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Die
vorliegende Erfindung betrifft N-Phenyl-2-pyrimidinaminderivate,
Verfahren zur Herstellung derselben, Medikamente, die solche Verbindungen
umfassen und die Verwendung solcher Derivate bei der Herstellung
von pharmazeutischen Zusammensetzungen für die therapeutische Behandlung
von warmblütigen
Lebewesen.
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Die
Erfindung betrifft N-Phenyl-2-pyrimidinaminderivate der Formel I
worin
R
1 steht
für einen
substituierten cyclischen Rest, wobei der cyclische Rest in jedem
Fall durch ein Ring-Kohlenstoffatom
gebunden ist und ausgewählt
ist aus Phenyl, Pyridyl, Pyrazinyl, Thiazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl und
Imidazolyl, und die Substituenten des oben genannten cyclischen
Rests ausgewählt
sind aus ein oder mehr der Gruppen Halogen, Cyano, Carbamoyl, -C(=O)-OR
3, -C(=O)-R
4, -SO
2-N(R
5)-R
6, -N(R
7)-R
8, -OR
9 und durch
Fluor substituiertes Niederalkyl, wobei
R
3,
R
4, R
5, R
6, R
7, R
8 und
R
9 jeweils unabhängig von den anderen stehen
für Wasserstoff
oder Niederalkyl, das unsubstituiert oder substituiert ist durch
Mono- oder Diniederalkylamino; und
R
2 ausgewählt ist
aus Halogen, Cyano, Carbamoyl, -C(=O)-OR
10,
-C(=O)-R
11, -SO
2-N(R
12)-R
13, -N(R
14)-R
15, -OR
16 und durch Fluor substituiertes Niederalkyl,
worin
R
10, R
11,
R
12, R
13, R
14, R
15 und R
16 jeweils unabhängig von den anderen stehen
für Wasserstoff
oder Niederalkyl, das unsubstituiert oder substituiert ist durch
Mono- oder Diniederalkylamino, und Salze solcher Verbindungen, die
mindestens eine Salz bildende Gruppe aufweisen.
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Ein
substituierter cyclischer Rest R1, wie zum
Beispiel ein substituierter Phenylrest R1,
kann mehrere Substituenten aufweisen, aber insbesondere nicht mehr
als drei und insbesondere in dem Fall von relativ großen Substituenten
vorzugsweise nur einen Substituenten, wobei die Substituenten hauptsächlich in
der para- (oder 4-Position) und/oder vorzugsweise meta-Position
(oder 3-Position) in Bezug auf die Bindungsstelle des cyclischen
Rests R1 vorliegen. Die oben genannten substituierten
cyclischen Reste R1, die andere sind als Phenyl,
weisen in der Regel bis zu zwei und vorzugsweise nur einen Substituenten
auf, der/die sich insbesondere in der para-Position und/oder vorzugsweise
in der meta-Position in Bezug auf die Bindungsstelle des cyclischen
Rests R1 befindet/befinden.
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Pyridyl,
das durch ein Ringkohlenstoffatom gebunden ist, steht für 2- oder
vorzugsweise 4- oder 3-Pyridyl, insbesondere 4-Pyridyl. Bei einem
monosubstituierten Pyridylrest R1 befindet
sich der Substituent vorzugsweise in der ortho-Position in Bezug
auf den Pyridinstickstoff.
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Halogen
in einem Rest R1 steht vorzugsweise für Chlor
oder Fluor.
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Ein
durch Halogen substituiertes Phenyl R1 steht
vorzugsweise für
2-, 3- oder 4-Chlorphenyl, 2,4-, 3,4- oder 2,5-Dichlorphenyl oder
2,3,4-Trichlorphenyl.
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Durch
Fluor substituiertes Niederalkyl R2 steht
für Niederalkyl,
das mindestens einen, aber vorzugsweise mehrere, Fluorsubstituenten
trägt,
insbesondere 1,1,2,2-Tetrafluorethyl oder ganz besonders bevorzugt Trifluormethyl.
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Mono-
oder Diniederalkylamino steht zum Beispiel für Methylamino oder Dimethylamino.
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Innerhalb
des Umfangs dieses Textes kennzeichnet der Begriff "Nieder" Reste, die bis zu
und einschließlich
7, vorzugsweise bis zu und einschließlich 4, Kohlenstoffatome einschließen.
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Sofern
es nicht anders in dem Zusammenhang, um den es sich handelt, angegeben
ist, steht Niederalkyl vorzugsweise für Methyl oder Ethyl.
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R3 und R7 stehen vorzugsweise
für Wasserstoff.
R8 steht vorzugsweise für Niederalkyl, wie insbesondere
n-Propyl. R9 steht vorzugsweise für Wasserstoff
oder Methyl.
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Salz
bildende Gruppen in einer Verbindung der Formel I stehen für Gruppen
oder Reste, die basische oder saure Eigenschaften aufweisen. Verbindungen,
die mindestens eine basische Gruppe oder mindestens einen basischen
Rest aufweisen, z.B. eine Mononiederalkylaminogruppe, einen Pyrazinylrest
oder einen Pyridylrest, können
Säureadditionssalze
bilden, z.B. mit anorganischen Säuren,
wie Chlorwasserstoffsäure, Schwefelsäure oder
einer Phosphorsäure,
oder mit geeigneten organischen Carbon- oder Sulfonsäuren, z.B. aliphatischen
Mono- oder Dicarbonsäuren,
wie Trifluoressigsäure,
Essigsäure,
Propionsäure,
Glykolsäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure Fumarsäure, Hydroxymaleinsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Citronensäure, Oxalsäure oder
Aminosäuren,
wie Arginin oder Lysin, aromatische Carbonsäuren, wie Benzoesäure, 2-Phenoxybenzoesäure, 2-Acetoxybenzoesäure, Salicylsäure, 4-Aminoslicylsäure, aromatisch-aliphatische
Carbonsäure,
wie Mandelsäure
oder Zimtsäure,
heteroaromatische Carbonsäuren,
wie Nicotinsäure
oder Isonicotinsäure, aliphatische
Sulfonsäuren,
wie Methan-, Ethan- oder 2-Hydroxyethansulfonsäure, oder aromatische Sulfonsäuren, z.B.
Benzol-, p-Toluol- oder Naphthalin-2-sulfonsäure. Wenn mehrere basische
Gruppen vorliegen, können
Mono- oder Polysäureadditionssalze
gebildet werden.
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Verbindungen
der Formel I, die saure Gruppen aufweisen, z.B. eine freie Carboxygruppe
in dem Rest R1, können Metall- oder Ammoniumsalze
bilden, wie Alkalimetall- oder Erdalkalimetallsalze, z.B. Natrium-,
Kalium-, Magnesium- oder Calciumsalze, oder Ammoniumsalze mit Ammoniak
oder geeigneten organischen Aminen, wie tertiären Monoaminen, z.B. Triethylamin
oder Tri(2-hydroxyethyl)amin, oder heterocyclische Basen, z.B. N-Ethylpiperidin
oder N,N'-Dimethylpiperazin.
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Verbindungen
der Formel I, die sowohl saure als auch basische Gruppen besitzen,
können
innere Salze bilden.
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Zum
Zweck der Isolierung oder Reinigung und auch in dem Fall, dass die
Verbindungen als Zwischenverbindungen weiter verwendet werden, ist
es auch möglich,
pharmazeutisch nicht annehmbare Salze zu verwenden. Nur die pharmazeutisch
annehmbaren nicht toxischen Salze werden jedoch therapeutisch verwendet, und
solche sind daher bevorzugt.
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Im
Hinblick auf die nahe Verwandtschaft zwischen den neuen Verbindungen
in freier Form und in Form ihrer Salze, einschließlich auch
der Salze, die als Zwischenverbindungen oder Zwischenstufen verwendet
werden können,
z.B. bei der Reinigung der neuen Verbindungen oder um solche Verbindungen
zu identifizieren, ist jede Bezugnahme oben und im Folgenden auf
die freien Verbindungen so zu verstehen, dass sie die entsprechenden
Salze einschließt,
wo es geeignet und zweckdienlich ist.
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Der
einschlägige
Stand der Technik umfasst die
EP 0 337 943 A ,
EP 0 564 409 A und
EP 0 233 461 A , die alle
spezielle Verbindungen offenbaren, die strukturell ähnlich,
aber von den Verbindungen der vorliegenden Erfindung verschieden
sind. Die
EP 0 564 409
A stellt teilweise einen Stand der Technik gemäß Artikel 54(3)
EPÜ dar,
und die Verbindungen, die in den verbleibenden zwei Druckschriften
beschrieben sind, weisen eine andere Nützlichkeit oder Anwendung auf.
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Die
Verbindungen der Formel I zeigen wertvolle pharmakologische Eigenschaften:
z.B. hemmen oder inhibieren sie die Enzymproteinkinase C mit einem
hohen Grad an Selektivität.
Phospholipid- und Calcium-abhängige
Proteinkinase C tritt in Zellen auf in einer großen Anzahl von Formen und nimmt
an verschiedenen grundlegenden Prozessen teil, wie Signalübertragung,
Proliferation und Differentiation, und auch bei der Freisetzung
von Hormonen und Neurotransmittern. Die Aktivierung von dem Enzym
wird entweder bewirkt durch Rezeptor vermittelte Hydrolyse von Phospholipiden
der Zellmembran oder durch direkte Wechselwirkung mit bestimmten
Tumor fördernden
aktiven oder wirksamen Substanzen. Die Sensitivität der Zelle
auf eine durch einen Rezeptor vermittelte Signalübertragung kann beträchtlich
beeinflusst werden durch Modifikation der Aktivität der Proteinkinase
C (als Signaltransmitter). Verbindungen, die im Stande sind, die
Aktivität
von Proteinkinase C zu beeinflussen, können verwendet werden als Tumor-hemmende
oder -inhibierende, antiinflammatorische, immunmodulierende und
antibakteriell wirksame Inhaltsstoffe und können sogar von Wert sein als Mittel
gegen Arteriosklerose und Störungen
des kardiovaskulären
Systems und zentralen Nervensystems.
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Früher wurde
Schweinehirnproteinkinase C, gereinigt gemäß dem Verfahren, das beschrieben
ist von T. Uchida und C.R. Filburn in J. Biol. Chem. 259, 12311
bis 12314 (1984), verwendet, um die hemmende oder inhibitorische
Wirkung auf Proteinkinase C zu bestimmen, und die inhibitorische
Wirkung auf Proteinkinase C wurde bestimmt gemäß dem Verfahren von D. Fabbro
et al., Arch. Biochem. Biophys. 239, 102 bis 111 (1985).
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Die
früher
verwendete Schweinehirnproteinkinase C ist ein Gemisch von verschiedenen
Subtypen (Isotypen) der Proteinkinase C. Wenn reine rekombinante
Isotypen verwendet werden anstelle von Schweinehirnproteinkinase
C in dem obigen Test, wird gefunden, dass die Verbindungen der Formel
I den „herkömmlichen" Isotyp α bevorzugt
inhibieren, während
die anderen „herkömmlichen" Isotypen β-1, β-2 und γ und insbesondere
die „nicht
herkömmlichen" Isotypen δ, ε und η und die „atypische" Isoform ζ in der Regel
zu einem deutlich geringeren Ausmaß inhibiert werden und in einigen
Fällen
sogar nur kaum.
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Rekombinante
PKC-Isotypen werden kloniert, exprimiert und gereinigt auf die folgende
Art und Weise:
Die Produktion von verschiedenen Proteinen mit
Hilfe von Baculoviren und deren Klonierung und Isolierung aus Sf9-Insektenzellen
werden durchgeführt
wie beschrieben von M.D. Summers und G.E. Smith "A manual method for baculovirus vectors
and insect cell culture procedure", Texas Agricul. Exptl. Station Bull.
(1987), 1555. Der Aufbau oder die Konstruktion und Isolierung von
rekombinanten Viren für
die Exprimierung oder Expression von PKC-α (Rinder), PKC-β1 (human),
PKC-β2 (human)
und PKC-γ (human/Rinder
Hybrid) in Sf9-Zellen werden auf die gleiche Art und Weise bewirkt
wie beschrieben von Stabel et al [S. Stabel, M. Liyanage und D.
Frith, "Expression
of protein kinase C isozymes in insect cells and isolation of recombinant
proteins", Meth.
Neurosc. (1993)]. Die Produktion der PKC-Isotypen in Sf9- Zellen wird durchgeführt auf
die Art und Weise, die angegeben ist von Stable et al. (siehe oben),
und die Reinigung der Enzyme wird bewirkt gemäß dem Verfahren, das beschrieben
ist in der Veröffentlichung
von McGlynn et al. [E. McGlynn, J. Liebetanz, S. Reutener, J. Wood,
N.B. Lydon, H. Hofstetter, M. Vanek, T. Meyer und D. Fabbro, "Expression and partial
characterization of rat protein kinase C-δ and protein kinase Cζ in insect
cells using recombinant baculovirus", J. Cell. Biochem. 49, 239-250 (1992)].
Für die
Erzeugung von rekombinanter PKC-δ (Ratte),
PKC-ε (Ratte), PKC-ζ (Ratte)
und PKC-η (Maus)
und ihre Expression und Reinigung, wird das Verfahren befolgt, das
beschrieben ist von Liyanage et al. ["Protein kinase C group B members PKC-δ, -ε, -ζ and PKC-λ: Comparison of
properties of recombinant proteins in vitro and in vivo", Biochem. J. 283,
781 bis 787 (1992), bzw. McGlynn et al, (siehe oben), mit dem zusätzlichen
Merkmal, dass der Transfervektor pAc360 verwendet wird für die Exprimierung
von PKC-η [V.
Luckow und M.D. Summers, "Trends
in the development of baculovirus expression", Biotechnology 6, 47 bis 55 (1988)].
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Die
Messung der Aktivität
von rekombinanten PKC-Isotypen, die erhalten werden durch das obige
Verfahren, wird ausgeführt
in der Abwesenheit von Lipid und Calicum (Cofaktoren). Protaminsulfat,
das in Abwesenheit von Cofaktoren phosphoryliert wird, wird als
Substrat verwendet. Die Aktivität
der Enzyme spiegelt den Transfer von 32P
aus γ[32P]-ATP in Protaminsulfat wider. Protaminsulfat
ist ein Gemisch von Polypeptiden, die jeweils vier C-terminale Argininreste
umfassen. Die Einverleibung von Phosphat wird gemessen unter den
folgenden Bedingungen: 100 μl
des Reaktionsgemisches umfassen in den Endkonzentrationen 20 mM
TRIS-HCl pH 7,4, 10 mM Mg[NO3]2,
0,5 mg/ml Protaminsulfat, 10 μM
ATP (0,1 μCi γ-[32P]-ATP; 10 Ci/mol; Amersham, Little Chalfont,
Vereinigtes Königreich),
verschiedene Konzentrationen der inhibierenden oder hemmenden Verbindungen
und 0,5 bis 2,5 E (Einheiten: eine Einheit ist die Menge von Enzym,
die in einer Minute und pro Milligramm von Protein, ein Nanomol
von 32P aus dem oben genannten γ-[32P]-ATP in Histon H1 [Sigma, Typ V-S]) von
den Enzymen überträgt oder
transferiert. Die Umsetzung oder Reaktion wird gestartet durch die
Zugabe von den Enzymen und dem Transfer bei 32°C. Die Reaktionszeit beträgt 20 min.
Die Reaktion wird dann gestoppt durch Tropfen von Aliquoten von
50 μl auf
P81 Chromatographiepapier (Whatman, Maidstone, Vereinigtes Königreich).
Nach Entfernung von ungebundenem γ-[32P]-ATP und Nukleotidfragmenten durch Waschschritte,
wie beschrieben von J.J. Witt und R. Roskoski, "Rapid protein kinase assay using phospho-cellulose-paper
absorption", Anal.
Biochem. 66, 253 bis 258 (1975), wird die Substratphosphorylierung
bestimmt durch Szintillationsmessung. In dem Test inhibieren die
Verbindungen der Formel I den α-Isotyp
der Proteinkinase C (PKC) bei einem IC50 von
so niedrig, wie etwa von 1 bis 75 μmol/l, in der Regel etwa von
1 bis 10 μmol/l. Im
Gegensatz dazu werden die anderen Isotypen von PKC in der Regel
nur bei beträchtlich
höheren
Konzentrationen (das heißt
bei Konzentrationen bis zu mehr als das 300-fach höhere) inhibiert.
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Wie
erwartet werden kann auf Basis der oben beschriebenen inhibitorischen
Wirkung auf Proteinkinase C, zeigen die Verbindungen der Formel
I antiproliferative Eigenschaften, die direkt gezeigt werden können in
einem anderen Test, der im Folgenden beschrieben ist, in dem die
inhibitorische Wirkung der Verbindungen der Formel I auf das Wachstum
von humanen T24-Blasenkarzinomzellen bestimmt wird. Solche Zellen
werden inkubiert in dem Minimalmedium von Eagle, dem 5% (v/v) Fötenkalbserum
zugegeben worden waren, in einem befeuchteten Inkubator bei 37°C und mit
5 Vol.-% an CO
2 in der Luft. Die Karzinomzellen
(1000 bis 1500) werden in Mikrotiterplatten mit 96 Vertiefungen
gesät und über Nacht
unter den oben genannten Bedingungen inkubiert. Die Testverbindung
wird in Reihenverdünnungen
am Tag 1 zugegeben. Die Platten werden 5 Tage lang unter den oben
genannten Bedingungen inkubiert. Während dieses Zeitraums durchlaufen
die Kontrollkulturen mindestens vier Zellteilungen. Nach der Inkubation
werden die Zellen fixiert mit 3,3% (w/v) wässriger Glutaraldehydlösung, mit
Wasser gewaschen und mit 0,05% (Gewicht/Volumen) wässriger
Methylenblaulösung
gefärbt.
Nach dem Waschen wird die Farbe eluiert mit 3% (w/v) wässriger
Chlorwasserstoffsäure.
Die optische Dichte (OD) pro Vertiefung, die direkt proportional
ist zu der Anzahl der Zellen, wird dann bei 665 nm gemessen unter
Verwendung eines Photometers (Titertek Multiskan). Die IC
50-Werte werden mit einem Computersystem berechnet
unter Verwendung der Formel
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Die
IC50-Werte werden definiert als die Konzentration
von einem wirksamen Inhaltsstoff oder Wirkstoff, bei dem die Anzahl
der Zellen pro Vertiefung am Ende des Inkubationszeitraums nur 50%
von der Anzahl der Zellen in den Kontrollkulturen beträgt. Im Fall
der Verbindungen der Formel I, liegen die IC50-Werte,
die so bestimmt werden, in der Regel ungefähr im Bereich von 1 bis 20 μmol/l.
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Die
Antitumorwirksamkeit der Verbindungen der Formel I kann auch in
vivo gezeigt werden:
Weibliche, haarlose Balb/c Mäuse mit
s.c. transplantierten menschlichen T24-Blasentumoren werden verwendet,
um die Antitumorwirksamkeit zu bestimmen. Am Tag 0, an dem die Tiere
unter peroraler Forene-Narkose stehen, werden etwa 25 mg eines soliden
Tumors unter die Haut an der linken Flanke der Tiere platziert,
und die kleine eingeschnittene Wunde wird geschlossen mit Hilfe
von Wundklammern. Am Tag 6 nach der Transplantation werden die Mäuse nach
dem Zufallsprinzip aufgeteilt in Gruppen von 6 Tieren, und die Behandlung beginnt.
Die Behandlung wird 15 Tage lang durchgeführt unter peroraler und intraperitonealer
Verabreichung von einmal täglich
einer Verbindung der Formel I in Dimethylsulfoxid/Tween 80/Natriumchloridlösung in
den verschiedenen Dosierungen. Die Tumore werden zweimal in einer
Woche gemessen mit einem Messschieber, und das Volumen der Tumore
wird berechnet. In dem Test bewirkt die perorale oder intraperitoneale
Verabreichung einer Verbindung der Formel I eine merkliche Reduktion
in dem durchschnittlichen Tumorvolumen im Vergleich zu den nicht
behandelten Kontrolltieren.
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Auf
der Basis der oben beschriebenen Eigenschaften können die Verbindungen der Formel
I verwendet werden, insbesondere als Tumor hemmende oder inhibierende
wirksame Inhaltsstoffe oder Wirkstoffe, z.B. bei der Behandlung
von Tumoren der Blase und der Haut. Wenn die Verbindungen der Formel
I verwendet werden bei der Behandlung von Krebs in Kombination mit
anderen chemotherapeutischen Arzneimitteln, verhindern sie die Entwicklung
einer Resistenz (Multidrug-Resistenz)
oder eliminieren eine bereits bestehende Resistenz gegenüber den
anderen chemotherapeutischen Arzneimitteln. Sie sind auch geeignet
für andere Verwendungen,
die oben genannt sind für
Proteinkinase C-Modulatoren und können auch insbesondere verwendet
werden bei der Behandlung von Störungen,
die auf die Inhibierung oder Hemmung von Proteinkinase C reagieren
oder ansprechen.
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Einige
der Verbindungen der Formel I inhibieren oder hemmen auch die Tyrosinkinaseaktivität von dem
Rezeptor für
den epidermalen Wachstumsfaktor (EGF). Die Rezeptor-spezifische
Enzymaktivität
spielt eine Schlüsselrolle
bei der Signalübertragung
oder Signaltransmission bei einer großen Zahl von Säugerzellen,
einschließlich
menschlichen oder humanen Zellen, insbesondere Epithelzellen, Zellen
des Immunsystems und Zellen des zentralen und peripheren Nervensystems.
Im Fall von verschiedenen Typen von Zellen ist die EGF induzierte
Aktivierung der mit dem Rezeptor in Verbindung stehenden Tyrosinproteinkinase
(EGF-R-TPK) eine notwendige Bedingung für eine Zellteilung und demzufolge
für die
Proliferation von einer Zellpopulation. Die Zugabe von EGF-Rezeptor
spezifischen Tyrosinkinaseinhibitoren hemmt daher die Replikation
von diesen Zellen.
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Die
Inhibierung von EGF-Rezeptor spezifischer Tyrosinproteinkinase (EGF-R-TPK)
kann z.B. gezeigt werden unter Verwendung des Verfahrens von E.
McGlynn et al, Europ. J. Biochem. 207, 265 bis 275 (1992). Die Verbindungen
gemäß der Erfindung
inhibieren die Enzymaktivität
um 50% (IC50) z.B. bei einer Konzentration von 0,1 bis 10 μM.
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Die
Verbindungen der Formel I, die die Tyrosinkinaseaktivität von dem
Rezeptor für
den epidermalen Wachstumsfaktor (EGF) inhibieren, können demzufolge
verwendet werden, z.B. bei der Behandlung von gutartigen oder bösartigen
Tumoren. Sie können
etwa Turmorregression bewirken und metastatische Verbreitung verhindern
und das Wachstum von Mikrometastasen. Sie können verwendet werden, insbesondere
im Fall der epidermalen Hyperproliferation (Psoriasis), bei der
Behandlung von Neoplasie vom Epithelcharakter, z.B. Brustkrebs (mastocarcinoma),
und im Fall von Leukämie.
Die Verbindungen können
auch verwendet werden bei der Behandlung von Störungen des Immunsystems und
einer Entzündung
oder Inflammation, wenn Proteinkinasen darin verwickelt sind. Außerdem können solche
Verbindungen der Formel I verwendet werden bei der Behandlung von
Störungen
des zentralen oder peripheren Nervensystems, wenn eine Signaltransmission oder
Signalübertragung
durch Proteinkinasen damit einhergeht.
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Die
Verbindungen der Formel I und Salze von solchen Verbindungen, die
mindestens eine Salz bildende Gruppe aufweisen, inhibieren auch
die Enzym p34cdc2/Cyclin Bcdc13 Kinase.
Diese Kinase steuert zusätzlich zu
anderen cdc2 bezogenen Kinasen spezielle Phasen der Zellteilung,
insbesondere den Übergang
von der G1-Phase in die S-Phase und ganz
insbesondere den Übergang
von der G2-Phase in die M-Phase.
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In
chronologischer Reihenfolge besteht der Cyclus einer eurkaryotischen
Zelle aus der Interphase und der M-Phase. Die Interphase wird begleitet
durch eine Zunahme in der Größe der Zelle.
In chronologischer Reihenfolge besteht die Interphase für ihren
Teil aus der S-Phase, der S-Phase und der G2-Phase.
In der G1-Phase (G = gap) finden biosynthetische
Verfahren in der Zelle statt. In der S-Phase (Synthesephase) verdoppelt sich
die DNS oder DNA. Die Zelle tritt dann in die G2-Phase
ein, die mit dem Beginn der Mitose endet.
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In
chronologischer Reihenfolge besteht die M-Phase für ihren
Teil aus der Teilung des Zellkerns (Mitose) und der Teilung des
Zytoplasmas (Zytokinese).
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Die
oben genannte Inhibierung oder Hemmung der Enzym p34cdc2/Cyclin
Bcdc13 Kinase kann mit dem folgenden Test
gezeigt werden:
10 μM
1-Methyladenin werden verwendet, um Starfish-Oozyten zu veranlassen,
in die M-Phase einzutreten. Die Oozyten werden dann in flüssigem Stickstoff
gefroren und bei -80°C
gelagert. Wenn es notwendig ist, werden die Oozyten homogenisiert
und zentrifugiert, wie beschrieben in D. Arion et al, Cell 55, 371
bis 378 (1988) und V. Rialet und L. Meijer, Anticancer Res. 11,
1581 bis 1590 (1991). Um die p34cdc2/Cyclin
Bcdc13 Kinase zu reinigen, wird der Überstand
der Oozyten zu p9CKShs-Sepharosekörnern gegeben,
die hergestellt werden aus rekombinantem Humanprotein p9CKShs, wie beschrieben in L. Azzi et al.,
Eur. J. Biochem. 203, 353 bis 360 (1992). Nach 30 min bei 4°C während konstant
gerührt
wird, werden die Körner
gründlich
gewaschen, und die aktive oder wirksame p34cdc2/Cyclin
Bcdc13 Kinase wird mit freiem Protein p9CKShs (3 mg/ml) eluiert. Die eluierte Kinase
wird getestet unter Verewndung von Histon H1 als Substrat, wie beschrieben
in L. Meijer et al., EMBO J. 8, 2275 bis 2282 (1989) und EMBO J.
10, 1545 bis 1554 (1991). In dem Test zeigen die Verbindungen der Formel
I und Salze von solchen Verbindungen, die mindestens eine Salz bildende
Gruppe aufweisen, eine Hemmkonzentration oder inhibierende Konzentration
IC50 (μmol/l)
von etwa 0,01 bis 2.
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Dieses
Ergebnis würde
auch zu der Erwartung Anlass geben, dass die Verbindung der Formel
I und Salze von solchen Verbindungen, die mindestens eine Salz bildende
Gruppe aufweisen, verwendet werden können bei der Behandlung von
hyperproliferativen Störungen,
wie Tumoren und Psoriasis.
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Die
Verbindungen der Formel I inhibieren oder hemmen auch die Produktion
von HIV-Viren, wie gezeigt durch den Test unten und können demzufolge
verwendet werden als Mittel gegen die Immunschwächekrankheit AIDS. Den Anfangssymptomen,
die bei einer HIV-Infektion beim Menschen beobachtet werden, folgt ein
klinischer Latenzzeitraum, der mehrere Jahre dauern kann. Nach diesem
Zeitraum tritt der Zustand auf, der als AIDS bekannt ist und in
der Regel zum Tod führt.
Dem Latenzzeitraum werden mehrere Faktoren zugeordnet: Immunantwort,
Einschließung
der Viren in Lymphknoten oder anderes Gewebe und Eintritt in einen
Zustand von molekularer und viraler Latenz, in der die infizierten
Zellen den viralen Zellzyklus nicht vervollständigen, was der Grund ist,
warum infektiöse
Viren nicht hergestellt werden können,
und die Infektion sich nicht ausbreiten kann. Der Zustand der molekularen
Latenz wurde untersucht unter Verwendung von Zellmodellen, wie der
ACH-2-Zelllinie
(K. Clouse et al., J. Immunol. 142, 431 (1989)] und der U1-Zelllinie
(T. Folks et al., J. Immunol. 140, 117 (1988)]. Solche Zellen werden
mit HIV-1-Viren infiziert, weisen aber nur einen niedrigen Gehalt
an infektiösen
Viren auf. Wenn jedoch solche Zellen stimuliert werden mit physiologisch
relevanten Faktoren, von denen bekannt ist, dass sie erhöht sind
bei AIDS-Patienten, wie dem Turmornekrosefaktor, Interleukin-6 etc.,
oder mit chemischen Induktoren, wie Phorboldiestern, z.B. 13-O-Acetyl-12-O-n-tetradecanoylphorbol,
folgt eine massive Produktion von dem Virus. Die ACH-2- und U1-Zellen
sind Vertreter von zwei verschiedenen Zellfamilien, die (Angriffs-)Ziele
sind für
eine HIV-Infektion, nämlich
Lymphocyten und Makrophagen.
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Bisher
war eine wirksame Prävention
der Progression des Fortschreitens oder der Entwicklung einer HIV-Infektion
bis zum Ausbruch von AIDS nicht möglich. Viele Versuche wurden
unternommen, um die Virusreplikation zu verhindern nach dem Ausbruch
von AIDS, das heißt
sozusagen in einem Stadium, in dem Viren in einem massiven oder
umfangreichen Maßstab
produziert werden. Im Gegensatz dazu haben die Verbindungen der
Formel I Auswirkungen auf die Zellprozesse, die zu der Aktivierung
von latent infizierten HIV-Zellen führen ohne Beeinträchtigung
normaler Zellprozesse, wie der Zellteilung.
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Wenn
die oben genannten U1- oder ACH-2-Zellen verwendet werden als Modell
für eine
virale Latenz, kann gezeigt werden, dass die HIV-Virusproduktion,
die induziert wird durch 13-O-Acetyl-12-O-n-tetradecanoylphorbol oder der Tumornekrosefaktor-alpha
wirksam inhibiert wirden durch die Verbindung der Formel I bei einer
Konzentration von etwa 0,001 bis 1 μmol/l, z.B. bei 0,03 μmol/l.
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Bevorzugt
sind Verbindungen der Formel I, worin R1 steht
für substituiertes
Pyridyl, das durch ein Ring-Kohlenstoffatom gebunden ist, wobei
die Substituenten des oben genannten Pyridylrests ausgewählt sind
aus Halogen, Cyano, Carbamoyl,
-C(=O)-OR3,
-N(R7)-R8 und -OR9, wobei
R3,
R7, R8 und R9 jeweils unabhängig von den anderen stehen
für Wasserstoff
oder Niederalkyl, und
R2 ausgewählt ist
aus Halogen, -C(=O)-OR10, wobei
R10 steht für Wasserstoff oder Niederalkyl,
und
aus durch Fluor substituiertem Niederalkyl,
und Salze solcher
Verbindungen, die mindestens eine Salz bildende Gruppe aufweisen.
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Bevorzugt
sind insbesondere Verbindungen der Formel I, worin
R1 steht für
einen Pyridylrest, der substituiert ist durch Halogen, Cyano, Carboxy,
Carbamoyl, Hydroxy oder durch N-Niederalkylamino, und
R2 steht für
Halogen oder durch Fluor substituiertes Niederalkyl,
und die
Salze davon.
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Besonders
bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, worin
R1,
steht für
einen 4-Pyridylrest, der in der 2-Position substituiert ist durch
Chlor, Cyano, Carboxy, Carbamoyl, Hydroxy oder durch N-Propylamino,
und
R2 steht für Chlor oder Trifluormethyl,
und
die Salze davon.
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Ganz
besonders bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, worin
R1 steht für
einen 4-Pyridylrest, der in der 2-Position in Bezug auf den Pyridinstickstoff
substituiert ist durch Chlor, Cyano, Carboxy, Carbamoyl, Hydroxy,
Amino, N-Propylamino, N,N-Dimethylamino oder durch N-Butylamino,
und
R2 steht für Chlor, Trifluormethyl, Carboxy
oder Niederalkoxycarbonyl,
und die Salze davon.
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Besonders
bevorzugt sind Verbindungen der Formel I, die in den Beispielen
beschrieben sind.
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Die
Verbindungen der Formel I und die Salze von solchen Verbindungen,
die mindestens eine Salz bildende Gruppe aufweisen, werden hergestellt
gemäß an sich
bekannter Verfahren. Das Verfahren gemäß der Erfindung wird wie folgt
ausgeführt:
- a) eine Verbindung der Formel II R1-C(=O)-CH=CH-N(R17)-R18 (II), worin
R17 und R18 jeweils
unabhängig
von dem anderen stehen für
Niederalkyl, und R1 wie oben definiert ist,
funktionelle Gruppen, die in einer Verbindung der Formel II vorliegen,
mit der Ausnahme der Gruppen, die an der Umsetzung teilnehmen, sofern
es notwendig ist, in geschützter
Form vorliegen, oder ein Salz von einer solchen Verbindung, wird
umgesetzt mit einer Verbindung der Formel III worin R2 wie
oben definiert ist, funktionelle Gruppen, die in einer Verbindung
der Formel III vorliegen, mit der Ausnahme der Guanidinogruppe,
die an der Umsetzung teilnimmt, sofern es notwendig ist, in geschützter Form
vorliegen, oder mit einem Salz einer solchen Verbindung, und beliebige
vorliegende Schutzgruppen werden entfernt, oder
- b) zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin R1 steht für
Pyridyl, Pyrazinyl, Thiazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl oder Imidazolyl,
von denen jedes substituiert ist durch einen Rest der Formel -N(R7)-R8, und R2 eine der oben genannten Bedeutungen aufweist,
wird eine Verbindung der Formel I, worin R1 steht
für Pyridyl,
Pyrazinyl, Thiazolyl, Pyrimidinyl, Pyridazinyl oder Imidazolyl,
von denen jedes durch eine Abgangsgruppe substituiert ist, umgesetzt
mit einem Amin der Formel HN(R7)R8 (IV),worin
die Substituenten wie oben definiert sind, funktionelle Gruppen,
die in einer Verbindung der Formel IV vorliegen, mit der Ausnahme
der Aminogruppe, die an der Umsetzung teilnimmt, sofern es notwendig
ist, in geschützter
Form vorliegen, und beliebige vorliegende Schutzgruppen werden entfernt,
oder
- c) zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin R1 steht für
einen beliebigen der oben genannten cyclischen Reste, die substituiert
sind durch Carbamoyl oder durch einen Rest der Formel -C(=O)-OR3, worin R3 für Wasserstoff
steht, und R2 eine beliebige der oben genannten
Bedeutungen aufweist, wird eine Verbindung der Formel I, worin R1 steht für
einen beliebigen der oben genannten cyclischen Reste, die durch
Cyano substituiert sind, hydrolysiert, oder
- d) zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin R1 für
einen Pyridylrest steht, der substituiert ist durch Cyano oder durch
-OR9, worin R9 steht
für Wasserstoff
oder Niederalkyl, und R2 eine beliebige
der oben genannten Bedeutungen aufweist, wird in einer N-Oxidopyridylverbindung
der Formel VIII worin R21 steht
für N-Oxidopyridyl,
das durch ein Ring-Kohlenstoffatom gebunden ist, und R2 eine
beliebige der oben genannten Bedeutungen aufweist, die N-Oxidogruppe
in eine Abgangsgruppe überführt, und
die erhaltene Abgangsgruppe wird aus dem Molekül durch nukleophile Substitution
in der ortho-Position in Bezug auf den Pyridylstickstoff unter Verwendung
eines Nukleophils, das Hydroxy, Cyano oder unsubstituiertes oder
durch Halogen substituiertes Niederalkoxy einführt entfernt, oder
- e) zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, worin R1 für
einen Pyridylrest steht, der substituiert ist durch Chlor, und R2 eine der oben genannten Bedeutungen aufweist,
wird eine N-Oxidopyridylverbindung der Formel VIII worin R21 steht
für N-Oxidopyridyl,
das durch ein Ring-Kohlenstoffatom gebunden ist, und R2 eine
beliebige der oben genannten Bedeutungen aufweist, umgesetzt mit
einem Reagenz, das Chlor in die ortho-Position in Bezug auf die
N-Oxidogruppe einführt,
und,
wenn es gewünscht
wird, wird eine Verbindung der Formel I, die erhältlich ist gemäß einem
der Verfahren a) bis e), in ihr Salz überführt, oder ein von einer Verbindung
der Formel I erhältliches
Salz wird in die freie Verbindung überführt.
-
Die
Art und Weise, in der die oben genannten Verfahrensvarianten ausgeführt werden,
wird in Einzelheiten unten erklärt.
-
Allgemeines:
-
Die
Endprodukte der Formel I können
Substituenten umfassen, die auch verwendet werden können als
Schutzgruppen in Ausgangsmaterialien für die Herstellung von anderen
Endprodukten der Formel I. Innerhalb des Umfangs oder Schutzbereichs
dieses Textes wird daher, sofern der Zusammenhang es nicht anders angibt,
nur eine leicht entfernbare Gruppe, die nicht ein Bestandteil des
besonderen gewünschten
Endprodukts der Formel I ist, als eine „Schutzgruppe" Bezug bezeichnet.
-
Schutzgruppen
und die Art und Weise, auf die sie eingeführt und entfernt werden, sind
beschrieben z.B. in „Protective
Groups in Organic Chemistry",
Plenum Press, London, New York 1973, und in "Methoden der Organischen Chemie", Houben-Weyl, 4.
Ausgabe, Band 15/1, Georg-Thieme-Verlag,
Stuttgart 1974, und in Theodora W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York
1981. Eine Eigenschaft von Schutzgruppen ist, dass sie leicht entfernt
werden können,
das heißt
sozusagen ohne ungewünschte
Sekundär-
oder Zweitreaktionen, die stattfinden, z.B. durch Solvolyse, Reduktion,
Photolyse oder auch unter physiologischen Bedingungen.
-
Hydroxyschutzgruppen
sind z.B. Acylradikale, wie unsubstituierte oder substituierte,
z.B. Halogen substituierte, Niederalkanoylreste, wie 2,2-Dichloracetyl-,
oder Acylreste von Carbonsäurehalbestern,
insbesondere tert.-Butoxycarbonyl, unsubstituiertes oder substituiertes
Benzyloxycarbonyl, z.B. 4-Nitrobenzyloxycarbonyl,
oder Diphenylmethoxycarbonyl, oder 2-Halogenniederalkoxycarbonyl,
wie 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl, und
auch Trityl oder Formyl, oder organische Silyl- oder Stannylreste,
und auch leicht entfernbare verethernde Gruppen, wie tert.-Niederalkyl,
z.B. tert.-Butyl, 2-Oxa- oder 2-Thiaaliphatische oder -cycloaliphatische
Kohlenwasserstoffreste, insbesondere 1-Niederalkoxyniederalkyl oder
1-Niederalkylthioniederalkyl, z.B. Methoxymethyl, 1-Methoxyethyl,
1-Ethoxyethyl, Methylthiomethyl, 1-Methylthioethyl oder 1-Ethylthioethyl,
oder 2-Oxa- oder 2-Thiacycloalkyl mit 5 oder 6 Ringatomen, z.B.
Tetrahydrofuryl oder 2-Tetrahydropyranyl oder entsprechende Thiaanaloga,
und auch unsubstituierte oder substituierte 1-Phenylniederalkylreste,
wie unsubstituiertes oder substituiertes Benzyl oder Diphenylmethyl,
wobei geeignete Substituenten der Phenylreste z.B. Halogen, wie
Chlor, Niederalkoxy, wie Methoxy und/oder Nitro sind.
-
Eine
geschützte
Aminogruppe kann z.B. in Form einer leicht spaltbaren Acylamino-,
Arylmethylamino-, veretherten Mercaptoamino-, 2-Acylniederalk-1-enylamino-,
Silylamino- oder Stannylaminogruppe oder in Form einer Azidogruppe
vorliegen.
-
In
einer entsprechenden Acylaminogruppe steht Acyl z.B. für den Acylrest
einer organischen Carbonsäure,
die z.B. bis zu 18 Kohlenstoffatome aufweist, insbesondere einer
Alkancarbonsäure,
die unsubstituiert oder substituiert ist, z.B. durch Halogen oder
durch Aryl, oder einer Benzoesäure,
die unsubstituiert oder substituiert ist, z.B. durch Halogen, Niederalkoxy
oder durch Nitro, oder eines Carbonsäurehalbesters. Solche Acylgruppen
sind z.B. Niederalkanoyl, wie Formyl, Acetyl oder Propionyl, Halogenniederalkanoyl,
wie 2-Halogenacetyl, insbesondere 2-Chlor-, 2-Brom-, 2-Iod-, 2,2,2-Trifluor-
oder 2,2,2-Trichloracetyl, Benzoyl, das unsubstituiert oder substituiert
ist, z.B. durch Halogen, Niederalkoxy oder durch. Nitro, z.B. Benzoyl,
4-Chlorbenzoyl, 4-Methoxybenzoyl oder 4-Nitrobenzoyl, oder Niederalkoxycarbonyl,
das verzweigt ist in der 1-Position des Niederalkylrests oder geeigneterweise
substituiert ist in der 1- oder 2-Position, insbesondere tert.-Niederalkoxycarbonyl,
z.B. tert.-Butoxycaxbonyl,
Arylmethoxycarbonyl, das ein oder zwei Arylreste aufweist, die vorzugsweise
für Phenyl
stehen, das unsubstituiert oder mono- oder polysubstituiert ist,
z.B. durch Niederalkyl, insbesondere tert.-Niederalkyl, wie tert.-Butyl, Niederalkoxy,
wie Methoxy, Hydroxy, Halogen, z.B. Chlor, und/oder durch Nitro,
wie unsubstituiertes oder substituiertes Benzyloxycarbonyl, z.B.
4-Nitrobenzyloxycarbonyl, oder substituiertes Diphenylmethoxycarbonyl,
z.B. Benzhydryloxycarbonyl oder Di(4-methoxyphenyl)-methoxycarbonyl,
Aroylmethoxycarbonyl, worin die Aroylgruppe vorzugsweise für Benzoyl
steht, das unsubstituiert oder substituiert ist, z.B. durch Halogen,
wie Brom, z.B. Phenacyloxycarbonyl, 2-Halogenniederalkoxycarbonyl, z.B. 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl,
2-Bromethoxycarbonyl oder 2-Iod-ethoxycarbonyl,
oder 2-(trisubstituiertes Silyl)ethoxycarbonyl, worin die Substituenten
jeweils unabhängig
von den anderen stehen für
einen aliphatischen, araliphatischen, cycloaliphatischen oder aromatischen
Kohlenwasserstoffrest, der unsubstituiert oder substituiert ist,
z.B. durch Niederalkyl, Niederalkoxy, Aryl, Halogen, oder durch
Nitro, und bis zu 15 Kohlenstoffatomen enthält, wie entsprechend unsubstituiertes
oder substituiertes Niederalkyl, Phenylniederalkyl, Cycloalkyl oder
Phenyl, z.B. 2-Triniederalkylsilylethoxycarbonyl,
wie 2-Trimethylsilylethoxycarbonyl oder 2-(Di-n-butylmethylsilyl)-ethoxycarbonyl, oder
2-Triarylsilylethoxycarbonyl, wie 2-Triphenylsilylethoxycarbonyl.
-
Andere
Acylreste, die geeignet sind als Aminoschutzgruppen, sind auch entsprechende
Rest von organischen Phosphor-, Phosphon- oder Phosphinsäuren, wie
Diniederalkylphosphoryl, z.B. Dimethylphosphoryl, Diethylphosphoryl,
Di-n-propylphosphoryl oder Diisopropylphosphoryl, Dicycloalkylphosporyl,
z.B. Dicyclohexylphosporyl, unsubstituiertes oder substituiertes Diphenylphosphoryl,
z.B. Diphenylphosphoryl, unsubstituiertes oder substituiertes, z.B.
nitrosubstituiertes, Di(phenylniederalkyl)phosphoryl, z.B. Dibenzylphosphoryl oder
Di(4-nitrobenzyl)phosphoryl,
unsubstituiertes oder substituiertes Phenyloxyphenylphosphonyl,
z.B. Phenyloxyphenylphosphonyl, Diniederalkylphosphinyl, z.B. Diethylphosphinyl,
oder unsubstituiertes oder substituiertes Diphenylphosphinyl, z.B.
Diphenylphosphinyl.
-
Bei
einer Arylmethylaminogruppe, die für eine Mono-, Di- oder insbesondere
Triarylmethylaminogruppe steht, stehen die Arylreste insbesondere
für unsubstituierte
oder substituierte Phenylreste. Solche Gruppen stehen z.B. für Benzyl-,
Diphenylmethyl- und insbesondere Tritylamino.
-
Eine
veretherte Mercaptogruppe in einer Aminogruppe, die durch einen
solchen Rest geschützt
ist, steht insbesondere für
Arylthio oder Arylniederalkylthio, worin Aryl insbesondere steht
für Phenyl,
das unsubstituiert oder substituiert ist, z.B. durch Niederalkyl,
wie Methyl oder tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Halogen,
wie Chlor, und/oder durch Nitro. Eine entsprechende Aminoschutzgruppe
ist z.B. 4-Nitrophenylthio.
-
In
einem 2-Acylniederalk-1-en-1-ylrest, der verwendet werden kann als
eine Aminoschutzgruppe, steht Acyl z.B. für den entsprechenden Rest einer
Niederalkancarbonsäure,
einer Benzoesäure,
die unsubstituiert oder substituiert ist, z.B. durch Niederalkyl,
wie Methyl oder tert.-Butyl, Niederalkoxy, wie Methoxy, Halogen,
wie Chlor, und/oder durch Nitro, oder insbesondere eines Carbonsäurehalbesters,
wie eines Carbonsäureniederalkylhalbesters.
Entsprechende Schutzgruppen sind insbesondere 1-Niederalkanoylprop-1-en-2-yl, z.B. 1-Acetylprop-1-en-2-yl
oder 1-Niederalkoxycarbonylprop-1-en-2-yl, z.B. 1-Ethoxycarbonylprop-1-en-2-yl.
-
Bevorzugte
Aminoschutzgruppen sind Acylreste von Carbonsäurehalbestern, insbesondere
tert.-Butoxycarbonyl,
Benzyloxycarbonyl, das unsubstituiert oder substituiert ist, z.B.
wie angegeben, z.B. 4-Nitrobenzyloxycarbonyl,
oder Diphenylmethoxycarbonyl, oder 2-Halogenniederalkoxycarbonyl,
wie 2,2,2-Trichlorethoxycarbonyl,
und auch Trityl oder Formyl. Die Entfernung der Schutzgruppen, die
keine Bestandteile des gewünschten
Endprodukts der Formel I sind, wird bewirkt in einer an sich bekannten
Art und Weise, z.B. durch Solvolyse, insbesondere Hydrolyse, Alkoholyse
oder Acidolyse, oder mit Hilfe einer Reduktion, insbesondere Hydrogenolyse
oder chemische Reduktion, soweit erforderlich stufenweise oder simultan.
-
Eine
geschützte
Aminogruppe wird in einer an sich bekannten Art und Weise freigesetzt
und, abhängig von
der Natur der Schutzgruppen, auf verschiedene Arten und Weisen,
vorzugsweise durch Solvolyse oder Reduktion.
-
2-Halogenniederalkoxycarbonylamino
(wo es geeignet ist nach Überführung einer
2-Bromniederalkoxycarbonylaminogruppe
in eine 2-Iodniederalkoxycarbonylaminogruppe), Aroylmethoxycarbonylamino
oder 4-Nitrobenzyloxycarbonylamino können gespalten werden, z.B.
durch Behandlung mit einem geeigneten chemischen Reduktionsmittel,
wie Zink in Gegenwart einer geeigneten Carbonsäure, wie wässrige Essigsäure. Aroylmethoxycarbonylamino
kann auch gespalten werden durch Behandlung mit einem nukleophilen,
vorzugsweise Salz bildenden Reagens, wie Natriumthiophenolat, und
4-Nitrobenzyloxycarbonylamino auch durch Behandlung mit einem Alkalimetalldithionit,
z.B. Natriumdithionit. Unsubstituiertes oder substituiertes Diphenylmethoxycarbonylamino,
tert.-Niederalkoxycarbonylamino
oder 2-trisubstituiertes Silylethoxycarbonylamino kann gespalten
werden durch Behandlung mit einer geeigneten Säure, z.B. Ameisensäure oder
Trifluoressigsäure,
unsubstituiertes oder substituiertes Benzyloxycarbonylamino, z.B.
durch Hydrogenolyse, das heißt
sozusagen durch Behandlung mit Wasserstoff in Gegenwart eines geeigneten
Hydrierungskatalysators, wie einem Palladiumkatalysator, unsubstituiertes
oder substituiertes Triarylmethylamino oder Formylamino, z.B. durch
Behandlung mit einer Säure,
wie einer Mineralsäure,
z.B. Chlorwasserstoffsäure,
oder einer organischen Säure,
z.B. Ameisen-, Essig- oder Trifluoressigsäure, wo es geeignet ist in
Gegenwart von Wasser, und einer Aminogruppe, die geschützt ist
durch eine organische Silylgruppe, kann befreit werden, z.B. durch
Hydrolyse oder Alkoholyse. Eine Aminogruppe, die geschützt ist
durch 2-Halogenacetyl, z.B. 2-Chloracetyl, kann freigesetzt oder
befreit werden durch Behandlung mit Thioharnstoff in Gegenwart einer
Base, oder mit einem Thiolatsalz, wie einem Alkalimetallthiolat,
von dem Thioharnstoff und nachfolgende Solvolyse, wie Alkoholyse oder
Hydrolyse, des erhaltenen Kondensationsprodukts. Eine Aminogruppe,
die geschützt
ist durch 2-substituiertes Silylethoxycarbonyl, kann auch in die
freie Aminogruppe überführt werden
durch Behandlung mit einem Fluorwasserstoffsäuresalz, das Fluoridanionen
freisetzt oder ergibt.
-
Eine
Hydroxygruppe, die geschützt
ist durch eine geeignete Acylgruppe, eine organische Silylgruppe oder
durch unsubstituiertes oder substituiertes 1-Phenylniederalkyl wird
analog freigesetzt zu einer entsprechend geschützten Aminogruppe. Hydroxy,
das geschützt
ist durch unsubstituiertes oder substituiertes 1-Phenylniederalkyl,
z.B. Benzyl, wird vorzugsweise freigesetzt durch katalytische Hydrierung,
z.B. in Gegenwart eines Palladium-auf-Kohlenstoff-Katalysators.
Eine Hydroxygruppe, die geschützt
ist durch 2,2-Dichloracetyl wird freigesetzt, z.B. durch basische
Hydrolyse, und eine Hydroxygruppe, die verethert ist durch tert.-Niederalkyl
oder durch einen 2-Oxa- oder 2-Thiaaliphatischen oder -cycloaliphatischen
Kohlenwasserstoffrest wird freigesetzt durch Acidolyse, z.B. durch
Behandlung mit einer Mineralsäure
oder einer starken Carbonsäure,
z.B. Trifluoressigsäure.
Hydroxy, das verethert ist durch einen organischen Silylrest, z.B.
Trimethylsilyl, kann auch freigesetzt werden durch ein Fluorwasserstoffsäuresalz,
das Fluoridanionen freisetzt, z.B. Tetrabutylammoniumfluorid.
-
Verfahren a:
-
Vorzugsweise
stehen R17 und R18 jeweils
für Methyl.
-
Freie
funktionelle Gruppen in einer Verbindung der Formel II, die vorzugsweise
geschützt
werden durch leicht entfernbare Schutzgruppen, sind insbesondere
Aminogruppen in dem Rest R1.
-
Freie
funktionelle Gruppen in einer Verbindung der Formel III, die vorzugsweise
geschützt
werden durch leicht entfernbare Schutzgruppen, sind insbesondere
Aminogruppen, aber auch Hydroxy- oder
Carboxygruppen.
-
Ein
Salz einer Verbindung der Formel II oder III ist vorzugsweise ein
Säureadditionssalz,
z.B. ein Nitrat oder eines der Säureadditionssalze,
die genannt sind für
die Endprodukte der Formel I.
-
Die
Umsetzung oder Reaktion wird ausgeführt in einem geeigneten Lösemittel
oder Dispersionsmedium, z.B. einem geeigneten Alkohol, wie 2-Methoxyethanol
oder einem geeigneten Niederalkanol, z.B. Isopropanol oder Isobutanol,
bei einer Temperatur von Raumtemperatur (etwa 20°C) bis 150°C, z.B. unter Rückfluss. Insbesondere
wenn die Verbindung der Formel II verwendet wird in der Form eines
Salzes, wird das Salz in die freie Verbindung überführt, vorzugsweise in situ,
durch Zugabe einer geeigneten Base, wie einem Alkalimetallhydroxid,
z.B. Natriumhydroxid.
-
Das
Ausgangsmaterial der Formel II wird erhalten durch Umsetzung einer
Verbindung der Formel V
worin
R
1 wie oben definiert ist, mit einer Verbindung
der Formel VI
worin
R
19 und R
20 jeweils
für Niederalkyl
stehen, und die anderen Substituenten wie oben definiert sind, analog zu
dem Verfahren, das beschrieben ist in der europäischen Patentanmeldung, welche
die Veröffentlichungsnummer
EP 0 233 461 A aufweist.
Typische Vertreter einer Verbindung der Formel VI sind N,N-Dimethylformamiddimethylacetal
und N,N-Dimethylformamiddiethylacetal. Die Umsetzung wird bewirkt
während
eines Erwärmens
der Reaktanten der Formeln V und VI, z.B. über einen Zeitraum von 1 bis
24 h, in Abwesenheit oder, wenn es notwendig ist, in Gegenwart eines
Lösemittels,
bei einer Temperatur von etwa 50°C
bis 150°C.
-
Alternativ
oder bei einer anderen Ausführungsform
kann das Ausgangsmaterial der Formel II auch erhalten werden durch
Umsetzung einer Verbindung der Formel V mit dem Ameisensäureethylester
der Formel H-C(=O)-O-CH2-CH3 und
Umsetzung des erhaltenen Produkts mit einem Amin der Formel H-N(R17)-R18, worin die
Substituenten wie oben definiert sind.
-
Das
Ausgangsmaterial der Formel III wird erhalten in Form eines Säureadditionssalzes
durch Umsetzung eines Anilinderivats der Formel VII
worin
R
2 wie oben definiert ist, mit Cyanamid
(NC-NH
2). Die Umsetzung wird bewirkt in
einem geeigneten Lösemittel
oder Dispersionsmedium, z.B. einem geeigneten Alkohol, z.B. einem
geeigneten Niederalkanol, wie Ethanol, z.B.
α) in Gegenwart
von äquimolaren
Mengen der Salz bildenden Säure,
z.B. Salpetersäure,
oder
β)
in Gegenwart eines deutlichen, z.B. 60%, Überschusses einer Mineralsäure, wie
Chlorwasserstoffsäure,
einem Ammoniumsalz der gewünschten
Salz bildenden Säure,
z.B. Ammoniumnitrat, das zugegeben wird, wenn die Reaktion vollständig ist,
bei einer Temperatur von Raumtemperatur bis 150°C, z.B. unter Rückfluss.
-
Verfahren b:
-
Eine
Abgangsgruppe ist reaktionsfähiges
verestertes Hydroxy, z.B. Hydroxy, das verestert ist durch eine
starke anorganische oder organische Säure, wie durch eine Mineralsäure, z.B.
eine Halogenwasserstoffsäure,
wie Chlorwasserstoff-, Bromwasserstoff- oder Iodwasserstoffsäure, auch
Schwefelsäure
oder ein Sulfurylhalogenid, z.B. Sulfurylfluorid, oder durch eine
starke organische Sulfonsäure,
wie eine Niederalkansulfonsäure,
die unsubstituiert oder substituiert ist, z.B. durch Halogen, wie
Fluor, oder eine aromatische Sulfonsäure, z.B. eine Benzolsulfonsäure, die
unsubstituiert oder substituiert ist durch Niederalkyl, wie Methyl,
Halogen, wie Brom, und/oder durch Nitro, z.B. eine Methansulfon-,
Trifluormethansulfon- oder p-Toluolsulfonsäure. Eine bevorzugte Abgangsgruppe
ist Halogen, wie insbesondere Chlor.
-
Die
Umsetzung wird vorzugsweise ausgeführt in Gegenwart eines Überschusses
des Amins der Formel IV, das auch, wo es geeignet ist, als Lösemittel
verwendet werden kann und, wenn es notwendig ist, in Gegenwart eines
inerten Lösemittels,
wie Dimethylsulfoxid, bei einer Temperatur von Raumtemperatur bis +150°C, z.B. bei
100°C.
-
Verfahren c:
-
Die
Hydrolyse von Cyano zu Carbamoyl kann ausgeführt werden in Gegenwart einer
geeigneten schwachen Base, wie einem Alkalimetallcarbonat, z.B.
Natriumcarbonat. Um zu vermeiden, dass die Hydrolyse teilweise zum
Carboxy fortgesetzt wird, ist es ratsam, die Hydrolyse mit Wasserstoffperoxid
in Gegenwart eines geeigneten Olefins auszuführen, wie vorzugsweise einem
Niederalken, z.B. 1-Hexen, in Gegenwart eines Alkalimetallcarbonats,
z.B. Natriumcarbonat, in einem geeigneten Lösemittel, wie einem Alkohol,
wie vorzugsweise Ethanol, bei Raumtemperatur.
-
Die
Hydrolyse von Cyano zu Carboxy wird durchgeführt in einem geeigneten Lösemittel,
wie einem Alkohol, wie Ethanol, z.B. in Gegenwart einer geeigneten
Base, wie einer wässrigen
Natriumhydroxidlösung, bei
Temperaturen von Raumtemperatur bis +150°C, z.B. bei 60°C.
-
Verfahren d:
-
Die Überführung der
N-Oxidogruppe in eine Abgangsgruppe wird z.B. bewirkt durch Umsetzung
mit einem geeigneten reaktionsfähigen
Carbonsäure-
oder Sulfonsäurederivat,
z.B. mit einem geeigneten Niederalkansäurechlorid, Niederalkansäureanhydrid,
wie Essigsäureanhydrid,
N,N-Dimethylcarbamoylchlorid, Toluolsulfonylchlorid,
Methansulfonylchlorid oder Trifluormethansulfonylchlorid. Ein Nukleophil,
das Cyano einführt,
ist z.B. ein geeignetes Silylcyanid, wie Triniederalkylsilylcyanid,
z.B. Trimethylsilylcyanid. Ein Nukleophil, das durch Niederalkoxy
oder Halogen substituiertes Niederalkoxy einführt, ist z.B. ein entsprechender
Niederalkanol, oder ein geeignetes Metallsalz, wie z.B. ein Alkalimetallsalz,
davon, das heißt
sozusagen ein entsprechendes Niederalkanolat. Hydroxy kann z.B.
eingeführt
werden durch Umsetzung einer Verbindung der Formel VIII mit einem
geeigneten Säureanhydrid
und durch Hydrolyse des erhaltenen Zwischenprodukts.
-
Das
Verfahren d wird in einem geeigneten Lösemittel, wie Acetonitril,
bei Temperaturen von etwa 0°C bis
150°C, vorzugsweise
von etwa Raumtemperatur bis 100°C,
ausgeführt.
-
Das
Ausgangsmaterial der Formel VIII wird erhalten z.B. durch Oxidation
einer entsprechenden Pyridylverbindung, die analog zu der Formel
VIII ist, worin R21 für Pyridyl steht, das gebunden
ist an einen Ringkohlenstoffatom, mit einem geeigneten Oxidationsmittel,
wie Wasserstoffperoxid, oder einer entsprechenden Persäure, z.B.
einer geeigneten Perbenzoesäure,
wie insbesondere m-Chlorperbenzoesäure, in
einem inerten Lösemittel,
wie Methylenchlorid, bei Raumtemperatur.
-
Alternativ
oder bei einer weiteren Ausführungsform
kann das Ausgangsmaterial der Formel VIII erhalten werden z.B. zuerst
durch Oxidation von Acetylpyridin, wie 4-Acetylpyridin, mit m-Chlorperbenzoesäure in einem
geeigneten Lösemittel,
die Methylenchlorid, z.B. unter Rückfluss, zu Acetylpyridin-N-oxid,
wie 4-Acetylpyridin-N-oxid, dann Überführung des erhaltenen Acetylpyridin-N-oxids,
wie 4-Acetylpyridin-N-oxid, mit Dimethylformamiddiethylacetal, das
z.B. gleichzeitig als Lösemittel
dient, z.B. bei etwa 110°C,
in 3-Dimethylamino-1-(N-oxidopyridyl)-2-propen-1-on, wie 3-Dimethylamino-1-(N-oxido-4-pyridyl)-2-propen-1-on,
und dann durch Umsetzung des letzteren mit einem R2-Phenylguanidin,
worin R2 wie oben definiert ist, oder vorzugsweise
mit einem geeigneten Salz, z.B. einem Nitrat, davon in einem geeigneten
Lösemittel,
wie Isopropanol, und in Gegenwart einer geeigneten Base, wie Natriumhydroxid,
z.B. unter Rückfluss,
um eine Verbindung der Formel VIII zu bilden.
-
Bei
einem weiteren Verfahren zur Herstellung des Ausgangsmaterials der
Formel VIII wird das oben genannte Acetylpyridin-N-oxid, wie 4-Acetylpyridin-N-oxid,
mit Phosphoroxychlorid in einem geeigneten inerten Lösemittel,
wie Toluol, z.B. bei etwa 100°C,
zuerst in Acetyl-2-chlorpyridin, z.B. 4-Acetyl-2-chlorpyridin, überführt. Das
erhaltene Acetyl-2-chlorpyridin, z.B. 4-Acetyl-2-chlorpyridin, wird
dann mit Dimethylformamiddiethylacetal, das z.B. gleichzeitig als
Lösemittel
dient, z.B. bei etwa 110°C,
in 3-Dimethylamino-1-(2-chlorpyridyl)-2-propen-1-on, wie 3-Dimethylamino-1-(2-chlor-4-pyridyl)-2-propen-1-on, überführt, das
dann mit einem geeigneten Salz umgesetzt wird, z.B, einem Nitrat,
eines R2-Phenylguanidins,
worin R2 wie oben definiert ist, in einem
geeigneten Lösemittel,
wie Isopropanol, und in Gegenwart einer geeigneten Base, wie Natriumhydroxid,
z.B. unter Rückfluss,
um eine Verbindung der Formel VIII zu bilden.
-
Verfahren e:
-
Ein
Reagens, das Chlor in die ortho-Position in Bezug auf die N-Oxidogruppe
einführt,
ist z.B. Phosphorpentachlorid, Trifluormethylsulfonylchlorid/HCl-Gas
oder vorzugsweise Phosphoroxychlorid. Durch Umsetzung einer Verbindung
der Formel VIII (zur Herstellung siehe oben Verfahren d) mit einem
solchen Reagens, wie insbesondere Phosphoroxychlorid, wird eine
Verbindung der Formel I erhalten, worin R1 für einen durch
Chlor substituierten Pyridylrest steht, der keine N-Oxidogruppe
mehr enthält.
Die Umsetzung mit Phosphoroxychlorid kann z.B. ausgeführt werden
in Abwesenheit eines Lösemittels
bei etwa 100°C.
Alternativ oder bei einer weiteren Ausführungsform ist es möglich, Phosphoroxychlorid
zusammen mit einem geeigneten Amin, wie Diisopropylamin, in einem
geeigneten Lösemittel,
z.B. einem chlorierten Kohlenwasserstoff, wie Chloroform, bei etwa
Raumtemperatur zu verwenden. Eine andere Möglichkeit ist Phosphoroxychlorid
in einem geeigneten Lösemittel
zu verwenden, wie Chloroform, Toluol oder Xylol, bei erhöhter Temperatur,
z.B. unter Rückfluss.
-
Säureadditionssalze
von Verbindungen der Formel I werden auf eine herkömmliche
Art und Weise erhalten, z.B. durch Behandlung mit einer Säure oder
einer geeigneten Anionenaustauschreagens.
-
Säureadditionssalze
können
in herkömmlicher
Art und Weise in die freien Verbindungen überführt werden, z.B. durch Behandlung
mit einem geeigneten basischen Mittel.
-
Gemische
von Isomeren können
getrennt werden in einzelne Isomere in einer an sich bekannten Art und
Weise, z.B. durch fraktionierte Kristallisation, Chromatographie,
etc.
-
Die
oben beschriebenen Verfahren einschließlich der Verfahren zur Entfernung
von Schutzgruppen und die zusätzlichen
Verfahrensmaßnahmen
werden, sofern es nicht anders angegeben wird, ausgeführt in einer
Art und Weise, die an sich bekannt ist, z.B. in Gegenwart oder Abwesenheit
von vorzugsweise inerten Lösemitteln
oder Verdünnungsmitteln,
sofern es notwendig ist in Gegenwart von Kondensationsmitteln oder Katalysatoren,
bei reduzierter oder erhöhter
Temperatur, z.B. in einem Temperaturbereich von etwa –20°C bis etwa
150°C, insbesondere
von etwa 0°C
bis etwa +70°C,
z.B. von etwa +10°C
bis etwa +50°C,
vornehmlich bei Raumtemperatur, in einem geeigneten Gefäß und, sofern
es notwendig ist, in einer inerten Gasatmosphäre, z.B. einer Stickstoffatmosphäre.
-
Unter
Berücksichtigung
all der Substituenten in dem Molekül sind, sofern es notwendig
ist, z.B. wenn leicht hydrolysierbare Reste vorliegen, besonders
milde Reaktionsbedingungen zu verwenden, wie kurze Reaktionszeiten,
die Verwendung von milden, sauren oder basischen Mitteln in niedriger
Konzentration, stöchiometrische
Verhältnisse
und der Auswahl von geeigneten Katalysatoren, Lösemitteln, Temperaturbedingungen und/oder
Druckbedingungen.
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Die
Erfindung betrifft auch solche Formen des Verfahrens, bei denen
eine Verbindung, die als Zwischenprodukt bei einer beliebigen Stufe
des Verfahrens erhältlich
ist, als Ausgangsmaterial verwendet wird, und die verbleibenden
Verfahrensstufen ausgeführt
werden oder das Verfahren unterbrochen wird bei einer beliebigen
Stufe oder ein Ausgangsmaterial gebildet wird unter den Reaktionsbedingungen
oder verwendet wird in Form eines reaktiven Derivats oder Salzes.
Die verwendeten Ausgangsmaterialien sind vorzugsweise solche die
gemäß dem Verfahren
zu den oben als besonders wertvoll beschriebenen Verbindungen führen.
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Die
vorliegende Erfindung betrifft auch neue Ausgangsmaterialien und/oder
Zwischenprodukte und Verfahren zur Herstellung davon. Die verwendeten
Ausgangsmaterialien und die ausgewählten Reaktionsbedingungen
sind vorzugsweise solche, durch welche die Verbindungen, die in
dieser Anmeldung als besonders bevorzugt beschrieben sind, erhalten
werden.
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Die
vorliegende Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Behandlung
von warmblütigen
Lebewesen, die unter einer Tumorerkrankung leiden, wobei das Verfahren
umfasst ein Verabreichen einer Menge, die wirksam zur Inhibierung
oder Hemmung von Tumoren, von einer Verbindung der Formel I oder
von einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon an warmblütige Lebewesen,
die eine solche Behandlung benötigen.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung einer Verbindung der
Formel I oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon bei
der Inhibition oder Hemmung von Proteinkinase C in warmblütigen Lebewesen
oder bei der Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen
zur Verwendung bei der therapeutischen Behandlung des menschlichen
oder tierischen Körpers.
In Abhängigkeit
von der Spezies, dem Alter, dem individuellen Zustand, dem Verabreichungsweg
oder der Verabreichungsroute und dem bestimmten klinischen Bild, werden
wirksame Dosierungen oder Dosen, z.B. tägliche Dosen von etwa 1 bis
1.000 mg, insbesondere 50 bis 500 mg, einem warmblütigen Lebewesen
von etwa 70 kg Körpergewicht
verabreicht.
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Die
Erfindung betrifft auch pharmazeutische Zusammensetzungen, die eine
wirksame Menge, insbesondere eine Menge, die wirksam ist zur Prophylaxe
oder Behandlung von einer der oben genannten Störungen, eines wirksamen Inhaltsstoffs
zusammen mit pharmazeutisch annehmbaren Trägern, die geeignet sind für eine topische,
enterale, z.B. orale oder rektale, oder parenterale Verabreichung
und die anorganisch oder organisch, fest oder flüssig sein können. Zur oralen Verabreichung
werden insbesondere Tabletten oder Gelatinekapseln verwendet, die
den wirksamen Inhaltsstoff oder Wirkstoff zusammen mit Verdünnungsmitteln,
z.B. Lactose, Dextrose, Saccharose, Mannit, Sorbit, Cellulose und/oder
Glycerin, und/oder Schmiermittel, z.B. Silica oder Siliciumoxid,
Talk, Stearinsäure
oder Salze davon, wie Magnesium- oder Calciumstearat, und/oder Polyethylenglykol
umfassen.
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Die
Tabletten können
auch Bindemittel oder Binder umfassen, z.B. Magnesiumaluminiumsilicat,
Stärken,
wie Mais-, Weizen- oder Reisstärke,
Gelatine, Methylcellulose, Natriumcarboxymethylcellulose und/oder Polyvinylpyrrolidon,
und, wenn es gewünscht
ist, Zerfallhilfsmittel oder Tablettensprengmittel, z.B. Stärken, Agar,
Alginsäure
oder ein Salz davon, wie Natriumalginat, und/oder Brause- oder schäumende Gemische
oder Adsorbentien, Farben oder Farbstoffe, Aromastoffe und Süßungsmittel.
Es ist auch möglich,
die pharmakologisch wirksamen Verbindungen der vorliegenden Erfindung
in Form von parenteral verabreichbaren Zusammensetzungen oder in
Form von Infusionslösungen
zu verwenden. Solche Lösungen
sind vorzugsweise isotonische, wässrige
Lösungen
oder Suspensionen, die z.B. im Fall von lyophilisierten Zusammensetzungen,
die den wirksamen Inhaltsstoff allein oder Zusammen mit einem Träger umfassen,
z.B. Mannit, vor der Verwendung hergestellt werden können. Die
pharmazeutischen Zusammensetzungen können sterilisiert sein oder werden
und/oder können
Hilfsstoffe umfassen, z.B. Konservierungsmittel, Stabilisatoren,
Benetzungs- oder Befeuchtungsmittel und/oder Emulgatoren, Solubilisierungsmittel,
Salze zur Regulierung des osmotischen Drucks und/oder Puffer. Die
vorliegenden pharmazeutischen Zusammensetzungen, die, wenn es gewünscht ist,
andere pharmakologische wirksame Substanzen umfassen können, wie
Antibiotika, werden in einer an sich bekannten Art und Weise hergestellt,
z.B. mit Hilfe von herkömmlichem
Misch-, Granulier-, Konfektionierungs-, Lösungs- oder Lyophilisierungsverfahren, und
umfassen etwa von 1% bis 100%, insbesondere von etwa 1% bis etwa
20%, Wirkstoff(e) oder wirksame(n) Inhaltsstoff(e).
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Die
folgenden Beispiele veranschaulichen die Erfindung. Die Rf-Werte werden bestimmt auf Kieselgeldünnschichtplatten
(Merck, Darmstadt, Deutschland). Das Verhältnis der Elutionsmittel in
den Elutionsgemischen, die verwendet werden, ist angegeben in Volumenteilen
(v/v) und die Temperaturen sind in Grad Celsius angegeben.
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Abkürzungen:
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- HV:
- Hochvakuum
- RT:
- Raumtemperatur
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Beispiel 1:
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31
mg (0,78 mmol) Natriumhydroxid werden zu einer Suspension von 150
mg (0,7 mmol) 3-Dimethylamino-1-(2-chlor-4-pyridyl)-2-propen-1-on
und 165 mg (0,71 mmol) 3-Chlorphenylguanidinnitrat
in 1,5 ml 2-Propanol gegeben. Nach 18 h langem Rühren unter Rückfluss
wird das Reaktionsgemisch gekühlt
und filtriert, und das auf dem Filter zurückgehaltene Material wird gründlich mit
Wasser gewaschen. Nach dem Trocknen (60°, HV) wird N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-chlor-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
erhalten; Schmp. 196° bis
198°, Rf = 0,67 (Methylenchlorid:Methanol = 95:5),
FAB-MS: 317 (M+ + 1).
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Das
Ausgangsmaterial wird auf die folgende Art und Weise erhalten:
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Stufe 1.1:
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4,12
ml (39,12 mmol) 3-Chloranilin werden in 25 ml Ethanol gegeben, und
3,3 g (78,4 mmol) Cyanamid werden zugegeben. 5,3 ml (62,7 mmol)
konzentrierte Chlorwasserstoffsäure
werden tropfenweise zu der braunen Lösung gegeben. Die Reaktionslösung wird
dann 20 h lang bei 78° gerührt. Nach
Konzentration unter reduziertem Druck wird der Rückstand in 25 ml Wasser gelöst, und
6,3 g (78,4 mmol) Ammoniumnitrat werden zugegeben. Die kristallisierte
Substanz wird durch Filtration isoliert, mit Wasser gewaschen und
bei 60° unter HV
getrocknet. 3-Chlorphenylguanidinnitrat wird erhalten; 1H-NMR
(Dimethylsulfoxid): 7,2 bis 7,8 (7H, m), 9,9 (1H, br, s).
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Stufe 1.2:
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24,61
g (177,62 mmol) 2-Chlor-4-cyanopyridin werden in 1,25 l Diethylether
unter Stickstoff gegeben, und 120 ml (22% in Tetrahydrofuran, 353
mmol) Methylmagnesiumchlorid werden zugegeben. Die rote Suspension
wird 40 h lang bei RT gerührt,
auf 1,25 l Eis/Wasser und 250 ml 6N Chlorwasserstoffsäure gegossen und
14 h lang bei RT gerührt.
Eine Extraktion mit Diethylether und Methylenchlorid, Trocknen mit
MgSO4 und Konzentration ergab 4-Acetyl-2-chlorpyridin;
Rf = 0,5 (Methylenchlorid:Methanol = 9:1).
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Stufe 1.3:
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16,2
g (104,2 mmol) 4-Acetyl-2-chlorpyridin werden 1 h lang bei 110° mit 116
ml Dimethylformamiddiethylacetal gerührt. Nach einem Kühlen auf
0°, Filtration
und Trocknung bei 60° unter
HV wird 3-Dimethylamino-1-(2-chlor-4-pyridyl)-2-propen-1-on erhalten. 1H-NMR (Dimethylsulfoxid): 2,98 (3H, s),
3,2 (3H, s), 5,9 (1H, d), 7,8 (3H, m), 8,5 (1H, d).
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Beispiel 2:
-
Analog
zum Beispiel 1 wird aus 150 mg (0,7 mmol) 3-Dimethylamino-1-(2-chlor-4-pyridyl)-2-propen-1-on
und 190 mg (0,71 mmol) 3-Trifluormethylphenylguanidinnitrat N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-(2-chlor-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
erhalten; Schmp. 168° bis
171°, Rf = 0,67 (Methylenchlorid:Methanol = 95:5).
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Das
Ausgangsmaterial wird auf die folgende Art und Weise erhalten:
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Stufe 2.1:
-
Analog
zu Stufe 1.1 wird aus 16,1 g (0,1 mol) 3-Trifluormethylaniline und
6,3 g (0,15 mol) Cyanamid 3-Trifluormethylphenylguanidinnitrat erhalten; 1H-NMR (DMSO): 7,6 (7H, m), 9,9 (1H, br,
s).
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Beispiel 3:
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0,8
g (2,41 mmol) N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-(N-oxido-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
werden in 40 ml Acetonitril suspendiert. 0,834 ml (6,65 mmol) Trimethylsilylcyanid
und 0,611 ml (6,665 mmol) Dimethylcarbamoylchlorid werden zugegeben,
und das Reaktionsgemisch wird 12 h lang bei 60° gerührt. Nach Konzentration unter
reduziertem Druck wird eine Kristallisation bewirkt aus Tetrahydrofuran/Diethylether.
N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-(2-cyano-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
wird erhalten; Schmp. 164° bis
166°, Rf = 0,40 (n-Hexan:Ethylacetat = 1:1).
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Das
Ausgangsmaterial wird auf die folgende Art und Weise erhalten:
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Stufe 3.1:
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15,1
g (0,0567 mmol) 3-Trifluormethylphenylguanidinnitrat und 2,84 g
(70,9 mmol) Natriumhydroxid werden zu einer Suspension von 10 g
(56,7 mmol) 3-Dimethylamino-1-(4-pyridyl)-2-propen-1-on [beschrieben in
EP 0 233 461 A ]
in 300 ml Isopropanol gegeben. Das Reaktionsgemisch wird unter Rückfluss
24 h lang gekocht. Nach dem Abkühlen
wird das Produkt durch Filtration isoliert, mit Wasser gewaschen
und bei 60° unter HV
getrocknet. N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-pyridyl-2-pyrimidinamin wird
erhalten; Schmp. 197° bis
198°, R
f = 0,58 (Ethylacetat).
-
Stufe 3.2:
-
10,57
g (33,4 mmol) N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-pyridyl-2-pyrimidinamin
werden in 200 ml Methylenchlorid suspendiert, und 10,49 g (33,42
mmol, 55% Stärke)
m-Chlorperbenzoesäure
werden zugegeben. Nach 2 h werden 200 ml Wasser zugegeben. Das Reaktionsgemisch
wird durch Filtration isoliert, mit Natriumcarbonatlösung und
Wasser gewaschen und nach einem Trocknen wird N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-(N-oxido-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
erhalten. Mehr Produkt wird durch Chromatographie (Methylenchlorid:Methanol
= 9:1) der konzentrierten Mutterlauge erhalten; Rf =
0,16 (Methylenchlorid:Methanol = 9:1).
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Beispiel 4:
-
100
mg (0,293 mmol) N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-(2-cyano-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin werden
in 15 ml Ethanol und 15 ml 2N Natriumhydroxidlösung 3 h lang bei 60° gerührt. Nach
Ansäurern
mit 4N Chlorwasserstoffsäure
wird N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-(2-carboxy-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin erhalten;
Schmp. 241° bis
245°, FAB-MS:
361 (M+ + N).
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Beispiel 5:
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500
mg (1,67 mmol) N-(3-Chlor-phenyl)-4-(N-oxido-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
werden in 5 ml Acetonitril suspendiert, und 0,42 ml (4,5 mmol) Dimethylcarbamoylchlorid
und 0,56 ml (4,5 mmol) Trimethylsilylcyanid werden zugegeben. Nach
einem Rühren
bei 60° über einen
Zeitraum von 14 h wird das Reaktionsgemisch auf RT gekühlt, und
das Reaktionsprodukt wird durch Filtration isoliert und mit Diethylether
gewaschen. Umkristallisation aus Tetrahydrofuran ergibt N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-cyano-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
in Form von gelben Kristallen; Schmp. 221° bis 222°, Rf =
0,6 (Hexan:Ethylacetat = 1:1).
-
Das
Ausgangsmaterial wird auf die folgende Art und Weise erhalten:
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Stufe 5.1:
-
2,8
g (12 mmol) 3-Chlorphenylguanidinnitrat und 0,5 g (12 mmol) Natriumhydroxid
werden zu einer Suspension von 2,0 g (11,7 mmol) 3-Dimethylamino-1-(4-pyridyl)-2-propen-1-on
[beschrieben in
EP 0
233 461 A ] in 100 ml Isobutanol gegeben, und das Reaktionsgemisch
wird 5 h lang unter Rückfluss
gekocht. Nach dem Kühlen
wird das Reaktionsprodukt durch Filtration isoliert, mit Wasser
gewaschen und chromatographiert (Tetrahydrofuran). Nach der Kristallisation
(Tetrahydrofuran/Diethylether) wird N-(3-Chlorphenyl)-4-pyridyl-2-pyrimidinamin
erhalten; Schmp. 167° bis
168°, R
f = 0,38 (Methylenchlorid:Methanol = 9:1).
-
Stufe 5.2:
-
1,0
g (3,54 mmol) N-(3-Chlorphenyl)-4-(pyridyl)-2-pyrimidinamin werden
in 50 ml Methylenchlorid suspendiert, und 1,1 g m-Chlorperbenzoesäure (50%
Stärke)
werden zugegeben. Nach 18 h langem Rühren bei RT wird das Reaktionsgemisch
filtriert, der Rückstand
in Ethylacetat/Tetrahydrofuran (1:1) gelöst und mit 1N Natriumhydroxidlösung und
Wasser extrahiert. Die getrocknete organische Phase wird konzentriert,
und der Rückstand
wird aus Diethylether/Tetrahydrofuran kristallisiert, um N-(3-Chlorphenyl)-4-(N-oxido-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
zu ergeben; Schmp. 268° bis
270°, Rf = 0,6 (Methylenchlorid:Methanol = 9:1).
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Beispiel 6:
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50
mg (0,16 mmol) N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-cyano-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
werden in 5 ml Ethanol und 5 ml 2N Natriumhydroxidlösung 2 h
lang bei 60° gerührt. Nach
einem Kühlen
auf RT wird das Produkt isoliert durch Filtration und mit Ethanol/Wasser
(9:1) gewaschen und bei 50° unter
HV getrocknet. Das Natriumsalz von N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-carboxy-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
wird erhalten; Schmp. > 250°, Rf = < 0,1 (Methylenchlorid:Methanol
= 9:1).
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Beispiel 7:
-
50
mg (0,16 mmol) N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-cyano-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
werden in 2 ml Methanol suspendiert. 0,58 ml Wasserstoffperoxid
(30% Stärke),
0,16 ml 1-Hexen und 11 mg Natriumcarbonat werden zugegeben, und
das Reaktionsgemisch wird 14 h lang bei RT gerührt. Das Produkt wird durch
Filtration isoliert, gewaschen (Methanol:Wasser = 1:1) und bei 50° unter HV
getrocknet. N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-carbamoyl-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
wird in Form eines gelben Pulvers erhalten; Schmp. 245° bis 247°, Rf = 0,23 (n-Hexan:Ethylacetat = 1:1).
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Beispiel 8:
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100
mg (0,293 mmol) N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-(2-cyano-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin werden
in 4 ml Methanol suspendiert. 1,1 ml Wasserstoffperoxid (30%), 0,32
ml 1-Hexen und 22 mg Natriumcarbonat werden zugegeben, und das Reaktionsgemisch
wird 16 h lang bei RT gerührt.
Das Produkt wird durch Filtration isoliert und gewaschen (Methanol/Wasser),
um N-(3-Trifluormethylphenyl)-4-(2-carbamoyl-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin zu
ergeben; Schmp. 240° bis
242°, FAB-MS: 360 (M+ + H).
-
Beispiel 9:
-
Auf
eine Art und Weise, die analog ist zu der, die oben beschrieben
ist, und durch an sich bekannte einfache Umsetzungen der Produkte
werden die folgenden Verbindungen hergestellt:
- a)
N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-n-propylamino4-pyridyl)-2-pyrimidinamin,
- b) N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-amino-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin,
- c) N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-hydroxy-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
und
- d) N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-methoxy-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin.
-
Beispiel 10:
-
300
mg (0,95 mmol) N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-chlor-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
(siehe Beispiel 1), 5,3 ml 1,3-Propandiol und 3,0 ml Dimethylformamid
werden 43 h lang bei 105° gerührt. Nach
Konzentration und wiederholter Chromatographie (Methylenchlorid:Methanol
= 98:2) wird N-(3-Chlorphenyl)-4-(2-dimethylamino-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
erhalten; Schmp. 176° bis
178°, FAB-MS:
326 (M+ + H).
-
Beispiel 11:
-
14,5
g (53,7 mmol) 3-Ethoxycarbonylphenylguanidinnitrat, 11,3 g (53,7
mmol) 3-Dimethylamino-1-(2-chlor-4-pyridyl)-2-propen-1-on
und 2,4 g (60 mmol) Natriumhydroxid werden in 150 ml Isobutanol
14 h lang bei 110° gerührt. Nach
dem Kühlen,
zweimaligen Waschen mit jeweils 100 ml Ethanol und Kristallisation (Tetrahydrofuran/Ethanol)
wird N-[3-Ethoxycarbonylphenyl]-4-(2-chlor-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin erhalten; Schmp.
149° bis
150°, FAB-MS:
355 (M+ + H).
-
Beispiel 12:
-
N-[3-Isopropoxycarbonylphenyl]-4-(2-chlor-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
wird als Sekundär-
oder Nebenprodukt von Beispiel 11 isoliert; Schmp. 130° bis 131°, FAB-MS:
383 (M+ + H).
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Beispiel 13:
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9,4
g (26,5 mmol) N-[3-Ethoxycarbonylphenyl]-4-(2-chlor-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
(siehe Beispiel 11) und 50 ml 2N Natriumhydroxidlösung werden
unter Rückfluss
in 300 ml Ethanol 1 h lang gekocht. Nach dem Kühlen auf RT wird das Reaktionsgemisch
angesäuert
(4N Chlorwasserstoffsäure)
und das Reaktionsprodukt wird durch Filtration isoliert. Nach dem
Trocknen bei 50° unter
HV werden zitronengelbe Kristalle von N-[3-Carboxyphenyl]-4-(2-chlor-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin erhalten;
Schmp: 267° bis
268°, FAB-MS:
327 (M+ + H).
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Beispiel 14:
-
Analog
zu Beispiel 1 wird aus 100 mg (0,32 mmol) N-[3-Chlorphenyl]-4-(2-chlor-4-pyridyl)-2-pyrimidinamin
und 3 ml (29,9 mmol) n-1-Butylamin N-[3-Chlorphenyl]-4-[2-(n-1-butylamino)-4-pyridyl]-2-pyrimidinamin erhalten;
Sch mp. 151° bis
158°, FAB-MS:
354 (M+ + N).
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Beispiel 15:
-
Tabletten,
von denen jede 20 mg Wirkstoff oder wirksamen Inhaltsstoff, z.B.
eine der Verbindungen der Formel I, die in den Beispielen 1 bis
14 beschrieben sind, enthält,
werden hergestellt mit der folgenden Zusammensetzung auf eine übliche Art
und Weise: Zusammensetzung:
| Wirkstoff | 20
mg |
| Weizenstärke | 60
mg |
| Lactose | 50
mg |
| Kolloid-Kieselerde | 5
mg |
| Talk | 9
mg |
| Magnesiumstearat | 1
mg |
| | 145 mg |
-
Herstellung:
-
Der
Wirkstoff oder der wirksame Inhaltsstoff wird mit einem Teil der
Weizenstärke,
mit der Lactose und mit der Kolloid-Kieselerde gemischt, und das
Gemisch wird durch ein Sieb gegeben. Ein weiterer Teil der Weizenstärke wird
mit der fünffachen
Meng von Wasser auf einem Wasserbad zu einer Paste verarbeitet,
und das Pulvergemisch wird mit der Paste geknetet, bis sich eine
leicht plastische Masse gebildet hat.
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Die
plastische Masse wird durch ein Sieb gepresst und etwa 3 mm Mesh-Größe und getrocknet,
und die erhaltenen trockenen Granalien werden wieder durch ein Sieb
gegeben. Die Reste der Weizenstärke,
des Talks und des Magnesiumstearats werden gemischt, und das Gemisch
wird gepresst, um Tabletten zu bilden, die jeweils 145 mg wogen
und eine Brechkerbe aufwiesen.
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Beispiel 16:
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Kapseln,
von denen jede 10 mg Wirkstoff, z.B. eine der Verbindungen der Formel
I, die in den Beispielen 1 bis 14 beschrieben sind, umfasste wurden
auf eine übliche
Art und Weise hergestellt, wie folgt: Zusammensetzung:
| Wirkstoff | 2500
mg |
| Talk | 200
mg |
| Kolloid-Kieselerde | 50
mg |
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Herstellung:
-
Der
Wirkstoff wird innig mit dem Talk und der Kolloid-Kieselerde gemischt,
und das Gemisch wird durch ein Sieb mit 0,5 mm Mesh-Größe gegeben
und in 11 mg Portionen in Hartgelatinekapseln von geeigneter Größe gefüllt.