CZ9904752A3

CZ9904752A3 - Deriváty aminospivopiperidinchinazolinu

Info

Publication number: CZ9904752A3
Application number: CZ19994752A
Authority: CZ
Inventors: Peter Hamley; Austen Pimm; Alan Tinker
Original assignee: Astra Pharmaceuticals Ltd.
Priority date: 1998-06-22
Filing date: 1998-06-22
Publication date: 2000-10-11

Abstract

Tento vynález poskytuje sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterém A představuje aromatický karbocyklický kruh či pětinebo šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné ajsou vybrány z atomu kyslíku, dusíku a síry; X představuje skupinu vzorce -(CH2)n-, kde n představuje nulu nebo 1; a R1, R2 a R3 > jsou definovány v popisu, ajejich farmaceuticky přijatelné soli ajejich enantiomery a tautomery; společně se způsobemjejich přípravy, přípravky, které je obsahují ajejich použití v léčbě. Sloučeniny jsou inhibitory syntázy oxidu dusnatého a tedy jsou vhodné zejména k terapii nebo profylaxi zánětlivých onemocnění a boles

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká nových sloučenin, které jsou deriváty aminospiropiperidinchinazolinu. Vynález se týká rovněž souvisejících aspektů včetně způsobů přípravy sloučenin a prostředků je obsahujících a jejich užití jako léčiv. Popisuje rovněž chemické meziprodukty vhodné pro přípravu těchto sloučenin.

Dosavadní stav techniky

Oxid dusnatý je v buňkách savců produkován z L-argininu působením specifických syntáz oxidu dusnatého (NOS). Tyto enzymy spadají do dvou různých skupin - konstitutivní NOS (cNOS) a indukovatelné NOS (iNOS). V současnosti jsou známy dva konstitutivní NOS a jeden indukovatelný NOS. Z konstitutivních NOS je endoteliální enzym (ecNOS) zapojený do procesu relaxace hladkých svalů a do regulace krevního tlaku a průtoku krve, zatímco neuronální enzym (ncNOS) slouží jako neurotransmitor a jak se zdá, je zapojen do regulace různých biologických funkcí jako je mozková ischemie. Indukovatelné NOS se podílí zvláště na patogenezi zánětlivých onemocnění. Regulace těchto enzymů proto skýtá značný potenciál pro léčbu velkého množství chorobných stavů. (J.E. Macdonald, Ann. Rep. Med. Chem. 31, 221 až 230 (1996) ) .

WO 97/14686 popisuje, mezi jinými sloučeninami, deriváty aminospiropiperidinchinazolinu tohoto obecného vzorce:

• · · · * · ·

ve kterém

R³ představuje různé substituenty využitelné jako léčiva.

Léčba nebo profylaxe zánětlivých stavů je popisována jako určité farmaceutické použití.

Podstata vynálezu

Tento vynález poskytuje sloučeninu obecného vzorce (I)

ve kterém

R¹a R² nezávisle na sobě představují atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu s 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu s 2 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, al• · • · · · kylthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, atom halogenu, hydroxyskupinu, trifluoromethylovou skupinu nebo aminoskupinu;

R³ představuje jeden nebo více substituentů vybraných nezávisle z atomu vodíku, alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylové skupiny se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylové skupiny se 2 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylthioskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, atomu halogenu, hydroxyskupiny, trifluormethylové skupiny, aminoskupiny, kyanoskupiny, nitroskupiny, trifluormethoxyskupiny, methansulfonylové skupiny, sulfamoylové skupiny, skupiny obecného vzorce -NR⁴R⁵, skupiny obecného vzorce -C00R⁶, skupiny obecného vzorce -CONR⁷R⁸, benzyloxyskupiny, fenylové skupiny nebo pětičlenného heterocyklického aromatického kruhu obsahujícího 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné, a jsou vybrány z atomu kyslíku, dusíku a síry, v nichž fenylová skupina nebo pětičlenný heterocyklický aromatický kruh jsou popřípadě substituovány, přičemž možnými substituenty jsou alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, atom halogenu, kyanoskupina, nitroskupina, hydroxyskupina, alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku, trifluormethylová skupina a trifluormethoxyskupina;

R⁴,R⁵, R⁶ nezávisle na sobě představují atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

R⁷ a R⁸ nezvisle na sobě představují atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinu, kde fenylová skupina je popřípadě substituována jednou nebo více skupinami nezávisle vybranými • · · • « * « φφ z alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, atomu halogenu, kyanoskupiny, nitroskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, trifluormethylová skupiny a trifluormethoxyskupiny;

X představuje skupinu vzorce -(CH₂)_n, kde n představuje nulu něho jedna; a

A představuje aromatický karbocyklický kruh či pětinebo šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující l až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z atomu kyslíku, dusíku a síry;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty nebo tautomery.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty a tautomery mají tu výhodu, že jsou účinnými inhibitory indukovatelné izoformy enzymu syntázy oxidu dusnatého (INOS) přítomného v makrofázích.

Vynález dále poskytuje způsob přípravy takových sloučenin nebo jejich famaceuticky přijatelné soli, enantiomerů, racemátů nebo tautomeru.

Tento vynález dále rovněž poskytuje sloučeninu obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, enantiomer, racemát nebo tautomer pro použití jako lék.

Další aspekt vynálezu poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, • 9 • · 9 9 9

9999 9 99 • 9 > 9 9 9 • · 9 9 9 ·« 99 enantiomer, u racemátu nebo tautomeru při výrobě léku k léčbě nebo profylaxi onemocnění nebo stavů, při kterých je přínosná inhibice syntézy oxidu dusnatého.

V dalším aspektu vynález poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomerů, racemátu nebo tautomeru při výrobě léku k léčbě nebo profylaxi zánětlivých onemocnění.

V souladu s tímto vynálezem je rovněž poskytován způsob léčby nebo snížení rizika onemocnění nebo stavů, při kterých je přínosná inhibice syntézy oxidu dusnatého, které zahrnují podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru, racemátu nebo tautomeru osobám trpícím uvedenými onemocněními nebo stavy nebo s jejich zvýšeným rizikem.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být rovněž výhodně používány v kombinaci s druhou farmaceuticky účinnou látkou, zejména v kombinaci se selektivním inhibitorem indukovatelné izoformy cyklooxygenázy (COX-2). Takto je jako další aspekt vynálezu poskytováno použití sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru, racemátu nebo tautomeru v kombinaci s inhibitorem COX-2 k léčbě zánětů, zánětlivých onemocnění a zánětu příbuzných onemocnění. Rovněž poskytuje způsob léčby nebo snižování rizika zánětů, zánětlivých onemocnění a zánětu příbuzných onemocnění u osob trpících uvedenými onemocněními nebo stavy nebo jejich rizikem, ve kterém tento způsob zahrnuje podávání terapeuticky účinných množství sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomerů, racemátu nebo tautomeru v kombinaci s inhibitorem COX-2 těmto osobám.

• · • · • 9 • · • 9 99

Upřednostňuje se, aby A v obecném vzorci (I) bylo před stavováno benzenovým kruhem.

Upřednostňuje se, aby R¹ v obecném vzorci (I) bylo představován atomem vodíku. Alternativně se upřednostňuje, aby R¹ v obecném vzorci (I) byl představován atomem fluoru.

Dává se přednost tomu, aby R² v obecném vzorci (I) byl představován atomem fluoru.

V jiných preferovaných provedeních má n v obecném vzor ci (I) hodnotu nula.

Jednotlivé sloučeniny vynálezu zahrnují:

(R R )-4'-amino-5'-fluor-1,3,4,lOa-tetrahydrospiro(pyrido-[2,l-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R S )-4'-amino-5'-fluor-1,3,4,lOa-tetrahydrospiro(pyrido-[2,l-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4-amino-5-fluor-3b',4',6',7'-tetrahydrospiro(chinazolin-2,5'-(2H,9 Ή)-thieno-[3,2-a]-indolizin)-9'-on;

(R*S*)-4-amino-5-fluor-3b',4',6',7'-tetrahydrospiro(chinazolin- 2 ,5'-(2H,9 Ή)-thieno-[3,2-a]-indolizin)-9'-on;

(R*R*)-4-amino-5-fluor-6¹,7',9',9a'-tetrahydrospiro(chinazolin- 2 , 8'-(2H,4 Ή)-thieno-[2,3-a]-indolizin)-4'-on;

(R*S*)-4-amino-5-fluor-6¹,7',9',9a'-tetrahydrospiro(chinazolin- 2 ,8¹ -(2H,4 Ή)-thieno-[2,3-a]-indolizin)-4'-on;

Φ φ φ · · · (R*R*)-4'-amino-7-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-7-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1'H)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-8-chlor-5¹-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-8-chlor-5¹-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-9-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-9-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-10-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro (pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4’-amino-10-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro (pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2’-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-7,8-dichlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2¹ -(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-7,8-dichlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-7-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro (pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-7-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,l-a]-isoindol-2,2'-(l'H)-chinazolin)-6-on;

» · • · ·* (R*R*)-4'-amino-8-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,l-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-8-methyl-5'-fluor-1,3,4,10b-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1'H)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-8-methoxy-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro (pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-8-methoxy-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro (pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-8-kyan-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-8-kyan-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-8-kyan-5',8'-difluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-8-kyan-5',8'-difluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-5'-fluor-7,8,10,lOa-tetrahydrospiro(pyrido-[3,4-a]-indolizin-9,2'-(1Ή)-chinazolin)-5-on;

(R*S*)-4'-amino-5'-fluor-7,8,10,10a-tetrahydrospiro(pyrido-[3,4-a]-indoli zin-9,2'-(1 Ή)-chinazolin)-5-on;

• ti ti ti ti ti ti ti ti ti ♦ · * ti • ti ·· ti ti • ti ti (R*R*)-4'-amino-5'-fluor-6b,7,9,10,-tetrahydrospiro(nafto-[2,l-a]-indolizin-8,2'-(l'H)-chinazolin)-l2-on;

(R*S*)-4'-amino-5'-fluor-6b,7,9,10,-tetrahydrospiro(nafto-[2,l-a]-indolizin-8,2'-(1'H)-chinazolin)-12-on;

a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty nebo tautomery.

Pojem alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku znamená, pokud není uvedeno jinak, alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, která má 1 až 6 atomů uhlíku nebo cykloalkylovou skupinu, která má 3 až 6 atomů uhlíku.

Příklady takových skupin zahrnují methylovou, ethylovou, n-propylovou, isopropylovou, n-butylovou, isobutylovou, terč.-butylovou, cyklopentylovou a cyklohexylovou skupinu.

Pojem alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku znamená, pokud není uvedeno jinak, alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, která má 2 až 6 atomů uhlíku a obsahuje jednu dvojnou vazbu nebo cykloalkylovou skupinu, která má 3 až 6 atomů uhlíku a obsahuje jednu dvojnou vazbu. Příklady takových skupin zahrnují ethenylovou skupinu, 1a 2-propenylovou skupinu, 2-methyl-2-propenylovou,

2-butenylovou, cyklopentenylovou a cyklohexenylovou skupinu.

Pojem alkinylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku znamená, pokud není uvedeno jinak, alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, která má 2 až 6 atomů uhlíku a obsahuje jednu trojnou vazbu. Příklady takových skupin zahrnují ethinylovou skupinu, 1- a 2-propinylovou skupinu a 2-butinylovou skupinu.

• 0 • · 0 ·

0 0

0 0 • 0 • ·0 • · 0 0

Pojem alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku znamená, pokud není uvedeno jinak, alkoxyskupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem, která má 1 až 6 atomů uhlíku. Příklady takových skupin zahrnují methoxyskupinu, ethoxyskupinu, n-propoxyskupinu, isopropoxyskupinu, n-butoxyskupinu, isobutoxyskupinu, sek.-butoxyskupinu a terc.-butoxyskupinu.

Jiné skupiny, například alkylthioskupina, se mají interpretovat podobně.

Shora zmíněný způsob přípravy sloučenin podle tohoto vynálezu nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, enantiomerů, racemátů nebo tautomerů zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce (II)

(II) ve kterém

R¹ a R² odpovídají definici uvedené výše, se sloučeninou obecného vzorce (III) nebo jeho chráněným derivátem

λ (III)

A -4—R³ o

X * 4

444 » 4

4

4*4 4 • 4 444 4

4 4 4 4 4 4

4· 444 4 9 9 9 ve kterém

O ,

R, A a X odpovídají definici uvedené výše.

Reakce se provádí v polárním rozpouštědle, například methanolu, ethanolu, acetonitrilu, dimethylformamidu nebo dimethylsulfoxidu za vhodné teploty, pohybující so obecně mezi 20 °C a teplotou varu rozpouštědla, nebo bez rozpouštědla, za teploty obecně mezi 20 °C a 200 °C. Bylo zjištěno, že je někdy vhodné použít chráněných forem sloučenin obecného vzorce (III), například acetalových forem, jako je například diethoxyacetalový derivát. Způsob se v tomto případě provádí přednostně za přítomnosti kyselého katalyzátoru. Žádané acetalové deriváty se vytvoří reakcí nechráněné sloučeniny obecného vzorce (III) s alkoholem, jako je ethanol, za použití způsobů dobře známých v oboru.

Tento vynález zahrnuje součeniny obecného vzorce (I) ve formě solí, zvláště adičních solí s kyselinou. Vhodné soli zahrnují jak soli vytvořené z organických, tak anorganických kyselin. Takovéto adiční soli s kyselinou budou obvykle farmaceuticky přijatelné, ačkoli při přípravě a čištění sloučeniny mohou připadat v úvahu rovněž použití solí farmaceuticky nepřijatelných kyselin. V souladu s tím upřednostňované soli zahrnují soli vytvořené z kyseliny chlorovodíkové, bromovodíkové, sírové, fosforečné, citrónové, vinné, mléčné, pyrohroznové, octové, jantarové, fumarové, maleinové, methansulfonové a benzensulfonové.

Soli sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být vytvořeny reakcí volné báze nebo její soli, enantiomerů, racemátu nebo tautomeru s jedním nebo více ekvivalenty vhodné kyseliny. Reakce se může provádět v roztoku nebo prostředí, ve kterých

0

9 ♦ r · · ·

0 000 0 0 000 »

0 0 0 0 » » · » · 0 0 0 0 0 » 0 4» · · « « je sůl nerozpustná nebo v rozpouštědle, ve kterém je sůl rozpustná, například ve vodě, dioxanu, ethanolu, tetrahydrofuranu nebo diethyleteru nebo ve směsi rozpouštědel, která mohou být odpařena ve vakuu nebo odstraněna lyofilizací. Reakce může být rovněž výměnným procesem nebo může být provedena na iontoměnivé pryskyřici.

Nové meziprodukty obecných vzorců (II) a (III) tvoří další aspekt tohoto vynálezu.

Sloučeniny obecného vzorce (II) mohou být připraveny způsoby, jako jsou způsoby uvedené v publikaci WO 97/14686.

Příprava sloučenin obecného vzorce (III) je buď obecně známá, nebo jich může být dosaženo za použití způsobů dobře známých v oboru. Sloučenina obecného vzorce (III) může být získána např. cyklizací sloučeniny obecného vzorce (IV),

ve kterém

R³, A a X jsou, jak byly definovány výše a

M je buď alkalický kov nebo kov alkalických zemin.

Příklady takových kovů zahrnují litium, sodík, draslík nebo hořčík.

9 · 9 • 9

Sloučeniny obecného vzorce (IV) mohou vzniknout in šitu působením kovu M, nebo jeho organokovového derivátu, na sloučeniny obecného vzorce (IV) • 9 • 999

9 9

9 999 (IV)

Hal ve kterém

Hal představuje atom halogenu, zejména atom bromu nebo jodu, za použití metod dobře známých v oboru. Reakci je nejlépe provádět v aprotickém rozpouštědle jako je ether, tetrahydrofuran nebo diglym za teplot mezi -100 až +30 °C .

Sloučeniny obecného vzorce (IV) mohou být připraveny reakcí sloučeniny vzorce (V)

HN (V) s derivátem kyseliny obecného vzorce (VI)

Hal (VI) * 0

0·· • « 0 0 «· 0 ·♦· 00 0 • 0 0 0 0

0 ·0 • ·

000 * · 0 0 0 0 • 0 0 » · *

000 Φ* ve kterém

R³, A a X a Hal jsou, jak byly definovány výše a

L je odstupující skupina.

Reakce může být provedena v organickém rozpouštědle, např. v ethanolu, dichlormethanu nebo diethylformamidu za teploty mezi 0 °C a teplotou varu rozpouštědla. Reakce může být katalyzována přidáním bázického činidla; použitelná bázická činidla zahrnují organické aminy (například triethylamin nebo pyridin), hydroxidy, alkoxidy nebo hydridy alkalických kovů. Vhodné odstupující skupiny zahrnují atom halogenu (zvláště chloru) a imidazol. Tyto deriváty kyseliny mohou být připraveny z odpovídajících kyselin (sloučenin obecného vzorce (VI), ve kterém L je skupina vzorce -OH, za použití metod dobře známých v oboru.

Meziprodukty mohou být použity jako chráněná forma. Ochranné skupiny a detaily způsobů jejich odstranění lze nalézt podle reference ve standardní publikaci Protecting Groups in Organic Synthesis, 2. vydání, Green and Wuts (1991).

Sloučeniny podle vynálezu a jejich meziprodukty mohou být izolovány ze svých reakčních směsí, a pokud je to nutné, dále čištěny, za použití standardních technik.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v enantiomerních formách. Všechny enantiomery, diastomery, racemáty a jejich směsi proto spadají do rozsahu tohoto vynálezu. Různé optické izomery mohou být izolovány dělením racemických směsí sloučenin za použití standardních technik, » φ • φφφ • · ♦ φ • · ♦ · ϊ ί ϊ** · * * * * • * · · φ φ · ΦΦΦ· ·* ·»· φφ ·· Φ· ·· například frakcionační krystalizace nebo HPLC.

Rovněž meziprodukty mohou existovat v enantiomerních formách a mohou být použity jako čisté enantiomery, diastomery, racemáty nebo směsi.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat v alternativních tautomerních formách. Sloučeniny obecného vzorce (I) jsou poskytovány v jiných v tautomerních formách nebo jako jejich směsi.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty a tautomery jsou vhodné neboř u zvířat vykazují farmakologickou aktivitu. Sloučeniny jsou aktivní zvláště jako inhibitory enzymu syntázy oxidu dusnatého. Zejména pak jsou to inhibitory indukovatelné izoformy enzymu syntázy oxidu dusnatého přítomné v makrofázích a jako takové jsou považovány za vhodné k léčbě, například jako protizánětlivé působící látky.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty a tautomery jsou indikovány k použití při terapii nebo profylaxi chorob nebo stavů, ke kterým přispívá syntéza nebo zvýšená syntéza forem syntázy oxidu dusnatého. Zejména jsou sloučeniny indikovány u savců včetně člověka k použití při terapii zánětlivých stavů.

Zvláště mohou být uvedeny tyto stavy:

osteoartritida, revmatoidní artritida, revmatoidní spondylitida, dnavá artritida a další artritické stavy a záněty kloubů;

• * · • · ··· • · 9 9 « « ·

9 99 9 • 9 9 • · ·♦· • · · · • 9 9 9

9 *·

9 9 9

9-9 9 9 9

9 9 9 · · · ekzém, psoriáza, dermatitida nebo jiné zánětlivé stavy kůže jako je popálení od slunce;

zánětlivá postižení oka jako je uveitida a konjuktivitida;

postižení plic, na kterých se účastní zánět, například astma, bronchitida, nemoc chovatelů holubů, farmářská plíce a akutní syndrom dechové tísně;

bakterémie, endotoxémie (septický šok), afty, gingivitida, pálení žáhy, bolest a pankreatitida;

postižení gastrointestinálního traktu včetně Crohnovy choroby, atrofické gastritidy, varialoformní gastritidy, ulcerozní kolitidy, celiakie, regionální ileitidy, peptických vředů, syndromu dráždivého tračníku, poškození gastrointestinálního traktu způsobeného infekcemi, například Helicobacterem pylori, nebo léčbou nesteroidními protizánětlivými přípravky;

a další stavy spojené se zánětem.

Sloučeniny budou vhodné rovněž k léčbě a zmírnění akutní nebo perzistentní zánětlivé nebo neuropatické bolesti nebo bolesti centrálního původu.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty a tautomery mohou být vhodné k použití rovněž při terapii nebo profylaxi dalších onemocnění a stavů, než jsou výše uvedené. Sloučeniny mohou být například vhodné k léčbě aterosklerózy, cystické fibrózy, hypotenze spojené se septickým a/nebo toxickým šokem, při φ φ φ φφφ φ · φ φ * φ • φφφ • φφ· φφ Φ·* Φ· · φ * φφφφ φφφ· •φ φφφ φφφφ ·* ·φ léčbě disfunkcí imunitního systému nebo jako adjuvans při krátkodobé imunosupresi při orgánových transplantacích, při léčbě komplikací souvisejících s diabetem a ke společné terapii s cytokiny, například s TNF nebo interleukiny.

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou vykazovat rovněž inhibiční aktivitu vůči neuronální izoformě syntázy oxidu dusnatého. Proto může být vhodná rovněž k terapii hypoxie, například při srdeční zástavě nebo mrtvici, neurodegenerativních poruchách včetně degenerativních poruch nervů a/nebo nekrčzy nervů u poruch jako jsou hypoxie, hypoglykémie, epilepsie a u vnějších poranění (jako poranění míchy nebo poranění hlavy), při konvulzích a toxicitě způsobených hyperbarickým kyslíkem, demenci, například presenilní demenci, Alzheimerově chorobě a demenci související s AIDS, při Syndenhamově chorei, Parkinsonově chorobě, syndromu Giles de la Tourette, Huntingtonově nemoci, amiotrofické latelární skleróze, Korsakoffově chorobě, imbecilitě související s poruchou mozkových cév, poruchách spánku, schizofrenii, depresi, autismu, sezónní afektivní poruše, pásmové nemoci, depresi a jiných symptomech spojených s premenstruačním syndromem a při septickém šoku.

U sloučenin obecného vzorce (I) lze rovněž očekávat aktivitu při prevenci a při překonávání tolerance na opiáty a benzodiazepiny, při léčbě drogové závislosti, migrény a jiných bolestí hlavy vaskulárního původu, neurogenních zánětů, při léčbě poruch gastrointestinální motility, nádorů a při indukci porodu.

Velikost podávaných dávek se bude u všech shora uvedených indikací pohybovat v závislosti na použité sloučenině, způsobu podání a požadované léčbě. Nicméně, uspokojivých výs9 9 9 9

9 999 9 • · 999 99 9*9 99 9 <9 · 9999 9999 *· <99 99 99 9 9 99

- 18 • 9 • 999 ledků se obecně dosáhne, pokud budou sloučeniny podávány u pevných forem v dávkách od 1 do 2000 mg denně.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty mohou být použity samotné nebo ve formě příslušného farmaceutického prostředku, ve kterém je sloučenina smíchána s farmaceuticky přijatelným adjuvans, rozpouštědlem nebo nosičem. Podávání může být enterální (včetně orálního, sublingválního nebo rektálního), intranazální, intravenózní, lokální nebo jinými parenterálními cestami, ale nikoliv pouze těmito. Běžné způsoby výběru a přípravy vhodných farmaceutických přípravků jsou popsány například v M.E. Aulton, Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs, Churchill Livingstone (1998). Farmaceutické prostředky vhodně obsahují méně než 80 %, lépe však méně než 50 % sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomerů, racemátu nebo tautomeru.

Tento vynález rovněž poskytuje způsob přípravy takového farmaceutického prostředku, který obsahuje směs komponent.

Sloučeniny obecného vzorce (I) a jejich farmaceuticky přijatelné deriváty mohou být rovněž výhodně použity v kombinaci s inhibitorem COX-2. Inhibitory COX-2, kterým se dává zvláště přednost, jsou Celecoxib a MK-956. Inhibitor NOS a inhibitor COX-2 mohou být bud’ zpracovány společně ve stejném farmaceutickém prostředku pro podávání v jedné dávkové jednotce, nebo může být každá komponenta připravena zvlášt, takže jejich oddělené dávky mohou být podávány buď současně nebo následně po sobě.

9

999

9- 9

9

999 • * · 9999 999·

999 99 ·· ··

Příklady provedení vynálezu

Vynález je ilustrován, nikoli však omezen, následujícími příklady:

Příprava 1

Chlorid kyseliny 2,3-dichlor-6-jodbenzoové

a) Kyselina 2,3-dichlor-6-jodbenzoová

13,4 ml (19,4 mmol) 1,45M roztoku n-butyllitia v hexanu se nakape za stálého míchání k roztoku 3,0 ml (21,4 mmol) diisopropylaminu v 90 ml tetrahydrofuranu při teplotě 0 °C. Po 30 minutách se roztok ochladí na -78 °C a přikape se roztok 5,30 g (19,4 mmol) 1,2-dichlor-4-jodbenzenu v 10 ml tetrahydrofuranu. Po 10 minutách se opatrně přidá tuhý oxid uhličitý a směs se ponechá 16 hodin, aby se ohřála na teplotu místnosti. Směs se zředí vodou a dvakrát extrahuje ethylacetátem. Vodná vrstva se okyselí zředěnou kyselinou chlorovodíkovou a poté dvakrát extrahuje ethylacetátem. Extrakty se vysuší síranem sodným a odpaří, až se získá 3,59 g sloučeniny uvedené v nadpise v podobě žluté pevné látky.

¹H NMR spektrum (250 MHz, dg-DMSO) 11,5 (1H, široký s), 7,82 (1H, d, J = 8,4 MHz), 7,44 (1H, d, J = 8,4 Hz).

b) Chlorid kyseliny 2,3-dichlor-6-jodbenzoové

Jedna kapka dimethylformamidu se za míchání přidá k roztoku 1,53 g (4,83 mmol) kyseliny 2,3-dichlor-6-jodbenzoové a 2 ml oxalylchloridu ve 20 ml ethylacetátu. Po dvou hodinách se nechá roztok odpařit a produkt se okamžitě ♦ · • ···

9 • · · · · ·· · • · · · · * · ·· «·* ·· ·· použije.

Příprava 2

Chlorid kyseliny 3-kyan-6-jodbenzoové

a) Methylester kyseliny 2-amino-5-kyanbenzoové

Roztok 4,6 g (20 mmol) methylesteru kyseliny 2-amino-5-brombenzoové a 3,6 g (40 mmol) kyanidu měďného ve 20 ml N-methylpyrrolidinonu se udržuje po 4 hodiny při teplotě 200 °C. Po ochlazení na teplotu místnosti se roztok zředí vodou, extrahuje ethylacetátem, vodný extrakt se okyselí 2N kyselinou chlorovodíkovou a filtruje. Organická vrstva se oddělí, suší síranem hořečnatým a odpaří. Odparek se čistí pomocí bleskové sloupcové chromatografie na silikagelu eluováním 50% ethylacetátem v hexanu, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpise jako 1,0 g bezbarvé olejovité látky.

MS (+EI) ^m/_z 176 (M⁺).

b) Methylester kyseliny 2-jod-5-kyanbenzoové

0,8 g (11,4 mmol) dusitanu sodného v 10 ml vody se při teplotě 0 °C přikape v průběhu 10 min za míchání k roztoku 2,0 g (11,4 mmol) methylesteru kyseliny 2-amino-5-kyanbenzoové ve 30 ml vody a v 15 ml koncentrované kyseliny sírové. Po dalších 15 minutách se za teploty 5 °C rychle přidá roztok 3,5 g (21 mmol) jodidu draselného ve 30 ml vody a směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Přidá se 10% vodný roztok thiosíranu sodného, směs se extrahuje ethylacetátem, extrakt se suší síranem hořečnatým a odpaří. Odparek se čistí pomocí bleskové sloupcové chromatografie na

000

0 0 0 0 0 00 silikagelu eluováním 20% roztokem ethylacetátum v hexanu, čímž získáme sloučeninu uvedenou v nadpise jako 2,8 g bezbarvé olejovité látky.

MS (+EI) ^m/_z 287 (M⁺).

c) Kyselina 2-jod-5-kyanbenzoové

Roztok 0,44 g (11 mmol) hydroxidu sodného v 10 ml vody se přidá do roztoku 2,7 g (9,4 mmol) methylesteru kyseliny 2-jod-5-kyanbenzoové v methanolu. Směs se 20 hodin míchá, poté se většina rozpouštědla odpaří a odparek se okyselí 2N kyselinou chlorovodíkovou. Výsledná sraženina se odfiltruje a vysuší, čímž se získá 1,7 g bílé pevné pevné látky.

MS (-CI) ^m/„ 272 (M-H)⁺.

d) Chlorid kyseliny 2-amino-5-kyanbenzoové

Tento se připraví způsobem podle přípravy 1, b) a přímo se použije.

Další chloridy jsou bud' běžně známy nebo se připraví ze známých kyselin způsobem podle přípravy 1 b).

Příprava 3

1-(2-Brom-6-chlorbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon

Roztok 0,5 mmol chloridu kyseliny 2-brom-6-chlorbenzoové v 5 ml dichlormethanu se přikape k roztoku 495 mg (5,1 mmol) 2,3-dihydro-4-pyridinonu a 1,2 ml triethylaminu ve 20 ml dichlormethanu. Směs se po 30 minut míchá, pak se zředí • · * · · · • · » · · < ·· »» vodou, nechá oddělit, vodný extrakt extrahuje dichlormethanem, organické extrakty se smísí a promyjí roztokem chloridu sodného, suší síranem sodným a odpaří. Odparek se čistí pomocí bleskové sloupcové chromatografie na silikagelu eluováním 30% roztokem ethylacetátem v hexanu, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpise jako 629 mg světle žluté olejovité látky.

MS (+CI) ^m/_z 316 (M+H)⁺.

Následující meziprodukty byly připraveny podobně z 2,3-dihydro-4-pyridinonu a příslušného chloridu kyseliny.

1) 1-(2-Brom-5-methylbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon: bezbarvá olejovitá látka

MS (+EI) ^m/_z 293/295 (M⁺).

2) l-(3-Brom-4-pyridinoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon: bílá pevná látka

MS (+EI) ^m/_z 280/282 (M⁺).

3) l-(2,3-Dichlor-6-jodbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon: bílá pevná látka

MS (+EI) ^m/_z 395/397 (M⁺).

4) l-(5-Kyan-2-jodbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon: bezbarvá olejovitá látka, použije se bez čištění.

5) 1-(5-Kyan-2-jodbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon • · • «00 • ·

0 < · 0 0

0 0 00 ·

0 0 0 0

0 0 0 0 0

000 00 00

MS (+EI) ^m/_z 341 (M⁺).

6) 1- (2-Brom-3-chlorbenzoyl) -2,3-dihydro-4-pyridinon

MS (+EI) ^m/_z 313/315 (M⁺).

7) 1-(2-Brom-4-chlorbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon

MS (+EI) ^m/_z 314 (M⁺).

8) 1-(2-Brom-5-chlorbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon

MS (+EI) ^m/_z 314 (M⁺).

9) 1-(2-Brom-3-thienoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon

MS (-CI) ^m/_z 284/286 (M-H)⁺.

10) 1-(2-Brom-5-methoxybenzoyl) -2,3-dihydro-4-pyridinon

MS (+EI) ^m/_z 309/311 (M⁺).

11) 1-(2-Jod-l-naftoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon

MS (-CI) ^m/_z 376 (M-H)¹.

12) l-(2-Jod-3-thienoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinon: bezbarvá olejovitá látka ¹H NMR spektrum (300 MHz, dg-DMSO) 7,55 (1H, d, J = 5,4 Hz), 7,47 - 7,43 (1H, m), 7,00 (1H, d, J = 5,4 Hz), 5,40 (1H, d,

J = 8,1 Hz), 4,18 (2H, t, J = 7,2 Hz), 2,68 (2H, t, J = 7,2 Hz) .

Φ • · • · * ΦΦΦ 9

9 999 9 Φ φφ· φ

Φ Φ ΦΦΦ φφ ΦΦ» • 9 9 9 9 9 9 ΦΦΦΦ

Φφ« ΦΑ φφ φφ φ«

Příprava 4 (+)-7-Chlor-l,3,4,10b-tetrahydropyrido-[2, l-a]-isoindol-2,6-dion

Směs 300 mg (0,954 mmol) l-(2-brom-6-chlorbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu, 0,54 ml (0,39 mmol) triethylaminu, 0,05 ml (1,3 mmol) kyseliny mravenčí a 47 mg (0,063 mmol) di-(trifenylfosfin)-diacetoxypaladia ve 3 ml dimethylformamidu se zahřívá 2 hodiny na 80 °C. Ochlazený roztok se filtruje přes rozsivkovou zeminu (Celíte), zředí vodou, dvakrát extrahuje ethylacetátem, extrakty se suší síranem sodným a odpaří. Odparek se čistí pomocí bleskové sloupcové chromatografie na silikagelu eluováním 50% roztokem ethylacetátu v hexanu, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpise jako 70 mg bezbarvé olejovité látky.

MS (+CI) ^m/_z 235/237 (M+H)⁺.

Sloučeniny uvedené v přípravách 5 až 7 se syntetizují s využitím postupu uvedeného v přípravě 4.

Příprava 5 (±)-7,8-Dichlor-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[2,l-a]-isoindol-2,6-dion

Z 1-(2,3-dichlor-6-jodbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu. Bílá pevná látka.

MS (+EI) ^m/_z 269/271 (M⁺).

• · · • · ··· ét · • · · • · ··* • · · · · · · β·· · · <

• · · · · · < ····

0· ··· «·β «· 00 0»

Příprava 6 (±)-8-Chlor-l,3,4,10b-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dion

Z 1-(2-brom-5-chlorbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu. Bezbarvá olejovitá látka.

MS (+EI) ^m/_z 235/237 (M⁺).

Příprava 7 (±)-3b,4,6,7-Tetrahydrothien-[3,2-a]-indolizin-5,9-dion

Z l-(3-brom-2-thienoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu. Bezbarvá olejovitá látka.

MS (+CI) ^m/_z 208 (M+H)⁺.

Příprava 8 (+)-8-Methyl-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dion

Směs 1,19 g (4,03 mmol) l-(2-brom-5-methylbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu, 1,14 ml (4,24 mmol) tri-n-butylcinhydridu a 66 mg (10 mol%) azo-bis(isobutyronitrilu) (AIBN) ve 40 ml toluenu se zahřívá po 2 hodiny na 90 °C, ochladí se, odpaří a čistí se pomocí bleskové sloupcové chromatografie na silikagelu eluováním 30% roztokem ethylacetátu v hexanu, čímž se získá sloučenina uvedená v nadpise jako 276 mg světle žluté olejovité látky.

ra · * · ··

MS (+EI) ^m/_z 215 (M⁺).

Sloučeniny uvedené v přípravách 9 až 12 se připravují s využitím postupu uvedeného v přípravě 8.

Příprava 9 (+)-8-Kyan-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dion

Z 1-(5-kyan-2-jodbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu.

MS (-CI) ^m/_z 226 (M⁺).

Příprava 10 (±)-7,8,10,10a-Tetrahydropyrido-[3,4-a]-indolizin-5,9-dion

Z 1-(2-Brom-4-pyridinoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu.

MS (+EI) ^m/_z 202 (M⁺).

Příprava 11 (±)-7-Methyl-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[3,4-a]-isoindol-2,6-dion

Z 1-(2-Methyl-6-jodbenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu.

MS (+EI) ^m/_z 215 (M⁺).

Příprava 12 (+)-6b,7,9,10-Tetrahydronafto-[3,4-a]-indolizin-8,12-dion

Z l-(2-jod-l-naftoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu.

MS (+CI) ^m/_z 252 (M+H)⁺.

Příprava 13 (+)-7-Methyl-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[3,4-a]-isoindol-2,6-dion

3,1 ml (2,8 mmol) 0,9M roztoku butyllitia v hexanu se nakape k roztoku 0,75 g (2,4 mmol) l-(2-brom-5-methoxybenzoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu ve 20 ml tetrahydrofuranu při teplotě -78 °C. Směs se po 2 hodiny míchá, poté se reakce zabrzdí vodou, extrahuje se ethylacetátem, extrakt se suší síranem sodným a odpaří. Odparek se čistí pomocí bleskové sloupcové chromatografie na silikagelu eluováním 50% roztokem ethylacetátu v hexanu, čímž získáme sloučeninu uvedenou v nadpise jako 240 mg bezbarvé olejovité látky.

MS (+EI) ^m/_z 231 (M⁺).

Sloučeniny uvedené v přípravách 14 až 16 se připravují s využitím postupu uvedeného v přípravě 13.

Příprava 14

10-Chlor-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[3,4-a]-isoindol-2,6-dion

Z 1-(2-brom-3-chlorbenzoyl) -2,3-dihydro-4-pyridinonu.

• » ♦ · ·

• · · ·

Bezbarvá olejovitá látka.

MS (+EI) ^m/_z 235/237 (M⁺).

Příprava 15

9-Chlor-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[3,4-a]-isoindol-2,6-dion

Z 1-(2-brom-4-chlorbenzoyl) -2,3-dihydro-4-pyridinonu. Bezbarvá olejovitá látka.

MS (+EI) ^m/_z 235/237 (M⁺).

Příprava 16

6,7,9,9a-Tetrahydrothieno~[2,3-a]-indolizin-4,8-dion

Z 1-(2-Brom-3-thienoyl)-2,3-dihydro-4-pyridinonu.

MS (+CI) ^m/_z 208 (M+H)⁺.

Příklad 1 (+)-(R R )-4'-Amino-5'-fluor-1,3,4,10a-tetrahydrospiro(pyrido -[2,l-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on

O

• · ·· · · ·

Roztok 0,13 g (0,61 mmol) 2-amino-6-fluorbenzamidinu a 0,12 g (0,59 mmol) 1,3,4,lOa-tetrahydropyrido-[3,4-a]-isoindol-2,6-dionu (J.C.S. Perkin, Trans. 1, 2477 (1984); Tetrahedron, 2239 (1993)) v 15 ml ethanolu se míchá 18 hodin pod zpětným chladičem. Směs se ochladí a filtruje, čímž se získá 0,1 g žluté pevné látky, která se čistí pomocí flash sloupcové chromatografie na neutrálním oxidu hlinitém eluováním směsí dichlormethanu a methanolu v poměru 99 : 1 až 95 : 5, až k získání prvního diasteroizomeru sloučeniny uvedené v nadpise (obsahující RR a SS enantiomery) jako 0,05 g žluté pevné látky. Teplota tání 207 až 209 °C.

Příklad 2 (±)-(R*S*)-4'-Amino-5'-fluor-1,3,4,10a-tetrahydrospiro(pyrido -[2,l-a]-isoindol-2,2'-(1'H)-chinazolin)-6-on

F NH₂

Filtrát, který ze získá vysrážením produktu z příkladu 1 se odpaří, čímž se získá 0,19 g hnědé olejovité látky. Ta se čistí pomocí bleskové sloupcové chromatografie na neutrálním oxidu hlinitém eluováním směsí dichlormethanu a methanolu v poměru 99 :1 až 95 : 5, čímž se získá druhý diasteroizomér sloučeniny uvedené v nadpise (obsahující RS a SR enantioméry) jako 0,03 g žluté pevné látky. Teplota tání 184 až 186 °C.

β · 9 9 • · • · · « » 9 9 ·

Příklad 3 (+)-(R*R*)-4-Amino-5-fluor-3b',4',6',7'-tetrahydrospiro(china zolin-2,5'-(2H,9 Ή)-thieno-[3,2-a]-indolizin)-9'-on

Roztok 100 mg (44 mmol) 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 7,80 mg (39 mmol) 3b,4,6,7-tetrahydrothieno-[3,2-a]-indolizin-5,9-dionu (příprava 7) v 10 ml ethanolu se zahřívá 5 hodin pod zpětným chladičem. Rozpouštědlo se odpaří a odparek se rozdělí chromatografii na silikagelu, eluováním směsí dichlormethanu a methanolu. První eluovaná frakce posky tuje 63 mg sloučeniny uvedené v nadpise (43 %), v podobě světle žluté pevné látky. Teplota tání 193 až 195 °c.

MS (+CI) ^m/_z 343 (M+H)⁺.

Příklad 4 (+)-(R*S*)-4-Amino-5-fluor-3b',4',6',7'-tetrahydrospiro(chinazolin-2,5'-(2H,9 Ή)-thieno-[3,2-a]-indolizin)-9'-on ·· 00 * ♦ · « » «0 « · 0 0 0 · ♦ · · · • 0 • · « • 0 • 0 ·· 000 0 • 0 0 • · 0 0 0 * · 0 • · 0

000

Druhá frakce eluovaná chromatografií popsaná v příkladu 3 poskytuje 33 mg sloučeniny uvedené v nadpise (22 %). Teplota tání 218 až 220 °C.

MS (+CI) ^m/_z 343 (M+H)⁺.

Sloučeniny příkladů 5 až 30 se připraví způsobem uvedeným v příkladech 3 a 4 z uvedených meziproduktů.

Sloučeniny příkladů 5 a 6 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 6,7,9,9a-tetrahydrothieno-(2,3-a)-indolizin-4,8-dionu (příprava 16).

Příklad 5 (+)-(R*R*)-4-Amino-5-fluor-6',7',9’,9a'-tetrahydrospiro(chinazolin-2,8'-(2H,4'H)-thieno-[2,3-a]-indolizin)-4'-on

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání >275 °C.

MS (+CI) ^m/_z 343 (M+H)⁺.

Příklad 6 (+)-(R*S*)-4-Amino-5-fluor-6',7',9',9a'-tetrahydrospiro[chinazolin-2,8'-(2H,4Ή)-thieno-[2,3-a]-indolizin)-4'-on

F NH₂

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 225 až 230 °C.

MS (+CI) ^m/₂ 343 (M+H)⁺.

Sloučeniny příkladů 7 a 8 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 7-chlor-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 4).

Příklad 7 (±)-(R*R*)“4¹-Amino-7-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-onhydrochlorid

MS (+CI) ^m/_z 371/373 (M+H)⁺; ¹H NMR spektrum (300 MHz, dg-DMSO) 7,62 (1H, d, J = 7,5 Hz), 7,54 (1H, t, J = 7,5 Hz), 7,45 (1H, d, J = 7,2 Hz), 7,13 (1H, dt, J = 6,6, 6,6, 8,1 Hz), 6,59 (1H, s), 6,40 (1H, d, J = 7,2 Hz), 6,37 - 6,33 (1H, m), 5,85 - 5,8 (2H, široký s), 4,79 (1H, dd, J = 3,3, 11,4 Hz), 4,12 (1H, dd, J = 3,9, 13,8 Hz), 3,40 - 3,35 (1H, m), 2,60 - 2,55 (1H, m), 1,91 (1H, d, J = 12 Hz), 1,37 (1H, dt, J = 5,7 12,9, 12,9 Hz) 1,04 (1H, t, J = 11,7 Hz).

Příklad 8 (±)-(R*S*)-4'-Amino-7-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-onhydrochlorid

MS (+CI) ^m/_z 371/373 dg-DMSO) 7,61 - 7,46 d, J = 8,1 Hz), 6,44 (M+H)⁺? ¹H NMR spektrum (300 MHz, (4H, m), 7,27 - 7,20 (2H, m), 6,74 (1H, (1H, dd, J = 8,4, 12,3 Hz), 4,75 (1H, dd,

·* ·*·» « · • · ·· • · « » • * · • · 99 · * · · · » • · · « • ·

J = 3,6 3,9 Hz), 3,32 - 3,19 (1H, lil) , 2,0 -1,95 (1H, m) , 1,5 - 1,4 (1H, m), 1,3 -1,1 (1H, m) .

Sloučeniny příkladů 9 a 10 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 8-chlor-l,3,4,10b-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 6).

Příklad 9 (±)-(R*R*)-4'-Amino-8-chlor-5’-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 308 °C (rozklad).

Příklad 10 (±)-(R*S*)-4'-Amino-8-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on

• · • 9 9 « ·

Získá se v podobě trifluoracetátové soli (amorfní) čištěním pomocí HPLC na reverzní fázi.

MS (+CI) ^m/2 371 (M+H)⁺, MS (-CI) ^m/z 369 (M-H)⁺.

Sloučeniny příkladů ll a 12 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 9-chlor-l,3,4,10b-tetrahydropyrido-[2,l-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 15).

Příklad 11 (±)-(R*R*)-4¹-Amino-9-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on

F NH₂

Cl

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 225 °C (rozklad).

Příklad 12 (±)-(R*S*)-4'-Amino-9-chlor-5'-fluor-1,3,4,10b-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 210 °C (rozklad).

Sloučeniny příkladů 13 a 14 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 10-chlor-l,3,4,10b-tetrahydropyrido-[2,l-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 14).

Příklad 13 (+)-(R*R*)-4'-Amino-10-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,l-a]-isoindol-2,2'-(1'H)-chinazolin)-6-on

O

F

NH₂

Získá se v podobě hydrochloridové soli.

MS (+CI) ^m/₂ 371 (M+H)⁺.

Příklad 14 (+)-(R*S*)-4'-Amino-10-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,l-a]-isoindol-2,2'-(1'H)-chinazolin)-6-on

999 · • 9 · • 9 99· • * ♦ • · · • 9 99» ♦ * 9 * · 9 9 9 * 9 · · • · · · ·· ·9 * *9 ♦ *9 • · 9 * 9 9 1 ♦ · 99

Sloučeniny příkladů 15 a 16 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 7,8-dichlor-l,3,4,10b-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 5).

Příklad 15 (+)-(R*R*)-4'-Amino-7,8-dichlor-5'-fluor-1,3,4,10b-tetrahydrospiro (pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(lΉ)-chinazolin)-6-on

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 258 až 260 °C.

• · ♦ ti tititi· • ti • tititi • · * * ti • * ti • · * ti

Příklad 16 (±)-(R*S*)-4'-Amino-7,8-dichlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydro-spiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on

Cl získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 259 až 261 °C.

Sloučeniny příkladů 17 a 18 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 7-methyl-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 11).

Příklad 17 (±)-(R*R*)-4'-Amino-7-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on φ φ φ φ

Teplota tání * * φφφφ ♦ φ * · φφ • φ φ φ ** φφφ

Získá se v podobě hydrochloridové soli. 201 až 204 °C.

Příklad 18 (±)-(R*S*)-4'-Amino-7-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1'H)-chinazolin)-6-on

ί Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 215 až 218 °C.

Sloučeniny příkladů 19 a 20 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 8-methyl-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 8).

Příklad 19 (±)-(R*R*)-4'-Amino-8-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2¹ -(1 Ή)-chinazolin)-6-on

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 238 až 239 °C.

Příklad 20 (±)-(R*S*)-4'-Amino-8-methyl-5’-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2, 2 ' - (1Ή)-chinazolin)-6-on

O

Sloučeniny příkladů 21 a 22 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 8-methoxy-l,3,4,lOb-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 13).

Příklad 21 (±)-(R*R*)-4'-Amino-8-methoxy-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydro spiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on *· »**· • · • · ·«

Získá se v podobě hydrochloridové soli.

MS (+CI) ^m/_z 367 (M+H)⁺.

Příklad 22 (+)-(R*S*)-4'-Amino-8-methoxy-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on

O

Získá se v podobě hydrochloridové soli.

MS (+CI) ^m/_z 367 (M+H)⁺.

Sloučeniny příkladů 23 a 24 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 8-kyan-l,3,4,10b-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 9).

Příklad 23 ·· 44 ’ ♦* 4 * 4 4 4 ‘4 4 ** 4444 • 4 4 • 4 444 • · 4 • · 4 ·· 444 (+)-(R*R*)-4'-Amino-8-kyan-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(lΉ)-chinazolin)-6-on

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 241 °C (rozklad).

Příklad 24 (±)-(R*S*)-4'-Amino-8-kyan-5'-fluor-1,3,4,1Ob-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 290 °C (rozklad).

Sloučeniny příkladů 25 a 26 se získají z 2-amino-2,6-difluorbenzamidindihydrochloridu a 8-kyan-l,3,4,10b-tetrahydropyrido-[2,1-a]-isoindol-2,6-dionu (příprava 9).

·♦ »4··

4 4 4 44

Příklad 25 (+)-(R*R*)-4'-Amino-8-kyan-5',8'-difluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1'H)-chinazolin)-6-on

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 243 °C (rozklad).

Příklad 26 (±)-(R*S*)-4'-Amino-8-kyan-5',8'-difluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on

Sloučeniny příkladů 27 a 28 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a l,8,10,10a-tetrahydropyrido-[3,4-a]-indolizin-5,9-dionu (příprava 10).

• 9

9

9·· • 9 9 • · * 9· • · · • · 9 • 9 ··· ® 9 9 • · · · 9 • « 9 » 9 · • 9 · • 9 · ·· 99

Příklad 27 (±)~(R*R*)~4'-Amino-5'-fluor-7,8,10,lOa-tetrahydrospiro(pyrido-[3,4-a]-indolizin-9,2'-(1Ή)-chinazolin)-5-on

O

Získá se v podobě hydrochloridové soli.

MS (+CI) ^m/_z 338 (M+H)⁺;

¹H NMR spektrum (300 MHz, dg-DMSO) 8,97 (1H, s), 8,72 (1H, d, J = 5,1 Hz), 7,67 (1H, d, J = 5 Hz), 7,20 (1H, q, J = 7 Hz), 6,8 (1H, široký s), 6,46 - 6,38 (2H, m), 4,97 (1H, dd, J = 3,6, 12 Hz), 4,18 (1H, dd, J = 4,5, 12,6 Hz), 3,45 (1H, dt,

J = 3,3, 12,9 Hz), 2,76 - 2,72 (1H, m), 1,97 (1H, d, J = 12 Hz), 1,45 (1H, dt, J = 5,4, 12,9, Hz), 1,10 (1H, t, J = 12,0 Hz) .

Příklad 28 (+)-(R*S*)-4'-Amino-5'-fluor-7,8,10,lOa-tetrahydrospiro(pyrido-[3,4-a]-indolizin-9,2'-(1Ή)-chinazolin)-5-on * »99 9

9 • 999 • 9··

MS (+CI) ^m/_z 338 (M+H)⁺;

^TH NMR spektrum (300 MHz, dg-DMSO) 8,95 (1H, s), 8,74 (1H, d, J = 4,8 Hz), 7,69 (1H, d, J = 5,1 Hz), 7,44 - 7,25 (3H, m), 6,78 (1H, d, J = 7,5 Hz), 6,52 - 6,46 (1H, m), 4,94 (1H, dd,

J = 3,6, 12,3 Hz), 4,20 (1H, dd, J = 4,8, 13,8 Hz), 3,8 -3,43 (1H, dd, zastíněný H₂0), 2,71 (1H, široký d, J = 9 Hz), 1,98 (1H, d, J = 13,2 Hz), 1,55 (1H, dt, J = 5,1, 12,9, Hz), 1,26 (1H, t, J = 12,9 Hz).

Sloučeniny příkladů 29 a 30 se získají z 2-amino-6-fluorbenzamidindihydrochloridu a 6b,7,9,10-tetrahydronafto-[2,l-a]-indolizin-8,12-dionu (příprava 12).

Příklad 29 (±)-(R*R*)-4'-Amino-5'-fluor-6b,7,9,10,-tetrahydrospiro(nafto-[2,l-a]-indolizin-8,2'-(1'H)-chinazolin)-12-on • 0 »000

0

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 208 až 210 °C.

Příklad 30 (+)-(R*S*)-4’-Amino-5'-fluor-6b,7,9,10,-tetrahydrospiro(nafto-[2,1-a]-indolizin-8,2'-(1Ή)-chinazolin)-12-on

Získá se v podobě hydrochloridové soli. Teplota tání 225 až 227 °C.

Testy

Farmakologické aktivita sloučenin podle tohoto vynálezu byla testována následujícími testy:

Test 1

Aktivita sloučenin obecného vzorce (I) nebo jejich • 0 0 * 0 0·· • · 0 0 · • 0 0 0 · 0 0 ·· ·»»· • 0 < 0··

0 < 0 «00

0 ♦ 0 0 <0 • 0 0 0 • 0 0 famaceuticky přijatelných solí, enantiomerů nebo tautomerů může být sériově testována na aktivitu inhibujici syntetázu oxidu dusnatého pomocí způsobu založeného na metodě, kterou popsal Fórstermann a kol., Eur. J. Pharm.

225, 161 až 165 (1992). Syntáza oxidu dusnatého přeměňuje ³H-L-arginin na ³H-L-citrullin, který může být oddělen kationtoměničovou chromatografií a kvantifikován čítáním kapalinovou scintilací.

Enzym se připraví po indukci z kultivovaných myších makrofágů linie J774A-1 (získaných z laboratoří Imperiál Cancer Research Fund). Buňky J774A-1 jsou kultivovány v Eaglově médiu modifikovaném Dulbeccosem (DMEM) doplněným 10% fetálním bovinním sérem, 4 mM L-glutaminu a antibiotiky (100 jednotek/ml penicilinu G, 100 mg/ml streptomycinu a 0,25 mg/ml amfotericinu B). Buňky se pěstují rutinně v nádobách o obsahu 225 cm³, obsahujících 35 ml média ve vlhké atmosféře obsahující 5 % C0₂, za teploty 37 °C.

Syntáza oxidu dusnatého je buňkami produkována jako odpověď na interferon-g (IFNg) a lipopolysacharid (LPS). Médium se z nádob s kulturou odstraní a nahradí 25 ml (na nádobu) čerstvého média obsahujícího 1 mg/m lipopolysacharidu a 10 jednotek/ml IFNg. Po uplynutí časového úseku 17 až 20 hodin se buňky odeberou seškrábnutím buněčného povlaku z povrchu nádob do kultivačního média. Buňky se zkoncentrují odstřeďováním (1000 x g po 10 minut) a přidáním k buněčným peletám roztoku obsahujícího 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 při 20 °C), 10 % objemových glycerolu, 0,1 % objemových Tritonu-X-100, 0,1 mM dithiothreitolu a kokteil proteázových inhibitorů zahrnující leuptin v koncentraci 2 mg/ml, sójový inhibitor trypsinu v koncentraci 10 mg/ml, aprotinin v koncentraci 5 mg/ml a fenylmethylsulfonylfluorid v koncentraci ··»· • · · • · ··· •9 * · · *· *e· *· · ·· • · · * · β·« • · · « ·· ·· *· * · « β * · * · • · · 9 * · · 9 e· *· mg/ml.

K provedení důkazu se přidá do jamek 96-jamkové filtrační plotny o velikosti pórů 0,45 μιη obsahujících 25 μΐ roztoku testované sloučeniny v 50 mM Tris-HCl 25 μΐ koktejlu skládajícího se z 50 mM Tris-HCl s pH 7,5 při 20 °C, 400 μΜ NADPH, 20 μΜ flavinadenin dinukleotidu, 20 μΜ flavin mononukleotidu, 4 μΜ tetrahydrobiopterinu, 12 μΜ L-argininu a 925 kBq L-[³H]argininu. Reakce se zahájí přidáním 50 μΐ buněčného lyzátu připraveného způsobem uvedeným výše a po jednohodinové inkubaci za teploty místnosti se ukončí přidáním 50 μΐ vodného roztoku 3 mM nitroargininu a 21 mM EDTA.

Značený L-citrullin se oddělí od značeného L-argininu s použitím Dowex AG - 50 W. 150 μΐ 25% vodné suspenze Dowex 50W (Na⁺ forma) se přidá k testu a poté se vše fitruje přes 96-jamkové plotny. 75 μΐ filtrátu se odebere jako vzorek a přidá do jamek 96-jamkové plotny obsahující pevné scintilační činidlo. Poté, co se vzorky nechají vysušit, určí se množství L-citrulinu scintilačním čítáním.

Při typickém pokusu je bazální aktivita vzorku 300 rozpadů za minutu na 75 μΐ, což se u kontrol s aktivní látkou zvýší až na 1900 rozpadů za minutu. Aktivita sloučeniny podle tohoto vynálezu se vyjádří jako IC_5Q (koncentrace lékové substance, která v testu způsobuje 50% inhibici enzymu), a jako standard se k ověření postupu používá 10μΜ aminoguanidin, který poskytuje IC₅₀ (50% inhibiční koncentraci). Sloučeniny se testují v různých koncentracích a podle získané inhibice se spočítají hodnoty IC_5Q. Sloučeniny, které inhibují enzym při koncentraci 100 μΜ z nejméně 25 %, se klasifikují jako aktivní a test s nimi se nejméně jednou opakuje.

Sloučeniny z příkladů 1 až 30 byly testovány ve shora uvedeném testu a poskytly v něm hodnoty IC₅₀ nižší než 25 μΜ, což ukazuje, že podle očekávání vykazují vhodnou terapeutickou aktivitu.

Test 2

Jak bylo prokázáno v následujících pokusech, vykazují sloučeniny rovněž aktivitu proti lidským formám indukovatelné syntázy oxidu dusnatého.

Enzym se připraví po indukci z kultivovaných lidských buněk adenokarcinomu tlustého střeva linie DLD 1 (získaných z European Collection of Animal Cell Culture - buněčná linie číslo 90102540). Buňky DLD 1 se kultivují v médiu RPMI 1640 obohaceném 10% fetálním bovinním sérem, 4 mM L-glutaminu a antibiotiky (penicilín G v koncentraci 100 jednotek/ml, streptomicin v koncentraci 100 μg/ml a amfotericin B v koncentraci 0,25 μg/ml). Buňky se rutinně kultivují za teploty 37 °C v nádobě o objemu 225 cm³ obsahující 35 ml média ve zvlhčené atmosféře obsahující 5 % CO₂·

Syntáza oxidu dusnatého je buňkami produkována v odpověď na interferon-i (IFN-τ) a interleukin-ΐβ (IL-Ιβ). Médium se z nádoby s kulturou odstraní a nahradí 25 ml (na nádobu) čerstvého média obsahujícího 250 jednotek/ml IL-Ιβ a 1000 jednotek/ml IFN-τ. Po uplynutí časového úseku 17 až 20 hodin v kultivovaném prostředí se buňky odeberou seškrábnutím buněčného jednovrstevného povlaku z povrchu nádob do kultivačního média. Buňky se zkoncentrují odstřeďováním (1000 x g po 10 minut) a lyzát se připraví přidáním • · • · ··· · • · · • · · · · • · · ·

roztoku obsahujícího 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 při 20 °C), 10 % objemových glycerolu, 0,1 % objemových Tritonu-X-100, 0,1 mM dithiothreitolu a kokteilu proteázových inhibitorů zahrnujícího leuptin v koncentraci 2 ug/ml, sójový inhibitor trypsinu v koncentraci 10 μg/ml, aprotinin v koncentraci 5 μg/ml a fenylmethylsulfonylfluorid v koncentraci 50 μg/ml.

K provedení důkazu se přidá k jamkám 96-jamkové plotny 25 μΐ substrátového koktejlu (50 mM Ttris-HCl (pH 7,5), 400 μΜ NADPH, 20 μΜ flavinadenin dinukleotidu, 20 μΜ flavin mononukleotidu a 4 μΜ tetrahydrobiopterinu). Testované sloučeniny se preinkubují s enzymem tak, že se přidají společně se 40 μΐ buněčného lyzátu (připraveného způsobem uvedeným výše) a inkubují jednu hodinu za teploty 37 °C. Na konci tohoto časového úseku se přidá 10 μΐ 30μΜ L-argininu a 925 kBq L-[³H]argininu v 50 mM Tris-HCl, čím se zahájí enzymatická reakce. Inkubace pokračuje další 1 hodinu za teploty 37 °C. Reakce se ukončí přidáním 50 μΐ vodného roztoku 3 mM nitroargininu a 21 mM EDTA.

Značený L-citrullin se oddělí od značeného L-argininu s použitím Dowex AG - 50W. 120 μΐ 25% vodné suspenze Dowex 50W se přidá do 96-jamkové filtrační plotny (velikost pórů 0,45 μιη). K tomu se přidá 120 μΐ terminační směsi. 75 μΐ filtrátu se odebere jako vzorek a přidá do jamek 96-jamkové plotny obsahujících pevné scintilační činidlo. Po ponechání vzorků usušit se, se množství L-citrullinu určí scintilačním čítáním.

Při typickém pokusu je bazální aktivita 300 rozpadů za minutu na 75 μΐ vzorku z kontrol s reakčním činidlem, což se za přítomnosti enzymu zvýší až na 3000 rozpadů za minutu. Aktivita sloučeniny se vyjádří jako IC_5Q (koncentrace lékové • · · · substance, která v testu způsobuje 50% inhibici enzymu) a L-NMMA, který poskytuje IC_5Q při 0,4μΜ koncentraci, se testuje jako standard k ověření postupu. Sloučeniny se testují v různých koncentracích a z dosažené inhibice se spočítají hodnoty IC_5Q.

Sloučeniny z příkladů 1 až 30 byly sériově testované a poskytly hodnoty IC₅₀ nižší než 25 μΜ, což naznačuje, že podle očekávání vykazují vhodnou terapeutickou aktivitu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY • · « · • ·

9 9 99 • 99 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9

R-*-a R² nezávisle na sobě představují atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu s 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylovou skupinu s 2 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alky lthioskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, atom halogenu, hydroxyskupinu, trifluoromethylovou skupinu nebo aminoskupinu;

R³ představuje jeden nebo více substituentů vybraných nezávisle z atomu vodíku, alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylové skupiny se 2 až 6 atomy uhlíku, alkinylové skupiny se 2 až 6 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkylthioskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, atomu halogenu, hydroxyskupiny, trifluormethylové skupiny, aminoskupiny, kyanoskupiny, nitroskupiny, trifluormethoxyskupiny, methansulfonylové skupiny, sulfamoylové skupiny, skupiny obecného vzorce -NR⁴R⁵, skupiny obecného vzorce -COOR⁶, skupiny obecného vzorce -CONR⁷R⁸, benzyloxyskupiny, fenylová skupiny nebo pětičlenného heterocyklického aromatického kruhu obsahujícího 1 až 3 heteroatomy, které mohou • · ··· · ► · · » · 9 · 9

99 99 » ♦ · « » 9 9 4 být stejné nebo odlišné, a jsou vybrány z atomu kyslíku, dusíku a síry, v nichž fenylová skupina nebo pětičlenný heterocyklický aromatický kruh jsou popřípadě substituovány, přičemž možnými substituenty jsou alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, atom halogenu, kyanoskupina, nitroskupina, hydroxyskupina, alkoxyskupina s 1 až 6 atomy uhlíku, trifluormethylová skupina a trifluormethoxyskupina;

R⁴,R⁵, R⁶ nezávisle na sobě představují atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku;

R⁷ a R⁸ nezávisle na sobě představují atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo fenylovou skupinu, kde fenylová skupina je popřípadě substituována jednou nebo více skupinami nezávisle vybranými z alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, atomu halogenu, kyanoskupiny, nitroskupiny, hydroxyskupiny, alkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, trifluormethylová skupiny a trifluormethoxyskupiny;

X představuje skupinu vzorce -(CH₂)_n, kde n představuje nulu nebo jedna; a

A představuje aromatický karbocyklický kruh či pětinebo šestičlenný heterocyklický aromatický kruh obsahující 1 až 3 heteroatomy, které mohou být stejné nebo odlišné a jsou vybrány z atomu kyslíku, dusíku a síry;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty nebo tautomery.

• · · ·· · · · · · · · · · . · · 9 · · · · · « *

- 54 - ! ! ♦·· · ♦ .......

• · · · · · · · · · ·· ·
2. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároku 1, ve kterém A představuje benzenový kruh.
3. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároků 1 a 2, ve kterem R představuje atom vodíku.
4. Sloučenina obecného vzorce (I) podle nároků 1 a 2, ve kterém R¹ představuje atom fluoru.
5. Sloučenina obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 4, ve kterém R² představuje atom fluoru.
6. Sloučenina obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 5, ve kterém X představuje skupinu vzorce -(CH₂)_na n je představováno nulou.
7. Sloučenina obecného vzorce (I), kterou je (R*R*)-4'-amino-5'-fluor-1,3,4,10a-tetrahydrospiro(pyrido— [ 2,1-a]-isoindol-2,2¹-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-5'-fluor-1,3,4,10a-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4-amino-5-fluor-3b',4',6',7'-tetrahydrospiro(chinazolin- 2,5'-(2H,9 Ή)-thieno-[3,2-a]-indolizin)-9'-on;

(R*S*)-4-amino-5-fluor-3b¹,4',6',7'-tetrahydrospiro(chinazolin-2,5'-(2H,9Ή)-thieno-[3,2-a]-indolizin)-9'-on;

(R*R*)-4-amino-5-fluor-6',7’,9',9a'-tetrahydrospiro(chinazolin-2,82H,4Ή)-thieno-[2,3-a]-indolizin)-4'-on;

• * • · φ · · · ···· φ φ φ φ · φ φ φ φ φ φ · · • φ φφφ φφ ·· (R*S*)-4-amino-5-fluor-6',7',9',9a'-tetrahydrospiro(chinazolin-2,8 ' - (2H, 4 ' H)-thieno-[2,3-a]-indolizin)-4'-on;

(R*R*)-4'-amino-7-chlor-5'-fluor-1,3,4,10b-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2’-(1’H)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-7-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(lΉ)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-8-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(l'H)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-8-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-9-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R S )-4'-amino-9-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*) -4 ' -amino-10-chlor-5 ' -f luor-1,3,4,10b-tetrahydrospi.ro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-10-chlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-7,8-dichlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1'H)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-7,8-dichlor-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

• · ··· · (R*R*)-4’-amino-7-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4’-amino-7-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,l-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-8-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-8-methyl-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-8-methoxy-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro (pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-8-methoxy-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro (pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-8-kyan-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4’-amino-8-kyan-5'-fluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1 Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-8-kyan-5',8'-difluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*S*)-4'-amino-8-kyan-5¹,8'-difluor-1,3,4,lOb-tetrahydrospiro(pyrido-[2,1-a]-isoindol-2,2'-(1Ή)-chinazolin)-6-on;

(R*R*)-4'-amino-5'-fluor-7,8,10,lOa-tetrahydrospiro(pyrido-[3,4-a]-indolizin-9, 2' - (1Ή)-chinazolin)-5-on;

• 4 · ·

4 44 • 4 4 • 4 4 4 4

4 4 4 (R*S*)-4'-amino-5'-fluor-7,8,10,lOa-tetrahydrospiro(pyrido-[3,4-a]-indolizin-9,2’-(1Ή)-chinazolin)-5-on;

(R*R*)-4¹-amino-5'-fluor-6b,7,9,10,-tetrahydrospiro(nafto-[2,l-a]-indolizin-8,2'-(1 Ή)-chinazolin)-12-on;

(R*S*)-4'-amino-5’-fluor-6b,7,9,10,-tetrahydrospiro(nafto-[2,l-a]-indolizin-8,2'-(1Ή)-chinazolin)-12-on;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli, enantiomery, racemáty nebo tautomery.
8. Sloučenina obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7, nebo její farmaceuticky přijatelná sůl, enantiomer nebo tautomer pro použití jako lék.
9. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl, enantiomer nebo tautomer ve směsi s farmaceuticky přijatelným adjuvans, ředidlem nebo nosičem.
10. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomerů nebo tautomeru pro výrobu léku k léčbě nebo profylaxi lidských onemocnění nebo stavů, u kterých je přínosem inhibice aktivity syntázy oxidu dusnatého.
11. Použití podle nároku 10, kde přednostně je indukovatelná syntáza oxidu dusnatého, která je inhibována.
12. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, • Φ φφφ φ • φ enantiomeru nebo tautomeru pro výrobu léku k léčbě nebo profylaxi zánětlivých onemocnění.
13. Použití podle nároku 12, kde onemocněním je astma nebo revmatoidní artritida.
14. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru pro výrobu léku k léčbě nebo profylaxi bolesti.
15. Použití sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru v kombinaci s inhibitorem COX-2 pro výrobu léku k léčbě nebo profylaxi zánětlivých onemocnění.
16. Způsob léčby nebo snižování rizika lidských onemocnění nebo stavů, u kterých je přínosem inhibice aktivity syntázy oxidu dusnatého, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru osobě trpící takovým onemocněním nebo stavem, nebo které takové onemocněni nebo stav zvýšeně hrozí.
17. Způsob léčby podle nároku 16, vyznačuj í cí se t í m , že přednostně je indukovatelná syntáza oxidu dusnatého, která je inhibována.
18. Způsob léčby nebo snižování rizika zánětlivých onemocnění u osoby trpící takovým onemocněním, nebo které takové onemocnění zvýšeně hrozí, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání osobě terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru.
19. Způsob léčby podle nároku 18, vyznačuj ící se t i m, že nemocněním je astma nebo revmatoidní artritida.
20. Způsob léčby nebo snižování rizika bolesti u osoby trpící takovým stavem, nebo které takový stav zvýšeně hrozí,vyznačující se tím, že zahrnuje podávání osobě terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru.
21. Způsob léčby nebo snižování rizika zánětlivých onemocnění u osoby trpící takovým onemocněním, nebo které takové onemocnění zvýšeně hrozí, vyznačující se tím, že zahrnuje podávání osobě terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru v kombinaci s inhibitorem COX-2.
22. Sloučenina obecného vzorce (III) ve kterém (III)

99 ·· • 9 9 9

9 9 · ·

9 9 9 9

9 9 · ·

99 «·

R , A a X jsou, jak byly definovány v nároku 1, s výhradou, že R³ nepředstavuje atom vodíku.
23. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce (I) podle některého z nároků 1 až 7 nebo její farmaceuticky přijatelné soli, enantiomeru nebo tautomeru vyznačující se tím, že zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce (II), ve kterém

R^-a R² jsou, jak byly definovány v nároku 1, nebo její soli, se sloučeninou obecného vzorce (III) (III) nebo jejím chráněným derivátem.