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DE102004051830A1 - Multifunktionales Referenzsystem bei Analytbestimmungen durch Fluoreszenz - Google Patents

Multifunktionales Referenzsystem bei Analytbestimmungen durch Fluoreszenz Download PDF

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DE102004051830A1
DE102004051830A1 DE102004051830A DE102004051830A DE102004051830A1 DE 102004051830 A1 DE102004051830 A1 DE 102004051830A1 DE 102004051830 A DE102004051830 A DE 102004051830A DE 102004051830 A DE102004051830 A DE 102004051830A DE 102004051830 A1 DE102004051830 A1 DE 102004051830A1
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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein System für den Lumineszenz-Nachweis eines Analyten in einer flüssigen Probe, wobei das System einen Träger umfasst, auf dem sich eine Analyt-spezifische Substanz und eine Referenzsubstanz befinden. Des Weiteren betrifft die Erfindung ein Verfahren zum Nachweis eines Analyten in einer flüssigen Probe, wobei das genannte System verwendet wird. Das erfindungsgemäße System eignet sich zusätzlich zum Nachweis eines Analyten dazu, die Probenmenge zu bestimmen, die Menge des Analyten zu bestimmen und/oder die Funktionsbereitschaft des Trägers für einen Nachweis festzustellen.

Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft ein System für den Lumineszenz-Nachweis eines Analyten in einer flüssigen Probe, wobei das System einen Träger umfasst, auf dem sich eine Analyt-spezifische Substanz und eine Referenzsubstanz befinden. Des weiteren betrifft die Erfindung ein Verfahren zum Nachweis eines Analyten in einer flüssigen Probe, wobei das genannte System verwendet wird. Das erfindungsgemäße System eignet sich zusätzlich zum Nachweis eines Analyten dazu, die Probenmenge zu bestimmen, die Menge des Analyten zu bestimmen und/oder die Funktionsbereitschaft des Trägers für einen Nachweis festzustellen.
  • Das erfindungsgemäße System und Verfahren zum Nachweis eines Analyten beruht auf einem Lumineszenz-Nachweis, insbesondere einem Fluoreszenz-Nachweis. Solche Nachweissysteme sind im Stand der Technik bereits seit langem bekannt. Bei den heutigen Analysemethoden stellt die photometrische Auswertung von analytischen Testelementen eines der gebräuchlichsten Verfahren zum schnellen Nachweis bzw. zur schnellen Bestimmung der Konzentration von Analyten in Proben dar. Allgemein werden photometrische Auswertungen im Bereich der Analytik, der Umweltanalytik und vor altem im Bereich der medizinischen Diagnostik eingesetzt. Insbesondere im Bereich der Blutglucosediagnostik aus Kapillarblut besitzen Testelemente, die photometrisch ausgewertet werden, einen großen Stellenwert.
  • Bei fluoreszenzspektrometrischen Nachweissystemen hängt die Intensität der Emission der fluoreszenziernden Substanzen direkt proportional von der Intensität der Anregung ab. Dabei kann die Intensität der Anregung durch viele Faktoren beeinflusst werden, zum Beispiel durch das Verhalten der Lichtquelle über die Zeit oder Veränderungen der Lichtwege. Gerade in einem Kleingerät, welches nicht feststehend in einem Labor zur Messung benutzt wird, können Veränderungen der Lichtwege unterschiedliche Anregungsintensitäten hervorrufen. Daher ist es sehr schwierig, absolute Fluoreszenzmessungen reproduzierbar durchzuführen.
  • Aus diesem Grunde verwenden die heute gängigen Fluoreszenz-Testsysteme eine Referenzsubstanz, auf die bezogen werden kann. Es sind verschiedene Arten von Referenzsubstanzen bekannt.
  • Beispielsweise ist im Stand der Technik bekannt, in Nachweissystemen, die auf einem Fluorophor beruhen, einen zweiten Fluorophor zu verwenden, der bei einer anderen Wellenlänge emittiert als der für den Analyten spezifischen Fluorophor. Dieser zweite Fluorophor kann somit als Referenz benutzt werden. Dabei kann dann durch zwei verschiedene Filter (und zwei Detektoren) zwischen den beiden Fluorophoren unterschieden werden, wobei ein Fluorophor keine chemische Umsetzung erfährt und als Referenz dienen kann. Dieses Nachweissystem ist beispielsweise in der folgenden Literaturstelle beschrieben: Principles of Fluorescence Spectroscopy, J. R. Lackowicz, Kluver Academic/Plenum Publishers, New York, Boston, Dordrecht, Moscow 1999, 2. Auflage.
  • Ein anderer Ansatz besteht in einer zeitaufgelösten und phasenmodulierten Referenzierung, bei der ein sehr langlebiger Fluorophor, der eine längere Lebensdauer als ein für den Analyten spezifischer kurzlebiger Fluorophor hat, als Referenzsubstanz verwendet wird. Während die langlebige Lumineszenz in ihren Parametern vom Analyten nicht beeinflusst wird, verändert sich die Intensität des für den Analyten spezifischen, kurzlebigen Leuchtstoffs in Abhängigkeit von der jeweiligen Analytkonzentration. Dann kann durch zeitaufgelöste Messung zuerst Analyt-Fluorophor gemessen werden und anschließend das Abklingen der Referenz aufgenommen werden. Das Verhältnis des Abklingsignals zu dem Signal des Analyten plus dem der Referenzsubstanz muss immer gleich sein, unabhängig mit welcher Intensität eingestrahlt wurde.
  • WO 99/06821 offenbart ein solches System. Hierbei werden zumindest zwei verschiedene Leuchtstoffe co-immobilisiert auf einem Träger verwendet, deren erster zumindest in der Lumineszenzintensität auf den zu bestimmenden Parameter des Analyten anspricht, und deren zweiter zumindest in der Lumineszenzintensität und der Abklingzeit auf den zu messenden Parameter nicht anspricht. Die Leuchtstoffe weisen unterschiedliche Abklingzeiten auf. Das Zeit- oder Phasenverhalten der sich ergebenden Lumineszenzantwort kann somit zur Bildung einer Referenzgröße für die Bestimmung des zu messenden Parameters des Analyten verwendet werden.
  • WO 02/056023 offenbart einen optischen Sensor zur Bestimmung zumindest eines Parameters in einer Probe, wobei auch hier ein auf den Parameter ansprechendes Indikatormaterial mit kurzer Ablingzeit und ein auf den Parameter nicht ansprechendes Referenzmaterial mit langer Abklingzeit verwendet werden. Hierbei sind das Indikatormaterial und das Referenzmaterial auf einem gemeinsamen Träger immobilisert und auf der Probenseite mit einer lichtundurchlässigen Schicht abgedeckt.
  • Die Referenzierung über einen zweiten Fluorophor, der bei einer anderen Wellenlänge gemessen wird, benötigt allerdings einen höheren apparativen Aufwand. So werden zum Beispiel zwei Filter anstelle nur eines einzigen Filters benötigt, um das Anregungslicht abblocken zu können, und es werden in der Regel auch zwei Detektoren benötigt. Hinzu kommt, dass durch die Trennung der optischen Wege nach der Anregung in unterschiedliche Detektoren einer der beiden Wege fehlerhaft sein kann, was dann zu einer falschen Referenzierung führen würde.
  • Bei der zeit- oder phasenaufgelösten Referenzierung besteht der Nachteil, dass die Messungen der Analyten immer vor einem leuchtenden Hintergrund durchgeführt werden müssen. Das bedeutet, das immer ein gewisser Offset oder Signaluntergrund besteht, der den Messbereich begrenzt. Dieses Prinzip ist beispielsweise in 1 dargestellt.
  • In 1 sieht man den Messbereich des Analytsignals mit und ohne Referenz. Ohne den Referenzfluorophor kann der Messbereich optimal auf den zu umspannenden Dynamikbereich angepasst werden. Mit Referenzfluorophor wird ein Teil des Messbereichs von der Referenz beansprucht.
  • Die Referenzsubstanzen bzw. Referenzleuchtstoffe, die in den oben genannten Verfahren des Standes der Technik eingesetzt werden, können nur als Referenzsubstanz für den Vergleich mit dem Analyten verwendet werden, sie können jedoch keine weiteren Funktionen erfüllen.
  • Ein wichtiges Thema bei der Bestimmung von Analyten im Diagnostik-Bereich ist jedoch auch die Benetzungserkennung und/oder eine Füllkontrolle des Testfeldes.
  • Auch in diesem Bereich gibt es im Stand der Technik Ansätze, die bestehenden Verfahren zu verbessern. WO 83/00931 offenbart eine Vorrichtung und ein Verfahren zum Nachweis einer flüssigen Probe, wobei bestimmt wird, ob eine ausreichende Menge an Probenflüssigkeit aufgetragen wurde. Dies wird erreicht, indem von einem Tropfendetektor, der eine Lichtquelle umfasst, Strahlung auf die Probe abgegeben wird, die innerhalb der Absorptionsbande von Wasser liegt. Es wird zunächst der Probenträger im trockenen und dann im benetzten Zustand bestrahlt und somit die Feuchtigkeit gemessen. Aufgrund des Unterschieds der detektierten Signale wird dann der Feuchtigkeitsgehalt der Probe berechnet.
  • US-Patent 5,114,350 offenbart ein Verfahren und eine Vorrichtung zur Bestimmung der Konzentration eines Analyten in einer Körperflüssigkeitsprobe. Der Grad der Benetzung des Reaktionsträgers wird dadurch gemessen, dass die Menge an reflektiertem Licht gemessen wird, die mit zunehmender Benetzung abnimmt.
  • DE 10248555 A1 offenbart ein Verfahren zur Erkennung und Kompensation der Unterdosierung von Teststreifen. In dieser Druckschrift wird ein Testelement beschrieben, welches ein Analyt-spezifisches Reagenz umfasst, das mit einem Analyten in einer Probe wechselwirkt, sowie eine Kontrollsubstanz, die mit einer Probenmatrix der Probe wechselwirkt. Das Analyt-spezifische Reagenz wechselwirkt mit dem Analyten in Abhängigkeit von der Analytkonzentration in einem Detektionswellenlängenbereich. Die Kontrollsequenz wechselwirkt bei Bestrahlung des Testfeldes mit der Probenmatrix in Abhängigkeit von der auf das Testfeld aufgegebenen Probenmenge. Die Kontrollsubstanz kann dabei auch mit dem in der Probenmatrix enthaltenen Wasser reagieren. Ein Beispiel, das in DE 10248555 genannt ist, verwendet Chlorphenolrot als Analyt-unabhängigen Farbbildner zur Bestimmung der Probenmenge und 2,18-Phosphormolybdänsäure als Analyt-spezifisches Reagenz zur Bestimmung der Glucosekonzentration in einer Probe, z. B. einer Blutprobe. In dem genannten Beispiel dieses Dokuments müssen somit zwei Wellenlängenbereiche detektiert werden, was dieses Testsystem apparativ aufwändig macht.
    •
  • Die der Erfindung zugrunde liegenden Aufgabe bestand darin, ein System und Verfahren zum Nachweis eines Analyten in einer flüssigen Probe bereitzustellen, welches mit einer Referenzsubstanz und einer analytspezifischen Substanz durchgeführt werden kann, ohne dabei den im Stand der Technik beschriebenen hohen apparativen Aufwand in Kauf nehmen zu müssen.
  • Die erfindungsgemäße Aufgabe wird gelöst durch ein System für den Lumineszenz-Nachweis eines Analyten in einer flüssigen Probe, umfassend einen Träger, umfassend eine Analyt-spezifische Substanz, die in der Lage ist, bei Kontakt mit dem Analyten ein erstes Lumineszenzsignal abzugeben, und ein Referenzsubstanz, die in der Lage ist, ein zweites Lumineszenzsignal abzugeben welches durch Kontakt mit der flüssigen Probe im wesentlichen gequencht wird.
  • Überraschendeweise lassen sich aus dem Stand der Technik bekannte Nachweisverfahren dadurch erfindungsgemäß vereinfachen, dass eine Referenzsubstanz verwendet wird, welche in Abwesenheit der Probe ein Lumineszenzsignal abgibt, welches als Referenzsignal verwendet werden kann. Bei Zugabe der Probe wird dieses Lumineszenzsignal schlagartig im wesentlichen gequencht, d.h. es liefert im wesentlichen kein Signal mehr, oder zumindest ein sehr stark verringertes Signal.
  • Besonders vorteilhaft für die vorliegende Erfindung ist es, wenn Anregung und Emission bei etwa den gleichen Wellenlängen liegen wie für die analytspezifische Substanz. Dies bedeutet, dass dann für die Detektion der Lumineszenzsignale ein einziger Detektor verwendet werden kann.
  • Durch die Eigenschaft der Referenzsubstanz, in Abwesenheit der Probe ein Lumineszenzsignal abzugeben, was dann bei Inkontaktbringen mit der Probe gequencht wird, kann die Referenzsubstanz nicht nur zum Nachweis des Analyten verwendet werden, sondern auch zum Bestimmen der Probenmenge, zum Bestimmen der Menge des Analyten und/oder der Funktionsbereitschaft des Trägers. Die Referenzsubstanz kann beispielsweise so gewählt werden, dass ihr Lumineszenzsignal bei Benetzung gequencht wird. Dann kann die Funktionsbereitschaft des Testsystems sichtbar gemacht werden. Falls also der Träger, der das Testsystem umfasst, in etwa bei der Lagerung feucht geworden ist oder dgl., oder andere Substanzen mit ihm in Kontakt gekommen sind, wird dieses Lumineszenzsignal der Referenzsubstanz gequencht sein, und es ist erkennbar, dass dieses Testsystem nicht funktionsbereit ist.
  • Vorzugsweise ist das Quenchen reversibel, d.h. wird die Probe oder insbesondere die Benetzung entfernt bzw. rückgängig gemacht, so kann auch das Lumineszenzsignal wieder hergestellt werden.
  • Damit kann neben der Referenzierung eine Benetzungserkennung und/oder eine Füllkontrolle mit dem erfindungsgemäßen System erreicht werden. Wird z.B. auf dem Träger ein Testfeld vorgesehen und dieses nicht vollständig von der Probe benetzt, bleibt ein Restlumineszenzsignal bestehen. Es ist dann möglich, rechnerisch eine Korrektur im Bezug auf das Analytsignal über diese Restlumineszenz zu machen.
  • Wenn die Lumineszenzeigenschaften im Bezug auf die Umgebungsfeuchte reversibel sind, kann eine solche Referenzsubstanz auch als Feuchteindikator verwendet werden. Der Feuchteindikator gibt dann über die Lagerbedingungen des Testsystems und seine Funktionsbereitschaft Auskunft. Mann kann somit die Referenzsubstanz auch als Indikator für ein zu wählendes Verfallsdatum des Testsystems verwenden.
  • Lumineszenzsubstanzen, insbesondere Fluorophore, die solche Eigenschaften aufweisen, sind im Stand der Technik kaum bekannt. Die meisten Fluorophore erfahren in feuchter Umgebung eine Fluoreszenzerhöhung und kein Quenchen.
  • Als Referenzsubstanz kommen prinzipiell alle Substanzen infrage, welche in der Lage sind, ein Lumineszenzsignal abzugeben, welches durch Kontakt mit der Probe im wesentlichen gequencht wird. Hierbei können alle Arten von Substanzen verwendet werden, die durch Kontakt mit irgendeinem Bestandteil der Probe in ihrem Lumineszenzsignal gequencht werden. Bestandteile in zu untersuchenden Proben, welche das Quenchen auslösen können, sind z.B. Wasser, Calcium, Magnesium oder andere Metalle oder deren Ionen, der pH-Wert sowie weitere Faktoren.
  • Wenn Wasser der für das Quenchen auslösende Faktor ist, ist die Referenzsubstanz vorzugsweise ausgewählt aus der Klasse der Chalcone der Formel 1.
  • Chalcone sind im Stand der Technik bekannt (B.M. Krasovitskii, D.G. Pereyaslova, ZH. Vsesoyuznogo Obscchestva im. D.I. Mendeleeva, 10 (6), 704 (1965); G.E. Dobretsov, V.A. Petrov, Yu.A. Vladimirov, Studia Biophysica Berlin, 71 (3), 181–187 (1978)).
  • Bevorzugt sind Substanzen der allgemeinen Formel 1,
    Figure 00080001
    wobei einer der Reste R2, R3 und R5 vorzugsweise ausgewählt ist aus NR11R12 und SO3Na. Die übrigen Substituenten R1, R4, R6, R6, R8, R9 und R10 können beliebige Substituenten sein, vorzugsweise Wasserstoff oder Halogen, insbesondere F, Cl, Br und I.
  • R11 und R12 sind vorzugsweise ausgewählt aus Wasserstoff, C1-C4-Alkyl, insbesondere Methyl, Ethyl, Propyl und Butyl, und CH2CH2-SO3Na.
  • Besonders bevorzugte Substanzen, die als erfindungsgemäße Referenzsubstanz geeignet sind, sind Aminochalcone und Chlorchalcone, insbesondere gemäß den allgemeinen Formeln II, III und IV.
  • Figure 00080002
  • Figure 00090001
  • Chlorchalcon wurde gemäß einem Verfahren von Krasovitskii hergestellt (B.M. Krasovitskii, D.G. Pereyaslova, ZH. Vsesoyuznogo Obscchestva im. D.I. Mendeleeva, 10 (6), 704 (1965)).
  • Aminochalcon, bei dem R11 und R12 Methyl sind, ist gewerblich erhältlich und wurde für orientierende Untersuchungen eingesetzt.
  • Das Aminochalcon der allgemeinen Formel V, bei der R11 und R12 beide CH2CH2-SO3Na sind, wurde über eine mehrstufige Synthese hergestellt.
  • Eine weitere bevorzugte Substanz ist somit die der Formel V.
  • Figure 00100001
  • Die Quenchreaktion kann auch durch Metallionen hervorgerufen werden. Es sind somit auch solche Verbindungen als Referenzsubstanzen erfindungsgemäß geeignet, deren Lumineszenzsignal bei Kontakt mit Metallionen im wesentlichen gequencht wird.
  • Insbesondere ist es möglich, Referenzsubstanzen auszuwählen, bei denen das Lumineszenzsignal durch den Kontakt mit Calcium- bzw. Magnesiumionen gequencht wird. Hierfür kommen z.B. Fluoreszenzfarbstoffe infrage, die bei einer Komplexbildung mit Ca2+ und/oder Mg2+ aufhören zu fluoreszieren bzw. sehr reduziert fluoreszieren.
  • Ein Beispiel für einen solchen Fluoreszenzfarbstoff ist FuraRED, welcher von der Firma Molprobes erhältlich ist. FuraRED hat die folgende Struktur:
    Figure 00100002
  • Eine dritte erfindungsgemäß geeignete Referenzsubstanz ist eine, welche auf eine pH-Änderung anspricht. Es handelt sich hierbei um Substanzen, deren Lumineszenzsignal bei einer pH-Wert-Änderung im wesentlichen gequencht wird.
  • Dies ist besonders vorteilhaft für Proben, wie z.B. Blut. Blut hat eine sehr hohe Pufferkraft und ist daher in der Lage, einen vorher im Testsystem eingestellten pH-Wert zu überspielen. Ist das Testsystem beispielsweise auf einen niedrigeren pH-Wert eingestellt (beispielsweise pH 5), wird bei Auftrag einer Blutprobe das Testsystem umgepuffert auf pH 7.
  • Ein Beispiel für eine solche Referenzsubstanz ist LysoSensor Blue DND-167 von Molprobes (Katalog Nr. L7533, ABS/EM' (nm): 373/425, PKA: 5,1, geeigneter pH-Bereich: 4,5–6,0).
  • LysoSensor Blue DND-167
    Figure 00110001
  • Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist auch ein Verfahren zum Nachweis eines Analyten in einer flüssigen Probe durch Lumineszenz, umfassend
    • (i) Bereitstellen eines Trägers, umfassend eine Analyt-spezifische Substanz, die in der Lage ist, bei Kontakt mit dem Analyten ein erstes Lumineszenzsignal abzugeben, und umfassend eine Referenzsubstanz, die in der Lage ist, ein zweites Lumineszenzsignal abzugeben, welches durch Kontakt mit der flüssigen Probe im wesentlichen gequencht wird,
    • (ii) Inkontaktbringen des Trägers mit einer flüssigen Probe, die einen nachzuweisenden Analyten umfasst, und
    • (iii) Messen der Lumineszenzsignale und Nachweisen des Analyten durch Vergleichen der Lumineszenzsignale.
  • Bei diesem Verfahren ist es ebenfalls, wie oben bereits erwähnt, bevorzugt, eine Referenzsubstanz und eine Analyt-spezifische Substanz zu verwenden, die im Wesentlichen im gleichen Wellenlängenbereich angeregt werden und emittieren. Vorzugsweise wird zunächst das Lumineszenzsignal der Referenzsubstanz in Abwesenheit der Probe gemessen, anschließend wird die flüssige Probe aufgebracht, und es wird das Lumineszenzsignal gemessen, welches von der Probe hervorgerufen wird. Dies kann vorzugsweise durch Verwendung eines einzigen Detektors geschehen. Es können jedoch auch verschiedene Detektoren angewandt werden, insbesondere dann, wenn die Wellenlängebereiche der Referenzsubstanz und der Analyt-spezifischen Substanz sich unterscheiden.
  • Beschreibung der Figuren
  • 1 zeigt den Messbereich für die Messung für das Lumineszenzsignal eines Analyten mit oder ohne Referenzsubstanz gemäß Verfahren des Standes der Technik.
  • 2 zeigt die Kinetik des Quenchens von Dimethylaminochalcon bei Benetzung.
  • 3 zeigt ein Testsystem unter Verwendung eines Chalcons mit 0,05 Feststoffgehalt. Als Proben wurden 4 Lösungen, jeweils enthaltend 0 mg/dl, 100 mg/dl, 300 mg/dl und 700 mg/dl Glucose verwendet. Es wurde die Intensität des Lumineszenz gemessen und mit dem gequenchten Signal, das von der Kontrollprobe mit 0 mg/dl Glucose stammte, vergleichen. Die Differenz-Counts sind maximal, wenn ausreichend Probe aufgetragen wurde. Sie werden immer kleiner, je weniger Probe aufgetragen wird.
  • 4 zeigt die Anzahl der Counts pro Volumen im selben Testformat wie in 3 beschrieben. Ab ca. 1 μl wird ein Plateau erreicht, unterhalb dessen keine zuverlässige Messung möglich ist.
  • 5 zeigt das Absorptions- und Emissionsspektrum von FuraRED.
  • 6 zeigt die Fluoreszenzemission von LysoSensor Blue DND-167 in Abhängigkeit des pH-Werts.
  • Beispiele
  • Beispiel 1
  • In einer einfachen Rezeptor wurde die Funktion des Dimethylaminochalcons überprüft. Da dieses Chalcon nicht wasserlöslich ist, wurde Methanol als Wasserersatz verwendet.
  • Dabei war schon visuell erkennbar, dass das unter UV-Licht in trockenem Zustand stark fluoreszierende Chalcon schlagartig keine Fluoreszenz mehr zeigt, wenn ein Tropfen McOH aufgbracht wird.
  • Testrezeptur 1:
    Figure 00130001
  • Das Chalcon wurde in McOH gelöst und mit dem Transpafill versetzt. Zu dieser Mischung wurde Propiofan gegeben und die Aufschlemmung homogonisiert. Anschließend wurde die Mischung auf eine Pokalonfolie aufgerakelt und bei 50°C für 5 Minuten getrocknet.
  • Die in 2 dargestellte Messung zeigt die Kinetik des Quenchens, wenn ein Tropfen Methanol auf die grünlich leuchtende Schicht, die auf die Pokalonfolie aufgerakelt wurde, aufgebracht wird. Hier sieht man ganz deutlich, dass ein schlagartiges Quenchen bei Aufbringen von Methanol erreicht wird, was jedoch reversibel ist, sobald das Methanol wieder von der Chalconschicht verdunstet d.h. trocknet.
    •

Claims (17)

  1. System für den Lumineszenz-Nachweis eines Analyten in einer flüssigen Probe, umfassend einen Träger, umfassend eine Analyt-spezifische Substanz, die in der Lage ist, bei Kontakt mit dem Analyten ein erstes Lumineszenzsignal abzugeben, und eine Referenzsubstanz, die in der Lage ist, ein zweites Lumineszenzsignal abzugeben, welches durch Kontakt mit der flüssigen Probe im wesentlichen gequencht wird.
  2. System nach Anspruch 1, weiterhin umfassend mindestens einen Detektor zum Messen der Lumineszenzsignale der Analyt-spezifischen Substanz und der Referenzsubstanz.
  3. System nach Anspruch 1 oder 2, weiterhin umfassend eine Auswertungseinheit zum Bestimmen der Probenmenge, der Menge des Analyten und/oder der Funktionsbereitschaft des Trägers.
  4. System nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Analyt-spezifische Substanz und die Referenz Fluorophoren sind.
  5. System nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Referenzsubstanz ausgewählt ist aus Substanzen, deren Lumineszenzsignal bei Kontakt mit Wasser im wesentlichen gequencht wird.
  6. System nach Anspruch 5, wobei die Referenzsubstanz eine Verbindung der Formel 1 ist.
  7. System nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei die Referenzsubstanz ausgewählt ist aus Substanzen, deren Lumineszenzsignal bei Kontakt mit Metallionen im wesentlichen gequencht wird.
  8. System nach Anspruch 7, wobei die Referenzsubstanz FuraRed ist.
  9. System nach einem der Ansprüche 1 bis 4, wobei die Referenzsubstanz ausgewählt ist aus Substanzen, deren Lumineszenzsignal bei einer pH-Wert-Änderung im wesentlichen gequencht wird.
  10. System nach Anspruch 9, wobei die Referenzsubstanz LysoSensor Blue DND-167 ist.
  11. System nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Analyt-spezifische Substanz und die Referenzsubstanz in einem im wesentlichen gleichen Wellenlängenbereich angeregt werden und emittieren.
  12. System nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei ein einziger Detektor zum Messen der Lumineszenzsignale der Analyt-spezifischen Substanz und der Referenzsubstanz verwendet wird.
  13. Verwendung einer Substanz, die in der Lage ist, ein Lumineszenzsignal abzugeben, welches bei Kontakt mit einer Flüssigkeit im wesentlichen gequencht wird, als Referenzsubstanz in einem Verfahren zum Nachweis eines Analyten.
  14. Verwendung einer Substanz, die in der Lage ist, ein Lumineszenzsignal abzugeben, welches bei Kontakt mit einer Flüssigkeit im wesentlichen gequencht wird, als Referenzsubstanz zur Bestimmung der Probenmenge.
  15. Verwendung einer Substanz, die in der Lage ist, ein Lumineszenzsignal abzugeben, welches bei Kontakt mit einer Flüssigkeit im wesentlichen gequencht wird, als Referenzsubstanz zur Feststellung der Funktionsbereitschaft eines Systems zum Nachweis eines Analyten.
  16. Verfahren zum Nachweis eines Analyten in einer flüssigen Probe durch Lumineszenz, umfassend (i) Bereitstellen eines Trägers, umfassend eine Analyt-spezifische Substanz, die in der Lage ist, bei Kontakt mit dem Analyten ein erstes Lumineszenzsignal abzugeben, und umfassend eine Referenzsubstanz, die in der Lage ist, ein zweites Lumineszenzsignal abzugeben, welches durch Kontakt mit der flüssigen Probe im wesentlichen gequencht wird, (ii) Inkontaktbringen des Trägers mit einer flüssigen Probe, die einen nachzuweisenden Analyten umfasst, und (iii) Messen der Lumineszenzsignale und Nachweisen des Analyten durch Vergleichen der Lumineszenzsignale.
  17. Verfahren nach Anspruch 16, wobei das Lumineszenzsignal der Referenzsubstanz vor dem in Kontaktbringen des Trägers mit der flüssigen Probe gemessen wird.
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