DD232052A5 - PROCESS FOR PREPARING SPINGOSINE DERIVATIVES - Google Patents
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Abstract
Beschrieben werden neue Verbindungen der Formel (I)-D und (I)-L gemaess Formelblatt, beispielsweise D- bzw. L-erythro-l-(bD-Glucopyranosyloxy)-3-hydroxy-2-palmitoylamino-4-trans-octadecen, welche eine wundheilungsfoerdernde bzw. zell- und geweberegenerierende Wirkung ausueben und zur Behandlung von Wunden jeglicher Genese therapeutisch verwendet werden koennen. Sie werden aus Ceramiden der Formel (II)-D und/oder (II)-L mit guter Ausbeute und in stereochemisch einheitlicher Form hergestellt. Das Verfahren umfasst den Schutz der 1-Hydroxylgruppe, die Veresterung der 3-Hydroxylgruppe, die Abspaltung der 1-Hydroxylschutzgruppe, die Umsetzung mit dem Trichloracetimidat einer 2,3,4,6-tetraacylierten D-Glucose und die Abspaltung der 0-Acylgruppen. Bei Verwendung eines D,L-Ceramids (II) wird die Veresterung der 3-Hydroxylgruppe durch eine optisch aktive Saeure durchgefuehrt, gefolgt von der Trennung in die Diastereomeren, oder es wird nach der Umsetzung mit dem D-Glucosederivat eine Trennung in die Diastereomeren vorgenommen.Described are novel compounds of the formula (I) -D and (I) -L according to the formula sheet, for example D- or L-erythro-l- (bD-glucopyranosyloxy) -3-hydroxy-2-palmitoylamino-4-trans-octadecene which exert a wound healing or cell and tissue regenerating effect and can be used therapeutically for the treatment of wounds of any genesis. They are prepared from ceramides of the formula (II) -D and / or (II) -L in good yield and in stereochemically uniform form. The method comprises the protection of the 1-hydroxyl group, the esterification of the 3-hydroxyl group, the cleavage of the 1-hydroxyl protecting group, the reaction with the trichloroacetimidate of a 2,3,4,6-tetraacylated D-glucose and the cleavage of the 0-acyl groups. When using a D, L-ceramide (II), the esterification of the 3-hydroxyl group is performed by an optically active acid, followed by the separation into the diastereomers, or after the reaction with the D-glucose derivative, a separation into the diastereomers is carried out ,
Description
Die Erfindung betrifft die Herstellung neuer Glykosphingolipide durch Totalsynthese. Die neuen Verbindungen weisen wertvolle therapeutische Eigenschaften bei Wunden jeglicher Art auf und können daher in der Medizin als Heilmittel eingesetzt werden.The invention relates to the preparation of new glycosphingolipids by total synthesis. The new compounds have valuable therapeutic properties in wounds of any kind and can therefore be used in medicine as a remedy.
Bei den bisher bekannten, im menschlichen Organismus vorkommenden Lipiden unterscheidet man zwei Gruppen: die humoralen, nicht strukturgebundenen Lipide und solche, welche Bestandteile von Zellstrukturen sind.In the previously known lipids occurring in the human organism, a distinction is made between two groups: the humoral, nonstructural lipids and those which are constituents of cell structures.
Zu den humoralen Lipiden, welche bei höheren Organismen eine biologische Funktion ausüben, gehören beispielsweise Steroidhormone und Prostaglandine. Letztere spielen bei entzündlichen Reaktionen der Gewebe eine Rolle.Humoral lipids which function biologically in higher organisms include, for example, steroid hormones and prostaglandins. The latter play a role in inflammatory tissue reactions.
Die strukturgebundenen Lipide spielen, neben der Energiespeicher-Funktion, vor allem in den Zellstrukturen, welche verschiedene Kompartmente der Zellen trennen, eine wichtige Rolle. In zunehmendem Maß wird erkannt, wie einzelne Lipide die Signalübertragung durch diese Membranen, z. B. durch die Veränderung der Membranfluidität (laterale Diffusionsgeschwindigkeit der Membraniipide) beeinflussen und steuern können. Im Verlauf eines Teilungszyklus der Zellen ändern sich die Membranzusammensetzung und damit die physikalischen Eigenschaften kontinuierlich. Als Komponenten dieser Membranen sind vor allem Phospholipide, Sterine und Glykospingolipide bekannt.The structure-bound lipids play, in addition to the energy storage function, especially in the cell structures that separate different compartments of the cells, an important role. Increasingly, it is recognized how individual lipids inhibit signal transmission through these membranes, e.g. B. by the change in membrane fluidity (lateral diffusion rate of Membraniipide) influence and control. In the course of a division cycle of the cells, the membrane composition and thus the physical properties change continuously. As components of these membranes, especially phospholipids, sterols and glycospingolipids are known.
Die Glykosphingolipide sind Abkömmlinge der Ceramide, welche aus einem Aminodiol wie das C18-Sphingosin oder das C2o-Sphingosin:The glycosphingolipids are descendants of ceramides derived from an aminodiol such as C 18 -sphingosine or C 2 o-sphingosine:
C13H27 C15H31 C 13 H 27 C 15 H 31
und einem langkettigen Fettsäurerest (RCO-) bestehen und der folgenden allgemeinen Formel entsprechen: Oand a long-chain fatty acid radical (RCO-) and conform to the following general formula: O
HN R R, R' = langkettigeHN R R, R '= long-chain
* aliphatische* aliphatic
Radikaleradical
OH CeramideOH ceramides
An die mit * bezeichnete Hydroxylgruppe der Ceramide ist ein Kohlenhydratanteil gebunden, welcher aus 1 bis 20 oder sogarTo the hydroxyl group of the ceramides designated * is bound a carbohydrate moiety, which is from 1 to 20 or even
mehr Zuckereinheiten bestehen kann.more sugar units can exist.
Je nach der Natur des Kohlenhydratanteils fallen die Glykosphingolipide in zwei Hauptklassen. Bei Verknüpfung des Ceramids mit einem oder mehreren Monosacchariden sind es die neutralen Glykosphingolipide—auch Cerebroside genannt, während die Verknüpfung mit einem Oligosaccharid, welches durch Acylneuraminsäuren (auch Sialinsäuren genannt) substituiert ist, die sauren Glykosphingolipide — auch Ganglioside genannt — ergibt. Letzteren werden Rezeptorfunktionen, z. B. für Viren und Toxine zugeschrieben; ferner sollen sie eine neuro-regenerative Wirkung haben.Depending on the nature of the carbohydrate portion, the glycosphingolipids fall into two major classes. When the ceramide is linked to one or more monosaccharides, the neutral glycosphingolipids are also called cerebrosides, while the linkage with an oligosaccharide which is substituted by acylneuraminic acids (also called sialic acids) gives the acidic glycosphingolipids, also called gangliosides. The latter become receptor functions, e.g. B. attributed to viruses and toxins; Furthermore, they should have a neuro-regenerative effect.
Dieser Stand der Technik wird insbesondere durch folgende Abhandlungen veranschaulicht:This prior art is illustrated in particular by the following treatises:
— K.Jungermann und H.Möhler: Biochemie, Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg-NewYork 1980,448-452;K. Jungmann and H. Moehler: Biochemistry, Springer-Verlag, Berlin-Heidelberg-New York 1980, 488-452;
— S. Hakomori, Annual Review of Biochemistry 52 (1981), 733-764.- S. Hakomori, Annual Review of Biochemistry 52 (1981), 733-764.
Bei den eigentlichen, aus dem Hirn stammenden Cerebrosiden besteht die Fettsäurekomponente meistens aus einer C24-Carbonsäure, welche eine Hydroxylgruppe in α-Stellung oder eine Doppelbindung tragen kann. Beispielsweise findet sich im Kerasin die Lingnocerinsäure C24H48O2, im Nerven die Nervonsäure C24H46O2, im Cerebron oder Phrenosin die Cerebronsäure C24H48O3 und im Hydroxynervon die Hydroxynervonsäure C24H4e03. In diesen und in den meisten Cerebrosiden besteht der Kohiehydratanteil aus 1 Mol Galaktose.In the actual cerebrosides derived from the brain, the fatty acid component usually consists of a C 24 -carboxylic acid which can carry a hydroxyl group in the α-position or a double bond. For example, found in the Kerasin Lingnocerinsäure C24H48O2, in the nervous nervonic acid C 24 H 46 O 2, in Cerebron or phrenosin the cerebronic C 24 H 48 O 3, and in the Hydroxynervon hydroxynervonic acid C 24 H 4 e03. In these and in most cerebrosides, the proportion of cohy hydrate consists of 1 mole of galactose.
In neuerer Zeit sind weitere neutrale Glykosphingolipide entdeckt worden, welche eine Fettsäurekomponente mit kürzerer aliphatischen Kette und einen aus mehreren Zuckereinheiten bestehenden Kohlehydratanteil aufweisen. Diese Verbindungen sind aber nicht im Gehirn, sondern in anderen Organen, beispielsweise im Darm, in der Milz, in der Leber und in den Erythrozyten, gefunden worden, weshalb der Name Cerebroside nicht mehr oder nur für die zuvor erwähnte Gruppe verwendet werden sollte.More recently, other neutral glycosphingolipids have been discovered which have a fatty acid component with a shorter aliphatic chain and a carbohydrate moiety consisting of several sugar units. However, these compounds have not been found in the brain, but in other organs, for example in the intestine, spleen, liver and erythrocytes, which is why the name cerebrosides should no longer or only be used for the previously mentioned group.
Es ist Ziel der Erfindung, den Stand der Technik durch neue, therapeutisch wirksame Verbindungen zu bereichern.It is an object of the invention to enrich the state of the art with new, therapeutically effective compounds.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, Verfahren zur Herstellung neuer Sphingosidinderivate bereitzustellen.The invention has for its object to provide processes for the preparation of new sphingosidine derivatives.
Überraschenderweise wurde nun eine neue Gruppe der neutralen Glykosphingolipide gefunden, welche sich gegenüber den oben erwähnten, bereits bekannten Verbindungen durch eine andere Fettsäurekomponente und/oder einen anderen Kohlehydratanteil, nämlich 1 Mol D-Glukose, auszeichnen. Diese neue chemische Struktur widerspiegelt sich in einer bei den Glykosphingolipiden bisher ebenfalls unbekannten wundheilungsfördernden bzw. einer zell- und geweberegenerierendenSurprisingly, a new group of neutral glycosphingolipids has now been found which are distinguished from the abovementioned compounds already known by a different fatty acid component and / or a different carbohydrate component, namely 1 mol of D-glucose. This new chemical structure is reflected in one of the glycosphingolipids previously also unknown wound healing or a cell and tissue regenerating
Wirkung.Effect.
Die erfindungsgemäß herzustellenden Verbindungen werden durch die Formel (I)-D und (I)-L auf beiliegendem Formelblatt wiedergegeben; wie aus den Formeln hervorgeht, besitzen sie die erythro-Konfiguration.The compounds to be prepared according to the invention are represented by the formula (I) -D and (I) -L on the attached formula sheet; As the formulas show, they have the erythro configuration.
Sofern es sich um Verbindungen der Formel (I)-D handelt, können sie als Zwischenprodukte in der Biosynthese bzw. im Metabolismus von in der Natur (Organe und Körperflüssigkeiten von Säugetieren) vorkommenden höheren Glykosphingolipiden, wie die Ganglioside, welche einen aus mehreren Zuckereinheiten bestehenden Kohlehydratanteil aufweisen, aufgefaßt werden. Die Verbindungen der Formel (I)-L hingegen haben in der Natur keinen Platz und können auch nicht als Teilformel oder Vorläufer von komplexeren Verbindungen aufgefaßt werden.As far as compounds of formula (I) -D are concerned, they may be used as intermediates in the biosynthesis or metabolism of higher glycosphingolipids occurring in nature (mammalian organs and body fluids), such as the gangliosides which comprise one of several sugar units Carbohydrate share have to be understood. By contrast, the compounds of the formula (I) -L have no place in nature and can not be regarded as partial or precursor of more complex compounds.
In den Formel (I)-D und (I)-L bedeuten:In the formulas (I) -D and (I) -L mean:
R1 den Acyl rest einer Fettsäure mit 14 bis 24 Kohlenstoffatomen oder die entsprechenden Acylreste mit einer Hydroxylgruppe in α-Stellung oder mit einer oder zwei Doppelbindungen in cis-Konfiguration und R2 den Pentadecanyl- oder Heptadecanylrest oder die entsprechenden Ci5- und C17-Reste mit einer, zwei oder drei Doppelbindungen, von welchen jeweils eine in 1,2-Stellung sitzt und trans-Konfiguration aufweist, die andere oder anderen, wenn vorhanden, cis-Konfiguration aufweisen.R 1 is the acyl radical of a fatty acid having 14 to 24 carbon atoms or the corresponding acyl radicals having a hydroxyl group in the α-position or having one or two double bonds in the cis configuration and R 2 is the pentadecanyl or heptadecanyl radical or the corresponding Ci 5 - and C 17 One, two or three double bond residues, one each in the 1,2-position and having the trans configuration, which have other or different, if any, cis configurations.
Die chemische Struktur ist im Kohlehydratanteil homogen; dennoch ist die Vielfalt der wundheilungsfördemden Glukosphingolipide bemerkenswert. Dabei ist jedoch zu beachten, daß diese Vielfalt alleine durch Variation des Lipidanteils zustandekommt. Das erscheint biologisch sinnvoll, denn hauptsächlich der aus einer Membran nach außen gerichtete Kohlehydratanteil des Moleküls ist für die biologische Aktivität bestimmend. Die Fluidität von Membranen wird z.B. von Glukosphingolipiden beeinflußt, indem das Amidproton des Ceramids mit den Phosphatgruppen von Phospholipiden in Wechselwirkung treten kann und somit einer Lipidmembran mehr Stabilität verleiht als sie nur durch eine Phosphorlipid/Steroid-Wechselwirkung allein zustande kommen kann.The chemical structure is homogeneous in the carbohydrate portion; however, the variety of wound healing promoting glucosphingolipids is remarkable. However, it should be noted that this diversity comes about solely by varying the lipid content. This seems biologically meaningful, because mainly the carbohydrate portion of the molecule directed outwards from a membrane is decisive for the biological activity. The fluidity of membranes is e.g. is affected by glucosphingolipids in that the amide proton of ceramide can interact with the phosphate groups of phospholipids, thus providing more stability to a lipid membrane than can be achieved only by a phospholipid / steroid interaction alone.
Die Verbindungen entfalten in vivo eine fördernde Wirkung auf die Zeil- und Geweberegeneration. Diese Wirkung läßt sich auch in vitro, mit Hilfe von Zellkulturen, nachweisen. Wird nämlich in einer Zellkultur, beispielsweise einer Fibroblastenkultur, vorerst die Teilungsrate durch Einwirkung eines schädigenden Agens künstlich herabgesetzt und wird die Kultur danach mit den Verbindungen behandelt, so wird die Teilungsrate in kurzer Zeit wieder auf einen normalen, mit jenem einer gesunden, unbeschädigten Kultur vergleichbaren oder identischen Wert gebracht. Dieselbe Behandlung einer parallel geführten, aber gesunden Zellkultur bewirkt hingegen keine Veränderungen der Teilungsrate. Es handelt sich also dabei nicht etwa um eine bloße mitotische Wirkung.The compounds have a promoting effect on cell and tissue regeneration in vivo. This effect can also be detected in vitro, with the help of cell cultures. Namely, in a cell culture, such as a fibroblast culture, for the time being, the rate of division artificially reduced by the action of a harmful agent and the culture is then treated with the compounds, the division rate in a short time back to a normal, with that of a healthy, undamaged culture comparable or identical value. The same treatment of a parallel, but healthy cell culture, however, causes no changes in the rate of division. It is therefore not about a mere mitotic effect.
Infolge der beschriebenen fördernden Wirkung auf die Regenerationsmechanismen geschädigter Zellen eignen sich die Verbindungen für eine therapeutische Anwendung bei Wunden jeglicher Genese, insbesondere bei schlecht oder langsam heilenden Wunden oder Ulzerationen. In der Tat führen sie insbesondere bei topischer Anwendung auf Wunden, wie Ulcus cruris, Geschwüre des Magendarmtraktes, insbesondere Ulcus ventriculi und Ulcus duodeni, diabetische Gangrän, Strahlenschäden, Verbrennungen und Hauttransplantationen, zur Bildung von gesundem, gut durchblutetem neuem Gewebe ohne störende Narben.As a result of the described beneficial effect on the regeneration mechanisms of damaged cells, the compounds are suitable for therapeutic use in wounds of any genesis, especially in poorly or slowly healing wounds or ulcers. In fact, especially when applied topically to wounds such as ulcus cruris, ulcers of the gastrointestinal tract, especially gastric ulcer and duodenal ulcer, diabetic gangrene, radiation damage, burns and skin grafts, they result in the formation of healthy, well-perfused new tissue without disfiguring scars.
Infolge ihrer höheren therapeutischen Wirksamkeit werden die Sphingosinderivate der Formel (I)-D ganz allgemein bevorzugt.Due to their higher therapeutic efficacy, the sphingosine derivatives of formula (I) -D are generally preferred.
Andererseits werden wegen ihrer höheren spezifischen Aktivität (Aktivität per Mikrogramm der Verbindung) jene Sphingosinderivate der Formel (I)-D und (I)-L ebenfalls bevorzugt, bei welchen R1 den Acylrest einer Fettsäure mit 14 bis 20 Kohlenwasserstoffatomen oder die entsprechenden Acylreste mit einer Hydroxylgruppe in α-Stellung oder mit einer oder zwei Doppelbindungen in cis-Konfiguration bedeutet, R2 jedoch die oben angegebene Bedeutung beibehält.On the other hand, because of their higher specific activity (microgram activity of the compound) those sphingosine derivatives of the formula (I) -D and (I) -L are also preferred in which R 1 is the acyl radical of a fatty acid having 14 to 20 carbon atoms or the corresponding acyl radicals a hydroxyl group in the α-position or with one or two double bonds in cis configuration, R 2, however, retains the meaning given above.
Besonders bevorzugt wird die engere Gruppe von Sphingosinderivaten, welche durch die Formel (I)-D wiedergegeben wird, in welcher R1 den Acylrest einer Fettsäure, einer a-Hydroxyfettsäure oder einer einfach oder zweifach cis-olef inisch ungesättigten Fettsäure mit 14 bis 20 Kohlenstoffatomen bedeutet und R2 die oben angegebene Bedeutung beibehält.Particularly preferred is the closer group of sphingosine derivatives represented by the formula (I) -D in which R 1 is the acyl radical of a fatty acid, an α-hydroxy fatty acid or a mono or di-cis-olefinically unsaturated fatty acid having 14 to 20 carbon atoms means and R 2 retains the meaning given above.
Beispiele der erfindungsgemäßen Verbindungen sind u.a.:Examples of the compounds of the invention include:
das D- und das L-erythro-HjS-D-GlucopyranosyloxyJ-S-hydroxy^-myristoylamino^-trans-octadecen und die entsprechenden -4-trans-eicosene;the D- and L-erythro-HjS-D-glucopyranosyloxy J-S-hydroxy-myristoylamino-trans-octadecene and the corresponding -4-trans-eicosenes;
das D- und das L-erythro-l-^-D-Glucopyranosyloxyl-S-hydroxy^-palmitoylamino-^trans-octadecen und die entsprechenden -4-trans-eicosene;the D- and the L-erythro-1-D-glucopyranosyloxyl S-hydroxy-palmitoylamino trans-octadecene and the corresponding 4-trans-eicosenes;
das D- und das L-erythro-M/S-D-GlucopyranosyloxyJ-S-hydroxy^-stearoylamino^-trans-octadecen und die entsprechenden -4-tra ns-eicosene;the D- and the L-erythro-M / S-D-glucopyranosyloxy J-S-hydroxy-stearoylamino-trans-octadecene and the corresponding -4-traps-eicosenes;
das D- und das L-erythro-l-(/3-D-Glucopyranosyloxy)-3-hydroxy-2-(9-cis-octadecenoylamino)-4-trans-octadecen und die entsprechenden-4-trans-eicosene;the D- and L-erythro-1 - (/ 3-D-glucopyranosyloxy) -3-hydroxy-2- (9-cis-octadecenoylamino) -4-trans-octadecene and the corresponding 4-trans-eicosenes;
das D- und das L-erythro-l-(/3-D-Glucopyranosyloxy)-3-hydroxy-2-(cis,cis-9,12-octadecadienoylamino)-4-trans-octadecen und die entsprechenden -4-trans-eicosene;the D- and L-erythro-1 - (/ 3-D-glucopyranosyloxy) -3-hydroxy-2- (cis, cis-9,12-octadecadienoylamino) -4-trans-octadecene and the corresponding 4-trans -eicosene;
das D- und das L-erythro-l-(|8-D-Glucopyranosyloxy)-3-hydroxy-2-eicosanoylamino-4-trans-octadecen und die entsprechenden -4-trans-eicosene;the D- and L-erythro-l- (| 8-D-glucopyranosyloxy) -3-hydroxy-2-eicosanoylamino-4-transoctadecenes and the corresponding -4-trans-eicosenes;
das D- und das L-erythro-l-(/3-D-Glucopyranosyloxy)-3-hydroxy-2-docosanoylamino-4-trans-octadecen und die entsprechenden -4-trans-eicosene;the D- and L-erythro-1 - (/ 3-D-glucopyranosyloxy) -3-hydroxy-2-docosanoylamino-4-transoctadecenes and the corresponding 4-trans-eicosenes;
das D- und das L-erythro-l-(/3-D-Glucopyranosyloxy)-3-hydroxy-2-tetracosanoylamino-4-trans-octadecen und die entsprechenden -4-trans-eicosene.the D- and L-erythro-l- (/ 3-D-glucopyranosyloxy) -3-hydroxy-2-tetracosanoylamino-4-trans-octadecene and the corresponding -4-trans-eicosenes.
Erfindungsgemäß werden die Sphingosinderivate der Formel (I)-D oder (I)-L in reinem Zustande und mit befriedigender Ausbeute durch Totalsynthese hergestellt. Das Verfahren eignet sich vorzüglich zur Anwendung in industriellem Maßstäbe und macht die Herstellung der Verbindungen von jeglicher natürlicher Quelle unabhängig.According to the invention, the sphingosine derivatives of the formula (I) -D or (I) -L are prepared in the pure state and with a satisfactory yield by total synthesis. The process is excellently suited for use on an industrial scale and makes the preparation of the compounds independent from any natural source.
Das Verfahren ist dadurch gekennzeichnet,daß man eine optische aktive Verbindung der Formel (M)-D oder (M)-L, in welcher R1 und R2 die oben angegebenen Bedeutungen haben, oder das entsprechende Racemat mit einem organischen Reagens, das mit einer primären Hydroxylgruppe selektiv zu reagieren vermag, unter Bildung von Verbindungen der Formel (III), in welchen R eine Hydroxylschutzgruppe bedeutet, umsetzt,The process is characterized in that an optically active compound of the formula (M) -D or (M) -L, in which R 1 and R 2 have the meanings given above, or the corresponding racemate with an organic reagent having reacting selectively with a primary hydroxyl group to form compounds of formula (III) in which R represents a hydroxyl-protecting group,
(A) die Verbindung der Formel (III) mit einer organischen Carbonsäure unter Bildung einer Verbindung der Formel (IV), in welcher Ac1 den Acylrest einer organischen Carbonsäure bedeutet, verestert oder(A) the compound of formula (III) with an organic carboxylic acid to form a compound of formula (IV) in which Ac 1 represents the acyl radical of an organic carboxylic acid esterified or
(B) bei Verwendung eines Racemates als Ausgangsprodukt die Verbndung der Formel (III) mit einer optisch aktiven organischen Säure verestert und das erhaltene Gemisch von diastereomeren Verbindungen der Formel (V), in welchen Ac2 den Acylrest einer optisch aktiven organischen Säure bedeutet, in die Diastereomeren trennt oder(B) when using a racemate as the starting material, the compound of the formula (III) esterified with an optically active organic acid and the resulting mixture of diastereomeric compounds of the formula (V), in which Ac 2 represents the acyl radical of an optically active organic acid, in the diastereomers separates or
(C) auf die Variante (B) anschließend, die einzelnen Diastereomeren der Formel (V) desacyliert und mit einer organischen Carbonsäure unter Bildung von enantiomeren Verbindungen der Formel (Vl), in welchen Ac3 den Acylrest einer organischen Carbonsäure bedeutet, verestert,(C) subsequently to variant (B), the individual diastereomers of the formula (V) are deacylated and esterified with an organic carboxylic acid to form enantiomeric compounds of the formula (VI) in which Ac 3 is the acyl radical of an organic carboxylic acid,
die bei der Variante (A) erhaltene Verbindung der Formel (IV) bzw.the compound of the formula (IV) obtained in variant (A) or
die bei der Variante (B) erhaltenen Diastereomeren der Formel (V) bzw.in the variant (B) obtained diastereomers of the formula (V) or
die bei der Variante (C) erhaltenen Enantiomeren der Formel (Vl) von der Hydroxylschutzgruppe R unter Bildung entsprechenderin the variant (C) obtained enantiomers of the formula (Vl) of the hydroxyl protecting group R to form corresponding
Verbindungen der Formel (VII), (VIII) bzw. (IX) befreit, die Verbindung der Formel (VII), (VIII) bzw. (IX) mit dem O-Trifluor- oder O-Trichloracetimidat einer D-Glucose, deren Hydroxylgruppen in den 2-, 3-, 4- und 6-Stellungen durch Acylreste Ac4 geschützt sind, unter Bildung von Verbindungen der jeweils entsprechenden Formel (X), (Xl) bzw. (XII) umsetzt, wenn für die Variante (A) als Ausgängsprodukt ein Racemat verwendet wird, die Verbindung der Formel (X) in die Diastereomeren trennt, und von den Verbindungen der Formel (X), (Xl) bzw. (XII) die Acylgruppen Ac1, Ac2, Ac3 und Ac4 gleichzeitig abspaltet, wobei aus Verbindungen der D- bzw. der L-Reihe jeweils Verbindungen der D- bzw. der L-Reihe entstehen.Compounds of the formula (VII), (VIII) or (IX) liberate the compound of the formula (VII), (VIII) or (IX) with the O-trifluoro or O-trichloroacetimidate of a D-glucose, their hydroxyl groups in the 2, 3, 4 and 6 positions are protected by acyl radicals Ac 4 , with the formation of compounds of the corresponding formula (X), (XI) or (XII) respectively, if for the variant (A) the starting material used is a racemate which separates the compound of the formula (X) into the diastereomers, and of the compounds of the formulas (X), (XI) or (XII) the acyl groups Ac 1 , Ac 2 , Ac 3 and Ac 4 simultaneously splits off, with compounds of the D or the L series each of the compounds D- and L-series arise.
Ausgangsprodukte des Verfahrens sind Ceramide der Formel (M)-D und/oder (H)-L; das Verfahren kann nämlich sowohl auf eine der optisch aktiven Verbindungen als auch auf das entsprechende Racemat angewendet werden. Wird als Ausgangsprodukt ein Racemat eingesetzt, so erfolgt auf einer bestimmten Verfahrensstufe eine Trennung in Diastereomere bzw. in Enantiomere, so daß als Endprodukt in jedem Fall die reinen und stereochemisch einheitlichen Verbindungen der Formel (I)-D oder (I)-L erhaltenStarting materials of the process are ceramides of the formula (M) -D and / or (H) -L; Namely, the method can be applied to either one of the optically active compounds and the corresponding racemate. If a racemate is used as the starting material, a separation into diastereomers or into enantiomers takes place at a certain process stage, so that the pure and stereochemically uniform compounds of the formula (I) -D or (I) -L are obtained as the end product in each case
werden. „__ --become. "__ -
Ihrerseits können die Ceramide der Formel (H)-D bzw. (H)-L oder ihr Racemat aus entsprechenden C18- oder C2o-Sphingosinen durch N-Acylierung mittels einer Fettsäure der Formel R1-OH, in welcher R1 die oben angegebene Bedeutung hat, oder eines reaktionsfähigen funktioneilen Derivates derselben hergestellt werden.For their part, the ceramides of the formula (H) -D or (H) -L or their racemate of corresponding C 18 - or C 2 o-sphingosines by N-acylation by means of a fatty acid of the formula R 1 -OH, in which R 1 has the meaning given above, or a reactive functional derivative thereof.
Die Fettsäure R1OH ist beispielsweise die Myristinsäure, die Palmitinsäure, die Stearinsäure, die Oelsäure (cis-9-Octadecensäure), die Linolsäure (eis, cis-9,12-Octadecadiensäure), die Arachinsäure (Eicosansäure), die Behensäure (Docosansäure) oder — an der oberen Grenze der für R1 angegebenen Bedeutung — dieTetracosansäure (Lignocerinsäure), die cis-15-Tetracosensäure (Nervonsäure), die 2-Hydroxytetracosansäure (Cerebronsäure), die 2-Hydroxy-15-tetracosensäure (Hydroxynervonsäure) oder die mit letzterer isomere 2-Hydroxy-17-tetracosensäure.The fatty acid R 1 OH is, for example, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid (cis-9-octadecenoic acid), linoleic acid (ice, cis-9,12-octadecadienoic acid), arachidic acid (eicosanoic acid), behenic acid (docosanoic acid ) or, at the upper limit of the meaning given for R 1 , the tetracosanoic acid (lignoceric acid), the cis-15-tetracosensic acid (nervonic acid), the 2-hydroxytetracosanoic acid (cerebronic acid), the 2-hydroxy-15-tetracosensic acid (hydroxynervonic acid) or the with the latter isomeric 2-hydroxy-17-tetracenoic acid.
Die Acylierung mit der Fettsäure R1-OH kann nach dem Verfahren von D. Shapiro und Mitarb. [J. Am. Chem. Soc. 81,4360 (1959)] bewerkstelligt werden; eine besonders ergiebige Arbeitsweise ist dafür entwickelt worden, wie im experimentellen Teil beschrieben wird.The acylation with the fatty acid R 1 -OH can be carried out according to the method of D. Shapiro and Mitarb. [J. At the. Chem. Soc. 81, 436 (1959)]; a particularly efficient mode of operation has been developed for this, as described in the experimental part.
Die den natürlich vorkommenden Glykosphingolipiden, Cerebrosiden und Gangliosiden zugrundeliegenden Sphingosine besitzen die erythro-Konfiguration und gehören der D-Reihe an. Das erfindungsgemäße Verfahren bringt nun die Möglichkeit, auch racemische Sphingosine in die Endprodukte der Formel (I)-D und (I)-L zu überführen. Dies ist von besonderer Bedeutung, weil die bekannten Synthesen der D-Sphingosine überzahlreiche, mitunter heikle Verfahrensstufen verlaufen, während eine neuere, einfache Synthese von R. R.Schmidt und R.Kläger [Angew. Chem. 94,215—216 (1982); Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 21, 210—211 (1982); Angew. Chem. Suppl. 1982,393—397] die racemischen Sphingosine mit guter Ausbeute liefert.The sphingosines underlying the naturally occurring glycosphingolipids, cerebrosides and gangliosides have the erythroid configuration and belong to the D series. The process according to the invention now makes it possible to convert racemic sphingosines into the end products of the formula (I) -D and (I) -L. This is of particular importance because the known syntheses of the D-sphingosines run over numerous, sometimes delicate process stages, while a recent, simple synthesis by R. R. Schmidt and R.Kläger [Angew. Chem. 94, 215-216 (1982); Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 21, 210-211 (1982); Angew. Chem. Suppl. 1982, 393-397] provides the racemic sphingosines in good yield.
Im folgenden wird das Verfahren ausführlicher beschrieben.In the following, the method will be described in more detail.
Der Schutz der primären Hydroxylgruppe der Ceramide (M)-D und/oder (M)-L soll mit Reagenzien vorgenommen werden, welche in Gegenwart einer primären und einer sekundären Hydroxylgruppe selektiv mit der ersteren reagieren. Es eignen sich als Schutzgruppe R insbesondere solche, die eine große räumliche Beanspruchung aufweisen wie die tert. Butyl-, Triphenylmethyl-(Trityl-), Trichloracetyl-, Trimethylsilyl-, tert. Butyldimethylsilyl- oder tert. Butyldiphenylsilylgruppe. Bevorzugt werden die Triphenylmethyl-, Monomethoxytriphenylmethyl-, tert. Butyldimethylsilyl- und tert. Butyldiphenylsilylgruppe.The protection of the primary hydroxyl group of ceramides (M) -D and / or (M) -L should be carried out with reagents which react selectively with the former in the presence of a primary and a secondary hydroxyl group. There are suitable as a protective group R in particular those which have a large spatial stress as the tert. Butyl, triphenylmethyl (trityl), trichloroacetyl, trimethylsilyl, tert. Butyldimethylsilyl or tert. Butyldiphenylsilyl. The triphenylmethyl, monomethoxytriphenylmethyl, tert. Butyldimethylsilyl and tert. Butyldiphenylsilyl.
Die Einführung der Schutzgruppe R erfolgt nach den bekannten Methoden der organischen Chemie, entsprechend der Art der gewählten Schutzgruppe. Beispielsweise kann die Triphenylmethylgruppe durch Behandeln des Ceramids mit einem entsprechenden Halogenid wie das Triphenylchlormethan oder das Triphenylbrommethan eingeführt werden. Auch für die tert.The introduction of the protecting group R is carried out according to the known methods of organic chemistry, according to the nature of the selected protecting group. For example, the triphenylmethyl group can be introduced by treating the ceramide with an appropriate halide such as triphenylchloromethane or triphenylbromomethane. Also for the tert.
Butyldimethylsilyl- und die tert. Butyldiphenylsilylgruppe kann das entsprechende Halogenid, vorzugsweise das Chlorid oder das Bromid, mit Vorteil benützt werden.Butyldimethylsilyl and the tert. Butyldiphenylsilylgruppe can be used with advantage the corresponding halide, preferably the chloride or the bromide.
Gemäß einer ersten Verfahrensvariante (A) wird nun das in 1-Stellung geschützte Ceramid der Formel (Ml)-D und/oder (IM)-L in der 3-Stellung mit einer organischen Carbonsäure der Formel Ac1OH oder einem reaktionsfähigen funktioneilen Derivat derselben zu Verbindungen der Formel (IV)-D und/oder (IV)-L verestert. Es eignen sich dazu vor allem aliphatische und aromatische Carbonsäuren; bevorzugt wird die Verwendung einer monoeyclischen aromatischen Carbonsäure wie die Benzoesäure oder eine substituierte Benzoesäure. Dieselben Carbonsäuren eignen sich ebenfalls bzw. werden ebenfalls bevorzugt bei der unten besprochenen Veresterung mit der Säure der Formel Ac3OH.According to a first process variant (A), the ceramide of the formula (III) -D and / or (III) -L protected in the 1-position is now in the 3-position with an organic carboxylic acid of the formula Ac 1 OH or a reactive functional derivative the same to compounds of formula (IV) -D and / or (IV) -L esterified. Aliphatic and aromatic carboxylic acids are particularly suitable for this purpose; preferred is the use of a monocyclic aromatic carboxylic acid such as benzoic acid or a substituted benzoic acid. The same carboxylic acids are also suitable or are likewise preferred in the esterification with the acid of the formula Ac 3 OH discussed below.
Die Veresterung, ob mit der Carbonsäure Ac1OH bzw. Ac3OH oder mit der optisch aktiven organischen Säure Ac2OH, kann nach den in „Ulimanns Encyklopädie der technischen Chemie", 4. Auflage, Band 11, Seiten 91 und folg., Verlag Chemie, Weinheim BRD (1976), beschriebenen Methoden durchgeführt werden. Sie erfolgt mit Vorteil unter Benutzung eines Carbonsäurehalogenids in Gegenwart einer tertiären organischen Base wie Triethylamin, Pyridin oder Dimethylanilin, in einem wasserfreien organischen Lösungsmittel wie Benzol, Toluol, Tetrahydrofuran, Diethylether oder Dichlormethan.The esterification, whether with the carboxylic acid Ac 1 OH or Ac 3 OH or with the optically active organic acid Ac 2 OH, according to the in "Ulimann's Encyclopedia of Industrial Chemistry", 4th Edition, Volume 11, pages 91 and result. It is advantageously carried out using a carboxylic acid halide in the presence of a tertiary organic base such as triethylamine, pyridine or dimethylaniline in an anhydrous organic solvent such as benzene, toluene, tetrahydrofuran, diethyl ether or dichloromethane.
Gemäß einer zweiten Verfahrensvariante (B) wird das in 1-Stellung geschützte Ceramid der Formel (III) in der 3-Stellung mit einer einfachen optisch akiven organischen Carbonsäure Ac2OH oder einem reaktionsfähigen funktioneilen Derivat derselben zu Verbindungen der Formel (V) verestert. Es eignen sich dazu die Weinsäure, die Dibenzoylweinsäure, die Mandelsäure, die O-Acetylmandelsäure, die Camphersäure, die Camphersulfonsäure oder die Bromcamphersulfonsäure usw.; bevorzugt wird die O-Acetylmandelsäure. Die Veresterung erfolgt mit Vorteil unter Benutzung eines Carbonsäurehalogenids in Gegenwart einer tertiären organischen Base, wie Pyridin, in einem wasserfreien organischen Lösungsmittel wie Benzol, Toluol, Tetrahydrofuran, Diethylether oder Dichlormethan.According to a second process variant (B), the protected in the 1-position ceramide of formula (III) in the 3-position with a simple optically active organic carboxylic acid Ac 2 OH or a reactive functional derivative thereof to give compounds of formula (V). Tartaric acid, dibenzoyltartaric acid, mandelic acid, O-acetylmandelic acid, camphoric acid, camphorsulfonic acid or bromocamphoric sulfonic acid, etc .; preferred is the O-acetylmandelic acid. The esterification is advantageously carried out using a carboxylic acid halide in the presence of a tertiary organic base such as pyridine in an anhydrous organic solvent such as benzene, toluene, tetrahydrofuran, diethyl ether or dichloromethane.
Anschließend erfolgt eine Auftrennung des Gemisches diastereomerer Verbindungen der Formel (V) durch Chromatographie, vorzugsweise auf Kieselgel, oder durch fraktionierte Kristallisation.Subsequently, the mixture of diastereomeric compounds of the formula (V) is separated by chromatography, preferably on silica gel, or by fractional crystallization.
Gemäß einer dritten Verfahrensvariante (C) werden die nach (B) erhaltenen Diastereomeren der Formel (V) durch basenkatalysierte Abspaltung der 3-0-Acylgruppe (Ac2), vorzugsweise in Natriummethanolat/Methanol, in die optischen Antipoden übergeführt. Diese werden dann jeweils mit einer einfachen organischen Carbonsäure der Formel Ac3OH oder einem reaktionsfähigen Derivat derselben zu Verbindungen der Formel (Vl) verestert. Es eignen sich dazu einfache aromatische und aliphatische Carbonsäuren. Bevorzugt wird die Verwendung einer aromatischen Carbonsäure, beispielsweise der Benzoesäure oder einer substituierten Benzoesäure.According to a third process variant (C), the diastereomers of the formula (V) obtained according to (B) are converted into the optical antipodes by base-catalyzed cleavage of the 3-0-acyl group (Ac 2 ), preferably in sodium methoxide / methanol. These are then each esterified with a simple organic carboxylic acid of the formula Ac 3 OH or a reactive derivative thereof to give compounds of the formula (VI). Suitable are simple aromatic and aliphatic carboxylic acids. Preference is given to the use of an aromatic carboxylic acid, for example benzoic acid or a substituted benzoic acid.
Die bei den Varianten (A), (B) und (C) erhaltenen Verbindungen (IV), (V) und (Vl) werden zur Abspaltung der Schutzgruppe in I-Stellung einer sauren Hydrolyse (Tritylschutzgruppen, Silylschutzgruppen) unterworfen und so die Verbindungen (VII), (VIII) und (IX) erhalten.The compounds (IV), (V) and (VI) obtained in variants (A), (B) and (C) are subjected to an acid hydrolysis (trityl protective groups, silyl protective groups) to cleave off the protective group in the I position and thus the compounds (VII), (VIII) and (IX).
Die Verbindungen (VII), (VIII) und (IX) werden mit dem O-Trichlor- oder O-Trifluoracetimidat einer D-Glucose, derenThe compounds (VII), (VIII) and (IX) are reacted with the O-trichloro or O-trifluoroacetimidate of a D-glucose, the
Hydroxylgruppen außer jener an der I-Stellung durch Acylreste Ac4 geschützt sind, unter Bildung von Verbindungen der Formel (X), (Xl) und (XII) umgesetzt. Im Fall der Verbindung (X) wird die Auftrennung in die Diastereomeren durchgeführt und von den Verbindungen (X), (Xl) und (XII) werden die Acylgruppen Ac1, Ac2, Ac3 und Ac4 gleichzeitig basenkatalysiert, vorzugsweise in Natriummethanolat/Methanol, abgespalten.Hydroxyl groups other than those protected at the I-position by Acylreste Ac 4 , to form compounds of the formula (X), (Xl) and (XII) implemented. In the case of the compound (X), the resolution into the diastereomers is carried out, and of the compounds (X), (XI) and (XII), the acyl groups Ac 1 , Ac 2 , Ac 3 and Ac 4 are simultaneously base-catalyzed, preferably in sodium methoxide / Methanol, split off.
Beschreibung der pharmakologischen Versuche Versuch 1Description of the Pharmacological Experiments Experiment 1
Ratten werden narkotisiert und die Fellhaare werden ihnen entfernt. Durch flaches Auflegen einer Metallscheibe von 2cm Durchmesser und einer Temperatur von 27O0C während 17 Sekunden wird beidseitig am Rumpf eine Verbrennungswunde verursacht. Die Glukosphingolipide werden in eine Geleegrundlage eingearbeitet, und diese wird täglich zweimal auf die Wunde gestrichen. Es wird die Dauer bis zur Endabheilung der Wunden gemessen. Gelees, welche die Glukosphingolipide enthalten, ergeben gegenüber der Kontrollgruppe eine Verkürzung der Abheiiungsdauer um bis zu 21 %.Rats are anesthetized and the fur hair is removed. By laying flat a metal disc of 2cm diameter and a temperature of 27O 0 C for 17 seconds is caused on both sides of the trunk a burn wound. The glucosphingolipids are incorporated into a jelly base and these are painted twice daily on the wound. The duration until the final healing of the wounds is measured. Jellies containing the glucosphingolipids result in a shortening of the duration of the ablation by up to 21% compared to the control group.
Versuch 2Trial 2
An Minipigs werden dorsal je vier Verbrennungswunden wie in Versuch 1 beschrieben und mit einem Hohlzylinder-Bohrer 4 Stanzwunden mit einem Durchmesser von 2,5cm gesetzt. Die Wirkstoffe werden in eine Geleegrundlage eingearbeitet, und die Wunden werden zweimal täglich mit dem Gelee bestrichen. Die Dauer bis zur Endabheilung wird festgehalten. Die Dauer bis zur Endabheilung wird durch die Glukosphingolipide um bis zu 18% verkürzt.On minipigs dorsally each four burn wounds as described in experiment 1 and set with a hollow cylinder drill 4 punching wounds with a diameter of 2.5cm. The active ingredients are incorporated into a jelly base and the wounds are coated twice daily with the jelly. The duration until the final healing is recorded. The duration until the final healing is reduced by up to 18% by the glucosphingolipids.
Versuch 3Trial 3
An Minipigs werden, wie in Versuch 1 beschrieben, Verbrennungswunden gesetzt. Nach 6,12,18 und 22 Tagen täglicher Wundbehandlung werden aus der Behandlungsgruppe Tiere entfernt und in Narkose getötet. Die Wunden werden ausgeschnitten, halbiert und in 4% gepuffertem Formalin fixiert. Diese Gewebestücke werden zu 4μπ\ dicken histologischen Paraffinschnitten verarbeitet. Folgende Parameter werden quantitativ erfaßt:Minipigs are burned as described in Experiment 1. After 6, 12, 18 and 22 days of daily wound treatment, animals are removed from the treatment group and killed under anesthesia. The wounds are excised, halved and fixed in 4% buffered formalin. These tissue pieces are processed to 4μπ \ thick histological paraffin sections. The following parameters are recorded quantitatively:
1. Länge der epithelialisierten Wundoberfläche1. Length of the epithelialized wound surface
2. Länge der nicht-epithelialisierten Wundoberfläche2. Length of non-epithelialized wound surface
3. Länge des Stratum basale der Epidermis3. Length of the stratum basale of the epidermis
4. Fläche der neugebildeten Epidermis4. Area of the newly formed epidermis
5. Fläche von Haarfollikeln und Talgdrüsen5. Area of hair follicles and sebaceous glands
Die Auswertung der Parameter ergibt, daß die mit Glukosphingolipid-haltigem Gelee behandelten Tiere eine längere epithelialisierte Wundoberfläche und eine kürzere nichtepithelialisierte Wundoberfläche haben als die mit einer wirkstofflosen Geleegrundlage behandelten Tiere.The evaluation of the parameters shows that the animals treated with glucosphingolipid-containing jelly have a longer epithelialized wound surface and a shorter non-epithelialized wound surface than the animals treated with a non-active jelly base.
Versuch 4Trial 4
An narkotisierten Ratten werden 1cm breite und 5 mm tiefe Stanzwunden gesetzt. In diese Wundlöcher werden Viskose-Zellulose-Hohlzylinder-Schwämme eingesetzt. In die innere Aushöhlung der Hohlzylinder werden täglich 100/nl einer glukosphingolipid-haltigen Lösung mit einem Gehalt an Glukosphingolipiden von 0,1 bis 15/xg/ml eingespritzt. 16 und 24 Tage nach der Implantation werden die Schwämme entnommen und auf den Gehalt an Hämoglobin, Desoxyribonukleinsäure und Hydroxyprolin untersucht. Die Wunden, welche mit den Glukosphingolipiden behandelt worden sind, haben einen signifikant höheren Hämoglobin-, DNS- und Hydroxyprolin-Gehalt in den Schwämmen als jene der Kontrolltiere.Anesthetized rats are given 1cm wide and 5mm deep punch wounds. Viscose-cellulose hollow cylinder sponges are used in these wound holes. 100 / nl of a glucosphingolipid-containing solution containing glucosphingolipids of 0.1 to 15 / xg / ml are injected daily into the inner cavity of the hollow cylinders. At 16 and 24 days after implantation, the sponges are removed and assayed for the levels of hemoglobin, deoxyribonucleic acid and hydroxyproline. The wounds treated with the glucosphingolipids have a significantly higher hemoglobin, DNA and hydroxyproline content in the sponges than those of the control animals.
Versuch 5Trial 5
Fibroblasten-Zellkulturen, welche in einem Nährmedium, das mit Bicarbonat und CO2-haltiger Atmosphäre bei pH 7,2 gepuffert ist, gewachsen sind, werden in einem neuen Nährmedium ausgesetzt, das kein Bicarbonat enthält und das normaler Atmosphäre ausgesetzt ist, wobei der pH 7,2 durch Zugabe eines geeigneten, nicht-toxischen Puffers, wie 2-[4-(2-Hydroxyäthyl)-piperazin-1-yl]-äthansulfonsäure/NaOH-Lösung (HEPES), stabilisiert wird.Fibroblast cell cultures grown in a nutrient medium buffered with bicarbonate and CO 2 -containing atmosphere at pH 7.2 are exposed in a new nutrient medium containing no bicarbonate and exposed to the normal atmosphere, the pH 7.2 by addition of a suitable, non-toxic buffer, such as 2- [4- (2-hydroxyethyl) -piperazin-1-yl] -äthansulfonsäure / NaOH solution (HEPES) stabilized.
Zellen, welche im Nährmedium kein Glukosphingolipid zur Verfügung haben, stellen das Wachstum nahezu ein, während sich Zellen in wirkstoffhaltigem Medium rasch erholen und die gleiche Wachstumsrate erlangen, wie Kontrollkulturen in bicarbonathaltigem Medium.Cells which have no glucosphingolipid in the nutrient medium virtually stop growth, while cells in drug-containing medium recover rapidly and attain the same growth rate as control cultures in bicarbonate-containing medium.
Gemessen wird die Wachstumsrate z. B. nach dreitägiger Glukosphingolipid-Wirkung, indem den Zellen während 5 Stunden 3H-Thymidin angeboten wird. Die Zellen werden danach durch osmotischen Schock aufgeschlossen und die DNS wird auf einem Diäthylaminoäthyl-Filterpapier zurückgehalten. Die Radioaktivität dieser Filter wird gemessen.The growth rate is measured z. After three days of glucosphingolipid activity, by adding 3 H-thymidine to the cells for 5 hours. The cells are then disrupted by osmotic shock and the DNA is retained on a diethylaminoethyl filter paper. The radioactivity of these filters is measured.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen bevorzugte Ausführungsformen der Erfindung.The following examples illustrate preferred embodiments of the invention.
^-NMR-Spektren wurden mit dem 250 MHz-Gerät WM 250 Cryospec der Firma Bruker, Spectrospin, Industriestraße 26, CH-8117 Fällanden/Zürich, gemessen. Die Verschiebungen sind auf Tetramethylsilan (TMS) als internen Standard bezogen und in ppm angegeben.NMR spectra were measured with the 250 MHz WM 250 Cryospec instrument from Bruker, Spectrospin, Industriestraße 26, CH-8117 Fällanden / Zurich. The shifts are based on tetramethylsilane (TMS) as an internal standard and reported in ppm.
Die angegebenen Schmelzpunkte wurden in einem Kupferblock bestimmt und sind nicht korrigiert.The melting points given were determined in a copper block and are uncorrected.
Zur analytischen Dünnschichtchromatographie (DC) wurden Kieselplatten der Firma E. Merck AG, Darmstatt (BRD), verwendet.For analytical thin-layer chromatography (TLC), silica plates from E. Merck AG, Darmstatt (FRG), were used.
Die Dünnschichtchromatogramme wurden, sofern die Substanzen nicht UV-aktiv waren, mit 15% Schwefelsäure besprüht und bei 120 0C entwickelt.The thin-layer chromatograms were, if the substances were not UV-active, sprayed with 15% sulfuric acid and developed at 120 0 C.
Präparative Säulenchromatographien wurden mit Kieselgel 60,0.0,62-0,200mm der Firma Merck durchgeführt. Für die Mitteldruckchromatographie wurden Fertigsäulen nach D. Flockerzi, Diplomarbeit, Universität Stuttgart (1978), mit Kieselgel „LiChroprep Si 60,15-25" verwendet.Preparative column chromatographies were carried out with silica gel 60.0.0.62-0.200 mm from Merck. For medium-pressure chromatography, finished columns according to D. Flockerzi, diploma thesis, University of Stuttgart (1978), with silica gel "LiChroprep Si 60.15-25" were used.
Die Ausbeuten wurden auf der Reinigungsstufe angegeben, auf der NMR-spektroskopisch und mittels Dünnschichtchromatographie keine Verunreinigungen nachzuweisen waren.The yields were indicated at the purification stage, on which NMR spectroscopy and no impurities were detectable by thin layer chromatography.
(a) Tetradecanal(a) Tetradecanal
32,3 g (15OmMoI) Pyridiniumchlorochromat werden bei Raumtemperatur unter starkem Rühren in 200 ml wasserfreiem Methylenchlorid suspendiert und mit einer Lösung von 21,4g (10OmMoI) Tetradecanol in 20ml wasserfreiem Methylenchlorid32.3 g (15OmMoI) of pyridinium chlorochromate are suspended at room temperature with vigorous stirring in 200 ml of anhydrous methylene chloride and with a solution of 21.4 g (10OmMoI) of tetradecanol in 20 ml of anhydrous methylene chloride
versetzt. Das Reaktionsgemisch kommt hierbei zum Sieden. Nach 1V2 Std. ist die Reaktion beendet. Man dekantiert ab und wäscht mit ca. 200ml trockenem Diethylether nach. Nach Filtrieren und Einengen des Lösungsmittels wird über Kieselgel mit Petroleumbenzin (Sdp. 35-80°C)/Essigester9:1 Chromatographien. Ausbeute: 18g (84%).added. The reaction mixture comes to a boil. After 1 h 2 h, the reaction is complete. It is decanted off and washed with approx. 200 ml of dry diethyl ether. After filtration and concentration of the solvent is over silica gel with petroleum spirit (bp 35-80 ° C) / ethyl acetate 9: 1 chromatographies. Yield: 18g (84%).
(b) Hexadecanal(b) hexadecanal
21,5g (10OmMoI) Pyridiniumchlorochromatwerden in 200ml wasserfreiem Dichlormethan suspendiert. 16g (66mMol) Hexadecanol in 50ml wasserfreiem Dichlormethan werden dazugetropft. Nach 2 Std. verdünnt man mit 300ml wasserfreiem Ether und dekantiert vom schwarzen Rückstand ab. Der Rückstand wird dreimal mit ca. 50 ml wasserfreiem Ether gewaschen. Die organischen Phasen werden vereinigt, und der Ether wird bis zur Trockene eingedampft. Es wird über Kieselgel mit Petrolether/ Essigester 9:1 Chromatographien. Ausbeute: 15g (95%). Smp. 33-340C.21.5 g (10OmMoI) of pyridinium chlorochromate are suspended in 200 ml of anhydrous dichloromethane. 16 g (66 mmol) of hexadecanol in 50 ml of anhydrous dichloromethane are added dropwise thereto. After 2 hours, diluted with 300 ml of anhydrous ether and decanted from the black residue. The residue is washed three times with about 50 ml of anhydrous ether. The organic phases are combined and the ether is evaporated to dryness. It is over silica gel with petroleum ether / ethyl acetate 9: 1 chromatographies. Yield: 15g (95%). Mp. 33-34 0 C.
(c) Formylmethylentriphenylphosphoran(c) formylmethylenetriphenylphosphorane
Die Verbindung wird nach dem Verfahren gemäß J. Chem. Soc. 1961,1266-1272 hergestellt.The compound is prepared by the method according to J. Chem. Soc. 1961, 12626-1272.
(d) 2-trans-Hexadecenal(d) 2-trans hexadecenal
100g (0,47 Mol) Tetradecenal und 173g (0,56 Mol) Formylmethylentriphenylphosphoran werden in 1 Liter wasserfreiem Chloroform 12 Std. zum Sieden erhitzt. Nach Abkühlen wird eingeengt und über eine kurze Kieselgelsäule mit Petroleumbenzin (Sdp. 35-80°C)/Essigester 9:1 Chromatographien, um das Triphenylphosphinoxid zu entfernen. Anschließend wird im Hochvakuum destilliert. Die Verbindung erweist sich mit jener gemäß Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 354,1626-1632 (1973) identisch. Ausbeute: 77g (69%).100 g (0.47 mol) of tetradecenal and 173 g (0.56 mol) of formylmethylenetriphenylphosphorane are heated to boiling in 1 liter of anhydrous chloroform for 12 hours. After cooling, the mixture is concentrated and chromatographed over a short silica gel column with petroleum benzine (bp 35-80 ° C.) / ethyl acetate 9: 1 to remove the triphenylphosphine oxide. It is then distilled under high vacuum. The compound turns out to be the one according to Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. 354, 1626-1632 (1973). Yield: 77g (69%).
RF = 0,5, Petroleumbenzin (Sdp. 35-80°C)/Essigester 9:1; UV: Blaufärbung mit Anisaldehydreagenz (0,5ml Anisaldehyd, 50 ml Eisessig, 1 ml H2SO4); Sdp. (10"3Torr): 115°C.R F = 0.5, petroleum spirit (bp 35-80 ° C) / ethyl acetate 9: 1; UV: blue staining with anisaldehyde reagent (0.5 ml anisaldehyde, 50 ml glacial acetic acid, 1 ml H 2 SO 4 ); Bp (10 " 3 torr): 115 ° C.
(e) 2-trans-Octadecenal(e) 2-trans octadecenal
12g (5OmMoI) Hexadecenal und 15,2g (5OmMoI) Formylmethylentriphenylphosphoran werden in 250ml wasserfreiem Toluol 8 Std. lang am Rückfluß gekocht. Es wird bis zur Trockene eingedampft. Der Rückstand wird fünfmal mit 100 ml Ether extrahiert. Der Extrakt wird bis zur Trockene eingedampft und mit Toluol über Kieselgel chromatographiert. Ausbeute: 8,2g (62%). Smp.: 35°C; RF = 0,8,Toluol/Essigester8:2.12 g (50 mmol) of hexadecenal and 15.2 g (50 mmol) of formylmethylenetriphenylphosphorane are refluxed in 250 ml of anhydrous toluene for 8 hours. It is evaporated to dryness. The residue is extracted five times with 100 ml of ether. The extract is evaporated to dryness and chromatographed over silica gel with toluene. Yield: 8.2g (62%). Mp: 35 ° C; R F = 0.8, toluene / ethyl acetate 8: 2.
(f) DX-erythro^-Amino-I.S-dihydroxy^-trans-octadecen (D,L-C18-Sphingosin)(f) DX-erythro ^ -amino-IS-dihydroxy ^ -trans-octadecene (D, LC 18 -sphingosine)
Diese Verbindung wird nach dem Verfahren gemäß Angew. Chem. 94,215-216 (1982); Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 21,210-211 (1982); Angew. Chem. Suppl. 1982,393-397 hergestellt.This compound is prepared by the method according to Angew. Chem. 94, 215-216 (1982); Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 21, 210-211 (1982); Angew. Chem. Suppl. 1982, 393-397.
(g) D.L-erythro^-Amino-S-hydroxy^trans-eicosadecensäure(g) D.L-erythro ^ -Amino-S-hydroxy ^ trans-eicosadecenoic acid
Die Verbindung wurde nach demselben Verfahren wie bei Verbindung (f) angegeben dargestellt.The compound was prepared by the same method as that of the compound (f).
.,1 ml (7,9mMol) trockenes Diisopropylamin wird unter Stickstoff zu einer auf -400C abgekühlten Lösung von 5,8mMol n-Butyllithium in 30 ml wasserfreiem, Stickstoff-gesättigtem Tetrahydrofruan gegeben. Es wird 30 Min. bei dieser Temperatur _ gerührt und dann auf -8O0C abgekühlt. Man läßt 1,6g (5,6mMol) N,N-Bis-(trimethylsilyl)-glycin-trimethylsilylester [Angew. chem. Int. Ed. Engl. 80,797 (1968)] in wenig Tetrahydrofuran gelöst langsam zutropfen, wobei sich die Lösung gelb bis braun färbt. Nach 90 Min. werden 2,2g (8,4mMol) 2-trans-Octadecenal gelöst in Tetrahydrofuran dazugetropft. Man läßt weitere 90 Min. bei -8O0C rühren. Anschließend erwärmt man auf Raumtemperatur und säuert mit gesättigter ethanolischer Salzsäure auf pH 5 an. Nach dem Absaugen wäscht man mit Wasser das Diisopropylaminhydrochlorid und das Glycinhydrochlorid aus.Dry diisopropylamine., 1 ml (7,9mMol) is anhydrous under nitrogen, to a solution, cooled to -40 0 C solution of 5,8mMol n-butyllithium in 30 ml, added nitrogen-saturated Tetrahydrofruan. It is stirred for 30 min. At this temperature _ and then cooled to -8O 0 C. 1.6 g (5.6 mmol) of N, N-bis- (trimethylsilyl) -glycine-trimethylsilyl ester [Angew. chem. Int. Ed. Engl. 80, 797 (1968)] dissolved in a little tetrahydrofuran is slowly added dropwise, whereby the solution turns yellow to brown. After 90 minutes, 2.2 g (8.4 mmol) of 2-trans-octadecenal dissolved in tetrahydrofuran are added dropwise. The mixture is left for another 90 min. At -8O 0 C stir. The mixture is then warmed to room temperature and acidified to pH 5 with saturated ethanolic hydrochloric acid. After filtration with suction, the diisopropylamine hydrochloride and glycine hydrochloride are washed with water.
Ausbeute: 1,6g (88%). Smp.: 15O0C (Zersetzung).Yield: 1.6g (88%). Mp: 1 5O 0 C ( replacement).
Elementaranalyse für C20H39NO3 (341,49):Elemental analysis for C 20 H 39 NO 3 (341.49):
berechnet: C 70,34 H 11,49 N 4,10calculated: C 70.34 H 11.49 N 4.10
; gefunden: 70,56 11,62 4,06'; found: 70,56 11,62 4,06 '
1H-NMR(inDMSO): 5,75-5,62(m,IH,-CH=CH-CHOH); 5,42-5,30 (dd, IH,C=CH-CHOH, Jtrans = 15,5Hz, Jvlc = 6,4Hz); 4,28-4,20 (dd, IH7-C=CH-CHOH, J1 = J2 = 6,1Hz);3,50-3,20(m,OH,NH3,H2O);3,17-3,12(d,IH,-CH-COOH,J = 6.1 Hz); 2,03-1,91 (m,2H, CH2-C=C); 1,40-1.10 (m, 26H, aliphat); 0,90-0,80 (t, 3H,-CH3). 1 H-NMR (in DMSO): 5.75-5.62 (m, IH, -CH = CH-CHOH); 5.42-5.30 (dd, IH, C = CH-CHOH, J trans = 15.5Hz, J vlc = 6.4Hz); 4.28-4.20 (dd, IH 7 -C = CH-CHOH, J 1 = J 2 = 6.1Hz); 3.50-3.20 (m, OH, NH 3 , H 2 O); 3.17-3.12 (d, IH, -CH-COOH, J = 6.1 Hz); 2.03-1.91 (m, 2H, CH 2 -C = C); 1.40-1.10 (m, 26H, aliphatic); 0.90 to 0.80 (t, 3H, -CH 3).
(h) D,L-erythro-2-Amino-1,3-dihydroxy-4-trans-eicosen(h) D, L-erythro-2-amino-1,3-dihydroxy-4-trans eicosene
(D,L-C2o-Sphingosin)(D, LC 2 o -sphingosine)
5,2g (15,2mMol) Verbindung (g) werden in 500ml wasserfreiem Tetrahydrofuran suspendiert. Man gibt 4,1 g (107mMol) Lithiumaluminiumhydrid in kleinen Portionen hinzu. Es wird 36Std. am Rückfluß zum Sieden erhitzt. Überschüssiges LiAIH4 wird durch vorsichtiges Zutropfen von Wasser zerstört. Nach Zutropfen von 30 ml 2 N Natronlauge kann ein gut filtrierbarer Niederschlag erhalten werden. Man filtriert, wäscht mit Tetrahydrofuran nach und engt bis zur Trockene ein. Zurück bleibt eine leicht gelbliche, wachsartige Substanz. Ausbeute: 3,8g (76%). Smp.: 58-6O0C; RF = 0,2, Chloroform/Methanol 1:1.5.2 g (15.2 mmol) of compound (g) are suspended in 500 ml of anhydrous tetrahydrofuran. Add 4.1 g (107 mmol) of lithium aluminum hydride in small portions. It will be 36h. heated to boiling at reflux. Excess LiAlH 4 is destroyed by careful dropwise addition of water. After dropwise addition of 30 ml of 2N sodium hydroxide solution, a readily filterable precipitate can be obtained. It is filtered, washed with tetrahydrofuran and concentrated to dryness. What remains is a slightly yellowish, waxy substance. Yield: 3.8 g (76%). M.p .: 58-6O 0 C; R F = 0.2, chloroform / methanol 1: 1.
1H-NMR(InCDCI3): 5,82-5,71 (m, 1H,-CH=CH-CHOH); 5,51-5,43 (dd, 1H,-CH=CH-CHOH, Jtrans = 15,5Hz Jvic = 7,3Hz); 4,09- 1 H-NMR (InCDCI 3 ): 5.82-5.71 (m, 1H, -CH = CH-CHOH); 5.51-5.43 (dd, 1H, -CH = CH-CHOH, J trans = 15.5Hz J vic = 7.3Hz); 4,09-
4.02 (dd, 1H, C=CH-CHOH, J1 = J2 = 6,1 Hz); 3,75-3,59 (m, 2H,-CH2OH); 2,94-2,85 (m, 1H,-CH-NH2); 2,49-2,15 (m, 3H, -NH2, HO-CH-); 2,14-1,97 (m, 3H1-CH2-OH, C=CH-CH2); 1,45-1,12 (m, 26H, aliphat.) 0,95-0,82 (t, 3H,-CH3). ~4.02 (dd, 1H, C = CH-CHOH, J 1 = J 2 = 6.1 Hz); 3.75-3.59 (m, 2H, -CH 2 OH); 2.94-2.85 (m, 1H, -CH-NH 2 ); 2.49-2.15 (m, 3H, -NH 2 , HO-CH-); 2.14-1.97 (m, 3H 1 -CH 2 -OH, C = CH-CH 2 ); 1.45-1.12 (m, 26H, aliphatic) 0.95-0.82 (t, 3H, -CH 3 ). ~
Allgemeine Vorschrift zur Synthese der Ceramides General procedure for the synthesis of ceramides s
2g (6,1 mMol) Sphingosin werden in 100ml Tetrahydrofuran gelöst. Man läßt gleichzeitig 50 ml 50% wässrige Natriumacetatlösung und 7,3 mMol des jeweiligen Fettsäurechlorides, gelöst in 20 ml wasserfreiem Ether, zutropfen. Man rührt 2 Std. bei Raumtemperatur. Die Etherphase wird abgetrennt und zweimal mit je 50 ml wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung und mit 50 ml Wasser ausgeschüttelt. Die organische Phase wird bis zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wird aus 100 ml Methanol und einmal aus 100 ml η-Hexan um kristallisiert, (i) D.L-erythro-i^-Dihydroxy^-palmitoylamino^-transoctadecen2 g (6.1 mmol) of sphingosine are dissolved in 100 ml of tetrahydrofuran. At the same time, 50 ml of 50% aqueous sodium acetate solution and 7.3 mmol of the respective fatty acid chloride, dissolved in 20 ml of anhydrous ether, are added dropwise. It is stirred for 2 hours at room temperature. The ether phase is separated and shaken twice with 50 ml of aqueous sodium bicarbonate solution and with 50 ml of water. The organic phase is concentrated to dryness. The residue is crystallized from 100 ml of methanol and once from 100 ml of η-hexane (i) D.L-erythro-i-dihydroxy-palmitoylamino-transoctadecene
8g (3OmMoI) Sphingosin werden in 200ml Tetrahydrofuran gelöst und unter intensivem Rühren mit 100ml einer 50% Natriumacetatlösung versetzt. Dazu werden 11g (4OmMoI) Palmitoylchlorid, gelöst in 15ml wasserfreiem Ether, langsam zugetropft. Anschließend läßt man noch 1 Std. bei Raumtemperatur rühren. Die wässrige Phase wird abgetrennt und die organische Phase wird mehrmals mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Nach Trocknen über Natriumsulfat und Einengen wird aus Methanol umkristallisiert. Ausbeute: 10g (70%). Smp. 94-96°C.8g (3OmMoI) sphingosine are dissolved in 200ml tetrahydrofuran and treated with vigorous stirring with 100ml of a 50% sodium acetate solution. For this purpose, 11 g (4OmMoI) of palmitoyl chloride, dissolved in 15 ml of anhydrous ether, slowly added dropwise. Then allowed to stir for 1 hr. At room temperature. The aqueous phase is separated and the organic phase is washed several times with saturated sodium bicarbonate solution. After drying over sodium sulfate and concentration is recrystallized from methanol. Yield: 10g (70%). Mp. 94-96 ° C.
RF = 0,57,Chloroform/Methanol 9:1(D,L-Sphingosin: RF = 0,04); 1H-NMR (80MHz, CDCI3 in ppm): 7,0 (brd, IH, NH); 5,75 (m,2H, HC=CH), 4,3 (m,1 H,-CH-N); 4,1-3,6 (m, 5H).R F = 0.57, chloroform / methanol 9: 1 (D, L-sphingosine: R F = 0.04); 1 H-NMR (80MHz, CDCl 3 in ppm): 7.0 (brd, IH, NH); 5.75 (m, 2H, HC = CH), 4.3 (m, 1H, -CH-N); 4.1-3.6 (m, 5H).
(j) D.L-erythiO-I.S-Dihydroxy^-palrnitoylamino^-transeicosen(j) D.L-erythio-I.S-dihydroxy -pitalo-nitylamino-tetranosecoses
Durchführung der Synthese nach der allgemeinen Vorschrift. Ausbeute: 2,66g (77%). Smp. 88-89°C; Rf = 0,15, Dichlormethan/Methanol 95:5.Performing the synthesis according to the general procedure. Yield: 2.66 g (77%). Mp. 88-89 ° C; Rf = 0.15, dichloromethane / methanol 95: 5.
Elementaranalyse für C36H71NO3 (565,89):Elemental analysis for C 36 H 71 NO 3 (565.89):
berechnet: C 76,41 H 12,63 N 2,47Calculated: C 76.41 H 12.63 N 2.47
gefunden: 76,22 12,61 2,47found: 76.22 12.61 2.47
1H-NMR (in CDCI3): 6,28-6,19 (d, 1H, NH, J = 8,8Hz); 5,88-5,71 (m, 1H, CH-CH-CHOH); 5,60-5,47 (dd, 1H, HC=CH-CHOH, Jtrans = 15,5Hz Jvic = 6,7Hz); 4,39-4,29 (m, 1H, CH-NH); 4,02-3,88 (m, 2H, C=C-CHOH, CH2OH); 3,78-3,67 (m, 1H, CH2OH); 2,68-2,55 (m, 1H, OH ); 2,29-2,19 (t, 2H, CO-CH2, J = 7,6Hz); 2,12-2,01 (m, 2H, C=C-CH2); 1,70-1,61 (m, 2H, CO-CH2-CH2); 1,45-1,15 (m, 5OH, aliphat); 0,95-0,83 (t, 6H, CH3). 1 H-NMR (in CDCl 3 ): 6.28-6.19 (d, 1H, NH, J = 8.8Hz); 5.88-5.71 (m, 1H, CH-CH-CHOH); 5.60-5.47 (dd, 1H, HC = CH-CHOH, Jtrans = 15.5Hz J vic = 6.7Hz); 4.39-4.29 (m, 1H, CH-NH); 4.02-3.88 (m, 2H, C = C-CHOH, CH 2 OH); 3.78-3.67 (m, 1H, CH 2 OH); 2.68-2.55 (m, 1H, OH); 2.29-2.19 (t, 2H, CO-CH 2 , J = 7.6Hz); 2.12-2.01 (m, 2H, C = C-CH 2 ); 1.70-1.61 (m, 2H, CO-CH 2 -CH 2 ); 1.45-1.15 (m, 5OH, aliphatic); 0.95 to 0.83 (t, 6H, CH 3).
(k) D^-erythro-i^-Dihydroxy^-stearoylamino-^-transeicosen(k) D ^ -erythro-i ^ -dihydroxy ^ -stearoylamino-^ -transseicoses
Durchführung der Synthese nach der allgemeinen Vorschrift. Ausbeute: 2,42g (67%). Smp.: 90-910C; Rf = CiöjDichlormethan/ Methanol 95:5.Performing the synthesis according to the general procedure. Yield: 2.42 g (67%). M.p .: 90-91 0 C; R f = C 10 -dichloromethane / methanol 95: 5.
Elementaranalyse für C38H75NO3 (595,95):Elemental analysis for C 38 H 75 NO 3 (595.95):
berechnet: C 76,84 H 12,71 N 2,36Calculated: C, 76.84, H, 12.71, N, 2.36
gefunden: 76,64 12,73 2,33found: 76.64 12.73 2.33
1H-NMR (in CDCI3): 6,28-6,19 (d, 1H, NH, J = 8,8Hz); (m, 1H, CH CH-CHOH); 5,60-5,47 (dd, 1H, C=CH-CHOH, Jtrans = 15,5Hz, Jvic = 6,7Hz); 4,37-4,28 (m, 1H, CH-NH); 4,00-3,87 (m, 2H, C=C-CHOH, CH2OH); 3,77-3,67 (m, 1H, CH2OH), 2,95-2,85 (m, 2H, OH); 2,28-2,18 (t,2H, CO-CH2); 2,11-2,00 (m,2H, C=C-CH2, J = 7,6Hz); 1,75-1,58 (m,2H, CO-CH2); 1,45-1,11 (m,54H, aliphat); 0,95-0,83 (t,6H,-CH3). 1 H-NMR (in CDCl 3 ): 6.28-6.19 (d, 1H, NH, J = 8.8Hz); (m, 1H, CH CH-CHOH); 5.60-5.47 (dd, 1H, C = CH-CHOH, J trans = 15.5Hz, Jvic = 6.7Hz); 4.37-4.28 (m, 1H, CH-NH); 4.00-3.87 (m, 2H, C = C-CHOH, CH 2 OH); 3.77-3.67 (m, 1H, CH 2 OH), 2.95-2.85 (m, 2H, OH); 2.28-2.18 (t, 2H, CO-CH 2 ); 2.11-2.00 (m, 2H, C = C-CH 2, J = 7.6 Hz); 1.75-1.58 (m, 2H, CO-CH 2 ); 1.45-1.11 (m, 54H, aliphatic); 0.95 to 0.83 (t, 6H, -CH 3).
(I) D^-erythro-I.S-Dihydroxy^-tetracosanoylamino^-transeicosen(I) D ^ -erythro-1S-dihydroxy -tetracosanoylamino ^ -transeicosen
Durchführung der Synthese nach der allgemeinen Vorschrift. Zum Lösen des Tetracosanoylchlorids werden allerdings 100 ml wasserfreier Ether benötigt. Ausbeute: 2,64g (64%). Smp. 93-940C; RF = 0,15, Dichlormethan/Methanol 95:5. ~ Elementaranalyse für C44H87NO3 (687,09): berechnet: C 77,93 H 12,92 N 2,06 gefunden: 77,98 13.02 2,21Performing the synthesis according to the general procedure. However, 100 ml of anhydrous ether are required to dissolve the tetracosanoyl chloride. Yield: 2.64 g (64%). . Mp 93-94 0 C; R F = 0.15, dichloromethane / methanol 95: 5. Elemental analysis for C 44 H 87 NO 3 (687.09): Calculated: C, 77.93, H, 12.92, N, 2.06, found: 77.98, 13.02 2.21
1H-NMR (in CDCI3): 6,30-6,25 (d, 1H, NH, J = 8,8Hz); (m, 1H, CH=C-CHOH); 5,59-5,47 (dd, 1H, CH=CH-CHOH, Jtrans = 15,5Hz, Jvic = 6,7Hz); 4,36-4,27 (m, 1H, CH-NH); 4,00-3,87 (m, 2H, C=C-CHOH, CH2OH); 3,75-3,65 (m, 1H, CH2OH); 2,85-2,73 (m, 2H, OH); 2,27-2,17 (t, 2H, CH-CH2, J = 7,6Hz); 2,10-2,00 (m, 2H, C=C-CH2); 1,70-1,55 (m, 2H, CO-CH2-CH2); 1,44-1,15 (m, 66H, aliphat); 0,93-0,82 (t,6H,-CH3). 1 H NMR (in CDCl 3 ): 6.30-6.25 (d, 1H, NH, J = 8.8Hz); (m, 1H, CH = C-CHOH); 5.59-5.47 (dd, 1H, CH = CH-CHOH, J trans = 15.5Hz, Jvic = 6.7Hz); 4.36-4.27 (m, 1H, CH-NH); 4.00-3.87 (m, 2H, C = C-CHOH, CH 2 OH); 3.75-3.65 (m, 1H, CH 2 OH); 2.85-2.73 (m, 2H, OH); 2.27-2.17 (t, 2H, CH-CH 2 , J = 7.6Hz); 2.10-2.00 (m, 2H, C = C-CH 2 ); 1.70-1.55 (m, 2H, CO-CH 2 -CH 2 ); 1.44-1.15 (m, 66H, aliphatic); 0.93 to 0.82 (t, 6H, -CH 3).
(1) D,L-erythro-3-Hydroxy-2-palmitoylamino-1 -(triphenylmethyloxyj^-trans-octadecen(1) D, L-erythro-3-hydroxy-2-palmitoylamino-1 - (triphenylmethyloxy) trans-octadecene
Die Verbindung wird analog dem Verfahren gemäß Chem. Phys. Lipids 3,59-69 (1969) hergestellt.The compound is analogous to the method according to Chem. Phys. Lipids 3,59-69 (1969).
1,08g (2mMol) Verbindung (j) werden in einer Mischung aus 6ml wasserfreiem Pyridin, 6ml wasserfreiem Chloroform und 6ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst und mit 0,56g (4mMol) Tritylchlorid versetzt. Nach einer Reaktionszeit von 48 Std. bei Raumtemperatur gießt man auf Wasser und extrahiert mit Ether. Nach Trocknen über Natriumsulfat und Einengen wird über Kieselgel mitToluol/Essigester9:1 Chromatographien. Für die Analyse wird über Mitteldruck mit Toluol/Essigester 9:1 Chromatographien. Ausbeute: 0,94g (60%).1.08 g (2 mmol) of compound (j) are dissolved in a mixture of 6 ml of anhydrous pyridine, 6 ml of anhydrous chloroform and 6 ml of anhydrous tetrahydrofuran, and 0.56 g (4 mmol) of trityl chloride are added. After a reaction time of 48 hours at room temperature, it is poured into water and extracted with ether. After drying over sodium sulfate and concentration, chromatograph on silica gel with toluene / ethyl acetate 9: 1. For the analysis, medium pressure with toluene / ethyl acetate 9: 1 chromatographies. Yield: 0.94 g (60%).
Smp. 58-600C; RF = 0,64,Toluol/Aceton 8:2 (gelbbraune Färbung mit H2SO4) [Verbindung (e): RF = 0,12].. Mp 58-60 0 C; R F = 0.64, toluene / acetone 8: 2 (tan colored with H 2 SO 4 ) [compound (e): R F = 0.12].
1H-NMB (250MHz, CDCI3 in ppm): 1 H-NMB (250 MHz, CDCI 3 in ppm):
7,3 (m, 15H, Trityl); 6,07 (d), 1H, NH, J = 7,6Hz); 5,62 (td, 1H,-CH2-CH=C, J = 7,6Hz); J = 15,2Hz);, 5,25 (dd, 1H, C=CH-CH, J = 6,1Hz,J = 15,2Hz); 4,18 (m,1H, -CH-N); 4,05 (m, 1H1-CH-O); 3,34 (dd, 1H,-CH2-O); 3,28 (dd,1 H, -CH2-O^ =4,0Hz, J = 9,8Hz); 2,2 (dd, 2H, CO-CH2-, J = 7,9Hz).7.3 (m, 15H, trityl); 6.07 (d), 1H, NH, J = 7.6Hz); 5.62 (td, 1H, -CH 2 -CH = C, J = 7.6Hz); J = 15.2Hz), 5.25 (dd, 1H, C = CH-CH, J = 6.1Hz, J = 15.2Hz); 4.18 (m, 1H, -CH-N); 4.05 (m, 1H 1 -CH-O); 3.34 (dd, 1H, -CH 2 -O); 3.28 (dd, 1H, -CH 2 -O ^ = 4.0Hz, J = 9.8Hz); 2.2 (dd, 2H, CO-CH 2 -, J = 7.9Hz).
(2) D-bzw. L-erythro-S-tH+l-O-Acetylmandeloyloxyl^-palmitoylamino-i^triphenylmethyloxyJ^-trans-octadecen 220mg (0,28mMol) der gemäß obigem Abschnitt erhaltenen Verbindung D-(D bzw. L-(D und 240mg (0,84mMol) L-(+)-Acetylmandelsäurechlorid werden in 5ml wasserfreiem Toluol und 1,2 ml wasserfreiem Pyridin gelöst. Nach einer Stunde ist das Pyridinhydrochlorid vollständig ausgefallen. Man verdünnt mit 10ml Ether und wäscht mit Wasser, trocknet über Natriumsulfat und engt ein. Die beiden Isomeren werden über Mitteldruckchromatographie mit Toluol/Essigester 95:5 getrennt. Ausbeute: 200mg (75% insgesamt; Verbindung D-(2): 38%, Verbindung L-(2): 37%).(2) D resp. L-erythro-S-tH + 10-acetylmandeloyloxy-palmitoylamino-1-triphenylmethyloxy-1-yl-octadecene 220 mg (0.28 mmol) of the compound D- (D or L- (D and 240 mg (0) obtained according to the above section). 84 mmol) of L - (+) - acetylmandelic acid chloride are dissolved in 5 ml of anhydrous toluene and 1.2 ml of anhydrous pyridine After one hour the pyridine hydrochloride is completely precipitated, diluted with 10 ml of ether and washed with water, dried over sodium sulphate and concentrated both isomers are separated by medium pressure chromatography with toluene / ethyl acetate 95: 5. Yield: 200 mg (75% total, compound D- (2): 38%, compound L- (2): 37%).
Verbindung D-(2): RF = 0,44, Verbindung L-(2): RF = 0,51 [Verbindung (I): RF = 0,25],Toluol/Essigester 9:1.Compound D- (2): R F = 0.44, compound L- (2): R F = 0.51 [compound (I): R F = 0.25], toluene / ethyl acetate 9: 1.
1H-NMR (250MHz, CDCI3 in ppm): Verbindung D-(2): 7,35 (m, 15H, Trityl); 5,85 (d, 1H, NH, J = 9,8Hz); 5,83 (s, 1H,-CH(Ph)OAc); 5,56 (m, 1H,-CH-0-Mandeloyl); 5,46 (td, 1H,-CH2-CH=C, J = 7,6Hz, J = 15,2Hz); 5,1 (dd, IH, C=CH-CH, J = 6,1 Hz, J = 15,2Hz); 4,3 (m, 1H,-CH-N); 3,35 (dd, 1H,-CH2-O, J = 9,4Hz, J = 5Hz); 3,19 (dd, 1H1-CH2-O, J = 9,4Hz, J = 5Hz). 1 H-NMR (250 MHz, CDCl 3 in ppm): Compound D- (2): 7.35 (m, 15H, trityl); 5.85 (d, 1H, NH, J = 9.8Hz); 5.83 (s, 1H, -CH (Ph) OAc); 5.56 (m, 1H, -CH-O-Mandeloyl); 5.46 (td, 1H, -CH 2 -CH = C, J = 7.6Hz, J = 15.2Hz); 5.1 (dd, IH, C = CH-CH, J = 6.1 Hz, J = 15.2Hz); 4.3 (m, 1H, -CH-N); 3.35 (dd, 1H, -CH 2 -O, J = 9.4Hz, J = 5Hz); 3.19 (dd, 1H 1 -CH 2 -O, J = 9.4Hz, J = 5Hz).
Verbindung L-(2): 7,3 (m, 15H,Trityl) 5,79 (s, 1H,-CH(Ph)OAc); 5,64 (td, 1H1-CH2-CH=CJ = 15,2Hz, J = 7,6Hz); 5,39 (m, 1 Hz, -CH-O Mandeloyl); 5,25 (dd, 1H,-C=CH-CH, J = 15,2Hz, J = 6,9Hz); 4,22 (m, 1H,-CH-N); 3,08 (dd, 1H,-CH2O, J = 9,4Hz, J = 5,0Hz); 2,95 (dd, 1H,-CH2-O, J = 9,4Hz, J = 6,25Hz).Compound L- (2): 7.3 (m, 15H, trityl) 5.79 (s, 1H, -CH (Ph) OAc); 5.64 (td, 1H 1 -CH 2 -CH = CJ = 15.2Hz, J = 7.6Hz); 5.39 (m, 1 Hz, -CH-O mandeloyl); 5.25 (dd, 1H, -C = CH-CH, J = 15.2Hz, J = 6.9Hz); 4.22 (m, 1H, -CH-N); 3.08 (dd, 1H, -CH 2 O, J = 9.4Hz, J = 5.0Hz); 2.95 (dd, 1H, -CH 2 -O, J = 9.4Hz, J = 6.25Hz).
(3) D- bzw. L-erythro-S-Hydroxy^-palmitoylamino-i-^riphenylmethyloxyJ-^trans-octadecen(3) D- and L-erythro-S-hydroxy ^ -palmitoylamino-1-piperiphenylmethyloxy) trans-octadecene
1 g (1,05mMol) Verbindung D-(2) bzw. L-(2) wird in 50ml wasserfreiem Methanol und 10ml wasserfreiem Toluol gelöst und mit 0,1 ml 1M Natriummethanolatlösung versetzt und bei Raumtemperatur gerührt. Nach 12 Std. wird mit Ionenaustauscher neutralisiert, filtriert und eingeengt.1 g (1.05 mmol) of compound D- (2) or L- (2) is dissolved in 50 ml of anhydrous methanol and 10 ml of anhydrous toluene and admixed with 0.1 ml of 1M sodium methoxide solution and stirred at room temperature. After 12 hours, it is neutralized with ion exchanger, filtered and concentrated.
Ausbeute: 0,8g (95%).Yield: 0.8g (95%).
Verbindung D-(3) bzw. L-(3): RF = 0,64, Toluol/Aceton 8:2. Die ^-NMR-Daten der zwei Verbindungen sind mit jenen der Verbindung vom Abschnitt (1) identisch.Compound D- (3) or L- (3): R F = 0.64, toluene / acetone 8: 2. The ^ -NMR data of the two compounds are identical to those of the compound of section (1).
(4) D-bzw. L-eiythro-S-Benzoyloxy-Z-palmitoylamino-i-ftriphenylmethyloxyM-trans-octadecen(4) D resp. L-eiythro-S-benzoyloxy-Z-palmitoylamino-i-ftriphenylmethyloxyM-trans-octadecene
930mg (1,2 mMol) Verbindung D-(3) bzw. L-(3) und 0,6ml (6mMol)Benzoylchlorid werden in 20ml wasserfreiem Toluol und 3ml930 mg (1.2 mmol) of compound D- (3) or L- (3) and 0.6 ml (6 mmol) benzoyl chloride are dissolved in 20 ml of anhydrous toluene and 3 ml
wasserfreiem Pyridin gelöst und IV2 Std. bei Raumtemperatur gerührt. Man verdünnt mit 1OmI Ether, wäscht mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung, trocknet mit Natriumsulfat und engt ein. Kieselgelchromatographie mit Toluol/Essigester 9:1 liefert reines Produkt. Ausbeute: 1 g (95%).dissolved anhydrous pyridine and stirred for 2 hrs. At room temperature. It is diluted with 1OmI ether, washed with saturated sodium bicarbonate solution, dried with sodium sulfate and concentrated. Silica gel chromatography with toluene / ethyl acetate 9: 1 gives pure product. Yield: 1 g (95%).
RF = 0,48, Toluol/Essigester 9:1.1H-NMR (250MHz, CDCI3 in ppm): 7,93 (m,2H, Benzoyl); 7,55 (m, 1H, Benzoyl); 7,4 (m,8H, Benzoyl,Trityl);5,88(td,1H,-CHz-CH=C,J = 15,2Hz,J = 6,7Hz); 5,7(m,2H,NH,-CH-OBz);5,44(dd,1H,C=CH-CH1J = 15,2Hz, J = 7,6Hz); 4,49 (m, 1H, CH-N); 3,45 (dd, 1H1-CH2-O, J = 9,2Hz, J = 3,4Hz); 3,2Hz(dd, W1-CH2-O-, J = 9,2Hz, J = 4Hz).R F = 0.48, toluene / ethyl acetate 9: 1. 1 H-NMR (250 MHz, CDCl 3 in ppm): 7.93 (m, 2H, benzoyl); 7.55 (m, 1H, benzoyl); 7.4 (m, 8H, benzoyl, trityl); 5.88 (td, 1H, -CHz-CH = C, J = 15.2Hz, J = 6.7Hz); 5.7 (m, 2H, NH, -CH-OBz); 5.44 (dd, 1H, C = CH-CH 1 J = 15.2Hz, J = 7.6Hz); 4.49 (m, 1H, CH-N); 3.45 (dd, 1H 1 -CH 2 -O, J = 9.2Hz, J = 3.4Hz); 3.2Hz (dd, W 1 -CH 2 -O-, J = 9.2Hz, J = 4Hz).
(5) D- bzw. L-erythro-S-Benzoyloxy-i-hydroxy^-palmitoyl-amino^-trans-octadecen(5) D- and L-erythro-S-benzoyloxy-i-hydroxy ^ -palmitoyl-amino ^ -trans-octadecene, respectively
400mg (0,45mMol) Verbindung D-(4) bzw. L-(4) werden in 5ml wasserfreiem Toluol gelöst und mit 0,18ml wasserfreiem Methanol und 0,1 ml Bortrifluoridetherat versetzt. Nach 10 Min. war kein Ausgangsprodukt mehr festzustellen. Man verdünnt mit 5ml Toluol, wäscht mit Wasser, trocknet über Natriumsulfat und engt ein. Zur Reinigung wird über Kieselgel mit Toluol/Aceton 9:1 Chromatographien. Ausbeute: 200mg (70%).400 mg (0.45 mmol) of compound D- (4) or L- (4) are dissolved in 5 ml of anhydrous toluene and admixed with 0.18 ml of anhydrous methanol and 0.1 ml of boron trifluoride etherate. After 10 minutes, no starting product was found. It is diluted with 5 ml of toluene, washed with water, dried over sodium sulfate and concentrated. For purification is over silica gel with toluene / acetone 9: 1 chromatographies. Yield: 200mg (70%).
RF = 0,44,Toluol/Aceton 8:2.1H-NMR (250MHz, CDCI3in ppm): 8,04(m, 2H, Benzoyl); 7,6 (m, 1H, Benzoyl); 7,47 (m, 2H, Benzoyl); 6,05 (d, 1H, NH, J = 8,8Hz); 5,86 (td, 1H,-CH5T-CH=C, J = 14,7Hz, J = 6,7Hz); 5,61 (dd, 1H,-C=CH-CH, J = 14,7Hz, J = 7,6Hz); 5,53 (m, 1H, -CH-OBz); 4,29 (m, 1H, -CH-N); 3,72 (m, 2H7-CH2- O); 2,9 (m, 1H, -OH).R F = 0.44, toluene / acetone 8: 2. 1 H-NMR (250 MHz, CDCl 3 in ppm): 8.04 (m, 2H, benzoyl); 7.6 (m, 1H, benzoyl); 7.47 (m, 2H, benzoyl); 6.05 (d, 1H, NH, J = 8.8Hz); 5.86 (td, 1H, -CH 5 T-CH = C, J = 14.7Hz, J = 6.7Hz); 5.61 (dd, 1H, -C = CH-CH, J = 14.7Hz, J = 7.6Hz); 5.53 (m, 1H, -CH-OBz); 4.29 (m, 1H, -CH-N); 3.72 (m, 2 H 7 -CH 2 - O); 2.9 (m, 1H, -OH).
(6) D-bzw. L-erythro-3-Benzoyloxy-2-palmitoylamino-1-(2,3,4,6-tetra-0-acetyl-/3-D-glucopyranosyloxy)-4-trans-octadecen 100mg (0,16mMpl) Verbindung D-(5) bzw. L-(5) und 180mg (0,32mMol) 0-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-c«-D- glucopyranosyl)-trichloracetimidat werden in 10ml wasserfreiem Methylenchlorid gelöst und mit einer Spatelspitze pulverisiertem Molekularsieb 0,4nm (4Ä) und 2ml 0,1 M Bortrifluorid-etherat in Methylenchlorid versetzt. Nach 3 Std. wird mit 10ml Chloroform verdünnt, vom Molekularsieb filtriert, mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Zur Reinigung wird über Kieselgel mit Toluol/Aceton 9:1 filtriert und über Mitteldruck mit Toluol/Aceton 9:1(6) D resp. L-erythro-3-benzoyloxy-2-palmitoylamino-1- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl- / 3-D-glucopyranosyloxy) -4-trans-octadecene 100mg (0.16mMpl) Compound D - (5) or L- (5) and 180 mg (0.32 mmol) of O- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-c-D-glucopyranosyl) -trichloroacetimidate are dissolved in 10 ml of anhydrous methylene chloride and with a spatula tip powdered molecular sieve 0.4nm (4A) and 2ml 0.1 M boron trifluoride etherate in methylene chloride. After 3 hrs. Is diluted with 10 ml of chloroform, filtered from the molecular sieve, washed with saturated sodium bicarbonate solution, dried over sodium sulfate and concentrated. For purification is filtered through silica gel with toluene / acetone 9: 1 and over medium pressure with toluene / acetone 9: 1
^ghromatographiert. Ausbeute: 78mg j50%)^f = 0,55,Toluol/Aceton 8:2.^ gh romatographed. Yield: 78m g j50%) ^ f = 0.5 5, toluene / Ac eton 8: 2.
^^ (250MHz, CDCI3 in ppm): "^^ (250MHz, CDCl 3 in ppm): "
Verbindung D-(6): 8,0 (m, 2H, Benzoyl); 7,57 (m, 1H, Benzoyl); 7,44 (m, 2H, Benzoyl); 5,81 (m, 2H, NH, CH2-CH=C); 5,42 (m, 2H, C=CH-CH-OBz); 5,15 (dd, 1H, H-4, J = 7,5Hz, J = 7,5Hz); 5,01 (m, 2H, H-3, H-2); 4,47 (m, 1H, NH); 3,39 (d, 1H, H-I, J = 7,9Hz), 4,23(dd,1H,H-6,J = 12,2Hz, J = 4,9Hz);4,04(dd,1H,H-6',J = 12,2Hz, J = 2,1 Hz);3,9(dd,1H,-CHr-O-,J = 9,8Hz, J = 3,05Hz); 3,68 (m, 2H, -CH2-O, H-5); 2,1 (s, 3H, Acetyl); 2,04 (s, 3H, Acetyl); 1,99 (s, 6H, Acetyl).Compound D- (6): 8.0 (m, 2H, benzoyl); 7.57 (m, 1H, benzoyl); 7.44 (m, 2H, benzoyl); 5.81 (m, 2H, NH, CH 2 -CH = C); 5.42 (m, 2H, C = CH-CH-OBz); 5.15 (dd, 1H, H-4, J = 7.5Hz, J = 7.5Hz); 5.01 (m, 2H, H-3, H-2); 4.47 (m, 1H, NH); 3.39 (d, 1H, HI, J = 7.9Hz), 4.23 (dd, 1H, H-6, J = 12.2Hz, J = 4.9Hz), 4.04 (dd, 1H, H-6 ', J = 12.2Hz, J = 2.1Hz); 3.9 (dd, 1H, -CHr-O, J = 9.8Hz, J = 3.05Hz); 3.68 (m, 2H, -CH 2 -O, H-5); 2.1 (s, 3H, acetyl); 2.04 (s, 3H, acetyl); 1.99 (s, 6H, acetyl).
Verbindung L-(6): 8,04 (m,2H, Benzoyl); 7,58 (m/1 H, Benzoyl); 7,45 (m,2H, Benzoyl); 5,95-5,72 (m,2H, NH7-CH2-CH=C); 5,6-5,3 (m, 2,-C=CH-OBz); 5,25-4,95 (m, 3H, H-4, H-3, H-2); 4,45 (m, 2H7-H-I-CH-N); 4,3-3,85 (m, 3H); 3,65 (m, 2H).Compound L- (6): 8.04 (m, 2H, benzoyl); 7.58 (m / 1H, benzoyl); 7.45 (m, 2H, benzoyl); 5.95-5.72 (m, 2H, NH 7 -CH 2 -CH = C); 5.6-5.3 (m, 2, -C = CH-OBz); 5.25-4.95 (m, 3H, H-4, H-3, H-2); 4.45 (m, 2H -HI 7-CH-N); 4.3-3.85 (m, 3H); 3.65 (m, 2H).
(7) D- bzw. L-erythro-i-^-D-Glucopyranosyloxyl-S-hydroxy^-palmitoylamino-^-trans-octadecen(7) D- or L-erythro-i - ^ - D-glucopyranosyloxyl-S-hydroxy -palmitoylamino-trans-octadecene
100mg (0,1 mMol) Verbindung D-(6) bzw. L-(6) werden in 5ml wasserfreiem Methanol suspendiert und mit einer katalytischen Menge Natrium-Metall versetzt. Nach 15 Min. wird mit Ionenaustauscher der sauren Form neutralisiert; dabei trübt sich die Lösung. Man erwärmt und filtriert. Nach Einengen wird zur Reinigung über eine kurze Kieselgelsäule mit Chloroform/Methanol 9:1 Chromatographien. Ausbeute: 70mg (100%).100 mg (0.1 mmol) of compound D- (6) or L- (6) are suspended in 5 ml of anhydrous methanol and admixed with a catalytic amount of sodium metal. After 15 min. Is neutralized with ion exchanger of the acidic form; while the solution becomes cloudy. It is heated and filtered. Concentration is followed by purification over a short silica gel column with chloroform / methanol 9: 1 chromatographies. Yield: 70mg (100%).
RF = 0,4, Chloroform/Methanol 85:15.R F = 0.4, chloroform / methanol 85:15.
1H-NMR (250MHz, DMSO in ppm): 1 H-NMR (250 MHz, DMSO in ppm):
Verbindung D-(7):7,5(d,1H,NH,J = 8,7Hz);5,52(m,1H,-CHr-CH=C);5,35(dd,1H, C=CH-J = 15,2Hz,J = 6,5 Hz); 5,03 (d,1 H, OH, J = 4,3Hz); 4,92 (m, 3H, OH); 4,5 (t, 1H, OH, J = 4,9Hz); 4,09 (d, 1H, H-1, J = 8,2Hz); 4,0-3,55 (m,4H) 3,45 (m, 2H); 3,15-2,9 (m, 4H); 2,1-1,9 (m, 4H); 1,45 (m, 2H); 1,22 (brs, 46H,-CH2-); 0,85 (m, 6H, CH3).Compound D- (7): 7.5 (d, 1H, NH, J = 8.7Hz); 5.52 (m, 1H, -CHr-CH = C); 5.35 (dd, 1H, C = CH-J = 15.2Hz, J = 6.5Hz); 5.03 (d, 1H, OH, J = 4.3Hz); 4.92 (m, 3H, OH); 4.5 (t, 1H, OH, J = 4.9Hz); 4.09 (d, 1H, H-1, J = 8.2Hz); 4.0-3.55 (m, 4H) 3.45 (m, 2H); 3.15-2.9 (m, 4H); 2.1-1.9 (m, 4H); 1.45 (m, 2H); 1.22 (brs, 46H, -CH 2 -); 0.85 (m, 6H, CH 3).
Verbindung L-(7): 7,47 (d. 1H. NH, J = 9,1 Hz); 5,52 (td, 1^CH2-CH=C, J = 15,2Hz, J = 6,1 Hz); 5,34 (dd, 1H, C=CH-CH, J = 15,2Hz, J = 6,7Hz); 4,9 (m, 3H, OH); 4,58 (m, 1H, OH); 4,13 (d, 1H, H-1, J = 7,3Hz); 4,0-2,91 (m, 1OH); 2,12-1,85 (m, 4H, CO-CH2, C=C-CH2); 1,58-1,09 (m, 48H, CH2 aliphat); 0,85 (m, 6H, CH3).Compound L- (7): 7.47 (i.e., 1H, NH, J = 9.1Hz); 5.52 (td, 1 ^ CH 2 -CH = C, J = 15.2Hz, J = 6.1Hz); 5.34 (dd, 1H, C = CH-CH, J = 15.2Hz, J = 6.7Hz); 4.9 (m, 3H, OH); 4.58 (m, 1H, OH); 4.13 (d, 1H, H-1, J = 7.3Hz); 4.0-2.91 (m, 1 OH); 2.12 to 1.85 (m, 4H, CO-CH 2, C = C-CH 2); 1.58-1.09 (m, 48H, CH 2 aliphatic); 0.85 (m, 6H, CH 3).
(8) D,L-erythro-3-Hydroxy-1-(diphenyl-p-methoxyphenyl-methyloxy)-2-stearoylamino-4-trans-eicosen(8) D, L-erythro-3-hydroxy-1- (diphenyl-p-methoxyphenylmethyloxy) -2-stearoylamino-4-trans eicosene
2g (3,3mMol) Verbindung (k) und 1,56g (5mMol) Monomethoxytritylchlorid werden in 30ml eines Gemisches aus jeweils wasserfreiem Tetrahydrofuran, Chloroform und Pyridin 1:1:1 2 Std. lang bei Raumtemperatur gerührt. Man gießt auf 100 ml Wasser und extrahiert zweimal mit 50ml Ether. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockene eingeengt. Man Chromatographien über Kieselgel mit Toluol/Essigester 8,5:1,5. Ausbeute: 2,1g (73%). Smp. 49-51 °C. RF = 0,27, Toluol/Essigester 8,5:1,52 g (3.3 mmol) of compound (k) and 1.56 g (5 mmol) of monomethoxytrityl chloride are stirred in 30 ml of a mixture of anhydrous tetrahydrofuran, chloroform and pyridine 1: 1: 1 for 2 hours at room temperature. It is poured into 100 ml of water and extracted twice with 50 ml of ether. The organic phase is dried over sodium sulfate and concentrated to dryness. Chromatography on silica gel with toluene / ethyl acetate 8.5: 1.5. Yield: 2.1 g (73%). Mp. 49-51 ° C. R F = 0.27, toluene / ethyl acetate 8.5: 1.5
Elementaranalyse für C58H91NO4 (866,28): berechnet: C 80,42 H 10,58 N 1,62 gefunden: 80,23 10,79" 1,74Elemental analysis for C 58 H 91 NO 4 (866.28): Calcd: C 80.42 H 10.58 N 1.62 Found: 80.23 10.79 "1.74
1H-NMR (in CDCI3): 7,42-7,20 (m, 12H, aromat.); 6,87-6,80 (m, 2H, aromat); 6,10-6,04 (d, 1H, NH, J = 7,9Hz); 5,73-5,57 (m, 1H, CH=CH-CHOH); 5,32-5,20 (dd, 1H, CH=CH-CHOH, Jvic = 6,4Hz, Jtrans = 15,5Hz); 4,22-4,14 (m, 1H7CH-NH); 4,10-4,02 (m, 1H, CH-OH); 3,79 (s, 3H, OCH3); 3,45-3,28 (m, 3H, OH, CH2OH); 2,25-2,17 (t, 2H, C=C-CH2, J = 7,6Hz); 1,97-1,88 (m, 2H, CH2-C=C); 1,70-1,60 (m, 2H, C=C-CH2-CH2); 1,40-1,15 (m, 54H, aliphat.); 0,95-0,82 (t, 6H,-CH3). 1 H-NMR (in CDCl 3 ): 7.42-7.20 (m, 12H, aromat.); 6.87-6.80 (m, 2H, aromat); 6.10-6.04 (d, 1H, NH, J = 7.9Hz); 5.73-5.57 (m, 1H, CH = CH-CHOH); 5.32-5.20 (dd, 1H, CH = CH-CHOH, J vic = 6.4Hz, J trans = 15.5Hz); 4.22 to 4.14 (m, 1 H 7 CH-NH); 4.10-4.02 (m, 1H, CH-OH); 3.79 (s, 3H, OCH 3 ); 3.45-3.28 (m, 3H, OH, CH 2 OH); 2.25-2.17 (t, 2H, C = C-CH 2 , J = 7.6Hz); 1.97-1.88 (m, 2H, CH 2 -C = C); 1.70-1.60 (m, 2H, C = C-CH 2 -CH 2 ); 1.40-1.15 (m, 54H, aliphatic); 0.95 to 0.82 (t, 6H, -CH 3).
(9) D-bzw. L-erythro-S-IH+l-O-Acetylmandeloyloxyl-'-iJiphenyl-p-methoxyphenylmethyloxyJ^-stearoylEJnino^-transeicosen .(9) D resp. L-erythro-S-IH + 1-O-acetylmandeloyloxyl-1-yl-phenyl-p-methoxyphenylmethyloxy-1-yl-stearoyl-1-ynino-3-triene.
4,3g (5 mMol) Verbindung D,L-(8) werden in 50 ml eines Gemisches aus wasserfreiem Toluol und wasserfreiem Pyridin 4:1 gelöst. 3,2g (15mMol) L(+)-0-Acetylmandelsäurechlorid werden hinzugegeben. Man läßt 2 Std. bei Raumtemperatur rühren. Nach Verdünnen mit 100 ml Ether wird zweimal mit 50 ml Wasser ausgeschüttelt. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Nach Chromatographieren über Kieselgel mit Toluol/Essigester 95:5 können die Diastereomeren D-(9) und L-(9) durch Mitteldruckchromatographie an Kieselgel mit Toluol/Essigester 96:4 getrennt werden. Verbindung D-(9): Ausbeute: 1,8g (35%, bezogen auf die Gesamtmenge an Verbindung (k). Smp. 59-610C, RF = 0,44, Toluol/ Essigester 95:5.4.3 g (5 mmol) of Compound D, L- (8) are dissolved in 50 ml of a mixture of anhydrous toluene and anhydrous pyridine 4: 1. 3.2g (15 mmol) of L (+) - O-acetylmandelic acid chloride are added. It is allowed to stir for 2 hours at room temperature. After dilution with 100 ml of ether, the mixture is shaken twice with 50 ml of water. The organic phase is dried over sodium sulfate and concentrated. After chromatography on silica gel with toluene / ethyl acetate 95: 5, the diastereomers D- (9) and L- (9) can be separated by medium pressure chromatography on silica gel with toluene / ethyl acetate 96: 4. Compound D (9): Yield: 1.8 g (35% based on the total amount of compound (k) mp 59-61 0 C, R F = 0.44, toluene / Essigester 95:... 5
1H-NMR (in CDCI3): 7,50-7,17 (m, 17H, aromat.); 6,86-6,80 (m, 2H, aromat); 5,85-5,80 (m, 2H, NH; CO-CH-OAc); 5,60-5,52 (m, 1H,CH-0Ac.mand.); 5,45-5,30 (m, 1H, CH=CH-CHO-); 5,17-5,05 (dd, 1H, CH=CH-CHO-, Jtrans = 15,5Hz, Jvic = 6,1 Hz); 4,35-4,24 (m,1 H, CH-NH-); 3,8 (s,3H, OCH3); 3,39-3,30 (dd,1 H, CH2O-, Jgem = 9,7Hz,Jvic = 3,9Hz);3,22-3714(dd,1H,CH2O-,Jgem = 9,7Hz, Jvic = 4,2Hz); 2,22 (s, 3H, OAc); 2,12-2,03 (t, 2H7 CO-CH27J = 7,6Hz); 1,85-1,75 (m, 2H, C=C-CH2); 1,60-1,50 (m, 2H, CO-CH2-CH2); 1,40-1,07 (m, 54H7 aliphat); 0,94-0,82 (t, 6H, CH3). 1 H-NMR (in CDCl 3 ): 7.50-7.17 (m, 17H, aromat.); 6.86-6.80 (m, 2H, aromat); 5.85-5.80 (m, 2H, NH; CO-CH-OAc); 5.60-5.52 (m, 1H, CH-OAc.mand.); 5.45-5.30 (m, 1H, CH = CH-CHO-); 5.17-5.05 (dd, 1H, CH = CH-CHO-, J trans = 15.5Hz, J vic = 6.1Hz ); 4.35-4.24 (m, 1H, CH-NH-); 3.8 (s, 3H, OCH 3 ); 3.39-3.30 (dd, 1H, CH 2 O-, J gem = 9.7Hz, J vic = 3.9Hz); 3.22-3 7 14 (dd, 1H, CH 2 O-, J gem = 9.7Hz, J vic = 4.2Hz); 2.22 (s, 3H, OAc); 2.12-2.03 (t, 2H 7 CO-CH 27 J = 7.6Hz); 1.85-1.75 (m, 2H, C = C-CH 2 ); 1.60-1.50 (m, 2H, CO-CH 2 -CH 2 ); 1.40-1.07 (m, 54H 7 aliphatic); 0.94 to 0.82 (t, 6H, CH 3).
Die Verbindungen D-(9) und L-(9) wurden durch Abspalten des Monomethoxytrityl- und Acetylmandeloylrestes in die entsprechenden enantiomeren Ceramide überführt. Die so erhaltenen Ceramide waren 1H-NMR-spektroskopisch mit der Verbindung (k) identisch.Compounds D- (9) and L- (9) were converted to the corresponding enantiomeric ceramides by cleavage of the monomethoxytrityl and acetylmandeloyl residues. The ceramides thus obtained were identical to the compound (k) by 1 H-NMR spectroscopy.
(10) D-erythro-3-[L(+)-0-AcetYlmandefoyloxy)-1-hydroxy-2-stearoylainino-4-trans-eicosen 1g (0,95mMol) Verbindung D-(9) wird in 50 ml eines Gemisches aus Dichlormethan und Methanol 4:1, welches 1 % p-Toluolsulfonsäure enthält, gelöst. Man läßt eine Stunde bei Raumtemperatur rühren. Dann wird zweimal mit wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung ausgeschüttelt. Nach Einengen wird über Kieselgel mit Toluol/Essigester 7,5:2,5 Chromatographien. Ausbeute: 0,47g (65%). Smp. 76-770C; RF = 0,46, Dichlormethan/Methanol 95:5.(10) D-erythro-3- [L (+) - O-Acetylmandefoyloxy) -1-hydroxy-2-stearoyl-amino-4-trans eicosene 1g (0.95 mmol) Compound D- (9) is dissolved in 50 ml of a Mixture of dichloromethane and methanol 4: 1, containing 1% p-toluenesulfonic acid, dissolved. It is allowed to stir for one hour at room temperature. Then shaken twice with aqueous sodium bicarbonate solution. After concentration is over silica gel with toluene / ethyl acetate 7.5: 2.5 chromatographies. Yield: 0.47 g (65%). . Mp 76-77 0 C; R F = 0.46, dichloromethane / methanol 95: 5.
1H-NMR (in CDCI3): 7,50-7,36 (m, 5H, aromat); 6,06-6,00 (d, 1H, NH, J = 8,2Hz); 5,78 (s, 1H, CO-CH-OAc); 5,57-5,28 (m, 2H, CH=CH); 4,25-4,13 (m, 1H, CCH-NH); 3,87-3,75 (m, 1H, CH2OH); 3,72-3,60 (m, 1H, CH2OH); 2,52-2,40 (m, 1H, OH); 2,23 (s, 3H, OAc) 2,22-2,13 (t, 2H1CO-CH2, J = 7,6Hz); 1,95-1,83 (m, 2H1C=C-CH2); 1,65-1,52 (m, 2H1CO-CH2-CH2); 1,37-1,10 (m,54H, aliphat.); 0,95-0,82 (t, 6H, CH3) 1 H-NMR (in CDCl 3 ): 7.50-7.36 (m, 5H, aromat); 6.06-6.00 (d, 1H, NH, J = 8.2Hz); 5.78 (s, 1H, CO-CH-OAc); 5.57-5.28 (m, 2H, CH = CH); 4.25-4.13 (m, 1H, CCH-NH); 3.87-3.75 (m, 1H, CH 2 OH); 3.72-3.60 (m, 1H, CH 2 OH); 2.52-2.40 (m, 1H, OH); 2.23 (s, 3H, OAc) 2.22-2.13 (t, 2H 1 CO-CH 2 , J = 7.6Hz); 1.95-1.83 (m, 2H 1 C = C-CH 2 ); 1.65-1.52 (m, 2H 1 CO-CH 2 -CH 2 ); 1.37-1.10 (m, 54H, aliphatic); 0.95 to 0.82 (t, 6H, CH 3)
(12) D^-erythro-S-Hydroxy^-stearoylamino-i-ftriphenylmethyloxyM-trans-eicosen(12) D ^ -erythro-S-hydroxy ^ -stearoylamino-i-fiphenylmethyloxyM-trans-eicosene
2;4g (4mMol) Verbindung (k) und 2,5g (8,9 mMol) Tritylchlorid werden in 45ml eines Gemisches aus jeweils wasserfreiem Tetrahydrofuran, Chloroform und Pyridin 1:1:1 48 Std. lang bei Raumtemperatur gerührt. Man gießt die Lösung auf 200 ml Wasser und extrahiert zweimal mit 100 ml Ether. Die Etherphase wird zweimal mit 50 ml 0,1 N Salzsäure gewaschen und anschließend mit 100ml wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung ausgeschüttelt. Man trocknet über Natriumsulfat und engt bis zur Trockene ein. Danach wird über Kieselgel mit Toluol/Essigester 9:1 chromatographiert. Ausbeute: 2g (60%); Smp. 69-700C; Rf = 0,55, Toluol/Aceton 8:22, 4 g (4 mmol) of compound (k) and 2.5 g (8.9 mmol) of trityl chloride are stirred in 45 ml of a mixture of anhydrous tetrahydrofuran, chloroform and pyridine 1: 1: 1 for 48 hours at room temperature. The solution is poured into 200 ml of water and extracted twice with 100 ml of ether. The ether phase is washed twice with 50 ml of 0.1 N hydrochloric acid and then extracted by shaking with 100 ml of aqueous sodium bicarbonate solution. It is dried over sodium sulfate and concentrated to dryness. It is then chromatographed over silica gel with toluene / ethyl acetate 9: 1. Yield: 2g (60%); M.p. 69-70 0 C; Rf = 0.55, toluene / acetone 8: 2
Elementaranalyse für C57H89NO3 (836,26): berechnet: C 81,86 H 10,71 N 1,67 gefunden: 81,74 10,72 1,74Elemental analysis for C 57 H 89 NO 3 (836.26): Calculated: C 81.86 H 10.71 N 1.67 Found: 81.74 10.72 1.74
1H-NMR (in CDCI3): 7,44-7,20 (m, 15H, aromat.); 6,11-6,05 (d, 1H, NH, J = 7,6Hz); 5,71-5,57 (m, 1H, CH=CH-CHOH); 5,32-5,20 (dd, 1H, CH=CH-CHOH, Juans = 15,5Hz, Jvi0 = 5,7Hz); 4,23-4,14 (m, 1H, CH-NH); 4,12-4,02 (m, 1H,-CHOH); 3,45-3,36 (m, 2H, OH, CH2OH); 3,34-3,27 (dd, 1H, CH2OH, Jgem = 9,5Hz, Jvic = 3,6Hz); 2,27-2,18 (t, 2H, CO-CH2, J = 7,6Hz); 1,98-1,88 (m, 2H, C=CH2); 1,71-1,60 (m, 2H, CH-CH2-CH2); 1,40-1,14 (m, 54H, aliphat,); 0,95-0,83 (t, 6H,-CH3). 1 H-NMR (in CDCl 3 ): 7.44-7.20 (m, 15H, aromat.); 6.11-6.05 (d, 1H, NH, J = 7.6Hz); 5.71-5.57 (m, 1H, CH = CH-CHOH); 5.32-5.20 (dd, 1H, CH = CH-CHOH, Juans = 15.5Hz, J vi0 = 5.7Hz); 4.23-4.14 (m, 1H, CH-NH); 4.12-4.02 (m, 1H, -CHOH); 3.45-3.36 (m, 2H, OH, CH 2 OH); 3.34-3.27 (dd, 1H, CH 2 OH, J gem = 9.5Hz, J vic = 3.6Hz); 2.27-2.18 (t, 2H, CO-CH 2 , J = 7.6Hz); 1.98-1.88 (m, 2H, C = CH 2 ); 1.71-1.60 (m, 2H, CH-CH 2 -CH 2 ); 1.40-1.14 (m, 54H, aliphatic,); 0.95 to 0.83 (t, 6H, -CH 3).
(13) O- bzw. L-erythro-3-(L[+]-O-Acetylmandeloyloxy)-1-hydroxy-2-palmitoylamino-4-trans-octadecen(13) O- or L-erythro-3- (L [+] - O -acetylmandeloyloxy) -1-hydroxy-2-palmitoylamino-4-trans-octadecene
400mg (0,42mMol) Verbindung D-(2) bzw. L-(2) aus Beispiel 1 (2) werden in 4ml wasserfreiem Toluol gelöst und mit 0,2ml wasserfreiem Methanol versetzt. Unter Feuchtigkeitsausschluß und starkem Rühren werden 0,1 ml (0,84mMol) Bortrifluoridetherat zugegeben, wobei sich die Lösung kurzzeitig gelb anfärbt. Nach 15 min war kein Ausgangsprodukt mehr vorhanden (DC).400 mg (0.42 mmol) of compound D- (2) or L- (2) from Example 1 (2) are dissolved in 4 ml of anhydrous toluene and mixed with 0.2 ml of anhydrous methanol. With exclusion of moisture and vigorous stirring, 0.1 ml (0.84 mmol) of boron trifluoride etherate are added, during which time the solution turns yellow. After 15 minutes, no starting product was present (TLC).
Man verdünnt mit Toluol, wäscht mit Wasser, trocknet über Natriumsulfat und entfernt das Lösungsmittel im Vakuum. Zur Reinigung wird über Kieselgeld mit Toluol/Aceton 9:1 chromatographiert. Ausbeute: 180mg (60%).It is diluted with toluene, washed with water, dried over sodium sulfate and the solvent is removed in vacuo. For purification is chromatographed on silica gel with toluene / acetone 9: 1. Yield: 180mg (60%).
Verbindung D-(13): RF = 0,4, Toluol/Aceton 8:2;Compound D- (13): R F = 0.4, toluene / acetone 8: 2;
Verbindung L-(13): RF = 0,44, Toluol/Aceton 8:2.Compound L- (13): R F = 0.44, toluene / acetone 8: 2.
1H-NMR (250MHz, CDCI3 in ppm): 1 H-NMR (250 MHz, CDCl 3 in ppm):
Verbindung D-(13): 7,41 (m, 5H, Phenyl); 6,2 (d, 1H, NH, J = 8,2Hz); 5,8 (s, 1H,-CH-OAc); 5,6-5,25 (m, 3H, CH=CH,-CH-O-Mandeloyl); 4,2 (m,1 H, CH-N); 3,81 (dd,1 ^-CH2-OH, J = 12,7Hz,J = 4,8Hz);3,65(dd,1H,-CH2-OH,J = 12,7Hz);2,45(m,1H, OH).; 2,2 (s, 3H,-CO-CH3); 2,18 (m, 2H, aliphat.); 1,9 (m, 2H, aliphat.); 1,55 (m, 4H, aliphat.); 1,22 (m, 44H, aliphat); 0,88 (m, 6H,Compound D- (13): 7,41 (m, 5H, phenyl); 6.2 (d, 1H, NH, J = 8.2Hz); 5.8 (s, 1H, -CH-OAc); 5.6-5.25 (m, 3H, CH = CH, -CH-O-mandeloyl); 4.2 (m, 1H, CH-N); 3.81 (dd, 1 ^ -CH 2 -OH, J = 12.7Hz, J = 4.8Hz); 3.65 (dd, 1H, -CH 2 -OH, J = 12.7Hz); 2.45 (m, 1H, OH); 2.2 (s, 3H, -CO-CH 3); 2.18 (m, 2H, aliphatic); 1.9 (m, 2H, aliphatic); 1.55 (m, 4H, aliphatic); 1.22 (m, 44H, aliphatic); 0.88 (m, 6H,
Verbindung L-(13): 7,4(m,5H, Phenyl); 5,86 (s, 1H,-CH-OAc); 5,8-5,62 (m,2H,-CH=CH-CH-O, NH); 5,48-5,3 (m,2H,-CH=CH-CH-O-Mandeloyl);4,0(m,2H,-CH-N,OH);3,5(dd,1H,-CH2-O,J = 4,6Hz);3,35(dd,1H, -CH2-O1J = 11,6Hz,J = 5,2Hz);2,2(s, 3H,-CO-CH5); 1,96 (m,4H, aliphat); 1,5 (m,2H, aliphat); 1,2 (m,46H, aliphat); 0,85 (m, 6H1-CH3).Compound L- (13): 7.4 (m, 5H, phenyl); 5.86 (s, 1H, -CH-OAc); 5.8-5.62 (m, 2H, -CH = CH-CH-O, NH); 5.48-5.3 (m, 2H, -CH = CH-CH-O-mandeloyl); 4.0 (m, 2H, -CH-N, OH); 3.5 (dd, 1H, -CH 2 -O, J = 4.6Hz); 3.35 (dd, 1H, -CH 2 -O 1 J = 11.6Hz, J = 5.2Hz); 2.2 (s, 3H, -CO-CH 5 ); 1.96 (m, 4H, aliphatic); 1.5 (m, 2H, aliphatic); 1,2 (m, 46H, aliphatic); 0.85 (m, 6H 1 -CH 3 ).
Elementaranalyse für C44H75NO6 (714,09):Elemental analysis for C 44 H 75 NO 6 (714.09):
berechnet: C 74,01 H 10,59 N1,96calculated: C 74.01 H 10.59 N 1.96
gefunden: 73,48 10,64 2,06found: 73.48 10.64 2.06
(14) D- bzw. L-erythro-1 -(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-(3-D-glucopyranosyloxy)-3-[L(+)-O-acetylmandeloyloxyl]-2-palmitoylamino-4-trans-octadecen(14) D- and L-erythro-1 - (2,3,4,6-tetra-O-acetyl- (3-D-glucopyranosyloxy) -3- [L (+) - O -acetylmandeloyloxyl] -2 -palmitoylamino-4-trans-octadecene
350mg (0,49mMol) Verbindung D-(13) bzw. L-(13) und 400mg (0,8mMol) 0-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-a-D-glucopyranosyl)-trichloracetimidat werden in 30 ml wasserfreiem Methylenchlorid gelöst und mit einer Spatelspitze pulverisiertem Molekularsieb Q,4nm (4Ä) versetzt. Unter Feuchtigkeitsausschluß und gutem Rühren wird 1ml Bortrifluorid-etherat zugegeben. Nach 2Std. ist kein Ausgangsprodu'rt mehr vorhanden (DC). Man wäscht mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung, trocknet über Natriumsulfat und entfernt das Lösungsmittel im Vakuum. Zur Reinigung wird über Kieselgel mit Toluol/Aceton 9:1 und anschließend noch über Mitteldruck mit Toluol/Aceton 9:1 chromatographiert. Ausbeute: 300 mg (59%). Verbindung D-(14): RF = 0,58, Toluol/Aceton 8:2; Verbindung L-(14): RF = 0,6, Toluol/Aceton 8:2350 mg (0.49 mmol) of compound D- (13) or L- (13) and 400 mg (0.8 mmol) of 0- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-α-D-glucopyranosyl) -trichloroacetimidate dissolved in 30 ml of anhydrous methylene chloride and mixed with a spatula tip of powdered molecular sieve Q, 4nm (4A). With exclusion of moisture and good stirring, 1 ml of boron trifluoride etherate is added. After 2 hours there is no output product left (DC). It is washed with saturated sodium bicarbonate solution, dried over sodium sulfate and the solvent is removed in vacuo. For purification is chromatographed over silica gel with toluene / acetone 9: 1 and then still over medium pressure with toluene / acetone 9: 1. Yield: 300 mg (59%). Compound D- (14): R F = 0.58, toluene / acetone 8: 2; Compound L- (14): R F = 0.6, toluene / acetone 8: 2
Elementaranalyse für C58H93NO15 (1044,37): berechnet: C 66,70 H 8,98 N 1,34 gefunden: 66,16 9,11 1,24Elemental analysis for C 58 H 93 NO 15 (1044.37): Calculated: C 66.70 H 8.98 N 1.34 Found: 66.16 9.11 1.24
(15) D- bzw. L-erythro-3-Hydroxy-1-(^-D-glucopyranosyloxy)-2-palmitoylamino-4-trans-octadecen(15) D- and L-erythro-3-hydroxy-1 - (- D -glucopyranosyloxy) -2-palmitoylamino-4-trans-octadecene
120mg (0,11 mMol) Verbindung D-(14) bzw. L-(14) werden in 6ml wasserfreiem Methanol gelöst, mit 0,05ml einer 1 M Natriummethanolatlösung versetzt und bei Raumtemperatur gerührt. Nach 2Std. neutralisiert man mit Ionenaustauscher der sauren Form, wobei eine leichte Trübung eintritt. Man erwärmt, filtriert vom Ionenaustauscher ab, wäscht mit Methanol nach und dampft bis zur Trockne ein. Zur Reinigung wird über Kieselgel mit Chloroform/Methanol 85:15 chromatographiert. Ausbeute: 75mg (97%).120 mg (0.11 mmol) of compound D- (14) or L- (14) are dissolved in 6 ml of anhydrous methanol, admixed with 0.05 ml of a 1 M sodium methoxide solution and stirred at room temperature. After 2 hours neutralized with ion exchanger of the acidic form, with a slight turbidity occurs. The mixture is heated, filtered from the ion exchanger, washed with methanol and evaporated to dryness. For purification is chromatographed over silica gel with chloroform / methanol 85:15. Yield: 75 mg (97%).
Verbindung D-(15): RF = 0,6, Chloroform/Methanol 8:2; Verbindung L-(15): RF = 0,6, Chloroform/Methanol 8:2Compound D- (15): R F = 0.6, chloroform / methanol 8: 2; Compound L- (15): R F = 0.6, chloroform / methanol 8: 2
Die Verbindungen sind mit den nach Beispiel 1 erhaltenen Verbindungen D-(7) bzw. L-(7) identisch. The compounds are identical to those obtained according to Example 1 compounds D- (7) and L- (7).
(16) D.L-eiythro-S-Benzöyloxy^-palmitoylamino-MtriphenylmethyloxyM-trans-octadecen(16) D.L-eiythro-S-benzyloxy-palmitoylamino-mtriphenylmethyloxyM-trans-octadecene
250mg (0,32mMol) D^-erythro-S-Hydroxy^-palmitoylamino-HtriphenylmethyloxyM-trans-octadecen [Verbindung (1)] werden in 6ml wasserfreiem Toluol und 1 ml wasserfreiem Pyridin gelöst. Dazu gibt man 0,25ml (1,5mMol) Benzoylchlorid und läßt 11/2Std. bei Raumtemperatur rühren. Man verdünnt mit 10ml Ether, wäscht mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung, trocknet über Natriumsulfat und engt bis zur Trockne ein. Zur Reinigung wird über Kieselgel mitToluol/Essigester9:1 Chromatographien. Das Produkt ist mit der nach Beispiel 1 dargestellten Verbindung D-(4)bzw. L-(4) 'H-NMR-spektroskopisch identisch. Ausbeute: 260mg (92%). RF = 0,48, Toluol/Essigester 9:1.250mg (0.32 mmol) of D ^ -erythro-S-hydroxy ^ -palmitoylamino-H-triphenylmethyloxyM-trans-octadecene [Compound (1)] are dissolved in 6 ml of anhydrous toluene and 1 ml of anhydrous pyridine. To this is added 0.25 ml (1.5 mmol) of benzoyl chloride and left for 1 1/2 hours. stir at room temperature. It is diluted with 10 ml of ether, washed with saturated sodium bicarbonate solution, dried over sodium sulfate and concentrated to dryness. For purification, chromatograph over silica gel with toluene / ethyl acetate 9: 1. The product is with the compound D- (4) or according to Example 1 shown in Example 1. L- (4) 'H NMR spectroscopy identical. Yield: 260mg (92%). R F = 0.48, toluene / ethyl acetate 9: 1.
(17) D.L-eryhtro-S-Benzoyloxy-i-hydroxy^-palmitoylamino^trans-octadecen(17) D.L-eryhtro-S-benzoyloxy-i-hydroxy ^ -palmitoylamino ^ trans-octadecene
700mg (0,79mMol) DjL-ervthro-S^-Benzoyl^-palmitoylamino-l-itriphenylmethyloxyl^trans-octadecen [Verbindung (16)] werden in 10ml wasserfreiem Toluol gelöst und mit 0,25ml wasserfreiem Methanol und 0,14ml Bortrifluorid-etherat versetzt. Nach 10 min war kein Ausgangsprodukt mehr vorhanden (DC). Man verdünnt mit 10 ml Toluol, wäscht mit Wasser, trocknet über Natriumsulfat und engt bis zur Trockne ein. Zur Reinigung wird über Kieselgel mit Toluol/Aceton 9:1 Chromatographien. Das Produkt ist mit der nach Beispiel 1 dargestellten Verbindung D-(5) bzw. L-(5) 1H-NMR-spektroskopisch identisch. Ausbeute: 350 mg (69%). RF = 0,44, Toluol/Aceton 8:2.700 mg (0.79 mmol) of DjL-ether-S-benzoyl-palmitoylamino-1-itriphenylmethyloxy trans-octadecene [Compound (16)] are dissolved in 10 ml of anhydrous toluene and treated with 0.25 ml of anhydrous methanol and 0.14 ml of boron trifluoride etherate added. After 10 minutes, no starting product was present (TLC). It is diluted with 10 ml of toluene, washed with water, dried over sodium sulfate and concentrated to dryness. For purification is over silica gel with toluene / acetone 9: 1 chromatographies. The product is identical to the compound D- (5) or L- (5) 1 H NMR spectroscopy according to Example 1. Yield: 350 mg (69%). R F = 0.44, toluene / acetone 8: 2.
(18) D-bzw. L-erythro-3-Benzoyloxy-2-palmitoylamino-1-(2,3,4,6-tetra-0-acetyl-J3-D-glucopyranosyloxy)-4-trans-octadecen(18) D resp. L-erythro-3-benzoyloxy-2-palmitoylamino-1- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl- J 3-D-glucopyranosyloxy) -4-trans-octadecene
200mg (0,31 mMol) D^-erythro-S-Benzoyloxy-i-hydroxy^-palmitoylamino^-trans-octadecen [Verbindung (17)] und 200mg (0,4mMpl) 0-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-a-D-glucopyranosyl)-trichloracetimidat werden in 10ml wasserfreiem Methylenchlorid gelöst und mit einer Spatelspitze pulverisiertem Molekularsieb 0,4nm (4Ä) versetzt. Nach Zugabe von 0,4ml einer 0,1 M Trimethylsilyltrifluoracetatlösung in Methylenchlorid läßt man noch 6Std. bei Raumtemperatur rühren. Man verdünnt mit Chloroform, filtriert vom Molekularsieb ab, wäscht mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung, trocknet über Natriumsulfat und engt bis zur Trockne ein. Man Chromatographien über Kieselgel mit Toluol/Aceton 9:1 und zur Trennung der Diastereomeren wird unter Mitteldruck mit Toluol/Aceton 9:1 an Kieselgel Chromatographien. Die erhaltenen Produkte sind mit den nach Beispiel 1 dargestellten Verbindungen D-(6) bzw. L-(6) identisch. Ausbeute: 160mg (50%, 25% D- und 25% L-Verbindung).200mg (0.31mmol) of D ^ -erythro-S-benzoyloxy-i-hydroxy ^ -palmitoylamino ^ -trans-octadecene [Compound (17)] and 200mg (0.4mMpl) 0- (2,3,4,6 -Tetra-O-acetyl-aD-glucopyranosyl) trichloroacetimidate are dissolved in 10 ml of anhydrous methylene chloride and treated with a spatula tip powdered molecular sieve 0.4nm (4A). After addition of 0.4 ml of a 0.1 M Trimethylsilyltrifluoracetatlösung in methylene chloride is allowed to continue for 6h. stir at room temperature. It is diluted with chloroform, filtered from the molecular sieve, washed with saturated sodium bicarbonate solution, dried over sodium sulfate and concentrated to dryness. Chromatography on silica gel with toluene / acetone 9: 1 and separation of the diastereomers is carried out under medium pressure with toluene / acetone 9: 1 on silica gel chromatographies. The products obtained are identical to the compounds D- (6) or L- (6) according to Example 1. Yield: 160mg (50%, 25% D and 25% L compound).
Verbindung D-(18): RF = 0,55,Toluol/Aceton 8:2;Compound D- (18): R F = 0.55, toluene / acetone 8: 2;
Verbindung L-(18): RF = 0,54, Toluol/Aceton 8:2.Compound L- (18): R F = 0.54, toluene / acetone 8: 2.
Die Abspaltung der Acetylgruppen wird nach der in Beispiel 1 (7) beschriebenen Methode durchgeführt; die erhaltenen Produkte erweisen sich mit den nach Beispiel 1 hergestellten Verbindungen D-(7) bzw. L-(7) identisch.The cleavage of the acetyl groups is carried out according to the method described in Example 1 (7); the products obtained prove to be identical to those prepared according to Example 1 compounds D- (7) and L- (7).
(19) D,L-erythro-3-Hydroxy-1-(diphenyl-p-methoxyphenyl-methyloxy)-2-tetracosanoylamino-4-trans-eicosen(19) D, L-erythro-3-hydroxy-1- (diphenyl-p-methoxyphenylmethyloxy) -2-tetracosanoylamino-4-trans eicosene
6g (7,2mMol) Verbindung (I) und 3,43g (11 mMol) Monomethoxytritylchlorid werden in 50ml wasserfreiem Pyridin 5 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Man gießt auf 200 ml Wasser und extrahiert zweimal mit 100 ml Ether. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und bis zur Trockne eingeengt. Man chromatographiert über Kieselgel mit Toluol/Essigester 8,5:1,5. Ausbeute: 4,13g (65%), RF = 0,27, Toluol/Essigester 85:15.6 g (7.2 mmol) of compound (I) and 3.43 g (11 mmol) of monomethoxytrityl chloride are stirred in 50 ml of anhydrous pyridine for 5 hours at room temperature. It is poured into 200 ml of water and extracted twice with 100 ml of ether. The organic phase is dried over sodium sulfate and concentrated to dryness. It is chromatographed on silica gel with toluene / ethyl acetate 8.5: 1.5. Yield: 4.13 g (65%), R F = 0.27, toluene / ethyl acetate 85:15.
(20) D,L-erythro-3-Benzoyloxy-1-(diphenyl-p-methoxyphenyl-methyloxy)-2-tetracosanoylamino-4-trans-eicosen(20) D, L-erythro-3-benzoyloxy-1- (diphenyl-p-methoxyphenylmethyloxy) -2-tetracosanoylamino-4-trans eicosene
4g (4,2 mMol) Verbindung (19) und 5g (34mMol) Benzoylchlorid werden in 30ml wasserfreiem Pyridin 12 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt. Man gießt auf 200ml Wasser und extrahiertzweimal mit 100ml Ether. Die organische Phase wird über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Man chromatographiert über Kieselgel mit Toluol/Essigester 9:1. Ausbeute: 3 g (66%). RF = 0,64, Toluol/Essigester 85:15.4 g (4.2 mmol) of compound (19) and 5 g (34 mmol) of benzoyl chloride are stirred in 30 ml of anhydrous pyridine for 12 hours at room temperature. It is poured onto 200 ml of water and extracted twice with 100 ml of ether. The organic phase is dried over sodium sulfate and evaporated. It is chromatographed on silica gel with toluene / ethyl acetate 9: 1. Yield: 3 g (66%). R F = 0.64, toluene / ethyl acetate 85:15.
(21) D.L-erythro-S-Benzoyloxy-i-hydroxy^-tetracosanoyl-amino^trans-eicosen(21) D.L-erythro-S-benzoyloxy-i-hydroxy-tetracosanoyl-amino-trans-eicosene
3g (2,8mMol) Verbindung (20) werden eine Stunde lang bei Raumtemperatur in 50ml eines Gemisches aus Dichlormethan/ Methanol 4:1, das 1 Gew.-% p-Toluolsulfonsäure enthält, gerührt. Man schüttelt mit 30ml gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung aus und dampft die organische Phase, nach Trocknen über Natriumsulfat, ein. Es wird über Kieselgel mit Dichlormethan/Methanol 97:3 chromatographiert. Ausbeute: 1,5g (67%). RF = 0,58 Dichlormethan/Methanol 95:5.3 g (2.8 mmol) of compound (20) are stirred for one hour at room temperature in 50 ml of a 4: 1 mixture of dichloromethane / methanol containing 1% by weight of p-toluenesulfonic acid. It is shaken out with 30 ml of saturated, aqueous sodium bicarbonate solution and the organic phase is evaporated, after drying over sodium sulfate. It is chromatographed on silica gel with dichloromethane / methanol 97: 3. Yield: 1.5g (67%). R F = 0.58 dichloromethane / methanol 95: 5.
(22) D-bzw. L-erythro-3-Benzoyloxy-2-tetracosanoylamino-1-(2,3,4,6-tetra-O-acetyl-/3-D-glucopyranosyloxy)-4-trans-eicosen(22) D resp. L-erythro-3-benzoyloxy-2-tetracosanoylamino-1- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl- / 3-D-glucopyranosyloxy) -4-trans-eicosene
150mg (0,19mMol) Verbindung (21) und 180mg (0,32mMol) 0-(2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-aD-glucopyranosyl)-trichloracetimidat werden in 10ml wasserfreiem Methylenchlorid gelöst und mit einer Spatelspitze pulverisiertem Molekularsieb 0,4nm (4Ä) und 2 ml 0,1 M Bortrifluoridetherat in Methylenchlorid versetzt. Nach 3 Stunden wird mit 10 ml Chloroform verdünnt, vom Molekularsieb filtriert, mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und eingeengt. Zur Reinigung wird über Kieselgel mit Toluol/Aceton 9:1 filtriert.150mg (0.19 mmol) Compound (21) and 180 mg (0.32 mmol) 0- (2,3,4,6-tetra-O-acetyl-aD-glucopyranosyl) trichloroacetimidate are dissolved in 10 mL of anhydrous methylene chloride and spatula-tipped powdered molecular sieve 0.4nm (4A) and 2 ml of 0.1 M boron trifluoride etherate in methylene chloride. After 3 hours, diluted with 10 ml of chloroform, filtered from the molecular sieve, washed with saturated sodium bicarbonate solution, dried over sodium sulfate and concentrated. For purification is filtered through silica gel with toluene / acetone 9: 1.
Die Diastereomeren D-(22) bzw. L-(22) werden durch Chromatographieren über Mitteldruck mit Toluol/Aceton 9:1 getrennt.The diastereomers D- (22) and L- (22) are separated by chromatography over medium pressure with toluene / acetone 9: 1.
Ausbeute:Yield:
D-(22) 40 mg (18%); RF = 0,55 Toluol/Aceton 8:2D- (22) 40 mg (18%); R F = 0.55 toluene / acetone 8: 2
L-(22) 40mg (18%); RF = 0,52Toluol/Aceton 8:2L- (22) 40mg (18%); R F = 0.52 toluene / acetone 8: 2
1H-NMR (250MHz, CDCI3 in ppm): 1 H-NMR (250 MHz, CDCl 3 in ppm):
Verbindung D-(22): 8,0 (m, 2H, Benzoyl); 7,57 (m, 1H, Benzoyl); 7,44 (m, 2H, Benzoyl); 5,81 (m, 2H, NH, CH2-CH = C); 5,42 (m, 2H, C = CH-CH-OBz); 5,15 (dd, 1H, H-4, J = 7,5Hz, J = 7,5Hz); 5,01 (m, 2H, H-3, H-2); 4,47 (m, 1H, NH); 3,39 (d, 1H, H-1, J = 7,9Hz); 4,23(dd,1H,H-6,J = 12,2 Hz, J = 4,9Hz);4,04(dd,1H,H-6',J = 12,2 Hz, J = 2,1 Hz); 3,9 (dd, 1H,-CH2-O-, J = 9,8 Hz, J = 3,05Hz); 3,68 (m, 2H,-CH2-O, H-5); 2,1 (s, 3H, Acetyl); 2,04 (s, 3H, Acetyl); 1,99 (s, 6H, Acetyl).Compound D- (22): 8.0 (m, 2H, benzoyl); 7.57 (m, 1H, benzoyl); 7.44 (m, 2H, benzoyl); 5.81 (m, 2H, NH, CH 2 -CH = C); 5.42 (m, 2H, C = CH-CH-OBz); 5.15 (dd, 1H, H-4, J = 7.5Hz, J = 7.5Hz); 5.01 (m, 2H, H-3, H-2); 4.47 (m, 1H, NH); 3.39 (d, 1H, H-1, J = 7.9Hz); 4.23 (dd, 1H, H-6, J = 12.2Hz, J = 4.9Hz), 4.04 (dd, 1H, H-6 ', J = 12.2Hz, J = 2, 1 Hz); 3.9 (dd, 1H, -CH 2 -O-, J = 9.8 Hz, J = 3.05Hz); 3.68 (m, 2H, -CH 2 -O, H-5); 2.1 (s, 3H, acetyl); 2.04 (s, 3H, acetyl); 1.99 (s, 6H, acetyl).
Verbindung L-(22): 8,04 (m, 2H, Benzoyl); 7,58 (m, 1H, Benzoyl); 7,45 (m, 2H, Benzoyl); 5,95-5,72 (m, 2H, NH,-CH2-CH=C); 5,6-5,3 (m, 2H,-C=CH-OBz); 5,25-4,95 (m, 3H, H-4, H-3, H-2); 4,45 (m, 2H, H-1 CH-N); 4,3-3,85 (m, 3H); 3,65 (m, 2H).Compound L- (22): 8.04 (m, 2H, benzoyl); 7.58 (m, 1H, benzoyl); 7.45 (m, 2H, benzoyl); 5.95-5.72 (m, 2H, NH, -CH 2 -CH = C); 5.6-5.3 (m, 2H, -C = CH-OBz); 5.25-4.95 (m, 3H, H-4, H-3, H-2); 4.45 (m, 2H, H-1 CH-N); 4.3-3.85 (m, 3H); 3.65 (m, 2H).
(23) O- bzw. L-erythro-l-O-ß-D-Glucopyranosyioxy-S-hydroxy^-tetracosanoylamino^-trans-eicosen 55,6mg (0,05mMol) Verbindung D-(22) bzw. L-(22) werden in 3ml wasserfreiem Methanol gelöst, mit 0,03 ml einer 1 M Natriummethanolatlösung versetzt und bei Raumtemperatur gerührt. Nach 1 Stunde neutralisiert man mit Ionenaustauscher der sauren Form, wobei eine leichte Trübung eintritt. Man erwärmt, filtriert vom Ionenaustauscher ab, wäscht mit Methanol nach und dampft zur Trockne ein. Zur Reinigung wird über Kieselgel mit Chlorofom-Methanol 85:15 Chromatographien. Ausbeute:(23) O- or L-erythro-lO-.beta.-D-glucopyranosyoxy-S-hydroxy-tetracosanoylamino-trans-eicosene 55.6 mg (0.05 mmol) Compound D- (22) and L- (22 ) are dissolved in 3 ml of anhydrous methanol, treated with 0.03 ml of a 1 M sodium methoxide solution and stirred at room temperature. After 1 hour neutralized with ion exchanger of the acidic form, with a slight turbidity occurs. The mixture is heated, filtered from the ion exchanger, washed with methanol and evaporated to dryness. For purification is over silica gel with chloroform-methanol 85:15 chromatographies. Yield:
42 mg (95%).42 mg (95%).
Verbindung D-(23): RF = 0,7, Chloroform/Methanol 8:2;Compound D- (23): R F = 0.7, chloroform / methanol 8: 2;
Verbindung L-(23): RF = 0,7, Chloroform/Methanol 8:2.Compound L- (23): R F = 0.7, chloroform / methanol 8: 2.
HN'HN '
0 OH (I)-D0 OH (I) -D
OH HNOH HN
R1 R 1
O OH (I)-LOH (I) -L
HOHO
OHOH
HNHN
(Y(Y
HO OH (H)-DHO OH (H) -D
R1 R 1
ην/ην /
r6 oh (HI)-D ,RJ r6 oh (HI) -D, R J
HM'HM'
HO OH (H)-LHO OH (H) -L
Hl·!·Hl ·! ·
RO OH (HI)-LRO OH (HI) -L
HN'HN '
RO OAc (IV)-DRO OAc (IV) -D
HiI ·HiI ·
RO OAcx (IV)-LRO OAc x (IV) -L
-^ 19 RA- 9-1 .5708- ^ 19 RA-9-1 .5708
R-R-
HN'HN '
RO OAc* (V)-DRO OAc * (V) -D
R1 R 1
HNHN
ίΎ,ίΎ,
RO OAc J (VI)-DRO OAc J (VI) -D
2/32.3
HN-HN
RO OAc2 (V)-LRO OAc 2 (V) -L
HIKHIK
(VI)-L(VI) -L
HNHN
5 R' 5 R '
ίΎ,ίΎ,
HO OAcx (VII)-DHO OAc x (VII) -D
ην/ην /
HO OAc1 (VII)-LHO OAc 1 (VII) -L
HNHN
.R'.R '
ί ρ2ί ρ2
HO OAc2 (VIII)-DHO OAc 2 (VIII) -D
R"R "
IN /IN /
rV.rV.
HO OAc3 (IX)-DHO OAc 3 (IX) -D
HO OAcc (VIII)-LHO OAc c (VIII) -L
Η!-ΚΗ! -Κ
OAc3 (IX)-LOAc 3 (IX) -L
-Q 19 U.. 9.-1-Q 19 U .. 9.-1
HNHN
RJ RJ
Ac4OAc 4 O
OAc (X)-DOAc (X) -D
Ac4OAc 4 O
OAcOAc
3/33.3
HN-HN
OAc1 OAc 1
(X)-L(X) -L
Ac4OAc 4 O
HN-HN
OAc" (XD-LOAc "(XD-L
OAc OAcOAc OAc
HNHN
R-R-
Ac4O 1 ΙAc 4 O 1 Ι
Ar· η IAr η I
O OAc-O OAc
(XII)-D(XII) -D
OAc Ac4OOAc Ac 4 O
AcAc
HN-HN
OAc3 OAc 3
(XII)-L(XII) -L
OAcOAc
215708215708
Claims (8)
die bei der Variante (B) erhaltenen Diastereomeren der Formel (V) bzw.the compound of the formula (IV) obtained in variant (A) or
in the variant (B) obtained diastereomers of the formula (V) or
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