DE2220246A1

DE2220246A1 - 1,2,4 Tnazol Nukleoside

Info

Publication number: DE2220246A1
Application number: DE19722220246
Authority: DE
Inventors: Jospeh Theodore Laguna Niguel Robins Roland Kenith Santa Ana Calif Witkowski (V St A)
Original assignee: International Chemical & Nuclear Corp , Pasadena, Calif (V St A )
Priority date: 1971-06-01
Filing date: 1972-04-25
Publication date: 1972-12-14
Also published as: FR2140126B1; HU167614B; JPS5519238B2; IE36478L; CH614452A5; IS2075A7; NO138805B; IS913B6; JPS5519239B2; NL7207156A; ES403142A1; DK143069B; BE784195A; EG11406A; DD99791A5; BG22827A3; IN142290B; FR2140126A1; GB1353565A; US3798209A

Description

Die derzeit bekannten zwei Nukleosid-Antibiotika mit fünfgliedrigen heterocyclischen Ringen sind Showdomycin und Pyrazomycin, welche den nachstehend angegebenen Formeln 1 und 2 entsprechen sollen: q _h

HOCH

Von den derzeit bekannten synthetischen nucleosidischen Antivirusmitteln sind die bedeutenderen 5-Jod-2^l-deoxyuridin (5-IDU), 9-ß-D-Aräbinofuranosyladenin (Ara-A) und 1-ß-D-arabinofuranosylcytosin (Ara-C). Von diesen Substanzen ist

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ORIGINAL INSPECTED

nur 5-IDU (in 0,1 Gewichts-#iger lösung) im Handel erhältlich, und zwar insbesondere als Antivirusmittel. Diese Verbindung ist mit dem Nachteil behaftet, dass sie nur wenig löslich und stark toxisch ist, worauf die unerwünscht starke Verdünnung zurückzuführen ist, in welcher diese Verbindung derzeit verwendet wird.

Alonso et al berichten in "J. Heterocyclic Chem." 7, 1269-72 (1970) die Herstellung von 1-(ß-D-Ribofurano8yl)-4-carboxamido-1,2,3-triazol, erwähnen jedoch keinerlei biologische Aktivität. Witkowski und Robins schlagen in "The Chemical Synthesis of the 1,2,4-Triazole Nucleosides, die mit üridin, 2'-Deoxyuridin, Thymidin und Cytidin verwandt sind" (vgl. J. Org. Chem. 35, 2635-41 (1970) verschiedene 1,2,4-Triazol^ükleosid-Analoga als Substanzen zur Durchführung von biologischen Tests vor, wobei jedoch keinerlei spezielle Wirkungen angegeben werden. Spätere Untersuchungen haben gezeigt, dass von den angegebenen Analoga nur 5-Brom-3-nitro-1-(2,3,5-tri-0-acetyl-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol eine geringe Antivirusaktivität besitzt, wobei man annimmt, dass diese Aktivität lediglich der Cytotoxizität der Verbindung zuzuschreiben ist.

Durch die Erfindung werden Verbindungen der Formel ■

geschaffen, worin G ein Pentofuranosylrest ist, der vorzugsweise durch ein 2'-Sauerstoff in trans-Steilung zu dem Triazol-Aglycon gekennzeichnet ist, während R₁ für eine Cyano-, Carboxamido-, Thiocarboxamido-, Methy!carboxylat-, Carboxamidoxim-,

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Carboxamidin-Gruppe oder ein physiologisch verträgliches Säureadditionssalz der letzteren Gruppe steht. Die Erfindung umfasst auch die O-acylierten Analoga der vorstehend angegebenen Verbindungen s owie deren 5'-Phosphate und■3 *,5'-cyclischen Phosphate, desgleichen die Ammniiium- und Alkalisalze der Phosphate.

Bevorzugte Verbindungen entsprechen der Formel

OH

worin R₁ die vorstehend angegebene Definition besitzt und einer der Substituenten R« oder R, für Wasserstoff steht, während der andere Hydroxyl bedeutet. Ferner kommen die 5'-Phosphate und 3¹,5¹ -cyclischen Phosphate dieser Verbindungen in Betracht. Erfindungsgemässe Verbindungen benitzen eine Antivirusaktivität und zeigen in nichtacylierter oder "entblockter" Form eine wesentlich grossere Wasserlöslichkeit als die bisher bekannten Nukleosid-Antivixrasmittel. Das bevorzugte 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2-4-triazol-3-carboxamid-Nukleosid der Erfindung zeigt ein breites Spektrum hinsichtlich Antivirusaktivität und Antitumoraktivitat.

Methyl-1,2,4-triazol-3-carboxylat und 3-Cyano-1,2,4-triazol sind Vorläufer, welche zur Durchführung von Synthesewegen zur Gewinnung der erfindungsgemässen 1,2,4-Triazol-Mukleoside eingesetzt werden können. Die zuerst genannte Verbindung lässt sich in zweckmässige-r Weise durch Oxydation von

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3-Methyl-1,2,4-triäzol und anschliessende Veresterung der erhaltenen Säure nach der Methode von öipens und Grinsteins (vgl. »Latvijas PSR Zinatnu Akad. Vestis.¹', Kim.Ser. (1965) (2) 204-08 (vgl. O.A. 63, 13243, 1965) herstellen. 3-Oyano-1,2,4-triazol wird nach einer Vielstufensynthese hergestellt, die von Cipens et al (loc. cit.) angegeben wird. Die Verbindung lässt sich in noch zwec!massigerer Weise durch Additionsreaktion von Dicyan und Hydrazin unter Bildung von 1-0yanoformimidsäurehydrazid und anschliessenden säurekatalysierten Ringschluss in Triäthyl-o-formiat zu der 3-Oyanoverbindung herstellen. Gemäss einer Variante wird das Irimethylsilyl-Derivat des Methyl-1,2,4-triazol-3-carboxylats in quantitativer Ausbeute durch Reaktion mit Hexamethyldisilazan unter Rückfluss gebildet und mit einem entsprechenden O-acylierten Halozucker-GX unter Bildung beispielsweise einer Mischung aus O-benzoyliertem 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carbonsäuremethylester und 5-0arbonsäuremethylester umgesetzt, und zwar gemäss folgendem Reaktionsschema:

η NO

3 ^x I XVO-OCH₃

^0Η3°-°^

worin B für Benzoyl steht. Der 3-Oarbonsäuremethylester wird durch fraktionierte Kristallisation oder vorzugsweise durch Säulenchromatographie an Kieselgel abgetrennt. Entbenzoylierung und Aminolyse liefern das 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid.

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Die "bevorzugte Synthesernethode besteht in dem säurekatalysierten Zusammenschmelzen eines entsprechend substituierten Triazole mit dem O-Acyl-bloekierten Zucker (in diesem Balle 1-0-Acetyl-2,3,5-tri-0-benzpJl-ß-D-ribofuranose) sowie in anschliessender Entbloekierung und Aminolyse, wie aus dem nachfolgenden Reaktionsschema hervorgeht:

A_c ist CH₅CO und B_z ist C₆H₅CO

Wahlweise kann das Schmelzen unter Verwendung von 3-Cyano-1,2,4-triazol erfolgen, worauf sich eine Umwandlung des 3-Cyano-1-(2,3,5-tri-O-acetyl-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazols in das aktive 3-Carboxamido-Nukleosid durch Umsetzung mit Wasserstoff periixyd in Gegenwart von wässrigem Ammoniak anschliesst. Dabei werden allerdings geringere Ausbeuten als in dem Falle erhalten, in welchem das Zusammenschmelzen mit Methyl-1,2,4-triazol-3-carboxylat erfolgt.

Das 3-Cyano-1-(2,3,5-tri-0-acetyl-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol ist unabhängig davon, ob es nach der SiIylierungs- oder Schmelzmethode erzeugt worden ist, ein wertvolles Zwischenprodukt zur Herstellung der erfindungsgemässen aktiven 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-thiocarboxamid-Nukleo-

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side, "beispielsweise durch Umsetzung dieser Verbindung mit Schwefelwasserstoff in Gegenwart von Triäthylamin und anschliessende Entacylierung, falls das blockierte Nukleosid als Zwischenprodukt verwendet wird.

In ähnlicherweise können die nukleosidischen 1,2,4-Triazol-3-carboxamidine aus dem 3-Cyano-1,2,4-triazol-Nukleosid hergestellt werden, und zwar entweder mit oder ohne als Zwischenprodukt erfolgende Bildung des 3-Carboxamidoxim-Analogons, wie aus dem folgenden Reaktionsschema hervorgeht:

HONS,/

^NH HOHHO ^

! Reduktion

worin G für einen der oben definierten Glykosylreste steht. Das Carboxamidin wird in freier Form bei der Synthese erhalten, welche das Oarboxamidoxim-Zwischenprodukt umfasst. Demgegenüber liefert die bevorzugte Herstellungsmethode direkt aus der 3-Cyanoverbindung in Gegenwart von Ammoniumchlorid das Carboxamidin in Form seines Hydrochloridsalzes. Andere physiologisch verträgliche Säureadditionssalze (beispielsweise Hydrobromid-, Hydrojodid-, Zitrat-, Acetat-, Sulfat-, Phosphat-Additionssalze) können durch Ionenaustausch oder durch Neutralisation des Hydrochloridsalzes mit Natriumbicarbonat und anschliessende Umsetzung des erhaltenen freien Carboxamidins mit einer entsprechenden Säure erhalten werden.

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Die erfindungsgemässen 3-Carboxamido-, 3-Thiocarboxamido- und 3-Carboxamidin-lTukleoside können in das entsprechende 5'-Phosphat- oder Ammonium- oder Alkalisalz des Phosphats umgewandelt werden, wobei diese Verbindungen.als solche verabreicht werden können. In ähnlicher Weise können 5'-Phosphate der als Zwischenprodukte auftretenden 3-Methy!carboxylat-, 3-Oyano- und 3-Carboxamidoxim-Verbindungen vor der Durchführung von Maßnahmen, welche die 3-Stellung des Iriazolaglykons betreffen und zur Bildung von aktiven Nukleotiden führen, hergestellt werden. Die Methoden der Phosphorylierung von Nukleosiden sind bekannt, wobei ihre Durchführung keine Schwierigkeiten bereitet. Gemäss einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird das 5'-Phosphat von 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid durch Umsetzung von 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-earbonsäuremethylester mit POCl, in Trimethylphosphat und anschliessende Hydrolyse in Eiswasser zur Gewinnung des freien 5'-Phosphats hergestellt. Die Bildung des Ammoniumsalzes und die Aminolyse des Methylesters erfolgen gleichzeitig bei der Behandlung mit wässrigem Ammoniak. Alkalisalze oder das freie 5'-Phosphat des 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1, 2,4-triazol-3-carboxamid-lTukleotids können dann aus dem Ammoniums al ζ des Phosphats durch -Ionenaustausch hergestellt werden.

Zur Bewirkung eines verbesserten Zeiltransportes können die 3',5'-cyclischen Phosphate der erfindungsgemässen aktiven Carboxamido-, Thiocarboxamido- und Oarboxamidinverbindungen durch eine Dicyclohexylcarbodiimid (DCO)-Cyclisierung der entsprechenden 5'-Phosphate geschützt werden. Wahlweise können 5'-Phosphate der Cyano-, Methylcarboxylat- und¹Carboxamidoxim-Zwischenprodukte vor Maßnahmen an der 3-Steilung des Aglykone, die zu den aktiven cyclischen Nukleotiden führen, cyclisiert werden. In jedem Falle können die cyclischen Phos-

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phate entweder in freier Form oder in Form von Ammonium- oder Alkalisalzen', welche auf die gleiche Weise wie im Falle der 5'-Phosphate erhalten werden, verwendet werden.

Wenn auch die Erfindung unter besonderer Bezugnahme auf eine Acetyl- oder Benzoy!blockierung der 2^f-, 3'- und 5'-Hydroxylgruppen des G-lykosylrestes beschrieben worden ist, so ist dennoch darauf hinzuweisen, dass jede Acylgruppe verwendet werden kann, um diese Hydroxylgruppen gegenüber Nebenreaktionen zu schützen, beispielsweise gegenüber einer Dehydratisierung während der Synthese der erfindungsgemässen Wirkstoffe. Sutherland et al beschreiben in ''Biochim. et Biophys. Acta" 148, 106 (1967), dass eine Acylierung von cyclischen Nukleotiden den Zelltransport verbessert. In ähnlicher Weise können auf andere Art freie Glykosylhydroxyle der erfindungsgemässen Nukleotide und Nukleoside im Hinblick auf eine verbesserte Lipidlöslichkeit acyliert werden oder beispielsweise mit Alkyl- oder Alkarylsulfonylgruppen versehen werden, beispielsweise mit Tosylgruppen, Mesylgruppen, Brosylgruppen, Nisylgruppen etc.

Wenn auch die Gruppe, welche die 1'-Stellung der vorstehend erwähnten Zuckerreagentien verlässt, als Acetyl oder im Falle der Silylierung als Halogen gekennzeichnet worden ist, so ist dennoch darauf hinzuweisen, dass jeder ersetzbare Rest verwendet werden kann, welcher einer Abtrennung als Nebenprodukt zugänglich ist.

Wenn auch vorstehend zu Erläuterungszwecken auf ß-D-Ribofuranosyl- und Xylofuranosyl-Gruppen Bezug genommen worden ist, so ist dennoch darauf hinzuweisen, dass die Erfindung auch die Verwendung von anderen Glykosylresten vorsieht, beispielsweise 2'-Deoxy-ß-D-ribofuranosyl, 2'-Deoxy-oc-D-ribofuranosyl und ß-D-Arabinofuranosyl. Im Falle der 2'-

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Deoxytriazol-Nukleoside können die eingesetzten Vorläufer Zucker aus 2-Deoxy-1,3,5-tri-0-~acetyl-D-ribofuranose oder 1_0-Acetyl-2-deoxy-3,5-di-0-(p-toluoyl)-D-ribofuranose bestehen, wobei die letztere bei der Behandlung von 2-Deoxy-3,5-di-0--(p-toluoyl)-D-ribofuranosylchlorid mit Quecksilber(II)-acetat in Tetrahydrofuran anfällt.'

Die Arabinosyltriazol-Hukleoside werden nach der Silylierungsmethode hergestellt, wobei 2,3,5-tri-O-Benzyl-D-arabinofuranosylchlorid verwendet wird.

Bei gegebener biologischer Aktivität der erfindungsgemässen Ribofuranosyltriazole scheint auch eine Aktivität der entsprechend substituierten Arabinofuranosyltriazole gegeben zu sein, insbesondere im Hinblick auf die bekannte Antivirusaktivität von "Ara-A" und "Ara-C". In ähnlicher Weise wird eine biologische Aktivität der entsprechenden 2^f-Deoxy-ß-D-ribofuranosyltriazole durch die bekannte Antivirusaktivität von 5-Jod-2'-deoxyuridin nahegelegt, nachdem eine Wirksamkeit der Ribofuranosyltriazole gemäss vorliegender Erfindung bfekannt ist, insbesondere gegen DNA-Viren, wie die Herpes-Typen 1 und Werden jedoch diese Verbindungen gegenüber den Viren des weiter unten folgenden Beispiels 16 get*stet, dann stellt man im wesentlichen keine Antivirusaktivität fest, was offensichtlich auf das Unvermögen der in der Gewebekultur vorliegenden Enzyme zurückzuführen ist, freie Nukleoside zu phosphorylieren, deren Glykosylreste keine trans-2¹-Sauerstoffatome aufweisen. Daher sollten diese Nukleoside synthetisch zu der angenommenen aktiven 5'-Phosphatform vor der Verabreichung phosphoryliert werden, Wahlweise kann das 5'-Phosphat vor der Verabreichung cyelisiert werden, wobei eine in vivo-Abspaltung den aktiven 5'-Phosphatmetaboliten liefert. Die Phosphorylierung erfolgt im wesentlichen wie die vorstehend beschriebene Phosphorylierung zur Herstellung der Ribotide.

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- ίο -

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung. Sofern nicht anders angegeben, beziehen sich alle Teil- und Prozentangaben auf das Gewicht und alle Temperaturangaben auf ⁰C. Alle Verdampfungen werden in einem Rotationsverdampfer unter vermindertem Druck bei 35°C durchgeführt.

Beispiel 1

1-(2,3,5-Tri-O-benzoyl-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carbonsäuremethylester und 1-(2,3,5-Tri-O-benzoyl-ß-D-ribof uranosyl)-1,2,4-triazol-5-carbonsäuremethylester (Silylierungemethode)

(Α) Herstellung von Methyl-N-(trimethylsilyl)-1 ^^-■'triazol^-carboxylat .

Eine Suspension von 14_f0 g (110 mMol) Methyl-1,2,4-triazol-3-carboxylat und 100 ml Hexamethyldisilazan wird unter Rühren solange am Rückfluss gehalten, bis die Freisetzung von Ammoniak aufhört (ca. 2 Stunden). Der Überschuss an HexamethyldisilaBan wird unter vermindertem Druck entfernt. Dabei erhält man 20,6 g (100 #) des N-Trimethylsilyl-Derivats von Methyl-1,2,4~triazol-3-carboxylat.

(B) Riboaylierung mit Halogenzucker

Eine lösung, die 20,6 g (110 mMol) Methyl-N-(trimethylsilyl)-1,2,4-triazol-3-carboxylat und 52,5 g (100 mMol) 2,3,5-Tri-O-benzoy.l-D-2iibofuranosylbromid in 300 ml eines wasserfreien-Acetonitrile enthält, wird bei 25°C während 3 Tagen gehalten. Das Lösungsmittel wird entfernt, worauf der Rückstand aus Äthanol umkristallisiert wird. Eine Umkristallisation des Materials aus Äthylacetat/ithanol sowie eine Säulenchromato-

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graphie der Filtrate an Kieselgel mit Chloroform liefert reines 1-(2,3,5-Tri-0-benzoyl-ß-D-ribofuranosyl)-1 ,2,4-triazol-3-earbonsäuremethylester in einer Menge von 25,1 g (44,0 fo) mit einem F. von 137 - 139°C.

Analyse: Berechnet für C₃₀H₂₅N₃O: C 63,04, H .4,41, N 7,35 Gefunden: C 62,91, H 4,17, N 7,10.

Die schneller wandernde Komponente in der Kieselgel-Kolonne wird aus Äthanol umkristallisiert, wobei man 13,2 g (23,1 $) 1-(2,3,5-Tri-O-benzoy1-ß-D-ribofuranosy1)-1,2,4-triazol-5-carbonsäuremethylester mit einem Έ. von 122 - 124°C erhält.

Analyse: Gefunden: C 63,20, H 4,35, N 7,12.

Beispiel 2

1 -( 2,3,5-Tri-o-benzoy1-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triaz'ol-3-carbonsäuremethy!ester (Schmelzmethode) -

Eine Mischung aus 12,7 g (10OmMoI) 1 ,2,4-!feiazol-3-car"boxylat und 55,4 g (110 mMol) 1-0-Acetyl-2,3,5-tri-0-benzoyl-ß-D-ribofuranose wird in einem Ölbad, das auf einer Temperatur von 160 - 165°C gehalten wird, erhitzt. Nachdem der Zucker geschmolzen ist, werden 400 mg bis-(p-Nitrophenyl)-phosphat unter Rühren zugesetzt, worauf die Mischung unter vermindertem Druck auf eine Temperatur von 160 - 165°C während einer Zeitspanne von 15 - 20 Minuten erhitzt wird. Eine TJmkristallisation des Rückstandes aus Äthylacetat/Äthanol liefert 42,5 g (74,5 %) eines Produktes mit einem F. von 137 - 139°C,

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Beispiel 3

1-(2,3,5-Tri-O-aeety1-ß-D-ribofuranosy1)-1,2,4-triazol-3-carbonsäuremethylester

Eine Mischung aus 12,7 g (0,10 Mol) Me thy1-1,2,4-triazol-3-carboxylat und 31,8 g (0,10 Mol) 1,2,3,5-Tetra-0-acety1-ß-D-ribof uranose wird in einem Ölbad, das auf einer Temperatur von 160 - 165⁰C gehalten wird, solange erhitzt, bis der Zucker geschmolzen ist. Dann werden 250 g bis-(p-Nitrophenyl)-phosphat zugesetzt, worauf das Erhitzen auf 160 - 165⁰O unter Rühren unter vermindertem Druck während einer Zeitspanne von 15-20 Minuten fortgesetzt wird. Der Rückstand wird in heissem Benzol gelöst. Die Lösung wird filtriert. Cyclohexan wird dem Piltrat zur Gewinnung von 30,0 g (77,8 i>) eines kristallinen Produktes mit einem P. von 107 - 109⁰C zugesetzt.

Analyse: Berechnet für C^H^N^Oq: C 46,75, H 4,97, N 10,91. Gefunden: 0 46,88, H 5,03, N 10,64.

Beispiel 4

1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1_t2,4-triazol-3-carbonsäuremethylester

Eine Lösung von 25,0 g (43,8 mMol) 1-(2,3,5-Tri-0-benzoylß-D-ribofuranosyl)-1 ,2,4-triazol-3-carbonsäuremethylester und 400 mg Natriummethylat in Methanol (200 ml) wird während einer Zeitspanne von 45 Minuten am Rückfluss gekocht. Die Lösung wird mit Bio-Rad AG50-X2(H) neutralisiert und filtriert, worauf das Piltrat zu einem Sirup konzentriert wird. Eine TJmkristallisation des Sirups aus Methanol/Äthylacetat liefert 8,0 g (70,5 f°) eines Produktes mit einem P. von 117 - 119°C.

Analyse: Berechnet für C₉H₁₅IT₃O₆: C 41,70, H 5,06, N 16,21. Gefunden: C 41,57, H 5,13, N 16,16.

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Beispiel 5 - , " ;_;

(A) 1 -(ß-D-Ribofuranosy 1)-1, 2♦ 4-triazol-3-carboxamid Methode 1 , . , _:

Eine lösung von 16,0 g (28,0 mMol) 1-(2,3,5-33ri-0-benzoyl-ß-D-rit)ofuranosyl)'-1,2,4-triazol-3-carbonsäurenietl:iylester. in ...... 300 ml eines "bei 0°0 mit wasserfreiem Ammoniak vorgesättigten Methanols wird in einem verschlossenen Druckkolben bei einer Temperatur von 25°C während einer Zeitspanne von 3 Tagen, ge-r halten. Das Lösungsmittel wird entfernt, ,worauf das Produkt ., aus Äthanol umkristallisiert wird. Dabei erhält man 6,7 g (98 fo) eines Materials mit einem F. von 174 - 176°C. Eine Umkristallisation des Produktes aus wässrigem Äthanol liefert eine zweite kristalline Form des Mukleosids mit einem E. von 166 - 168⁰C. .

Analyse: Berechnet für CgH₁₂N₄O₅: C 39,34, H 4,95, Π 22,94." Gefunden: C 39,08, H 5,10, Ή 22,67.

(B) 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carbpxamid Methode 2 · ' '

Eine Lösung von 10,0 g (26,0 mMol) 1-(2,3,5-Tri-O-acetyl-ß-D-ribofuranosyl)-1 ^^-triazol^-carbonsäuremethylester in 70 ml Methanol, das bei 0⁰C mit wasserfreiem Ammoniak gesättigt worden ist, wird in einem verschlossenen Druckkolben· bei 25°C während einer Zeitspanne von 18 Stünden gehalten. Das Produkt wird aus Äthanol umkristallisiert, wobei man 5,70 g (90,0 -fo) 1-(ß-Di-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid . erhält. ■

(C) 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1₁2,4-triazol-3-carboxamid Methode 3 . ...

Eine Mischung aus 705 mg (2,0 mMol) 3-Cyano-1-(2„3,5-tri-

? 0 9 B B 1 / I 2 Ί 5

0-acetyl-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol, 20 ml eines 28 ^igen wässrigen Ammoniaks und 3,0 ml eines 30 /Sigen Wasserstoffperoxyds wird bei 25⁰C während einer Zeitspanne von 6 Stunden gerührt. Eine weitere 3,0 ml-Portion eines 30 ^igen Wasserstoffperoxyds wird anschliessend zugesetzt, worauf das Rühren bei 25⁰C während einer Zeitspanne von 12 Stunden fortgesetzt wird. Der Überschuss an Wasserstoffperoxyd wird durch Zugabe von Platinschwarz zerstört. Die Lösung wird filtriert. Das Filtrat wird zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in Methanol gelöst, worauf 5,0 g Kieselgel der Lösung zugesetzt werden. Das Lösungsmittel wird entfernt. Die Kieselgelmischung wird auf eine Kieselgelsäule aufgebracht. Eine Eluierung mit Äthylacetat/Methanol (1:1) liefert 250 mg (51,2 #) 1-(ß-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamid.

Beispiel 6

1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid (Ammoniumsalz des 3',5'-cyclischen Phosphats)

Zu 5,7 g (15,9 mMol 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid-5^l-phosphat-Ammoniumsalz in Pyridin werden 4,65 g (15,9 mMol) 4-Morpholin-lT,ET^T-dicyclohexylcarboxamidin gegeben, worauf die erhaltene Lösung im Vakuum einige Male mit Pyridin bis zu einem wasserfreien Sirup eingedampft wird. Der Sirup wird in 1 1 Pyridin gelöst und tropfenweise (während einer Zeitspanne von 1 Stunde) durch einen Rückflusskühler in eine unter Rückfluss stehende wasserfreie Lösung von 16,4 g (79,6 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid in 3 1 Pyridin gegeben. Die Lösung wird während weiterer 2 Stunden am Rückfluss gehalten, worauf langsam 200 ml Wasser zugesetzt werden. Nach ca. 12 Stunden wird die Lösung im Vakuum eingedampft, worauf der Rückstand mit 200 ml Wasser und 50 ml Äther versetzt wird. Die Suspension wird kräftig gerührt und anschliessend filtriert. Die wässrige Schicht wird abgetrennt und mit 2 χ 100 ml Äther extrahiert. Die

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wässrige Schicht wird durch Dowex 50 (ΝΗΪ -Form, 100 - 200 mesh) geschickt. Das Eluant wird zu einem Sirup eingedampft. Oa. 100 ml Äthanol werden dem Sirup zugesetzt, worauf die erhaltene Mischung hei Zimmertemperatur während einer Zeitspanne von ca. 12 Stunden stehengelassen wird. Der gebildete rohe niederschlag wird filtriert, worauf das Piltrat bei Zimmertemperatur während einer Zeitspanne von 2 Wochen stehengelassen wird. Der erhaltene Niederschlag (1,2 g) wird in 5 ml warmem Wasser gelöst, worauf 40 ml Ithanol zugesetzt werden. Die erhaltenen Kristalle werden filtriert und 12 Stunden lang bei 78°C über Pp⁰R im Vakuum getrocknet. Dabei erhält man 1,05 g 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid (Ammoniumsalz des 3',5¹-cyclischen Phosphats): αψ° = 67° (0=1, H₂O); IR (KBr) 1688 cm"¹ r_$\ ^. 245⁰G (Zersetzung).

Analyse: Berechnet für C₈H₁₁N₄O₇P^TH₃: 0 29,73, H 4,36, N 21,66. Gefunden: C 29,86, H 4,67, N 21,47.

Beispiel 7

1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid-5^l phosphat-Ammoniumsalz

Eine Lösung von 259 mg (1,00 mMol) 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-. triazol-3-carbönsäuremethylester, 3,0 ml Trimethylphosphat und 0,20 ml Phosphorylchlorid wird bei O⁰C während einer Zeitspanne von 1,5 Stunden gerührt. Dann wird Eiswasser zugesetzt, worauf die Lösung mit wässrigem Natriumhydrogencarbonat neutralisiert wird. Die Lösung wird mit Chloroform extrahiert, worauf die wässrige Phase auf 0⁰C abgekühlt und mit Ammoniak gesättigt wird. Die Lösung wird bei 25⁰C während einer Zeitspanne von 16 Stunden gehalten und anschliessend filtriert. Das Piltrat wird zu einem kleinen Volumen eingeengt. Die Zugabe von Äthanol liefert einen Niederschlag,/ der in Wasser gelöst

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und durch eine Bio-Rad AG5O^M-X2 (KH₄)-Säule (20 ml) geschickt wird. Eine. Konzentration der Fraktionen, welche das Nukleοtid enthalten, liefert das Ammoniumsalz von 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid-5'-phosphat in einer Menge von 190 mg (53,0 #").

Analyse: Berechnet für OgH₁₆N₅OgP₁H₂O: C 26,74, H 5,05 N 19,50.
Gefunden: C 26,78, H 5,23, N 19,68.

Beispiel 8

1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1.2.4-triazol-3-thiocarboxamid

Eine Mischung aus 8,0 g (22,7 mMol) 3-Oyano-1-(2,3,5-tri-0-acetyl-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol, 14,0 ml Triäthylamin und 200 ml Äthanol wird bei 25°C gerührt, wobei Schwefelwasserstoffgas in die lösung während einer Zeitspanne von 2 Stunden eingeleitet wird. Das lösungsmittel wird entfernt, worauf der Rückstand mit einer Lösung von 600 g Natriummethylat in 150 ml Methanol während einer Zeitspanne von 3 Stunden bei 25⁰C behandelt wird. Nachdem die Lösung mit Bio-Rad AG 5OW-X2(£[) neutralisiert worden ist, wird sie filtriert, Das Lösungsmittel wird entfernt. Eine TJmkristallisation des Produktes aus wässrigem Äthanol liefert 4,5 g (76,1 $) des Thiocarboxamids mit einem F. von 173 - 175⁰C.

Analyse: Berechnet für CgH₁₂N-O₄S: C 36,92, H 4,65. N 21,53, S 12,32.
Gefunden: C 37,12, H 4,90, N 21,26, S 12,02

Beispiel 9

3-Cyano-1-(2,3,5-tri-O-acety1-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol

Eine Mischung aus 9,41 g (0,10 Mol) 3-Cyano-1,2,4-triazol

209851 /1235

2220-248

und 31,8 g (0,10 Mol) 1,2,3,5-Tetra--0-acetyi-ß-D-ribofuranöse wird in einem auf einer Temperatur von 15O⁰O gehaltenen
Ölbad erhitzt. Dann werden 100 mg bis-(p-Mtropheny !phosphat zugesetzt, wobei das Rühren und Erhitzen auf 15O⁰C unter ver mindertem Druck während einer Zeitspanne von 15 Minuten fort gesetzt wird. Der Rückstand wird, in Chloroform gelöst. Die
Lösung wird filtriert. Das Lösungsmittel wird entfernt. Eine Umkristallisation des Rückstandes aus Ä'ther liefert 28,2 g
(80 fo) eines Produktes mit einem F. von 96 - 97^OC

Analyseί Berechnet für C₁-H₁gU.0„; C 47,73, H 4,58, N 15,90. Gefunden: C 47,79, H 4,63, N 1-5,95.

Beispiel 10

1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2 j^-triazoi^-carboamidin-Hydrochlorid .. _i .

Eine Mischung aus 7,04 g (20,0 mMol) 3-Cyano-1-(2,3,5-tri-0-aeetylß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol, 1*07 g (20,0 mMol)
Ammoniumchlorid und 150 ml eines wasserfreien Ammoniaks wird in eine Bombe bei 85⁰C während einer Zeitspanne von 18 Stunden erhitzt. Hach der Entfernung des Ammoniaküberschusses
wird der Rückstand aus Acetonitril/Ä'thanol umkristallisiert. Dabei erhält man 5,30 g (95 #) eines Produktes mit einem F. von 177 - 179°C (Zersetzung).

Analyse: Berechnet für C₈H₁₄ClH₅O₄: C 34,35, H 5,05, Cl 12,68,

s 25,04. ■

Gefunden: C 34,39, H 5,06, Cl 12,73, N 24,99.

Beispiel 11

1-(i3-D-Ribof uranosyl)-1 . 2,4-triazol^3-carbo:xamidoxin

Eine Lösung von 3,0 g (8,52 mMol) 3-Cyano-1-(2_i3,5-tri-

098S1/123S

0-acetyl-ß-3)-rilDofuranosyl)-1,2,4-triazol und eines Überschusses von Hydroxylamin in 100 ml Ithanol wird unter-Rühren während einer Zeitspanne von 2 Stunden am Rückfluss erhitzt. Das Lösungsmittel wird entfernt. Das Produkt wird aus wässrigem Äthanol umkristallisiert. Dabei erhält man 2,0 g (90,7 #) des Carboxamidoxins mit einem Ϊ. von 212-214°C (Zersetzung).

Analyse: Berechnet für CgH₁₅H₅O₅: 0 37,07, H 5,06, N 27,02. Gefunden: C 36,89, H 4,92, N 27,23.

Beispiel 12

1-(ß-D-Xylofuran osyl)-1«2.4-triazol-3-carboxami4

Eine Mischung aus 12,7 g (40,0 mMol) Tetra-O-acetyl-D-Xylofuranose, 5,08 g (40,0 mMol) Methy1-1,2,4-triazol-3-carboxylat und 50 mg bis-(p-ETitrophenyl)-phosphat wird unter vermindertem Druck während einer Zeitspanne von 20 Minuten in einem auf einer Temperatur von 160 - 165⁰C gehaltenen Ölbad erhitzt. Der Rückstand wird abgekühlt und in Chloroform gelöst. Das rohe Produkt wird durch Chromatographie an Zieselgel mit Chloroform/Aceton (20:1) gereinigt. Ein Teil (2,0 g) des gereinigten 1-(2,3,5-Tri-0-acetyl-ß-D-xylofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carbonsäuremethylesters wird während einer Zeitspanne von 16 Stunden bei 25°C mit Methanol, das mit Ammoniak gesättigt worden ist, behandelt. Das Lösungsmittel wird entfernt. Der Rückstand wird aus wässrigem Äthanol umkristallisiert. Dabei erhält man 0,70 g eines Produktes mit einem F. von 194 - 196,5°C.

Analyse: Berechnet für CgH₁₂N₄O₅: C 39,34, H 4,95, N 22,94. Gefunden: C 39,18, H 4,82, N 22,97.

0 9 8 51/12 3

Beispiel 13

1-(2,3,5-Tri-O-acetyl-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid '

Eine Lösung von 488 mg (2,00 mMol) 1 -(ß-D-Ribofuranosy])-1,2,4-triazol-3-carboxamid in 10,0 ml Pyridin, das 1,0 ml Essigsäureanhydrid enthält, wird während einer Zeitspanne von 22 Stunden auf einer Temperatur von 0 - 5°C gehalten. 1,0 ml Äthanol wird zugesetzt, worauf die Lösung bei Zimmertemperatur während einer Zeitspanne von 2 Stunden gerührt wird. Das Lösungsmittel wird entfernt, worauf Wasser dem Rückstand zugesetzt wird. Die Mischung wird mit Methylenchlorid (drei 20 ml-Portionen) extrahiert. Die organische Schicht wird mit wässrigem Natriumhydrogencarbonat und Wasser extrahiert. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet und filtriert und zu einem Sirup eingedampft, der auf eine Eieselgelsäule aufgebracht wird. Die Eluierung mit Chloroform/Methanol (19:1) liefert das reine Produkt in Form eines amorphen Feststoffs, der in einer Menge von 560 mg {75,6 $>) anfällt.

Analyse: Berechnet für C₁₄H₁₈N₄O₈: C 45,40, H 4,90, N 15,13. Gefunden: 0 45,36, H 4,66, N 14,90.

Wird 1-(2,3,5-Tri-O-acety1-ß-D-ribofuranosy1)-1,2,4-triazol-3-carboxamid oral 2 χ täglich während einer Zeitspanne von 9 Tagen in Dosierungen von 125 und 250 mg/kg/Tag an Mäuse verabreicht, die mit Influenza A₂ (Jap 305) infiziert worden sind, dann wird die Anzahl der überlebenden Tiere merklich erhöht, desgleichen die mittlere Überlebenödauer der behandelten Tiere im Vergleich zu Vergleichstieren.

209851/1230

22202Λ6

Beispiel 14

1 -(ß-D-Arabinofuranosy 1) -1.2.4-triazol-3-oarbo3camid

Eine Lösung, die 4,12 g (22,0 mMol) Methyl-N-(trimethylsilyl)-1,2,4-triazol-3-carboxylat und 8,78 g (20,0 mMol) 2,3,5-Tri-O-benzyl-D-arabinofuranosylchlorid in 100 ml wasserfreiem Methylenchlorid enthält, wi£d während einer Zeitspanne von 48 Stunden bei 25⁰C gehalten. Die lösung wird zur Trockne eingedampft, der Rückstand wird in Methylenchlorid gelöst, worauf die Lösung mit wässrigem Natriumhydrogencarbonat und Wasser gewaschen wird. Die Methylenchloridlösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet und filtriert, worauf das Piltrat zu einem Sirup konzentriert wird, der auf eine Kieselgelsäule, gefüllt mit Benzol, aufgebracht wird. Die Eluierung der Säule mit Benzol/Ither (7:3) liefert 1,9 g eines sirupartigen Produktes, das mit 50 ml Methanol behandelt wird, das bei 0⁰C mit wasserfreiem Ammoniak gesättigt worden ist. Die Behandlung erfolgt in einem Druckkolben bei 25⁰C während einer Zeitspanne von 48 Stunden. Das Lösungsmittel wird entfernt. Das Produkt wird aus Methylenchlorid/Cyclohexan umkristallisiert. Dabei erhält man 1,3 g (12,6 $>) 1-(2,3,5-Tri-0-benzyl-ß-D-arabinofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid mit einem F. von 100 - 102⁰C.

Analyse: Berechnet für C₂gH~₀N, 0,-: C 67,69, H 5,88, N 10,89. Gefunden: C 67,82, H 5,70, N 10,94.

Eine Suspension aus Palladiumruß und 20 ml Methanol wird in der Weise hergestellt, dass 300 mg Palladiumchlorid mit Wasserstoff reduziert werden. Der Suspension wird eine Lösung von 600 mg 1-(2,3,5-Tri-0-benzyl-ß-D-arabinofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxämid in 25 ml Methanol zugesetzt. Die Mischung wird in einer Hydrierungsvorrichtung unter einem Druck von 1,76 kg/cm (25 psi) während einer Zeitspanne von 2 Stunden

209851 /1235

bei 2O°C geschüttelt. Der Katalysator wird durch. Filtration entfernt. Die Lösung wird durch eine mit Amberlite IR45(OH) (15 ml) gefüllte Säule geschickt. Das lösungsmittel wird entfernt, worauf der Rückstand aus Äthanol umkristallisiert wird. Dabei erhält man 250 mg (88,5 $) eines Produktes mit einem F.- von 189 - 191°C.

Analyse: Berechnet für CgH₁₂IT₄O₅: 0 39,34, H 4,95, N 22,94. Gefunden: 0 39,25, H 4,86, N 23,09.

Beispiel 15

(A) 1-0-Acetyl~2-deoxy-3.5-di--0-p-toluoyl-»D-ribofuranose

Eine Mischung aus 15,6 g (40,0 mMol) 2-Deoxy-3,5-di-0-p-toluoyl-D-ribofuranosylchlorid, 12,7 g (40,0 mMol) Quecksilber(II)-acetat und 200 ml Tetrahydrofuran wird bei 25°0 während einer Zeitspanne von 10 Stunden gerührt. Das Lösungsmittel wird entfernt, worauf Chloroform dem Rückstand zugesetzt wird. Die Mischung wird mit einer 30 folgen wässrigen Kalium^ odidlösung (vier 60 ml-Portionen) und Wasser extrahiert. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zu einem Sirup (16,0 g, 97,0 fi) konzentriert. Eine Umkristallisation eines Teils des Produktes aus Gyclohexan/Benzol liefert ein reines Material mit einem F. von 88 - 91⁰C.

Analyse: Berechnet für C₂₅H₂₄O₇: C 66,98, H 5,87. Gefunden: C 67,23, H 5,97.

(B) 1-(2-Deoxy-3,5-di-0-p-toluoyl-a-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carbonsäuremethylester und 1-(2-Deoxy-3,5-di-0-ptoluoyl-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carbonsäuremethylester , , .

Eine Mischung aus 4,54 g (11,0 mMol) 1-0-Acetyl-2-deoxy-3,5-di-0-

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p-toluoyl-D-ribofuranose, 1,27 g (10,0 mMol) Methyl-1,2,4-triazol-3-carboxylat und 10 mg bis-(p-Nitrophenyl)-phosphat wird unter Rühren sowie unter vermindertem Druck während einer Zeitspanne von 10-15 Minuten in einem auf einer Temperatur von 150°0 gehaltenen Ölbad erhitzt. Der Rückstand wird in Methylenchlorid gelöst, worauf die Lösung filtriert und anschliessend mit einer wässrigen lösung von Natriumhydrogencarbonat sowie mit Wasser gewaschen wird. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zu einem Sirup eingedampft. Eine Säulenchromatographie dieser anomeren Mischung an Kieselgel mit Chloroform liefert das a-Anomere, das aus Cyclohexan/Methylenchlorid umkristallisiert wird. Man erhält 780 mg des reinen Produktes mit einem P. von 94 - 95°C.

Analyse: Berechnet für O₂₅H₂₅IT₅O₇: 0 62,62, H 5_f26, N 8,76. Gefunden: C 62,44, H 5,16, N 8,64.

Die aufeinanderfolgenden Fraktionen aus der Kieselgelsäule enthalten eine Mischung der α- und ß-Anomeren. Diese Fraktionen werden vereinigt. Die Mischung wird durch Säulenchromatographie an Kieselgel mit Chloroform weiter gereinigt. Dabei erhält man das ß-Anomere als Sirup.

(0) 1-(2-Deo3c.y-ß-D-ribofuranos.vl)-1,2.4-triazol-3-oarboxamid

Eine Lösung von 650 mg (1,35 mMol) 1-(2-Deoxy-3,5-di-0-ptoluoyl-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carbonsäuremethylester in 20 ml Methanol, das bei O⁰C mit wasserfreiem Ammoniak gesättigt worden ist, wird bei 25⁰C während einer Zeitspanne von 3 Tagen in einer verschlossenen Druckflasche gehalten. Das Lösungsmittel wird entfernt, worauf der Rückstand auf eine Kieselgelsäule aufgebracht wird. Eine Eluierurig mit Äthylacetat/Methanol (9:1) liefert 1-(2-Deoxy-ß-D-ribofuranosyl)-1,2,4-

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triazol-3-carbo:xamid in einer Menge von 250 mg (80,8 $) in Form eines amorphen Feststoffes.

Analyse: Berechnet für C₈H₃₂N₄O₄: 0 42,10, H 5,30, N 24,55. Gefunden: C 41,86, H 5,12, N 24,49.

(D) 1-(2-Deoxy-a-D-ribofuranoByl)-1.2,4-triazol-3-oarboxamia

Eine Lösung von 780 mg (1,63 mMol) 1-(2-Deoxy-3,5-di-0-ptoluoyl-a-D-rihofuranosyl)-1,2,4-triazol-5-carbonsäuremethylester in 25 ml Methanol, das hei O⁰C mit wasserfreiem Ammoniak gesättigt worden ist, wird in einem verschlossenen Druckkolben hei 25°0 während einer Zeitspanne von 3 Tagen gehalten. Das !lösungsmittel wird entfernt, worauf das rohe !Produkt auf eine Kieselgelsäule aufgebracht wird. Eine Eluierung mit Ithylacetat/Methanol (9:1) liefert 1-(2-Deo3cy-a-D-ribofuranosyl)-1,2,4 triazol-3-carboxamid in einer Menge von 350 mg (94,4 $) in Form eines amorphen Feststoffes.

Analyse: Berechnet für C₈H₁₂F₄O.: C 42,10, H 5,30, N 24,55.

Gefunden: C 41,88, H 5,48, N 24,29. ^

Wird die gleiche Methode zur Umwandlung der getrennten Methylesteranomeren in ihre entsprechenden Carbonamide angewendet, dann kann die anomere Mischung der Methylester, welche gemäss Teil (B) gebildet wird, mit Ammoniak umgesetzt werden, wobei eine Mischung aus den α- und ß-Anomeren des Carbonamide erhalten

Beispiel 16

Die erfindungsgemässen Antivirusmittel werden auf ihre Aktivität gegenüber kleinen und grossezi Yiren sowohl von DNA- als ' auch von RNA-Typen nach der Virusbewertungsmethode (VR-Methode)

209 851/1235

von Sidwell et al (Appl. Microbiol. 22, 797 (1971)) getestet. V.R. >1,0 bedeutet eine definitive Antivirusaktivität, V.R. von 0,5 -" 0,9 bedeutet eine massige Antivirusaktivität und V.R. < 0,5 gibt an, dass nur eine geringfügige oder keine merkliche Antivirusaktivität vorhanden ist. Die nachfolgend zusammengefassten Ergebnisse, denen zu Vergleichszwecken Werte gegenübergestellt werden, die unter Verwendung von bekannten Antivirusmitteln erhalten worden sind, werden durch Testen auf Mikrotest II (Fälcon Piastics)-Kunststoffplatten mit einer Monoschicht von KB- oder RK13-Zellen erhalten.

Von den zur Durchführung des Tests eingesetzten Viren erzeugt der Herpes-Typ 1 labialis (kalte Entzündungen), Herpes-Keratitis und Herpes-Eneephalitis. Der Herpes-Typ 2 erzeugt Herpes genitalis, eine verbreitete und übertragbare Form der Geschlechtskrankheit. Myxoma verursacht den Tod von Hauskaninchen und wilden Kaninchen, dem eine Erkrankung der Atemwege und starke Schwellungen vorangehen. Pseudorabies erzeugt eine infektiöse bulbäre Paralyse, die auch bei Vieh, Schafen, Schweinen, Hunden und Nerzen als "mad itch"-Krankheit bekannt ist. Der Parainfluenza-ViruB erzeugt eine schwache Erkrankung der oberen Atemwege von Menschen, insbesondere kleinen Kindern, und wird mit der Konjunktivitis von Vieh in Verbindung gebracht. Vaccinia ist eine avirulente Form des Pockenvirus, der zur Pockenimpfung verwendet wird. Seine Verwendung hat gelegentlich unerwünschte Nebenwirkungen zur Folge. Der Rhino-Typ 13 ist einer der vielen Viren, auf welche die üblichen Erkältungen zurückzuführen sind.

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	Verbindung	Typ 1 Herpes VR	Vergleichende	Myxoma VR	Tabelle I	Vaccinia VR	Adeno VR	Para- influenza VR	Typ 13 Rhino VR
	1-(ß-D-Ribofurano- syl)-1,2,4-triazol- 3-carboxamid Ammoniumsalz des 5'- phosphaiB von 1-(ß- D-Ribofuranosy1)- 1,2,4-triazol-3- carboxamid	1,5, 1,0 1,2 0,7 0,8	Typ 2 Herpes VR	1,7		1,0,0,9 0,5	O₁ 0, O₁	1,0,1,0 0,8 0,5	0,5 0,3
Nr.			1,3 0,9	Antivirusaktivität		.5, ,5 ,0
1 2			Pseudo- rabies VR
	0,0,0,0

55 3 1-(ß-D-Ribofurano-

™ sy1)-1,2-4-triazol-

_> 3-ta±ocarboxamid 0,5 - 0,2 0,1 0,3 0,0 0,0,0,0 0,1,0,2

^ 4 1-(S-D-Xy lofurano«-

^ syl)-1,2,4-triazol- 0,7,

to 3-carboxamid 1,2 - 0,95 0,8 0,7 0,1 0,7,0,8 0,4,0,5

<" 5 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamidin-0,8
Hydrochlorid · 1,0 - 1,1 0,6 - 0,1 0,7,0,8 0,6

6 1 - (ß£D-Ribofuran osyl)-1,2,4-triazol- 0,65

3-carboxamid, Ammo- 0,8 - 0,7 .0,5 - · 0 0 0,6,0,5 niumsalz des 3',5^fcyclischen Phosphats

5-IDU - 1,4,1,0

1,6 1,8 0,8 0,6 1,3 0,2 0,0 0,0 hO

Ara-C 1,2,1,1 0,8 0,6 0,4 0,8 0,2 0,1 0,1

Ara-A 0,7- .0,0

1,1 0,6 0,8,0,8 0,6,1,1 0,7,0,9 0,0, , 0,1 0,1

0,2	0,1	0,3
0,95	0,8	0,7
1,1	0,6	—■
0,7	- 0,5	—
0,8	0,6	1,3
0,6	0,4	0,8

Die vorstehend angegebene Verbindung 1 wurde in Kaninehen- und Hamstern getestet. Bei nicht-toxischen Dosen wird eine merkliche Anti-HSV-Keratitisaktivität festgestellt. Die Verbindung inhibiert merklich die Entwicklung von HSV-induzierten Veränderungen von Mäuseschwänzen, wenn eine lokale Verabreichung an die Infektionsstelle erfolgt. Die Verbindung wurdi auch in Mäusen gegenüber Influenza A2, Influenza B und Parainfluenza 1 getestet, wobei eine sehr hohe Antivirusaktivität beobachtet worden ist. Diese Verbindung zeigt, wie aus der Tabelle I zu ersehen ist, ein Spektrum der Antivirusaktivität, das wesentlich breiter ist als das Spektrum von IDU, Ara-A oder Ara-C. Zusätzlich zu der vorstehend gezeigten Antivirusaktivität inhibiert 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-earboxamid das Wachstum der Bakterien Pseudomonas aeroginosa und der Fungi Candida albicans und Cryptococcus diffluents.

Alle Verbindungen 1-6 besitzen eine niedrige Cytotoxizität und sind in wässrigen Medien löslich.

1-ß-D-Ribofuranosyl-i,2,4-triazol-3-carboxamid besitzt ferner eine interessante Antitumoraktivität. An drei Gruppen von C Blk/6-Mäusen (6 Tiere pro Gruppe) wird subkutan Adenocarcinoma-755 verabreicht. Zwei Gruppen erhalten die Verbindung (100 mg/kg χ 7 Tage und 200 mg/kg χ 7, Tage) intrapertoneal, während die dritte Gruppe, die als Vergleichsgruppe dient, nur eine .Salzlösung erhält. Am 16. Tag zeigen die behandelten Tiere eine 18 #ige bzw. 63 $ige Inhibierung des Tumors im Vergleich zu den Vergleichstieren. Bei der Durchführung eines ähnlichen Versuches werden DBA/2-Mäuse mit L-1210 Leukämiezellen (1 χ 10^ Zellen pro Tier) geimpft. Man stellt eine 31 #ige Zunahme der mittleren Überlebensdauer gegenüber Vergleichstieren fest, wenn eine Behandlung mit der Verbindung (250 mg/kg χ 7 Tage) durchgeführt wird. Erfolgt eine Verabreichung in einer Dosierung von 250 mg/kg χ 14 Tage, dann hat die Verbindung 80 # überlebende Tiere (Mäuse)

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zur Folge, denen intraperitoneal Ehrlich-!-Ascitescarcinom eingepflanzt worden ist. Ferner wird eine in vivo-Aktivität gegenülDer Novikoff-Hepatoma festgestellt.

Ferner wurde festgestellt, dass 1,2,4-Triazol-3-carboxamid selbst eine merkliche Antivirusaktivität besitzt. Erfolgt ein Testen nach der vorstehend beschriebenen Methode, dann werden folgende VR-Werte erhalten: Herpes Typ 1 - 0,6, 1,0; Taccinia 0,8 und Parainfluenza 0,6, 0,6. Wird diese Verbindung gegenüber Adeno- und Rhino-Typ 13-Viren getestet, dann betragen die entsprechenden VR-Werte 0,0 bzw. 0,3.

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Claims

- 28 Patentansprüche

O worin G für einen Pentofuranosylrest steht und R^ (a) HgNCT^ ,

(b) H₂NQ^^S, (c) Η₂Νσ^^ΝΗ, (d) physiologisch vertragliche Säureadditionssalze von (c), (e) HONHO^ , (f) NsC oder (g) CH₃OC^⁰ bedeutet.
2. 5'-Phosphate und 3*,5'-cyclische Phosphate einer Verbindung gemäss Anspruch 1.
3. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass G ein Pentofuranosylrest ist, dessen 2'-Sauerstoffatom in trans-Stellung zu dem AgIykon steht.
4. Verbindung nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass G ein Pentofuranosylrest ist, dessen 2'-Sauerstoff in trans-Stellung zu dem AgIykon steht.
5. Verbindung der Formel

(D

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22202Aß

worin einer der Substituenten R₂ und R, für Hydroxyl steht, während der andere Wasserstoff bedeutet, wobei R₁ (a) H₂ITO^⁰, (b) H₂NC^⁸, (c) E₂NG^¹¹, (d) physiologisch verträgliche Säureadditionssalze von (c), (e) HONHO ,

(f) N^C-, oder (g) CH₃OC^⁰ bedeutet, (II) ein 5'-Phosphat einer Verbindung der Formel (I) .und (III) ein 5',5^feyclisches Phosphat einer Verbindung (I).
6. Verbindung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass R₂ für Wasserstoff steht.
7. Verbindung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass anderweitig freie Glykosylhydroxyle acylblockiert sind,
8. Verbindung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass R₁ für.(a), (T)) .Cc) oder (d) steht. .
9. Verbindung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass R₁ für (a), (b) oder (d) steht. "
10. Ammonium- oder Alkalisalz eines 5'-Phosphats(ti) gemäss Anspruch 9.
11. Verbindung nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass R, für Wasserstoff steht.
12. Verbindung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass anderweitig freie Glykosylhydroxyle acylblockiert sind.
13. Verbindung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass R₁ für (a), (b), (c) oder (d) steht.

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222Ü2A6
14. Verbindung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass R₁ für (a), (b) oder (d) steht. '"
15. Ammonium- oder Alkalisalz eines 5'-Phosphats(II) gemäss Anspruch 4.
16. Verbindung (I) gemäss Anspruch 6.
17.'Verbindung (II) gemäss Anspruch 6.
18. Verbindung (III) gemäss Anspruch 6.
19. Verbindung (I) gemäss Anspruch 11.
20. Verbindung (II) gemäss Anspruch 11.
21. Verbindung (III) gemäss Anspruch 11.
22. Ammoniumsalz des 5'-Phosphats von 1-(ß-D-Ribofuranosyl-1,2,4-triazol-3-carboxamid.
23. 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid.
24. 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-thiocarboxamid.
25. 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamidin.
26. 1-(2,3,5-Tri-O-acetyl-ß-D-ribofuranosy1)-1,2,4-triazol-3-carboxamid.
27. 1-(ß-D-Ribofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamidin-Hydrochlorid.
28. 1-(ß-D-Xylofuranosyl)-1,2,4-triazol-3-carboxamid.

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29. i-Cß-B-RlbofuranosylO-i^^-triazol^-carhoxamid (3¹,5'-cyclisches Phosphat).
30. Anmoniumsalz der Verbindung gemäss Anspruch 29.

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