CN1835756A

CN1835756A - 有丝分裂驱动蛋白抑制剂

Info

Publication number: CN1835756A
Application number: CNA2004800233078A
Authority: CN
Inventors: P·J·科尔曼; C·D·科克斯
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 2003-08-15
Filing date: 2004-08-11
Publication date: 2006-09-20
Also published as: US7666862B2; WO2005018547A3; WO2005018547A2; CA2533889A1; JP2007502773A; EP1656146A2; EP1656146A4; AU2004266629B2; AU2004266629A1; US20080199459A1

Abstract

本发明涉及二氢吡咯化合物，其可用于治疗细胞增殖疾病、用于治疗与KSP驱动蛋白活性有关的疾病、以及用于抑制KSP驱动蛋白。本发明还涉及包括这些化合物的组合物、以及使用这些化合物治疗哺乳动物的癌症的方法。

Description

有丝分裂驱动蛋白抑制剂

技术领域

本发明涉及2，2-二取代的2，5-二氢吡咯衍生物，其是有丝分裂驱动蛋白抑制剂，特别是有丝分裂驱动蛋白KSP的抑制剂，可用于治疗细胞增殖疾病，例如癌、增生、再狭窄、心脏肥大、免疫症和炎症。

在这些治疗剂中，用于治疗癌症的有紫杉烷和长春花生物碱。紫杉烷与长春花生物碱作用于微管，所述微管存在于各种细胞结构中。微管是有丝分裂纺锤体的主要结构元素。有丝分裂纺锤体负责将基因组的复制模板分配到由细胞分裂产生的两个子细胞的每一个中。据推测，有丝分裂纺锤体被这些药物破坏，从而抑制了癌细胞分裂并且诱导癌细胞死亡。然而，微管形成其他类型的细胞结构，包括神经进程中用于胞内运输的渠道(track)。因为这些药物不能特异性地靶向于有丝分裂纺锤体，因此它们具有限制其应用性的副作用。

改善癌症治疗用药物的特异性具有重要意义，因为，如果与这些药物给药有关的副作用能被减少，则将实现其治疗学益处。常规性地，癌症治疗中的突出改善与识别通过新机制起作用的治疗剂有关。其例子不仅包括紫杉烷，而且还包括拓扑异构酶I抑制剂的喜树碱类。从这两个角度考虑，有丝分裂驱动蛋白是新型抗癌剂的更具前景的目标。

有丝分裂驱动蛋白是有丝分裂纺锤体装配和发挥作用中不可或缺的酶，但是通常不是其它微管结构的一部分，如在神经进程中。有丝分裂驱动蛋白在有丝分裂所有阶段过程中都扮演重要角色。这些酶是“分子运动原”，它们将ATP水解释放的能量转变成机械力，驱动细胞负荷沿着微管进行定向运动。足以完成这一任务的催化区是约340个氨基酸的致密结构。在有丝分裂期间，驱动蛋白将微管组构为作为有丝分裂纺锤体的双极结构。驱动蛋白调解染色体沿纺锤体微管的移动，以及与有丝分裂的特定相有关的有丝分裂纺锤体中的结构变化。有丝分裂驱动蛋白功能的试验性扰动引起有丝分裂纺锤体的畸形或者机能障碍，通常导致细胞周期停滞与细胞死亡。

在有丝分裂驱动蛋白中，已经被识别的有丝分裂驱动蛋白有KSP。KSP属于正端导向(plus end-directed)的微管运动原的进化学上保存下来的驱动蛋白亚族，所述微管运动原装配成由反向平行的均二聚体构成的双极均四聚体。在有丝分裂期间，KSP伴随有丝分裂纺锤体的微管。将针对KSP的抗体显微注射到人细胞中，防止在前中期期间纺锤体极分离，生成单极纺锤体并引起有丝分裂停滞和诱导细胞程序死亡。KSP与相关驱动蛋白在其他非人的有机体中，使反向平行微管集束，并使它们彼此相对滑行，因此驱动两个纺锤体极分离。KSP也可在分裂后期调解B纺锤体伸长和微管在纺锤体极处的聚集。

已经描述了人KSP(也称为HsEg5)[Blangy，et al.，Cell，83：1159-69(1995)；Whitehead，et al.，Arthritis Rheum.，39：1635-42(1996)；Galgio et al.，J.Cell Biol.，135：339-414(1996)；Blangy，et al.，J Biol.Chem.，272：19418-24(1997)；Blangy，et al.，Cell Motil Cytoskeleton，40：174-82(1998)；Whitehead and Rattner，J.Cell Sci.，111：2551-61(1998)；Kaiser，et al.，JBC 274：18925-31(1999)；GenBank登记号：X85137，NM004523和U37426]，并且已经描述了KSP基因片段(TRIP5)[Lee，etal.，Mol Endocrinol.，9：243-54(1995)；GenBank登记号L40372]。已经报导了非洲爪蟾属KSP同系物(Eg5)，以及果蝇K-LP61F/KRP 130。

最近已经描述了某些喹唑啉酮作为KSP抑制剂(PCT公开WO01/30768，2001年5月3日)。

有丝分裂驱动蛋白对于发现和开发新型有丝分裂化学疗法是具有前景的目标。因此，本发明的目的是提供可用于抑制有丝分裂驱动蛋白KSP的方法与组合物。

发明概述

本发明涉及二氢吡咯衍生物，其可用于治疗细胞增殖疾病，用于治疗与KSP驱动蛋白活性有关的病症，并用于抑制KSP驱动蛋白。本发明的化合物可由下式I表示：

发明详述

本发明的化合物可用于抑制有丝分裂驱动蛋白并通过下式I所示化合物、或其可药用盐或立体异构体进行说明：

其中：

a为0或1；

b为0或1；

m为0、1或2；

n为0、1、2或3；

r为0或1；

s为0或1；

t为0、1或2；

u为0、1或2；

R¹和R²独立地选自：H、(C₁-C₆)烷基、芳基、杂环基和(C₃-C₆)环烷基，其任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；

R³选自：

1)氢，

2)C₁-C₁₀烷基，

3)C₁-C₁₀烷基-O-R^d，

4)C₂-C₁₀烯基-O-R^d，

5)C₂-C₁₀炔基-O-R^d，

6)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-O-R^d，

7)C₁-C₁₀烷基-(C＝O)_b-NR^cR^c’，

8)C₂-C₁₀烯基-(C＝O)_bNR^cR^c’，

9)C₂-C₁₀炔基-(C＝O)_bNR^cR^c’，

10)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-(C＝O)_bNR^cR^c’，

11)C₁-C₁₀烷基-S(O)_m-R^d，

12)C₂-C₁₀烯基-S(O)_m-R^d，

13)C₂-C₁₀炔基-S(O)_m-R^d，

14)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-S(O)_m-R^d，

所述烷基、烯基、炔基和环烷基任选被一个或多个选自R⁶的取代基取代；

R⁴独立地选自：

1)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

2)(C＝O)_aO_b芳基，

3)CO₂H，

4)卤代，

5)CN，

6)OH，

7)O_bC₁-C₆全氟烷基，

8)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

9)S(O)_mR^a，

10)S(O)₂NR⁸R⁹，

11)-OPO(OH)₂；

所述烷基、芳基、烯基、炔基、杂环基和环烷基任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；

R⁵选自：

1)氢；

2)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)_aO_b芳基，

4)CO₂H，

5)卤代，

6)CN，

7)OH，

8)O_bC₁-C₆全氟烷基，

9)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

10)S(O)_mR^a，

11)S(O)₂NR⁸R⁹，

12)-OPO(OH)₂；

R⁶独立地选自：

1)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

2)(C＝O)_aO_b芳基，

3)C₂-C₁₀烯基，

4)C₂-C₁₀炔基，

5)(C＝O)_aO_b杂环基，

6)CO₂H，

7)卤代，

8)CN，

9)OH，

10)O_bC₁-C₆全氟烷基，

11)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

12)S(O)_mR^a，

13)S(O)₂NR⁸R⁹，

14)氧代，

15)CHO，

16)(N＝O)R⁸R⁹，或

17)(C＝O)_aO_bC₃-C₈环烷基，

18)-OPO(OH)₂；

R⁷选自：

1)(C＝O)_rO_s(C₁-C₁₀)烷基，

2)O_r(C₁-C₃)全氟烷基，

3)氧代，

4)OH，

5)卤代，

6)CN，

7)(C₂-C₁₀)烯基，

8)(C₂-C₁₀)炔基，

9)(C＝O)_rO_s(C₃-C₆)环烷基，

10)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-芳基，

11)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-杂环基，

12)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-N(R^b)₂，

13)C(O)R^a，

14)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂R^a，

15)C(O)H，

16)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂H，

17)(C＝O)_rN(R^b)₂，

18)S(O)_mR^a，

19)S(O)₂N(R^b)₂，和

20)-OPO(OH)₂；

所述烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、亚烷基和杂环基任选被最多三个选自以下的取代基取代：R^b、OH、(C₁-C₆)烷氧基、卤素、CO₂H、CN、O(C＝O)C₁-C₆烷基、氧代、NO₂和N(R^b)₂；

R⁸和R⁹独立地选自：

1)H，

2)(C＝O)O_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)O_bC₃-C₈环烷基，

4)(C＝O)O_b芳基，

5)(C＝O)O_b杂环基，

6)C₁-C₁₀烷基，

7)芳基，

8)C₂-C₁₀烯基，

9)C₂-C₁₀炔基，

10)杂环基，

11)C₃-C₈环烷基，

12)SO₂R^a，和

13)(C＝O)NR^b ₂，

所述烷基、环烷基、芳基、杂环基、烯基和炔基任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代，或

R⁸和R⁹可与它们所连接的氮一起形成每个环为3-7元环并且除了所述氮之外任选含有一个或两个另外的选自N、O和S的杂原子的单环或双环杂环，所述单环或双环杂环任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代，

R¹⁰选自：H和F；

R¹¹和R¹²独立地选自：F和-CH₂F；

R¹³和R¹⁴独立地选自：H和-CH₂F；

R^ox不存在或者是氧代；

R^a独立地选自：(C₁-C₆)烷基、(C₃-C₆)环烷基、芳基或杂环基，其任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；

R^b独立地选自：H、(C₁-C₆)烷基、芳基、杂环基、(C₃-C₆)环烷基、(C＝O)OC₁-C₆烷基、(C＝O)C₁-C₆烷基、(C＝O)芳基、(C＝O)杂环基、(C＝O)NR^eR^e′或S(O)₂R^a，其任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；

R^c和R^c′独立地选自：H、(C₁-C₆)烷基、芳基、NH₂、OH、OR^a、-(C₁-C₆)烷基-OH、-(C₁-C₆)烷基-O-(C₁-C₆)烷基、(C＝O)OC₁-C₆烷基、(C＝O)C₁-C₆烷基、(C＝O)芳基、(C＝O)杂环基、(C＝O)NR^eR^e′、S(O)₂R^a和-(C₁-C₆)烷基-N(R^b)₂，其中烷基任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；或

R^c和R^c′可与它们所连接的氮一起形成每个环为3-7元环并且除了所述氮之外任选含有一个或两个另外的选自N、O和S的杂原子的单环或双环杂环，所述单环或双环杂环任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；

R^d选自：H、(C₁-C₆)烷基、-(C₂-C₆)烷基-OH、-(C₁-C₆)烷基-O-(C₁-C₆)烷基和-(C₁-C₆)烷基-N(R^b)₂，其中烷基任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；

R^e和R^e′独立地选自：H、(C₁-C₆)烷基、芳基、杂环基和(C₃-C₆)环烷基，其任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；或

R^e和R^e′可与它们所连接的氮一起形成每个环为3-7元环并且除了所述氮之外任选含有一个或两个另外的选自N、O和S的杂原子的单环或双环杂环，所述单环或双环杂环任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代。

本发明的化合物可用于抑制有丝分裂驱动蛋白并通过下式II所示化合物、或其可药用盐或立体异构体进行说明：

其中：

a为0或1；

b为0或1；

m为0、1或2；

n为0、1、2或3；

r为0或1；

s为0或1；

t为0或1；

u为0或1；

R³选自：

1)氢，

2)C₁-C₁₀烷基，

3)C₁-C₁₀烷基-O-R^d，

4)C₂-C₁₀烯基-O-R^d，

5)C₂-C₁₀炔基-O-R^d，

6)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-O-R^d，

7)C₁-C₁₀烷基-(C＝O)_b-NR^cR^c′，

8)C₂-C₁₀烯基-(C＝O)_bNR^cR^c′，

9)C₂-C₁₀炔基-(C＝O)_bNR^cR^c′，

10)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-(C＝O)_bNR^cR^c′，

11)C₁-C₁₀烷基-S(O)_m-R^d，

12)C₂-C₁₀烯基-S(O)_m-R^d，

13)C₂-C₁₀炔基-S(O)_m-R^d，

14)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-S(O)_m-R^d，

R⁴独立地选自：

1)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

2)(C＝O)_aO_b芳基，

3)CO₂H，

4)卤代，

5)CN，

6)OH，

7)O_bC₁-C₆全氟烷基，

8)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

9)S(O)_mR^a，

10)S(O)₂NR⁸R⁹，和

11)-OPO(OH)₂；

R⁵选自：

1)氢；

2)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)_aO_b芳基，

4)CO₂H，

5)卤代，

6)CN，

7)OH，

8)O_bC₁-C₆全氟烷基，

9)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

10)S(O)_mR^a，

11)S(O)₂NR⁸R⁹，

R⁶独立地选自：

1)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

2)(C＝O)_aO_b芳基，

3)C₂-C₁₀烯基，

4)C₂-C₁₀炔基，

5)(C＝O)_aO_b杂环基，

6)CO₂H，

7)卤代，

8)CN，

9)OH，

10)O_bC₁-C₆全氟烷基，

11)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

12)S(O)_mR^a，

13)S(O)₂NR⁸R⁹，

14)氧代，

15)CHO，

16)(N＝O)R⁸R⁹，或

17)(C＝O)_aO_bC₃-C₈环烷基，和

18)-OPO(OH)₂；

R⁷选自：

1)(C＝O)_rO_s(C₁-C₁₀)烷基，

2)O_r(C₁-C₃)全氟烷基，

3)氧代，

4)OH，

5)卤代，

6)CN，

7)(C₂-C₁₀)烯基，

8)(C₂-C₁₀)炔基，

9)(C＝O)_rO_s(C₃-C₆)环烷基，

10)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-芳基，

11)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-杂环基，

12)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-N(R^b)₂，

13)C(O)R^a，

14)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂R^a，

15)C(O)H，

16)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂H，

17)C(O)N(R^b)₂，

18)S(O)_mR^a，

19)S(O)₂N(R^b)₂，和

20)-OPO(OH)₂；

R⁸和R⁹独立地选自：

1)H，

2)(C＝O)O_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)O_bC₃-C₈环烷基，

4)(C＝O)O_b芳基，

5)(C＝O)O_b杂环基，

6)C₁-C₁₀烷基，

7)芳基，

8)C₂-C₁₀烯基，

9)C₂-C₁₀炔基，

10)杂环基，

11)C₃-C₈环烷基，

12)SO₂R^a，和

13)(C＝O)NR^b ₂，

R¹¹和R¹²独立地选自：F和-CH₂F；

R¹³和R¹⁴独立地选自：H和-CH₂F，条件是当t为1时，R¹⁴为H，并且当u是1时，R¹³为H；

R^ox不存在或者是氧代；

在本发明的实施方案中，化合物通过下式III所示化合物、或其可药用盐或立体异构体进行说明：

其中：

a为0或1；

b为0或1；

m为0、1或2；

n为0、1或2；

r为0或1；

s为0或1；

t为0或1；

R¹和R²独立地选自：H、(C₁-C₆)烷基、芳基和(C₃-C₆)环烷基，其任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；

R⁴独立地选自：

1)卤代，

2)OH，

3)O_bC₁-C₆全氟烷基，

R⁵选自：

1)氢；

2)卤代，

3)OH，

4)O_bC₁-C₆全氟烷基，

R⁷选自：

1)(C＝O)_rO_s(C₁-C₁₀)烷基，

2)O_r(C₁-C₃)全氟烷基，

3)氧代，

4)OH，

5)卤代，

6)CN，

7)(C₂-C₁₀)烯基，

8)(C₂-C₁₀)炔基，

9)(C＝O)_rO_s(C₃-C₆)环烷基，

10)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-芳基，

11)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-杂环基，

12)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-N(R^b)₂，

13)C(O)R^a，

14)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂R^a，

15)C(O)H，

16)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂H，和

17)C(O)N(R^b)₂，

18)S(O)_mR^a，和

19)S(O)₂N(R^b)₂；

R⁸和R⁹独立地选自：

1)H，

2)(C＝O)O_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)O_bC₃-C₈环烷基，

4)(C＝O)O_b芳基，

5)(C＝O)O_b杂环基，

6)C₁-C₁₀烷基，

7)芳基，

8)C₂-C₁₀烯基，

9)C₂-C₁₀炔基，

10)杂环基，

11)C₃-C₈环烷基，

12)SO₂R^a，和

13)(C＝O)NR^b ₂，

R¹²选自：F和-CH₂F；

R¹⁴选自：H和-CH₂F，条件是当t为1时，R¹⁴为H；

R^e和R^e独立地选自：H、(C₁-C₆)烷基、芳基、杂环基和(C₃-C₆)环烷基，其任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；或

本发明的另一个实施方案通过下式IV所示化合物、或其可药用盐或立体异构体进行说明：

其中：

a为0或1；

b为0或1；

m为0、1或2；

r为0或1；

s为0或1；

R¹和R²独立地选自：H和(C₁-C₆)烷基，其任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；

R⁴独立地选自：

1)卤代，

2)OH，

3)O_bC₁-C₆全氟烷基，

R⁷选自：

1)(C＝O)_rO_s(C₁-C₁₀)烷基，

2)O_r(C₁-C₃)全氟烷基，

3)氧代，

4)OH，

5)卤代，

6)CN，

7)(C₂-C₁₀)烯基，

8)(C₂-C₁₀)炔基，

9)(C＝O)_rO_s(C₃-C₆)环烷基，

10)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-芳基，

11)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-杂环基，

12)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-N(R^b)₂，

13)C(O)R^a，

14)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂R^a，

15)C(O)H，

16)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂H，和

17)C(O)N(R^b)₂，

18)S(O)_mR^a，和

19)S(O)₂N(R^b)₂；

R⁸和R⁹独立地选自：

1)H，

2)(C＝O)O_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)O_bC₃-C₈环烷基，

4)(C＝O)O_b芳基，

5)(C＝O)O_b杂环基，

6)C₁-C₁₀烷基，

7)芳基，

8)C₂-C₁₀烯基，

9)C₂-C₁₀炔基，

10)杂环基，

11)C₃-C₈环烷基，

12)SO₂R^a，和

13)(C＝O)NR^b ₂，

本发明化合物的具体例子包括：

(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(4R，6S)-6-氟-1-甲基氮杂环庚烷-4-基]-2-(羟基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酰胺，

(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(4S，6R)-6-氟-1-甲基氮杂环庚烷-4-基]-2-(羟基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酰胺，

或其可药用盐或立体异构体。

本发明的化合物可具有不对称中心、手性轴与手性平面(在E.I.Eliel和S.H.Wilen，Stereochemistry of Carbon Compounds，John Wiley& Sons，New York，1994，1119-1190页中有述)并作为外消旋物、外消旋混合物、和作为单个的非对映体存在，具有其所有可能的异构体及其混合物，包括光学异构体，所有这些立体异构体都被归入本发明。另外，本文所述化合物可作为互变异构体存在，两种互变异构形式都包括在本发明的范围内，即使只描述了一个互变结构。

当任一变量(如R⁴、R⁷、R¹⁰等)在任何结构中出现超过一次时，在每种情况中的定义与其它情况中的定义相独立。另外，只有当这种组合产生稳定的化合物时才允许进行取代基与变量的组合。从取代基到环系统中的线条表示所示键可与任一个可取代的环原子连接。如果环体系是多环的，则表示键仅在最接近的环上与适当的碳原子的任一个连接。

很清楚，本发明化合物上的取代基与取代形式可由本领域技术人员进行选择，以得到化学上稳定的化合物，并且其可通过本领域已知的技术及下述方法容易地从可用起始原料合成。如果取代基自身被多于一个基团取代，可以理解，这些多个基团可在相同的碳或者不同的碳上，只要得到稳定结构即可。术语“任选被一个或多个取代基取代”应该等价于术语“任选被至少一个取代基取代”，并且在此情况下优选方案具有0-3个取代基。

如同本文使用的，“烷基”是指包括具有特定碳原子数的支链与直链的饱和脂族烃基。例如，“C₁-C₁₀烷基”中的C₁-C₁₀定义为包括具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个碳的直链或者支链构型的基团。例如，“C₁-C₁₀烷基”具体包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基等等。术语“环烷基”是指具有特定碳原子数的单环饱和脂族烃基。例如，“环烷基”包括环丙基、甲基-环丙基、2，2-二甲基-环丁基、2-乙基-环戊基、环己基等等。在本发明的实施方案中，术语“环烷基”包括上面刚刚所述的基团并且另外包括单环不饱和脂族烃基。例如，在该实施方案中所定义的“环烷基”包括环丙基、甲基-环丙基、2，2-二甲基-环丁基、2-乙基-环戊基、环己基、环戊烯基、环丁烯基等。

术语“亚烷基”是指具有特定碳原子数的烃双基基团。例如，“亚烷基”包括-CH₂-、-CH₂CH₂-等。

当用在术语“C₁-C₆芳烷基”和“C₁-C₆杂芳烷基”中时，“C₁-C₆”是指该结构部分中的烷基部分，并且未描述该结构部分中芳基和杂芳基部分中的碳原子数。

“烷氧基”表示具有指示数目的碳原子的通过氧桥连接的环状或者非环状烷基。因此“烷氧基”包括上述烷基和环烷基的定义。

如果未指定碳原子数，则术语“烯基”是指直链、支链或环状的包含2-10个碳原子和至少一个碳-碳双键的非芳香烃基。优选存在一个碳-碳双键，并且可存在最多四个非芳香碳-碳双链。因此，“C₂-C₆烯基”是指具有2-6个碳原子的烯基。烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、2-甲基丁烯基和环己烯基。烯基的直链、支链或者环状部分可含有双键并且如果指明是取代烯基，则其可被取代。

术语“炔基”是指直链、支链或环状的包含2-10个碳原子和至少一个碳-碳三键的烃基。可存在最多三个碳-碳三键。因此，“C₂-C₆炔基”是指具有2-6个碳原子的炔基。炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、3-甲基丁炔基等。炔基的直链、支链或者环状部分可含有三键并且如果指明是取代炔基，则其可被取代。

在某些情况下，取代基可用包括0的碳原子范围定义，如(C₀-C₆)亚烷基-芳基。如果芳基为苯基，则该定义包括苯基自身，以及-CH₂Ph、-CH₂CH₂Ph、CH(CH₃)CH₂CH(CH₃)Ph，等等。

如本文使用的，“芳基”是指任何在各环中具有最多7个原子的稳定的单环或者双环碳环，其中至少一个环是芳香性的。这些芳基单元的例子包括苯基、萘基、四氢萘基、2，3-二氢化茚基与联苯基。在其中芳基取代基是双环的并且一个环是非芳香的情况中，很清楚，通过芳环进行连接。

本文使用的术语“杂芳基”表示在每个环中具有最多7个原子的稳定的单环或者双环，其中至少一个环是芳香的并含有1-4个选自O、N与S构成组中的杂原子。在该定义范围内的杂芳基包括但不限于：吖啶基、咔唑基、1，2-二氮杂萘基、喹喔啉基、吡唑基、吲哚基、苯并三唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基、异喹啉基、噁唑基、异噁唑基、吲哚基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、四氢喹啉。正如以下杂环定义中的一样，“杂芳基”可以理解为包括任何含氮杂芳基的N-氧化物衍生物。如果杂芳基取代基是双环的并且一个环是非芳香的或者不包含杂原子，可以理解，分别通过芳环或者含杂原子的环进行连接。

如本文使用的，术语“杂环”或者“杂环基”是指含1-4个选自O、N和S构成组中的杂原子的5-10元芳香或者非芳香杂环，并且包括双环基团。因此“杂环基”包括上述的杂芳基，及其二氢与四氢类似物。“杂环基”另外的例子包括但不限于以下：苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋咱基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、咔唑基、咔啉基、1，2-二氮杂萘基、呋喃基、咪唑基、二氢吲哚基、吲哚基、indolazinyl、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、萘并吡啶基、噁二唑基、噁唑基、噁唑啉、异噁唑啉、氧杂环丁基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、四氢异喹啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮杂环丁基、1，4-二氧杂环己基、六氢氮杂_基、哌嗪基、哌啶基、吡啶-2-酮基、吡咯烷基、吗啉基、硫代吗啉基、二氢苯并咪唑基、二氢苯并呋喃基、二氢苯并噻吩基、二氢苯并噁唑基、二氢呋喃基、二氢咪唑基、二氢吲哚基、二氢异噁唑基、二氢异噻唑基、二氢噁二唑基、二氢噁唑基、二氢吡嗪基、二氢吡唑基、二氢吡啶基、二氢嘧啶基、二氢吡咯基、二氢喹啉基、二氢四唑基、二氢噻二唑基、二氢噻唑基、二氢噻吩基、二氢三唑基、二氢氮杂环丁基、亚甲基二氧苯甲酰基、四氢呋喃基、与四氢噻吩基、及其N-氧化物。可通过碳原子或者通过杂原子连接杂环基取代基。

优选杂环选自：2-氮杂_酮、苯并咪唑基、2-diazapinone、咪唑基、2-咪唑烷酮、吲哚基、异喹啉基、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡啶基、吡咯烷基、2-哌啶酮、2-嘧啶酮、2-吡咯烷酮、喹啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、和噻吩基。

本领域技术人员可理解，本文使用的“卤代”或“卤素”包括氯代、氟代、溴代与碘代。

除非另外明确说明，烷基、烯基、炔基、环烷基、芳基、杂芳基和杂环基取代基可为取代的或未取代的。例如，(C₁-C₆)烷基可被一个、两个或三个选自以下的取代基取代：OH、氧代、卤素、烷氧基、二烷基氨基、或杂环基如吗啉基、哌啶基等。在这种情况下，如果一个取代基是氧代并且另一个取代基是OH，则定义包括以下：-(C＝O)CH₂CH(OH)CH₃、-(C＝O)OH、-CH₂(OH)CH₂CH(O)等等。

在某些情况，R^c与R^c′、R^f与R^f′定义为使得它们可与它们所连接的氮一起形成每个环为5-7元环并且除了所述氮之外任选含有一个或两个另外的选自N、O和S的杂原子的单环或双环杂环，所述杂环任选被一个或多个选自R⁷的取代基取代。可如此形成的杂环的例子包括但不限于以下基团，记住杂环任选被一个或多个(并且在实施方案中，被一个、两个或三个)选自R⁷的取代基取代：

在某些情况中，R^d与R^d′定义为使得它们可与它们所连接的磷一起形成环为5-7元环并且除了所述氮之外任选含有一个或两个另外的选自NR^e、O与S的杂原子的单环杂环，所述杂环任选被一个或多个选自R⁷的取代基取代。可如此形成的杂环的例子包括但不限于以下基团，记住杂环任选被一个或多个(并且在实施方案中，被一个或两个)选自R⁷的取代基取代：

在实施方案中，R¹选自H和C₁-C₆烷基。

在实施方案中，R²选自H和C₁-C₆烷基。

在实施方案中，R¹⁰、R¹³和R¹⁴是H。

在实施方案中，R³选自-C₁-C₁₀烷基-O-Rg和-C₁-C₁₀烷基-NR^fR^f′，其任选被一个或两个选自R¹⁰的取代基取代。

在实施方案中，R⁴独立地选自卤素和OH。在另一个实施方案中，n是2，R⁴独立地选自卤素。

在实施方案中，R⁴独立地选自H、卤素和OH。

在实施方案中，u是0。

在实施方案中，t是1，R¹²是氟代。

在实施方案中，u和t是0，R¹³是H，R¹⁴是-CH₂F。

在实施方案中，u和t是0，R¹⁴是H，R¹³是-CH₂F。

在实施方案中，R^ox不存在。

本发明包括式I所示化合物的游离形式、及其可药用盐和立体异构体。本文中示例性的某些特定化合物是胺化合物的质子化盐。术语“游离形式”是指非盐形式的胺化合物。包括在本文范围内的可药用盐不仅包括示例性地用于本文所述特定化合物的盐，而且包括式I所示化合物游离形式的所有典型的可药用盐。所述特定盐化合物的游离形式可使用本领域已知的技术进行分离。例如，通过用适当的稀碱水溶液如稀NaOH、碳酸钾、氨和碳酸氢钠的水溶液处理盐，得到游离形式。游离形式在某些物理性能，如在极性溶剂中的溶解度方面，可不同于其各自盐的形式，但是用于本发明目的时，酸盐和碱盐在药学意义上等价于它们各自的游离形式。

可从本发明的含有碱性或者酸性结构部分的化合物通过常规化学方法合成得到本发明化合物的可药用盐。通常，通过离子交换色谱法或者使游离碱与化学计量的或过量的所需形成盐所用的无机酸或有机酸在适当的溶剂中或在各种溶剂的组合中反应，制备碱性化合物的盐。同样地，通过使酸性化合物与适当的无机碱或有机碱反应，制备酸性化合物的盐。

因此，本发明化合物的可药用盐包括通过使碱性的本发明化合物与无机酸或有机酸反应制备的本发明化合物的常规的无毒盐。例如，常规的无毒盐包括那些得自无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的盐，以及从有机酸如乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、马来酸、羟基马来酸、苯基乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙基磺酸、三氟乙酸等制备的盐。

当本发明的化合物是酸性时，适当的“可药用盐”是指从可药用无毒碱包括无机碱和有机碱制备的盐。得自无机碱的盐包括铝、铵、钙、铜、三价铁、二价铁、锂、镁、三价锰、二价锰、钾、钠、锌等的盐。特别优选铵、钙、镁、钾和钠的盐。得自可药用有机无毒碱的盐包括一级胺、二级胺和三级胺的盐，取代胺(包括天然存在的取代胺)的盐，环胺和碱性离子交换树脂(如精氨酸、甜菜碱咖啡因、胆碱、N，N¹-二苯甲基乙二胺)、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、哈胺、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤类、可可碱、三乙胺、三甲胺三丙胺、氨基丁三醇等的盐。

上述可药用盐和其它典型的可药用盐的制备的更全面描述参见Berg等人的“Pharmaceutical Salts”，J.Pharm.Sci.1977：66：1-19。

还应注意本发明的化合物是潜在的内盐或两性离子，因为在生理条件下，化合物中的脱质子化酸性结构部分，如羧基，可为阴离子性的，该电荷可然后被内部平衡掉以对抗质子化或烷基化的碱性结构部分的阳离子电荷，如四价氮原子。

在图解和实施例中使用的以下缩写的定义如下：

CDI	1，1’-羰基二咪唑
CDI	1，1’-羰基二咪唑	CSP HPLC	手性静相高效液相色谱法
DAST	三氟化(二乙氨基)硫	CSP HPLC	手性静相高效液相色谱法
DAST	三氟化(二乙氨基)硫	DCE	1，2-二氯乙烷
DCM	二氯甲烷	DCE	1，2-二氯乙烷
DCM	二氯甲烷	DMF	二甲基甲酰胺
DMSO	二甲基亚砜	DMF	二甲基甲酰胺
DMSO	二甲基亚砜	EtOAc	乙酸乙酯
LAH	氢化锂铝	EtOAc	乙酸乙酯
LAH	氢化锂铝	LiHMDS	六甲基二甲硅烷基叠氮化锂(Lithium hexamethyldisilazide)
MsCl	甲磺酰氯	LiHMDS	六甲基二甲硅烷基叠氮化锂(Lithium hexamethyldisilazide)
MsCl	甲磺酰氯	NaHMDS	六甲基二甲硅烷基叠氮化钠(Sodium hexamethyldisilazide)
NOE	核极化效应	NaHMDS	六甲基二甲硅烷基叠氮化钠(Sodium hexamethyldisilazide)
NOE	核极化效应	PTC	相转移催化剂
TBSCl	叔丁基二甲基甲硅烷基氯	PTC	相转移催化剂
TBSCl	叔丁基二甲基甲硅烷基氯	TEA	三乙胺
TFA	三氟乙酸	TEA	三乙胺
TFA	三氟乙酸	THF	四氢呋喃

除了文献中已知的或在实验过程中示例的其它标准操作之外，本发明的化合物也可通过使用以下图解中所示反应制备。因此，以下说明性的图解不限于所列化合物，或不限于任何用于说明性目的所用的特定取代基。在图解中示出的取代基标号不一定与权利要求中所用的标号相互关联，并且为了清楚起见，通常表示为单个取代基与化合物连接，在化合物中，允许在上文式I定义条件下存在多个取代基。

图解

如图解A所示，关键的2，2-二取代的二氢吡咯中间体A-8可得自容易获得的适当取代的α-苯基甘氨酸。根据Van Betsbrugge等人所述过程(Tetrahedron，1997，53，9233-9240)制备α-烯丙基-α-苯基甘氨酸。酯还原以及与羰基二咪唑环化得到中间体A-4。烯丙基属烯烃的钌氧化，然后通过形成酯以及氮的烷基化得到中间体A-5。环化和脱羧基得到中间体A-6。然后可使用环羰基以引入适当取代的苯基部分。随后皂化和氧保护得到对映异构体的混合物，其通常可通过手性色谱法分离，以得到被保护的中间体A-8。环氮可与三光气反应形成关键的中间体A-9。其然后可与各种取代的氨基哌啶反应，得到后面图解中所示的本发明的化合物。

图解B说明3-氟-5-氨基氮杂环庚烷化合物的制备，以及将这些基团引入到本发明的化合物中。应该注意，中间体B-3中的侧链羟基的氟化物取代通常得期望的中间体B-5和环同系物B-4。这些中间体化合物可通过硅胶色谱法分离，然后可使中间体B-4与A-9反应，制备本发明的化合物B-6。

图解C-E说明各种其它氟代或氟甲基取代的氨基氮杂环庚烷的制备，其可被引入到本发明化合物的合成中。因此，如图解C和D中所示，根据分子内还原烷基化形成氮杂环庚烷的环，从而得到4-羟基氮杂环庚烷化合物(如C-4和D-4)。然后如图解所示，将羟基变为适当取代的胺。

图解E说明与图解B中所示类似的、更直接地合成3-氟-5-氨基氮杂环庚烷中间体E-6的路线。

图解F说明二氢吡咯环上的2-羟基甲基部分的烷基化。

图解G说明了对羟甲基部分的进一步修饰以制备本发明化合物G-2和G-3。

羟甲基部分也可被氧化，得到相应的醛H-1，其然后可经历还原胺化，得到化合物H-2，如图解H所示。

氨基羰基部分上的替代性的活化基团的使用在图解I中阐述。

图解J说明环羟甲基部分的进一步同系化(homologation)。最初与膦酸乙酸三甲酯(trimethyl phosphonoacetate)反应，得到不饱和醇侧链化合物J-1和同系的醛J-2的混合物。可通过色谱分离并使用这些化合物制备相应的化合物J-3和J-4。

醛H-1还可与格氏试剂反应，得到化合物K-1，如图解K所示。

如图解L所示，二氢吡咯上2-位的醛部分还可与膦酸乙酸三甲酯反应，在共轭双键还原后，得到酯化合物ML2。L-2进行氢化锂铝还原，然后进行Dess-Martin氧化，得到醛L-4，其然后可如前述进行还原胺化。

图解M说明C-2侧链的氟化，以及随后的羟基部分通过与叠氮化钠进行相应的三氟甲磺酸酯的置换，向胺的转化。

图解N说明二氟甲基部分向C-2侧链中的引入。

图解A

图解A(续)

图解B

图解C

图解D

图解E

图解F

图解G

图解H

图解I

图解J

图解J(续)

图解K

图解L

图解L(续)

图解M

图解N

实用性

本发明的化合物可用于多种应用。如本领域技术人员所预料的，有丝分裂可以多种方式被改变；也就是说，人们可通过增加或减少有丝分裂路径中组分的活性来影响有丝分裂。换句话说，有丝分裂可通过干扰平衡(通过抑制或者激活某些组分)而受到影响(如破坏)。类似方法可用来改变减数分裂。

在优选方案中，使用本发明的化合物调节有丝分裂纺锤体形成，因此，引起有丝分裂中细胞周期停滞的延长。本发明使用的“调节”是指改变有丝分裂纺锤体形成，包括增加和减少纺锤体形成。本文使用的“有丝分裂纺锤体形成”是指通过有丝分裂驱动蛋白将微管组构成为双极结构。本文中的“有丝分裂纺锤体机能障碍”是指有丝分裂停滞和单极纺锤体形成。

本发明的化合物可用于与有丝分裂驱动蛋白结合和/或调节有丝分裂驱动蛋白的活性。在优选方案中，有丝分裂驱动蛋白是如美国专利6,284,480第5栏中所述的有丝分裂驱动蛋白的bimC亚族成员。在另外的优选方案中，有丝分裂驱动蛋白是人KSP，尽管得自其他有机体的有丝分裂驱动蛋白的活性也可通过本发明的化合物进行调节。关于这一点，调节是指增加或者减少纺锤体极的分离，引起有丝分裂纺锤体极的畸形，即，张开，或引起有丝分裂纺锤体的形态学扰动。为了达到上述目的，在KSP定义中还包括各种KSP的变体和/或片段。另外，其他有丝分裂驱动蛋白可受到本发明化合物的抑制。

本发明的化合物可用于治疗细胞增殖疾病。可通过本文提供的方法和组合物治疗的疾病状态包括但不限于癌症(在下文中进一步讨论)、自身免疫病、关节炎、移植排斥、炎症性肠病、医疗过程(包括但不限于手术、血管成形术等)后引发的增殖。可以预料，有时候细胞不处在过度增殖或不足增殖状态(异常状态)下并且仍然需要治疗。例如，在伤口愈合期间，细胞可能“正常地”增殖，但是可能需要增强增殖。同样地，正如以上讨论的，在农业领域中，细胞可能处在“正常的”状态下，但是可能需要调节增殖以通过直接提高作物生长、或通过抑制不利地影响作物的植物或有机体的生长而强化作物。因此，在一个实施方案中，本发明包括对经受或即将经受这些病症或状态中任一种折磨的细胞或个体进行施用。

本文提供的化合物、组合物和方法特别可用于治疗癌症，所述癌症包括实体瘤，如皮、乳腺、脑、宫颈癌、睾丸癌等等。更特别地，可通过本发明的化合物、组合物和方法治疗的癌症包括但不限于：心脏：肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肉瘤)，粘液瘤，横纹肌瘤，纤维瘤，脂肪瘤和畸胎瘤；肺：支气管原性癌(鳞状上皮细胞癌、未分化小细胞癌、未分化大细胞癌、腺癌)，肺泡(支气管)癌，支气管腺瘤，肉瘤，淋巴瘤，软骨错构瘤，间皮瘤；胃肠：食管(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)，胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)，胰腺(胰管腺癌、胰岛瘤、胰升血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、血管活性肠肽瘤)，小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波西氏肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂肪瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)，大肠(腺癌、管状腺瘤、绒毛状腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；泌尿生殖道：肾(腺癌、韦母氏瘤[胚胎性癌肉瘤]、淋巴瘤、白血病)，膀胱和尿道(鳞状细胞癌、移行细胞癌、腺癌)，前列腺(腺癌、肉瘤)，睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎性癌、畸胎癌、绒毛膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样瘤、脂肪瘤)；肝脏：肝瘤(肝细胞癌)，肝胆管型肝癌，肝胚细胞瘤，血管肉瘤，肝细胞性腺瘤，血管瘤；骨：骨原性肉瘤(骨肉瘤)，纤维肉瘤，恶性纤维组织细胞瘤，软骨肉瘤，尤因氏肉瘤，恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)，多发性骨髓瘤，恶性巨细胞瘤脊索瘤，骨软骨瘤(骨软骨外生骨疣)，良性软骨瘤，成软骨细胞瘤，软骨粘液纤维瘤，骨样骨瘤和巨细胞瘤；神经系统：颅(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黄瘤、佩吉特氏病)，脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)，脑(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管膜瘤胚组织瘤[松果体瘤]、多形性恶性胶质瘤、寡枝神经胶质细胞瘤、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天性肿瘤)，脊髓纤维神经瘤，脑膜瘤，神经胶质瘤，肉瘤)；妇科：子宫(子宫内膜癌)，子宫颈(宫颈癌、肿瘤前子宫颈非典型增生)，卵巢(卵巢癌[浆液性囊腺癌、粘液性囊腺癌、未分类癌]，粒膜-鞘细胞瘤，塞-莱二氏细胞瘤，无性细胞瘤，恶性畸胎瘤)，外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑色素瘤)，阴道(明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄样肉瘤(胚横纹肌肉瘤、输卵管(癌)；血液学的：血液(骨髓性白血病[急性和慢性的]，急性淋巴母细胞性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，骨髓增生性疾病，多发性骨髓瘤，脊髓发育不良综合征)，霍奇金病，非霍奇金氏淋巴瘤[恶性淋巴瘤]；皮肤：恶性黑色素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波西氏肉瘤、胎块发育不良痣、脂肪瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；和肾上腺：成神经细胞瘤。因此，本文所述术语“癌细胞”包括受到上述所认定的条件中任一种折磨的细胞。

通过调节bimC驱动蛋白亚族的真菌成员的活性，本发明的化合物也可用做抗真菌药，如美国专利6,284,480中所述。

可根据标准药学实践对哺乳动物优选人给用单独的本发明的化合物，或优选给用本发明的化合物与可药用载体、赋形剂或者稀释剂组合的药物组合物形式。所述化合物可以口服或胃肠外给药，包括静脉内、肌肉内、腹膜内、皮下、直肠和局部给药途径。

本文使用的术语“组合物”包括含特定量的特定成分的产品、以及直接地或者间接地得自特定量的特定成分的组合的任何产品。

含有活性成分的药物组合物可为适合口服给药的形式，例如，片剂、锭剂、菱形片、水性悬浮液或油性悬浮液、可分散性粉剂或者颗粒剂、乳剂、硬胶囊或软胶囊剂、或糖浆剂或酏剂。口服用组合物可根据本领域已知的用于制备药物组合物的任何方法制备，并且该组合物可含有一种或多种选自甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂构成组中的试剂，以提供药学上形色味兼具的制剂。片剂含有与适于制造片剂的无毒可药用赋形剂混合的活性成分。这些赋形剂可为例如，惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或者磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或者藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或者阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或者滑石。片剂可为未包衣的，或者它们可通过已知技术进行包衣以掩盖药物的令人不快的味道或延迟药物在胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时期内提供持续作用。例如，可使用水溶性掩味物质如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素，或可使用延时物质如乙基纤维素、乙酸丁酸纤维素。

口服用制剂也可为硬明胶胶囊形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或者高岭土混合，或者口服用制剂也可为软明胶胶囊形式，其中活性成分与水溶性载体如聚乙二醇或者油性介质如花生油、液体石蜡或者橄榄油混合。

水性悬浮液含有与适合制造水性悬浮液的赋形剂混合的活性物质。这些赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍树胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂可以为天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或者烯化氧类与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者是环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物如十七亚乙氧基鲸蜡醇，或者是环氧乙烷与得自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨糖醇一油酸酯，或者是环氧乙烷与得自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物例如聚乙烯脱水山梨糖醇-油酸酯。水性悬浮液也可含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂例如蔗糖、糖精或者天冬甜素。

油性悬浮液可通过将活性成分悬浮在植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或者椰子油、或悬浮在矿物油例如液体石蜡中而制备。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或者鲸蜡醇。可加入例如上述那些甜味剂和矫味剂以提供适口的口服制剂。这些组合物可通过加入抗氧化剂例如叔丁基化羟基茴香醚或者α-生育酚得以贮存。

通过加入水，适于制备水性悬浮液的可分散性粉剂和颗粒剂提供与分散剂或润湿剂、悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。适当的分散剂或润湿剂和悬浮剂如上面已经描述的那些。可存在另外的赋形剂，例如甜味剂、矫味剂和着色剂。这些组合物可通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸得以保存。

本发明的药物组合物也可为水包油型乳液剂形式。油相可能是植物油例如橄榄油或者花生油，或者可能是矿物油例如液体石蜡，或者是它们的混合物。适当的乳化剂可能是天然存在的磷脂例如大豆卵磷脂，得自脂肪酸和己糖醇酐的酯或者偏酯例如脱水山梨糖醇单油酸酯，以及所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。乳剂也可能含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧化剂。

糖浆剂和酏剂可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或者蔗糖进行配制。这些制剂也可含有缓和剂、防腐剂、矫味剂、着色剂和抗氧化剂。

药物组合物可为无菌注射用水溶液形式。在可接受的介质和溶剂中，可使用水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。

无菌可注射制剂也可是无菌可注射水包油型微乳液剂，其中活性成分溶于油相中。例如，活性成分可首先溶于大豆油和卵磷脂的混合物中，然后将油性溶液引入到水和甘油的混合物中，以加工形成微乳液剂。

可注射溶液或者微乳液剂可通过局部快速浓注被引入到患者的血流中。或者，以保持本发明化合物的恒定循环浓度的方式给用溶液或者微乳液剂是有利的。为了维持这一恒定浓度，可使用连续静脉内输送装置。这种装置的例子是Deltec CADD-PLUS^TM 5400型静脉内泵。

药物组合物可为用于肌肉内和皮下给药用的无菌可注射水性悬浮液或油性悬浮液的形式。该悬浮液可根据本领域已知的技术配制，使用上述适当的分散剂或者润湿剂以及悬浮剂。无菌可注射制剂也可为在无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，如作为在1，3-丁二醇中的溶液。另外，无菌非挥发油类通常用作溶剂或者悬浮介质。为了这一目的，可使用任何包括合成甘油一酯或甘油二酯的温和的非挥发油。另外，脂肪酸例如油酸可用在可注射制剂中。

式I的化合物也可以直肠给药用栓剂的形式给药。这些组合物可以通过将药物与适当的无刺激性的赋形剂混合制备，所述赋形剂在通常温度下为固体，在直肠温度下为液体，从而在直肠中融化，释放药物。这些物质包括可可脂、甘油胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇的混合物和聚乙二醇脂肪酸酯。

对于局部施用，使用含有式I所示化合物的霜剂、膏剂、凝胶剂、溶液或者悬浮液等。(为了这一应用，局部施用将包括漱口剂和含嗽液。)

本发明的化合物可以通过局部使用适当的鼻内介质和输送装置的鼻腔内形式给药，或通过透皮路径给药，使用本领域普通技术人员已知的皮肤贴片的那些形式。为了以透皮给药系统的形式给药，剂量给药当然会以连续而不是间歇的方式贯穿于给药方案的全过程。本发明的化合物也可作为使用基质例如可可脂、甘油胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇的混合物和聚乙二醇脂肪酸酯的栓剂形式进行递送。

当本发明的化合物给药进入受试人时，每日剂量通常根据开处方医师进行判断，剂量通常随着个体患者的年龄、体重、性别和应答，以及随着患者症状的严重程度的不同而不同。

在一个示例性应用中，对经历癌症治疗的哺乳动物给用适当量的化合物。给药量为每天约0.1毫克/公斤体重到约60毫克/公斤体重，优选每天0.5毫克/公斤体重到约40毫克/公斤体重。

本发明化合物也用于与已知的治疗剂和抗癌药联合使用。例如，本发明化合物与已知的抗癌药联合使用。目前公开的化合物与其它抗癌药或化疗药的联合使用在本发明的范围内。这些药物的例子可见于Cancer Principles and Practice of Oncology，V.T.Devita和S.Hellman(编辑)，第6版(2001年2月15日)，Lippincott Williams &Wilkins Publishers.本领域的普通技术人员根据药物的特性和所涉及的癌症，将能辨别哪种药物联合是有用的。这些抗癌药包括但不限于以下：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素(retinoid)受体调节剂、胞毒/细胞生长抑制剂、抗增殖药、异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂及其他血管生成抑制剂，细胞增殖和存活信号抑制剂、细胞程序死亡诱导剂以及干扰细胞周期关卡的药物。当与放射治疗联合给用时，本发明的化合物特别有用。

在一实施方案中，本发明的化合物也可用于与已知的抗癌药联合使用，所述抗癌药包括以下：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视色素受体调节剂、胞毒剂、抗增殖药、异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、及其他血管生成抑制剂。

“雌激素受体调节剂”是指干扰或者抑制雌激素与受体结合的化合物，无论机制如何。雌激素受体调节剂的例子包括但不限于他莫昔芬、雷洛昔芬、艾多昔芬、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟维司群、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯、4，4′-二羟基二苯甲酮-2，4-二硝基苯基-腙、和SH646。

“雄激素受体调节剂”是指干扰或者抑制雄激素与受体结合的化合物，无论机制如何。雄激素受体调节剂的例子包括非那甾胺及其他5α-还原酶抑制剂、尼鲁米特、氟他米特、比卡鲁胺、利阿唑和乙酸阿比特龙。

“类视色素受体调节剂”是指干扰或者抑制类视色素与受体结合的化合物，无论机制如何。这些类视色素受体调节剂的例子包括蓓萨罗丁、维甲酸、13-顺式-视黄酸、9-顺式-视黄酸、α-二氟甲基鸟氨酸、ILX23-7553、反式-N-[4′-羟苯基]维甲胺和N-4-羧基苯基维甲胺。

“胞毒/细胞生长抑制剂”是指主要通过直接干扰细胞发挥功能或者抑制或者干扰细胞分裂(mytosis)引起细胞死亡或者抑制细胞增殖的化合物，包括烷化剂、肿瘤坏死因子、嵌入剂、低氧可活化化合物、微管抑制剂/微管稳定剂、有丝分裂驱动蛋白抑制剂、有丝分裂进程中所涉及的激酶的抑制剂、抗代谢药；生物应答调节剂；激素/抗激素治疗剂、造血生长因子、单克隆抗体靶向治疗剂、拓扑异构酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和泛素连接酶抑制剂。

胞毒剂的例子包括但不限于sertenef、恶液质素、异环磷酰胺、他索纳明、氯尼达明、卡铂、六甲蜜胺、松龙苯芥、二溴卫矛醇、雷莫司汀、福莫司汀、奈达铂、奥沙利铂、替莫唑胺、heptaplatin、雌氮芥、托西酸英丙舒凡、氯乙环磷酰胺、尼莫司汀、二溴螺氯铵、嘌嘧替派、洛铂、沙铂、泊非霉素、顺铂、伊罗夫文、右异环磷酰胺、顺式胺二氯(2-甲基吡啶)铂、苄基胍、葡磷酰胺、GPX100、(反式，反式，反式)-双-mu-(己烷-1，6-二胺)-mu-[二胺-铂(II)]双[二胺(氯代)铂(II)]四氯化物、diarizidinylspermine、三氧化二砷、1-(11-十二烷基氨基-10-羟基十一烷基)-3，7-二甲基黄嘌呤、佐柔比星、伊达比星、柔红霉素、比生群、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、戊柔比星、氨柔比星、抗瘤酮、3′-脱氨基-3′-吗啉代-13-脱氧-10-羟基洋红霉素、蒽环霉素、加柔比星、依利奈法德、MEN10755、和4-脱甲氧基-3-脱氨基-3-氮杂环丙烯基-4-甲基磺酰基-柔红霉素(参见WO 00/50032)。

低氧可活化化合物的例子是替拉扎明。

蛋白酶体抑制剂的例子包括但不限于乳胞素和保特佐米。

微管抑制剂/微管稳定剂的例子包括紫杉醇、硫酸长春地辛3’，4’-二脱氢-4’-脱氧-8’-去甲长春碱、多西他赛(docetaxol)、根霉素、多拉司他汀、羟乙基磺酸米伏布林、auristatin、西马多丁、RPR109881、BMS184476、长春氟宁、cryptophycin、2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、脱水长春碱、N，N-二甲基-L-缬氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-脯氨酸-叔丁基酰胺、TDX258、埃皮霉素(epothilones)(参见美国专利6,284,781和6,288,237)和BMS188797。

拓扑异构酶抑制剂的一些例子为拓朴替康、hycaptamine、依诺替康、鲁比替康、6-乙氧基丙酰基-3′，4′-O-外-亚苯甲基-教酒菌素、9-甲氧基-N，N-二甲基-5-硝基吡唑并[3，4，5-kl]吖啶-2-(6H)丙胺、1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，12H-苯并[de]吡喃并[3′，4′：b，7]-吲嗪并[1，2b]喹啉-10，13(9H，15H)二酮、洛托替康、7-[2-(N-异丙基氨基)乙基]-(20S)喜树碱、BNP1350、BNPI1100、BN80915、BN80942、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、索布佐生、2′-二甲基氨基-2′-脱氧-依托泊苷、GL331、N-[2-(二甲基氨基)乙基]-9-羟基-5，6-二甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑-1-甲酰胺、asulacrine、(5a，5aB，8aa，9b)-9-[2-[N-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-甲基氨基]乙基]-5-[4-羟基-3，5-二甲氧基苯基]-5，5a，6，8，8a，9-hexohydrofuro(3′，4′：6，7)萘并(2，3-d)-1，3-二氧杂环戊烯-6-酮、2，3-(亚甲基二氧)-5-甲基-7-羟基-8-甲氧基苯并[c]-菲啶鎓、6，9-二[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]isoguinoline-5，10-二酮，5-(3-氨基丙基氨基)-7，10-二羟基-2-(2-羟基乙基氨基甲基)-6H-吡唑并[4，5，1-de]吖啶-6-酮、N-[1-[2(二乙基氨基)乙基氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-硫杂蒽-4-基甲基]甲酰胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)吖啶-4-甲酰胺、6-[[2-(二甲基氨基)乙基]氨基]-3-羟基-7H-茚并[2，1-c]喹啉-7-酮、和地美司钠。

有丝分裂驱动蛋白抑制剂的例子，特别是人的有丝分裂驱动蛋白KSP的抑制剂的例子在PCT公开WO 01/30768和WO 01/98278、WO03/050,064(2003年6月19日)，WO 03/050,122(2003年6月19日)，WO03/049,527(2003年6月19日)，WO 03/049,679(2003年6月19日)，WO03/049,678(2003年6月19日)和WO 03/39460(2003年5月15日)和待审PCT公开US03/06403(提交日2003年3月4日)，US03/15861(提交日2003年5月19日)，US03/15810(提交日2003年5月19日)，US03/18482(提交日2003年6月12日)和US03/18694(提交日2003年6月12日)中有述。有丝分裂驱动蛋白抑制剂的实施方案中，包括但不限于KSP抑制剂、MKLP1抑制剂、CENP-E抑制剂、MCAK抑制剂、Kif14抑制剂、Mphosphl的抑制剂和Rab6-KIFL的抑制剂。

“在有丝分裂进程中所涉及的激酶的抑制剂”包括但不限于aurora激酶的抑制剂、Polo样激酶(PLK)抑制剂(特别是PLK-1的抑制剂)、bub-1的抑制剂和bub-R1的抑制剂。

“抗增殖药物”包括反义RNA和DNA寡核苷酸如G3139、ODN698、RVASKRAS、GEM231和INX3001，和抗代谢药如依诺他滨、卡莫氟、替加氟、喷司他丁、去氧氟尿苷、三甲曲沙、氟达拉宾、卡培他滨、加洛他滨、阿糖胞苷ocfosfate、fosteabine钠水合物、雷替曲塞、paltitrexid、乙嘧替氟、噻唑呋啉、地西他滨、诺拉曲塞、培美曲塞、nelzarabine、2′-脱氧-2′-甲叉基胞苷、2′-氟亚甲基-2′-脱氧胞苷、N-[5-(2，3-二氢-苯并呋喃基)磺酰基]-N′-(3，4-二氯苯基)脲、N6-[4-脱氧-4-[N2-[2(E)，4(E)-十四碳二烯酰]甘氨酰氨基]-L-甘油基-B-L-甘露-庚吡喃糖基]腺嘌呤、aplidine、ecteinascidin、曲沙他滨、4-[2-氨基-4-氧代-4，6，7，8-四氢-3H-嘧啶并[5，4-b][1，4]噻嗪-6-基-(S)-乙基]-2，5-噻吩酰-L-谷氨酸、氨基喋呤、5-氟尿嘧啶、阿拉诺新、11-乙酰基-8-(氨基甲酰氧基甲基)-4-甲酰基-6-甲氧基-14-氧杂-1，11-二氮杂四环(7.4.1.0.0)-十四碳-2，4，6-三烯-9-基乙酸酯、苦马豆素、洛美曲索、右雷佐生、蛋氨酸酶、2′-氰基-2′-脱氧-N4-棕榈酰基-1-B-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶和3-氨基吡啶-2-甲醛硫代半腙。

单克隆抗体靶向治疗剂的例子包括具有与癌细胞特异性或靶细胞特异性单克隆抗体结合的胞毒剂或放射性同位素的那些治疗剂。例子包括Bexxar。

“HMG-CoA还原酶抑制剂”是指3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂。具有HMG-CoA还原酶抑制活性的化合物可使用本领域熟知的试验进行识别。例如，参见美国专利4,231,938第6栏中的所述试验，以及WO 84/02131第30-33页所述试验。术语“HMG-CoA还原酶抑制剂”和“HMG-CoA还原酶的抑制剂”当用在本文中具有相同含义。

HMG-CoA还原酶抑制剂的例子可使用并且不限于洛伐他汀(MEVACOR^_；参见美国专利4,231,938，4,294,926和4,319,039)，辛伐他汀(ZOCOR^_；参见美国专利4,444,784,4,820,850和4,916,239)，普伐他汀(PRAVACHOL^_；参见美国专利4,346,227，4,537,859，4,410,629，5,030,447和5,180,589)，氟伐他汀(LESCOL^_，参见美国专利5,354,772，4,911,165，4,929,437，5,189,164，5,118,853，5,290,946和5,356,896)，和阿托伐他汀(LIPITOR^_，参见美国专利5,273,995，4,681,893，5,489,691和5,342,952)。可在本发明方法中使用的这些和其它另外的HMG-CoA还原酶抑制剂的结构式在M.Yalpani，″Cholesterol Lowering Drugs″，Chemistry & Industry，第85-89页(1996年2月5日)中的87页和美国专利4,782,084和4,885,314中有述。本文使用的术语HMG-CoA还原酶包括所有的可药用内酯和开环酸的形式(即，其中内酯环打开形成游离的酸)以及具有HMG-CoA还原酶抑制活性的化合物的盐和酯的形式，因此，这些盐、酯、开环酸和内酯形式包括在本发明的范围内。内酯部分和它对应的开环酸的形式的示例在如下结构式I和II中显示如下。

内酯开环酸

I II

在存在开环酸形式的HMG-CoA还原酶抑制剂中，盐和酯的形式可由开环的酸形成，并且所有这些形式包括在本文使用的术语“HMG-CoA还原酶抑制剂”的含义中。在实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂选自洛伐他汀和辛伐他汀，在另外的实施方案中，选自辛伐他汀。本文中，HMG-CoA还原酶抑制剂有关的术语“可药用盐”意思指本发明所用化合物的无毒盐，其通常使游离酸与适当的有机碱或者无机碱反应制备，特别是那些从阳离子例如钠、钾、铝、钙、锂、镁、锌和四甲基铵形成的盐，以及那些从胺例如氨、乙二胺、N-甲基葡糖胺、赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、二乙醇胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙基胺、1-对氯苄基-2-吡咯烷-1′-基-甲基苯并-咪唑、二乙胺、哌嗪和三(羟基甲基)氨基甲烷形成的盐。HMG-CoA还原酶抑制剂的盐的另外的例子可包括但不限于乙酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、碳酸氢盐、硫酸氢盐、酒石酸氢盐、硼酸盐、溴化物、乙二胺四乙酸钙盐、右旋樟脑磺酸盐、碳酸盐、氯化物、克拉维酸盐、柠檬酸盐、二氢氯化物、乙二胺四乙酸盐、乙二磺酸盐、丙酸酯十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、乙醇酰阿散酸盐、hexylresorcinate、哈胺、氢溴化物、氢氯化物、羟基萘酸盐、碘化物、isothionate、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、粘酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、pamaote、棕榈酸盐、panthothenate、磷酸盐/二磷酸盐、多聚半乳糖醛酸盐、水杨酸盐、硬脂酸盐、碱式乙酸盐、琥珀酸盐、丹宁酸盐、酒石酸盐、teoclate、甲苯磺酸盐、三乙基碘化物(triethiodide)和戊酸盐。

上述HMG-CoA还原酶抑制剂化合物的酯衍生物可作为潜药，当其吸收到温血动物的血流中时，可以释放药物形式的方式裂解，并使药物提供改善的疗效。

“异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂”是指抑制异戊二烯基-蛋白质转移酶包括法呢基-蛋白质转移酶(FPTase)、香叶基香叶基-蛋白质转移酶I型(GGPTase-I)和香叶基香叶基-蛋白质转移酶II型(GGPTase-II，也叫做Rab GGPTase)的任何一个或者任何组合的化合物。异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂化合物的例子包括：(±)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮，(-)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮，(+)-6-[氨基(4-氯苯基)(1-甲基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-(3-氯苯基)-1-甲基-2(1H)-喹啉酮，5(S)-正丁基-1-(2，3-二甲基苯基)-4-[1-(4-氰基苄基)-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮，(S)-1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基苄基)-5-咪唑基甲基]-5-[2-(乙磺酰基)甲基)-2-哌嗪酮，5(S)-正丁基-1-(2-甲基苯基)-4-[1-(4-氰基苄基)-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮，1-(3-氯苯基)-4-[1-(4-氰基苄基)-2-甲基-5-咪唑基甲基]-2-哌嗪酮，1-(2，2-二苯基乙基)-3-[N-(1-(4-氰基苄基)-1H-咪唑-5-基乙基)氨基甲酰基]哌啶，4-{5-[4-羟基甲基-4-(4-氯吡啶-2-基甲基)-哌啶-1-基甲基]-2-甲基咪唑-1-基甲基}苄腈，4-{5-[4-羟基甲基-4-(3-氯苄基)-哌啶-1-基甲基]-2-甲基咪唑-1-基甲基}苄腈，4-{3-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基)苄基]-3H-咪唑-4-基甲基}苄腈，4-{3-[4-(5-氯-2-氧代-2H-[1，2′]联吡啶-5′-基甲基]-3H-咪唑-4-基甲基}苄腈，4-{3-[4-(2-氧代-2H-[1，2′]联吡啶-5′-基甲基]-3H-咪唑-4-基甲基}苄腈，4-[3-(2-氧代-1-苯基-1，2-二氢吡啶-4-基甲基)-3H-咪唑-4-基甲基}苄腈，18，19-二氢-19-氧代-5H，17H-6，10：12，16-二桥亚甲基(dimetheno)-1H-咪唑并[4，3-c][1，11，4]二氧杂氮杂环十九炔-9-腈、(±)-19，20-二氢-19-氧代-5H-18，21-桥亚乙基-12，14-亚乙烯基-6，10-桥亚甲基-22H-苯并[d]咪唑并[4，3-k][1，6，9，12]氧杂三氮杂-环十八炔-9-腈，19，20-二氢-19-氧代-5H，17H-18，21-桥亚乙基-6，10：12，16-二桥亚甲基-22H-咪唑并[3，4-h][1，8，11，14]氧杂三氮杂环二十炔-9-腈，和(±)-19，20-二氢-3-甲基-19-氧代-5H-18，21-桥亚乙基-12，14-亚乙烯基-6，10-桥亚甲基-22H-苯并[d]咪唑并[4，3-k][1，6，9，12]氧杂-三氮杂环十八炔-9-腈。

异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂的其它例子可在下列公开和专利中找到：WO 96/30343、WO 97/18813、WO 97/21701、WO 97/23478、WO 97/38665、WO 98/28980、WO 98/29119、WO 95/32987、美国专利5,420,245、美国专利5,523,430、美国专利5,532,359、美国专利5,510,510、美国专利5,589,485、美国专利5,602,098、欧洲专利公开0618221、欧洲专利公开0675112、欧洲专利公开0604181、欧洲专利公开0696593、WO 94/19357、WO 95/08542、WO 95/11917、WO 95/12612、WO 95/12572、WO 95/10514、美国专利5,661,152、WO 95/10515、WO95/10516、WO 95/24612、WO 95/34535、WO 95/25086、WO 96/05529、WO 96/06138、WO 96/06193、WO 96/16443、WO 96/21701、WO96/21456、WO 96/22278、WO 96/24611、WO 96/24612、WO 96/05168、WO 96/05169、WO 96/00736、美国专利5,571,792、WO 96/17861、WO96/33159、WO 96/34850、WO 96/34851、WO 96/30017、WO 96/30018、WO 96/30362、WO 96/30363、WO 96/31111、WO 96/31477、WO96/31478、WO 96/31501、WO 97/00252、WO 97/03047、WO 97/03050、WO 97/04785、WO 97/02920、WO 97/17070、WO 97/23478、WO97/26246、WO 97/30053、WO 97/44350、WO 98/02436、和美国专利5,532,359。异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂对血管生成的作用的例子参见European J.of Cancer，Vol.35，No.9，pp.1394-1401(1999)。

“血管生成抑制剂”是指抑制新血管形成的化合物，无论机制如何。血管生成抑制剂的例子包括但不限于酪氨酸激酶抑制剂如酪氨酸激酶受体Flt-1抑制剂(VEGFR1)和Flk-1/KDR(VEGFR2)抑制剂、表皮衍生生长因子、成纤维细胞衍生生长因子或者血小板衍生生长因子的抑制剂、MMP(基质金属蛋白酶)抑制剂、整联蛋白阻断剂、干扰素-α、白细胞介素-12、多硫酸戊聚糖(pentosan polysulfate)、环加氧酶抑制剂，包括非甾族抗炎药(NSAIDs)如阿斯匹林和布洛芬以及选择性环加氧酶-2抑制剂如塞来昔布和罗非昔布(PNAS，Vol.89，p.7384(1992)；JNCI，Vol.69，p.475(1982)；Arch.Opthalmol.，Vol.108，p.573(1990)；Anat.Rec.，Vol.238，p.68(1994)；FEBS Letters，Vol.372，p.83(1995)；Clin，Orthop.Vol.313，p.76(1995)；J.Mol.Endocrinol.，Vol.16，p.107(1996)；Jpn.J.Pharmacol.，Vol.75，p.105(1997)；Cancer Res.，Vol.57，p.1625(1997)；Cell，Vol.93，p.705(1998)；Intl.J.Mol.Med.，Vol.2，p.715(1998)；J.Biol.Chem.，Vol.274，p.9116(1999))、甾族抗炎药(如皮质类固醇、盐皮质激素、地塞米松、强的松、氢化泼尼松、甲泼尼龙、倍他米松)、羧胺三唑(carboxyamidotriazole)、考布他汀A-4、角鲨胺、6-O-氯乙酰基-羰基)-烟曲霉醇(fumagillol)、酞咪哌啶酮、血管抑素(angiostatin)、肌钙蛋白-1、血管紧张素II拮抗剂(参见Fernandez etal.，J.Lab.Clin.Med.105：141-145(1985))，和VEGF抗体(参见，NatureBiotechnology，Vol.17，pp.963-968(1999年10月)；Kim et al.，Nature，362，841-844(1993)；WO 00/44777；和WO 00/61186)。

其它调节或者抑制血管生成并可用于与本发明的化合物联合使用的治疗剂包括调节或者抑制凝血和纤溶体系的药物(参见Clin.Chem.La.Med.38：679-692(2000)综述)。这些调节或者抑制凝血和纤溶路径的药物的例子包括但不限于肝素(参见Thromb.Haemost.80：10-23(1998))、低分子量肝素和羧基肽酶U抑制剂(又名活性凝血酶可活化纤溶抑制剂[TAFIa]的抑制剂)(参见Thrombosis Res.101：329-354(2001))。TAFIa抑制剂已经在PCT公开WO 03/013,526和美国申请60/349,925(提交日：2002年1月18日)。

“干扰细胞周期关卡的药物”是指抑制转导细胞周期关卡信号的蛋白激酶从而使癌细胞对DNA损害物质增敏的化合物。这些药物包括ATR、ATM、Chk1和Chk2激酶和cdk和cdc激酶的抑制剂，具体地通过7-羟基星形孢菌素、flavopiridol、CYC202(Cyclacel)和BMS-387032示例。

“细胞增殖和生存信号通道抑制剂”是指抑制细胞表面受体和那些表面受体的信号转导级联下游的药物。这些药物包括EGFR抑制剂(例如吉非替尼和erlotinib)、ERB-2抑制剂(例如曲妥珠单抗)、IGFR抑制剂、细胞因子受体抑制剂、MET抑制剂、PI3K抑制剂(例如LY294002)、丝氨酸/苏氨酸激酶(包括然而并非限于Akt抑制剂如在WO 02/083064、WO 02/O83139、WO 02/083140和WO 02/083138中所述)、Raf激酶抑制剂(例如BAY-43-9006)、MEK抑制剂(例如CI-1040和PD-098059)和mTOR抑制剂(例如Wyeth CCI-779)。这些药物包括小分子抑制剂化合物和抗体拮抗剂。

“细胞程序死亡诱导剂”包括TNF受体家族成员(包括TRAIL受体)的活化剂。

与非甾族抗炎药的联合使用是指使用作为有效的COX-2抑制剂的非甾族抗炎药。为了这一目的，如果根据细胞或微粒体试验测量的非甾族抗炎药用于抑制COX-2的IC₅₀是1μM或更低，则非甾族抗炎药是有效的。

本发明还包括与作为选择性COX-2抑制剂的非甾族抗炎药联合使用。为了这一目的，作为选择性COX-2抑制剂的非甾族抗炎药规定为是那些通过细胞或者微粒体试验测定的、由COX-2的IC₅₀与COX-1的IC₅₀的比测出COX-2/COX-1抑制特异性为至少100倍的非甾族抗炎药。这些化合物包括但不限于在以下文献中公开的：美国专利5,474,995，授权日1995年12月12日；美国专利5,861,419，授权日1999年1月19日；美国专利6,001,843，授权日1999年12月14日；美国专利6,020,343，授权日2000年2月1日；美国专利5,409,944，授权日1995年4月25日；美国专利5,436,265，授权日1995年7月25日；美国专利5,536,752，授权1996年7月16日；美国专利5,550,142，授权1996年8月27日；美国专利5,604,260，授权日1997年2月18日；美国专利5,698,584，授权日1997年12月16日；美国专利5,710,140，授权日1998年1月20日；WO 94/15932，公开日1994年7月21日；美国专利5,344,991，授权日1994年6月6日；美国专利5,134,142，授权日1992年7月28日；美国专利5,380,738，授权日1995年1月10日；美国专利5,393,790，授权日1995年2月20日；美国专利5,466,823，授权日1995年11月14日；美国专利5,633,272，授权日1997年5月27日；和美国专利5,932,598，授权日1999年8月3日，所有文献作为参考被并入本文。

可用于本发明治疗方法的COX-2抑制剂为：

3-苯基-4-(4-(甲基磺酰基)苯基)-2-(5H)-呋喃酮；和

5-氯-3-(4-甲基磺酰基)苯基-2-(2-甲基-5-吡啶基)吡啶；

或其可药用盐。

COX-2抑制剂化合物的一般和具体的合成方法在以下文献中有述：美国专利5,474,995,1995年授权日12月12日；美国专利5,861,419，授权日1999年1月19日；和美国专利6,001,843，授权日1999年12月14日，所有文献作为参考并入本文。

已描述作为COX-2特异性抑制剂并因此可用于本发明中的化合物包括但不限于以下化合物：

或其可药用盐。

描述作为COX-2特异性抑制剂并因此可用于本发明中的化合物及其合成方法在以下的专利、待审申请和公开物中有述，所有文献作为参考并入本文：WO 94/15932，公开1994年7月21日；美国专利5,344,991，授权1994年6月6日；美国专利5,134,142，授权1992年7月28日；美国专利5,380,738，授权1995年1月10日；美国专利5,393,790，授权1995年2月20日；美国专利5,466,823，授权日1995年11月14日；美国专利5,633,272，授权1997年5月27日；和美国专利5,932,598，授权1999年8月3日。

作为COX-2特异性抑制剂并因此可用于本发明中的化合物及其合成方法在以下的专利、待审申请和公开物中有述，所有文献作为参考并入本文：美国专利5,474,995，授权日1995年12月12日；美国专利5,861,419，授权日1999年1月19日；美国专利6,001,843，授权日1999年12月14日；美国专利6,020,343，授权日2000年2月1日；美国专利5,409,944，授权日1995年4月25日；美国专利5,436,265，授权日1995年7月25日；美国专利5,536,752，授权日1996年7月16日；美国专利5,550,142，授权日1996年8月27日；美国专利5,604,260，授权日1997年2月18日；美国专利5,698,584，授权日1997年12月16日；和美国专利5,710,140，授权日1998年1月20日。

血管生成抑制剂的其它例子包括但不限于血管内皮抑素(endostatin)、ukrain、ranpirnase、IM862、5-甲氧基-4-[2-甲基-3-(3-甲基-2-丁烯基)氧杂环丙基]-1-氧杂螺[2，5]辛-6-基(氯乙酰基)氨基甲酸酯、acetyldinanaline、5-氨基-1-[[3，5-二氯-4-(4-氯苯甲酰基)苯基]甲基]-1H-1，2，3-三唑-4-甲酰胺、CM101、角鲨胺、考布他汀、RPI4610，NX31838、硫酸化磷酸甘露戊糖、7，7-(羰基-二[亚氨基-N-甲基-4，2-吡咯并羰基亚氨基[N-甲基-4，2-吡咯]-羰基亚氨基]-二-(1，3-萘二磺酸酯)和3-[(2，4-二甲基吡咯-5-基)亚甲基]-2-吲哚满酮(SU5416)。

如上所述，“整联蛋白阻断剂”是指选择性地拮抗、抑制或对抗生理配体与α_vβ₃整联蛋白结合的化合物，是指选择性地拮抗、抑制或对抗生理配体与α_vβ₅整联蛋白的结合的化合物，是指拮抗、抑制或对抗生理配体与α_vβ₃和α_vβ₅整联蛋白二者的结合的化合物，是指拮抗、抑制或对抗在毛细血管内皮细胞上表达的特定整联蛋白的活性的化合物。该术语还指α_vβ₆、α_vβ₈、α₁β₁、α₂β₁、α₅β₁、α₆β₁和α₆β₄整联蛋白的拮抗剂。该术语还指α_vβ₃、α_vβ₅、α_vβ₆、α_vβ₈、α₁β₁、α₂β₁、α₅β₁、α₆β₁和α₆β₄整联蛋白的任意组合的拮抗剂。

酪氨酸激酶抑制剂的特定例子包括N-(三氟甲基苯基)-5-甲基异噁唑-4-甲酰胺，3-[(2，4-二甲基吡咯-5-基)甲叉基(methylidenyl))吲哚满-2-酮，17-(烯丙基氨基)-17-脱甲氧基geldanamycin，4-(3-氯-4-氟苯基氨基)-7-甲氧基-6-[3-(4-吗啉基)丙氧基]喹唑啉，N-(3-乙炔基苯基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)-4-喹唑啉胺，BIBX1382，2，3，9，10，11，12-六氢-10-(羟基甲基)-10-羟基-9-甲基-9，12-环氧基-1H-二吲哚并[1，2，3-fg：3′，2′，1′-kl]吡咯并[3，4-i][1，6]苯并二氮芳辛-1-酮，SH268，genistein，STI571，CEP2563，4-(3-氯苯基氨基)-5，6-二甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶甲磺酸酯，4-(3-溴-4-羟基苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉，4-(4′-羟基苯基)氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉，SU6668，STI571A，N-4-氯苯基-4-(4-吡啶基甲基)-1-phthalazinamine，和EMD121974。

与除了抗癌化合物之外的化合物的联合还包括在本发明方法中。例如，本发明所要求保护的化合物与PPAR-γ(即PPAR-gamma)激动剂和PPAR-δ(即PPAR-delta)激动剂的联合，可用在某些恶性病的治疗中。PPAR-γ和PPAR-δ是核过氧化物酶体增殖物激活受体γ和δ。PPAR-γ在内皮细胞上的表达及其与血管生成的关系已经在文献(参见J.Cardiovasc.Pharmacol.1998；31：909-913；J.Biol.Chem.1999；274：9116-9121；Invest.Ophthalmol Vis.Sci.2000；41：2309-2317)中报导。新近，已显示PPAR-γ激动剂体外抑制对VEGF的生血管应答；曲格列酮和马来酸罗格列酮抑制小鼠中视网膜新血管生成的发展(Arch.Ophthamol.2001；119：709-717)。PPAR-γ激动剂和PPAR-γ/α激动剂包括但不限于噻唑烷二酮(如DRF2725，CS-011，曲格列酮，罗格列酮，和吡格列酮)，非诺贝特，吉非罗齐，氯贝丁酯，GW2570，SB219994，AR-H039242，JTT-501，MCC-555，GW2331，GW409544，NN2344，KRP297，NP0110，DRF4158，NN622，GI262570，PNU182716，DRF552926，2-[(5，7-二丙基-3-三氟甲基-1，2-苯并异噁唑-6-基)氧基]-2-甲基丙酸(在USSN 09/782，856中公开)，和2(R)-7-(3-(2-氯-4-(4-氟苯氧基)苯氧基)丙氧基)-2-乙基色满-2-羧酸(在USSN 60/235,708和60/944,697中公开)。

本发明的另一个实施方案是本发明公开的化合物与基因治疗的联合在癌症治疗中的应用。对于治疗癌症的基因策略的综述参见Hall等人的(Am J Hum Genet 61：785-789，1997)和Kufe等人的(Cancer Medicine，5th Ed，pp 876-889，BC Decker，Hamilton 2000)。基因治疗可用于递送任何肿癌抑制基因。这些基因的例子包括但不限于p53，其可通过重组病毒调解的基因转移进行递送(参见例如美国专利6,069,134)，uPA/uPAR拮抗剂(″Adenovirus-Mediated Delivery of a uPA/uPARAntagonist Suppresses Angiogenesis-Dependent Tumor Growth andDissemination in Mice，″Gene Therapy，1998年8月；5(8)：1105-13)，和干扰素γ(J Immunol 2000；164：217-222)。

本发明的化合物也可与固有多药耐药性(MDR)抑制剂联合给药，特别是与转运蛋白高水平表达有关的MDR的抑制剂联合。这些MDR抑制剂包括p-糖蛋白(P-gp)抑制剂，如LY335979、XR9576、OC144-093、R101922、VX853和PSC833(valspodar)。

本发明的化合物可与抗吐剂联合使用，用于治疗恶心或呕吐，包括急性的、迟发的、晚期的和预期的呕吐，其可起因于本发明化合物的使用，其中本发明的化合物单独使用或与放射治疗联合使用。为了预防或者治疗呕吐，本发明的化合物可与其它抗吐剂特别是神经激肽-1受体拮抗剂、5HT3受体拮抗剂如昂丹司琼、格拉司琼、托吡司琼和扎替司琼、GABAB受体激动剂如氯苯氨丁酸、皮质类固醇如Decadron(地塞米松)、康宁乐、Aristocort、鼻松、Preferid、Benecorten或者例如在以下文献中公开的其它药物：美国专利2,789,118，2,990,401，3,048,581，3,126,375，3,929,768，3,996,359，3,928,326和3,749,712，抗多巴胺能药如吩噻嗪(例如丙氯拉嗪、氟奋乃静、硫利达嗪和甲砜达嗪)、甲氧氯普胺或者屈大麻酚联合使用。为了治疗或者预防给用本发明化合物时发生的呕吐，与选自神经激肽-1受体拮抗剂、5HT3受体拮抗剂和皮质类固醇的抗吐剂联合的治疗是优选的。

与本发明的化合物联合使用的神经激肽-1受体拮抗剂在例如以下文献中充分地描述：

U.S.专利5,162,339，5,232,929，5,242,930，5,373,003，5,387,595，5,459,270，5,494,926，5,496,833，5,637,699，5,719,147；欧洲专利公开EP 0 360 390，0 394 989，0 428 434，0 429 366，0 430 771，0436 334，0 443 132，0 482 539，0 498 069，0 499 313，0 512 901，0 512 902，0 514 273，0 514274，0 514 275，0 514 276，0 515 681，0 517 589，0 520 555，0 522 808，0 528 495，0 532 456，0533 280，0 536 817，0 545 478，0 558 156，0 577 394，0 585 913，0 590 152，0 599 538，0 610793，0 634 402，0 686 629，0 693 489，0 694 535，0 699 655，0 699 674，0 707 006，0 708 101，0709 375，0 709 376，0 714 891，0 723 959，0 733 632和0 776 893；PCT

国际申请公开WO 90/05525，90/05729，91/09844，91/18899，92/01688，92/06079，92/12151，92/15585，92/17449，92/20661，92/20676，92/21677，92/22569，93/00330，93/00331，93/01159，93/01165，93/01169，93/01170，93/06099，93/09116，93/10073，93/14084，93/14113，93/18023，93/19064，93/21155，93/21181，93/23380，93/24465，94/00440，94/01402，94/02461，94/02595，94/03429，94/03445，94/04494，94/04496，94/05625，94/07843，94/08997，94/10165，94/10167，94/10168，94/10170，94/11368，94/13639，94/13663，94/14767，94/15903，94/19320，94/19323，94/20500，94/26735，94/26740，94/29309，95/02595，95/04040，95/04042，95/06645，95/07886，95/07908，95/08549，95/11880，95/1401795/15311，95/16679，95/17382，95/18124，95/18129，95/19344，95/20575，95/21819，95/22525，95/23798，95/26338，95/28418，95/30674，95/30687，95/33744，96/05181，96/05193，96/05203，96/06094，96/07649，96/10562，96/16939，96/18643，96/20197，96/21661，96/29304，96/29317，96/29326，96/29328，96/31214，96/32385，96/37489，97/01553，97/01554，97/03066，97/08144，97/14671，97/17362，97/18206，97/19084，97/19942和97/21702；和英国专利公开2 266 529，2 268 931，2 269 170，2 269590，2 271 774，2 292 144，2 293 168，2 293 169，和2 302 689。

这些化合物的制备在上述专利和公开中有充分描述，所述文献作为参考并入本文。

在实施方案中，用于与本发明的化合物联合使用的神经激肽-1受体拮抗剂选自：2-(R)-(1-(R)-(3，5-二(三氟甲基)苯基)乙氧基)-3-(S)-(4-氟苯基)-4-(3-(5-氧代-1H，4H-1，2，4-三唑并)甲基)吗啉或其可药用盐，其在美国专利5,719,147中有述。

本发明的化合物也可与用于治疗贫血的药物给用。这些贫血治疗剂为例如连续红细胞生成受体活化剂(如阿法依泊汀)。

本发明的化合物也可与用于治疗嗜中性白细胞减少症的药物给用。这些嗜中性白细胞减少症治疗剂为例如调节嗜中性白细胞的产生和功能的造血生长因子如人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。G-CSF的例子包括非格司亭。

本发明的化合物也可与免疫增强药如左旋四咪唑、异丙肌苷和日达仙给用。

因此，本发明的范围包括本发明所要求保护的化合物与选自以下的第二化合物的联合使用：

1)雌激素受体调节剂，

2)雄激素受体调节剂，

3)类视色素受体调节剂，

4)胞毒/细胞生长抑制剂，

5)抗增殖药，

6)异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂，

7)HMG-CoA还原酶抑制剂，

8)HIV蛋白酶抑制剂，

9)逆转录酶抑制剂，

10)血管生成抑制剂，

11)PPAR-γ激动剂，

12)PPAR-δ激动剂，

13)固有多药耐药性抑制剂，

14)抗吐剂，

15)用于治疗贫血的药物，

16)用于治疗嗜中性白细胞减少症的药物，

17)免疫增强药，

18)细胞增殖和生存信号抑制剂，

19)干扰细胞周期关卡的药物，和

20)细胞程序死亡诱导剂。

关于本发明化合物的术语“给用”/“给药”及其变体(如“给用”化合物)是指将化合物或者该化合物的潜药引入到需要治疗的动物的系统内。当本发明的化合物或其潜药与一种或多种其它活性剂(如胞毒剂等等)联合提供时，“给用”/“给药”及其变体各自可理解为包括所述化合物或其潜药及其他药物的同时的和连续的给予。

本文使用的术语“治疗有效量”是指在组织、系统、动物或者人中引起生物学或者医学应答的活性物质或者药物的量，该量通过研究人员、兽医、医生或者其它临床医师确定。

术语“治疗癌症”或者“癌症的治疗”是指对遭受癌病况折磨的哺乳动物给药以及是指通过杀死癌细胞减轻癌病况的作用，还指导致癌症生长和/或转移抑制的作用。

在实施方案中，用作第二化合物的血管生成抑制剂选自酪氨酸激酶抑制剂、表皮衍生生长因子抑制剂、成纤维细胞衍生生长因子的抑制剂、血小板衍生生长因子的抑制剂、MMP(基质金属蛋白酶)抑制剂、整联蛋白阻断剂、干扰素-α、白细胞介素-12、多硫酸戊聚糖、环加氧酶抑制剂、羧胺三唑、考布他汀A-4、角鲨胺、6-O-(氯乙酰基-羰基)-烟曲霉醇、酞咪哌啶酮、血管抑素、肌钙蛋白-1、或者VEGF抗体。在实施方案中，雌激素受体调节剂是他莫昔芬或者雷洛昔芬。

权利要求的保护范围还包括治疗癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的式I的化合物与放射治疗和/或与选自以下的化合物：

1)雌激素受体调节剂，

2)雄激素受体调节剂，

3)类视色素受体调节剂，

4)胞毒/细胞生长抑制剂，

5)抗增殖药，

6)异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂，

7)HMG-CoA还原酶抑制剂，

8)HIV蛋白酶抑制剂，

9)逆转录酶抑制剂，

10)血管生成抑制剂，

11)PPAR-α激动剂，

12)PPAR-δ激动剂，

13)固有多药耐药性抑制剂，

14)抗吐剂，

15)用于治疗贫血的药物，

16)用于治疗嗜中性白细胞减少症的药物，

17)免疫增强药，

18)细胞增殖和生存信号抑制剂，

19)干扰细胞周期关卡的药物，和

20)细胞程序死亡诱导剂。

本发明的另一个实施方案是治疗癌症的方法，该方法包括联合给药治疗有效量的式I的化合物与紫杉醇或者曲妥珠单抗。

本发明另外包括治疗或者预防癌症的方法，该方法包括联合给用治疗有效量的式I化合物与COX-2抑制剂。

本发明还包括可用于治疗或者预防癌症的药物组合物，包括治疗有效量的式I化合物和选自以下的化合物：

1)雌激素受体调节剂，

2)雄激素受体调节剂，

3)类视色素受体调节剂，

4)胞毒/细胞生长抑制剂，

5)抗增殖药，

6)异戊二烯基-蛋白质转移酶抑制剂，

7)HMG-CoA还原酶抑制剂，

8)HIV蛋白酶抑制剂，

9)逆转录酶抑制剂，

10)血管生成抑制剂，

11)PPAR-γ激动剂，

12)PPAR-δ激动剂，

13)细胞增殖和生存信号抑制剂，

14)干扰细胞周期关卡的药物，和

15)细胞程序死亡诱导剂。

本发明另外包括本发明的化合物在筛选与KSP结合的其它化合物的方法中的应用。为了在筛选与KSP驱动蛋白结合的化合物的方法中使用本发明的化合物，使KSP与载体结合，并将本发明的化合物(其作为有丝分裂药物)添加到试验中。或者，使本发明的化合物与载体结合并加入KSP。在其中寻找新型结合剂的化合物类型包括特异性抗体、在化学库筛选中被识别的非天然结合剂、肽类似物等等。特别感兴趣的是候选药物的筛选试验，所述候选药物对人细胞具有低毒性。各式各样的试验可用于此目的，包括标记的体外蛋白质-蛋白质结合测定法、电泳迁移变动分析、蛋白质结合免疫测定、官能试验(磷酸化作用试验等等)等等。

有丝分裂药物与KSP的结合的测定可以多种方式进行。在优选方案中，有丝分裂药物(本发明的化合物)被标记，例如，用荧光部分或者放射性部分标记并直接测定结合。例如，这可通过将所有或者一部分KSP附着到固相载体上，加入被标记的有丝分裂药物(例如本发明的化合物，其中至少一个原子被可检测的同位素替代)，洗去过量试剂，和测定存在在固体载体上的那些标记物的量而完成。可使用本领域已知的各种封闭和洗涤步骤。

本文中的“被标记”是指化合物被直接地或者间接地用提供可检测信号的标记物进行标记，所述标记物为例如放射性同位素、荧光标记、酶、抗体、粒子如磁粒子、化学发光标记、或者特异性结合分子等等。特异性结合分子包括配对体如生物素和抗生蛋白链菌素、地高辛和地高辛抗体等等。对于特异性结合成员，互补的成员将通常根据已知的过程如上述过程用为探测做准备的分子进行标记。标记物可以直接地或者间接地提供可检测信号。

在一些实施方案中，只有一种组分被标记。例如，驱动蛋白可在酪氨酸位置使用¹²⁵I进行标记，或用荧光团进行标记。或者，超过一种的组分可被不同的标记物做标记；例如使用¹²⁵I用于所述蛋白，使用荧光团用于有丝分裂药物。

本发明的化合物还可用作竞争剂用于筛选另外的候选药物。“候选生物活性药物”或者“候选药物”或者本文所用语法上等价的词是指任何要测试它们的生物活性的分子，如蛋白质、低聚肽、有机小分子、聚糖、多核苷酸等等。它们能够直接地或者间接地改变细胞增殖表型或者细胞增殖序列的表达，包括核酸序列和蛋白质序列。在其它情况下，筛选细胞增殖蛋白质结合和/或活性的改变。这类筛选可在微管存在或不存在的条件下进行。在筛选蛋白质结合或者活性的情况中，优选方案排除了已知与特定蛋白例如聚合体结构如微管和能量源如ATP结合的分子。本文试验的优选方案包括在其内源性未加修饰状态下不与细胞增殖蛋白质结合的候选药物，本文中称为“外源性”药物。在另一个优选方案中，外源性药物另外排除了KSP的抗体。

候选药物可以包括许多化学种类，尽管通常它们是有机分子，优选是分子量超过100并小于约2,500道尔顿的小的有机化合物。候选药物包含与蛋白进行结构相互作用时所需的官能团，特别是氢键和亲脂性结合时，并且通常至少包括胺、羰基、羟基、醚、或者羧基，优选包括至少两个所述化学官能团。候选药物经常包含环碳或者杂环结构和/或芳香或者多芳香结构，其被一个或多个上述官能团取代。候选药物还可在生物分子中找到，所述生物分子包括肽、糖类、脂肪酸、甾族、嘌呤类、嘧啶类，其衍生物、结构类似物或者组合。特别优选肽。

候选药物从各式各样的包括合成或天然化合物库的来源中获得。例如，许多途径可用于随机和定向合成各式各样的有机化合物和生物分子，包括随机化寡核苷酸的表达。或者，可获得或容易地生产细菌、真菌、植物和动物提取物形式的天然化合物库。另外，天然的或者合成的库和化合物容易地通过常规的化学、物理和生物化学方法进行修饰。可使已知的药理学试剂经历定向或随机的化学修饰，如酰基化、烷基化、酯化、酰胺化，以制造结构类似物。

竞争性筛选试验可通过将KSP和第一试样中的候选药物结合进行。第二试样包括有丝分裂药物、KSP和候选药物。这可在微管存在或不存在的条件下进行。候选药物结合的确定根据两种试样进行，两种试样之间的变化或者结合差异表明存在能够与KSP结合并潜在地调节其活性的药物。也就是说，如果候选药物与第一试样的结合不同于与第二试样的结合，候选药物能够与KSP结合。

在优选方案中，候选药物的结合的确定通过使用竞争性结合试验进行。在该实施方案中，竞争剂是已知与KSP结合的一结合部分，如抗体、肽、结合配偶体、配体等等。在某种情况下，可在候选药物和结合部分之间存在竞争性结合，结合部分取代候选药物。

在一实施方案中，候选药物被标记。候选药物、或者竞争剂、或者两者首先被加入到KSP中，保持足够进行结合的时间，如果存在的话。可在任何有利于最佳活性的温度下进行培养，通常为约4到约40℃。

培养周期根据最优活性选择，但是还可被最优化以促进快速高通量筛选。通常0.1到1小时就足够了。通常除去或者冲走过量试剂。然后加入第二组分，追踪被标记组分的存在或不存在，以表明结合。

在优选方案中，首先加入竞争剂，然后加入候选药物。竞争剂的替代表明候选药物与KSP结合并且因此能够与KSP结合并潜在地调节KSP的活性。在该实施方案中，任一组分可被标记。因此，例如，如果竞争剂被标记，洗涤液中标记物的存在表明药物被替代。或者，如果候选药物被标记，则载体上标记物的存在表明替代。

在另一实施方案中，首先加入候选药物，培养并洗涤，然后加入竞争剂。竞争剂结合的缺乏可表明候选药物以较高的亲合力与KSP结合。因此，如果候选药物被标记，则载体上标记物的存在以及竞争剂结合的缺乏一起表明候选药物能够与KSP结合。

识别KSP结合部位很有意义。这可通过各种方式进行。在一个实施方案中，一旦已经确认KSP与有丝分裂药物结合，则将KSP打碎或对其进行修饰，并重复试验以识别结合必需的组件。

通过筛选能够调节KSP活性的候选药物的试验检查调节，包括上述候选药物与KSP结合的步骤，并确定KSP生物活性的改变。在该实施方案中，候选药物将与KSP结合(虽然这不是必要的)，并如本文定义的那样改变其生物学活性或者生化活性。该方法包括体外细胞筛选法和体内细胞筛选法，针对细胞周期分布、细胞存活性的改变或者针对有丝分裂纺锤体的存在、形态学、活性、分布或者量，所述各变量通常如上所述。

或者，可使用示差筛选来识别与未加修饰的KSP结合但是不能与经过修饰的KSP结合的候选药物。

可在试验中使用阳性对照和阴性对照。优选所有的对照和实验试样至少重复三份，以获得统计学上具有显著意义的结果。对所有试样培养足够用于药物与蛋白质结合的时间。培养后，洗涤所有试样，使其不含非特异性结合的材料，并测定结合的、通常被标记的药物的量。例如，当使用放射性同位素示踪时，可在闪烁计数器计数试样，以确定结合的化合物的量。

可在筛选试验中引入各种其它试剂。这些试剂包括如盐、中性蛋白如白蛋白、洗涤剂等等，其可用于促进最佳的蛋白质-蛋白质结合和/或减少非特异性的或背景的相互作用。另外，可使用另外改善试验效率的试剂，如蛋白酶抑制剂、核酸酶抑制剂、抗微生物药物等。组分的混合物可以任何提供所需结合的顺序加入。

本发明的这些及其它方面从本文中的教导是显而易见的。

试验

在实施例中描述的本发明的化合物通过如下所述的试验进行检测并发现具有激酶抑制活性。其它试验在文献中已知并且可通过本领域的技术人员容易地操作(参见，例如PCT公开WO 01/30768，2001年5月3日，18-22页)。

1.驱动蛋白ATP酶体外试验

人多组氨酸标记的KSP运动结构域(KSP(367H))的克隆和表达

用于表达人KSP运动结构域构建体的质粒通过使用pBluescript全长人KSP构建体(Blangy et al.，Cell，83卷，pp1159-1169，1995)作为模板的PCR进行克隆。N末端引物5′-GCAACGATTAATATGGCGTCGCAGCCAAATTCGTCTGCGAAG(SEQ.ID.NO.：1)和C末端引物5′-GCAACGCTCGAGTCAGTGATGATGGTGGTGATGCTGATTCACTTCAGGCTTATTCAATAT(SEQ.ID.NO.：2)用来扩增运动结构域和颈连接体区。PCR产物用AseI和XhoI消化，连接到pRSETa(Invitrogen)的NdeI/XhoI消化产品中并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中。

细胞在37℃下生长到OD₆₀₀为0.5。培养物冷却到室温后，用100μMIPTG诱导KSP表达，并继续培养过夜。细胞通过离心作用成为小球并用冰冷却的PBS洗涤一次。小球进行快速冷冻并在-80℃下贮存。

蛋白纯化

细胞小球在冰上解冻，并重悬在裂解缓冲液(50mM K-HEPES，pH8.0，250mM KCl，0.1％Tween，10mM咪唑，0.5mM Mg-ATP，1mMPMSF，2mM benzimidine，1x完全蛋白酶抑制剂混合物(Roche))中。细胞悬浮液在冰上用1mg/ml溶菌酶和5mM β-巯基乙醇培养10分钟，然后超声处理(3×30秒)，随后的所有过程在4℃下进行。裂解产物以40,000xg离心40分钟，上清液稀释并装载在处于缓冲液A(50mM K-HEPES，pH 6.8，1mM MgCl₂，1mM EGTA，10μM Mg-ATP，1mM DTT)中的SP琼脂糖凝胶柱上(Phaumacia，5ml柱体)，用0到750mM在缓冲液A中的KCl梯度洗脱。收集含有KSP的级分并用Ni-NTA树脂(Qiagen)培养1小时，树脂用缓冲液B(裂解缓冲液减去PMSF和蛋白酶抑制剂混合物)洗涤三次，然后进行3次的15分钟培养，并用缓冲液B洗涤。最后，培养树脂并用缓冲液C(和缓冲液B一样，除了pH为6.0)洗涤三次15分钟，并倾倒柱中。KSP用洗脱缓冲液(与缓冲液B相同，除了使用150mMKCl和250mM咪唑)洗脱。收集含有KSP的级分，制成10％的蔗糖中溶液，并在-80℃贮存。

从由牛脑中分离的微管蛋白制备微管。1mg/ml的纯化的微管蛋白(＞97％不含MAP)在37℃在10μM紫杉醇、1mM DTT、1mM GTP在BRB8O缓冲液(80mM K-PIPES，1mM EGTA，1mM MgCl₂，pH6.8)中的溶液的存在下聚合。通过超速离心法和除去上清液从未聚合的微管蛋白中分离得到微管。含有微管的小球逐渐地再悬浮在10μM紫杉醇、1mM DTT、50μg/ml氨苄青霉素、和5μg/ml的氯霉素在BRB8O中的溶液中。

驱动蛋白运动结构域用微管、1mM ATP(1∶1MgCl₂∶Na-ATP)、和化合物在23℃下，在含有80mM K-HEPES(pH7.0)、1mM EGTA、1mM DTT、1mM MgCl₂和50mM KCl的缓冲液中培养。反应通过用最终的缓冲液组合物2-10倍稀释而终止，缓冲液组合物为80mMHEPES和50mM EDTA。通过甲基氮萘红/钼酸铵试验测量得自ATP水解反应的游离磷酸盐，所述试验加入150μl淬灭剂C缓冲液，其含有2∶1比率的淬灭剂A：淬灭剂B。淬灭剂A含有0.1mg/ml的甲基氮萘红和0.14％的聚乙烯醇；淬灭剂B含有12.3mM钼酸铵四水合物在1.15M硫酸中的溶液。反应在23℃培养10分钟，在540nm测量磷酸根合-钼酸盐络合物的吸光率。

实施例中的化合物2-6a和2-6b的混合物在以上试验中检测并发现其IC₅₀≤50μM。

II.细胞增殖试验

将细胞装板在96孔组织培养皿中，装板密度使得在24、48和72小时期间可进行对数生长，并使之过夜附着。随后的一天，以10点二分之一对数滴定法将化合物加入到所有板中。各滴定系列进行一式三份，在整个试验过程中保持0.1％的恒定的DMSO浓度。还包括了单独的0.1％DMSO作为对照。各化合物稀释系列在没有血清的培养基中制备。本试验中血清的最后浓度为在200μL体积培养基中为5％。加入药物后，在24、48或者72小时向滴定板上的各试样和对照孔中加入二十微升Alamar蓝染色剂，并返回到37℃进行培养。在CytoFluor II读板器上使用530-560毫微米激发波长、590毫微米发射波长分析6-12小时后的Alamar蓝色荧光。

通过以X轴上的化合物浓度与Y轴上的各滴定点的细胞生长平均抑制百分数绘图，得到细胞毒性EC₅₀。在该试验中，已经用单独介质处理的对照孔中的细胞生长定义为100％生长，用化合物处理的细胞的生长与该值相对比。专有自设软件使用对数4-参数曲线拟合用来计算细胞毒性百分数的数值和拐点。细胞毒性百分数定义为：

细胞毒性％：(荧光_对照)-(荧光_试样)×100×(荧光_对照)^-1

拐点为细胞毒性EC₅₀。

III.通过FACS评价有丝分裂停滞和细胞程序死亡

FACS分析用来评价化合物抑制细胞的有丝分裂和诱导细胞程序死亡的能力，通过测量处理的细胞群中的DNA含量进行。细胞以每6cm²组织培养皿1.4×10⁶个细胞的密度接种，并过夜使附着。然后细胞用介质(0.1％DMSO)处理或者用化合物滴定系列处理8-16小时。处理后，细胞在给定时间通过胰蛋白酶消化收获，通过离心作用形成小球。细胞小球在PBS中漂清并用70％乙醇固定，在4℃贮存过夜或更长时间。

对于FACS分析，使至少500,000个固定细胞形成小球并通过吸出除去70％乙醇，然后细胞在4℃用核糖核酸酶A(50Kunitz单位/ml)和碘化丙啶(50μg/ml)培养30分钟，使用Becton Dickinson FACSCaliber分析。使用Modfit细胞周期分析模型软件(Verity Inc.)分析(得自10,000个细胞的)数据。

以X轴上的化合物浓度与Y轴上的每个滴定点的细胞周期G2/M期中的细胞百分数(通过碘化丙啶荧光测量)绘图，得到有丝分裂停滞的EC₅₀。使用SigmaPlot程序，使用对数4-参数曲线拟合进行数据分析以计算拐点，进行数据分析。拐点作为有丝分裂停滞的EC₅₀。类似的方法用来测定化合物的细胞程序死亡的EC₅₀。这里，在各滴定点的细胞程序死亡细胞的百分数(通过碘化物荧光测量)绘制在Y轴上，如上所述进行类似的分析。

IV.检测单极纺锤体的免疫荧光显微术

在Kapoor et al.的(2000)J.Cell Biol.150：975-988中基本上描述了DNA、微管蛋白和中心粒周围蛋白(pericentrin)的免疫荧光染色。对于细胞培养研究，将细胞装板在组织培养处理的玻璃小室载玻片上，并使其过夜附着。然后细胞用感兴趣的化合物培养4到16小时。培养完成后，吸出培养基和药物，从玻璃载玻片上取出小室和垫圈。然后细胞进行浸透、固定、洗涤、和封闭，用于根据所指方案进行非特异性抗体结合。用二甲苯将石蜡包埋的肿瘤切片进行脱石蜡化，然后在封闭之前通过乙醇系列再水合。载玻片在4℃下在初级抗体(小鼠单克隆抗α-微管蛋白抗体，得自Sigma的克隆DM1A，1∶500稀释；兔的多克隆抗中心粒周围蛋白抗体，得自Covance，1∶2000稀释)中培养过夜。洗涤后，载玻片用稀释到15μg/ml的偶联二级抗体(FITC偶联的针对微管蛋白的驴抗小鼠IgG；德克萨斯红偶联的针对中心粒周围蛋白的驴抗兔IgG)在室温下培养1小时。然后洗涤载玻片并用Hoechst 33342复染以显现DNA。在Nikon落射荧光显微镜上使用Metamorph反褶积和成像软件使免疫染色的试样以100x油浸物镜成像。

实施例

提供的例子意在帮助进一步了解本发明。使用的特定原料、物质和条件用在说明本发明，并且不限制本发明的合理范围。

图解1

图解1(续)

步骤1：4-烯丙基-4-苯基-1，3-噁唑烷-2-酮(1-4)

向15.8g(416mmol)LAH粉末在600mL乙醚的悬浮液中加入18.3g(90mmol)α-烯丙基-α-苯基甘氨酸乙酯(1-3)(根据Van Betsbruggeet.al.的Tetrahedron，1997，53，9233-9240制备)在75mL乙醚中的溶液，加入速率使得保持温和的回流。室温下搅拌过夜后，小心淬灭反应，使用27mL水然后加入27mL 15％NaOH，最后加入82mL水。加入一定量Na₂SO₄，搅拌混合物1小时，滤去固体，浓缩溶液，将残余物溶解在300mL的CH₂Cl₂中，Na₂SO₄干燥，浓缩得到氨基醇，为无色油状物。氨基醇(4.5g，25mmol)溶解在50mL的CH₂Cl₂中并冷却到0℃。在加入5.4mL(53mmol)三乙胺和4.5g(28mmol)1，1’-羰基二咪唑后，使混合物回温到室温，并搅拌4小时，然后将反应物倾入到分液漏斗中，用1M HCl、水洗涤两次，Na₂SO₄干燥，浓缩得到噁唑烷酮1-4，为无色油状物，1-4数据为：

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ7.4-7.2(m，5H)，6.6(s，1H)，5.6-5.5(m，1H)，5.2(m，2H)，4.5(d，1H)，4.35(d，1H)，2.8(m，1H)，2.6(m，1H)ppm。

步骤2：二酯(1-5)

将68g(334.6mmol)1-4在500mL CH₂Cl₂中的溶液冷却到-78℃，并将臭氧鼓入通过溶液，直到维持住浅蓝色，然后将O₂鼓入通过溶液，持续15分钟。然后将N₂鼓入通过溶液，持续30分钟，此时，加入491mL(6.7摩尔)甲硫醚，搅拌溶液过夜的同时慢慢恢复到室温。旋转蒸发除去挥发物质，得到棕色油状物。将该物质悬浮在1L tBuOH中，加入200mL(1.9摩尔)2-甲基-2-丁烯。然后向该溶液中滴加160g(1.33摩尔)NaH₂PO₄和70g(774mmol)NaClO₂在800mL H₂O中的混合物。加入完成后，混合物另外搅拌4小时，分层后，旋转蒸发浓缩有机层，将残余物溶解在EtOAc中，并与得自反应的水相放置在分液漏斗中。分离后，水相用EtOAc提取3次，Na₂SO₄干燥，浓缩得到约90g黄色胶状物。残余物悬浮在500mL MeOH中，向溶液鼓入HCl气直到溶液几乎回流。将烧瓶塞住，并过夜搅拌同时冷却到室温。旋转蒸发除去挥发物，残余物装载在处于CH₂Cl₂中的硅胶柱上，用EtOAc/己烷洗脱，得到甲酯，为淡橙色胶状物。将残余物溶解在500mL THF中，冷却到0℃，加入32.6mL(220.5mmol)溴乙酸叔丁酯，然后加入10.6g NaH(264.6mmol 60％悬浮液)。使混合物回温到室温并且搅拌过夜，用饱和NH₄Cl溶液淬灭，用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗、Na₂SO₄干燥、浓缩，残余物用硅胶色谱法纯化，EtOAc/己烷洗脱，得到1-5，为稠厚的浅黄色胶状物。1-5数据：

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ74-7.3(m，5H)，4.65(d，1H)，4.55(d，1H)，3.9(d，1H)，3.65(s，3H)，3.5(d，1H)，3.35(d，1H)，3.2(d，1H)，1.4(s，9H)ppm.HRMS(ES)C₁₈H₂₃NO₆M+Na计算值：372.1423。

实测值：372.1412。

步骤3：7a-苯基二氢-1H-吡咯并[1，2-c][1，3]噁唑-3，6-(5H)-二酮(1-6)

在-78℃下向18.6g(53mmol)的1-5在150mL THF中的溶液中滴加58.6mL(58.6mmol)的1M的LiHMDS在THF中的溶液。在该温度下搅拌1小时后，除去冷却浴，使反应回温到室温并且搅拌过夜。混合物用饱和NH₄Cl溶液淬灭，用EtOAc提取两次，用盐水洗涤两次，Na₂SO₄干燥并浓缩。将残余物溶解在60mL甲酸中，并在100℃下加热24小时，真空除去挥发物，将残余物加以CH₂Cl₂/己烷/Et₂O研磨，得到1-6，为米黄色固体。1-6数据：

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ7.5-7.3(m，5H)，4.7(d，1H)，4.3(d，1H)，4.2(d，1H)，3.5(d，1H)，3.1(d，1H)，2.95(d，1H)，2.9(d，1H)ppm。

步骤4：6-(2，5-二氟苯基)-7a-苯基-5，7a-二氢-1H-吡咯并[1，2-c][1，3]噁唑-3-酮(1-7)

在-78℃下向2.2g(10mmol)的1-7在150mL THF中的悬浮液中滴加12.2mL(12.2mmol)1M NaHMDS在THF中的溶液。搅拌30分钟后，使溶液回温到0℃，并放置1小时。溶液冷却到-78℃，加入4.35g(12.2mmol)N-苯基双(三氟甲磺酰亚胺)在10mL THF中的溶液。除去冷却浴，使混合物回温到室温并且过夜搅拌。混合物用饱和NH₄Cl溶液淬灭，用EtOAc提取两次，用盐水洗涤两次，Na₂SO₄干燥并浓缩。将残余物溶解在75mL DME和18mL水中，向该混合物中加入1.29g(30mmol)LiCl、3.2g(30mmol)Na₂CO₃和4.8g(30mmol)的2，5-二氟苯基硼酸。然后溶液用N₂脱气1分钟，继之加入630mg(0.5mmol)的四(三苯基膦)钯(0)。反应在90℃加热3h，冷却到室温，用饱和NaHCO₃稀释，用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗涤，Na₂SO₄干燥，浓缩，残余物用硅胶色谱法纯化，CH₂Cl₂/己烷洗脱，得到1-7，为白色固体。1-7数据：

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ7.5-7.3(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.8(s，1H)，4.9(d，1H)，4.75(d，1H)，4.5(d，1H)，4.25(d，1H)ppm.HRMS(ES)C₁₈H₁₃F₂NO₂

M+H计算值：314.0987。实测值：314.0993。

步骤5：2-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-4-(2，5-二氟苯基)-2-苯基-2，5-二氢-1H-吡咯(1-8)

在60℃将1.75g(5.6mmol)1-7在15mL EtOH和10mL 3M NaOH中的悬浮液加热3小时，冷却到室温，倾入具有EtOAc和盐水的分液漏斗中。分层，水相用EtOAc提取两次，合并的有机相用盐水洗涤两次，Na₂SO₄干燥，浓缩得到白色固体。向该烧瓶中加入30mL CH₂Cl₂，1.5g(22.3mmol)咪唑和1.76g(11.7mmol)TBSCl，得到的悬浮液搅拌过夜。反应用CH₂Cl₂稀释，用水洗涤两次，Na₂SO₄干燥，浓缩，残余物用硅胶色谱法纯化，EtOAc/己烷洗脱，得到1-8，为白色固体。1-8的数据：

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ7.6-7.3(m，5H)，7.1-6.9(m，3H)，6.75(s，1H)，4.25(d，1H)，4.1(d，1H)，3.95(d，1H)，3.75(d，1H)，0.9(s，9H)，0.1(s，3H)，0.05(s，3H)ppm。

步骤6：中间体1-8的对映异构体拆分

使用Chiralpak AD^_10×50cm柱，用1％异丙醇的己烷溶液(含0.1％二乙胺)以150mL/分钟经色谱法进行对映异构体拆分。对4×250mmChiralpak AD^_柱以1毫升/分钟用1％异丙醇的己烷溶液(含0.1％二乙胺)的洗脱液进行分析HPLC的分析，表明第一洗脱的活性对映体的R_t＝5.5分钟，第二对映体的R_t＝6.9分钟。

步骤7：氨基甲酰氯1-9

在0℃下，向1.95g(6.6mmol)的三光气在25mL THF中的溶液中加入1.31g(3.3mmol)第一洗脱对映体1-8和915μL(6.6mmol)三乙胺在10mLTHF中的溶液。除去冰浴，使反应回温到室温，搅拌3小时，然后在水和EtOAc之间分配反应物，分层，Na₂SO₄干燥，浓缩，得到1-9，为棕色油状物。1-9数据：

HRMS(ES)C₂₄H₂₈ClF₂NO₂Si M+H计算值：464.1619。实测值：464.1625。

图解1A

二酯1-5的替代性合成方案

向14.8g(73mmol)1-4和110mL CH₂Cl₂、110mL CH₃CN、和320mL水的双相混合物中加入约200mg氯化钌(III)水合物。然后在1小时内在急速搅拌下分份加入高碘酸钠(85.6g，400mmol)。加入完成后，反应在室温下搅拌4小时以上，混合物用500mL水和1.5L EtOAc稀释，过滤除去固体。滤液放置在分液漏斗，分离各相，水相用EtOAc提取两次，合并的有机相用盐水洗涤两次，Na₂SO₄干燥。浓缩后，将暗褐色固体溶解在250mL MeOH中，以不使溶液温度增加到超过35℃的速率向溶液缓慢通入HCl(g)。5分钟后，将反应体系塞住，在室温下搅拌过夜，旋转蒸发器上除去挥发物，残余物用硅胶色谱法纯化，EtOAc/己烷洗脱，得到13.6g(58mmol)甲酯，为粘性油状物。然后将残余物溶于200mLTHF中，冷却到0℃，加入10.3mL(70mmol)溴代乙酸叔丁酯，然后加入2.8g NaH(70mmol的60％悬浮液)。使混合物回温到室温并搅拌过夜，混合物用饱和NH₄Cl溶液淬灭，用EtOAc提取两次。合并的有机层用盐水洗，Na₂SO₄干燥，浓缩，残余物用硅胶色谱法纯化，EtOAc/己烷洗脱，得到1-5，为无色油状物。1-5数据：

¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ7.4-7.3(m，5H)，4.65(d，1H)，4.55(d，1H)，3.9(d，1H)，3.65(s，3H)，3.5(d，1H)，3.35(d，1H)，3.2(d，1H)，1.4(s，9H)ppm.HRMS(ES)C₁₈H₂₃NO₆M+Na计算值：372.1423。实测值：372.1412。

图解1B

步骤1：4-亚甲基-2-苯基脯氨酸甲酯(1B-2)

将苯基甘氨酸甲酯-HCl(100g)的水溶液(300mL)用10N NaOH中和到pH8。水溶液用EtOAc提取(3×200mL)。合并的有机提取物用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。残余物(56.7g，344mmol)溶解在原甲酸三甲酯(100mL)并用苯甲醛(34.9mL，36.4g，344mmol)处理。在搅拌2小时之后，反应用Et₂O(200mL)稀释并用水(3×50mL)洗。有机溶液用MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将一部分亚胺残余物(26.8g，100mmol)溶解在二氯甲烷(240mL)中并用160mL 10N NaOH、甲代烯丙基二氯化物(50.0g，400mmol)和Bu₄NHSO₄(3.59g)处理，在室温下搅拌10小时之后，反应物用二氯甲烷稀释并分离有机溶液，MgSO₄干燥，过滤并浓缩。将残余物再溶解于Et₂O/IN HCl(200mL/200mL)并搅拌2小时，分离水相并用10N NaOH中和(到pH8)。水性混合物用EtOAc(3×200mL)提取。合并的有机溶液用MgSO₄干燥，过滤并浓缩，将残余物溶解在水中并中和(到pH8)。该混合物用EtOAc提取(X 3)，然后MgSO₄干燥，过滤，浓缩得到1B-2粗品。该残余物经过急骤层析法(SiO₂；30％EtOAc/己烷)纯化，得到纯的1B-2。1B 2的数据：

¹HNMR(500MHz ，CDCl₃)δ7.51(m，2H)，7.42(m，3H)，5.03(s，1H)，4.95(s，1H)，3.71(m，5H)，3.41(m，1H)，2.80(m，1H)ppm。

步骤2：7a-苯基二氢-1H-吡咯并[1，2-c][1，3]噁唑-3，6(5H)-二酮(1-6)

将LiAlH₄(7.14g，188mmol)在THF(500mL)中的悬浮液冷却到0℃，并在20分钟内加入酯1B-2(10.2g，47mmol)在THF(50mL)中的溶液处理。在0℃搅拌30分钟之后，反应通过加入水(7.1mL)、15％NaOH水溶液(7.1mL)和H₂O(21.3mL)小心淬灭。加入固体Na₂SO₄，搅拌混合物40分钟。混合物过滤并浓缩。残余物(8.2g，43.3mmol)溶解在二氯甲烷(300mL)中并用三乙胺(9.0mL，6.5g，65.0mmol)和羰基二咪唑(9.14g，56.4mmol)处理，室温下搅拌48小时后，反应物用二氯甲烷稀释并用1N HCl和盐水洗涤。有机溶液浓缩，不用进一步纯化。将残余物1B-3(9.2g，42.8mmol)在二氯甲烷(200mL)中的溶液冷却到-78℃，使臭氧通过溶液直到维持蓝色。吹扫溶液并用甲硫醚(35mL)处理。在过夜逐渐回温到室温后，将溶液浓缩到黄色固体，用Et₂O研磨该固体得到纯的1-6。1-6数据：

图解2

4-[(叔丁氧基羰基)(甲基)氨基]-2-(羟基甲基)哌啶-1-羧酸苄基酯(2-2)

向2.0g(6.8mmol)2-1(报导于：S.J.Hayes，T.C.Malone，G.JohnsonJ.Org.Chem.1991，56，4084-4086)在100mL CH₂Cl₂中的溶液中加入3.33mL(23.9mmol)三乙胺，然后滴加2.44g(15.4mmol)SO₃-吡啶在50mL DMSO中的溶液。在室温下搅拌5小时后，在CH₂Cl₂和H₂O之间分配所述混合物，分离各相，用2×1M HCl、饱和NaHCO₃水溶液、盐水洗，MgSO₄干燥并浓缩，得到酮。向2.1g(7.2mmol)该酮溶于35mLMeOH的溶液中加入1mL AcOH和14.4mL(28.9mmol)2M的MeNH₂的MeOH溶液。搅拌1小时后，加入910mg(14.4mmol)的NaCNBH₃在5mLMeOH中的溶液，反应搅拌过夜。反应物用饱和NH₄Cl水溶液淬灭，用CH₂Cl₂提取，用NaHCO₃、H₂O、盐水洗，MgSO₄干燥并浓缩，得到2.0g(7.2mmol)的胺。将该物质溶解在25mL CH₂Cl₂中，加入1.78g(8.2mmol)二碳酸二叔丁酯(di-tert-butyl dicarbonate)和1.8mL(12.9mmol)的三乙胺，得到的混合物搅拌72小时，然后在CH₂Cl₂和饱和NaHCO₃水溶液之间分配反应物，用H₂O、盐水洗，MgSO₄干燥，并浓缩。残余物用硅胶色谱法、EtOAc/己烷纯化，得到1.85g(4.6mmol)的非对映异构体的混合物，将其溶解在20mL THF和1mL MeOH中，冷却到0℃，加入496mg(22.8mmol)LiBH₄。回温到室温并搅拌过夜后，反应用饱和NH₄Cl水溶液淬灭，用EtOAc提取，用H₂O、盐水洗，MgSO₄干燥并浓缩，得到2-2，为无色胶状物。2-2数据：

LRMS(ES)C₂₀H₃₀N₂O₅M+H计算值：379。实测值：379。

[2-(羟基甲基)-1-甲基哌啶-4-基]甲基氨基甲酸叔丁基酯(2-3)

向1.08g(2.9mmol)2-2在30mL EtOH中的溶液中加入7mL(74mmol)1，4-环己二烯和催化量的10％Pd-C。搅拌过夜后，反应用硅藻土过滤，旋转蒸发浓缩，溶于25mL MeOH。向其中加入2mL AcOH和700μL(8.6mmol)37％的甲醛水溶液。搅拌过夜后，加入540mg(8.6mmol)NaCNBH₃在5mL MeOH中的溶液，反应搅拌1小时以上。旋转蒸发除去溶剂，残余物在EtOAc和NaHCO₃水溶液之间分配，有机相用盐水洗，Na₂SO₄干燥并浓缩。向残余物加入CH₂Cl₂进行吸收，过滤并浓缩，得到2-3，为无色油状物。2-3数据：LRMS(ES)C₁₃H₂₆N₂O₃M+H计算值：259。实测值：259。

[2-(氟甲基)-1-甲基哌啶-4-基]甲基氨基甲酸叔丁基酯(2-5)和(6-氟-1-甲基氮杂环庚烷-4-基)甲基氨基甲酸叔丁基酯(2-4)

在-78℃下向350μL(2.6mmol)的三氟化(二乙基氨基)硫(DAST)在15mL CH₂Cl₂中的溶液中加入520mg(2.0mmol)2-3在5mL CH₂Cl₂中的溶液。使反应慢慢地回温到室温并搅拌过夜，然后用冰水淬灭。混合物用另外的CH₂Cl₂和少量3M KOH分配，有机相用水洗，Na₂SO₄干燥，并浓缩。将残余物装载在硅胶柱上，用EtOAc-20∶1∶1EtOH/NH₄OH/H₂O洗脱。要洗脱的第一产品为扩环产品2-4，为无色油状物，待洗脱的第二产品为2-5，为无色油状物。分离8-5和8-4，作为反式非对映体的对映体混合物。通过1D和2D核磁共振谱学确定结构。

2-4数据：¹HNMR(600MHz，CD₂Cl₂)δ4.75(m，1H)，4.1-3.9(m，1H)，2.9-2.7(m，3H)，2.75(s，3H)，2.4(s，3H)，2.35(m，1H)，2.1-1.7(m，4H)，1.4(s，9H)ppm.2-5数据：¹HNMR(500MHz，CD₂Cl₂)δ4.8-4.5(m，2H)，4.1-4.0(m，1H)，3.2(m，1H)，2.75(m，2H)，2.7(s，3H)，2.45(s，3H)，1.9-1.5(m，4H)，1.45(s，9H)ppm。

(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(4R，6S)-6-氟-1-甲基氮杂环庚烷-4-基]-2-(羟基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酰胺(2-6a)和(2S)-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(4S，6R)-6-氟-1-甲基氮杂环庚烷-4-基]-2-(羟基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酰胺(2-6b)的合成

将45mg(0.17mmol)2-4在30mL EtOAc中的溶液用HCl气体饱和，在室温下搅拌1小时，然后通过旋转蒸发使反应浓缩，将得到的白色固体悬浮在1mL THF中，向其中加入88mg(0.19mmol)1-9、151μL(0.87mmol)二异丙基乙基胺和少量DMAP。在50℃加热过夜后，加入500μL三氟乙酸并在室温下继续再搅拌1小时，然后用饱和NaHCO₃水溶液淬灭。混合物用CH₂Cl₂分配，有机相用盐水洗，MgSO₄干燥并浓缩。将残余物装载在硅胶柱上并用CHCl₃-80∶10∶10CHCl₃/EtOAc/MeOH洗脱，得到2-6a和2-6b的混合物，为无色胶状物。2-6a/2-6b数据：HRMS(ES)，C₂₆H₃₀F₃N₃O₂M+H计算值：474.2363，实测值：474.2377。

以下化合物通过简单地改变图解1-2和图解A-N中所示过程，用适当的替代试剂代替所述图解中所用试剂而制备。

R₁	R₂	R₃	R₄	R₅
R₁	R₂	R₃	R₄	R₅	Me	CH₂OH	Me	Cl	H
Me	CH₂OH	Me	Br	H	Me	CH₂OH	Me	Cl	H
Me	CH₂OH	Me	Br	H	Me	CH₂OH	Me	CN	H
Me	CH₂OH	Me	Me	H	Me	CH₂OH	Me	CN	H
Me	CH₂OH	Me	Me	H	Me	CH₂OH	Me	CF₃	H
Me	CH₂OH	Me	NO₂	H	Me	CH₂OH	Me	CF₃	H
Me	CH₂OH	Me	NO₂	H	Me	CH₂OH	Me	F	OH
Me	CH₂OH	Me	F	NH₂	Me	CH₂OH	Me	F	OH
Me	CH₂OH	Me	F	NH₂	Me	CH₂OH	Me	F	F
Me	CH₂OH	Me	F	SH	Me	CH₂OH	Me	F	F

序列表

<110>默克公司(Merck & Co.，Inc.)

P.J.科尔曼(Coleman，Paul J.)

C.D.科克斯(Cox，Christopher D.)

<120>有丝分裂驱动蛋白抑制剂

<130>21484

<160>2

<170>FastSEQ for Windows Version 4.0

<210>1

<211>42

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>全合成核苷酸序列

<400>1

gcaacgat taatatggcgtc gcagccaaat tcgtctgcga ag 42

<210>2

<211>60

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>全合成核苷酸序列

<400>2

gcaacgctcg agtcagtgat gatggtggtg atgctgattc acttcaggct tattcaatat 60

Claims

1.下式I表示的化合物或其可药用盐或立体异构体：

其中：

a为0或1；

b为0或1；

m为0、1或2；

n为0、1、2或3；

r为0或1；

s为0或1；

t为0、1或2；

u为0、1或2；

R³选自：

1)氢，

2)C₁-C₁₀烷基，

3)C₁-C₁₀烷基-O-R^d，

4)C₂-C₁₀烯基-O-R^d，

5)C₂-C₁₀炔基-O-R^d，

6)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-O-R^d，

7)C₁-C₁₀烷基-(C＝O)_b-NR^cR^c′，

8)C₂-C₁₀烯基-(C＝O)_bNR^cR^c′，

9)C₂-C₁₀炔基-(C＝O)_bNR^cR^c′，

10)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-(C＝O)_bNR^cR^c′，

11)C₁-C₁₀烷基-S(O)_m-R^d，

12)C₂-C₁₀烯基-S(O)_m-R^d，

13)C₂-C₁₀炔基-S(O)_m-R^d，

14)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-S(O)_m-R^d，

R⁴独立地选自：

1)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

2)(C＝O)_aO_b芳基，

3)CO₂H，

4)卤代，

5)CN，

6)OH，

7)O_bC₁-C₆全氟烷基，

8)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

9)S(O)_mR^a，

10)S(O)₂NR⁸R⁹，

11)-OPO(OH)₂；

R⁵选自：

1)氢；

2)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)_aO_b芳基，

4)CO₂H，

5)卤代，

6)CN，

7)OH，

8)O_bC₁-C₆全氟烷基，

9)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

10)S(O)_mR^a，

11)S(O)₂NR⁸R⁹，

12)-OPO(OH)₂；

R⁶独立地选自：

1)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

2)(C＝O)_aO_b芳基，

3)C₂-C₁₀烯基，

4)C₂-C₁₀炔基，

5)(C＝O)_aO_b杂环基，

6)CO₂H，

7)卤代，

8)CN，

9)OH，

10)O_bC₁-C₆全氟烷基，

11)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

12)S(O)_mR^a，

13)S(O)₂NR⁸R⁹，

14)氧代，

15)CHO，

16)(N＝O)R⁸R⁹，或

17)(C＝O)_aO_bC₃-C₈环烷基，

18)-OPO(OH)₂；

R⁷选自：

1)(C＝O)_rO_s(C₁-C₁₀)烷基，

2)O_r(C₁-C₃)全氟烷基，

3)氧代，

4)OH，

5)卤代，

6)CN，

7)(C₂-C₁₀)烯基，

8)(C₂-C₁₀)炔基，

9)(C＝O)_rO_s(C₃-C₆)环烷基，

10)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-芳基，

11)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-杂环基，

12)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-N(R^b)₂，

13)C(O)R^a，

14)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂R^a，

15)C(O)H，

16)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂H，

17)(C＝O)_rN(R^b)₂，

18)S(O)_mR^a，

19)S(O)₂N(R^b)₂，和

20)-OPO(OH)₂；

R⁸和R⁹独立地选自：

1)H，

2)(C＝O)O_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)O_bC₃-C₈环烷基，

4)(C＝O)O_b芳基，

5)(C＝O)O_b杂环基，

6)C₁-C₁₀烷基，

7)芳基，

8)C₂-C₁₀烯基，

9)C₂-C₁₀炔基，

10)杂环基，

11)C₃-C₈环烷基，

12)SO₂R^a，和

13)(C＝O)NR^b ₂，

R¹⁰选自：H和F；

R¹¹和R¹²独立地选自：F和-CH₂F；

R¹³和R¹⁴独立地选自：H和-CH₂F；

R^ox不存在或者是氧代；

R^b独立地选自：H、(C₁-C₆)烷基、芳基、杂环基、(C₃-C₆)环烷基、(C＝O)OC₁-C₆烷基、(C＝O)C₁-C₆烷基、(C＝O)芳基、(C＝O)杂环基、(C＝O)NR^eR^e＇或S(O)₂R^a，其任选被一个、两个或三个选自R⁷的取代基取代；

2.下式II所示的权利要求1的化合物或其可药用盐或立体异构体：

其中：

a为0或1；

b为0或1；

m为0、1或2；

n为0、1、2或3；

r为0或1；

s为0或1；

t为0或1；

u为0或1；

R³选自：

1)氢，

2)C₁-C₁₀烷基，

3)C₁-C₁₀烷基-O-R^d，

4)C₂-C₁₀烯基-O-R^d，

5)C₂-C₁₀炔基-O-R^d，

6)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-O-R^d，

7)C₁-C₁₀烷基-(C＝O)_b-NR^cR^c′，

8)C₂-C₁₀烯基-(C＝O)_bNR^cR^c′，

9)C₂-C₁₀炔基-(C＝O)_bNR^cR^c′，

10)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-(C＝O)_bNR^cR^c′，

11)C₁-C₁₀烷基-S(O)_m-R^d，

12)C₂-C₁₀烯基-S(O)_m-R^d，

13)C₂-C₁₀炔基-S(O)_m-R^d，

14)(C₁-C₆-亚烷基)_nC₃-C₈环烷基-S(O)_m-R^d，

R⁴独立地选自：

1)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

2)(C＝O)_aO_b芳基，

3)CO₂H，

4)卤代，

5)CN，

6)OH，

7)O_bC₁-C₆全氟烷基，

8)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

9)S(O)_mR^a，

10)S(O)₂NR⁸R⁹，和

11)-OPO(OH)₂；

R⁵选自：

1)氢；

2)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)_aO_b芳基，

4)CO₂H，

5)卤代，

6)CN，

7)OH，

8)O_bC₁-C₆全氟烷基，

9)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

10)S(O)_mR^a，

11)S(O)₂NR⁸R⁹，

R⁶独立地选自：

1)(C＝O)_aO_bC₁-C₁₀烷基，

2)(C＝O)_aO_b芳基，

3)C₂-C₁₀烯基，

4)C₂-C₁₀炔基，

5)(C＝O)_aO_b杂环基，

6)CO₂H，

7)卤代，

8)CN，

9)OH，

10)O_bC₁-C₆全氟烷基，

11)O_a(C＝O)_bNR⁸R⁹，

12)S(O)_mR^a，

13)S(O)₂NR⁸R⁹，

14)氧代，

15)CHO，

16)(N＝O)R⁸R⁹，或

17)(C＝O)_aO_bC₃-C₈环烷基，和

18)-OPO(OH)₂；

R⁷选自：

1)(C＝O)_rO_s(C₁-C₁₀)烷基，

2)O_r(C₁-C₃)全氟烷基，

3)氧代，

4)OH，

5)卤代，

6)CN，

7)(C₂-C₁₀)烯基，

8)(C₂-C₁₀)炔基，

9)(C＝O)_rO_s(C₃-C₆)环烷基，

10)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-芳基，

11)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-杂环基，

12)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-N(R^b)₂，

13)C(O)R^a，

14)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂R^a，

15)C(O)H，

16)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂H，

17)C(O)N(R^b)₂，

18)S(O)_mR^a，

19)S(O)₂N(R^b)₂，和

20)-OPO(OH)₂；

R⁸和R⁹独立地选自：

1)H，

2)(C＝O)O_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)O_bC₃-C₈环烷基，

4)(C＝O)O_b芳基，

5)(C＝O)O_b杂环基，

6)C₁-C₁₀烷基，

7)芳基，

8)C₂-C₁₀烯基，

9)C₂-C₁₀炔基，

10)杂环基，

11)C₃-C₈环烷基，

12)SO₂R^a，和

13)(C＝O)NR^b ₂，

R¹¹和R¹²独立地选自：F和-CH₂F；

R^ox不存在或者是氧代；

3.下式III所示的权利要求2的化合物或其可药用盐或立体异构体：

其中：

a为0或1；

b为0或1；

m为0、1或2；

n为0、1或2；

r为0或1；

s为0或1；

t为0或1；

R⁴独立地选自：

1)卤代，

2)OH，

3)O_bC₁-C₆全氟烷基，

R⁵选自：

1)氢；

2)卤代，

3)OH，

4)O_bC₁-C₆全氟烷基，

R⁷选自：

1)(C＝O)_rO_s(C₁-C₁₀)烷基，

2)O_r(C₁-C₃)全氟烷基，

3)氧代，

4)OH，

5)卤代，

6)CN，

7)(C₂-C₁₀)烯基，

8)(C₂-C₁₀)炔基，

9)(C＝O)_rO_s(C₃-C₆)环烷基，

10)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-芳基，

11)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-杂环基，

12)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-N(R^b)₂，

13)C(O)R^a，

14)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂R^a，

15)C(O)H，

16)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂H，和

17)C(O)N(R^b)₂，

18)S(O)_mR^a，和

19)S(O)₂N(R^b)₂；

R⁸和R⁹独立地选自：

1)H，

2)(C＝O)O_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)O_bC₃-C₈环烷基，

4)(C＝O)O_b芳基，

5)(C＝O)O_b杂环基，

6)C₁-C₁₀烷基，

7)芳基，

8)C₂-C₁₀烯基，

9)C₂-C₁₀炔基，

10)杂环基，

11)C₃-C₈环烷基，

12)SO₂R^a，和

13)(C＝O)NR^b ₂，

R¹²选自：F和-CH₂F；

R¹⁴选自：H和-CH₂F，条件是当t为1时，R¹⁴为H；

4.下式IV所示权利要求3的化合物或其可药用盐或立体异构体：

其中：

a为0或1；

b为0或1；

m为0、1或2；

r为0或1；

s为0或1；

R⁴独立地选自：

1)卤代，

2)OH，

3)O_bC₁-C₆全氟烷基，

R⁷选自：

1)(C＝O)_rO_s(C₁-C₁₀)烷基，

2)O_r(C₁-C₃)全氟烷基，

3)氧代，

4)OH，

5)卤代，

6)CN，

7)(C₂-C₁₀)烯基，

8)(C₂-C₁₀)炔基，

9)(C＝O)_rO_s(C₃-C₆)环烷基，

10)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-芳基，

11)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-杂环基，

12)(C＝O)_rO_s(C₀-C₆)亚烷基-N(R^b)₂，

13)C(O)R^a，

14)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂R^a，

15)C(O)H，

16)(C₀-C₆)亚烷基-CO₂H，和

17)C(O)N(R^b)₂，

18)S(O)_mR^a，和

19)S(O)₂N(R^b)₂；

R⁸和R⁹独立地选自：

1)H，

2)(C＝O)O_bC₁-C₁₀烷基，

3)(C＝O)O_bC₃-C₈环烷基，

4)(C＝O)O_b芳基，

5)(C＝O)O_b杂环基，

6)C₁-C₁₀烷基，

7)芳基，

8)C₂-C₁₀烯基，

9)C₂-C₁₀炔基，

10)杂环基，

11)C₃-C₈环烷基，

12)SO₂R^a，和

13)(C＝O)NR^b ₂，

5.选自以下的化合物：

2S-4-(2，5-二氟苯基)-N-[(4S，6R)-6-氟-1-甲基氮杂环庚烷-4-基]-2-(羟基甲基)-N-甲基-2-苯基-2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酰胺，

或其可药用盐。

6.权利要求1所述的化合物，其选自：

R₁ R₂ R₃ R₄ R₅ Me CH₂OH Me Cl H Me CH₂OH Me Br H Me CH₂OH Me CN H Me CH₂OH Me Me H Me CH₂OH Me CF₃ H Me CH₂OH Me NO₂ H Me CH₂OH Me F OH Me CH₂OH Me F NH₂ Me CH₂OH Me F F ME CH₂OH Me F SH

或其可药用盐或立体异构体。

7.包括权利要求1的化合物和可药用载体的药物组合物。

8.在需要治疗的哺乳动物中治疗或者预防癌症的方法，包括对所述哺乳动物给用治疗有效量的权利要求1的化合物。

9.权利要求8的治疗或者预防癌症的方法，其中癌症选自脑、泌尿生殖道、淋巴系统、胃、喉和肺的癌症。

10.权利要求8的治疗或者预防癌症的方法，其中癌症选自组织细胞淋巴瘤、肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、恶性胶质瘤(gioblastomas)和乳腺癌。

11.制备药物组合物的方法，包括使权利要求1的化合物与可药用载体组合。

12.权利要求7的组合物，另外包括选自以下的第二化合物：

1)雌激素受体调节剂，

2)雄激素受体调节剂，

3)类视色素受体调节剂，

4)胞毒/细胞生长抑制剂，

5)抗增殖药，

6)异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂，

7)HMG-CoA还原酶抑制剂，

8)HIV蛋白酶抑制剂，

9)逆转录酶抑制剂，

10)血管生成抑制剂，

11)PPAR-γ激动剂，

12)PPAR-δ激动剂，

13)细胞增殖和生存信号抑制剂，

14)干扰细胞周期关卡的药物，和

15)细胞程序死亡诱导剂。

13.权利要求12的组合物，其中第二化合物为选自酪氨酸激酶抑制剂、表皮衍生生长因子的抑制剂、成纤维细胞衍生生长因子的抑制剂、血小板衍生生长因子的抑制剂、MMP抑制剂、整联蛋白阻断剂、干扰素-α、白细胞介素-12、多硫酸戊聚糖、环加氧酶抑制剂、羧胺三唑、考布他汀A-4、角鲨胺、6-O-(氯乙酰基-羰基)-烟曲霉醇、酞咪哌啶酮、血管抑素、肌钙蛋白-1和VEGF的抗体构成组中的血管生成抑制剂。

14.权利要求7的组合物，另外包括蛋白体抑制剂。

15.权利要求7的组合物，另外包括aurora激酶抑制剂。

16.权利要求7的组合物，另外包括Raf激酶抑制剂。

17.权利要求7的组合物，另外包括丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂。

18.权利要求7的组合物，另外包括非KSP的另一有丝分裂驱动蛋白的抑制剂。

19.权利要求12的组合物，其中第二化合物是选自他莫昔芬和雷洛昔芬的雌激素受体调节剂。

20.治疗癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的权利要求1的化合物与放射治疗。

21.治疗或者预防癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的权利要求1的化合物和选自以下的化合物：

1)雌激素受体调节剂，

2)雄激素受体调节剂，

3)类视色素受体调节剂，

4)胞毒/细胞生长抑制剂，

5)抗增殖药，

6)异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂，

7)HMG-CoA还原酶抑制剂，

8)HIV蛋白酶抑制剂，

9)逆转录酶抑制剂，

10)血管生成抑制剂，

11)PPAR-γ激动剂，

12)PPAR-δ激动剂，

13)固有多药耐药性抑制剂，

14)抗吐剂，

15)用于治疗贫血的药物，

16)用于治疗嗜中性白细胞减少症的药物，

17)免疫增强药，

18)细胞增殖和生存信号抑制剂，

19)干扰细胞周期关卡的药物，和

20)细胞程序死亡诱导剂。

22.治疗或者预防癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的权利要求1的化合物、放射治疗和选自以下的化合物：

1)雌激素受体调节剂，

2)雄激素受体调节剂，

3)类视色素受体调节剂，

4)胞毒/细胞生长抑制剂，

5)抗增殖药，

6)异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂，

7)HMG-CoA还原酶抑制剂，

8)HIV蛋白酶抑制剂，

9)逆转录酶抑制剂，

10)血管生成抑制剂，

11)PPAR-γ激动剂，

12)PPAR-δ激动剂，

13)固有多药耐药性抑制剂，

14)抗吐剂，

15)用于治疗贫血的药物，

16)用于治疗嗜中性白细胞减少症的药物，

17)免疫增强药，

18)细胞增殖和生存信号抑制剂，

19)干扰细胞周期关卡的药物，和

20)细胞程序死亡诱导剂。

23.治疗或者预防癌症的方法，包括给用治疗有效量的权利要求1的化合物和紫杉醇或者曲妥珠单抗。

24.治疗或者预防癌症的方法，包括给用治疗有效量的权利要求1的化合物和GPIIb/IIIa拮抗剂。

25.权利要求24的方法，其中GPIIb/IIIa拮抗剂是替罗非班。

26.治疗或者预防癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的权利要求1的化合物和COX-2抑制剂。

27.治疗或者预防癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的权利要求1的化合物和蛋白体抑制剂。

28.治疗或者预防癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的权利要求1的化合物和aurora激酶抑制剂。

29.治疗或者预防癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的权利要求1的化合物和Raf激酶抑制剂。

30.治疗或者预防癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的权利要求1的化合物和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂。

31.治疗或者预防癌症的方法，包括联合给用治疗有效量的权利要求1的化合物和非KSP有丝分裂驱动蛋白的抑制剂。

32.调节有丝分裂纺锤体形成的方法，包括给用治疗有效量的权利要求1的化合物。

33.抑制有丝分裂驱动蛋白KSP的方法，包括给用治疗有效量的权利要求1的化合物。