Kolonnen vas-5 kes med 30 ml vand og elueres med en blanding af methanol og vand.

Eluatet inddampes til tprhed under reduceret tryk. Remanensen oplp-ses i 10 ml 50%’s vandigt methanol, og oplpsningen omrpres i 2,5 time ved stuetemperatur, medens pH-vaerdien holdes pi 9,0 med 10%'s vandig natriumcarbonatoplpsning. Oplosningen inddampes til ca. 5 ml.

10 Koncentratet indstilles pi pH-værdi 2,0 og hældes gennem en kolonne, der. er pak.ket med 20. ml. i.kke-ionis.k adsorptionsharpiks, HP-20 og elueres med vand. Eluatet lyofiliseres, hvorved der fis 78 mg D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (4), som er identisk med det ifplge eksempel 71-1 fremstillede produkt.

15 Eksempel 108.

1) Trin 1:

n T COOH

D L | CH3 (CH2)5CONHCHCOOBz1 H2NCHCONHCHCH2C6H5

(çh2)2 + (çh2)3 D

COOH BocHN CHCONHNHBoc

D

(D (2)

D

-> CH3 ( CH 2)5CONHCHCOOBzl (Çho)2

COOH

I L I

CONHCHCONHCHCH0CftH, | D 265

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3)

DK 156252 B

260

Heptanoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-PheOH (3) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,7 - 2,4 (41 H, m), 2,8 -5 3,2 (2H, s), 3,4 - 4,8 (4H, m), 5,15 (2H, s), 6,7 (1H, m), 7,26 (5H, s), 7,40 (5H, s), 7,8 (1H, m), 8,2 (2H, m), 8,7 (1H, m), 9,60 (1H, bred s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CHgCCHg^CONHÇHCOOH

Wi

COOH

I k i CONHCHCONHCHCH„CfiK-i T) 2 6 o (fH2}3

BocHN CHCOHNNHBoc D

(4)

Heptanoyl-y-D-Glu(o-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-D-10 PheOH (4) fremstilles pi i det væsentlige samme mide som beskrevet i trin 2 i eksempel 93.

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 0,91 (3H, m), 1,1 - 2,7 (20H, m), 1,46 (18H, s), 3,1 (2H, m), 3,8 - 4,6 (4H, m), 7,19 (5H, s) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CHgCCHg^CONHCHCOOH

«FVt

I L ?°°H

conhchconhchch„crh.

I n 2 6 5 (çh2)3 u

HoNCHC00H 1 D

(5)

DK 156252 B

261

Heptanoyl-3r-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-PheOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mlde som beskrevet i trin 3 i eksempel 93. NMR-Spektrum (D20-NaOD): δ = 0,83 (3H, t, J=6Hz), 1,0 - 2,1 (16H, m), 2,28 (4H, t, J=7,5Hz), 3,10 (2H, AB del af ABX-system, 5 J=14,8,4Hz), 3,15 (1H, t, J=7,5Hz), 4,16 (2H, bred t, J=8Hz), 4,50 (1H, dd, J=8,4Hz), 7,3 (5H, m) ppm.

Eksempel 109.

1) Trin 1:

D L

CHg (CH2) gCONHCHCOOBzl H2NÇHCONH(CH2)3COOH

(çh2)2 + (çh2)3 COOH BocHN CHCONHNHBoc

D

(D (2)

D

-> ch3(ch2)5conhchcoobzi <CÔ2)2

L

CONHCHCONH(CH2)3COOH

Φ*2>3

BocHN CHCONHNHBoc D

(3)

Heptanoyl-2f-D-Glu(o-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-CD)-NHNHBoc-10 (L)-îf-AbuOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 0,7 - 2,6 (27H, m), 1,40 (18H, s), 2,8 - 4,6 (5H, m), 5,11 (2H, s), 6,65 (1H, m), 7,34 (5H, s), 7,82 (2H, m), 8,16 (1H, d, J=7Hz), 8,60 (1H, m), 9,52 (1H, 15 bred s), ppm.

DK 156252 B

262 2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)5CONHÇHCOOH

<ciy2

L

CONHCHCONH(CH2)3COOH

4¾½

BocHN CHCOHNNHBoc D

(4)

Heptanoyl-ï-D-Glu(tt-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-ï-AbuOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 93.

5 IR-Spektrum (Nujol): v = 1700 (bred), 1640 (bred) og 1520 ΓΠ3Χ (bred) cm ^.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 0,88 (3H, m), 1,1 - 2,6 (27H, m), 1,43 (18H, s), 3,8 - 4,6 (3H, m) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CH3(CH2)5CONHCHCOOH

(ch2)2

L

CONHÇHCONH(CH2)3COOH

(ch2)3 H„NiHCOOH * D

10 Heptanoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-ï-AbuOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 93.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 1710, 1635 og 1540 cm ^.

NMR-Spektrum (DjO): δ = 0,85 (3H, bred t, J=6Hz), 1,0 - 2,8 15 (24H, m), 3,28 (2H, t, J=6,5Hz), 3,83 (1H, t, J=6Hz), 4,1 - 4,5 (2H, m) ppm.

263

Eksempel 110.

DK 156252 B

1) Trin 1 : n T COOH CH0 D L I I 3 CKHj-OCH0CONH CHCOOBzl + H0NCHCONHCHCH0CH 6 5 2 | 2 | n 21 (çh2)2 (çh2)3 u ch3 COOH B ocHN CHCONHNHB oc

D

(D (2)

D

-> CcH[-OCH0CONHCHCOOBzl 6 5 2 | (CH2)2 L ÇOOH ÇHg

CO NHCHC0NHCHCHoCH I D 2I

(çh2)3 u ch3

B ocHN CH CONHNHBoc D

(3)

Phenoxyacetyl-ï-D-Glu(o-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-LeuOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som 5 beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,7 - 2,4 (19H, m), 1,40 (18H, s), 3,6 - 4,7 (4H, m), 4,55 (2H, s), 5,15 (2H, s), 6,5 - 8,8 (10H, m), 7,34 (5H, s), 9,55 (1H, bred s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CcH,-CONHCHCOOH

ο o i (ÔH2)2 L Ç°°H ch3

CONHCHCONHCHCH.CH I r» “ I

(çh2)3 d CH3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

(4)

DK 156252 B

264

Phenoxyacetyl-ï-D-G!u(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-LeuOH (4) fremstilles pâ i det vaesentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 93.

NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 0,90 (6H, bred d, J=5Hz), 1,3 - 2,7 5 (13H, m), 1,43 (18H, s), 3,8 - 5,0 (4H, m), 4,60 (2H, s), 6,8 - 7,6 (5H, m) ppm.

3) Trin 3:

« D Forbmdelse (4) -> C.H.CONHCHCOOH

O D | I L f00H FH3

CONH(jîHCONHCHCH2CH

(ÇH ) D CH.

HNCHCOOH Z D

(5)

Phenoxyacetyl-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-LeuOH (5) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i ek~ 10 sempel 93.

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 0,88 (6H, m), 1,2 - 2,7 (13H, m), 3,73 (1H, bred s), 4,2 - 4,7 (3H, m), 4,55 (2H, s), 6,8 - 7,5 (5H, m) ppm.

Eksempe! 111.

265

DK 156252 B

1) Trin 1: OAc CH, n

l f 3 D

CH. CH CONHCHCONHCHCOOBzl SD T 1 (CH2)2

L

CONHCHCOOH

4Η2}3

BocHN CHCONHNHBoc D

(1) OAc ÇH3 d -> CH- CHCO NHCHCONHCHCOOBzl D L «^>2

I T COOH

I L I

CONHCHCONHCHCH-C-H-OBzl D 285

BocHN CHCOHNNHBoc D

(2)

En suspension af 596 mg D-TyrOH(OBzl) i en blanding af 2 ml bis-(trimethylsilyl)acetamid, 2 ml dimethylformamid og 2 ml methylen-5 chlorid omrores ved stuetemperatur i 2 timer. Den resulterende oplps-ning sættes til en oplpsning af det blandede anhydrid af 1,64 g D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc (1) i en blanding af 10 ml methylenchlorid og 5 ml ethylacetat. Reaktionsblandingen omrores ved -15°C ί 1 time og holdes natten over 10 i koleskab. Den resulterende oplosning inddampes, optages i 50 ml ethylacetat og vaskes successivt med fortyndet saltsyreoplosning, 2 gange med vand og med saltvand. Den resulterende oplosning tomes over magnesiumsulfat, og oplosningsmidlet afdestilleres, hvorved der fâs 2,11 g af et amorft fast stof. Det faste stof tritureres med ether, 266

DK 156252 B

og den overstâende væske kasseres, hvorved der fâs 1,74 g D-Lac-(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-D-TyrOH(OBzl) (2).

2) Trin 2: OH CH„ n

I I 3 D

Forbindelse (2) -> CH„ CH CONHCHCONHÇHCOOH

D L (CH,)2

COOH

L | C0NHCHC0NHCHCHoCftH-0Bzl I n 2 6 5 «rH2>3

BocHN CHCONHNHBoc D

(3) 5 19 rnllN natriumhydroxidopl0sning sættes til en oplpsning af 1,74 g D-Lac(OAc)-L-Ala-Y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc-(L)-D-TyrOH(OBzl) (2) î en blanding af 15 ml methanol og 7 ml vand, og oplpsningen omrpres ved 5°C i 30 minutter og ved stuetem-peratur i 1,5 time. Reaktionsblandingen neutraliseres til pH-vaerdi 7 10 med IN saltsyreoplpsning og inddampes i vakuum. Koncentratet for-tyndes med vand, syrnes med IN saltsyre til pH-værdi 7 og ekstra-heres derefter med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og saltvand, terres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fâs D-Lac(OH)-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-15 Boc-(L)-D-TyrOH(OBzl) (3).

3) Trin 3:

?H fH3 D

Forbindelse (3)-> CH, CH CONHCHCONHÇHCOOH

D L (CH,),

COOH

L I

CONHCHCONHCHCH9CftH-OBzl I 2 6 5

(PH2}3 H0NCHCOOH “ D

DK 156252 B

267 D-Lac(OH)-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-TyrOH(OBzl) (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 93.

4) Trin 4:

?H ?H3 D

Forbindelse (4) -> CH„ CH CONHCHCONHCHCOOH

D L (CH2)2

I T COOH

I L i CONHCHCONHCHCH0CeHcOH I n 2 6 5

(ch2)3 U

H0NCHCOOH ^ D

(5) 5 En oplpsning af 258 mg D-Lac(OH)“L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-meso- DAP-(L)~D-TyrOH(QBzl) (4) i en blanding af 2 ml 0,25N saltsyre-oplosning og 8 ml methanol hydrogeneres over 120 mg 10%'s palla-diumsort i 21,5 timer. Reaktionsblandingen filtreres, og filtratet inddampes tîl tprhed. Remanensen oploses i 5 ml methanol, og op-10 losningen behandles med 1,5 ml ΊΝ natriumhydroxidoplpsning ved 5°C.

Den resulterende oplosning neutraliseres tîl pH-værdi 7, inddampes, indstilles pi pH-værdi 2 og hældes gennem en kolonne, der er pakket med 16 ml HP-20. Eluering udfores med vandigt methanol og derefter med methanol. De fraktioner, som indeholder den pnskede forbindelse, 15 sammenhældes, inddampes, oploses i vand og lyofiliseres, hvorved der fis 100 mg D-Lac(OH)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDÀP-(L)-D-Tyr-OH (5). NMR-Spektrum (D20): δ = 1,0 - 2,5 (10H, m), 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,41 (3H, d, J=7Hz), 2,6 - 3,4 (2H, m), 3,74 (1H, t, J=6Hz), 4,0 - 4,6 (5H, m), 6,82 (2H, d, J=9Hz), 7,10 (2H, d, 20 J=9Hz) ppm.

DK 156252B

Eksempel 112.

268 1) Trin 1:

D L

CH„(CH0)cCONHCHCOOBzl + H0NCHCOOH

ό Δ D t « | Çh2 (Ch2)3 COOH BocHN CHCONHNHBoc

D

(D (2)

D

-> CH '(CH0)K CONHCHCOOBzl o Z O |

I L

CONHÇHCOOH

(<?Η2}3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3)

Heptanoyl-^D-Asp(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles pa i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i 5 eksempel 93 ud fra forbindelse (1) 0g (2).

NMR-Spektrum (CDCÿ: ! « 0,7 - 1,0 (3H, m), 1,0 - 2,0 (32H, m), 2,0 - 2,5 (2H, m), 2,8 - 3,1 (2H, m), 4,1 - 4,9 (2H, m), 4,9 - 5,1 (1H, m), 5,27 (2H, s), 5,5 - 6,0 (1H, m), 7,0 - 7,3 (2H, m), 7,50 (5H, s), 8,9 - 9,2 (1H, m), 9,2 - 9,6 (1 H, m) ppm.

2) Trin 2: 269

DK 156252 B

D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)5COHNCHCOOH

I L

COHN CHCOOH

(ch2)3

BocHN CHCOHNNHBoc D

(4)

D

-> ch3 (ch2)5 CONHCHCOOH

1¾

I L

CONHCHCOOH

(fH2}3

H0NCHCOOH J D

(4)

Heptanoyl-p-D-Asp(a-OH)-(L)-mesoDAP (4) fremstilles pâ i det væ-sentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 og 2 i eksempel 93 ud fra forbindelse (3).

5 NMR-Spektrum (D2O): δ = 0,84 (3H, t, J=6Hz), 1,2 - 2,0 (14H, m), 2.2 - 2,4 (2H, m), 2,5 - 3,0 (2H, m), 3,75 (1H, t, J=6Hz), 4,0 - 4.3 (2H, m) ppm.

Eksempel 113.

1) Trin 1: OAe n

I O L

CfiHc CH CONHCHCOOBzl + HoNCHC00Bzl bù , 2 i

Ws Wa COOH BocHNCHCONHNHBoc

D

U) (2) 270

DK 156252 B

?Ac D

-> C„Hc CH CONHCHCOOBzl 6 5 l

Ws I L

CONHCHC00H

i 2 (?H2}3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3)

Mandelyl(OAc)-Ô-D-Aad(a-OBzl)-(L)-Boc(D)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc (3) fremstilles pâ i det vaesentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) og (2).

NMR-Spektrum (CDCI3): δ = 1,4 (18H, s), 1,2 - 2,0 (10H, m), 5 2,16 (3H, s), 2,0 - 2,4 (2H, m), 4,0 - 4,2 (1H, m), 4,3 - 4,7 (2H, m), 5,08 C2H, s), 5,3 - 5,6 (1H, m), 6,08 (1H, s), 6,7 - 7,1 (3H, m), 7,30 (10H, s), 8,8 - 9,0 (1H, m) ppm.

2) Trin 2:

?H D

Forbindelse (3) -> CcH. CHCOHNCHCOOH -> O O |

We

I L

COHNCHCOOH

(ch2)3

BocHNCHCOHNNHBoc

D

?H D

C^CHCONHCHCOOH 6 5 I

(ch2)3

L

CONHCHCOgH

(4) H0NCHCOOH 2 D

271

DK 156252 B

Mandelyl-6-D-Aad(a-OH)-(U-mesoDAP (4) fremstilles p! i det væsent-lige samme mâde som beskrevet i trin 2 og 3 i eksempel 93 ud fra forbindelse (3).

NMR-Spektrum (D2O): δ = 1,2 - 2,0 (10H, m), 2,1 - 2,4 (3H, m), 5 3,6 - 3,9 (1H, m), 4,2 - 4,5 (2H, m), 5,17 (1H, s), 7,42 (5H, s) PPm.

Eksempel 114.

1) Trin 1:

........D L

CH3(CH2)5CONHÇHCOOB2l + HgNÇHCOOH

(?H2}3 (Çh2)3 CO„H BocHN CHCONHNHBoc

Δ D

(D (2)

D

-> CH3(CH2)5COHNCHCOOBzl

Ws

I L

COHN CHCOOH

4H2}3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3)

Heptanoyl-5-D-Aad(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (3) 10 fremstilles pâ i det væsentllge samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 93 ud fra forbindelse (1) 0g (2).

t

DK 156252 B

272 2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CHgCCH 2)gCONH CHCOOH

Ws

I L

CONHCHCOOH

(<h>3

BocHN CHCONHNHBoc D

(4) H.eptanoyi-5-D-Aad(tt-OH)-(L}-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (3j fremsfilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i «eksempel -93.

5 NMR-Spektrum (CDgDD)·: δ =:0,7 - 1,1 (3H, m), 1,1 - 2,1 (36H, m), 2.1 - 2,6 (4H, m), 3Λ9 - 4,6 C3H, m) ppm.

IR-Spektrum (Nujol) : vmgx =3270, 1700, 1640, 1520 og 1160 cm ^.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CH3(CH2)gCONH ÇHCOOH

Ws

I L

CONHCHCOOH

Wî

H0NCHCOOH 1 D

(5)

Heptanoyl-5-D-Aad(a-OH)-(L)-mesoDAP (5) fremstilles pi i det væ-10 sentlige samme made som beskrevet i trin 3 i eksempel 93.

NMR-Spektrum (D20): δ = 0,7 - 1,0 (3H, m), 1,1 - 2,1 (18H, m), 2.1 - 2,5 (4H, m), 3,76 (1H, t, J=6Hz), 4,2 - 4,4 (2H, m) ppm.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3260, 1715, 1625 og 1540 cm ms x

Eksempel 115.

273

DK 156252 B

1) Trin 1: OAc CHs d

CHg(CH0)lcCHCHCOCl + HCNCH CO NHCHGOOH

ο & lb | 2 γ I

^150¾ (<ΤΗ2>2 I L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

<?“A

BocHN CHCOOH D

(D (2) OAc CH„ n

I I 3 D

-> CH3(CH2)16CHCHCONHCHCONHCHCOOH

I L I

<CH2>15CH3 (ÇH2>2 I L CHg CONHCHCONHCHCOOH I n (CH2}3

BocHN bHCOOH D

(3)

Til en oplpsning af 561 mg L-Ala-3f-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(L)-D-AlaOH (2) i en blanding af 20 ml methylenchlorid og 3,25 5 g bis(trimethylsilyl)acetamid sættes en oplosning af 630 mg 2-(hexa-decyl-3-acetoxyeicosanoylchlorid (1) i 5 ml methylenchlorid.

Reaktionsblandingen lades henstâ i 5 dage ved stuetemperatur og inddampes, hvorved der fâs en olieagtig remanens, til hvilken der sættes 20 ml vand og 50 ml ether. Den organiske fase fraskilles, 10 tprres over magnesiumsulfat og inddampes i vakuum. Den som remanens vundne pasta spjlechromatograferes pi kiselsyre og elueres med en blanding af chloroform og methanol i forholdet 2:1, hvorved der fâs 283 mg 2-hexadecyl-3-acetoxyeicosanoyl-L-Ala-2T-D-Glu(e-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-A!aOH (3).

DK 156252 B

274 NMR-Spektrum (CDCIg+CDgOD) : δ = 0,85 (6H, m), 1,94 (3H, s), 3,65 - 4,55 (m), 5,02 (1H, m), 6,34 (1H, m), 6,98 (1H, m) ppm.

2) Trin 2:

?H <?H3 D

Forbindelse (3) -> CH3(CH jX-CHCHCONHCHCONHCHCOOH

(ch2)15ch3 l (ch2)2 I L “3 CO NHCHCONHCHCOOH I η

(?Η2}3 H9NCHC00H * D

(4) 200 mg 2-hexadecyl-3-acetoxyeicosanoyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-5 Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala-OH (3) oploses i 2 ml trifluoreddikesyre, og blandingen lades henstl i 30 minutter ved stuetemperatur. Reak-tionsblandingen inddampes, og den som remanens vundne olie oplpses i 15 ml n-butanol, hvorefter der tilsættes 1 ml IN natriumhydroxidop-losning. Efter henstand i 2 timer ved stuetemperatur sættes 10 ml 10 vand og 20 ml n-butanol til reaktionsblandingen. n-Butanolfasen fraskilles og inddampes i vakuum, hvorved der fâs 150 mg 2-hexa-decyl-3-hydroxyeicosanoyl-L-Ala-îf-D-Glu(e-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (4).

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 0,89 (6H, m), 3,65 (1H, m), 4,00 (1H, 15 m), 4,25 - 4,60 (4H, m) ppm.

275

Eksempel 116.

DK 156252 B

1) Trin 1:

<fH3 D

H0N CH CONHCHCOOH 2 L ' (ch2)2

L

CONH CH CONH CHgCOOH ->

BocHNCHCOOH

............. ,D. .. ..... . ......... . · (1)

?H3 D

CONHCHCONHCHCOOH

I 1 (ch2)2

HC-OAc T

i

HC-OAc CONHCHCONHCHgCOOH

AcO-C -H (σΗ2)3

HC-OAc BocHNCHCOOH

I D

CHgOAc (2)

Pentaacetyl-D-gluconyl-L-Ala-Y-D-GluCa-OI-D-OJ-Boc-fDl-mesoDAP-(U-GlyOH (2) fremstilles pi i det væsentlige samme mide som be-5 skrevet i trin 1 i eksempel 1.

IR-Spektrum (Nuiol): v = 3350 - 3300, 1730 - 1710, 1700 - 1690 og max 1650 cm ^.

DK 156252 B

276 2) Trin 2:

Forbindelse (2) ->

fH3 D

CONHCHCONHCHCOOH

| L ^2>2 HC-OAc L

HC -OA c CONHCHCONHCH0COOH

1 l 2

AcO-C -H (CH0)o | \ Δ à

HC-OAc HoNCHCOOH

I -2 jq CH.gOAc C3)

Pentaacetyl-D-glucQnyl-L-Ala-y-D-iGlu(a-OH)- ( L) -mesoDAP- ( L) -GlyOH (3) iremstrUes pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel T7.

5 NMR-Spektrum (.CDgOD.): δ = Ί,37 (3H, d, J=7Hz), 1,50 - 2,34 (10H, m), 2,00 (9H, s), 2,10 (3H, s), 2,17 (3H, s), 3,92 (2H, s), 3,95 - 4,50 (6H, m), 5,10 - 5,75 (4H, m) ppm.

3) Trin 3:

Forbindelse (3) -> CH, n

j 3 D

CONHCHCONHCHCOOH

| L <CH2>2 HC-OH

I L

HÇ-OH CONH(j:HCONHCH2COOH

HO-Ç-H (ÇH2)3

HC-OH H9NCHC00H

CH2OH u (4) 2 77

DK 156252 B

D-Gluconyl-L-Ala-î'-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (4) fremstilles pl i det væsentlige samme mlde som beskrevet i trin 2 i eksempel 18. NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,44 (3H, d, J=7Hz), 1,34 - 2,50 (10H, m), 3,75 (2H, s), 3,85 (2H, d, J=10Hz), 3,84 - 4,67 (8H, m) ppm.

5 Eksempel 117.

1) Trin 1 :

fH3 D

h9n ch conh chcooh L (°¾

L

CONH CH CONH CHoC00H -> I 2 (?H2}3

BocHN CHCONHNHBoc D

(D

O D L p^3 d

\-“CH ( CH0)nCH0 CONH CH CONH CH COOH

L (CH2)2

L

CONHCHCONHCHrtCOOH I 2 (fH2}3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(2) 5-(N-Z-5-Oxo-4-oxazolidinyl)valeryl-L-Ala-ï-D-Glu(o-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (2) fremstilles pê i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 1.

10 NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,50 (18H, s), 1,38 - 2,50 (18H, m), 4,00 (2H, s), 4,10 - 4,60 (5H, m), 4,27 (2H, s), 6,60 (2H, ABq, J=4 & 6Hz), 7,43 (5H, s) ppm.

278

DK 156252 B

2) Trin 2: COOH Çh3 d

Forbindelse (2) -> H„N CH (CH9)Q CH0 CONHCHCONHCHCOOH

D-L L (CH2)2

I L

CONHCHCONHCHgCOOH

(fH2)3

BocHN CHCONHNHBoc

(3) D

e-Aminopimelyl-L-Ala-ï’-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)“NH-NHBoc-(L)-GlyOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme made som beskrevet ί trin 2 i eksempel 11.

5 NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (18H, s), 1,34 - 2,50 (18H, m), 3,92 (2H, s), 3,63 - 4,50 (5H, m) ppm.

3) Trin 3: COOH CH0 „

i I 3 D

Forbindelse (3) -> H9NCH(CH0)QCH9 CONHCHCONHCHCOOH

Δ n t ù ό Δ t i L L (CH2)2

! L

CONHCHCONHCH0COOH I 2 (?H2}3 h9nchcooh (4) α-Aminopimelyl-L-Ala-Y-D-Glu (o-OH) - (L) -mesoDAP- (L) -GlyOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i 10 eksempel 17.

NMR-Spektrum (D20): 5 = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,33 - 2,50 (18H, m), 3,73 (1H, t, J=7Hz), 3,83 (1H, t, J=7Hz), 3,97 (2H, s), 4,07 - 4,30 C3H, m) ppm.

Eksempel 118.

279

DK 156252 B

1) Trin 1 :

<rH3 D

H0NCH CONHCHCOOH 2 L · L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOH

I D —> (çh2)3

...... BocHNCHCOOH

(D D

î ?H3 D

CH3CL JL ^(CH2)gCONHCHCONHÇHCOOH

Il II L (<ΡΑ I L ÇHg

CH3° f| ^ CH3 CONHCHCONHCHCOOH

O | D

BocHNCHCOOH (2) D

1,64 g L-Ala-r-D-Glu(o-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(U-D-AlaOH (1) oploses i en blanding af 30 ml dioxan og 30 ml vand. Til denne op-5 losning sættes 606 mg triethylamin. Til blandingen sættes 872 mg 10-(2/3-dimethoxy-5-methyl-l,4-benzoquino-6-yl)decansyre-N-hy-droxysuccinimidester. Reaktionsblandingen holdes ved stuetemperatur i 24 timer, hvorefter den inddampes og ekstraheres med ethylacetat.

Den organiske fase vaskes successivt med vandig saltsyreoplosning, 10 vand og saltvand og torres over magnesiumsulfat. Ved afdampning af oplosningsmidlet fâs et skum, som pulveriseres med ether, hvorved der fâs 0,97 g 10-(2,3-dimethoxy-5-methyl-1,4-benzoquino-6-yl)-decanoyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (2).

DK 156252B

280 IR-Spektrum (Nujol): vmgx =3280, 1710, 1640 og 1610 cm NMR-Spektrum (CDCI3): δ = 1,48 (9H, s), 2,00 (3H, s), 4,00 (6H, s), 3,66 - 4,66 (5H, m) ppm.

2) Trin 2:

Forbinâelse (2) -> 0 fH3 d

CIÎ3O fc (CH9) CONHCHCONHCHCOOH

L «f* hk AAcH I ^ ?*3

3σ ïï 3 CONHCHCONHCHCOOH

0 | D

(PVs

H„NCHCOOH (3) D

5 0,945 g 10-(2,3-dimethoxy-5-methyl-1,4-benzoquino-6-yl)decanoyl-L-

Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (2) oplpses i 20 ml trifluoreddikesyre, og oplpsningen holdes i 1 time ved stuetem-peratur. Reaktionsblandingen inddampes I vakuum, og remanensen oplpses i vand. pH-Værdlen i den vandige oplpsning indstilles pâ 2 -10 3, og hele oplpsningen underkastes chromatografi pâ en kofonne med 100 ml HP-20. Kolonnen elueres med en blanding af vand og vandigt methanol i forholdet 1:2. Ved inddampning af de sidstnævnte frak-tioner fâs et orangefarvet skum, som oplpses i vand og lyofiliseres, hvorved der fâs 0,80 g 10-(2,3-dimethoxy-5-methyl-1,4-benzoquino-15 6-yl)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3).

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1720, 1640, 1610 og 1530 cm"1. NMR-Spektrum (CD3CD): 6 = 2,00 (3H, s), 3,92 (6H, s), 3,60 - 4,50 (5H, m) ppm.

Eksempel 119.

281

DK 156252 B

1) Trin 1:

?H3 D

h9n CH CONHCHCOOH L <f2)2 1 L ’r”3

CONHCHCONHCHCOOH

I D —> «rH2>3

BocHN CHCOOH

(1) D

°CH3 chi°vJv'°CH3 ri fH3 d

(CH9)Q CONHCHCONHCHCOOH

^ “ T i L taV2 3 L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

(?H2}3

BocHN CH COOH

(2) D

10-(2,3,4-Trimethoxy-6-methylphenyl)decanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)- (L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (2) fremstilles pâ i det væsentlige 5 samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 118.

IR-Spektrum (Nujol): v = 1710, 1640 og 1530 cm ^.

max NMR-Spektrum (CDCI3): δ = 1,46 (9H, s), 2,27 (3H, s), 3,90 (9H, s), 4,00 - 5,00 (5H, m), 6,50 (1H, s) ppm.

2) Trin 2: 282

DK 156252 B

Forbindelse (2) -> °CH3

CH

TT fH3 D

(CH2)9CONHCHCONHÇHCOOH

ch3 L (ÇH2)2 I L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

(Çh2)3

H0NCHCOOH

(3) D

10-(2,3,4-T rimethoxy-6-methylphenyl)decanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 113.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3260, 1720, 1620 og 1530 cm'1.

NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 2,26 (3H, s), 3,83 (9H, s), 6,60 (1H, s) ppm.

Eksempel 120.

1) Trin 2:

?H3 D

H„N CH CONHCHCOOH 2 Γ I

L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOH

I D —>

BocHNCHCOOH U) D

DK 156252 B

283

ÇH3 fH3 D

C, „H„.COOCH CONHCHCONHCHCOOH "5 t» t t I

(CH2)2 I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

(?H2}3

BocHN CHCOOH (2) D

O-Stearoyl-Lac-L-AI a - Z- D - G J u ( a - OH ) - (L) - Boc- ( D)-mesoDAP-( L) - D-AlaOH (2) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 118.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1720 og 1630 cm"1.

5 NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 0,90 (3H, m), 4,15 - 4,90 (5H, m), 5,17 (1H, m) ppm.

2) Trin 2:

Ç»3 ?»3 D

Forbindelse (2) -> C1(IH COOCHCON HCHCONHCHCOOH

(ch2)2 L <rH3

CONHCHCONHCHCOOH

(iH2)3 D

H0NCHCOOH Δ n

(3) D

O-Stearyl-Lac-L-Ala-y-D-Glu (o-OH) - ( L) -mesoDAP- (L) -D-AlaOH (3) fremstilles pa i det væsentlige samme mlde som i trin 2 i eksempel 10 118.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3370, 1740, 1650 (skulder) og 1630 -1 cm .

NMR-Spektrum (D20-NaHC03): fi = 0,87 (3H, m), 3,74 (1H, m), 4,0 - 4,5 (4H, m), 5,10 (1H, m) ppm< 15 [“]D = -38,24° (c = 0,30, i 5%’s NaHCOg).

Eksempel 121.

284

DK 156252 B

1) Trin 1: CH„ n H0N CH CONHCHCOOH 2 L 1 (ch2)2 L Çh3

CONHCHCONHCHCOOH

I D —>

BocHNCHCOOH

(1) D

Ç«3 D

CH3(CH2)22 CONH CH CONHCHCOOH

L <ÇH2>2 I L çh3

CONHCHCONHCHCOOH

D

(ch2)3

BocHNCHCOOH (2) D

n-Tetracosanoyl-L-Ala-Y-D-GluCo-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (2) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 î 5 eksempel 118.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx s 3300, 1750 og 1630 cm"1.

NMR-Spektrum (CDCIg): 6 = 0,89 (3H, m), 4,0 - 4,9 (5H, m) ppm.

2) Trin 2: ‘ 285

DK 156252 B

Forbindelse (2) ->

fH3 D

CH3(CH2)22 conhchconhchcooh L (™2>2 I L <?H3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

(CH2)3 h9nchcooh

(3) D

n-Tetracosanoyl-L-Ala-îf-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 118.

5 IR-Spektrum (Nujol): v = 3280, 1730 og 1630 cm ^.

NMR-Spektrum ^O+NaHCOg): δ = 0,88 (3H, m), 3,72 (1H, m), 3,95 - 4,6 (4H, m) ppm.

Eksempel 122.

1) Trin 1:

L

h2nçhcooh ch3 d (CH2)3 + CH3(CH2)16 C0NHCHC0NHÇHC00B21

BocHN CHCOOH L (CH0)0 u COOSu (1) (2)

DK 156252 B

286 Çh3 d -> CHg(CH2)16CONHCHCONHÇHCOOBzl L W2

I L

CONHCHCOOH

BocHNCHCOOH

(3) 580 mg (D)-Boc-mesoDAP (1) oplpses i en blanding af 10 ml methanol, 40 ml methylenchlorid og 404 mg triethylamin. Til denne oplpsning sættes 1,34 g stearoyl-L-Aia-D-Glu(a-OBzl)OSu. Den resulterende oplpsning lades henstâ ved stuetemperatur natten over, inddampes og 5 ekstraheres med ethylacetat efter syrning. Den organiske fase vaskes med vand, tprres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fâs 1,10 g stearoyl-L-Ala-Y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP (3). IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 2700 - 2500 (bred), 1720 (bred),

iTla X

1650 (skulder) og 1630 cm V

10 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 0,88 (3H, m), 1,0 - 2,50 (54H, m), 4,0 - 4,50 (4H, m), 5,12 (2H, s), 7,36 (5H, s), 7,84 (1H, d, J=7Hz), 8,04 OH, d, J=7Hz), 8,28 OH, d, J=7Hz) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

fH3 D

CH0(CH0)1c CO NH CH CONHCHCOOH 3 2 16 τ I

W*

* L

CONHCHCOOH

(<ΓΗ2}3

H9NCHCOOH

(2) D

287

DK 156252B

1.10 g stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-DAP (3) oplpses i 80 ml eddikesyre og hydrogeneres over 120 mg 10%'s palladiumsort. Katalysatoren fjernes ved filtrering, og filtratet inddampes, hvorved der fâs en gummiagtig remanens, som oplpses i 5 ml trifluoreddike- 5 syre. Efter henstand i 15 minutter ved stuetemperatur afdampes oplosningsmidlet, hvorved der fis et skum, som trîtureres med dieth-ylether, hvorved der fâs 0,90 g stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (4).

IR-Spektrum (Nujol): v_ = 3300, 2600 - 2300, 1720, 1650 (skulder) max 10 og 1630 cm ^.

NMR-Spektrum (NaOD-D20): δ = 0,84 (3H, m), 1,0 - 2,60 (45H, m), 3.10 - 3,40 (1H, m), 4,0 - 4,50 (3H, m) ppm.

Eksempel 123.

1) Trin 1:

L

HgNCHCOOH D

(ch2)3 + ch3(ch2)16conhçhcoobz1

BocHNCHCOOH (CH9)9 D fcoOSu (1) (2)

D

-> CH„ (CH0) 1R CONHCHCOOBzl ô a JLO j

(Ch2)2 I L

CONHCjHCOOH

4H2}3

BocHNCHCOOH

(3) D

15 Stearoyl-Ï-D-Glu (α-OBzl)- (L) -Boc- (D)-mesoDAP (3) fremstilles pi I det væsentlige samme mâde som'i trin 1 i eksempel 122.

IR-Spektrum (Nujol): vmax ~ 3300, 2600 - 2300 (bred), 1750 - 1700 (bred) og 1650 (bred) cm ^.

‘ 288

DK 156252 B

NMR-Spektrum (dimethylsuffoxid -dg): δ = 0,86 (3H, m), 1,0 - 2,40 (5H, m), 4,0 - 4,50 (3H,.m), 5,13 (2H, s), 6,90 (1H, m), 7,36 (5H, s), 7,70 - 8,30 (2H, m) ppm.

2) Trin 2:

D

CH3(CH2)16 CONH <pH CODE

<™2>2

I L

CONHCKCOOH

«r'Vs

HnNCÎTCOOH (4) D

5 Steffroÿl-Y-TD’GlulÊa^IïHl-CLO^mesQDAP (4) fremstilles pâ i det væsent-lige^sammermlide^om l'trin 2 i éksempel 122.

IR-Spektrum (Nujol): υ = 3250 (skulder), 1720 og 1640 cm

ΓΠ9 X

NMR-Spektrum (NaOD-D2g): 6 = 0,80 - 2,80 (45H, m), 3,12 - 3,40 (1H, m), 4,0 - 4,32 (2H, m) ppm.

10 Eksempel 124.

1) Trin 1:

L

HgNCHCOOH D

(çh2)3 + [ch3(ch2)15]2chconhchcoobzi

BocHNCHCOOH (CH0)„ D éoOSu (1) (2)

DK 156252 B

289

D

-> [ch3(ch2)15]2chconhchcoobzi W2

I L

CONHCHCOOH

Φ*2>3

BocHN CHCOOH (3) D

2-Hexadecyloctadecanoyl-3'-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 122.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3300, 1730 (bred), 1680 og 1640 cm"1.

mQX

5 NMR-Spektrum (CDCIg): 6 = 0,87 - 2,87 (77H, m), 4,33 - 4,80 (3H, m), 5,16 (2H, s), 7,33 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

D

[CH3(CH2)15] 2 CHCO NH CH COOH

(CH2)2

L

CONHCHCOOH

<{®A

h9nchcooh

(4) *D

2-Hexadecyloctadecanoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 122.

10 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250, 1720 og 1630 cm ^.

NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 0,68 - 2,68 (77H, m), 3,68 - 4,00 (1H, m), 4,16 - 4,83 (2H, m) ppm.

DK 156252B

290

Eksempel 125.

1) Trin 1:

L

H„N CH COOH CH, ^ ti | | 3 L·) (CH2)3 + [CH3(CH2)15]2CHCONHCHCONHCHCOOBzl

BocHN CHCOOH L (CH9)„ D I Δ Δ υ COOSu (1) (2)

ÇHg D

-> [ CHg (CH2)15 ] 2 CHCONHCHCONHCHCOOBzl L <ǻ2>2 I L CH3 conhchconh6hcooh l n ^H2>3

BocHN CHCOOH

(3) D

2-Hexadecyloctadecanoyl-L-Ala-îf-D-Glu(o-OBzl)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentiige samme mâde sorti 5 i trin 1 i eksempel 122.

I R-Spektrum (Nujol): v „ = 3300, 1745, 1660 (skulder) og 1640 max cm 2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

fH3 D

[CH3(CH2)15]2 chco nh ch conhchcooh L <f2>2 ! L <r«3

conhchconhchcooh <ch2>3 D

H„NCHCOOH

(4) D

291

DK 156252 B

2-Hexadecyloctadecanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-0H)-(L)-mesoDAP-(L)-D-

AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 122.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3270, 1730 og 1630 cm \ ma x 5 NMR-Spektrum (trifluoreddikesyre): δ = 0,92 (6H, m), 4,30 - 5,00 (5H, m) ppm.

Eksempel 126.

1) Trin 1: L <fH3 H2NCHCONHCHCOOH ch3 d (CH0)0 D + [CH0(CH0)01 ] 9CH CONHCHCONHCHCOOBzl | Z ô O ù JjI « γ |

BocHNCHCOOH (CH9)9 D \ i i u COOSu (1) (2)

fH3 D

-> [ CHg ( CH2) 21 ] 2 CH CONHCHCONHCHCOOBzl L <CH2>2 L ?H3

CONH CH CONH CHCOOH

i D

«rH2>3

BocHNCHCOOH (3) D

2-Docosyltetracosanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc*(D)-meso-10 DAP“(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 122.

IR-Spektrum (Nujol): v s 3250, 1750 (skulder), 1715 (skulder), max 1690, 1660 og 1640 cm"1.

292

DK 1S6252B

2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

D

[CH3(CH2)21] 2 CHCO NHCH CONHCHCOOH

L <PV2 I L <fH3

CONHCHCONHCHCOOH • D

(CH2}3

h9N(!:hcooh <« D

‘2-I^c©sy1tetTæEOsanoyjl-:L--Ala-ï-D-Glu (α-OH) - (L) -mesoDAP-(L)-D-A'IaQH (4) Treemstitles pi i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempël 122.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1720 og 1645 - 1625 (bred) cm \ NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 0,67 - 3,00 (107H, m), 4,33 - 4,67 (3H, m) ppm.

Eksempel 127.

1) Trin 1:

L

HgNCHCOOH D

CCH2>3 + [CH3(CH2)21 ]2CHCONHCHCOOBz1

BocHN CHCOOH (CH„)„ D èœl U) (2)

DK 156252B

293

D

-> [ch3(ch2)21]2chconhchcoobz1 (ÇH2>2 I l

CONHCHCOOH

^H2>3

BocHN CHCOOH (3) D

2-Docosyltetracosanoyl-3f-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 122.

IR-Spektrum (Nujol): v s 3300, 1740 (skulder), 1720 (bred), 1690

ΓΠα X

5 og 1640 cm ^.

NMR-Spektrum (CDCI3): 6 = 0,86 - 2,50 (101H, m), 4,10 - 4,83 (3H, m), 5,13 (2H, s), 7,30 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

D

[ch3(ch2)21]2 CHCONH CHCOOH

Ù*2>2

I L

CONHCHCOOH

(ch2)3

HoNCHCOOH

(4) D

2-Docosyltetracosanoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (4) fremstilles 10 pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 122.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3300, 1720 og 1640 - 1620 (bred) cm NMR-Spektrum (CDCIg): 6 = 0,68 - 2,86 (101H< m), 4,33 - 4,86 (2H, m) ppm.

DK 156252 B

294

Eksempel 128.

1) Trin 1:

Fs D

[CH3(CH2)21 ]2CHCONHCHCONHCHCOOBz1 -> L <F252 I L Fs

CONHCHCONHCHCOOH

4H2>3 D

BocHNCHCOOH

(D D

Fs D

[CH3(CH2)21]2 CHCO NHCH CONHCHCOOBzI

L 4H2>2 I L Fs CONHCHCONHCHCOOCH,

<Fs>s D

BocHN CHCOOCH,

(2) D

1,50 g 2-docosyltetracosanoyl-L-Ala-?'-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-me-soDAP-(L)-D-AlaOH (1) oploses i en blanding af 50 ml tetrahydro-5 furan og 20 ml methylendichlorid. Til denne oplpsning sættes 6 ml af en 0,5 mol etherisk oplpsning af diazomethan under omrpring, og blandingen lades reagere i 1 tlme. Overskud af diazomethan sonder-deles ved tilsætning af eddikesyre, og den resulterende oplpsning inddampes, hvorved der fâs en voksagtig remanens, som hældes pâ en 10 silicagelkolonne. Ved eluering med chloroform-methanol ï forholdet 20:1 og pâfolgende inddampning fâs 0,90 g 2-docosyltetracosanoyl-L-Ala-ï-D-Glu (o-OBzl) - (L) -Boc- (D) -mesoDAP- L-D-Ala COMe) - (D) -OMe (2).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1755 (skulder), 1745, 1690, 1660

iiiqX

15 og 1640 cm"1.

NMR-Spektrum (CDCIg): 6 = 0,86 - 2,50 (116H, m), 3,68 (3H, m), 3,72 (3H, s), 4,16 - 4,83 (5H, m), 5,15 (2H, s), 7,33 (5H, s) ppm.

295

DK 156252 B

2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

?H3 D

[CH3(CH2)21]2 CHCO NH CHCONHCHCOOBzl

L

I L ^3 CO NH CHCONHCHCOOCH„ I D 0 <?H2>3 HC1.H.NCHCOOCH, .......... . · · · ' T) ύ

(4) U

1,0 g 2-docosyltetracosanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala(OMe)-(D)-OMe (3) oploses ί 40 ml eddikesyre og behandles derefter med 2 ml hydrogenchloridmættet eddikesyre.

5 Efter henstand i 2 timer ved stuetemperatur inddampes oplosningen, hvorved der fâs en hvid remanens, som vaskes grundigt med di-isopropylether, hvorved der fâs 0,90 g 2-docosyltetracosanoyl-L-Ala-2f-D-Glu(a-OBzl)-(L)-mesoDAP-(L)-D-Ala(OMe)-(D)-OMe (4).

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1750, 1660 og 1640 cm 10 NMR-Spektrum (CDCI3): δ = 0,68 - 3,00 (107H, m), 3,68 - 4,00 (6H, bred), 4,33 - 5,86 (4H, m), 5,16 (2H, s), 7,36 (5H, s) ppm.

Eksempel 129.

1) Trin 1: ?AC D L fH3 (CfiH,-)î>CCONHCHCOOBzl + H0N CH CONHCHCOOH->

ο o / , 2 | D

(CH2)2 (^H2>3 COOSu BocHNCHCONHNHBoc

D

(D (2)

DK '156252 B

296

?Ac D

( C6H5 ) 2 c CONHCH C©OBzl <ÇH2>2

I 1 CH3 îSBNHjGKCONHCHCOOH

• T) \«GH2)3

B ocHNCKCONHNHB oc D

m ^il een ;opl0srirng raf '2/76 >g ÎBoc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH-(D)-£2) pg £90 mil itriathylamin i acetone-vand i forholdet 2:1 isætfees mn coplpsnrng :af 3/4 g .(5,8 millimol) O-acetylbenziloyl-ÎT-D-iGLuXa-Ofiziy-H&ujtxmitTÎïdylester i acetone ved 0°C under omroring.

5 CQmrpnrngen fartsaettes -na.tten :over, hvorefter blandingen lades ajutage ^tuétemperatur.. Ef.ter afdampning af acetonet sættes 60 ml éthylacétat fil memanensen, oog den organiske fase vaskes med fortyndet rnatniurnhydrogencarbonatopl^sning, mættet natriumchlorid-oplosniing, fortyndet saltsyreoplpsning og vand. Efter torring over 10 magrresiumsulfat fjernes oplosningsmidlet i vakuum, og remanensen tritureres med isopropylether, hvorved der fas 4,63 g O-acetyl-benziloyl-ï-D-Glu-(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AIaOH-(D)-NHNHBoc (3).

NMR-Spektrum (CDCI^): δ = 1,0 - 2,0 (29H, m), 2,05 (3H, s), 15 2,0 - 2,6 (2H, m), 4,0 - 5,0 (4H, m), 5,13 (2H, s), 5,66 (1H, bred s), 6,80 (3H, m), 7,07 (2H, m), 7,33 (15H, s), 8,94 (1H, s) ppm.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3300, 1735, 1670, 1520, 1240, 1165 og ΓΠαΧ 700 cm-1.

2) Trin 2: 297

DK 156252 B

?" D

Forbindelse (3) -> (c^icONHÇHCOOH

(CH2)2 L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

<?H2>3 °

BocHN CH CONHNHBoc D

(4)

Til en oplpsning af 4,2 g 0-acetylbenziloyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH-(D)-NHNHBoc (3) i 25 ml methanol sættes under omrpring og ved 0°C 16 ml IN natriumhydroxidoplosning.

5 Blandingen omrpres i isbad i 30 minutter og derefter ved stuetempe-ratur i 30 minutter. Efter tilsætning af 16 ml IN saltsyreoplesning fjernes opl0sningsmidlet i vakuum, og remanensen oplpses i 60 ml ethylacetat og 40 ml vand. Den organiske fase vaskes med mættet natriumchloridoplpsning, tprres over magnesiumsulfat og inddampes, 10 hvorefter remanensen tritureres med diethylether, hvorved der fâs 2,97 g benziloyl-ï-D-Glu(a-OH)-'(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH-(D)-NHNHBoc (4).

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,23 (3H, d, 7Hz), 1,0 - 2,0 (26H, m), 2,0 - 2,6 (2H, m), 3,9 - 4,7 (4H, m), 7,1 - 7,7 (10H, m) ppm.

15 IR-Spektrum (Nujol): v„av = 3300, 1720, 1650, 1510, 1240, 1160 og ilia a 700 cm"1.

2) Trin 2:

DK 156252B

298

?H D

Forbindelse (4) -> (C_Hc)0CCONHCHCOOH

O O Z I

Wî I t ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

(ÇH2)s d

H9NCHCOOH à D

(5) 2,5 g benziloyI-3f-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH-(D)-NHNHBoc (4) behandles med 10 ml trifluoreddikesyre i 15 minut-ter ved stuetemperatur. Det resulterende trifluoreddikesyresalt af 5 benziloyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH-(D)-NHNH2 (2,44 g) oplpses î 18 ml IN svovlsyreoplpsning, og der tilsættes 0,62 g natriummetaperiodat ved 0°C under omrpring. Efter omrpring I 20 minutter ved 0°C behandles reaktionsblandingen med natriumbisulfit og hældes derefter pâ en kolonne med 170 ml HP-20. Efter fjernelse af 10 uorganiske salte med vand foretages eluering med methanol-vand i forholdet 1:1. Eluatet lyofiliseres, hvorved der fâs 1,0 g benziloyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5).

[a]D = +11,90° (c = 0,36 i vand).

NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,36 (3H, d, 7Hz), 1,3 - 2,1 (8H, m), 15 2,1 - 2,5 (2H, m), 3,76 (1H, t, 6Hz), 4,0 - 4,6 (3H, m), 7,45 (10H, d, 3Hz) ppm.

IR-Spektrum (Nujol): = 3300, 1710, 1645, 1520, 1220 og 700 ΠΊαΧ cm”^.

Eksempel 130.

299

DK 156252 B

1) Trin 1: D L <?H3 (C-Η,. )0 CHCONHCHCOOBzl + H0NCHCONHCHCOOH -> 6 5 2 I 2 | n W2 <FV3 COOSu BocHNCHCONHNHBoc

D

(D (2) D............

(SH5^CHCONHCHCOOBzl (W2 I L ÇH3 CONH CH CONH CH COOH I n (CH9)„ u

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3)

Diphenylacetyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles pi i det væsentlige samme mlde som 5 beskrevet i trin 1 i eksempel 129.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 1,0 - 2,3 (31 H, m), 3,7 - 4,5 (4H, m), 5,0 (1H, s), 5,06 (2H, s), 6,3 - 7,0 (1H, m), 7,23 ( 10H, s), 7,28 (5H, s), 7,5 - 8,1 (3H, m), 7,3 - 9,0 (2H, m), 9,5 (1H, s) ppm.

10 IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3300, 1725, 1630, 1525, 1220, 1160 og

XTid X

700 cm'1.

DK 156252 B

300 2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> (CgH^CHCO NHÇHCOOH

(fH2>2 I L <ΓΗ3

CONHCHCONHCHCOOH 1 D

(?Η2}3

BocHN CHCONHNHBoc D

(4)

Diphenylacetyl-3f-D-Glu(a“OH)T(l_)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH-(D)-NHNHBoc (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme màde som beskrevet i trin 2 i eksempel 129.

5 NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,3 - 2,5 (28H, m), 3,9 - 4,6 (4H, m), 5,10 (1H, s), 7,30 (10H, d, J=3Hz) ppm.

IR-Spektrum (Nujol): v s 3300, 1720, 1650, 1520, 1220, 1160 og ΓΠ3Χ 700 cm'1.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> (CeHc)_ CHCO NHCHCOOH

O O Z | <?H2>2

I L ÇHj CONHCHCONHCHCOOH

CÇH2)s D

H0NCHCOOH Δ D

(5) 10 Diphenyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 129.

[a]p^ = +4,02° (c = 0,2 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,3 - 2,6 (10H, m), 3,73 (1 H, t, J=6Hz), 4,0 - 4,6 (3H, m), 5,20 OH, s), 7,36 (10H, s) 15 ppm.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250, 1720, 1620, 1525, 1220 og 700 -1

DK 156252B

301 cm

Eksempel 131.

l) Trin 1: D L ?H3 C6H5CH=CHCONHÇHCOOBz1 + H2NÇHCONHCHCOOH ->

(PH2}2 (ÎH2}3 D

COOSu BocHNCHCONHNHBoc

D

(D (2)

D

C„HcCH=CHCONHCHCOOBzl 6 5 i

I L ÇK3 CONHCHCONHCHCOOH

(^Η2>3 °

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3) 5 Cinnamoy l-Y-D-Glu (a-OBzl )-(!_)“ Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH- (D)-NHNHBoc (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet î trin 1 i eksempel 129.

NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 1,1 - 2,6 (31H, m), 3,9 - 4,7 (4H, m) , 5,19 (2H, s), 6,67 (1H, d, J=16Hz), 7,1 - 7,9 (1H, m) ppm.

10 IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3260, 1730, 1650, 1625, 1520 og 1160 ΠισΧ cm"V.

DK 156252 B

302 2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CgH5 CH=CHCONHCHCOOH

«k>2 I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

(ÇH2)3 d

BocHNCHCONHNHBoc

D

(4)

Cinnamoyl-ÿ-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-CL)-D-AlaOH-(D)-NHNHBoc (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme made som be-skrevet i trin 2 i eksempel 129.

5 NMR-Spektrum (CD^OD): 6 = 1,1 - 2,6 (31H, m), 3,9 - 4,7 (4H, m), 6,67 (1H, d, J=16Hz), 7,3 - 7,9 (6H, m) ppm.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3260, 1740, 1690, 1655, 1620, 1550 og

ΓΠβ X

1160 cm"1.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CcHcCH=CHCONHCH COOH

ο o i «iH2>2 I L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOH

‘ I D

(?Η2}3 H„NCHCOOH Δ D

(5) 10 Cinnamoyl-Y-D-G!u(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-A!aOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 129.

[a]^2 = *5,69° (c = 0,22 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,5 - 2,6 (10H, 15 m), 3,74 (1H, t, J=6Hz), 4,1 - 4,6 (3H, m), 6,65 (1H, d, J=16Hz), 7,2 - 7,7 (6H, m) ppm.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3250, 1720, 1650, 1620, 1530 og 1220

nid X

DK 156252B

303 cm

Eksempel 132.

1) Trin 1: D L fH3

f^jV-CONHCHCOOBzl + HgNfHCONHCHCOOH

(CHg^ ^^2^3 COOSu BocHN CH CONHNHBoc ...... .............. D ·· (1) (2) ->

^ D

(^VV-CONHCHCOOBzl OT d** L ÇH3 CONHCHCONHCHCOOH • n (CH2}3

BocHN CHCONHNHBoc D

(3) 5 Adamantan-1-carbonyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 129.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 1,0 - 2,3 (46H, m), 4,0 - 4,5 (4H, m), 5,10 (2H, s), 6,5 - 6,9 (1H, m), 7,33 (5H, 10 s), 7,5 - 8,6 (5H, m), 9,53 (1H, s) ppm.

IR-Spektrum (Nujol): vmax/ = 3300, 1740 (skulder), 1720, 1685,

BiiaX

1630, 1520, 1240, 1160 og 700 cm'1.

DK 156252 B

304 2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> ^/\^CONH(^HCOOH

δί T2>2 CH ' I L I 3 CONHCHCONHCHCOOH I n (?H2)3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(4)

Adamantan-1-carbonyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-

AlaOH-(D)-NHNHBoc (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 129.

5 NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,3 - 2,5 (46H, m), 3,9 - 4,6 (4H, m) PPm.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1720, 1640, 1520, 1240 og 1160 cm ^.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> NH CH COOH

nX

^ II™* CONHCHCONHCHCOOH i n

(?Η2}3 H0NCHCOOH Z D

(5) 10 Adamantan-1-carbonyl-y-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 129.

[a]22 = -2,64° (c = 0,23 i vand).

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,2 - 2,6 (25H, 15 m), 3,80 (1H, t, J=6Hz), 4,2 - 4,5 (3H, m) ppm.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3250, 1720, 1635 og 1520 cm ma x 305

DK 156252 B

Eksempel 133.

1) Trin 1:

OH CH„ n I ! 3 D

CH„CH CONH CHCONH CHCOOH

D L «*2>2

L

CONHCHCONHCHgCOOH

(çh2)3

H„NCHCOOH

(1) D

°H ?H3 D

-> CH„ CH CONH CH CONHCHCOOH

D L <ÇH2>2 I L

CONHCHCONHCH2COOH

<fH2>3 ZHNCHCOOH

(2) D

Til en oplosning af 1,2 g D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-5 (L)-GlyOH (1) i 5 ml vand sættes 0,96 g triethylamin og en oplosning af 0,69 g benzyloxycarbonyloxyimino-2-phenylacetonitril i 5 ml acetone ved 0°C under omroring, og blandingen omrores natten over ved stuetemperatur. Efter afdampning af acetonet sættes 5 ml vand og 5 ml ethylacetat til remanensen. Den vandige fase fraskilles, vaskes med 10 5 ml ethylacetat, syrnes med IN saltsyreoplosning og ekstraheres med 20 ml ethylacetat. Ekstrakten vaskes 2 gange med hver gang 5 ml vand og torres over magnesiumsulfat. Ved afdampning af oplosnings-midlet fâs 1,42 g (94,7% af det teoretiske) D-Lac-L-Ala-Ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (2).

DK 156252 B

306 2) Trin 2:

?H <»3 D

Forbindelse (2) -> CH0CHCONHCHCONHCHCOOMe

3 I

I L

CONHCHCONHCHnCOOMe I 2 (fH2}3 ZHNCHCOOMe

D

(3) TU en opiosning af 1,42 g D-l_ac-L-AIa-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (2) i 30 ml methanol sættes en oplosning af diazomethan i diethylether ved 0°C under omroring. Blandingen om-5 rpres i 4 timer ved 0°C og i 2 timer ved stuetemperatur og lades derefter henstâ natten over. Efter tilsætning af 0,1 ml eddikesyre afdampes oplpsningsmidiet i vakuum, og remanensen krystalliseres af ethylacetat, hvorved der fâs 1,30 g D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OMe)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOMe-(D)-OMe (3).

10 NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,33 (3H, d, J=7Hz), 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,5 - 2,5 ¢1 OH, m), 3,67 (9H, s), 3,95 (2H, s), 4,0 - 4,6 (4H, m), 5,06 (2H, s), 7,47 (5H, s) ppm.

IR-Spektrum CNujol): vmav = 3310, 1760, 1740, 1690, 1660, 1630, 1550

Πια X

_1 og 1280 cm .

15 3) Trin 3: OH CH, n

I I 3 D

Forbindelse (3) -> CH,CHCONHCHCONHCHCOOMe όΏ L 1

Wl

I L

CONHCHCONHCH„COOMe 1 4 Cçh2)3

H0NCHCOOMe 1 D

(4) 307

DK 156252 B

En oplosning af D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OMe)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOMe-(D)-OMe (3) i 30 ml 80%'s methanol hydrogenolyseres i nærværelse af 0,12 g 10%'s palladium/kul. Efter fjernelse af kataly-satoren afdampes oplpsningsmidlet i vakuum, og remanensen kry-5 stalliseres af methanol-diethylether, hvorved der fas 0,86 g D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OMe)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOMe-(D)-OMe (4).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,43 (3H, d, J=7Hz), 1,53 (3H, d, J=7Hz), 1,5 - 2,6 (10H, m), 3,6 - 3,8 (1H, m), 3,77 (9H, s), 4,03 (2H, s), 4,1 - 4,6 (4H, m) ppm.

10 IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3370, 1730, 1630, 1520 og 1210 cm"1.

ma x

Eksempel 134.

1) Trin 1 :

OAc CHg D L

CHoCHCOHNCHCOHNCHCOOBzl + ZHN CH COHN CH9COOH 3γν γ I · ύ <ÇH2>2 (ίΗ2}3

COOSu H„NCHCOOH

 D

(1) (2) U <pAc CH3 d -> CHq CH COHN CH COHNÇHCOOBzl

D L ^H2>2 I D

COHNCHCOOH

<K>3

ZHNCHCOHNCH9COOH (3) L

En oplosning af 186 mg Z-(L)-mesoDAP(L)-GlyOH (2) i 3 ml vand indstilles pâ pH-værdi 8 med triethylamin, og der tilsættes en oplos-15 ning af 260 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-3f-D-Glu(OSu) (a-OBzl) (1) i 2 ml dioxan. Blandingen omrpres ved stuetemperatur I 5 tlmer, medens pH-vasrdien holdes pâ 8 med triethylamin, hvorefter der inddampes.

DK 156252 B

308

Den vandige fase fortyndes med 10 ml vand og indstilles pâ pH-værdi 4 med IN saltsyre. Denne oplpsning vaskes med ethylacetat og indstilles pâ pH-værdi 2 med 1N saltsyre, hvorefter den ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med mættet natriumchloridoplpsning, 5 torres over magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fâs 203 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(D)-Z-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (3).

NMR-Spektrum (CDjOD): δ = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,45 (3H, d, ,J=7Hz), 1,4 - 2,0 '(6H, m), 2,10 (3H, s), 2,0 - 2,4 (4H, m), 3,93 10 X2H, s), 4,1 - 4,7 C4H, m), <4,9 - 5,1 (1H, m), 5,12 (2H, :$), 5,20 C2H, s), 7,37 (10H, s) ppm.

Bksempel :Î35.

T) Trrm 1 : OAc CH,

I I 3 D

<CH,CHCOHNCHCDHNCHCOOBzl D L ‘<W2 I d

COHNCHCOOH

<FVs ZHN CH COHN CH,COOH L Δ (1) OAc CH, n

I I 3 D

-> CH, CH COHN CH COHNCHCOOH

D L W2

I D

COHNCHCOOH

<fH2}3

H2NCHCOHNCH2COOH

(2) L

DK 156252 B

309

En oplpsning af 180 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(D)-z-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (1) i 30 ml methanol hydrogeneres over 50 mg 10% s palladiumsort under hydrogen ved atmosfæretryk. Reakti-onsblandingen filtreres, og filtratet inddampes. Koncentratet oploses i 5 1 ml methanol og tritu reres med ether, hvorefter det filtreres. Det vundne pulver vaskes med ether, hvorved der fâs 98 mg D-Lac-(OAc)-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (2).

NMR-Spektrum (D20): δ - 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,43 (3H, d, J=7Hz), 1,5 - 2,2 (10H, m), 2,0 (3H, s), 3,90 (2H, s), 4,0 - 4,5 (5H, m) 10 ppm.

Eksempel 136.

1) Trin 1:

?Ac <?H3 D

CH , CH COHN CHCO HN CH COOH 3D I 1 <W2

* D COHN CH COOH

<f»2>3

HgN CH COHNCHgCOOH

(D

OH CH, n

i i 3 D

--> CH,CH COHNCHCOHNCHCOOH

“n t I

I D

COHNCHCOOH

HgN CHCOHN CHgCOOH

(2) L

DK 156252 B

310

En oplosning af 105 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-îf-D-Glu(a-OH)-(D)-meso-DAP-(L)-GlyOH (1) i 5 ml methanol omreres ved stuetemperatur i 3 timer, medens pH-værdien holdes pâ 9 ved tilsætning af 5%’s vandig kaliumcarbonatoplpsning.

5 Oplosningen inddampes, og remanensen indstilles pâ pH-værdi 3,5 og hældes pâ en kolonne med aktivkul. Kolonnen vaskes med vand og elueres med 70%'s vandigt acetone. Eluatet inddampes, og remanensen oploses i 0,5 ml methanol og tritureres med ether. Det sâledes vundne bundfald filtreres og vaskes med ether, hvorved der fâs 60 mg D-10 Lac-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (2).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,44 (3H, d, J=7Hz), 1,7 - 2,5 (10H, m), 3,98 (2H, s), 4,08 (1H, t, J=6Hz), 4,2 - 4,5 (5H, m) ppm.

Eksempel 137.

OAc ÇHg D L

CH„CHCOHN CHCO HN CHCOOBzl + H„NCHCOOH

3n L 1 2 l ° (ÇH2)2 <ÇH2)3

COOH BocHNCHCOHNCH0COOH

(1) D (2)

OAc CH0 T

I I d L

-> CH, CH COHN CH COHNCHCOOBzl D L W2

I L

COHNCHCOOH

^H2}3

BocHN CHCOHN CH„COOH (3) D

311

DK 156252 B

Til en kold blanding af 1,05 g D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(OH) (α-OBzl) (1) og 317 mg N-hydroxysuccinimid i en blanding af 10 ml dioxan og 2 ml tetrahydrofuran sættes 557 mg Ν,Ν'-dicyclohexyl-carbodiimid. Blandingen omrpres ved 10°C i 10 minutter og ved stue-5 temperatur natten over. Det udfældede Ν,Ν'-dicyclohexylurinstof frafiltreres, vaskes med dioxan og filtreres. De samlede filtrater inddampes, og remanensen oplpses i 6 ml dioxan. Til denne oplpsning sættes en oplpsning af 600 mg Boc-(D)-mesoDAP-(D)-GlyOH (2) og 0,57 ml N-methylmorpholin i 6 ml dimethylformamid. Den resulterende 10 oplpsning omrpres ved 0°C i 30 minutter, og omrpringen fortsættes ved stuetemperatur i 2^3 timer, hvorefter der tilsættes yderligere 0,10 ml N-methylmorpholin. Blandingen omrpres ved samme temperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen inddampes, fortyndes med vand og vaskes med ether. Den vandige fase afkples, syrnes til pH-værdi 2 15 med IN vandig saltsyreoplpsning og ekstraheres derefter 4 gange med en blanding af methylenchlorid og ethylacetat i forholdet 1:1. De samlede ekstrakter vaskes 2 gange med vand og saltvand, tprres over vandfrit magnesiumsulfat og inddampes, hvorved der fâs 1,2 g af et amorft fast stof. Det faste stof oplpses i 2 ml methylenchlorid og 20 fortyndes med 30 ml ether, hvorved der fâs et olieagtigt bundfald, og den overstêende væske fradekanteres. Denne operation gentages 3 gange. Det resulterende bundfald oplpses i methylenchlorid, og op-Ipsningen inddampes under vakuum, hvorved der fâs 932 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-Jf-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-GlyOH (3) 25 som et amorft fast stof.

NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD): δ = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,47 (9H, s), 1,49 (3H, d, J=7Hz), 1,2 - 2,0 (6H, m), 2,0 - 2,5 (4H, m), 2,15 (3H, s), 3,99 (2H, bred s), 5,02 (1H, q, J=7Hz), 5,20 (2H, s), 7,39 (5H, s) ppm.

Eksempel 138.

312

DK 156252 B

OAc CH„ n

I i 3 D

CH 0 CH COHN CHCO EN CHCOOB zl 3D L 1 <W2

I L

COHN CHCOOH (ÇH2)3

BocHNCHCOHNCH9COOH D Δ (1) OH CH„ n

I I 3 H

--> CJH„ CH COHNCHCOHNCHCOOH

D L <*W2

I L

COHN CHCOOH <ÇH2>3

BocHNCHCOHNCH9COOH

(2) D

4,6 ml IN vandig natriumhydroxidoplpsning sættes til en oplpsning af 865 mg D-Lac(OAc)-L-Ala-r-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-GlyOH (1) i en blanding af 8 ml methanol og 4 ml vand, og der 5 omrpres ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen afkples til 0°C, neutraliseres til pH-værdi 7 med IN vandig saltsyreoplpsning og inddampes derefter. Koncentratet fortyndes med vand og vaskes med ether. Den vandige fase inddampes, og koncentratet syrnes til pH-værdi 2 med IN vandig saltsyreoplpsning, hvorefter der chromato-10 graferes pâ 40 ml makroporos, ikke-ionisk adsorptionsharpiks, HP-20, og elueres med 50%’s vandigt methanol. Eluatet inddampes, tritureres i ether og inddampes igen, hvorved der fâs 600 mg D-Lac-L-Ala-Ï-D-Glu (α-OH) - (L) -Boc- (D) -mesoDAP- (D) -GlyOH (2).

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,0 - 2,8 (16H, m), 1,43 (9H, s), 3,83 -15 4,5 (4H, m), 3,96 (2H, s) ppm.

Eksempel 139.

313

DK 156252 B

OH CH„ n | l à D

CH „ CH COHN CH CO HN CH COOH

D ’ L W2

I L

COHN CHCOOH

Ws

BocHNCHCOHNCH9COOH D Δ

(D

OH CH„ n

I I 3 D

-> CH„ CH COHN CH COHN CH COOH

D L î'Wî I l COHN CHCOOH <fH2}3

h9nchcohnch9cooh (2) D

560 mg D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-GlyOH

(1) oplpses i 5 ml tetrahydrofuran, og oplpsningen omrpres ved stue-temperatur i 15 minutter. Reaktionsblandingen inddampes til tprhed.

5 Remanensen tritureres med ether, og den overstâende væske kasse-res. Den slledes vundne remanens inddampes under vakuum, hvorved der fâs 647 mg af et fast stof. Det faste stof oplpses i vand, og oplosningen indstilles pâ pH-værdi 3,0 med IN vandlg saltsyre og chromatograferes pâ 40 ml makroporps, ikke-ionisk adsorptionharpiks, 10 HP-20. De fraktioner, som indeholder den pnskede forbindelse, isole- res, inddampes og lyofiliseres, hvorved der fâs 324 mg D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-GlyOH (2).

NMR-Spektrum (DjO): 6 * 1,1 - 2,5 (10H, m), 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,43 (3H, d, J=7Hz), 4,01 (2H, s), 4,09 (1H, t, J=6Hz), 4,2 - 4,6 15 (4H, m) ppm.

[a]*5 = -35,4° (c = 0,26 i vand).

Eksempel 140.

314

DK 156252 B

D

ch3(ch2)6conhchcooh CCH2)2 I L <rH3 CONHCHCONHCHCOOH ->

1 D

(?Η2}3 ELNCHCOOH Z D

(1)

D

CH„(CH0)eCONHCHCOOMe

ό m O I

<·™2>2 I L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOMe * 1 D

(fH2}3 H9NCHC00Me

(2) D

ΤΠ en oplspning af 150 mg n-octanoyl-ï-D-Giu(a-OH)-(L)-mesoDAP-D-AlaOH (1) i 150 ml methanol sættes ved stuetemperatur 1 ml kon-centreret saltsyre. Blandingen lades henstâ i 2 uger ved samme 5 temperatur. ΤΠ Reaktîonsblandingen sættes triethylamin for at ind-stille pH-værdien i oplpsningen pi 7 - 8. Ved afdampning af oplps-nîngsmidlet i vakuum fis en olieagtig remanens, som ekstraheres med ethylacetat. Ekstrakten vaskes med vand og saltvand og tprres over magnesiumsulfat. Efter afdampning af oplpsningsmidlet I vakuum 10 pulveriseres remanensen med isopropylether, hvorved der fis 102 mg n-octanoyl-ï-D“Glu(a-OMe)-(L)-mesoDAP-D-AlaOMe-(D)-Ome (2). NMR-Spektrum (CDCI3): 6 = 0,90 (3H, t, J=7Hz), 1,00 - 2,33 (25H, m), 3,73 (9H, s), 4,33 - 4,66 (4H, m), 6,50 - 7,50 (5H, m) ppm.

315

Eksempel 141.

DK 156252 B

1) Trin 1: DL-2,3-Diacetoxypropionyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OBzl)”(L)-Z-(D)“meso- DAP-(D)-NHNHZ-(L)-GlyOH fremstilles pâ i det væsentlige samme 5 mâde som i trin 1 i eksempel 1.

NMR-Spektrum (CDCI3): δ = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 2,01 (3H, s), 2,12 (3H, s), 3,95 (2H, s), 4,25 - 4,65 (6H, m), 5,03 - 5,30 (8H, m), 7,35 (15H, s) ppm.

2) Trin 2: 10 DL-2,3-Diacetoxypropionyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-

GlyOH fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 26.

NMR-Spektrum (DjO): 6 = 1,42 (3H, d, J=7Hz), 2,10 (3H, s), 2,21 (3H, s), 3,83 (1H, m), 3,96 (2H, s), 5,30 (1H, t, J=5Hz) ppm.

15 3) Trin 3: DL-2,3-Dihydroxypropionyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 12.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,47 (3H, d, J=7Hz), 3,85 (2H, d, J=4Hz), 20 4,00 (2H, s), 4,27 - 4,63 (5H, m) ppm.

Eksempel 142.

l) Trin 1:

Stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 26.

25 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,80 - 2,40 (60H, m), 4,10 - 4,60 (5H, m), 5,12 (2H, s), 7,33 (5H, s), 7,80 - 8,43 (4H, m) , 6,80 - 7,10 (1H, m) ppm.

DK 156252 B

316 2) Trin 2:

Stearoy!-L-Ala-Y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-^taOMe-(D)-OMe fremstilles pl i det væsentlige samme mlde som i trin 1 i eksempel 128.

5 NMR-Spektrum CCDCI3): δ = 0,68 - 2,53 (65H, m), 3,67 C3H, s), 3,70 (3H, s), 4,10 - 4,70 (5H, m), 5,13 (2H, s), 6,33 - 6,67 (1H, m), 7,00 (1H, d, J=8Hz), 7,30 (5H, s), 7,30 - 7,70 (2H, m) ppm.

3) Trin 3:

Stea roy 1 - L-Ala -ï- D-ifîl u(co-J3H>- ( L) -mesoDAP- ( L) - D-AlaOMe- ( DHOMe 10 fremstilles pl i otitet væseritlige samme mlde som i trin 2 i .eksempel 128.

:NMR-Spektr.um (d i met h,y Isu I f o x id -dg): δ = 0,68 - 2,50 (51 H, m), 3,68 X3H, s,), .3,77 X3H, Â)„ 4,0 - 4,70 (5H, m), 7,80 - 8,50 (5H, m) ppm.

15 Eksenjpel 143.

1) Trin 1:

Stea royl-L-Ala-ï-D-Glu (o-OMe)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-OMe-(L)-D-AlaOMe fremstilles pl i det væsentlige samme mlde som i trin 1 i eksempel 128.

20 NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 0,80 - 2,68 (60H, m), 3,90 (9H, s), 4,33 - 4,66 (5H, m) ppm.

2) Trin 2:

Stea royl-L-Ala-T-D-G lu (a-OMe)-(L) -mesoDAP-(D)-OMe-(L)-D-AlaOMe fremstilles pl i det væsentlige samme mlde som beskrevet i trin 2 i 25 eksempel 128.

NMR-Spektrum (CDCIg-CDgOD): δ = 0,68 - 2,50 (51H, m), 3,87 (6H, s), 3,90 (3H, s), 4,27 - 4,66 (5H, m) ppm.

Eksempel 144.

317

DK 156252 B

1) Trin 1:

Stearoyl-L-Val-y-D-GluÎa-OBzD-ÎÜ-Boc-ÎDÎ-mesoDAP-ÎD-D-AlaOH fremstilles pâ i det væsentlige samme mêde som beskrevet i trin 1 i 5 eksempel 26.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg) : δ = 0,70 - 2,50 (64H, m), 4,0 - 4,60 (5H, m), 5,15 (2H, s), 6,70 - 7,10 (1H, m), 7,36 (5H, s), 7,50 - 8,50 (4H, m) ppm.

2) Trin 2: 10 Stearoyl-L-Val-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 3 i eksempel 26.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,68 - 2,50 (55H, m), 3,67 - 3,90 (1H, m), 4,0 - 4,50 (4H, m), 7,50 - 8,40 (4H, m) 15 ppm.

Eksempel 145.

Farmaceutiske præparater.

1) Præparater til injektion.

De npdvendige mængder af stoffet FR-900156 fordeles i hætteglas, 20 som hver indeholder 500 mg af det aktive stof. Hætteglassene forsegles hermetisk for at udelukke bakterier. Nâr indholdet i hætteglassene skal anvendes, tilsættes 2 ml sterilt destilleret vand til injektionsbrug, hvorefter den vandige oplpsning admini- streres ved injektion.

25 2) Fremstilling af tabletter.

DK 156252 B

318

En egnet sammensætnîng af en tablet bestâr af fplgende blanding:

Stoffet FR-900156 200 mg

Mannitol 400 mg 5 Stivelse 50 mg

Magnesiumstearat 10 mg 3) Fremstilling af en kapsel.

Stoffet FR-900156 300 mg 10 Magnesiumstearat 15 mg

De ovennævnte ingredienser blandes, hvorefter de anbringes i en hârd gelatinekapsel pâ sædvanlig mâde.

Eksempel 146.

1) Trin 1 :

L ?H3 ÇH3 D

HJJCHCONHCHCOOH + CH,(CH„),.CONHCHCONHCHCOObzl

" I Π ό Z 10 j I

(ÇH2)3 u l (ch2)2

BocHN CHCOOH COOSu D (1) (2)

<TH3 D

-> CH0(CH0)in CONHCHCONHCHCOOBzl 3 2 10 T l (<rH2>2 I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

(Çh2)3

BocHN CHCOOH

(3) D

319

DK 156252 B

Lau royl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(!_)_ Boc-(D)-mesoDAP-( L)-(D)-

Ala(OH) (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som . tp|n 1 j eksempe| 122.

5 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid ). 5 = o,80 - 2,50 (48H, m), 4,0 - 4,50 (5H, m), 5,10 (2H, s), 6/80 . 7,00 (1H, m), 7,33 (5H, s), 7,70 - 8,40 (4H, m) ppm.

2) Trin 2: Çh3 d

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)10 CONHCHCONHCHCOOMe

L

I L 7¾ CONHCHCONHCHCOOMe

I D

(CH2>3

BocHN CHCOOMe

(4) D

Lauroyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OMe)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala(OMe)-10 (D)-OMe (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 128.

NMR-Spektrum (CDCI3): δ = 0,80 - 2,50 (48H, m), 3,73 (9H, s), 4,10 - 4,70 (5H, m), 5,30 (1H, d, J=8Hz), 6,50 (1H, bred s), 6,96 (1H, d, J=8Hz), 7,33 - 7,65 (2H, m) ppm.

15 3) Trin 3: ÇHg d

Forbindelse (4) -> CHgfC^^gCONHCHCONHCHCOOMe L <ÇH2>2 I L <ΤΗ3 CONHCHCONHCHCOOMe

1 D

<ρν> HClH«NCHCOOMe (5) °

DK 156252 B

320

Lauroyl-L-Ala-ï-D-GIu(a-OMe)-(L)-mesoDAP-(L)-D-A!a(OMe)-(D)-OMe-hydrochloridsalt (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trîn 2 i eksempel 128.

NMR-Spektrum (drmethylsulfoxid -dg): δ = 0,80 - 2,40 (39H, m), 3,68 *5 (6H, s), 3,78 (3H, s), 3,88 - 4,00 (1H, m), 4,12 - 4,50 (4H, m), 8,04 C2H, t, J=8Hz), 8,20 (2H,“t, J=8Hz), 8^64 (2H, bred) ppm.

Eksempel 147.

DTrinl: CHgOBzl

L ?H3 I D

H^NCHC0NHCHGDOH + «Ï3H3(CH2)16 CONHCHCONHCHCOOBzl ° L (ÇH2)2

BocHNCHCOGH COOSu D Cl) (2) CH„OBzl I d -> CH0(CH0)_ CONHCHCONHCHCOOBzl Ο ά ID y |

<?V2 I L

CONHCHCONHCHCOOH

i ° CÇH2>3

BocHNCHCOOH (3) D

Stearoyl-L-Ser(OBzl)-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP~(L)-10 D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mide som i trin 1 i eksempel 122.

NMR-Spektrum CCDC^-CDgOD): 6 = 0,88 (3H, m), 1,1 - 1,4 (30H, m), 1,45 (9H, s), 3,6 - 3,9 (2H, m), 4,53 (2H, s), 5,15 (2H, s), 7,31 C10H, s) ppm.

DK 156252 B

321 2) Trin 2: çh2oh d

Forbindelse (3) -> CH„(CH0)ie CONHCHCONHCHCOOH

ύ δ ίο T I

<Wi I L <rH3

CONHCHCONHCHCOOH

i - (ÇHg^

BocHN CHCOOH

(4) D

Stearoyl-L-Ser-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala(OH) (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 93.

5 NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD): 6 = 0,90 (3H, m), 1,30 (30H, s), 1,46 (9H, s), 2,1 - 2,55 (4H, m), 3,65 - 4,80 (7H, m) ppm.

3) Trin 3:

CH20H D

Forbindelse (4) -> CH3(CH2)16 CONHCHCONHCHCOOH

L <™2)2 L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH D

(fH2}3

HgNCHCOOH

(5) .....................

Stearoyl-L-Ser-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-Ala(OH) (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 10 93.

NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD): 6 = 0,90 (3H, m), 1,05 - 2,60 (45H, m), 4,02 (1H, m), 4,30 - 4,95 (6H, m) ppni.

DK 156252B

Eksempel 148.

322 1) Trin 1:

L <rH3 fH3 D

H0N CH CONHCHCOOH + CH0(CH0)1c CONHCHCONHCHCOOBzl 2 | D 3 2 16 t | «?Η2>3 ?H2

BocHNCHCOOMe CHg D (1) (2) COOSu ÇHg d -> CH„(CH0)ie CONHCHCONHCHCOOBzl

3 2 16 j I

(W

I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

D

W

BocHNCHCOOMe (3) °

Stearoyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala-(D)-OMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 5 1 i eksempel 122.

NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD): δ = 0,90 (3H, s), 1,28 (30H, s), 1,40 (9H, s), 3,74 (3H, s), 4,05 - 4,60 (5H, m), 5,18 (2H, s), 7,36 (5H, s) ppm.

323

DK 156252 B

2) Trin 2: Çh3 d

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)16 CONHCHCONHCHCOOH

L (ch2)2 L Ç"s

CONHCHCONHCHCOOH

D

(?Η2}3

BocH N CHCOOMe

(4) D

Stearoyl-L-Ala-y-D-Glu(et-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala(OH)-(D)-OMe (4) fremstilles pâ ί det væsentlige samme som i trin 2 i ek-sempel 93.

5 NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD) : 6 = 0,89 (3H, m), 1,30 (30H, s), 1,46 (9H, s), 3,77 (3H, s), 4,05 - 4,60 (5H, m) ppm.

3) Trin 3:

ÇHg D

Forbindelse (4) -> CH3(CH2>16CONHCHCONHCHCOOH

L Wî I L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOH

! D

W

HCl, H„N CHCOOMe

(5) D

Stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-Ala(OH)-(D)-OMe-hydrochloridsalt (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som 10 i trin 3 i eksempel 93.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ s 0,85 (3H, m), 3,74 (3H, s), 3,8 - 4,55 (5H, m) ppm.

Eksempel 149.

324

DK 156252 B

1) Trin 1: r CH, ÇH« «

Xj I 3 i ô U

H„N CH CONHCHCOOMe + CH„(CH0)lc CONHCHCONHCHCOOBzl 2 · n 3 2 16 L · <ÇV3 <ÇH2>2

BocHHCECOOH COOSu D (1) (2)

fH3 D

-> CH0(CH„)1c CONHCHCONHCHCOOBzl ô Δ ΙΟ T l

I L

CONHCHCONHCHCOOMe

D

(Çh2)3

BocHNCHCOOH (3) D

Stearoyl-L-Ala-y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 I eksempel 5 122.

NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD): 6 = 0,88 (3H, m), 1,27 (30H, s), 1,42 (9H, s), 3,71 (3H, s), 4,03 - 4,65 (5H, m), 5,18 (2H, s), 7,35 (5H, s) ppm.

DK 156252 B

325 2) Trin 2:

fH3 D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2>16 CONHCHCONHCHCOOH

L <{**>* I L <fH3 CONHCHCONHCHCOOMe

I D

(Çh2)3

BocHN CHCOOH

(4) D

Stearoyl-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mide som i trin 2 i eksem-pel 93.

5 NMR-Spektrum (CDCIg-CD^D): δ = 0,88 (3H, m), 1,31 (30H, s), 1,46 (9H, s), 3,73 (3H, s), 4,00 - 4,65 (5H, m) ppm.

3) Trin 3:

“3 D

Forbindelse (4) -> CH3(CH2>16CONHCHCONHCHCOOH

L <»2 I L fH3 CONHCHCONHCHCOOMe ............„ I......D .

HCl,H0NCHCOOH

(5) D

Stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe-hydrochlo-ridsalt (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 10 i eksempel 128.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid ~dg): δ s 0,86 (3H, m), 3,68 (3H, s), 3,85 (1H, s), 4,10 - 4,50 (4H, m) ppm.

Eksempel 150.

326

DK 156252 B

1) Trin 1:

L ?H3 fH3 D

HJÎCHCONHCHCOOH * CH,(CH„)lc CONHCH CONHCHCOOMe

il n ά i lb τ I

^ l H2}3

BocHN CHCOOH COOSu ° (1) (2)

?H3 D

-> CH3(CH2)16 CONH CH CONHCHCOOMe L W) L ™3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

(Çh2)3

BocHN CHCOOH (3) D

Stearoyl-L-Ala*y-D-Glu(o-OMe)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mide som i trin 1 i eksempel 5 122.

NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD): 6 = 0,89 (3H, m), 1,28 (30H, s), 1,45 (9H, s), 3,76 (3H, s) ppm.

2) Trin 2: ÇH3 d

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)16 CONH CH CONHCHCOOMe L (°¾

L ÇH3 CONHCHCONHCHCOOH D

«?H2>3

HCl, H «N CHCOOH

(4) D

DK 156252 B

327

Stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OMe)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH-hydro-chloridsalt (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mide som i trin 2 i eksempel 128.

NMR-Spektrum (CDCIg-C^OD): δ = 0,98 (3H, m), 1,0 - 2,5 (38H, 5 m), 3,73 (3H, s), 3,94 (1H, m), 4,20 - 4,57 (4H, m) ppm.

Eksempel 151.

1) Trin 1:

L fH3 ÇHg D

H9NÇHC0NHCHC00H + CH«(CH„)1fi CONHCHCONHCHCOOMe Δ I n 3 2 16 t | (<rH2}3 (CH2}2 B ocHN CH COOMe COOSu D (D (2) CH, n -> CHq(CH0) . c CONH CH CONHCHCOOMe ο Δ iO , j (?H2>2 I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

BocHNCHCOOMe

(3) D

Stearoyt-L-Ala-ï-D-Glu(o-OMe)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe (3) fremstilles pi i det væsentlige samme mide som i trin 1 i eksem-10 pel 122.

NMR-Spektrum (CDCIg-CDgOD): 6 = 0,92 (3H, m), 1,31 (30H, s), 1,48 (9H, s), 3,77 (6H, s) ppm.

DK 156252B

328 2) Trin 2:

Cllg d

Forbindelse (3) -> CH0(CH0).c CONHCHCONHCHCOOMe O Z 1D T | <w2 I L ^3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

<fH2>3

HCl.H-NCHCOOMe (4) D

Stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(cc-OMe)-(L)-mesoDAP-(L)-D-Ala-D-OMe-hydro-ehloridsalt (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 128.

5 NMR-Spektrum (CDC^CDgOD) : δ = 0,90 (3H, m), 1,08 - 2,47 (48H, m), 3,74 (3H, s), 3,85 (3H, s), 3,93 - 4,09 (1H, m), 4,25 - 4,80 (4H, m) ppm.

Eksempel 152.

1) Trin 1:

L ί«3 5 B

H.,N CH CONHCHCOOMe + CH-(CH,),„ CONHCHCONHCHCOOMe 6 \ η O Z lu y | «fH2>3 (?H2>2

BocHN CHCOOH COOSu D (D (2)

, DK 156252 B

329

Ρ*3 D

-> CH„(CH„),„CONH CH CONHCHCOOMe O Z 10 j | (fH2>2 I L <fH3 CONHCHCONHCHCOOMe

D

(CH2)3

BocHN CHCOOH (3) D

Stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OMe)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksem-pel 122.

NMR-Spektrum (CDCIg-CDgOD) : δ = 0,88 (3H, m), 1,28 (30H, s), 5 1,46 (9H, s), 3,75 (6H, s) ppm.

2) Trin 2:

f»3 D

Forbindelse (3) --> CH„(CH„).„CONHCHCONHCHCOOMe O Z 10 ·*> | <?H2>2 I L <?Η3

CONHCHCONHCHCOOMe | D

«f’Vs

HCl,H 0NCHCOOH

(4)

Stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OMe)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe-hydro-chloridsalt (4) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 128.

10 NMR-Spektrum (CDCIg-CDgOD) : δ = 0,89 (3H, m), 1,0 - 2,5 (48H, m), 3,75 (6H, s), 3,95 (1H, m), 4,15 - 4,95 (4H, m) ppm.

Eksempel 153.

DK 156252B

330 1) Trin 1:

L fs D

H2N?HCOOBz1 + C6H5CH,COHNCHCONHCHCOOB2l <?H2>3 L (ÇH2)2

BocHNCHCONHNHBoc COOSu D (1) (2)

?H3 D

-> CgHgCHgCONHCHCONHCHCOOBzl L (¾½

L

CONHCHCOOH

BocHNCHCONHNHBoc (3) D

Phenylacetyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)- NHNHBoc 5 (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 122.

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 1,47 (18H, s), 3,60 (2H, s), 5,20 (2H, s), 7,33 (5H, s), 7,40 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

f»3 D

Forbtadelse (3) -> CgHgCHj CONH CH CONHCHCOOH

L w*

I L

CONHCHCOOH

(0¾

BocHNCHCONHNHBoc (4) D

331

DK 156252 B

Phenylacetyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-niesoDAP-(D)-NHNH-Boc (4) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 93.

NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 1,47 (18H, s), 3,60 (2H, s), 4,00 -5 4,66 (4H, s), 7,30 (5H, s) ppm.

3) Trin 3:

?H3 D

Forbindelse (4) -> CgHgCHg CONH CH CONHCHCOOH

'' W2

IL

CONHCHCOOH

(?Η2}3

H0NCHCOOH

(5) D

Phenylacetyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (5) fremstilles pi i det væsentlige samme mide som i trin 3 i eksempel 93.

10 NMR-Spektrum (D20): δ = 1,40 (3H, d, J=8Hz), 3,60 (2H, s), 3,80 (1H, m), 4,24 (2H, t, J=7Hz), 7,36 (5H, s) ppm.

Eksempel 154.

1) Trin 1 :

L D

H2N<j'HCOOH + C6H5CH2CONHCHCOOBzl (?H2}3 (Çh2>2

BocHNCHCONHNHBoc COOSu D <D (2)

DK 156252 B

332

D

-> CgHgCHg'COH N CHCOOB zl ΦΗ2>2

I L

CONHCHCOOH

ΦΗ2>3

BocHN CHCONHNHBoc (3) D

Rhenyfecétyi-T^D-.GluÎ:a-CEJB;zI)~;(L)-Boc-(D)-mesoDAP- (D)-NHNHBoc iC3) ffhæmsÆïÈlEs pâ .i cdfet waeservtljge samme mâde som i trin 1 i eksempel *22.

.NMR-Spstetratm δ '= 1,/47 (18H, s), 3,65 (2H, bred s), 5,17 S (C2H, jsO, 7J30 Cm, 7,,36 XSH, a), ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CgHgCHg COHNCHCOOH

W2

I L

CONHCHCOOH

4¾

BocHNCHCONHNHBoc (4) D

Phenylacetyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc (4) fremstilles pâ i det vaesentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 93.

Forbindelse (4) -> CgHgCHg COHNÇHCOOH

DK 156252B

333 3) Trin 3:

D

<PH2>2 I L

CONHCHCOOH

(?H2>3 h9nchcooh

(5) D

Phenylacetyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mide som i trin 3 i eksempel 93.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,20 - 2,50 (10H, m), 3,64 (2H, s), 3,72 5 (1H, t, J=7Hz), 4,24 (1H, t, J=7Hz), 4,30 (1H, t, J=7Hz), 5,36 (5H, s) ppm.

Eksempel 155.

1) Trin 1:

Ps D

HgNCHCONHCHCOOH

L (<fH2>2 I L

CONHCHCONHCHgCOOH -> (fH2)3

BocHN CHCOOH D

(D

?H fH3 D

CH„( CH0), CHCCHJ, n CONH CH CONH CHCOOH o i on τ ί 1U T | D,L L (CH2)2

I L

CONHCHCONHCHgCOOH

(Ρ2}3

BocHN CHCOOH

(2) D

DK 156252 B

334 (12-Hydroxy)stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (2) fremstilies pâ i det vaesentlige samme made som i trin 1 i eksempel 1.

NMR-Spektrum (CD^OD): δ = 0,90 (3H, t, J=5Hz), 1,25 (9H, s), 5 1,15 - 1,83 (39H, m), 2,15 - 2,42 (4H, m), 3,93 (2H, s), 4,25 - 4,53 (5H, m) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (2) ->

?H f«3 D

CH3( CH2)sCH(CH2)10 conhchconhchcooh D,L L <PV2

I L

CONHCHCONHCHgCOOH

4Η2}3

h9nchcooh (3) D

(12-Hydroxy)stearoyl-L-Ala-î'-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (3) fremstilies pi i det vaesentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 10 1.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,83 (3H, t, J=5Hz), 1,16 - 1,66 (39H, m), 1,92 - 2,25 (4H, m), 3,73 (2H, bred s), 4,07 - 4,25 (5H, m) ppm.

335 DK 156252 B

Eksempel Î56.

1) Trin 1 :

fH3 D

HoNCHC0NHCHC00H 2 L 1 <w2

I L

CO NH CH CONH CH0COOH -> I 2 (FH2}3

BocHNCHCOOH

D

(1)

?H fH3 D

CH„( CH„), „CHCON HCHCONHCHCOOH

ύ ^ T T * U,L L (CH2)2

I L

CONHCHCONHCHgCOOH

4H2}3

BocHNCHCOOH (2) D

β-D, L-Hydroxypalmitoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(L)-GlyOH (2) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som i 5 trin 1 i eksempeJ 1.

NMR-Spektrum (CD^OD) : 6 = 0,92 (3H, t, J=5Hz), 1,30 - 1,75 (37H, m), 1,45 (9H, s), 2,30 - 2,63 (2H, m), 3,97 (2H, s), 4,00 - 4,58 (5H, m) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (2) -> 336

Df? 156252 B

OH ÇHg L

CH„( CH„),, (WoNHCHCDNHÇHCOOH

3 213^ D <ch2)2

L

CONHGHCONHCHgCOOH

(H}3

H0NCHCOOH »> D

/.L- Hydrox.y pa I ni ftoy l-.L- A La^ï-D - GI u (α-OH ) - ( L) -mesoDAP- (L) -GlyOH 13) ifnems.tïHes pà i xtet væssnHige samme rrarde som i trin 2 i eksempel 1.

5 NMR-Spektr.irm (dimethykuFfoxrd -dg): δ = 8,66 (3H, t, J=5Hz), 1,23 - 1,75 (37H, m), 2,08 - 2,23 (2H, m), 3,63 (2H, bred s), 4,13 - 4,43 (5H, m) ppm.

Eksempel 157.

1) Trin 1: Çh3 d H0N CHCONH CH COOH 2 T 1 Wï

L

CONHCHCONHCHgCOOH -> (fH2}3

BocHN CHCONHNHBoc D

(D

DK 156252B

337 OCOCH3 CH3 d

CH„( CH0),èH(CH„), -CONHCH CONHCHCOOH

3 ί *>τ\ γ Λ lu T | ’ <CH2}2 I l CONH CH CONH CH„COOH I 2 (fH2}3

BocHNCHCONHNHBoc

(2) D

(12-D,L-Acetoxy)stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(D)-NHNHBoc-(L)-GlyOH (2) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 1.

NMR-Spektrum (CD^OD): δ = 0,90 (3H, t, J=5Hz), 1,30 - 1,73 C37H, 5 m), 1,43 (9H, s), 2,02 (3H, s), 2,13 - 2,36 (4H, m), 3,95 (2H, s), 4,33 - 4,53 (5H, m) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (2) -> OCOCH„ CH„ n

I 3 j 3 D

CH«(CH9)-CH(CH9)inCONHCHCONHCHCOOH

3 2 5n . 2 10 t I

Wî

I L

CONHCHCONHCH0COOH

I 2 (PH2}3 h9nchcooh

(3) O

(12-D, L-Acetoxy)stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(e-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mlde som i trin 2 i 10 eksempel 1.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 0,87 (3H, t, J=5Hz), 1,28 - 1,73 (37H, m), 2,00 (3H, s), 2,13 - 2,33 (4H, m), 3,92 (2H, s), 4,30 - 4,50 (5H, m) ppm.

338 DK 156252 B

Eksempel 158.

l) Trin 1:

L ?H f«3 D

H0NCHCONHCH0COOMe + CH„CH CONHCHCONHCHCOOBzl Z I Z «5n J I

(ÇH2>3 (fH2>2

ZHNCHCOOMe COOH

D

(D (2) OH CH3 d -> CH„ CH CONH CH CONHCHCOOBzl 3n L 1

I L

CONHCHCONHCHgCOOMe ΦΗ2>3 ZHNCHCOOMe

(3) D

D-Lac-L-Ala-r-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOMe-(D)-OMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i 5 eksempel 122.

NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 1,37 (6H, d, J=7Hz), 1,3 - 2,5 (10H, m) , 3,67 (3H, s), 3,70 (3H, s), 3,95 (2H, s), 4,0 - 4,6 (5H, m), 5,09 (2H, s), 5,17 (2H, s), 7,35 (10H, s) ppm.

Forbindelse (3) -> 339

DK 156252 B

2) Trin 2: OH CH. n 1 | 3 ü

CH.CHCONHCHCONHCHCOOH

° L (CH2>2

L

CONHCHCONHCH2COOMe <Κ>3

H9NCHCOOMe (4) D

D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOMe-(D)-OMe (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 72. NMR-Spektrum (D20): δ = 1,37 (3H, d, J=6Hz), 1,41 (3H, d, J=6Hz), 5 1,5 - 2,4 (10H, m), 3,73 (3H, s), 3,82 (3H, s), 4,00 (2H, s), 4,0 - 4,5 (5H, m) ppm.

Eksempel 159.

1) Trin 1 :

L fH3 D

H„NCHCONHCHCOOBzl + CcH,CH0COHNCHCOOBzl 2 | n 6 5 2, (fH2)3 D (ÇH2)2

BocHNCHCONHNHBoc COOSu D (1) (2)

D

-> CeHc CH. COHN CHCOOBzl O O Z | (fH2>2 I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

D

BocHNCHCONHNHBoc (3) D

DK 156252 B

340

PhenylacetyI-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme rnide som i trin 1 i eksempel 122.

NMR-Spektrum (CDC^-CDgOD): 6 * 1,48 (18H, s), 3,62 (2H, s), 5 3,67 (1H, m), 5,19 (2H, s), 7,34 (5H, s), 7,39 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CgHgCH2 COHNCHCOOH

I L fH3

CONHCHCONHCHCOOH

• D

(CH2)3

BocHNCHCONHNHBoc

(4) D

Phenylacetyl-y-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala-(D)-NHNHBoc (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mide som i trin 2 i eksempel 93.

10 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 55 1,30 (3H, d, J=7Hz), 3,55 (2H, s), 3,8 - 4,8 (4H, m), 6,77 (1H, d, J=8Hz), 7,36 (5H, s), 7,8 - 8,9 (5H, m), 8,63 (1H, s) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (4) -> CgHgCHg COHNCHCOOH

I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

Φν, °

H,NCHCOOH

(5) D

Phenylacetyl-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) frem-15 stilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 93.

DK 156252 B

341 NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,39 (3H, d, J=7Hz), 1,20 - 2,55 (10H, m), 3,66 (2H, s), 1,20 - 2,55 (10H, m), 3,66 (2H, s), 3,80 (1H, t, J=6Hz), 4,20 - 4,55 (3H, m), 7,36 (5H, s) ppm.

Eksempel 160.

5 1) Trin 1:

L fH3 fH3 D

H0N CH CO NHCHCOOH + CH„(CH„)c CONHCHCONHCHCOOB21

2 I n o 2 ο τ I

(çh2)3 u l (çh2)2

BocHNCHCONHNHBoc COOSu D (D (2)

CH3 D

-> CH,(CHje COHNCHCONHCHCOOBzl

6 z Ο γ I

<W2 I L ?H3

CONH CH CONH CH COOH

I D

(<rH2}3

BocHNCHCONHNHBoc (3) D

n-Octanoyl-L“Ala-ï-D-Glu(o-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala-(D)-NHNHBoc (3) fremstilles pa i det væsentlige samme mâde som beskrevet î trin 1 i eksempel 122.

NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD): δ = 0,90 (3H, m), 1,15 - 2,53 (46H, 10 m), 4,27 - 4,69 (5H, m), 5,21 (2H, s), 7,40 (5H, s) ppm.

DK 156252 B

342 2) Trin 2:

?H3 D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)g CONHCHCONHCHCOOH

L (9¾½ I l 9¾

CONHCHCONHCHCOOH

D

(<ΓΗ2}3

BocHNCHCONHNHBoc

(4) D

n-Octanoyl-L-Ala-3f-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala" (D)-NHNHBoc (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme made som beskrevet i trin 2 i eksempeî 93.

5 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,6 - 2,4 (49H, m), 3,8 - 4,6 (5H, m), 6,71 (1 H, m), 7,75 - 8,80 (5H, m), 9,60 (1H, s) ppm.

3) Trin 3:

?H3 D

Forbindelse (4) -> CH3(CH„)6 CONHCHCONHCHCOOH

L Wl I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

D

(CH2>3 h9nchcooh

(5) D

n-Octanoyl-D-Ala-r-D-Giu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3 i eksempeî 93.

10 NMR-Spektrum (DjO): δ = 0,87 (3H, m), 1,1 - 2,6 (28H, m), 3,85 (1H, t, J=6Hz), 4,2 - 4,6 (4H, m) ppm.

DK 156252 B

Eksempel 161.

343 1) Trin 1:

L 7¾ D

H.NCHCOOH + CH„(CH„)„ COHNCHCONHCHCOOBzl

Δ \ ô Δ Ό j I

<?H2>3 | H2^2

BocHNCHCONHNHBoc COOSu D (1) (2)

ÇH3 D

--> CHgCCH^gCOHNCHCONHCHCOOBzl L <CH2>2

L

CONHCHCOOH

<fH2>3

BocHNCHCONHNHBoc

(3) D

n-Octanoyl-L-Ala-2f-D-Glu(o-OBz!)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP“(D)-NHNH-Boc (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i 5 eksempel 122.

NMR-Spektrum (CDCI3): Ô = 0,68 - 2,50 (46H, m), 4,16 - 4,83 (4H, m), 5,14 (2H, s), 6,70 - 7,0 (bred, 1H), 7,36 (5H, s), 7,70 - 8,0 (bred, 1H), 9,20 (1H, s) ppm.

2) Trin 2:

?H3 D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)gCONHCHCONHCHCOOH

L <%)2 I L

CONHCHCOOH

CÇH2>3 h9nchcooh

(4) D

DK 156252 B

344 n-Octanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som trin 2 og 3 i eksempel 93.

NMR-Spektrum (DjO): δ = 0,68 - 2,50 (28H, m), 3,67 - 4,00 (1Ή, m), 4,16 - 4,50 (3H, m) ppm.

5 Eksempel 162.

l) Trin 1:

L D

H„N CH COOH t CH0(CH„)c COHNCHCOOBzl 2 | o i o | (CHo)q (?Η2}2 i Δ o \ ù ù

BocHN CHCONHNHBoc COOSu D (1) (2)

D

-> CH3(CH2)6CONHCHCOOB2l <9Η2>2

I L

CONHCHCOOH

(éH2)3

BocHN CHCONHNHBoc

(3) D

n-Octanoyl-L-Ala-r-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-CD)-mesoDAP-(D)-NHNH-Boc (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 122.

10 NMR-Spektrum (CDCÿ: δ = 0,70 - 2,50 (43H, m), 4,0 - 4,80 (3H, m) , 5,20 (2H, s), 5,50 - 5,80 (1H, m), 6,30 - 6,60 (2H, m), 6,80 - 7,10 (2H, m), 7,35 (5H, s), 9,10 (1H, s) ppm.

DK 156252 B

345 2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)6 CONHCHCOOH

(ch2)2

L

CONHCHCOOH

(ch2)3 h9nchcooh

Δ D

(4) D

n-Octanoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP (4). fremstiiles pâ i det væ-sentlige samme mlde som i trin 2 og 3 i eksempel 93.

NMR-Spektrum (DjO): δ = 0,68 - 2,60 (25H, m), 3,80 (1H, t, 5 J=7Hz), 4,16 - 4,50 (2H, m) ppm.

Eksempel 163.

1) Trin 1:

D L

CH„(CHo)c CONHCHCOOBzl + HoNCHCONHCHCO0H

«5 Z 6 | 2 | t·» (CH2)2 (çh2)4

COOSu NHZ

(D (2)

D

-> CH3(CH2)6CONHCHCOOBzl

Wi I L fH3

CONHCHCONHCHCOOH

<?Η2>4 D NHZ

(3)

DK 156252 B

346 0,915 g L-Lys(s-Z)-D-AlaOH C2) oplpses i en blanding af 40 ml methy-lenchlorid, 40 ml methanol og 0,53 g triethylamin. Til denne oplpsning sættes 1,20 g n-octanoyl-D-Glu(a-OBzl)-ï-OSu (1), og den vundne oplpsning lades henstâ natten over ved stuetemperatur. Reaktions-5 blandingen inddampes til en pasta, hvortil der sættes 50 ml vand, 50 ml ether og IN saltsyreoplpsning. Den resulterende blanding omrpres grundigt, og etheren afdampes, hvorved der fra den vandige fase udskilles krystaller. Krystallerne frafiltreres, vaskes med vand og terres, hvorved der fâs 1,50 g n-octanoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Lys-10 (t-Z)-D-AlaOH (3).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1725, 1685, 1650 og 1630 cm~^.

me x NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,84 (3H, t, J=7Hz), 1.00 - 2,40 (25H, m), 2,84 - 3,12 (2H, m), 4,10 - 4,50 (3H, m), 5.00 (2H, s), 5,10 (2H, s), 7,32 (10H, s), 8,10 (2H, t, J=8Hz), 8,84 15 Cl H, d, J=8Hz) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2)6CONHCHCOOH

<?*2>2 | L f3

CONHCHCONHCHCOOH

4H2}4 D nh2 (4) 1,20 g octanoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-L-Lys(E-Z)-D-AlaOH (3) oplpses i 50 ml eddikesyre og hydrogeneres over 150 mg palladiumsort. Katalysa-toren fjernes ved filtrering, og filtratet inddampes til en pasta.

20 Pastaen lades henstâ, hvorved der fâs krystaller. Krystallerne vaskes grundigt med diethylether, og der fâs 0,80 g octanoyl-ï-D-Glu(a-OH)-L-Lys-D-AlaOH (4).

[a]p = +41,7° (c = 0,2 i eddikesyre).

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3360, 1710 (skulder) og 1640 cm 25 NMR-Spektrum (DjO): δ = 0,84 (3H, forstyrret t, J=7Hz), 1,00 - 2,50 (25H, m), 2,80 - 3,10 (2H, m), 4,00 - 4,40 (3H, m) ppm.

Eksempel 164.

347

DK 156252 B

1) Trin 1: D L <rH3

CH3<CH2)16CONHÇHCOOBzl + HgNÇHCONHCHCOOH

<ch2)2 (ch2)4 D

COOSu NHZ

(D (2)

D

-> ch3(ch2)16conhchcoobz1 ................

I L çh3

CONHCHCOKHCHCOOH

<?"A “

NHZ

(3)

Stearoyl-Y-D-GluCa-OBzQ-L-LysU-ZJ-D-AlaOH (3) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 163.

5 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,84 (3H, t, J=7Hz), 1.00 - 2,40 (45H, m), 2,80 - 3,10 (2.H, m), 4,00 - 4,80 (3H, m), 5.00 (2H, s), 5,08 (2H, s), 7,32 (10H, s), 7,80 (1H, d, J=8Hz), 8,08 (2H, t, J=8Hz) ppm.

2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -CH3(CH2)16 CONHCHCOOH

<W2 I L ÇH3 CONHCHCONHCHCOOH I n nh2 (4)

DK 156252 B

348

Stearoyl-Y-D-Glu(a-OH)-L-D-AlaOH (4) fremstilles pl i det væsentlige samme mide som i trin 2 i eksempel 163.

[b]d = -11,10° (c = 0,21 i eddikesyre).

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3350, 1730 og 1640 cm 5 NMR-Spektrum (Na0D-D20): δ = 0,68 - 2,80 (50H, m), 4,10 - 4,50 (3H, m) ppm.

Eksempel 165.

1) Trin 1:

D D

CH3(CH2)16 CONHCHCOOBzl CHgCCHg) ^CONHCHCOOBzl w2 —> W2

Il II

CONHÇHCOOH CONHCHCOQMe (ÇH^g ΦΗ2}3

BocHNCHCOOH BocHNCHCOOMe

D JD

(1) (2) 2,20 g stearoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP (1) pploses i 10 50 ml tetrahydrofuran, og der tilsættes en etherisk diazomethan- oplpsning, indtil oplpsningens lysegule farve holder sig. Efter 10 minutters forlpb sonderdeles overskydende diazomethan ved tilsætning af eddikesyre. Den resulterende oplosning inddampes, hvorved der fis en hvid krystallinsk remanens, som vaskes med diisopropylether 15 til dannelse af 2,10 g stearoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-meso-DAP-(L)-(OMe)-(D)-(OMe) (2).

IR-Spektrum (Nujol): vmax =3300, 1740, 1680 og 1640 cm”^.

NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 0,83 - 2,50 (45H, m), 3,71 (3H, s), 3,75 (3H, s), 4,10 - 5,00 (3H, m), 5,20 (2H, s), 7,36 (5H, s) ppm.

DK 156252B

349 2) Trin 2:

D

Forbindelse (3) -> CHgCCHgljgCONHCHCOOBzl <W2

I L

CONHCHCOOMe

<{®A

HCl,H„NCHCOOMe (3) *D

0,90 g stearoyl-y-D-Glu(o-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-(OMe}-(D)-(OMe) (2) oplpses i en blanding af 10 ml eddikesyre og 4 ml hydrogenchloridmættet eddikesyre. Oplosningen lades henstâ i 15 5 minutter ved stuetemperatur og inddampes derefter, hvorved der fâs en krystallinsk remanens. Denne vaskes grundigt med Isopropylether, hvorved der fâs stearoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-mesoDAP-(L)-(OMe)-(D)-(OMe)-hydrochloridsalt (3).

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3300, 1740 og 1640 cm \ 10 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,76 - 2,40 (45H, m), 3,64 (3H, s), 3,76 (3H, s), 3,84 - 4,40 (3H, m), 5,12 (2H, s), 7,38 (5H, s) ppm.

3) Trin 3:

D

Forbindelse (3) -> CH3(CH2>16CONHCHCOOH

(CH2>2

L

CONHCHCOOMe

Ws HCl,H„NCHCOOMe (4) 2°

Stearoyl-ï-D-Glu(B-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-(OMe)-(D)-(OMe) (4) frem-15 stilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 163.

330

DK 156252 B

[a]p = +3,901° (c = 0,2 i eddikesyre).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1730, 1640 og 1600 cm

ma X

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,70 - 2,32 (45H, m), 3,62 (3H, s), 3,74 (3H, s), 3,80 - 4,32 (3H, m), 8,02 Cl H, d, J=8Hz), 5 8,30 (1H, d, J=8Hz) ppm.

Eksempel 166.

1) Trin 1 : CH3 d CH3(CH2)20 CONHCHCOHNCHCOOBzl +

L

COOSu (1) L fH3

HgNÇHCONHC HCOOH

Ws D ->

BocHN CHCOOH

D (2)

?H3 D

CH„(CH„)„n CONHCHCOHNCHCOOBzl O Ù Ù U γ | (ch2)2 L fH3 CO ΝΉ CH CO NH CHCOOH I tj (fH2}3

BocHNCHCOOH (3) D

Til en suspension af 2,91 g n-docosanoyi-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-ï-OSu (1) i 50 ml methylenchlorid sættes 0,89 g triethylamin og 1,44 10 g Boc-(D)-mesoDAP-(L)-(D)-AlaOH (2). Blandingen holdes i 66 timer ved stuetemperatur og înddampes derefter i vakuum. Til remanensen sættes 100 ml vand, 10 ml IN saltsyreoplpsning og 30 ml ethylether.

Den resulterende blanding omrores i 15 minutter, og ethyletherfasen 351

DK 156252 B

fjernes. Det udfældede stof isoleres ved filtrering og vaskes med vand til dannelse af et râprodukt, som vaskes med diisopropylether, hvorved der fâs 3,60 g n-docosanoyl-L-Ala-2f-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-(D)-AlaOH (3).

5 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1720, 1680 og 1630 cm \ NMR-Spektrum (CDCIg-COjOD) : δ = 0,94 (3H, m), 1,1 - 2,5 (65H, m), 5,21 (2H, s), 7,38 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) -> Çh3 d .ch,3(.ch2).20 GONHCH.C0NHÇHGQQ3?1 . ...

L <W2 I L <fH3 CO NH CH CONH CH COOMe I η (fH2}3

BocHNCH COOMe (4) D

Ti! en opiosning af 1,5 g n-docosanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-10 Boc-(D)-mesoDAP-(L)-AlaOH (3) I en blanding af 40 ml tetrahydro-furan og 20 ml chloroform sættes 10 ml 0,6M diazomethan i ethylether.

Den vundne blanding omrpres i 30 minutter ved stuetemperatur, hvorefter overskydende reagens spnderdeles med eddikesyre. Reak-tionsblandingen inddampes, og remanensen vaskes med ethylether og 15 isoleres ved filtrering, hvorved der fâs 1,36 g n-docosanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala(OMe)-(D)-OMe (4). NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD): δ = 0,90 (3H, m), 1,1 - 2,6 (65H, m), 3,71 (3H, s), 3,74 (3H, s), 5,19 (2H, s), 7,48 (5H, s) ppm.

DK 156252B

352 3) Trin 3: Çh3 l

Forbindelse (4) -> CH„(CHQ)on CONHCHCONHCHCOOH

ο Δ ù\j j | (?H2>2 I L SE3 CONH CHCONHCHCOOMe • T) «?h2)3 HCl,H,NCHCOOMe

(5) *D

1,25 g n-docosanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe-(D)-OMe (4) oploses i 20 ml eddikesyre og hydroge-neres over 10%'s palladium/kul med hydrogen ved atmosfæretryk.

5 Efter fjernelse af katalysatoren saettes 8 ml eddikesyre, der er mættet med hydrogenchlorid, til filtratet. Den vundne blanding holdes i 3 timer ved stuetemperatur og inddampes i vakuum, hvorved der fis en krystallinsk remanens, som isoleres og vaskes med diisopropylether, hvorved der fâs 1,08 g n-docosanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-D-10 AlaOMe-(D)-OMe-hydrochloridsalt (5). t«]D s -11,42° (c = 0,30 i eddikesyre).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3380, 1745 og 1630 cm"^.

max NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid _dg): 6 = 0,87 (3H, m), 1,05 - 2,45 (56H, m), 3,63 (3H, s), 3,75 (3H, s) ppm.

15 Eksempel 167.

1) Trin 1:

?H3 D

CH„(CH0)0n CONHCHCONHCHCOOBzl -> 3 2 20 T i (<rH2)2 I L ?H3 CONHCHCONHCHCOOH I n (fH2}3

BocHNCHCOOH (1) D

DK 156252 B

353

?»3 D

CH3(CH2)20 conhchconhchcooh L (ί?Η2>2 I L Ç»3

CONHCHCONHCHCOOH

* T) (fH2}3

H9NCHC00H

(2) D

n-Docosanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (2) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 166.

[a]p = -19,34° (c = 0,20 i eddikesyre).

5 IR-Spektrum (Nujol) : v = 3380, 1740 og 1630 cm

ΓΠα X

NMR-Spektrum (NaOD-D2Û): 6 = 0,91 (3H, m), 3,25 (1H, m), 4,0 - 4,6 (5H, m) ppm.

Eksempel 168.

1) Trin 1 :

?H3 D

CH3(CH2)22CONHCHCONHCHCOOBz1 + L «?H2>2 COOSu (1) L ÏH3 h9nchconhchcooh (jjHj), D ->

BocHNCHCOOH

D (2)

DK 156252 B

354

?H3 D

CHjCCH,)., CONH CH CONHCHCOOBzl L <fH2>2 I L ?*3

CONH CH CONHCHCOOH

CÎai2>3 °

BocHN CHCOOH

(3) D

n-Tetracosanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det vaesentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1720, 1680 og 1630 cm 5 NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD): δ = 0,90 (3H, m), 1,05 - 2,50 (69H, m), 5,15 (2H, s), 7,34 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

fH3 D

CH3(CH2)22 CONH CH CONHCHCOOBzl L <™2>2 L <?H3 CONH CH CONHCHCOOMe • n (fH2>3

BocHN CHCOOMe (4) D

n-Tetracosanoyl-L-A!a-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)>mesoDAP-(L)-D-AlaOMe-(D)-OMe (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som 10 i trin 2 i eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1735, 1685 og 1630 cm-1.

NMR-Spektrum (CDCIg-CDgOD): δ = 0,89 (3H, m), 1,05 - 2,50 (69H, m), 3,69 (3H, s), 3,73 (3H, s), 5,18 (2H, s), 7,42 (15H, s) ppm.

355

DK 156252 B

3) Trin 3:

Forbindelse (4) -> Çh3 d ch3 (ch2) 22conhchconhchcooh L (9¾½ L Ç«3 CONHCHCONHCHCOOMe I t\ (fH2}3 (5) HCl,H„NcHCOOMe

D

n-Tetraco$anoyl-L-Ala-y-D-GIu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe-(D)-OMe-hydrochloridsalt (5) fremstilles pi i det vasentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 166.

5 [a]D = -14,01° (c = 0,26 i eddikesyre).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3380, 1745 og 1630 cm

ma X

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,85 (3H, m), 1,0 - 2,4 (60H, m), 3,60 (3H, s), 3,72 (3H, s) ppm.

4) Trin 4:

Forbindelse (3) -> Çh3 d CH3(CH2)22 conhchconhchcooh L (CH2)2 L ?H3

CONH CH CONHCHCOOH 1 D

(Çh2>3 .

H9NCHCOOH

(6) D

10 D-Tetracosanoyl-L-Ala-y-D-Glu(e-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (6) fremstilles pi i det vasentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 166.

DK 156252 B

356 IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3280, 1730 og 1630 cm NMR-Spektrum (D20+NaHC03) : δ = 0,88 (3H, m), 3,72 (1H, m), 3,95 - 4,6 (4H, m) ppm.

Eksempel 169.

OAc CHg D L

CH0 tü CONHCHC ONHCHCOOBzl + H0N CHCONHCH0COOMe 3n t I 2 I 2 (fH2)2 (fH2}3 COOH BocHN CHCOOMe (1) D (2) ->

?Ac fH3 D

CH«CH CONHCHCONHCHCOOBzl 45 n T ·

<ÇH2>2 I L

CONHCHCONHCHgCOOMe <Κ>3

BocHN CHCOOMe ° (3) 5 D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzI)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-Gly-OMe-(D)-OMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3250, 1720, 1680 og 1630 cm"1.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,2 - 1,9 (17H, m), 2,12 (3H, s), 1,9 -10 2,6 (2H, m), 3,70 (6H, s), 3,97 (2H, s), 4,0 - 4,6 (4H, m), 4,98 (1H, q, J=7Hz), 5,18 (2H, s), 7,35 (5H, s) ppm.

DK 156252B

357

Eksempel 170.

1) Trin 1: OAc CHg jj CH „CH CONHCHCON HCHCOOBzl + HoNCHCONHCHoC00Me 3n T 1 2 1 2 ^Η2}2 (fH2}2 COOH ZHNCHCOOMe (1) D (2) ->

OAc CH„ n I I 3 D

CH,, CH CONHCHCONHCHCOOBzl D L W2

I L

CONHCHCONHCHgCOOMe

Ws ZHNCHCOOMe D (3) D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(e-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOMe-(D)-OMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i 5 eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujol) : v = 3260, 1735 og 1635 cm’^.

NMR-Spektrum (CDCIg): 6 = 1,1 - 2,5 (10H, m), 1,35 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (3H, d, J=7Hz), 2,08 (3H, s), 3,60 (3H, s), 3,67 (3H, s), 3,94 (2H, d, J=7Hz), 4,1 - 4,8 (4H, m), 4,9 - 5,2 (1H, m), 5,06 10 (2H, s), 5,09 (2H, s), 7,30 (10H, s) ppm.

DK 156252 B

358 2) Trin 2:

Forbindelse (3) -->

?AC fH3 D

CH«CH CONHCHCONHCHCOOH

3D T * W2

I L

CONHCHCONHCH2COOMe (°H2^3

(4) H«NCHCOOMe ^ D

1,32 g D-Lac(OAc)-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOMe-(D)-OMe (3) hydrogeneres i 15 ml eddikesyre over 0,4 g 10%'s palladium/kul i 1,5 tlme med hydrogen ved atmosfæretryk og ved 5 stuetemperatur. Efter endt reaktion frafiltreres katalysatoren, og filtratet inddampes til tprhed. Remanensen pulverlseres med ether, hvorved der fis 1,1 g D-Lac(OAc)-L-Ala-îf-D-Glu(a-OH)-(L)-meso-DAP-(L)-GlyOMe-(D)-OMe (4).

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,2 - 2,3 (10H, m), 1,43 (3H, d, J=7Hz), 10 1,47 (3H, d, J=7Hz), 3,77 (3H, s), 3,87 (3H, s), 4,03 (2H, s), 4,1 - 4,5 (4H, m), 5,07 (1H, q, J=7Hz) ppm.

Eksempel 171.

1) Trin 1:

OAc CH, n T

I l 3 D L

CH, CH CONHCHCONHCHCOOBzl + H0NCHCONHCHeCOOH L 1 ^ · 2 (ÇH2)2 (ÇH2)3 COOH BocHN CHCOOMe (D D (2) -> 359

DK 156252 B

OAc CH,, n

| I 3 D

CH9 CH CONHCHCONHCHCOOBzl 3n t I

(CH2>2

L

CONHCHCONHCHgCOOH

(fH2}3

BocHNCHCOOMe D (3) D- Lac (OAc) - L-Ala- ï- D-GI u (o:pBzl ) - (L) - Boc:.(D) -mesoDAP- (L) -GlyOH-(D)-OMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3270, 1735 og 1650 cm \ 5 NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 1,2 - 2,7 (16H, m), 1,43 (9H, s), 2,12 (3H, s), 3,70 (3H, s), 3,8 - 4,5 (7H, m), 4,9 - 5,3 (1H, m), 5,13 (2H, s), 7,32 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

ŸA° pH3 D

CH„CH CONHCHCONHCHCOOH D L

I L

CONHCHCONHCH0COOH

i 2 <PH2)3

(4) BocHNCHCOOMe D

D-Lac (OAc)-L-Ala-y-D"Giu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-10 (D)-OMe (4) fremstilles pl i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 170.

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3300, 1725 og 1650 cm \ NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,3 - 2,6 (16H, m), 1,43 (9H, s), 2,11 (3H, s), 3,70 (3H, s), 3,93 (2H, s), 4,2 - 4,6 (4H, m), 5,08 (1H, 15 q, J=7Hz) ppm.

DK 156252 B

360

Eksempel 172.

1) Trin 1 :

D

CH3(CH2)5 conhchcooh W2 I L fH3 CONHCHCONHCHCOOH ->

D

(ÇH^g

H0NCHCOOH £ D

(1)

D

CH„ (CH„) .CONH CHCOOH

ΟΔΟ | W2 I L ?H3

CONHCHCONHCHCOOH

i - <ί»Λ

BocHN CHCOOH

(2) D

1,00 g heptanoyl-îf-D-Glu(a-ÛH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (1) oplo-ses i en blanding af 10 ml vand og 20 ml dioxan. 730 mg triethylamin 5 og 640 mg 2-(tert.butoxycarbonyloxyimino)-2-phenylacetonitril sættes til opiesningen. Efter omrpring i 16 timer ved stuetemperatur ind-dampes reaktionsblandingen. Til remanensen sættes 30 ml vand, 8 ml IN saltsyre og ethylacetat. Den organiske fase fraskilles og vaskes med saltvand, torres over magneslumsulfat og inddampes i vakuum, 10 hvorved der fâs en olieagtig remanens, som behandles med ethylether og diisopropylether til dannelse af 925 mg heptanoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (2).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1720 og 1630 cm NMR-Spektrum (CDgOD) : δ = 0,90 (3H, m), 1,1 - 2,6 (23H, m), 3,70 15 (1H, t, J=6Hz), 3,90 - 4,65 (3H, m) ppm.

DK 156252 B

361 2) Trin 2:

Forbindelse (2) ->

D

CHg (CH2) gCONH CHCOOMe (ch2)2

L ÏH3 CONHCHCONHCHCOOMe D

(ch2)3

BocHN CHCOOMe (3) D

Heptanoyl-2T-D-Glu(a-OMe)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe-(D)-OMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 2 i eksempel 166.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3300, 1735, 1685 og 1630 cm NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 0,91 (3H, m), 1,15 - 1,90 (16H, m), 2,00 - 2,45 (4H, m), 3,71 (9H, s), 4,06 (1H, m), 4,24 - 4,56 (3H, m) ppm.

3) Trin 3:

Forbindelse (3) ->

D

CH3 (CH2) gCONH CHCOOMe <CH2>2 L ÇH3 CONH CHCONH CH COOMe

I D

(?H2}3 H„NCHCOOMe

(4) D

DK 156252B

362

Heptanoyl-y-D-Glu(a-OMe)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe- (D)-OMe (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme rnide som i trin 3 i eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3320, 3080, 1740 og 1635 cm’1.

5 NMR-Spektrum (CD3OD) : δ = 0,92 (3H, m), 1,16 - 2,46 (26H, m), 3,74 (9H, s), 4,21 - 4,60 (4H, m) ppm.

Eksempel 173.

1) Trin 1:

D

CH«(CH„)e CO NHCHCOOB zl

à ù b I

(CH2)2 L <fH3 CONHCHCONHCHCOOH ->

I D

(ÇH2)3

BocHN CHCOOH

(D D

D

CHg (CH2) gCONH CHCOOMe CÇH2>2 I L ÇH3 CONH CHCONH CHCOOMe

I D

CÇh2)3

BocHNCHCOOMe

(2) D

Octanoyl-ï-D-Glu(a-OMe)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOMe-D-OMe 10 (2) fremstilles pâ i det væsentlige pâ samme mâde som i trin 2 i eksempel 166.

IR-Spektrum CNujol): vmax = 3370, 1750, 1690 og 1640 cm-1.

NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 0,89 (3H, m), 1,05 - 2,75 (37H, m), 3,72 (9H, s), 4,20 (1H, m), 4,35 - 4,75 (3H, m), 5,35 (1H, d, 15 J=8Hz), 6,75 (1 H, d, J=8Hz), 6,85 (1H, d, J=8Hz), 7,42 (1H, d, J=7Hz) ppm.

363

DK 156252 B

2} Trin 2:

Forbindelse (2) ->

D

CH3(CH2)6 CONHCHCOOMe <W2

| L ÇHS

CONH CH CONH CH COOMe D

(fH2>3

HCl,H9NCHCOOMe £ D

(3)

Octanoyl-ï-D-Glu (α-OMe) - ( L) -mesoDAP- ( L) -D-AlaOMe- (D)-OMe-hy-drochloridsalt (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 166.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3280, 1735 og 1630 cm ^.

NMR-Spektrum (CDgOD): δ = 0,89 (3H, m), 1,2 - 2,5 (22H, m), 3,72 (6H, s), 3,86 (3H, s), 4,07 (1H, t, J=6Hz), 4,19 - 4,65 (3H, m) ppm.

Eksempel 174.

10 1) Trin 1:

0H ?H3 D L

CH„ CH CONHCHCONHCHCOOBzl + H9NCHC0NHCH9C00Me <9H2}2 iCH2h

COOH BocHNiHCOOH

(1) D (2)->

DK 156252B

364 OH CHs d CH,CH CONHCHCONHCHCOOBzl D L ^H2>2

I L

CO NHCHCONHCH„COOMe I 2 CÇH2)3

BocHNCHCOOH

D (3) D-Lac-L-Ala-y-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOMe (3) fremstilles pl i det væsentlige samme rnide som i trin 1 i eksempel 166. ‘ NMR-Spektrum (COjOD): 6 = 1,38 (6H, d, J=7Hz), 1,47 (9H, s), ^ ^/3 - 2,5 (10H, m), 3,75 (3H, s), 4,00 (2H, s), 4,0 - 4,6 (5H, ro), 5,20 (2H, s), 7,40 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

OH CH3 d CHnCHCONHCHCONHCHCOOH

D L W2 I L

CONHCHCONHCHgCOOMe (Çh2)3

(4) H„NCHCOOH Z D

D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOMe (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 166.

10 IR-Spektrum (Nujol): v . =3280, 1740 og 1640 cm~^.

max NMR-Spektrum (D20): δ = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,41 (3H, d, J=7Hz), 1,3 - 2,5 (10H, m), 3,75 (3H, s), 3,98 (2H, s), 4,0 - 4,6 (5H, m) ppm.

DK 156252 B

365

Eksempel 175.

1) Trin 1: OH CH„ n γ

| | 3 D L

CH0CHCONHCHCONHCHCOOBzl + HoNCHC0NHCHoCO0H

3|-. t I " I c (<tH2)2 (<pH2}3 COOH BocHN CHCOOMe (1) D (2) -> OH CH, n

I I 3 D

CH,CH CONHCHCONHCHCOOBzl D L

I L

CONHCHCONHCHgCOOH

(çh2)3

BocHN CHCOOMe D (3) D-Lac-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-OMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 1 i 5 eksempel 166.

NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,42 (9H, s), 1,2 - 2,5 (16H, m), 3,70 (3H, s), 3,92 (2H, s), 4,0 - 4,6 (5H, m), 5,17 (2H, s), 7,35 (5H, s) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) -->

?H ?H3 D

CH ,CH CONHCH CONH CH COOH

° L (fH2)2

I L

CONHCHCONHCHgCOOH

(ch2)3 (4) H 0N CHCOOMe

1 D

DK 156252 B

366 D-Lac-L“Ala-ï-D-Glù(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-OMe (4) fremstilles pâ i det vaesentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 166.

IR-Spektrum (KBr): vmax =3700 - 2500, 1730 og 1650-cm'1.

5 NMR-Spektrum (DjO): δ = 1,37 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,3 - 2,5 (10H, m), 3,80 (2H, s), 3,83 (3H, s), 4,0 - 4,6 (5H, m) PPm.

Eksempel 176.

1) Trin 1:

?H3 D

H„N CH CONH CHCOOBzl ÇONH(CH2)BCH3 L CCH9)9 HÇOAc

I + AcOCH

I L l CONHCHCONHCHgCOOH HCOAc (Çh2)3 HCOAc ZHN CHCONHNHZ COOSu (1) D (2) --> H OAc H H CH« n

i i i l | o U

CH „(CH0)cNHCO— C — C C — C — CONH CH CONHCHCOOBzl ΟΔΟ 1 I I I T · OAc H OAc OAc u (CH2>2

I L

CONHCHCONHCH0COOH I 2 (ch2)3

ZHN CHCONHNHZ D

(3) 10 Til en isafkplet oplosning af 1,23 g L-Ala-îf-D-GluCa-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHZ (1) og 0,30 g triethylamin i en blanding af 12 ml acetone og 2 ml vand sættes en oplpsning af 0,84 g 1-N-n-hexyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramid-N-hydroxylsuccinimyl-ester (2) i 12 ml acetone. Blandingen omrpres natten over, medens 15 blandingen lades antage stuetemperatur. Efter inddampning sættes 367

DK 156252 B

remanesen til en blanding af 50 ml vand og 100 ml ethylacetat. Den organiske fase vaskes med 30 ml vandig natriumhydrogencarbonatop-Ipsning, 30 ml vand, 30 ml 10%'s saltsyre og 2 gange med hver gang 30 ml vand, hvorefter den tprres over magnesiumsulfat. Oplpsnings-5 midlet fjernes i vakuum, hvorved der fis 1,15 g l-N-n-hexyl-2,3,- 4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidyl-L-Ala-r-D-Glu(a-0Bzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNHZ (3).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 0,7 - 1,0 (3H, m), 1,1 - 1,7 (19H, m), 1,7 - 2,3 (2H, m), 1,96 (3H, s), 2,00 (3H, s), 2,07 10 (3H, s), 2,12 (3H, s), 2,8 - 3,1 (2H, m), 3,8 - 4,5 (10H, m), 5,00 (2H, s), 5,06 (2H, s), 5,10 (2H, s), 5,30 (1H, m), 5,60 (1H, m), 7,34 (15H, s), 7,7 - 8,2 (5H, m), 8,40 (1H, m), 9,98 (1H, s) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) -> H OAc HH CH0

I I i I , 3 D

CH 9 ( CH0)K NHCO - C-C C-C —CONH CH CONHCH0COOH

O Z D I I I I T | Λ OAc H OAc OAc (CH0).

IL L

L

CONHCHCONHCH2COOH

«fH2>3 h„nchconhnh9 z d ^ (4) 1-N-n-Hexyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D*glucaramidoyl-L-Ala-ir-D-Glu-15 (a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNH2 (4) fremstilles pl i det væsentlige samme mâde som i trin 2 I eksempe! 163.

NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 0,8 - 1,1 (3H, m), 1,1 - 2,5 (21H, m), 2,03 (6H, s), 2,17 (3H, s), 2,23 (3H, s), 3,0 - 3,6 (2H, m), 3,7 - 4,8 (6H, m), 5,1 - 6,0 (4H, m) ppm.

DK 156252 B

368 3) Trin 3:

Forbindelse (4)---

? ?AC? ? D

CH3(CH2)5NHCO —Ç-C c Ç—CONHCHCONHCH0COOH

ύ Δ ® I I I J T I 2 OAc H OAc OAc lt (CH2>2

I L

CONH CH CONHCHg COOH

(fH2}3

H0NCHCOOH 1 D

(5)

Til isafkolet oplosning af 0,64 g 1-N-n-hexyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-gluca ramidoyl-L-Ala-3r-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH-(D)-NHNH2 (4) i en blanding af 3 ml 10%'s saltsyre og 6 ml 1,4-dioxan 5 sættes 0,2 g N-bromsuccinimld. Efter omrpring I 1 time ved stuetem-peratur behandles blandingen med natriumbisulfit og indstilles der-efter pâ pH-værdi 4 med vandigt natriumcarbonat. Efter inddampning oplpses remanensen I 2 ml IN saltsyre og hældes pâ en kolonne med 40 ml HP-20. Efter fjernelse af uorganlske salte med vand fâs pro-10 duktet ved at eluere med 70%'s methanol. Eluatet lyofiliseres, hvorved der fâs 0,43 g l-N-n-hexyl-2,3,4,5-0-tetraacetyI-D-glucaramidoyI-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (5).

NMR-Spektrum (D20): 6 = 0,7 - 1,0 (3H, m), 1,0 - 1,6 (19H, m), 1,6 - 2,5 (2H, m), 2,14 (3H, s), 2,16 (3H, s), 2,22 (3H, s), 2,24 15 (3H, s), 3,0 - 3,3 (2H, m), 3,76 (1H, m), 4,0 - 4,6 (5H, m), 5,1 - 5,8 (4H, m) ppm.

DK 156252 B

369 4) Trin 4:

Forbindelse (5) ->

H OH H H CH3 D

CH „ ( CH J c NHCO - C— C-C-C — CO NH CH CONHCHCOOH

3 2 5 I I I i T I

OH H OH OH <CH2^2

L

CONHCHCONHCHgCOOH

(fH2}3 H^NCHCOOH Δ D

(6)

Til en isafkolet oplpsning af 0,33 g 1-N-n-hexyl-2,3,4,5-0-tetra-acetyl-D-glucaramidoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH

(5) i 50%'s methanol sættes 2 ml 2N kaliumcarbonatoplosning. Blan-5 dingen omrpres i 2 timer ved samme temperatur og syrnes derefter til pH-værdi 4 med 10%'s saltsyre. Efter inddampning oploses remanensen i 1 ml IN saltsyre og hældes pâ en kolonne med 15 ml HP-20. Uorga-niske salte fjernes med vand, hvorefter der elueres med 80%'s methanol. Eluatet lyofiliseres, hvorved der fâs 0,26 g 1 -N-n-hexyl-D-glu-10 caramidoyl-L-Ala-y-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (6).

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3300, 1720, 1640, 1540 og 1230 cm-1.

iTld X

NMR-Spektrum (D20): 6 = 0,7 - 1,0 (3H, m), 1,0 - 2,5 (21H, m), 3,1 - 3,5 (2H, m), 3,5 - 4,5 (10H, m) ppm.

Eksempel 177.

15 1) Trin 1:

OH ÇHg D L

CH„ CH CONHCHCONHCHCOOMe + H„NCHCONHCH0COOH

3n T I 2 i 2 (°¾½ (?H2}3

COOH BocHN CHCOOH

(1) D (2) ->

DK 156252 B

370 OH CH, n

l I 3 D

CH, CH CONHCHCONHCHCOOMe ° L <*V2

I L

CONHÇHCONHCH2COOH

(fH2}3

BocHN CHCOOH

D (3) D-Lac-L-A!a-ï-D-Glu(a-OMe)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-GlyOH (3) fremstilles pâ i det vaesentlige samme mâde som r trin 1 i eksempel 166.

NMR-Spektrum (CD-jOD): δ = 1,46 (9H, s), 1,2 - 2,4 (10H, m), 3,72 5 (3H, s), 3,93 (2H, s), 4,0 - 4,6 (5H, m) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) -> OH CH, n

I i 3 D

ptt I ' n3CHCONHCHCONHCHCOOMe

D L (W

I L

CONHCHCONHCHgCOOH

(fH2)3

(4) H0NCHCOOH ά D

D-Lac- L-Ala-ï- D-G lu (a-OMe) - CL) -mesoDAP- (L) -GlyOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 166.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,45 (3H, d, J=7Hz), 10 1,3 - 2,6 (10H, m), 3,77 (3H, s), 3,87 (2H, s), 4,2 - 4,6 (4H, m) ppm.

Eksempel 178.

DK 156252B

371 OH CHq _ ,

I i 3 D L

CH„CH CONHCHCONHCHCOOMe + HoNCHC0NHCHoC00Me Ojj l I ^ i ^ «f»2>2 <fH2>3

COOSu BocHK CHCOOH

(1) D (2) ->

?H fH3 D

CH3 CH CONHCHCONHCHCOOMe .

D L (ch2>2

L

CONHCHCONHCH2COOMe <fH2>3

BocHN CHCOOH D

OH CHg D

-> CHq CH CONHCHCONHCHCOOMe D L îch % (ch2)2

1 L

CONH CH CONH CH„ COOMe I 2

(<fH2)3 H,NCHCOOH 6 D

(3) D-Lac-L-Ala-ï-D-G!u(a-OMe)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOMe (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme rnlde som i trin 1 og 3 i eksempel 166.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,36 (3H, d, J=7Hz), 1,42 (3H, d, J=7Hz), 5 1,2 - 2,4 (10H, m), 3,72 (6H, s), 3,98 (2H, s), 4,2 - 4,5 (4H, m) ppm.

Eksempel 179.

372

DK 156252 B

1) Trin 1: OH CH3 d l

CH3 dîH CONHCHCONHÇHCOOMe + HgNCHCONHCHgCOOH

° L (fH2}2 (fH2}3 COOH BocHN CHCOOMe

Cl) ° (2) -> OH CH„ n

I j 3 D

CH„ CH CONH CHC ONH CHCOOMe D L ^H2>2

I L

CONHCHCONHCHgCOOH . .. ,

Ws

BocHN CHCOOMe D

D- Lac- L- Aia-ï-D-G I u (α-OMe) - ( L) - Boc-(D) -mesoDAP- (D) -OMe- (L) -Gly-OH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme rnlde som i trin 1 i 5 eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1730 og 1660 cm”\ max NMR-Spektrum (CD3OD): δ = 1,47 (9H, s), 1,4 - 2,5 (16H, m), 3,73 (6H, s), 3,95 (2H, s), 4,0 - 4,6 (5H) ppm.

DK 156252 B

373 2) Trin 2:

Forbindelse (3) -> ?H <rH3 d

CH,CH CONHCHCONHÇHCOOMe D L

I L

CONHCHCONHCH2COOH

<ÇH2>3 H„NCHCOOMe 1 D

(4) D-Lac-L-Ala-Y-D-Glu(a-OMe)-(L)-mesoDAP-(D)-OMe-(L)-GlyOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som i trin 3 i eksempel 166.

5 [a] p = -22,9° (c = 0,2 i vand).

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,33 (3H, d, J=7Hz), 1,40 (3H, d, J=7Hz), 1,2 - 2,6 (10H, m), 3,77 (3H, s), 3,83 (3H, s), 4,0 - 4,6 (5H, m) PPm.

Eksempel 180.

10 1) Trin 1: H3CN/CH3 OT) L Ψ*

/°\ D H - N CH CONH CH C00H

• /CONHCHCOOBzl L J D

AJ/ (in + fv

% \ î 2 2 L

! \ COOSu

V

H-c ^CH3 (1) (2) 374

DK 156252 B

H3Cn^/CH3 _> δδ

/‘SJ D

f, T-CONHCHCOOBzl Γ\ CH, 0 0 I L l

X CONHCHCONHCHCOOH

H-C CH. I D

* ' C®2>4

NHZ

C3) · Z/S^S-Diisopropyliden-L-Z-ketogulonoyl-Y-D-GluCa-OBzO-L-LysCZ)- D-AlaOH (3) fremstilles pi i det væsentlige samme mide som i trin 1 i eksempel 163.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1750 - 1620 og 1250 - 1060 cm ma x 5 2) Trin 2:

Forbindelse (3) -> OHOHOH ^

III D

HOCHgCHCHCHCO CONHCHCOOBzl (CH2)2 L ÇH3

CONHCHCONHCHCOOH D

((fH2>4 nh2 (4) 375

DK 156252 B

0,9 g 2,3,4,6^Μ8ορΓθργΙι^βη-2^βίθ9υΙοηογΙ-3·-0-ΟΙυ(α-ΟΒζΙ)-1--1.γ$-(Z)-D-AlaOH (3) oplpses i dioxan. Til oplpsningen sættes 5 ml kon-centreret saJtsyre, og blandingen omrpres i 20 timer og indstilles derefter pâ pH-værdi 6-7 med vandig natriumhydrogencarbonat-5 oplosning. Den resulterende blanding inddampes i vakuum, og re-manensen oplpses i vand. Oplpsningen hældes pâ en spjle med 30 ml kul. Spjlen elueres med methanol og éthanol i forholdet 1:1. De frak-tioner, som indeholder den onskede forbindelse (4), isoleres, og oplpsningsmidlet afdampes, hvorved der fis et skum, som lyofiliseres 10 til dannelse af 400 mg 2-keto-L-gulonoyl-2f-D-Glu(a-OBzl)-L-Lys-D-AlaOH (4).

NMR-Spektrum (D20): δ - 1,32 (3H, d, J=7Hz), 3,15 (2H, t, J=7Hz), 3,66 - 4,50 (8H, m), 5,10 (2H, s), 7,43 (5H, s) ppm.

3) Trin 3:

Forbindelse (4) -> OHOHOH ~

tii D

HOCH2CHCHCHCO CONHCHCOOH

w2

L

CONH CH CONH CH COOH

I D

<pv« nh2 (5) 15 2-Keto-L-gulonoyl-îf-D-Glu(e-OH)-L-Lys-D-AîaOH (5) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 163.

NMR-Spektrum (D20): δ = 1,36 (3H, d, Js7Hz), 3,05 (2H, t, J=7Hz), 3,70 - 4,50 (8H, m) ppm.

Eksempel 181.

DK 156252B

376 1) Trin 1 :

H-C ’CHW

0 o Λ CH- y0^ d l | 3

(C /-CONHCHCOOBzl H-NCHCONHCHCOOH

\ / 1 ♦ l D

( \ COOSu BocHNCHCOOH

v D

H-C^CH- CD C2) Ο ό H3Cv^/CH3 3Ό

/Ό'\ . D

_^ / N-CONHCHCOOBzl W T2hi Γ3 '

CH- \ CONHCHCONHCHCOOH

1 \ l » (012)3

O /0 I J

X" BocHNCHCOOH

H-C CH- D

3 a CS) 2,3,4,6-Diisopropyliden-2-keto-L-gulonoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme 5 mâde som i trin 1 i eksempel 163.

DK 156252B

377 IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1730, 1680, 1520 og 1250 - 1060

Πια X

cm NMR-Spektrum (CD^OD): δ = 1,06 (3H, s), 1,20 (3H, s), 1,47 (15H, s), 4,16 - 4,50 (9H, m), 5,20 (2H, s), 7,40 (5H, s) ppm.

5 2) Trin 2:

Forbindelse (3) -> OHOHOH ^

I I i D

HOCH2CHCHCHCO CONHCHCOOBzl 4H2}2 I L fH3

CONHCHCONHCHCOOH

I D

<f»A

h9nchcooh

(4) D

2-Keto-L-gulonoyl-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 180.

IR-Spektrum (Nujol): v s 3300, 1730, 1650, 1530, 1220, 1180 og

Πια X

10 1050 cm ^.

NMR-Spektrum (D2O): δ = 1,33 (3H, d, J=8Hz), 3,66 - 4,50 (8H, m), 5,30 (2H, s), 7,47 (5H, s) ppm.

DK 156252B

3) Trin 3: 378

Forbindelse (4) -> OHOHOH t.

i I ! D

hoch2chchchco CONHCHCOOH

<W2 I L 9¾

CONHCHCONHCHCOOH

I D

W3

H9NCHC00H

(5) D

2-Keto-L-gulonoyl-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (5) fremstilles pâ i det vaesentlîge samme mide som i trin 2 i eksempel 163.

5 IR-Spektrum (Nujol): = 3300, 1720 og 1670 cm max NMR-Spektrum (D20): δ = 1,38 (3H, d, J=7Hz), 1,70 - 2,50 (10H, m), 3,60 - 4,40 (8H, m) ppm.

Eksempel 182.

1) Trin 1 :

9¾ D L

CH„(CH„)lfiCOHNCHCOHNCHCOOBzl + ELNCHCOHNCHCOOEt 3 2 16 L I 2 1 n (fH2}2 (?H2}3 COOSu ZHNCHCOOEt (D D (2) ->

DK 156252 B

379

Y"S D

CH,(CH„),-COHNCHCOHNCHCOOBzl 3 2 16 τ I

<ÇH2>2 I L *fH3 COHN CHCOHN CHCOOEt

4¾½D

ZHNCHCOOEt

D

(3)

Stearoyl-ï-D-Glu(c-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-OEt-(L)-D-AlaOEt (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet ί trin 1 i eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujoi) : = 3280, 1.750,. .1710 og 1650 cm"\ ΓΠαΧ 5 NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 0,87 (3H, m), 3,96 - 4,60 (9H, m), 5,10 (2H, s), 5,13 (2H, s), 7,32 (10H, s) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3) ->

<?H3 D

CH„( CH„). -COHNCHCOHNCHCOOH 3 2 16 γ I

Wi I l <rH3

COHN CH COHN CHCOOEt D

(fH2}3 H9NCHC00Et

(4) D

584 mg stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-OEt- (L)-D-AlaOEt (3) oplpses i 20 ml eddikesyre og hydrogeneres over 10 10%'s palladium/kul ved 2 1/2 atmosfærers hydrogentryk. Efter fjer- nelse af katalysatoren ved filtrering inddampes filtratet i vakuum. Til remanensen sættes hexan, hvorved der fâs krystaller, som vaskes med varm isopropylether til dannelse af 340 mg stearoyl-Ala-ï-D-

Glu(α-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-OEt- (L)-D-AlaOEt (4).

15 IR-Spektrum (Nujol): = 3290, 1740 og 1630 cm max 380

DK 1S6252B

NMR-Spektrum (trifluoreddikesyre): δ = 0,87 (3H, m), 1,1 - 2,9 (54H, m), 4,13 - 5,00 (9H, m) ppm.

Eksempel 183.

1) Trin 1:

?H3 D L C,HS

CH„(CH„). CONHCHCOHNCHCOOBzl + H-NCHCOHNCHCOOEt d 2 5 r> I " I Γ) D (ÇH2)2 <ÇH2>2 COOSu ZHNCHCOOEt

D

(1) (2) Çh3 d CH9(CH0),- CONH CH COHNCHCOOBzl

O ù Ο I

<fI2)2 I L 9¾

CO OHN CHCOHN CHCOOEt * D

(CH2)3 ZHNCHCOOEt (3) ° 5 Heptanoyl-L-Ala-r-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-OEt-(L)-D-AlaOEt (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskre-vet i trin 1 i eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujol): V|nax = 3260, 1730, 1680 og 1620 cm-1.

NMR-Spektrum (CDCIg): δ = 0,85 (3H, m), 1,05 - 2,40 (29H, m), 10 3,93 - 4,70 (8H, m), 5,06 (2H, s), 5,11 (2H, s), 5,58 (1H, d, J=8Hz), 6,60 C2H, d, J=8Hz), 7,20 (1H, d, J=8Hz), 7,31 (10H, s) ppm.

DK 156252B

2) Trin 2: 381

<FH3 D

Forbindelse (3) -> CH9(CH0)_ COHNCH COHNCHCOOH

ΟΔΟ x I

<ÇH2>2 I L <TH3 CO HN CHCOHN CH COOE t • Γ) (ίΗ2}3 H„NCHCOOEt (4)

Heptanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(o-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-OEt-(L)-D-AlaOEt (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i trin 2 i eksempel 182.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3280, 1740 og 1635 cm"1.

IiIq λ NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 = 0,87 (3H, m), 1,02 - 2,33 (27H, m), 3,40 (TH, m) ppm.

Eksempel 184.

1) Trin 1 : °, CH, n

OAc U I 3 D

| H-NCHCOHNCHCOOBzl C6H5CH2l^COÇHCHÇHÇHCOON-J + L (CH2)2

AcO AcO OAc jj COHNCHCOHNCH-COOH

O | 2 (<rH2) 3

ZHNCHCOHNNHZ

Z

(2) 382

DK 156252 B

• OAc CH- -,

I I 3 D

C,H cCH-NKCOCHCHCHCHCOHNCHCOHNCHCOOB Z1 _„ 6 5 2 | | ( L ,1

AcO AcO OAC (CH2) 2

I L

COHNCHCOHNCH-COOH I 2 (çh2)3

(3) ZHNCHCOHNNHZ

D

1-N-Benzyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidoyl-L-Ala-ï'-D-Glu-(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHZ-(L)-GlyOH (3) fremstilles pâ samme mâde som beskrevet i trin 1 i eksempel 166, smeltepunkt 176 -178°C.

5 IR-Spektrum (Nujol): v =3350, 1750, 1670 og 1530 cm max NMR-Spektrum (drmethylsulfoxid -dg): δ = 1,0 - 2,2 (13H, m), 1,85 (3H, s), 1,94 (3H, s), 2,00 (3H, s), 2,10 (3H, s), 3,6 - 4,5 (8H, m), 4,95 (2H, s), 5,00 (2H, s), 5,06 (2H, s), 5,1 - 5,7 (2H, m), 7,20 (5H, s), 7,28 (15H, s), 7,6 - 8,6 (3H, m) ppm.

10 2) Trin 2:

Forbindelse (3) -> OAc ^3

i | ô D

C,HcCH-NHC0CHCHCHCHC0HNCHC0HNCHC00H 6 5 2 i |i t j

AcO AcO OAc > CCH2)2

I L

COHNCHCOHNCH-C00H

. i 2 ^3 H-NCHCOHNNH-

• . D L

(4) 383

DK 156252B

1-N-Benzyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidoyl-L-Ala-ï-D-Glu-(o-OH)-(L)-mesoDAP-(D)"NHNH2-(L)-G!yOH (4) fremstilles pâ samme mâde som i trin 2 i eksempel 146, smeltepunkt 178 - 181°C (spnder-deling).

5 IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3300, 1750, 1650 og 1530 cm"1.

NMR-Spektrum (CHgOD): δ = 1,1 - 2,5 (13H, m), 1,83 (3H, s), 2,00 (3H, s), 2,13 (3H, s), 2,23 (3H, s), 3,85 (2H, s), 7,25 (5H, s) PPm.

3) Trin 3: 10 Forbindelse (4) ->

OAc fH3 D

C, H c CHNH COCH CH CHCHCOHNCHCOHNCHC00H 6 5 2 i i i t I

AcO AcO OAc ^ >1

12 2 L

C0HNCHC0HNCH,C00H

i 2 t“2)3

H9NCHC00H

Z D

(5) 1-N-Benzyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-gIucaramidoyl-L-Ala-ï-D-Glu-(e-OH)-(L)“mesoDAP-(U)-GlyOH (5) fremstilles pâ samme mâde som i trin 3 i eksempel 176, smeltepunkt 145 - 150°C.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3350, 1760, 1660 (skulder), 1650 og 1530 15 cm \ NMR-Spektrum (D20): δ = 1,43 (3H, d, J=7Hz), 1,3 - 2,5 (10H, m), 2,00 (3H, s), 2,10 (3H, s), 2,23 (6H, s), 3,7 - 4,0 (3H, m), 4,0 - 4,5 (3H, m), 5,1 - 6,0 (4H, m), 7,37 (5H, s) ppm.

4) Trin 4: 384

DK 156252 B

?H f3 D

C,H c CH,NHCOCHCHCHCHCOHNCHCOHNCHCOOH

HO HO OH rru ί

^ CH 2^2 L

COHNCHCOHNCH,COOH

I · 2 ffVs

H7NCHC00H

L D

C6) 1-N-Benzyl-D-giucaramidoyl-L-Ala-Y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (6) fremstilles pâ samme mâde som i trin 4 i eksempel 176, smeltepunkt 117 - 120°C.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3350, 1730, 1640 (skulder) og 1540 -1 cm .

NMR-Spektrum (D20): 6 = 1,42 (3H, d, J=7Hz), 1,2 - 2,5 (10H, m), 3,86 (2H, s), 3,5 - 5,0 (10H, m), 7,35 (5H, s) ppm.

Eksempel 185.

10 1) Trin 1: OAc CH3 d CH, (CH,) -. NH COCHCHCHCHCOOSu + Η,Ν^ HCOHNCHCOOBzl 3 2 11 | i i 2 τ i

AcO AcO OAc L‘ (CH2)2 1

L

COHN CHCOHN CHgCOOH

(2) (CH2)3

ZHNCHCONHNHZ

D

DK 156252 B

385

?Ac ^3 D

CH„ (CH 9). 1NHCOCHCHCHCHCOHNCHCOHNCHCOOBzl à Z 11 | | | y i -> AcO AcO OAc u (0¾½

I L

COHNÇHCOHNCHgCOOH

(3) (p2)3

ZHOCHCONHNHZ

D

1 -N-Laury 1-2,3,4,5-O-tetraazety I-D-glucaramidoyl-L“Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-NHNHBoc-(D)-GlyOH (3) fremstilles pâ samme mâde som beskrevet ί trin 1 i eksempel 166.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3350, 1760, 1670, 1650 og 1540 cm'1.

5 NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,9 (3H, m), 1,0 - 2,3 (33H, m), 1,95 (3H, s), 2,00 (3H, s), 2,07 (3H, s), 2,15 (3H, s), 3,00 (2H, m), 3,2 - 4,6 (10H, m), 5,08 (2H, s), 5,13 (2H, s), 5,18 (2H, s), 5,2 - 5,8 (2H, m), 7,37 (15H, s), 7,7 - 8,5 (5H, m), 9,20 ( 1H, m), 9,90 ( 1H, s) ppm.

10 2) Trin 2:

Forbindelse (3) -> OAc CHq n

I l 3 D

CH0 (CHJ- - NHCOCHCHCHCHCOHNCHCOHNCHCOOH 3 2 11 lit t I

AcO AcO OAc (CH2>2

L

COHNCHCOHNCHgCOOH

(fH2}3

H2NCHCONHNH2 (4) D

1- N-Laury 1-2,3,4,5-O-tetraacetyl-D-glucaramidoyl-L-Ala-ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-NHNH2"(L)-GlyOH (4) fremstilles pâ samme mâde som i trin 2 i eksempel 163.

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3350, 1760, 1660 og 1540 cm ^.

15 NMR-Spektrum (CD3OD): 6 = 0,90 (3H, m), 1,0 - 2,4 (33H, m), 2,02 (6H, s), 2,13 (3H, s), 2,20 (3H, s), 2,9 - 3,3 (2H, m), 3,80 (2H, s) ppm.

386 DK 156252 B

3) Trin 3:

Forbindelse (4) ->

OAe ipHg D

CH, (CH,) -1 nhcochchchchcohnchcohnchcooh AcO AcO OAc (ϋΗ2)2

L

COHN CHCOHN CH,COOH i 4 (Çh2)3

H-NCHCOOH (4) D

1-N-Lauryl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidoyl-L-Ala-lf-D-Glu-(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (5) fremstilles pi samme mâde som i trin 3 i eksempel 176.

5 IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3350, 1760, 1660 og 1540 cm’1.

ΓΠαΧ NMR-Spektrum (D20): δ = 0,80 (3H, m), 1,0 - 2,5 (33H, m), 2,08 (6H, s), 2,16 (3H, s), 2,20 (3H, s), 3,10 (2H, m), 3,78 (2H, s) PPm.

4) Trin 4:

Forbindelse (5) ->

?H fH3 D

CH, (CH,),, NHCOCHCHCHCHCOHNCHCOHNCHCOOH 3 2 11 I . Il t I

HO HO ÔH h (CH2)2

I L

cohnçhcohnch2cooh (fH2}3 h,nchcooh

(6) D

10 1-N-Lauryl-D-glucaramidoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-GlyOH (6) fremstilles pi samme mâde som i trin 4 i eksempel 176.

IR-Spektrum (Nujol): vmax ~ 3300, 1720, 1640 og 1540 cm NMR-Spektrum (D20): 6 s 0,80 (3H, m), 1,0 - 2,5 (33H, m), 3,20 (2H, m), 3,80 (2H, m) ppm.

387

Eksempel 186.

DK 156252 B

1) Trin 1:

<rH3 D L

ZNHCH CONH CHCOOBzl HoNCHC0NHCHoC00H

D I 2 | 2 CÇh2>2 + «rH2>3 COOSu BocHNCHCONHNHBoc

D

(D (2) Çh3 d ——> · ZNHCHÇO NHCHCOQBzl.........

D ^H2>2

L

conhchconhch2cooh (ÇH2>3

BocHNCHCONHNHBoc

D

(3) 2,31 g Boc-(D)-mesoDAP-(L)-Gly-(D)-NHNHBoc (2) oploses i en btanding af 60 ml dioxan og 50 ml vand, og der tilsættes 610 mg triethylamin og 2,70 g Z-D-Ala-D-Glu(a-OBzl)-Y-OSu (1). Blandingen 5 lades henstâ i 18 timer ved stuetemperatur og inddampes under redu-ceret tryk. Til remanensen sættes en blanding af 30 ml vand, 10 ml 1N saltsyre og 100 ml ethylacetat. Den organiske fase fraskilles, vaskes med saltvand, torres over magnesiumsulfat og inddampes i vakuum. Det resulterende amorfe pulver vaskes med diisopropylether 10 og isoleres, hvorved der fâs et râprodukt, som renses ved chroma-tografi pâ 100 ml silicagel og elueres med chloroform-methanol (10:1-5:1, v/v). De fraktioner, som indeholder den pnskede forbin-delse (3), isoleres og inddampes til tprhed, hvorved der fis 1,09 g Z-D-Ala-ï-D-Glu-a-OBzl-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-Gly-(D)-NHNHBoc 15 (3), smeltepunkt 125°C (spnderdeling). [α]^ = -4,39° (c = 0,21 i chci3).

DK 156252 B

388 IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3300, 1720 og 1670 cm \ 2) Trin 2:

?H3 D

Forbindelse (3) -- NH0CHCONHCHC00H

i 1 (ch9)9

I L

C0NHCHC0NHCH2C02H

(PH2}3

BocNHCHCONHNHBoc

D

(4) 980 mg Z-D-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-Gly-(D)-NHNHBoc C3) oplpses i 20 ml eddikesyre og hydrogeneres med 5 hydrogen ved atmosfæretryk over 200 mg 10%'s palladium/kul. Efter fjernelse af katalysatoren inddampes filtratet under reduceret tryk.

Den resulterende sirup oplpses i 5 ml vand og underkastes spjle-chromatografi pâ 50 ml HP-20 under eluering med vand-methanol (1:1, v/v). De fraktioner, som indeholder den pnskede forbindelse (4), 10 isoleres og inddampes til tprhed, hvorved der fis 610 mg H-D-Ala-ï-D-Glu-(LJ-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-Gly-(D)-NHNHBoc (4), smelte-punkt 159°C (spnderdeling).

[a]D = -17,30° (c = 0,1 i methanol).

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3270 og 1670 cm \ 15 NMR-Spektrum (CDgOD): 6 = 1,1 - 2,4 (31H, m), 3,70 - 4,55 (6H, m) ppm.

Eksempel 187.

389

DK 156252 B

1) Trin 1:

fH3 D

CH„(CH9)-X0NHCHC0NHCHC09Bz1 t ch„ L (CH9)9 + nh9chconhchco2h C02-Su (ÇH2)3 u

(1) Z-NHCHCO„H

D A

-> (2)

<fH3 D

CH3(CH2)14C0NHCHC0NHCHC02Bz1 L (ch2)2 L CHs conhchconhAhco9h (^η2)3 d z-nhchco9h D Δ (3)

Til en oplpsning af 918 mg Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (2) i en blanding af 25 ml methylenchlorid og 6 ml methanol sættes 760 mg triethylamin. Nir oplpsningen er blevet klar, sættes 1,01 g palmito-5 yl-L-Ala-D-Glu(OSu)OBzl (1) til oplpsningen. Blandingen hoides i 18 timer ved stuetemperatur og inddampes i vakuum. Til remanensen sættes 30 ml vand og 8 ml ΊΝ saltsyre. Det udfældede stof isoleres, vaskes med vand og torres, hvorved der fâs 2,06 g râprodukt, som vaskes med varm diisopropylether, hvorved der fâs 2,00 g palmito-10 yl-L-Ala-ï-D-Glu-(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3), smeltepunkt 185 - 187°C.

[a]D = -15,38° (c = 0,21 i AcOH).

IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3300, 1725, 1690 og 1630 cm NMR-Spektrum (CDCIg-CDgOD): δ = 0,87 (3H, m), 1,0 - 2,4 (44H, 15 m), 4,1 - 4,6 (5H, m), 5,06 (2H, s) ppm.

Forbindelse (3) -> 390

DK 156252 B

2) Trin 2: CH3 d ch3(ch2)14conhchconhchco2h L (¾½ L ?H3 conhchconhchco9h

(ÇH 2>3 D NH9CHC09H ZD

(4) 1,86 g palmitoyl-L-Ala-ï-D-GIu-(a-0-Bzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-Ala-OH (3) oploses i 40 ml eddikesyre og hydrogeneres over 1,0 g 10%'s palladium/kul med hydrogen ved atmosfæretryk. Efter fjernelse 5 af katalysatoren afdampes eddikesyren i vakuum. Til remanensen sættes diisopropylether, og den krystallinske masse isoleres, hvorved der fis 1,30 g palmitoyl-L-Ala-ï-D-Glu-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (4), smeltepunkt 185 - 190°C.

[a]D = -14,07° (c = 0,21 i AcOH).

10 IR-Spektrum (Nujol): v = 3320, 1730 (skulder), 1710 og 1625

iuqX

-1 cm .

NMR-Spektrum (Na0D-D20): δ = 0,87 (3H, m), 1,05 - 2,60 (44H, m), 3,91 - 4,54 (5H, m) ppm.

Eksempel 188.

’5 ’)Trin1: CH. D

I ^ NH,CHC0NHCHC0,H 2 , 2

Wi conhchconhchco9h - 1 n 2 7 CÇH233

• BocNHCHC02H D

CD

391

DK 156252 B

î«3 0

-) CH3(CH2)28C0NHCHC0NHÇHC02H

ccty 2 t î»3

CONHCHCONHCHCO.H

I· D 2

Ws

BocNHCHC02H

D

(2)......

Til en oplpsning af 528 mg H-L-Ala-ï-D-Glu-(a-C)H)-(L)-Boc-(D)-me-soDAP-(L)-D-Ala-OH (1) i en blanding af 20 ml methylenchlorid og 6 ml methanol sættes 314 mg triethylamin og 518 mg triacontansyre-N-hydroxysuccinimidester. Efter omrpring I 16 timer ved stuetemperatur 5 inddampes reaktionsblandingen i vakuum, og til remanensen sættes en blanding af 10 ml vand og 4 ml IN saltsyre. Det udfældede stof isoleres, vaskes med vand og tprres, hvorved der fâs et râprodukt, som vaskes med varm diisopropylether, hvorved der fâs 610 mg tria-contanoyl-L-Ala-ï-D-Glu- (o-OH) - (L) -Boc- (D) -mesoDAP- (L) -D-AlaOH 10 (2), smeltepunkt 157°C (spnderdeling).

[0]D =-14,67° (c = 0,20 i AcOH).

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3280, 1720 og 1625 cm \ NMR-Spektrum (CDC^-CDgOD): δ = 0,92 (3H, m), 1,1 - 2,1 (77H, m), 2,15 2,50 (4H, m) ppm.

Forbindelse (2) —->

DK 156252B

392 2) Trin 2: *

Fs D

CHjCCH2) 2 sC0NHCHC0NHCHC02H

L (CH2)z I L “3

C0NHCHC0NHCHC07H I D. Z

3

Nï^CHCÎ^H

(3) D

Til en supension af 500 mg tnacontanoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OH)-(L)-Boc-(D)-mesoDAP-(L)-D-AIa-OH (2) i 20 ml eddikesyre sættes 10 ml eddikesyre, der er mættet med hydrogenchlorid, og blandingen om-5 rores pi dampbad i 5 minutter, afkples til stuetemperatur og hoides i 1,5 time ved samme temperatur. Reaktionsblandingen inddampes i vakuum, remanensen vaskes med vand, og det udfældede stof isoleres og tprres, hvorved der fis 412 mg triacontanoy!-L-A!a-ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH, smeltepunkt 185°C (spnderdelrng).

10 IR-Spektrum (Nujol): = 3300, 1720 og 1625 cm"1.

(Il 3.X

NMR-Spektrum (trifluoreddikesyre) : 5 =0,90 (3H, m) ppm.

Eksempel 189.

393

DK 156252 B

1) Trin 1: n CH, D L I ^ CH»(CH_)-CONHCHCOOBzl HCl’H NCHCONHCHCOOEt

ύ 25 | 2 I D

^2^2 + (CH^ ^00511 ZHNtlnCOOEt

CD D

(2)

D

CH-CCHO rCCNHCHCOOBzl -^ V 5 j CCH2)2 I L L CH, II I 0 CONHCHCONHCHCOOEt

c<k>3D

ZHNCHCOOEt

D

(3) n-Heptanoyl-Y-D-Glu(û-OBzn-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOEt-(D)OEt (3) fremstilles pê i det væsentlige samme mâde som beskrevet 5 ί eksempel 187, trin 1, smeltepunkt 141 - 142°C.

[o]D = -10,31° (c = 0,22 i CHCÿ.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): fi = 0,85 (3H, m), 1,05 - 2,40 (29H, m), 3,93 - 4,70 (8H, m), 5,06 (2H, s), 5,11 (2H, s), 5,58 (1H, d, J=8Hz), 6,60 (2H, d, J=8Hz), 7,20 (1H, d, J=8Hz), 7,31 10 C10H, s) ppm.

Forbindelse (3) -> 394

DK 156252 B

2) Trin 2:

D

CH3Cch2)jCONHCHCOOH

2 I ^ t CH CONHCHCONHCH^OOEt C | 23 3 ” H^NCHCOOEt

D

OU

n-Heptanoyl-y-D-Glu(a-OH)-(L)-mesoDAP-CL)-D-AlaOEt-CD)-OEt (4) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 187, trin 2, smeltepunkt 179 - 182°C.

5 [a]D =-13,85° (c = 0,29 i AcOH).

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): δ = 0,87 (3H, m), 1,02 - 2,33 (27H, m), 3,40 (1H, m) ppm.

Eksempel 190.

1) Trin 1 : CH- D L | 3 CH3(CH2)sC0NHÇHC02Bz1 nh2çhconhchco2h Cçh2)2 + CÇH2)3 -^ C02Su ZNHCHC02Et

D

' CD (2) 395

DK 156252 B

D

_^ ch3(ch2)5conhchco2bzi ^H2^2 CH-

Il I j

CONHCHCONHCHCO,H I D

(3) ZNHCHC02Et

D

Heptanoyl-ï-D-Glu-ta-OBzD-ÎÜ-Z-iDÎ-mesoDAP-CDÎ-OEt-CD-D-AlaOH (3) fremstilles pi i det væsentlige samme mâde som beskrevet i ek-sempel 187, trin 1, smeltepunkt 94 - 102°C.

[a] D = -1,06° (c = 0,21 i CHCI3).

5 IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3280, 1735, 1685 og 1630 cm'1.

m s x NMR-Spektrum (CDCkj): δ = 0,86 (3H, m), 1,05 - 2,55 (26H, m), 3,9 - 4,9 (6H, m), 5,10 (2H, s), 5,16 (2H, s), 7,32 (10H, s) ppm.

2) Trin 2:

Forbindelse (3)->

D

ch3(ch2)5conhçhco2h

Wlh CH-

Il I 3

C0NHCHC0NHCHC0,H

I 2 W3 NH2CHC02Et

D

(4) 930 mg heptanoyl-Y-D-Glu-(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-OEt-(L)-10 D-AlaOH (3) opl0ses i 20 ml eddikesyre og hydrogeneres over 200 mg 10%'s palladium/kul med hydrogen under atmosfæretryk.

DK 156252 B

396

Efter fjernelse af katalysatoren afdampes eddikesyren i vakuum. Remanensen renses ved sojlechromatografi pê 50 ml HP-20 under anvendelse af ethanol-H20 (3:7, v/v) som eluent, hvorved der fâs 490 mg heptanoyl-y-D-Glu-(o-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-OMe-(L)-D-AlaOH 5 (4), smeltepunkt 218°C.

[a] p = -14,63° (c = 0,2 I vand).

IR-Spektrum (Nujol): v =3280, 1740 og 1635 cm

IÏ13X

NMR-Spektrum (D20): 6 = 0,90 (3H, m), 1,2 - 2,6 (26H, m), 4,1 - 4,55 (6H, m) ppm.

Eksempel 191.

397

DK 156252 B

1) Trin 1: CH, D L CH, I 3 | 3 CH,(CH,),cCONHCHCONHCHCOz1 3ocNHCHC0NHCHC0,Me J 2 lb | 2 ; 2

L (CH,), T (CH,), D

I 22 ! 23 C02Su ZNHCHC02Me

D

(1) (2) CH, D I 3 CH3(CH2)16C0NHCHC0NHCHC02Bzl -> L (CH2)2 L CH, I 3 CONKCHC ONHCHCO 0 Me I 2 îch2)3 d ZNHCHCO-jMe

D

(3) 100 ml trifluoreddikesyre sættes til 19,0 g Boc-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-(D)-OMe-(L)-D-AlaOMe (2), og blandingen omrpres i 2 timer ved 5 stuetemperatur. Efter fjernelse af trifluoreddikesyren oploses rema-nensen i 300 ml methylenchlorid, og der tilsættes 14,38 g triethylamin og 24,38 g stearoyl-L-Ala-D-Glu(OSu)OBzl (3). En blanding af 250 ml methanol og 50 ml tetrahydrofuran sættes til reaktlonsblandingen.

DK 156252 B

398

Efter omr0ring natten over ved stuetemperatur tilsættes 300 ml vand og IN saltsyre, indtil pH-værdien i oplosningen bliver 4. Det resul-terende bundfald isoleres og vaskes med vand til dannelse af et râprodukt, som renses ved sojlechromatografi pâ 800 g silicagel med 5 chloroform-methanot (50:1, v/v) som eluent, hvorved der fâs 21,13 g stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-OMe-(L)-D-AlaOMe (3), smeltepunkt 166-170°C.

[o]D = -15,59° (c = 0,30 i CHCIg).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1730, 1685 og 1635 cm ^.

ΓΠ3 X

10 NMR-Spektrum (CDCI3): δ (ppm) = 0,88 (3H, m), 1,06-2,55 (48H, m), 3,66 (3H, s), 3,71 (3H, s), 4,20-4,80 (5H, m), 5,10 (2H, s), 5,40 (2H, s), 5,78 (1H, d, J=8Hz), 6,50 (1H, m), 7,04 (1H, d, J=8Hz), 7,30 (10H, s).

2) Trin 2: ta5

15 Forbindelse (3) : ^ D

CH- CCH- ) , * CONHŒCONHCaCO 7K

3 2 10 r | · ~ CfzV . fs CQNHlKCONHCHCO,Ms I D - 3 HCl-NH,ŒC0,Me "D ά

W

6,0 g stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-OMe-(L)-D-AlaOMe (3) opl0ses i 80 ml eddikesyre og hydrogeneres med hydrogen ved atmosfæretryk over 1,2 g 10%'s palladium/kul. Efter fjernelse af katalysatoren mættes filtratet med hydrogenchlorid, og 20 oplosningen inddampes i vakuum. Til remanensen sættes toluen, og toluenet afdampes i vakuum. Der tilsættes diisopropylether, blandin-gen omrores i 6 timer, og det udfældede stof isoleres og torres, 399

DK 156252 B

hvorved der fis 4,60 g stearoyl-L-Ala-ï-D-Glu-iU-mesoDAP-CD)-OMe-(L)-D-AlaOMe-hydrochlorid (4), smeltepunkt 186-187°C.

Eksempel 192.

1) Trin 1: CH-, D L j ù

ŒziCZ1)s CONHCHCOzBzl NH2ÇHC0NHCHC02H

Cçh2)2 * (L ï *

\uZ '‘WJ

^00S}1 . . ZNHŒC02Me CD C2)

D

Œ3 s C°NS<pC02B zl cf2)? Fs Cçh2)2 ZHHCHCQ-Me

D L

CD

5 Heptanoyl-ï-D-Glu-(α-OBzl) -(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-OMe- (L)-D-

AlaOH (3) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 191, trin 1, smeltepunkt 114-11 G°C.

[a] D = -12,26° (c = 0,19 i CHCÿ.

»

DK 156252B

400 IR-Spektrum (Nxijol..): v = 3300, 1735, 1685 og 1635 cm”**.

, fifaX

NMR-Spektrum JCCDCI^): δ (ppm) - 0,86 (3H, m), 1,05-2,45 (23H, m), 3,67 (3H, .s), 4,15-4,80 (4H, m), 5,05 (2H, s), 5,12 (2H, s), 7,29 (10H, s).

5 2) Trin 2:

Forbindet&e X3) ^ Ώ Œ, (Œ2)sC0NHÇSC0 jH (uE?) 2 I L Fs

CONHCHCQNHCaCQ,E

I P 2 CCSjJ.

NH-CaC02H

u ^ O)

Til en oplpsning af 490 mg heptanoyl-Y-D-Glu-(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-OMe-(L)-D-AlaOH (3) i 5 ml methanol sættes 3 ml IN natriumhydroxidoplpsning. Efter omrpring î 2,5 timer ved stuetempe-10 ratur inddampes reaktionsblandingen. 34 ml 0,1N saltsyre og 50 ml ethylacetat sættes til remanensen, og den vandige fase ekstraheres igen med 50 ml ethylacetat. De organiske faser sammenhældes og vaskes med saltvand, tprres over magnesiumsulfat og inddampes til en olieagtig remanens. Remanensen oplpses i 20 ml eddikesyre og hydro-15 générés over 100 mg 10%'s palladium/kui med hydrogen ved atmosfære-tryk. Efter fjernelse af katalysatoren afdampes eddikesyren i vakuum. Remanensen renses ved spjIechromatografi pâ 15 ml HP-20 med vand-methanol (7:3, v/v) og lyofiliseres, hvorved der fâs 220 mg hepta-noyl-ï-D-Glu- (L)-mesoDAP-(L)-AlaOH (4).

Eksempel 193.

401

DK 156252 B

1) Trin 1 :

C3T

D L | 2

ŒjCCHjJjCONHCaCOjBîl NB^ŒCONHCHCOjH

znhcscOjH

Cl) C2)

D

ar3 0¾} scsNHpço2B2i Cça2)2 Œ Il l 5

CONHCHCONHCHCO-H

± , » .

CtH2)2 2HNŒC0-H · D ^ C3)

Til en oplpsning af 12,85 g Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (2) i 180 ml methylenchlorid sættes 10,61 g triethylamin og 15,61 g heptanoyl-D-5 Glu-(OSu)OBzl (1). Efter omrpring I 18 timer inddampes blandingen i vakuum. Til remanensen sættes 225 ml 2%'s saltsyre, og bundfaldet isoleres og vaskes med vand til dannelse af et râprodukt. Rensning udfpres ved vask med varm diisopropylether, hvorved der fis 20,35 g rent heptanoyl-ï-D-Glu-(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH 10 (3), smeltepunkt 192-195°C.

[a]p = -10,89° (c - 0,21 i tetrahydrofuran).

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3290, 1725, 1710 (skulder), 1685, 1650

ΓΠ3 X

(skulder) og 1635 cm

DK 156252 B

402 NMR-Spektrum (CDCI3-CD3OD) : 6 (ppm) = 0,87 (3H, m), 1,05-2,50, (23H, m), 4,08-4,70 (4H, m), 5,09 (2H, s), 5,15 (2H, s), 7,34 (10H, s).

2) Trin 2: 5 Forbindelse (3) -ï 0

Ca3CCa23S<:QNÏÏ(faC02a ^2? Z CH.

I L I 5

CONHCHCQNHCHCO

<fzh D

NHjCHCOjH

Ci) 20,0 g heptanoyl-ï-D-Glu-(a-OBzl)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (4) oplpses i 200 ml eddikesyre og hydrogeneres over 4,0 g 10%’s palladium/kul med hydrogen ved atmosfæretryk. Efter fjernelse af 10 katalysatoren afdampes eddikesyren i vakuum. Remanensen renses ved spjlechromatografi pâ 400 ml HP-20 med vand-methanol (7:3, v/v) og lyofiliseres, hvorved der fis 11,15 g heptanoyl-ï-D-Glu-(L)-meso-DAP-(L)-D-AlaOH (4).

Eksempel 194.

D

Ca.CC52).C0NHCaC02Srl · ..cçs,)2 I L· COMŒCONHŒCOzH - ' CŒjJs ZNHŒC0.Er αί o ~

DK 156252 B

403

D

jCONHCHCOjH

— foh ca3 CONH&HCONHCHCO ^

<fl>3 D îîH2CHC02H

C2)

Heptanoyl-ï-D-Glu-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (1) fremstilles pâ i det væsentlige samme mâde som beskrevet i eksempel 192, trin 2.

Eksempel 195.

1) Trin 1: CHj D

HC1NE- (ÎhCONHCHCO 73zI L

| ^ L CE- I l i CONHCHCONHCHCO-St . —- I D 2 CCH-)- ZNHCHCO-Et D ^

Cl] <3-

I ° D

CH jCŒ2) 16 CQNHCHC0NHCHC02S2l CCH2)2

l\ £3 B

CONHŒCQNHCHCO^S' L, > *

‘ Z^HCHCO-St D L

C2)

DK 156252B

404 606 mg triethylamin og 1,53 g stearinsyre-N-hydroxysuccinimidester sætte,s til en oplosning af 3,15 g H-L-Ala-ï-D-Glu-a-OBzl-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOEt-(L)-OEt.HCI (1), og reaktionsblandingen holdes i 16 timer ved stuetemperatur. Efter inddampning i vakuum 5 sættes 30 ml vand og 2 ml 1N saltsyre til remanensen, og det resul-terende bundfald isoleres ved filtrering, hvorved der fis 3,95 g stea royl-L-Ala-Y-D“Glu-a-OBzl-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOEt-(D)-OEt (2).

2) Trin 2:

P3 . D

CHjCCH2) ldC0NHŒC0SH(jaC00BrI

COHMCHCQHNŒCbOEr I 2 ZHNCHCOaSr .

B

C2)

Ps D

-* CH3 CÔr2) lâ COHNCHCOHNCHCOOH* 1 n p CQHNŒCOHNCHCGCEt

£2)3 D

H-NCHCOGBr 2

C3J

10 Stearoyl-L-Ala-Y-D-Glu-(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-OEt-(L)-D-AlaOEt (3) fremstilles pi lignende mlde som beskrevet i eksempel 191, trin 2.

Eksempel 196.

405

DK 156252 B

1) Trin 1 : CH-

I s D

NHjCHCONHCHCOjH -g

Wi

ZHHŒCO-H

D ^ £1J 0 ' CH.

I i D

CHjCCa-JjQCNHŒCONHCHCOjH Œ L I L | 3

(CE,) ^NHŒCONHCECOjH

CCH,), D

Γ ZMHŒCOtH D ~ C2) 3,30 g L-Ala-Y-D-Glu-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (1) opl0ses i en blanding af 1,68 g triethylamin og 80 ml methylenchlorid. Til 5 denne oplpsning ssettes 2,42 g behensyre-N-hydroxysuccinimidester, og den resulterende oplpsning lades hensta natten over ved stuetem-peratur. Reaktionsblandingen Inddampes til en olieagtig remanens, som oploses i 100 ml vand og syrnes med 18 ml 1N saltsyre. Bundfaldet filtreres og vaskes med vand. Det sâledes vundne produkt terres i 10 vakuum og vaskes grundigt med varmt ethylacetat, hvorved der fâs 4,75 g hvide krystaller af behenoyl-L-Ala-ï-D-Glu-(L)-Z-(D)-meso-DAP-(L)-D-AlaOH (2), smeltepunkt 170-172°C.

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3250, 2700-2600 (bred), 1710, 1660

ma X

(skulder) og 1630 cm \

DK 156252B

406 2) Trin 2: ' ^

I - D

CH*(CH-) 7n CONHCHCONHÇHCO-H CH- 5 120 α) Γ ^ eu i CCH2) 2conhchconhchco^s — CÇH2)

ZNHCHCO-E

m r C2) CH- · , I 3 CD) ŒjCCHy 2Q CONHCHCONHCHCOjH ^ •CD) | (L) / 3

Cch7) 7conhchconhchCq7h fzh m . mzcsco^.

CD) C3)

Behenoyl-L-Ala-ï-D-Glu-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3) fremstilles pâ lignende made som beskrevet i eksempel 192, trin 1, smeltepunkt 180°C (spnderdeling).

5 IR-Spektrum (Nujol): vmgx = 3380, 1740 og 1630 cm [a]D = -19,34° (c = 0,20 i ŒjCOOH).

Eksempel 197.

1) Trin 1 :

D D

NH2ÇHC02H ^3^¾) c œ2)2 _ c&h i -c I l

CONKCHCQ^ C0NHvj3C02H

Cfz3î J

ZNHiacajH zjœiaco^ , b 2

£1) CU

DK 156252 B

407 4,1 g triethylamin og 4,67 g stearinsyre-succinimidester sættes til en suspension af 5,55 g H-ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-Z-(D)-mesoDAP (1) i 60 ml chloroform, og reaktionsblandingen holdes i 16 timer ved stuetem-peratur. Efter inddampning i vakuum sættes 50 ml vand og 48,5 ml IN 5 saltsyre til remanensen, og det vundne bundfald isoleres ved filtre-ring, vaskes med vand og tprres, hvorved der fis 8,75 g stearoyl-ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-Z-(D)-mesoDAP (2), smeltepunkt 130-139°C.

[ct]p = -0,19° (c = 0,51 i methanol).

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3350, 3280, 1750, 1725, 1710, 1620 og ΠΊ3Χ 10 1600 cm ' ^' NMR-Spektrum (CD^OD): δ (ppm) = 0,87 (3H, m), 1,10-2,40 (42H, m), 4,0-4,5 (3H, m), 5,05 (2H, s), 7,26 (10H, s).

2) Trin 2:

D D

CS- CCH2316 CONHŒCO zH (23(αΗζ)16ΟΟΝΗαΐΟΟ^ CCH2)2 CÇE2}; II — . Il

CONHCHCQ-H C0NECHC07H

ώ 1 I

T23 Wj

ZNHŒCa^ HC1-NH-CHC0-E

• tw (33

Stearoyl-ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-mesoDAP.HCI (3) fremstilles pâ lignende 15 mâde som beskrevet i eksempel 192, trin 2, smeltepunkt 125°C (skum-dannelse).

DK 156252B

408 [a] q = -9,73° Ce = 0,55 i eddikesyre).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3250, Î720 og 1640 cm”1.

max

Eksempel 198.

1) Trin 1 :

D

HCl * NK^ŒCQ^B zl CH3(CH2)16C0KHŒC02Brl CCS2) 2 CÇH2) 2 I t — I l

„ CONHCHCO-H

CONHCHCO^H j 2Γ ' CÇ%ÏS Cçs2)ï

ZNHCHCOjH' ZNHCaCO^H

O] es 5 StearoyI-ï-D-Glu-a-OBzl-(L)-Z-(D)-mesoDAP (2) fremstilles pâ lignen-de mâde som beskrevet i eksempel 197, trin 1.

[a]D = 10,70° Ce = 0,20 i CHgCOOH).

IR-Spektrum CNujol): v = 3270, 1725, 1690, 1680 og 1635 cm ma x NMR-Spektrum (CDC^-CDgOD) : 6 Cppm) = 0,87 (3H, m), 1,03-2,40 10 (42H, m), 4,05-4,65 (3H, m), 5,08 C2H, s), 5,14 C2H, s), 7,32 C10H, s).

DK 156252 B

409 2) Trin 2:

D D

ChsCCH2) 16CQNHCHCa-2B ri CH^ (¾) lfi CONHCHCOjE

C=ÿz · 4 CÇH2)2

C0NHCHC07E CONHbîCOjH

ck)!

ZNHCHCOjE HCl-NHjÇHCOjH

C23 C3Î

Stearoyl-2f-D-Glu-(a-OH)-(L)-mesoDAP. HCl (3) fremstilles pâ lignende mâde som beskrevet i eksempel 192, trin 2.

IR-Spektrum (Nujol): v = 3250, 1720 og 1640 cm Ί.

ΓΠ3 X

5 Eksempel 199.

1 ) Trin 1 :

D

ŒjCCH^CONHCHCCOBiL

cia,J , I t Fs

CÛNHCHCONHŒCOOH

fa S * ZHNCHCOOEt

D

CD

DK 156252 B

410

. D

-► CHjCOy sCDNHŒC00H - • càr2)2 . i ψζ

C0NHCHC0NHCHC00H

<fzh °

ZHNCHCOOH

D

C2)

Til en suspension af 63,0 g heptanoyl-2f-D-Glu-(a-OBzI)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(D)-OEt-(L)-D-AlaQH (1) i en blanding af 630 ml vand og 630 ml éthanol sættes 100 ml 12%'s vandigt natriumhydroxid. Efter omr0ring i 1 time tilsaettes 100 ml dioxan, og blandingen omrpres i 5 yderligere 1 time. Til reaktionsblandingen sættes 61 ml 18%’s saltsyre, og opiosningen inddampes i vakuum til dannelse af en olieagtig rema-nens, hvortil der sættes 500 ml vand. Blandingen ekstraheres med 800 ml og 300 ml ethylacetat, og ekstrakten vaskes med saltvand, t0rres over magnesiumsulfat og inddampes i vakuum. Til den olieagtige 10 remanens sættes diisopropylether, og det vundne pulver isoleres ved filtrering, hvorved der fâs 57,6 g heptanoyl-y-D-Glu-(a-OH)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH C2).

[a] p = -4,73° (c = 0,3 i methanol).

IR-Spektrum (Nujol): vm = 3300, 1720 og 1630 cm"^.

max w 15 NMR-Spektrum (CD^OD): δ (ppm) = 0,88 (3H, m), 5,06 (2H, s), 7,30 (5H, s).

2) Trin 2:

DK 156252 B

411

Forbmdelse (2) f CffjCCH^ gCONHGHCOOH

Cœ,)2 IL ÇHj

CONHCHCONHCHCOOH

H,NCHCOOH C3) D

*

22,0 g heptanoyl-ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-Z-(D)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH

(2) opl0ses i en blanding af 190 ml methanol og 10 ml vand og hydro-5 générés over 4 g 10%'s palladium/kul med hydrogen ved atmosfære-tryk. Efter fjernelse af katalysatoren afdampes oplpsningsmidlet I vakuum. Remanensen oplpses i 10 ml vand og underkastes spjlechro-matografi pâ 250 ml HP-20 under eluering med vand-methanol (7:3) og lyofiliseres, hvorved der fâs 9,13 g af et amorft pulver. Ved kry-10 stallisation af en blanding af 72 ml éthanol og 21 ml methanol fâs 9,10 g heptanoyl-ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-mesoDAP-(L)-D-AlaOH (3).

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3250, 1740 og 1666-1640 (bred) cm NMR-Spektrum (D20): δ (ppm) = 0,82 (3H, t, J=6Hz), 1,00-2,60 (20H, m), 1,35 (3H, d, J=8Hz), 3,81 (1H, t, J=7Hz), 4,40-4,80 (3H, 15 m).

DK 156252 B

412

Eksempel 200.

D

CS sC0NHÇHC00H

Wz œ I L F3 CONHCHCONHCHCOOE t -JL·—. . * Wî H-NCHCOOEt OT * 0

__ CHjCCHj) ^CONH(piCOOH

Cft)z „ 1 L Po

CONHCHCONHCHCOOH

I D

cfVs E-NCHCOOH ' * 0

C2X

13 ml IN natriumhydroxld sættes til en suspension af 2,0 g heptano-yl-ï-D-Glu-(a-OH)-(L)-mesoDAP-(D)-OEt-(L)-D-AlaOEt (1) i en blanding af 30 ml methanol og 5 ml vand. Efter omrpring i 2 timer ved 5 stuetemperatur tilsættes 13 ml IN saltsyre, og reaktionsblandingen inddampes r vakuum. Remanensen oplpses i 3 ml vand og underkastes spjlechromatografi pâ 30 ml HP-20. De med vand-methanol (7:3) elue-rede fraktioner samles og lyofiliseres, hvorved der fâs 0,95 g hep-tanoyl-Y-D-Glu- (α-OH) - (L) -mesoDAP- (L)-D-AlaOH (2).

10 IR-Spektrum (Nujol): v =3250, 1740 og 1666-1640 (bred) cm ιϊιαΧ NMR-Spektrum (D20): 6 (ppm) = 0,82 (3H, t, J=6Hz), 1,00-2,60 (20H, m), 1,35 (3H, d, J=8Hz), 3,81 (1H, t, J=7Hz), 4,40-4,80 (3H, m).

DK 156252B

413

Eksempel 201.

1) Trin 1:

D L PS

CH3(CH2)2^C0NHCHC02B21 -h . H-2NaiC0NHCHC02H

coy2 (çh2)4

CO^u AhZ

CD (2)

D

ch3(ch2)20cowîçhco2bz1 -(CH2)2 ch, I l I 3 CONHCHCONHCHCO-H I D 2

Wl

NHZ

C3)

Til en suspension af 4,74 g L-Lys(s-Z)-D-AlaOH (2) i en blanding af 100 ml methanol og 100 ml chloroform sættes 2,73 g triethylamin og 5 8,86 g docosanoyl-D-Glu(OSu)OBzl (1). Efter omroring i 4 timer ved stuetemperatur inddampes reaktionsblandingen under reduceret tryk.

Til remanensen sættes 30 ml 1N saltsyre og 150 ml vand til dannelse af en krystallinsk masse, som isoleres og vaskes med vand. Det râ krystallinske produkt tflrres og vaskes med varm diisopropylether, 10 hvorved der fâs 11,00 g docosanoyl-ï-D~Glu-(a-OBzl)-L-Lys(s-Z)-D-AlaOH (3), smeltepunkt 157-160°C.

[a] p = '7,84° (c - 0,82 i eddikesyre).

414

DK 156252 B

IR-Spektrum (Nujol): vmav = 3280, 1725, 1680 og 1630 cm"1.

NMR-Spektrum (dimethylsulfoxid -dg): 6 (ppm) = 0,89 (3H, m), 1,00-2,42 (53H, m), 2,76-3,15 (2H, m), 4,01-4,46 (2H, m), 5,07 (2H, s), 5,17 (2H, s), 7,42 (10H, s), 7,87-8,35 (4H, m).

5 2) Trin 2:

D

CH3(CH2)20CONHCHCO2H

Forbindelse (3) ^ (CH2) 2

L I

C0NHCHC0NHCHC0,H

NH- m* (4) 1,0 g docosanoyl-y-D-Glu-(a-OBzl)-L-Lys(s-Z)-D-AlaOH (3) oplpses i 20 ml eddikesyre og hydrogeneres over 200 mg 10%'s palladium/kul med hydrogen under atmosfæretryk. Efter fjernelse af katalysatoren 10 afdampes eddikesyren i vakuum. Remanensen fortyndes med diiso-propylether til dannelse af et râprodukt, som vaskes med vand og tprres, hvorved der fâs 624 mg rent docosanoyl-îf-D-Glu-(a-OH)-L-Lys-D-AlaOH, smeltepunkt 200-204°C (spnderdeling).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3290, 1720 og 1630 cm ^ msx 15 [®]q s -15,0° (c = 0,31 i eddikesyre).

415

DK 156252 B

Eksempel 202.

1) Trin 1: D L ÇH- I 0

CH3(CH2)14C0NH(j:HC02B2l NK2CHC0NHCHC02H

cfy 2 cjjv*D

C02Su ml (D ... .......... (2)

D

CH-(CH-)..CONHCHCO-Bzl ^ 3 2 14 j 2 CCH2)2 ch3 i l i

CONHCHCONHCHCO-H

I D

Cçh2)4

NHZ

(3)

Til en suspension af 5,27 g L-Lys(s-Z)-D-AlaOH (2) i en blanding af 100 ml methanol og 100 ml chloroform sættes 3,03 g triethylamin og 5 8,59 g palmitoyl-D-Glu(OSu)OBzl (1). Efter omrpring i 2,5 timer ved stuetemperatur inddampes den vundne klare oplpsning under reduce-ret tryk. Til remanensen sættes 33 ml 1N saltsyre til dannelse af en krystallinsk masse, som isoleres og vaskes med vand. Den resulteren-de krystallinske masse tprres, vaskes med varm diisopropylether og 10 tprres, hvorved der fis 11,13 g palmitoyl-3’-D-Glu-(a-OBzl)-L-Lys-(s-Z)-D-AlaOH (3), smeltepunkt 153-156°C.

[o]q = -7,84° (c = 1,03 i eddikesyre).

IR-Spektrum (Nujol): v = 3300, 1730, 1690 og 1630 cm

nia X

NMR-Spektrum (CDCIg): δ (ppm) = 0,87 (3H, m), 1,00-2,65 (41 H, 15 m), 2,75-3,45 (2H, m), 4,15-4,83 (3H, m), 5,05 (2H, s), 5,12 (2H, s), 7,30 (10H, s).

DK 156252 B

416

2) Trin 2: D

^3 CCH2^ 14C0NHCHC02H

Forbindelse (3) -^ I

(CH,), CH.

I u u I 3

. I L I

CONHCHCONHCHCO-H

Cç«z)4 D

Ah2 (4) 10,62 g palmitoyl-Y-D-Glu-(a-OBzl)-L-Lys(e-Z)-D-AlaOH (3) oplpses i 200 ml eddikesyre og hydrogeneres over 2,0 g 10%'s palladium/kul med 5 hydrogen under atmosfæretryk. Efter fjernelse af katalysatoren af-dampes eddikesyren i vakuum. Remanensen tritureres i vand. Den vundne krystallinske masse isoleres ved filtrering, vaskes med vand og tprres i 10 timer ved 60°C under reduceret tryk, hvorved der fâs 6,69 g palmitoyl-ï-D-Glu-(a-OH)-L-Lys-D-AlaOH (4), smeltepunkt 10 193-199°C.

[o]p = -16,45° (c = 0,5 i eddikesyre).

IR-Spektrum (Nujol): vmax = 3290, 1720 (skulder), 1700 og 1635 -1 cm .

NMR-Spektrum (D20-NaO-D): δ (ppm) = 0,72-2,85 (46H, m), 15 4,05-4,48 (3H, m).

Claims (5)

1. R]j betegner methyl, m betegner 2, og n betegner 1, da betegner R og R^ hver for sig hydrogen eller en gruppe med den almene formel 2 2 2

25 -C0N(Ra)(Rfo), hvor Ra betegner mono- eller dicarboxy-C^- eller -C^g- alkyl, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl-- eller -C3-alkyl, α-carboxyethyl, phenyl-C^g- alkoxycarbonyl-C^- eller -C3-alkyl eller pheny1-carboxy-_ g-alkyl, hvor phenyldelen kan være substitueret med hydroxy; og 2

30 Rb har den ovenfor anfarte betydning; og nâr R^" betegner hydrogen eller acyl som ovenfor defineret, n betegner 1, r£ betegner methyl, RP betegner carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl eller phenyl-C. --alkoxycarbonyl, 2 1 35. betegner carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl, carbazoyl, 3-tert.butoxycarbonylcarbazoyl, 3-benzyloxycarbonylcarbazoyl eller en gruppe med den 2 2 2 almene formel -C0N(Ra)(Rj,), hvor Ra betegner monocarboxy-C^g-alkyl, DK 156252 B 419 methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl-_g-alkyl eller phenyl-_ g-alkoxycarbonyl-_g - alkyl, betegner hydrogen, og m betegner 2, da betegner ikke hydrogen; 5 eller farraaceutisk tolerable salte deraf, kendetegnet ved, at a) til fremstilling af en forblndelse med den almene formel la RÎ-(HNCHCO) -HNCH-rÇ COHNCH-R* (Çh2)3 I. Rj-HNCH-Rq hvor betegner acyl som ovenfor defineret, R^ betegner hydrogen, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller £ 10 tert.butoxycarbonyl eller phenyl-C^ ^ * alkoxycarbonyl, betegner methoxy-, ethoxy-, propoxy-, butoxy-, tert.butoxy- eller tert.pentoxycarbonyl eller benzyloxycarbonyl og r£, n, m, og har den ovenfor anforte betydning, eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf omsættes en forbindelse med den almene formel II 15 R*-(HNCHCO) -HNÇH-R? c 11 n i i *b W« COOH Π eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf med en forbindelse med den almene formel III HjNCH-R2 (çn2) m R^HNCH-Rq eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf, 20. hvilke almene formler II og III symbolerne har den ovenfor anforte DK 156252 B 420 betydning, og, om ansket, til fremstilling af en forbindelse med den almene formel Id i R^HNCHCO) -HNCH-RP i « n i 2 *b (?H2>m _ COHNCH-R^ (fH 2), W HjNCH-R^ hvor r]> betegner hydrogen eller carboxy, R^ og hver betegner hydrogen, carboxy eller en gruppe med den almene formel 2 2 2

5 -C0N(Ra)(R^), hvor Ra betegner mono- eller dicarboxy-C^ g-alkyl eller phenyl(carboxy)-C. --alkyl, hvor phenyldelen kan være substitueret 2 1_b 1 1 med hydroxy, R^ har den ovenfor anfarte betydning, og R , Rj-,, n og m har den ovenfor anfarte betydning, eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf underkastes en pâ den ovenfor beskrevne mâde vunden 10 forbindelse la en reaktion til fjernelse af beskyttelsesgruppeme, eller b) til fremstilling af en forbindelse med den almene formel la' Rj-(HNÇHCO)n-HNÇH-Rp *b W» . COHNCH-R^ (CH,) W Rj-HNCH-Rq eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf omsættes en forbindelse med den almene formel Ib H-(HNCHCO)n-HNCH-Ep «J <?Vm , COHNCH-R* CCH2)3 Ib Rj-HNCH-Rq DK 156252 B 421 eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf med et acyleringsmiddel med den almene formel rJ-oh hvor Rq har den ovenfor anferte betydning, eller et reaktivt dérivât 5 deraf, i hvilke almene formler symbolerne har den ovenfor angivne betydning, eller c) til fremstilling af en forbindelse med den almene formel Id R1- (HN pîCO)n-HNÇH-R J «i r COHNÇH-R H^NCH-R^ hvor R? betegner hydrogen eller carboxy, - og R^ hver betegner 2 2 hydrogen, carboxy eller en gruppe med den almene formel -C0N(Ra)(R^), 2 10 hvor Ra betegner mono- eller dicarboxy-C^ g-alkyl eller phen- yl(carboxy)-C. ,-alkyl, hvor phenyldelen kan være substitueret med 2 1*° 1 1 hydroxy, R^ har den ovenfor anferte betydning, og R , R^, n og m hver har den ovenfor anforte betydning, eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf underkastes en forbindelse med den almene formel le R^CHNCHCO) -HNCH-RÇ *i ü | i 2 COHNÇH-R (fH2) k Rr-HNCH-Rq

422 DK 156252 B hvor symbolerne har den ovenfor anferte betydning, forudsat at mindst én af r|, R^, R^ og Rr er eller indeholder en beskyttelsesgruppe, eller et farmaceutisk tolerabelt sait deraf en reaktion til fjernelse af beskyttelsesgrupper.

1. Analogifremgangsmâde til fremstilling af di-, tri- eller tetrapeptider med den alraene formel I Rl-(HNpHCO)n-HNCH-Rp < 4»V. 2 COHNCH-R* ?H2 1 CH, CH„ p i*n Rr-HNCH-Rq hvor R^ betegner hydrogen eller acyl, der er valgt blandt C . ..-alk-5 anoyl, som kan bære én eller flere substituenter, som kan være hydroxy, lavere-alkanoyloxy eller lavere-alkoxy, phenyl-lavere-alkanoyl, phenoxy-lavere-alkanoyl, thienyl-lavere-alkanoyl, tert.butoxycarbonyl, arachidonoyl, 6-amino-6-carboxyhexanoyl, benzoyl, mandelyl, phenylacetoxyacetyl, phenylcarbamoyl, 10 benzyloxycarbonyl, adamantan-carbonyl, benzyloxybenzoyl, salicyloyl, diphenylacetyl, cinnamoyl, benzensulfonyl, O-stearoyl-lactoyl, benziloyl, O-acetylbenziloyl, nicotinoyl, N-benzyloxycarbonyl-L-5-oxo-2-pyrrolidincarbonyl, 5-oxo-2-pyrrolidincarbonyl, retinoyl, 5-(N-benzyloxycarbonyl-5-oxo-4-oxazolidinyl)-valeryl, 10-(2,3-15 dimethoxy-5-methyl-l,4-benzoquino-6-yl)decanoyl, 10-(2,3,4- trimethoxy-6-methylpbenyl)decanoyl, l-N-hexyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidoyl, 1-N-benzyl-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidoyl, 1-N-laury1-2,3,4,5-0-tetraacetyl-D-glucaramidoyl, 1 -N-benzyl- D -glucaramidoyl, 1-N-hexyl-D-glucaramidoyl, 1-N-lauryl-D-glucaramidoyl, 20 2,3,4,6-diisopropyliden-L-2-ketogulonoyl og 2-keto-L-gulonoyl; betegner hydrogen, methyl, isopropyl, hydroxymethyl, benzyloxymethyl eller benzyl; og r" hver for sig betegner hydrogen, carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl, carbazoyl, DK 156252B 418 3-tert.butoxycarbonylcarbazoyl, 3-benzyloxycarbonylcarbazoyl eller en 2 2 2 gruppe med den almene formel -CON(Ra) (¾). hvor Ra betegner mono-eller dicarboxy-C^g -alkyl, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl- g-alkyl, phenyl-C^_g- 5 alkoxycarbony 1-g-alkyl eller phenylcarboxy-C^ g-alkyl, hvor phenyldelen kan være substitueret med hydroxy og R^ betegner hydrogen eller g-alkyl; RP betegner hydrogen, carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl eller phenyl-C^_2‘ 10 alkoxycarbonyl; j· R betegner hydrogen, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, butoxy-, tert.butoxy- eller tert.pentoxycarbonyl eller benzyloxycarbonyl; m betegner et helt tal 1-3; og n betegner et helt tal 0-2; 15 med det forbehold, at nâr det ene af symboleme R^ og betegner hydrogen, betegner det andet carboxy, methoxy-, ethoxy-, propoxy-, isopropoxy-, butoxy- eller tert.butoxycarbonyl, carbazoyl, 3- tert. butoxycarbonylcarbazoyl, 3-benzyloxycarbonylcarbazoyl eller en 2 2 2 2 gruppe med den almene formel -C0N(Ra) (R^), hvor Ra og har den 20 ovenfor anfarte betydning; nâr R^ betegner hydrogen, tert.butoxycarbonyl eller benzyloxycarbonyl,

2. Fremgangsmâde ifolge krav 1, kendetegnet ved, at R^ betegner hydrogen eller ^g-alk-anoyl, som kan være substitueret med hydroxy, lavere-alkanoyloxy eller lavere-alkoxy.

3. Fremgangsmâde ifelge krav 1, 2 10 kendetegnet ved, at R betegner en gruppe med den almene 2 2 2 2 formel -C0N(Ra) (Rj-,), hvor Ra og Rj, hver for sig har den i krav 1 anforte betydning, og R^ betegner carboxy.

4. Fremgangsmâde ifolge krav 3, kendetegnet ved, at n betegner 0, og R betegner c^_22~ 15 alkanoyl.

5. Fremgangsmâde ifolge krav 4, kendetegnet ved, at R^ betegner heptanoyl, R^ betegner 2 r carboxy, m betegner 2, R betegner 1-carboxyethylcarbamoyl, og R betegner hydrogen.