CN1911237B - 用于治疗乙型肝炎的β-L-2＇-脱氧-核苷 - Google Patents

Abstract

本发明涉及治疗宿主乙型肝炎感染的方法，该方法包括施用有效量的、具有抗-HBV生物活性的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷或其药学上可接受的盐或其前药，其中的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷具有式(I)结构，其中R选自基团H，直链、支链或环状的烷基，CO-烷基，CO-芳基，CO-烷氧烷基，CO-芳氧基烷基，CO-取代的芳基，烷基磺酰基，芳基磺酰基，芳烷基磺酰基，氨基酸残基，一、二或三磷酸酯，或磷酸酯衍生物；以及BASE是嘌呤或嘧啶碱基，它们可选择地被取代。2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷或其药学上可接受的盐或其前药可单独给药，也可以和其它的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷结合用药，或与其它抗乙型肝炎药剂结合用药。

Description

用于治疗乙型肝炎的β-L-2＇-脱氧-核苷

本申请为申请日为1999年8月10日，申请号为200410002863.9，发明名称为“用于治疗乙型肝炎的β-L-2′-脱氧-核苷”的专利申请的分案申请。

相关说明

本申请为CN99809553.2的分案申请。

发明的背景技术

本发明涉及乙型肝炎病毒(也称为“HBV”)治疗方法领域，该方法包括将一种或多种有效量的本文公开的活性化合物，或其中一种化合物的药学上可接受的前药或其盐单独或结合地给需要这种治疗的宿主单独施用。

除了烟草以外，在导致人的癌症方面HBV是第二位的。虽然假定它可以直接导致癌症的发展，或通过慢性炎症、肝硬化和与感染有关的细胞再生而间接导致癌症的发展，但是HBV诱导癌症的机理仍是未知的。

乙型肝炎已经成为在世界性的流行病。在经过宿主不知道已被感染的2-6个月的潜伏期之后，HBV感染可能引起急性肝炎和肝损伤，这可能会引起腹痛、黄疸以及血液中某些酶指标升高。HBV可能会引起急性重型肝炎，并会快速发展，这是常常导致患者死亡的疾病，所述的疾病会使肝脏的大部分受到破坏。

典型的患者能够从急性肝炎期恢复。但是，在一些患者的血液中高水平的病毒抗原继续发展，或者不稳定，或周期性引起慢性感染。慢性感染可导致慢性迁延性肝炎。慢性迁延性肝炎的患者在发展中国家是很普遍的。到1991年中期，仅在非洲就有二亿二千五百万慢性的HBV携带者，在全世界大约有三亿病毒携带者。慢性迁延性肝炎可引起疲劳，肝硬变和肝细胞癌，原发肝癌。

在西方发达国家，HBV感染的高发人群包括和HBV携带者或他们的血液样品接触的人。HBV的流行病学调查与获得性免疫缺陷综合征(AIDS)非常相似，这说明了为什么在AIDS患者或与AIDS有关的综合症患者中常常会出现HBV感染。但是，HBV比HIV的传染性更强。

但是，最近通过基因工程已经生产出疫苗，并且被广泛应用。不幸的是，疫苗对已经感染了HBV的人没有帮助。α-干扰素是由基因工程制备的蛋白质，每天用其治疗是允许的，但是治疗的成功率只有三分之一左右。另外，干扰素也不能口服给药。

现已鉴定出具有抗HBV活性的一些合成核苷。BCH-189，的(-)-对映体，已知为3TC，是U.S.P 5,539,116(Liotta等人)要求保护的产品，已经被U.S.Food and Drug Administration批准用于肝炎的治疗。另外，也可参见EP-A-0494 119 A1，申请人为Bio Chem Phanna，Inc.。

顺式-2-羟甲基-5-(5-氟胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫杂戊烷(″FTC″)具有抗HBV活性，参见WO 92/15308；Furman等人，″The Anti-Hepatitis BVirus Activities，Cytotoxicities，and Anabolic Profiles of the(-)and(+)Enantiomers                                                       ofcis-5-Fluoro-l-[2-(Hydroxymethyl)-1，3-oxathiolane-5-yl]-Cytosine″，Antimicrobial Agents and Chemotherapy，1992年12月，p 2686-2692；和Cheng等人，Journal of Biological Chemistry，Vol.267(20)，13938-13942(1992)。

von Janta-Lipinski等人公开的3′-氟-改性的-β-2′-脱氧核糖核苷5′-三磷酸酯可用于抑制乙型肝炎的多聚酶(J.Med.Chem.，1998，41，2040-2046)。具体地说，已经公开了下述核苷的5′-磷酸酯是有效的HBV DNA多聚酶抑制剂：3′-脱氧-3′-氟-β-L-胸腺嘧啶核苷(β-L-FTTP)，2′，3′-二脱氧-3′-氟-β-L-5-胞嘧啶核苷(β-L-FdCTP)，and 2′，3′-二脱氧-3′-氟-β-L-5-甲基胞嘧啶核苷(β-L-FMethCTP)。

WO 96/13512(Genencor International，Inc.和Lipitek，Inc.)公开的某些L-呋喃核糖基核苷可用于治疗癌症和病毒。特别是公开了此类化合物治疗癌症和HIV的应用。

U.S.P 5,565,438，5,567,688和5,587,362(Chu等人)公开了2′-氟-5-甲基-β-L-阿拉伯呋喃糖基尿嘧啶核苷(L-FMAU)用于治疗乙型肝炎和Epstein Barr病毒的应用。

Yale University and University of Georgia Research Foundation，Inc.在WO 92/18517中公开了用于治疗乙型肝炎病毒的L-FddC(β-L-5-氟-2′，3′-二脱氧胞苷)。

核苷类β-L-2′-脱氧胞苷(β-L-2′-dC)，β-L-2′-脱氧胸苷(β-L-dT)和β-L-2′-脱氧腺苷(β-L-2′-dA)的合成在本领域是已知的。1972年，Antonin Holy首次公开了β-L-dC和β-L-dT，“Nucleic AcidComponents and Their Analogs.CL III.Preparation of2′-deoxy-L-Ribonucleosides of the Pyrimidine Series″，Collect.Czech.Chem.Commun.，(1972)，37(12)，4072-87。Morris S.Zedeck等人在Mol.Phys.(1967)，3(4)，386-95中首次公开了用于抑制Pseudomonastestosteroni中诱导酶合成的β-L-dA。

某些2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷是已知的，它们具有抗肿瘤和选择性的抗病毒活性。Verri等人公开了2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷作为抗肿瘤剂和抗疱疹病毒剂(Mol.Pharmacol.(1997)，51(1)，132-138和Biochem.J(1997)，328(1)，317-20)。Saneyoshi等人指出2′-脱氧-L-核苷可作为反转录酶(1)抑制剂，用于控制反转录病毒和治疗AIDS，参见Jpn.Kokal Tokkyo Koho，JP06293645(1994)。

Giovanni等人尝试用2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷治疗假狂犬病病毒(PRV)，见Biochem.J.，(1993)，294(2)，381-5。

Tyrsted等人(Biochim.Biophys.Acta(1968)，155(2)，619-22)和Bloch等人(J.Med.Chem.，(1967)，10(5)，908-12)研究了用于化疗的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷。

本领域已知β-L-2′-脱氧胸苷(β-L-dT)可用于抑制疱疹复合病毒1型(HSV-1)胸腺嘧啶激酶(TK)。lotti等人在WO 92/08727中指出β-L-dT是通过HSV-1TK，而不是通过人的TK选择性抑制D-胸苷的磷酸化作用。Spaldari等人报道了L-胸苷被疱疹复合病毒1型胸腺嘧啶激酶磷酸化，并且抑制病毒生长，J.Med.Chem.，(1992)，35(22)，4214-20。

鉴于乙型肝炎已经成为世界范围的流行病，其对感染的患者具有严重的，并且常常是悲剧式的结果，因此对给宿主提供新的、有效低毒的治疗药物，以治疗人的病毒感染有强烈的需求。

因此，本发明的目的是提供治疗人或其它宿主的乙型肝炎感染的新方法和新的组合物。

发明概述

本发明公开了治疗人或其它宿主的乙型肝炎感染的方法，包括将一种或多种有效量的、有生物活性的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷(本文也称为β-L-d-核苷或β-L-2′-d-核苷)或其药学上可接受的盐或其前药，单独或结合地给需要这种治疗的患者施用，其中选择性地含有药学上可接受的载体。在本说明书中使用的术语“2′-脱氧”是指在核苷的2′-位上没有取代基。

本发明公开的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷，或其药学上可接受的前药，或其盐，或含有这些化合物的药用制剂用于预防和治疗乙型肝炎感染和其它有关的症状，如抗HBV抗体阳性和HBV-阳性症状、由HBV引起的慢性肝炎、肝硬化、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性迁延性肝炎和疲劳。这些化合物或制剂也可以用于预防性地防止或延迟患有HBV抗体阳性或HBV-抗原阳性或与HBV接触的个体的临床症状的发展。

在本发明的一个实施方案中，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物是下式化合物：

其中R选自H，直链、支链或环状的烷基，CO-烷基，CO-芳基，CO-烷氧烷基，CO-芳氧基烷基，CO-取代的芳基，烷基磺酰基，芳基磺酰基，芳烷基磺酰基，氨基酸残基，一、二或三磷酸酯，或磷酸酯衍生物；以及BASE是嘌呤或嘧啶碱基，它们可选择地被取代。

在本发明的另一实施方案中，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物是下式的β-L-2′-脱氧腺苷，或其药学上可接受的盐或其前药：

其中R选自H，一、二或三磷酸酯，酰基或烷基，或稳定的磷酸酯衍生物(形成稳定的核苷酸前药)。

在本发明的另一实施方案中，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物是下式的β-L-2′-脱氧胞苷，或其药学上可接受的盐或其前药：

其中R选自H，一、二或三磷酸酯，酰基或烷基，或稳定的磷酸酯衍生物(形成稳定的核苷酸前药)。

在本发明的另一实施方案中，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物是下式的β-L-2′-脱氧尿苷，或其药学上可接受的盐或其前药：

其中R选自H，一、二或三磷酸酯，酰基或烷基，或稳定的磷酸酯衍生物(形成稳定的核苷酸前药)。

在本发明的另一实施方案中，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物是下式的β-L-2′-脱氧鸟苷，或其药学上可接受的盐或其前药：

其中R选自H，一、二或三磷酸酯，酰基或烷基，或稳定的磷酸酯衍生物(形成稳定的核苷酸前药)。

在本发明的另一实施方案中，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物是下式的β-L-2′-脱氧肌苷，或其药学上可接受的盐或其前药：

其中R选自H，一、二或三磷酸酯，酰基或烷基，或稳定的磷酸酯衍生物(形成稳定的核苷酸前药)。

在本发明的另一实施方案中，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物是下式的β-L-2′-脱氧胸苷，或其药学上可接受的盐或其前药：

其中R选自H，一、二或三磷酸酯，酰基或烷基，或稳定的磷酸酯衍生物(形成稳定的核苷酸前药)。

在本发明的另一实施方案中，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷与一种或多种其它2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷，或与一种或多种对乙型肝炎病毒显示出活性的化合物交替给药或结合给药。一般来说，在进行交替给药治疗时，将每一种药剂的有效剂量连续给药；在结合给药治疗时，以两种或多种药剂的有效剂量同时给药。所用的剂量取决于药物的吸收、失活和排泄速率，以及本领域熟练技术人员所知的其它因素。需要注意的是，剂量的数值还可随着所治疗症状的严重程度变化。进一步的，对一个特定的接受者而言，特定的剂量和用药日程应该按照个体的需要，以及开药或监督组合物给药的医生的处方随时间调整。

在另一实施方案中，本发明包括了治疗人的HBV感染的方法，该方法包括施用本发明公开的、HBV治疗有效量的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物的前药。这里所述的前药是指在体内用药后能够转化成本发明核苷的化合物。非限定的实例包括药学上可接受的盐(或称为″生理上可接受的盐″)，活性化合物的5′和N⁴(胞苷)或N⁶(腺苷)酰化或烷基化的衍生物，或是活性化合物的5′-磷脂或5′-醚脂。

附图说明

图1说明了用L-核糖或L-木糖作原料，制备得到β-L-赤式-呋喃戊糖核苷(β-L-dN)的一般方法。

图2说明了根据积累和衰变的规律，L-dA，L-dC，和L-dT在人体的Hep G2细胞中的代谢图。所述的细胞用10μM化合物孵化。

图3说明β-L-dA、β-L-dT和β-L-dC在土拨鼠慢性肝炎模型中的抗病毒效果。

发明的详细描述

本文所用的术语“基本是单一异构体形式”或“以分离的形式”是指2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷至少是以差不多95％的指定立体构型存在，在一优选的实施方案中，活性化合物至少是以此纯度给需要治疗的患者用药。

如本文所用的术语乙型肝炎和其有关的症状是指乙型肝炎和例如下述的有关症状：抗HBV抗体阳性和HBV-阳性症状、由HBV引起的慢性肝炎、肝硬化、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性迁延性肝炎和疲劳。本发明的方法包括应用2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物预防性地防止或延迟患有HBV抗体阳性或HBV-抗原阳性或与HBV接触的个体的临床症状的发展。

除非另有说明，本文所用的术语烷基是指饱和的直链、直链或环状的伯、仲或叔烃，典型的是C₁-C₁₈，优选C₁-C₆，特别是包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、新戊基(amyl)、叔戊基、环戊基和环己基。

这里所用的术语酰基是指式-C(O)R′部分，其中的R′是烷基；芳基，烷芳基，芳烷基，杂芳基，包括甲氧基甲基的烷氧烷基；包括苄基的芳烷基；芳氧基烷基如苯氧基甲基；包括用卤素、C₁-C₄烷基或C₁-C₄烷氧基取代的苯基的芳基，或氨基酸残基。特别是术语酰基包括但不限于乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、3-甲基丁酰基、琥珀酸氢酯、3-氯苯甲酸酯、苯甲酰基、乙酰基、新戊酰基、甲磺酸酯、丙酰基、戊酰基、正己酰基、辛酰基、癸酰基、十二烷酰基、十四烷酰基、十六烷酰基、硬脂酰基和油酰基。

这里所用术语嘌呤或嘧啶碱基，包括但不限于6-烷基嘌呤类和N⁶-烷基嘌呤类，N⁶-酰基嘌呤类，N⁶-苄基嘌呤，N⁶-卤代嘌呤，N⁶-乙烯基嘌呤，N⁶-乙炔基嘌呤，N⁶-酰基嘌呤，N⁶-羟烷基嘌呤，N⁶-硫代烷基嘌呤，N²-烷基嘌呤类，N⁴-烷基嘧啶类，N⁴-酰基嘧啶类，4-苄基嘧啶，N⁴-卤代嘧啶类，N⁴-乙炔基嘧啶类，4-酰基和N⁴-酰基嘧啶类，4-羟烷基嘧啶类，4-硫代烷基嘧啶类，胸腺嘧啶，胞嘧啶，6-氮杂嘧啶，包括6-氮杂胞嘧啶，2-和/或4-巯基嘧啶，尿嘧啶，C⁵-烷基嘧啶类，C⁵-苄基嘧啶类，C⁵-卤代嘧啶类，C⁵-乙烯基嘧啶，C⁵-乙炔基嘧啶，C⁵-酰基嘧啶，C⁵-羟烷基嘌呤，C⁵-酰胺基嘧啶，C⁵-氰基嘧啶，C⁵-硝基嘧啶，C⁵-氨基嘧啶，N²-烷基嘌呤类，N²-烷基-6-硫代嘌呤类，5-氮杂胞苷基，5-氮杂尿嘧啶基，三唑并吡啶基，嘧唑并吡啶基，吡咯并吡啶基和吡唑并嘧啶基。必要和需要时，可把碱上的功能性氧和氮基团保护起来。适当的保护基团是本领域已知的，包括三甲基甲硅烷基，二甲基己基甲硅烷基，叔丁基二甲基甲硅烷基和叔丁基二苯基甲硅烷基，三甲苯基，烷基，酰基如乙酰基和丙酰基，甲磺酰基和对甲苯磺酰基。

这里所用的术语生物活性核苷是指在用肝炎病毒进行2.2.15细胞转染试验时，核苷所表现出来的EC₅₀为15摩尔或更少。

优选的碱包括胞嘧啶，5-氟胞嘧啶，5-溴胞嘧啶，5-碘胞嘧啶，尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，5-溴尿嘧啶，5-碘尿嘧啶，5-甲基尿嘧啶，胸腺嘧啶，腺嘌呤，鸟嘌呤，肌苷，黄嘌呤，2，6-二氨基嘌呤，6-氨基嘌呤，6-氯嘌呤和2，6-二氯嘌呤，6-溴嘌呤，2，6-二溴嘌呤，6-碘嘌呤，2，6-二碘嘌呤，5-溴乙烯基胞嘧啶，5-溴乙烯基尿嘧啶，5-溴乙烯基胞嘧啶，5-溴乙烯基尿嘧啶，5-三氟甲基胞嘧啶，5-三氟甲基尿嘧啶。

如在下述文献中所公开的，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷可以5′-磷脂或5′-磷醚的形式提供：Kucera，L.S.，N.Lyer，E.Leake，A.Raben，Modest  E.J.，D.L.W.，和C.Piantadosi.1990.Novelmembrane-interactive ether lipid analogs that inhibit infectious HIV-1production and induce defective virus formation.AIDS Res HumRetroviruses.6：491-501；Piantadosi，C.，J.Marasco C.J.，S.L.morris-Natschke，K.L.Meyer，F.Gumus，J.R.Surles，K.S.Ishaq，L.S.Kucera，N.lyer，CA.Wallen，S.Piantadosi，和E.J.Modest.199l-Synthesis and evaluation of novel ether lipid nucleoside conjugatesfor anti-HIV activity.J Med Chem.34：1408-1414；Hosteder，K.Y.，D.D.Richman，DA.Carson，L.M.Stuhmiller，G.M.T.van Wijic，和H.vanden Bosch.1992.Greafly enhanced inhibition of human immunodeficiencyvirus type 1 replication in CEM and HT4-6C cells by 31-deoxythymidinediphosphate dimyristoylglycerol，a lipid prodrug of 31-deoxythymidine.Antimicrob Agents Chemother.36：2025-2029；Hostetler，K.Y.，L.M.StuInniller，H.B.Lenting，H.van den Bosch，和D.D.Richman.1990.Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs ofazidothymidine and other antiviral nucleosides.J.Biol Chem.265：6112-7。

通过与适当的酯化剂如酰卤或酸酐进行反应，可将2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷转化成药学上可接受的酯。按照常规的方法可将核苷或其药学上可接受的前药转化成药学上可接受的盐，例如通过用适当的酸或碱进行处理。也可以把所述的酯或盐转化成其母体的核苷，例如通过水解实现。

本文所用的术语药学上可接受的盐或复合物是指2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷的盐或复合物，它们保留了母体化合物所需要的生物活性，并且在有毒性时使不需要的毒性作用最小。这些盐的非限制性实例是(a)与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)形成的酸加成盐，与有机酸形成的盐，所述的有机酸例如是乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、棕榈酸(palmoicacid)、藻朊酸、多谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸和多半乳糖醛酸；(b)与阳离子(如钠、钾、锌、钙、铋、钡、镁、铝、铜、钴、镍、镉、钠、钾等)或与N，N-二苄基乙二胺、铵或乙二胺生成的有机阳离子形成的碱加成盐；或(c)(a)和(b)的结合，如鞣酸锌盐等。

本文所用的术语前药是指给药后在体内可转化成核苷的化合物。非限制性的实例是药学上可接受的盐(另外也可以称为“生理上可接受的盐”)，活性化合物的5′和N⁴或N⁶酰化或烷基化的衍生物，以及活性化合物的5′-磷脂和5′-醚脂衍生物。

活性化合物的改性，特别是在其N⁴，N⁶and 5′-O位的改性可影响活性物质的生物利用率和代谢速率，因此可控制活性物质的释放。

本发明优选的实施方案是治疗人或其它宿主动物的HBV感染的方法，该方法包括施用有效量的一种或多种选自下述的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物：β-L-2′-脱氧腺苷，β-L-2′-脱氧胞苷，β-L-2′-脱氧尿苷，β-L-2′-脱氧鸟苷，β-L-2′-脱氧肌苷，β-L-2′-脱氧胸苷或它们生理上可接受的前药，包括磷酸酯，5′和/或N⁶烷基化或酰基化的衍生物，或其生理上可接受的盐，并且选择性地有药学上可接受的载体。本发明化合物或者具有抗-HBV活性，或者能够代谢成具有抗-HBV活性的一种或多种化合物。在优选的实施方案中，2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷基本上是以单一异构体的形式给药，即其指定的立体构型至少在95％左右。

核苷前药

本文所述的任一核苷均可以稳定的核苷前药给药，以提高核苷的活性、生物利用率、稳定性或核苷的其它性能。一些核苷的配体是已知的。一般，核苷的烷基化、酰化或其它一、二或三磷酸酯化的亲脂改性，可提高核苷的稳定性。在磷酸酯部分可代替一个或多个氢原子的取代基的实例是烷基，芳基，类固醇，碳水化合物，其中包括蔗糖、1，2-甘油二酯和醇类。其中有许多在R.Jones和N.Bischofberger，Antiviral Research，27(1995)1-17中已有描述。上述任意一种都可以与本发明公开的核苷结合使用以达到预期的效果。

在一实施方案中，可以提供的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷是其5′-羟基亲脂化的前药。美国专利公开了有适当的亲脂化取代基的非限制性实例，它们以共价键引入核苷，优选在核苷的5′-O位引入，或者是亲脂化的制剂，这些专利包括U.S.P 5,149,794(1992年9月22日，Yatvin等人)；5,194,654(1993年3月16日，Hostetler等人)；5,223,263(1993年6月29日，Hostetler等人)；5,256,641(1993年10月26日，Yatvin等人)；5,411,947(1995年5月2日，ostetler等人)；5,463,092(1995年10月31日，Hostetler等人)；5,543,389(1996年8月6日，Yatvin等人)；5,543,390(1996年8月6日，Yatvin等人)；5,543,391(1996年8月6日，Yatvin等人)；和5,554,728(1996年9月10日；Basava等人)。

前述专利申请公开的亲脂化取代基可连接于本发明的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物，并且还公开了亲脂化的制剂，这些专利包括WO 89/02733，WO 90/00555，WO 91/16920，WO 91/18914，WO93/00910，WO 94/26273，WO 96/15132，EP 0 350 287，EP 93917054.4和WO 91/19721。

2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷的其它非限制性实例是含有下述公开出版物所述取代基的化合物。它们所衍生的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷可用于本文所述的适应症，或者还可以作抗病毒剂，包括抗-HBV剂。Ho，D.H.W.(1 973)Distribution of kinase and deaminase of1β-D-arabinoftnanosylcytosine in tissues of man and mouse.Cancer Res.33，2816-2820；Holy，A.(1993)Isopolar phosphorous-modifiednucleotide analogues.In：De Clercq(Ed.)，Advances in Antiviral DrugDesign，Vol.1，JAI Press，pp.1 79-23 1；Hong，C.I.，Nechaev，A.，和West，C.R.(1 979a) Synthesis and antitumor activity of1β-D-arabinofuranosylcytosine conjugates of cortisol and cortisone.Biochem.Biophys.Rs.Commun.88，1223-1229；Hong，C.I.，Nechaev，A.，Kirisits，A.J.Buchheit，D.J.和West，C.R.(1980)Nucleoside conjugatesas potential antitumor agents.3.Synthesis and antitumor activity of1-(β-D-arabinofiiranosyl)cytosine conjugates of corticosteriods andselected lipophilic alcohols.J Med.Chem.28，171-177；Hostetler，K.Y.，Stuhmiller，L.M.，Lenting，H.B.M.van den Bosch，H.和Riclirnan，D.D.(1990)Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs ofazidothymidine and other antiviral nucleosides.J Biol.Chem.265，61 12-6117；Hostetler，K.Y.，Carson，D.A.和Richnian，D.D.(1991)；Phosphatidylazidothymidine：mechanism of antiretroviral action in CEMcells，J.Biol.Chem.266，11714-11717；Hostetler，K.Y.，Korba，B.Sridhar，C.，Gardener，M.(1994a)Antiviral activity ofphosphatidyl-dideoxycytidine in hepatitis B-infected cells and enhancedhepatic uptake in mice.Antiviral Res.24，59-67；Hostetler，K.Y.，Richman，D.D.，Sridhar，C.N.Feigner，P.L，Feigner，J.，Ricci，J.，Gardener，M.F.Selleseth，D.W.和Ellis，M.N.(1994b)Phosphatidylazidothymidineand phosphatidyl-ddC：Assessment of uptake in mouse lymphoid tissuesand antiviral activities in human immunodeficiency virus-infected cellsand in rauscher leukemia virus-infected mice.Antimicrobial AgentsChemother.38，2792-2797；Hunston，R.N.，Jones，A.A.McGuigan，C.，Walker，R.T.，Balzarini，J.，和De Clercq，E.(1984)Synthesis andbiological properties of some cyclic phosphotriesters derived from2′-deoxy-5-fluorouridine.J.Med.Chem.27，440A44；Ji，Y.H.，Moog，C.，Schmitt，G.，Bischoff，P.和Luu，B.(1990)，Monophosphoric acid diestersof 7β-hydroxycholesterol and of pyrimidine nucleosides as potentialantitumor agents：synthesis and preliminary evaluation of antitumoractivity.J.Med Chem.33，2264-2270；Jones，A.S.，McGuigan，C.，Walker，R.T.，Baizarini，J.and D～lercq，E.(1984)Synthesis，properties，and biological activity of some nucleoside  cyclic phosphoramidates.JChem.Soc.Perkin Trans.I，1471-1474；Juodka，B.A.和Smart，J.(1974)Synthesis of ditribonucleoside a(p→N)amino acid derivatives.Coil.Czech.Chem.Comm.39，363-968；Kataoka，S.，Imai，J.，Yamaji，N.，Kato，M.，Saito，M.，Kawada，T.和Imal，S.(1989)AIkylated cAMPderivatives；selective synthesis and biological activities.Nucleic Acids Res.Sym.Ser.，21，1-2；Kataoka，S.，Uchida，R.和Yamaji，N.(1991)Aconvenient synthesis of adenosine 3′，5′cyclic phosphate(cAMP)benzyland methyl triesters.Heterocycles32，1351-1356；Kinchington，D.，Harvey，J.J.，O′Connor，T.J.，Jones，B.C.N.M.，Devine，K.G.，Taylor-Robinson，D.，Jefflies，D.J.和McGuigan，C.(1992)Comparison of antiviral effects ofzidovudine phosphoramidate and phosphorodiamidate derivatives againstHIV and Mul V in vitro.Antiviral Chem.Chemother.3，107-112；Kodama，K.，Morozumi，M.，Saitoh，K.I.，Kuninaka，H.，Yoshino，H.和Saneyoshi，M.(1989)Antitumor activity and pharmacology of1-β-D-arabinofliranosylcytosine  -5′-stearylphosphate；an orally activederivative of 1-β-D-arabinofiiranosylcytosine.Jpn.J.Cancer Res.80，679-685；Korty，M.和Engels，J.(1979)The effects ofadenosine-andguanosine 3′，5′-phosphoric and acid benzyl esters on guinea-pigve～tricular myocardium.Naunyn-Schmiedeberg′s Arch.Pharmacol.310，103-111；Kumar，A.，Goe，P.L.，Jones，A.S.Walker，R.T.Balaarini，J.和De Clercq，E.(1990)Synthesis and biological evaluation of some cyclicphosphoramidate nucleoside derivatives.J.Med.Chem.33，2368-2375；LeBec，C.，和Huynh-Dinh，T.(1991)Synthesis of lipophilic phosphatetriester derivatives of 5-fluorouridine and arabinocytidine as anticancerprodrugs.Tetrahedron Lett.32，6553-6556；Lichtenstein，J.，Barner，H.D.和Cohen，S.S.(1960)The metabolism of exogenously suppliednucleotides by Escherichia coli，J.Biol.Chem.235，457-465；Lucthy，J.，Von Daeniken，A.，Friederich，J.Manthey，B.，Zweifel，J.，Schiatter，C.和Benn，M.H.(1981)Synthesis and toxicological properties of threenaturally occurring cyanoepithioalkanes.Mitt.Geg.Lebensmittelunters.Hyg.72，131-133(Chem.Abstr.95，127093)；McGuigan，C.Tollerfield，S.M.和Riley，P.A.(1989)Synthesis and biological evaluation of somephosphate triester derivatives of the anti-viral drug Ara.Nucleic Acids Res.17，6065-6075；McGuigan，C.，Devine，K.G.，O′Connor，T.J.，Galpin，S.A.，Jeffries，D.J.和Kinchington，D.(1990a)Synthesis and evaluationof some novel phosphoramidate derivatives of 3′-azido-3′-deoxythymidine(AZT)as anti-HIV compounds.Antiviral Chem.Chemother.1，107-113；McGuigan，C.，O′Connor，T.J.，Nicholls，S.R.Nickson，C.和Kinchington，D.(1990b)Synthesis and anti-HIV activity of some novel substituteddialkyl phosphate derivatives of AZT 和ddCyd.Antiviral Chem.Chemother.1，355-360；McGuigan，C.，Nicholls，S.R.，O′Connor，T.J.，and Kinchington，D.(1990c)Synth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结合或交替治疗

已经认识到，在用抗病毒剂长期治疗之后，对HBV的变异体可能会出现抗药性。最典型的抗药性是因为病毒生存期中所用酶的编码基因发生突变而形成的，最典型的是HBV，DNA聚合酶。最近，已经知道抗HBV病毒感染的效力可以延长、扩展或恢复，这可通过将本发明化合物和第二，并且可能是和第三种抗病毒化合物结合或交替给药来实现，所述的第二或第三种化合物可诱发与基本药物不同的突变。另外，通过这种结合或交替治疗也可以改变所述药物的药动力学、生物学分布或其它药物参数。一般来说，结合治疗通常比交替治疗更优选，因为它可使病毒同时产生多种作用。

本文所述的β-L-2′-dA、β-L-2′-dC、β-L-2′-dU、β-L-2′-dG、β-L-2′-dT、β-L-dI或其它β-L-2′-核苷，或这些化合物的前药、磷酸酯或盐的抗乙型肝炎病毒的活性通过以其中的两种或多种核苷结合或交替使用，可得到提高。另外，例如把本文提供的β-L-2′-dA、β-L-2′-dC、β-L-2′-dU、β-L-2′-dG、β-L-2′-dT、β-L-dI或其它β-L-2′-核苷与3TC，FTC，L-FMAU，DAPD，法昔洛韦(famciclovir)，penciclovir，BMS-200475，bis pomPMEA(adefovir，dipivoxil)；lobucavir，9-1，3-二羟-2-丙氧甲基鸟嘌呤(ganciclovir)，或ribavarin结合或交替给药。

在本文的任一实施方案中，如果本发明的β-L-2′-核苷与被酶磷酰化成活性形式的第二种核苷类或非核苷类反转录酶抑制剂结合或交替用药，优选第二种化合物的磷酰化与所选用的本发明的β-L-2′-核苷在体内的磷酰化酶不同。激酶的实例是胸腺嘧啶激酶、胞嘧啶激酶、鸟苷激酶、腺苷激酶、脱氧胞苷激酶、5′-核苷酸酶和脱氧鸟苷激酶。活性化合物的制备

本发明的2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷衍生物在本领域是已知的，可按照Holy，Collect.Czech.Chem.Commun.(1972)，37(12)，4072-87和Mo).Phys.(1967)，3(4)，386-95公开的方法制备。

用L-核糖或L-木糖唑原料制备β-L-赤式-呋喃戊糖核苷(β-L-dN)的一般方法如图1所示。

活性核苷的一、二或三磷酸酯衍生物可按照已经公开的方法制备。一磷酸酯可按照Imal等人在J.Org.Chem.，34(6)，1547-1550(1969年6月)中所述的方法制备。二磷酸酯可按照Davisson等人在J.Org.Chem.，52(9)，1794-1801(1987)中所述的方法制备。三磷酸酯可按照Hoard等人在J.Am.Chem.Soc.，87(8)，1785-1788(1965)中所述的方法制备。

实验方法

熔点是用Gallenkamp MFB-595-010M的仪器，用开口毛细管进行测定，并且未经校正。UV吸收光谱用Uvikon 931(KONTRON)分光光度计在乙醇中进行测定。¹H-NMR谱是在室温下，于DMSO-d₆中，用Bruker AC 250或400光谱仪测定。化学位移以ppm给出，以DMSO-d₅为2.49ppm作为参考值。为了确认质子的排布，进行了氘互换、脱偶试验或2D-COSY试验。信号的多样性用下述方式表示：s(单峰)，d(双峰)，dd(双重双峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，br(宽峰)，m(多重峰)。所有的J-值单位是赫兹(Hz)。FAB质谱是用正-(FAB＞0)或负-(FAB＜0)离子脉冲装置，在JEOL DX 300质谱仪上进行的，基质是3-硝基苯甲醇(NBA)或甘油和硫代甘油(GT)的混合物(50∶50，v/v)。比旋光用Perkin-Elmer 241旋光分光计(通道长1cm)，单位是10^-1degcm²g^-1。.元素分析用″Service de Microanalyses du CNRS，Division deVernaison″(法国)测定，分析结果用元素符号标明，其功能在理论值的±0.4％之内。薄层色谱在预涂了Silica Gel 60F₂₅₄(Merck，Art.5554)的铝板上进行，通过UV吸收，再用10％乙醇硫酸炭化和加热后，完成产品的显色。柱色谱在大气压下，于Silica Gel 60(Merck，Art.9385)柱上完成。

实施例1  2′-脱氧-β-L-腺苷的立体有择合成

9-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-木糖型呋喃糖基)腺苷(3)

9-(2-O-乙酰基-3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-木糖型呋喃糖基)腺苷2[参见：Gosselin，G；Bergogne，M.-C.；Imbach，J.-L，″Synthesis andAntiviral Evaluation of β-LXyloftnanosyl Nucleosides of the FiveNaturally Occuring Nucleic Acid Bases″，Journal of HeterocyclicChemistry，1993，30(Oct.-Nov.)，1229-1233](8.30g，16.05mmol)和98％水合肼(234mL，48.5mmol)在吡啶/冰乙酸混合物(4/1，v/v，170mL)中的溶液于室温下搅拌22小时。加入丙酮(40mL)使反应停止反应并继续搅拌1小时。将反应混合物减至其体积的一半，用水(250mL)稀释，用氯仿(2×150mL)萃取。有机层用NaHCO₃(3×100mL)饱和水溶液和水(3×100mL)依次洗涤，干燥，过滤，浓缩并同甲苯和甲醇共蒸发。残留物用硅胶柱色层法(0-3％MeOH在二氯甲烷中)纯化，.得到从二异丙醚中沉淀的3(5.2g，68％)：′H NMR(DMSO-d₆)：δ4.5-4.9(m，4H，H-2′，H-4′，H-5′和H-5″)，5.64(t，1H，H-3′，J_2′，3′＝J_3′，4′＝3.5Hz)，6.3(br s，1H，OH-2′)，6.45(d，1H，H-1′，J₁′_，2′＝4.6Hz)，7.3(br s，2H，NH₂-6)，7.4-7.9(m，10H，2苯甲酰基)，8.07和8.34(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z 476[M+H]⁺，136[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z 474[M-H]^-，134[B]^-；UV(95％乙醇)：λmax 257nm(ε16400)，230nm(ε29300)，λmin 246nm(ε14800)；[α]_D ²⁰＝-64(c 1.07，CHCl₃).元素分析计算值C₂₄H₂₁N₅0₄(M＝475.45)：C，6043；H，4.45；N，14.73。实测值：C，60.41；H，4.68；N，14.27。

9-(3，5-二-O-苯甲酰基-2-脱氧-β-L-苏式-呋喃戊糖基)腺苷(4)

向化合物3(1.00g，2.11mmol)的干燥乙腈(65mL)溶液加入4-(二甲氨基)吡啶(0.77g，6.32mmol)和苯氧硫代碳酰氯(0.44mL，3.16mmol)。该混合物于室温下搅拌2小时。在浓缩后，将残留物溶解在二氯甲烷中(50mL)，用水(2×30mL)、0.5N盐酸水溶液(30ml)和水(3×30mL)依次洗涤。将有机层干燥、过滤、浓缩至干。该粗硫代碳基化的中间体用三(三甲代甲硅烷基)硅烷水合物(0.78mL，5.23mmol)和α，α′-偶氮异丁腈(AIBN，0.112g，0.69mmol)在干燥二噁烷(17mL)中回流2小时进行直接处理。真空排除溶剂，残留物用硅胶柱色层法(0-5％MeOH在二氯甲烷中)纯化，得到泡沫状的纯4(0.93g，96％)：¹H NMR(DMSO-d₆)：δ62.9-3.1(m，2H，H-2′和H-2″)，4.6-4.7(m，3H，H4′，H-5和d H-5″)，5.8(br s，1H，H-3′)，6.43(dd，1H，H-l′，J₁′_，2′＝3.1Hz，J₁′_，2′＝7.6Hz)，7.3(br s，2H，NH₂-6)，7.4-7.9(m，10H，2苯甲酰基)，8.05和8.33(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T(FAB+)m/z 460[M+H]+，325[S]+，136(BH₂]+，(FAB^-)m/z 458(M-H]^-，134[B]^-；UV(95％乙醇)：λmax 261nm(ε14400)，231nm(ε26300)，λmin 249nm(ε12000)；[α]_D ²⁰＝-38(c 1.04，DMSO)。6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(3，5-二-O-苯甲酰基-2-脱氧-β-L-苏式-呋喃戊糖基)腺苷(5)

向化合物4(0.88g，1.92mmol)在干燥吡啶(40mL)中的溶液加入4-一甲氧基三苯甲基氯(1.18g，3.84mmol)。该混合物于60℃搅拌24小时。在加入甲醇后(5mL)，溶液被浓缩到干燥。将残留物溶解在二氯甲烷中(50mL)，用水(30mL)、NaHCO₃饱和水溶液(30mL)和水(30mL)依次洗涤。将有机层干燥、过滤、浓缩并与甲苯共蒸发，得到泡沫状的纯5(1.01g，72％)：¹H NMR(CDCl₃)：δ2.9-3.0(m，2H，H-2′和H-2″)，3.62(s，3H，OCH₃)，4.6-4.8(m，3H，H-4′，H-5′和H-5″)，5.85(pt，IH，H-3′)，6.44(dd，1H，H-1′，J₁′_，2′＝3.1Hz，J₁′_，2”＝7.3Hz)，6.9(br s，1H，NH-6)，6.7-6.8(2m，24H，2苯甲酰基和MMTr)，7.97和8.13(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T(FAB+)m/z 732[M+H]+，(FAB^-)m/z730(M-H]^-；UV(95％乙醇)：λmax 274nm(ε12100)，225nm(ε24200)，λmin 250nm(ε5900)；[α]_D ²⁰＝-16(c 1.12，DMSO)。6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(2-脱氧-β-L-苏式-呋喃戊糖基)腺苷(6)

化合物5(0.95g，1.30mmol)用甲醇氨(40mL)溶液(在-10℃饱和)处理，在室温下过夜。在浓缩后，将残留物溶解在二氯甲烷中(60mL)，用水(30mL)洗涤。水层用二氯甲烷(10mL)萃取两次，合并有机层，干燥，过滤和浓缩。残留物用硅胶柱色层法(0-5％MeOH在二氯甲烷中)纯化，.得到泡沫状的纯6：¹H NMR(CDCl₃)：δ2.6-2.9(m，2H，H-2′和H-2″)，3.5(br s，1H，OH-5′)，3.55(s，3H，OCH₃)，3.9-4.0(m，3H，H4′，H-5′和H-5″)，4.5-4.6(m，IH，H-3′)，6.03(dd，1H，H-1′，J₁′_，2′＝4.0Hz，J₁′_，2”＝8.8Hz)，7.0(br s，1H，NH-6)，6.7-6.8和7.1-7.4(2m，14H，MMTr)，7.40(d，1H，OH-3′，J_H，oH＝10.6Hz)7.80和7.99(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T(FAB+)m/z 524[M+H]+，408[BH₂]⁺’(FAB^-)m/z 1045(M-H]^-，522[M-H]^-406[B]^-；UV(95％乙醇)：λmax  275nm(ε12300)，λmin 247nm(ε3600)；[α]_D ²⁰＝+28(c 0.94，DMSO)。6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(2-脱氧-5-O-(4-一甲氧基三苯甲基)-β-L-苏式-呋喃戊糖基)腺苷(7)

化合物6(0.62g，1.24mmol)在干燥吡啶中(25mL)用一甲氧基三苯甲基氯(0.46g，1.49mmol)在室温下处理16小时。在加入甲醇(5mL)后，将混合物浓缩到干燥。残留物溶解在二氯甲烷中(60mL)，用水(40mL)，饱和NaHCO₃水溶液(40mL)和水(3×40mL)依次洗涤。有机层干燥、过滤、浓缩并同甲苯和甲醇共蒸发。残留物由硅胶柱色层法纯化(0-10％MeOH在二氯甲烷中)，得到泡沫状的7(0.71g，72％)：¹H NMR(DMSO-d₆)：δ2.21(d，1H，H-2′J₂′_，2”＝14.3Hz)，2.6-2.7(m，1H，H-2″)，3.1-3.3(2m，2H，H-5′和H-5″)，3.64和3.65(2s，6H，2x OCH₃)，4.1-4.2(m，1H，H-4′)，4.2-4.3(m，1H，H-3′)，5.68(d，IH，OH-3′，J_H，oH＝5.2Hz)，6.24(d，1H，H-1′，J₁′_，2”＝7.0Hz)，6.7-6.8和7.1-7.3(2m，29H，2MMTr和NH-6)，7.83和8.21(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z 796[M+H]⁺，408[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z 794[M-H]^-，406[B]^-，UV(95％乙醇)：λmax 275nm(ε30900)，λmin 246nm(ε12800)；[α]_D ²⁰＝+14(c 1.03，DMSO)。6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(3-O-苯甲酰基-2-脱氧-5-O-(4-一甲氧基三苯甲基)-β-L-赤-呋喃戊糖基)腺苷(8)

将二乙基偶氮二羧酸酯(0.38mL，2.49mmol)在干燥四氢呋喃(20mL)中的溶液滴加到核苷7(0.66g，0.83mmol)、三苯膦(0.66g，2.49mmol)和苯甲酸(0.30g，2.49mmol)在干燥THF(20mL)中冷溶液中(0℃)。该混合物在室温下搅拌18小时，加入甲醇(1mL)。减压排除溶剂，粗材料由硅胶柱色层法纯化(0-5％乙酸乙酯，在二氯甲烷中)，得到受三苯膦轻微污染的化合物8。

6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(2-脱氧-5-O-(4-一甲氧基三苯甲基)-β-L-赤-呋喃戊糖基)腺苷(9)

化合物8用甲醇氨(20mL)溶液(在-10℃饱和)在室温下处理24小时，而后将反应混合物浓缩到干燥。残留物溶解在二氯甲烷中(30Lm)，用水(20mL)洗涤。水层由二氯甲烷(2×20mL)萃取，合并有机层，干燥过滤浓缩。经硅胶柱色层法(0-2％MeOH，在二氯甲烷中)纯化后得到泡沫状纯化合物9(0.50g，由7计算为76％)：¹H NMR(DMSO-d₆)：δ2.2-2.3(m，1H，H-2′)，2.8-2.9(m，1H，H-2″)，3.1-3.2(m，2H，H-5′和H-5″)，3.64和3.65(2s，6H，2x OCH₃)，3.97(pq，IH，H-4′)，4.4-4.5(m，1H，H-3′)，5.36(d，1H，OH-3′，J_H，OH＝4.5Hz)，6.34(t，IH，H-I′，J₁′_，2′＝J₁′_，2”＝6.4Hz)，6.8-6.9和7.1-7.4(2m，29H，2MMTr和NH-6)，7.81和8.32(2s，2H，H-2和H-8)；MS：基质G/T，(FAB⁺)m/z 796[M+H]⁺，408[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z 794[M-H]^-；406[B]^-；UV(95％乙醇)：λmax 276nm(ε42600)，λmin 248nm(ε23300)；[α]_D ²⁰＝+29(c1.05，DMSO)。

2′-脱氧-β-L-腺苷(β-L-dA)

化合物9(0.44g，0.56mmol)用80％的乙酸水溶液(17mL)在室温下处理8小时。该混合物浓缩到干燥，残留物溶解在水中(20mL)，用二乙醚(2×15mL)洗涤。浓缩水层并与甲苯和甲醇共蒸发。在经硅胶柱色层法(0-12％MeOH，在二氯甲烷中)纯化和Millex HV-4装置(0.45μ，Millipore)过滤后得到所希望的2′-脱氧-β-L-腺苷(β-L-dA)(0.12g，83％)：mp 193-194℃(由水结晶的)(Lit.184-185℃，对L-对映体[参阅Robins，M.J.；Khwaja，T.A.；Robins，R.K.J.Org.Chem.1970，35，636～39]和187-189℃，对D-对映体[参阅：Ness，R.K.inSynthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry；Zorbach，W.W.，Tipson，R.S.，Eds.；J.Wiley and sons：New York，1968；Vol 1，pp 183-187]；¹HNMR(DMSO-d₆)：δ2.2-2.3和2.6-2.7(2m，2H，H-2′和H-2″)，3.4-3.6(2m，2H，H-5′和H-5″)，3.86(pq，1H，H-4′)，4.3-4.4(m，1H，H-3′)，5.24(t，1H，OH-5′，J_H，OH＝5.8Hz)，5.30(d，1H，OH-3′，J_H，OH＝4.0Hz)，6.32(dd，1H，H-I′，J₁′_，2′＝6.2Hz，J₁′_，2”＝7.8Hz)，7.3(br s，2H，NH₂-6)，8.11和8.32(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z 252[M+H]⁺，136[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z 250[M-H]^-；134[B]^-；UV(95％乙醇)：λmax 258nm(ε14300)，λmin 226nm(ε2100)；[α]_D ²⁰＝+25(c 1.03，H₂O)，(Lit.[α]_D ²⁰＝+23(c 1.0，H₂O)，对L-对映体[参阅.：Robins，M.J.；Khwaja，T.A.；Robins，R.K.J Org.Chem.1970，35，636-639]和[α]_D ²⁰＝-25(c 0.47，H₂0)对D-对映体(参阅.：Ness，R.K.in Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry；Zorbach，W.W.，Tipson，R.S.，Eds.；J.Wiley and sons：New York，1968；Vol 1，pp 183-187]).元素分析计算值C₁₀H₁₃N₅0₃+1.5H₂0(M＝278.28)：C，43.16；H，5.80；N，25.17.实测值：C，43.63；H，5.45；N，25.33。

实施例22′-脱氧-β-L-腺苷(β-L-dA)的立体有择合成

反应1：

前体：L-核糖(Cultor Science Food，CAS[24259-59-4]，批次RIB9711013)

反应试剂：硫酸95-97％(Merck；ref 1.00731.1000)；苯甲酰氯(Fluka；ref12930)；硫酸钠(Prolabo；ref28111.365)

溶剂：甲醇P.A.(Prolabo；ref 20847.295)；吡啶99％(Acros；ref131780025)；二氯甲烷P.A(Merck；ref 1.06050.6025)；乙酸P.A.(carloerba；ref20104298)；乙酸酐(Fluka；ref 45830)；乙醇95(Prolabo；ref20823.293)

参考文献：Recondo，E.F.，和Rinderknecht，H.，Eine neue，EmfacheSynthese des 1-O-Acetyl-2，3，5-Tri-O-β-L-D-Ribofuranosides.，Helv.Chim.Acta，1171-1173(1959).

L-核糖140(150g，1mol)在甲醇中(2L)溶液用硫酸(12ml)处理，并在+4℃放置12小时，而后用吡啶(180ml)中和。蒸发后以浆液形式给出甲基呋喃核苷141的α，β混合物。将这种在吡啶(1.3L)中的正位异构体混合物的溶液用苯甲酰氯(580ml，5mol)处理，同时冷却和机械搅拌。使该溶液在室温下放置12小时，而后倒入冰(大约10L)并继续搅拌。将该混合物(水包油)用硅藻土床过滤。在硅藻土床上得到的油用水(3×3L)洗涤，而后用乙酸乙酯(3L)溶解。有机相用5％NaHCO₃溶液(2L)和水(2L)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到作为浓浆液的1-O-甲基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-α/β-L-呋喃核苷142。将这种油溶解在乙酸酐(560ml)和乙酸(240ml)中。在滴加浓硫酸(80ml)后，使该溶液在机械搅拌下维持冷态(+4℃)10小时。而后在搅拌下向该溶液倒入冰(大约10L)。该混合物(水中的油状化合物)在硅藻土床上过滤。在硅藻土床上得到的粘稠固体用水(3×3L)洗涤，而后溶解在二氯甲烷(2.5L)中。有机相用5％NaHCO₃(1L)和水(2×2L)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到粘稠的固体143，再由乙醇(95％)结晶(产量225g，44％)。

1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃核糖143的分析：

mp 129-130℃(EtOH 95)(lit.(l)mp 130-131℃)

¹H NMR(200MHz，CDCI₃)：δ8.09-7.87(m，6H，H_Arom)，7.62-7.31(m，9H，H_Arom)6.43(s，1H，H₁)，5.91(dd，1H，H₃，J_3，46.7Hz，J_3，24.9Hz)，5.79(pd，1H，H₂，J_3，24，9Hz；J_1，2＜1)，4,78(m，2H，H₄和H₅)，4,51(dd，1，H₅，J_5，513，1Hz，J₅′_，45，5Hz)，2,00(s，3H，CH₃CO)；(同商品1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖)

质谱分析(FAB+，GT)m/z 445(M-OAc)⁺

元素分析C₂₈H₂₄O₉计算值C 66.66H 4.79；实测值C H反应2：

前体：腺嘌呤(Pharma-Waldhof；ref400134.001 lot 45276800)

反应试剂：发烟氯化锡(Fluka；ref 96558)；NH3/甲醇(NH₃饱和的甲醇；见第5页)；硫酸钠(Prolabo；ref281 11.365)

溶剂：乙腈(Riedel-de Hean；ref 33019；CaH₂蒸馏)；氯仿Pur(Acros；ref 22706463)；乙酸乙酯Pur(Carlo erba；ref 528299)

参考文献：Saneyoshi，M.，和Satoh，E.，Synthetic Nucleosides andNucleotides.XIII Stannic Chloride Catalyzed Ribosylation of  Several6-Substituted  Purines.Chem.Pharm.Bull.，27，2518-2521(1979)；Nakayama，C.，和Saneyoshi，M.，Synthetic Nucleosides and Nucleotides.XX.Synthesis of Various 1-β-Xylofuranosyl-5-Alkyluracils and RelatedNucleosides，Nucleosides，Nucleotides，1，139-146(1982).

将腺嘌呤(19.6g，144mmol)悬浮在乙腈(400ml)和1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃核糖143中。向该悬浮液加入发烟氯化锡(22ml，187mmol).在12小时后，该反应浓缩到小体积(大约100ml)，加入碳酸氢钠(110g)和水(120ml)。所得到的白色固体(锡盐)用热氯仿(5×200ml)萃取，合并萃取物在硅藻土床上过滤。有机相用5％NaHCO₃溶液和水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到化合物144(60g，无色泡沫)。该泡沫在密封的反应瓶中于室温在搅拌下用氨饱和的甲醇(220ml)处理4天。减压蒸发掉溶剂，所得粉末悬浮在乙酸乙酯中(400ml)，回流1小时。过滤后，粉末由水(220ml)重结晶，得到L-腺苷145(24g，结晶，75％)。

β-L-腺苷的分析：

mp233-234℃(水)(lit.(4)mp235-238℃)

¹H NMR(200MHz，DSMO-D₆)：δ8.34-8.12(2s，2H，H₂，和H₈)，7.37(1s，2H，NH₂)，5.86(d，1H，H₁′，J₁′_，2′，6.2Hz)，5.43(m，2H，OH₂′和OH₅′)，5.19(d，1H，OH₃′，J 3.7Hz)，4.60(m，H₂′)，4.13(m，1H，H₃′)3.94(m，1H，H₄′)，3.69-3.49(m，2H，H₅′_a和H₅′_b)，(同商品D-腺苷)

质谱分析(FAB+，GT)m/z 268(M+H)⁺，136(BH₂)⁺

反应3：

反应试剂：1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷(Fluka；ref36520)；硫酸钠(Prolabo；ref281 11.365)

溶剂：吡啶99％(Acros；ref 131780025)，乙酸乙酯Pur(Carlo erba；ref 528299)；乙腈(Riedel-de Hean；ref 33019)

参考文献：Robins，M.J.，等人，Nucleic Acid Celated Compounds.42.A General Procedure for the Efficient Deoxygenation of SecondaryAlcohols.Regiospecific and Stereoselective Conversion of Ribonucleosidesto 2′Deoxynucleosides.J.Am.Chem.Soc.105，4059-4065(1983)。

向悬浮在吡啶(320ml)中的L-腺苷145(47,2g，177mmol)加入1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷(63ml，201mmol)，将该混合物在室温下搅拌12小时。蒸发出吡啶，残留物分配于乙酸乙酯(1L)和5％NaHCO₃溶液(600ml)之中。有机相用0.5N HCl的溶液(2×500ml)和水(500ml)洗涤，硫酸钠干燥，过滤，蒸干。所得到的固体由乙腈结晶，得到化合物146(81g，90％)。

3′，5′-O-(1，1，3，3-四异丙基-1，3-二硅氧烷基)-β-L-腺苷146的分析：

mp 97-98℃(乙腈)(lit.(5)D-对映体98℃)

¹H NMR(200MHz，CDCl₃)：δ8.28和7.95(2s，2H，H₂和H₈)，5.96(d，1H，J₁′_，2′1，1Hz)，5.63(s，2H，NH₂)，5.10(dd，1H，H₃′，J₃′_，4′7.6Hz，J₃′_，2′5.5Hz)，4.57(dd，1H，H₂′，J₂′_，1′1.2Hz；J_2，3，7.6Hz)，4.15-3.99(m，3H，H₄′，H₅′_a和H₅′_b)，3.31(s1，1H，OH₂′)，1.06(m，28H，异丙基质子)

质谱分析(FAB-，GT)m/z 508(M-H)^-，134(B)^-；(FAB+，GT)m/z510(m+H)⁺，136(BH₂)⁺

反应4：

反应试剂：

二甲基氨基吡啶99％(Acros；ref 1482702050)；

氯代硫羰碳酸苯基酯99％(Acros；ref215490050)；

三(三甲代甲硅烷基)硅烷，“TTMSS”(Fluka；ref93411)；

α，α′-偶氮异丁基腈″AIBN″(Fluka，ref 11630)；

硫酸钠(Prolabo；ref281 11.365)

溶剂：乙腈(Riedel-de Haen；ref 33019)；乙酸乙酯Pur(Carlo Erba；ref 528299)；二噁烷P.A.(Merck；ref 1.09671.1000)；二氯甲烷(merck；ref1.06050.6025)；甲醇(Carlo Erba；ref 309002)；

参考文献：Robins，M.J.，Wilson，J.S.，和Hansske，F.，NucleicAcid Related Compounds.42.A General Procedure for the EfficientDeoxygenation of Secondary Alcohols.Regiospecific and StereoselectiveConversion of Ribonucleosides to 2′-Deoxynucleosides.J.Am.Chem.Soc.，105，4059-4065(1983)。

向化合物146(34g，67mmol)加入乙腈(280ml)、DMAP(16.5g，135mmol)和氯代硫羰碳酸苯基酯(10.2ml，73mmol)，该溶液在室温下搅拌12小时。蒸发出溶剂，残留物在乙酸乙酯(400ml)和0.5N HCI的溶液(400ml)中分配。有机层用HCI 0.5N的溶液(400ml)和水(2×400ml)洗涤，硫酸钠干燥，过滤和蒸干，得到浅黄色固体中间体。将该粗品147溶解在二噁烷中(ml)，并加入AIBN(3.3g，20mmol)和TTMSS(33ml，107mmol)。将该溶液逐步加热到回流，并搅拌2小时。反应物被浓缩成黄色油，进行色谱分离(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇95/5)，得到化合物148(23g，无色泡沫，70％)。等分部分由乙醇/石油醚结晶。

3′，5′-O-(1，1，3，3-四异丙基-1，3-二硅氧烷基)-2′-脱氧-β-L-腺苷148的分析：

mp：110-111℃(EtOH/石油醚)(Lit.(5)mp 113-114℃(EtOH))

¹H NMR(200MHz，CDCl₃)：δ8.33和8.03(2s，2H，H₂和H₈)，6.30(dd，1H，H₁′，J 2.85Hz，J 7.06Hz)，5.63(s1，2H，NH₂)，4.96(m，IH，H₃′)，4.50(m，2H，H_5a和H_5b)，2，68(m，2H，H₂′_a和H₂′_b)，1.08(m，28H，异丙基质子)

质谱分析(FAB+，GT)m/z 494(M+H)⁺，136(BH₂)⁺

反应5：

反应试剂：氟化氨(Fluka；ref 09742)；硅胶(Merck；ref1.07734.2500)

溶剂：甲醇P.A.(Prolabo；ref 20847.295)；二氯甲烷P.A.(Merck；ref1.06050.6025)；乙醇95％(Prolabo；ref 20823.293)

参考文献：Zhang，W.，和Robins，M.J.，Removal of SilylProtecting Groups from Hydroxyl Functions with Anunonium Fluoride inMethanol.，Tetrahedron Lett.，33，1177-1180(192).

3′，5′-O-(1，1，3，3-四异丙基-1，3-二硅氧烷基)-2′-脱氧-β-L-腺苷148(32g，65mmol)和氟化氨(32g，mmol)的甲醇溶液在回流下搅拌2小时。加入硅胶，将该混合物小心地蒸发，得到白色粉末。将该粉末加到硅胶柱的顶部，用二氯甲烷/甲醇9/1洗脱，合并适宜的馏分，蒸发得到白色粉末，而后由乙醇(95％)结晶(12.1g，75％)。

2′-脱氧-β-L-腺苷149的分析：

mp 189-190℃(EtOH 95)(同商品2′-脱氧-D-腺苷)

¹H NMR(200MHz，DMSO-D₆)：δ8.35和8.14(2s，2H，H₂和H₈)，7.34(s1，2H，NH₂)，6.35(dd，1H，H₁.，J 6.1Hz，J 7.85Hz)，5.33(d，1H，0H₂′，J 4.0Hz)，5.28(dd，1H，H₃′，J 4.95Hz；J 6.6Hz)，4.42(m，1H，OH5′)，3.88(m，1H，H₄′)，3.63-3.52(m，2H，H₅′_a和H₅′_b)，2，71(m，I H，H₂′_a)，2.28(m，1H，H₂′_b).(同商品2′-脱氧-D-腺苷)

α_D+26⁰(c 0.5水)(商品2′-脱氧-D-腺苷-25⁰(c 0.5水)).

UVλmax 260nm(ε14100)(H₂O).

质谱分析(FAB+，GT)m/z 252(M+H)⁺，136(BH₂)⁺

实施例32′-脱氧-β-L-胞苷的立体有择合成

1-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-木糖型呋喃糖基)尿嘧啶(11)

将水合肼(1.4mL，28.7mmol)加入到1-(2-O-乙酰基-3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-木糖型呋喃糖基)尿嘧啶10[参阅：Gosselin，G.；Bergogne，M.-C.；Imbach，J.L，″Synthesis and Antiviral Evaluation ofβ-L-xyl ofiiranosyl Nucleosides of the Five Naturally Occuring NucleicAcid Bases″，Journal of Heterocyclic Chemistry，1993，30(Oct.-Nov.)，1229-1233](4.79g，9.68mmol)在吡啶(60mL)和乙酸(15mL)中的溶液。该溶液在室温下搅拌过夜。加入丙酮(35mL)，搅拌混合物30分钟。减压蒸发。所得残留物由硅胶柱色层法[洗脱液：在二氯甲烷中的阶式梯度甲醇(0-4％)]纯化，得到11(3.0g，68％)，由环己烷/二氯甲烷结晶：mp＝111-114℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ11.35(br s，1H，NH)，7.9-7.4(m，11H，2 C₆H₅CO，H-6)，6.38(d，1H，OH-2′，J_OH-2＝4.2Hz)，5.77(d，1H，H-I′，J₁′_，2′＝1.9Hz)，5.55(d，IH，H-5，J_5-6＝8Hz)，5.54(dd，1H，H-3′，J₃′_，2′＝3.9Hz和J₃′_，4′＝1.8Hz)，4.8(m，1H，H-4′)，4.7(m，2H，H-5′和H-5″)，4.3(m，1H，H-2′)；MS：FAB＞0(基质GT)m/z 453(M+H)⁺，105(C₆H₅CO)⁺；FAB＜0(基质GT)m/z 451(M-H)；121(C₆H₅CO₂)^-，111(B)^-；元素分析计算值C₂₃H₂₀N₂O₈·H₂O：C，58.09；H，4.76；N，5.96.实测值：C，57.71；H，4.42；N，5.70.

1-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-阿糖型呋喃糖基)尿嘧啶(12)

向1-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-木糖型呋喃糖基)尿嘧啶11(8g，17.7mL)在无水苯-DMSO混合物(265mL，6∶4，v/v)的溶液中加入无水吡啶(1.4mL)、二环己基碳二亚胺(10.9g，53mmol)和二氯乙酸(0.75mL)。所得到的混合物在室温下搅拌4小时，而后用乙酸乙酯(400mL)稀释，并加入草酸(4.8g，53mmol)在甲醇(14mL)中的溶液。搅拌1小时后，过滤溶液。滤液用饱和NaCl溶液(2×500mL)，3％NaHCO₃溶液(2×500mL)和水(2×500mL)洗涤。有机相用Na₂SO₄干燥，而后减压蒸发。所得残留物溶解在绝对EtOH-苯混合物(140mL，2∶1，v/v)中，在0℃向该溶液加入N_aBH₄(0.96g，26.5mmol)，搅拌1小时后，用乙酸乙酯(400mL)稀释该溶液，而后过滤。滤液用饱和NaCl溶液(400mL)和水(400mL)洗涤.有机相用Na₂SO₄干燥，而后减压蒸发。所得粗产品由硅胶柱色层法纯化[洗脱液：二氯甲烷中的阶式梯度甲醇(0-3％)]，得到12(5.3g，66％)，由乙腈结晶：mp＝182-183℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ11.35(br s，1H，NH)，8.0-7.5(m，11H，2C₆H₅CO，H-6)，6.23(br s，1H，OH-2′)，6.15(d，1H，H-1′，J₁′_，2′＝4Hz)，5.54(d，IH，H-5，J_5-6＝8.1Hz)，5.37(t，1H，H-3′，J₃′_，2′＝J₃′_，4′＝2.6Hz)，4.7-4.6(m，2H，H-5′和H-5″)，4.5(m，1H，H-4′)；MS：FAB＞0(基质GT)m/z 453(M+H)⁺，341(S)⁺，113(BH₂)⁺’105(C₆H₅CO)⁺；FAB＜0(基质GT)m/z451(M-H)；121(C₆H₅CO₂)^-，111(B)^-；元素分析计算值C₂₃H₂₀N₂O₈·H₂O：C，61.06；H，4.46；N，6.19.实测值：C，60.83；H，4.34；N，6.25.1-(3，5-二-O-苯甲酰基-2-脱氧-β-L-赤-阿糖型呋喃糖基)尿嘧啶(13)

向1-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-阿糖型呋喃糖基)尿嘧啶(12)(5.2g，11.4mmoL)的无水二氯乙烷溶液(120mL)加入苯氧基硫代碳酰氯(4.7ml，34.3mmoL)和4-二甲胺基吡啶(DMAP，12.5g，102.6mmoL)。所得到的溶液在室温下和氩气氛中搅拌1小时，而后减压蒸发。残留物溶解在二氯甲烷(300mL)中，有机溶液用冰冷的0.2N盐酸溶液(3×200mL)和水(2×200mL)依次洗涤，用Na₂SO₄干燥，减压蒸发。该产品同无水二噁烷共蒸发几次，并溶解在此溶剂中(110mL)。向所得到的溶液在氩气氛下加入三(三甲硅烷基)硅烷水合物(4.2mL，13.7mmol)和α，α′-偶氮异丁腈(AIBN，0.6g，3.76mmol)。将该反应混合物加热，在氩气氛下，于100℃搅拌1小时，而后冷却至室温并减压蒸发。残留物由硅胶柱色层法纯化[洗脱液：甲醇(0-5％)梯度洗脱]，得到13(2.78g，56％)，由EtOH结晶：mp＝223-225℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ11.4(brs，1H，NH)，8.0-7.5(m，11H，2C₆H₅CO，H-6)，6.28(t，1H，H-1′，J＝7Hz)，5.5(m，2H，H-1′和H-5)，4.6-4.4(m，3H，H-4′，H-5′和H-5″)，2.6(m，2H，H-2′和H-2″)；MS:FAB＞0(基质GT)m/z 437(M+H)⁺，3325(S)+；FAB＜0(基质GT)m/z 435(M-H)^-，111(B)^-；元素分析计算值C₂₃H_2～N₂O₇：C，63.30；H，4.62；N，6.42.实测值：C，62.98；H，4.79；N，6.40。

2-脱氧-β-L-胞苷(β-L-dC)

将Lawesson′s试剂(1.72g，4.26mmol)在氩气氛下加入到1-(3，5-二-O-苯甲酰基-2-脱氧-β-L-赤-阿糖型呋喃糖基)尿嘧啶13(2.66g，6.1mmol)的无水二氯乙烷(120mL)溶液中，反应混合物回流搅拌2小时，而后减压蒸出溶剂，残留物由硅胶柱色层法纯化[洗脱液：二氯甲烷中的阶式梯度乙酸乙酯(0-8％)]，得到黄色泡沫状的4-硫代中间体。将该硫代中间体(1.5g，3.31mmol)在甲醇氨中的溶液(预先在-10℃饱和并塞紧)(50mL)在100℃，在不锈钢高压罐中加热3小时而后冷却到0℃。减压蒸出溶剂。所得到的粗产品由硅胶柱色层法纯化[洗脱液：二氯甲烷中的阶式梯度甲醇(0-20％)]。最后，将适当馏分合并，通过MillexHV-4(0.45μm，Millipore)过滤，减压蒸发，得到所希望的泡沫状的2-脱氧-β-L-胞苷(β-L-dC)(0.6g，80％)，由绝对乙醇结晶：mp＝198-199℃；

¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ7.77(d，1H，H-6，J_6-5＝7.4Hz)，7.10(br d，2H，NH-₂)，6.13(t，1H，H-I′，J＝6.7Hz)，5.69(d，IH，H-5，J_5-6＝7.4Hz)，5.19(d，1H，OH-3′，J_OH-3′＝4.1Hz)，4.96(t，1H，OH-5′，J_oH-5′＝J_OH-5”＝5.2Hz)，4.1(m，IH，H-3′)，3.75(m，1H，H-4′)，3.5(m，2H，H-5′和H-5″)，2.0(m，IH，H-2′)，1.9(m，IH，H-2″)；MS:FAB＞0(基质GT)m/z 228(M+H)⁺，112(8H₂)⁺；FAB＜0(基质GT)m/z  226(M-H)^-；[α]_D ²⁰＝-69(c 0.52，DMSO)[[α]_D ²⁰＝+76(c 0.55，DMSO)D-对映体的商品盐酸盐]。元素分析计算值C₉H₁₃N₃O₄：C，47.57；H，5.77；N，18.49.实测值：C，47.35；H，5.68；N，18.29.

实施例42′-脱氧-β-L-胞苷(β-L-dC)的立体有择合成

2-氨基-β-L-阿糖呋喃并[1′，2′：4，5]噁唑啉(1)

L-阿糖(170g，1.13mol)、氨腈(100g，2.38mol)、甲醇(300ml)和6M-NH₄OH(50ml)的混合物在室温下搅拌3天，而后保持在-10℃过夜。该产品用抽吸收集，用甲醇和乙醚依次洗涤，真空干燥。得到分析纯的化合物1，130g(66.0％)：m.p 170-172℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δppm 6.35(br 5，2H，NH₂)，5.15(d，1H，H-1，J＝5.6Hz)，5.45(br s，1H，OH-3)，4.70(br s，1H，OH-5)，4.55(d，1H，H-2，J＝5.6Hz)，4.00(br s，1H，H-3)，3.65(m，1H，H-4)，3.25(m，2H，H-5，H-5′).

反应试剂：L-阿糖：Fluka，＞99.5％，ref 10839

氨腈：Fluka，＞98％，ref 28330

O^2，2′-脱水-β-L-尿苷(2)

将化合物1(98.8g，0.57mol)和甲基丙炔酸酯(98ml)在50％含水乙醇(740ml)的溶液回流5小时，而后冷却、减压浓缩到起始体积的一半。在用丙酮(600ml)沉淀后，产品用抽吸收集，用乙醇和乙醚洗涤，干燥。部分地浓缩母液，用丙酮(1000mL)沉淀浓缩液，固体用空吸法收集，用丙酮和乙醚洗涤，得到另一个产品。总产量80g(62％)化合物2，m.p.236-240℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δppm 7.87(d，1H，H-6，J＝7.4Hz)，6.35(d，1H，H-I′，J＝5.7Hz)，5.95(d，1H，H-5，J＝7.4Hz)，5.90(d，1H，OH-3′)，5.20(d，1H，H-2′，J＝5.7Hz)，5.00(m，1H，OH-3′)，4.44(brs，1H，H-3′)，4.05(m，1H，H-4′)，3.25(m，2H，H-5，H-5′).

反应试剂：丙炔酸甲酯：FIuka，＞97％，ref 81863

3′，5′-二-O-苯甲酰基-O^2，2′-脱水-β-L-尿苷(3)

向化合物2(71.1g，0.31mol)在无水吡啶(1200ml)中的溶液，在0℃和氩气氛下加入苯甲酰氯(80.4ml)。该反应混合物在室温并排除大气湿气的条件下搅拌5小时，加入乙醇停止反应。减压蒸出溶剂，所得残留物同甲苯和绝对乙醇共蒸发。而后将该粗产品混合物用乙醇稀释，抽吸收集沉淀，用乙醇和乙醚依次洗涤，干燥，得到129g(95.8％)化合物3，m.p.254℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δppm 8.1-7.4(m，11H，C₆H₅CO，H-6)，6.50(d，1H，H-1′，J＝5.7Hz)，5.90(d，1H，H-5，J＝7.5Hz)，5.80(d，1H，H-2′，J＝5.8Hz)，5.70(d，1H，H-3′)4.90(m，1H，H-4′)，4.35(m，2H，H-5，H-5′).

反应试剂：苯甲酰氯：Fluka，p.a.，ref 12930

3′，5′-二-O-苯甲酰基-2′-氯-2′-脱氧-β，L-尿苷(4)

在0℃向化合物3(60.3g，0.139mol)在二甲基甲酰胺(460ml)中的溶液加入3.2N-HCl/DMF溶液(208ml，通过在0℃将47.2ml乙酰氯加入27.3ml甲醇和133.5ml二甲基甲酰胺的溶液中现场制备)。该反应混合物于100℃，在排除大气湿气的条件下搅拌1小时，在冷却下来后注入水(4000ml)。化合物4的沉淀用抽吸收集，用水洗涤，乙醇重结晶。收集这种结晶，用冷的乙醇和乙醚洗涤，减压干燥。得到化合物4产品60.6g(92.6％)，m.p.164-165℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δppm 8.7(br s，1H，NH)，8.1-7.3(m，11H，C₆H₅CO，H-6)，6.15(d，1H，H-1′，J＝4.8Hz)，5.5(m，2H，H-5，H-2′)，4.65(m，4H，H-3′，H-4′，H-5′，H-5″).

反应试剂：乙酰氯：Fluka，p.a.，ref 00990

3，5′-二-O-苯甲酰基-2′-脱氧-β，L-尿苷(5)

使化合物4(60.28g，0.128mol)、三正丁基锡水合物(95ml)和偶氮二异丁基腈(0.568g)在干燥甲苯(720ml)中的混合物在搅拌下回流5小时，而后冷却。固体用空吸法收集，用冷的甲苯和石油醚洗涤。滤液减压浓缩，用石油醚稀释，以获得另一份化合物5，产量54.28g(97.2％)：m.p.220-221℃；¹H NMR(CDCl₃)δppm 8.91(br s，1H，NH)，8.1-7.5(m，11H，C₆H₅CO，H-6)，6.43(q，1H，H-1′，J₁′_，2′＝5.7Hz和J₁′_，2”＝8.3Hz)，5.7-5.6(m，2H，H-3′和H-5)，4.84.6(m，3H，H-5′，H-5″和H-4′)，2.8-2.7(m，1H，H-2′)，2.4-2.3(m，1H，H-2″).

反应试剂：三正丁基锡水合物：FIuka，＞98％，ref 90915

偶氮二异丁基腈：：FIuka，＞98％，ref 116303′，5′-二-O-苯甲酰基-2′-脱氧-β，L-4-硫代-尿苷(6)

将化合物5(69g，0.158mol)和Lawesson′s试剂(74g)在无水二氯甲烷(3900ml)中的溶液在氩气氛下搅拌过夜。在蒸出溶剂后，粗残留物用硅胶柱色层法纯化(洗脱剂：二氯甲烷中的梯度甲醇(0-2％)]，得到定量的纯化合物6(73g)：¹H NMR(CDCl₃)δppm 9.5(br s，1H，NH)，8.1-7.4(m，10H，C₆H₅CO)，7.32(d，1H，H-6，J＝7.7Hz)，6.30(dd，1H，H-1′，J＝5.6Hz和J＝8.2Hz)，6.22(d，1H，H-5，J＝7.7Hz)，5.6(m，1H，H-3′)，4.7(m，2H，H-5′，H-5″)，4.5(m，1H，H-4′)，2.8(m，1H，H-2′)，2.3(m，1H，H-2″).

反应试剂：

Lawesson′s试剂：FIuka，＞98％，ref 61750

2′-脱氧-β-L-胞嘧啶

将化合物6(7.3g，0.016mol)在氨饱和的甲醇(73ml)中的溶液中，在不锈钢瓶中在100℃加热3小时。在小心冷却后，减压蒸出溶剂。残留物的水溶液用乙酸乙酯洗涤，并蒸干。照此法准备化合物6的其他9份样品(每份7.3g)(总计6＝73g)。合并10份残留物，用绝对乙醇稀释，并冷却，得到作为结晶的7。由固-液萃取法(在乙酸乙酯中回流1小时)从6结晶上除去残留的苯甲酰胺。化合物6的产量，28.75g(78.6％)：m.p.141-145℃；¹H NMR(DMSO)δppm 8.22和8.00(2brs，2H，NH₂)，7.98(d，1H，H-6，J＝7.59Hz)，6.12(t，1H，H-1′，J＝6.5Hz和J＝7.6Hz)，5.89(d，1H，H-5，J＝7.59Hz)，5.3(br s，1H，OH-3′)，5.1(br 5，1H，OH-5′)，4.2(m，1H，H-3′)，3.80(q，1H，H-4′，J＝3.6Hz和J＝6.9Hz)，3.6-3.5(m，2H，H-5′，H-5″)，2.2-2.0(m，2H，H-2′，H-2″)；FAB＜0，(GT)m/e226(M-H)^-；110(B)^-；FAB＞0(GT)228(M+H)⁺，112(B+2H)⁺；[α]_D ²⁰＝-56.48(c＝1.08在DMSO中)；UV(pH 7)λmax 270nm(ε10000).

反应试剂：

甲醇氨：预先在-5℃饱和，封紧，保存在冰箱内。

实施例52′-脱氧-β-L-胸苷(β-L-dT)的立体有择合成

3，5′-二-O-苯甲酰基-2′-脱氧-5-碘-β，L-尿苷(7)

将化合物5(105.8g，0.242mol)、碘(76.8g)、CAN(66.4g)和乙腈(2550ml)的混合物在80℃搅拌3小时，而后将该反应混合物在室温冷却，形成化合物7的结晶(6.6g，63.5％)；m.p.192-194℃；¹H NMR(DMSO)δppm.8.34(s，1H，NH)，8.2-7.2(m，11H，2C₆H₅CO，H-6)，6.31(q，1H，H-1′，J＝5.5Hz和J＝8.7Hz)，5.5(m，1H，H-3′)，4.7(m，2H，H-5′，H-5″)，4.5(m，1H，H-4′)，2.7(m，1H，H-2′)，2.3(m，1H，H-2″)；FAB＜0，(GT)m/e 561(M-H)^-；237(B)^-；FAB＞0(GT)563(M+H)⁺；[α]_D ²⁰+39.05(c＝1.05在DMSO中)；UV(EtOH 95％)λmax＝281nm(ε＝9000)，λmin＝254nm(ε＝4000)，λmax＝229nm(ε＝31000)；元素分析计算值C₂₃H₁₉IN₂O₇：C，49.13H，3.41N，4.98I，22.57.实测值：C，49.31H，3.53N，5.05I，22.36.

反应试剂：碘：Fluka，99.8％，ref 57650

硝酸铈铵(CAN)：Aldrich，＞98.5％，ref21，547-3

3′，5′-二-O-苯甲酰基-2′-脱氧-3-N-甲苯酰基-β，L-胸苷(9)

向化合物7(86.6g，0.154mol)在包含N-乙基二异丙胺(53.6ml)的无水吡啶(1530ml)溶液中，在0℃分批加入对甲苯酰氯(40.6ml).反应混合物在室温搅拌2小时，而后加入水停止反应，反应混合物用二氯甲烷萃取。有机相用水洗涤，硫酸钠干燥，并蒸干，得到粗3′，5′-二-O-苯甲酰基-2′-脱氧-3-N-甲苯酰基-5-碘-β，L-尿苷(8)，它可用于下一步反应而无须进一步纯化。

粗混合物8、乙酸钯(3.44g)、三苯膦(8.0g)在N-甲基吡咯烷酮(1375ml)和三乙胺(4.3ml)的溶液中，在室温搅拌45分钟。而后在0℃在氩气氛下滴加四甲基锡(42.4ml)。在100-110℃搅拌过夜后，将该反应混合物注入水，用乙醚萃取。有机溶液用硫酸钠干燥，并减压浓缩。残留物由硅胶柱色层法纯化[洗脱剂：在甲苯中以乙酸乙酯(0-10％)梯度洗脱]，得到泡沫状的化合物9(42.3g，48.3％，第二步)。¹H NMR(DMSO)δppm.8.3-7.2(m，15H，2C₆H₅CO，1CH₃C₆H₄CO，H-6)，6.29(t，1H，H-1′，J＝7.0Hz)，5.7(m，1H，H-3′)，4.7-4.5(m，3H，H-5′，H-5″，H-4′)，2.7-2.6(m，2H，H-2′，H-2″)；FAB＜0，(GT)m/e 567(M-H)^-，449(M-CH₃C₆H₄CO)^-，243(B)^-，121(C₆H₅COO)^-，FAB＞0(GT)1137(2M+H)⁺，569(M+H)⁺，325(M-B)^-，245(B+2H)⁺，119(CH₃C₆H₅CO)⁺。

反应试剂：对甲苯酰氯：Aldrich，98％，ref 10，663-1

二异丙基乙胺：Aldrich，＞99.5％，ref 38，7～9

N-甲基吡咯烷酮：Aldrich，＞99％，ref 44，377-8

乙酸钯：Aldrich，＞99.98％，ref 37，987-5

三苯膦：Fluka，＞97％，ref 93092

四甲基锡：Aldrich，＞99％，ref 14，647-1

2′-脱氧-β-L-胸苷

化合物9(42.3g，0.074mol)的甲醇溶液(1850ml)(该溶液用氨饱和)在室温下搅拌2天。在蒸发溶剂后，残余物用水稀释，和用乙酸乙酯洗涤数次。分离水层，减压蒸发，残余物用硅胶柱色谱纯化[洗脱剂：在二氯甲烷中以甲醇(0-10％)梯度洗脱]得到2′-脱氧-β-L-胸苷，在乙醇中结晶(11.62g，64.8％)。m.p.185-188℃；¹H NMR(DMSO)δppm 11.3(s，1H，NB)，7.70(s，1H，H-6)，6.2(pt，1H，H-1′)，5.24(d，1H，OH-3′，J＝4.2Hz)，5.08(t，1H，OH-5′，J＝5.1Hz)，4.2(m，1H，H-3′)，3.7(m，1H，H-4′)，3.5-3.6(m，2H，H-5′，H-5″)，2.1-2.0(m，2H，H-2′，H-2″)；FAB＜0，(GT)m/e 483(2M-H)；349(M+T-H)；241(M-H)；125(B)^-；FAB＞0(GT)243(M+H)+，127(B+2H)⁺；)⁺；[α]_D ²⁰-13.0(c＝1.0在DMSO中)；UV(pH 1)λ_max＝267nm(∈＝9700)，λ_min＝234nm(∈＝2000).

试剂：

甲醇氨：预先在-5℃饱和，封紧，保存在冰箱内。

实施例62′-脱氧-β-L-肌苷(-β-L-dI)的立体有择合成

β-L-dI通过2′-脱氧-β-L-腺苷(β-L-dA)的脱氨基作用合成，按照前述9-D-吡喃葡萄糖系列所描述的方法进行(参阅：I.Iwal，T.Nishimura和B.Shimizu，Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry，W.W.Aorbach和R.S.Tipson，eds.，John Wiley&Sons，Inc.New York，vol.1，pp.135-138(1968))。

β-L-dA(200mg)在乙酸(0.61ml)和水(19ml)混合物中的溶液同亚硝酸钠(495mg)一起加热，并将该混合物在室温搅拌过夜。而后减压蒸干。其残留物的水溶液用IR-120(H+)离子交换柱处理，该柱用水洗脱，收集适当馏分并蒸干，得到纯β-L-dI(106mg，产率53％，非最佳产率)，用甲醇结晶。：m.p.＝209⁰-211℃；UV(H₂O)，λ_max＝247nm；¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.32和8.07(2s，每个1H，H-2和H-8)，6.32(Pt，1H，H-1；J＝6.7Hz)，4.4(m，1H，H-3′)，3.9(m，1H，H-4′)，3.7-3.4(m，由HOD部分遮蔽的2H，H-5′，5″)，2.6和2.3(2m，每个1H，H-2′和H-2″)；质谱(基质，甘油-硫代甘油，1∶1，v/v)，FAB＞0：253(m+H)⁺，137(碱+2H)⁺；FAB＜0：251(m-H)^-，135(碱)^-；[α]_D ²⁰＝+19.3(-c 0.88，H₂O).

活性化合物的抗-HBV活性

按照下述的详细说明，可在2.2.15细胞培养仪(HepG2细胞用肝炎病毒转换)上评价活性化合物抑制病毒生长的能力。

对在此系统中进行的抗病毒效果试验以及HBV DNA分析的概要和说明已在Korba和Milman，1991，Antiviral Res.，15：217中公开。抗病毒效果的评价在两个分开的细胞通道上进行。所有板上的所有穴在同一时间以同一密度接种。

由于HBV DNA细胞内和细胞外水平的固有变化，相对于未处理细胞中这些HBV DNA多种形式的平均水平而言，抑制率仅大于3.5倍(对HBV病毒颗粒DNA)或3.0倍(对HBV DNA复制中间体)就认为是相当满意的了(p＜0.05)。在各个细胞DNA样品(在这些试验中使每一细胞的基础值保持一常数)中综合的HBV DNA水平可用来计算HBVDNA各个形式的细胞内水平，由此可确认不同样品中相等量的细胞DNA具有可比性。

在未处理的细胞中，细胞外HBV病毒颗粒DNA的典型数值范围为50-150pg/ml培养介质(平均值大约是76pg/ml)。在未处理的细胞中，细胞内HBV DNA复制中间体的典型数值范围为50-100μg/pg细胞DNA(平均值大约是74μg/pg细胞DNA)。一般来说，由于用抗病毒化合物进行了处理，与HBV病毒颗粒DNA的下降水平相比，细胞内HBV DNA的下降水平不明显，并且出现的更缓慢(Korba和Milman，1991，Antiviral Res.，15：217)。

该方法是将这些试验的结果进行杂化分析，分析是在与大约1.0pg细胞内HBV DNA至每个细胞中有2-3基因组模板以及与1.0pg/ml细胞外HBV DNA至3×10⁵病毒颗粒/ml相当的情况下进行的。

实施例7

本实施例对β-L-dA、β-L-dC、β-L-dU、β-L-2′-dG、β-L-dI和β-L-dT的三磷酸酯衍生物的抑制乙型肝炎的能力进行了试验。表1给出了β-L-dT(β-L-dT-TP)，β-L-dC(β-L-dC-TP)，β-L-dU(β-L-dU-TP)和β-L-dA(β-L-dA-TP)三磷酸酯对北美土拨鼠肝炎病毒(WHV)DNA聚合酶、人体DNA聚合酶α，β，和γ的抑制活性比较。

表1

抑制剂	WHV DNAIC<sub>50</sub>	DNA αK<sub>i</sub>b(μM)	DNA βK<sub>i</sub>b(μM)	DNA γK<sub>i</sub>b(μM)
					β-L-dT-TP	0.34	＞100	＞100	＞100
β-L-dA-TP	2.3	＞100	＞100	＞100
					β-L-dC-TP	2.0	＞100	＞100	＞100
β-L-dU-TP	8	＞100	＞100	＞100

^aIC₅₀：50％抑制浓度

^bK_i值是用小牛胸腺活化的DNA作为模板引物和以dATP作为基质测定的。抑制剂用Dixon图表进行分析。在这些条件下对dATP计算出人体DNA聚合酶α的平均Km值，大约为2.6μM。对于dATP，人体DNA聚合酶β的Km值处于稳定状态，为3.33μM。人体DNA聚合酶γ的Km值处于稳定状态，为5.2μM。

实施例8

本实施例对β-L-dA、β-L-dC、β-L-dU、β-L-2′-dG和β-L-dT的抗乙型肝炎活性经转染Hep G-2(2.2.15)细胞进行试验。表2说明了β-L-dA、β-L-dC、β-L-dU和β-L-dT对转染Hep G-2(2.2.15)细胞的抗乙型肝炎病毒复制作用。

表2

化合物	HBV病毒颗粒aEC<sub>50</sub>(μM)	HBV  RibEC<sub>50</sub>(μM)	细胞毒性1C<sub>50</sub>(μM)	选择性指数1C<sub>50</sub>/EC<sub>50</sub>
					β-L-dT	0.05	0.05	＞200	＞4000
β-L-dC	0.05	0.05	＞200	＞4000

化合物	HBV病毒颗粒aEC<sub>50</sub>(μM)	HBV  RibEC<sub>50</sub>(μM)	细胞毒性1C<sub>50</sub>(μM)	选择性指数1C<sub>50</sub>/EC<sub>50</sub>
					β-L-dA	0.05	0.05	＞200	＞2000
β-L-dI	1.0	1.0	＞200	＞200
					β-L-dU	5.0	5.0	＞200	＞40

^a细胞外DNA

^b复制的中间体(细胞内DNA)

实施例9

用2.2.15细胞测定β-L-dA，β-L-dC和β-L-dT结合时对乙型肝炎病毒生长的作用。结果列于表3。

表3

组合物	比例	EC<sub>50</sub>
			L-dC+L-dT	1∶3	0.023
L-dC+L-dT	1∶1	0.053
			L-dC+L-dT	3∶1	0.039
L-dC+L-dA	1∶30	0.022
			L-dC+L-dA	1∶10	0.041
L-dC+L-dA	1∶3	0.075
			L-dT+L-dA	1∶30	0.054
L-dT+L-dA	1∶10	0.077
			L-dT+L-dA	1∶3	0.035

各种结合方式的抗-HBV活性都具有协同作用。此外，在此模型中L-dA+L-dC+L-dT的结合方式也具有协同作用。

实施例10

本实施例测定了β-L-dA和β-L-dC单独或结合使用时在2.2.15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用。结果列于表4。

表4

aβ-L-2′-脱氧腺苷(μM)	bβ-L-2′-脱氧胞苷(μM)	抑制率％	cC.I.
				0.5		90
0.05		24
				0.005		1
	0.5	95
					0.05	40
	0.005	10
				0.05	0.05	80	0.34
0.05	0.005	56	0.20
				0.05	0.0005	50	0.56
0.005	0.05	72	0.35
				0.005	0.005	54	0.35
0.005	0.0005	30	0.16
				0.0005	0.05	50	0.83
0.0005	0.005	15	0.28
				0.0005	0.0005	0	N.A.

^aβ-L-2′-脱氧腺苷：IC₅₀＝0.09μM

^bβ-L-2′-脱氧胞苷：IC₅₀＝0.06μM

^c结合指数值说明具有协同作用(＜1)，加合作用(＝1)，以及拮抗作用(＞1)

实施例11

此实施例测定了L-dA、L-dT和L-dC对土拨鼠肝炎病毒(WHV)慢性感染的北美土拨鼠(Marmota monar)肝DNA病毒属感染作用。这种HBV感染的动物模型是广泛被使用的，并已经证明可用作抗HBV的抗病毒剂评价的模型。

方法：

试验组(n＝3只动物/药物组，n＝4只动物/对照组)

第1组        载体对照

第2组        拉米夫定(lamivudine)(3TC)(10mg/kg/天)

第3-6组      L-dA(0.01，0.1，1.0，10mg/kg/天)

第7-10组     L-dT(0.01，0.1，1.0，10mg/kg/天)

第11-14组    L-dC(0.01，0.1，1.0，10mg/kg/天)

药物每天经口服管饲法给药一次，在第0，1，3，7，14，21，28天和在治疗后的+1，+3，+7，+14，+28和+56天时取血液样品。用点印迹法定量测定PCR，以血清中WHV DNA的减少评价活性和毒性。

结果在图3和表5说明。

表5

在土拨鼠慢性HBV感染模型中LdA，LdT和LdC的抗病毒活性

¹LdA，LdT和LdC每天一次口服给药10mg/kg

²限量检测为每毫升血清1ng/ml WHV-DNA

此体内模型的数据说明L-dA，L-dT和L-dC具有高活性。首先，病毒的负荷减少到不能检出(L-dT)，或几乎不能检出(L-dA，L-dC)的水平。其次，在此模型中L-dA，L-dT和L-dC比3TC(拉米夫定)具有更好的活性。第三，在停止L-dT用药后二周，没有检测出病毒水平反弹。第四，剂量响应曲线指出在L-dA和L-dC的剂量下，波浪式的增加说明抗病毒活性与L-dT类似。第五，所有接受药物的动物体重增加，并且没有发现与药物有关的毒性。

化合物的毒性

通过考察所观察到的抗病毒作用是不是由于对细胞生存能力的一般作用来进行毒性分析。所用的方法是测定β-L-dA、β-L-dC和β-L-dT在人体骨髓clorogenic试验中的细胞生长，并与拉米夫定进行比较，结果见表6。

表6

化合物	CFU-GM(μM)	BFU-E(μM)
			β-L-dA	＞10	＞10
β-L-dC	＞10	＞10
			β-L-dT	＞10	＞10
β-L-dU	＞10	＞10
			拉米夫定	＞10	＞10

药物组合物的制备

患有本文所述任何疾病，包括乙型肝炎的人可用下述方法治疗：给患者施用有效量的β-2′-脱氧-β-L-赤式-呋喃戊糖核苷，例如β-2′-脱氧腺苷、β-2′-脱氧胞苷、β-2′-脱氧尿苷、β-2′-脱氧鸟苷和β-2′-脱氧胸苷，或它们药学上可接受的前药或盐，并有药学上可接受的载体或稀释剂存在。活性物质可以任何适当的途径给药，例如以液体或固体的形式经口服、肠胃外、静脉内、真皮内、皮下或局部给药。

在药学上可接受的载体或稀释剂中含有的活性化合物的量足以能够给予患者治疗有效量，以抑制病毒在体内的复制，而且不会给所治疗的患者造成明显的毒副作用。所谓的“抑制量”是指活性成分的量足以能产生例如本文所述的各个试验可测出的抑制作用。

在上述所有条件下，优选的化合物剂量在每天大约1-50mg/kg，优选在1-20mg/kg体重范围内，更常见的每天给接受者0.1至大约100mg/kg体重。药学上可接受的前药的有效剂量范围可以进行释放的核苷母体的重量为基础进行计算。如果前药本身也显示出活性，其有效剂量可按上述方法用前药的重量确定，或用本领域已知的其它方法确定。

化合物可方便的以适当的单位剂量形式给药，包括，但不限于每单位剂量形式中含有7-3000mg，优选含有70-1400mg活性成分。通常口服剂量为50-1000mg是方便的。

理想的是，活性成分给药后能使活性化合物在血浆中的峰值浓度达到大约0.2-70μM，优选大约1.0-10μM。例如通过静脉内注射0.1-5％的活性成分的溶液来实现，所述的溶液可以是在盐水中，或者以活性成分的大药团形式给药。

在药物组合物中活性化合物的浓度取决于所述药物的吸收、失活和排泄速率，以及本领域熟练技术人员已知的其它因素。需要注意的是，剂量的数值还可随着所治疗症状的严重程度变化。进一步的，对一个特定的接受者而言，特定的剂量和用药日程应该按照个体的需要，以及开药或监督组合物给药的医生的处方随时间调整。这里所说的浓度范围仅仅是举例说明，并不限制要求保护的组合物的范围。活性成分可一次给药，也可以较小的剂量，以可改变的时间间隔分成数次给药。

活性化合物优选的给药模式是口服。口服的组合物通常含有惰性稀释剂或可食用的载体。它们可包在明胶胶囊里，或压成片剂。为了进行口服用药的治疗，可以把活性化合物与赋形剂掺合，并以片剂、药片或胶囊的形式使用。作为组合物的一部分，还可以包括药学上可相容的黏合剂和/或辅剂材料。

片剂、丸剂、胶囊、药片等可含有下述任意成分，或有类似性质的化合物：黏合剂如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖；崩解剂如藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotes；glidant如二氧化硅胶体；甜味剂如蔗糖或糖精；调味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙味调料。当单位剂量形式是胶囊时，除了上述材料以外，其中还可以含有液体载体如脂肪油。此外，单位剂量形式可含有其他各种能够改善剂量单元的物理形式的物质，例如糖衣、虫胶或其它肠溶试剂。

本发明化合物还可以酏剂、悬浮剂、糖浆、薄膜、口香糖等之中的组分给药。除了活性化合物以外，糖浆中还可含有作为甜味剂的蔗糖和某些防腐剂、染料和色素，以及调味剂。

本发明化合物或其药学上可接受的衍生物或其盐还可与其它不损害所需效果的活性物质混合，或与有补充作用的物质混合，这些物质例如是抗生素、抗菌剂、抗炎剂、蛋白酶抑制剂，或其它核苷或非核苷抗病毒剂。肠胃外、真皮内、皮下或局部应用的溶液或悬浮液可含有下述组分：无菌稀释剂如注射用水、盐水溶液、混合油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢盐；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，和能够调节张力的试剂如氯化钠或葡萄糖。母液制剂可封装在用玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多次剂量的容器中。

如果是静脉内给药，优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲溶液(PBS)。

在优选的实施方案中，活性化合物与可保护该化合物，使其不会在身体里快速消失的载体一起制剂，例如控制释放的剂型，包括植入体和微胶囊释放系统。可以使用可生物降解的、具有生物相容性的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐类、聚乙醇酸、胶原蛋白、聚邻酯(polyorthoesters)、和polylacetic acid。制备这些制剂的方法是本领域常用的。所用的材料可在Aiza Corporation买到。

脂质体的悬浮液(包括对感染细胞作为靶标的脂质体，所述细胞具有针对病毒抗原的单克隆抗体)也是优选的药用载体。这些可按照本领域已知的方法制备，例如，按照U.S.P 4,522,811中所述的方法制备。例如，脂质体的制剂可按照下述方法制备：将适当的脂质体(例如硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、硬脂酰基磷脂酰胆碱、arachadoyl磷脂酰胆碱和胆固醇)溶于无机溶剂，然后蒸发，在容器表面留下干燥脂质体的薄膜。然后，在容器中加入活性化合物或其一、二和/或三磷酸酯衍生物的水溶液。之后，用手摇动形成旋涡，使脂质体材料从容器壁上游离，并分散脂质体集合物，从而形成脂质体悬浮液。

参考优选的实施方案已经对本发明进行了描述。由说明书前文的详细描述可知，对本领域的熟练技术人员而言，本发明的各种变体和改进是显而易见的。所有这些变体和改进都在本发明的保护范围之内。

Claims (13)

1.有效量的下式化合物或其药学上可接受的盐在生产用于治疗乙型肝炎病毒在宿主内感染的药物中的用途，

其中R选自H和一、二或三磷酸酯。

2.权利要求1的用途，其中的化合物是

或其药学上可接受的盐。

3.权利要求1的用途，其中所述的R是单磷酸酯。

4.权利要求1的用途，其中所述的R是二磷酸酯。

5.权利要求1的用途，其中所述的R是三磷酸酯。

6.权利要求1的用途，其中将所述化合物在适于口服递送的药学可接受的载体中给药。

7.权利要求1的用途，其中将所述化合物在适于静脉内递送的药学可接受的载体中给药。

8.权利要求1的用途，其中将所述化合物在适于肠道外递送的药学可接受的载体中给药。

9.权利要求1的用途，其中将所述化合物在适于真皮内递送的药学可接受的载体中给药。

10.权利要求1的用途，其中将所述化合物在适于皮下递送的药学可接受的载体中给药。

11.权利要求1的用途，其中将所述化合物在适于局部递送的药学可接受的载体中给药。

12.权利要求1的用途，其中所述化合物的形式为含有50至1000mg所述化合物的口服剂量单位。

13.权利要求12的用途，其中所述的口服剂量单位为片剂或胶囊。

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