CN205193076U - 一种生物素-亲和素系统快速检测卡 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种生物素-亲和素系统快速检测卡，属于体外诊断试剂领域。本实用新型包括壳体（6），壳体（6）上设有加样孔（7）和观察孔（8）；壳体（6）内设有检测试纸条，检测试纸条包括底板（1）以及依次设置在底板（1）上的样品垫（2）、荧光标记物结合垫（3）、硝酸纤维素膜（4）和吸水纸（5）；硝酸纤维素膜（4）上设有包被有抗人单克隆抗体Ⅱ的检测带（T）和包被有羊抗鼠IgG的质控带（C）；加样孔（7）与样品垫（2）对应设置，观察孔（8）与硝酸纤维素膜（4）对应设置。本实用新型灵敏度高，特异性强，操作简便省时，检测结果准确、稳定，适合定性及定量检测样本。

Description

一种生物素-亲和素系统快速检测卡

技术领域

本实用新型涉及体外诊断试剂领领域，特别涉及一种生物素-亲和素系统快速检测卡。

背景技术

目前检测方法常用化学发光法、固相免疫层吸法、放射免疫分析法、免疫增强比浊法、胶体金法。这些检测诸多方法中均存在不足，如酶联免疫法、固相免疫层吸法、放射免疫分析法，操作繁琐、检测时间长、结果重复性差、核素污染，某些方法只能进行定性检测。化学发光免疫分析法虽具有准确、灵敏度高、特异性强、精密度好的优点，但其所用仪器价格昂贵，所用试剂又为进口试剂，一般实验室难以开展，并且不适用于急诊检验。

而在此基础上建立的生物素-亲和素系统(biotinavidinsystem，BAS)，是一种新型生物反应放大系统，主要表现为灵敏度高、特异性强、稳定性好、适用性强等方面，被广泛应用于医学各领域。亲和素（Avidin，AV）是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为68kDa，由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。亲和素的等电点低、不含糖基、与生物素高特异性结合，在检测运用中有高灵敏度、低非特异性的结合等优点，生物素易与蛋白质、核酸类生物大分子结合，形成生物素衍生物，再与SA结合，将信号多级放大且大分子原有生物活性得到保持，使检测方法的灵敏度显著提高。SA与生物素间具有极高的亲和力，其反应呈高度专一性，BSA系统的非特异性干扰低，且SA与生物素的结合高速、高效，检测时间快。酸碱、有机溶剂、变性剂均不影响SA与生物素的结合力。SA能够与绝大多数用于标记的物质结合，例如大分子物质：荧光蛋白、铁蛋白等。BAS系统可显著提高标记免疫检测的灵敏度，在免疫学领域中应用广泛。

将生物素-亲和素系统应用于免疫组化，酶联免疫，荧光免疫，放射免疫等检测技术中，可显著地提高以上技术方法的敏感性、特异性和稳定性，使方法更简便，有助于临床快速诊断。链霉亲和素现已经广泛应用于时间分辨免疫荧光技术定量PCR、单链DNA制备、生物大分子的纯化、单克隆抗体制备、生物芯片、肿瘤放射免疫诊断和治疗等领域，在生物技术领域将不断得到新的应用，应用范围非常广泛、应用潜力极大。利用生物素-亲和素系统研制检测快速诊断试剂尚无报道。

生物素-亲和素系统检测原理：BAS是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素与亲和素间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。链霉亲和素（Streptavidin，SA）是链霉亲和素菌在培养过程中的分泌产物，其生物学特性与亲和素（Avidin，AV）相似，与生物素结合常数为10¹⁵/M，是抗原抗体反应（10⁵/M~10¹¹/M）的一万倍以上。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了荧光蛋白的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于荧光蛋白在聚合到一定程度时发出荧光，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。链霉亲和素是与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白质，链霉亲和素与亲和素一样分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此几乎所有用于标记的物质均可以同亲和素或链霉亲合素结合。

实用新型内容

本实用新型的目的是提供一种生物素-亲和素系统快速检测卡，本实用新型的检测卡基于生物素-链霉亲和素放大系统、免疫层析技术和抗原抗体反应，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、适用性强等优点，适用于临床快速诊断。

本实用新型的技术方案为：

一种生物素-亲和素系统快速检测卡，包括壳体6，所述壳体6上设有加样孔7和观察孔8；所述壳体6内设有检测试纸条，所述检测试纸条包括底板1以及依次设置在底板1上的样品垫2、含有链霉亲和素标记的荧光蛋白和生物素标记的抗人单克隆抗体的荧光标记物结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5；所述硝酸纤维素膜4上设有包被有抗人单克隆抗体的检测带T和包被有羊抗鼠IgG的质控带C；所述样品垫2、荧光标记物结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5依次搭接设置在底板1上；所述加样孔7与样品垫2对应设置，所述观察孔8与硝酸纤维素膜4对应设置。

其中，链霉亲和素标记的荧光蛋白中，荧光蛋白为藻胆蛋白、绿色荧光蛋白中的一种。另外，抗人单克隆抗体和抗人单克隆抗体具有不同的识别表位。

作为优选方案，所述样品垫2、荧光标记物结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5依次搭接粘贴在底板1上。

作为优选方案，所述荧光标记物结合垫3和吸水纸5分别压接在硝酸纤维素膜4的两端；所述样品垫2压接在荧光标记物结合垫3上。

作为优选方案，所述加样孔7为圆形孔；所述观察孔8为矩形孔。

作为优选方案，所述壳体6包括上盖和底座，所述底座上设有放置检测试纸条的凹槽，加样孔7和观察孔8设置于所述上盖上。

本实用新型生物素-亲和素系统快速检测卡的工作原理如下：

采用免疫反应的原理和生物素-亲和素系统检测原理，利用双抗体夹心法制备而成。所述荧光标记物结合垫3含有链霉亲和素标记的荧光蛋白和生物素标记的抗人单克隆抗体，检验时样本与生物素标记的抗人单克隆抗体免疫反应，形成抗原抗体结合物，同时生物素与链霉亲和素标记的荧光蛋白体结合，形成抗原-抗体-生物素-链霉亲和素-荧光蛋白结合体，结合体随着样本在硝酸纤维素膜上层析流动，当复合物流层析至硝酸纤维素膜上的检测区处，与检测带上包被的抗人单克隆抗体发生反应，从而被固定在检测带上，样本中的抗原越多，检测带上的复合物越多，条带上的光密度值就越高。同时，未与抗原结合的抗体-生物素-链霉亲和素-荧光蛋白结合体不与检测带上的抗人单克隆抗体发生反应而继续向前移动，最后与质控带上的羊抗鼠IgG发生反应而固定在对照区（质控带）上。当样本中不含抗原时，则只显示一条质控带。当样本中含抗原时，检测带就会清晰的显示出来。

当反应结束后，利用免疫荧光测定仪将检测带和质控带的光密度进行分析，并将分析的结果进行运算，从而的得到相对光密度值（RI），然后检测仪根据已预先设置在检测仪内的标准曲线对抗原的浓度进行计算并显示结果。

本实用新型的有益效果为：

1、本实用新型利用“链霉亲和素-生物素放大系统”，提高检测灵敏度，降低非特异性结合，有利于提高检测卡性能。

2、本实用新型将荧光蛋白作为标记物，此标记物稳定性良好，有利于提高检测稳定性。藻胆蛋白作为荧光免疫检测系统，不仅克服了人工合成荧光素造价高、合成过程中产生有害物质等缺点，而且具有易于保存稳定的优点；藻胆蛋白色基多，荧光量子产率高；斯托克位移大，低非特异性吸附；荧光位于橙红光区，北京荧光干扰少；表面有很多活性集团交联方便；与抗体共价结合既保持了抗体的免疫特征，其光谱学特性也不受影响等优点。

3、利用本实用新型的检测时间不大于10分钟，极大地提高了检测效率。

4、本实用新型通过荧光免疫分析仪对结果进行判读，可实现自动化，减少主观因素的影响，提供便利、快速、可靠的诊断结果。

5、本实用新型可批量生产，适用于临床快速诊断和现场快速诊断；易于保存，有利于基层单位推广。

附图说明

为了更清楚地说明本实用新型实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本实用新型的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本实用新型生物素-亲和素系统快速检测卡中检测试纸条的结构示意图；

图2为本实用新型生物素-亲和素系统快速检测卡中壳体的结构示意图。

具体实施方式

实施例1

如图1、图2所示，一种生物素-亲和素系统快速检测卡，包括壳体6，壳体6包括上盖和底座，上盖和底座卡接；底座上设有放置检测试纸条的凹槽，上盖上设有加样孔7和观察孔8；加样孔7为圆形孔；观察孔8为矩形孔。

检测试纸条卡置于底座上的凹槽内。检测试纸条包括底板1以及依次设置在底板1上的样品垫2、荧光标记物结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5。样品垫2、荧光标记物结合垫3、硝酸纤维素膜4和吸水纸5依次搭接粘贴在底板1上；具体地，荧光标记物结合垫3和吸水纸5分别压接在硝酸纤维素膜4的两端；样品垫2压接在荧光标记物结合垫3上。加样孔7与样品垫2对应设置，观察孔8与硝酸纤维素膜4对应设置。

荧光标记物结合垫3上固定有生物素标记的单克隆抗体(浓度0.3～1.5mg/mL)和链霉亲和素(或亲和素)标记的荧光蛋白(使用激发光波长530nm，发射光波长570nm，浓度0.1～1.0mg/mL)；检测区内的硝酸纤维素膜4上固定有识别另外一个表位的单克隆抗体构成的检测带T(浓度0.5～3mg/mL)和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控带C(浓度0.2～2.0mg/mL)，质控带C用于检测试纸条的有效性。

链霉亲和素标记的荧光蛋白中，荧光蛋白为藻胆蛋白。另外，抗人单克隆抗体和抗人单克隆抗体具有不同的识别表位。

将生物素标记的单克隆抗体和链霉亲和素(或亲和素)标记的荧光蛋白固定在荧光标记物结合垫3上，将有识别另外一个表位的单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体包被固定于硝酸纤维素膜上分别作为检测带T和质控带C。荧光标记物结合垫上的生物素-抗体与链霉亲和素-荧光蛋白形成复合物“抗单克隆抗体I-生物素-链霉亲和素-荧光蛋白”，当待测样品加到样品垫2上后，通过层析作用向前移动，样品与“抗体-生物素-链霉亲和素-荧光蛋白”反应形成复合物在层析作用下反应复合物继续向前移动经过硝酸纤维膜上包被的抗单克隆抗体(检测带)时，反应复合物被包被的单克隆抗体捕获形成复合物，通过荧光免疫分析仪读取检测带的反应信号，在激发光源的作用下，荧光物质发射特定波长的荧光信号，荧光免疫分析仪俘获荧光信号，通过信号转化及设定的标准曲线自动转化为定量数值，计算出样本的浓度，得到结果。

本实用新型的检测试剂卡灵敏度高，特异性强，操作简便省时，检测结果准确、稳定，适合定性及定量检测样本。

本实用新型与目前常见的检测方法相比(如：化学发光法、固相免疫层吸法、放射免疫分析法、免疫增强比浊法、胶体金法)，不仅缩短了检测时间，降低了成本，简化了操作方法，最重要的是运用生物素-链霉亲和素放大系统在量极微时便可检测出，大大提高了检测灵敏度。

Claims (5)

1.一种生物素-亲和素系统快速检测卡，包括壳体（6），其特征在于：所述壳体（6）上设有加样孔（7）和观察孔（8）；所述壳体（6）内设有检测试纸条，所述检测试纸条包括底板（1）以及依次设置在底板（1）上的样品垫（2）、含有链霉亲和素标记的荧光蛋白和生物素标记的抗人单克隆抗体的荧光标记物结合垫（3）、硝酸纤维素膜（4）和吸水纸（5）；所述硝酸纤维素膜（4）上设有包被有抗人单克隆抗体的检测带（T）和包被有羊抗鼠IgG的质控带（C）；所述样品垫（2）、荧光标记物结合垫（3）、硝酸纤维素膜（4）和吸水纸（5）依次搭接设置在底板（1）上；所述加样孔（7）与样品垫（2）对应设置，所述观察孔（8）与硝酸纤维素膜（4）对应设置。

2.如权利要求1所述生物素-亲和素系统快速检测卡，其特征在于：所述样品垫（2）、荧光标记物结合垫（3）、硝酸纤维素膜（4）和吸水纸（5）依次搭接粘贴在底板（1）上。

3.如权利要求1或2所述生物素-亲和素系统快速检测卡，其特征在于：所述荧光标记物结合垫（3）和吸水纸（5）分别压接在硝酸纤维素膜（4）的两端；所述样品垫（2）压接在荧光标记物结合垫（3）上。

4.如权利要求1所述生物素-亲和素系统快速检测卡，其特征在于：所述加样孔（7）为圆形孔；所述观察孔（8）为矩形孔。

5.如权利要求1所述的生物素-亲和素系统快速检测卡，其特征在于：所述壳体（6）包括上盖和底座，所述底座上设有放置检测试纸条的凹槽，加样孔（7）和观察孔（8）设置于所述上盖上。