DE10017249A1

DE10017249A1 - Highly sensitive detection of malignant tumors, comprises immunological determination of RiV particles using specific antibodies

Info

Publication number: DE10017249A1
Application number: DE2000117249
Authority: DE
Inventors: Peter Solisch
Original assignee: Individual
Current assignee: Varicula Life Science Ag 17166 Teterow De; Varicula Life Science Ag De
Priority date: 2000-04-06
Filing date: 2000-04-06
Publication date: 2001-10-11

Abstract

A 'yes-no' in vitro process for detecting malignant tumors in human or veterinary medicine comprising using antibodies (I) in body fluids, derived cell sediments or cell tissue to detect malignant tumors, chronic viral infections, granulomas of various etiologies, extrauterine pregnancies or other processes associated with RiV in vertebrate cells, by an immunological method, is new. A 'yes-no' in vitro process for detecting malignant tumors in human or veterinary medicine comprising using antibodies (I) in body fluids, derived cell sediments or cell tissue to detect malignant tumors, chronic viral infections, granulomas of various etiologies, extrauterine pregnancies or other processes associated with RiV in vertebrate cells, by an immunological method. (I) are species-specific or non-species specific, in impure (serum) or purified form, mono- or polyclonal, directed against species-specific or non-species-specific RiV particles and specific for particular individual components of RiV particles (e.g. monoclonal antibodies produced using individual components of RiV particles). (I) are directed against annexin V, annexin I, 14-3-3 zeta, 14-3-3 iota , galectin-3, S100A4, S100A2, glutathione-S-transferase, Nm23, aldolase, gCAP39, myosin (light chain), actin, vimentin, nucleolin, alpha -actinin, histone 2A, ribosomal protein L, HSP27, HSP70, proteasome C6, proteasome ( delta ), proteasome (I), ezrin, ER-60, PDI, enolase, natural killer enhancing factor, a mammalian protein homologous with the plant protein (lectin) hevein (partial sequence XQXGRQAGGKLXPDN), a protein homologous with stratherin (ca. 50 kD, partial sequence FGYGYGPYQPYPEQP) or annexin-I isoform (H 156 Y).

Description

Die Erfindung betrifft ein Ja/nein-in-vitro-Verfahren zur Feststellung bösartiger Tumore in der Human- und Veterinärmedizin.The invention relates to a yes / no in vitro method for the detection of malignant tumors in human and veterinary medicine.

Es ist bekannt, dass in-vitro-Verfahren wie Messung der Blutsenkungsgeschwindigkeit und der numerischen Senkung der Erythrozyten im peripheren Blut u. a. fast ausschließlich bei fortgeschritte ner Manifestation der Erkrankung bedingt durch bösartige Tumore deutliche Positivmarker darstellen, dass moderne "Tumormarker" diesen Trend verfahrenstechnisch erheblich verbessert haben, dass die letzteren jedoch für eine oder mehrere Tumorarten spezifisch oder selektiv spezifisch, alle Tumorarten nicht zu erfassen in der Lage sind und somit ein Screeningverfahren mit erheblichem technischen Aufwand und des Risikos auf Grund der Reaktionsbreite der Tumormarker bestimmte Tumorarten nicht mitzuerfassen als gegeben angesehen werden muss, dass die Anti-RiV-Partikel-Antikörper Dynamik im peripheren Blut nicht nur von der Existenz eines bösartigen Tumors, sondern vor allem durch Wechselwirkung Tumor/Immunsystem numerisch bestimmt wird, wodurch die Ja/nein- Interpretationen in einem Teil der Untersuchungsfälle durch Einzelfallinterpretationen ergänzt werden müssen.It is known that in vitro methods such as blood sedimentation rate and blood flow measurement numerical reduction of erythrocytes in peripheral blood u. a. almost exclusively with progress the manifestation of the disease due to malignant tumors are clear positive markers, that modern "tumor markers" have significantly improved this trend in terms of process technology the latter, however, specific or selectively specific for one or more types of tumor, all types of tumor are unable to detect and therefore a screening process with considerable technical Effort and risk due to the range of reactions of the tumor markers certain tumor types Not to be taken for granted that the anti-RiV particle antibody Dynamics in peripheral blood not only from the existence of a malignant tumor, but above all by tumor / immune system interaction is determined numerically, whereby the yes / no Interpretations in some of the examination cases are supplemented by individual case interpretations have to.

Das Ziel der Erfindung ist es, die Existenz bösartiger Tumore unabhängig von der Tumorart bereits in der biologischen und klinisch nicht-manifesten Krankheitsphase durch ein Ja/nein-in-vitro-Verfahren festzustellen und die Notwendigkeit einer Einzelfallinterpretation zu vermeiden.The aim of the invention is to determine the existence of malignant tumors regardless of the type of tumor the biological and clinically non-manifest phase of the disease through a yes / no in vitro procedure determine and avoid the need for an individual case interpretation.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, mittels neuartiger, Ja/nein-in-vitro-Verfahren bösartige Tu more unabhängig von der Tumorart in der biologischen Manifestationsphase und von der dynami schen Wechselbeziehung Tumor/Gesamtorganismus festzustellen, um durch andere Verfahren, die klinische Manifestation der bösartigen Tumoren zu verhindern.The invention is based on the object, by means of novel, yes / no in vitro malignant Tu more regardless of the type of tumor in the biological manifestation phase and of the dynami to determine the tumor / whole organism's interrelation in order to determine by other methods that prevent clinical manifestation of malignant tumors.

Es wurde gefunden, dass jede Vertebratenzelle auf Stress mit dem Reaktionsmuster in Vertebraten zellen (RiV) reagiert, dass sich die betroffenen Zellen auf dem Wege zur örtlichen, funktionellen und genetischen Unabhängigkeit befinden - d. h. zu "Krebszellen" werden - dem Gesamtorganismus ge genüber zu eröffnen suchen, um das eigene Überleben zu sichern, was in der Disziplinierung des Gesamtorganismus in der betreffenden Situation in Frage gestellt ist, dass in der Reihenfolge steigen der Häufigkeit folgende praxisrelevante Prozesse erkannt wurden, die kausal mit RiV in Zusammen hang gebracht werden konnten:
Extrauteringravidität, Granulome verschiedener Ätiologie, chronische Virusinfektionen und bösartige Tumore, dass in diesen Fällen RiV-Partikel und ihre Bestandteile in wesentlichen Mengen über die Sensibilitätsgrenze von Nachweisverfahren in die Körperflüssigkeiten abgegeben werden, dass diese Mengen bei eindeutigem Nachweis und nach klinisch offensichtlichem Ausschluss der seltenen, ba nalen und/oder therapeutisch heilbarer zugänglicher Prozesse, in der Mehrheit bösartige Tumore und/oder chronische Virusinfektionen durch den RiV-Partikel-Nachweis als solche gekennzeichnet sind, dass RiV-Partikel-Nachweis und/oder seine Bestandteile in Körperflüssigkeit oder Zellaufberei tung in vitro eine Ja/nein-Feststellung von bösartigen Tumoren und/oder chronischen Virusinfektionen sehr nahe kommt.It was found that each vertebrate cell responds to stress with the reaction pattern in vertebrate cells (RiV), that the affected cells are on the way to local, functional and genetic independence - ie to "cancer cells" - to the whole organism in order to ensure their own survival, which is questioned in the discipline of the whole organism in the situation in question, that the following practice-relevant processes were identified in order of increasing frequency, which could be causally associated with RI:
Ectopic pregnancy, granulomas of various etiology, chronic viral infections and malignant tumors, that in these cases RiV particles and their components are released into the body fluids in significant amounts above the sensitivity limit of detection methods, that these amounts with clear detection and after clinically evident exclusion of the rare, basic and / or therapeutically curable accessible processes, the majority of malignant tumors and / or chronic viral infections are characterized as such by the RiV particle detection that RiV particle detection and / or its components in body fluid or cell processing in vitro a yes / no determination of malignant tumors and / or chronic viral infections comes very close.

Examples of use

Erstens: Mit Hilfe von RiV-Partikel-Antikörper, ungereinigt aus Seren, auch speziesunspezifisch, poly- oder monoklonal werden Proben aus Urin, Serum, Liquor cerebrospinalis, Drüsensekreten oder Zell sedimente aus diesen oder Geweben mit immunologischen oder immunmorphologischen Methoden zur Reaktion gebracht bei der RiV-Partikel oder seine Bestandteile als Antigen aufgefasst werden. Eine als positiv definierte Immunreaktion dient - nach Ausschluss seltener Prozesse - als Wahrschein lichkeitsbeweis für bösartige Tumore im Herkunftsbereich des Untersuchungssubstrats.First: With the help of RiV particle antibodies, unpurified from sera, also species-unspecific, poly- or samples from urine, serum, cerebrospinal fluid, glandular secretions or cells become monoclonal sediments from these or tissues using immunological or immunomorphological methods reacted in which RiV particles or their constituents are regarded as antigen. An immune reaction defined as positive serves as a probability - after rare processes have been excluded Evidence of malignant tumors in the area of origin of the examination substrate.

Zweitens: Monoklonale oder Polyklonale Antikörper gegen die Bestandteile der RiV-Partikel werden wie im ersten Beispiel eingesetzt. Die Bezeichnungen der RiV-Partikel-Bestandteile zu denen ent sprechende monoklonale Antikörper hergestellt und in immunologischen Verfahren verwendet werden lauten:
Annexin V, Annexin I, 14-3-3 ζ, 14-3-3 ε, Galectin-3, S100A4, S100A2, Glutathion-S Transferase, Nm23, Aldolase, gCAP39, Myosin (leichte Kette), Actin, Vimentin, Nucleolin, α-Actinin, Histon 2A, ribo somales Protein L/, HSP27, HSP70, Proteasom C6, Proteasom (δ), Proteasom (I), Ezrin, ER-60, PDI, Enolase, natural killer enhancing factor, zum Pflanzenprotein Hevein (Lectin) homologes Säugerpro tein (Teilsequenz: XQXGRQAGGKLXPDN), zu Stratherin homologes Protein (ca. 50k Dk, Teilse quenz: FGYGYGPYQPVPEQP) und Annexin-I-Isoform (H 156 Y).Second, monoclonal or polyclonal antibodies against the components of the RiV particles are used as in the first example. The names of the RiV particle components for which corresponding monoclonal antibodies are produced and used in immunological processes are:
Annexin V, Annexin I, 14-3-3 ζ, 14-3-3 ε, galectin-3, S100A4, S100A2, glutathione-S transferase, Nm23, aldolase, gCAP39, myosin (light chain), actin, vimentin, nucleolin , α-actinin, histone 2A, ribo somales protein L /, HSP27, HSP70, proteasome C6, proteasome (δ), proteasome (I), ezrin, ER-60, PDI, enolase, natural killer enhancing factor, to the plant protein Hevein ( Lectin) homologous mammalian protein (partial sequence: XQXGRQAGGKLXPDN), protein homologous to stratherin (approx. 50k Dk, partial sequence: FGYGYGPYQPVPEQP) and annexin I isoform (H 156 Y).

Drittens: Patient A, geboren 1935 seit einigen Wochen am Ende der Miktion Bluttropfen und Blutspu ren in der Unterwäsche; urologische Anamnese unauffällig; urologischer Status und rektaler Tastbe fund unauffällig; Sonographie der Nieren bis auf solitärer Zyste am unteren Pol links ebenfalls unauf fällig; Prostata hyperthrophiert: Volumen: 60,6 ml, Blasenboden durch Prostata erheblich imprimiert; Urinzytologie: suspekte Urothelzellen, Kontrolle erforderlich; urographische Untersuchung unauffällig; cystoskopische Untersuchung zeigt keine eindeutigen zu Probeexzision zwingende Veränderung; diagnostischer Einsatz eines neuen Testes: ELISA mit monoklonalen Antikörpern gegen RiV-Partikel auf der Festplatte, diese wird mit dem Urin-Zentrifugat-Überstand des Patienten in Verdünnungsstufen inkubiert und der automatischen computergesteuerten Farbauswertung unterzogen: bei einer Verdün nung des Urinüberstandes von 1 : 50 liegt noch ein E-Wert von 0,589 vor: d. h. große Mengen RiV-Par tikel befinden sich im Urin: Diagnose: bösartiger Tumor in der Niere oder den ableitenden Harnwegen; Wiederholung der cystoskopischen Untersuchung diesmal mit mehreren Probeexzisionen der Harn blase: Diagnose: Urothelkarzinom; Ergänzung der ELISA Diagnostik durch monoklonale Antikörper gegen die Isoform des Annexin 1 (H 156 Y) - ein Bestandteil der RiV-Partikel - bei der Verdünnungs stufe 1 : 50 des Urinzentrifugat-Überstandes ergab sich ein E-Wert von 0,459, der ebenfalls als positiv und die Diagnose absichernd angesehen werden muss.Third: patient A, born in 1935 for a few weeks at the end of micturition, blood drops and blood spotting ren in underwear; urological history unremarkable; urological status and rectal palpation find unremarkable; Sonography of the kidneys, except for the solitary cyst on the lower pole on the left, is also unresponsive due; Prostate hyperthrophied: Volume: 60.6 ml, bladder floor significantly impressed by prostate; Urine cytology: suspicious urothelial cells, control required; urographic examination unremarkable; cystoscopic examination shows no clear change that requires trial excision; Diagnostic use of a new test: ELISA with monoclonal antibodies against RiV particles on the hard disk, this is diluted with the patient's urine centrifugate supernatant incubated and subjected to the automatic computer-controlled color evaluation: with a dilution If the urine supernatant is 1:50, there is an E value of 0.589: d. H. large quantities of RiV Par particles are in the urine: diagnosis: malignant tumor in the kidney or the urinary tract; Repetition of the cystoscopic examination this time with several test excisions of the urine bladder: diagnosis: Urothelial Carcinoma; Complement the ELISA diagnostics with monoclonal antibodies against the isoform of Annexin 1 (H 156 Y) - a component of the RiV particles - in the dilution Level 1:50 of the urine centrifugate supernatant gave an E-value of 0.459, which was also positive and the diagnosis must be viewed as a confirmation.

E-Werte unter 0,200 sind als negativ und ohne Hinweis auf bösartige Tumore anzusehen, d. h. Tumor- Ausschluss bei wiederholter Bestätigung des negativen Befundes.E values below 0.200 are to be regarded as negative and without any indication of malignant tumors, i.e. H. Tumor- Exclusion from repeated confirmation of the negative result.

Claims

Yes / no in vitro method for the detection of malignant tumors in human and veterinary medicine, characterized in that with the help of antibodies in body fluids, in cell sediments from these and in cell tissues malignant tumors, chronic viral infections, granulomas of different etiology and ectopic pregnancy as well as other processes accompanied by RiV in vertebrate cells, it is found that these antibodies can be species-specific or non-species-specific, that these antibodies are used unpurified in sera or purified using methods known per se, that poly- or monoclonal antibodies are used that the antibodies against the RiV particle are directed in a species-specific or non-species-specific manner, that the antibodies are used individually specifically against the individual constituents of RiV particles, that individual constituents of RiV particles match those monoclonal antibodies r manufactured and used in immunological processes against which the antibodies are used are designated as follows:
Annexin V, Annexin I, 14-3-3 ζ, 14-3-3 ε, galectin-3, S100A4, S100A2, glutathione-S transferase, Nm23, aldolase, gCAP39, myosin (light chain), actin, vimentin, nucleolin , α-actinin, histone 2A, ribo somales protein L /, HSP27, HSP70, proteasome C6, proteasome (δ), proteasome (I), ezrin, ER-60, PDI, enolase, natural killer enhancing factor, to the plant protein Hevein ( Lectin) homologous mammalian protein (partial sequence: XQXGRQAGGKLXPDN), protein homologous to stratherin (approx. 50k Dk, partial sequence: FGYGYGPYQPVPEQP) and annexin I isoform (H 156 Y).