CZ2002355A3 - Inhibitory pyrimidin-2,4,6-trion metaloproteinázy - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká inhibitorů pyrimidin -2,4,6- trion metaloproteinázy a farmaceutických preparátů a způsobů léčby a zánětlivých, nádorových a dalších onemocnění.

Dosavadní stav techniky

Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, jsou inhibitory zinkových metaloendopeptidáz, obzvláště těch, které patří do podrodin matrixových metaloproteináz (také nazývaných MMP nebo matrixiny) a reprolysinů z rodiny metzincinů (Rawlings et al., Methods in Enzymology, 248, 183-228 (1995) a Stocker et al., Protein Science, 4, 823-840 (1995)).

MP podrodina enzymů obsahuje v současnosti sedmnáct členů (MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11,

MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-16, MMP-17, MMP-18, MMP19, MMP-20). MMP enzymy jsou nejvíce známy pro jejich úlohu v obratu proteinů extracelulární matrix, čímž hrají důležitou úlohu v normálních fyziologických postupech, jako jsou například reprodukce, vývoj a diferenciace. MMP enzymy jsou navíc exprimovány v mnoha patologických situacích, v kterých se vyskytuje abnormální obrat pojivové tkáně. Například bylo prokázáno, že MMP-13, enzym s výraznou aktivitou degradující kolagen typu II (hlavní kolagen v chrupavce, je zvýšeně exprimován v chrupavce při artróze ( Mitchell et al. , J Clin Invest., 97, 761 (1996)). Další MMP enzymy (MMP-2, MMP-3, MMP8, MMP-9, MMP-12) jsou také zvýšeně exprimovány v chrupavce při artróze a je očekáváno, že inhibice některých z těchto MMP enzymů sníží nebo zablokuje urychlený úbytek chrupavky typický pro onemocnění kloubů, jako je například artróza nebo revmatoidní artritida.

• · fl ·

II II ···· · · • · · · · · · · ·· · · · · · · ·

Savčí reprolysiny jsou známy pod zkratkou ADAM (A Disintegrin And Metalloproteinase) (Wolfberg et al., J Cell Biol., 131, 275-278 (1995)) a obsahují navíc k doméně podobné metaloproteinázám i dezintegrinovou doménu. Do dnešní doby bylo identifikováno 23 odlišných enzymů ADAM.

Enzym ADAM-17, také známý jako enzym konvertuj ící tumor nekrotizující faktor-alfa (TÁCE), je nejznámšjším enzymem ADAM. Enzym ADAM-17 (TÁCE) je zodpovědný za štěpení tumor nekrotizujícího faktoru-alfa (TNF-α, také známý jako kachektin) navázaného na buňku. TNF-α hraje roli v mnoha infekčních a autoimunních onemocněních (W Friers, FEBS Lettesr, 285, 199 ( 1991) ) . Dále bylo prokázáno, že TNF-α je hlavním mediátorem zánětlivé odpovědi v sepsi a v septickém šoku (Spooner et al., Clinical Immunology and Immunopathology, 62 Sil (1992)). Existují dvě formy TNF-α, typ II membránový protein o relativní molekulové váze 26000 (26 kD) a rozpustná 17 kD forma tvořená proteinem navázaným k buňce specifickým proteolytickým štěpením. Rozpustná 17 kD forma TNF-κ je uvolňována buňkou a je sdružena se škodlivými účinky TNF-a.

Forma TNF-α je také schopná na místech vz.dctlen.ycn o a.

místa syntézy. Inhibitory TÁCE tedy zabraňují tvorbě TNF-α a zabraňují škodlivým účinkům rozpustného faktoru.

Vybrané sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu jsou účinnými inhibitory agrekanázy, enzymu důležitému pro degradaci agrekanu chrupavky. Agrekanáza patří pravděpodobně také mezi enzymy ADAM (Tortorella et al. , Science 284, 1664 (1999)). Úbytek agrekanu z chrupavkové matrix je důležitým faktorem v progresi onemocnění kloubů, jako jsou například artróza a revmatoidní artritis a agrekanáza pravděpodobně zpomaluje nebo blokuje ztrátu chrupavky u těchto onemocnění. Jiné enzymy ADAM, které jsou ·· · ♦ · · · · · · • · · · · · · • · · · ···· exprimovány za patologických situacích, zahrnují enzym ADAM TS-1 (Kuno, et al., J Biol Chem 272, 556-562 (1997)) a enzymy ADAM 10, 12 a 15 (Wu et al. , Biochem, Biophys Comm, 235, 437442, (1997)). Jak se zvyšují znalosti týkající se exprese, patologických substrátů a onemocnění sdružených s enzymy ADAM, bude oceněn plný význam úlohy inhibice této třídy enzymů.

Je známo, že u různých patologických situací jsou exprimovány různé kombinace enzymů MMP a ADAM. U jednotlivých onemocnění mohou být proto preferovány inhibitory se specifickými selektivitami pro jednotlivé enzymy ADAM a/nebo MMP. Revmatoidní artritis je například zánětlivé onemocnění · kloubů charakterizované vysokými hladinami TNF a ztrátou složek kloubní matrix. V tomto případě může být přednostní léčbou léčba sloučeninou, která inhibuje enzymy TÁCE a agrekanázu, stejně tak jako enzymy MMP, jako je například MMP-13. Na druhou stranu u méně zánětlivých onemocnění, jako je například artróza, mohou být preferovány sloučeniny, které inhibují enzymy MMP degradující matrix, jako jsou například enzymy MMP13, ale nikoli TÁCE.

Vynálezci také objevili, že je možné identifikovat inhibitory definované vzorcem I s diferenciálními metaloproteinázami a aktivitou reprolysinu ( přednostně inhibiční aktivita vůči MMP13) . Jedna skupina přednostních inhibitorů definovaných vzorcem I, kterou byly vynálezci schopni identifikovat, zahrnují inhibitory, které selektivně inhibují enzym MMP-13 přednostně před enzymem MMP-1.

Inhibitory matrixových metaloproteináz a reprolysinu jsou dobře známy v literatuře. Publikace PCT WO 98/58925 publikovaná 30. prosince 1998 se specificky týká inhibitorů MMP na bázi pyrimidin 2,4,6 trionu. Publikace European Patent Publication 606,046 publikované 13. července 1994 se týká •· ·· ·· ···· ·· ·· ··· < · · · ···· . ·· ······ ·· * ·· ···· ·· ··· ·· ···· určitých heterocyklických inhibitorů MMP. Patent United States Patent 5,861,510 vydaný 19. ledna 1999 se týká cyklických arylsulfonylamino hydroxyamových kyselin, které jsou užitečné jako inhibitory MMP. Publikace PCT WO 98/34918 publikovaná 13. srpna se týká heterocyklických hydoxyamových kyselin zahrnujících určité dialkyl substituované sloučeniny, které js.-ou užitečné jako inhibitory MMP. Publikace PCT WO 96/27583 a WO 98/07697 publikované 7. března 1996 a 26. února 1998 se týkají arylsulfonyl hydroxyamových kyselin. Publikace PCT WO 98/03516 publikovaná 29. ledna 1998 se týká fosfinátů s aktivitou MMP. Publikace PCT 98/33768 publikovaná 6. srpna 1998 se týká N-nesubstituovaných arylsulfonylamino hydroxyaminových kyselin. Publikace PCT Publication WO 98/08825 a WO 9808815, obě publikované 5. března 1998, se týkají určitých heterocyklických inhibitorů MMP. Patentové přihlášky United States Patent 60/096232 a 60/096256, obě zaregistrované 12. srpna 1998, se také týkají MMP na bázi heterocyklické hydroxyamové kyseliny a inhibitorů TÁCE. Každá z výše uvedených publikací je tímto začleněna jako reference ce-lým svým obsahem.

Popis vynálezu

Předkládaný vynález se týká sloučenin definovaných vzorcem:

(O kde R¹ je vodík, (Ci-C₄) perfluoroalkyl, (Ci-C₈) alkyl nebo (C₃C₈)- cykloalkyl, kde řečené ( Cx-Cs) alkyl nebo (C3-C₈) cykloalkyl mohou volitelně obsahovat jeden až tři heteroatomy nezávisle

9 9 vybrané ze skupiny obsahující kyslík, >NR⁵ a síru, kde řečené (Ci-C8) alkyl nebo (C3-C8) cykloalkyl mohou být volitelně substituovány jedním až dvěmi substituenty nezávisle vybranými ze skupiny obsahující (Ci-C4) alkyl, (C6-C10) aryl, (C2-Cio) heteroaryl, OH, NH2, (Cx-C4) alkylamino, di [ (Cx-Cj alkyl]amino, (C3-C8) cykloalkylamino, (C3-C8) cykloalkylamino (Ci-C4) alkylamino, (Ci-C8) alkoxy, -CONH2, -CONHR⁴, -NOC(R⁴)2 a (C₃-C₈) cykloalkyl, kde řečený ( C₃-C₈) cykloalkyl může volitelně obsahovat jeden nebo dva heteroatomy nezávisle vybrané z >NR⁵, kyslíku a síry.

R² a R³ jsou nezávisle vybrané ze skupiny obsahující vodík nebo (Cx-C4) alkyl, kde řečený ( Ci-C4) alkyl může volitelně obsahovat jeden heteroatom vybraný ze skupiny obsahující kyslík, >NR⁵ nebo síru, a řečený ( Cx-C₄) alkyl může být volitelně substituován (C₆-C₁₀) arylem, (C₂-Ci₀) heteroarylem, OH, NH₂, (Ci-C₄) alkylamino, di[(Ci-C₄) alkyl] amino, (C₃-C₈) cykloalkylamino, (C₃-C₈) alkylamino (0χ-0₄) alkylamino, (Ci-C₄) alkoxy, -C0N(R⁴)₂ a (C₃-C₈) cykloalkylem; kde řečený ( C₃-C₈) cykloalkyl může obsahovat jeden nebo dva heteroatomy nezávisle vybrané z >NR⁵, kyslíku a síry;

X je vybráno ze skupiny obsahující kyslík, síru, >S0₂, >S=0, >NR⁴, .CH2O-, -OCH2, -CH2S-, -CH2(S=O)-, -CH2SO2-, -SCH2-, -soch2, -SO2CH2-, -N(R⁴)CH2-, -CH₂N(R⁴)-, -N(R⁴)SO₂- a -S0₂N(R⁴)

R⁴, kdekoli se vyskytuje, je nezávisle vybrán ze skupiny obsahující vodík a (Ci-C₄) alkyl;

R⁵, kdekoli se vyskytuje, je nezávisle vybrán ze skupiny obsahující vodík a (0₂-0₄) alkyl, (C₆-C₁₀) aryl, (C₂-Ci₀) heteroaryl, OH, CONH₂, CONHR⁴, -CON(R⁴)₂ a (C₃-C₈) cykloalkyl;

·· ·· ·· ·«·· ·· • · · · · · · · * · · · · · · · ·

Υ je vybráno ze skupiny obsahující vazbu, kyslík, síru, >S0₂, >S=0, >NH, -CH₂-, _CHO₂-, -OCH₂, -CH₂S-, -CH₂(S=O)-, -CH₂SO₂-, SCH₂-, -SOCH₂-, -SO₂CH₂~, -NHCH₂-, -CH₂NH~, -CH₂CH₂-, -CH=CH-, NHSO₂- a -SO₂NH-;

Ar je (C₆-Cio) aryl nebo (C₂-C₁₀) heteroaryl; a

Z je (C₆-Cio) aryl, (C₃-C₈) cykloalkyl, (C₃-C₈) cykloalkyl (C_xC₄) alkyl, nebo (C₂-Ci₀) heteroaryl; kde jeden nebo dva kruhové uhlíkové atomy řečených ( C₃-C₈) cykloalkylu nebo (C₃-C₈) cykloalkyl (C_x-C₄) cykloalkylu mohou být volitelně nahrazeny heteroatomy nezávisle vybranými ze skupiny obsahující kyslík, síru a NR⁵;

Kde Ar¹ a Z mohou být volitelně substituovány na jakémkoli z kruhových uhlíkových atomů schopných tvorby další vazby jedním až třemi substituenty nezávisle vybranými z F, Cl, Br, CN, OH, (C_x-C₄) alkyl, (Ci-C₄) perf luoroalkyl, (C_x-C₄) perfluoroalkoxy, (Ci-C₄) alkoxy, a (C₃-C₈) cykloalkyloxy;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Předkládaný vynález se také týká farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí nebo sloučenin definovaných vzorcem I. Kyseliny, které jsou používány k přípravě farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí výše zmíněných zásditých sloučenin jsou takové soli, které tvoří netoxické kyselé adiční soli, tj. soli obsahující farmakologicky přijatelné anionty, jako jsou například hydrochloridové, hydrobromidové, hydrojodidové, nitrátové, sulfátové, bisulfátové, fosfátové, kyselé fosfátové, acetátové, laktátové, citrátové, kyselé citrátové, taratrátové, bitartarátové, sukcinátové, maleátové, fumarátové, glukonátové, sacharátové, benzoátové, metansulfonátové, etansulfonátové, benzensulfonátové, p·· 44 4444 44 44 • 444 44 4 4444 • · · 4 4 · 4 4 ·4 4 4 • 4 4 44 4 444 4 4

4 4 4.4 4 4 4 · · ' «4 4444 44 444 44 4444 toluensulfonátové a pamoátové [tj. l,l'-metylen -bis- (2hydroxy -3- naftoátové)] soli.

Vynález se také týká zásaditých adičních solí definovaných vzorcem I. Chemické zásady, které mohou být použity jako činidla k přípravě farmaceuticky přijatelných zásaditých solí těchto sloučenin definovaných vzorcem I, které jsou kyselé svým charakterem, jsou takové sloučeniny, které tvoří netoxické zásadité soli s takovými sloučeninami. Takové netoxické zásadité soli zahrnují, ale nejsou omezeny na sloučeniny odvozené od farmakologicky přijatelných kationtů, jako jsou například kationty alkalických kovů (například draselné a sodné) a kationty kovů alkalických zemin ( například kalciové a hořečnaté) amonné nebo aminové adiční soli rozpustné ve vodě, jako jsou například N-metylglukamin( meglumin) , a nižší alkanolamonium a další zásadité soli farmaceuticky přijatelných organických aminů.

Termín vazba, jak je zde použitý ve skupině Y, znamená, že skupiny Ar¹ a Z jsou přímo připojeny prostřednictvím vazby uhlík-uhlík, takže vytvářejí převislé arylové kruhy, jako je například difenyl.

Termín alkyl, jak je zde používán, zahrnuje, ledaže je uvedeno jinak, nasycené monovalentní uhlovodíkové radikály mající nevětvené, větvené nebo cyklické skupiny nebo jejich kombinace. Alkylové skupiny, kdekoli se vyskytují, mohou být volitelně substituovány vhodným substituentem.

Termín alkenyl, jak je zde používán, zahrnuje, ledaže je uvedeno jinak, uhlovodíkové radikály obsahující alespoň jednu olefinovou vazbu a mající nevětvené, větvené nebo cyklické skupiny nebo jejich kombinace.

44 ·· 4444 44 ··

4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 ·· · · · ··· 4 4 · ··· · · 4 4·· '·· ···· 44 444 44 4444

Termín alkynyl, jak je zde používán, zahrnuje, ledaže je uvedeno jinak, uhlovodíkové radikály obsahující alespoň jednu trojnou vazbu mezi uhlíkovými atomy a mající nevětvené, větvené nebo cyklické skupiny nebo jejich kombinace.

Termín alkoxy, jak je zde používán, zahrnuje O-alkylové skupiny, kde alkyl je stejný, jako je definováno výše.

Termín halo, jak je zde uvedeno jinak, fluor, chlor, nebo chlor.

používán, zahrnuje, ledaže je brom nebo jod, přednostně fluor

Termín aryl, jak je zde používán, zahrnuje, ledaže je uvedeno jinak, organický radikál odvozený z aromatického uhlovodíku odstraněním jednoho nebo více vodíkových . atomů, jako jsou například fenyl nebo naftyl, volitelně substituovaný 1 až 3 vhodnými substituenty, jako jsou například fluo, chlor, kyano, nitro, trif luorometyl, (Ci-C₆) alkoxy, (C₆-Ci₀) aryloxy, (C₃-C₈) cykloalkyloxy, trifluorometoxy, difluorometoxy, nebo (Ci-C₆) alkyl.

Termín heteroaryl, jak je zde používán, zahrnuje, ledaže je uvedeno jinak, organický radikál odvozený od aromatické heterocyklické sloučeniny odstraněním jednoho nebo více vodíkových atomů, jako jsou například pyridyl, furyl, pyrolyl, thienyl, izothiazolyl, imidazolyl, benzimidazolyl, tetrazolyl, pyrazinyl, pyrimidyl, chinolyl, izochinolyl, benzofuryl, izobenzofuryl, benzothienyl, pyrazolyl, indolyl, izoindolyl, purinyl, karbazolyl, thiazolyl, oxazolyl, benzthiazolyl, nebo benzoxazolyl, volitelně substituovaný 1 až 3 vhodnými substituenty, jak je definováno níže, jako jsou fluoro, chloro, trif luorometyl, (Ci-C₆) alkoxy, (C₆-Ci₀) aryloxy, (C₃-C₈) cykloalkyloxy, trifluorometoxy, difluorometoxy, nebo (Ci-C₆) alkyl.

• 4 «4 »* ···* ·♦ ·· • · · « · · · · · 4 4

4 · 444·· 44 4 • 4 4 · ♦ · 4 4 4 4 4 • 44 44 · 4 4 4

4··· ·· ··· ·· ····

Vhodný substituent znamená chemicky a farmaceuticky přijatelnou funkční skupinu, . tj. skupinu, která neruší inhibiční aktivitu vynalezených sloučenin. Takové vhodné substituenty mohou být rutinně vybrány osobami znalými oboru. Ilustrativní příklady vhodných substituentů zahrnují, ale nejsou omezeny na halogenové skupiny, perfluoroalkylové skupiny, perfluoroalkoxy skupiny, alkylové skupiny, hydroxy skupiny, oxo skupiny, merkapto skupiny, alkylthio skupiny, alkoxy skupiny, arylové nebo heteroarylové skupiny, aryloxy nebo heteroaryloxy skupiny, karboxy skupiny, amino skupiny, alkylové a dialkylamino skupiny, karbamoylové skupiny, alkylkarbonylové skupiny, alkoxykarbonylové skupiny, alkylaminokarbonylové skupiny, dialkylamino karbonylové skupiny, arylkarbonylové skupiny, aryloxykarbonylové skupiny, alkylsulfonylové skupiny, arylsulfonylové skupiny a podobně.

Některé sloučeniny definované vzorcem I obsahují chirální centra a proto existují v různých enantiomerních formách. Tento vynález se týká všech optických izomerů, enantiomerů, diastereomerů a stereoizomerů sloučenin definovaných vzorcem I a jejich směsí. Sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu také existují v různých tautomerních formách. Vynález se také týká všech tautomerů definovaných vzorcem I.

Přednostní sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, jsou takové sloučeniny, kde R² a R³ jsou každý vodík. Další přednostní sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, zahrnují sloučeniny, kde X je kyslík, -OCH₂-, -CH₂O-, přednostněji kde X je kyslík, přednostněji kde Y je vazba, kyslík, síra, CH₂, >SO₂, -OCH₂, nebo CH₂O, přednostněji kde Y je kyslík.

Další formy vynálezu zahrnují takové sloučeniny definované vzorcem I, kde X je síra, >S0₂, -SCH₂, CH₂S, -CH₂SO₂-, -SO₂CH₂-, *» ·» «» ♦··· ·♦ 99 • 9 V t «9* 0··« • · V · · 99· · · * η A »·· ·· ·· ··

-L V *« 9··· ·· ·<· 99 99·· přednostněji kde Y je vazba, kyslík, síra, CH₂, >SO₂, -OCH₂-, CH₂O-, nej přednostněji kde Y je kyslík.

Další formy vynálezu zahrnují takové sloučeniny definované vzorcem I, kde X je >NR⁴, -CH2NR⁴, nebo -NR4CH₂-, . přednostněji kde Y je vazba, kyslík, síra, CH₂, >S0_2í -OCH₂-, -CH₂O-, přednostněji kde Y je -OCH₂-, -CH₂O-, nej přednostněj i kde Y je kyslík.

Další formy vynálezu zahrnují takové sloučeniny definované vzorcem I, kde X je -N(R⁴)SO2- nebo -SO2N(R⁴), přednostněji kde Y je vazba, kyslík, síra, CH2, >SO₂, -OCH₂-, -CH₂O-, přednostněji kde Y je kyslík, -OCH₂-, nej přednostněj i kde Y je kyslík.

Další přednostní sloučeniny jsou takové sloučeniny, kde Ar¹ je volitelně substituovaný fenyl.

Další formy vynálezu zahrnují takové sloučeniny definované vzorcem I, kde Z je (C₆-Ci₀) aryl, přednostně fenyl, volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty, přednostně žádným, jedním nebo dvěmi substituenty nezávisle vybranými ze skupiny obshující F, Cl, Br, -CN, OH, (Ci-C₄) alkyl, (Ci-C₄) perfluoralkyl, (Ci-C₄) perfluoralkoxyl, (Ci-C₄) alkoxy a (C₃-C₈) cykloalkoxy.

Další formy vynálezu zahrnují takové sloučeniny definované vzorcem I, kde Z je (C₃-C₈) cykloalkyl (tj . (C₃-C₈) cykloalkyl nebo (C₃-C₈) cykloalkyloxy-(Ci-C₄) alkyl), kde jeden nebo dva kruhové uhlíkové atomy řečeného (C₃-C₈) cykloalkylu mohou být volitelně nahrazeny heteroatomy nezávisle vybranými ze skupiny obsahující kyslík, síru, nebo NR⁵, kde R⁵ je vybrané ze skupiny obsahující vodík, (Ci-C4) alkyl, (C6-C10) aryl, (C2-C10) heteroaryl, OH, CONH2, CONHR⁴, -CONHR⁴, -NOC(R⁴)2 a (C₃-C₈) • · ····

cykloalkyl. Takové přednostní skupiny zahrnují cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cykllohexyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, N-metyl-3-azetidinyl, piperazinyl, piperidinyl, 1,3-oxazolidin-4-on-5-yl, 1,3-oxazolidin-2,4dion-5-yl,

4,5-dihydro-1,2-oxazolidin-3 -on-4-y1,

1,31,31,2thiazolidin-4-on-5-yl, imidazolidin-4-on-5-yl, pyrzplidin-3-on-4-yl,

1.3- thiazolidin-2,4-dion-5-yl,

1.3- imidazolidin-2,4-dion-5-yl, tetrahydro-1,3-oxazin-4-on-5-yl, tetrahydro-1,3-oxazin-2,4-dion-5-yl, morfolinyl, morfolin-3on-2-yl, morfolin-3,5-dion-2-yl, 2,3-dihydro-l,4-oxazin-3-on2-yl, tetrahydro-1,3-thiazin-4-on-5-yl, tetrahydro-1,3 thiazin-2,4-dion-5-yl, thiomorfolinyl, thiomorfolin-3-on-2-yl, thiomorfolin-3,5-dion-2-yl, 2,3-dihydro-1,4-thiazin-3-on-2-yl, hexahydro-1,2-diazin-3-on-4-yl, 4,5-dihydro-2H-pyridazin-3-on4-yl, hexahydro-1,3-diazin-2,4-dion-5-yl, piperazin-2-on-3-yl, tetrahydro-1,3,4-thiadiazin-5-on-6-yl, 5,6-dihydro-l,3,4thiadiazin-5-on-6-yl, 1,3,4-oxadiazin-5-on-6-yl, 5,6-dihydro1.2.4- oxadiazin-5-on-6-yl, 1,2,4-oxadiazin-3,5-dion-6-yl a

1.2.4- triazin-6-on-5-yl, přednostně cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, N-metyl-3-azetidinyl, piperazinyl, piperidinyl, Ν'metyl piperidinyl a morfolinyl, přednostněji cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, tetrahydrofuranyl a tetrahydropyranyl, nejpřednostněji cyklopropyl, tetrahydrofuranyl a tetrahydropyranyl.

Další formy vynálezu zahrnují ty sloučeniny definované vzorcem I, kde Z je (C₃-C₈) cykloalkyl (C1.-C4) alkyl, kde jeden nebo dva kruhové uhlíkové atomy řečeného ( C₃-C₈) cykloalkyl (C1-C4) alkylu mohou být volitelně nahrazeny heteroatomy nezávisle vybranými ze skupiny obsahující kyslík, síru, nebo >NR⁵, kde R⁵ je vybráno ze skupiny obsahující vodík, (C1-C4) alkyl, (C6-C10) aryl, (C2-C10) heteroaryl, OH, -CONH2, -CONHR⁴, -NOC(R⁴)2, a (C₃C₈) cykloalkyl. Přednostní cykloalkylová a heterocykloalkylové ·4· · • · · kruhy jsou stejné, jako je popsáno výše. Přednostními alkyly řečeného ( C₃-C₈) cykloalkyl (C_x-C₄) alkylu jsou metylen a etylen.

Další formy vynálezu zahrnují ty sloučeniny definované vzorcem I, kde Z je (C₂-C₁₀) heteroaryl, přednostně pyridyl, furyl, pyroyl, thienyl, izothiazolyl, imidazolyl, benzimidazolyl, tetrazolyl, pyrazinyl, pyrimidyl, chinolyl, izochinolyl, benzofuryl, izobenzofuryl, benzothienyl, pyrazolyl, indolyl, izoindolyl, purinyl, karbazolyl, izoxazolyl, thiazolyl, oxazolyl, benzthiazolyl, nebo benzoxazolyl, přednostněji pyridyl, pyrimidyl, nebo pyrazolyl, nejpřednostněji pyridyl; kde každý řečený ( C₂-C₁₀) heteroaryl může být volitelně substituován 1 až 3 vhodnými substituenty, jako jsou například fluoro, chloro, trifluorometyl, (C!-C₆) alkoxy, (C₆-C₁₀) aryloxy, trifluorometoxy, difluorometoxy nebo (Ci-C₆) alkyl.

Další přednostní sloučeniny vynálezu zahrnují ty sloučeniny, kde Ar¹ je fenyl nebo (C₂-Ci₀) heteroaryl, přednostně pyridyl, furyl, pyroyl, thienyl, izothiazolyl, imidazolyl, benzimidazolyl, tetrazolyl, pyrazinyl, pyrimidyl, chinolyl, izochinolyl, benzofuryl, izobenzofuryl, benzothienyl, pyrazolyl, indolyl, izoindolyl, purinyl, karbazolyl, izoxazolyl, thiazolyl, oxazolyl, benzthiazolyl, nebo benzoxazolyl, přednostněji fenyl, pyridinyl, pyrazinyl, pyrimidyl, pyrimidyl, nejpřednostněji pyridyl nebo fenyl volitelně substituovaný 1 až 3 vhodnými substituenty, jako jsou například fluoro, chloro, trifluorometyl, ( Ci-C₆) alkoxy, (C₆-C₁₀) aryloxy, trif luorometoxy, dif luorometoxy nebo (Ck-Cg) alkyl.

Další přednostní sloučeniny vynálezu zahrnují ty sloučeniny, kde Ar¹ a Z jsou substituovány jakýmikoli kruhovými atomy uhlíku schopnými tvorby další vazby jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny obsahující F, Cl,

Br, -CN, OH, (C!-C₄) alkyl, (Cx-C₄) perfluoroalkyl, (Cx-C₄) perfluoroalkoxy, (Ci-C₄) alkoxy a (C₃-C₈) alkyloxy.

Nejpřednostnější sloučeniny vynálezu zahrnují ty sloučeniny definované vzorcem I, kde X je kyslík, Y je vazba, kyslík, síra, -CH₂-, >SO₂, -OCH₂-, -CH₂O-; R¹ je vodík nebo (Ci-C₄) alkyl, kde řečený ( Ci-C₄) alkyl může volitelně obsahovat jeden až dva heteroatomy nezávisle vybrané z kyslíku a >NR⁵, kde řečený ( Cx-C4) alkyl může být také volitelně substituován jedním až třemi substituenty (přednostně žádným, jedním nebo dvěmi substituenty) nezávisle vybranými ze skupiny obsahující (Ci-C4) alkyl, OH, NH2, (Ci-C4) alkylamino, di[(Ci~C4) alkyl] amino, (Ci-C4) alkoxy, -CONH2, -C0NHR⁴ a NOC(R⁴)2; a R² a R³ jsou nezávisle vybrány ze skupiny obsahující vodík a (Ci-C₄) alkyl.

Další formy vynálezu zahrnují ty sloučeniny definované vzorcem I, kde R¹ je (Cx-C4) alkyl volitelně obsahující jeden až tři heteroatomy ( přednostně dva heteroatomy oddělené alespoň jedním uhlíkovým atomem, přednostně kde řečeným heteroatomem je -NH- nebo 0, ne j přednostněj i 0), kde řečený ( Ci-C4) alkyl je substituován OH, NH2, (Cx-C4) alkylamino, di [ (Ci-C4) alkyl] amino, (Cx-C4) alkoxy nebo -N0C(R⁴)2, přednostně di [ (Cx-C₄) alkyl] amino.

Další formy vynálezu zahrnují ty sloučeniny definované vzorcem I, kde alespoň jeden z R² nebo R³ je (Ci-C₄) alkyl, volitelně substituovaný jedním heteroatomem (přednostně je řečeným heteroatomem -NH- nebo -0-, nejpřednostněji -0-), kde řečený (Ci-C₄) alkyl je substituován jednou nebo dvěmi skupinami nezávisle vybranými z (C_e-C₁₀) arylu nebo (C₂-Ci₀) heteroarylu.

Další přednostní sloučeniny zahrnují ty sloučeniny, kde:

R¹ je metyl; R² a R³ jsou každý vodík; X je kyslík; Y je kyslík; a Z je (C_s-C₁₀) aryl;

• · · · • ··

R1 je n-butyl; R2 a R3 jsou	každý	vodík; X	je	kyslík; Y je
kyslík; a Z je	(C6-Cio) aryl;
R1 je metyl; kyslík; a Z je	R2 a R3 jsou (Cs-Cio) aryl;	každý	vodík; X	je	kyslík; Y	je
R1 je n-butyl; kyslík; a Z je	R2 a R3 jsou (C6-Clo) aryl;	každý	vodík; X	je	kyslík; Y	je

Specifické vybrány ze 5-Metyl-5přednostní sloučeniny definované vzorcem skupiny obsahuj ící:

(4-fenoxy-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

jsou

5-Metyl-5- (4-(4-fluorofenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-n-Butyl-5- (4-fenoxy-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5-n-Butyl-5- (4-(4'-fluorofenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-fenyl-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (3-fenyl-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion; a

5-Metyl-5- (4-benzyloxy-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

Dalši sloučeniny vynálezu zahrnují:

5-Metyl-5- (4-(4'-chlorofenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

• 4 · · ♦ * • 4 4

4 4

4444 ·

• 4 4 4 • «

4 <

4·4 ·· · 4 · · *

4 4 · ·

4444

5-Metyl-5- (4-(4'-kyanofenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(4'-trifluorometylfenoxy)-fenoxy) -pyrimidin 2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(4'-metoxyfenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(3'-chlorofenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(3-fluorofenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(3'-trifluorofenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(3-chlorofenylmetoxy)-fenoxy)

2,4,6-trion;

-pyrimidin

5-Metyl-5- (4-(4^Z-fluorofenylmetoxy)-fenoxy) -pyrimidin

2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(4-fluoro -2'- chloro-fenylmetoxy) -fenoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(4-fluoro -2'- fluoro-fenylmetoxy) -fenoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(4-fluoro -2'- metyl-fenylmetoxy) -fenoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

• · ie ·..·»..*

5-Metyl-5- (4-(4'-fluoro -2'- trifluorometyl-fenylmetoxy) fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(4'-fluoro -2'- cyklopropyl-fenylmetoxy) fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(pyridin -2- yl) - fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(4-fluoro-pyridin -2- yl) - fenoxy) -pyrimidin 2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(4-chloro-pyridin -2- yl) - fenoxy) -pyrimidin 2,4,6-trion;

5-Metyl-5trion;	(4-(pyridin -4-	yl)-	fenoxy)	-pyrimidin	-2,4,6-
5-Metyl-5trion;	(4-(pyridin -3-	yl)-	fenoxy)	-pyrimidin	-2,4,6-
R — C —> Υ «Xtrion;	(4-(pyrimidin -2-	yi) -	fenoxy)	-pyrimidin	-2,4,6-
5-Metyl-5trion;	(4-(pyrimidin -4-	yU-	fenoxy)	-pyrimidin	-2,4,6-
5-Metyl-5trion;	(4-(pyrazin -3-	yU-	fenoxy)	-pyrimidin	-2,4,6-
5-Metyl-5trion;	(4-(pyrazin -4-	yU-	fenoxy)	-pyrimidin	-2,4,6-

• · ·

I · · · · ·· ···· ··

1,5-Dimetyl -5- (4-(4-fluorofenylmetoxy) - fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

1-Etyl, 5-metyl -5- (4-(4'-fluorofenylmetoxy) - fenoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

1-(2-metoxyetyl)-5-metyl -5- (4-(4'-fluorofenylmetoxy) fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

1-(2-dimetylamino-etyl)-5-metyl -5- (4-(4'-fluorofenylmetoxy)

- fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

1-Cyklopropylmetyl -5- metyl -5- (4-(4-fluorofenylmetoxy) fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Dimetylaminometyl -5- (4-(4'-fluorofenylmetoxy) - fenoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

5-(2-Dimetylamino-etyl) -5- (4-(4-fluorofenylmetoxy) fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5-(2-metoxyetyl) -5- (4-(4-fluorofenylmetoxy) - fenoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Cyklopropylmetyl -5- (4-(4'-fluorofenylmetoxy) - fenoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Etyl -5- (4-(4-fluorofenylmetoxy) - fenoxy) -pyrimidin 2,4,6-trion;

5-Trifluorometyl -5- (4-(4-fluorofenylmetoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

fenoxy) • fl flfl « flfl ·· • · · * • · · • flfl fl • · · • fl flflfl ·

5-Izopropyl -5- (4-(4'-fluorofenylmetoxy) - fenoxy) -pyrimidin

-2,4,6-trion;

5-Izobutyryl -5- (4-(4'-fluorofenylmetoxy) - fenoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl -5- (4-(4~fluorofenylmetoxy) - fenylthio) -pyrimidin

-2,4,6-trion;

5-Metyl -5- (4-(4'-fluorofenylmetoxy) - fenylsulfoňyl) pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl -5- (4-(4'-fluorofenylmetoxy) - fenylsulfoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl -5- (4-(4'-íluorofenylmetoxy) - fenylamino) -pyrimidin

-2,4,6-trion;

5-Metyl -5- (N-metyl-N-4-(4-fluorofenylmetoxy) - fenylamino) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5- (4-(4-fluorofenoxy) - fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5- (4-(4'-chlorofenoxy) - fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(4'-fluorofenyl) - fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(4'-chlorofenyl) - fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(4-fluorofenyl) - fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (3-(4'-chlorofenyl) trion;

- fenoxy) -pyrimidin -2,4,65-Metyl-5- (5-(4'-fluorofenoxy) -2- pyridyloxy) -pyrimidin 2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (2-(4'-fluorofenoxy) -5- pyridyloxy) -pyrimidin 2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (2-(4-fluorofenoxy) -6- pyrazinyloxy) -pyrimidin 2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (2-(4'-fluorofenoxy) -6- pyrimidyloxy) -pyrimidin 2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(cyklopropylmetoxy) -fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(cyklobutylmetoxy) -fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(cyklopentylmetoxy) -fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

5-Metyl-5- (4-(3-tetrahydrofuranylmetoxy) -fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

5-Metyl-5- (4-(4'-tetrahydropyranylmetoxy) -fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion; a

5-Metyl-5- (4-(N-metyl -3- azetidinylmetoxy) -fenoxy) pyrimidin -2,4,6-trion;

nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

φφφ· • φ φφφφ záněty, tísně, Alzheimerovu transplantací, chorobu, orgánovou alergickou

Předkládaný vynález se také týká farmaceutického preparátu pro léčbu onemocnění vybraných ze skupiny obsahující artritis ( včetně artrózy a revmatoidní artrity), nespecifické střevní Crohnovu nemoc, emfyzém, akutní syndrom respirační astma, chronickou obstrukční plicní nemoc, toxicitu způsobenou kachexii, alergické reakce, kontaktní hypersenzitivitu, nádorová onemocnění (jako jsou například nádorová invaze, nádorové metastázy, solidní nádory zahrnující rakovinu tlustého střeva, nádory prsu, plic a prostaty a hematopoetické malignity zahrnující leukémie a lymfomy) , tkáňové ulcerace, restenózy, periodontální chorobu, epidermolýzis bulosa, osteoporózu, uvolnění umělých kloubních implantátů, aterosklerózu (zahrnující rupturu aterosklerotického plátu), aortální aneurysma (zahrnující aneurysma abdominální aorty a mozkové aneurysma) , městnavé srdeční selhání, infarkt myokardu, mozkovou mrtvici, mozkovou poranění míchy, neurodegenerativní chronická) , autoimunní onemocnění, ischémii, trauma hlavy, onemocnění ( akutní a

Huntingtonovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, migrénu, depresi, mozkovou amyloidovou kognitivní zlepšení, roztroušenou poranění, popáleniny, sklerózu, makulární diabetes, periferní neuropatii, bolesti, angiopatii, nootropické nebo amyotrofickou laterální sklerózu, okulární angiogenezi, korneální degeneraci, abnormální hojení ran, korneální zjizvení, skleritis, AIDS, sepsi, septický šok a další onemocnění charakterizovaná metaloproteinázovou aktivitou a další onemocnění charakterizovaná reprolysinovou aktivitou u savců včetně člověka, obsahující množství sloučeniny definované vzorcem I nebo její farmaceuticky přijatelné soli účinné v léčbě těchto onemocnění a farmaceuticky přijatelný nosič.

Předkládaný vynález se také týká farmaceutického preparátu pro inhibici a) matrix metaloproteináz nebo jiných metaloproteináz hrajících roli v degradaci matrix, nebo b) savčího reprolysinů (jako je například agrekanáza, nebo enzymy ADAM TS-1, 10, 12, 15 a 17, nejpřednostněji agrekanáza, nebo enzym ADAM-17) u savce včetně člověka obsahující účinné množství sloučeniny definované vzorcem I nebo její farmaceuticky přijatelné soli.

Předkládaný vynález se také týká způsobu léčby onemocnění vybraného ze skupiny obsahující artritis (včetně artrózy a revmatoidní artrity) , nespecifické střevní záněty, Crohnovu nemoc, emfyzém, akutní syndrom respirační tísně, astma, chronickou obstrukční plicní chorobu, Alzheimerovu nemoc, toxicitu způsobenou orgánovou transplantací, kachexii, alergické reakce, alergickou kontaktní hypersenzitivitu, nádorová onemocnění (jako jsou například nádorová invaze, nádorové metastázy, solidní nádory zahrnuj ící rakovinu tlustého střeva, nádory prsu, plic a prostaty a hematopoetické malignity zahrnující leukémie a lymfomy), tkáňové ulcerace, restenózy, periodontální chorobu, epidermolýzis bulosa, osteoporózu, uvolnění umělých kloubních implantátů, aterosklerózu (zahrnující rupturu aterosklerotického plátu), aortální aneurysma (zahrnující aneurysma abdominální aorty a mozkové aneurysma) , městnavé srdeční selhání, infarkt myokardu, mozkovou mrtvici, mozkovou ischémii, trauma hlavy, poranění míchy, neurodegenerativní onemocnění ( akutní a chronická) , autoimunní onemocnění, Huntingtonovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, migrénu, depresi, periferní neuropatii, bolesti, mozkovou amyloidovou angiopatii, nootropické nebo kognitivní zlepšení, amyotrofickou laterální sklerózu, roztroušenou sklerózu, okulární angiogenezi, korneální poranění, makulární degeneraci, abnormální hojení ran, popáleniny, diabetes, korneální zjizvení, skleritis, AIDS, sepsi, septický šok a další onemocnění charakterizovaná matrix ·· ···♦ • · • ··· • * ·· ·· • · · <

metaloproteinázovou aktivitou a další onemocnění charakterizovaná reprolysinovou aktivitou u savců včetně člověka, obsahující množství sloučeniny definované vzorcem I nebo její farmaceuticky přijatelné soli účinné v léčbě těchto onemocnění.

Termín léčení, jak je zde používán, se týká zvrácení, zmírnění, inhibice progrese, nebo prevence poruchy nebo onemocnění, ke kterým se tento termín vztahuje, nebo jednoho či více příznaků takové poruchy či onemocnění. Termín léčba, jak je zde používán, se týká vlastního léčení, jak je definováno v předchozím odstavci.

Předkládaný vynález se také týká způsobu inhibice a) matrix metaloproteináz hrajících roli v degradaci matrix, nebo b) savčího reprolysinu (jako je například agrekanáza, nebo enzymy ADAM TS-1, 10, 12, 15 a 17, přednostně agrekanáza, nebo enzym

ADAM-17) u savce včetně člověka obsahující účinné množství sloučeniny definované vzorcem I nebo její farmaceuticky přijatelné soli.

Předmětný vynález také zahrnuje íztopově značené sloučeniny, které jsou identické se sloučeninami citovanými ve Vzorci I, ale s tím že jeden nebo více atomů jsou nahrazeny atomem majícím atomovou hmotnost nebo hmotové číslo odlišné od atomové hmotnosti nebo hmotového čísla běžně nacházeného v přírodě. Příklady izotopů, které mohou být inkorporovány do sloučenin vynálezu zahrnují izotopy vodíku, uhlíku, dusíku, kyslíku, fosforu, fluoru a chloru, jako jsou například ²H, ³H, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸O, ¹⁷O, ³¹P, ³¹P, ³⁵S, ¹⁸F a ^3SC1. Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, jejich proléky a farmaceuticky přijatelné soli řečených sloučenin nebo řečených proléků, které obsahují výše zmíněné izotopy a/nebo jiné izotopy dalších atomů jsou v rozsahu tohoto vynálezu. Určité ··** • · • ··· · • · · ·

Φ· ··

Φ Φ · · φφ ··«· φφ ΦΦ·· izotopově značené sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, například ty sloučeniny, v kterých jsou inkorporovány radioaktivní izotopy, jako například ³H a ¹⁴C, jsou užitečné v analýzách tkáňové distribuce léků a/nebo substrátu. Trítiované, tj . ³H a uhlík-14, tj. ¹⁴C, izotopy jsou jejich přípravy a izotopy, jako jsou obzvláště preferovány pro snadnost detekovatelnost. Dále náhrada těžšími například deuterium, tj. ²H může vést k určitým terapeutickým výhodám v důsledku větší metabolické stability, například zvýšeného poločasu in vivo nebo sníženého dávkování a tudíž mohou být za určitých okolností preferovány. Izotopově značené sloučeniny, které jsou definovány Vzorcem I tohoto vynálezu a jejich proléky mohou být obecně připraveny provedením postupů uvedených ve Schématech a/nebo v Příkladech provedení vynálezu a Přípravách uvedených níže substitucí snadno dostupného izotopově označeného činidla za neizotopově značené činidlo.

Vynález také zahrnuje farmaceutické preparáty obsahující proléky sloučenin definovaných vzorcem I. Tento vynález také zahrnuje způsoby léčby nebo prevence onemocnění, která mohou být léčena, nebo jim může být zabráněno inhibici matrix metaloproteináz, nebo inhibici savčího reprolysinu, kteréžto způsoby zahrnují podání proléků sloučenin definovaných vzorcem I. Sioučeniny definované vzorcem I mající volné amino, amido, hydroxy, sulfonamidové nebo karboxylové skupiny, mohou být přeměněny na proléky. Proléky zahrnují sloučeniny, kde aminokyselinové reziduum, nebo polypeptidový řetězec dvou nebo více ( například dvou, tří, nebo čtyř) aminokyselinových reziduí, které jsou kovalentně připojeny prostřednictvím peptidové vazby k volným amido, amino, hydroxy nebo karboxylovým skupinám sloučenin definovaných vzorcem I. Aminokyselinová rezidua zahrnují 20 přirozeně se vyskytujících aminokyselin běžně označovaných třípísmennými symboly a také obsahujících 4-hydroxyprolin, hydroxylysin, demosin, *··· ·

#4 · 4

4 4 · • * ·

4« ♦4 4444 izodemosin, 3-metylhistidin, norvalin, beta-alanin, gamaaminomáselnou kyselinu, citrulin, homocystein, homoserin, ornitin a methionin sulfon. Proléky také zahrnují sloučeniny, kde karbonáty, karbamáty, amidy a alkylové estery jsou kovalentně navázány k výše uvedeným substituentům definovaným vzorcem I prostřednictvím karbonylového uhlíkového vedlejšího řetězce proléku.

Osoba běžně znalá oboru ocení, že sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, jsou užitečné v léčbě širokého spektra onemocnění. Osoba běžně znalá oboru také ocení, že při použití sloučenin, které jsou předmětem vynálezu, v léčbě specifického onemocnění, mohou být tyto sloučeniny kombinovány s různými existujícími terapeutickými látkami používanými pro toto onemocnění.

Pro léčbu revmatoidní artritidy mohou být sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, zkombinovány s látkami, jako jsou například inhibitory TNF-α, jako jsou například monoklonální protilátky anti-TNF ( jako například Remicade⁴’) a TNF receptorové imunoglobulinové molekuly (jako je například Enbrel°, nízká dávka metotrexátu, lefumidu, hydroxychlorochinu, d-penicilaminu, auranofinu nebo parenterálního či perorálního zlata.

Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, mohou být také použity v kombinaci s existujícími terapeutickými látkami pro léčbu osteoartritidy. Vhodné látky, které mají být použity v kombinaci, zahrnují standardní nesteroidní protizánětlivé látky (odtud NSAIDs), jako jsou piroxikam, diklofenak, propionové kyseliny, jako je například naproxem, flurbiprofen, fenoprofen, ketoprofen, ibuprofen, fenamáty, jako jsou například kyselina mefenamová, indometacin, sulindak, apazon, pyrazolony, jako je například fenylbutazon,

4· ·· • · 4 · *· ·»»* • · • · ·· ·· ··* ·· ·· • · · · • · · • · ·

4 9 •4 9499 salicyláty, jako je například aspirin, inhibitory COX-2, jako je celecoxib, valdecoxib, paracoxib a rofecoxib, analgetika LTD-4, LTB-4 a 5-LO inhibitory, inhibitory p38 kinázy a intraartikulární léčebné postupy, jako je například použití kortikosteroidů a hyaluronových kyselin, jako je například hyalgan a synvisc.

Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, mohou být také použity v kombinaci s protinádorovými látkami, jako jsou například endostatin a angiostatin, nebo cytotoxické látky, jako jsou například adriamycin, daunomycin, cisplatina, etoposid, taxol, taxotere a alkaloidy, jako je například vinkristin a antimetabolity, jako je například metotrexát.

Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, mohou být také použity v kombinaci s kardiovaskulárními látkami, jako jsou například blokátory kalciových kanálů, látky snižující hladiny lipidů, jako jsou například statiny, fibráty, betablokátory, inhibitory ACE, antagonisté receptoru pro angiotensin 2 a inhibitory agregace destiček.

Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, mohou být také použity v kombinaci s látkami působícími na CNS, jako jsou například antidepresiva (jako například sertalin) , antiparkinsonika (jako například deprenyl, L-dopa, Requip, Mirapex, inhibitory MAO, jako například selegilin a rasagilin, inhibitory comP, jako například Tasmar, inhibitory A-2, inhibitory zpětného vychytávání dopaminu, antagonisté NMDA, agonisté nikotinu, inhibitory NK-1, agonisté dopaminu a inhibitory neuronální syntázy oxidu dusnatého) a léky proti Alzheimerově chorobě, jako například donezepil, tacrin, inhibitory COX-2, propentofylin nebo metryfonát.

#» 44

4 * 4

4 4 · · · 4 ··♦·

4·* * • * • *·*

44·

44

4 · « ♦ 4 ·

4 4 4

4 4

4 4··4

Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, mohou být také použity v kombinaci s látkami působícími proti osteoporóze, jako jsou například roloxifen, droloxifen, lasofoxifen nebo fosamax, a imunosupresivními látkami, jako jsou například FK-506 a rapamycin.

Detailní popis vynálezu

Následující reakční Schéma ilustruje přípravu sloučenin, které jsoui předmětem vynálezu. Ledaže je indikováno jinak jsou X, Y, Ar¹, Z, R¹, R² a R³ v reakčních Schématech a v diskusi, která následuje, definovány stejně, jako je uvedeno výše.

«0 400*

0 ·00

Schéma 1 *♦ *0

0 0

0

0 0 0

0000

0 0 0 0'«

000 ♦

0 0

00 0 4 ·

0 0 0 0 0

0000

IV

Schéma 2 ···· • · · • · · • ·

Vlil

·· • · · · • 9 ·

Schéma 3 ·· · · « · • · · · • · • ·

99

9 9

9999

R³ I • 9

9

Schéma 4 • · · · · • * · • · · · · • ·

R² U ^R

O^N^O

X—Ar¹—Y— 2

R3

Schéma 1 se týká přípravy sloučenin, definovaných vzorcem I v dvoukrokové syntéze ze sloučenin definovaných vzorcem V. Co se týká Schématu 1, je sloučenina definovaná vzorcem I připravena ze sloučeniny definované vzorcem IV, kde L¹ a L² jsou odstupující skupiny, jako jsou například metoxy, etoxy, benzyloxy nebo chloro, přednostně etoxy, reakcí s derivátem urey definovaným vzorcem III:

(II v přítomnosti silné zásady v polárním rouzpouštědle. Vhodné zásady zahrnují metoxid sodný, etoxid sodný a metoxid hořečnatý, přednostně etoxid sodný. Vhodná rozpouštědla zahrnují alkoholy (jako je například etanol) , nebo tetrahydrofuran, přednostně absolutní etanol. Výše uvedená reakce je provedená při teplotě od zhruba 20°C až zhruba 90 °C, přednostně od zhruba 50°C až zhruba 65 °C po dobu zhruba 15 minut až zhruba 16 hodin.

Sloučenina definovaná vzorcem IV je připravena ze sloučeniny definované vzorcem V, kde L³ je odstupující skupina, jako je například halo, p-tolylsulfonyloxy (OTs) , nebo metylsulfonyloxy (OMs), přednostně halo, nejpřednostněji chloro nebo bromo, reakcí se sloučeninou definovanou vzorcem HX-Ar¹-Y-Z v přítomnosti zásady v polárním rozpouštědle. Vhodná rozpouštědla zahrnují dimetylformamid (DMF), alkoholy (jako je například etanol), nebo tetrahydrofuran, přednostně etanol. Výše uvedená reakce je provedena při teplotě zhruba 20 °C až • · » · zhruba 90°, přednostně zhruba 50 °C až zhruba 65 °C po dobu mezi zhruba 15 minutami až zhruba 16 hodinami.

Sloučeniny definované vzorcem V mohou být připraveny způsoby dobře známými v oboru, jako jsou například způsoby popsané v PCT patentové publikaci WO 98/58925, nebo metody shrnuté v publikaci The Organic Chemistry of Drug Synthesis, D. Lednicer a LA Mitscher, Svazek 1, strany 167 až 277 a reference zde uvedené. Každá z výše uvedených publikací a aplikací je tímto inkorporována v celém svém rozsahu.

Sloučeniny definované vzorcem III jsou komerčně dostupné nebo mohou být připraveny způsoby dobře známými osobám znalým oboru.

Sloučeniny definované vzorcem HX-Ar^Y-Z jsou komerčně dostupné nebo mohou být připraveny způsoby dobře známými osobám znalých oboru.

Schéma 2 se týká přípravy sloučenin definovaných vzorcem I v tříkrokové syntéze ze sloučenin definovaných vzorcem VI nebo VII. Co se týká Schématu 2, je sloučenina definovaná vzorcem I připravena ze sloučeniny definované vzorcem IX reakcí s vhodnou zásadou a vhodnou alkylační látkou definovanou vzorcem r/l⁴ v přítomnosti rozpouštědla. Vhodné zásady zahrnují hydrid sodný, karbonát draselný, karbonát sodný, trietylamin, pyridin nebo trietanolamin; nejpřednostněji hydrid sodný. Vhodné alkylační látky zahrnují látky, kde L⁴ je halo, ptolylsulfonyloxy ( OTs) nebo metylsulfonyloxy ( OMs) , přednostně halo, nejpřednostněji chloro nebo bromo; nebo alkylační látky zahrnují takové sloučeniny, jako jsou Eshenmoserovi soli; epoxidy nebo vhodně substituované elektrofilní azidiny. Vhodná rozpouštědla závisí na použité zásadě, ale mohou být zvoleny z N,N-dimetylformamidu, tetrahydrofuranu, acetonitrilu a vody.

• · • · · • · · · · ·

Výše uvedená reakce je provedena při teplotě od zhruba 0°C do zhruba 30°C, přednostně od zhruba 20°C do zhruba 25°C po dobu mezi zhruba 15 minutami až zhruba 16 hodinami.

Sloučenina definovaná vzorcem IX může být připravena ze sloučeniny definované vzorcem VIII reakcí s ureou definovanou vzorcem

v přítomnosti silné zásady v polárním rozpouštědle. Vhodné zásady zahrnují metoxid sodný, etoxid sodný a metoxid hořečnatý, přednostně etoxid sodný. Vhodná rozpouštědla zahrnují alkoholy (jako je například etanol), nebo tetrahydrofuran, přednostně absolutní etanol. Výše uvedená reakce je provedená při teplotě od zhruba 20°C až zhruba 90°C, přednostně od zhruba 50°C až zhruba 65°C po dobu zhruba 15 minut až zhruba 16 hodin.

Sloučenina definovaná vzorcem VIII může být připravena ze sloučeniny definované vzorcem VI, kde L³ je odstupující skupina, jako je například halo, p-tolylsulfonyloxy ( OTs), nebo metylsulf onyloxy. ( OMs) , přednostně halo, nej přednostněj i chloro, reakcí se sloučeninou definovanou vzorcem HX-aL-Y-Z v přítomnosti zásady v polárním rozpouštědle. Vhodná rozpouštědla zahrnují metoxid sodný, etoxid sodný, uhličitan draselný a hydrid sodný, přednostně etoxid sodný. Vhodná rozpouštědla zahrnují dimetylformamid (DMF), alkoholy (jako je například etanol) , nebo tetrahydrofuran, přednostně etanol. Výše uvedená reakce je provedena při teplotě zhruba 20 °C až zhruba 90°, přednostně zhruba 50°C až zhruba 70°C po dobu mezi ·· » · zhruba 15 minutami až zhruba 16 hodinami, přednostně zhruba 3 hodiny. Reakce tohoto typu jsou dále ilustrovány způsobem JB Niederla a RT Rotha, J Amer Chem Soc 62, 1154 (1940).

Sloučenina definovaná vzorcem VIII může být připravena ze sloučeniny definované vzorcem VII v přítomnosti vhodného katalyzátoru, přednostně rhodium ( II) acetátu podle postupu popsaného M Campbellem et al., Aust J Chem. 45, 2061 (1992).

Sloučeniny definované vzorcem VI a VII jsou komerčně dostupné nebo je lze snadno získat z dostupných výchozích materiálů podle způsobů dobře známých osobám znalých oboru. Sloučeniny definované vzorcem VII mohou být například připraveny podle způsobu DW Peace et al., Synthesis, 658 (1971).

Sloučeniny definované vzorcem III jsou komerčně dostupné nebo mohou být připraveny způsoby dobře známými osobami znalými oboru.

Schéma 3 se týká přípravy sloučenin definovaných vzorcem I, obzvláště sloučenin, kde X je kyslík, nebo -OCH₂-. Co se týká Schématu 3, může být sloučenina definovaná vzorcem I získána alkylaci sloučeniny definované vzorcem XI vhodným fenolem definovaným vzorcem HOAr^Y-Z podle způsobu O. Mitsonubuho (Synthesis 1 (1981)), nebo alkylaci vhodnou alkylační látkou definovanou vzorcem L³CH₂Ar¹-Y-Z, kde L³ je odstupující skupina, jako jsou například halo, p-tolylsulfonyloxy ( OTs) , nebo metylsulfonyloxy ( OMs) , přednostně halo, nejpřednostněji chloro nebo bromo, ve vhodném rozpouštědle, jako jsou například N, N-dimetylformamid, tetrahydrofuran, acetonitril v přítomnosti vhodné zásady, jako jsou například hydrid sodný, uhličitan draselný, trietylamin, pyridin nebo tri etanolamin. Výše uvedená reakce je provedena při teplotě zhruba 0°C až » · * • · « · « zhruba 50°, přednostně zhruba 20°C až zhruba 65°C po dobu mezi zhruba 15 minutami až zhruba 16 hodinami.

Sloučeniny definované vzorcem XI mohou být připraveny ze sloučenin definovaných vzorcem X podle způsobu JA Vida et al. , J Med Chem, 17, 732 (1974).

Sloučeniny definované vzorcem X mohou být připraveny ze sloučeniny definované vzorcem XII reakcí s vhodnou zásadou, v přítomnosti vhodné alkylační látky R¹]/¹ a rozpouštědla, jak je popsáno v Biehl et al., J Het Chem 23, 9 (1986). Vhodné zásady zahrnují hydrid sodný, uhličitan draselný, trietylamin, pyridin, trietanolamin; nejpřednostněji trietanolamin. Vhodné alkylační látky zahrnují látky, kde L⁴ je halo, ptolylsulfonyloxy ( OTs) nebo metylsulfonyloxy ( OMs) , přednostně halo, nejpřednostněji chloro nebo bromo; nebo alkylační látky zahrnují takové sloučeniny, jako jsou Eshenmoserovi soli; epoxidy nebo vhodně substituované elektrofilní azidiny. Vhodná rozpouštědla závisí na použité zásadě, ale mohou být zvoleny z N,N-dimetylformamidu, tetrahydrofuranu, acetonitrilu a vody. Výše uvedená reakce je provedena při teplotě od zhruba 0°C do zhruba 3 0°C, přednostně od zhruba 20°C do zhruba 25°C po dobu mezi zhruba 15 minutami až zhruba 16 hodinami.

Sloučeniny definované vzorcem XII jsou komerčně dostupné nebo mohou být připraveny způsoby shrnutými v publikaci The Organič Chemistry of Drug Synthesis, D Lednicer a LA Mitschner, Svazek 1, strany 167 až 277 a v odkazech zde citovaných.

Schéma 4 se týká přípravy sloučenin definovaných vzorcem I, kde X je síra nebo -CH₂-, nebo jejich oxidované deriváty >SO₂, >SO, -SO₂CH₂-, -SOCH₂-. Co se týká Schématu 4, může být taková sloučenina definovaná vzorcem I získána alkylací pyrimidin 2,4,6- trionového kruhu sloučeniny definované vzorcem XIV, ♦ · « ·

A *

9· · · « · ♦ · · ·

99* · (kde R² a R³ jsou vodík) s vhodnou alkylační látkou L³R², kde L³ je odstupující skupina, jako jsou například halo, ptolylsulfonyloxy (OTs), nebo metylsulfonyloxy (OMs), přednostně halo, nejpřednostněji chloro nebo bromo ve vhodném rozpouštědle, jako jsou například dimetylf ormamid (DMF), tetrahydrofuran, acetonitril v přítomnosti vhodné zásady, jako jsou například hydrid sodný, uhličitan draselný, trietylamin, pyridin nebo trietanolamin. Výše uvedená reakce je provedena při teplotě zhruba 20°C až zhruba 70°, přednostně zhruba 20°C po dobu mezi zhruba 15 minutami až zhruba 16 hodinami.

Sloučeniny definované vzorcem XIV mohou být připraveny alkylaci sloučeniny definované vzorcem X s vhodným disulfidem definovaným vzorcem (SAr^Y-Z^ nebo (SCH₂Ar¹-Y-Z) ₂ ve vhodném rozpouštědle, jako jsou například N, N-dimetylformamid, tetrahydrofuran, acetonitril v přítomnosti vhodné zásady, jako jsou například hydrid sodný, uhličitan draselný, trietylamin, pyridin nebo trietanolamin. Výše uvedená reakce je provedena při teplotě zhruba 20°C až zhruba 70°, přednostně zhruba 20°C po dobu mezi zhruba 15 minutami až zhruba 16 hodinami.

Disulfidy (SAr¹-Y-Z)2 nebo (SC^A^-Y-Z) 2 mohou být připraveny z odpovídajících thiolů HSAr¹-Y-Z nebo HSCH2Ar¹-Y-Z oxidativními způsoby dobře známými osobám znalým oboru.

Sloučeniny mohou být oboru.

definované vzorcem X jsou komerčně dostupné nebo připraveny způsoby dobře známými osobám znalým

Sloučeniny definované vzorcem I, které jsou svým charakterem zásadité, jsou schopné tvořit celou řadu různých solí s různými anorganickými a organickými kyselinami. Ačkoli takové soli musí být farmaceuticky přijatelné pro podání zvířatům, je často žádoucí v praxi iniciálně izolovat « · »· ··*’ • · • · · · ·· ♦ * r ♦ * ’ I » ?

sloučeninu definovanou vzorcem I z reakční směsi jako farmaceuticky nepřijatelnou sůl, a poté ji jednoduše konvertovat zpět na volnou bázi této sloučeniny reakcí s alkalickým činidlem a následně konvertovat volnou bázi na farmaceuticky přijatelnou kyselou adiční sůl. Kyselé adiční soli výchozích sloučenin tohoto vynálezu jsou snadno připraveny reakcí výchozí sloučeniny s významně ekvivalentním množstvím zvolené minerální nebo organické kyseliny ve vodném solventním médiu, nebo ve vhodném organickém rozpouštědle, jako jsou například metanol nebo etanol. Po pečlivém odpaření rozpouštědla je získána požadovaná pevná sůl.

Kyseliny, které jsou používány k přípravě farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí výchozích sloučenin tohoto vynálezu, jsou ty kyseliny, které tvoří netoxické adiční soli, tj. soli obsahující farmakologicky přijatelné anionty, jako jsou například hydrochloridové, hydrobromidové, hydrojodidové, nitrátové, sulfátové, nebo bisulfátové, fosfátové, nebo kyselé fosfátové, acetátová, laktátové, citrátové, nebo kyselé citrátové, tartarátové, nebo bitartarátové, sukcinátové, maleátové, fumarátové, glukonátové, sacharátové, benzoátové, metansulfonátové a pamoátové [tj. l,l'-metylen -bis- (2hydroxy -3- naftoátové)] soli.

Ty sloučeniny definované vzorcem I, které jsou svým charakterem kyselé, jsou schopné tvořit bázické soli s různými farmakologicky přijatelnými katioty. Příklady takových solí zahrnují soli alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin a obzvláště, sodné a draselné soli. Tyto soli jsou připraveny konvenčními technikami. Chemické zásady, které jsou použity jako činidla k přípravě farmaceuticky přijatelných zásaditých solí, které jsou předmětem vynálezu, jsou ty zásady, které tvoří netoxické zásadité soli se zde popsanými kyselými sloučeninami definovanými vzorcem I. Tyto netoxické zásadité ·· · · soli zahrnují ty soli, které jsou odvozeny od farmakologicky přijatelných katiotů, jako jsou soli sodné, draselné, kalciové a hořečnaté atd. Tyto soli mohou být snadno připraveny reakcí odpovídajících kyselých sloučenin, a poté odpařením výsledného roztoku do sucha, přednostně za sníženého tlaku.

Alternativně mohou být také připraveny smíšením nižších alkanolických roztoků kyselých sloučenin a požadovaného alkoxidu alkalického kovu, a poté odpařením výsledného roztoku do sucha stejným způsobem jako předtím. V každém případě jsou přednostně použita stoichiometrická množství činidel, aby se zajistilo ukončení reakce maximální výtěžky produktu.

Biologická stanovení

V následujících in vitro testech je prokázána schopnost sloučenin definovaných vzorcem I nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí (odtud také nazývaných jako sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu) inhibovat metaloproteinázy nebo savčí reprolysin a následně je demonstrována jejich účinnost pro léčbu onemocnění charakterizovaných aktivitou metaloproteinázy nebo savčího reprolysinu (jako je například tvorba tumor nekrotizujícího faktoru).

Stanovení MMP

Selektivní inhibitory kolagenázy 3 (matrix metaloproteináza 13), jak jsou zde použity, se týkají látek, které vykazují alespoň 100 násobnou selektivitu, co se týká inhibice aktivity enzymu kolagenázy 3 vůči enzymu kolagenázy 1 s účinností méně než 100 nM, jak je definováno podle výsledků IC₅₀ z MMP-13/MMP1 fluorescenčních stanovení popsaných níže. Selektivní inhibitory kolagenázy 3 mohou být identifikovány vyšetřením inhibitorů, které jsou předmětem předkládaného vynálezu v MMP13/MMP-l fluorescenčních stanoveních popsaných níže a výběrem ·

«,» 4 4 4 4

4·* * 4 4 4 444

těch látek s poměry IC₅₀ inhibice MMP-13/MMP-1 100 nebo vyššími a účinností nižší než je 100 nM.

Neselektivní inhibitory kolagenázy, jak jsou zde použity, se týkají látek, které vykazují nižší než 100 násobnou selektivitu, co se týká inhibice aktivity enzymu kolagenázy 3 vůči enzymu kolagenázy 1 s účinností více než 100 nM, jak je definováno podle výsledků IC₅₀ z MMP-13/MMP-1 fluorescenčních stanovení popsaných níže.

Schopnost inhibitorů kolagenázy inhibovat aktivitu kolagenázy je dobře známa v oboru. K identifikaci matrix metaloproteinázových inhibitorů mohou být použity následující testy.

Inhibice lidské kolagenázy (MMP-1)

Lidská rekombinantní kolagenáza je aktivována trypsinem. Množství trypsinu je optimalizováno pro každou šarži kolagenázy 1, ale typická reakce používá následující poměr: 5 ug trypsinu na 100 ug kolagenázy. Trypsin a kolagenáza jsou inkubovány při pokojové teplotě po dobu 10 minut a poté je přidán pětinásobný nadbytek (50 mg/10 mg trypsinu) inhibitoru trypsinu ze sójových bobů.

Zásobní roztoky ( 10 mM) v dimetylsulfoxidu a poté následujícího schématu:

inhibitorů jsou připraveny jsou naředěny za použití mM - 120 uM - 12 uM

1,2 uM - 0,12 uM

Do příslušných jamek 96 jamkové mikrofluorescenční destičky je v tripletu přidáno 25 mikrolitrů každé z koncentrací. Finální koncentrace inhibitoru bude ředění 1: 4 po přidání enzymu a substrátu. Pozitivní kontroly (enzym, bez inhibitoru) jsou

...........

umístěny v jamkách D7-D12 a negativní kontroly (žádný enzym, žádný inhibitor) jsou umístěny v jamkách D1-D6.

Kolagenáza 1 je naředěna do 240 ng/ml a poté je přidáno 25 ul do příslušných jamek mikrofluorescenční destičky. Finální koncentrace kolagenázy ve stanovení je 60 ng/ml.

Substrát (DNP-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys (NMA)-NH₂) je připraven jako 5 mM zásobní roztok v dimetylsulfoxidu a poté je naředěn 20 uM v testovacím pufru. Test je zahájen přidáním 50 ul substrátu na jamku mikrofluorescenční destičky za vzniku finální koncentrace 10 uM.

Fluorescence ( 360 nM excitace, 460 nm emise) je odečítána v čase 0 a poté po 2 0 minutových intervalech. Stanovení je provedeno při pokojové teplotě a probíhá typicky 3 hodiny.

Poté je sestaven graf fluorescence versus čas pro blank i pro kolagenázu obsahující vzorky (data z tripletů jsou zprůměrována) . Časový bod, který poskytuje dobrý signál (alespoň pětinásobek oproti blanku), a který je na lineární části křivky ( obvykle okolo 120 minut) je zvolen, aby se určily hodnoty IC₅₀. Čas nula je použit jako blank pro každou sloučeninu v každé koncentraci a tyto hodnoty jsou odečteny od údajů ve 120 minutě. Data jsou sestavena do grafu jako inhibitor koncentrace versus % kontrol (inhibitor fluorescence vydělený samotnou fluorescencí kolagenázy x 100) . Hodnoty IC₅₀ jsou určeny z koncentrace inhibitoru, který dává signál, který je 50% kontroly.

Pokud jsou hodnoty IC₅₀ zaznamenány jako nižší než 0,0 3 uM, jsou poté inhibitory testovány při koncentracích 0,3 uM, 0,03 uM a 0,003 uM.

♦ φ • · ♦· • * ♦ ♦ • · · φφφ φφφ « · « φ φ ·

Inhibice gelatinázy (ΜΜΡ-2)

Lidská rekombinantní 72 kD gelatináza (MMP-2, gelatináza A) je aktivována po dobu 16-18 hodin s lmM p-aminofenylrtuťnatým acetátem (z čerstvě připraveného zásobního 100 mM zásobního roztoku v 0,2N NaOH) při teplotě 4°C a mírným promíchávání.

mM zásobní roztoky inhibitorů v dimetylsulfoxidu jsou sériově naředěny v testovacím pufru (50 mM TRIS, pH 7,5, 200 mM NaCI, 5 mM CaCl₂, 20 uM ZnC12 a 0,02% BRIJ-35 (vol/vol) za použití následujícího schématu:

mM - 120 uM - 12 uM - 1,2 uM - 0,12 uM

Další naředění jsou připravena podle nezbytnosti při dodržení stejného schématu. V každém testu jsou provedena stanovení pro minimálně 4 koncentrace inhibitoru pro každou sloučeninu. Poté je do jamek 96-jamkové mikrofluorescenční destičky s dnem ve tvaru písmene U přidáno v tripletu 25 ul inhibitoru o každé koncentraci. Ve finálním testu je objem 100 ul, finální koncentrace inhibitoru jsou výsledkem dalšího ředění 1:4 (tj. 30 uM - 3 uM - 0,3 uM - 0,03 uM, atd) . V tripletu jsou také připraveny také blank ( žádný enzym, žádný inhibitor) a pozitivní enzymová kontrola ( s enzymem, žádný inhibitor) .

Aktivovaný enzym je naředěn na 100 ng/ml v testovacím pufru, do příslušných jamek mikrodestiček je přidáno 25 ul na jamku. Finální koncentrace v testu je 25 ng/ml (0,34 nM) .

Pět mM dimetylsulfoxidového zásobního roztoku substrátu ( McaPro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH₂) je naředěno 20 uM v testovacím pufru na 20 uM. Test je zahájen přidáním 50 ul naředěného substrátu za vzniku finální koncentrace substrátu 10 uM. V čase 0 je odečtena okamžitě fluorescence (320 excitace, 390 emise) a následné odečety jsou prováděny každých 15 minut při pokojové teplotě pomocí zařízení PerSpective Biosystems « ♦

00·· ··· · « 0 ♦ · ··

Cytofluor Multi-Well Plate Reader s přírůstkem při 90 j ednotkách.

Je sestrojen graf hodnoty fluorescence enzymu a blanku versus čas. Pro stanovení hodnot IC₅₀ je zvolen časný časový bod na lineární částí této křivky. Nulový časový bod je pro každou sloučeninu odečten od pozdějšího časového bodu a údaje jsou poté vyjádřeny jako procento enzymové kontroly (inhibitor fluorescence vydělený fluorescencí pozitivní enzymové kontroly x 100). Data jsou vyjádřena v grafu jako koncentrace inhibitoru versus procento enzymové kontroly. Hodnoty IC₅₀ jsou definovány jako koncentrace inhibitoru, která dává signál, který je 50% pozitivní enzymové kontroly.

Inhibice aktivity stromelysinu (MMP-3

Lidský rekombinantní stromelysin (MMP-3, stromelysin 1) je aktivován po dobu 20-22 hodin s 2 mM p-aminofenylrtuťnatým acetátem (z čerstvě připraveného 100 mM zásobního roztoku v 0,2N NaOH) při teplotě 37°C.

mM zásobní roztoky inhibitorů v dimetylsulfoxidu jsou sériově naředěny v testovacím pufru (50 mM TRIS, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl₂ a 0,02% BRIJ-35 ( vol/vol) za použití následujícího schématu:

mM - 120 uM - 12 uM - 1,2 uM - 0,12 uM

Další naředění jsou připravena podle nezbytnosti při dodržení stejného schématu. V každém testu jsou provedena stanovení pro minimálně 4 koncentrace inhibitoru pro každou sloučeninu. Poté je do jamek 96-jamkové mikrofluorescenční destičky s dnem ve tvaru písmene U přidáno v tripletu 25 ul inhibitoru o každé koncentraci. Ve finálním testu je objem 100 ul, finální koncentrace inhibitoru jsou výsledkem dalšího ředění 1:4 (tj. 30 uM - 3 uM - 0,3 uM - 0,03 uM, atd). V tripletu jsou také • Φ φφ φ *

žádný inhibitor) žádný inhibitor) .

φφ · ·

Φ·· • · ♦ · φφ φ φ

φ »·♦· připraveny také blank ( žádný enzym, pozitivní enzymová kontrola ( s enzymem,

Aktivovaný enzym je naředěn na 200 ng/ml v testovacím pufru, do příslušných jamek mikrodestiček je přidáno 25 ul na jamku. Finální koncentrace v testu je 50 ng/ml (0,875 nM).

Deset mM dimetylsulfoxidového zásobního roztoku substrátu (Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nva-Trp-Arg-Lys(Dnp)-NH₂) je naředěno v testovacím pufru na 6 uM. Test je zahájen přidáním 50 ul naředěného substrátu za vzniku finální koncentrace substrátu 3 uM. V čase 0 je odečtena okamžitě fluorescence (320 excitace, 390 emise) a následné odečety jsou prováděny každých 15 minut při pokojové teplotě pomocí zařízení PerSpective Biosystems Cytofluor Multi-Well Plate Reader s přírůstkem při 90 jednotkách.

Je sestrojen graf hodnoty fluorescence enzymu a blanku versus čas. Pro stanovení hodnot IC₅o je zvolen časný časový bod na lineární části této křivky. Nulový časový bod je pro každou sloučeninu odečten od pozdějšího časového bodu a údaje jsou poté vyjádřeny jako procento enzymové kontroly ( inhibitor fluorescence vydělený fluorescencí pozitivní enzymové kontroly x 100). Data jsou vyjádřena v grafu jako koncentrace inhibitoru versus procento enzymové kontroly. Hodnoty IC_5O jsou definovány jako koncentrace inhibitoru, která dává signál, který je 50% pozitivní enzymové kontroly.

Inhibice lidské 93 kD gelatinázy (MMP-9

Inhibice 92 kD gelatinázové (MMP-9) aktivity je testováno za použití substrátu Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH₂ (10 uM) za podobných podmínek, jak je popsáno výše pro inhibici lidské kolagenázy (MMP-l).

* · ·· Φ·<· φ φ φ • φ ·φφ • ♦ · φ φ · «« φ·· ♦ φ φ

φ φ

φφφφ

Lidská rekombinantní 92 kD gelatinázové (MMP-9) je aktivována po dobu 2 hodin s 1 mM p-aminofenylrtuťnatým acetátem ( z čerstvě připraveného 100 mM zásobního roztoku v 0,2N NaOH) při teplotě 37°C.

mM zásobní roztoky inhibitorů v dimetylsulfoxidu jsou sériově naředěny v testovacím pufru (50 mM TRIS, pH 7,5, 200 mM NaCl, 5 mM CaCl₂, 20 uM ZnCl₂ a 0,02% BRIJ-35 (vol/vol) za použití následujícího schématu:

mM - 120 uM - 12 uM - 1,2 uM - 0,12 uM

Další naředění jsou připravena podle nezbytnosti při dodržení stejného schématu. V každém testu jsou provedena stanovení pro minimálně 4 koncentrace inhibitoru pro každou sloučeninu. Poté je do jamek 96-jamkové mikrofluorescenční destičky s dnem ve tvaru písmene U přidáno v tripletu 25 ul inhibitoru o každé koncentraci. Ve finálním testu je objem 100 ul, finální koncentrace inhibitoru jsou výsledkem dalšího ředění 1:4 (tj. 3 0 uM - 3 uM - 0,3 uM - 0,03 uM, atd). V tripletu jsou také připraveny také blank ( žádný enzym, žádný inhibitor) a pozitivní enzymová kontrola ( s enzymem, žádný inhibitor) .

Aktivovaný enzym je naředěn na 100 ng/ml v testovacím pufru, do příslušných jamek mikrodestiček je přidáno 25 ul na jamku. Finální koncentrace v testu je 25 ng/ml (0,27 nM) .

Pět mM dimetylsulfoxidového zásobního roztoku substrátu ( McaPro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH₂) je naředěno v testovacím pufru na 20 uM. Test je zahájen přidáním 50 ul naředěného substrátu za vzniku finální koncentrace substrátu 10 uM. V čase 0 je odečtena okamžitě fluorescence ( 320 excitace, 390 emise) a následné odečety jsou prováděny každých 15 minut při pokojové teplotě pomocí zařízení PerSpective Biosystems Cytofluor Multi-Well Plate Reader s přírůstkem při 90 jednotkách.

• * «

4*4« ·· • 444 * 4 • 444 ♦ ·

Je sestrojen graf hodnoty fluorescence enzymu a blanku versus čas. Pro stanovení hodnot IC₅₀ je zvolen časný časový bod na lineární části této křivky. Nulový časový bod je pro každou sloučeninu odečten od pozdějšího časového bodu a údaje jsou poté vyjádřeny jako procento enzymové kontroly (inhibitor fluorescence vydělený fluorescencí pozitivní enzymové kontroly x 100). Data jsou vyjádřena v grafu jako koncentrace inhibitoru versus procento enzymové kontroly. Hodnoty IC₅₀ jsou definovány jako koncentrace inhibitoru, která dává signál, který je 50% pozitivní enzymové kontroly.

Inhibice MMP-13

Lidská rekombinantní MMP-13 je aktivována po dobu 1,5 hodiny s mM ΑΡΜΑ ( p-aminofenylrtuťnatým acetát) při teplotě 37°C a naředěna v testovacím pufru (50 mM TRIS, pH 7,5, 200 mM NaCl, 5 mM CaCl₂, 20 uM ZnCl₂ a 0,02% brij). Do každé jamky 96jamkové mikrofluorescenční destičky je přidáno 25 ul naředěného enzymu. Enzym je poté pro stanovení naředěn 1:4 přidáním inhibitoru a substrátu za vzniku finální koncentrace 100 mg/ml.

Deset mM zásobní roztoky inhibitorů jsou připraveny v dimetylsulfoxidu a poté naředěny v testovacím pufru pomocí ředícího schématu jako pro inhibici lidské kolagenázy ( MMP-1) . Do mikrofluorescenční destičky je v tripletu přidáno 25 mikrolitrů každé koncentrace. Finální koncentrace v testu jsou

0 uM, 3 uM, 0,3 uM a 0,03 uM. Pro inhibici lidské kolagenázy (MMP-1) je připraven substrát ( Dnp-Pro-Cha-Gly-Cys( me) -HisAla-Lys (NMA)-NH₂) a 50 ul je přidáno do každé jamky za vzniku finální koncentrace 10 uM. V čase 0 je odečtena fluorescence (360 excitace, 450 emise) a následné odečety jsou prováděny každých 5 minut po dobu 1 hodiny.

• · · 2 • * · φ

φφφ· φ

φ

Pozitivní kontroly obsahují enzym a substrát bez inhibitoru, a blanky obsahují pouze substrát.

Hodnoty IC₅₀ jsou určeny jako inhibice lidské kolagenázy ( MMP1) . Pokud jsou hodnoty IC₅₀ zaznamenány jako nižší než 0,03 uM, jsou poté inhibitory testovány ve finální koncentraci 0,3 uM, 0,03 uM, 0,003 uM a 0,0003 uM.

Testování kolagenního filmu MMP-13

Krysí kolagen typu I je označen radionuklidem ¹⁴C anhydridem kyseliny octové (TE Cawston a AJ Barret, Anal Biochem 99, 340345 (1979)) a použit k přípravě 96 jamkových destiček obsahující radionuklidem označené kolagenové filmy ( Barbara Jophnson-Wint, Anal. Biochem. 104, 175-181 (1980)). Pokud je přidán do jamky roztok obsahující kolagenázu, štěpí enzym nerozpustný kolagen, který se rozvíjí a je tedy solubilizován. Aktivita kolagenázy je přímo proporcionální množství solubilizovaného kolagenu, určené poměrem radioaktivity uvolněné do supernatantu, jak může být měřeno standardním scintilačním počítačem. Inhibitory kolagenázy jsou proto sloučeniny, které redukují uvolněné radioaktivní počty s ohledem na kontroly bez přítomného inhibitoru. Jedna specifická forma tohoto testu je popsána detailněji níže.

Pro určení selektivity sloučenin pro MMP-13 versus MMP-1 za použití kolagenu jako substrátu je použit následující postup. Rekombinantní lidská proMMP-1 je aktivována podle postupů popsaných výše. Aktivovaná MMP-13 nebo MMP-1 jsou naředěny do 0,6 ug/ml pomocí pufru (50 mM TRIS, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM CaCl₂, 1 uM ZnCl₂, 0,05% BRIJ-35, 0,02% azid sodný).

Jsou připraveny zásobní roztoky testované sloučeniny (10 nM) v dimetylsulfoxidu. Ředění testovaných sloučenin v Tris pufru (výše) jsou připravena na 0, 2, 2, 0, 20, 200, 2000 a 20000 nM.

« ·

0«

0 ♦

0 ·

t 0

4

0 4 0·· ·

• *

100 ul příslušného ředění léku a 100 ul naředěného enzymu jsou napipetovány do jamek 96 jamkové destičky obsahující kolagenové filmy označené ¹⁴C-kolagenem. Finální koncentrace enzymu je 0,3 ug/ml, zatímco finální koncentrace léku je 0,1, 1,0, 10, 100, 1000 nM. Každá koncentrace léku a kontroly je analyzována v tripletu. Tripletové kontroly také probíhají za podmínek, za kterých není přítomen žádný enzym, a s enzymem při absenci sloučeniny.

Destičky jsou inkubovány při teplotě 37°C po takovou dobu, při které dojde k solubilizaci 30-50% dostupného kolagenu, jak je určeno spočítáním dalších kontrolních jamek v různých časových bodech. Ve většině případů je vyžadováno okolo 9 hodin inkubace. Při pokročení testu je odebrán supernatant z každé z jamek a je spočítán scintilačním počítačem. Pozadí je odečteno ( určeno odečtem v jamkách bez enzymu) od každého z vzorku a procento uvolnění je odečteno ve vztahu k jamkám pouze s enzymem a bez inhibitoru. Hodnoty tripletu pro každý bod jsou zprůměrovány a data jsou uvedena do grafu jako procento uvolnění versus léková koncentrace. Hodnoty IC₅₀ jsou určeny z bodu, v kterém je získáno 50% inhibice uvolnění radioaktivního kolagenu. Aby se určila identita aktivních kolagenáz v médiu určeném pro chrupavku, byly provedeny testy za použití kolagenu jako substrátu, média určeného pro chrupavku a inhibitorů různého výběru. Médium určené pro chrupavku bylo staženo v době, kdy se objevila degradace kolagenu a představuje tedy kolagenázy zodpovědné za štěpení kolagenu. Testy byly provedeny s výjimkou, že místo použití rekombinantního enzymu MMP-13 nebo rekombinantního enzymu MMP1 bylo enzymovým zdrojem médium určené pro chrupavku.

φ φ · φ * ♦ ·

Φ φφ·· «φ φφφφ • ♦ · • φ φ ··

• · •Φ φφφφ

Degradace chrupavkového kolagenu z bovinní nosní chrupavky indukovaná IL-1

Tento test používá bovinní nosní chrupavčité explantáty, které jsou běžně používány k testování účinnosti různých sloučenin inhibovat buďto degradaci proteoglykanu indukovanou IL-1, nebo degradaci kolagenu indukovanou IL-1. Bovinní nosní chrupavka je tkáň, která je velmi podobná kloubní chrupavce, tj. chondrocyty jsou obklopeny matrix, která je primárně z kolagenu typu II a z agrekanu. Tkáň je používána, protože 1) je velmi podobná kloubní chrupavce, 2) je snadno dostupná, 3) je relativně homogenní, a 4) degraduje s predikovatelnou kinetikou po stimulaci IL-1.

K testování sloučenin byly použity dvě varianty tohoto testu. Obě varianty dávají podobné výsledky. Tyto dvě varianty jsou popsány níže:

Varianta 1

Tři částky bovinní nosní chrupavky ( přibližně 2 mm v průměru x 1,5 mm dlouhé) jsou umístěny do každé jamky 24 jamkové destičky na tkáňové kultury. Jeden ml média bez séra je poté přidáno do každé jamky. Sloučeniny jsou připraveny jako 10 mM zásobní roztoky v DMSO a poté jsou naředěny přibližně v médiu bez séra do finální koncentrace například 50, 500 a 5000 nM.

Každá koncentrace je testována v tripletu.

Lidský rekombinantní IL-la (5 ng/ml) (IL-1) je přidán do tripletových kontrolních jamek a do každé jamky obsahující lék. Jsou připraveny také tripletové kontrolní jamky, v kterých nejsou ani lék, ani IL-1. Je odstraněno médium a je přidáno čerstvé médium a čerstvé médium obsahující IL-1 a příslušné lékové koncentrace ve dnech 6, 12, 18 nebo každé 3-4 dny, pokud je to nutné. V každém časovém bodu jsou odstraněná • 4

4·»*

I · ·

I · 4 »· média uložena při teplotě -20 °C pro pozdější analýzu. Je-li chrupavka v jamkách s pouze IL-1 téměř kompletně resorbována (okolo 21 dne), je experiment ukončen. Médium je odstraněno a uloženo. Alikvóty (100 ul) z každé jamky v každém časovém bodě jsou sebrány dohromady, natráveny papainem a poté analyzovány na obsah hydroxyprolinu. Pozadí hydroxyprolinu (průměr jamek bez Il-l a bez léku) je odečteno od každého datového bodu a pro každý triplet je vypočten průměr. Data jsou poté exprimována jako procento průměrné hodnoty samotného IL-1 a vyneseny do grafu. Hodnota IC₅₀ je poté určena z tohoto grafu.

Varianta 2

Experimentální postup je stejný, jako je uvedeno ve Variantě A až do 12. dne. Dvanáctý den je upravené médium z každé jamky odstraněno a zamraženo. Do každé jamky je přidán jeden ml fosfátového pufru (PBS) obsahujícího 0,5 ug/ml trypsinu a v inkubaci je pokračováno po dlších 48 hodin při teplotě 37°C. Po 48 hodinách inkubace v trypsinu je roztok BS odstraněn. Alikvóty (50 ul) roztoku PBS/trypsin a předchozí dva časové body (dny 6 a 12) jsou sebrány dohromady, zhydrolyzovány a je určen obsah hydroxyprolinu. Pozadí hydroxyprolinu ( průměr jamek bez Il-l a bez léku) je odečteno od každého datového bodu a pro každý triplet je vypočten průměr. Data jsou poté exprimována jako procento průměrné hodnoty samotného IL-1 a vyneseny do grafu. Hodnota IC₅₀ je poté určena z tohoto grafu. V této variantě je časový průběh experimentu výrazně zkrácen. Přidání trypsinu na 48 hodin po 12 dnech stimulace IL-1 pravděpodobně uvolňuje jakýkoli kolagen typu II, který byl poškozen aktivitou kolagenázy, ale nebyl uvolněn z chrupavkové matrix. V nepřítomnosti IL-1 stimulace, produkuje reakce s trypsinem pouze slabé pozadí degradace kolagenu v chrupavkových explantátech.

Inhibice tvorby TNF o

• · » * ·

4

o ·*#♦ · ·

4 4 4·

Schopnost sloučenin nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí inhibovat tvorbu TNF a následně demonstrovat jejich účinnost v léčbě onemocnění, v kterých hraje roli TNF, je uvedena v následujícím in vitro testu:

Test na lidských monocytech

Lidské mononukleární buňky byly izolovány z antikoagulované lidské krve za použití jednokrokové separační techniky Ficollhypaque. 2) Mononukleární buňky byly promyty třikrát v Hanksově vyváženém solném roztoku (HBSS) s divalentními kationty a resuspendovány do denzity 2 x 10⁶/ml HBSS obsahujícího 1% BSA Diferenciální odečety určené za použití Abbott Cell Dyn 3500 analyzátoru ukázaly, že monocyty byly v rozmezí 17-24% ze všech buněk v těchto preparátech.

180 ul buněčné suspenze bylo rozděleno na alikvóty do 96 jamkových destiček s plochým dnem (Costar). Přidáním sloučenin a LPS (100 ng/ml finální koncentrace) vznikl finální objem 200 ul. Všechny testy byly provedeny v tripletu. Po 4 hodinách inkubace při teplotě 37°C v humidifikovaném CO₂ inkubátoru byly destičky odstraněny a centrifugovány ( 10 minut při přibližně 250 x g) a supernatanty byly odstraněny a analyzovány na TNFa za použití R+D ELISA křtu.

Stanovení agrekanázy

Primární prasečí chondrocyty z kloubní chrupavky jsou izolovány sekvenčním natrávením trypsinem a kolagenázou přes noc a jsou umístěny v množství 2xl0⁵ buněk na jamku do 48 jamkových destiček s 5 uCi/ml ³⁵S (1000 Ci/mmol) síry v destičkách potažených kolagenem typu I. Buňkám je umožněno inkorporovat značku do své proteoglykanové matrix ( přibližně 1 týden) při teplotě 37°C pod atmosférou 5% CO₂.

• fc ···· fcfc fcfc·· • fc • fcfc· • fc fcfc· • fc fcfc fc · fc · • · * • · · · fcfcfc ·· ····

Noc před zahájením testu jsou monovrstvy chondrocytů promyty dvakrát v DMEM/1% PSF/G a poté jsou inkubovány v čerstvém DMEM/1% FBS přes noc.

Následující ráno jsou chondrocyty promyty jedenkrát v DMEM/1% PSF/G. Po finálním promytí je směs usazena v inkubátoru, zatímco se provádějí ředění.

Média a ředění mohou být připravena, jak je popsáno v Tabulce níže.

Kontrolní média	Samotné DMEM (kontrolní média)
IL-1 média	DMEM + IL-1 (5 ng/ml)
Ředění léku	Připravte zásobní roztoky všech sloučenin v DMSO v koncentraci 10 mM Připravte 100 uM zásobní roztoky všech sloučenin v DMEM v 96 jamkové destičce. Skladujte přes noc v mrazáku Další den proveďte sériová ředění v DMEM s IL-1 do 5 uM, 500 nM a 50 nM Aspirujte finální promytí z jamek a přidejte 50 ul sloučeniny z výše uvedených ředění do 4 50 ul média s IL-1 v příslušných jamkách 48 jamkových destiček. Finální koncentrace sloučeniny se rovnají 500 nM, 50 nM a 5 nM. Všechny vzorky jsou zkompletovány na každé destičce v tripletu s kontrolními vzorky a se vzorky s pouze IL-1

Destičky jsou označeny a pouze vnitřek 24 jamek destičky je použit. Na jedné z destiček je několik sloupců ozačeno jako IL-1 (žádný lék) a kontrola (žádný IL-1, žádný lék). Tyto kontrolní sloupce jsou periodicky odečítány, aby se monitorovalo uvolňování 35S proteoglykanu. Do jamek jsou přidány kontrolní a IL-1 média (450 ul) následované • · *

0 ·

0

9009 « »♦ · • · ···. . i • · · · · • · · «0 »00

Destičky jsou krát vvšší než • · · « · » ·· ···· sloučeninou ( 50 ul) tak, aby se zahájil test. inkubovány při teplotě 37 °C s 5% CO₂ atmosférou.

Při 40-50% uvolnění (je-li CPM z IL-1 média 4-5 v kontrolní médiu), jak je určeno kapalným scintilačním odečítáním (LSC) vzorků média, je test ukončen (9-12 hodin). Médium je odstraněno ze všech jamek a je umístno do scintilačních zkumavek. Je přidána scintilační látka a jsou získány radioaktivní odečety (LSC). K solubilizaci buněčných vrstev je přidáno do každé jamky 500 ul pufru s papainem (0,2 M Tris, pH 7,0, 5 mM EDTA, 5 mM DTT a 1 mg/ml papainu. Destičky s trávícím roztokem jsou inkubovány při teplotě 60 °C přes noc. Buněčná vrstva je odstraněna z destiček další den a je umístěna do scintilačních zkumavek. Poté je přidána scintilační látka a vzorky jsou odečteny (LSC).

Je určeno procento uvolněné radioaktivity z celkového množství přítomného v každé jamce. Procento inhibice sloučeninou je určeno na vzorcích IL-1 jako 0% inhibice (100% z celkové radioaktivity)

Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, které byly testovány, mají hodnoty IC₅₀ v alespoň jedné z výše uvedených analýz méně než 100 uM, přednostně méně než 100 nM. Určité přednostní skupiny sloučenin mají diferenciální selektivitu vůči různým enzymům MMP nebo ADAM. Jedna skupina přednostních sloučenin má selektivní aktivitu vůči enzymu MMP13 oproti MMP-1.

Pro podání savcům, včetně člověka, za účelem inhibice matrix metaloproteináz nebo savčího reprolysinu může být použita celá řada konvenčních způsobů zahrnujících podání perorální, parenterální (například intravenózní, intramuskulární nebo subkutánní) , bukální, anální a topícké. Obecně mohou být • · • ·

podávány sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu (odtud nazývané také jako aktivní sloučeniny) v dávkách mezi 0,1 a 25 mg/kg tělesné váhy jedince, který má být léčen, na den, přednostně od zhruba 0,3 do 5 mg/kg. Aktivní sloučenina bude podávána přednostně perorálně nebo parenterálně. Budou však nezbytné některé odchylky v dávkování v závislosti na onemocnění jedince, který má být léčen. Osoba zodpovědná za podávání určí v každém případě příslušnou dávku pro individuálního j edince.

Sloučeniny, které jsou předmětem předkládaného vynálezu, mohou být podávány v celé řadě dávkovačích forem, terapeuticky účinné sloučeniny, které jsou předmětem tohoto vynálezu jsou obecně přítomny v takových dávkovačích formách v koncentracích v rozmezí do zhruba 5,0% do zhruba 70% váhově.

Pro perorální podání mohou být použity tablety obsahující různé excipientní látky, jako jsou například mikrokrystalická celulóza, citrát sodný, uhličitan vápenatý, dikalcium fosfát a glycin, spolu s různými dezintegračními látkami, jako jsou například škrob (a přednostně kukuřičný, bramborový nebo tapiokový škrob) , kyselina alginová a určité komplexní silikáty, spolu s granulačními vazebnými látkami, jako jsou například polyvinylpyrolidon, sacharóza, želatina a akácie. Navíc jsou pro tabletovací účely velmi užitečné lubrikační látky, jako jsou například magnézium stearát, laurylsulfát sodný a talek. Pevné látky podobného typu mohou být také použity jako plnící látky v želatinových kapslích, přednostní materiály v tomto spojení také zahrnují laktózu nebo mléčný cukr, stejně tak jako polyetylén glykoly o vysoké molekulové váze. Jsou-li požadovány vodné suspenze a/nebo elixíry pro perorální podání, může být aktivní složka zkombinována s různými sladícími nebo dochucujícími látkami, barvivý a pokud je to požadováno také emulzifikujícími a/nebo • · » · suspendujícími látkami, spolu s takovými dilučními látkami, jako jsou například voda, etanol, propylen glykol, glycein a jejich různé kombinace. V případě živočichů jsou tyto látky obsaženy s výhodou v jejich stravě nebo v pitné vodě v koncentraci 5-5000 ppm, přednostně 25 až 500 ppm.

Pro parenterální podání (intramuskulární, intraperitoneální, subkutánní a intravenózní použití) je obvykle připraven sterilní injekční roztok s aktivní složkou. Mohou být použity roztoky terapeutické sloučeniny, která je předmětem předkládaného vynálezu buďto v sezamovém oleji nebo v oleji z burských oříšků, nebo ve vodném propylen glykolu. Vodné roztoky by měly být vhodně upraveny a pufrovány, přednostně při pH větším než 8 pokud je to možné, a tekutou ředící látkou jsou udržovány izotonické. Tyto vodné roztoky jsou vhodné pro intravenózní injekční účely. Olejové roztoky jsou vhodné pro intraartikulární, intramuskulární a subkutánní injekční účely. Příprava všech těchto roztoků za sterilních podmínek je snadno provedena standardními farmaceutickými technikami dobře známými osobám znalým oboru. V případě živočichů mohou být sloučeniny podány intramuskulárně nebo subkutánně v dávkách zhruba 0,1 až 50 mg/kg/den, s výhodou 0,2 až 10 mg/kg/den podaných v jedné dávce nebo až ve třech rozdělených dávkách.

Aktivní sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, mohou být také formulovány do rektálních preparátů, jako jsou čípky nebo retenční náplavy, například obsahující konvenční čípkový základ, jako jsou například kakaové máslo nebo jiné glyceridy.

Pro intranazální podání, nebo inhalační podání jsou aktivní sloučeniny, které jsou předmětem vynálezu, pohodlně dopravovány ve formě roztoku nebo suspenze v nádobce se sprejovou pumpou, která je stlačována nebo pumpována pacientem, nebo ve formě aerosolového spreje ve stlačené nádobce, nebo ve formě nebulizéru s použitím vhodné poháněči látky, například dichlorodifluorometanu, trichlorofluorometanu, dichlorotetrafluoroetanu, oxidu uhličitého, nebo jiného vhodného plynu. V případě stlačeného aerosolu může být dávkovači jednotka určena pomocí ventilu odměřujícího určité množství. Stlačená nádobka nebo nebulizér mohou obsahovat roztok nebo suspenzi s aktivní sloučeninou. Kapsle a náplně ( vyrobené například z želatiny) pro použití v inhalačním zařízení nebo insuflátoru mohou být formulovány tak, aby obsahovaly směs prášku sloučeniny, která je předmětem vynálezu a vhodnou práškovou bázi, jako jsou například laktóza nebo škrob.

Příklady provedení vynálezu

Následující Příklady provedení vynálezu ilustrují preparát sloučenin, které jsou předmětem předkládaného vynálezu. Body tání jsou neupravené. NMR data jsou uvedena v dílech na milion (δ) a jsou vztahovány na deuteriový signál ze vzorkového rozpouštědla ( deuteriochloroform, ledaže je specifikováno jinak) .· Komerční činidla byla použita bez další purifikace. THF znamená tetrahydrofuran. DMF znamená N,N-dimetylformamid. Chromatografie znamená sloupcovou, chromatografii provedenou za použití 32-63 mm silika gelu a pod tlakem dusíku ( blesková chromatografie). Pokojová nebo okolní teplota znamená 20-25°C. Všechny nevodné reakce byly provedeny pod dusíkovou atmosférou pro pohodlí a k maximalizaci výtěžků. Koncentrace při sníženém tlaku nebo ve vakuu znamená, že byla použita rotační odparka.

Příklad 1

5-Metyl, 5-(4'fenoxy-fenoxy)-pyrimidin -2,4,6-trion.

O ·· ····

Do absolutního alkoholu (25 ml) byl opatrně přidán sodík ( 190 mg, 8, 26 mM) a roztok byl promícháván, až se stal homogenní. Byla přidána urea (620 mg, 10,32 mM) a směs byla promíchávána po dobu 30 minut. Po kapkách byl přidán roztok dietyl-2-metyl2- (4'-fenoxy-fenoxy) malonátu (1,48 g, 4,13 mM) v absolutním etanolu ( 25 ml) a výsledná směs byla zahřívána pod zpětným chlazením (6 hodin). Reakční směs byla ochlazena na pokojovou teplotu, odpařena do sucha a rozdělena mezi etylacetát ( 100 ml) a vodu (100 ml) . Vodná vrstva byla separována, okyselena na pH 1 vodným IN HCl a extrahována etylacetátem (3x100 ml) . Zkombinované oragnické extrakty byly vysušeny síranem hořečnatým ( MgSO₄) , zfiltrovány odpařeny do sucha. Výsledný vodný prášek byl krystalizován z horkého metylen chloridu za vzniku cílové sloučeniny ve formě bílého krystalického materiálu (310 mg, viz Tabulka 1 s analytickými daty).

Příklady 2 až 9

Příklady 2 až 9 byly provedeny podobným postupem, který je popsán výše, s výjimkou toho, že dietyl-2-metyl-2-( 4' -fenoxyfenoxy) malonát byl nahrazen vhodně substituovaným malonátem. V tabulce, která následuje je Me metyl, Bu je n-butyl, Ex No je Příklad číslo, a m/z váha molekulárního iontu s nízkým rozlišením.

Tabulka 1

Ex. No.	Struktura	m/z	NMR data (400MHz)	Bod táníl °C
1	0	4e					3252	δ (d6-acetone); 1.95	182
		Ck					(s,3H); 2.85 (s. br.
		L L	A	A,	)		2H); 6.85-7.00 (m,
	0 N I		u					6H); 7.05 (m, 1H);
	H							7.30-7.35 (m, 2H).
2	Η. X	Bu	0.	A			367.3	δ (d*-acetone); 0.95 (t, 3H); 1.40 (m,2H);	59-60
	cA-n I H	k >·	A·	Αχ	I)		1.55 (m, 2H); 225
		w					(m, 2H); 2.85 (s, br. 2H); 6.82-7.00 (m. 6H); 7.05 (m, 1H); 7.10-7.15 (m, 2H).
3	0	le<					3432	δ (d®-acetone); 1.95	187-9
	-Λ	v					(s,3H); 2.85 (s, br,
	<X|< A	*<	Λ	AA	V			2H); 6.85-7.00 (m, 6H), 7.10-7.15 9m, 2H).
4	0 II Rn					385.2	δ (d6-acetone); 0.95	183
	Hx Xj				XF		(t,3H); 1.40 (m, 2H);
	cAnx	y	AZ	V			1.55 (m. 2H); 225
	I H							(m. 2H); 2.85 (s. br. 2H); 6.82-7.00 (m, 6H), 7.10-7.15 (m, 2H).
5	n						309.3	δ (d®-acetone); 1.97	175
	Η...Λ5	Λβ		c	)		(s. 3H); 2.90 (s, br.
	IN cX-N			Ti				2H); 6.75-6.78 (dd.
	X	''O					1H); 7.061-7.067 (m.
	j I H							1H); 727-7.46 (m, 5H); 7.57-7.59 (d. 2H).

Ex. No.	Struktura	m/z	NMR data (400MHz)	Bod tání °C
6	-A l H	O O yy V/	309.3	δ (d6-acetone); 1.95 (s, 3H); 6.86-6.89 (dd, 1H); 727-7.62 (m, 8H).	200-202
7	O HN'^' H	:°Ό.	339.1	δ (d6-acetone); 1.88 (s. 3H); 5.03 (s, 2H), 6.77-6.91 (m, 4H); 7.30-7.45 (m, 5H).

Preparát 1

Dietyl-2-n-butyl, 2-(4fenoxy-fenoxy)malonát

Do absolutního alkoholu ( 25 ml) byl pomalu a opatrně přidán sodík ( 112 mg) a roztok byl promícháván, až se stal homogenní. Pomalu byl přidán 4-fenoxyfenol ( 910 mg) ( Aldrich Chemical Company) a výsledná směs byla promíchávána (30 minut, pokojová teplota). Po kapkách byl přidán roztok dietyl-a-bromo- a-nbutyl-malonátu (1,44 g) (viz Preparát 3) v absolutním etanolu ( 25 ml) a výsledná směs byla zahřívána pod zpětným chlazením (1 hodinu). Reakční směs byla ochlazena na pokojovou teplotu, odpařena do suchá a rozdělena mezi etylacetát ( 100 ml) a vodu (100 ml). Organická vrstva byla separována, promyta vodou ( 3x100 ml), vysušena ( síran hořečnatý), zfiltrována a odpařena za vzniku požadované sloučeniny ve formě čistého oleje (1,82 g) . ^XH NMR (CDC1₃) : δ = 0,85-0,88 (t,3H), 1,21-1,25 (t,6H),

1,31-1,39 (m,4H), 2,2-2,27 (m,2H), 4,23-4,28 (q,4H), 6,80-6,95 (m,6H), 7,03-7,08 (t,lH), 7,25-7,31 (q,2H), m/z = 401 (M⁺) .

Preparát 2

Dietyl-2-metyl, 2-(4fenoxy-fenoxy)malonát

Do absolutního alkoholu ( 25 ml) byl pomalu a opatrně přidán sodík ( 112 mg) a roztok byl promícháván, až se stal homogenní. Pomalu byl přidán 4-fenoxyfenol ( 910 mg) ( Aldrich Chemical Company) a výsledná směs byla promíchávána (30 minut, pokojová teplota) . Po kapkách byl přidán roztok dietyl-a-bromo- a-nmetyl-malonátu (1,23 g) (Aldrich Chemical Company) v absolutním etanolu ( 25 ml) a výsledná směs byla zahřívána pod zpětným chlazením ( 1 hodinu) . Reakční směs byla ochlazena na pokojovou teplotu, odpařena do sucha a rozdělena mezi etylacetát (100 ml) a vodu (100 ml) separována, promyta vodou (3x100 hořečnatý) , zfiltrována a

Organická vrstva byla ml) , vysušena (síran za vzniku požadované odpařena sloučeniny ve formě čistého oleje (1,48 g) . ’ή NMR (CDC1₃) : δ =

1,25-1,28 (t,6H), 1,71 (s,3H), 4,24-4,30 (q4H), 6,88-6,97 (m,6H), 7,04-7,08 (t,lH), 7,25-7,32 (q,2H), m/z = 359 (M⁺) .

• · · ·

Φ · • 9

• · · · ··

Malonáty zahrnující sloučeniny obsažené v Tabulce 2 byly připraveny za použití analogických postupů, které jsou popsány výše (preparáty 1 a 2) , vycházeje od příslušných α-bromo, aalkyl malonátu a příslušného fenolu. V tabulce, která následuje je Me metyl a Et je etyl.

• · ·♦

Tabulka 2

Struktura	Ή NMR	m/z
0	Ie					δ (de-acetone); 1.19-
EtO^				.F	1.23 (t, 6H); 1.64 (s, 3H); 4.19-4.24 (q, 4H); 6.90-7.14	3772
EtO	0	o			(m, 9H).
		JAe				δ (d3 - chloroform);
π		[				0.86-0.88 (t, 3H); 1.21-1.23	419.3
eX		°Y		rr	,F	(t, 6H); 125-1.38'(m. 4H); 2.18-2.22 (m. 2H);.42O -
EtťL		0	Lo	AJ		4.25 (q, 4H); 6.80-7.00 (m.
						8H).
0						δ (d6-acetone); 1.19-
	4e_		JL i		123 (t, 6H); 1.75 (s, 3H);	343.3
Etcr		>OX	TíL	/%/		424-429 (q, 4H); 6.95 - 7.63
EtO			U			(m, 9H).
0		4e A				δ (d6-acetone); 1.19-
Je Etcr^	iH			122 (t. 6H); 1.72 (s, 3H); 423-4.26 (q, 4H); 6.89-7.60	343.3
EtO		%	V	Sl		(m, 9H).

• · · ·

Preparát 3

Dietyl-a-bromo-a-n-butylmalonát

V metylen chloridu butylmalonát (32,2 rozpuštěn dietyl-nreakci s po kapkách rozpuštěném v metylen ( 200 ml) byl g) a podroben přidávaným roztokem bromu (24,0 g) chloridu (25 ml). Výsledná směs byla promíchávána (1 hodinu, pokojová teplota), kdy přetrvávalo oranžové zbarvení.

Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu a reziduum bylo destilováno ve vysokém vakuu za vzniku požadované sloučeniny ve formě čistého oleje (teplota bodu varu 105°C až 110°, 36,0 g) . ¹H NMR (CDC1₃) : δ = 0,89-0,92 (t,3H), 1,25-1,29 (t,6H),

1,35-1,37 (m,4H), 2,2-2,26 (m,2H), 4,23-4,29 (q,4H), m/z = 295 a 297 (M⁺) .

Claims (1)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   Sloučenina definovaná vzorcem „1

   X—Ar—Y—Z (!) kde R¹ je vodík, (Ci-C4) perfluoroalkyl, (Ci-C8) alkyl nebo (C3C8) cykloalkyl, kde řečené ( Ci-C8) alkyl nebo (C3-C8) cykloalkyl mohou volitelně obsahovat jeden až tři heteroatomy nezávisle vybrané ze skupiny obsahující kyslík, >NR⁵ a síru, kde řečené (Ci-C8) alkyl nebo (C₃-C₈) cykloalkyl mohou být volitelně substituovány jedním až dvěmi substituenty nezávisle vybranými ze skupiny obsahující (Ci-C₄) alkyl, (C₆-Ci₀) aryl, (C₂-Ci₀) heteroaryl, OH, NH₂, (Ci-C₄) alkylamino, di[(Cx-C₄) alkyl] amino, (C₃-C₈) cykloalkylamino, (C₃-C₈) cykloalkylamino (C_x-C₄) alkylamino, (C_x-C₈) alkoxy, -CONH₂, -CONHR⁴, -NOC(R⁴)₂ a (C₃-C₈) cykloalkyl, kde řečený ( C₃-C₈) cykloalkyl může volitelně obsahovat jeden nebo dva heteroatomy nezávisle vybrané z >NR⁵, kyslíku a síry.

   R² a R³ jsou nezávisle vybrané ze skupiny obsahující vodík nebo (Ci~C₄) alkyl, kde řečený ( Ci-C₄) alkyl může volitelně obsahovat jeden heteroatom vybraný ze skupiny obsahující kyslík, >NR⁵ nebo síru, a řečený ( Ci-C₄) alkyl může být volitelně substituován (C₆-C₁₀) arylem, (C₂-Ci₀) heteroarylem, OH, NH_2/ (Ci-C₄) alkylamino, di[(Ci-C₄) alkyl] amino, (C₃-C₈) cykloalkylamino, (C₃-C₈) alkylamino (C!-C₄) alkylamino, (Ci-C₄) alkoxy, -CON(R⁴)₂ a (C₃-C₈) cykloalkylem; kde řečený ( C₃-C₈) cykloalkyl může obsahovat jeden nebo dva heteroatomy nezávisle vybrané z >NR⁵, kyslíku a síry;

   φ φ φφ φφφφ φ φ

   ΦΦ φφφφ

   X je vybráno ze skupiny obsahující kyslík, síru, >S0₂, >S=0, >NR⁴, -CH2O-, -OCH2í -CH2S-, -CH2(S=O)-, -CH2SO2-, -SCH2-z -soch2, -SO2CH2-, -N(R⁴)CH2-, -CH₂N(R⁴)-, -N(R⁴)SO₂- a-SO₂N(R⁴)-;

   R⁴, kdekoli se vyskytuje, je nezávisle vybrán ze skupiny obsahující vodík a (C1-C4) alkyl;

   R⁵, kdekoli se vyskytuje, je nezávisle vybrán ze skupiny obsahující vodík a (C1-C4) alkyl, (C₆-Ci₀) aryl, (C₂-C₁₀) heteroaryl, OH, CONH₂, CONHR⁴, -CON(R⁴)₂ a (C₃-C₈) cykloalkyl;

   Y je vybráno ze skupiny obsahující vazbu, kyslík, síru, >S0₂, >S=0, >NH, -CH₂-, -CHO₂-, -OCH₂, -CH₂S-_z -CH₂(S=O)-, -CH₂SO₂-, sch₂-, -soch₂-, -so₂ch₂-, -nhch₂-, -ch₂nh-, -ch₂ch₂-, -ch=ch-, NHSO₂- a -SO₂NH-;

   Ar je (Cg-Cio) aryl nebo (C₂-Ci₀) heteroaryl; a

   Z je (C₆-Cio) aryl, (C₃-C₈) cykloalkyl, (C₃-C₈) cykloalkyl (CiC₄) alkyl, nebo (C₂-C₁₀) heteroaryl; kde jeden nebo dva kruhové uhlíkové atomy řečených ( C₃-C₈) cykloalkylu nebo (C₃-C₈) cykloalkyl (Ci-C₄) cykloalkylu mohou být volitelně nahrazeny heteroatomy nezávisle vybranými ze skupiny obsahující kyslík, síru a NR⁵;

   Kde Ar¹ a Z mohou být volitelně substituovány na jakémkoli z kruhových uhlíkových atomů schopných tvorby další vazby jedním až třemi substituenty nezávisle vybranými ze skupiny obsahující F, Cl, Br, CN, OH, (Ci-C₄) alkyl, (Ci-C₄) perfluoroalkyl, (Ci-C₄) perfluoroalkoxy, (Ci-C₄) alkoxy, a (C₃C₈) cykloalkyloxy;

   nebo její farmaceuticky přijatelné soli.

   2. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R² a R³ jsou každý vodík.

   3. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde X je kyslík, CH₂- nebo -CH₂O- .

   4. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde X je síra, >S0₂, -SCH₂-, -CH₂-S-, -CH₂SO₂- nebo -SO₂CH₂-.

   5. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde X je >NR⁴, CH2N(R⁴)- nebo -N(R⁴)CH2-.

   65 • 4 • • ♦ • ·· ·· • · · • · • · • · ···· »· ♦·· • · ♦ • · · · · 9 9 · 4 · • · ·>· • ·· • · · 9 4 • 99 9 • 44 44 · 6. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde X je -N( R⁴) SO₂- nebo -SO₂N(R⁴)- • 7. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde Y je vazba, kyslík, síra, - ch₂-, >so₂, -och₂- nebo -CH₂O- . 8. Sloučenina podle patentového nároku 3, kde Y je vazba, kyslík, síra, - -ch₂-, >so₂, -och₂- nebo -CH₂O- . 9. Sloučenina podle patentového nároku 4, kde Y je vazba, kyslík, síra, - -ch₂-, >so₂, -och₂- nebo -CH₂O-. 10. Sloučenina podle patentového nároku 5, kde Y je vazba, kyslík, síra, - -ch₂-, >so₂, -och₂- nebo -CH₂O-. 11. Sloučenina podle patentového nároku 6, kde Y je vazba, kyslík, síra, - -ch₂-, >so₂, -och₂- nebo -CH₂O- . 12. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde Y je kyslík, -

   OCH₂- nebo -CH₂O- .

   13. Sloučenina podle patentového nároku 3, kde Y je kyslík, OCH₂- nebo -CH₂O- .

   14. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde X a Y jsou každý kyslík.

   15. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde Ar¹ je fenyl.

   16. Sloučenina podle patentového nároku 12, kde Ar¹ je fenyl. 17. Sloučenina podle patentového nároku 13, kde Ar¹ je fenyl. 18. Sloučenina podle patentového nároku 14, kde Ar¹ je fenyl.

   19. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde Z je (C₆-C₁₀) aryl nebo (C₂-C₁₀) heteroaryl. 20. Sloučenina podle patentového nároku 3, kde Z je (c₆-c₁₀) aryl nebo (C₂-Ci₀) heteroaryl. 21. Sloučenina podle patentového nároku 12, kde Z je (C₆-C₁₀) aryl nebo (C₂-Cio) heteroaryl. 22. Sloučenina podle patentového nároku 13, kde Z je (Cg~C_Xo) aryl nebo (C₂-Cio) heteroaryl. 23. Sloučenina podle patentového nároku 17, kde Z je (c₆-c₁₀) aryl nebo (C₂-C₁₀) heteroaryl. 24. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde Z je (C₆-C₁₀)

   aryl.

   ··

   4· ···· • · • ···

   25. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde Z je Z je (C₃C₈) cykloalkyl (C_x-C₄) alkyl, kde jeden nebo dva kruhové uhlíkové atomy řečených ( C₃-C₈) cykloalkylu nebo (C₃-C₈) cykloalkyl (Ci-C₄) cykloalkylu mohou být volitelně nahrazeny heteroatomy nezávisle vybranými ze skupiny obsahující kyslík, síru nebo NR^S; kde R^s je vybráno ze skupiny obsahující vodík, (Cx-C4) alkyl, (C6-C10) aryl, (C2-Cxo) heteroaryl, OH, -CONH2, CONHR⁴, -NOC(R⁴)2 a (C₃-C₈) cyklolalkyl.

   26. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde Z je ( C₂-Ci₀) heteroaryl.

   27. Sloučenina podle patentového nároku 2, kde Ar¹ a Z jsou substituovány jakýmkoli z kruhových uhlíkových atomů schopných tvorby další vazby jedním až třemi substituenty nezávisle vybranými ze skupiny obsahující F, Cl, Br, CN, OH, (C_x-C₄) alkyl, (C_x-C₄) perf luoroalkyl, (C_x-C₄) perfluoroalkyloxy, (C_xC₄) alky loxy a (C₃-C₈) cykloalkyloxy.

   28. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde X je kyslík, Y je vazba, kyslík, síra, -CH₂-, >S0₂, -OCH₂-_Z nebo -CH₂O-, R¹ je vodík nebo (Cx-C4) alkyl, kde řečený ( Cx-C4) alkyl může volitelně obsahovat jeden nebo dva heteroatomy nezávisle vybranými ze skupiny obsahující kyslík a >NR⁵, kde řečený ( CxC₄) alkyl může být volitelně substituován jedním až třemi substituenty nezávisle vybranými ze skupiny obsahující (C_x-C₄) alkyl, OH, NH₂, (C_x-C₄) alkylamino, di [ (C_x-C₄) alkyl] amino, (C_xC₄) alky loxy, -CONH₂, -CONH₂, -CONHR⁴ a -CONR⁴ a R² a R³ jsou nezávisle vybrány ze skupiny obsahující vodík a (C_x-C₄) alkyl.

   29. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R² a R³ jsou každý vodík, X je kyslík, Y je kyslík a Z je (C₂-C₁₀) heteroaryl.

   30. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R¹ je metyl, R² a R³ jsou každý vodík, X je kyslík, Y je kyslík a Z je (C₆-C_X0) aryl.

   ♦· ···· ··

   31. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R¹ je n-butyl, R² a R³ jsou každý vodík, X je kyslík, Y je kyslík a Z je (C₆C₁₀) aryl.

   32. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R¹ je metyl, R² a R³ jsou každý vodík, X je kyslík, Y je vazba a Z je (C₆-Ci₀) aryl.

   33. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde R¹ je n-butyl, R² a R³ jsou každý vodík, X je kyslík, Y je vazba a Z je (CgCio) aryl.

   34. Sloučenina podle patentového nároku 1, kde řečená sloučenina je vybrána ze skupiny obsahující:

   5-Metyl-5- (4-fenoxy-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

   5-Metyl-5- (4-(4-fluorofenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

   5-n-Butyl-5- (4-fenoxy-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

   5-n-Butyl-5- (4-(4'-fluorofenoxy)-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6trion;

   5-Metyl-5- (4-fenyl-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion;

   5-Metyl-5- (3-fenyl-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion; a

   5-Metyl-5- (4-benzyloxy-fenoxy) -pyrimidin -2,4,6-trion; nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.

   35. Farmaceutický preparát pro léčbu onemocnění vybraných ze skupiny obsahující artritis, nespecifické střevní záněty, Crohnovu nemoc, emfyzém, akutní syndrom respirační tísně, astma, chronickou obstrukční plicní chorobu, Alzheimerovu nemoc, toxicitu způsobenou orgánovou transplantací, kachexii, alergické reakce, alergickou kontaktní hypersenzitivitu, nádorová onemocnění, tkáňové ulcerace, restenózy, periodontální chorobu, epidermolýzis bulosa, osteoporózu, uvolnění umělých kloubních implantátů, aterosklerózu, aortální aneurysma, městnavé srdeční selhání, infarkt myokardu, mozkovou mrtvici, mozkovou ischémii, trauma hlavy, poranění míchy, neurodegenerativní onemocnění, autoimunní onemocnění, Huntingtonovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, migrénu, depresi, mozkovou kognitivní roztroušenou poranění, popáleniny,

   00··

   0· 00«· ·· ·*

   0*0 · * * J

   0 0 ·· · · *

   0 0 0 ·· ·

   0 · · · ·

   000 ··♦· periferní neuropatii, angiopatii, nootropické amyotrofickou laterální okulární angiogenezi, degeneraci, abnormální bolesti, nebo sklerózu, korneální amyloidovou zlepšení, sklerózu, makulární diabetes, hojení ran, korneální zjizvení, skleritis, AIDS, sepsi a septický šok u savce včetně člověka, obsahující množství sloučeniny podle patentového nároku 1 účinné v léčbě těchto onemocnění a farmaceuticky přijatelný nosič.

   36. Způsob léčby onemocnění vybraných ze skupiny obsahující artritis, nespecifické střevní záněty, Crohnovu - nemoc, emfyzém, akutní syndrom respirační tísně, astma, obstrukční plicní chorobu, Alzheimerovu nemoc, způsobenou orgánovou transplantací, kachexii, reakce, alergickou kontaktní hypersenzitivitu, chronickou toxicitu alergické nádorová onemocnění, tkáňové ulcerace, restenózy, periodontální chorobu, epidermolýzis bulosa, osteoporózu, uvolnění umělých kloubních implantátů, aterosklerózu, aortální aneurysma, městnavé srdeční selhání, infarkt myokardu, mozkovou mrtvici, mozkovou ischémii, trauma neurodegenerati vní onemocnění, hlavy, poranění míchy, autoimunní onemocnění,

   Huntingtonovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, migrénu, depresi, mozkovou amyloidovou kognitivní zlepšení, roztroušenou sklerózu, poranění, makulární popáleniny, diabetes, periferní neuropatii, bolesti, angiopatii, nootropické nebo amyotrofickou laterální sklerózu, okulární angiogenezi, korneální degeneraci, abnormální hojení ran, korneální zjizvení, skleritis, AIDS, sepsi a septický šok u savce včetně člověka, obsahující množství sloučeniny podle patentového nároku 1 účinné v léčbě těchto onemocnění.

   37. Farmaceutický preparát pro léčbu onemocnění, která mohou být léčena inhibici matrix metaloproteináz u savce včetně člověka, kterýžto preparát obsahuje množství sloučeniny podle • ♦ • · ·· patentového nároku 1 účinné v léčbě těchto onemocnění a farmaceuticky přijatelný nosič.

   38. Farmaceutický preparát pro léčbuu onemocnění, která mohou být léčena inhibici savčího reprolysinu u savce včetně člověka, kterýžto preparát obsahuje množství sloučeniny podle patentového nároku 1 účinné v léčbě těchto onemocnění a farmaceuticky přijatelný nosič.

   39. Způsob inhibice matrix metaloproteináz u savce včetně člověka, kterýžto způsob zahrnuje podání řečenému savci účinného množství sloučeniny podle patentového nároku 1.

   fc

   40. Způsob inhibice savčího reprolysinu u savce včetně člověka, kterýžto způsob zahrnuje podání řečenému savci účinného množství sloučeniny podle patentového nároku 1.