CN1959415B - 化学氧化法测定总胆红素的试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种化学氧化法测定总胆红素的试剂盒：试剂1：磷酸二氢钾0.5～3g/L，磷酸氢二钠16～82g/L，氯化钠2.5～12.5g/L，聚乙烯吡咯烷酮1～30g/L，乙二胺四乙酸二钠0.2～1g/L，曲拉通X-1000.5～3ml/L，硫柳汞0.05～0.25g/L，磷酸氢二钠——磷酸二氢钾缓冲液pH值7.6～8.4；试剂2：磷酸氢二钠1～5.5g/L，磷酸二氢钾0.25～1.5g/L，过硫酸钾12.5～65g/L，氯化钠4.5～22.5g/L，硫柳汞0.05～0.25g/L，磷酸氢二钠——磷酸二氢钾缓冲液pH值6.8～7.6。该试剂盒线性上限大、抗干扰性强、测定准确度、精密度和灵敏度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定血清、血浆或尿液中总胆红素的试剂盒，具体讲是一种化学氧化法测定总胆红素的试剂盒。
背景技术
总胆红素是人体内由血红素代谢产生的结合或非结合型胆红素的总称，总胆红素异常偏高常见于肝胆疾病，近年来一些研究表明血液中胆红素低于正常值常与冠心病有关。因此，对人体的血清、血浆或尿液中总胆红素的测定，是医学检验最常规的项目之一。
测定总胆红素的试剂盒目前主要有以下三种：重氮法测定总胆红素的试剂盒、酶法测定总胆红素的试剂盒和化学氧化法测定总胆红素的试剂盒。
重氮法测定总胆红素的试剂盒：历史最久，在严格控制操作环境温度、时间、步骤下，采用该试剂盒对总胆红素水平偏高的样本检出率较高，且试剂价格低廉。所以目前仍广泛应用。但采用该试剂盒对总胆红素的检测操作复杂、试剂不稳定、反应不专一等问题一直是困扰医学工作者的难题，虽然100多年来人们作过无数次的改良，但至今仍无满意的结果。
酶法测定总胆红素的试剂盒：采用该试剂盒测定总胆红素具有简单、特异的特点。但由于酶催化胆红素反应速度慢，尤其是难以催化δ胆红素反应，因此实际测得为葡萄糖醛酸结合胆红素与非结合型胆红素的值，而不能真实反映总胆红素。且某些特殊病人样本如光照疗法后产生的光胆红素(不属于胆红素)亦可参与此反应，导致测值不准确，这些缺点大大限制了其应用。另外酶法测定总胆红素的试剂盒酶热稳定性差，保存时间短，价格过高，不利于推广应用。所以，目前虽然已能进入临床应用，但远非完善，还需继续研究。
化学氧化法测定总胆红素的试剂盒：
从上世纪九十年代起，化学氧化法中的钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒开始在国外实际应用，从1998年起钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒开始进入我国。与重氮法测定总胆红素的试剂盒和酶法测定总胆红素的试剂盒相比，钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒逐步显示出测定总胆红素时其操作简单方便、试剂稳定、保存时间长(如双试剂剂型在室温下可以稳定一年，置于仪器的试剂仓中可以稳定一个月以上)以及价格低廉等优点。但该试剂盒测低值样本时，副反应较明显而影响结果，且有一定毒性，尤其是废弃物可能被还原成剧毒的偏钒酸盐而污染环境。
国内外最新研究结果表明，化学氧化法中的过硫酸钾氧化法测定总胆红素的试剂(盒)既保留了钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒原有的优点，又具有钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒所不具有的对环境无污染、测低值样本时副反应小于钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒等优点。但它仍然存在以下缺点：1、线性上限小，不能完全覆盖全部的病理变化；2、抗干扰性差；3、副反应的影响仍较明显，反应曲线不规范，且未到终点；4、测定的准确度、精密度和灵敏度尚低，且在测低值时尤其明显。由于以上缺点的存在，所以，过硫酸钾氧化法测定总胆红素的试剂盒迄今为止仍没有得到实际应用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，提供一种既具有现有技术的过硫酸钾氧化法测定总胆红素试剂盒的优点，又线性上限大、抗干扰性强、反应曲线规范、能迅速到达终点且测定的准确度、精密度和灵敏度高且能实际应用的化学氧化法(过硫酸钾氧化法，下同)测定总胆红素的试剂盒。
本发明的技术方案是，提供一种化学氧化法测定总胆红素的试剂盒，该试剂盒由试剂1和试剂2组成，其中试剂1的各组份及其浓度范围(浓度以克/升即g/L或毫升/升即ml/L表示)如下：
磷酸二氢钾 0.5～3g/L
磷酸氢二钠 16～82g/L
氯化钠 2.5～12.5g/L
聚乙烯吡咯烷酮 1～30g/L
乙二胺四乙酸二钠 0.2～1g/L
曲拉通X-100 0.5～3ml/L
硫柳汞 0.05～0.25g/L
以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为7.6～8.4；
其中试剂2的各组份及其浓度范围(浓度以克/升即g/L)如下：
磷酸氢二钠 1～5.5g/L
磷酸二氢钾 0.25～1.5g/L
过硫酸钾 12.5～65g/L
氯化钠 4.5～22.g/L
硫柳汞 0.05～0.25g/L
以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为6.8～7.6。
其中试剂1的各组份及其浓度的优选范围(浓度以克/升即g/L或毫升/升即ml/L表示)如下：
磷酸二氢钾 1～2g/L
磷酸氢二钠 25～50g/L
氯化钠 4～7.5g/L
聚乙烯吡咯烷酮 5～20g/L
乙二胺四乙酸二钠 0.3～0.7g/L
曲拉通X-100 0.75～1.75ml/L
硫柳汞 0.08～0.15g/L
以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为7.8～8.2；
其中试剂2的各组份及其浓度范围(浓度以克/升即g/L)如下：
磷酸氢二钠 1.6～3.3g/L
磷酸二氢钾 0.4～0.8g/L
过硫酸钾 20～40g/L
氯化钠 7～15g/L
硫柳汞 0.08～0.15g/L
以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为7.0～7.4。
其中试剂1的各组份及其浓度的最佳值(浓度以克/升即g/L或毫升/升即ml/L)如下：
磷酸二氢钾 1.5g/L
磷酸氢二钠 35g/L
氯化钠 5g/L
聚乙烯吡咯烷酮 15g/L
乙二胺四乙酸二钠 0.5g/L
曲拉通X-100 1.2ml/L
硫柳汞 0.1g/L
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为8.0；
其中试剂2的各组份及其浓度的最佳值(浓度以克/升即g/L)如下：
磷酸氢二钠 2.5g/L
磷酸二氢钾 0.6g/L
过硫酸钾 30g/L
氯化钠 10g/L
硫柳汞 0.1g/L
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为7.2。
在以上组分中，磷酸二氢钾和磷酸氢二钠形成稳定的缓冲液，利于试剂中各种成分的分散稳定性。乙二胺四乙酸二钠，可络合微量元素等金属离子，减少胆红素的自氧化。氯化钠，模拟人体内真实的生化环境，对于样本中胆红素成分保持原有空间构像，且有增强溶液的离子强度，产生原盐效应，加速反应速率的作用。聚乙烯吡咯烷酮是一种非离子型水溶性高分子化合物，可提高灵敏度。曲拉通X-100表面活性剂，是非水溶性间胆的增溶剂，是反应的促进剂、润滑剂，它提高检测的灵敏度，促进样本中各种物质溶解，减少样本脂浊等对测定的影响。过硫酸钾，主要起氧化性的作用。硫柳汞，主要起防腐剂的作用。
本发明试剂1和试剂2的配置方法为常规方法，即试剂1和试剂2分别加入水如蒸馏水(蒸馏水的量根据实际需要加入)后各自混合搅匀即可。
用本发明的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒基于下列原理测定总胆红素：总胆红素在表面活性剂存在下，被化学氧化剂氧化，生成胆绿素，可测定到350-550nm处吸光度的减少与总胆红素的浓度成正比。
温度30～45℃；比色杯光径1.0cm。
波长350-550nm(主)/450-650nm(副)(副波长可消除标本中其它基质的干扰，提高检测灵敏度，即仪器读取的吸光度A为A主波长-A副波长。)。
样品(标准) 8μl；
试剂1(R1) 180～320μl；试剂2(R2)40～120μl
样品(校准管以校准品作样品)加R1混匀，30-40℃孵育3～5min后读取吸光度A0；加入R2混匀，30-45℃孵育5min后，读取吸光度A1，ΔA＝A1-A0。
计算
附图说明
图1是现有技术的过硫酸钾氧化法的测定总胆红素的试剂盒线性范围示意图。
图2是本发明化学氧化法的测定总胆红素的试剂盒线性范围示意图。
图3是现有技术的过硫酸钾氧化法的测定总胆红素的试剂盒反应曲线图。
图4是本发明化学氧化法的测定总胆红素的试剂盒反应曲线图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明远不仅限于以下实施例。
实施例1
试剂1(R1)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 3g
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 82g
氯化钠(NaCl) 2.5g
聚乙烯吡咯烷酮[(C6H9NO)n] 30g
乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2) 0.2g
曲拉通X-100(TritonX-100) 3ml
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.05g
H2O(蒸馏水，下同) 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为8.4。
试剂2(R2)
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 5.5g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.5g
过硫酸钾(K2S2O8) 12.5g
氯化钠(NaCl) 22.5g
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.05g
H2O 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为7.6。
将试剂1按常规方法与蒸馏水混合搅匀即可。将试剂2同样按常规方法与蒸馏水混合搅匀即可。
用本实施例的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒基于下列原理测定总胆红素：总胆红素在表面活性剂存在下，被化学氧化剂氧化，生成胆绿素，可测定到350-550nm处吸光度的减少与总胆红素的浓度成正比。
温度 37℃；比色杯光径 1.0cm。
波长450nm(主)/546nm(副)(副波长可消除标本中其它基质的干扰，提高检测灵敏度，即仪器读取的吸光度A为A主波长-A副波长。)。
样品(标准) 8μl；
试剂1(R1) 240μl；试剂2(R2) 60μl
样品(校准管以校准品作样品)加R1混匀，37℃孵育3～5min后读取吸光度A0；加入R2混匀，37℃孵育5min后，读取吸光度A1，ΔA＝A1-A0。
计算
实施例2
试剂1(R1)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.5g
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 16g
氯化钠(NaCl) 12.5g
聚乙烯吡咯烷酮[(C6H9NO)n] 1g
乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2) 1g
曲拉通X-100(TritonX-100) 0.5ml
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.25g
H2O 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为7.6。
试剂2(R2)
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 1g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.25g
过硫酸钾(K2S2O8) 65g
氯化钠(NaCl) 4.5g
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.25g
H2O 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为6.8。
本实施例2的制备方法及用本实施例的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒测定总胆红素的方法同实施例1。
实施例3
试剂1 (R1)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 2g
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 50g
氯化钠(NaCl) 4g
聚乙烯吡咯烷酮[(C6H9NO)n] 20g
乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2) 0.3g
曲拉通X-100(TritonX-100) 1.75ml
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.15g
H2O 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为7.8。
试剂2(R2)
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 1.6g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.4g
过硫酸钾(K2S2O8) 40g
氯化钠(NaCl) 7g
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.15g
H2O 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为7.0。
本实施例3的制备方法及用本实施例的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒测定总胆红素的方法同实施例1。
实施例4
试剂1(R1)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 1g
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 25g
氯化钠(NaCl) 7.5g
聚乙烯吡咯烷酮[(C6H9NO)n] 5g
乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2) 0.7g
曲拉通X-100(TritonX-100) 0.75ml
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.15g
H2O 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为8.2。
试剂2(R2)
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 3.3g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.8g
过硫酸钾(K2S2O8) 20g
氯化钠(NaCl) 15g
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.08g
H2O 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为7.4。
本实施例4的制备方法及用本实施例的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒测定总胆红素的方法同实施例1。
实施例5
试剂1(R1)
磷酸二氢钾(KH2PO4) 1.5g
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 35g
氯化钠(NaCl) 5g
聚乙烯吡咯烷酮[(C6H9NO)n] 15g
乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2) 0.5g
曲拉通X-100(TritonX-100) 1.2ml
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.1g
H2O 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为8.0。
试剂2(R2)
磷酸氢二钠(含12H2O)(Na2HPO4.12H2O) 2.5g
磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.6g
过硫酸钾(K2S2O8) 30g
氯化钠(NaCl) 10g
硫柳汞(C9H9O2HgNaS) 0.1g
H2O 加至 1000ml
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为7.2。
本实施例5的制备方法及用本实施例的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒测定总胆红素的方法同实施例1。
下面结合附图和表格对现有技术的过硫酸钾氧化法测胆红素的试剂盒(下面简称现有的试剂盒)与本发明的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒(下面简称本发明的试剂盒)的性能进行比较。通过测定精密度、准确性及各种干扰物等的影响比较这两种试剂盒的优缺点。
原理：
现有的试剂盒：过硫酸钾在乳化剂OP作为反应促进剂下优先与总胆红素反应，引起450nm波长处吸光度的下降，其下降值与总胆红素浓度成正比。
本发明的试剂盒：在磷酸盐缓冲液中，在曲拉通X-100作为增敏剂和反应促进剂的条件下，改良化学氧化剂与总胆红素反应，引起450nm波长处吸光度的下降，其下降值与总胆红素浓度成正比。
试剂：
现有的试剂盒按以下配方配制：
试剂1：含0.05％乳化剂OP的生理盐水；
试剂2：过硫酸钾73.98mmol/L水溶液。
本发明的试剂盒：试剂1和试剂2。
仪器：
日立7020全自动生化分析仪；岛津2450紫外分光光度计。
实验参数：
日立7020实验参数：二点终点法，反应10分钟，波长：主波长450nm，副波长546nm，样品量8u L与R1 240uL先行混合孵育5分钟，测A1，后加入R2，60uL混合反应5分钟(35点)测A2，A2-A1与相同条件下的校正液吸光度比较就可测出样品值。反应的温度37℃，比色皿光径l 0cm，二种试剂的以上试验参数完全相同。
岛津2450紫外分光光度计实验参数：波长450nm，反应的温度37℃，比色皿光径l 0cm。
两种试剂盒的线性范围的比较：
配制0，50，100，200，300，400，500，600，700总胆红素标准溶液(单位μmol/L)，用两种试剂盒在生化仪上测定：
| 理论值(μmol/L) | 0 | 50 | 100 | 200 | 300 | 400 | 500 | 600 | 700 |
| 本发明的试剂盒 | 0.1 | 50.4 | 101.2 | 202.3 | 303.5 | 403.6 | 506.1 | 607.6 | 697.6 |
| 现有的试剂盒 | 0.1 | 49.2 | 98.6 | 192.5 | 289.4 | 384.7 | 476.6 | 567.4 | 620.6 |
结合图1(现有的试剂盒)、图2(本发明的试剂盒)可以看出，本发明的试剂盒的线性范围比现有的试剂盒的线性范围大。
两种试剂盒实时反应曲线的比较：
现有的试剂盒的曲线时有波动现象，且未到终点(参见图3)。
本发明的试剂盒的实时反应曲线，不论是高、低值样品，在线性范围内反应曲线规范(参见图4)为其最大特点，良好的反应曲线是保证结果准确的基础。
两种试剂盒的抗干扰性能的比较：
在罗氏质控品(68.4μmol/L)中加入四种干扰物形成混合血清，测定结果如下：
| 干扰物及其浓度 | 肝素(1250U/L) | 脂肪乳(6.5mmol/L) | Hb(7.4g/L) | VitC(1.0g/L) |
| 本发明的试剂盒测值 | 68.8 | 68.1 | 69.1 | 68.2 |
| 本发明的试剂盒偏差 | 0.58％ | 0.44％ | 1.02％ | 0.29％ |
| 现有的试剂盒测值 | 67.2 | 67.3 | 69.6 | 67.9 |
| 现有的试剂盒偏差 | 1.75％ | 1.61％ | 1.75％ | 0.73％ |
从上表可以看出本发明的试剂盒比现有的试剂盒的抗干扰性能好。
两种试剂盒的灵敏度的比较：
现有的试剂盒测定时灵敏度低，所监测的是胆红素的吸光度，而血液中各种成分相当复杂，不少物质在450nm处均有吸收，尽管采用了546nm的副波长以去除血红蛋白的干扰，但由过硫酸钾氧化后产生的吸光度下降仍是不够灵敏的，易受干扰。这种现象在低值时(10μmol/L左右)十分明显，高值样品同样存在，只是由于测定总吸光度较大，将这一现象给淹没了。这个现象也影响了过硫酸钾氧化法的准确度和精密度性能。
本发明的试剂盒中含有曲拉通X-100和聚乙烯吡咯烷酮，能与胆红素络合而增强吸光度，相对来说各种物质的吸光度影响可忽略。
两种试剂盒的精密度和准确度比较：
以罗氏校正品定标，测定罗氏高值(68.4μmol/L)和低值(23.4μmol/L)质控品。连续用两种试剂盒进行准确度比较，结果如下：
| TB1L均值(n＝20) | 本发明的试剂盒 | 现有的试剂盒 |
| 罗氏高值实测均值 | 68.5μmol/L(偏差0.15％) | 66.8μmol/L(偏差2.34％) |
| 测量精密度 | 1.5％ | 2.6％ |
| 罗氏低值实测均值 | 23.6μmol/L(偏差0.85％) | 20.5μmol/L(偏差12.39％) |
| 测量精密度 | 2.2％ | 6.8％ |
对于测定低值质控品，现有的试剂盒的精密度和准确度均较差，本发明的试剂盒的测值较准。
综上所述，本发明化学氧化法的测定总胆红素的试剂盒与现有技术的(化学氧化法中的)过硫酸钾氧化法的测定总胆红素的试剂盒相比，本发明的试剂盒保留了现有技术的过硫酸钾氧化法的测定总胆红素的试剂盒的优点：测定总胆红素时其操作简单方便，试剂稳定，保存时间长，价格低廉(以上也是钒酸氧化法试剂盒的优点)，且对环境无污染，具有良好的环保安全性能，测低值样本时副反应小于钒酸氧化法测定总胆红素的试剂盒(以上克服了钒酸氧化法试剂盒的缺点)。
本发明化学氧化法测定总胆红素的试剂盒还具现有技术的过硫酸钾氧化法的测定总胆红素的试剂盒所不具有的优点和有益效果：
1、线性上限大，能基本覆盖全部的病理变化。本发明的试剂盒的总胆线性达1026μmol/L，是目前市场上各种方法测胆红素试剂盒中的线性上限大的试剂盒。它取得了几乎可全部涵盖临床上遇到的胆红素的病理高值的线性，可一次发出报告，避免了稀释重做，从而节省了人力和物力。
2、反应具有很快的到达终点时间的特性，其反应曲线规范。其反应速度快，副反应的影响很小。本发明的试剂盒约2分钟到达终点，直接反映出这是一种极高的氧化效率。本发明的试剂盒的规范的反应曲线是测值准确的重要保证，尤其是总胆红素在参考值范围之内的样品都能测准。自从低浓度胆红素是冠心病的危险因素的观点发表以来，要求在健康人群中测准总胆红素的值的呼声日益升高，而本发明的试剂盒可以满足这种愿望和要求。
3、抗干扰性能强，已进行的多种干扰物试验，在常见的干扰物浓度下基本无干扰。如溶血和脂质是常见的干扰，前者用546um副波长，可减除80％-90％左右，对于脂质，通过样本空白也能基本减除。本发明的试剂盒具有优越的抗干扰能力。
4、灵敏度、准确度和精密度高，能真实反映人体胆红素代谢的各种生理病理变化。测准高值能及时反映肝脏疾病的变化，而测准低值对于冠心病的及早预防治疗也具有很高的价值。与现有技术的过硫酸钾氧化法的测定总胆红素的试剂盒相比，本发明化学氧化法的测定总胆红素的试剂盒在临床检验中具有明显的应用优势。
Claims (3)
1.一种化学氧化法测定总胆红素的试剂盒，其特征在于：该试剂盒由试剂1和试剂2组成，其中试剂1的各组份及其浓度范围如下：
磷酸二氢钾 0.5～3g/L
磷酸氢二钠 16～82g/L
氯化钠 2.5～12.5g/L
聚乙烯吡咯烷酮 1～30g/L
乙二胺四乙酸二钠 0.2～1g/L
曲拉通X-100 0.5～3ml/L
硫柳汞 0.05～0.25g/L
以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为7.6～8.4；
其中试剂2的各组份及其浓度范围如下：
磷酸氢二钠 1～5.5g/L
磷酸二氢钾 0.25～1.5g/L
过硫酸钾 12.5～65g/L
氯化钠 4.5～22.5g/L
硫柳汞 0.05～0.25g/L
以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为6.8～7.6。
2.根据权利要求1所述的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒，其特征在于：其中试剂1的各组份及其浓度范围如下：
磷酸二氢钾 1～2g/L
磷酸氢二钠 25～50g/L
氯化钠 4～7.5g/L
聚乙烯吡咯烷酮 5～20g/L
乙二胺四乙酸二钠 0.3～0.7g/L
曲拉通X-100 0.75～1.75ml/L
硫柳汞 0.08～0.15g/L
以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为7.8～8.2；
其中试剂2的各组份及其浓度范围如下：
磷酸氢二钠 1.6～3.3g/L
磷酸二氢钾 0.4～0.8g/L
过硫酸钾 20～40g/L
氯化钠 7～15g/L
硫柳汞 0.08～0.15g/L
以上磷酸氢二钠与磷酸二氢钾溶解混合后调PH值为7.0～7.4。
3.根据权利要求2所述的化学氧化法测定总胆红素的试剂盒，其特征在于：其中试剂1的各组份及其浓度如下：
磷酸二氢钾 1.5g/L
磷酸氢二钠 35g/L
氯化钠 5g/L
聚乙烯吡咯烷酮 15g/L
乙二胺四乙酸二钠 0.5g/L
曲拉通X-100 1.2ml/L
硫柳汞 0.1g/L
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为8.0；
其中试剂2的各组份及其浓度如下：
磷酸氢二钠 2.5g/L
磷酸二氢钾 0.6g/L
过硫酸钾 30g/L
氯化钠 10g/L
硫柳汞 0.1g/L
磷酸氢二钠与磷酸二氢钾混合后调PH值为7.2。
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