DE2436479A1 - METHOD OF CLEANING UP STEROID HETEROSIDES - Google Patents
METHOD OF CLEANING UP STEROID HETEROSIDESInfo
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25. Juli 1974July 25, 1974
Pierre Fabre S9 A9, 75016 Paris / Frankreich Verfahren zur Reinigung von Steroid-HeterosidenPierre Fabre S 9 A 9 , 75016 Paris / France Process for the purification of steroid heterosides
Verfahren zur Reinigung von Steroid-HeterosidenMethod for purifying steroid heterosides
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Reinigung von Steroid-Heterosiden, insbesondere von Steroid-Heterosiden, die aus Wurzelstöcken von Rubcus aculeatus L. (auch "petit houx" genannt) extrahiert sind, unter Erzielung von Extrakten von Ruscus aculeatus L. mit einem definierten Gehalt an Steroid-Heterosiden.The invention relates to a method for purifying steroid heterosides, in particular of steroid heterosides, which are obtained from root stocks of Rubcus aculeatus L. (also called "petit houx") are extracted to obtain extracts of Ruscus aculeatus L. with a defined content of steroid heterosides.
Die Wurzelstöcke von Ruscus aculeatus L, enthalten verschiedene aktive Substanzen, deren wichtigste Gru'ope aus Steroid-Heterosiden mit venotonischer Wirkung besteht, welche durch Hydrolyse zu den Prosapogeninen und den Geninen führen.The rhizomes of Ruscus aculeatus L contain various active substances, the most important of which are steroid heterosides with venotonic action, which through hydrolysis lead to the prosapogenins and the genins.
Die Arzneibücher geben keinen Gehalt an aktiven Stoffen licher Extrakte an, und so bestehen auch beachtliche Schwankungen im Gehalt an Steroid-Heterosiden flüssiger Extrakte vom Ruscus Kodextyp (Arzneibuchtyn). Je nach Ursprung der Pflanze und Erntezeit können z, B. die Abweichungen von 0,45 bis 1,20 g Steroid-Heteroside pro 100 g Kodextyp-Extrakte variieren, was zu entsprechenden Schwankungen in den therapeutischen Aktivitäten dieser Extrakte führt.The pharmacopoeias do not state any active substance extracts, and so there are considerable fluctuations in the content of steroid heterosides of liquid extracts of the Ruscus codex type (Pharmacopoeia). Depending on the origin of the plant and harvest time, for example, the deviations can vary from 0.45 to 1.20 g of steroid heterosides per 100 g of codex type extracts, resulting in corresponding fluctuations in the therapeutic activities of these extracts.
Zur Behebung dieser Nachteile erscheint es unerläßlich, Flüssigextrakte, Feuchtextrakte und Trockenextrakte von Ruscus auf einen Gehalt an aktiven Stoffen einzustellen, deren Wirkungen und Oharmakologische Eigenschaften genau definiert und konstant sind.To remedy these disadvantages, it seems essential to use liquid extracts, Adjust moist extracts and dry extracts from Ruscus to a content of active substances, their effects and Pharmacological properties are well defined and constant.
Die leichte Erzielung derartiger eingestellter Extrakte gelingt mit Hilfe des erfindungsgemäßen Reinigungsverfahrens, das zu Steroid-Heterosiden in Pulverform, die praktisch zu 100 °/> rein sind, sowie zu Lösungen oder Zwischenprodukten genau definierter Zusammensetzung führt, insbesondere zu Extrakten mit einem Gehalt an 20, 50 oder 80 % Steroid-Heterosiden.Such adjusted extracts can be easily achieved with the help of the purification process according to the invention, which leads to steroid heterosides in powder form that are practically 100 % pure, as well as to solutions or intermediate products of a precisely defined composition, in particular to extracts with a content of 20, 50 or 80 % steroid heterosides.
Es sind bereits zahlreiche Verfahren bekannt, die es ermöglichen, die Steroid-Heteroside von Ruscus aculeatus L. in mehr oder weniger reiner Form zu erhalten, insbesondere Ausfällverfahren durch Änderung des Lösungsmittels, Verfahren zur Absorption an Stoffen wie z. B. Siliciumdioxid, Aluminiumoxid, Magnesiumoxid, Kieselgur oder Tierkohle, Verfahren zur Fest-Plüssig-Extraktion unter Verwendung von wenig polaren Lösungsmitteln, wie' z. B. Benzol, Petroläther oder Chloroform, und schließlich Verfahren zur Flüssig-Flüssig-Extraktion.Numerous processes are already known which make it possible to use the steroid heterosides of Ruscus aculeatus L. in more or to obtain less pure form, in particular precipitation processes by changing the solvent, processes for absorption on substances such as B. silicon dioxide, aluminum oxide, magnesium oxide, kieselguhr or animal charcoal, method for solid-plush extraction using less polar solvents, such as' z. B. benzene, petroleum ether or chloroform, and finally, processes for liquid-liquid extraction.
Keines der bekannten Verfahren ermöglichte bisher die Erzielung von sehr reinen Steroid-Heterosiden in guter Ausbeute und unter in industriellem Maßstab leicht durchzuführenden Bedingungen. Dies ist insbesondere auf die Tatsache zurückzuführen, daß die Steroid-Heteroside aufgrund ihrer chemischen Struktur mit nicht unbedeutenden grenzflächenaktiven Eigenschaften ausgestattet sind, was eine sehr große Leichtigkeit zur Eingehung von Verbindungen mit den verschiedensten Stoffen zur Folge hat, und insbesondere bei den Extraktionen vom Flüssig-Flüssig-Typ kann die Gegenwart eines grenzflächenaktiven Mittels den Ablauf der Extraktion empfindlich stören, z. B.· durch Modifizierung der Grenzflächeneigenschaften.None of the known methods has so far made it possible to achieve this of very pure steroid heterosides in good yield and under conditions that are easy to implement on an industrial scale. This is particularly due to the fact that the steroid heterosides because of their chemical structure are endowed with not insignificant surface-active properties, which is very easy to enter of compounds with a wide variety of substances, and especially in the liquid-liquid type extractions the presence of a surfactant can delicately interfere with the extraction process, e.g. B. · by modification the interface properties.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Reinigungsverfahren, bei dem eine Flüssig-Flüssig-Extraktion unter so^lchen Bedingungen durchgeführt wird, daß eine sehr große Ausbeute an Steroid-Heterosiden, deren Reinheit in der Größenordnung von 100 io liegt, erhalten wird.The present invention relates to a purification process in which a liquid-liquid extraction is carried out under such conditions that a very large yield of steroid heterosides, the purity of which is of the order of 100 io, is obtained.
Die vorliegende Erfindung betrifft daher ein Verfahren zur Reinigung von Steroid-Heterosiden, insbesondere von Steroid-Heterosiden aus Ruscus aculeatus L., durch Flüssig-Flüssig-Extraktion, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine organische Phase, die mindestens ein Lösungsmittel für Steroid-Heteroside (Butanol) enthält, mit einer wäßrigen Phase, deren pH-Wert mit Hilfe einer Base auf 13 oder darüber eingestellt ist, extrahiert,The present invention therefore relates to a method for cleaning of steroid heterosides, in particular of steroid heterosides from Ruscus aculeatus L., by liquid-liquid extraction, which is characterized in that an organic phase containing at least one solvent for steroid heterosides (butanol) contains, extracted with an aqueous phase, the pH of which is adjusted to 13 or above with the aid of a base,
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wobei die Steroid-Heteroside vor der Extraktion in Lösung sind in einer der beiden Phasen, und daß man nach Dekantierung die erhaltenen Steroid-Heteroside aus der organischen Phase abtrennt. wherein the steroid heterosides are in solution prior to extraction in one of the two phases, and that, after decanting, the steroid heterosides obtained are separated off from the organic phase.
Der vorliegenden Erfindung liegt die Erkenntnis zugrunde, daß, im Vergleich zu Verfahren, bei denen eine die Steroid-Heteroside enthaltende wäßrige Phase extrahiert wird, und deren tdH-Wert in der Regel nahe dem Neutralpunkt liegt, die erfindungsgemäße Verwendung einer wäßrigen Phase mit einem pH-Wert von über 13 einen ausgezeichneten Auftrenn-Koeffizienten an Steroid-Heterosiden zu bewahren ermöglicht unter gleichzeitiger beträchtlicher Erhöhung der Löslichkeit der mit den Steroid-Hetero3iden in der Regel vergesellschafteten Verunreinigungen in der wäßrigen Phase.The present invention is based on the finding that, in comparison to methods in which the steroid heterosides containing aqueous phase is extracted, and whose tdH value is usually close to the neutral point, the invention Use of an aqueous phase with a pH of over 13 has an excellent separation coefficient on steroid heterosides allows to preserve while at the same time considerably increasing the solubility of the steroid hetero3ids usually associated impurities in the aqueous phase.
Unter Berücksichtigung vorstehender Gegebenheiten ist leicht einzusehen, daß die vorliegende Erfindung gleichzeitig sowohl diejenigen Verfahren umfaßt, gemäß welchen sich die Steroid-Heteroside in wäßriger Lösung befinden und durch die organische Phase extrahiert werden, während die Verunreinigungen in der wäßrigen Lösung zurückgehalten werden, als auch diejenigen Verfahren, gemäß welchen sich die Steroid-Heteroside im organisdhen Lösungsmittel in Lösung befinden und die Verunreinigungen durch die wäßrige Lösung extrahiert werden, wobei die Steroid-Heteroside in der organisdsn Phase zurückgehalten werden.With the foregoing in mind, it is easy to see that the present invention is capable of both includes those methods according to which the steroid heterosides are in aqueous solution and through the organic Phase are extracted while the impurities are retained in the aqueous solution, as well as those processes according to which the steroid heterosides in the organisdhen Solvents are in solution and the impurities are extracted by the aqueous solution, the steroid heterosides be held back in the organisdsn phase.
Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform des Verfahrens der Erfindung ist die wäßrige Phase, welche die zum Zeitpunkt der Plüssig-Plüssig-Extraktion verwendeten Steroid-Heteroside enthält, diejenige Lösung, welche erhalten wird durch Behandlung der rohen oder vorzugsweise fein zerkleinerten Wurzeln von Ruscus aculeatus L. mit Wasser unter Druck und unter Erhitzen nach Abtrennung des Trebers und eventueller Konzentration der überstehenden Lösung auf einen Gehalt von 50 i» Trockensubstanz, wobei der pH-Wert der auf diese Weise erhaltenen Lösung auf 13According to a preferred embodiment of the method of the invention, the aqueous phase which contains the steroid heterosides used at the time of the Plüssig-Plüssig extraction is that solution which is obtained by treating the raw or preferably finely chopped roots of Ruscus aculeatus L. with water under pressure and with heating after separation of the spent grain and any concentration of the supernatant solution to a level of 50 i »dry substance, wherein the pH value of the solution thus obtained at 13
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oder einen darüber liegenden Wert mit Hilfe einer Base eingestellt wird.or set a value above this with the aid of a base will.
Gemäß einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird die organische Phase, welche die der Flüssig-Flüssig-Extraktion zu unterwerfenden Steroid-Heteroside enthält, erhalten durch Extraktion der rohen Wurzeln von Ruscus aculeatus L. mit Wasser unter Druck und unter Erhitzen, wie oben angegeben, Abdekantieren der überstehenden Phase, eventuelle Konzentration und anschließende Extraktion dieser Phase oder des Konzentrats ein- oder mehrere Male mit einem Lösungsmittel für Steroid-Heteroside, ohne daß der pH-Wert der wäßrigen Lösung basisch eingestellt wird. Die organische Phase, die der Reinigung durch Flüssig-Plüssig-Extraktion unterworfen wird, wird gewonnen durch Vereinigung der organischen Phasen aus der vorausgehenden Extraktion» According to a further preferred embodiment of the invention, the organic phase, which is that of the liquid-liquid extraction Contains steroid heterosides to be subjected to, obtained by extraction of the raw roots of Ruscus aculeatus L. with water under pressure and with heating, as indicated above, decanting of the supernatant phase, possible concentration and subsequent extraction of this phase or the concentrate one or more times with a solvent for steroid heterosides, without the pH of the aqueous solution being adjusted to be basic. The organic phase that the purification through Liquid-Plüssig extraction is subjected to is obtained by Combination of the organic phases from the previous extraction »
Gemäß weiterer vorteilhafter Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung werden 20 oder 80 i» Steroid-Heteroside enthaltende Pulver hergestellt und anschließend wahlweise in Wasser oder einem Lösungsmittel für Steroid-Heteroside gelöst, um auf diese Weise die wäßrige oder organische Phase zu bilden, die dann zu Reinigungszwecken der Flüssig-Flüssig-lxtraktion unterworfen wird nach Einstellung des pH-Werts auf 13 oder darüber, falls es sich um eine wäßrige Phase handelt« Gemäß einer dieser Ausführungsformen wird ein 20 % Steroid-Heteroside enthaltendes Pulver hergestellt aus einer konzentrierten 9 etwa 50 % Trockensubstanz enthaltenden^ wie oben angegeben gewonnenen Lösung durch Zerstäubung derselben. Gemäß einer anderen Ausführungsform wird ein 80 $ Steroid-Heteroside enthaltendes Pulver hergestellt durch Extraktion von Ruscus aculeatus L.-Wurzeln mit Wasser unter Druck und unter Erhitzen, Abtrennen des Trebers, eventuelle Konzentration 9 ein- oder mehrmalige Extraktion der überstehenden Lösung mit einem Lösungsmittel für Steroid-Heterosid^ Konzentration der vereinigten organischen Extrakte durch VerdampfenAccording to other advantageous embodiments of the present invention are made 20 or 80 powder i "steroid heterosides containing and then optionally dissolved in water or a solvent for the steroid heterosides to form in this way the aqueous or organic phase, which then for cleaning the Liquid-liquid extraction is subjected after adjusting the pH to 13 or above, if it is an aqueous phase. According to one of these embodiments, a 20 % steroid heteroside-containing powder is prepared from a concentrated 9 containing about 50 % dry matter ^ solution obtained as indicated above by atomization of the same. According to another embodiment, a powder containing 80 $ steroid heterosides is produced by extraction of Ruscus aculeatus L. roots with water under pressure and with heating, separation of the spent grains, possible concentration 9 single or multiple extraction of the supernatant solution with a solvent for Steroid-Heterosid ^ Concentration of the combined organic extracts by evaporation
iind Zerstäuben der konzentrierten Lösung unter Erzielung des Pulvers mit einem Gehalt an 80 $ Steroid-Heterosiden.iind atomizing the concentrated solution to achieve the Powder containing $ 80 steroid heterosides.
Es erweist sich auch als vorteilhaft, die erhaltenen organischen Phasen zu konzentrieren und mit Wasser zu behandeln, bis eine von organischem Lösungsmittel, z. B. Butanol, freie wäßrige Phase erhalten wird, und durch Zerstäubung dieser wäßrigen Phase ein Pulver mit einem Gehalt an 50 ^ Steroid-Heterosiden herzustellen.It also proves advantageous to concentrate the organic phases obtained and treat them with water, to one of organic solvents, e.g. B. butanol, free aqueous phase is obtained, and by atomization of this aqueous phase a powder with a content of 50 ^ steroid heterosides to manufacture.
Die -verschiedenen auf diese Weise erhaltenen Lösungen oder Zwischenprodukte darstellende Pulver sind ebenfalls erfindungswesentlich. The various solutions obtained in this way or Powders representing intermediate products are also essential to the invention.
Bei den zur Einstellung des pH-Werts der wäßrigen Lösung auf 13 oder darüber verwendeten Basen handelt es sich vorzugsweise um Alkalimetall- oder Erdalkalimetallhydroxide, insbesondere um Natrium- oder Kaliumhydroxid, doch sind auch andere Basen verwendbar, sofern sie in wäßriger Lösung zu einem pH-Wert in der Größenordnung von 13 zu führen vermögen.The bases used to adjust the pH of the aqueous solution to 13 or above are preferred alkali metal or alkaline earth metal hydroxides, especially sodium or potassium hydroxide, but other bases are also possible can be used, provided that they are able to lead to a pH value in the order of magnitude of 13 in aqueous solution.
Beim Lösungsmittel für Steroid-Heteroside handelt es sich vorzugsweise um aliphatische Alkohole, die mit Wasser (oder einer wäßriges. Lösung mit einem pH-Wert von über 13) nicht oder nur wenig mischbar sind, insbesondere um n-Butanol, doch sind auch alle übrigen bekannten Lösungsmittel für Steroid-Heteroside zur Durchführung des Verfahrens der Erfindung verwendbar.The solvent for steroid heterosides is preferably aliphatic alcohols which are immiscible or only slightly miscible with water (or an aqueous solution with a pH of more than 13), in particular n-butanol, but all the others are also miscible known solvents for steroid heterosides can be used for carrying out the method of the invention.
Ei'findimgsgemäß wird das Lösungsmittel für Steroid-Heteroside vorzugsweise in Form des reinen Lösungsmittels verwendet, doch ist es auch im Gemisch mit einem inerten oder schwach polaren Lösungsmittel verwendbar, oder es kann auch ein Gemisch aus Lösungsmitteln für Steroid-Heteroside verwendet werden. According to the invention, the solvent for steroid heterosides is preferably used in the form of the pure solvent, but it can also be used in a mixture with an inert or weakly polar solvent, or a mixture of solvents for steroid heterosides can also be used.
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Selbstverständlich kann die Flüssig-Flüssig-Extraktion gemäß der Erfindung auch wiederholt werden, d. h. es ist möglich, eine die Steroid-Heteroside enthaltende wäßrige Phase mehrere Male mit einem organischen Lösungsmittel zu extrahieren, und es ist ebenso möglich, eine die Steroid-Heteroside enthaltende wäßrige Phase zu extrahieren und die auf diese Weise erhaltene organische Phase erneut zu extrahieren mit einer basischen Lösung von pH 13» um die Reinigung zu vollenden, und alle Kombinationen sind möglich und liegen im Rahmen der vorliegenden Erfindung.Of course, the liquid-liquid extraction according to of the invention can also be repeated, i.e. H. it is possible to use one aqueous phase containing the steroid heterosides Male to extract with an organic solvent, and it is also possible to use one containing the steroid heterosides To extract aqueous phase and extract the organic phase obtained in this way again with a basic solution of pH 13 »to complete the cleaning, and all combinations are possible and are within the scope of the present invention.
Nach dem Abdekantieren werden die gereinigten Steroid-Heteroside aus. der organischen Phase abgetrennt nach üblichen bekannten Methoden. In allen Fällen erweist es sich jedoch als zweckmäßig, eine Wasserwäsche der organischen Phase vorzusehen, um die Base abzutrennen, die bei der Extraktion unvermeidlich eingeschleppt wurde, wobei es sich in bestimmten Fällen als notwendig erweisen kann, die vorhandenen Spuren an Base mit Hilfe einer Ionenaustauscher-Säule abzutrennen, die beispielsweise ein saures Harz vom Typ "Amberlite IRC 50" enthält.After decanting, the purified steroid heterosides are made out. the organic phase separated according to customary known Methods. In all cases, however, it proves to be expedient to provide a water wash for the organic phase to separate off the base which was inevitably introduced during the extraction, which in certain cases is necessary can prove to separate the existing traces of base with the help of an ion exchange column, for example an acidic resin of the type "Amberlite IRC 50" contains.
Sobald die organische Phase von der mitgeschleppten Base befreit ist, wird vorzugsweise konzentriert bis zum Beginn einer Niederschlagsbildung, worauf das Konzentrat bei niedriger Temperatur mehrere Stunden lang stehen gelassen und anschließend filtriert, gewaschen und getrocknet, vorzugsweise durch Erhitzen unter Vakuum, wird; wenn das verwendete Lösungsmittel n-Butanol ist, kann beispielsweise eine Trockentemperatür in der Größenordnung von 100 0C bei 15 mm Hg verwendet werden. Das unter diesen Bedingungen erhaltene Pulver zeigt einen Gehalt an Steroid-Heterosiden nahe 100 $. Die Gesamtausbeute des Verfahrens liegt in der Größenordnung von 50 bis 80 $·As soon as the organic phase has been freed from the base carried along, it is preferably concentrated until a precipitate begins to form, whereupon the concentrate is left to stand at low temperature for several hours and then filtered, washed and dried, preferably by heating under vacuum; if the solvent used is n-butanol, for example a dry temperature on the order of 100 ° C. at 15 mm Hg can be used. The powder obtained under these conditions shows a steroid heteroside content close to $ 100. The overall yield of the process is on the order of $ 50 to $ 80
Gemäß einer Variante des Konzentrations-Verfahrensschritts kann die Konzentration der organischen Phase mit dem Wasser be-According to a variant of the concentration process step can increase the concentration of the organic phase with the water
- St ~ - St ~
wirkt werden und die auf diese Weise erhaltene wäßrige Lösung von Steroid-Heterosiden kann dann in solcher Weise zerstäubt werden, daß ein Pulver mit einer Ausbeute und einem Gehalt an aktiven Stoffen erhalten wird, das den oben beschriebenen vergleichbar ist.acts and the aqueous solution of steroid heterosides obtained in this way can then be atomized in such a way that a powder is obtained with a yield and an active substance content comparable to those described above is.
Pur die therapeutische Anwendung ist es besonders vorteilhaft, eine äthanolische Lösung mit einem Gehalt an 2 % Steroid-Heterosiden herzustellen. Eine derartige Lösung kann leicht erhalten werden aus gereinigten Pulvern mit einem Gehalt an 100 i<> Steroid-Heterosiden durch einfaches Verdünnen, doch ist es auch möglich, eine derartige Lösung aus den die Zwischenprodukte bildenden Pulvern zu gewinnen.For therapeutic purposes, it is particularly advantageous to prepare an ethanolic solution with a content of 2 % steroid heterosides. Such a solution can be easily obtained from purified powders containing 100 i <> steroid heterosides by simple dilution, but it is also possible to obtain such a solution from the intermediates forming powders.
Es ist ferner möglich, direkt eine äthanolische Lösung mit einem Gehalt an ungefähr 2 fo Steroid-Heterosiden herzustellen durch Aufnehmen des 50 i<> Trockensubstanz enthaltenden Konzentrats in Äthanol bei 96 ° und anschließendes Dekantieren.It is also possible to prepare an ethanolic solution with a content of about 2 fo steroid heterosides directly by receiving the 50 i <> dry substance containing concentrate in ethanol at 96 °, followed by decantation.
In der Regel erweist es sich als vorteilhaft, die hergestellten therapeutischen Lösungen zu titrieren, selbst wenn sie durch Verdünnen eines Pulvers mit einem Gehalt an normalerweise 100 i< > Steroid-Heterosiden erhalten wurden.In general, it is advantageous to titrate the therapeutic solutions prepared, even if they were obtained by dilution of a powder containing typically 100 i <> steroid heterosides.
Die Anwendung der folgenden experimentellen Maßnahmen hat sich daher als besonders vorteilhaft erwiesen.The application of the following experimental measures has therefore proven to be particularly advantageous.
Dosierungdosage
In ein auf 100 cm- geeichtes Fläschchen wurden 0,020 g genau abgewogene Probe an Steroid-Heterosiden eingebracht und diese Probe wurde in konzentrierter Schwefelsäure gelöst, worauf bis zum Eichstrich aufgefüllt wurde. Die erhaltene Lösung wurde mindestens 1 Stunde lang stehen gelassen (im folgenden wird diese Lösung mit I bezeichnet).A vial calibrated to the nearest 100 cm got an accuracy of 0.020 g weighed sample of steroid heterosides was introduced and this sample was dissolved in concentrated sulfuric acid, whereupon up was filled up to the calibration mark. The resulting solution was left to stand for at least 1 hour (hereinafter referred to as this solution is labeled I).
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2436A792436A79
In ein anderes auf 100 cm- geeichtes Fläschchen wurden ungefähr 0,050 g genau abgewogene Probe an Ruscus-Extrakt (der gewonnen war durch Trocknung einer wäßrigen oder organischen Lösung) eingebracht. Zu dieser Probe wurde konzentrierte Schwefelsäure zugesetzt und es wurde bis zur Lösung gerührt, worauf das Volumen auf 100 cm aufgefüllt wurde. Die erhaltene Lösung wurde mindestens 1 Stunde lang stehen gelassen (im folgenden wird diese Lösung mit II bezeichnet).In another vial, calibrated at 100 cm, were approximately 0.050 g precisely weighed sample of Ruscus extract (the obtained by drying an aqueous or organic solution). This sample was concentrated Sulfuric acid was added and the mixture was stirred until it dissolved, whereupon the volume was made up to 100 cm. The received The solution was left to stand for at least 1 hour (hereinafter this solution is referred to as II).
Mit Hilfe der Lösung I wurde die folgende Verdünnungsreihe hergestellti The following dilution series was prepared with the aid of solution I: i
1 21 2
Lösung I 0 5 ml 12,5 ml 20 ml 25 mlSolution I 0 5 ml 12.5 ml 20 ml 25 ml
mit konz. H SO.with conc. H SO.
aufgefüllt auf 10° ml made up to 10 ° ml
mg Steroid-Heterosid 01 ?
fo ml Schwefelsäure- 9 mg steroid heteroside 01?
fo ml sulfuric acid- 9
lösungsolution
Es wurde die optische Dichte jeder' Staadardlösung gegen eine Blindprobe gemessen und die gefundenen Werte der optischen Dichte wurden als Punktion der Konzentration graphisch aufgetragen« Durch Messung der optischen Dichte der Lösung II wurde daraus die Konzentration an Steroid-Heterosiden und nach Umrechnung diejenige des Extraktes bestimmt.The optical density of each Staadard solution was compared to a The blank sample was measured and the optical density values found were plotted graphically as a puncture of the concentration « The concentration of steroid heterosides was determined from this by measuring the optical density of solution II Conversion determines that of the extract.
Bei Kenntnis der Konzentration des Extraktes war es sodann leicht, dessen Gehalt an Steroid-Heterosiden beispielsweise auf 2 fo einzustellen.If the concentration of the extract was known, it was then easy to adjust its steroid heteroside content to, for example, 2 fo.
Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung und die erzielbaren Vorteile näher erläutern, stellen ,jedoch keinerlei Beschränkung dar.The following examples are intended to explain the invention and the advantages that can be achieved in more detail, but not to constitute a restriction represent.
Beispiel 1; Herstellung eines Konzentrats mit einem Gehalt an 50 fo Trockenextrakt Example 1 ; Production of a concentrate with a content of 50 fo dry extract
a) Extraktion:a) Extraction:
In einem Reaktor aus rostfreiem Stahl wurde die Extraktion von 150 kg fein zerkleinerten (Korngröße 1 mm) Ruscus-Wurzeln nit 2000 1 entmineralisiertem V/asser bei 110 0C durchgeführt. Der Druck betrug 0,5 Bar; die Rührgeschwindigkeit betrug 50 UoLI; die Extraktionsdauer betrug 1 Stunde.In a stainless steel reactor, the extraction of 150 kg finely ground (particle size 1 mm) Ruscus roots nit was / ater performed demineralized 2000 1 V at 110 0 C. The pressure was 0.5 bar; the stirring speed was 50 UoLI; the extraction time was 1 hour.
Nach dem Abkühlen wurde in einem Dekantierapnarat vom Tyn "Westfalia SDA 2 30" mit einer Geschwindigkeit von 5500 UoM 45bis 50 Minuten lang dekantiert.After cooling, a decanter from Tyn "Westfalia SDA 2 30" with a speed of 5500 rpm Decanted for 45 to 50 minutes.
Die Brühe wurde sodann in einer Klärvorrichtung vom Typ "SAMR 3036" bis zur Erzielung einer klaren Lösung geklärt.The broth was then clarified in a "SAMR 3036" clarifier until a clear solution was obtained.
b) Konzentrierungϊb) Concentrationϊ
Es wurde sodann eine Konzentrierung unter Vakuum in einer Doppeleffekt-Apparatur durchgeführt bis zur Erzielung eines Konzentrats mit einem Gehalt an 50 $ Trockenextrakt (Konzentrat A).It was then concentrated under vacuum in a double effect apparatus carried out until a concentrate with a content of $ 50 dry extract (concentrate A) is obtained.
Beispiel 2: Herstellung eines gereinigten Steroid-Heterosid-Pulvers Example 2: Preparation of a purified steroid-heteroside powder
Der pH-Wert eines gemäß Beispiel 1 erhaltenen Konzentrats wurde mit Hilfe einer N-Natriumhydroxidlösung auf 13 eingestellt.The pH of a concentrate obtained according to Example 1 was adjusted to 13 with the aid of an N sodium hydroxide solution.
609330/0322609330/0322
Die auf diese Weise erhaltene basische Lösung wurde Volumen oro Volumen 3 Mal hintereinander mit n-Butanol extrahiert. Die stark farbigen Verunreinigungen erschienen nach der Dekantierung in der wäßrigen Phase, während die Steroid-Heteroside in der organischen Phase verblieben. Die vereinigten Butanolphasen wurden mit Wasser gewaschen und danach mit Tierkohle behandelt, um die letzten farbigen Verunreinigungen abzutrennen. The basic solution obtained in this way was extracted by volume or volume 3 times in succession with n-butanol. The strongly colored impurities appeared after decanting in the aqueous phase, while the steroid heterosides remained in the organic phase. The combined butanol phases were washed with water and then with animal charcoal treated to remove the last colored impurities.
Die erhaltene organische Phase wurde bis zum Beginn einer Niederschlagsbildung konzentriert und das erhaltene Konzentrat wurde bei +5 0C 4 Stunden lang stehen gelassen, worauf filtriert, gewaschen und bei 100 0O unter einem Vakuum von 15 mm Hg getrocknet wurde.The organic layer obtained was concentrated until the start of precipitation, and the concentrate was stirred at 0 +5 C for 4 hours left standing, and then filtered, washed, and 100 mm in 0 O under a vacuum of 15 Hg was dried.
Durchgeführte Analysen führten zu folgenden Ergebnissen:The analyzes carried out led to the following results:
Gehalt des Steroid-Heterosid-Pulvers: 98 bis 100 ?S, Verfahrensausbeute: 50 bis 70 $Content of the steroid heteroside powder: 98 to 100? S, Process yield: $ 50 to $ 70
Beispiel 3? Herstellung eines Pulvers mit einem Gehalt an etwa 20 $ Steroid-Heterosiden Example 3 ? Manufacture of a powder containing about $ 20 steroid heterosides
Ein gemäß Beispiel 1 erhaltener konzentrierter Extrakt wurde durch Zerstäubung zur Trockene gebracht unter Einhaltung folgender Bedingungen:A concentrated extract obtained according to Example 1 was brought to dryness by atomization while observing the following Conditions:
Eintrittstemperatur der Luft: 200 0C,
Austrittstemperatur der Luft: 95 0C,
Turbinengeschwindigkeit: 16000 UpMInlet temperature of the air: 200 0 C,
Outlet temperature of the air: 95 0 C,
Turbine speed: 16,000 rpm
Auf diese Weise wurde ein Zerstäubungsprodukt mit einem Gehalt von etwa 20 $> Steroid-Heterosiden erhalten unter Erzielung einer Ausbeute von etwa 18 bis 20 $, bezogen auf das Gewicht der Ruscus-Wurzeln.In this way, an atomized product containing about $ 20 steroid heterosides was obtained with a yield of about $ 18 to $ 20 based on the weight of the Ruscus roots.
Beispiel 4: Herstellung eines Pulvers mit einem Gehalt an
etwa 80 $ Steroid-Heterosiden Example 4: Production of a powder containing
about $ 80 steroid heterosides
Ein gemäß Beispiel 1 erhaltenes Konzentrat wurde drei aufein anderfolgenden Butanol-Extraktionen bei Zimmertemperatur unterworfen. A concentrate obtained according to Example 1 was subjected to three successive butanol extractions at room temperature.
Der erhaltene Butanolextrakt wurde sodann in einem Plattenverdampfer
konzentriert, bevor er durch Zerstäubung unter
Einhaltung der folgenden Bedingungen zur Trockene gebracht
wurde:The butanol extract obtained was then concentrated in a plate evaporator before being subjected to atomization
Brought to dryness compliance with the following conditions
became:
Eintrittstemperatur der Luft: 200 0C,
Austrittstemperatur der Luft: 100 0C,
Turbinengeschwindigkeit: 22000 UpMInlet temperature of the air: 200 0 C,
Outlet temperature of the air: 100 0 C,
Turbine speed: 22,000 rpm
Beispiel 5: Herstellung eines Pulvers mit einem Gehalt an
etwa 50 # Steroid-Heterosiden Example 5: Production of a powder containing
about 50 # steroid heterosides
Ein gemäß Beispiel 1 erhaltenes Konzentrat wurde vier aufeinanderfolgenden
Extraktionen mit Butanol unterworfen. Die erhaltenen Butanolphasen wurden vereinigt und in Wasser konzentriert
bis zur Erzielung einer von Butanol freien wäßrigen
Phase. Durch Zerstäubung dieser wäßrigen Phase wurde ein Extrakt mit einem Gehalt an 50 $ Steroid-Heterosiden erhalten.A concentrate obtained according to Example 1 was subjected to four successive extractions with butanol. The butanol phases obtained were combined and concentrated in water until an aqueous solution free of butanol was obtained
Phase. By atomizing this aqueous phase, an extract containing 50% steroid heterosides was obtained.
Beispiel 6: Herstellung eines gereinigten Steroid-Heterosid-Pulvers Example 6: Preparation of a purified steroid-heteroside powder
Der gemäß Beispiel 4 erhaltene Butanolextrakt wurde einer
Plüssig-Fltiaeig-Extraktion unterworfen mit einer Natronlaugelösung von pH 13, die die in den Steroid-Heterosiden vorliegenden
Verunreinigungen löste. Die auf diese Weise erhaltene organische Phase wurde mit Wasser gewaschen, um die sich darinThe butanol extract obtained in Example 4 became a
Plüssig-Fltiaeig is subjected to extraction with a sodium hydroxide solution of pH 13, which dissolved the impurities present in the steroid heterosides. The organic phase thus obtained was washed with water to remove it
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gelöste Natronlauge zu entfernen, worauf die organische Lösung durch eine Säule mit Ionenaustauscherharz vom Typ "Amberlite IRC 50" geschickt wurde. Das erhaltene Eluat wurde sodann bis zum Beginn einer Niederschlagsbildung konzentriert und anschließend filtriert, gewaschen und, wie in Beispiel 2 beschrieben, getrocknet.To remove dissolved sodium hydroxide solution, whereupon the organic solution is passed through a column with ion exchange resin of the type "Amberlite IRC 50 "was sent. The eluate obtained was then to concentrated at the beginning of a precipitate and then filtered, washed and, as described in Example 2, dried.
Das erhaltene weiße Pulver enthielt di^ Steroid-Heteroside in reiner Form. Die Verfahrensausbeute lag in der Größenordnung von 55 bis 75 $.The white powder obtained contained di ^ steroid heterosides in pure form. The process yield was on the order of $ 55 to $ 75.
Das in Beispiel 2 beschriebene Verfahren wurde wiederholt, jedoch mit der Ausnahme, daß, statt die gemäß Beispiel 2 erhaltene letzte organische Phase zu konzentrieren, eine Konzentration in Wasser bewirkt wurde; die auf diese Weise erhaltene wäßrige Lösung wurde sodann zerstäubt.The procedure described in Example 2 was repeated with the exception that instead of that obtained in Example 2, the procedure was repeated Concentrate last organic phase, a concentration in water has been effected; the aqueous obtained in this way Solution was then atomized.
Die im Zerstäubungsprodukt enthaltenen Steroid-Heteroside wurden in reiner Form (98 bis 100 $) erhalten.The steroid heterosides in the nebulized product were obtained in pure form ($ 98 to $ 100).
Es ergibt sich somit, daß die verschiedenen Verfahrensstufen des erfindungsgemäßen Verfahrens unter industriellen Bedingungen leicht durchführbar sind und daß insbesondere die Flüssig-Flüssig-Extraktionen mit Hilfe einer der zahlreichen bekannten, für diesen Zweck üblicherweise industriell verwendeten Apparaturen durchführbar sind, insbesondere z. B. mit Extraktionsvorrichtungen vom Misch-Dekantier-Typ oder mit Gegenstrom-Extraktionsvorrichtungen. It thus follows that the various process stages of the process according to the invention under industrial conditions are easy to carry out and that in particular the liquid-liquid extractions with the help of one of the numerous known, apparatus commonly used industrially for this purpose are feasible, in particular z. B. with extractors of the mixer-decanter type or with countercurrent extractors.
SO983Ö/Ö022SO983Ö / Ö022
Die kontinuierliche Durchführung dieser Operationen wirft keinerlei Probleme auf, was das erfindungsgemäße Verfahren vom industriellen Standpunkt aus noch interessanter macht.The continuous implementation of these operations does not pose any problems whatsoever, which is the case with the method according to the invention makes it even more interesting from an industrial point of view.
Die nach dem Verfahren der Erfindung gewonnenen Steroid-Heterosids sind als Arzneimittel verwendbar, insbesondere als Venotonica.The steroid heterosides obtained by the process of the invention are useful as medicaments, especially as venotonica.
Die für diese Versuche verwendeten Flüssigextrakte wiesen einen Gehalt an 2 % Steroid-Heterosiden auf.The liquid extracts used for these experiments had a content of 2 % steroid heterosides.
Die akute Toxizität von 2 % Steroid-Heterosiden enthaltenden Extrakten ist ganz gering und praktisch gleich derjenigen einer 50 ^igen alkoholischen Lösung.The acute toxicity of extracts containing 2% steroid heterosides is very low and practically equal to that of a 50% alcoholic solution.
Nach Verabreichung per os über einen Zeitraum von 1 Monat (subchroniache Toxizität) konnten durch Autopsie (Wistar-Ratten) makroskopisch und histologisch im Bereich der Eingeweide keinerlei Anomalien festgestellt werden. Der Mittelwert der Gewichtskurven von behandelten Tieren war fast zur Deckung zu bringen mit demjenigen von unbehandelten Vergleichstieren.After administration orally over a period of 1 month (subchronic toxicity) could by autopsy (Wistar rats) macroscopically and histologically no abnormalities whatsoever were found in the viscera. The mean of the Weight curves of treated animals were almost identical to those of untreated control animals.
An der Ratte wurde mit Garraghenin ein Oedem an der Pfote hervorgerufen; bei den mit 0,5 bis 1 ml/kg Extrakt aus Ruscus aculeatus L. behandelten (Verabreichung per os) Tieren ging das Oedem 2 bis 3 Stunden nach der Verabreichung zurück; es wurde gefunden, daß die prozentuelle Verminderung Oroportional den verabreichten Dosen und in allen Fällen statistisch nachweisbar war.In the rat, Garraghenin produced edema on the paw; in the animals treated with 0.5 to 1 ml / kg extract from Ruscus aculeatus L. (administration per os) animals edema resolved 2 to 3 hours after administration; the percentage reduction was found to be proportional the administered doses and in all cases statistically verifiable was.
50983Ö/Ö82250983Ö / Ö822
lie in der Klinik in Form von oralen und rektalen Präparaten untersuchten Extrakte ergaben sehr vorteilhafte Ergebnisse bei der Behandlung von varikösen und Orevarikösen Syndromen und dem unter der französischen Bezeichnung "jambes lourdes" bekannten Syndrom. Die mittlere Posologie betrug 1,5 ml Extrakt pro Tag. Bei akuter hämorrhoidaler Krisis wurden ausgezeichnete Ergebnisse erhalten mit einer Offensiv-Posologie von ?■ mal täglich 1,5 bis 2 ml.lie in the clinic in the form of oral and rectal preparations The extracts tested gave very beneficial results in the treatment of varicose and ovarian syndromes and the one under the French name "jambes lourdes" known syndrome. The mean posology was 1.5 ml of extract per day. In acute hemorrhoidal crisis, excellent Results obtained with an offensive posology of 1.5 to 2 ml times a day.
Sehr gute Ergebnisse wurden auch erhalten mit zusammengesetzten Formulierungen, in denen mit dem Extrakt aus Ruscus aculeatus L. gleichzeitig das Vitaminpaar P und C sowie ein Salidiureticum verabreicht wurden.Very good results have also been obtained with compound formulations in which the extract from Ruscus aculeatus is used L. at the same time the vitamin pair P and C and a salidiuretic were administered.
Die verschiedenen angewandten Produkte führten niemals zu Unverträglichkeiten und ergaben immer konstante therapeutische Ergebnisse.The various products used never led to incompatibilities and always gave constant therapeutic results.
$09030/082^$ 09030/082 ^
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FR7402195A FR2258175A1 (en) | 1974-01-23 | 1974-01-23 | Purifying steroid heterosides by liquid-liquid extraction - esp. those from Ruscus aculeatus to give a prod. of predictable activity |
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Cited By (1)
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Families Citing this family (2)
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Cited By (2)
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