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DE2130559C3 - Diagnostisches Mittel zum Nach weis von Urobihnogen - Google Patents

Diagnostisches Mittel zum Nach weis von Urobihnogen

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Publication number
DE2130559C3
DE2130559C3 DE2130559A DE2130559A DE2130559C3 DE 2130559 C3 DE2130559 C3 DE 2130559C3 DE 2130559 A DE2130559 A DE 2130559A DE 2130559 A DE2130559 A DE 2130559A DE 2130559 C3 DE2130559 C3 DE 2130559C3
Authority
DE
Germany
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acid
urobilinogen
urine
diazonium
detection
Prior art date
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Application number
DE2130559A
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English (en)
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DE2130559A1 (de
DE2130559B2 (de
Inventor
Dieter Dr.Rer.Nat. 6806 Viernheim Berger
Hans-Georg Dr.Rer. Nat. Rey
Peter Dr.Rer.Nat. Rieckmann
Walter Dr.Rer.Nat. 6800 Mannheim Rittersdorf
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Roche Diagnostics GmbH
Original Assignee
Boehringer Mannheim GmbH
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Publication date
Application filed by Boehringer Mannheim GmbH filed Critical Boehringer Mannheim GmbH
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Priority to DD162894A priority patent/DD98763A5/xx
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Priority to FI1685/72A priority patent/FI53508C/fi
Priority to CH883772A priority patent/CH564774A5/xx
Priority to GB2781372A priority patent/GB1343247A/en
Priority to US00262923A priority patent/US3853466A/en
Priority to ES403875A priority patent/ES403875A1/es
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Priority to AT841073A priority patent/AT322116B/de
Priority to SE7207961A priority patent/SE394328B/xx
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    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/72—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood pigments, e.g. haemoglobin, bilirubin or other porphyrins; involving occult blood
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Description

R.-
— N NX
in welcher X ein stabilisierendes Anion und R1 und R2 mehratomige Elektronendonatorgruppen mit mindestens einem mesomeriefähigen Elektronenpaar, wobei einer der Reste R1 und R2 auch Wasserstoff, Halogen oder eine niedere Alkylgruppe sein kann, darstellen, und die Reste R3 und R4 Wasserstoff oder eine die Diazokupplung nit Urobilinogen sterisch nicht hindernde Gruppe darstellen, wobei die Summe der Hammettsehen Sigmavverte aller Substituenten R1, R2, R3 und R4 - 0,4 nicht überschreiten darf, als Indikatorsubstanzen für den Nachweis von Urobilinogen. gegebenenfalls zusammen mit Bilirubin.
3. Verwendung von Verbindungen der allgemeinen Formel I gemäß Anspruch 1, in welchen R1 eine Hydroxy-, Alkylmercapto- oder niedere Alkoxygruppe und R2 eine Hydroxy-, Alkoxy-, Phenoxy-, Alkylmercapto-, Phenylmercapto-, Phenyl-alkyl-amino-. gegebenenfalls substituierte Phenylamino oder Acylaminogruppe, wobei einer der Reste R1 und R2 auch Wasserstoff, Halogen oder eine Methylgruppe sein kann, und R3 und R4 Wasserstoff, ein Halogenatom, eine Hydroxy-, Alkoxy-, Phenoxy-, Alkylmercapto-, Phenylmercapto-, Phenyl-alkylamino-, gegebenenfalls substituierte Phenylamino-, Acylamino-, Alkyl- und Carboxylgruppe und X" ein Halogenid oder das Anion einer Sauerstoffsäure oder einer durch Halogenwasserstoff koordinativ gesättigten Lewissäure darstellt.
4. Verwendung von Verbindungen gemäß Anspruch 3, in welcher X" einen Chlorid-, Sulfat-, Tetrafluoroborat-, Tctrachlorozinkat-, Hexachloroantimonat-, Arylsulfonat- oder Carbonsäurerest bedeutet.
5. Reagenz zum Nachweis von Urobilinogen, gegebenenfalls zusammen mit Bilirubin, gekennzeichnet durch einen Gehalt an mindestens einem Diazoniumsalz gemäß Anspruch ] und einer festen organischen oder anorganischen Säure.
6. Mittel gemäß Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß es als feste Säure Meta^hosphorsäure enthält.
7. Mittel gemäß Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß es zusätzlich ein Netzmittel enthält.
S. Mittel gemäß Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, daß es als Diazoniumsalz 4-Methoxy-benzoldiazuniumsalz enthält.
9. Mittel gemäß Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß die Diazoniumsalze auf einem saugfahigen Träger imprägniert sind.
Die vorliegende Erfindung betrifft Indikatorsul·- stanzen zur- Nachweis von Urobilinogen in KörperilüsMgkeite .orzugsweise in Urin.
Es ist ; .-.annt. daß man Urobilr.jgen-Korper (Biianc), Indol. Sulfonamide, Porphobilinogen. Harnindikan und 5-Hydroxy-indolessigsäure mit einer Lösung von p-Dimethylamino-benzaldehyd in SaIzsäure nachweisen kann. Dieser Nachweis ist in der Literatur als Ehrlichs Reaktion bekannt; er hat insbesondere in der medizinischen Diagnostik als Nachweis von »vermehrten Urobilinogenen« im Urin erhebliche Bedeutung gewonnen. Obwohl die Probe nicht sehr spezifisch ist, gilt sie als Standard-Methode für die Diagnose von Leber- und Gallenerkrankungen. Da Testpapiere in der klinisch-chemischen Diagnostik immer mehr an Bedeutung gewinnen, sind inzwischen auch Testpapiere zum Nachweis von Urobilinogen auf der Basis der Ehrlichschen Reaktion entwickelt worden. Diesen Testpapieren haften zwei wesentliche Mangel an:
1. Die Farbreaktion entwickelt sich so langsam, daß man vor der Ablesung mindestens 1 Minute warten muß.
2. Die Testpapiere besitzen naturgemäß die Unspezifität der Ehrlichschen Probe, so daß falsch positive Ergebnisse nicht ausgeschlossen werden können.
Es gibt zwar schon seit langer Zeit Hinweise, daC Urobilinogen mit diazotierter Sulfanilsäure zu einem gelben Farbstoff kuppelt. Diese Reaktion wurde 1884 von Ehrlich entdeckt und als sogenannte »gelbe Diazoreaktion« beschrieben. Die Reaktion wurde zwar in der Folgezeit noch mehrere Male untersucht, jedoch konnte bis heute nicht sichergestellt werden, ob es sich zweifelsfrei um eine Diazokupplung mit Urobilinogen handelt oder ob etwa auch andere Stoffe für die Bildung des gelben Farbstoffes verantwortlich sind (vgl. T. K.. W i t h, Biologie der Gallenfarbstoffe, Georg Thieme-Verlag, Stuttgart, 1960, S. 32 und 211), Da es sich hier mehr um ein Kuriosum als um ein brauchbares Mittel für die klinisch-chemische Diapnostik handelt, ist die gelbe Diazoreaktion praktisch bedeutungslos und wird in den einschlägigen Lehrbüchern kaum erwähnt.
Es wurde nun überraschenderweise gefunden, daC stabile Benzoldiazoniumsalze, deren gegebenenfalls mehrfach substituierter Phenylrest in ortho- oder paraStellung mindestens eine mehratomige Elektronendonatorgruppe mit wenigstens einem mesomeriefähigen Elektronenpaar enthält, wobei die Summe dei Hammeltschen Sigmawerte aller Substituenten den Wert |-0,4 nicht überschreiten darf, für den Nachweis von Urobilinogen hervorragend brauchbar sind, Demgemäß besteht die Erfindung in der Verwendung der genannten Benzoldiazoniumsalze als Indikator-
substanzen für den Nachweis -.on L'robilino«en, Begebene nf all:, zusammen mit Bilirubin.
Elektronendonatoi gruppen sind erfindunsseemäf' Cruppen. die Sauerstoff, Schwefel oder Stickstoff in direkter Bindung mit de··' P'renvlresi enthalten. Sauerstoffhaltige Gruppen sind hci-.pieUuei.se H\- COVy-. Alkoxy- oder Arvloxvgnippen. AU schwefe'lh duge Gruppen kommen an -ich nur Alk\lmercap:oc.ier Ar>!mercaptogruppen in Frage, da freie Mercapt-gruppen wegen ihrer O\\daii.>i>,emp!indlichkeii in c : Rege! nicht brauchbar sind. AU stickstoffhaltige ( vippcn sind Acylamino-. .\P. L;n,ino- oder Aryla' >!aminogruppen bra...hbar. "während L:riM;ostit'uii -:e Aminogruppen und Alk>!aminogruppen auf (.-und ihrer Basizität unter den Bed^igunaen der i- f Mkiion meist protonien uerden und dann kein r ■ -omeriefähiges Elektronenpaar mehr besitzen. Bei r.:r Auswahl der Substituenten muß ferner darauf _:■ K-htet werden, daß diese nicht mit der Diazogruppe .· gieren. Dies trifft insbesondere für o-Acylamino-. ! o-Arylaminogruppen zu.
!-,esonders \orteilhaft lassen sich Verbindungen der ■ !gemeinen Formel I verwenden.
R,—
P-,
— N N ■ X
;:' welcher X ein stabiiisierr ides Anion und R1 ;.nü R2 mehratomige Elektronendonatorgruppen mit mindestens einem mesomeriefähigen Elektronenpaar. wobei einer der Reste Rj und R2 auch Wasserstoff, Halogen oder eine niedere Alkylgruppe sein kann, <: ^stellen, und die Reste R3 und^R4 Wasserstoff oder tine die Diazokupplung mit Urobilinogen sterisch nicht hindernde Gruppe darstellen, wobei die Summe der Hammettschen Sigmawerte aller Substituenten R1, R2, R3 und R4 -j-0,4 nicht überschreiten darf.
Die Verbindungen [ sind insbesondere für die Verwendung auf saugfähigen Trägern brauchbar.
Die erfindungsgemäßen Benzoldiazoniumsalze reagieren mit Urobilinogen nahezu momentan und ergeben sehr spezifische rote bis blaue Farbstoffe, welche sich zum Nachweis auch sehr geringer Konzentrationen besonders gut eignen. Darüber hinaus besitzen die erfindungsgemäßen Verbindungen den großen Vorteil, daß die Farbreaktion von Harnstoff nicht gestört wird. Die bisher bekannten Testpapiere werden von dem im Harn anwesenden Harnstoff je nach Konzentration gelb gefärbt, was den Nachweis geringer Urobilinogen-Mengen erheblich erschweren kann. Darüber hinaus wird die erfindungsgemäße Farbreaktion gerade durch die Substanzen, die häufig im Harn vorkommen und die Ehrliehsehe Probe bekannterweise am meisten stören, nicht beeinflußt; zu diesen Störsubstanzen gehören insbesondere die aromatischen Amine, welche als Arzneimittel (Sulfon- So amide, Sulfonylharnstoffe usw.) vielfach mit dem Urin ausgeschieden werden. Die Anwesenheit dieser aromatischen Amine im Harn führte bisher zu gelben bzw. orangen Farbreaktionen, welche die durch Urobilinogen hervorgerufene Färbung sowohl überdecken als auch vortäuschen können.
Für den Nachweis des zur Diagnostizierung von Leber- und Gallenerkrankungen ebenfalls wichtigen Bilirubins uerden zwar Diazoniumsalze u'- B. Diazosulfanilsäure. p-Nitrobenzoi-diazoniumsalz oder 2,4-Dichlorbenzol-diazoniumsalz) bereits seit längerer Zeit verwendet. Diese ergeben jedoch erwartungsgemäß mit Urobilinngen keine brauchbare Farbreaktion.
Im Gegensat/ dazu erlauben es die erf ndungsgemäßen Verbindungen. Urobilinogen neben Bilirubin .spezifisch nachzuweisen. In einigen Fällen reagiert zwar auch Bilirubin mit den erfindungsgemäßen Verbindungen, jedoch erfolgt die Reaktion erst, nachdem die Farbreaktion n.it Urobilinogen schon weitgehend entwickelt ist. und unterscheidet sich farblich so stark, daß es überraschend sogar möglich ist, beide Gallenfarbstoffe mit einem Reagenz nebeneinander zu bestimmen, und die Mengenverhältnisse an Hand der entwickelten Mischfarbe abzuschätzen. So zeigt etwa eine Rotfärbung die Anwesenheit von Urobilinogen und eine später entwickelte Blaufärbung das Vorhandensein von Bilirubin an. Bei gleichzeitiger Anwesenheit beider Gallenfarbstoffe färbt sich der Teststreifen zunächst rot und später zunehmend violett. In Ausnahmefällen entwickeln sich die Farbreaktionen gleichzeitig, wodurch das Testergebnis jedoch nicht beeinflußt wird.
Für den Fall, daß die Reaktion mit Bilirubin unterdrückt werden soll, kann man dies dadurch erreichen, daß man a.b. Indikator ein Diazoniumsalz relativ niedriger Elektrophilie verwendet und die Reaktion unter Zugabe kationischer Netzmittel ablaufen läßt.
Es ist auf diese Weise möglich, die Mittel zum Nachweis von Urobilinogen gegebenenfalls zusammen mit Bilirubin so zu modifizieren, daß sie dem angestrebten Zweck optimal gerecht werden.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel I werden vorzugsweise zur Herstellung von Testpapieren verwendet. Die Substanzen werden zu diesem Zweck mit einer Säure und gewunschtenfalls mit Zusatzstoffen, wie z. B. Stabilisatoren und Netzmittel, auf einen saugfähiger Träger gebracht. Außerdem sind die Verbindungen I zur Herstellung von Testfilmstreifen gemäß der deutschen Offenlegungsschrift 1 598 153 und zum Nachweis von Urobilinogen in Lösungen geeignet.
Zur Herstellung der bevorzugten Ausführungsform der neuen diagnostischen Mittel wird ein saugfähiger Träger, vorzugsweise Filterpapier, mit einer Lösung getränkt, die 0,05 bis 5 g, vorzugsweise 0,1 bis 1 g (pro 100 ml) eines Diazoniumsalzes der allgemeinen Formel I sowie 2 bis 30 g, vorzugsweise 5 bis 20 g einer festen anorganischen oder organischen Säure und gewunschtenfalls Netzmittel und/oder Stabilisatoren enthält.
Als Lösungsmittel für die Imprägnierlösungen kommen vor allem Wasser und leichtflüchtige organische Lösungsmittel, die nicht mit Diazoniumsalzen reagieren, in Frage. Es sind dies vor allem niedere Alkohole, Essigester und Acetonitril.
Bei der Herstellung der Diazoniumsalzlösung kann man entweder so verfahren, daß man das fertige Diazoniumsalz der Lösung zuführt oder indem man das Salz in der Lösung durch Diazotierung eines aromatischen Amins in bekannter Weise erzeugt.
Bevorzugt und erfindungsgemäß besonders brauchbar sind diejenigen Verbindungen der allgemeinen Formel I, in welchen R1 eine Hydroxy-, Alkylmercapto- oder niedere Alkoxygruppe und R2 eine Hydroxy-, Alkoxy-, Phenoxy-, Alkylmercapto-, Phenylmercapto-,
Phenylalkyl-amino. gcgebeii.iifalls substituierte Phenylamino- oder Acylaminogruppe, wobei einer Λρ.τ Reste R1 und R2 auch Wasserstoff. Halogen »der eine Methylgruppe sein kann, und R3 und R4 Wasserstoff, ein Halogenatom. eine Hydroxy-, Alkoxy-, Phenoxy-, Alkylmercapto-, Phenylmercapto-, Phenyl-alkylamino-, gegebenenfalls substituierte Phenylamino, Acylamino-, Alkyl- und Carboxylgruppe und X~ em Halogenid, oder das Anion einer Sauerstoffsäure oder einer durch Halogenwasserstoff koordinativ gesättigten Lewissäure darstellt.
Aus Haltbarkeitsgründen werden normalerweise nur stabile Diazoniumsalze eingesetzt, d. h. Salze, die ein stabilisierenaes Anion besitzen: dies sind insbesondere das Sulfat-, d Tetrafluoroborat-. das Tetrachlorozinkat-, das Hexachloroantimonation sowie Arylsulfonationen.
Als feste anorganische und organische Säuren, kommen beispielsweise o-Phosphorsäure, Metaphosphorsäure, Sulfosalr.ylsäure Oxalsäure, oder saure Salze, wie z. B. Kaliumbisulfat in Frage auch Addukte aus Lewissäuren und Lewisbasen sind brauchbar, wenn sie entsprechend sauer reagieren. Besonders bewährt hat sich die handelsübliche Metaphosphorsäure, die etwa 50 bis 60% ihres Natriumsalzes enthält, da diese erfindungsgemäß besonders stabile Testpapiere liefert.
Metaphosphorsäure und Oxalsäure haben außerdem den Vorteil, daß sie Testpapiere liefern, die mit Bilirubin nur sehr langsam reagieren.
Die stabilisierenden Zusätze sind aus der Diazochemie bereits hinlänglich bekannt; solche Zusätze sind z. B. Natriumfluoroborat, Natriumarylsulfonat, Magnesiumsulfat oder Natriummetaphosphat.
Die Verwendung von Netzmitteln ist nicht nur wegen der erzielten besseren Benetzbarkeit angezeigt, sie entfalten auch noch zusätzliche spezifische Wirkungen. So bewirken anionische Netzmittel, insbesonde/e Sulfate und Sulfonate, eine Erhöhung der Empfindlichkeit und eine leicht bathochrome Färbverschiebung beim Nachweis von Urobilinogen. Als Beispiele für anionische Netzmittel seien Natriumlaurylsulfat und Natrium-p-dodecylbenzolsulfonat genannt.
In manchen Fällen ist es ei wünscht, nur signifikant erhöhte Urobilinogen-Spiegel nachzuweisen. In diesen Fällen ist es möglich, die Empfindlichkeit und die Reaktionsgeschwindigkeit durch einen Zusatz kationischer Netzmittel, wie z. B. Laurylpyridiniumchlorid, herabzusetzen.
Nichtionogene Netzmittel, wie z. B. Polyoxyäthylentriglycerid, beeinflussen im allgemeinen nur die Benetzbarkeit der Testpapiere.
Die Netzmittel werden in Mengen von etwa 0,1 bis 3 g, vorzugsweise 0,3 bis 1 g pro 100 ml Imprägnierlösung zugesetzt.
Die einzelnen Bestandteile der Rezepturen können auch nacheinander aufgebracht werden, wenn es die Löslichkeiten erfordern oder wenn besondere Effekte erzielt werden sollen. So kann es z. B. aus Stabilitätsgründen günstig sein, erst das Diazoniumsalz und den Stabilisator aufzugeben und dann erst mit Säure nachzuimprägnieren.
Nach dem Imprägnieren der saugfähigen Träger werden diese bei möglichst niederen Temperaturen getrocknet, um die Diazoniumsalze nicht zu schädigen.
Als saugfähige Träger kommen vor allem Filterpapiere in Frage, aber auch Vliese und Filze aus säurebeständigen Kunststoffen, wie z. B. Polypropylen und Polyester, können verwendet werden.
Obwohl Testpapiere eine bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung und die elegantesten diagnostischen Mittel für Inhaltsstoffe von Körperflüssigkeiten darstellen, ist es natürlich auch möglich, die erlindungsgemäßen Diazoniumsalze zum Urobilinogen-Nachweis in flüssiger Phase zu verwenoen. Tropft man die Diazoniumsalze in saurer Lösung Li urobilinogenhaltigem Urin, so erhält man rote bis blaue Färbung :i oder Fällungen, welche gegebenenfalls mittels organischer Lösungsmittel, wie z. B. Chloroform, extrahiert werden können.
Zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens zum Nachweis von Urobilinogen in Körperflüssigkeiten taucht man die neuen diagnostischen Mittel in die zu untersuchende Lösung ein und liest den Farbumschlag nach kurzer Zeit ab.
Die erfindungsgemäß \erwendeten Diazoniumsalze bzw. die entsprechenden \mine sind allgemein bekannt.
Zum quantitativen Nachweis von Urobilinogen im Urin mittels photometrischen Methoden haben sich als Nachweisreagenzien 4-Methoxy-benzoI-diazoniumsalze sowie 2,4-Dimetlioxy-benzoldiazoniumsaIze besonders bewährt.
Die Hammettschen Sigmawerte sind bekanntlich Maßzahlen für den elektronenanziehenden odor elektr-inenliefernden Effekt von Substituenten (im ersteren Fall ergeben sich positive, im letzteren negative Sigmawerte). Die Sigmawerte sind additiv, wobei das Vorzeichen der Summe angibt, ob — verglichen mit dem Substituenten Wasserstoff — der elektronenanziehende oder der elektronenliefernde Effekt überwiegt. Der erfindungsgemäße Grenzwert von +0,4 besagt also, daß die Wirkung der elektronenliefernden Substituenten durch elektronenanz'pfiende Substituenten nur bis zum Sigmawert von +0,4 gemindert werden darf. Es kann beispielsweise ein Benzoldiazoniumsalz mit einer Hydroxylgruppe in ParaStellung (Sigmawert = —0,37) noch einen oder mehrere elektronenanziehende Gruppen mit einem Gesamt-Sigmawert bis zu + 0,83 besitzen, während ein solches Diazoniumsalz, das mit einer o-Methoxy- oder p-Acetaminogruppe substituiert ist (Sigmawert in beiden Fällen ±0), elektronenanziehende Gruppen nur noch bis zu einem Gesamt-Sigmawert von +0,4 enthalten darf.
Obwohl Hammett-Berechnungen heute routinemäßig durchgeführt werden und ein wertvolles Mittel für theoretische Aussagen in der Chemie der Aromaten darstellen, ist es nicht statthaft, diese als allgemeingültige Absolutwerte zu betrachten. Vielmehr handelt es sich um Näherungswerte, die mit gewissen Unsicherheiten der empiiischen Ermittlung behaftet sind. Diese Unsicherheiten spielen jedoch nur in seltenen 'Irenzfällen eine Rolle, die die technische Lehre der vorliegenden Erfindung in keiner Weise beeinträchtigen.
In den folgenden Beispielen sind das erfindungsgemäße Verfahren und die erfindungsgemäßen diagnostischen Mittel näher erläutert.
Beispiel 1
Filterpapier (Schleicher und SchüII 23 SL) wird mit einer Lösung von folgender Zusammensetzung imprägniert und bei 400C getrocknet.
2
4-Mcthoxyncnzoldiaz.oniumfluohoral 0,3 g
Mclaphosphorsäiirc 10,0 g
Dodecylbenzolsulfonsäure
(Natriumsalz) 0,4 g
Methanol 5,0 ml
Wasser, ad 100 ml
Das Testpapier gibt bei Eintauchen im Urin nach etwa 5 bis 10 Sekunden die folgenden Farbreaklionen:
IO
Urobilinogenfrcier Urin: keine Farbänderung, Urin mit normalem Urobilinogengchalt: Rosa. Urin mit erhöhtem Urobilinogcngehalt: Karminrot.
Ähnliche Farbreaktionen geben Testpapicrc, die 0,3 g der folgenden Diazoniumsalze enthalten:
2-Mcthoxybcnzoldiazoniumfluoborat, 2-Hydroxybenzoldiazoniumsulfat, 4-Mydroxybcnzoldiazoniumsulfat, 2,4-Dihydroxybenzoldiazoniumuiioborat.
Beispiel 2
Filterpapier (Schleicher und Schüll 23 SL) wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung imprägniert und bei 40"C getrocknet.
^■Methoxyhen/oldiazonaumfluoboral 0,3 g
Oxalsäure 10,0 g
Methanol, ad 100 ml
Einzelne Streifen des so erhaltenen Testpapiers (a) werden mit Lösungen von je 0,4 g Polyoxyäthylentriglyccrid (b), Dodccylbenzolsulfonsäure (Nalriumsalz) (c) bzw. Laurylpyridiniumchlorid (d) in 100 ml Mcthylenchlorid nachimprägniert und im warmen Luftstrom getrocknet. Die Testpapiere geben mit urobilinogenhaltigen Urincn nach etwa 5 bis 10 Sekunden die folgenden Reaktionen:
559
4-Butoxy-, 4-Phcnoxy-, 4-McIhOXy^-FnCtIIyI-, 2-Mc thoxy-5-nicthyl-, 2-Mcthylmercapto-, 4-Mcthylmcr capto- oder 4-Clilor-2-mcthoxy-5-mcthylanilin ersetz ist.
Beispiel 4
Filterpapier (Schleicher und Schüll 23 SI.) wire mit folgenden Lösungen nacheinander imprägnier und getrocknet.
I. 4-Acelamidobenzoldiazonium-
fluoborat 0,3 g
Natriummetaphosphat 5,0 g
Wasser, ad 100 ml
II. Oxalsäure 15,0 g
Natriumlaurylsulfat 0,5 g
Methanol, ad 100 ml
Das Teslpapicr reagiert mit urobilinogenhaltigcn Urin mit karminroter Farbe.
Test papier Rcaklionsfarbc Urin mi
0.5		 mg % Urobilinogcn
1.0 J 2,0		 t ! I
f i I
f f- I
I !
a
b
C
d 		Ziegelrot
Ziegrlrot
Karminrot
Ziegelrot		 I
I !		 t I
1 ;
ί I I
I
Beispiel 5
»5 Filierpapier (Schleicher und Schüll 23 SL) wire mit einer Lösung folgender Zusammensetzung imprägniert und bei 400C getrocknet.
S-ChloM-mclhoxybcnzoldiazonium-
iuliiolsiiluinai 0,5 g
Sulfosalicylsäurc 5,0 g
Dodccylbcnzolsiilfonsäurc
(Nalriumsalz) 0,8 g
Methanol, ad 100 ml
35 Das Testpapicr gibt beim Rintauchcn in urobili nogcnhaltigcn Urin sofort eine Karminrolfärb'.ing Beim Eintauchen in bilirubinhalligcn Urin crh.ili man nach 10 bis 20 Sekunden eine blaugriine Färbung Urine, die Urobilinogcn und Bilirubin enthalten liefern je nach deren Verhältnis Zwischentöne zwi sehen diesen Färbungen.
45
schwach; J f
! 4 sehr stark.
mäßig; f -f J- ■- stark;
Beispiel 3
Filterpapier (Schleicher und Schüll) wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung imprägniert und bei 400C getrocknet.
4-Äthoxyanilin . 0,25 g
Isoamylnitrit 1,0 ml
Oxalsäure !0,0 g
Dodecylbenzolsulfonsäure
(Natriumsalz) 0,4 g
Methanol, ad 100 ml
Das Testpapier reagiert mit urobilinogenhalligem Urin karminrot. Mit ähnlichen, zum Teil etwas mehr violetten Farbtönen reagieren Testpapiere, bei denen das 4-Älhoxy-anilin durch gleiche Mengen 2-Äthoxy-,
Beispiel 6
Polyestervlies wird mit Lösungen folgender Zusammensetzung imprägniert und bei 400C getrocknet
Benzoldiazoniumsalz (a bis f) 0,1 g
Sulfosalicylsäure 10,0 g
Dodecylben.'olsulfonsäure
(Natriumsalz) 0.4 g
Methanol/Wasser 1 : 1. ad 100 ml
Folgende Diazoniumsalze wurden verwendet:
a 2-Methoxy-5-^hloΓ-benzol-diazonium-tetra-
chlorozinkat (Echtrotsalz RC), b ''-Benzamido^-methyl-S-methoxy-benzoldiazonium-tetrachlorozinkat (Echlviolctl-
salz B),
c 4-Benzamido-2,5-dimethoxy-benzoI-diazonium-
telrachlorozinkat (Echtblausalz RR), d 4-Benzamido-2,5-diälhoxy-bcnzoI-diazonium-
tctrachloroztnkat (Echtblausalz BB). c 4-Mcthoxyphcnylamino-bcnzol-diazonium-
chlorid (Variaminblausalz B), f Phenylamino-benzol-diazonium-hydrogensulfai.
309647/423
Mil it robil inogen ha 11 igem
iirbungen erhallen :
a Rot - Blau.
Kolviolett,
Blaiiviolett.
d Β1·, -.lviolctt,
e lilaiigrün,
Blaugrün.
Urin wurden folgende
e ι s ρ ι c I 7
F-'iltcrpapicr (Schleicher und Schüll 23 SL) wird nit wäßrigen lösungen gotränkt, die außer 5g <aliunihydrogensiilfat noch je 0,5 g der folgenden lia/oniumsalze auf K)O ml enthalten.
2,4-Dinicthoxyben/oldia/oniiimiluoborat, 3.4-Dimcthoxyben/oldiazoniumiiuoborat, 2,5-Diincthoxybcn/oldiazoniumfIiioborat, 3.4,5-Trimcthoxyben/oldiazoniumniioborat, 4-(lydroxy-3.5-dichlorbenzoldiazoniiimlluoborat.
Alle diese Testpapicre reagieren mit urobilinogcnlaltigem Urin nut roten bis lilarotcn Farbtönen.
Werden diese Testpapiere mit l'/o'gcn Lösungen lcr folgenden Netzmittel nachimprägniert, so erhält nan kräftigere Roluolett- bis Blauviolett-Färbungen.
hodecylbcnzolsulfonsäurc (Natrium·-al/.) in Methylenchlorid.
Natmimlaurylsulfat in Chloroform-Methanol, Dodccansulfonsäurc (Natriumsalz)
in Chloroform-Methanol,
Dioclylnatriumsulfosuccinat in Mcthylcnchlorid.
IU- i s ρ ι e I II)
Filierpapier (Schleicher und Schüll) wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung imprägniert und :·. bei 40''C getrocknet.
S-Chlor^-hydroxyanilin 0,25 g
Isoamylnilrit 1.0 ml
Oxalsäure 10,0 g
I Jodecvlbcn/olsu If oiisäure
(Nat'riumsalz) 0,4 g
Methanol, ad 100 ml
Das Testpapier reagiert mil urohilinogcnhaltigcm Urin karminrot. Denselben Farbumschlag ergibt ein Testpapier, das in analoger Weise unter Verwendung von 4-Benzyloxy-aniliii hergestellt wurde.
Beispiel 11
Filterpapier (Schleicher und Schüll 23 SL) wird mit folgenden Lösungen nacheinander imprägniert und getrocknet:
45
Beispiel 8
Filterpapier (Schleicher und Schüll 23 SL) wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung imprägniert und bei 40 C getrocknet.
5-Amino-salicylsäure 0,2 g
Metaphosphorsäiirc 15,0 g
Natriumnitrit 0,1 g
Dodecylbenzolsulfosäure
(Natriumsalz) 0,4 g
Methanol 5 ml
Wasser, ad 100 ml
Das Testpapier reagiert mit urobilinogenhaltigem Urin mit ziegelroter Farbe.
Beispiel 9
55
5,0 ml urobiiinogenhaltiger Urin wird mit 2,0 ml ;iner Lösung von 2% 2,4-Dimethoxybenzoldiazoliumfluoborat in 2 η-Salzsäure versetzt. Nach 2 Miiuten wird mit 5,0 ml Chloroform versetzt und kräftig iurchgeschüttelt. Danach wird ein Teil der Chloro- So orm-Phase in eine Küvette überführt und die Exinktion bei 495 nm gemessen. Durch Vergleich mit ler Extinktion eines Standards läßt sich der genaue Jrobilinogen-Gehalt des Urins ermitteln.
I. S-Methoxy^-acctamidobcnzoldiazo-
imimfhioboral 0,3 g
Natriummctaphosphat 5,0 g
Wasser, ad 100 ml
II. Oxalsäure 15.0 g
Nalriumlaurylsülfat 0.5 g
Methanol, ad 100 ml
Das rcsipapier reagiert mit urobilinogenhalligem Urin mit iot\ioletter Farbe.
Beispiel 12
Filterpapier (Schleicher und Schüll 23 SL) wird mit einer wäßrigen Lösung getränkt, die außer 5 g Kaliumhydrogensulfat 0,5 g 5-Chlor-2,4-dimethoxybenzoldia/oniumfluoborat auf 100 ml enthält. So hergestelltes Testpapier reagiert mit urobilinogenhaltigem Urin schön rotviolett.
Wird das Testpapier mit l°/oigen Lösungen der folgenden Netzmittel nachimprägniert, so erhält man noch kräftigere Rotviolctt-Färbungen.
Dodecylbenzolsiilfonsäure (Natriumsalz) in Methylenchlorid,
Natriumlaurylsulfat in Chloroform-Methanol, Dodecansulfonsäure (Natriumsalz)
in Chloroform-Methanol,
Dioctylnatriumsulfosuccinat in Methylenchlorid.
Beispiel 13
Filterpapier (Schleicher und Schüll 23 SL) wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung imprägniert und bei 40 C getrocknet:
5-Amino-3-sulfo-salicylsäure 0,2 g
Metaphosphorsäure 15,0 g
Natriumnitrit 0,1 g
Dodecylbenzolsulfosäure
(Natriumsalz) 0,4 g
Methanol 5 ml
Wasser, ad 100 ml
Das Testpapier reagiert mit urobilinogenhaltigem Urin mit ziegelroter Farbe.
5617

Claims (2)

Patertansprüche:
1. Verwendung son stabilen Benzoldiazoniunisalzen. deren gegebenenfalls mehrfa.h suhstiüiierter Phenylrest in ortho- oder para-Sti!:ung mindestens eine mehratomige Elektr.mendonatorgruppe mit wenigstens einem mesomeriefähigen F-'lektronenpaar enthält, wobei die Summe der Hammettschen Sigmawerte aller Substituenten den Wert 0.4 nicht überschreiten darf, als Indikatorsubstanzen für den Nachweis von I robilir.oszen. gegebenenfalls zusammen mit Bilirubin.
2. Verwendung von 'verbindungen der allgemeinen Formel I
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