CN1898268A - 嵌合型抗cd44的抗体和其在治疗急性髓性白血病中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供两种包含特定氨基酸序列的嵌合型抗CD44的抗体和其在药物制备中的用途，所述抗体来源于抗体A3D8和H90，所述药物用于在癌症治疗、特别是在急性髓性白血病治疗中清除病理性干细胞。
Description
本发明涉及抗癌、特别是抗白血病的嵌合型抗体治疗法。
不同类型的白血病可分类为：原淋巴细胞白血病，其特别地包括急性成淋巴细胞性白血病(ALL)或淋巴瘤，和成髓细胞白血病(其特别包括急性成髓细胞性白血病(AML))。AML代表几乎一半的白血病病例，即在法国代表大约1000个新病例和在美国代表6000个新病例，发病率在过去40年中呈指数增长。和AML对应的是骨髓细胞在未成熟阶段的分化的抑制，并且AML是通过母细胞(blastic cell)对骨髓的侵入和循环血液传送的，所述母细胞的细胞学特征将不同AML亚类型分为M1至M7(法国-美国-英国(FAB)分类法)型，最常见的是M1至M5类型。
在急性髓性白血病(AML)中，白血病克隆组织成来源于具有极强自我更新能力的稀少的白血病干细胞(LSC)的谱系(hierarchy)，所述白血病干细胞产生停止在骨髓分化的各个阶段的白血病母细胞，确定了不同的AML亚型。
1978年，Leo Sachs在Nature(1978，Aug10；274(5671)：535-9)中公开：小鼠白血病细胞在生理性生长因子和分化因子存在的情况下可被诱导进行分化。该结果在人白血病细胞中得到证实，并且通过使用两种髓细胞生成(myelopoiesis)分化诱导剂视黄酸和G-CSF，所述结果成功地移植到了体内。遗憾的是，尽管进行了广泛的研究，但只在两种AML亚型(具有t(8；21)易位的AML3和AML2亚型)中获得完全的好转。本发明者之前已显示CD44的连接逆转了骨髓分化阻滞的不同水平(AML1至AML5)(Nat Med.1999 Jun；5(6)：669-76)。AML母细胞的分化通过下面来验证：
-产生氧化还原功能例如氧化猝发(oxidative burst)的能力，
-谱系抗原表达的增加，和，
-细胞学特征，分化的骨髓细胞的所有细节。
此外，CD44和特定的单克隆抗体(mAbs)的连接也可诱导THP-1、NB4和HL60细胞系的终末分化，所述细胞系分别是AML5(原单核细胞亚型)、AML3(早幼粒细胞亚型)和AML2(原粒细胞亚型)的令人感兴趣的模型。然后可在NB4细胞中诱导大量的编程性死亡，但在THP-1和HL60细胞中只诱导中度的编程性死亡。
白血病干细胞(LSC)与所有其他AML细胞的区别在于自我更新能力即产生与母细胞相似的子细胞的能力。强烈的自我更新能力是LSC的固有特性，并且已显示是白血病发展所必需的。
在实验中，通过将人LSC移植入NOD/SCID免疫缺陷小鼠来对人LSC进行鉴定，其在所述小鼠体内产生如实地再现供体的AML类型的疾病。因为在移植后，其拥有起始白血病克隆的能力，所有其被称为SL-IC，即SCID-白血病起始细胞。这些SLC与其他白血病细胞截然不同，因为其只存在于CD34+cd38-细胞部分中，该细胞部分代表了0.1％至1％的AML细胞群体，并且在所有AML亚型中都是如此。
总之，为了寻找新的治疗AML的治疗法，必需有效地靶向LSC并将其清除。
常规的AML治疗法是化学疗法，但尽管其成功地导致60-85％的患者的最初完全好转，但仍不能治愈大多数AML患者(5年存活率：37％)并且在AML患者特别是在超过55-60岁的成人的长期存活方面，只取得很小的进步(5年存活率：15％)。该状况促使努力发展新的靶向性疗法，使用促编程性死亡试剂(三氧化二砷)、反义策略(抗BCL2)和转录的抗诱导剂(DNA甲基化酶、组蛋白乙酰化试剂)。然而，大多数目前使用的治疗策略是靶向周期性细胞的，而SL-IC是静息细胞，表明需要发现新的治疗方法。
本发明者以前的工作产生了特异性靶向白血病细胞以诱导这些细胞分化的新的治疗方法，其涉及抗-CD44的抗体(Charrad等人Nature Medicine 1999)。该治疗方法，称为“分化疗法”，通过使用视黄酸作为分化诱导分子，和常规疗法结合用于治疗患有AML3亚型的患者，所述常规疗法是化学疗法。
其他实验使本发明者选择特定的抗CD44的抗体H90(也称作P245)，该抗体不仅能够分化白血病细胞而且还能清除白血病干细胞。事实上，该抗CD44的抗体完全治愈人白血病NOD/SCID小鼠(Jin L.等人2003)。因为化学疗法是种痛苦的疗法，因此该抗体可能通过在单一疗法中被单独使用来取代化学疗法。
然而，作为鼠抗CD44的抗体的该抗体，其在人中的用途受到限制。事实上，经注射的鼠科动物抗体可导致由患者产生的抗该外源蛋白的应答，称作HAMA(人抗小鼠抗体)。该HAMA的发展可随抗体变化而变化，但当HAMA出现后，鼠科动物抗体的施用就失去所有功效。
本发明已开发出具有提高的活性特别是提高的分化活性的嵌合型抗CD44的抗体。
因此，本发明接着提供了用于抗癌特别是抗白血病的单一疗法中有用的两种嵌合型抗CD44的抗体。
本发明的两种嵌合型抗CD44的抗体包含分别由核苷酸序列SEQID n°1、3和5，或SEQ ID N°1、3和7编码的氨基酸序列，对应的氨基酸序列是SEQ ID N°2、4和6，或SEQ ID N°2、4和8。本发明也包含其F(ab′)2、Fab、Fab′、scFv、Fv或CDRs(互补决定区)片段和核苷酸序列SEQ ID N°1、SEQ ID N°3、SEQ ID N°5、氨基酸序列SEQ ID N°2、SEQ ID N°4、SEQ ID N°6和包含所述核苷酸序列中的至少一个的转移构建体。
所述第一嵌合型抗CD44的抗体或其片段是指与γ1嵌合的抗CD44的抗体。除了初始活性外，该γ1构建体可提供强ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)和CDC(补体依赖性细胞毒性)的成分。
相反地，所述第二嵌合型抗CD44的抗体或其片段对应于具有极少或不具有ADCC和CDC的γ4构建体。此外，该后一构建体也具有含有较少糖类成分的有利方面，这允许我们避开某些反应，特别是异源免疫反应，或非特异性结合。此外，由于该独特的有关免疫毒性的中性和加上其自己的分化治疗性活性的原因，γ4构建体成分可有利地用作靶向分子，在所述分子上可连接有任何互补治疗性药物或颗粒(放射性同位素、细胞毒性化合物，…)。
另外，γ4嵌合型抗体半寿期大约为20至25天，完全满足需要。
有利地，使用重组杆状病毒表达这些抗体使其在糖类组成方面完全受到控制。
优选地，使用完整的嵌合型抗体。事实上，当以完整的抗体而不是以F(ab′)2、Fab或Fab′片段化的抗体或以小构建体(scFv等)的形式使用时，治疗性抗体通常更有效。
在另外的优选的实施方案中，嵌合型抗体是单克隆抗体。
本发明也涉及本发明的嵌合型抗CD44的抗体在药物制备中的用途，所述药物用于在癌症治疗中清除病理性干细胞。
本发明也涉及本发明的嵌合型抗CD44的抗体在药物制备中的用途，所述药物用于在癌症治疗中以离体方式特异性地清除病理性干细胞和保存正常干细胞。
本发明的另外的方面涉及用于从患者中清除病理性干细胞的方法，其包括在允许抗原-抗体反应的情况下给所述患者施用本发明的嵌合型抗CD44的抗体，这样只有病理性干细胞被清除。
此外，本发明还涉及用于以离体的方式从白血病或癌症患者的组织样品中特异性地清除病理性干细胞和保存正常干细胞的方法，其包括在允许抗原-抗体反应的情况下，将所述组织样品与本发明的至少一种嵌合型抗CD44的抗体接触。该方法适用于纯化骨髓细胞群体。
所述药物/方法避免了来源于病理性干细胞特别是白血病细胞和癌细胞的病理性细胞的产生。
如上所述，为了根除白血病干细胞，分化疗法需要使用化学疗法。根据本发明，嵌合型抗CD44的抗体的应用不仅以提高的效率诱导白血病细胞的分化而且诱导白血病干细胞的清除而不需要任何化学疗法。
可以以每次治疗大约10mg至1000mg，优选地大约100至400mg的剂量施用本发明的药物。可增加或减少和/或重复(在一段时间内)治疗的次数以提高药物的功效。
因为嵌合型γ4抗体是无毒性的，其剂量可轻易地增加并且根据患者而调整。
药物产品可以任何合适的药物制剂的形式存在，特别是以片剂、颗粒剂、胶囊剂、粉剂、混悬液、口服溶液、用于注射的溶液的形式存在。优选地可通过缓慢的输注进行施用。
根据本发明使用的药物也可另外包含任何合适的化合物和适合想要的制剂的赋形剂，特别是任何药物惰性媒介物。
有利地，合适的制剂是用于注射、优选地用于静脉内注射的盐溶液。
可通过本发明的药物治疗的病理性细胞是白血病细胞、病理性干细胞和更特别地是白血病干细胞和乳腺癌或结肠癌干细胞。
实际上，不断增加的证据显示在其他癌症例如AML中，肿瘤克隆也通过极少数肿瘤干细胞的大量扩增和自我更新得以保持。因为CD44也存在于大多数癌细胞中，所以CD44连接也可有效地清除这些肿瘤干细胞，从而其也可在除AML外的几种癌症中具有治疗性效果。
本发明也通过下列的实施例和参照下列图表来举例说明，所述实施例纯粹用于举例说明目的。
-图1是指4个病毒克隆：B2954、B2955、B2957、B2958的DNA的Southern印迹。第一、第二和第三张玻片分别对应于BET显色、与Cγ1探针和κ探针的杂交。
-图2是指另外4个病毒克隆：B3667、B3668、B3669、B3670的DNA的Southern印迹。第一、第二和第三张玻片分别对应于BET显色、与κ探针和γ探针的杂交。
根据本申请提供的公开内容(包括公开内容、实施例、权利要求和图表)以及根据现有技术的方法，本领域技术人员无需过多实验可产生可选择的实施方案，这些实施方案也包含在本发明中。
实施例1：抗CD44的单克隆抗体清除白血病(肿瘤)干细胞
使用NOD/SCID小鼠白血病模型和经移植的PML-RAR小鼠。NOD/SCID小鼠白血病模型是个独特的模型，其忠实地重演了人AML的所有亚型(除AML3外)的病理，更重要的是，其使得可以监控被赋予大量增殖和自我更新能力以及负责白血病克隆的维持的人白血病干细胞的非常小的亚群的命运。
材料和方法
AML细胞。通过Ficoll密度梯度离心富集新鲜或冷冻的AML外周血细胞并用含有5％胎牛血清的Iscove′s Modified Dulbecco′s培养基洗涤。
将AML细胞移植入NOD/SCID小鼠。在即将进行AML细胞的尾静脉注射之前，使用来自137Cs源的375或400cGy亚致死照射8至12周大小的NOD/SCID小鼠。小鼠每隔一天分别以每只小鼠10μg和7μg的浓度经腹膜内注射接受人干细胞因子(SCF)和huIL3/hu GM-CSF(PIXY321)的融合蛋白。
白血病干细胞(LSC)的测定法。已证实(Bonnet和Dick，Nature.Medicine 3：730-737，1997)AML至NOD/SCID小鼠的移植是通过展示CD34++CD38neg免疫表型的白血病干细胞(LSC)稀少群体的增殖和有限分化产生的，所述白血病干细胞存在于白血病克隆中并维持该克隆。因此，AML移植的成功表明LSC的存在。在指定的时间点(4-8周)上，通过不同时间点上来自膝关节的吸出物(平均每份吸出物106个细胞)来估计在接受移植的NOD/SCID小鼠的骨髓中白血病浸润的百分比。使用成组的针对造血特异性抗原(CD45)和分化抗原(CD33、CD14、CD15、CD11b)的mAbs标记白血病群体。CD19的缺少被认为是已分化的细胞不来源于正常造血干细胞的标志，所述干细胞存在于接受移植的AML样品中。
结果
| ％huCD45+细胞 | |||||
| 在初级受体中(primaryrecipients) | 在次级受体中*(secondaryrecipients) | ||||
| 患者 | AML亚型 | 未经治疗的 | 经P245治疗的 | 来自未经治疗的初级受体 | 来自经P245治疗的初级受体 |
| 4971 | M5 | 23+/-19 | 0 | 23.4+/-16 | 0.0+/-0.1 |
| 5131 | M5 | 67+/-20 | 7+/-10 | 1.7+/-1.5 | 0.0+/-0.1 |
| 5173 | M4 | 14+/-12 | 2+/-2 | 7.3+/-3 | 0+/-0 |
表1：P245抑制AML干细胞在NOD/SCID小鼠中的发展。用15.106人AML细胞(第0天)经静脉内注射小鼠，从第20天至第50天用P245处理小鼠(750μg/注射，每周3次)。根据人Pan-骨髓抗原huCD45的表达(来自膝关节的吸出物，平均每份吸出物106个细胞)在骨髓中测量人AML细胞的百分数。数据是来自3个独立的实验(5只鼠/组)的平均值+/-SD。该表显示P245抑制AML的发展。*次级受体不接受P245注射。
到目前为止进行的4个独立实验以完全可重复的方式清楚地显示，P245在初级患者中高效地清除大部分AML细胞(表1)。如表2中所显示的，这可能部分归因于终极分化的诱导。然而，其也可能主要归因于大部分白血病干细胞的清除，如通过次级移植检测所显示的(表1)。这些结果显示在体内可能清除AML干细胞，应当指出未观察到毒性和其他不想要的副作用。进一步研究P245对长期存活的影响。此外，也研究P245对正常干细胞的影响。最有趣的是，在最初的实验中，没有观察到P245对正常CD34+脐带血细胞的移植的影响，这显示P245在体内选择性地清除AML干细胞。
| 患者 | 治疗 | huCD45+细胞的百分比 | CD45+群体中CD15+的百分比 |
| 4971 | 无 | 43 | 22 |
| P245 | 6.2 | 56 |
表2.AML母细胞在经P245治疗的初级受体中的体内分化：通过ALM细胞(CD45+)上的粒细胞特异性分化抗原CD15的增加的表达来证明分化。该实验是4个独立实验中的一个代表性实验。
接受了移植的PML-RAR小鼠，已使本发明者能够研究CD44靶向的分子对AML3亚型的模型的体内影响，所述亚型是唯一一个不能被移植入NOD/SCID小鼠中的亚型。因为还没有可使用的针对鼠科动物CD44的mAbs，所以对HA的治疗功效进行研究并将其与视黄酸的功效进行比较，所述视黄酸诱导了AML母细胞的完全终极分化和诱导接受了移植的PML-RAR小鼠的完全好转。获得的结果(概括于表3)清楚地表明，施用4天后，在消除疾病的脾大特征上，HA和视黄酸一样有效，并且其也成功地减少了骨髓中白血病母细胞的浸润。该效果是HA剂量依赖性的。已分化的粒细胞前体的出现强烈地暗示着HA诱导AML母细胞的终极分化，如其在体外进行的一样，并且与视黄酸相似。总之，这些结果第一次显示，CD44连接是在体内清除AML细胞的有效方法并且为在AML中发展CD44靶向的治疗法提供了新的基础。
| 治疗 | 平均脾重量(mg) | 骨髓中母细胞的百分比 | 骨髓中中幼粒细胞和晚幼粒细胞的百分比 |
| 无 | 480+/-45 | 85+/-7 | 12+/-3 |
| HA | 120+/-57 | 28+/15 | 48+/-23 |
| RA | 135+/-68 | 18+/-7 | 67+/-17 |
表3：HA在体内抑制PML-RAR细胞(AML3)的生长并诱导其终极分化。通过渗透泵以1μl/小时的速度给12天前用105个白血病PML-RAR母细胞移植的白血病小鼠施用HA(6.105kAa)4天。观察到脾大的强列抑制，伴随骨髓中母细胞浸润的减少(通过显微镜观察计数)和正在分化的粒细胞前体细胞的增加。数据来自3个独立实验(5只小鼠/组)的平均值+/-SD。RA：视黄酸。
实施例2：鼠科动物抗体H90在杆状病毒-Sf9细胞系统中的嵌合化和表达-IgG1的表达
起始材料
使用2块5×106个细胞的H90杂交瘤(在干冰上)。H90单克隆抗体是IgG1κ。
使用WO 95 20672和Lieby等人的在Blood，15 june 2001，第97卷，n°12，p.3820-3828中的论文所描述的“Baculomab”技术。
1-重链和轻链可变区的分离
-总RNA的分离：根据厂商描述的方案使用Qiagen extraction试剂盒(Ref.74 104)。
-互补DNA的合成
对上面提取的总RNA进行反转录。所使用的转录酶是Qiagen的Omniscript(Ref.205 111)。
-VH和VL的扩增
所用的技术来源于“Chardes，T.，Villard，S.，Ferrieres，G.，Piechaczyk，M.，Cerutti，M.，Devauchelle，G.和B.Pau.1999.“Efficient and direct sequencing of mouse variable regionsfrom any immunoglobulin gene family.FEBS Lett.452，386-394”中描述的技术。
为鉴定和克隆轻链或重链可变区，平行地进行18个PCR。然后将大约400bp的片段克隆入质粒pGEMTeasy中，然后进行测序。通过公司MWGBiotech进行测序。
a-VL区的扩增
结果
第1试验：研究2个克隆
-H90 32LS C1 15
-H90 32LS C1 18
序列的分析显示克隆15和18不编码免疫球蛋白可变区。因此进行(经修改的方案)其他互补DNA的制备并克隆和分析PCR产物。
第2试验：获得4个克隆
-H90 3LS C1 5
-H90 3LS C1 7
-H90 22LS C1 12
-H90 22LS C1 16
克隆12和16对应于κ假基因(异常重排的Mus musculus免疫球蛋白κ链mRNA)。
克隆H80 3LS C1 7实际上对应着功能性VL-κ可变区(SEQ ID N°1和2)。因此将该克隆插入杆状病毒转移载体pBHUCk47。
b-VH区的扩增
使用相同的技术分离重链可变区。进行18个PCR。
结果
第1试验：分析1个克隆
-H90 19HS C1 9
该克隆的序列分析表明其对应于鼠科动物的假基因(读框移位)。
第2试验：合成新的互补DNA并用于PCR分析。
分析2个克隆：
-H90 17HS C1 23
-H90 17HS C1 28
这两个克隆实际上对应着鼠科动物γ1可变区；不巧的是大约1/3的N末端缺失。然而，对IMGT的序列分析使我们能够鉴定最可能的胚系来源，从而设计其他PCR引物。
通过后一种方法，本发明者分离了新的克隆：H90 3HS clone 15。
序列的分析显示正确的鼠科动物VH区域(SEQ ID N°3和4)。这是被导入杆状病毒转移载体中的克隆。
2-重链和轻链可变区插入转移载体
设计PCR引物以扩增这些VHs和VLs，并允许其与位于上游的信号序列和位于下游的κ或γ1恒定区同相插入(insertion in phasewith)。
通过测序再次证实所获得的构建体。
3-以IgG1的形式表达H90抗体的重组病毒的构建
从质粒构建体H90 3HS克隆15中分离H90抗体的重链区，然后将其插入转移载体p119Cg1，该载体允许人γ1重链的表达。提供了γ1恒定区的序列(SEQ ID N°5和6)。
4-重组病毒的获得
用(i)经纯化的病毒DNA和(ii)含有上述VH和VL区(SEQ IDN°1和3)的两种转移载体的DNA共转染Sf9细胞。
通过裂解噬菌斑技术克隆在28℃下温育5天后产生的病毒。扩增9个分离的克隆，并通过ELISA法检验抗体表达。发现所有的克隆是阳性的。选择克隆B2954、B2955、B2957和B2958用于互补分析。
5-产生的抗体的特异性的验证
重新扩增4个表达抗体的病毒克隆并分析大约5ml的培养上清液以验证重组抗体对于人CD44的特异性。
6-重组病毒的基因组的确认
提取4个病毒克隆的DNA，用HindIII限制性内切核酸酶降解，然后通过Southern印迹法进行分析。相继使用两个对于重链和轻链特异性的探针：Cγ1探针和κ探针(图1)。
实施例3：鼠科动物抗体H90在杆状病毒-Sf9细胞体系中的嵌合化和表达-IgG4的表达
如实施例2中所述从H90杂交瘤中分离鼠科动物抗CD44的抗体的VH和VL可变区。
1-以IgG4形式表达H90抗体的重组病毒的构建
从质粒H90 3HS clone 15中分离H90抗体的重链区，然后将其插入至允许表达人γ4重链的转移载体p119Cg4。提供了γ4恒定区的序列(SEQ ID N°7和8)。
2-重组病毒的获得
用2个分别含有上述VH(p119Cg4)和VL(pBHUCk47)、和病毒DNA的转移载体(重组杆状病毒)共转染Sf9细胞。在28℃下温育5天后，通过裂解噬菌斑技术克隆产生的病毒。扩增10个分离的病毒克隆。通过ELISA法验证抗体产物(捕获抗体：抗Fdγ1，结合位点，用过氧化物酶标记的人抗κ抗体(Sigma)显现)。
ELISA结果：所有的分离病毒克隆都产生抗体。
| PBS | IgG4H9016个克隆：B3651到B3666 | +对照 |
| 0.080.0710.0830.0670.0570.0560.0580.0710.1160.070.0580.0550.0640.0530.0770.078 | B3651 1.245B3652 0.737B3653 0.723B3654 0.909B3655 0.874B3656 0.778B3657 0.837B3658 0.809B3659 0.99B3660 0.743B3661 0.869B3662 0.729B3663 1.021B3664 0.784B3665 1.45B3666 0.733 | 3.3143.0652.4841.7591.1270.7070.4130.257 |
粗体：所选的4个克隆
3-重组病毒的基因组的确认
确认表达抗体的4个病毒克隆的基因组(克隆B3667、B3668、B3669和B3670)。扩增后，在35000rpm下沉淀培养上清液中包含的病毒30分钟(TLA100，Beckmann)。然后提取和纯化这些病毒的DNA，之后用HindIII限制性内切核酸酶降解。在琼脂糖凝胶上分离降解产物，然后用两种对于人重链和轻链特异性的探针进行杂交(图2)。
这些克隆中的两个即B3668和B3669表现对应于预期的基因组组织的限制性和杂交特征谱。扩增单个重组体B3669，然后对重组H90γ4抗体的产量和纯度进行滴定。
验证抗体对于CD44的特异性。
4-抗体产量和纯度
使Sf9细胞适合于在无血清培养基(SB5/6培养基，由Dr GérardDevauchelle(Saint Christol Les Alès，France)提供)上培养。
为了进行生产，将Sf9细胞以大约500000个细胞/ml的密度播种在摇瓶中，终体积400ml。立即用B3669病毒以2PFU/细胞的感染复数感染所述细胞，然后在28℃下进行温育。
感染4天后，在3000rpm下离心培养物。取出上清液并在-80℃下贮存待用。
按照蛋白A的常规纯化技术纯化培养上清液中包含的抗体。简而言之，将培养基的pH值调整至8.5，然后在装入蛋白A柱(High TrapProtA FF，Amersham)之前将该培养基通过0.5μm的Millipore芯子进行过滤。在用100mM Tris缓冲液，pH 8.5洗涤柱子后，用100mM柠檬酸钠，pH 3.0洗脱抗体。用2M Tris，pH 8.8(每3体积洗脱物用1体积的Tris)中和所收集的级分。
在Macrosep 30K(Pall)中浓缩抗体。通过ELISA测定制剂并通过在10％的聚丙烯酰胺凝胶上的迁移和银染分析制剂。
实施例4：嵌合型抗CD44抗体的分化活性
与人γ1/γ4嵌合的H90
进行与人γ1嵌合的H90对髓性白血病细胞系THP-1和NB4的分化活性的研究。使用已在Florence Smadja-Joffe(ref Blood January2002，vol 99，number 1-Blood August 2000，第96卷，number 3)的出版物中描述的分化标准进行该研究。该以前的研究已显示最可靠的分化参数是骨髓分化特异性抗原例如CD11b(在粒细胞和巨噬细胞分化的过程中增加的)、CD14(单核细胞分化特异性的)和/或CD15水平的增加(在粒细胞分化的过程中增加最多，同时在单核细胞分化过程中增加程度较低)。
结果
THP-1和NB4细胞是已建立的细胞系，其分别是AML5和AML3亚型的模型(Charrad等人Blood 2002)。这些细胞系已用不同形式的分化诱导性抗CD44的抗体H90(鼠科动物形式、或和人γ1链嵌合的形式或和人γ4链嵌合的形式(分别称为ch-人γ1链和ch-人γ1链H90))处理了3天。已以50μg/mL的终浓度使用这些形式中的每一种形式。通过使用FITC(异硫氰酸荧光素)缀合的特异性单克隆抗体和流式细胞仪分析法估计分化抗原CD11b、CD15和CD14的水平。其用阳性细胞的百分比和用平均荧光强度(所有荧光强度都相对于用FITC缀合的同型匹配的IgG标记的细胞的荧光强度)来表示。如果H90的不同形式引起阳性细胞或平均荧光强度的至少一种或2种分化抗原的表达增加，则认为其能够诱导分化。
在表4中显示的结果表明人γ1和人γ1嵌合的H90分子比鼠的H90分子更能有效地诱导THP-1和NB4细胞的分化。事实上，在THP-1细胞中，其引起CD15阳性细胞的百分比和CD15荧光强度的更高的增加和引起CD14阳性细胞百分比更高的增加。类似地，在NB4细胞中，其比鼠H90形式更能增加CD15的表达，并且在增加CD11b的水平上其和鼠H90的效果相同；人γ4嵌合的H90在该方面比人γ1嵌合的H90更有效。
表4
| 对照* | H90 | |||||
| 鼠科动物 | ch-人γ1链** | ch-人γ4链** | ||||
| THP-1细胞(成单核细胞性AML细胞) | CD15 | ％阳性细胞 | 87 | 72 | 99 | 83 |
| 平均荧光强度 | 36 | 45 | 94 | 65 | ||
| CD14 | ％阳性细胞 | 0 | 3 | 11 | 14 | |
| 平均荧光强度 | 0 | 28 | 22 | 25 | ||
| NB4细胞(早幼粒细胞性AML细胞) | CD15 | ％阳性细胞 | 87 | 72 | 99 | 83 |
| 平均荧光强度 | 36 | 45 | 94 | 65 | ||
| CD11b | ％阳性细胞 | 19 | 33 | 35 | 34 | |
| 平均荧光强度 | 32 | 47 | 27 | 45 | ||
对照*：用鼠科动物IgG1、人γ1或人γ4处理的细胞。获得相似的值。在该表中显示的值是通过用鼠IgG1处理细胞获得的值。
除此以外是由γ1构建体的Fc部分诱导的CDC细胞毒性活性和特别是ADCC细胞毒性活性。
在“体外”研究嵌合型P245(H90)对两种前述AML系的细胞毒性活性，并将所述嵌合型P245(H90)与其他抗CD44的抗体包括P245、A3D8和Hermes 3进行比较。
对于THP1和NB4，观察到用γ1嵌合的抗体的强细胞毒性能力。在第4天，细胞毒性大于80％。只有嵌合的抗体才表现该活性；鼠科动物抗体不具有该特性。使用来自患有AML5的患者的细胞也观察到该特性。
成单核细胞型AML5细胞既是靶细胞(因为其表达CD44受体)，又是效应细胞(因为作为单核细胞，其具有针对γ球蛋白特别是γ1的Fc受体，引起ADCC现象)，其与早幼粒细胞AML3细胞的情况不同，所述早幼粒细胞AML3细胞只是靶细胞。
也在“体外”使用NK细胞(常规测定法)就细胞毒性对该ADCC活性进行研究。
对于γ4构建体，只观察到分化活性而未观察到细胞毒性。
实施例5：galenic载体的配制-乳剂
将LIPOID E-80、Vit E和硬脂酰胺直接溶解在油相中。但将泊洛沙姆(poloxamer)和甘油直接溶解在水相中。使用磁力搅拌器分别制备油相和水相，过滤并加热至70℃的温度。使用磁力搅拌器混合两相。将温度提高至85℃。用Polytron或Ultraturrax进行匀浆3至5分钟使混合物均匀。将乳液通过高压均化器(或高压微射流纳米分散设备(microfluidizer))5分钟。将温度快速地达到20℃。用0.1M氢氯酸将pH调整至想要的值。将乳液通过0.45μm过滤器进行过滤，将其在硅化玻璃瓶中于氮气氛围下贮存并在高温高压灭菌器中灭菌。
经显示高达40个IgG分子可缀合至一个单个的油状阳离子小滴。
总之，该galenic载体经显示增加了AML细胞上抗体位点的数目和提高了抗CD44抗体的半寿期。
实施例6：根据本发明的治疗法
药物的配制(20mL的烧瓶，冻干的)
-活性成分：100mg冻干的P245
-赋形剂：蔗糖、聚山梨醇酯、磷酸单钠(monosodic phosphate)、磷酸二钠(disodic phosphate)。
可将该制剂保持在+2和+8℃之间，以其包装形式保存18个月。不要冷冻。
制备后，可保存药物3小时。
治疗法：通过缓慢输注(例如，在两小时内)注射4mg/Kg。
Claims (15)
1.选自SEQ ID N°1、SEQ ID N°3的核苷酸序列。
2.选自SEQ ID N°2、SEQ ID N°4的氨基酸序列。
3.包含权利要求1的至少一种核苷酸序列的转移构建体。
4.包含由SEQ ID N°1、3和5编码的氨基酸序列的嵌合型抗CD44的抗体和其F(ab’)2、Fab、Fab’、scFv、Fv或CDRs片段。
5.包含SEQ ID N°2、4和6的嵌合型抗CD44的抗体和其F(ab’)2、Fab、Fab’、scFv、Fv或CDRs片段。
6.包含由SEQ ID N°1、3和7编码的氨基酸序列的嵌合型抗CD44的抗体和其F(ab’)2、Fab、Fab’、scFv、Fv或CDRs片段。
7.包含SEQ ID N°2、4和8的嵌合型抗CD44的抗体和其F(ab’)2、Fab、Fab’、scFv、Fv或CDRs片段。
8.权利要求3至7的嵌合型抗体，其中所述抗CD44的抗体是单克隆抗体。
9.权利要求3至8中任一项的嵌合型抗体，其中所述嵌合型抗CD44的抗体和galenic载体偶联。
10.权利要求3至9的嵌合型抗CD44抗体在药物的制备中的用途，该药物用于在癌症治疗中清除病理性干细胞。
11.权利要求10的在药物制备中的用途，所述药物用于在癌症治疗中通过离体的方式特异性清除病理性干细胞和保存正常干细胞。
12.权利要求10至11中任一项的用途，其中所述干细胞是白血病干细胞。
13.权利要求3至9的嵌合型抗CD44的抗体在药物制备中的用途，所述药物用于分化白血病细胞和清除白血病干细胞。
14.权利要求10至11的用途，其中所述干细胞是乳腺癌或结肠癌干细胞。
15.权利要求10至14中任一项的用途，其中通过慢速输注，以每次治疗10mg至1000mg的剂量施用所述嵌合型抗CD44的抗体。
Applications Claiming Priority (2)
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|---|---|---|---|
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| EP03292873A EP1532984A1 (en) | 2003-11-19 | 2003-11-19 | Use of anti CD44 antibodies for eradicating stem cells in acute myeloid leukemia |
Publications (1)
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|---|---|
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Family
ID=34429570
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA2004800389743A Pending CN1898268A (zh) | 2003-11-19 | 2004-11-19 | 嵌合型抗cd44的抗体和其在治疗急性髓性白血病中的用途 |
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| WO (1) | WO2005049082A2 (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101368173B (zh) * | 2008-04-09 | 2011-12-28 | 协和干细胞基因工程有限公司 | 抗人cd44的工程抗体、载体、试剂盒及其用途 |
| CN102741292A (zh) * | 2010-02-04 | 2012-10-17 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 在治疗头和颈鳞状细胞癌中使用的cd44单克隆抗体 |
| CN111132701A (zh) * | 2017-10-25 | 2020-05-08 | 锕医药股份有限公司 | 基于抗-cd45的调理方法及其与基于基因编辑细胞的疗法的联合应用 |
| CN113552363A (zh) * | 2020-04-03 | 2021-10-26 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | Cd44作为造血干/祖细胞的标志物及其应用 |
| CN114213538A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-03-22 | 北京市神经外科研究所 | Cd44抗体、嵌合抗原受体及其应用 |
| CN114316049A (zh) * | 2021-12-24 | 2022-04-12 | 北京市神经外科研究所 | Cd44抗体、嵌合抗原受体及其应用 |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8071072B2 (en) * | 1999-10-08 | 2011-12-06 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
| EP2079484A4 (en) * | 2006-09-07 | 2010-03-17 | Stemline Therapeutics Inc | MONITORING OF CANCER STEM CELLS |
| WO2008030538A2 (en) * | 2006-09-07 | 2008-03-13 | Stemline Therapeutics, Inc. | Cancer stem cell-targeted cancer therapy |
| UY30776A1 (es) * | 2006-12-21 | 2008-07-03 | Medarex Inc | Anticuerpos cd44 |
| EP2009028A1 (en) * | 2007-06-27 | 2008-12-31 | Monoclonal Antibodies Therapeutics | Combination of a conventional anti-cancer treatment with anti-CD44 antibody administration for treating solid tumors |
| EP2403518A4 (en) * | 2009-03-06 | 2013-01-23 | Angstrom Pharmaceuticals Inc | Compositions and methods for modulating cell migration |
| CA2815000C (en) * | 2010-10-22 | 2024-05-21 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Discovery of regulatory t cells programmed to suppress an immune response |
| BR112014010009A2 (pt) * | 2011-10-26 | 2017-04-25 | Univ California | "anticorpo que se liga a cd44, seus métodos de produção e usos no tratamento ou prevenção de malignidade hematológica ou leucemia linfocítica crônica, método de alvejar anticorpo, kit de detecção, bem como composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico e vetor de expressão" |
| WO2014201417A1 (en) * | 2013-06-14 | 2014-12-18 | The University Of Kansas | Methods and compositions of modulating tumor initiating cells and the use thereof |
| NL2011904C2 (en) * | 2013-12-06 | 2015-06-09 | Stichting Vu Vumc | Leukemic stem cell markers. |
| WO2021160269A1 (en) * | 2020-02-13 | 2021-08-19 | UCB Biopharma SRL | Anti cd44-ctla4 bispecific antibodies |
| JP2023526529A (ja) | 2020-05-19 | 2023-06-21 | アンスティテュ・クリー | サイトカイン放出症候群の診断及び処置の方法 |
| CA3220458A1 (en) | 2021-05-18 | 2022-11-24 | Janssen Biotech, Inc. | Compositions comprising a t cell redirection therapeutic and an anti-cd44 therapeutic |
| WO2024040195A1 (en) | 2022-08-17 | 2024-02-22 | Capstan Therapeutics, Inc. | Conditioning for in vivo immune cell engineering |
| WO2024170543A1 (en) | 2023-02-14 | 2024-08-22 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Anti-cd44 antibodies and uses thereof |
| WO2024249954A1 (en) | 2023-05-31 | 2024-12-05 | Capstan Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle formulations and compositions |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994009811A1 (en) * | 1992-10-30 | 1994-05-11 | Duke University | An adhesion molecule |
| FR2715664B1 (fr) | 1994-01-31 | 1996-04-12 | Proteine Performance Sa | Baculovirus recombinant et son utilisation pour la production d'anticorps monoclonaux. |
| US6492332B1 (en) * | 1995-12-12 | 2002-12-10 | Omeros Corporation | Irrigation solution and methods for inhibition of tumor cell adhesion, pain and inflammation |
| EP0826696B1 (de) * | 1996-09-03 | 2002-05-29 | GSF-Forschungszentrum für Umwelt und Gesundheit GmbH | Verwendung bi-und trispezifischer Antikörper zur Induktion einer Tumorimmunität |
| JPH10301492A (ja) * | 1997-04-23 | 1998-11-13 | Sony Corp | 暗号化装置および方法、復号装置および方法、並びに情報処理装置および方法 |
| KR100653803B1 (ko) * | 2000-01-21 | 2006-12-05 | 소니 가부시끼 가이샤 | 데이터 처리 시스템 및 데이터 처리 시스템에서의 데이터 처리 방법 |
| TW538636B (en) * | 2000-09-01 | 2003-06-21 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | Reproduction equipment, reproduction equipment specifying equipment, reproduction equipment specifying system and methods and recording media for said equipment and system |
| US6972324B2 (en) * | 2001-05-18 | 2005-12-06 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies specific for CD44v6 |
| DE60224275T2 (de) * | 2001-06-01 | 2008-12-11 | Biogen Idec Ma Inc., Cambridge | Moleküle und verfahren zur inhibierung der freisetzung von kim-1 |
-
2003
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Cited By (9)
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|---|---|---|---|---|
| CN101368173B (zh) * | 2008-04-09 | 2011-12-28 | 协和干细胞基因工程有限公司 | 抗人cd44的工程抗体、载体、试剂盒及其用途 |
| CN102741292A (zh) * | 2010-02-04 | 2012-10-17 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 在治疗头和颈鳞状细胞癌中使用的cd44单克隆抗体 |
| CN102741292B (zh) * | 2010-02-04 | 2015-10-21 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 在治疗头和颈鳞状细胞癌中使用的cd44单克隆抗体 |
| CN111132701A (zh) * | 2017-10-25 | 2020-05-08 | 锕医药股份有限公司 | 基于抗-cd45的调理方法及其与基于基因编辑细胞的疗法的联合应用 |
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| CN113552363B (zh) * | 2020-04-03 | 2024-03-08 | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 | Cd44作为造血干/祖细胞的标志物及其应用 |
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