[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

CZ299600B6 - Heterocyklické slouceniny obsahující dusík jako inhibitory p38 proteinkinázy a farmaceutické prostredky s jejich obsahem - Google Patents

Heterocyklické slouceniny obsahující dusík jako inhibitory p38 proteinkinázy a farmaceutické prostredky s jejich obsahem Download PDF

Info

Publication number
CZ299600B6
CZ299600B6 CZ0216399A CZ216399A CZ299600B6 CZ 299600 B6 CZ299600 B6 CZ 299600B6 CZ 0216399 A CZ0216399 A CZ 0216399A CZ 216399 A CZ216399 A CZ 216399A CZ 299600 B6 CZ299600 B6 CZ 299600B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
group
compound
disease
substituents
alkyl
Prior art date
Application number
CZ0216399A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ216399A3 (cs
Inventor
W. Bemis@Guy
Gerald Salituro@Francesco
Patrick Duffy@John
E. Cochran@John
Martin Harrington@Edmund
Murcko@Mark
P. Wilson@Keith
Su@Michael
P. Galullo@Vincent
Original Assignee
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/822,373 external-priority patent/US5945418A/en
Application filed by Vertex Pharmaceuticals Incorporated filed Critical Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Publication of CZ216399A3 publication Critical patent/CZ216399A3/cs
Publication of CZ299600B6 publication Critical patent/CZ299600B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P23/00—Anaesthetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/56—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D237/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings
    • C07D237/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D237/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D237/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazine or hydrogenated 1,2-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D237/18—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/12—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/20—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/04—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Anesthesiology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

Substituované cyklické slouceniny obsahující dusík obecných vzorcu Ia, Ib, Ic, Id, Ie, If, Ig nebo Ih, jejichž symboly jsou definovány v patentových nárocích, nebo jejich farmaceuticky prijatelné soli, jako inhibitory p38, savcí proteinkinázy úcastnící se na proliferaci bunek, bunecné smrti a odezve na extracelulární podnety, a farmaceutické prostredky obsahující tyto inhibitory pro ošetrování a prevenci ruzných chorob.

Description

Oblast techniky
Vynález se tyká heterocyklických sloučenin obsahujících dusík jako inhibitor p38, savčí proteinkinázy účastnící se na proliferací buněk, buněčné smrti a odezvě na extracelulámí podněty. Vynález se dále týká farmaceutických prostředků obsahujících inhibitory podle vynálezu a způ10 sobů použití těchto prostředků pro ošetřování a prevenci různých chorob.
Dosavadní stav techniky i? Proteinkinázy se účastní různých odpovědí buněk na extracelulámí signály. Byla již objevena řada mitogenem aktivovaných proteinokináz (MAPK). Členy této skupiny jsou Ser/Thr kinázy, které aktivují své substráty fosfory lácí [B. Stein a kol., Ann. Rep. Med. Chem., 31. str. 289 až 298 (1966)]. MAPK jsou samy aktivovány různými signály, včetně růstových faktorů, cytokinů, UV záření a činidel vyvolávajících stres,
Obzvláště zajímavou MAPK je p38. p38. známý také jako protein vázající protizáněllivou látku potlačující cytokin (CSBP) a RK, a byla izolována z myších pre B buněk, které byly transíekovány liposacharídovým receptorem CD 14 (LPS) a indukovány LPS. p38 byl již izolován a byla stanovena jeho sekvence, stejně tak cDNA, která ho kóduje u lidí a myší. Aktivace p38 byla pozorována v buňkách stimulovaných stresy, jako jsou reakce na lipopolysacharidy (LPS), UV záření, anisomycin nebo osmotický šok, a cytokiny, jako jsou IL-1 a TNE
Inhibice p38 kinázy vede k blokádě tvorby jak IL— 1 tak TNF. 1L-1 a TNF stimulují tvorbu ostatních prozánětlivýeh cytokinů, jako jsou 11 -6 a IL—8 a mají za následek akutní a chronická so zánětlivá onemocnění a postmenopauzální osteoporosu [R. B. Kimble a j.. Endocrinol., 136, str. 3054 až 3061 (1995)].
Na základě toho se předpokládá, že p38 spolu s dalšími MAPK hrají roli při zprostředkování buněčné odezvy na zánětlivé stimuly, jako jsou akumulace leukocytů. aktivace makrofágů/35 monocytů, resorpce tkáně, horečka, odezvy akutní Fáze a neutrofilie. Kromě toho se MAPK, jako je p38, účastní rakoviny trombinem vyvolané agregace destiček, imunodeficitních poruch, autoimunitnícli onemocnění, buněčné smrti, alergií, osteoporózy a neurodegenerativních onemocnění. Inhibitory p38 byly také použity v oblasti ošetřování bolesti prostřednictvím inhibice indukce prostaglandin-endoperoxid-$yntázy-2. Další choroby spojené s nadprodukcí II.-I, IL 6. IL-8 nebo TNF jsou uvedeny ve WO 96/21654.
Bylo již započato s vývojem léků, které specificky inhibují MAPK. Například PCT publikace WO 95/31451 popisuje pyrazolové sloučeniny, které inhibují MAPK a zejména p38. Avšak účinnost těchto inhibitorů in vivo se stále zkoumá.
V souladu s tím je stále velká poptávka po vývoji dalších silných p38 specifických inhibitorů, které jsou použitelné při ošetřování různých stavů spojených s aktivací p38.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález řeší tento problém přípravou sloučenin, které vykazují silnou a specifickou inhibici p38.
Podstatou vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce la nebo lb
kde io každý ze substituentů Q] a Q2 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující pčtičlenné až šestičlenné aromatické karbocyklické nebo heterocyklické kruhové systémy, nebo osmičlenné až desetičlenné bicyklické kruhové systémy sestávající z aromatických karbocyklických kruhů, aromatických heterocyklických kruhů nebo kombinace aromatického karbocyklického kruhu a aromatického heterocyklického kruhu, kde heterocyklické kruhy obsahují I nebo 2 heteroatomy vybrané z atomů dusíku, kyslíku a síry;
Qi je substituováno 1 až 4 substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující atom halogenu; alkylovou skupinu s I až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NR':, OR', OR2R' nebo CONR'2; skupinu O-alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 3 atomy uhlíku, popřípa2o dě substituovanou skupinami NR'2, OR', CO2R' nebo CONRS; dále skupiny NR'2; OCFú CF\; NO?, C'O2R'; CONHR'; SR'; S(O2)N(R')>: SCF< CN; N(R')C(O)R’; N(R')C(O)ORl; N(R')C{O)C(O)R'; N(R')S(O2)R1; N(R')RJ; N(R*)< OR4; OCfOjR1; OP(O)2H2; N~CH-N(R')2; 3.4-metliylendÍoxvskupinu; -NH-C{O)-O-CH2^I pyridin; -NH C(O)Cl F-morlolin; -NHC(O)CH2-piperazin; nebo -NH-C(O)CH2-pyrrolidin; a
Q> je popřípadě substituováno až 4 substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující atom halogenu; přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s l až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NR\, OR', CO2R', S(O2)N(R')2, N=CH-N(R')2, R nebo CONRC; skupinu O-alkyl, kde alkylová část obsahuje I až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NRS OR', CO2R', S(O2)N(R')2, N-CH-N(R')2, R nebo CONRC; dále skupiny NR',; OCFg CF,; NO2; CO2R'; CONHR'; R1; OR3; NHR3; SR3; C(O)R3; C(O)N(R')R’; C(O)ORŮ SR'; S{O3)N(R')2; SCF·?; N=CH-N(R')2; CN; -NH-C(-NH)-NH2: -Cl FNH-C{=NH)-NH2; nebo -C H ,-N H- i m idazo 1 ί n;
kde R' je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, alkylovou skupinu s I až 3 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku nebo alkynylovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku, fenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu substituovanou l až 3 substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující atom halogenu, methoxyskupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu, aminoskupinu, hydroxyskupinu, methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu;
R? je vybráno ze skupiny zahrnující pčtičlenné až šestičlenné aromatické karbocyklické nebo heterocyklické kruhové systémy, a
R4 je alkylová skupina s I až 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovaná skupinami N(R')2. OR',
CO?R\ CON(R')? nebo SO2N(R)2; nebo pětičlenný až šestičlenný karbocyklický nebo heterocyklický kruhový systém, popřípadě substituovaný skupinami N(R')2. OR', CO2R', CON(R')2 nebo SO2N(R2)2;
s
X je vybrán ze skupiny zahrnující -S-, -O . -S(O)-, -S(C)2>—N(R2)—,
-N(R2)-S(O2H -N(R?)-C(Ó)O-, -O C’(O)-N(R2)- -C(O) , -C(O)O-, -O-C(O)-. -C(O)N(R2K -NírVCíOK -N(R2)-, -JC(R2)?- nebo -C(ORV;
id každé R je nezávisle vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, -R2, -N(R )2, -OR, -SR2, —C(O)—N( R)2, -S(O2)-N(R)2 nebo -C(O)-OR2. přičemž dvě přilehlá R jsou popřípadě vázána jedno na druhé a spolu s každým Y. ke kterým jsou vázána, tvoří čtyřčlenný až osmičlenný karbocyklický nebo heterocyklický kruh. nebo. pokud Y je N. je R k němu navázané volný pár elektronu;
R je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku nebo alkenylovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku, které jsou obě popřípadě substituovány skupinami N(R')2, -OR', -SR'. -C(O)-N{R')2, -S(O2)-N(R')2, C(O)-()R' nebo R2;
Y je N nebo C;
A. je-li přítomno, je zvoleno z N nebo CR';
n je 0 nebo I, přičemž, pokud n je 0. vazba mezi dusíkovým atomem v kruhu a uhlíkovým 25 atomem nesoucím X-Q? jc jednoduchá vazba; a
Ri je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, alkylovou skupinu s I až 3 atomy uhlíku, skupinu OH nebo - O—alkyl, kde alkylová Část obsahuje 1 až 3 atomy uhlíku;
nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Dále jsou podstatou vynálezu farmaceutické prostředky, které obsahují inhibitory p38 podle vynálezu, fyto prostředky lze použít při léčení nebo prevenci různých onemocnění, jako jsou rakovina, zánětlivá onemocnění, autoimunitní onemocnění, destruktivní poruchy kostí, prolifca5 rační onemocnění, infekční onemocnění, virová onemocněním a ncurodegenerativní onemocnění.
Tyto prostředky lze také použít pro prevenci buněčné smrti a hyperplazie, a proto se mohou použít k ošetřování nebo prevenci reperfúzc/ischémie při mrtvici, srdečních záchvatů a hypoxii orgánů. Tyto prostředky lze také použít pro prevenci trombinem vyvolané agregace destiček.
-3CZ 299600 B6
Předkládaný vynález poskytuje inhibitory' p38 obecného vzorce Ia nebo lb
každý ze substituentů Q[ a Q- je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující pětičlenné až Šestičlenné aromatické karbocyklické nebo heterocyklické kruhové systémy, nebo osmičlenné až deseticlenné bicyklické kruhové systémy sestávající z aromatických karbocylických kruhů, aromatických heterocyklických kruhů nebo kombinace aromatického karbocykliekého kruhu a aromatického heterocyklického kruhu, kde heterocyklické kruhy obsahují 1 nebo 2 heteroatomy vybrané z atoio mň dusíku, kyslíku a síry;
Qi je substituováno 1 až 4 substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující atom halogenu; alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NR'2, OR'. CO2R' nebo CONRM skupinu O—alkyI, kde alkylová část obsahuje I až 3 atomy uhlíku, popřípa15 dě substituovanou skupinami NR\ OR', CO2R' nebo CONRN; dále skupiny NR\: OCF3; CF3; NO,; CO,R'; CONHR'; SR'; S(O>)N(R'),; SCF,; CN; N(R')C(O)R'; N(R’)C(O)ORj; N(R')C(O)C(O)RJ; N(R')S(O2)Rj; N(R')K'; N(Rj)S OR1; OCfOJR1; OP(0);,Hs N=CH-N(R')j: 3,4-methylendioxyskupinu; -NH-C(O)-O-CH2^-pyridin; -NH C(O)CK2-morfolin; -NHC(())CH2-piperazin; nebo -NH C(O)CII?—pyrrolidin: a
Q2 je popřípadě substituováno až 4 substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující atom halogenu; přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s I až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NR'2, OR', CO2R', S<O>)N(R')?, N-CH-N(R')2. R3 nebo CONR'2; skupinu O—alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NRN OR', C()?R', S(O2)N(R')2, N=CH-N(R')2, R' nebo CONRN; dále skupiny NR\; OCF3; CF.g NOg CO2R'; CONHR'; R3; OR3; NHR3; SR?: C(O)R3; C(O)N(R')R\ C(O)OR3; SR': S(O2)N(R')2; SCF?; NH?H-N(R')2; CN; NH-C(-NH}-NH2; CH2NH-C(=NH)-NH2; nebo -C H2-N H-imidazol in;
kde R' je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkenylovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku nebo alkynylovou skupinu sc 2 až 3 atomy uhlíku, fenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu substituovanou 1 až 3 substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující atom halogenu, methoxyskupinu, kyanoskupinu, nitroskupinu. aminoskupinu, hydroxyskupinu, methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu;
R3 je vybráno ze skupiny zahrnující pětičlenné až šestičlenné aromatické karbocyklické nebo heterocyklické kruhové systémy, a
R* je alkylová skupina s 1 a Ž 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovaná skupinami N(R')2. OR',
COiR', CON(R')2 nebo SO2N(R2)2; nebo pětičlenný až šestičlenný karboeyklický nebo heterocyklický kruhový sytém, popřípadě substituovaný skupinami N(R')>, OR'. CO2R', CON(R')2 nebo SO2N(R)2:
-4CZ 299600 B6
X je vybrán ze skupiny zahrnující -S-, -S(O2)-. —S(O> . -S(O,)-N(R·)-,
-N(R2)-S(O2b, N(R2hC(O)O , -O-C(O)-N(R2)-. -C(O)-. -C(C))O-. -CPC(O)-, -C(O)N(R2K -N(R2)-C{0)-, -N(R2H -C(R2)2- nebo -C(OR?)2-;
každé Rje nezávisle vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, -R, -N(R )2, -OR2, -SR2, —C(O)—N(R2)2, -S(O2)-N{R2)2 nebo -C(O)-OR2, přičemž dvč přilehlá R jsou popřípadě vázána jedno na druhé a spolu s každým Y. ke kterým jsou vázána, tvoří čtyřčlenný až osmičlenný karbocyklický nebo heterocyklický kruh, nebo, pokud Y je N, je R k němu navázané volný pár elektronu;
1(1
R je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, alkylovou skupinu s I až 3 atomy uhlíku nebo alkenylovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku, kterc jsou obě popřípadě substituovány skupinami -N(R')2, -OR'. SR', -C(O)-N(R')2, S(O2)-N{R')2, -C(O)-OR' nebo R1;
Y je N nebo C;
A, je-li přítomno, je zvoleno z N nebo CR';
n je 0 nebo 1, přičemž, pokud n jc 0, vazba mezi dusíkovým atomem v kruhu a uhlíkovým atomem nesoucím X-Q2 je jednoduchá vazba; a
R[ je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, skupinu OH nebo -O-alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 3 atomy uhlíku;
nebo jej ich farmaceuticky přijatelné sol i.
Jestliže obě R tvoří spolu dohromady se skupinami Y, ke kterým jsou připojeny, kruh, je odborníkovi zřejmé, že z každého nekondenzovaného R se ztratí atom vodíku. Například, je-li kruhová struktura tvořena vazbou obou R dohromady, kdy jedna je -ΝΠ-CH·? a druhá je
-ClECH!, jeden koncový atom vodíku se z každého R ztratí (je vyznačeno lučně). Proto vzniklá část kruhové struktur} má vzorec -NH CH2-CI E~CH2Odborníkovi je zřejmé, že jestliže R| je OH, vzniklý inhibitor se může tautomerizovat na sloučeniny vzorce
což jsou též inhibitory p38 podle tohoto vynálezu.
Podle dalšího výhodného provedení vynálezu je Q, vybráno ze skupiny zahrnující fenylovou nebo pyridylovou skupinu obsahující 1 až 3 substituenty nezávisle vybrané ze skupiny zahrnující
4o atom chloru, atom fluoru, atom bromu, skupinu -CI li, -OCH;,, -Ol 1, -Cíý, -OChý. -0(CH2)2CH2, -NIC, 3,4-mcthylendioxvskupinu, skupinu -N(CH?)2. NH-S(O2) fenyl· -NH-C(O)O-CH2 4-pyridin, -NH-C(O)ClE-morfolÍn, -NH-C(O)CIE-N(CHÓ2NH-C(())CH2-piperazin, -NH-C(O)CH2-pyrrolidin, -NH-C(O)C(O)-morfolín.
-5CZ 299600 B6
-NH-C{O)C(O)-piperazin. -NH-C(O)C(O)-pyrrolidin, -O-CÍOjCHy-NjCfl·,): nebo
-O-(CH3)2-N(CHi)? a kde alespoň jeden z těchto substituentů je v poloze ortho.
Ještě výhodněji Oi je fenylová nebo pyridylová skupina obsahující alespoň dva z výše uvedených substituentů, přičemž oba jsou v poloze ortho.
Určitými specifickými příklady výhodného Qi jsou:
-ή CZ 299600 B6
Cl
O
O
NH
O
HN*
HN
N.
Cl
Cl
O
Ό
O
HN
NH nebo cr
Ci
Nej výhodněji je Qi vybráno ze skupiny zahrnující 2-fluor-6-trifluormethylfenyk 2.6difluorfenyl, 2,6-dichlorfenyl, 2-chlor-4-hydroxyfenyl, 2-chlor-4 aminofenyl, 2.6-diehlor-4-aminoťěnyI, 2,6-dichlor -3 -aminofenyl, 2,6-dimethyM-hydroxyfenyl, 2-metlioxy-3.5-dichlorM5 pyridyl, 2-chlor- 4.5-mcthylendioxyfenyl nebo 2-chloM-(N-2-morfolino-acetamido)fenyI.
Podle výhodného provedení vynálezu je Q2 je vybráno ze skupiny zahrnující fenylovou nebo pyridylovou skupinu a kde Q2 popřípadě obsahuje 0 až 3 substituenty. z nichž každý je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující atom chloru, atom fluoru, atom bromu, methylovou skupinu, ío ethylovou skupinu, isopropylovou skupinu, skupinu -OCH;, OH, NH2. -Cl·;. -OCH, -SCII;,
-C(O)OH, -C'(O)OCH;, -CH2NH2, -N(CH,)2, -Cl Mpyrrolidin. -CHOH. -CH2 N(CH;)2.
-CH?-piperazin,-NH-C(-NH)-NH2. CH2 -NH-C{=NH)-NH2 a -Cl MNI l-imidazolin.
- QCZ 299600 B6
Určitými specifickými příklady výhodného Q2jsou:
- 10CZ 299600 B6
t t
nesubstituovaná 2-pyrtdylová skupina nebo nesubstituovaná fenylová skupina.
Nej výhodnější jsou sloučeniny, kde Q.: je vybráno ze skupiny zahrnující fenyl, 2-isopropylfenyl,
3,4-dimethylfenyI, 2-ethylfcnyl, 3-fluorlcnyl. 2••methylfenyl, 3-chlor^f-tluorfenyl, 3-chlorfenyl, 2-karbomethoxyfenyl, 2-karboxyfenyl, 2-methyM-chlorfenyl, 2-brom fenyl. 2 pyridyl. 2-methylenhydroxy fenyl, 4 fluorfenyl, 2-methyM-fluorfenyl. 2-ehlor-4-tluorfcnyl. 2.4-difluorfenyl, 2-hydroxy-4-fluorfenyl a 2-mcthylenhydroxy-4-nuorfenyl.
ío Podle dalšího výhodného provedení je kde X je vybráno ze skupiny zahrnující -S- -O-. -S(O2)-, $(0)-. -NR2-. -C(R2)2 nebo -0(0)-. Nejvýhodněji jc X -S /
Podle dalšího výhodného provedení je η 1 a Aje N.
i? Podle dalšího výhodného provedení je každé Y C.
Podle ještě výhodnějšího provedení je každé YCaR připojené k těmto skupinám Y je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku nebo methylovou skupinu.
Určité specifické inhibitory podle vynálezu jsou shrnuty v tabulce 1 níže.
- 17CZ 299600 Bó
Tabulka 1 Sloučeniny obecných vzorců la a lb
- 13 CZ 299600 Bó .δ.
struktura
3l.Č.
st rukcura
-<
N S'
N 3'
- 14CZ 299600 B6
- 15 CZ 299600 Bó
Sl.č. Struktura Sl.č. Struktura
20 α!γζζ%5 Η’β xr ΐ 34 L
20 35 Ϊ1 crNp^ct cjr
30 ΉΧΟ 36 .CH, y^ci VxX f3 xr
31 37 Xv cz γ Xi
32 CHa 38 Xc X'
- 16CZ 299600 B6
- 17CZ 299600 B6
Sl.č. Struktura Sl.č, Struktura
^ΟΗ5 zAv^CH, fi Ί 3 -x
43 v li 49 crV^
SgAj ” a-Yy-ř
44 60 X CH»
ΔΔ vX^
HaC^NH JlX
51 Ms/ -O 53 n^n-,AsA^ F
Ox
52 iL Jl „
Inhibitory p38 obecného vzorce la, uvedeného výše se mohou připravit reakcí sloučeniny
kde každý substituent má význam uvedený výše pro inhibitory podle vynálezu, s reakčním ? činidlem s odstupující skupinou obecného vzorce Ila
R*
Lr <3
1-2 (Ha) , kde R' má výše uvedený význam, nebo s reakčním činidlem s odstupující skupinou obecného vzorce lib tllb), ío kde každá ze skupin L|. L a nezávisle znamená odstupující skupinu,
Činidlo s odstupující skupinou se v této reakci přidává v nadbytku, bud' čisté nebo s korozpouštědlem, jako je toluen. Reakce se provádí při teplotě mezi 25 a 150 °C.
Jako činidla s odstupující skupinou obecného vzorce Ila. která lze použít při přípravě inhibitorů p38 podle vynálezu, lze uvést dimethylacetal dimethylformamidu, dimethylacetal. dimethylaeetamidu, trimethylorthoformiát. diethylacetal dimethylformamidu a další příbuzná činidla. Výhodným činidlem s odstupující skupinou obecného vzorce Ila při přípravě inhibitorů podle vynálezu je dimethylacetal dimethylformamidu.
Jako činidla s odstupující skupinou obecného vzorce lib. která lze použít při přípravě inhibitorů p38 podle vynálezu, lze uvést fosgen, karbonyldiimidazol, diethylkarbonát a trifosgen.
Ještě výhodnější způsoby přípravy sloučenin podle vynálezu používají sloučeniny obecného vzorce II. kde každý z vedených substituentů má významy uvedené u výše jmenovaných výhodných a nej výhodnějších sloučenin podle vynálezu.
Protože zdrojem Ri je činidlo s odstupující skupinou (C -R' nebo OO), jeho identita samozřejmě závisí na struktuře tohoto činidla. Proto u sloučenin, kde Rt je OH, musí být tímto činidlem sloučenina vzorce lib. Podobně, je-li Rj atom vodíku nebo alkylová skupina s 1 až 3 atomy uhlíku, použitým činidlem musí být sloučenina vzorce 11a. K získání inhibitorů, kde Rj je O-alkyl. kde alkylová část rná 1 až 3 atomy uhlíku, sc nejdříve připraví sloučenina, kde R| je Ol l a potom se tato hydroxyskupina alkyluje standardními technikami, jako je reakce s hydridem sodným v DMF. s methyljodidem a elhyljodidem.
- 19CZ 299600 B6
Bezprostřední předchůdce inhibitoru podle vynálezu obecného vzorce ía (to je sloučeniny obecného vzorce II) lze připravit podle obou schémat syntézy popsaných níže:
Schéma 1
Ve schématu 1 lze pořadí stupňů I) a 2) obrátit. Také výchozí nitril lze nahradit odpovídající kyselinou nebo esterem. Alternativně lze též použít místo nitrilu jiné známé latentní karboxylové skupiny nebo karboxamidové skupiny (viz schéma 2). Do tohoto schématu lze začlenit obměny, jako jsou karboxylové kyseliny, estery karboxylových kyselin, oxazol i ny nebo oxazolidinony, za použití následného odstranění chránících skupin a funkcionalizace, což jsou metody známé zc stavu techniky.
Jako báze se v prvním stupni schématu 1 (a ve schématu 2 níže) používají hydrid sodný, amid sodný, LDA, lithiumhexamcthyIdisilazid. hexamethyldisilazid sodný nebo jakákoliv z ostatních nenukleofilních bází, které de proton ují polohu alfa na nitril.
Také přidání HX-Q2 v jednom stupni, jak je výše naznačeno, lze nahradit dvěma stupni - přidá20 níin chráněného nebo nechráněného X derivátu a potom adicí Q> derivátu v následujícím stupni.
-20CZ 299600 B6
Schéma 2
odstranění chráníc £ skupiny tunkcionalizace baze + HX-Q2 v
Y—Y // v
N=(a£
Qz ’X
Ve schématu 2 je Z vybráno ze skupiny zahrnující COOH, COOR'. CON(R')_u oxazolin. oxazolidinon nebo CN. R' má s výhodou výše uvedený význam.
Dále se vynález týká způsobů přípravy inhibitorů p38 obecného vzorce Ib, jak je uveden výše. Tyto způsoby spočívají v reakci sloučeniny obecného vzorce UI
kde různé substituenty mají významy uvedené výše pro inhibitory podle vynálezu, s činidlem obsahujícím odstupující skupinu obecného vzorce Ha nebo lib
R·
O
Lf
Í3
Ila) ílb)
L2 jak jsou popsána výše.
Níže jsou uvedena dvě schémata úplné syntézy inhibitorů p38 obecného vzorce Ib podle vynálezu.
-21 CZ 299600 B6
Schéma 3
Ve schématu 3 lze Q, substituovaný derivát nechat reagovat s bází, jako je hydrid sodný, amid sodný, LDA, lithiumhexamethyldisílazid, hexametbyldisilazid sodný nebo jakákoliv jiná nenukleofilní báze, která deprotonuje polohu alfa na Z skupině, což je maskovaná amidová skupina. Alternativně je Z karboxylová kyselina, ester karboxy lové kyseliny, oxazolin nebo oxazolidinon. Anion vzniklý zdeprotonace se potom uvede ve styk s dusíkatou heterocyklickou sloučc10 ni nou. která obsahuje dvě odstupující skupiny nebo latentní odstupující skupiny, v přítomnosti palladiového katalyzátoru. Jako příklad takové sloučeniny lze uvést 2.6-dichlorpy ridin.
Ve stupni 2 se zavádí Q2 kruhová část. To lze provádět za použití mnoha reakcí známých ze stavu techniky, které vedou ke tvorbě diarylovýcb sloučenin. Jedním příkladem muže být reakce ary lové lithiové sloučeniny s pyridinovým meziproduktem vzniklým ve stupni 1. Alternativně se arylkovová sloučenina, jako je arylslannan nebo arvlboronová kyselina, nechá reagovat s arylhalogcnidovou částí pyridinového meziproduktu v přítomnosti kovového palladiového katalyzátoru.
?o Ve stupni 3 se ze skupiny Z odštěpí chránicí skupina a/nebo se tato skupina funkcionalizuje za vzniku amidové sloučeniny. Je-li Z karboxylová kyselina, ester karboxylové kyseliny, oxazolin nebo oxazolidin, lze pro přípravu amidu použít různé způsoby odštěpení chránicí skupiny a funkcionalizace, kterc jsou známé ze stavu techniky. Nakonec se ve stupni 4 amidová sloučenina eyklizuje na konečný produkt za použití reakčních činidel, jako jsou acetal DMF nebo podobná činidla, bud1 v čisté formě nebo v organickém rozpouštědle.
- 22 CZ 299600 B6
Schéma 4
Qi )
z soupeř. 1 1) Báze
Schéma 4 je podobné s výjimkou, že diarylový meziprodukt se nejprve uvolní před reakcí s Q( 5 výchozí látkou.
Podstatou vynálezu jsou dále inhibitory p38 podobné inhibitorům obecných vzorců la a lb výše, ale kde C-\ v kruhu nesoucím substituent Q1 je redukována. Tyto inhibitory mají obecné vzorce le nebo Id
kde A, Qh Q2, R, Rf. X, Y a n mají význam uvedený výše pro sloučeniny obecných vzorců la a lb, Tyto definice platí pro všechna provedení každé z těchto možností (to je pro významy základní, výhodné, výhodnější a nejvýhodnější). R? je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, skupiny -CRJOH, -C(O)R4, C(O)ORÍ -CRSOPOdl·, -PCbH2 a soli -POTU.
I5
Jestliže R? není atom vodíku, očekává se, že vzniklé sloučeniny budou vc formě profarmak, která mohou být štěpena in vivo za vzniku sloučeniny, kde Rje atom vodíku.
V dalším výhodném provedení vc sloučeninách obecného vzorce le je A s výhodou atom dusíku. 20 n je s výhodou I a X je s výhodou atom síry. Ve sloučeninách obecného vzorce le nebo Id jsou
Q[ a Q2 s výhodou stejné substituenty uvedené výše u sloučenin obecných vzorců la a lb.
Sloučeniny obecných vzorců le a Id lze připravit přímo ze sloučenin obecného vzorce la nebo lb. které obsahují atom vodíku, alkylovou skupinu s l až 3 atomy uhlíku nebo alkenylovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku nebo alkinylovou skupinu v poloze substituentů Rt (to je. kde R, = RJ. Schémata syntézy těchto sloučenin jsou znázorněna ve schématech 5 a 6 níže.
CZ 299600 Bó
Schéma 5
fa
Schéma 6
!d
V těchto schématech se sloučeniny obecného vzorce la nebo lb redukují reakcí s nadbytkem diisobutylaluminiumhydridu nebo s ekvivalentním činidlem, čímž se získá kruhová redukovaná io sloučenina obecného vzorce Ie nebo Id.
Zavedení jiné skupiny IČ než je atom vodíku na kruhový atoin dusíku se provádí reakcí sloučenin vzorce Ie nebo Id uvedených výše s příslušným činidlem nebo s příslušnými činidly. Příklady těchto modifikací jsou uvedeny níže v příkladech provedení vynálezu.
Určité specifické inhibitory podle vynálezu obecného vzorce Ic jsou shrnuty v tabulce 2 níže.
-24*
Tabulka 2 Sloučeniny obecného vzorce Ic
Struktura Sl.č. Struktura
101 11Q o 1 f
102 111
103 112
104 ____ 113 <vCHl CHj
s: .č
Struktura
S1. č.
Struktura
-26CZ 299600 B6
Sl. č. Struktura
31. č.
Struktura
-27CZ 299600 B6
3j. -č. Struktura
Sl,
Struktura
-28 C7. 299600 B6
Struktura Sl.č. Struktura
-29CZ 299600 Bó
Podstatou vynálezu jsou dále inhibitory p38, le. lf, Ig nebo Ih
kde
Qi je pčtiělenný až šestičlenný aromatický karboeyklický nebo heterocyklický kruhový systém: nebo osmičlenný až desetičlenný bicyklický kruhový systém obsahující aromatické karbocyklické kruhy, aromatické heterocyklické kruhy nebo kombinaci aromatického karbocyklického kruhu a aromatického heterocyklického kruhu, kde heterocyklické kruhy obsahují 1 nebo 2 heteroatomy vybrané z atomů dusíku, kyslíku a síry; kde Q? je substituováno I až 4 substituenty, ío z nichž každý je nezávisle vybraný zc skupiny zahrnující atom halogenu; alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NRS. OR'. CO2R' nebo C()NR'2; skupinu O—alky 1. kde alkylová část obsahuje 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NRC, OR', CO2R' nebo CONRC; dále skupiny NR\; OCE,; CFy NO2; CO2R'; CONHR'; SR': S(O2)N(R')2; SCF,: CN; N(R')C(O)R4; N(R')C’(O)OR4: N(R')C(O)('(O)R4; N(R’)S(O:)R4;
i? N(R')R4; N(R*),; OR4; OC(O)R4; OP(O)dI> nebo N-CH--N<R')2; a
A, Q], Q?, R, R', X, Y a n mají význam uvedený výše u vzorců la a lb (Tylo definice platí pro všechna provedení každého z proměnných významů, tj. pro základní, výhodné, ještě výhodnější a nejvýhodnější významy. Ještě výhodněji je ve sloučeninách obecného vzorce le Q2 nesub20 stituovaná fenylová skupina.);
nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Podle jednoho výhodného provedení je Q5 substituováno 2 až 4 substituenty, přičemž alespoň jeden z uvedených substituentů je přítomen v poloze ortho vzhledem v místu připojení Q; na zbytek inhibitoru. Jestliže Q; je bicyklický kruh, jsou přítomny dva substituenty v poloze ortho na kruhu, který je nejblíže (loje, který je přímo připojen) ke zbytku molekuly inhibitoru. Další dva případné substituenty mohou být přítomny na každém kruhu. Ještě výhodněji jsou obě ortho polohy substituovány jedním z těchto substituentů.
Podle dalšího výhodného provedení je Q2 je monocyklický karboeyklický kruh a každý z uvedených orthosubstituentů na Q, je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující atom halogenu a methylovou skupinu. Podle dalšího výhodného provedení Q2 obsahuje I až 2 substituenty kromě uvedených ortho-substituentú, přičemž uvedené další substituenty jsou nezávisle vybrány ze sku.15 piny zahrnující NR',. OR'. CO2R'. CN. N(R')C(O)R4. N(R')C(O)OR4. N(R')C(O)C(O)RJ. N(R')S(O2)R', N(R')RJ. Ν(Κ4),, OR4. OC(O)RJ. OP(O)-,H2 nebo N-CIl-N(R'
-30CZ 299600 Ró
Výhodně je Q; vybráno / jakýchkoliv významů Q3 přítomných ve sloučeninách vzorce le shrnutých v tabulce 3 níže nebo z jakýchkoliv významů Q7 přítomných ve sloučeninách vzorce lg shrnutých v tabulce 4 níže.
Pracovníkům v oboru je zřejmé, že sloučeniny obecného vzorce lc jsou přímými prekurzory určitých inhibitorů p38 podle vynálezu obecného vzorce la a lc (to je, kde Q, - Q?). Dále je též zřejmé, že sloučeniny obecného vzorce lg jsou prekurzory určitých inhibitoru p3 8 podle vynálezu obecného vzorce lb a Id (loje. kde Q; -= Q0. Proto syntéza inhibitorů obecného vzorce Ie je znázorněna výše ve schématech 1 a 2, kde Qi se nahradí za Q3. Podobně syntéza inhibitorů obecného vzorce lg je znázorněna ve schématech 3 a 4. kde Qi sc nahradí za Qi.
Syntéza inhibitorů obecného vzorce lf a lh je níže znázorněna ve schématech 7 a 8.
Schéma 7
’3I CZ 299600 B6
f' F vy
Schéma 8
QrNHs ba/ e
Br
Q2-boronová kyselina palladium (o)
acylát
Schéma 8 zobrazuje syntézu sloučenin typu lh. Například reakcí výchozího dibroindcrivátu, jako je 2.6-dibrompyridin. s aminem v přítomnosti báze, jako je hydrid sodný, se získá 2-amino-65 bromderivát, Reakcí tohoto meziproduktu s analogem fenylboronové kyseliny {Q2 boronová kyselina), jako je fenyl boronová kyselina, v přítomnosti palladiového katalyzátoru se získá disubstituovaný derivát, který se polom může acylovat na konečný produkt. Pořadí prvních dvou stupňů této syntézy se může obrátit.
to Vynálezci předpokládají, aniž b\ byli vázáni na teorii, že diorthosubstituce v Q;, kruhu inhibitorů obecných vzorců le a Ig a přítomnosti dusíku přímo připojeného na Q| kruh v inhibitorech obecných vzorců Iťa lh způsobují „zploštění“ sloučeniny, což umožňuje účinné inhibovat p38.
Výhodným inhibitorem podle vynálezu obecného vzorce Ie je sloučenina, kde A je atom uhlíku, is n je 1, X je atom síry. každé Y je atom uhlíku, každé R je atom vodíku, Q, je 2,6-dichlorfenyl a Q, je fenyl. přičemž tato sloučenina jc zde označena jako sloučenina 201. Výhodným inhibitorem podle vynálezu obecného vzorce Ig je sloučenina, kde Qi je 2,6 dichlorfenyl. Q2 je fenyl, každé Y je atom uhlíku a každé R jc atom vodíku, l ato sloučenina je zde označena jako sloučenina 202. Další výhodné sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce Ig jsou shrnuty ío v tabulce 4 níže.
Výhodné sloučeniny podle vynálezu obecného vzorce lh jsou shrnuty v tabulce 5 níže. Dalšími výhodnými sloučeninami obecného vzorce lh jsou sloučeniny, kde Q: je fenyl nezávisle substituovaný v polohách 2 a 6 atomem chloru nebo fluoru, každé Y je atom uhlíku, každé R je atom vodíku a Q2 je 2-methylťenyl, 4-fluorfenyl, 2,4-difluorfenyl, 2-inethylcnhydroxyM-fluorfenyl nebo 2-mct hyl-4-fluorfenyl.
Určité specifické inhibitory obecných vzorců Ie. Ig a lhjsou shrnuty v tabulkách níže.
- 32 CZ 299600 B6
Tabulka 3 Inhibitory obecného vzorce Ie
- jj CZ 299600 Bó
Tabulka 4 Inhibitory obecného vzorce lg
Sl.č. Struktura Sl.č. Struktura
-34CL 299600 Bó
- 35 CZ 299600 Bó
-36CZ 299600 B6 sl.č. struktura
Sl.č. Struktura
-37CZ 299600 Bó
-38CZ 299600 B6
Sl.č. Struktura Sl.č. Struktura
.Cl A .Cl 0
NHj [1 \ nh3
Cl Cl Γ
358 XX 11 365 SN II íl Ί
%A II xV h T
X UL
X xct Χ .F
v ‘‘NHj |l 1 “'NHj
357 F ΙΪ 366 Γ jv
χλ w JI ΪΊ
4
0
^Cl X ^.F
v 'NH;
XHj H F
358 XX ( 387 r '»
. U JI tS
íl Ί 0
Xh3 H A 'nh2
359 -n^nh2 368 F r
Xx Jl XX
xcl X
H ?H (1 _J ‘NH,
360 Ci 369 F *N (I yHí
Xx JI ťS
Uc
F
-39C7. 299600 B6
Sl.č. Struktura Sl.č. Struktura
361 Λ 370 1 A P
u ct 9 F w u
*N Γ3
Π ^Cl A -F 0
kJ snh2 il J 'NH,
362 Cl *N 11 || η 371 7?
ΊΓ LJ IfS
y v.
^ci 0 íP
kJ 'NH: 1 v XNB2
363 r' jí* ?h4 372
JI Ίι Ί
|l H
lf^ ,ci -Cl
kNHa o •NHj
373 CJ “N II fk 382 Cl 1
11 H II
HjC' JI cK AJ
Cl
0 ^Cl Π -Cl 0
'NH, •NHj
374 Cl F< Z 303 Cl ^A 'N F
sj '5^ jl Ά
|! U
-40CZ 299600 B6
-41 CZ 299600 B6
-,r.r'2r -ura
380
s crukr-:5
389
381 ,CH,
Ϊ90
396
/“S
397
393
398
-42QL 299600 B6
si. č. D^rúkt;jr3 5 . . Č . strak: -ji ϊ 1
Cl 0 (A .C 0 1 I
L·? NH, Ιψ H Nh;
Ci Cl
394 n < El 399 n F
II 1 IÍJ
LA 1
r 1 1 i Fz F
í .Cl ^Ci
íf l r 0 fPT 0 II
v \η, 1 1 h 'NH,
395 Cl <k r ' 1301 Cl N II fH’
[ Vr“’ 1 II ΪΎ
UA- M
r _
- 43 CZ 299600 B6
Tabulka 5 Inhibitory obecného vzore Ih
-44CZ 299600 B6
Účinnost inhibitorů p38 podle vynálezu byla zkoušena in vitro, in vivo nebo v buněčné linii. Testy in vitro zahrnují testy, které stanoví inhibici bud1 účinnosti kinázy nebo účinnosti A IPasy aktivovaného p38. Alternativně testy in vitro stanovují schopnost inhibitoru vázat se na p38 a lze to měřit buď radioaktivním značením inhibitoru před vázáním, izolováním komplexu inhibitor/38
-45 CZ 299600 B6 a stanovením množství radioznačené vazby, nebo provedením pokusu, kdy se nove inhibitory inkubují s p38 vazbou na známé radioligandy.
Testy buněčné kultury na inhibiční účinnost sloučenin podle vynálezu mohou stanovil množství
I NF, IL—1, IL—6 nebo IL—8 produkované v čisté krvi nebo v jejích buněčných frakcích v buňkách ošetřených inhibitorem vc srovnání s buňkami ošetřenými negativními kontrolami. Hladina těchto cytokinů se muže stanovit použitím komerčně dostupných látek FLISA.
ln vivo testem použitelným pro stanovení inhibiční účinnosti inhibitoru p38 podle vynálezu je ío potlačení otoku zadní tlapky u krys u artritidy vy volané pomocnou látkou Myeobactcrium butyricum. To je popsáno v práci J. C. Boehm a j„ J. Med. Chem., 39, str. 3929 až 3937 (1996), což je zde uváděno jako odkaz. Inhibitory p38 podle vynálezu lze také testovat na zvířecích modelech artritidy, resorpce kostí, endotoxinového šoku a funkce imunity, jak je popsáno v práci A. M.
Badger a j., .1. Pharmacol. Experimcntal Therapeudcs. 279. str. 1453 až 1461 (1996), což je zde uváděno jako odkaz.
Inhibitory p38 nebo jejich farmaceutické soli lze formulovat do farmaceutických prostředků pro podávání zvířatům nebo lidem. Tyto farmaceutické prostředky, které obsahují množství inhibitoru p38 účinné k ošetření nebo prevenci stavu způsobeného p38 a farmaceuticky přijatelný nosič, tvoří též součást předloženého vynálezu.
Výraz „stav způsobený p38L\ jak je zde používán, znamená jakékoliv onemocnění nebo jiný škodlivý stav. o kterém je známo, že při něm p38 hraje roli. Jedná se o stavy, o nichž je známo, že jsou způsobeny nadprodukcí IL- 1, THF. 1L-6 nebo 1L.-8. Těmito stavy jsou, bez omezení.
zánětlivá onemocnění, autoimunitní onemocnění, destruktivní choroby kostí, proliferační onemocnění, infekční onemocnění, neurodegenerativní onemocnění, alergie, reperfuzc/isehemie u mrtvice, srdeční záchvaty, angiogenní onemocnění, hypoxie orgánů, vaskulární hyperplazie, srdeční hypertrofie. trombincm vyvolané agregace destiček a stavy spojené s proslaglandinendoperoxid-syntázou-2.
Jako zánětlivá onemocnění, která lze ošetřoval nebo před kterými lze se chránil, aniž by však to bylo omezeno pouze na ně, lze uvést akutní pankreatitidu. chronickou pankreatitidu, astma, alergie a syndrom respirační úzkosti li dospělých,
Jako autoimunní onemocnění, která lze ošetřovat nebo před kterými lze se chránit, aniž by však to bylo omezeno pouze na ně, lze uvést glomerulonefritidu, revniatoidní artritidu, systémový lupus erythematodes, sklerodermii, chronickou thyreoiditidu, Gravesovu chorobu, autoimunitní gastritidu. diabetes, autoimunní hemolytickou anémii, autoimunitní neutropenii. thrombocytopcnii, atopickou dermatitidu, chronickou aktivní hepatitidu, těžkou myastlienií, sklerosu multiplex.
zánětlivé střevní onemocnění, uleerativní kolitidu, Crohnovu chorobu, psoriázu nebo onemocnění způsobené reakcí štěp versus hostitel.
Jako destruktivní poruchy kostí, které lze ošetřovat nebo před kterými lze se chránit, aniž by však to bylo omezeno pouze na ně, lze uvést osteoporosu. ostcoartritidu a poruchy kostí související
4í s mnohočetným myelomem.
Jako proliferační onemocnění, která lze ošetřovat nebo před kterými lze se chránit, aniž by však to bylo omezeno pouze na ně, lze uvést akutní myelogenní leukémii, chronickou myelogenní leukémii, metastatický melanom, Kaposiho sarkom a mnohočetný nivclom.
Jako angiogenní onemocnění, která lze ošetřovat nebo před kterými lze se chránit. lze uvést pevné nádory, oční neovaskulitidu. infantilní hemangiomy.
Jako infekční onemocnění, která lze ošetřovat nebo před kterými lze se chránit, aniž by však to bylo omezeno pouze na ně, lze uvést sepsi, septický šok a Shi gel Losu.
-46CZ 299600 B6
Jako virová onemocnění, která lze ošetřovat nebo před kterými lze se chránit, aniž by však to bylo omezeno pouze na ně, lze uvést akutní hepatitídovou infekci (včetně hepatitidy A. hepatitidy B a hepatitidy C), HfV infekci a CMV retin itidu.
Jako neurodegenerativní onemocnění, která lze ošetřovat nebo před kterými se lze pomocí sloučenin podle vynálezu chránit, aniž by to však bylo omezeno pouze na ne. lze uvést Alzheimerovo onemocnění, Parkinsonovo onemocnění, cerebrální ischemie nebo neurodegenerativní onemocnění způsobené traumatickým poraněním.
n) „Stavy způsobené p3také zahrnují ischemii/reperfuzi li mrtvice, srdeční záchvaty, myokardiální isehemii, hypoxii orgánů, vaskulámí hyperplazii. kardiální hypertrofii a trombinem vyvolanou agregaci destiček.
i? Kromě toho jsou inhibitory p38 podle vynálezu také schopny inhibovat expresi vyvolanou prozánětlivými proteiny, jako je prostaglandinová endoperoxid synthasa-2 (PGIIS-2), také označovaná jako cyklooxygenáza-2 (COX-2). Proto dalšími „stavy způsobenými p38 jsou otoky, analgezie, horečka a bolestí, jako jsou neuromuskulární bolesti, bolesti hlavy, rakovinové bolesti, bolesti zubů a bolesti při artritidě.
Onemocnění, která lze ošetřovat nebo proti kterým se lze bránit inhibitory p38 podle vynálezu, lze také vhodně zařadit do skupiny cytokinů (IL 1, TNF, IL- 6. IL—8). o kterých se předpokládá, že způsobují tato onemocnění.
Tak onemocnění nebo stavy způsobené IL-I zahrnují revmatickou artritidu, ostcoartritidu. mrtvici, syndrom endotoxemic a/nebo toxického šoku, zánětlivou reakci vyvolanou endotoxinem, zánětlivé střevní onemocnění, tuberkulózu, atcrosklerózu, degeneraci svalu, kachexii, psoriatickou artritidu, Reiterův syndrom, dnu, traumatickou artritidu, rubeolovou artritidu, akutní synovitidu, diabetes, pankreatické onemocnění β—buněk a Alzheimerovo onemocnění.
Onemocnění nebo stavy způsobené TNF zahrnují revmatickou artritidu, revmatickou spondylitidu. osteoartritidu, dnovou artritidu a další artritické stavy, sepsi, septický šok. endotoxický šok. gramnegativní sepsi, toxický šokový syndrom, syndrom resp i rač nich chorob dospělých, cerebrální malárii, chronická pulmonární zánětlivá onemocnění, silikosu, pulmonární sarkoidosu, choroby resorpce kostí, reperfuzní poranění, reakce štěp hostitel, odmítání aloimplantátu. horečku a myalgii způsobenou infekcí, kachexii sekundární na infekci, AIDS, ARC nebo zhoubné bujení, keloidní formace, tvorbu zjizvené tkáně, Crohnovo onemocnění, ulceralívní kol itidu nebo pyrexii. Onemocnění způsobená TNF také zahrnují virové infekce, jako je HIV, CMV, chřipka a herpes, a veterinární virové infekce, jako jsou len ti virové infekce, včetně, avšak nikoliv pouze, koňského infekčního viru anemie, viru kozlí artritidy, viru visna nebo viru maedi. nebo retrovirové infekce, včetně viru kočičího deficitu imunity, viru hovězího deficitu imunity nebo viru psího deficitu imunity.
Onemocnění a stavy způsobené II -8 zahrnují onemocnění charakterizovaná masivní neurofilní infiltrací, jako je psoriáza, zánětlivé střevní onemocnění, astma, srdeční a ledvinová reperfuzní poranění, syndrom respíračních chorob dospělých, trombóza a glomerulonefritida.
Kromě toho lze sloučeniny podle vynálezu použít topicky k ošetření nebo k prevenci stavů způsobených nebo exacerbovaných 1L-1 nebo I NF. Těmito stavy jsou zanícené klouby, ekzém, psoriáza. zánětlivé stavy kůže, jako je spálení sluncem, zánětlivé oční stavy, jako je konjunktivitida, pyrexie, bolest a další stavy spojené se zánětem.
Kromě toho lze také sloučeniny podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelné soli použít v prostředcích pro ošetřování nebo prevenci výše uvedených onemocnění.
-47CZ 299600 Bó
Farmaceuticky přijatelnými solemi sloučenin podle vynálezu jsou soli odvozené od farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin a bází. Jako příklady vhodných solí s kyselinami lze uvést acetát, adipát. alginát, aspartát, benzoát, bcnzensulfonál, hydrogensíran. butxrát, citrát, kafrát. kafrsulfonát. cyklopentanpropionát, diglukonát, dodecylsulfát. ethansulfonát.
formiát, fumarát, glukohcptanoát, glycerofosfát, glukolát, hemisulfát. heptanoát. hexanoát, hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyethansulfonát, laktát, maleinát. malonát. methansulfonát, 2-naftalcnsulfonát, nikoťmát. nitrát, oxalát, palmoát, pektinát. persulfát, 3fenylpropionát. fosfát, pikrát, pivalát, propionát. salicylát. sukcinát, sulfát, tartarát. thiokyanát, tosylát a undekanoát. Další kyseliny, jako jc kyselina oxalová, byť nejsou samy o sobě farmaccuio ticky přijatelné, lze použít při přípravě solí použitelných jako meziprodukty pro přípravu sloučenin podle vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných solí s kyselinami. Soli odvozené od příslušných bází zahrnují soli s alkalickými kovy (například sodné a draselné), s kovy alkalických zemin (například horečnaté) a amoniové soli a soli N (alkyl)4' soli. kde alkylové části mají l až 4 atomy uhlíku. Vynález také předpokládá kvarternizaci jakýchkoliv bazických dusík obsahujících i? skupin v popsaných sloučeninách. Touto kvarternizaci lze získat ve vodě nebo v oleji rozpustné nebo dispergovatelné produkty.
Jako farmaceuticky přijatelné nosiče, které se mohou použít v těchto farmaceutických prostředcích, lze uvést, aniž by to znamenalo omezení pouze na ně, ion lomen iěc, oxid hlinitý, stea2(i rát. hlinitý, lecitin, sérové proteiny, jako je albumin lidského síra. pufrovací látky, jako jsou fosfáty, glycin, kyselinu sorbovou. sorbát draselný, směsi parciálních glyceridu nasycených rostlinných mastných kyselin, vodu. soli nebo elektrolyty, jako je protaminsulfát, sekundární hydrogenfosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidní oxid křemičitý, trisilikát hořečnatý, polyvinylpyrrolidon, látky na bázi celulózy, polyelylen25 glykol, sodnou sůl karboxymethylcelulózy, polyakryláty. vosky, blokové polymery polyethylenu a polyoxypropylenu, polyethylenglykol a tuk z vlny.
Prostředky podle vynálezu se mohou podávat orálně, parenterálně, ínhalováním spreje, topicky. rektálně, nasálně, bukálně, vaginálně nebo přes implantovaný reservoár. Výrazem „parenterálně“ .m se míní podkožní, intravenosní. intramuskulámí, iniraartikulární. intrasynoviální, intrasternální, intratekální, intrahepatální. intralesionální a intrakraniální injekce nebo infuse. Výhodně sc prostředky podle vynálezu podávají orálně, intraperitoneálně nebo intravenosně.
Sterilními injikovatelnýnu formami prostředků podle vynálezu mohou být vodné nebo olejovité suspenze. Tyto suspenze lze připravovat známými způsoby za použití vhodných dispergačnícb nebo smáčecíeh činidel a suspendačních činidel. Sterilními injikovatelnými přípravky mohou být také sterilní injikovatelné roztoky nebo suspense v netoxickém parenterálně přijatelném ředidle nebo rozpouštědle, například jako roztok v 1,3-butandiolu. Z těchto přijatelných nosičů a rozpouštědel, která lze používat, lze uvést vodu, Ringerův roztok a isotonický roztok chloridu sodné40 ho. Kromě toho se běžně používají sterilní stálé oleje jako rozpouštědlové nebo suspendační prostředí. Pro tento účel lze použít jakýkoliv nedráždi vý stálý olej, včetně syntetických monoglyceridů nebo diglyceridů. Při přípravě injikovatelných přípravků, jako jsou přírodní farmaceuticky přijatelné oleje, jako je olivový olej nebo ricinový olej, zejména v jejich polyoxyethylovaných formách, lze použít mastné kyseliny, jako je kyselina olejová a její glyeeridové deriváty.
Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou také obsahovat ředidlo nebo dispergační činidlo s dlouhým alkoholovým řetězcem, jako je karboxymethylcelulóza nebo podobná dispergační činidla, která se běžně používají při přípravě farmaceuticky přijatelných dávkových forem, včetně emulzí nebo suspensí. Pro účely přípravy těchto prostředků lze také použít další běžně používané povrchově aktivní látky, jako jsou Tweeny, Spaný a j iná emulgační činidla nebo činidla
5d zvyšující biologickou snášitelnost běžně používaná při přípravě farmaceuticky přijatelných pevných, kapalných nebo jiných dávkových forem.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze podával orálně v jakékoliv orálně při jatelné formě, včetně, avšak nikoliv pouze takto, kapslí, tablet, vodných suspenzí nebo roztoků. V případě tablet pro orální použití se jako nosiče obvykle používají laktóza a kukuřičný škrob. Typicky se také
-48 CZ 299600 B6 přidávají mazadla, jako jc stearát hořečnatý. Pro orální podávání ve formě kapslí jsou použitelnými ředidly laktóza a vysušený kukuřičný škrob. Jsou-li pro orální podávání požadovány vodné suspenze, účinná látka se kombinuje semulgačními nebo suspendaěními činidly, V případě potřeby lze také přidávat určitá sladící, chuťová nebo barvicí činidla.
Alternativně lze podávat farmaceutické prostředky podle vynálezu ve formě čípku pro rektální podávání. Čípky lze připravit smísením účinné látky svhodnou nedráždivou pomocnou látkou, která je pevná při teplotě místnosti, aleje kapalná při rektální teplotě a proto taje v konečníku, čímž se uvolňuje léčivá látka. Pomocnými látkami mohou být kakaové máslo, včelí vosk a póly10 ethylenglykoly.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze také podávat topicky. zejména jestliže jsou plochy nebo orgány vyžadující toto ošetření přístupné topickou aplikací, včetně onemocnění očí. kůže nebo nižšího intestinálního traktu. Pro každou z těchto ploch nebo pro každý orgán se vhodné topické přípravky připraví snadno.
Topická aplikace na nižší intcstinální trakt se provádí pomocí rektálních čípkových přípravku (viz výše) nebo vhodným přípravkem ve formě střevního nálevu. Lze také použít topické transdennální náplasti.
Pro topické aplikace se farmaceutické prostředky mohou formulovat ve formě vhodné masti, která obsahuje účinnou složku suspendovanou nebo rozpuštěnou v jednom nebo více nosičích. Nosiče pro topické podávání sloučenin podle vynálezu zahrnují, avšak nejsou omezeny pouze na ně, minerální olej, kapalnou technickou vazelínu, bílou vazelínu, propylenglykol, polypyethylen, polyoxypropy lenovou sloučeninu, emulgační vosk a vodu. Alternativně lze farmaceutické prostředky formulovat ve vhodné tekutě lékové formě nebo ve formě krému, které obsahují účinnou složku suspendovanou nebo rozpuštěnou v jednom nebo více farmaceuticky přijatelných nosičích. Vhodně nosiče zahrnují, avšak nejsou omezeny pouze na ně, minerální olej. sorbitanmonostearát, polysorbát 60, voskové eetylestery, ceteary (alkohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a vodu.
Pro oftalmické použití se farmaceutické prostředky mohou formulovat jako mikronizované suspenze v isotoniekém sterilním solném roztoku s upraveným pH nebo s výhodou jako roztoky v isotonickém solném roztoku s upraveným pH, buď s ochrannými látkami, jako je benzyl35 alkoniumchloríd, nebo bez nich. Alternativně se pro oftalmické použití mohou farmaceutické prostředky formulovat ve formě mastí, jako je vazelína.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu lze také podávat formou nasálního aerosolu nebo inhalací. Tyto prostředky se připravují podle známých technik přípravy farmaceutických přípravků a lze je připravil jako roztoky v solném roztoku, za použití bcn/ylalkoholu nebo jiných vhodných ochranných přísad, absorpčních promotorů ke zvyšování biosnášitelnosti, fluorovaných uhlovodíků a/nebo dalších běžných solubilizačních nebo dispergačních činidel.
Množství inhibitoru p38, které se má spojit s nosičovými materiály za vzniku jednotkové dávko4? vé formy, se mění v závislosti na ošetřovaném hostiteli a na zvláštním způsobu podávání. S výhodou se tyto prostředky formulují tak. že se pacientovi, který přijímá tylo přípravky, podává dávka inhibitoru mezi 0.01 a 100 mg/kg tělesné hmotnosti na den.
Je samozřejmé, že specifická dávka a ošetřovací režim pro jednotlivé pacienty závisí na mnoha faktorech, včetně účinnosti specifické podávané sloučeniny, na věku, tělesné hmotnosti, celkovém zdravotním stavu, pohlaví, dietě, době podávání, rychlosti vylučování, kombinaci léčiv a na názoru ošetřujícího lékaře a na vážnosti konkrétního onemocnění, které má být ošetřeno. Množství inhibitoru také závisí na specifické sloučenině v prostředku.
-49CZ 299600 Bó
Dále se vynalez týká způsobů ošetřování nebo prevence stavů způsobených p38, který spočívá v tom, že se pacientovi podává jeden z výše popsaných farmaceutických prostředků. Výrazem ..pacient1 se zde míní živočich, s výhodou člověk.
S výhodou se tohoto způsobu používá k ošetřování nebo k prevenci stavu zahrnujících zánětlivá onemocnění, autoimunní onemocnění, destruktivní poruchy kostí, proliferační poruchy, infekční onemocnění, degenerativní onemocnění, alergie, reperfuzi/ischemii u mrtvice, srdeční záchvaty, angiogenní poruchy, hypoxii orgánů, vaskulámí byperplazii, srdeční hypertrofii a trombinem vyvolanou agregaci destiček.
ío
Dále se vynález týká inhibitorů podle vynálezu pro použití k ošetřování nebo k prevenci onemocnění a stavu způsobených 1L-1. IL-ό, IL-8 nebo I NF. Tyto stavy jsou popsány výše.
V závislosti na jednotlivých stavech zprostředkovaných p38, které mají být ošetřeny nebo kterým i? má být předcházeno, lze obvykle podával další léčiva, která se obvykle podávají při ošetřování nebo prevenci těchto stavů, spolu $ inhibitory podle vynálezu. Například pro ošetřování proliferačních onemocnění lze kombinovat chemoterapeulieké látky nebo další antíproliferační látky s inhibitory p38 podle vynálezu.
Tyto další látky lze podávat odděleně od prostředků obsahujících inhibitory p38 jako součást smíšeného dávkového režimu. Alternativně mohou být tyto látky součástí jednotlivých dávkových forem smíšených s inhibitorem p38 do jednoho prostředku.
Pro objasnění vynálezu slouží následující příklady provedení vynálezu. Tyto příklady slouží pouze pro ilustraci předloženého vy nálezu a ne pro jakékoliv jeho omezení.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava inhibitoru p38 sloučeniny 1
Příklady přípravy několika sloučenin obecného vzorce la jsou uvedeny dále v následujících 4 příkladech.
A.
K suspenzí amidu sodného, 90% (1,17 g, 30 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (20 ml) se při teplotě místnosti přidá roztok benzylkyanidu (2.92 g. 25,0 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml). Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 30 minut. K reakční směsi se přidá roztok 3.6-díehlorpyridazinu (3,70 g, 25,0 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml). Reakční směs se míchá po dobu 30 minut a potom se zředí nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Potom se reakční směs extrahuje ethylacetátem. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se
-50CZ 299600 B6 promyje vodou, roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým. přefiltruje se a zahustí se za sníženého tlaku.
Zbytek se čistí chromatografií na silikagelu (eluční činidlo: 30% ethylacetát v n--hexanu), čímž se získá 3.71 g (16,20 mmol - 54 %) produktu ve formě bílé pevné látky.
B.
N
K suspenzi hydridu sodného, 95% (0,14 g, 6,0 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (10 ml) se ío při teplotě místnosti přidá thíofenol (0.66 g. 6.0 ml). Reakční směs se potom míchá po dobu minut. K reakční směsi se přidá roztok produktu ze stupně A (1,31 g. 5.72 mmol) v absolutním ethanolu (20 ml). Reakční směs se potom zahřívá a míchá pod zpětným chladičem po dobu 1 hodiny. Ochlazená reakční směs se zahustí za sníženého tlaku. Zbytek se zředí roztokem 1 N hydroxidu sodného (10 ml), polom se extrahuje methylenchloridem. Organická fáze se pro15 myje vodou, roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí se za sníženého tlaku.
Zbytek sc čistí chromatografií na silikagelu (eluční činidlo: 20% ethylacetát v n hexanu), čímž se získá 0,66 g (2,19 mmol - 40 %) produktu ve formě bílé pevné látky.
C.
prekurzor sloučeniny 1
Směs produktu ze stupně B (0.17 g, 0,69 mmol) a koncentrované kyseliny sírové (5 ml) sc zahřívá na teplotu 100 °C po dobu 1 hodiny. Roztok sc ochladí a upraví sc na pH 8 nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Reakční směs se extrahuje methylenchloridem. Organická vrstva se promyje vodou, roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí se za sníženého tlaku, čímž se získá 0,22 g (0,69 mmol - 100 %) prekurzoru sloučeniny 1 ve formě oranžového oleje. 111 NMR (500 MHz, CD/)D) d 7,7 (d), 7,5 (d). 7,4 (m). 7,3 7,2 (m).
-51 Q'L 299600 B6 >
SLOUČENINA
D.
prekurzor sloučeniny 1
Roztok prekurzorů sloučeniny 1 ze stupně C (0,22 g. 0,69 mmol} a dimetliylaeetalu Ν,Ν-dimethylfonnamidu (0,18 g, 1,5 mmol) v toluenu (5 ml) se zahřívá na teplotu 100 C' po dobu 1 hodiny. Po ochlazení se vzniklá pevná látka odfiltruje a rozpustí se v teplém ethylacetátu. Produkt se vysráží přidáváním diethyletheru po kapkách. Potom se produkt odfiltruje a promyje se diethyletherem. čímž se získá 0,038 g sloučeniny 1 ve formě žluté pevné lálkv. III NMR (500 MHz, CDCfi) d 8,63 (s). 7.63 - 7,21 (m), 6,44 (d).
ID
Příklad 2
Příprava inhibitoru p38 - sloučeniny 2
A.
První meziprodukt uvedený výše se připraví podobným způsobem jako v příkladu IA za použití 4-fluorfenyIaeetonitrilu, čímž se získá 1,4 g (5,7 mmol, - 15 %) produktu.
Výše uvedený meziprodukt se připraví podobným způsobem jako v příkladu 1B. Získá se 0.49 g (1,5 mmol, 56 %) produktu.
-52CZ 299600 B6
C.
N
prekurzor sloučeniny 2
Výše uvedený meziprodukt se připraví podobným způsobem jako v příkladu 1C. Získá se 0,10 g (0.29 mmol. 45%) prekurzoru sloučeniny 2. 'H NMR (500 MHz. CDCh) d 7.65- 7.48 (m). 7,47 - 7,30 (ni), 7,29 - 7,11 (m), 7.06 - 6,91 (mý 5.85 (s, široký).
D.
sloučenina 2 prekurzor sloučeniny 2
Sloučenina 2 (která je uvedena v tabulce 1) se připraví z prekurzoru sloučeniny 2 podobným způsobem jako v příkladu ID. Získá se 0,066 g produktu. ’H NMR (500 MHz. CDCh) d 8,60 (s). 7.62 - 7,03 (m), 6,44 (d).
Příklad 3
Příprava inhibitoru p38 - sloučeniny 6
A.
Cl
Cl
První meziprodukt při přípravě sloučeniny 6 se připraví podobným způsobem, jak je popsáno v příkladu 1Λ, za použití 2,6••dichiorfcny(acetonitrilu, čímž se získá 2,49g (8.38 mmol, 28 %) produktu.
- 53 CZ 299600 B6
Β.
Následující stupeň přípravy sloučeniny 6 se provádí podobným způsobem, jak je popsáno v příkladu 1B. Získá se 2,82 g (7,6 mmol, 91 %) produktu.
C.
Konečný meziprodukt, prekurzor sloučeniny 6. se připraví podobným způsobem, jak je popsáno v příkladu IC. Získá se 0,89 g (2,3 mmol), 85 %) produktu. 'H NMR (500 MHz. CDiOD) d ío 7,5 - 7.4 (dd), 7,4 (m), 7.3 (d), 7,2 (m), 7,05 (d).
D.
prekurzor sloučeniny 6
Konečný stupeň přípravy sloučeniny 6 (která je uvedena v tabulce 1) se provádí podobně, jak je 15 popsáno v příkladu ID. Získá se 0,06 g produktu. 'U NMR (500 MHz, CDCh) d 8,69 (s).
7,65 - 7,59 (d). 7,58 - 7,36 (m), 7,32 - 7,22 (m). 6,79 (d), 6,53 (d).
- 54CZ 299600 B6
Příklad 4
Příprava inhibitoru p38 — sloučeniny 5
A.
První meziprodukt při přípravě sloučeniny 5 se připraví podobným způsobem, jak je popsán v příkladu 1 A, za použití 2.4-dichlorfenylacctonitrilu. čímž se získá 3.67 g {12,36 mmol, 49 %) produktu.
B.
Druhý meziprodukt se připraví podobným způsobem, jak je popsán v příkladu IB. Získá se 3.82 g (9,92 mmol, 92 %) produktu.
C.
prekurzor sloučeniny 5
Konečný meziprodukt, prekurzor sloučeniny 5. se připraví podobným způsobem, jak je popsán v příkladu IC. Získá se 0,10 g (0,24 mmol, 92 %) produktu. *11 NMR (500 MHz. CDk)D) η d 7,9 (d), 7,7 (d), 7.6 - 7,5 (dd), 7,4 - 7,3 (m), 2.4 (s).
- 55 CZ 299600 B6
D.
prekurzor sloučeniny 5
Konečný stupeň pří přípravě sloučeniny 5 (která je uvedena v tabulce 1) se provádí podobným způsobem, jak je popsán v příkladu 10. Získá se 0,06 g produktu. 'Η NMR (500 MHz. CDCI.O d 8,64 (s), 7,51 - 7.42 (m), 7,32 - 7,21 (m). 6,85 (d). 631 (d). 2.42 (s).
Další sloučeniny obecného vzorce la podle vynálezu se mohou připravit podobným způsobem za použití příslušných výchozích sloučenin.
Příklad 5
Příprava inhibitoru A p38 - sloučeniny obecného vzorce lb 15 Přiklad přípravy inhibitoru p38 podle vynálezu obecného vzorce lb je uveden níže.
A.
\ // c/ \ Cl /
NC
-Cl stupeň 1 1) báze r, / \
2) C!”\ /
Cl x 1/ Cl_ z“\ // \ ' / NC N—\
Cl
Cl
K suspenzi amidu sodného, 90% (1,1 ekv) v bezvodém tetrahydrofuranu se při teplotě místnosti 20 přidá roztok 2,6-diehlorbenzylkyanidu (1,0 ekv) v bezvodém tetrahydrofuranu. Směs sc míchá při teplotě místnosti po dobu 30 minut. K reakění směsi se přidá roztok 2,6-dichlorpyridinu (1 ekv) v bezvodcm tetrahydrofuranu. Reakce se monitoruje pomocí 1 LC a jakmile je skončena, reakění směs se zředí nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Potom se reakční směs extrahuje ethylacetátem. Vrstvy sc oddělí a organická vrstva se promyje vodou.
roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem horečnatým, přefiltruje sc a zahustí se za sníženého tlaku. Zbytek se čistí chromatografií na silikagelu, čímž se získá čistý produkt.
-56CZ 299600 B6 / c' /_\ r\ /
NC N=y
Β.
Cl w ‘ ' \ // \ ' / NC N=\
Cl
Cl // \ \_/
K roztoku 4-fluorbrombenzenu (1 ekv) v bezvodém tetrahydrofuran li se při teplotě - 78 °C přidá tere,butyllithiutn (2 ekv. roztok v hexanech). Reakění směs se potom míchá po dobu 30 minut. K reakční směsi se přidá roztok produktu ze stupně A {1 ekv) v bezvodém THF. Reakční směs se potom monitoruje a pomalu se nechá ohřát na teplotu místnosti, Reakční směs se ochladí vodou a potom se extrahuje methylenchloridem. Organická fáze se promyje vodou, roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem horečnatým a zahustí se za sníženého tlaku. Zbytek se chromatografuje na silikagelu, čímž se získá produkt.
C.
\ // Cl c,/_\ /r\ /—\ /
NC \_/
Γ\ \ !/
Cl — Cl o=/ nh2 /rK \_/ “\
Směs produktu ze stupně B a koncentrované kyseliny sírové se zahřívá na teplotu 100 °C po dobu 1 hodiny. Roztok se ochladí a upraví se na pil s nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodné15 ho. Reakční směs se extrahuje methylenchloridem. Organická vrstva se promyje vodou, roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem horečnatým a zahustí se za sníženého tlaku, čímž se získá produkt. Konečný produkt se čistí ry chlou chromatografií na silikagelu.
-57CZ 299600 B6
D.
Ci \
/r\ \-/
inhibitor o3 8
Roztok produktu ze stupně C (1 ekv) a dimethylaeetalu N.N-dimethyl formamidu {2 ekv) v toluenu se zahřívá na teplotu 100 °C po dobu I hodiny. Po ochlazení sc vzniklá směs přefiltruje a rozpustí se v teplém ethylacetátu. Produkt se vysráží přidáváním diethyletheru po kapkách. Produkt sc potom odfiltruje a promyje se diethyletherem, čímž sc získá inhibitor p38 obecného vzorce lb. Konečný produkt se čistí chromatografií na silikagelu.
Další sloučeniny obecného vzorce lb podle vynálezu se mohou připravit podobným způsobem za io použití příslušných výchozích sloučenin.
Příklad 6
Příprava inhibitoru p38 sloučeniny 103
sloučenina 12 sloučenina 103
Tento příklad popisuje typickou přípravu sloučeniny obecného vzorce lc.
A.
Inhibitor p38, sloučenina 12. sc připraví podobně jako v příkladu 4, s výjimkou toho. že se vc stupni B použije 4-fluorthiofenyl.
-58 CZ 299600 B6
Β.
Sloučenina 12 se rozpustí v bezvodém THF (5 ml) při teplotě místnosti. K tomuto roztoku se přidá diisobutylaluminiumhydrid (1 M roztok v toluenu, 5 ml, 5 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Reakční směs se potom zředí ethylacetátem a ochladí se přidáním Rochellovy soli. Vrstvy se oddělí a organická vrstva se izoluje, promyje se vodou, roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým a přefiltruje se. čímž se získá surová sloučenina 103. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu eluci 2% methanolem v methylenchloridu. Takto se získá čistá sloučenina 103 (210 mg. výtěžek 50%): 'li NMR lú (500 MHz, CDC10 7,51 (m, 1H), 7,38 (d, 2H). 7,20 (t, 2H). 7,08 (t, 211).6.70 (široký s, 111). 6,30 (dd, 2H), 5,20 (s. 211).
Příklad 7
Příprava inhibitoru p.38 - sloučeniny 201
A.
Ph fenyl
Výchozí nitril uvedený výše (5,9 g, 31.8 mmol) se rozpustí při teplotě místnosti v DMF (20 ml). Potom se přidá hydrid sodný (763 mg. 31.8 mmol) a vznikne světle žlutě zbarvený roztok. Po 15 minutách se přidá roztok 2,5 dibrompyridinu (5.0 g, 21,1 mmol) v DMF (10 ml) a potom pal lad iumtetrakis(trifeny Ifosfin) (3 mmol). Roztok se potom zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin. Reakění směs sc ochladí na teplotu místnosti a zředí se ethylacetátem. Organická vrstva se potom izoluje, promyje se vodou a potom roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým, přefiltruje se a odpaří se za sníženého tlaku na surový olej. Rychlou chromatografií na koloně se 10% ethylacetátem v hexanu eluuje požadovaný produkt (5,8 g,
84 %) ve formě špinavě bílé pevné látky.
B.
Bromid připravený ve stupni A (194,8 mg, 0,57 mmol) se rozpustí v xylenu (15 ml). K tomuto 35 roztoku se přidá thiofenylstannan (200 μΙ, 587 mmol) a palladiumtetrakis(trifenyIfosfin) (25 mg).
-59CZ 299600 B6
Roztok se zahřívá k varu pod zpětným chladičem přes noc. ochladí se. přefiltruje se a odpaří za sníženého tlaku. Surový produkt se chromatografuje na silikagelu a eluuje se methylenchloridem, čímž se získá čistý produkt (152 mg, 72 %) ve formě žlutého oleje.
C.
sloučenina 2C1
Nitril připravený ve stupni B (1.2 g, 3.37 mmol) se rozpustí v ledové kyselině octové (30 ml). K tomuto roztoku se přidá voda (120 μ], 6,67 mmol) a potom chlorid titaniěitý (760 μΙ, 6,91 mmol). čímž sc směs stane exotermnL Roztok se potom zahřívá k varu pod zpětným chladilo čem po dobu 2 hodin, ochladí se a naleje se do 1 N HCI. Vodná vrstva se extrahuje methylenchloridem. Organická vrstva se znovu promyje 1 N NaOH, vysuší se nad síranem horečnatým a přefiltruje se přes ucpávku silikagelu. Ucpávka se nejprve eluuje methylenchloridem. čímž se odstraní nezrcagovaná výchozí látka, a potom ethylacetátem, čímž se získá sloučenina 201.
Ethylacetát se odpaří, čímž se získá čistá sloučenina 201 (E0 g. 77 %).
Příklad 8
Příprava inhibitoru p38 — sloučeniny 110
A.
Výchozí nitril (3,76 g, 11,1 mmol) se nejprve rozpustí v ledové kyselině octové (20 ml). K tomuto roztoku se přidá chlorid titaniěitý (22,2 mmol) a voda (22,2 mmol) a směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 1 hodiny. Reakční směs se potom ochladí a zředí se směsí vody a ethylacetátu. Organická vrstva se potom izoluje, promyje se roztokem chloridu sodného a vysuší se nad síranem hořečnatým. Organická vrstva se potom odfiltruje a odpaří se za sníženého tlaku. Vzniklý surový produkt se chromatografuje na silikagelu a eluuje se 5% methanolem v methylenchloridu, čímž se získá čistý produkt ve formě žluté pěny (2.77 g, 70 %).
- 60CZ 299600 B6
Β.
Amid připravený ve stupni A (1,54 g. 4,3 mmol) se rozpustí v toluenu (20 ml). Potom se přidá dimetliylacelal Ν,Ν-dimethylfbmiamídu (1,53 g, 12.9 mmol). vzniklý roztok se zahřívá po dobu 10 minut, načež sc nechá ochladit na teplotu místnosti. Reakční směs se potom odpaří za sníženého tlaku a zbytek se ehromatografuje na silikagelu a eluuje se 2 až 5% methanolem v methylenehloridu. Získaná látka se potom rozpustí v horkém ethylacetátu. Roztok se nechá vychladnout, čímž vykrystaluje čistý produkt ve formě žluté pevné látky (600 mg, 40 %), Další produkt ('800 mg) se získá z matečného louhu,
C.
Bromid zc stupně B (369 mg. 1 mmol) se rozpustí v TUP (10 ml). Potom se přidá diisobutylaluminiumhydrid (1,0 M roztok. 4 mmol). reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu
10 minut a potom sc směs ochladí methanolem (1 ml). Pak se přidá nasycený roztok Rochellovy soli a směs sc extrahuje ethylacetátem. Organická vrstva se izoluje, vysuší se nad síranem hořečnatým, odpaří se a zbytek se ehromatografuje na silikagelu a eluuje se 1 až 3% methanolem v methylenchloridu, čímž se získá jasně oranžová pevná látka (85 mg, výtěžek 23 %).
D,
sloučenina. 1.10
Bromid připravený ve stupni C1 (35,2 mg, OJ mmol) se rozpustí v xylenu (12 ml). K tomuto roztoku se přidá thiofenol (0.19 mmol) a potom tributylcímnelhoxid (0J9 mmol). Vzniklý roztok se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 10 minut, načež se přidá palladiumtetrakis-61 CZ 299600 B6 (trifenylfosfin) (0,020 mmol). Reakční směs se zahřívá a monitoruje se na vymizení bromidové výchozí látky. Potom se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a proleje se ucpávkou silikagelu. Ucpávka se eluuje nejprve mcthylenchloridem, čímž se odstraní nadbytek cínového reakčního činidla a potom 5% methanolem v ethylacetátu, čímž se eluuje inhibitor p38. Filtrát se zahustí a potom se znovu chromatografuje na silikagelu za použití 5 % methanolu v ethylacetátu jako elučního činidla, čímž se získá čistá sloučenina 1 10 (20 mg. 52 %).
Příklad 9 ío
Příprava inhibitoru p38 sloučeniny 202
A.
Pd(PPh3}4
Výchozí nitril (2,32 g, 12 mmol) se při teplotě místnosti rozpustí v DMF (10 ml). Potom se přidá hydrid sodný (12 mmol) a vznikne jasně žlutě zbarvený roztok. Po 15 minutách se přidá roztok 2,6-dibrompyridinu (2,36 g, 10 mmol) v DMF (5 ml) a potom palladiumtetrakis(trifenylfosím) (1,0 mmol). Roztok se potom zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 3 hodin. Pak se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a zředí se ethylacetátem. Organická vrstva se izoluje.
promyje se vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým. přefiltruje se a odpaří se za sníženého tlaku, čímž se získá surový olej, Rychlou chromatografií na koloně se eluuje 10% ethylacetátem v hexanu produkt (1,45 g, 42 %) ve formě bílé pevné látky.
B.
Bromová sloučenina připravená ve slupni A (1,77 g, 5.2 mmol) se rozpustí v toluenu (20 ml) a vzniklý roztok se odplyní. V atmosféře dusíku se přidá roztok fenylboronové kyseliny (950 mg. 7,8 mmol) v ethanolu (4 ml) a roztok uhličitanu sodného (1,73 g, 14 mmol) ve vodě (4 ml). Reakční směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 1 hodiny a potom se ochladí na teplotu místnosti. Reakční směs se zředí ethylacetátem a promyje se vodou a roztokem chloridu
-62CZ 299600 B6 sodného. Organická vrstva sc potom vysuší síranem horečnatým, přefiltruje se a zahustí se za sníženého tlaku. Zbytek se čistí na silikagelu a eluujc se 30% ethylacetátem v hexanu, čímž se získá produkt ve formě bílé pevné látky (1,56 g. 88 %).
s C.
Nitril ze stupně B {700 mg, 2,07 mmol) se rozpustí v koncentrované kyselině sírové (10 ml) a zahřívá sc na teplotu 80 °C po dobu l hodiny. Reakční směs se potom ochladí na teplotu místnosti a pil se upraví na 8 za použití 6N hydroxidu sodného. Směs se pak extrahuje ethylio acetátem. Organická vrstva se izoluje, vysuší se síranem hořečnatým a odpaří se za sníženého tlaku, čímž se získá sloučenina 202 ve formě žluté pěny (618 mg, 84 %).
Příklad 10
Příprava sloučeniny 410
A,
F F
2o Plamenem vysušená 100 ml baňka s kulatým dnem se naplní 2,28 g (93,8 mmol) kousku hořčíku a 50 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Přidá se jeden krystal jodu. čímž vznikne světle hnědé zabarvení. K tomuto roztoku se přidá 1,5 ml z 10,0 tni (79,1 mmol) vzorku 2-brom-5-fluortoluenu. Roztok se zahřívá k varu pod zpětným chladičem. Hnědé zabarvení zeslábne a var se udržuje až se vnější zdroj tepla odstraní, eož ukazuje tvorbu Grignardova činidla. Když var skončí, přidá se další 1,0 až 1,5 ml dávka bromidu, čímž vznikne prudký var. Postup se opakuje, až se přidá všechen bromid. Olivově zelený roztok se zvnějšku zahřívá k varu po dobu I hodiny, čímž se zajistí ukončení reakce. Roztok se ochladí v lázni sledem a injekční stříkačkou se k němu přidá 9.3 ml (81,9 mmol) trimethylborátu ve 100 ml tetrahydrofuranu při teplotě -78 °C. Po přidáni Grignardova činidla se baňka odstraní z chladicí lázně a roztok sc míchá přes noc při teplotě místnosti. Šedobílá suspenze se nalcje do 300 ml vody a tekavé látky se odpaří za sníženého tlaku. Přidá se HCl (400 ml 2 N roztoku) a mléčně bílá směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Vysráží se bílá pevná látka. Směs se extrahuje diethyletherein
- 63 CZ 299600 B6 a organický extrakt se vysuší (MgSO4) a odpaří se za sníženého tlaku, čímž se získá I 1.44 g (94 %) boronové kyseliny ve formě bílé pevné látky.
B.
Ve 100 ml baňce s kulatým dnem se rozpustí 7.92 g (33.4 mmol) 2,6-dibrompyridinu v 50 ml bezvodého toluenu, čímž vznikne čirý bezbarvý roztok. Přidá se 4-fluor 2-methylbenzenboronová kyselina (5,09 g. 33,1 mmol) připravená ve stupni A, čímž vznikne bílá suspenze. Pak se přidá uhličitan thalia (17.45 g, 37.2 mmol) a potom katalytické množství (150 mg) Pd(PPh;)4. Směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem přes noc, ochladí se a přefiltruje se přes sloupec silikagelu, Silikagel se promyje CIBCh a filtrát se odpaří, čímž se získá bílá pevná látka. Ta se rozpustí v minimálním množství 50% ( HAT v hexanu a chromatografuje se na krátké koloně silikagelu za použití 30% ClLCl· v hexanu, čímž se získá 6.55 g (74 %) 2-brom-6-( 4-fluor 2methylfenyl)pyridinu ve formě bílé pevné látky.
e
V 50 ml baňce s kulatým dnem se rozpustí 550 mg (2,07 mmol) 2-brom-6-(4 fluor-2-mcthylfenyl)pyridinu připraveného ve stupni B v 30 ml bezvodého tetrahydrofuranu, přičemž se vytvoří čirý bezbarvý roztok. Přidá se 2.6-difluoranilin (2,14 ml, 2,14 mmol) a potom 112 mg (2,79 mmol) 60% NaH suspenze v minerálním oleji. Během mírně cxotermní reakce se pozoruje vývin plynu. Roztok se zahřívá k varu pod zpětným chladičem přes noc a potom se ochladí. Reakční směs se naleje do 10% NH4Ct a extrahuje se CILCb. Organický extrakt se vysuší (MgSOJ a odpaří se za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý olej, který' je směsí produktu a výchozí látky. Směs sc chromatografuje na krátké koloně silikagelu za použití 50% CíLCL v hexanu, čímž se získá 262 ing (40 %) 2-(2,6 difluorfenyI)-6-(4-fluor 2-methylfenyl)pyriduiu ve formě bezbarvého oleje.
-64QL 299600 Bó
D.
V 100 ml baňce s kulatým dnem sc rozpustí 262 mg (834 mmol) 2-(2,6-difluorfenyl)-6 (4-fluor -2—methylfenyl)pyridinn připraveného vc stupni C v 30 ml bezvodého CHCh a vznikne čirý ? bezbarvý roztok. Přidá se chlorsulfonylisokyanát (1.0 ml. 11.5 mmol) a světle žlutý roztok se míchá při teplotě místnosti přes noc. Přidá se voda (-30 ml), čímž sc reakce stane mírně exotermní a vyvíjí sc intenzivně plyn. Po smíchání přes noc se organická vrstva oddělí, vysuší sc (MgSO,}) a odpaří se za sníženého tlaku, čímž se získá hnědý olej. který je směsí produktu a výchozí látky. Tato směs se chromatografuje na krátké koloně silikagelu za použití 10% EtOAc io v OTCE. Izolovaná výchozí látka se znovu podrobí reakčním podmínkám a vyčistí se stejným způsobem, čímž se získá celkově 205 mg (69 %) močoviny ve formě bíle pevné látky.
Příklad 11
Příprava sloučeniny 138
OH sloučenina 103 sloučenina 123
Sloučenina 103 (106 mg, 0.25 mmol) se rozpustí v THE (0,5 ml) a k tomuto roztoku sc přidá triethylamin (35 μΙ, 0,25 mmol) a polom nadbytek formaldehydu (37% vodný roztok, 45 mg).
Reakční směs se nechá míchat při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs se potom odpaří v rotačním odpařováku za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v methylenchloridu a aplikuje se na rychlou kolonu se silikagelem. Kolona sc eluuje 2% methanolem v methylenchloridu. čímž se získá čistý produkt (78 mg, výtěžek 70 %).
-65CZ 299600 B6
Příklad 12
Příprava profarmaka sloučeniny 103
A.
sloučenina 133 fosfátové profartr.akurn sloučeniny 103
Sloučenina 138 (I ekvivalent) se rozpustí v methylenchloridu a k roztoku se přidá triethylamin (1 ekvivalent) a potom dibenzylfosfonylchlorid (1 ekvivalent). Roztok se míchá při teplotě místnosti a monitoruje se pomocí TLC na spotřebu výchozí látky. Methylenchloridová vrstva sc to potom zředí ethylacetátem a promyje se 1 N IICL nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem NaCl, Organická vrstva se potom vysuší, odpaří se v rotačním odpařováku a surový produkt se čistí na silikagelu. Čistý produkt se potom rozpustí v methanolu a dibenzylesterove chránící skupiny se odstraní 10% palladiem na uhlí v atmosféře vodíku. Když je reakce skončena, katalyzátor se odfiltruje přes celit a filtrát se odpaří, čímž sc získá fosfátový produkt.
B.
s.l oučernna 103
Sloučenina 103 (210 mg, 1,05 mmol) se rozpust v TUL (2 ml) a ochladí se v atmosféře dusíku na 2o -50 °C. K tomuto roztoku se přidá lithiumhexamethyldisilazan (1,1 mmol) a potom chloracetylchlorid (1,13 mmol). Reakění směs se odstraní z chladicí lázně a nechá sc ohřát na teplotu místnosti, načež se zředí ethylacetátem a ochladí sc vodou. Organická vrstva sc promyje roztokem chloridu sodného, vysuší se a odpaří se v rotačním od pa řo vaku k suchu. Surový produkt se čistí rychtou chromatografií na silikagelu za použití 25% ethylacetátu v hexanu jako elučního
2? činidla, čímž se získá 172 mg (70 %) čistého požadovaného produktu, který se použije takový, jaký je. v následujících reakcích.
- 66 CZ 299600 B6
C.
dimethylund noacetylové profarmakum sloučeniny 103
Chloracetylová sloučenina se rozpustí v methylenchloridu a nechá se reagovat s nadbytkem 5 dimethylaminu. Reakce se monitoruje pomocí TLC a jakmile je skončena, všechny těkavé látky se odstraní, čímž se získá požadovaný produkt.
Příklad 13 o
Příprava sloučenin 34 a 117
A.
14(¾
Nitril z příkladu 5 stupně A (300 mg, 1.0 mmol) se rozpustí v ethanolu (10 ml) a k tomuto roztoku se přidá thiomočovina (80,3 mg, 1,05 mmol). Reakční směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 4 hodin a potom TLC ukazuje, že veškerá výchozí látka je spotřebována. Reakční směs se ochladí a všechny těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v acetonu (10 ml).
K roztoku se potom přidá 2.5-difluornitrobenzen (1 ΙΟμΙ, L01 mmol) a pak uhličitan draselný (200 mg, 1,45 mmol) a voda (400 μΙ). Reakční směs se nechá míchat při teplotě místnosti přes noc. Polom se reakční směs zředí methylenchloridem (25 ml) a přefiltruje se přes vatovou ucpávku. Všechny těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí rychlou chromatografií na silikagelu eluci gradientem od 10% až 25% ethylacetátu v hexanu, čímž sc získá požadovaný produkt (142 mg. 33 %).
-67CZ 299600 B6
Β.
Nitrilový produkt ze stupně A (142 mg, 0,33 mmol) se smísí s koncentrovanou kyselinou sírovou (2 ml), zahřívá se k varu pod zpětným chladičem po dobu 1 hodiny a potom se nechá ochladit na teplotu místnosti. Potom se směs zředí ethylacetátem a opatrně se neutralizuje nasyceným vodným roztokem uhličitanu draselného. Vrstvy se rozdělí a organická vrstva se promyje vodou, roztokem chloridu sodného a vysuší se nad síranem horečnatým. Směs se přefiltruje a odpaří se k suchu. Zbytek se použije v následujícím stupni bez dalšího čištění (127 mg, výtěžek 85 %).
11) C.
sloučenina 34
Amid ze stupně B (127 mg, 0.28 mmol) se rozpustí v TI IF (3 ml) a k tomuto roztoku se přidá dimethylacetal dimethylformamidu (110 pl. 0.83 mmol). Reakění směs se zahřívá k varu pod zpětným chladičem po dobu 5 minut a potom se ochladí na teplotu místnosti. Všechny těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se čistí rychlou chromatografií na silikagelu eluci 2.5% methanolem v metliylenchloridu. čímž se získá čistá požadovaná sloučenina 34 (118 mg. 92 %),
D.
sloučenina 34 sloučenina 117
-68CZ 299600 136
K roztoku sloučeniny 34 (100,8 mg, 0.22 mmol) v benzenu (3,4 ml) se přidá roztok chloridu nikelnatého hexahydrátu (103 mg. 0,44 mmol) ve směsi benzenu a methanolu (0,84 ml/0.84 ml) a vzniklý roztok se ochladí na 0 °C. K tomuto roztoku se potom přidá borohydrid sodný (49 mg. 1,3 mmol). Reakční směs se míchá, přičemž se nechá ohřát na teplotu místnosti. Potom se reakční směs odpaří za sníženého tlaku a zbytek se čistí rychlou chromatografií eluci 2% niethanolem v methylenchloridu. čímž se získá čistý požadovaný produkt, sloučenina 117, (21 mg, výtěžek 25 %).
ío Příklad 14
Příprava sloučenin 53 a 142
A.
F
Produkt naznačený ve výše uvedené reakci se syntetizuje za použití postupu podle příkladu 1 stupně B za použití chlorpyridazinu (359 mg. 1.21 mmol) a 2,4-diíluorthiofenolu (176 mg. 1.21 mmol). Produkt se získá po rychlé chromatografii na silikagelu (451 mg. 92 %).
B.
Výše uvedená reakce se provádí postupem popsaným v příkladu 1 stupni C za použití 451 mg výchozí látky a 5 ml koncentrované kvseliny sírové, čímž se získá uvedený produkt (425 nm. 90 %).
-69CZ 299600 B6
Výše uvedena reakce se provádí postupem popsaným v příkladu 1 stupni D za použití výchozího amidu (410 mg. 0,96 mmol) a dimethylaeetalu dimethylformamidu (3 mmol). Reakění směs se zahřívá na teplotu 50 °C po dobu 30 minut a pak se zpracuje dříve popsaným způsobem. Získá se sloučenina 53 (313 mg. 75 %).
D.
sloučenina 53 sloučenina 142 ío Sloučenina 34 (213 mg. 0,49 mmol) se rozpustí v Ti IF (10 ml), ochladí sc na 0 °C a k tomuto roztoku se přidá boran v THF (l M, 0,6 mmol). Reakění směs se míchá po dobu 30 minut, potom se ochladí vodou a zředí se ethylacetátem. Organická vrstva se promyje vodou a roztokem chloridu sodného, vysuší se a odpaří se v rotačním odpařováku. Zbytek se čisti na silikagelu elueí gradientem I až 5% methanolem v methylenchloridu. čímž sc získá sloučenina 142 (125 mg. 57 %).
Příklad 15
Klonování p38 kinázy v hmyzích buňkách
Byly identifikovány dvě „spliee“ varianty lidské p38 kinázy. CSBP1 a CSBP2, K ampliřikaei kódující oblasti CSBP2 cDNA za použití HcLa buněčné knihovny (Stratagene) jako matrice byly použily specifické oligonukleotidové primery. Produkt polymerázové řetězové reakce byl klonován do pET-15b vektoru (Novagen). Baculovirový přenosový vektor, pVL (Hts)6—p38 byl zho2? toven subklonováním Xha\-BamH\ fragmentu pETl5b—(His)6~p38 do komplementárních míst v Plazmídu pVL1392 (Pharmingen).
Plazmid pVL-(IIis)6 p38 směroval syntézu rekombinantního proteinu sestávajícího z peptidu (MGSSIIIIIIHHHSSGLVPRGSI1ΜΙΈ, kde LVPRGS představuje trombinové štěpící místo)
-70CZ 299600 B6 s 23 zbytky kondenzovaného do čtecího rámce na N-konec p38, jak bylo potvrzeno DNA sekvencí a N-koncovou sekvencí exprimovaného proteinu. Monovrstvová kultura Spodoptera frugiperda (Sf9) hmyzích buněk (ATCC) byla udržována v TNM -EH prostředí (Gibco BRE) doplněném 10% fetálním hovězím sérem v T-baňce při teplotě 27 °C. Buňky SfO v log fázi byly ko ? transfektovány s lineární virovou DNA nukleárního mnohostěnného viru Aulographa california (Pharmingen) a přenosovým vektorem pVL-{His)6—p38 za použití Lipofectinu (invitrogen). Jednotlivé rekombinantní baeulovirové klony byly čištěny plakovým testem za použití 1% nízkotající agarózy.
Příklad 16
Exprese a čištění rekombinantní p38 kinázy b Buňky Trichoplusia ni ( Γη-368) High-Fíve '' (Invitrogen) sc pěstují v suspenzi v Excel-405 médiu prostém proteinu (JRH Bioscience) v třepací baňce při teplotě 27 °C. Buňky při hustotě
1.5 x IOfl buněk/ml se infikují rckombinantním baculovirem popsaným výše při multiplicitě infekce 5. Expresní hladina rekombinantu p38 se monitoruje imunoznačením za použití králičí antílátky anti-p38 (Santa Cruz Biotech no logy). El mota buněk se sklidí za 72 hodin po infekci, kdy expresní hladina p38 dosáhne svého maxima.
Zmražen pasta buněk z buněk exprimujících (His)$-značcný p38 se rozmrazí v 5 objemech pufru A (50 mM NaH.POi pil 8.0. 200 mM NaCl. 2 mM β-mcrkaptoethanol, 10% glycerol a 0,2 mM PMSE). Po mechanickém rozbití buněk v mikrofluidizéru se lyzát centrifuguje při
3 0 0 00 x g po dobu 30 minut. Supematant se inkubuje po dávkách po dobu 3 až 5 hodin při teplotě 4 °C Talon (Clontech) pryskyřicí s afinitou na kov v poměru I ml pryskyřice na 2 až 4 mg očekávaného p38. Pryskyřice sedimentuje centrifugací při 500 x g po dobu 5 minut a jemně se promyje po dávkách pufrem A. Pryskyřice se suspenduje a naleje se na kolonu (přibližně
2.6 x 5,0 cm) a promyje se pufrem A + 5 mM imidazolem.
(His)6-p38 se eluuje pufrem A + 100 niM imidazolem a následně se dialyzuje přes noc při teplotě 4 °C proti 2 litrům pufru B (50 mM HEPES, pH 7.5. 25 mM β-glycerofosfát, 5% glycerol. 2 mM DTT). His6 značení se odstraní přidáním 1,5 jednotek trombinu (Calbiochem) na mg p38 a inkubací při teplotě 20 °C po dobu 2 až 3 hodin. Trombin se ochladí přidáním 0,2 mM PMSE a potom se celý vzorek naplní do 2 ml benzamidinagarózové (American International Chemical) kolony.
Průběžná průtoková frakce se naplní do 2,6 x 5,0 cm kolony Q-Sepharose (Pharmacia) předem ekvilibrované v pufru B + 0.2 mM PMSE. p.38 se eluuje lineárním gradientem 20 kolonovým objemem na 0,6 M NaCl v pufru B. Eluovaný proteinový pík se spojí a dialyzuje se přes noc při teplotě 4 °C proti pufru C (50 mM HEPES pH 7.5. 5% glvcerok 50 mM NaCl, 2 mM D I E. 0.2 mM PMSF).
Dialyzovaný protein se zahustí v Centriprep (Amicon) na 3 az 4 ml a aplikuje se na 2.6 x 100 cm kolonu Sephaeryl S-I00HR (Phannacia). Protein se eluujc rychlostí 35 ml/hodina. Hlavní pík sc spojí, upraví se na 20 mM DIT, zahustí se na 10 až 80 mg/ml a zmrazí se na alikvotní podíly při teplotě -70 °C nebo sc ihned použije.
Příklad 17
Aktivace p38
P38 se aktivuje slučováním 0.5 mg/ml p38 s 0,005 mg/ml DD-dvojitý mutant MKK6 v pufru B + 10 mM MgCE, 2 mM ATP, 0,2 mM Na2VO4 po dobu 30 minut při teplotě 20 °C. Aktivační směs se potom naplní do 1.0 x 10 cm MonoQ kolony (Pharmacia) a eluujc se lineárním gra-71 CZ 299600 B6 dientern 20 kolonovým objemem na 1.0 M NaCl v pufru B. Aktivovaný p38 se eluuje po ADP a ATP. Aktivovaný pík p38 se spojí a dialyzuje se proti pufru B + 0,2 mM Na?V()4, čímž se odstraní NaCl. Dialyzovaný protein se upraví na koncentraci 1.1 M fosforečnanu draselného přidáním 4.0 M zásobního roztoku a naplní se do 1.0 x 10 cm HIC kolony (Rainin Hydropore) předem ekvilibrované v pufru D (10% glycerol, 20 mM β-glycerofosfát. 2.0 ntM DTT) + 1J Μ K2HPO4. Protein se eluuje lineárním gradientem 20 kolonovým objemem na pufr D + 50 mM KiHPOj. Dvojitě fosforylovaný p38 se eluuje jako hlavní pík a spojí se pro dialyzu proti pufru B + 0,2 mM Na2VO4. Aktivovaný p38 se skladuje při teplotc -70 °C.
Příklad 18
Testy inhibice p38 i? A, Inhibice fosforylace EGF peptidového receptoru
Test se provádí v přítomnosti 10 mM MgCl·, 25 mM β glycerofosfátu, 10% glycerolu a 100 mM HEPES pufru při pil 7,6. Pro typické stanovení IC50 se připraví zásobní roztok obsahující všechny výše uvedené složky a aktivovaný p38 (5 nM). Alikvotní podíly zásobního roztoku se naplní do lahviček. Do každé lahvičky se vloží stanovený objem DMSO nebo inhibitoru v DMSO (konečná koncentrace DMSO při reakci je 5 %), smísí se a inkubuje se při teplotě místnosti po dobu 15 minut. Do každé lahvičky se přidá EGF peptidový receptor. KRELVEPLTPSGEAPNQAEER, fosforylový akceptor reakce p38 katalyzované kinázy (1). na konečnou koncentraci 200 μΜ. Reakce kinázy se iniciuje ATP (100 μΜ) a lahvičky se inkubují při teplotě 30 °C.
Po 30 minutách se reakce zastaví stejným objemem 10% trifluoroctové kyseliny (TFA).
Fosforylovaný peptid se stanoví HPLC analýzou. Oddělení fosforylovaného peptidu od nefosforylovaného peptidu se provádí na koloně s obrácenými fázemi (Deltapak, 5 μηι, 08 100D, díl ě. 011795) s binárním gradientem vody a acetonitrilu, každý s obsahem OJ % TFA. IGn (koncent50 race inhibitoru poskytující 50% inhibici) se stanoví vynesením % zbylé účinnosti proti koncentraci inhibitoru.
B. Inhibice účinnosti ATPasy
Tento test se provádí v přítomnosti IO111M MgCE, 25 mM β-glycerofosfátu, 10% glycerolu a 100 mM HEPES pufru při pH 7.6. Pro typické stanovení Ki, se Km pro A FP účinnosti A TPasy aktivované reakcí p38 stanoví bez přítomnosti inhibitoru a v přítomnosti dvou koncentrací inhibitoru. Připraví se zásobní roztok obsahující všechny výše uvedené složky a aktivovaný p38 (60 nM). Alikvotní podíly zásobního roztoku se naplní do lahviček. Do každé lahvičky se vloží stanovený objem DMSO nebo inhibitoru v DMSO (konečná koncentrace DMSO při reakci je 2.5 %), smísí se a inkubuje se při teplotě místnosti po dobu 15 minut. Reakce se iniciuje přidáním různých koncentrací ATP a potom se inkubuje při teplotě 30 °C. Po 30 minutách se reakce zastaví 50 μ| EDTA (OJ M, konečná koncentrace), pH 8,0. Produkt působení p38 A1 Pasy, ADP, se stanoví UPEC analysou.
Oddělení ADP od ATP se provádí na koloně s obrácenými fázemi (Supelcosil. LC—18. 3 μηι. díl č. 5-8985) za použití binárního rozpouštčdlového gradientu následujícího složení: rozpouštědlo A - OJ M fosfátový pufr obsahující 8 mM tetrabutylamoniurnhydrogensíran (Sigma Chemical Co., katalog č. T 7158), rozpouštědlo B rozpouštědlo A s 30 % methanolu.
Ki se stanoví z rychlostních údajů jako funkce inhibitoru a koncentrací ATP, Výsledky pro několik inhibitorů podle vynálezu jsou shrnuty v tabulce 6 níže.
-72CZ 299600 B6
Tabulka 6
sloučenina Κί(μΜ)
1 >20
2 15
_> 5
5 2,9
6 0.4
ιο Další inhibitory p38 podle vynálezu také inhibují účinnost ATPasy p38.
C. Inhibice 1L-1, TNF JL-6 a IL-8
Produkce v LPS-stímulovaných PBMC
Inhibitory se sériově zředí v DMSO z 20 mM zásobního roztoku. Připraví se alespoň 6 sériových zředění. Potom se připraví 4x inhibilorové zásobní roztoky přidáním 4 μΙ inhibitorového zředění na 1 ml RPMI 1640 media/10% fetální hovězí sérum. 4x inhibítorové zásobní roztoky obsahují inhibitor v koncentracích 80 μΜ, 32 μΜ. 12,8 μΜ, 5,12 μΜ, 2,048 μΜ, 0,819 μΜ, 0,328 μΜ.
2D 0,131 μΜ. 0,052 μΜ, 0.021 μΜ atd. 4\ inhibítorové zásobní roztoky se před použitím předehřejí na37°C.
Buňky ze sražených leukocytů z lidské čerstvé krve se oddělí od ostatních buněk ve Vaeutaineru CPF od firmy Becton & Diekinson {obsahující 4 ml krve a dostatek DPBS bez Mg /Ca- k napl25 není trubice) centrifugaci při 1500 x g po dobu 15 minut. Periferní krevní mononukleární buňky (PBMC) umístěné na vrcholu gradientu ve Vaeutaineru se odstraní a promyjí se dvakrát RPMI 1640 mediem/10% fetálním hovězím sérem. PBMC se shromáždí centrifugaci při 500 xg po dobu 10 minut. Celkový počet buněk se stanoví za použití Neubauerovy komory buněk a buňky se upraví na koncentraci 4.8 x 10ft buněk/ml v mediu kultury buněk (RPMI 1640 doplněném
10% fetálním hovězím sérem).
Alternativně se při testu použije přímo celá krev obsahující antikoagulační činidlo.
Do každé jamky 96-jamkové desky pro buněčnou kulturu se umístí 100 μΙ buněčné suspenze nebo celá krev. Potom se k buňkám přidá 50 μ| 4x inhibitorového zásobního roztoku. Nakonec se přidá 50 μΐ lipopolysacharidového (LPS) pracovního zásobního roztoku (16 ng/ml v mediu buněčné kultury), čímž se získá konečná koncentrace 4 ng/ml LPS v testu. Celkový testovací objem nosičové kontroly se tak upraví na 200 μ| přidáním 50 μΐ media buněčné kultury. PBMC buňky nebo celá krev sc potom inkubuje přes noc (po dobu 12 až 15 hodin) při teplotě 37 °C s 5 % CO? ve vlhké atmosféře.
Následující den se buňky mísí v třepačce po dobu 3 až 5 minut před centrifugaci pří 500 x g po dobu 5 minut. Sklidí se supematanty buněčné kultury a analyzují se pomoct ELISA pro hladiny IL-lb (R & D Systems, Quantikine kits, #DBL50), TIIN-a (BioSource, #KHC30l2), IL 6 (Endogen, #EH2-IL6) a 1L-8 (Endogen, #EII2-1L8) podle instrukcí výrobce. F.L1SA údaje se použijí pro vytvoření křivek dávka-odezva, z nichž se odvodí hodnoty IC5<,.
Výsledky pro test kinázy („kináza, pododstavec A výše), IL— I a TNI v LPS-stímulovaných PBMC („buňky) a IL 1. INF a IL 6 v celé krvi („WB) pro různé p38 inhibitory podle vynále50 zu jsou uvedeny v tabulce 7 níže:
-73Q7. 299600 B6
Tabulka 7 sl. kinasa buňka IL-1 buňka TNF W3 IL-1 Yi3 TNF W3 TL-6
TC 1 ICso TC2, TCÍ5 icso
2 * N.D. N.D. N.D. N.D, N.D.
3 + N.D. N.D. N,D. N.D. N.D.
5 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
6 + + ++ + N.D. N.D. N.D.
1 + + + N.D. N.D. N.D,
8 + + + N.D. N.D. N.D.
9 + + + N.D. N.D. N.D.
10 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
11 + + + N.D. N.D. N.D.
12 + + ++ ++ + + +
13 + + + N.D. N.D. N.D.
14 + ++ + N.D. N.D. N.D.
15 + ++ N.D. N.D. N.D.
sl. kir.asa buňka IL-l buňka TN? W3 TL- 1 WL TNF WB IL-í
v c. -LV50 ic5: ICS; ÍC,, -'“SO - T-,o
16 44 4 44 N.D. N.D. N.D.
17 4 4 4 N.D. N.D. N.D.
18 4 4 4 N.D: N.D. N.D,
19 4 4 4 N.D. N.D. N.D.
20 44 4 4 N.D. N.D. N.D.
21 44 44 4 N.D. N.D, N.D.
22 + 4 4 N.D. N.D, N.D.
23 44 44 4 4 4 4
24 44 4*+ 44 4 4 N.D,
25 44 44 4 N.D. N.D. N.D.
26 4 444 44 4 4 4
27 44 + 4 4 4 4
28 44 44 44 N.D. N.D. N.D.
29 +4 +4 44 N.D. N.D. N.D.
30 4 4 4 4 N.D. N.D.
31 4 4 + N.D. N.D. N.D.
32 44 4 + 4 4 4 4
33 44 4 + 44 4 4 4
34 4 4 4 N.D. N.D. N.D.
35 44 44 4 4 4 4
36 4 4 4 4 4 4
37 44 44 4 4 4 4
38 444 + 44 44 44 +4 44
39 44 4 4 N.D. N.D. N.D.
40 44 44 4 N.D. N.D. N.D.
41 444 444 444 N.D. N.D. N.D.
42 4 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
43 44 4 4 N.D. N.D. N.D.
44 44 4 4 N.D. N.D, N.D.
45 4+ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
46 ++ 4 4 N.D. N.D. N.D,
Q7. 299600 B6
sl. kinasa buňka IL-1 buňka TNF WB ZL-1 WB TNF WB IL-6
č. T''-1 1 ^50 T 1 '‘-SU iC5D IC5C IC,3
Al ++ + + + ΝΌ: N.D. N.D.
48 ++ + + + N,D. N.D. N.D.
49 ++ +++ + + + +
50 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
51 ++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
52 + + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
53 +++ +++ +++ +4—l· +++ +++
101 ++ +++ +++ + + ++
102 +++ +++ +++ + ++ ++
103 +++ +++ +++ + ++ ++
104 ++ ++ ++ + + +
105 ++ + + N.D. N.D. N.D.
106 +++ +++ +++ + ++ ++
107 + + + + N.D. N.D. N.D.
109 4-4- + +++ +++ + + ++
108 ++ + ++ +++ ++ +++ +++
110 + + + + N.D. N.D. N.D.
111 + + + + N.D. N.D. N.D.
112 + + ++ + + + +
113 ++ + +++ ++ + + -j-
114 + + + +++ +++ ++ ++ +++
115 ++ + +++ +++ + + +
116 + + + +++ ++ + + +
117 + + + +++ +++ ++ ++ +++
118 + + ++ ++ + + +
119 ++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
120 N.D. ++ + + + +
121 +++ +++ ++ + + +
122 ++ ++ + + + +
123 ++ ++ ++ + + +
-76CZ 299600 B6 $0
sl. kinasa buňka IL-1 ic5J buňka TNF T + 5í) WS IL-1 WB TNF Xso WB 11,- IC,
č. IC5a
124 4 4 4 N.D, N.D. N.D.
125 444 +44 +4+ 4 4 4
126 4 +4 4 N.D. N.D. N.D.
127 44+ 444 +4+ 4+ 44 +4 +
128 4 4 4 *N.D. N.D. N.D.
129 444 444 +44 4+ 4 4 +
130 4+4 + 4 4 N.D. N.D. N.D.
131 44+ +4 + 44 + N.D. N.D. N.D.
132 +4+ + 4 + 44 N.D. N.D. N.D.
133 +44 +4+ 444 N.D. N.D. N.D.
134 444 4+ 4 N.D. N.D. N.D.
135 444 + 4 4 4 4 4
136 4+4 4+4 44+ 4 4 4+
137 444 + 44 4+ 4 4 4+
138 44 444 4+ 4 + +4+
139 444 444 4 4 4 4
140 444 44+ +4+ 44 4 4+
141 444 +4+ 444 4 4 4
142 444 +4+ 4 + 4 +4+ + 44 4+4
143 4+ + +4+ + 4 4 -i. +
144 444 44+ 44 4 4 4 +
145 444 4+4 +4+ 44+ 4+4 4+4
201 + 4 4 4 4 4+4 4
203 + N.D. N.D, N.D. N.D. N.D.
204 4 N.D. N.D. N.D, N.D. N.D.
205 4 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
206 44 4 4 N.D. N.D. N.D.
207 4 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
208 N.D. 4+ N.D. N.D; N.D. N.D.
209 N.D. 4 N.D. N.D. N.D. N.D.
202/ + 44 44 ++ 4 4 4
-77CZ 299600 B6
si . kinasa buňka TL-l buňka TŽ Jr W3 IL- I z* 3 TNF W3 Tl-É
č. icí3 ic50 IC5- IC50 ica
301
302 +++ +++ ++ + + +
303 + X + +
304 + + +
305 +++ ++* + + + +
306 ++ ++ + + + +
307 ++ + + +
308 + N.D. N.D,. N.D, N.D. N.D.
309 ++ ++ ++ + + +
310 ++ + + N.D. N.D. N.D.
311 ++ + + N.D. N.D. N.D.
312 ++ + + + +
313 ++ + + N.D. N.D. N.D.
314 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
315 + N.D. N.D, N.D. 'N.D. N.D.
316 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
317 + + N.D. N.D. N.D.
318 ++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
319 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
320 ++T ++ ++ N.D. N.D. N.D.
321 X N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
322 + + N.D. N.D. N.D.
323 ++ ++ ++ N.D. N.D. N.D.
324 ++ ++ + N.D. N.D. N.D.
325 +++ ++ + + +
326 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
327 + + N.D, N.D. N.D. N.D. N.D.
328 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
329 ++ + + + +
330 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
331 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
sl. k línasa buňka IL- -1 buňka T\TF WB IL-1 WS TNF WS 1T-S
č. IC\3 ICS0 i<%, IC50 IC50 iciZ
332 ++ + + + +
333 ++ + + N.D. N.D. N.D.
334 + N.D. N.D. N.D. N.D, N.D.
335 ++ + + + + +
336 + N.D. N.D, N.D. N.D. N.D.
337 + N.D, N.D. N.D. N.D. N.D.
338 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
339 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
340 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
341 ++ ++ ++ N.D. N.D. N.D.
342 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
343 + N.D. N.D. N.D, N.D. N.D.
344 N.D. N.D. N.D, N.D. N.D.
345 + N.D. N.D. N.D, N.D. N.D.
346 ++ + + + + -r
347 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
348 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
349 + ++ + + + +
350 + ++ N.D. N.D. N.D.
351 + + N.D. N.D. N.D.
352 + N.D. N.D. N.D. N.D.
353 + 4- N.D. N.D. N.D.
354 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
355 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
356 4- N.D. N.D. N.D. N.D. N.D,
357 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
358 ++ + + N.D. N.D. N.D.
359 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
360 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
1 . kinasa buňka IL-1 buňka TN? W3 IL-1 WB INF W3 Xb-Ě
ICM TC5Q TC50 TCS0 ICso
361 + + ++ + N.D. N.D. N.D.
362 +++ ++ ++ + + +
363 +++ +++ ++ + + +
364 +++ +++ ++ + + +
365 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
366 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
367 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
368 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
369 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
370 N.D. N.D. N.D. N.D, N.D. N.D.
371 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
372 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
373 N.D. N.D, N.D. N.D. N.D. N.D.
374 ++ N.D. N.D, N.D. N.D, N.D.
375 ++ + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
376 4-+41 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
377 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
378 ++ + N.D, N.D. N.D. N.D. N.D.
379 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
380 ++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
381 4-4- N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
382 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
383 ++ + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
384 ++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
385 ++ N.D. N.D. N.D; N.D. N.D.
386 4* N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
387 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
388 +4-4- N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
389 ++ N.D. N.D. N.D, N.D. N.D,
390 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
sl. kínasa buňka IL- 1 buňka TNF WS IL- 1 WS TNF WS TL·' -6
č. ICjq 1CSŮ IC,- I CíQ TC 50
391 ++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
392 ++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
393 4+ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
394 444 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
395 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
396 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
397 + N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
393 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
399 444 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
1301 +++ N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
401 444 ++ +4 4 4 4
402 +++ +++ +4+ 4 4 4
403 +++ +++ 444 4 4 44
404 44+ +++ 444 4 4 4
405 +++ 44+ 44 N.D. N.D. N.D.
406 ++ +4 4 N.D. N.D. N.D.
407 +t- 4+ 4 N.D. N.D. N.D.
408 +++ 4+4 44 N.D. N.D. N.D,
409 +++ +4+ 44 + 4 4 44
410 +++ 4+4 4+4 +4 + 4 +4
411 ++- 444 4+4 + + +
412 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D.
'5o hodnoty pro kinázu, ..+++ znamená < '0,1 μΜ, ,.+Τ1 znamená mezi OJ a i 1.0 μΜ
a ,.+“ znamená >1,0 μΜ. Pro buněčný IL-1 a TNF hodnoty. „+++ znamená <0,1 μΜ, „++” znamená mezi 0,1 a 0,5 μΜ a „+ znamená >0,5 μΜ, Pro celou krev (WET) hodnoty. „+++“ znamená <0,25 μΜ. ,.+ f znamená mezi 0,25 a 0,5 μΜ a znamená >0.5 μΜ. Ve všech testech uvedených v tabulce níže ..N.D. znamená, že hodnoty nebyly stanoveny.
Další p38 inhibitory podle vynálezu také inhibují fosforylaci LGL peptidovcho receptoru a produkci IL-1, TNF a IL 6. jakož i IL-8 v LPS stimulovaných PBMC nebo v celé krvi.
-81 C7. 299600 B6
D. inhibice IL-6 a IL-8
Produkce v IL-i-stimulovaných PBMC
Tento test se provádí na PBMC přesné takových, jak bylo uvedeno výše. kromě toho. že se k testu přidá 50 μΙ IL-1 b pracovního zásobního roztoku (2 ng/ml media buněčné kultury) místo LPS pracovního zásobního roztoku.
Supematanty buněčné kultury se sklidí, jak je popsáno výše, a analyzují se pomocí ELISA na to hladiny IL-6 (Endogen, #LH2-IL6), a 11-8 (Endogen, #EH2-IL8) podle instrukcí výrobce.
ELISA údaje se použijí pro vytvoření křivek dávka-odezva. z nichž se odvodí hodnoty ICTq. Výsledky p38 inhibitoru, sloučeniny 6, jsou uvedeny v tabulce 8 níže:
Tabulka 8 testovaný cytokin ICS(1 (μΜ)
IL-6 0,6
1L-8 0,85
E. Inhibice LPS vyvolané prostaglandinové endoperoxid syntasy-2 (PGHS-2 nebo COX-2) Indukce PBMS
Lidské periferní mononuklcárni buňky se izolují ze srážených leukocytů čerstvé lidské krve centrifugací ve Vaeutainer CPT (Becton & Dickinson). 15 χ 106 buněk se naočkuje do 6-jamkové desky pro tkáňovou kulturu obsahující RPMI 1640 doplněný 10% fetálním hovězím sérem, 50 U/ml penicilinu, 50 pg/ml streptomycinu a 2 mM L-glutamincm. Přidá se sloučenina 6 (výše) na 0,2, 2,0 a 20 μΜ konečné koncentrace v DMSO. Potom se přidá LPS na konečnou koncentraci 4 ng/ml, čímž se vyvolá exprese enzymu. Konečný objem kultury je 10 ml na jamku.
Po inkubaci při teplotě 37 °C a 5% CO2 přes noc se sklidí buňky seškrábáním a následnou centrifugací, potom se odstraní supernatant a buňky se promyjí dvakrát ledově studeným DPBS (Dulbecco fosfátem pufrovaný solný roztok, BioWhiltaker). Buňky se lysují na ledu po dobu
10 minut v 50 μΐ studeného lysového pufru (20 mM Tris-HCI. pil 7,2, 150 mM NaCl, 1%
Triton-X-100, 1% deoxycholová kyselina, 0,1% SDS. 1 mM EDTA, 2% aprotinin (Sigma). 10 pg/ml pepstatin, 10 pg/ml leupeptin. 2 mM PMSL, ImM benzamidin, 1 mM DTT) obsahujícím 1 pl Benzonasy (DNAasa od firmy Merck). Koncentrace proteinu v každém vzorku sc stanoví za použití BCA testu (Pierce) a albuminu hovězího séra jako standardu, Potom se koncentrace proteinu v každém vzorku upraví na 1 mg/ml studeným lysovým pufrem. Ke 100 pl lyzátu se přidá stejný objem 2xSDS PAGE pufru a vzorek se vaří po dobu 5 minut. Proteiny (30 mg/proužek) se frakcionují podle velikosti na 4 až 20% SDS PAGE gradientových gelech (Novex) a potom se elektroforeticky přenášejí na nitrocelulózovou membránu po dobu 2 hodin při 100 mA vTowbinové přenosovém pufru (25 mM Tris, 192 mM glycin) obsahujícím 20% methanolu.
Membrána se předem zpracovává po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti blokovacím pufrem (5% nelučné sušené mléko v DPBS doplněné 0,1% Tweenem-20) a promyje se třikrát v DPBS/0,1% Tween-20. Membrána se inkubujc pres noc při teplotě 4 °C s 1:250 ředěnou monoklonální protilátkou anti-COX-2 (Transduction Laboratories) v blokovacím pufru. Po 3 promytích v DPBS/0,1% Tween-20 se membrána inkubuje 1:1000 ředěnou křenovou peroxidázou spojenou s ovčím
5o antisérem na myši Ig (Amersham) v blokovacím pufru po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Potom se membrána promyje třikrát v DPBS/0,1% Tween 20 a pro stanovení hladiny exprese COX-2 se použije ECL detekční systém (SuperSignal' ' CL-HRP Substráte System. Pierce).
-82C7. 299600 B6
Výsledky výše uvedeného testu naznačují, že sloučenina 6 inhibuje LPS vyvolanou PGHS-2 expresi v PBMC.
I když je zde uvedena řada provedení podle vynálezu, je samozřejmé, že základní smysl lze měnit, čímž se získají další provedení použitelná při způsobu podle vynálezu.

Claims (11)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1* Substituovaná bicyklická sloučenina obsahující dusík obecného vzorce la nebo lb každý ze substituentů Qi a Q2 je nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující pčličlenné až šestičlenné aromatické karboeyklické nebo heterocyklické kruhové systémy, nebo osmičlenné až desetičlenné bieyklické kruhové systémy sestávající z aromatických karboeykliekýeh kruhů, aromatic20 kých heterocyklických kruhů nebo kombinace aromatického karbocykliekého kruhu a aromatického heterocykl ického kruhu, kde heterocykl ieké kruhy obsahují I nebo 2 heteroatomy vybrané z atomů dusíku, kyslíku a síry;
    Q, je substituováno 1 až 4 substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující atom ha loge25 nu; alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NRE, OR'. OR2R' nebo CONRE; skupinu O-alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NRE, OR'. CO2R' nebo CONRE: dále skupiny NRE; OCÍE; CFy NO,. CO;R'; CONHR'; SR'; S(O2)N(R’)2; SCl·'-,; CN; N(R')C(O)RJ; N(R')C(O)OR'; N(R’)C(O)C(O)R'; N(R')S(O;)R'; N(R’)R'; N(Rj)2; ORj; 0C(O)Rj; OP(O)-,H2; N=CIl-N(R')2;
    30 3,4-inethylendíoxyskupinu; -NH-C(O) 0-01?—4—pyridin; -Nli-C(O)CH2-morfolin;
    -NH-C(O)CH2-piperazin: nebo NI I—<?<O)CH2—pyrrolidin; a
    Q? je popřípadě substituováno až 4 substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující atom halogenu: přímou nebo rozvětvenou alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě ?5 substituovanou skupinami NRE. OR', CO2RE S(O2)N(R')2. N=CTI-N(R')>, R’ nebo CONRE; skupinu O-alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NRE ORE CO2RE S(O2)N(R')2, N=CH-N(R')2, R’ nebo CONRE; dále skupiny NRE; OCF,; CF,; NO2; CO,R’; CONHR'; R\ OR5; Nl IR'; SR'; C(O)R’; C(O)N(R')R’; C(O)OR': SR'; S(O2)N(R')2; SCF,; N=CH-N(R')2; CN; -NII-C(=NH)-NH2; -CII2NII-C(=NH)-NIF; nclw
    40 -CH2-NH- imidazolin;
    kde R' je vybráno ze skupiny zahrnuj ící atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, alkeny lovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku nebo alkynyl o vou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku, fenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu substituovanou 1 až 3 substituenty nezávisle vybra-83 CZ 299600 B6 ným i ze skupiny zahrnující atom halogenu, methoxy skupinu, kyanoskupinu, nitroskupínu. aminoskupinu, hydroxyskupinu. methylovou skupinu nebo ethylovou skupinu;
    R’ je vybráno ze skupiny zahrnující pětičlenné až šestičlenné aromatické karbocyklické nebo 5 heterocyklické kruhové systémy, a
    R4 je alkylová skupina s I až 4 atomy uhlíku, popřípadě substituovaná skupinami N(R')2. OR', CO2R', CON(R')2 nebo SO2N(R)2; nebo pětičlenný až šestičlenný karbocyklický nebo heterocyklický kruhový systém, popřípadě substituovaný skupinami N(R')2. OR'. CO2R', CON(R')>
    κι nebo SO2N(RD2;
    X jc vybrán ze skupiny zahrnující -S-. -O-, -S(O2j-, -S(O) . -S(O2)-N(R2)-, N(R>S(O2)-. -N(R2)-C(Ó)O-, -O C(O)-N(R?H -C(O)-. -C(O)O-, -O-C(O)-. -C(O)N(R2)-, -N(Ř?)--C(O)-, -N(R2)-, -(C(R2)2 nebo -C<OR2)2-;
    každé R je nezávisle vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku. -R2, \(Rk -OR . -SR2. -C(O)-N(R )2. -S{O2)-N(R2)2 nebo -C(O) OR“, přičemž dvě přilehlá R jsou popřípadě vázána jedno na druhé a spolu s každým Y, ke kterým jsou vázána, tvoří čtyřčlenný až osmičlenný karbocyklický nebo heterocyklický kruh. nebo, pokud Y je N. jc R k němu navázané volný pár
    20 elektronů;
    R2 je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, alkylovou skupinu s I až 3 atomy uhlíku nebo alkenylovou skupinu se 2 až 3 atomy uhlíku, které jsou obě popřípadě substituovány skupinami -N(R% OR', -SR', -C(O)-N(R')2, -S(O3>-N(R')2. -C(O)-OR' nebo R3;
    Y je N nebo C;
    A. je-li přítomno, je zvoleno zN nebo CR';
    30 n je 0 nebo 1, přičemž, pokud n je 0, vazba mezi dusíkovým atomem v kruhu a uhlíkovým atomem nesoucím X-Q2 je jednoduchá vazba; a
    Ri jc vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, skupinu OH nebo —O—alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až 3 atomy uhlíku;
    nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
  2. 2. Substituovaná bicyklická sloučenina obsahující dusík obecného vzorce lc nebo kl
    40 kde A, Oi, Q2, R. R', X. Y au mají význam uvedený pro sloučeniny obecných vzorců la a lb; a
    R' je vybráno ze skupiny zahrnující atom vodíku, skupiny -CR7OH, C(())R4, -C(O)OR’. - CR'2OPO2,H2 a-PO,H2,
    -84CZ 299600 B6 nebo její farmaceuticky přijatelná sul.
  3. 3. Substituovaná cyklická sloučenina obsahující dusík obecného vzorce le, lf. Ig nebo lh ? kde
    Q; je pětičlenný až šestičlenný aromatický karbocyklický nebo heterocyklický kruhový systém; nebo osmičlenný až desetičlenný bicyklický kruhový systém obsahující aromatické karbocyklické kruhy, aromatické heterocyklické kruhy nebo kombinaci aromatického karbocyklického
    10 kruhu a aromatického hctcrocyklického kruhu, kde heterocyklické kruhy obsahují 1 nebo 2 heteroatomy vybrané z atomů dusíku, kyslíku a síry; kde Q; jc substituováno 1 až 4 substituenty. z nichž každý je nezávisle vybraný ze skupiny zahrnující atom halogenu: alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami NRC, OR'. CO2R' nebo CONRS; skupinu O—alkyl, kde alkylová část obsahuje 1 až. 3 atomy uhlíku, popřípadě substituovanou skupinami i? NRC, OR'. CO2R' nebo CONRC; dále skupiny NRC; OCR CR NOy CO?R': CONHR'; SR'; S(O2)N(R')>: SCF,: CN: N(R')C(O)RJ: N(R')C(O)ORJ; N(R')C(O)C(O)R'; N(R')S(()2)R4:
    N(R')RJ; N(R4),; OR1; OC(O)R'; OP(O),II. nebo N=CH-N(R')2; a A, Qj. Q2, R, R', X. Y a n mají význam uvedený v nároku 1;
    nebo její farmaceuticky přijatelná sůl.
  4. 4. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků I až 3, kde Qi je vybráno ze skupiny zahrnující fenylovou nebo pyridylovou skupinu obsahující 1 až 3 substituenty nezávisle vybrané ze skupiny
    2? zahrnující atom chloru, atom fluoru, atom bromu, skupinu -CH;, OCH;, -OH, -CF;, -OCR -O(CH2)2CH;. -NH2, 3.4-methylendioxyskupinu, skupinu -N(CH3)2, -NH-S(O2)--fenyl. -NH-C(0)O-CH2-4-pyrÍdin, -NH<’(O)CH2-morfolin, NH-C(O)CH2-N(CHR -NH-C(Ó)CFF-pipcrazin, -NH-C(O)CH2-pyrrolidin, -NH-C(O)C(O) morfolin, -NH-C(O)C(O)piperazin, -NH-C(O)C(O)-pyrrolidin, O C(O)CH2-N(CH;)2 nebo -0-{ΟΕ)?-Ν{ΟΊ;)2 a kde
    30 alespoň jeden z těchto substituentů je v poloze ortho.
  5. 5. Sloučenina podle nároku 4, kde Q, obsahuje alespoň dva substituenty, přičemž oba jsou v poloze ortho.
    - 8S c/. zyybtju bo
  6. 6. Sloučenina podle nároku 4. kde Qi je vybráno ze skupiny zahrnující:
    -87CZ 299600 B6
    -88CZ 299600 B6
  7. 7. Sloučenina podle nároku 6, kde Qj je vybráno ze skupiny zahrnující 2-fluor-6-trifluormethylfenyl, 2,6-difluorfenyl, 2,6-dichlorfenyl, 2-chlor-4-hydroxy fenyl. 2-chloiM-aminofenyl, 2,6-dichlor-4-aminofcnyl. 2,6-dichlor-3-aniinofeny 1, 2.6-dimelhyl-4-hydroxy fenyl,
    5 2—methoxy-3,5—dichlor^-—pyridyl. 2-chlor-4,5-methylendio\yfenyl nebo 2-chlor—4-(N-2morfo l i no-acetam i do) feny I.
  8. 8. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde Q2 je vybráno ze skupiny zahrnující fenylovou nebo pyridylovou skupinu a kde Q2 popřípadě obsahuje až 3 substiluenly. z nichž ío každý je nezávisle vy brán ze skupiny zahrnující atom chloru, atom fluoru, atom bromu, methylovou skupinu, ethylovou skupinu, isopropylovou skupinu, skupinu -OCH;, -OH. -Nil·,
    CF,. -OCH. -SCIl·,. C(O)OH, -C(O)OCH;, -CH2NH?, -N(CH;)2, -CH2-pyrrolidin, -CILOH. -CH2-N(CH;)2, CH2 piperazin. -NH-C(=NH)-NH2, —CH2—NI 1—C(—Ň H)—NI I? a -Cl l2-NN-imidazolin.
    -89CZ 299600 B6
  9. 9. Sloučenina podle nároku 8, kde Q: je vybráno ze skupiny zahrnující:
    CZ 299bUU B6 nesubstituovanou 2-pyridylovou skupinu nebo nesubstituovanou fenylovou skupinu.
  10. 10. Sloučenina podle nároku 9, kde Q? je vybráno ze skupiny zahrnuj ící fenyl 2-isopropylfenyl,
    5 3,4-dimethylfenyl 2 ethylfenyl 3-fluorfenyl 2-niethylfcnyl, 3-chlor-4-lluorfenyl, 3-ehlorfenyl. 2-karboxymethoxyfcnyI, 2-karboxy fenyl, 2-methyM-chlorfenyl, 2-bronifenyl 2—pyridyl. 2- methy lenhydroxy fenyl, 4-fluorfenyl, 2-methyM-fluor fenyl 2-chlor 4- fluor fenyl 2,4-difluorfenyl 2-hydro\y-4-lluor fenyl a 2 methy len hydroxy-4-fluor fenyl ío 11, Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde X je vybráno ze skupiny zahrnující -S-, -O- -S(O0 , -S(OH -NR2-, -C(R2)? nebo -C(O)-.
    12. Sloučenina podle nároku 10, kde X je S,
    15 13. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, kde n je 1 a A je N.
    14. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků I až 3, kde každé Y je C.
    15. Sloučenina podle nároku 14, kde každé R připojené k Y je nezávisle vybráno ze skupiny
    20 zahrnující atom vodíku a methylovou skupinu,
    - 92 cz zyyouu B6
    16. Sloučenina podle nároku 1. která je vybrána ze skupiny zahrnující kteroukoliv z následují cích sloučenin:
    -93CZ 299600 Bó
    Λ ί.
    struktura sl.č struktura β I
    N S'
    N S'
    N 'S'
    -94CZ 299600 B6
    -95 CZ 299600 B6
    S’ . č. Struktura
    Sl.č. Struktura
    -96CZ 299600 B6
    -97CZ 299600 B6
    Sl.č. Struktura Sl.č. Struktura
    43 -.OHj ζΑγΑ'ΟΗ, 49 a\JLw XT O%i· Ό- ÁbcHs Á. k 44 (/T 50 %χΝ·^ xF kÁ/k, :-Q il 51 53 'AAa fY -sAJ Ϊ F cu 52 Cr k-O
    -98CZ 299600 B6
    17. Sloučenina podle nároku 2. která je vybrána ze skupiny zahrnující kteroukoliv z následují cích sloučenin:
    Sl.č. Struktura Si. č. Struktura
    - 99 CZ 299600 B6 s:.č.
    Struktur a
  11. 11. č.
    siru/ ru r a
    - 100CZ 299600 Bó u/
    - 101 CZ 299600 B6 >l· ,č. Struktura Sl·. č. Suruktip-a
    -102CZ 299600 B6 si-č. Struktura Sl.č. Struktura
    18. Sloučenina podle nároku 3, kde Q-. je substituováno 2 až 4 substituenty. přičemž alespoň jeden z uvedených substituentů jc přítomen v poloze ortho vzhledem v místu připojení Q; na zbytek inhibitoru,
    19. Sloučenina podle nároku 18, kde obé polohy ortho jsou obsazeny jedním z uvedených nezávisle vybraných substituentů.
    - 103C7 299600 Bó
    20. Sloučenina podle nároku 19. kde Q? je monocyklicky karboeyklieký kruh a každý z uvedených orthosubstituentů na Qje nezávisle vybrán ze skupiny zahrnující atom halogenu a methylovou skupinu.
    21. Sloučenina podle nároku 19, kde Q;, obsahuje I až 2 substituenty kromě uvedených ortho substituentů, přičemž uvedené další substituenty jsou nezávisle vybrány ze skupiny zahrnující NR\, OR', C()?R'. CN, N(R')C(O)R4. N(R')C(O)OR4. N(R')C(O)C(O)Rl. N(R')S(O2)R4, N(R')R4, N(R')2, OR4. OC(O)R4, OP(O);H2 nebo N~CH-N(R')2.
    - 104CZ 299600 B6
    22. Sloučenina podle nároku 3. kterou je sloučenina obecného vzorce le a je vybrána ze skupiny zahrnující kteroukoliv z následujících sloučenin;
    - 105CZ 299600 B6
    23, Sloučenina podle nároku 3, kterou je sloučenina obecného vzorce Ig a je vybrána ze skupiny zahrnující kteroukoliv z následujících sloučenin:
    31. č. .Struktura Sl.č. Struktura
    - 106 C'Z 299600 B6
    - 107CZ 299600 B6
    - 108 Q.7. 299600 B6
    Sl.č, Struktura
    Sl.č. struktura
    - 109CZ 299600 B6
    -110CZ 299600 B6
    CZ 299600 Bb
    Sl.č. struktura Sl.č. Struktura
    -112CZ 299600 B6
    ¢.7. 299600 B6
    -114CZ 299600 B6
    24. Sloučenina podle nároku 3, kterou je sloučenina obecného v/orce Ih a je vybrána ze skupiny zahrnující kteroukoliv z následujících sloučenin:
    - 115 Q7. 299600 B6
    26. Použití sloučeniny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 24 k přípravě farmaceutického prostředku pro ošetřování nebo prevenci zánětlivých onemocnění, autoimunitních onemocněni, virových onemocnění, destruktivních poruch kostí, pro I i fe rač nich poruch, infekčních onemocnění, neuro-116CZ 299600 B6 degenerativních onemocnění, alergií, reperfúze/ischémie při mrtvici, ischémie myokardu, renální ischémie, srdečních záchvatů, angiogenních poruch, hypoxic orgánů, vaskulámí hyperplazie. srdeční hypertrofie, trombinem vyvolané agregace destiček nebo stavů spojených s prostaglandin -endoperoxid-syntázou-2.
    5 27. Použití podle nároku 26. při němž je prostředek určen pro ošetřování nebo prevenci zánětlivého onemocnění vybraného ze skupiny zahrnující akutní pankreatitidu. chronickou pankreatuidu, astma, alergie a syndrom respirační úzkosti dospělých.
    28, Použití podle nároku 26, při němž je prostředek určen pro ošetřování nebo prevenci autoimunitního onemocnění vybraného ze skupiny zahrnující glomerulonefritidu, revmatoidní artritito du, systémový lupus erythematosus, sklerodermii, chronickou thyroiditidu, Gravcsovu chorobu, autoimunitní gastritidu, diabetes, autoimunitní herno lyrickou anémií, autoimunitní neutropenii. thrombocytopenii, atopickou dermatitidu. chronickou aktivní hepatitidu, myastenii gravis. roztroušenou sklerózu, zánětlivé střevní onemocnění, uleerativní kolítidu, Crohnovu chorobu, psoriázu a onemocnění štěp versus hostitel.
    i? 29, Použití podle nároku 26. při němž je prostředek určen pro ošetřování nebo prevenci destruktivní choroby kostí vybrané ze skupiny zahrnující osteoaiiritidu, oslcoporózu a chorobu kostí související s m noh ocet ným my e lomem.
    30. Použití podle nároku 26. při němž je prostředek určen pro ošetřování nebo prevenci proliferační ho onemocnění vybraného ze skupiny zahrnující akutní myclogcnní leukémii, chronickou
    20 myelogenní leukémii, metastatický melanom. Kaposiho sarkom a mnohočetný myelom.
    31. Použití podle nároku 26. při němž je prostředek určen pro ošetřování nebo prevenci infekčního onemocnění vybraného ze skupiny zahrnující sepsi, septický šok a Shigellosu.
    32. Použití podle nároku 26, při němž je prostředek určen pro ošetřování nebo prevenci virového onemocnění vybraného ze skupiny zahrnující akutní h cpát itie kou infekci, HIV infekci a GMV
    25 retinitidu.
    33. Použití podle nároku 26, při němž je prostředek určen pro ošetřování nebo prevenci neurodegenerativního onemocnění vybraného ze skupiny zahrnující Alzheimerovu chorobu. Parkinsonovu chorobu, cerebrální ischemii a neurodegenerativní onemocnění způsobené traumatickým poraněním.
    30 34. Použití podle nároku 26, při němž je prostředek určen pro ošetřování nebo prevenci ischémie/reperfúze při mrtvici nebo myokardiální ischémie. renální ischémie, srdečních záchvatu, hypoxie orgánů nebo trombinem vyvolané agregace destiček.
    35. Použití podle nároku 26, při němž jc prostředek určen pro ošetřování nebo prevenci stavu spojeného s prostaglandin-endoperoxid-syntázou-2 vybraného ze skupiny zahrnující otok,
    35 horečku, analgezii a bolest.
    36. Použiti podle nároku 35, pří němž se uvedená bolest vybere ze skupiny zahrnující neuromuskulární bolest, bolest hlavy, bolest při rakovině, bolest zubů a artritickou bolest.
    37. Použití podle nároku 26, při němž je prostředek určen pro ošetřování nebo prevencí angiogenního onemocnění vybraného ze skupiny zahrnující solidní nádory, oční neovaskularizaci a
    4(i infantilní hemangiomy.
    45 Konce dokumentu
CZ0216399A 1996-12-18 1997-12-17 Heterocyklické slouceniny obsahující dusík jako inhibitory p38 proteinkinázy a farmaceutické prostredky s jejich obsahem CZ299600B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US3428896P 1996-12-18 1996-12-18
US08/822,373 US5945418A (en) 1996-12-18 1997-03-20 Inhibitors of p38
US08/862,925 US6147080A (en) 1996-12-18 1997-06-10 Inhibitors of p38

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ216399A3 CZ216399A3 (cs) 1999-09-15
CZ299600B6 true CZ299600B6 (cs) 2008-09-17

Family

ID=27364615

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0216399A CZ299600B6 (cs) 1996-12-18 1997-12-17 Heterocyklické slouceniny obsahující dusík jako inhibitory p38 proteinkinázy a farmaceutické prostredky s jejich obsahem

Country Status (29)

Country Link
US (1) US6147080A (cs)
EP (1) EP0951467B1 (cs)
JP (1) JP4171072B2 (cs)
CN (2) CN1284783C (cs)
AP (1) AP1136A (cs)
AT (1) ATE236165T1 (cs)
AU (1) AU738000B2 (cs)
BG (1) BG64533B1 (cs)
BR (1) BR9714415A (cs)
CA (1) CA2274825C (cs)
CZ (1) CZ299600B6 (cs)
DE (1) DE69720522T2 (cs)
DK (1) DK0951467T3 (cs)
EA (1) EA002855B1 (cs)
EE (1) EE04191B1 (cs)
ES (1) ES2202658T3 (cs)
HK (1) HK1023340A1 (cs)
HU (1) HUP0001125A3 (cs)
ID (1) ID21919A (cs)
IL (1) IL130349A0 (cs)
IS (1) IS5069A (cs)
NO (1) NO315047B1 (cs)
NZ (1) NZ336146A (cs)
PL (1) PL202464B1 (cs)
PT (1) PT951467E (cs)
SK (1) SK284578B6 (cs)
TR (1) TR199902194T2 (cs)
TW (1) TW521071B (cs)
WO (1) WO1998027098A1 (cs)

Families Citing this family (126)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7091181B2 (en) 1994-12-12 2006-08-15 Omeros Corporation Method of inhibition of pain and inflammation during surgery comprising administration of soluble TNF receptors
US6608060B1 (en) * 1996-12-18 2003-08-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
CA2306448A1 (en) 1997-10-16 1999-04-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Models and treatments for cardiac hypertrophy in relation with nf-at3 function
AU1924699A (en) 1997-12-19 1999-07-12 Smithkline Beecham Corporation Compounds of heteroaryl substituted imidazole, their pharmaceutical compositionsand uses
MY132496A (en) 1998-05-11 2007-10-31 Vertex Pharma Inhibitors of p38
WO1999061039A2 (en) * 1998-05-22 1999-12-02 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Novel composition for modulating ischemic cell death
US6858617B2 (en) 1998-05-26 2005-02-22 Smithkline Beecham Corporation Substituted imidazole compounds
EP1277740A1 (en) * 1998-06-12 2003-01-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
WO1999064400A1 (en) * 1998-06-12 1999-12-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated INHIBITORS OF p38
US6184226B1 (en) 1998-08-28 2001-02-06 Scios Inc. Quinazoline derivatives as inhibitors of P-38 α
AU762245B2 (en) * 1998-09-18 2003-06-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
AR023659A1 (es) 1998-09-18 2002-09-04 Vertex Pharma Un compuesto inhibidor de p38, una composicion farmaceutica que lo comprende y el uso de dicha composicion en el tratamiento y prevencion de estados patologicos
AU1127700A (en) * 1998-10-20 2000-05-08 Omeros Medical Systems, Inc. Irrigation solution containing mapk inhibitors and their use for treating pain and inflammation
DE69914357T2 (de) 1998-11-04 2004-11-11 Smithkline Beecham Corp. Pyridin-4-yl oder pyrimidin-4-yl substituierte pyrazine
UA73492C2 (en) 1999-01-19 2005-08-15 Aromatic heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
CA2360934A1 (en) 1999-02-22 2000-08-31 Lin-Hua Zhang Polycyclo heterocyclic derivatives as antiinflammatory agents
MXPA01009077A (es) 1999-03-12 2002-03-27 Boehringer Ingelheim Pharma Composiciones heterociclicos aromaticos como agentes anti-inflamatorios.
SI1165516T1 (en) 1999-03-12 2005-02-28 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Heterocyclic urea and related compounds useful as anti-inflammatory agents
JP2000281588A (ja) * 1999-03-30 2000-10-10 Sankyo Co Ltd ガンの予防又は治療薬及びそのスクリーニング方法
ES2260033T3 (es) * 1999-07-02 2006-11-01 Stuart A. Lipton Uso de los inhibidores p38 mapk en efermadades oftalmicas.
DE60024830T2 (de) 1999-07-09 2006-06-14 Boehringer Ingelheim Pharma Verfahren zur herstellung heteroarylsubstituierter ureaverbindungen
CA2388142C (en) * 1999-10-21 2008-12-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Heteroalkylamino-substituted bicyclic nitrogen heterocycles as inhibitors of p38 protein kinase
HUP0203477A3 (en) * 1999-10-21 2004-12-28 Hoffmann La Roche Alkylamino substituted bicyclic nitrogen heterocycles as inhibitors of p38 protein kinase, pharmaceutical compositions containing them and their preparations
WO2001038313A1 (en) 1999-11-23 2001-05-31 Smithkline Beecham Corporation 3,4-DIHYDRO-(1H)QUINAZOLIN-2-ONE COMPOUNDS AS CSBP/p39 kINASE INHIBITORS
WO2001038314A1 (en) * 1999-11-23 2001-05-31 Smithkline Beecham Corporation 3,4-dihydro-(1h)quinazolin-2-one compounds as csbp/p38 kinase inhibitors
US6759410B1 (en) 1999-11-23 2004-07-06 Smithline Beecham Corporation 3,4-dihydro-(1H)-quinazolin-2-ones and their use as CSBP/p38 kinase inhibitors
US6525046B1 (en) 2000-01-18 2003-02-25 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Aromatic heterocyclic compounds as antiinflammatory agents
US6608052B2 (en) 2000-02-16 2003-08-19 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Compounds useful as anti-inflammatory agents
US7235551B2 (en) 2000-03-02 2007-06-26 Smithkline Beecham Corporation 1,5-disubstituted-3,4-dihydro-1h-pyrimido[4,5-d]pyrimidin-2-one compounds and their use in treating csbp/p38 kinase mediated diseases
AU2001247700A1 (en) * 2000-03-22 2001-10-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
WO2002014281A1 (en) * 2000-08-11 2002-02-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyridine derivatives as inhibitors of p38
PE20020506A1 (es) * 2000-08-22 2002-07-09 Glaxo Group Ltd Derivados de pirazol fusionados como inhibidores de la proteina cinasa
US7998507B2 (en) * 2000-09-21 2011-08-16 Elan Pharma International Ltd. Nanoparticulate compositions of mitogen-activated protein (MAP) kinase inhibitors
JP4524072B2 (ja) 2000-10-23 2010-08-11 グラクソスミスクライン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 新規化合物
US6670357B2 (en) 2000-11-17 2003-12-30 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating p38 kinase-associated conditions and pyrrolotriazine compounds useful as kinase inhibitors
US6867300B2 (en) * 2000-11-17 2005-03-15 Bristol-Myers Squibb Company Methods for the preparation of pyrrolotriazine compounds useful as kinase inhibitors
CA2431904A1 (en) 2000-12-20 2002-08-01 Merck & Co., Inc. (halo-benzo carbonyl)heterocyclo fused phenyl p38 kinase inhibiting agents
WO2002064594A2 (en) * 2001-02-12 2002-08-22 F. Hoffmann-La Roche Ag 6-substituted pyrido-pyrimidines
GB0112348D0 (en) * 2001-05-19 2001-07-11 Smithkline Beecham Plc Compounds
GB2375771A (en) * 2001-05-24 2002-11-27 Univ Leeds Decellularisation of tissue implant material
US6552019B1 (en) 2001-06-11 2003-04-22 John Cochran Inhibitors of p38
US6794265B2 (en) 2001-08-02 2004-09-21 Ultradots, Inc. Methods of forming quantum dots of Group IV semiconductor materials
US6710366B1 (en) 2001-08-02 2004-03-23 Ultradots, Inc. Nanocomposite materials with engineered properties
US7005669B1 (en) 2001-08-02 2006-02-28 Ultradots, Inc. Quantum dots, nanocomposite materials with quantum dots, devices with quantum dots, and related fabrication methods
US20030066998A1 (en) 2001-08-02 2003-04-10 Lee Howard Wing Hoon Quantum dots of Group IV semiconductor materials
US6819845B2 (en) 2001-08-02 2004-11-16 Ultradots, Inc. Optical devices with engineered nonlinear nanocomposite materials
GB0124936D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124941D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124932D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124931D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124939D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124933D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124938D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
GB0124934D0 (en) * 2001-10-17 2001-12-05 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
WO2003060102A2 (en) * 2002-01-11 2003-07-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Crystal structures of jnk-inhibitor complexes and binding pockets thereof
AU2003209321A1 (en) * 2002-01-18 2003-07-30 Pharmacia Corporation Substituted pyridazinones as inhibitors of p38
KR101058292B1 (ko) * 2002-02-12 2011-08-22 글락소스미스클라인 엘엘씨 Ｐ38 억제제로 유용한 니코틴아미드 유도체
ES2299689T3 (es) 2002-02-25 2008-06-01 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Compuestos de cicloalquil-uera fusionada con benzo 1,4-disustituido, utiles para el tratamiento de enfermedades por citoquinas.
US20040034083A1 (en) * 2002-04-18 2004-02-19 Stephenson Diane T. Combination therapy for the treatment of Parkinson's disease with cyclooxygenase-2 (COX2) inhibitor(s)
JP4603268B2 (ja) 2002-04-19 2010-12-22 グラクソスミスクライン・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー 新規化合物
AU2003221753A1 (en) * 2002-04-23 2003-11-10 Bristol-Myers Squibb Company Aryl ketone pyrrolo-triazine compounds useful as kinase inhibitors
PL219736B1 (pl) 2002-04-23 2015-07-31 Bristol Myers Squibb Co Pochodna pirolotriazynoaniliny, kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie
US7388009B2 (en) * 2002-04-23 2008-06-17 Bristol-Myers Squibb Company Heteroaryl-substituted pyrrolo-triazine compounds useful as kinase inhibitors
TW200400034A (en) * 2002-05-20 2004-01-01 Bristol Myers Squibb Co Pyrazolo-pyrimidine aniline compounds useful as kinase inhibitors
EP1513821B1 (en) * 2002-05-23 2007-10-31 Cytopia PTY Ltd Protein kinase inhibitors
EP1707205A2 (en) 2002-07-09 2006-10-04 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Pharmaceutical compositions of anticholinergics and p38 kinase inhibitors in the treatment of respiratory diseases
GB0217757D0 (en) 2002-07-31 2002-09-11 Glaxo Group Ltd Novel compounds
NZ574520A (en) 2002-11-27 2011-02-25 Dmi Biosciences Inc Use of casein which is at least 10% dephosphorylated for the treatment of diseases and conditions mediated by increased phosphorylation
GB0308186D0 (en) * 2003-04-09 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
GB0308185D0 (en) * 2003-04-09 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
GB0308201D0 (en) * 2003-04-09 2003-05-14 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
ATE482200T1 (de) * 2003-05-01 2010-10-15 Bristol Myers Squibb Co Als kinaseinhibitoren geeignete arylsubstituierte pyrazolamidverbindungen
EP1633758B1 (en) 2003-05-15 2011-11-23 Arqule, Inc. Imidazothiazoles and imidazoxazole derivatives as inhibitors of p38
WO2005000298A2 (en) * 2003-06-03 2005-01-06 Novartis Ag 5-membered heterocycle-based p-38 inhibitors
BRPI0411825B8 (pt) 2003-06-26 2021-05-25 Novartis Ag inibidores de p38 quinase a base de heterociclo de 5 elementos, seus processos de preparação e seus usos, bem como composição farmacêutica
WO2005007632A1 (en) * 2003-07-18 2005-01-27 Pharmacia Corporation Substituted pyridazinones as inhibitors of p38
EP1990338B1 (en) 2003-07-25 2010-09-22 Novartis AG Biphenylcyclopropylamides as p-38 Kinase inhibitors
GB0318814D0 (en) * 2003-08-11 2003-09-10 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
US7419978B2 (en) * 2003-10-22 2008-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Phenyl-aniline substituted bicyclic compounds useful as kinase inhibitors
ES2528302T3 (es) 2003-12-03 2015-02-06 Ym Biosciences Australia Pty Ltd Heterociclos con 6 anillos de nitrógeno fenilsustituidos como inhibidores de la polimerización de microtúbulos
GB0402143D0 (en) * 2004-01-30 2004-03-03 Smithkline Beecham Corp Novel compounds
US7829560B2 (en) 2004-07-08 2010-11-09 Arqule, Inc. 1,4-disubstituted naphthalenes as inhibitors of P38 MAP kinase
US7504521B2 (en) * 2004-08-05 2009-03-17 Bristol-Myers Squibb Co. Methods for the preparation of pyrrolotriazine compounds
US20060035893A1 (en) 2004-08-07 2006-02-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical compositions for treatment of respiratory and gastrointestinal disorders
PE20060421A1 (es) 2004-08-12 2006-06-01 Bristol Myers Squibb Co Procedimiento para preparar un compuesto de pirrolotriazina anilina como inhibidores de cinasa
WO2006021848A1 (en) * 2004-08-27 2006-03-02 Ranbaxy Laboratories Limited Anti-inflammatory agents
US20080051416A1 (en) * 2004-10-05 2008-02-28 Smithkline Beecham Corporation Novel Compounds
EP2258704A1 (en) 2004-10-19 2010-12-08 ArQule, Inc. Synthesis of imidazooxazole and imidazothiazole inhibitors of p38 map kinase
PE20060777A1 (es) 2004-12-24 2006-10-06 Boehringer Ingelheim Int Derivados de indolinona para el tratamiento o la prevencion de enfermedades fibroticas
US20060178388A1 (en) * 2005-02-04 2006-08-10 Wrobleski Stephen T Phenyl-substituted pyrimidine compounds useful as kinase inhibitors
MY145343A (en) 2005-03-25 2012-01-31 Glaxo Group Ltd Novel compounds
CA2603163A1 (en) 2005-03-25 2006-10-05 Glaxo Group Limited Process for preparing pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-one and 3,4-dihydropyrimido[4,5-d]pyrimidin-2(1h)-one derivatives
PE20100741A1 (es) 2005-03-25 2010-11-25 Glaxo Group Ltd COMPUESTOS DERIVADOS DE 3,4-DIHIDROPIRIMIDO[4,5-d]PIRIMIDIN-2(1H)-ONA COMO INHIBIDORES DE QUINASA p38
EP1868612A4 (en) 2005-03-25 2010-03-24 Glaxo Group Ltd NOVEL CONNECTIONS
US20060235020A1 (en) * 2005-04-18 2006-10-19 Soojin Kim Process for preparing salts of 4-[[5-[(cyclopropylamino)carbonyl]-2-methylphenyl]amino]-5-methyl-N-propylpyrrolo[2,1-f][1,2,4]triazine-6-carboxamide and novel stable forms produced therein
GB0512429D0 (en) * 2005-06-17 2005-07-27 Smithkline Beecham Corp Novel compound
US7473784B2 (en) * 2005-08-01 2009-01-06 Bristol-Myers Squibb Company Benzothiazole and azabenzothiazole compounds useful as kinase inhibitors
WO2007021710A1 (en) * 2005-08-12 2007-02-22 Merck & Co., Inc. Heterobicyclic compounds useful as p38 kinase inhibiting agents
CA2627497C (en) 2005-10-28 2014-10-14 Takeda Pharmaceutical Company Limited Heterocyclic amide compound and use thereof
BRPI0708644A2 (pt) * 2006-03-07 2011-06-07 Bristol-Myers Squibb Company compostos de pró-fármaco de anilina de pirrolotriazina úteis como inibidores de cinase
EP2083816A2 (en) * 2006-10-27 2009-08-05 Brystol-Myers Squibb Company Heterocyclic amide compounds useful as kinase inhibitors
US7943617B2 (en) 2006-11-27 2011-05-17 Bristol-Myers Squibb Company Heterobicyclic compounds useful as kinase inhibitors
CA2681420A1 (en) * 2007-03-20 2008-09-25 Cadila Pharmaceuticals Limited P38 inhibitors
EP1992344A1 (en) 2007-05-18 2008-11-19 Institut Curie P38 alpha as a therapeutic target in pathologies linked to FGFR3 mutation
EP2108641A1 (en) * 2008-04-11 2009-10-14 Laboratorios Almirall, S.A. New substituted spiro[cycloalkyl-1,3'-indo]-2'(1'H)-one derivatives and their use as p38 mitogen-activated kinase inhibitors
EP2111861A1 (en) 2008-04-21 2009-10-28 Ranbaxy Laboratories Limited Compositions of phosphodiesterase type IV inhibitors
JP2011525183A (ja) 2008-06-20 2011-09-15 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー キナーゼ阻害剤として有用なイミダゾピリジンおよびイミダゾピラジン化合物
CN102131806A (zh) * 2008-06-20 2011-07-20 百时美施贵宝公司 用作激酶抑制剂的三唑并吡啶化合物
WO2010038428A1 (ja) * 2008-09-30 2010-04-08 武田薬品工業株式会社 タキサン系抗がん剤の置き換え薬
EP2393806B1 (en) 2009-02-06 2017-10-25 Elan Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of jun n-terminal kinase
GB0902648D0 (en) 2009-02-17 2009-04-01 Argenta Discovery Ltd Pharmaceutical compounds and compositions
GB0908317D0 (en) * 2009-05-14 2009-06-24 Argenta Discovery Ltd Pharmaceutical compounds and compositions
WO2012031057A1 (en) 2010-09-01 2012-03-08 Bristol-Myers Squibb Company Bms- 582949 for the treatment of resistant rheumatic disease
CN103842362B (zh) 2011-05-09 2017-05-24 爱普制药有限责任公司 用于治疗阿尔茨海默氏病的组合物和方法
EP3553169B1 (en) 2011-12-28 2021-11-03 Kyoto Prefectural Public University Corporation Normalization of culture of corneal endothelial cells
CN103772392A (zh) * 2012-10-23 2014-05-07 杨子娇 一类治疗房角狭窄的化合物及其用途
US10813920B2 (en) 2013-11-14 2020-10-27 The Doshisha Drug for treating corneal endothelium by promoting cell proliferation or inhibiting cell damage
CN106659723A (zh) 2014-07-09 2017-05-10 爱普制药有限责任公司 用于治疗神经病症的方法
WO2017075274A1 (en) 2015-10-27 2017-05-04 Children's Hospital Medical Center Use of mapk inhibitors to reduce loss of hematopoietic stem cells during ex vivo culture and/or genetic manipulation
US20190060286A1 (en) 2016-02-29 2019-02-28 University Of Florida Research Foundation, Incorpo Chemotherapeutic Methods
US11466008B2 (en) 2017-09-18 2022-10-11 Eip Pharma, Llc Co-crystals of neflamapimod (VX-745)
US10342786B2 (en) 2017-10-05 2019-07-09 Fulcrum Therapeutics, Inc. P38 kinase inhibitors reduce DUX4 and downstream gene expression for the treatment of FSHD
KR20200066655A (ko) 2017-10-05 2020-06-10 풀크럼 쎄러퓨틱스, 인코포레이티드 DUX4의 발현을 저감시키기 위한 p38 저해제의 용도
MX2020009228A (es) 2018-03-08 2021-01-08 Incyte Corp Compuestos diolicos de aminopirazina como inhibidores de fosfoinositida 3-cinasas-gamma.
WO2020010003A1 (en) 2018-07-02 2020-01-09 Incyte Corporation AMINOPYRAZINE DERIVATIVES AS PI3K-γ INHIBITORS
WO2020108659A1 (zh) 2018-11-30 2020-06-04 上海医药集团股份有限公司 含氮杂环类化合物及其组合物、制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995031451A1 (en) * 1994-05-16 1995-11-23 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
WO1996021654A1 (en) * 1995-01-12 1996-07-18 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5716972A (en) * 1993-01-13 1998-02-10 Smithkline Beecham Corporation Pyridyl substituted imidazoles
IL110296A (en) * 1993-07-16 1999-12-31 Smithkline Beecham Corp Imidazole compounds process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
AU6691994A (en) * 1994-02-10 1995-08-29 Vladimir Ivanovich Ivanov Device for phono-electrophoresis
EA001203B1 (ru) * 1995-10-06 2000-12-25 Мерк Энд Ко., Инк. Замещенные имидазолы, обладающие антиканцерогенной и цитокин-ингибирующей активностью
US5717100A (en) * 1995-10-06 1998-02-10 Merck & Co., Inc. Substituted imidazoles having anti-cancer and cytokine inhibitory activity
GB9523675D0 (en) * 1995-11-20 1996-01-24 Celltech Therapeutics Ltd Chemical compounds
ZA97175B (en) * 1996-01-11 1997-11-04 Smithkline Beecham Corp Novel substituted imidazole compounds.
WO1997044467A1 (en) * 1996-05-20 1997-11-27 Signal Pharmaceuticals, Inc. MITOGEN-ACTIVATED PROTEIN KINASE p38-2 AND METHODS OF USE THEREFOR
AU708883B2 (en) * 1996-06-10 1999-08-12 Merck & Co., Inc. Substituted imidazoles having cytokine inhibitory activity
GB9613021D0 (en) * 1996-06-21 1996-08-28 Pharmacia Spa Bicyclic 4-aralkylaminopyrimidine derivatives as tyrosine kinase inhibitors
CA2260213C (en) * 1996-07-11 2005-03-29 Pfizer Inc. Pyridylpyrrole compounds useful as interleukin- and tnf antagonists
WO1998006715A1 (en) * 1996-08-09 1998-02-19 Smithkline Beecham Corporation Novel piperazine containing compounds
US5945418A (en) * 1996-12-18 1999-08-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995031451A1 (en) * 1994-05-16 1995-11-23 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds
WO1996021654A1 (en) * 1995-01-12 1996-07-18 Smithkline Beecham Corporation Novel compounds

Also Published As

Publication number Publication date
CZ216399A3 (cs) 1999-09-15
ES2202658T3 (es) 2004-04-01
CN1244867A (zh) 2000-02-16
EP0951467A1 (en) 1999-10-27
ATE236165T1 (de) 2003-04-15
AP1136A (en) 2003-01-31
DK0951467T3 (da) 2003-07-21
NZ336146A (en) 2000-09-29
CN1519240A (zh) 2004-08-11
AU5610598A (en) 1998-07-15
EE9900252A (et) 1999-12-15
EA199900559A1 (ru) 2000-02-28
HK1023340A1 (en) 2000-09-08
BR9714415A (pt) 2000-04-18
US6147080A (en) 2000-11-14
NO315047B1 (no) 2003-06-30
PL334133A1 (en) 2000-02-14
NO992960L (no) 1999-08-17
NO992960D0 (no) 1999-06-17
TR199902194T2 (xx) 2000-06-21
AP9901565A0 (en) 1999-06-30
BG64533B1 (bg) 2005-06-30
CA2274825A1 (en) 1998-06-25
CN1284783C (zh) 2006-11-15
EE04191B1 (et) 2003-12-15
SK284578B6 (sk) 2005-07-01
BG103575A (en) 2000-06-30
DE69720522T2 (de) 2003-11-27
PL202464B1 (pl) 2009-06-30
EP0951467B1 (en) 2003-04-02
PT951467E (pt) 2003-08-29
EA002855B1 (ru) 2002-10-31
JP2001506266A (ja) 2001-05-15
DE69720522D1 (de) 2003-05-08
IL130349A0 (en) 2000-06-01
SK80599A3 (en) 2000-01-18
ID21919A (id) 1999-08-12
IS5069A (is) 1999-06-07
WO1998027098A1 (en) 1998-06-25
JP4171072B2 (ja) 2008-10-22
CN1153770C (zh) 2004-06-16
CA2274825C (en) 2008-08-26
TW521071B (en) 2003-02-21
HUP0001125A3 (en) 2002-01-28
AU738000B2 (en) 2001-09-06
HUP0001125A2 (hu) 2000-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ299600B6 (cs) Heterocyklické slouceniny obsahující dusík jako inhibitory p38 proteinkinázy a farmaceutické prostredky s jejich obsahem
JP4704560B2 (ja) ｐ３８の複素環式インヒビター
JP2012149085A (ja) Ｐ３８のインヒビターとしてのピリジン誘導体
JP2009542680A (ja) キナーゼカスケードを調節するためのビアリル組成物および方法
US20110281878A1 (en) INHIBITORS OF p38
JP2004536057A (ja) ｐ３８インヒビターとして使用する２，５−二置換ピリジン、ピリミジン、ピリダジンおよび１，２，４−トリアジンの誘導体
JP2004506042A5 (cs)
AU2001283237A1 (en) Pyridine derivatives as inhibitors of p38
KR100559917B1 (ko) ｐ38 프로테인 키나아제의 저해제로서 치환된 질소를 함유하는헤테로사이클
MXPA00011076A (en) Heterocyclic inhibitors of p38

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20091217